2008R0273 — IT — 01.07.2013 — 001.001

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REGOLAMENTO (CE) N. 273/2008 DELLA COMMISSIONE

del 5 marzo 2008

che stabilisce modalità di applicazione del regolamento (CE) n. 1255/1999 del Consiglio per quanto riguarda i metodi di analisi e la valutazione qualitativa del latte e dei prodotti lattiero-caseari







LA COMMISSIONE DELLE COMUNITÀ EUROPEE, visto il trattato che istituisce la Comunità europea, visto il regolamento (CE) n. 1255/1999 del Consiglio, del 17 maggio 1999, relativo all'organizzazione comune dei mercati nel settore del latte e dei prodotti lattiero-caseari ( 1 ), in particolare gli articoli 10 e 15, l'articolo 26, paragrafo 3, l'articolo 29, paragrafo 1, e l'articolo 31, paragrafo 4, considerando quanto segue: (1) Il regolamento (CE) n. 213/2001 della Commissione ( 2 ) stabilisce le modalità di applicazione del regolamento (CE) n. 1255/1999 del Consiglio per quanto riguarda i metodi di analisi e la valutazione qualitativa del latte e dei prodotti lattiero-caseari. Gli sviluppi tecnici realizzati nel campo dei metodi di analisi rendono necessarie alcune modifiche sostanziali a tali modalità. Per motivi di chiarezza e di efficienza e visto il numero considerevole e la tecnicità di tali modifiche appare opportuno abrogare il regolamento (CE) n. 213/2001 e sostituirlo con un nuovo regolamento. (2) È necessario verificare la composizione e le caratteristiche qualitative del latte e dei prodotti lattiero-caseari stabilite nel quadro dei regimi previsti dal regolamento (CE) n. 1255/1999 allo scopo di garantirne la piena conformità con i requisiti fissati. (3) Spesso i metodi di riferimento previsti per tali verifiche sono metodi pubblicati da organismi internazionali quali il Comitato europeo di normalizzazione (CEN), la Federazione internazionale dell’industria del latte (FIL-IDF), l'Organizzazione internazionale per la standardizzazione (ISO) e l'AOAC International (Association of Official Analytical Chemists) e regolarmente aggiornati da tali organismi. In alcuni casi esiste un metodo di riferimento comunitario, mentre in altri casi la normativa comunitaria non precisa alcun metodo di riferimento. Per garantire un'applicazione uniforme dei metodi di riferimento è opportuno compilare un elenco di tali metodi di riferimento e dare alla Commissione la facoltà di modificarlo, se necessario. (4) Non si deve tuttavia escludere la possibilità di applicare metodi di routine, per il cui uso occorre specificare requisiti minimi. (5) Per stabilire una prassi uniforme per la valutazione dei risultati delle analisi, è inoltre opportuno fissare procedure comuni; lo stesso vale per la valutazione organolettica dei prodotti considerati e per il riesame dei risultati in caso di contestazione. (6) Per determinate analisi non esistono attualmente metodi di riferimento convalidati internazionalmente riconosciuti. Non sono quindi disponibili informazioni sulle variazioni dei risultati analitici da laboratorio a laboratorio. È pertanto opportuno stabilire metodi a livello comunitario, convalidati secondo le norme stabilite a livello internazionale, da applicare come metodi di riferimento. (7) Il regolamento (CE) n. 1898/2005 della Commissione ( 3 ) reca modalità di applicazione del regolamento (CE) n. 1255/1999 del Consiglio in ordine allo smercio sul mercato comunitario di crema di latte, burro e burro concentrato e prevede l'aggiunta di rivelatori al burro concentrato, al burro o alla crema, in determinate circostanze, per garantirne la corretta utilizzazione finale. La marcatura è importante per il corretto funzionamento del regime. Per assicurare la parità di trattamento degli operatori partecipanti è opportuno stabilire metodi comuni per l'individuazione di determinati rivelatori. (8) A norma dell'articolo 9 del regolamento (CE) n. 1255/1999 è possibile concedere un aiuto all'ammasso privato di formaggi prodotti a base di latte di pecora. Per questi stessi prodotti può essere concessa una speciale restituzione a norma dell'articolo 31 del suddetto regolamento. È possibile importare nella Comunità da determinati paesi terzi, a condizioni preferenziali, formaggi prodotti con latte di pecora, di capra o di bufala oppure con miscele di latte di questi animali. Per questo motivo è necessario verificare con controlli adeguati che nei formaggi di cui trattasi non sia stato incorporato latte vaccino. È quindi opportuno definire un metodo di riferimento comunitario atto a rivelare la presenza di latte vaccino, fatto salvo il ricorso a metodi di routine conformi a determinati criteri. (9) A norma del regolamento (CEE) n. 2921/90 della Commissione, del 10 ottobre 1990, relativo alla concessione di aiuti per il latte scremato destinato alla fabbricazione di caseina e di caseinati ( 4 ), occorre accertare l'assenza di coliformi. Il metodo di riferimento riconosciuto a livello internazionale per la ricerca di coliformi nel latte e nei prodotti lattiero-caseari è la norma ISO 4831. È stato stabilito un metodo di riferimento comunitario per la ricerca di coliformi basato sulla succitata norma. (10) Il regolamento (CEE) n. 2658/87 del Consiglio, del 23 luglio 1987, relativo alla nomenclatura tariffaria e statistica e alla tariffa doganale comune ( 5 ), differenzia le aliquote dei dazi doganali degli alimenti composti per animali appartenenti alla voce tariffaria 2309 in funzione del loro tenore in prodotti lattiero-caseari. Ai fini di un'applicazione uniforme delle disposizioni in oggetto, occorre adottare un metodo d'analisi del tenore in lattosio generalmente riconosciuto e obbligatorio per tutti gli Stati membri. (11) A norma del regolamento (CE) n. 1255/1999 il burro e il latte scremato in polvere destinati all'intervento, nonché il latte scremato in polvere destinato all'alimentazione degli animali devono soddisfare determinati requisiti di qualità. È quindi opportuno stabilire metodi di riferimento per accertare il rispetto dei suddetti requisiti. (12) Il presente regolamento introduce determinati metodi per la prima volta. È necessario prevedere un periodo sufficiente a decorrere dall'entrata in vigore del presente regolamento per permettere ai laboratori di introdurre e utilizzare correttamente tali metodi nuovi. In caso di revisione e pubblicazione di uno dei metodi di riferimento elencati nell'allegato I da parte dell'organismo di normalizzazione che l'ha elaborato, è opportuno concedere ai laboratori un periodo di sei mesi per aggiornare i procedimenti analitici in modo da conformarsi alla nuova norma. (13) Le misure di cui dal presente regolamento sono conformi al parere del comitato di gestione per il latte e i prodotti lattiero-caseari, considerando quanto segue: HA ADOTTATO IL PRESENTE REGOLAMENTO:







CAPO I

DISPOSIZIONI GENERALI

Articolo 1

Oggetto e campo di applicazione

1. Il presente regolamento stabilisce determinati metodi di riferimento per le analisi chimiche, fisiche e microbiologiche e per la valutazione organolettica del latte e dei prodotti lattiero-caseari, da utilizzare nell'ambito dei regimi previsti dall'organizzazione comune dei mercati nel settore del latte e dei prodotti lattiero-caseari istituita dal regolamento (CE) n. 1255/1999, e le modalità di applicazione di tali metodi.

2. L'elenco dei metodi di riferimento applicabili alle analisi di cui all'articolo 1 è riportato nell'allegato I del presente regolamento.

3. La Commissione aggiorna l'elenco secondo la procedura di cui all'articolo 42 del regolamento (CE) n. 1255/1999.

Articolo 2

Metodi di routine

Per l'esecuzione delle analisi previste dalla normativa comunitaria possono essere applicati metodi di routine, purché siano adeguatamente tarati e periodicamente verificati rispetto al metodo di riferimento. I risultati sono comparati tenendo conto della distorsione costante, della ripetibilità e della riproducibilità.

In caso di controversia, prevalgono i risultati ottenuti con il metodo di riferimento.

Gli Stati membri informano la Commissione dell'uso dei metodi di routine nelle analisi di cui all'articolo 1.







CAPO II

METODI DI ANALISI

Articolo 3

Valutazione del rispetto dei limiti regolamentari di una data partita

L'allegato II del presente regolamento si applica per stabilire il rispetto dei requisiti di composizione previsti dalla normativa, tranne che nel caso delle analisi dei rivelatori.

Articolo 4

Valutazione organolettica

1. Per il latte e i prodotti lattiero-caseari diversi dal burro destinato all'ammasso pubblico, gli Stati membri utilizzano, quale metodo di riferimento per la valutazione organolettica, la norma FIL-IDF 99C/1997 o altri metodi equivalenti debitamente comunicati alla Commissione.

Per verificare il livello delle prestazioni degli assaggiatori e l'attendibilità dei risultati della valutazione organolettica si applicano le procedure indicate nell'allegato III.

2. Per il burro destinato all'ammasso pubblico, per verificare il livello delle prestazioni degli assaggiatori e l'attendibilità dei risultati della valutazione organolettica si applicano le procedure indicate nell'allegato III.

La procedura descritta nell'allegato IV si applica come metodo di riferimento per la valutazione organolettica.

Articolo 5

Determinazione dei rivelatori

1. Il metodo di analisi descritto nell'allegato V si applica come metodo di riferimento per la determinazione del tenore di trigliceridi dell'acido enantico nel burro, nel butteroil e nella crema.

2. Il metodo di analisi descritto nell'allegato VI si applica come metodo di riferimento per la determinazione della vanillina nel burro concentrato, nel burro o nella crema.

3. Il metodo d'analisi descritto nell'allegato VII si applica come metodo di riferimento per la determinazione del tenore di estere etilico dell'acido beta-apo-8'-carotenico nel burro concentrato e nel burro.

4. Il metodo d'analisi descritto nell'allegato VIII si applica come metodo di riferimento per la determinazione del tenore di stigmasterolo o di β-sitosterolo nel burro e nel burro concentrato.

5. L'aggiunta di rivelatori al burro concentrato, al burro o alla crema si considera effettuata nel rispetto della pertinente normativa comunitaria se i risultati ottenuti sono conformi alle specifiche dei punti 10 e 11 dell'allegato V e del punto 8 degli allegati VI, VII e VIII.

Articolo 6

Ricerca di caseina di latte vaccino

1. Per verificare che i formaggi che devono essere prodotti esclusivamente con latte di pecora, con latte di capra o con latte di bufala oppure con miscele di latte di pecora, capra o bufala non contengano caseina di latte vaccino si applica il metodo d'analisi di riferimento descritto nell'allegato IX.

La caseina di latte vaccino si considera presente se il contenuto di caseina di latte vaccino nel campione analizzato è pari o superiore a quello del campione di riferimento contenente l'1 % di latte vaccino descritto nell'allegato IX.

2. I metodi di routine per individuare la presenza di caseina di latte vaccino nei formaggi di cui al paragrafo 1 possono essere applicati alle seguenti condizioni:

a) il limite di individuazione non deve essere superiore allo 0,5 %;

b) non si devono ottenere risultati falsamente positivi; e

c) la caseina di latte vaccino è individuabile con la sensibilità richiesta anche dopo i lunghi periodi di maturazione consueti in commercio.

In caso di mancato rispetto di una delle condizioni sopra elencate si ricorre al metodo di riferimento descritto nell'allegato IX.

Articolo 7

Ricerca di coliformi

Per la ricerca di coliformi nel burro, nel latte scremato in polvere, nella caseina e nei caseinati si applica il metodo di riferimento descritto nell'allegato X.

Articolo 8

Determinazione del tenore di lattosio

Il tenore di lattosio nei prodotti che rientrano nel codice NC 2309 è determinato in base al metodo di riferimento descritto nell'allegato XI.

Articolo 9

Ricerca di siero di latte presamico

1. Per la ricerca di siero di latte presamico nel latte scremato in polvere destinato all'ammasso pubblico si applica il metodo di riferimento descritto nell'allegato XII.

2. Per la ricerca di siero di latte presamico nel latte scremato in polvere e nelle miscele destinati all'alimentazione animale si applica il metodo di riferimento descritto nell'allegato XII. Se si riscontra la presenza di siero di latte presamico si applica l'allegato XIII.

Articolo 10

Ricerca di latticello

Per la ricerca di latticello nel latte scremato in polvere si applica il metodo di riferimento descritto nell'allegato XIV.

Articolo 11

Ricerca di residui di antibiotici

Per la ricerca di residui di antibiotici nel latte scremato in polvere si applica il metodo di riferimento descritto nell'allegato XV.

Articolo 12

Determinazione del contenuto di latte scremato in polvere

Per la determinazione del contenuto di latte in polvere negli alimenti composti per animali si applica il metodo di riferimento descritto nell'allegato XVI.

Articolo 13

Ricerca di amido

Per la ricerca di amido nel latte scremato in polvere, nel latte in polvere denaturato e negli alimenti composti per animali si applica il metodo di riferimento descritto nell'allegato XVII.

Articolo 14

Determinazione del tenore di umidità nella crema in polvere

Per la determinazione del tenore di umidità nella crema in polvere si applica il metodo di riferimento descritto nell'allegato XVIII.

Articolo 15

Determinazione del tenore di umidità del latticello acido in polvere

Per la determinazione del tenore di umidità del latticello acido in polvere destinato agli alimenti composti per animali si applica il metodo di riferimento descritto nell'allegato XIX.

Articolo 16

Determinazione della purezza del grasso di latte

Per la determinazione della purezza del grasso di latte si applica il metodo di riferimento descritto nell'allegato XX.







CAPO III

DISPOSIZIONI GENERALI E FINALI

Articolo 17

Assicurazione qualità

Le analisi sono eseguite in laboratori che dispongono di un sistema di assicurazione della qualità analitica che comprende procedure di controllo interno della qualità. I laboratori non accreditati partecipano a programmi di verifica dell'idoneità almeno una volta all'anno e i loro risultati non deviano di oltre 2σR (deviazione standard di riproducibilità del metodo di riferimento) rispetto al valore comune. Il laboratorio tiene a disposizione, per consultazione, una descrizione particolareggiata dei sistemi utilizzati.

I laboratori accreditati in conformità delle norme di cui all'articolo 12 del regolamento (CE) n. 882/2004 del Parlamento europeo e del Consiglio, del 29 aprile 2004, relativo ai controlli ufficiali intesi a verificare la conformità alla normativa in materia di mangimi e di alimenti e alle norme sulla salute e sul benessere degli animali ( 6 ), sono esentati dall'obbligo di sottoporsi alle verifiche di idoneità.

Articolo 18

Campionamento e contestazione dei risultati analitici

1. Si procede al campionamento in conformità alla normativa pertinente per il prodotto trattato. In assenza di disposizioni in materia di campionamento si applicano le disposizioni della norma ISO 707 FIL 50: Latte e prodotti lattiero-caseari — Metodi di campionamento.

2. Nella relazione di laboratorio sui risultati dell'analisi figurano gli elementi atti a consentire una valutazione dei risultati conformemente all'allegato II e all'allegato XXI.

3. Per l'esecuzione delle analisi previste dalla normativa comunitaria si procede al prelievo di campioni in doppio.

4. Se l'operatore contesta i risultati di un'analisi, si applica la procedura indicata nell'allegato XXI.

5. Se entro cinque giorni lavorativi dal campionamento il fabbricante dimostra che la procedura di campionamento non è stata correttamente eseguita, occorre, se possibile, ripetere il campionamento. Se non è possibile procedere a un nuovo campionamento, la partita è accettata.

▼M1 —————

▼M1

Articolo 19 bis

Notifiche

Le notifiche di cui all’articolo 2, all’articolo 4, paragrafo 1, e all’allegato III C sono effettuate in conformità al regolamento (CE) n. 792/2009 della Commissione ( 7 ).

▼B

Articolo 20

Abrogazioni

Il regolamento (CE) n. 213/2001 è abrogato.

I riferimenti al regolamento abrogato si intendono fatti al presente regolamento e vanno letti secondo la tavola di concordanza di cui all'allegato XXII.

Articolo 21

Entrata in vigore

Il presente regolamento entra in vigore il terzo giorno successivo alla pubblicazione nella Gazzetta ufficiale dell'Unione europea.

Esso si applica a decorrere dal 31 marzo 2008.

Il presente regolamento è obbligatorio in tutti i suoi elementi e direttamente applicabile in ciascuno degli Stati membri.









ALLEGATO I

(Articolo 1)

ELENCO DEI METODI DI RIFERIMENTO

Legenda Min. = minimo, Max. = massimo, Allegato = allegato del regolamento citato, s.s.n.g.= sostanza secca non grassa, NP = numero di perossidi, A = aspetto, G = gusto, C = consistenza, CBT = carica batterica totale, Term. = tenore in germi termofili, SM = Stato membro, FIL = Federazione internazionale dell’industria del latte, ISO = Organizzazione internazionale per la standardizzazione, IUPAC = Unione internazionale di chimica pura e applicata, ADPI = American Dairy Products Institute, LCD = latte condensato dolcificato, LCE = latte o crema evaporati.







PARTE A Regolamento della Commissione Prodotto Parametro Limiti (1) Metodo di riferimento Nota Regolamento (CE) n. 2771/1999 — Ammasso pubblico Burro non salato Materie grasse Min. 82 % m/m ISO 17189:2003FIL 194:2003 Acqua Max. 16 % m/m ISO 3727-1:2001FIL 80-1:2001 s.s.n.g. Max. 2 % m/m ISO 3727-2:2001FIL 80-2:2001 Acidità del grasso 1,2 mmol/100 g di grasso ISO 1740:2004FIL 6:2004 NP (max.) 0,3 meq. ossigeno/ 1 000 g di grasso ISO 3976:2006FIL 74:2006 Nota 1 Coliformi Non rilevabili in 1 g Allegato X Nota 3 Grassi diversi da quelli del latte Non rilevabili con l'analisi dei trigliceridi Allegato XX Rivelatori: steroli Non rilevabili, β-sitosterolo ≤ 40 mg/kg Allegato VIII Altri rivelatori: — vanillina Non rilevabili Allegato VI — estere etilico dell'acido carotenico ≤ 6 mg/kg Allegato VII — trigliceridi dell'acido enantico Non rilevabili Allegato V Caratteristiche organolettiche Almeno 4 punti su 5 per A, F e C Allegato IV Dispersione idrica Almeno 4 punti ISO 7586:1985FIL 112A:1989 Regolamento (CE) n. 2771/1999 — Ammasso privato Burro non salato Materie grasse Min. 82 % m/m ISO 17189:2003FIL 194:2003 Acqua Max. 16 % m/m ISO 3727-1:2001FIL 80-1:2001 s.s.n.g. Max. 2 % m/m ISO 3727-2:2001FIL 80-2:2001 Regolamento (CE) n. 2771/1999 — Ammasso privato Burro salato Materie grasse Min. 80 % m/m ISO 17189:2003FIL 194:2003 Acqua Max. 16 % m/m ISO 3727-1:2001FIL 80-1:2001 s.s.n.g. (sale escluso) Max. 2 % m/m ISO 3727-2:2001FIL 80-2:2001 Sale Max. 2 % m/m ISO 15648:2004FIL 179:2004 Regolamento (CE) n. 1898/2005, capitolo II Burro non salato Materie grasse Min. 82 % m/m ISO 17189:2003FIL 194:2003 Grassi diversi da quelli del latte Allegato XX Acqua Max. 16 % m/m ISO 3727-1 2001FIL 80-1:2001 s.s.n.g. Max. 2 % m/m ISO 3727-2:2001FIL 80-2:2001 Rivelatori: — steroli Cfr. allegato VIII Allegato VIII — vanillina Cfr. allegato VI Allegato VI — estere etilico dell'acido carotenico Cfr. allegato VII Allegato VII — trigliceridi dell'acido enantico Cfr. allegato V Allegato V Regolamento (CE) n. 1898/2005, capitolo II Burro salato Materie grasse Min. 80 % m/m ISO 17189:2003FIL 194:2003 Grassi diversi da quelli del latte Allegato XX Acqua Max. 16 % m/m ISO 3727-1:2001FIL 80-1:2001 s.s.n.g. (sale escluso) Max. 2 % m/m ISO 3727-2:2001FIL 80-2:2001 Sale Max. 2 % m/m ISO 15648:2004FIL 179:2004 Rivelatori: — steroli Cfr. allegato VIII Allegato VIII — vanillina Cfr. allegato VI Allegato VI — estere etilico dell'acido carotenico Cfr. allegato VII Allegato VII — trigliceridi dell'acido enantico Cfr. allegato V Allegato V Regolamento (CE) n. 1898/2005, capitolo II Burro concentrato Materie grasse Min. 99,8 % m/m FIL 24:1964 Acqua e s.s.n.g. Max. 0,2 % m/m ISO 5536:2002FIL 23:2002 (umidità) FIL 24:1964 (s.s.n.g.) Acidità delle materie grasse 1,2 mmol/100 g di grasso ISO 1740:2004FIL 6:2004 NP (max.) 0,5 meq. ossigeno/ 1 000 g di grasso ISO 3976:2006FIL 74:2006 Nota 1 Grassi diversi da quelli del latte Assente Allegato XX Gusto Netto Odore Assenza di odori estranei Varie Assenza di neutralizzanti, antiossidanti e conservanti Rivelatori: — steroli Cfr. allegato VIII Allegato VIII — vanillina Cfr. allegato VI Allegato VI — estere etilico dell'acido carotenico Cfr. allegato VII Allegato VII — trigliceridi dell'acido enantico Cfr. allegato V Allegato V Regolamento (CE) n. 1898/2005, capitolo II Crema Materie grasse Min. 35 % m/m ISO 2450:1999FIL 16 C: 1987 Grassi diversi da quelli del latte Allegato XX Rivelatori: — steroli Cfr. allegato VIII Nota 2 — vanillina Cfr. allegato VI Allegato VI — estere etilico dell'acido carotenico Cfr. allegato VII Nota 2 — trigliceridi dell'acido enantico Cfr. allegato V Allegato V Regolamento (CE) n. 1898/2005, capitolo III Burro concentrato Materie grasse Min. 96 % m/m Nota 2 Grassi diversi da quelli del latte Allegato XX s.s.n.g. Max. 2 % m/m Nota 2 Rivelatori: — stigmasterolo (95 % m/m) 15 g/100 kg di burro concentrato Allegato VIII — stigmasterolo (85 % m/m) 17 g/100 kg di burro concentrato Allegato VIII — trigliceridi dell'acido enantico 10,34 kg/t di burro concentrato Allegato V — estere etilico dell'acido butirrico e stigmasterolo — estere etilico dell'acido butirrico — stigmasterolo: Allegato VIII Nota 2 — estere etilico dell'acido butirrico e trigliceridi dell'acido enantico — estere etilico dell'acido butirrico — trigliceridi dell'acido enantico: Allegato V Nota 2 Lecitina (E 322) Max. 0,5 % m/m Nota 2 NaC1 Max. 0,75 % m/m ISO 15648:2004FIL 179:2004 Acidità delle materie grasse 1,2 mmol/100g di grasso ISO 1740:2004FIL 6:2004 NP (max.) Max. 0,5 meq. ossigeno/ 1 000 g di grasso ISO 3976:2006FIL 74:2006 Nota 1 Gusto Netto Odore Assenza di odori estranei Varie Assenza di neutralizzanti, antiossidanti e conservanti Regolamento (CE) n. 1898/2005, capitolo IV Burro non salato Materie grasse Min. 82 % m/m ISO 17189:2003FIL 194:2003 Acqua Max. 16 % m/m ISO 3727-1:2001FIL 80-1:2001 s.s.n.g. Max. 2 % m/m ISO 3727-2:2001FIL 80-2:2001 Regolamento (CE) n. 1898/2005, capitolo IV Burro salato Materie grasse Min. 80 % m/m ISO 17189:2003FIL 194:2003 Acqua Max. 16 % m/m ISO 3727-1:2001FIL 80-1:2001 s.s.n.g. (sale escluso) Max. 2 % m/m ISO 3727-2:2001FIL 80-2:2001 Sale Max. 2 % m/m ISO 15648:2004FIL 179:2004 Articolo 9 e titolo II del regolamento (CE) n. 1255/1999 Formaggi a base di latte di pecora e/o di capra Latte vaccino < 1 % m/m Allegato IX Regolamento (CEE) n. 2921/90 Allegato I — Caseina acida Acqua Max. 12,00 % m/m ISO 5550:2006FIL 78:2006 Materie grasse Max. 1,75 % m/m ISO 5543:2004FIL 127:2004 Acidità libera Max. 0,30 ml di soluzione 0,1 N NaOH/g ISO 5547:1978FIL 91:1979 Regolamento (CEE) n. 2921/90 Allegato I — Caseina presamica Acqua Max. 12,00 % m/m ISO 5550:2006FIL 78:2006 Materie grasse Max. 1,00 % m/m ISO 5543:2004FIL 127:2004 Ceneri Min. 7,50 % m/m ISO 5545:1978FIL 90:1979 Regolamento (CEE) n. 2921/90 Allegato I — Caseinati Acqua Max. 6,00 % m/m ISO 5550:2006FIL 78:2006 Proteine del latte Min. 88,00 % m/m ISO 5549:1978FIL 92:1979 Materie grasse e ceneri Max. 6,00 % m/m ISO 5543:2004FIL 127:2004 Ceneri fisse ISO 5544:1978FIL 89:1979 Ceneri ISO 5545:1978FIL 90:1979 Regolamento (CEE) n. 2921/90 Allegato II — Caseina acida Acqua Max. 10,00 % m/m ISO 5550:2006FIL 78:2006 Materie grasse Max. 1,50 % m/m ISO 5543:2004FIL 127:2004 Acidità libera Max. 0,20 ml di soluzione 0,1 N NaOH/g ISO 5547:1978FIL 91:1979 CBT (max.) 30 000/g ISO 4833:2003 Nota 3 Coliformi Assente in 0,1 g Allegato X Nota 3 Term. (max.) 5 000/g ISO 4833:2003 Note 3 e 4 Regolamento (CEE) n. 2921/90 Allegato II — Caseina presamica Acqua Max. 8,00 % m/m ISO 5550:2006FIL 78:2006 Materie grasse Max. 1,00 % m/m ISO 5543:2004FIL 127:2004 Ceneri Min. 7,50 % m/m ISO 5545:1978FIL 90:1979 CBT (max.) 30 000/ g ISO 4833:2003 Nota 3 Coliformi Assente in 0,1 g Allegato X Nota 3 Term. (max.) 5 000/g ISO 4833:2003 Note 3 e 4 Regolamento (CEE) n. 2921/90 Allegato II — Caseinati Acqua Max. 6,00 % m/m ISO 5550:2006FIL 78:2006 Proteine del latte Min. 88,00 % m/m ISO 5549:1978FIL 92:1979 Materie grasse e ceneri Max. 6,00 % m/m ISO 5543:2004FIL 127:2004 ISO 5544:1978FIL 89:1979 o ISO 5545:1978FIL 90:1979 CBT (max.) 30 000/g ISO 4833:2003 Nota 3 Coliformi Assente in 0,1 g Allegato X Nota 3 Term. (max.) 5 000/ g ISO 4833:2003 Note 3 e 4 Regolamento (CEE) n. 2921/90 Allegato III — Caseinati Acqua Max. 6,00 % m/m ISO 5550:2006FIL 78:2006 Proteine del latte Min. 85,00 % m/m ISO 5549:1978FIL 92:1979 Materie grasse Max. 1,50 % m/m ISO 5543:2004FIL 127:2004 Lattosio Max. 1,00 % m/m ISO 5548:2004FIL 106:2004 Ceneri Max. 6,50 % m/m ISO 5544:1978FIL 89:1979 o ISO 5545:1978FIL 90:1979 CBT (max.) 30 000/g ISO 4833:2003 Nota 3 Coliformi Assente in 0,1 g Allegato X Nota 3 Term. (max.) 5 000/g ISO 4833:2003 Note 3 e 4 Regolamento (CE) n. 2799/1999 Alimenti composti per animali e latte scremato in polvere (LSP) per l'alimentazione degli animali Acqua (latticello acido in polvere) Max. 5 % m/m Allegato XIX Proteine 31,4 % m/m (min.) sull'estratto secco non grasso ISO 8968-123:2001FIL 20-123:2001 Acqua (LSP) Max. 5 % m/m ISO 5537:2004FIL 26:2004 Materie grasse (LSP) Max. 11 % m/m ISO 1736:2000FIL 9C:1987 Siero di latte presamico (LSP) Assente Allegato XIII Nota 6 Amido (LSP) Assente Allegato XVII Acqua (miscela) Max. 5 % sull'estratto secco non grasso ISO 5537:2004FIL 26:2004 Materie grasse (miscela) Direttiva 84/4/CEE della Commissione (GU L 15 del 18.1.1984, pag. 29) Siero di latte presamico (miscela) Assente Allegato XIII Tenore di LSP (del prodotto finale) Min. 50 % m/m Allegato XVI Materie grasse (del prodotto finale) Min. 2,5 % m/m o 5 % m/m Direttiva 84/4/CEE della Commissione (GU L 15 del 18.1.1984, pag. 29) Nota 7 Amido (del prodotto finale) Min. 2 % m/m Allegato XVII Nota 8 Rame (del prodotto finale) 25 ppm Direttiva 78/633/CEE della Commissione (GU L 206 del 26.7.1987, pag. 43) Regolamento (CE) n. 214/2001 LSP (metodo spray) Materie grasse Max. 1,0 % m/m ISO 1736:2000FIL 9C:1987 Proteine 31,4 % (2)m/m (min.) dell'estratto secco non grasso ISO 8968-1/2:2001FIL 20-1/2:2001 Acqua Max. 3,5 % m/m ISO 5537:2004FIL 26:2004 Acidità Max. 19,5 ml, 0,1 N NaOH/10 g solidi magri ISO 6091:1980FIL 86:1981 Lattati Max. 150 mg/100 g di solidi magri ISO 8069:2005FIL 69:2005 Fosfatasi Negativa ISO 11816-1:2006FIL 155-1:2006 Indice di insolubilità Max. 0,5 ml a 24 °C ISO 8156:2005FIL 129:2005 Particelle combuste Disco A o B (15,0 mg) ADPI (1990) CBT 40 000/g ISO 4833:2003 Nota 3 Coliformi Negativo/0,1 g Allegato X Nota 3 Latticello Negativo Allegato XIV Siero di latte presamico Negativo Allegato XII Siero di latte acido Negativo Nota 2 Antibiotici Allegato XV (1) Fatti salvi i requisiti del regolamento specifico (2) Il tenore minimo di proteine proposto è del 34 % a partire dal 1o settembre 2009.







PARTE B I metodi di riferimento elencati nella parte B si applicano all'analisi di prodotti contemplati da qualsivoglia regolamento della prima colonna. Regolamento della Commissione Prodotto Codice NC Parametro Limiti Metodo di riferimento Nota Regolamento (CE) n. 2658/87 Regolamento (CE) n. 2535/2001 Regolamento (CE) n. 1282/2006 Latte e crema di latte, non concentrati e senza aggiunta di zuccheri o di altri dolcificanti 0401 Materie grasse (≤ 6 % m/m) I limiti sono quelli specificati nella descrizione del codice NC del prodotto specifico e, ove del caso, precisati dal regolamento (CEE) n. 3846/87 della Commissione (GU L 366 del 24.12.1987, pag. 1), nella parte 9 della nomencaltura per le restituzioni all'esportazione o dal regolamento (CE) n. 2535/2001 (GU L 341 del 22.12.2001, pag. 29) ISO 1211:2001FIL 1D:1996 Materie grasse (> 6 % m/m) ISO 2450:1999FIL 16C:1987 Latte e crema di latte, concentrati o con aggiunta di zuccheri o di altri dolcificanti 0402 Materie grasse (forma liquida) ISO 1737:1999FIL 13C:1987 Materie grasse (forma solida) ISO 1736:2000FIL 9C:1987 Proteine ISO 8968-123:2001FIL 20-123:2001 Saccarosio (tenore normale) ISO 2911:2004 FIL 35:2004 Saccarosio (tenore basso) Nota 2 Sostanza secca (LCD) ISO 6734:1989FIL 15B:1991 Sostanza secca (LCE) ISO 6731:1989FIL 21B:1987 Acqua (latte in polvere) ISO 5537:2004FIL 26:2004 Acqua (crema in polvere) Allegato XVIII Latticello, latte e crema fermentati o acidificati, concentrati o non concentrati, con aggiunta di zuccheri o di altri dolcificanti 0403 Materie grasse ISO 1211:2001FIL 1D:1996 ISO 1736:2000FIL 9C:1987 ISO 2450:1999FIL 16C:1987 ISO 7208:1999FIL 22B:1987 ISO 8262-3:2005FIL 124-3:2005 Proteine ISO 8968-123:2001FIL 20-123:2001 Saccarosio (tenore normale) ISO 2911:2004FIL 35:2004 Saccarosio (tenore basso) Nota 2 Acqua (latticello acido in polvere) Allegato XIX Acqua (latticello dolce in polvere) ISO 5537:2004FIL26:2004 Sostanza secca (altri prodotti) Metodi approvati dall'autorità competente Siero di latte, anche concentrato o con aggiunta di zuccheri o di altri dolcificanti; prodotti costituiti di componenti naturali del latte 0404 Materie grasse ISO 1736:2000FIL 9C:1987 ISO 2450:1999FIL 16C:1987 ISO 7208:1999FIL 22B:1987 Proteine ISO 8968-123:2001FIL 20-123:2001 Saccarosio (tenore normale) ISO 2911:2004FIL 35:2004 Saccarosio (tenore basso) Nota 2 0404 90 Proteine ISO 8968 1/2 2001FIL 20-1/2:2001 Acqua FIL 21B:1987 Sostanza secca ISO 6734:1989FIL 15B:1991 (Prodotti concentrati) ISO 6731:1989FIL 21B:1987 Burro e altre materie grasse del latte; paste da spalmare lattiere 0405 Materie grasse (se ≤ 85 % m/m) ISO 17189:2003FIL 194:2003 Burro Acqua ISO 3727-1:2001FIL 80-1:2001 s.s.n.g. ISO 3727-2:2001FIL 80-2:2001 NaCl ISO 15648:2004FIL 179:2004 Materie grasse (se > 99 % m/m) FIL 24:1964 Butteroil Acqua (se materie grasse < 99 % m/m) ISO 5536:2002FIL 23:2002 Formaggi e latticini 0406 Materie grasse ISO 1735:2004FIL 5:2004 Sostanza secca ISO 5534:2004FIL 4:2004 Sostanza secca (Ricotta) ISO 2920:2004FIL 58:2004 NaCl ISO 5943:2006FIL 88:2006 Lattosio ISO 5765-1/2:2002FIL 79-1/2:2002 Regolamento (CEE) n. 2658/87 Mangimi composti 2309 Lattosio Allegato XI

Note dell'elenco dei metodi di riferimento dell'Unione europea:

Nota 1: Isolamento delle materie grasse del latte secondo la norma ISO 1740:1991 (protezione dalla luce).

Nota 2: Non è stato stabilito nessun metodo di riferimento. Metodi approvati dall'autorità competente.

Nota 3: La preparazione del campione deve essere eseguita secondo la norma ISO 8261:2001FIL 122:2001.

Nota 4: Incubazione per 48 ore alla temperatura di 55 °C, precauzioni da adottare per evitare il prosciugamento del terreno di coltura.

Nota 5: % m/m s.s.n.g. = % m/m sostanza secca — % m/m materia grassa.

Nota 6: Direttiva 84/4/CEE della Commissione.

Nota 7: Regolamento (CE) n. 2799/1999 della Commissione (GU L 340 del 31.12.1999, pagg. 3-27).

Nota 8: Direttiva 78/633/CEE della Commissione.









ALLEGATO II

(Articolo 3)

VALUTAZIONE DELLA CONFORMITÀ DI UNA PARTITA CON I LIMITI REGOLAMENTARI

1. PRINCIPIO

Se la normativa pertinente prevede procedure dettagliate di campionamento, si osservano tali procedure. Negli altri casi si utilizza un campione, composto di almeno 3 unità di campione, prelevato casualmente dalla partita presentata al controllo. Si può preparare un campione composito. Il risultato ottenuto si raffronta con i limiti regolamentari calcolando un intervallo di fiducia del 95 % pari al doppio della deviazione standard, dove la deviazione standard dipende da queste due ipotesi: 1) se il metodo è validato nell'ambito della cooperazione internazionale con valori definiti di σr e σR oppure 2) in caso di validazione interna, se è stato calcolato un valore di riproducibilità interna. L'intervallo di fiducia viene quindi comparato con l'incertezza di misurazione del risultato.

2. METODO CONVALIDATO NELL'AMBITO DELLA COLLABORAZIONE INTERNAZIONALE

In questo caso sono state stabilite la deviazione standard di ripetibilità σr e la deviazione standard di riproducibilità σR e il laboratorio è in grado di dimostrare l'osservanza delle caratteristiche di esecuzione del metodo validato.

Calcolare la media aritmetica

n

Calcolare l'incertezza ampliata (k = 2) di

Se il risultato finale x della misurazione è calcolato utilizzando una formula del tipo x = y 1 + y 2, x = y 1 – y 2, x = y 1 · y 2 o x = y 1 / y 2 si devono seguire le procedure di combinazione delle deviazioni standard abituali in tali casi.

Si ritiene che la partita non rispetti il limite regolamentare superiore UL se

;

altrimenti si ritiene che la partita rispetti il limite superiore UL.

Si ritiene che la partita non rispetti il limite regolamentare inferiore LL se

;

altrimenti si ritiene che la partita rispetti il limite inferiore LL.

3. VALIDAZIONE INTERNA MEDIANTE IL CALCOLO DELLA DEVIAZIONE STANDARD DI RIPRODUCIBILITÀ INTERNA

Se si utilizzano metodi non previsti dal presente regolamento e se non sono state stabilite le misure della precisione è necessario procedere ad una validazione all'interno del laboratorio. Nella formula di calcolo dell'incertezza ampliata U, anziché σr e rispettivamente siR, occorre utilizzare la deviazione standard di ripetibilità interna sir e la deviazione standard di riproducibilità interna σ R .

Le regole per l'adozione della decisione corrispondono a quelle indicate al punto 1. Tuttavia, se si ritiene che la partita non rispetti il limite regolamentare occorre ripetere le misurazioni utilizzando il metodo specificato nel presente regolamento e la decisione va presa secondo le regole indicate al punto 1.









ALLEGATO III

(Articolo 4)

VALUTAZIONE DEGLI ASSAGGIATORI E DELL'AFFIDABILITÀ DEI RISULTATI DI ANALISI ORGANOLETTICHE

Le procedure che seguono si applicano se si ricorre a metodi di classificazione mediante punteggio (norma FIL 99C:1997).

A. DETERMINAZIONE DELL «INDICE DI RIPETIBILITÀ»

Un assaggiatore deve analizzare alla cieca almeno 10 campioni in doppio entro un periodo di 12 mesi. Tale operazione si effettua di solito in più sessioni. I risultati delle caratteristiche dei singoli prodotti sono valutati utilizzando la formula seguente:

dove:

w1 : indice di ripetibilità

xi1 : punteggio per la prima valutazione del campione xi

xi2 : punteggio per la seconda valutazione del campione xi

n : numero di campioni

I campioni da valutare devono coprire un'ampia gamma di qualità. wI non deve superare 1,5 (scala a 5 punti).

B. DETERMINAZIONE DELL «INDICE DI DEVIAZIONE»

Tale indice si applica per controllare se un assaggiatore utilizza, per la valutazione qualitativa, la stessa scala di un gruppo sperimentato di assaggiatori. I punteggi attribuiti dall'assaggiatore vengono confrontati con la media dei punteggi del gruppo di assaggiatori.

Per la valutazione dei risultati si utilizza la formula seguente:

dove:

xi1; xi2 : cfr. lettera A)

; : punteggio medio del gruppo di assaggiatori per la prima e, rispettivamente, la seconda valutazione del campione xi

n : numero di campioni (almeno 10 in 12 mesi).

I campioni da valutare devono coprire un'ampia gamma di qualità. DI non deve superare 1,5 (scala a 5 punti).

Gli Stati membri comunicano eventuali difficoltà incontrate nell'applicazione di questa procedura.

Se si riscontra che singoli assaggiatori superano il limite di 1,5 per gli indici di deviazione o di ripetibilità, l'esperto o gli esperti dell'autorità ufficiale devono eseguire uno o più controlli di «riesecuzione» su campioni da essi classificati nel corso delle settimane immediatamente successive, oppure devono eseguire uno o più controlli «accompagnati» insieme ai medesimi assaggiatori. È necessaria una sorveglianza rigorosa per decidere se continuare a ricorrere ai loro servizi. È necessario documentare e conservare le risultanze come prova dell'eseguita sorveglianza.

C. CONFRONTO DEI RISULTATI OTTENUTI IN DIFFERENTI REGIONI DI UNO STATO MEMBRO E IN DIFFERENTI STATI MEMBRI

Ove del caso, almeno una volta all'anno deve essere organizzata una prova che permetta il confronto dei risultati ottenuti da assaggiatori di differenti regioni. Se si rilevano differenze significative, occorre fare in modo di individuarne le ragioni e arrivare a risultati simili.

Gli Stati membri possono organizzare prove che permettano di confrontare i risultati ottenuti dai loro assaggiatori e da assaggiatori di Stati membri confinanti. Se si riscontrano differenze significative occorre procedere a un esame approfondito allo scopo di giungere a risultati simili.

Gli Stati membri comunicano alla Commissione i risultati di tali confronti.









ALLEGATO IV

(Articolo 4)

VALUTAZIONE ORGANOLETTICA DEL BURRO

1. CAMPO D’APPLICAZIONE

La presente procedura per la valutazione organolettica del burro ha lo scopo di fornire un metodo uniforme applicabile in tutti gli Stati membri.

Per ulteriori dettagli occorre riferirsi alla norma in vigore della FIL (Federazione internazionale dell’industria del latte) per il latte e i prodotti lattiero-caseari, FIL 99 — Parti 1,2,3, sulla valutazione organolettica.

2. DEFINIZIONI

Per «valutazione organolettica» si intende l'esame delle caratteristiche di un prodotto mediante gli organi di senso.

Per «gruppo di esperti» si intende un gruppo di esperti selezionati per la valutazione che, durante le operazioni di valutazione, lavorano senza comunicare fra di loro e senza influenzarsi reciprocamente.

Per «assaggiatore» si intende una persona scelta per la sua capacità di eseguire un esame organolettico. Questo tipo di assaggiatore può avere un'esperienza limitata.

Per «assaggiatore esperto» si intende una persona con un alto grado di sensibilità sensoriale e con esperienza nel campo dei metodi di analisi organolettica, capace di compiere valutazioni organolettiche coerenti e attendibili su vari prodotti. Questo tipo di assaggiatore deve avere una buona memoria sensoriale a lungo termine.

Per «punteggio» si intende il risultato della valutazione organolettica effettuata da un gruppo di esperti ed espresso mediante l'uso di una scala numerica. Si deve usare una nomenclatura dei difetti.

Per «classificazione» si intende una classificazione di qualità eseguita sulla base del punteggio.

Per «documenti di controllo» si intendono i documenti utilizzati per registrare i punteggi singoli assegnati a ciascuna caratteristica e la classificazione finale del prodotto. (Questo documento si può usare anche per registrare la composizione chimica).

3. LOCALE DI PROVA

Per ulteriori dettagli occorre riferirsi alle norme ISO 8589 e ISO/DIS 22935-2 FIL 99-2, paragrafo 7.

Prendere le opportune precauzioni perché gli assaggiatori nella camera di prova non siano influenzati da fattori esterni.

La camera di prova deve essere esente da odori estranei e facile da pulire. Le pareti devono essere di colore chiaro e non riflettenti.

La camera di prova e la sua illuminazione devono essere tali da non influire sulle proprietà del prodotto da valutare.

La camera deve essere equipaggiata di apposito dispositivo di controllo termostatico che permetta di mantenere il burro a temperatura costante. Al momento della classificazione il burro deve avere una temperatura di 12 °C (± 2 °C).

4. SELEZIONE DEGLI ASSAGGIATORI

L'assaggiatore deve avere familiarità con i prodotti a base di burro e avere la competenza necessaria per eseguire una classificazione organolettica. La sua competenza deve essere riesaminata periodicamente (almeno una volta all'anno) da parte dell'autorità competente.

4.1. Consultare le norme ISO/DIS 22935-1 FIL 99-1 paragrafo 4 (assunzione) e paragrafo 5.1 per ulteriori dettagli sui requisiti generali e sulle prove che possono essere utilizzate prima dell'assunzione ufficiale di un nuovo assaggiatore. È fondamentale che la formazione sia continua ed è opportuno organizzare regolarmente sessioni generali. Per informazioni sulla formazione del gruppo di esperti riferirsi alla norma ISO 8586-1.

4.2. La formazione iniziale dovrebbe riguardare i seguenti aspetti: — teoria generale e importanza pratica della valutazione organolettica, — metodi, punteggi e descrizione delle impressioni sensoriali, — individuazione e riconoscimento delle caratteristiche organolettiche e conoscenza della terminologia organolettica specifica, — conoscenze di base sulla fabbricazione del burro, — riferimenti e campioni convalidati in modo da aiutare l'assaggiatore a riconoscere sapori specifici e una specifica intensità di gusto nel prodotto.

5. REQUISITI DEL GRUPPO DI ASSAGGIATORI

Il gruppo deve essere composto da un numero dispari di assaggiatori, mai inferiore a tre, comprendente una maggioranza di dipendenti dell'autorità competente o di persone autorizzate che non lavorano per l'industria lattiero-casearia.

Il presidente del gruppo è responsabile dell'intera procedura e può essere membro del gruppo di assaggiatori.

Affinché gli assaggiatori possano fornire prestazioni ottimali, prima di procedere alla valutazione occorre tener conto di diversi fattori:

— gli assaggiatori non devono essere affetti da malattie che potrebbero comprometterne le prestazioni: in caso di malattia dell'assaggiatore occorrerà sostituirlo con un altro,

— gli assaggiatori devono presentarsi puntualmente per partecipare alla valutazione e disporre di tempo sufficiente per compierla,

— gli assaggiatori devono evitare l'impiego di prodotti fortemente odorosi quali profumi, lozioni dopobarba, deodoranti e astenersi dal consumo di alimenti molto aromatizzati (speziati), ecc.,

— nella mezzora che precede la valutazione gli assaggiatori non devono fumare, né mangiare o bere tranne acqua.

6. PRESTAZIONI

Per conservare il proprio livello di competenze è necessario che tutti gli assaggiatori prendano parte regolarmente alle riunioni dei gruppi di valutazione organolettica, la cui frequenza dipenderà dal volume di produzione del burro, e che partecipino possibilmente ad una riunione del gruppo di esperti al mese.

Anche gli assaggiatori esperti dovrebbero prendere parte ad un certo numero di riunioni del gruppo di esperti all'anno e possibilmente ad almeno una riunione per trimestre.

7. CAMPIONAMENTO E PREPARAZIONE DEL CAMPIONE

È fondamentale che l'identità dei campioni sia tenuta celata durante la valutazione per evitare qualsiasi interferenza. È opportuno che i campioni siano contrassegnati da un codice.

Questi aspetti devono essere regolati prima della valutazione. La temperatura del burro durante il trasporto fino al locale di prova deve essere fissata a 6 °C ± 2 °C.

Se la valutazione organolettica è eseguita presso il magazzino frigorifero, il campione di burro è prelevato mediante un campionatore per burro. Se la valutazione organolettica è eseguita in un luogo diverso dal magazzino frigorifero, occorre prelevare un campione di almeno 500 g. Durante la valutazione, il burro deve avere una temperatura di 12 °C (± 2 °C) (cfr. la norma: ISO/DIS 22935-2 FIL 99-2, dove la temperatura di valutazione del burro è di 14 °C ± 2 °C). Evitare assolutamente grandi scostamenti da questo intervallo.

8. VALUTAZIONE DI CIASCUNA CARATTERISTICA

8.1. La valutazione organolettica è eseguita in relazione alle seguenti tre caratteristiche: aspetto, consistenza e gusto/aroma. «Laspetto» comprende le caratteristiche seguenti: colore, purezza visibile, assenza di contaminazione fisica, assenza di muffe e uniformità di dispersione dell'acqua. La dispersione dell'acqua è valutata conformemente alla norma FIL 112A/1989. La «consistenza» comprende le caratteristiche seguenti: corpo, struttura e compattezza. La spalmabilità può essere controllata utilizzando mezzi fisici su richiesta di uno Stato membro che desidera soddisfare le esigenze dei suoi consumatori. La Commissione potrà decidere di armonizzare tale metodologia in futuro. Il «corpo» si riferisce alla coesione interna del prodotto presentato al consumatore. Di solito è associato alla compattezza e alla spalmabilità e dovrebbe essere uniforme in tutto il prodotto. È una caratteristica strettamente legata alla struttura, che designa la capacità del prodotto di reggersi grazie al proprio peso. È correlato alla resistenza al taglio, che può essere misurata meccanicamente e attraverso la sensazione tattile sotto le dita e in bocca. Il «gusto» designa le caratteristiche percepite in bocca soprattutto dalle papille gustative della lingua. «Laroma» designa le caratteristiche percepite dal senso dell'odorato. Uno scostamento significativo dalla temperatura raccomandata impedisce una valutazione corretta della consistenza e del gusto. La temperatura è quindi della massima importanza. La classificazione del burro deve essere posticipata se la temperatura non rientra nella fascia raccomandata.

8.2. Ogni caratteristica deve essere oggetto di una valutazione organolettica separata. Il punteggio è assegnato in base alla tabella 1.

8.3. Può essere opportuno che, prima di iniziare la valutazione, gli assaggiatori assegnino insieme un punteggio ad uno o più campioni di riferimento per quanto riguarda aspetto, consistenza e gusto, in modo da raggiungere una maggiore uniformità.

8.4. Il punteggio per l'accettazione è il seguente: nell'assegnare un punteggio, riferirsi alla parte 7 — Nomenclatura e alla descrizione dei criteri applicabili ai punti.



Punteggio massimo Punteggio richiesto Aspetto 5 4 Consistenza 5 4 Gusto/aroma 5 4 — Se non si raggiunge il punteggio richiesto, occorre fornire una descrizione del difetto. — Il punteggio assegnato da ogni assaggiatore ad ogni caratteristica deve essere registrato nel documento di controllo. — Il prodotto è accettato o scartato sulla base di una decisione a maggioranza. — Non devono verificarsi frequentemente casi in cui le differenze tra i punteggi individuali assegnati a ciascuna caratteristica sono maggiori di un punto (non più di una volta su 20 campioni). In caso contrario il presidente deve riesaminare la competenza del gruppo di assaggiatori.

9. SUPERVISIONE

Il presidente del gruppo, che deve essere un funzionario dell'autorità competente e che può essere membro del gruppo di assaggiatori, avrà la responsabilità generale dell'intera procedura. Il presidente deve registrare nel documento di controllo i punteggi individuali per ciascuna caratteristica e certificare se il prodotto è stato accettato o scartato.

10. NOMENCLATURA

Cfr. l'allegata tabella 2.

11. RIFERIMENTO

FIL-IDF 99C:1997 Valutazione organolettica dei prodotti lattiero caseari con punteggio — Metodo di riferimento

ISO/DIS 22935 FIL 99 Norma internazionale per il latte e i prodotti lattiero-caseari — Analisi organolettica — Parti 1-3

ISO 8586-1 Analisi organolettica — Orientamenti generali per la selezione, la formazione e la sorveglianza degli assaggiatori — Parte 1

ISO 8589 Analisi organolettica — Orientamenti generali per l'allestimento dei locali di prova

FIL-IDF 112A:1989 Burro — Determinazione del valore di dispersione dell'acqua







Tabella 1 Punteggio del burro Aspetto Consistenza Gusto + aroma Punti (classe di qualità) N. (1) Osservazioni Punti (classe di qualità) N. (1) Osservazioni Punti (classe di qualità) N. (1) Osservazioni 5 Molto buono tipo ideale massima qualità (uniformemente asciutto) 5 Molto buono tipo ideale massima qualità (ben spalmabile) 5 Molto buono tipo ideale massima qualità (aroma finissimo assolutamente puro) 4 Buono (2) nessun difetto evidente 4 17 18 Buono (2) dura morbida 4 Buono (2) nessun difetto evidente 3 1 2 3 4 5 6 7 8 Discreto (leggeri difetti) acquoso, goccioline d'acqua non uniforme, due colori striature screziato marezzato chiazzato separazione d'olio colore eccessivo poroso 3 14 15 16 17 18 Discreto (leggeri difetti) corta, fragile, friabile pastosa, grassa appiccicosa dura molle 3 21 22 25 27 33 34 35 Discreto (leggeri difetti) impuro gusto estraneo acido sapore di cotto, sapore di bruciato sapore di foraggio grossolano, amaro eccessivamente salato 2 1 3 4 5 6 10 11 12 Scadente (difetti evidenti) acquoso, goccioline d'acqua striature screziato marezzato chiazzato separazione d'olio materie estranee muffa sale non disciolto 2 14 15 16 17 18 Scadente (difetti evidenti) corta, fragile, friabile pastosa, grassa appiccicosa dura molle 2 21 22 23 25 32 33 34 35 36 38 Scadente (difetti evidenti) impuro gusto estraneo stantio acido sapore di ossidato, sapore metallico sapore di foraggio grossolano, amaro eccessivamente salato ammuffito, marcio sapore chimico 1 1 3 4 5 6 7 9 10 11 12 Molto scadente (difetti gravi) acquoso, goccioline d'acqua striature screziato marezzato chiazzato separazione d'olio colore eccessivo granulare materie estranee muffa sale non disciolto 1 14 15 16 17 18 Molto scadente (difetti gravi) corta, fragile, friabile pastosa, grassa appiccicosa dura molle 1 22 24 25 26 28 29 30 31 32 34 35 36 37 38 Molto scadente (difetti gravi) gusto estraneo sapore di formaggio, di formaggio acido acido sapore di lievito sapore di muffa rancido oleoso, di pesce di sego sapore di ossidato, sapore metallico grossolano, amaro eccessivamente salato ammuffito, marcio di malto sapore chimico (1) Tabella 2. (2) I difetti citati sotto «Buono» sono solo deviazioni minime dal tipo ideale.







Tabella 2 Nomenclatura dei difetti del burro I. Aspetto 1. acquoso, goccioline d'acqua evidenti 2. colore non uniforme, due colori 3. striato 4. screziato, marezzato 5. chiazzato 6. separazione d'olio 7. colore eccessivo 8. poroso 9. granuloso 10. materiale estraneo 11. muffa 12. sale non disciolto II. Consistenza 14. corta, fragile, friabile 15. pastosa, grassa 16. appiccicosa 17. dura 18. molle III. Gusto e aroma 20. mancanza d'aroma, insipido 21. impuro (1) 22. gusto estraneo 23. stantio 24. sapore di formaggio, di formaggio acido 25. acido 26. sapore di lievito 27. a) sapore di cotto b) sapore di bruciato 28. sapore di muffa 29. rancido 30. oleoso, di pesce 31. sapore di sego 32. a) sapore di ossidato b) sapore metallico 33. sapore di foraggio 34. grossolano, amaro 35. eccessivamente salato 36. ammuffito, marcio 37. sapore di malto 38. sapore di prodotti chimici (1) Questa definizione deve venire usata il più raramente possibile e solo quando il difetto non può essere descritto in modo più accurato.









ALLEGATO V

(Articolo 5)

DETERMINAZIONE DEL TENORE DEL TRIGLICERIDE DELL'ACIDO ENANTICO NEL BURRO, NEL BUTTEROIL E NELLA CREMA MEDIANTE ANALISI GASCROMATOGRAFICA DEI TRIGLICERIDI

1. CAMPO D’APPLICAZIONE

Il metodo permette la determinazione del tenore di trigliceride dell'acido enantico nel butteroil, nel burro e nella crema.

2. TERMINI E DEFINIZIONI

Tenore di acido enantico: tenore di trigliceride dell'acido enantico determinato col procedimento specificato dal metodo.

Nota: Il tenore di acido enantico è espresso in kg/t di prodotto per il butteroil e il burro e in kg/t di materia grassa del latte per la crema.

3. PRINCIPIO

Le materie grasse del latte sono estratte dai vari prodotti secondo la norma ISO 14156 FIL 172:2001. La determinazione quantitativa del tenore di trigliceride dell'acido enantico nella materia grassa estratta è eseguita mediante gascromatografia con colonna capillare (GC). Il risultato ottenuto per il campione è valutato con riferimento al trigliceride dell'acido caproico come standard interno.

Nota: Si è riscontrato che anche il tributirino costituisce uno standard interno soddisfacente.

4. REAGENTI

Usare esclusivamente reagenti di purezza analitica riconosciuta.

4.1. n-esano

4.2. Trigliceride standard di acido caproico, avente una purezza di almeno il 99 %

4.3. Trigliceride standard di acido enantico, avente una purezza di almeno il 99 %

4.4. Solfato di sodio anidro (Na2SO4)

5. APPARECCHIATURA

Normale apparecchiatura di laboratorio, in particolare:

5.1. Bilancia analitica con una risoluzione di 1 mg

5.2. Palloni volumetrici della capacità di 10 ml e 20 ml

5.3. Tubi per centrifuga della capacità di 30 ml

5.4. Evaporatore rotante

5.5. Forno regolabile su 50 °C ± 5 °C

5.6. Carta da filtro di porosità media del diametro di circa 15 cm

5.7. Attrezzatura per gascromatografia 5.7.1. Gascromatografo provvisto di un sistema di splittaggio o splitless o di un iniettore in colonna e di rivelatore a ionizzazione di fiamma (FID). 5.7.2. Colonna GC, con una fase stazionaria di provata efficacia per la separazione del trigliceride (100 % dimetilpolisiloxano o 5 % fenil-95 % metilpolisiloxano). Selezionare la fase stazionaria, la lunghezza della colonna (tra 4 m e 15 m), il diametro interno (tra 0,22 mm e 0,50 mm) e lo spessore della pellicola [(0,12 μm o più] tenendo conto dell'esperienza del laboratorio e del sistema di iniezione applicato. In ogni modo la colonna selezionata produce sia una separazione completa tra il picco dell'eluente e il trigliceride di acido caproico, sia una risoluzione della linea di base tra i picchi di trigliceride dell'acido caproico e dell'acido enantico. Segue un elenco di esempi delle condizioni applicabili. 5.7.2.1. Esempio di condizioni applicabili utilizzando un iniettore di splittaggio: — Gas di trasporto (carrier): elio — Pressione in testa alla colonna: 100 kPa — Colonna: lunghezza 12 m, diametro interno 0,5 mm, spessore della pellicola 0,1 μm, colonna di silice fusa — Fase stazionaria: 100 % dimetilpolisiloxano o 5 % fenil-95 % dimetilpolisiloxano (ad esempio HT5) — Temperatura della colonna: temperatura iniziale 130 °C, mantenuta per 1 min, alzata in ragione di 20 °C/min fino a 260 °C e quindi alzata in ragione di 30 °C/min fino a 360 °C; mantenuta a 360 °C per 10 min — Temperatura del rivelatore: 370 °C — Temperatura dell'iniettore: 350 °C — Rapporto di splittaggio 1:30 — Quantità di campione iniettata: 1 μl. 5.7.2.2. Esempio di condizioni applicabili utilizzando un iniettore in colonna: — Gas di trasporto (carrier): idrogeno (sistema a flusso costante) — Pressione in testa alla colonna: 89 kPa — Colonna: lunghezza 4 m, diametro interno 0,32 mm, spessore della pellicola 0,25 μm, colonna di silice fusa — Fase stazionaria: 5 % fenil, 95 % dimetilpolisiloxano — Temperatura della colonna: temperatura iniziale di 60 °C, mantenuta per 2 min, alzata in ragione di 35 °C/min fino a 340 °C, mantenuta a questa temperatura per 5 min — Temperatura del rivelatore: 350 °C — Quantità di campione iniettata: 1 μl

5.8. Siringa di iniezione della capacità di 5 μl

6. CAMPIONAMENTO

È importante che il laboratorio riceva un campione veramente rappresentativo, che non ha subito danni o modifiche durante il trasporto o il magazzinaggio.

Il campionamento non rientra nel metodo specificato nella presente norma internazionale. Un metodo di campionamento raccomandato è quello descritto nella norma FIL 50C:1995 o ISO 707-1997 — Latte e prodotti latteo caseari — Metodi di campionamento.

7. PROCEDIMENTO

7.1. Preparazione del campione e della porzione da analizzare

Procedere secondo quanto descritto dalla norma ISO 14156 FIL 172:2001.

7.1.1. Butteroil e burro

7.1.1.1. Fondere da 50 a 100 g del campione nel forno (5.5)

7.1.1.2. Porre 0,5 g-1,0 g di solfato di sodio anidro (5.4) in una carta da filtro ripiegata

7.1.1.3. Filtrare il grasso attraverso la carta da filtro contenente il solfato di sodio anidro e raccogliere il filtrato in un becher conservato nel forno (5.5). Nel far decantare il burro sciolto sulla carta da filtro attenzione a non trasferire siero.

7.1.2. Crema

7.1.2.1. Portare il campione ad una temperatura di 20 °C±2 °C

7.1.2.2. Mescolare o agitare accuratamente il campione

7.1.2.3. Diluire una quantità di campione adatta per ottenere 100 ml di porzione da analizzare con una frazione in massa di grasso di circa il 4 %

7.1.2.4. Procedere come per il latte crudo e il latte omogeneizzato (vedi ISO 14156 FIL 172:2001, §8.3) per estrarre il grasso dalla crema

7.1.2.5. Pesare in un pallone volumetrico da 10 ml (5.2), con l'approssimazione di 1 mg, 1 g del grasso estratto Aggiungere 1 ml della soluzione 7.2.2. Portare a 10 ml con n-esano (4.1) e miscelare

7.1.2.6. Introdurre 1 ml della soluzione 7.1.1.2 in un pallone volumetrico da 10 ml (5.2) e diluire a 10 ml con n-esano (5.1)

7.2. Preparazione delle soluzioni standard di taratura

7.2.1. Sciogliere 100 mg del trigliceride di acido enantico (4.3) in 10 ml di n-esano (4.1)

7.2.2. Sciogliere 100 mg del trigliceride di acido caproico (4.2) in 10 ml di n-esano (4.1)

7.2.3. Introdurre 1 ml della soluzione 7.2.2. in un pallone volumetrico da 10 ml (5.2). Portare a 10 ml con n-esano (4.1)

7.2.4. Introdurre 1 ml della soluzione 7.2.1. e 1 ml della soluzione 7.2.2 in un pallone volumetrico da 10 ml (5.2). Portare a 10 ml con n-esano (4.1)

7.2.5. Introdurre 1 ml della soluzione 7.2.4 in un pallone volumetrico da 10 ml (5.2) e portare a 10 ml con n-esano (4.1)

7.3. Determinazione cromatografica

7.3.1. Iniettare 1 μl della soluzione standard 7.2.5 due volte

7.3.2. Iniettare 1 μl di ogni soluzione campione Nota: Se si usa un iniettore in colonna occorre applicare una diluizione maggiore sia alle soluzioni standard che alle soluzioni campione.

7.3.3. Ripetere l'operazione 7.3.1 ogni tre campioni in modo che i campioni siano compresi tra le due iniezioni di soluzione standard. I risultati si basano sui fattori medi di risposta ottenuti dai cromatogrammi standard.

8. CALCOLO DEI RISULTATI

Per ogni cromatogramma integrare l'area dei picchi associati ai trigliceridi dell'acido enantico e dell'acido caproico.

Seguire queste istruzioni per ogni sequenza completa, ossia per un gruppo di campioni compresi tra le due iniezioni di standard (la soluzione standard iniettata due volte immediatamente prima dei campioni è la STD1 e la soluzione standard iniettata due volte immediatamente dopo è la STD2).

8.1. Taratura

8.1.1. Calcolare il fattore di risposta Rf1(a) e Rf1(b) per ogni doppio di STD1 Rf1 (a) o (b) = (area del picco del trigliceride dell'acido caproico/area del picco del trigliceride dell'acido enantico) × 100. Calcolare il fattore di risposta medio Rf1 Rf1 = [Rf1(a) + Rf1(b)]/2

8.1.2. Analogamente calcolare il fattore di risposta medio Rf2 per STD2

8.1.3. Calcolare il fattore di risposta medio Rf Rf = (Rf1 + Rf2)/2

8.2. Campioni da analizzare

Per ogni cromatogramma campione ottenuto tra STD1 e STD2 calcolare il tenore di acido enantico C (kg/t) come segue:

C = (area del picco del trigliceride dell'acido enantico × Rf × 100)/(area del picco del trigliceride dell'acido caproico × Wt × 1 000)

dove:

— Wt = peso del grasso prelevato (g)

— 100 = volume di diluizione del campione

— 1 000 = fattore di conversione (da μg/g a kg/t)

Per i campioni di burro tener conto del tenore di grasso butirrico e calcolare un valore di concentrazione corretto C burro (kg/t di burro)

Cburro = Cgrasso × F

dove F è il tenore di grasso del burro.

9. PRECISIONE

Maggiori dettagli di una prova interlaboratorio sul burro secondo le norme ISO 5725-1 e ISO 5725-2 sui metodi di precisione figurano al punto 12.

I valori dei limiti di ripetibilità e riproducibilità sono espressi con un grado di probabilità del 95 % e non possono applicarsi a fasce di concentrazione e a matrici diverse da quelle date.

9.1. Ripetibilità

Le differenze assolute tra due singoli risultati analitici, ottenuti con lo stesso metodo su materiale da analizzare identico nello stesso laboratorio dallo stesso operatore utilizzando la stessa attrezzatura entro un breve intervallo di tempo saranno superiori a 0,35 kg/t in un numero di casi non maggiore del 5 %.

9.2. Riproducibilità

Le differenze assolute tra due singoli risultati di prova, ottenuti con lo stesso metodo su materiale da analizzare identico in laboratori diversi da operatori diversi utilizzando attrezzature diverse saranno superiori a 0,66 kg/t in un numero di casi non maggiore del 5 %.

10. LIMITI DI TOLLERANZA: LIMITI INFERIORI (CASO DI QUANTITÀ INSUFFICIENTI)

10.1. Per verificare che l'aggiunta di rivelatori sia stata effettuata correttamente, dal prodotto marcato devono essere prelevati tre campioni

10.2. Burro e burro concentrato 10.2.1. Il tasso di incorporazione è di 11 kg di trigliceride di acido enantico puro al 95 % almeno per tonnellata di burro, ovvero 10,45 kg 10.2.2. I risultati dell'analisi dei tre campioni del prodotto sono utilizzati per verificare il tasso e l'omogeneità di incorporazione del rivelatore; il risultato più basso ottenuto è confrontato con i seguenti limiti: — 9,51 kg/t (95 % del tasso minimo di incorporazione di trigliceride dell'acido enantico puro al 95 %, singola determinazione) — 6,89 kg/t (70 % del tasso minimo di incorporazione di trigliceride dell'acido enantico puro al 95 %, singola determinazione) — la concentrazione di rivelatore nel campione che dà il risultato più basso viene utilizzata per interpolazione rispettivamente tra 9,51 kg/t e 6,89 kg/t

10.3. Crema 10.3.1. Il tasso di incorporazione è di 10 kg di trigliceride di acido enantico puro al 95 % almeno per tonnellata di materia grassa del latte, ovvero 9,50 kg/t di materie grasse del latte contenenti rivelatori. 10.3.2. I risultati dell'analisi dei tre campioni del prodotto sono utilizzati per verificare il tasso e l'omogeneità di incorporazione del rivelatore; il risultato più basso ottenuto è confrontato con i seguenti limiti: — 8,60 kg/t (95 % del tasso minimo di incorporazione di trigliceride dell'acido enantico puro al 95 %, singola determinazione) — 6,23 kg/t (70 % del tasso minimo di incorporazione di trigliceride dell'acido enantico puro al 95 %, singola determinazione) — la concentrazione di rivelatore nel campione che dà il risultato più basso viene utilizzata per interpolazione rispettivamente tra 8,60 kg/t e 6,23 kg/t

11. LIMITI DI TOLLERANZA: LIMITI SUPERIORI (IN CASO DI QUANTITÀ SUPERIORE DI OLTRE IL 20 %)

11.1. Per verificare che l'aggiunta di rivelatori sia stata effettuata correttamente, dal prodotto marcato devono essere prelevati tre campioni.

11.2. Burro e burro concentrato 11.2.1. I risultati dell'analisi dei tre campioni ottenuti dall'analisi del prodotto sono utilizzati per verificare il tasso e l'omogeneità di incorporazione del rivelatore; la media di questi risultati è confrontata con i seguenti limiti: — il limite superiore è pari a 12,96 kg/t

11.3. Crema 11.3.1. I risultati dell'analisi dei tre campioni ottenuti dall'analisi del prodotto sono utilizzati per verificare il tasso e l'omogeneità di incorporazione del rivelatore; la media di questi risultati è confrontata con i seguenti limiti: — il limite superiore è pari a 11,82 kg/t

12. INFORMAZIONI SUPPLEMENTARI: ANALISI STATISTICA DEI RISULTATI DELL'ANALISI DEI TRIGLICERIDI PER LA DETERMINAZIONE DI TRIEPTANOATO NEL GRASSO BUTIRRICO

Sono state effettuate quattro prove collaborative per determinare il tenore di trieptanoato nel burro contenente rivelatori.

Al primo test circolare hanno partecipato nove laboratori senza che siano state fornite specifiche dei metodi analitici da utilizzare.

Al secondo test circolare hanno partecipato 10 laboratori e sono stati applicati quattro metodi diversi:

— Quantificazione del metileptanoato utilizzando come standard interno n-nonano o metilnonanoato

— Quantificazione di trieptanoato utilizzando come standard interno il tricaproato

— Quantificazione di metileptanoato usando un campione/una miscela di taratura

— Quantificazione di metileptanoato usando una miscela di taratura.

Inoltre nel caso in cui siano stati analizzati i FAME (esteri metilici degli acidi grassi) sono stati utilizzati due diversi procedimenti di metilazione (De Francesco e Christopherson & Glass).

In base ai risultati ottenuti sono stati selezionati due metodi per eseguire il terzo test circolare:

— Quantificazione del metileptanoato utilizzando come standard interno n-nonano o metilnonanoato

— Quantificazione di trieptanoato utilizzando come standard interno il tricaproato.

I risultati di sette laboratori hanno evidenziato che il metodo FAME ha dato esito ad una maggiore variabilità e di conseguenza si è deciso di utilizzare solo la determinazione dei trigliceridi di trieptanoato seguendo il procedimento della quantificazione q di trieptanoato utilizzando come standard interno il tricaproato. Inoltre, l'analisi del trigliceride deve essere effettuata con la colonna capillare.

Nel quarto test circolare nove laboratori hanno esaminato quattro campioni (A, B, C, D); i risultati sono riportati nelle tabelle 1 e 2.

Due laboratori (DE e UE) hanno analizzato i campioni utilizzando il metodo FAME.

Visto lo scarso numero di laboratori il calcolo statistico è stato compiuto sia sulla gamma completa (figure 1 e 2) di dati, includendo i risultati dei FAME, sia sui dati ottenuti dall'analisi dei TG.

Prove per i valori erratici

— Campione A: i test di Dixon, Cochran e Grubbs ai livelli 1 e 5 %, hanno evidenziato un valore erratico di laboratorio.

— Campione B: il test di Grubbs al livello 5 % ha evidenziato un valore erratico di laboratorio.

— Campione C: i test di Dixon e Grubbs ai livelli 1 e 5 %, hanno evidenziato un valore erratico di laboratorio.

— Campione D: i test di Dixon e Grubbs ai livelli 1 e 5 %, hanno evidenziato un valore erratico di laboratorio.

Il valore erratico è stato escluso dal calcolo.

Va notato che i risultati ottenuti col metodo FAME non sono mai stati considerati come valori erratici nelle prove eseguite.

Parametri di precisione

Nelle tabelle 1 e 2 figurano i risultati di tutti i laboratori e i parametri di precisione calcolati su un numero accettabile (8) di laboratori, ma sfortunatamente non ottenuti con lo stesso metodo analitico.

Le tabelle 3 e 4 indicano i risultati ottenuti esclusivamente con il metodo dei TG e i corrispondenti parametri di precisione. L'accettazione di questi parametri è subordinata all'accettazione del basso numero di laboratori (6).

Le figure 2 e 3 indicano la tendenza di Sr e SR calcolata per i 4 campioni dei 2 gruppi di dati sopra descritti.

La tabella 5 indica i valori di Sr e SR con i corrispondenti valori raggruppati e i parametri generali r e R.

Infine è stata calcolata la differenza critica con la probabilità del 95 %.







Tabella 1 Risultati statistici dei metodi TG + FAME* Campione A R1 R2 Media N. di laboratori selezionati previa esclusione dei valori erratici 8 RENNES FR1 11,0 11,1 11,1 N. di valori erratici 1 RIKILT NL 11,2 11,2 11,2 Valori erratici DК ZPLA DE* 11,6 11,8 11,7 Valore medio 11,3 ADAS GB 11,4 11,2 11,3 Valore vero 11,0 CNEVA FR2 11,4 11,4 11,4 Deviazione standard di ripetibilità (Sr) 0,09 LODI IT 11,1 11,3 11,2 Deviazione standard relativa di ripetibilità (RSDr) (%) 0,80 EELA FI 11,3 11,2 11,3 Ripetibilità r (95 %) 0,26 ISPRA UE* 11,0 11,0 11,0 Ripetibilità relativa r % 2,24 D.V.F.A. DK 13,3 11,8 12,6 Deviazione standard di riproducibilità (SR) 0,23 Deviazione standard relativa di riproducibilità (RSDR) (%) 2,04 Riproducibilità R (95 %) 0,84 Riproducibilità relativa R % 5,71 Campione B R1 R2 Media N. di laboratori selezionati previa esclusione dei valori erratici 8 RENNES FR1 12,7 12,8 12,8 N. di valori erratici 1 RIKILT NL 13,5 13,3 13,4 Valori erratici DK ZPLA DE* 14,0 13,8 13,9 Valore medio 13,4 ADAS GB 13,4 13,5 13,5 Valore vero 13,5 CNEVA FR2 13,3 13,4 13,4 Deviazione standard di ripetibilità (Sr) 0,14 LODI IT 13,9 13,5 13,7 Deviazione standard relativa di ripetibilità (RSDr) (%) 1,04 EELA FI 13,4 13,2 13,3 Ripetibilità r (95 %) 0,40 ISPRA UE* 13,2 13,3 13,3 Ripetibilità relativa r % 2,91 D.V.F.A. DK 14,1 14,8 14,5 Deviazione standard di riproducibilità (SR) 0,35 Deviazione standard relativa di riproducibilità (RSDR) (%) 2,61 Riproducibilità R (95 %) 0,99 Riproducibilità relativa R % 7,31







Tabella 2 Risultati statistici dei metodi TG + FAME* Campione C R1 R2 Media N. di laboratori selezionati previa esclusione dei valori erratici 8 RENNES FR1 8,9 9,2 9,1 N. di valori erratici 1 RIKILT NL 9,2 9,3 9,3 Valori erratici DK ZPLA DE* 9,2 9,4 9,3 Valore medio 9,3 ADAS GB 9,5 9,3 9,4 Valore vero 9,3 CNEVA FR2 9,4 9,4 9,4 Deviazione standard di ripetibilità (Sr) 0,14 LODI IT 9,2 9,5 9,4 Deviazione standard relativa di ripetibilità (RSDr) (%) 1,50 EELA FI 9,4 9,6 9,5 Ripetibilità r (95 %) 0,40 ISPRA UE* 9,4 9,3 9,4 Ripetibilità relativa r % 4,20 D.V.F.A. DK 10,7 10,9 10,8 Deviazione standard di riproducibilità (SR) 0,17 Deviazione standard relativa di riproducibilità (RSDR) (%) 1,82 Riproducibilità R (95 %) 0,47 Riproducibilità relativa R % 5,10 Campione D R1 R2 MEDIA N. di laboratori selezionati previa esclusione dei valori erratici 8 RENNES R1 1,6 1,6 1,6 N. di valori erratici 1 RIKILT NL 2,1 2,1 2,1 Valori erratici DK ZPLA DE* 2,3 2,3 2,3 Valore medio 2,1 ADAS GB 2,1 2,2 2,2 Valore vero 2,1 CNEVA FR2 2,1 2,1 2,1 Deviazione standard di ripetibilità (Sr) 0,08 LODI IT 2,2 1,9 2,1 Deviazione standard relativa di ripetibilità (RSDr) (%) 3,81 EELA FI 2,3 2,3 2,3 Ripetibilità r (95 %) 0,22 ISPRA UE* 2,3 2,3 2,3 Ripetibilità relativa r % 10,67 D.V.F.A. DK 3,4 2,9 3,2 Deviazione standard di riproducibilità (SR) 0,24 Deviazione standard relativa di riproducibilità (RSDR) (%) 11,43 Riproducibilità R (95 %) 0,67 Riproducibilità relativa R % 32,00







Tabella 3 Risultati statistici dei metodi TG + FAME* Campione A R1 R2 Media N. di laboratori selezionati previa esclusione dei valori erratici 6 RENNES FR1 11,0 11,1 11,1 N. di valori erratici 1 RIKILT NL 11,2 11,2 11,2 Valori erratici DК ADAS GB 11,4 11,2 11,3 Valore medio 11,2 CNEVA FR2 11,4 11,4 11,4 Valore vero 11,0 LODI IT 11,1 11,3 11,2 Deviazione standard di ripetibilità (Sr) 0,09 EELA FI 11,3 11,2 11,3 Deviazione standard relativa di ripetibilità (RSDr) (%) 0,80 D.V.F.A. DK 13,3 11,8 12,6 Ripetibilità r (95 %) 0,25 Ripetibilità relativa r % 2,24 Deviazione standard di riproducibilità (SR) 0,13 Deviazione standard relativa di riproducibilità (RSDR) (%) 1,16 Riproducibilità R (95 %) 0,36 Riproducibilità relativa R % 3,25 Campione B R1 R2 Media N. di laboratori selezionati previa esclusione dei valori erratici 6 RENNES FR1 12,7 12,8 12,8 N. di valori erratici 1 RIKILT NL 13,5 13,3 13,4 Valori erratici DК ADAS GB 13,4 13,5 13,5 Valore medio 13,3 CNEVA FR2 13,3 13,4 13,4 Valore vero 13,5 LODI IT 13,9 13,5 13,7 Deviazione standard di ripetibilità (Sr) 0,15 EELA FI 13,4 13,2 13,3 Deviazione standard relativa di ripetibilità (RSDr) (%) 1,13 D.V.F.A. DK 14,1 14,8 14,5 Ripetibilità r (95 %) 0,42 Ripetibilità relativa r % 3,16 Deviazione standard di riproducibilità (SR) 0,33 Deviazione standard relativa di riproducibilità (RSDR) (%) 2,48 Riproducibilità R (95 %) 0,93 Riproducibilità relativa R % 6,94







Tabella 4: Risultati statistici del metodo TG Campione C R1 R2 Media N. di laboratori selezionati previa esclusione dei valori erratici 6 RENNES FR1 8,9 9,2 9,1 N. di valori erratici 1 RIKILT NL 9,2 9,3 9,3 Valori erratici DК ADAS GB 9,5 9,3 9,4 Valore medio 9,3 CNEVA FR2 9,4 9,4 9,4 Valore vero 9,3 LODI IT 9,2 9,5 9,4 Deviazione standard di ripetibilità (Sr) 0,15 EELA FI 9,4 9,6 9,5 Deviazione standard relativa di ripetibilità (RSDr) (%) 1,61 D.V.F.A. DK 10,7 10,9 10,8 Ripetibilità r (95 %) 0,42 Ripetibilità relativa r % 4,51 Deviazione standard di riproducibilità (SR) 0,19 Deviazione standard relativa di riproducibilità (RSDR) (%) 2,04 Riproducibilità R (95 %) 0,53 Riproducibilità relativa R % 5,71 Campione D R1 R2 Media N. di laboratori selezionati previa esclusione dei valori erratici 6 RENNES FR1 1,6 1,6 1,6 N. di valori erratici 1 RIKILT NL 2,1 2,1 2,1 Valori erratici DK Valore medio 2,1 ADAS GB 2,1 2,2 2,2 Valore vero 2,1 CNEVA FR2 2,1 2,1 2,1 Deviazione standard di ripetibilità (Sr) 0,09 LODI IT 2,2 1,9 2,1 Deviazione standard relativa di ripetibilità (RSDr) (%) 4,29 EELA FI 2,3 2,3 2,3 Ripetibilità r (95 %) 0,26 D.V.F.A. DK 3,4 2,9 3,2 Ripetibilità relativa r % 12,01 Deviazione standard di riproducibilità (SR) 0,25 Deviazione standard relativa di riproducibilità (RSDR) (%) 11,90 Riproducibilità R (95 %) 0,69 Riproducibilità relativa R % 33,32







Tabella 5 Ripetibilità e riproducibilità (metodo FAME*) N. di laboratori Valori erratici Ripetibilità Sr (95 %) Riproducibilità SR (95 %) Campione A 8 1 0,09 0,23 Campione Β 8 1 0,14 0,35 Campione C 8 1 0,14 0,17 Campione D 8 1 0,08 0,24 Valore collettivo 0,116 0,256 R R Valore collettivo* 2,8 0,324 0,716 CrD95 =0,40 Purezza minima dichiarata del trieptanoato = 95 % Limite minimo dichiarato del trieptanoato nel grasso butirrico = 11 kg/t Se si prende in considerazione la differenza critica per una probabilità del 95 %, la media dei due risultati non deve essere inferiore a: 10,05 kg/t nel caso che sia incorporato trieptanoato puro al 95 %.







Ripetibilità e riproducibilità (senza FAME) N. di laboratori Valori erratici Ripetibilità Sr (95 %) Riproducibilità SR (95 %) Campione A 6 1 0,09 0,13 Campione B 6 1 0,15 0,33 Campione C 6 1 0,15 0,19 Campione D 6 1 0,09 0,25 Valore collettivo 0,124 0,237 r R Valore collettivo* 2,8 0,347 0,663 CrD95 = 0,36 Purezza minima dichiarata del trieptanoato = 95 % Limite minimo dichiarato del trieptanoato nel grasso butirrico = 11 kg/t Se si prende in considerazione la differenza critica per una probabilità del 95 %, la media dei due risultati non deve essere inferiore a: 10,09 kg/t nel caso che sia incorporato trieptanoato puro al 95 %.

Figura 1 ( 8 )

Risultati sperimentali: campione A

Risultati sperimentali: campione B

Risultati sperimentali: campione C

Risultati sperimentali: campione D

Figura 2

Deviazione standard di ripetibilità e di riproducibilità a diversi livelli (TG + FAME)

Figura 3

Deviazione standard di ripetibilità e di riproducibilità a diversi livelli (TG)

Figura 4

Esempio con l'uso di un iniettore in colonna









ALLEGATO VI

(Articolo 5)

DETERMINAZIONE DEL CONTENUTO IN VANILLINA NEL BURRO CONCENTRATO, NEL BURRO O NELLA CREMA, PER CROMATOGRAFIA IN FASE LIQUIDA AD ALTA PRESTAZIONE

1. OGGETTO E CAMPO D’APPLICAZIONE

Il metodo descrive un procedimento per la determinazione quantitativa del contenuto di vanillina nel burro concentrato, nel burro o nella crema.

2. PRINCIPIO

Estrazione di una quantità nota di campione con una miscela di isopropanolo/etanolo/acetonitrile (1:1:2). Precipitazione della maggior parte del grasso per raffreddamento fra – 15 °C e – 20 °C e successiva centrifugazione.

Dopo diluizione con acqua, determinazione del contenuto in vanillina per cromatografia in fase liquida ad alta prestazione (HPLC).

3. APPARECCHIATURA

Normale apparecchiatura di laboratorio, in particolare:

3.1. congelatore, campo di temperatura da – 15 °C a – 20 °C

3.2. siringhe a perdere, della capacità di 2 ml

3.3. microfiltri a membrana con pori da 0,45 μm e resistenti a una soluzione contenente il 5 % della soluzione di estrazione (4.4)

3.4. sistema di cromatografia in fase liquida, consistente in una pompa (della portata di 1,0 ml/min), un iniettore (iniezione da 20 μl, automatica o manuale), un rivelatore UV (funzionante a 306 nm, fondo scala a 0,01 Å), un registratore o integratore e un termostato a colonna funzionante a 25 °C

3.5. colonna analitica (250 mm × 4,6 mm d.i.), riempita con LiChrospher RP 18 (Merck, 5 μm) o equivalente

3.6. colonna di guardia (ca. 20 mm × 3 mm d.i.), riempita a secco con LiChrospher RP 18 (5-10 μm) od equivalente

3.7. centrifuga a 2 000 rpm

4. REAGENTI

Tutti i reagenti impiegati debbono essere di purezza analitica riconosciuta.

4.1. Isopropanolo

4.2. Etanolo 96 % (v/v)

4.3. Acetonitrile

4.4. Soluzione di estrazione Mescolare isopropanolo (4.1), etanolo (4.2) ed acetonitrile (4.3) nel rapporto 1:1:2 (v/v).

4.5. Vanillina (4-idrossi-3-metossibenzaldeide) ≥ 98 % 4.5.1. Soluzione madre di vanillina (= 500 μg/ml) In un matraccio tarato da 100 ml, pesare 50 mg circa (CM mg) di vanillina (4.5) con la precisione di 0,1 mg; aggiungere 25 ml di soluzione di estrazione (4.4) e portare a volume con acqua. 4.5.2. Soluzione standard di vanillina (= 10 μg/ml) Pipettare 5 ml di soluzione di riserva di vanillina (4.5.1) in un matraccio tarato da 250 ml e portare a volume con acqua. 4.5.3. Metanolo per HPLC 4.5.4. Acido acetico glaciale 4.5.5. Acqua per HPLC 4.5.6. Fase mobile HPLC In un matraccio tarato da 1 000 ml, miscelare 300 ml di metanolo (4.5.3) con 500 ml circa d'acqua (4.5.5) e 20 ml di acido acetico (4.5.4); portare a volume con acqua (4.5.5). Filtrare per filtro da 0,45 μm (3.3).

5. PROCEDIMENTO

5.1. Preparazione delle aliquote da analizzare

5.1.1. Burro

Riscaldare il campione fino a fusione incipiente. Evitare il surriscaldamento locale oltre i 30 °C. In ogni caso il burro non si deve separare in due fasi. Quando il campione diventa sufficientemente plastico, renderlo omogeneo agitando. Rimescolare il burro per 15 secondi prima di prelevarne un'aliquota. In un matraccio tarato da 100 ml, pesare 5 g (SM g) di burro, con l'approssimazione di 1 mg.

5.1.2. Burro concentrato

Immediatamente prima di prelevare l'aliquota da analizzare, collocare il contenitore col burro concentrato in una stufa a 40-50 °C fino a fusione completa e rendere omogeneo il campione, agitando in senso rotatorio o rimescolando, senza eccedere in energia per evitare la formazione di bolle d'aria. In un matraccio tarato da 100 ml, pesare 4 g (SM g) di burro concentrato, con l'approssimazione di 1 mg.

5.1.3. Crema

Riscaldare il campione in bagnomaria o incubatore termostatato a 35-40 °C. Distribuire il grasso in modo omogeneo agitando in senso rotatorio e, se necessario, rimescolando. Portare rapidamente il campione alla temperatura di 20 ± 2 °C. Il campione deve presentarsi omogeneo; in caso contrario, ripetere l'operazione. In un matraccio tarato da 100 ml, pesare 10 g (SM g) di crema, con l'approssimazione di 1 mg.

5.2. Preparazione della soluzione da analizzare

Aggiungere 75 ml circa di soluzione di estrazione (4.4) all'aliquota da analizzare (5.1.1, 5.1.2 o 5.1.3), agitare o scuotere energicamente per 15 minuti circa e portare a volume con la soluzione di estrazione (4.4). Trasferire 10 ml circa di questo estratto in una provetta fornita di tappo. Collocare la provetta nel congelatore (3.1) e lasciar riposare per 30 minuti circa. Centrifugare l'estratto freddo per 5 minuti a 2 000 rpm circa e decantare immediatamente. Lasciare che la soluzione decantata raggiunga la temperatura ambiente. Pipettare 5 ml della soluzione decantata in un matraccio tarato da 100 ml e portare a volume con acqua. Filtrare una porzione del liquido per microfiltro a membrana (3.3) usando una siringa (3.2). Il filtrato è pronto per la determinazione HPLC.

5.3. Taratura

In un matraccio tarato da 100 ml, pipettare 5 ml della soluzione standard di vanillina (4.5.2). Aggiungere 5 ml di soluzione di estrazione (4.4) e portare a segno con acqua. Questa soluzione contiene 0,5 μg/ml di vanillina.

5.4. Determinazione HPLC

Lasciar stabilizzare il sistema cromatografico per 30 minuti circa. Iniettare la soluzione standard (5.3). Ripetere l'operazione finché la differenza di area o di altezza dei picchi fra due iniezioni successive è inferiore al 2 %. Nelle condizioni descritte, il tempo di ritenzione della vanillina è di circa 9 minuti. Analizzare in doppio la soluzione standard (5.3), iniettando 20 μl. Iniettare 20 μl delle soluzioni (5.2). Determinare l'area o l'altezza del picco ottenuto per la vanillina. Ripetere il duplicato della soluzione standard (5.3) dopo dieci iniezioni delle soluzioni (5.2).

6. CALCOLO DEI RISULTATI

Calcolare il valore medio delle aree (o delle altezze), (AC), dei picchi per la vanillina associate all'iniezione in doppio effettuata per inquadrare ciascun gruppo di soluzioni (quattro aree o altezze in totale).

Calcolare il fattore di risposta (R) con la formula:

dove CM rappresenta la massa della vanillina in mg (4.5.1).

Il contenuto (C) di vanillina nel campione esaminato, espresso in mg/kg, è dato dalla formula

dove:

AS = area del picco della vanillina del campione esaminato

SM = massa in g del campione esaminato (5.1.1, 5.1.2, 5.1.3).

Nota: Quando si analizza la crema per individuare la vanillina, la concentrazione del rivelatore va espressa in mg rivelatore/kg grasso di latte. A tal fine si moltiplica C per 100/f, dove f è il tenore di grasso in percentuale della crema (m/m).

20 = fattore che tiene conto delle diluizioni dello standard e del campione esaminato

0,96 = fattore di correzione per il contenuto in grasso nella prima diluizione del campione esaminato

Nota: In luogo delle aree dei picchi, si possono impiegare le rispettive altezze (cfr. 8.3).

7. PRECISIONE DEL METODO

7.1. Ripetibilità (r)

La differenza tra i risultati di due determinazioni effettuate nell'intervallo di tempo minimo possibile dallo stesso operatore con la stessa apparecchiatura su un materiale da analizzare identico non deve superare 16 mg/kg.

7.2. Riproducibilità (R)

La differenza fra i risultati di due determinazioni effettuate da operatori in laboratori diversi, impiegando apparecchiature diverse su materiali identici, non deve superare 27 mg/kg.

8. LIMITI DI TOLLERANZA

8.1. Dal prodotto a cui sono stati aggiunti rivelatori devono essere prelevati tre campioni per controllarne l'omogeneità.

8.2. Rivelatore ottenuto partendo dalla vaniglia naturale o dalla vanillina sintetica. 8.2.1. La quantità di 4-idrossi-3-metossibenzaldeide da incorporare è di 250 grammi per tonnellata di burro concentrato o di burro. Nel caso della crema, il tasso di incorporazione è di 250 g/t di grasso di latte. 8.2.2. I risultati dell'analisi dei tre campioni ottenuti dall'analisi del prodotto sono utilizzati per verificare il tasso e l'omogeneità di incorporazione del rivelatore; il risultato più basso è confrontato con i seguenti limiti: — 220,8 mg/kg (95 % del tasso minimo di incorporazione), — 158,3 mg/kg (70 % del tasso minimo di incorporazione). La concentrazione di rivelatore nel campione che dà il risultato più basso viene utilizzata per interpolazione tra 220,8 mg/kg e 158,3 mg/kg.

8.3. Tracciante ottenuto esclusivamente a partire da baccelli di vaniglia o loro estratti integrali. 8.3.1. La quantità di 4-idrossi-3-metossibenzaldeide da incorporare è di 100 grammi per tonnellata di burro concentrato o di burro. Nel caso della crema, il tasso di incorporazione è di 100 g/t di grasso di latte. 8.3.2. I risultati dell'analisi dei tre campioni ottenuti dall'analisi del prodotto sono utilizzati per verificare il tasso e l'omogeneità di incorporazione del rivelatore; il risultato più basso è confrontato con i seguenti limiti: — 78,3 mg/kg (95 % del tasso minimo di incorporazione), — 53,3 mg/kg (70 % del tasso minimo di incorporazione). La concentrazione di rivelatore nel campione che dà il risultato più basso viene utilizzata per interpolazione tra 78,3 mg/kg e 53,3 mg/kg.

9. NOTE

9.1. Il recupero della vanillina aggiunta al livello di 250 mg/kg di butteroil varia da 97,0 a 103,8. Il contenuto medio ritrovato è risultato essere del 99,9 % con una deviazione standard del 2,7 %.

9.2. La soluzione standard contiene il 5 % di soluzione di estrazione per compensare l'allargamento del picco provocato dalla presenza del 5 % della soluzione di estrazione nelle aliquote analizzate. Ciò consente una quantificazione attraverso l'altezza del picco.

9.3. L'analisi è fondata su una curva di taratura lineare, con intercetta zero.

9.4. La linearità deve essere controllata impiegando appropriate diluizioni della soluzione standard (4.5.2), la prima volta che si effettua l'analisi e successivamente ad intervalli regolari, nonché dopo ogni modifica o riparazione dell'apparecchiatura HPLC. La vanillina può essere degradata in acido vanillico, divanillina e altre componenti grazie all'attività di enzimi intrinseci nella crema non pastorizzata o suoi prodotti.









ALLEGATO VII

(Articolo 5)

DETERMINAZIONE PER SPETTROMETRIA DELL'ESTERE ETILICO DELL'ACIDO BETA-APO-8'-CAROTENICO NEL BURRO E NEL BURRO CONCENTRATO

1. OGGETTO E CAMPO D’APPLICAZIONE

Il metodo descrive un procedimento per la determinazione quantitativa dell'estere etilico dell'acido beta-apo-8'-carotenico (estere apocarotenico) nel burro e nel burro concentrato. L'estere apocarotenico è la somma di tutte le sostanze presenti in un estratto di campioni ottenuto nelle condizioni descritte nel metodo e che assorbe luce di lunghezza d'onda 440 nm.

2. PRINCIPIO

Il grasso di burro viene sciolto in etere di petrolio e l'assorbanza è misurata a 440 nm. Il tenore di estere apocarotenico viene determinato ad uno standard esterno.

3. APPARECCHIATURA

3.1. Pipette graduate da 0,25, 0,50, 0,75 e 1,0 ml

3.2. Spettrofotometro utilizzabile a 440 nm (e da 447 a 449 nm) e munito di celle con cammino ottico di 1 cm

3.3. Palloni volumetrici, ad esempio da 20 ml e da 100 ml

3.4. Bilancia analitica, con risoluzione di 0,1 mg, in grado di pesare con l'approssimazione di 1 mg e con leggibilità di 0,1 mg

3.5. Forno regolato su 45 °C ± 1 °C

3.6. Filtri circolari senza ceneri

4. REAGENTI

Tutti i reagenti devono essere di purezza analitica riconosciuta.

4.1. Sospensione di estere apocarotenico (circa 20 %) 4.1.1. Determinare il tenore della sospensione come segue: Riscaldare la sospensione tra 45 °C e 50 °C e mescolare nel contenitore originale chiuso. In un matraccio (100 ml) pesare con precisione 400 mg, disciogliere in 20 ml di cloroformio (4.4) e portare a volume con cicloesano (4.5). Diluire 5 ml di questa soluzione portandola a 100 ml con cicloesano (soluzione A). Diluire 5 ml della soluzione A portandola a 100 ml con cicloesano. Misurare l'assorbanza a 447-449 nm (misurare il massimo in rapporto al cicloesano come bianco, utilizzando celle con cammino ottico di un 1 cm). Tenore di estere apocarotenico P (%) = (Abs max × 40 000)/(Msusp × 2 550) o svolgere: (Absmax / 2 550) × (100/5) × (100/5) × (100/Msusp) Absmax = assorbenza della soluzione in esame al massimo Msusp = massa della sospensione (g) 2 550 = valore di riferimento Abs (1 %, 1 cm) P = purezza (tenore) della sospensione (%) Nota La sospensione di estere apocarotenico è sensibile all'aria, al calore e alla luce; può essere conservata per circa 12 mesi nel suo contenitore originale chiuso (sigillato sotto azoto), in luogo fresco; dopo l'apertura, la sospensione deve essere utilizzata entro breve tempo. 4.1.2. Soluzione standard di estere apocarotenico, circa 0,2 mg/ml Pesare, con l'approssimazione di 1 mg, circa 0,100 g di sospensione di estere apocarotenico (4.1.1) (W), disciogliere in essenza di petrolio (4.2), trasferire quantitativamente in un pallone volumetrico della capacità di 100 ml e portare alla tacca con essenza di petrolio. Questa soluzione contiene (W × P)/10 mg/ml di estere apocarotenico. Nota: La soluzione deve essere conservata in luogo fresco e al buio; la soluzione non utilizzata deve essere scartata dopo un mese.

4.2. Essenza di petrolio (40-60 °C)

4.3. Solfato di sodio anidro, granulare, preventivamente essiccato a 102 °C per 2 ore

4.4. Cloroformio

4.5. Cicloesano

5. PROCEDIMENTO

5.1. Preparazione del campione da analizzare

5.1.1. Burro concentrato

Fondere il campione in un forno a circa 45 °C.

5.1.2. Burro

Fondere il campione in un forno a circa 45 °C e filtrarne una parte rappresentativa attraverso un filtro contenente circa 10 g di solfato di sodio anidro (4.3), in ambiente protetto da luce naturale e artificiale forte, alla temperatura di 45 °C. Raccogliere una quantità opportuna di materia grassa butirrica.

5.2. Determinazione

Pesare, con l'approssimazione di 1 mg, circa 1 g di burro concentrato [o di materia grassa butirrica estratta (5.1.2)], (M). Trasferire quantitativamente in un pallone volumetrico da 20 ml (V) usando essenza di petrolio (4.2); portare alla tacca e miscelare accuratamente.

Trasferirne una parte in una cella da 1 cm e misurare l'assorbanza a 440 nm, in rapporto ad un bianco di essenza di petrolio. Ottenere la concentrazione di estere apocarotenico nella soluzione, per riferimento al diagramma di taratura (C μg/ml).

5.3. Taratura

Pipettare 0, 0,25, 0,5, 0,75 e 1,0 ml di soluzione standard di estere apocarotenico (4.1.2) in cinque palloni volumetrici da 100 ml. Diluire a volume con essenza di petrolio (4.2) ed agitare.

Le concentrazioni approssimative delle soluzioni vanno da 0 a 2 μg/ml e sono calcolate accuratamente per riferimento alla concentrazione della soluzione standard (4.1.2) (W × P)/10 mg/ml. Misurare le assorbanze a 440 nm in rapporto ad un bianco di essenza di petrolio (4.2).

Riportare su un diagramma i valori dell'assorbanza (asse delle y) in funzione della concentrazione di estere apocarotenico (asse delle x). Calcolare l'equazione della curva tipo.

6. CALCOLO DEI RISULTATI

6.1. Il tenore di estere apocarotenico, espresso in mg/kg di prodotto, è dato da: Burro concentrato: (C × V)/M Burro: 0,82 (C × V)M dove: C = tenore di estere apocarotenico (μg/ml) letto sul diagramma di taratura (5.3) V = volume (ml) della soluzione da analizzare (5.2) M = massa (g) della porzione da analizzare (5.2) 0,82 = fattore di correzione per il tenore di grasso butirrico del burro

7. PRECISIONE DEL METODO

7.1. Ripetibilità

7.1.1. Analisi del burro

La differenza tra i risultati di due determinazioni effettuate nell'intervallo di tempo minimo possibile dallo stesso operatore con la stessa apparecchiatura su un materiale da analizzare identico non deve superare 1,4 mg/kg.

7.1.2. Analisi del burro concentrato

La differenza tra i risultati di due determinazioni effettuate nell'intervallo di tempo minimo possibile dallo stesso operatore con la stessa apparecchiatura su un materiale da analizzare identico non deve superare 1,6 mg/kg.

7.2. Riproducibilità

7.2.1. Analisi del burro

La differenza fra i risultati di due determinazioni effettuate da operatori in laboratori diversi, impiegando apparecchiature diverse su materiali identici, non deve superare 4,7 mg/kg.

7.3. Analisi del burro concentrato

La differenza fra i risultati di due determinazioni effettuate da operatori in laboratori diversi, impiegando apparecchiature diverse su materiali identici, non deve superare 5,3 mg/kg.

7.4. Fonte dei dati relativi alla precisione

I dati di precisione sono stati determinati mediante un esperimento eseguito nel 1995, cui hanno partecipato 11 laboratori, su 12 campioni marcati (6 prove in doppio cieco) per il burro e altrettanti 12 campioni marcati (6 prove in doppio cieco) per il burro concentrato.

8. LIMITI DI TOLLERANZA

8.1. Per verificare che l'aggiunta di rivelatori è stata effettuata correttamente, dal prodotto marcato devono essere prelevati tre campioni.

8.2. Burro 8.2.1. Il tasso di incorporazione per il burro, tenendo conto dell'assorbanza di fondo, è 22 mg/kg. 8.2.2. I risultati dell'analisi dei tre campioni ottenuti dall'analisi del prodotto sono utilizzati per verificare il tasso e l'omogeneità di incorporazione del rivelatore; il risultato più basso è confrontato con i seguenti limiti: — 17,7 mg/kg (95 % del tasso minimo di incorporazione), — 12,2 mg/kg (70 % del tasso minimo di incorporazione). La concentrazione di rivelatore nel campione che dà il risultato più basso viene utilizzata per interpolazione tra 17,7 mg/kg e 12,2 mg/kg.

8.3. Burro concentrato 8.3.1. Il tasso di incorporazione per il burro concentrato, tenendo conto dell'assorbanza di fondo, è 24 mg/kg. I risultati dell'analisi dei tre campioni ottenuti dall'analisi del prodotto sono utilizzati per verificare il tasso e l'omogeneità di incorporazione del rivelatore; il risultato più basso è confrontato con i seguenti limiti: — 19,2 mg/kg (95 % del tasso minimo di incorporazione), — 13,2 mg/kg (70 % del tasso minimo di incorporazione). La concentrazione di rivelatore nel campione che dà il risultato più basso viene utilizzata per interpolazione tra 19,2 mg/kg e 13,2 mg/kg.









ALLEGATO VIII

(Articolo 5)

DETERMINAZIONE DEL SITOSTEROLO OPPURE DELLO STIGMASTEROLO NEL BURRO CONCENTRATO O NEL BURRO MEDIANTE GASCROMATOGRAFIA CON COLONNA CAPILLARE

1. OGGETTO E CAMPO D’APPLICAZIONE

Il metodo descrive un procedimento per la determinazione quantitativa del sitosterolo o dello stigmasterolo nel burro concentrato e nel burro. Il sitosterolo viene considerato come la somma del β-sitosterolo e del 22-diidro-β-sitosterolo, in quanto gli altri sitosteroli vengono considerati irrilevanti.

2. PRINCIPIO

Il burro concentrato o il burro viene saponificato con idrossido di potassio in soluzione etanolica e l'insaponificabile viene estratto con etere etilico.

Gli steroli vengono trasformati in eteri trimetil-sililici ed analizzati mediante gascromatografia su colonna capillare facendo riferimento ad uno standard interno a base di betulino.

3. APPARECCHIATURA

3.1. Pallone di saponificazione da 150 ml provvisto di condensatore a ricadere con giunti in vetro smerigliato

3.2. Imbuti separatori da 500 ml

3.3. Palloni da 250 ml

3.4. Imbuti livellatori di pressione, da 250 ml o simili, per la raccolta dell'etere etilico di scarto

3.5. Colonna di vetro, da 350 mm × 20 mm, provvista di setto in vetro sinterizzato

3.6. Bagnomaria o cuffia riscaldante

3.7. Fiale da 2 ml

3.8. Gascromatografo idoneo ad essere usato con una colonna capillare e provvisto di un sistema di splittaggio costituito da: 3.8.1. Camera termostatica per colonne, capace di mantenere la temperatura desiderata con una precisione di ±1 °C 3.8.2. Un’unità di vaporizzazione termoregolabile 3.8.3. Un rivelatore a ionizzazione di fiamma ed un convertitore-amplificatore 3.8.4. Un integratore-registratore idoneo ad essere usato con il convertitore-amplificatore (3.8.3).

3.9. Una colonna capillare in silice fusa coperta interamente di BP1 o equivalente (o qualsiasi altra colonna di risoluzione almeno equivalente) su uno spessore uniforme di 0,25 μm; la colonna deve essere in grado di separare i derivati trimetilsililici di lanosterolo e sitosterolo. È idonea una colonna della lunghezza di 12 m e un diametro interno di 0,2 mm

3.10. Microsiringa per gascromatografia, da 1 μl, provvista di ago in acciaio temperato.

4. REAGENTI

Tutti i reagenti devono essere di purezza analitica riconosciuta. L'acqua da impiegare deve essere acqua distillata o acqua di purezza almeno equivalente.

4.1. Etanolo, avente una purezza di almeno il 95 %.

4.2. Idrossido di potassio, soluzione al 60 %: sciogliere 600 g di idrossido di potassio (minimo 85 %) in acqua e portare al volume di 1 l con acqua.

4.3. Betulino avente una purezza di almeno il 99 %. 4.3.1. Soluzioni di standard interno di betulino in etere etilico (4.4). 4.3.1.1. La concentrazione della soluzione di betulino usata per la determinazione del sitosterolo deve essere pari a 1,0 mg/ml. 4.3.1.2. La concentrazione della soluzione di betulino usata per la determinazione dello stigmasterolo deve essere pari a 0,4 mg/ml.

4.4. Etere etilico, di purezza analitica (esente da perossidi o da residui).

4.5. Solfato di sodio anidro, granulare, preventivamente essiccato a 102 °C per 2 ore.

4.6. Reagente sililante, ad esempio TRI-SIL (disponibile presso la Pierce Chemical Co., Cat N. 49001) o equivalente (attenzione: il TRI-SIL è infiammabile, tossico, corrosivo e forse cancerogeno. Il personale di laboratorio deve conoscere i dati di sicurezza relativi al prodotto e prendere le relative precauzioni).

4.7. Lanosterolo

4.8. Sitosterolo, di purezza nota non inferiore al 90 % (P). Nota 1: La purezza dei materiali standard usati per la taratura deve essere determinata con il metodo di normalizzazione. Si suppone che tutti gli steroli presenti nel campione siano rappresentati sul cromatogramma, che l'area totale dei picchi rappresenti il 100 % dei costituenti sterolici e che gli steroli diano la stessa risposta al rivelatore. La linearità del sistema deve essere convalidata alle gamme di concentrazione che interessano. 4.8.1. Soluzione standard di sitosterolo: preparare una soluzione contenente, con l'approssimazione di 0,001 mg/ml, circa 0,5 mg/ml (W1) di sitosterolo (4.8) in etere etilico (4.4).

4.9. Stigmasterolo, di purezza nota non inferiore al 90 % (P) 4.9.1. Soluzione standard di stigmasterolo: preparare una soluzione contenente, con l'approssimazione di 0,001 mg/ml, circa 0,2 mg/ml (W1) di stigmasterolo (4.9) in etere etilico (4.4).

4.10. Miscela per la prova di risoluzione: preparare una soluzione contenente 0,05 mg/ml di lanosterolo (4.7) e 0,5 mg/ml di sitosterolo (4.8) in etere etilico (4.4).

5. PROCEDIMENTO

5.1. Preparazione di soluzioni standard per cromatografia:

la soluzione di standard interno (4.3.1) dev'essere aggiunta alla appropriata soluzione standard di sterolo, nello stesso momento in cui viene aggiunta al campione saponificato (cfr. 5.2.2).

5.1.1. Soluzione cromatografica standard di sitosterolo: trasferire 1 ml di soluzione standard di sitosterolo (4.8.1) in ciascuna delle due fiale (3.7) ed eliminare l'etere etilico in corrente di azoto. Aggiungere 1 ml di soluzione di standard interno (4.3.1.1) ed eliminare l'etere etilico in corrente di azoto.

5.1.2. Soluzione cromatografica standard di stigmasterolo: trasferire 1 ml di soluzione standard di stigmasterolo (4.9.1) in ciascuna delle due fiale (3.7) ed eliminare l'etere etilico in corrente di azoto. Aggiungere 1 ml di soluzione di standard interno (4.3.1.2) ed eliminare l'etere etilico in corrente di azoto.

5.2. Preparazione degli insaponificabili

5.2.1. Fondere il campione di burro ad una temperatura non superiore a 35 °C, agitare vigorosamente. Pesare con l'approssimazione di 1 mg, circa 1 g di burro (W2) o di burro concentrato (W2) in un pallone da 150 ml (3.1). Aggiungere 50 ml di etanolo (4.1) e 10 ml di soluzione di idrossido di potassio (4.2). Applicare il condensatore a ricadere e scaldare a circa 75 °C per 30 minuti. Staccare il condensatore e raffreddare il pallone a una temperatura prossima a quella ambiente.

5.2.2. Aggiungere 1 ml di soluzione di standard interno (4.3.1.1) al pallone se si deve determinare il sitosterolo, oppure di soluzione (4.3.1.2) se si deve determinare lo stigmasterolo. Agitare accuratamente. Trasferire quantitativamente il contenuto dei palloni in un imbuto separatore da 500 ml (3.2), sciacquando il pallone alternativamente con 50 ml d'acqua e 250 ml di etere etilico (4.4). Agitare vigorosamente l'imbuto separatore per due minuti e lasciar separare le fasi. Eliminare lo strato acquoso inferiore e lavare lo strato etereo agitando con 4 successive aliquote d'acqua da 100 ml ciascuna. Nota 2: Per evitare che si formi un'emulsione, è essenziale che i primi due risciacqui con acqua vengano effettuati delicatamente (10 inversioni). Il terzo risciacquo dev'essere effettuato agitando vigorosamente per 30 secondi. Se si forma un'emulsione, essa può essere dissolta aggiungendo 5-10 ml di etanolo. Se si aggiunge etanolo, è essenziale effettuare due ulteriori lavaggi vigorosi con acqua.

5.2.3. Far passare lo strato etereo limpido, esente da sapone, attraverso una colonna di vetro (3.5) contenente 30 g di solfato di sodio anidro (4.5). Raccogliere l'etere in un pallone di 250 ml (3.3). Aggiungere granuli regolatori d'ebollizione ed evaporare quasi completamente su bagnomaria o cuffia riscaldante avendo cura di raccogliere i solventi di scarto. Nota 3: Se gli estratti di campione sono portati a completo essiccamento a una temperatura troppo elevata, si possono verificare perdite di sterolo.

5.3. Preparazione di eteri trimetilsililici

5.3.1. Trasferire la soluzione eterea che resta nel pallone in una fiala da 2 ml (3.7) con 2 ml di etere etilico ed eliminare l'etere in corrente di azoto. Sciacquare il pallone con altri 2 ml di etere etilico, trasferendo nella fiala ed eliminando ogni volta l'etere in corrente di azoto.

5.3.2. Sililare il campione aggiungendo 1 ml di TRI-SIL (4.6). Chiudere la fiala ed agitare vigorosamente fino a scioglimento. Se lo scioglimento è incompleto, scaldare a 65-70 °C. Far riposare per almeno 5 minuti prima di iniettare nel gascromatografo. Sililare gli standard nello stesso modo dei campioni. Sililare la miscela per la prova di risoluzione (4.10) nello stesso modo dei campioni. Nota 4: La sililazione deve essere effettu