1992L0040 — IT — 01.05.2004 — 003.001 — 1
Trattandosidiunsemplice strumentodidocumentazione,essononimpegnalaresponsabilitàdelleistituzioni
►B DIRETTIVA92/40/CEEDELCONSIGLIO
del19maggio1992
cheistituiscedelle misurecomunitarie dilottacontrol'influenza aviaria
(GU L 167 del 22.6.1992, pag. 1)
Modificata da:
Gazzetta ufficiale
n. pag. data
►M1Regolamento (CE) n. 806/2003 del Consiglio del 14 aprile 2003 L 122 1 16.5.2003
Modificata da:
►A1Atto di adesione dell'Austria, della Finlandia e della Svezia C241 21 29.8.1994
(adattato dalla decisione 95/1/CE, Euratom, CECA del Consiglio) L 1 1 1.1.1995
►A2Atto relativo alle condizioni di adesione della Repubblica ceca, della
Repubblica di Estonia, della Repubblica di Cipro, della Repubblica diLettonia, della Repubblica di Lituania, della Repubblica di Ungheria,della Repubblica di Malta, della Repubblica di Polonia, della Repubblica
di Slovenia e della Repubblica slovacca e agli adattamenti dei trattati sui
quali si fonda l'Unione europeaL 236 33 23.9.2003
▼B
DIRETTIVA92/40/CEEDELCONSIGLIO
del19maggio1992
che istituisce delle misure comunitarie di lotta contro l'influenza
aviaria
IL CONSIGLIO DELLE COMUNITÀ EUROPEE,
visto il trattato che istituisce la Comunità economica europea, in parti-colare l'articolo 43,
vista la proposta della Commissione (
1),
visto il parere del Parlamento europeo (2),
visto il parere del Comitato economico e sociale (3),
considerando che i volatili sono compresi nell'allegato II del trattato;
che la commercializzazione dei volatili costituisce un'importante fontedi reddito per la popolazione agricola;
considerando la necessità di istituire, a livello comunitario, le misure di
lotta da prendere in caso di insorgenza dell'influenza aviaria in formaaltamente patogena, provocata da un virus dell'influenza con caratteri-stiche specifiche, in prosieguo denominata «influenza aviaria» alloscopo di garantire lo sviluppo del settore avicolo e contribuire alla
protezione sanitaria degli animali nella Comunità;
considerando che l'insorgere dell'influenza aviaria può rapidamente
assumere uncarattere di epizoozia provocan do mortalità e perturba-zioni tali da compromettere gravemente la redditività dell'allevamentodei volatili ingen erale;
considerando che è indispensabile agire non appena si sospetta la
presenza di tale malattia, in modo da prendere provvedimenti imme-
diati ed efficaci di lotta incaso di successiva con ferma;
considerando che occorre evitare la diffusione della malattia fin dalla
sua prima comparsa, sottoponendo ad attento controllo gli spostamentidegli animali e l'uso di prodotti che possano essere contaminati eprocedendo ad eventuale vaccinazione;
considerando che la diagnosi della malattia deve essere effettuata sotto
l'egida di laboratori responsabili, il cui operato deve essere coordinatoda un laboratorio comunitario di riferimento;
considerando che il mantenimento di un livello zoosanitario uniforme
nella Comunità presuppone l'adozione di misure comuni per la lotta
contro l'influenza aviaria;
considerando che, al momento della comparsa dell'influenza aviaria,
sono applicabili le disposizioni dell'articolo 3 della decisione 90/424/CEE del Consiglio, del 26 giugno 1990, relativa a talune spese nelsettore veterinario (
4);
considerando l'opportunità di affidare alla Commissione il compito di
prendere le necessarie misure di applicazione,
HA ADOTTATO LA PRESENTE DIRETTIVA:
Articolo 1
La presente direttiva definisce le misure comunitarie di lotta da appli-
care in caso di comparsa dell'influenza aviaria negli allevamenti divolatili da cortile, fatte salve le disposizioni che disciplinano gli scambiintracomunitari.1992L0040 — IT — 01.05.2004 — 003.001 — 2
(1) GU n. C 231 del 5. 9. 1991, pag. 4.
(2) GU n. C 326 del 16. 12. 1991, pag. 242.
(3) GU n. C 79 del 30. 3. 1992, pag. 8.
(4) GU n. L 224 del 18. 8. 1990, pag. 19. Decisione modificata dalla decisione
91/133/CEE (GU n. L 66 del 13. 3. 1991, pag. 18).
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La presente direttiva non si applica se la malattia viene individuata in
altri volatili: tuttavia, inquesto caso, lo Stato membro in teressatosegnala alla Commissione tutte le misure che ha adottato.
Articolo 2
Ai fini della presente direttiva si applicano, se del caso, le definizioni
di cui all'articolo 2 della direttiva 90/539/CEE del Consiglio, del 15
ottobre 1990, relativa alle norme di polizia sanitaria per gli scambiintracomunitari e le importazioni in provenienza dai paesi terzi dipollame e uova da cova (
1).
Inoltre si intende per:
a)volatile infetto qualsiasi volatile:
— in cui sia stata ufficialmente confermata la presenza dell'in-
fluenza aviaria ai sensi dell'allegato I, a seguito di un esameeffettuato da unlaboratorio ricon osciuto, oppure
— in cui siano stati constatati, se si tratta di un secondo focolaio o
di un focolaio successivo, sintomi clinici o lesioni post mortempropri dell'influenza aviaria;
b)volatile sospetto di infezione: qualsiasi volatile che presenti sintomi
clinici o lesioni post mortem tali da indurre ragionevolmente asospettare la presenza dell'influenza aviaria, o qualsiasi volatile incui sia stata accertata la presenza del virus A dell'influenza, sotto-tipo H5 o H7;
c)volatile sospetto di contaminazione: qualsiasi volatile che abbia
potuto essere esposto, direttamente o indirettamente, al virus dell'in-fluenza aviaria, oppure al virus A dell'influenza, sottotipo H5 o H7;
d)autorità competente: l'autorità competente ai sensi dell'articolo 2,
punto 6 della direttiva 90/425/CEE (
2);
e)veterinario ufficiale: il veterinario designato dall'autorità compe-
tente.
Articolo 3
Gli Stati membri si adoperano affinché il sospetto dell'esistenza di
influenza aviaria sia oggetto di notifica obbligatoria ed immediataall'autorità competente.
Articolo 4
1. Qualora in un'azienda siano presenti volatili sospetti di infezione
di influenza aviaria, gli Stati membri si adoperano affinché il veteri-
nario ufficiale applichi immediatamente i mezzi ufficiali diinvestigazione allo scopo di confermare o escludere la presenza dellamalattia e, in particolare, prelevare o far prelevare i campioni idoneiper gli esami di laboratorio.
2. Non appena è notificato un caso sospetto di infezione, l'autorità
competente pone l'azienda interessata sotto controllo ufficiale e dispone
inparticolare che:
a) venga compilato un registro di tutte le categorie di volatili presenti
nell'azienda specificando, per ciascuna di esse, quanti volatili sonomorti, quanti presentano sintomi clinici e quanti non presentanosintomi; il registro dovrà essere aggiornato per tener conto dei vola-tili nati e morti nel corso del periodo in cui si sospetta l'infezione; i
dati di detto registro dovranno essere tenuti aggiornati, essere
presentati su richiesta, e potranno essere controllati in occasione diciascuna visita;1992L0040 — IT — 01.05.2004 — 003.001 — 3
(1) GU n. L 303 del 31. 10. 1990, pag. 6. Direttiva modificata da ultimo dalla
direttiva 91/496/CEE (GU n. L 268 del 24. 9. 1991, pag. 56).
(2) GU n. L 224 del 18. 8. 1990, pag. 29. Direttiva modificata da ultimo dalla
direttiva 91/496/CEE (GU n. L 268 del 24. 9. 1991, pag. 56).
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b) tutti i volatili presenti nell'azienda siano tenuti nei locali in cui sono
allevati o confinati in altri locali in cui possano essere isolati pernon essere in contatto con altri volatili;
c) siano proibiti gli spostamenti di volatili provenienti o destinati all'a-
zienda;
d) sia subordinato all'autorizzazione dell'autorità competente:
— qualsiasi movimento di persone, di altri animali e di veicoli in
provenienza dall'azienda o a destinazione della stessa;
— qualsiasi movimento di carni o di carcasse di volatili, mangimi,
materiale, rifiuti, deiezioni, lettiere, letami o tutto ciò che èsuscettibile di trasmettere l'influenza aviaria;
e) dall'azienda non siano fatte uscire uova, tranne le uova inviate diret-
tamente in uno stabilimento riconosciuto per la fabbricazione e/o iltrattamento degli ovoprodotti conformemente all'articolo 6, punto 1della direttiva 89/437/CEE (
1), e che vengono trasportate conforme-
mente ad un'autorizzazione rilasciata dall'autorità competente.
Questa autorizzazione dovrà soddisfare i requisiti dell'allegato I;
f) venga fatto ricorso a mezzi appropriati di disinfezione alle entrate
ed alle uscite dei fabbricati in cui sono allevati i volatili, nonchédell'azienda stessa;
g) venga effettuata un'indagine epidemiologica conformemente all'arti-
colo 7.
3. Inattesa dell'en trata invigore delle misure ufficiali, previste al
paragrafo 2, il proprietario o il detentore di qualsiasi allevamento divolatili sospetti di infezione si adopera per garantire il rispetto delle
disposizioni di cui al paragrafo 2, ad esclusione della lettera g).
4. L'autorità competente può estendere qualsiasi misura di cui al
paragrafo 2 ad altre aziende qualora, tenuto conto dell'ubicazione edella configurazione dei fabbricati o di eventuali contatti con l'aziendanella quale si sospetta la presenza della malattia, vi siano fondatimotivi per sospettare un'eventuale contaminazione.
5. Le misure previste ai paragrafi 1 e 2 rimangono applicabili finché
la sospetta presenza dell'influenza aviaria sia esclusa dal veterinario
ufficiale.
Articolo 5
1. Non appena viene confermata ufficialmente la presenza dell'in-
fluenza aviaria in un'azienda, gli Stati membri si adoperano affinchél'autorità competente dispogna, oltre all'applicazione delle misurepreviste all'articolo 4, paragrafo 2:
a) che tutti i volatili presenti nell'azienda siano abbattuti in loco senza
indugio. I volatili morti o abbattuti e tutte le uova devono essere
distrutti. Queste operazioni devono essere eseguite in modo da
ridurre al minimo il rischio di diffusione della malattia;
b) che tutti i materiali o tutti i rifiuti, come il mangime, le lettiere ed il
letame, suscettibili di essere contaminati vengano distrutti o sotto-
posti a trattamento idoneo. Quest'ultimo, eseguito conformemente
alle istruzioni del veterinario ufficiale, deve garantire la distruzionedel virus dell'influenza aviaria eventualmente presente;
c) che, qualora i volatili siano stati macellati durante il periodo
presunto di incubazione della malattia, le carni da essi ottenute
vengano, nella misura del possibile, individuate e distrutte;
d) che le uova da cova deposte durante il presunto periodo di incuba-
zione e uscite dall'azienda siano individuate e distrutte; i pulcini già
nati da queste uova devono essere posti sotto sorveglianza ufficiale;
le uova da mensa deposte durante il presunto periodo di incubazionee uscite dall'azienda devono, nella misura del possibile, essere indi-1992L0040 — IT — 01.05.2004 — 003.001 — 4
(1) GU n. L 212 del 22. 7. 1989, pag. 87. Direttiva modificata dalla direttiva 89/
662/CEE (GU n. L 395 del 30. 12. 1989, pag. 13).
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viduate e distrutte, a meno che non siano state precedentemente
disinfettate in modo corretto;
e) che, ultimate le operazioni di cui alle lettere a) e b), i fabbricati
adibiti all'allevamento dei volatili e le loro vicinanze nonché i
veicoli usati per il trasporto e qualsiasi materiale suscettibile diessere contaminato vengano puliti e disinfettati conformementeall'articolo 11;
f) che nell'azienda non vengano reintrodotti volatili per almeno 21
giorni a decorrere dall'ultimazione delle operazioni di cui alla letterae);
g) che venaga effettuata un'indagine epidemiologica conformemente
all'articolo 7.
2. L'autorità competente può estendere le misure di cui al paragrafo
1 ad altre aziende vicine qualora la loro ubicazione, topografia o
contatto con l'azienda in cui è stata confermata la presenza della
malattia permettano di sospettare un'eventuale contaminazione.
Articolo 6
Nel caso di allevamenti costituiti da due o più branchi separati,
l'autorità competente può, sulla base dei criteri stabiliti dalla Commis-sione secondo la procedura prevista all'articolo 21, derogare ai requisitidell'articolo 5, paragrafo 1, per i branchi sani di un'azienda infetta, a
condizione che il veterinario ufficiale confermi che le operazioni ivi
effettuate lasciano i branchi completamente separati per quantoriguarda la stabulazione, il governo e l'alimentazione, in modo che ilvirus non può propagarsi da un branco all'altro.
Articolo 7
1. L'indagine epidemiologica verte sugli aspetti seguenti:
— la durata del periodo in cui l'influenza aviaria può essere stata
presente nell'azienda;
— l'origine probabile dell'influenza aviaria nell'azienda e l'identifica-
zione delle altre aziende i cui volatili possono essere stati infettatio contaminati dalla stessa fonte del virus;
— i movimenti di persone, volatili o altri animali, veicoli, uova, carni
e carcasse, nonché qualsiasi materiale o materia suscettibile di aver
veicolato il virus dell'influenza aviaria nell'azienda in questione o inprovenienza da essa.
2. Viene istituita un'unità di crisi per coordinare pienamente tutte le
misure necessarie all'eradicazione dell'influenza aviaria con la massimatempestività e per condurre l'indagine epidemiologica.
Le norme generali riguardanti le unità di crisi nazionali e l'unità di crisi
comunitaria sono adottate dal Consiglio che delibera a maggioranzaqualificata, su proposta della Commissione.
Articolo 8
1. Qualora il veterinario ufficiale abbia motivo per sospettare che i
volatili di un'azienda possano essere stati contaminati in conseguenzadi movimenti di persone, animali o veicoli o in qualsiasi altro modo,
l'azienda in questione è sottoposta a controllo ufficiale conformemente
al paragrafo 2.
2. Il controllo ufficiale ha lo scopo di individuare immediatamente
qualsiasi caso sospetto di influenza aviaria, di tenere un registro dei
volatili detenuti nell'azienda e di controllarne i movimenti nonché, oveoccorra, di prendere le misure elencate al paragrafo 3.
3. Quando un'azienda è sottoposta a controllo ufficiale conforme-
mente ai paragrafi 1 e 2, l'autorità competente vieta l'uscita di volatilidall'azienda tranne per il loro trasferimento diretto in un macello, sottocontrollo ufficiale, ai fini della loro immediata macellazione. L'autoriz-zazione è concessa previa esecuzione, da parte del veterinario ufficiale,di un esame clinico dei volatili dal quale risulti l'assenza dell'influenza1992L0040 — IT — 01.05.2004 — 003.001 — 5
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aviaria nell'azienda. Le restrizioni ai movimenti degli animali previste
nel presente articolo sono applicate per un periodo di almeno 21 giornia decorrere dall'ultima data in cui può essersi verificata la contamina-
zione; tali restrizioni devono comunque essere applicate per un periodo
di almeno 7 giorni.
4. Qualora ritenga che le condizioni lo permettono, l'autorità compe-
tente può limitare le misure di cui al presente articolo ad una parte
dell'azienda ed ai volatili che si trovano in tale parte, a condizione
che i volatili in questione siano stati completamente separati dalrestante quanto al ricovero, al governo e all'alimentazione e che le rela-tive operazioni siano state eseguite da addetti diversi.
Articolo 9
1. Non appena è ufficialmente confermata la presenza dell'influenza
aviaria gli Stati membri si adoperano affinché l'autorità competentedelimiti, attorno all'azienda infetta, una zona di protezione di almeno3 km di raggio, inserita in una zona di sorveglianza di almeno 10 kmdi raggio. Nel delimitare queste zone si tiene conto dei fattori d'ordine
geografico, amministrativo, ecologico ed epizooziologico connessi
all'influenza aviaria, nonché delle strutture di controllo.
2. Le misure applicate nella zona di protezione comprendono:
a) l'identificazione di tutte le aziende che detengono volatili all'interno
della zona;
b) visite periodiche di tutte le aziende che detengono volatili, l'esame
clinico dei volatili in questione, compresa, ove occorra, la raccoltadi campioni da sottoporre ad esami di laboratorio; va tenuto inoltreunregistro delle visite e dei risultati degli esami;
c) il sequestro di tutti i volatili nei locali in cui sono allevati o in qual-
siasi altro locale in cui possano essere tenuti isolati;
d) il ricorso a mezzi appropriati di disinfezione agli ingressi e alle
uscite delle aziende;
e) il controllo dei movimenti degli addetti alle manipolazione dei vola-
tili, delle carcasse di volatili e delle uova, nonché dei veicoli adibitial trasporto di volatili, di carcasse e di uova all'interno della zona; inlinea di massima il trasporto di volatili è vietato, fatta eccezione per
il transito sui grandi assi stradali o ferroviari;
f) il divieto di uscita dei volatili e di uova da cova dall'azienda in cui
si trovano, tranne qualora l'autorità competente abbia autorizzato il
trasporto:
i) di volatili destinati alla macellazione immediata in un macello
situato, di preferenza, nella zona infetta o, in casi di impossi-
bilità, in un macello designato dall'autorità competente al difuori della zona infetta. Le carni di tali volatili devono recareil marchio sanitario speciale previsto all'articolo 5, paragrafo 1della direttiva 91/494/CEE (
1);
ii) di pulcini di un giorno o di pollastre pronte per la deposizione
in un'azienda situata nella zona di sorveglianza, in cui non sonopresenti altri volatili. L'azienda destinataria deve essere sotto-posta al controllo ufficiale di cui all'articolo 8, paragrafo 2;
iii) di uova da cova in un incubatoio designato dall'autorità compe-
tente; prima della spedizione, le uova e gli imballaggi che le
contengono devono essere disinfettati. Gli spostamenti previsti
ai punti i), ii) e iii) devono essere effettuati direttamente e sottocontrollo ufficiale. Essi sono autorizzati soltanto previa esecu-zione, da parte del veterinario ufficiale, di una ispezionesanitaria dell'azienda. I mezzi di trasporto usati devono esserepuliti e disinfettati prima e dopo l'uso;
g) il divieto di spostare o spandere letame o lettiere usate di volatili
senza autorizzazione;1992L0040 — IT — 01.05.2004 — 003.001 — 6
(1) GU n. L 268 del 24. 9. 1991, pag. 35.
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h) il divieto di fiere, mercati, esposizioni e altri raduni di volatili o di
altri uccelli.
3. Le misure applicate nella zona di protezione restano in vigore per
almeno 21 giorni dopo l'esecuzione delle operazioni preliminari di
pulizia e di disinfezione dell'azienda infetta, conformemente all'articolo
11. La zona di protezione entra allora a far parte della zona di sorve-glianza.
4. Le misure applicate nella zona di sorveglianza comprendono:
a) l'identificazione di tutte le aziende che detengono volatili situate
nella zona;
b) il controllo dei movimenti dei volatili e di uova da cova nell'ambito
della zona;
c) il divieto di uscita dalla zona dei volatili per i primi 15 giorni,
tranne per il trasporto diretto dei volatili ad un macello situato fuoridalla zona di sorveglianza, designato dall'autorità competente. Le
carni di tali volatili devono recare il marchio sanitario speciale
previsto all'articolo 5 della direttiva 91/494/CEE;
d) il divieto di uscita dalla zona di sorveglianza di uova da cova,
tranne per il trasporto ad un incubatoio designato dall'autorità
competente. Prima della spedizione le uova e gli imballaggi che le
contengono devono essere disinfettati;
e) il divieto di uscita dalla zona di concime e lettiere usate di volatili;
f) il divieto di fiere, mercati, esposizioni o altri raduni di volatili o di
altri uccelli;
g) fatte salve le disposizioni di cui alle lettere a) e b), il divieto di
trasporto di volatili, fatta eccezione per il transito sui grandi assistradali o ferroviari.
5. Le misure applicate nella zona di sorveglianza restano in vigore
per almeno 30 giorni dopo l'esecuzione delle operazioni preliminari di
pulizia e di disinfezione dell'azienda infetta, conformemente all'articolo11.
6. Qualora le zone siano situate sul territorio di più Stati membri, le
autorità competenti degli Stati membri interessati collaborano alloscopo di delimitare le zone di cui al paragrafo 1. Tuttavia, se neces-
sario, la zona di protezione e la zona di sorveglianza sono delimitate
secondo la procedura di cui all'articolo 21.
Articolo 10
Gli Stati membri si adoperano affinché:
a) l'autorità competente stabilisca le procedure che le consentono di
seguire i movimenti di uova e di volatili;
b) il proprietario o il detentore di volatili debba fornire, a richiesta
dell'autorità competente, le informazioni relative ai volatili e alleuova che entrano o escono dall'azienda;
c) le persone addette al trasporto o alla commercializzazione di volatili
e di uova devono poter comunicare all'autorità competente le infor-mazioni relative agli spostamenti dei volatili e delle uova da essetrasportati o commercializzati e a fornire qualsiasi altro dettaglio in
materia.
Articolo 11
Gli Stati membri si adoperano affinché:
a) i disinfettanti da usare e le relative concentrazioni siano ufficial-
mente approvati dall'autorità competente;
b) le operazioni di pulizia e disinfezione siano effettuate sotto controllo
ufficiale, conformemente:
i) alle istruzioni impartite dal veterinario ufficiale,
ii) alla procedura per la pulizia e la disinfezione delle aziende
infette prevista all'allegato II.1992L0040 — IT — 01.05.2004 — 003.001 — 7
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Articolo 12
La raccolta dei campioni e gli esami di laboratorio volti ad accertare la
presenza del virus dell'influenza aviaria devono essere effettuati confor-
memente all'allegato III.
Articolo 13
Gli Stati membri si adoperano affinché l'autorità competente adotti
tutte le misure necessarie per informare le persone stabilite nelle zonedi protezione e di sorveglianza in merito alle restrizioni in vigore eprendano tutte le disposizioni necessarie ai fini di un'adeguata applica-zione delle suddette misure.
Articolo 14
1. Gli Stati membri si adoperano affinché in ogni Stato membro sia
designato:
a) un laboratorio nazionale munito delle attrezzature e del personale
specializzato necessari per poter procedere alla valutazione dellapatogenesi degli isolati del virus dell'influenza conformementeall'allegato III, capitolo 7, nonché all'identificazione dei virus Adell'influenza e dei sottotipi H5 o H7;
b) un laboratorio nazionale incaricato del controllo dei reagenti da
usare nei laboratori regionali di diagnosi;
c) un istituto o laboratorio nazionale in grado di controllare che i
vaccini autorizzati siano conformi alle specificazioni stabilitedall'autorizzazione di immissione sul mercato.
2. I laboratori nazionali di cui all'allegato IV sono responsabili del
coordinamento delle norme e dei metodi di diagnosi, per l'uso deireagenti e per la prova dei vaccini.
3. I laboratori nazionali di cui all'allegato IV sono responsabili del
coordinamento delle norme e dei metodi di diagnosi stabiliti da ciascunlaboratorio di diagnosi dell'influenza aviaria all'interno dello Statomembro. A questo scopo essi:
a) possono fornire i reagenti diagnostici ai laboratori regionali;
b) controllano la qualità di tutti i reagenti diagnostici usati in detto
Stato membro;
c) organizzano periodicamente prove comparative;
d) conservano isolati del virus dell'influenza aviaria, provenienti da
casi confermati in detto Stato membro;
e) garantiscono la conferma di risultati positivi ottenuti nei laboratori
diagnostici regionali.
4. I laboratori nazionali indicati nell'allegato IV cooperano con il
laboratorio comunitario di riferimento previsto all'articolo 15.
Articolo 15
Il laboratorio comunitario di riferimento per l'influenza aviaria è indi-
cato nell'allegato V. Le competenze ed i compiti di questo laboratoriosono quelli che figurano nell'allegato, fatte salve le disposizioni della
decisione 90/424/CEE, in particolare l'articolo 28.
Articolo 16
La vaccinazione contro l'influenza aviaria mediante vaccini autorizzati
dall'autorità competente può essere praticata soltanto per integrare lemisure di lotta prese al momento della comparsa della malattia econformemente alle disposizioni seguenti:
a) La decisione di introdurre la vaccinazione per integrare le misure di
lotta viene presa, in collaborazione con lo Stato membro interessato,
dalla Commissione che delibera secondo la procedura prevista all'ar-ticolo 21. Tale decisione tiene conto dei criteri seguenti:
— la concentrazione di volatili nella zona colpita,1992L0040 — IT — 01.05.2004 — 003.001 — 8
▼B
— le caratteristiche e la composizione di ciascun vaccino utilizzato,
— le modalità di controllo della distribuzione, dell'ammasso e
dell'impiego dei vaccini,
— le specie e le categorie di volatili che possono o devono essere
sottoposti a vaccinazione,
— le zone in cui può o deve essere eseguita la vaccinazione.
Tuttavia inderoga al primo comma, lo Stato membro in teressato
può, previa notifica alla Commissione, prendere la decisione dieffettuare la vaccinazione d'emergenza intorno ad un focolaio,purché non siano pregiudicati gli interessi fondamentali della
Comunità. questa decisione sarà immediatamente riesaminata
nell'ambito del comitato veterinario permanente, secondo la proce-dura prevista all'articolo 21.
b) Qualora uno Stato membro venga autorizzato, a norma della lettera
a), ad effettuare la vaccinazione d'emergenza in una parte delimitatadel proprio territorio, tale misura non modifica la qualifica del terri-torio restante purché le misure di immobilizzazione degli animali
vaccinati restino in vigore per un periodo da determinare secondo
la procedura prevista all'articolo 21.
Articolo 17
1. Ciascuno Stato membro redige un piano d'allarme nel quale
vengono specificate le misure nazionali da applicare in caso di
comparsa dell'influenza aviaria.
Il piano deve consentire l'accesso alle installazioni, alle attrezzature, al
personale e a tutti gli altri materiali idonei necessari per una rapida edefficace eradicazione del focolaio.
2. I criteri da applicare per la redazione dei piani figurano nell'alle-
gato VI.
3. I piani redatti in conformità con i criteri indicati all'allegato VI
vengono presentati alla Commissione entro 6 mesi dalla messa in appli-cazione della presente direttiva.
4. La Commissione esamina i piani allo scopo di determinare se essi
consentano di raggiungere l'obiettivo perseguito e propone allo Stato
membro in questione qualsiasi emendamento necessario, in particolare
per garantirne la compatibilità con quelli degli altri Stati membri.
La Commissione approva i piani, se necessario modificati, secondo la
procedura prevista all'articolo 21.
I piani possono essere successivamente modificati o completati secondo
la stessa procedura, in modo da tener conto dell'evoluzione della situa-zione.
Articolo 18
1. Nella misura in cui ciò sia necessario all'applicazione uniforme
della presente direttiva, ed in collaborazione con le autorità competenti,gli esperti della Commissione possono effettuare controlli in loco. A talfine, essi possono verificare, controllando una percentuale rappresenta-
tiva di stabilimenti se le autorità competenti controllano il rispetto della
presente direttiva da parte di detti stabilimenti. La Commissioneinforma gli Stati membri del risultato dei controlli effettuati.
Lo Stato membro sul cui territorio viene effettuato un controllo presta
tutta l'assistenza necessaria affinché gli esperti possano espletare le loro
mansioni.
Le modalità de applicazione del presente articolo sono adottate secondo
la procedura prevista all'articolo 21.
Articolo 19
Le condizioni di partecipazione finanziaria della Comunità alle azioni
connesse all'attuazione dalla presente direttiva sono definite nella deci-sione 90/424/CEE.1992L0040 — IT — 01.05.2004 — 003.001 — 9
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Articolo 20
Gli allegati sono modificati, se necessario, dal Consiglio che delibera a
maggioranza qualificata su proposta della Commissione, in particolare
per tener conto dell'evoluzione delle ricerche e delle procedure di
diagnosi.
Articolo 21
1. La Commissione è assistita dal comitato permanente per la catena
alimentare e la salute degli animali, istituito dall'articolo 58 del regola-mento (CE) n. 178/2002 (
1).
2. Nei casi in cui è fatto riferimento al presente articolo, si appli-
cano gli articoli 5 e 7 della decisione 1999/468/CE (2).
Il periodo di cui all'articolo 5, paragrafo 6, della decisione 1999/468/
CE è fissato a tre mesi.
3. Il comitato adotta il proprio regolamento interno.
Articolo 22
Gli Stati membri mettono in vigore le disposizioni legislative, regola-
mentari e amministrative necessarie per conformarsi alla presentedirettiva anteriormente al 1
ogennaio 1993. Essi ne informano immedia-
tamente la Commissione.
Quando gli Stati membri adottano tali disposizioni, queste contengono
un riferimento alla presente direttiva o sono corredate da un siffattoriferimento all'atto della pubblicazione ufficiale. Le modalità di tale
riferimento sono decise dagli Stati membri.
Articolo 23
Gli Stati membri sono destinatari della presente direttiva.1992L0040 — IT — 01.05.2004 — 003.001 — 10
(1) GU L 31 dell'1.2.2002, pag. 1.
(2) GU L 184 del 17.7.1999, pag. 23.▼M1
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ALLEGATO I
AUTORIZZAZIONEAFARUSCIREUOVADALL'AZIENDACONFOR-
MEMENTE ALL'ARTICOLO 4, PARAGRAFO 2, LETTERA e) DELLA
PRESENTEDIRETTIVA
L'autorizzazione dell'autorità competente ai fini del trasporto delle uova da
un'azienda sospetta soggetta alle disposizioni dell'articolo 4, paragrafo 2, lettera
e), verso uno stabilimento riconosciuto per la fabbricazione ed il trattamento di
ovoprodotti conformemente all'articolo 6, paragrafo 1 della direttiva 89/437/
CEE, di seguito denominato «stabilimento designato», dovrà rispettare le condi-
zioni seguenti:
1) per poter lasciare l'azienda sospetta le uova dovranno:
a) soddisfare i requisiti dell'allegato, capitolo IV della direttiva 89/437/CEE;
b) essere inviate direttamente dall'azienda sospetta allo stabilimento desi-
gnato; ogni spedizione dovrà essere sigillata prima della partenza dal
veterinario ufficiale dell'azienda sospetta e dovrà restare sigillato per tutta
la durata del trasporto fino allo stabilimento designato;
2) il veterinario ufficiale dell'azienda sospetta informa l'autorità competente
dello stabilimento designato dell'intenzione di inviargli delle uova;
3) l'autorità competente responsabile dello stabilimento designato si assicurerà
che:
a) le uova di cui al punto 1, lettera b) siano mantenute isolate dalle altre
uova dal momento del loro arrivo fino a quando non siano trattate;
b) i gusci di tali uova siano considerati materiale ad alto rischio conforme-
mente all'articolo 2, paragrafo 2 della direttiva 90/667/CEE (1) e siano
trattati conformemente ai requisiti del capitolo II della direttiva summen-
zionata;
c) il materiale d'imballaggio, i veicoli utilizzati per il trasporto delle uova di
cui al punto 1, lettera b), nonché tutti i luoghi con cui le uova sono
entrate in contatto siano puliti e disinfettati in modo tale che qualsiasi
virus dell'influenza aviaria sia distrutto;
d) il veterinario ufficiale dell'azienda sospetta sia informato di qualsiasi
spedizione di uova trattate.1992L0040 — IT — 01.05.2004 — 003.001 — 11
(1) GU n. L 363 del 27. 12. 1990, pag. 51.
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ALLEGATO II
PROCEDURA PER LA PULIZIA E LA DISINFEZIONE DI UNA
AZIENDAINFETTA
I.Pulizia edisinfezionepreliminari
a) Non appena le carcasse dei volatili siano state rimosse per essere
distrutte, quelle parti dei locali incui son o allevati i volatili e qualsiasi
parte di edifici, cortili, ecc. contaminati durante l'abbattimento o l'ispe-
zione post mortem devono essere irrorati con disinfettanti approvati
conformemente all'articolo 11 della presente direttiva.
b) Qualsiasi tessuto di volatili e uova che avrebbero potuto contaminare gli
edifici, i cortili, gli utensili ecc. deve essere accuratamente recuperato ed
eliminato con le carcasse.
c) Il disinfettante utilizzato deve rimanere sulla superficie trattata per
almeno 24 ore.
II.Pulizia edisinfezionefinale
a) Il grasso ed il sudiciume devono essere eliminati da tutte le superfici con
l'applicazione di un prodotto sgrassante e successivamente lavate con
acqua.
b) Una volta lavate con acqua come indicato alla lettera a), le superfici di
cui sopra devono essere irrorate di nuovo con un disinfettante.
c) Dopo sette giorni i locali devono essere trattati con un prodotto sgras-
sante, sciacquati con acqua fredda, irrorati con un disinfettante e
nuovamente sciacquati con acqua.
d) Il concime e le lettiere usate devono essere trattati con un metodo atto ad
uccidere il virus. Questo metodo deve comprendere una delle procedure
seguenti:
i) essere bruciati o sottoposti a vapore ad una temperatura di 70º C;
ii) essere seppelliti ad una profondità tale da impedirne l'accesso ai
parassiti ed agli uccelli selvatici;
iii) essere accumulati ed inumiditi (se necessario per facilitare la fermen-
tazione), coperti per mantenere il calore in modo tale che
raggiungano una temperatura di 20º C, e rimanere coperti per 42
giorni in maniera da impedirne l'accesso ai parassiti ed agli uccelli
selvatici.1992L0040 — IT — 01.05.2004 — 003.001 — 12
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ALLEGATO III
METODI DIAGNOSTICI PER LA CONFERMA E LA DIAGNOSI
DIFFERENZIALEDELL'INFLUENZAAVIARIA
I metodi per isolare e individuare i virus dell'influenza aviaria, descritti qui di
seguito, devono essere considerati come orientamenti e criteri minimi da appli-
care nella diagnosi della malattia.
Ai fini dei metodi diagnostici per la conferma e la diagnosi differenziale dell'in-
fluenza aviaria si applica la definizione seguente:
per «influenza aviaria», si intende un'infezione dei volatili causata da qualsiasi
virus A dell'influenza avente un indice di patogenicità intravenosa superiore a
1,2 nei pulcini di sei settimane, ovvero qualsiasi infezione provocata da virus
A dell'influenza, sottotipo H5 o H7, per il quale il sequenziamento dei nucleotidi
abbia rilevato la presenza di molteplici amminoacidi basici nel sito di clivaggio
dell'emoagglutinina.
CAPITOLO 1
Campionatureetrattamentodeicampioni
1.Campioni
Frammenti prelevati mediante tampone nell'intestino (o feci) e nella trachea
di volatili malati; feci o contenuti degli organi (intestino, tessuti cerebrali,
trachea, polmoni, fegato, milza e altri) dell'animale malato, prelevati da vola-
tili morti di recente.
2.Trattamento dei campioni
Gli organi e i tessuti menzionati al paragrafo 1 sopra elencati possono essere
trattati insieme, salvo per quanto riguarda le feci, per le quali è essenziale un
trattamento separato. I materiali prelevati devono essere immersi completa-
mente in un quantitativo sufficiente di antibiotico. I campioni di feci e gli
organi devono essere omogeneizzati (in un miscelatore chiuso o in un
mortaio conpestello e sabbia sterile) inunmezzo an tibiotico e portati in
sospensione in tale mezzo al 10—20 % p/v. Le sospensioni devono essere
lasciate riposare per circa due ore a temperatura ambiente (o per un intervallo
superiore a 4 ºC) e successivamente chiarificati mediante centrifugazione (ad
esempio da 800 a 1 000 % g per 10 minuti).
3.Mezzo antibiotico
Numerosi laboratori hanno utilizzato con successo mezzi antibiotici di varia
composizione e i laboratori nazionali potranno essere consultati in proposito
nei rispettivi paesi. Per i campioni di feci occorre una elevata concentrazione
di antibiotici; una miscela tipica è la seguente: 10000 unità/ml di penicillina,10 mg/ml di streptomicina, 0,25 mg/ml di gentamicina e 5 000 unità/ml di
micostatina in una soluzione salina tampone di fosfato. Queste dosi possono
essere ridotte fino a 5 volte per i tessuti e i prelievi di trachea. Per l'accerta-
mento della Clamidia, si possono aggiungere 50 mg/ml di ossitetraciclina.
Nella preparazione del mezzo antibiotico, occorre assolutamente controllare
il pH dopo l'aggiunta degli antibiotici e portarlo ad un valore compreso tra
7,0 e 7,4.
CAPITOLO 2
Isolamentodelvirus
Isolamento del virus nelle uova embrionale di galline
Inoculare 0,1—0,2 ml del liquido sopranatante chiarificato nella cavità allan-
tioca di almeno 4 uova embrionale di gallina previamente sottoposto a
incubazione per 8—10 giorni. Idealmente si dovrebbero utilizzare uova prove-
nienti da un branco indenne da organismi patogeni specifici, ma, in caso di
impossibilità, si possono utilizzare uova provenienti da un branco in cui sia
comprovata l'assenza di anticorpi dell'influenza aviaria. Le uova inoculate sono
mantenute alla temperatura di 37 ºC ed esaminate ogni giorno in controluce. Leuova in cui si constata che l'embrione è morto o è morente, nonché tutte le uova
restanti 6 giorni dopo l'inoculazione, vengono refrigerate a 4 ºC e il liquido
allantoico/amniotico sottoposto alla prova dell'attività emoagglutinante. Qualora
non si constati emoagglutinazione, il procedimento sopra descritto deve essere
ripetuto inoculando nelle uova liquido allantoico/amniotico non diluito.1992L0040 — IT — 01.05.2004 — 003.001 — 13
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Quando viene constatata emoagglutinazione, la presenza di batteri deve essere
esclusa mediante coltura. In caso di presenza di batteri, far passare i liquidi
attraverso un filtro a membrana di 450 nm, quindi aggiungere altri antibiotici e
procedere nuovamente, come indicato sopra, alla inoculazione in uova embrio-
nate.
CAPITOLO 3
Diagnosidifferenziale
1.Differenziazione preliminare
Data l'importanza di porre in atto al più presto possibile provvedimenti volti
a limitare la propagazione del virus, ciascun laboratorio regionale dovrebbe
essere ingrado di iden tificare qualsiasi virus isolato che provoca emoagglu-
tinazione, come il virus dell'influenza di sottotipo H5 o H7, oltre al virus
della malattia di Newcastle. Occorre pertanto utilizzare i liquidi emoaggluti-
nanti eseguendo una prova di inibizione dell'emoagglutinazione come
descritto ai capitoli 5 e 6. Una inibizione positiva, cioè pari a 24ou più, con
l'antisiero policionale specifico dei sottotipi H5 o H7 dell'influenza A ed
avente un titolo noto, pari almeno a 29, potrà servire per una identificazione
preliminare sulla cui base istituire misure provvisorie di contenimento.
2.Identificazione di conferma
Dal momento che esistono 13 sottotipi di emoagglutinina e 9 sottotipi di
neuramnidasi del virus dell'influenza, con varianti all'interno di ciascuno di
essi, non è pratico né economicamente fattibile, per i singoli laboratori nazio-
nali, conservare antisieri che consentano di effettuare una caratterizzazione
antigenica completa degli isolati d'influenza. Nondimeno, ciascun laboratorio
nazionale è tenuto a:
i) confermare che l'isolato è un virus A dell'influenza, mediante prova di
doppia immunodiffusione atta a rivelare l'antigene del gruppo, secondo
il procedimento indicato al capitolo 9 (si possono impiegare altresì,secondo le preferenze del laboratorio nazionale, le tecniche di immuno-
fluorescenza o ELISA);
ii) determinare se l'isolato appartiene al sottotipo H5 o H7;
iii) eseguire una prova dell'indice di patogenicità intravenosa su pulcini di
sei settimane, secondo il procedimento indicato al capitolo 7, indici di
patogenicità intravenosa superiori a 1,2 denotano la presenza di virus e
richiedono quindi la gamma completa delle misure profilattiche (è utile
che i laboratori nazionali eseguano prove anche per determinare l'attitu-
dine di un isolato a produrre placche nelle colture di cellule, come
specificato al capitolo 8).
I laboratori nazionali devono trasmettere immediatamente al laboratorio
comunitario di riferimento, per una caratterizzazione completa, tutti gli isolati
di influenza aviaria e di virus H5 e H7.
3.Altre prove di individuazione del tipo e delle caratteristiche degli isolati
Il laboratorio comunitario di riferimento dovrebbe ricevere tutti i virus
emoagglutinanti dei laboratori nazionali, da sottoporre ad ulteriori esami anti-
genici e genetici, ai fini di una maggiore comprensione dell'epidemiologia
della o delle malattie nella Comunità, conformemente alle competenze ed ai
compiti del laboratorio comunitario di riferimento.
Oltre a queste funzioni, il laboratorio comunitario di riferimento effettua una
tipizzazione antigenica completa di tutti i virus dell'influenza ricevuti. Per i
virus H5 e H7 con indici di patogenicità intravenosa non superiori a 1,2, si
dovrebbe effettuare altresì un sequenziamento dei nucleotidi del gene dell'e-
moagglutinina per determinare la presenza di amminoacidi basici multipli nel
sito di clivaggio della proteina dell'emoagglutinina. Virus dotati di amminoa-
cidi basici multipli nel sito del clivaggio, anche se presentano deboli indici di
patogenicità, richiedono la piena applicazione delle misure di lotta contro
l'influenza aviaria.
CAPITOLO 4
Prove sierologiche per individuare gli anticorpi dei virus dell'influenza
aviaria
1. Nei programmi di eradicazione in cui è noto il sottotipo H dei virus, oppure
se si usa come antigene il virus omologo, il monitoraggio sierologico per la
rivelazione dell'infezione può essere effettuato mediante le prove d'inibizione
dell'emoagglutinazione secondo il procedimento indicato ai capitoli 5 e 6.1992L0040 — IT — 01.05.2004 — 003.001 — 14
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Se il sottotipo di emoagglutinina non è noto, l'infezione da virus A dell'in-
fluenza può essere dimostrata mediante la rivelazione di anticorpi contro gli
antigeni specifici del gruppo.
A questo scopo si può ricorrere alla prova di doppia immunodiffusione
(descritta al capitolo 9) oppure alla prova ELISA (che presenta peraltro il
problema di essere specifica all'ospite, in quanto dipende dalla rivelazione
delle immunoglobuline dell'ospite). La prova di doppia immunodiffusione
dà raramente risultati positivi negli uccelli acquatici, tranne quando è noto il
sottotipo; si può quindi utilizzare su questo tipo di volatili soltanto per la
ricerca di anticorpi dei sottotipi H5 e H7.
2. a)Campioni
Prelevare campioni di sangue da tutti i volatili, se il branco è costituito da
meno di 20 capi, e da 20 esemplari in caso di branchi più numerosi (si ha,
in tal modo, una probabilità superiore al 99 % di individuare almeno un
caso sieropositivo se almeno il 25 % degli individui del branco è positivo,
indipendentemente dalle dimensioni del branco stesso). Lasciar coagulare
il sangue e asportare il siero da sottoporre alla prova.
b)Ricerca degli anticorpi
Verificare la capacità di singoli campioni di siero di inibire l'antigene
emoagglutinante del virus dell'influenza, mediante prove standard di inibi-
zione dell'emoagglutinazione come indicato nel capitolo 6.
Un aspetto discusso è se nella prova di inibizione dell'emoagglutinante
occorra usare 4 o 8 unità di emoagglutinina. Entrambe le ipotesi sembrano
valide; la scelta deve essere quindi lasciata a discrezione dei laboratori
nazionali.
Tuttavia l'antigene usato incide sul livello al quale un siero è considerato
positivo: usando 4 unità di emoagglutinina, un siero è considerato positivo
se rivela untitolo uguale o superiore a 24; usando 8 unità di emoaggluti-
nina, un siero è considerato positivo se rivela un titolo uguale o superiore
a23.
CAPITOLO 5
Provadiemoagglutinazione(HA)
Reagenti
1. Soluzione salina isotonica tamponata con fosfato (SPT) (0,05M) al pH
compreso tra 7,0 e 7,4.
2. Prelevare globuli rossi da almeno 3 volatili esenti da organismi patogeni
specifici (incaso di impossibilità, il san gue può essere prelevato da volatili
che sono regolarmente sottoposti a controllo e che non presentano anticorpi
dell'influenza aviaria), raggrupparli e aggiungerli ad un volume uguale di
soluzione di Alsever. Prima dell'uso, i globuli rossi devono essere lavati 3
volte in soluzione salina tamponata con fosfato. Per l'esecuzione della prova
si raccomanda una sospensione all'1 % (globuli confezionati v/v) in soluzione
salina tamponata.
3. Il laboratorio comunitario di riferimento fornirà o raccomanderà, come anti-
gene standard, i virus H5 e H7 a bassa virulenza.
Procedimento
1. Porre 0,025 ml di soluzione in ciascuno dei pozzetti di una piastra di micro-
titolazione in materiale plastico (usare pozzetti a V).
2. Versare 0,025 ml di sospensione del virus (ad esempio liquido allantoico) nel
primo pozzetto.
3. Usare un diluente da microtitolazione per raddoppiare la diluzione (da 1/2 a
1/4096) di virus nella piastra.
4. Aggiungere altri 0,025 ml di soluzione salina in ogni pozzetto.
5. Aggiungere 0,025 ml di globuli rossi all'1 % in ogni pozzetto.
6. Mescolare agitando leggermente e porre a riposo alla temperatura di 4 ºC.7. La lettura viene effettuata 30—40 minuti dopo, una volta stabilizzati i globuli
rossi di controllo. La lettura si effettua inclinando la piastra ed osservando la
presenza o l'assenza di globuli rossi raggruppati a forma di goccia. Il flusso
nei pozzetti che non presentano emoagglutinazione deve essere identico a
quello constatato presso i globuli rossi di controllo esenti dal virus.
8. Il titolo di emoagglutinazione è costituito dalla diluizione più elevata che
provoca agglutinazione dei globuli rossi. Tale diluizione può essere conside-1992L0040 — IT — 01.05.2004 — 003.001 — 15
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rata come contenente una unità emoagglutinante (HAU). Un metodo più
accurato per la determinazione del titolo di emoagglutinazione consiste
nell'effettuare prove di agglutinazione sul virus in una serie di diluizioni
iniziali progressive, ad esempio 1/3, 1/4, 1/5, 1/6, ecc. Si raccomanda questa
procedura per una preparazione accurata dell'antigene per le prove di inibi-
zione dell'emoagglutinazione (capitolo 6).
CAPITOLO 6
Provadiinibizionedell'emoagglutinazione
Reagenti
1. Soluzione salina tamponata con fosfato (SPT).
2. Liquido allantoico contenente il virus, diluito nella soluzione salina in modo
da avere un contenuto di 4 o 8 unità di emoagglutinazione per 0,025 ml.
3. Globuli rossi di pollame: 1 %.
4. Siero di pollame negativo di controllo.5. Siero positivo di controllo.
Procedimento
1. Versare 0,025 ml di soluzione salina tamponata con fosfato in tutti i
pozzetti di una piastra di microtitolazione in materiale plastico (i pozzetti
devono avere una forma a V).
2. Versare 0,025 ml di siero nel primo pozzetto della piastra.
3. Usare un diluente da microtitolazione per ottenere una diluizione di 1/2 di
siero sulla piastra.
4. Aggiungere 0,025 ml di liquido allantoico diluito contenente 4o8u ni t àd i
emoagglutinazione.
5. Mescolare picchiettando leggermente e conservare alla temperatura di 4 ºC
per almeno 60 minuti o a temperatura ambiente per almeno 30 minuti.
6. Aggiungere 0,025 ml di globuli rossi all'1 % in tutti i pozzetti.
7. Mescolare picchiettando leggermente e porre a riposo alla temperatura di
4 ºC.
8. La lettura delle piastre è effettuata dopo 30—40 minuti, dopo che i globuli
rossi di controllo si sono stabilizzati. La lettura viene effettuata inclinando
la piastra e osservando se nel flusso del liquido vi è o meno formazione di
gocce in misura uguale a quelle dei pozzetti di controllo che contengono
unicamente globuli rossi (0,025 ml) e soluzione salina (0,05 ml).
9. Il titolo di inibizione dell'emoagglutinazione è costituito dalla diluizione
massima di antisiero che comporta una inibizione totale di 4 o 8 unità di
virus (ciascuna prova dovrebbe comprendere una titolazione di emoaggluti-
nazione a scopo di conferma della presenza delle unità di agglutinazione
richieste).
10. I risultati sono validi se si ottiene un titolo inferiore a 2
3per 4 unità di
agglutinazione o 22per 8 unità di agglutinazione con il siero negativo di
controllo ed un titolo inferiore o uguale a 1 con una diluizione del siero di
controllo positivo del titolo noto.
CAPITOLO 7
Provadell'indice dipatogenicitàendovenosa(IVPI)
1. Diluire da 10−1, in una soluzione isotonica salina sterile, liquido allantoico
infetto prelevato dall'ultimo livello di passaggio disponibile, preferibilmente
dall'isolamento iniziale senza selezione.
2. Iniettare per via endovenosa 0,1 ml di virus diluito in dieci pulcini di sei
settimane (deve trattarsi di animali esenti dallo specifico patogeno).
3. Esaminare i pulcini per 10 giorni, ad intervalli di 24 ore.
4. Classificare ognuno dei pulcini ad ogni osservazione nel modo seguente: 0 =
normale; 1 = malato; 2 = gravemente malato; 3 = morto.
5. L'indice è calcolato come nell'esempio che segue:1992L0040 — IT — 01.05.2004 — 003.001 — 16
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Sintomi cliniciGiorni successivi all'inoculazione
Totale punteggio
123456789 1 0
normale 10 2 0 0 0 0 0 0 0 0 12 × 0 = 0
malato 0 4 2 0 0 0 0 0 0 0 6 × 1 = 6
gravemente
malato (*)0222 000000 6 × 2 = 1 2
morto 0 2 6 8 10 10 10 10 10 10 76 × 3 = 228
Totale = 246
L'indice è costituito dal punteggio medio per pulcino per ogni osservazione ossia246
100¼2;46:
(*) Deve trattarsi di un giudizio clinico soggettivo; in questo caso, tuttavia, i volatili presentano generalmente
uno o più dei sintomi seguenti: complicazioni respiratorie, depressione, diarrea, cianosi dell'epidermide o
del bargiglio, edema facciale o cranico, sintomi neuropatologici.
CAPITOLO 8
Valutazionedellacapacitàdiformazionediplacca
1. Il procedimento migliore consiste nell'utilizzare tutta una gamma di diluizioni
di virus per essere certi di disporre sulla piastra dei numeri ottimali di
placche. Dieci diluizioni fino a 10−7in soluzione salina fosfatata dovrebbero
essere sufficienti.
2. Monostrati confluenti di cellule di embrione di volatile o una linea cellulare
adeguata (ad esempio rene bovino Madin-Darby) sono preparati e disposti in
scatole di Petri aventi 5 cm di diametro.
3. Aggiungere in due scatole di Petri 0,2 ml di ciascuna delle diluizioni di virus
e lasciar assorbire il virus per 30 minuti.
4. Lavare 3 volte con la soluzione salina le cellule infette, indi ricoprirle con il
mezzo pertinente, contenente l'1 % p/v di agar e 0,01 mg/ml di tripsina,
oppure non contenente tripsina; è importante non aggiungere siero al mezzo
di copertura.
5. Dopo una incubazione a 37 ºC per 72 ore, le placche dovrebbero avere una
dimensione sufficiente. Per una migliore osservazione delle placche, aspor-
tare lo strato di agar di copertura e colorare il monostrato cellulare con
cristalvioletto (0,5 % p/v) inmetan olo al 25 % v/v.
6. Tutti i virus dovrebbero fornire placche evidenti, se incubati alla presenza di
tripsina nello strato di copertura. Se nel mezzo di copertura non vi è tripsina,
soltanto i virus virulenti per i volatili producono placche.
CAPITOLO 9
Immunodiffusionedoppia
Il metodo raccomandato per rivelare la presenza del virus A dell'influenza
consiste nell'individuare gli antigeni del nucleocapside o della matrice, che
sono cumuni a tutti i virus A dell'influenza. A ciò si perviene generalmente
mediante le prove di immunodiffusione doppia, utilizzando preparazioni di virus
concentrati o estratti di membrana corio-allantoidea infetta.
Idonei preparati di virus concentrati si possono ottenere semplicemente centrifu-
gando ad alta velocità liquido allantoico infetto e sottoponendolo ad un
trattamento a base di detergente lauroilsarcosinato di sodio, in modo che dal
frazionamento del virus siano liberati gli antigeni che si trovano all'interno del
nucleocapside e della matrice. Si può usare anche un precipitante acido, aggiun-
gendo al liquido allantoico HCL 1N, per ottenere un pH finale compreso tra 3,5
e 4,0, refrigerando per circa un'ora a 0 ºC e centrifugando a bassa velocità
(1 000 g) per 10 minuti.
Il liquido supernatante può essere eliminato ed il precipitato contenente il virus
può essere rimesso in sospensione in un volume minimo di tampone glicina-
sarcosile (lauroilsarcosinato di sodio all'1 % tamponato con glicina 0,5 M, fino
ad ottenere un pH di 9,0). Queste preparazioni possiedono antigeni sia del
nucleocapside che della matrice.
Beard (1970) ha descritto la preparazione di antigeni ricchi di nucleocapside
ottenuti dalle membrane corio-allantoidee prelevate da uova infette. Il procedi-1992L0040 — IT — 01.05.2004 — 003.001 — 17
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mento si svolge come segue: si estraggono le membrane corio-allantoidee dalle
uova infette con emoagglutinina positiva; si frantumano od omogeneizzano le
membrane; si congela e sgela tre volte, centrifugando quindi per 10 minuti a
1 000 g; si elimina il deposito formatosi e si tratta il liquido supernatante con
formalina allo 0,1 % per utilizzarlo come antigene.
Entrambi questi antigeni possono essere utilizzati per la prova di immunodiffu-
sione doppia, con 1 % di agarosio o di agar o gel contenenti cloruro di sodio
all'8 % portato a molarità di 0,1 M contampon e fosfato a pH 7,2. Il virus A
dell'influenza è confermato dalle linee di precipitina formate dall'antigene di
prova e dall'antigene positivo noto, prendendo come termine di riferimento un
antisiero positivo noto che, coalescendo, producono una linea d'identità.1992L0040 — IT — 01.05.2004 — 003.001 — 18
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ALLEGATO IV
ELENCODEILABORATORINAZIONALIPERL'INFLUENZAAVIARIA
Belgio Institut National de Recherches Vétérinaires
Groeselenberg 99, B-1180 Bruxelles
Danimarca National Veterinary Laboratory, Poultry Disease Division
Hangøvej 2, DK-8200 Aarhus N
Germania Institut für Kleintierzucht der Bundesforschungsanstalt für
Landwirtschaft
Braunschweig-Völkenrode, Postfach 280, D-3100 Celle
Francia Centre National d'Etudes Vétérinaires et Alimentaires — Labo-
ratoire Central de Recherches Agricoles et Porcines
B.P. 53, F-22440 Ploufragan
Grecia Institut des Maladies infectieuses et parasitaires
66, rue du 26 octobre, 54627 — Thessaloniki
Irlanda Veterinary Research Laboratory
Abbotstown, Castleknock, Dublin 15
Italia Istituto Patologie Aviaire, Facoltà di medicina veterinaria,
Università di Napoli
via Aniezzo, Falcone 334, I-80127 Napoli F Delpino 1
Lussemburgo Institut National de Recherches Vétérinaires
Groeselenberg 99, B 1180 Bruxelles
Paesi Bassi Centraal Diergeneeskundig Instituut, Vestiging Virologie
Houtribweg 39, NL-8221 RA Lelystad
Portogallo Laboratório Nacional de Investigação Veterinária (LNIV)
Estrada de Benfica 701, 1500 Lisboa
Spagna Centro Nacional de Referencia para la Peste Aviar — Labora-
torio Nacional de Sanidad y Producción Animal de Barcelona
Zona Franca Circunvalación-Tramo 6, Esquina Calle 3. Barce-
lona
Regno Unito Central Veterinary Laboratory
New Haw, Weybridge, GB-Surrey KT15 3NB
Austria Bundesanstalt für Virusseuchenbekämpfung bei Haustieren,
Wien-Hetzendorf
Finlandia Eläinlääkintä- ja elintarvikelaitos, Helsinki — Anstalten för
veterinärmedicin och livsmedel, Helsingfors
Svezia Statens veterinärmedicinska anstalt, Uppsala
Repubblica ceca Státní veterinární ústav Praha, Sídlištní 24/136, 165 03 Praha 6
Estonia Veterinaar- ja Toidulaboratoorium, Väike-Paala 3, 11415
Tallinn
Cipro Εργαστήριο Αναφοράς για τις Ασθένειες των Ζώων ,
Κτηνιατρικές Υπηρεσίες , 1417 Λευκωσία (National Refe-
rence Laboratory for Animal Health Veterinary Services, CY-
1417 Nicosia)
Lettonia Valsts veterin ārmedic īnas diagnostikas centrs, Lejupes iela 3,
LV-1076 R īga1992L0040 — IT — 01.05.2004 — 003.001 — 19
▼A1
▼A2
▼A2
Lituania Nacionalin ėveterinarijos laboratorija, J. Kairi ūkščio g. 10,
LT-2021 Vilnius
Ungheria Országos Állategészségügyi Intézet (OÁI),
Pf. 2., Tábornok u. 2.,
HU-1581 Budapest
Malta Istituto Zooprofilatico Sperimentale delle Venezie, Padova,
Italy
Polonia Laboratorium Zakładu Chorób Drobiu Pa ństwowego Instytutu
Weterynaryjnego, Al. Partyzantów 57,
PL-24-100 Puławy
Slovenia Nacionalni veterinarski inštitut, Gerbi čeva 60,
SI-1000 Ljubljana
Slovacchia Štátny veterinárny ústav, Pod dráhami 918,
SK-96086 Zvolen1992L0040 — IT — 01.05.2004 — 003.001 — 20
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ALLEGATO V
LABORATORIO COMUNITARIO DI RIFERIMENTO PER
L'INFLUENZAAVIARIA
Nome del laboratorio
Central Veterinary Laboratory
New Haw
Weybridge
Surrey KT 15 3NB
Regno Unito
Il laboratorio comunitario di riferimento per l'influenza aviaria ha le competenze
ed i compiti seguenti:
1) coordinare in consultazione con la Commissione, i metodi di diagnosi dell'in-
fluenza aviaria negli Stati membri, segnatamente mediante:
a) la specificazione, la detenzione e il rilascio dei ceppi di virus dell'in-
fluenza aviaria ai fini dei testi sierologici e della preparazione
dell'antisiero;
b) il rilascio dei sieri di riferimento e di altri reagenti di riferimento ai labo-
ratori di riferimento nazionali ai fini della standardizzazione delle prove e
dei reagenti utilizzati in ogni Stato membro;
c) la creazione e la conservazione di una collezione di ceppi e di isolanti del
virus dell'influenza aviaria;
d) l'organizzazione periodica di prove comparative comunitarie delle proce-
dure di diagnosi;
e) la raccolta e il raffronto dei dati e delle informazioni concernenti i metodi
di diagnosi utilizzati ed i risultati delle prove effettuate nella Comunità;
f) la caratterizzazione degli isolati del virus dell'influenza aviaria mediante
metodi più avanzati al fine di consentire una migliore comprensione della
epizooziologia dell'influenza aviaria;
g) il controllo dell'evoluzione della situazione in tutto il mondo in materia di
sorveglianza di epizooziologia e di prevenzione dell'influenza aviaria;
h) il mantenimento di una perizia sul virus dell'influenza aviaria e su altri
virus in causa, in modo tale da permettere una rapida diagnosi differen-
ziale;
i) l'acquisizione di una conoscenza approfondita della preparazione e dell'u-
tilizzazione dei prodotti di medicina veterinaria immunologica utilizzati
per l'eradicazione ed il controllo dell'influenza aviaria;
2) apportare un aiuto efficace all'identificazione dei focolai di influenza aviaria
negli Stati membri mediante lo studio degli isolati di virus che gli vengono
inviati per conferma della diagnosi, dell'individuazione delle caratteristiche e
degli studi epizooziologi. Il laboratorio dovrebbe inparticolare essere in
grado di analizzare sequenziamente dei nucleotidi per permettere la determi-
nazione della sequenza di amminoacidi dedotta nel sito di clivaggio della
molecola di emoagglutinina dei virus influenzali di sottotipo H5 o H7;
3) facilitare la formazione o riqualificazione professionale degli esperti in
diagnosi di laboratorio in vista dell'armonizzazione delle tecniche diagno-
stiche intutta la Comun ità.1992L0040 — IT — 01.05.2004 — 003.001 — 21
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ALLEGATO VI
CRITERIPERIPIANIDIINTERVENTO
I piani di intervento devono prevedere almeno:
1) la creazione di un nucleo di emergenza a livello nazionale incaricato del
coordinamento di tutte le misure di urgenza adottate dallo Stato membro
interessato;
2) un elenco dei centri locali di urgenza dotati di strutture adeguate per il
coordinamento delle misure di controllo a livello locale;
3) informazioni dettagliate sul personale incaricato delle misure di urgenza,
con riferimento alle sue qualifiche e responsabilità;
4) la possibilità per qualsiasi centro locale di controllo di urgenza di contattare
rapidamente le persone o organizzazioni direttamente o indirettamente inte-
ressate dall'insorgenza di un focolaio;
5) la disponibilità di attrezzature e materiale adatti per la corretta esecuzione
delle misure di urgenza;
6) istruzioni dettagliate sulle azioni da adottare in caso di infezione o contagio
sospetti o confermati, comprendenti i mezzi di distruzione delle carcasse;
7) programmi di formazione per l'aggiornamento e lo sviluppo delle cono-
scenze relative alle procedure amministrative;
8) per i laboratori di diagnosi, un servizio per gli esami post mortem, la
capacità necessaria per gli esami sierologici ed istologici, ecc. e l'aggiorna-
mento delle tecniche di diagnosi rapida (a tal fine occorre adottare
disposizioni per il trasporto rapido di campioni);
9) precisioni relative al quantitativo di vaccini contro l'influenza aviaria rite-
nuto necessario in caso di ripristino della vaccinazione di emergenza;
10) le disposizioni regolamentari per realizzare piani di intervento.1992L0040 — IT — 01.05.2004 — 003.001 — 22