1994D0577 — FR — 01.05.2004 — 003.001 — 1
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►BDÉCISIONDE LA COMMISSION
du 15 juillet 1994
établissant les conditions de police sanitaire et la certification vétérinaire applicables à l'importa-
tion de sperme de bovins en provenance de pays tiers
(94/577/CE)
(JO L 221 du 26.8.1994, p. 26)
Modifiée par:
Journal officiel
nopage date
►M1 Décision 1999/495/CE de la Commission du 1erjuillet1999 L 192 56 24.7.1999
►M2 Décision 2004/52/CE de la Commission du 9 janvier 2004 L 10 67 16.1.2004
Modifiée par:
►A1 Acte relatif aux conditions d'adhésion à l'Union européenne de la Répu-
blique tchèque, de la République d'Estonie, de la République de Chypre,de la République de Lettonie, de la République de Lituanie, de la Répu-
blique de Hongrie, de la République de Malte, de la République de
Pologne, de la République de Slovénie etde la République slovaque, etaux adaptations des traités sur lesquels est fondée l'Union européenneL 236 33 23.9.2003
▼B
DÉCISIONDE LA COMMISSION
du 15 juillet 1994
établissant les conditions de police sanitaire et la certification vété-
rinaire applicables à l'importation de sperme de bovins en
provenance de pays tiers
(94/577/CE)
LA COMMISSION DES COMMUNAUTÉS EUROPÉENNES,
vu le traité instituant la Communauté européenne,
vu la directive 88/407/CEE du Conseil, du 14 juin 1988, fixant les
exigences de police sanitaire applicables aux échanges intracommunau-
taires et aux importations de sperme d'animaux de l'espèce bovine (1),
modifiée en dernier lieu par la directive 93/60/CEE (2), etnot amment
ses articles 10 et 11,
considérant que la liste des pays tiers en provenance desquels les États
membres autorisent l'importation de sperme d'animaux domestiques del'espèce bovine, ci-après dénommée «la liste», a été établie par la déci-sion 90/14/CEE de la Commission (
3), modifiée par la décision 91/276/
CEE (4);
considérant que la situation sanitaire d'Israël a entraîné une interdiction
d'importation à l'égard de ce pays, arrêtée par la décision 91/277/CEEde la Commission (
5);
considérantque les décisions 91/479/CEE (6), 91/549/CEE (7), 92/123/
CEE (8), 92/124/CEE (9), 92/125/CEE (10), 92/126/CEE (11), 92/127/
CEE (12), 92/128/CEE (13), 92/386/CEE (14), 92/387/CEE (15) et92/455/
CEE (16) de la Commission fixent les conditions sanitaires et la certifi-
cation vétérinaire applicables à l'importation de sperme de bovins enprovenance respectivement des États-Unis d'Amérique, du Canada, dePologne, de Finlande, de Nouvelle-Zélande, d'Australie, de Suisse, deSuède, de Hongrie, de Norvège etde Tchécoslovaquie;
considérant que la directive 93/60/CEE, qui doit être mise en œuvre
dans les États membres le 1
erjuillet1994 au plus t ard, modifie la direc-
tive 88/407/CEE et rend donc nécessaire la modification des décisionsrelatives aux pays tiers susmentionnés; que, pour simplifier la législa-
tion communautaire dans ce domaine et éviter toute ambiguïté, il
convientde regrouper les décisions susment ionnées etd'abroger cellesconcernantchaque pays individuellement ;
considérantque, vu les disposit ions de l'accord sur l'espace économique
européen, il n'est pas nécessaire de maintenir les certificats vétérinairespour les importations de sperme d'animaux de l'espèce bovine enprovenance d'Autriche, de Finlande, de Norvège et de Suède;
considérant que, conformément à l'avis du comité scientifique vétéri-
naire, un test supplémentaire de dépistage de la maladie hémorragiqueépizootique est exigé;1994D0577 — FR — 01.05.2004 — 003.001 — 2
(1)J O noL 194 du 22. 7. 1988, p. 10.
(2)J O noL 186 du 28. 7. 1993, p. 28.
(3)J O noL 8 du 11. 1. 1990, p. 71.
(4)J O noL 135 du 30. 5. 1991, p. 58.
(5)J O noL 135 du 30. 5. 1991, p. 60.
(6)J O noL 258 du 16. 9. 1991, p. 1.
(7)J O noL 298 du 29. 10. 1991, p. 6.
(8)J O noL 48 du 22. 2. 1992, p. 1.
(9)J O noL 48 du 22. 2. 1992, p. 10.
(10)J O noL 48 du 22. 2. 1992, p. 19.
(11)J O noL 48 du 22. 2. 1992, p. 28.
(12)J O noL 48 du 22. 2. 1992, p. 37.
(13)J O noL 48 du 22. 2. 1992, p. 46.
(14)J O noL 204 du 21. 7. 1992, p. 13.
(15)J O noL 204 du 21. 7. 1992, p. 22.
(16)J O noL 247 du 27. 8. 1992, p. 1.
▼B
considérantque le Canada estle seul pays où des examens de rout ine
pour ladite maladie sont effectués tous les six mois, préalablement à lacollecte de sperme; qu'il est donc nécessaire d'autoriser une période
transitoire pour l'application de la présente décision en ce qui concerne
le Canada, afin de donner aux autorités vétérinaires canadiennes letemps nécessaire pour introduire le nouveau test dans leur programmede routine;
considérant, par ailleurs, que, étant donné les progrès réalisés récem-
ment en matière d'épidémiologie de la fièvre catarrhale, il estdésormais possible d'autoriser l'importation de sperme de bovins en
provenance d'Australie;
considérant qu'il apparaît que la situation sanitaire des pays tiers figu-
rant sur la liste est bonne et contrôlée par des services vétérinaires bienstructurés et organisés en ce qui concerne les maladies transmissiblespar le sperme;
considérant que les autorités vétérinaires compétentes des pays tiers
figurant sur la liste se sont engagées à notifier à la Commission desCommunautés européennes et aux États membres, par télex ou téléco-
pieur et dans un délai de 24 heures, la confirmation de l'apparition
d'une quelconque des maladies figurant sur la liste A de l'Office inter-national des épizooties (OIE) ou toute modification de la politique devaccination concernant l'une de ces maladies ou, dans un délai appro-prié, l'apparition de maladies figurant sur la liste B de l'OIE et touteproposition de modification des règles d'importation applicables aux
animaux domestiques ou au sperme ou aux embryons de ces animaux;
considérant que les autorités vétérinaires compétentes des pays tiers
figurant sur la liste se sont engagées à contrôler officiellement la déli-
vrance des certificats en application de la présente décision et à veillerà ce que l'ensemble des certificats, dérogations et résultats de labora-toire pertinents, sur lesquels peut avoir été fondée la certification,soientconservés dans un dossier officiel pendantau moins douze
mois après l'expédition du sperme auquel ils se réfèrent;
considérant que les autorités vétérinaires compétentes des pays tiers
figurant sur la liste se sont engagées à agréer officiellement les centres
de collecte de sperme pour l'exportation de sperme de bovins vers laCommunauté économique européenne, conformément à l'article 9 dela directive 88/407/CEE du Conseil;
considérant que les conditions sanitaires et la certification vétérinaire
doivent être adaptées au statut sanitaire du pays tiers en cause;
considérantque les mesures prévues par la présent e décision sont
conformes à l'avis du comité vétérinaire permanent,
A ARRÊTÉ LA PRÉSENTE DÉCISION:
Article premier
Les États membres autorisent l'importation de sperme de bovins
remplissant les conditions fixées dans les certificats établis dans lapart ie 1 des annexes A, B, C etD etprovenantseulementdes pays t iersénumérés dans la partie 2 des annexes A, B, C et D respectivement.
Toutefois, ils autorisent les importations, en provenance du Canada, de
sperme de bovins collecté et traité conformément à la décision 91/549/
CEE, jusqu'au 31 décembre 1994.
Article 2
Les décisions 91/479/CEE, 92/123/CEE, 92/124/CEE, 92/125/CEE, 92/
126/CEE, 92/127/CEE, 92/128/CEE, 92/386/CEE, 92/387/CEE et92/
445/CEE sontabrogées.
La décision 91/549/CEE estabrogée à part ir du 1
erjanvier 1995.1994D0577 — FR — 01.05.2004 — 003.001 — 3
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Article 3
Les dispositions relatives au Canada, visées à l'article 1erpremier
alinéa, sontapplicables à part ir du 1erjanvier 1995.
Article 4
Les États membres sont destinataires de la présente décision.1994D0577 — FR — 01.05.2004 — 003.001 — 4
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ANNEXE A
PARTIE 1
CERTIFICATSANITAIRE
relatif à l'importation de sperme de bovins
1994D0577 — FR — 01.05.2004 — 003.001 — 5
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1994D0577 — FR — 01.05.2004 — 003.001 — 6
▼B
►(1) (2)M11994D0577 — FR — 01.05.2004 — 003.001 — 7
▼A1
PARTIE 2
Listedespaysautorisésàutiliser lemodèledecertificat sanitaireétabliàla
partie 1 de l'annexe A
NOUVELLE-ZÉLANDE
ROUMANIE
SUISSE1994D0577 — FR — 01.05.2004 — 003.001 — 8
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ANNEXE B
PARTIE 1
CERTIFICATSANITAIRE
relatif à l'importation de sperme de bovins en provenance des États-Unis d'Amérique
1994D0577 — FR — 01.05.2004 — 003.001 — 9
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1994D0577 — FR — 01.05.2004 — 003.001 — 10
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►(1) (2)M11994D0577 — FR — 01.05.2004 — 003.001 — 11
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PARTIE 2
Listedespaysautorisésàutiliser lemodèledecertificat sanitaireétabliàla
partie 1 de l'annexe B
ÉTATS-UNIS D'AMÉRIQUE1994D0577 — FR — 01.05.2004 — 003.001 — 12
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ANNEXE C
PARTIE 1
CERTIFICATSANITAIRE
relatif à l'importation de sperme de bovins
1994D0577 — FR — 01.05.2004 — 003.001 — 13
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1994D0577 — FR — 01.05.2004 — 003.001 — 14
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►(1) (2)M11994D0577 — FR — 01.05.2004 — 003.001 — 15
▼B
PARTIE 2
Listedespaysautorisésàutiliser lemodèledecertificat sanitaireétabliàla
partie 1 de l'annexe C
CANADA: à l'exclusion de la région de la vallée de l'Okanagan, en Colombie
britannique, définie comme la zone délimitée par une ligne tracée àpartir d'un point situé sur la frontière qui sépare le Canada des
États-Unis d'Amérique, par 120º 15 ′de longitude et 49º de latitude,
dans une direction nord jusqu'à un point situé par 119º 35 ′de longi-
tude et 50º 30 ′de latitude, dans une direction nord-est jusqu'à un
point situé par 119º de longitude et 50º 45 ′de latitude, dans une
direction sud jusqu'à un point situé sur la frontière qui sépare le
Canada des États-Unis d'Amérique par 118º 15 ′de longitude et 49º
de latitude.1994D0577 — FR — 01.05.2004 — 003.001 — 16
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ANNEXE D
PARTIE 1
CERTIFICATSANITAIRE
relatif à l'importation de sperme de bovins en provenance des États-Unis d'Amérique
1994D0577 — FR — 01.05.2004 — 003.001 — 17
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1994D0577 — FR — 01.05.2004 — 003.001 — 18
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►(1) (2)M11994D0577 — FR — 01.05.2004 — 003.001 — 19
▼B
PARTIE 2
Listedespaysautorisésàutiliser lemodèledecertificat sanitaireétabliàla
partie 1 de l'annexe D
AUSTRALIE1994D0577 — FR — 01.05.2004 — 003.001 — 20
▼B
ANNEXE E
Protocole relatif à untest de dosage par immuno-absorptionà liaison enzy-
matique, bloquant ou concurrent, à l'aide d'un anticorps monoclonal
spécifiqueàungroupepourlarecherche desanticorpsduvirusdelafièvre
catarrhale
TEST ELISA CONCURRENT DE RECHERCHE DE LA FIÈVRE
CATARRHALE À L'AIDE DE L'ANTICORPSMONOCLONAL 3-17-A3
Le test permet de dépister les anticorps de tous les sérotypes connus du virus de
la fièvre catarrhale (VFC).
Le principe du test est l'interruption de la réaction entre l'antigène du VFC et un
anticorps monoclonal spécifique au groupe (3-17-A3) par l'addition de dilutions
du sérum à tester. Les anticorps du VFC présents dans le sérum à tester bloquent
la réactivité de l'anticorps monoclonal (AMC), ce qui atténue le changement
escompté de couleur lors de l'addition du substrat enzymatique.
MATÉRIEL ET RÉACTIFS
1. Plaques de microtitrage à fond plat.
2. Antigène: préparé selon la procédure décrite ci-dessous.3. Tampon bloquant: 5 % (p/v) de poudre de lait séché «Marvel», 0,1 % (v/v)
de «Tween-20» (fourni sous forme de sirop de polyoxyéthylène sorbiton
monolaurate) dans du PBS (phosphate-buffered saline).
4. Anticorps monoclonal: 3-17-A3 (fournis sous forme de surnageant de culture
tissulaire hybridome) stocké à − 20 ºC ou lyophilisé, dilué au 1/50 avec un
tampon bloquant avant utilisation, dirigé contre le polypeptide p7 spécifique
au groupe.
5. Conjugué: globuline de lapin anti-souris (adsorbée et éluée), conjuguée à de
la peroxidase de raifortetconservée à l'obscurit é à 4 ºC.
6. Substrat et chromogène: 0,2 g d'orthophénylène diamine (OPD) dissoute dans
un tampon composé de 2,553 g d'acide citrique et 4,574 g de di-sodium
hydrogénorthophosphate porté à 500 ml avec de l'eau distillée, subdivisé en
fractions aliquotes de 25 ml et conservé à l'obscurité à − 20 ºC puis addi-
tionné de 12 µl/25 ml de peroxyde d'hydrogène (30 % p/v) immédiatement
avant utilisation.
MANIPULER L'OPD AVEC PRÉCAUTIONS — PORTER DES GANTS
EN CAOUTCHOUC — PRODUIT SUSPECT D'ÊTRE MUTAGÈNE.
7. Acide sulfurique 1 M: 26,6 ml d'acide ajouté à 473,4 ml d'eau distillée.
ATTENTION: TOUJOURS AJOUTER L'ACIDE À L'EAU, JAMAIS L'EAU
À L'ACIDE.
8. Agitateur orbital.9. Lecteur de plaques ELISA (le test peut être lu visuellement).1994D0577 — FR — 01.05.2004 — 003.001 — 21
▼B
SCHÉMA DE L'ÉPREUVE
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▼B
PROTOCOLE D'ESSAI
Contrôle à blanc
La ligne 1, de A à H, est un contrôle à blanc comprenant l'antigène du VFC et
le conjugué. Il peut être utilisé pour étalonner le lecteur ELISA.
Contrôle de l'AMC
La ligne 2, de A à H, est le contrôle de l'anticorps monoclonal et comprend
l'antigène du VFC, l'anticorps monoclonal et le conjugué. Il s'agit d'un contrôlenégatif. La moyenne des valeurs de densité optique de cette ligne de contrôle
représente la valeur d'inhibition 0 %.
Contrôle positif
La ligne 3, de A à H est le contrôle positif. Il comprend l'antigène du VFC, des
dilutions d'antisérums positifs du VFC, l'AMC et le conjugué. Ce contrôle sert à
indiquer que le test se déroule normalement et que des niveaux similaires d'inhi-
bition devraient être obtenus d'un test à l'autre.
Sérums à tester
Dans le schéma de test présenté ci-avant, dix-huit sérums doivent être testés
dans des dilutions de 1/2, 1/4, 1/8 et 1/16. Il en ressortira des informations sur
le titre de l'anticorps contenu dans les sérums à tester. La gamme des dilutions
pourrait être élargie encore pour obtenir des titres finals de dilution du sérum. À
l'inverse, pour des études sérologiques à grande échelle, le sérum pourrait être
testé à une dilution unique (1/4) ou à deux dilutions (1/2 et 1/4) en tant
qu'épreuve de contrôle rapide.
MODE OPÉRATOIRE
1. Diluer l'antigène du VFC à la concentration prétitrée dans du PBS. Agiter
brièvement (par agitateur à ultrason) pour disperser les agrégats de virus (à
défaut de cet appareil, agiter vigoureusement à la pipette) et en ajouter 50
µl dans toutes les loges de la plaque ELISA. Tapoter les bords de la plaque
pour disperser l'antigène.
2. Incuber à 37 ºC pendant soixante minutes dans un agitateur orbital. Laver les
plaques en rinçantles loges avec du PBS non st érile, puis sécher à l'aide de
papier buvard.
3. Ajouter 50 µl de tampon bloquant par loge. Ajouter les sérums à tester et le
sérum positif dans les loges appropriées et diluer le contenu de la plaque à
l'aide d'une pipette à canaux multiples. Ne pas ajouter de sérum au contrôle
à blanc ou au contrôle de l'AMC.
4. Immédiatement après addition des sérums à tester, diluer l'AMC dans le
tampon bloquant (à une dilution prétitrée) et en ajouter 50 µl dans toutes les
loges de la plaque, à l'exception du contrôle à blanc.
5. Incuber à 37 % pendant soixante minutes dans un agitateur orbital. Laver
trois fois avec du PBS et sécher à l'aide de papier buvard.
6. Diluer le concentré de globuline de lapin anti-souris au 1/5 000 dans le
tampon bloquant et en introduire 50 µl dans toutes les loges de la plaque.
7. Incuber à 37 ºC pendant soixante minutes dans un agitateur orbital. Laver
trois fois avec du PBS et sécher à l'aide de papier buvard.
8. Décongeler l'OPD et, immédiatement avant utilisation, ajouter 12 µld e
peroxyde d'hydrogène à 30 % à chaque fraction de 25 ml d'OPD. En intro-
duire 50 µl dans toutes les loges de la plaque. Attendre le virage de la
couleur pendant environ dix minutes et arrêter la réaction à l'aide d'acide
sulfurique 1 M (50 µl). La couleur devraitvirer dans les loges de cont rôle
de l'ANC et dans les loges contenant des sérums SANS anticorps dirigés
contre le VMC.
9. Examiner les plaques soit visuellement, soit à l'aide d'un lecteur spectropho-
tométrique et enregistrer les résultats.
ANALYSE DES RÉSULTATS
Calculer la moyenne de densité optique (DO) à partir des contrôles AMC. Cela
représente la valeur d'inhibition 0 %. Les valeurs de densité optique des sérums
à tester sont exprimées en pourcentage des valeurs d'inhibition, à l'aide de la
formule suivante:
pourcentage de la valeur d’inhibition ¼100/C0DO en pr´ esence du s´ erum ` a tester
DO en l’absence du s´ erum ` a tester/C21001994D0577 — FR — 01.05.2004 — 003.001 — 23
▼B
Les valeurs d'inhibition supérieures à 40 % à une dilution du sérum de 1/4 sont
considérées comme positives. La lecture visuelle est possible dans la mesure ou
une inhibition de 40 % est la plus faible valeur aisément discernable à l'œil nu.1994D0577 — FR — 01.05.2004 — 003.001 — 24
▼B
PRÉPARATION DE L'ANTIGÈNE VFC POUR LA TECHNIQUE ELISA
1. Laver trois fois dix roux de cellules BHK-21 confluentes à l'aide d'un milieu
Eagle exempt de sérum, puis infecter par le sérotype 1 du virus de la fièvre
catarrhale dans un milieu Eagle exemptde sérum.
2. Incuber à 37 ºC et examiner chaque jour pour observer l'effet cytopathogène
(ecp).
3. Lorsque l'ecp devientévidentsur 80 à 90 % de la plaque de cellules de
chaque roux, récupérer le virus en agitant pour détacher les cellules adhé-
rantà la paroi.
4. Centrifuger à2 000-3 000tours par minute pour obtenir un culot cellulaire.
5. Jeter le surnageant et remettre les cellules en suspension dans environ 30 ml
de PBS contenant 1 % de «Sarkosyl» et 2 ml de fluorure de phénylméthyl-
sulphonyl (tampon lyse). Cette opération peut entraîner une gélification des
cellules, auquel cas il faut ajouter davantage de tampon lyse pour atténuer
ceteffet .
NB: le fluorure de phénylméthylsulphonyl est dangereux. Le manipuler
avec une extrême prudence.
6. Fragmenter les cellules pendant soixante secondes à l'aide d'une sonde ultra-
sonique fonctionnant à une amplitude de 30 microns.
7. Centrifuger à 10 000 tours par minute pendant dix minutes.8. Stocker le surnageant à + 4 ºC et remettre le reste du culot cellulaire en
suspension dans 10 à 20 ml de tampon lyse.
9. Agiter à l'aide d'un appareil à ultrason et clarifier en récupérant le surna-
geant à chaque stade, trois fois au total.
10. Réunir les fractions surnageantes et centrifuger à24 000tours par minute
pendantcentvingtminut es à + 4 ºC sur un coussin de 5 ml de sucrose à
40 % (p/v dans du PBS) en utilisant des tubes de centrifugation Beckmann
de 30 ml etun rot or SW 28.
11. Jeter le surnageant, laisser s'égoutter les tubes soigneusement et remettre le
granule de culot cellulaire en suspension dans du PBS, en le soumettant aux
ultrasons. Stocker l'antigène en fractions aliquotes à − 70 ºC.
TITRAGE DE L'ANTIGÈNE VFC POUR LA TECHNIQUE ELISA
L'antigène de la fièvre catarrhale est titré par la technique ELISA indirecte. Des
dilutions 1/2 d'antigène sont titrées par rapport à une dilution constante (1/50)
d'anticorps monoclonal 3-17-A3. Le protocole est le suivant:
MODE OPÉRATOIRE
1. Diluer l'antigène VFC dans du PBS sur l'ensemble de la plaque de microti-
trage dans une série de dilutions 1/2 (50 µl par loge) en utilisant une pipette à
canaux multiples.
2. Incuber pendant une heure à 37 ºC dans un agitateur orbital.3. Laver trois fois les plaques avec du PBS.4. Ajouter 50 µl d'anticorps monoclonal 3-17-A3 (dilué au 1/50) dans chaque
loge de la plaque de microtitrage.
5. Incuber pendant 1 heure à 37 ºC dans un agitateur orbital.6. Laver trois fois les plaques avec du PBS.
7. Ajouter dans chaque loge de la plaque de microtitrage 50 µl de globuline de
lapin anti-souris conjuguée à de la peroxydase de raifort, diluée jusqu'à une
concentration optimale prétitrée.
8. Incuber pendant une heure à 37 ºC dans un agitateur orbital.9. Ajouter le substrat et le chromogène comme indiqué précédemment. Arrêter
la réaction au bout de dix minutes en ajoutant de l'acide sulfurique 1 M (50
µl par loge).
Dans l'essai concurrent, l'anticorps monoclonal doit se trouver en excédent; on
utilise donc une dilution d'antigène qui se trouve sur la courbe de titrage (et
non dans la zone de plateau) et qui donne approximativement une DO de 0,8
au boutde dix minut es.1994D0577 — FR — 01.05.2004 — 003.001 — 25
▼B
Protocole relatif à l'essai d'immunodiffusion sur gel d'agar en vue de la
détection d'anticorps de la maladie hémorragique épizootique
Le test d'immunodiffusion sur gel d'agar est effectué selon le protocole suivant:
MATÉRIELS ET RÉACTIFS
1. Antigène
Préparer l'antigène précipitant dans un quelconque système de culture cellu-
laire compatible avec la multiplication rapide du (des) sérotype(s)
approprié(s) du virus de la maladie hémorragique épizootique. Les cellules
BHK ou Vero sontrecommandées. L'ant igène estprésentdans le fluide
supernageant à la fin de la croissance virale mais doit être concentré de 50
à 100 fois pour être efficace. On y parvient à l'aide d'une quelconque
méthode de concentration protéique type; le virus de l'antigène peut être
inactivé par addition de 0,3 % (v/v) de béta-propiolactone.
2. Sérum de contrôle positif connu
À l'aide d'un sérum de référence international et d'antigène un sérum type
national est produit, standardisé en vue d'obtenir une proportion optimale
par rapport au sérum de référence international, liophylisé et utilisé comme
sérum de contrôle connu dans chaque test.
3. Sérum à tester.
MODE OPÉRATOIRE
1. Verser de l'agarose à 1 % dans un tampon de borate ou de barbitol de
sodium, pH 8,5 à 9,0 dans une boîte de Pétri à une profondeur minimale de
3,0 mm.
2. Un ensemble à tester de sept loges exemptes d'humidité, de 5,0 mm de
diamètre, est creusé dans l'agar. Le schéma comprend une loge centrale et
six loges disposées dans un cercle d'un rayon de 3 mm.
3. Remplir la loge centrale à l'aide d'antigène standard. Remplir les loges péri-
phériques 2, 4 et6 avec des sérums posit ifs connus, les loges 1, 3 et5 avec
des sérums à tester.
4. Le système est incubé pendant soixante-douze heures au maximum à tempé-
rature ambiante dans une chambre humide fermée.
INTERPRÉTATION
Un sérum à tester est positif s'il forme une ligne de précipitine spécifique avec
l'antigène ainsi qu'une ligne complète d'identité avec le sérum de contrôle. Un
sérum à tester est négatif s'il ne forme pas de ligne spécifique avec l'antigène
et n'infléchit pas la courbe du sérum de contrôle. Les boîtes de Pétri doivent
être examinées sur fond sombre et en éclairage indirect.1994D0577 — FR — 01.05.2004 — 003.001 — 26