PRILOG III.

Uzorkovanje i testiranje iz članaka 4. i 7.

1. Uzorkovanje i testiranje za službeni nadzor radi otkrivanja iz članka 4. stavaka 1. i 2. provodi se na sljedeći način: uzorkovanje uključuje uzorak tla po standardnoj stopi od najmanje 1 500 ml tla/ha uzet s najmanje 100 cilindričnih uzoraka dobivenih bušenjem uzetih po mogućnosti iz točaka uzorkovanja raspoređenih u obliku pravokutne mreže koja prekriva cijelu proizvodnu jedinicu s međusobnim razmakom od najmanje 5 m širine i najviše 20 m dužine. Za daljnje ispitivanje, tj. ekstrakciju cisti, identifikaciju vrste i, prema potrebi, određivanje patotipa/virulentne grupe upotrebljava se cijeli uzorak. Testiranje se provodi primjenom sljedećih metoda ekstrakcije navedenog štetnog organizma opisanih u relevantnim validiranim i međunarodno priznatim dijagnostičkim protokolima: (a) kad je riječ o ekstrakciji, metode koje se temelje na Fenwickovu aparatu, centrifugi Schuiling, elutrijatoru Seinhorst ili elutrijatoru Kort; (b) kad je riječ o otkrivanju i identifikaciji, jedno od sljedećeg: i. izdvajanje cisti Globodera iz ostataka na temelju morfologije ciste, nakon čega slijedi identifikacija vrste na temelju morfologije pojedinačnih cisti i ličinki, u kombinaciji s konvencionalnim PCR testom koji se temelji na metodi Bulman & Marshall, 1997. (1) (ako se sumnja na prisutnost organizma G. tabacum, može se provesti i konvencionalni PCR test koji se temelji na metodi Skantar et al., 2007. (2)); ii. izdvajanje cisti Globodera iz ostataka na temelju morfologije ciste, nakon čega slijedi identifikacija vrste na temelju morfologije pojedinačnih cisti i ličinki, u kombinaciji s PCR testom u stvarnom vremenu na temelju metode Gamel et al., 2017. (3); iii. izdvajanje cistolikih nematoda iz ostataka, nakon čega slijedi otkrivanje vrsta s pomoću PCR testa u stvarnom vremenu na temelju metode Gamel et al., 2017. (3)

2. Uzorkovanje za službeni nadzor radi praćenja iz članka 7. provodi se u skladu s jednim od sljedećeg: (a) uzorkovanje iz točke 1., s minimalnom stopom uzorkovanja tla od najmanje 400 ml/ha; (b) ciljano uzorkovanje najmanje 400 ml tla nakon vizualnog pregleda korijenja ako postoje vidljivi simptomi; ili (c) uzorkovanje najmanje 400 ml tla koje je u dodiru s krumpirima nakon vađenja pod uvjetom da je moguće ući u trag proizvodnoj jedinici u kojoj je uzgajan krumpir. Testiranje za službeni nadzor radi praćenja iz članka 7. provodi se u skladu s točkom 1.

3. Odstupajući od točke 1., standardna stopa uzorkovanja može se smanjiti na najmanje 400 ml tla/ha u svakom od sljedećih slučajeva: (a) postoje pisani dokazi da se krumpiri ili bilje navedeni u točki 1. Priloga I. nisu uzgajali i nisu bili prisutni u proizvodnoj jedinici šest godina prije službenog nadzora radi otkrivanja; (b) tijekom posljednja dva uzastopna službena nadzora radi otkrivanja na uzorcima veličine 1 500 ml tla/ha nije nađen nijedan primjerak navedenog štetnog organizma te se nakon prvog službenog nadzora radi otkrivanja nisu uzgajali krumpiri ili bilje iz točke 1. Priloga I., osim onih za koje je obvezan službeni nadzor radi otkrivanja u skladu s člankom 4. stavkom 1.; (c) tijekom posljednjeg službenog nadzora radi otkrivanja koji se morao provesti na uzorku veličine najmanje 1 500 ml tla/ha nije nađen nijedan primjerak navedenog štetnog organizma ili cisti navedenog štetnog organizma bez žive tvari te se u proizvodnoj jedinici nakon posljednjeg službenog nadzora radi otkrivanja nisu uzgajali krumpiri ili bilje iz točke 1. Priloga I., osim onih za koje je obvezan službeni nadzor radi otkrivanja u skladu s člankom 4. stavkom 1.

4. Stopa uzorkovanja može se smanjiti za polja veća od 8 ha odnosno 4 ha u svakom od sljedećih slučajeva: (a) kod standardne stope uzorka iz točke 1., prvih 8 ha uzorkuje se po stopi koja je tamo navedena, ali se može smanjiti za svaki dodatni hektar do najmanje 400 ml tla/ha; (b) kod umanjene veličine uzorka iz točke 3., prvih 4 ha se uzorkuje po stopi koja je tamo navedena, ali se dalje može smanjiti za svaki dodatni hektar do najmanje 200 ml tla/ha.

5. Umanjeni uzorak iz točaka 3. i 4. može se upotrebljavati u daljnjim službenim nadzorima radi otkrivanja iz članka 3. stavka 1. sve dok se u predmetnoj proizvodnoj jedinici ne pronađu navedeni štetni organizmi.

6. Standardna veličina uzorka tla može se smanjiti do najmanje 200 ml tla/ha pod uvjetom da se proizvodna jedinica nalazi na području koje je proglašeno nezaraženim navedenim štetnim organizmom te da je označena, održavana i nadzirana u skladu s relevantnim Međunarodnim standardima za fitosanitarne mjere (ISPM br. 4) (4).

7. Najmanja veličina uzorka tla u svim slučajevima je 200 ml tla po proizvodnoj jedinici.

(1) Bulman, S.R. & Marshall, J.W. (1997.). Differentiation of Australasian potato cyst nematode (PCN) populations using the Polymerase Chain Reaction (PCR). New Zealand Journal of Crop and Horticultural Science 25, str. 123.–129.

(2) Skantar, A.M., Handoo, Z.A., Carta, L.K., Chitwood, D.J. (2007). Morphological and molecular identification of Globodera pallida associated with Potato in Idaho. Journal of Nematology 39(2), str. 133.–144.

(3) Gamel, S., Letort A., Fouville D., Folcher L., Grenier E. (2017.). Development and validation of real-time PCR assays based on novel molecular markers for the simultaneous detection and identification of Globodera pallida, G. rostochiensis and Heterodera schachtii. Nematology 19 (7), str. 789.–804.

(4) ISPM 4. 1995. Requirements for the establishment of pest free areas. Rim, IPPC, FAO. https://www.ippc.int/en/publications/614/