1971L0393 — IT — 15.12.1972 — 001.001 — 1
Trattandosidiunsemplice strumentodidocumentazione,essononimpegnalaresponsabilitàdelleistituzioni
►B SECONDADIRETTIVADELLACOMMISSIONE
del18novembre1971
chefissaimetodid'analisicomunitaripericontrolli ufficiali deglialimentiperglianimali
(71/393/CEE)
(GU L 279 del 20.12.1971, pag. 7)
Modificata da:
Gazzetta ufficiale
n. pag. data
►M1Direttiva 73/47/CEE della Commissione del 5 dicembre 1972 L 83 35 30.3.1973
▼B
SECONDADIRETTIVADELLACOMMISSIONE
del18novembre1971
che fissa i metodi d'analisi comunitari per i controlli ufficiali degli
alimentiperglianimali
(71/393/CEE)
LA COMMISSIONE DELLE COMUNITÀ EUROPEE,
visto il trattato che istituisce la Comunità economica europea,vista la direttiva del Consiglio, del 20 luglio 1970, concernente l'intro-
duzione di modi di prelevamento dei campioni e di metodi d'analisi
comunitari per il controllo ufficiale degli alimenti per gli animali(
1),
in particolare l'articolo 2,
considerando che la suddetta direttiva prevede che i controlli ufficiali
degli alimenti per gli animali, destinati a constatare l'osservanza dellecondizioni prescritte in virtù delle disposizioni legislative, regolamen-tari o amministrative concernenti le qualità e la composizione deglialimenti per gli animali, siano effettuati secondo i modi di preleva-
mento di campioni ed i metodi di analisi comunitari;
considerando che la direttiva n. 71/250/CEE della Commissione, del 15
giugno 1971(
2), ha già fissato un certo numerto di metodi di analisi
comunitari; che tenuto conto dello stato d'avanzamento dei lavori sinqui effettuati, è necessario adottare una seconda serie di metodi;
considerando che le misure previste dalla presente direttiva sono
conformi al parere del Comitato permanente per gli alimenti per gli
animali,
HA ADOTTATO LA PRESENTE DIRETTIVA:
Articolo 1
Gli Stati membri prescrivono che le analisi per i controlli ufficiali degli
alimenti per gli animali, per quanto riguarda il loro contenuto in
umidità, basi azotate volatili, fosforo totale e sostanze grasse gregge,siano effettuate secondo i metodi descritti all'allegato della presentedirettiva.
Le disposizioni generali di cui alla prima parte dell'allegato (introdu-
zione) della prima direttiva n. 71/250/CEE della Commissione, del 15
giugno 1971, che fissa i metodi di analisi comunitari per controlli uffi-
ciali degli alimenti per gli animali si applicano ai metodi descrittiall'allegato della presente direttiva.
Articolo 2
Gli Stati membri mettono in vigore, al più tardi il 1
ogennaio 1973, le
disposizioni legislative, regolamentari o amministrative necessarie peruniformarsi alle disposizioni della presente direttiva e ne informanoimmediatamente la Commissione.
Articolo 3
Gli Stati membri sono destinatari della presente direttiva.1971L0393 — IT — 15.12.1972 — 001.001 — 2
(1) GU n. L 170 del 3. 8. 1970, pag. 2.
(2) GU n. L 155 del 12. 7.1971, pag. 13.
▼B
ALLEGATO
1.DETERMINAZIONEDELL'UMIDITÀ
1.Scopoecampod'applicazione
Il metodo permette di determinare il contenuto in umidità degli alimenti per
gli animali. ►M1Il metodo non riguarda l'analisi dei prodotti lattieri in
quanto alimenti semplici degli animali, l'analisi delle sostanze minerali e
delle miscele essenzialmente composte di sostanze minerali, l'analisi dei
grassi e degli oli animali e vegetali, come pure l'analisi dei semi e frutti olea-
ginosi definiti nel regolamento n. 136/66/CEE del Consiglio, del 22
settembre 1966, relativo all'attuazione di un'organizzazione comune dei
mercati nel settore dei grassi(1).◄
La determinazione del contenuto in umidità dei semi e frutti oleaginosi è
oggetto dell'allegato III del regolamento (CEE) n. 1470/68 della Commis-
sione, del 23 settembre 1968, relativo al prelievo ed alla riduzione dei
campioni nonché alla determinazione del tenore in olio, impurità ed umidità
dei semi oleosi(2).
2.Principio
La quantità di prodotto su cui si opera è sottoposta all'essiccazione in condi-
zioni ben definite varianti in funzione della natura dell'alimento. La perdita di
massa è determinata per pesata. È necessario procedere ad una preessicca-
zione quando si tratta di alimenti solidi aventi un elevato contenuto di
umidità.
3.Apparecchiatura
3.1. Mulino da laboratorio costruito in materiale non assorbente l'umidità,
facile a pulirsi, che permetta una macinazione rapida ed uniforme senza
provocare sensibile riscaldamento, eviti al massimo il contatto con l'aria
esterna e risponda alle esigenze indicate in 4.1.1 e 4.1.2 (per es. micro-
macinatori a martelli o a raffreddamento ad acqua, mulini a coni
smontabili, macinatori a movimento lento o a dischi dentati);
3.2. Bilancia analitica, precisione mg 0,5;3.3. Recipienti essiccati in metallo inossidabile o in vetro, provvisti di
coperchi a chiusura stagna all'aria; superficie utile che permetta di otte-
nere una ripartizione della quantità di prodotto su cui si opera dell'ordine
di g per cm
20,3;
3.4. Stufa isotermica (± 1 ºC) a riscaldamento elettrico convenientemente
ventilata, capace di assicurare una regolazione rapida della tempera-
tura(3);
3.5. Stufa a vuoto a riscaldamento elettrico regolabile, provvista di una
pompa ad olio e di un dispositivo per l'introduzione di aria calda disidra-
tata o di un disidratante (per es. ossido di calcio);
3.6. Essiccatore a piastra in metallo o in porcellana, spessa, perforata, conte-
nente un efficace disidratante.
4.Mododioperare
N.B.: Le operazioni descritte in questo capitolo debbono essere effettuate
immediatamente dopo l'apertura degli imballaggi contenenti i
campioni. Le analisi debbono essere effettuate almeno in doppio.1971L0393 — IT — 15.12.1972 — 001.001 — 3
(1) GU n. 172 del 30. 9. 1966, pag. 3025/66.
(2) GU n. L 239 del 28. 9. 1968, pag. 2.
(3) Per la essiccazione dei cereali nonché delle farine, semole e semolini, la stufa deve
avere una capacità calorifica tale che, preventivamente regolata alla temperatura di
131 ºC possa raggiungere nuovamente tale temperatura in meno di 45 minuti, dopoavervi introdotto il numero massimo di campioni da essiccare simultaneamente. Lastufa deve avere una ventilazione tale che, essiccando per due ore tutti i campioni difrumento tenero che essa può contenere, i risultati presentino una differenza inferiore
allo 0,15 % rispetto ai risultati ottenuti con 4 ore di essiccazione.
▼B
4.1.Preparazione
4.1.1. Alimenti eccettuati quelli menzionati sub 4.1.2 e 4.1.3
Prelevare una quantità di prodotto di almeno g 50. Se necessario
macinare o dividere in particelle di grandezza appropriata in
modo da evitare ogni variazione del contenuto di umidità (cf. 6).
4.1.2. Cereali e semole
Prelevare una quantità di prodotto di almeno g 50. Macinare in
particelle di cui almeno il 50 % passino in un setaccio a maglie
di mm 0,5 e non lascino più di 10 % di residuo su di un setaccio
a maglie rotonde di mm 1 di diametro.
4.1.3. Alimenti liquidi o pastosi, alimenti costituiti essenzialmente da
sostanze grasse
Prelevare una quantità di prodotto di almeno g 25, pesata con
l'approssimazione di mg 10, ed aggiungere una quantità appro-
priata di sabbia anidra, pesare con l'approssimazione di mg 10 e
mescolare sino ad ottenere un prodotto polverulento omogeneo.
4.2.Essiccazione
4.2.1. Alimenti eccettuati quelli menzionati sub 4.2.2 e 4.2.3
Tarare, con la precisione di mg 0,5, un recipiente (3.3), provvisto
del coperchio. Pesare nel recipiente tarato, con l'approssimazione
di mg 1, circa g 5 di prodotto e ripartirli uniformemente. Porre il
recipiente, privo del suo coperchio, nella stufa preventivamente
riscaldata a 103 ºC. Per evitare che la temperatura della stufa
discenda troppo, introdurvi il recipiente nel più breve tempo
possibile. Lasciare essiccare per 4 ore a partire dal momento in
cui la stufa ha nuovamente raggiunto la temperatura di 103 ºC.
Rimettere il coperchio sul recipiente, estrarre quest'ultimo dalla
stufa, lasciarlo raffreddare per 30-45 minuti in essiccatore (3.6) e
pesare con l'approssimazione di mg 1.
Nel caso di alimenti costituiti essenzialmente da sostanze grasse,
effettuare un'essiccazione complementare di 30 minuti nella stufa
a 103 ºC. Lo scarto tra le due pesate non deve superare 0,1 % di
umidità.
4.2.2. Cereali, farine, semole e semolini
Tarare con la precisione di mg 0,5 un recipiente (3.3), provvisto
del coperchio. Pesare nel recipiente tarato, con l'approssimazione
di mg 1, almeno g 5 di prodotto macinato e ripartirlo uniforme-
mente. Porre il recipiente, senza coperchio, nella stufa
preventivamente riscaldata a 130 ºC. Per evitare che la tempera-
tura della stufa discenda troppo, introdurre il recipiente nel più
breve tempo possibile. Lasciare essiccare per 2 ore a partire dal
momento in cui la stufa ha nuovamente raggiunto la temperatura
di 130 ºC. Rimettere il coperchio sul recipiente, estrarre quest'ul-
timo dalla stufa, lasciare raffreddare per 30-45 minuti
nell'essiccatore (3.6) e pesare con l'approssimazione di mg 1.
4.2.3. Alimenti composti contenenti più del 4 % di saccarosio o lattosio,
alimenti semplici quali carrube, prodotti cerealicoli idrolizzati,
germi di malto, fettucce di barbabietole, «solubili» di pesce e
zuccheri; alimenti composti contenenti più del 25 % di sali mine-
rali con acqua di cristallizzazione
Tarare con l'approssimazione di mg 0,5 un recipiente (3.3), prov-
visto del coperchio. Pesare nel recipiente tarato, con
l'approssimazione di mg 1, circa g 5 di prodotto e ripartirli
uniformemente. Porre il recipiente, privo del coperchio, nella
stufa a vuoto (3.5) preventivamente riscaldata ad una temperatura
di 80-85 ºC.Per evitare che la temperatura della stufa discenda
troppo, introdurre il recipiente nel più breve tempo possibile.
Portare la pressione a 100 Torrs e lasciare essiccare a questa pres-
sione durante 4 ore in corrente d'aria secca e calda, o mediante un
disidratante (g 300 circa per 20 campioni). In quest'ultimo caso
interrompere la connessione con la pompa a vuoto allorquando
la pressione prescritta è raggiunta. Misurare la durata dell'essicca-
zione a partire dal momento in cui la stufa ha nuovamente
raggiunto la temperatura di 80-85 ºC.
Riportare poi con precauzione la stufa alla pressione atmosferica.
Aprire la stufa, coprire immediatamente il recipiente con il coper-1971L0393 — IT — 15.12.1972 — 001.001 — 4
▼B
chio, estrarlo dalla stufa, lasciarlo raffreddare per 30-45 minuti in
essiccatore (3.6) e pesare con l'approssimazione di mg 1.
Procedere ad una essiccazione complementare di 30 minuti nella
stufa a vuoto, alla temperatura di 80-85 ºC, e pesare di nuovo. Lo
scarto tra le due pesate non deve superare 0,1 % di umidità.
4.3.Preessiccazione
4.3.1. Alimenti eccettuati quelli menzionati sub 4.3.2
Gli alimenti solidi, il cui contenuto di umidità è elevato e rende
difficile la macinazione, devono essere preessiccati nel modo
seguente.
Pesare, con l'approssimazione di mg 10, g 50 di prodotto non
macinato (un grossolano spezzettamento può essere effettuato, se
necessario, nel caso di alimenti compressi o agglomerati) in un
recipiente appropriato (per es. piastra di alluminio di cm 20 × 12
con bordo di cm 0,5). Lasciar essiccare in stufa alla temperatura
di 60-70 ºC, sino a che il contenuto di umidità sia portato ad un
valore compreso tra l'8 e il 12 %. Togliere dalla stufa, lasciar
raffreddare allo scoperto nel laboratorio per un'ora e pesare con
l'approssimazione di mg 10. Macinare subito dopo come indicato
in 4.1.1 ed effettuare la essiccazione come indicato sub 4.2.1 o
4.2.3 secondo la natura dell'alimento.
4.3.2. Cereali
I cereali in granella aventi una percentuale di umidità superiore al
17 % debbono essere preessiccati nel modo seguente: Pesare, con
la precisione di mg 10, g 50 di cereali in granella non moliti in un
recipiente appropriato (per es. piastra di alluminio di cm 20 × 12
con bordo di cm 0,5). Lasciare essiccare in stufa per 5 o 7 minuti
alla temperatura di 130 ºC. Togliere dalla stufa, lasciar raffred-
dare allo scoperto nel laboratorio per 2 ore e pesare con
l'approssimazione di mg 10. Molire subito dopo, come indicato
sub 4.1.2 ed effettuare l'essiccazione come indicato sub 4.2.2.
5.Calcolodeirisultati
Il contenuto di umidità, in percento del campione, è dato dalle seguenti
formule:
5.1.Essiccazione senza preessiccazione
E/C0m ðÞ /C1100
E
in cui:
E = massa iniziale, in grammi, della quantità di prodotto sottoposta all'a-
nalisi
m = massa in grammi del prodotto essiccato.
5.2.Essiccazione con preessiccazione
M0/C0m ðÞ M
M0 þE/C0M/C20/C21
/C1100
E¼100 1 /C0Mm
EM0/C18/C19
in cui:
E = massa iniziale, in grammi, della quantità di prodotto sottoposta all'a-
nalisi,
M = massa, in grammi del prodotto dopo preessiccazione,
M′= massa, in grammi del prodotto dopo macinazione,
m = massa, in grammi del prodotto essiccato.
5.3.Ripetibilità
La differenza tra i risultati di due determinazioni parallele effettuate
sullo stesso campione non deve superare 0,2 % di umidità.1971L0393 — IT — 15.12.1972 — 001.001 — 5
▼B
6.Osservazioni
Se una macinazione si manifesta necessaria e se ne deriva che essa provochi
una variazione del contenuto in umidità del prodotto, i risultati d'analisi
concernente i componenti dell'alimento devono essere convertiti conforme-
mente al contenuto in umidità del campione iniziale.
2.DETERMINAZIONEDELLEBASIAZOTATEVOLATILI
A. PER MICRODIFFUSIONE
1.Scopoecampod'applicazione
Il metodo permette di determinare il contenuto di basi azotate volatili,
espresse in ammoniaca degli alimenti per gli animali.
2.Principio
Il campione viene estratto con acqua, la soluzione viene chiarificata e filtrata.
Le basi azotate volatili sono spostate per mezzo di una soluzione di carbo-
nato di potassio per microdiffusione, raccolte in una soluzione di acido
borico e titolate con acido solforico.
3.Reattivi
3.1. Soluzione al 20 % (p/v) d'acido tricloroacetico;3.2. Indicatore: sciogliere mg 33 di verde di bromocresolo e mg 65 di rosso
di metile in ml 100 d'etanolo al 95-96 % (v/v).
3.3. Soluzione di acido borico: in un pallone tarato da litri 1, sciogliere g 10
d'acido borico p.a. in ml 200 d'etanolo al 95-96 % (v/v) e ml 700
d'acqua. Aggiungere ml 10 di indicatore (3.2). Mescolare e aggiustare
se necessario il colore della soluzione al rosso chiaro mediante aggiunta
di una soluzione d'idrossido di sodio. ml 1 di questa soluzione consente
di fissare al massimo µg 300 di ammoniaca.
3.4. Soluzione satura di carbonato di potassio: sciogliere g 100 di carbonato
di potassio p.a. in ml 100 d'acqua portata all'ebollizione. Lasciar raffred-
dare e filtrare.
3.5. Acido solforico 0,02 N.
4.Apparecchiatura
4.1. Agitatore rotativo a capovolgimento: circa 35-40 giri minuto.
4.2. Celle di Conway (vedasi figura), in vetro o in materia plastica.4.3. Microburette, graduate a ml 1/100.
5.Mododioperare
Pesare, con l'approssimazione di mg 1, g 10 di sostanza e porli in un pallone
tarato da ml 200 con ml 100 d'acqua. Agitare il pallone, nell'agitatore rota-
tivo, per 30 minuti. Aggiungere ml 50 della soluzione d'acido tricloroacetico
(3.1), portare a volume con acqua, agitare energicamente e filtrare su di un
filtro a pieghe.
Porre, con una pipetta, ml 1 della soluzione di acido borico (3.3) nell'incavo
centrale della cella Conway e, nella corona della cella, ml 1 del filtrato otte-
nuto dal campione. Coprire parzialmente con il coperchio ingrassato. Lasciar
scolare rapidamente nella corona periferica ml 1 della soluzione satura di
carbonato di potassio (3.4) e chiudere ermeticamente il coperchio. Agitare
con precauzione la cella per rotazione in un piano orizzontale in modo da
assicurare la miscelazione dei due reattivi. Mantenere l'apparecchio per
almeno 4 ore alla temperatura ambiente o per 1 ora a 40 ºC.
Titolare le basi volatili nella soluzione d'acido borico con la soluzione
d'acido solforico 0,02 N (3.5) per mezzo di una microburetta (4.3).
Effettuare un saggio in bianco impiegando lo stesso modo di operare in
assenza della sostanza da analizzare.
6.Calcolodeirisultati
ml 1 di H
2SO40,02 N corrisponde a mg 0,34 di ammoniaca.
Esprimere i risultati in per cento del campione.1971L0393 — IT — 15.12.1972 — 001.001 — 6
▼B
Ripetibilità
La differenza tra i risultati di due determinazioni parallele effettuate sullo
stesso campione non deve sorpassare:
— 10 % in valore relativo per i contenuti in ammoniaca inferiori a 1,0 per
cento;
— 0,1 in valore assoluto per i contenuti in ammoniaca uguali o superiori a
1,0 per cento.
7.Osservazioni
Se il contenuto in ammoniaca del campione è superiore allo 0,6 % diluire
preventivamente la soluzione chiarificata.1971L0393 — IT — 15.12.1972 — 001.001 — 7
▼B
CELLA CONWAY
Scala 1/1
1971L0393 — IT — 15.12.1972 — 001.001 — 8
▼B
CELLA CONWAY
B. PER DISTILLAZIONE
1.Scopoecampodiapplicazione
Il metodo permette di determinare il contenuto di basi azotate volatili,
espresse in ammoniaca, nelle farine di pesce non contenenti, praticamente,
urea. Il metodo non è applicabile che per contenuti di ammoniaca inferiori
a 0,25 %.
2.Principio
Il campione viene estratto con acqua, la soluzione viene chiarificata e
filtrata. Le basi azotate volatili sono spostate all'ebollizione per aggiunta
di ossido di magnesio e sono raccolte in una quantità determinata d'acido
solforico il cui eccesso viene titolato di ritorno con una soluzione d'idros-
sido di sodio.
3.Reattivi
3.1. Soluzione al 20 % (p/v) d'acido tricloroacetico,
3.2. Ossido di magnesio p.a.,
3.3. Emulsione di antischiuma (p. es. silicone),
3.4. Acido solforico 0,1 N,3.5. Soluzione d'idrossido di sodio 0,1 N,
3.6. Soluzione allo 0,3 % (p/v) di rosso di metile in etanolo al 95-96 %
(v/v).
4.Apparecchiatura
4.1. Agitatore rotativo a capovolgimento: circa 35-40 giri per minuto4.2. Apparecchio per distillazione tipo Kjeldahl.
5.Mododioperare
Pesare, con l'approssimazione di mg 1, g 10 di sostanza e porli in un
pallone tarato da ml 200 con ml 100 d'acqua. Agitare il pallone, nell'agi-
tatore rotativo, per 30 minuti. Aggiungere ml 50 della soluzione d'acido
tricloroacetico (3.1), portare a volume con acqua, agitare vigorosamente
e filtrare su di un filtro a pieghe.
Prelevare una quantità di filtrato limpido in funzione del presunto conte-
nuto di basi azotate volatili (ml 100 sono generalmente sufficienti).
Diluire a ml 200 ed aggiungere g 2 di ossido di magnesio (3.2) e qualche
goccia di emulsione antischiuma (3.3). La soluzione deve risultare alcalina
alla cartina di tornasole, altrimenti aumentare la quantità di ossido di
magnesio (3.2). Distillare ml 150 circa della soluzione in un apparecchio
del tipo Kjeldahl e raccogliere il distillato in una beuta contenente un
volume esattamente misurato (ml 25-50) d'acido solforico 0,1 N (3.4).
Durante la distillazione evitare il surriscaldamento delle pareti del reci-
piente di distillazione. Far bollire la soluzione solforica per due minuti,
raffreddare e titolare di ritorno l'eccesso di acido solforico con la solu-
zione d'idrossido di sodio 0,1 N (3.5) in presenza dell'indicatore al rosso
di metile (3.6). Effettuare una prova in bianco impiegando lo stesso modo
di operare, in assenza del campione da analizzare.
6.Calcolodeirisultati
ml 1 di H
2SO40,1 N corrisponde a mg 1,7 di ammoniaca. Esprimere il
risultato in parti per cento del campione.
Ripetibilità
La differenza tra i risultati di due determinazioni parallele effettuate, in
valore relativo, sullo stesso campione non deve sorpassare il 10 per cento
di ammoniaca.1971L0393 — IT — 15.12.1972 — 001.001 — 9
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3.DETERMINAZIONEDELFOSFOROTOTALE
Metodo fotometrico
1.Scopoecampodiapplicazione
Il metodo permette la determinazione del contenuto di fosforo totale negli
alimenti per gli animali. Esso è particolarmente indicato per l'analisi dei
prodotti poveri in fosforo. In certi casi (prodotti ricchi in fosforo) un metodo
gravimetrico può essere applicato.
2.Principio
Il campione viene mineralizzato, per via secca (per gli alimenti organici), o
per via umida (per i composti minerali e gli alimenti liquidi) e viene portato
in soluzione acida. La soluzione viene trattata con il reattivo vanado-molib-
dico. La densità ottica della soluzione gialla così formatasi, viene misurata
allo spettrofotometro a nm 430.
3.Reattivi
3.1. Carbonato di calcio p.a.,3.2. Acido cloridrico p.a., d: 1,1 (circa 6 N),3.3. Acido nitrico p.a., d: 1,045,3.4. Acido nitrico p.a., d: 1,38-1,42,3.5. Acido solforico p.a., d: 1,84,3.6. Reattivo vanado-molibdico: mescolare, in un pallone tarato da 1 litro,
ml 200 di soluzione di eptamolibdato d'ammonio (3.6.1) con ml 200 di
soluzione di monovanadato d'ammonio (3.6.2) e ml 134 d'acido nitrico
(3.4). Portare a volume con acqua.
3.6.1. Soluzione di eptamolibdato d'ammonio: sciogliere in acqua calda
g 100 di eptamolibdato d'ammonio p.a. (NH)
46Mo7O24·4 H2O.
Aggiungere ml 10 d'ammoniaca (d: 0,91) e portare ad 1 litro
con acqua.
3.6.2. Soluzione di monovanadato d'ammonio: sciogliere in ml 400 di
acqua calda g 2,35 di monovanadato d'ammonio p.a. NH4VO3.
Aggiungere lentamente agitando ml 20 d'acido nitrico diluito (ml
7 di HNO3(3.4) + ml 13 di H2O) e portare ad 1 litro con acqua.
3.7. Soluzione tipo, contenente mg 1 di fosforo per ml: sciogliere in acqua g
4,387 di fosfato monopotassico p.a. KH2PO4. Portare ad 1 litro con
acqua.
4.Apparecchiatura
4.1. Crogioli da incenerimento di quarzo o porcellana,4.2. Forno elettrico a muffola munito di termostato regolato a 550 ºC,4.3. Matracci di Kjeldahl da ml 250,4.4. Palloni tarati e pipette di precisione,4.5. Spettrofotometro,4.6. Tubi da saggio a tappo smerigliato, diametro circa mm 16, a smeriglia-
tura normalizzata 14,5; capacità ml 25 a 30.
5.Mododioperare
5.1.Preparazione della soluzione
Secondo la natura del campione, preparare una soluzione come indicato
sub 5.1.1 o 5.1.2.
5.1.1. Caso generale
Pesare, al mg, g 1 o più del prodotto da analizzare. Trasferire
questa quantità in un matraccio di Kjeldahl ed aggiungere ml 20
d'acido solforico (3.5), agitare per imbibire d'acido tutta la
sostanza ed evitare che essa aderisca alle pareti del pallone,
riscaldare e mantenere per 10 minuti all'ebollizione. Lasciar
raffreddare leggermente, aggiungere ml 2 di acido nitrico (3.4),
riscaldare lentamente, lasciare ancora raffreddare leggermente,
aggiungere di nuovo un po' di acido nitrico (3.4) e portare all'e-1971L0393 — IT — 15.12.1972 — 001.001 — 10
▼B
bollizione. Ripetere tali operazioni sino ad ottenre una soluzione
incolore. Raffreddare, aggiungere un po' d'acqua e trasferire il
liquido in un pallone tarato da ml 500 lavando il pallone con
acqua calda. Lasciar raffreddare, portare a volume con acqua,
mescolare e filtrare.
5.1.2 Campioni contenenti sostanze organiche e non contenenti diidro-
genofosfati di calcio e magnesio
Pesare, al mg, g 2,5 di prodotto da analizzare in un crogiolo da
incenerimento e mescolarli intimamente con g 1 di carbonato di
calcio (3.1). Calcinare al forno a 550 ºC ± 5 ºC fino ad ottenere
ceneri bianche o grigie (una piccola quantità di carbone non
disturba).
Trasportare quantitativamente le ceneri in un becher da ml 250.
Aggiungere ml 20 d'acqua ed acido cloridrico (3.2) sino a cessa-
zione dell'effervescenza.
Aggiungere quindi un eccesso di ml 10 di acido cloridrico (3.2).
Porre il becher su un bagno di sabbia ed evaporare fino a secco
per insolubilizzare la silice. Riprendere il residuo con ml 10
d'acido nitrico (3.3) e far bollire per 5 minuti sul bagno di sabbia
senza arrivare a secco. Trasferire il liquido in un pallone tarato da
ml 500 lavando il becher, a più riprese, con acqua calda. Lasciar
raffreddare; portare a volume con acqua, mescolare e filtrare.
5.2.Sviluppo della colorazione e misura della densità ottica
Diluire una parte aliquota del filtrato ottenuto secondo 5.1.1 o 5.1.2 per
ottenere una concentrazione in fosforo che raggiunga al massimo µg per
ml 40. Introdurre in un tubo da saggio (4.6) ml 10 di questa soluzione
ed aggiungervi ml 10 del reattivo vanado-molibdico (3.6). Mescolare e
lasciar riposare per almeno 10 minuti alla temperatura di 20 ºC. Misu-
rare la densità ottica allo spettrofotometro a nm 430 per comparazione
con una soluzione ottenuta per aggiunta di ml 10 di reattivo vanadomo-
libdico (3.6) a ml 10 di acqua.
5.3.Curva di taratura
Preparare, a partire dalla soluzione tipo (3.7) delle soluzioni contenenti
rispettivamente µg 5, 10, 20, 30 e 40 di fosforo per ml. Prelevare ml 10
di ciascuna di tali soluzioni ed aggiungervi ml 10 di reattivo vanadomo-
libdico (3.6). Mescolare e lasciar riposare almeno 10 minuti alla
temperatura di 20 ºC. Misurare le densità ottiche nelle condizioni indi-
cate sub 5.2.
Tracciare la curva di taratura portando in ordinata i valori di densità
ottica ed in ascissa le quantità corrispondenti di fosforo. La curva è
lineare per le concentrazioni di fosforo comprese entro µg per ml 0 e 40.
6.Calcolodeirisultati
Determinare la quantità di fosforo nella quantità di sostanza sottoposta all'a-
nalisi riferendosi alla curva di taratura. Esprimere i risultati in per cento del
campione.
Ripetibilità
La differenza tra i risultati di due determinazioni parallele effettuate sullo
stesso campione non deve sorpassare:
— 3 % in valore relativo per contenuti in fosforo inferiori al 5 %;
— 0,15 in valore assoluto per contenuti in fosforo uguali o superiori al 5 per
cento.
4.DETERMINAZIONEDELLESOSTANZEGRASSEGREGGE
1.Scopoecampodiapplicazione
Il metodo permette di determinare il contenuto in sostanze grasse gregge
degli alimenti per gli animali. Il metodo non riguarda l'analisi dei semi e
dei frutti oleosi previsti nel regolamento n. 136/66/CEE del Consiglio del
22 settembre 1966. La determinazione del contenuto in olio di tali prodotti
è oggetto dell'allegato V del regolamento (CEE) n. 1470/68 della Commis-
sione, del 23 settembre 1968. Sono previsti due procedimenti in funzione
della natura dell'alimento.1971L0393 — IT — 15.12.1972 — 001.001 — 11
▼B
1.1.Procedimento A (estratto etereo): da applicare a tutti gli alimenti, salvo
a quelli citati sub 1.2
1.2.Procedimento B: da applicare agli alimenti le cui sostanze grasse non
possono essere completamente estratte dall'etere dietilico senza prelimi-
nare idrolisi, agli alimenti di origine animale, glutini, polpe essiccate di
patate, trebbie essiccate di birreria e di distilleria, lieviti essiccati, scarti
della biscotteria, della panificazione e di alimenti cotti, prodotti lattieri
ed alimenti contenenti una forte percentuale di questi ultimi (almeno
40 %) ed agli alimenti composti arricchiti di grassi.
2.Principio
2.1.Procedimento A: Le sostanze grasse sono estratte con etere dietilico. Il
solvente viene eliminato ed il residuo viene essiccato e pesato.
2.2.Procedimento B: Il campione è idrolizzato a calco con acido cloridrico.
La soluzione viene raffreddata e filtrata. Il residuo lavato ed essiccato è
sottoposto ad estrazione con etere dietilico secondo il metodo A.
3.Reattivi
3.1. Etere dietilico, anidro; d: 0,720, eb.: 34,5 ºC, praticamente esente da
perossidi,
3.2. Solfato di sodio p.a., anidro,
3.3. Acido cloridrico 3 N,
3.4. Coadiuvante di filtrazione, per es. farina fossile, Hyflo-supercel,3.5. Tetracloruro di carbonio p.a.
4.Apparecchiatura
4.1. Estrattore di Soxhlet o apparecchio equivalente,4.2. Apparecchio di riscaldamento elettrico a temperatura regolabile atto ad
evitare esplosioni,
4.3. Stufa per essiccazione nel vuoto (meno di 100 Torr).
5.Mododioperare
5.1.Procedimento A (vedasi osservazione 7.1)
Pesare, con l'approssimazione di mg 1, g 5 del campione e mescolarli
con g 2 a 3 (o più se necessario) di solfato di sodio anidro (3.2). Intro-
durre la miscela in un ditale per estrazione esente da sostanze grasse e
coprire con un tampone di ovatta sgrassata. (La miscela può essere
eventualmente fatta nel ditale per estrazione.)
Porre il ditale in un estrattore (4.1) ed estrarre per 6 ore con etere dieti-
lico (3.1). Se si utilizza un estrattore di Soxhlet, regolare il
riscaldamento in modo da ottenere almeno 15 sifonamenti all'ora.
Raccogliere l'estratto etereo in un pallone essiccato, nel cui interno si è
posto qualche granello di pietra pomice(
1), e tarato.
Eliminare l'etere per distillazione ed essiccare poi il residuo dell'evapo-
razione per un'ora e mezza nella stufa ad essiccazione nel vuoto (4.3)
alla temperatura di 75 ºC. Raffreddare in un essiccatore e pesare. Assi-
curarsi, effettuando una seconda essiccazione della durata di 30 minuti,
che il peso della sostanza grassa resti costante (la perdita di peso deve
essere inferiore a mg 1).
5.2.Procedimento B
Pesare, con l'approssimazione di mg 1, g 2,5 del campione (vedasi
osservazione 7.2) ed introdurli in un becher da ml 400 o in una beuta
da ml 300. Aggiungere ml 100 di acido cloridrico 3N (3.3) e qualche
frammento di pietra pomice. Ricoprire il becher con un vetro di orologio
o applicare sulla beuta un refrigerante a ricadere. Portare la mescolanza
a lenta ebollizione e mantenerla per 1 ora su di una piccola fiamma o su
di una piastra riscaldante. Evitare che la sostanza aderisca alle pareti del
recipiente.1971L0393 — IT — 15.12.1972 — 001.001 — 12
(1) Sostituire i granelli di pietra pomice con alcune palline di vetro, quando si debbono
eseguire ulteriori esami qualitativi sulla sostanza grassa.
▼B
Raffreddare ed aggiungere una quantità sufficiente di un coadiuvante di
filtrazione (3.4) per evitare qualsiasi perdita di sostanza grassa durante
la filtrazione. Filtrare su un doppio filtro di carta bagnato, esente da
sostanze grasse. Lavare il residuo con acqua fredda fino a scomparsa
della reazione acida. Verificare che il filtrato non contenga sostanze
grasse. La presenza delle medesime nel filtrato indica che una estrazione
del campione con etere dietilico deve essere effettuata, prima dell'idro-
lisi, nel modo indicato al punto 5.1.
Porre il doppio filtro con il residuo su un vetro da orologio; essiccare
per un'ora e mezza nella stufa a tempertura di 95-98 ºC.
Porre il doppio filtro ed il residuo secco in un ditale da estrazione,
estrarre con etere dietilico e proseguire come indicato sub 5.1, secondo
paragrafo.
6.Calcolodeirisultati
Esprimere il risultato in per cento del campione.
Ripetibilità
La differenza tra i risultati di due determinazioni parallele effettuate sullo
stesso campione non deve sorpassare 0,3 per cento di sostanze grasse.
7.Osservazioni
7.1. Per i prodotti a forte contenuto in sostanze grasse, difficili ad essere
macinati o non appropriati per operare su un quantitativo ridotto
omogeneo, procedere come segue: pesare, con l'approssimazione di mg
1, g 20 di campione e mescolarli con g 10 o più di solfato di sodio
anidro (3.2). Procedere all'estrazione con etere dietilico (3.1) come indi-
cato sub 5.1. Portare l'estratto ottenuto al volume di ml 500 con
tetracloruro di carbonio (3.5) e mescolare. Prelevare ml 50 di tale solu-
zione e portarli in un palloncino essiccato, provvisto di qualche
frammento di pietra pomice(1), e tarato. Eliminare il solvente per distil-
lazione, essiccare e proseguire come indicato sub 5.1 ultimo paragrafo.
Eliminare il solvente dal residuo dell'estrazione che si trova nel ditale e
macinare il residuo alla finezza di mm 1. Porre nuovamente il prodotto
nel ditale di estrazione (non aggiungere solfato di sodio), estrarre con
etere dietilico e proseguire come indicato in 5.1 secondo e terzo para-
grafo.
Calcolare i risultati in per cento del campione tenendo conto della parte
aliquota utilizzata nella prima estrazione secondo la formula che segue:
(10 a + b) · 5
nella quale
a = estratto etereo in grammi della parte aliquota, dopo la prima estra-
zione,
b = estratto etereo in grammi dopo la seconda estrazione.
7.2. La quantità di sostanza sottoposta all'analisi nel caso di prodotti poveri
di materie grasse può essere portata a g 5.1971L0393 — IT — 15.12.1972 — 001.001 — 13
(1) Sostituire i frammenti di pietra pomice con alcune palline di vetro, quando si debbono
eseguire ulteriori esami qualitativi sulla sostanza grassa.