2008R0900 — FR — 02.03.2010 — 001.001

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►B RÈGLEMENT (CE) No 900/2008 DE LA COMMISSION du 16 septembre 2008 définissant les méthodes d’analyse et autres dispositions de caractère technique nécessaires pour l’application du régime d’importation de certaines marchandises résultant de la transformation de produits agricoles (version codifiée) (JO L 248, 17.9.2008, p.8)

Modifié par:









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RÈGLEMENT (CE) No 900/2008 DE LA COMMISSION

du 16 septembre 2008

définissant les méthodes d’analyse et autres dispositions de caractère technique nécessaires pour l’application du régime d’importation de certaines marchandises résultant de la transformation de produits agricoles

(version codifiée)







LA COMMISSION DES COMMUNAUTÉS EUROPÉENNES, vu le traité instituant la Communauté européenne, vu le règlement (CEE) no 2658/87 du Conseil du 23 juillet 1987 relatif à la nomenclature tarifaire et statistique et au tarif douanier commun ( 1 ), et notamment son article 9, considérant ce qui suit: (1) Le règlement (CEE) no 4154/87 de la Commission du 22 décembre 1987 définissant les méthodes d’analyse et autres dispositions de caractère technique nécessaires pour l’application du règlement (CEE) no 3033/80 du Conseil relatif au régime d’échanges applicable à certaines marchandises résultant de la transformation de produits agricoles ( 2 ) a été modifié de façon substantielle ( 3 ). Il convient, dans un souci de clarté et de rationalité, de procéder à la codification dudit règlement. (2) Aux fins d’assurer un traitement uniforme à l’importation dans la Communauté des marchandises auxquelles s’applique le règlement (CE) no 3448/93 du Conseil du 6 décembre 1993 déterminant le régime d’échange applicable à certaines marchandises résultant de la transformation des produits agricoles ( 4 ), il importe de définir les méthodes d’analyse et autres dispositions de caractère technique en tenant compte de l’évolution scientifique et technique. (3) Les mesures prévues au présent règlement sont conformes à l’avis de la section tarifaire et statistique du comité du code des douanes, considérant ce qui suit: A ARRÊTÉ LE PRÉSENT RÈGLEMENT:







Article premier

Le présent règlement définit les méthodes d’analyse communautaires nécessaires pour l’application du règlement (CE) no 3448/93 en ce qui concerne les importations et du règlement (CE) no 1460/96 de la Commission ( 5 ) ou, à défaut, la nature des opérations analytiques à suivre ou le principe d’une méthode à appliquer.

Article 2

Conformément aux définitions reprises dans l’annexe III du règlement (CE) no 1460/96 relatives à la teneur en amidon/glucose et à la teneur en saccharose/sucre interverti/isoglucose et pour l’application des annexes II et III dudit règlement, les formules, procédures et méthodes suivantes sont utilisées pour les teneurs en amidon/glucose et en saccharose/sucre inverti/isoglucose:

1) Teneur en amidon/glucose (exprimée en amidon 100 % à l’état sec, sur la marchandise en l’état) a) (Z – F) × 0,9, quand la teneur en glucose est supérieure ou égale à celle du fructose, ou b) (Z – G) × 0,9, quand la teneur en glucose est inférieure à celle du fructose où: Z = teneur en glucose déterminée par la méthode décrite dans l’annexe I du présent règlement; F = teneur en fructose déterminée par HPLC (chromatographie en phase liquide haute précision); G = teneur en glucose déterminée par HPLC. Dans le cas du point a), lorsque la présence d’un hydrolysat de lactose est déclarée et/ou des quantités de lactose et de galactose sont mises en évidence, une teneur en glucose (déterminée par HPLC), équivalente à celle du galactose (déterminée par HPLC), est déduite de la teneur totale en glucose (Z) avant que tout autre calcul ne soit effectué.

2) Teneur en saccharose/sucre interverti/isoglucose (exprimée en saccharose, sur la marchandise en l’état) a) S + (2F) × 0,95, quand la teneur en glucose est supérieure ou égale à celle du fructose; b) S + (G + F) × 0,95, quand la teneur en glucose est inférieure à celle du fructose où: S = teneur en saccharose déterminée par HPLC; F = teneur en fructose déterminée par HPLC; G = teneur en glucose déterminée par HPLC. Lorsque la présence d’un hydrolysat de lactose est déclarée et/ou des quantités de lactose et de galactose sont mises en évidence, une teneur en glucose équivalente à celle du galactose (déterminée par HPLC) est déduite de la teneur en glucose (G) avant que tout autre calcul ne soit effectué.

3) Matières grasses provenant du lait a) Sous réserve des dispositions reprises au point b), la teneur en poids en matière grasse du lait de la marchandise en l’état est déterminée par l’extraction à l’éther de pétrole après hydrolyse à l’acide chlorhydrique. b) Lorsque, dans la composition de la marchandise, des matières grasses autres que celles du lait sont également déclarées, la procédure suivante est appliquée: — la teneur en poids en % en matière grasse (totale) de la marchandise en l’état est déterminée comme mentionné au point a), — pour la détermination des matières grasses provenant du lait, une méthode utilisant l’extraction à l’éther de pétrole, précédée par l’hydrolyse par l’acide chlorhydrique et suivie par la chromatographie en phase gazeuse des esters méthyliques des acides gras, est appliquée. Pour autant que la présence de matières grasses provenant du lait soit mise en évidence, leur pourcentage est calculé en multipliant le pourcentage de butyrate de méthyle par 25 avant de multiplier la valeur ainsi obtenue par la teneur totale en poids de matières grasses, exprimée en pourcentage, de la marchandise en l’état et de la diviser par 100.

4) Teneur en protéine du lait a) Sous réserve des dispositions reprises au point b), la teneur en protéines du lait de la marchandise en l’état est calculée en multipliant la teneur en azote (déterminée par la méthode Kjeldahl) par le facteur 6,38. b) Lorsque, dans la composition de la marchandise, des composants contenant des protéines autres que les protéines du lait sont également déclarés: — la teneur en azote totale (en pourcentage en poids) est déterminée par la méthode Kjeldahl, — la teneur en protéines du lait est calculée comme au point a) en soustrayant de la teneur en azote totale en pourcentage en poids la teneur en azote correspondant aux protéines autres que celles du lait.

Article 3

Pour l’application de l’annexe I du règlement (CE) no 1460/96, les méthodes et/ou procédures suivantes sont utilisées:

1) Pour le classement des produits repris sous les codes NC 0403 10 51 à 0403 10 59 et 0403 10 91 à 0403 10 99 et 0403 90 71 à 0403 90 79 et 0403 90 91 à 0403 90 99, la détermination de la teneur en poids des matières grasses provenant du lait se fait selon la méthode décrite à l’article 2, point 3, du présent règlement.

2) Pour le classement des produits repris sous les codes NC 1704 10 11 à 1704 10 99 et 1905 20 10 à 1905 20 90, la détermination du saccharose y compris le sucre interverti calculé en saccharose est effectuée selon une méthode HPLC. Par sucre interverti calculé en saccharose, on entend la somme arithmétique du fructose et du glucose à part égale multipliée par 0,95.

3) Pour le classement des produits repris sous les codes NC 1806 10 10 à 1806 10 90, la détermination du saccharose/sucre interverti/isoglucose est effectuée selon les formules, méthode et procédures reprises dans l’article 2, point 2, du présent règlement.

4) Pour le classement des produits repris sous les codes NC 3505 20 10 à 3505 20 90, la détermination d’amidon ou fécule, de dextrines ou d’autres amidons ou fécules modifiées est effectuée selon la méthode reprise dans l’annexe II du présent règlement.

5) Pour le classement des produits repris sous les codes NC 3809 10 10 à 3809 10 90, la détermination de matières amylacées est effectuée selon la méthode reprise dans l’annexe II du présent règlement.

6) Pour le classement des produits repris sous les codes NC 1901 90 11 et 1901 90 19, la distinction entre les deux codes se fait sur la base de la détermination de l’extrait sec qui est effectuée par séchage à la température de 103 ± 2 °C jusqu’à poids constant.

7) Pour le classement de produits dans les codes NC 1902 19 10 et 1902 19 90, la présence de farines et semoules de blé tendre dans les pâtes alimentaires est recherchée d’après la méthode reprise dans l’annexe III du présent règlement.

8) Le dosage du mannitol et du D-glucitol (sorbitol) contenu dans les marchandises relevant des codes NC 2905 44 11 à 2905 44 99 et 3824 60 11 à 3824 60 99 est déterminé par HPLC.

Article 4

1. Un bulletin d’analyse est établi.

2. Le bulletin d’analyse doit indiquer notamment:

— toutes les données relatives à l’identification de l’échantillon,

— la méthode communautaire utilisée et la référence exacte du texte légal la reprenant; ou, le cas échéant, la référence à une méthode détaillée reprenant la nature des opérations analytiques à suivre ou le principe d’une méthode à appliquer indiqués dans le présent règlement,

— les éléments susceptibles d’avoir influencé les résultats,

— les résultats de l’analyse compte tenu de l’expression de ceux-ci dans la méthode utilisée et de l’expression dictée pour les besoins des services douaniers ou de gestion qui ont demandé l’analyse.

Article 5

Le règlement (CEE) no 4154/87 est abrogé.

Les références faites au règlement abrogé s’entendent comme faites au présent règlement et sont à lire selon le tableau de correspondance figurant à l’annexe V.

Article 6

Le présent règlement entre en vigueur le vingtième jour suivant celui de sa publication au Journal officiel de l’Union européenne.

Le présent règlement est obligatoire dans tous ses éléments et directement applicable dans tout État membre.

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ANNEXE I

Détermination enzymatique de la teneur en amidon et en ses produits de dégradation, y compris le glucose, dans des produits alimentaires au moyen de la chromatographie en phase liquide à haute performance (CLHP)

1. Domaine d’application

Cette méthode décrit la détermination de la teneur en amidon et en ses produits de dégradation, y compris le glucose dans des produits alimentaires destinés à la consommation humaine, soit «amidon». La teneur en amidon est déterminée à partir de l’analyse quantitative du glucose par chromatographie en phase liquide à haute performance (CLHP) après conversion enzymatique de l’amidon et de ses produits de dégradation en glucose.

2. Définition de la teneur totale en glucose et de la teneur totale en glucose exprimée en amidon

On entend par teneur totale en glucose la valeur Z telle qu’elle est calculée au point 7.2.1 de la présente annexe. Elle représente la teneur en amidon et en la totalité de ses produits de dégradation, y compris le glucose.

La teneur en amidon/glucose définie à l’annexe III du règlement (CE) no 1460/96 est calculée sur la base de la teneur totale en glucose Z et conformément aux dispositions de l’article 2, point 1, du présent règlement.

La teneur en amidon (ou dextrines) visée à la colonne 3 de l’annexe IV du règlement (CE) no 1043/2005 ( 6 ) est calculée sur la base de la teneur totale en glucose Z définie à l’article 2, point 2.1, du règlement (CE) no 904/2008 ( 7 ).

On entend, par teneur en amidon visée au point 1 de la présente annexe, la valeur E, calculée au point 7.2.2 de la présente annexe. Elle est exprimée en % (m/m). Elle est équivalente à la teneur totale en glucose Z, exprimée en amidon. Cette valeur E n’intervient pas dans les calculs précités.

3. Principes

Les échantillons sont homogénéisés et suspendus dans l’eau. L’amidon et ses produits de dégradation présents dans les échantillons sont convertis de façon enzymatique en glucose en deux étapes:

1) l’amidon et ses produits de dégradation sont partiellement convertis en chaînes de glucose soluble au moyen d’alpha-amylase thermostable à 90 °C. Pour une conversion effective, il est nécessaire que les échantillons soient complètement dissous ou présents sous forme d’une suspension contenant des parties solides de très petite taille;

2) les chaînes de glucose soluble sont converties en glucose au moyen d’amyloglucosidase à 60 °C.

Les produits ayant une teneur élevée en protéines ou graisses sont clarifiés et filtrés.

La détermination des sucres est réalisée par analyse CLHP.

Parce qu'il peut se produire une inversion du sucrose au cours du traitement enzymatique, la détermination des sucres libres est aussi réalisée par analyse CLHP pour calculer la teneur corrigée en glucose.

4. Réactifs et autres matériaux

Utiliser des réactifs d’une classe analytique reconnue et de l’eau déminéralisée.

4.1. Glucose, minimum 99 %.

4.2. Fructose, minimum 99 %.

4.3. Sucrose, minimum 99 %.

4.4. Maltose-monohydraté, minimum 99 %.

4.5. Lactose-monohydraté, minimum 99 %.

4.6. Solution d’alpha-amylase thermostable (1,4-alpha-D-Glucan-glucanohydrolase), avec une activité de l’ordre de 31 000 U/ml (1U libère 1,0 mg de maltose de l’amidon en 3 minutes, avec un pH de 6,9 et à 20 °C). Cet enzyme peut contenir un faible volume d’impuretés (par exemple, du glucose ou du sucrose) et d’autres enzymes interférents. Stockage à environ 4 °C. Comme solution de rechange, d’autres sources d’alpha-amylase peuvent être utilisées en fournissant une solution finale avec une activité enzymatique comparable.

4.7. Amyloglucosidase (1,4-alpha-D-Glucan glucohydrolase) à partir d’Aspergillus niger, poudre d’une activité d’environ 120 U/mg ou environ 70 U/mg (1 U libère 1 micromol de glucose de l’amidon par minute avec un pH de 4,8 et à 60 °C). Cet enzyme peut contenir un faible volume d’impuretés (par exemple, du glucose ou du sucrose) et d’autres enzymes interférents (par exemple, de l’invertase). Stockage à environ 4 °C. Comme solution de rechange, d’autres sources d’amyloglucosidase peuvent être utilisées en fournissant une solution finale avec une activité enzymatique comparable.

4.8. Acétate de zinc dihydraté, p.a.

4.9. Hexacyanoferrate de potassium (II) (K4[Fe(CN)]6.3H2O), extra-pur.

4.10. Acétate de sodium anhydre, p.a.

4.11. Acide acétique glacial, 96 % (v/v) (minimum).

4.12. Tampon d’acétate de sodium (0,2 mol/l). Peser 16,4 grammes d’acétate de sodium (point 4.10) dans un bécher. Les dissoudre dans de l’eau et les transvaser avec les eaux de rinçage dans une fiole jaugée de 1 000 ml. Porter au volume avec de l’eau et ajuster le pH à 4,7 à l’aide d’acide acétique [au moyen d’un pH-mètre (point 5.7)]. Cette solution peut être utilisée au maximum pendant six mois si elle est stockée à 4 °C.

4.13. Solution d’amyloglucosidase. Préparer une solution d’amyloglucosidase en poudre (point 4.7), au moyen d’un tampon d’acétate de sodium (point 4.12). L’activité enzymatique doit être suffisante et conforme à la teneur en amidon dans la quantité d’échantillon [par exemple, une activité d’environ 600 U/ml est obtenue à partir de 0,5 g d’amyloglucosidase en poudre à 120 U/mg (point 4.7) dans un volume final de 100 ml pour 1 g d’amidon dans la quantité d’échantillon]. À préparer immédiatement avant utilisation.

4.14. Solutions de référence. Préparer des solutions de glucose, de fructose, de sucrose, de maltose et de lactose dans de l’eau, telles qu’elles sont utilisées conventionnellement pour l’analyse CLHP de sucres.

4.15. Réactif pour la clarification (Carrez I). Dans un bécher, dissoudre 219,5 grammes d’acétate de zinc (point 4.8) dans de l’eau. Les transvaser avec les eaux de rinçage dans une fiole jaugée de 1 000 ml et ajouter 30 ml d’acide acétique (point 4.11). Bien mélanger et porter au volume avec de l’eau. Cette solution peut être utilisée au maximum pendant six mois si elle est stockée à température ambiante. D’autres réactifs de clarification équivalents à la solution de Carrez peuvent être utilisés.

4.16. Réactif pour la clarification (Carrez II). Dans un bécher, dissoudre 106,0 grammes d'hexacyanoferrate de potassium (II) (point 4.9) dans de l’eau. Les transvaser avec les eaux de rinçage dans une fiole jaugée de 1 000 ml. Bien mélanger et porter au volume avec de l’eau. Cette solution peut être utilisée au maximum pendant six mois si elle est stockée à température ambiante. D’autres réactifs de clarification équivalents à la solution de Carrez peuvent être utilisés.

4.17. Phase mobile CLHP. Préparer une phase mobile qui est conventionnellement utilisée pour l’analyse des sucres par la CLHP. Si on utilise une colonne de gel de silice amynopropile, par exemple, un mélange d’eau et d’acétonitrile est une phase mobile courante.

5. Appareils

5.1. Verrerie de laboratoire standard.

5.2. Filtres plissés, par exemple, 185 mm.

5.3. Filtres à seringue, 0,45 μm, convenant pour les solutions aqueuses.

5.4. Tubes à échantillons convenant au passeur d’échantillons utilisé dans le cadre de la CLHP.

5.5. Fioles jaugées de 100 ml.

5.6. Seringues en plastique, 10 ml.

5.7. pH-mètre.

5.8. Balance d’analyse.

5.9. Bain-marie avec thermostat, réglable à 60 °C et 90 °C.

5.10. Appareils à CLHP pour l’analyse des sucres.

6. Procédure

6.1. Préparation de l’échantillon pour différents types de produits

Le produit est homogénéisé.

6.2. Portion de l’échantillon

La quantité d’échantillon est estimée à partir de la déclaration des ingrédients et des conditions de l’analyse CLHP (concentration de la solution de référence du glucose) et ne dépasse pas:

Peser l’échantillon avec une précision de 0,1 mg.

6.3. Essai à blanc

L’essai à blanc consiste à accomplir une analyse complète (décrite au point 6.4), sans ajouter l’échantillon. Son résultat est utilisé pour calculer la teneur en amidon (point 7.2).

6.4. Analyse

6.4.1. Préparation des échantillons

Mélanger l’échantillon en le secouant ou en le remuant. La portion d’essai choisie (point 6.2) est transvasée dans une fiole jaugée (point 5.5) avec environ 70 ml d’eau chaude.

Après dissolution ou suspension, ajouter 50 microlitres d’alpha-amylase thermostable (point 4.6) et chauffer à 90 °C pendant 30 minutes dans un bain-marie (point 5.9). Refroidir aussi vite que possible à 60 °C dans un bain-marie et ajouter 5 ml d’une solution d’amyloglucosidase (point 4.13). Pour des échantillons qui pourraient influencer le pH de la solution de réaction, contrôler le pH et l’ajuster à 4,6-4,8, au besoin. Laisser réagir pendant 60 minutes à 60 °C. Refroidir les échantillons à la température ambiante.

6.4.2. Clarification

Pour les échantillons avec une forte teneur en protéines ou graisses, la clarification est nécessaire en ajoutant 1 ml de Carrez I (point 4.15) à la solution d’échantillon. Après avoir secoué, ajouter 1 ml de Carrez II (point 4.16). Secouer l'échantillon à nouveau.

6.4.3. Traitement pour analyse CLHP

L’échantillon dans la fiole jaugée est dilué jusqu’au trait de jauge avec de l’eau, homogénéisée et filtrée dans un filtre plissé (point 5.2). Collecter l’extrait d’échantillon.

Filtrer les extraits au moyen d’un filtre à seringue (point 5.3) avec une seringue (point 5.6) qui a fait l’objet d’un lavage préalable à l’aide de l’extrait. Collecter le filtrat dans des tubes (point 5.4).

6.5. Chromatographie

La CLHP est habituellement réalisée pour l’analyse des sucres. Si l’analyse CLHP révèle des traces de maltose, cela peut être un signe de la conversion incomplète de l’amidon, qui se traduit par une récupération trop faible du glucose.

7. Calcul et expression des résultats

7.1. Calcul des résultats de la CLHP

Pour le calcul de la teneur en amidon, les résultats de deux analyses CLHP sont nécessaires, à savoir les sucres présents dans l’échantillon avant «sucres libres» et après traitement enzymatique (conformément à la description de la présente méthode). Il faut aussi procéder à une détermination à blanc pour être en mesure de corriger les sucres présents dans les enzymes.

Dans l’analyse CLHP, la zone de pic est déterminée par intégration, et la concentration est calculée après calibrage avec des solutions de référence (point 4.14). À partir de la concentration de glucose (g/100 ml) après traitement enzymatique, la concentration de glucose (g/100 ml) dans l’essai à blanc est soustraite. En fin de compte, la teneur (g de sucre/100 g d’échantillon) en sucre est calculée au moyen de la quantité d’échantillon pesée, ce qui donne:

1) Analyse CLHP avant traitement enzymatique, fournissant la teneur (g/100 g) en sucres libres: — glucose G — fructose F — sucrose S

2) Analyse CLHP après traitement enzymatique, donnant la teneur (g/100 g) en sucres: — glucose après correction de l’essai à blanc (Ge cor) — fructose Fe — sucrose Se

7.2. Calcul de la teneur en amidon

7.2.1. Calcul de la teneur totale en glucose «Z»

Si la quantité de fructose après traitement enzymatique (Fe) est supérieure à la quantité de fructose avant traitement enzymatique (F), le sucrose présent dans l’échantillon est alors en partie converti en fructose et en glucose. Cela signifie qu'une correction doit être opérée pour le glucose libéré (Fe – F).

Z, teneur finale en glucose après correction en g/100 g:

Z = (Ge cor) – (Fe – F)

7.2.2. Calcul de la teneur totale en glucose exprimée en amidon

E, teneur en amidon en g/100 g:

E = [(Ge cor) – (Fe – F)] × 0,9

8. Précision

Les détails d’un essai interlaboratoire sur la précision de la méthode appliquée sur deux échantillons sont résumés sous ce point. Ils reflètent les exigences de performance pour la méthode décrite dans la présente annexe.

Résultats d’un essai interlaboratoire (à titre d’information)

Un essai interlaboratoire a été réalisé, en 2008, avec la participation des laboratoires douaniers européens.

L’évaluation de la précision a été réalisée conformément au texte intitulé «Protocol for the design, conduct and interpretation of method-performance studies», W. Horwitz, (IUPAC technical report), Pure & Appl. Chem., vol. 67, no 2, pp. 331-343, 1995.

Les données relatives à la précision de la méthode sont indiquées dans le tableau ci-dessous.







Échantillons 1: 2: Z échantillon 1 Z échantillon 2 Nombre de laboratoires 41 42 Nombre de laboratoires retenus après élimination des cas extrêmes 38 39 Moyenne (%, m/m) 29,8 55,0 Écart-type de répétabilité (sr) (%, m/m) 0,5 0,5 Écart-type de reproductibilité (sR) (%, m/m) 1,5 2,3 Limite de répétabilité (r) (%, m/m) 1,4 1,4 Limite de reproductibilité (R) (%, m/m) 4,2 6,6

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ANNEXE II

Détermination de la teneur en amidon ou fécule, dextrines ou autres amidons ou fécules modifiés, contenus dans les marchandises relevant des codes NC 3505 20 10 à 3505 20 90 ainsi qu’en matières amylacées contenues dans les marchandises relevant des codes NC 3809 10 10 à 3809 10 90

I. PRINCIPE

Par hydrolyse acide, l’amidon est transformé en sucres réducteurs qui sont dosés volumétriquement au moyen de la liqueur de Fehling.

II. APPAREILLAGE ET REACTIFS

1. Ballon de 250 ml environ

2. Fiole jaugée de 200 ml

3. Burette graduée de 25 ml

4. Acide chlorhydrique de densité 1,19

5. Solution de potasse caustique

6. Charbon décolorant

7. Liqueur de Fehling

8. Solution de bleu de méthylène à 1 %

III. MODE OPERATOIRE

Dans un ballon d’environ 250 ml, introduire une prise d’essai correspondant à une quantité d’amidon d’environ 1 gramme. Ajouter 100 ml d’eau distillée et 2 ml d’acide chlorhydrique. Porter à ébullition à reflux pendant 3 heures.

Transvaser le contenu du ballon ainsi que le produit de son rinçage dans une fiole jaugée de 200 ml et y ajouter la solution de potasse caustique jusqu’à réaction légèrement acide. Compléter le volume à 200 ml par de l’eau distillée et filtrer le tout sur un peu de charbon décolorant.

Verser ensuite la solution dans une burette graduée et réduire 10 ml de liqueur de Fehling selon la méthode ci-après:

Dans un ballon à fond plat d’environ 250 ml, verser 10 ml de liqueur de Fehling (5 ml de solution A et 5 ml de solution B). Agiter jusqu’à obtention d’une solution claire, puis ajouter 40 ml d’eau distillée ainsi qu’une petite quantité de quartz ou de pierre ponce.

Placer le ballon sur une plaque d’amiante de forme carrée percée en son milieu d’une ouverture circulaire d’un diamètre de 6 cm environ, reposant elle-même sur une toile métallique. Chauffer le ballon de manière que le liquide commence à bouillir au bout de 2 minutes environ.

Ajouter au liquide en ébullition, à l’aide d’une burette, des quantités successives de la solution sucrée jusqu’à ce que la couleur bleue de la liqueur de Fehling devienne à peine perceptible; ajouter alors, à titre d’indicateur, 2 ou 3 gouttes de solution de bleu de méthylène, puis compléter la titration en ajoutant goutte à goutte une nouvelle quantité de la solution sucrée jusqu’à disparition de la couleur bleue de l’indicateur.

Pour plus de précision, répéter la titration dans les mêmes conditions en ajoutant cependant, en une seule fois, la presque totalité de la solution sucrée nécessaire à la réduction de la liqueur de Fehling. Dans cette deuxième titration, la réduction de la liqueur de Fehling doit s’opérer dans un délai de 3 minutes. Continuer l’ébullition pendant exactement 2 minutes. Titrer en ajoutant goutte à goutte pendant la troisième minute jusqu’à la disparation de la couleur bleue de l’indicateur.

Le pourcentage en poids d’amidon de l’échantillon est déterminé au moyen de la formule suivante:

amidon % = [(T × 200 × 100)/(n × p)] × 0,95

dans laquelle:

T : représente la quantité en grammes de dextrose anhydre correspondant à 10 ml de liqueur de Fehling (5 ml de solution A + 5 ml de solution B). Ce titre est de 0,04945 g de dextrose anhydre lorsque la solution A contient 17,636 g de cuivre par litre;

n : représente le nombre de ml de la solution sucrée utilisée pour la titration;

p : représente le poids de la prise d’essai;

0,95 : représente le taux de conversion du dextrose anhydre en amidon.

IV. PREPARATION DE LA LIQUEUR DE FEHLING

Solution A : Dissoudre, dans une fiole jaugée au moyen d’eau distillée, 69,278 g de sulfate de cuivre cristallisé pur pour analyse (CuSO4 5H2O) exempt de fer et ajuster la solution au volume d’un litre au moyen d’eau distillée. Le titre exact de cette solution devra être vérifié au moyen d’une détermination quantitative du cuivre.

Solution B : Dissoudre, dans une fiole jaugée, au moyen d’eau distillée, 100 g d’hydroxyde de sodium et 346 g de tartrate double de sodium et de potassium (sel de Seignette) et ajuster la solution au volume d’un litre au moyen d’eau distillée.

Les deux solutions A et B doivent être mélangées à volume égal immédiatement avant utilisation. 10 ml de liqueur de Fehling (5 ml de solution A + 5 ml de solution B) sont complètement réduits, si l’on opère dans les conditions indiquées au point III, par 0,04945 g de dextrose anhydre.









ANNEXE III

Recherche de la présence de farine ou de semoule de blé tendre dans les pâtes alimentaires

(d’après la méthode Young et Gilles, modifiée par Bernaerts et Gruner)

I. PRINCIPE

Un extrait de l’échantillon des pâtes alimentaires à analyser est préparé en utilisant un solvant non polaire.

Cet extrait est chromatographié sur couche mince de gel de silice de façon à séparer les stérols présents en différentes fractions sous forme de bandes.

Suivant le nombre de bandes intenses révélées, il est possible de déterminer si le produit examiné est fabriqué, soit exclusivement à partir de blé dur ou de blé tendre, soit à partir d’un mélange de ces deux produits. Il est également possible de déterminer si des œufs ont été ajoutés à ces matières premières.

II. APPAREILLAGE ET REACTIFS

1. Homogénéiseur ou broyeur permettant d’obtenir une mouture passant à travers un tamis normalisé d’une ouverture de mailles de 0,200 mm.

2. Tamis normalisé d’une ouverture de mailles de 0,200 mm.

3. Évaporateur sous pression réduite avec bain-marie.

4. Plaque de verre, feuille d’aluminium ou autre support approprié de 20 cm × 20 cm recouvert d’une couche mince de gel de silice. Si on prépare soi-même la couche mince, on utilisera du gel de silice mélangé à environ 13 % de plâtre et on l’appliquera sur la plaque de verre en couche de 0,25 mm avec un appareillage adéquat et en suivant les instructions des fabricants.

5. Micropipette permettant de mesurer 20 microlitres.

6. Cuve avec couvercle convenant pour le développement des chromatogrammes.

7. Nébulisateur.

8. Éther de pétrole de point d’ébullition compris entre 40 et 60 °C redistillé avant l’emploi.

9. Éther éthylique anhydre p.a.

10. Tétrachlorure de carbone pour chromatographie redistillé avant l’emploi.

11. Acide phosphomolybdique p.a.

12. Alcool éthylique 94°.

III. MODE OPÉRATOIRE

Moudre une vingtaine de grammes de l’échantillon à analyser de façon qu’ils passent en totalité à travers le tamis. Introduire la prise d’essai moulue dans un flacon Erlenmeyer et recouvrir avec 150 ml d’éther de pétrole. Laisser à la température ambiante jusqu’au lendemain. Agiter de temps en temps.

Filtrer ensuite sur entonnoir Büchner muni d’une couche d’adjuvant de filtration ou sur filtre plissé. Transvaser peu à peu la solution limpide obtenue dans un ballon taré de 100 ml. Évaporer le solvant sous pression réduite en chauffant le ballon au bain-marie à 40-50 °C. Après évaporation du solvant, continuer de chauffer sous pression réduite pendant 10 minutes.

Après refroidissement du ballon, déterminer le poids de l’extrait. Diluer l’extrait dans de l’éther éthylique à raison de 1 ml d’éther éthylique par 60 milligrammes d’extrait.

Activer les couches minces en les portant à 130 °C pendant 3 heures. Laisser refroidir dans un dessiccateur contenant du gel de silice. Les plaques qui ne sont pas utilisées immédiatement sont conservées dans le même dessiccateur.

Appliquer sur une couche, de préférence fraîchement activée, 20 microlitres de la solution limpide sous forme d’une bande de largeur constante de 3 cm de long constituée de gouttelettes juxtaposées. Laisser évaporer le solvant.

Développer le chromatogramme à la température ambiante avec le tétrachlorure de carbone en utilisant une cuve chromatographique recouverte sur les parois de papier filtre imbibé de solvant. Après une heure environ, le solvant a atteint une hauteur de 18 cm. Enlever la plaque et laisser évaporer le solvant à l’air. Développer une seconde fois le chromatogramme de façon à mieux séparer les bandes. Laisser évaporer à nouveau le solvant à l’air.

Vaporiser la couche mince de gel de silice avec une solution de 20 % d’acide phosphomolybdique dans l’alcool éthylique. La couleur de la couche doit être uniformément jaune. Révéler les bandes en plaçant la plaque vaporisée pendant 5 minutes à 110 °C.

IV. INTERPRÉTATION DU CHROMATOGRAMME

Si le chromatogramme présente une seule bande principale intense possédant un Rf d’environ 0,4-0,5, le blé utilisé pour la fabrication de la pâte alimentaire est du blé dur. Si, en revanche, deux bandes principales d’égale intensité apparaissent, la matière première utilisée est du blé tendre. Les mélanges de blé dur et de blé tendre peuvent être appréciés en évaluant l’intensité relative des deux bandes.

Si l’on constate la présence de trois bandes (deux bandes à la hauteur des bandes principales du blé tendre, plus une bande intermédiaire), il y a addition d’œufs à la pâte. Dans ce cas, la matière première utilisée est du blé dur si la bande supérieure est moins intense que la bande intermédiaire. En revanche, si la bande supérieure est plus intense que la bande intermédiaire, la matière première utilisée est du blé tendre.









ANNEXE IV







Règlement abrogé avec sa modification Règlement (CEE) no 4154/87 de la Commission (JO L 392 du 31.12.1987, p. 19) Règlement (CE) no 203/98 de la Commission (JO L 21 du 28.1.1998, p. 6)









ANNEXE V







Tableau de correspondance Règlement (CEE) no 4154/87 Présent règlement Articles 1er à 4 Articles 1er à 4 Article 5 — — Article 5 Article 6 Article 6 Annexes I, II et III Annexes I, II et III — Annexe IV — Annexe V