1977L0096 — IT — 05.06.2003 — 009.001 — 1
Trattandosidiunsemplice strumentodidocumentazione,essononimpegnalaresponsabilitàdelleistituzioni
►B DIRETTIVADELCONSIGLIO
del21dicembre1976
concernente la ricerca delle trichine all'importazione dai paesi terzi di carni fresche provenienti
daanimalidomesticidellaspeciesuina
(77/96/CEE)
(GU L 26 del 31.1.1977, pag. 67)
Modificata da:
Gazzetta ufficiale
n. pag. data
►M1Direttiva81/476/CEE del Consiglio del 24 giugno 1981 L 186 20 8.7.1981
►M2Direttiva83/91/CEE del Consiglio del 7 febbra io 1983 L 59 34 5.3.1983
►M3Direttiva84/319/CEE dellaCommissione del 7 giugno 1984 L 167 34 27.6.1984
►M4Regolamento (CEE) n. 3768/85 del Consiglio del 20 dicembre 1985 L 362 8 31.12.1985
►M5Direttiva89/321/CEE dellaCommissione del 27 a prile 1989 L 133 33 17.5.1989
►M6Direttiva94/59/CE dellaCommissione del 2 dicembre 1994 L 315 18 8.12.1994
►M7Regolamento (CE) n. 807/2003 del Consiglio del 14 aprile 2003 L 122 36 16.5.2003
Modificata da:
►A1Atto di adesione della Grecia L 291 17 19.11.1979
►A2Atto di adesione dell'Austria, della Finlandia e della Svezia C 241 21 29.8.1994
(adattato dalla decisione 95/1/CE, Euratom, CECA del Consiglio) L 1 1 1.1.1995
▼B
DIRETTIVADELCONSIGLIO
del21dicembre 1976
concernentelaricercadelletrichineall'importazionedaipaesiterzi
dicarnifrescheprovenientidaanimalidomesticidellaspeciesuina
(77/96/CEE)
IL CONSIGLIO DELLE COMUNITÀ EUROPEE,
visto il trattato che istituisce la Comunità economica europea,
vistaladirettiva72/462/CEE del Consiglio, del 12 dicembre 1972,
relativa a problemi sanitari e di polizia sanitaria all'importazione dianimali delle specie bovina e suina e di carni fresche in provenienzadai paesi terzi (
1), modificata da ultimo dalla direttiva 75/379/CEE (2),
in particolare l'articolo 21,
vistalapropostadellaCommissione,
considerando che, nella direttiva 72/462/CEE, il Consiglio ha previsto,
all'articolo 21, l'elaborazione di un metodo e delle modalità necessarieper rivelare la presenza di trichine nelle carni fresche di animali della
specie suina;
considerando che l'applicazione della direttiva 72/462/CEE non potrà
avere gli effetti previsti finché esisteranno tra gli Stati membri disparitànelle garanzie richieste relativamente alla ricerca delle trichine all'im-portazione di carni fresche provenienti dai paesi terzi; che, per
eliminare tali disparità, è necessario stabilire un regime comunitario in
materia;
considerando che, per tutelare la salute del consumatore, è necessario
che le carni suine fresche siano sottoposte sistematicamente ad unesame svolto secondo metodi riconosciuti efficaci, in modo da permet-
tere l'eliminazione di quelle contenenti trichine;
considerando che, se l'esame ha luogo nel paese terzo esportatore, deve
essere effettuato in macelli rispondenti a determinati requisiti ecomprendenti in particolare un laboratorio d'esame dotato di materialeidoneo;
considerando che, per poter distinguere le carni esaminate dalle altre, è
necessario disporre che sulle carni esaminate con esito negativo vengaapposto un bollo speciale;
considerando che occorre istituire una procedura che instauri una stretta
ed efficace cooperazione tra la Commissione e gli Stati membri per
valutare l'opportunità di ammettere stabilimenti situati nei paesi terzi
all'esecuzione dell'esame o al lavoro sulle carni esaminate e peradeguare all'evoluzione tecnica e all'esperienza acquisita le disposizionitecniche riguardanti in particolare i metodi d'esame, i requisiti dei labo-ratori d'esame e le modalità di bollature delle carni esaminate;
considerando che è opportuno autorizzare gli Stati membri ad ammet-
tere le carni fresche non sottoposte ad esame per accertare la presenzadi trichine nel paese terzo speditore a condizione che tali carni sianosottoposte ad un trattamento mediante freddo che garantisca l'elimina-zione delle trichine eventualmente presenti nel paese terzo speditore o
nello Stato membro destinatario; che tale trattamento deve tuttavia
essere eseguito secondo modalità ben definite e in stabilimenti chesoddisfino adetermina ti requisiti,1977L0096 — IT — 05.06.2003 — 009.001 — 2
(1) GU n. L 302 del 31. 12. 1972, pag. 28.
(2) GU n. L 172 del 3. 7. 1975, pag. 17.
▼B
HA ADOTTATO LA PRESENTE DIRETTIVA:
Articolo 1
Lapresente direttivariprende le definizioni previste nelladirettiva72/
462/CEE.
Si intende inoltre per:
a) carni fresche: le carni fresche di animali domestici della specie
suina;
b) esame: l'esame per accertare la presenza di trichine nelle carni
fresche.
Articolo 2
1. Per essere ammesse al traffico intracomunitario, le carni fresche
provenienti dapa esi terzi contenenti muscoli scheletrici (muscoli
striati) devono essere sottoposte ad un esame effettuato sotto il
controllo e la responsabilità di un veterinario ufficiale.
2. L'esame deve essere effettuato secondo uno dei metodi indicati
nell'allegato I sull'animale intero o, in mancanza, su ogni mezzena,
quarto o pezzo destinato ad essere importato nella Comunità.
3. L'esame deve essere effettuato in un macello riconosciuto nel
paese speditore, conformemente all'articolo 4 della direttiva 72/462/CEE, ed autorizzato ad eseguire tale esame conformemente all'articolo
4 dellapresente direttiva .
4. L'esame deve essere effettuato prima dell'apposizione del bollo
sanitario di cui all'allegato B, capitolo X, della direttiva 72/462/CEE.
5. Qualora l'esame non possa essere effettuato nel paese speditore,
lo Stato membro destinatario può autorizzare l'importazione di carnifresche a condizione che l'esame venga effettuato sul suo territorio almomento del controllo sanitario di cui all'articolo 24, paragrafo 2, delladirettiva 72/462/CEE, in un posto di controllo ai sensi dell'articolo 27,
paragrafo 1, lettera b), di detta direttiva.
6. a) Se il risultato dell'esame è negativo le carni fresche devono
essere bollate immediatamente dopo il termine dell'esame,conformemente all'allegato III.
b) Per la bollatura ad inchiostro deve essere utilizzato un colorante
ai sensi dell'articolo 17, paragrafo 3, della direttiva 72/462/CEE.
Articolo 3
1. In deroga all'articolo 2, lo Stato membro destinatario può autoriz-
zare che le carni fresche provenienti da alcuni paesi terzi o parti di essi
non siano assoggettate ad un esame a condizione che siano sottopostead un trattamento mediante freddo effettuato in conformità dell'allegatoIV.
2. Tale trattamento è effettuato in uno stabilimento situato nel terri-
torio del paese terzo speditore di cui all'articolo 4, paragrafo 1.
L'esecuzione del trattamento mediante freddo nel paese terzo speditore
deve risultare da un'attestazione da parte del veterinario ufficiale nei
certificati di salubrità che accompagnano le carni fresche, citati all'arti-
colo 22, paragrafo 3, della direttiva 72/462/CEE.
3. Qualora tale trattamento non sia effettuato nel paese terzo esso
deve esserlo in un posto di controllo di cui all'articolo 2, paragrafo 5.
L'esecuzione del trattamento mediante freddo nello Stato membro deve
risultare da un'attestazione del veterinario ufficiale nei certificati dicontrollo che accompagnano le carni fresche citati all'articolo 25 delladirettiva72/462/CEE.1977L0096 — IT — 05.06.2003 — 009.001 — 3
▼B
Articolo 4
1. L'autorizzazione di un macello ad eseguire l'esame e quella di un
laboratorio di sezionamento a sezionare o a disossare carni fresche chehanno subito detto esame o di uno stabilimento ad eseguire trattamentimediante freddo di cui all'articolo 3 sono decise secondo la procedura
prevista all'articolo 9. Oltre ai requisiti previsti all'articolo 4 della diret-
tiva 72/462/CEE, si tiene conto delle garanzie che sono offerte ai finidel rispetto delle disposizioni dellapresente direttivae, per qua ntoconcerne i macelli:
a) dell'esistenza dei locali e dell'apparecchiatura necessaria per l'esecu-
zione dell'esame;
b) della qualificazione del personale incaricato dell'esecuzione dell'e-
same.
I macelli e i laboratori di sezionamento sono autorizzati soltanto se le
autorità competenti del paese terzo hanno ufficialmente riconosciutoche tale macello o laboratorio di sezionamento è in grado di soddisfare
alle disposizioni dell'articolo 5 e a quelle dell'allegato III. Inoltre, per
quanto riguarda un macello, esso deve disporre di un laboratorioconforme ai requisiti di cui al capitolo I dell'allegato II e in grado disoddisfare alle disposizioni dell'allegato I e a quelle degli altri capitolidell'allegato II.
L'autorizzazione di uno stabilimento ad eseguire il trattamento
mediante freddo può aver luogo soltanto se le competenti autorità delpaese terzo hanno ufficialmente riconosciuto che questo stabilimento è
in grado di soddisfare alle disposizioni dell'allegato IV.
2. Nell'elenco o negli elenchi di cui all'articolo 4, paragrafo 4, della
direttiva 72/462/CEE verrà inserita un'indicazione speciale in corri-
spondenza dei nomi degli stabilimenti autorizzati ai sensi del
paragrafo 1.
Articolo 5
1. Nei macelli autorizzati in conformità dell'articolo 4, la macella-
zione di suini le cui carni sono destinate alla Comunità deve essereeffettuata in locali o, in mancanza di questi, in tempi diversi da quelli
in cui sono macellati i suini le cui carni non sono destinate alla
Comunità, salvo il caso che le carni di questi suini siano soggette adun esame in base alle stesse modalità.
2. Il sezionamento o il disossamento delle carni che hanno subito un
esame con risultato negativo e che sono destinate alla Comunitàdevono essere effettuati nei laboratori di sezionamento in conformitàdell'articolo 4.
In detti laboratori, il sezionamento o il disossamento delle carni sopra
indicate devono essere effettuati in locali o, in mancanza di questi, intempi diversi da quelli in cui sono sezionate o disossate le carni non
destinate alla Comunità, salvo il caso che queste ultime siano anch'esse
soggette ad un esame in base alle stesse modalità.
Articolo 6
I controlli nei paesi terzi, di cui all'articolo 5 della direttiva 72/462/
CEE, hanno parimenti lo scopo di verificare l'applicazione dellapresente direttiva.
Articolo 7
Gli Stati membri compilano e comunicano alla Commissione l'elenco
dei posti di controllo di cui all'articolo 2, paragrafo 5, nei quali possonoessere eseguiti:
— l'esame,
— il trattamento mediante freddo di cui all'articolo 3.
Essi vigilano affinché tali posti dispongano degli impianti necessari per
l'esecuzione delle operazioni corrispondenti.1977L0096 — IT — 05.06.2003 — 009.001 — 4
▼M2
Articolo 8
Per tener conto dell'evoluzione tecnologica, possono essere decisi
adeguamenti o aggiunte agli allegati della presente direttiva, secondo
la procedura di cui all'articolo 9; le decisioni adottate al riguardo
devono garantire il mantenimento del livello delle garanzie sanitarieesistenti.
Articolo 9
1. La Commissione è assistita dal comitato permanente per la catena
alimentare e la salute degli animali, istituito dall'articolo 58 del regola-mento (CE) n. 178/2002 (
1).
2. Nei casi in cui è fatto riferimento al presente articolo, si appli-
cano gli articoli 5 e 7 della decisione 1999/468/CE (2).
Il periodo di cui all'articolo 5, paragrafo 6, della decisione 1999/468/
CE è fissato a tre mesi.
3. Il comitato adotta il proprio regolamento interno.
Articolo 11
Gli Stati membri adottano entro il 1ogennaio 1979 al più tardi le dispo-
sizioni legislative, regolamentari ed amministrative necessarie perconformarsi alle disposizioni della presente direttiva e ne informano
immediatamente la Commissione.
Articolo 12
Gli Stati membri sono destinatari della presente direttiva.1977L0096 — IT — 05.06.2003 — 009.001 — 5
(1) GU L 31 dell'1.2.2002, pag. 1.
(2) GU L 184 del 17.7.1999, pag. 23.▼M7
▼M1
▼B
▼B
ALLEGATO I
METODIDIRICERCADELLETRICHINE
I. ESAME TRICHINOSCOPICO
a)Attrezzatura
Trichinoscopio a lampada incandescente con possibilità d'ingrandimento
a50 e 80-100 volte.
Vetri compressori composti dadue la stre di vetro che possono essere
compresse l'una sull'altra, una delle quali è divisa in zone uguali; forbici
curve, pinzetta, un coltello per tagliare i campioni, piccoli contenitori
numerati per il deposito dei campioni, un contagocce, un bicchierino
contenente acido acetico e uno contenente potassa caustica per chiarifi-
care eventuali calcificazioni o ammollire la carne disseccata.
b)Prelievo deicampioni
Quando la carcassa è intera, si prelevi un campione della dimensione
minima di una nocciola da entrambi i pilastri del diaframma nella
zona di transizione tra la parte muscolare e quella tendinea. Quando vi
è un solo pilastro di diaframma, si deve prelevare un campione di
dimensione doppia. Qualora manchino i due pilastri di diaframma,
devono essere prelevati due campioni aventi circa la dimensione di
una nocciola nella parte del diaframma vicino alle coste o allo sterno
o dai muscoli linguali o dal massetere oppure dai muscoli addominali.
Per le carni in pezzi: da ciascun pezzo tre campioni di muscoli schele-
trici, contenenti poco grasso, se possibile della dimensione di una
nocciola, e prelevati a dei punti diversi, per quanto possibile presso
alle ossa o ai tendini.
c)Procedura
Da ciascuno dei campioni di cui sopra, l'analista deve tagliare, nel caso
di carcasse in cui esistono i due pilastri di diaframma, sette, quindi
complessivamente 14, e se esiste un solo pilastro di diaframma, 14
pezzettini della dimensione di un chicco d'avena da diverse parti, possi-
bilmente nellazonaintermediatramuscolo e tendine, e comprimerli tra
le lastre del vetro compressore in modo che si possano leggere chiara-
mente, attraverso i preparati, i consueti caratteri di stampa. Se la carne
dei pezzi da esaminare è secca e vecchia, i preparati devono essere
immersi, primadellacompressione, per 10-20 minuti in unaliscivadi
potassa caustica diluita con il volume doppio di acqua.
Se, per il prelievo dei campioni, devono essere utilizzati nelle carcasse
la parte del diaframma vicino alle coste o allo sterno, i muscoli linguali
o il massetere oppure i muscoli addominali, da ciascun campione si
devono tagliare 14, e cioè complessivamente 28 pezzettini aventi la
dimensione di un chicco d'avena.
Da ciascuno dei campioni prelevati dalle carni in pezzi, il controllore
delle trichine deve sezionare 4 pezzettini della dimensione di un chicco
d'avena, cioè complessivamente 12 pezzettini.
L'esame trichinoscopico deve svolgersi in modo che ciascun preparato
si possa esaminare lentamente e accuratamente. Se, nel corso dell'ana-
lisi al trichinoscopio, si rilevano posti sopetti la cui natura non può
essere accertata, pure con il massimo ingrandimento del trichinoscopio,
bisogna procedere ad un esame al microscopio.
L'esame al microscopio deve essere effettuato in modo che ciascun
preparato possa essere esaminato lentamente e accuratamente con un
ingrandimento di 30-40 volte.
In caso di dubbio, l'esame va proseguito con altri campioni e preparati,
se necessario, con ingrandimenti più forti, finché si ottiene lo schiari-
mento. Per l'esame trichinoscopico occorrono almeno tre minuti.
Nell'utilizzazione dei campioni sostitutivi prelevati dalla parte del
diaframma vicina alle coste o allo sterno, dai muscoli linguali o dal
massetere oppure dai muscoli addominali, l'esame trichinoscopico deve
durare almeno sei minuti.
Il tempo minimo fissato per l'esame non comprende il tempo necessario
per il prelievo dei campioni e l'approntamento dei preparati.1977L0096 — IT — 05.06.2003 — 009.001 — 6
▼B
L'analista non potrà esaminare al trichinoscopio generalmente più di
840 pezzettini al giorno, eccezionalmente può arrivare a 1 050.
II. METODO DELLA DIGESTIONE ARTIFICIALE
a)Attrezzatura emateriale
— Coltello per il prelievo dei campioni
— Piccoli recipienti chiudibili numerati per la conservazione dei
campioni, se del caso sino alla ripetizione dell'esame
— Stufa— Imbuto di vetro da2-3 litri con sostegno e tubo di gommadi
raccordo, pinze per staccare il tubo di raccordo
— Setaccio di plastica (diametro circa 18 cm, ampiezza delle maglie
circa1 mm)
— Garza— Tubo a punta saldata— Vaschetta— Tritacarne
— Stereomicroscopio (da 15 a 40 ingrandimenti) con adeguata illumi-
nazione
— Il liquido di digestione halaseguente composizione:
10 g di pepsina (80 u/g FIP: Fédération internationale de phar-
macie), 5 ml di HCl (almeno 37 %), riempire con acqua corrente a
1l .
b)Prelievo deicampioni
1. Per le carcasse intere, prelevare un campione di almeno 20 g da un
pilastro di diaframma nella zona di transizione tra la parte muscolare
e la parte tendinea; qualora non esistano pilastri di diaframma, prele-
vare un campione della stessa dimensione dalla parte di diaframma
vicina alle coste o allo sterno o dalla lingua o dal massetere oppure
dai muscoli addominali.
2. Per le carni in pezzi: prelevare un campione d'almeno 20 g dai
muscoli scheletrici, contenente poco grasso e per quanto possibile
vicino alle ossa o ai tendini.
c)Metodo
Per l'esame di un campione collettivo prelevato da dieci suini, da
ciascun singolo campione (20 g) viene preso un campione di 10 g. I
rimanenti 10 g sono conservati per un eventuale esame isolato.
Dieci campioni di 10 g ciascuno vengono riuniti per un esame collet-
tivo, tritati in un tritacarne (diametro dei fori del disco pari a 2 mm) e
messi, senza premere, nel setaccio munito di una garza. Il setaccio è
sospeso in un imbuto collegato con un tubo di gomma a punta saldata;
l'imbuto è riempito con il liquido di digestione fino alla copertura
completa del materiale di analisi. Il rapporto materiale di esame/liquido
di digestione deve essere di circa1: 20-1: 30.
Dopo un'incubazione di 18-20 ore alla temperatura di 37-39 ºC, il tubo
aguzzo viene staccato. Eliminare con cura il liquido a galla che si trova
nel tubo e raccogliere in una capsula il sedimento che è accuratamente
risciacquato. Individuare le trichine con uno steriomicroscopio con
ingrandimento di 20-40 volte.
In caso di esito positivo o incerto dell'esame di un campione collettivo,
si devono analizzare uno alla volta i corrispondenti singoli campioni
rimasti, con l'aggiunta di altri 20 g prelevati su ciascun suino, o, nel
caso in cui si tratta di carni in pezzi, con l'aggiunta di altri 20 g prele-
vati su ciascuno dei pezzi, conformemente al capoverso b) sopracitato.
III. METODO DELLA DIGESTIONE ARTIFICIALE SU UN INSIEME DI
PRELIEVI
a)Attrezzatura ereattivi
— Coltello e pinzette per il prelievo dei campioni
— Tritacarne con fori del diametro di 2-3 mm1977L0096 — IT — 05.06.2003 — 009.001 — 7
▼M3
▼B
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▼M3
— Matraccio «Erlenmeyer» da 3 000 ml, con tappo di gomma o ovatta
— I imbuto separatore conico della capacità di 2 000 ml
— I supporto ordinario con base ad A, della lunghezza di circa 28 cm e
barra di 80 cm
— I anello del diametro di circa 10-11 cm, da fissare al supporto— I morsa a testa piana (23 × 40 mm), da fissare al supporto mediante
doppio attacco
— I setaccio (ampiezza della maglia: 177 micron), con diametro
esterno di 11 cm, munito di reticella in ottone o in acciaio inossida-
bile
— I imbuto di diametro interno non inferiore a 12 cm
— Cilindri graduali da 100 ml
— I stereomicroscopio (ingrandimento 15-40 volte) dotato di adeguata
illuminazione o I trichinoscopio con tavola orizzontale per il
compressore dotato di adeguata illuminazione
— Qualora venga impiegato il trichinoscopio: vaschetta per il
conteggio delle larve. Essa deve essere ricavata da piastre in acrilico
dello spessore di 3 mm con le seguenti caratteristiche:
i) fondo della vaschetta: 180 × 40 mm suddiviso in quadri,
ii) lati: 230 × 20 mm,
iii) estremità: 40 × 20 mm.
Il fondo e le estremità devono essere inseriti frai due la ti, in modo
da formare una vaschetta con due piccoli manici ad ambedue le
estremità. Il lato superiore del fondo deve essere sollevato di 7-
9 mm sul livello di base del quadro formato dalle estremità e dai
lati. Le varie parti vanno fissate con un adesivo adatto al materiale
— Un certo numero di scatole di Petri del diametro di 9 cm (qualora si
impieghi lo stereomicroscopio) con quadrettatura da 10 × 10 mm sul
fondo, tracciata con uno strumento appuntito
— Alcuni recipienti da 10 litri, da usare per la decontaminazione con
un trattamento quale la formalina dell'apparecchiatura, e per il
restante succo digestivo nei casi di reperto positivo
— Acido cloridrico concentrato (37 %)— Pepsina della forza di 1:10 000 NF (US National Formulary)
corrispondente a: 1:12 500 BP (British Pharmacopoea)
corrispondente a: 2 000 FIP (Fédération internationale de phar-
macie)
— Una quantità di vassoi che possano raccogliere 50 campioni da circa
2 g ciascuno
— Una bilancia che abbia un grado di precisione pari a 0,1 g.
b)Prelievo deicampioni
1. Per le carcasse intere, prelevare un campione di circa 2 g da un pila-
stro di diaframma nella zona di transizione tra la parte muscolare e
la parte tendinea; qualora non esistano pilastri di diaframma, prele-
vare un campione della stessa dimensione dalla parte di diaframma
vicina alle coste o allo sterno o dalla lingua o dal massetere oppure
dai muscoli addominali.
2. Per le carni in pezzi prelevare un campione di circa 2 g dai muscoli
scheletrici, contenente poco grasso e per quanto possibile vicino alle
ossao a i tendini.
c)Metodo
1. i)Serie completa di campioni (100 campioni per volta)
Si asporta circa 1 g da ciascuno dei 100 campioni prelevati dai
suini. Il campione collettivo è tritato nel tritacarne.
La carne tritata viene introdotta nel matraccio «Erlenmeyer» da
3 l, unitamente a 7 g di pepsina, circa 2 litri di acqua corrente,
a temperatura tra i 40 e 41 ºC circa, nonché 25 ml di acido clori-
drico concentrato. Si agita la miscela per dissolvere la pepsina.
Il pH soluzione sarà di circa 1,5-2.
— Per la digestione, il matraccio «Erlenmeyer» è posto in incu-
bazione a 40-41 ºC per circa 4 ore. Il matraccio viene agitato
regolarmente durante questo tempo almeno due volte all'ora.
— La soluzione digerita è filtrata attraverso il setaccio in un
imbuto conico separatore da 2 litri, indi lasciato in riposo sul
supporto per almeno un'ora.1977L0096 — IT — 05.06.2003 — 009.001 — 8
▼M3
— Si spillano circa 45 ml in un cilindro graduato, distribuendoli
poi uniformemente, in ragione di 15 ml per scatola, in tre
scatole di Petri il cui fondo è suddiviso in quadri.
— Ogni scatola di Petri è accuratamente esaminata allo stereo-
microscopio per vedere se sono presenti larve di trichina.
— Se è fatto uso di vaschette di conteggio delle larve, i 45 ml
vengono distribuiti in due di tali vaschette e quindi esaminati
al trichinoscopio.
Nel deposito, le larve si presentano come organismi arrotolati,
simili a molle di orologio. Esse sono facilmente individuabili
e spesso, quando l'acqua è tiepida, svolgono e riavvolgono la
loro «spirale».
— I liquidi di digestione devono essere esaminati non appena
sono pronti. L'esame non può assolutamente essere rimandato
al giorno seguente.
Qualora i liquidi di digestione non siano chiari o non vengano
esaminati entro 30 minuti dalla loro preparazione, si procede
alla loro chiarificazione come segue. Il campione finale di
45 ml viene versato nel cilindro graduato e lasciato riposare
per dieci minuti. Trascorso questo tempo, si prelevano
mediante aspirazione 30 ml del liquido supernatante e ai
15 ml rimanenti viene aggiunta acqua di rubinetto fino ad
ottenere un volume totale di 45 ml. Dopo un ulteriore periodo
di riposo di 10 minuti, vengono nuovamente prelevati
mediante aspirazione 30 ml del liquido supernatante e i
restanti 15 ml vengono versati in una scatola di Petri o in
una vaschetta per il conteggio delle larve per essere esami-
nati. Lavare il cilindro graduato con 10 ml di acqua di
rubinetto; aggiungere il liquido ottenuto al campione nella
scatola di Petri o nella vaschetta per il conteggio delle larve
ed esaminare.
ii)Serie incompleta di campioni (meno di 100 campioni)
Ad una serie completa di 100 campioni si possono aggiungere
fino a 15 campioni singoli, da esaminare insieme agli altri. Se il
numero di campioni da esaminare è superiore a 15 e inferiore a
100, il liquido di digestione deve essere ridotto proporzional-
mente.
2. Qualora le analisi di un campione collettivo forniscano un risultato
positivo o dubbio, occorre prelevare da ogni suino un ulteriore
campione di 20 g secondo il procedimento di cui al precedente punto
b). I campioni di 20 g prelevati da cinque suini vengono riuniti in un
campione globale ed esaminati seguendo il metodo sopra descritto.
In tal modo verranno esaminati campioni provenienti da 20 gruppi
di cinque suini. Qualora venga individuata la presenza di trichine in
uno dei campioni globali costituiti dai prelievi su cinque suini, si
devono prelevare ulteriori campioni di 20 g da ciascuno dei suini
del gruppo ed esaminarli separatamente seguendo il metodo di cui
sopra.
IV. METODO DELLA DIGESTIONE ARTIFICIALE ASSISTITA MECCA-
NICAMENTE SU UN INSIEME DI PRELIEVI/TECNICA DELLA
SEDIMENTAZIONE
a)Apparecchiatureereattivi
— Coltello o forbici per il prelievo dei campioni
— Vassoi contrassegnati con 50 quadrati, ognuno dei quali sia capace
di contenere campioni dell'ordine di 2 g di carne
— Miscelatore di laboratorio Stomacher Thermo 3 500— Sacchetti di plastica adatti al miscelatore di laboratorio Stomacher
3 500
— Imbuti separatori conici da 2 l, preferibilmente con tappo di sicu-
rezzain teflon
— Sostegni, anelli e morsetti— Setacci (ampiezza della maglia 177 micron), del diametro esterno di
11 cm, in retina in acciaio inossidabile
— Imbuto con diametro interno non inferiore a 12 cm, per sostenere i
setacci
— Cilindri graduati da 100 ml— Distributori da25 ml
— Becher della capacità di 3 l1977L0096 — IT — 05.06.2003 — 009.001 — 9
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— Cucchiaio o verghetta in vetro per agitare il fluido contenuto nel
becher
— Siringa in plastica e tubo per l'aspirazione— Cucchiaio misuratore da 6 g— Termometro (precisione ± 0,5 ºC) per temperature comprese fra 1 e
100 ºC
— Vibratore (ad esempio: un rasoio elettrico privato delle testine)— Relais capace di inserire e disinserire la corrente a intervalli di 1
minuto
— Trichinoscopio con tavolo orizzontale o stereomicroscopio, con
adeguata illuminazione
— Qualora venga impiegato il trichinoscopio: vaschetta per il
conteggio delle larve. Essa deve essere ricavata da piastre in acrilico
dello spessore di 3 mm con le seguenti caratteristiche:
i) fondo della vaschetta: 180 × 40 mm, suddiviso in quadri,
ii) lati 230 × 20 mm,
iii) estremità: 40 × 20 mm.
Il fondo e le estremità devono essere inseriti frai la ti, in modo da
formare una vaschetta con due piccoli manici ad ambedue le
estremità. Il lato superiore del fondo deve essere sollevato di 7-
9 mm sul livello di base del quadrato formato dalle estremità e dai
lati. Le varie parti vanno fissate con un adesivo adatto al materiale.
— Qualora si impieghi lo stereomicroscopio: un certo numero di
scatole di Petri da 9 cm di diametro, con quadrettatura da
10 × 10 mm sul fondo, tracciata con uno strumento appuntito
— Acido cloridrico al 17,5 %— Pepsina, della forza di 1:10 000 NF (US National Formulary)
corrispondente a: 1:12 500 BP (British Pharmacopoea)
corrispondente a: 2 000 FIP (Fédération internationale de phar-
macie)
— Alcuni recipienti da 10 l, da impiegare per la decontaminazione con
un trattamento quale la formalina dell'apparecchiatura, e per il rima-
nente succo digestivo nei casi di risultato positivo
— Bilancia della precisione di 0,1 g.
b)Prelievo deicampioni
1. Per le carcasse intere, prelevare un campione di circa 2 g da un pila-
stro di diaframma nella zona di transizione fra la parte muscolare e
la parte tendinea. Qualora non esistano pilastri di diaframma, prele-
vare un campione della stessa dimensione dalla parte di diaframma
vicina alle coste od allo sterno o dal massetere o dai muscoli addo-
minali.
2. Per le carni in pezzi: prelevare un campione di circa 2 g dai muscoli
scheletrici, contenente poco grasso e per quanto possibile vicino alle
ossaod a i tendini.
c)Metodo
1.Procedimento di digestione
i)Serie completa di campioni (100 campioni per volta)
— Adattare un doppio sacchetto di plastica al miscelatore di
laboratorio Stomacher 3 500 e regolare la temperatura su 40-
41 ºC;
— versare nel sacchetto interno di plastica 1,5 litri di acqua a
32 ºC, e portarla alla temperatura di 40-41 ºC;
— aggiungere all'acqua contenuta nello Stomacher 25 ml di
acido cloridrico al 17,5 %;
— aggiungere 100 campioni da 1 g circa alla temperatura di 25-
30 ºC, prelevati da ciascuno dei campioni singoli secondo le
indicazioni del punto b);
— aggiungere infine 6 grammi di pepsina. L'ordine delle
aggiunte deve essere rispettato rigorosamente per evitare la
decomposizione dellapepsina ;
— azionare lo Stomacher lasciando pestare il contenuto del
sacchetto per 25 minuti;
— togliere il sacchetto di plastica dallo Stomacher e filtrare il
liquido di digestione attraverso il setaccio, raccogliendo il
liquido in un becher da3 litri;1977L0096 — IT — 05.06.2003 — 009.001 — 10
▼M3
— lavare il sacchetto di plastica con 100 ml circa d'acqua, da
impiegare poi per risciacquare il setaccio e da aggiungere
infine al filtrato contenuto nel becher;
ad una serie completa di 100 campioni si possono aggiungere
fino a 15 campioni singoli, da esaminare insieme agli altri.
ii)Serie incompleta di campioni (meno di 100 campioni)
— Adattare un doppio sacchetto di plastica al miscelatore di
laboratorio Stomacher 3 500 e regolare la temperatura su 40-
41 ºC;
— preparare il liquido di digestione miscelando circa un litro e
mezzo d'acqua con 25 ml di acido cloridrico all'1,5 %.
Aggiungere poi 6 g di pepsina e mescolare il tutto, alla
temperatura di 40-41 ºC. L'ordine di queste aggiunte deve
essere rispettato rigorosamente per evitare la decomposizione
dellapepsina ;
— prelevare un volume di liquido di digestione corrispondente a
15 ml per grammo di campione (per 30 campioni, ad esempio
il volume sarà 30 × 15 = 450 ml) e trasferirlo nel più interno
dei due sacchetti di plastica insieme ai campioni di carne da 1
grammo circa (a 25-30 ºC) prelevati da ciascuno dei campioni
singoli secondo le indicazioni del punto b);
— versare nel sacchetto esterno acqua alla temperatura di 41 ºC
circa, fino ad un volume totale di un litro e mezzo nei due
sacchetti;
— azionare lo Stomacher lasciando pestare il contenuto del
sacchetto per 25 minuti;
— togliere il sacchetto di plastica dallo Stomacher e filtrare il
liquido di digestione attraverso il setaccio, raccogliendo il
liquido in un becher da3 litri;
— lavare il sacchetto di plastica con 100 ml circa d'acqua, da
impiegare poi per sciacquare il setaccio e da aggiungere
infine al filtrato contenuto nel becher.
2.Isolamento delle larve per sedimentazione
— Aggiungere al liquido di digestione da 300 a 400 grammi di
ghiaccio in fiocchi, scaglie o frammenti, fino a un volume totale
di 2 litri circa. Agitare poi il liquido di digestione fino a fusione
del ghiaccio. Nel caso delle serie incomplete (vedi punto 1 ii), la
qualità di ghiaccio deve essere ridotta di conseguenza;
— trasferire il liquido di digestione così refrigerato in un imbuto
separatore da 2 litri, provvisto di un vibratore su un morsetto
addizionale;
— lasciare sedimentare per 30 minuti nell'imbuto separatore, che
deve essere fatto vibrare ad intermittenza, cioè alternando, ad
esempio, un minuto di vibrazione con un minuto di pausa;
— dopo 30 minuti, far defluire rapidamente 60 ml del sedimento in
un cilindro graduato da 100 ml (l'imbuto deve essere risciacquato
con soluzione detergente dopo l'impiego);
— dopo aver lasciato riposare i 60 ml di campione per almeno 10
minuti, eliminare il supernatante fino ad un volume residuo di
15 ml, aspirando con una siringa a perdere fino a lasciare un
volume di 15 ml nel quale sarà ricercata la presenza delle larve.
— Per l'aspirazione si può impiegare una siringa a perdere provvista
di tubo di plastica. La lunghezza del tubo deve essere tale che
nel cilindro di misura rimangano 15 ml di liquido mentre le
flange della siringa poggiano sul bordo del cilindro stesso;
— versare i 15 ml restanti in una vaschetta per il conteggio delle
larve o in due scatole di Petri, ed esaminare al trichinoscopio
od allo stereomicroscopio;
— i liquidi di digestione devono essere esaminati non appena sono
pronti. L'esame non può assolutamente essere rimandato al
giorno seguente.
Qualora i liquidi di digestione non siano chiari o non vengano
esaminati entro 30 minuti dalla loro preparazione, si procede
alla loro chiarificazione come segue. Il campione finale di 60 ml
viene versato nel cilindro graduato e lasciato riposare per dieci
minuti. Trascorso questo tempo, si prelevano mediante aspira-
zione 45 ml del liquido supernatante e ai 15 ml rimanenti viene
aggiunta acqua di rubinetto fino ad ottenere un volume totale di
45 ml. Dopo un ulteriore periodo di riposo di 10 minuti, vengono
nuovamente prelevati mediante aspirazione 30 ml del liquido
supernatante e i restanti 15 ml vengono versati in una scatola di1977L0096 — IT — 05.06.2003 — 009.001 — 11
▼M3
Petri o una vaschetta per il conteggio delle larve per esservi
esaminati. Lavare il cilindro graduato con 10 ml di acqua di rubi-
netto; aggiungere il liquido ottenuto al campione nella scatola di
Petri o nella vaschetta per il conteggio delle larve ed esaminare.
3. Qualora le analisi di un campione collettivo forniscano un risultato
positivo o dubbio, occorre prelevare da ogni suino un ulteriore
campione di 20 g secondo il procedimento di cui al precedente punto
b). I campioni di 20 g prelevati da cinque suini vengono riuniti in un
campione globale ed esaminati seguendo il metodo sopra descritto.
In tal modo verranno esaminati campioni provenienti da 20 gruppi
di cinque suini. Qualora venga individuata la presenza di trichine in
uno dei campioni globali costituiti dai prelievi su cinque suini, si
devono prelevare ulteriori campioni di 20 g da ciascuno dei suini
del gruppo ed esaminarli separatamente seguendo il metodo di cui
sopra.
V. METODO DELLA DIGESTIONE ARTIFICIALE ASSISTITA MECCA-
NICAMENTE SU UN INSIEME DI PRELIEVI/TECNICA DI
ISOLAMENTO SUL FILTRO
a)Apparecchiatureereattivi
Come indicato al metodo IV, punto a).Ulteriore attrezzatura:
— 1 imbuto Gelman da un litro, con portafiltro (diametro del potra-
filtro: 45 mm);
— dischi filtranti, consistenti in:
una reticella circolare di acciaio inossidabile, con maglie dell'am-
piezzadi 35 micron. Il dia metro dellareticelladeve essere di
45 mm;
due anelli di gomma, ricavati da un foglio dello spessore di 1 mm,
con diametro esterno di 45 mm e il diametro interno di 38 mm. La
reticella metallica circolare deve essere posta fra i due anelli e
fissata con un adesivo a due componenti adatto al materiale;
— beuta da 3 litri, con un tubo laterale per l'aspirazione;
— pompadi filtra zione;— sacchetti di plastica da 80 ml almeno;
— apparecchio termosaldante per i sacchetti di plastica;
— Rennilasi, 1:150 000 unità Soxhtel per grammo.
b)Raccoltadeicampioni:
Vedi metodo IV, punto b).
c)Metodo
1.Procedimento di digestione
i)Serie completa (100 campioni per volta):
Vedi metodo IV, punto c) 1 i).
ii)Serie incompleta di campioni (meno di 100 campioni):
Vedi metodo IV, punto c) 1 ii).
2.Isolamento delle larve per filtrazione
— Aggiungere al liquido di digestione da 300 a 400 grammi di
ghiaccio in fiocchi, scaglie o frammenti, fino al volume di 2 litri
circa.
In caso di serie meno numerose, ridurre di conseguenza la
quantità di ghiaccio;
— agitare il liquido di digestione fino a fusione del ghiaccio;
— lasciar riposare il liquido di digestione così refrigerato per
almeno 3 minuti, per lasciare alle larve il tempo di avvolgersi a
spirale;
— montare sulla beuta collegata alla pompa da filtrazione l'imbuto
Gelman, con relativo portafiltro e filtro;
— versare nell'imbuto Gelman il fluido di digestione e filtrare.
Verso la fine della filtrazione, il passaggio del liquido di dige-
stione attraverso il filtro può essere aiutato applicando
l'aspirazione mediante la pompa. Sospendere l'aspirazione prima
che il filtro rimanga secco, cioè quando nell'imbuto rimangono 2-
5 ml di liquido;1977L0096 — IT — 05.06.2003 — 009.001 — 12
▼M3
— unavoltafiltra to tutto il liquido di digestione, togliere il disco
filtrante e collocarlo in un sacchetto di plastica da 80 ml insieme
a 15-20 ml di soluzione di rennilasi (2 g di rennilasi in 100 ml di
acqua potabile);
— sigillare due volte il sacchetto di plastica, collocarlo nello Stoma-
cher per tre minuti, ad esempio mentre esso lavora su una serie
completao incompletadi ca mpioni;
— dopo tre minuti, aprire con un paio di forbici il sacchetto di
plastica completo di disco filtrante e soluzione di rennilasi e
versare il liquido in una vaschetta per il conteggio delle larve o
in una scatola di Petri, in vista dell'esame allo stereomicroscopio;
— i fluidi di digestione devono essere esaminati non appena sono
pronti. L'esame non può assolutamente essere rimandato al
giorno seguente.
Nota:
I dischi filtranti non devono essere mai impiegati se non sono perfet-
tamente puliti.
I dischi sporchi non devono mai essere lasciati essiccare.
I dischi filtranti possono essere puliti lasciandoli per una notte in una
soluzione di rennilasi. Prima dell'impiego, essi devono essere lavati
nello Stomacher in una soluzione di rennilasi.
3. Qualora le analisi di un campione collettivo forniscano un risultato
positivo o dubbio, occorre prelevare da ogni suino un ulteriore
campione di 20 g secondo il procedimento di cui al precedente punto
b). I campioni di 20 g prelevati da cinque suini vengono riuniti in un
campione globale ed esaminati seguendo il metodo sopra descritto.
In tal modo verranno esaminati campioni provenienti da 20 gruppi
di cinque suini. Qualora venga individuata la presenza di trichine in
uno dei campioni globali costituiti dai prelievi su cinque suini, si
devono prelevare ulteriori campioni di 20 g da ciascuno dei suini
del gruppo ed esaminarli separatamente seguendo il metodo di cui
sopra.
VI. METODO DELLA DIGESTIONE SU UN INSIEME DI PRELIEVI
RICORRENDO ALL'AGITAZIONE MAGNETICA
a)Apparecchiaturaereattivi
— Coltelli e pinzette per il prelievo dei campioni
— Vassoi contrassegnati con 50 quadrati, capaci di contenere campioni
dell'ordine di 2 g di carne
— Sminuzzatore Moulinette
— Agitatori con piastra di riscaldamento termostabile e sbarretta agita-
trice ricopertadi teflon dellalunghezzadi 5 cm circa
— Imbuti separatori conici da 2 litri
— Sostegni, anelli e morsetti
— Setacci (ampiezza della maglia 177 micron) in retina inossidabile,
del diametro esterno di 11 cm
— Imbuti con diametro interno non inferiore a 12 cm, per sostenere i
setacci
— Becher della capacità di 3 litri
— Cilindri graduati da 50 ml o tubi di centrifuga
— Trichinoscopio con tavolo orizzontale o stereomicroscopio, con illu-
minazione adeguata
— Qualora venga impiegato il trichinoscopio; vaschetta per il
conteggio delle larve. Essa deve essere ricavata da piastre in acrilico
dello spessore di 3 mm con le seguenti caratteristiche:
i) fondo della vaschetta: 180 × 40 mm, suddivisa in quadri,
ii) lati: 230 × 20 mm,
iii) estremità: 40 × 20 mm.
Il fondo e le estremità devono essere inserite frai due la ti, in modo
da formare una vaschetta con due piccoli manici ad ambedue le
estremità.
Il lato superiore del fondo deve essere sollevato di 7-9 mm sul
livello di base del quadro formato dalle estremità e dai lati. Le varie
parti vanno fissate con un adesivo adatto al materiale
— Qualora venga impiegato lo stereomicroscopio: un certo numero di
scatole di Petri da 9 cm di diametro con quadrettatura da 10 × 10 mm
sul fondo tracciato con uno strumento appuntito1977L0096 — IT — 05.06.2003 — 009.001 — 13
▼M3
— Foglio d'alluminio
— Acido cloridrico al 25 %— Pepsina, della forza di 1:10 000 NF (US National Formulary)
corrispondente a: 1:12 500 BP (British Pharmacopoea)corrispondente a: 2 000 FIP (Fédération internationale de phar-
macie)
— Acqua di mulinetto riscaldata alla temperatura di 46-48 ºC— Un certo numero di secchi da10 litri, daimpiega re per ladeconta -
minazione con un trattamento quale la formalina
dell'apparecchiatura, e per il rimanente succo digestivo nei casi di
risultato positivo
— Bilancia della precisione di 0,1 g
b)Prelievo deicampioni
1. Per le carcasse intere, prelevare un campione di circa 2 g da un pila-
stro di diaframma nella zona di transizione fra la parte muscolare e
la parte tendinea. Qualora non esistano pilastri di diaframma, prele-
vare un campione della stessa dimensione dalla parte di diaframma
vicina alle coste od allo sterno, o dal massetere o dai muscoli addo-
minali.
2. Per le carni in pezzi: prelevare un campione di circa 2 g dai muscoli
scheletrici, contenente poco grasso e per quanto possibile vicino alle
ossaod a i tendini.
c)Metodo
1. i)Serie completa (100 campioni alla volta)
— Trattare nello sminuzzatore Moulinette 100 campioni da 1 g
circa, prelevati da ciscuno dei campioni singoli secondo le
indicazioni del punto b). Lo sminuzzatore deve essere azio-
nato 3-4 volte, per un secondo circa ogni volta;
— trasferire la carne sminuzzata in un becher da 3 litri e cospar-
gerla con 10 g di pepsina. Versare nel becher 2 litri di acqua
pota bile a46-48 ºC, insieme a16 ml di a cido cloridrico;
— immergere ripetutamente la parte sminuzzante del Moulinette
nel liquido digerente contenuto nel becher, per eliminare il
materiale da esaminare che ancora vi aderisce;
— introdurre nel becher la sbarretta agitatrice e coprire il becher
con foglio d'alluminio;
— porre il becher sulla piastra riscaldante dell'agitatore magne-
tico, previamente portata a temperatura, e cominciare
l'agitazione. Prima dell'avvio, l'agitatore magnetico deve
essere regolato in modo da mantenere una temperatura
costante di 44-46 ºC per tutto il periodo di funzionamento.
Durante l'intero processo di agitazione, il liquido di dige-
stione deve ruotare a velocità abbastanza elevata da formare
un profondo vortice al centro, ma senza dar luogo a spruzzi;
— agitare il liquido di digestione per 30 minuti, alla fine dei
quali arrestare l'apparecchio e trasferire il fluido nell'imbuto
separatore per la sedimentazione, filtrandolo attraverso un
setaccio;
— lasciare riposare per 30 minuti il liquido di digestione nell'im-
buto;
— dopo 30 minuti, spillare rapidamente 40 ml di liquido, racco-
gliendolo nel cilindro graduato o nel tubo da centrifuga;
— Lasciare riposare i 40 ml di liquido per 10 minuti, trascorsi i
quali aspirare il supernatante, lasciando un volume di 10 ml;
— il campione rimanente di 10 ml di sedimento viene versato in
una vaschetta per il conteggio delle larve o in una scatola di
Petri;
— risciacquare il cilindro graduato o il tubo da centrifuga con
circa 10 ml circa di acqua potabile, che deve essere aggiunta
al campione nella vaschetta per la conta delle larve o nella
scatola di Petri. Successivamente, esaminare al trichinoscopio
o allo stereomicroscopio.
I liquidi di digestione devono essere esaminati non appena
sono pronti. L'esame non può assolutamente essere rimandato
al giorno seguente. Qualora i liquidi di digestione non
vengano esaminati entro 30 minuti dalla loro preparazione,
si procede alla loro chiarificazione come segue. Il campione
di circa 40 ml viene versato nel cilindro graduato e lasciato1977L0096 — IT — 05.06.2003 — 009.001 — 14
▼M3
riposare per dieci minuti. Trascorso questo tempo, si prele-
vano 30 ml del liquido supernatante lasciando un volume di
10 ml. A questo volume viene aggiunta acqua di rubinetto
fino ad ottenere un volume totale di 40 ml. Dopo un ulteriore
periodo di riposo di 10 minuti vengono prelevati 30 ml del
liquido supernatante mediante aspirazione, lasciando un
volume di 10 ml al fine dell'esame in una scatola di Petri o
in una vaschetta per il conteggio delle larve. Lavare il
cilindro graduato con 10 ml di acqua di rubinetto; il liquido
ottenuto deve essere aggiunto al campione nella scatola di
Petri o nella vaschetta per il conteggio delle larve per esservi
esaminate.
Se il sedimento non risulta chiaro all'esame, il campione deve
essere versato in un cilindro graduato e il suo volume portato
a 40 ml con l'aggiunta di acqua di rubinetto. Seguire poi il
metodo di cui sopra.
ii)Serie incompleta di campioni (meno di 100 campioni)
Qualora necessario, 15 campioni da 1 g ciascuno possono essere
aggiunti ad una serie completa di 100 campioni per essere esami-
nati nello stesso tempo secondo il metodo indicato al punto c) 1
i). Se i campioni son più di 15, essi devono essere esaminati
come una serie completa. Nel caso di serie che hanno al massimo
50 campioni, il liquido di digestione può essere ridotto ad 1 litro.
2. Qualora le analisi di un campione collettivo forniscano un risultato
positivo o dubbio, occorre prelevare da ogni suino un ulteriore
campione di 20 g secondo il procedimento di cui al precedente punto
b). I campioni di 20 g prelevati da cinque suini vengono riuniti in un
campione globale ed esaminati seguendo il metodo sopra descritto.
In tal modo verranno esaminati campioni provenienti da 20 gruppi
di cinque suini. Qualora venga individuata la presenza di trichine in
uno dei campioni globali costituiti dai prelievi su cinque suini, si
devono prelevare ulteriori campioni di 20 g da ciascuno dei suini
del gruppo ed esaminarli separatamente seguendo il metodo di cui
sopra.
VII. METODO DI DIGESTIONE AUTOMATICA PER GRUPPI DI
CAMPIONI FINO A 35 GRAMMI
a)Attrezzature ereattivi
— Coltello o forbici per il prelievo dei campioni
— Vassoi contrassegnati con 50 quadrati, ognuno dei quali sia capace
di contenere campioni dell'ordine di 2 g di carne
— Miscelatore Trichomatic 35 munito di dispositivo di filtrazione
— Acido cloridrico all'8,5 % ± 0,5 % in peso
— Membrane filtranti trasparenti e policarbonati del diametro di 50 mm
e con maglie dell'ampiezza di 14 micron
— Pepsina, della forza di 1: 10 000 NF (U.S. National Formulary)
corrispondente a 1: 12 500 BP (British Pharmacopoea)
corrispondente a 2 000 FIP (Fédération internationale de pharmacie)
— Bilancia della precisione di 0,1 g
— Pinzette apuntapia tta— Vetrini da microscopio con lato di almeno 5 cm o scatole di Petri
del diametro di almeno 6 cm, con quadrettatura da 10 × 10 mm
sul fondo, tracciata con uno strumento appuntito
— (Stereo) microscopio a luce trasmessa (ingrandimento 15-60 volte) o
trichinoscopio con tavolo orizzontale
— Recipiente per la raccolta dei liquidi di scarico
— Recipiente da 10 litri, da usare per la decontaminazione delle appa-
recchiature con un trattamento quale la formalina e per il restante
succo digestivo nei casi di risultato positivo.
b)Prelievo deicampioni
1. Per le carcasse intere, prelevare un campione di circa 2 g da un pila-
stro di diaframma nella zona di transizione tra la parte muscolare e
la parte tendinea; qualora non esistano pilastri di diaframma, prele-
vare un campione della stessa dimensione dalla parte di diaframma
vicina alle coste o allo sterno o dal massetere o dai muscoli addomi-
nali.1977L0096 — IT — 05.06.2003 — 009.001 — 15
▼M5
▼M5
2. Per le carni in pezzi, prelevare un campione di circa 2 g dai muscoli
scheletrici, contenente poco grasso e per quanto possibile vicino alle
ossao a i tendini.
c)Metodo
1.Procedimento di digestione
— Sistemare il miscelatore con il dispositivo di filtrazione, colle-
gare il tubo di scarico e dirigerlo verso il recipiente apposito.
— Quando viene attivato il miscelatore, inizia il riscaldamento.
— Prima dell'avvio, aprire e chiudere la valvola inferiore che si
trova sotto la camera di reazione.
— Aggiungere un massimo di 35 campioni da 1 g circa (alla tempe-
ratura di 25-30 ºC), prelevati da ciascuno dei singoli campioni
secondo le indicazioni della lettera b). Accertarsi che vengano
asportati i pezzi più grandi di tendini per evitare che ostruiscano
la membrana filtrante.
— Versare acqua sul bordo di una camera per liquidi collegata al
miscelatore (circa 400 ml).
— Versare circa 30 ml di acido cloridrico (8,5 %) sul bordo della
camera per liquidi più piccola collegata.
— Collocare una membrana filtrante sotto il filtro grossolano nel
portafiltro del dispositivo di filtrazione.
— Aggiungere infine ►M67g◄di pepsina. L'ordine delle
aggiunte deve essere rigorosamente rispettato per evitare la
decomposizione dellapepsina .
— Chiudere i coperchi della camera di reazione e delle camere per
liquidi.
— Selezionare la durata della digestione: periodo di digestione
breve (5 minuti) per i campioni di suini in età normale di macel-
lazione e periodo di digestione prolungato (8 minuti) per gli altri
campioni.
— Il distributore automatico si mette in moto quando viene attivato
il pulsante di avviamento del miscelatore e la digestione procede
automaticamente con la successiva filtrazione. Il procedimento si
conclude dopo 10-13 minuti e si arresta automaticamente.
— Aprire il coperchio della camera di reazione dopo essersi accer-
tati che la camera è vuota. Qualora la camera contenga ancora
schiumao resti del liquido di digestione, ripetere il procedimento
secondo le indicazioni della lettera c, punto 4.
2.Isolamento delle larve
— Smontare il portafiltro e collocare la membrana filtrante su un
vetrino o in unasca tolaPetri.
— Esaminare la membrana filtrante al microscopio o al trichino-
scopio.
3.Pulitura delle apparecchiature
— Se il risultato è positivo, riempire con acqua bollente i 2/3 della
camera di reazione del miscelatore. Versare normale acqua
corrente nella camera per liquidi collegata fino a coprire il
sensore di livello inferiore. Svolgere quindi il programma di puli-
tura automatica. Decontaminare il portafiltro e le apparecchiature
restanti, ad esempio mediante trattamento al formolo.
— Al termine della giornata lavorativa, riempire d'acqua la camera
per liquidi del miscelatore ed eseguire un programma standard.
4.Impiego di membrane filtranti
Una membrana filtrante di policarbonato non può essere utilizzata
più di cinque volte. Dopo ogni impiego essadeve essere gira tae
controllata per individuare eventuali danni che la renderebbero
inadatta ad un ulteriore uso.
►M65.◄Metodo da applicare quando la digestione è incompleta e
rende impossibile la filtrazione
Al termine del procedimento automatico nel miscelatore secondo le
indicazioni della lettera c, punto 1, aprire il coperchio della camera
di reazione e verificare se vi restano schiuma o liquido di digestione.
Se tale è il caso, seguire la seguente procedura:
— chiudere la valvola inferiore sotto la camera di reazione;1977L0096 — IT — 05.06.2003 — 009.001 — 16
▼M6
▼M5
▼M5
— smontare il portafiltro e collocare la membrana filtrante su un
vetrino o in unasca tolaPetri;
— rimontare il portafiltro dopo avervi collocato una nuova
membrana filtrante;
— versare acqua nella camera per liquidi del miscelatore fino a
coprire il sensore di livello inferiore;
— eseguire il programma di pulitura automatica;— al termine del programma di pulitura, aprire il coperchio della
camera di reazione e verificare se vi resta ancora del liquido;
— se la camera è vuota, smontare il portafiltro e posare con una
pinzetta la membrana filtrante su un vetrino o in una scatola
Petri;
— esaminare secondo le indicazioni della lettera c, punto 2 le due
membrane filtranti. Se non possono essere esaminate, ripetere
l'intero procedimento di digestione prolungando il periodo di
digestione secondo le indicazioni della lettera c, punto 1.
►
M66.◄Qualora le analisi di un campione collettivo forniscano un
risultato positivo o dubbio, occorre prelevare da ogni suino un altro
campione di 20 g secondo il procedimento di cui alla precedente
lettera b). Questi campioni vengono analizzati individualmente
secondo il metodo sopradescritto.1977L0096 — IT — 05.06.2003 — 009.001 — 17
▼B
ALLEGATO II
CAPITOLO I
REQUISITI IMPOSTI AI LABORATORI PER LA RICERCA DELLE
TRICHINE
1. I laboratori per la ricerca delle trichine devono trovarsi nella vicinanza
immediata dei locali di macellazione dei suini e disporre almeno di:
a) un locale adeguatamente attrezzato, che possa essere chiuso a chiave,
destinato al confezionamento dei preparati, con pareti lisce rivestite o
verniciate fino all'altezza di 2 m con materiale lavabile e chiaro. Si
dovrà predisporre un locale di preparazione per ciascun metodo di esame
utilizzato;
b) un locale di ricerca adeguatamente attrezzato, che possa essere chiuso a
chiave e che possa essere oscurato qualora si utilizzi il trichinoscopio;
c) dispositivi che assicurino un'areazione adeguata e, se necessario, un
impianto di climatizzazione che permetta di mantenere costantemente la
temperatura ambiente sotto ai + 25 ºC;
d) illuminazione naturale o artificiale sufficiente, che non alteri i colori; va
evitata un'irradiazione solare intensa;
e) nel locale di preparazione, impianti sufficienti per la pulizia e la disinfe-
zione delle mani;
►M3f)◄se necessario, un impianto di refrigerazione per la conserva-
zione dei campioni di carni;
g) un locale per la pulizia e la disinfezione degli strumenti d'esame (ad
esempio contenitori per il deposito dei campioni, vetri compressori,
coltelli e forbici) con:
— pavimenti in materiali impermeabili e imputrescibili, facili da pulire e
disinfettare,
— pareti lisce, rivestite o verniciate con materiale lavabile e chiaro fino
all'altezza di almeno 2 m;
Tale disposizione non è di applicazione quando vengono utilizzati i
metodi di cui ai punti II, III, IV, V, VI dell'allegato I, purché i laboratori
dispongano di un grande acquaio adeguatamente piombato;
►M3h)◄spogliatoi, lavabi e locali di soggiorno nonché latrine a sciac-
quone;
►M3i)◄lavabi alimentati con acqua corrente calda e fredda, potabile, e
provvisti di prodotti per la pulizia e la disinfezione, nonché di asciuga-
mani da utilizzare una sola volta;
►M3j)◄recipienti a tenuta stagna, resistenti alla corrosione, muniti di
coperchio a chiusura ermetica tale da impedire qualsiasi prelevamento
non autorizzato del contenuto, destinati ad accogliere i resti di campioni;
►M3k)◄impianti che forniscano in quantità sufficiente acqua potabile
calda e fredda;
►M3l)◄un dispositivo per l'evacuazione delle acque di scarico che
risponda alle norme previste per il riconoscimento dei macelli;
►M3m)◄adeguati dispositivi di protezione contro gli animali indeside-
rabili (insetti, roditori, ecc.).
CAPITOLO II
DISPOSIZIONI RELATIVE AL PERSONALE, AI LOCALI, ALLE
ATTREZZATURE EDAGLI STRUMENTI D EI LABORATORI PER LA
RICERCADELLETRICHINE
2. È sempre richiesta la massima pulizia del personale addetto al laboratorio,
dei locali, dell'attrezzatura e degli strumenti.
a) In particolare, il personale deve indossare abiti da lavoro puliti e deve
lavarsi le mani più volte nel corso di una giornata di lavoro, oltre che ad
ogni ripresadel la voro;1977L0096 — IT — 05.06.2003 — 009.001 — 18
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▼B
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▼B
b) nessun animale deve essere ammesso nei laboratori per la ricerca delle
trichine;
c) il materiale e gli strumenti di lavoro devono essere sempre in ottimo stato
di manutenzione e di pulizia; devono essere puliti e disinfettati con cura
più volte nel corso di una giornata di lavoro, nonché alla fine della stessa.
3. L'utilizzazione dell'acqua potabile è d'obbligo per tutti gli usi.
4. Per quanto riguarda lo stato di salute del personale incaricato del prelievo dei
campioni al fine d'esame, si applicano le disposizioni dell'allegato B, capitolo
IV, n. 11 e n. 12, delladirettiva72/462/CEE.
5. I campioni di carni necessari per l'esame e prelevati subito dopo la macella-
zione devono essere sottoposti immediatamente all'esame nel laboratorio per
laricercadelle trichine del ma cello.
È vietato effettuare esami all'esterno del macello nel quale gli animali sono
stati macellati.
6. Per prevenire l'insorgere della stanchezza e le relative conseguenze, devono
essere concesse al personale addetto al controllo brevi periodi di riposo.
CAPITOLO III
DISPOSIZIONICONCERNENTIITRICHINOSCOPI
La concezione e il tipo dei trichinoscopi devono soddisfare ai seguenti requisiti
minimi:
1. Semplicità d'impiego.
2. Altaluminosità:
— deve essere possibile ottenere risultati sicuri del controllo anche in locali
non completamente oscurati;
— quale fonte luminosa si utilizzerà una lampada da proiezione di 100 W
(12 v).
3. Ingrandimento sufficiente:
— normale ingrandimento di lavoro: 50 volte;
— ingrandimento da 80 a 100 volte per identificare oggetti non chiara-
mente identificati con l'ingrandimento normale.
4. Contrasto:
— a qualsiasi ingrandimento si deve avere un'immagine chiara, precisa, a
colori netti.
5. Meccanismo di commutazione:
— quando si cambia il rapporto di ingrandimento, la compensazione della
luminosità dello schermo deve avvenire automaticamente.
6. Aumento del contrasto:
— il sistema di condensatori deve essere provvisto di un diaframma per la
variazione del contrasto che consenta di esaminare accuratamente anche
i campioni più difficili;
— il diaframma deve essere di facile impiego (ad esempio, regolabile
mediante levetta fissata sul quadro di comando del trichinoscopio).
7. Agevole messaafuoco dell'obiettivo:
— messa a fuoco rapida mediante anello zigrinato;
— messa a fuoco di precisione mediante levetta.
8. Regolazione della tensione:
— per ottenere la luminosità voluta nella situazione specifica.
9. Guidaasenso unico del vetro compressore:
— un dispositivo automatico di blocco deve assicurare il passaggio a senso
unico del vetro compressore per evitare spostamenti accidentali.
10. Visibilità dellasuperficie di proiezione.1977L0096 — IT — 05.06.2003 — 009.001 — 19
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11. Superficie di proiezione:
— diametro minimo di 54 cm,
— alto potere riflettente,— durevolezza,— smontabilità,— facilità di pulizia.1977L0096 — IT — 05.06.2003 — 009.001 — 20
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ALLEGATO III
BOLLATURADELLECARNICHEHANNOSUBITOL'ESAMEPERLA
RICERCADELLETRICHINE
1. La bollatura sanitaria deve essere effettuata sotto la responsabilità del veteri-
nario ufficiale. A tal fine egli detiene e custodisce:
— gli strumenti per la bollatura che può consegnare al personale ausiliario
soltanto al momento e per il tempo necessario per effettuare la bollatura
stessa;
— i bolli metallici di cui al numero 5. Questi bolli metallici sono consegnati
al personale ausiliario al momento in cui sono utilizzati e in numero
corrispondente alle necessità.
2. Il bollo deve essere un timbro di forma rotonda, di 2,5 cm di diametro. Sul
timbro devono figurare le seguenti indicazioni, in caratteri perfettamente
leggibili:
— verso il centro, la lettera T maiuscola formata da due barre della
lunghezzadi 1 cm e dellala rghezzadi 0,2 cm;
— sotto laletteraT predetta , unadelle sigle CEE, EEG, EWG, EØF, EEC
►A1, EOK◄o►A2ETY◄. Le lettere devono avere un'altezza di
0,4 cm.
3. Le carcasse sono bollate con marchio a inchiostro o a fuoco sulla faccia
interna della coscia, in conformità del paragrafo 2.
4. La testa è bollata con un marchio a inchiostro o a fuoco rispondente alle
prescrizioni del paragrafo 2.
I pezzi, esclusi quelli esenti da bollatura sanitaria ai sensi dell'allegato B,
capitolo X, paragrafo 43, della direttiva 72/462/CEE, ottenuti nei laboratori
di sezionamento da carcasse regolarmente bollate, sempreché non rechino
alcuna stampigliatura, devono essere bollati prima dell'applicazione del bollo
sanitario, in conformità del paragrafo 2. L'etichetta di cui al predetto para-
grafo 43, secondo comma, deve rispondere ai requisiti del successivo
paragrafo 6.
5. La bollatura può anche essere effettuata mediante bollo metallico di forma
rotonda, non riutilizzabile, da fissare su ciascun pezzo o ciascuna carcassa;
detto bollo deve essere di materiale resistente e pienamente conforme ai
requisiti igienici.
Sul bollo metallico devono figurare le seguenti indicazioni, in caratteri
perfettamente leggibili:
— verso il centro la lettera T maiuscola,
— sotto laletteraT predetta , unadelle sigle CEE, EEG, EWG, EØF, EEC
►A1, EOK◄o►A2ETY◄.
Le lettere devono avere un'altezza di 0,2 cm.
6. Sull'etichetta di cui all'allegato B, capitolo X, paragrafo 44, della direttiva di
cui al punto 4 deve figurare, oltre al bollo sanitario, un bollo chiaramente
leggibile identico a quello previsto al paragrafo 2.1977L0096 — IT — 05.06.2003 — 009.001 — 21
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ALLEGATO IV
TRATTAMENTOCOLFREDDO
I.Metodo1
1. La carne portata in frigorifero allo stato congelato va conservata in
queste condizioni.
2. L'attrezzatura tecnica e la sistemazione del locale refrigeratore debbono
essere tali da garantire in tutti i punti del locale e in tutte le parti della
carne la temperatura di cui al punto 6, che deve essere raggiunta nel più
breve tempo possibile e mantenuta costantemente.
3. Gli imballaggi isolanti vanno eliminati prima della refrigerazione, tranne
per la carne che al momento dell'introduzione nel locale frigorifero ha
già raggiunto in tutte le sue parti la temperatura di cui al punto 6.
4. Le partite di carne vanno mantenute nel locale frigorifero, separate e
sotto chiave.
5. Per ogni partita di carne vanno annotati il giorno e l'ora dell'introduzione
nel locale frigorifero.
6. La temperatura nel locale frigorifero deve essere almeno di −25 ºC, deve
essere misurata termoelettricamente con apparecchi tarati e deve essere
tenuta sotto registrazione costante. Essa non deve essere misurata diretta-
mente nella corrente d'aria fredda. Gli apparecchi di misura vanno tenuti
sotto chiave. I diagrammi devono riportare i numeri corrispondenti del
registro delle ispezione effettuate all'atto dell'importazione, nonché il
giorno e l'ora d'inizio e di fine della congelazione, e vanno conservati
per un anno.
7. La carne avente diametro o spessore fino a 25 cm va refrigerata ininter-
rottamente per almeno 240 ore, le carne avente diametro o spessore tra
25 e 50 cm, per almeno 480 ore. La carne avente diametro o spessore
superiore, non può essere sottopostaaquesto procedimento di refrigera -
zione. La durata di refrigerazione viene calcolata a partire dal momento
in cui il locale frigorifero raggiunge la temperatura di cui al punto 6.
II.Metodo2
Si osservano le disposizioni generali dei paragrafi da 1 a 5 del metodo 1
e si applicano le seguenti combinazioni di tempo e temperatura:
1. La carne avente diametro o spessore sino a 15 cm va refrigerata secondo
una delle seguenti combinazioni di tempo e temperatura:
— 20 giorni a− 15 ºC,
— 10 giorni a− 23 ºC,— 6 giorni a− 20 ºC,
2. La carne avente diametro o spessore compreso tra 15 e 50 cm va refrige-
rata secondo una delle seguenti combinazioni di tempo e temperatura:
— 30 giorni a− 15 ºC,
— 20 giorni a− 25 ºC,— 12 giorni a− 29 ºC.
La temperatura nel locale frigorifero non deve superare il livello della
temperatura di inattivazione scelta. Essa va misurata termoelettricamente
con apparecchi tarati, va tenuta sotto registrazione costante e non deve
essere misurata direttamente nella corrente d'aria fredda. Gli apparecchi
di misura vanno tenuti sotto chiave. I diagrammi devono riportare i
numeri corrispondenti del registro delle ispezioni effettuate all'atto
dell'importazione delle carni, nonché il giorno e l'ora di inizio e di fine
della congelazione, e vanno conservati per un anno.
III.Metodo3
Controllo della temperatura al centro delle carni in pezzi
1. Le seguenti combinazioni di tempo e temperatura vanno rispettate
quando si controlla la temperatura al centro delle carni in pezzi, fatte
salve le disposizioni di cui ai paragrafi da 2 a 6:
— 106 ore a− 18 ºC,1977L0096 — IT — 05.06.2003 — 009.001 — 22
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— 82 ore a− 21 ºC,
— 63 ore a− 23,5 ºC,
— 48 ore a− 26 ºC,
— 35 ore a− 29 ºC,— 22 ore a− 32 ºC,— 8 ore a− 35 ºC,— 1/2 oraa− 37 ºC.
2. Le carni introdotte già congelate devono essere mantenute in tale stato.
3. Le partite di carni vanno tenute separate nel locale frigorifero e sotto
chiave.
4. Per ogni partita di carne vanno annotati il giorno e l'ora dell'introduzione
nel locale frigorifero.
5. Le apparecchiature tecniche e l'alimentazione energetica del locale frigo-
rifero devono essere tali da garantire che la temperatura di cui al
paragrafo 1 venga raggiunta molto rapidamente e manutenuta in tutte le
parti delle carni.
6. La temperatura va misurata termoelettricamente con apparecchi tarati e
tenuta sotto registrazione costante. La sonda del termometro deve essere
collocata al centro di un pezzo di carne calibrato di dimensioni non infe-
riori al pezzo di carne più spesso da congelare. Il pezzo di carne suddetto
va collocato nel punto meno favorevole del locale frigorifero, non vicino
all'impianto di raffreddamento né esposto direttamente alla corrente
d'aria fredda. Gli apparecchi di misura vanno tenuti sotto chiave. I
diagrammi devono riportare i numeri corrispondenti del registro delle
ispezioni effettuate all'atto dell'importazione delle carni, nonché il giorno
e l'ora di inizio e di fine della congelazione, e vanno conservati per un
anno.1977L0096 — IT — 05.06.2003 — 009.001 — 23
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ALLEGATO V
ISPEZIONEECONGELAZIONEDELLECARNIEQUINE
1.Ispezione
L'ispezione delle carni equine deve essere effettuata secondo uno dei metodi
di digestione menzionati nell'allegato I, fatte salve le modifiche di seguito
indicate.
— Si prelevano campioni di almeno 10 g dal muscolo linguale o dal masse-
tere. In assenza del muscolo linguale o del massetere, si preleva un
campione delle stesse dimensioni da un pilastro di diaframma nella zonadi transizione tra la parte muscolare e la parte tendinea. Dal muscolo
vanno tolti il tessuto connettivo e il grasso.
— Un campione di 5 g viene digerito ai fini dell'ispezione qualora si
applichi la digestione artificiale su un insieme di prelievi conformemente
all'allegato I, punti da III a VII. Per ogni digestione, il peso totale del
muscolo da esaminare non deve superare i 100 g. Per le metodiche III,
IV, V e VI di cui all'allegato I o 35 g per la metodica VII di cui all'alle-
gato I.
— In caso di esito positivo, si conserva un altro campione di 10 g per un
esame indipendente successivo.
2.Congelazionedellecarniequine
Per uccidere le trichine con la congelazione, le carni equine vengono sotto-
poste ad un trattamento col freddo secondo uno dei metodi indicati
nell'allegato IV.1977L0096 — IT — 05.06.2003 — 009.001 — 24