1998R1459 — FR — 03.02.1999 — 001.001 — 1
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►B RÈGLEMENT (CE) No1459/98 DE LA COMMISSION
du 8 juillet 1998
établissant une méthode de référence pour la détermination de la vanilline dans le beurre
concentré, dans le beurre et dans la crème
(JO L 193 du 9.7.1998, p. 16)
Modifié par:
Journal officiel
no page date
►M1Règlement (CE) no175/1999 de la Commission du 26 janvier 1999 L 20 22 27.1.1999
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RÈGLEMENT (CE) No1459/98 DE LA COMMISSION
du 8 juillet 1998
établissant une méthode de référence pour la détermination de la
vanilline dans le beurre concentré, dans le beurre et dans la crème
LA COMMISSION DES COMMUNAUTÉS EUROPÉENNES,
vu le traité instituant la Communauté européenne,
vu le règlement (CEE) no804/68 du Conseil du 27 juin 1968 portant
organisation commune des marchés dans le secteur du lait et desproduits laitiers (
1), modifié en dernier lieu par le règlement (CE) no
1587/96 (2), et notamment son article 6, paragraphe 6, et son article 12,
paragraphe 3,
considérant que le règlement (CE) no2571/97 de la Commission du 15
décembre 1997 relatif à la vente à prix réduit de beurre et à l’octroid’une aide à la crème, au beurre et au beurre concentré destinés à lafabrication de produits de pâtisserie, de glaces alimentaires et autresproduits alimentaires (
3) prévoit, dans certaines circonstances, le traçage
de la crème, du beurre et du beurre concentré pour garantir une utilisa-tion finale correcte de ces produits;
considérant que, compte tenu de l’importance du traçage pour le bon
fonctionnement du régime et afin de garantir une égalité de traitemententre opérateurs qui y participent, il convient d’établir des méthodescommunes de détermination des traceurs visés dans le règlement (CE)n
o2571/97;
considérant qu’il est difficile d’établir de telles méthodes de référence
pour tous les traceurs simultanément; que l’établissement d’uneméthode de référence permettant la détermination de la vanilline dans lebeurre concentré, dans le beurre ou dans la crème constitue un nouveaupas dans cette direction;
considérant que les mesures prévues au présent règlement sont
conformes à l’avis du comité de gestion du lait et des produits laitiers,
A ARRÊTÉ LE PRÉSENT RÈGLEMENT:
Article premier
La méthode d’analyse précisée en annexe s’applique comme méthode
de référence pour la détermination de la vanilline dans le beurreconcentré, dans le beurre ou dans la crème visés au règlement (CE) n
o
2571/97.
Le beurre concentré, le beurre ou la crème ont été tracés conformément
à l’article 6 du règlement (CE) no2571/97 si les résultats obtenus
correspondent aux spécifications du point 8 de l’annexe.
Article 2
Le présent règlement entre en vigueur le troisième jour suivant celui de
sa publication au Journal officiel des Communautés européennes .
Il est applicable à partir du 1erseptembre 1998.
Le présent règlement est obligatoire dans tous ses éléments et directe-
ment applicable dans tout État membre.
(1) JO L 148 du 28. 6. 1968, p. 13.
(2) JO L 206 du 16. 8. 1996, p. 21.
(3) JO L 350 du 20. 12. 1997, p. 3.
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ANNEXE
Détermination de la teneur en vanilline dans le beurre concentré, dans le
beurre ou dans la crème à l’aide de la chromatographie liquide à haute
performance
1.Objet et champ d’application
La méthode décrit un mode opératoire permettant la détermination quanti-
tative de vanilline dans le beurre, le beurre concentré ou dans la crème.
Elle est applicable aux échantillons reçus dans le cadre du règlement (CE)
no2571/97.
2.Principe
Extraction d’une quantité connue d’échantillon à l’aide d’un mélange
d’isopropanol/éthanol/acétonitrile (1:1:2). Précipitation de la plus grandepartie de la matière grasse par réfrigération (température comprise entre−15 et −20 °C), suivie par une centrifugation.
Après dilution avec de l’eau, détermination de la teneur en vanilline par
chromatographie liquide à haute performance (HPLC).
3.Appareillage
Matériel courant de laboratoire, et notamment les éléments suivants:
3.1. congélateur, d’une amplitude de température comprise entre −15 et
−20 °C;
3.2. seringues, jetables, d’une capacité de 2 ml;3.3. microfiltres à membranes (diamètre des pores: 0,45 µm), résistant à une
solution contenant 5 % de solution d’extraction (4.4);
3.4. système de chromatographie liquide composé d’une pompe (flux de 1,0
ml/min), d’un injecteur (injection de 20 µl, automatique ou manuelle),
d’un détecteur d’UV (fonctionnant à 306 nm, 0,01 AU pleine échelle),d’un enregistreur ou d’un intégrateur ainsi que d’un four thermostatique àcolonne fonctionnant à 25 °C;
3.5. colonne analytique (250 mm × 4,6 mm ID), garnie avec la phase LiChros-
pher RP 18 (Merck, 5 µm) ou équivalent;
3.6. précolonne (environ 20 m m×3m mI D ) garnie à sec avec la phase
Perisorb RP 18 (30 à 40 µm) ou équivalent.
4.Réactifs
Tous les réactifs utilisés doivent être de qualité analytique reconnue.
4.1. Isopropanol4.2 Éthanol 96 % (v/v)4.3. Acétonitrile4.4. Solution d’extraction
Mélanger de l’isopropanol (4.1), de l’éthanol (4.2) et de l’acétonitrile (4.3)
dans le rapport de 1:1:2 (V/V).
4.5. Vanilline (4-hydroxy-3-méthoxy-benzaldéhyde)4.5.1. Solution mère de vanilline (=500 µg/ml)
Peser à 0,1 mg près environ 50 mg (mg CM) de vanilline (4.5) dans une
fiole jaugée de 100 ml, ajouter 25 ml de solution d’extraction (4.4) etcompléter avec de l’eau.
4.5.2. Solution étalon de vanilline (=10 µg/ml)
À l’aide d’une pipette, introduire 5 ml de solution mère de vanilline
(4.5.1) dans une fiole jaugée de 250 ml et compléter avec de l’eau.
4.6. Méthanol, qualité CLHP4.7. Acide acétique glacial4.8. Eau, qualité CLHP4.9. Phase mobile CLHP
Mélanger 300 ml de méthanol (4.6) à environ 500 ml d’eau (4.8) et à 20
ml d’acide acétique (4.7) dans une fiole jaugée de 1 000 ml et compléteren volume avec de l’eau (4.8). Filtrer à travers un filtre (0,45 µm).
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5.Mode opératoire
5.1.Préparation de l’échantillon pour essai
5.1.1. Beurre
Chauffer l’échantillon jusqu’à ce qu’il commence à fondre. Éviter toute
surchauffe locale au-dessus de 40 °C. Lorsque l’échantillon devient suffi-
samment plastique, l’homogénéiser en l’agitant. Remuer le beurre pendant15 s avant de prendre un échantillon. Introduire dans une fiole jaugée de100 ml enviro n5g( gS M )d e beurre et le pese rà1m gp r ès .
5.1.2. Beurre concentré
Immédiatement avant l’échantillonnage, placer dans un four à 40-50 °Cl e
récipient contenant le beurre concentré jusqu’à ce qu’il fonde complète-ment. Mélanger l’échantillon en le faisant tourner ou en le remuant; éviterla formation de bulles d’air lors d’une opération trop vigoureuse. Intro-duire dans une fiole jaugée de 100 ml enviro n4g( gS M )d e beurre et le
peserà1m gp r ès .
5.1.3. Crème
Chauffer l’échantillon dans un bain-marie ou une étuve à une température
de 35 à 40 °C. Répartir la graisse de manière homogène en le faisant
tourner et, si nécessaire, en le remuant. Refroidir rapidement l’échantillon( 2 0±2 °C). L’échantillon doit avoir un aspect homogène, sinon recom-
mencer l’opération. Introduire dans une fiole jaugée de 100 ml environ 10g (g SM) de beurre et le peser à 1 mg près.
5.2.Préparation de la solution d’essai
Ajouter environ 75 ml de solution d’extraction (4.4) à la prise d’essai
(5.1.1, 5.1.2 ou 5.1.3), remuer ou secouer vigoureusement pendant environ15 min et compléter avec la solution d’extraction (4.4). Transférer environ10 ml de cet extrait dans un tube à essai pourvu d’un bouchon. Placer letube à essai dans le congélateur (3.1) et le laisser reposer environ 30 min.Centrifuger l’extrait froid pendant 5 min à environ 2 000 rpm et décanterimmédiatement. Laisser la solution décantée se refroidir à la températureambiante. Introduire à la pipette 5 ml de la solution décantée dans unefiole jaugée de 100 ml et compléter avec de l’eau. Filtrer une partiealiquote à l’aide d’un microfiltre à membrane (3.3). Le filtrat est prêt pourla détermination par CLHP.
5.3.Calibrage
Introduire à la pipette 5 ml de la solution étalon de vanilline (4.5.2) dans
une fiole jaugée de 100 ml. Ajouter 5 ml de solution d’extraction (4.4) etcompléter avec de l’eau jusqu’à la marque. Cette solution contient 0,5µg/ml de vanilline.
5.4.Détermination par CLHP
Laisser le système chromatographique se stabiliser pendant environ 30
min. Injecter la solution étalon (5.3). Répéter cette opération jusqu’à ceque la différence de l’aire des pics ou la hauteur des pics entre deuxinjections successives soit inférieure à 2 %. Dans les conditions décrites,le temps de rétention de la vanilline est d’environ 9 min. Analyser lasolution étalon (5.3) en double en injectant 20 µl. Injecter 20 µl des
solutions d’essai (5.2). Déterminer la superficie ou la hauteur du pic devanilline obtenu. Recommencer en double l’injection de solution étalon(5.3) après 10 injections d’échantillons pour essais (5.2).
6.Calcul des résultats
Calculer la superficie (ou la hauteur) moyenne (AC) des pics de vanilline
correspondant aux injections en double encadrant chaque lot de solutionsd’essai (4 surfaces ou hauteurs).
Calculer le facteur de réponse (R):
R = AC/CM
où CM est la masse de vanilline en mg (4.5.1).
La teneur (mg/kg) en vanilline (C) de l’échantillon d’essai est donnée par
la formule suivante:
C=AS × 20 × 0,96
S M×R
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où:
AS = superficie du pic de vanilline de l’échantillon d’essai,
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SM = masse de l’échantillon d’essai en g (5.1.1, 5.1.2 ou 5.1.3).
Lorsque la crème est analysée pour la détermination de la vanil-
line, on doit exprimer la concentration du traceur en mg detraceur/kg de matière grasse butyrique, en multipliant C par100/f, f étant la teneur en matière grasse de la crème en % (m/m)
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B
20 = facteur qui prend en compte les dilutions de l’étalon et de
l’échantillon d’essai,
0,96 = facteur de correction pour la teneur en matière grasse lors de la
première dilution de l’échantillon d’essai.
Note:
On peut utiliser les hauteurs de pics au lieu de la surface des pics (voir
point 8.3).
7.Précision de la méthode
7.1. Répétabilité (r)
La différence entre les résultats de deux déterminations effectuées dans
l’intervalle de temps le plus bref possible par un seul opérateur utilisant lemême appareillage sur du matériel d’essai identique ne doit pas dépasser16 mg/kg.
7.2. Reproductibilité (R)
La différence entre les résultats de deux déterminations effectuées par des
opérateurs de différents laboratoires, utilisant des appareillages différentssur du matériel d’essai identique, ne peut dépasser 27 mg/kg.
8.Limites de tolérance
8.1. Trois échantillons doivent être prélevés sur le produit tracé afin de vérifier
l’homogénéité.
8.2. Traceur obtenu soit à partir de vanille soit à partir de vanilline synthé-
tique.
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M1
8.2.1. Le taux d’incorporation du 4-hydroxy-3-méthoxy-benzaldéhyde est de 250
g par tonne de beurre concentré ou de beurre. Lorsque c’est de la crèmequi est tracée, le taux d’incorporation est de 250 g par tonne de matièregrasse butyrique.
8.2.2. On utilise les résultats obtenus pour les trois échantillons à partir de
l’analyse du produit pour vérifier le taux et l’homogénéité de l’incorpora-tion du traceur, et on compare le plus faible de ces résultats avec leslimites suivantes [en prenant en considération la différence critique pourune probabilité de 95 % (DCr
95)]:
— 221,0 mg/kg (95 % du taux d’incorporation minimal),
— 159,0 mg/kg (70 % du taux d’incorporation minimal).
La concentration du traceur dans l’échantillon donnant le résultat le plus
faible est utilisée par interpolation entre 221,0 mg/kg et 159,0 mg/kg.
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8.3. Traceur obtenu exclusivement à partir de gousses de vanille ou d’extraits
intégraux de ces dernières.
▼M1
8.3.1. Le taux d’incorporation du 4-hydroxy-3-méthoxy-benzaldéhyde est de 100
g par tonne de beurre concentré ou de beurre. Lorsque c’est de la crèmequi est tracée, le taux d’incorporation est de 100 g par tonne de matièregrasse butyrique.
8.3.2. On utilise les résultats obtenus pour les trois échantillons à partir de
l’analyse du produit pour vérifier le taux et l’homogénéité de l’incorpora-tion du traceur, et on compare le plus faible de ces résultats avec leslimites suivantes [en prenant en considération la différence critique pourune probabilité de 95 % (DCr
95)]:
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— 79,0 mg/kg (95 % du taux d’incorporation minimal),
— 54,0 mg/kg (70 % du taux d’incorporation minimal).
La concentration du traceur dans l’échantillon donnant le résultat le plus
faible est utilisée par interpolation entre 79,0 mg/kg et 54,0 mg/kg.
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9.Notes
9.1. La répétabilité r est la valeur en dessous de laquelle la différence absolue
entre deux résultats d’essais individuels obtenus avec la même méthodesur du matériel d’essai identique dans les mêmes conditions (même maté-riel, même laboratoire et dans un bref intervalle de temps) peut — selontoute vraisemblance — se situer dans une probabilité précise; en l’absenced’autres indications, cette probabilité est de 95 %.
9.2. La reproductibilité R est la valeur en dessous de laquelle la différence
absolue entre deux résultats d’essais individuels obtenus avec la mêmeméthode sur du matériel d’essai identique dans des conditions différentes(opérateurs différents, matériel différent, laboratoires différents et/ou délaidifférent) peut être escomptée se situer dans une probabilité précise; enl’absence d’autres indications, cette probabilité est de 95 %.
9.3. La récupération de la vanilline ajoutée à un niveau de 250 mg/kg de
butteroil varie de 97,0 à 103,8. La teneur moyenne qui a été constatée
était de 99,9 % avec un écart type de 2,7 %.
9.4. La solution étalon contient 5 % de solution d’extraction pour compenser
l’élargissement du pic provoqué par la présence de 5 % de solutiond’extraction des échantillons d’essai. Cela permet une quantification parhauteur de pic.
9.5. L’analyse se fonde sur une ligne d’étalonnage linéaire (intercept: zéro).
En utilisant des dilutions appropriées de la solution étalon (4.5.2), on
vérifie la linéarité la première fois que l’analyse est effectuée et ensuite àintervalles réguliers ainsi qu’après la modification ou la rénovation del’équipement CLHP.