2002L0069—IT—26.08.2002—000.001—1
Trattandosidiunsemplice strumentodidocumentazione,essononimpegnalaresponsabilitàdelleistituzioni
►B DIRETTIVA2002/69/CEDELLACOMMISSIONE
del►C1 30luglio2002 ◄
chestabilisceimetodidicampionamentoed'analisiperilcontrolloufficialedidiossineeladeter-
minazione diPCBdiossina-similineiprodottialimentari
(Testorilevante aifinidelSEE)
(GUL209del6.8.2002,pag.5)
Rettificatada:
►C1Rettifica,GUL252del20.9.2002,pag.40(2002/69/CE)
▼B
DIRETTIVA2002/69/CEDELLACOMMISSIONE
del►C1 30luglio2002 ◄
chestabilisceimetodidicampionamentoed'analisiperilcontrollo
ufficiale di diossine e la determinazione di PCB diossina-simili nei
prodottialimentari
(Testorilevante aifinidelSEE)
LACOMMISSIONEDELLECOMUNITÀEUROPEE,
vistoiltrattatocheistituiscelaComunitàeuropea,
vista la direttiva 85/591/CEE del Consiglio, del 20 dicembre 1985,
concernente l'introduzione di modalità di prelievo di campioni e dimetodi d'analisi comunitari per il controllo di prodotti destinati all'ali-mentazioneumana(
1)►C1,inparticolaregliarticoli1e4, ◄
considerandoquantosegue:
(1)Ilregolamento (CE) n.466/2001 della Commissione(2),modifi-
cato da ultimo dal regolamento (CE) n. 563/2002(3), e
modificatodalregolamento (CE)n.2375/2001delConsiglio(4),
stabilisce i limiti massimi di diossine e furani in taluni prodottialimentari.
(2)Ladirettiva89/397/CEEdelConsiglio,del14giugno1989,rela-tiva al controllo ufficiale dei prodotti alimentari(
5), definisce i
principi generali per l'esecuzione del controllo dei prodotti
alimentari. Ladirettiva 93/99/CEEdelConsiglio,del29ottobre
1993, riguardante misure supplementari in merito al controlloufficialedeiprodottialimentari(
6),introduceunsistemadistan-
dard qualitativi per i laboratori incaricati dagli Stati membri dieffettuareilcontrolloufficialedeiprodottialimentari.
(3)La direttiva 85/591/CEE ha fissato criteri generali per i metodi
di campionamento e analisi. In certi casi è tuttavia necessario
stabilire criteri e/o requisiti più specifici cui il metodo d'analisideveattenersi,perfarsìcheilaboratoriutilizzinometodid'ana-lisiconlivellidiprestazioneparagonabili.
(4)Ledisposizioniriguardantilemodalitàdiprelievodicampioniei metodi d'analisi vengono stabilite in base alle conoscenzeattuali e possono essere adeguate in funzione dell'evoluzione
delleconoscenzescientificheetecniche.
(5)Le disposizioni stabilite nella presente direttiva si riferisconounicamente al prelievo di campioni e all'analisi di diossine e
PCBdiossina-simili ai fini dell'attuazione del regolamento(CE)n.466/2001enonpregiudicanolastrategiadicampionamento,ilivellielafrequenzadeiprelieviqualiindicatiagliallegatiIIIeIV della direttiva 96/23/CE del Consiglio, del 29 aprile 1996,
concernente le misure di controllo su talune sostanze e sui loro
residui negli animali vivi e nei loro prodotti. Esse abrogano ledirettive 85/358/CEE e 86/469/CEE e le decisioni 89/187/CEEe 91/664/CEE(
7) e non pregiudicano peraltro i criteri per il
prelievo mirato di campioni prescritto dalla decisione 98/179/CE della Commissione, del 23 febbraio 1998, recante modalità
d'applicazione per il prelievo ufficiale di campioni al fine della
sorveglianza su talune sostanze e sui loro residui negli animalivivieneiprodottidiorigineanimale(
8).2002L0069—IT—26.08.2002—000.001—2
(1) GUL372del31.12.1985,pag.50.
(2) GUL77del16.3.2001,pag.1.
(3) GUL86del3.4.2002,pag.5.
(4) GUL321del6.12.2001,pag.1.
(5) GUL186del30.6.1989,pag.23.
(6) GUL290del24.11.1993,pag.14.
(7) GUL125del23.5.1996,pag.10.
(8) GUL65del5.3.1998,pag.31.
▼B
(6)Occorreapplicareunapproccioattivoperottenereuninsiemedi
dati affidabili sulla presenza di PCBdiossina-simili nei prodotti
alimentari. È pertanto necessario fissare criteri generali per imetodid'analisidaimpiegarenelladeterminazionediPCBdios-sina-similineiprodottialimentari.
(7)Si potrebbe impiegare un metodo di screening ad alto rendi-mento, di comprovata validità e ampiamente accettato, perselezionareicampionichepresentanolivellisignificativididios-sina, livelli che occorre poi determinare tramite un metodo diconferma. Occorre pertanto stabilire criteri severi per il metododiconfermaecriteriminimiperilmetododiscreening.
(8)Le misure previste dalla presente direttiva sono conformi alparere del comitato permanente per la catena alimentare e lasalutedeglianimali,
HAADOTTATOLAPRESENTEDIRETTIVA:
Articolo 1
Gli Stati membri garantiscono che i campioni destinati al controllo
ufficiale dei livelli di diossine e furani, nonché alla determinazione
deilivellidiPCBdiossina-simili,neiprodottialimentari,sonoprelevati
secondolemodalitàdescrittenell'allegatoI.
Articolo 2
Gli Stati membri garantiscono che i campioni destinati al controllo
ufficiale dei livelli di diossine e di furani, nonché alla determinazionedeilivellidiPCBdiossina-simili,neiprodottialimentarisonoconformiaicriteridescrittinell'allegatoII.
Articolo 3
Gli Stati membri mettono in vigore le disposizioni legislative, regola-
mentari ed amministrative necessarie per conformarsi alla presentedirettiva al più tardi entro il 28 febbraio 2003. Esse ne informano
immediatamente laCommissione.
QuandogliStati membri adottano tali disposizioni, questecontengono
un riferimento alla presente direttiva o sono corredate di un siffattoriferimento all'atto della pubblicazione ufficiale. Le modalità di taleriferimentosonodecisedagliStatimembri.
Articolo 4
Lapresentedirettivaentrainvigoreilventesimogiornosuccessivoalla
pubblicazionenella Gazzetta ufficiale delle Comunità europee .
Articolo 5
GliStatimembrisonodestinataridellapresentedirettiva.2002L0069—IT—26.08.2002—000.001—3
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ALLEGATO I
METODI DI CAMPIONAMENTO PER IL CONTROLLO UFFICIALE
DEI LIVELLI DI DIOSSINE (PCDD/PCDF) E LA DETERMINAZIONE
DIPCBDIOSSINA-SIMILIINTALUNIPRODOTTIALIMENTARI
1.Finalità ecampod'applicazione
Ilprelievodeicampionidestinatialcontrolloufficialedelleconcentrazioni
di diossina (PCDD/PCDF), nonché alla determinazione del contenuto di
PCB diossina-simili(1), nei prodotti alimentari deve essere effettuato
secondoimetodiquidescritti.Icampioniglobalicosìottenutisonoconsi-
derati rappresentativi delle partite o sottopartite da cui sono prelevati. Il
rispettodeilivellimassimistabilitinelregolamento(CE)n.466/2001della
Commissione,chedefinisceitenorimassimiditalunicontaminantipresenti
nelle derrate alimentari, sarà stabilito in base ai livelli determinati nei
campionidilaboratorio.2002L0069—IT—26.08.2002—000.001—4
(1) Tabella TEF per la valutazione dei rischi umani stabiliti dall'OMS sulla base delle
conclusioni dell'incontro di Stoccolma del 15-18 giugno 1997 [Van den Berg et al.,1998, «Toxic Equivalency Factors (TEFs) for PCBs,PCDDs,PCDFsfor Humans andforWildlife»,EnvironmentalHealthPerspectives,106(12)pag.775].
Congenere ValoreTEF
Policlorodibenzodiossine («PCDD»)
2,3,7,8-TCDD 1
1,2,3,7,8-PeCDD 1
1,2,3,4,7,8-HxCDD 0,1
1,2,3,6,7,8-HxCDD 0,11,2,3,7,8,9-HxCDD 0,1
1,2,3,4,6,7,8-HpCDD 0,01
OCDD 0,0001
Dibenzofurani («PCDF»)
2,3,7,8-TCDF 0,1
1,2,3,7,8-PeCDF 0,05
2,3,4,7,8-PeCDF 0,5
1,2,3,4,7,8-HxCDF 0,1
1,2,3,6,7,8-HxCDF 0,1
1,2,3,7,8,9-HxCDF 0,1
2,3,4,6,7,8-HxCDF 0,11,2,3,4,6,7,8-HpCDF 0,01
1,2,3,4,7,8,9-HpCDF 0,01
OCDF 0,0001
PCB «diossina-simili» NonortoPCB+MonoortoPCB
NonortoPCB
PCB77 0,0001
PCB81 0,0001
PCB126 0,1
PCB169 0,01
MonoortoPCB
PCB105 0,0001
PCB114 0,0005
PCB118 0,0001
PCB123 0,0001
PCB156 0,0005
PCB157 0,0005PCB167 0,00001
PCB189 0,0001
Abbreviazioni: «T» = tetra, «Pe» = penta; «Hx» = esa; «Hp» = epta; «O» = octa;
«CDD»=clorodibenzodiossina;«CDF»=clorodibenzofurano;«CB»=clorobifenile.
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2.Definizioni
Partita:quantitàidentificabilediprodottoalimentare,contenutainun'unica
consegna e avente caratteristiche comuni ufficialmente riconosciute, quali
l'origine, la varietà, il tipo d'imballaggio, l'imballatore, lo speditore e la
marcatura. Nel caso del pesce e dei prodotti della pesca, è comparabile
ancheladimensione.
Sottopartita: porzione di una partita designata per essere sottoposta a
campionamentosecondolemodalitàstabilite.Ognisottopartitadeveessere
fisicamenteseparataeidentificabile.
Campione elementare: quantitativo dimateriale prelevato inunsolopunto
dellapartitaodellasottopartita.
Campione globale: aggregazione di tutti i campioni elementari prelevati
dallapartitaodallasottopartita
Campione di laboratorio: parte/quantità rappresentativa del campione
globaledestinataallaboratorio.
3.Disposizionigenerali
3.1.Personale
Il prelievo è effettuato da persona qualificata e abilitata, secondo quanto
specificatodagliStatimembri.
3.2.Materiale da campionare
Ciascunapartitadaanalizzareèoggettodicampionaturaseparata.
3.3.Precauzioni
Durante la campionatura e la preparazione dei campioni di laboratorio, è
necessario evitare qualsiasi alterazione che possa modificare il tenore di
diossine e di PCB diossina-simili, compromettendo le analisi o la rappre-
sentativitàdelcampioneglobale.
3.4.Campioni elementari
I campioni elementari sono prelevati per quanto possibile in punti diversi
della partita o sottopartita. Qualsiasi deroga a tale norma va segnalata nel
verbaledicuialpunto3.8.
3.5.Preparazione del campione globale
Ilcampioneglobaleècostituitodatuttiicampionielementari.Èdialmeno
un kg, a meno che ciò non sia poco pratico, ad esempio, nel caso di
campionamentodiunasingolaconfezione.
3.6.Suddivisione del campione globale in campioni di laboratorio a fini di
attuazione, difesa e riferimento
Icampionidilaboratorioprelevatiafinidiattuazione,difesaeriferimento
sono ottenuti dal campione globale omogeneizzato, a condizione che tale
proceduranonsiaincontrastoconlaregolamentazionedegliStatimembri.
Ledimensionideicampionidilaboratoriodevonoesseretalidaconsentire
almenolosvolgimentodianalisiduplici.
3.7.Confezionamento e inoltro di campioni globali e campioni di laboratorio
Ciascun campione globale e di laboratorio va collocato in un recipiente
pulito, di materiale inerte, che lo protegga adeguatamente contro qualsiasi
fattore di contaminazione, da perdita di analiti per assorbimento nella
parete interna del recipiente e dai danni che potrebbero essere causati dal
trasporto.Siprendanoaltresìtutteleprecauzioninecessarieperevitarealte-
razionidellacomposizionedelcampioneglobaleedilaboratorioduranteil
trasportoolaconservazione.
3.8.Sigillatura ed etichettatura dei campioni globali e di laboratorio
Ognicampioneufficialevienesigillatosulluogodelprelievoeidentificato
secondoleprescrizionivigentinelloStatomembro.Perciascunprelievodi
campione, si redige un verbale di campionamento che consenta d'identifi-
care con certezza la partita campionata, la data e il luogo di
campionamento, nonché qualsiasi informazione supplementare che possa
essereutileall'analista.2002L0069—IT—26.08.2002—000.001—5
▼B
4.Modalitàdiprelievodeicampioni
Ilmetododiprelievoapplicatodeveassicurarecheilcampioneglobalesia
rappresentativodellapartitachedeveesserecontrollata.
Numero dei campioni elementari
Nelcasodellatteedeglioli,periqualisipuòpresumereunadistribuzione
omogenea dei contaminanti in oggetto all'interno di una data partita, è
sufficiente prelevare tre campioni elementari da ogni partita che forma il
campione globale, indicando il numero della partita. Per gli altri prodotti,
il numero minimo di campioni elementari da prelevare per partita è indi-
catoallatabella1.
Il peso del campione globale che raggruppa tutti i campioni elementari
deveesseredialmeno1kg(cfr.punto3.5).Icampionielementarisonodi
pesoanalogo.Ilpesodiuncampioneelementaredeveesseredialmeno100
grammiedipendedalle dimensionideicomponenti della partita.Qualsiasi
deroga atale norma vasegnalata nelverbale dicui alpunto3.8.Secondo
quanto disposto dalla decisione 97/747/CE della Commissione, del 27
ottobre 1997, che fissa i livelli e le frequenze di prelievo di campioni,
previsti dalla direttiva 96/23/CE del Consiglio, per il controllo di talune
sostanze e dei loro residui in alcuni prodotti di origine animale(1), un
campione di uova di gallina è costituito da almeno 12 uova (per partite
sfuse e per partite formate da confezioni singole, si vedano le tabelle 1 e
2).
Tabella1
Numerominimodicampionielementari daprelevare daunapartita
Pesodellapartita(inkg)Numerominimodicampionielementari
daprelevare
<50 3
50a500 5
>500 10
Selapartitaècostituitadaconfezionisingole,ilnumerodiconfezioniche
vaprelevatoperformareuncampioneglobaleèindicatonellatabella2.
Tabella2
Numero di confezioni (campioni elementari) da prelevera per formare
uncampioneglobaleselapartitaècostituitadaconfezionisingole
Numerodiconfezioniounitàdella
partitaNumerominimodiconfezioniounità
daprelevare
1a25 1confezioneounità
26a100 circail5%,almeno2confezioni
ounità
>100 circail5%,finoaunmassimodi
10confezioniounità
5.Conformitàdellapartitaosottopartitaallespecifiche
Il laboratorio di controllo procede a una doppia analisi del campione di
laboratorioecalcolalamediadeirisultati,qualorailrisultatoottenutonella
primaanalisieccedaillivellomassimoosiainferioreallivellomassimodi
unvalorechenonsuperiil20%.Lapartitaèaccettataseilrisultatodella
prima analisi è al di sotto del livello massimo di un valore superiore al
20 % o, dove la doppia analisi è necessaria, se la media è conforme al
corrispondentelivellomassimoindicatonelregolamento(CE)n.466/2001.2002L0069—IT—26.08.2002—000.001—6
(1) GUL303del6.11.1997,pag.12.
▼B
ALLEGATO II
PREPARAZIONE DEI CAMPIONI E SPECIFICHE PER I METODI
D'ANALISI IMPIEGATI NEL CONTROLLO UFFICIALE DEI LIVELLI
DI DIOSSINE (PCDD/PCDF) E NELLA DETERMINAZIONE DI PCB
DIOSSINA-SIMILIINTALUNIPRODOTTIALIMENTARI
1.Finalità ecampod'applicazione
Queste specifiche si applicano all'analisi di prodotti alimentari nell'ambito
dei controlli ufficiali del tenore di diossine [policlorodibenzodiossine
(PCDD) e policlorodibenzofurani (PCDF)] e della determinazione di PCBdiossina-simili.
Il controllo della presenza di diossine nei prodotti alimentari può essere
effettuato mediante una strategia che preveda un metodo di screening per
selezionareicampioniconlivellididiossineediPCBdiossina-similisupe-
rioriallivelloconsideratooinferioridiunvalorealdisottodel30-40%.
Occorre poi determinare/confermare la concentrazione di diossine nei
campioniconlivellisignificativitramiteunmetododiconferma.
Imetodidiscreeningsonoimpiegati perrilevare lapresenzadidiossinee
PCB diossina-simili ai livelli considerati. Essi sono dotati di una grande
capacità di trattamento di campioni, il che consente di passare al vaglio
un'elevataquantitàdicampioniperricercarequellichepotrebberorivelarsi
positivi. Questi metodi sono specialmente concepiti in modo da evitare i
falsirisultatinegativi.
I metodi di conferma forniscono informazioni complete o complementari
che consentono di individuare e quantificare in maniera inequivocabile le
diossineeiPCBdiossina-similiallivelloconsiderato.
2.Contesto
Poiché i campioni ambientali e biologici (inclusi i campioni di prodotti
alimentari) generalmente contengono miscele complesse di diversi conge-
nerididiossine,peragevolare lavalutazione deirischièstatoelaboratoil
concetto di «fattori di tossicità equivalente» (TEF). I TEF consentono di
esprimere concentrazioni di miscele di PCDD e PCDF sostituiti alle posi-
zioni 2,3,7,8 e, di recente, alcune forme di PCB non orto e orto
clorosostituiti aventi proprietà simili a quelle delle diossine in equivalenti
tossici(TE)di2,3,7,8-TCDD(cfr.nota1,allegatoI).
Le concentrazioni delle singole sostanze in un dato campione vengono
dapprima moltiplicate per il corrispondente TEF e poi sommate per otte-
nerelaconcentrazionetotaledeicompostidiossina-similiespressainTE.
Perilcalcolodel«limite superiore»,sisupponecheilcontributoalTEdi
ognicongenerenonquantificatosiaugualeallasogliadideterminazione.
Per il calcolo del «limite inferiore», si suppone che il contributo al TE di
ognicongenerenonquantificatosiaugualeazero.
Perilcalcolodel«valoreintermedio»,sisupponecheilcontributoalTEdi
ognicongenerenonquantificatosiaugualeallametàdellasogliadiquanti-
ficazione.
3.Requisiti applicabili alla garanzia della qualità nella preparazione dei
campioni
— Occorre adottare tutte le precauzioni possibili per evitare qualsiasi
contaminazioneduranteognifasedelcampionamentoedell'analisi.
— Icampionidevonoessereconservatietrasportatiinappositicontenitori
di vetro, alluminio, polipropilene o polietilene, dopo avere rimosso
eventuali tracce di polvere di carta dal contenitore. Gli strumenti in
vetro devono essere risciacquati con solventi sottoposti a un controllo
voltoadeterminarelapresenzadidiossine.
— Laconservazioneeiltrasportodevonosvolgersiinmododapreservare
l'integritàdelcampionealimentare.
— Se necessario, triturare e mescolare bene ogni campione di laboratorio
ricorrendoaunmetodochegarantiscaunacompletaomogeneizzazione
(ad esempio, la triturazione deve consentire al materiale di passare
attraverso un setaccio a maglie di 1 mm); prima della triturazione, i
campioni devono essere asciugati, nel caso il livello di umidità sia
troppoelevato.
— Occorre fare un'analisi in bianco, ovvero effettuare l'intera procedura
analiticasenzailcampione.2002L0069—IT—26.08.2002—000.001—7
▼B
— Il peso del campione utilizzato per l'estrazione deve essere tale da
rispondereairequisitirelativiallasensibilità.
— Esistono numerose procedure specifiche per la preparazione dei
campioni, che possono essere impiegate in modo soddisfacente per i
prodotti considerati. Le procedure devono essere convalidate in base a
orientamentiriconosciutisulpianointernazionale.
4.Requisitiapplicabiliailaboratori
— I laboratori devono dimostrare la validità del metodo nell'intervallo di
tolleranza del livello considerato, ad esempio, 0,5x, 1x e 2x il livello
considerato, con un coefficiente di variazione accettabile per analisi
ripetute.Perulterioriinformazionisuicriteridivalidità,cfr.ilpunto5.
— Illimitediquantificazioneperunmetododiconfermanondeveessere
superiore a un quinto del livello considerato, per garantire coefficienti
divariazioneaccettabilinell'intervallosummenzionato.
— Sidevonocostantementeeffettuarecontrolliinbiancoedesperimentio
analisi dei campioni di controllo con l'aggiunta di indicatori (di prefe-
renza, sedisponibile, materiale di riferimento certificato), quali misure
internedigaranziadellaqualità.
— La riuscita partecipazione a studi condotti in collaborazione con altri
laboratori che valutano la competenza del laboratorio è il modo
migliore per dimostrarne la perizia nell'ambito di analisi specifiche.
Tuttavia, il buon esito della partecipazione a studi condotti con altri
laboratori, ad esempio, sucampioni di terreno o di acque residue, non
dimostranecessariamentecheillaboratoriosiaaltrettantocompetentea
trattare campioni di prodotti alimentari o mangimi, caratterizzati da
livelli di contaminazione minore. È pertanto requisito imprescindibile
la partecipazione regolare a studi condotti in collaborazione con altri
laboratori sulla determinazione di diossina e di PCB diossina-simili
nellecorrispondentimatricidiprodottialimentari/mangimi.
— In conformità con quanto prescritto dalla direttiva 93/99/CEE del
Consiglio, i laboratori devono essere accreditati da un organismo rico-
nosciuto in base alla Guida ISO 58, che certifichi l'applicazione della
garanzia della qualità relativamente ai metodi d'analisi. I laboratori
devonoessereaccreditatiinbaseallanormaISO/IEC/17025:1999.
5.Requisiti applicabili alla procedura d'analisi per le diossine e i PCB
diossina-simili
Requisiti di base di validità delle procedure d'analisi:
—Elevata sensibilità e limiti di rilevabilità bassi .Perquantoconcernele
PCDD e i PCDF, le quantità rilevabili devono essere dell'ordine del
picogrammo di TE (10-12g), data l'estrema tossicità di alcuni di questi
composti. È noto che i PCB si presentano in quantità più elevate
rispetto alle PCDD e ai PCDF. Per quanto concerne la maggior parte
dei congeneri di PCB, una sensibilità dell'ordine del nanogrammo (10-
9g) è sufficiente. Tuttavia, per la determinazione dei congeneri più
tossicidiPCBdiossina-simili(inparticolareicongenerinonortososti-
tuiti)sideveottenerelastessasensibilitàdellePCDDedeiPCDF.
—Alta selettività (specificità) . Occorre distinguere le PCDD, i PCDF e i
PCB diossina-simili da una moltitudine di altri composti che, estratti
simultaneamente dal campione e suscettibili d'interferire, sonopresenti
in concentrazioni di molto superiori a quelle degli analiti da rilevare.
Per quanto concerne i metodi di gascromatografia/spettrometria di
massa(GC/MS),ènecessariodistingueretravaricongeneri,inpartico-
laretraquellitossici(adesempio,idiciassettePCDDePCDFsostituiti
alle posizioni 2,3,7,8 e i PCB diossina-simili) e altri congeneri.
Mediante biotest dovrebbe essere possibile determinare selettivamente
ivaloridiTE,qualesommadiPCDD,PCDFePCBdiossina-simili.
—Estrema accuratezza (esattezza e precisione) . La determinazione deve
fornire una stima valida della concentrazione reale presente in un
campione. È necessario porre estrema cura (accuratezza della misura-
zione: grado di concordanza tra il risultato di una misurazione e il
valorerealeoassegnatodelmisurando)perevitarecheirisultatidell'a-
nalisi di un campione siano respinti a causa della scarsa affidabilità
dellastimadeiTE.L'accuratezzaèlarisultantediesattezza(differenza
tra il valore medio misurato per un analita in un materiale certificato,
espressainpercentuale ditale valore)eprecisione (laprecisione viene
generalmentecalcolatasottoformadiscarto-tipo;essaincludelaripeti-
bilità elariproducibilità eindicailgradodiconcordanza trairisultati
ottenutiapplicandoripetutamentelaprocedurasperimentaleindetermi-
natecondizioni).
I metodi di screening possono comprendere biotest e metodi GC/MS,
mentre i metodi di conferma sono costituiti dalla gascromatografia ad2002L0069—IT—26.08.2002—000.001—8
▼B
alta risoluzione e dalla spettrometria ad alta risoluzione (HRGC/
HRMS).SidevonoosservareiseguenticriteriperilvaloretotaleinTE:
Metodidiscreening Metodidiconferma
Percentuale di falsinegativi<1%
Esattezza –20%a+20%
CV (coefficiente di
variazione)<30% <15%
6.Requisitispecifici applicabili aimetodid'analisiGC/MSconfinalitàdi
screeningodiconferma
— Quale primo passo dell'analisi, da effettuare, ad esempio prima dell'e-
strazione per convalidare la procedura d'analisi, occorre aggiungere
standard interni di PCDD/F clorosostituiti alle posizioni 2,3,7,8 e
marcati con
13C (e standard interni di PCB diossina-simile marcati
con13C, se si devono determinare PCB diossina-simili). Va aggiunto
almenouncongenere perciascungruppoomologodiPCDD/Fdatetra
a octaclorati (e almeno un congenere per ciascun gruppo omologo di
PCBdiossina-simile,sesidevonodeterminarePCBdiossina-simili)(in
alternativa, è possibile aggiungere almeno un congenere per ciascuna
funzione di registrazione di ioni selezionati tramite spettrografia di
massa utilizzata per il controllo di PCDD/F e PCB diossina-simile. Si
consiglia vivamente, soprattutto perimetodi di conferma, diutilizzare
l'insieme dei diciassette standard interni di PCDD/F clorosostituiti alle
posizioni2,3,7,8marcaticon13C,nonchélatotalitàdeidodicistandard
interni di PCB diossina-simile marcati con13C (nel caso si debbano
determinarePCBdiossina-simili).
Vannoinoltredeterminatiifattoridirispostarelativaperqueicongeneri
aiqualinonèstatoaggiuntoalcunanalogomarcatocon13C,utilizzando
soluzioniditaraturaadeguate.
— Per i prodotti alimentari d'origine vegetale e per i prodotti alimentari
d'origine animale con un contenuto di grasso inferiore al 10 %,
l'aggiunta di standard interni prima dell'estrazione è obbligatoria. Per iprodottid'origineanimaleconuncontenutodigrassosuperioreal10%,
gli standard interni possono essere aggiunti o prima dell'estrazione o
dopo l'estrazione del grasso. Occorre convalidare adeguatamente l'effi-
cacia dell'estrazione, a seconda della fase in cui sono stati introdotti
gli standard interni e del modo in cui i risultati sono riportati (sulla
basedelprodottoodelgrasso).
— Prima dell'analisi GC/MS, occorre aggiungere 1 o 2 standard di recu-
pero(surrogato).
— È necessario effettuare il controllo del recupero. Per i metodi di
conferma,irecuperideisingolistandardinternidevonoesserecompresi
trail60%eil120%.Recuperiinferioriosuperioripersingoliconge-
neri,inparticolarealcunedibenzodiossineealcunidibenzofuranieptae
octaclorati, sonoaccettabili, purchéillorocontributoalvaloreTEnon
superi il 10 % del valore totale TE (tenendo conto unicamente di
PCDD/F).Perquantoconcerneimetodidiscreening,irecuperidevono
esserecompresitrail30%eil140%.
— È opportuno separare le diossine dai composti clorurati interferenti,
quali i PCB e gli eteri clorurati di difenile, ricorrendo ad adeguate
tecniche cromatografiche (dipreferenza tramite unacolonnadiflorisil,
d'alluminae/odicarbone).
— La separazione gascromatografica degli isomeri deve essere adeguata
(overlapping<25%tra1,2,3,4,7,8-HxCDDe1,2,3,6,7,8-HxCDD).
— Perladeterminazione, siconsigliadifareriferimento almetodo«EPA
Method1613,RevisionB:Tetra- throughOctachlorinated Dioxinsand
Furans by Isotope Dilution HRGC-HRMS», o ad un altro metodo con
criteridirendimentoequivalenti.
— Ladifferenzatraillivellomassimoeillivellominimonondeveessere
superioreal20%periprodotti alimentari conunacontaminazione da
diossina di circa 1 pg. WHO/TE/g di base lipidica (tenendo conto
unicamente di PCDD/PCDF). La stessa prescrizione si applica ai
prodotti alimentari a basso contenuto di grasso che presentano livelli
di contaminazione dell'ordine di circa 1 pg. WHO/TE/g di prodotto.
Perlivellidicontaminazioneinferiori,adesempio0,50pg.TE/gdipro-
dotto,ladifferenzatraillivellomassimoeillivellominimopuòessere
dell'ordinedel25-40%.2002L0069—IT—26.08.2002—000.001—9
▼B
7.Metodid'analisidiscreening
7.1.Introduzione
Il metodo di screening consente di applicare vari approcci analitici: un
approcciopuramentediscreeningeunapproccioquantitativo.
Approcciodiscreening
Larispostadeicampionièconfrontataconquelladiuncampionediriferi-
mentoallivelloconsiderato.Icampionilacuirispostaèinferioreaquella
del campione di riferimento sono considerati negativi, mentre quelli con
rispostasuperioresonoritenutipositivi.Requisiti:
— Inogniseriediprovesidevonoincludereuncampionediriferimentoe
uno in bianco, estratti e analizzati allo stesso tempo e alle medesime
condizioni. Il campione di riferimento deve presentare una risposta
nettamentesuperioreaquelladelbianco.
— Sidevonoincluderecampionidiriferimentosupplementariconconcen-
trazioneparia0,5xe2xillivelloconsiderato,perdimostrarel'efficacia
del test nell'intervallo considerato per il controllo del livello conside-
rato.
— Qualora si analizzino altre matrici, occorre dimostrare la validità dei
campioni di riferimento, utilizzando di preferenza campioni il cui
livello di TE, stabilito tramite HRGC/HRMS, sia equivalente a quello
delcampionediriferimentoodiunbiancoarricchito.
— Poiché nei biotest non si possono utilizzare standard interni, i test di
ripetibilità sono estremamente importanti per ottenere informazioni
sulloscarto-tiponell'ambitodiunaserieditest.Ilcoefficientedivaria-
zionedeveessereinferioreal30%.
— Per quanto concerne i biotest, occorre definire quali sono i composti-
bersaglio, lepotenziali interferenze eilvalore massimotollerato peril
bianco.
ApproccioquantitativoL'approccio quantitativo comprende obbligatoriamente una serie di dilui-
zioni-tipo, un processo di purificazione e di misurazione doppio o triplo,
nonché analisi in bianco e controlli di recupero. Il risultato può essereespressoinTE,dandoperscontatocheicompostiresponsabilidelsegnale
soddisfanoilprincipiodiTE.Atalfine,sipuòimpiegarelaTCDD(ouna
miscela-tipo di diossine/furani) per elaborare una curva di taratura che
consenta di calcolare il livello di TE nell'estratto e, di conseguenza, nel
campione. Tale risultato è poi corretto con il livello di TE calcolato per
uncampioneinbianco(pertenerecontodiimpurezzederivantidaisolventi
edallesostanzechimicheutilizzate)eperilrecupero(quest'ultimaquantità
ècalcolataapartiredallivellodiTEinuncampionedicontrolloqualitàla
cuiconcentrazioneèequivalenteaquelladellivellomassimoconsiderato).
Èfondamentaletenerecontocheunapartedellaperditaapparentedelrecu-
pero può essere dovuta agli effetti della matrice e/o alle differenze tra i
valorideiTEFneibiotesteivalorideiTEFufficialistabilitidall'OMS.
7.2.Requisiti per i metodi d'analisi utilizzati per lo screening
— Lo screening può essere effettuato tramite metodi d'analisi GC/MS e
biotest.AimetodiGC/MSsiapplicanoleprescrizionistabilitealpunto
6.Prescrizionispecifichesonostabilitealpunto7.3peribiotestcellu-
lari,ealpunto7.4peribiotestrealizzaticonkit.
— Si devono fornire informazioni sul numero di risultati falsi positivi e
falsi negativi di un'ampia serie di campioni al di sopra e al di sotto
dei livelli massimi o dei valori delle soglie d'intervento, raffrontati al
contenuto di TE determinato tramite metodo analitico di conferma. La
percentualerealedifalsinegativideveessereinferioreall'1%.Affinché
il metodo di screening risulti vantaggioso, la percentuale di campioni
falsipositivideveesseresufficientementebassa.
— Irisultati positivi devonoesseresempre convalidati tramite unmetodo
analiticodiconferma(HRGC/HRMS).Icampionicorrispondentiauna
vasta gamma di TE devono inoltre essere confermati tramite HRGC/
HRMS (circa 2-10 % dei campioni negativi). Si devono fornire dati
sulle corrispondenze tra i risultati dei biotest e quelli della HRGC/
HRMS.
7.3.Requisiti specifici per i biotest cellulari
— Quandosieffettuaunbiotest,sideveutilizzareinogniprovaunaserie
di concentrazioni di riferimento di TCDD o una miscela di diossine/
furani (curva di risposta con un R
2> 0,95 per una dose completa).2002L0069—IT—26.08.2002—000.001—10
▼B
Tuttavia, ai fini dello screening, si può utilizzare nell'analisi dei
campioniabassaconcentrazioneunacurvadettagliataneilivellibassi.
— Peririsultatidelbiotestinunintervalloditempocostante,èopportuno
usareunaconcentrazione diriferimentodiTCDD(circa3xillimite di
determinazione) suunmodulodicontrollodella qualità.Inalternativa,
sipuòutilizzarelarispostarelativadiuncampionediriferimentopara-
gonata a una curva di taratura di TCDD, dato che la risposta delle
cellulepuòdipenderedamolteplicifattori.
— Si raccomanda di compilare e verificare i grafici del controllo della
qualità (QC) per ogni tipo di materiale di riferimento, per garantire
cheilrisultatosiaconformeallelineeguidaindicate.
— L'induzione della diluizione utilizzata per il campione deve situarsi
nella parte lineare della curva di risposta, in particolare per i calcoli
quantitativi.Icampionichenonrientranonellapartelinearedellacurva
di risposta devono essere diluiti e nuovamente analizzati. Si consiglia
pertantodianalizzarealmeno3diluizioniallavolta.
— Loscartopercentuale-tiponondeveesseresuperioreal15%quandosi
effettuaunadeterminazione triplaperognidiluizionedelcampione,né
superioreal30%fratreesperimentiindipendenti.
— Èpossibilesceglierecomelimitedirilevamentounvaloreequivalentea
3 volte lo scarto-tipo della soluzione di solvente in bianco o della
risposta di fondo. Un altro metodo consiste nell'applicare una risposta
che sia superiore alla risposta di fondo (fattore d'induzione 5 volte il
solventeinbianco)calcolatadallacurvaditaraturadelgiorno.Èpossi-
bilesceglierecomelimitediquantificazioneunvaloreequivalentea5-
6 volte lo scarto-tipo della soluzione di solvente in bianco o della
rispostadifondooppureapplicareunarispostachesianettamentesupe-
riore alla risposta di fondo (fattore d'induzione 10 volte il solvente in
bianco)calcolatadallacurvaditaraturadelgiorno.
7.4.Requisiti specifici per i biotest effettuati con kit (1)
— Occorre seguire le istruzioni del fabbricante relative alla preparazione
deicampioniealleanalisi.
— Ilkitnondeveessereutilizzatooltreladatadiscadenzaindicata.— Nonsidevonoutilizzarematerialiocomponentiprevistiperaltrikit.
— I kit vanno conservati e utilizzati alle condizioni di temperatura di
conservazioneediimpiegoindicate.
— Illimite dirilevazione pergliimmunodosaggièparialla sommadella
media e 3x lo scarto tipo, basandosi su 10 analisi ripetute del bianco,
divisoperilvaloredellapendenzadell'equazionediregressionelineare.
— È opportuno impiegare standard di riferimento per le prove di labora-
torio, al fine di garantire che la risposta allo standard rientri in un
intervallodivaloriaccettabile.
8.Comunicazionedeirisultati
A condizione che il metodo d'analisi impiegato lo consenta, i risultati
dell'analisi devono contenere i livelli dei singoli congeneri di PCDD/F e
PCB,nonchéessereindicaticomelimiteinferiore,limitesuperioreevalore
intermedio, ondefornire lamaggior quantità didatipossibileepermettere
cosìd'interpretareirisultatiinbasealleprescrizionispecifiche.
Larelazionedeveinoltremenzionareilcontenutolipidicodelcampioneeil
metodoimpiegatoperl'estrazionedelgrasso.
Irecuperideisingolistandardinternidevonoesserefornitisesisituanoal
difuori dell'intervallo menzionato alpunto6equalora eccedano illivello
massimo;neglialtricasi,dietrorichiesta.2002L0069—IT—26.08.2002—000.001—11
(1) I kit per biotest attualmente in commercio non hanno dato prove sufficienti di sensi-
bilità e affidabilità, tali da poterli utilizzare per rilevare la presenza di diossine ai
livellirichiestineicampionidiprodottialimentariemangimi.