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►BDIRECTIVEDU CONSEIL
du 21 décembre 1976
relative à la recherche de trichines lors des importations, en provenance des pays tiers, des
viandes fraîches provenant d'animaux domestiques de l'espèce porcine
(77/96/CEE)
(JO L 26 du 31.1.1977, p. 67)
Modifiée par:
Journal officiel
nopage date
►M1 Directive 81/476/CEE du Conseil du 24 juin 1981 L 186 20 8.7.1981
►M2 Directive 83/91/CEE du Conseil du 7 février 1983 L 59 34 5.3.1983
►M3 Directive 84/319/CEE de la Commission du 7 juin 1984 L 167 34 27.6.1984
►M4 Règlement(CEE) no3768/85 du Conseil du 20 décembre 1985 L 362 8 31.12.1985
►M5 Directive 89/321/CEE de la Commission du 27 avril 1989 L 133 33 17.5.1989
►M6 Directive 94/59/CE de la Commission du 2 décembre 1994 L 315 18 8.12.1994
►M7 Règlement(CE) no807/2003 du Conseil du 14 avril 2003 L 122 36 16.5.2003
Modifiée par:
►A1 Acte d'adhésion de la Grèce L 291 17 19.11.1979
►A2 Acte d'adhésion de l'Autriche, de la Finlande et de la Suède C 241 21 29.8.1994
(adapté par la décision 95/1/CE, Euratom, CECA du Conseil) L 1 1 1.1.1995
►A3 Acte relatif aux conditions d'adhésion à l'Union européenne de la Répu-
blique tchèque, de la République d'Estonie, de la République de Chypre,de la République de Lettonie, de la République de Lituanie, de la Répu-
blique de Hongrie, de la République de Malte, de la République de
Pologne, de la République de Slovénie etde la République slovaque, etaux adaptations des traités sur lesquels est fondée l'Union européenneL 236 33 23.9.2003
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DIRECTIVEDU CONSEIL
du 21 décembre 1976
relative àla recherche de trichines lorsdesimportations,enprove-
nance des pays tiers, des viandes fraîches provenant d'animaux
domestiques de l'espèce porcine
(77/96/CEE)
LE CONSEIL DES COMMUNAUTÉS EUROPÉENNES,
vu le traité instituant la Communauté économique européenne,
vu la directive 72/462/CEE du Conseil, du 12 décembre 1972, concer-
nant des problèmes sanitaires et de police sanitaire lors de l'importationd'animaux des espèces bovine etporcine etdes viandes fraîches enprovenance des pays tiers (
1), modifiée en dernier lieu par la directive
75/379/CEE (2), et notamment son article 21,
vu la proposition de la Commission,
considérantque dans la direct ive 72/462/CEE le Conseil a prévu, à
l'article 21, l'élaboration d'une méthode et des modalités nécessaires
pour révéler la présence des trichines dans les viandes fraîches d'ani-
maux de l'espèce porcine;
considérant que l'application de la directive 72/462/CEE n'aura pas les
effets escomptés aussi longtemps que des disparités existent entre lesÉtats membres quant aux garanties exigées en ce qui concerne le dépis-tage des trichines lors de l'importation des viandes fraîches enprovenance des pays tiers; qu'il est en conséquence nécessaire d'établir
un régime communautaire en la matière;
considérant que, afin de protéger la santé du consommateur, il est
nécessaire que la viande fraîche porcine soit soumise systématiquement
à un examen appliquantdes mét hodes reconnues efficaces, afin d'éli-miner celle qui contiendrait des trichines;
considérant que, lorsque l'examen est effectué dans le pays tiers expé-
diteur, il doit être fait dans des abattoirs répondant à certainesconditions et comportant notamment un laboratoire d'examen pourvud'un matériel d'examen approprié;
considérantque, afin de pouvoir dist inguer les viandes examinées de
celles qui ne le seraientpas, il estnécessaire de prévoir l'apposit iond'une marque spéciale aux viandes dontl'examen s'estrévélé négat if;
considérantqu'il convientde confier à une procédure, inst aurantune
coopération étroite et efficace entre la Commission et les États
membres, l'appréciation quant à l'opportunité d'admettre des établisse-
ments se trouvant dans les pays tiers à l'exécution de cet examen ouau travail des viandes examinées et qu'il convient, en outre, de confierà la même procédure la tâche d'adapter, en fonction de l'évolution de latechnique et de l'expérience acquise, les dispositions techniques qui
concernent en particulier les méthodes d'examen, les exigences rela-
tives aux laboratoires d'examen, les modalités de marquage desviandes examinées;
considérant qu'il est opportun d'autoriser les États membres d'admettre
les viandes fraîches n'ayantpas subi un examen de dépist age destrichines dans le pays tiers expéditeur à condition que ces viandessoient soumises à un traitement par le froid, garantissant l'inactivationde trichines éventuellement présentes, dans le pays tiers expéditeur ou
dans l'État membre destinataire; que, toutefois, ce traitement doit être
fait suivant certaines modalités bien définies et dans des établissementsrépondant à certaines conditions,1977L0096 — FR — 01.05.2004 — 010.001 — 2
(1)J O noL 302 du 31. 12. 1972, p. 28.
(2)J O noL 172 du 3. 7. 1975, p. 17.
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A ARRÊTÉ LA PRÉSENTE DIRECTIVE:
Article premier
La présente directive reprend les définitions prévues dans la directive
72/462/CEE.
En outre, on entend par:
a) viandes fraîches: les viandes fraîches d'animaux domestiques de
l'espèce porcine;
b) examen: l'examen visantà déceler la présence de t richines dans les
viandes fraîches.
Article 2
1. Pour pouvoir être admises au trafic intracommunautaire, les
viandes fraîches provenant de pays tiers contenant des muscles squelet-tiques doivent être soumises à un examen effectué sous le contrôle et la
responsabilité d'un vétérinaire officiel.
2. L'examen doit être effectué selon l'une des méthodes indiquées à
l'annexe I et ce, sur l'animal entier ou, à défaut, sur chaque demi-
carcasse, quartier ou morceau destinés à être importés dans la Commu-nauté.
3. L'examen doit être effectué dans un abattoir agréé dans le pays
expéditeur, conformément à l'article 4 de la directive 72/462/CEE, etadmis à l'exécution de cet examen, conformément à l'article 4 de laprésente directive.
4. L'examen doit être effectué avant l'apposition du marquage de
salubrité prévu à l'annexe B chapitre X de la directive 72/462/CEE.
5. Si l'examen ne peut être effectué dans le pays expéditeur, l'État
membre destinataire peut autoriser l'importation des viandes fraîches à
condition que l'examen soit effectué sur son territoire lors du contrôle
de salubrité prévu à l'article 24 paragraphe 2 de la directive 72/462/CEE, dans un poste de contrôle au sens de l'article 27 paragraphe 1sous b) de ladite directive.
6. a) Si le résultat de l'examen est négatif, les viandes fraîches doivent
être marquées immédiatement après la fin de l'examen, confor-mémentà l'annexe III.
b) Pour le marquage à l'encre, il y a lieu d'utiliser un colorant au
sens de l'article 17 paragraphe 3 de la directive 72/462/CEE.
Article 3
1. Par dérogation à l'article 2, l'État membre destinataire peut auto-
riser que des viandes fraîches provenant de certains pays tiers ouparties de ceux-ci peuvent ne pas être soumises à un examen, à condi-tion qu'elles soient soumises à un traitement par le froid effectuéconformémentà l'annexe IV.
2. Ce traitement est effectué dans un établissement situé sur le terri-
toire du pays tiers expéditeur et visé à l'article 4 paragraphe 1.
L'exécution du traitement par le froid dans le pays tiers expéditeur doit
faire l'objet d'une attestation de la part du vétérinaire officiel dans les
certificats de salubrité accompagnant les viandes fraîches et visés à
l'article 22 paragraphe 3 de la directive 72/462/CEE.
3. Au cas où ce traitement n'est pas effectué dans le pays tiers expé-
diteur, il doit l'être dans un poste de contrôle indiqué à l'article 2paragraphe 5.
L'exécution du traitement par le froid dans l'État membre doit faire
l'objet d'une attestation de la part du vétérinaire officiel dans les certi-ficats accompagnant les viandes fraîches et visés à l'article 25 de ladirective 72/462/CEE.1977L0096 — FR — 01.05.2004 — 010.001 — 3
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Article 4
1. L'admission d'un abattoir à l'exécution de l'examen et celle d'un
atelier de découpe au découpage ou au désossage des viandes fraîchesayant subi cet examen ou l'admission d'un établissement au traitementpar le froid visé à l'article 3 est décidée selon la procédure prévue àl'article 9. Il est tenu compte, outre des exigences prévues à l'article 4
de la directive 72/462/CEE, des garanties qui sont offertes quant au
respect des dispositions de la présente directive, et, en ce qui concerneles abattoirs:
a) de l'existence des locaux et l'appareillage nécessaire pour l'exécution
de l'examen,
b) de la qualification du personnel affecté à l'exécution de cet examen.
L'admission d'un abattoir et d'un atelier de découpe ne peut intervenir
que si les autorités compétentes du pays tiers ont officiellement
reconnu que cet abattoir et cet atelier de découpe sont en mesure desatisfaire aux conditions prévues à l'article 5 et à l'annexe III; en outre,en ce qui concerne l'abattoir, que celui-ci dispose d'un laboratoireconforme aux conditions prévues à l'annexe II chapitre I et en mesure
de satisfaire aux dispositions des autres chapitres de cette annexe II et à
celles de l'annexe I.
L'admission d'un établissement au traitement par le froid ne peut inter-
venir que si les autorités compétentes du pays tiers ont officiellement
reconnu que cet établissement est en mesure de satisfaire aux condi-tions prévues à l'annexe IV.
2. Une indication spéciale sera insérée dans la ou les listes visées au
paragraphe 4 de l'article 4 de la directive 72/462/CEE en regard des
noms des établissements admis au sens du paragraphe 1.
Article 5
1. Dans les abattoirs admis conformément à l'article 4, l'abattage des
porcs dont les viandes sont destinées à la Communauté doit êtreeffectué dans des locaux ou, à défaut, à des moments différents deceux où sont abattus les porcs dont les viandes ne sont pas destinées à
la Communauté, sauf si les viandes de ces porcs sont soumises à un
examen effectué selon les mêmes modalités.
2. Le découpage etle désossage de viandes qui ontsubi un examen
dont le résultat s'est révélé négatif et qui sont destinées à la Commu-
nauté doivent être effectués dans des ateliers de découpe,conformémentà l'art icle 4.
Dans ces ateliers de découpe, le découpage ou le désossage de ces
viandes doivent être effectués dans des locaux ou, à défaut, à desmoments différents de ceux où sont découpées ou désossées les viandesqui ne sont pas destinées à la Communauté, sauf si ces viandes ont étésoumises à un examen selon les mêmes modalités.
Article 6
Les contrôles dans les pays tiers prévus à l'article 5 de la directive 72/
462/CEE ontégalementpour objetde vérifier l'applicat ion de la
présente directive.
Article 7
Les États membres établissent et communiquent à la Commission la
liste des postes de contrôle visés à l'article 2 paragraphe 5 dans lesquelspeuvent être faits:
— l'examen,
— le traitement par le froid prévu à l'article 3.
Ils veillent à ce que ces postes disposent des installations nécessaires
pour l'exécution des opérations correspondantes.1977L0096 — FR — 01.05.2004 — 010.001 — 4
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Article 8
Afin de tenir compte de l'évolution technologique, des adaptations ou
compléments aux annexes de la présente directive peuvent être déci-
dées selon la procédure prévue à l'article 9; les décisions prises à cet
égard doivent assurer le maintien du niveau des garanties sanitairesexistantes.
Article 9
1. La Commission est assistée par le comité permanent de la chaîne
alimentaire et de la santé animale institué par l'article 58 du règlement(CE) n
o178/2002 (1).
2. Dans le cas où il est fait référence au présent article, les articles 5
et7 de la décision 1999/468/CE (2) s'appliquent.
La période prévue à l'article 5, paragraphe 6, de la décision 1999/468/
CE estfixée à t rois mois.
3. Le comité adopte son règlement intérieur.
Article 11
Les États membres mettent en vigueur, le 1erjanvier 1979 au plus tard,
les dispositions législatives, réglementaires et administratives néces-saires pour se conformer à la présente directive. Ils en informent
immédiatement la Commission.
Article 12
Les États membres sont destinataires de la présente directive.1977L0096 — FR — 01.05.2004 — 010.001 — 5
(1) JO L 31 du 1.2.2002, p. 1.
(2) JO L 184 du 17.7.1999, p. 23.▼M7
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ANNEXE I
MÉTHODES DE RECHERCHE DES TRICHINES
I. EXAMEN TRICHINOSCOPIQUE
a)Appareillage
Trichinoscope à lampe à incandescence permettant un grossissement de
50 et80 à 100 fois.
Compresseur, constitué de deux plaquettes de verre pouvant être pres-
sées l'une contre l'autre et dont l'une est divisée en zones égales, des
petits ciseaux courbés, une petite pince, un couteau pour découper les
échantillons, de petits récipients numérotés destinés à recueillir les
échantillons, un compte-gouttes, un verre contenant de l'acide acétique
et un contenant une solution de potasse caustique pour éclaircir en cas
de calcification éventuelle ou pour ramollir de la viande séchée.
b)Prélèvement des échantillons
Lorsque la carcasse est entière, il faut prélever au moins un échantillon
de la grosseur d'une noisette sur chacun des piliers du diaphragme dans
la zone de transition entre la partie musculaire et la partie tendineuse.
S'il n'y a qu'un pilier du diaphragme, il fauty prélever un échant illon de
deux fois la grosseur d'une noisette. En l'absence des deux piliers du
diaphragme, il fautprélever deux échant illons de la grosseur d'une
noisette environ sur la partie du diaphragme située près des côtes ou
du sternum ou sur la musculature de la langue ou sur les muscles masti-
cateurs ou encore sur les muscles abdominaux.
Pour les morceaux de viande: de chaque morceau, trois échantillons de
muscles squelettiques, contenant peu de graisse, si possible de la dimen-
sion d'une noisette et prélevés à des points différents, dans la mesure du
possible près des os ou des tendons.
c)Mode opératoire
De chacun des échantillons prélevés sur des carcasses entières décrits
ci-dessus, le contrôleur des trichines doit découper, au cas où les deux
piliers du diaphragme sont présents, sept fragments de la taille d'un
grain d'avoine, soit 14 fragments au total, et au cas où un seul des
piliers du diaphragme serait présent, 14 fragments, à différents endroits
et si possible dans la zone intermédiaire entre muscle et tendon, et les
presser entre les lames de verre du compresseur de sorte que les carac-
tères d'imprimerie normaux puissent être lus facilement à travers les
préparations. Si la viande des morceaux à examiner est sèche et vieillie,
les préparations doivent être trempées pendant 10 à 20 minutes dans
une lessive de potasse diluée avec deux volumes d'eau avant d'être pres-
sées.
Si, dans le cas de carcasses entières, les échantillons proviennent de la
partie du diaphragme située près des côtes ou du sternum, de la muscu-
lature de la langue ou des muscles masticateurs ou encore des muscles
abdominaux, 14 fragments de la taille d'un grain d'avoine doivent être
découpés de chaque échantillon, soit 28 fragments au total. De chacun
des échantillons prélevés sur les morceaux de viande, le contrôleur des
trichines doit découper 4 fragments de la taille d'un grain d'avoine, soit
12 fragments au total.
L'examen au trichinoscope doit se faire de façon que chaque prépara-
tion soit examinée lentement et soigneusement. Si, au cours de
l'examen trichinoscopique on décèle des endroits suspects dont la nature
ne peut être déterminée avec certitude, même à l'aide du plus fort gros-
sissement du trichinoscope, on devra procéder à un examen de contrôle
à l'aide du microscope.
L'examen microscopique doitse faire de façon à ce que chaque prépa-
ration soit examinée lentement et soigneusement avec un grossissement
de 30 à 40 fois.
En cas de doute, l'examen doit être poursuivi avec d'autres échantillons
et préparations, si nécessaire avec des grossissements supérieurs, jusqu'à
ce que les précisions souhaitées soient obtenues. L'examen trichinosco-
pique doitdurer 3 minut es au moins.1977L0096 — FR — 01.05.2004 — 010.001 — 6
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En cas d'utilisation d'échantillons de remplacement provenant de la
partie du diaphragme située près des côtes ou du sternum, de la muscu-
lature de la langue ou des muscles masticateurs ou encore des muscles
abdominaux, l'examen trichinoscopique doit durer 6 minutes au moins.
Le temps minimal fixé pour l'examen ne comprend pas le temps néces-
saire pour le prélèvement des échantillons et pour la confection des
préparations.
En général, un contrôleur ne devrait pas examiner au trichinoscope plus
de 840 fragments par jour, ce nombre pouvant toutefois être porté
exceptionnellement à 1 050.
II. MÉTHODE DE LA DIGESTION ARTIFICIELLE
a)Appareillage et matériel
— Couteau pour le prélèvement des échantillons.
— Petits récipients numérotés pouvant être fermés pour la conservation
des échantillons, éventuellement jusqu'au renouvellement des
examens.
— Étuve.— Entonnoir en verre de 2 à 3 l avec support et tuyau de raccordement
en caoutchouc, pinces pour débrancher le tuyau de raccordement.
— Tamis en plastique (diamètre 18 cm environ, mailles de 1 mm
environ).
— Étamine.— Tube effilé à pointe soudée.— Cuvette.
— Hache-viande.
— Stéréomicroscope (grossissement 15 à 40 fois) disposant d'un éclai-
rage approprié.
— Liquide de digestion composé comme suit: 10 g de pepsine [80 U/g
FIP (Fédération internationale de pharmacie)], 5 ml de HCl (37 %
au moins), porter à un litre avec de l'eau courante.
b)Prélèvement des échantillons
1. Lorsque les carcasses sont entières, prélever un échantillon de 20 g
au moins dans un des piliers du diaphragme dans la zone de transi-
tion entre la partie musculaire et la partie tendineuse; s'il n'y a pas de
pilier du diaphragme, prélever la même quantité sur la partie du
diaphragme située près des côtés ou du sternum ou sur la muscula-
ture de la langue ou les muscles masticateurs, ou encore sur la
musculature abdominale.
2. Pour les morceaux de viande, prélever un échantillon de 20 g au
moins dans les muscles squelettiques, contenant peu de graisse et,
dans la mesure du possible, près des os ou des tendons.
c)Méthode
Pour l'examen d'un échantillon collectif provenant de dix porcs, un
échantillon pesant 10 g est prélevé sur chaque échantillon individuel
(20 g). Les 10 g restants sont gardés pour un examen individuel qui
seraitévent uellementnécessaire.
Dix échantillons de 10 g chacun sont réunis en un échantillon collectif,
broyés au moyen d'un hache-viande (diamètre des trous 2 mm) et
placés, sans tasser, dans le tamis garni d'une étamine. Le tamis est alors
suspendu dans un entonnoir relié par un morceau de tuyau en caout-
chouc à un tube effilé, dont la pointe est soudée; l'entonnoir est rempli
avec le liquide de digestion jusqu'à ce que le matériel d'analyse soit
complètement recouvert. Le rapport matériel d'analyse/liquide de diges-
tion doit être de
1/20à1/30environ.
Après une incubation de 18 à 20 heures à 37 à 39 ºC, le tube effilé est
débranché. Éliminer avec précaution le liquide surnageant dans ce tube
etrecueillir dans une capsule le sédimentqui estsoigneusementrincé.
Rechercher la présence des trichines à l'aide du stéréomicroscope avec
un grossissementde 20 à 40 fois.
En cas de résultat positif ou douteux de l'analyse d'un échantillon
collectif, analyser individuellement les échantillons restants augmentés
de 20 g prélevés sur chaque porc ou, dans le cas où il s'agitde1977L0096 — FR — 01.05.2004 — 010.001 — 7
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morceaux de viande, augmentés de 20 g prélevés sur chaque morceau,
conformémentau pointb).
III. MÉTHODE DE LA DIGESTION ARTIFICIELLE D'ÉCHANTILLONS
COLLECTIFS
a)Appareillage et réactifs
— Un couteau et des pinces pour le prélèvement des échantillons.
— Un hache-viande dont les trous devraient avoir un diamètre compris
entre 2 et 3 mm.
— Un Erlenmeyer de 3 l muni d'un bouchon de caoutchouc ou d'ouate.
— Un entonnoir conique de séparation d'une capacité de 2 000 ml.
— Un supportordinaire à pied en A de 28 cm de longueur, muni d'une
tige de 80 cm.
— Un anneau de 10 à 11 cm pouvant être fixé sur le support.
— Une pince pourvue d'une machoire plate (23/40 mm) qui peut être
attachée au support à l'aide d'un manchon double.
— Un tamis (finesse de maille: 177 µ) d'un diamètre extérieur de 11 cm
pourvu d'un treillis en laiton, ou en acier inoxydable.
— Un entonnoir d'un diamètre intérieur d'au moins 12 cm.
— Des éprouvettes graduées de 100 ml.— Un stéréomicroscope (grossissement 15 à 40 fois) disposant d'un
éclairage approprié, ou un trichinoscope pourvu d'une table horizon-
tale pour le compresseur disposant d'un éclairage approprié.
— En cas d'utilisation du trichinoscope: une cuvette pour le comptage
des larves qui peut être décrite comme suit:
une cuvette formée de plaques acryliques d'une épaisseur de 3 mm
et ayant les caractéristiques suivantes:
i) fond de la cuvette: 180 × 40 mm, divisé en carrés;
ii) plaques latérales: 230 × 20 mm;
iii) plaques frontales: 40 × 20 mm.
Le fond et les plaques frontales doivent être fixés entre les plaques
latérales de façon à former une cuvette munie de 2 petites poignées
aux deux extrémités. La partie supérieure du fond devrait se trouver
surélevée de 7 à 9 mm par rapportà la base du cadre formé par les
plaques latérales et frontales. Les plaques doivent être fixées à l'aide
d'une colle appropriée au matériau.
— En cas d'utilisation du stéréomicroscope, une série de boîtes de Pétri
d'un diamètre de 9 cm dont le fond a été divisé en carrés d'examen
de 10 × 10 mm à l'aide d'un instrument pointu.
— Plusieurs poubelles de 10 l à employer lors de la décontamination
par un traitement tel que le formol de l'appareillage, et pour le suc
digestif restant en cas de résultat positif.
— De l'acide chlorhydrique concentré (37 %).— Pepsine à la concentration: 1:10 000 NF (US National Formulary),
correspondantà 1:12 500 BP (Brit ish Pharmacorpoea),
correspondant à 2 000 FIP (Fédération internationale de pharmacie).
— Un nombre de plateaux qui puissent contenir 50 échantillons
d'environ 2 g chacun.
— Une balance de précision de 0,1 g.
b)Prélèvement des échantillons
1. Lorsque les carcasses sont entières, prélever un échantillon d'appro-
ximativement 2 g dans un des piliers du diaphragme dans la zone de
transition entre la partie musculaire et la partie tendineuse; s'il n'y a
pas de pilier du diaphragme, prélever la même quantité sur la partie
du diaphragme située près des côtes ou du sternum ou sur la muscu-
lature de la langue ou les muscles masticateurs, ou encore sur la
musculature abdominale.
2. Pour les morceaux de viande, prélever un échantillon d'approximati-
vement 2 g dans les muscles squelettiques, contenant peu de graisse
et, dans la mesure du possible, près des os ou des tendons.1977L0096 — FR — 01.05.2004 — 010.001 — 8
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c)Méthode
1. i) Groupes complets d'échantillons ( 1 0 0àl af o i s )
Un échantillon d'approximativement 1 g est prélevé sur chacun
des 100 échantillons individuels provenant des porcs. L'échan-
tillon collectif est passé une fois au hache-viande.
La viande hachée estplacée dans l'Erlenmeyer de 3 l, en même
temps que 7 g de pepsine, et recouverte de 2 l d'eau de robinet
chauffée à une température approximative de 40 à 41 ºC, et de
25 ml d'acide chlorhydrique concentré. Agiter le mélange pour
dissoudre la pepsine.
Le pH de la solution est alors d'environ 1,5 à 2.
— Pour la digestion, l'Erlenmeyer est placé dans une étuve à 40-
41 ºC pendant4 h environ. Pendantce t emps, il estrégulière-
mentagit é au moins deux fois par heure.
— La solution digérée est filtrée à l'aide du tamis à travers
l'entonnoir conique de séparation de 2 l et laissée au repos
sur le supportpendantau moins une heure.
— Un volume total d'approximativement 45 ml est soutiré dans
une éprouvette graduée et réparti dans trois boîtes de Pétri,
dontle fond estdivisé en carrés, à raison de 15 ml par boît e.
— Chaque boîte de Pétri est minutieusement examinée au stéréo-
microscope afin de déceler les larves.
— En cas d'utilisation de cuvettes pour le comptage des larves,
les 45 ml sont répartis dans deux cuvettes et examinés au
trichinoscope.
Les larves apparaissentdans le dépôtcomme des organismes
identifiables et, si l'eau est tiède, on observe fréquemment les
enroulements et les déroulements de la spirale.
— Les liquides de digestion doivent être examinés dès qu'ils sont
prêts. En aucun cas, l'examen ne doit être remis au lende-
main.
Si les liquides de digestion sont insuffisamment transparents
ou s'ils ne sontpas examinés dans un délai de 30 mn suivant
leur préparation, ils doivent être éclaircis comme suit: verser
l'échantillon final de 45 ml dans une éprouvette graduée et
laisser sédimenter pendant 10 mn. À l'issue de ce délai,
enlever 30 ml du liquide surnageant par aspiration et ajouter
aux 15 ml restants de l'eau du robinet jusqu'à obtenir un
volume total de 45 ml. Après une nouvelle période de repos
de 10 mn, enlever 30 ml du liquide surnageantpar aspirat ion,
verser les 15 ml restants dans une boîte de Pétri ou dans une
cuvette pour le comptage des larves, en vue de l'examen.
Laver l'éprouvette graduée avec 10 ml d'eau du robinet;
ajouter le liquide obtenu à l'échantillon dans la boîte de Pétri
ou dans la cuvette pour le comptage des larves et examiner.
ii)Groupes de moins de 100 échantillons
Un maximum de 15 échantillons individuels peuvent être ajoutés
à un groupe complet de 100 échantillons pour être examinés en
même temps que ces derniers. Si le nombre d'échantillons à
examiner estsupérieur à 15 etinférieur à 100, le liquide de
digestion doit être réduit proportionnellement.
2. En cas de résultat positif ou douteux de l'examen d'un échantillon
collectif, un échantillon de 20 g doit être prélevé sur chaque porc
conformément aux indications visées à la lettre b) ci-avant. Les
échantillons de 20 g provenant de 5 porcs doivent être réunis et
examinés selon la méthode décrite ci-avant. De cette façon, des
échantillons de 20 groupes de 5 porcs seront examinés. Si les
trichines sont décelées dans un groupe d'échantillons de 5 porcs,
des échantillons de 20 g doivent être prélevés sur chaque animal
appartenant à ce groupe et examinés suivant la méthode décrite ci-
avant.
IV. MÉTHODE DE LA DIGESTION D'ÉCHANTILLONS COLLECTIFS
AVEC ASSISTANCE MÉCANIQUE / TECHNIQUE DE LA SÉDIMEN-
TATION
a)Appareillage et réactifs
— Un couteau ou des ciseaux pour découper les échantillons.1977L0096 — FR — 01.05.2004 — 010.001 — 9
▼M3
— Des plateaux divisés en 50 carrés pouvant contenir chacun des
échantillons de viande d'environ 2 g.
— Un Stomacher Lab-blender 3500, Thermo model.— Des sacs en plastique adaptés au Stomacher Lab-blender.
— Des ampoules à décantation coniques d'une capacité de 2 l munies
de préférence de robinets de sécurité en Teflon.
— Des supports avec anneaux et fixations.
— Des tamis, finesse de maille 177 µ, d'un diamètre extérieur de 11 cm,
pourvus d'un treillis en acier inoxydable.
— Des entonnoirs d'un diamètre intérieur d'au moins 12 cm destinés à
recevoir les tamis.
— Des éprouvettes graduées de 100 ml.— Un doseur de 25 ml.
— Des béchers d'une capacité de 3 l.
— Une cuillère ou une tige en verre pour agiter le liquide de digestion
dans le bécher.
— Une seringue en plastique et un tube d'aspiration.
— Une cuillère graduée de 6 g.— Un thermomètre d'une précision de ± 0,5 ºC allant de 1 à 100 ºC.— Un vibrateur, par exemple un rasoir électrique sans tête.
— Un relais s'allumant et s'éteignant toutes les minutes.
— Un trichinoscope pourvu d'une table horizontale ou un stéréomicro-
scope disposantd'un éclairage approprié.
— Une cuvette pour le comptage des larves (en cas d'utilisation d'un
trichinoscope).
La cuvette doit être formée de plaques acryliques d'une épaisseur de
3 mm et doit avoir les caractéristiques suivantes:
i) fond de la cuvette: 180 × 40 mm, divisé en carrés;
ii) plaques latérales: 230 × 20 mm;
iii) plaques frontales: 40 × 20 mm.
Le fond et les plaques frontales doivent être fixés entre les plaques
latérales de façon à former deux petites poignées aux deux extré-
mités. La partie supérieure du fond devrait se trouver surélevée de
7 à 9 mm par rapportà la base du cadre formé par les plaques lat é-
rales etfront ales. Fixer les plaques à l'aide d'une colle appropriée au
matériau.
— En cas d'utilisation du stéréomicroscope, un certain nombre de
boîtes de Pétri d'un diamètre de 9 cm, dont le fond a été divisé en
carrés de 10 × 10 mm à l'aide d'un instrument pointu.
— Solution d'acide chlorhydrique à 17,5 %.
— Pepsine à la concentration: 1:10 000 NF (US National Formulary),
correspondantà 1:12 500 BP (Brit ish Pharmacopoea),correspondant à 2 000 FIP (Fédération internationale de pharmacie).
— Plusieurs poubelles de 10 l à employer lors de la décontamination
par un traitement tel que le formol, de l'appareillage et pour le suc
digestif restant en cas de résultat positif.
— Une balance d'une précision de 0,1 g.
b)Prélèvement des échantillons
1. Lorsque les carcasses sont entières, prélever un échantillon d'appro-
ximativement 2 g dans un des piliers du diaphragme dans la zone de
transition entre la partie musculaire et la partie tendineuse; s'il n'y a
pas de pilier du diaphragme, prélever la même quantité sur la partie
du diaphragme située près des côtes ou du sternum ou sur les
muscles masticateurs ou encore sur la musculature abdominale.
2. Pour les morceaux de viande, prélever un échantillon d'approximati-
vement 2 g dans les muscles squelettiques, contenant peu de graisse
et, dans la mesure du possible, près des os ou des tendons.
c)Méthode
1.Procédé de digestion
i)Groupes complets d'échantillons ( 1 0 0àl af o i s )
— Garnir le Stomacher Lab-blender 3500 d'un double sachet en
plastique et régler la température à 40-41 ºC.
— Verser un litre et demi d'eau chauffée à 32-35 ºC dans le
sachet intérieur et porter à 40-41 ºC.1977L0096 — FR — 01.05.2004 — 010.001 — 10
▼M3
— Transférer dans le sachet25 ml de la solut ion d'acide chlor-
hydrique à 17,5 %.
— Ajouter ensuite 100 échantillons d'1 g environ chacun (à 25-
30 ºC) prélevés sur chacun des échantillons individuels selon
le procédé visé à la lettre b).
— Ajouter enfin 6 g de pepsine. Respecter scrupuleusement
l'ordre des opérations pour éviter la décomposition de la
pepsine.
— Broyer dans le Stomacher pendant 25 mn.— Enlever le sachet en plastique du Stomacher, filtrer le liquide
de digestion à l'aide du tamis et laisser couler dans un bécher
de 3 l.
— Laver le sacheten plast ique avec 100 ml d'eau environ qui
sont ensuite utilisés pour rincer le tamis et ajoutés au filtrat
contenu dans le bécher.
Un maximum de 15 échantillons individuels peuvent être
ajoutés à un groupe complet de 100 échantillons pour êtreexaminés en même temps que ces derniers.
ii)Groupes de moins de 100 échantillons
— Garnir le Stomacher Lab-blender 3500 d'un double sachet en
plastique et régler la température à 40-41 ºC.
— Préparer un liquide de digestion en mélangeant environ un
litre et demi d'eau et 25 ml d'acide chlorhydrique à 17,5 %.
Ajouter 6 g de pepsine et mélanger le tout à une température
de 40-41 ºC. Respecter scrupuleusement l'ordre des opérations
pour éviter la décomposition de la pepsine.
— Déterminer un volume de liquide de digestion correspondant
à 15 ml par g d'échantillon (ainsi, pour 30 échantillons, il
faudra prélever 30 × 15 ml = 450 ml) etle t ransférer dans le
sachet plastique intérieur en même temps que les échantillons
de viande d'environ 1 g (à 25-30 ºC) prélevés sur chacun des
échantillons individuels selon le procédé visé à la lettre b).
— Verser de l'eau à environ 41 ºC dans le sachetext érieur
jusqu'à obtenir un volume total dans les deux sachets de un
litre et demi.
— Broyer dans le Stomacher pendant 25 mn.— Enlever le sachet en plastique du Stomacher, filtrer le liquide
de digestion à l'aide du tamis et laisser couler dans un bécher
de 3 l.
— Laver le sacheten plast ique avec 100 ml d'eau environ qui
sont ensuite utilisés pour rincer le tamis et ajoutés au filtrat
contenu dans le bécher.
2.Isolement des larves par sédimentation
— Ajouter au liquide de digestion 300-400 g de glace en paillettes
ou de glace pilée pour obtenir un volume d'environ 2 l. Agiter
jusqu'à ce que la glace soitfondue. Dans le cas de groupes plus
petits [voir sous ii)], la quantité de glace doit être réduite en
conséquence.
— Transférer le liquide de digestion refroidi dans une ampoule à
décantation de 2 l pourvu d'un vibrateur fixé par une pince
supplémentaire.
— Pour la sédimentation, laisser le liquide dans l'ampoule à décen-
tation pendant 30 mn en faisant alterner une minute de vibration
et une minute d'arrêt.
— Après 30 mn, introduire rapidement 60 ml de sédiment dans une
éprouvette graduée de 100 ml. (Après utilisation, rincer l'enton-
noir avec une solution détergente).
— Laisser reposer l'échantillon de 60 ml au moins, enlever le
liquide surnageant par aspiration jusqu'à laisser dans l'éprouvette
un volume de 15 ml qui sera examiné pour rechercher la
présence des larves.
— Pour l'aspiration, utiliser une seringue en plastique à jeter,
pourvue d'un tube en plastique.
La longueur de celui-ci devrait être telle que 15 ml de liquide
restent dans l'éprouvette graduée lorsque la collerette de la
seringue se trouve au niveau du bord du cylindre.
— Introduire les 15 ml restants dans une cuvette pour le comptage
des larves ou dans 2 boîtes de Pétri et les examiner au trichino-
scope ou au stéréomicroscope.1977L0096 — FR — 01.05.2004 — 010.001 — 11
▼M3
— Les liquides de digestion doivent être examinés dès qu'ils sont
prêts. En aucun cas, l'examen ne doit être remis au lendemain.
Si les liquides de digestion sont insuffisamment transparents ou
s'ils ne sontpas examinés dans un délai de 30 mn suivantleur
préparation, ils doivent être éclaircis comme suit: verser l'échan-
tillon final de 60 ml dans une éprouvette graduée et laisser
sédimenter pendant 10 mn. À l'issue de ce délai, enlever 45 ml
du liquide surnageant par aspiration et ajouter aux 15 ml restants
de l'eau du robinet jusqu'à obtenir un volume total de 45 ml.
Après une nouvelle période de repos de 10 mn, enlever 30 ml
du liquide surnageant par aspiration, verser les 15 ml restants
dans une boîte de Pétri ou dans une cuvette pour le comptage
des larves en vue de l'examen. Laver l'éprouvette graduée avec
10 ml d'eau du robinet; ajouter le liquide obtenu à l'échantillon
dans la boîte de Pétri ou dans la cuvette pour le comptage deslarves etexaminer.
3. En cas de résultat positif ou douteux de l'examen d'un échantillon
collectif, un échantillon de 20 g doit être prélevé sur chaque porc
conformément aux indications visées à la lettre b) ci-avant. Les
échantillons de 20 g provenant de 5 porcs doivent être réunis et
examinés selon la méthode décrite ci-avant. De cette façon, des
échantillons de 20 groupes de 5 porcs seront examinés. Si les
trichines sont décelées dans un groupe d'échantillons de 5 porcs,
des échantillons de 20 g doivent être prélevés sur chaque animal
appartenant à ce groupe et examinés suivant la méthode décrite ci-
avant.
V. MÉTHODE DE LA DIGESTION D'ÉCHANTILLONS COLLECTIFS
AVEC ASSISTANCE MÉCANIQUE / TECHNIQUE DE L'ISOLEMENT
PAR FILTRATION
a)Appareillage et réactifs
Les mêmes que ceux de la lettre a) de la méthode IV plus:
— Un entonnoir Gelman d'un litre avec support pour filtre (diamètre du
support: 45 mm).
— Des disques filtrants composés de:
un treillis rond en acier inoxydable, finesse de la maille 35 µ,
diamètre du disque: 45 mm;
deux anneaux en caoutchouc d'une épaisseur de 1 mm; diamètre
extérieur: 45 mm, diamètre intérieur: 38 mm.
Le treillis doit être placé entre les deux anneaux et fixé à l'aide
d'une colle à deux composants adaptée aux deux matériaux.
— Un Erlenmeyer de 3 l muni d'un tube latéral pour aspiration.— Une trompe à eau.
— Des sachets en plastique d'une capacité d'au moins 80 ml.
— Un soude-sac.— Rennilase, 1:150 000 unités Soxlet par g.
b)Prélèvement des échantillons
Voir lettre b) de la méthode IV.
c)Méthode
1.Procédé de digestion
i)Groupes complets d'échantillons (100 à la fois)
Voir lettre c) point 1 sous i) du titre IV.
ii) Groupes de moins de 100 échantillons
Voir lettre c) point 1 sous ii) du titre IV.
2.Isolement des larves par filtration
— Ajouter au liquide de digestion 300-400 g de glace en paillettes
ou de glace pilée pour obtenir un volume d'environ 2 l. Dans le
cas de groupes plus petits, la quantité de glace doit être réduite
en conséquence.
— Agiter le liquide de digestion jusqu'à ce que la glace soit fondue.
Laisser reposer le liquide de digestion refroidi pendant 3 mm au
moins pour que les larves puissents'enrouler.
— Monter l'entonnoir Gelman muni d'un support pour filtre, dans
lequel se trouve un disque filtrant, sur un Erlenmeyer relié à
une trompe à eau.1977L0096 — FR — 01.05.2004 — 010.001 — 12
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— Introduire le liquide de digestion dans l'entonnoir Gelman et
filtrer. Vers la fin, le passage du liquide à travers le filtre peut
être accéléré en procédant à une aspiration à l'aide de la trompe
à eau. Terminer l'aspiration juste avant que le filtre ne sèche,
c'est-à-dire lorsqu'il reste 2 à 5 ml de liquide dans l'entonnoir.
— Après filtration de tout le liquide de digestion, enlever le disque
filtrant et le placer dans un sachet en plastique de 80 ml en ajou-
tant 15 à 20 ml de solution de rennilase. Pour obtenir la solution
de rennilase, on introduit 2 g de rennilase dans 100 ml d'eau du
robinet.
— Pratiquer une double soudure du sachet en plastique et le placer
dans le Stomacher entre le sachet intérieur et le sachet extérieur.
— Broyer dans le Stomacher pendant 3 mn, par exemple, pendant
que l'appareil estut ilisé pour l'analyse d'un groupe completou
incompletd'échant illons.
— Après 3 mn, enlever du Stomacher le sachet en plastique conte-
nant le disque filtrant et la solution de rennilase et l'ouvrir à
l'aide de ciseaux. Introduire le liquide dans une cuvette pour le
comptage des larves ou une boîte de Pétri. Laver le sachet avec
5 à 10 ml d'eau qui sont ensuite introduits dans la cuvette en vue
de la trichinoscopie ou dans une boîte de Pétri pour examen au
stéréomicroscope.
— Les liquides de digestion doivent être examinés dès qu'ils sont
prêts. En aucun cas, l'examen ne doit être remis au lendemain.
NoteNe jamais utiliser des disques filtrants qui ne sont pas parfaitement
propres. Ne jamais sécher des disques filtrants s'ils ne sont pas
propres.
Pour nettoyer les disques, il faut les laisser dans une solution de
rennilase pendant la nuit. Avant d'être utilisés, ils doivent être lavés
dans le Stomacher à l'aide d'une solution de rennilase.
3. En cas de résultat positif ou douteux de l'examen d'un échantillon
collectif, un échantillon de 20 g doit être prélevé sur chaque porc
conformément aux indications visées sous b) ci-dessus. Les échantil-
lons de 20 g provenantde 5 porcs doiventêt re réunis etexaminés
selon la méthode décrite ci-dessus. De cette façon, des échantillons
de 20 groupes de 5 porcs serontexaminés. Si les t richines sontdéce-
lées dans un groupe d'échantillons de 5 porcs, des échantillons de
20 g doivent être prélevés sur chaque animal appartenant à ce groupe
et examinés suivant la méthode décrite ci-avant.
VI. MÉTHODE DE LA DIGESTION D'ÉCHANTILLONS COLLECTIFS
UTILISANT UN AGITATEUR MAGNÉTIQUE
a)Appareillage et réactifs
— Un couteau et des pinces pour le prélèvement des échantillons.
— Des plateaux divisés en 50 carrés pouvant contenir chacun des
échantillons de viande d'environ 2 g.
— Une moulinette.— Un agitateur magnétique pourvu d'une plaque chauffante à tempéra-
ture contrôlée et un barreau magnétique (recouvert de Teflon)
d'environ 5 cm.
— Des ampoules à décantation coniques d'une capacité de 2 l.
— Des supports avec anneaux et fixations.
— Des tamis, finesse de la maille 177 µ, d'un diamètre extérieur de
11 cm, pourvus d'un treillis en acier inoxydable.
— Des entonnoirs d'un diamètre intérieur d'au moins 12 cm destinés à
recevoir le tamis.
— Un bécher de 3 l.— Des éprouvettes graduées d'une capacité approximative de 50 ml ou
des tubes de centrifugation.
— Un trichinoscope pourvu d'une table horizontale ou un stéréomicro-
scope disposantd'un éclairage approprié.
— Une cuvette pour le comptage des larves (en cas d'utilisation d'un
trichinoscope).
La cuvette doit être formée de plaques acryliques d'une épaisseur de
3 mm et doit avoir les caractéristiques suivantes:
i) fond de la cuvette: 180 × 40 mm, divisé en carrés,
ii) plaques latérales: 230 × 20 mm,1977L0096 — FR — 01.05.2004 — 010.001 — 13
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iii) plaques frontales: 40 × 20 mm.
Le fond et les plaques frontales doivent être fixés entre les plaques
latérales de façon à former deux petites poignées aux deux extré-
mités. La partie supérieure du fond devrait se trouver surélevée de
7 à 9 mm par rapportà la base du cadre formé par les plaques lat é-
rales etfront ales.
Fixer les plaques à l'aide d'une colle appropriée au matériau.
— Plusieurs boîtes de Pétri (en cas d'utilisation d'un stéréomicroscope
dontle fond a ét é divisé en carrés de 10 × 10 mm à l'aide d'un
instrument pointu.
— Une feuille d'aluminium.
— Acide chlorhydrique à 25 %.
— Pepsine à la concentration: 1:10 000 NF (US National Formulary),
correspondantà 1:12 500 BP (Brit ish Pharmacopoea),correspondant à 2 000 FIP (Fédération internationale de pharmacie).
— Eau du robinetchauffée à 46-48 º C.
— Plusieurs poubelles de 10 l à employer lors de la décontamination
par un traitement tel que le formol de l'appareillage, et pour le suc
digestif restant en cas de résultat positif.
— Une balance d'une précision de 0,1 g.
b)Prélèvement des échantillons
1. Lorsque les carcasses sont entières, prélever un échantillon d'appro-
ximativement 2 g dans un des piliers du diaphragme dans la zone de
transition entre la partie musculaire et la partie tendineuse; s'il n'y a
pas de pilier du diaphragme, prélever la même quantité sur la partie
du diaphragme située près des côtes ou du sternum ou sur les
muscles masticateurs ou encore sur la musculature abdominale.
2. Pour les morceaux de viande, prélever un échantillon d'approximati-
vement 2 g dans les muscles squelettiques, contenant peu de graisse
et, dans la mesure du possible, près des os ou des tendons.
c)Méthode
1. i) Groupes complets d'échantillons ( 1 0 0àl af o i s )
— Broyer dans la moulinette 100 échantillons d'environ 1 g,
prélevés sur chaque échantillon individuel conformément aux
indications de la lettre b). Faire fonctionner l'appareil trois ou
quatre fois pendant une seconde.
— Transférer la viande broyée dans un bécher de 3 l etla
saupoudrer de 10 g de pepsine. Introduire dans le bécher 2 l
d'eau du robinetchauffée à 46-48 º C etajout er 16 ml d'acide
chlorhydrique.
— Tremper plusieurs fois le dispositif de broyage de la mouli-
nette dans le liquide de digestion se trouvant dans le bécher
pour en ôter les substances y adhérant encore.
— Placer le barreau magnétique dans le bécher et couvrir celui-
ci d'une feuille d'aluminium.
— Poser le bécher sur la plaque préchauffée de l'agitateur
magnétique et mettre en route l'agitation. Avant de
commencer le processus d'agitation, l'agitateur magnétique
doit être réglé de telle sorte qu'une température constante de
44-46 ºC puisse être maintenue pendant le fonctionnement.
Au cours du processus d'agitation, le liquide de digestion
doit tourner à une vitesse suffisamment élevée pour former
un profond tourbillon central sans provoquer d'éclaboussures.
— Agiter le liquide de digestion pendant 30 mn, arrêter l'appa-
reil; filtrer le liquide de digestion au travers du tamis placé
dans un entonnoir et recueillir le filtrat dans une ampoule à
décantation.
— Laisser le liquide de digestion dans l'ampoule à décantation
pendant30 mn.
— Après 30 mn, transférer rapidement un échantillon de 40 ml
du liquide de digestion dans l'éprouvette graduée ou le tube
de centrifugation.
— Laisser reposer l'échantillon de 40 ml pendant 10 mn et
aspirer ensuite 30 ml de liquide surnageant laissant ainsi un
volume de 10 ml.
— L'échantillon de 10 ml de sédiment restant est versé dans une
cuvette pour le comptage des larves ou dans une boîte de
Pétri.1977L0096 — FR — 01.05.2004 — 010.001 — 14
▼M3
— Rincer l'éprouvette graduée ou le tube de centrifugation avec
environ 10 ml d'eau du robinetqui serontajout és à l'échan-
tillon dans la cuvette de comptage des larves ou dans la
boîte de Pétri. Procéder ensuite à l'observation au trichino-
scope ou à l'examen au stéréomicroscope, selon le cas.
— Les liquides de digestion doivent être examinés dès qu'ils sont
prêts. En aucun cas, l'examen ne doit être remis au lende-
main.
— Si les liquides de digestion ne sont pas examinés dans un
délai de 30 mn suivant leur préparation, ils doivent être
éclaircis comme suit: verser l'échantillon final d'environ
40 ml dans une éprouvette graduée et laisser sédimenter
pendant10 mn. À l'issue de ce délai, enlever 30 ml du liquide
surnageantafin d'obt enir un volume de 10 ml. Ce volume est
porté à 40 ml avec de l'eau du robinet. Après une nouvelle
période de repos de 10 mn, enlever 30 ml du liquide surna-
geant, par aspiration, pour obtenir un volume de 10 ml à
examiner dans une boîte de Pétri ou dans une cuvette pour
le comptage des larves. Laver l'éprouvette graduée avec
10 ml d'eau du robinet et ajouter le liquide obtenu à l'échan-
tillon dans la boîte de Pétri ou dans la cuvette pour le
comptage des larves, en vue d'un examen.
Si l'examen faitapparaît re que le sédimentn'estpas clair,
l'échantillon doit être versé dans une éprouvette graduée et
son volume doit être porté à 40 ml avec de l'eau du robinet.
Ensuite la méthode précitée est appliquée.
ii)Groupes de moins de 100 échantillons
15 échantillons de 1 g chacun peuvent le cas échéant être ajoutés
à un groupe de 100 échantillons et examinés en même temps que
ces derniers selon la méthode décrite à la lettre c). Plus de 15
échantillons doivent être examinés en tant que groupe complet.
Dans le cas de groupes allantjusqu'à 50 échant illons, les liquides
de digestion peuvent être réduits à 1 l.
2. En cas de résultat positif ou douteux de l'examen d'un échantillon
collectif, un échantillon de 20 g doit être prélevé sur chaque porc
conformément aux indications visées à la lettre b) ci-avant. Les
échantillons de 20 g provenant de 5 porcs doivent être réunis et
examinés selon la méthode décrite ci-avant. De cette façon des
échantillons de 20 groupes de 5 porcs seront examinés. Si les
trichines sont décelées dans un groupe d'échantillons de 5 porcs,
des échantillons de 20 g doivent être prélevés sur chaque animal
appartenant à ce groupe et examinés suivant la méthode décrite ci-
avant.
VII. MÉTHODE DE DIGESTION AUTOMATIQUE POUR ÉCHANTILLONS
COLLECTIFS JUSQU'À 35 GRAMMES
a.Appareillage et réactifs
— un couteau ou des ciseaux pour découper les échantillons,
— des plateaux divisés en 50 carrés pouvant contenir chacun des
échantillons de viande d'environ 2 grammes,
—u n blender Trichomatic 35 avec dispositif de filtration,
— solution d'acide chlorhydrique 8,5 % ± 0,5 % en poids,
— des filtres à membrane de polycarbonate transparent d'un diamètre
de 50 millimètres et dont les pores mesurent 14 microns,
— pepsine à la concentration 1: 10 000 NF (US National Formulary),
correspondantà 1: 12 500 BP (Brit ish Pharmacopoea),correspondant à 2 000 FIP (Fédération internationale de pharmacie),
— une balance d'une précision de 0,1 gramme,
— des pinces à bouts plats,
— plusieurs lamelles porte-objets d'une largeur d'au moins 5 centimè-
tres ou plusieurs boîtes de Petri d'un diamètre d'au moins 6
centimètres dont le fond a été divisé en carrés de 10 × 10 millimè-
tres à l'aide d'un instrument pointu,
— un (stéréo)microscope à lumière transmise (grossissement: 15 à 60
fois) ou un trichinoscope à table horizontale,
— une poubelle pour récolter les liquides résiduels,— plusieurs poubelles de 10 litres à employer lors de la décontamina-
tion, par un traitement tel que le formol, de l'appareillage et pour le
suc digestif restant en cas de résultat positif.1977L0096 — FR — 01.05.2004 — 010.001 — 15
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b.Prélèvement des échantillons
1. Lorsque les carcasses sont entières, prélever un échantillon d'appro-
ximativement 2 grammes dans un des piliers du diaphragme, dans la
zone de transition entre la partie musculaire et la partie tendineuse;
s'il n'y a pas de pilier du diaphragme, prélever la même quantité sur
la partie du diaphragme située près des côtes ou du sternum ou sous
les muscles masticateurs, ou encore sur la musculature abdominale.
2. Pour les morceaux de viande, prélever un échantillon d'approximati-
vement 2 grammes dans les muscles squelettiques contenant peu de
graisse et, dans la mesure du possible, près des os ou des tendons.
c.Méthode
1.Procédé de digestion
— Placer le blender équipé du dispositif de filtration, relier le tuyau
de décharge et introduire le tube dans la poubelle.
— Lorsque le blender estallumé, le chauffage commence.
— Avant de commencer, ouvrir le bouton situé en dessous de
l'enceinte de réaction et le fermer.
— Ajouter ensuite jusqu'à 35 échantillons d'environ 1 gramme
chacun (à 25-30 ºC) prélevés sur chacun des échantillons indivi-
duels conformémentau pointb. S'assurer qu'il n'y a plus de gros
morceaux de tendons qui pourraient adhérer au filtre de la
membrane.
— Verser de l'eau dans le récipientrelié au blender (approximative-
ment400 millilit res).
— Verser environ 30 millilitres d'acide chlorhydrique (8,5 %) dans
le récipient contenant le liquide de digestion.
— Placer un filtre à membrane sous le filtre grossier dans le dispo-
sitif de filtrage.
— Ajouter enfin ►M67 grammes ◄de pepsine. Il convientde se
conformer strictement à l'ordre d'addition pour éviter la décom-
position de la pepsine.
— Fermer le couvercle de l'enceinte de réaction et du récipient
contenant le liquide de digestion.
— Sélectionner la période de digestion: courte période de digestion
(5 minutes) pour les porcs à l'âge normal de l'abattage et durée de
digestion plus longue (8 minutés) pour les autres échantillons.
— la mise en route est automatique lorsqu'on appuie sur le bouton
ad hoc dublender ; la digestion, suivie de la filtration, s'enclen-
chera automatiquement.
— Après 10 à 13 minutes, le processus est terminé et s'arrête auto-
matiquement.
— Ouvrir le couvercle de l'enceinte de réaction s'il est établi que
l'enceinte est vide. S'il y a de la mousse ou des restes du liquide
de digestion dans le récipient, répéter le mode opératoire confor-
mémentau pointc sous 4.
2.Isolement des larves
— Démonter le support du filtre et transférer le filtre à membrane
sur une lamelle porte-objet ou dans une boîte de Petri.
— Examiner les filtres à membrane à l'aide d'un microscope ou d'un
trichinoscope.
3.Nettoyage de l'équipement
— En cas de résultat positif, remplir d'eau bouillante l'enceinte de
réaction du blender jusqu'aux deux tiers. Verser de l'eau de la
distribution dans le récipient de connection jusqu'à ce que le
niveau du capteur inférieur soit recouvert. Mettre en oeuvre le
programme de nettoyage automatique. Décontaminer le porte-
filtre ainsi que le reste de l'équipement, par exemple par un trai-
tement au formol.
— À la fin de la journée de travail, remplir d'eau le récipient conte-
nantle liquide du blender et mettre en route un programme
normal.
4.Utilisation de filtres à membrane
Aucun filtre à membrane en polycarbonate ne peut être utilisé plus
de cinq fois. Retourner le filtre après chaque usage. En outre, vérifier1977L0096 — FR — 01.05.2004 — 010.001 — 16
▼M6
▼M6
le filtre après chaque usage pour déterminer s'il a subi un dommage,
ce qui le rendrait impropre à toute autre utilisation.
►M65.◄Méthode à utiliser lorsque la digestion est incomplète et
que la filtration ne peut donc être mise en œuvre
Lorsque le processus automatique dans le blender estmis en œuvre
conformémentau pointc sous 1, ouvrir le couvercle de l'enceint e de
réaction et vérifier s'il y reste de la mousse ou du liquide. Si tel est le
cas, appliquer le mode opératoire suivant:
— Fermer la valve située en dessous de l'enceinte de réaction.
— Démonter le porte-filtre et transférer le filtre à membrane sur une
lamelle porte-objet ou dans une boîte de Petri.
— Placer un nouveau filtre à membrane sur un porte-filtre et monter
le porte-filtre.
— Verser de l'eau dans le récipientdu blender contenant le liquide
de digestion jusqu'à ce que le niveau du capteur inférieur soit
recouvert.
— Mettre en œuvre le programme de nettoyage automatique.— Une fois que le programme de nettoyage est terminé, ouvrir le
couvercle de l'enceinte de réaction et vérifier s'il reste du liquide.
— Si la chambre est vide, démonter le porte-filtre et, à l'aide d'une
pince, transférer le filtre à membrane sur une lamelle porte-objet
ou dans une boîte de Petri.
— Les deux filtres à membrane sont examinés conformément au
point c sous 2. Si les filtres ne peuvent être examinés, répéter
tout le processus de digestion pendant un temps allongé confor-
mémentau pointc sous 1.
►
M66.◄En cas de résultat positif ou incertain donné par un échan-
tillon collectif, il convient de prélever un nouvel échantillon de 20
grammes, sur chaque porc, conformémentau pointb ci-dessus. Ces
échantillons sont analysés individuellement conformément à la
méthode susmentionnée.1977L0096 — FR — 01.05.2004 — 010.001 — 17
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ANNEXE II
CHAPITRE PREMIER
CONDITIONS AUXQUELLES DOIVENT RÉPONDRE LES LABORA-
TOIRES DE DÉPISTAGE DES TRICHINES
1. Les laboratoires de dépistage des trichines doivent se trouver à proximité
immédiate des locaux d'abbatage des porcs et disposer au moins:
a) d'un local suffisammentéquipé, fermantà clé, pour la confect ion des
préparations; ses murs seront lisses, enduits jusqu'à une hauteur de deux
mètres d'un revêtement ou d'une peinture lavable et claire.
Un local de préparation sera prévu pour chaque méthode d'examen
utilisée;
b) d'un local d'examen suffisammentéquipé, fermantà clé, occult able dans
le cas d'utilisation d'un trichinoscope;
c) d'équipements d'aération suffisants et, si nécessaire, d'une installation de
climatisation permettant d'obtenir une température ambiante ne dépassant
pas + 25 ºC;
d) d'un éclairage naturel ou artificiel suffisant, ne modifiant pas les
couleurs; éviter une lumière solaire intense;
e) des équipements suffisants pour le nettoyage et la désinfection des mains
dans le local de préparation;
►M3f)◄éventuellement d'une installation frigorifique pour la conserva-
tion des échantillons de viande;
g) d'une salle d'eau pour le nettoyage et la désinfection du matériel
d'examen (par exemple récipients à échantillons, compresseurs, couteaux
etciseaux) pourvu:
— d'un revêtement de sol imperméable et imputrescible, facile à nettoyer
età désinfect er,
— de murs lisses enduits jusqu'à une hauteur de 2 m au minimum d'un
revêtement ou d'une peinture lavable et claire.
Cette disposition n'est pas obligatoire en cas d'application des méthodes
visées aux titres II, III, IV, V, VI de l'annexe I à condition que les labo-
ratoires disposent d'un grand évier convenablement raccordé aux
canalisations;
►M3h)◄de vestiaires, lavabos et locaux de séjour ainsi que de cabinets
d'aisance équipés de chasses d'eau;
►M3i)◄de lavabos alimentés en eau potable courante, froide et chaude,
pourvus de produits de nettoyage et de désinfection et de serviettes à
jeter après usage;
►M3j)◄de récipients étanches, résistant à la corrosion, pourvus de
couvercles fermant hermétiquement, conçus de manière à empêcher tout
prélèvement non autorisé du contenu, destinés à recueillir les restes
d'échantillons;
►M3k)◄d'installations fournissant une quantité suffisante d'eau potable,
froide etchaude;
►M3l)◄d'un dispositif d'évacuation des eaux résiduaires conforme aux
prescriptions régissant l'agrément des abattoirs;
►M3m)◄de dispositifs appropriés de protection contre les animaux
indésirables tels qu'insectes, rongeurs, etc.1977L0096 — FR — 01.05.2004 — 010.001 — 18
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CHAPITRE II
PRESCRIPTIONSAPPLICABLESAUPERSONNEL,AUXLOCAUX,AU
MATÉRIEL ET INSTRUMENTS DES LABORATOIRES DE DÉPIS-
TAGE DES TRICHINES
2. Le plus parfait état de propreté du personnel de laboratoire, des locaux, du
matériel et des instruments est toujours exigé.
a) Le personnel doit notamment porter des vêtements de travail propres et se
laver les mains plusieurs fois au cours d'une même journée de travail ainsi
qu'à chaque reprise du travail;
b) aucun animal ne doit pénétrer dans les laboratoires de dépistage des
trichines;
c) le matériel et les instruments utilisés pour le travail doivent être main-
tenus en bon état d'entretien et de propreté; ils doivent être
soigneusement nettoyés et désinfectés plusieurs fois au cours d'une
même journée de travail ainsi qu'à la fin des opérations de la journée.
3. L'utilisation d'eau potable est exigée pour tous les usages.
4. En ce qui concerne l'état de santé du personnel affecté au prélèvement des
échantillons de viande en vue de l'examen, sont applicables les dispositions
prévues à l'annexe B chapitre IV points 11 et 12 de la directive 72/462/CEE.
5. Les échantillons de viande nécessaires pour l'examen doivent être prélevés
immédiatement après l'abattage et examinés sans délai dans le laboratoire de
dépistage des trichines de l'abattoir.
Il est interdit de procéder à cet examen en dehors de l'abattoir où les animaux
ont été abattus.
6. Pour prévenir la fatigue et ses conséquences, de brèves interruptions de
travail doivent être accordées au personnel de contrôle.
CHAPITRE III
PRESCRIPTIONSCONCERNANTLES TRICHINOSCOPES
La conception et le type des trichinoscopes doivent satisfaire aux critères mini-
maux suivants:
1. Facilité d'emploi
2. Éclairage puissant
— il faut que les résultats du contrôle soient certains même si les locaux ne
sont pas complètement occultes,
— la source lumineuse sera une lampe de projection de 100 W (12 V).
3. Grossissementsuffisant
— grossissementde t ravail normal: 50 fois,
— grossissement 80 à 100 fois pour une identification certaine des objets
pas clairement identifiables avec le grossissement de travail normal.
4. Pouvoir séparateur
— chaque grossissementdoitdonner une image claire, précise, de couleur
nette.
5. Dispositif de commutation
— tout changement de grossissement doit s'accompagner d'un ajustement
automatique de la luminosité de l'image.
6. Augmentation du contraste
— le condenseur doit être équipé d'un diaphragme à iris permettant de
renforcer les contrastes pour l'examen approfondi des cas délicats,
— le diaphragme à iris doitêt re facile à régler (par exemple levier de
commande fixé sur la table du trichinoscope).
7. Facilité de mise au point
— mise au pointrapide par bague de réglage,
— mise au pointfine par levier de commande.
8. Réglage de la tension
— permettant d'obtenir la luminosité voulue dans la situation donnée.
9. Déplacementdu compresseur en sens unique1977L0096 — FR — 01.05.2004 — 010.001 — 19
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— un système de blocage automatique doit assurer le déplacement du
compresseur en un seul sens pour empêcher tout décalage intempestif.
10. Vues dégagées vers la surface de projection.
11. Surface de projection
— diamètre de 54 cm au minimum,
— puissance de réflexion élevée,— durable,— démontable,— facile à nettoyer.1977L0096 — FR — 01.05.2004 — 010.001 — 20
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ANNEXE III
MARQUAGEDESVIANDESAYANTSUBIL'EXAMENDEDÉPISTAGE
DES TRICHINES
1. Le marquage des viandes doit être effectué sous la responsabilité du vétéri-
naire officiel. À cet effet, celui-ci détient et conserve:
— les instruments destinés au marquage; il ne peut les remettre au personnel
auxiliaire qu'au momentmême du marquage etpour le laps de t emps
nécessaire à celui-ci,
— les estampilles-plaquettes, dont il est fait mention au no5. Ces estam-
pilles-plaquettes sont remises au personnel auxiliaire au moment même
où elles doivent être utilisées et en nombre correspondant aux besoins.
2. La marque doit être un cachet de forme ronde ayant un diamètre de 2,5 cm.
Sur le cachet doivent figurer les indications suivantes, en caractères parfaite-
mentlisibles:
— vers le centre, la lettre T en majuscule dont les barres ont 1 cm de
longueur et0,2 cm de largeur,
— sous la lettre T précitée, un des sigles CEE, EEG, EWG, EØF, EOK,
EEC, ETY, EHS, EMÜ, EEK, EEB, EGK, KEE ou EGS. Les lettres
doiventavoir une haut eur de 0,4 cm.
3. Les carcasses sontmarquées à l'encre ou au feu, à la face int erne des cuisses,
conformémentau paragraphe 2.
4. Les têtes sont marquées à l'encre ou au feu, à l'aide d'une marque répondant
aux prescriptions du paragraphe 2.
Les morceaux, à l'exception de ceux exclus du marquage de salubrité en
vertu du paragraphe 43 du chapitre X annexe B de la directive 72/462/CEE,
obtenus dans les ateliers de découpe à partir de carcasses régulièrement
marquées, doivent, dans la mesure où ils ne portent pas d'estampille, être
marqués et cela avant l'apposition du marquage de salubrité, conformément
au paragraphe 2.
L'étiquette prévue au deuxième alinéa du paragraphe 43 précité doit répondre
aux conditions du paragraphe 6 ci-dessous.
5. Le marquage peut aussi être effectué à l'aide d'une estampille-plaquette d'une
forme ronde. Cette estampille-plaquette à fixer sur chaque morceau ou sur
chaque carcasse doit être telle que son réemploi doit être rendu impossible;
elle doit être en matériaux résistant, répondant à toutes les exigences de
l'hygiène.
Sur l'estampille-plaquette doivent figurer les indications suivantes en carac-
tères parfaitement lisibles:
— vers le centre, la lettre T en majuscule,
— sous la lettre T précitée, un des sigles CEE, EEG, EWG, EØF, EOK,
EEC, ETY, EHS, EMÜ, EEK, EEB, EGK, KEE ou EGS. Les lettres
doiventavoir une haut eur de 0,2 cm.
6. Sur l'étiquette prévue au paragraphe 44 chapitre X annexe B de la directive
mentionnée au point 4 doit figurer, en plus de la marque de salubrité, une
marque bien lisible qui estla réplique de la marque prévue au paragraphe 2.1977L0096 — FR — 01.05.2004 — 010.001 — 21
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ANNEXE IV
TRAITEMENT PAR LE FROID
I.Méthode 1
1. Les viandes importées à l'état congelé sont à conserver dans cet état.
2. L'installation technique et l'alimentation en énergie de la chambre frigo-
rifique doivent être telles que la température visée au point 6 puisse être
atteinte dans les plus brefs délais et maintenue dans toutes les parties de
la chambre frigorifique ainsi que de la viande.
3. Tous les emballages isolants doivent être enlevés avant la congélation,
sauf en ce qui concerne la viande qui, lors de l'introduction dans la
chambre frigorifique, a déjà atteint, dans toutes ses parties, la tempéra-
ture visée au point 6.
4. Les lots doivent être conservés séparément dans la chambre frigorifique
etgardés sous clé.
5. Pour chaque lot, le jour et l'heure de l'introduction dans la chambre
frigorifique doivent être notés.
6. La température dans la chambre frigorifique doit atteindre − 25 ºC au
moins; elle doit être vérifiée par des appareils de mesure thermoélec-
trique étalonnés et constamment enregistrée. Elle ne doit pas être
mesurée à même le courantd'air froid. Les appareils de mesure doivent
être gardés sous clé. Les graphiques doivent porter l'indication des
numéros correspondants du registre de l'inspection des viandes à l'impor-
tation ainsi que du jour et de l'heure du début et de la fin de la
congélation et être conservés un an.
7. Les viandes dontle diamèt re ou l'épaisseur estégal ou inférieur à 25 cm
doivent être congelées, sans interruption, pendant 240 heures au moins,
celles dont le diamètre ou l'épaisseur est compris entre 25 cm et 50 cm
pendant480 heures au moins. Les viandes dontle diamèt re ou l'épaisseur
estsupérieur à ces dimensions ne doiventpas êt re soumises à ce procédé
de congélation. La durée de congélation se calcule à partir du moment
où la température visée au point 6 est atteinte dans la chambre de congé-
lation.
1. Les viandes importées à l'état congelé sont à conserver dans cet état.
2. L'installation technique et l'alimentation en énergie de la chambre frigo-
rifique doivent être telles que la température visée au point 6 puisse être
atteinte dans les plus brefs délais et maintenue dans toutes les parties de
la chambre frigorifique ainsi que de la viande.
3. Tous les emballages isolants doivent être enlevés avant la congélation,
sauf en ce qui concerne la viande qui, lors de l'introduction dans la
chambre frigorifique, a déjà atteint, dans toutes ses parties, la tempéra-
ture visée au point 6.
4. Les lots doivent être conservés séparément dans la chambre frigorifique
etgardés sous clé.
5. Pour chaque lot, le jour et l'heure de l'introduction dans la chambre
frigorifique doivent être notés.
6. La température dans la chambre frigorifique doit atteindre − 25 ºC au
moins; elle doit être vérifiée par des appareils de mesure thermoélec-
trique étalonnés et constamment enregistrée. Elle ne doit pas être
mesurée à même le courantd'air froid. Les appareils de mesure doivent
être gardés sous clé. Les graphiques doivent porter l'indication des
numéros correspondants du registre de l'inspection des viandes à l'impor-
tation ainsi que du jour et de l'heure du début et de la fin de la
congélation et être conservés un an.
7. Les viandes dontle diamèt re ou l'épaisseur estégal ou inférieur à 25 cm
doivent être congelées, sans interruption, pendant 240 heures au moins,
celles dont le diamètre ou l'épaisseur est compris entre 25 cm et 50 cm
pendant480 heures au moins. Les viandes dontle diamèt re ou l'épaisseur
estsupérieur à ces dimensions ne doiventpas êt re soumises à ce procédé
de congélation. La durée de congélation se calcule à partir du moment
où la température visée au point 6 est atteinte dans la chambre de congé-
lation.1977L0096 — FR — 01.05.2004 — 010.001 — 22
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II.Méthode 2
Les dispositions générales des points 1 à 5 de la méthode 1 doivent être
satisfaites et les combinaisons de temps et de température suivantes
appliquées.
1. Les morceaux de viande d'un diamètre ou d'une épaisseur de 15 cm au
maximum doivent être congelés selon l'une des combinaisons de temps
et de température suivantes:
— 20 jours à − 15 ºC,
— 10 jours à − 23 ºC,— 6 jours à − 29 ºC.
2. Les morceaux de viande d'un diamètre ou d'une épaisseur de 15 à 50 cm
doivent être congelés selon l'une des combinaisons de temps et de tempé-
rature suivantes:
— 30 jours à − 15 ºC,
— 20 jours à − 25 ºC,— 12 jours à − 29 ºC.
La température dans la chambre frigorifique ne doit pas être supérieure
au niveau de la température d'inactivation choisie. Elle doit être mesuréeà l'aide d'appareils thermoélectriques étalonnés, et constamment enregis-
trée. Elle ne doit pas être mesurée à même le courant d'air froid. Les
appareils de mesure doiventêt re gardés sous clé. Les graphiques doivent
porter l'indication des numéros correspondants du registre de l'inspection
des viandes à l'importation ainsi que du jour et de l'heure du début et de
la fin de la congélation et être conservés un an.
III.Méthode 3
Contrôle de la température à cœur des morceaux de viande.
1. Appliquer les combinaisons de temps et de température suivantes si la
température à cœur des morceaux de viande est vérifiée et que les condi-
tions des points 2 à 6 sont remplies:
— 106 heures à − 18 ºC,
— 82 heures à − 21 ºC,— 63 heures à − 23,5 ºC,— 48 heures à − 26 ºC,— 35 heures à − 29 ºC,— 22 heures à − 32 ºC,— 8 heures à − 35 ºC,— ½ heure à − 37 ºC.
2. Les viandes entrées à l'état congelé doivent être conservées dans cet état.
3. Les lots doivent être conservés séparément et sous clé dans la chambre
frigorifique.
4. Enregistrer la date et l'heure d'arrivée de chaque lot dans la chambre
frigorifique.
5. L'équipementt echnique etla source d'énergie de la chambre frigorifique
doivent permettre de garantir que la température visée au point 1 est
atteinte très rapidement et maintenue en tout point des morceaux de
viande.
6. La température doit être mesurée à l'aide d'appareils thermoélectriques
étalonnés, et constamment enregistrée. La sonde du thermomètre doit
être placée au centre d'un morceau de viande calibré d'une dimension
non inférieure au morceau de viande le plus épais à congeler. Ce
morceau de viande calibré doitêt re placé à l'endroitle moins favorable
de la chambre frigorifique, ni à proximité immédiate de l'équipement de
refroidissement ni à même le courant d'air froid. Les instruments doivent
être conservés sous clé. Les graphiques doivent porter l'indication des
numéros correspondants du registre de l'inspection des viandes à l'impor-
tation ainsi que du jour et de l'heure du début et de la fin de la
congélation et être conservés un an.1977L0096 — FR — 01.05.2004 — 010.001 — 23
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ANNEXE V
INSPECTIONET CONGÉLATION DES VIANDESCHEVALINES
1.Inspection
L'inspection des viandes chevalines doit être faite conformément à une
méthode de digestion mentionnée à l'annexe I modifiée comme suit:
— des spécimens d'au moins 10 g doiventêt re prélevés dans le muscle de la
langue ou de la joue. En l'absence de muscle de la langue ou de la joue,
prélever un spécimen de la même taille sur le pilier du diaphragme au
point de transition avec la partie tendineuse. Le muscle doit être exempt
de tissu conjonctif et de graisse,
— un échantillon de 5 g est digéré en vue de l'inspection si la méthode de
digestion artificielle d'échantillons collectifs est appliquée conformément
à l'annexe I points III à VII. Pour chaque méthode de digestion, le poids
total de muscle examiné ne doit pas dépasser 100 g pour les méthodes
visées aux points III, IV, V et VI de l'annexe I ou 35 g pour la méthode
visée au pointVII de l'annexe I,
— en cas de résultat positif, prélever un autre spécimen de 10 g en vue d'une
analyse ultérieure séparée.
2.Congélation des viandes chevalines
Pour que les trichines soient tuées à la congélation, les viandes chevalines
doivent subir un traitement frigorifique conformément à l'une des méthodes
décrites à l'annexe IV.1977L0096 — FR — 01.05.2004 — 010.001 — 24