1973L0046 — FR — 26.05.1999 — 004.001 — 1
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►BQUATRIÈME DIRECTIVEDE LA COMMISSION
du 5 décembre 1972
portant fixation de méthodes d'analyse communautaires pour le contrôle officiel des aliments des
animaux
(73/46/CEE)
(JO L 83 du 30.3.1973, p. 21)
Modifiée par:
Journal officiel
nopage date
►M1Directive 81/680/CEE de laCommission du 30 juillet 1981 L 246 32 29.8.1981
►M2Directive 92/89/CEE de laCommission du 3 novembre 1992 L 344 35 26.11.1992
►M3Directive 98/54/CE de laCommission du 16 juillet 1998 L 208 49 24.7.1998
►M4Directive 1999/27/CE de laCommission du 20 a vril 1999 L 118 36 6.5.1999
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QUATRIÈME DIRECTIVEDE LA COMMISSION
du 5 décembre 1972
portant fixation de méthodes d'analyse communautaires pour le
contrôle officiel des aliments des animaux
(73/46/CEE)
LA COMMISSION DES COMMUNAUTÉS EUROPÉENNES,
vu le traité instituant la Communauté économique européenne,vu ladirective du Conseil, du 20 juillet 1970, concerna nt l'introduction
de modes de prélèvement d'échantillons et de méthodes d'analyse
communautaires pour le contrôle officiel des aliments des animaux(
1),
modifée par la directive no72/275/CEE du 20 juillet 1972(2), et notam-
ment son article 2,
considérant que la directive susvisée prévoit que les contrôles officiels
des aliments des animaux, pour constater si les conditions prescrites envertu des dispositions législatives, réglementaires ou administrativesconcernant la qualité et la composition des aliments des animaux sont
respectées, sont effectués selon des modes de prélèvement d'échantil-
lons et des méthodes d'analyse communautaires;
considérant que les directives n
o71/250/CEE, no71/393/CEE et no72/
199/CEE de laCommission, des 15 juin 1971(3), 18 novembre 1971(4)
et 27 avril 1972(5), ont déjà fixé un certain nombre de méthodes d'ana-
lyse communautaires; que, compte tenu de l'état d'avancement des
travaux effectués depuis lors, il convient d'arrêter une quatrième série
de méthodes;
considérant que les mesures prévues à la présente directive sont
conformes à l'avis du Comité permanent des aliments des animaux,
A ARRÊTÉ LA PRÉSENTE DIRECTIVE:
Article premier
Les États membres prescrivent que les analyses pour les contrôles offi-
ciels des aliments des animaux, en ce qui concerne les teneurs enhumidité des graisses et des huiles animales et végétales, ainsi que lesteneurs en magnésium et en cellulose brute des aliments sont effectuées
selon les méthodes décrites à l'annexe I de la présente directive.
Article 3
Les États membres mettent en vigueur, le 1erjanvier 1974 au plus tard,
les dispositions législatives, réglementaires ou administratives néces-
saires pour se conformer aux dispositions de la présente directive. Ils
en informent immédiatement la Commission.
Article 4
Les États membres sont destinataires de la présente directive.1973L0046 — FR — 26.05.1999 — 004.001 — 2
(1)J O noL 170 du 3. 8. 1970, p. 2.
(2)J O noL 171 du 29. 7. 1972, p. 39.
(3)J O noL 155 du 12. 7. 1971, p. 13.
(4)J O noL 279 du 20. 12. 1971, p. 7.
(5)J O noL 123 du 29. 5. 1972, p. 6.▼M1
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ANNEXE I
1.DOSAGE DE L'HUMIDITÉ DANS LES GRAISSES ET LES HUILES
ANIMALES ET VÉGÉTALES
1.Objet et domaine d'application
La méthode permet de déterminer la teneur en humidité (eau et autres
matières volatiles) des graisses et des huiles animales et végétales.
2.Principe
L'échantillon est soumis à la dessiccation à 103 ºC jusqu'à cessation de la
diminution de masse. La perte de masse est déterminée par pesée.
3.Appareillage
3.1. Récipient à fond plat, en matériau résistant à la corrosion, diamètre: 8 à
9 cm, hauteur: 3 cm environ
3.2. Thermomètre à mercure, avec bulbe renforcé, et chambre de dilatation à
l'extrémité supérieure, gradué de 80 ºC environ à 110 ºC au moins,
longueur: 10 cm environ
3.3. Bain de sable ou plaque chauffante électrique3.4. Dessiccateur, contenant un déshydratant efficace3.5. Balance analytique
4.Mode opératoire
Peser, à 1 mg près, 20 g environ de l'échantillon homogénéisé dans le réci-
pient (3.1) sec et taré, contenant le thermomètre (3.2). Chauffer sur le bain de
sable ou la plaque chauffante (3.3), en agitant constamment à l'aide du ther-
momètre, de façon que la température atteigne 90 ºC en 7 minutes environ.
Réduire l'intensité du chauffage en suivant la fréquence avec laquelle les
bulles montent du fond du récipient. La température ne doit pas dépasser
105 ºC. Continuer à agiter en raclant le fond du récipient jusqu'à cessation
de laforma tion de bulles.
Pour assurer l'élimination complète de l'humidité, répéter à plusieurs reprises
le chauffage à 103 ºC ± 2 ºC, en refroidissant à 93 ºC entre les chauffages
successifs. Laisser refroidir ensuite dans le dessiccateur (3.4) jusqu'à tempé-
rature ambiante et peser. Répéter cette opération jusqu'à ce que la perte de
masse entre deux pesées successives n'excède plus 2 mg.
N.B.Une augmentation de masse de l'échantillon après chauffage répété
indique une oxydation de la graisse. Dans ce cas, calculer le résultat à
partir de la pesée effectuée immédiatement avant le début de l'augmen-
tation de masse.
5.Calcul des résultats
La teneur en humidité pour cent d'échantillon est donnée par la formule:
M
1/C0M2 ðÞ /C1100
Mo
dans laquelle:
Mo= masse, en grammes, de la prise d'essai,
M1= masse, en grammes, du récipient avec son contenu, avant le chauf-
fage,
M2= masse, en grammes, du récipient avec son contenu, après le chauf-
fage.
Les résultats inférieurs à 0,05 p. cent doivent être rapportés par la mention
«moins de 0,05 p. cent».
RépétabilitéLa différence entre les résultats de deux déterminations parallèles effectuées
sur un même échantillon ne doit pas dépasser 0,05 p. cent en valeur absolue.1973L0046 — FR — 26.05.1999 — 004.001 — 3
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2.DOSAGE DU MAGNÉSIUM
— par spectrophotométrie d'absorption atomique —
1.Objet et domaine d'application
La méthode permet de doser le magnésium dans les aliments des animaux.
Elle est particulièrement indiquée pour déterminer les teneurs en magnésium
inférieures à 5 p.cent.
2.Principe
L'échantillon est incinéré et mis en solution dans l'acide chlorhydrique dilué.
S'il ne contient pas de substances organiques, il est mis directement en solu-
tion dans l'acide chlorhydrique dilué. La solution est diluée et la teneur en
magnésium est déterminée par spectrophotométrie d'absorption atomique à
285,2 nm, par comparaison avec des solutions étalon.
3.Réactifs
3.1. Acide chlorhydrique p.a., d: 1,163.2. Acide chlorhydrique p.a., d: 1,193.3. Magnésium, en ruban ou en fil, ou sulfate de magnésium MgSO
4.7H2O
p.a. séché sous vide à la température ambiante
3.4. Solution de sel de strontium (chlorure ou nitrate) à 2,5 p.cent (p/v) de
strontium (= 76,08 g de SrCl2.6H2O p.a./1 ou 60,38 g de Sr (NO3)2p.a./1)
3.5. Solution étalon de magnésium: peser, à 1 mg près, 1 g de magnésium
(3.3), préalablement débarrassé avec soin de sa pellicule d'oxyde, ou
une quantité correspondante de sulfate de magnésium (3.3), l'introduire
dans un ballon jaugé de 1 000 ml, ajouter 80 ml d'acide chlorhydrique
(3.1), laisser dissoudre et compléter à 1 000 ml par de l'eau. 1 ml de
cette solution contient 1,000 mg de magnésium.
4.Appareillage
4.1. Creusets à incinération en platine, quartz ou porcelaine4.2. Four à moufle électrique, avec thermostat4.3. Spectrophotomètre d'absorption atomique
5.Mode opératoire
5.1.Mise en solution
5.1.1.Aliments constitués exclusivement de substances minérales
Peser, à 1 mg près, 5 g de l'échantillon et les introduire dans un
ballon jaugé de 500 ml avec 250 à 300 ml d'eau. Ajouter 40 ml
d'acide chlorhydrique (3.1), amener à ébullition et maintenir le
liquide en ébullition douce durant 30 minutes. Laisser refroidir,
compléter au volume par de l'eau, homogénéiser et filtrer dans
un becher sec à travers un filtre à plis sec. Rejeter les 30 premiers
ml du filtrat.
En présence de silice, traiter 5 g de l'échantillon par une quantité
suffisante (15 à 30 ml) d'acide chlorhydrique (3.2) et évaporer à
sec sur un bain d'eau. Poursuivre comme indiqué en 5.1.2, à partir
de latroisième phra se.
5.1.2.Aliments constitués essentiellement de substances minérales
Peser, à 1 mg près, 5 g de l'échantillon dans un creuset à inciné-
ration et incinérer à 550 ºC au four à moufle jusqu'à obtention de
cendres exemptes de particules charbonneuses. Pour éliminer la
silice, ajouter aux cendres une quantité suffisante (15 à 30 ml)
d'acide chlorhydrique (3.2) et évaporer à sec sur un bain d'eau.
Sécher ensuite durant une heure à l'étuve à 105 ºC. Reprendre le
résidu par 10 ml d'acide chlorhydrique (3.1) et transférer à l'aide
d'eau chaude dans un ballon jaugé de 500 ml. Amener à ébulli-
tion, laisser refroidir et compléter au volume par de l'eau.
Homogénéiser et filtrer dans un becher sec à travers un filtre à
plis sec. Rejeter les 30 premiers ml du filtrat.1973L0046 — FR — 26.05.1999 — 004.001 — 4
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5.1.3.Aliments constitués essentiellement de substances organiques
Peser, à 1 mg près, 5 g de l'échantillon dans un creuset à inciné-
ration et incinérer à 550 ºC dans un four à moufle, jusqu'à
obtention de cendres exemptes de particules charbonneuses.Reprendre les cendres par 5 ml d'acide chlorhydrique (3.2),
évaporer à sec sur un bain d'eau et sécher ensuite durant une
heure à l'étuve à 105 ºC, pour insolubiliser lasilice. Reprendre
le résidu par 5 ml d'acide chlorhydrique (3.1), transférer à l'aide
d'eau chaude dans un ballon jaugé de 250 ml, amener à ébullition,
laisser refroidir et compléter au volume par de l'eau. Homogé-
néiser et filtrer dans un becher sec à travers un filtre à plis sec.
Rejeter les 30 premiers ml du filtrat.
5.2.Mesure de l'absorption atomique
Préparer, en diluant la solution étalon (3.5) par de l'eau, au moins 5
solutions de référence de concentrations croissantes, choisies en fonction
de lazone de mesure optimum du spectrophotomètre. Ajouter à cha que
solution 10 ml de solution de sel de strontium (3.4) et compléter ensuite
au volume à 100 ml par de l'eau.
Diluer par de l'eau une partie aliquote du filtrat obtenu en 5.1.1, 5.1.2.
ou 5.1.3 de façon à obtenir une concentration en magnésium comprise
dans les limites de concentration des solutions de référence. La concen-
tration en acide chlorhydrique de cette solution ne doit pas dépasser
0,4 N. Ajouter 10 ml de solution de sel strontium (3.4) et compléter
ensuite au volume à 100 ml par de l'eau.
Mesurer l'absorption de la solution à doser et des solutions de référence
à lalongueur d'onde de 285,2 nm.
6.Calcul des résultats
Calculer la quantité de magnésium de l'échantillon à partir des solutions de
référence. Exprimer le résultat en pour cent de l'échantillon.
RépétabilitéLa différence entre les résultats de deux déterminations parallèles effectuées
sur le même échantillon ne doit pas dépasser 5 p.cent, en valeur relative.
3.DOSAGE DE LA CELLULOSE BRUTE
1.Objet et domaine d'application
La méthode permet de doser, dans les aliments des animaux, les matières
organiques exemptes de graisses et insolubles en milieu acide et en milieu
alcalin, conventionnellement désignées sous le nom de cellulose brute.
2.Principe
L'échantillon, éventuellement dégraissé, est traité successivement par des
solutions bouillantes d'acide sulfurique et d'hydroxyde de potassium de
concentrations déterminées. Le résidu est séparé par filtration sur un filtre
en verre, lavé, séché, pesé puis calciné entre 475 et 500 ºC. La perte de poids
résultant de la calcination correspond à la cellulose brute présente dans
l'échantillon d'essai.
3.Réactifs
3.1. Acide sulfurique, c = 0,13 mol/l
3.2. Antimousse (n-octanol par exemple)3.3. Adjuvant de filtration (Celite 545 ou équivalent) chauffé à 500 ºC
pendant 4 heures (8.6)
3.4. Acétone
3.5. Éther de pétrole (point d'ébullition 40-60 ºC)
3.6. Acide chlorhydrique, c = 0,5 mol/l3.7. Solution d'hydroxyde de potassium, c = 0,23 mol/l
4.Appareillage
4.1. Unité de chauffage pour la digestion par des solutions d'acide sulfurique
ou d'hydroxyde de potassium. Cette unité est munie d'un support à1973L0046 — FR — 26.05.1999 — 004.001 — 5
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creuset filtrant (4.2) et pourvue d'un tuyau avec vanne vers le vide et la
vidange. Elle est éventuellement pourvue d'air comprimé. Avant chaque
utilisation journalière, préchauffer l'unité avec de l'eau bouillante
pendant 5 minutes.
4.2. Creuset filtrant en verre de 50 ml avec un filtre en verre fritté de poro-
sité 40-90 µm. Avant la première utilisation chauffer à 500 ºC pendant
quelques minutes et refroidir (8.6).
4.3. Cylindre d'au moins 270 ml avec un réfrigérant à reflux, approprié à
l'ébullition
4.4. Étuve avec thermostat4.5. Four à moufle avec thermostat4.6. Unité d'extraction comprenant un support pour le creuset filtrant (4.2) et
un tuyau d'évacuation avec vanne vers le vide et la vidange
4.7. Joints pour assembler l'unité de chauffage (4.1), le creuset (4.2) et le
cylindre (4.3), et pour connecter l'unité d'extraction (4.6) à froid et le
creuset
5.Mode opératoire
Peser à 0,001 g près 1 g de l'échantillon préparé, le mettre dans le creuset
(4.2) (voir observations 8.1, 8.2, 8.3) et ajouter 1 g d'adjuvant de filtration
(3.3).
Assembler l'unité de chauffage (4.1) et le creuset filtrant (4.2), puis attacher
le cylindre (4.3) au creuset. Remplir de 150 ml d'acide sulfurique bouillant
(3.1) l'ensemble cylindre-creuset et si nécessaire ajouter quelques gouttes
d'antimousse (3.2). Porter le liquide à ébullition en 5 ± 2 minutes et bouillir
vivement pendant 30 minutes exactement.
Positionner la vanne vers le tuyau de vidange (4.1) et, sous vide, filtrer
l'acide sulfurique à travers le creuset filtrant et laver le résidu avec trois fois
30 ml d'eau bouillante, en veillant à ce que le résidu aille à sec après chaque
lavage.
Fermer la vanne de vidange et mettre 150 ml de solution bouillante d'hydro-
xyde de potassium (3.7) dans l'ensemble cyclindre-creuset filtrant et ajouter
quelques gouttes d'antimousse (3.2). Porter le liquide à ébullition en 5 ± 2
minutes et bouillir vivement pendant exactement 30 minutes. Filtrer et
répéter la procédure de lavage comme pour l'acide sulfurique.
Après le lavage final et le séchage, disjoindre le creuset et son contenu et le
reconnecter à l'unité d'extraction à froid (4.6). Mettre le vide et laver le
résidu dans le creuset avec trois portions successives de 25 ml d'acétone
(3.4) en veillant à ce que le résidu aille à sec après chaque lavage.
Sécher le creuset jusqu'à poids constant à l'étuve à 130 ºC. Après chaque
séchage, refroidir dans un dessiccateur et peser rapidement. Placer le creuset
dans un four à moufle et réduire en cendres jusqu'à poids constant entre 475
et 500 ºC pendant au moins 30 minutes.
Après chaque chauffage, refroidir d'abord dans le four puis dans le dessicca-
teur avant de peser.
Effectuer un essai à blanc sans l'échantillon. La perte de poids résultant de la
minéralisation ne doit pas excéder 4 mg.
6.Calcul des résultats
La teneur en cellulose brute pour cent d'échantillon est donnée par la
formule:
b/C0c ðÞ /C2 100
a
dans laquelle:
a = masse de l'échantillon (en g),
b = perte de masse (en g) à la calcination, lors du dosage,
c = perte de masse (en g) à la calcination, lors de l'essai à blanc.1973L0046 — FR — 26.05.1999 — 004.001 — 6
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7.Répétabilité
La différence entre deux déterminations parallèles effectuées sur le même
échantillon ne doit pas dépasser:
— 0,3 dans la valeur absolue pour contenu des fibres brutes plus faible que
10 %,
— 3 % par rapport au résultat plus élevé, pour le contenu des fibres brutes
égal ou supérieur à 10 %.
8.Observations
8.1. Les aliments des animaux contenant plus de 10 % de matières grasses
doivent être dégraissés avant analyse par l'éther de pétrole (3.5).
Connecter le creuset filtrant (4.2) et son contenu à l'unité d'extraction à
froid (4.6), appliquer le vide et laver le résidu avec trois fois 30 ml
d'éther de pétrole. S'assurer que le résidu est sec. Connecter le creuset
et son contenu à l'unité de chauffage (4.1) et continuer comme décrit
en 5.
8.2. Les aliments des animaux contenant des matières grasses qui ne peuvent
être directement extraites par l'éther de pétrole (3.5) doivent être
dégraissés comme en 8.1 puis dégraissés de nouveau après ébullition
avec l'acide.
Après ébullition avec l'acide et les lavages qui suivent, connecter le
creuset et son contenu à l'unité d'extraction à froid (4.6) et laver trois
fois avec 30 ml d'acétone et ensuite trois fois avec 30 ml d'éther de
pétrole. Filtrer sous vide jusqu'au séchage et continuer l'analyse comme
décrite en 5, au niveau du traitement par l'hydroxyde de potassium.
8.3. Si l'échantillon contient plus de 5 % de carbonates, exprimés en carbo-
nate de calcium, connecter le creuset (4.2) avec l'échantillon pesé à
l'unité de chauffage (4.1). Laver l'échantillon avec trois fois 30 ml
d'acide chlorhydrique (3.6). Après chaque addition, attendre environ 1
minute avant de filtrer. Laver une fois avec 30 ml d'eau et puis conti-
nuer comme décrit en 5.
8.4. Si un appareil en forme de dressoir est utilisé (plusieurs creusets atta-
chés à la même unité de chauffage), ne pas effectuer deux essais du
même échantillon dans la même série.
8.5. Si, après ébullition, il est difficile de filtrer les solutions acide et
basique, utiliser l'air comprimé par le tuyau de vidange de l'unité de
chauffage puis continuer la filtration.
8.6. La température de calcination ne devrait pas dépasser 500 ºC de façon à
allonger la durée de vie des creusets filtrants en verre. Prendre soin
d'éviter les chocs thermiques pendant les cycles de chauffage et de
refroidissement.1973L0046 — FR — 26.05.1999 — 004.001 — 7
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