1998R1459 — IT — 03.02.1999 — 001.001 — 1
Trattandosi di un semplice strumento di documentazione, esso non impegna la responsabilità delle istituzioni
►B REGOLAMENTO (CE)N. 1459/98 DELLA COMMISSIONE
dell’8 luglio 1998
che stabilisce un metodo di riferimento per la determinazione della vanillina nel burro concentrato,
nel burro o nella crema
(GU L 193 del 9.7.1998, pag. 16)
Modificato da:
Gazzetta ufficiale
n. pag. data
►M1Regolamento (CE) n. 175/1999 della Commissione del 26 gennaio 1999 L20 22 27.1.1999
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REGOLAMENTO (CE)N. 1459/98 DELLA COMMISSIONE
dell’8 luglio 1998
che stabilisce un metodo di riferimento per la determinazione della
vanillina nel burro concentrato, nel burro o nella crema
LA COMMISSIONE DELLE COMUNITÀ EUROPEE,
visto il trattato che istituisce la Comunità europea,
vistoilregolamento(CEE)n.804/68delConsiglio,del27giugno1968,
relativoall’organizzazionecomunedeimercatinelsettoredellatteedeiprodotti lattiero-caseari(
1), modificato da ultimo dal regolamento (CE)
n. 1587/96(2), in particolare l’articolo 6, paragrafo 6, e l’articolo 12,
paragrafo 3,
considerando che il regolamento (CE) n. 2571/97, del 15 dicembre
1997,relativoallavenditaaprezzoridottodiburroeallaconcessionediun aiuto per la crema, il burro e il burro concentrato destinati allafabbricazione di prodotti della pasticceria, di gelati e di altri prodottialimentari(
3), dispone che, in certi casi, la crema, il burro e il burro
concentrato vengano addizionati di appositi rivelatori, per sorvegliarnela corretta utilizzazione finale;
considerando che, data l’importanza di verificare il corretto funziona-
mento del sistema e per assicurare parità di trattamento a tutti glioperatoripartecipanti,èopportunostabiliremetodicomuniperladeter-minazione dei rivelatori di cui al regolamento (CE) n. 2571/97;
considerando che è difficile stabilire simultaneamente metodi di riferi-
mentopertuttiirivelatori;chelafissazionediunmetododiriferimentoper la determinazione della vanillina nel burro concentrato, nel burro onella crema costituisce un progresso in questa direzione;
considerando che le misure previste dal presente regolamento sono
conformi al parere del comitato di gestione per il latt e e i prodotti
lattiero-caseari,
HA ADOTTATO IL PRESENTE REGOLAMENTO:
Articolo 1
Il metodo di analisi specificato in allegato si applica come metodo di
riferimento per la determinazione della vanillina nel burro concentrato,nel burro o nella crema ai sensi del regolamento (CE) n. 2571/97.
Il burro concentrato, il burro o la crema risultano identificati ai sensi
dell’articolo 6 del regolamento (CE) n. 2571/97 qualora i risultati otte-nuti siano conformi alle specifiche del punto 8 dell’allegato.
Articolo 2
Il presente regolamento entra in vigore il terzo giorno successivo alla
pubblicazione nella Gazzetta ufficiale delle Comunità europee .
Esso si applica a decorrere dal 1
osettembre 1998.
Il presente regolamento è obbligatorio in tutti i suoi elementi e diretta-
mente applicabile in ciascuno degli Stati membri.
(1) GU L 148 del 28. 6. 1968, pag. 13.
(2) GU L 206 del 16. 8. 1996, pag. 21.
(3) GU L 350 del 20. 12. 1997, pag. 3.
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ALLEGATO
Determinazione del contenuto in vanillina nel burro concentrato, nel burro o
nella crema, per cromatografia in fase liquida ad alto rendimento
1.Finalità e campo di applicazione
Ilmetododescriveunprocedimentoperladeterminazionequantitativadel
contenuto di vanillina nel burro concentrato, nel burro o nella crema.
Esso si applica ai campioni ricevuti ai sensi del regolamento (CE) n.
2571/97.
2.Principio
Estrazione di una quantità nota di campione con una miscela di isopropa-
nolo/etanolo/acetonitrile (1:1:2). Precipitazione della maggior parte delgrasso per raffreddamento fra −15 °Ce −20 °Ce successiva centrifuga-
zione.
Dopo diluizione con acqua, determinazione del contenuto in vanillina per
cromatografia in fase liquida ad alto rendimento (HPLC).
3.Apparecchiatura
Normale apparecchiatura di laboratorio, e in particolare:
3.1. Congelatore, campo di temperatura da −15 °Ca −20 °C.
3.2. Siringhe a perdere, della capacità di 2 ml.3.3. Microfiltri a membrana con pori da 0,45 µm e resistenti a una soluzione
contenente il 5% della soluzione di estrazione (4.4).
3.4. Sistema di cromatografia in fase liquida, consistente in una pompa (della
portata di 1,0 ml/min), un iniettore (iniezione da 20 µl, automatica o
manuale), un rivelatore UV (funzionante, a 306 nm, fondo scala a 0,01AU),unregistratoreointegratoreeuntermostatoacolonnafunzionantea25°C.
3.5. Colonna analitica (250 mm × 4,6 mm d.i.), riempita con LiChrospher RP
18 (Merck, 5 µm) o equivalente.
3.6. Colonna di guardia (ca. 20 m m×3m m d.i.), riempita a secco con
Perisorb RP 18 (30-40 µm) od equivalente.
4.Reattivi
Tutti i reattivi impiegati debbono essere di purezza analitica riconosciuta.
4.1. Isopropanolo4.2. Etanolo 96% (v/v)4.3. Acetonitrile4.4. Soluzione di estrazione
Mescolare isopropanolo (4.1), etanolo (4.2) ed acetonitrile (4.3) nel
rapporto 1:1:2 (V/V).
4.5. Vanillina (4-idrossi-3-metossibenzaldeide)4.5.1. Soluzione di riserva di vanillina (=500 µg/ml)
In un matraccio tarato da 100 ml, pesare 50 mg circa (CM mg) di
vanillina(4.5)conlaprecisionedi0,1mg;aggiungere25mldisoluzionedi estrazione (4.4) e portare a volume con acqua.
4.5.2. Soluzione standard di vanillina (=10 µg/ml)
Pipettare 5,00 ml di soluzione di riserva di vanillina (4.5.1) in un
mastraccio tarato da 250 ml e portare a volume con acqua.
4.6. Metanolo per HPLC4.7. Acido acetico glaciale4.8. Acqua per HPLC4.9. Fase mobile HPLC4.10. In un matraccio tarato da 1000 ml, miscelare 300 ml di metanolo (4.6)
con 500 ml circa d’acqua (4.8) e 20,0 ml di acido acetico (4.7); portare avolume con acqua (4.8). Filtrare per filtro da 0,45 µm.
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5.Modo di operare
5.1.Preparazione delle aliquote da analizzare
5.1.1. Burro
Riscaldare il campione fino a fusione incipiente. Evitare il surriscalda-
mento locale oltre i 40 °C. Quando il campione diventa sufficientemente
plastico,renderloomogeneoagitando.Rimescolareilburroper15secondiprima di prelevarne un’aliquota. In un matraccio tarato da 100 ml, pesare5 g circa (Sm g) di burro, con l’approssimazione di 1 mg.
5.1.2. Burro concentrato
Immediatamente prima di prelevare l’aliquota da analizzare, collocare il
contenitore col burro concentrato in una stufa a 40-50 °Cfino a fusione
completa a rendere omogeneo il campione agitando in senso rotatorio orimescolando,senzaeccedereinenergiaperevitarelaformazionedibolled’aria.Inunmatracciotaratoda100ml,pesare4gcirca(SMg)diburroconcentrato, con l’approssimazione di 1 mg.
5.1.3. Crema
Riscaldareilcampioneinbagnomariaotermostatoa35-40 °C.Distribuire
il grasso in modo omogeneo agitando in senso rotatorio e, se necessario,rimescolando. Portare rapidamente il campione alla temperatura di20±2 °C. Il campione deve presentarsi omogeneo; in caso contrario,
ripetere l’operazione. In un matraccio tarato da 100 ml, pesare 10 g (SMg) di crema, con l’approssimazione di 1 mg.
5.2.Preparazione della soluzione da analizzare
Aggiungere 75 ml circa di soluzione di estrazione (4.4) all’aliquota da
analizzare (5.1.1, 5.1.2 o 5.1.3), agitare o scuotere energicamente per 15minuti circa e portare a volume con la soluzione di estrazione (4.4).Trasferire 10 ml circa di questo estratto in una provetta fornita di tappo.Collocarelaprovettanelcongelatore(3.1)elasciarriposareper30minuticirca. Centrifugare l’estratto freddo per 5 minuti a 2000 rpm circa edecantare immediatamente. Lasciare che la soluzione decantata raggiungalatemperaturaambiente.Pipettare5,00mldellasoluzionedecantatainunmatraccio tarato da 100 ml e portare a volume con acqua. Filtrare unaporzione del liquido per microfiltro a membrana (3.3). Il filtrato è prontoper la determinazione HPLC.
5.3.Taratura
In un matraccio tarato da 100 ml, pipettare 5,00 ml della soluzione
standarddivanillina(4.5.2).Aggiungere5,0mldisoluzionediestrazione(4.4) e portare a segno con acqua. Questa soluzione contiene 0,5 µg/ml
vanillina.
5.4.Determinazione HPLC
Lasciarstabilizzareilsistemacromatograficoper30minuticirca.Iniettare
la soluzione standard (5.3). Ripetere l’operazione finché la differenza disuperficieodialtezzadellecuspidifradueiniezionisuccessiveèinferioreal 2%. Nelle condizioni descritte, il tempo di ritenzione della vanillina èdi circa 9 minuti. Analizzare in doppio la soluzione standard (5.3), iniet-tando20 µl.Iniettare20 µldellesoluzioni(5.2).Determinarelasuperficie
o l’altezza della cuspide ottenuta per la vanillina. Ripetere il duplicatodella soluzione standard (5.3) dopo dieci iniezioni delle soluzioni (5.2).
6.Calcolo dei risultati
Calcolare il valore medio delle superfici (o delle altezze), (AC), delle
cuspidi per la vanillina associate all’iniezione in doppio effettuata perinquadrare ciascun gruppo di soluzioni (quattro superfici in totale).
Calcolare il fattore di risposta (R) con la formula
R=AC/CM
dove CM rappresenta la massa della vanillina in mg (4.5.1).
Ilcontenuto(C)divanillinanelcampioneesaminato,espressoinmg/kg,è
dato dalla formula
C=AS×20×0,96
SM×R
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▼B
dove
AS = area della cuspide della vanillina del campione esaminato
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SM = massa in g del campione esaminato (5.1.1, 5.1.2, 5.1.3).
Quando la crema viene analizzata per individuare la vanillina, la
concentrazione del tracciante va espressa in mg tracciante/kggrasso di latte. A tal fine si moltiplica Cper 100/f, essendo iltenore di grasso in percentuale della crema (m/m)
▼
B
20 = fattore che tiene conto delle diluizioni dello standard e del
campione esaminato
0,96 = fattore di correzione per il contenuto in grasso nella prima dilui-
zione del campione di prova.
Nota:
In luogo delle superfici delle cuspidi, si possono impiegare le rispettive
altezze (cfr. 8.3).
7.Precisione del metodo
7.1. Ripetibilità (r)
La differenza fra i risultati di due determinazioni eseguite nel più breve
tempo possibile da un solo operatore, impiegando la stessa apparecchia-tura su materiali identici, non deve superare 16 mg/kg.
7.2. Riproducibilità (R)
Ladifferenzafrairisultatididuedeterminazionieffettuatedaoperatoriin
laboratori diversi, impiegando apparecchiature diverse su materiali iden-tici, non deve superare 27 mg/kg.
8.Limiti di tolleranza
8.1. Perverificarel’omogeneitàdelprodottocontrassegnato,bisognaprelevare
tre campioni.
8.2. Rivelatore ottenuto partendo dalla vainiglia o dalla vanillina sintetica.
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M1
8.2.1. La quantità di 4-idrossi-3-metossibenzaldeide da incorporare è di 250
grammipertonnelatadiburroconcentratoodiburro.Quandolaricercaditraccianti riguarda la crema, il tasso di incorporazione è di 250 g/t digrasso di latte.
8.2.2. I risultati dell’analisi dei tre campioni del prodotto vengono utilizzati per
verificareiltassoel’omogeneitàdiincorporazionedeltracciante:ilrisul-tato più basso ottenuto dall’analisi del prodotto viene confrontato con iseguenti limiti [si prende in considerazione la differenza critica per unaprobabilità del 95% (CrD95)]:
— 221,0 mg/kg (il 95% del tasso minimo di incorporazione),
— 159,0 mg/kg (il 70% del tasso minimo di incorporazione).
La concentrazione di tracciante nel campione che dà il risultato più basso
viene utilizzata per interpolazione tra 221,0 mg/kg e 159,0 mg/kg.
▼
B
8.3. Rivelatore,ottenutoesclusivamenteapartiredabaccellidivanigliaoloro
estratti integrali.
▼M1
8.3.1. La quantità di 4-idrossi-3-metossibenzaldeide da incorporare è di 100
grammi per tonnellata di burro concentrato o di burro. Quando la ricercadi traccianti riguarda la crema, il tasso di incorporazione è di 100 g/t digrasso di latte.
8.3.2. I risultati dell’analisi dei tre campioni del prodotto vengono utilizzati per
verificareiltassoel’omogeneitàdiincorporazionedeltracciante:ilrisul-tato più basso ottenuto dall’analisi del prodotto viene confrontato con iseguenti limiti [si prende in considerazione la differenza critica per unaprobabilità del 95% (CrD95)]:
— 79,0 mg/kg (il 95% del tasso minimo di incorporazione),
— 54,0 mg/kg (il 70% del tasso minimo di incorporazione).
La concentrazione di tracciante nel campione che dà il risultato più basso
viene utilizzata per interpolazione tra 79,0 mg/kg e 54,0 mg/kg.
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9.Note
9.1. Il valore r della ripetibilità è il valore al di sotto del quale la differenza
assoluta fra i risultati di due prove singole, ottenuti applicando lo stessometodo a materiali identici e nelle stesse condizioni (stessa apparecchia-tura, stesso labortori o e a breve distanza di tempo), può prevedibilmente
rientrare in una probabilità specifica; in mancanza di altre indicazioni, laprobabilità è del 95%.
9.2. Il valore R della riproducibilità è il valore al di sotto del quale la
differenza assoluta tra i risultati di due prove singole, ottenuti applicandolo stesso metodo a materiali identici ma in condizioni diverse (operatoridiversi, apparecchiature differenti, laboratori differenti e/o tempi diffe-renti), può prevedibilmente rientrare in una probabilità specifica; inmancanza di altre indicazioni, la probabilità è del 95%.
9.3. Il recupero della vanillina aggiunta al livello di 250 mg/kg di butteroil
varia da 97,0 a 103,8. Il contenuto medio ritrovato è risultato essere del99,9% con una deviazione standard del 2,7%.
9.4. La soluzione standard contiene il 5% di soluzione di estrazione per
compensarel’allargamentodellacuspideprovocatodallapresenzadel5%della soluzione di estrazione nelle aliquote analizzate. Ciò consente unaquantificazione attraverso l’altezza della cuspide.
9.5. L’analisièfondatasuunacurvaditaraturalineare,conintercettazero.La
linearità deve essere controllata impiegando appropriate diluizioni dellasoluzione standard (4.5.2), la prima volta che l’analisi viene effettuata e,successivamente,aintervalliregolari,nonchédopoognimodificaoripara-zione dell’apparecchiatura HPLC.