1973L0405 — FR — 14.04.1982 — 001.001 — 1
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►BDIRECTIVEDU CONSEIL
du 22 novembre 1973
concernant le rapprochement des législations des États membres relatives aux méthodes de
contrôle de la biodégradabilité des agents de surface anioniques
(73/405/CEE)
(JO L 347 du 17.12.1973, p. 53)
Modifiée par:
Journal officiel
nopage date
►M1Directive du Conseil du 31 mars 1982 (82/243/CEE) L 109 18 22.4.1982
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DIRECTIVEDU CONSEIL
du 22 novembre 1973
concernant le rapprochement des législations des États membres
relatives aux méthodes de contrôle de la biodégradabilité des
agents de surface anioniques
(73/405/CEE)
LE CONSEIL DES COMMUNAUTÉS EUROPÉENNES,
vu le traité instituant la Communauté économique européenne, et
notamment son article 100,
vu la directive du Conseil, du 22 novembre 1973, concernant le rappro-
chement des législations des États membres relatives aux détergents(1),
et notamment son article 4,
vu laproposition de laCommission,vu l'avis de l'Assemblée(
2),
vu l'avis du Comité économique et social(3),
considérant que, pour permettre aux États membres de mesurer le taux
de biodégradabilité des agents de surface anioniques, il est opportun dese référer aux méthodes de contrôle déjà utilisées à cet effet danscertains États membres; qu'en revanche, en cas de contestation, il est
nécessaire que le contrôle de la biodégradabilité soit effectué d'après
une méthode de référence commune;
considérant qu'il convient, ainsi que le prévoit l'article 4 de la directive
du 22 novembre 1973, de fixer des tolérances appropriées pour la
mesure de la biodégradabilité afin de se prémunir contre les incerti-
tudes des méthodes de contrôle qui pourraient conduire à desdécisions de rejet ayant des conséquences économiques importantes;qu'une décision de rejet ne doit donc être prise que si une analyseindique un taux de biodégradabilité inférieur à 80 %,
A ARRÊTÉ LA PRÉSENT DIRECTIVE:
Article premier
Laprésente directive concerne les méthodes de contrôle de labiodégra -
dabilité des agents de surface anioniques ►M1présents dans les
détergents tels que visés à l'article 1erde ladirective 73/404/CEE ◄.
Article 2
En conformité avec les prescriptions de l'article 4 de la directive 73/
404/CEE concernant les détergents, les États membres interdisent lamise sur le marché et l'emploi sur leur territoire d'un détergent si lamesure du taux de biodégradabilité des agents de surface anioniquescontenus dans ce détergent donne un résultat inférieur à 80%, cettemesure étant effectuée selon l'une des méthodes suivantes:
— méthode OCDE, publiée dans le rapport technique de l'Organisation
de coopération et de développement économiques du 11 juin 1976«proposition de méthode pour la détermination de la biodégradabi-lité des agents de surface dans les détergents synthétiques»,
— méthode en vigueur en Allemagne, établie par la Verordnung über
die Abbaubarkeit anionischer und nichtionischer grenzflächenak-
tiver Stoffe in Wasch- und Reinigungsmitteln du 30 janvier 1977,publiée au Bundesgesetzblatt 1977, partie I, page 244, dans la1973L0405 — FR — 14.04.1982 — 001.001 — 2
(1) Voir p. 51 du présent Journal officiel (SIC! JO noL 347 du 17. 12. 1973, p.
51).
(2)J O noC 10 du 5. 2. 1972, p. 29.
(3)J O noC 89 du 23. 8. 1972, p. 13.▼M1
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version du règlement portant modification de ce règlement, du 18
juin 1980, publié au Bundesgesetzblatt 1980, partie I, page 706,
— méthode en vigueur en France, approuvée par arrêté du 28
décembre 1977 publié au Journal officiel de la République
française du 18 janvier 1978, pages 514 et 515, et norme expéri-
mentale T 73-260 (juin 1981), éditée par l'Association française de
normalisation (Afnor),
— méthode en vigueur au Royaume-Uni, dite Porous Pot Test ,e t
décrite dans le rapport technique no70 (1978) du Water Research
Centre.
Article 3
Dans le cadre de la procédure définie à l'article 5 paragraphe 2 de la
directive 73/404/CEE, l'avis du laboratoire est donné pour ce quiconcerne les agents de surface anioniques sur la base de la méthodede référence (test de confirmation) décrite en annexe à la présente
directive.
Article 3 bis
Les modifications nécessaires pour adapter l'annexe au progrès tech-
nique sont arrêtées conformément à la procédure de l'article 7 terde
ladirective 73/404/CEE.
Article 4
1. Les États membres mettent en vigueur les dispositions législa-
tives, réglementaires et administratives nécessaires pour se conformerà la présente directive dans un délai de dix-huit mois à compter de sanotification et en informent immédiatement la Commission.
2. Les États membres veillent à communiquer à la Commission le
texte des dispositions essentielles de droit interne qu'ils adoptent dans
le domaine régi par la présente directive.
Article 5
Les États membres sont destinataires de la présente directive.1973L0405 — FR — 14.04.1982 — 001.001 — 3
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ANNEXE
DÉTERMINATION DE LA BIODÉGRADABILITÉ DES AGENTS DE
SURFACE ANIONIQUES
Méthode de référence (test de confirmation)
CHAPITRE 1
1.1.Définition
Aux termes de la présente directive, les agents de surface anioniques
sont les agents qui, après passage sur échangeurs d'ions cationiques et
anioniques, sont séparés par élution fractionnelle et déterminés sous
forme de substance active au bleu de méthylène (MBAS) suivant la
méthode d'analyse décrite au chapitre 3.
1.2.Équipement nécessaire
La méthode de mesure est fondée sur l'emploi d'une installation à boue
activée, schématisée sur la figure 1 et représentée de manière plus
détaillée sur la figure 2.
L'équipement se compose d'un récipient A, destiné à stoc-ker les eaux
résiduaires synthétiques, d'une pompe doseuse B, d'une cuve d'aération
C, d'un décanteur D, d'une pompe à air comprimé Epour recycler la
boue activée et d'un récipient Fdestiné à recueillir l'effluent traité.
Les récipients AetFdoivent être en verre ou en matière plastique
appropriée et contenir au moins 24 l. La pompe Bdoit assurer une
alimentation régulière de la cuve d'aération en effluent synthétique; en
cours de fonctionnement normal, cette cuve doit contenir 3 l de
mélange. Un verre fritté Gdestiné à l'aération est suspendu dans la
cuveCau sommet du cône intérieur de cette cuve. La quantité d'air
insufflée par le dispositif d'aération doit être contrôlée par un débimètre
H.
1.3.Effluent synthétique
Pour effectuer cet essai, on se sert d'un effluent synthétique.Dissoudre par litre d'eau du robinet:— 160 mg de peptone,
— 110 mg d'extrait de viande,
— 30 mg d'urée [CO (NH
2)2],
— 7 mg de chlorure de sodium (NaCl),
— 4 mg de chlorure de calcium (CaCl2·2 H2O),
— 2 mg de sulfate de magnésium (MgSO4·7 H2O),
— 28 mg de monohydrogénophosphate de potassium (K2HPO4),
— 20 ± 2 mg de MBAS.
On extrait la MBAS du produit faisant l'objet de l'essai par la méthode
indiquée au chapitre 2. L'effluent synthétique est préparé chaque jour.
1.4.Préparation des échantillons
1.4.1. Les agents de surface non formulés peuvent être essayés tels quels. La
teneur en MBAS doit être déterminée afin de préparer l'effluent synthé-
tique (1.3.).
1.4.2. Dans le cas de formulations, on procède à la détermination de la teneur
en MBAS et en savon. On procède à une extraction alcoolique et à une
séparation de la MBAS (voir chapitre 2). Il faut connaître la teneur en
MBAS de l'extrait pour préparer l'effluent synthétique.
1.5.Fonctionnement de l'installation
Au départ, on remplit la cuve d'aération Cet le décanteur Davec de
l'effluent synthétique. Le décanteur Ddoit être fixé à une hauteur telle
que la cuve d'aération Ccontienne 3 l. On introudit (SIC! introduit) 3 ml
d'un effluent secondaire de bonne qualité, fraîchement prélevé dans une
installation de traitement d'eaux résiduaires, essentiellement domesti-
ques. L'effluent doit être maintenu dans des conditions aérobies
pendant la période comprise entre l'échantillonnage et l'utilisation. On
met ensuite en marche le dispositif d'aération, la pompe à air comprimé
Eet lapompe doseuse B. L'effluent synthétique doit passer dans la cuve
d'aération Cau débit horaire de 1 l, ce qui donne un temps moyen de
rétention de trois heures.1973L0405 — FR — 14.04.1982 — 001.001 — 4
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Il faut régler le rythme d'aération de telle façon que le contenu de la
cuveCreste constamment en suspension et que la teneur en oxygène
dissous soit au minimum de 2 mg/l. La formation de mousse doit être
empêchée par des moyens appropriés. On n'utilisera cependant pas
d'agents antimousse qui ont une action inhibitrice sur la boue activée
ou qui contiennent du MBAS. Lapompe Edoit être réglée de telle sorte
qu'il y ait dans la cuve d'aération Cun recyclage continu et régulier de
la boue activée issue du décanteur. La boue qui s'est accumulée au
sommet de la cuve d'aération C,au fond du décanteur Dou dans le
circuit de circulation,doit être remise en circulation au moins une fois
par jour par brossage ou par tout autre moyen approprié. Quand la
boue ne décante pas, on peut favoriser la décantation par addition,
répétée si nécesssaire (SIC! nécessaire), de fractions de 2 ml d'une solu-
tion à 5 % de chlorure ferrique.
L'effluent sortant du décanteur Dest recueilli dans la cuve Fpendant 24
heures, après quoi on prélève un échantillon après avoir procédé à
l'homogénéisation du mélange. La cuve Fdoit alors être nettoyée
soigneusement.
1.6.Contrôle du dispositif de mesure
Lateneur en MBAS (en mg/l) de l'effluent synthétique est déterminée
immédiatement avant usage.
La teneur en MBAS (en mg/l) de l'eau résiduaire collectée pendant 24
heures dans la cuve Fdoit être déterminée par la même méthode d'ana-
lyse, immédiatement après le prélèvement, sinon les échantillons sont
conservés, de préférence par congélation. La concentration doit être
déterminée à 0,1 mg MBAS/l près.
Pour vérifier la bonne marche de l'opération, on mesure au moins deux
fois par semaine la demande chimique en oxygène (DCO) ou le carbone
organique dissous (COD) de l'effluent filtré sur fibre de verre, accumulé
dans la cuve Fet de l'effluent synthétique filtré qui est stocké dans la
cuveA.
Ladiminution de laDCO ou du COD doit se sta biliser lorsque labiodé-
gradation journalière de la MBAS est à peu près régulière, c'est-à-dire à
lafin de lapériode initia le indiquée sur lafigure 3.
La teneur en matières sèches minérales de la boue activée contenue dans
la cuve d'aération doit être déterminée deux fois par semaine (en g/l). Si
elle dépasse 2,5 g/l, il faut éliminer l'excès de boue activée.
L'essai de biodégradation est effectué à la température ambiante; cette
température doit être régulière et maintenue entre 292 et 297 K (19-24º
C).
1.7.Calcul de la biodégradation
Le pourcentage de biodégradation de la MBAS doit être calculé quoti-
diennement à partir de la teneur en MBAS (exprimée en mg/l) de
l'effluent synthétique et de l'eau résiduaire correspondante recueillie
dans la cuve F. Les valeurs ainsi obtenues doivent être représentées
graphiquement, comme l'indique la figure 3.
La biodégradabilité de la MBAS est calculée en prenant la moyenne
arithmétique des valeurs obtenues au cours des 21 jours suivant la
période initiale, délai pendant lequel la biodégradation doit avoir été
régulière et l'installation doit avoir fonctionné sans aucune perturbation.
En aucun cas, la durée de la période initiale ne dépassera six semaines.
Les valeurs quotidiennes de la biodégradation doivent être calculées à
0,1 % près, mais le résultat final est déterminé au nombre entier près.
Dans certains cas, la fréquence des prélèvements peut être diminuée
mais, pour calculer la moyenne, on utilisera les résultats d'au moins 14
prélèvements journaliers répartis sur la période de 21 jours qui suivent
lapériode initia le.
CHAPITRE 2
TRAITEMENT PRÉLIMINAIRE DES PRODUITS À EXAMINER
2.1.Notes préliminaires
2.1.1.Traitement des échantillons
Le traitement des agents de surface anioniques et des détergents préala-
blement à la détermination de la biodégradation par le test de
confirmation est le suivant:1973L0405 — FR — 14.04.1982 — 001.001 — 5
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Produits Traitement
Agents de surface anioni-
quesNéant
Détergents Extraction alcoolique suivie d'une sépara-
tion par échange d'ions et d'une élution
fractionnelle à partir de l'échangeur
d'anions.
Le but de l'extraction alcoolique est d'éliminer des produits commercia-
lisés les composants insolubles et inorganiques qui peuvent, le cas
échéant, perturber le test de biodégradation.
2.1.2.Procédé d'échange d'ions
Il est nécessaire, pour l'exactitude des tests de biodégradation, d'isoler et
de séparer les agents de surface anioniques du savon et des agents de
surface non ioniques et cationiques.
Ce résultat est obtenu grâce à l'application d'une technique d'échange
d'ions utilisant une résine échangeuse d'anions macroporeuse et les
agents d'élution appropriés permettant l'élution fractionnée. Le savon et
les agents de surface anioniques et non ioniques se trouvent ainsi isolés
en une seule opération.
2.1.3.Contrôle analytique
Après homogénéisation, la teneur en agents de surface anioniques du
détergent synthétique est déterminée suivant la méthode d'analyse à la
MBAS. La teneur en savon est déterminée selon une méthode appro-
priée. Cette analyse des produits est nécessaire pour le calcul des
quantités requises pour la préparation des fractions destinées aux essais
de biodégradation.
Une extraction quantitative ne s'impose pas; toutefois, on extraira au
moins 80 %des agents de surface anioniques. Habituellement, on en
obtient 90 % et plus.
2.2.Principe
À partir d'un échantillon homogène (poudres, pâtes et liquides dessé-
chés), on obtient un extrait par l'éthanol qui contient les agents de
surface, le savon et d'autres composants solubles de l'alcool, de l'échan-
tillon de détergent.
L'extrait par l'éthanol est évaporé et dissous dans un mélange isopro-
panol/eau; on fait passer la solution ainsi obtenue à travers un
dispositif mixte échange de cations fortement acide/échange d'anions
macroporeux, porté à la température de 323 K (50º C). Cette tempéra-
ture est nécessaire pour empêcher la précipitation des acides gras en
milieu acide.
Les agents de surface non ioniques restent dans l'effluent.Les acides gras du savon sont séparés par élution avec de l'éthanol
contenant du dioxyde de carbone. On obtient alors les agents de surface
anioniques sous forme de sels d'ammonium par élution avec une solu-
tion de bicarbonate d'ammonium dans un mélange isopropanol/eau. Ces
sels d'ammonium sont utilisés pour le test de biodégradation.
Les agents de surface cationiques, susceptibles de perturber le test de
biodégradation et la procédure analytique, sont éliminés par l'échangeur
de cations placé au-dessus de l'échangeur d'anions.
2.3.Produits chimiques et appareillage
2.3.1. Eau désionisée.
2.3.2. Éthanol, 95 % (v/v) C
2H5OH (dénaturants admis: méthy-léthylcétone ou
méthanol).
2.3.3. Mélange isopropanol/eau (50/50 v/v):
— 50 parties d'isopropanol (CH3CHOH · CH3),
— 50 parties d'eau (2.3.1.).
2.3.4. Solution de dioxyde de carbone dans l'éthanol (environ 0,1 % de CO2):
au moyen d'un tube de transfert doté d'un disque en verre fritté incor-
poré, faire barboter le dioxyde de carbone (CO2) à travers l'éthanol1973L0405 — FR — 14.04.1982 — 001.001 — 6
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(2.3.2.) pendant 10 minutes. La solution doit être préparée extemporané-
ment.
2.3.5. Solution de bicarbonate d'ammonium (60/40 v/v): 0,3 mol de NH4HCO3dans 1 000 ml d'un mélange isopropanol/eau constitué de 60 parties
d'isopropanol et de 40 parties d'eau (2.3.1.).
2.3.6. Échangeur de cations (KAT), fortement acide, résistant à l'alcool (50-
100 mesh).
2.3.7. Échangeur d'anions (AAT), macroporeux, Merck Lewatit MP 7080 (70-
150 mesh) ou équivalent.
2.3.8. Acide chlorhydrique, 10 % HCl (p/p).2.3.9. Ballon à fond rond de 2 000 ml avec rodage conique et condenseur à
reflux.
2.3.10. Entonnoir filtrant de 90 mm de diamètre (pouvant être chauffé) pour
filtres en papier.
2.3.11. Fioles à vide de 2 000 ml.2.3.12. Colonnes d'échangeurs à enveloppe chauffante et robinet: tube intérieur
de 60 mm de diamètre et de 450 mm de hauteur (figure 4)
2.3.13. Bain-marie.2.3.14. Étuve de séchage à vide.2.3.15. Thermostat.
2.3.16. Évaporateur rotatif.
2.4.Extraction et séparation des agents de surface anioniques
2.4.1.Préparation de l'extrait
La quantité d'agents de surface nécessaire pour l'essai de biodégradation
est d'environ 50 g MBAS.
Normalement la quantité de produit à extraire ne dépasse pas 1 000 g;
cependant il peut être nécessaire d'extraire des quantités supplémentaires
de l'échantillon.
Pour des raisons pratiques, la quantité de produit utilisé sera dans la
plupart des cas limitée à 5 000 g lors de la préparation des extraits
pour l'essai de biodégradation.
L'expérience a montré qu'une série d'extractions limitées est préférable à
une seule extraction d'un (SIC! d'une) grande quantité de produit. En ce
qui concerne les échangeurs, les quantités spécifiées sont conçues pour
une capacité de 600 à 700 mmol d'agents de surface et de savon.
2.4.2.Isolement des composants solubles dans l'alcool
Ajouter 250 g du détergent à analyser à 1 250 ml d'éthanol et porter le
mélange à ébullition puis le soumettre à reflux pendant une heure, en
agitant. Filtrer la solution alcoolique chaude dans un entonnoir filtrant
à large pores, porté à la température de 323 K (50º C), et aspirer forte-
ment. Laver la fiole et l'entonnoir filtrant avec environ 200 ml d'éthanol
chaud. Recueillir le filtrat et le lavage du filtre dans une fiole à vide.
Lorsque les produits à analyser sont des pâtes ou des liquides, s'assurer
que l'échantillon ne contient pas plus de 55 g d'agents de surface anio-
niques et 35 g de savon. Évaporer cet échantillon pesé jusqu'à
dessiccation complète. Dissoudre le résidu dans 2 000 ml d'éthanol et
procéder comme ci-dessus.
Dans le cas de poudres de faible densité apparente (< 300 g/l), il est
recommandé d'augmenter la proportion d'éthanol dans le rapport 20/1.
Évaporer le filtrat d'éthanol jusqu'à dessiccation complète, de préférence
au moyen d'un évaporateur rotatif. Répéter l'opération si une plus grande
quantité d'extrait est nécessaire. Dissoudre le résidu dans 5 000 ml d'un
mélange isopropanol/eau.
2.4.3.Préparation des colonnes d'échangeurs d'ions
Colonne d'échangeurs de cations
Placer 600 ml de résine échangeuse de cations (2.3.6.) dans un bécher
de 3 000 ml et couvrir en ajoutant 2 000 ml d'acide chloridrique
(2.3.8.). Laisser reposer pendant au moins 2 heures en agitant de temps
en temps. Décanter l'acide et transférer la résine dans la colonne
(2.3.12.) au moyen d'eau désionisée. La colonne doit comporter un1973L0405 — FR — 14.04.1982 — 001.001 — 7
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tampon de laine de verre. Laver la colonne avec de l'eau désionisée à un
débit de 10-30 ml/min jusqu'à ce que l'éluat soit exempt de chlorure.
Déplacer l'eau avec 2 000 ml d'un mélange isopropanol/eau (2.3.3.) à
un débit de 10-30 ml/min. Lacolonne d'écha ngeurs est prête à l'emploi.
Colonne d'échangeurs d'anions
Placer 600 ml de résine échangeuse d'anions (2.3.7.) dans un bécher de
3 000 ml et couvrir en ajoutant 2 000 ml d'eau désionisée. Laisser
l'échangeur gonfler pendant au moins 2 heures. Transférer la résine
dans la colonne avec de l'eau. La colonne doit comporter un tampon en
laine de verre désionisée comme couche de soutien des échangeurs.
Laver la colonne avec une solution 0,3 mol de bicarbonate d'ammonium
(2.3.5.) jusqu'à ce qu'elle soit exempte de chlorure, ce qui nécessite
environ 5 000 ml de solution. Laver ensuite avec 2 000 ml d'eau désio-
nisée. Déplacer l'eau avec 2 000 ml d'un mélange isopropanol/eau
(2.3.3.) à un débit de 10-30 ml/min. La colonne d'échangeurs est main-
tenant sous forme OH et prête à l'emploi.
2.4.4.Procédé d'échange d'ions
Monter les colonnes d'échangeurs de sorte que la colonne d'échangeurs
de cations se trouve au-dessus de la colonne d'échangeurs d'anions.
Porter les colonnes à la température de 323 K (50º C) au moyen d'un
thermostat. Chauffer 5 000 ml de la solution obtenue au point 2.4.2.
jusqu'à 333 K (60º C) et passer la solution à travers le groupe d'échan-
geurs à un débit de 20 ml/min. Laver les colonnes avec 1 000 ml d'un
mélange chaud d'isopropanol/eau (2.3.3.).
Pour obtenir les agents de surface anioniques synthétiques (MBAS),
démonter la colonne KAT. Éluer les acides gras du savon de la colonne
KAT au moyen de 5 000 ml d'une solution d'échanol/CO2(à 323 K; 50º
C) (2.3.4.). Rejeter l'éluat.
Éluer ensuite les MBAS de lacolonne AAT a u moyen de 5 000 ml de
solution de bicarbonate d'ammonium (2.3.5.). Évaporer l'éluat jusqu'à
dessiccation sur un bain de vapeur ou dans un évaporateur rotatif. Les
résidus contiennent les MBAS (sous forme de sel d'ammonium) et,
éventuellement, les produits anioniques non tensio-actifs qui ne nuisent
pas au test de biodégradation. Ajouter de l'eau désionisée jusqu'à obten-
tion d'un volume d'éterminé et doser lateneur en MBAS da ns une
fraction aliquote conformément au chapitre 3. La solution est utilisée
comme solution étalon des détergents anioniques pour l'essai de biodé-gradation. La solution doit être maintenue à une température inférieure à
278 K (5º C).
2.4.5Régénération des résines échangeuses d'ions
L'échangeur de cations est jeté après emploi.
On régénère la résine échangeuse d'anions en faisant passer dans la
colonne une quantité supplémentaire d'une solution de bicarbonate
d'ammonium (2.3.5.) à un débit d'environ 10 ml/min jusqu'à ce que
l'éluat soit exempt d'agents de surface anioniques (essai au bleu de
méthylène). Laver ensuite l'échangeur d'anions avec 2 000 ml d'un
mélange isopropanol/eau (2.3.3.). L'échangeur d'anions peut de nouveau
être utilisé.
CHAPITRE 3
DÉTERMINATION DES AGENTS DE SURFACE ANIONIQUES DANS
L'ESSAI DE BIODÉGRADATION
3.1.Principe
La méthode est basée sur le fait que le colorant cationique qu'est le bleu
de méthylène donne avec les agents de surface anioniques des sels bleus
que l'on peut extraire au chloroforme. Afin d'éviter les interférences,
l'extraction est d'abord effectuée à partir d'une solution alcaline et
l'extrait est ensuite agité avec une solution acide de bleu de méthylène.
L'absorbance de la phase organique séparée est mesurée par photométrie
à la longueur d'onde d'absorption maximale de 650 nm.
3.2.Réactifs et appareillage
3.2.1. Solution tampon ph 10: dissoudre 24 g de bicarbonate de sodium
(NaHCO
3) pour analyse et 27 g de carbonate de sodium anhydre
(Na2CO3) pour analyse dans de l'eau dé-sionisée et diluer à 1 000 ml.
3.2.2. Solution neutre de bleu de méthylène: dissoudre 0,35 g de bleu de
méthylène pour analyse dans de l'eau désionisée et diluer à 1 000 ml.1973L0405 — FR — 14.04.1982 — 001.001 — 8
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Préparer la solution au moins 24 heures avant l'emploi. L'absorbance de
la phase chloroforme de l'essai à blanc, comparée à celle du chloroforme
pur, ne doit pas dépasser 0,015 pour 1 cm d'épaisseur de la couche à 650
nm.
3.2.3. Solution acide de bleu de méthylène: dissoudre 0,35 g de bleu de
méthylène pour analyse dans 500 ml d'eau désionisée et mélanger avec
6,5 ml d'H2SO4(d = 1,84 g/ml). Diluer avec 1 000 ml d'eau désionisée.
Préparer la solution au moins 24 heures avant l'emploi. L'absorbance de
la phase de chloroforme de l'essai à blanc, comparée à celle du chloro-
forme pur, ne doit pas dépasser 0,015 pour 1 cm d'épaisseur de la
couche à 650 nm.
3.2.4. Chloroforme (trichlorométhane) CHCl3pour analyse, fraîchement
distillé.
3.2.5. Dodécylbenzène-méthylester d'acide sulfonique.3.2.6. Solution d'hydroxyde de potassium dans l'éthanol, KOH 0,1 mol.3.2.7. Éthanol pur (C
2H5OH).
3.2.8. Acide sulfurique (H2SO40,5 mol).
3.2.9. Solution de phénolphthaléine: dissoudre 1 g de phénolphtaléine dans 50
ml d'éthanol et ajouter 50 ml d'eau désionisée en agitant continuelle-
ment. Éliminer par filtration tout précipité obtenu.
3.2.10. Acide chlorhydrique et méthanol: 250 ml d'acide chlorhydrique
concentré pour analyse et 750 ml de méthanol.
3.2.11. Ampoule à décantation de 250 ml.3.2.12. Fiole jaugée de 50 ml.3.2.13. Fiole jaugée de 500 ml.
3.2.14. Fiole jaugée de 1 000 ml.
3.2.15. Ballon à fond rond avec rodage en verre, condenseur à reflux de 250 ml;
granulés pour faciliter l'ébullition.
3.2.16. pH-mètre.
3.2.17. Photomètre pour mesures à 650 nm, avec des cuves de 1 à 5 cm.
3.2.18. Papier filtre qualitatif.3.3.Méthode
Les échantillons destinés à l'analyse ne doivent pas être prélevés à
travers une couche de mousse.
Après avoir été soigneusement nettoyé à l'eau, l'appareillage utilisé pour
l'analyse doit être entièrement rincé avec une solution d'acide chlorhy-
drique et de méthanol (3.2.10.), puis avec de l'eau désionisée avant
usage.
Filtrer les effluents d'entrée et de sortie de l'installation à boue activée à
examiner dès l'échantillonnage. Éliminer les premiers 100 ml des filtrats.
Placer un volume mesuré de l'échantillon, neutralisé si nécessaire, dans
une ampoule à décantation de 250 ml (3.2.11.). Le volume de l'échan-
tillon doit contenir entre 20 et 150 µg de MBAS. Pour une teneur en
MBAS plus faible, on peut utiliser jusqu'à 100 ml de l'échantillon. Lors-
qu'on en utilise moins de 100 ml, diluer à 100 ml avec de l'eau
désionisée. Ajouter à l'échantillon 10 ml de la solution tampon (3.2.1.)
5 ml de lasolution neutre de bleu de méthylène (3.2.2.) et 15 ml de
chloroforme (3.2.4.). Agiter le mélange de façon régulière et sans trop
de vigueur pendant une minute. Après la séparation de phases, faire
passer la couche de chloroforme dans une seconde ampoule à décanta-
tion contenant 110 ml d'eau désionisée et 5 ml de solution acide de bleu
de méthylène (3.2.3.). Agiter le mélange pendant une minute. Faire
passer la couche de chloroforme sur un filtre de coton hydrophile préa-
lablement lavé à l'alcool et imbibé de chloroforme dans une fiole
graduée (3.2.12.).
Extraire à trois reprises les solutions alcalines et acides, au moyen de 10
ml de chloroforme lors de ladeuxième et de latroisième extra ction.
Filtrer les extraits combinés de chloroforme à travers le même filtre de
coton hydrophile et diluer à la marque dans la fiole de 50 ml (3.2.12.)
avec le chloroforme utilisé pour relaver le coton hydrophile. Mesurer
l'absorbance de la solution de chloroforme avec un photomètre à 650
nm dans des cuves de 1 à 5 cm en comparant avec celle du chloroforme
pur. Faire un essai de dosage en blanc tout au long de la méthode.1973L0405 — FR — 14.04.1982 — 001.001 — 9
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3.4.Courbe d'étalonnage
Préparer une solution d'étalonnage à partir de la substance étalon de
dodécylbenzène-méthylester d'acide sulfonique (tétrapropylène type PM
340) après saponification dans le sel de potassium. La MBAS est
exprimée en dodécylbenzène sulfonate de sodium (PM 348).
Peser 400 à 450 mg de dodécylbenzène méthylester (SIC! dodécylben-
zène-méthylester) d'acide sulfonique (3.2.5.) à 0,1 mg près dans un
ballon à fond rond et ajouter 50 ml de solution d'hydroxyde de potas-
sium et d'éthanol (3.2.6.) et quelques granulés pour faciliter l'ébullition.
Après avoir monté le condenseur à reflux, faire bouillir pendant une
heure. Après refroidissement, laver le condenseur et le rodage de verre
avec environ 30 ml d'éthanol et ajouter ces lavages au contenu du
ballon. Titrer la solution à l'acide sulfurique jusqu'à décoloration de la
phénolphthaléine. Transférer cette solution dans une fiole jaugée de
1 000 ml (3.2.14.), diluer à la marque avec de l'eau désionisée et
mélanger.
Rediluer ensuite une partie de cette solution mère de l'agent de surface.
En prélever 25 ml et transférer dans une fiole jaugée de 500 ml
(3.2.13.), diluer à la marque avec de l'eau désionisée et mélanger.
Cette solution étalon contientE/C21;023
20000mg MBAS/ml, Ereprésentant
le poids de l'échantillon en mg.
Pour établir la courbe d'étalonnage, prélever respectivement 1, 2, 4, 6 et
8 ml de la solution étalon et diluer chacun de ces prélèvements à 100 ml
avec de l'eau désionisée. Procéder ensuite comme indiqué au point 3.3.)
(y compris un essai de dosage en blanc).
3.5.Calcul des résultats
La courbe d'étalonnage (3.4.) indique la quantité d'agent de surface anio-
nique (MBAS) contenue dans l'échantillon. La teneur en MBAS de
l'échantillon est indiquée par:
mg MBAS /C21000
V= MBAS mg/l
V = le volume en ml de l'échantillon utilisé.
Exprimer les résultats en dodécylbenzène sulfonate de sodium (PM
348).
3.6.Expression des résultats
Exprimer les résultats en MBAS mg/l à 0,1 mg près.1973L0405 — FR — 14.04.1982 — 001.001 — 10
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Figure 1
A: Récipient de stockage
B: Pompe doseuse
C: Cuve d'aération (capacité 3 l)D: Décanteur
E: Pompe à air comprimé
F: CollecteurG: Aérateur (verre fritté)H: Débimètre à air1973L0405 — FR — 14.04.1982 — 001.001 — 11
Figure 2
▼M11973L0405 — FR — 14.04.1982 — 001.001 — 12
Figure 3
Calcul de la biodégradabilité — Test de confirmation
▼M11973L0405 — FR — 14.04.1982 — 001.001 — 13
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Figure 4
Colonne d'echangeur chauffante
(Dimension en millimètres)
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