1971L0393 — FR — 15.12.1972 — 001.001 — 1
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►BDEUXIÈME DIRECTIVEDE LA COMMISSION
du 18 novembre 1971
portant fixation de méthodes d'analyse communautaires pour le contrôle officiel des aliments des
animaux
(71/393/CEE)
(JO L 279 du 20.12.1971, p. 7)
Modifiée par:
Journal officiel
nopage date
►M1Directive 73/47/CEE de la Commission du 5 décembre 1972 L 83 35 30.3.1973
▼B
DEUXIÈME DIRECTIVEDE LA COMMISSION
du 18 novembre 1971
portant fixation de méthodes d'analyse communautaires pour le
contrôle officiel des aliments des animaux
(71/393/CEE)
LA COMMISSION DES COMMUNAUTÉS EUROPÉENNES,
vu le traité instituant la Communauté économique européenne,vu la directive du Conseil, du 20 juillet 1970, concernant l'introduction
de modes de prélèvement d'échantillons et de méthodes d'analyse
communautaires pour le contrôle officiel des aliments des animaux(
1),
et notamment son article 2,
considérant que la directive susvisée prévoit que les contrôles officiels
des aliments des animaux pour constater si les conditions prescrites envertu des dispositions législatives, réglementaires ou administrativesconcernant la qualité et la composition des aliments des animaux sontrespectées, sont effectués selon des modes de prélèvement d'échantil-
lons et des méthodes d'analyse communautaires;
considérant que la directive n
o71/250/CEE de la Commission, du 15
juin 1971(2), a déjà fixé un certain nombre de méthodes d'analyse
communautaires; que, compte tenu de l'état d'avancement des travauxeffectués depuis lors, il convient d'arrêter une seconde série deméthodes;
considérant que les mesures prévues dans la présente directive sont
conformes à l'avis du Comité permanent des aliments des animaux,
A ARRÊTÉ LA PRÉSENTE DIRECTIVE:
Article premier
Les États membres prescrivent que les analyses pour les contrôles offi-
ciels des aliments des animaux en ce qui concerne leurs teneurs en
humidité, bases azotées volatiles, phosphore total et matières grassesbrutes sont effectuées selon les méthodes décrites à l'annexe de laprésente directive.
Les dispositions générales figurant à la partie 1 de l'annexe (introduc-
tion) de la première directive n
o71/250/CEE de la Commission, du 15
juin 1971, portant fixation de méthodes d'analyse communautaires pour
le contrôle officiel des aliments des animaux sont applicables auxméthodes décrites à l'annexe de la présente directive.
Article 2
Les États membres mettent en vigueur, le 1
erjanvier 1973 au plus tard,
les dispositions législatives, réglementaires ou administratives néces-saires pour se conformer aux dispositions de la présente directive. Ilsen informent immédiatement la Commission.
Article 3
Les États membres sont destinataires de la présente directive.1971L0393 — FR — 15.12.1972 — 001.001 — 2
(1)J O noL 170 du 3. 8. 1970, p. 2.
(2)J O noL 155 du 12. 7. 1971, p. 13.
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ANNEXE
1.DOSAGE DE L'HUMIDITÉ
1.Objet et domaine d'application
La méthode permet de déterminer la teneur en humidité des aliments des
animaux. ►M1Elle ne concerne pas l'analyse des produits laitiers en tant
qu'aliments simples des animaux, l'analyse des substances minérales et des
mélanges essentiellement composés de substances minérales, l'analyse des
graisses et des huiles animales et végétales, ainsi que l'analyse des graines
et fruits oléagineux définis dans le règlement no136/66/CEE du Conseil, du
22 septembre 1966, portant établissement d'une organisation commune des
marchés dans le secteur des matières grasses(1).◄
La détermination de la teneur en humidité des graines et fruits oléagineux
fait l'objet de l'annexe III du règlement (CEE) no1470/68 de la Commission,
du 23 septembre 1968, relatif à la prise et réduction des échantillons ainsi
qu'à la détermination de la teneur en huile, en impuretés et en humidité des
graines oléagineuses(2).
2.Principe
La prise d'essai est soumise à la dessication dans des conditions définies,
variant en fonction de la nature de l'aliment. La perte de masse est déter-
minée par pesée. Il est nécessaire de procéder à une prédessication lorsqu'il
s'agit d'aliments solides, ayant une teneur élevée en humidité.
3.Appareillage
3.1. Broyeur construit en matériau n'absorbant pas l'humidité, facile à
nettoyer, permettant un broyage rapide et uniforme sans provoquer
d'échauffement sensible, évitant au maximum le contact avec l'air exté-
rieur, et répondant aux exigences indiquées en 4.1.1 et 4.1.2 (par ex.,
micro-broyeurs à marteaux ou à refroidissement à eau, moulins à cônes
démontables, broyeurs à mouvement lent ou à disques dentés).
3.2. Balance analytique, précision 0,5 mg.3.3. Récipients secs en métal inoxydable ou en verre, munis d'un couvercle
assurant une fermeture étanche à l'air; surface utile permettant d'obtenir
une répartition de la prise d'essai de l'ordre de 0,3 g par cm
2.
3.4. Étuve isotherme (± 1 ºC) à chauffage électrique, assurant une régulation
rapide de la température et convenablement ventilée(3).
3.5. Étuve à vide, à chauffage électrique réglable, munie d'une pompe à huile
et soit d'un dispositif à introduction d'air chaud déshydraté, soit d'un
déshydratant (par ex., oxyde de calcium).
3.6. Dessicateur à plaque en métal ou en porcelaine, épaisse, perforée, conte-
nant un déshydratant efficace.
4.Mode opératoire
NB: Les opérations décrites dans ce chapitre doivent être effectuées immé-
diatement après l'ouverture des emballages contenant les échantillons.
Les analyses doivent être effectuées au moins en double.
4.1.Préparation
4.1.1. Aliments à l'exception de ceux mentionnés en 4.1.2 et 4.1.3
Prélever au moins 50 g de l'échantillon. Si nécessaire, broyer ou
diviser de façon appropriée pour éviter toute variation de la
teneur en humidité (voir 6).1971L0393 — FR — 15.12.1972 — 001.001 — 3
(1) JO no172 du 30. 9. 1966, p. 3025/66.
(2) JO noL 239 du 28. 9. 1968, p. 2.
(3) Pour la dessication des céréales ainsi que des farines, gruaux et semoules, l'étuve doit
avoir une capacité calorifique telle que, réglée préalablement à une température de 13
oC, elle puisse atteindre à nouveau cette température moins de 45 minutes après lamise en place du nombre maximal de prises d'essai à sécher simultanément. Elledevrait avoir une ventilation telle que, en séchant pendant deux heures, toutes les prisesd'essais de froment tendre qu'elle peut contenir, les résultats présentent une différence
inférieure à 0,15 % par rapport aux résultats obtenus après quatre heures de séchage.
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4.1.2. Céréales et gruaux
Prélever au moins 50 g de l'échantillon. Moudre en particules
dont au moins 50 % passent par un tamis à mailles de 0,5 mm
et ne laissent pas plus de 10 % de refus sur le tamis à mailles
rondes de 1 mm.
4.1.3. Aliments liquides ou pâteux, aliments constitués essentiellement
de matières grasses
Prélever et peser à 10 mg près, 25 g environ de l'échantillon, y
ajouter une quantité appropriée de sable anhydre, pesée à 10 mg
près, et mélanger jusqu'à obtention d'un produit homogène.
4.2.Dessication
4.2.1. Aliments à l'exception de ceux mentionnés en 4.2.2 et 4.2.3
Tarer, à 0,5 mg près, un récipient (3.3) muni de son couvercle.
Peser, à 1 mg près, dans le récipient taré à 5 g environ de l'échan-
tillon et répartir uniformément la prise d'essai. Placer le récipient
dans l'étuve prélablement chauffée à 103 ºC, le couvercle étant
enlevé. Pour éviter que la température de l'étuve ne descende
trop, introduire le récipient en un temps minimum. Laisser sécher
durant quatre heures à partir du moment où l'étuve a atteint à
nouveau la température de 103 ºC. Remettre le couvercle sur le
récipient, retirer celui-ci de l'étuve, laisser refroidir durant 30 à
45 minutes dans le dessicateur (3.6) et peser à 1 mg près.
Dans le cas des aliments constitués essentiellement de matières
grasses, effectuer une dessication complémentaire de 30 minutes
dans l'étuve à 103 ºC. L'écart entre les deux pesées ne doit pas
excéder 0,1 % d'humidité.
4.2.2. Céréales, farines, gruaux et semoules
Tarer, à 0,5 mg près, un récipient (3.3) muni de son couvercle.
Peser, à 1 mg près, dans le récipient taré 5 g environ de l'échan-
tillon broyé et répartir uniformément la prise d'essai. Placer le
récipient dans l'étuve préalablement chauffée à 130 ºC, le
couvercle étant enlevé. Pour éviter que la température de l'étuve
ne descende trop, introduire le récipient en un temps minimum.
Laisser sécher durant deux heures comptées à partir du moment
où l'étuve a atteint à nouveau la température de 130 ºC. Remettre
le couvercle sur le récipient, retirer celui-ci de l'étuve, laisser
refroidir 30 à 45 minutes dans le dessicateur (3.6) et peser à
1 mg près.
4.2.3. Aliments composés contenant plus de 4 % de saccharose ou de
lactose: aliments simples tels que caroube, produits céréaliers
hydrolysés, germes de malt, cossettes de betteraves, solubles de
poisson et sucres; aliments composés contenant plus de 25 p.
cent de sels minéraux renfermant de l'eau de cristallisation
Tarer, à 0,5 mg près, un récipient (3.3) muni de son couvercle.
Peser, à 1 mg près, dans le récipient taré 5 g environ de l'échan-
tillon et répartir uniformément la prise d'essai. Placer le récipient
dans l'étuve à vide (3.5) préalablement chauffée à une tempéra-
ture de 80 à 85 ºC, le couvercle étant enlevé. Pour éviter que
latempérature de l'étuve ne descende trop, introduire le récipient
en un temps minimum.
Amener la pression à 100 Torrs et laisser sécher à cette pression
durant quatre heures, soit sous un courant d'air sec et chaud, soit
à l'aide d'un déshydratant (300 g environ pour 20 échantillons).
Dans ce dernier cas, couper la connexion avec la pompe à vide
lorsque la pression prescrite est atteinte. Compter la durée de
séchage à partir du moment où l'étuve a atteint à nouveau la
température de 80 à 85 ºC. Ramener ensuite avec précaution
l'étuve à la pression atmosphérique. Ouvrir l'étuve, couvrir immé-
diatement le récipient de son couvercle, retirer le récipient del'étuve, laisser refroidir durant 30 à 45 minutes dans le dessicateur
(3.6) et peser à 1 mg près. Procéder à une dessication complé-
mentaire de 30 minutes dans l'étuve à vide à la température de
80 à 85 ºC et peser à nouveau. L'écart entre les deux pesées ne
doit pas excéder 0,1 % d'humidité.1971L0393 — FR — 15.12.1972 — 001.001 — 4
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4.3.Prédessication
4.3.1. Aliments, à l'exception de ceux mentionnés en 4.3.2
Les aliments solides, dont la teneur en humidité est élevée et rend
le broyage difficile, doivent être prédesséchés comme suit.
Peser à 10 mg près, 50 g de l'échantillon non broyé (une division
grossière peut être effectuée, si nécessaire, dans le cas des
aliments comprimés ou agglomérés) dans un récipient approprié
(par exemple, plaque en aluminium de 20 × 12 cm avec bord de
0,5 cm). Laisser sécher dans une étuve à la température de 60 à
70 ºC, jusqu'à ce que la teneur en humidité soit ramenée à une
valeur comprise entre 8 et 12 p. cent. Retirer de l'étuve, laisser
refroidir à découvert dans le laboratoire durant une heure et peser
à 10 mg près. Broyer immédiatement après comme indiqué en
4.1.1 et effectuer la dessication comme indiqué en 4.2.1 ou
4.2.3, selon la nature de l'aliment.
4.3.2. Céréales
Les grains ayant un taux en humidité supérieur à 17 p. cent
doivent être prédesséchés comme suit:
Peser, à 10 mg près, 50 g du grain non moulu dans un récipient
approprié (par exemple, plaque en aluminium de 20 × 12 cm avec
bord de 0,5 cm). Laisser sécher dans une étuve pendant 5 à 7
minutes à la température de 130 ºC. Retirer de l'étuve, laisser
refroidir à découvert dans le laboratoire durant deux heures et
peser à 10 mg près. Moudre immédiatement après, comme
indiqué en 4.1.2 et effectuer la dessication comme indiqué en
4.2.2.
5.Calcul des résultats
La teneur en humidité, en pour cent de l'échantillon, est donnée par les
formules suivantes:
5.1.Dessication sans prédessication
E/C0m ðÞ /C1100
E
où:
E = masse initiale, en grammes, de la prise d'essai,
m = masse, en grammes, de la prise d'essai sèche.
5.2.Dessication avec prédessication
M0/C0m ðÞ M
M0 þE/C0M/C20/C21
/C1100
E¼100 1 /C0Mm
EM0/C18/C19
où:
E = masse initiale, en grammes, de la prise d'essai,
M = masse, en grammes, de la prise d'essai après prédessication,M′= masse, en grammes, de la prise d'essai après broyage ou mouture,
m = masse, en grammes, de la prise d'essai sèche.
5.3.Répétabilité
La différence entre les résultats de deux déterminations parallèles effec-
tuées sur un même échantillon ne doit pas dépasser 0,2 % d'humidité.
6.Observation
Si un broyage s'avère nécessaire et s'il ressort que celui-ci entraîne une varia-
tion de la teneur en humidité du produit, les résultats d'analyse concernant les
composants de l'aliment doivent être convertis conformément à la teneur en
humidité de l'échantillon initial.1971L0393 — FR — 15.12.1972 — 001.001 — 5
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2.DOSAGE DES BASES AZOTÉES VOLATILES
A. PAR MICRODIFFUSION
1.Objet et domaine d'application
La méthode permet de déterminer la teneur en bases azotées volatiles, expri-
mées en ammoniac des aliments des animaux.
2.Principe
L'échantillon est extrait par l'eau, la solution est déféquée et filtrée. Les bases
azotées volatiles sont déplacées à l'aide d'une solution de carbonate de potas-sium par microdiffusion, recueillies dans une solution d'acide borique et
titrées par l'acide sulfurique.
3.Réactifs
3.1. Solution à 20 p.cent (p/v) d'acide trichloracétique.
3.2. Indicateur: dissoudre 33 mg de vert de bromocrésol et 65 mg de rouge
de méthyle dans 100 ml d'éthanol à 95-96 p.cent (v/v).
3.3. Solution d'acide borique: dans un ballon jaugé de 1 l, dissoudre 10 g
d'acide borique p.a. dans 200 ml d'éthanol à 95-96 p.cent (v/v) et
700 ml d'eau. Ajouter 10 ml d'indicateur (3.2). Mélanger et ajuster si
nécessaire la coloration de la solution au rouge clair par addition d'une
solution d'hydroxyde de sodium. 1 ml de cette solution permet de fixer
au maximum 300 µg de NH
3.
3.4. Solution saturée de carbonate de potassium: dissoudre 100 g de carbo-
nate de potassium p.a. dans 100 ml d'eau à l'ébullition. Laisser refroidir
et filtrer.
3.5. Acide sulfurique 0,02 N.
4.Appareillage
4.1. Mélangeur (culbuteur): environ 35 à 40 retournements par minute.
4.2. Cellules de Conway (v. schéma), en verre ou en matière plastique.
4.3. Microburettes, graduées au 1/100 ml.
5.Mode opératoire
Peser, à 1 mg près, 10 g de l'échantillon et les introduire dans un ballon jaugé
de 200 ml avec 100 ml d'eau. Mélanger durant 30 minutes dans le culbuteur.
Ajouter 50 ml de solution d'acide trichloracétique (3.1), compléter au volume
avec de l'eau, agiter vigoureusement et filtrer sur un filtre à plis.
Introduire à la pipette dans la partie centrale de la cellule de Conway 1 ml de
solution d'acide borique (3.3) et dans la couronne de la cellule 1 ml du filtrat
de l'échantillon. Couvrir partiellement à l'aide du couvercle graissé. Laisser
tomber rapidement dans la couronne 1 ml de solution saturée de carbonate
de potassium (3.4) et fermer le couvercle de façon étanche. Remuer avec
précaution la cellule en lui donnant un mouvement de rotation dans un plan
horizontal, afin d'assurer le mélange des deux réactifs. Laisser incuber soit
durant quatre heures au moins à la température ambiante, soit durant une
heure à 40 ºC.
Titrer les bases volatiles dans la solution d'acide borique par l'acide sulfu-
rique 0,02 N (3.5) en utilisant une microburette (4.3).
Effectuer un essai à blanc en appliquant le même mode opératoire, en
l'absence d'échantillon à analyser.
6.Calcul des résultats
1m ld eH2SO40,02 N correspond à 0,34 mg d'ammoniac.
Exprimer le résultat en pour cent de l'échantillon.
Répétabilité
La différence entre les résultats des deux déterminations parallèles effectuées
sur un même échantillon ne doit pas dépasser:
10 p.cent en valeur relative pour les teneurs en ammoniac inférieures à
1,0 p.cent;1971L0393 — FR — 15.12.1972 — 001.001 — 6
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0,1 en valeur absolue pour les teneurs en ammoniac égales ou supérieures à
1,0 p.cent.
7.Observation
Si la teneur en ammoniac de l'échantillon est supérieure à 0,6 p.cent, diluer le
filtrat initial.1971L0393 — FR — 15.12.1972 — 001.001 — 7
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CELLULE DE CONWAY
Échelle 1/1
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B. PAR DISTILLATION
1.Objet et domaine d'application
La méthode permet de déterminer la teneur en bases azotées volatiles,
exprimées en ammoniac, des farines de poisson ne contenant pratiquement
pas d'urée. Elle n'est applicable que pour des teneurs en ammoniac infé-
rieures à 0,25 p.cent.
2.Principe
L'échantillon est extrait par l'eau, la solution est déféquée et filtrée. Les
bases azotées volatiles sont déplacées à l'ébullition par addition d'oxyde
de magnésium et recueillies dans une quantité déterminée d'acide sulfu-
rique dont l'excès est titré en retour par une solution d'hydroxyde de
sodium.
3.Réactifs
3.1. Solution à 20 p.cent (p/v) d'acide trichloracétique.
3.2. Oxyde de magnésium p.a.
3.3. Émulsion d'antimousse (silicone, par ex.).
3.4. Acide sulfurique 0,1 N.3.5. Solution d'hydroxyde de sodium 0,1 N.
3.6. Solution à 0,3 p.cent (p/v) de rouge de méthyle dans l'éthanol à 95-
96 p.cent (v/v).
4.Appareillage
4.1. Mélangeur (culbuteur): environ 35 à 40 retournements par minute.4.2. Appareil à distiller du type Kjeldahl.
5.Mode opératoire
Peser, à 1 mg près, 10 g de l'échantillon et les introduire avec 100 ml
d'eau dans un ballon jaugé de 200 ml. Mélanger durant 30 minutes dans
le culbuteur. Ajouter 50 ml de solution d'acide trichloracétique (3.1),
compléter au volume avec de l'eau, agiter vigoureusement et filtrer sur
un filtre à plis.
Prélever une quantité de filtrat limpide en fonction de la teneur présumée
en bases azotées volatiles (100 ml conviennent, en général). Diluer à
200 ml et ajouter 2 g d'oxyde de magnésium (3.2) et quelques gouttes
d'émulsion antimousse (3.3). La solution doit être alcaline au papier de
tournesol; si elle ne l'est pas, ajouter de l'oxyde de magnésium (3.2).
Distiller 150 ml environ de la solution dans un appareil du type Kjeldahl
et recueillir le distillat dans un erlenmeyer contenant un volume exacte-
ment mesuré (25 à 50 ml) d'acide sulfurique 0,1 N (3.4). Au cours de la
distillation, éviter une surchauffe des parois. Faire bouillir durant 2
minutes la solution sulfurique, refroidir et titrer l'excès d'acide sulfurique
en retour par la solution d'hydroxyde de sodium 0,1 N (3.5) en présence
de l'indicateur au rouge de méthyle (3.6).
Effectuer un essai à blanc en appliquant le même mode opératoire, en
l'absence d'échantillon à analyser.
6.Calcul des résultats
1m ld eH
2SO40,1 N correspond à 1,7 mg d'ammoniac.
Exprimer le résultat en pour cent de l'échantillon.
Répétabilité
La différence entre les résultats de deux déterminations parallèles effec-
tuées sur un même échantillon ne doit pas dépasser, en valeur relative,
10 p.cent d'ammoniac.1971L0393 — FR — 15.12.1972 — 001.001 — 9
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3.DOSAGE DU PHOSPHORE TOTAL
Méthode photométrique
1.Objet et domaine d'application
La méthode permet de déterminer la teneur en phosphore total des aliments
des animaux. Elle est particulièrement indiquée pour l'analyse des produits
pauvres en phosphore. Dans certains cas (produits riches en phosphore), une
méthode gravimétrique peut être appliquée.
2.Principe
L'échantillon est minéralisé, soit par voie sèche (pour les aliments organi-
ques), soit par voie humide (pour les composés minéraux et les aliments
liquides) et mis en solution acide. La solution est traitée par le réactif
vanado-molybdique. La densité optique de la solution jaune ainsi formée est
mesurée au spectrophotomètre à 430 nm.
3.Réactifs
3.1. Carbonate de calcium p.a.3.2. Acide chlorhydrique p.a., d: 1,1 (6 N environ).3.3. Acide nitrique p.a., d: 1,045.3.4. Acide nitrique p.a., d: 1,38 à 1,42.3.5. Acide sulfurique p.a., d: 1,84.3.6. Réactif vanado-molybdique: Mélanger 200 ml de solution d'heptamolyb-
date d'ammonium (3.6.1), 200 ml de solution de monovanadate
d'ammonium (3.6.2) et 134 ml d'acide nitrique (3.4) dans un ballon
jaugé de 1 l. Compléter au volume avec de l'eau.
3.6.1. Solution d'heptamolybdate d'ammonium: Dissoudre dans l'eau
chaude 100 g d'heptamolybdate d'ammonium p.a. (NH
4) 6Mo7O24·4H2O. Ajouter 10 ml d'ammoniac (d: 0,91) et compléter à
1 l avec de l'eau.
3.6.2. Solution de monovanadate d'ammonium: Dissoudre dans 400 ml
d'eau chaude 2,35 g de monovanadate d'ammonium p.a.
NH4VO3. Ajouter lentement et tout en agitant 20 ml d'acide
nitrique dilué (7 ml de HNO3(3.4) + 13 ml de H2O) et compléter
à 1 l avec de l'eau.
3.7. Solution étalon à 1 mg de phosphore par ml: Dissoudre dans l'eau
4,387 g de dihydrogénophosphate de potassium p.a. KH2PO4. Compléter
à 1 l avec de l'eau.
4.Appareillage
4.1. Creusets à incinération, en quartz ou porcelaine.4.2. Four à moufle électrique, muni d'un thermostat réglé à 550 ºC.4.3. Matras de Kjeldahl, 250 ml.4.4. Ballons jaugés et pipettes de précision.4.5. Spectrophotomètre.4.6. Tubes à essai, diamètre: 16 mm environ, à rodage normalisé 14,5; capa-
cité: 25 à 30 ml.
5.Mode opératoire
5.1.Préparation de la solution
Selon la nature de l'échantillon, préparer une solution comme indiqué en
5.1.1 ou 5.1.2.
5.1.1. Cas général
Peser, à 1 mg près, 1 g ou plus de l'échantillon. Introduire la prise
d'essai dans un matras de Kjeldahl, ajouter 20 ml d'acide sulfu-
rique (3.5), agiter pour imprégner complètement la matière
d'acide et éviter qu'elle n'adhère aux parois du ballon, chauffer
et maintenir pendant 10 minutes à ébullition. Laisser refroidir
légèrement, ajouter 2 ml d'acide nitrique (3.4), chauffer douce-
ment, laisser refroidir légèrement, ajouter à nouveau un peu1971L0393 — FR — 15.12.1972 — 001.001 — 10
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d'acide nitrique (3.4) et porter à ébullition. Répéter ces opérations
jusqu'à obtention d'une solution incolore. Refroidir, ajouter un
peu d'eau, transvaser le liquide dans un ballon jaugé de 500 ml
en rinçant le matras à l'eau chaude. Laisser refroidir, compléter
au volume avec de l'eau, homogénéiser et fitrer.
5.1.2. Échantillons contenant des matières organiques et exempts de
dihydrogénophosphates de calcium et de magnésium
Peser, à 1 mg près, 2,5 g environ de l'échantillon dans un creuset
à incinération. Mélanger intimement la prise d'essai à 1 g de
carbonate de calcium (3.1). Calciner au four à 550 ºC ± 5 ºC
jusqu'à obtention de cendres blanches ou grises (une petite quan-
tité de charbon ne gêne pas).
Transvaser les cendres dans un bécher de 250 ml. Ajouter 20 ml
d'eau et de l'acide chlorhydrique (3.2) jusqu'à cessation de l'effer-
vescence. Ajouter ensuite 10 ml d'acide chlorhydrique (3.2) en
excès. Porter le bécher sur un bain de sable et évaporer à sec
pour insolubiliser la silice. Reprendre le résidu par 10 ml d'acide
nitrique (3.3) et faire bouillir pendant 5 minutes sur le bain de
sable, sans évaporer à sec. Transvaser le liquide dans un ballon
jaugé de 500 ml en rinçant le bécher à plusieurs reprises à l'eau
chaude. Laisser refroidir, compléter au volume avec de l'eau,
homogénéiser et filtrer.
5.2.Développement de la coloration et mesure de la densité optique
Diluer une partie aliquote du filtrat obtenu en 5.1.1 ou 5.1.2 pour obtenir
une concentration en phosphore atteignant au maximum 40 µg/ml. Intro-
duire 10 ml de cette solution dans un tube à essai (4.6) et y ajouter 10 ml
du réactif vanado-molybdique (3.6). Homogénéiser et laisser reposer 10
minutes au moins à la température de 20 ºC. Mesurer la densité optique
au spectrophotomètre à 430 nm par comparaison avec une solution
obtenue par addition de 10 ml du réactif vanado-molybdique (3.6) à
10 ml d'eau.
5.3.Courbe d'étalonnage
Préparer à partir de la solution étalon (3.7) des solutions contenant
respectivement 5, 10, 20, 30 et 40 µg de phosphore par ml. Prélever
10 ml de chacune de ces solutions et y ajouter 10 ml du réactif
vanado-molybdique (3.6). Homogénéiser et laisser reposer 10 minutes
au moins à la température de 20 ºC. Mesurer les densités optiques dans
les conditions indiquées en 5.2.
Tracer la courbe d'étalonnage en portant en ordonnée les valeurs de la
densité optique et en abcisse les quantités correspondantes de phosphore.
La courbe est linéaire pour les concentrations comprises entre 0 et 40 µg/
ml.
6.Calcul des résultats
Déterminer la quantité de phosphore de la prise d'essai en se référant à la
courbe d'étalonnage.
Exprimer le résultat en pour cent de l'échantillon.
Répétabilité
La différence entre les résultats de deux déterminations parallèles effectuées
sur un même échantillon ne doit pas dépasser:
3 p.cent en valeur relative pour les teneurs en phosphore inférieures à
5 p.cent;
0,15 en valeur absolue pour les teneurs en phosphore égales ou supérieures à
5 p.cent.
4.DOSAGE DES MATIÈRES GRASSES BRUTES
1.Objet et domaine d'application
La méthode permet de déterminer la teneur en matières grasses brutes des
aliments des animaux. Elle ne concerne pas l'analyse des graines et fruits
oléagineux définis dans le règlement 136/66/CEE du Conseil du 22
septembre 1966. La détermination de la teneur en huile de ces produits fait
l'objet de l'annexe V du règlement (CEE) no1470/68 de la Commission du 23
septembre 1968.1971L0393 — FR — 15.12.1972 — 001.001 — 11
▼B
Deux procédés sont prévus en fonction de la nature de l'aliment.
1.1.Procédé A (extrait éthéré): appliqué à tous les aliments, sauf à ceux
mentionnés en 1.2.
1.2.Procédé B: appliqué aux aliments dont les matières grasses ne peuvent
être totalement extraites par l'éther diéthylique sans hydrolyse préalable,
aux aliments d'origine animale, glutens, pulpes séchées de pommes de
terre, drèches séchées de brasserie et de distillerie, levures séchées,
déchets de biscuiterie, de pains et aliments cuits, produits laitiers et
aliments contenant une forte proportion de ceux-ci (au moins 40 p.cent)
et aux aliments composés enrichis en graisses.
2.Principe
2.1.Procédé A: Les matières grasses sont extraites par l'éther diéthylique. Le
solvant est éliminé et le résidu est séché et pesé.
2.2.Procédé B: L'échantillon est hydrolysé à chaud par l'acide chlorhy-
drique. La solution est refroidie et filtrée. Le résidu, lavé et séché, est
soumis à l'extraction par l'éther diéthylique selon le procédé A.
3.Réactifs
3.1. Éther diéthylique, anhydre, d: 0,720, éb: 34,5 ºC, pratiquement exempt
de peroxydes.
3.2. Sulfate de sodium, p.a., anhydre.3.3. Acide chlorhydrique 3 N.3.4. Adjuvant de filtration, par ex. terre de diatomée, Hyflo-supercel.3.5. Tétrachlorure de carbone p.a.
4.Appareillage
4.1. Extracteur selon Soxhlet ou appareil équivalent.
4.2. Appareil de chauffage à température réglable, antidéflagrant.
4.3. Étuve à dessication par le vide (moins de 100 Torrs).
5.Mode opératoire
5.1.Procédé A (voir observation 7.1)
Peser, à 1 mg près, 5 g de l'échantillon et les mélanger à 2 à 3 g (ou
plus, si nécessaire) de sulfate de sodium anhydre (3.2). Introduire le
mélange dans une cartouche à extraction exempte de matières grasses
et recouvrir d'un tampon de coton dégraissé. (Le mélange peut se faire
éventuellement dans la cartouche.)
Placer la cartouche dans un extracteur (4.1) et extraire durant six heures
par l'éther diéthylique (3.1). Si on utilise un extracteur selon Soxhlet,
régler le chauffage pour obtenir 15 siphonnages au moins à l'heure.
Recueillir l'extrait éthéré dans un ballon sec, muni de quelques frag-
ments de pierre ponce(
1) et taré.
Éliminer l'éther par distillation et sécher ensuite le résidu d'évaporation
pendant une heure et demie dans l'étuve à dessication par le vide (4.3) à
la température de 75 ºC. Refroidir dans un dessicateur et peser. Effec-
tuer une seconde dessication pendant 30 minutes pour s'assurer que le
poids de la matière grasse reste constant (la perte de poids doit être infé-
rieure à 1 mg).
5.2.Procédé B
Peser, à 1 mg près, 2,5 g de l'échantillon (voir observation 7.2) et les
introduire dans un bécher de 400 ml ou un erlenmeyer de 300 ml.
Ajouter 100 ml d'acide chlorhydrique 3 N (3.3) et quelques fragments
de pierre ponce. Recouvrir le bécher d'un verre de montre ou munir
l'erlenmeyer d'un réfrigérant à reflux. Amener le mélange à ébullition
douce, à l'aide d'une petite flamme ou d'une plaque chauffante, et l'y
maintenir durant une heure. Éviter que le produit adhère aux parois du
récipient.1971L0393 — FR — 15.12.1972 — 001.001 — 12
(1) Remplacer les fragments de pierre ponce par des perles de verre lorsque la matière
grasse doit faire l'objet d'examens qualitatifs ultérieurs.
▼B
Refroidir et ajouter une quantité d'adjuvant de filtration (3.4) suffisante
pour éviter toute perte de matière grasse lors de la filtration. Filtrer sur
un double papier-filtre mouillé, exempt de matières grasses. Laver le
résidu à l'eau froide jusqu'à disparition de réaction acide. Vérifier que
le filtrat ne contient pas de matières grasses. La présence de celles-ci
dans le filtrat indique qu'une extraction de l'échantillon par l'éther
diéthylique, selon le procédé indiqué en 5.1, doit être effectuée préala-
blement à l'hydrolyse.
Placer le double papier-filtre contenant le résidu sur un verre de montre
et sécher durant une heure et demie dans l'étuve à la température de 95 à
98 ºC.
Introduire le double filtre et le résidu sec dans une cartouche à extrac-
tion, extraire par l'éther diéthylique et poursuivre le mode opératoire
comme indiqué en 5.1 deuxième alinéa.
6.Calcul des résultats
Exprimer le résultat en pour cent de l'échantillon.
Répétabilité
La différence entre les résultats de deux déterminations parallèles effectuées
sur un même échantillon ne doit pas dépasser 0,3 p.cent de matière grasse.
7.Observations
7.1. Pour les produits à teneur élevée en matières grasses, difficiles à broyer
ou non appropriés au prélèvement d'une prise d'essai réduite homogène,
procéder comme suit. Peser, à 1 mg près, 20 g de l'échantillon et les
mélanger à 10 g ou plus de sulfate de sodium anhydre (3.2). Procéder
à l'extraction par l'éther diéthylique (3.1) comme indiqué en 5.1.
Compléter l'extrait obtenu à 500 ml avec du tétrachlorure de carbone
(3.5) et homogénéiser. Prélever 50 ml de la solution et les porter dans
un petit ballon sec, muni de quelques fragments de pierre ponce(1)e t
taré. Éliminer le solvant par distillation, sécher et poursuivre le mode
opératoire comme indiqué en 5.1 dernier alinéa. Éliminer le solvant du
résidu d'extraction se trouvant dans la cartouche et broyer le résidu à la
finesse de 1 mm. Placer à nouveau le produit dans la cartouche à extrac-
tion (ne pas ajouter de sulfate de sodium), extraire par l'éther diéthylique
et poursuivre le mode opératoire comme indiqué en 5.1 deuxième et
troisième alinéas.
Calculer le résultat en pour cent de l'échantillon, en tenant compte de la
partie aliquote utilisée lors de la première extraction, selon la formule
ci-après:
(10 a + b) · 5
dans laquelle:
a = extrait éthéré en grammes de la partie aliquote, après la première
extraction,
b = extrait éthéré en grammes après la deuxième extraction.
7.2. La prise d'essai des produits pauvres en matières grasses peut être portée
à5g .1971L0393 — FR — 15.12.1972 — 001.001 — 13
(1) Remplacer les fragments de pierre ponce par des perles de verre lorsque la matière
grasse doit faire l'objet d'examens qualitatifs ultérieurs.