HR Službeni list Europske unije 3

31979L0796



SLUŽBENI LIST EUROPSKE UNIJE 26.07.1979.

PRVA DIREKTIVA KOMISIJE

od 26. srpnja 1979.

o utvrđivanju metoda analize koje se koriste u Zajednici za ispitivanje određenih šećera namijenjenih prehrani ljudi

(79/796/EEZ)

KOMISIJA EUROPSKIH ZAJEDNICA,

uzimajući u obzir Ugovor o osnivanju Europske ekonomske zajednice,

uzimajući u obzir Direktivu Vijeća 73/437/EEZ od 11. prosinca 1973. o usklađivanju zakonodavstava država članica u odnosu na određene šećere namijenjene prehrani ljudi (1), a posebno njezin članak 11.,

budući da se člankom 11. te Direktive utvrđuje da se sastav određenih šećera mora provjeriti metodama analize koje se primjenjuju unutar Zajednice;

budući da je poželjno da se donese početni niz metoda za koje su provedene studije;

budući da su u Prilogu Direktivi 73/437/EEZ utvrđene metode za određivanje tipa boje za šećer ili bijeli šećer i za ekstra bijeli šećer, metoda mjerenja vodljivosti pepela u ekstra bijelom šećeru, u otopini šećera, u otopini invertnog šećera i u sirupu invertnog šećera te metoda određivanja boje u otopini ekstra bijelog šećera i otopini šećera;

budući da bi, s druge strane bilo uputno, dok se ne formuliraju daljnje metode Zajednice za određivanje reducirajućih šećera, dopustiti državama članicama mogućnost da nastave odobravati upotrebu Laneove i Eynonove metode (u Prilogu II. točki III. 3. i točki III. 4., metode 7. i 8.) umjesto Luff-Schoorlove metode (u Prilogu II. točki III. 3. i točki III. 4., metoda 6.);

budući da su metode analize predviđene ovom Direktivom u skladu s mišljenjem Stalnog odbora za hranu,

DONIJELA JE OVU DIREKTIVU:

Članak 1.

1. Države članice zahtijevaju da se analize potrebne za provjeru kriterija navedenih u Prilogu I., izvode u skladu s metodama opisanim u Prilogu II. ovoj Direktivi.

2. Ne dovodeći u pitanje drugi podstavak, za određivanje reducirajućih šećera u sljedećim šećerima upotrebljavat će se Luff-Schoorlova metoda (u Prilogu II., metoda 6.):

— otopini šećera,

— otopini bijelog šećera,

— otopini invertnog šećera,

— otopini bijelog invertnog šećera,

— sirupu invertnog šećera,

— glukoznom sirupu,

— osušenom glukoznom sirupu,

— dekstroza monohidratu,

— bezvodnoj dekstrozi.

Države članice, međutim, mogu na svom državnom području za određivanje reducirajućih šećera u jednom ili više gore navedenih šećera zahtijevati upotrebu Laneove i Eynonove metode (Prilog II., metode 7. i/ili 8. prema potrebi).

3. Ako država članica koristi mogućnost iz stavka 2. drugog podstavka, ona o tome odmah obavješćuje Komisiju i druge države članice.

Članak 2.

Države članice donose zakone i druge propise potrebne za usklađivanje s ovom Direktivom najkasnije 18 mjeseci nakon njezine objave. One o tome odmah obavješćuju Komisiju.

Članak 3.

Ova je Direktiva upućena državama članicama.

Sastavljeno u Bruxellesu 26. srpnja 1979. Za Komisiju Étienne DAVIGNON Član Komisije

(1) SL L 356, 27.12.1973., str. 71.

PRILOG I.

PODRUČJE PRIMJENE METODA ANALIZE KOJE SE KORISTE U ZAJEDNICI ZA ODREĐENE ŠEĆERE NAMIJENJENE PREHRANI LJUDI

I. Određivanje gubitka mase sušenjem u: — polubijelom šećeru (upotrebom metode 1., iz Priloga II.) — šećeru ili bijelom šećeru — ekstra bijelom šećeru II. Određivanje suhe tvari u: II.1. — glukoznom sirupu (upotrebom metode 2., iz Priloga II.) — osušenom glukoznom sirupu — dekstroza monohidratu — bezvodnoj dekstrozi II.2. — otopini šećera ili otopini bijelog šećera (upotrebom metode 3., iz Priloga II.) — otopini invertnog šećernoj ili otopini bijelog invertnog šećera — sirupu invertnog šećera ili sirupu bijelog invertnog šećera III. Mjerenje reducirajućih šećera u: III.1. — polubijelom šećeru (upotrebom metode 4., iz Priloga II.) III.2. — šećeru ili bijelom šećeru (upotrebom metode 5., iz Priloga II.) — ekstra bijelom šećeru III.3. — otopini šećera (upotrebom metode 6. ili 7., iz Priloga II.) — otopini bijelog šećera — otopini invertnog šećera — otopini bijelog invertnog šećera — sirupu invertnog šećera — sirupu bijelog invertnog šećera III.4. — glukoznom sirupu (upotrebom metode 6. ili 8., iz Priloga II.) — osušenom glukoznom sirupu — dekstroza monohidratu — bezvodnoj dekstrozi IV. Određivanje sulfatnog pepela u: — glukoznom sirupu (upotrebom metode 9., iz Priloga II.) — osušenom glukoznom sirupu — dekstroza monohidratu — bezvodnoj dekstrozi V. Određivanje polarizacije u: — polubijelom šećeru (upotrebom metode 10., iz Priloga II.) — šećeru ili bijelom šećeru — ekstra bijelom šećeru

PRILOG II.

METODE ANALIZE ZA PROVJERU SASTAVA ODREĐENIH ŠEĆERA NAMIJENJENIH PREHRANI LJUDI

UVOD

1. Priprema uzorka za analizu

Uzorak dostavljen u laboratorij treba dobro promiješati.

Odvojiti dio uzorka od najmanje 200 g i prenijeti ga odmah u čistu, suhu, hermetički zatvorenu posudu.

2. Reagensi i oprema

Popis opreme sadrži samo posebne instrumente i opremu ili onu koja zahtijeva posebne standarde.

Pojam voda, podrazumijeva destiliranu vodu ili demineraliziranu vodu najmanje jednake čistoće.

Ako nije drukčije navedeno, sve kemijske tvari koje se koriste moraju biti priznate analitičke čistoće.

Pojam otopina reagensa, ukoliko nije drukčije navedeno, podrazumijeva vodenu otopinu.

3. Izražavanje rezultata

Rezultat naveden u službenom izvješću o analizi predstavlja srednju vrijednost dobivenu iz najmanje između dva određivanja koja zadovoljavaju kriterij ponovljivosti.

Ukoliko nije drukčije određeno, rezultati se izražavaju kao maseni udio u uzorku zaprimljenom u laboratoriju.

Broj decimalnih mjesta u tako izraženom rezultatu određen je preciznošću metode.

METODA 1.

ODREĐIVANJE GUBITKA MASE SUŠENJEM

1. Opseg i područje primjene

Ovom se metodom određuje gubitak mase sušenjem u:

— polubijelom šećeru,

— šećeru ili bijelom šećeru,

— ekstra bijelom šećeru.

2. Definicija

„Gubitak mase sušenjem”: iznos gubitka mase pri sušenju, određen opisanom metodom.

3. Princip

Gubitak mase sušenjem određuje se sušenjem pri temperaturi 103 ± 2 °C.

4. Oprema

4.1. Analitička vaga točnosti 0,1 mg.

4.2. Sušionik s odgovarajućom ventilacijom i regulatorom temperature s mogućnošću održavanja temperature na 103 ± 2 °C.

4.3. Metalna posudica za vaganje s ravnim dnom, otporna na djelovanje uzorka i uvjete analize, promjera najmanje 100 mm i dubine najmanje 30 mm.

4.4. Eksikator sa svježe aktiviranim silika-gelom ili odgovarajućim sušilom s indikatorom prisutnosti vode.

5. Postupak

Napomena: postupci opisani u točkama od 5.3. do 5.7. moraju se provesti odmah nakon otvaranja posude s uzorkom.

5.1. Osušiti posudicu (4.3.) do konstantne mase u sušioniku (4.2.) pri 103 ± 2 °C.

5.2. Ostaviti posudicu da se hladi u eksikatoru (4.4.) najmanje 30 do 35 minuta i zatim je izvagati s točnošću 0,1 mg.

5.3. U posudicu izvagati približno 20 do 30 g uzorka s točnošću 0,1 mg.

5.4. Staviti posudicu u sušionik (4.2.) na tri sata pri 103 ± 2 °C.

5.5. Ostaviti posudicu da se ohladi u eksikatoru (4.4.) i zatim izvagati s točnošću 0,1 mg.

5.6. Ponovo postaviti posudice u sušionik na 30 minuta pri 103 ± 2 °C.

Ostaviti da se ohladi u eksikatoru (4.4.) i zatim izvagati s točnošću 0,1 mg. Ponoviti ovaj postupak ako je razlika između dva vaganja veća od 1 mg. Ako se masa poveća, za izračun upotrijebiti najnižu izmjerenu vrijednost.

5.7. Ukupno vrijeme sušenja ne smije biti duže od četiri sata.

6. Izražavanje rezultata

6.1. Formula i metoda izračunavanja:

Gubitak mase sušenjem izražava se kao postotak u odnosu na masu originalnog uzorka i izračunava se na sljedeći način:

gdje je:

m0 početna masa uzorka u gramima, m1 masa uzorka nakon sušenja u gramima.

6.2. Ponovljivost

Razlika između rezultata dva određivanja koje provodi isti analitičar istodobno ili neposredno jedno za drugim na istom uzorku, u istim uvjetima, ne smije prelaziti 0,02 g na 100 g uzorka.

METODA 2.

ODREĐIVANJE SUHE TVARI

Metoda s vakuum sušionikom

1. Opseg i područje primjene:

Ovom se metodom određuje udio suhe tvari u:

— glukoznom sirupu,

— sušenom glukoznom sirupu,

— dekstroza monohidratu,

— bezvodnoj dekstrozi.

2. Definicija

„Udio suhe tvari”: udio suhe tvari određen opisanom metodom.

3. Princip

Udio suhe tvari određuje se pri temperaturi od 70 ± 1 °C upotrebom vakuum sušionika, pri tlaku od najviše 3,3 kPa (34 mbar). Kod glukoznog sirupa ili sušenoga glukoznog sirupa, uzorci se prije sušenja pripremaju miješanjem s vodom i kremenim pijeskom.

4. Reagensi

4.1. Kremeni pijesak: pročistiti u Buchnerovom lijevku višekratnim ispiranjem razrijeđenom klorovodičnom kiselinom (1 ml koncentrirane kiseline, gustoće 1,19 g/ml pri 20 °C, na litru vode). Postupak je završen kada je otopina nakon ispiranja kisela. Ispiranje nastaviti vodom sve dok pH filtrata ne bude veći od 4. Osušiti u sušoniku pri 103 ± 2 °C i pohraniti u hermetički zatvorenu posudu.

5. Oprema

5.1. Vakuum sušionik, nepropustan, sa termostatom, termometrom i opremljen termometrom i vakuum manometrom. Sušionik mora biti konstruiran tako da omogućuje brzi prijenos topline na posudice za vaganje postavljene na njezinim policama.

5.2. Uređaj za sušenje zraka koji se sastoji od staklene kolone napunjene svježe aktiviranim suhim silika - gelom ili odgovarajućim sredstvom za sakupljanje vlage i koji sadrži indikator prisutnosti vode. Ova staklena kolona se povezana je s uređajem za ispiranje plinova koji sadrži koncentriranu sumpornu kiselinu i povezan je sa dovodom zraka u sušionik.

5.3. Vakuum pumpa kojom se u sušioniku može održavati tlak od 3,3 kPa (34 mbar) ili manji.

5.4. Metalna posudica za vaganje s ravnim dnom, otporna na djelovanje uzoraka i uvjete analize, promjera najmanje 100 mm i dubine najmanje 300 mm.

5.5. Stakleni štapić, dovoljno dug da ne može u potpunosti upasti u posudu.

5.6. Eksikator koji sadrži svježe aktivirani suhi silika - gel ili odgovarajući adsorbent za sakupljanje vlage s indikatorom sadržine vode.

5.7. Analitička vaga točnosti 0,1 mg.

6. Postupak

6.1. U posudicu za vaganje (5.4.) opremljenu staklenim štapićem (5.5.) potrebno je usipati približno 30 g kremenog pijeska (4.1.). To se sve zajedno postavi u sušionik (5.1.) pri 70 ± 1 °C i tlak se smanji na 3,3 kPa (34 mbar) ili manje.

Sušiti najmanje 5 sati, dovodeći spori dotok zraka u sušionik kroz uređaj za sušenje zraka. Povremeno treba provjeriti tlak i ako je potrebno korigirati ga.

6.2. U sušioniku ponovo uspostaviti atmosferski tlak, povećavajući pažljivo dotok suhog zraka. Posudu zajedno sa staklenim štapićem treba odmah staviti u eksikator (5.6.). Ostaviti da se ohladi i tada izvagati.

6.3. U čašu od 100 ml izvagati 10 g uzorka s točnošću od približno 1 mg.

6.4. Uzorak razrijediti s 10 ml tople vode i otopinu kvantitativno prenijeti u posudu za vaganje koristeći stakleni štapić (5.5.).

6.5. Posudicu s uzorkom i staklenim štapićem staviti u sušionik i smanjiti tlak na 3,3 kPa (34 mbar) ili manje. Sušiti pri 70 ± 1 °C, propuštajući spori protok suhog zraka kroz sušionik.

Postupak sušenja traje 20 sati; krajem prvog dana smanjenje mase je najveće. Nužno je da vakuum pumpa radi na prethodno prilagođenom tlaku i omogući spor dotok suhog zraka u sušionik kako bi se tijekom noći održavao tlak od približno 3,3 kPa (34 mbar) ili manje.

6.6. Ponovo uspostaviti atmosferski tlak u sušioniku, povećavajući pažljivo dotok suhog zraka. Posudicu za vaganje zajedno sa sadržajem staklenim štapićem treba odmah staviti u eksikator. Ostaviti da se ohladi i tada izvagati uz točnost od 1 mg.

6.7. Nastaviti s postupkom (6.5.) još 4 sata. Ponovo uspostaviti atmosferski tlak u sušioniku i odmah staviti posudicu u eksikator. Ostaviti da se ohladi i tada izvagati. Provjeriti je li postignuta konstantna masa. Smatra se da je konstantna masa postignuta na zadovoljavajući način ako razlika između dvaju vaganja iste posudice nije veća od 2 mg. Ako je razlika veća, ponoviti postupak 6.7.

6.8. Za određivanje suhe tvari u uzorcima bezvodne dekstroze ili monohidrata dekstroze nije potrebna upotrijebiti kremeni pijesak i vodu.

7. Izražavanje rezultata

7.1. Formula i metoda izračunavanja

Udio suhe tvari, izražen kao postotak u odnosu na masu uzorka, izražen je jednadžbom:

pri čemu je:

m0= početna masa uzorka u gramima;

m1= masa posudice za vaganje i kremenog pijeska, staklenog štapića i ostatka uzorka nakon sušenja, u gramima;

m2= masa posude za vaganje, kremenog pijeska i staklenog štapića u gramima.

7.2. Ponovljivost

Razlika između rezultata dva određivanja koje provodi isti analitičar istovremeno ili neposredno jedno za drugim na istom uzorku, pod istim uvjetima, ne smije biti veća od 0,12 g na 100 g uzorka.

METODA 3.

ODREĐIVANJE UKUPNE SUHE TVARI

(Refraktometrijska metoda)

1. Opseg i područje primjene:

Ovom se metodom određuje udio suhe tvari u:

— otopini šećera,

— otopini bijelog šećera,

— otopini invertnog šećera,

— otopini bijelog invertnog šećera,

— sirupu invertnog šećera,

— sirupu bijelog invertnog šećera.

2. Definicija

„Udio suhe tvari”: udio suhe tvari određen opisanom metodom.

3. Princip

Indeks refrakcije uzorka određuje se pri 20 °C te se udio suhe tvari očita pomoću referentne tablice u kojoj je navedena koncentracija kao funkcija indeksa refrakcije.

4. Oprema

4.1. Refraktometar, točnosti 4 decimalna mjesta, s termometrom i pumpom za vodu povezanom s termostatski kontroliranom vodenom kupelji temperature 20 ± 0,5 °C.

4.2. Izvor svjetlosti koji se sastoji od natrijeve svjetiljke.

5. Postupak

5.1. Ako su u uzorku prisutni kristali, treba ih ponovo otopiti razrjeđivanjem uzorka u omjeru 1 : 1 (m/m).

5.2. U refraktometru (4.1.) izmjeriti indeks refrakcije uzorka pri 20 °C.

6. Izražavanje i izračunavanje rezultata

6.1. Izračunati udio suhe tvari iz indeksa refrakcije za otopinu saharoze pri 20 °C navedenog u tablici i korigirati rezultat dobiven iz tablice za prisutnost invertnih šećera, dodavajući 0,022 za svaki 1 % invertnog šećera prisutnog u analiziranom uzorku.

6.2. Ako je uzorak bio razrijeđen vodom u omjeru 1:1 (m/m), izračunani udio suhe tvari množi se s dva.

6.3. Ponovljivost

Razlika između rezultata dva određivanja koje provodi isti analitičar istovremeno ili neposredno jedno za drugim na istom uzorku, u istim uvjetima, ne smije prelaziti 0,2 g suhe tvari na 100 g uzorka.

REFERENTNE TABLICE

Refrakcijski indeksi (n) otopine saharoze pri 20 °C (1)

n (20 °C) Saharoza (%) 1,3330 0,009 1,3331 0,078 1,3332 0,149 1,3333 0,218 1,3334 0,288 1,3335 0,358 1,3336 0,428 1,3337 0,498 1,3338 0,567 1,3339 0,637 1,3340 0,707 1,3341 0,776 1,3342 0,846 1,3343 0,915 1,3344 0,985 1,3345 1,054 1,3346 1,124 1,3347 1,193 1,3348 1,263 1,3349 1,332 1,3350 1,401 1,3351 1,470 1,3352 1,540 1,3353 1,609 1,3354 1,678 1,3355 1,747 1,3356 1,816 1,3357 1,885 1,3358 1,954 1,3359 2,023 1,3360 2,092 1,3361 2,161 1,3362 2,230 1,3363 2,299 1,3364 2,367 1,3365 2,436 1,3366 2,505 1,3367 2,574 1,3368 2,642 1,3369 2,711 1,3370 2,779 1,3371 2,848 1,3372 2,917 1,3373 2,985 1,3374 3,053 1,3375 3,122 1,3376 3,190 1,3377 3,259 1,3378 3,327 1,3379 3,395 1,3380 3,463 1,3381 3,532 1,3382 3,600 1,3383 3,668 1,3384 3,736 1,3385 3,804 1,3386 3,872 1,3387 3,940 1,3388 4,008 1,3389 4,076 1,3390 4,144 1,3391 4,212 1,3392 4,279 1,3393 4,347 1,3394 4,415 1,3395 4,483 1,3396 4,550 1,3397 4,618 1,3398 4,686 1,3399 4,753 1,3400 4,821 1,3401 4,888 1,3402 4,956 1,3403 5,023 1,3404 5,091 1,3405 5,158 1,3406 5,225 1,3407 5,293 1,3408 5,360 1,3409 5,427 1,3410 5,494 1,3411 5,562 1,3412 5,629 1,3413 5,696 1,3414 5,763 1,3415 5,830 1,3416 5,897 1,3417 5,964 1,3418 6,031 1,3419 6,098 1,3420 6,165 1,3421 6,231 1,3422 6,298 1,3423 6,365 1,3424 6,432 1,3425 6,498 1,3426 6,565 1,3427 6,632 1,3428 6,698 1,3429 6,765 1,3430 6,831 1,3431 6,898 1,3432 6,964 1,3433 7,031 1,3434 7,097 1,3435 7,1642 1,3436 7,230 1,3437 7,296 1,3438 7,362 1,3439 7,429 1,3440 7,495 1,3441 7,561 1,3442 7,627 1,3443 7,693 1,3444 7,759 1,3445 7,825 1,3446 7,891 1,3447 7,957 1,3448 8,023 1,3449 8,089 1,3450 8,155 1,3451 8,221 1,3452 8,287 1,3453 8,352 1,3454 8,418 1,3455 8,484 1,3456 8,550 1,3457 8,615 1,3458 8,681 1,3459 8,746 1,3460 8,812 1,3461 8,878 1,3462 8,943 1,3463 9,008 1,3464 9,074 1,3465 9,139 1,3466 9,205 1,3467 9,270 1,3468 9,335 1,3469 9,400 1,3470 9,466 1,3471 9,531 1,3472 9,596 1,3473 9,661 1,3474 9,726 1,3475 9,791 1,3476 9,856 1,3477 9,921 1,3478 9,986 1,3479 10,051 1,3480 10,116 1,3481 10,181 1,3482 10,246 1,3483 10,311 1,3484 10,375 1,3485 10,440 1,3486 10,505 1,3487 10,570 1,3488 10,634 1,3489 10,699 1,3490 10,763 1,3491 10,828 1,3492 10,892 1,3493 10,957 1,3494 11,021 1,3495 11,086 1,3496 11,150 1,3497 11,215 1,3498 11,279 1,3499 11,343 1,3500 11,407 1,3501 11,472 1,3502 11,536 1,3503 11,600 1,3504 11,664 1,3505 11,728 1,3506 11,792 1,3507 11,856 1,3508 11,920 1,3509 11,984 1,3510 12,048 1,3511 12,112 1,3512 12,176 1,3513 12,240 1,3514 12,304 1,3515 12,368 1,3516 12,431 1,3517 12,495 1,3518 12,559 1,3519 12,623 1,3520 12,686 1,3521 12,750 1,3522 12,813 1,3523 12,877 1,3524 12,940 1,3525 13,004 1,3526 13,067 1,3527 13,131 1,3528 13,194 1,3529 13,258 1,3530 13,321 1,3531 13,384 1,3532 13,448 1,3533 13,511 1,3534 13,574 1,3535 13,637 1,3536 13,700 1,3537 13,763 1,3538 13,826 1,3539 13,890 1,3540 13,953 1,3541 14,016 1,3542 14,079 1,3543 14,141 1,3544 14,204 1,3545 14,267 1,3546 14,330 1,3547 14,393 1,3548 14,456 1,3549 14,518 1,3550 14,581 1,3551 14,644 1,3552 14,707 1,3553 14,769 1,3554 14,832 1,3555 14,894 1,3556 14,957 1,3557 15,019 1,3558 15,082 1,3559 15,144 1,3560 15,207 1,3561 15,269 1,3562 15,332 1,3563 15,394 1,3564 15,456 1,3565 15,518 1,3566 15,581 1,3567 15,643 1,3568 15,705 1,3569 15,767 1,3570 15,829 1,3571 15,891 1,3572 15,953 1,3573 16,016 1,3574 16,078 1,3575 16,140 1,3576 16,201 1,3577 16,263 1,3578 16,325 1,3579 16,387 1,3580 16,449 1,3581 16,511 1,3582 16,573 1,3583 16,634 1,3584 16,696 1,3585 16,758 1,3586 16,819 1,3587 16,881 1,3588 16,943 1,3389 17,004 1,3590 17,066 1,3591 17,127 1,3592 17,189 1,3593 17,250 1,3594 17,311 1,3595 17,373 1,3596 17,434 1,3597 17,496 1,3598 17,557 1,3599 17,618 1,3600 17,679 1,3601 17,741 1,3602 17,802 1,3603 17,863 1,3604 17,924 1,3605 17,985 1,3606 18,046 1,3607 18,107 1,3608 18,168 1,3609 18,229 1,3610 18,290 1,3610 18,351 1,3611 18,412 1,3613 18,473 1,3614 18,534 1,3615 18,595 1,3616 18,655 1,3617 18,716 1,3618 18,777 1,3619 18,837 1,3620 18,898 1,3621 18,959 1,3622 19,019 1,3623 19,080 1,3624 19,141 1,3625 19,201 1,3626 19,262 1,3627 19,322 1,3628 19,382 1,3629 19,443 1,3630 19,503 1,3631 19,564 1,3632 19,624 1,3633 19,684 1,3634 19,745 1,3635 19,805 1,3636 19,865 1,3637 19,925 1,3638 19,985 1,3639 20,045 1,3640 20,106 1,3641 20,166 1,3642 20,226 1,3643 20,286 1,3644 20,346 1,3645 20,406 1,3646 20,466 1,3647 20,525 1,3648 20,585 1,3649 20,645 1,3650 20,705 1,3651 20,765 1,3652 20,825 1,3653 20,884 1,3654 20,944 1,3655 21,004 1,3656 21,063 1,3657 21,123 1,3658 21,183 1,3659 21,242 1,3660 21,302 1,3661 21,361 1,3662 21,421 1,3563 21,480 1,3664 21,540 1,3665 21,599 1,3666 21,658 1,3667 21,718 1,3668 21,777 1,3669 21,836 1,3670 21,896 1,3671 21,955 1,3672 22,014 1,1673 22,073 1,3674 22,132 1,3675 22,192 1,3676 22,251 1,1677 22,310 1,3678 22,369 1,3679 22,428 1,3680 22,487 1,3681 22,546 1,3682 22,605 1,3683 22,664 1,3684 22,723 1,3685 22,781 1,3686 22,840 1,3687 22,899 1,3688 22,958 1,3689 23,017 1,3690 23,075 1,3691 23,134 1,3692 23,193 1,3693 23,251 1,3694 23,310 1,3695 23,369 1,3696 23,427 1,3697 23,486 1,3698 23,544 1,3699 23,603 1,3700 23,661 1,3701 23,720 1,3702 23,778 1,3703 23,836 1,3704 23,895 1,3705 23,953 1,3706 24,011 1,3707 24,070 1,3708 24,128 1,3709 24,186 1,3710 24,244 1,3711 24,302 1,3712 24,361 1,3713 24,419 1,3714 24,477 1,3715 24,535 1,3716 24,593 1,3717 24,651 1,3718 24,709 1,3719 24,767 1,3720 24,825 1,3721 24,883 1,3722 24,941 1,3723 24,998 1,3724 25,056 1,3725 25,114 1,3726 25,172 1,3727 25,230 1,3728 25,287 1,3729 25,345 1,3730 25,403 1,3731 25,460 1,3732 25,518 1,3733 25,576 1,3734 25,633 1,3735 25,691 1,3736 25,748 1,3737 25,806 1,3738 25,863 1,3739 25,921 1,3740 25,978 1,3741 26,035 1,3742 26,093 1,3743 26,150 1,3744 26,207 1,3745 26,265 1,3746 26,322 1,3747 26,379 1,3748 26,436 1,3749 26,493 1,3750 26,551 1,3751 26,608 1,3752 26,665 1,3753 26,722 1,3754 26,779 1,3755 26,836 1,3756 26,893 1,3757 26,950 1,3758 27,007 1,3759 27,064 1,3760 27,121 1,3761 27,178 1,3762 27,234 1,3763 27,291 1,3764 27,348 1,3765 27,405 1,3765 27,462 1,3767 27,518 1,3768 27,575 1,3769 27,632 1,3770 27,688 1,3771 27,745 1,3772 27,802 1,3773 27,858 1,3774 27,915 1,3775 27,971 1,3776 28,028 1,3777 28,084 1,3778 28,141 1,3779 28,197 1,3780 28,253 1,3781 28,310 1,3782 28,366 1,3783 28,422 1,3784 28,479 1,3785 28,535 1,3786 28,591 1,3787 28,648 1,3788 28,704 1,3789 28,760 1,3790 28,816 1,3791 28,872 1,3792 28,928 1,3793 28,984 1,3794 29,040 1,3795 29,096 1,3796 29,152 1,3797 29,208 1,3798 29,264 1,3799 29,320 1,3800 29,376 1,3801 29,432 1,3802 29,488 1,3803 29,544 1,3804 29,600 1,3805 29,655 1,3806 29,711 1,3807 29,767 1,3808 29,823 1,3809 29,878 1,3810 29,934 1,3811 29,989 1,3812 30,045 1,3813 30,101 1,3814 30,156 1,3815 30,212 1,3816 30,267 1,3817 30,323 1,3818 30,378 1,3819 30,434 1,3820 30,489 1,3821 30,544 1,3822 30,600 1,3823 30,655 1,3824 30,711 1,3825 30,766 1,3826 30,821 1,3827 30,876 1,3828 30,932 1,3829 30,987 1,3830 31,042 1,3831 31,097 1,3832 31,152 1,3833 31,207 1,3834 31,262 1,3835 31,317 1,3836 31,372 1,3837 31,428 1,3838 31,482 1,3839 31,537 1,3840 31,592 1,3841 31,647 1,3842 31,702 1,3843 31,757 1,3844 31,812 1,3845 31,867 1,3846 31,922 1,3847 31,976 1,3848 32,031 1,3849 32,086 1,3850 32,140 1,3851 32,195 1,3852 32,250 1,3853 32,304 1,3854 32,359 1,3855 32,414 1,3856 32,468 1,3857 32,523 1,3858 32,577 1,3859 32,632 1,3860 32,686 1,3861 32,741 1,3862 32,795 1,3863 32,849 1,3864 32,904 1,3865 32,958 1,3866 33,013 1,3867 33,067 1,3868 33,121 1,3889 33,175 1,3870 33,230 1,3871 33,284 1,3872 33,338 1,3873 33,392 1,3874 33,446 1,3875 33,500 1,3876 33,555 1,3877 33,609 1,3878 33,663 1,3879 33,717 1,3880 33,771 1,3881 33,825 1,3882 33,879 1,3883 33,933 1,3884 33,987 1,3885 34,040 1,3886 34,094 1,3887 34,148 1,3888 34,202 1,3889 34,256 1,3890 34,310 1,3891 34,363 1,3892 34,417 1,3893 34,471 1,3894 34,524 1,3895 34,578 1,3896 34,632 1,3897 34,685 1,3898 34,739 1,3899 34,793 1,3900 34,846 1,3901 34,900 1,3902 34,953 1,3903 35,007 1,3904 35,060 1,3905 35,114 1,3906 35,167 1,3907 35,220 1,3908 35,274 1,3909 35,327 1,3910 35,380 1,3911 35,434 1,3912 35,487 1,3913 35,540 1,3914 35,593 1,3915 35,647 1,3916 35,700 1,3917 35,753 1,3918 35,806 1,3919 35,859 1,3920 35,912 1,3921 35,966 1,3922 36,019 1,3923 36,072 1,3924 36,125 1,3925 36,178 1,3926 36,231 1,3927 36,284 1,3928 36,337 1,3929 36,389 1,3930 36,442 1,3931 36,495 1,3932 36,548 1,3933 36,601 1,3934 36,654 1,3935 36,706 1,3936 36,759 1,3937 36,812 1,3938 36,865 1,3939 36,917 1,3940 36,970 1,3941 37,023 1,3942 37,075 1,3943 37,128 1,3944 37,180 1,3945 37,233 1,3946 37,286 1,3947 37,338 1,3948 37,391 1,3949 37,443 1,3950 37,495 1,3951 37,548 1,3952 37,600 1,3953 37,653 1,3954 37,705 1,3955 37,757 1,3956 37,810 1,3957 37,862 1,3958 37,914 1,3959 37,967 1,3960 38,019 1,3961 38,071 1,3962 38,123 1,3963 38,175 1,3964 38,228 1,3965 38,280 1,3966 38,332 1,3967 38,384 1,3968 38,436 1,3969 38,488 1,3970 38,540 1,3971 38,592 1,3972 38,644 1,3973 38,696 1,3974 38,748 1,3975 38,800 1,3976 38,852 1,3977 38,904 1,3978 38,955 1,3979 39,007 1,3980 39,059 1,3981 39,111 1,3982 39,163 1,3983 39,214 1,3984 39,266 1,3985 39,318 1,3986 39,370 1,3987 39,421 1,3988 39,473 1,3989 39,525 1,3990 39,576 1,3991 39,628 1,3992 39,679 1,3993 39,731 1,3994 39,782 1,3995 39,834 1,3996 39,885 1,3997 39,937 1,3998 39,988 1,3999 40,040 1,4000 40,091 1,4001 40,142 1,4002 40,194 1,4003 40,245 1,4004 40,296 1,4005 40,348 1,4006 40,399 1,4007 40,450 1,4008 40,501 1,4009 40,553 1,4010 40,604 1,4011 40,655 1,4012 40,706 1,4013 40,757 1,4014 40,808 1,4015 40,860 1,4016 40,911 1,4017 40,962 1,4018 41,013 1,4019 41,064 1,4020 41,115 1,4021 41,166 1,4022 41,217 1,4023 41,268 1,4024 41,318 1,4025 41,369 1,4026 41,420 1,4027 41,471 1,4028 41,522 1,4029 41,573 1,4030 41,623 1,4031 41,674 1,4032 41,725 1,4033 41,776 1,4034 41,826 1,4035 41,877 1,4036 41,928 1,4037 41,978 1,4038 42,029 1,4039 42,080 1,4040 42,130 1,4041 42,181 1,4042 42,231 1,4043 42,282 1,4044 42,332 1,4045 42,383 1,4046 42,433 1,4047 42,484 1,4048 42,534 1,4049 42,585 1,4050 42,635 1,4051 42,685 1,4052 42,736 1,4053 42,786 1,4054 42,836 1,4055 42,887 1,4056 42,937 1,4057 42,987 1,4058 43,037 1,4059 43,088 1,4060 43,138 1,4061 43,188 1,4062 43,238 1,4063 43,288 1,4064 43,338 1,4065 43,388 1,4066 43,439 1,4067 43,489 1,4068 43,539 1,4069 43,589 1,4070 43,639 1,4071 43,689 1,4072 43,739 1,4073 43,789 1,4074 43,838 1,4075 43,888 1,4076 43,938 1,4077 43,988 1,4078 44,038 1,4079 44,088 1,4080 44,138 1,4081 44,187 1,4082 44,237 1,4083 44,287 1,4084 44,337 1,4085 44,386 1,4086 44,436 1,4087 44,486 1,4088 44,535 1,4089 44,585 1,4090 44,635 1,4091 44,684 1,4092 44,734 1,4093 44,783 1,4094 44,833 1,4095 44,882 1,4096 44,932 1,4097 44,981 1,4098 45,031 1,4099 45,080 1,4100 45,130 1,4101 43,179 1,4102 45,228 1,4103 45,278 1,4104 45,327 1,4105 45,376 1,4106 45,426 1,4107 45,475 1,4108 45,524 1,4109 45,574 1,4110 45,623 1,4111 45,672 1,4112 45,721 1,4113 45,770 1,4114 45,820 1,4115 45,869 1,4116 45,918 1,4117 46,967 1,4118 46,016 1,4119 46,065 1,4120 46,114 1,4121 46,163 1,4122 46,212 1,4123 46,261 1,4124 46,310 1,4125 46,359 1,4126 46,408 1,4127 46,457 1,4128 46,506 1,4129 46,555 1,4130 46,604 1,4131 46,652 1,4132 46,701 1,4133 46,750 1,4134 46,799 1,4135 46,848 1,4136 46,896 1,4137 46,945 1,4138 46,994 1,4139 47,043 1,4140 47,091 1,4141 47,140 1,4141 47,188 1,4143 47,237 1,4144 47,286 1,4145 47,334 1,4146 47,383 1,4147 47,431 1,4148 47,480 1,4149 47,528 1,4150 47,577 1,4151 47,625 1,4152 47,674 1,4153 47,722 1,4154 47,771 1,4155 47,819 1,4156 47,868 1,4157 47,916 1,4158 47,964 1,4159 48,013 1,4160 48,061 1,4161 48,109 1,4162 48,158 1,4163 48,206 1,4164 48,254 1,4165 48,302 1,4166 48,350 1,4167 48,399 1,4168 48,447 1,4169 48,495 1,4170 48,543 1,4171 48,591 1,4172 48,639 1,4173 48,687 1,4174 48,735 1,4175 48,784 1,4176 48,832 1,4177 48,880 1,4178 48,928 1,4179 48,976 1,4180 49,023 1,4181 49,071 1,4182 49,119 1,4183 49,167 1,4184 49,215 1,4185 49,263 1,4186 49,311 1,4187 49,359 1,4188 49,407 1,4189 49,454 1,4190 49,502 1,4191 49,550 1,4192 49,598 1,4193 49,645 1,4194 49,693 1,4195 49,741 1,4196 49,788 1,4197 49,836 1,4198 49,884 1,4199 49,931 1,4200 49,979 1,4201 50,027 1,4202 50,074 1,4203 50,122 1,4204 50,169 1,4205 50,217 1,4206 50,264 1,4207 50,312 1,4208 50,359 1,4209 50,407 1,4210 50,454 1,4211 50,502 1,4212 50,549 1,4213 50,596 1,4214 50,644 1,4215 50,691 1,4216 50,738 1,4217 50,786 1,4218 50,833 1,4219 50,880 1,4220 50,928 1,4221 50,975 1,4222 51,022 1,4223 51,069 1,4224 51,116 1,4225 51,164 1,4226 51,211 1,4227 51,258 1,4228 51,305 1,4229 51,352 1,4230 51,399 1,4231 51,446 1,4232 51,493 1,4233 51,540 1,4234 51,587 1,4235 51,634 1,4236 51,681 1,4237 51,728 1,4238 51,775 1,4239 51,822 1,4240 51,869 1,4241 51,916 1,4242 51,963 1,4243 52,010 1,4244 52,057 1,4245 52,104 1,4246 52,150 1,4247 52,197 1,4248 52,244 1,4249 52,291 1,4250 52,338 1,4251 52,384 1,4252 52,431 1,4253 52,478 1,4254 52,524 1,4255 52,571 1,4256 52,618 1,4257 52,664 1,4258 52,711 1,4259 52,758 1,4260 52,804 1,4261 52,851 1,4261 52,897 1,4263 52,944 1,4264 52,990 1,4265 53,037 1,4266 53,083 1,4267 53,130 1,4268 53,176 1,4269 53,223 1,4270 53,269 1,4271 53,316 1,4272 53,362 1,4273 53,408 1,4274 53,455 1,4275 53,501 1,4276 53,548 1,4277 53,594 1,4278 53,640 1,4279 53,686 1,4280 53,733 1,4281 53,779 1,4282 53,825 1,4283 53,871 1,4284 53,918 1,4285 53,964 1,4286 54,010 1,4287 54,056 1,4288 54,102 1,4289 54,148 1,4290 54,194 1,4291 54,241 1,4292 54,287 1,4293 54,333 1,4294 54,379 1,4295 54,425 1,4296 54,471 1,4297 54,517 1,4298 54,563 1,4299 54,609 1,4300 54,655 1,4301 54,701 1,4302 54,746 1,4303 54,792 1,4304 54,838 1,4305 54,884 1,4306 54,930 1,4307 54,976 1,4308 55,022 1,4309 55,067 1,4310 55,113 1,4311 55,159 1,4312 55,205 1,4313 55,250 1,4314 55,296 1,4315 55,342 1,4316 55,388 1,4317 55,433 1,4318 55,479 1,4319 55,524 1,4320 55,570 1,4321 55,616 1,4322 55,661 1,4323 55,707 1,4324 55,752 1,4325 55,798 1,4326 55,844 1,4327 55,889 1,4328 55,935 1,4329 55,980 1,4330 56,026 1,4331 56,071 1,4332 56,116 1,4133 56,162 1,4334 56,207 1,4335 56,253 1,4336 56,298 1,4337 56,343 1,4338 56,389 1,4339 56,434 1,4340 56,479 1,4341 56,525 1,4342 56,570 1,4343 56,615 1,4344 56,660 1,4345 56,706 1,4346 56,751 1,4347 56,796 1,4348 56,841 1,4349 56,887 1,4350 56,932 1,4351 56,977 1,4352 57,022 1,4353 57,067 1,4354 57,112 1,4355 57,157 1,4356 57,202 1,4357 57,247 1,4358 57,292 1,4359 57,337 1,4360 57,382 1,4361 57,427 1,4362 57,472 1,4363 57,517 1,4364 57,562 1,4365 57,607 1,4366 57,652 1,4367 57,697 1,4368 57,742 1,4369 57,787 1,4370 57,832 1,4371 57,877 1,4372 57,921 1,4373 57,966 1,4374 58,011 1,4375 58,056 1,4376 58,101 1,4377 58,145 1,4378 58,190 1,4379 58,235 1,4380 58,279 1,4381 58,324 1,4382 58,369 1,4383 58,413 1,4384 53,458 1,4385 58,503 1,4386 58,547 1,4387 58,592 1,4388 58,637 1,4389 58,681 1,4390 58,726 1,4391 58,770 1,4392 58,815 1,4393 58,859 1,4394 58,904 1,4395 58,948 1,4396 58,993 1,4397 59,037 1,4398 59,082 1,4399 59,126 1,4400 59,170 1,4401 59,215 1,4402 59,259 1,4403 59,304 1,4404 59,348 1,4405 59,392 1,4406 59,437 1,4407 59,481 1,4408 59,525 1,4409 59,569 1,4410 59,614 1,4411 59,658 1,4412 59,702 1,4413 59,746 1,4414 59,791 1,4415 59,835 1,4416 59,879 1,4417 59,923 1,4418 59,967 1,4419 60,011 1,4420 60,056 1,4421 60,100 1,4422 60,144 1,4423 60,188 1,4424 60,232 1,4425 60,276 1,4426 60,320 1,4427 60,364 1,4428 60,408 1,4429 60,452 1,4430 60,496 1,4431 60,540 1,4432 60,584 1,4433 60,628 1,4434 60,672 1,4435 60,716 1,4436 60,759 1,4437 60,803 1,4438 60,847 1,4439 60,891 1,4440 60,935 1,4441 60,979 1,4442 61,023 1,4443 61,066 1,4444 61,110 1,4445 61,154 1,4446 61,198 1,4447 61,241 1,4448 61,285 1,4449 61,329 1,4450 61,372 1,4451 61,416 1,4452 61,460 1,4453 61,503 1,4454 61,547 1,4455 61,591 1,4456 61,634 1,4457 61,678 1,4458 61,721 1,4459 61,765 1,4460 61,809 1,4461 61,852 1,4462 61,896 1,4463 61,939 1,4464 62,983 1,4465 62,026 1,4466 62,070 1,4467 62,113 1,4468 62,156 1,4469 62,200 1,4470 62,243 1,4471 62,287 1,4472 62,330 1,4473 62,373 1,4474 62,417 1,4475 62,460 1,4476 62,503 1,4477 62,547 1,4478 62,590 1,4479 62,633 1,4480 62,677 1,4481 62,720 1,4482 62,763 1,4483 62,806 1,4184 62,849 1,4485 62,893 1,4486 62,936 1,4487 62,979 1,4488 63,022 1,4489 63,065 1,4490 63,108 1,4491 63,152 1,4492 63,195 1,4493 63,238 1,4494 63,281 1,4495 63,324 1,4496 63,367 1,4497 63,410 1,4498 63,453 1,4499 63,496 1,4500 63,539 1,4501 63,582 1,4502 63,625 1,4503 63,668 1,4304 63,711 1,4505 63,754 1,4506 63,797 1,4507 63,840 1,4508 63,882 1,4509 63,925 1,4510 63,968 1,4511 64,011 1,4512 64,054 1,4513 64,097 1,4514 64,139 1,4515 64,182 1,4516 64,225 1,4517 64,268 1,4518 64,311 1,4519 64,353 1,4520 64,396 1,4521 64,439 1,4522 64,481 1,4523 64,524 1,4524 64,567 1,4525 64,609 1,4526 64,652 1,4527 64,695 1,4528 64,737 1,4529 64,780 1,4530 64,823 1,4531 64,865 1,4532 64,908 1,4533 64,950 1,4534 64,993 1,4535 65,035 1,4536 65,078 1,4537 65,120 1,4538 65,163 1,4539 65,205 1,4540 65,248 1,4541 65,290 1,4542 65,333 1,4543 65,375 1,4544 65,417 1,4545 65,460 1,4546 65,502 1,4547 65,544 1,4548 65,587 1,4549 65,629 1,4550 65,672 1,4551 65,714 1,4552 65,756 1,4553 65,798 1,4554 65,841 1,4555 65,883 1,4556 65,925 1,4557 65,967 1,4558 66,010 1,4559 66,052 1,4560 66,094 1,4561 66,136 1,4562 66,178 1,4563 66,221 1,4564 66,263 1,4565 66,305 1,4566 66,347 1,4567 66,389 1,4568 66,431 1,4569 66,473 1,4570 66,515 1,4571 66,557 1,4572 66,599 1,4573 66,641 1,4574 66,683 1,4575 66,725 1,4576 66,767 1,4577 66,809 1,4578 66,851 1,4579 66,893 1,4580 66,935 1,4581 66,977 1,4582 67,019 1,4583 67,061 1,4584 67,103 1,4585 67,145 1,4586 67,186 1,4587 67,228 1,4588 67,270 1,4589 67,312 1,4590 67,354 1,4591 67,396 1,4592 67,437 1,4593 67,479 1,4594 67,521 1,4595 67,563 1,4596 67,604 1,4597 67,646 1,4598 67,688 1,4599 67,729 1,4600 67,771 1,4601 67,813 1,4602 67,854 1,4603 67,896 1,4604 67,938 1,4605 67,979 1,4606 68,021 1,4607 68,063 1,4608 68,104 1,4609 68,146 1,4610 68,187 1,4611 68,229 1,4611 68,270 1,4613 68,312 1,4614 68,353 1,4615 68,395 1,4616 68,436 1,4617 68,478 1,4618 68,519 1,4619 68,561 1,4620 68,602 1,4621 68,643 1,4622 68,685 1,4623 68,726 1,4624 68,768 1,4625 68,809 1,4626 68,850 1,4627 68,892 1,4628 68,933 1,4629 68,974 1,4630 69,016 1,4631 69,057 1,4632 69,098 1,4633 69,139 1,4634 69,181 1,4635 69,222 1,4636 69,263 1,4637 69,304 1,4638 69,346 1,4639 69,387 1,4640 69,428 1,4641 69,469 1,4642 69,510 1,4643 69,551 1,4644 69,593 1,4645 69,634 1,4646 69,675 1,4647 69,716 1,4648 69,757 1,4649 69,798 1,4650 69,839 1,4651 69,880 1,4652 69,921 1,4653 69,962 1,4654 70,003 1,4655 70,044 1,4656 70,085 1,4657 70,126 1,4658 70,167 1,4659 70,208 1,4660 70,249 1,4661 70,290 1,4662 70,331 1,4663 70,372 1,4664 70,413 1,4665 70,453 1,4666 70,494 1,4667 70,535 1,4668 70,576 1,4669 70,617 1,4670 70,658 1,4671 70,698 1,4672 70,739 1,4673 70,780 1,4674 70,821 1,4675 70,861 1,4676 70,902 1,4677 70,943 1,4678 70,984 1,4679 71,024 1,4680 71,065 1,4681 71,106 1,4681 71,146 1,4683 71,187 1,4684 71,228 1,4685 71,268 1,4686 71,309 1,4687 71,349 1,4688 71,390 1,4689 71,431 1,4690 71,471 1,4691 71,512 1,4692 71,552 1,4693 71,593 1,4694 71,633 1,4695 71,674 1,4696 71,714 1,4697 71,755 1,4698 71,795 1,4699 71,836 1,4700 71,876 1,4701 71,917 1,4702 71,957 1,4703 71,998 1,4704 72,038 1,4705 72,078 1,4706 72,119 1,4707 72,159 1,4708 72,199 1,4709 72,240 1,4710 72,280 1,4711 72,320 1,4712 72,361 1,4713 72,401 1,4714 72,441 1,4715 72,482 1,4716 72,522 1,4717 72,562 1,4718 72,602 1,4719 72,643 1,4720 72,683 1,4721 72,723 1,4722 72,763 1,4723 72,803 1,4724 72,843 1,4725 72,884 1,4726 72,924 1,4727 72,964 1,4728 73,004 1,4729 73,044 1,4730 73,084 1,4731 73,124 1,4732 73,164 1,4733 73,204 1,4734 73,244 1,4735 73,285 1,4736 73,325 1,4737 73,365 1,4738 73,405 1,4739 73,445 1,4740 73,485 1,4741 73,524 1,4742 73,564 1,4743 73,604 1,4744 73,644 1,4745 73,684 1,4746 73,724 1,4747 73,764 1,4748 73,804 1,4749 73,844 1,4750 73,884 1,4751 73,924 1,4752 73,963 1,4753 74,003 1,4754 74,043 1,4755 74,083 1,4756 74,123 1,4757 74,162 1,4758 74,202 1,4759 74,242 1,4760 74,282 1,4761 74,321 1,4762 74,361 1,4763 74,401 1,4764 74,441 1,4765 74,480 1,4766 74,520 1,4767 74,560 1,4768 74,599 1,4769 74,639 1,4770 74,678 1,4771 74,718 1,1772 74,758 1,4773 74,797 1,4774 74,837 1,4775 74,876 1,4776 74,916 1,4777 74,956 1,4778 74,995 1,4779 75,035 1,4780 75,074 1,1781 75,114 1,4782 75,153 1,4783 75,193 1,4784 75,232 1,4785 75,272 1,4786 75,311 1,4787 75,350 1,4788 75,390 1,4789 75,429 1,4790 75,469 1,4791 75,508 1,4792 75,547 1,4793 75,587 1,4794 75,626 1,4795 75,666 1,4796 75,705 1,4797 75,744 1,4798 75,784 1,4799 75,823 1,4800 75,862 1,4801 75,901 1,4802 75,941 1,4803 75,980 1,4804 76,019 1,4805 76,058 1,4806 76,098 1,4807 76,137 1,4808 76,176 1,4809 76,215 1,4810 76,254 1,4810 76,294 1,4812 76,333 1,4813 76,372 1,4814 76,411 1,4815 76,450 1,4816 76,489 1,4817 76,528 1,4818 76,567 1,4819 76,607 1,4820 76,646 1,4821 76,685 1,4822 76,724 1,4823 76,763 1,4824 76,802 1,4825 76,841 1,4826 76,880 1,4827 76,919 1,4828 76,958 1,4829 76,997 1,4830 77,036 1,4831 77,075 1,4832 77,113 1,4833 77,152 1,4834 77,191 1,4835 77,230 1,4336 77,269 1,4837 77,308 1,4838 77,347 1,4839 77,386 1,4840 77,425 1,4841 77,463 1,4842 77,502 1,4843 77,541 1,4844 77,580 1,4845 77,619 1,4846 77,657 1,4847 77,696 1,4848 77,735 1,4849 77,774 1,4850 77,812 1,4851 77,851 1,4852 77,890 1,4853 77,928 1,4854 77,967 1,4855 78,006 1,4856 78,045 1,4857 78,083 1,4858 78,122 1,4859 78,160 1,4860 78,199 1,4861 78,238 1,4862 78,276 1,4863 78,315 1,4864 78,353 1,4865 78,392 1,4866 78,431 1,4867 78,469 1,4868 78,508 1,4869 78,546 1,4870 78,585 1,4871 78,623 1,4872 78,662 1,4873 78,700 1,4874 78,739 1,4875 78,777 1,4876 78,816 1,4877 78,854 1,4878 78,892 1,4879 78,931 1,4880 78,969 1,4881 79,008 1,4882 79,046 1,4883 79,084 1,4884 79,123 1,4885 79,161 1,4886 79,199 1,4887 79,238 1,4888 79,276 1,4889 79,314 1,4890 79,353 1,4891 79,391 1,4892 79,429 1,4893 79,468 1,4894 79,506 1,4895 79,544 1,4896 79,582 1,4897 79,620 1,4898 79,659 1,4899 79,697 1,4900 79,735 1,4901 79,773 1,4902 79,811 1,4903 79,850 1,4904 79,888 1,4905 79,926 1,4906 79,964 1,4907 80,002 1,4908 80,040 1,4909 80,078 1,4910 80,116 1,4911 80,154 1,4912 80,192 1,4913 80,231 1,4914 80,269 1,4915 80,307 1,4916 80,345 1,4917 80,383 1,4918 80,421 1,4919 80,459 1,4920 80,497 1,4921 80,534 1,4922 80,572 1,4923 80,610 1,4924 80,648 1,4925 80,686 1,4926 80,724 1,4927 80,762 1,4928 80,800 1,4929 80,838 1,4930 80,876 1,4931 80,913 1,4932 80,951 1,4933 80,989 1,4934 81,027 1,4935 81,065 1,4936 81,103 1,4937 81,140 1,4938 81,178 1,4939 81,216 1,4940 81,254 1,4941 81,291 1,4942 81,329 1,4943 81,367 1,4944 81,405 1,4945 81,442 1,4946 81,480 1,4947 81,518 1,4948 81,555 1,4949 81,593 1,4950 81,631 1,4951 81,668 1,4952 81,706 1,4953 81,744 1,4954 81,781 1,4955 81,819 1,4956 81,856 1,4957 81,894 1,4958 81,932 1,4959 81,969 1,4960 82,007 1,4961 82,044 1,4962 82,082 1,4963 82,119 1,4964 82,157 1,4965 82,194 1,4966 82,232 1,4967 82,269 1,4968 82,307 1,4969 82,344 1,4970 82,381 1,4971 82,419 1,4972 82,456 1,4973 82,494 1,4974 87,531 1,4975 82,569 1,9976 82,606 1,4977 82,643 1,4978 82,681 1,4979 82,718 1,4980 82,755 1,4981 82,793 1,4982 82,830 1,4983 82,867 1,4984 82,905 1,4985 82,942 1,4986 82,979 1,4987 83,016 1,4988 83,054 1,4989 83,091 1,4990 83,128 1,4991 83,165 1,4992 83,202 1,4993 83,240 1,4994 83,277 1,4995 83,314 1,4996 83,351 1,4997 83,388 1,4998 83,425 1,4999 83,463 1,5000 83,500 1,5001 83,537 1,5002 83,574 1,5003 83,611 1,5004 83,648 1,5005 83,685 1,5006 83,722 1,5007 83,759 1,5008 83,796 1,5009 83,833 1,5010 83,870 1,5011 83,907 1,5012 83,944 1,5013 83,981 1,5014 84,018 1,5015 84,055 1,5016 84,092 1,5017 84,129 1,5018 84,166 1,5019 84,203 1,5020 84,240 1,5021 84,277 1,5022 84,314 1,5023 84,351 1,5024 84,388 1,5025 84,424 1,5026 84,461 1,5027 84,498 1,5028 84,535 1,5029 84,572 1,5030 84,609 1,5031 84,645 1,5032 84,682 1,5033 84,719 1,5034 84,756 1,5035 84,792 1,5036 84,829 1,5037 84,866 1,5038 84,903 1,5039 84,939 1,5040 84,976 1,5041 85,013 1,5042 85,049 1,5043 85,086 1,5044 85,123 1,5045 85,159 1,5046 85,196 1,5047 85,233 1,5048 85,269 1,5049 85,306 1,5050 85,343 1,5051 85,379 1,5052 85,416 1,5053 85,452 1,5054 85,489 1,5055 85,525 1,5056 85,562 1,5057 85,598 1,5058 85,635 1,5059 85,672 1,5060 85,708 1,5061 85,744 1,5062 85,781 1,5063 85,817 1,5064 85,854 1,5065 85,890 1,5066 85,927 1,5067 85,963 1,5068 86,000 1,5069 86,036 1,5070 86,072 1,5071 86,109 1,5072 86,145 1,5073 86,182 1,5074 86,218 1,5075 86,254 1,5076 86,291 1,5077 86,327 1,5078 86,363 1,5079 86,399

METODA 4.

MJERENJE REDUCIRAJUĆIH ŠEĆERA IZRAŽENIH KAO INVERTNI ŠEĆERI

(Metoda Berlinskog instituta)

Opseg i područje primjene

1. Ovom se metodom određuje količina reducirajućih šećera, izraženih kao invertni šećer, u polubijelom šećeru.

2. Definicija

„Reducirajući šećeri izraženi kao invertni šećer”: količina reducirajućih šećera određena opisanom metodom.

3. Princip

Otopina uzorka koji sadrži reducirajuće šećere koristi se za redukciju otopine bakrovog (II) kompleksa. Nastali bakrov (I) oksid tada se oksidira standardnom otopinom joda, čiji se suvišak određuje povratnom titracijom standardnom otopinom natrijevog tiosulfata.

4. Reagensi

4.1. Otopina bakra (II) (Müllerova otopina)

4.1.1. U 400 ml kipuće vode otopiti 35 g bakrovog (II) sulfata pentahidrata (CuSO4·5H2O). Ostaviti da se ohladi.

4.1.2. U 500 ml kipuće vode otopiti 173 g natrij-kalijevog tartarat tetrahidrata (Rochelle ili Seignette sol; KNaC4H4O6×4H2O) i 68 g bezvodnog natrijevog karbonata. Ostaviti da se ohladi.

4.1.3. Obje otopine (4.1.1. i 4.1.2.) preliti u odmjernu tikvicu od jedne litre i nadopuniti vodom do 1 litre. Dodati 2 g aktivnog ugljena, protresti, ostaviti da stoji nekoliko sati i profiltrirati preko debelog filter papira ili membranskog filtra.

Ako se tijekom stajanja pojave male količine bakrovog (I) oksida, otopinu treba ponovo profiltrirati.

4.2. Otopina octene kiseline, 5 mol/litra

4.3. Otopina joda 0,01665 mol/litra (tj. 0,0333 N; 4,2258 g/litra)

4.4. Otopina natrijevog tiosulfata 0,0333 mol/litra

4.5. Otopina škroba: jednoj litri kipuće vode dodati suspenziju 5 g topljivog škroba u 30 ml vode. Ostaviti da vrije 3 minute, ostaviti da se ohladi i dodati, ako je potrebno, 10 mg živinog (II) jodida kao konzervans.

5. Oprema

5.1. Erlenmeyerova tikvica, 300 ml; birete i pipete

5.2. Kipuća vodena kupelj

6. Postupak

6.1. U Erlenmeyerovu tikvicu od 300 ml odvagati uzorak (10 g ili manje) koji sadrži do 30 mg invertnog šećera i otopiti u približno 100 ml vode.

U Erlenmeyerovu tikvicu koja sadrži otopinu uzorka otpipetirati 10 ml otopine bakra (II) (4.1.). Sadržaj tikvice promiješati kružnim pokretima i tikvica se ostavi točno 10 minuta u kipućoj vodenoj kupelji (5.2.).

Razina otopine u Erlenmeyerovoj tikvici mora biti barem 20 mm ispod razine vode u vodenoj kupelji. Tikvicu treba brzo ohladiti mlazom hladne vode. Tijekom ovog postupka otopina se ne smije miješati, jer bi u protivnom atmosferski kisik ponovo oksidirao istaloženi bakrov (I) oksid.

Bez protresanja tikvice otpipetirati 5 ml octene kiseline 5 mol/litra (4.2.) i odmah iz birete dodati suvišak (između 20 i 40 ml) otopine joda 0,01665 mol/litra (4.3.).

Promiješati kako bi se otopio talog bakra. Titrirati suvišak joda s otopinom natrijevog sulfata 0,0333 mol/litra (4.4.) koristeći otopinu škroba (4.5.) kao indikator. Indikator se dodaje pri kraju titracije.

6.2. Provesti slijepu probu s vodom. Ovo je potrebno provesti za svaku novu otopinu bakra (II) (4.4.). Titracija ne smije prijeći 0,1 ml.

6.3. Provesti hladnu kontrolnu probu s otopinom šećera. Ostaviti na sobnoj temperaturi 10 minuta kako bi reagirale sve eventualno prisutne reducirajuće tvari kao što je sumporni dioksid.

7. Izražavanje rezultata

7.1. Formula i metoda izračunavanja

Volumen upotrijebljenog joda = ml 0,01665 mol/litra joda dodanog u suvišku minus ml 0,0333 mol/litra natrijevog tiosulfata utrošenog pri titraciji.

Volumen (u ml) 0,01665 mol/litra utrošenog joda korigira se oduzimanjem:

7.1.1. Broj ml utrošenih za slijepu probu provedenu s vodom (6.2.).

7.1.2. Broj ml utrošenih za hladnu probu s otopinom šećera (6.3.).

7.1.3. Vrijednosti od 2,0 ml za svakih 10 g saharoze u upotrijebljenom alikvotu, ili proporcionalne količine ako uzorak sadrži manje od 10 g saharoze (korekcija za saharozu).

Nakon ovih korekcija, svaki ml otopine joda (4.3.) koji je reagirao, odgovara jednom miligramu invertnog šećera.

Količina invertnog šećera, izražena kao postotak u uzorku, izračunava se na sljedeći način:

pri čemu je:

V1= broj ml otopine joda (4.3.) nakon korekcije,

m0= masa upotrijebljenog uzorka, u gramima.

7.2. Ponovljivost

Razlika između rezultata dva određivanja, koja na istom uzorku provodi isti analitičar istodobno ili neposredno jedno za drugim, u istim uvjetima, ne smije prelaziti 0,02 g na 100 g uzorka.

METODA 5.

MJERENJE REDUCIRAJUĆIH ŠEĆERA IZRAŽENIH KAO INVERTNI ŠEĆER

(Metoda po Knightu i Allenu)

1. Opseg i područje primjene

Ovom se metodom određuje količina reducirajućih šećera, izraženih kao invertni šećer u:

— šećeru ili bijelom šećeru,

— ekstra bijelom šećeru.

2. Definicija

„Reducirajući šećeri izraženi kao invertni šećer”: količina reducirajućih šećera određena opisanom metodom.

3. Princip

Otopini uzorka dodaje se u suvišku bakrovog (II) reagensa koji se reducira, a nereducirani dio se povratno titrira otopinom EDTA.

4. Reagensi

4.1. Otopina etilen diamin tetraoctene kiseline (di-natrijeva sol) (EDTA) 0,0025 mol/litra: otopiti 0,930 g EDTA u vodi i nadopuniti vodom do jedne litre.

4.2. Otopina mureksid indikatora: u 50 ml vode otopiti 0,25 g mureksida i pomiješati s 20 ml vodene otopine metilenskog modrila 0,2 g/100 ml.

4.3. Alkalni bakreni reagens: U približno 600 ml vode koja sadrži 40 ml 1,0 mol/litra natrijevog hidroksida, otopiti 25 grama bezvodnog natrijevog karbonata i 25 g kalij-natrijevog tartarat tetrahidrata. U približno 100 ml vode otopiti 6,0 grama bakrovog (II) sulfata pentahidrata (CuSO4·5H2O) i dodati otopini tartarata. Razrijediti vodom do 1 litre.

Napomena: otopina ima ograničen rok trajanja (jedan tjedan).

4.4. Standardna otopina invertnog šećera: u odmjernoj tikvici od 250 ml otopiti 23,750 g čiste saharoze (4.5.) u približno 120 ml vode, dodati 9 ml klorovodične kiseline (ζ = 1,16) i ostaviti da stoji osam dana pri sobnoj temperaturi. Otopinu dopuniti do 250 ml i provjeriti je li hidroliza potpuna mjerenjem polarimetrom ili saharimetrom u 200 mm cijevi. Vrijednost mora biti 11,80 ° ± 0,05 °S (vidi napomenu 8.). Otpipetirati 200 ml ove otopine u odmjernu tikvicu od 2 000 ml. Razrijediti vodom i uz protresanje (da ne bi došlo do prevelike lokalne alkalnosti) dodati 71,4 ml otopine natrijevog hidroksida (1 mol/litra) u kojoj je otopljeno 4 g benzojeve kiseline. Dopuniti do 2 000 ml da se dobije otopina invertnog šećera 1 g/100 ml. pH vrijednost ove otopine mora biti približno 3.

Ovu stabilnu osnovnu otopinu smije se razrijediti samo neposredno prije upotrebe.

4.5. Čista saharoza: uzorak čiste saharoze koji sadrži invertnog šećera najviše 0,001 g/100 g.

5. Oprema

5.1. Epruvete: 150 mm × 20 mm.

5.2. Bijela porculanska zdjelica.

5.3. Analitička vaga točnosti 0,1 mg.

6. Postupak

6.1. U epruveti (5.1.) otopiti 5 g uzorka šećera u 5 ml hladne vode. Dodati 2,0 ml bakrovog reagensa (4.3.) i promiješati. Epruvetu pet minuta uroniti u kipuću vodenu kupelj, a zatim ohladiti u hladnoj vodi.

6.2. Otopinu iz epruvete se kvantitativno prenijeti u bijelu porculansku zdjelicu (5.2.) koristeći što manju količinu vode, dodati 3 kapi indikatora (4.2.) te titrirati otopinom EDTA (4.1.). V0 je utrošeni volumen otopine ml EDTA pri titraciji.

Neposredno prije završne točke boja otopine mijenja se od zelene preko sive do ljubičaste, na završnoj točki. Ljubičasta boja zatim polako nestaje zbog oksidacije bakrovog (I) oksida u bakrov (II) oksid brzinom koja ovisi o koncentraciji prisutnog reduciranog bakra. Stoga završnoj točki titracije treba pristupiti prilično brzo.

6.3. Konstruirati baždarnu krivulju dodavajući poznate količine invertnog šećera (u obliku prikladno razrijeđene otopine 4.4.) k 5 g čiste saharoze (4.5.) i dodati dovoljnu količinu hladne vode tako da je ukupno dodano 5 ml otopine. Nacrtati dijagram volumena utrošenog pri titraciji (u ml) u ovisnosti o udjelu invertnog šećera dodanog k 5 g saharoze: dobiveni dijagram je linearan u području od 0,001 do 0,019 g/100 g invertnog šećera/100 g uzorka.

7. Izražavanje rezultata

7.1. Metoda izračunavanja

Iz baždarne krivulje očitati udio invertnog šećera koji odgovara vrijednosti V0 ml EDTA upotrijebljene pri analizi uzorka.

7.2. Kod uzoraka za analizu s koncentracijom većom od 0,017g invertnog šećera/100 g uzorka, potrebno je količinu uzorka koji je uzet sukladno postupku (6.1.) odgovarajuće smanjiti, a uzorak za analizu dopuniti do 5 g s čistom saharozom (4.5.).

7.3. Ponovljivost

Razlika između rezultata dvaju određivanja, koja provodi isti analitičar istovremeno ili neposredno jedno za drugim na istom uzorku te pod istim uvjetima, ne smije biti veća od 0,005 g na 100 g uzorka.

8. Napomena

Za pretvorbu °S u polarimetrijske stupnjeve, podijeliti °S s 2,889 (cijevi od 200 mm; izvor svjetlosti koji se sastoji od natrijeve svjetiljke; instrument mora biti instaliran u prostoriji u kojoj je moguće održavati temperaturu na približno 20 °C).

METODA 6.

ODREĐIVANJE REDUCIRAJUĆIH ŠEĆERA IZRAŽENIH KAO INVERTNI ŠEĆER ILI DEKSTROZNI EKVIVALENT

(Luff-Schoorlova metoda)

1. Opseg i područje primjene

Ovom se metodom određuje:

1.1. Količina reducirajućih šećera izražena kao invertni šećer u:

— otopini šećera,

— otopini bijelog šećera,

— otopini invertnog šećera,

— otopini bijelog invertnog šećera,

— sirupu invertnog šećerna,

— sirupu bijelog invertnog šećernom.

1.2. Količina reducirajućih šećera izražena i izračunana (na bazi suhe tvari) kao dekstrozni ekvivalent u:

— glukoznom sirupu,

— sušenom glukoznom sirupu.

1.3. Količina reducirajućih šećera izražena kao D-glukoza u:

— dekstroza monohidratu,

— bezvodnoj dekstrozi.

2. Definicija

„Reducirajući šećeri izraženi kao invertni šećeri, D-glukoza ili dekstrozni ekvivalent”: količina reducirajućih šećera izraženih kao invertni šećer, D-glukoza ili dekstrozni ekvivalent, određena opisanom metodom.

3. Princip

Reducirajući šećeri u uzorku (ako je potrebno pročišćenom) zagrijavaju se do točke vrenja u standardiziranim uvjetima s otopinom bakrovih (II) iona, koji se djelomično reducira u bakar (I). Višak bakrovih (II) iona određuje se jodometrijski.

4. Reagensi

4.1. Carrez otopina (I): otopiti u vodi 21,95 g cinkovog acetata dihidrata (Zn(CH3COO)2 ·2H2O) (ili 24 g cinkovog acetat trihidrata (Zn(CH3COO)2·3H2O) i 3 ml ledene octene kiseline i nadopuniti do 100 ml vodom.

4.2. Carrez otopina (II): otopiti u vodi 10,6 g kalijevog heksacijanoferata (II) trihidrata K4[Fe(CN)6] ·3H2O i nadopuniti vodom do 100 ml.

4.3. Luff-Schoorlov reagens: pripremiti sljedeće otopine:

4.3.1. Otopina bakrovog (II) sulfata: u 100 ml vode otopiti 25 g bakrovog (II) sulfata pentahidrata (CuSO4·5H2O) koji ne sadrži željezo.

4.3.2. Otopina limunske kiseline: u 50 ml vode otopiti 50 g limunske kiseline monohidrata (C6H8O7·H2O).

4.3.3. Otopina natrijevog karbonata: otopiti 143,8 g bezvodnog natrijevog karbonata u oko 300 ml tople vode i ostaviti da se ohladi.

4.3.4. U odmjernoj tikvici od jedne litre dodati otopinu limunske kiseline (4.3.2.) otopini natrijevog karbonata (4.3.3.) miješajući laganim kružnim pokretima. Miješati kružnim pokretima dok burna reakcija ne prestane, a zatim dodati otopinu bakrovog (II) sulfata (4.3.1.) i nadopuniti do 1 000 ml vodom. Ostaviti otopinu da stoji preko noći i zatim, ako je potrebno, profiltrirati. Provjeriti molaritet dobivenog reagensa metodom opisanom u točki 6.1. (Cu 0,1 mol/litra; Na2CO3 1 mol/litra).

4.4. Otopina natrijevog tiosulfata, 0,1 mol/litra.

4.5. Otopina škroba: u jednu litru kipuće vode dodati mješavinu koja se sastoji od 5 g topljivog škroba i 30 ml vode. Ostaviti da vrije tri minute, a zatim ostaviti da se ohladi i dodati, ako je potrebno, 10 mg živinog (II) jodida, koji služi kao konzervans.

4.6. Sumporna kiselina, 3 mol/litra.

4.7. Otopina kalijevog jodida, 30 % (m/v).

4.8. Listići plovućca, prokuhani u klorovodičnoj kiselini, isprani vodom od kiseline i zatim osušeni.

4.9. Izopentanol

4.10. Natrijev hidroksid, 0,1 mol/litra.

4.11. Klorovodična kiselina, 0,1 mol/litra.

4.12. Otopina fenolftaleina, 1 % (m/v) u etanolu.

5. Oprema

5.1. Erlenmeyerova tikvica, 300 ml, s povratnim kondenzatorom.

5.2. Štoperica.

6. Postupak

6.1. Standardizacija Luff-Schoorlovog reagensa (4.3.).

6.1.1. U 25 ml Luff-Schoorlovog reagensa (4.3.) dodati 3 g kalijevog jodida i 25 ml 3 mol/litra sumporne kiseline (4.6.).

Titrirati s 0,1 mol/litra natrijevim tiosulfatom (4.4.) koristeći otopinu škroba (4.5.) kao indikator dodan pred kraj titracije. Ukoliko volumen utrošenog 0,1 mol/litra natrijevog tiosulfata nije 25 ml, reagens treba ponovo pripremiti.

6.1.2. U odmjernu tikvicu od 100 ml otpipetirati 10 ml reagensa i razrijediti vodom do određenog volumena.

Otpipetirati 10 ml razrijeđenog reagensa u 25 ml 0,1 mol/litra klorovodične kiseline (4.11.) u Erlenmeyerovoj tikvici i zagrijavati u kipućoj vodenoj kupelji 1 sat. Ohladiti, nadopuniti do originalnog volumena svježe prokuhalom vodom i titrirati s 0,1 mol/l natrijevim hidroksidom (4.10.) koristeći fenolftalein (4.12.) kao indikator.

Volumen utrošenog 0,1 mol/litra natrijevog hidroksida (4.10.) mora biti između 5,5 i 6,5 ml.

6.1.3. Titrirati 10 ml razrijeđenog reagensa (6.1.2.) s 0,1 mol/litra klorovodičnom kiselinom (4.11.) koristeći fenolftalein (4.12.) kao indikator. U završnoj točki titracije nestaje ljubičasta boja.

Volumen utrošene 0,1 mol/litra klorovodične kiseline (4.11.) mora biti između 6,0 i 7,5 ml.

6.1.4. pH vrijednost Luff-Schoorlovog reagensa pri 20 °C mora biti između 9,3 i 9,4 ml.

6.2. Priprema otopine

6.2.1. S točnošću 1 mg izvagati 5 g uzorka i kvantitativno prenijeti u odmjernu tikvicu od 250 ml s 200 ml vode. Izbistriti, ako je potrebno, dodavanjem 5 ml Carrezove otopine (I) (4.1.) i zatim 5 ml Carrezove otopine (II) (4.2.). Promiješati nakon svakog dodavanja. Nadopuniti vodom do 250 ml. Dobro promiješati. Profiltrirati ako je potrebno.

6.2.2. Razrijediti otopinu (6.2.1.) tako da 25 ml otopine sadrži najmanje 15 mg i najviše 60 mg reducirajućih šećera izraženih kao glukoza.

6.3. Titracija po Luff-Schoorlovoj metodi

U Erlenmeyerovu tikvicu od 300 ml (5.1.). otpipetirati 25 ml Luff-Schoorlovog reagensa (4.3.) i 25 ml otopine šećera (6.2.2.) te dodati dva listića plovućca (4.8.). Na Erlenmeyerovu tikvicu (5.1.) spojiti povratno hladilo i aparaturu odmah postvaiti na azbestnu mrežicu iznad Bunsenovog plamenika. Srednji dio mrežice mora na azbestnom dijelu biti istog promjera kao dno tikvice. Zagrijavati tekućinu do vrenja 2 minute i pustiti da lagano vrije točno 10 minuta. Odmah ohladiti u hladnoj vodi i nakon 5 minuta titrirati na sljedeći način:

Dodati 10 ml otopine kalijevog jodida (4.7.) i odmah zatim dodati oprezno (zbog burne reakcije) 25 ml 3 mol/litra sumporne kiseline (4.6.). Titrirati s 0,1 mol/litra otopinom natrijevog tiosulfata (4.4.) dok otopina ne postane gotovo bezbojna, zatim dodati nekoliko ml otopine škroba (4.5.) kao indikator i nastaviti titraciju dok plava boja ne nestane.

Provesti kontrolnu probu koristeći 25 ml vode umjesto 25 ml otopine šećera (6.2.2.).

7. Izražavanje rezultata

7.1. Formula i način izračunavanja

Iz donje tablice očitati (interpolirati ako je potrebno) masu glukoze ili invertnog šećera u mg koja odgovara razlici između dva očitanja titracija, koji su izraženi u ml 0,1 mol/litra natrijevog tiosulfata.

Rezultat se izražava kao invertni šećer ili D-glukozu, kao postotak (m/m) suhe tvari.

7.2. Ponovljivost

Razlika između rezultata dviju titracija koje provodi isti analitičar istovremeno ili neposredno jednu iza druge, na istom uzorku te pod istim uvjetima, ne smije biti veća od 0,2 ml.

8. Napomena

Prije zakiseljavanja sumpornom kiselinom može se dodati mala količina izopentanola (4.9.) kako bi se smanjilo pjenjenje.

Tablice vrijednosti prema Luff-Schoorlovom reagensu

0,1 mol/litra Na2S2O3 Glukoza, fruktoza, invertni šećeri C6H12O6 ml mg razlika 1 2,4 2 4,8 2,4 3 7,2 2,4 4 9,7 2,5 5 12,2 2,5 6 14,7 2,5 7 17,2 2,5 8 19,8 2,6 9 22,4 2,6 10 25,0 2,6 11 27,6 2,6 12 30,3 2,7 13 33,0 2,7 14 35,7 2,7 15 38,5 2,8 16 41,3 2,8 17 44,2 2,9 18 47,1 2,9 19 50,0 2,9 20 53,0 3,0 21 56,0 3,0 22 59,1 3,1 23 62,2 3,1

METODA 7.

MJERENJE REDUCIRAJUĆIH ŠEĆERA IZRAŽENIH KAO INVERTNI ŠEĆER

(Laneova i Eynonova modifikacija konstantnog volumena)

1. Opseg i područje primjene

Ovom se metodom određuju reducirajući šećeri, izraženi kao invertni šećer u:

— otopini šećerna,

— otopini bijelog šećera,

— otopini invertnog šećera,

— otopini bijelog invertnog šećera,

— sirupu invertnog šećera,

— sirupu bijelog invertnog šećera.

2. Definicija

„Reducirajući šećeri izraženi kao invertni šećer”: količina reducirajućih šećera određena opisanom metodom.

3. Princip

Određeni volumen pripremljene Fehlingove otopine titrira se u točki vrenja s određenim volumenom uz korištenje metilenskog modrila kao unutarnjeg indikatora.

4. Reagensi

4.1. Fehlingova otopina:

4.1.1. Otopina A: Otopiti 69,3 g bakrovog (II) sulfata pentahidrata (CuSO4·5H2O) u vodi i dopuniti do 1 000 ml.

4.1.2. Otopina B: Otopiti 346,0 g natrij-kalijevog tartrata tetrahidrata (KNaC4H4O6·4H2O) i 100,0 g natrijevog hidroksida u vodi idopuniti do 1 000 ml. Prije upotrebe dekantirati bistru otopinu od taloga koji s vremenom može nastati.

Napomena:

Ove dvije otopine treba čuvati u smeđim bocama ili bocama boje jantara.

4.2. Otopina natrijevog hidroksida, 1 mol/litra.

4.3. Standardna otopina invertnog šećera: u odmjernoj tikvici od 250 ml otopiti 23,750 g čiste saharoze u približno 120 ml vode, dodati 9 ml klorovodične kiseline (ζ = 1,16) i ostaviti da stoji osam dana na sobnoj temperaturi. Otopinu dopuniti do 250 ml i mjerenjem polarimetrom ili saharimetrom u 200 mm cijevi provjeriti je li hidroliza potpuna. Vrijednost mora biti 11,80 ° ± 0,05 °S (vidi napomenu 8.). Otpipetirati 200 ml ove otopine u odmjernu tikvicu od 2 000 ml. Razrijediti vodom i uz protresanje (da ne bi došlo do prevelike lokalne alkalnosti) dodati 71,4 ml otopine natrijevog hidroksida (1 mol/litra) u kojoj je otopljeno 4 g benzojeve kiseline. Dopuniti do 2 000 ml da se dobije otopina invertnog šećera 1 g/100 ml. pH vrijednost ove otopine mora biti približno 3.

Ovu stabilnu osnovnu otopinu smije se razrijediti neposredno prije upotrebe.

Za pripremu otopine invertnog šećera 0,25 g/100 ml, pri 20 °C do oznake napuniti odmjernu tikvicu od 250 ml otopinom invertnog šećera 1 g/100 ml. Sadržaj tikvice prelije se u odmjernu tikvicu od 1 000 ml i nadopuni vodom do oznake, opet pri 20 °C.

4.4. Otopina metilenskog modrila, 1 g/100 ml.

5. Oprema

5.1. Laboratorijska tikvica od vatrostalnog stakla s uskim grlom, 500 ml.

5.2. Bireta, 50 ml, sa slavinom i vrhom za istjecanje, graduirana na 0,05 ml.

5.3. Graduirane pipete, 20 ml, 25 ml i 50 ml.

5.4. Odmjerne tikvice s jednom oznakom, 250 ml, 1 000 ml i 2 000 ml.

5.5. Plamenik koji omogućava vrenje u skladu s uvjetima opisanim u 6.1., i uočavanje promjene boje u završnoj točki bez potrebe uklanjanja tikvice (5.1.) od izvora topline.

5.6. Zaporni sat koji mjeri sekunde.

6. Postupak

6.1. Standardizacija Fehlingove otopine

6.1.1. U čistu, suhu čašu otpipetirati 50 ml otopine B (4.1.2.), a zatim 50 ml otopine A (4.1.1.) i dobro promiješati.

6.1.2. Isprati i napuniti biretu 0,25 % (0,25 g/100 ml) standardnom otopinom invertnog šećera (4.3.).

6.1.3. Otpipetirati alikvot od 20 ml mješavine otopina A i B (6.1.1.) u tikvicu od vatrostalnog stakla od 500 ml (5.1.). U tikvicu dodati 15 ml vode. Iz birete dodati 39 ml otopine invertnog šećera, dodati malu količinu granula protiv stvaranja plinskih mjehura i laganim kružnim pokretima promiješati sadržaj tikvice.

6.1.4. Tikvicu sa sadržajem zagrijavati do vrenja i pustiti da vrije točno dvije minute; tikvica se ne smije ukloniti s plamenika tijekom daljnjeg postupka niti vrenje smije prestati.

Na kraju dvominutnog perioda vrenja, dodati tri ili četiri kapi otopine metilenskog modrila (4.4.): otopina mora biti intenzivno plave boje.

6.1.5. Nastaviti standardizaciju dodajući iz birete postupno standardnu otopinu invertnog šećera, najprije po 0,2 ml; zatim 0,1 ml i na kraju kap po kap do završne točke. U završnoj točki nestaje plava boja metilenskog modrila. Otopina poprima crvenkastu boju kao rezultat suspendiranog bakrovog (I) oksida.

6.1.6. Završna bi se točka trebala postići tri minute od početka vrenja otopine. Konačni titar, V0, treba biti između 39,0 i 41,0 ml. Ukoliko je V0 izvan tih granica, potrebno je prilagoditi koncentraciju bakra u Fehlingovoj otopini A (4.1.1.) i ponoviti postupak standardizacije.

6.2. Priprema otopina uzorka

Koncentracija otopine uzorka treba biti takva da sadrži između 250 i 400 mg invertnog šećera u 100 ml.

6.3. Preliminarna proba

6.3.1. Preliminarnu probu je potrebno provesti kako bi se osiguralo da je količina vode koja se dodaje u 20 ml miješane otopine A i B dovoljna da se dobije konačni volumen od 75 ml nakon titracije.

Provesti isti postupak kako je opisano u 6.1.4., ali umjesto standardne otopine invertnog šećera koristiti otopinu uzorka, tj. iz birete u tikvicu dodati 25 ml otopine uzorka. Dodati 15 ml vode i pustiti da vrije dvije minute, a zatim titrirati do završne točke kako je opisano u 6.1.5.

6.3.2. Ako nakon dodavanja otopine metilenskog modrila ostane crvenkasta boja, znači da je koncentracija otopine uzorka prevelika. U tom slučaju, probu treba odbaciti i ponoviti s otopinom uzorka manje koncentracije.

Ukoliko je potrebno više od 50 ml otopine uzorka za dobivanje crvenkaste boje, mora se upotrijebiti otopina uzorka veće koncentracije.

Količinu vode koju je potrebno dodati, izračunati tako da se volumen mješavine Fehlingovih otopina (20 ml) i volumen otopine uzorka oduzmu od 75 ml.

6.4. Završna analiza otopine uzorka

6.4.1. U tikvicu od vatrostalnog stakla otpipetirati 20 ml miješane Fehlingove otopine i količinu vode određenu kako je opisano u 6.3.

6.4.2. Iz birete dodati određeni titar otopine uzorka (kako je određeno u 6.3.) 1 ml manje. Dodati granule protiv stvaranja plinskih mjehura, kružnim pokretima promiješati sadržaj tikvice, zagrijati tikvicu i sadržaj do vrenja i titrirati kako je opisano u (6.3.). Završna točka bi se trebala postići jednu minutu nakon dodavanja otopine metilenskog modrila. Konačni titar = V1.

7. Izražavanje rezultata

7.1. Formula i metoda izračunavanja

Količina reducirajućih šećera u uzorku, izraženih kao invertni šećer, izračunava se na sljedeći način:

% reducirajućih šećera (kao invertni šećer) =

gdje je:

C = koncentracija otopine uzorka u g na 100 ml; V0 = volumen standardne invertne otopine upotrijebljen pri standardizacijskoj titraciji, u ml; V1 = volumen otopine uzorka upotrijebljene za preciznu analizu opisanu u točki 6.4.2., u ml; f = faktor korekcije kojim se uzima u obzir koncentracija saharoze u otopini uzorka. Vrijednosti su prikazane u sljedećoj tablici:

Saharoza (g u kipućoj smjesi) Faktor korekcije f 0 1,000 0,5 0,982 1,0 0,971 1,5 0,962 2,0 0,954 2,5 0,946 3,0 0,939 3,5 0,932 4,0 0,926 4,5 0,920 5,0 0,915 5,5 0,910 6,0 0,904 6,5 0,898 7,0 0,893 7,5 0,888 8,0 0,883 8,5 0,878 9,0 0,874 9,5 0,869 10,0 0,864

Korekcije za različite količine saharoze u otopini uzorka mogu se iz tablice izračunavati interpolacijom.

Napomena:

Približna koncentracija saharoze može se izračunati tako da se od ukupne koncentracije otopljenih čvrstih tvari izraženih kao saharoza, koji se određuju pomoću indeksa refrakcije otopine koristeći metodu 3. iz ovog dokumenta oduzme koncentracija otopljenih čvrstih tvari, koje potječu od invertnog šećera (za potrebe ovog izračuna f = 1,0).

7.2. Ponovljivost

Razlika između rezultata dvaju određivanja, koja provodi isti analitičar, istovremeno ili neposredno jedno za drugim, na istom uzorku te pod istim uvjetima, ne smije prelaziti 1,0 % njihove aritmetičke sredine.

8. Napomena:

Za pretvorbu °S u polarimetrijske stupnjeve, podijeliti °S s 2,889 (cijevi od 200 mm; izvor svjetlosti natrijeva svjetiljka; instrument mora biti instaliran u prostoriji u kojoj je moguće održavati temperaturu na približno 20 °C).

METODA 8.

ODREĐIVANJE DEKSTROZNOG EKVIVALENTA

(Laneova i Eynonova konstanta)

1. Opseg i područje primjene

Ovom se metodom određuje dekstrozni ekvivalent u:

— glukoznom sirupu,

— sušenom glukoznom sirupu,

— dekstroza monohidratu,

— bezvodnoj dekstrozi.

2. Definicija

2.1. „Reducirajuća snaga” je količina reducirajućih šećera, određena opisanom metodom, izražena kao bezvodna dekstroza (D-glukoza) i izračunana kao maseni udio u uzorku.

2.2. „Ekvivalent dekstroze” je reducirajuća snaga, izračunana kao maseni udio u suhoj tvari uzorka.

3. Princip

Otopina uzorka u točki vrenja, u strogo specificiranim uvjetima, titrira se s određenim volumenom pripremljene Fehlingove otopine uz korištenje metilenskog modrila kao unutarnjeg indikatora.

4. Reagensi

4.1. Fehlingova otopina:

4.1.1. Otopina A.

Otopiti 69,3 g bakar (II) sulfata pentahidrata (CuSO4 ·5H2O) u vodi i dopuniti do 1 000 ml u odmjernoj tikvici.

4.1.2. Otopina B.

Otopiti 346,0 g natrij-kalijevog tartarat tetrahidrata (KNaC4H4O6·4H2O) i 100 g natrijevog hidroksida u vodi. Dopuni do 1 000 ml u odmjernoj tikvici. Prije upotrebe dekantirati bistru otopinu od taloga koji s vremenom može nastati.

Napomena:

Ove dvije otopine (4.1.1. i 4.1.2.) treba pohraniti u smeđe boce ili boce boje jantara.

4.1.3. Priprema miješane Fehlingove otopine

U čistu i suhu čašu otpipetirati 50 ml otopine B (4.1.2.), a zatim 50 ml otopine A (4.1.1.) i dobro promiješati.

Napomena:

Miješana Fehlingova otopina ne smije se pohranjivati nego ju je uvijek potrebno pripremiti svježu i standardizirati (6.1.).

4.2. Bezvodna dekstroza (D-glukoza) (C6H12O6)

Prije upotrebe materijal treba sušiti četiri sata u vakuum sušioniku na temperaturi 100 ± 1 °C ili manje i pri unutarnjem tlaku približno 10 kPa (103 mbar).

4.3. Standardna otopina dekstroze, 0,600 g/100 ml

S točnošću od 0,1 mg izvagati 0,6 g bezvodne dekstroze (4.2.), otopiti je u vodi, otopinu kvantitativno prenijeti u odmjernu tikvicu od 100 ml (5.4), nadopuniti vodom do oznake i promiješati.

Ova se otopina prije svake upotrebe mora svježe pripremiti.

4.4. Otopina metilenskog modrila, 0,1 g/100 ml

Otopiti 0,1 g metilenskog modrila u 100 ml vode.

5. Oprema

5.1. Laboratorijska tikvica od vatrostalnog stakla s uskim grlom, 250 ml

5.2. Bireta, 50 ml, sa slavinom i vrhom za istjecanje, graduirana na 0,05 ml.

5.3. Pipete s jednom oznakom, 25 ml i 50 ml.

5.4. Odmjerne tikvice s jednom oznakom, 100 ml i 500 ml.

5.5. Plamenik koji omogućava vrenje u skladu s uvjetima opisanim u točki 6.1. i uočavanje promjene boje u završnoj točki bez potrebe uklanjanja tikvice (5.1.) od izvora topline (vidi točku 6.1., napomenu 3.).

5.6. Zaporni sat koji mjeri sekunde.

6. Postupak

6.1. Standardizacija Fehlingove otopine

6.1.1. U čistu, suhu vatrostalnu tikvicu (5.1.). otpipetirati 25 ml Fehlingove otopine (4.1.3.)

6.1.2. Napuniti biretu (5.2.) standardnom otopinom dekstroze (4.3.) i podesiti meniskus na oznaku nula.

6.1.3. U vatrostalnu tikvicu (5.1.) iz birete dodati 18 ml standardne otopine dekstroze (4.3.). Kružnim pokretima izmiješati sadržaj tikvice.

6.1.4. Vatrostalnu tikvicu postaviti na plamenik (5.5.) koji je prethodno podešen tako da vrenje počne nakon 120 ± 15 sekundi.

Plamenik se tijekom titracije ne smije dodatno podešavati (vidi napomenu 1.).

6.1.5. Kad započne vrenje, uključiti zaporni sat.

6.1.6. Sadržaj tikvice pustiti da vrije 120 sekundi, mjereći vrijeme zapornim satom.

Pri kraju vrenja dodati 1 ml otopine metilenskog modrila (4.4.).

6.1.7. Nakon 120 sekundi vrenja (mjerenih zapornim satom) početi iz birete (6.1.2.) u vatrostalnu tikvicu (5.1.) dodavati po 0,5 ml standardne otopine dekstroze dok u potpunosti ne nestane plava boja metilenskog modrila (vidi napomene 2. i 3.).

Zabilježiti ukupni dodani volumen standardne otopine dekstroze uključujući predzadnje dodavanje 0,5 ml (X ml).

6.1.8. Ponoviti postupak pod točkama 6.1.1. i 6.1.2.

6.1.9. U vatrostalnu tikvicu (5.1.) iz birete dodati (X–0,3) ml standardne otopine dekstroze.

6.1.10. Ponoviti postupak pod točkama 6.1.4., 6.1.5 i 6.1.6.

6.1.11. Nakon 120 sekundi vrenja (mjereno zapornim satom) početi iz birete dodavati standardnu otopinu dekstroze u vatrostalnu tikvicu (5.1.), najprije po 0,2 ml, zatim kap po kap, dok ne nestane plava boja metilenskog modrila.

Pri kraju postupka standardnu otopinu glukoze treba dodavati u intervalima od 10 do 15 sekundi.

Ova dodavanja bi trebala biti završena u vremenu do 60 sekundi, a ukupno vrijeme vrenja ne smije biti duže od 180 sekundi.

Kako bi se to postiglo, mogla bi biti potrebna i treća titracija, s malo većim, prikladno podešenim, početnim dodatkom standardne otopine dekstroze (6.1.9.).

6.1.12. Zabilježiti volumen standardne otopine dekstroze (V0 ml), utrošen do završne točke zadnje titracije (vidi napomenu 4.).

6.1.13. V0 mora biti između 19,0 i 21,0 ml standardne otopine dekstroze (4.3).

Ako je V0 izvan tih granica, treba prilagoditi koncentraciju Fehlingove otopine A (4.1.1.) i ponoviti postupak standardizacije.

6.1.14. Budući da je V0 poznat, za svakodnevnu standardizaciju miješane Fehlingove otopine potrebna je samo jedna titracija, s početnim volumenom dodavanja standardne otopine dekstroze (V0 – 0,5) ml.

Napomena 1.:

Ovim se osigurava da, kad započne vrenje, stvaranje pare bude neprekidno tijekom cijelog procesa titracije, čime se u najvećoj mogućoj mjeri sprečava ulazak zraka u tikvicu i reoksidacija njezinog sadržaja.

Napomena 2.:

Nestajanje modre boje metilenskog modrila najbolje se uočava tako da se promatraju gornji slojevi i meniskus otopine u tikvici, jer je u njemu relativno malo istaloženog crvenog bakar (I) oksida. Nestajanje modre boje najbolje se uočava ako se koristi indirektno svjetlo. Korisno je i postaviti bijeli zaslon iza tikvice.

Napomena 3.:

Tijekom određivanja bireta mora biti što je više moguće izolirana od izvora topline.

Napomena 4.:

Budući da je uvijek prisutan ljudski faktor, svaki analitičar treba provesti vlastitu standardizaciju i u izračunu koristiti vlastite vrijednosti za V0 (7.1.).

6.2. Preliminarno ispitivanje pripremljenog uzorka

6.2.1. Ukoliko približna vrijednost reducirajuće snage (2.1.) pripremljenog uzorka nije poznata, potrebno je provesti preliminarno ispitivanje kojim se određuje približna vrijednost potrebna za izračunavanje masenog udjela u uzorku (6.3.).

Ovo se ispitivanje provodi na sljedeći način:

6.2.2. Pripremiti 2 % otopinu m/v uzorka s procijenjenom vrijednosti „Z”.

6.2.3. Postupiti kako je opisano u točki 6.1.2., koristeći otopinu uzorka (6.2.2.) umjesto standardne otopine dekstroze.

6.2.4. Postupiti kako je opisano u točki 6.1.1.

6.2.5. Postupiti kako je opisano u točki 6.1.3., koristeći 10,0 ml otopine uzorka umjesto 18,0 ml standardne otopine dekstroze.

6.2.6. Postupiti kako je opisano u točki 6.1.4.

6.2.7. Sadržaj tikvice zagrijati do vrenja. Dodati 1 ml otopine metilenskog modrila (4.4.).

6.2.8. Odmah po početku vrenja, treba uključiti zaporni sat (5.6.) i započeti s dodavanjem po 1,0 ml otopine uzorka iz birete u tikvicu u intervalima od približno 10 sekundi, dok ne nestane boja metilenskog modrila.

Zabilježiti ukupni dodani volumen otopine uzorka uključujući predzadnje dodavanje (Y ml).

6.2.9. „Y” ne smije biti veći od 50 ml. Ukoliko jest, treba povećati koncentraciju otopine uzorka i ponoviti titraciju.

6.2.10. Približna reducirajuća snaga pripremljenog uzorka, izražena kao maseni udio, izračunava se na sljedeći način:

6.3. Uzorak za analizu

S točnošću 0,1 mg izvagati pripremljeni uzorak (mg) koja sadrži između 2,85 i 3,15 g reducirajućih šećera izraženih kao bezvodna dekstroza (D-glukoza), koristeći pri izračunavanju ili poznatu približnu vrijednost reducirajuće snage (2.1.) ili približnu vrijednost dobivenu u točki 6.2.10.

6.4. Otopina uzorka

Otopiti uzorak u vodi i nadopuniti do 500 ml u odmjernoj tikvici.

6.5. Određivanje

6.5.1. Postupiti kako je opisano u točki 6.1.1.

6.5.2. Napuniti biretu (5.2.) otopinom uzorka (6.4.) i podesiti meniskus na oznaku nula.

6.5.3. U vatrostalnu tikvicu birete dodati 18,5 ml otopine uzorka. Izmiješati sadržaj kružnim kretnjama.

6.5.4. Postupiti kako je opisano u točki 6.1.4.

6.5.5. Postupiti kako je opisano u točki 6.1.5.

6.5.6. Postupiti kako je opisano u točki 6.1.6.

6.5.7. Postupiti kako je opisano u točki 6.1.7., koristeći otopinu uzorka umjesto standardne otopine dekstroze.

6.5.8. Postupiti kako je opisano u točki 6.1.8.

6.5.9. Postupiti kako je opisano u točki 6.1.9., koristeći otopinu uzorka umjesto standardne otopine dekstroze.

6.5.10. Postupiti kako je opisano u točki 6.1.10.

6.5.11. Postupiti kako je opisano u točki 6.1.11., koristeći otopinu uzorka umjesto standardne otopine dekstroze.

6.5.12. Zabilježiti volumen otopine uzorka (V1) upotrijebljen do završne točke zadnje titracije.

6.5.13. V1 mora biti između 19,0 i 21,0 ml otopine uzorka.

Ukoliko je V1 izvan tih granica, treba prilagoditi koncentraciju otopine uzorka i ponoviti postupak pod točkama 6.5.1. do 6.5.12.

6.5.14. Treba provesti dva određivanja na istoj otopini uzorka.

6.6. Količina suhe tvari

Odrediti udio suhe tvari metodom 2. pripremljenog uzorka.

7. Izražavanje rezultata

7.1. Formula i metoda izračunavanja

7.1.1. Reducirajuća snaga

Reducirajuća snaga, izražena kao maseni udio u pripremljenom uzorku, izračunava se na sljedeći način:

pri čemu je:

V0= volumen standardne otopine dekstroze (4.3.) upotrijebljen pri standardizacijskoj titraciji (6.1), izražen u ml;

V1= volumen otopine uzorka (6.4.) upotrijebljen pri titraciji utvrđivanja (6.5.), izražen u ml;

M= masa uzorka (6.3.) upotrijebljena za pripremu 500 ml otopine uzorka, izražena u gramima.

7.1.2. Dekstrozni ekvivalent

Dekstrozni ekvivalent, izračunan kao postotak u odnosu na masu suhe tvari u pripremljenom uzorku, izražen je na sljedeći način:

pri čemu je:

RP = reducirajuća snaga, izračunana kao maseni udio pripremljenog uzorka (7.1.1.); D = količina suhe tvari u pripremljenom uzorku, izražena kao postotak mase.

7.1.3. Rezultat je aritmetička sredina dvaju određivanja, pod uvjetom da su zadovoljen kriterij ponovljivosti (7.2.).

7.2. Ponovljivost

Razlika između rezultata dva određivanja, koja provodi isti analitičar, istovremeno ili neposredno jedno za drugim, na istom uzorku te pod istim uvjetima, ne smije prelaziti 1,0 % njihove aritmetičke sredine.

METODA 9.

ODREĐIVANJE SULFATNOG PEPELA

1. Opseg i područje primjene

Ovom se metodom određuje količina sulfatnog pepela u:

— glukoznom sirupu,

— sušenom glukoznom sirupu,

— dekstroza monohidratu,

— bezvodnoj dekstrozi.

2. Definicija

„Količina sulfatnog pepela”: količina sulfatnog pepela određena opisanom metodom.

3. Princip

Određuje se ostatak mase uzorka nakon spaljivanja u oksidacijskoj atmosferi pri 525 °C u prisutnosti sumporne kiseline i izračunava se kao maseni udio u uzorku.

4. Reagensi

4.1. Sumporna kiselina, razrijeđena otopina: uz miješanje i hlađenje polako i pažljivo dodati 100 ml koncentrirane sumporne kiseline (gustoća pri 20 °C = 1,84 g/ml; 96 % m/m) u 300 ml vode

5. Oprema

5.1. Električna mufolna peć opremljena pirometrom, radne temperature 525 ± 25 °C.

5.2. Analitička vaga, točnosti 0,1 mg.

5.3. Lončići za žarenje, od platine ili kvarcnog stakla, odgovarajućeg kapaciteta.

5.4. Eksikator, sa svježe aktiviranim silikagelom ili odgovarajućim sušilom i s indikatorom prisutnosti vode.

6. Postupak

Lončić za žarenje (5.3.) zagrijati na temperaturu spaljivanja, ohladiti u eksikatoru i izvagati. S točnošću 0,1 mg u lončić za žarenje izvagati 5 g glukoznog sirupa ili sušenoga glukoznog sirupa, ili približno 10 g dekstroza monohidrata ili bezvodne dekstroze.

Dodati 5 ml otopine sumporne kiseline (4.1.) (vidi napomenu 8.1.) i uzorak pažljivo zagrijavati u lončiću za žarenje iznad plamena ili na žarnoj ploči dok potpuno ne pougljeni. Postupak karbonizacije, pri kojem iz uzorka izlaze pare (vidi napomenu 8.2.), treba izvoditi u digestoru.

Lončić za žarenje (5.3.) staviti u mufolnu peć (5.1.) u kojoj je temperatura 525 ± 25 °C i spaljivati do nastanka bijelog pepela. To obično traje dva sata (vidi napomenu 8.3.).

Uzorak hladiti približno 30 minuta u eksikatoru (5.4.) i zatim izvagati.

7. Izražavanje rezultata

7.1. Formula i metoda izračunavanja

Količina sulfatnog pepela, izražena kao maseni udio u analiziranom uzorku, izračunava se na sljedeći način:

pri čemu je:

m1= masa pepela u gramima;

m0= masa uzorka u gramima.

7.2. Ponovljivost

Razlika između rezultata dvaju određivanja, koja provodi isti analitičar, istovremeno ili neposredno jedno za drugim, na istom uzorku pod istim uvjetima, ne smije prelaziti 2 % njihove aritmetičke sredine.

8. Napomene

8.1. Sumpornu kiselinu dodavati u malim količinama kako bi se spriječilo prekomjerno pjenjenje.

8.2. Pri prvoj karbonizaciji potreban je veliki oprez kako bi se spriječio gubitak uzorka ili pepela zbog prekomjernog nabreknuća uzorka.

8.3. Ukoliko uzorak ne sagori potpuno (tj. ostanu crne čestice), lončić za žarenje treba izvaditi iz peći, ohladiti, ostatak uzorka nakon hlađenja navlažiti s nekoliko kapi vode i vratiti u peć.

METODA 10.

ODREĐIVANJE POLARIZACIJE

1. Opseg i područje primjene

Ovom se metodom određuje polarizacija u:

— polubijelom šećeru,

— šećeru ili bijelom šećeru,

— ekstra bijelom šećeru.

2. Definicija

Polarizacija je optička rotacija polarizirane svjetlosti otopine šećera 26 g šećera na 100 ml u cijevi duljine 200 mm.

3. Princip

Polarizacija se određuje upotrebom saharimetra ili polarimetra pod uvjetima opisanim u sljedećoj metodi.

4. Reagensi

4.1. Sredstvo za bistrenje: alkalna otopina olovnog acetata.

U približno 1 000 ml netom provrele vode dodati 560 g suhog alkalnog olovnog acetata. Pustiti mješavinu da vrije 30 minuta i zatim ostaviti da stoji preko noći.

Pretočiti površinsku tekućinu i razrijediti je netom provrelom vodom kako bi se dobila otopina gustoće 1,25 g/ml, pri 20 °C.

Zaštititi otopinu od kontakta sa zrakom.

4.2. Dietil eter

5. Oprema

5.1. Saharimetar, graduiran za normalnu masu od 26 g saharoze, ili polarimetar.

Ovaj instrument mora biti instaliran u prostoriji u kojoj je moguće održavati temperaturu na približno 20 °C. Instrument kalibrirati standardnim kvarcnim pločicama.

5.2. Izvor svjetlosti sastoji se od natrijeve svjetiljke.

5.3. Precizne polarimetrijske cijevi duge 200 mm, greška ne smije biti veća od ± 0,02 mm.

5.4. Analitička vaga točnosti 0,1 mg.

5.5. Pojedinačno kalibrirane odmjerne tikvice od 100 ml s čepom. Tikvice stvarnog volumena 100,00 ± 0,01 ml mogu se koristiti bez korekcije. Tikvice volumena izvan ovih granica moraju se koristiti s prikladnom korekcijom kojom se volumen podešava na 100 ml.

5.6. Vodena kupelj, s termostatski kontroliranom temperaturom od 20 ± 0,1 °C.

6. Postupak

6.1. Priprema otopine.

Što je brže moguće izvagati 26 ± 0,002 g uzorka i kvantitativno ga prenijeti u odmjernu tikvicu od 100 ml (5.5.) s približno 60 ml vode.

Otopiti kružnim pokretima, bez zagrijavanja.

Ako je potrebno bistrenje, dodati 0,5 ml olovo acetata (4.1.).

Promiješati otopinu rotirajući tikvicu i ispirući pritom stjenke tikvice, sve dok volumen ne bude takav da je meniskus približno 10 mm ispod oznake.

Tikvicu staviti u kontroliranu vodenu kupelj (5.6.) na 20 ± 0,1 °C dok temperatura otopine šećera ne bude konstantna.

Dodavanjem kapi dietil etera (4.2.).ukloniti mjehuriće na površini tekućine

Nadopuniti vodom do oznake.

Začepiti i temeljito promiješati preokrećući tikvicu barem tri puta.

Ostaviti da stoji pet minuta.

6.2. Polarizacija

Održavati temperaturu na 20 ± 1 °C u svim daljnjim postupcima.

6.2.1. Uređaj namjestiti na nulu.

6.2.2. Uzorak profiltrirati kroz filtar papira. Prvih 10 ml filtrata odbaciti. Sakupiti sljedećih 50 ml filtrata.

6.2.3. Cijev polarimetra oprati ispirući je dvaput otopinom uzorka za analizu (6.2.2).

6.2.4. Cijev pažljivo napuniti otopinom uzorka za analizu pri 20 ± 0,1 °C.

Ukloniti sve mjehuriće zraka pri stavljanju na mjesto krajnje ploče. Postaviti napunjenu cijev u ležište uređaja.

6.2.5. Zabilježiti rotaciju s točnošću 0,05 °S ili 0,02 kutnih stupnjeva. Ponoviti postupak još četiri puta. Izračunati srednju vrijednost pet očitanja.

7. Izražavanje rezultata

7.1. Formula i metoda izračunavanja

Rezultati se izražavaju u stupnjevima S s točnošću 0,1 °S. Za pretvorbu kutnih stupnjeva u stupnjeve S, koristi se sljedeća formula:

7.2. Ponovljivost

Razlika između rezultata dva određivanja, koja provodi isti analitičar, istovremeno ili neposredno jedno za drugim, na istom uzorku te pod istim uvjetima, tako da svaki predstavlja srednju vrijednost pet očitanja, ne smije prelaziti 0,1 °S.

(1) n vrijednosti u ovoj tablici izračunane su iz jednadžbe koju je razvio K. Rosenhauer za ICUMSA, a programirao ih je i izračunao Frank G. Carpenter iz UDSA te su objavljene u časopisu Sugar J. br. 33., str. 15.-22. (lipanj 1970.). Refrakcijski indeks se mjerio pri 20 °C s nultom crtom Na. Stupnjevi Brixa (% saharoze prema težini) dobiveni su vaganjem pri 20 °C u zraku pri tlaku od 760 Torra (mm Hg) i relativnoj vlazi 50 %. Ova tablica zamjenjuje prijašnju tablicu 47.012, 11. izdanje, uzetu iz časopisa Intern. Sugar J. 39., 22s (1937.).