1982L0434 — FR — 10.04.1990 — 001.001 — 1
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►BDEUXIÈME DIRECTIVEDE LA COMMISSION
du 14 mai 1982
concernant le rapprochementdeslégislations desÉtatsmembres relatives auxméthodesd'analyse
nécessaires au contrôle de la composition des produits cosmétiques
(82/434/CEE)
(JO L 185 du 30.6.1982, p. 1)
Modifiée par:
Journal officiel
nopage date
►M1Directive 90/207/CEE de la Commission du 4 avril 1990 L 108 92 28.4.1990
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DEUXIÈME DIRECTIVEDE LA COMMISSION
du 14 mai 1982
concernant le rapprochement des législations des États membres
relatives aux méthodes d'analyse nécessaires au contrôle de la
composition des produits cosmétiques
(82/434/CEE)
LA COMMISSION DES COMMUNAUTÉS EUROPÉENNES,
vu le traité instituant la Communauté économique européenne,
vu la directive 76/768/CEE du Conseil, du 27 juillet 1976, concernant
le rapprochement des législations des États membres relatives auxproduits cosmétiques(
1), modifiée par la directive 79/661/CEE(2), et
notamment son article 8 paragraphe 1,
considérant que la directive 76/768/CEE prévoit des contrôles officiels
des produits cosmétiques visant à constater que les conditions prévuespar les dispositions communautaires concernant la composition desproduits cosmétiques sont respectées;
considérant qu'il convient d'établir le plus rapidement possible toutes
les méthodes d'analyse nécessaires et que la première étape pouratteindre ce but ayant été réalisée par la fixation de certaines méthodes
dans la directive 80/1335/CEE de la Commission(
3), la fixation des
méthodes d'identification des agents d'oxydation et de dosage duperoxyde d'hydrogène dans les produits capillaires, d'identification etde dosage semi-quantitatif de certains colorants d'oxydation dans lesteintures pour cheveux, d'identification et de dosage des nitrites, d'iden-
tification et de dosage du formaldehyde libre, de dosage de la résorcine
dans les shampooings et les lotions capillaires, de dosage du méthanolpar rapport à l'éthanol ou au propanol-2, constituent une deuxièmeétape;
considérant que les mesures prévues à la présente directive sont
conformes à l'avis du comité pour l'adaptation au progrès technique dela directive 76/768/CEE,
A ARRÊTÉ LA PRÉSENTE DIRECTIVE:
Article premier
Les États membres prennent toutes les mesures utiles pour que, lors des
contrôles officiels des produits cosmétiques:
— l'identification des agents d'oxydation et le dosage du peroxyde
d'hydrogène dans les produits capillaires,
— l'identification et le dosage semi-quantitatif de certains colorants
d'oxydation dans les teintures pour cheveux,
— l'identification et le dosage des nitrites,
— l'identification et le dosage du formaldehyde libre,
— le dosage de la résorcine dans les shampooings et les lotions capil-
laires,
— le dosage du méthanol par rapport à l'éthanol ou au propanol-2
soient effectués selon les méthodes décrites à l'annexe.
Article 2
Les États membres mettent en vigueur les dispositions législatives,
réglementaires ou administratives nécessaires pour se conformer auxdispositions de la présente directive, au plus tard le 31 décembre1983. Ils en informent immédiatement la Commission.1982L0434 — FR — 10.04.1990 — 001.001 — 2
(1)J O noL 262 du 27. 9. 1976, p. 169.
(2)J O noL 192 du 31. 7. 1979, p. 35.
(3)J O noL 383 du 31. 12. 1980, p. 27.
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Article 3
Les États membres sont destinataires de la présente directive.1982L0434 — FR — 10.04.1990 — 001.001 — 3
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ANNEXE
I.IDENTIFICATION DES AGENTS D'OXYDATION ET DOSAGE DU
PEROXYDE D'HYDROGÈNE DANS LES PRODUITS CAPILLAIRES
OBJET ET CHAMP D'APPLICATION
Le dosage iodométrique du peroxyde d'hydrogène dans les produits cosmétiques
est possible en l'absence de tout autre agent d'oxydation réagissant avec les
iodures pour former de l'iode. Avant d'entreprendre le dosage iodométrique du
peroxyde d'hydrogène, il est donc indispensable de détecter et d'identifier les
autres agents d'oxydation éventuellement présents. Cette identification s'effectue
en deux opérations, la première concerne les persulfates, les bromates et le
peroxyde d'hydrogène, la seconde le peroxyde de baryum.
A. IDENTIFICATION DES PERSULFATES, DES BROMATES ET DU
PEROXYDE D'HYDROGÈNE
1. PRINCIPE
Le persulfate de sodium, de potassium et d'ammonium, le bromate de
potassium et de sodium et le peroxyde d'hydrogène, qu'il provienne ou
non du peroxyde de baryum, sont identifiés par chromatographie
descendante sur papier à l'aide de deux solvants de développement.
2. RÉACTIFS
Tous les réactifs doivent être de qualité analytique.
2.1. Solutions aqueuses de référence à 0,5 % (m/v) des composés suivants:
2.1.1. persulfate de sodium2.1.2. persulfate de potassium
2.1.3. persulfate d'ammonium
2.1.4. bromate de potassium
2.1.5. bromate de sodium
2.1.6. peroxyde d'hydrogène
2.2. Solvant de développement A, éthanol à 80 % (v/v)
2.3. Solvant de développement B, benzène-méthanol-alcool isoamylique-eau
(34-38-18-10, v)
2.4. Réactif A, solution aqueuse d'iodure de potassium à 10 % (m/v)
2.5. Réactif B, solution aqueuse d'amidon à 1 % (m/v)
2.6. Réactif C, acide chlorhydrique à 10 % (m/m)
2.7. Acide chlorhydrique 4 N
3. APPAREILLAGE
3.1. papier pour chromatographie (Whatman n
o3e tno4 ou équivalent)
3.2. micropipette d'un µl
3.3. fioles jaugées de 100 ml
3.4. filtres plissés
3.5. matériel courant pour chromatographie descendante sur papier
4. PRÉPARATION DE L'ÉCHANTILLON
4.1.Produits solubles dansl'eau
Préparer deux solutions d'échantillon en dissolvant respectivement 1 et
5 g du produit dans 100 ml d'eau. Pour réaliser la chromatographie sur
papier décrite au point 5, utiliser 1 µl de chacune de ces deux solutions.1982L0434 — FR — 10.04.1990 — 001.001 — 4
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4.2.Produits partiellement solubles dans l'eau
4.2.1. Peser 1 et 5 g d'échantillon, les mettre en suspension dans 50 ml d'eau,
compléter à 100 ml et mélanger. Filtrer les deux suspensions à l'aide
d'un filtre plissé (point 3.4) et utiliser 1 µl de chacun des deux filtrats
pour réaliser la chromatographie sur papier décrite au point 5.
4.2.2. Préparer deux nouvelles suspensions de 1 et 5 g d'échantillon dans 50 ml
d'eau, acidifier avec de l'acide chlorhydrique dilué (point 2.7) compléter
à 100 ml avec de l'eau et mélanger. Filtrer les suspensions à l'aide d'un
filtre plissé (point 3.4) et utiliser 1 µl de chacun des deux filtrats pour
réaliser la chromatographie sur papier décrite au point 5.
4.3.Crèmes
Homogénéiser séparément 5 et 20 g du produit dans 100 ml d'eau et
utiliser les dispersions pour réaliser la chromatographie sur papier
décrite au point 5.
5. MODE OPÉRATOIRE
5.1. Dans deux cuves pour chromatographie descendante sur papier, mettre
une certaine quantité des solvants de développement A (point 2.2) et B
(point 2.3). Saturer les cuves par les vapeurs de solvants pendant 24 h
au moins.
5.2. Sur une bande de papier pour chromatographie (Whatman no3 ou équi-
valent) de 40 cm de long et 20 cm de large (point 3.1) ou d'un autre
format approprié, déposer sur chaque point de départ 1 µl de l'une des
solutions (ou suspensions filtrées) d'échantillon et de référence prépa-
rées aux points 4 et 2.1 et faire évaporer le solvant à l'air.
5.3. Mettre la bande (point 5.2) dans la cuve remplie du solvant A (point
5.1) et chromatographier jusqu'à ce que le front du solvant ait parcouru
35 cm (environ 15 h).
5.4. Répéter les opérations décrites aux points 5.2 et 5.3 avec du papier pour
chromatographie (Whatman no4 ou équivalent) (point 3.1) et le solvant
B (point 2.3). Chromatographier jusqu'à ce que le solvant de développe-
ment ait parcouru 35 cm (environ 5 h).
5.5. Après développement, sortir les bandes de papier des cuves et les
sécher à l'air.
5.6. Révéler les taches en pulvérisant:
5.6.1. le réactif A (point 2.4) et aussitôt après le réactif B (point 2.5). Les
taches de persulfates apparaissent d'abord sur le chromatogramme,
suivies de taches de peroxyde d'hydrogène. Marquer ces taches au
moyen d'un crayon.
5.6.2. le réactif C (point 2.6) sur les chromatogrammes obtenus au point 5.6.1.
Des taches gris bleu indiquant la présence de bromates apparaissent.
5.7. Dans les conditions indiquées ci-avant pour les solvants A (point 2.2) et
B (point 2.3) les valeurs Rf des solutions de référence (point 2.1) sont
les suivantes:
Solvant A (point 2.2) Solvant B (point 2.3)
Persulfate de sodium 0,40 0,10
Persulfate de potassium 0,40 0,02 + 0,05Persulfate d'ammonium 0,50 0,10 + 0,20
Bromate de sodium 0,40 0,20
Bromate de potassium 0,40 0,10 + 0,20Peroxyde d'hydrogène 0,80 0,80
B. IDENTIFICATION DU PEROXYDE DE BARYUM
1. PRINCIPE
La présence de peroxyde de baryum est mise en évidence:
— d'une part par formation du peroxyde d'hydrogène après l'acidifica-
tion de l'échantillon (titre A, point 4.2),1982L0434 — FR — 10.04.1990 — 001.001 — 5
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— d'autre part, par l'identification d'ions baryum.
En l'absence de persulfates (titre A): on ajoute de l'acide sulfurique
dilué à une partie de la solution d'échantillon acide (titre B, point 4.1),
ce qui entraîne la formation d'un précipité blanc de sulfate de baryum.
La présence d'ions baryum dans la solution d'échantillon (point 4.1) est
confirmée par chromatographie sur papier comme indiqué au point 5 ci-
après.
En cas de présence simultanée de peroxyde de baryum et de persulfates
(titre B, point 4.2) après fusion alcaline de l'insoluble et dissolution
dans l'acide chlorhydrique, on établit la présence d'ion baryum par chro-
matographie et/ou par précipitation à l'état de sulfate.
2. RÉACTIFS
2.1. Méthanol2.2. Acide chlorhydrique concentré à 36 % (m/m)2.3. Acide chlorhydrique 6 N2.4. Acide sulfurique 4 N
2.5. Rhodizonate disodique
2.6. Chlorure de baryum (BaCl
22H2O)
2.7. Carbonate de sodium anhydre2.8. Solution aqueuse de chlorure de baryum à 1 % (m/v)2.9. Solvant de développement, méthanol-acide chlorhydrique concentré à
36 % — eau (80 + 10 + 10, v)
2.10. Réactif, solution aqueuse de rhodizonate disodique à 0,1 % (m/v);
préparer la solution juste avant l'utilisation
3. APPAREILLAGE
3.1. Micropipette de 5 µl3.2. Creusets en platine3.3. Fioles jaugées de 100 ml3.4. Papier pour chromatographie (Schleicher et Schüll 2043 b ou équiva-
lent). Placer pendant une nuit dans la cuve pour chromatographie (titre
A, point 3.5) contenant le solvant (titre B, point 2.9) et sécher
3.5. Filtres plissés3.6. Matériel courant pour la chromatographie ascendante sur papier
4. PRÉPARATION DE L'ÉCHANTILLON
4.1.Produits ne contenant pas de persulfates
4.1.1. Homogénéiser ou dissoudre 2 g du produit dans 50 ml d'eau et, au
moyen d'acide chlorhydrique (titre B, point 2.3) porter le pH de la solu-
tion à environ 1.
4.1.2. Transvaser la solution (suspension) dans une fiole jaugée de 100 ml.
Compléter au trait avec de l'eau et mélanger. Utiliser cette solution
pour réaliser la chromatographie sur papier décrite au point 5 et pour
identifier le baryum par précipitation du sulfate.
4.2.Produits contenant des persulfates
4.2.1. Homogénéiser ou dissoudre 2 g du produit dans 100 ml d'eau et filtrer.4.2.2. Ajouter au résidu séché 7 à 10 fois son poids de carbonate de sodium
(titre B, point 2.7) mélanger et fondre le mélange dans un creuset de
platine (titre B, point 3.2) pendant une demi-heure.
4.2.3. Refroidir à la température ambiante, mettre en suspension le produit de
la fusion dans 50 ml d'eau et filtrer (titre B, point 3.5).
4.2.4. Dissoudre dans l'acide chlorhydrique 6 N (titre B, point 2.3) et porter à
100 ml avec de l'eau. Utiliser cette solution pour réaliser la chromato-1982L0434 — FR — 10.04.1990 — 001.001 — 6
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graphie sur papier décrite au point 5 et pour identifier le baryum par
précipitation du sulfate.
5. MODE OPÉRATOIRE
5.1. Dans une cuve pour chromatographie ascendante sur papier, mettre une
certaine quantité de solvant (titre B, point 2.9) et saturer la cuve
pendant 15 h, au moins.
5.2. Sur une feuille de papier pour chromatographie, préalablement traité
comme indiqué (titre B, point 3.4) déposer respectivement sur trois
points de départ, 5 ul de chacune des solutions préparées (titre B, point
4.1.2) et (titre B, point 4.2.4) et de la solution de référence (titre B,
point 2.8).
5.3. Faire évaporer le solvant à l'air et chromatographier verticalement
jusqu'à ce que le solvant de développement ait parcouru 30 cm.
5.4. Sortir le chromatogramme de la cuve et le sécher à l'air.5.5. Faire apparaître les taches sur le chromatogramme en pulvérisant celui-
ci avec le réactif (titre B, point 2.10).
En présence de baryum, des taches rouges de Rf 0,10 environ apparais-
sent.
C. DOSAGE DU PEROXYDE D'HYDROGÈNE
1. PRINCIPE
Le dosage iodométrique du peroxyde d'hydrogène repose sur la réaction
suivante:
H
2O2+2 H++2I−→I2+2 H2O
Il s'agit d'une réaction lente, mais il est possible de l'accélérer en ajou-
tant du molybdate d'ammonium. L'iode formé, dosé par des procédés
titrimétriques à l'aide d'une solution de thiosulfate de sodium, permet
de calculer la teneur en peroxyde d'hydrogène.
2. DÉFINITION
La teneur de l'échantillon en peroxyde d'hydrogène déterminée selon
cette méthode est exprimée en pourcentage de masse du produit.
3. RÉACTIFS
Tous les réactifs doivent être de qualité analytique.
3.1. Acide sulfurique 2 N3.2. Iodure de potassium3.3. Molybdate d'ammonium3.4. Solution de thiosulfate de sodium 0,1 N3.5. Solution d'iodure de potassium à 10 % (m/v). Préparer la solution
extemporanément
3.6. Solution de molybdate d'ammonium à 20 % (m/v)3.7. Solution d'amidon à 1 % (m/v)
4. APPAREILLAGE
4.1. Béchers en verre de 100 ml
4.2. Burette de 50 ml
4.3. Fioles jaugées de 250 ml4.4. Éprouvettes graduées de 25 et 100 ml4.5. Pipettes jaugées de 10 ml4.6. Fioles coniques de 250 ml1982L0434 — FR — 10.04.1990 — 001.001 — 7
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5. MODE OPÉRATOIRE
5.1. Dans un bécher de 100 ml, peser une quantité (m grammes) du produit
équivalente à 0,6 g environ de peroxyde d'hydrogène; les transvaser
quantitativement dans une fiole jaugée de 250 ml à l'aide d'une petite
quantité d'eau, compléter au trait avec de l'eau et mélanger.
5.2. Pipeter 10 ml de la solution d'échantillon (point 5.1) dans une fiole
conique de 250 ml (point 4.6) et ajouter successivement 100 ml d'acide
sulfurique 2 N (point 3.1), 20 ml de solution d'iodure de potassium
(point 3.5) et trois gouttes de solution de molybdate d'ammonium (point3.6).
5.3. Titrer immédiatement l'iode formé à l'aide de la solution de thiosulfate
de sodium 0,1 N (point 3.4) et, juste avant d'atteindre le point d'équiva-
lence, ajouter quelques ml de solution d'amidon comme indicateur.
Noter la quantité en ml de thiosulfate de sodium 0,1 N utilisée (V).
5.4. Selon le processus indiqué aux points 5.2 et 5.3, effectuer un dosage à
blanc, les 10 ml de solution d'échantillon étant remplacés par 10 ml
d'eau. Noter la quantité en ml de thiosulfate de sodium 0,1 N utilisée
(Vo).
6. CALCUL
Calculer la teneur du produit en peroxyde d'hydrogène, en pourcentage
de masse (% m/m), à l'aide de la formule:
% de peroxyde d0hydrog`ene¼V/C0Vo ðÞ /C2 1;7008 /C2250/C2100
m/C210/C21000
% de peroxyde d0hydrog`ene¼V/C0Vo ðÞ /C2 4;252
m
où:
m = la quantité en g de produits examiné (point 5.1),
Vo = la quantité en ml de solution de thiosulfate 0,1 N utilisée lors
du dosage à blanc (point 5.4.),
V = la quantité en ml de solution de thiosulfate 0,1 N utilisée lors
du titrage de la solution d'échantillon (point 5.3).
7. RÉPÉTABILITÉ(1)
Pour une teneur en peroxyde d'hydrogène de l'ordre de 6 % (m/m) la
différence entre les résultats de 2 dosages parallèles effectués sur le
même échantillon ne doit pas dépasser 0,2 %.
II.IDENTIFICATION ET DOSAGE SEMI-QUANTITATIF DE
CERTAINS COLORANTS D'OXYDATION DANS LES TEINTURES
POUR CHEVEUX
1. OBJET ET CHAMP D'APPLICATION
Cette méthode permet l'identification et le dosage semi-quantitatif des
substances suivantes dans les teintures pour cheveux sous forme de
crème et de liquide:
Dénomination des substances Symbole
diaminobenzènes
1-2 diaminobenzène (o. phénylènediamine) (OPD)
1-3 diaminobenzène (m. phénylènediamine) (MPD)
1-4 diaminobenzène (p. phénylènediamine) (PPD)1982L0434 — FR — 10.04.1990 — 001.001 — 8
(1) Selon la norme ISO 5725.
▼B
Dénomination des substances Symbole
diaminotoluènes
3-4 diaminotoluène (o. toluylènediamine) (OTD)
2-4 diaminotoluène (m. toluylènediamine) (MTD)
2-5 diaminotoluène (p. toluylènediamine) (PTD)
diaminophénols
2-4 diaminophénol (DAP)
hydroquinone
1-4 dihydroxybenzène (H)
α-naphtol (αN)
Pyrogallol
1-2-3 trihydroxybenzène (P)
Résorcine
1-3 dihydroxybenzène (R)
2. PRINCIPE
Les colorants d'oxydation sont extraits, à pH 10, des teintures en forme
de crème ou de liquide à l'aide de l'éthanol à 96º et identifiés par chro-
matographie sur couche mince monodimensionnelle (point 5) et/ou
bidimensionnelle (point 6).
Afin d'effectuer le dosage semi-quantitatif des substances on compare
l'image chromatographique des échantillons obtenue à l'aide de quatre
systèmes de développement avec celle des solutions des produits de
référence chromatographiées.
3. RÉACTIFS
Tous les réactifs doivent être de qualité analytique.
3.1. Éthanol absolu3.2. Acétone3.3. Éthanol 96 º (v/v)3.4. Ammoniaque à 25 %
(d
420= 0,91)
3.5. L (+) acide ascorbique3.6. Chloroforme3.7. Cyclohexane3.8. Azote technique3.9. Toluène3.10. Benzène3.11. Butanol 13.12. Butanol 23.13. Acide hypophosphoreux à 50 %3.14. Réactif diazoique: on pourra utiliser soit:
— le 4 nitro-1-benzènediazonium salifié et stabilisé par l'ion chloro-
benzène sulfonate par exemple (rouge 2 JN de Francolor ou
équivalent),
— le 2-chloro-4-nitro-1-benzènediazonium salifié et stabilisé par l'ion
naphtalenbenzoate par exemple (NNCD Reagent — Ref n
o74150
de FLUKA ou équivalent).
3.15. Nitrate d'argent1982L0434 — FR — 10.04.1990 — 001.001 — 9
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3.16. p-diméthylaminobenzaldéhyde
3.17. 2-5 diméthylphénol
3.18. Chlorure ferrique 6 H2O
3.19. Acide chlorhydrique à 10 % (m/v)
3.20.Substancesde référence
Les substances de référence sont celles indiquées au titre I «Objet et
champ d'application».
Dans le cas de composés aminés, la substance de référence doit être
constituée exclusivement par la forme chlorhydrate (mono ou di) ou
par la forme de base.
3.21.Solutions de référence à 0,5 % (m/v)
Préparer une solution à 0,5 % (m/v) de chacune des substances de réfé-
rence (point 3.20).
Peser 50 mg ± 1 mg de substance de référence dans une fiole jaugée de
10 ml.
Ajouter 5 ml d'éthanol à 96º (point 3.3).
Ajouter 250 mg d'acide ascorbique (point 3.5).Alcaliniser à l'aide de la solution ammoniacale (point 3.4) jusqu'à un
pH apparent de 10.
Compléter à 10 ml avec de l'éthanol à 96º et mélanger.Remarques
Les solutions peuvent être conservées pendant une semaine dans un
endroit frais, à l'abri de la lumière.
Dans certains cas, lors de l'addition de l'acide ascorbique et de l'ammo-
niaque, il peut se produire un précipité. Il convient alors de laisser
décanter avant de procéder au prélèvement.
3.22.Solvant de développement
3.22.1. Acétone-chloroforme-toluène: 35-25-40 (v/v)
3.22.2. Chloroforme-cyclohexane-éthanol absolu-ammoniaque 25 % 80-10-10-1
(v/v)
3.22.3. Benzène-butanol secondaire-eau: 50-25-25 (v/v). Bien agiter le mélange
et prendre la phase supérieure après décantation à la température du
laboratoire (entre 20 et 25 º C).
3.22.4. Butanol I-chloroforme et réactif M: 7-70-23 (v/v). Laisser décanter
soigneusement à 20-25 º et prendre la phase inférieure.
Préparation duréactif M
NH
4OH à 25 % (v/v) (point 3.4) 24 volumes
Acide hypophosphoreux à 50 % (point 3.13) 1 volume
H2O 75 volumes
Remarque
Les solvants de développement contenant de l'ammoniaque doivent être
bien agités, juste avant l'emploi.
3.23.Révélateurs
3.23.1.Réactif diazoïque
Faire une solution aqueuse à 5 % (m/v) du réactif (point 3.14) choisi.
Cette solution doit être préparée au moment de l'emploi.
3.23.2.Réactif d'Ehrlich
Dissoudre 2 g de p-diméthylaminobenzaldéhyde (point 3.16) dans
100 ml d'acide chlorhydrique à 10 % (m/v) aqueux (point 3.19).1982L0434 — FR — 10.04.1990 — 001.001 — 10
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3.23.3.2-5 diméthylphénol-chlorure ferrique 6 H2O
Solution 1: dissoudre 1 g de diméthylphénol (point 3.17) dans 100 ml
d'éthanol à 96 º (point 3.3).
Solution 2: dissoudre 4 g de chlorure ferrique 6 H2O (point 3.18) dans
100 ml d'éthanol à 96 º (point 3.3).
Lors de la révélation on pulvérise séparément d'abord la solution 1, puis
la solution 2.
3.23.4.Nitrate d'argent ammoniacal
À une solution aqueuse à 5 % (m/v) de nitrate d'argent (point 3.15)
ajouter de l'ammoniaque à 25 % (point 3.4) jusqu'à dissolution du préci-
pité.
Ce réactif sera préparé au moment de son utilisation. Ne pas conserver.
4. APPAREILLAGE
4.1. Équipement de laboratoire pour chromatographie sur couche mince.4.1.1. Enceinte en plastique ou en verre permettant de maintenir la chromato-
plaque sous azote pendant le dépôt et jusqu'au développement. Cette
précaution est nécessaire eu égard à la grande oxydabilité de certains
colorants.
4.1.2. Seringue de 10 µl, graduée de 0,2 en 0,2 µl avec une aiguille à section
droite ou mieux repeating dispenser , 50 µl, monté sur statif de manière
à pouvoir mettre la plaque sous azote.
4.1.3. Couches minces de silice prêtes à l'emploi, épaisseur 0,25 mm, format
20 × 20 cm (Macherey et Nagel Silice G-HR ou équivalent).
4.2. Centrifugeuse 4 000 tours/mn.
4.3. Tubes de centrifugeuse de 10 ml fermés par un bouchon à vis.
5. MODE OPÉRATOIRE
5.1.Traitement des échantillons
À l'ouverture du tube, éliminer les 2 ou 3 premiers cm de crème.Dans un tube à centrifuger (point 4.3) préalablement purgé à l'azote,
introduire:
— 300 mg d'acide ascorbique,
— 3 g de crème ou 3 g de liquide homogénéisé.
Ajouter quelques gouttes d'ammoniaque (point 3.4) si le pH est infé-
rieur à 10 et compléter à 10 ml avec l'éthanol 96 º (point 3.3).
Homogénéiser sous azote, boucher, puis centrifuger à 4 000 tours/mn
pendant 10 mn.
Utiliser la solution surnageante.
5.2.Chromatographie
5.2.1.Dépôt
Déposer sous azote, sur une plaque de silice (point 4.1.3) et sur 9 points
de départ, 1 µl de chacune des 11 solutions de référence. Ces solutions
de référence sont partagées ainsi:
123456789
R P H PPD DAP PTD OPD OTD MPD
MTD αN
D'autre part, déposer sur chacun des dixième et onzième points 2 µl des
solutions échantillons obtenues au point 5.1.
Conserver la plaque sous azote jusqu'au moment où elle est chromato-
graphiée.1982L0434 — FR — 10.04.1990 — 001.001 — 11
▼B
5.2.2.Développement
Introduire la plaque dans une cuve préalablement purgée à l'azote,
saturée avec l'un des 4 solvants appropriés (point 3.22) et laisser déve-
lopper à température ambiante (20 à 25 º) et à l'obscurité jusqu'à ce que
le front du solvant ait parcouru environ 15 cm depuis la ligne de départ.
Sortir la plaque et la sécher sous azote à température ambiante.
5.2.3.Révélation
Pulvériser aussitôt la plaque avec l'un des 4 révélateurs cités au point
3.23.
5.2.4.Identification
On compare les Rf et les colorations obtenues pour l'échantillon avec
celles des substances de référence déposées. Le tableau I donne à titre
indicatif les Rf et colorations obtenues pour chaque substance de réfé-
rence en fonction du solvant de développement et des révélateurs.
En cas d'identification douteuse on peut parfois obtenir une confirma-
tion en ajoutant à l'échantillon la substance de référence correspondante.
5.2.5.Dosage semi-quantitatif
Comparer visuellement l'intensité des taches correspondante à chaque
substance identifiée au point 5.2.4 à une gamme étalon de concentration
connue et appropriée obtenue à partir de la substance de référence
correspondante.
Lorsque la concentration du composant de l'échantillon est trop élevée,
diluer la solution à déposer et procéder à un nouveau dosage.1982L0434 — FR — 10.04.1990 — 001.001 — 12
TABLEAU I
Valeurs Rf et colorations obtenues immédiatement après révélation
Produits de
référence
(3.20)Solvants de développement Révélateurs
Rf Colorations
3.22.1 3.22.2 3.22.3 3.22.4Réactif de diazoïque
(3.23.1)Réactif d'Ehrlich
(3.23.2)Réactif au diméthyl-
phénol-chlorure
ferrique
(3.23.3)Réactif au nitrate
d'argent
(3.23.4)
OPD 0,62 0,60 0,30 0,57 Brun faible — — Brun faible
MPD 0,40 0,60 0,47 0,48 Brun violacé* Jaune Brun faible Brun faible
PPD 0,20 0,50 0,30 0,48 Brun Rouge vif* Violet Gris
OTD 0,60 0,60 0,53 0,60 Brun* Orangé faible Brun faible Brun gris
MTD 0,40 0,67 0,45 0,60 Brun rouge* Jaune Brun Noir
PTD 0,33 0,65 0,37 0,70 Brun Orangé Violet* Gris
DAP 0,07 — 0 0,05 Brun* Orangé Violet Brun
H 0,50 0,35 0,80 0,20 — Orangé Violet Noir*
αN 0,90 0,80 0,90 0,75 Orangé brun — Violet* Noir
P 0,37 — 0,67 0,05 Brun Violet très faible Brun très faible Brun*
R 0,50 0,37 0,80 0,17 Orangé* Violet faible Brun très faible Brun faible
Notes:1. L'OPD est faiblement révélé, le solvant (point 3.22.3) doit être utilisé pour le séparer nettement de l'OTD.
2. * indique la meilleure révélation.▼B1982L0434 — FR — 10.04.1990 — 001.001 — 13
▼B
6. EXAMEN PAR CHROMATOGRAPHIE SUR COUCHE MINCE
BIDIMENSIONNELLE
La chromatographie sur couche mince bidimensionnelle décrite ici
nécessite le recours aux réactifs suivants:
6.1.Substanceset solutions de référence
6.1.1. β-naphtol ( β-N)
6.1.2. 2-aminophénol (OAP)
6.1.3. 3-aminophénol (MAP)6.1.4. 4-aminophénol (PAP)
6.1.5. 2-nitro-p-phénylènediamine (2 NPPD)
6.1.6. 4-nitro-o-phénylènediamine (4 NOPD)
Préparer une solution à 0,5 % (m/v) de chacune des substances de réfé-
rence supplémentaires comme indiqué au point 3.2.1.
6.2.Solvant de développement
6.2.1. Acétate d'éthyle-cyclohexane-ammoniaque à 25 % (65-35-0,5, v)
6.3.Révélateur
Placer un récipient en verre dans une cuve de développement pour
chromatographie sur couche mince, y introduire environ 2 g d'iode cris-
tallisé et fermer la cuve.
6.4.Chromatographie
6.4.1. Tracer comme indiqué sur la figure 1, deux lignes sur la couche adsor-
bante d'une plaque pour chromatographie sur couche mince (point
4.1.3).
6.4.2. Déposer sous azote sur le point de départ 1 (figure 1) 1 à 4 µl d'extrait
(point 5.1). La quantité dépend de l'intensité des taches obtenues sur le
chromatogramme (point 5.2).
6.4.3. Déposer, partagés entre les points 2 et 3 (figure 1), les colorants d'oxy-
dation identifiés (ou supposés identifiés) au point 5.2. Distance entre les
points: 1,5 cm. Déposer 2 µl de chacune des solutions de référence, à
l'exception du DAP, dont il est nécessaire de déposer 6 µl. Conduire
l'opération sous azote.
6.4.4. Recommencer l'opération décrite au point 6.4.3 pour les points de
départ 4 et 5 (figure 1) et conserver la plaque sous azote jusqu'à la
chromatographie.
6.4.5. Purger une cuve à chromatographier, avec de l'azote et y introduire une
quantité appropriée de solvant de développement (point 3.22.2). Placer
la plaque (point 6.4.4) dans la cuve, et chromatographier dans la
première direction d'élution (figure 1) à l'obscurité. Chromatographier
jusqu'à ce que le front du solvant ait parcouru au moins 13 cm.
6.4.6. Sortir la plaque de la cuve et la placer dans la cuve (point 4.1) purgée à
l'azote pour évaporer les restes de solvant (pendant au moins 60 mn).
6.4.7. Introduire avec une éprouvette graduée une quantité appropriée du
solvant (point 6.2.1) dans une cuve purgée à l'azote, placer la plaque
tournée de 90º par rapport à la première direction d'élution (point
6.4.6) dans la cuve et chromatographier dans la deuxième direction
dans l'obscurité jusqu'à ce que le front du solvant ait atteint la ligne
tracée sur la couche adsorbante. Oter la plaque de la cuve et évaporer
le solvant à l'air.
6.4.8. Exposer la plaque pendant 10 mn dans la cuve à chromatographier aux
vapeurs d'iode (point 6.3) et interpréter le chromatogramme bidimen-
sionnel à l'aide des références chromatographiées en même temps
(tableau II).
Remarque
Pour obtenir une coloration maximale des taches, laisser le chromato-
gramme à l'air pendant une demi-heure après la révélation.
6.4.9. La présence des colorants d'oxydation trouvés au point 6.4.8 peut être
confirmée de façon indubitable en recommençant les manipulations
décrites aux points 6.4.1 à 6.4.8 inclus, en veillant à ajouter sur le point1982L0434 — FR — 10.04.1990 — 001.001 — 14
▼B
de départ 1, en plus de la quantité d'extrait prescrite au point 6.4.2, 1 µl
des substances de référence identifiées au point 6.4.8.
Si aucune autre tache n'est trouvée, l'interprétation du chromatogramme
primitif est exacte.1982L0434 — FR — 10.04.1990 — 001.001 — 15
▼B
TABLEAU II
Couleur des substances de référence après chromatographie et révélation
aux vapeurs d'iode
Substances de réfé-
renceCouleur après révélation aux vapeurs d'iode
R Beige
P Brun
α-N Violet
β-N Brun clair
H Violet brun
MPD Jaune brun
PPD Violet brun
MTD Brun foncé
PTD Jaune brun
DAP Brun foncé
AOP Orange
MAP Jaune brun
PAP Violet brun
2-NPPD Brun
4-NOPD Orange
Figure 1
1982L0434 — FR — 10.04.1990 — 001.001 — 16
▼B
III.IDENTIFICATIONET DOSAGE DES NITRITES
A. IDENTIFICATION
1. OBJET ET CHAMP D'APPLICATION
Cette méthode convient à l'identification des nitrites dans les produits
cosmétiques.
Elles est applicable en particulier aux crèmes, aux produits pâteux et
aux dentifrices.
2. PRINCIPE
La caractérisation des nitrites se fait à l'aide de la 2-aminobenzaldéhyde
phényl-hydrazone.
3. RÉACTIFS
Tous les réactifs doivent être de qualité analytique.
3.1. Acide sulfurique dilué: diluer 2 ml d'acide sulfurique concentré
(d420= 1,84)
dans 11 ml d'eau distillée.
3.2. Acide chlorhydrique dilué: diluer 1 ml d'acide chlorhydrique concentré
(d420= 1,19)
dans 11 ml d'eau distillée.
3.3. Méthanol
3.4. Solution de 2-aminobenzaldéhyde phényl hydrazone (réactif nitrine R)
dans du méthanol.
Peser 2 g de Nitrine R et les introduire dans une fiole jaugée de 100 ml.
Ajouter goutte à goutte 4 ml d'acide chlorhydrique dilué (point 3.2) et
agiter. Compléter avec du méthanol et mélanger jusqu'à ce que la solu-
tion soit tout à fait limpide. Conserver la solution dans un flacon de
verre brun (point 4.3).
4. APPAREILLAGE
4.1. Béchers de 50 ml
4.2. Fiole jaugée de 100 ml4.3. Flacon de verre brun de 125 ml
4.4. Plaquette en verre de 10 × 10 cm
4.5. Spatule en matière synthétique
4.6. Papier filtre de 10 × 10 cm
5. MODE OPÉRATOIRE
5.1. Étendre uniformément une partie de l'échantillon à examiner sur la
plaque de verre (point 4.4). Veiller à ce que l'épaisseur de la couche
n'excède pas 1 cm.
5.2. Tremper une feuille de papier filtre (point 4.6) dans de l'eau distillée et
la déposer sur l'échantillon en l'appliquant convenablement à l'aide de la
spatule (point 4.5).
5.3. Attendre environ 1 mn et verser au centre du papier filtre:
— 2 gouttes d'acide sulfurique dilué (point 3.1)
puis
— 2 gouttes de la solution de nitrine (point 3.4)
5.4. Après 5 à 10 s, enlever le papier filtre et l'examiner à la lumière du
jour. Une coloration rouge violet indique la présence de nitrites.
Lorsque la teneur en nitrites est peu élevée, la coloration violette vire
au jaune en 5 à 15 s. Ce virage n'intervient qu'après une à deux minutes
en présence de quantitées plus importantes de nitrites.1982L0434 — FR — 10.04.1990 — 001.001 — 17
▼B
6. REMARQUE
L'intensité de la coloration violette ainsi que la durée du virage au jaune
peut donner une indication de la teneur en nitrite de l'échantillon.
B. DOSAGE
1. OBJET ET CHAMP D'APPLICATION
La méthode indiquée ci-après est adaptée au dosage des nitrites dans les
produits cosmétiques.
2. DÉFINITION
La teneur de l'échantillon en nitrite, déterminée selon cette méthode, est
exprimée en pourcentage de la masse de nitrite de sodium.
3. PRINCIPE
Après dilution et clarification de l'échantillon, on réalise une réaction
colorimétrique avec le N( α-naphtyl — éthylène diamine) et l'intensité
de la coloration obtenue est mesurée à 538 nm.
4. RÉACTIFS
Tous les réactifs doivent être de qualité analytique.
4.1. Réactifs de clarification (ces réactifs ne peuvent pas être utilisés plus
d'une semaine après leur préparation).
4.1.1. Réactif I (Carrez I): dissoudre 106 g de ferrocyanure de potassium K4Fe
(CN)63H2O dans de l'eau distillée et compléter à 1 000 ml.
4.1.2. Réactif II (Carrez II): dissoudre 219,5 g d'acétate de zinc Zn
(CH3COO)22H2O et 30 ml d'acide acétique glacial dans de l'eau
distillée et compléter à 1 000 ml.
4.2. Solution de nitrite de sodium: dans une fiole jaugée de 1000 ml,
dissoudre 0,500 g de nitrite de sodium dans de l'eau distillée et
compléter au trait de jauge. Diluer 10,0 ml de cette solution mère
jusqu'à 500 ml. 1 ml de cette dernière solution = 10 µg de NaNO2.
4.3. Solution d'hydroxyde de sodium normale.4.4. Solution à 0,2 % de chlorhydrate de sulfanilamide: dissoudre 2 g de
sulfanilamide dans 800 ml d'eau en chauffant. Refroidir et ajouter100 ml d'HCl concentré en agitant. Compléter à 1 000 ml.
4.5. Acide chlorhydrique 5 N.4.6. Réactif au N —( α-naphtyl): cette solution sera préparée le jour même
de son utilisation.
Dissoudre 0,1 g de dichlorhydrate de N — ( α-naphtyl éthylène-diamine)
dans de l'eau et compléter à 100 ml.
5. APPAREILLAGE
5.1. Balance analytique5.2. Fioles jaugées de 100, 250, 500 et 1 000 ml
5.3. Pipettes jaugées
5.4. Éprouvettes de 100 ml5.5. Filtre plissé exempt de nitrite, de 15 cm de diamètre
5.6. Bain-marie
5.7. Spectrophotomètre avec cuves de 1 cm de trajet optique5.8. pH mètre5.9. Microburette de 10 ml
5.10. Bécher de 50 ml1982L0434 — FR — 10.04.1990 — 001.001 — 18
▼B
6. MODE OPÉRATOIRE
6.1. Peser avec une précision de 0,1 mg environ 0,5 g (m) de l'échantillon
homogénéisé et les introduire dans un bécher de 250 ml. Diluer jusqu'à
un volume d'environ 150 ml avec de l'eau distillée chaude. Placer le
bécher pendant une demi-heure dans un bain-marie à 80 ºC en agitantde temps en temps.
6.2. Refroidir à la température ambiante et ajouter successivement en
agitant, 2 ml du réactif de Carrez I (point 4.1.1) et 2 ml du réactif de
Carrez II (point 4.1.2).
6.3. Ajuster le pH à 8,3 au pH mètre, avec une solution N d'hydroxyde de
sodium. Transvaser quantitativement dans une fiole jaugée de 250 ml et
compléter jusqu'au trait avec de l'eau distillée.
6.4. Mélanger et filtrer sur filtre plissé (point 5.5).6.5. Pipeter une quantité convenable (V ml) du filtrat clair ne dépassant pas
25 ml, dans une fiole jaugée de 100 ml; diluer avec de l'eau distillée
jusqu'à 60 ml.
6.6. Mélanger, ajouter 10,0 ml de chlorhydrate de sulfanilamide (point 4.4)
puis 6,0 ml d'acide chlorhydrique 5 N (point 4.5). Mélanger et laisser
reposer pendant 5 mn. Ajouter 2,0 ml du réactif N — ( α-naphtyl) (point
4.6) mélanger et laisser reposer pendant 3 mn. Compléter à 100 ml et
mélanger.
6.7. Préparer un essai à blanc en répétant les opérations effectuées aux
points 6.5 et 6.6 sans addition du réactif N ( α-naphtyl) (point 4.6).
6.8. Mesurer (point 5.7) la densité optique à 538 nm de la solution échan-
tillon (point 6.6) par rapport à l'essai à blanc (point 6.7).
6.9. Lire sur la courbe d'étalonnage (point 6.10) la teneur en nitrite de
sodium en µg par 100 ml de solution (m
1) correspondant à la densité
optique trouvée pour l'échantillon (point 6.8).
6.10. Courbe d'étalonnage. Préparer à l'aide de la solution de nitrite de
sodium (point 4.2) une courbe d'étalonnage dans la gamme de 0 — 20
— 40 — 60 — 80 — 100 µg de nitrite de sodium par 100 ml.
7. CALCUL
Calculer la teneur en nitrite de sodium de l'échantillon en pourcentage
de la masse à l'aide de la formule suivante:
% NaNO 2¼250
V/C2m1/C210/C06/C2100
m¼m1
V/C2m/C240
où:
m = la masse en g de l'échantillon soumis à l'analyse (point 6.1),
m1= la teneur en nitrite de sodium en microgrammes trouvée confor-
mément aux indications du point 6.9,
V = le nombre de ml de filtrat utilisés pour la mesure (point 6.5).
8. RÉPÉTABILITÉ(1)
Pour une teneur en nitrite de sodium de 0,2 %, la différence entre les
résultats de 2 dosages parallèles effectués sur le même échantillon ne
doit pas dépasser 0,005 %.
IV.IDENTIFICATIONET DOSAGE DU FORMALDÉHYDE LIBRE
1. OBJET ET CHAMP D'APPLICATION
La méthode comporte une identification et deux dosages selon la
présence ou non de donneurs de formaldéhyde. Elle est applicable à
tous les produits cosmétiques.1982L0434 — FR — 10.04.1990 — 001.001 — 19
(1) Selon la norme ISO 5725.▼M1
▼M1
1.1.Identification
1.2.Dosage global par colorimétrie à l'acétylacétone
Cette méthode s'applique lorsque le formaldéhyde est utilisé seul ou
avec d'autres conservateurs non donneurs de formaldéhyde.
Dans le cas contraire, et si le résultat dépasse la concentration maxi-
male autorisée dans le produit fini, on utilise la méthode de
conformation suivante.
1.3.Dosage en présence de donneursde formaldéhyde:
Dans la méthode précédente, lors de la dérivation, les donneurs de
formaldéhyde sont clivés et conduisent à des résultats trop élevés
(formaldéhyde libre et combiné).
Il est impératif de séparer le formaldéhyde libre par une chromatogra-
phie liquide.
2. DÉFINITION
La teneur de l'échantillon en formaldéhyde libre déterminée selon cette
méthode est exprimée en pourcentage de la masse de formaldéhyde.
3. IDENTIFICATION3.1.Principe
Le formaldéhyde libre et combiné donne, en milieu sulfurique, une
coloration rose ou mauve en présence du réactif de Schiff.
3.2.Réactifs
Tous les réactifs doivent être de qualité analytique et l'eau doit être
déminéralisée.
3.2.1. Fuchsine3.2.2. Sulfite de sodium hydraté à 7 H
2O
3.2.3. Acide chlorhydrique concentré (d=1,19)3.2.4. Acide sulfurique environ 1 M
3.2.5.Réactif de Schiff
Dans un bécher, peser 100 mg de fuchsine (point 3.2.1); les dissoudre
dans 75 ml d'eau à 80 ºC; après refroidissement, ajouter 2,5 g de sulfite
de sodium (point 3.2.2) et 1,5 ml d'acide chlorhydrique (point 3.2.3);
compléter à 100 ml; durée de conservation: 2 semaines.
3.3.Mode opératoire
3.3.1. Dans un bécher de 10 ml, introduire environ 2 g d'échantillon.3.3.2. Ajouter 2 gouttes de H
2SO4(point 3.2.4) et 2 ml de réactif de Schiff
(point 3.2.5). Ce réactif doit être rigoureusement incolore au moment
de l'emploi.
Agiter, laisser en contact 5 mn.
3.3.3. Si, dans les 5 mn, une coloration rose ou mauve est observée, la quan-
tité de formaldéhyde présente est supérieure à 0,01 %.
Procéder alors au dosage du formaldéhyde libre et combiné selon le
point 4 et, si nécessaire le point 5.
4. DOSAGE GLOBAL PAR COLORIMÉTRIE À L'ACÉTYLACÉTONE4.1.Principe
Le formaldéhyde réagit avec l'acétylacétone en présence d'acétate
d'ammonium pour former le 3-5 diacétyl-1-4-dihydrolutidine. Celui-ci
est extrait avec le butanol-1. L'absorbance de l'extrait est mesurée à
410 nm.1982L0434 — FR — 10.04.1990 — 001.001 — 20
▼M1
4.2.Réactifs
Tous les réatifs doivent être de qualité analytique et l'eau doit être
déminéralisée.
4.2.1. Acétate d'ammonium anhydre
4.2.2. Acide acétique concentré d204 = 1,05
4.2.3. Acétylacétone fraichement distillée sous pression réduite 25 mm Hg 25º
et ne devant présenter aucune absorption à 410 nm
4.2.4. Butanol-1
4.2.5. Acide chlorhydrique 1 M
4.2.6. Acide chlorhydrique environ 0,1 M4.2.7. Hydroxyde de sodium 1 M4.2.8. Empois d'amidon fraichement préparé selon la pharmacopée européenne
(1 g/50 ml d'eau) (2
eédition 1980, partie I-VII-1-1)
4.2.9. Formaldéhyde à 37-40 %
4.2.10. Solution titrée d'iode 0,05 M
4.2.11. Solution titrée de thiosulfate de sodium 0,1 M
4.2.12.Réactif à l'acétylacétone
Dans une fiole jaugée de 1 000 ml, dissoudre:
— 150 g d'acétate d'ammonium (point 4.2.1),
— 2 ml d'acétylacétone (point 4.2.3),
— 3 ml d'acide acétique (point 4.2.2).
Compléter à 1 000 ml avec de l'eau (pH de la solution environ 6,4).Ce réactif doit être fraichement préparé.
4.2.13. Réactif (point 4.2.12) sans acétylacétone
4.2.14.Formaldéhyde étalon: solution mère
Dans une fiole jaugée de 1 000 ml, introduire 5 g de formaldéhyde
(point 4.2.9) et compléter à 1 000 ml avec de l'eau.
Détermination du titre de la solution mère.Prélever 10,00 ml, ajouter 25,00 ml de solution titrée d'iode (point
4.2.10) et 10 ml de solution hydroxyde de sodium (point 4.2.7).
Laisser reposer 5 mn.
Acidifier par 11 ml d'HCL (point 4.2.5) et doser l'iode en excès par une
solution titrée de thiosulfate de sodium (point 4.2.11) en présence
d'empois d'amidon comme indicateur.
1 ml de solution d'iode (point 4.2.10) consommé correspond à 1,5 mg
de formaldéhyde.
4.2.15.Formaldéhyde étalon: solution diluée
Réaliser successivement une dilution au 1/20 puis une dilution au 0/100
de la solution mère dans l'eau.
1 ml de cette solution contient environ 1 µg de formaldéhyde.Calculer sa teneur exacte.
4.3.Appareillage
4.3.1. Matériel courant de laboratoire4.3.2. Filtre «séparateur de phase» réf. Whatman 1 PS (ou équivalent)
4.3.3. Centrifugeuse
4.3.4. Bain-marie réglé à 60 ºC4.3.5. Spectrophotomètre
4.3.6. Cuves de verre de 1 cm de parcours optique1982L0434 — FR — 10.04.1990 — 001.001 — 21
▼M1
4.4.Mode opératoire
4.4.1.Solution échantillon
Dans une fiole jaugée de 100 ml, peser à 0,001 g près une masse
d'échantillon pour essai (en g) correspondant à une quantité présumée
de formaldéhyde d'environ 150 µg.
Compléter à 100 ml avec de l'eau et mélanger (solution S).
[vérifier que le pH est voisin de 6, sinon effectuer la dilution dans la
solution d'acide chlorhydrique (point 4.2.6)]
Dans une fiole conique de 50 ml, ajouter:
— 10,00 ml de solution S,
— 5,00 ml de réactif à l'acétylacétone (point 4.2.12) et de l'eau pour
obtenir un volume de 30 ml.
4.4.2.Solution témoin
L'interférence éventuelle d'une coloration de fond dans l'échantillon
pour essai est éliminée de la manière suivante:
Dans une fiole conique de 50 ml, ajouter:
— 10,00 ml de solution S,
— 5,00 ml du réactif (point 4.2.13) et de l'eau pour obtenir un volume
de 30 ml.
4.4.3.Essai à blanc
Dans une fiole conique de 50 ml, ajouter:
5,00 ml de réactif à l'acétylacétone (point 4.2.12) et de l'eau pour
obtenir un volume de 30 ml.
4.4.4.Dosage
4.4.4.1. Agiter les mélanges préparés aux points 4.4.1, 4.4.2 et 4.4.3. Immerger
les fioles coniques dans un bain-marie à 60 ºC pendant exactement
10 mn. Refroidir pendant 2 mn dans un bain d'eau glacée.
4.4.4.2. Transvaser dans une ampoule à décanter de 50 ml contenant exactement
10 ml de butanol-1 (point 4.2.4). Rincer avec 3 à 5 ml d'eau. Agiter
fortement le mélange pendant 30 s exactement. Laisser décanter.
4.4.4.3. Filtrer la phase butanolique sur filtre «séparateur de phase» (point
4.3.2) dans les cuves de mesure.
Une centrifugation (3 000 g pendant 5 mn) est également utilisable.
4.4.4.4. Mesurer l'absorbance A1à 410 nm de l'extrait de la solution échantillon
obtenue au point 4.4.1 contre l'extrait de la solution témoin du point
4.4.2.
4.4.4.5. De la même façon, mesurer l'absorbance A2de l'extrait de l'essai à
blanc obtenu au point 4.4.3 contre du butanol-1.
NB:Toutes ces opérations doivent être exécutées dans un délai de
25 mn à partir du moment où la fiole conique est placée dans le
bain-marie à 60 ºC.
4.4.5.Courbe d'étalonnage
4.4.5.1. Dans une fiole conique de 50 ml, introduire:
— 5,00 ml de solution étalon diluée (point 4.2.15),
— 5,00 ml de réactif à l'acétylacétone (point 4.2.12) et de l'eau pour
obtenir un volume final de 30 ml.
4.4.5.2. Continuer selon les indications (point 4.4.4) et mesurer l'absorbance par
rapport au butanol-1 (point 4.2.4).
4.4.5.3. Répéter le processus avec 10, 15, 20 et 25 ml de solution étalon diluée
(point 4.2.15).
4.4.5.4. Pour obtenir la valeur du point 0 (correspondant à la coloration des
réactifs) procéder comme au point 4.4.4.5.
4.4.5.5. Construire la courbe d'étalonnage après soustraction de la valeur du
point 0 de chacune des absorbances obtenues aux points 4.4.5.1 et
4.4.5.3.1982L0434 — FR — 10.04.1990 — 001.001 — 22
▼M1
La loi de Beer est respectée jusqu'à 30 µg de formaldéhyde.
4.5.Calculs
4.5.1. Soustraire A2de A1et lire sur la courbe d'étalonnage (point 4.4.5.5) la
quantité C exprimée en microgrammes de formaldéhyde contenue dans
la solution du point 4.4.1.
4.5.2. La teneur en formaldéhyde de l'échantillon (% m/m) est calculée selon
la formule:
Formald´ehyde % ¼C
103/C1m
où:
m = masse en g de la prise d'essai.
4.6.Répétabilité (1)
Pour une teneur en formaldéhyde de 0,2 %, la diférence entre les résul-
tats de 2 dosages parallèles effectués sur le même échantillon ne doit
pas dépasser 0,005 % pour le dosage colorimétrique à l'acétylacétone.
Si le dosage du formaldéhyde libre conduit à des résultats supérieurs à
ceux prévus dans la directive 76/768/CEE, à savoir:
a) compris entre 0,05 et 0,2 % sur produit non étiqueté;
b) supérieurs à 0,2 % sur produit étiqueté ou non,
il y a obligation d'opérer selon la méthode décrite au point 5.
5. DOSAGE EN PRÉSENCE DE DONNEURS DE FORMALDÉHYDE
5.1.Principe
Le formaldéhyde séparé est transformé en dérivé lutidinique jaune par
réaction en ligne avec l'acétylacétone dans un réacteur postcolonne. Le
dérivé formé est dosé par absorbance à 420 nm.
5.2.Réactifs
Tous les réactifs doivent être de qualité analytique et l'eau doit être
déminéralisée.
5.2.1. Eau de qualité HPLC5.2.2. Acétate d'ammonium anhydre5.2.3. Acide acétique
5.2.4. Acétylacétone (conservée à 4 ºC)
5.2.5. Phosphate disodique anhydre5.2.6. Acide orthophosphorique à 85 % (d = 1,7)5.2.7. Méthanol5.2.8. Dichlorométhane
5.2.9. Formaldéhyde à 37-40 %
5.2.10. Hydroxyde de sodium 1 M5.2.11. Acide chlorhydrique 1 M5.2.12. Acide chlorhydrique 0,002 M
5.2.13. Empois d'amidon fraîchement préparé selon la pharmacopée européenne
5.2.14. Solution titrée d'iode 0,05 M5.2.15. Solution titrée de thiosulfate de sodium 0,1 M1982L0434 — FR — 10.04.1990 — 001.001 — 23
(1) Selon la norme ISO 5725.
▼M1
5.2.16.Phase mobile
Solution aqueuse de phosphate disodique (point 5.2.5) 0,006 M ajustée
à pH 2,1 avec de l'acide orthophosphorique (point 5.2.6).
5.2.17.Réactif postcolonne
Dissoudre dans une fiole jaugée de 1 000 ml:
— 62,5 g d'acétate d'ammonium (point 5.2.2),
— 7,5 ml d'acide acétique (point 5.2.3),
— 5 ml d'acétylacétone (point 5.2.4).
Compléter à 1 000 ml avec de l'eau (point 5.2.1).Maintenir ce réactif à l'abri de la lumière.Conservation au maximum 3 jours à 25 ºC.
On ne doit pas observer d'évolution de couleur.
5.2.18.Formaldéhyde étalon: solution mère
Dans une fiole jaugée de 1 000 ml, introduire 10 g de formaldéhyde
(point 5.2.9) et compléter à 1 000 ml avec de l'eau.
Détermination du titre de la solution mère: prélever 5,00 ml, ajouter
25,00 ml de la solution titrée d'iode (point 5.2.14) et 10 ml, de solution
d'hydroxyde de sodium (point 5.2.10).
Laisser reposer 5 mn. Acidifier par 11,00 ml d'HCL (point 5.2.11) et
doser l'iode en excès par une solution titrée de thiosulfate de sodium
(point 5.2.15) en présence d'empois d'amidon (point 5.2.13) comme
indicateur.
1 ml de solution d'iode (point 5.2.14) consommée correspond à 1,5 mg
de formaldéhyde.
5.2.19.Formaldéhyde étalon: solution diluée
Réaliser une dilution au 1/100 de la solution mère dans la phase mobile
(point 5.2.16). 1 ml de cette solution contient environ 37 µg de formal-
déhyde. Calculer sa teneur exacte.
5.3.Appareillage
5.3.1. Matériel courant de laboratoire
5.3.2. Une pompe HPLC sans pulsations5.3.3. Une pompe basse pression sans pulsations pour le réactif (ou une
deuxième pompe HPLC de mêmes caractéristiques que la première)
5.3.4. Une vanne d'injection munie d'une boucle de 10 µl5.3.5. Réacteur postcolonne comprenant les éléments suivants:
1 ballon 3 tubulures de 1 l,
+ 1 chauffe ballon de 1 l+ 2 colonnes Vigreux à 10 plateaux minimum (réfrigérant à air)+ tube inox (pour échange thermique) de 1,6 mm — diamètre intérieur:
0,23 mm — longueur: 400 mm
+ tube Téflon de 1,6 mm — diamètre intérieur: 0,30 mm — longueur:
5 m (tricotin) (voir appendice 1)
+ 1 Té sans volume mort (Valco ou équivalent)
+ 3 raccords Union sans volume mort
OU:un module postcolonne du type Applied Biosystems PCRS 520 ou
équivalent muni d'un réacteur de 1 ml
5.3.6. Membrane filtrante 0,45 µ5.3.7. Cartouche SEP PAKR C
18(ou équivalent)
5.3.8. Colonnes prêtes à l'emploi
— Bischoff hypersil RP 18 (type NC réf. C 25.46 1805)
(5 µ — longueur = 250 mm — diam. int. = 4,6 mm)
— ou Dupont, Zorbax ODS
(5 µ — longueur = 250 mm - diam. int. = 4,6 mm)1982L0434 — FR — 10.04.1990 — 001.001 — 24
▼M1
— ou Phase SEP, sphérisorb ODS 2
(5µ — longueur = 250 mm — diam. int. = 4,0 mm)
5.3.9.Précolonne
Bischoff K1Hypersil RP 18 (réf. KL G 6301 1805) ou équivalente (5µ
— longueur = 10 mm)
5.3.10. La colonne et la précolonne sont connectées par un système Ecotube
(réf. A 15020508 Bischoff) ou équivalent
5.3.11. Réaliser le montage (point 5.3.5) selon le schéma de l'appendice 2.
Les connections après la valve d'injection doivent être les plus courtes
possible.
Dans ce cas, le tube inox placé entre la sortie du réacteur et l'entrée du
détecteur a pour but de refroidir le mélange avant la détection et la
température dans le détecteur n'est pas connue mais constante.
5.3.12. Détecteur UV/visible
5.3.13. Enregistreur
5.3.14. Centrifugeuse
5.3.15. Bain ultrasons5.3.16. Agitateur vibrant (type Vortex ou équivalent)
5.4.Mode opératoire
5.4.1.Courbe d'étalonnage
Elle est effectuée par la mesure de la hauteur des pics en fonction de la
concentration.
Les solutions standards sont préparées par dilution de la solution diluée
de formaldéhyde étalon (point 5.2.19) avec la phase mobile (point
5.2.16).
— 1,00 ml de solution étalon (point 5.2.19) diluée à 20,00 ml (environ
185 µg/100 ml),
— 2,00 ml de solution étalon (point 5.2.19) diluée à 20,00 ml (environ
370 µg/100 ml),
— 5,00 ml de solution étalon (point 5.2.19) diluée à 25,00 ml (environ
740 µg/100 ml),
— 5,00 ml de solution étalon (point 5.2.19) diluée à 20,00 ml (environ
925 µg/100 ml).
Les solutions standards sont stockées pendant une heure à la tempéra-
ture du laboratoire et doivent être fraîchement préparées.
La linéarité de la courbe d'étalonnage est bonne pour des concentrations
de 1,00 à 15,00 µg/ml.
5.4.2.Préparation des échantillons
5.4.2.1.Cas des émulsions ( crèmes, fonds de teint , eyeliners)
Peser dans un flacon bouché de 100 ml, à 0,001 g près, une masse (m)
d'échantillon (en g) correspondant à une quantité présumée de formal-
déhyde d'environ 100 µg.
Ajouter 20 ml de dichlorométhane (point 5.2.8) et 20,00 ml d'acide
chlorhydrique (point 5.2.12).
Mélanger à l'agitateur vibrant (point 5.3.16) et aux ultrasons (point
5.3.15).
Séparer les deux phases par centrifugation (3000 g pendant 2 mn). Par
ailleurs, laver une cartouche (poiont 5.3.7) avec 2 ml de méthanol
(point 5.2.7), puis la conditionner avec 5 ml d'eau (point 5.2.1).
Faire passer 4 ml de la phase aqueuse de l'extrait à travers la cartouche
conditionnée, éliminer les premiers 2 ml et récupérer la fraction
suivante.1982L0434 — FR — 10.04.1990 — 001.001 — 25
▼M1
5.4.2.2.Cas des lotions et shampooings
Peser dans un flacon bouché de 100 ml, à 0,001 g près, une masse (m)
d'échantillon (en g) correspondant à une quantité présumée de formal-
déhyde d'environ 500 µg.
Compléter à 100 ml avec la phase mobile (point 5.2.16).La solution est filtrée sur membrane filtrante (point 5.3.6) et injectée ou
passée au travers d'une cartouche (point 5.3.7) conditionnée comme au
point 5.4.2.1.
Toutes les solutions doivent être injectées extemporanément.
5.4.3.Conditions chromatographiques
— Débit de la phase mobile: 1 ml/mn,
— débit du réactif: 0,5 ml/mn,— débit total en sortie du détecteur: 1,5 ml/mn,— volume injecté: 10 µl,— température d'élution: dans les séparations difficiles, la colonne est
immergée dans un bain de glace fondante: attendre l'équilibrage des
températures (15 à 20 mn),
— température réaction post-colonne: 100 ºC,— détection: 420 nm.
NB:L'ensemble du système chromatographique et postcolonne doit être
rincé à l'eau (point 5.2.1) après utilisation. Dans le cas d'un arrêt
supérieur à deux jours, ce rinçage est suivi par un rinçage au
méthanol. Avant de reconditionner le système, effectuer unpassage à l'eau pour éviter les recristallisations.
5.5.Calculs
Cas des émulsions (point 5.4.2.1)
Teneur en formaldéhyde % (m/m):
C/C110/C06/C1100
5m¼C/C110/C04
5m
Cas des lotions et shampooings (point 5.4.2.2):
Teneur en formaldéhyde:
C/C110/C06/C1100
m¼C/C110/C04
m
où:
m = la masse en grammes de l'échantillon soumis à l'analyse
C = la concentration en µg/100 ml en formaldéhyde lue sur la courbe
étalon (point 5.4.1).
5.6.Répétabilité (1)
Pour une teneur en formaldéhyde de 0,05 %, la différence entre les
résultats de deux dosages parallèles effectués sur le même échantillon
ne doit pas dépasser 0,001 %.
Pour une teneur en formaldéhyde de 0,2 %, la différence entre les résul-
tats de deux dosages parallèles effectués sur le même échantillon ne
doit pas dépasser 0,005 %.1982L0434 — FR — 10.04.1990 — 001.001 — 26
(1) Selon la norme ISO 5725.
▼B
V.DOSAGE DE LA RÉSORCINE DANS LES SHAMPOOINGS ET LES
LOTIONS CAPILLAIRES
1. OBJET ET CHAMP D'APPLICATION
Cette méthode décrit le dosage de la résorcine dans les shampooings et
lotions capillaires par chromatographie en phase gazeuse.
Elle s'applique à des concentrations de 0,1 à 2,0 % de la masse du
produit.
2. DÉFINITION
La teneur en résorcine déterminée selon cette méthode est exprimée en
pourcentage de la masse de résorcinol.
3. PRINCIPE
La résorcine et le 3,5-dihydroxytoluène utilisé comme étalon interne,
sont isolés de l'échantillon par chromatographie sur couche mince. On
isole les deux composés par prélèvement du support et extraction avec
du méthanol. Les résidus sont ensuite séchés, silylés et dosés par chro-
matographie en phase gazeuse.
4. RÉACTIFS
Tous les réactifs doivent être de qualité analytique:
4.1. Acide chlorhydrique à 25 % (m/m)4.2. Méthanol4.3. Éthanol à 96 % (v/v)4.4. Plaques de silice sur support plastique ou aluminium, avec indicateur
fluorescent prêtes à l'emploi et désactivées.
Préparer comme suit: vaporiser d'eau les plaques de silice jusqu'à ce
qu'elles deviennent brillantes. Les sécher à température ambiante
pendant 1 à 3 heures.
NB:Si les plaques ne sont pas désactivées, il peut y avoir des pertes de
résorcine par adsorption irréversible sur la silice.
4.5. Solvant de développement: acétone — chloroforme — acide acétique
(20 — 75 — 5 v).
4.6. Solution étalon de résorcine; dissoudre 400 mg de résorcine dans 100 ml
d'éthanol à 96 % (1 ml correspond à 4 000 µg de résorcine).
4.7. Solution étalon interne; dissoudre 400 mg de 3,5-dihydroxytoluène
(DHT) dans 100 ml d'éthanol à 96 % (1 ml correspond à 4 000 µg de
DHT).
4.8. Mélange étalon: mélanger 10 ml de solution du point 4.6 et 10 ml de
solution du point 4.7 dans une fiole jaugée de 100 ml, compléter au
volume avec de l'éthanol à 96 % et mélanger (1 ml correspond à
400 µg de résorcine et 400 µg de DHT).
4.9. Réactifs de silylation:4.9.1. N, O-bis-(triméthylsilyl) trifluoroacétamide (BSTFA)4.9.2. Hexaméthyldisilazane (HMDS)4.9.3. Triméthylchlorosilane (TMCS)
5. APPAREILLAGE
5.1. Équipement courant de chromatographie sur couche mince et en phase
gazeuse
5.2. Verrerie de laboratoire
6. MODE OPÉRATOIRE6.1.Préparation de l'échantillon
6.1.1. Peser avec précision dans un bécher de 150 ml une prise d'essai du
produit (m grammes) contenant environ 20 à 50 mg de résorcine.1982L0434 — FR — 10.04.1990 — 001.001 — 27
▼B
6.1.2. Acidifier avec de l'acide chlorhydrique (point 4.1) (environ 2 à 4 ml).
Ajouter 10 ml (40 mg de DHT) de solution interne (point 4.7) et
mélanger. Transvaser dans une fiole jaugée de 100 ml à l'aide d'éthanol.
Compléter au volume avec de l'éthanol (point 4.3) et mélanger.
6.1.3. Déposer 250 µl de la solution du point 6.1.2 sur une plaque se silice
désactivée (point 4.4) sur une ligne continue d'environ 8 cm de long.
Prendre soin d'obtenir une bande aussi mince que possible.
6.1.4. Déposer de la même manière (point 6.1.3), sur la même plaque, 250 µl
de mélange étalon (point 4.8).
6.1.5. Sur la ligne de départ, déposer 2 spots de 5 µl de chaque solution des
points 4.6 et 4.7 pour faciliter la localisation après le développement de
la plaque.
6.1.6. Dans une cuve non saturée, développer la plaque avec le solvant de
développement (point 4.5) jusqu'à ce qu'il ait parcouru 12 cm depuis
la ligne de départ (45 mn). Sécher la plaque à l'air et localiser la zone
résorcine/DHT sous lumière UV à 254 nm. Les deux composés ontenviron la même valeur de Rf.
Prélever les bandes ainsi repérées et rassembler l'adsorbant de chacune
d'elle dans une fiole de 10 ml.
6.1.7. Extraire l'adsorbant contenant l'échantillon et celui contenant le
mélange étalon de la manière suivante:
Ajouter 2 ml de méthanol (point 4.2) et extraire pendant 1 heure en
agitant de façon continue. Filtrer le mélange et répéter l'extraction
pendant 15 mn avec 2 ml de méthanol (point 4.2).
6.1.8. Évaporer le solvant de la totalité des extraits en les plaçant une nuit
dans un dessicateur sous vide rempli d'un desséchant approprié. Ne
pas évaporer à chaud.
6.1.9. Silyler les résidus (point 6.1.8) comme indiqué soit en 6.1.9.1 soit au
point 6.1.9.2.
6.1.9.1. Ajouter 200 µl de BSTFA (point 4.9.1) et laisser le mélange dans un
récipient bouché à température ambiante, pendant 12 h.
6.1.9.2. Ajouter successivement 200 µl de HMDS (point 4.9.2) et 100 µl de
TMCS (point 4.9.3) et chauffer le mélange pendant 30 mn à 60 ºC
dans un récipient bouché. Refroidir.
6.2.Chromatographie en phase gazeuse
6.2.1.Conditions opératoires
La phase stationnaire doit donner un degré de résolution égal ou supé-
rieur à 1,5.
R¼2d0R2/C0d0R1
W1þW2
où
R1et R2= temps de rétention exprimé en mn de 2 pics,
W1et W2= largeur des mêmes pics à mi-hauteur,
d′ = vitesse de déroulement du papier en mm/mn.
Les conditions opératoires suivantes permettent d'obtenir ce résultat:
colonne: acier inoxydable,
longueur: 200 cm,
diamètre: =3 (1/8″)
remplissage: 10 % OV 17 sur chromosorb WAW
100—120 mesh.
détecteur ionisation de flamme1982L0434 — FR — 10.04.1990 — 001.001 — 28
▼B
températures:
colonne: 185 ºC (isotherme)
injecteur: 250 ºCdétecteur: 250 ºC
gaz vecteur: azote,débit 45: ml/mn.
Pour le réglage du débit d'hydrogène et d'air suivre les instructions du
fabricant.
6.2.2. Injecter 1 à 3 µl des solutions obtenues au point 6.1.9. Faire 5 injections
pour chaque solution. Mesurer la surface des pics de façon précise et
calculer le rapport des surfaces:
S = surface du pic de résorcine/surface du pic du DHT.
7. CALCUL
La concentration en résorcine de l'échantillon exprimée en pourcentage
de masse (% m/m) est donnée par:
%r ´esorcine ¼
4
M/C2S´echantillon
Sm ´elange ´etalon
où:
M = prise d'essai en grammes (point 6.1.1),
S échantillon = rapport moyen obtenu pour les pics de la solution
échantillon,
S mélange étalon = rapport moyen obtenu pour les pics du mélange
étalon d'après le point 6.2.2.
8. RÉPÉTABILITÉ(1)
Pour une teneur en résorcine de 0,5 % la différence entre les résultats
de 2 dosages parallèles effectués sur le même échantillon ne doit pas
dépasser 0,025 %.
VI.DOSAGE DU MÉTHANOL PAR RAPPORT À L'ÉTHANOL OU AU
PROPANOL-2
1. OBJET ET CHAMP D'APPLICATION
Cette méthode décrit le dosage du méthanol par chromatographie en
phase gazeuse dans tous les types de produits cosmétiques (y compris
aérosols). Elle s'applique à des concentrations relatives de 0 à 10 %.
2. DÉFINITION
La teneur en méthanol déterminée selon cette méthode est exprimée en
pourcentage de masse de méthanol par rapport à la masse d'éthanol ou
de propanol-2.
3. PRINCIPE
Le dosage est effectué par chromatographie en phase gazeuse.
4. RÉACTIFS
Tous les réactifs doivent être de qualité analytique
4.1. Méthanol
4.2. Éthanol absolu
4.3. Propanol-24.4. Chloroforme, rincé à l'eau pour éliminer les alcools1982L0434 — FR — 10.04.1990 — 001.001 — 29
(1) Selon la norme ISO 5725.
▼B
5. APPAREILLAGE
5.1. Chromatographe en phase gazeuse avec détecteur catharométrique (pour
les échantillons de produits en aérosols).
Chromatographe en phase gazeuse avec détecteur à ionisation de
flamme (pour les échantillons d'autres produits).
5.2. Fioles jaugées de 100 ml
5.3. Pipettes jaugées (2 ml, 20 ml, 0-1 ml)
5.4. Microseringues de 0 à 100 µl et 0 à 5 µl
Pour les échantillons de produits en aérosols seulement, seringue à gaz
spéciale avec vanne coulissante (figure 5 de la méthode d'échantillo-
nage)(1).
6. MODE OPÉRATOIRE6.1.Préparation des échantillons
6.1.1. Les produits en aérosols sont traités comme indiqué au chapitre II de
l'annexe de la directive de la Commission 80/1335/CEE du 22
décembre 1980(
1) puis analysés par chromatographie en phase gazeuse
dans les conditions prescrites au point 6.2.1.
6.1.2. Les autres produits traités comme indiqués au chapitre II précité sont
dilués dans l'eau jusqu'à une concentration de 1 à 2 % d'éthanol ou de
propanol-2, puis analysés par chromatographie en phase gazeuse dans
les conditions prescrites au point 6.2.2.
6.2.Conditions de la chromatographie en phase gazeuse
6.2.1. Pour les échantillons de produits en aérosols
6.2.1.1. On utilisera une colonne remplie avec 10 % d'Hallcomid M 18 sur
chromosorb W AW 100—120 mesh et un détecteur catharométrique
6.2.1.2. La phase stationnaire doit donner un degré de résolution égal ou supé-
rieur à 1,5:
R¼2d0R2/C0d0R1
W1þW2
où:
R1et R2= temps de rétention exprimé en mn de 2 pics,
W1et W2= largeur des mêmes pics à mi-hauteur,
d′ = vitesse de déroulement du papier en mm/mn.
6.2.1.3. Les conditions suivantes permettent d'obtenir ces résultats:
Type de la colonne: acier inoxydable
longueur: 3,5 m
diamètre: 3 mm
Courant du détecteur catharomé-
trique:150 mA
Gaz vecteur: Hélium — pression: 2,5 bar débit:
45 ml/mn.
Températures
Injecteur: 150 ºC
Détecteur: 150 ºCColonne: 65 ºC
6.2.2. Pour les échantillons d'autres produits:1982L0434 — FR — 10.04.1990 — 001.001 — 30
(1)J O noL 383 du 31. 12. 1980, p. 27.
▼B
6.2.2.1. On utilisera une colonne remplie de chromosorb 105 ou de porapak QS
et un détecteur à ionisation de flamme.
6.2.2.2. La phase stationnaire doit donner un degré de résolution égal ou supé-
rieur à 1,5:
R¼2d0R2/C0d0R1
W1þW2
où
R1et R2= temps de rétention exprimé en mn de 2 pics,
W1et W2= largeur des mêmes pics à mi-hauteur,
d′ = vitesse de déroulement du papier en mm/mn.
6.2.2.3. Les conditions suivantes permettent d'obtenir ces résultats
Type de la colonne: acier inoxydable
longueur: 2 mdiamètre: 3 mm
électromètre: sensiblité de 8.10
−10A
gaz vecteur: azote — pression: 2,1 bars débit:
40 ml/mn
auxiliaire: hydrogène — pression: 1,5 bar
débit: 20 ml/mn
Températures:
injecteur: 150 ºC
détecteur: 230 ºCcolonne: 120 ºC ou 130 ºC
7. COURBES ÉTALONS
7.1. Dans les conditions prescrites au point 6.2.1 (colonne Hallcomid M 18),
utiliser les mélanges étalons définis ci-après. Préparer ces mélanges par
mesure volumétrique, mais déterminer la quantité exacte délivrée en
pesant immédiatement après chaque addition.
Concentration relative
% m/mméthanol
mlÉthanol
ml
(ou
propanol-
2)Chloroforme jusqu'à un
volume de
2,5 % environ 0,5 20 100 ml
5,0 % environ 1,0 20 100 ml
7,5 % environ 1,5 20 100 ml
10,0 % environ 2,0 20 100 ml
Injecter 2 à 3 µl dans le chromatographe selon les modalités prescrites
au point 6.2.1.
Calculer le rapport des surfaces des pics (méthanol/éthanol) ou
(méthanol/propanol-2) de chaque mélange. Tracer la courbe étalon en
utilisant:
comme axe des X: le pourcentage de méthanol par rapport à
l'éthanol ou au propanol-2,
comme axe des Y: le rapport des surfaces des pics (méthanol/
éthanol) ou (méthanol/propanol-2).
7.2. Dans les conditions prescrites au point 6.2.2 (Porapak QS ou Chromo-
sorb 105) utiliser les mélanges étalons définis ci-après. Préparer ces1982L0434 — FR — 10.04.1990 — 001.001 — 31
▼B
mélanges par mesure volumétrique, mais déterminer la quantité exacte
délivrée en pesant immédiatement après chaque addition.
Concentration relative
% m/mMéthanol
µlÉthanol
ml
(ou
propanol-
2)Eau jusquà un volume
de
2,5 % environ 50 2 100 ml
5,0 % environ 100 2 100 ml
7,5 % environ 150 2 100 ml
10,0 % environ 200 2 100 ml
Injecter 2 à 3 µl dans le chromatographe selon les modalités prescrites
au point 6.2.2.
Calculer le rapport des surfaces des pics (méthanol/éthanol) ou
(méthanol/propanol-2) de chaque mélange. Tracer la courbe étalon en
utilisant:
comme axe des X: le pourcentage de méthanol par rapport à
l'éthanol ou au propanol-2,
comme axe des Y: le rapport des surfaces des pics (méthanol/
éthanol) ou (méthanol/propanol-2).
7.3. Dans les 2 cas la courbe d'étalonnage doit être une droite.
8. RÉPÉTABILITÉ(1)
Pour des teneurs en méthanol de 5 % par rapport à l'éthanol ou au
propanol-2, la différence entre les résultats de 2 dosages parallèles
effectués sur le même échantillon ne doit pas dépasser 0,25 %.1982L0434 — FR — 10.04.1990 — 001.001 — 32
(1) Selon la norme ISO 5725.
▼M1
Appendice 1
CONFECTION D'UN TRICOTIN
ACCESSOIRES UTILISÉS POUR LA RÉALISATION DU «TRICOTIN»
— 1 bobine en bois:
diamètre extérieur de 5 cm, au milieu de laquelle sera percé un trou de
1,5 cm. Quatre pointes en acier seront plantées de façon équidistante (voir
schéma de la bobine en fig. 1 et fig. 2). Écart entre 2 pointes 1,8 cm et plan-
tées à 0,5 cm en retrait du trou.
— 1 tige rigide (genre crochet) pour réaliser les boucles à partir de tube Téflon.— Tube Téflon de 1,6 mm; diamètre intérieur: 0,3 mm; longueur: 5 m.
RÉALISATION DU «TRICOTIN»
Pour démarrer le tricotin, il faut enfiler le tube Téflon de haut en bas par le trou
central de la bobine (en laissant dépasser de la face inférieure environ 10 cm de
tube, ce qui permettra de tirer légèrement sur la chaînette en cours de confec-
tion) puis enrouler le tube autour de chacune des 4 pointes pour faire le
premier tour (voir fig. 3).
L'entrée et la sortie du tricotin seront garnies de ferrules et de vis de compres-
sion; attention à ne pas écraser le Téflon au sertissage.
À partir du deuxième rang, faire passer le tube par l'extérieur de chaque pointe
pour former ensuite une boucle de la façon suivante:
— faire passer le tube du rang inférieur sur le tube du rang supérieur à l'aide de
la tige rigide (voir fig. 4).
Ce travail est répété sur chacune des pointes en respectant l'ordre 1 — 2 — 3 —
4 et ce, jusqu'à concurrence des 5 m ou de la longueur désirée.
Laisser environ 10 cm de tube pour fermer la chaînette. Passer le tube dans
chacune des 4 boucles, tirer légèrement: la chaînette est ainsi fermée.
NB:Il existe sur le marché des tricotins confectionnés pour les réactions post-
colonne (Supelco).1982L0434 — FR — 10.04.1990 — 001.001 — 33
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Schéma de la bobine
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Appendice 2
1 = pompe HPLC (point 5.3.2)
2 = vanne d'injection (point 5.3.4)
3 = colonne avec précolonne4 = pompe réactif
5 = té sans volume mort
5′= té (Vortex)
6-6′= raccord Union sans volume mort
7 = tricotin
7′= réacteur
8 = ballon 3 tubulures avec eau bouillante9 = chauffe-ballon
10 = réfrigérant
11 = tube inox échangeur thermique11′= échangeur thermique
12 = détecteur UV/visible
13 = module postcolonne PCRS 520
5.3.5.
5.3.6.
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