2008R0273 — FR — 01.07.2013 — 001.001

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RÈGLEMENT (CE) No 273/2008 DE LA COMMISSION

du 5 mars 2008

portant modalités d’application du règlement (CE) no 1255/1999 du Conseil en ce qui concerne les méthodes à utiliser pour l’analyse et l’évaluation de la qualité du lait et des produits laitiers







LA COMMISSION DES COMMUNAUTÉS EUROPÉENNES, vu le traité instituant la Communauté européenne, vu le règlement (CE) no 1255/1999 du Conseil du 17 mai 1999 portant organisation commune des marchés dans le secteur du lait et des produits laitiers ( 1 ), et notamment ses articles 10 et 15, son article 26, paragraphe 3, son article 29, paragraphe 1, et son article 31, paragraphe 4, considérant ce qui suit: (1) Le règlement (CE) no 213/2001 de la Commission ( 2 ) fixe les modalités d’application du règlement (CE) no 1255/1999 du Conseil en ce qui concerne les méthodes à utiliser pour l’analyse et l’évaluation de la qualité du lait et des produits laitiers. À la lumière des progrès techniques réalisés dans le domaine des méthodes d’analyse, il convient d’effectuer d’autres modifications substantielles. Par souci de clarté et d’efficacité, et compte tenu du nombre et du caractère technique des modifications nécessaires, il est opportun d’abroger le règlement (CE) no 213/2001 et de le remplacer par un nouveau règlement. (2) Il importe de vérifier les caractéristiques de composition et de qualité du lait et des produits laitiers établies dans le cadre des régimes prévus par le règlement (CE) no 1255/1999 pour garantir qu’elles sont strictement conformes aux exigences fixées. (3) Les méthodes de référence à appliquer pour ces vérifications sont souvent des méthodes publiées par des organismes internationaux tels que le Comité européen de normalisation (CEN), la Fédération internationale de laiterie (FIL), l’Organisation internationale de normalisation (ISO) et l’Association scientifique garante de l’excellence des méthodes analytiques (AOAC International) et régulièrement mises à jour par ces organismes. Dans certains cas, une méthode de référence communautaire est établie, alors que dans d’autres, aucune méthode de référence n’est spécifiée dans la réglementation communautaire. En vue de garantir l’uniformité d’application des méthodes de référence, il convient d’établir une liste des méthodes de référence et de donner à la Commission les moyens d’adapter la liste si nécessaire. (4) Il n’y a pas lieu d’exclure l’application de méthodes de routine, raison pour laquelle il importe de spécifier les conditions minimales de leur utilisation. (5) Afin d’assurer une pratique uniforme pour l’évaluation des résultats des analyses, il convient également d’établir des procédures communes. Il en va de même pour l’évaluation sensorielle des produits concernés et pour le réexamen des résultats qui ont fait l’objet d’une contestation. (6) Pour certaines analyses, il n’existe pas actuellement de méthodes de référence internationalement acceptées qui ont été validées; de ce fait, aucune information n’est disponible quant aux variations des résultats d’analyse d’un laboratoire à l’autre; il est donc nécessaire de définir au niveau communautaire des méthodes qui ont été validées conformément aux règles établies internationalement et qu’il convient d’appliquer en tant que méthodes de référence. (7) Le règlement (CE) no 1898/2005 de la Commission ( 3 ) fixe les modalités d’application du règlement (CE) no 1255/1999 du Conseil en ce qui concerne les mesures d’écoulement sur le marché communautaire pour la crème, le beurre et le beurre concentré, et prévoit des outils de traçage de la crème, du beurre et du beurre concentré dans certaines circonstances, afin de veiller à une utilisation finale correcte de ces produits. Le traçage est indispensable au bon fonctionnement de ce programme. Pour garantir l’égalité de traitement entre les opérateurs participants, il convient de fixer des méthodes communes pour déterminer certains de ces traceurs. (8) Une aide au stockage privé des fromages à base de lait de brebis peut être octroyée en vertu de l’article 9 du règlement (CE) no 1255/1999. Une restitution spéciale peut être octroyée pour les mêmes produits au titre de l’article 31 dudit règlement. Il est prévu d’importer dans la Communauté à partir de certains pays tiers dans des conditions préférentielles des fromages à base de lait de brebis, de lait de chèvre et de lait de bufflonne ou de mélanges de lait de brebis, de chèvre et de bufflonne. En raison des dispositions susvisées, il est nécessaire de vérifier par des contrôles appropriés que du lait de vache n’a pas été incorporé dans les produits concernés. Par conséquent, il convient d’établir une méthode de référence communautaire de détection du lait de vache, sans préjudice de l’application de méthodes de routine, sous réserve que celles-ci soient conformes à certains critères. (9) Le règlement (CEE) no 2921/90 de la Commission du 10 octobre 1990 relatif à l’octroi des aides au lait écrémé en vue de la fabrication de caséine et de caséinates ( 4 ) prévoit que l’absence de coliformes doit être recherchée. Les méthodes de référence internationalement reconnues pour la recherche de coliformes dans le lait et les produits laitiers relèvent de la norme ISO 4831. Une méthode de référence communautaire pour la recherche des coliformes fondée sur ladite norme a donc été établie. (10) Le règlement (CEE) no 2658/87 du Conseil du 23 juillet 1987 relatif à la nomenclature tarifaire et statistique et au tarif douanier commun ( 5 ) différencie les taux des droits de douane pour les aliments composés pour animaux relevant de la position tarifaire 2309 en fonction de leur teneur en produits laitiers. Afin d’assurer une application uniforme des dispositions en question, il convient de déterminer pour l’analyse de la teneur en lactose une méthode généralement reconnue et obligatoire pour tous les États membres. (11) Le règlement (CE) no 1255/1999 prévoit que certaines exigences qualitatives doivent être respectées en ce qui concerne le beurre et le lait écrémé en poudre destinés à l’intervention ou, dans le cas du lait écrémé en poudre, destiné à l’alimentation des animaux. Il convient par conséquent de fixer des méthodes de référence pour la vérification du respect desdites exigences. (12) Certaines méthodes sont introduites pour la première fois dans le présent règlement. Il importe de prévoir à compter de la date d’entrée en vigueur du présent règlement un délai suffisant pour permettre aux laboratoires d’assurer une introduction et une utilisation correctes de ces méthodes. À chaque fois qu’une méthode de référence visée à l’annexe I est révisée puis publiée par l’organisme de normalisation compétent, il convient d’accorder aux laboratoires une période de six mois pour mettre à jour leurs procédures d’analyse conformément à la nouvelle norme. (13) Les mesures prévues au présent règlement sont conformes à l’avis du comité de gestion du lait et des produits laitiers, considérant ce qui suit: A ARRÊTÉ LE PRÉSENT RÈGLEMENT:







CHAPITRE I

DISPOSITIONS GÉNÉRALES

Article premier

Objet et champ d’application

1. Le présent règlement fixe certaines méthodes de référence pour l’analyse chimique, physique et microbiologique et pour l’évaluation sensorielle du lait et des produits laitiers, à utiliser dans le cadre des régimes prévus par l’organisation commune des marchés dans le secteur du lait et des produits laitiers, établie par le règlement (CE) no 1255/1999, ainsi que les règles relatives à l’application de ces méthodes.

2. La liste des méthodes de référence applicables aux analyses visées au paragraphe 1 figure à l’annexe I du présent règlement.

3. La Commission met à jour ladite liste conformément à la procédure prévue à l’article 42 du règlement (CE) no 1255/1999.

Article 2

Méthodes de routine

Des méthodes de routine peuvent être utilisées pour les analyses prévues par la réglementation communautaire à condition qu’elles soient correctement calibrées et régulièrement contrôlées par rapport à la méthode de référence. Il convient de tenir compte du biais constant, de la répétabilité et de la reproductibilité pour comparer les résultats.

En cas de litige, les résultats obtenus par la méthode de référence sont déterminants.

Les États membres informent la Commission du recours aux méthodes de routine dans le cadre de l’analyse visée à l’article 1er.







CHAPITRE II

MÉTHODES D’ANALYSE

Article 3

Évaluation de la conformité d’un lot avec la limite réglementaire

Sauf en ce qui concerne l’analyse des traceurs, l’annexe II du présent règlement s’applique pour définir la conformité avec les exigences légales en matière de composition.

Article 4

Évaluation sensorielle

1. En ce qui concerne le lait et les produits laitiers autres que le beurre destiné au stockage public, les États membres utilisent comme méthode de référence pour l’évaluation sensorielle soit la norme FIL 99C1997, soit d’autres méthodes comparables qu’ils communiquent à la Commission.

Les procédures de l’annexe III sont appliquées pour la vérification du travail des évaluateurs et la fiabilité des résultats dans les analyses sensorielles.

2. Pour le beurre destiné au stockage public, les procédures de l’annexe III sont appliquées pour la vérification du travail des évaluateurs et la fiabilité des résultats dans les analyses sensorielles.

La méthode décrite à l’annexe IV est appliquée comme méthode de référence pour l’évaluation sensorielle.

Article 5

Traceurs

1. La méthode d’analyse décrite à l’annexe V s’applique comme méthode de référence pour la détermination de la teneur du beurre, du butteroil et de la crème en triglycérides de l’acide énanthique.

2. La méthode d’analyse décrite à l’annexe VI s’applique comme méthode de référence pour la détermination de la vanilline dans le beurre concentré, dans le beurre ou dans la crème.

3. La méthode d’analyse décrite à l’annexe VII s’applique comme méthode de référence pour la détermination de la teneur du beurre concentré ou du beurre en ester éthylique de l’acide β-apo-8’-caroténique.

4. La méthode d’analyse décrite à l’annexe VIII s’applique comme méthode de référence pour la détermination de la teneur du beurre et du beurre concentré en β-sitostérol ou en stigmastérol.

5. Le beurre concentré, le beurre ou la crème sont réputés avoir été tracés conformément à la réglementation communautaire adoptée en la matière si les résultats obtenus correspondent aux spécifications des points 10 et 11 de l’annexe V et du point 8 des annexes VI, VII et VIII.

Article 6

Détection de la caséine de lait de vache

1. La méthode d’analyse de référence figurant à l’annexe IX est appliquée pour garantir l’absence de caséine de lait de vache dans le fromage produit exclusivement à partir du lait de brebis, du lait de chèvre ou du lait de bufflonne ou à partir d’un mélange de lait de brebis, de chèvre et de bufflonne.

La caséine de lait de vache est considérée comme présente si la teneur de l’échantillon analysé en caséine de lait de vache est supérieure ou égale à la teneur de l’échantillon de référence contenant 1 % de lait de vache, prévu à l’annexe IX.

2. Les méthodes de routine pour la détection de la caséine de lait de vache dans les fromages visés au paragraphe 1 peuvent être utilisées dans les conditions suivantes:

a) la limite de détection maximale est de 0,5 %;

b) il n’y a pas de résultats faux positifs; et

c) la caséine de lait de vache est détectable avec la sensibilité requise, même après de longues périodes de maturation, comme cela peut se produire dans les conditions habituelles de l’exploitation commerciale.

Les méthodes de référence de l’annexe IX s’appliquent si une seule des exigences susmentionnées n’est pas satisfaite.

Article 7

Détection des coliformes

La recherche de coliformes dans le beurre, le lait écrémé en poudre, la caséine et les caséinates est effectuée conformément à la méthode de référence décrite à l’annexe X.

Article 8

Détermination de la teneur en lactose

La teneur en lactose des produits relevant du code NC 2309 est déterminée conformément à la méthode de référence décrite à l’annexe XI.

Article 9

Détection du lactosérum présure

1. La recherche de lactosérum présure dans le lait écrémé en poudre destiné au stockage public est effectuée conformément à la méthode de référence décrite à l’annexe XII.

2. La recherche de lactosérum présure dans le lait écrémé en poudre et les mélanges destinés à l’alimentation animale est effectuée conformément à la méthode de référence décrite en annexe XII. C’est l’annexe XIII qui doit être appliquée en cas de détection de lactosérum présure.

Article 10

Détection du babeurre

La recherche de babeurre dans le lait écrémé en poudre est effectuée conformément à la méthode de référence décrite à l’annexe XIV.

Article 11

Détection des résidus antimicrobiotiques

La recherche de résidus antimicrobiotiques dans le lait écrémé en poudre est effectuée conformément à la méthode de référence décrite à l’annexe XV.

Article 12

Détermination de la teneur en lait écrémé en poudre

La teneur en lait écrémé en poudre des aliments composés pour animaux est déterminée conformément à la méthode de référence décrite à l’annexe XVI.

Article 13

Détection de l’amidon

La recherche de l’amidon dans le lait écrémé en poudre, dans le lait en poudre dénaturé et dans les aliments composés pour animaux est effectuée conformément à la méthode de référence décrite à l’annexe XVII.

Article 14

Détermination de la teneur en humidité de la crème déshydratée

La teneur en humidité de la crème déshydratée est déterminée conformément à la méthode de référence décrite à l’annexe XVIII.

Article 15

Détermination de la teneur en humidité du babeurre acide en poudre

La teneur en humidité du babeurre acide en poudre destiné aux aliments pour animaux est déterminée conformément à la méthode de référence décrite à l’annexe XIX.

Article 16

Détermination de la pureté des matières grasses lactiques

La pureté des matières grasses lactiques est déterminée conformément à la méthode de référence décrite à l’annexe XX.







CHAPITRE III

DISPOSITIONS GÉNÉRALES ET FINALES

Article 17

Assurance qualité

Les analyses sont effectuées dans des laboratoires qui disposent d’un système d’assurance qualité appliqué aux analyses et incluant des procédures de contrôle interne de la qualité. Les laboratoires non agréés se prêtent au moins une fois par an à des essais d’aptitude dont les résultats ne s’écartent pas de plus de 2σR (écart-type de reproductibilité de la méthode de référence) de la valeur de consensus. Une description détaillée des systèmes appliqués doit être disponible dans le laboratoire.

Sont dispensés d’essais d’aptitude les laboratoires agréés conformément aux normes visées à l’article 12 du règlement (CE) no 882/2004 du Parlement européen et du Conseil du 29 avril 2004 relatif aux contrôles officiels effectués pour s’assurer de la conformité avec la législation sur les aliments pour animaux et les denrées alimentaires et avec les dispositions relatives à la santé animale et au bien-être des animaux ( 6 ).

Article 18

Échantillonnage et contestation des résultats d’analyses

1. L’échantillonnage est effectué conformément à la réglementation applicable au produit concerné. Si l’échantillonnage ne fait l’objet d’aucune disposition particulière, il convient d’appliquer les dispositions de la norme ISO 707 IDF 50, Lait et produits laitiers — Lignes directrices pour l’échantillonnage.

2. Les rapports de laboratoire sur les résultats de l’analyse contiennent des éléments suffisants pour permettre une évaluation des résultats conformément à l’annexe II et à l’annexe XXI.

3. Des échantillons dédoublés sont prélevés aux fins des analyses prévues par la réglementation communautaire.

4. La procédure définie à l’annexe XXI s’applique dans les cas où les résultats d’une analyse ne sont pas acceptés par l’opérateur.

5. Si, dans les cinq jours ouvrables qui suivent la prise d’échantillons, le fabricant apporte la preuve que la procédure d’échantillonnage n’a pas été effectuée correctement, l’échantillonnage est, si possible, répété. Dans le cas où un nouvel échantillonnage n’est pas possible, le lot est accepté.

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Article 19 bis

Notifications

Les communications visées à l’article 2, à l’article 4, paragraphe 1, et à l’annexe III C sont effectuées conformément au règlement (CE) no 792/2009 de la Commission ( 7 ).

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Article 20

Abrogations

Le règlement (CE) no 213/2001 est abrogé.

Les références au règlement abrogé s’entendent comme faites au présent règlement et sont à lire selon le tableau de correspondance figurant à l’annexe XXII.

Article 21

Entrée en vigueur

Le présent règlement entre en vigueur le troisième jour suivant celui de sa publication au Journal officiel de l’Union européenne.

Il s’applique à compter du 31 mars 2008.

Le présent règlement est obligatoire dans tous ses éléments et directement applicable dans tout État membre.









ANNEXE I

(Article 1er)

LISTE DES MÉTHODES DE RÉFÉRENCE

Index Min. = minimum, Max. = maximum, Annexe = annexe au règlement cité, m.s.n.g. = matières sèches non grasses, IP = indice de peroxyde, A = aspect, G = goût, C = consistance, TTG = teneur totale en germes, Therm. = teneur en germes thermophiles, EM = Etat membre, FIL = Fédération internationale de laiterie, ISO = International Standards Organization (Organisation internationale de normalisation), UICPA = Union internationale de chimie pure et appliquée, ADPI = American Dairy Products Institute, LCS = lait concentré sucré, LCC = lait ou crème évaporé.







PARTIE A Règlement de la Commission Produits concernés Paramètre Limite (1) Méthode de référence Remarque Règlement (CE) no 2771/1999 — Stockage public Beurre non salé Matières grasses Min. 82 % m/m ISO 17189:2003FIL 194:2003 Eau Max. 16 % m/m, ISO 3727-1:2001FIL 80-1:2001 m.s.n.g. Max. 2 % m/m, ISO 3727-2:2001FIL 80-2:2001 Acides gras 1,2 mmole/100 g de matières grasses ISO 1740:2004FIL 6:2004 IP (max.) 0,3 méq. d’oxygène/1 000 g de matières grasses ISO 3976:2006FIL 74:2006 Note 1 Coliformes Non détectables dans 1 g Annexe X Note 3 Matières grasses non lactiques Non détectables par l’analyse des triglycérides Annexe XX Traceurs: stérol Non détectables, β-sitostérol ≤ 40 mg/kg Annexe VIII Autres traceurs — vanilline Non détectable Annexe VI — ester éthylique de l’acide caroténique ≤ 6 mg/kg Annexe VII — triglycérides de l’acide énanthique Non détectables Annexe V Caractéristiques sensorielles Au moins 4 points sur 5 pour A, F et C Annexe IV Dispersion de l’eau Au moins 4 points ISO 7586:1985 — FIL 112A:1989 Règlement (CE) no 2771/1999 — Stockage public Beurre non salé Matières grasses Min. 82 % m/m ISO 17189:2003FIL 194:2003 Eau Max. 16 % m/m ISO 3727-1:2001FIL 80-1:2001 m.s.n.g. Max. 2 % m/m ISO 3727-2:2001FIL 80-2:2001 Règlement (CE) no 2771/1999 Stockage public Beurre salé Matières grasses Min. 80 % m/m ISO 17189:2003FIL 194:2003 Eau Max. 16 % m/m ISO 3727-1:2001FIL 80-1:2001 m.s.n.g. (hors sel) Max. 2 % m/m ISO 3727-2:2001FIL 80-2:2001 Sel Max. 2 % m/m ISO 15648:2004FIL 179:2004 Règlement (CE) no 1898/2005 — chapitre II Beurre non salé Matières grasses Min. 82 % m/m ISO 17189:2003FIL 194:2003 Matières grasses non lactiques Annexe XX Eau Max. 16 % m/m ISO 3727-1 2001FIL 80-1:2001 m.s.n.g. Max. 2 % m/m ISO 3727-2:2001FIL 80-2:2001 Traceurs: — stérols Voir l’annexe VIII Annexe VIII — vanilline Voir l’annexe VI Annexe VI — ester éthylique de l’acide caroténique Voir l’annexe VII Annexe VII — triglycérides de l’acide énanthique Voir l’annexe V Annexe V Règlement (CE) no 1898/2005 — chapitre II Beurre salé Matières grasses Min. 80 % m/m ISO 17189:2003FIL 194:2003 Matières grasses non lactiques Annexe XX Eau Max. 16 % m/m ISO 3727-1:2001FIL 80-1:2001 m.s.n.g. (hors sel) Max. 2 % m/m ISO 3727-2:2001FIL 80-2:2001 Sel Max. 2 % m/m ISO 15648:2004FIL 179:2004 Traceurs: — stérols Voir l’annexe VIII Annexe VIII — vanilline Voir l’annexe VI Annexe VI — ester éthylique de l’acide caroténique Voir l’annexe VII Annexe VII — triglycérides de l’acide énanthique Voir l’annexe V Annexe V Règlement (CE) no 1898/2005 — chapitre II Beurre concentré Matières grasses Min. 99,8 % m/m FIL 24:1964 Eau et m.s.n.g. Max. 0,2 % m/m ISO 5536:2002FIL 23:2002 (humidité) FIL 24:1964 (m.s.n.g.) Acides gras 1,2 mmole/100 g de matières grasses ISO 1740:2004FIL 6:2004 IP (max.) 0,5 méq. d’oxygène/1 000 g de matières grasses ISO 3976:2006FIL 74:2006 Note 1 Matières grasses non lactiques Absence Annexe XX Goût Franc Odeur Absence d’odeurs étrangères Autres Absence d’agents neutralisants, d’antioxygènes et de conservateurs Traceurs: — stérols Voir l’annexe VIII Annexe VIII — vanilline Voir l’annexe VI Annexe VI — ester éthylique de l’acide caroténique Voir l’annexe VII Annexe VII — triglycérides de l’acide énanthique Voir l’annexe V Annexe V Règlement (CE) no 1898/2005 — chapitre II Crème Matières grasses Minimum 35 % m/m ISO 2450:1999FIL 16 C:1987 Matières grasses non lactiques Annexe XX Traceurs: — stérols Voir l’annexe VIII Note 2 — vanilline Voir l’annexe VI Annexe VI — ester éthylique de l’acide caroténique Voir l’annexe VII Note 2 — triglycérides de l’acide énanthique Voir l’annexe V Annexe V Règlement (CE) no 1898/2005 — chapitre III Beurre concentré Matières grasses Min. 96 % m/m Note 2 Matières grasses non lactiques Annexe XX m.s.n.g. Max. 2 % m/m Note 2 Traceurs: — stigmastérol (95 % m/m) 15 g/100 kg de beurre concentré Annexe VIII — stigmastérol (85 % m/m) 17 g/100 kg de beurre concentré Annexe VIII — triglycérides de l’acide énanthique 10,34 kg/t de beurre concentré Annexe V — ester éthylique de l’acide butyrique et stigmastérol — ester éthylique de l’acide butyrique — stigmastérol: annexe VIII Note 2 — ester éthylique de l’acide butyrique et triglycérides de l’acide énanthique — ester éthylique de l’acide butyrique — triglycérides de l’acide énanthique: annexe V Note 2 Lécithine (E 322) Max. 0,5 % m/m Note 2 NaC1 Max. 0,75 % m/m ISO 15648:2004FIL 179:2004 Acides gras 1,2 mmole/100g de matières grasses ISO 1740:2004FIL 6:2004 IP (max.) Max. 0,5 méq. d’oxygène/1 000 g de matières grasses ISO 3976:2006FIL 74:2006 Note 1 Goût Franc Odeur Absence d’odeurs étrangères Autres Absence d’agents neutralisants, d’antioxygènes et de conservateurs Règlement (CE) no 1898/2005 — chapitre IV Beurre non salé Matières grasses Min. 82 % m/m ISO 17189:2003FIL 194:2003 Eau Max. 16 % m/m ISO 3727-1:2001FIL 80-1:2001 m.s.n.g. Max. 2 % m/m ISO 3727-2:2001FIL 80-2:2001 Règlement (CE) no 1898/2005 — chapitre IV Beurre salé Matières grasses Min. 80 % m/m ISO 17189:2003FIL 194:2003 Eau Max. 16 % m/m ISO 3727-1:2001FIL 80-1:2001 m.s.n.g. (hors sel) Max. 2 % m/m ISO 3727-2:2001FIL 80-2:2001 Sel Max. 2 % m/m ISO 15648:2004FIL 179:2004 Article 9 et titre II du règlement (CE) no 1255/1999 Fromage à base de lait de brebis et/ou de chèvre Lait de vache < 1 % m/m Annexe IX Règlement (CEE) no 2921/90 Annexe I — Caséine acide Eau Max. 12,00 % m/m ISO 5550:2006FIL 78:2006 Matières grasses Max. 1,75 % m/m ISO 5543:2004IDF127:2004 Acidité libre Max. 0,30 ml de solution NaOH 0,1 N/g ISO 5547:1978 — FIL 91:1979 Règlement (CEE) no 2921/90 Annexe I — Caséine présure Eau Max. 12,00 % m/m ISO 5550:2006FIL 78:2006 Matières grasses Max. 1,00 % m/m ISO 5543:2004FIL 127:2004 Cendres Min. 7,50 % m/m ISO 5545:1978FIL 90:1979 Règlement (CEE) no 2921/90 Annexe I — Caséinates Eau Max. 6,00 % m/m ISO 5550:2006FIL 78:2006 Protéines du lait Min. 88,00 % m/m ISO 5549:1978FIL 92:1979 Matières grasses et cendres Max. 6,00 % m/m ISO 5543:2004FIL 127:2004 Cendres fixes ISO 5544:1978FIL 89:1979 Cendres ISO 5545:1978FIL 90:1979 Règlement (CEE) no 2921/90 Annexe II — Caséine acide Eau Max. 10,00 % m/m ISO 5550:2006FIL 78:2006 Matières grasses Max. 1,50 % m/m ISO 5543:2004FIL 127:2004 Acidité libre Max. 0,20 ml de solution NaOH 0,1 N/g ISO 5547:1978FIL 91:1979 TTG (max.) 30 000/g ISO 4833:2003 Note 3 Coliformes Absence/0,1 g Annexe X Note 3 Therm. (max.) 5 000/g ISO 4833:2003 Notes 3 et 4 Règlement (CEE) no 2921/90 Annexe II — Caséine présure Eau Max. 8,00 % m/m ISO 5550:2006FIL 78:2006 Matières grasses Max. 1,00 % m/m ISO 5543:2004FIL 127:2004 Cendres Min. 7,50 % m/m ISO 5545:1978FIL 90:1979 TTG (max.) 30 000/g ISO 4833:2003 Note 3 Coliformes Absence/0,1 g Annexe X Note 3 Therm. (max.) 5 000/g ISO 4833:2003 Notes 3 et 4 Règlement (CEE) no 2921/90 Annexe II — Caséinates Eau Max. 6,00 % m/m ISO 5550:2006FIL 78:2006 Protéines du lait Min. 88,00 % m/m ISO 5549:1978FIL 92:1979 Matières grasses et cendres Max. 6,00 % m/m ISO 5543:2004FIL 127:2004 ISO 5544:1978FIL 89:1979 ou ISO 5545:1978FIL 90:1979 TTG (max.) 30 000/g ISO 4833:2003 Note 3 Coliformes Absence/0,1 g Annexe X Note 3 Therm. (max.) 5 000/g ISO 4833:2003 Notes 3 et 4 Règlement (CEE) no 2921/90 Annexe III — Caséinates Eau Max. 6,00 % m/m ISO 5550:2006FIL 78:2006 Protéines du lait Min. 85,00 % m/m ISO 5549:1978FIL 92:1979 Matières grasses Max. 1,50 % m/m ISO 5543:2004FIL 127:2004 Lactose Max. 1,00 % m/m ISO 5548:2004FIL 106:2004 Cendres Max. 6,50 % m/m ISO 5544:1978FIL 89:1979 ou ISO 5545:1978FIL 90:1979 TTG (max.) 30 000/g ISO 4833:2003 Note 3 Coliformes Absence/0,1 g Annexe X Note 3 Therm. (max.) 5 000/g ISO 4833:2003 Notes 3 et 4 Règlement (CE) no 2799/1999 Aliments composés pour animaux et lait écrémé en poudre (LEP) (pour l’alimentation des animaux) Eau (babeurre acide en poudre) Max. 5 % m/m Annexe XIX Protéines 31,4 % m/m (min.) sur l’extrait sec non gras ISO 8968-123:2001FIL 20-123:2001 Eau (LEP) Max. 5 % m/m ISO 5537:2004FIL 26:2004 Matières grasses (LEP) Max. 11 % m/m ISO 1736:2000FIL 9C:1987 Lactosérum présure (LEP) Absence Annexe XIII Note 6 Amidon (LEP) Absence Annexe XVII Eau (mélange) Max. 5 % m/m sur l’extrait sec non gras ISO 5537:2004FIL 26:2004 Matières grasses (mélanges) Directive 84/4/CEE de la Commission (JO L 15 du 18.1.1984, p. 29) Lactosérum présure (mélanges) Absence Annexe XIII Teneur en LEP (du produit final) Min. 50 % m/m Annexe XVI Matières grasses (du produit final) Min. 2,5 % m/m ou 5 % m/m Directive 84/4/CEE de la Commission (JO L 15 du 18.1.1984, p. 29) Note 7 Amidon (du produit final) Min. 2 % m/m Annexe XVII Note 8 Cuivre (du produit final) 25 ppm Directive 78/633/CEE de la Commission (JO L 206 du 26.7.1987, p. 43) Règlement (CE) no 214/2001 LEP (procédé spray) Matières grasses Max. 1,0 % m/m ISO 1736:2000FIL 9C:1987 Protéines 31,4 % (2)m/m (min.) sur l’extrait sec non gras ISO 8968-1/2:2001FIL 20-1/2:2001 Eau Max. 3,5 % m/m ISO 5537:2004FIL 26:2004 Acidité Max. 19,5 ml, NaOH 0,1N, 10 g de matières sèches non grasses ISO 6091:1980FIL 86:1981 Lactates Max. 150 mg/100 g de matières sèches non grasses ISO 8069:2005FIL 69:2005 Phosphatase Négatif ISO 11816-1:2006FIL 155-1:2006 Indice d’insolubilité Max. 0,5 ml à 24 °C ISO 8156:2005FIL 129:2005 Particules brûlées Filtre A ou B (15,0 mg) ADPI (1990) TTG 40 000/g ISO 4833:2003 Note 3 Coliformes Négatif/ 0,1 g Annexe X Note 3 Babeurre Négatif Annexe XIV Lactosérum présure Négatif Annexe XII Lactosérum acide Négatif Note 2 Agents antimicrobiens Annexe XV (1) Sans préjudice des exigences prévues par le règlement concerné. (2) La teneur moyenne en protéines passerait à 34 % au 1er septembre 2009.







PARTIE B Les méthodes de référence énumérées à la partie B sont applicables pour l’analyse de produits couverts par n’importe quel règlement indiqué dans la première colonne. Règlement de la Commission Produits concernés Code NC Paramètre Limite Méthode de référence Remarque Règlement (CEE) no 2658/87 Règlement (CE) no 2535/2001 Règlement (CE) no 1282/2006 Lait et crème de lait, non concentrés ni additionnés de sucre ou d’autres édulcorants 0401 Matières grasses (≤ 6 % m/m) Les limites sont celles spécifiées dans la description du code NC pour le produit concerné et, le cas échéant, précisées par le règlement (CEE) no 3846/87 de la Commission (JO L 366 du 24.12.1987, p. 1), partie 9 de la nomenclature à l’exportation, ou par le règlement (CE) no 2535/2001 (JO L 341 du 22.12.2001, p. 29) ISO 1211:2001FIL 1D:1996 Matières grasses (> 6 % m/m) ISO 2450:1999FIL 16C:1987 Lait et crème de lait, concentrés ou additionnés de sucre ou d’autres édulcorants 0402 Matières grasses (forme liquide) ISO 1737:1999FIL 13C:1987 Matières grasses (forme solide) ISO 1736:2000FIL 9C:1987 Protéines ISO 8968-123:2001IDF 20-123:2001 Saccharose (teneur normale) ISO 2911:2004FIL 35:2004 Saccharose (faible teneur) Note 2 Matière sèche (LCS) ISO 6734:1989FIL 15B:1991 Matière sèche (LCC) ISO 6731:1989FIL 21B:1987 Eau (lait en poudre) ISO 5537:2004FIL 26:2004 Eau (crème en poudre) Annexe XVIII Babeurre, lait et crème fermentés ou acidifiés, concentrés ou non concentrés, additionnés de sucre ou d’autres édulcorants 0403 Matières grasses ISO 1211:2001FIL 1D:1996 ISO 1736:2000FIL 9C:1987 ISO 2450:1999FIL 16 C:1987 ISO 7208:1999FIL 22B:1987 ISO 8262-3:2005FIL 124-3:2005 Protéines ISO 8968-123:2001FIL 20-123:2001 Saccharose (teneur normale) ISO 2911:2004FIL 35:2004 Saccharose (faible teneur) Note 2 Eau (babeurre acide en poudre) Annexe XIX Eau (babeurre doux en poudre) ISO 5537:2004IDF26:2004 Matière sèche (autres produits) Méthodes approuvées par l’autorité compétente Lactosérum, même concentré ou additionné de sucre ou d’autres édulcorants; produits composés de composants naturels du lait 0404 Matières grasses ISO 1736:2000FIL 9C:1987 ISO 2450:1999FIL 16C:1987 ISO 7208:1999FIL 22B:1987 Protéines ISO 8968-123:2001FIL 20-123:2001 Saccharose (teneur normale) ISO 2911:2004FIL 35:2004 Saccharose (faible teneur) Note 2 0404 90 Protéines ISO 8968 1/2 2001FIL 20-1/2:2001 Eau FIL 21B:1987 Matière sèche ISO 6734:1989FIL 15B:1991 (Produits concentrés) ISO 6731:1989FIL 21B:1987 Beurre et autres matières grasses du lait; pâtes à tartiner laitières 0405 Matières grasses (si ≤ 85 % m/m) ISO 17189:2003FIL 194:2003 Beurre Eau ISO 3727-1:2001FIL 80-1:2001 m.s.n.g. ISO 3727-2:2001FIL 80-2:2001 NaCl ISO 15648:2004FIL 179:2004 Matières grasses (si > 99 % m/m) FIL 24:1964 Butteroil Eau (si matières grasses < 99 % m/m) ISO 5536:2002FIL 23:2002 Fromages et caillebotte 0406 Matières grasses ISO 1735:2004FIL 5:2004 Matière sèche ISO 5534:2004FIL 4:2004 Matière sèche (Ricotta) ISO 2920:2004FIL 58:2004 NaCl ISO 5943:2006FIL 88:2006 Lactose ISO 5765-1/2:2002FIL 79-1/2:2002 Règlement (CEE) no 2658/87 Aliments composés pour animaux 2309 Lactose Annexe XI

Remarques concernant la liste des méthodes de référence de l’Union européenne:

Note 1: Isolement de la matière grasse laitière conformément à la norme ISO 1740:1991 (protection contre la lumière).

Note 2: Aucune méthode de référence n’a été définie. Méthodes approuvées par l’autorité compétente.

Note 3: Préparation de l’échantillon conformément à la norme ISO 8261:2001FIL 122:2001.

Note 4: Incubation pendant 48 heures à une température de 55 °C. Veiller à empêcher le milieu de culture de s’assécher.

Note 5: % m/m de m.s.n.g. = % m/m de matière sèche — % m/m de matière grasse.

Note 6: Directive 84/4/CEE de la Commission.

Note 7: Règlement (CE) no 2799/1999 de la Commission (JO L 340 du 31.12.1999, p. 3.27)

Note 8: Directive 78/633/CEE de la Commission.









ANNEXE II

(Article 3)

ÉVALUATION DE LA CONFORMITÉ D’UN LOT AVEC LA LIMITE RÉGLEMENTAIRE

1. PRINCIPE

Dans les cas où la réglementation prévoit des procédures d’échantillonnage détaillées, il convient de suivre ces procédures. Dans tous les autres cas, on utilise un échantillon d’au moins trois unités prélevées de manière aléatoire du lot soumis à vérification. Un échantillon composite peut être préparé. Le résultat obtenu est comparé aux limites réglementaires par le calcul d’un intervalle de confiance de 95 % correspondant à deux fois l’écart-type, ce dernier étant établi différemment selon que 1) la méthode est validée dans le cas d’une collaboration internationale avec des valeurs définies pour σr et σR, ou que 2), en cas de validation interne, une valeur de reproductibilité interne a été calculée. Cet intervalle de confiance est dès lors égal à l’incertitude de mesure du résultat.

2. LA MÉTHODE EST VALIDÉE DANS LE CADRE D’UNE COLLABORATION INTERNATIONALE

Dans ce cas de figure, l’écart-type de répétabilité σr et l’écart-type de reproductibilité σR ont été définis et le laboratoire peut prouver sa conformité avec les caractéristiques de performances de la méthode validée.

Calculer la moyenne arithmétique

n

Calculer l’incertitude étendue (k = 2) de

Si le résultat final x de la mesure est calculé au moyen d’une formule du type x = y 1 + y 2, x = y 1 – y 2, x = y 1 · y 2 ou x = y 1 / y 2 ou il convient de suivre les procédures habituelles de combinaison des écarts-types appliquées en pareils cas.

Le lot est jugé non conforme à la limite réglementaire supérieure UL si

;

Il est jugé conforme à UL dans tous les autres cas.

Le lot est jugé non conforme à la limite réglementaire inférieure LL si

;

Il est jugé conforme à LL dans tous les autres cas.

3. VALIDATION INTERNE AVEC CALCUL DE L’ÉCART-TYPE DE REPRODUCTIBILITÉ INTERNE

En cas d’utilisation de méthodes non prévues au présent règlement et si aucune mesure de précision n’a été définie, la validation doit être faite en interne. Dans les formules de calcul de l’incertitude étendue U, il convient d’utiliser un écart-type de répétabilité interne sir et un écart-type de reproductibilité interne siR au lieu respectivement de σr et σ R .

Les règles de décision sont celles visées au point 1. Si toutefois le lot est jugé non conforme à la limite réglementaire, les mesures doivent être répétées avec la méthode spécifiée au présent règlement et la décision prise conformément au point 1.









ANNEXE III

(Article 4)

ÉVALUATION DES ÉVALUATEURS ET DE LA FIABILITÉ DES RÉSULTATS RELATIFS AUX ANALYSES SENSORIELLES

Les procédures suivantes sont applicables en cas de recours à des méthodes de notation (norme FIL 99C:1997).

A. DÉTERMINATION DE L'«INDICE DE RÉPÉTABILITÉ»

Au moins dix échantillons seront analysés sous forme de double en aveugle par un évaluateur au cours d’une période de douze mois. Cette opération se fait habituellement en plusieurs sessions. Les résultats des caractéristiques des divers produits sont évalués par application de la formule suivante:

dans laquelle:

wI : indice de répétabilité

xi1 : note relative à la première évaluation de l’échantillon xi

xi2 : note relative à la seconde évaluation de l’échantillon xi

n : nombre d’échantillons

Les échantillons à évaluer doivent représenter une large gamme de qualité. wI ne doit pas dépasser 1,5 (échelles à 5 points).

B. DÉTERMINATION DE L'«INDICE DE L’ÉCART»

Cet indice doit être utilisé pour vérifier si un évaluateur utilise la même échelle d’évaluation de la qualité qu’un groupe d’évaluateurs expérimentés. Les notes données par l’évaluateur sont comparées avec la moyenne des notes accordées par le groupe.

La formule suivante est utilisée aux fins de l’évaluation des résultats:

dans laquelle:

xi1; xi2 : Voir point (A)

; : note moyenne accordée par le groupe d’évaluateurs respectivement pour la première et la seconde évaluation de l’échantillon xi

n : nombre d’échantillons (au moins dix par période de douze mois).

Les échantillons à évaluer doivent représenter une large gamme de qualité. DI ne doit pas dépasser 1,5 (échelles à 5 points).

Les États membres communiquent toute difficulté rencontrée lors de l’application de cette méthode.

Lorsque certains évaluateurs dépassent la limite de 1,5 fixée en termes d’indices de l’écart ou de répétabilité, les experts des autorités officielles procèdent au «réexamen» aléatoire d’un ou plusieurs des échantillons que ces évaluateurs classifieront au cours des semaines suivantes, ou ils réalisent un ou plusieurs contrôles «accompagnés» avec ces évaluateurs. Une surveillance étroite est nécessaire pour décider s’il convient de continuer de recourir à leurs services. Les conclusions doivent être documentées et conservées comme preuve d’une action de suivi.

C. COMPARAISON DES RÉSULTATS OBTENUS DANS DIFFÉRENTES RÉGIONS D’UN ÉTAT MEMBRE ET DANS DIFFÉRENTS ÉTATS MEMBRES

Si possible, un test permettant de comparer les résultats obtenus par des évaluateurs de différentes régions doit être organisé au moins une fois par an. Si des écarts significatifs sont observés, les mesures nécessaires doivent être prises pour en déterminer les raisons et aboutir à des résultats comparables.

Les États membres peuvent organiser des tests permettant de comparer les résultats obtenus par leurs propres évaluateurs et par ceux d’États membres voisins. En cas de différences significatives, une étude approfondie est réalisée entreprise en vue d’obtenir des résultats comparables.

Les États membres communiquent les résultats de ces comparaisons à la Commission.









ANNEXE IV

(Article 4)

ÉVALUATION SENSORIELLE DU BEURRE

1. CHAMP D’APPLICATION

L’objectif de la présente procédure d’évaluation sensorielle du beurre est de fournir une méthode uniforme, applicable dans tous les États membres.

Pour plus de détails, se reporter à la norme internationale FIL Lait et produits laitiers, FIL 99, Parties 1, 2 et 3 sur l’évaluation sensorielle.

2. DÉFINITIONS

Par «évaluation sensorielle», on entend l’examen des propriétés d’un produit par les organes des sens.

Par «jury», on entend un groupe d’évaluateurs sélectionnés travaillant, au cours de l’évaluation, sans communiquer entre eux et sans exercer d’influence les uns sur les autres.

Par «évaluateur», on entend une personne choisie pour son aptitude à pratiquer un test sensoriel. Ce type d’évaluateur peut n’avoir qu’une expérience limitée.

Par «évaluateur expert», on entend une personne dotée d’une sensibilité sensorielle aiguë et d’une longue expérience de la méthodologie sensorielle, capable de pratiquer des évaluations sensorielles cohérentes et fiables sur divers produits. Ce type d’évaluateur disposera d’une bonne mémoire sensorielle à long terme.

Par «notation», on entend l’évaluation sensorielle par un jury, au moyen d’une échelle numérique. Une nomenclature des défauts doit être utilisée.

Par «classification», on entend la classification de la qualité effectuée sur la base de la notation.

Par «documents de contrôle», on entend les documents utilisés pour enregistrer les notes attribuées à chaque propriété et la qualité finale du produit. (La composition chimique peut également être consignée dans ces documents.)

3. SALLE D’ESSAI

Pour plus de détails, voir ISO 8589 et ISO/DIS 22935-2 FIL 99-2, paragraphe 7.

Des précautions doivent être prises pour que les évaluateurs dans la salle d’essai ne soient pas influencés par des facteurs extérieurs.

La salle d’essai doit être exempte d’odeurs étrangères et facile à nettoyer. Les murs doivent être de couleur claire et non réfléchissants.

La salle d’essai et son éclairage ne doivent pas affecter les propriétés des produits à noter.

La salle doit être équipée d’un système thermostatique approprié permettant de maintenir le beurre à une température constante. La température du beurre doit être de 12 °C (±2 °C) au moment de la classification.

4. SÉLECTION DES ÉVALUATEURS

L’évaluateur doit être familiarisé avec les produits du beurre et posséder les compétences nécessaires pour effectuer une classification sensorielle. Ses compétences doivent être évaluées régulièrement (au moins une fois par an) par l’autorité compétente.

4.1. Pour plus de détails sur les exigences générales et les tests de présélection à faire passer à tout nouveau candidat évaluateur, consulter la norme ISO/DIS 22935-1 FIL 99-1, paragraphe 4 (recrutement) et paragraphe 5.1. Il est crucial que la formation soit continue et que des sessions générales aient lieu à intervalles réguliers. Pour plus d’informations sur la formation du jury, voir la norme ISO 8586-1.

4.2. La formation initiale doit inclure les éléments suivants: — théorie générale et importance pratique de l’évaluation sensorielle, — méthodes, échelles et description des impressions sensorielles, — détection et identification des propriétés sensorielles et des notions sensorielles spécifiques, — formation de base sur la fabrication du beurre, — références et échantillons validés pour aider l’évaluateur à reconnaître des saveurs spécifiques et l’intensité des saveurs dans le produit.

5. EXIGENCES APPLICABLES AU JURY

Le jury doit être composé d’un nombre impair d’évaluateurs, au minimum trois. La majorité d’entre eux doivent être employés auprès de l’autorité compétente ou être des personnes agréées non employées dans le secteur du lait.

Le président du jury est responsable de toute la procédure et peut participer aux travaux du jury.

Plusieurs facteurs doivent être pris en considération avant l’évaluation afin d’obtenir des performances optimales de la part des sujets:

— les sujets ne doivent souffrir d’aucune maladie pouvant affecter leurs performances; si tel est le cas, il convient de remplacer l’évaluateur concerné par un autre sujet,

— les sujets doivent être à l’heure pour participer à l’évaluation et s’assurer qu’ils ont réservé suffisamment de temps pour effectuer l’évaluation,

— les sujets ne doivent pas utiliser de produits fortement odorants tels que parfums, lotions après-rasage, déodorants, et doivent éviter de manger des aliments fortement aromatisés (épicés), etc.,

— les sujets ne peuvent ni fumer, ni manger, ni boire autre chose que de l’eau pendant la dernière demi-heure précédant l’évaluation.

6. PERFORMANCES

Pour maintenir leurs compétences à niveau, tous les évaluateurs sont tenus de participer régulièrement à des jurys d’évaluation sensorielle dont la fréquence sera fonction des volumes de production de beurre, à raison si possible d’une évaluation par mois.

Les évaluateurs experts sont eux aussi tenus de participer à plusieurs évaluations chaque année et, si possible, au moins une fois par trimestre.

7. ÉCHANTILLONNAGE ET PRÉPARATION DE L’ÉCHANTILLON

Il est indispensable que l’identité des échantillons soit tenue secrète au cours de l’évaluation pour éviter toute influence. Il convient donc d’attribuer un code aux échantillons.

Ce code doit être attribué avant l’évaluation. La température du beurre pendant son transport jusqu’à la salle d’essai est fixée à 6 °C ± 2 °C.

Lorsque l’évaluation sensorielle est effectuée dans un entrepôt frigorifique, l’échantillon est prélevé au moyen d’une sonde à beurre. Si elle est effectuée ailleurs que dans l’entrepôt frigorifique, un échantillon d’au moins 500 g doit être prélevé. Au cours de l’évaluation, le beurre doit avoir une température de 12 °C (± 2 2 °C) (voir ISO/DIS 22935-2 FIL 99-2 qui fixe la température d’évaluation du beurre à 14 °C ± 2 °C). Il est absolument nécessaire d’éviter de grands écarts par rapport à cette température.

8. ÉVALUATION DE LA VALEUR DE CHAQUE PROPRIÉTÉ

8.1. L’évaluation sensorielle doit être effectuée pour les trois propriétés suivantes: l’aspect, la consistance et la flaveur. L'«aspect» couvre les éléments suivants: la couleur, la pureté apparente, l’absence de contamination physique, de moisissure et l’uniformité de la dispersion de l’eau. La dispersion de l’eau est testée conformément à la norme FIL 112A/1989. La «consistance» couvre les éléments suivants: le corps, la texture et la fermeté. Si, dans le souci de répondre aux exigences des consommateurs, un État membre donné le souhaite, la tartinabilité du beurre peut être évaluée au moyen de méthodes physiques. La Commission pourrait envisager une harmonisation de ces méthodes à l’avenir. Le «corps» désigne la cohésion du produit lorsqu’il est consommé. Il est généralement associé aux notions de fermeté et de tartinabilité et doit être uniforme dans l’ensemble du produit. Il est étroitement lié à la texture et caractérise l’aptitude du produit à se tenir sous son propre poids. La résistance pendant la coupe donne une indication du corps, qui se mesure mécaniquement mais aussi en bouche et au toucher. La «flaveur» désigne les caractéristiques perçues lors de la mise en bouche, principalement par les papilles gustatives présentes sur la langue. L'«arôme» désigne les caractéristiques perçues par l’odorat. Un écart de température important par rapport à la température recommandée empêche une évaluation fiable de la consistance et de la flaveur. La température revêt donc une importance capitale. La procédure de classification du beurre doit être reportée si la température se situe en dehors de la plage recommandée.

8.2. Chaque propriété doit faire l’objet d’une évaluation sensorielle séparée. La notation s’effectue conformément au tableau 1.

8.3. Il peut être utile pour les évaluateurs de noter ensemble, avant de commencer l’évaluation, un ou plusieurs échantillons de référence en termes d’aspect, de consistance et de flaveur, dans un souci d’uniformité.

8.4. Les notes sont les suivantes: Voir partie 7 — Nomenclature et description des critères d’attribution des points lors de la notation.



Note maximale Note exigée Aspect 5 4 Consistance 5 4 Flaveur/Arôme 5 4 — Lorsque la note exigée n’est pas atteinte, une description du défaut doit être donnée. — La note attribuée par chaque évaluateur pour chaque propriété doit être enregistrée dans le document de contrôle. — Le produit est accepté ou rejeté sur la base d’une décision prise à la majorité. — Les cas où les écarts entre les notes attribuées par les différents membres du jury à chaque propriété dépassent 1 point ne devraient pas se produire fréquemment (pas plus d’une fois pour 20 échantillons), à défaut de quoi la compétence du jury devrait être soumise à un contrôle par le président du jury.

9. SURVEILLANCE

Un président de jury, qui doit être un employé officiel de l’autorité compétente et peut être membre du jury, assume la responsabilité générale de la procédure entière. Il doit enregistrer les notes attribuées à chaque propriété dans le document de contrôle et certifier si le produit est accepté ou rejeté.

10. NOMENCLATURE

Voir tableau 2 ci-joint.

11. RÉFÉRENCE

FIL-IDF 99C:1997 Évaluation sensorielle des produits laitiers par notation — Méthode de référence

ISO/DIS 22935 FIL 99 Norme internationale Lait et produits laitiers — Analyse sensorielle — Parties 1-3

ISO 8586-1 Analyse sensorielle — Guide général pour la sélection, l’entraînement et le contrôle des sujets — Partie 1

ISO 8589 Analyse sensorielle — Directives générales pour la conception de locaux destinés à l’analyse

FIL-IDF 112A:1989 Beurre — Détermination de la valeur de dispersion de l’eau







Tableau 1 Notation du beurre Aspect Consistance Flaveur + arôme Points No (1) Remarques Points (qualité) No (1) Remarques Points (qualité) No (1) Remarques 5 Très bon type idéal qualité la plus élevée (taux d’humidité uniforme) 5 Très bon type idéal qualité la plus élevée (bonne tartinabilité) 5 Très bon type idéal qualité la plus élevée (arôme pur beurre très fin) 4 Bon (2) pas de défauts apparents 4 17 18 Bon (2) dur mou 4 Bon (2) pas de défauts apparents 3 1 2 3 4 5 6 7 8 Moyen (légers défauts) aqueux, gouttelettes d’eau apparentes couleur non homogène, bicolore rayé marbré tacheté (points colorés, taches de beurre fondu) séparation d’huile trop coloré inclusion d’air apparente (poreux) 3 14 15 16 17 18 Moyen (légers défauts) pâte courte, cassante, beurre grumeleux pâteux, pommadeux collant dur mou 3 21 22 25 27 33 34 35 Moyen (légers défauts) impur goût étranger, arrière-goût acide goût de cuit, goût de roussi goût de fourrage âcre, amer trop salé 2 1 3 4 5 6 10 11 12 Mauvais (défauts évidents) aqueux, gouttelettes d’eau apparentes rayé marbré tacheté (points colorés, taches de beurre fondu) séparation d’huile matières étrangères moisi sel non dissous 2 14 15 16 17 18 Mauvais (défauts évidents) pâte courte, cassante, beurre grumeleux, pâteux, pommadeux collant dur mou 2 21 22 23 25 32 33 34 35 36 38 Mauvais (défauts évidents) impur goût étranger, arrière-goût goût de vieux acide goût d’oxydé, goût métallique goût de fourrage âcre, amer trop salé goût de vase, fade, putride goût de produits chimiques 1 1 3 4 5 6 7 9 10 11 12 Très mauvais (défauts prononcés) aqueux, gouttelettes d’eau apparentes rayé marbré tacheté (points colorés, taches de beurre fondu) séparation d’huile trop coloré granuleux matières étrangères moisi sel non dissous 1 14 15 16 17 18 Très mauvais (défauts prononcés) pâte courte, cassante, beurre grumeleux, pâteux, pommadeux collant dur mou 1 22 24 25 26 28 29 30 31 32 34 35 36 37 38 Très mauvais (défauts prononcés) goût étranger, arrière-goût goût de fromage, goût de fromage acide acide levuré goût de moisi rance huileux, goût d’huile de poisson, goût de poisson suiffeux goût d’oxydé, goût métallique âcre, amer trop salé goût de vase, fade, putride malté (goût de malt) goût de produits chimiques (1) Tableau 2. (2) Les défauts visés sous «bon» ne constituent que de très petits écarts par rapport au type idéal.







Tableau 2 Défauts du beurre I. Aspect 1. aqueux, gouttelettes d’eau apparentes 2. couleur non homogène, bicolore 3. rayé 4. marbré 5. tacheté (points colorés, taches de beurre fondu) 6. séparation d’huile 7. trop coloré 8. inclusion d’air apparente (poreux) 9. granuleux 10. matières étrangères 11. moisi 12. sel non dissous II. Consistance 14. pâte courte, cassante, beurre grumeleux 15. pâteux, pommadeux 16. collant 17. dur 18. mou III. Flaveur et arôme 20. manque d’arôme, fade 21. impur (1) 22. goût étranger, arrière-goût 23. goût de vieux 24. goût de fromage, goût de fromage acide 25. acide 26. levuré 27. a) goût de cuit b) goût de roussi 28. goût de moisi 29. rance 30. huileux, goût d’huile de poisson, goût de poisson 31. suiffeux 32. a) goût d’oxydé b) goût métallique 33. goût de fourrage 34. âcre, amer 35. trop salé 36. goût de vase, fade, putride 37. goût de malt 38. goût de produits chimiques (1) Cette appellation doit être utilisée le plus rarement possible et seulement quand on ne peut définir le défaut de façon plus précise.









ANNEXE V

(Article 5)

DÉTERMINATION DE LA TENEUR DU BEURRE, DU BUTTEROIL ET DE LA CRÈME EN TRIGLYCÉRIDES DE L’ACIDE ÉNANTHIQUE PAR CHROMATOGRAPHIE EN PHASE GAZEUSE DES TRIGLYCÉRIDES

1. CHAMP D’APPLICATION

La présente méthode permet de déterminer la teneur du butteroil, du beurre et de la crème en triglycérides de l’acide énanthique.

2. TERMES ET DÉFINITION

Teneur en acide énanthique: teneur en triglycérides de l’acide énanthique déterminée conformément à la procédure établie dans la présente méthode.

Note: La teneur en acide énanthique s’exprime en kg par tonne de produit pour le butteroil et le beurre, et en kg par tonne de matières grasses lactiques pour la crème.

3. PRINCIPE

Les matières grasses lactiques sont extraites des différents produits conformément à la norme ISO 14156 FIL 172:2001. La détermination quantitative de la teneur des matières grasses extraites en triglycérides de l’acide énanthique s’effectue par chromatographie en phase gazeuse (CPG) capillaire. Le résultat obtenu pour l’échantillon est évalué en référence aux triglycérides de l’acide caproïque comme étalon interne.

Note: La tributyrine est également considérée comme un étalon interne satisfaisant.

4. RÉACTIFS

Tous les réactifs doivent être de qualité analytique reconnue.

4.1. n-hexane

4.2. Triglycéride de l’acide caproïque standard, pureté d’au moins 99 %

4.3. Triglycéride de l’acide énanthique standard, pureté d’au moins 99 %

4.4. Sulfate de sodium anhydre (Na2SO4)

5. MATÉRIEL

On utilise du matériel de laboratoire courant et notamment:

5.1. Balance de précision ayant une sensibilité de 1 mg

5.2. Fioles jaugées d’une capacité de 10 ml et 20 ml

5.3. Tubes à centrifugation d’une capacité de 30 ml

5.4. Évaporateur rotatif

5.5. Four pouvant être maintenu à une température de 50 °C ± 5 °C

5.6. Papier-filtre de porosité moyenne et d’environ 15 cm de diamètre

5.7. Dispositif de chromatographie en phase gazeuse 5.7.1. Chromatographe en phase gazeuse équipé d’un injecteur de type split/splitless ou on column et d’un détecteur à ionisation de flamme (FID) 5.7.2. Colonne CPG dotée d’une phase stationnaire ayant prouvé son efficacité à réaliser la séparation des triglycérides (100 % diméthylpolysiloxane ou 5 % phényle-95 % méthylpolysiloxane). Choisir la phase stationnaire, la longueur de la colonne (entre 4m et 15m), le diamètre intérieur (entre 0,22 mm et 0,50 mm) et l’épaisseur du film (au moins 0,12 μm) en tenant compte de l’expérience de laboratoire et du système d’injection utilisé. Dans tous les cas, la colonne choisie doit être de nature à produire non seulement une séparation complète entre le pic du solvant et les triglycérides de l’acide caproïque, mais aussi une résolution ligne de base entre les pics des triglycérides de l’acide caproïque et énanthique. Des exemples de conditions applicables sont donnés ci-dessous. 5.7.2.1. Exemple de conditions applicables en cas d’utilisation d’un injecteur de type split: — Gaz vecteur: hélium — Pression de la tête de colonne: 100 kPa — Colonne: 12m de long, 0,5 mm de diamètre intérieur, film d’une épaisseur de 0,1 μm, colonne de silice fondue — Phase stationnaire: 100 % diméthylpolysiloxane ou 5 % phényle-95 % diméthylpolysiloxane (ex. HT5) — Température de la colonne: température initiale de 130 °C, maintenue pendant 1 minute, poussée à 260 °C à une vitesse de 20 °C/min puis poussée à 360 °C à une vitesse de 30 °C/min; maintien à 360 °C pendant 10 minutes — Température du détecteur: 370 °C — Température de l’injecteur: 350 °C — Rapport de division 1:30 — Quantité d’échantillon injectée: 1 μl 5.7.2.2. Exemple de conditions applicables en cas d’utilisation d’un injecteur on column — Gaz vecteur: hydrogène (système à débit constant) — Pression de la tête de colonne: 89 kPa — Colonne: 4m de long, 0,32 mm de diamètre intérieur, film d’une épaisseur de 0,25 μm, colonne de silice fondue — Phase stationnaire: 5 % phényle, 95 % diméthylpolysiloxane — Température de la colonne: température initiale de 60 °C, maintenue pendant 2 minutes, poussée à 340 °C à une vitesse de 35 °C/min, maintenue à cette température pendant 5 minutes — Température du détecteur: 350 °C — Quantité d’échantillon injectée: 1 μl

5.8. Seringue d’injection d’une capacité de 5 μl

6. ÉCHANTILLONNAGE

Il est important que le laboratoire reçoive un échantillon qui soit vraiment représentatif et n’ait été ni endommagé ni modifié lors du transport ou du stockage.

L’échantillonnage n’est pas couvert par la méthode décrite dans cette norme internationale. Une méthode d’échantillonnage recommandée est présentée dans les normes FIL: 50C:1995 ou ISO 707-1997 — Lait et produits laitiers — Méthodes d’échantillonnage.

7. MODE OPÉRATOIRE

7.1. Préparation de l’échantillon d’essai et de la prise d’essai

Procéder suivant les normes ISO 14156 FIL 172:2001.

7.1.1. Butteroil, beurre

7.1.1.1. Faire fondre 50g à 100g d’échantillon d’essai au four (5.5)

7.1.1.2. Placer 0,5g à 1,0g de sulfate de sodium anhydre (5.4) dans un papier-filtre plié

7.1.1.3. Filtrer la matière grasse à travers le papier-filtre contenant le sulfate de sodium anhydre en recueillant le filtrat dans un bécher gardé au four (5.5). Pour décanter le beurre fondu sur le papier-filtre, veiller à ce que le sérum n’ait pas traversé

7.1.2. Crème

7.1.2.1. Porter l’échantillon d’essai à une température de 20 °C ± 2 °C

7.1.2.2. Mélanger ou agiter soigneusement l’échantillon

7.1.2.3. Diluer une quantité adaptée d’échantillon d’essai pour obtenir 100 ml d’une prise d’essai avec une fraction massique de matière grasse d’environ 4 %

7.1.2.4. Procéder comme pour le lait cru et le lait homogénéisé (voir ISO 14156 FIL 172:2001, §8.3) pour extraire la matière grasse de la crème

7.1.2.5. Dans une fiole jaugée de 10 ml (5.2), peser 1g de la matière grasse extraite, à 1 mg près. Ajouter 1 ml de la solution 7.2.2. Compléter jusqu’à 10 ml avec du n-hexane (5.1) et homogénéiser

7.1.2.6. Introduire 1 ml de la solution 7.1.1.2 dans une fiole jaugée de 10 ml (5.2) et diluer jusqu’à 10 ml avec du n-hexane (4.1)

7.2. Préparation des standards d’étalonnage

7.2.1. Dissoudre 100 mg des triglycérides de l’acide énanthique (4.3) dans 10 ml de n-hexane (4.1)

7.2.2. Dissoudre 100 mg des triglycérides de l’acide caproïque (4.2) dans 10 ml de n-hexane (4.1)

7.2.3. Introduire 1 ml de la solution 7.2.2 dans une fiole jaugée de 10 ml (5.2). Compléter jusqu’à 10 ml avec du n-hexane (4.1)

7.2.4. Introduire 1 ml de la solution 7.2.1 et 1 ml de la solution 7.2.2 dans une fiole jaugée de 10 ml (5.2). Compléter jusqu’à 10 ml avec du n-hexane (4.1)

7.2.5. Introduire 1 ml de la solution 7.2.4 dans une fiole jaugée de 10 ml (5.2) et compléter jusqu’à 10 ml avec du n-hexane (4.1)

7.3. Détermination chromatographique

7.3.1. Injecter deux fois 1 μl de la solution étalon 7.2.5

7.3.2. Injecter 1 μl de chaque solution d’essai Note: Si le système d’injecteur on column est adopté, il convient d’appliquer une dilution supérieure non seulement à la solution étalon mais aussi à la solution d’essai.

7.3.3. Répéter l’opération 7.3.1 tous les 3 échantillons afin d’encadrer les échantillons entre deux séries de deux injections d’étalons. Les résultats reposent sur les coefficients de réponse moyens des chromatogrammes standard.

8. CALCUL DES RÉSULTATS

Pour chaque chromatogramme, intégrer l’aire des pics correspondant aux triglycérides de l’acide énanthique et de l’acide caproïque.

Suivre ces instructions pour chaque séquence encadrée, c’est-à-dire pour chaque série d’échantillons précédés et suivis d’une injection d’étalons; l’étalon injecté deux fois juste avant lesdits échantillons est STD1 et l’étalon injecté deux fois juste après ceux-ci est STD2.

8.1. Étalonnage

8.1.1. Calculer le coefficient de réponse pour chaque double de STD1, Rf1(a) et Rf1(b) Rf1 (a) ou (b) = (Aire des pics pour les triglycérides de l’acide caproïque/Aire des pics pour les triglycérides de l’acide énanthique) × 100 Calculer le coefficient de réponse moyen, Rf1 Rf1 = (Rf1(a) + Rf1(b)) / 2

8.1.2. De même, calculer le coefficient de réponse moyen STD2, Rf2

8.1.3. Calculer le coefficient de réponse moyen, Rf Rf = (Rf1 + Rf2) /2

8.2. Échantillons d’essai

Pour chaque chromatogramme test obtenu entre STD1 et STD2, calculer la teneur en acide énanthique, C (kg/tonne):

C = (Aire des pics pour les triglycérides de l’acide énanthique × Rf × 100)/(Aire des pics pour les triglycérides de l’acide caproïque × Wt × 1 000)

où:

— Wt = poids de matière grasse prélevée (g),

— 100 = volume de dilution de l’échantillon,

— 1 000 = coefficient de conversion (de μg/g en kg/t)

Pour les échantillons de beurre, prendre en considération leur teneur en matières grasses et calculer une valeur de concentration corrigée, Cbeurre (kg/t de beurre)

Cbeurre = Cmat. grasses × F

où F est la teneur en matières grasses du beurre.

9. PRÉCISION

Le point 12 décrit un essai interlaboratoire mené sur le beurre conformément aux normes ISO 5725-1 et ISO 5725-2 en ce qui concerne l’exactitude des méthodes de mesure.

Les valeurs de la limite de répétabilité et de reproductibilité sont exprimées pour un taux de probabilité de 95 % et elles ne sont pas applicables à d’autres plages et matrices de concentration que celles indiquées.

9.1. Répétabilité

La différence absolue entre deux résultats d’essai obtenus, dans un court intervalle de temps, par la même méthode sur du matériel d’essai identique, dans le même laboratoire et par le même opérateur utilisant les mêmes équipements ne peut dépasser 0,35 kg/t dans plus de 5 % des cas.

9.2. Reproductibilité

La différence absolue entre deux résultats d’essais obtenus par la même méthode sur du matériel d’essai identique, dans des laboratoires différents et par des opérateurs différents utilisant des équipements différents, ne peut dépasser 0,66 kg/t dans plus de 5 % des cas.

10. LIMITES DE TOLÉRANCE: LIMITES BASSES (POUR DES QUANTITÉS INSUFFISANTES)

10.1. Pour vérifier si le produit a été tracé correctement, il convient de prélever trois échantillons du produit tracé

10.2. Beurre et beurre concentré 10.2.1. On incorpore par tonne de beurre 11 kg de triglycéride de l’acide énanthique d’une pureté d’au moins 95 %, soit 10,45 kg/t 10.2.2. Les résultats des trois échantillons obtenus suite à l’analyse du produit servent à vérifier le taux et l’homogénéité de l’incorporation du traceur, le plus faible de ces résultats étant comparé avec les limites suivantes: — 9,51 kg/t (95 % du taux d’incorporation minimal de triglycéride de l’acide énanthique d’une pureté de 95 %, détermination unique), — 6,89 kg/t (70 % du taux d’incorporation minimal de triglycéride de l’acide énanthique d’une pureté de 95 %, détermination unique), — La concentration du traceur dans l’échantillon donnant le résultat le plus faible est utilisée par interpolation respectivement entre 9,51 kg/t et 6,89 kg/t.

10.3. Crème 10.3.1. On incorpore par tonne de matières grasses butyriques 10 kg de triglycéride de l’acide énanthique d’une pureté d’au moins 95 %, soit 9,50 kg/t de matières grasses butyriques tracées 10.3.2. Les résultats des trois échantillons obtenus suite à l’analyse du produit servent à vérifier le taux et l’homogénéité de l’incorporation du traceur, le plus faible de ces résultats étant comparé avec les limites suivantes: — 8,60 kg/t (95 % du taux d’incorporation minimal de triglycéride de l’acide énanthique d’une pureté de 95 %, détermination unique), — 6,23 kg/t (70 % du taux d’incorporation minimal de triglycéride de l’acide énanthique d’une pureté de 95 %, détermination unique), — La concentration du traceur dans l’échantillon donnant le résultat le plus faible est utilisée par interpolation respectivement entre 8,60 kg/t et 6,23 kg/t.

11. LIMITES DE TOLÉRANCE: LIMITES HAUTES (POUR DES QUANTITÉS SUPÉRIEURES DE PLUS DE 20 %)

11.1. Pour vérifier si le produit a été tracé correctement, il convient de prélever trois échantillons du produit tracé

11.2. Beurre et beurre concentré 11.2.1. Les résultats des trois échantillons obtenus suite à l’analyse du produit servent à vérifier le taux et l’homogénéité de l’incorporation du traceur, la moyenne de ces résultats étant comparée avec les limites suivantes: — Limite haute: 12,96 kg/t.

11.3. Crème 11.3.1. Les résultats des trois échantillons obtenus suite à l’analyse du produit servent à vérifier le taux et l’homogénéité de l’incorporation du traceur, la moyenne de ces résultats étant comparée avec les limites suivantes: — Limite haute: 11,82 kg/t.

12. INFORMATIONS SUPPLÉMENTAIRES: ANALYSE STATISTIQUE DES RÉSULTATS DE LA DÉTERMINATION DE LA TENEUR DE LA GRAISSE BUTYRIQUE EN TRIHEPTANOATE PAR ANALYSE DES TRIGLYCÉRIDES

Quatre essais interlaboratoires ont été menés pour déterminer la teneur du beurre tracé en triheptanoate.

Neuf laboratoires ont participé au 1er essai circulaire pour lequel aucune méthode analytique n’a été spécifiée.

Pour le 2e essai circulaire (dix laboratoires participants), 4 méthodes différentes ont été appliquées:

— Quantification du méthylheptanoate avec le n-nonane ou le méthylnonanoate comme étalon interne

— Quantification du triheptanoate avec le tricaproate comme étalon interne

— Quantification du méthylheptanoate avec un échantillon/mélange d’étalonnage

— Quantification du méthylheptanoate avec un mélange d’étalonnage

En outre, lorsque les FAME ont été analysés, on a eu recours à deux méthodes de méthylation différentes (De Francesco et Christopherson & Glass).

Sur la base des résultats obtenus, deux méthodes ont été retenues pour le 3e essai circulaire:

— Quantification du méthylheptanoate avec le n-nonane ou le méthylnonanoate comme étalon interne

— Quantification du triheptanoate avec le tricaproate comme étalon interne

Les résultats de 7 laboratoires ont montré que la méthode fondée sur les FAME était source d’une plus grande variabilité. Il a donc été décidé de se limiter à la détermination des triglycérides du triheptanoate en suivant la méthode de la quantification du triheptanoate avec le tricaproate comme étalon interne. Par ailleurs, l’analyse des triglycérides a dû être réalisée sur colonne capillaire.

Au cours du 4e essai circulaire, quatre échantillons (A, B, C, D) ont été étudiés par neuf laboratoires (résultats dans les tableaux 1 et 2).

Deux laboratoires (DE et UE) ont analysé les échantillons à l’aide de la méthode fondée sur les FAME.

Étant donné le nombre réduit de laboratoires, le calcul statistique se base à la fois sur l’ensemble complet (figures 1 et 2) des données, résultats de l’analyse des FAME inclus, et sur les données obtenues par l’analyse des TG.

Tests pour la recherche de valeurs aberrantes:

— échantillon A. Les tests de Dixon, Cochran et Grubbs à des seuils de 1 et 5 % ont révélé une valeur aberrante dans l’analyse,

— échantillon B. Le test de Grubbs à un seuil de 5 % a révélé une valeur aberrante dans l’analyse,

— échantillon C. Les tests de Dixon et Grubbs à des seuils de 1 et 5 % ont révélé une valeur aberrante dans l’analyse,

— échantillon D. Les tests de Dixon et Grubbs à des seuils de 1 et 5 % ont révélé une valeur aberrante dans l’analyse.

La valeur aberrante a été exclue du calcul.

Il faut noter que les résultats obtenus par la méthode fondée sur les FAME n’ont jamais été considérés comme des valeurs aberrantes d’après les tests utilisés.

Paramètres de précision

Les tableaux 1 et 2 indiquent les résultats de tous les laboratoires et les paramètres de précision calculés pour un nombre acceptable (8) de laboratoires mais, malheureusement, non obtenus par la même méthode d’analyse.

Les tableaux 3 et 4 indiquent les résultats obtenus uniquement par l’analyse des TG et les paramètres de précision correspondants. Ces paramètres sont acceptés sous réserve de l’acceptation du nombre réduit de laboratoires (6).

Les figures 2 et 3 illustrent la tendance de Sr et SR calculée pour les 4 échantillons des deux ensembles de données décrits ci-dessus.

Le tableau 5 indique les valeurs de Sr et SR avec les valeurs collectives correspondantes et les paramètres totaux de r et R.

Enfin, la différence critique au seuil de probabilité de 95 % a été calculée.







Tableau 1 Résultats statistiques des méthodes TG + FAME* Échantillon A R1 R2 Moyenne Nombre de laboratoires retenu après élimination des valeurs aberrantes 8 RENNES FR1 11,0 11,1 11,1 Nombre de valeurs aberrantes 1 RIKILT NL 11,2 11,2 11,2 Valeurs aberrantes DК ZPLA DE* 11,6 11,8 11,7 Valeur moyenne 11,3 ADAS GB 11,4 11,2 11,3 Valeur réelle 11,0 CNEVA FR2 11,4 11,4 11,4 Écart-type de répétabilité (Sr) 0,09 LODI IT 11,1 11,3 11,2 Écart-type relatif de répétabilité (RSDr %) 0,80 EELA FI 11,3 11,2 11,3 Répétabilité r (95 %) 0,26 ISPRA UE* 11,0 11,0 11,0 Répétabilité relative r % 2,24 D.V.F.A. DK 13,3 11,8 12,6 Écart-type de reproductibilité (SR) 0,23 Écart-type relatif de reproductibilité (RSDR %) 2,04 Reproductibilité R (95 %) 0,84 Reproductibilité relative R % 5,71 Échantillon B R1 R2 Moyenne Nombre de laboratoires retenu après élimination des valeurs aberrantes 8 RENNES FR1 12,7 12,8 12,8 Nombre de valeurs aberrantes 1 RIKILT NL 13,5 13,3 13,4 Valeurs aberrantes DK ZPLA DE* 14,0 13,8 13,9 Valeur moyenne 13,4 ADAS GB 13,4 13,5 13,5 Valeur réelle 13,5 CNEVA FR2 13,3 13,4 13,4 Écart-type de répétabilité (Sr) 0,14 LODI IT 13,9 13,5 13,7 Écart-type relatif de répétabilité (RSDr %) 1,04 EELA FI 13,4 13,2 13,3 Répétabilité r (95 %) 0,40 ISPRA UE* 13,2 13,3 13,3 Répétabilité relative r % 2,91 D.V.F.A. DK 14,1 14,8 14,5 Écart-type de reproductibilité (SR) 0,35 Écart-type relatif de reproductibilité (RSDR %) 2,61 Reproductibilité R (95 %) 0,99 Reproductibilité relative R % 7,31







Tableau 2 Résultats statistiques des méthodes TG + FAME* Échantillon C R1 R2 Moyenne Nombre de laboratoires retenu après élimination des valeurs aberrantes 8 RENNES FR1 8,9 9,2 9,1 Nombre de valeurs aberrantes 1 RIKILT NL 9,2 9,3 9,3 Valeurs aberrantes DK ZPLA DE* 9,2 9,4 9,3 Valeur moyenne 9,3 ADAS GB 9,5 9,3 9,4 Valeur réelle 9,3 CNEVA FR2 9,4 9,4 9,4 Écart-type de répétabilité (Sr) 0,14 LODI IT 9,2 9,5 9,4 Écart-type relatif de répétabilité (RSDr %) 1,50 EELA FI 9,4 9,6 9,5 Répétabilité r (95 %) 0,40 ISPRA UE* 9,4 9,3 9,4 Répétabilité relative r % 4,20 D.V.F.A. DK 10,7 10,9 10,8 Écart-type de reproductibilité (SR) 0,17 Écart-type relatif de reproductibilité (RSDR %) 1,82 Reproductibilité R (95 %) 0,47 Reproductibilité relative R % 5,10 Échantillon D R1 R2 Moyenne Nombre de laboratoires retenu après élimination des valeurs aberrantes 8 RENNES R1 1,6 1,6 1,6 Nombre de valeurs aberrantes 1 RIKILT NL 2,1 2,1 2,1 Valeurs aberrantes DK ZPLA DE* 2,3 2,3 2,3 Valeur moyenne 2,1 ADAS GB 2,1 2,2 2,2 Valeur réelle 2,1 CNEVA FR2 2,1 2,1 2,1 Écart-type de répétabilité (Sr) 0,08 LODI IT 2,2 1,9 2,1 Écart-type relatif de répétabilité (RSDr %) 3,81 EELA FI 2,3 2,3 2,3 Répétabilité r (95 %) 0,22 ISPRA UE* 2,3 2,3 2,3 Répétabilité relative r % 10,67 D.V.F.A. DK 3,4 2,9 3,2 Écart-type de reproductibilité (SR) 0,24 Écart-type relatif de reproductibilité (RSDR %) 11,43 Reproductibilité R (95 %) 0,67 Reproductibilité relative R % 32,00







Tableau 3 Résultats statistiques des méthodes TG + FAME* Échantillon A R1 R2 Moyenne Nombre de laboratoires retenu après élimination des valeurs aberrantes 6 RENNES FR1 11,0 11,1 11,1 Nombre de valeurs aberrantes 1 RIKILT NL 11,2 11,2 11,2 Valeurs aberrantes DК ADAS GB 11,4 11,2 11,3 Valeur moyenne 11,2 CNEVA FR2 11,4 11,4 11,4 Valeur réelle 11,0 LODI IT 11,1 11,3 11,2 Écart-type de répétabilité (Sr) 0,09 EELA FI 11,3 11,2 11,3 Écart-type relatif de répétabilité (RSDr %) 0,80 D.V.F.A. DK 13,3 11,8 12,6 Répétabilité r (95 %) 0,25 Répétabilité relative r % 2,24 Écart-type de reproductibilité (SR) 0,13 Écart-type relatif de reproductibilité (RSDR %) 1,16 Reproductibilité R (95 %) 0,36 Reproductibilité relative R % 3,25 Échantillon B R1 R2 Moyenne Nombre de laboratoires retenu après élimination des valeurs aberrantes 6 RENNES FR1 12,7 12,8 12,8 Nombre de valeurs aberrantes 1 RIKILT NL 13,5 13,3 13,4 Valeurs aberrantes DК ADAS GB 13,4 13,5 13,5 Valeur moyenne 13,3 CNEVA FR2 13,3 13,4 13,4 Valeur réelle 13,5 LODI IT 13,9 13,5 13,7 Écart-type de répétabilité (Sr) 0,15 EELA FI 13,4 13,2 13,3 Écart-type relatif de répétabilité (RSDr %) 1,13 D.V.F.A. DK 14,1 14,8 14,5 Répétabilité r (95 %) 0,42 Répétabilité relative r % 3,16 Écart-type de reproductibilité (SR) 0,33 Écart-type relatif de reproductibilité (RSDR %) 2,48 Reproductibilité R (95 %) 0,93 Reproductibilité relative R % 6,94







Tableau 4 Résultats statistiques de la méthode TG Échantillon C R1 R2 Moyenne Nombre de laboratoires retenu après élimination des valeurs aberrantes 6 RENNES FR1 8,9 9,2 9,1 Nombre de valeurs aberrantes 1 RIKILT NL 9,2 9,3 9,3 Valeurs aberrantes DК ADAS GB 9,5 9,3 9,4 Valeur moyenne 9,3 CNEVA FR2 9,4 9,4 9,4 Valeur réelle 9,3 LODI IT 9,2 9,5 9,4 Écart-type de répétabilité (Sr) 0,15 ËÈLA FI 9,4 9,6 9,5 Écart-type relatif de répétabilité (RSDr %) 1,61 D.V.F.A. DK 10,7 10,9 10,8 Répétabilité r (95 %) 0,42 Répétabilité relative r % 4,51 Écart-type de reproductibilité (SR) 0,19 Écart-type relatif de reproductibilité (RSDR %) 2,04 Reproductibilité R (95 %) 0,53 Reproductibilité relative R % 5,71 Échantillon D R1 R2 Moyenne Nombre de laboratoires retenu après élimination des valeurs aberrantes 6 RENNES FR1 1,6 1,6 1,6 Nombre de valeurs aberrantes 1 RIKILT NL 2,1 2,1 2,1 Valeurs aberrantes DK Valeur moyenne 2,1 ADAS GB 2,1 2,2 2,2 Valeur réelle 2,1 CNEVA FR2 2,1 2,1 2,1 Écart-type de répétabilité (Sr) 0,09 LODI IT 2,2 1,9 2,1 Écart-type relatif de répétabilité (RSDr %) 4,29 EELA FI 2,3 2,3 2,3 Répétabilité r (95 %) 0,26 D.V.F.A. DK 3,4 2,9 3,2 Répétabilité relative r % 12,01 Écart-type de reproductibilité (SR) 0,25 Écart-type relatif de reproductibilité (RSDR %) 11,90 Reproductibilité R (95 %) 0,69 Reproductibilité relative R % 33,32







Tableau 5 Répétabilité et reproductibilité (avec FAME) Nb. de labos Valeur aberrante Répétabilité Sr (95 %) Reproductibilité SR (95 %) Échantillon A 8 1 0,09 0,23 Échantillon Β 8 1 0,14 0,35 Échantillon C 8 1 0,14 0,17 Échantillon D 8 1 0,08 0,24 Valeur collective 0,116 0,256 R R Valeur collective* 2,8 0,324 0,716 CrD95 = 0,40 Pureté minimum indiquée pour le triheptanoate = 95 % Limite minimum indiquée pour la teneur de la graisse butyrique en triheptanoate = 11 kg/t Si l’on prend en considération la différence critique pour un seuil de probabilité de 95 %, la moyenne des deux résultats ne doit pas être inférieure à: en cas d’incorporation de triheptanoate d’une pureté de 95 %: 10,05 kg/t.







Répétabilité et reproductibilité (sans FAME) Nb. de labos Valeur aberrante Répétabilit Sr (95 %) Reproductibilité SR (95 %) Échantillon A 6 1 0,09 0,13 Échantillon B 6 1 0,15 0,33 Échantillon C 6 1 0,15 0,19 Échantillon D 6 1 0,09 0,25 Valeur collective 0,124 0,237 r R Valeur collective * 2,8 0,347 0,663 CrD95 = 0,36 Pureté minimum indiquée pour le triheptanoate = 95 % Teneur limite minimum indiquée de la graisse butyrique en triheptanoate = 11 kg/t Si l’on prend en considération la différence critique pour un seuil de probabilité de 95 %, la moyenne des deux résultats ne doit pas être inférieure à: en cas d’incorporation de triheptanoate d’une pureté de 95 %: 10,09 kg/t.

Figure 1 ( 8 )

Résultat de l’expérience: Échantillon A

Résultat de l’expérience: Échantillon B

Résultat de l’expérience: Échantillon C

Résultat de l’expérience: Échantillon D

Figure 2

Écart type de répétabilité et de reproductibilité à différents seuils (TG+FAME)

Figure 3

Écart type de répétabilité et de reproductibilité à différents seuils (TG)

Figure 4

Exemple d’utilisation d’un injecteur on-column









ANNEXE VI

(Article 5)

DÉTERMINATION DE LA TENEUR EN VANILLINE DU BEURRE CONCENTRÉ, DU BEURRE OU DE LA CRÈME PAR CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE À HAUTE PERFORMANCE

1. OBJET ET CHAMP D’APPLICATION

La méthode décrit un mode opératoire permettant la détermination quantitative de la vanilline dans le beurre, le beurre concentré ou la crème.

2. PRINCIPE

Extraction d’une quantité connue d’échantillon à l’aide d’un mélange d’isopropanol/éthanol/acétonitrile (1:1:2). Précipitation de la plus grande partie de la matière grasse par réfrigération (température comprise entre – 15 et – 20 °C), suivie d’une centrifugation.

Après dilution avec de l’eau, détermination de la teneur en vanilline par chromatographie liquide à haute performance (CLHP).

3. INSTRUMENTS

Matériel courant de laboratoire, et notamment les éléments suivants:

3.1. congélateur, d’une amplitude de température comprise entre – 15 et – 20 °C

3.2. seringues, jetables, d’une capacité de 2 ml

3.3. microfiltres à membrane (diamètre des pores: 0,45 μm), résistant à une solution contenant 5 % de solution d’extraction (4.4)

3.4. système de chromatographie liquide composé d’une pompe (débit de 1,0 ml/min), d’un injecteur (injection de 20 μl, automatique ou manuelle), d’un détecteur d’UV (fonctionnant à 306 nm, 0,01 Å pleine échelle), d’un enregistreur ou d’un intégrateur ainsi que d’un four thermostatique à colonne fonctionnant à 25 °C

3.5. colonne analytique (250 mm × 4,6 mm ID), garnie avec la phase LiChrospher RP 18 (Merck, 5 μm) ou équivalent

3.6. précolonne (environ 20 mm × 3 mm ID) garnie à sec avec la phase Perisorb RP 18 (5 à 10 μm) ou équivalent

3.7. Centrifugeuse fonctionnant à 2 000 t/min.

4. RÉACTIFS

Tous les réactifs utilisés doivent être de qualité analytique reconnue.

4.1. Isopropanol

4.2. Éthanol 96 % (v/v)

4.3. Acétonitrile

4.4. Solution d’extraction Mélanger de l’isopropanol (4.1), de l’éthanol (4.2) et de l’acétonitrile (4.3) selon un rapport de 1:1:2 (v/v).

4.5. Vanilline (4-hydroxy-3-méthoxybenzaldéhyde) ≥ 98 % 4.5.1. Solution mère de vanilline (= 500 μg/ml) Peser à 0,1 mg près environ 50 mg (mg CM) de vanilline (4.5) dans une fiole jaugée de 100 ml, ajouter 25 ml de solution d’extraction (4.4) et compléter avec de l’eau. 4.5.2. Solution étalon de vanilline (= 10 μg/ml) À l’aide d’une pipette, introduire 5 ml de solution mère de vanilline (4.5.1) dans une fiole jaugée de 250 ml et compléter avec de l’eau. 4.5.3. Méthanol, qualité CLHP 4.5.4. Acide acétique, glacial 4.5.5. Eau, qualité CLHP 4.5.6. Phase mobile CLHP Mélanger 300 ml de méthanol (4.5.3) à environ 500 ml d’eau (4.5.5) et à 20 ml d’acide acétique (4.5.4) dans une fiole jaugée de 1 000 ml et compléter avec de l’eau (4.5.5). Filtrer à travers un filtre (0,45 μm) (3.3).

5. MODE OPÉRATOIRE

5.1. Préparation de l’échantillon d’essai

5.1.1. Beurre

Chauffer l’échantillon jusqu’à ce qu’il commence à fondre. Éviter toute surchauffe locale au-dessus de 30 °C. Le beurre ne peut en aucun cas se séparer en deux phases. Lorsque l’échantillon devient suffisamment plastique, l’homogénéiser en l’agitant. Remuer le beurre pendant 15 s avant de prendre un échantillon. Introduire dans une fiole jaugée de 100 ml environ 5 g (g SM) de beurre et le peser à 1 mg près.

5.1.2. Beurre concentré

Immédiatement avant l’échantillonnage, placer dans un four à 40-50 °C le récipient contenant le beurre concentré jusqu’à ce qu’il fonde complètement. Mélanger l’échantillon en le faisant tourner ou en le remuant; éviter la formation de bulles d’air lors d’une opération trop vigoureuse. Introduire dans une fiole jaugée de 100 ml environ 4 g (g SM) de beurre concentré et le peser à 1 mg près.

5.1.3. Crème

Chauffer l’échantillon dans un bain-marie ou une étuve à une température de 35 à 40 °C. Répartir la graisse de manière homogène en le faisant tourner et, si nécessaire, en le remuant. Refroidir rapidement l’échantillon (20 ± 2 °C). L’échantillon doit avoir un aspect homogène, faute de quoi l’opération doit être recommencée. Introduire dans une fiole jaugée de 100 ml environ 10 g (g SM) de crème et la peser à 1 mg près.

5.2. Préparation de la solution d’essai

Ajouter environ 75 ml de solution d’extraction (4.4) à la prise d’essai (5.1.1, 5.1.2 ou 5.1.3), remuer, ou secouer vigoureusement, pendant environ 15 minutes et compléter avec la solution d’extraction (4.4). Transférer environ 10 ml de cet extrait dans un tube à essai pourvu d’un bouchon. Placer le tube à essai dans le congélateur (3.1) et le laisser reposer environ 30 minutes. Centrifuger l’extrait froid pendant 5 minutes à environ 2 000 t/min et décanter immédiatement. Laisser la solution décantée revenir à la température ambiante. Introduire à la pipette 5 ml de la solution décantée dans une fiole jaugée de 100 ml et compléter avec de l’eau. À l’aide d’une seringue (3.2), filtrer une partie aliquote à travers un microfiltre à membrane (3.3). Le filtrat est prêt pour la détermination par CLHP.

5.3. Étalonnage

Introduire à la pipette 5 ml de la solution étalon de vanilline (4.5.2) dans une fiole jaugée de 100 ml. Ajouter 5 ml de solution d’extraction (4.4) et compléter avec de l’eau jusqu’au trait. Cette solution contient 0,5 μg/ml de vanilline.

5.4. Détermination par CLHP

Laisser le système chromatographique se stabiliser pendant environ 30 minutes. Injecter la solution étalon (5.3). Répéter cette opération jusqu’à ce que la différence de l’aire des pics ou la hauteur des pics entre deux injections successives soit inférieure à 2 %. Dans les conditions décrites, le temps de rétention de la vanilline est d’environ 9 minutes. Analyser la solution étalon (5.3) en double en injectant 20 μl. Injecter 20 μl des solutions d’essai (5.2). Déterminer l’aire ou la hauteur du pic de vanilline obtenu. Recommencer l’injection en double de solution étalon (5.3) après 10 injections d’échantillons d’essai (5.2).

6. CALCUL DES RÉSULTATS

Calculer l’aire (ou la hauteur) moyenne (AC) des pics de vanilline correspondant aux injections en double encadrant chaque lot de solutions d’essai (4 aires ou hauteurs au total).

Calculer le coefficient de réponse (R):

où CM est la masse de vanilline en mg (4.5.1).

La teneur (mg/kg) en vanilline (C) de l’échantillon d’essai est donnée par la formule suivante:

où:

AS = aire ou hauteur du pic de vanilline de l’échantillon d’essai

SM = masse de l’échantillon d’essai en g (5.1.1, 5.1.2 ou 5.1.3).

Note: Lorsque la crème est analysée pour la détermination de la vanilline, on doit exprimer la concentration du traceur en mg de traceur/kg de matières grasses butyriques en multipliant C par 100/f, f étant la teneur en matières grasses de la crème en % (m/m).

20 = facteur qui prend en compte les dilutions de l’étalon et de l’échantillon d’essai

0,96 = facteur de correction pour la teneur en matières grasses lors de la première dilution de l’échantillon d’essai

Note: On peut utiliser les hauteurs de pics au lieu de l’aire des pics (voir point 8.3).

7. PRÉCISION DE LA MÉTHODE

7.1. Répétabilité (r)

La différence entre les résultats de deux déterminations effectuées dans l’intervalle de temps le plus bref possible par un seul opérateur utilisant le même appareillage sur du matériel d’essai identique ne doit pas dépasser 16 mg/kg.

7.2. Reproductibilité (R)

La différence entre les résultats de deux déterminations effectuées par des opérateurs de laboratoires différents, utilisant des appareillages différents sur du matériel d’essai identique, ne peut dépasser 27 mg/kg.

8. LIMITES DE TOLÉRANCE

8.1. Trois échantillons doivent être prélevés sur le produit tracé afin de vérifier l’homogénéité

8.2. Traceur obtenu soit à partir de vanille soit à partir de vanilline synthétique: 8.2.1. Le taux d’incorporation de 4-hydroxy-3-méthoxy-benzaldéhyde est de 250 g par tonne de beurre concentré ou de beurre. Lorsque le traçage concerne la crème, le taux d’incorporation est de 250 g par tonne de matières grasses butyriques. 8.2.2. Les résultats des trois échantillons obtenus suite à l’analyse du produit servent à vérifier le taux et l’homogénéité de l’incorporation du traceur, le plus faible de ces résultats étant comparé avec les limites suivantes: — 220,8 mg/kg (95 % du taux d’incorporation minimal), — 158,3 mg/kg (70 % du taux d’incorporation minimal). La concentration du traceur dans l’échantillon donnant le résultat le plus faible est utilisée par interpolation entre 220,8 mg/kg et 158,3 mg/kg.

8.3. Traceur obtenu exclusivement à partir de gousses de vanille ou d’extraits intégraux de ces dernières: 8.3.1. Le taux d’incorporation de 4-hydroxy-3-méthoxybenzaldéhyde est de 100 g par tonne de beurre concentré ou de beurre. Lorsque le traçage concerne la crème, le taux d’incorporation est de 100 g par tonne de matières grasses butyriques. 8.3.2. Les résultats des trois échantillons obtenus suite à l’analyse du produit servent à vérifier le taux et l’homogénéité de l’incorporation du traceur, le plus faible de ces résultats étant comparé avec les limites suivantes: — 78,3 mg/kg (95 % du taux d’incorporation minimal), — 53,3 mg/kg (70 % du taux d’incorporation minimal). La concentration du traceur dans l’échantillon donnant le résultat le plus faible est utilisée par interpolation entre 78,3 mg/kg et 53,3 mg/kg.

9. NOTES

9.1. La récupération de la vanilline ajoutée à un niveau de 250 mg/kg de butteroil varie de 97,0 à 103,8. La teneur moyenne constatée était de 99,9 % avec un écart type de 2,7 %.

9.2. La solution étalon contient 5 % de solution d’extraction pour compenser l’élargissement du pic provoqué par la présence de 5 % de solution d’extraction des échantillons d’essai. Cette manière de procéder permet une quantification par hauteur de pic.

9.3. L’analyse se fonde sur une ligne d’étalonnage linéaire (intercept: zéro).

9.4. En utilisant des dilutions appropriées de la solution étalon (4.5.2), on vérifie la linéarité la première fois que l’analyse est effectuée et ensuite à intervalles réguliers ainsi qu’après la modification ou la rénovation de l’équipement CLHP. La vanilline peut se décomposer en acide vanillique, en divanilline et d’autres composés sous l’effet des enzymes intrinsèques contenus dans la crème non pasteurisée ou les produits de celle-ci.









ANNEXE VII

(Article 5)

DÉTERMINATION DE LA QUANTITÉ D’ESTER ÉTHYLIQUE DE L’ACIDE β-APO-8’-CAROTÉNIQUE DANS LE BEURRE CONCENTRÉ ET LE BEURRE PAR SPECTROMÉTRIE

1. OBJET ET CHAMP D’APPLICATION

La méthode décrit une procédure permettant la détermination quantitative de l’ester éthylique de l’acide β-apo-8’-caroténique (ester apo-caroténique) dans le beurre concentré et le beurre. L’ester apo-caroténique est la somme de toutes les substances présentes dans un concentré d’échantillons obtenu dans les conditions décrites dans la méthode, qui absorbent le rayonnement à 440 nm.

2. PRINCIPE

La matière grasse butyrique est dissoute dans de l’essence minérale légère et l’absorbance est mesurée à 440 nm. La quantité d’ester apo-caroténique est déterminée par référence à une norme externe.

3. INSTRUMENTS

3.1. Pipettes graduées à 0,25, 0,50, 0,75 et 1,0 ml

3.2. Spectrophotomètre, conçu pour un usage à 440 nm (et 447-449 nm) et équipé de cellules d’une longueur optique de 1 cm

3.3. Fioles jaugées de 20 ml et 100 ml

3.4. Balance analytique d’une sensibilité de 0,1 mg, capable de peser au mg près, lisibilité de 0,1 mg

3.5. Four à 45 °C ± 1 °C

3.6. Filtres sans cendres à filtration rapide

4. RÉACTIFS

Tous les réactifs utilisés doivent être de qualité analytique reconnue.

4.1. Suspension d’ester apo-caroténique (environ 20 %) 4.1.1. Établir le contenu de la suspension comme suit: Chauffer la suspension entre 45 °C et 50 °C et l’homogénéiser dans l’emballage original fermé. Peser environ 400 mg dans une fiole jaugée (100 ml), les dissoudre dans 20 ml de chloroforme (4.4) et compléter en volume avec du cyclohexane (4.5). Diluer 5 ml de cette solution à 100 ml avec du cyclohexane (solution A). Diluer 5 ml de la solution A à 100 ml avec du cyclohexane. Mesurer l’absorbance à 447-449 nm (mesurer le maximum en prenant le cyclohexane comme blanc et en utilisant des cellules d’une longueur optique de 1 cm). Teneur en ester apo-caroténique P (%) = (Absmax × 40 000)/(Msusp × 2 550) ou forme développée: (Absmax /2 550) × (100/5) × (100/5) × (100/Msusp) Absmax = absorbance maximale de la solution de mesure Msusp = masse de la suspension (g) 2 550 = valeur d’absorbance de référence (1 %, 1 cm) P = Pureté (teneur) de la suspension (%) Note: L’ester apo-caroténique en suspension est sensible à l’air, à la chaleur et à la lumière. Il peut se conserver environ douze mois dans son emballage original, fermé (scellé sous azote) et stocké dans un endroit frais. Après ouverture, le contenu doit être utilisé rapidement. 4.1.2. Solution étalon d’ester apo-caroténique, environ 0,2 mg/ml Prélever, à 1 mg près, environ 0,100 g d’ester apo-caroténique en suspension (4.1.1) (Wg), dissoudre dans de l’essence minérale (4.2), transférer quantitativement dans une fiole jaugée de 100 ml et compléter jusqu’au trait avec de l’essence minérale. Cette solution contient (W × P) 10 mg/ml d’ester apo-caroténique. Note: la solution doit être stockée dans un endroit frais, à l’abri de la lumière. Après un mois, elle n’est plus utilisable.

4.2. Essence minérale (40-60 °C)

4.3. Sulfate de sodium, anhydre, en granulés, préalablement séché à 102 °C pendant 2 heures

4.4. Chloroforme

4.5. Cyclohexane

5. MODE OPÉRATOIRE

5.1. Préparation de l’échantillon d’essai

5.1.1. Beurre concentré

Faire fondre l’échantillon dans un four à 45 °C environ.

5.1.2. Beurre

Faire fondre l’échantillon dans un four à 45 °C environ et en filtrer une partie représentative à l’aide d’un filtre contenant environ 10 g de sulfate de sodium anhydre (4.3). L’opération doit se faire à l’abri de toute lumière naturelle ou artificielle forte et la température doit être maintenue à 45 °C. Prélever une quantité appropriée de graisse butyrique.

5.2. Détermination

Peser, à 1 mg près, environ 1 g de beurre concentré ou de graisse butyrique extraite (5.1.2), (M). Transférer quantitativement dans une fiole jaugée de 20 ml (V), remplir jusqu’au trait avec de l’essence minérale (4.2) et mélanger soigneusement.

Déposer une petite quantité de ce mélange sur une cellule de 1 cm et mesurer l’absorbance à 440 nm en prenant comme blanc de l’essence minérale. On obtient la concentration d’ester apo-caroténique dans la solution par référence à la courbe d’étalonnage (C μ/ml).

5.3. Étalonnage

Introduire à l’aide des pipettes graduées 0, 0,25, 0,5, 0,75 et 1,0 ml de solution étalon d’ester apo-caroténique (4.1.2) dans cinq fioles jaugées de 100 ml. Diluer avec de l’essence minérale (4.2) en remplissant jusqu’au trait et mélanger.

Les concentrations des solutions s’échelonnent approximativement entre 0 et 2 μg/ml et sont calculées de manière précise par référence à la concentration de la solution étalon (4.1.2), (W × P)/10 mg/ml. Mesurer les absorbances à 440 nm en prenant comme blanc de l’essence minérale (4.2).

Reporter les valeurs d’absorbance sur l’axe des ordonnées et les concentrations d’ester apo-caroténique sur l’axe des abscisses. Calculer l’équation de la courbe type.

6. CALCUL DES RÉSULTATS

6.1. La teneur en ester apo-caroténique, exprimée en mg/kg de produit, est donnée par la formule suivante: Beurre concentré: (C × V)/M Beurre: 0,82 (C × V)M où: C = la teneur en ester apo-caroténique, μg/ml, donnée par la courbe d’étalonnage (5.3) V = volume (ml) de la solution d’essai (5.2) M = masse (g) de la prise d’essai (5.2) 0,82 = un coefficient correcteur pour la teneur en graisse butyrique du beurre

7. PRÉCISION DE LA MÉTHODE

7.1. Répétabilité

7.1.1. Analyse du beurre

La différence entre les résultats de deux déterminations effectuées, dans l’intervalle de temps le plus court possible, sur du matériel d’essai identique et par un seul opérateur utilisant le même appareillage ne doit pas dépasser 1,4 mg/kg.

7.1.2. Analyse du beurre concentré

La différence entre les résultats de deux déterminations effectuées, dans l’intervalle de temps le plus court possible, sur du matériel d’essai identique et par un seul opérateur utilisant le même appareillage ne doit pas dépasser 1,6 mg/kg.

7.2. Reproductibilité

7.2.1. Analyse du beurre

La différence entre les résultats de deux déterminations effectuées sur du matériel d’essai identique par des opérateurs travaillant dans des laboratoires différents et utilisant un appareillage différent ne doit pas dépasser 4,7 mg/kg.

7.3. Analyse du beurre concentré

La différence entre les résultats de deux déterminations effectuées sur du matériel d’essai identique par des opérateurs travaillant dans des laboratoires différents et utilisant un appareillage différent ne doit pas dépasser 5,3 mg/kg.

7.4. Source des données de précision

Les données de précision ont été définies sur la base d’une expérience menée en 1995 qui impliquait onze laboratoires et portait sur douze échantillons tracés (six doubles aveugles) pour le beurre et sur douze échantillons tracés (six doubles aveugles) pour le beurre concentré.

8. LIMITES DE TOLÉRANCE

8.1. Pour vérifier si le produit a été tracé correctement, il faut prélever trois échantillons du produit tracé.

8.2. Beurre 8.2.1. Le taux d’incorporation pour le beurre, compte tenu de l’absorbance de fond, est de 22 mg/kg. 8.2.2. Les résultats des trois échantillons obtenus suite à l’analyse du produit servent à vérifier le taux et l’homogénéité de l’incorporation du traceur, le plus faible de ces résultats étant comparé avec les limites suivantes: — 17,7 mg/kg (95 % du taux d’incorporation minimal), — 12,2 mg/kg (70 % du taux d’incorporation minimal). La concentration du traceur dans l’échantillon donnant le résultat le plus faible est utilisée par interpolation entre 17,7 mg/kg et 12,2 mg/kg.

8.3. Beurre concentré 8.3.1. Le taux d’incorporation pour le beurre concentré, compte tenu de l’absorbance de fond, est de 24 mg/kg. Les résultats des trois échantillons obtenus suite à l’analyse du produit servent à vérifier le taux et l’homogénéité de l’incorporation du traceur, le plus faible de ces résultats étant comparé avec les limites suivantes: — 19,2 mg/kg (95 % du taux d’incorporation minimal), — 13,2 mg/kg (70 % du taux d’incorporation minimal). La concentration du traceur dans l’échantillon donnant le résultat le plus faible est utilisée par interpolation entre 19,2 mg/kg et 13,2 mg/kg.









ANNEXE VIII

(Article 5)

DÉTERMINATION DU SITOSTÉROL OU DU STIGMASTÉROL DANS LE BEURRE OU LE BEURRE CONCENTRÉ PAR CHROMATOGRAPHIE EN PHASE GAZEUSE AVEC COLONNE CAPILLAIRE

1. OBJET ET CHAMP D’APPLICATION

La méthode décrit une procédure permettant la détermination quantitative du sitostérol ou du stigmastérol dans le beurre et le beurre concentré. Le sitostérol est la somme du β-sitostérol et du 22-dihydro-β-sitostérol, les autres sitostérols étant considérés comme peu importants.

2. PRINCIPE

Le beurre ou le beurre concentré est saponifié à l’aide d’hydroxyde de potassium dans une solution d’éthanol et les insaponifiables sont extraits à l’aide d’éther diéthylique.

Les stérols sont transformés en triméthyl-silyl-éthers et sont analysés par chromatographie en phase gazeuse avec colonne capillaire par rapport à un étalon interne: la bétuline.

3. INSTRUMENTS

3.1. Ballon de saponification de 150 ml équipé d’un réfrigérant à reflux à embouts rodés

3.2. Ampoules à décanter de 500 ml

3.3. Ballons de 250 ml

3.4. Ampoules d’égalisation de la pression, de 250 ml ou d’une contenance similaire, destinées à recueillir l’éther diéthylique à éliminer

3.5. Colonne de verre, de 350 mm × 20 mm, dotée d’un raccord en verre fritté

3.6. Bain-marie ou manchon isotherme

3.7. Flacons à réaction de 2 ml

3.8. Appareil de chromatographie en phase gazeuse pouvant être utilisé avec une colonne capillaire, muni d’un dispositif de fractionnement composé: 3.8.1. d’un four thermostaté pour les colonnes pouvant maintenir la température souhaitée avec une précision de ±1 °C; 3.8.2. d’un injecteur thermoréglable; 3.8.3. d’un détecteur à ionisation de flamme et convertisseur-amplificateur; 3.8.4. d’un intégrateur-enregistreur pouvant être utilisé avec le convertisseur-amplificateur (3.8.3).

3.9. Une colonne capillaire de silice fondue entièrement recouverte de BP1 ou d’une substance équivalente (ou toute autre colonne permettant d’obtenir une résolution au moins équivalente) sur une épaisseur uniforme de 0,25 μm; la colonne doit être en mesure de séparer les dérivés triméthyl-silyl du lanostérol et du sitostérol. Une colonne BP1 de 12 m de longueur et de 0,2 mm de diamètre interne est appropriée.

3.10. Microseringue à aiguille en acier trempé pour chromatographie en phase gazeuse de 1 μl

4. RÉACTIFS

Tous les réactifs doivent être de qualité analytique reconnue. L’eau utilisée doit être de l’eau distillée ou de l’eau ayant une pureté au moins équivalente.

4.1. Éthanol, pur au moins à 95 %

4.2. Hydroxyde de potassium, solution à 60 %, dissoudre 600 g d’hydroxyde de potassium (minimum 85 %) dans de l’eau et compléter à 1 l avec de l’eau

4.3. Bétuline d’une pureté d’au moins 99 % 4.3.1. Solutions de bétuline dans l’éther diéthylique (4.4) 4.3.1.1. La concentration de la solution de bétuline utilisée pour la détermination du sitostérol doit être de 1,0 mg/ml 4.3.1.2. La concentration de la solution de bétuline utilisée pour la détermination du stigmastérol doit être de 0,4 mg/ml.

4.4. Éther diéthylique, de pureté analytique (exempt de péroxydes ou de résidus)

4.5. Sulfate de sodium, anhydre, en granulés, préalablement séché à 102 °C pendant 2 heures

4.6. Réactif de silylation, par exemple TRI-SIL (pouvant être obtenu auprès de Pierce Chemical Co, Cat no 49001), ou équivalent (Attention: le TRI-SIL est inflammable et toxique, corrosif et peut-être carcinogène. Le personnel de laboratoire doit bien connaître les règles de sécurité applicables au TRI-SIL et prendre les précautions qui s’imposent.)

4.7. Lanostérol

4.8. Sitostérol, de pureté connue égale ou supérieure à 90 % (P) Note 1: La pureté des matériaux étalons utilisés pour le calibrage doit être déterminée à l’aide de la méthode de normalisation. On part de l’hypothèse que tous les stérols présents dans l’échantillon sont représentés dans le chromatogramme, que l’aire totale des pics représente 100 % des constituants stéroliques et que les stérols donnent la même réponse au détecteur. La linéarité du système doit être vérifiée pour les niveaux de concentration considérés. 4.8.1. Solution étalon de sitostérol — préparer une solution à 0,001 mg/ml près, contenant environ 0,5 mg/ml (W1) de sitostérol (4.8) dans de l’éther diéthylique (4.4)

4.9. Stigmastérol, d’une pureté connue, égale ou supérieure à 90 % (P) 4.9.1. Solution standard de stigmastérol — préparer une solution à 0,001 mg/ml près, contenant environ 0,2 mg/ml (W1) de stigmastérol (4.9) dans l’éther diéthylique (4.4)

4.10. Mélange pour le test de résolution: préparer une solution contenant 0,05 mg/ml de lanostérol (4.7) et 0,5 mg/ml de sitostérol (4.8) dans de l’éther diéthylique (4.4)

5. MODE OPÉRATOIRE

5.1. Préparation des solutions étalons pour la chromatographie

Ajouter la solution étalon interne (4.3.1) à la solution étalon de stérol appropriée en même temps qu’à l’échantillon saponifié (voir 5.2.2).

5.1.1. Solution chromatographique étalon de sitostérol: transférer 1 ml de solution étalon de sitostérol (4.8.1) dans chacun des deux flacons à réaction (3.7) et éliminer l’éther diéthylique sous un flux d’azote. Ajouter 1 ml de solution interne (4.3.1.1) et éliminer l’éther diéthylique sous un flux d’azote.

5.1.2. Solution chromatographique étalon de stigmastérol: transférer 1 ml de solution étalon de stigmastérol (4.9.1) dans chacun des deux flacons à réaction (3.7) et éliminer l’éther diéthylique sous un flux d’azote. Ajouter 1 ml de solution étalon interne (4.3.1.2) et éliminer l’éther diéthylique sous un flux d’azote.

5.2. Préparation des insaponifiables

5.2.1. Faire fondre l’échantillon de beurre à une température de 35 °C au maximum; le mélanger soigneusement en le remuant. Peser à 1 mg près, environ 1 g de beurre (W2) ou de beurre concentré (W2) dans un flacon de 150 ml (3.1). Ajouter 50 ml d’éthanol (4.1) et 10 ml de solution d’hydroxyde de potassium (4.2). Adapter le réfrigérant à reflux et porter à environ 75 °C pendant 30 minutes. Détacher le réfrigérant et laisser refroidir le ballon à la température ambiante.

5.2.2. Ajouter 1,0 ml de solution étalon interne dans le ballon (4.3.1.1 s’il s’agit de déterminer le sitostérol ou 4.3.1.2 s’il s’agit de déterminer le stigmastérol). Mélanger soigneusement. Transférer le contenu du ballon quantitativement dans une ampoule à décanter de 500 ml (3.2). Rincer le ballon avec 50 ml d’eau, puis 250 ml d’éther diéthylique (4.4). Agiter vigoureusement l’ampoule à décanter pendant 2 minutes et laisser les phases se séparer. Éliminer la phase aqueuse inférieure et laver la phase éthérée en agitant avec 4 parties aliquotes successives de 100 ml d’eau. Note 2: Pour éviter la formation d’une émulsion, il est indispensable que les deux premiers rinçages à l’eau soient effectués délicatement (10 inversions). Pour le troisième rinçage, on peut agiter vigoureusement pendant 30 secondes. Si une émulsion se forme, elle peut être éliminée par l’addition de 5 à 10 ml d’éthanol. Si de l’éthanol est ajouté, il est indispensable de procéder à deux nouveaux et vigoureux lavages à l’eau.

5.2.3. Faire passer la phase éthérée limpide et exempte de savon à travers une colonne en verre (3.5) contenant 30 g de sulfate de sodium anhydre (4.5). Collecter l’éther dans un ballon de 250 ml (3.3). Ajouter une bille antiprojection et évaporer jusqu’à la quasi-dessiccation dans un bain-marie ou un manchon isotherme en prenant soin de collecter les solvants à éliminer. Note 3: Si des extraits d’échantillons sont évaporés à sec à une température trop élevée, il peut y avoir des pertes de stérol.

5.3. Préparation des triméthyl-silyl-éthers

5.3.1. Transférer la solution d’éther restant dans le ballon dans un f