+++++

( 1 ) JO NO 172 DU 30 . 9 . 1966 , P . 3025/66 .

( 2 ) JO NO L 175 DU 29 . 6 . 1973 , P . 5 .

( 3 ) JO NO 197 DU 29 . 10 . 1966 , P . 3393/66 .

( 4 ) JO NO L 54 DU 3 . 3 . 1972 , P . 3 .

( 5 ) JO NO L 172 DU 22 . 7 . 1968 , P . 1 .

( 6 ) JO NO L 106 DU 29 . 4 . 1977 , P . 20 .

( 7 ) JO NO L 78 DU 31 . 3 . 1972 , P . 5 .

( 8 ) JO NO L 333 DU 30 . 12 . 1975 , P . 13 .

REGLEMENT ( CEE ) NO 1058/77 DE LA COMMISSION DU 18 MAI 1977 RELATIF AUX CARACTERISTIQUES DES HUILES D'OLIVE ET DE CERTAINS PRODUITS CONTENANT DE L'HUILE D'OLIVE ET MODIFIANT LA NOMENCLATURE DU TARIF DOUANIER COMMUN EN CE QUI CONCERNE L'HUILE D'OLIVE

LA COMMISSION DES COMMUNAUTES EUROPEENNES ,

VU LE TRAITE INSTITUANT LA COMMUNAUTE ECONOMIQUE EUROPEENNE ,

VU LE REGLEMENT NO 136/66/CEE DU CONSEIL , DU 22 SEPTEMBRE 1966 , PORTANT ETABLISSEMENT D'UNE ORGANISATION COMMUNE DES MARCHES DANS LE SECTEUR DES MATIERES GRASSES ( 1 ) , MODIFIE EN DERNIER LIEU PAR LE REGLEMENT ( CEE ) NO 1707/73 ( 2 ) , ET NOTAMMENT SES ARTICLES 13 PARAGRAPHE 4 ET 18 PARAGRAPHE 3 ,

VU LE REGLEMENT NO 162/66/CEE DU CONSEIL , DU 27 OCTOBRE 1966 , RELATIF AUX ECHANGES DES MATIERES GRASSES ENTRE LA COMMUNAUTE ET LA GRECE ( 3 ) , ET NOTAMMENT SES ARTICLES 3 PARAGRAPHE 4 ET 9 ,

VU LE REGLEMENT ( CEE ) NO 443/72 DU CONSEIL , DU 29 FEVRIER 1972 , RELATIF AUX PRELEVEMENTS APPLICABLES A L'HUILE D'OLIVE AYANT SUBI UN PROCESSUS DE RAFFINAGE , AINSI QU'A CERTAINS PRODUITS CONTENANT DE L'HUILE D'OLIVE ( 4 ) , ET NOTAMMENT SON ARTICLE 8 ,

CONSIDERANT QUE , A L'HEURE ACTUELLE , TOUTES LES HUILES D'OLIVE VIERGES SONT INCLUSES DANS LA SOUS-POSITION 15.07 A II A ) DU TARIF DOUANIER COMMUN ; QUE , DE CE FAIT , UN SEUL PRELEVEMENT EST FIXE POUR CES PRODUITS ; QUE , AFIN DE PERMETTRE AU PRELEVEMENT A L'IMPORTATION D'ATTEINDRE SON OBJECTIF , IL CONVIENT DE LE FIXER SUIVANT LES DIVERS TYPES D'HUILE VIERGE ET , A CETTE FIN , DE DISTINGUER LES HUILES D'OLIVE SUIVANT LEURS CARACTERISTIQUES PHYSICOCHIMIQUES ; QU'IL Y A LIEU , EN CONSEQUENCE , D'ADAPTER LA NOMENCLATURE DU TARIF DOUANIER COMMUN ;

CONSIDERANT QUE LA NOMENCLATURE TARIFAIRE RESULTANT DE L'APPLICATION DU REGLEMENT NO 136/66/CEE EST REPRISE DANS LE TARIF DOUANIER COMMUN ANNEXE AU REGLEMENT ( CEE ) NO 950/68 ( 5 ) , MODIFIE EN DERNIER LIEU PAR LE REGLEMENT ( CEE ) NO 874/77 ( 6 ) ;

CONSIDERANT QUE , POUR ASSURER LE FONCTIONNEMENT CORRECT DU SYSTEME DE PRELEVEMENTS APPLICABLES A L'IMPORTATION DES GRIGNONS D'OLIVE , IL CONVIENT DE PREVOIR UNE METHODE UNIQUE POUR LA DETERMINATION DE LA TENEUR EN HUILE DE CES PRODUITS ;

CONSIDERANT QUE LE REGLEMENT ( CEE ) NO 618/72 DE LA COMMISSION , DU 29 MARS 1972 , RELATIF AUX CARACTERISTIQUES DES HUILES D'OLIVE AINSI QUE DE CERTAINS PRODUITS CONTENANT DE L'HUILE D'OLIVE ( 7 ) , A ETE MODIFIE A PLUSIEURS REPRISES , NOTAMMENT PAR LE REGLEMENT ( CEE ) NO 3366/75 ( 8 ) ; QUE , COMPTE TENU DES NOUVELLES MODIFICATIONS A Y APPORTER IL A ETE JUGE OPPORTUN DE L'ABROGER ET DE REPRENDRE DANS UN NOUVEAU REGLEMENT L'ENSEMBLE DES DISPOSITIONS ;

CONSIDERANT QUE LES MESURES PREVUES AU PRESENT REGLEMENT SONT CONFORMES A L'AVIS DU COMITE DE GESTION DES MATIERES GRASSES ,

A ARRETE LE PRESENT REGLEMENT :

ARTICLE PREMIER

1 . EST SEULE CONSIDEREE COMME HUILE D'OLIVE , AU SENS DE LA SOUS-POSITION 15.07 A DU TARIF DOUANIER COMMUN , L'HUILE PROVENANT UNIQUEMENT DU TRAITEMENT DES OLIVES , A L'EXCLUSION DE L'HUILE D'OLIVE REESTERIFIEE ET DE TOUT MELANGE D'HUILE D'OLIVE AVEC DES HUILES D'AUTRE NATURE .

LA MISE EN EVIDENCE DE LA PRESENCE D'HUILE D'OLIVE REESTERIFIEE OU D'HUILES D'AUTRE NATURE EST EFFECTUEE AU MOYEN DES METHODES REPRISES RESPECTIVEMENT AUX ANNEXES VII ET VIII .

2 . RELEVENT DES SOUS-POSITIONS 15.07 A I A ) , 15.07 A I B ) ET 15.07 A I C ) DU TARIF DOUANIER COMMUN LES HUILES QUI ONT LES CARACTERISTIQUES INDIQUEES A L'ANNEXE I POINTS 1 , 2 ET 3 . POUR LA DETERMINATION DES CARACTERISTIQUES VISEES CI-DESSUS , SONT UTILISEES LES METHODES DECRITES AUX ANNEXES IV , V ET VI .

3 . RELEVENT DE LA SOUS-POSITION 15.07 A II A ) DU TARIF DOUANIER COMMUN LES HUILES QUI ONT LES CARACTERISTIQUES REPRISES A L'ANNEXE I POINT 4 .

4 . NE RELEVENT PAS DE LA SOUS-POSITION 15.17 A DU TARIF DOUANIER COMMUN LES PRODUITS DE LA POSITION 15.17 AYANT LES CARACTERISTIQUES INDIQUEES A L'ANNEXE II .

ARTICLE 2

1 . LA TENEUR EN HUILE D'OLIVE DES GRIGNONS ET DES AUTRES RESIDUS DE L'EXTRACTION DE L'HUILE D'OLIVE RELEVANT DE LA SOUS-POSITION 23.04 A EST DETERMINEE CONFORMEMENT A LA METHODE FIGURANT A L'ANNEXE IX .

2 . LA TENEUR EN HUILE D'OLIVE VISEE AU PARAGRAPHE 1 EST EXPRIMEE EN POURCENTAGE DE SON POIDS RAPPORTE A CELUI DE LA MATIERE SECHE .

ARTICLE 3

LE TARIF DOUANIER COMMUN ANNEXE AU REGLEMENT ( CEE ) NO 950/68 EST MODIFIE COMME SUIT :

1 . A LA NOTE COMPLEMENTAIRE 1 DU CHAPITRE 15 , LES TERMES " DU NO 15.07 " SONT REMPLACES PAR " DE LA SOUS-POSITION 15.07 D " .

2 . LES NOTES COMPLEMENTAIRES 2 , 3 ET 4 DU CHAPITRE 15 SONT REMPLACEES PAR LES NOTES COMPLEMENTAIRES 2 , 3 ET 4 FIGURANT A L'ANNEXE III DU PRESENT REGLEMENT .

3 . LA SOUS-POSITION 15.07 A EST REMPLACEE PAR LE TEXTE SUIVANT :

* * TAUX DES DROITS

NUMERO TARIF * DESCRIPTION * AUTONOMES % OU PRELEVEMENT ( P ) * CONVENTIONNELS %

1 * 2 * 3 * 4

15.07 * A . HUILE D'OLIVE :

* I . NON TRAITEE :

* A ) HUILE D'OLIVE VIERGE * 20 ( P ) * -

* B ) HUILE D'OLIVE VIERGE LAMPANTE * 20 ( P ) * -

* C ) AUTRE * 20 ( P ) * -

* II . AUTRE :

* A ) OBTENUE PAR TRAITEMENT DES HUILES DES SOUS-POSITIONS 15.07 A I A ) OU 15.07 A I B ) , MEME COUPEE D'HUILE D'OLIVE VIERGE * 20 ( P ) * -

* B ) NON DENOMMEE * 20 ( P ) * -

ARTICLE 4

DANS TOUS LES ACTES COMMUNAUTAIRES OU IL EST FAIT REFERENCE AUX SOUS-POSITIONS 15.07 A II OU 15.07 A I A ) ET B ) DU TARIF DOUANIER COMMUN , CES REFERENCES SONT A CONSIDERER COMME SE RAPPORTANT , SELON LES CARACTERISTIQUES DU PRODUIT CONCERNE , RESPECTIVEMENT AUX SOUS-POSITIONS 15.07 A I A ) , B ) ET C ) ET 15.07 A II A ) ET B ) DU TARIF DOUANIER COMMUN .

ARTICLE 5

LE REGLEMENT ( CEE ) NO 618/72 DE LA COMMISSION EST ABROGE .

ARTICLE 6

LE PRESENT REGLEMENT ENTRE EN VIGUEUR LE QUARANTE-TROISIEME JOUR SUIVANT CELUI DE SA PUBLICATION AU JOURNAL OFFICIEL DES COMMUNAUTES EUROPEENNES .

LE PRESENT REGLEMENT EST OBLIGATOIRE DANS TOUS SES ELEMENTS ET DIRECTEMENT APPLICABLE DANS TOUT ETAT MEMBRE .

FAIT A BRUXELLES , LE 18 MAI 1977 .

PAR LA COMMISSION

FINN GUNDELACH

VICE-PRESIDENT

ANNEXES

SOMMAIRE

PAGES

ANNEXE I : CARACTERISTIQUES DES HUILES D'OLIVE 9

ANNEXE II : PRODUITS DE LA SOUS-POSITION 15.17 A 10

ANNEXE III : NOTES COMPLEMENTAIRES 2 , 3 ET 4 DU CHAPITRE 15 DU TARIF DOUANIER COMMUN 10

ANNEXE IV : I . TRAITEMENT DE L'ECHANTILLON PAR L'ALUMINE ACTIVEE 12

II . NEUTRALISATION ET DECOLORATION DE L'HUILE D'OLIVE EN LABORATOIRE 12

ANNEXE V : RECHERCHE DE LA PRESENCE D'HUILE DE GRIGNONS D'OLIVE DANS LES HUILES D'OLIVE 14

A . METHODE DITE " DE BELLIER " 14

B . METHODE DITE " DE VIZERN MODIFIEE " 14

ANNEXE VI : RECHERCHE DES SAVONS PAR LA MISE EN EVIDENCE DE L'ALCALINITE 16

ANNEXE VII : RECHERCHE DE LA PRESENCE DES HUILES REESTERIFIEES 16

ANNEXE VIII : RECHERCHE DE LA PRESENCE D'AUTRES HUILES DANS L'HUILE D'OLIVE :

ANALYSE DE LA FRACTION STEROLIQUE DES CORPS GRAS 20

ANNEXE IX : TENEUR EN HUILE DES GRIGNONGS D'OLIVE 24

ANNEXE I

CARACTERISTIQUES DES HUILES D'OLIVE

1 . EST CONSIDEREE COMME HUILE D'OLIVE VIERGE , AU SENS DE LA SOUS-POSITION 15.07 A I A ) DU TARIF DOUANIER COMMUN , L'HUILE D'OLIVE NATURELLE OBTENUE UNIQUEMENT PAR DES PROCEDES MECANIQUES , Y COMPRIS LA PRESSION , A L'EXCLUSION DE TOUT MELANGE AVEC DE L'HUILE D'OLIVE OBTENUE DE FACON DIFFERENTE , PRESENTANT LES CARACTERISTIQUES SUIVANTES :

A ) UNE TENEUR EN ACIDES GRAS LIBRES , EXPRIMEE EN ACIDE OLEIQUE , NON SUPERIEURE A 3 % ;

B ) UN COEFFICIENT D'EXTINCTION K270 ( ABSORBANCE SOUS UNE EPAISSEUR DE 1 CM D'UNE SOLUTION A 1 G D'HUILE POUR 100 ML DANS L'ISOOCTANE ( 2 , 2 , 4 TRIMETHYLPENTANE ) POUR LA LONGUEUR D'ONDE DE 270 NM ) NON SUPERIEUR A 0,25 ET , APRES TRAITEMENT DE L'ECHANTILLON D'HUILE SUR ALUMINE ACTIVEE , NON SUPERIEUR A 0,11 ;

C ) UNE VARIATION DU COEFFICIENT D'EXTINCTION AU VOISINAGE DE 270 NM NON SUPERIEURE A 0,01 .

CETTE VARIATION EST DEFINIE PAR :

* K = KM - 0,5 ( KM-4 + KM+4 )

KM DESIGNE LE COEFFICIENT D'EXTINCTION A LA LONGUEUR D'ONDE DU MAXIMUM DE LA COURBE D'ABSORPTION AU VOISINAGE DE 270 NM ,

KM-4 ET KM+4 DESIGNENT LES COEFFICIENTS D'EXTINCTION AUX LONGUEURS D'ONDE INFERIEURE ET SUPERIEURE DE 4 NM A CELLE DE KM ;

D ) REACTIONS DE BELLIER ET DE VIZERN MODIFIEE NEGATIVES , EFFECTUEES CONFORMEMENT AUX METHODES REPRISES A L'ANNEXE V SOUS A ET B ;

E ) UNE RECHERCHE DES SAVONS NEGATIVE , EFFECTUEE CONFORMEMENT A LA METHODE DECRITE A L'ANNEXE VI .

2 . EST CONSIDEREE COMME HUILE D'OLIVE VIERGE LAMPANTE , AU SENS DE LA SOUS-POSITION 15.07 A I B ) DU TARIF DOUANIER COMMUN , QUELLE QUE SOIT SON ACIDITE , L'HUILE D'OLIVE PRESENTANT LES CARACTERISTIQUES SUIVANTES :

A ) UN COEFFICIENT D'EXTINCTION K270 SUPERIEUR A 0,25 ET , APRES TRAITEMENT DE L'ECHANTILLON SUR ALUMINE ACTIVEE , NON SUPERIEUR A 0,11 .

DES HUILES AYANT UNE TENEUR EN ACIDES GRAS LIBRES , EXPRIMEE EN ACIDE OLEIQUE , SUPERIEURE A 3 % PEUVENT AVOIR , APRES PASSAGE SUR ALUMINE ACTIVEE , UN COEFFICIENT D'EXTINCTION K270 SUPERIEUR A 0,11 . DANS CE CAS , APRES NEUTRALISATION ET DECOLORATION EFFECTUEES EN LABORATOIRE , CONFORMEMENT A LA METHODE REPRISE A L'ANNEXE IV , ELLES DOIVENT AVOIR LES CARACTERISTIQUES SUIVANTES :

- UN COEFFICIENT D'EXTINCTION K270 NON SUPERIEUR A 1,10 ,

- UNE VARIATION DU COEFFICIENT D'EXTINCTION AU VOISINAGE DE 270 NM SUPERIEURE A 0,01 ET NON SUPERIEURE A 0,16 ;

B ) REACTIONS DE BELLIER ET DE VIZERN MODIFIEE NEGATIVES , EFFECTUEES CONFORMEMENT AUX METHODES REPRISES A L'ANNEXE V SOUS A ET B ;

C ) UNE RECHERCHE DES SAVONS NEGATIVE , EFFECTUEE CONFORMEMENT A LA METHODE DECRITE A L'ANNEXE VI .

3 . SONT CONSIDEREES COMME RELEVANT DE LA SOUS-POSITION 15.07 A I C ) DU TARIF DOUANIER COMMUN LES HUILES , NOTAMMENT LES HUILES DE " GRIGNONS D'OLIVE " , PRESENTANT LES CARACTERISTIQUES SUIVANTES :

A ) UNE TENEUR EN ACIDES GRAS LIBRES , EXPRIMEE EN ACIDE OLEIQUE , SUPERIEURE A 3 % ;

B ) REACTIONS DE BELLIER ET DE VIZERN MODIFIEE POSITIVES , EFFECTUEES CONFORMEMENT AUX METHODES REPRISES A L'ANNEXE V SOUS A ET B ;

C ) UNE RECHERCHE DES SAVONS NEGATIVE , EFFECTUEE CONFORMEMENT A LA METHODE REPRISE A L'ANNEXE VI .

4 . EST CONSIDEREE COMME RELEVANT DE LA SOUS-POSITION 15.07 A II A ) DU TARIF DOUANIER COMMUN L'HUILE D'OLIVE OBTENUE PAR TRAITEMENT DES HUILES DES SOUS-POSITIONS 15.07 A I A ) ET 15.07 A I B ) , MEME COUPEE D'HUILE D'OLIVE VIERGE , PRESENTANT LES CARACTERISTIQUES SUIVANTES :

A ) UNE TENEUR EN ACIDES GRAS LIBRES , EXPRIMEE EN ACIDE OLEIQUE , DE 3 % AU MAXIMUM ;

B ) UNE RECHERCHE DES SAVONS POSITIVE , EFFECTUEE CONFORMEMENT A LA METHODE DECRITE A L'ANNEXE VI ,

OU :

- UN COEFFICIENT D'EXTINCTION K270 SUPERIEUR A 0,25 ET NON SUPERIEUR A 1,10 ET , APRES TRAITEMENT DE L'ECHANTILLON D'HUILE SUR ALUMINE ACTIVEE , SUPERIEUR A 0,11 ,

ET

- UNE VARIATION DU COEFFICIENT D'EXTINCTION AU VOISINAGE DE 270 NM SUPERIEURE A 0,01 ET NON SUPERIEURE A 0,16 .

CETTE VARIATION EST DEFINIE PAR :

* K = KM - 0,5 ( KM-4 + KM+4 )

KM DESIGNE LE COEFFICIENT D'EXTINCTION A LA LONGUEUR D'ONDE DU MAXIMUM DE LA COURBE D'ABSORPTION AU VOISINAGE DE 270 NM ,

KM-4 ET KM+4 DESIGNENT LES COEFFICIENTS D'EXTINCTION AUX LONGUEURS D'ONDE INFERIEURE ET SUPERIEURE DE 4 NM A CELLE DE KM ;

C ) REACTIONS DE BELLIER ET DE VIZERN MODIFIEE NEGATIVES , EFFECTUEES CONFORMEMENT AUX METHODES REPRISES A L'ANNEXE V SOUS A ET B .

ANNEXE II

PRODUITS DE LA SOUS-POSITION 15.17 A

SONT EXCLUS DE LA SOUS-POSITION 15.17 A :

A ) LES RESIDUS PROVENANT DU TRAITEMENT DES CORPS GRAS CONTENANT DE L'HUILE DONT L'INDICE D'IODE , DETERMINE SELON LA METHODE DE WIJS SANS CATALYSEUR , EST INFERIEUR A 70 OU SUPERIEUR A 100 ;

B ) LES RESIDUS PROVENANT DU TRAITEMENT DES CORPS GRAS CONTENANT DE L'HUILE DONT L'INDICE D'IODE EST COMPRIS ENTRE 70 ET 100 MAIS DONT LA SURFACE DU PIC AYANT LE VOLUME DE RETENTION DU BETA-SITOSTEROL , DETERMINEE CONFORMEMENT AUX DISPOSITIONS DE L'ANNEXE VIII , REPRESENTE MOINS DE 93 % DE LA SURFACE TOTALE DES PICS DES STEROLS .

ANNEXE III

NOTES COMPLEMENTAIRES 2 , 3 ET 4 DU CHAPITRE 15 DU TARIF DOUANIER COMMUN

2 . A . EST SEULE CONSIDEREE COMME HUILE D'OLIVE , AU SENS DE LA SOUS-POSITION 15.07 A , L'HUILE PROVENANT EXCLUSIVEMENT DU TRAITEMENT DES OLIVES , A L'EXCLUSION DE L'HUILE D'OLIVE REESTERIFIEE ET DE TOUT MELANGE D'HUILE D'OLIVE AVEC DES HUILES D'UNE AUTRE NATURE .

B . SONT CONSIDEREES COMME HUILES D'OLIVE NON TRAITEES LES HUILES DEFINIES AUX POINTS I , II ET III CI-APRES .

I . EST SEULE CONSIDEREE COMME HUILE D'OLIVE VIERGE , AU SENS DE LA SOUS-POSITION 15.07 A I A ) , L'HUILE D'OLIVE NATURELLE OBTENUE UNIQUEMENT PAR DES PROCEDES MECANIQUES , Y COMPRIS LA PRESSION , A L'EXCLUSION DE TOUT MELANGE AVEC DE L'HUILE D'OLIVE OBTENUE DE FACON DIFFERENTE , PRESENTANT LES CARACTERISTIQUES SUIVANTES :

A ) UNE TENEUR EN ACIDES GRAS LIBRES , EXPRIMEE EN ACIDE OLEIQUE , DE 3 % AU MAXIMUM ;

B ) UN COEFFICIENT D'EXTINCTION K270 ( ABSORBANCE SOUS UNE EPAISSEUR D'UN CENTIMETRE D'UNE SOLUTION D'UN GRAMME D'HUILE POUR 100 MILLILITRES DANS L'ISOOCTANE ( 2 , 2 , 4 TRIMETHYLPENTANE ) POUR LA LONGUEUR D'ONDE DE 270 NANOMETRES ) NON SUPERIEUR A 0,25 ET , APRES TRAITEMENT DE L'ECHANTILLON D'HUILE SUR ALUMINE ACTIVEE , NON SUPERIEUR A 0,11 ;

C ) UNE VARIATION DU COEFFICIENT D'EXTINCTION AU VOISINAGE DE 270 NANOMETRES NON SUPERIEURE A 0,01 .

CETTE VARIATION EST DEFINIE PAR :

* K = KM - 0,5 ( KM-4 + KM+4 )

KM DESIGNE LE COEFFICIENT D'EXTINCTION A LA LONGUEUR D'ONDE DU MAXIMUM DE LA COURBE D'ABSORPTION AU VOISINAGE DE 270 NANOMETRES ;

KM-4 ET KM+4 DESIGNENT LES COEFFICIENTS D'EXTINCTION AUX LONGUEURS D'ONDE INFERIEURE ET SUPERIEURE DE 4 NANOMETRES A CELLE DE KM ;

D ) REACTIONS DE BELLIER ET DE VIZERN MODIFIEE NEGATIVES ;

E ) UNE RECHERCHE DES SAVONS NEGATIVE .

II . EST CONSIDEREE COMME HUILE D'OLIVE VIERGE LAMPANTE , AU SENS DE LA SOUS-POSITION 15.07 A I B ) , QUELLE QUE SOIT SON ACIDITE , L'HUILE D'OLIVE PRESENTANT LES CARACTERISTIQUES SUIVANTES :

A ) UN COEFFICIENT D'EXTINCTION K270 SUPERIEUR A 0,25 ET , APRES TRAITEMENT DE L'ECHANTILLON SUR ALUMINE ACTIVEE , NON SUPERIEUR A 0,11 . DES HUILES AYANT UNE TENEUR EN ACIDES GRAS LIBRES , EXPRIMEE EN ACIDE OLEIQUE , SUPERIEURE A 3 % PEUVENT AVOIR , APRES PASSAGE SUR ALUMINE ACTIVEE , UN COEFFICIENT D'EXTINCTION K270 SUPERIEUR A 0,11 . DANS CE CAS , APRES NEUTRALISATION ET DECOLORATION EFFECTUEES EN LABORATOIRE , ELLES DOIVENT AVOIR LES CARACTERISTIQUES SUIVANTES :

- UN COEFFICIENT D'EXTINCTION K270 NON SUPERIEUR A 1,10 ,

- UNE VARIATION DU COEFFICIENT D'EXTINCTION AU VOISINAGE DE 270 NANOMETRES SUPERIEURE A 0,01 ET NON SUPERIEURE A 0,16 ;

B ) REACTIONS DE BELLIER ET DE VIZERN MODIFIEE NEGATIVES ;

C ) UNE RECHERCHE DES SAVONS NEGATIVE .

III . SONT CONSIDEREES COMME PRODUITS RELEVANT DE LA SOUS-POSITION 15.07 A I C ) LES HUILES , NOTAMMENT LES HUILES DE " GRIGNONS D'OLIVE " , PRESENTANT LES CARACTERISTIQUES SUIVANTES :

A ) UNE TENEUR EN ACIDES GRAS LIBRES , EXPRIMEE EN ACIDE OLEIQUE , SUPERIEURE A 3 % ;

B ) REACTIONS DE BELLIER ET/OU DE VIZERN MODIFIEE POSITIVES ;

C ) UNE RECHERCHE DES SAVONS NEGATIVE .

C . RELEVE DE LA SOUS-POSITION 15.07 A II A ) L'HUILE D'OLIVE OBTENUE PAR LE TRAITEMENT DES HUILES DES SOUS-POSITIONS 15.07 A I A ) ET/OU 15.07 A I B ) , MEME COUPEES D'HUILE D'OLIVE VIERGE , PRESENTANT LES CARACTERISTIQUES SUIVANTES :

A ) UNE TENEUR EN ACIDES GRAS LIBRES , EXPRIMEE EN ACIDE OLEIQUE , DE 3 % AU MAXIMUM ;

B ) UNE RECHERCHE DES SAVONS POSITIVE

OU :

- UN COEFFICIENT D'EXTINCTION K270 SUPERIEUR A 0,25 ET NON SUPERIEUR A 1,10 ET , APRES TRAITEMENT DE L'ECHANTILLON SUR ALUMINE ACTIVEE , SUPERIEUR A 0,11 ,

ET

- UNE VARIATION DU COEFFICIENT D'EXTINCTION AU VOISINAGE DE 270 NANOMETRES SUPERIEURE A 0,01 ET NON SUPERIEURE A 0,16 .

CETTE VARIATION EST DEFINIE PAR :

* K = KM - 0,5 ( KM-4 + KM+4 )

KM DESIGNE LE COEFFICIENT D'EXTINCTION A LA LONGUEUR D'ONDE DU MAXIMUM DE LA COURBE D'ABSORPTION AU VOISINAGE DE 270 NANOMETRES ,

KM-4 ET KM+4 DESIGNENT LES COEFFICIENTS D'EXTINCTION AUX LONGUEURS D'ONDE INFERIEURE ET SUPERIEURE DE 4 NANOMETRES A CELLE DE KM ;

C ) REACTIONS DE BELLIER ET DE VIZERN MODIFIEE NEGATIVES .

3 . SONT EXCLUS DE LA SOUS-POSITION 15.17 A :

A ) LES RESIDUS PROVENANT DU TRAITEMENT DES CORPS GRAS CONTENANT DE L'HUILE DONT L'INDICE D'IODE , DETERMINE SELON LA METHODE DE WIJS SANS CATALYSEUR , EST INFERIEUR A 70 OU SUPERIEUR A 100 ;

B ) LES RESIDUS PROVENANT DU TRAITEMENT DES CORPS GRAS CONTENANT DE L'HUILE DONT L'INDICE D'IODE EST COMPRIS ENTRE 70 ET 100 MAIS DONT LA SURFACE DU PIC AYANT LE VOLUME DE RETENTION DU BETA-SITOSTEROL , DETERMINEE CONFORMEMENT AUX DISPOSITIONS REPRISES A L'ANNEXE VIII DU REGLEMENT VISE A LA NOTE COMPLEMENTAIRE 4 CI-DESSOUS , REPRESENTE MOINS DE 93 % DE LA SURFACE TOTALE DES PICS DES STEROLS .

4 . LES METHODES D'ANALYSE POUR LA DETERMINATION DES CARACTERISTIQUES DES PRODUITS VISES CI-DESSUS SONT CELLES PREVUES RESPECTIVEMENT AUX ANNEXES DU REGLEMENT ( CEE ) NO 1058/77 .

ANNEXE IV

I . TRAITEMENT DE L'ECHANTILLON PAR L'ALUMINE ACTIVEE

1 . INTRODUIRE 30 G D'ALUMINE BASIQUE , OBTENUE SELON LE PROCEDE DECRIT AU PARAGRAPHE 2 , DANS UNE COLONNE A CHROMATOGRAPHIE DE 35 MM ENVIRON DE DIAMETRE ET DE 450 MM DE LONGUEUR , MUNIE D'UN TUBE D'ECOULEMENT DE 10 MM ENVIRON DE DIAMETRE .

TASSER MECANIQUEMENT L'ALUMINE , EN LAISSANT TOMBER DOUCEMENT LA COLONNE MAINTENUE VERTICALE , DE FACON REPETEE , SUR UNE SURFACE DE BOIS . INTRODUIRE , DANS LA COLONNE AINSI PREPAREE , 100 ML D'UNE SOLUTION A 10 % D'HUILE DANS L'HEXANE .

RECUEILLIR L'ELUAT ET EVAPORER LE SOLVANT SOUS VIDE A UNE TEMPERATURE INFERIEURE A 25* C .

SUR L'HUILE AINSI OBTENUE , LA DETERMINATION DU COEFFICIENT D'EXTINCTION A 270 NM DOIT ETRE FAITE IMMEDIATEMENT .

2 . ON OBTIENT L'ALUMINE BASIQUE D'ACTIVITE BROCKMANN I ( 0 % D'EAU ) EN CHAUFFANT PENDANT TROIS HEURES A 380-400* C DE L'ALUMINE BASIQUE ( POUR CHROMATOGRAPHIE ) DE GRANULOMETRIE COMPRISE ENTRE 30 UM ET 130 UM ( 80 UM DE MOYENNE ) . A 100 G DE CE PRODUIT , AJOUTER 5 ML D'EAU DISTILLEE POUR OBTENIR DE L'ALUMINE BASIQUE D'UNE ACTIVITE BROCKMANN COMPRISE ENTRE II ET III . AGITER FREQUEMMENT ET LAISSER REPOSER UNE NUIT DANS UN RECIPIENT HERMETIQUEMENT FERME .

VERIFICATION DE L'ACTIVITE DE L'ALUMINE

INTRODUIRE 30 G D'ALUMINE BASIQUE ( OBTENUE DE LA MANIERE INDIQUEE CI-DESSUS ) DANS UNE COLONNE POUR CHROMATOGRAPHIE DE 35 MM ENVIRON DE DIAMETRE ET DE 450 MM DE LONGUEUR , FAIRE PASSER A TRAVERS CETTE COLONNE , DANS LES CONDITIONS SPECIFIEES PAR LA METHODE , UN MELANGE DE 95 % D'HUILE D'OLIVE VIERGE AYANT UN COEFFICIENT D'EXTINCTION K270 INFERIEUR A 0,18 ET DE 5 % D'UNE HUILE D'ARACHIDE TRAITEE LORS DE SON RAFFINAGE PAR LES TERRES DECOLORANTES ET AYANT UN COEFFICIENT D'EXTINCTION K270 NON INFERIEUR A 4 . SI LE MELANGE PRESENTE UN COEFFICIENT D'EXTINCTION SUPERIEUR A 0,11 , L'ALUMINE EST ACCEPTABLE . SI L'ELUTION DES TRIENES CONJUGUES SUR CETTE ALUMINE NE S'EST PAS PRODUITE , IL FAUT UTILISER UNE ALUMINE PLUS HYDRATEE , APRES AVOIR VERIFIE SI ELLE SATISFAIT AUX EXIGENCES DU TEST PRECEDENT .

II . NEUTRALISATION ET DECOLORATION DE L'HUILE D'OLIVE EN LABORATOIRE

A . NEUTRALISATION DE L'HUILE

1 . APPAREILLAGE

- BECHER DE 300 ML DE FORME HAUTE ,

- CENTRIFUGEUSE DE LABORATOIRE AVEC TUBES DE 100 ML ,

- BECHER DE 250 ML ,

- BALLONS DE 100 ML ,

- AMPOULE A DECANTER D'UN LITRE .

2 . REACTIFS

- SOLUTION AQUEUSE D'HYDROXYDE DE SODIUM A 12 % ,

- SOLUTION ETHANOLIQUE A 1 % DE PHENOLPHTALEINE ,

- HEXANE PUR POUR ANALYSE ,

- ALCOOL ISOPROPYLIQUE PUR POUR ANALYSE .

3 . MODE OPERATOIRE

A ) HUILES D'ACIDITE EXPRIMEE EN ACIDE OLEIQUE INFERIEURE A 30 %

INTRODUIRE , DANS UN BECHER DE 300 ML DE FORME HAUTE , 50 G D'HUILE BRUTE ET CHAUFFER A 65* C AU BAIN-MARIE . EN AGITANT LENTEMENT , AJOUTER UNE QUANTITE DE SOLUTION D'HYDROXYDE DE SODIUM A 12 % CORRESPONDANT A L'ACIDITE LIBRE DE L'HUILE , AVEC UN EXCES DE 5 % . CONTINUER A AGITER PENDANT CINQ MINUTES , EN MAINTENANT LA TEMPERATURE A 65* C .

TRANSFERER LE TOUT DANS DES TUBES A CENTRIFUGER DE 100 ML , SEPARER LA PATE SAVONNEUSE PAR CENTRIFUGATION . VERSER L'HUILE DECANTEE DANS UN BECHER DE 250 ML ET LAVER AVEC 50-60 ML D'EAU DISTILLEE BOUILLANTE TOUT EN ELIMINANT LA COUCHE AQUEUSE A L'AIDE D'UN SIPHON . REPETER LES LAVAGES JUSQU'A ELIMINATION COMPLETE DES TRACES DE SAVON RESIDUEL ( DISPARITION DE LA COLORATION ROSE A LA PHENOLPHTALEINE ) .

CENTRIFUGER L'HUILE POUR ELIMINER LES PETITES QUANTITES D'EAU RESIDUELLE .

B ) HUILES D'ACIDITE EXPRIMEE EN ACIDE OLEIQUE SUPERIEURE A 30 %

DANS UNE AMPOULE A DECANTER D'UN LITRE , INTRODUIRE 50 G D'HUILE BRUTE , 200 ML D'HEXANE , 100 ML D'ALCOOL ISOPROPYLIQUE ET UNE QUANTITE DE SOLUTION D'HYDROXYDE DE SODIUM A 12 % CORRESPONDANT A L'ACIDITE LIBRE DE L'HUILE , AVEC UN EXCES DE 0,3 % . AGITER ENERGIQUEMENT PENDANT UNE MINUTE . AJOUTER 100 ML D'EAU DISTILLEE , AGITER DE NOUVEAU ET LAISSER REPOSER .

APRES SEPARATION DES COUCHES , LAISSER S'ECOULER LA COUCHE INFERIEURE CONTENANT LES SAVONS . ENTRE LES DEUX COUCHES ( HUILEUSE AU-DESSUS ET AQUEUSE AU-DESSOUS ) SE FORME SOUVENT UNE COUCHE INTERMEDIAIRE CONSTITUEE DE MUCILAGES ET DE SUBSTANCES INSOLUBLES QUI DOIT EGALEMENT ETRE ELIMINEE .

PROCEDER ENSUITE AU LAVAGE DE LA SOLUTION HEXANIQUE D'HUILE NEUTRE AVEC DES PORTIONS DE 50-60 ML D'UNE SOLUTION D'ALCOOL ISOPROPYLIQUE/EAU DISTILLEE 1/1 ( V/V ) JUSQU'A DISPARITION DE LA COLORATION ROSE A LA PHENOLPHTALEINE . PROCEDER ENSUITE A L'ELIMINATION COMPLETE DE L'HEXANE PAR DISTILLATION SOUS VIDE ( PAR EXEMPLE , A L'EVAPORATEUR ROTATIF ) .

B . DECOLORATION DE L'HUILE NEUTRALISEE

1 . APPAREILLAGE

- BALLON DE 250 ML A 3 COLS RODES PERMETTANT D'INSERER :

A ) UN THERMOMETRE GRADUE EN DEGRES ET PERMETTANT DE FAIRE DES LECTURES JUSQU'A 90* C ;

B ) UN AGITATEUR MECANIQUE TOURNANT A 250-300 TOURS PAR MINUTE EQUIPE POUR LE FONCTIONNEMENT SOUS VIDE ;

C ) UN RACCORD VERS LA POMPE A VIDE ,

- POMPE A VIDE , MUNIE D'UN MANOMETRE , CAPABLE DE DONNER DES PRESSIONS RESIDUELLES DE 15-30 MILLIBARS .

2 . MODE OPERATOIRE

PESER DANS LE BALLON A 3 COLS 100 G ENVIRON DE L'HUILE NEUTRALISEE . INSERER LE THERMOMETRE ET L'AGITATEUR , RELIER A LA POMPE A VIDE ET CHAUFFER JUSQU'A 90* C EN AGITANT .

MAINTENIR CETTE TEMPERATURE , TOUJOURS SOUS AGITATION , JUSQU'A CE QUE L'HUILE A ANALYSER SOIT TOTALEMENT DEBARRASSEE DE SON HUMIDITE ( TRENTE MINUTES ENVIRON ) .

INTERROMPRE ALORS LE VIDE ET AJOUTER 2 A 3 G DE TERRE ACTIVEE . RETABLIR LE VIDE JUSQU'A OBTENTION D'UNE PRESSION RESIDUELLE DE 15-30 MILLIBARS ET , TOUJOURS A LA TEMPERATURE DE 90* C , AGITER PENDANT TRENTE MINUTES A 250 TOURS PAR MINUTE ENVIRON .

FILTRER ENSUITE A CHAUD DANS UNE ETUVE THERMOSTATIQUE ( 50-60* C )

ANNEXE V

RECHERCHE DE LA PRESENCE D'HUILE DE GRIGNONS D'OLIVE DANS LES HUILES D'OLIVE

A . METHODE DITE DE BELLIER

1 . MATERIEL

- BALLON DE 100 ML , MUNI D'UN REFRIGERANT A REFLUX ,

- PIPETTE DE 5 ML GRADUEE EN DIXIEMES ,

- SYSTEME CHAUFFANT PERMETTANT D'ATTEINDRE LA TEMPERATURE DE 80* C ENVIRON ,

- THERMOMETRE DE 15 A 60* C .

2 . REACTIFS

- SOLUTION HYDRO-ALCOOLIQUE DE POTASSE ( 42,5 G DE KOH DISSOUS DANS 72 ML D'EAU DISTILLEE , LE VOLUME ETANT COMPLETE A 500 ML AVEC DE L'ALCOOL ETHYLIQUE A 95* ) ,

- SOLUTION D'ALCOOL ETHYLIQUE , TITRANT 70* ,

- SOLUTION AQUEUSE D'ACIDE ACETIQUE 1 + 2 ( EN VOLUME ) , AJUSTEE DE FACON QUE 1,5 ML NEUTRALISENT EXACTEMENT 5 ML DE LA SOLUTION HYDRO-ALCOOLIQUE D'HYDROXYDE DE POTASSIUM EN PRESENCE DE PHENOLPHTALEINE .

3 . PREPARATION DE L'ECHANTILLON

L'HUILE EST PRIVEE D'EAU PAR DECANTATION ET FILTRATION SUR PAPIER EFFECTUEES A UNE TEMPERATURE LEGEREMENT SUPERIEURE AU POINT DE FUSION DE CERTAINS CONSTITUANTS CONCRETS QUI AURAIENT PU SE SEPARER DE LA MATIERE GRASSE FLUIDE .

4 . MODE OPERATOIRE

INTRODUIRE DANS LE BALLON 1 ML ENVIRON D'HUILE PREPAREE COMME INDIQUE AU PARAGRAPHE 3 . AJOUTER 5 ML DE SOLUTION HYDRO-ALCOOLIQUE DE POTASSE . ADAPTER LE REFRIGERANT A REFLUX ET PORTER A EBULLITION PENDANT DIX MINUTES EN AGITANT DE TEMPS EN TEMPS . LAISSER REFROIDIR JUSQU'A LA TEMPERATURE AMBIANTE . AJOUTER 1,5 ML DE SOLUTION AQUEUSE D'ACIDE ACETIQUE ET 50 ML DE SOLUTION D'ALCOOL ETHYLIQUE PREALABLEMENT AMENEE A LA TEMPERATURE DE 50* C . MELANGER PAR AGITATION , INTRODUIRE LE THERMOMETRE ET LAISSER REFROIDIR , EN OBSERVANT L'ASPECT DE LA SOLUTION DES QU'ELLE ATTEINT LA TEMPERATURE DE 45* C . SI UN PRECIPITE FLOCONNEUX SE FORME A UNE TEMPERATURE SUPERIEURE A 40* C , LA REACTION EST POSITIVE . EN L'ABSENCE D'UN PRECIPITE FLOCONNEUX CARACTERISE , MAINTENIR LE LIQUIDE A TEMPERATURE AMBIANTE , QUI DOIT ETRE COMPRISE ENTRE 20 ET 22* C PENDANT AU MOINS VINGT-QUATRE HEURES , ET SI NECESSAIRE PENDANT QUARANTE-HUIT HEURES . OBSERVER A NOUVEAU LA SOLUTION : LA FORMATION D'UN PRECIPITE FLOCONNEUX EN SUSPENSION AU MILIEU DU LIQUIDE INDIQUE EGALEMENT QUE LA REACTION EST POSITIVE .

EXPRESSION DES RESULTATS

RECHERCHE DE L'HUILE DE GRIGNONS ( METHODE DE BELLIER ) POSITIVE OU NEGATIVE .

B . METHODE DITE DE VIZERN MODIFIEE

L'INSAPONIFIABLE DE L'HUILE A ANALYSER EST ISOLE ET SON COMPORTEMENT EN SOLUTION DANS L'ALCOOL A 85* EST ETUDIE DANS CERTAINES CONDITIONS .

1 . MATERIEL

- BALLONS DE 300 ML EN VERRE RESISTANT AUX ALCALINS ET MUNI D'UN REFRIGERANT A REFLUX ,

- AMPOULES A DECANTATION DE 500 ML OU DE 1 000 ML ,

- BECHERS DE 300 ML ET DE 250 ML ,

- EPROUVETTE EN VERRE .

2 . REACTIFS

- SOLUTION ALCOOLIQUE D'HYDROXYDE DE POTASSIUM 2N ,

- ETHER DE PETROLE ,

- ALCOOL ETHYLIQUE A 50 % ,

- ALCOOL ETHYLIQUE A 96* MESURE A L'ALCOOMETRE ,

- EAU OXYGENEE A 10 VOLUMES ,

- ALCOOL ETHYLIQUE A 85* MESURE A L'ALCOOMETRE .

3 . MODE OPERATOIRE

PESER ENVIRON 5 G DE L'ECHANTILLON A ANALYSER DANS UN BALLON DE 300 ML . AJOUTER 50 ML DE LA SOLUTION ALCOOLIQUE D'HYDROXYDE DE POTASSIUM 2N . MONTER LE REFRIGERANT A REFLUX ET PORTER A LEGERE EBULLITION . AGITER APRES UNE HEURE DE CHAUFFAGE , REFROIDIR A 30-35* C ET TRANSVASER DANS UNE AMPOULE A DECANTATION EN UTILISANT 50 ML D'EAU DISTILLEE .

LAVER SOIGNEUSEMENT LE BALLON AVEC 50 ML D'ETHER DE PETROLE , REPETER L'OPERATION A PLUSIEURS REPRISES . TRANSVASER L'ETHER DE PETROLE DANS UNE AMPOULE A DECANTATION . AGITER ENERGIQUEMENT LE CONTENU UN PEU PLUS D'UNE MINUTE . APRES DECANTATION , ELIMINER LA PHASE AQUEUSE EN LA TRANSVASANT DANS UNE DEUXIEME AMPOULE A DECANTATION . AJOUTER ENCORE 50 ML D'ETHER DE PETROLE , AGITER ENERGIQUEMENT LE CONTENU UN PEU PLUS D'UNE MINUTE ET LAISSER DECANTER . LA PHASE AQUEUSE EST TRANSVASEE DANS UNE TROISIEME AMPOULE A DECANTATION A LAQUELLE ON AJOUTE ENCORE 50 ML D'ETHER DE PETROLE . AGITER ENERGIQUEMENT ENSUITE ET LAISSER DECANTER .

RECUEILLIR DANS UNE AMPOULE A DECANTATION LES EXTRAITS ETHERES PROVENANT DES DIFFERENTES EXTRACTIONS DE L'INSAPONIFIABLE ET LAVER AU MOINS TROIS FOIS AVEC DE L'ALCOOL A 50 % ( 50 ML A CHAQUE FOIS ) JUSQU'A CE QUE LE LIQUIDE DE LAVAGE NE DONNE PLUS DE REACTION ALCALINE A LA PHENOLPHTALEINE .

FILTRER LA SOLUTION DE L'INSAPONIFIABLE DANS UN BECHER DE 300 ML , LAVER LE FILTRE AVEC DE L'ETHER DE PETROLE ET ELIMINER LE SOLVANT PAR DISTILLATION . AJOUTER 10 ML D'ALCOOL A 96* ET APRES CHAUFFAGE MODERE ( ENVIRON 40* C ) , FILTRER DANS UN BECHER DE 100 ML . LAVER LE BECHER DE 300 ML AVEC 10 ML D'ALCOOL A 96* ET FILTRER ENSUITE DANS LE DEUXIEME BECHER .

DANS LE BECHER DE 100 ML CONTENANT LES EXTRAITS ALCOOLIQUES DE L'INSAPONIFIABLE , AJOUTER 5 ML D'EAU OXYGENEE A 10 VOLUMES , CHAUFFER AU BAIN-MARIE JUSQU'A EVAPORATION COMPLETE . AJOUTER ENCORE 20 ML D'ALCOOL A 96* ET 5 ML D'EAU OXYGENEE ; LAISSER DE NOUVEAU EVAPORER COMPLETEMENT .

RETIRER LE BECHER DU BAIN-MARIE ET AJOUTER 20 ML D'ALCOOL A 85* . CHAUFFER PRUDEMMENT AU BAIN-MARIE EN FAISANT TRES ATTENTION DE NE PAS PROVOQUER DES PERTES D'ALCOOL POUR NE PAS DIMINUER LA CONCENTRATION . IL S'AGIT D'UN ELEMENT TRES IMPORTANT QU'IL NE FAUT PAS NEGLIGER .

FILTRER SUR PAPIER , REFROIDIR ET EXAMINER LE COMPORTEMENT DE LA SOLUTION AU BOUT D'UNE HEURE , PUIS DE QUATRE HEURES . SI , APRES UNE HEURE , LA SOLUTION EST ABSOLUMENT TRANSPARENTE , L'ANALYSE EST NEGATIVE , C'EST-A-DIRE QU'IL N'Y A PAS D'HUILE DE GRIGNONS .

SI , APRES UNE HEURE , LA SOLUTION EST TROUBLE , REPETER L'OBSERVATION QUATRE HEURES APRES .

SI , AU BOUT DE QUATRE HEURES , LA SOLUTION EST ENCORE TROUBLE , MAIS NE PRESENTE PAS DE FLOCONS , L'ANALYSE EST ENCORE NEGATIVE . EN REVANCHE , SI ON OBSERVE LA FORMATION DE FLOCONS , L'ANALYSE EST POSITIVE ET L'ON SE TROUVE EN PRESENCE D'HUILE DE GRIGNONS .

EXPRESSION DES RESULTATS

RECHERCHE DE L'HUILE DE GRIGNONS ( METHODE DE VIZERN MODIFIEE ) : POSITIVE OU NEGATIVE .

OBSERVATIONS

LES HUILES D'OLIVE DONNENT UNE SOLUTION TRANSPARENTE OU AU MAXIMUM LEGEREMENT OPALINE PENDANT TOUT L'ESSAI . LES HUILES DE GRIGNONS PURES OU MELANGEES PRESENTENT DES FLOCONS CARACTERISTIQUES QUI RESTENT EN SUSPENSION COMME DES PETITS NUAGES ET QUI FINISSENT PAR SE DEPOSER AU BOUT DE PLUSIEURS HEURES DE REPOS .

ANNEXE VI

RECHERCHE DES SAVONS PAR LA MISE EN EVIDENCE DE L'ALCALINITE

PRINCIPE DE LA METHODE

MISE EN EVIDENCE DES SAVONS ALCALINS PAR ACTION SUR LE BLEU DE BROMOPHENOL .

REACTIFS

- SOLUTION A 0,1 % DE BLEU DE BROMOPHENOL DANS L'ETAHANOL A 96 % ( V/V ) ,

- ACETONE FRAICHEMENT DISTILLEE , ADDITIONNEE DE 2 % D'EAU ( V/V ) .

L'ACETONE A 2 % D'EAU DOIT PRESENTER UNE TEINTE JAUNE OU JAUNE VERDATRE EN PRESENCE DE QUELQUES GOUTTES DE LA SOLUTION DE BLEU DE BROMOPHENOL .

MATERIEL

TUBE A ESSAI DE 150 MM FOIS 15 MM .

MODE OPERATOIRE

INTRODUIRE DANS LE TUBE A ESSAI 10 ML D'ACETONE ET 1 GOUTTE DE SOLUTION DE BROMOPHENOL . LA SOLUTION DEVRAIT VIRER AU JAUNE . SINON , RINCER LE TUBE ET LE BOUCHON AVEC DE L'ACETONE JUSQU'A DISPARITION DE LA COLORATION BLEUE . INTRODUIRE 10 G D'HUILE DANS LE TUBE , L'OBTURER A L'AIDE D'UN BOUCHON PROPRE , AGITER ET LAISSER REPOSER . UN VIRAGE AU BLEU DANS LA COUCHE SUPERIEURE D'ACETONE INDIQUE LA PRESENCE DE SAVON .

EXPRESSION DES RESULTATS

LES RESULTATS SONT EXPRIMES COMME POSITIFS OU NEGATIFS .

ANNEXE VII

RECHERCHE DE LA PRESENCE DES HUILES REESTERIFIEES

LA METHODE A POUR BUT DE DETERMINER , DANS LES HUILES ET GRAISSES , LA COMPOSITION DE LA FRACTION DES ACIDES GRAS QUI SONT ESTERIFIES SUR LA POSITION 2 ( POSITION * , OU POSITION INTERNE ) DU GLYCEROL , LES HUILES D'OLIVE REESTERIFIEES CONTENANT PLUS D'ACIDE PALMITIQUE EN POSITION * QUE LES HUILES D'OLIVE NON REESTERIFIEES .

PRINCIPE

CETTE METHODE REPOSE SUR L'HYDROLYSE PARTIELLE ET SPECIFIQUE DES TRIGLYCERIDES PAR LA LIPASE PANCREATIQUE AVEC FORMATION PREFERENTIELLE DE MONO-2 GLYCERIDES . CETTE HYDROLYSE CONDUIT A UN MELANGE RENFERMANT , A COTE DES TRIGLYCERIDES NON HYDROLYSES , DES DIGLYCERIDES , DES MONO-2 GLYCERIDES ET DES ACIDES GRAS LIBRES . CE MELANGE EST FRACTIONNE PAR CHROMATOGRAPHIE EN COUCHE MINCE ET LES MONOGLYCERIDES ISOLES . CES MONOGLYCERIDES SONT METHANOLYSES , ET LES ESTERS METHYLIQUES OBTENUS SONT ANALYSES PAR CHROMATOGRAPHIE EN PHASE GAZEUSE .

LE PRODUIT ANALYSE DOIT ETRE CONSIDERE COMME AYANT ETE ADDITIONNE D'HUILE REESTERIFIEE LORSQUE LE POURCENTAGE D'ACIDE PALMITIQUE CONSTATE DANS LA POSITION 2 DES TRIGLYCERIDES EST SUPERIEUR A 2 % .

1 . MATERIEL

- AMPOULE A DECANTER DE 500 ML ,

- COLONNE EN VERRE POUR CHROMATOGRAPHIE DE 13 MM DE DIAMETRE INTERIEUR ET DE 400 MM DE LONGUEUR , EQUIPEE D'UNE PLAQUE EN VERRE FRITTE ET D'UN ROBINET ,

- BALLON DE 250 ML A COL LARGE ,

- BALLON DE 100 ML ,

- TUBE DE CENTRIFUGEUSE DE 10 ML , AVEC BOUCHON RODE ,

- SERINGUE HYPODERMIQUE DE 1 ML , EQUIPEE D'UNE AIGUILLE MINCE ,

- BALLON DE 25 ML , AVEC REFRIGERANT A AIR D'ENVIRON 1 M DE LONGUEUR AVEC RACCORD RODE ,

- BECHER DE 50 ML ,

- BURETTE DE 5 ML , GRADUEE EN 1/20 ML ,

- ETALEUR POUR CHROMATOGRAPHIE EN COUCHE MINCE , AVEC PLAQUES DE VERRE DE 20 FOIS 20 CM ,

- MICROSERINGUE DELIVRANT DES GOUTTES DE 3-4 UL ,

- CUVE DE DEVELOPPEMENT POUR CHROMATOGRAPHIE EN COUCHE MINCE ,

- EVAPORATEUR ROTATIF ,

- ETUVE REGLABLE A 103* C PLUS OU MOINS 2* C ,

- THERMOSTAT REGLABLE ENTRE 30* C ET 45* C A PLUS OU MOINS 0,5* C ,

- AGITATEUR ELECTRIQUE VIBRANT PERMETTANT UNE AGITATION ENERGIQUE DU TUBE DE CENTRIFUGEUSE ,

- PULVERISATEUR POUR CHROMATOGRAPHIE EN COUCHE MINCE ,

- LAMPE ULTRAVIOLETTE POUR L'EXAMEN DES PLAQUES CHROMATOGRAPHIQUES ,

- AGITATEUR DE LABORATOIRE , D'UN TYPE CONVENABLE POUR LA DISPERSION ET LE MELANGE DE MATERIAUX HETEROGENES ,

- PH-METRE ,

- AGITATEUR A HELICE ,

- CHRONOMETRE .

2 . REACTIFS

- SOLUTION AQUEUSE D'HYDROXYDE DE SODIUM A 12 % ( M/V ) ,

- SOLUTION A 1 % ( M/V ) DE PHENOLPHTALEINE DANS L'ETHANOL A 95 % ( V/V ) ,

- OXYDE DIETHYLIQUE , EXEMPT DE PEROXYDES ,

- ALCOOL ISOPROPYLIQUE , OU ALCOOL ETHYLIQUE A 95 % ( V/V ) , POUR ANALYSES ,

- ALUMINE ACTIVEE POUR CHROMATOGRAPHIE , NEUTRE , DE DEGRE D'ACTIVITE BROCKMANN I , RECEMMENT ACTIVEE PENDANT DEUX HEURES A 260* C ET CONSERVEE DANS UN DESSICATEUR ,

- HEXANE , OU A DEFAUT ETHER DE PETROLE ( EB = 30-50* C ) , POUR CHROMATOGRAPHIE ,

- ACIDE FORMIQUE A 98 % ( M/M ) AU MINIMUM ,

- LIPASE PANCREATIQUE D'ACTIVITE CONVENABLE ( NOTE 1 , NOTE 2 ) ,

- SOLUTION TAMPON : SOLUTION AQUEUSE 1 M DE TRIS - HYDROXYMETHYL-AMINOMETHANE AMENEE JUSQU'A PH 8 PAR DE L'ACIDE CHLORHYDRIQUE 6 N ( CONTROLE POTENTIOMETRIQUE ) ,

- SOLUTION AQUEUSE A 0,1 % ( M/V ) DE CHOLATE DE SODIUM ( QUALITE ENZYMATIQUE ) ,

- SOLUTION D'ACIDE CHLORHYDRIQUE 6 N ,

- SOLVANT DE DEVELOPPEMENT : HEXANE ( OU , A DEFAUT , ETHER DE PETROLE ) /OXYDE DIETHYLIQUE/ACIDE FORMIQUE 70/30/1 ( V/V/V ) ,

- SOLUTION AQUEUSE DE GOMME ARABIQUE A 10 % ( M/V ) ,

- SOLUTION AQUEUSE DE CHLORURE DE CALCIUM ( CACL2 ) A 22 % ( M/V ) ,

- SOLUTION ALCOOLIQUE A 0,2 % ( M/V ) DE DICHLORO-2'-7' FLUORESCEINE , LEGEREMENT ALCALINISEE PAR ADDITION D'UNE GOUTTE D'HYDROXYDE DE SODIUM 1N PAR 100 ML ,

- SILICE EN POUDRE , AVEC LIANT , DE QUALITE POUR CHROMATOGRAPHIE EN COUCHE MINCE ,

- SOLUTION AQUEUSE DE CHOLATE DE SODIUM A 20 % ( M/V ) ,

- SOLUTION AQUEUSE D'HYDROXYDE DE SODIUM 0,1 N ,

- HUILE VEGETALE NEUTRALISEE .

3 . PREPARATION DE L'ECHANTILLON

ECHANTILLON D'ACIDITE INFERIEURE A 3 % : NEUTRALISATION DIRECTE SUR ALUMINE SELON 3.2 .

ECHANTILLON D'ACTIVITE SUPERIEURE A 3 % : NEUTRALISATION PAR LES ALCALIS EN PRESENCE DE SOLVANT SELON 3.1 , PUIS PASSAGE SUR ALUMINE SELON 3.2 .

3.1 . NEUTRALISATION PAR LES ALCALIS EN PRESENCE DE SOLVANT

VERSER , DANS UNE AMPOULE A DECANTER DE 500 ML , 10 G ENVIRON D'HUILE BRUTE , 100 ML D'HEXANE , OU , A DEFAUT , D'ETHER DE PETROLE , 50 ML D'ALCOOL ISOPROPYLIQUE OU D'ALCOOL ETHYLIQUE A 95* QUELQUES GOUTTES DE LA SOLUTION DE PHENOLPHTALEINE ET UNE QUANTITE DE LA SOLUTION D'HYDROXYDE DE SODIUM A 12 % CORRESPONDANT A L'ACIDITE LIBRE DE L'HUILE , PLUS UN EXCES DE 0,3 % . AGITER ENERGIQUEMENT PENDANT UNE MINUTE ; AJOUTER 50 ML D'EAU DISTILLEE , AGITER A NOUVEAU ET LAISSER REPOSER .

APRES DECANTATION , ELIMINER LA COUCHE INFERIEURE CONTENANT LES SAVONS . ELIMINER LES EVENTUELLES COUCHES INTERMEDIAIRES ( MUCILAGES ET SUBSTANCES INSOLUBLES ) , LAVER LA SOLUTION HEXANIQUE DE L'HUILE NEUTRALISEE AVEC DES PORTIONS SUCCESSIVES 25 OU 30 ML D'UNE SOLUTION D'ALCOOL ISOPROPYLIQUE , OU ETHYLIQUE , ET D'EAU DISTILLEE 1-1 ( V/V ) JUSQU'A DISPARITION DE LA COLORATION ROSEE DE LA PHENOLPHTALEINE .

ELIMINER LA PLUS GRANDE PARTIE DE L'HEXANE PAR DISTILLATION SOUS VIDE , ET SECHER L'HUILE A 30-40* C SOUS VIDE A L'AIDE D'UN COURANT D'AZOTE PUR JUSQU'A ELIMINATION TOTALE DU SOLVANT .

3.2 . PASSAGE SUR ALUMINE

PREPARER UNE SUSPENSION DE 15 G D'ALUMINE ACTIVEE DANS 50 ML D'HEXANE OU , A DEFAUT , D'ETHER DE PETROLE , ET VERSER , EN AGITANT , DANS UNE COLONNE EN VERRE POUR CHROMATOGRAPHIE . REGULARISER LA REPARTITION DE L'ALUMINE ET LAISSER S'ECOULER LE SOLVANT JUSQU'A 1-2 MM AU-DESSUS DU NIVEAU SUPERIEUR DE L'ABSORBANT . VERSER SOIGNEUSEMENT DANS LA COLONNE UNE SOLUTION PREPAREE ENVIRON QUINZE MINUTES AVANT PAR DISSOLUTION DE 5 G D'HUILE DANS 25 ML D'HEXANE OU , A DEFAUT , D'ETHER DE PETROLE , ET RECUEILLIR LA TOTALITE DU LIQUIDE SORTANT DE LA COLONNE DANS UN BALLON DE 100 ML .

ELIMINER LA PLUS GRANDE PARTIE DU SOLVANT PAR DISTILLATION SOUS VIDE , PUIS SECHER L'HUILE A 30-40* C SOUS VIDE A L'AIDE D'UN COURANT D'AZOTE PUR JUSQU'A ELIMINATION TOTALE DU SOLVANT .

4 . PREPARATION DES CHROMATOPLAQUES

PLACER , DANS UN BALLON DE 250 ML A COL LARGE , 30 G DE SILICE EN POUDRE AVEC LIANT ET 60 ML D'EAU DISTILLEE , ET AGITER JUSQU'A OBTENTION D'UNE BOUILLIE BIEN HOMOGENE . DEGAZER EN MAINTENANT SOUS LE VIDE DE LA TROMPE A EAU PENDANT UNE MINUTE .

ETALER DANS LES CONDITIONS USUELLES LA BOUILLIE SUR LES PLAQUES AU MOYEN DE L'ETALEUR EN REGLANT L'EPAISSEUR DE LA COUCHE A 0,25 MM .

LA QUANTITE DE BOUILLIE CI-DESSUS EST SUFFISANTE POUR LA PREPARATION DE 5 PLAQUES 20 FOIS 20 CM .

LAISSER SECHER LES PLAQUES A L'AIR PENDANT ENVIRON QUINZE MINUTES ET , ENSUITE , LES SECHER DANS UNE ETUVE A 103* C PLUS OU MOINS 2* C PENDANT DEUX HEURES .

CONSERVER LES PLAQUES AINSI PREPAREES DANS UN DESSICATEUR .

5 . MODE OPERATOIRE

5.1 . HYDROLYSE PAR LA LIPASE PANCREATIQUE

PESER DANS LE TUBE DE CENTRIFUGEUSE DE 10 ML ENVIRON 0,1 G DE L'ECHANTILLON PREPARE .

AJOUTER 20 MG DE LIPASE ET 2 ML DE SOLUTION TAMPON . AGITER SOIGNEUSEMENT ET AVEC PRECAUTION , PUIS AJOUTER 0,5 ML DE LA SOLUTION DE CHOLATE DE SODIUM A 0,1 % ET 0,2 ML DE LA SOLUTION DE CHLORURE DE CALCIUM . FERMER LE TUBE PAR LE BOUCHON RODE , SECOUER AVEC PRECAUTION ( EN EVITANT DE MOUILLER LE BOUCHON ) ET METTRE IMMEDIATEMENT LE TUBE DANS LE THERMOSTAT , REGLE A 40* C PLUS OU MOINS 0,5* C , EN AGITANT EXACTEMENT PENDANT UNE MINUTE .

RETIRER LE TUBE DU THERMOSTAT ET AGITER ENERGIQUEMENT PENDANT DEUX MINUTES EXACTEMENT .

REFROIDIR AUSSITOT SOUS UN COURANT D'EAU ; AJOUTER 1 ML D'ACIDE CHLORHYDRIQUE 6 N ET 1 ML D'OXYDE DIETHYLIQUE . BOUCHER ET AGITER ENERGIQUEMENT . LAISSER REPOSER ET PRELEVER LA PHASE ORGANIQUE SUPERIEURE A L'AIDE DE LA SERINGUE .

5.2 . SEPARATION DES MONOGLYCERIDES PAR CHROMATOGRAPHIE EN COUCHE MINCE

DEPOSER L'EXTRAIT SUR LA PLAQUE CHROMATOGRAPHIQUE A ENVIRON 1,5 CM DU BORD INFERIEUR EN LIGNE CONTINUE ET UNIFORME AFIN D'OBTENIR UNE LIGNE DE DEPART LA PLUS FINE POSSIBLE .

INTRODUIRE LA PLAQUE DANS LA CUVE DE DEVELOPPEMENT BIEN SATUREE ET DEVELOPPER AVEC LE SOLVANT DE DEVELOPPEMENT JUSQU'A 1 CM ENVIRON DU BORD SUPERIEUR . LE DEVELOPPEMENT DE LA PLAQUE DOIT SE FAIRE A LA TEMPERATURE D'ENVIRON 20* C .

SECHER LA PLAQUE A L'AIR A LA TEMPERATURE DE LA CUVE ET PULVERISER LA SOLUTION DE DICHLORO-2'-7' FLUORESCEINE . DELIMITER LA BANDE DES MONOGLYCERIDES ( RF = 0,035 ENVIRON ) SOUS LUMIERE ULTRAVIOLETTE , LES RECUPERER A L'AIDE D'UNE SPATULE METALLIQUE ( EN EVITANT D'ENLEVER LES COMPOSANTS RESTES SUR LA LIGNE DE DEPART ) ET RECUEILLIR LA SILICE DANS LE BALLON DE METHYLATION DE 25 ML .

TRANSFORMER LES MONOGLYCERIDES EN ESTERS METHYLIQUES EN TRAITANT DIRECTEMENT DANS LES CONDITIONS DE LA METHODE GENERALE DE PREPARATION DES METHYLS ESTERS DES ACIDES GRAS INDIQUES AU POINT 7.3 LA SILICE PRECEDEMMENT RECUEILLIE , PUIS PROCEDER A LA CHROMATOGRAPHIE EN PHASE GAZEUSE DES ESTERS SELON LA METHODE INDIQUEE AU POINT 7.4 .

DETERMINER SUR LE MEME ECHANTILLON LA COMPOSITION DES ACIDES GRAS TOTAUX , DONT LA COMPARAISON AVEC CELLE DES ACIDES GRAS EN POSITION 2 EST UTILE POUR L'INTERPRETATION DES RESULTATS OBTENUS .

6 . EXPRESSION DES RESULTATS

CALCULER LA COMPOSITION DES ACIDES GRAS EN POSITION 2 EN % AVEC UN CHIFFRE DECIMAL ( NOTE 3 ) .

7 . NOTES

7.1 . CONTROLE DE L'ACTIVITE LIPASIQUE

PREPARER UNE EMULSION D'HUILE EN AGITANT , DANS UN MELANGEUR ADEQUAT PENDANT ENVIRON 10 MINUTES , UN MELANGE CONSTITUE PAR 165 ML DE LA SOLUTION DE GOMME ARABIQUE A 10 % , 15 G DE GLACE PILEE ET 20 ML D'UNE HUILE PREALABLEMENT NEUTRALISEE .

DANS UN BECHER DE 50 ML , METTRE SUCCESSIVEMENT 10 ML DE L'EMULSION CI-DESSUS , 0,3 ML DE SOLUTION DE CHOLATE DE SODIUM A 20 % ET 20 ML D'EAU DISTILLEE .

PLACER LE BECHER DANS UN THERMOSTAT REGLE A 37* C PLUS OU MOINS 0,5* C ET INTRODUIRE DANS LE BECHER LES ELECTRODES D'UN PH-METRE ET UN AGITATEUR A HELICE .

A L'AIDE D'UNE BURETTE DE 5 ML , AJOUTER GOUTTE A GOUTTE UNE SOLUTION D'HYDROXYDE DE SODIUM 0,1 N JUSQU'A OBTENTION D'UN PH DE 8,5 .

AJOUTER UN VOLUME ADEQUAT D'UNE SUSPENSION DE POUDRE DE LIPASE DANS L'EAU ( VOIR CI-DESSOUS ) . DES QUE LE PH-METRE INDIQUE UN PH DE 8,3 , METTRE EN MARCHE LE CHRONOMETRE ET AJOUTER LA SOLUTION D'HYDROXYDE DE SODIUM 0,1 N AU RYTHME NECESSAIRE POUR MAINTENIR LE PH A LA VALEUR DE 8,3 . NOTER CHAQUE MINUTE LE VOLUME DE SOLUTION ALCALINE CONSOMME .

REPORTER LES DONNEES OBTENUES DANS UN SYSTEME D'AXES DE COORDONNEES , EN PORTANT EN ABSCISSES LES TEMPS ET EN ORDONNEES LES ML DE SOLUTION ALCALINE CONSOMMEE POUR MAINTENIR LE PH CONSTANT . UN GRAPHIQUE LINEAIRE DOIT ETRE OBTENU .

LA SUSPENSION DE LIPASE MENTIONNEE AU PARAGRAPHE PRECEDENT EST UNE SUSPENSION A 1 % EN POIDS DANS L'EAU . PRENDRE POUR CHAQUE ESSAI LA QUANTITE NECESSAIRE DE CETTE SUSPENSION POUR QUE , EN QUATRE OU CINQ MINUTES ENVIRON , 1 ML DE SOLUTION ALCALINE SOIT CONSOMME . NORMALEMENT , CE RESULTAT EST OBTENU AVEC 1 A 5 MG DE POUDRE .

L'UNITE LIPASE EST DEFINIE COMME LA QUANTITE D'ENZYME QUI LIBERE 10 MICRO-EQUIVALENTS D'ACIDE PAR MINUTE .

ACTIVITE A DE LA POUDRE UTILISEE , MESUREE EN UNITES LIPASE PAR MG :

V = NOMBRE DE ML DE SOLUTION D'HYDROXYDE DE SODIUM 0,1 N PAR MINUTE , CALCULE A PARTIR DU GRAPHIQUE ,

M = MASSE DE LA PRISE D'ESSAI DE POUDRE , EN MG .

LA LIPASE UTILISEE DOIT AVOIR UNE ACTIVITE COMPRISE ENTRE 0,8 ET 2 UNITES LIPASE PAR MG .

7.2 . PREPARATION DE LA LIPASE

IL EXISTE DANS LE COMMERCE DES LIPASES AYANT UNE ACTIVITE LIPASIQUE SATISFAISANTE . IL EST EGALEMENT POSSIBLE DE LA PREPARER AU LABORATOIRE DE LA FACON SUIVANTE :

REFROIDIR A 0* C 5 KG DE PANCREAS FRAIS DE PORC , DEBARRASSES DE LA GRAISSE SOLIDE ET DU TISSU CONJONCTIF QUI LES ENTOURENT , ET LES TRITURER DANS UN MOULIN A LAMES POUR OBTENIR UNE PATE FLUIDE . AGITER CETTE PATE A FROID PENDANT QUATRE A SIX HEURES AVEC 2,5 L D'ACETONE ANHYDRE , PUIS CENTRIFUGER . EXTRAIRE LE RESIDU TROIS AUTRES FOIS AVEC LE MEME VOLUME D'ACETONE , DEUX FOIS AVEC UN MELANGE ACETON-OXYDE DIETHYLIQUE 1/1 ( V/V ) , ET DEUX FOIS AVEC DE L'OXYDE DIETHYLIQUE .

SECHER LE RESIDU PENDANT QUARANTE-HUIT HEURES SOUS VIDE POUR OBTENIR UNE POUDRE STABLE QUI DOIT ETRE CONSERVEE AU REFRIGERATEUR .

7.3 . PREPARATION DES ESTERS METHYLIQUES D'ACIDES GRAS

SELON LA METHODE DECRITE AU POINT II DE L'ANNEXE VI DU REGLEMENT ( CEE ) NO 72/77 DE LA COMMISSION , DU 13 JANVIER 1977 , MODIFIANT LE REGLEMENT ( CEE ) NO 1470/68 RELATIF A LA PRISE ET A LA REDUCTION DES ECHANTILLONS AINSI QU'A LA DETERMINATION DE LA TENEUR EN HUILE , EN IMPURETES ET EN HUMIDITE DES GRAINES OLEAGINEUSES ( 1 ) .

7.4 . CHROMATOGRAPHIE EN PHASE GAZEUSE DES ESTERS METHYLIQUES D'ACIDES GRAS

SELON LA METHODE DECRITE AU POINT III DE L'ANNEXE VI DU REGLEMENT ( CEE ) NO 72/77 .

( 1 ) JO NO L 12 DU 15 . 1 . 1977 , P . 11 .

ANNEXE VIII

RECHERCHE DE LA PRESENCE D'AUTRES HUILES DANS L'HUILE D'OLIVE : ANALYSE DE LA FRACTION STEROLIQUE DES CORPS GRAS

PRINCIPE

ANALYSE PAR CHROMATOGRAPHIE EN PHASE GAZEUSE DES STEROLS PREPARES PAR CHROMATOGRAPHIE SUR COUCHES MINCES A PARTIR DE L'INSAPONIFIABLE SECHE AVEC PRECAUTION .

APPAREILLAGE

1 . APPAREILLAGE POUR LA CHROMATOGRAPHIE SUR COUCHE MINCE , COMPRENANT EN PARTICULIER QUATRE PLAQUES DE VERRE DE 20 FOIS 20 FOIS 0,4 CM , DEUX DE 20 FOIS 5 FOIS 0,4 CM ET UNE MICROSERINGUE DE 0,1 ML ,

2 . BECHER DE 50 ML ,

3 . FILTRES POREUX , POROSITE 3 , DIAMETRE 15 MM ,

4 . BALLON DE 100 ML ,

5 . EPROUVETTE DE CENTRIFUGEUSE A FOND CONIQUE DE 10 ML , MUNIE D'UN BOUCHON RODE ,

6 . PIPETTES GRADUEES DE 1 ML ,

7 . APPAREIL DE CHROMATOGRAPHIE EN PHASE GAZEUSE , EQUIPE D'UN DETECTEUR A IONISATION DE FLAMME AVEC UN INJECTEUR EN ARGENT OU EN VERRE OU SYSTEME D'INJECTION DIRECTE SUR LA COLONNE ET RELIE A UN ENREGISTREUR ,

8 . COLONNE DE CHROMATOGRAPHIE EN PHASE GAZEUSE , EN VERRE OU EN ACIER INOXYDABLE EN U OU SPIRALE , DE 1 A 2 M DE LONG ET DE 3 A 4 MM DE DIAMETRE INTERIEUR , PHASE STATIONNAIRE DE GOMME DE SILICONE ( TYPE METHYL ( 1 ) ) STABLE JUSQU'A AU MOINS 300* C , IMPREGNANT AU TAUX DE 2 A 4 % UNE TERRE DE DIATOMEE CALCINEE , LAVEE AUX ACIDES ET SILANISEE , DE GRANULOMETRIE 80/100 OU 100/120 MESH ,

REMARQUE : CERTAINS TYPES D'ACIER INOXYDABLE POUVANT PROVOQUER DES RESULTATS ERRONES PAR DETERIORATION DES STEROLS , LE VERRE EST RECOMMANDE ,

9 . MICROSERINGUE POUVANT FOURNIR DES DOSES ATTEIGNANT 5 OU 10 UL .

REACTIFS

1 . CHLOROFORME POUR CHROMATOGRAPHIE ,

2 . BENZENE POUR CHROMATOGRAPHIE ,

3 . HEPTANE ,

4 . GEL DE SILICE ( PAR EXEMPLE KIESELGEL G ) ,

5 . SOLUTION DE REFERENCE POUR LA CHROMATOGRAPHIE SUR PLAQUE CONSTITUEE DE CHOLESTEROL A 5 % DANS LE CHLOROFORME ,

6 . ACETONE POUR CHROMATOGRAPHIE ,

7 . SOLUTION A 0,1 % DANS L'ACOOL ETHYLIQUE ABSOLU DE SEL SODIQUE DE 2'7' DICHLOROFLUORESCEINE ,

8 . PYRIDINE ,

9 . HEXAMETHYLDISILAZANE ,

10 . TRIMETHYL CHLOROSILANE ,

11 . SOLUTION POUR LE TEST DE SENSIBILITE : 1 MG DE CHOLESTEROL PAR ML DE N-PENTANE ,

12 . SOLUTION POUR LE TEST DE LA RESOLUTION DES PICS : 0,9 MG DE PHYTOSTEROLS D'HUILE DE COLZA ET 0,1 MG DE CHOLESTEROL PAR ML DE N-PENTANE . LES STEROLS DOIVENT ETRE FRAICHEMENT PREPARES SELON LE PROCEDE DECRIT SOUS B DU MODE OPERATOIRE ,

13 . SOLUTION POUR LE TEST DE REFERENCE : 1 MG DE PHYTOSTEROLS D'HUILE DE TOURNESOL PAR ML DE N-PENTANE , FRAICHEMENT PREPARES COMME CELA EST DECRIT SOUS B DU MODE OPERATOIRE .

PREPARATION DES PLAQUES POUR CHROMATOGRAPHIE

PLACER DANS L'ORDRE , SUR L'ETALEUR , UNE PLAQUE 20 FOIS 5 FOIS 0,4 CM , QUATRE PLAQUES 20 FOIS 20 FOIS 0,4 CM ET UNE PLAQUE 20 FOIS 5 FOIS 0,4 CM .

DANS UN BALLON DE 500 ML A COL LARGE , PLACER 40 G DE GEL DE SILICE ET ENVIRON 80 ML D'EAU . AGITER AVEC UNE BAGUETTE EN VERRE , EVENTUELLEMENT AVEC UN AGITATEUR MECANIQUE EN VERRE JUSQU'A OBTENTION D'UNE SUSPENSION HOMOGENE . ELIMINER LES GAZ EVENTUELS EN FAISANT LE VIDE A L'AIDE D'UNE TROMPE A EAU PENDANT UNE MINUTE AU MOINS . PORTER ENSUITE LA SUSPENSION SUR L'ETALEUR TOUT EN REGLANT L'EPAISSEUR A 0,5 MM ET RECOUVRIR UNIFORMEMENT LES PLAQUES . LAISSER SECHER LES PLAQUES A L'AIR PENDANT QUINZE MINUTES ENVIRON ET SECHER ENSUITE DANS UNE ETUVE A 105* C PENDANT DEUX HEURES . CONSERVER LES PLAQUES AINSI PREPAREES DANS UN DESSICCATEUR SOUS VIDE .

MODE OPERATOIRE

A . PREPARATION DE L'INSAPONIFIABLE

INTRODUCTION

ON DESIGNE SOUS LE NOM D'INSAPONIFIABLE LES SUBSTANCES SOLUBLES DANS LA MATIERE GRASSE , LESQUELLES , APRES SAPONIFICATION , SONT INSOLUBLES DANS L'EAU ET SOLUBLES DANS LE SOLVANT UTILISE POUR LE DOSAGE . IL COMPREND LES CONSTITUANTS NATURELS DES MATIERES GRASSES ( STEROLS , ALCOOLS , HYDROCARBURES ) , AINSI QUE LES SUBSTANCES ORGANIQUES NON VOLATILES A 100* C ( HUILES MINERALES ) ETRANGERES AUX MATIERES GRASSES QU'ELLES PEUVENT EVENTUELLEMENT CONTENIR . COMME SOLVANT , ON UTILISE L'ETHER DE PETROLE OU BIEN L'OXYDE D'ETHYLE . IL FAUT TENIR COMPTE QUE LES RESULTATS AVEC LES DEUX SOLVANTS SONT , DANS LA PLUPART DES CAS , DIFFERENTS ET QU'ON TROUVE DES TENEURS EN % PLUS ELEVEES AVEC L'OXYDE D'ETHYLE . POUR L'HUILE D'OLIVE , COMPTE TENU DES CONDITIONS CLIMATIQUES OU SE TROUVENT LA MAJORITE DES LABORATOIRES D'ANALYSES , L'ETHER DE PETROLE A ETE RECONNU COMME LE SOLVANT A EMPLOYER .

METHODE A L'ETHER DE PETROLE

MATERIEL

- BALLON D'ENVIRON 150 ML POUVANT ETRE ADAPTE A UN REFRIGERANT A REFLUX ,

- AMPOULES A DECANTATION D'ENVIRON 500 ML ,

- ETUVE REGLEE A 103* C PLUS OU MOINS 2* C .

REACTIFS

- SOLUTION ETHANOLIQUE DE KOH ENVIRON 2 N DANS L'ETHANOL A 95 % ( V/V ) . LE REACTIF NE DEVRA PAS ETRE PLUS FONCE QUE LA COULEUR JAUNE PAILLE ,

- ETHER DE PETROLE DISTILLANT ENTRE 40 ET 60* C , POSSEDANT UN INDICE DE BROME INFERIEUR A 1 , EXEMPT DE RESIDU .

MODE OPERATOIRE

PESER EXACTEMENT A 0,01 G PRES ENVIRON 5 G DE MATIERE GRASSE DANS LE BALLON . AJOUTER 50 ML DE LA SOLUTION ETHANOLIQUE DE KOH ENVIRON 2 N . ADAPTER AU REFRIGERANT A REFLUX . CHAUFFER UNE HEURE A LEGERE EBULLITION . ARRETER LE CHAUFFAGE . AJOUTER PAR LE HAUT DU REFRIGERANT ENVIRON 50 ML D'EAU DISTILLEE ET AGITER .

TRANSVASER APRES REFROIDISSEMENT DANS UNE AMPOULE A DECANTATION ET RINCER LE BALLON A PLUSIEURS REPRISES , AVEC AU TOTAL ENVIRON 50 ML D'ETHER DE PETROLE .

AGITER ENERGIQUEMENT PENDANT UNE MINUTE .

LAISSER REPOSER JUSQU'A SEPARATION COMPLETE DES DEUX PHASES ET RECUEILLIR LA SOLUTION SAVONNEUSE DANS UNE SECONDE AMPOULE A DECANTATION . S'IL SE FORME , PAR EXCEPTION , UNE EMULSION , LA DETRUIRE PAR ADDITION DE PETITES QUANTITES D'ETHANOL OU DE SOLUTION CONCENTREE D'HYDROXYDE DE POTASSIUM .

RETIRER L'EXTRACTION DE LA SOLUTION SAVONNEUSE ENCORE DEUX FOIS AVEC CHAQUE FOIS ENVIRON 50 ML D'ETHER DE PETROLE .

REUNIR LES 3 FRACTIONS ETHEREES DANS UNE MEME AMPOULE , LES LAVER A TROIS REPRISES AVEC ENVIRON 50 ML D'ETHANOL A 50 % ( V/V ) .

PAR LE HAUT DE L'AMPOULE , TRANSVASER , EN PLUSIEURS FOIS SI NECESSAIRE , QUANTITATIVEMENT LA SOLUTION D'ETHER DE PETROLE DANS UN BALLON DE 250 ML TARE ( EN EFFECTUANT DES PETITS RINCAGES DE L'AMPOULE AVEC DE L'ETHER DE PETROLE ) .

LE SOLVANT EST ELIMINE EN LE CHAUFFANT PRUDEMMENT SOUS VIDE , LES RESIDUS SONT SECHES A UNE TEMPERATURE INFERIEURE A 50* C SOUS VIDE , EN VUE D'EVITER DES OXYDATIONS INDESIRABLES .

B . SEPARATION DE LA FRACTION STEROLIQUE PAR CHROMATOGRAPHIE SUR COUCHE MINCE

INTRODUIRE DANS LA CUVE DE DEVELOPPEMENT LE MELANGE HEPTANE N / ACETONE 85/15 OU BENZOL/ACETONE 95/5 ( V/V ) JUSQU'A HAUTEUR D'1 CM ENVIRON ; FERMER A L'AIDE DU COUVERCLE ET LAISSER REPOSER PENDANT TROIS HEURES AU MOINS DE FACON QUE L'EQUILIBRE LIQUIDE/VAPEUR S'ETABLISSE . IL EST EGALEMENT CONSEILLE DE FIXER SUR LES SURFACES INTERIEURES DE LA CHAMBRE DES BANDES DE PAPIER FILTRE QUI PLONGENT DANS L'ELUANT . CETTE PRECAUTION OFFRE L'AVANTAGE DE REDUIRE D'UN TIERS ENVIRON LA DUREE DE MIGRATION DU FRONT DU LIQUIDE ET DE FAIRE ELUER LES COMPOSANTS DE FACON PLUS UNIFORME .

PREPARER ENTRE-TEMPS UNE SOLUTION A 5 % D'INSAPONIFIABLE EXTRAIT A L'ETHER DE PETROLE DANS LE CHLOROFORME . PRELEVER 0,3 ML ENVIRON DE CETTE SOLUTION ET LA DEPOSER A L'AIDE DE LA MICROSERINGUE DE 0,1 ML SUR LA PLAQUE CHROMATOGRAPHIQUE A 1,5 CM ENVIRON DU BORD INFERIEUR , EN BANDE CONTINUE ET UNIFORME DE FACON A OBTENIR UNE LIGNE DE DEPART LA PLUS MINCE POSSIBLE . SELON LA TECHNIQUE HABITUELLE , DEPOSER A UNE EXTREMITE DE LA PLAQUE QUELQUES ML DE LA SOLUTION DE REFERENCE CONTENANT DU CHOLESTEROL AFIN D'IDENTIFIER LE RF DE LA FRACTION STEROLIQUE .

PLACER LA PLAQUE DANS LA CUVE DE DEVELOPPEMENT PREPAREE COMME INDIQUE CI-DESSUS . LA TEMPERATURE AMBIANTE DOIT ETRE DE 20* C ENVIRON . FERMER AVEC LE COUVERCLE ET DEVELOPPER JUSQU'A CE QUE LE FRONT DU SOLVANT SOIT ARRIVE A 1 CM ENVIRON DU BORD SUPERIEUR DE LA PLAQUE . RETIRER LA PLAQUE DE LA CHAMBRE DE DEVELOPPEMENT ET LAISSER EVAPORER LE SOLVANT DANS UN COURANT D'AZOTE CHAUD .

REVELER EN VAPORISANT UNIFORMEMENT ET AVEC PRECAUTION LA SOLUTION ALCOOLIQUE DE SEL SODIQUE DE LA 2'7' DICHLOROFLUORESCEINE SUR LA PLAQUE . EN EXAMINANT LA PLAQUE A L'ULTRAVIOLET , ON DETERMINE LA POSITION DES STEROLS GRACE A L'ALIGNEMENT AVEC LA TACHE DE CHOLESTEROL PROVENANT DE LA SOLUTION DE REFERENCE . RECUPERER EN GRATTANT A L'AIDE D'UNE SPATULE METALLIQUE LA BANDE DES STEROLS . INTRODUIRE LE GEL DE SILICE SEPARE DANS UN BECHER DE 50 ML AVEC 15 ML DE CHLOROFORME CHAUD , AGITER ET TRANSFERER LA TOTALITE DE GEL DE SILICE SUR LE FILTRE POREUX ET FILTRER .

LAVER TROIS FOIS LE FILTRE CHAQUE FOIS AVEC UNE PORTION DE 15 ML DE CHLOROFORME CHAUD , TOUT EN RECUEILLANT LE FILTRAT DANS UN BALLON DE 100 ML .

EVAPORER LA SOLUTION CHLOROFORMIQUE JUSQU'A 4 A 5 ML ET LA VERSER DANS L'EPROUVETTE POUR CENTRIFUGEUSE MUNIE D'UN BOUCHON RODE , TARE AU PREALABLE . PORTER A SEC EN EVAPORANT LE SOLVANT PAR UN LEGER RECHAUFFEMENT DANS UN COURANT D'AZOTE ET PESER LA FRACTION STEROLIQUE AINSI OBTENUE .

C . ANALYSE CHROMATOGRAPHIQUE EN PHASE GAZEUSE DES STEROLS

1 . PREPARATION DES TRIMETHYLSILETHERS ( TMSE )

POUR CHAQUE MG DE STEROL , AJOUTER DANS L'EPROUVETTE 0,02 ML DE REACTIF POUR LA SILANISATION , COMPOSE D'UN MELANGE DE PYRIDINE-HEXAMETHYLLAZANE-TRIMETHYLCHLOROSILANE 9/3/1 ( V/V/V ) EN AYANT SOIN D'EVITER TOUTE TRACE D'HUMIDITE . PLACER L'EPROUVETTE DANS UN DESSICCATEUR PENDANT TRENTE MINUTES ENVIRON , PUIS FERMER , CENTRIFUGER PENDANT QUELQUES MINUTES . PRELEVER , POUR L'ANALYSE A PRATIQUER ENSUITE , LA SOLUTION RESTANTE .

2 . CONDITIONS DE L'ANALYSE PAR CHROMATOGRAPHIE EN PHASE GAZEUSE

TEMPERATURE DE LA COLONNE : 220 A 250* C .

TEMPERATURE DU SYSTEME D'INJECTION S'IL EST CHAUFFE SEPAREMENT : 20 A 40* C AU-DESSUS DE LA TEMPERATURE DE LA COLONNE . DEBIT DE L'AZOTE : 30 A 60 ML PAR MINUTE . DECONNECTER LE DETECTEUR ET EQUILIBRER LES NOUVELLES COLONNES DANS CES CONDITIONS PENDANT SEIZE A VINGT-QUATRE HEURES . CONNECTER LE DETECTEUR , ALLUMER LA FLAMME ET REGLER LES DEBITS D'HYDROGENE , D'OXYGENE OU D'AIR DE FACON A OBTENIR UNE HAUTEUR DE FLAMME ET UNE SENSIBILITE CONVENABLES . METTRE EN MARCHE L'ENREGISTREUR ET LAISSER SE DEROULER LE PAPIER A UNE VITESSE APPROPRIEE ; AJOUTER LE ZERO ET L'ATTENUATEUR . SI LA LIGNE DE BASE EST STABLE , L'APPAREIL EST PRET A ETRE UTILISE .

3 . TEST DE SENSIBILITE

PRELEVER 5 ML DE LA SOLUTION DU TEST DE SENSIBILITE , EVAPORER LE SOLVANT , TRAITER COMME INDIQUE EN 1 ; INJECTER 0,1 A 0,2 UL DE LA SOLUTION AINSI PREPAREE ( TMSE ) . UN PIC DE CHOLESTEROL DOIT SEUL APPARAITRE SUR LE CHROMATOGRAMME .

REGLER L'ATTENUATEUR DE FACON A UTILISER APPROXIMATIVEMENT TOUTE L'ECHELLE DE L'ENREGISTREUR .

4 . TEST DE RESOLUTION DES PICS

PRELEVER 5 ML DE LA SOLUTION PREPAREE POUR LE TEST DE RESOLUTION .

EVAPORER LE SOLVANT , TRAITER COMME INDIQUE EN 1 .

INJECTER 0,1 A 0,2 UL DE LA SOLUTION AINSI PREPAREE ( TMSE ) .

LES PICS DE CHOLESTEROL , DE BRASSICASTEROL , DE CAMPESTEROL ET DE * -SITOSTEROL DOIVENT APPARAITRE SUR LE CHROMATOGRAMME . MESURER LES DISTANCES DE RETENTION ( DISTANCE DU POINT D'INJECTION AU POINT DE HAUTEUR MAXIMAL DU PIC ) DES PICS , DCH POUR LE CHOLESTEROL , DB POUR LE BRASSICASTEROL , DC POUR LE CAMPESTEROL ET DS POUR LE *-SITOSTEROL ET LES LARGERUS A LA BASE DES PICS ( LONGUEUR DE RETENTION ENTRE LES INTERSECTIONS AVEC LA LIGNE DE BASE DES TANGENTES AUX POINTS D'INFLEXION SITUES SUR LES COTES AVANT ET ARRIERE DU PIC ) WCH POUR LE CHOLESTEROL ET WB POUR LE BRASSICASTEROL . LA RESOLUTION DES PICS , EXPRIMEE PAR LA FORMULE :

DOIT ETRE EGALE AU MOINS A 1 .

CALCULER LES TEMPS DE RETENTION RELATIFS ( CHOLESTEROL = 1,00 ) POUR LE BRASSICASTEROL , LE CAMPESTEROL ET LE *-SITOSTEROL .

5 . TEST DE REFERENCE

PRELEVER 5 ML DE LA SOLUTION DU TEST DE REFERENCE , EVAPORER LE SOLVANT , TRAITER COMME INDIQUE EN 1 , INJECTER 0,1 A 0,2 UL DE LA SOLUTION AINSI PREPAREE ( TMSE ) . LES PICS DE CAMPESTEROL , DE STIGMASTENOL , DE *-SITOSTEROL ET * 7 STIGMASTENOL DOIVENT APPARAITRE SUR LE CHROMATOGRAMME .

MESURER LES DISTANCES DE RETENTION DES PICS , DC POUR LE CAMPESTEROL , DST POUR LE STIGMASENOL , DS POUR LE *-SITOSTEROL ET DST - 7 POUR LE * 7 STIGMASTENOL .

CALCULER LES TEMPS DE RETENTION RELATIFS QUI SONT APPROXIMATIVEMENT :

CHOLESTEROL : 1,0 ,

BRASSICASTEROL : 1,1 ,

CAMPESTEROL : 1,3 ,

STIGMASTEROL : 1,4 ,

*-SITOSTEROL : 1,6 ( 2 )

* 7 STIGMASTENOL : 1,8 ( 3 ) .

6 . ANALYSE

INJECTER 0,1 A 0,2 UL DE LA SOLUTION TMSE DES STEROLS A ANALYSER ET ENREGISTRER LE CHROMATOGRAMME .

D . EXPRESSION DES RESULTATS

POUR L'INTERPRETATION DE LA COMPOSITION DE LA FRACTION STEROLIQUE ANALYSEE , IL NE FAUT PAS RELEVER DES PICS AYANT DES TEMPS DE RETENTION DIFFERENTS DE CEUX DETERMINES EXPERIMENTALEMENT POUR LES 6 STEROLS SUSMENTIONNES .

LA TENEUR EN % EN *-SITOSTEROL EST DONNEE PAR LA FORMULE :

LE CONTENU EN *-SITOSTEROL NE DEVRA PAS ETRE INFERIEUR A 93 % PAR RAPPORT A LA COMPOSITION EN % DES STEROLS TOTAUX .

( 1 ) PAR EXEMPLE SE 30 .

( 2 ) SI D'AUTRES STEROLS ONT , COMME LE * 5 AVENASTEROL , DANS CES CONDITIONS , LE MEME VOLUME DE RETENTION QUE LE *-SITOSTEROL , ILS SONT COMPTES COMME DU *-SITOSTEROL .

( 3 ) SI D'AUTRES STEROLS ONT , DANS CES CONDITIONS , LE MEME VOLUME DE RETENTION QUE LE * 7 STIGMASTENOL , ILS SONT COMPTES COMME DU * 7 STIGMASTENOL .

ANNEXE IX

TENEUR EN HUILE DES GRIGNONS D'OLIVE

MATERIEL

- APPAREIL D'EXTRACTION APPROPRIE MUNI D'UN BALLON DE 200 A 250 ML ,

- BAIN A CHAUFFAGE ELECTRIQUE ( BAIN DE SABLE , BAIN D'EAU , ETC . ) OU PLAQUE CHAUFFANTE ,

- BALANCE ANALYTIQUE ,

- ETUVE REGLEE A 80* C AU MAXIMUM ,

- ETUVE A CHAUFFAGE ELECTRIQUE MUNI D'UN DISPOSITIF DE THERMOREGULATION REGLE A 103* C PLUS OU MOINS 2* C ET PERMETTANT DE REALISER UNE INSUFFLATION D'AIR OU UNE PRESSION REDUITE ,

- BROYEUR MECANIQUE FACILE A NETTOYER ET PERMETTANT LE BROYAGE SANS ECHAUFFEMENT ET SANS DIMINUTION SENSIBLE DE LEUR TENEUR EN EAU ET EN HUILE ,

- CARTOUCHE D'EXTRACTION ET COTON HYDROPHILE OU PAPIER FILTRE , EXEMPTS DE PRODUITS EXTRACTIBLES A L'HEXANE ,

- DESSICATEUR ,

- TAMIS A TROUS DE 1 MM DE DIAMETRE ,

- PIERRE PONCE EN PETITS GRAINS , PREALABLEMENT SECHEE .

REACTIF

N-HEXANE TECHNIQUE DONT LE RESIDU A L'EVAPORATION COMPLETE DOIT ETRE INFERIEUR A 0,002 G POUR 100 ML .

MODE OPERATOIRE

PREPARATION DE L'ECHANTILLON POUR ESSAI

BROYER L'ECHANTILLON POUR LABORATOIRE , SI NECESSAIRE , DANS LE BROYEUR MECANIQUE PREALABLEMENT BIEN NETTOYE AFIN DE LE REDUIRE EN PARTICULES POUVANT TRAVERSER COMPLETEMENT LE TAMIS .

UTILISER UN VINGTIEME ENVIRON DE L'ECHANTILLON POUR PARFAIRE LE NETTOYAGE DU BROYEUR , REJETER CETTE MOUTURE , BROYER LE RESTE , LE RECUEILLIR , LE MELANGER AVEC SOIN ET L'ANALYSER SANS DELAI .

PRISE D'ESSAI

PESER , A 0,01 G PRES , DES LA FIN DU BROYAGE , ENVIRON 10 G DE L'ECHANTILLON POUR ESSAI .

PREPARATION DE LA CARTOUCHE D'EXTRACTION

PLACER LA PRISE D'ESSAI DANS LA CARTOUCHE ET BOUCHER CELLE-CI AVEC LE TAMPON DE COTON HYDROPHILE . DANS LE CAS OU ON A UTILISE UN PAPIER FILTRE , EMBALLER LA MOUTURE DANS CE PAPIER .

PRESECHAGE

SI LE GRIGNON EST TRES HUMIDE ( TENEUR EN EAU ET EN MATIERES VOLATILES SUPERIEURE A 10 % ) , EFFECTUER UN PRESECHAGE EN PLACANT PENDANT UN TEMPS CONVENABLE LA CARTOUCHE REMPLIE ( OU LE PAPIER FILTRE ) DANS L'ETUVE CHAUFFEE A 8* C AU MAXIMUM , POUR RAMENER LA TENEUR EN EAU ET EN MATIERES VOLATILES AU-DESSOUS DE 10 % .

PREPARATION DU BALLON

PESER , A 1 MG PRES , LE BALLON CONTENANT 1 A 2 GRAINS DE PIERRE PONCE , PREALABLEMENT SECHE A L'ETUVE A 103* C PLUS OU MOINS 2* C PUIS REFROIDI PENDANT AU MOINS UNE HEURE DANS UN DESSICCATEUR .

PREMIERE EXTRACTION

PLACER DANS L'APPAREIL D'EXTRACTION LA CARTOUCHE ( OU LE PAPIER FILTRE ) CONTENANT LA PRISE D'ESSAI . VERSER DANS LE BALLON LA QUANTITE NECESSAIRE D'HEXANE . ADAPTER LE BALLON A L'APPAREIL D'EXTRACTION ET PLACER LE TOUT SUR LE BAIN A CHAUFFAGE ELECTRIQUE . CONDUIRE LE CHAUFFAGE DANS DES CONDITIONS TELLES QUE LE DEBIT DU REFLUX SOIT AU MOINS DE TROIS GOUTTES A LA SECONDE ( EBULLITION MODEREE , NON TUMULTUEUSE ) .

APRES QUATRE HEURES D'EXTRACTION , LAISSER REFROIDIR . ENLEVER LA CARTOUCHE DE L'APPAREIL D'EXTRACTION ET LA PLACER DANS UN COURANT D'AIR AFIN D'ELIMINER LA MAJEURE PARTIE DU SOLVANT QUI L'IMPREGNE .

DEUXIEME EXTRACTION

VIDER LA CARTOUCHE DANS LE MICROBROYEUR ET BROYER AUSSI FINEMENT QUE POSSIBLE . REPLACER QUANTITATIVEMENT LE MELANGE DANS LA CARTOUCHE ET CELLE-CI DANS L'APPAREIL D'EXTRACTION .

RECOMMENCER L'EXTRACTION PENDANT ENCORE DEUX HEURES EN UTILISANT LE MEME BALLON CONTENANT LA PREMIERE EXTRACTION .

LA SOLUTION OBTENUE DANS LE BALLON D'EXTRACTION DOIT ETRE LIMPIDE . A DEFAUT , LA FILTRER SUR UN PAPIER FILTRE EN LAVANT PLUSIEURS FOIS LE PREMIER BALLON ET LE PAPIER FILTRE AVEC DE L'HEXANE . RECUEILLIR LE FILTRAT ET LE SOLVANT DE LAVAGE DANS UN DEUXIEME BALLON PREALABLEMENT SECHE ET TARE A 1 MG PRES .

ELIMINATION DU SOLVANT ET PESEE DE L'EXTRAIT

CHASSER PAR DISTILLATION SUR BAIN A CHAUFFAGE ELECTRIQUE LA MAJEURE PARTIE DU SOLVANT . ELIMINER LES DERNIERES TRACES DE SOLVANT EN CHAUFFANT LE BALLON A L'ETUVE A 103* C PLUS OU MOINS 2* C PENDANT 20 MINUTES . FACILITER CETTE ELIMINATION , SOIT EN INSUFFLANT DE L'AIR DE TEMPS A AUTRE OU DE PREFERENCE UN GAZ INERTE , SOIT EN OPERANT SOUS PRESSION REDUITE .

LAISSER REFROIDIR LE BALLON DANS UN DESSICCATEUR PENDANT AU MOINS UNE HEURE , ET LE PESER A 1 MG PRES .

CHAUFFER A NOUVEAU 10 MINUTES DANS LES MEMES CONDITIONS , REFROIDIR AU DESSICCATEUR ET PESER .

LA DIFFERENCE ENTRE LES RESULTATS DE CES DEUX PESEES DOIT ETRE INFERIEURE OU EGALE A 10 MG . SINON , CHAUFFER A NOUVEAU PENDANT DES PERIODES DE DIX MINUTES SUIVIES DU REFROIDISSEMENT ET DE LA PESEE , JUSQU'A CE QUE LA DIFFERENCE DE MASSE SOIT AU PLUS EGALE A 10 MG . RETENIR LA DERNIERE PESEE DU BALLON .

EFFECTUER DEUX DETERMINATIONS SUR LE MEME ECHANTILLON POUR ESSAI .

EXPRESSION DES RESULTATS

MODE DE CALCUL ET FORMULE

A ) L'EXTRAIT EXPRIME EN POURCENTAGE EN MASSE DU PRODUIT TEL QUEL , EST EGAL A :

OU : S EST LE POURCENTAGE EN MASSE D'EXTRAIT DU PRODUIT TEL QUEL ,

M0 EST LA MASSE , EN GRAMMES , DE LA PRISE D'ESSAI ,

M1 EST LA MASSE , EN GRAMMES , DE L'EXTRAIT APRES SECHAGE .

PRENDRE COMME RESULTAT LA MOYENNE ARITHMETIQUE DES DEUX DETERMINATIONS , SI LES CONDITIONS DE REPETABILITE SONT REMPLIES .

EXPRIMER LE RESULTAT AVEC UNE SEULE DECIMALE .

B ) L'EXTRAIT EST RAPPORTE A LA MATIERE SECHE EN UTILISANT LA FORMULE SUIVANTE :

OU :

S EST LE POURCENTAGE EN MASSE D'EXTRAIT DU PRODUIT TEL QUEL ( VOIR SOUS A ) ) ,

U EST SA TENEUR EN EAU ET EN MATIERES VOLATILES .

REPETABILITE

LA DIFFERENCE ENTRE LES RESULTATS DES DEUX DETERMINATIONS , EFFECTUEES SIMULTANEMENT OU RAPIDEMENT L'UNE APRES L'AUTRE PAR LE MEME ANALYSTE , NE DOIT PAS ETRE SUPERIEURE A 0,2 G D'EXTRAIT A L'HEXANE POUR 100 G D'ECHANTILLON .

DANS LE CAS CONTRAIRE , REPETER L'ANALYSE SUR DEUX AUTRES PRISES D'ESSAI . SI CETTE FOIS ENCORE LA DIFFERENCE DEPASSE 0,2 G , PRENDRE COMME RESULTAT LA MOYENNE ARITHMETIQUE DES QUATRE DETERMINATIONS EFFECTUEES .