1971L0393 — IT — 09.10.1998 — 004.001 — 1
Trattandosidiunsemplice strumentodidocumentazione,essononimpegnalaresponsabilitàdelleistituzioni
►B SECONDADIRETTIVADELLACOMMISSIONE
del18novembre1971
chefissaimetodid'analisicomunitaripericontrolli ufficiali deglialimentiperglianimali
(71/393/CEE)
(GU L 279 del 20.12.1971, pag. 7)
Modificata da:
Gazzetta ufficiale
n. pag. data
►M1Direttiva 73/47/CEE della Commissione del 5 dicembre 1972 L 83 35 30.3.1973
►M2Direttiva 81/680/CEE della Commissione del 30 luglio 1981 L 246 32 29.8.1981
►M3Direttiva 84/4/CEE della Commissione del 20 dicembre 1983 L 15 28 18.1.1984
►M4Direttiva 98/64/CE della Commissione del 3 settembre 1998 L 257 14 19.9.1998
▼B
SECONDADIRETTIVADELLACOMMISSIONE
del18novembre1971
che fissa i metodi d'analisi comunitari per i controlli ufficiali degli
alimentiperglianimali
(71/393/CEE)
LA COMMISSIONE DELLE COMUNITÀ EUROPEE,
visto il trattato che istituisce la Comunità economica europea,vista la direttiva del Consiglio, del 20 luglio 1970, concernente l'intro-
duzione di modi di prelevamento dei campioni e di metodi d'analisi
comunitari per il controllo ufficiale degli alimenti per gli animali(
1),
inparticolare l'articolo 2,
considerando che la suddetta direttiva prevede che i controlli ufficiali
degli alimenti per gli animali, destinati a constatare l'osservanza dellecondizioni prescritte in virtù delle disposizioni legislative, regolamen-tari o amministrative concernenti le qualità e la composizione deglialimenti per gli animali, siano effettuati secondo i modi di preleva-
mento di campioni ed i metodi di analisi comunitari;
considerando che la direttiva n. 71/250/CEE della Commissione, del 15
giugno 1971(
2), ha già fissato un certo numerto di metodi di analisi
comunitari; che tenuto conto dello stato d'avanzamento dei lavori sinqui effettuati, è necessario adottare una seconda serie di metodi;
considerando che le misure previste dalla presente direttiva sono
conformi al parere del Comitato permanente per gli alimenti per gli
animali,
HA ADOTTATO LA PRESENTE DIRETTIVA:
Articolo 1
Gli Stati membri prescrivono che le analisi per i controlli ufficiali degli
alimenti per gli animali, per quanto riguarda il loro contenuto in
umidità, basi azotate volatili, fosforo totale e sostanze grasse gregge,siano effettuate secondo i metodi descritti all'allegato della presentedirettiva.
Articolo 2
Gli Stati membri mettono in vigore, al più tardi il 1ogennaio 1973, le
disposizioni legislative, regolamentari o amministrative necessarie peruniformarsi alle disposizioni della presente direttiva e ne informanoimmediatamente la Commissione.
Articolo 3
Gli Stati membri sono destinatari della presente direttiva.1971L0393 — IT — 09.10.1998 — 004.001 — 2
(1) GU n. L 170 del 3. 8. 1970, pag. 2.
(2) GU n. L 155 del 12. 7.1971, pag. 13.▼M2
▼B
▼B
ALLEGATO
1.DETERMINAZIONEDELL'UMIDITÀ
1.Scopoecampod'applicazione
Il metodo permette di determinare il contenuto in umidità degli alimenti per
gli animali. ►M1Il metodo non riguarda l'analisi dei prodotti lattieri in
quanto alimenti semplici degli animali, l'analisi delle sostanze minerali e
delle miscele essenzialmente composte di sostanze minerali, l'analisi dei
grassi e degli oli animali e vegetali, come pure l'analisi dei semi e frutti olea-
ginosi definiti nel regolamento n. 136/66/CEE del Consiglio, del 22
settembre 1966, relativo all'attuazione di un'organizzazione comune dei
mercati nel settore dei grassi(1).◄
La determinazione del contenuto in umidità dei semi e frutti oleaginosi è
oggetto dell'allegato III del regolamento (CEE) n. 1470/68 della Commis-
sione, del 23 settembre 1968, relativo al prelievo ed alla riduzione dei
campioni nonché alla determinazione del tenore in olio, impurità ed umidità
dei semi oleosi(2).
2.Principio
La quantità di prodotto su cui si opera è sottoposta all'essiccazione in condi-
zioni ben definite varianti in funzione della natura dell'alimento. La perdita di
massa è determinata per pesata. È necessario procedere ad una preessicca-
zione quando si tratta di alimenti solidi aventi un elevato contenuto di
umidità.
3.Apparecchiatura
3.1. Mulino da laboratorio costruito in materiale non assorbente l'umidità,
facile a pulirsi, che permetta una macinazione rapida ed uniforme senza
provocare sensibile riscaldamento, eviti al massimo il contatto con l'aria
esterna e risponda alle esigenze indicate in 4.1.1 e 4.1.2 (per es. micro-
macinatori a martelli o a raffreddamento ad acqua, mulini a coni
smontabili, macinatori a movimento lento o a dischi dentati);
3.2. Bilancia analitica, precisione mg 0,5;3.3. Recipienti essiccati in metallo inossidabile o in vetro, provvisti di
coperchi a chiusura stagna all'aria; superficie utile che permetta di otte-
nere una ripartizione della quantità di prodotto su cui si opera dell'ordine
di g per cm
20,3;
3.4. Stufa isotermica (± 1 ºC) a riscaldamento elettrico convenientemente
ventilata, capace di assicurare una regolazione rapida della tempera-
tura(3);
3.5. Stufa a vuoto a riscaldamento elettrico regolabile, provvista di una
pompa ad olio e di un dispositivo per l'introduzione di aria calda disidra-
tata o di undisidratan te (per es. ossido di calcio);
3.6. Essiccatore a piastra inmetallo o inporcellan a, spessa, perforata, con te-
nente un efficace disidratante.
4.Mododioperare
N.B.: Le operazioni descritte in questo capitolo debbono essere effettuate
immediatamente dopo l'apertura degli imballaggi contenenti i
campioni. Le analisi debbono essere effettuate almeno in doppio.1971L0393 — IT — 09.10.1998 — 004.001 — 3
(1) GU n. 172 del 30. 9. 1966, pag. 3025/66.
(2) GU n. L 239 del 28. 9. 1968, pag. 2.
(3) Per la essiccazione dei cereali nonché delle farine, semole e semolini, la stufa deve
avere una capacità calorifica tale che, preventivamente regolata alla temperatura di
131 ºC possa raggiungere nuovamente tale temperatura in meno di 45 minuti, dopoavervi introdotto il numero massimo di campioni da essiccare simultaneamente. Lastufa deve avere una ventilazione tale che, essiccando per due ore tutti i campioni difrumento tenero che essa può contenere, i risultati presentino una differenza inferiore
allo 0,15 % rispetto ai risultati ottenuti con 4 ore di essiccazione.
▼B
4.1.Preparazione
4.1.1.Alimenti eccettuati quelli menzionati sub4.1.2 e 4.1.3
Prelevare una quantità di prodotto di almeno g 50. Se necessario
macinare o dividere in particelle di grandezza appropriata in
modo da evitare ogni variazione del contenuto di umidità (cf. 6).
4.1.2.Cereali e semole
Prelevare una quantità di prodotto di almeno g 50. Macinare in
particelle di cui almeno il 50 % passino in un setaccio a maglie
di mm 0,5 e non lascino più di 10 % di residuo su di un setaccio
a maglie rotonde di mm 1 di diametro.
4.1.3.Alimenti liquidi o pastosi, alimenti costituiti essenzialmente da
sostanze grasse
Prelevare una quantità di prodotto di almeno g 25, pesata con
l'approssimazione di mg 10, ed aggiungere una quantità appro-
priata di sabbia anidra, pesare con l'approssimazione di mg 10 e
mescolare sino ad ottenere un prodotto polverulento omogeneo.
4.2.Essiccazione
4.2.1.Alimenti eccettuati quelli menzionati sub4.2.2 e 4.2.3
Tarare, con la precisione di mg 0,5, un recipiente (3.3), provvisto
del coperchio. Pesare nel recipiente tarato, con l'approssimazione
di mg 1, circa g 5 di prodotto e ripartirli uniformemente. Porre il
recipiente, privo del suo coperchio, nella stufa preventivamente
riscaldata a 103 ºC. Per evitare che la temperatura della stufa
discenda troppo, introdurvi il recipiente nel più breve tempo
possibile. Lasciare essiccare per 4 ore a partire dal momento in
cui la stufa ha nuovamente raggiunto la temperatura di 103 ºC.
Rimettere il coperchio sul recipiente, estrarre quest'ultimo dalla
stufa, lasciarlo raffreddare per 30-45 minuti in essiccatore (3.6) e
pesare conl'approssimazion e di mg 1.
Nel caso di alimenti costituiti essenzialmente da sostanze grasse,
effettuare un'essiccazione complementare di 30 minuti nella stufa
a 103 ºC. Lo scarto tra le due pesate non deve superare 0,1 % di
umidità.
4.2.2.Cereali, farine, semole e semolini
Tarare con la precisione di mg 0,5 un recipiente (3.3), provvisto
del coperchio. Pesare nel recipiente tarato, con l'approssimazione
di mg 1, almeno g 5 di prodotto macinato e ripartirlo uniforme-
mente. Porre il recipiente, senza coperchio, nella stufa
preventivamente riscaldata a 130 ºC. Per evitare che la tempera-
tura della stufa discenda troppo, introdurre il recipiente nel più
breve tempo possibile. Lasciare essiccare per 2 ore a partire dal
momento in cui la stufa ha nuovamente raggiunto la temperatura
di 130 ºC. Rimettere il coperchio sul recipiente, estrarre quest'ul-
timo dalla stufa, lasciare raffreddare per 30-45 minuti
nell'essiccatore (3.6) e pesare con l'approssimazione di mg 1.
4.2.3.Alimenti composti contenenti più del 4 % di saccarosio o lattosio,
alimenti semplici quali carrube, prodotti cerealicoli idrolizzati,
germi di malto, fettucce di barbabietole, «solubili» di pesce e
zuccheri; alimenti composti contenenti più del 25 % di sali mine-
rali con acqua di cristallizzazione
Tarare con l'approssimazione di mg 0,5 un recipiente (3.3), prov-
visto del coperchio. Pesare nel recipiente tarato, con
l'approssimazione di mg 1, circa g 5 di prodotto e ripartirli
uniformemente. Porre il recipiente, privo del coperchio, nella
stufa a vuoto (3.5) preventivamente riscaldata ad una temperatura
di 80-85 ºC.Per evitare che la temperatura della stufa discenda
troppo, introdurre il recipiente nel più breve tempo possibile.
Portare la pressione a 100 Torrs e lasciare essiccare a questa pres-
sione durante 4 ore in corrente d'aria secca e calda, o mediante un
disidratante (g 300 circa per 20 campioni). In quest'ultimo caso
interrompere la connessione con la pompa a vuoto allorquando
la pressione prescritta è raggiunta. Misurare la durata dell'essicca-
zione a partire dal momento in cui la stufa ha nuovamente
raggiunto la temperatura di 80-85 ºC.
Riportare poi con precauzione la stufa alla pressione atmosferica.
Aprire la stufa, coprire immediatamente il recipiente con il coper-1971L0393 — IT — 09.10.1998 — 004.001 — 4
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chio, estrarlo dalla stufa, lasciarlo raffreddare per 30-45 minuti in
essiccatore (3.6) e pesare conl'approssimazion e di mg 1.
Procedere ad una essiccazione complementare di 30 minuti nella
stufa a vuoto, alla temperatura di 80-85 ºC, e pesare di nuovo. Lo
scarto tra le due pesate non deve superare 0,1 % di umidità.
4.3.Preessiccazione
4.3.1.Alimenti eccettuati quelli menzionati sub4.3.2
Gli alimenti solidi, il cui contenuto di umidità è elevato e rende
difficile la macinazione, devono essere preessiccati nel modo
seguente.
Pesare, conl'approssimazion e di mg 10, g 50 di prodotto non
macinato (un grossolano spezzettamento può essere effettuato, se
necessario, nel caso di alimenti compressi o agglomerati) in un
recipiente appropriato (per es. piastra di alluminio di cm 20 × 12
conbordo di cm 0,5). Lasciar essiccare instufa alla temperatura
di 60-70 ºC, sino a che il contenuto di umidità sia portato ad un
valore compreso tra l'8 e il 12 %. Togliere dalla stufa, lasciar
raffreddare allo scoperto nel laboratorio per un'ora e pesare con
l'approssimazione di mg 10. Macinare subito dopo come indicato
in 4.1.1 ed effettuare la essiccazione come indicato sub 4.2.1 o
4.2.3 secondo la natura dell'alimento.
4.3.2.Cereali
I cereali in granella aventi una percentuale di umidità superiore al
17 % debbono essere preessiccati nel modo seguente: Pesare, con
la precisione di mg 10, g 50 di cereali in granella non moliti inun
recipiente appropriato (per es. piastra di alluminio di cm 20 × 12
conbordo di cm 0,5). Lasciare essiccare instufa per 5 o 7 minuti
alla temperatura di 130 ºC. Togliere dalla stufa, lasciar raffred-
dare allo scoperto nel laboratorio per 2 ore e pesare con
l'approssimazione di mg 10. Molire subito dopo, come indicato
sub 4.1.2 ed effettuare l'essiccazione come indicato sub 4.2.2.
5.Calcolodeirisultati
Il contenuto di umidità, in percento del campione, è dato dalle seguenti
formule:
5.1.Essiccazione senza preessiccazione
E/C0m ðÞ /C1100
E
incui:
E = massa iniziale, in grammi, della quantità di prodotto sottoposta all'a-
nalisi
m = massa ingrammi del prodotto essiccato.
5.2.Essiccazione con preessiccazione
M0/C0m ðÞ M
M0 þE/C0M/C20/C21
/C1100
E¼100 1 /C0Mm
EM0/C18/C19
incui:
E = massa iniziale, in grammi, della quantità di prodotto sottoposta all'a-
nalisi,
M = massa, ingrammi del prodotto dopo preessiccazion e,
M′= massa, in grammi del prodotto dopo macinazione,
m = massa, ingrammi del prodotto essiccato.
5.3.Ripetibilità
La differenza tra i risultati di due determinazioni parallele effettuate
sullo stesso campione non deve superare 0,2 % di umidità.1971L0393 — IT — 09.10.1998 — 004.001 — 5
▼B
6.Osservazioni
Se una macinazione si manifesta necessaria e se ne deriva che essa provochi
una variazione del contenuto in umidità del prodotto, i risultati d'analisi
concernente i componenti dell'alimento devono essere convertiti conforme-
mente al contenuto in umidità del campione iniziale.
2.DETERMINAZIONEDELLEBASIAZOTATEVOLATILI
A. PER MICRODIFFUSIONE
1.Scopoecampod'applicazione
Il metodo permette di determinare il contenuto di basi azotate volatili,
espresse in ammoniaca degli alimenti per gli animali.
2.Principio
Il campione viene estratto con acqua, la soluzione viene chiarificata e filtrata.
Le basi azotate volatili sono spostate per mezzo di una soluzione di carbo-
nato di potassio per microdiffusione, raccolte in una soluzione di acido
borico e titolate conacido solforico.
3.Reattivi
3.1. Soluzione al 20 % (p/v) d'acido tricloroacetico;3.2. Indicatore: sciogliere mg 33 di verde di bromocresolo e mg 65 di rosso
di metile inml 100 d'etan olo al 95-96 % (v/v).
3.3. Soluzione di acido borico: in un pallone tarato da litri 1, sciogliere g 10
d'acido borico p.a. inml 200 d'etan olo al 95-96 % (v/v) e ml 700
d'acqua. Aggiungere ml 10 di indicatore (3.2). Mescolare e aggiustare
se necessario il colore della soluzione al rosso chiaro mediante aggiunta
di una soluzione d'idrossido di sodio. ml 1 di questa soluzione consente
di fissare al massimo µg 300 di ammoniaca.
3.4. Soluzione satura di carbonato di potassio: sciogliere g 100 di carbonato
di potassio p.a. inml 100 d'acqua portata all'ebollizion e. Lasciar raffred-
dare e filtrare.
3.5. Acido solforico 0,02 N.
4.Apparecchiatura
4.1. Agitatore rotativo a capovolgimento: circa 35-40 giri minuto.
4.2. Celle di Con way (vedasi figura), invetro o inmateria plastica.4.3. Microburette, graduate a ml 1/100.
5.Mododioperare
Pesare, con l'approssimazione di mg 1, g 10 di sostanza e porli in un pallone
tarato da ml 200 con ml 100 d'acqua. Agitare il pallone, nell'agitatore rota-
tivo, per 30 minuti. Aggiungere ml 50 della soluzione d'acido tricloroacetico
(3.1), portare a volume con acqua, agitare energicamente e filtrare su di un
filtro a pieghe.
Porre, con una pipetta, ml 1 della soluzione di acido borico (3.3) nell'incavo
centrale della cella Conway e, nella corona della cella, ml 1 del filtrato otte-
nuto dal campione. Coprire parzialmente con il coperchio ingrassato. Lasciar
scolare rapidamente nella corona periferica ml 1 della soluzione satura di
carbonato di potassio (3.4) e chiudere ermeticamente il coperchio. Agitare
con precauzione la cella per rotazione in un piano orizzontale in modo da
assicurare la miscelazione dei due reattivi. Mantenere l'apparecchio per
almeno 4 ore alla temperatura ambiente o per 1 ora a 40 ºC.
Titolare le basi volatili nella soluzione d'acido borico con la soluzione
d'acido solforico 0,02 N (3.5) per mezzo di una microburetta (4.3).
Effettuare un saggio in bianco impiegando lo stesso modo di operare in
assenza della sostanza da analizzare.
6.Calcolodeirisultati
ml 1 di H
2SO40,02 N corrisponde a mg 0,34 di ammoniaca.
Esprimere i risultati in per cento del campione.1971L0393 — IT — 09.10.1998 — 004.001 — 6
▼B
Ripetibilità
La differenza tra i risultati di due determinazioni parallele effettuate sullo
stesso campione non deve sorpassare:
— 10 % in valore relativo per i contenuti in ammoniaca inferiori a 1,0 per
cento;
— 0,1 in valore assoluto per i contenuti in ammoniaca uguali o superiori a
1,0 per cento.
7.Osservazioni
Se il contenuto in ammoniaca del campione è superiore allo 0,6 % diluire
preventivamente la soluzione chiarificata.1971L0393 — IT — 09.10.1998 — 004.001 — 7
▼B
CELLA CONWAY
Scala 1/1
1971L0393 — IT — 09.10.1998 — 004.001 — 8
▼B
CELLA CONWAY
B. PER DISTILLAZIONE
1.Scopoecampodiapplicazione
Il metodo permette di determinare il contenuto di basi azotate volatili,
espresse in ammoniaca, nelle farine di pesce non contenenti, praticamente,
urea. Il metodo non è applicabile che per contenuti di ammoniaca inferiori
a 0,25 %.
2.Principio
Il campione viene estratto con acqua, la soluzione viene chiarificata e
filtrata. Le basi azotate volatili sono spostate all'ebollizione per aggiunta
di ossido di magnesio e sono raccolte in una quantità determinata d'acido
solforico il cui eccesso viene titolato di ritorno con una soluzione d'idros-
sido di sodio.
3.Reattivi
3.1. Soluzione al 20 % (p/v) d'acido tricloroacetico,
3.2. Ossido di magnesio p.a.,
3.3. Emulsione di antischiuma (p. es. silicone),
3.4. Acido solforico 0,1 N,3.5. Soluzione d'idrossido di sodio 0,1 N,
3.6. Soluzione allo 0,3 % (p/v) di rosso di metile in etanolo al 95-96 %
(v/v).
4.Apparecchiatura
4.1. Agitatore rotativo a capovolgimento: circa 35-40 giri per minuto4.2. Apparecchio per distillazione tipo Kjeldahl.
5.Mododioperare
Pesare, con l'approssimazione di mg 1, g 10 di sostanza e porli in un
pallone tarato da ml 200 con ml 100 d'acqua. Agitare il pallone, nell'agi-
tatore rotativo, per 30 minuti. Aggiungere ml 50 della soluzione d'acido
tricloroacetico (3.1), portare a volume conacqua, agitare vigorosamen te
e filtrare su di unfiltro a pieghe.
Prelevare una quantità di filtrato limpido in funzione del presunto conte-
nuto di basi azotate volatili (ml 100 sono generalmente sufficienti).
Diluire a ml 200 ed aggiungere g 2 di ossido di magnesio (3.2) e qualche
goccia di emulsione antischiuma (3.3). La soluzione deve risultare alcalina
alla cartina di tornasole, altrimenti aumentare la quantità di ossido di
magnesio (3.2). Distillare ml 150 circa della soluzione in un apparecchio
del tipo Kjeldahl e raccogliere il distillato in una beuta contenente un
volume esattamente misurato (ml 25-50) d'acido solforico 0,1 N (3.4).
Durante la distillazione evitare il surriscaldamento delle pareti del reci-
piente di distillazione. Far bollire la soluzione solforica per due minuti,
raffreddare e titolare di ritorno l'eccesso di acido solforico con la solu-
zione d'idrossido di sodio 0,1 N (3.5) in presenza dell'indicatore al rosso
di metile (3.6). Effettuare una prova in bianco impiegando lo stesso modo
di operare, in assenza del campione da analizzare.
6.Calcolodeirisultati
ml 1 di H
2SO40,1 N corrisponde a mg 1,7 di ammoniaca. Esprimere il
risultato in parti per cento del campione.
Ripetibilità
La differenza tra i risultati di due determinazioni parallele effettuate, in
valore relativo, sullo stesso campione non deve sorpassare il 10 per cento
di ammoniaca.1971L0393 — IT — 09.10.1998 — 004.001 — 9
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3.DETERMINAZIONEDELFOSFOROTOTALE
Metodo fotometrico
1.Scopoecampodiapplicazione
Il metodo permette la determinazione del contenuto di fosforo totale negli
alimenti per gli animali. Esso è particolarmente indicato per l'analisi dei
prodotti poveri infosforo. Incerti casi (prodotti ricchi infosforo) unmetodo
gravimetrico può essere applicato.
2.Principio
Il campione viene mineralizzato, per via secca (per gli alimenti organici), o
per via umida (per i composti minerali e gli alimenti liquidi) e viene portato
in soluzione acida. La soluzione viene trattata con il reattivo vanado-molib-
dico. La densità ottica della soluzione gialla così formatasi, viene misurata
allo spettrofotometro a nm 430.
3.Reattivi
3.1. Carbonato di calcio p.a.,3.2. Acido cloridrico p.a., d: 1,1 (circa 6 N),3.3. Acido nitrico p.a., d: 1,045,3.4. Acido nitrico p.a., d: 1,38-1,42,3.5. Acido solforico p.a., d: 1,84,3.6. Reattivo vanado-molibdico: mescolare, in un pallone tarato da 1 litro,
ml 200 di soluzione di eptamolibdato d'ammonio (3.6.1) con ml 200 di
soluzione di monovanadato d'ammonio (3.6.2) e ml 134 d'acido nitrico
(3.4). Portare a volume conacqua.
3.6.1. Soluzione di eptamolibdato d'ammonio: sciogliere in acqua calda
g 100 di eptamolibdato d'ammonio p.a. (NH)
46Mo7O24·4 H2O.
Aggiungere ml 10 d'ammoniaca (d: 0,91) e portare ad 1 litro
conacqua.
3.6.2. Soluzione di monovanadato d'ammonio: sciogliere in ml 400 di
acqua calda g 2,35 di monovanadato d'ammonio p.a. NH4VO3.
Aggiungere lentamente agitando ml 20 d'acido nitrico diluito (ml
7 di HNO3(3.4) + ml 13 di H2O) e portare ad 1 litro conacqua.
3.7. Soluzione tipo, contenente mg 1 di fosforo per ml: sciogliere in acqua g
4,387 di fosfato monopotassico p.a. KH2PO4. Portare ad 1 litro con
acqua.
4.Apparecchiatura
4.1. Crogioli da incenerimento di quarzo o porcellana,4.2. Forno elettrico a muffola munito di termostato regolato a 550 ºC,4.3. Matracci di Kjeldahl da ml 250,4.4. Palloni tarati e pipette di precisione,4.5. Spettrofotometro,4.6. Tubi da saggio a tappo smerigliato, diametro circa mm 16, a smeriglia-
tura normalizzata 14,5; capacità ml 25 a 30.
5.Mododioperare
5.1.Preparazione della soluzione
Secondo la natura del campione, preparare una soluzione come indicato
sub 5.1.1 o 5.1.2.
5.1.1.Caso generale
Pesare, al mg, g 1 o più del prodotto da analizzare. Trasferire
questa quantità in un matraccio di Kjeldahl ed aggiungere ml 20
d'acido solforico (3.5), agitare per imbibire d'acido tutta la
sostanza ed evitare che essa aderisca alle pareti del pallone,
riscaldare e mantenere per 10 minuti all'ebollizione. Lasciar
raffreddare leggermente, aggiungere ml 2 di acido nitrico (3.4),
riscaldare lentamente, lasciare ancora raffreddare leggermente,
aggiungere di nuovo un po' di acido nitrico (3.4) e portare all'e-1971L0393 — IT — 09.10.1998 — 004.001 — 10
▼B
bollizione. Ripetere tali operazioni sino ad ottenre una soluzione
incolore. Raffreddare, aggiungere un po' d'acqua e trasferire il
liquido in un pallone tarato da ml 500 lavando il pallone con
acqua calda. Lasciar raffreddare, portare a volume conacqua,
mescolare e filtrare.
5.1.2Campioni contenenti sostanze organiche e non contenenti diidro-
genofosfati di calcio e magnesio
Pesare, al mg, g 2,5 di prodotto da analizzare in un crogiolo da
incenerimento e mescolarli intimamente con g 1 di carbonato di
calcio (3.1). Calcinare al forno a 550 ºC ± 5 ºC fino ad ottenere
ceneri bianche o grigie (una piccola quantità di carbone non
disturba).
Trasportare quantitativamente le ceneri in un becher da ml 250.
Aggiungere ml 20 d'acqua ed acido cloridrico (3.2) sino a cessa-
zione dell'effervescenza.
Aggiungere quindi un eccesso di ml 10 di acido cloridrico (3.2).
Porre il becher su un bagno di sabbia ed evaporare fino a secco
per insolubilizzare la silice. Riprendere il residuo con ml 10
d'acido nitrico (3.3) e far bollire per 5 minuti sul bagno di sabbia
senza arrivare a secco. Trasferire il liquido in un pallone tarato da
ml 500 lavando il becher, a più riprese, con acqua calda. Lasciar
raffreddare; portare a volume conacqua, mescolare e filtrare.
5.2.Sviluppo della colorazione e misura della densità ottica
Diluire una parte aliquota del filtrato ottenuto secondo 5.1.1 o 5.1.2 per
ottenere una concentrazione in fosforo che raggiunga al massimo µg per
ml 40. Introdurre in un tubo da saggio (4.6) ml 10 di questa soluzione
ed aggiungervi ml 10 del reattivo vanado-molibdico (3.6). Mescolare e
lasciar riposare per almeno 10 minuti alla temperatura di 20 ºC. Misu-
rare la densità ottica allo spettrofotometro a nm 430 per comparazione
con una soluzione ottenuta per aggiunta di ml 10 di reattivo vanadomo-
libdico (3.6) a ml 10 di acqua.
5.3.Curva di taratura
Preparare, a partire dalla soluzione tipo (3.7) delle soluzioni contenenti
rispettivamente µg 5, 10, 20, 30 e 40 di fosforo per ml. Prelevare ml 10
di ciascuna di tali soluzioni ed aggiungervi ml 10 di reattivo vanadomo-
libdico (3.6). Mescolare e lasciar riposare almeno 10 minuti alla
temperatura di 20 ºC. Misurare le densità ottiche nelle condizioni indi-
cate sub 5.2.
Tracciare la curva di taratura portando in ordinata i valori di densità
ottica ed in ascissa le quantità corrispondenti di fosforo. La curva è
lineare per le concentrazioni di fosforo comprese entro µg per ml 0 e 40.
6.Calcolodeirisultati
Determinare la quantità di fosforo nella quantità di sostanza sottoposta all'a-
nalisi riferendosi alla curva di taratura. Esprimere i risultati in per cento del
campione.
Ripetibilità
La differenza tra i risultati di due determinazioni parallele effettuate sullo
stesso campione non deve sorpassare:
— 3 % in valore relativo per contenuti in fosforo inferiori al 5 %;
— 0,15 in valore assoluto per contenuti in fosforo uguali o superiori al 5 per
cento.
4.DETERMINAZIONEDIOLIEGRASSIGREGGI
1.Scopoecampodiapplicazione
Il metodo permette di determinare il contenuto di oli e grassi greggi negli
alimenti per gli animali. Esso non riguarda l'analisi dei semi e dei frutti
oleosi descritta nel regolamento n. 136/66/CEE del Consiglio, del 22
settembre 1996.
Dei due procedimenti sotto descritti, dovrà essere applicato il primo o il
secondo in funzione della natura e della composizione dell'alimento, nonché
del motivo per cui si esegue l'analisi.1971L0393 — IT — 09.10.1998 — 004.001 — 11
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1.1.Procedimento A — Oli e grassi greggi estraibili direttamente
Il metodo è applicabile a singoli materiali di origine vegetale, fatta ecce-
zione per quelli di cui al procedimento B.
1.2.Procedimento B — Oli e grassi greggi totali
Il metodo è applicabile a materiali singoli di origine animale e a tutti gli
alimenti composti. Esso deve essere usato per tutti i materiali dai quali
gli oli e i grassi non possono essere completamente estratti senza idrolisi
preliminare, ad esempio i glutini, i lieviti, le proteine di patata e i
prodotti che sono stati sottoposti a procedimenti quali l'estrusione, la
fioccatura ed il riscaldamento.
1.3.Interpretazione dei risultati
Se il valore ottenuto con il procedimento B è più elevato di quello otte-
nuto con il procedimento A, si considera corretto il risultato ottenuto
conil procedimen to B.
2.Principio
2.1.Procedimento A
Il campione è estratto con etere di petrolio. Il solvente viene eliminato
ed il residuo viene essiccato e pesato.
2.2.Procedimento B
Il campione è trattato a caldo con acido cloridrico. La miscela viene
raffreddata e filtrata. Dopo essere stato lavato ed essiccato, il residuo è
sottoposto all'analisi secondo il procedimento A.
3.Reattivi
3.1. Etere di petrolio, con punto di ebollizione compreso fra 40 ºC e 60 ºC.
L'indice di bromo deve essere inferiore a 1 ed il residuo all'evaporazione
inferiore a 2 mg/100 ml.
3.2. Solfato di sodio, anidro.3.3. Acido cloridrico 3 M.3.4. Coadiuvante di filtrazione, per esempio farina fossile, Hyflo-supercel.
4.Apparecchiatura
4.1. Estrattore. Se l'apparecchio è munito di un sifone (apparecchio di
Soxhlet), la portata del riflusso deve essere regolata inmodo da otten ere
almeno 10 cicli l'ora. Se si tratta di un apparecchio senza sifone, il
liquido deve rifluire in quantità pari a circa 10 ml al minuto.
4.2. Ditali da estrazione, esenti da sostanze solubili nell'etere di petrolio, la
cui porosità sia compatibile con le esigenze di cui al punto 4.1.
4.3. Stufa per essiccazione nel vuoto a 75 ºC ± 3 ºC o a pressione atmosfe-
rica a 100 ºC ± 3 ºC.
5.Mododioperare
5.1.Procedimento A (punto 8.1)
Pesare, con l'approssimazione di 1 mg, 5 g del campione; introdurli in
un ditale da estrazione (4.2) e coprire con un tampone di cotone sgras-
sato.
Porre il ditale inunestrattore (4.1) ed estrarre per 6 ore conetere di
petrolio (3.1). Raccogliere l'estratto in un pallone essiccato, contenente
qualche granello di pietra pomice(
1), e tarato.
Eliminare il solvente per distillazione. Essiccare il residuo introducendo
il pallone in una stufa per essicazione (4.3), lasciandovelo per un'ora e
mezza. Lasciar raffreddare inunessiccatore e pesare. Essiccare un a
seconda volta per 30 minuti, onde assicurarsi che il peso della sostanza1971L0393 — IT — 09.10.1998 — 004.001 — 12
(1) Sostituire i frammenti di pietra con alcune palline di vetro, quando si debbano eseguire
ulteriori esami qualitativi sulla sostanza oleosa o grassa.
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oleosa o grassa rimanga costante (la perdita di peso tra due pesate
successive deve essere inferiore a 1 mg).
5.2.Procedimento B
Pesare, con l'approssimazione di 1 mg, 2,5 g del campione (punto 8.2);
introdurli in un becher da 400 ml o in una beuta da 300 ml ed aggiun-
gere 100 ml di acido cloridrico 3 M (3.3) e qualche frammento di pietra
pomice. Ricoprire il becher conunvetro da orologio o applicare sulla
beuta un refrigerante a ricadere. Portare la miscela a lenta ebollizione
su piccola fiamma o su piastra riscaldante e mantenerla per un'ora.
Evitare che la sostanza aderisca alle pareti del recipiente.
Raffeddare ed aggiungere una quantità sufficiente di un coadiuvante di
filtrazione (3.4) per evitare qualsiasi perdita di sostanza grassa durante
la filtrazione stessa. Filtrare su un doppio filtro di carta bagnato, esente
da materie grasse. Lavare il residuo con acqua fredda fino a reazione
neutra del filtrato. Verificare che il filtrato non contenga sostanzagrasse. La presenza di queste nel filtrato indica che, prima dell'idrolisi,
deve essere effettuata un'estrazione del campione con etere di petrolio,
secondo il procedimento A.
Porre il doppio filtro conil residuo su unvetro da orologio ed essiccare
per un'ora e mezza nella stufa a 100 ºC ± 3 ºC.
Introdurre il doppio filtro con il residuo secco in un ditale da estrazione
(4.2) e coprire con un tampone di cotone sgrassato. Porre il ditale in un
estrattore (4.1) e proseguire come indicato al punto 5.1, secondo e terzo
paragrafo.
6.Calcolodeirisultati
Esprimere il risultato della pesata in parti per cento del campione.
7.Ripetibilità
La differenza tra i risultati di due determinazioni parallele effettuate sullo
stesso campione dallo stesso analista non deve essere superiore a:
— 0,2 %, in valore assoluto, per i contenuti in materie oleose e grasse
gregge inferiori a 5 %,
— 4,0 % del risultato più elevato, per i contenuti compresi fra 5 % e 10 %,— 0,4 %, in valore assoluto, per i contenuti superiori a 10 %.
8.Osservazioni
8.1. Per i prodotti ad elevato tenore in sostanze oleose e grasse, difficili da
macinare o non appropriati per il prelevamento di una piccola quantità
omogenea, procedere come segue:
Pesare, con l'approssimazione di 1 mg, 20 g di campione e mescolarli
con 10 g o più di solfato di sodio anidro (3.2). Procedere all'estrazione
con etere di petrolio (3.1) come indicato al punto 5.1. Portare l'estratto
ottenuto al volume di 500 ml con etere di petrolio (3.1) e mescolare.
Introdurre 50 ml della soluzione in un palloncino essiccato, contenente
qualche frammento di pietra pomice(
1), e tarato. Eliminare il solvente
per distillazione, essiccare e proseguire come indicato al punto 5.1,
ultimo paragrafo.
Eliminare il solvente dal residuo dell'estrazione che si trova nel ditale,
macinare il residuo alla finezza di 1 mm, porlo nuovamente nel ditale
(non aggiungere solfato di sodio) e proseguire come indicato al punto
5.1, secondo e terzo paragrafo.
Il contenuto in materie oleose e grasse gregge in parti per cento del
campione è dato dalla formula:
(10 a + b) × 5
nella quale
a = massa, ingrammi, del residuo della prima estrazion e (parte aliquota
dell'estratto)
b = massa, in grammi, del residuo della seconda estrazione.1971L0393 — IT — 09.10.1998 — 004.001 — 13
(1) Sostituire i frammenti di pietra con alcune palline di vetro, quando si debbano eseguire
ulteriori esami qualitativi sulla sostanza oleosa o grassa.
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8.2. La quantità di sostanza sottoposta all'analisi nel caso di prodotti poveri
di materie oleose e grasse può essere portata a 5 g.
8.3. Gli alimenti per animali domestici, contenenti un elevato tenore di
acqua, possono rendere necessaria l'aggiunta di solfato di sodio anidro
prima dell'idrolisi e dell'estrazione ai sensi del procedimento B.
8.4. Nel procedimento descritto al punto 5.2 può essere preferibile usare
acqua calda, invece che fredda, per lavare il residuo dopo la filtrazione.
8.5. Per alcuni mangimi il tempo di essiccazione di 1,5 h deve essere prolun-
gato; va tuttavia evitata una essiccazione eccessiva, che potrebbe portare
a risultati insoddisfacenti. È possibile usare altresì un forno a microonde.
8.6. Se il tenore di sostanza oleosa o grassa è superiore al 15 %, nel proce-
dimento A si raccomanda di effettuare una estrazione preliminare prima
dell'idrolisi e nel procedimento B una riestrazione. Ciò può dipendere in
parte dalla natura del mangime e da quella della sostanza oleosa o
grassa contenuta nel mangime stesso.1971L0393 — IT — 09.10.1998 — 004.001 — 14