1971L0250 — FR — 26.05.1999 — 003.001 — 1
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►BPREMIÈRE DIRECTIVEDE LA COMMISSION
du 15 juin 1971
portant fixation de méthodes d'analyse communautaire pour le contrôle officiel des aliments des
animaux
(71/250/CEE)
(JO L 155 du 12.7.1971, p. 13)
Modifiée par:
Journal officiel
nopage date
►M1Directive 81/680/CEE de la Commission du 30 juillet 1981 L 246 32 29.8.1981
►M2Directive 98/54/CE de la Commission du 16 juillet 1998 L 208 49 24.7.1998
►M3Directive 1999/27/CE de la Commission du 20 avril 1999 L 118 36 6.5.1999
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PREMIÈRE DIRECTIVEDE LA COMMISSION
du 15 juin 1971
portant fixation de méthodes d'analyse communautaire pour le
contrôle officiel des aliments des animaux
(71/250/CEE)
LA COMMISSION DES COMMUNAUTÉS EUROPÉENNES,
vu le traité instituant la Communauté économique européenne,vu la directive du Conseil, du 20 juillet 1970, concernant l'introduction
de modes de prélèvement d'échantillons et de méthodes d'analyse
communautaires pour le contrôle officiel des aliments des animaux(
1),
et notamment son article 2,
considérant que la directive susvisée prévoit que les contrôles officiels
des aliments des animaux, pour constater si les conditions prescrites envertu des dispositions législatives, réglementaires et administrativesconcernant la qualité et la composition des aliments des animaux, sontrespectées et sont effectuées selon des modes de prélèvement d'échan-
tillons et des méthodes d'analyse communautaires;
considérant qu'il convient d'établir le plus rapidement possible toutes
les méthodes d'analyse nécessaires, et que la fixation des méthodes dedosage de l'acide cyanhydrique, du calcium, des carbonates, descendres brutes, des cendres insolubles dans HCl, du chlore des chlo-rures, de l'essence de moutarde, du lactose, du potassium, du sodium,
des sucres, de la théobromine et de l'urée, la détermination des alca-
loïdes des lupins ainsi que l'activité uréasique des produits de sojaconstituent une première étape;
considérant que les mesures prévues dans la présente directive sont
conformes à l'avis du Comité permanent des aliments des animaux,
A ARRÊTÉ LA PRÉSENTE DIRECTIVE:
Article premier
Les États membres prescrivent que les analyses pour les contrôles offi-
ciels des aliments des animaux en ce qui concerne leurs teneurs enacide cyanhydrique, calcium, carbonates, cendres brutes, cendres inso-
lubles dans HC1, chlore des chlorures, ►
M3 ◄lactose,
potassium, sodium, sucres ►M3 ◄et urée
►M2 ◄ainsi que l'activité uréasique des produits de
soja sont effectuées selon les méthodes décrites à l'annexe de laprésente directive.
Les dispositions générales figurant à la partie 1 de l'annexe sont appli-
cables aux méthodes d'analyse arrêtées selon la directive 70/373/CEE
du Conseil.
Article 2
Les États membres mettent en vigueur, le 1
erjuillet 1972 au plus tard,
les dispositions législatives, réglementaires ou administratives néces-saires pour se conformer aux dispositions de la présente directive. Ilsen informent immédiatement la Commission.
Article 3
Les États membres sont destinataires de la présente directive.1971L0250 — FR — 26.05.1999 — 003.001 — 2
(1)J O noL 170 du 3. 8. 1970, p. 2.▼M1
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ANNEXE
MÉTHODES D'ANALYSE DES COMPOSANTS DES ALIMENTS DES
ANIMAUX
1.DISPOSITIONS GÉNÉRALES CONCERNANT LES MÉTHODES
D'ANALYSEDES ALIMENTS DES ANIMAUX
A. PRÉPARATION DES ÉCHANTILLONS EN VUE DE L'ANALYSE
1.Objet
Les modalités décrites ci-après concernent la préparation en vue de l'ana-
lyse des échantillons finals, transmis aux laboratoires de contrôle après
avoir été prélevés conformément aux dispositions de la première directive
76/371/CEE de la Commission, du 1ermars 1976, portant fixation de modes
de prélèvement communautaires d'échantillons pour le contrôle officiel des
aliments d'animaux(1).
La préparation de ces échantillons doit permettre que les prises d'essais
prévues dans les méthodes d'analyse soient homogènes et représentatives
des échantillons finals.
2.Précautions à prendre
Effectuer toutes les opérations de façon à éviter autant que possible une
contamination de l'échantillon ou des modifications de sa composition.
Effectuer les broyages, les mélanges et les tamisages aussi rapidement que
possible en exposant au minimum l'échantillon à l'air et à la lumière. Éviter
l'utilisation de moulins ou de broyeurs susceptibles de produire un échauf-
fement notable de l'échantillon. Le broyage manuel est recommandé pour
les aliments particulièrement sensibles à la chaleur. Veiller, en outre, à ce
que l'appareillage même ne soit pas une source de contamination en oligo-
éléments.
Si l'échantillon ne peut être préparé sans variation sensible de sa teneur en
humidité, déterminer cette teneur avant et après la préparation par la
méthode établie à la partie 1 de l'annexe de la deuxième directive 71/393/
CEE de la Commission, du 18 novembre 1971, portant fixation de
méthodes d'analyse communautaires pour le contrôle officiel des aliments
des animaux(2), modifiée par la directive 73/47/CEE de la Commission,
du 5 décembre 1972(3),
3.Mode opératoire
Mélanger intimement l'échantillon final soit mécaniquement, soit manuelle-
ment. Partager en deux portions égales (si possible, par la méthode des
quartiers). Conserver l'une des portions dans un récipient approprié, propre
et sec, muni d'une fermeture hermétique, et préparer l'autre portion ou une
partie représentative de celle-ci, de 100 grammes au moins, comme indiqué
ci-après.
3.1.Aliments pouvant être moulus en l'état
Sauf indication spécifique dans les méthodes d'analyse, tamiser la totalité
de l'échantillon sur un tamis à mailles carrées de 1 mm de côté (conforme
à la recommandation ISO R565) après avoir broyé, si nécessaire. Éviter
tout broyage superflu.
Mélanger l'échantillon tamisé et le recueillir dans un récipient approprié,
propre et sec, muni d'une fermeture hermétique. Mélanger à nouveau,
immédiatement avant de prélever la prise d'essai.
3.2.Aliments pouvant être moulus après dessication
Sauf indication spécifique dans les méthodes d'analyse, dessécher l'échan-
tillon, de façon à ramener sa teneur en humidité à 8-12 %, en appliquant
le procédé de prédessication indiqué sous le point 4.3 de la méthode de1971L0250 — FR — 26.05.1999 — 003.001 — 3
(1)J O noL 102 du 15. 4. 1976, p. 1.
(2)J O noL 279 du 20. 12. 1971, p. 7.
(3)J O noL 83 du 30. 3. 1973, p. 35.▼M1
▼M1
dosage de l'humidité mentionnée sous le point 2 ci-dessus. Procéder ensuite
comme indiqué sous le point 3.1.
3.3.Aliments liquides ou semi-liquides
Recueillir l'échantillon dans un récipient approprié, propre et sec, muni
d'une fermeture hermétique. Mélanger intimement, immédiatement avant
de prélever la prise d'essai.
3.4.Autres aliments
Si l'échantillon ne peut être préparé selon l'un des procédés indiqués ci-
dessus, appliquer tout autre procédé de préparation approprié permettant
d'obtenir des prises d'essai homogènes et représentatives des échantillons
finals.
4.Conservation des échantillons
Conserver les échantillons à une température ne pouvant altérer leur
composition. Utiliser des récipients de verre brun pour les échantillons
destinés à l'analyse de vitamines ou de substances particulièrement sensi-
bles à la lumière.
B. DISPOSITIONS CONCERNANT LES RÉACTIFS ET L'APPAREILLAGE
UTILISÉS DANS LES MÉTHODES D'ANALYSE
1. Sauf indication spécifique dans les méthodes d'analyse tous les réactifs
doivent être de qualité «pour analyse» (p.a.). Pour l'analyse des oligo-
éléments, la pureté des réactifs doit être contrôlée par un essai à blanc.
Selon le résultat obtenu, une purification supplémentaire peut être requise.
2. Les opérations de mise en solution, de dilution, de rinçage ou de lavage,
mentionnées dans les méthodes d'analyse sans indication quant à la nature
du solvant ou du diluant, impliquent qu'il faut utiliser de l'eau. En règle
générale, l'eau doit être déminéralisée ou distillée. Dans des cas particu-
liers, indiqués dans les méthodes d'analyse, elle doit être soumise à des
procédés spécifiques de purification.
3. Compte tenu de l'équipement usuel des laboratoires de contrôle, seuls les
instruments et appareils spéciaux ou devant répondre à des conditions
spécifiques sont mentionnés dans les méthodes d'analyse. Ce matériel doit
être bien nettoyé, tout particulièrement pour les déterminations de très
faibles quantités de substances.
C. APPLICATION DES MÉTHODES D'ANALYSE ET EXPRESSION DES
RÉSULTATS
1. En général, une seule méthode d'analyse est établie pour la détermination
d'une substance dans les aliments des animaux. Lorsque plusieurs méthodes
sont données, la méthode appliquée par le laboratoire de contrôle doit être
mentionnée sur le bulletin d'analyse.
2. Le résultat indiqué sur le bulletin d'analyse est la valeur moyenne obtenue à
partir de deux déterminations au moins, effectuées sur des prises d'essais
distinctes, et dont la répétabilité est satisfaisante.
Ce résultat doit être exprimé conformément aux indications données dans la
méthode d'analyse avec un nombre approprié de chiffres significatifs, et
être corrigé, si nécessaire, en fonction de la teneur en humidité de l'échan-tillon final, préalable à la préparation.1971L0250 — FR — 26.05.1999 — 003.001 — 4
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2.DOSAGE DE L'ACIDE CYANHYDRIQUE
1.Objet et domaine d'application
La méthode permet de déterminer la teneur en acide caynhydrique libre et
combiné sous forme de glucosides des aliments des animaux et, notamment,
des produits de graines de lin, de farine de manioc et de certaines espèces de
haricots.
2.Principe
L'échantillon est mis en suspension dans l'eau. L'acide cyanhydrique est
libéré sous l'action de ferments, entraîné par distillation à la vapeur d'eau et
recueilli dans un volume déterminé de solution de nitrate d'argent acidifiée.
Le cyanure d'argent est séparé par filtration et l'excès de nitrate d'argent est
titré par une solution de thiocyanate d'ammonium.
3.Réactifs
3.1. Suspension d'amandes douces: broyer 20 amandes douces mondées dans
100 ml d'eau à 37 à 40 ºC. Vérifier l'absence d'acide cyanhydrique sur
10 ml de la suspension, à l'aide d'un papier picro-sodé ou en effectuant
un essai à blanc comme indiqué en 5 dernier paragraphe.
3.2. Solution à 10 pour cent (p/v) d'acétate de sodium, neutre à la phénolph-
taléine.
3.3. Émulsion d'antimousse (silicone, par ex.).3.4. Acide nitrique, d: 1,40.
3.5. Solution de nitrate d'argent: 0,02 N.
3.6. Solution de thiocyanate d'ammonium: 0,02 N.3.7. Solution saturée de sulfate d'ammonium ferrique.
3.8. Ammoniaque, d: 0,958.
4.Appareillage
4.1. Étuve munie d'un thermostat réglé à 38 ºC.4.2. Appareil de distillation par entraînement à la vapeur d'eau muni d'un
réfrigérant avec rallonge courbée.
4.3. Ballons à fond plat de 1000 ml, à bouchon rodé.
4.4. Bain d'huile.
4.5. Burette graduée à 1/20 ml.
5.Mode opératoire
Peser, à 5 mg près, 20 g de l'échantillon, les introduire dans un ballon de 1 l
à fond plat et ajouter 50 ml d'eau et 10 ml de suspension d'amandes douces(3.1). Boucher le ballon et le maintenir pendant seize heures dans l'étuve à
38 ºC. Refroidir ensuite à la température ambiante et ajouter 80 ml d'eau,
10 ml de solution d'acétate de sodium (3.2) et une goutte d'émulsion anti-
mousse (3.3).
Relier le ballon à l'appareil de distillation à la vapeur et le placer dans un
bain d'huile préalablement portée à une température légèrement supérieure à
100 ºC. Distiller 200 à 300 ml de liquide en faisant passer dans le ballon un
puissant courant de vapeur et en chauffant doucement le bain d'huile.
Recueillir le distillat dans un erlenmeyer placé à l'abri de la lumière et conte-
nant 50 ml exactement de solution de nitrate d'argent 0,02 N (3.5) et 1 ml
d'acide nitrique (3.4). Veiller à ce que la rallonge du réfrigérant plonge dans
la solution de nitrate d'argent.
Transvaser le contenu de l'erlenmeyer dans un ballon jaugé de 500 ml,
compléter au volume avec de l'eau, agiter et filtrer. Prélever 250 ml du filtrat,
ajouter 1 ml environ de solution de sulfate d'ammonium ferrique (3.7) et
titrer en retour l'excès de nitrate d'argent par la solution de thiocyanate
d'ammonium 0,02 N (3.6) débitée de la burette graduée à 1/20 ml.
Effectuer éventuellement un essai à blanc en appliquant le même mode
opératoire à 10 ml de suspension d'amandes douces (3.1), en l'absence
d'échantillon à analyser.1971L0250 — FR — 26.05.1999 — 003.001 — 5
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6.Calcul des résultats
Si l'essai à blanc indique une consommation de solution de nitrate d'argent
0,02 N, soustraire cette valeur du volume consommé par le distillat de
l'échantillon.
1 ml de AgNO30,02 N correspond à 0,54 mg de HCN. Exprimer le résultat
en pour cent de l'échantillon.
7.Observation
Si l'échantillon contient une quantité importante de sulfures (haricots, par
ex.), il se forme un précipité noir de sulfure d'argent qui est filtré avec le
dépôt de cyanure d'argent. La formation de ce précipité entraîne une perte
de solution de nitrate d'argent 0,02 N dont le volume doit être retranché du
volume pris en considération pour le calcul de la teneur en HCN. A cet effet,
procéder comme indiqué ci-après.
Traiter le dépôt retenu sur le filtre par 50 ml d'ammoniaque (3.8) pour
dissoudre le cyanure d'argent. Laver le résidu par de l'ammoniaque diluée et
procéder à la détermination de sa teneur en argent. Convertir la valeur
obtenue en ml de solution de nitrate d'argent 0,02 N.
La teneur en HCN de l'échantillon peut également être déterminée par titra-
tion du filtrat ammoniacal acidifié par l'acide nitrique.
3.DOSAGE DU CALCIUM
1.Objet et domaine d'application
La méthode permet de déterminer la teneur en calcium total des aliments des
animaux.
2.Principe
L'échantillon est incinéré, les cendres sont traitées par l'acide chlorhydrique
et le calcium est précipité sous forme d'oxalate de calcium. Après dissolution
du précipité dans l'acide sulfurique, l'acide oxalique formé est titré par une
solution de permanganate de potassium.
3.Réactifs
3.1. Acide chlorhydrique p.a., d: 1,14
3.2. Acide nitrique p.a., d: 1,40
3.3. Acide sulfurique p.a., d: 1,133.4. Ammoniaque p.a., d: 0,983.5. Solution saturée à froid d'oxalate d'ammonium p.a.
3.6. Solution à 30 pour cent (p/v) d'acide citrique p.a.
3.7. Solution à 5 pour cent (p/v) de chlorure d'ammonium p.a.3.8. Solution à 0,04 pour cent (p/v) de vert de bromocrésol3.9. Solution de permanganate de potassium 0,1 N
4.Appareillage
4.1. Four à moufle électrique, à circulation d'air et thermostat4.2. Creusets à incinération en platine, quartz ou porcelaine4.3. Creusets filtrants en verre, porosité G
4
5.Mode opératoire
Peser, à 1 mg près, 5 g environ de l'échantillon (ou plus si nécessaire), les
calciner à 550 ºC et transvaser les cendres dans un bécher de 250 ml. Ajouter
40 ml d'acide chlorhydrique (3.1), 60 ml d'eau et quelques gouttes d'acide
nitrique (3.2). Porter à ébullition et maintenir celle-ci pendant trente minutes.
Refroidir, transvaser la solution dans un ballon jaugé de 250 ml. Rincer,
compléter le volume jusqu'au trait de jauge avec de l'eau, homogénéiser et
filtrer.
Prélever à la pipette, selon la teneur présumée en calcium, une quantité
aliquote contenant de 10 à 40 mg de calcium et l'introduire dans un bécher
de 250 ml. Ajouter 1 ml de solution d'acide citrique (3.6) et 5 ml de solution
de chlorure d'ammonium (3.7). Compléter le volume à 100 ml environ avec1971L0250 — FR — 26.05.1999 — 003.001 — 6
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de l'eau. Porter à ébullition, ajouter 8 à 10 gouttes de solution de vert de
bromocrésol (3.8) et 30 ml de solution chaude d'oxalate d'ammonium (3.5).
Si un précipité apparaît, dissoudre celui-ci par addition de quelques gouttes
d'acide chlorhydrique (3.1).
Neutraliser ensuite très lentement par l'ammoniaque (3.4), en agitant cons-
tamment, jusqu'à obtention d'un pH de l'ordre de 4,4 à 4,6 (virage del'indicateur). Placer le bécher dans un bain d'eau bouillante, maintenir durant
trente minutes pour laisser déposer le précipité formé. Retirer le bécher du
bain d'eau. Laisser reposer durant une heure et filtrer dans un creuset filtrant
G
4.
Laver le bécher et le creuset à l'eau jusqu'à élimination de l'excès d'oxalate
d'ammonium (l'absence de chlorure dans les eaux de lavage indique que le
lavage a été suffisant).
Dissoudre le précipité sur le filtre par 50 ml d'acide sulfurique (3.3) chaud.
Rincer le creuset à l'eau chaude et amener le filtrat à 100 ml environ.
Amener la température à 70-80 ºC et titrer goutte à goutte par la solution de
permanganate de potassium (3.9) jusqu'à obtention d'une coloration rose
persistant pendant 1 minute.
6.Calcul des résultats
1 ml de permanganate de potassium 0,1 N correspond à 2,004 mg de
calcium. Exprimer le résultat obtenu en pour cent de l'échantillon.
7.Observations
7.1. Pour les très faibles teneurs en calcium, procéder comme indiqué ci-
après. Filtrer le précipité d'oxalate de calcium sur un papier filtre sans
cendres. Après lavage, sécher le filtre et le calciner à 550 ºC dans un
creuset en platine. Reprendre le résidu par quelques gouttes d'acide
sulfurique (3.3), évaporer à sec, calciner à nouveau à 550 ºC et peser.
Si p représente le poids de sulfate de calcium obtenu, la teneur en
calcium de la quantité aliquote prélevée = p × 0,2944.
7.2. Si l'échantillon est constitué uniquement de matières minérales, procéder
à la dissolution par l'acide chlorhydrique sans incinération préalable.
Pour les produits tels que les phosphates aluminocalciques, difficiles à
dissoudre dans les acides, procéder comme suit à une fusion alcaline
avant la dissolution. Mélanger intimement dans un creuset de platine la
prise d'essai avec environ 5 fois son poids d'un mélange, en parties
égales, de carbonate de potassium et de carbonate de sodium. Chauffer
avec précaution jusqu'à fusion complète du mélange. Après refroidisse-
ment, dissoudre par l'acide chlorhydrique.
7.3. Si la teneur en magnésium de l'échantillon est élevée, procéder à une
seconde précipitation de l'oxalate de calcium.
4.DOSAGE DES CARBONATES
1.Objet et domaine d'application
La méthode permet de doser les carbonates, conventionnellement exprimés
en carbonate de calcium, dans la plupart des aliments des animaux. Dans
certains cas cependant (carbonate de fer, par exemple), il faut utiliser une
méthode particulière.
2.Principe
Les carbonates sont décomposés par l'acide chlorhydrique; le gaz carbonique
libéré est recueilli dans un tube gradué et son volume est comparé à celui
dégagé, dans les mêmes conditions, par une quantité connue de carbonate
de calcium p.a.
3.Réactifs
3.1. Acide chlorhydrique, d: 1,10.3.2. Carbonate de calcium p.a.
3.3. Acide sulfurique 0,1 N environ, coloré par du rouge de méthyle.
4.Appareillage
Appareil selon Scheibler-Dietrich (v. schéma) ou appareil équivalent.1971L0250 — FR — 26.05.1999 — 003.001 — 7
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5.Mode opératoire
Selon la teneur en carbonates de l'échantillon, peser une prise d'essai comme
indiqué ci-après:
0,5 g pour les produits contenant de 50 à 100 pour cent de carbonates,
exprimés en carbonate de calcium;
1 g pour les produits contenant de 10 à 50 pour cent de carbonates,
exprimés en carbonate de calcium;
2 g à 3 g pour les autres produits.
Introduire la prise d'essai dans le flacon spécial (4) de l'appareil, muni d'un
petit tube en matière incassable contenant 10 ml d'acide chlorhydrique (3.1),
et raccorder le flacon à l'appareil. Tourner le robinet à trois voies (5) de
façon que le tube (1) communique avec l'extérieur. A l'aide du tube mobile
(2), qui est rempli d'acide sulfurique coloré (3.3) et relié au tube gradué (1),
amener le niveau du liquide à la graduation zéro. Tourner le robinet (5), de
façon à faire communiquer les tubes (1) et (2), et vérifier le niveau zéro.
Laisser couler lentement l'acide chlorhydrique (3.1) sur la prise d'essai en
inclinant le flacon (4). Égaliser la pression en abaissant le tube (2). Agiter
le flacon (4) jusqu'à cessation complète du dégagement de gaz carbonique.
Rétablir la pression en ramenant le liquide au même niveau dans les tubes (1)
et (2). Faire la lecture après quelques minutes , lorsque le volume gazeux est
devenu constant.
Effectuer dans les mêmes conditions un essai de comparaison sur 0,5 g de
carbonate de calcium (3.2).
6.Calcul des résultats
La teneur en g de carbonates, exprimés en carbonate de clacium, pour cent
d'échantillon est donnée par le rapport:
V/C2100
T/C22P
dans lequel:
V = ml de CO2dégagés par la prise d'essai.
T = ml de CO2dégagés par 0,5 g de CaCO3p.a.
P = poids de la prise d'essai en g.
7.Observations
7.1. Lorsque la prise d'essai est supérieure à 2 g, introduire préalablement
15 ml d'eau distillée dans le flacon (4) et mélanger avant de commencer
l'essai. Employer le même volume d'eau pour l'essai de comparaison.
7.2. Si l'on utilise un appareil d'un volume différent de celui de Scheibler-
Dietrich, il faut y adapter la prise d'essai de l'échantillon et de la
substance de comparaison ainsi que le calcul des résultats.1971L0250 — FR — 26.05.1999 — 003.001 — 8
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APPAREIL D'APRÈS SCHEIBLER-DIETRICH POUR DOSAGE DU CO2
(Mesures en mm)
5.DOSAGE DES CENDRESBRUTES
1.Objet et domaine d'application
La méthode permet de déterminer la teneur en cendres brutes des aliments
des animaux.
2.Principe
L'échantillon est incinéré à 550 ºC; le résidu est pesé.
3.Réactifs
Solution à 20 pour cent (p/v) de nitrate d'ammonium.
4.Appareillage
4.1. Plaque chauffante.
4.2. Four à moufle électrique, avec thermostat.
4.3. Creusets à incinération en platine ou en alliage de platine et or (10 pour
cent Pt, 90 pour cent Au), rectangulaires (60 × 40 × 25 mm) ou ronds
(diamètre: 60 à 75 mm, hauteur: 20 à 25 mm).1971L0250 — FR — 26.05.1999 — 003.001 — 9
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5.Mode opératoire
Peser, à 1 mg près, 5 g environ de l'échantillon (2,5 g pour les produits ayant
tendance à gonfler) dans un creuset à incinération préalablement calciné et
taré. Placer le creuset sur la plaque chauffante et chauffer progressivement
jusqu'à carbonisation de la matière. Introduire le creuset dans le four à
moufle réglé à 550 ºC ± 5 ºC. Maintenir à cette température jusqu'à obtention
de cendres blanches, gris clair ou rougeâtres, apparemment dépourvues de
particules charbonneuses. Placer le creuset dans un dessiccateur, laisser
refroidir et peser immédiatement.
6.Calcul des résultats
Calculer le poids du résidu en déduisant la tare.
Exprimer le résultat en pour cent de l'échantillon.
7.Observations
7.1. Les cendres des matières difficiles à incinérer doivent être soumises à
une première incinération de trois heures au moins, refroidies et addi-
tionnées de quelques gouttes d'une solution à 20 pour cent de nitrate
d'ammonium (prudemment, pour éviter la dispersion ou le collage des
cendres). Poursuivre la calcination après dessiccation à l'étuve.
Répéter éventuellement l'opération jusqu'à incinération complète.
7.2. Pour les matières qui résistent au traitement indiqué en 7.1, opérer
comme suit. Après une incinération de trois heures, reprendre lescendres par de l'eau chaude et filtrer sur un petit filtre sans cendres.
Incinérer le filtre et son contenu dans le creuset initial. Amener le filtrat
dans le creuset refroidi, évaporer à sec, incinérer et peser.
7.3. Dans le cas des huiles et des graisses , peser avec exactitude une prise
d'essai de l'ordre de 25 g dans un creuset de capacité appropriée. Carbo-
niser en enflammant la matière au moyen d'une mèche de papier filtre
sans cendres. Après combustion, humecter par le minimum nécessaire
d'eau. Sécher et incinérer comme indiqué en 5.
6.DOSAGE DES CENDRESINSOLUBLES DANS L'ACIDE CHLORHY-
DRIQUE
1.Objet et domaine d'application
La méthode permet de déterminer la teneur en matières minérales insolubles
dans l'acide chlorhydrique des aliments des animaux. Deux procédés sont
prévus en fonction de la nature de l'échantillon.
1.1.Procédé A: applicable aux aliments organiques simples et à la plupart
des aliments composés;
1.2.Procédé B: applicable aux composés et mélanges minéraux ainsi qu'aux
aliments composés dont la teneur en insoluble chlorhydrique, déterminée
selon le procédé A, est supérieure à 1 pour cent.
2.Principe
2.1.Procédé A: l'échantillon est incinéré, les cendres sont traitées à ébulli-
tion par l'acide chlorhydrique et le résidu insoluble est filtré et pesé.
2.2.Procédé B: l'échantillon est traité par l'acide chlorhydrique. La solution
est filtrée, le résidu est incinéré et les cendres obtenues sont traitées
comme dans le procédé A.
3.Réactifs
3.1. Acide chlorhydrique 3 N.3.2. Solution à 20 pour cent (p/v) d'acide trichloracétique.
3.3. Solution à 1 pour cent (p/v) d'acide trichloracétique.
4.Appareillage
4.1. Plaque chauffante.4.2. Four à moufle électrique, avec thermostat.4.3. Creusets à incinération en platine ou en alliage de platine et or (10 pour
cent Pt, 90 pour cent Au), rectangulaires (60 × 40 × 25 mm) ou ronds
(diamètre: 60 à 75 mm, hauteur: 20 à 25 mm).1971L0250 — FR — 26.05.1999 — 003.001 — 10
▼B
5.Mode opératoire
5.1.Procédé A
Incinérer la prise d'essai selon le mode opératoire décrit pour le dosage
des cendres brutes. On peut également utiliser les cendres obtenues lors
de ce dosage.
Introduire les cendres dans un bécher de 250 à 400 ml à l'aide de 75 ml
d'acide chlorhydrique 3 N (3.1). Porter prudemment le liquide à ébulli-
tion douce et maintenir celle-ci pendant quinze minutes. Filtrer la
solution chaude sur un papier filtre sans cendres et laver le résidu avec
de l'eau chaude jusqu'à disparition de réaction acide. Sécher le filtre
contenant le résidu et incinérer dans un creuset taré à une température
de 550 ºC au moins et de 700 ºC au plus. Refroidir en dessiccateur et
peser.
5.2.Procédé B
Peser, à 1 mg près, 5 g de l'échantillon et les introduire dans un bécher
de 250 à 400 ml. Ajouter successivement 25 ml d'eau et 25 ml d'acidechlorhydrique 3 N (3.1), mélanger et attendre la fin de l'effervescence.
Ajouter encore 50 ml d'acide chlorhydrique 3 N (3.1). Attendre la fin
d'un éventuel dégagement gazeux, placer ensuite le bécher dans un
bain d'eau bouillante et l'y maintenir pendant trente minutes ou plus, si
nécessaire, afin d'hydrolyser complètement l'amidon éventuellement
présent.
Filtrer à chaud sur filtre sans cendres et laver le filtre à l'aide de 50 ml
d'eau chaude (v. observation 7). Placer le filtre contenant le résidu dans
un creuset à incinération, sécher et incinérer à une température de 550 ºC
au moins et 700 ºC au plus. Introduire ensuite les cendres dans un
bécher de 250 à 400 ml à l'aide de 75 ml d'acide chlorhydrique 3 N
(3.1); poursuivre comme indiqué en 5.1, deuxième alinéa.
6.Calcul des résultats
Calculer le poids du résidu en déduisant la tare. Exprimer le résultat en pour
cent de l'échantillon.
7.Observation
Si la filtration s'avère difficile, recommencer le dosage en remplaçant les
50 ml d'acide chlorhydrique 3 N par 50 ml d'acide trichloracétique à 20
pour cent (3.2) et en lavant le filtre à l'aide d'une solution chaude d'acide
trichloracétique à 1 pour cent (3.3).
7.DOSAGE DU CHLORE DES CHLORURES
1.Objet et domaine d'application
La méthode permet de doser le chlore des chlorures solubles dans l'eau,
conventionnellement exprimé en chlorure de sodium. Elle est applicable à
tous les aliments des animaux.
2.Principe
Les chlorures sont mis en solution dans l'eau. Si le produit contient des
matières organiques, on procède à une défécation. La solution est légèrement
acidifiée par l'acide nitrique et les chlorures sont précipités sous forme de
chlorure d'argent à l'aide d'une solution de nitrate d'argent. L'excès de nitrate
d'argent est titré par une solution de thiocyanate d'ammonium, selon la
méthode de Volhard.
3.Réactifs
3.1. Solution de thiocyanate d'ammonium 0,1 N.
3.2. Solution de nitrate d'argent 0,1 N.3.3. Solution saturée de sulfate d'ammonium ferrique.3.4. Acide nitrique, d: 1,383.5. Éther diéthylique p.a.3.6. Acétone p.a.3.7. Solution de Carrez I: dissoudre dans l'eau 24 g d'acétate de zinc,1971L0250 — FR — 26.05.1999 — 003.001 — 11
▼B
Zn (CH3COO)2·2H2O et 3 g d'acide acétique glacial. Compléter à
100 ml avec de l'eau.
3.8. Solution de Carrez II: dissoudre dans l'eau 10,6 g de ferrocyanure de
potassium K4[Fe (CN)6]·3H2O. Compléter à 100 ml avec de l'eau.
3.9. Charbon actif p.a., exempt de chlorures et n'en adsorbant pas.
4.Appareillage
Mélangeur (culbuteur): environ 35 à 40 retournements par minute.
5.Mode opératoire
5.1.Préparation de la solution
Selon la nature de l'échantillon, préparer une solution comme indiqué en
5.1.1, 5.1.2 ou 5.1.3.
Effectuer, en parallèle, un essai à blanc exempt d'échantillon à analyser.
5.1.1. Échantillons exempts de matière organique
Peser, à 1 mg près, une prise d'essai (pas plus de 10 g), ne conte-
nant pas plus de 3 g de chlore sous forme de chlorures et
l'introduire dans un flacon jaugé de 500 ml avec 400 ml d'eau à
20 ºC environ. Mélanger durant trente minutes dans le culbuteur,
compléter au volume, homogénéiser et filtrer.
5.1.2. Échantillons contenant des matières organiques, à l'exception des
produits mentionnés en 5.1.3
Peser, à 1 mg près, 5 g environ de l'échantillon et les introduire
avec 1 g de charbon actif dans un flacon jaugé de 500 ml.
Ajouter 400 ml d'eau à 20 ºC environ et 5 ml de solution de
Carrez I (3.7), agiter et ajouter ensuite 5 ml de solution de Carrez
II (3.8). Mélanger durant trente minutes dans le culbuteur,
compléter au volume, homogénéiser et filtrer.
5.1.3. Aliments cuits, tourteaux et farine de lin, produits riches en farine
de lin et aux autres produits riches en mucilages ou en
substances colloïdales (par ex. amidon dextriné)
Préparer la solution comme indiqué en 5.1.2 mais ne pas filtrer.
Décanter (si nécessaire, centrifuger), prélever 100 ml du liquide
surnageant et les les introduire dans un ballon jaugé de 200 ml.
Mélanger avec de l'acétone (3.6) et compléter au volume avec
ce solvant, homogénéiser et filtrer.
5.2.Titration
Introduire à la pipette dans un erlenmeyer 25 à 100 ml du filtrat (selon
la teneur présumée en chlore) obtenu en 5.1.1, 5.1.2 ou 5.1.3. La portion
aliquote ne doit pas contenir plus de 150 mg de chlore (Cl). Diluer, si
nécessaire, à 50 ml au moins avec de l'eau, ajouter 5 ml d'acide nitrique
(3.4), 20 ml de solution saturée de sulfate d'ammonium ferrique (3.3) et
2 gouttes de solution de thiocyanate d'ammonium (3.1) débitées à l'aide
d'une burette remplie jusqu'au trait de jauge zéro. Débiter ensuite à l'aide
d'une burette la solution de nitrate d'argent (3.2) de façon à obtenir un
excès de 5 ml. Ajouter 5 ml d'éther diéthylique (3.5) et agiter fortement
pour rassembler le précipité.
Titrer l'excès de nitrate d'argent par la solution de thiocyanate d'ammo-
nium (3.1) jusqu'à ce que le virage au rouge-brun persiste pendant une
minute.
6.Calcul des résultats
La quantité de chlore (p) exprimée en chlorure de sodium, présente dans le
volume de filtrat prélevé pour la titration, est donnée par la formule suivante:
p = 5,845 (V1−V2)m g
dans laquelle: V1= ml de solution de nitrate d'argent 0,1 N ajoutés
V2= ml de solution de thiocyanate d'ammonium 0,1 N
utilisés lors de la titration.
Si l'essai à blanc indique une consommation de solution de nitrate d'argent
0,1 N, retrancher cette valeur du volume (V1−V2).
Exprimer le résultat en pour cent de l'échantillon.1971L0250 — FR — 26.05.1999 — 003.001 — 12
▼B
7.Observations
7.1. La titration peut également se faire par potentiométrie;7.2. Pour les produits très riches en matières grasses, procéder à un dégrais-
sage préalable par l'éther diéthylique ou l'éther de pétrole;
7.3. Pour les farines de poisson, la titration peut être effectuée par la
méthode de Mohr.
9.DOSAGE DU LACTOSE
1.Objet et domaine d'application
La méthode permet de déterminer la teneur en lactose des aliments qui en
contiennent plus de 0,5 pour cent.
2.Principe
Les sucres sont dissous dans l'eau. La solution est soumise à la fermentation
par la levure Saccharomyces cerevisiae qui laisse le lactose intact. Après
défécation et filtration, la teneur en lactose du filtrat est déterminée par la
méthode Luff-Schoorl.
3.Réactifs
3.1. Suspension de Saccharomyces cerevisiae: Mettre en suspension 25 g de
levure fraîche dans 100 ml d'eau. La suspension se conserve une
semaine au maximum en réfrigérateur.
3.2. Solution de Carrez I:
Dissoudre dans l'eau 24 g d'acétate de zinc Zn (CH3COO)2·2H2Oe t3g
d'acide acétique glacial. Compléter à 100 ml avec de l'eau.
3.3. Solution de Carrez II: Dissoudre dans l'eau 10,6 g de ferrocyanure de
potassium K4[Fe (CN6)] · 3 H2O. Compléter à 100 ml avec de l'eau.
3.4. Réactif selon Luff-Schoorl:
Verser, tout en agitant prudemment, la solution d'acide citrique (3.4.2)
dans la solution de carbonate de sodium (3.4.3). Ajouter ensuite la solu-
tion de sulfate de cuivre (3.4.1) et compléter à 1 l avec de l'eau. Laisser
reposer une nuit et filtrer. Contrôler la normalité du réactif ainsi obtenu
(Cu 0,1 N; Na2CO32 N). Le pH de la solution doit être de 9,4 environ.
3.4.1. Solution de sulfate de cuivre: Dissoudre 25 g de sulfate de cuivre
p.a. Cu SO4·5H2O, exempt de fer, dans 100 ml d'eau.
3.4.2. Solution d'acide citrique:
Dissoudre 50 g d'acide citrique p.a. C6H8O7·H2O dans 50 ml
d'eau.
3.4.3. Solution de carbonate de sodium: Dissoudre 143,8 g de carbonate
de sodium anhydre p.a. dans 300 ml environ d'eau chaude.
Laisser refroidir.
3.5. Granulés de pierre ponce bouillis dans l'acide chlorhydrique, lavés à
l'eau et séchés.
3.6. Solution à 30 pour cent (p/v) d'iodure de potassium.
3.7. Acide sulfurique 6 N.
3.8. Solution de thiosulfate de sodium 0,1 N.3.9. Solution d'amidon: Ajouter un mélange de 5 g d'amidon soluble dans
30 ml d'eau à 1 l d'eau bouillante. Faire bouillir durant trois minutes,
laisser refroidir, ajouter éventuellement 10 mg d'iodure mercurique
comme agent conservateur.
4.Appareillage
Bain d'eau muni d'un thermostat, réglé de 38 à 40 ºC.1971L0250 — FR — 26.05.1999 — 003.001 — 13
▼M3
▼B
▼B
5.Mode opératoire
Peser, à 1 mg près, 1 g de l'échantillon et introduire cette prise d'essai dans
un ballon jaugé de 100 ml. Ajouter 25 à 30 ml d'eau. Placer le ballon
pendant trente minutes dans un bain d'eau bouillante et refroidir ensuite à
35 ºC environ. Ajouter 5 ml de suspension de levure (3.1) et homogénéiser.
Laisser reposer le ballon durant deux heures dans un bain d'eau, à la tempé-
rature de 38 à 40 ºC. Refroidir ensuite jusqu'à 20 ºC environ.
Ajouter 2,5 ml de solution de Carrez I (3.2) et agiter pendant trente secondes;
ajouter ensuite 2,5 ml de solution de Carrez II (3.3) et agiter à nouveau
pendant trente secondes. Compléter à 100 ml avec de l'eau, mélanger et
filtrer. Prélever à la pipette une quantité de filtrat n'excédant pas 25 ml et
contenant de préférence 40 à 80 mg de lactose et introduire celle-ci dans un
erlenmeyer de 300 ml. Si nécessaire, compléter à 25 ml avec de l'eau.
Procéder de la même façon à un essai à blanc avec 5 ml de suspension de
levure (3.1).
Déterminer comme suit la teneur en lactose selon Luff-Schoorl. Ajouter 25 ml
exactement du réactif selon Luff-Schoorl (3.4) et deux granulés de pierre
ponce (3.5). Chauffer, en agitant à la main, sur une flamme libre de hauteur
moyenne et porter le liquide à ébullition en deux minutes environ. Placerimmédiatement l'erlenmeyer sur une toile métallique pourvue d'un écran
d'amiante muni d'un trou de 6 cm environ de diamètre, sous laquelle on a
préalablement allumé une flamme. Celle-ci est réglée de façon que seul le
fond de l'erlenmeyer soit chauffé. Adapter ensuite un réfrigérant à reflux sur
l'erlenmeyer. A partir de ce moment, faire bouillir pendant dix minutes exac-
tement. Refroidir immédiatement dans l'eau froide et après cinq minutes
environ, titrer comme suit:
Ajouter 10 ml de solution d'iodure de potassium (3.6) et, immédiatement
après et avec prudence (en raison du risque de formation d'une mousse abon-
dante), 25 ml d'acide sulfurique 6 N (3.7). Titrer ensuite avec la solution de
thiosulfate de sodium 0,1 N (3.8) jusqu'à apparition d'une coloration jaune
terne, ajouter l'indicateur à l'amidon (3.9) et achever la titration.
Effectuer la même titration sur un mélange exactement mesuré de 25 ml de
réactif selon Luff-Schoorl (3.4) et 25 ml d'eau, après avoir ajouté 10 ml de
solution d'iodure de potassium (3.6) et 25 ml d'acide sulfurique 6 N (3.7),
sans porter à ébullition.
6.Calcul des résultats
Établir à l'aide de la table annexée la quantité de lactose en mg correspondant
à la différence entre les résultats des deux titrations, exprimés en ml de thio-
sulfate de sodium, 0,1 N.
Exprimer le résultat en parts de lactose anhydre pour cent de l'échantillon.
7.Observation
Pour les produits contenant plus de 40 pour cent de sucres fermentescibles,
utiliser plus de 5 ml de suspension de levure (3.1).
Table des valeurs pour 25 ml de réactif selon Luff-Schoorl
ml de Na
2S2O30,1 N, deux minutes de chauffage, dix minutes d'ébullition
Na2S2O30,1 NGlucose, fructose, sucres
invertis
C6H12O6Lactose
C12H22O11Maltose
C12H22O11Na2S2O30,1 N
ml mg différence mg différence mg différence ml
1 2,4 2,4 3,6 3,7 3,9 3,9 1
2 4,8 2,4 7,3 3,7 7,8 3,9 2
3 7,2 2,5 11,0 3,7 11,7 3,9 3
4 9,7 2,5 14,7 3,7 15,6 4,0 45 12,2 2,5 18,4 3,7 19,6 3,9 5
6 14,7 2,5 22,1 3,7 23,5 4,0 6
7 17,2 2,6 25,8 3,7 27,5 4,0 78 19,8 2,6 29,5 3,7 31,5 4,0 8
9 22,4 2,6 33,2 3,8 35,5 4,0 9
10 25,0 2,6 37,0 3,8 39,5 4,0 1011 27,6 2,7 40,8 3,8 43,5 4,0 1112 30,3 2,7 44,6 3,8 47,5 4,1 12
13 33,0 2,7 48,4 3,8 51,6 4,1 13
14 35,7 2,8 52,2 3,8 55,7 4,1 141971L0250 — FR — 26.05.1999 — 003.001 — 14
▼B
Na2S2O30,1 NGlucose, fructose, sucres
invertis
C6H12O6Lactose
C12H22O11Maltose
C12H22O11Na2S2O30,1 N
ml mg différence mg différence mg différence ml
15 38,5 2,8 56,0 3,9 59,8 4,1 15
16 41,3 2,9 59,9 3,9 63,9 4,1 16
17 44,2 2,9 63,8 3,9 68,0 4,2 17
18 47,1 2,9 67,7 4,0 72,2 4,3 1819 50,0 3,0 71,7 4,0 76,5 4,4 1920 53,0 3,0 75,7 4,1 80,9 4,5 20
21 56,0 3,1 79,8 4,1 85,4 4,6 21
22 59,1 3,1 83,9 4,1 90,0 4,6 2223 62,2 3,1 88,0 94,6 23
10.DOSAGE DU POTASSIUM
1.Objet et domaine d'application
La méthode permet de déterminer la teneur en potassium des aliments des
animaux.
2.Principe
L'échantillon est incinéré et les cendres sont mises en solution dans l'acide
chlorhydrique. La teneur en potassium de la solution est déterminée par
photométrie de flamme en présence de chlorure de césium et de nitrate d'alu-
minium. L'addition de ces substances élimine, dans une large mesure,
l'interférence d'éléments perturbateurs.
3.Réactifs
3.1. Acide chlorhydrique p.a., d: 1,12.3.2. Chlorure de césium, p.a.3.3. Nitrate d'aluminium Al (NO
3)3·9H2O, chimiquemeent pur.
3.4. Chlorure de potassium p.a., anhydre.3.5. Solution tampon: dissoudre dans l'eau 50 g de chlorure de césium (3.2)
et 250 g de nitrate d'aluminium (3.3), compléter à 1 l avec de l'eau et
homogénéiser. Conserver en flacons de matière plastique.
3.6. Solution étalon de potassium: dissoudre dans l'eau 1,907 g de chlorure
de potassium (3.4), en ajoutant 5 ml d'acide chlorhydrique (3.1),
compléter à 1 l avec de l'eau et homogénéiser. Conserver en flacons de
matière plastique. 1 ml de cette solution contient 1,00 mg de potassium.
4.Appareillage
4.1. Creusets à incinération en platine, quartz ou porcelaine, éventuellement
munis de couvercles.
4.2. Four à moufle électrique, avec thermostat.4.3. Photomètre de flamme.
5.Mode opératoire
5.1.Analyse de l'échantillon
Peser, en règle générale, 10 g de l'échantillon, à 10 mg près, dans un
creuset à incinération et incinérer la substance à 450 ºC durant trois
heures. Après refroidissement, transvaser quantitativement le résidu
d'incinération à l'aide de 250 à 300 ml d'eau, puis de 50 ml d'acidechlorhydrique (3.1) dans un ballon jaugé de 500 ml. Après cessation du
dégagement éventuel de gaz carbonique, chauffer la solution et la main-
tenir durant deux heures à une température voisine de 90 ºC, en agitant
de temps en temps. Laisser refroidir à la température ambiante, porter au
trait de jauge avec de l'eau, agiter et filtrer. Introduire dans un ballon
jaugé de 100 ml une partie aliquote du filtrat contenant au maximum
1,0 mg de potasium, ajouter 10,0 ml de solution tampon (3.5), porter
au trait de jauge avec de l'eau et homogénéiser. En présence de plus
fortes teneurs en potassium, diluer la solution à analyser dans des1971L0250 — FR — 26.05.1999 — 003.001 — 15
▼B
proportions adéquates, avant l'addition de la solution tampon. Le tableau
ci-après est donné à titre indicatif pour une prise d'essai de 10 g environ.
Teneur présumée de l'échantillon en
potassium
(% K)Facteur de dilution Partie aliquote en ml de la solution
jusqu'à 0,1 — 50
0,1 à 0,5 — 100,5 à 1,0 — 5
1,0 à 5,0 1: 10 10
5,0 à 10,0 1: 10 5
10,0 à 20,0 1: 20 5
Effectuer la mesure par photométrie de flamme à la longueur d'onde de
768 nm.
Calculer le résultat à l'aide de la courbe d'étalonnage.
5.2.Courbe d'étalonnage
Introduire 10 ml exactement de la solution étalon (3.6) dans un ballon
jaugé de 250 ml, porter au trait de jauge avec de l'eau et homogénéiser.
Introduire dans des ballons jaugés de 100 ml exactement 5, 10, 15, 20 et
25 ml de cette solution, correspondant respectivement à des quantités de
potassium de 0,2, 0,4, 0,6, 0,8 et 1,0 mg. Compléter la série par un
ballon témoin exempt de solution étalon. Ajouter dans chaque ballon
10,0 ml de solution tampon (3.5), porter au trait de jauge avec de l'eau
et homogénéiser. Effectuer les mesures comme indiqué en 5.1. Le tracé
de la courbe d'étalonnage est en général linéaire jusqu'à une concentra-
tion en potassium de 1 mg dans 100 ml de solution.
6.Calcul des résultats
Exprimer le résultat en pour cent de l'échantillon.
7.Observation
L'adjonction de solution tampon (3.5) pour éliminer l'interférence d'éléments
perturbateurs n'est pas toujours nécessaire.
11.DOSAGE DU SODIUM
1.Objet et domaine d'application
La méthode permet de déterminer la teneur en sodium des aliments des
animaux.
2.Principe
L'échantillon est incinéré et les cendres sont mises en solution dans l'acide
chlorhydrique. La teneur en sodium de la solution est déterminée par photo-
métrie de flamme en présence de chlorure de césium et de nitrate
d'aluminium. L'addition de ces substances élimine, dans une large mesure,
l'interférence d'éléments perturbateurs.
3.Réactifs
3.1. Acide chlorhydrique p.a., d: 1,12
3.2. Chlorure de césium, p.a.
3.3. Nitrate d'aluminium Al (NO
3)3·9H2O, chimiquement pur
3.4. Chlorure de sodium p.a., anhydre
3.5. Solution tampon: dissoudre dans l'eau 50 g de chlorure de césium (3.2)
et 250 g de nitrate d'aluminium (3.3), compléter à 1 l avec de l'eau et
homogénéiser. Conserver en flacons de matière plastique.
3.6. Solution étalon de sodium: dissoudre dans l'eau 2,542 g de chlorure de
sodium (3.4) en ajoutant 5 ml d'acide chlorhydrique (3.1), compléter à 1 l
avec de l'eau et homogénéiser. Conserver en flacons de matière plas-
tique. 1 ml de cette solution contient 1,00 mg de sodium.1971L0250 — FR — 26.05.1999 — 003.001 — 16
▼B
4.Appareillage
4.1. Creusets à incinération en platine, quartz ou porcelaine, éventuellement
munis de couvercles.
4.2. Four à moufle électrique, avec thermostat.4.3. Photomètre de flamme.
5.Mode opératoire
5.1.Analyse de l'échantillon
Peser, en règle générale, 10 g de l'échantillon à 10 mg près dans un
creuset à incinération et incinérer la substance à 450 ºC durant trois
heures. Éviter la surchauffe (inflammation). Après refroidissement,
transvaser quantitativement le résidu d'incinération à l'aide de 250 à
300 ml d'eau, puis de 50 ml d'acidechlorhydrique (3.1) dans un ballon
jaugé de 500 ml. Après cessation du dégagement éventuel de gaz carbo-
nique, chauffer la solution et la maintenir durant deux heures à une
température voisine de 90 ºC, en agitant de temps en temps. Laisser
refroidir à la température ambiante, porter au trait de jauge avec del'eau, agiter et filtrer. Introduire dans un ballon jaugé de 100 ml une
partie aliquote du filtrat contenant au maximum 1,0 mg de sodium,
ajouter 10,0 ml de solution tampon (3.5), porter au trait de jauge avec
de l'eau et homogénéiser. En présence de plus fortes teneurs en sodium,
diluer la solution à analyser dans des proportions adéquates, avant
l'addition de la solution tampon. Le tableau ci-après est donné à titre
indicatif pour une prise d'essai de 10 g environ.
Teneur présumée de l'échantillon en
sodium
(% Na)Facteur de dilution Partie aliquote en ml de la solution
jusqu'à 0,1 — 50
0,1 à 0,5 — 10
0,5 à 1,0 — 5
1,0 à 5,0 1: 10 105,0 à 10,0 1: 10 5
10,0 à 20,0 1: 20 5
Effectuer la mesure par photométrie de flamme à la longueur d'onde de
589 nm.
Calculer le résultat à l'aide de la courbe d'étalonnage.
5.2.Courbe d'étalonnage
Introduire 10 ml exactement de la solution étalon (3.6) dans un ballon
jaugé de 250 ml, porter au trait de jauge avec de l'eau et homogénéiser.
Introduire dans des ballons jaugés de 100 ml exactement 5, 10, 15, 20 et25 ml de cette solution, correspondant respectivement à des quantités de
sodium de 0,2, 0,4, 0,6, 0,8 et 1,0 mg. Compléter la série par un ballon
témoin exempt de solution étalon. Ajouter dans chaque ballon 10,0 ml
de solution tampon (3.5), porter au trait de jauge avec de l'eau et homo-
généiser. Effectuer les mesures comme indiqué en 5.1. Le tracé de la
courbe d'étalonnage est en général linéaire jusqu'à une concentration en
sodium de 1 mg dans 100 ml de solution.
6.Calcul des résultats
Exprimer le résultat en pour cent de l'échantillon.
7.Observations
7.1. Pour les produits dont la teneur en sodium est supérieure à 4 pour cent,
il est préférable d'incinérer la substance durant deux heures dans un
creuset muni d'un couvercle. Après refroidissement, ajouter de l'eau,
mettre le résidu en suspension à l'aide d'un fil de platine, sécher et inci-
nérer à nouveau durant deux heures dans le creuset muni de son
couvercle.
7.2. Si l'échantillon est constitué uniquement de matières minérales, procéder
à la dissolution, sans incinération préalable.1971L0250 — FR — 26.05.1999 — 003.001 — 17
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12.DOSAGE DES SUCRES
1.Objet et domaine d'application
La méthode permet de doser les sucres réducteurs et les sucres totaux après
inversion, exprimés en glucose ou, le cas échéant, en saccharose, par conver-
sion à l'aide du facteur 0,95. Elle est applicable aux aliments composés. Des
modalités particulières sont prévues pour d'autres aliments. Le cas échéant, il
y a lieu de doser séparément le lactose et d'en tenir compte dans le calcul des
résultats.
2.Principe
Les sucres sont dissous dans l'éthanol dilué; la solution est déféquée au
moyen des réactifs de Carrez I et II. Après élimination de l'éthanol, les
dosages sont effectués avant et après inversion, selon la méthode de Luff-
Schoorl.
3.Réactifs
3.1. Éthanol à 40 pour cent (v/v), d: 0,948 à 20 ºC, amené au point de
virage de la phénolphtaléine.
3.2. Solution de Carrez I:
Dissoudre dans l'eau 24 g d'acétate de zinc Zn (CH3COO)2·2H2Oe t
3 g d'acide acétique glacial. Compléter à 100 ml avec de l'eau.
2H2O et 3 g d'acide acétique glacial. Compléter à 100 ml avec de
l'eau.
3.3. Solution de Carrez II: Dissoudre dans l'eau 10,6 g de ferrocyanure de
potassium K4[Fe (CN6)] · 3 H2O. Compléter à 100 ml avec de l'eau.
3.4. Solution à 0,1 pour cent (p/v) de méthylorange.
3.5. Acide chlorhydrique 4 N.3.6. Acide chlorhydrique 0,1 N.
3.7. Solution d'hydroxyde de sodium 0,1 N.
3.8. Réactif selon Luff-Schoorl:
Verser, tout en agitant prudemment, la solution d'acide citrique (3.8.2)
dans la solution de carbonate de sodium (3.8.3). Ajouter ensuite la
solution de sulfate de cuivre (3.8.1) et compléter à 1 l avec de l'eau.
Laisser reposer une nuit et filtrer. Contrôler la normalité du réactif
ainsi obtenu (Cu 0,1 N; Na
2CO32 N). Le pH de la solution doit être
de 9,4 environ.
3.8.1. Solution de sulfate de cuivre: dissoudre 25 g de sulfate de cuivre
p.a., CuSO4·5H2O, exempt de fer, dans 100 ml d'eau.
3.8.2. Solution d'acide citrique: dissoudre 50 g d'acide citrique p.a.,
C6H8O7·H2O, dans 50 ml d'eau.
3.8.3. Solution de carbonate de sodium: dissoudre 143,8 g de carbo-
nate de sodium anhydre p.a. dans 300 ml environ d'eau chaude.
Laisser refroidir.
3.9. Solution de thiosulfate de sodium 0,1 N.3.10. Solution d'amidon: Ajouter un mélange de 5 g d'amidon soluble dans
30 ml d'eau à 1 l d'eau bouillante. Faire bouillir durant trois minutes,
laisser refroidir, ajouter éventuellement 10 mg d'iodure mercurique
comme agent conservateur.
3.11. Acide sulfurique 6 N.
3.12. Solution à 30 pour cent (p/v) d'iodure de potassium.
3.13. Granulés de pierre ponce bouillis dans l'acide chlorhydrique, lavés à
l'eau et séchés.
3.14. Isopentanol.
4.Appareillage
Mélangeur (culbuteur): environ 35 à 40 retournements par minute.1971L0250 — FR — 26.05.1999 — 003.001 — 18
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5.Mode opératoire
5.1.Mise en solution
Peser, à 1 mg près, 2,5 g de l'échantillon, et les introduire dans un
ballon jaugé de 250 ml. Ajouter 200 ml d'éthanol (3.1) et mélanger
pendant une heure dans le culbuteur. Ajouter 5 ml de solution de Carrez
I (3.2) et agiter pendant une minute. Ajouter ensuite 5 ml de solution de
Carrez II (3.3) et agiter à nouveau pendant une minute. Porter au
volume avec de l'éthanol (3.1), homogénéiser et filtrer. Prélever 200 ml
du filtrat et évaporer environ la moitié du volume, afin d'éliminer la
majeure partie de l'éthanol. Transvaser quantitativement le résidu d'éva-
poration, à l'aide d'eau chaude, dans un ballon jaugé de 200 ml,
refroidir, porter au volume avec de l'eau, homogénéiser et filtrer, si
nécessaire. Cette solution sera utilisée pour le dosage des sucres réduc-
teurs et, après inversion, pour le dosage des sucres totaux.
5.2.Dosage des sucres réducteurs
Prélever à la pipette une quantité de solution n'excédant pas 25 ml et
contenant moins de 60 mg de sucres réducteurs, exprimés en glucose.
Si nécessaire, compléter à 25 ml avec de l'eau distillée et déterminer la
teneur en sucres réducteurs selon Luff-Schoorl. Le résultat est exprimé
en glucose pour cent.
5.3.Dosage des sucres totaux après inversion
Prélever à la pipette 50 ml de solution et les porter dans un ballon jaugé
de 100 ml. Ajouter quelques gouttes de solution de méthylorange (3.4)
puis, prudemment et tout en agitant, de l'acide chlorhydrique 4 N (3.5)
jusqu'à virage net au rouge. Ajouter 15 ml d'acide chlorhydrique 0,1 N
(3.6), plonger la ballon dans un bain d'eau à forte ébullition et l'y main-
tenir durant trente minutes. Refroidir rapidement à 20 ºC environ et
ajouter 15 ml de solution d'hydroxyde de sodium 0,1 N (3.7). Compléter
à 100 ml avec de l'eau et homogénéiser. Prélever une quantité n'excé-
dant pas 25 ml et contenant moins de 60 mg de sucres réducteurs,
exprimés en glucose. Si nécessaire, compléter à 25 ml avec de l'eau
distillée et déterminer la teneur en sucres réducteurs selon Luff-Schoorl.Le résultat est exprimé en glucose pour cent ou, le cas échéant, en
saccharose, en multipliant par le facteur 0,95.
5.4.Titration selon Luff-Schoorl
Prélever à la pipette 25 ml du réactif selon Luff-Schoorl (3.8) et les
porter dans un erlenmeyer de 300 ml; ajouter 25 ml, exactement
mesurés, de la solution déféquée de sucres. Ajouter deux granulés de
pierre ponce (3.13), chauffer, en agitant à la main, sur une flamme libre
de hauteur moyenne et porter le liquide à ébullition en deux minutes
environ. Placer immédiatement l'erlenmeyer sur une toile métallique
pourvue d'un écran d'amiante muni d'un trou de 6 cm environ de
diamètre, sous laquelle on a préalablement allumé une flamme. Celle-ci
est réglée de façon que seul le fond de l'erlenmeyer soit chauffé.
Adapter ensuite un réfrigérant à reflux sur l'erlenmeyer. A partir de ce
moment, faire bouillir pendant dix minutes exactement. Refroidir immé-
diatement dans l'eau froide et après cinq minutes environ, titrer comme
suit:
Ajouter 10 ml de solution d'iodure de potassium (3.12) et, immédiate-
ment après et avec prudence (en raison du risque de formation d'une
mousse abondante), 25 ml d'acide sulfurique 6 N (3.11). Titrer ensuite
par la solution de thiosulfate de sodium 0,1 N (3.9) jusqu'à apparition
d'une coloration jaune terne, ajouter l'indicateur à l'amidon (3.10) et
achever la titration.
Effectuer la même titration sur un mélange exactement mesuré de 25 ml
de réactif selon Luff-Schoorl (3.8) et 25 ml d'eau, après avoir ajouté
10 ml de solution d'iodure de potassium (3.12) et 25 ml d'acide sulfu-
rique 6 N (3.11), sans porter à ébullition.
6.Calcul des résultats
Établir à l'aide de la table la quantité de glucose en mg correspondant à la
différence entre les valeurs des deux titrations, exprimées en ml de thiosul-
fate de sodium 0,1 N.
Exprimer le résultat en pour cent de l'échantillon.
7.Modes opératoires particuliers
7.1. Pour les aliments très riches en mélasse et d'autres aliments peu homo-
gènes, peser 20 g et les introduire dans un ballon jaugé de 1 l avec1971L0250 — FR — 26.05.1999 — 003.001 — 19
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500 ml d'eau. Mélanger pendant une heure dans le culbuteur. Déféquer
au moyen des réactifs de Carrez I (3.2) et II (3.3) comme décrit en 5.1
en utilisant, toutefois, une quantité 4 fois plus élevée de chaque réactif.
Porter au volume avec de l'éthanol à 80 pour cent (v/v).
Homogénéiser et filtrer. Éliminer l'éthanol comme décrit en 5.1. En
l'absence d'amidon dextrinisé, porter au volume avec de l'eau distillée.
7.2. Pour les mélasses et les aliments simples, riches en sucres et pratique-
ment exempts d'amidon (caroubes, cossettes séchées de betteraves, etc.)
peser 5 g, les introduire dans un ballon jaugé de 250 ml, ajouter 200 ml
d'eau distillée et mélanger pendant une heure ou plus, si nécessaire, dans
le culbuteur. Déféquer ensuite au moyen des réactifs de Carrez I (3.2) et
II (3.3), comme décrit en 5.1. Porter au volume avec de l'eau, homogé-
néiser et filtrer. Pour doser les sucres totaux, poursuivre comme décrit
en 5.3.
8.Observations
8.1. Il est recommandé d'ajouter environ 1 ml d'isopentanol (3.14) (sans tenir
compte du volume), avant l'ébullition avec le réactif de Luff-Schoorl,
afin d'éviter la formation de mousse.
8.2. La différence entre la teneur en sucres totaux après inversion, exprimés
en glucose, et la teneur en sucres réducteurs, exprimés en glucose,
multipliée par 0,95, donne la teneur en saccharose pour cent.
8.3. Pour déterminer la teneur en sucres réducteurs, à l'exclusion du lactose,
deux voies peuvent être adoptées:
8.3.1. Pour un calcul approximatif, on multiplie par 0,675 la teneur en
lactose établie par un dosage séparé et on retranche le résultat
obtenu de la teneur en sucres réducteurs.
8.3.2. Pour un calcul précis des sucres réducteurs, à l'exclusion du
lactose, il est nécessaire de partir de la même prise d'essai pour
les deux déterminations finales. L'une des analyses est effectuée
sur une partie de la solution obtenue en 5.1, l'autre sur une partie
de la solution obtenue lors du dosage du lactose selon la méthode
prévue à cet effet (après fermentation des autres espèces de
sucres et défécation).
Dans les deux cas, la quantité de sucre présente est déterminée selon la
méthode de Luff-Schoorl et calculée en mg de glucose. Les deux valeurs
sont retranchées l'une de l'autre et la différence est exprimée en pour
cent de l'échantillon.
ExempleLes deux volumes prélevés correspondent, pour chaque dosage, à une
prise d'essai de 250 mg.
Dans le premier cas, on consomme 17 ml de solution de thiosulfate de
sodium 0,1 N, ce qui correspond à 44,2 mg de glucose, dans le
deuxième cas 11 ml, ce qui correspond à 27,6 mg de glucose.
La différence s'élève à 16,6 mg de glucose.
La teneur en sucres réducteurs (lactose excepté), calculée en glucose est
donc de:
4/C216;6
10¼6;64 pour cent
Table des valeurs pour 25 ml de réactif selon Luff-Schoorl
ml de Na2S2O30,1 N, deux minutes de chauffage, dix minutes d'ébullition
Na2S2O30,1 NGlucose, fructose, sucres
invertis
C6H12O6Lactose
C12H22O11Maltose
C12H22O11Na2S2O30,1 N
ml mg différence mg différence mg différence ml
1 2,4 2,4 3,6 3,7 3,9 3,9 1
2 4,8 2,4 7,3 3,7 7,8 3,9 23 7,2 2,5 11,0 3,7 11,7 3,9 3
4 9,7 2,5 14,7 3,7 15,6 4,0 4
5 12,2 2,5 18,4 3,7 19,6 3,9 51971L0250 — FR — 26.05.1999 — 003.001 — 20
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Na2S2O30,1 NGlucose, fructose, sucres
invertis
C6H12O6Lactose
C12H22O11Maltose
C12H22O11Na2S2O30,1 N
ml mg différence mg différence mg différence ml
6 14,7 2,5 22,1 3,7 23,5 4,0 6
7 17,2 2,6 25,8 3,7 27,5 4,0 7
8 19,8 2,6 29,5 3,7 31,5 4,0 8
9 22,4 2,6 33,2 3,8 35,5 4,0 9
10 25,0 2,6 37,0 3,8 39,5 4,0 1011 27,6 2,7 40,8 3,8 43,5 4,0 11
12 30,3 2,7 44,6 3,8 47,5 4,1 12
13 33,0 2,7 48,4 3,8 51,6 4,1 1314 35,7 2,8 52,2 3,8 55,7 4,1 14
15 38,5 2,8 56,0 3,9 59,8 4,1 15
16 41,3 2,9 59,9 3,9 63,9 4,1 1617 44,2 2,9 63,8 3,9 68,0 4,2 17
18 47,1 2,9 67,7 4,0 72,2 4,3 18
19 50,0 3,0 71,7 4,0 76,5 4,4 1920 53,0 3,0 75,7 4,1 80,9 4,5 2021 56,0 3,1 79,8 4,1 85,4 4,6 21
22 59,1 3,1 83,9 4,1 90,0 4,6 22
23 62,2 88,0 94,6 23
14.DOSAGE DE L'URÉE
1.Objet et domaine d'application
La méthode permet de déterminer la teneur en urée des aliments des
animaux.
2.Principe
L'échantillon est mis en suspension dans l'eau en présence d'un défécant. La
suspension est filtrée. La teneur en urée du filtrat est déterminée, après addi-
tion de 4-diméthylaminobenzaldéhyde (4-DMAB), par mesure de la densité
optique à la longueur d'onde de 420 mm.
3.Réactifs
3.1. Solution de 4-diméthylaminobenzaldéhyde: dissoudre 1,6 g de 4-DMAB
p.a. dans 100 ml d'éthanol à 96 pour cent et ajouter 10 ml d'acide chlor-
hydrique p.a. (D: 1,19). Ce réactif se conserve au maximum deux
semaines.
3.2. Solution de Carrez I:
dissoudre dans l'eau 24 g d'acétate de zinc, Zn (CH3COO)2·2H2Oe t3g
d'acide acétique glacial. Compléter à 100 ml avec de l'eau.
3.3. Solution de Carrez II: dissoudre dans l'eau 10,6 g de ferrocyanure de
potassium, K4[Fe(CN)6]·3H2O. Compléter à 100 ml avec de l'eau.
3.4. Charbon actif p.a., n'adsorbant pas l'urée (à contrôler).
3.5. Solution à 0,1 pour cent (p/v) d'urée p.a.
4.Appareillage
4.1. Mélangeur (culbuteur): environ 35 à 40 retournements par minute.
4.2. Tubes à essai: 160 × 16 mm, à bouchons rodés.
4.3. Spectrophotomètre.
5.Mode opératoire
5.1.Analyse de l'échantillon
Peser, à 1 mg près, 2 g de l'échantillon et les introduire avec 1 g de
charbon actif (3.4) dans un flacon jaugé de 500 ml. Ajouter 400 ml
d'eau et 5 ml des solutions de Carrez I (3.2) et II (3.3). Mélanger durant1971L0250 — FR — 26.05.1999 — 003.001 — 21
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trente minutes dans le culbuteur. Compléter au volume avec de l'eau,
agiter et filtrer.
Prélever 5 ml des filtrats limpides et incolores, les introduire dans les
tubes à essai à bouchon rodé, ajouter 5 ml de solution de 4-DMAB
(3.1) et mélanger. Placer les tubes dans un bain d'eau à 20 ºC. Après
quinze minutes, mesurer la densité optique de la solution de l'échantillon
au spectrophotomètre à 420 nm par comparaison avec la solution de
l'essai à blanc des réactifs.
5.2.Courbe d'étalonnage
Prélever des volumes de 1, 2, 4, 5 et 10 ml de la solution d'urée (3.5),
les introduire dans des ballons jaugés de 100 ml et compléter au volume
avec de l'eau. Prélever 5 ml de chaque solution, y ajouter respectivement
5 ml de solution de 4-DMAB (3.1), homogénéiser et mesurer la densité
optique comme indiqué plus haut par comparaison avec une solution
témoin contenant 5 ml de 4-DMAB et 5 ml d'eau, exempte d'urée.
Tracer la courbe d'étalonnage.
6.Calcul des résultats
Déterminer la quantité d'urée de la prise d'essai en se référant à la courbe
d'étalonnage.
Exprimer le résultat en pour cent de l'échantillon.
7.Observations
7.1. Pour les teneurs en urée supérieures à 3 pour cent, réduire la prise
d'essai à 1 g ou diluer la solution initiale pour ne pas avoir plus de
50 mg d'urée dans 500 ml.
7.2. Pour les faibles teneurs en urée, augmenter la prise d'essai pour autant
que le filtrat reste limpide et incolore.
7.3. Si l'échantillon contient des composés azotés simples, tels que les acides
aminés, il est indiqué d'effectuer la mesure de la densité optique à
435 nm.
16.DÉTERMINATION DE L'ACTIVITÉ URÉASIQUE DE PRODUITS
DÉRIVÉSDU SOJA
1.Objet et domaine d'application
L'épreuve permet de déterminer l'activité de l'uréase des produits dérivés du
soja et de mettre en évidence une cuisson insuffisante de ces produits.
2.Principe
L'activité uréasique est déterminée par la quantité d'azote ammoniacal libérée
par 1 g de produit en une minute, à 30 ºC, à partir d'une solution d'urée.
3.Réactifs
3.1. Acide chlorhydrique 0,1 N.3.2. Solution d'hydroxyde de sodium 0,1 N.
3.3. Solution tampon de phosphates 0,05 M contenant dans 1 000 ml, 4,45 g
de phosphate disodique (Na
2HPO4·2 H2O) et 3,40 g de phosphate mono-
potassique (KH2PO4).
3.4. Solution tamponnée d'urée, fraîchement préparée, contenant 30,0 g
d'urée par 1 000 ml de solution tampon (3.3); pH 6,9 — 7,0.
4.Appareillage
4.1. Appareil à titration potentiométrique ou pH-mètre très sensible
(0,02 pH), avec agitateur magnétique.
4.2. Bain d'eau muni d'un thermostat, réglé à 30 ºC exactement.
4.3. Tubes à essai: 150 × 18 mm, à bouchons rodés.1971L0250 — FR — 26.05.1999 — 003.001 — 22
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5.Mode opératoire
Broyer (dans un moulin à café, par exemple) 10 g environ de l'échantillon de
façon qu'il passe à travers un tamis à mailles de 0,2 mm. Dans un tube à
essai à bouchon rodé, peser à 1 mg près, 0,2 g de l'échantillon broyé et
ajouter 10 ml de solution tamponnée d'urée (3.4). Boucher immédiatement
et agiter vigoureusement. Porter le tube dans le bain d'eau réglé à 30 ºC exac-
tement et l'y laisser trente minutes exactement. Immédiatement après, ajouter
10 ml d'acide chlorhydrique 0,1 N (3.1), refroidir rapidement à 20 ºC et
transvaserquantitativement le contenu du tube dans un récipient à titration,
en rinçant à deux reprises par 5 ml d'eau. Titrer immédiatement et rapide-
ment au moyen de la solution d'hydroxyde de sodium 0,1 N (3.2) par
électrométrie à l'aide d'une électrode de verre, jusqu'à pH 4,7.
Effectuer un essai à blanc , en opérant comme suit.
Introduire rapidement et successivement dans un tube à essai à bouchon rodé
une prise d'essai de 0,2 g, pesée à 1 mg près, 10 ml d'acide chlorhydrique
0,1 N (3.1) et 10 ml de solution tamponnée d'urée (3.4). Refroidir immédia-
tement le tube dans de l'eau glacée et l'y laisser trente minutes. Transvaser
ensuite, dans les conditions indiquées ci-dessus, le contenu du tube dans le
récipient à titration au moyen de la solution d'hydroxyde de sodium 0,1 N
(3.2) jusqu'à pH 4,7.
6.Calcul des résultats
L'activité uréasique est donnée par la formule:
mg N
g min :`a3 0º C ¼1;4b/C0a ðÞ
30/C1E
dans laquelle, a = ml de solution d'hydroxyde de sodium 0,1 N consommés
par la prise d'essai
b = ml de solution d'hydroxyde de sodium 0,1 N consommés
par l'essai à blanc
E = prise d'essai en g.
7.Observations
7.1. La méthode convient pour une activité uréasique pouvant atteindre 1 mg
de N/g min. à 30 ºC. Pour des produits plus actifs, la prise d'essai peut
être réduite jusqu'à 50 mg.
7.2. Les produits dont la teneur en matières grasses brutes dépasse 10 pour
cent doivent être préalablement dégraissés à froid.1971L0250 — FR — 26.05.1999 — 003.001 — 23