2.

u Prilogu X. poglavlje C se mijenja kako slijedi: (a) u točki 3.1. točke (a) i (b) se zamjenjuje se sljedećim: „(a) Sumnjivi slučajevi Uzorci goveda poslani na laboratorijsko testiranje prema odredbama članka 12. stavka 2. moraju se bez odlaganja podvrgnuti potvrdnom testiranju uz primjenu barem jedne od sljedećih metoda i protokola utvrđenih u najnovijem izdanju Priručnika: i. imunohistokemijska (IHC) metoda; ii. SAF-imunoblotting ili alternativa odobrena od OIE-a; iii. dokazivanje karakterističnih fibrila elektronskim mikroskopom; iv. histopatološka pretraga; v. kombinacija brzih testova utvrđenih u trećem podstavku. U slučaju da je nalaz histopatološkog ispitivanja nejasan ili negativan, tkiva se podvrgavaju daljnjem ispitivanju jednom od drugih potvrdnih metoda i protokola. Brzi se testovi mogu primjenjivati, kako za primarna ispitivanja sumnjivih slučajeva, tako i – kod nejasnog ili negativnog nalaza – za naknadnu potvrdu, prema smjernicama referentnog laboratorija Zajednice i pod uvjetom da: i. se potvrda provodi u nacionalnom referentnom laboratoriju za TSE; i ii. je jedan od dvaju brzih testova Western blot; i iii. drugi brzi test koji se primjenjuje: — obuhvaća negativnu kontrolu tkiva i jedan GSE goveđi uzorak kao pozitivnu kontrolu tkiva, — je različit tip testa od onog primijenjenog za primarno ispitivanje; i iv. ako se brzi Western blot primjenjuje kao prvi test, nalaz toga testa mora se dokumentirati i dostaviti nacionalnom referentnom laboratoriju za TSE; i v. ako nalaz primarnog ispitivanja nije potvrđen naknadnim brzim testom, uzorak se mora podvrgnuti pretraživanju jednom od drugih potvrdnih metoda; ako se za tu namjenu primjenjuje histopatološka pretraga nalaz na koju je bio nejasan ili negativan, tkivo se mora podvrgnuti daljnjem ispitivanju nekom drugom potvrdnom metodom i protokolom. Ako je nalaz jednog potvrdnog testa prema podtočkama od i. do v. prvog podstavka pozitivan, životinje se smatraju pozitivnim slučajevima GSE-a. (b) Praćenje GSE-a Uzorci goveda poslani na laboratorijsko testiranje prema odredbama Priloga III. poglavlja A dijela I. moraju se ispitati brzim testom. Ako je nalaz brzog testa nejasan ili pozitivan, uzorak se bez odlaganja podvrgava potvrdnom testiranju uz primjenu barem jedne od sljedećih metoda i protokola, koji su utvrđeni u najnovijem izdanju Priručnika: i. imunohistokemijska (IHC) metoda; ii. SAF-imunoblotting ili alternativna odobren od OIE-a; iii. dokazivanje karakterističnih fibrila elektronskim mikroskopom; iv. histopatološka pretraga; v. kombinacija brzih testova određenih u četvrtom podstavku. U slučaju da je nalaz histopatološke pretrage nejasan ili negativan, tkiva se podvrgavaju daljnjem ispitivanju nekom drugom potvrdnom metodom i protokolom. Brzi se testovi mogu primjenjivati, kako za primarna ispitivanja sumnjivih slučajeva, tako i – kod nejasnog ili pozitivnog nalaza – za naknadnu potvrdu, prema smjernicama referentnog laboratorija Zajednice i pod uvjetom da: i. se potvrda provodi u nacionalnom referentnom laboratoriju za TSE; i ii. je jedan od dvaju brzih testova Western blot; i iii. drugi brzi test koji se primjenjuje: — obuhvaća negativnu kontrolu tkiva i jedan GSE uzorak goveda kao pozitivnu kontrolu tkiva, — je različit tip testa od onog primijenjenog za primarno ispitivanje; i iv. ako se brzi Western blot primjenjuje kao prvi test, mora se dokumentirati nalaz toga testa i dostaviti nacionalnom referentnom laboratoriju za TSE; i v. ako nalaz primarnog ispitivanja nije potvrđen naknadnim brzim testom, uzorak se mora podvrgnuti ispitivanju nekom drugom potvrdnom metodom; ako se za tu namjenu primjenjuje histopatološka pretraga, čiji je nalaz bez rezultata ili je negativan, tkivo se mora podvrgnuti daljnjem ispitivanju nekom drugom potvrdnom metodom i protokolom. Životinja se smatraju pozitivnim slučajem GSE-a ako je nalaz brzog testa nejasan ili pozitivan i barem je jedan od potvrdnih testova prema podtočkama od i. do v. prvoga stavka pozitivan.”; (b) u točki 3.2. podtočka (a) zamjenjuje se sljedećim: „(a) Sumnjivi slučajevi Uzorci ovaca i koza poslani na laboratorijsko testiranje prema odredbama članka 12. stavka 2. bez odlaganja se moraju podvrgnuti potvrdnom testiranju uz primjenu barem jedne od sljedećih metoda i protokola utvrđenih u najnovijem izdanju Priručnika: i. imunohistokemijska (IHC) metoda; ii. SAF-imunoblotting ili alternativna odobrena od OIE-a; iii. dokazivanje karakterističnih fibrila elektronskim mikroskopom; iv. histopatološka pretraga. U slučaju da je nalaz histopatološke pretrage nejasan ili negativan, tkiva se podvrgavaju daljnjem ispitivanju nekom drugom potvrdnom metodom i protokolom. Brzi se testovi mogu primjenjivati za primarna ispitivanja sumnjivih slučajeva. Takvi se testovi ne smiju primjenjivati za naknadnu potvrdu. Ako je nalaz brzog testa koji je primijenjen za primarno ispitivanje sumnjivih slučajeva pozitivan ili nejasan, uzorak se mora podvrgnuti ispitivanju jednim od potvrdnih testova prema podtočkama od i. do iv. prvog podstavka. Ako se za tu namjenu primjenjuje histopatološka pretraga pa se pokaže da je nalaz nejasan ili negativan, tkiva se moraju podvrgnuti daljnjem ispitivanju nekom drugom potvrdnom metodom i protokolom. Ako je nalaz jednog potvrdnog ispitivanja prema podtočkama od i. do iv. prvog podstavka pozitivan, životinje se smatraju pozitivnim slučajevima TSE-a i provodi se daljnje ispitivanje kako je navedeno u točki (c).”; (c) u točki 3.2. naslov podtočke (c) zamjenjuje se sljedećim: „(c) Daljnje ispitivanje pozitivnih slučajeva TSE-a”; (d) u točki 3.2. podtočki (c) i. zamjenjuje se sljedećim: „(i) Primarno molekularno testiranje s diskriminatornim imunoblottingom Uzorci klinički sumnjivih slučajeva i životinja koje su testirane u skladu s Prilogom III. poglavljem A dijelom II. točkama 2. i 3., koje se smatraju pozitivnim slučajevima TSE-a, ali koje nakon ispitivanja prema točkama (a) ili (b) nisu atipični slučajevi grebeža, ili pokazuju karakteristike koje se prema mišljenju ispitnog laboratorija moraju dalje ispitivati, šalju se na daljnje ispitivanje metodom primarne molekularne tipizacije u: — Agence Française de Sécurité Sanitaire des Aliments, Laboratoire de pathologie bovine, 31, avenue Tony Garnier, BP 7033, F-69342, Lyon Cedex, Francuska, ili — Veterinary Laboratories Agency, Woodham Lane, New Haw, Addlestone, Surrey KT15 3NB, Ujedinjena Kraljevina, ili — laboratorij, koji imenuje nadležno tijelo, a koji je uspješno sudjelovao u provjeri izvedbe koju je organizirao referentni laboratorij Zajednice za primjenu metode molekularne tipizacije.”; (e) u točki 3.2. podtočki (c) ii. riječ „grebež ovaca” zamjenjuje se s „TSE”; (f) točka 4. zamjenjuje se sljedećim: „4. Brzi testovi S ciljem provođenja brzih testova u skladu s člankom 5. stavkom 3. i člankom 6. stavkom 1. primjenjuju se sljedeći brzi testovi za praćenje GSE-a u goveda. — imunoblotting test na temelju postupka Western bloting za dokazivanje PrPRes fragmenta otpornog na proteinazu K (Prionics-check Western test), — kemiluminiscentni test ELISA koji uključuje postupak ekstrakcije i ELISA tehniku, uz korištenje obogaćenog kemiluminiscetnog reagensa (Enfer test & Enfer TSE Kit verzija 2.0, automatizirana priprema uzorka), — imunološko određivanje na temelju mikroploče za otkrivanje PrPSc (Enfer TSE Version 3) — sendvič metoda imunološkog određivanja PrPRres s TeSeE SAP kompletom za otkrivanje koja se obavlja nakon denaturacije i koncentracije s TeSeE purifikacijskim kompletom (Bio-Rad TeSeE brzi test), — imunološko određivanje na bazi mikroploča (ELISA) kojim se otkriva PrPRes otporan na proteinazu K, s monoklonskim protutijelima (Prionics Check LIA test), — imunološko određivanje uz korištenje kemijskoga polimera za selektivno hvatanje PrPSc i otkrivanje monoklonskim protutijelom usmjereno prema očuvanim regijama molekule PrP (IDEXX HerdChek BSE-Scrapie Antigen Test Kit, EIA), — imunološko određivanje s bočnim tokom uz korištenje dvaju monoklonskih protutijela za otkrivanje fragmenata PrP otpornih na proteinazu K (Prionics Check PrioSTRIP), — dvostrano imunološko određivanje uz korištenje dvaju različitih monoklonskih protutijela usmjerena na dva epitopa izložena u rastvorenom stanju goveđeg PrPSc (Roboscreen Beta Prion BSE EIA Test Kit), — sendvič metoda imunološkog određivanja PrPSc otpornog na proteinazu K (Roche Applied Science PrionScreen). S ciljem provedbe brzih testova u skladu s člankom 5. stavkom 3. i člankom 6. stavkom 1., sljedeće metode koriste se kao brzi testovi za praćenje TSE-a u ovaca i koza: — sendvič metoda imunološkog određivanja PrPRres s TeSeE SAP kompletom za otkrivanje koja se obavlja nakon denaturacije i koncentracije s TeSeE purifikacijskim kompletom (Bio-Rad TeSeE brzi test), — sendvič metoda imunološkog određivanja za PrPRes s TeSeE SAP kompletom za otkrivanje u ovaca i koza, provedena nakon postupka denaturizacije i koncentracije s TeSeE purifikacijskim kompletom za ovce i koze (Bio-Rad Te-SeE Sheep/Goat test), — kemiluminiscentni test ELISA koji uključuje i postupak ekstrakcije i ELISA tehniku, uz korištenje obogaćenog kemiluminiscentnog reagensa (Enfer TSE Kit version 2.0), — imunološko određivanje na temelju mikroploče za otkrivanje PrPSc (Enfer TSE Version 3), — imunološko određivanje uz korištenje kemijskoga polimera za selektivno hvatanje PrPSc i otkrivanje monoklonskim protutijelom usmjereno prema očuvanim regijama molekule PrP (IDEXX HerdChek BSE-Scrapie Antigen Test Kit, EIA), — imunoblotting test koji se temelji na Western bloting proceduri za otkrivanje fragmenta PrPRes otpornog na proteinazu K (Prionics Check Western Small Ruminants test - — kemiluminiscentno imunološko određivanje na temelju mikroploče za otkrivanje PrPSc otpornog na proteinazu K (Prionics Check LIA Small Ruminants). U svim testovima, uzorak tkiva na kojem se provodi testiranje mora biti u skladu s uputama proizvođača za korištenje. Proizvođač brzih testova mora raspolagati sustavom osiguranja kvalitete koji je odobrio referentni laboratorij Zajednice kojim se jamči da izvedba testa ostaje nepromijenjena. Proizvođači moraju predočiti referentnom laboratoriju Zajednice protokol testiranja. Promjene na brzim testovima odnosno protokolima testiranja smiju se napraviti samo nakon prethodnog informiranja referentnog laboratorija Zajednice i pod uvjetom da referentni laboratorij Zajednice ustanovi da ta promjena ne mijenja osjetljivost, specifičnost ili pouzdanost brzog testa. Odgovarajući nalaz dostavlja se Komisiji i nacionalnim referentnim laboratorijima.”