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RÈGLEMENT (CEE) No 1822/86 DE LA COMMISSION

du 30 mai 1986

modifiant le règlement (CEE) no 1061/69 en ce qui concerne les méthodes d'analyse pour la détermination de l'amidon dans les concentrats de protéines de soja ainsi que dans les marchandises en contenant

LA COMMISSION DES COMMUNAUTÉS EUROPÉENNES, vu le traité instituant la Communauté économique européenne,

vu le règlement (CEE) no 97/69 du Conseil, du 16 janvier 1969, relatif aux mesures à prendre pour l'application uniforme de la nomenclature du tarif douanier commun (1), modifié en dernier lieu par le règlement (CEE) no 2055/84 (2), et notamment son article 3,

considérant que l'article 1er du règlement (CEE) no 1061/69 de la Commission (3), modifié en dernier lieu par le règlement (CEE) no 419/77 (4), définit les méthodes d'analyse pour l'application du règlement (CEE) no 3033/80 du Conseil, du 11 novembre 1980, déterminant le régime d'échanges applicable à certaines marchandises résultant de la transformation de produits agricoles (5);

considérant que, à la suite des études effectuées, il s'avère nécessaire, pour la détermination de la teneur en amidon des concentrats de protéines de soja ainsi que des marchandises en contenant, de remplacer la méthode d'analyse prescrite par une méthode plus appropriée;

considérant que la méthode reprise en annexe présente de meilleures garanties;

considérant qu'il est opportun de modifier certaines dénominations chimiques;

considérant que les mesures prévues au présent règlement sont conformes à l'avis du comité de la nomenclature du tarif douanier commun,

A ARRÊTÉ LE PRÉSENT RÈGLEMENT:

Article premier

Le règlement (CEE) no 1061/69 est modifié comme suit:

1. L'article 1er est remplacé par le texte suivant:

« Article premier

1. Lorsque le classement d'une marchandise visée à l'article 1er du règlement (CEE) no 3033/80 dans l'une des sous-positions du tarif douanier commun dépend de sa teneur en poids d'amidon ou fécule, cette teneur est déterminée en fonction de la quantité d'amidon du fécule à l'état anhydre contenu dans ladite marchandise.

2. La teneur en poids d'amidon ou de fécule de concentrats de protéines de soja, ainsi que des marchandises en contenant, est déterminée d'après la méthode enzymatique définie dans l'annexe V.

3. La teneuer en poids d'amidon ou de fécule de marchandises autres que celles visées dans le paragraphe 2 est déterminée d'après la méthode Ewers modifiée définie dans l'annexe I chapitre I de la troisième directive 72/199/CEE de la Commission (1).

Toutefois, lorsque la marchandise en cause contient des amidons ou fécules autres que natifs, sans contenir en même temps de saccharose ou de sucre interverti, la teneur en poids d'amidon ou de fécule de cette marchandise est déterminée d'après la méthode par saccharification définie dans l'annexe I.

Pour l'application des dispositions du présent paragraphe, les dextrines sont considérées comme des amidons ou fécules autres que natifs.

(1) JO no L 123 du 29. 5. 1972, p. 6. »

2. L'article 4 est remplacé par le texte suivant:

« Article 4

La proportion de D-mannitol contenu dans les marchandises relevant des sous-positions 29.04 C III et 38.19 T du tarif douanier commun, calculée sur leur teneur en D-glucitol (sorbitol), est déterminée d'après la méthode définie dans l'annexe IV. »

3. L'annexe IV est modifiée comme suit:

a) Le titre est remplacé par le titre suivant:

« DÉTERMINATION DE LA PROPOSITION DU D-MANNITOL CONTENU DANS LES MARCHANDISES RELEVANT DES SOUS-POSITIONS 29.04 C III ET 38.19 T DU TARIF DOUANIER COMMUN, CALCULÉE SUR LEUR TENEUR EN D-GLUCITOL. »

b) Le paragraphe I est remplacé par le texte suivant:

« I. Principe

Pour déterminer la proportion de D-Mannitol contenu dans les marchandises relevant des sous-positions 29.04 C III et 38.19 T du tarif douanier commun, calculée sur leur teneur en D-Glucitol, on utilise la chromatographie en phase gazeuse. À cette fin, il est nécessaire de transformer au préalable les produits non volatiles en leurs dérivés acétylés. »

c) Au paragraphe III, la lettre b) est remplacée par le texte suivant:

« b) Conditions opératoires de la chromatographie

Température d'injection: 300 °C;

température de la colonne: 210 °C;

débit du gaz vecteur (par exemple azote): 25 ml/minute;

débit d'hydrogène: 25 ml/minute;

quantité injectée: 1 microlitre.

Le pic du D-mannitol apparaît avant celui du D-glucitol.

Pour déterminer la proportion du D-mannitol contenu dans les marchandises analysées calculée sur leur teneur en D-glucitol, il suffit de faire le rapport des aires des deux pics correspondants. »

4. L'annexe du présent règlement est ajoutée en tant qu'annexe V.

Article 2

Le présent règlement entre en vigueur le vingt et unième jour suivant celui de sa publication au Journal officiel des Communautés européennes.

Le présent règlement est obligatoire dans tous ses éléments et directement applicable dans tout État membre.

Fait à Bruxelles, le 30 mai 1986.

Par la Commission

COCKFIELD

Vice-président

(1) JO no L 14 du 21. 1. 1969, p. 1.

(2) JO no L 191 du 19. 7. 1984, p. 1.

(3) JO no L 141 du 12. 6. 1969, p. 24.

(4) JO no L 56 du 1. 3. 1977, p. 46.

(5) JO no L 323 du 29. 11. 1980, p. 1.

ANNEXE

« ANNEXE V

1.2 // 1. // Objet et domaine d'application // // La méthode permet de déterminer la teneur en poids en amidon ou fécule des concentrats de protéines de soja ainsi que des marchandises en contenant. // 2. // Définition // // On entend par « teneur en amidon ou fécule » des marchandises reprises au point 1, la valeur T, telle qu'elle est calculée au point 7 de la présente méthode. // 3. // Principe // // L'échantillon est lavé avec de l'éthanol à 40 % vol, pour en éliminer les sucres solubles et les produits solubles de dégradation de l'amidon. Le résidu est désagrégé au moyen d'hydroxade de sodium et l'amidon, scindé en unités de glucose avec de l'amyloglucosidase. Le dosage du glucose est effectué par voie enzymatique. // 4. // Réactifs // // (utiliser de l'eau bidistillée). // 4.1. // Éthanol à 40 % vol. // 4.2. // Solution d'hydroxyde de sodium 0,5 N (0,5 mol/1). // 4.3. // Acide acétique (glacial) à 96 % au moins. // 4.4. // Solution de l'amyloglycosidase: immédiatement avant l'emploi, dissoudre environ 10 mg d'amyloglucosidase (EC 3.2.1.3.) (6 U/mg) dans 1 ml d'eau enzymatique (1). // 4.5. // Tampon triéthanolamine: dissoudre 14,0 g de chlorhydrate de triéthanolamine [chlorure de tris(2-hydroxyethyl)ammonium] et 0,25 g de sulfate de magnésium (MgSO4.7H2O) dans 80 ml d'eau, y ajouter environ 5 ml de solution d'hydroxyde de sodium 5 N (5 mol/1) et ajuster le pH à 7,6 au moyen d'une solution d'hydroxyde de sodium 1 N (1 mol/1). // // Compléter à 100 ml avec de l'eau. Ce tampon se conserve pendant au moins 4 semaines à 4 ° C. // 4.6. // Solution de NADP (Nicotinamide Adénine Dinicléotide phosphate, sel disodique): dissoudre 60 mg de NADP dans 6 ml d'eau. Cette solution de conserve pendant au moins quatre semaines à 4 °C. // 4.7. // Solution de ATP (Adénosine-5-triphosphate, sel disodique): dissoudre 300 mg d'ATP. 3H20 et 300 mg d'hydrogénocarbonate de sodium (NaHCO3) dans 6 ml d'eau. Cette solution se conserve pendant au moins quatre semaines à 4 ° C. // 4.8. // Suspensiond e HK/G6P-DH (Hexokinase-EC 2.7.1.1) et de glucose-6-phosphate deshydrogènase (EC 1.1.1 49): // // mettre en suspension 280 U HK et 140 U G6P-DH dans 1 ml de solution de sulfate d'ammonium (C=3,2 mol/1). Cette suspension se conserve pendant au moins une année à 4 ° C. // 5. // Appareillage // 5.1. // Centrifugeuse ayant une accélération minimale 1 000 × g (calculée au milieu du tube). // 5.2. // Tubes à centrifuger en verre de 100 ml. // 5.3. // Agitateur magnétique avec bain-marie à 60 ° C. // 5.4. // Barreaux aimantés. // 5.5. // Spectrophotomètre U. V. muni avec cuves de 1 cm. // 5.6. // Pipettes pour l'analyse

(1) U est l'unité international de l'activité enzymatique.

// 6. // Mode opératoire // 6.1. // Lavage avec éthanol, désagrégation au moyen d'hydroxyde de sodium et hydrolyse enzymatique de l'amidon: // 6.1.1. // D'après la teneur présumée en amidon, choisir les pesées ci-après. (La teneur en amidon ne devrait pas dépasser 0,4 g par pesée.) 1.2.3.4 // // // // // Teneur en amidon présumée du produit en g/100 g // Pesée approximative, en gramme (P) // Volume du ballon jaugé // Facteur de dilution jusqu'au litre (f) // // // // // > 70 // 0,35 - 0,4 // 500 // 2 // 20-70 // max. 0,5 // 500 // 2 // 5-20 // max. 1 // 250 // 4 // < 5 // max. 2 // 200 // 5 // // // // 1.2 // 6.1.2. // Peser (avec une précision de 0,1 mg) l'échantillon dans un tube (5.2) à centrifuger et y ajouter 50 ml d'éthanol à 40 % vol (4.1). // 6.1.3. // Agiter pendant vingt minutes à la température ambiante sur l'agitateur magnétique. // 6.1.4. // Laisser le barreau aimanté dans le tube et centrifuger pendant cinq minutes. // 6.1.5. // Aspirer précautionneusement et éliminer la phase liquide (trompe à eau ou pipette Pasteur). // 6.1.6. // Laver le résidu en agitant avec 25 ml d'éthanol à 40 % vol (4.1). // 6.1.7. // Centrifuger, aspirer précautionneusement et éliminer la phase liquide. // 6.1.8. // Faire ces opérations (6.1.6 et 6.1.7) au moins encore une fois. // 6.1.9. // Ajouter au résidu 50 ml de solution d'hydroxyde de sodium 0,5 N (4.2) et maintenir sous agitation constante pendant trente minutes dans le bain-marie de l'agitateur magnétique (5.3), à 60 ° C. // 6.1.10. // Ajuster le pH à 4,6-4,8 avec quelques ml d'acide acétique concentré (4.3) // 6.1.11. // Placer le tube à centrifuger dans le bain-marie avec l'agitateur magnétique (5.3), à 60 ° C, ajouter 1,0 ml de solution de l'enzyme (4.4) et laisser agir pendant trente minutes, sous agitation. // 6.1.12. // Après refroidissement, transvaser quantitativement dans le ballon jaugé (6.1.1) indiqué et ajuster jusqu'à la marque avec de l'eau. // 6.1.13. // Si nécessaire, filtrer à travers un filtre plissé. // 6.2. // Dosage du glucose // 6.2.1. // La solution d'essai doit contenir 100-1 000 mg de glucose par litre, ce qui correspond à un DE340 qui se situe entre 0,1-1,0. // // La solution d'essai diluée dans une proportion de 1 + 30 avec de l'eau ne doit pas présenter à 340 nm, une absorbance dépassant 0,4 (mesurée par rapport à l'air). // 6.2.2. // Amener le tampon (4.5) à la température ambiante (20 °C). // 6.2.3. // La température des réactifs et de l'échantillon doit être de 20 °C à 25 °C. // 6.2.4. // Mesurer l'absorbance à 340 nm par rapport à l'air (pas de cuve dans le trajet optique de référence). // 6.2.5. // Exécution selon le schéma de pipetage repris ci-dessous: 1.2.3 // // // // Introduire dans les cuves // Témoin (ml) // Essai (ml) // // // // Tampon (réactif 4.5) // 1,00 // 1,00 // NADP (réactif 4.6) // 0,10 // 0,10 // ATP (réactif 4.7) // 0,10 // 0,10 // Solution d'essai (6.1.12 ou 13) // - // 0,10 // Eau bidistillée // 2,00 // 1,90 // // // 1.2 // // Mélanger, après environ 3 minutes mesurer l'absorbance des solutions (E1). Déclencher la réaction par addition de: 1.2.3 // // // // HK/G6P-DH (réactif 4.8) // 0,02 // 0,02 // // // 1.2 // // Mélanger, attendre la fin de la réaction (env. 15 min.) et mesurer l'absorbance des solutions (E1). Tenir compte d'éventuelles réactions de dérive. // // Si la réaction n'est pas terminée après quinze minutes, continuez à lire les absorbances de cinq minutes en cinq minutes jusqu'à ce que l'augmentation de l'absorbance soit constante sur cinq minutes, et ensuite, extrapolez l'absorbance au temps de l'addition de la suspension 4.8. // // // 6.2.6. // Pour les témoins et l'essai, calculer la différence d'absorbance E2-E1. Soustraire la différence d'absorbance du témoin de celle de l'essai (= DE) // // (DE = DE essai - DE témoin): // // De cette différence, on obtient la teneur en glucose de la solution d'essai. // // Teneur en Glucose, en g/l de la solution d'essai: 1.2.3.4 // // G = // 3,22 × 180,16 6,3 × 1 × 0,1 × 1 000 // × DE340 = 0,921 × DE340 1.2 // // (masse moléculaire du glucose = 180,16) // 6.2.7. // Si la mesure de l'absorbance à 340 mn n'est pas possible, la mesure peut être effectuée à la longueur d'onde de 365 nm ou 334 nm. Dans ce cas, le chiffre 6,3 de la formule G ci-dessus est remplacé par le chiffre 3,5 ou 6,18 respectivement. // 7. // Calcul et expression des résultats // // Teneur en Amidon en g/100 g 1.2.3 // // T = // 100 × 0,9 × G p × f 1.2.3 // // ou // // // G // = glucose, en g/l (6.2.6) // // f // = facteur de dilution (6.1.1) // // p // = pesée de l'échantillon, en g // // 0,9 // = facteur de conversion du glucose en l'amidon » enzymatique.