1997L0012 — IT — 31.12.1998 — 001.001 — 1
Trattandosidiunsemplice strumentodidocumentazione,essononimpegnalaresponsabilitàdelleistituzioni
►B DIRETTIVA97/12/CEDELCONSIGLIO
del17marzo1997
chemodificaeaggiornaladirettiva64/432/CEErelativaaproblemidipoliziasanitariainmateria
discambiintracomunitari dianimalidelle speciebovinaesuina
(GU L 109 del 25.4.1997, pag. 1)
Modificata da:
Gazzetta ufficiale
n. pag. data
►M1Direttiva 98/99/CE del Consiglio del 14 dicembre 1998 L 358 107 31.12.1998
▼B
DIRETTIVA97/12/CEDELCONSIGLIO
del17marzo1997
che modifica e aggiorna la direttiva 64/432/CEE relativa a
problemi di polizia sanitaria in materia di scambi intracomunitari
dianimalidellespeciebovinaesuina
IL CONSIGLIO DELL'UNIONE EUROPEA,
visto il trattato che istituisce la Comunità europea, in particolare l'arti-
colo 43,
vista la proposta della Commissione(1),
visto il parere del Parlamento europeo(2),
visto il parere del Comitato economico e sociale(3),
considerando che l'armonizzazione delle disposizioni in campo veteri-
nario ha registrato notevoli progressi; che il Consiglio ha adottato, in
particolare, la direttiva 90/425/CEE, del 26 giugno 1990, relativa ai
controlli veterinari e zootecnici applicabili negli scambi intracomunitaridi taluni animali vivi e prodotti di origine animale, nella prospettivadella realizzazione del mercato interno(
4), la direttiva 91/496/CEE, del
15 luglio 1991, che fissa i principi relativi all'organizzazione deicontrolli veterinari per gli animali che provengono dai paesi terzi e
che sono introdotti nella Comunità e che modifica le direttive 89/662/
CEE, 90/425/CEE e 90/675/CEE(
5), la direttiva 85/511/CEE, del 18
novembre 1985, che stabilisce misure comunitarie di lotta contro l'aftaepizootica(
6) e la direttiva 92/119/CEE, del 17 dicembre 1992, che
introduce misure generali di lotta contro alcune malattie degli animali
nonché misure specifiche per la malattia vescicolare dei suini(7);
considerando che il Consiglio, nella risoluzione del 22 dicembre 1993,
relativa al rafforzamento delle misure di epidemosorveglianza veteri-naria(
8), ha convenuto di adoprarsi per consentire una rapida
applicazione dei principi contenuti in detta risoluzione in sede di modi-fica della direttiva 64/432/CEE del Consiglio, del 26 giugno 1964,
relativa a problemi di polizia sanitaria in materia di scambi intracomu-
nitari di animali delle specie bovina e suina(
9);
considerando che, vista questa situazione, è necessario modificare la
direttiva 64/432/CEE, in particolare per quanto concerne il periodo dipermanenza in uno Stato membro prima del trasporto, le norme relativeagli animali di meno di 15 giorni, le norme di lotta contro determinate
malattie e le norme relative ai centri di raccolta, ai trasportatori e ai
commercianti;
considerando che, ai fini di un «reperimento» rapido e preciso degli
animali per motivi di salute animale, ogni Stato membro dovrebbecreare una base dati informatica che registri l'identità degli animali,
tutte le aziende sul suo territorio e i movimenti degli animali;
considerando che la direttiva 64/432/CEE è stata sostanzialmente modi-
ficata in numerose occasioni; che, per maggior chiarezza, è necessariosemplificare e aggiornare tale direttiva,1997L0012 — IT — 31.12.1998 — 001.001 — 2
(1) GU n. C 33 del 2. 2. 1994, pag. 1.
(2) GU n. C 128 del 9. 5. 1994, pag. 105.
(3) GU n. C 133 del 16. 5. 1994, pag. 31.
(4) GU n. L 224 del 18. 8. 1990, pag. 29. Direttiva modificata da ultimo dalla
direttiva 92/118/CEE (GU n. L 62 del 15. 3. 1993, pag. 49).
(5) GU n. L 268 del 24. 9. 1991, pag. 56. Direttiva modificata da ultimo dalla
direttiva 96/43/CE (GU n. L 162 dell'1. 7. 1996, pag. 1).
(6) GU n. L 315 del 26. 11. 1985, pag. 11. Direttiva modificata da ultimo
dall'atto di adesione del 1994.
(7) GU n. L 62 del 15. 3. 1993, pag. 69. Direttiva modificata da ultimo dall'atto
di adesione del 1994.
(8) GU n. C 16 del 19. 1. 1994, pag. 1.
(9) GU n. 121 del 29. 7. 1964, pag. 1977/64. Direttiva modificata da ultimo
dalla direttiva 95/25/CE (GU n. L 243 dell'11. 10. 1995, pag. 16).
▼B
HA ADOTTATO LA PRESENTE DIRETTIVA:
Articolo 1
Gli articoli e gli allegati B, C, D (capitolo II) ed E della direttiva 64/
432/CEE sono sostituiti dal testo allegato alla presente direttiva; gli
allegati A, D (capitolo I) ed F sono sostituiti dal testo allegato alla
direttiva 98/46/CE.
Articolo 2
1. Gli Stati membri mettono in vigore le disposizioni legislative,
regolamentari ed amministrative necessarie per conformarsi allapresente direttiva ►
M1anteriormente al 1oluglio 1999 ◄. Essi ne
informano immediatamente la Commissione.
Quando gli Stati membri adottano tali disposizioni, queste contengono
un riferimento alla presente direttiva o sono corredate di siffatto riferi-
mento all'atto della pubblicazione ufficiale. Le modalità del riferimentosono decise dagli Stati membri.
2. Gli Stati membri comunicano alla Commissione il testo delle
principali disposizioni legislative che essi adottano nel settore discipli-nato dalla presente direttiva.
Articolo 3
La presente direttiva entra in vigore il giorno della pubblicazione nella
Gazzetta ufficiale delle Comunità europee .
Articolo 4
Gli Stati membri sono destinatari della presente direttiva.1997L0012 — IT — 31.12.1998 — 001.001 — 3
▼M1
▼B
▼B
ALLEGATO
DIRETTIVA64/432/CEE
(Modificaeaggiornamentodegliarticoli edegliallegati)
Articolo 1
La presente direttiva riguarda gli scambi intracomunitari di animali delle specie
bovina e suina, ad eccezione del suino selvatico definito all'articolo 2, lettera e)
della direttiva 80/217/CEE(1), fatte salve le disposizioni di cui alle direttive 80/
215/CEE(2), 85/511/CEE, 88/407/CEE(3), 89/608/CEE(4), 90/425/CEE, 90/429/
CEE(5), 90/667/CEE(6), 91/496/CEE, 91/628/CEE(7), 92/102/CEE(8), 92/119/
CEE e alla decisione 90/424/CEE(9).
Articolo 2
1. Si applicano le definizioni dell'articolo 2 della direttiva 90/425/CEE e
dell'articolo 2 della direttiva 91/628/CEE.
2. Inoltre ai fini della presente direttiva s'intende per:a)allevamento: un animale o l'insieme degli animali che sono tenuti in
un'azienda [ai sensi dell'articolo 2, lettera b) della direttiva 92/102/CEE]
come unità epidemiologica e, in caso di più allevamenti in un'azienda, questi
ultimi devono formare un'unità distinta avente la medesima qualifica sani-
taria.
b)animale da macello: un animale della specie bovina (comprese le specie
Bison bison e Bubalus bubalus) o un animale della specie suina destinato
ad essere condotto ad un macello o ad un centro di raccolta, dal quale
potrà essere avviato solamente alla macellazione;
c)animali da allevamento oda produzione: gli animali delle specie bovina
(comprese le specie Bison bison e Bubalus bubalus) e suina diversi da quelli
di cui alla lettera b), ed in particolare quelli destinati all'allevamento, alla
produzione di latte o di carne, oppure al lavoro, a mostre e esposizioni, fatta
eccezione per gli animali che partecipano a manifestazioni culturali e spor-
tive;
d)allevamento bovino ufficialmente indenne da tubercolosi: un allevamento
bovino che risponde alle condizioni indicate nell' ►
M1allegato A, parte I,
paragrafi 1 e 2 ◄;
e)Stato membro oregione di Stato membro ufficialmente indenne da tuberco-
losi:uno Stato membro o una parte di Stato membro che risponde alle
condizioni indicate nell' ►M1allegato A, parte I, paragrafi 4 e 5 ◄;
f)allevamento bovino ufficialmente indenne da brucellosi: un allevamento
bovino che risponde alle condizioni indicate nell' ►M1allegato A, parte
II, paragrafi 1 e 2 ◄;
g)regione ufficialmente indenne da brucellosi: una regione di uno Stato
membro che risponde alle condizioni indicate nell'allegato A, parte II, para-
grafi 7, 8 e 9;
h)Stato membro ufficialmente indenne da brucellosi: uno Stato membro che
risponde alle condizioni indicate nell' ►M1allegato A, parte II, paragrafi
7, 8 e 9◄;
i)allevamento bovino indenne da brucellosi: un allevamento bovino che
risponde alle condizioni indicate nell' ►M1allegato A, parte II, paragrafi
4e5◄;1997L0012 — IT — 31.12.1998 — 001.001 — 4
(1) GU n. L 47 del 21. 2. 1980, pag. 11. Direttiva modificata da ultimo dalla decisione 93/
384/CEE (GU n. L 166 dell'8. 7. 1993, pag. 34).
(2) GU n. L 47 del 21. 2. 1980, pag. 4. Direttiva modificata da ultimo dalla direttiva 91/
687/CEE (GU n. L 377 del 31. 12. 1991, pag. 16).
(3) GU n. L 194 del 22. 7. 1988, pag. 10. Direttiva modificata da ultimo dalla direttiva 93/
60/CEE (GU n. L 186 del 28. 7. 1993, pag. 28).
(4) GU n. L 351 del 2. 12. 1989, pag. 34.
(5) GU n. L 224 del 18. 8. 1990, pag. 62. Direttiva modificata da ultimo dall'atto di
adesione del 1994.
(6) GU n. L 363 del 27. 12. 1990, pag. 51. Direttiva modificata da ultimo dalla direttiva
92/118/CEE.
(7) GU n. L 340 dell'11. 12. 1991, pag. 17. Direttiva modificata da ultimo dalla direttiva
95/29/CE (GU n. L 148 del 30. 6. 1995, pag. 52).
(8) GU n. L 355 del 5. 12. 1992, pag. 32. Direttiva modificata dall'atto di adesione del
1994.
(9) GU n. L 224 del 18. 8. 1990, pag. 19. Decisione modificata da ultimo dalla decisione
94/370/CE (GU n. L 168 del 2. 7. 1994, pag. 31).
▼B
j)allevamento ufficialmente indenne da leucosi bovina enzootica: un alleva-
mento che risponde alle condizioni indicate nell'allegato D, capitolo I,
sezioni A e B;
k)Stato membro oregione ufficialmente indenne da leucosi bovina enzootica:
una regione o uno Stato membro che risponde alle condizioni indicate nell'
►M1allegato D, capitolo I, Sezioni E e F ◄;
l)veterinario ufficiale: il veterinario designato dall'autorità centrale compe-
tente;
m)veterinario riconosciuto: un veterinario riconosciuto dall'autorità veterinaria
competente in conformità all'articolo 14, paragrafo 3, sezione B;
n)malattie soggette a dichiarazione obbligatoria: le malattie elencate nell'alle-
gato E (I);
o)centro di raccolta: qualsiasi luogo, comprese le aziende, i centri di raduno e
i mercati, nel quale sono raggruppati i bovini e i suini provenienti da diffe-
renti aziende di origine, ai fini della costituzione di gruppi di animali
destinati agli scambi. Questi centri di raccolta devono essere autorizzati a
fini di scambi e soddisfare i requisiti di cui all'articolo 11;
p)regione: la parte del territorio di uno Stato membro, di superficie non infe-
riore a 2 000 km2, che è soggetta al controllo delle autorità competenti e che
include almeno una delle seguenti regioni amministrative:
— Belgio: province — provincie
— Germania: Regierungsbezirk— Danimarca: amt o isola
— Francia: département
— Italia: provincia— Lussemburgo:
— Paesi Bassi: rvv-kring
— Regno Unito: Inghilterra, Galles e Irlanda del Nord:
county
Scozia: district o island area
— Irlanda: county
— Grecia: νοµός
— Spagna: provincia
— Portogallo: territorio continentale: distrito; altre parti
del territorio del Portogallo: região autó-
noma
— Austria: Bezirk— Svezia: län
— Finlandia: lääni/län
q)commerciante: una persona fisica o giuridica che compra e vende, diretta-
mente o indirettamente, animali a titolo commerciale, ha un regolare
avvicendamento di tali animali e, al massimo entro 30 giorni dall'acquisto
di animali li rivende o li trasferisce dai primi impianti ad altri impianti che
non sono di sua proprietà, è registrata e soddisfa le condizioni stabilite all'ar-
ticolo 13.
Articolo 3
1. Ogni Stato membro vigila affinché dal suo territorio vengano spediti verso
il territorio di un altro Stato membro soltanto animali che rispondono alle perti-
nenti condizioni stabilite dalla presente direttiva.
2. Gli animali delle specie bovina e suina oggetto della presente direttiva
debbono:
a) essere sottoposti:
— ad un controllo di identità e
— ad un esame clinico, nelle 24 ore precedenti la partenza, da parte di un
veterinario ufficiale e non presentare segni clinici di malattia;1997L0012 — IT — 31.12.1998 — 001.001 — 5
▼B
b) provenire da un'azienda o da una zona non soggette, per motivi di polizia
sanitaria, a divieto o restrizioni per le specie considerate secondo la legisla-
zione comunitaria e/o nazionale;
c) essere identificati secondo le disposizioni della direttiva 92/102/CEE;
d) non essere destinati alla macellazione o soggetti a restrizioni di polizia sani-
taria nell'ambito di un programma nazionale o regionale per l'eradicazione di
malattie contagiose o infettive;
e) essere conformi alle disposizioni degli articoli 4 e 5.
Articolo 4
1. Dal momento in cui lasciano l'azienda di origine fino all'arrivo a destina-
zione in un altro Stato membro, gli animali delle specie bovina e suina oggetto
della presente direttiva non debbono mai entrare in contatto con altri artiodattili
che non hanno la stessa qualifica sanitaria.
2. Gli animali delle specie bovina e suina oggetto della presente direttiva
devono essere trasportati mediante mezzi di trasporto che soddisfano le disposi-
zioni della direttiva 91/628/CEE del Consiglio nonché le disposizioni
dell'articolo 12.
3. Le condizioni per l'autorizzazione dei centri dove possono essere effettuate
la pulizia e la disinfezione sono stabilite secondo la procedura di cui all'articolo
17.
Articolo 5
1. Gli animali delle specie bovina e suina oggetto della presente direttiva
debbono essere accompagnati, durante il trasporto verso il luogo di destinazione,
da un►M1certificato conforme al modello 1 o al modello 2 di cui all'allegato
F◄. Il certificato è costituito da un unico foglio o qualora sia necessario più di
un foglio, i gruppi di due o più fogli formano un insieme unico e indivisibile, ed
è provvisto di un numero di serie. Esso viene rilasciato il giorno dell'esame sani-
tario, perlomeno in una delle lingue ufficiali del paese di destinazione. Il
certificato ha una validità di 10 giorni a decorrere dalla data dell'esame sani-
tario.
2. Gli esami sanitari per il rilascio del certificato sanitario (comprese le
garanzie addizionali) per una partita di animali possono essere effettuati nell'a-
zienda di origine o in un centro di raccolta. A tal fine l'autorità competente
provvede affinché i certificati sanitari siano redatti dal veterinario ufficiale al
termine delle ispezioni, delle visite e dei controlli previsti dalla presente diret-
tiva.
Tuttavia, per quanto concerne:a) gli animali provenienti da centri di raccolta riconosciuti, tali certificati
possono essere redatti:
— in base al documento ufficiale contenente le informazioni necessarie
compilato dal veterinario ufficiale responsabile dell'azienda di origine o
— in base ai ►
M1certificato conforme, a seconda dei casi, al modello 1 o
al modello 2 che figurano nell'allegato F ◄, le cui sezioni A e B siano
state debitamente completate e attestate dal veterinario ufficiale responsa-
bile dell'azienda di origine;
b) gli animali provenienti da un'azienda qualificata nell'ambito della rete di cui
all'articolo 14, tale certificato può essere redatto:
— in base al documento ufficiale contenente le informazioni necessarie
compilato dal veterinario riconosciuto responsabile dell'azienda di origine
o
— in base ai ►M1certificato conforme, a seconda dei casi, al modello 1 o
al modello 2 che figurano nell'allegato F ◄, le cui sezioni A e B siano
state debitamente completate e attestate dal veterinario riconosciuto
responsabile dell'azienda di origine.
In tale occasione il veterinario ufficiale garantirà, se necessario, il rispetto delle
garanzie supplementari previste dalla normativa comunitaria.
3. Il veterinario ufficiale responsabile del centro di raccolta effettua, al loro
arrivo, tutti i controlli necessari sugli animali.
4. Il veterinario ufficiale che compila la ►M1sezione C del certificato
conforme, a seconda dei casi, al modello 1 o al modello 2 dell'allegato F ◄,è
tenuto a provvedere alla registrazione dei movimenti degli animali nel sistema
ANIMO il giorno del rilascio del certificato.
5. Gli animali di cui alla presente direttiva possono transitare per un centro di
raccolta situato in uno Stato membro diverso dallo Stato membro di destina-1997L0012 — IT — 31.12.1998 — 001.001 — 6
▼B
zione. In tal caso il ►M1certificato conforme, a seconda dei casi, al modello 1
o al modello 2 che figurano nell'allegato F ◄►M1(compresa la sezione
C)◄deve essere compilato dal veterinario ufficiale responsabile dello Stato
membro dal quale provengono gli animali. Il veterinario ufficiale responsabile
del centro di raccolta fornisce un attestato per lo Stato membro di destinazione
compilando un secondo certificato analogo a quello che figura nell'allegato F,
annotandovi il numero di serie dell'originale e allegandolo all'originale oppure
ad una copia autenticata del certificato originale. In tal caso il periodo di
validità combinata del certificato non può essere superiore a quello di cui al
paragrafo 1.
Articolo 6
1. Gli animali d'allevamento o da produzione debbono rispondere, oltre ai
requisiti indicati negli articoli 3, 4 e 5, alle seguenti condizioni:
— debbono essere rimasti in una sola azienda negli ultimi 30 giorni prima del
carico o nell'azienda d'origine sin dalla nascita, se hanno meno di 30 giorni
d'età. Il veterinario ufficiale deve accertarsi, in base all'identificazione uffi-
ciale di cui all'articolo 3, paragrafo 2, lettera c) ed ai documenti ufficiali, che
gli animali soddisfano tale condizione e, inoltre, che gli animali provengono
dalla Comunità o sono stati importati da un paese terzo conformemente alla
legislazione veterinaria comunitaria;
Tuttavia per gli animali che transitano per un centro di raccolta riconosciuto
situato nello Stato membro d'origine, la durata del soggiorno a fini di
raccolta al di fuori dell'azienda di origine non può essere superiore a sei
giorni;
— gli animali importati da un paese terzo in uno Stato membro che non costi-
tuisce la destinazione definitiva devono essere trasportati nello Stato
membro di destinazione quanto prima, accompagnati dal certificato rilasciato
ai sensi dell'articolo 7 della direttiva 91/496/CEE;
— arrivati a destinazione, gli animali importati da un paese terzo sono soggetti,
prima di ulteriori movimenti, alle disposizioni della presente direttiva ed in
particolare alla disposizione di cui al primo trattino e non possono essere
trasferiti nell'allevamento fino a quando il veterinario responsabile di tale
azienda non abbia accertato che gli animali in questione non possono
compromettere la qualifica sanitaria dell'azienda.
Se un animale proveniente da un paese terzo viene ammesso in un'azienda,
nessun animale dell'azienda può essere ceduto nei 30 giorni successivi
all'ammissione a meno che l'animale importato sia completamente isolato
dagli altri animali dell'azienda.
2. I bovini d'allevamento o da produzione debbono rispondere, oltre ai requi-
siti indicati negli articoli 3, 4 e 5, alle seguenti condizioni:
a) provenire da un allevamento bovino ufficialmente indenne da tubercolosi e,
qualora si tratti di animali di età superiore a sei settimane, aver reagito nega-
tivamente ad un'intradermotubercolinizzazione effettuata nei trenta giorni
precedenti l'uscita dall'allevamento d'origine, conformemente alle disposi-
zioni dell'allegato B, punto 32, lettera d).
L'intradermotubercolinizzazione non è necessaria qualora gli animali proven-
gano da uno Stato membro o da una parte di uno Stato membro riconosciuti
ufficialmente indenni da tubercolosi oppure da uno Stato membro o da una
parte di uno Stato membro che facciano parte di una rete di sorveglianza
riconosciuta;
b) nel caso di animali non castrati, provenire da un allevamento bovino ufficial-
mente indenne da brucellosi e, se sono di età superiore a 12 mesi, presentare
un tasso brucellare inferiore a 30 unità internazionali (UI) agglutinanti per
millimetro alla sieroagglutinazione [o qualsiasi prova autorizzata con proce-
dura dal comitato veterinario permanente (CVP) a seguito dell'adozione dei
relativi protocolli] praticata nei 30 giorni precedenti l'uscita dall'allevamento
di origine, conformemente alle disposizioni dell'allegato C, sezione A.
La sieroagglutinazione (o qualsiasi prova autorizzata con procedura dal
comitato veterinario permanente a seguito dell'adozione dei relativi proto-
colli) non è necessaria se gli animali provengono da uno Stato membro o
da una parte di Stato membro riconosciuti ufficialmente indenni da brucellosi
oppure da uno Stato membro o da una parte di uno Stato membro che
facciano parte di una rete di sorveglianza riconosciuta;
c) provenire da un allevamento ufficialmente indenne da leucosi bovina enzoo-
tica e, se sono di età superiore a 12 mesi, aver reagito negativamente ad una
prova individuale eseguita nei 30 giorni precedenti l'uscita dall'allevamento
d'origine, conformemente alle disposizioni dell'allegato D.
La prova non è necessaria se gli animali provengono da uno Stato membro o
da una parte di Stato membro riconosciuti indenni da leucosi bovina enzoo-
tica oppure da uno Stato membro o da una parte di uno Stato membro che
facciano parte di una rete di sorveglianza riconosciuta;1997L0012 — IT — 31.12.1998 — 001.001 — 7
▼B
d) non entrare mai in contatto, dal momento in cui lasciano l'azienda di origine
sino all'arrivo a destinazione, con animali che soddisfano solamente le condi-
zioni di cui al paragrafo 3.
3. I bovini da macello, oltre a rispondere ai requisiti di cui agli articoli 3, 4 e
5, debbono provenire da allevamenti ufficialmente indenni da tubercolosi,
indenni da leucosi bovina enzootica e, se si tratta di bovini non castrati, prove-
nire da allevamenti ufficialmente indenni da brucellosi.
Tuttavia fino al 31 dicembre 1999 i paesi destinatari possono concedere alla
Spagna autorizzazioni generali o limitate di introduzione sul loro territorio di
bovini da macello provenienti da allevamenti non ufficialmente indenni da
tubercolosi, da leucosi bovina enzootica e da brucellosi, purché tali bovini:
— siano stati sottoposti con risultato negativo, nei trenta giorni precedenti la
data di carico, alle prove appropriate prescritte negli allegati B, C e D,
— siano direttamente avviati, fin dal loro arrivo nel paese di destinazione, in un
macello e siano ivi macellati il più rapidamente possibile e in ogni caso
entro 72 ore dopo l'arrivo, conformemente ai requisiti di polizia sanitaria.
Articolo 7
Gli animali da macello che, non appena arrivati nel paese di destinazione, sono
stati condotti:
— in un macello, devono esservi macellati il più rapidamente possibile, e in
ogni caso entro 72 ore dopo l'arrivo, conformemente ai requisiti di polizia
sanitaria oppure
— in un centro di raccolta riconosciuto devono essere trasferiti al termine del
mercato in un macello, dove sono macellati il più rapidamente possibile e
in ogni caso entro tre giorni lavorativi dopo l'arrivo, nel centro di raccolta,
conformemente ai requisiti di polizia sanitaria. Fra l'arrivo al centro di
raccolta e l'arrivo al macello, tali animali non devono mai venire a contatto
con artiodattili che non soddisfino i requisiti previsti dalla presente direttiva.
Articolo 8
Gli Stati membri provvedono affinché il sospetto della presenza di una delle
malattie di cui all'allegato E, parte I formi oggetto di una notifica obbligatoria
e immediata all'autorità competente.
Ciascuno Stato membro comunica annualmente alla Commissione, entro il 31
maggio, e per la prima volta nel 1999, le informazioni dettagliate relative alla
presenza sul suo territorio durante il precedente anno di calendario, delle
malattie di cui all'allegato E (I) o di qualsiasi malattia per la quale la normativa
comunitaria preveda garanzie supplementari, nonché informazioni dettagliate sui
programmi di controllo e di eradicazione in corso. Tali informazioni saranno
basate su criteri uniformi da stabilirsi secondo la procedura prevista all'articolo
17. La Commissione presenta queste informazioni agli Stati membri nell'ambito
del comitato veterinario permanente e può servirsene in particolare per quanto
concerne le decisioni di cui agli allegati A e D.
Articolo 9
1. Qualora uno Stato membro abbia, per tutto il suo territorio o parte di esso,
un programma nazionale obbligatorio di lotta contro una delle malattie conta-
giose elencate nell'allegato E, parte II, esso può sottoporlo alla Commissione,
precisando in particolare:
— la distribuzione della malattia sul suo territorio;
— la motivazione del programma, in base alla gravità della malattia e al proba-
bile rapporto costi/benefici del programma stesso;
— la zona geografica in cui il programma sarà applicato;
— le varie categorie di qualifica applicabili alle aziende, gli standard da conse-
guire per ciascuna categoria e i metodi di prova da utilizzare;
— le procedure di monitoraggio del programma, i cui risultati debbono essere
trasmessi perlomeno annualmente alla Commissione;
— le misure da adottare qualora, per un qualsiasi motivo, un'azienda perda la
propria qualifica;
— le misure da adottare qualora le prove effettuate conformemente alle dispo-
sizioni del programma diano risultati positivi.
2. La Commissione esamina i programmi comunicati dagli Stati membri. I
programmi di cui al paragrafo 1 possono essere approvati, in osservanza dei
criteri indicati al paragrafo 1, secondo la procedura di cui all'articolo 17. Al
tempo stesso o al più tardi tre mesi dopo l'approvazione dei programmi sono
precisate, secondo la stessa procedura, le garanzie complementari, generali o
limitate, che possono essere richieste negli scambi intracomunitari. Tali garanzie1997L0012 — IT — 31.12.1998 — 001.001 — 8
▼B
debbono essere al massimo equivalenti a quelle che lo Stato membro prevede
nell'ambito nazionale.
3. I programmi presentati dagli Stati membri possono essere modificati o
completati secondo la procedura di cui all'articolo 17. Secondo la stessa proce-
dura possono essere approvate modifiche o integrazioni dei programmi già
approvati o delle garanzie definite conformemente al paragrafo 2.
Articolo 10
1. Se uno Stato membro ritiene che il proprio territorio sia indenne, total-
mente o in parte, da una delle malattie elencate nell'allegato E, parte II, esso
presenta alla Commissione la documentazione giustificativa appropriata, preci-
sando in particolare:
— la natura della malattia e la cronistoria della sua comparsa sul proprio terri-
torio;
— i risultati delle prove di controllo basate su indagini sierologiche, microbio-
logiche, patologiche o epidemiologiche e sul fatto che la malattia deve
essere obbligatoriamente dichiarata alle competenti autorità;
— il periodo durante il quale è stato effettuato il controllo;
— eventualmente il periodo durante il quale è stata vietata la vaccinazione
contro la malattia e la zona geografica interessata dal divieto;
— le misure previste per controllare l'assenza della malattia.
2. La Commissione esamina la documentazione presentata dagli Stati
membri. Le garanzie complementari, generali o limitate, che possono essere
richieste negli scambi intracomunitari, possono essere precisate secondo la
procedura di cui all'articolo 17. Tali garanzie devono essere al massimo equiva-
lenti a quelle applicate dallo Stato membro nell'ambito nazionale.
3. Lo Stato membro interessato comunica alla Commissione qualsiasi
cambiamento nelle informazioni relative alla malattia di cui al paragrafo 1, in
particolare per quanto concerne la comparsa di nuovi focolai della malattia.
Alla luce di tali comunicazioni, le garanzie definite conformemente al paragrafo
2 possono essere modificate o soppresse secondo la procedura di cui all'articolo
17.
Articolo 11
1. Gli Stati membri provvedono affinché i centri di raccolta, per essere auto-
rizzati dall'autorità competente, soddisfino almeno i seguenti requisiti:
a) siano sotto il controllo di un veterinario ufficiale che garantisce in particolare
il rispetto delle disposizioni dell'articolo 4, paragrafi 1 e 2;
b) siano situati in una zona non soggetta a divieto o restrizioni secondo la perti-
nente normativa comunitaria o la legislazione nazionale;
c) siano puliti e disinfettati prima di ogni utilizzazione secondo le disposizioni
del veterinario ufficiale;
d) in base alla capacità, siano provvisti:
— di un ambiente esclusivamente adibito a tal fine quando utilizzati come
centro di raccolta;
— di impianti adeguati che consentano di caricare e scaricare e di ospitare
opportunamente gli animali, di abbeverarli, di nutrirli e di somministrare
loro tutte le cure eventualmente necessarie; tali impianti devono poter
essere puliti e disinfettati facilmente;
— di opportune infrastrutture di ispezione;
— di opportune infrastrutture di isolamento;— di attrezzature di pulizia e di disinfezione dei locali e dei carri bestiame
adeguate;
— di una zona adeguata di raccolta del foraggio, dello strame e del letame;— di un adeguato sistema di raccolta delle acque di scolo;
— di un ufficio o di un locale per il veterinario ufficiale;
e) ammettano solo animali identificati e provenienti da allevamenti ufficial-
mente indenni da tubercolosi, brucellosi e leucosi o animali da macello che
soddisfino i requisiti stabiliti nella presente direttiva, in particolare quelli di
cui all'articolo 6, paragrafo 3. A tal fine, all'arrivo degli animali il proprie-
tario o il responsabile del centro verifica o fa verificare il marchio di
identificazione degli animali nonché i documenti sanitari o gli altri docu-
menti di accompagnamento in base alle specie o categorie in questione;
f) siano ispezionati regolarmente per verificare che continuano a sussistere le
condizioni che hanno consentito l'autorizzazione.1997L0012 — IT — 31.12.1998 — 001.001 — 9
▼B
2. Il proprietario o il responsabile del centro di raccolta deve iscrivere in un
registro o su supporto informaticoin base al documento di accompagnamento
oppure ai numeri o marchi di identificazione degli animali e conservare per
almeno tre anni:
— il nome del proprietario, l'origine, la data di entrata e di uscita, il numero e
l'identificazione degli animali della specie bovina o il numero di registra-
zione dell'azienda di origine o dell'allevamento d'origine degli animali dellaspecie suina che entrano nel centro e la loro destinazione prevista;
— il numero di registrazione del trasportatore e il numero di immatricolazione
del veicolo che consegna e raccoglie gli animali dal centro.
3. L'autorità competente rilascia un numero di autorizzazione a ciascun
centro di raccolta autorizzato. Tale autorizzazione può limitarsi ad una determi-
nata specie o agli animali da allevamento e da produzione oppure agli animali
da macello. L'autorità competente comunica alla Commissione l'elenco dei
centri di raccolta autorizzati nonché gli eventuali aggiornamenti. La Commis-
sione comunica tali informazioni agli Stati membri nell'ambito del comitato
veterinario permanente.
4. L'autorità competente può sospendere o revocare l'autorizzazione in caso
di mancato rispetto delle disposizioni del presente articolo o di altre disposizioni
pertinenti della presente direttiva o di qualsiasi altra direttiva pertinente in
materia di polizia sanitaria. L'autorizzazione può essere ripristinata quando
l'autorità competente si sia accertata che il centro di raccolta si è conformato a
tutte le disposizioni pertinenti della presente direttiva.
5. L'autorità competente si accerta che i centri di raccolta dispongano,
quando sono operativi, di un numero di veterinari ufficiali sufficiente per assol-
vere le mansioni loro assegnate.
6. Le eventuali modalità esecutive necessarie per l'applicazione uniforme del
presente articolo sono stabilite secondo la procedura di cui all'articolo 17.
Articolo 12
1. Gli Stati membri provvedono affinché il trasportatore di cui all'articolo 5
della direttiva 91/628/CEE soddisfi i seguenti requisiti aggiuntivi:
a) utilizzi per il trasporto degli animali dei mezzi di trasporto:
— costruiti in modo tale che il letame, lo strame o il foraggio degli animali
non possano scolare o fuoriuscire dal veicolo;
— puliti e disinfettati con disinfettanti autorizzati dall'autorità competente
immediatamente dopo ogni trasporto di animali o di prodotti che possono
incidere sulla salute degli animali, e se necessario, prima di ogni
trasporto di animali;
b) disponga di attrezzature adeguate per la pulizia e la disinfezione, approvate
dall'autorità competente come pure di impianti per l'immagazzinamento dello
strame e del letame o fornisca la documentazione comprovante che tali
operazioni sono svolte presso terzi riconosciuti dall'autorità competente.
2. Per ciascun veicolo utilizzato per il trasporto di animali, il trasportatore
deve provvedere affinché sia tenuto un registro contenente almeno le seguenti
informazioni, che devono essere conservate per almeno tre anni:
i) luogo, data del ritiro, nome o ragione sociale delle aziende o dei centri di
raccolta dai quali gli animali sono stati prelevati;
ii) luogo, data, nome o ragione sociale ed indirizzo del o dei destinatari;
iii) specie e numero degli animali trasportati;
iv) data e luogo delle operazioni di disinfezione;
v) dati particolareggiati della documentazione di accompagnamento (numero di
serie di certificati, ecc).
3. Il trasportatore provvede affinché, tra la partenza dall'azienda o dal centro
di raccolta d'origine e l'arrivo al luogo di destinazione, la partita di animali non
entri mai in contatto con animali di qualifica inferiore.
4. Gli Stati membri provvedono affinché il trasportatore si impegni per
iscritto a far sì che in particolare:
— siano adottate tutte le misure necessarie per conformarsi alla presente diret-
tiva ed in particolare alle disposizioni previste dal presente articolo
concernenti la documentazione appropriata che deve accompagnare gli
animali;
— il trasporto degli animali sia affidato a personale in possesso della capacità,
della competenza e delle conoscenze professionali necessarie.
5. In caso di mancata osservanza delle disposizioni del presente articolo si
applicano per analogia, per quanto concerne la salute degli animali, le disposi-
zioni di cui all'articolo 18 della direttiva 91/628/CEE.1997L0012 — IT — 31.12.1998 — 001.001 — 10
▼B
Articolo 13
1. Gli Stati membri provvedono affinché tutti i commercianti siano registrati,
approvati, ricevano dall'autorità competente un numero di autorizzazione e
soddisfino almeno i seguenti requisiti:
a) trattare solo animali che siano identificati e provengano da allevamenti uffi-
cialmente indenni da tubercolosi, brucellosi e leucosi o animali da macello
che soddisfino i requisiti stabiliti nella presente direttiva, in particolare quelli
di cui all'articolo 6, paragrafo 3. A tal fine il commerciante si accerta che gli
animalisiano opportunamente identificati e accompagnati dall'adeguata docu-
mentazione sanitaria.
Tuttavia, l'autorità competente può autorizzare transazioni di animali identi-
ficati che non soddisfino i suddetti requisiti purché tali animali siano
immediatamente avviati in un macello dello Stato membro d'origine senza
transitare per i loro impianti, per esservi macellati il più rapidamente possi-
bile al fine di evitare qualsiasi propagazione di malattie. Dovranno essere
prese le disposizioni necessarie affinché fin dal loro arrivo nel macello tali
animali non possano entrare in contatto con altri animali e affinché siano
macellati separatamente rispetto agli altri animali;
b) iscrivere in un registro o su supporto informatico in base al documento di
accompagnamento oppure ai numeri o marchi di identificazione degli
animali, e conservare per almeno tre anni:
— il nome del proprietario, l'origine, la data d'acquisto, le categorie, il
numero e l'identificazione degli animali delle specie bovina o il numero
di registrazione dell'azienda di origine o dell'allevamento d'origine degli
animali della specie suina acquistati;
— il numero di registrazione del trasportatore e il numero di immatricola-
zione del veicolo che consegna e raccoglie gli animali;
— il nome e l'indirizzo dell'acquirente e la destinazione degli animali;
— le copie dei ruolini di marcia, se previsti, e/o il numero di serie dei certi-
ficati sanitari;
c) nel caso in cui animali soggiornino nei loro impianti provvedere affinché:
— sia impartita al personale adibito al governo degli animali una formazione
specifica relativamente ai requisiti della presente direttiva nonché alla
cura e al benessere di detti animali;
— gli animali siano messi a disposizione del veterinario ufficiale per l'ese-
cuzione periodica di controlli ed, eventualmente, di prove su tutti gli
animali e siano prese tutte le iniziative necessarie per prevenire la propa-
gazione di malattie.
2. Gli Stati membri provvedono affinché ciascun impianto utilizzato dal
commerciante per l'esercizio della sua professione sia registrato, riceva dall'au-
torità competente un numero di autorizzazione e soddisfi almeno i seguenti
requisiti:
a) essere soggetto al controllo di un veterinario ufficiale;
b) essere situato in una zona non soggetta a divieto o restrizioni secondo la
pertinente normativa comunitaria o la legislazione nazionale;
c) essere provvisto:
— di impianti adeguati e di capacità sufficiente, in particolare di adeguate
infrastrutture di ispezione e di infrastrutture di isolamento che permettano
di isolare tutti gli animali nel caso in cui si manifesti una malattia conta-
giosa;
— di impianti che consentano di caricare e scaricare e, se del caso, di ospi-
tare opportunamente gli animali, di abbeverarli, di nutrirli e di
somministrare loro tutte le cure eventualmente necessarie; tali impianti
devono poter essere puliti e disinfettati facilmente;
— di una zona adeguata di raccolta dello strame e del letame;— di un adeguato sistema di raccolta delle acque di scolo;
d) essere pulito e disinfettato prima di ogni utilizzazione secondo le istruzioni
del veterinario ufficiale.
3. L'autorità competente può sospendere o revocare l'autorizzazione in caso
di mancato rispetto delle disposizioni del presente articolo o di altre disposizionipertinenti della presente direttiva o di qualsiasi altra direttiva pertinente in
materia di polizia sanitaria. L'autorizzazione può essere ripristinata quando
l'autorità competente si sia accertata che il commerciante si è conformato alle
disposizioni pertinenti della presente direttiva.
4. L'autorità competente procede a regolari ispezioni per verificare che conti-
nuano a sussistere le pertinenti condizioni richieste dal presente articolo.1997L0012 — IT — 31.12.1998 — 001.001 — 11
▼B
Articolo 14
1. L'autorità competente di uno Stato membro può istituire un sistema di reti
di sorveglianza.
Del sistema di sorveglianza fanno parte almeno:
— gli allevamenti;
— il proprietario dell'azienda o la persona fisica o giuridica che ne è responsa-
bile;
— il veterinario riconosciuto o il veterinario ufficiale responsabile dell'azienda;— il servizio veterinario ufficiale dello Stato membro;
— i laboratori ufficiali di diagnosi veterinaria o qualsiasi laboratorio ricono-
sciuto dall'autorità competente;
— una base di dati informatizzata;
I veterinari ufficiali dei macelli e dei centri di raccolta autorizzati saranno asso-
ciati al sistema di reti.
2. Gli obiettivi principali di tale sistema di reti di sorveglianza sono l'attribu-
zione della qualifica ufficiale delle aziende, il mantenimento di tale qualifica
mediante ispezioni periodiche, la raccolta di dati epidemiologici e la sorve-
glianza delle malattie, al fine di garantire il rispetto di tutte le prescrizioni
della presente direttiva o di qualsiasi altra direttiva pertinente in materia di
polizia sanitaria.
Il sistema di reti di sorveglianza è obbligatorio in tutte le aziende del territorio
dello Stato membro che ha istituito un siffatto sistema. L'autorità competente
può tuttavia autorizzare l'istituzione di una siffatta rete soltanto in una parte del
territorio, costituita da una o più regioni adiacenti conformi alle definizioni di
cui all'articolo 2, paragrafo 2, lettera p). Qualora sia concessa questa deroga i
movimenti di animali da altre regioni, che non fanno parte del sistema di reti
verso questa parte del territorio, sono soggetti alle disposizioni della presente
direttiva.
L'autorità competente definisce gli obblighi e i diritti ai quali devono attenersi i
veterinari riconosciuti, i responsabili o proprietari delle aziende e gli altri even-
tuali soggetti associati al sistema, comprese le persone responsabili del rilascio
del certificato sanitario.
3. L'autorità competente provvede affinché gli obblighi di cui al paragrafo 2
includano almeno quanto segue:
A. Ogni proprietario o responsabile di un'azienda ha l'obbligo:
i) di assicurarsi, mediante contratto o atto giuridico, i servizi di un veteri-
nario riconosciuto dalla autorità competente;
ii) di rivolgersi immediatamente al veterinario riconosciuto dell'azienda
qualora sospetti la presenza di una malattia infettiva o di qualsiasi
malattia soggetta a denuncia;
iii) informare il veterinario riconosciuto di qualsiasi arrivo di animali nella
sua azienda;
iv) di isolare gli animali prima di ammetterli nella sua azienda per consen-
tire al veterinario riconosciuto di verificare, se necessario tramite le
prove richieste, la possibilità di mantenere la qualifica dell'azienda.
B. Il veterinario riconosciuto di cui all'articolo 2, paragrafo 2, lettera m) è
soggetto al controllo dell'autorità competente e deve soddisfare i seguenti
requisiti:
i) soddisfare le condizioni per l'esercizio della professione veterinaria;
ii) non avere legami finanziari o di parentela con il proprietario o il respon-
sabile dell'azienda;
iii) possedere una conoscenza specifica nel settore della polizia sanitaria in
riferimento agli animali delle specie interessate. Deve cioè:
— aggiornare regolarmente le proprie conoscenze, soprattutto per
quanto concerne le norme sanitarie pertinenti;
— soddisfare i requisiti stabiliti dall'autorità competente per garantire il
corretto funzionamento della rete;
— fornire al proprietario o al responsabile dell'azienda informazioni ed
assistenza affinché siano prese tutte le iniziative volte a garantire che
sia mantenuta la qualifica dell'azienda, anche sulla base di
programmi convenuti con l'autorità competente;
— vigilare sul rispetto dei requisiti concernenti:
i) l'identificazione e la certificazione sanitaria degli animali dell'al-
levamento, degli animali ammessi e di quelli acquistati,1997L0012 — IT — 31.12.1998 — 001.001 — 12
▼B
ii) la notifica obbligatoria delle malattie infettive degli animali e di
qualsiasi altro fattore di rischio per la loro salute o benessere, e
per la salute umana,
iii) l'accertamento, per quanto possibile, della causa di morte degli
animali e il luogo in cui devono essere consegnati,
iv) le condizioni igieniche dell'allevamento e delle unità di produ-
zione degli animali.
Se necessario per il corretto funzionamento del sistema, ciascuno
Stato membro può limitare la competenza dei veterinari a un numero
determinato di aziende o a una determinata area geografica.
L'autorità competente compila gli elenchi dei veterinari riconosciuti
e delle aziende autorizzate che fanno parte della rete. Qualora
l'autorità competente constati che uno dei soggetti associati alla rete
non soddisfa più i requisiti di cui sopra, essa sospende o revoca il
riconoscimento, fatte salve le altre sanzioni eventualmente applica-
bili.
C. La base di dati informatizzata deve contenere almeno le informazioni
seguenti:
1. Per ciascun animale:
— il codice di identificazione,
— la data di nascita,— il sesso,— la razza o il mantello,— il codice di identificazione della madre, o nel caso di un animale
importato da un paese terzo, il numero di identificazione attribuito in
seguito al controllo conformemente alla direttiva 92/102/CEE, che sia
in collegamento con il numero di identificazione di origine,
— il numero di identificazione dell'azienda di nascita,— i numeri di identificazione di tutte le aziende in cui l'animale è stato
custodito e le date di ciascun movimento,
— la data del decesso o della macellazione.
2. Per ciascuna azienda:
— un numero di identificazione consistente — oltre al codice del paese
— in un codice che non superi 12 caratteri;
— il nome e l'indirizzo del detentore.
3. La base di dati dovrà permettere in qualsiasi momento di disporre delle
informazioni seguenti:
— il numero di identificazione di tutti gli animali della specie bovina
presenti in un'azienda o, in caso di gruppi di animali della specie
suina, il numero di registrazione dell'azienda d'origine o dell'alleva-
mento d'origine nonché, se del caso, il numero del certificato
sanitario;
— un elenco di tutti i movimenti di ciascun animale della specie bovina
a partire dall'azienda di nascita o, per gli animali importati da paesi
terzi, dall'azienda di importazione; e per gruppi di suini il numero di
registrazione dell'ultima azienda o dell'ultimo allevamento e, per gli
animali importati da paesi terzi, dell'azienda di importazione.
Queste informazioni saranno conservate nella base di dati finché siano
trascorsi tre anni consecutivi dopo il decesso dell'animale di specie
bovina o finché siano trascorsi tre anni consecutivi a partire dalla registra-
zione in caso di registrazione di suini.
Tuttavia agli animali della specie suina si applicano solo i paragrafi 2 e 3.
4. Tutti gli altri soggetti associati alla rete diversi da quelli di cui al paragrafo
3, parti A e B, operano sotto la responsabilità dell'autorità competente. L'autorità
competente di ciascuno Stato membro è responsabile per l'istituzione della rete e
procede a controlli periodici della medesima per garantirne il corretto funziona-
mento.
5. Gli Stati membri che istituiscono un sistema di reti di sorveglianza quale
definito nei paragrafi da 1 a 4, operativo per un periodo minimo di dodici mesi,
chiedono alla Commissione di approvarlo secondo la procedura di cui all'arti-
colo 17.
A tal fine la Commissione esamina la documentazione presentata dagli Stati
membri.
Gli esperti della Commissione convalidano i sistemi mediante un sistema di
procedura di verifica.1997L0012 — IT — 31.12.1998 — 001.001 — 13
▼B
Se l'esito della procedura di verifica è positivo, la Commissione, entro 90 giorni
dalla data di ricezione della domanda di approvazione, presenta al comitato
veterinario permanente una relazione corredata di proposte adeguate.
Qualora si constatino infrazioni ripetute, l'autorizzazione del sistema di reti di
sorveglianza può essere sospesa secondo la procedura prevista all'articolo 17 su
richiesta della Commissione o di uno o più Stati membri.
6. Gli Stati membri che hanno istituito un sistema di reti di sorveglianza rico-
nosciuto conformemente al presente articolo sono autorizzati a non applicare ai
movimenti di animali di cui alla presente direttiva effettuati nel loro territorio
l'articolo 3, paragrafo 2, lettera a), secondo trattino.
7. Entro il 31 dicembre 1999 il Consiglio, in base a una relazione della
Commissione accompagnata da proposte per cui sia prevista una decisione a
maggioranza qualificata, riesamina le disposizioni del presente articolo alla
luce dell'esperienza maturata, al fine di modificarle, aggiornarle e, se del caso,
estenderle a tutti gli Stati membri.
8. Il finanziamento del sistema di reti di sorveglianza sarà trattato nell'ambito
della revisione dell'allegato B della direttiva 85/73/CEE(1) conformemente
all'articolo 8 della direttiva 96/43/CE.
Articolo 15
1. Gli Stati membri adottano misure specifiche adeguate per punire qualsiasi
infrazione della presente direttiva commesa da persone fisiche o giuridiche.
2. Qualora si accerti che le disposizioni della presente direttiva non sono o
non sono state soddisfatte, l'autorità competente del luogo in cui è stato effet-
tuato l'accertamento adotta tutte le misure appropriate sia per tutelare la salute
degli animali che per prevenire il diffondersi di malattie.
Secondo i casi, le misure adottate dall'autorità competente possono consistere in
quanto segue:
a) terminare il viaggio o rinviare gli animali al luogo di partenza per il tragitto
più diretto, purché tale misura non rischi di mettere a repentaglio la salute o
il benessere degli animali;
b) ospitare in luogo adeguato gli animali e fornire loro le cure necessarie in
caso di interruzione del viaggio;
c) far abbattere gli animali. La destinazione e l'utilizzazione di tali animali dopo
la macellazione sono disciplinate:
— dalle disposizioni di cui alla direttiva 64/433/CEE(2), oppure
— dalle disposizioni di cui alla direttiva 90/667/CEE qualora la qualifica
sanitaria degli animali non potesse essere accertata o questi ultimi potes-
sero rappresentare un rischio per la salute degli animali o la sanità
pubblica. Tuttavia qualora occorra applicare le disposizioni previste dalla
direttiva 90/667/CEE, deve essere concesso al proprietario o al suo
mandatario un termine per la regolarizzazione prima di ricorrere a
quest'ultima possibilità. In questo caso si applicano le disposizioni del
paragrafo 3 del presente articolo.
3. L'autorità competente dello Stato membro di destinazione avverte imme-
diatamente l'autorità competente dello Stato membro di origine qualora constati
un'infrazione della presente direttiva.
Conformemente alle disposizioni di cui alla direttiva 89/608/CEE, gli Stati
membri si prestano reciproca assistenza nell'applicazione della presente direttiva,
in particolare per garantire l'osservanza delle disposizioni del presente articolo.
4. Il presente articolo lascia impregiudicate le norme nazionali applicabili in
materia di sanzioni penali.
Articolo 16
1. Gli allegati A, D, capitolo I, E e F sono modificati dal Consiglio che deli-
bera a maggioranza qualificata su proposta della Commissione, in particolare
per adeguarli all'evoluzione tecnica e scientifica.
Gli allegati B, C e D, capitolo II sono modificati dalla Commissione secondo le
procedure di cui all'articolo 17.1997L0012 — IT — 31.12.1998 — 001.001 — 14
(1) GU n. L 32 del 5. 2. 1985, pag. 14. Direttiva modificata da ultimo dalla direttiva 96/43/
CE (GU n. L 162 dell'1. 7. 1996, pag. 1).
(2) GU n. 121 del 29. 7. 1964, pag. 2012/64. Direttiva modificata da ultimo dalla direttiva
95/23/CE (GU n. L 243 dell'11. 10. 1995, pag. 7).
▼B
Tuttavia,
a) anteriormente al 1oluglio 1997 la Commissione presenta al Consiglio una
proposta di modifica dell'allegato A e dell'allegato D, capitolo I, affinché
siano aggiornati e, se necessario, essa applicherà la stessa procedura all'arti-
colo F. Il Consiglio delibera a maggioranza qualificata sulle proposte entro il
1ogennaio 1998;
b) anteriormente al 30 giugno 1998, la Commissione, in conformità della proce-
dura di cui all'articolo 17 e in base al parere del comitato scientifico
veterinario, aggiorna e modifica, se necessario, gli allegati B e C e l'allegato
D, capitolo II, per adeguarli al progresso scientifico.
2. Entro il 31 dicembre 1999 il Consiglio, in base a una relazione della
Commissione accompagnata da proposte adeguate per cui sia prevista una deci-
sione a maggioranza qualificata, riesamina le disposizioni della presente
direttiva alla luce dell'esperienza maturata, al fine di modificarle e aggiornarle
onde conformarsi alle norme previste per la realizzazione del mercato interno.
Articolo 17
Nei casi in cui si fa riferimento alla procedura prevista nel presente articolo, il
comitato veterinario permanente istituito con decisione 68/361/CEE(1) del
Consiglio delibera conformemente alla procedura di cui all'articolo 18 della
direttiva 89/662/CEE(2).
Articolo 18
Gli Stati membri che non hanno istituito un sistema di reti di sorveglianza rico-
nosciuto provvedono affinché una base di dati informatizzata conforme alle
disposizioni previste all'articolo 14 sia pienamente operativa a decorrere dal 31
dicembre 1999.
Articolo 19
Le norme stabilite dalla direttiva 90/425/CEE si applicano in particolare ai
controlli all'origine, all'organizzazione e alle conseguenze dei controlli a carico
del paese di destinazione, nonché alle misure di salvaguardia da attuare.
Articolo 20
Gli Stati membri sono destinatari della presente direttiva.1997L0012 — IT — 31.12.1998 — 001.001 — 15
(1) GU n. L 255 del 18. 10. 1968, pag. 23.
(2) GU n. L 395 del 30. 12. 1989, pag. 13. Direttiva modificata da ultimo dalla direttiva
92/118/CEE (GU n. L 62 del 15. 3. 1993, pag. 49).
▼B
ALLEGATO A
I.Allevamentobovinoufficialmenteindennedatubercolosi
1. È considerato ufficialmente indenne da tubercolosi un allevamento bovino
nel quale:
a) nessun animale presenta sintomi clinici di tubercolosi;
b) tutti gli animali di età superiore a sei settimane hanno reagito negati-
vamente ad almeno due intradermotubercolinizzazioni ufficiali
praticate secondo le disposizioni dell'allegato B, la prima sei mesi
dopo l'eradicazione di qualsiasi eventuale infezione dall'allevamento e
la seconda sei mesi più tardi; qualora l'allevamento sia stato creato
solamente con animali provenienti da allevamenti ufficialmente
indenni da tubercolosi, la prima intradermotubercolinizzazione ha
luogo perlomeno 60 giorni dopo la creazione dell'allevamento e la
seconda non è richiesta;
c) dopo l'esecuzione della prima prova di cui alla precedente lettera b),
non è stato introdotto nell'allevamento alcun bovino di età superiore a
sei settimane, salvo qualora abbia reagito negativamente ad una intra-
dermotubercolinizzazione praticata e valutata secondo le disposizioni
dell'allegato B ed eseguita nei 30 giorni precedenti o nei 30 giorni
successivi alla data d'introduzione dell'animale nell'allevamento.
Questa prova non è richiesta negli Stati membri o nelle regioni di uno
Stato membro in cui la percentuale degli allevamenti bovini infetti da
tubercolosi è inferiore allo 0,2 % oppure quando l'animale proviene da
un allevamento ufficialmente indenne da tubercolosi.
2. Un allevamento bovino mantiene la qualifica di allevamento ufficialmente
indenne da tubercolosi se:
a) continuano ad essere soddisfatte le condizioni di cui al paragrafo 1,
lettere a) e c);
b) tutti gli animali che entrano nell'azienda provengono da allevamenti
ufficialmente indenni da tubercolosi;
c) tutti gli animali dell'azienda, ad eccezione dei vitelli di meno di sei
settimane d'età nati nell'azienda, sono sottoposti ad intradermotuberco-linizzazioni di routine, praticate annualmente secondo le disposizioni
dell'allegato B.
Se, in uno Stato membro o in una parte di Stato membro, tutti gli alle-
vamenti bovini sono sottoposti alle operazioni ufficiali di lotta contro
la tubercolosi, la Commissione può tuttavia modificare, secondo la
procedura di cui all'articolo 17, la frequenza delle prove di routine
secondo le seguenti modalità:
— qualora la percentuale di allevamenti bovini infetti da tubercolosi
non risulti, in media superiore all'1 %, in occasione degli ultimi
due controlli annuali, l'intervallo tra le tubercolinizzazioni di
routine può essere portato a due anni;
— qualora la percentuale di allevamenti bovini infetti non risulti
superiore, in media allo 0,2 %, in occasione degli ultimi due
controlli biennali, l'intervallo tra le tubercolinizzazioni di routine
può essere portato a tre anni;
— qualora la percentuale di allevamenti bovini infetti non risulti, in
media superiore allo 0,1 %, in occasione degli ultimi due controlli
triennali, l'intervallo tra le tubercolinizzazioni di routine può essere
portato a quattro anni e/o l'età degli animali sottoposti a queste
prove può essere portata a 24 mesi.
Sempre in base all'articolo 17, la Commissione può inoltre decidere di
aumentare la frequenza delle tubercolinizzazioni di routine qualora
cresca il livello di diffusione della malattia.
Se la percentuale media di allevamenti infetti non è superiore allo
0,1 % nel corso dei due più recenti periodi di controllo, la Stato
membro che dispone di un sistema di identificazione e registrazione
dei bovini tale da consentire l'identificazione degli allevamenti di
origine e di transito può rinunciare alle tubercolinizzazioni annuali
degli allevamenti, purché:
1) prima di essere introdotti in un allevamento tutti i bovini siano stati
sottoposti ad una intradermotubercolinizzazione che abbia dato
risultato negativo;
2) tutti i bovini macellati siano oggetto di una ricerca delle lesioni
provocate dalla tubercolosi e queste ultime siano sottoposte ad un
esame batteriologico per evidenziare il bacillo della tubercolosi.1997L0012 — IT — 31.12.1998 — 001.001 — 16
▼B
3. La qualifica di allevamento ufficialmente indenne da tubercolosi è
sospesa se:
a) non sono soddisfatte le condizioni di cui al precedente paragrafo 2;
b) la reazione di un animale ad una tubercolinizzazione di routine sia
considerata positiva o venga diagnosticato un caso di tubercolosi nel
corso dell'ispezione post mortem di routine.
In tali casi la qualifica di «ufficialmente indenne» dev'essere sospesa
fintanto che tutti i rimanenti animali, di età superiore alle sei setti-
mane, abbiano reagito negativamente ad almeno due
intradermotubercolinizzazioni ufficiali effettuate conformemente all'al-
legato B, la prima delle quali almeno due mesi dopo l'eliminazione
dell'animale dall'allevamento e la seconda ad almeno 42 giorni di
distanza.
Tuttavia, in deroga a quanto precede, se al termine di una prova di
routine effettuata in un allevamento uno o più animali hanno reagito
positivamente alla tubercolinizzazione e si ritiene che possa non trat-
tarsi di tubercolosi bovina, il o i casi sospetti di tubercolosi devono
essere sottoposti ad approfondita indagine, avendo cura di rintracciare
e di controllare l'allevamento di residenza al momento della prova e se
l'autorità competente lo ritiene necessario, qualsiasi allevamento in cui
gli animali abbiano precedentemente soggiornato e di effettuare tutti
gli esami di laboratorio e post mortem necessari.
In attesa dei risultati di questi esami e prove, la qualifica di ufficial-
mente indenne da tubercolosi degli allevamenti è sospesa sino al
momento in cui gli esami clinici e di laboratorio oppure le tubercoli-
nizzazioni abbiano escluso la presenza della tubercolosi dei bovini. Se
la presenza di tubercolosi non è confermata la qualifica dell'alleva-
mento o degli allevamenti può essere ripristinata.
Qualora la prova di routine specificata al paragrafo 2, lettera c) non sia
stata effettuata nei termini previsti, la qualifica dell'allevamento non è
sospesa a condizione che tale prova sia effettuata entro i 60 giorni
successivi alla scadenza inizialmente prevista e che le prove succes-
sive avvengano secondo il calendario iniziale.
c) l'allevamento contiene animali aventi una qualifica indeterminata,
secondo quanto specificato all'allegato B, punto 32. In tal caso la
qualifica dell'allevamento rimarrà sospesa fino a quando non si sarà
chiarita la situazione degli animali.
4. Uno Stato membro o una parte di Stato membro possono essere dichiarati,
in base alla procedura di cui all'articolo 17, ufficialmente indenni da
tubercolosi qualora soddisfino le seguenti condizioni:
a) la percentuale degli allevamenti bovini infetti non ha superato, per sei
anni consecutivi, lo 0,01 % e almeno il 99,9 % degli allevamenti sono
stati dichiarati, durante un periodo di dieci anni, ufficialmente indenni
da tubercolosi;
b) esiste un sistema di identificazione che consente di identificare gli
allevamenti di origine e di transito per ciascun bovino;
c) tutti i bovini macellati sono sottoposti ad un'ispezione post mortem
effettuata da un veterinario ufficiale;
d) tutti i casi sospetti di tubercolosi vengono opportunamente indagati,
avendo cura di rintracciare e di controllare gli eventuali allevamenti
di origine o di transito e di effettuare tutti gli esami di laboratorio
necessari. In attesa dei risultati di questi esami, la qualifica di ufficial-
mente indenne da tubercolosi degli allevamenti d'origine o di transito è
sospesa sino al momento in cui gli esami clinici o di laboratorio
oppure le tubercolinizzazioni abbiano escluso la presenza della tuber-
colosi dei bovini.
5. Lo Stato membro o una parte dello Stato membro mantengono la quali-
fica di ufficialmente indenni da tubercolosi se:
a) continuano ad essere rispettate le condizioni del precedente paragrafo
4, lettere a), b), c) e d);
b) in presenza di un caso di tubercolosi confermato, viene ritirata la
qualifica di ufficialmente indenne da tubercolosi all'allevamento di
origine e di transito;
c) la qualifica di ufficialmente indenne da tubercolosi degli allevamenti
nei quali è stata confermata tale malattia è ritirata sin quando:
— tutti gli animali considerati infetti siano stati macellati;
— siano stati disinfettati i locali e gli attrezzi di lavoro;1997L0012 — IT — 31.12.1998 — 001.001 — 17
▼B
— tutti i restanti bovini di età superiore alle sei settimane abbiano
reagito negativamente ad almeno due intradermotubercolinizza-
zioni ufficiali praticate secondo le disposizioni dell'allegato B, la
prima almeno sei mesi dopo la rimozione degli animali infetti e
la seconda a sei mesi di distanza.
6. Qualora sussista motivo di ritenere che, per quanto concerne la tuberco-
losi, vi siano cambiamenti significativi nella situazione di uno Stato
membro o di una parte di Stato membro riconosciuti ufficialmente
indenni da tubercolosi la Commissione può decidere, in base alla proce-
dura di cui all'articolo 17, di sospendere o di revocare tale qualifica e
chiedere che vengano eseguite tubercolinizzazioni di routine secondo
quanto prevede il precedente paragrafo 2, lettera c).
II.Allevamenti bovini indenni da brucellosi e ufficialmente indenni da
brucellosi
Ai fini della presente parte II si intende per «bovini» tutti gli animali della
specie bovina, ad eccezione dei maschi castrati prima dei quattro mesi d'età.
1. Un allevamento bovino è ufficialmente indenne da brucellosi se:
a) non contiene bovini vaccinati contro la brucellosi, salvo qualora si
tratti di femmine vaccinate almeno tre anni prima;
b) tutti i bovini sono immuni da sintomi clinici di brucellosi da almeno
sei mesi;
c) tutti i bovini di età superiore ai 12 mesi sono stati sottoposti, con
esito negativo, ad una delle seguenti serie di prove, eseguite confor-
memente all'allegato C;
i) due sieroagglutinazioni, praticate ad un intervallo superiore a tre
mesi e inferiore a dodici mesi,
ii) tre prove dell'anello (ring test), effettuate a tre mesi di intervallo
e seguite, non meno di sei settimane dopo, da una sieroagglutina-
zione,
iii) due prove all'antigene di Brucella tamponato, ad un intervallo
superiore a tre mesi ed inferiore a dodici mesi,
iv) due prove di microagglutinazione, ad un intervallo superiore a tre
mesi e inferiore a dodici mesi.
2. Un allevamento bovino mantiene la qualifica di ufficialmente indenne da
brucellosi se:
a) viene effettuata annualmente, con esito negativo, una delle seguenti
serie di prove, conformemente alle disposizioni dell'allegato C:
i) tre prove dell'anello, effettuate ad intervalli di almeno tre mesi,
ii) tre saggi ELISA sul latte, effettuati ad intervalli di almeno tre
mesi,
iii) due prove dell'anello, effettuate ad un intervallo di almeno tre
mesi e seguite, non meno di sei settimane dopo, da una provasierologica,
iv) due saggi ELISA sul latte effettuati ad un intervallo di almeno tre
mesi e seguiti, non meno di sei settimane dopo, da una prova
sierologica,
v) due prove sierologiche, effettuate ad un intervallo non inferiore a
tre mesi e non superiore a sei mesi.
Per uno Stato membro o per una parte di Stato membro non ufficial-
mente indenni da brucellosi, ma in cui tutti gli allevamenti bovini
sono sottoposti ad operazioni ufficiali di lotta contro la brucellosi, la
Commissione può tuttavia modificare, in base alla procedura di cui
all'articolo 17, la frequenza delle prove di routine secondo le
modalità seguenti:
— se la percentuale degli allevamenti infetti non supera l'1 %, può
essere sufficiente effettuare annualmente due prove dell'anello o
due saggi ELISA sul latte ad un intervallo di almeno tre mesi,
oppure una prova sierologica;
— se almeno il 99,8 % degli allevamenti bovini sono stati ricono-
sciuti, per un periodo minimo di quattro anni, ufficialmente
indenni da brucellosi, l'intervallo tra i controlli può essere portato
a due anni ed i controlli debbono essere effettuati ricorrendo ad
una delle prove sierologiche di cui al paragrafo 7, lettera a);
b) tutti i bovini che entrano nell'allevamento provengono da allevamenti
riconosciuti come ufficialmente indenni da brucellosi e, nel caso di
bovini di età superiore ai 12 mesi, essi presentano un tasso brucellare
inferiore a 30 UI agglutinanti per millilitro se sottoposti ad una1997L0012 — IT — 31.12.1998 — 001.001 — 18
▼B
sieroagglutinazione praticata, secondo le disposizioni dell'allegato C,
nei 30 giorni precedenti l'introduzione nell'allevamento.
La sieroagglutinazione di cui alla lettera b) non è tuttavia richiesta
negli Stati membri, o nelle regioni di Stati membri in cui la percen-
tuale di allevamenti bovini infetti da brucellosi non supera, da
almeno due anni, lo 0,2 % oppure qualora gli animali provengano
da un allevamento bovino riconosciuto ufficialmente indenne da
brucellosi all'interno dello stesso Stato membro o della stessa regione
e non siano entrati in contatto, durante il trasporto, con bovini aventi
una qualifica inferiore;
c) in deroga alla precedente lettera b), i bovini provenienti da un alleva-
mento indenne da brucellosi possono essere introdotti in un
allevamento ufficialmente indenne da brucellosi purché abbiano
perlomeno 18 mesi di età e siano stati vaccinati contro la brucellosi
da più di un anno.
Questi animali debbono presentare, nei 30 giorni precedenti all'intro-
duzione, un tasso brucellare inferiore a 30 UI agglutinanti per
millilitro ed una reazione negativa di fissazione del complemento,
entrambe le prove effettuate secondo le disposizioni dell'allegato C.
Tuttavia, nel caso in cui, in base alle suddette disposizioni, un bovino
proveniente da un allevamento indenne da brucellosi venga introdotto
in un allevamento bovino ufficialmente indenne da brucellosi,
quest'ultimo sarà considerato come indenne da brucellosi per i due
anni successivi alla data d'introduzione dell'animale in questione.
3. La qualifica di ufficialmente indenne da brucellosi di un allevamento è
sospesa o ritirata se:
a) non sono rispettate le condizioni di cui ai paragrafi 1 e 2 oppure
b) si sospetta, in base a prove di laboratorio o per motivi clinici, che
uno o più animali siano malati di brucellosi.
Se si sospetta che uno o più animali di un allevamento ufficialmente
indenne da brucellosi siano malati di brucellosi, la qualifica dell'alleva-
mento può essere sospesa piuttosto che ritirata, purché l'animale o gli
animali vengano immediatamente distrutti o isolati.
Se l'animale è stato distrutto, la sospensione può essere revocata purché
tutti i bovini dell'allevamento con un'età superiore a 12 mesi, sottoposti a
due sieroagglutinazioni effettuate conformemente alle disposizioni
dell'allegato C presentino un tasso brucellare inferiore a 30 UI aggluti-
nanti per millilitro. La prima prova è effettuata non prima di 30 giorni
dopo la rimozione dell'animale e la seconda perlomeno 60 giorni dopo.
Se l'animale è stato isolato, esso può essere reintrodotto nell'allevamento
con il ripristino della qualifica dell'allevamento, purché presenti, ad una
successiva sieroagglutinazione, un tasso brucellare inferiore a 30 UI
agglutinanti per millilitro ed abbia reagito negativamente alla prova di
fissazione del complemento; le prove debbono essere eseguite secondo
le disposizioni dell'allegato C.
Se, in seguito a prove di laboratorio o a indagini epidemiologiche, è
confermata la presenza di brucellosi in un allevamento, la qualifica di
tale allevamento non sarà ripristinata fin quando tutte le bovine gravide
al momento della comparsa della malattia non abbiano reagito negativa-
mente alle prove summenzionate, l'ultima delle quali eseguita non prima
di 21 giorni dopo il parto.
4. Un allevamento bovino è considerato indenne da brucellosi se soddisfa
le condizioni di cui al paragrafo 1, lettere a), b) e c), tranne per il fatto
che:
i) le femmine possono essere vaccinate:
— entro i primi sei mesi d'età con vaccino vivo (ceppo 19) o con
altri vaccini autorizzati secondo la procedura di cui all'articolo
17 oppure
— entro i primi 15 mesi di età, con vaccino ucciso con adiuvante
45/20, controllato e riconosciuto ufficialmente;
ii) i bovini di età inferiore a 30 mesi che sono stati vaccinati con
vaccino vivo (ceppo 19) possono presentare, alla sieroagglutina-
zione, un tasso brucellare superiore a 30 UI agglutinanti per
millilitro, ma inferiore a 80 UI agglutinanti per millilitro, sempreché
presentino, alla reazione di fissazione del complemento, un tasso
inferiore a 30 unità CEE, se si tratta di femmine vaccinate da meno
di 12 mesi, o un tasso inferiore a 20 unità CEE in tutti gli altri casi;1997L0012 — IT — 31.12.1998 — 001.001 — 19
▼B
iii) oltre alle prove elencate al paragrafo 1, lettera c) sono autorizzate
anche le seguenti serie di prove, al fine di conseguire la qualifica
di «indenne da brucellosi»:
a) due prove all'antigene di Brucella tamponato eseguite ad un
intervallo superiore a tre mesi e inferiore a 12 mesi,
b) due prove di microagglutinazione eseguite ad un intervallo supe-
riore a tre mesi e inferiore a 12 mesi, secondo le disposizioni
dell'allegato C.
5. Un allevamento bovino mantiene la qualifica di indenne da brucellosi se:
i) è sottoposto a una delle serie di prove elencate al precedente para-
grafo 2, lettera a);
ii) i bovini che arrivano nell'allevamento soddisfano ai requisiti elencati
al precedente paragrafo 2, lettera b) oppure
— provengono da allevamenti indenni da brucellosi e, se si tratta di
bovini di età superiore a 12 mesi, presentano, nei 30 giorni prece-
denti l'introduzione nell'allevamento, un tasso brucellare inferiore
a 30 UI agglutinanti per millilitro alla sieroagglutinazione e una
reazione negativa di fissazione del complemento, conformemente
alle disposizioni dell'allegato C oppure,
— provengono da allevamenti indenni da brucellosi, hanno un'età
inferiore a 30 mesi e sono stati vaccinati con vaccino vivo (ceppo
19); essi possono presentare un tasso brucellare superiore a 30 UI
agglutinanti per millilitro, ma inferiore a 80 UI agglutinanti per
millilitro, sempreché presentino, alla reazione di fissazione del
complemento, un tasso inferiore a 30 unità CEE se si tratta di
femmine vaccinate da meno di 12 mesi ed un tasso inferiore a
20 unità CEE in tutti gli altri casi.
6. La qualifica di allevamento indenne da brucellosi può essere sospesa o
ritirata se:
a) non sono rispettate le condizioni di cui ai precedenti paragrafi 4 e 5,
oppure
b) si sospetta, in seguito a prove di laboratorio o per motivi clinici, che
uno o più bovini di età superiore ai 30 mesi siano malati di brucel-
losi.
Se, in un allevamento qualificato indenne da brucellosi, si sospetta che
uno o più bovini di età superiore ai 30 mesi siano malati di brucellosi, la
qualifica dell'allevamento può essere sospesa, invece che ritirata, purché
l'animale o gli animali siano immediatamente distrutti o isolati.
Nel caso in cui l'animale sia stato distrutto, la sospensione può essere
revocata se tutti i bovini dell'azienda di età superiore ai 12 mesi, sotto-
posti a due sieroagglutinazioni secondo le disposizioni dell'allegato C,
presentano un tasso brucellare inferiore a 30 UI agglutinanti per milli-
litro. La prima prova dev'essere eseguita non prima di 30 giorni dopo
la rimozione dell'animale e la seconda ad almeno 60 giorni di distanza.
Nel caso in cui l'animale sia stato isolato, esso può essere reintrodotto
nell'allevamento, con il ripristino della qualifica dell'allevamento, purché
ad una successiva sieroagglutinazione presenti un tasso brucellare infe-
riore a 30 UI agglutinanti per millilitro e reagisca negativamente ad
una prova di fissazione del complemento; le prove debbono essere
eseguite conformemente alle disposizioni dell'allegato C.
Se, in seguito a prove di laboratorio o a indagini epidemiologiche, viene
confermata la brucellosi in un allevamento, la qualifica di tale alleva-
mento non sarà ripristinata sin quando tutte le bovine gravide al
momento della comparsa della malattia abbiano reagito negativamente
alle prove suddette, l'ultima delle quali eseguita non prima di 21 giorni
dopo il parto.
7. Una regione di uno Stato membro può essere dichiarata ufficialmente
indenne da brucellosi secondo la procedura di cui all'articolo 17 se
soddisfa le seguenti condizioni:
a) non si è verificato, da almeno tre anni, alcun caso di aborto dovuto
alla brucellosi e perlomeno il 99,8 % degli allevamenti sono stati
dichiarati, da 10 anni, ufficialmente indenni da brucellosi;
b) esiste un sistema d'identificazione che consente di identificare gli
allevamenti di origine e di transito per ogni bovino.
8. Fatte salve le disposizioni di cui al seguente paragrafo 9, una regione
dichiarata ufficialmente indenne da brucellosi mantiene tale qualifica se
tutti i bovini di età superiore ai 24 mesi sono sottoposti, ogni tre anni, a1997L0012 — IT — 31.12.1998 — 001.001 — 20
▼B
due prove dell'anello oppure ad una prova sierologica. In caso di
reazione positiva si applicano le disposizioni del precedente paragrafo 6.
9. Una regione dichiarata ufficialmente indenne da brucellosi deve notifi-
care tutti i casi di brucellosi alla Commissione. Quest'ultima può, in
base alla procedura di cui all'articolo 17, proporre di sospendere o di
revocare la qualifica e chiedere che vengano effettuate le prove di
routine relative alla brucellosi secondo uno dei programmi esposti al
precedente paragrafo 2.
10. Uno stato membro può essere dichiarato, in base alla procedura di cui
all'articolo 17, ufficialmente indenne da brucellosi se risponde alle
seguenti condizioni:
a) non si è verificato, da almeno tre anni, alcun caso di aborto dovuto a
brucellosi e almeno il 99,8 % degli allevamenti sono stati dichiarati,
da 10 anni, ufficialmente indenni da brucellosi;
b) esiste un sistema d'identificazione che consente di identificare gli
allevamenti di origine e di transito per ogni bovino.
11. Uno Stato membro dichiarato ufficialmente indenne da brucellosi
mantiene tale qualifica se:
— ogni bovino sospetto di aver contratto la brucellosi è notificato
all'autorità competente e sottoposto agli esami ufficiali per la brucel-
losi, che devono includere almeno due prove sierologiche del sangue,
compresa la prova di fissazione del complemento, nonché un esame
microbiologico dei campioni necessari prelevati in caso di aborto;
— sino a quando permane il sospetto d'infezione, ossia sino a quando le
prove di cui al primo trattino abbiano fornito risultati negativi, è
sospesa la qualifica di ufficialmente indenne da brucellosi dell'alle-
vamento di origine o di transito dell'animale sospetto;
— in caso di reazione positiva si applicano le disposizioni del prece-
dente paragrafo 6.
12. Uno Stato membro dichiarato ufficialmente indenne da brucellosi noti-
fica tutti i casi di brucellosi alla Commissione. La Commissione può,
in base alla procedura di cui all'articolo 17, proporre la sospensione o
la revoca della qualifica e chiedere che vengano eseguite le prove di
routine per la brucellosi, conformemente a uno dei programmi esposti
al precedente paragrafo 2.
13. a) Ai fini della presente parte II si intende per prova sierologica una
prova di sieroagglutinazione, una prova all'antigene di Brucella
tamponato, una prova di fissazione del complemento, una prova di
plasmoagglutinazione, una prova dell'anello di latte su plasma
sanguigno, una prova di microagglutinazione o saggio singolo ELISA
su sangue, secondo la descrizione di cui all'allegato C.
b) Se le prove dell'anello vengono effettuate su campioni di latte sfuso,
il numero delle prove indicato nel presente allegato dev'essere
raddoppiato e gli intervalli tra le prove dimezzati.1997L0012 — IT — 31.12.1998 — 001.001 — 21
▼B
ALLEGATO B
(NORME PER LA FABBRICAZIONE E L'UTILIZZAZIONE DELLE
TUBERCOLINEBOVINEEDAVIARIE)
1. Le tubercolinizzazioni controllate ufficialmente devono essere effettuate
mediante tubercoline PPD o tubercoline preparate sinteticamente e concen-
trate a caldo («tubercoline sintetiche»).
2. Gli standard di fabbricazione per il controllo delle tubercoline PPD bovine e
delle tubercoline cosiddette «sintetiche» devono essere titolati in unità
tubercoliniche comunitarie (UTC) mediante prove biologiche secondo le
norme CEE per la tubercolina standard CEE.
3. Gli standard di fabbricazione per il controllo delle tubercoline aviarie
devono essere espressi in unità internazionali e titolati per via biologica,
secondo lo standard CEE della tubercolina PPD aviaria.
4. Lo standard CEE per la tubercolina PPD bovina è fornito dall'Instituut voor
Dierhonderij en Diergezondheid (ID-DLO), Lelystad, Paesi Bassi.
5. Lo standard CEE per la tubercolina «sintetica» bovina è fornito dall'«Institut
Pasteur» di Parigi, Francia.
6. Lo standard CEE per la tubercolina aviaria è fornito dal Veterinary Labora-
tory Agency, Addlestone, Weybridge, Regno Unito.
7. Le tubercoline bovine devono essere preparate con uno dei ceppi di Myco-
bacterium bovis indicati qui di seguito:
a) AN5;
b) Vallee.
8. Le tubercoline aviarie devono essere preparate con uno dei ceppi di Myco-
bacterium avium indicati qui di seguito:
a) D4ER;
b) TB56.
9. Il pH delle tubercoline deve essere compreso fra 6,5 e 7,5.
10. Per quanto concerne l'aggiunta alle tubercoline di conservanti antimicrobici
o di altre sostanze, deve risultare dimostrato, a giudizio dell'istituto statale
responsabile del controllo ufficiale della tubercolina, che tale aggiunta non
altera l'innocuità né l'efficacia del prodotto.
Le concentrazioni massime consentite per il fenolo e la glicerina sono le
seguenti:
a) fenolo: 0,5 % M/v;
b) glicerina: 10 % v/v.
11. Superata con esito favorevole l'ultima prova di attività, le tubercoline,
conservate a temperature comprese fra 2 ºC e 8 ºC ed al riparo dalla luce,
rimangono valide per tutta la durata dei periodi sotto indicati:
a) tubercoline PPD liquide: due anni.
tubercoline PPD liofilizzate: otto anni;
b) tubercoline «sintetiche» diluite: due anni.
12. Nei rispettivi paesi, gli istituti statali seguenti sono incaricati del controllo
ufficiale delle tubercoline:
a) Germania: Paul-Ehrlich Institut, Frankfurt/Main;
b) Belgio: Institut d'hygiène et d'épidémiologie, rue J. Wytsman 14, B-
1050 Bruxelles;
c) Francia: Laboratoire national des médicaments vétérinaires, Fougères;d) Granducato del Lussemburgo: istituto del paese fornitore;e) Italia: Istituto superiore di sanità, Roma;
f) Paesi Bassi: Instituut voor Dierhonderij en Diergezondheid (ID-DLO),
Lelystad, Paesi Bassi;
g) Danimarca: Statens Veterinaere Serumlaboratorium, Kobenhavn V;h) Irlanda: istituto del paese fornitore;
i) Regno Unito: Veterinary Laboratory Agency, Applestone, Weybridge;1997L0012 — IT — 31.12.1998 — 001.001 — 22
▼B
j) Grecia: Κέντρο Κτηνιατριχών Ιδρυµάτων Νεαπόλεως 25, 153 10
Αθήνα;
k) Spagna: Laboratorio de Sanidad y Producción Animai de Granada;l) Portogallo: Laboratório Nacional de Investigação Veterinária, Lisboa;m) Austria: Bundesanstalt für Tierseuchenbekämpfung, Mödling;n) Finlandia: Central Veterinary Laboratory, Weybridge;o) Svezia: Statens veterinärmedicinska anstalt, Uppsala.
13. Ciascuna partita di tubercoline infialate e pronte per l'uso dev'essere oggetto
di un controllo ufficiale.
14. Le tubercoline devono essere controllate con metodi biologici e chimici.15. Le tubercoline devono essere sterili. Le prove di sterilità devono essere
effettuate secondo le norme della farmacopea europea.
16. Le tubercoline devono risultare esenti da proprietà tossiche od irritanti in
base a una prova effettuata secondo le norme della farmacopea europea.
17. Le tubercoline devono essere sottoposte a un'analisi chimica per determinare
l'esatta concentrazione della glicerina e/o del fenolo, nonché la concentra-
zione di altri eventuali conservanti.
18. Una prova di non sensibilizzazione alla tubercolina deve essere effettuata
secondo le norme della farmacopea europea.
19. L'attività delle tubercoline deve essere valutata con metodi biologici, appli-
cabili alle tubercoline PPD e a quelle «sintetiche» e basati sul confronto
delle tubercoline in esame con tubercoline standard.
20. Il contenuto proteico delle tubercoline PPD (tubercoloproteina) si ottiene
secondo il metodo di Kjeldahl. Il fattore di conversione dell'azoto in tuber-
coloproteine è 6,25.
21. Lo standard CEE per la tubercolina «sintetica» bovina ha un'attività di
65 000 unità tubercoliniche comunitarie (UTC) provvisorie per ml, e viene
distribuito in fiale da 5 ml.
22. Lo standard CEE per la tubercolina PPD bovina ha un'attività di 50 000 UTC
per mg di PPD, e viene distribuito allo stato liofilizzato in fiale contenenti
1,8 mg di PPD (0,00002 mg di PPD corrispondono cioè ad 1 unità tuberco-
linica comunitaria di attività).
23. La tubercolina PPD aviaria della norma CEE ha un'attività di 50 000 unità
internazionali (UI) per mg di derivato proteico purificato essiccato e viene
distribuita allo stato liofilizzato in fiale contenenti 10 mg di PPD più
26,3 mg di sali (0,0000726 mg dello standard corrispondono cioè ad 1
unità internazionale di attività).
24. Le tubercoline che i fabbricanti presentano per il controllo agli istituti statali
di cui al paragrafo 12 devono essere state oggetto di una prova biologica di
attività in paragone con gli opportuni standard elencati ai paragrafi 2 e 3.
25. a)Provediattivitàsucavie
La prova dev'essere effettuata su cavie albine di peso fra 400 e 600 g.
Tali cavie devono essere in buona salute al momento dell'inoculazionedella tubercolina. Per ciascuna prova vanno impiegate non meno di otto
cavie. La prova dev'essere effettuata a non meno di un mese di distanza
dalla sensibilizzazione.
aa) Per il controllo delle tubercoline bovine, le cavie devono essere
sensibilizzate con un dei metodi seguenti:
1. iniezione di Mycobacterium bovis del ceppo AN5, ucciso col
calore, in coadiuvante oleoso;
2. iniezione di Mycobacterium bovis del ceppo AN5 vivo in emul-
sione salina fisiologica;
3. iniezione di vaccino BCG.
bb) Per il controllo delle tubercoline aviarie, le cavie devono essere
sensibilizzate mediante inoculazione di 2 mg di micobatteri tuberco-
lari del tipo aviario, uccisi col calore, sospesi in 0,5 ml di paraffina
liquida sterile, ovvero mediante inoculazione di micobatteri tuberco-
lari vivi del tipo aviario in emulsione salina fisiologica. Il ceppo da
impiegare è quello del tipo aviario D4.
cc) Qualunque tubercolina esaminata dev'essere titolata mediante inocu-
lazione intradermica in paragone con l'opportuna tubercolina
standard, impiegando gruppi di cavie opportunamente sensibilizzate.1997L0012 — IT — 31.12.1998 — 001.001 — 23
▼B
Le cavie devono essere tosate sui due fianchi. La prova deve essere
effettuata confrontando le reazioni indotte da una serie di inocula-
zioni intracutanee di dosi da 0,2 ml al massimo di diluizioni della
tubercolina standard in soluzione salina isotonica tamponata conte-
nente lo 0,0005 % di Tween 80, con una corrispondente serie di
inoculazioni della tubercolina in esame. Le diluizioni devono essere
preparate in serie geometrica ed essere iniettate nelle cavie secondo
una distribuzione irregolare in quadrato latino (otto iniezioni, da
praticarsi in quattro punti su ciascun lato). Il diametro delle aree di
reazione su ciascun lato deve essere misurato e registrato dopo 24-
28 ore.
Per ciascun campione di tubercolina sotto prova deve essere effet-
tuata una valutazione dell'attività relativa e dei suoi limiti di
affidabilità, basata su metodi statistici, impiegando come metametri
i diametri delle aree di reazione ed i logaritmi delle dosi. L'attività
della tubercolina bovina in esame è accettabile se, in base alla valu-
tazione, ogni dose destinata ai bovini risulta contenere 2000 UTC
(± 25 %). L'attività di qualunque tubercolina in esame, deve essere
espressa, secondo i casi, in unità tubercoliniche comunitarie o in UI/
ml.
b)Controllodell'attività suibovini
Un controllo dell'attività delle tubercoline bovine può essere effettuato
periodicamente su bovini infetti da tubercolosi per via naturale o artifi-
ciale. Dette prove di attività, da praticarsi su gruppi di bovini
tubercolitici, devono essere effettuate per inoculazione intradermica della
tubercolina in esame in 4 o 6 punti, in paragone con l'opportuno stan-
dard; l'attività della tubercolina deve essere valutata con metodi
statistici come nella prova su cavie.
26. Per l'etichettatura dei contenitori e degli imballaggi delle tubercoline devono
essere rispettate le seguenti norme:
L'etichetta del contenitore e quella dell'imballaggio devono indicare:
— il nome del preparato,
— per i preparati liquidi, il volume totale del contenitore,— il numero di unità comunitarie o di unità internazionali per ml o per mg,— il nome del fabbricante,— il numero della partita,— per i preparati liofilizzati, la natura e la quantità del liquido di ricostitu-
zione.
L'etichetta del contenitore o dell'imballaggio deve indicare:
— data di scadenza,
— condizioni di conservazione,— denominazione e, se possibile, proporzione di ogni sostanza aggiunta,— tipo di bacillo dal quale è stata ricavata la tubercolina.
27. Dei laboratori comunitari designati conformemente all'articolo 17 verranno
incaricati di controlli complementari delle tubercoline utilizzate nei vari
Stati membri per assicurare che l'attività di ciascuna di queste tubercoline
sia conforme a quella della corrispondente tubercolina standard comunitaria.
Tali analisi devono essere effettuate su bovini tubercolitici, su cavie oppor-
tunamente sensibilizzate e mediante appropriate reazioni chimiche.
28. Sono riconosciute ufficialmente le seguenti tecniche di intradermotubercoli-
nizzazione:
a) intradermotubercolinizzazione unica: inoculazione singola di tubercolina
bovina;
b) intradermotubercolinizzazione comparativa: inoculazione simultanea
delle due tubercoline (aviaria e bovina).
29. La dose di tubercolina inoculata non deve essere inferiore a:
1) 2 000 UCT di tubercolina bovina;
2) 2 000 UI di tubercolina aviaria W15.
Il volume di ciascuna dose non deve superare 0,2 ml.
30. La tubercolinizzazione deve essere effettuata inoculando la tubercolina, o le
tubercoline, nella pelle del collo. I punti di inoculazione devono trovarsi al
limite tra il terzo anteriore ed il terzo mediano del collo. Quando nello
stesso animale vengono inoculate ambedue le tubercoline il punto d'inocula-
zione della tubercolina aviaria deve trovarsi a circa 10 cm dalla cresta del
collo e il punto di inocolazione della tubercolina bovina a 12,5 cm al di
sotto di una linea approssimativamente parallela a quella della spalla, o su1997L0012 — IT — 31.12.1998 — 001.001 — 24
▼B
diversi punti del collo; negli animali giovani, sul cui collo non vi è abba-
stanza spazio per effettuare le due inoculazioni a distanza sufficiente sullo
stesso lato, ciascuna inoculazione va praticata su uno dei due lati del collo,
in punti identici, al centro del terzo mediano del collo.
31. Tecnica ed interpretazione delle reazioni di tubercolinizzazione
a)Tecnica
Tosare e pulire i punti di inoculazione. Prendere fra il pollice e l'indice
una piega di pelle in ciascuna delle zone depilate, misurarne lo spessore
con un calibro e annotarne il risultato. Introdurre obliquamente negli
strati più profondi della pelle, tenendo il taglio trasversale della punta
rivolto verso l'esterno, un ago corto sterile, collegato ad una siringa
graduata caricata con la tubercolina in esame. Iniettare la dose di tuber-
colina. L'inoculazione è avvenuta in modo corretto se la palpazione
rivela un piccolo gonfiore, delle dimensioni di un pisello, in ciascun
punto di inoculazione. A distanza di 72 ore dall'inoculazione, misurare
nuovamente lo spessore della piega cutanea in ciascun punto di inocula-
zione e annotarne il risultato.
b)Interpretazione delle reazioni
L'interpretazione delle reazioni deve essere fondata su osservazioni
cliniche e sulla registrazione dell'aumento, o degli aumenti, dello spes-
sore della piega cutanea nei punti di inoculazione, 72 ore dopo
l'inoculazione della tubercolina o delle tubercoline.
ba)Reazione negativa: si osserva solo un gonfiore circoscritto con
aumento di spessore della piega cutanea non superiore a 2 mm,
senza segni clinici, quali edema diffuso od esteso, essudazione,
necrosi, dolore o infiammazione dei doti linfatici della regione o
dei linfonodi.
bb)Reazione dubbia: non si osservano segni clinici del tipo di quelli
menzionati al punto ba), e l'aumento dello spessore della piega
cutanea è superiore a 2 mm ed inferiore a 4 mm.
bc)Reazione positiva: si osservano segni clinici del tipo di quelli
menzionati al punto ba), o si riscontra un aumento di 4 mm o più
dello spessore della piega cutanea nel punto di iniezione.
32.Interpretazionedelleintradermotubercolinizzazioni ufficiali
a) Intradermotubercolinizzazione singola:
positiva: reazione secondo la definizione del paragrafo 31, lettera
bc);
dubbia: reazione secondo la definizione del paragrafo 31, lettera
bb);
negativa: reazione secondo la definizione del paragrafo 31, lettera
ba).
Gli animali per i quali la intradermotubercolinizzazione singola non dà
esito conclusivo devono essere sottoposti ad un'altra prova a distanza di
almeno 42 giorni.
Gli animali che non risultano negativi a questa seconda prova devono
essere ritenuti positivi.
Gli animali che risultano positivi all'intradermotubercolinizzazione
singola possono essere sottoposti ad un'intradermotubercolinizzazione
comparativa.
b) Intradermotubercolinizzazione comparativa per il riconoscimento degli
allevamenti ufficialmente indenni da tubercolosi e per il mantenimento
di tale qualifica:
positiva: reazione bovina positiva, superiore di oltre 4 mm alla
reazione alla tubercolina aviaria, ovvero presenza di segni
clinici;
dubbia: reazione bovina positiva o dubbia, superiore da 1 a 4 mm
alla reazione alla tubercolina aviaria, ed assenza di segni
clinici.
negativa: reazione bovina negativa, ovvero reazione bovina positiva o
dubbia, ma di intensità pari o inferiore ad una reazione
positiva o dubbia alla tubercolina aviaria ed assenza di
segni clinici in ambedue i casi.1997L0012 — IT — 31.12.1998 — 001.001 — 25
▼B
Gli animali per i quali l'intradermotubercolinizzazione comparativa non
dà esito conclusivo devono essere sottoposti ad un'altra prova a distanza
di almeno 42 giorni. Gli animali che non risultano negativi a questa
seconda prova devono essere ritenuti positivi.
c) Per gli allevamenti dove siano presenti animali per i quali si ritenga che:
1) abbiano avuto una reazione dubbia ad una intradermotubercolinizza-
zione singola,
2) siano risultati positivi all'intradermotubercolinizzazione singola, ma
che sono in attesa di un nuovo controllo per intradermotubercoliniz-
zazione,
3) abbiano avuto una reazione dubbia ad una intradermotubercolinizza-
zione comparativa,
la qualifica di «allevamento ufficialmente indenne da tubercolosi» può
essere sospesa e gli animali dell'allevamento sono esclusi dagli scambi
intracomunitari fino al momento in cui sia chiarito lo stato degli animali
di cui sopra.
d) Se gli animali devono essere sottoposti, in base alla legislazione comuni-
taria, a intradermotubercolinizzazione prima del trasporto, la prova deve
essere interpretata in modo tale da escludere dagli scambi intracomuni-
tari tutti gli animali che mostrano un aumento dello spessore della piega
cutanea superiore a 2 mm o la presenza di segni clinici.1997L0012 — IT — 31.12.1998 — 001.001 — 26
▼B
ALLEGATO C
BRUCELLOSI
A.Sieroagglutinazione
1. Il siero agglutinante tipo deve essere conforme al siero campione prepa-
rato dal Veterinary Laboratory Agency, Addlestone, Weybridge,
Inghilterra.
L'ampolla deve contenere 1 000 unità internazionali (UI) agglutinanti
provenienti dalla liofilizzazione di 1 ml di siero bovino.
2. Il siero tipo è quello fornito dal Bundesgesundheitsamt di Berlino.3. Il tasso delle agglutine brucellari di un siero deve essere espresso in
unità internazionali per ml (ad esempio: siero X = 80 UI per ml).
4. La lettura della sieroagglutinazione lenta in tubi deve avvenire al 50 % o
al 75 % di agglutinazione; l'antigene utilizzato dovrà essere stato titolato
nelle identiche condizioni in presenza di siero tipo.
5. L'agglutinabilità dei vari antigeni nei confronti del siero tipo deve essere
compresa entro i seguenti limiti:
— se la lettura è fatta al 50 %: tra 1/600 e 1/1 000
— se la lettura è fatta al 75 %: tra 1/500 e 1/750.
6. Per la preparazione dell'antigene destinato alla sieroagglutinazione in
tubi (metodo lento) devono essere utilizzati i ceppi Weybridge n. 99 e
USDA 1119 o qualsiasi altro ceppo di sensibilità equivalente.
7. I terreni di coltura utilizzati sia per la conservazione del ceppo nel labo-
ratorio che per la produzione dell'antigene devono essere scelti in modo
da non favorire la dissociazione batterica (S-R); si dovrà impiegare di
preferenza l'agarpatata.
8. L'emulsione batterica deve essere effettuata con soluzione fisiologica
(NaCl 8,5 ‰) fenicato allo 0,5 %. Non deve essere usato il formolo.
9. Si devono incaricare del controllo ufficiale degli antigeni i seguenti isti-
tuti ufficiali:
a) Germania: Bundesgesundheitsamt, Berlino;
b) Belgio: Institut national de recherches vétérinaires, Bruxelles;
c) Francia: Laboratoire central de recherches vétérinaires, Alfort;
d) Granducato del Lussemburgo: istituto del paese fornitore;e) Italia: Istituto superiore di sanità, Roma;
f) Paesi Bassi: Instituut voor Dierhouderij en Diergezondheit (ID-
DLO) Lelystad;
g) Danimarca: Statens Veterinaere Serum Laboratorium, Kobenhavn V;
h) Irlanda: Veterinary Research Laboratory, Department of Agriculture
and Food, Dublin;
i) Regno Unito:
— Gran Bretagna: Veterinary Laboratory Agency, Addlestone,
Weybridge, England;
— Irlanda del Nord: Veterinary Research Laboratory, Stormont,
Belfast;
j) Grecia: Κέντρο Κτηνιατρικών Ιδρυµάτων Νεαπόλεως 25, 153
10 Αθήνα;
k) Spagna: Centro Nacional de Brucelosis; Laboratorio de Sanidad y
Producción Animal de Santa Fè (Granada);
l) Portogallo: Laboratório Nacional de Investigação Veterinária,
Lisboa;
m) Austria: Bundesanstalt für Tierseuchenbekämpfung, Mödling;
n) Finlandia: Eläinlääkintä — ja elintarvikelaitos, Helsinki/anstalten för
veterinärmedicin och livs medel, Helsingfors;
o) Svezia: Statens veterinärmedicinska anstalt, Uppsala.
10. Gli antigeni possono essere forniti concentrati purché il coefficiente di
diluizione richiesto sia indicato sull'etichetta del flacone.1997L0012 — IT — 31.12.1998 — 001.001 — 27
▼B
11. Per effettuare una sieroagglutinazione occorre preparare almento tre
diluizioni per ogni siero. Le diluizioni del siero sospetto devono essere
effettuate in modo che la lettura della reazione al limite d'infezione
avvenga nel tubo mediano. In caso di reazione positiva in questo tubo
il siero sospetto conterrà quindi almeno la quantità di 30 UI agglutinanti
per millilitro.
B.Reazionedifissazionedelcomplemento
1. Come siero standard vale lo stesso substandard del siero della brucellosi
di cui al punto A 1 del presente allegato. Oltre alle unità di agglutina-
zione internazionali (UAI), devono essere presenti in un millilitro di
questo siero della brucellosi liofilizzato 1 000 unità sensibilizzanti che
fissano il complemento. Queste unità sensibilizzanti sono denominate
unità sensibilizzanti CEE (USC).
2. La fornitura del siero standardizzato è assicurata dal Bundesgesundheit-
samt di Berlino.
3. Il tenore di anticorpi che fissano il complemento, in un siero, va
espresso in unità sensibilizzanti CEE (USC) (esempio: siero X
= 60 USC/ml).
4. Un siero contenente in 1/ml 20 unità sensibilizzanti CEE (il che corri-
sponde ad un'attività del 20 ‰ dell'attività del siero di riferimento) o
più, deve essere considerato positivo.
5. I sieri devono essere inattivati come segue:
a) bovini: 56-60 ºC per 30-50 minuti;
b) suini: 60 ºC per 30-50 minuti.
6. Per la produzione dell'antigene si devono usare i ceppi Weybridge n. 99
o USDA 1119. L'antigene è costituito da un'emulsione batterica in solu-
zione fisiologica allo 0,85 % o in soluzione tampone veronal.
7. Per la reazione si deve usare una dose di complemento che sia maggiore
della dose minima necessaria per una emolisi totale.
8. Nell'esecuzione della reazione, si devono effettuare ogni volta i seguenti
controlli:
a) controllo dell'effetto anticomplementare del siero;
b) controllo dell'antigene;
c) controllo delle emazie sensibilizzate;d) controllo del complemento;e) controllo di sensibilità della reazione con l'aiuto di un siero positivo;f) controllo della specificità della reazione con l'aiuto di un siero nega-
tivo.
9. La sorveglianza e il controllo ufficiale dei sieri standard e degli antigeni
sono affidati agli organismi di cui alla sezione A, paragrafo 9 del
presente allegato.
10. Gli antigeni possono essere forniti in forma concentrata, purché sull'eti-
chetta sia indicato il coefficiente di diluizione necessario.
C.Provadell'anello (RingTest)
1. La prova dell'anello deve essere effettuata sul contenuto di ogni bidone di
latte o sul contenuto di ogni grande contenitore dell'azienda.
2. L'antigene tipo da impiegare deve provenire da uno degli istituti elencati
alla sezione A, paragrafo 9, lettere da a) a j). Si raccomanda di impiegare
antigeni standardizzati secondo le raccomandazioni dell'OMS/FAO.
3. L'antigene può essere colorato solo con ematossilina o tetrazolo; occorre
dare la preferenza all'ematossilina.
4. Se non sono utilizzati metodi di conservazione, la reazione deve essere
effettuata tra la diciottesima e la ventiquattresima ora successiva alla
mungitura. Qualora la prova sul latte debba essere effettuataoltre 24 oredopo il prelievo del campione, si devono adottare sistemi di conserva-
zione. Come conservanti si possono utilizzare il formolo o il cloruro
mercurico; in tal caso, la prova deve essere effettuata entro 14 giorni
successivi al giorno in cui è stato prelevato il campione. In caso di utiliz-
zazione del formolo, la concentrazione finale nel campione di latte deve
essere dello 0,2 %; la proporzione tra la quantità di latte e la soluzione di
formolo da aggiungere deve essere almeno di 10 a 1. Al posto del1997L0012 — IT — 31.12.1998 — 001.001 — 28
▼B
formolo si può utilizzare il cloruro mercurico; anche in tal caso la
concentrazione finale nel latte deve essere dello 0,2 % e la proporzione
tra la quantità di latte e la soluzione del cloruro mercurico da aggiungere
di 10 a 1.
5. La reazione deve essere effettuata secondo uno dei seguenti metodi:
— su una colonna di latte di almeno 25 mm di altezza e su un volume di
latte di 1 ml cui sono stati aggiunti 0,03 ml di uno degli antigeni stan-
dardizzati colorati;
— su una colonna di latte di almeno 25 mm di altezza e su un volume di
latte di 1 ml cui sono stati aggiunti 0,05 ml di uno degli antigeni stan-
dardizzati colorati;
— su un volume di latte di 8 ml cui sono stati aggiunti 0,08 ml di uno
degli antigeni standardizzati colorati;
— su una colonna di latte di almeno 25 mm di altezza e su un volume di
latte di 2 ml cui sono stati aggiunti 0,05 ml di uno degli antigeni stan-
dardizzati colorati.
6. La miscela di latte e di antigeni deve essere tenuta in termostato a 37 ºC
per almeno 45 e al massimo 60 minuti. La prova deve essere valutata
entro 15 minuti dalla rimozione della soluzione dal termostato.
7. La reazione deve essere valutata secondo il seguente criterio:
a)reazione negativa: latte colorato, crema decolorata;
b)reazione positiva: latte e crema colorati in modo identico o latte deco-
lorato e crema colorata.
D.Provaall'antigenediBrucella tamponato
La prova all'antigene di Brucella tamponato può essere effettuata secondo
uno dei seguenti metodi:
a)Metodo manuale
1. Come siero standard è impiegato il secondo siero internazionale stan-
dard anti-Brucella abortus, fornito dal Veterinary Laboratory Agency,Addlestone, Weybridge, Inghilterra.
2. L'antigene è preparato senza riferimento alla concentrazione delle
cellule, ma la sua sensibilità deve essere standardizzata rispetto al
secondo siero internazionale standard anti-Brucella abortus, in modo
tale che l'antigene dia reazione positiva con un siero diluito 1:47,5 e
reazione negativa con un siero diluito 1:55.
3. L'antigene deve essere sospeso in diluente per l'antigene di Brucella
tamponato a pH 3,65 ± 0,5, e può essere stato colorato mediante rosa
Bengala.
4. Per la preparazione dell'antigene devono essere utilizzati il ceppo
Weybridge n. 99 opure l'USDA 1119 o qualunque altro ceppo di
sensibilità equivalente.
5. I terreni di coltura impiegati per la conservazione del ceppo in labora-
torio e per la produzione dell'antigene devono essere tali da non
provocare la dissociazione batterica (S-R); sono raccomandabili il
terreno agarpatata oppure i metodi di coltura continua.
6. L'antigene deve essere controllato nei confronti di 8 sieri liofilizzati,
riconosciuti rispettivamente positivi e negativi.
7. La sorveglianza e il controllo ufficiale dei sieri e degli antigeni stan-
dard sono effettuati dagli organismi ufficiali elencati nella sezione A,
paragrafo 9.
8. L'antigene deve essere fornito pronto per l'uso.9. La prova all'antigene di Brucella tamponato deve essere effettuata nel
modo seguente:
a) porre una goccia (0,03 ml) di antigene a fianco di una goccia
(0,03 ml) del siero su una piastra bianca;
b) mescolare con un agitatore, prima in linea retta, poi tracciando dei
cerchi del diametro di 10-12 mm circa;
c) agitare la piastra alternativamente per 4 minuti (circa 30 movimenti
al minuto);
d) effettuare la lettura della prova in buone condizioni d'illumina-
zione; in mancanza di agglutinazione la prova sarà considerata
negativa; qualsiasi grado di agglutinazione va considerato positivo,1997L0012 — IT — 31.12.1998 — 001.001 — 29
▼B
salvo quando appare chiara un'eccessiva essiccazione intorno ai
margini.
b)Metodo automatizzato
Il metodo automatizzato deve essere sensibile ed esatto almeno quanto il
metodo manuale.
E.Provadell'anello dilatte,effettuatasuplasmasanguigno
a)Prelievo del plasma sanguigno
Le provette con il sangue reso non coagulabile mediante aggiunta di
EDTA sono centrifugate per 3 minuti a 3 000 giri al minuto e poi conser-
vate per 12-24 ore a 37 ºC.
b)Impostazione diagnostica
Si versano 0,2 ml di plasma stabilizzato in una provetta contenente 1 ml
di latte crudo. Dopo aver agitato, si aggiunge una goccia (0,05 ml) di
antigene ABR e si agita nuovamente. L'antigene è standardizzato rispetto
ad un antigene standard messo a disposizione dall'istituto menzionato alla
sezione A, paragrafo 9, lettera a).
Dopo aver lasciato riposare per 45 minuti ad una temperatura di 37 ºC, si
esamina il risultato entro 15 minuti. La prova è considerata positiva se
l'anello di latte ha la stessa colorazione o una colorazione più pronunciata
di quella della colonna di latte.
F.Agglutinazionedelplasmasanguigno
Il plasma sanguigno ottenuto conformemente al metodi di cui alla sezione E,
lettera a) può essere utilizzato immediatamente dopo centrifugazione senza
che sia necessario procedere alla stabilizzazione termica. Si mescolano
0,05 ml di plasma con 1 ml antigene per la sieroagglutinazione al 50 %, il
che corrisponde ad un titolo di diluizione 1:20 nel caso della sieroagglutina-
zione. Si esamina il risultato dopo aver lasciato riposare per 18-24 ore allatemperatura di 37 ºC. La prova è considerata positiva se l'agglutinazione è
uguale o superiore al 50 %.
G.Provadimicroagglutinazione
1. Il diluente è costituito da una soluzione fisiologia 0,85 % fenicata allo
0,5 %;
2. L'antigene è preparato nel modo descritto nei paragrafi 6, 7 e 8 della
sezione A e titolato nel modo descritto alla sezione punto A, paragrafo
5. Al momento dell'uso dell'antigene si aggiunge safranina 0 allo 0,02 %
(diluizione finale).
3. Il siero standard è lo stesso siero di cui alla sezione A, paragrafo 1.4. La fornitura del siero standard è assicurata dal Bundesgesundheitsamt di
Berlino.
5. La prova di microagglutinazione utilizza piastre fornite di pozzetti a
fondo conico e della capacità di 0,250 ml. La prova viene eseguita nella
maniera seguente:
a) prediluizioni dei sieri: a ciascun pozzetto di una piastra contenente
0,075 ml di diluente si aggiungono 0,050 ml di ogni siero in esame.
Le mescolanze vengono agitate per 30 secondi.
b) diluizioni scalari dei sieri: per ogni siero preparare almeno tre dilui-
zioni. A tale scopo a partire dalle prediluizioni (1:2,5) si prelevano0,025 ml di ciascun siero e si trasferiscono su una piastra contenente
0,025 ml di diluente. In tal modo la prima diluizione viene portata al
valore di 1:5 e le successive vengono eseguite per raddoppio.
c) aggiunta dell'antigene: nei singoli pozzetti contenenti le diverse dilui-
zioni dei sieri in esame si aggiunge antigene in volume di 0,025 ml.
Previa agitazione per 30 secondi le piastre vengono chiuse con i
rispettivi coperchi e poste a 37 ºC per 20-24 ore in atmosfera umidifi-
cata.
d) lettura dei risultati: si valuta il quadro della sedimentazione dell'anti-
gene mediante esame del fondo del pozzetto riflesso da uno specchio
concavo posto al di sotto di esso. Nel caso di prova negativa l'antigene
sedimenta sotto forma di un bottone compatto, a margini netti e di
colore rosso intenso. In caso di positività si forma invece un velo
diffuso, di colorito rosa ed uniformemente distribuito. Le diverse1997L0012 — IT — 31.12.1998 — 001.001 — 30
▼B
percentuali di agglutinazione vengono determinate per raffronto con
controlli dell'antigene indicanti 0, 25, 50, 75 e 100 % di agglutina-
zione. Il titolo di ciascun siero viene espresso in UIA/ml. Nella prova
è opportuno inserire controlli costituiti da siero negativo e siero posi-
tivo diluito in modo da contenere 30 UIA/ml.
H.Saggio di immunoassorbimento enzimatico (ELISA) per la ricerca della
brucellosibovina
1. Per procedere al saggio ELISA occorrono le attrezzature ed i reattivi qui
indicati:
a) micropiastre, cuvette o qualsiasi altro recipiente per la fase solida;
b) l'antigene è fissato sulla fase solida con o senza l'ausilio di anticorpi
leganti policlonali o monoclonali;
c) il fluido biologico da esaminare;d) controlli positivi e controlli negativi corrispondenti;e) il coniugato;
f) un substrato adatto all'enzima impiegato;
g) una soluzione di arresto, se necessario;h) soluzioni per la diluizione dei campioni per la preparazione dei reattivi
e per il lavaggio;
i) un sistema di lettura corrispondente al substrato impiegato.
2.Standardizzazione e sensibilità della prova
1) i campioni di latte sfuso vengono classificati negativi se danno una
reazione inferiore al 50 % di quella data da una diluizione di
1:10 000 del secondo siero standard internazionale della brucellosi
diluito in latte negativo;
2) i campioni singoli di siero vengono classificati negativi se danno una
reazione inferiore al 10 % di quella data da una diluizione di 1:200 del
secondo siero standard internazionale della brucellosi diluito in solu-
zione salina o qualsiasi altra soluzione riconosciuta secondo la
procedura prevista all'articolo 17 previo parere del comitato scientifico
veterinario.
Gli standard ELISA della brucellosi devono essere quelli specificati
nella sezione A, paragrafi 1 e 2 (da usare alle diluizioni indicate sull'e-
tichetta).
3.Condizioni di impiego del saggio ELISA per la ricerca della brucellosi
bovina
Il metodo ELISA può essere utilizzato su un campione di latte o di siero
prelevato dal latte proveniente da un'azienda in cui almeno il 30 % delle
vacche da latte sono in lattazione.
Se si utilizza tale metodo, devono essere prese misure per assicurare una
corrispondenza tra i campioni prelevati e gli animali da cui provengono il
latte o i sieri esaminati.1997L0012 — IT — 31.12.1998 — 001.001 — 31
▼B
ALLEGATO D
CAPITOLO I
ALLEVAMENTI, STATI MEMBRI E REGIONI UFFICIALMENTE
INDENNIDALEUCOSIBOVINAENZOOTICA
A. È considerato ufficialmente indenne da leucosi bovina enzootica un alleva-
mento nel quale:
i) non è stato constatato, in base ad osservazioni cliniche o in seguito a
esami di laboratorio, alcun caso di leucosi bovina enzootica, né si è
avuta conferma di alcun caso nel corso degli ultimi due anni e
ii) tutti gli animali di età superiore ai 24 mesi hanno, nel corso degli ultimi
12 mesi, reagito negativamente a due prove eseguite conformemente al
presente allegato, ad un intervallo di almeno quattro mesi oppure
iii) sono soddisfatti i requisiti di cui al precedente punto i) e l'azienda è
situata in uno Stato membro o in una regione ufficialmente indenne da
leucosi bovina enzootica.
B. Un allevamento mantiene la qualifica di ufficialmente indenne da leucosi
bovina enzootica se:
i) continuano ad essere soddisfatte le condizioni di cui alla sezione A,
punto i);
ii) tutti gli animali introdotti nell'allevamento provengono da un alleva-
mento ufficialmente indenne da leucosi bovina enzootica;
iii) tutti gli animali di età superiore ai 24 mesi continuano a reagire negati-
vamente ad una prova eseguita ogni tre anni conformemente al capitolo
II.
C. La qualifica di allevamento ufficialmente indenne da leucosi è sospesa se
non sono rispettate le condizioni di cui alla precedente sezione B.
D. La qualifica rimane sospesa sino a quando saranno soddisfatte le seguenti
condizioni:
1. Se un unico animale dell'allevamento ufficialmente indenne da leucosi
bovina enzootica ha reagito positivamente ad una delle prove di cui al
capitolo II:
i) l'animale che ha reagito positivamente e, qualora si tratti di una
vacca, gli eventuali vitelli da essa partoriti, debbono essere destinati
alla macellazione, sotto il controllo delle autorità veterinarie;
ii) i restanti animali debbono aver reagito negativamente ad una prova
sierologica eseguita conformemente al capitolo II non prima di tre
mesi dopo la rimozione dell'animale risultato positivo e della sua
possibile progenie;
iii) dev'essere condotta un'indagine epidemiologica e gli allevamenti
epidemiologicamente collegati a quello infetto debbono essere
soggetti alle misure di cui al punto ii).
L'autorità competente può tuttavia concedere una deroga all'obbligo di
macellare il vitello di una vacca infetta qualora sia stato separato dalla
madre dopo la nascita. In tal caso il vitello deve soddisfare le condizioni
stabilite al seguente paragrafo 2, punto iii).
2. Se più animali di un allevamento ufficialmente indenne da leucosi bovina
enzootica hanno reagito positivamente o se l'infezione è stata confermata
in un allevamento:
i) gli animali che hanno reagito positivamente e i relativi vitelli, qualora
si tratti di vacche, debbono essere destinati alla macellazione sotto il
controllo delle autorità veterinarie;
ii) tutti gli animali di età superiore ai 24 mesi debbono aver reagito
negativamente a due prove eseguite conformemente al capitolo II ad
un intervallo di almeno 4 mesi e inferiore a 12 mesi;
iii) tutti gli altri animali possono, una volta identificati, rimanere nell'a-
zienda sino ad aver raggiunto l'età di 24 mesi e devono superare le
prove di cui al precedente punto ii);
iv) dev'essere condotta un'indagine epidemiologica e gli allevamenti
epidemiologicamente collegati a quello infetto debbono essere
soggetti alle misure stabilite al precedente punto ii).
L'autorità competente può tuttavia concedere una deroga all'obbligo di
macellare il vitello di una vacca infetta purché sia stato separato dalla
madre dopo la nascita. In tal caso il vitello deve soddisfare le condizioni
stabilite al precedente punto III).1997L0012 — IT — 31.12.1998 — 001.001 — 32
▼B
3. Se la qualifica di allevamento ufficialmente indenne da leucosi bovina
enzootica è stata sospesa per un qualsiasi altro motivo, tutti gli animali
dell'allevamento di età superiore ai 24 mesi debbono reagire negativa-
mente ad una prova sierologica eseguita conformemente al capitolo II.
E. La Commissione può proporre, in base, alla procedura di cui all'articolo 17,
che uno Stato membro o una regione di uno Stato membro siano riconosciuti
indenni da leucosi bovina enzootica purché soddisfino le seguenti condi-
zioni:
a) perlomeno il 99,8 % degli allevamenti bovini sono considerati alleva-
menti indenni da leucosi bovina enzootica ai sensi della precedente
sezione A,
oppure
b) nessun caso di leucosi bovina enzootica è stato confermato nello Stato
membro o nella regione in questione negli ultimi tre anni e
nel caso di uno Stato membro, tutti gli animali di età superiore ai 24 mesi
in almeno il 10 % degli allevamenti, scelti a caso, sono stati sottoposti,
con esito negativo, alle prove di cui al capitolo II nei 24 mesi precedenti
e
nel caso di una regione o di uno Stato membro, tutti gli animali di età
superiore ai 24 mesi sono stati sottoposti, con esito negativo, ad una delle
prove di cui al capitolo II.
F. Uno Stato membro o una regione di uno Stato membro mantiene la qualifica
di ufficialmente indenne da leucosi bovina enzootica se:
i) si è annualmente provveduto ad accertare, mediante un campione alea-
torio con un tasso di affidabilità del 99 %, che gli allevamenti infetti
sono meno dello 0,2 % oppure a sottoporre, con esito negativo, perlo-
meno il 20 % dei bovini di età superiore ai due anni ad una prova
eseguita conformemente al capitolo II;
oppure
ii) qualora non si sia registrato, per almeno tre anni, nessun caso di leucosi
bovina enzootica nello Stato membro o nella regione in una proporzione
di un allevamento su 10 000 si può decidere, in base all'articolo 17, di
interrompere le prove sierologiche di routine purché:
— tutti gli animali macellati nel territorio dello Stato membro o della
regione in questione siano soggetti ad un'ispezione post mortem da
parte di un veterinario ufficiale, che deve notificare tutti i tumori ai
fini degli esami di laboratorio;
— lo Stato membro notifichi tutti i casi di leucosi bovina enzootica che
si verificano nella regione interessata dalla decisione della Commis-
sione. La Commissione può decidere, in base alla procedura di cui
all'articolo 17, di sospendere o di revocare la decisione d'interrompere
le prove sierologiche di routine;
— tutti gli animali che reagiscono positivamente ad una prova di immu-
nodiffusione vengano macellati e l'allevamento resti soggetto alle
restrizioni sino a quando verrà ripristinata la sua qualifica conforme-
mente all'allegato D, capitolo I, sezione D.
G. i) La qualifica di «ufficialmente indenne da leucosi bovina enzootica» di
uno Stato membro o di una regione di uno Stato membro è sospesa,
secondo la procedura di cui all'articolo 17, qualora i casi di leucosi
bovina enzootica registrati e confermati riguardino oltre lo 0,2 % delle
aziende della regione o dello Stato membro.
ii) La qualifica di «ufficialmente indenne da leucosi bovina enzootica» può
essere ripristinata, secondo la procedura di cui all'articolo 17, qualora:
a) oltre alle misure di cui alla precedente sezione D, paragrafi 1 e 2,
perlomeno il 20 % degli altri allevamenti della regione o dello Stato
membro, selezionati a caso, siano stati soggetti, entro un periodo di 12
mesi, ad una delle prove di cui al capitolo II;
b) i risultati di queste prove consentano di stabilire, con un tasso di affi-
dabilità del 99 %, che gli allevamenti infetti sono meno dello 0,2 %.
CAPITOLO II
ESAMIPERLARICERCADELLALEUCOSIBOVINAENZOOTICA
La ricerca della leucosi bovina enzootica è effettuata mediante un esame di
immunodiffusione come descritto nelle sezioni A e B o mediante un saggio di
immunoassorbimento enzimatico (ELISA) come descritto nella sezione C.
L'esame di immunodiffusione è effettuato solo in esami individuali. In caso di
contestazione debitamente motivata dei risultati degli esami, si effettua un
controllo complementare mediante un esame di immunodiffusione.1997L0012 — IT — 31.12.1998 — 001.001 — 33
▼B
A.Reazionediimmunodiffusionesugeldiagar
1. L'antigene da impiegare nella prova deve contenere glicoproteine del
virus della leucosi bovina. Esso va standardizzato rispetto a un siero di
riferimento (siero E 1) fornito dallo Statens Veterinaere Serum Labora-
torium di Copenaghen.
2. La responsabilità della standardizzazione degli antigeni di laboratorio
rispetto al siero ufficiale CEE di riferimento (siero E 1) fornito dallo
Statens Veterinaere Serum Laboratorium di Copenaghen è affidata ai
seguenti istituti:
a) Germania: Bundesforschungsanstalt für Viruskrankheiten der Tiere,
Tübingen;
b) Belgio: Institut national de recherches vétérinaires, Bruxelles;
c) Francia: Laboratoire national de pathologie bovine, Lyon;d) Granducato del Lussemburgo: —
e) Italia: Istituto zooprofilattico sperimentale, Perugia;
f) Paesi Bassi: Instituut voor Dierhouderij en Diergezondheit (ID-
DLO), Lelystad;
g) Danimarca: Statens Veterinaere Serum Laboratorium, København;h) Irlanda: Veterinary Research Laboratory, Abbotstown, Dublin;
i) Regno Unito:
1. Gran Bretagna: Veterinary Laboratory Agency, Addlestone,
Weybridge, England;
2. Irlanda del Nord: Veterinary Research Laboratory, Stormont,
Belfast;
j) Spagna: Subdirección general de sanidad animai, Laboratorio de
sanidad y producción animal de Algete (Madrid);
k) Portogallo: Laboratório Nacional de Investigação Veterinária,
Lisboa;
l) Grecia: Κέντρο Κτηνιατριχών Ιδρυµάτων Νεαπόλεως 25, 153
10 Αθήνα;
m) Austria: Bundesanstalt für Tierseuchenbekämpfung, Mödling;
n) Finlandia: Eläinlääkintä — ja elintarvikelaitos, Helsiniki/Anstalten
for veterinärmedicin och livsmedel, Helsingfors;
o) Svezia: Statens veterinärmedicinska anstalt, Uppsala.
3. Gli antigeni standard di laboratorio devono essere presentati almeno una
volta all'anno ai laboratori di riferimento CEE elencati al paragrafo 2 per
essere esaminati in rapporto al siero tipo ufficiale CEE. Indipendente-
mente da detta standardizzazione, l'antigene in uso può essere
standardizzato secondo la tecnica descritta alla parte B.
4. I reattivi da impiegare sono i seguenti:
a) antigene: esso dovrà contenere le glicoproteine specifiche del virus
della leucosi bovina enzootica standardizzato rispetto al siero uffi-
ciale CEE;
b) siero in esame;
c) siero di controllo riconosciuto positivo;
d) gel di agar:
0,8 % di agar,
8,5 % di NaCl,tampone Tris 0,05 M, a pH 7,2;
versare 15 ml di questo terreno in una scatola Petri del diametro di
85 mm, in modo da ottenere uno strato di agar dello spessore di
2,6 mm.
5. Nell'agar sul fondo della scatola ricavare sette pozzetti, esenti da umidità
e distribuiti come segue: un pozzetto centrale e 6 pozzetti disposti in
cerchio attorno ad esso,
Diametro del pozzetto centrale: 4 mm;Diametro dei pozzetti periferici: 6 mm;Distanza fra il pozzetto centrale e i pozzetti periferici: 3 mm.1997L0012 — IT — 31.12.1998 — 001.001 — 34
▼B
6. Riempire il pozzetto centrale con l'antigene standard, i pozzetti periferici
1 e 4 (vedi lo schema) con un siero riconosciuto come positivo e i
pozzetti 2, 3, 5 e 6 con i sieri in esame. Il riempimento va effettuato
fino a scomparsa del menisco.
7. Le quantità ottenute sono le seguenti:
antigene: 32 microlitri,
siero di controllo: 73 microlitri,
sieri in esame: 73 microlitri.
8. Incubare per 72 ore a temperatura ambiente (20-27 ºC), in atmosfera
confinata ed umida.
9. La lettura può essere effettuata dopo 24 e 48 ore, ma non è possibile
ottenere il risultato finale prima di 72 ore:
a) il siero in esame è positivo se forma una linea specifica di precipita-
zione con l'antigene del virus della LBE e una linea completa di
identità con il siero di riferimento;
b) il siero in esame è negativo se non forma una linea specifica di preci-
pitazione con l'antigene della LBE e se non provoca l'incurvamento
della linea del siero di riferimento;
c) la reazione è considerata non conclusiva:
i) se la linea del siero di riferimento si incurva verso l'antigene della
LBE senza formare con l'antigene una linea di precipitazione visi-
bile,
ovvero
ii) se non può essere interpretata come negativa o positiva.
Quando la reazione non è conclusiva, la prova può essere ripetuta e
può essere impiegato siero concentrato.
10. Può essere utilizzata qualsiasi altra distribuzione o disposizione dei
pozzetti purché il siero E 4 diluito 1:10 in siero negativo risulti positivo.
B.Metodoperlastandardizzazionedell'antigene
Soluzioni e materiali necessari1. 40 ml di agarosio all'1,6 % in tampone Tris/HCl 0,05 M a pH 7,2, conte-
nente l'8,5 % di NaCl;
2. 15 ml di siero della leucosi bovina, contenente anticorpi delle sole glico-
proteine del virus della leucosi bovina, diluito 1:10 in tampone Tris/HCl
0,05 M a pH 7,2, contenente l'8,5 % di NaCl;
3. 15 ml di siero della leucosi bovina, contenente anticorpi delle sole glico-
proteine del virus della leucosi bovina, diluito 1:5 in tampone Tris/HCl
0,05 M a pH 7,2, contenente l'8,5 % di NaCl;
4. quattro scatole Petri in plastica, del diametro di 85 mm;5. un punzone del diametro di 4-6 mm;6. antigene di riferimento;
7. antigene da standardizzare;
8. bagnomaria (56 ºC).ProcedimentoSciogliere l'agarosio (1,6 %) nel tampone Tris/HCl, riscaldando cautamente a
100 ºC. Mettere in bagnomaria a 56 ºC per circa 1 ora. Porre in bagnomaria
a 56 ºC anche le diluizioni di siero della leucosi bovina.
Mescolare 15 ml della soluzione di agarosio a 56 ºC con 15 ml di siero della
leucosi bovina (1:10), agitare rapidamente e versare due porzioni da 15 ml
della miscela in due scatole Petri. Ripetere il procedimento con il siero della
leucosi bovina diluito 1:5.
Quando l'agarosio si è solidificato, praticare i pozzetti secondo il seguente
schema:
Aggiunta dell'antigene
i) Scatole Petri 1 e 3:
pozzetto A — antigene di riferimento non diluito,
pozzetto B — antigene di riferimento, diluito 1:2,pozzetti C e E — antigene di riferimento,1997L0012 — IT — 31.12.1998 — 001.001 — 35
▼B
pozzetto D — antigene da controllare, non diluito.
ii) Scatole Petri 2 e 4:
pozzetto A — antigene in esame, non diluito
pozzetto B — antigene in esame, diluito 1:2,
pozzetto C — antigene in esame, diluito 1:4,
pozzetto D — antigene in esame, diluito 1:8.
Istruzioni complementari
1. Per realizzare una precipitazione ottimale, l'esperimento va effettuato con
due diluizioni di siero (1:5 e 1:10).
2. Se il diametro di precipitazione è troppo piccolo ad ambedue le dilui-
zioni, il siero va ulteriormente diluito.
3. Se la precipitazione per ambedue le diluizioni è indistinta e il diametro è
troppo grande, per il siero va scelta una diluizione inferiore.
4. La concentrazione finale dell'agarosio deve essere dello 0,8 %; quella dei
sieri deve essere rispettivamente del 5 % e del 10 %.
5. Riportare i diametri misurati sull'accluso sistema di assi coordinati. La
diluizione di lavoro deve corrispondere alla diluizione dell'antigene sotto
prova che ha lo stesso diametro dell'antigene di riferimento.
C.Saggio di immunoassorbimento enzimatico (ELISA) per la ricerca della
leucosibovinaenzootica
1. Per procedere al saggio ELISA occorrono le attrezzature e i reattivi qui
indicati:
a) micropiastre, cuvette o qualsiasi altro recipiente per la fase solida;
b) l'antigene è fissato sulla fase solida con o senza l'ausilio di anticorpi
leganti policlonali o monoclonali. Se la fase solida è rivestita diretta-
mente dall'antigene, tutti i campioni in esame che presentano reazione
positiva devono essere riesaminati facendo riferimento all'antigene di
controllo nel caso di LBE. Quest'ultimo deve essere identico all'anti-
gene in questione, salvo nel caso di antigeni dei virus della leucosi
bovina. Se gli anticorpi leganti sono distribuiti sulla fase solida, gli
anticorpi non devono reagire ad antigeni diversi da quelli del virus
della leucosi bovina;
c) il fluido biologico da esaminare;
d) un controllo positivo e negativo corrispondente;e) il coniugato;f) un substrato adatto all'enzima impiegato;
g) una soluzione di arresto, se necessario;
h) soluzioni per la diluizione dei campioni per la preparazione dei reattivi
e per il lavaggio;
i) un sistema di lettura appropriato per il substrato impiegato.
2.Standardizzazione e sensibilità della prova
La sensibilità del saggio ELISA deve essere di livello tale che il siero E4
risulti positivo quando è diluito 10 volte (campioni di siero) o 250 volte
(campioni di latte) più della diluizione ottenuta da singoli campioni presi
congiuntamente. Nelle prove in cui i campioni (siero e latte) sono esami-
nati individualmente, il siero E4 diluito nella proporzione di 1:10 (nel
siero negativo) o di 1:250 (nel latte negativo) deve presentare una
reazione positiva quando è esaminato in una diluizione di prova uguale
a quella impiegata per le prove individuali. Agli istituti ufficiali elencati
al punto A2 incombe la responsabilità di controllare la qualità del metodo
ELISA e di determinare in particolare, per ogni partita di produzione, il
numero di campioni da raggruppare, in base al tasso di siero E4.
Il siero E4 è fornito dallo Statens Veterinaere Serum Laboratorium di
Copenaghen.
3.Condizioni di utilizzazione del saggio ELISA
Il metodo ELISA può essere utilizzato su un campione di latte o di siero
prelevato dal latte proveniente da un'azienda in cui almeno il 30 % delle
vacche da latte sono in lattazione.
Se si ricorre a tale metodo, si devono prendere misure per garantire la
corrispondenza tra i campioni prelevati e gli animali da cui provengono
il latte esaminato o i sieri.1997L0012 — IT — 31.12.1998 — 001.001 — 36
▼B
ALLEGATO E (I)
a)Malattie deibovini
— Afta epizootica
— Rabbia— Tubercolosi— Brucellosi— Pleuropolmonite essudativa contagiosa dei bovini— Leucosi bovina enzootica— Carbonchio ematico
b)Malattie deisuini
— Rabbia
— Brucellosi— Peste suina classica— Peste suina africana— Afta epizootica— Esantema vescicolare dei suini— Carbonchio ematico1997L0012 — IT — 31.12.1998 — 001.001 — 37
▼B
ALLEGATO E (II)
— Malattia di Aujeszky
— Rinotracheite bovina infettiva— Infezione da Brucella suis— Gastroenterite trasmissibile1997L0012 — IT — 31.12.1998 — 001.001 — 38
▼B
ALLEGATO F
1997L0012 — IT — 31.12.1998 — 001.001 — 39
▼B
1997L0012 — IT — 31.12.1998 — 001.001 — 40
▼B
1997L0012 — IT — 31.12.1998 — 001.001 — 41