1973L0046 — IT — 19.08.1981 — 001.001 — 1
Trattandosidiunsemplicestrumentodidocumentazione,essononimpegnalaresponsabilitàdelleistituzioni
►B QUARTADIRETTIVADELLACOMMISSIONE
del5dicembre1972
chefissaimetodid'analisicomunitaripericontrolliufficialideglialimentiperglianimali
(73/46/CEE)
(GU L 83 del 30.3.1973, pag. 21)
Modificata da:
Gazzetta ufficiale
n. pag. data
►M1Direttiva81/680/CEE dellaCommissione del 30 luglio 1981 L 246 32 29.8.1981
▼B
QUARTADIRETTIVADELLACOMMISSIONE
del5dicembre1972
chefissaimetodid'analisicomunitaripericontrolli ufficialidegli
alimentiperglianimali
(73/46/CEE)
LA COMMISSIONE DELLE COMUNITÀ EUROPEE,
visto il trattato che istituisce la Comunità economica europea,
vistaladirettivadel Consiglio, del 20 luglio 1970, concernente l'intro-
duzione di modi di prelevamento dei campioni e di metodi d'analisicomunitari per il controllo ufficiale degli alimenti per gli animali(
1),
modificata dalla direttiva n. 72/275/CEE del 20 luglio 1972(2), in parti-
colare l'articolo 2,
considerando che la suddetta direttiva prevede che i controlli ufficiali
degli alimenti per gli animali destinati a constatare l'osservanza delle
condizioni prescritte in virtù delle disposizioni legislative, regolamen-tari o amministrative concernenti le qualità e la composizione deglialimenti per gli animali, siano effettuati secondo i modi di preleva-mento di campioni ed i metodi di analisi comunitari;
considerando che le direttive n. 71/250/CEE, n. 71/393/CEE e n. 72/
199/CEE dellaCommissione, del 15 giugno 1971(
3), del 18 novembre
1971(4) e del 27 aprile 1972(5) hanno già fissato un certo numero di
metodi di analisi comunitari; che, tenuto conto dello stato d'avanza-mento dei lavori sin qui effettuati, è necessario adottare una quartaserie di metodi;
considerando che le misure previste dalla presente direttiva sono
conformi al parere del Comitato permanente degli alimenti per glianimali,
HA ADOTTATO LA PRESENTE DIRETTIVA:
Articolo 1
Gli Stati membri prescrivono che le analisi per i controlli ufficiali degli
alimenti per gli animali, per quanto riguarda il contenuto in umidità dei
grassi e degli oli animali e vegetali e per quanto riguarda i contenuti inmagnesio e con cellulosa grezza degli alimenti, siano effettuatesecondo i metodi descritti all' allegato I della presente direttiva.
Articolo 2
Gli Stati membri prescrivono che le analisi per i controlli ufficiali degli
alimenti per gli animali, per quanto riguarda il loro contenuto in reti-
nolo (vitamina A), tiamina (aneurina, vitamina B1), acidi ascorbico e
deidroascorbico (vitamina C), siano effettuate secondo i metodidescritti all'allegato II della presente direttiva.
Articolo 3
Gli Stati membri mettono in vigore, non oltre il 1ogennaio 1974, le
disposizioni legislative, regolamentari o amministrative necessarie per1973L0046 — IT — 19.08.1981 — 001.001 — 2
(1) GU n. L 170 del 3. 8. 1970, pag 2.
(2) GU n. L 171 del 29. 7. 1972, pag. 39.
(3) GU n. L 155 del 12. 7. 1971, pag. 13.
(4) GU n. L 279 del 20. 12. 1971, pag. 7.
(5) GU n. L 123 del 29. 5. 1972, pag. 6.▼M1
▼B
▼M1
▼B
▼B
conformarsi alle disposizioni della presente direttiva e ne informano
immediatamente la Commissione.
Articolo 4
Gli Stati membri sono destinatari della presente direttiva.1973L0046 — IT — 19.08.1981 — 001.001 — 3
▼B
ALLEGATO I
1.DETERMINAZIONE DELL'UMIDITÀ NEI GRASSI E NEGLI OLI
ANIMALIEVEGETALI
1.Scopoecampod'applicazione
Il metodo permette di determinare il contenuto in umidità (acqua ed altre
materie volatili) dei grassi e degli oli animali e vegetali.
2.Principio
Il campione viene sottoposto ad essiccazione a 103ºC fino a cessazione della
diminuzione di massa. La perdita di massa viene determinata per pesata.
3.Apparecchiatura
3.1. Recipiente a fondo piano, di materiale resistente alla corrosione,
diametro: da cm 8 a 9, altezza: circa cm 3
3.2. Termometro a mercurio con bulbo rinforzato e camera di espansione
all'estremità superiore, graduato da circa 80ºC ad almeno 110ºC,
lunghezza: circa cm 10.
3.3. Bagno di sabbia o piastra elettrica riscaldante
3.4. Essiccatore, contenente un efficace disidratante3.5. Bilancia analitica
4.Mododioperare
Pesare, con l'approssimazione di mg 1, circa g 20 del campione omogeneiz-
zato nel recipiente (3.1), essiccato e tarato, contenente il termometro (3.2).
Riscaldare sul bagno di sabbia o sulla piastra riscaldante (3.3), agitando
continuamente con il termometro, in modo da far salire la temperatura a
90ºC in circa7 minuti.
Ridurre l'intensità del riscaldamento secondo la frequenza con la quale le
bolle risalgono dal fondo del recipiente. La temperatura non deve superare i
105ºC. Continuare ad agitare raschiando il fondo del recipiente sino a quando
non si formano più bolle.
Per assicurare l'eliminazione completa dell'umidità, riscaldare più volte a
103ºC ± 2ºC, raffreddando a 93ºC tra i riscaldamenti successivi. Lasciar
quindi raffreddare nell'essiccatore (3.4), sino a temperatura ambiente e
pesare. Ripetere l'operazione fino a quando la perdita di massa tra due pesate
successive non superamg 2.
N.B.Un aumento della massa del campione dopo i ripetuti riscaldamenti
indica un'ossidazione del grasso. In questo caso, calcolare il risultato
basandosi sulla pesata effettuata immediatamente prima che la massa
abbia incominciato ad aumentare.
5.Calcolodeirisultati
Il contenuto in umidità, in per cento del campione, è dato dalla seguente
formula:
(M
1−M2)·Mo100
in cui:M
o= massa, in grammi, della quantità di prodotto sottoposta all'analisi
M1= massa, in grammi, del recipiente con il suo contenuto prima del
riscaldamento
M2= massa, in grammi, del recipiente con il suo contenuto dopo il riscal-
damento.
I risultati inferiori a 0,05 % debbono essere riportati con la dizione «meno di
0,05 %».
Ripetibilità
La differenza tra i risultati di due determinazioni parallele, effettuate sullo
stesso campione, non deve oltrepassare 0,05 % in valore assoluto.1973L0046 — IT — 19.08.1981 — 001.001 — 4
▼B
2.DETERMINAZIONEDELMAGNESIO
— per spettrofotometria d'assorbimento atomico —
1.Scopoecampodiapplicazione
Il metodo permette di determinare il magnesio nei mangimi. Esso è partico-
larmente adatto per determinare i contenuti di magnesio inferiori al 5 %.
2.Principio
Il campione viene incenerito e sciolto nell'acido cloridrico diluito. Se non
contiene sostanze organiche, viene sciolto direttamente all'acido cloridrico
diluito. Lasoluzione viene diluitae il contenuto di ma gnesio viene determi-
nato con la spettrofotometria d'assorbimento atomico a 285,2 nm, per
raffronto con soluzioni tipo.
3.Reattivi
3.1. Acido cloridrico p.a., d: 1,163.2. Acido cloridrico p.a., d: 1,19
3.3. Magnesio, in nastro o filo, o solfato di magnesio MgSO
4·7H2O p.a.
essiccato nel vuoto a temperatura ambiente
3.4. Soluzione di sale di stronzio (cloruro o nitrato) al 2,5 % (p/v) di stronzio
(= 76,08 g di SrCl2·6H2O p.a./1 o 60,38 g di Sr (NO3)2p.a./1).
3.5. Soluzione tipo di magnesio: pesare, con la precisione di mg 1, g 1 di
magnesio (3.3) liberato con cura della pellicola di ossido od una quantità
corrispondente di solfato di magnesio (3.3), introdurlo in un pallone
tarato da ml 1 000, aggiungere ml 80 di acido cloridrico (3.1), lasciare
sciogliere e portare a ml 1 000 aggiungendo acqua; ml 1 di tale solu-
zione contiene mg 1,000 di magnesio.
4.Apparecchiatura
4.1. Crogiolo da incenerimento di platino, quarzo o porcellana
4.2. Forno elettrico a muffola, provvisto di termostato4.3. Spettrofotometro d'assorbimento atomico
5.Mododioperare
5.1Preparazione della soluzione
5.1.1.Alimenti costituiti esclusivamente da sostanze minerali
Pesare, con l'approssimazione di mg 1, g 5 del campione, intro-
durli in un pallone tarato da ml 500 con ml 250 a 300 d'acqua.
Aggiungere ml 40 di acido cloridrico (3.1). Portare ad ebollizionee lasciare bollire lentamente il liquido per 30 minuti. Lasciare
raffreddare, portare a volume con acqua, mescolare e filtrare su
filtro di carta a pieghe asciutto. Scartare i primi ml 30 di filtrato.
In presenza di silice trattare g 5 di campione con una quantità
sufficiente (ml 15 a 30) di acido cloridrico (3.2) ed evaporare a
secco a bagnomaria. Proseguire come indicato in 5.1.2 a partire
dal 3º periodo.
5.1.2.Alimenti costituiti essenzialmente da sostanze minerale
Pesare, con l'approssimazione di mg 1, g 5 del campione in un
crogiolo daincenerimento ed incenerire a550ºC in un forno a
muffola, sino ad ottenere ceneri esenti da particelle carboniose.
Per eliminare la silice, aggiungere alle ceneri una quantità suffi-
ciente (ml 15 a 30) di acido cloridrico (3.2), ed evaporare a
secco su bagnomaria. Essiccare poi per un'ora in stufa a 105ºC.
Riprendere il residuo con ml 10 di acido cloridrico (3.1) e trasfe-
rire, mediante acqua calda, in pallone tarato da ml 500. Portare
all'ebollizione, lasciar raffreddare e portare a volume con acqua.
Mescolare e filtrare su filtro di carta asciutto in un bicchiere
asciutto. Scartare i primi ml 30 di filtrato.
5.1.3.Alimenti costituiti essenzialmente da sostanze organiche
Pesare, con l'approssimazione di mg 1, g 5 del campione in un
crogiolo daincenerimento e incenerire a550ºC in un forno a
muffola, sino a ottenere ceneri esenti da particelle carboniose.1973L0046 — IT — 19.08.1981 — 001.001 — 5
▼B
Riprendere le ceneri con ml 5 di acido cloridrico (3.2), evaporare
a secco in bagno maria ed essiccare quindi per un'ora in una stufa
a105ºC per insolubilizza re lasilice. Riprendere il residuo con ml
5 di acido cloridrico (3.1), trasferire, con l'ausilio di acqua calda,
in un pallone tarato da ml 250, portare all'ebollizione, lasciar
raffreddare e portare a volume con acqua. Mescolare e filtrare su
filtro di carta asciutto in un bicchiere asciutto. Scartare i primi ml
30 di filtrato.
5.2Misura dell'assorbimento atomico
Preparare almeno 5 soluzioni di riferimento a concentrazioni crescenti,
scelte in funzione dellazonadi misura zione optimum dello spettrofoto-
metro, diluendo con acqua la soluzione campione (3.5). Aggiungere a
ciascuna soluzione ml 10 di soluzione di sale di stronzio (3.4) e comple-
tare quindi il volume a ml 100 mediante aggiunta d'acqua.
Diluire con acqua una parte del filtrato ottenuto in 5.1.1, 5.1.2 o in 5.1.3
in modo da ottenere una concentrazione di magnesio compresa fra i
limiti di concentrazione delle soluzioni di riferimento. La concentrazione
di acido cloridrico di questa soluzione non deve essere superiore a 0,4 N.
Aggiungere ml 10 di soluzione di sale di stronzio (3.4) e completare
quindi il volume a ml 100 mediante aggiunta d'acqua.
Misurare l'assobimento della soluzione da determinare e delle soluzioni
di riferimento alla lunghezza d'onda di 285,2 nm.
6.Calcolodeirisultati
Determinare la quantità di magnesio del campione riferendosi alle soluzioni
campione. Esprimere il risultato in percento del campione.
RipetibilitàLa differenza tra i risultati di due determinazioni parallele effettuate su di
uno stesso campione non deve essere superiore al 5 %, in valore relativo.
3.DETERMINAZIONEDELLACELLULOSAGREZZA
1.Scopoecampod'applicazione
Il metodo permette di determinare nei mangimi le materie organiche, esenti
da grasso, insolubili in ambiente acido e in ambiente alcalino, convenzional-
mente designate con il nome di cellulosa grezza.
2.Principio
Il campione, eventualmente sgrassato, è trattato successivamente con solu-
zioni bollenti di acido solforico e di idrossido di potassio di concentrazioni
determinate. Il residuo è separato per filtrazione su amianto, lavato, essiccato,
pesato e calcinato a 900ºC. La perdita di peso conseguente alla calcinazione
corrisponde alla cellulosa grezza della quantità di prodotto sottoposta all'ana-
lisi.
3.Reattivi
3.1. Acido solforico p.a. 0,26 N3.2. Amianto trattato: aggiungere ad amianto per crogiolo di Gooch circa
cinque volte il suo peso di acido cloridrico diluito (un volume di acido
cloridrico, d: 1,19, più tre volumi d'acqua). Far bollire la miscela per
circa 45 minuti, lasciar raffreddare, filtrare su imbuto di Büchner.
Lavare il residuo prima con acqua, fino all'eliminazione dell'acido clori-
drico nelle acque di lavaggio, e poi con acetone (3.6). Essiccare
l'amianto nella stufa e calcinarlo quindi per due ore a 900ºC. Lasciar
raffreddare e conservare in bottiglia chiusa. L'amianto così trattato può
essere utilizzato più di una volta. Esso deve essere conforme alle
prescrizioni di cui al punto 5.1 per quanto riguarda la prova in bianco.
3.3. Emulsione antischiuma (per esempio silicone)
3.4. Soluzione d'idrossido di potassio p.a. 0,23 N
3.5. Acido cloridrico 0,5 N3.6. Acetone puro3.7. Etere dietilico puro1973L0046 — IT — 19.08.1981 — 001.001 — 6
▼B
4.Apparecchiatura
4.1. Becher da almeno ml 600, graduato a ml 200
4.2. Dischi di porcellana del diametro di circa mm 80 e dello spessore di
circamm 4, con circa32 fori da l dia metro di circamm 4 cia scuno.
4.3. Beute da vuoto da circa l 2, con tappo di gomma, graduate in corrispon-
denzadi ml 800 e provviste di un imbuto di vetro del dia metro di mm
120.
4.4. Piastre filtranti del diametro di circa mm 40 e dello spessore di circa
mm 4, con bordo obliquo adattato al cono dell'imbuto (4.3), con 16
fori di circa mm 4 di diametro ciascuno e ricoperte da una griglia metal-
lica a maglio di circa mm 1 di lato. Le piastre e le griglie metallichenon debbono alterarsi per azione degli acidi o degli alcali.
4.5. Crogioli di platino o di quarzo per incenerimento
4.6. Forno elettrico a muffola, con termostato.
4.7. Essiccatore
4.8.Filtro di amianto
Mettere in sospensione g 2,0 di amianto (3.2) in ml 100 d'aqua. Filtrare
sotto vuoto su una piastra filtrante ricoperta da una griglia metallica
(4.4) postanell'imbuto di unabeutadavuoto (4.3). Ra ccogliere il
filtrato e filtrarlo nuovamente con lo stesso filtro. Eliminare il filtrato.
5.Mododioperare
Pesare, con l'approssimazione di mg 1, g 3 di campione e g 2 di amianto
trattato (3.2) in un becher (4.1), aggiungere ml 200 di acido solforico (3.1)
e qualche goccia di emulsione antischiuma (3.3). Portare rapidamente all'e-
bollizione e lasciare bollire per 30 minuti esatti. Per mantenere costante il
volume, coprire il becher con un dispositivo raffreddante, per esempio un
pallone a fondo rotondo da ml 500 a circolazione di acqua fredda. Interrom-
pere l'ebollizione aggiungendo circa ml 50 d'acqua fredda e filtrare
immediatamente sotto vuoto su un filtro di amianto già preparato comme
indicato in 4.8.
Lavare il residuo con 5 parti da circa ml 100 di aqua molto calda per ottenere
un volume finale di filtrato di ml 800. Travasare tutto il residuo nel becher
(4.1), nel quale è già stato collocato un disco di porcellana (4.2) per rendere
regolare l'ebollizione. Aggiungere ml 200 di soluzione di idrossido di
potassio (3.4). Portare rapidamente all'ebollizione e lasciar bollire per 30
minuti esatti. Aggiungere circa ml 50 d'acqua fredda e filtrare immediata-
mente sotto vuoto su un nuovo filtro di amianto già preparato come indicato
sub 4.8. Lavare il residuo con acqua molto calda fino a neutralità delle acque
di lavaggio (saggio su tornasole); lavare quindi tre volte con acetone (3.6)
(complessivamente, circa ml 100).
Trasferire quantitativamente il residuo in un crogiuolo per incenerimento
(4.5), sminuzzarlo — se necessario — ed essiccare nella stufa a 130ºC fino
apeso costa nte.
Far raffreddare in essiccatore e pesare rapidamente. Introdurre quindi il
crogiolo nel forno a muffola (4.6) e lasciar calcinare per 30 minuti a 900ºC.
Far raffreddare nell'essiccatore e pesare rapidamente.
Eseguire con lo stesso procedimento una prova in bianco con l'amianto trat-
tato (3.2), senza campione. La perdita di peso conseguente alla calcinazione
dei g 6 d'amianto non deve essere superiore a mg 10.
6.Calcolodeirisultati
Il contenuto in cellulosa grezza, in percento del campione, è dato dalla
formula:
a/C0b ðÞ /C1 100
3
in cui:
a = perdita di peso conseguente alla calcinazione, nella determinazione,
b = perdita di peso conseguente alla calcinazione, nella prova in bianco.
Ripetibilità
La differenza tra i risultati di due determinazioni parallele eseguite sullo
stesso campione non deve superare:1973L0046 — IT — 19.08.1981 — 001.001 — 7
▼B
0,3 in valore assoluto, per i contenuti di cellulosa grezza inferiori al 10 %;
3 % in valore relativo per i contenuti di cellulosa grezze uguali o superiori
al1 0% .
7.Osservazioni
7.1. Gli alimenti che contengono più del 10 % di materie grasse debbono
essere sgrassati prima dell'analisi con etere dietilico. A tale scopo, collo-
care il saggio (g 3 pesati con l'approssimazione di mg 1) su un filtro
d'amianto (4.8). Coprire 3 volte con circa ml 50 di etere dietilico (3.7)
e filtrare ogni volta sotto vuoto con precauzione. Travasare tutto il
saggio e l'amianto in un becher (4.1) e proseguire l'analisi come indicato
in 5.
7.2. Gli alimenti che contengono materie grasse non direttamente estraibili
debbono essere sgrassati una prima volta come indicato sub 7.1 ed una
seconda volta dopo il lavaggio del residuo dell'attacco acido.
A questo scopo, lavare tre volte il residuo di questo attacco con acetone
(3.6) (complessivamente ml 100), quindi altre tre volte con ml 50 di
etere di etilico (3.7). Versare quindi tutti i residui in un becher (4.1) e
proseguire l'analisi come indicato in 5, secondo capoverso (trattamento
con lasoluzione di idrossido di pota ssio).
7.3. Nel caso di alimenti ricchi di calcio (più del 2 % di calcio) versare il
saggio (g 3 pesati con l'approssimazione di mg 1) in un becher (4.1)
contenente ml 100 di acido cloridrico 0,5 N (3.5) e lasciare riposare a
freddo per 5 minuti. Filtrare immediatamente e lavare con acqua fredda.
Utilizzare come adiuvante di filtrazione i g 2,0 di amianto previsti per
l'ebollizione con l'acido solforico. Se la filtrazione risulta difficile,
diluire la sospensione con acetone. Procedere quindi come indicato in 5.1973L0046 — IT — 19.08.1981 — 001.001 — 8
▼B
ALLEGATO II
1.DETERMINAZIONEDELRETINOLO(VITAMINAA)
1.Scopoecampodiapplicazione
Il metodo permette di determinare il contenuto di retinolo (vitamina A) nei
mangimi, nei concentrati e nelle premiscele. Il limite inferiore di determina-
zione è 10 000 UI/kg per gli alimenti fortemente pigmentati, e di 4 000 UI/kg
per gli altri prodotti(1). I prodotti sono suddivisi in due gruppi asecondadel
loro presunto contenuto in retinolo:
Gruppo A: contenuto inferiore a200 000 UI/kg
Gruppo B: contenuto uguale o superiore a 200 000 UI/kg
2.Principio
Il campione viene idrolizzato a caldo con una soluzione di idrossido di
potassio in mezzo etanolico ed in presenza di una sostanza antiossidante o
in atmosfera di azoto. La miscela è estratta con 1,2-dicloroetano. L'estratto
è evaporato a secco e ripreso con etere di petrolio. La soluzione viene croma-
tografata su colonna di ossido di alluminio (per i prodotti di cui al gruppoB
la cromatografia è necessaria solo in alcuni casi). Il retinolo è determinato
per spettrofotometria a 610 nm dopo la formazione di un complesso colorato
con la reazione di Carr-Price, nel caso dei prodotti di cui al gruppo A; per
spettrofotometrianell'UV a325 nm per quelli del gruppo B.
3.Reattivi
a)impiegati per l'analisi dei prodotti di cui ai gruppi A e B
3.1. Etanolo al 96 % (v/v)
3.2. Soluzione al 10 % (p/v) di ascorbato di sodio p.a. oppure3.3. Azoto, purificato3.4. Soluzione al 50 % (p/v) di idrossido di potassio p.a.
3.5. Soluzione di idrossido di potassio 1 N
3.6. Soluzione di idrossido di potassio 0,5 N3.7. 1,2-dicloroetano p.a.3.8. Etere di petrolio, puro, punto di ebollizione 30—50ºC. Se del caso,
purificarlo nel seguente modo. Sbattere ml 1 000 di etere di petrolio
ogni volta con ml 20 di acido solforico concentrato, fino a che
l'acido resta incolore. Eliminare l'acido e lavare l'etere successiva-
mente con ml 500 di acqua, due volte con ml 250 di una
soluzione al 10 % di idrossido di sodio e tre volte con ml 500 di
acqua. Eliminare la fase acquosa, essiccare l'etere per un'ora su
carbone attivo e solfato di sodio anidro, filtrare e distillare.
3.9. Ossido di alluminio standardizzato secondo Brockmann: calcinare
per 8 ore a 750ºC, raffreddare in essiccatore e conservare in flacone
di vetro scuro, con tappo smerigliato. Prima di utilizzarlo per la
cromatografia, inumidirlo nel seguente modo: si introducono in
unabeutadi vetro scuro g 10 di ossido di a lluminio e ml 0,7 di
acqua, si chiude ermeticamente e si scalda per 5 minuti a bagno-
maria bollente agitando di tanto in tanto energicamente. Lasciare
raffreddare, agitando. Verificare l'attività dell'ossido di alluminio
così preparato sottoponendo all'analisi secondo 5.3 e 5.4 una
quantità nota (500 UI) di retinolo tipo (3.17).
3.10. Ossido di alluminio basico, I grado di attività.3.11. Etere etilico, puro. Eliminare i perossidi e le tracce di acqua a
mezzo di cromatografia su colonna di ossido di alluminio basico
(3.10) (g 25 di ossido di alluminio per ml 250 di etere etilico).
3.12. Soluzioni di etere di petrolio (3.8) al 4 %, 8 %, 12 %, 16 % e 20 %
di etere etilico (3.11).
3.13. Soluzione di solfuro di sodio 0,5 M in glicerinaa l 70 % (v/v),
preparata a partire da solfuro di sodio p.a.1973L0046 — IT — 19.08.1981 — 001.001 — 9
(1) 1 UI = 0,3 µg di retinolo.
▼B
b)impiegati esclusivamente per l'analisi dei prodotti del gruppo A
3.14. Benzene p.a., cristallizzabile
3.15. Cloroformio p.a. Eliminare l'etanolo, il fosgene e le tracce di acqua
a mezzo di cromatografia su colonna di ossido di alluminio basico
(3.10) (g 50 di ossido di alluminio per ml 200 di cloroformio;
conviene cromatografare una seconda volta i primi ml 50 di eluato).
3.16. Reattivo di Carr-Price: agitare g 25 circa di tricloruro di antimonio
p.a. (conservato in essiccatore) con ml 100 di cloroformio (3.15)
fino a saturazione della soluzione. Un modico deposito di tricloruro
di antimonio non disturba. Aggiungere ml 2 di anidride acetica p.a.
Conservare in una bottiglia di vetro scuro con tappo smerigliato, in
frigorifero. Si conserva per parecchie settimane.
3.17. Retinolo tipo controllato spettrofotometricamente.
c)impiegati esclusivamente per l'analisi dei prodotti del gruppo B
3.18. Isopropanolo, per cromatografia
4.Apparecchiatura
4.1. Bagnomaria
4.2. Apparecchio rotativo per evaporazione sotto vuoto provvisto di palloni
di differenti capacità
4.3. Colonne da cromatografia, in vetro (lunghezza: mm 300, diametro
interno: circamm 13)
4.4. Spettrofotometro con vaschette da mm 10 (di quarzo nel caso di misure
nell'UV)
4.5. Lampada UV; 365 nm
5.Mododioperare
N.B.Tutte le operazioni debbono essere fatte in assenza di luce diretta ed
impiegando vetreria scura
5.1.Entità del campione
Prelevare una quantità di campione finemente macinato proporzionale al
presunto contenuto in vitamina A, e cioè:
g 0,1-1,0 per i concentrati (contenuti superiori a 20 000 UI/g);
g 3,0-5,0 per le premiscele (contenuti compresi tra400 e 20 000 UI/g);g 10-20 per le miscele minerali;
g 30 per i prodotti di cui al gruppo A.
Introdurre immediatamente la quantità di sostanze da sottoporre ad
analisi in un pallone da ml 500 a collo smerigliato.
5.2.Idrolisi ed estrazione (
1)
Aggiungere successivamente alla quantità di sostanza da sottoporre ad
analisi ml 40 di etanolo (3.1), ml 2 della soluzione di ascorbato di sodio
(3.2)(2), ml 10 dellasoluzione di idrossido di pota ssio (3.4) e ml 2 della
soluzione di solfuro di sodio (3.13). Scaldare il pallone, innestato su un
refrigerante a ricadere, per 30 min a 70—80 ºC, raffreddandolo poi sotto
acqua corrente. Aggiungere ml 50 di etanolo (3.1) e ml 100 (prelevato
con pipetta tarata) di 1,2-dicloroetano (3.7). Agitare energicamente e
travasare poi il supernatante in un imbuto separatore. Aggiungere,
nell'imbuto separatore, ml 150 della soluzione di idrossido di potassio
(3.5), agitare per 10 secondi e lasciare riposare fino alla separazione
delle fasi. Raccogliere la fase dicloroetanica (fase inferiore) in un altro
imbuto separatore, aggiungere ml 40 della soluzione di idrossido di
potassio (3.6), agitare per 10 secondi e lasciare riposare fino alla separa-
zione delle fasi. Raccogliere la fase dicloroetanica in imbuto separatore
e lavarla 6—8 volte con ml 40 di acqua per volta, fino alla scomparsa
della reazione alcalina (saggio alla fenolftaleina). Raccogliere la fase
dicloroetanica ed eliminare le ultime tracce di acqua a mezzo di strisce
di carta da filtro.1973L0046 — IT — 19.08.1981 — 001.001 — 10
(1) Per gli alimenti d'allattamento e per i prodotti che possono agglomerarsi o rigonfiare,
raddoppiare la quantità dei reattivi indicati in 5.2, primo e secondo comma.
(2) L'aggiunta di ascorbato di sodio non è necessaria quando si esegue l'idrolisi in atmo-
sferadi a zoto.
▼B
Evaporare a secco una parte aliquota della soluzione, su bagnomaria alla
temperatura di 40 ºC e sotto vuoto. Riprendere rapidamente il residuo
con ml 5 di etere di petrolio (3.8).
Per i prodotti di cui al gruppo A cromatografare come descritto al punto
5.3.1.
Per i prodotti di cui al gruppo B , trasferire la soluzione in un pallone
tarato da ml 50, portare a volume con etere di petrolio (3.8), omogeneiz-
zare e misurare la densità ottica come indicato al punto 5.4.2.
5.3.Cromatografia
5.3.1.Prodotti appartenenti al gruppo A
Riempire un tubo per cromatografia (4.3), fino all'altezza di mm
200, di g 10 di ossido di alluminio, preparato secondo (3.9),prece-
dentemente impregnato con etere di petrolio (3.8). Introdurre
nella colonna la soluzione ottenuta in 5.2 e aggiungere immedia-
tamente ml 20 di etere di petrolio (3.8). Eluire successivamente
con aliquote di ml 10 delle soluzioni di etere di petrolio al 4 %,
8 %, 12 %, 16 % e 20 % dietere etilico (3.12), sotto vuoto
parziale o sotto pressione in modo che la velocità di eluizione
siadi 2 a3 gocce a l secondo.
Il carotene è eluito per primo(1). Il retinolo è generalmente eluito
amezzo dellasoluzione di etere di petrolio a l 20 % di etere
etilico (3.12). L'eluizione viene controllata in luce ultravioletta
(irradiando per brevissimo tempo la colonna con una lampada a
mercurio). La banda fluorescente del retinolo è nettamente
distinta dalle bande gialle che la seguono e che sono le xantofil-
le.Raccogliere la frazione di eluato che contiene il retinolo in una
erlenmeyer.
5.3.2.Prodotti appartenenti al gruppo B
La cromatografia viene effettuata solo se le misure della densità
otticaottenute secondo 5.4.2 non sono conformi a lle prescrizioni
indicate in 5.4.2.
Se è necessaria la cromatografia, introdurre nella colonna croma-
tografica una parte aliquota della soluzione in etere di petrolio
ottenuta in 5.2, contenente all'incirca 500 UI di retinolo e croma-
tografare nel modo indicato in 5.3.1.
5.4.Misure della densità ottica
5.4.1.Prodotti appartenenti al gruppo A
Portare a secco sotto vuoto l'eluato contenente il retinolo, ottenuto
in 5.3.1. Riprendere il residuo con ml 2 di benzene (3.14). Prele-
vare ml 0,3 di questa soluzione ed aggiungervi ml 3 del reattivo
di Carr-Price (3.16). Si sviluppa una colorazione blu. Misurare la
densità ottica allo spettrofotometro a 610 nm, esattamente 30
secondi dopo l'inizio della reazione. Determinare il contenuto in
retinolo riferendosi ad una curva di taratura ottenuta a partire da
soluzioni benzeniche di retinolo tipo aconcentra zioni crescenti
trattate con il reattivo di Carr-Price (da 2 a 16 UI di retinolo
tipo (3.17) in ml 0,3 di benzene (3.14) + ml 3 di reattivo di
Carr-Price (3.16). La curva di taratura deve essere periodicamente
ricontrollata sulla scorta dello standard e della soluzione del reat-
tivo di Carr-Price preparato di fresco.
5.4.2.Prodotti appartenenti al gruppo B
Prelevare una parte aliquota della soluzione in etere di petrolio
ottenuta in 5.2 e contenente all'incirca 200 UI di retinolo. Portare
asecco sotto vuoto e riprendere il residuo con ml 25 di isopropa -
nolo (3.18). Misurarne la densità ottica allo spettrofotometro a
325, 310 e 334 nm. Il massimo di assorbimento è a 325 nm. Il
contenuto in retinolo della soluzione viene calcolato nel seguente
modo:
E325·18,30 = UI di vitamina A/ml
I rapporti tra le densità ottiche1973L0046 — IT — 19.08.1981 — 001.001 — 11
(1) Il contenuto in carotene può essere determinato misurando la densità ottica a 450 nm;
E1%
1c m¼2600 :
▼B
E310:E325ed E334:E325
debbono essere di 6:7 = 0,857.
Se uno di questi rapporti si scosta sensibilmente da questo valore
(< 0,830 o > 0,880), ladetermina zione delle densità ottiche deve
essere preceduta dalla cromatografia secondo le modalità indicate
in 5.3.2. Se la misura delle densità ottiche effettuata dopo croma-
tografia fa rilevare che i rapporti sopraddetti si scostano ancora
sensibilmente dal valore di 0,857 (< 0,830 o > 0,880) la determi-
nazione deve essere effettuata seguendo il procedimento previsto
per i prodotti del gruppo A.
6.Calcolodelrisultato
Calcolare il contenuto in retinolo del campione tenendo conto del peso della
sostanza sottoposta ad analisi e delle diluizioni effettuate nel corso della
analisi. Esprimere i risultati in UI di retinolo per kg.
Ripetibilità
La differenza tra i risultati di due determinazioni effettuate in parallelo sullo
stesso campione non deve superare:
— 20 %, in valore relativo, per i contenuti inferiori a 75 000 UI/kg;
— 15 000 UI per i contenuti compresi tra75 000 e 150 000 UI/kg;— 10 %, in valore relativo, per i contenuti compresi tra 150 000 e
250 000 UI/kg;
— 25 000 UI per i contenuti compresi tra250 000 e 500 000 UI/kg;— 5 %, in valore relativo, per i contenuti che superano le 500 000 UI/kg.
2.DETERMINAZIONEDELLATIAMINA(ANEURINA,VITAMINAB
1)
1.Scopoecampodiapplicazione
Il metodo permette di determinare il contenuto in tiamina (aneurina, vitamina
B1) dei mangimi, dei concentrati e delle premiscele. Il limite inferiore della
determinazione è di 5 ppm.
2.Principio
Il campione viene trattato a caldo con acido solforico diluito e poi idrolizzato
per via enzimatica. La soluzione ottenuta è sottoposta ad ossidazione alca-
lina. Il tiocromo che così si forma è estratto con isobutanolo e determinato
per fluorimetria.
3.Reattivi
3.1. Soluzione tipo di tiamina a 100 µg/ml: sciogliere mg 112,3 di clori-
drato di tiamina purissimo, precedentemente seccato sotto vuoto fino
a peso costante, in ml 1000 di acido solforico 0,2 N (3.2). Al freddo
e lontano dalla luce diretta questa soluzione si conserva per un mese.
3.2. Acido solforico 0,2 N
3.3. Disolfito di sodio, puro
3.4. Soluzione al 20 % (p/v) di ferricianuro di potassio p.a.3.5. Soluzione al 25 % (p/v) di idrossido di potassio p.a.3.6. Miscela ossidante: mescolare ml 2 della soluzione di ferricianuro di
potassio (3.4) a ml 48 della soluzione di idrossido di potassio (3.5).
Questamiscelanon si conservapiù di 4 ore.
3.7. Isobutanolo, p.a.
3.8. Soluzione di acetato di sodio p.a. 2,5 N
3.9. Preparazione multienzimatica contenente proteasi, fosfatasi e amilasi
(per esempio, clarasi)
3.10. Etanolo al 96 % (v/v)
4.Apparecchiatura
4.1. Bagnomaria
4.2. Centrifuga (3 500 giri/min) con tubi di ml 30—50 di capacità, provvisti
di tappo smerigliato1973L0046 — IT — 19.08.1981 — 001.001 — 12
▼B
4.3. Fluorimetro
5.Mododioperare
5.1.Idrolisi enzimatica
Mettere in due palloni tarati da ml 250 e denominati A e B una mede-
sima quantità di materiale prelevato dal campione finemente macinato e
contenenti circa µg 100 di tiamina; aggiungere ml 125 di acido solforico
(3.2).Al solo pallone A aggiungere, inoltre, ml 1 della soluzione tipo
(3.1) (tipo interno).
Agitare energicamente, porre i palloni in un bagnomaria bollente e
tenerveli per 15 minuti agitandoli di tanto in tanto. Lasciare raffreddare
fino a 45 ºC circa. Aggiungere in ogni pallone ml 20 della soluzione di
acetato di sodio (3.8) e g 0,5 della preparazione multienzimatica (3.9);
lasciare riposare per 20 minuti a temperatura ambiente. Aggiungere ml
20 della soluzione di acetato di sodio (3.8), portare a volume con acqua,
omogeneizzare e filtrare. Raccogliere i filtrati A e B dopo averne scor-
tato i primi ml 15. Preparare le seguenti soluzioni.
5.1.1.Soluzione tipo T
Porre in un tubo dacentrifuga(4.2.) ml 5 del filtra to A e mg 10
circadi disolfito di sodio (3.3.). Immergere il tubo in un ba gno-
maria bollente per 15 minuti e lasciarlo poi raffreddare fino a
temperatura ambiente.
5.1.2.Soluzioni A (tipo interno) e B (campione)
Introdurre in un tubo dacentrifuga(4.2) ml 5 del filtra to A ed in
altro tubo (4.2) ml 5 del filtrato B.
5.2.Ossidazione
Aggiungere alle soluzioni T, A e B ml 5 della miscela ossidante (3.6),
dopo un minuto, ml 10 di isobutanolo (3.7). Tappare i tubi e agitare
energicamente per 5 secondi. Lasciare riposare per un minuto e centrifu-
gare per separare le fasi. Prelevare da ogni tubo ml 5 della fase
superiore isobutanolica, introdurli rispettivamente in altrettanti palloni
tarati da ml 25, portare a volume con etanolo (3.10) ed omogeneizzare
(= estratti T, A e B).
5.3.Misurazione della fluorescenza
Effettuare le misure alla lunghezza d'onda alla quale il fluorimetro dà
una risposta ottimale alla fluorescenza del tiocromo. Irradiare a circa
365 nm. Azzerare lo strumento con l'estratto T. Misurare la intensità
dellafluorescenzadegli estra tti A e B.
6.Calcolodelrisultato
Il contenuto in µg di tiamina per kg di campione è dato dalla fomula:
d/C1b
a/C0b ðÞc
dove
a= intensità della fluorescenza dell'estra tto A (tipo interno)
b = intensità della fluorescenza dell'estratto B (campione)
c = peso in g delle quantità di sostanza sottoposte all'analisi
d = quantità di tiamina, in µg, aggiunta alla quantità di sostanza sottoposta
all'analisi (tipo interno)
RipetibilitàLa differenza tra i risultati di due determinazioni effettuate in parallelo sullo
stesso campione non deve superare:
— 10 %, in valore relativo, per i contenuti inferiori a 500 mg/kg
— 5 %, in valore relativo, per i contenuti uguali o superiori a 500 mg/kg.1973L0046 — IT — 19.08.1981 — 001.001 — 13
▼B
3.DETERMINAZIONE DELL'ACIDO ASCORBICO E DELL'ACIDO
DEIDROASCORBICO
(VITAMINAC)
1.Scopoecampodiapplicazione
Il metodo permette di determinare la somma degli acidi ascorbico e deidroa-
scorbico (vitamina C) nei mangimi, nei concentrati e nelle premiscele. Il
limite inferiore delladetermina zione è di 5 ppm. I prodotti sono suddivisi in
due gruppi asecondadel loro presunto contenuto in vita minaC:
Gruppo A: contenuto inferiore ag 10/kg
Gruppo B: contenuto uguale o superiore a g 10/kg
2.Principio
Il campione, posto in sospensione in una soluzione diluita di acido metafo-
sforico, è estratto con cloroformio. La fase acquosa viene trattata con una
soluzione di 2,6-diclorofenol-indofenolo, per trasformare l'acido ascorbico in
acido deidroascorbico, e poi con una soluzione di 2,4-dinitrofenilidrazina.
L'idrazone che si forma è estratto con una miscela di acetato di etile, acido
acetico glaciale e acetone. La soluzione viene cromatografata su colonna di
gel di silice, l'eluato è evaporato a secco ed il residuo viene disciolto in acidosolforico diluito. Ladensità otticadellasoluzione viene determina tacon il
fotometro a509 nm.
Per i prodotti del gruppo A , l'eluato, ottenuto per cromatografia su colonna,
viene inoltre cromatografato su strato sottile per isolare l'idrazone.
3.Reattivi
3.1. Soluzione tipo allo 0,05 % di acido L-ascorbico: sciogliere mg 50 di
acido L-ascorbico p.a. in circa ml 20 della soluzione di acido metafo-
sforico (3.2) e portare a ml 100 con acqua. Da prepararsi al momento
dell'uso.
3.2. Soluzioni al 10 % (p/v) di acido metafosforico: sciogliere in acqua g
200 di acido metafosforico p.a., sminuzzati in mortaio, e portare a ml
2000 con acqua. Conserva al 4 ºC. Stabile per una settimana.
3.3. Cloroformio p.a.
3.4. Soluzione allo 0,5 % (p/v) di 2,6-diclorofenol-indofenolo p.a. Da
prepararsi al momento dell'uso
3.5. Coadiuvanti per la filtrazione (S. ed S. n. 121 analoghi)
3.6. Soluzione acida al 2 % (p/v) di 2,4-dinitrofenilidrazina: sciogliere g 2
di 2,4-dinitrofenilidrazina in ml 100 di acido solforico diluito (ml 25 di
acido solforico p.a., d: 1,84, portati a ml 100 con acqua). A freddo
questa soluzione si conserva una settimana.
3.7. Azoto oppure
3.8. Anidirde carbonica, in bombole
3.9. Miscela di acetato di etile p.a./acido acetico glaciale/acetone p.a. 96/2/
2 in volume
3.10. Miscela di diclorometano p.a./acido acetico glaciale: 97/º3 in volume
3.11. Gel di silice, granulometria: mm 0,05-0,23.12. Gel di silice H, secondo Stahl, per cromatografia su strato sottile
3.13. Acido solforico diluito: porre ml 105 di acqua in un pallone tarato da
ml 200 e portare a volume con acido solforico p.a., d: 1,84
3.14. Solvente di eluizione per cromatografia su strato sottile: miscelare ml
75 di etere etilico p.a., ml 25 di acetato di etile p.a. e ml 4,0 di acido
acetico al 96 % (p/v). Rinnovarlo dopo 2-3 cromatografie.
4.Apparecchiatura
4.1. Bagno termostatico regolato a + 20 ºC4.2. Centrifuga (g/m 3 500) con tubi di ml 40-50 di capacità, provvisti di
tappo smerigliato
4.3. Apparecchio rotativo per evaporazione sotto vuoto provvisto di palloni
daml 250.1973L0046 — IT — 19.08.1981 — 001.001 — 14
▼B
4.4. Colonne da cromatografia, in vetro (altezza: mm 100, diametro interno
mm 20) provviste di setto poroso in vetro (ad esempio tubi di Allihn)
4.5. Spettrofotometro o colorimetro afiltri, con va schette di mm 10 di spes-
sore,
4.6. Apparecchiatura per cromatografia su strato sottile, con lastre di gel di
silice (3.12) spessore dello strato mm 0,5-0,6 (vanno bene le lastre
pronte per l'impiego). Seccare le lastre per 2h30-3 ore in stufa a
120—130 ºC.
Lasciare raffreddare e conservare poi in essiccatore almeno 24 ore prima
di utilizzarle.
4.7. Stufaasecco regola taa120—130 ºC.
5.Mododiprocedere
5.1.Estrazione
Introdurre in due palloni tarati A e B da ml 250, provvisti di tappo
smerigliato, quantità identiche di campione finemente macinato, conte-
nenti circa200 µg di vita minaC. Aggiungere solo nel pallone A ml
0,4 della soluzione tipo di vitamina C (3.1) ed omogeneizzare scuotendo
leggermente (tipo interno).
Aggiungere in ogni pallone ml 30 di cloroformio (3.3) e ml 25 della
soluzione di acido metafosforico (3.2) a 4 ºC. Agitare brevemente e
lasciare poi riposare per 10—15 minuti. Aggiungere ml 25 di acqua,
tappare bene i palloni, agitare energicamente per 10 secondi e lasciare
riposare per 10—15 minuti nel bagno termostatico (4.1). Centrifugare
per separare la fase acquosa da quella cloroformica. Proseguire le opera-
zioni simultaneamente sugli estratti acquosi A (tipo interno) e B, come
descritto qui di seguito.
5.2.Ossidazione
Prelevare con una pipetta tarata ml 40 della soluzione acquosa sovra-
stante (leggermente torbida) ottenuta in 5.1, introdurla in un provettone
a tappo smerigliato, aggiungervi ml 0,5—1 della soluzione di 2,6-diclo-
rofenolindofenolo (3.4) e mescolare. Si forma una colorazione rossa, che
deve persistere almeno 15 minuti. Aggiungere poi mg 300 circa di
coadiuvante della filtrazione (3.5), agitare e filtrare su un filtro a pieghe
asciutto. Il filtrato può non essere limpido.
5.3.Reazione con la 2,4-dinitrofenilidrazina ed estrazione dell'idrazone
Prelevare con una pipetta tarata ml 10 del filtrato ottenuto in 5.2, intro-
durli in un tubo dacentrifuga(4.2), a ggiungere ml 2 dellasoluzione di
2,4-dinitrofenilidrazina (3.6) e mescolare. Fare passare rapidamente nel
tubo una corrente di azoto (3.7) o di anidride carbonica (3.8), tappare il
tubo ed immergerlo per circa 15 ore (una notte) nel bagno termostatico
(4.1).
Aggiungere poi ml 3 di acqua, ml 20 della miscela acetato di etile/acido
acetico glaciale/acetone (3.9) e mg 800 circa di coadiuvante della filtra-
zione (3.5).
Tappare il tubo, agitare energicamente per 30 secondi e centrifugare.
Introdurre ml 15 della fase superiore in un pallone da evaporazione ed
evaporare a pressione ridotta nell'evaporatore rotativo (4.3), fino ad otte-
nere un residuo oleoso. Sciogliere il residuo in ml 2 dellamiscela
acetato di etile/acido acetico glaciale/acetone (3.9) riscaldando a 50 ºC;
lasciare raffreddare, aggiungere ml 10 della miscela diclorometano/acido
acetico glaciale (3.10) e mescolare.
5.4.Cromatografia su colonna
Riempire una colonna per cromatografia (4.4), fino all'altezza di mm 30,
di miscela diclorometano/acido acetico glaciale (3.10). Mettere in
sospensione (agitando energicamente) in ml 30 della miscela diclorome-
tano/acido acetico glaciale (3.10) g 5 di gel di silice (3.11); versare la
sospensione nella colonna. Lasciare depositare e assestare poi sotto
debole pressione di azoto (3.7).
Versare nella colonna la soluzione ottenuta in 5.3, lavare il pallone con
una piccola quantità della miscela diclorometano/acido acetico glaciale
(3.10) e versare nella colonna; riempire poi quest'ultima con la miscela
(3.10) e proseguire il lavaggio della colonna con la stessa miscela (3—4
aliquote di ml 5 circa) fino ad ottenere un eluato incolore. Eliminare la
frazione di eluato colorata in giallo.1973L0046 — IT — 19.08.1981 — 001.001 — 15
▼B
Eluire la zona rossastra che sta in testa alla colonna con la miscela
acetato di etile/acido acetico glaciale/acetone (3.9), raccogliere l'eluato
ed evaporarlo a secco.
5.4.1.Per i prodotti del gruppo A (contenuti in vitamina C inferiori a g
10/kg), sciogliere il residuo in ml 2 della miscela acetato di etile/
acido acetico glaciale/acetone (3.9) e procedere immediatamente
alla cromatografia su strato sottile come descritto in 5.5.
5.4.2.Per i prodotti del gruppo B (contenuti in vitamina C uguali o
superiori a g 10/kg) , riprendere il residuo oleoso con ml 4,0 di
acido solforico diluito (3.13), agitare energicamente per scio-
glierlo completamente e provvedere alla misurazione della
densità otticacome descritto in 5.6.
5.5.Cromatografia su strato sottile
Effettuare in doppio le operazioni indicate qui appresso. Deporre sulla
lastra (4.6) sotto forma lineare ml 0,5 della soluzione ottenuta in 5.4.1.
Sviluppare per 20 minuti almeno col solvente di eluizione (3.14), in
vaschetta saturata, fino alla separazione netta della zona dell'idrazone
colorato in rosa. Lasciare asciugare all'aria. Delimitare la zona rosa,
raschiarla con una spatola e trasferire quantitativamente la massa polve-
rulenta in una colonna per cromatografia (4.4).
Eluire successivamente una volta con ml 2 e 2 volte con ml 1,5 della
miscela acetato di etile/acido acetico glaciale/acetone (3.9). Raccogliere
l'eluato in un piccolo pallone (l'ultima frazione deve essere incolore).
Evaporare a secco, riprendere il residuo oleoso con ml 4,0 di acido
solforico diluito (3.13), agitare energicamente per sciogliere completa-
mente il residuo e procedere alla misurazione della densità ottica.
5.6.Misura della densità ottica
Misurare la densità ottica con il fotometro a 509 nm, 20—30 minuti
dopo aver sciolto il residuo in acido solforico. Effettuare le misure in
raffronto con l'acido solforico diluito (3.13).
5.7.Prova in bianco
Eseguire una prova in bianco applicando lo stesso modo di operare, in
assenza del campione.
6.Calcolodelrisultato
Il contenuto in g di vitamina C per kg di campione è dato dalla formula:
c/C0a ðÞ /C1 2
b/C0c ðÞ /C1 10d
dove
a= densità ottica del bia nco
b = densità otticadellasoluzione del tipo internoc = densità otticadellasoluzione in esa me
d = peso in g della quantità di sostanza sottoposta ad analisi.
Ripetibilità
La differenza tra i risultati di due determinazioni effettuate in parallelo sullo
stesso campione non debbono superare:
— 10 %, in valore relativo, per i contenuti in vitamina C inferiori a g 10 per
kg;
— 5 %, in valore relativo, per i contenuti uguali o superiori a g 10/kg.1973L0046 — IT — 19.08.1981 — 001.001 — 16