1971L0250 — IT — 19.08.1981 — 001.001 — 1
Trattandosi di un semplice strumento di documentazione, esso non impegna la responsabilità delle istituzioni
►B PRIMA DIRETTIVA DELLA COMMISSIONE
del 15 giugno 1971
che fissa i metodi d'analisi comunitari per controlli ufficiali degli alimenti per gli animali
(71/250/CEE)
(GU L 155 del 12.7.1971, pag. 13)
Modificata da:
Gazzetta ufficiale
n. pag. data
►M1Direttiva 81/680/CEE della Commissione del 30 luglio 1981 L 246 32 29.8.1981
▼B
PRIMA DIRETTIVA DELLA COMMISSIONE
del 15 giugno 1971
che fissa i metodi d'analisi comunitari per controlli ufficiali degli
alimenti per gli animali
(71/250/CEE)
LA COMMISSIONE DELLE COMUNITÀ EUROPEE,
visto il trattato che istituisce la Comunità economica europea,vista la direttiva del Consiglio, del 20 luglio 1970, concernente l'intro-
duzione di modi di prelevamento dei campioni e di metodi d'analisi
comunitari per il controllo ufficiale degli alimenti per gli animali(
1),
in particolare l'articolo 2,
considerando che la suddetta direttiva prevede che i controlli ufficiali
degli alimenti per gli animali, per constatare se le condizioni prescrittein virtù delle disposizioni legislative, regolamentari ed amministrativeconcernenti le qualità e la composizione degli alimenti per gli animalisono rispettate, siano effettuati secondo i metodi di prelevamento di
campioni ed i metodi di analisi comunitari;
considerando che è necessario stabilire il più rapidamente possibile tutti
i metodi d'analisi necessari e che la fissazione dei metodi di dosaggiodi acido cianidrico, di calcio, di carbonati, di ceneri gregge, di ceneriinsolubili in acido cloridrico, di cloro dei cloruri, dell'essenza disenapa, di lattosio, di potassio, di sodio, di zuccheri, della teobromina
e dell'urea, la determinazione degli alcaloidi dei lupini e l'attività urea-
sica dei prodotti della soia costituiscono un primo stadio;
considerando che le misure previste dalla presente direttiva sono
conformi al parere del Comitato permanente degli alimenti per glianimali,
HA ADOTTATO LA PRESENTE DIRETTIVA:
Articolo 1
Gli Stati membri prescrivono che le analisi per i controlli ufficiali degli
alimenti per gli animali, per quanto riguarda il loro contenuto in acidocianidrico, calcio, carbonati, ceneri gregge, ceneri insolubili in acido
cloridrico, cloro dei cloruri, essenza di senapa, lattosio, potassio, sodio,
zuccheri, teobromina ed urea, la determinazione degli alcaloidi deilupini e l'attività ureasica dei prodotti della soia, siano effettuatesecondo i metodi descritti nell'allegato della presente direttiva.
Le disposizioni generali figuranti nella parte 1 dell'allegato sono appli-
cabili ai metodi di analisi adottati ai sensi della direttiva 70/373/CEE
del Consiglio.
Articolo 2
Gli Stati membri mettono in vigore, al più tardi il 1
oluglio 1972, le
disposizioni legislative, regolamentari ed amministrative necessarie peruniformarsi alle disposizioni della presente direttiva e ne informanoimmediatamente la Commissione.
Articolo 3
Gli Stati membri sono destinatari della presente direttiva.1971L0250 — IT — 19.08.1981 — 001.001 — 2
(1) GU n. L 170 del 3. 8. 1970, pag. 2.▼M1
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ALLEGATO
METODI D'ANALISI DEI COMPONENTI DEI MANGIMI
1.DISPOSIZIONI GENERALI CONCERNENTI I METODI DI ANALISI
DEGLI ALIMENTI PER GLI ANIMALI
A. PREPARAZIONE DEI CAMPIONI PER L'ANALISI
1.Oggetto
Le modalità qui di seguito descritte riguardano la preparazione per l'analisi
dei campioni finali, trasmessi ai laboratori di controllo dopo essere stati
prelevati conformemente alle disposizioni della prima direttiva 76/371/
CEE della Commissione, del 1omarzo 1976, che fissa i modi comunitari
di prelevamento dei campioni per il controllo ufficiale degli alimenti per
gli animali(1).
La preparazione di questi campioni deve assicurare che le aliquote di
sostanza previste dai metodi di analisi siano omogenee e rappresentative
dei campioni finali.
2.Precauzioni da adottare
Effettuare tutte le operazioni in modo da evitare, nei limiti del possibile, di
contaminare il campione o di modificarne la composizione. Effettuare le
triturazioni, le miscelazioni e le setacciature con la massima rapidità, espo-
nendo al minimo il campione all'aria e alla luce. Evitare l'impiego di mulini
o trituratori capaci di riscaldare eccessivamente il campione. Per gli
alimenti particolarmente sensibili al calore si raccomanda la triturazione
manuale. Assicurarsi altresì che l'apparecchiatura in sé stessa non costi-
tuisca una fonte di contaminazione da oligoelementi.
Se il campione non può essere preparato senza variazione sensibile del
contenuto di umidità, quest'ultimo va determinato prima e dopo la prepara-
zione, secondo il metodo di dosaggio dell'umidità fissato alla parte 1
dell'allegato alla seconda direttiva 71/393/CEE della Commissione, del 18
novembre 1971, che fissa i metodi di analisi comunitari per controlli uffi-
ciali degli alimenti per gli animali(2), modificato dalla direttiva 73/47/CEE
della Commissione, del 5 dicembre 1972(3).
3.Modo di operare
Miscelare intimamente il campione finale, sia per via meccanica, sia a
mano. Dividere in due porzioni uguali (se possibile, col metodo dei quarti).
Conservare una delle due porzioni in un recipiente appropriato pulito ed
asciutto, a chiusura ermetica, e preparare l'altra prozione, o parte rappresen-
tativa di essa, dell'entità di almeno 100 g, nel modo qui di seguito indicato.
3.1. Alimenti che possono essere macinati tal quali
Salvo specifiche indicazioni dei metodi di analisi, setacciare la totalità del
campione su un setaccio a maglie quadrate di un millimetro di lato
(conforme alla raccomandazione ISO R 565) dopo averlo frantumato se
necessario. Evitare ogni frantumazione superflua.
Mescolare il campione setacciato e raccoglierlo in un recipiente appropriato
pulito ed asciutto, provvisto di chiusura ermetica. Mescolare di nuovo
immediatamente prima di prelevare l'aliquota per l'analisi.
3.2. Alimenti che possono essere macinati dopo essiccazione
Salvo specifiche indicazioni dei metodi di analisi, essiccare il campione, in
modo da portarne il contenuto di umidità all'8-12 %, applicando il procedi-
mento di preessiccazione indicato al punto 4.3 del metodo di dosaggio
dell'umidità menzionato al precedente punto 2. Procedere poi come indicato
al punto 3.1.1971L0250 — IT — 19.08.1981 — 001.001 — 3
(1) GU n. L 102 del 15. 4. 1976, pag. 1.
(2) GU n. L 279 del 20. 12. 1971, pag. 7.
(3) GU n. L 83 del 30. 3. 1973, pag. 35.▼M1
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3.3. Alimenti liquidi o semiliquidi
Raccogliere il campione in un recipiente appropriato pulito ed asciutto,
provvisto di chiusura ermetica. Mescolarlo intimamente, immediatamente
prima di prelevare le aliquote per l'analisi.
3.4. Altri alimenti
Se il campione non può essere preparato secondo uno dei procedimenti qui
sopra indicati, applicare qualsiasi altro procedimento di preparazione appro-
priato ad ottenere aliquote per l'analisi omogenee e rappresentative dei
campioni finali.
4.Conservazione dei campioni
Conservare i campioni a temperatura tale da non alterare la loro composi-
zione. Per i campioni destinati all'analisi di vitamine o di prodotti
particolarmente sensibili alla luce, utilizzare recipienti in vetro bruno.
B. DISPOSIZIONI CONCERNENTI I REATTIVI E L'APPARECCHIATURA
DA UTILIZZARE SECONDO I METODI DI ANALISI
1. Salvo specifiche indicazioni dei metodi di analisi, tutti i reattivi devono
essere di purezza analitica (p.a.). Per l'analisi degli oligoelementi, la
purezza dei reattivi dev'essere controllata con una prova in bianco. A
seconda del risultato ottenuto, può rendersi necessaria una purificazione
supplementare.
2. Le operazioni di dissoluzione, diluizione, risciacquo o lavaggio, menzionate
nei metodi di analisi senza precisazioni sulla natura del solvente o del
diluente, implicano l'impiego di acqua. Di norma, l'acqua deve essere demi-
neralizzata o distillata. In casi particolari, indicati nei metodi di analisi,
essa deve essere sottoposta a procedimenti specifici di purificazione.
3. Tenuto conto dell'abituale equipaggiamento dei laboratori di controllo,
l'apparecchiatura descritta nei metodi di analisi si limita agli strumenti e
agli apparecchi speciali o che impongano esigenze specifiche. Questo mate-
riale deve essere ben pulito, soprattutto per le determinazioni di quantità
assai basse di sostanze.
C. APPLICAZIONE DEI METODI DI ANALISI ED ESPRESSIONE DEI
RISULTATI
1. In generale, per la determinazione di una sostanza degli alimenti per
animali è stabilito un solo metodo di analisi. Qualora sia fissato più di un
metodo, il metodo applicato dal laboratorio di controllo deve essere
menzionato sul bollettino di analisi.
2. Sul bollettino di analisi dev'essere indicato il valore medio ottenuto in base
ad almeno due determinazioni, effettuate su aliquote distinte di sostanza, la
cui ripetibilità sia soddisfacente.
Il risultato deve essere espresso secondo le indicazioni fornite nei metodi di
analisi con un numero appropriato di cifre significative e se necessario
dev'essere corretto in funzione del contenuto di umidità del campione finale
prima della preparazione1971L0250 — IT — 19.08.1981 — 001.001 — 4
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2.DETERMINAZIONE DELL'ACIDO CIANIDRICO
1.Scopo e campo di applicazione
Il metodo permette la determinazione dell'acido cianidrico libero e dell'acido
cianidrico combinato sotto forma di glucosidi nei mangimi e, particolar-
mente, nei prodotti provenienti dai semi di lino, dalla farina di manioca e
da alcune specie di fagioli.
2.Principio
Il campione viene posto in sospensione acquosa. L'acido cianidrico viene
liberato dall'azione dei fermenti. L'acido cianidrico libero, trascinato dal
vapore d'acqua, viene raccolto in un sufficiente volume di una soluzione di
nitrato d'argento acidificata. Il cianuro d'argento viene separato per filtrazione
e l'eccesso di nitrato d'argento viene titolato mediante una soluzione di tiocia-
nato d'ammonio.
3.Reattivi
3.1. Sospensione di mandorle dolci: macinare 20 mandorle dolci mondate
con ml 100 di acqua da 37 a 40 ºC. Verificare su ml 10 di tale sospen-
sione l'assenza di acido cianidrico, per mezzo di una cartina al picrato
sodico o effettuando un saggio in bianco come indicato al punto 5.,
ultimo paragrafo.
3.2. Soluzione al 10 % (p/v) d'acetato di sodio, neutra alla fenolftaleina
3.3. Antischiuma (p.e. silicone)
3.4. Acido nitrico, d: 1,40
3.5. Soluzione di nitrato d'argento 0,02 N
3.6. Soluzione di tiocianato d'ammonio 0,02 N
3.7. Soluzione satura di solfato ferrico ammonico
3.8. Ammoniaca, d: 0,958.
4.Apparecchiatura
4.1. Stufa munita di termostato regolato a 38 ºC
4.2. Apparecchio di distillazione in corrente di vapore d'acqua, munito di un
refrigerante con un tubo di rallungo curvato
4.3. Palloni a fondo piatto da ml 1000 a tappo smerigliato
4.4. Bagno d'olio4.5. Burette graduate a ml 1/20.
5.Modo di operare
Mettere in un pallone a fondo piatto da ml 1000, g 20 del campione, pesati
con l'approssimazione di mg 5, con ml 50 di acqua e ml 10 di sospensione di
mandorle dolci (3.1). Tappare il pallone e mantenerlo per 16 ore nella stufa a
38 ºC. Raffreddare alla temperatura ambiente ed aggiungere ml 80 di acqua,
ml 10 di soluzione d'acetato di sodio (3.2) ed una goccia di antischiuma
(3.3).
Collegare il pallone all'apparecchio di distillazione a corrente di vapore e
porlo in un bagno d'olio preventivamente portato ad una temperatura legger-
mente superiore a 100 ºC. Distillare ml 200 a 300 di liquido, facendo passare
nel pallone una forte corrente di vapore, scaldando lentamente il bagno
d'olio. Raccogliere il distillato in un erlenmeyer, porlo al riparo dalla luce e
contenente ml 50 esatti di soluzione di nitrato d'argento 0,02 N (3.5) e ml 1
d'acido nitrico (3.4).
Sorvegliare che il tubo curvato del refrigerante resti immerso nella soluzione
di nitrato d'argento. Travasare il contenuto dell'erlenmeyer in un pallone
tarato da ml 500, portare al volume con acqua, mescolare e filtrare. Prelevare
ml 250 del filtrato, aggiungervi ml 1 di solfato ferrico ammonico (3.7) e tito-
lare di ritorno l'eccesso di nitrato d'argento con la soluzione di tiocianato
d'ammonio 0,02 N (3.6) proveniente da una buretta graduata a ml 1/20.
Effettuare, eventualmente,una prova in bianco , impiegando lo stesso modo
d'operare, su una quantità di ml 10 di sospensione di mandorle dolci (3.1)
in assenza del campione da analizzare.1971L0250 — IT — 19.08.1981 — 001.001 — 5
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6.Calcolo dei risultati
Se nel saggio in bianco ci è stato un consumo di soluzione di nitrato
d'argento 0,02 N, sottrarre questa quantità dal volume impiegato per il distil-
lato del campione.
1 ml di AgNO30,02 N corrisponde a mg 0,54 di HCN. Esprimere il risultato
in per cento del campione.
7.Osservazioni
Se il campione contiene una notevole quantità di solfuri (p.e. nei fagioli) si
forma un precipitato nero di solfuro d'argento che è filtrato con il deposito di
cianuro d'argento. La formazione di tale precipitato trascina una perdita della
soluzione di nitrato d'argento 0,02 N il cui volume deve essere detratto dal
volume preso in considerazione per il calcolo del contenuto in HCN. A tale
scopo procedere come appresso indicato:
Trattare il deposito rimasto sul filtro con ml 50 di ammoniaca (3.8) per scio-
gliere il cianuro d'argento. Lavare il residuo con ammoniaca diluita e
procedere alla determinazione del suo contenuto in argento. Convertire il
valore ottenuto in ml di soluzione di nitrato d'argento 0,02 N.
Il contenuto di acido cianidrico può essere egualmente determinato per tito-
lazione del filtrato ammoniacale, acidificato con acido nitrico.
3.DETERMINAZIONE DEL CALCIO
1.Scopo e campo di applicazione
Determinazione del contenuto di calcio totale negli alimenti per gli animali.
2.Principio
Il campione viene incenerito, le ceneri sono trattate con acido cloridrico ed il
calcio viene precipitato sotto forma di ossalato di calcio. Dopo soluzione del
precipitato in acido solforico, l'acido ossalico formatosi è titolato mediante
una soluzione di permanganato di potassio.
3.Reattivi
3.1. Acido cloridrico p.a., d: 1,143.2. Acido nitrico p.a., d: 1,403.3. Acido solforico p.a., d: 1,13
3.4. Ammoniaca p.a., d: 0,98
3.5. Soluzione satura a freddo d'ossalato d'ammonio p.a.3.6. Soluzione al 30 % (p/v) d'acido citrico p.a.3.7. Soluzione al 5 % (p/v) di cloruro d'ammonio p.a.3.8. Soluzione allo 0,04 % (p/v) di verde di bromocresolo
3.9. Soluzione di permanganato di potassio 0,1 N.
4.Apparecchiatura
4.1. Forno elettrico a muffola, a circolazione d'aria, munito di termostato4.2. Crogioli da incenerimento in platino, quarzo o porcellana
4.3. Crogioli filtranti in vetro di porosità G
4.
5.Modo di operare
Pesare, con la precisione di mg 1, g 5 circa di campione (o più se neces-
sario), calcinarli a 550 ºC e trasferire le ceneri in un becher da ml 250.
Aggiungere ml 40 di acido cloridrico (3.1), ml 60 di acqua ed alcune gocce
di acido nitrico (3.2). Portare all'ebollizione e mantenerla per 30 minuti.
Raffreddare, trasferire quantitativamente la soluzione in un pallone tarato di
ml 250. Lavare il becher, completare il volume con acqua, mescolare e
filtrare.
Prelevare con la pipetta, secondo il contenuto presunto di calcio, una quantità
aliquota contenente da mg 10 a 40 di calcio ed introdurla in un becher da ml
250. Aggiungere ml 1 di soluzione di acido citrico (3.6) e ml 5 di soluzione
di cloruro d'ammonio (3.7). Completare a circa ml 100 con acqua. Portare
all'ebollizione, aggiungere da 8 a 10 gocce di soluzione di verde di bromo-1971L0250 — IT — 19.08.1981 — 001.001 — 6
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cresolo (3.8) e ml 30 di soluzione calda di ossalato d'ammonio (3.5). Se
compare un precipitato, ridiscioglierlo mediante l'aggiunta di alcune gocce
di acido cloridrico (3.1).
Neutralizzare in seguito molto lentamente con ammoniaca (3.4), agitando
continuamente, fino ad ottenere un pH dell'ordine da 4,4 a 4,6 (viraggio
dell'indicatore). Porre il becher in un bagno d'acqua bollente e mantenervelo
per 30 minuti per lasciare depositare il precipitato formatosi. Ritirare il
becher dal bagno d'acqua. Lasciare riposare un'ora e filtrare su un crogiolo
filtrante G4. Lavare il becher ed il crogiolo con acqua, fino all'eliminazione
dell'eccesso di ossalato d'ammonio. (L'assenza di cloruri nelle acque di
lavaggio indica l'efficacia di quest'ultimo).
Disciogliere il precipitato su un filtro con ml 50 di acido solforico (3.3)
caldo. Lavare il crogiolo con acqua calda e portare il filtrato a ml 100 circa.
Portare la temperatura da 70 a 80 ºC e titolare, goccia a goccia, con la solu-
zione di permanganato di potassio (3.9) sino ad ottenere una colorazione rosa
persistente per 1 minuto.
6.Calcolo dei risultati
1 ml di permanganato di potassio 0,1 N corrisponde a mg 2,004 di calcio.
Esprimere il risultato in per cento del campione.
7.Osservazioni
7.1. Per le piccolissime quantità in calcio, procedere come indicato qui
appresso: Filtrare il precipitato di ossalato di calcio su un filtro di carta
senza ceneri. Dopo lavaggio, essiccare il filtro e calcinarlo a 550 ºC in
un crogiolo di platino. Riprendere il residuo con alcune gocce di acido
solforico (3.3), evaporare a secco, calcinare di nuovo a 550 ºC e pesare.
Sia p il peso di solfato di calcio ottenuto, il contenuto in calcio della
parte aliquota prelevata = p × 0,2944.
7.2. Se il campione è costituito soltanto da sostanze minerali, eseguire la sua
dissoluzione con acido cloridrico, senza preventivo incenerimento. Per i
prodotti, come i fosfati alluminocalcici, difficilmente solubili negli acidi,
procedere ad una fusione alcalina prima della dissoluzione. A tale scopo
mescolare intimamente, in un crogiolo di platino, il quantitativo di pro-
dotto su cui si opera, con circa 5 volte il suo peso di una miscela, a parti
uguali, di carbonato di potassio e di carbonato di sodio. Riscaldare con
precauzione fino a fusione completa della mescolanza. Dopo raffredda-
mento, disciogliere mediante acido cloridrico.
7.3. Se il contenuto in magnesio del campione è elevato, procedere ad una
seconda precipitazione dell'ossalato di calcio.
4.DETERMINAZIONE DEI CARBONATI
1.Scopo e campo di applicazione
Il metodo permette la determinazione dei carbonati, convenzionalmente
espressi in carbonato di calcio, nella maggior parte degli alimenti per gli
animali. In alcuni casi (ad esempio carbonato di ferro) bisogna impiegare un
metodo particolare.
2.Principio
I carbonati sono decomposti dall'acido cloridrico: l'anidride carbonica liberata
viene raccolta in un tubo graduato ed il suo volume è comparato a quello
sprigionato, nelle medesime condizioni, da una quantità nota di carbonato di
calcio p.a.
3.Reattivi
3.1. Acido cloridrico, d: 1,103.2. Carbonato di calcio p.a.3.3. Acido solforico 0,1 N circa, colorato con rosso di metile.
4.Apparecchiatura
Apparecchio di Scheibler-Dietrich (v. schema) o apparecchio equivalente.
5.Modo di operare
Secondo il contenuto in carbonati del campione, pesare una quantità di pro-
dotto come appresso indicato:1971L0250 — IT — 19.08.1981 — 001.001 — 7
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g 0,5 per i prodotti contenenti da 50 a 100 % di carbonati, espressi in
carbonato di calcio;
g 1 per i prodotti contenenti da 10 a 50 % di carbonati, espressi in
carbonato di calcio;
g da 2 a 3 in tutti gli altri casi.
Introdurre la quantità di sostanza da analizzare nello speciale recipiente (4)
dell'apparecchio, provvisto di un piccolo tubo in materiale infrangibile,
contenente ml 10 di acido cloridrico (3.1), e raccordare il recipiente all'appa-
recchio. Girare il rubinetto a tre vie (5), in modo che il tubo (1) comunichi
con l'esterno. Per mezzo del tubo mobile (2), che è riempito di acido solfo-
rico colorato (3.3) ed è collegato al tubo graduato (1), portare il livello del
liquido alla graduazione zero. Girare il rubinetto (5) in modo da far comuni-
care i tubi (1) e (2) e verificare se il livello è a zero.
Versare lentamente l'acido cloridrico (3.1) sulla sostanza inclinando il reci-
piente (4). Pareggiare la pressione abbassando il tubo (2). Agitare il
recipiente (4) fino alla cessazione completa dello sviluppo dell'anidride
carbonica.
Ristabilire la pressione riportando il liquido allo stesso livello nei tubi (1) e
(2). Eseguire la lettura dopo qualche minuto quando il volume gassoso è
divenuto costante.
Effettuare nelle stesse condizioni un saggio comparativo su g 0,5 di carbo-
nato di calcio (3.2).
6.Calcolo dei risultati
Il contenuto in g di carbonati, espressi in carbonato di calcio, per cento
grammi del campione, è dato dal rapporto:
V/C1100
T/C12P
nel quale V = ml di CO2liberati dalla quantità di sostanza sottoposta all'a-
nalisi
T = ml di CO2liberati da g 0,5 di CaCO3p.a.
P = peso in g della sostanza sottoposta ad analisi.
7.Osservazioni
7.1. Quando la quantità di sostanza sottoposta all'analisi è superiore a g 2,
introdurre preventivamente ml 15 di acqua distillata nel recipiente (4) e
mescolare prima di cominciare il saggio. Impiegare il medesimo volume
d'acqua per il saggio comparativo.
7.2. Quando si utilizza un apparecchio di volume diverso da quello di Schei-
bler-Dietrich, apportare le conseguenti variazioni alla quantità di
sostanza su cui si opera, alla quantità di carbonato di calcio nel saggio-
tipo ed ai calcoli dei risultati.1971L0250 — IT — 19.08.1981 — 001.001 — 8
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APPARECCHIO SCHEIBLER-DIETRICH PER IL DOSAGGIO DELLA CO2
(Misure in mm)
5.DETERMINAZIONE DELLE CENERI GREZZE
1.Scopo e campo di applicazione
Il metodo permette di determinare il tenore di ceneri grezze negli alimenti
per gli animali.
2.Principio
Il campione è incenerito alla temperatura di 550 ºC; il residuo viene pesato.
3.Reattivi
Soluzione al 20 % (p/v) di nitrato d'ammonio.
4.Apparecchiatura
4.1. Piastra riscaldante
4.2. Forno a muffola elettrico, munito di termostato
4.3. Crogioli da incenerimento in platino o in lega di platino e oro (10 % di
Pt, 90 % di Au), rettangolari (mm 60 × 40 × 25) o circolari (diametro di
mm da 60 a 75, altezza di mm da 20 a 25).1971L0250 — IT — 19.08.1981 — 001.001 — 9
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5.Modo di operare
Pesare con l'approssimazione di mg 1 g 5 circa (o g 2,5 per i prodotti aventi
tendenza a rigonfiare) del campione in un crogiolo per incenerimento preven-
tivamente calcinato e tarato. Porre il crogiolo sopra la piastra riscaldante
elettrica e scaldare progressivamente fino a carbonizzazione della sostanza.
Introdurre il crogiolo in un forno a muffola regolato a 550 ºC ± 5 ºC. Mante-
nere a tale temperatura fino ad ottenere ceneri bianche, grigie chiare o
rossastre, apparentemente esenti di particelle carboniose. Porre il crogiolo in
un essiccatore, lasciare raffreddare e pesare immediatamente.
6.Calcolo dei risultati
Calcolare il peso del residuo deducendone la tara. Esprimere il risultato in
per cento del campione.
7.Osservazioni
7.1. Incenerire i prodotti di difficile incenerimento dopo una prima incenera-
zione di almeno 3 ore, raffreddare e addizionare alcune gocce di una
soluzione al 20 % di nitrato d'ammonio (prudentemente, per evitare la
proiezione e l'aggregazione delle ceneri). Proseguire la calcinazione
dopo essiccazione nella stufa. Ripetere eventualmente l'operazione fino
ad incenerimento completo.
7.2. Per i prodotti che resistono al trattamento indicato in 7.1 operare come
segue: dopo un incenerimento di 3 ore riprendere le ceneri con acqua
distillata calda e filtrare su un piccolo filtro senza ceneri. Incenerire il
filtro ed il suo contenuto nello stesso crogiolo. Aggiungere il filtrato
nel crogiolo raffreddato, portare a secco, incenerire e pesare.
7.3. Nel caso degli oli e dei grassi , pesare esattamente una quantità di pro-
dotto dell'ordine di g 25 in un crogiolo di capacità appropriata.
Carbonizzare accendendo il prodotto per mezzo di una miccia di carta
da filtro senza ceneri. Dopo combustione, umettare con la quantità
minima necessaria d'acqua. Essiccare ed incenerire come indicato in 5.
6.DETERMINAZIONE DELLE CENERI INSOLUBILI IN ACIDO
CLORIDRICO
1.Scopo e campo di applicazione
Il metodo permette di determinare il contenuto in sostanze minerali insolubili
in acido cloridrico negli alimenti per gli animali. Due metodi sono previsti in
dipendenza della natura del campione.
1.1. Metodo A: applicabile agli alimenti semplici di origine organica ed alla
maggior parte degli alimenti composti;
1.2. Metodo B: applicabile ai composti ed alle miscele minerali oltre che agli
alimenti composti il cui contenuto di insolubile in acido cloridrico,
determinato secondo il metodo A, è risultato superiore all'1 %.
2.Principio
2.1. Metodo A: il campione è incenerito e le ceneri sono trattate all'ebolli-
zione con acido cloridrico e il residuo insolubile viene filtrato e pesato.
2.2. Metodo B: il campione è trattato con acido cloridrico. La soluzione è
filtrata, il residuo è incenerito e le ceneri ottenute vengono trattate
come nel metodo A.
3.Reattivi
3.1. Acido cloridrico 3 N.3.2. Soluzione al 20 % (p/v) di acido tricloroacetico
3.3. Soluzione all'1 % (p/v) di acido tricloroacetico
4.Apparecchiatura
4.1. Piastra riscaldante4.2. Forno elettrico a muffola, munito di termostato4.3. Crogioli da incenerimento in platino o in lega di platino e oro (10 % di
Pt, 90 % di Au), rettangolari (60 × 40 × 25 mm) o rotondi (diametro: da
60 a 75 mm, altezza: da 20 a 25 mm).1971L0250 — IT — 19.08.1981 — 001.001 — 10
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5.Modo di operare
5.1. Metodo A
Incenerire la sostanza da analizzare secondo il modo di operare descritto
per la determinazione delle ceneri grezze. Si possono egualmente utiliz-
zare le ceneri ottenute in questa determinazione.
Trasferire le ceneri in un becher da ml 250 a 400, mediante ml 75
d'acido cloridrico 3 N (3.1). Portare con precauzione a lenta ebollizione
che viene mantenuta per 15 minuti. Filtrare la soluzione calda su un
filtro di carta senza ceneri e lavare il residuo con acqua calda sino a
scomparsa della reazione acida. Essiccare il filtro contenente il residuo
ed incenerire in un crogiolo tarato a temperatura di almeno 550 ºC e non
superiore a 700 ºC. Raffreddare in essiccatore e pesare.
5.2. Metodo B
Pesare con l'approssimazione di mg 1 g 5 di campione ed introdurli in
un becher da ml 250 a 400. Aggiungere successivamente ml 25 d'acqua
e ml 25 d'acido cloridrico 3 N (3.1), agitare sino alla cessazione dellaeffervescenza. Aggiungere ancora ml 50 d'acido cloridrico 3 N (3.1).
Attendere la fine di nuova effervescenza e porre il becher in un bagno
di acqua bollente e tenervelo per la durata di 30 minuti o più, se neces-
sario, al fine d'idrolizzare completamente l'amido eventualmente
presente.
Filtrare a caldo su di un filtro senza ceneri e lavare il filtro mediante ml
50 d'acqua calda. Porre il residuo ed il filtro in una capsula da inceneri-
mento (vedi osservazione 7). Porre il filtro contenente il residuo in un
crogiolo da incenerimento, essiccare ed incenerire a temperatura non
inferiore a 550 ºC e non superiore a 700 ºC. Portare infine le ceneri in
un becher della capacità di ml 250 a 400 mediante ml 75 d'acido clori-
drico 3 N (3.1) e continuare come descritto in 5.1 secondo paragrafo.
6.Calcolo dei risultati
Calcolare il peso del residuo deducendone la tara. Esprimere il risultato in
per cento del campione.
7.Osservazione
Se la filtrazione si compie difficilmente, ricominciare la determinazione
sostituendo i ml 50 di acido cloridrico 3 N con ml 50 d'acido tricloroacetico
al 20 % (3.2) lavando il filtro mediante una soluzione calda di acido triclo-
roacetico all'1 % (3.3).
7.DETERMINAZIONE DEL CLORO DEI CLORURI
1.Scopo e campo di applicazione
Il metodo permette di determinare il cloro dei cloruri solubili in acqua,
convenzionalmente espresso in cloruro di sodio. Esso è applicabile a tutti
gli alimenti per gli animali.
2.Principio
I cloruri vengono disciolti in acqua. Se il prodotto contiene sostanze orga-
niche, si procede ad una chiarificazione. La soluzione è leggermente
acidificata con acido nitrico ed i cloruri vengono precipitati sotto forma di
cloruro d'argento a mezzo di una soluzione di nitrato d'argento. L'eccesso di
nitrato d'argento è titolato mediante una soluzione di solfocianuro
d'ammonio, secondo il metodo Volhard.
3.Reattivi
3.1. Soluzione titolata di solfocianuro d'ammonio 0,1 N
3.2. Soluzione titolata di nitrato d'argento 0,1 N3.3. Soluzione satura di solfato doppio ferrico ammonico3.4. Acido nitrico, d: 1,383.5. Etere dietilico p.a.3.6. Acetone p.a.3.7. Soluzione di Carrez I:1971L0250 — IT — 19.08.1981 — 001.001 — 11
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disciogliere in acqua g 24,0 d'acetato di zinco, Zn (CH3COO)2·2H2Oe
g 3 di acido acetico glaciale. Portare a ml 100 con acqua.
3.8. Soluzione di Carrez II: disciogliere in acqua g 10,6 di ferrocianuro di
potassio K4[FE(CN)6]·3H2O e portare a ml 100 con acqua.
3.9. Carbone attivo p.a., esente da cloruri e non assorbente cloro.
4.Apparecchiatura
Miscelatore rotativo a capovolgimento: da circa 35 a 40 giri al minuto.
5.Modo di operare
5.1. Preparazione della soluzione
Secondo la natura del campione preparare una soluzione come indicato
in 5.1.1, 5.1.2 o 5.1.3.
Effettuare, per paragone, un saggio in bianco , esente di campione da
analizzare.
5.1.1. Campioni esenti da sostanze organiche
Pesare con l'approssimazione di mg 1 un quantitativo del
campione (non più di g 10) e non contenente più di g 3 di cloro
sotto forma di cloruri ed introdurlo in un matraccio tarato da ml
500 con ml 400 di acqua a 20 ºC circa. Mescolare per 30 minuti
col miscelatore rotativo, portare a volume, mescolare e filtrare.
5.1.2. Campioni contenenti materie organiche,ad eccezione dei prodotti
riportati in 5.1.3
Pesare con l'approssimazione di mg 1 un quantitativo di campione
di circa g 5 ed introdurlo con un grammo di carbone attivo in un
matraccio tarato da ml 500. Aggiungere ml 400 di acqua a circa
20 ºC e ml 5 di soluzione di Carrez I (3.7), agitare ed aggiungere
ml 5 di soluzione di Carrez II (3.8). Agitare per 30 minuti con
l'agitatore rotativo, portare a volume, mescolare e filtrare.
5.1.3. Alimenti cotti,panelli e farina di lino,prodotti ricchi di farina di
lino ed altri prodotti ricchi di mucillaggini o di sostanze colloi-
dali (per esempio amido destrinizzato)
Preparate la soluzione come indicato in 5.1.2 ma senza filtrare.
Dopo decantazione (se necessario centrifugare) prelevare ml 100
della parte superiore della soluzione e porli in un pallone tarato
da ml 200, mescolare con acetone (3.6) e portare a volume con
acetone, agitare e filtrare.
5.2. Titolazione
Porre in un Erlenmeyer, con la pipetta, da ml 25 a 100 del filtrato
(secondo il contenuto presunto in cloro) ottenuto secondo 5.1.1, 5.1.2 o
5.1.3. La parte aliquota non deve contenere più di mg 150 di cloro (Cl).
Diluire, se necessario, con acqua distillata fino ad almeno ml 50,
aggiungere ml 5 di acido nitrico (3.4), ml 20 di soluzione di solfato
doppio ferrico ammonico (3.3) e 2 gocce di soluzione di solfocianurodi ammonio (3.1) proveniente dalla buretta riempita a questo scopo
fino al tratto zero. Far gocciolare in seguito da una buretta la soluzione
di nitrato d'argento (3.2) fino ad averne un eccesso di ml 5. Aggiungere
ml 5 di etere dietilico (3.5) ed agitare fortemente per far coagulare il
precipitato.
Titolare l'eccesso di nitrato d'argento con la soluzione di solfocianuro
d'ammonio (3.1) fino a viraggio rosso-bruno, persistente per 1 minuto.
6.Calcolo dei risultati
La quantità di cloro (p) espresso in cloruro di sodio, presente nel volume del
filtrato prelevato per la titolazione, è data dalla formula seguente:
p = mg 5,845 (V
1−V2)
nella quale V1= ml di soluzione di nitrato d'argento 0,1 N aggiunti
V2= ml di soluzione di solfocianuro di ammonio 0,1 N utiliz-
zati per la titolazione.
Qualora il saggio in bianco indica un consumo di soluzione di nitrato
d'argento 0,1 N sottrarre questo valore dal volume (V1−V2).
Esprimere il risultato in per cento del campione.1971L0250 — IT — 19.08.1981 — 001.001 — 12
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7.Osservazioni
7.1. La titolazione può ugualmente essere fatta con il metodo potenziome-
trico;
7.2. Per i prodotti molto ricchi in sostanze grasse, procedere ad uno sgras-
saggio preliminare con etere dietilico o etere di petrolio;
7.3. Per le farine di pesce, la titolazione può essere effettuata con il metodo
di Mohr.
8.DETERMINAZIONE DELL'ESSENZA DI SENAPA
1.Scopo e campo di applicazione
Il metodo permette di determinare il quantitativo di essenze di senapa, aspor-
tabili con il vapore d'acqua, espresse in isotiocianato d'allile, dai panelli delle
specie Brassica e Sinapis e dagli alimenti composti che le contengono.
2.Principio
In una soluzione acquosa dell'alimento, le essenze di senapa sono liberate per
azione dei fermenti, trasportate per distillazione in presenza di etanolo e
raccolte nell'ammoniaca diluita. La soluzione è trattata a caldo con un
volume determinato in soluzione di nitrato d'argento, raffreddata e filtrata.
L'eccesso di nitrato d'argento viene titolato con una soluzione di tiocianato
d'ammonio.
3.Reattivi
3.1. Senapa bianca (Sinapis alba)
3.2. Etanolo al 95 o 96 % (v/v)3.3. Emulsione antischiuma (p.e. silicone)3.4. Ammoniaca, d: 0,958
3.5. Soluzione di nitrato d'argento 0,1 N
3.6. Soluzione di tiocianato d'ammonio 0,1 N3.7. Acido nitrico, d: 1,403.8. Soluzione satura di solfato ferrico ammonico
4.Apparecchiatura
4.1. Pallone a fondo piatto, da ml 500, a tappo smerigliato
4.2. Apparecchio per distillazione con refrigerante e dispositivo che permette
di evitare il trascinamento di goccioline.
5.Modo di operare
Pesare, con l'approssimazione di mg 1, g 10 di campione ed introdurli in un
pallone di ml 500 a fondo piatto, aggiungendo g 2 di senapa bianca fine-
mente macinata (sorgente di fermento) (3.1) e ml 200 d'acqua a 20 ºC.
Tappare il pallone e mantenerlo per circa 2 ore a 20 ºC agitando frequente-
mente. Aggiungere ml 40 di etanolo (3.2) ed una goccia d'emulsione
antischiuma (3.3). Distillare circa ml 150 di liquido e raccogliere il distillato
in un pallone tarato, da ml 250, contenente ml 20 d'ammoniaca (3.4) facendo
attenzione che l'estremità del refrigerante peschi nel liquido. Aggiungere alla
soluzione ammoniacale ml 50 di soluzione di nitrato d'argento 0,1 N (3.5).
Porre sul pallone tarato un piccolo imbuto e scaldare la miscela per 1 ora
su un bagno d'acqua bollente. Lasciar raffreddare, portare al volume con
acqua, mescolare e filtrare.
Prelevare ml 100 del filtrato limpido, aggiungervi ml 5 d'acido nitrico (3.7) e
ml 5 circa di soluzione di solfato ferrico ammonico (3.8). Titolare di ritorno
l'eccesso di nitrato d'argento con la soluzione di tiocianato d'ammonio 0,1 N
(3.6).
Effettuare un saggio in bianco , con lo stesso modo di operare, impiegando g
2 di senapa bianca finemente macinata e non aggiungendo il campione da
analizzare.
6.Calcolo dei risultati
Sottrarre il volume di soluzione di nitrato d'argento 0,1 N, consumato nel
saggio in bianco, da quello consumato per la soluzione del campione. Il1971L0250 — IT — 19.08.1981 — 001.001 — 13
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valore così ottenuto dà il numero dei millilitri di soluzione di nitrato
d'argento 0,1 N consumati per l'essenza di senapa della quantità di campione
posta in analisi.
1 ml di AgNO30,1 N corrisponde a mg 4,956 di isotiocianato d'allile. Espri-
mere il risultato in per cento del campione.
9.DETERMINAZIONE DEL LATTOSIO
1.Scopo e campo di applicazione
Il metodo permette di determinare il contenuto di lattosio negli alimenti che
non contengono più di 0,5 %.
2.Principio
Gli zuccheri sono sciolti nell'acqua. La soluzione è sottoposta alla fermenta-
zione dal lievito Saccaromyces cerevisiae che lascia intatto il lattosio. Dopo
chiarificazione e filtrazione il contenuto in lattosio del filtrato è determinato
con il metodo di Luff-Schoorl.
3.Reattivi
3.1. Sospensione di Saccaromyces cerevisiae: porre in sospensione g 25 di
lievito fresco in ml 100 di acqua. La sospensione si conserva in frigori-
fero per una settimana al massimo.
3.2. Soluzione di Carrez I:
sciogliere nell'acqua g 24 d'acetato di zinco Zn (CH3COO)2·2H2Oeg
3 d'acido acetico glaciale. Portare a ml 100 con acqua.
3.3. Soluzione di Carrez II: sciogliere nell'acqua g 10,6 di ferrocianuro di
potassio K4[Fe(CN6)]·3 H2O. Portare a ml 100 con acqua.
3.4. Reattivo di Luff-Schoorl:
Aggiungere, agitando sempre lentamente, la soluzione d'acido citrico
(3.4.2) alla soluzione di carbonato di sodio (3.4.3). Aggiungere quindi
la soluzione di solfato di rame (3.4.1) e portare al volume di 1 1 con
acqua. Lasciar riposare una notte e filtrare. Controllare la normalità del
reattivo così ottenuto (Cu 0,1 N; Na2CO32N). Il pH della soluzione
deve essere di circa 9,4.
3.4.1. Soluzione di solfato di rame: Sciogliere g 25 di solfato di rame
p.a., CuSO4·5 H2O, esente da ferro, in ml 100 d'acqua.
3.4.2. Soluzione d'acido citrico: Sciogliere g 50 d'acido citrico p.a.,
C6H8O7·H2O, in ml 50 d'acqua.
3.4.3. Soluzione di carbonato di sodio: Sciogliere g 143,8 di carbonato
di sodio anidro p.a. in circa ml 300 d'acqua calda. Lasciar raffred-
dare.
3.5. Granelli di pietra pomice bolliti nell'acido cloridrico, lavati in acqua ed
essiccati.
3.6. Soluzione al 30 % (p/v) di ioduro di potassio3.7. Acido solforico 6 N
3.8. Soluzione di tiosolfato di sodio 0,1 N
3.9. Soluzione d'amido: aggiungere una miscela di g 5 d'amido solubile in ml
30 d'acqua a l 1 d'acqua bollente. Far bollire per 3 minuti, lasciar
raffreddare, aggiungere eventualmente mg 10 di ioduro di mercurio,
quale agente conservatore.
4.Apparecchiatura
Bagno d'acqua munito di termostato, regolato da 38 a 40 ºC.
5.Modo di operare
Pesare, con l'approssimazione di mg 1, g 1 del campione ed introdurlo in un
pallone tarato da ml 100. Aggiungere ml 25 a 30 d'acqua. Porre il pallone per
30 min. in un bagno d'acqua bollente e raffreddare poi a circa 35 ºC. Aggiun-
gere ml 5 di sospensione di lievito (3.1), mescolare. Lasciar riposare il
pallone per 2 ore in un bagno d'acqua alla temperatura da 38 a 40 ºC.
Raffreddare quindi sino a circa 20 ºC.1971L0250 — IT — 19.08.1981 — 001.001 — 14
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Aggiungere ml 2,5 di soluzione di Carrez I (3.2) ed agitare per 30 sec.;
aggiungere poi ml 2,5 di soluzione di Carrez II (3.3) ed agitare nuovamente
per 30 sec. Portare a ml 100 conacqua, mescolare e filtrare. Prelevare con la
pipetta un quantitativo di filtrato non eccedente ml 25 e contenente da mg 40
a 80 di lattosio. Se necessario completare a ml 25 con acqua ed introdurla in
un matraccio di erlenmeyer da ml 300.
Procedere nello stesso modo ad un saggio in bianco con ml 5 di sospensione
di lievito (3.1).
Determinare come segue il contenuto di lattosio secondo Luff-Schoorl.
Aggiungere esattamente ml 25 del reattivo di Luff-Schoorl (3.4) e due
granelli di pietra pomice (3.5). Riscaldare agitando a mano, su una fiamma
libera di media altezza e portare il liquido all'ebollizione in circa 2 min.
Porre immediatamente l'erlenmeyer su una tela metallica, provvista di uno
schermo di amianto munito di un foro del diametro di circa cm 6, sulla quale
è stata preventivamente accesa una fiamma. Questa è regolata in modo taleche soltanto il fondo dell'erlenmeyer venga riscaldato. Adattare sull'erlen-
meyer un refrigerante a riflusso. A decorrere da tale momento far bollire
per 10 minuti esatti. Raffreddare immediatamente in acqua fredda e dopo
circa 5 min. titolare nel seguente modo:
Aggiungere ml 10 di soluzione di ioduro di potassio (3.6) e, subito dopo, con
molta attenzione (a causa del rischio della formazione di abbondante
schiuma), ml 25 di acido solforico 6 N (3.7). Titolare quindi con la soluzione
di tiosolfato di sodio 0,1 N (3.8) sino all'apparire di una colorazione giallo
opaco, aggiungere l'indicatore all'amido (3.9) e terminare la titolazione.
Effettuare la stessa titolazione su di una mescolanza, esattamente misurata, di
ml 25 di reattivo di Luff-Schoorl (3.4) e ml 25 d'acqua, dopo aver aggiunto
ml 10 di soluzione di ioduro di potassio (3.6) e ml 25 d'acido solforico 6 N
(3.7) senza portare all'ebollizione.
6.Calcolo dei risultati
Stabilire, a mezzo della tabella allegata, la quantità di lattosio in mg corri-
spondente alla differenza dei risultati delle due titolazioni, espressi in ml di
tiosolfato di sodio 0,1 N.
Esprimere il risultato in per cento delle parti di lattosio anidro del campione.
7.Osservazione
Per i prodotti contenenti più del 40 % di zuccheri fermentescibili, utilizzare
più di ml 5 di sospensione di lievito (3.1).
Tabella per ml 25 del reattivo dopo Luff-Schoorl
ml di 0,1 N Na
2S2O3a 2 minuti di riscaldamento, 10 minuti di ebollizione
0,1 N
Na2S2O3Glucosio, fruttosio,
zuccheri invertiti
C6H12O6Lattosio
C12H22O11Maltosio
C12H22O110,1 N
Na2S2O3
ml mg differenza mg differenza mg differenza ml
1 2,4 2,4 3,6 3,7 3,9 3,9 1
2 4,8 2,4 7,3 3,7 7,8 3,9 2
3 7,2 2,5 11,0 3,7 11,7 3,9 3
4 9,7 2,5 14,7 3,7 15,6 4,0 45 12,2 2,5 18,4 3,7 19,6 3,9 5
6 14,7 2,5 22,1 3,7 23,5 4,0 6
7 17,2 2,6 25,8 3,7 27,5 4,0 78 19,8 2,6 29,5 3,7 31,5 4,0 89 22,4 2,6 33,2 3,8 35,5 4,0 9
10 25,0 2,6 37,0 3,8 39,5 4,0 10
11 27,6 2,7 40,8 3,8 43,5 4,0 1112 30,3 2,7 44,6 3,8 47,5 4,1 12
13 33,0 2,7 48,4 3,8 51,6 4,1 13
14 35,7 2,8 52,2 3,8 55,7 4,1 1415 38,5 2,8 56,0 3,9 59,8 4,1 15
16 41,3 2,9 59,9 3,9 63,9 4,1 16
17 44,2 2,9 63,8 3,9 68,0 4,2 1718 47,1 2,9 67,7 4,0 72,2 4,3 1819 50,0 3,0 71,7 4,0 76,5 4,4 19
20 53,0 3,0 75,7 4,1 80,9 4,5 20
21 56,0 3,1 79,8 4,1 85,4 4,6 211971L0250 — IT — 19.08.1981 — 001.001 — 15
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0,1 N
Na2S2O3Glucosio, fruttosio,
zuccheri invertiti
C6H12O6Lattosio
C12H22O11Maltosio
C12H22O110,1 N
Na2S2O3
ml mg differenza mg differenza mg differenza ml
22 59,1 3,1 83,9 4,1 90,0 4,6 22
23 62,2 3,1 88,0 94,6 23
10.DETERMINAZIONE DEL POTASSIO
1.Scopo e campo di applicazione
Il metodo permette di determinare il contenuto di potassio degli alimenti per
gli animali.
2.Principio
Il campione è incenerito e le ceneri sono portate in soluzione nell'acido clori-
drico. Il contenuto di potassio della soluzione è determinato con la fotometria
di fiamma, in presenza di cloruro di cesio e di nitrato di alluminio.
L'aggiunta di tali sostanze elimina, in gran parte, l'effetto degli elementi
perturbatori.
3.Reattivi
3.1. Acido cloridrico p.a., d: 1,123.2. Cloruro di cesio p.a.
3.3. Nitrato d'alluminio Al (NO
3)3·9H2O, chimicamente puro
3.4. Cloruro di potassio p.a., anidro3.5. Soluzione tampone: sciogliere nell'acqua g 50 di cloruro di cesio (3.2) e
g 250 di nitrato d'alluminio (3.3), portare ad 1 l con acqua e mescolare.
Conservare in bottiglie di materia plastica.
3.6. Soluzione campione di potassio: sciogliere in acqua g 1,907 di cloruro
di potassio (3.4) aggiungendovi ml 5 d'acido cloridrico (3.1), portare ad
1 l con acqua e mescolare. Conservare in bottiglie di materia plastica.
ml 1 di questa soluzione contiene mg 1,00 di potassio.
4.Apparecchiatura
4.1. Crogioli da incenerimento in platino, quarzo o porcellana, eventual-
mente muniti di coperchi
4.2. Forno elettrico a muffola, munito di termostato
4.3. Fotometro a fiamma.
5.Modo di operare
5.1. Analisi del campione
Pesare, generalmente, g 10 di campione, con l'approssimazione di mg
10, in un crogiolo da incenerimento ed incenerire la sostanza a 450 ºC
per circa 3 ore. Dopo raffreddamento, trasportare quantitativamente il
residuo dell'incenerimento mediante ml 250 a 300 di acqua, poi con ml
50 d'acido cloridrico (3.1) in un pallone tarato da ml 500. Dopo la
cessazione della eventuale liberazione di anidride carbonica, riscaldare
la soluzione a una temperatura vicina a 90 ºC e mantenervela per 2 ore
mescolando di tanto in tanto. Lasciar raffreddare a temperatura
ambiente, portare al segno con acqua, agitare e filtrare. Introdurre in un
pallone tarato da ml 100 una parte aliquota del filtrato, contenente al
massimo mg 1,0 di potassio, aggiungere ml 10 di soluzione tampone
(3.5), portare al volume con acqua e mescolare. In presenza di più forti
quantitativi di potassio, diluire la soluzione da analizzare in proporzione
adeguata prima dell'aggiunta della soluzione tampone. La tabella che
segue viene data a titolo indicativo per una quantità di g 10, circa, di
sostanza posta in analisi.
Contenuto presunto di potassio
(% k) col campioneFattore di diluizioneParte aliquota, in ml, della solu-
zione
sino a 0,1 — 50
da 0,1 a 0,5 — 101971L0250 — IT — 19.08.1981 — 001.001 — 16
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Contenuto presunto di potassio
(% k) col campioneFattore di diluizioneParte aliquota, in ml, della solu-
zione
da 0,5 a 1,0 — 5
da 1,0 a 5,0 1: 10 10da 5,0 a 10,0 1: 10 5
da 10,0 a 20,0 1: 20 5
Effettuare la misura, con fotometro a fiamma, alla lunghezza d'onda di
nm 768. 768.
Calcolare il risultato mediante la curva di taratura.
5.2. Curva di taratura
Introdurre ml 10 esatti della soluzione campione (3.6) in un pallone
tarato da ml 250, portare al volume con acqua e mescolare. Introdurre,
in palloni tarati da ml 100, rispettivamente ml 5, 10, 15, 20 e 25 di tale
soluzione, esattamente misurati, corrispondenti a quantitativi di potassio
di mg 0,2, 0,4, 0,6, 0,8 e 1,0. Completare la serie con un pallone testi-
mone nel quale non si pone la soluzione campione. Aggiungere ad ogni
pallone ml 10,0 di soluzione tampone (3.5), portare al volume con acqua
e mescolare. Effettuare le misure come indicato in 5.1. Il tracciato della
curva di taratura è, in genere, lineare sino ad una concentrazione di
potassio di mg 1 in ml 100 di soluzione.
6.Calcolo dei risultati
Esprimere i risultati in per cento del campione.
7.Osservazione
L'aggiunta della soluzione tampone (3.5), per eliminare l'interferenza di
elementi perturbatori, non è sempre necessaria.
11.DETERMINAZIONE DEL SODIO
1.Scopo e campo di applicazione
Il metodo permette di determinare il contenuto di sodio degli alimenti per gli
animali.
2.Principio
Il campione è incenerito e le ceneri sono portate in soluzione nell'acido clori-
drico. Il contenuto in sodio della soluzione è determinato con la fotometria di
fiamma in presenza di cloruro di cesio e di nitrato di alluminio. L'aggiunta di
queste due ultime sostanze elimina, in gran parte, l'interferenza degli
elementi perturbatori.
3.Reattivi
3.1. Acido cloridrico p.a., d: 1,12
3.2. Cloruro di cesio, p.a.
3.3. Nitrato d'alluminio Al(NO
3)3·9H2O, chimicamente puro
3.4. Cloruro di sodio p.a., anidro
3.5. Soluzione tampone: sciogliere nell'acqua g 50 di cloruro di cesio (3.2) e
g 250 di nitrato d'alluminio (3.3), portare ad 1 l con acqua e mescolare,
conservare in bottiglie di materia plastica.
3.6. Soluzione campione di sodio: sciogliere in acqua g 2,542 di cloruro di
sodio (3.4), aggiungendovi ml 5 di acido cloridrico (3.1), portare ad 1 l
con acqua e mescolare; conservare in bottiglie di materia plastica. ml 1
di questa soluzione contiene mg 1,00 di sodio.
4.Apparecchiatura
4.1. Crogioli da incenerimento in platino, quarzo o porcellana, eventual-
mente muniti di coperchi
4.2. Forno elettrico a muffola, munito di termostato
4.3. Fotometro a fiamma.1971L0250 — IT — 19.08.1981 — 001.001 — 17
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5.Modo di operare
5.1. Analisi del campione
Pesare, generalmente, g 10 di campione, con l'approssimazione di mg
10, in un crogiolo da incenerimento ed incenerire la sostanza a 450 ºC
per circa 3 ore. Evitare che la sostanza s'infiammi. Dopo raffreddamento
trasferire quantitativamente il residuo dell'incenerimento, mediante ml
250 a 300 di acqua, poi con ml 50 d'acidocloridrico (3.1), in un pallone
tarato da ml 500. Dopo la cessazione della eventuale liberazione di
anidride carbonica, riscaldare la soluzione a una temperatura vicina a
90 ºC e mantenervela per 2 ore mescolando di tanto in tanto. Lasciar
raffreddare a temperatura ambiente, portare al volume con acqua, agitare
e filtrare. Introdurre in un pallone tarato da ml 100, una parte aliquota
del filtrato contenente al massimo mg 1,0 di sodio, aggiungere ml 10,0
di soluzione tampone (3.5), portare al volume con acqua e mescolare,
diluire la soluzione da analizzare in proporzioni adeguate, prima dell'ag-
giunta della soluzione tampone. La tabella che segue viene data a titolo
indicativo per una quantità di g 10 circa di sostanza posta in analisi.
Contenuto presunto di sodio
(% Na) nel campioneFattore di diluizioneParte aliquota, in ml, della solu-
zione
sino a 0,1 — 50
da 0,1 a 0,5 — 10
da 0,5 a 1,0 — 5da 1,0 a 5,0 1: 10 10
da 5,0 a 10,0 1: 10 5
da 10,0 a 20,0 1: 20 5
Effettuare la misura, con fotometro di fiamma, alla lunghezza d'onda di
589 nm.
Calcolare il risultato mediante la curva di taratura.
5.2. Curva di taratura
Introdurre ml 10, esatti, della soluzione campione (3.6), in un pallone
tarato da ml 250, portare al volume con acqua e mescolare. Introdurre,
in palloni tarati da ml 100, rispettivamente ml 5, 10, 15, 20 e 25 di tale
soluzione, esattamente misurati, corrispondenti a quantitativi di sodio di
0,2, 0,4, 0,6, 0,8 ed 1,0 mg. Completare la serie con un pallone testi-
mone nel quale non si pone la soluzione campione. Aggiungere ad
ogni pallone ml 10,0 di soluzione tampone (3.5), portare al volume con
acqua e mescolare. Effettuare le misure come indicato in 5.1. Il tracciato
della curva di taratura è, in genere, lineare sino a una concentrazione di
sodio di mg 1 in ml 100 di soluzione.
6.Calcolo dei risultati
Esprimere i risultati in per cento del campione.
7.Osservazioni
7.1. Per i prodotti il cui contenuto di sodio è superiore al 4 %, è preferibile
incenerire la sostanza per 2 ore in un crogiolo munito di coperchio.
Dopo raffreddamento aggiungere acqua, porre il residuo in sospensione
mediante un filo di platino, essiccare ed incenerire nuovamente per 2
ore in un crogiolo munito di coperchio.
7.2. Se il campione è costituito soltanto di sostanze minerali, eseguire la sua
dissoluzione senza preventiva incenerazione.
12.DETERMINAZIONE DEGLI ZUCCHERI
1.Scopo e campo di applicazione
Il metodo permette di determinare il contenuto in zuccheri riduttori ed in
zuccheri totali dopo inversione, espressi in glucosio e se del caso, in sacca-
rosio per conversione, mediante il fattore 0,95. Il metodo è applicabile
principalmente agli alimenti composti. Particolari modalità sono previste per
altri alimenti. All'occorrenza si doserà separatamente il lattosio e se ne terrà
conto nel calcolo dei risultati.1971L0250 — IT — 19.08.1981 — 001.001 — 18
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2.Principio
Gli zuccheri presenti vengono disciolti nell'etanolo diluito; la soluzione viene
chiarificata con i reattivi di CarrezI e II. Dopo l'eliminaz ione dell'etanolo, le
determinazioni sono effettuate, prima e dopo l'inversione, secondo il metodo
Luff-Schoorl.
3.Reattivi
3.1. Etanolo al 40 % (v/v), d: 0,948 a 20 ºC, neutralizzato alla fenolftaleina
3.2. Soluzione di Carrez I:
sciogliere nell'acqua g 24 d'acetato di zinco Zn (CH3COO)2·2H2Oeg
3 d'acido acetico glaciale. Portare a 100 ml con acqua.
3.3. Soluzione di Carrez II:
Sciogliere nell'acqua g 10,6 di ferrocianuro di potassio K4[Fe(CN)6]·
3H2O. Portare a 100 ml con acqua.
3.4. Soluzione alla 0,1 % (p/v) di metilarancio
3.5. Acido cloridrico 4 N
3.6. Acido cloridrico 0,1 N
3.7. Soluzione d'idrossido di sodio 0,1 N
3.8. Reattivo di Luff-Schoorl:
Aggiungere, agitando sempre lentamente, la soluzione d'acido citrico
(3.8.2) alla soluzione di carbonato di sodio (3.8.3). Aggiungere quindi
la soluzione di solfato di rame (3.8.1) e portare al volume di 1 l con
acqua. Lasciar riposare una notte e filtrare. Controllare la normalità
del reattivo così ottenuto (Cu 0,1 N; Na2CO32N). Il pH della solu-
zione deve essere di circa 9,4.
3.8.1. Soluzione di solfato di rame: sciogliere g 25 di solfato di rame
p.a., CuSO4·5 H2O, esente da ferro, in ml 100 d'acqua.
3.8.2. Soluzione d'acido citrico: sciogliere g 50 d'acido citrico p.a.,
C6H8O7·H2O, in ml 50 d'acqua.
3.8.3. Soluzione di carbonato di sodio: sciogliere g 143,8 di carbonato
di sodio anidro p.a. in circa ml 300 d'acqua calda. Lasciar
raffreddare.
3.9. Soluzione di tiosolfato di sodio 0,1 N
3.10. Soluzione d'amido: Aggiungere una miscela di g 5 d'amido solubile in
ml 30 d'acqua a 1 l d'acqua bollente. Far bollire per minuti 3, lasciar
raffreddare, aggiungere eventualmente mg 10 di ioduro di mercurio,
quale agente conservatore
3.11. Acido solforico 6 N
3.12. Soluzione di ioduro di potassio al 30 % (p/v)3.13. Granelli di pietra pomice bolliti nell'acido cloridrico, lavati in acqua ed
essiccati
3.14. Isopentanolo.
4.Apparecchiatura
Mescolatore rotativo a capovolgimento: circa 35 a 40 giri al minuto.
5.Modo di operare
5.1. Preparazione della soluzione
Introdurre g 2,5 di sostanza, pesata con l'approssimazione del mg, in un
pallone tarato da ml 250. Aggiungere ml 200 di etanolo (3.1) e far
girare il pallone per 1 ora nell'apparecchio rotativo. Aggiungere ml 5
di soluzione Carrez I (3.2) ed agitare per un minuto. Aggiungere in
seguito ml 5 di soluzione Carrez II (3.3) ed agitare di nuovo per un
minuto. Portare a volume con etanolo (3.1), omogeneizzare e filtrare.
Prelevare ml 200 del filtrato ed evaporare circa la metà del volume
iniziale allo scopo di eliminare la maggior quantità di etanolo. Traspor-
tare quantitativamente, mediante acqua calda, tutto il residuo della
evaporazione in un pallone tarato da ml 200, raffreddare, portare a
volume con acqua distillata, omogeneizzare e filtrare, se necessario.1971L0250 — IT — 19.08.1981 — 001.001 — 19
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Questa soluzione sarà utilizzata per la determinazione degli zuccheri
riduttori, e, dopo inversione, per il dosaggio degli zuccheri totali.
5.2. Determinazione degli zuccheri riduttori
Pipettare una quantità di soluzione non superiore a ml 25 e contenente
meno di mg 60 di zuccheri riduttori, espressi in glucosio. Se necessario,
completare al volume di ml 25 con acqua distillata e determinare il
contenuto in zuccheri riduttori secondo Luff-Schoorl. Esprimere il risul-
tato in glucosio per cento.
5.3. Determinazione degli zuccheri totali dopo inversione
Pipettare ml 50 della soluzione e porli in un pallone tarato da ml 100.
Aggiungere qualche goccia di soluzione di metilarancio (3.4), poi, con
molta attenzione, e sempre agitando, aggiungere acido cloridrico 4 N
(3.5) fino ad ottenere un viraggio nettamente rosso. Aggiungere ml 15
di acido cloridrico 0,1 N (3.6), mantenere il pallone per 30 minuti in
un bagnomaria a forte ebollizione. Raffreddare rapidamente alla tempe-
ratura di circa 20 ºC ed aggiungere ml 15 di soluzione di idrossido di
sodio 0,1 N (3.7). Portare al volume di ml 100 con acqua distillata ed
omogeneizzare. Prelevare una quantità non superiore a ml 25 e conte-
nente meno di mg 60 di zuccheri riduttori espressi in glucosio. Se
necessario, completare con acqua distillata al volume di ml 25 e deter-
minare il contenuto in zuccheri riduttori secondo Luff-Schoorl.
Esprimere il risultato in per cento di glucosio, o se del caso, di sacca-
rosio moltiplicando per il fattore 0,95.
5.4. Titolazione secondo Luff-Schoorl
Pipettare ml 25 del reattivo di Luff-Schoorl (3.8) e portarlo in un
pallone di erlenmeyer da ml 300; aggiungere ml 25, esattamente misu-
rati, della soluzione zuccherina chiarificata. Dopo aver aggiunto due
granuli di pietra pomice (3.13) riscaldare, agitando a mano, su fiamma
libera di altezza media e portare il liquido all'ebollizione in circa 2
minuti. Portare immediatamente l'erlenmeyer su una tela metallica,
provvista di uno schermo d'amianto munito di un foro del diametro di
circa cm 6, sulla quale è stata preventivamente accesa una fiamma.
Questa è regolata in modo tale che soltanto il fondo dell'erlenmeyer
venga riscaldato. Adattare sull'erlenmeyer un refrigerante a riflusso. A
decorrere da tale momento far bollire per 10 minuti esatti. Raffreddare
immediatamente in acqua fredda e dopo circa 5 minuti titolare nel
seguente modo: aggiungere ml 10 di soluzione di ioduro di potassio
(3.12) e, subito dopo, con molta attenzione (a causa del rischio della
formazione di schiuma abbondante) ml 25 d'acido solforico 6 N (3.11).
Titolare quindi con la soluzione di tiosolfato di sodio 0,1 N (3.9) sino
all'apparire di una colorazione giallo opaco, aggiungere l'indicatore all'a-
mido (3.10) e terminare la titolazione.
Effettuare la stessa titolazione su di una mescolanza esattamente misu-
rata di ml 25 di reattivo di Luff-Schoorl (3.8) e ml 25 d'acqua, dopo
aver aggiunto ml 10 di soluzione di ioduro di potassio (3.12) e ml 25
d'acido solforico 6 N (3.11) senza portare all'ebollizione.
6.Calcolo dei risultati
Stabilire, a mezzo della tabella, la quantità in mg di glucosio corrispondente
alla differenza dei risultati delle due titolazioni espresse in ml di tiosolfato di
sodio 0,1 N.
Esprimere il risultato in per cento del campione.
7.Modi di operare per casi particolari
7.1. Per gli alimenti molto ricchi in melasso e altri alimenti poco omogenei,
pesare g 20, introdurli in un pallone tarato da 1 l con ml 500 di acqua.
Far girare nell'apparecchio rotativo per un'ora. Chiarificare con i reattivi
di Carrez I (3.2) e II (3.3) come descritto in 5.1 utilizzando, tuttavia, una
quantità 4 volte più elevata di ciascun reattivo. Portare a volume con
alcool all'80 % (V/V). Omogeneizzare e filtrare. In questo caso conviene
eliminare l'alcool come descritto in 5.1. In caso di assenza d'amido
destrinizzato, portare a volume con acqua distillata.
7.2. Per i melassi e per gli alimenti semplici, ricchi in zuccheri e pratica-
mente essenti di amido (carrube, fettucce essiccate di barbabietole
ecc.), pesare g 5, introdurli in un pallone tarato da ml 50, aggiungere
ml 200 di acqua distillata e far girare nell'apparecchio rotativo, per
un'ora o più, se necessario. Chiarificare con i reattivi di CarrezI (3.2)
e II (3.3), come descritto al punto 5.1. Portare a volume con acqua,1971L0250 — IT — 19.08.1981 — 001.001 — 20
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omogeneizzare e filtrare. Per la determinazione degli zuccheri totali,
continuare come descritto al punto 5.3.
8.Osservazioni
8.1. È consigliabile aggiungere circa ml 1 di isopentanolo (3.14) (senza tener
conto del volume), prima dell'ebollizione con il reattivo Luff-Schoorl,
per evitare la produzione di schiuma.
8.2. La differenza tra il per cento di zuccheri totali dopo inversione, espressi
in glucosio, ed il per cento di zuccheri riduttori espressi in glucosio,
moltiplicata per 0,95, dà il contenuto percentuale di saccarosio.
8.3. Per determinare il contenuto di zuccheri riduttori, ad esclusione del
lattosio, possono essere adottate due vie:
8.3.1. Per un calcolo approssimativo si moltiplica per 0,675 il contenuto
di lattosio stabilito con una determinazione separata e detrarre il
risultato ottenuto dalla percentuale di zuccheri riduttori.
8.3.2. Per un calcolo preciso degli zuccheri riduttori, fatta eccezione del
lattosio, è necessario partire dalla medesima quantità pesata per le
due determinazioni finali. Un'analisi è effettuata con una piccola
parte della soluzione ottenuta in 5.1, l'altra è effettuata su una
parte di soluzione ottenuta durante la determinazione del lattosio,
secondo il metodo appropriato (dopo fermentazione degli altri
zuccheri e chiarificazione).
Nei due casi, la quantità di zucchero presente è determinata secondo il
metodo Luff-Schoorl e calcolata in milligrammi di glucosio. I due valori
sono detratti uno dall'altro e la differenza viene espressa in percento del
campione.
EsempioLe due quantità pipettate corrispondono, per ciascuna analisi, a una
quantità di mg 250 del campione.
Nel primo caso si consumano ml 17 di una soluzione di tiosolfato di
sodio 0,1 N, corrispondenti a mg 44,2 di glucosio; nel secondo caso si
consumano ml 11 corrispondenti a mg 27,6 di glucosio. La differenza è
pari a mg 16,6 di glucosio.
Il contenuto in zuccheri riduttori (eccettuato il lattosio), calcolato in
glucosio, è perciò di:
4/C216;6
10¼6;64 %
Tabella dei valori per ml 25 del reattivo dopo Luff-Schoorl
ml di Na2S2O30,1 N a 2 minuti di riscaldamento, 10 minuti di ebollizione
Na2S2O30,1 NGlucosio, fruttosio
zuccheri invertiti
C6H12O6Lattosio
C12H22O11Maltosio
C12H22O11Na2S2O30,1 N
ml mg differenza mg differenza mg differenza ml
1 2,4 2,4 3,6 3,7 3,9 3,9 1
2 4,8 2,4 7,3 3,7 7,8 3,9 2
3 7,2 2,5 11,0 3,7 11,7 3,9 34 9,7 2,5 14,7 3,7 15,6 4,0 45 12,2 2,5 18,4 3,7 19,6 3,9 5
6 14,7 2,5 22,1 3,7 23,5 4,0 6
7 17,2 2,6 25,8 3,7 27,5 4,0 78 19,8 2,6 29,5 3,7 31,5 4,0 8
9 22,4 2,6 33,2 3,8 35,5 4,0 9
10 25,0 2,6 37,0 3,8 39,5 4,0 1011 27,6 2,7 40,8 3,8 43,5 4,0 11
12 30,3 2,7 44,6 3,8 47,5 4,1 12
13 33,0 2,7 48,4 3,8 51,6 4,1 1314 35,7 2,8 52,2 3,8 55,7 4,1 1415 38,5 2,8 56,0 3,9 59,8 4,1 15
16 41,3 2,9 59,9 3,9 63,9 4,1 16
17 44,2 2,9 63,8 3,9 68,0 4,2 171971L0250 — IT — 19.08.1981 — 001.001 — 21
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Na2S2O30,1 NGlucosio, fruttosio
zuccheri invertiti
C6H12O6Lattosio
C12H22O11Maltosio
C12H22O11Na2S2O30,1 N
ml mg differenza mg differenza mg differenza ml
18 47,1 2,9 67,7 4,0 72,2 4,3 18
19 50,0 3,0 71,7 4,0 76,5 4,4 19
20 53,0 3,0 75,7 4,1 80,9 4,5 20
21 56,0 3,1 79,8 4,1 85,4 4,6 2122 59,1 3,1 83,9 4,1 90,0 4,6 2223 62,2 88,0 94,6 23
13.DETERMINAZIONE DELLA TEOBROMINA
1.Scopo e campo di applicazione
Il metodo permette la determinazione del contenuto in teobromina nei sotto-
prodotti provenienti dalla trasformazione delle fave di cacao.
2.Principio
La teobromina è estratta con il cloroformio. L'estratto viene evaporato a
secco quindi viene posto in soluzione nell'acqua e trattato con un volume
determinato di soluzione di nitrato d'argento. L'acido nitrico liberato è titolato
con una soluzione di idrossido di sodio.
3.Reattivi
3.1. Cloroformio p.a.
3.2. Ammoniaca, d: 0,958
3.3. Solfato di sodio anidro p.a.3.4. Soluzione d'idrossido di sodio 0,1 N
3.5. Soluzione di nitrato d'argento 0,1 N
3.6. Soluzione all'1 % (p/v) di rosso di fenolo in etanolo3.7. Etere dietilico.
4.Apparecchiatura
Palloni a fondo piatto da ml 500, a tappo smerigliato.
5.Modo di operare
Pesare, con l'approssimazione di mg 1, una quantità di campione di g 10 al
massimo, non contenente più di mg 80 di teobromina. Introdurla in un
pallone da ml 500 a fondo piatto ed a tappo smerigliato, aggiungere ml 270
di cloroformio (3.1) e ml 10 di ammoniaca (3.2). Chiudere il pallone ed
agitare energicamente per 5 minuti. Aggiungere g 12 di solfato di sodio
anidro (3.3), agitare nuovamente e lasciare in riposo sino all'indomani.
Filtrare in un erlenmeyer da ml 500 e lavare il residuo con ml 100 di cloro-
formio (3.1). Far evaporare il solvente per distillazione, eliminandone le
ultime tracce su un bagno di acqua bollente. Aggiungere al residuo ml 50 di
acqua e portare all'ebollizione. Dopo raffreddamento neutralizzare esatta-
mente con soluzione d'idrossido di sodio (3.4) in presenza di ml 0,5 di
soluzione di rosso di fenolo (3.6). Aggiungere 20 ml di soluzione di nitrato
d'argento (3.5). Titolare l'acido nitrico liberato con la soluzione di idrossido
di sodio (3.4) sino a viraggio dell'indicatore (pH 7,4).
6.Calcolo dei risultati
ml 1 di NaOH 0,1 N corrisponde a mg 18 di teobromina.
Esprimere il risultato in percento del campione.
7.Osservazione
Il prodotto il cui contenuto in sostanze grasse gregge sorpassa l'8 %, deve
essere preventivamente sgrassato a freddo con un'estrazione, della durata di
6 ore, effettuata con etere di petrolio (Eb. 40 ºC).1971L0250 — IT — 19.08.1981 — 001.001 — 22
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14.DETERMINAZIONE DELL'UREA
1.Scopo e campo di applicazione
Il metodo permette di determinare il contenuto di urea negli alimenti per gli
animali.
2.Principio
Il campione è messo in sospensione nell'acqua in presenza di un chiarifi-
cante. La sospensione viene filtrata. Il contenuto di urea del filtrato è
determinato, dopo aggiunta di 4-dimetilamminobenzaldeide (4-DMAB),
misurando la densità ottica alla lunghezza d'onda di 420 nm.
3.Reattivi
3.1. Soluzione di 4-dimetilamminobenzaldeide: sciogliere g 1,6 di 4-DMAB
in ml 100 di etanolo p.a. al 96 % ed aggiungere ml 10 di acido clori-
drico p.a. (D: 1,19). Questo reattivo si conserva soltanto per due
settimane.
3.2. Soluzione di Carrez I: sciogliere nell'acqua g 24 di acetato di zinco, Zn
(CH3COO)2·2 H2O e g 3 di acido acetico glaciale. Portare a ml 100 con
acqua.
3.3. Soluzione di Carrez II: sciogliere nell'acqua g 10,6 di ferrocianuro di
potassio K4[Fe(CN)6]·3H2O. Portare a ml 100 con acqua.
3.4. Carbone attivo p.a., non assorbente urea (eseguire un controllo)3.5. Soluzione allo 0,1 % (p/v) d'urea p.a.
4.Apparecchiatura
4.1. Agitatore rotativo a capovolgimento, circa 35 a 40 giri per minuto4.2. Tubi da saggio di mm 160 × 16, a tappo smerigliato4.3. Spettrofotometro.
5.Modo di operare
5.1. Analisi del campione
Pesare, con l'approssimazione di mg 1, g 2 di campione ed introdurli,
con g 1 di carbone attivo (3.4), in un matraccio tarato da ml 500, con
ml 400 di acqua e ml 5 di ciascuna delle soluzioni di Carrez I e II
(3.2) e (3.3). Mescolare per mezz'ora mediante l'agitatore rotativo a
capovolgimento. Portare al volume con acqua, agitare e filtrare. Prele-
vare ml 5 del filtrato limpido ed incolore e del filtrato della prova in
bianco e porli nei tubi da saggio con tappo smerigliato, aggiungere ml
5 di soluzione di 4-DMAB (3.1) e mescolare. Porre i tubi in un bagno
d'acqua a 20 ºC. Dopo 15 minuti, misurare l'estinzione della soluzione
del campione allo spettrofotometro a 420 nm rispetto alla prova in
bianco dei reattivi.
5.2. Curva di taratura
Prelevare volumi di ml 1, 2, 4, 5 e 10 della soluzione di urea (3.5) ed
introdurli in palloni tarati da ml 100, portando al volume con acqua.
Prelevare ml 5 di ciascuna soluzione aggiungendovi, rispettivamente,
ml 5 di soluzione di 4-DMAB (3.1), mescolare e misurare l'estinzione,
come avanti indicato, rispetto ad una soluzione testimone contenente
5 ml di 4-DMAB e 5 ml d'acqua, esente da urea. Tracciare la curva di
taratura.
6.Calcolo dei risultati
Determinare la quantità d'urea, nella parte di campione sottoposta all'analisi,
riferendosi alla curva di taratura. Esprimere il risultato in per cento del
campione.
7.Osservazioni
7.1. Per contenuti di urea superiori al 3 % ridurre la quantità di campione da
sottoporre all'analisi a g 1, per non avere più di mg 50 d'urea in ml 500.
7.2. Per piccoli contenuti di urea, aumentare la quantità di campione da
sottoporre all'analisi, compatibilmente con l'ottenimento di un filtrato
limpido ed incolore.1971L0250 — IT — 19.08.1981 — 001.001 — 23
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7.3. Quando il prodotto contiene composti azotati semplici ed in particolare
modo amminoacidi, è consigliabile eseguire la misurazione dell'estin-
zione a 435 nm.
15.DETERMINAZIONE DEGLI ALCALOIDI DEI LUPINI
1.Scopo e campo di applicazione
Il metodo permette di determinare il contenuto in alcaloidi dei semi di lupini.
2.Principio
Gli alcaloidi sono sciolti in una mescolanza di etere dietilico e di cloroformio
ed estratti con una soluzione di acido cloridrico. Gli alcaloidi sono precipitati
con l'acido silico-tungstico, il precipitato è incenerito ed il residuo viene
pesato.
3.Reattivi
3.1. Etere dietilico
3.2. Cloroformio
3.3. Soluzione d'idrossido di sodio 4 N3.4. Acido cloridrico 0,3 N
3.5. Cloruro di sodio p.a.
3.6. Soluzione al 10 % (p/v) d'acido silico-tungstico, SiO
2· 12WO3·2 6H2O.
4.Apparecchiatura
4.1. Agitatore meccanico
4.2. Crogioli da incenerimento in platino, quarzo o porcellana
4.3. Forno elettrico a muffola.
5.Modo di operare
Pesare, con l'approssimazione di mg 5, g 15 di campione ed introdurlo in un
imbuto separatore da ml 200 circa, provvisto di tappo smerigliato (per es.
imbuto separatore). Aggiungere ml 100 di etere dietilico (3.1) e ml 50 di
cloroformio (3.2) esattamente misurati e, mediante buretta graduata, ml 10
di soluzione d'idrossido di sodio (3.3). Agitare vigorosamente per evitare la
formazione di grumi. Dibattere ancora a diverse riprese e lasciare riposare
sino all'indomani. Se il liquido dello strato superiore non è completamente
limpido, aggiungere qualche goccia d'acqua. Filtrare lo strato etere-cloro-
formio. Raccogliere ml 50 del filtrato in un pallone tarato da ml 50 e
travasare, quantitativamente, in un imbuto separatore da ml 150, mediante
ml 50 di etere dietilico (3.1). Estrarre 3 volte, successivamente, con ml 20
d'acido cloridrico (3.4), lasciar decantare e raccogliere l'estratto acido dopo
ciascuna estrazione. Riunire gli estratti acidi in un becher da ml 250. Elimi-
nare le ultime tracce d'etere e di cloroformio riscaldando leggermente.
Aggiungere circa g 1 di cloruro di sodio (3.5), lasciar raffreddare e precipi-
tare gli alcaloidi con la soluzione d'acidosilico-tungstico (3.6). Agitare con
l'agitatore meccanico per 30 min. Lasciare riposare una notte, filtrare su filtro
senza ceneri e lavare il precipitato successivamente, per 2 volte con ml 10 e
2 volte con ml 5 d'acido cloridrico (3.4).
Porre il filtro, contenente il precipitato, in un crogiolo da incenerimento ed
incenerire a 900 ºC. Lasciar raffreddare e pesare.
6.Calcolo dei risultati
Il quantitativo di alcaloidi della quantità di sostanza analizzata si ottiene
moltiplicando il peso delle ceneri per il fattore 0,2. Esprimere il risultato in
per cento del campione.
16.DETERMINAZIONE DELL'ATTIVITÀ UREASICA DEI PRODOTTI
DERIVATI DALLA SOIA
1.Scopo e campo di applicazione
Il saggio permette di determinare l'attività ureasica dei prodotti derivati dalla
soia e di mettere in evidenza l'insufficiente cottura di tali prodotti.1971L0250 — IT — 19.08.1981 — 001.001 — 24
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2.Principio
L'attività ureasica è determinata dalla quantità di azoto ammoniacale liberata
in un minuto da g 1 di prodotto, a 30 ºC, partendo da una soluzione di urea.
3.Reattivi
3.1. Acido cloridrico 0,1 N
3.2. Soluzione d'idrossido di sodio 0,1 N3.3. Soluzione tampone di fosfati 0,05 M contenente in ml 1000, g 4,45 di
fosfato disodico (Na
2HPO4·2 H2O) e g 3,40 di fosfato monopotassico
(KH2PO4).
3.4. Soluzione tamponata d'urea, di recente preparazione, contenente g 30
d'urea in ml 1000 di soluzione tampone (3.3); pH 6,9 — 7,0.
4.Apparecchiatura
4.1. Apparecchio per la titolazione potenziometrica o pH-metro molto sensi-
bile (0,02 pH), con agitatore magnetico
4.2. Bagno d'acqua munito di termostato, regolato a 30 ºC esattamente
4.3. Tubi da saggio delle misure di mm 150 × 18, a tappo smerigliato.
5.Modo di operare
Macinare (per esempio in un macinacaffè) g 10 circa del campione in modo
che passi in un setaccio a maglie di mm 0,2. In un tubo da saggio a tappo
smerigliato, pesare, con l'approssimazione di circa mg 1, g 0,2 del campione
macinato ed aggiungere ml 10 di soluzione tamponata d'urea (3.4). Chiudere
immediatamente il tubo ed agitare vigorosamente. Porre il tubo in un bagno
d'acqua, regolato esattamente a 30 ºC e lasciarvelo per 30 minuti esatti.
Subito dopo aggiungere ml 10 d'acido cloridrico 0,1 N (3.1), raffreddare rapi-
damente a 20 ºC e trasferire quantitativamente il contenuto del tubo in
unrecipiente per la titolazione, ripulendo il tubo in due riprese con ml 5 di
acqua. Titolare immediatamente e rapidamente con la soluzione d'idrossido
di sodio 0,1 N (3.2), con il pH-metro munito di un elettrodo di vetro, sino
al pH 4,7.
Effettuare un saggio in bianco operando come segue:
Introdurre rapidamente e successivamente in un tubo da saggio a tappo
smerigliato, un quantitativo di campione di g 0,2, pesati con l'approssima-
zione di mg 1, ml 10 d'acido cloridrico 0,1 N (3.1) e ml 10 di soluzione
tamponata d'urea (3.4). Raffreddare immediatamente il tubo in acqua ghiac-
ciata e lasciarvelo per 30 minuti. Trasferire poi quantitativamente, con le
stesse norme avanti riportate, il contenuto del tubo in un recipiente per la
titolazione e titolare con la soluzione di idrossido di sodio 0,1 N (3.2) sino
a pH 4,7.
6.Calcolo dei risultati
L'attività ureasica è data dalla formula:
mg N
g min :a3 0º C ¼1;4b/C0a ðÞ
30/C1E
nella quale a = ml di soluzione d'idrossido di sodio 0,1 N consumata nell'a-
nalisi
b = ml di soluzione d'idrossido di sodio 0,1 N consumata nella
prova in bianco
E = quantità in grammi del campione sottoposta all'analisi.
7.Osservazioni
7.1. Il metodo è applicabile per un'attività ureasica che può raggiungere al
massimo mg 1 di N/g min. a 30 ºC. Per prodotti più attivi la quantità
di campione da sottoporre all'analisi può essere ridotta sino a mg 50.
7.2. I prodotti il cui contentuto in sostanze grasse gregge sorpassa il 10 %
dovranno preventivamente essere sgrassati a freddo.1971L0250 — IT — 19.08.1981 — 001.001 — 25