CUARTA DIRECTIVA DE LA COMISIÓN

de 11 de octubre de 1985

relativa a la aproximación de las legislaciones de los Estados miembros en materia de métodos de análsis necesarios para el control de la composición de los productos cosméticos

( 85/490/CEE )

LA COMISIÓN DE LAS COMUNIDADES EUROPEAS ,

Visto el Tratado constitutivo de la Comunidad Económica Europea ,

Vista la Directiva 76/768/CEE del Consejo , de 27 de julio de 1976 , relativa a la aproximación de las legislaciones de los Estados miembros en materia de productos cosméticos (1) , cuya última modificación la constituye la Directiva 85/391/CEE (2) y , en particular , el apartado 1 de su artículo 8 ,

Considerando que la Directiva 76/768/CEE prevé controles oficiales de los productos cosméticos para comprobar el cumplimiento de las condiciones previstas por las disposiciones comunitarias relativas a la composición de los productos cosméticos ;

Considerando que es conveniente establecer lo antes posible todos los métodos de análisis necesarios y que , una vez realizadas tres etapas para alcanzar dicho fin mediante la fijación de determinados métodos en las Directivas 80/1335/CEE (3) , 82/434/CEE (4) , y 83/514/CEE (5) de la Comisión , la cuarta etapa debe consistir en la fijación de los métodos de identificación y determinación cuantitativa del clorobutanol de glicerol , de determinación cuantitativa del 1-(4-aminobenzoato ) de glicerol , de determinación cuantitativa del clorobutanol , de identificación y determinación cuantitativa de la quinina , de identificación y determinación cuantitativa de los bisulfitos inorgánicos , de identificación y determinación cuantitativa de los cloratos de metales alcalinos , de identificación y determinación cuantitativa del yodato sódico ;

Considerando que las medidas previstas en la presente Directiva se atienen al dictamen del Comité para la adaptación al progreso técnico de la Directiva 76/768/CEE ,

HA ADOPTADO LA PRESENTE DIRECTIVA :

Artículo 1

Los Estados miembros adoptarán todas las medidas necesarias para que , en los controles oficiales de productos cosméticos :

- la identificación y determinación cuantitativa del 1-(4-aminobenzoato) de glicerol ,

- la determinación cuantitativa del clorobutanol ,

- la identificación y determinación cuantitativa de la quinina ,

- la identificación y determinación cuantitativa de los sulfitos y bisulfitos inorgánicos ,

- la identificación y determinación cuantitativa de los cloratos de metales alcalinos , y

- la identificación y determinación cuantitativa del yodato de sodio

se realicen según los métodos descritos en el Anexo .

Artículo 2

Los Estados miembros aplicarán las disposiciones legales , reglamentarias o administrativas necesarias para cumplir la presente Directiva , a más tardar el 31 de diciembre de 1986 , e informarán de ello inmediatamente a la Comisión .

Artículo 3

Los destinatarios de la presente Directiva serán los Estados miembros .

Hecho en Bruselas , el 11 de octubre de 1985 .

Por la Comisión

Stanley CLINTON DAVIS

Miembro de la Comisión

(1) DO n º L 262 de 27 . 9 . 1976 , p. 169 .

(2) DO n º L 224 de 22 . 8 . 1985 , p. 40 .

(3) DO n º L 383 de 31 . 12 . 1980 , p. 27 .

(4) DO n º L 185 de 30 . 6 . 1982 , p. 1 .

(5) DO n º L 291 de 24 . 10 . 1983 , p. 9 .

ANEXO

IDENTIFICACIÓN Y DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DEL 1-(4-AMINOBENZOATO) DE GLICEROL

A . IDENTIFICACIÓN

1 . OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN

Este método sirve para poner de manifiesto la presencia del 1-(4-aminobenzoato) de glicerol o 4-aminobenzoato de a-monoglicerilo . También permite identificar el 4-aminobenzoato de etilo ( benzocaína DCI ) , eventualmente presente como impureza .

2 . PRINCIPIO

La identificación se realiza por cromatografía en capa fina de gel de sílice con indicador fluorescente y revelado de la función amina primaria libre por formación en la placa de un colorante diazoico .

3 . REACTIVOS

Todos los reactivos deben ser de calidad analítica .

3.1 . Mezcla disolvente : ciclohexano/isopropanol/diclorometano estabilizado : 48/64/9 ( v/v/v ) .

3.2 . Disolvente de desarrollo : éter de petróleo ( 40-60 ) /benceno/acetona/solución de hidróxido amónico ( mínimo 25 % de NH3 ) : 35/35/35/1 ( v/v/v/v ) .

3.3 . Revelador :

solución a ) : nitrito sódico : 1 g en 100 ml de ClH 1 M , preparado justo antes de usar ;

solución b ) : 2-naftol : 0,2 g en 100 ml de KOH 1 M

3.4 . Soluciones patrón :

- 4-aminobenzoato de a-monoglicerilo : 0,050 g en 100 ml de la mezcla disolvente ( 3.1 ) .

- 4-aminobenzoato de etilo : 0,050 g en 100 ml de la mezcla disolvente ( 3.1 ) .

3.5 . Placas de gel de sílice 60 F254 , de 0,25 mm de espesor y 200 · 200 mm de tamaño .

4 . EQUIPO

4.1 . Equipo normal para cromatografía en capa fina .

4.2 . Baño de ultrasonidos .

4.3 . Filtro Millipore FH 0,5 m o equivalente .

5 . PROCEDIMIENTO

5.1 . Preparación de la muestra

Pesar 1,5 g de muestra en un matraz aforado de 10 ml con tapón esmerilado . Completar hasta 10 ml con la mezcla disolvente ( 3:1 ) . Tapar y dejar durante 1 hora a temperatura ambiente en el baño de ultrasonidos ( 4.2 ) . Filtrar por el filtro Millipore ( 4.3 ) . Utilizar el filtrado para la cromatografía .

5.2 . Cromatografía en capa fina

Depositar sobre la placa ( 3.5 ) 10 l del filtrado ( 5.1 ) y 10 l de cada solución patrón ( 3.4 ) . Desarrollar el cromatrograma hasta una altura de 15 cm en una cubeta previamente saturada con el disolvente ( 3.2 ) . Dejar secar a temperatura ambiente .

5.3 . Revelado

5.3.1 . Observar la placa con luz ultravioleta de 254 nm .

5.3.2 . Sobre la placa perfectamente seca , pulverizar la solución ( 3.3 a ) . Dejar secar a temperatura ambiente durante 1 minuto y pulverizar inmediatamente la solución ( 3.3 b ) .

Secar la placa en estufa de 60 ° C . Las manchas aparecen de color naranja con los siguientes R f : 4-aminobenzoato de -monoglicerilo : 0,07 ; 4-aminobenzoato de etilo : 0,55 .

B . DETERMINACIÓN CUANTITATIVA

1 . OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN

Este método sirve para la determinación cuantitativa del 1-(4-aminobenzoato) de glicerol ( 4-aminobenzoato de -monoglicerilo ) . También permite la determinación cuantitativa del 4-aminobenzoato de etilo . Es adecuado para la determinación como máximo de 5 % ( m/m ) de 4-aminobenzoato de -monoglicerilo y de 1 % ( m/m ) de 4-aminobenzoato de etilo .

2 . DEFINICIÓN

El contenido en 4-aminobenzoato de -monoglicerilo y en 4-aminobenzoatode etilo , determinado por este método , se expresa como porcentaje en masa ( % m/m ) del producto .

3 . PRINCIPIO

El producto problema se pone en suspensión en metanol , y tras el tratamiento adecuado de la muestra , se realiza la determinación por cromatografía líquida de alta presión ( HPLC ) .

4 . REACTIVOS

Todos los reactivos deben ser de calidad analítica y , en particular , adecuados para HPLC .

4.1 . Metanol .

4.2 . Dihidrógeno-ortofosfato de potasio KH2 PO4 .

4.3 . Diacetato de cinc Zn(CH3COO)2 · 2H2O .

4.4 . Ácido acético d (20,4) = 1,05 .

4.5 . Hexacianoferrato de tetrapotasio : K4FE(CN)6) · 3H2O .

4.6 . 4-hidroxibenzoato de etilo .

4.7 . 4-aminobenzoato de a-monoglicerilo .

4.8 . 4-aminobenzoato de etilo ( benzocaína ) .

4.9 . Solución tampón ( 0,02 M ) : disolver 2,72 g de dihidrógeno-ortofosfato de potasio ( 4.2 ) en 1 l de agua .

4.10 . Eluyente : solución tampón ( 4.9 ) /metanol ( 4.1 ) : 61/39 ( v/v ) . La composición de esta fase móvil puede modificarse de forma que el factor de resolución R sea igual o superior a 1,5 :

R = 2 ( d'R2 - d'R1 ) / ( W1 + W2 )

donde :

R1 y R2 = tiempos de retención , expresados en minutos , de dos picos ,

W1 y W2 = anchura , expresada en mm , de los mismos picos a media altura ,

d' = velocidad del papel mm/minuto .

4.11 . Solución madre de 4-aminobenzoato de a-monoglicerilo : pesar con precisión unos 40 mg de 4-aminobenzoato de a-monoglicerilo en un matraz aforado de 100 ml . Disolver en 40 ml de metanol ( 4.1 ) . Completar hasta la marca de enrase con la solución tampón ( 4.9 ) y mezclar .

4.12 . Solución madre de 4-aminobenzoato de etilo : pesar con precisión unos 40 mg de 4-aminobenzoato de etilo en un matraz aforado de 100 ml . Disolver en 40 ml de metanol ( 4.1 ) . Completar hasta la marca de enrase con la solución tampón ( 4.9 ) y mezclar .

4.13 . Solución del patrón interno : pesar con precisión unos 50 mg de 4-hidroxibenzoato de etilo ( 4.6 ) en un matraz aforado de 100 ml . Disolver en 40 ml de metanol ( 4.1 ) . Completar hasta la marca de enrase con la solución tampón ( 4.9 ) y mezclar .

4.14 . Soluciones patrón : preparar cuatro soluciones patrón por disolución en 100 ml de eluyente ( 4.10 ) , según el cuadro siguiente :

Solución * 4-aminobenzoato de a-monoglicerilo * 4-aminobenzoato de etilo * 4-hidroxibenzoato de etilo *

* ml ( 4.11 ) * µg/ml (*) * ml ( 4.12 ) * µg/ml (*) * ml ( 4.13 ) * µg/ml (*) *

I * 2 * 8 * 2 * 8 * 10 * 50 *

II * 4 * 16 * 3 * 12 * 10 * 50 *

III * 6 * 24 * 4 * 16 * 10 * 50 *

IV * 10 * 40 * 5 * 20 * 10 * 50 *

(*) Estos valores se dan a título indicativo y corresponden a una pesada exacta de las soluciones 4.11 , 4.12 y 4.13 .

N.B. Estas soluciones pueden prepararse de forma diferente .

4.15 . Solución de Carrez I : disolver 26,5 g de hexacianoferrato de tetrapotasio ( 4.5 ) en agua y completar hasta 250 ml .

4.16 . Solución de Carrez II : disolver 54,9 g de diacetato de cinc ( 4.3 ) y 7,5 ml de ácido acético ( 4.4 ) en agua y completar hasta 250 ml .

4.17 . Lichrosorb Merck RP-18 , o equivalente , con tamaño medio de partícula de 5 µm .

5 . EQUIPO

5.1 . Material normal de laboratorio .

5.2 . Cromatógrafo de HPLC con detector ultravioleta de longitud de onda variable y cámara termostática a 45 ° C .

5.3 . Columna de acero inoxidable : 250 mm de longitud , 4,6 mm de diámetro interior . La columna está rellena de Lichrosorb RP-18 ( 4.17 ) .

5.4 . Baño de ultrasonidos .

6 . PROCEDIMIENTO

6.1 . Preparación de la muestra

6.1.1 . Pesar con precisión alrededor de 1 g de muestra en un vaso de 100 ml y añadir 10 ml de metanol ( 4.1 ) .

6.1.2 . Poner el vaso durante 20 minutos en un baño de ultrasonidos ( 5.4 ) . Pasar cuantitativamente la suspensión así obtenida a un matraz aforado de 100 ml con 75 ml de eluyente ( 4.10 ) como máximo . Añadir sucesivamente 1 ml de solución de Carrez I ( 4.15 ) y 1 ml de solución de Carrez II ( 4.16 ) , mezclando después de cada operación . Completar hasta la marca de enrase con el eluyente ( 4.10 ) , mezclar de nuevo y filtrar por filtro de pliegues .

6.1.3 . Utilizando una pipeta , pasar , a un matraz aforado de 50 ml , 3,0 ml del filtrado obtenido en 6.1.2 y 5,0 ml de la solución del patrón interno ( 4.13 ) . Completar hasta la marca de enrase con el eluyente ( 4.10 ) y mezclar . Utilizar la solución así obtenida para proceder al análisis cromatográfico descrito en el punto 6.2 .

6.2 . Cromatografía

6.2.1 . Ajustar el flujo de la fase móvil ( 4.10 ) a 1,2 ml/min y la temperatura de la columna a 45 ° C .

6.2.2 . Ajustar el detector ( 5.2 ) a 274 nm .

6.2.3 . Utilizando una microjeringa , inyectar al menos dos veces 20 µl de solución ( 6.1.3 ) en el cromatógrafo y medir las áreas de los picos .

6.3 . Curva de calibración

6.3.1 . Inyectar 20 µl de cada una de las soluciones patrón ( 4.14 ) y medir las áreas de los picos .

6.3.2 . Para cada concentración , calcular la relación entre el área del pico del 4-aminobenzoato de a-monoglicerilo y el área del pico del patrón interno . Trazar la curva de calibración representando esta relación en ordenadas y la relación de masas correspondientes en abscias .

6.3.3 . Proceder de la misma forma con el 4-aminobenzoato de etilo .

7 . CÁLCULO

7.1 . De la curva de calibración obtenida en 6.3 leer las relaciones de masas ( RP1 , RP2 ) correspondientes a las relaciones entre las áreas de los picos calculados en el punto 6.2.3 , donde :

RP1 = masa del 4-aminobenzoato de a-monoglicerilo/masa del 4-hidroxibenzoato de etilo ,

RP2 = masa del 4-aminobenzoato de etilo/masa del 4-hidroxibenzoato de etilo .

7.2 . A partir de las relaciones de masa así obtenidas , calcular el contenido en 4-aminobenzoato de a-monoglicerilo y en 4-aminobenzoato de etilo , como porcentaje en masa ( % m/m ) , utilizando las fórmulas siguientes :

g % ( m/m ) 4-aminobenzoato de a-monoglicerilo = RP1 × q/6 p

g % ( m/m ) de 4-aminobenzoato de etilo = RP2 × q/6 p

donde :

q = cantidad en mg de 4-hidroxibenzoato de etilo ( patrón interno ) pesada en el punto 4.13 ,

p = cantidad en g de muestra pesada en el punto 6.1.1 .

8 . REPRODUCIBILIDAD (1)

8.1 . Para un contenido en 4-aminobenzoato de a-monoglicerilo del 5 % ( m/m ) , la diferencia entre los resultados de dos determinaciones paralelas realizadas con la misma muestra no debe pasar del 0,25 % .

8.2 . Para un contenido en 4-aminobenzoato de etilo del 1 % ( m/m ) , la diferencia entre los resultados de dos determinaciones paralelas realizadas con la misma muestra no debe pasar del 0,10 % .

9 . OBSERVACIONES

9.1 . Antes de proceder al análisis propiamente dicho , conviene determinar si la muestra no contiene ningún compuesto capaz de coincidir con el pico del patrón interno ( 4-aminobenzoato de etilo ) en el cromatograma .

9.2 . Para comprobar la ausencia de posibles interferencias , repetir la determinación cambiando en ± 10 % la proporción de metanol en la fase móvil .

DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DEL CLOROBUTANOL

1 . OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN

Este método es adecuado para la determinación cuantitativa del clorobutanol hasta la concentración máxima del 0,5 % ( m/m ) en todos los productos cosméticos , excepto en aerosoles .

2 . DEFINICIÓN

El contenido en clorobutanol determinado por este método se expresa como porcentaje en masa ( % m/m ) del producto .

3 . PRINCIPIO

Tras el tratamiento adecuado del producto problema , la determinación se realiza por cromatografía de gases utilizando 2,2,2-tricloroetanol como patrón interno .

4 . REACTIVOS

Todos los reactivos deben ser de calidad analítica .

4.1 . Clorobutanol ( 1,1,1-tricloro-2-metilpropano-2-ol ) .

4.2 . 2,2,2-tricloroetanol .

4.3 . Etanol absoluto .

4.4 . Solución patrón de clorobutanol : 0,025 g en 100 ml de etanol ( 4.3 ) , ( m/r ) .

4.5 . Solución del patrón interno de 2,2,2-tricloroetanol : 0,004 g en 100 ml de etanol ( 4.3 ) , ( m/r ) .

5 . EQUIPO

5.1 . Material normal de laboratorio .

5.2 . Cromatógrafo de gases con detector de captura de electrones 63Ni .

6 . PROCEDIMIENTO

6.1 . Preparación de la muestra

Pesar con precisión de 0,1 g a 0,3 g de muestra ( p g ) en un matraz aforado de 100 ml , disolver en etanol ( 4.3 ) , añadir 1 ml de la solución del patrón interno ( 4.5 ) y completar hasta la marca de enrase con etanol ( 4.3 ) .

6.2 . Condiciones de la cromatografía de gases

6.2.1 . Las condiciones deben ser tales que el factor de resolución R de la columna sea igual o superior a 1,5 :

R = 2 ( d'R2 - d'R1 ) / ( W1 + W2 )

donde :

R1 y R2 = tiempos de retención , expresados en minutos , de dos picos ,

W1 y W2 = anchura , expresada en mm , de los mismos picos a media altura ,

d' = velocidad del papel en mm/mn .

6.2.2 . Como ejemplo , las siguientes condiciones proporcionan el resultado deseado :

Columna * I * II *

Naturaleza * Vidrio * Acero inoxidable *

Longitud * 1,80 m * 3 m *

Diámetro * 3 mm * 3 mm *

Fase estacionaria * 10 % Carbomax 20 M TPA sobre Gaschrom Q 80-100 mesh * 5 % OV 17 sobre Chromosorb WAW DMCS 80-100 mesh *

Acondicionamiento * 2 a 3 días a 190 ° C * *

Temperaturas : * * *

- inyectar * 200 ° C * 150 ° C *

- columna * 150 ° C * 100 ° C *

- detector * 200 ° C * 150 ° C *

Gas de arrastre * Nitrógeno * Argón/metano ( 95/5 v/v ) *

Flujo * 35 ml/mm * 32 ml/mn *

6.3 . Curva de calibración

En 5 matraces aforados de 100 ml , añadir a 1 ml de la solución del patrón interno ( 4.5 ) respectivamente 0,20 , 0,30 , 0,40 , 0,50 , 0,60 ml de la solución ( 4.4 ) y completar hasta 100 ml con etanol ( 4.3 ) . Inyectar 1 µl de cada una de estas soluciones en el cromatógrafo en las condiciones descritas en el punto 6.2.2 y trazar la curva de calibración representado en abscisas la relación de las masas clorobutanol 2,2,2-tricloroetanol y en ordenadas la relación de las superficies correspondientes .

6.4 . Inyectar 1 µl de la solución obtenida en 6.1 y proceder en las condiciones descritas en el punto 6.2.2 .

7 . CÁLCULO

7.1 . Calcular , a partir de la curva de calibración ( 6.3 ) , la cantidad " a " expresada en µg de clorobutanos de la solución ( 6.1 ) .

7.2 . El contenido en clorobutanol de la muestra ( % m/m ) se calcula según la fórmula :

% de clorobutanol ( m/m ) = ( a × 10 2 ) / ( p × 10 6 ) = a/ ( p × 10 4 )

8 . REPRODUCIBILIDAD (1)

Para un contenido en clorobutanol del 0,5 % ( m/m ) , la diferencia entre los resultados de dos determinaciones paralelas efectuadas con la misma muestra no debe pasar del 0,01 % .

Nota

Si el resultado es igual o superior a la concentración máxima autorizada , es conveniente comprobar la ausencia de interferencias .

IDENTIFICACIÓN Y DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE LA QUININA

A . IDENTIFICACIÓN

1 . OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN

Este método sirve para poner de manifiesto la presencia de quinina en los champúes y lociones capilares .

2 . PRINCIPIO

La identificación se realiza por cromatografía en capa fina de gel de sílice y revelado de la fluorescencia azul de la quinina en medio ácido a 360 nm .

Para confirmar , se puede suprimir esta fluorescencia por medio de vapores de bromo y hacer aparecer una fluorescencia amarillenta con vapores de amoníaco .

3 . REACTIVOS

Todos los reactivos deben ser de calidad analítica .

3.1 . Placas de gel de sílice de 0,25 mm de espesor , sin indicador de fluorescencia , de 200 × 200 mm de tamaño .

3.2 . Disolvente de desarrollo : tolueno/éter dietílico/diclorometano/dietilamina : 20/20/20/8 ( v/v/v/v ) .

3.3 . Metanol .

3.4 . Ácido sulfúrico 96 % ( d (20,4) = 1,84 ) .

3.5 . Éter dietílico .

3.6 . Reactivo revelador : añadir con precaución 5 ml de ácido sulfúrico ( 3.4 ) a 95 ml de éter dietílico ( 3.5 ) en un recipiente refrigerado .

3.7 . Bromo .

3.8 . Amoníaco al 28 % ( d (20,4) = 0,90 ) .

3.9 . Quinina anhidra .

3.10 . Solución patrón : pesar con precisión unos 100 mg de quinina anhidra ( 3.9 ) y disolverlos con metanol ( 3.3 ) en un matraz aforado de 100 ml , completando hasta la marca de enrase .

4 . EQUIPO

4.1 . Equipo normal para cromatografía en capa fina .

4.2 . Baño de ultrasonidos .

4.3 . Filtros Millipore FH 0,5 µm , o equivalentes , con equipo de filtración adecuado .

5 . PROCEDIMIENTO

5.1 . Preparación de la muestra

Pesar con precisión una cantidad de muestra que pueda contener unos 100 mg de quinina en un matraz aforado de 100 ml , disolver y completar hasta la marca de enrase con metanol ( 3.3 ) . Tapar y dejar durante 1 hora a temperatura ambiente en el baño de ultrasonidos ( 4.2 ) . Filtrar por el filtro ( 4.3 ) y utilizar este filtrado para la cromatografía .

5.2 . Cromatografía en capa fina

Depositar sobre la placa de gel de sílice ( 3.1 ) 1,0 µl de la solución patrón ( 3.10 ) y 1,0 µl de la solución problema ( 5.1 ) . Desarrollar el cromatograma hasta una altura de 15 cm en una cubeta previamente saturada con los vapores del disolvente ( 3.2 ) .

5.3 . Revelado

5.3.1 . Secar la placa a temperatura ambiente .

5.3.2 . Pulverizar el reactivo ( 3.6 ) .

5.3.3 . Dejar secar la placa durante 1 hora a temperatura ambiente .

5.3.4 . Observar la placa con luz ultravioleta a 360 nm . La quinina aparece en forma de mancha fluorescente de color azul intenso .

Como ejemplo , la tabla siguiente reproduce los Rf de los principales alcaloides de la quina , desarrollados con el disolvente ( 3.2 ) .

Alcaloides * Rf *

Quinina * 0,20 *

Quinidina * 0,29 *

Cinconina * 0,33 *

Cinconidina * 0,27 *

Hidroquinidina * 0,17 *

5.3.5 . Para confirmar la identificación de la quinina , se expone la placa durante alrededor de 1 hora a los vapores de bromo ( 3.7 ) ; la fluorescencia desaparece . Al exponer a continuación la misma placa a los vapores de amoníaco ( 3.8 ) , las manchas reaparecen con una coloración parda y , si se vuelve a examinar la placa con luz ultravioleta a 360 nm , se observa fluorescencia amarillenta .

Límite de detección : 0,1 µg de quinina .

B . DETERMINACIÓN CUANTITATIVA

1 . OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN

Este método sirve para la determinación cuantitativa de la quinina en los champúes y lociones capilares . Es adecuado para la determinación de las concentraciones máximas permitidas de 0,5 % ( m/m ) en los champúes y de 0,2 % ( m/m ) en las lociones .

2 . DEFINICIÓN

El contenido en quinina determinado por este método se expresa como porcentaje en masa ( % m/m ) del producto .

3 . PRINCIPIO

Tras el tratamiento adecuado del producto problema se realiza la determinación cuantitativa por cromatografía líquida de alta presión ( CLHP ) .

4 . REACTIVOS

Todos los reactivos deben ser de calidad analítica y , en particular , adecuados para HPLC .

4.1 . Acetonitrilo .

4.2 . Dihidrógeno-ortofosfato de potasio ( KH2PO4 ) .

4.3 . Ácido ortofosfórico al 85 % ( d (20,4) = 1,7 ) .

4.4 . Bromuro de tetrametilamonio .

4.5 . Quinina anhidra .

4.6 . Metanol .

4.7 . Solución de ácido ortofosfórico 0,1 M : disolver 11,53 g de ácido ortofosfórico ( 4.3 ) en agua en matraz aforado de 1 000 ml y completar hasta la marca de enrase .

4.8 . Solución de dihidrógeno-ortofosfato de potasio 0,1 M : disolver 13,6 g de dihidrógeno-ortofosfato de potasio ( 4.2 ) en agua en matraz aforado de 1 000 ml y completar hasta la marca de enrase .

4.9 . Solución de bromuro de tetrametilamonio 0,1 M : disolver 15,40 g de bromuro de tetrametilamonio ( 4.4 ) en agua en matraz aforado de 1 000 ml y completar hasta la marca de enrase .

4.10 . Eluyente : ácido ortofosfórico 0,1 M ( 4.7 ) /dihidrógeno-ortofosfato de sodio 0,1 M ( 4.8 ) /bromuro de tetrametilamonio 0,1 M ( 4.9 ) /agua/acetonitrilo ( 4.1 ) : 10/50/100/340/90 ( v/v/v/v/v ) .

La composición de la fase móvil puede modificarse de forma que el factor de resolución R sea igualo superior a 1,5 :

R = ( d'R2 - d'R1 ) / ( W1 + W2 )

donde :

R1 y R2 = tiempos de retención , expresados en minutos , de dos picos ,

W1 y W2 = anchura , expresada en mm , de los mismos picos a media altura ,

d' = velocidad del papel en mm/min .

4.11 . Sílice tratada con octadecilsilano , de granulometría 10 µm .

4.12 . Soluciones patrón : en una serie de matraces aforados de 100 ml , pesar respectivamente con precisión 5,0 , 10,0 , y 20 mg de quinina anhidra ( 4.5 ) . Ajustar con metanol ( 4.6 ) y agitar hasta disolución de la quinina . Filtrar cada solución por filtro ( 5.5 ) de 0,5 µm .

5 . EQUIPO

5.1 . Material normal de laboratorio .

5.2 . Baño de ultrasonidos .

5.3 . Cromatógrado de HPLC con detector ultravioleta de longitud de onda variable .

5.4 . Columna de acero inoxidable de 25 cm de longitud y 4,6 mm de diámetro interior , rellena con sílice ( 4.11 ) .

5.5 . Filtros Millipore FH 0/5 µm , o equivalentes , con equipo de filtración adecuado .

6 . PROCEDIMIENTO

6.1 . Preparación de la muestra

Pesar con precisión en un matraz aforado de 100 ml una cantidad de muestra que corresponda a unos 10 mg de quinina anhidra . Añadir 20 ml de metanol ( 4.6 ) y poner el matraz durante 20 minutos en el baño de ultrasonidos ( 5.2 ) . Completar hasta la marca de enrase con metanol ( 4.6 . ) . Mezclar la solución y filtrar una parte alícuota por el filtro ( 5.5 ) .

6.2 . Condiciones de la cromatografía

- Flujo de la fase móvil ( 4.10 ) : 1,0 ml/min .

- Longitud de onda del detector : 332 nm .

- Volumen inyectado : 10,0 µl de solución filtrada ( 6.1 ) .

- Medida del área del pico .

6.3 . Curva de calibración

Introducir al menos tres veces 10,0 µl de cada una de las soluciones patrón ( 4.12 ) . Medir el área del pico y calcular su valor medio para cada concentración .

Trazar la curva de calibración y comprobar que es una línea recta .

7 . CÁLCULO

7.1 . A partir de la curva de calibración ( 6.3 ) , calcular la cantidad de quinina anhidra , expresada en µg , contenida en el volumen inyectado .

7.2 . La concentración de quinina anhidra en la muestra , como porcentaje en masa , se obtiene por la fórmula siguiente :

% ( m/m ) de quinina anhidra = B/A

donde

B = cantidad en µg de quinina anhidra contenida en los µl de la solución filtrada ( 6.1 ) ,

A = masa de la muestra ( 6.1 ) expresada en g .

8 . REPRODUCIBILIDAD (1)

Para un contenido en quinina anhidra del orden del 0,5 % ( m/m ) , la diferencia entre los resultados de dos determinaciones paralelas realizadas con la misma muestra no debe pasar del 0,02 % .

Para un contenido en quinina anhidra del orden del 0,2 % ( m/m ) , la diferencia entre los resultados de dos determinaciones paralelas realizadas con la misma muestra no debe pasar del 0,01 % .

IDENTIFICACIÓN Y DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE SULFITOS Y BISULFITOS INORGÁNICOS

OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN

El método describe la identificación y determinación cuantitativa de los sulfitos y bisulfitos inorgánicos en productos cosméticos . Sólo puede aplicarse a productos que tengan una fase acuosa o alcohólica y para concentraciones de hasta el 0,2 % de dióxido de azufre .

A . IDENTIFICACIÓN

1 . PRINCIPIO

La muestra se calienta con ácido clorhídrico , y el dióxido de azufre liberado se identifica por su olor o con ayuda de un papel indicador .

2 . REACTIVOS

Todos los reactivos deben ser de calidad analítica .

2.1 . Acido clorhídrico ( 4M ) .

2.2 . Papel indicador de yodato de potasio con almidón , u otro papel indicador apropiado .

3 . EQUIPO

3.1 . Material normal de laboratorio .

3.2 . Matraz de 25 ml con condensador corto de reflujo .

4 . PROCEDIMIENTO

4.1 . Poner en el matraz ( 3.2 ) unos 2,5 g de muestra y 10 ml de ácido clorhídrico ( 2.1 ) .

4.2 . Mezclar y llevar a ebullición .

4.3 . Detectar el dióxido de azufre por el olor o por medio del papel indicador ( 2.2 ) .

B . DETERMINACIÓN CUANTITATIVA

1 . DEFINICIÓN

El contenido de la muestra en sulfito o bisulfito , determinado según este método , se expresa como porcentaje en masa de dióxido de azufre .

2 . PRINCIPIO

Tras acidificar la muestra , el dióxido de azufre liberado se destila y se recoge en una solución de peróxido de hidrógeno . El ácido sulfúrico formado se valora con una solución patrón de hidróxido sódico .

3 . REACTIVOS

Todos los reactivos deben ser de calidad analítica .

3.1 . Peróxido de hidrógeno al 0,2 % ( m/v ) . Este reactivo debe prepararse cada día .

3.2 . Acido ortofosfórico ( d 25/4 = 1,75 ) .

3.3 . Metanol .

3.4 . Solución patrón de hidróxido sódico 0,01 M .

3.5 . Nitrógeno .

3.6 . Indicador : mezcla 1:1 ( v/v ) de rojo de metilo al 0,03 % ( m/v ) en etanol y de azul de metileno al 0,05 % ( m/v ) en etanol . Filtrar la solución .

4 . EQUIPO

4.1 . Material normal de laboratorio .

4.2 . Destilador ( ver esquema ) .

5 . PROCEDIMIENTO

5.1 . Pesar con precisión unos 2,5 g de muestra en el matraz de destilación A ( ver esquema ) .

5.2 . Añadir 60 ml de agua y 50 ml de etanol ( 3.3 ) y mezclar .

5.3 . Poner 10 ml de peróxido de hidrógeno ( 3.1 ) , 60 ml de agua y algunas gotas de indicador ( 3.6 ) en el recipiente D destinado a recoger el destilado ( ver esquema ) . Añadir algunas gotas de hidróxido sódico ( 3.4 ) hasta que el indicador vire al verde .

5.4 . Proceder de la misma forma con el frasco lavador E ( ver esquema ) .

5.5 . Montar el destilador y ajustar el flujo de nitrógeno ( 3.5 ) a unas 60 burbujas por minuto .

5.6 . Introducir por el embudo 15 ml de ácido ortofosfórico ( 3.2 ) en el matraz de destilación A .

5.7 . Llevar rápidamente a ebullición y dejar hervir suavemente durante 30 minutos .

5.8 . Desconectar el recipiente D que contiene el destilado . Enjuagar el tubo y , a continuación , valorar con la solución de hidróxido sódico ( 3.4 ) hasta que el indicador ( 3.6 ) vire al verde .

6 . CÁLCULO

Calcular el contenido en sulfito o bisulfito de la muestra como porcentaje en masa con ayuda de la fórmula siguiente :

% ( m/m ) de dióxido de azufre = 3,2 MV/m

donde :

M = concentración molar de la solución de hidróxido sódico ( 3.4 ) ,

V = volumen en ml de hidróxido sódico ( 3.4 ) necesarios para la valoración ( 5.8 ) ,

m = masa en g de la muestra ( 5.1 ) .

7 . REPRODUCIBILIDAD (2)

Para un contenido en dióxido de azufre del 0,2 % ( m/m ) , la diferencia entre los resultados de dos determinaciones paralelas realizadas con la misma muestra no debe pasar del 0,006 % .

Destilador de dióxido de azufre según Tanner : ver D.O.

IDENTIFICACIÓN Y DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE CLORATOS DE METALES ALCALINOS

OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN

El método describe la identificación y determinación cuantitativa de los cloratos en los dentríficos y otros productos cosméticos .

A . IDENTIFICACIÓN

1 . PRINCIPIO

Los cloratos se separan de los otros halatos por cromatografía en capa fina y se detectan por la formación de yodo producida por la oxidación del yoduro de potasio .

2 . REACTIVOS

Todos los reactivos deben ser de calidad analítica .

2.1 . Soluciones patrón : soluciones acuosas de clorato , bromato y yodato de potasio al 0,2 % ( m/v ) , recién preparados .

2.2 . Disolvente de desarrollo : solución de amoníaco al 28 % ( m/v ) /acetona/butanol : 60/130/30 ( v/v/v ) .

2.3 . Solución acuosa de yoduro de potasio al 5 % ( m/v ) .

2.4 . Solución de almidón del 1 al 5 % ( m/v ) .

2.5 . Ácido clorhídrico M .

2.6 . Placas de cromatografía en capa fina , ya preparadas , recubiertas con celulosa , de 0,25 mm de espesor .

3 . EQUIPO

Material normal de laboratorio para cromatografía en capa fina .

4 . PROCEDIMIENTO

4.1 . Obtener el extracto acuoso de alrededor de 1 g de muestra , filtrar y diluir hasta unos 25 ml .

4.2 . Depositar sobre la placa ( 2.6 ) 2 µl de la solución ( 4.1 ) y 2 µl de cada una de las tres soluciones patrón ( 2.1 ) .

4.3 . Poner la placa en una cubeta y desarrollar por cromatografía ascendente sobre tres cuartos , aproximadamente , de la longitud de la placa con ayuda del disolvente ( 2.2 ) .

4.4 . Sacar la placa de la cubeta y dejar evaporar el disolvente ( unas 2 horas ) .

4.5 . Pulverizar sobre la placa la solución de yoduro de potasio ( 2.3 ) y dejar secar durante unos 5 minutos .

4.6 . Pulverizar sobre la placa la solución de almidón ( 2.4 ) y dejar secar durante unos 5 minutos .

4.7 . Pulverizar sobre la placa ácido clorhídrico ( 2.5 ) .

5 . LECTURA

En presencia de clorato aparece una mancha azul ( eventualmente parda ) después de una media hora .

Los valores de Rf son los siguientes :

Halato * Rf *

Yodato * 0 - 0,2 *

Bromato * 0,5 - 0,6 *

Clorato * 0,7 - 0,8 *

Los bromatos y yodatos reaccionan inmediatamente . Hay que cuidar de no confundir las manchas de bromatos y de cloratos .

B . DETERMINACIÓN CUANTITATIVA

1 . DEFINICIÓN

El contenido de la muestra en clorato determinado según este método se expresa como porcentaje en masa de clorato .

2 . PRINCIPIO

El clorato se reduce con polvo de cinc en medio ácido . El cloruro formado se valora por potenciometría con nitrato de plata . Una determinación similar previa a la reducción permite revelar la presencia eventual de haluros .

3 . REACTIVOS

Todos los reactivos deben ser de calidad analítica .

3.1 . Ácido acético al 80 % ( m/m ) .

3.2 . Cinc en polvo

3.3 . Solución patrón de nitrato de plata 0,1 M .

4 . EQUIPO

4.1 . Material normal de laboratorio .

4.2 . Potenciómetro equipado con electrodo indicador de plata .

5 . PROCEDIMIENTO

5.1 . Preparación de la muestra

Pesar con precisión una cantidad ( m ) de unos 2 g en un tubo de centrífuga . Añadir unos 15 ml de ácido acético ( 3.1 ) y mezclar cuidadosamente . Esperar 30 minutos y centrifugar durante 15 minutos a 2 000 rev/min . Decantar el sobrenadante en un matraz aforado de 50 ml . Repetir dos veces la centrifugación añadiendo 15 ml de ácido acético ( 3.1 ) al sedimento . Reunir las soluciones en el mismo matraz aforado y completar hasta la marca de enrase con ácido acético ( 3.1 ) .

5.2 . Reducción del clorato

Tomar 20 ml de la solución ( 5.1 ) y añadir 0,6 g de cinc en polvo ( 3.2 ) . Llevar a ebullición en un matraz con condensador de reflujo . Después de 30 minutos de ebullición , dejar enfriar y filtrar . Enjuagar el matraz con agua y lavar con ella el filtro . Mezclar el filtrado y el agua del enjuague .

5.3 . Determinación del cloruro

Valorar la solución ( 5.2 ) con nitrato de plata ( 3.3 ) utilizando el potenciómetro ( 4.2 ) . Valorar de la misma forma 20 ml de la solución ( 5.1 ) con nitrato de plata ( 3.3 ) .

Si el producto contiene derivados de bromo o de yodo que puedan liberar bromuros o yoduros tras la reducción , la curva de valoración presentará varios puntos de inflexión . En este caso , el volumen de la solución patrón ( 3.3 ) que corresponde al cloruro viene dado por la diferencia entre los volúmenes correspondientes al último y al penúltimo punto de inflexión .

6 . CÁLCULO

El contenido de la muestra en clorato se calcula por la fórmula :

% ( m/m ) de clorato = ( 20,9 ( V - V' ) M ) /m

donde :

V = volumen en ml de la solución de nitrato de plata ( 3.3 ) utilizada para valorar la solución ( 5.2 ) ,

V' = volumen en ml de la solución de nitrato de plata ( 3.3 ) utilizada para valorar la solución ( 5.1 ) ,

M = molaridad de la solución de nitrato de plata ( 3.3 ) ,

m = masa en g de la muestra ( 85.1 ) .

7 . REPRODUCIBILIDAD (1)

Para un contenido en clorato del 3 al 5 % ( m/m ) , la diferencia entre los resultados de dos determinaciones paralelas realizadas con la misma muestra no debe pasar del 0,07 % ( m/m ) .

IDENTIFICACIÓN Y DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DEL YODO SÓDICO

OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN

El método sirve para la identificación y la determinación cuantitativa del yodato sódico en productos cosméticos que se eliminan inmediatamente después de usarse .

A . IDENTIFICACIÓN

1 . PRINCIPIO

El yodato sódico se separa de los otros halatos por cromatografía en capa fina y se identifica por la oxidación del yoduro a yodo .

2 . REACTIVOS

Todos los reactivos deben ser de calidad analítica .

2.1 . Soluciones patrón : soluciones acuosas de clorato , bromato y yodato de potasio al 0,01 % ( m/v ) , recién preparadas .

2.2 . Disolvente de desarrollo : solución de amoníaco al 28 % ( m/v ) /acetona/butanol : 60/130/30 ( v/v/v ) .

2.3 . Solución acuosa de yoduro de potasio al 5 % ( m/v ) .

2.4 . Solución de almidón del 1 al 5 % ( m/v ) .

2.5 . Ácido clorhídrico M .

3 . EQUIPO

3.1 . Placas de cromatografía en capa fina , ya preparadas , recubiertas con celulosa , de 0,25 mm de espesor .

3.2 . Material normal de laboratorio para cromatografía en capa fina .

4 . PROCEDIMIENTO

4.1 . Obtener el extracto acuoso de alrededor de 1 g de muestra , filtrar y diluir hasta unos 10 ml .

4.2 . Depositar 2 µl de esta solución sobre la línea de base de la placa ( 3.1 ) , así como 2 µl de cada una de las tres soluciones patrón ( 2.1 ) .

4.3 . Poner la placa en una cubeta y desarrollar por cromatografía ascendente sobre tres cuartos , aproximadamente , de la longitud de la placa con ayuda del disolvente ( 2.2 ) .

4.4 . Sacar la placa de la cubeta y dejar evaporar el disolvente a temperatura ambiente unas 2 horas .

4.5 . Pulverizar sobre la placa la solución de yoduro de potasio ( 2.3 ) y dejar secar durante unos 5 minutos .

4.6 . Pulverizar sobre la placa la solución de almidón ( 2.4 ) y dejar secar durante unos 5 minutos .

4.7 . Pulverizar finalmente el ácido clorhídrico ( 2.5 ) .

5 . LECTURA

En presencia de yodato aparece inmediatamente una mancha azul ( también puede ser parda o hacerse parda con el tiempo ) , con el valor de R f aproximadamente entre 0 y 0,2 .

Los bromatos reaccionan inmediatamente , con valores de R f de 0,5 a 0,6 , y los cloratos reaccionan después de unos 30 minutos , con valores de R f de 0,7 a 0,8 .

B . DETERMINACIÓN CUANTITATIVA

1 . DEFINICIÓN

El contenido de la muestra en yodato sódico determinado por este método se expresa como porcentaje en masa de yodato sódico .

2 . PRINCIPIO

El yodato sódico se disuelve en agua y se determina por cromatografía líquida de alta presión ( HPLC ) , utilizando una columna de fase inversa C18 y otra columna de intercambio amónico , dispuestas en serie .

3 . REACTIVOS

Todos los reactivos deben ser de calidad analítica y , en particular , adecuados para HPLC .

3.1 . Ácido clorhídrico , 4M .

3.2 . Solución acuosa de sulfito sódico al 5 % ( m/v ) .

3.3 . Solución madre de yodato sódico : 50 mg de yodato sódico en 100 ml de agua .

3.4 . Dihidrógeno-ortofosfato de potasio .

3.5 . Ortofosfato disódico dihidratado .

3.6 . Fase móvil para la HPLC : disolver 3,88 g de dihidrógeno-ortofosfato de potasio ( 3.4 ) y 1,19 g de ortofosfato disódico dihidratado ( 3.5 ) en 1l de agua .

El pH de la solución obtenida es 6,2 .

3.7 . Papel indicador universal , pH 1-11 .

4 . EQUIPO

Material normal de laboratorio

4.1 . Filtro de papel de 110 mm de diámetro , Schleicher y Schuell n º 575 o equivalente .

4.2 . Cromatógrafo de HPLC con detector ultravioleta de longitud de onda variable .

4.3 . Dos columnas dispuestas en serie , cada una de 120 mm de longitud y 4,6 mm de diámetro interior ; la primera columna rellena con Nucleosil ( R ) 5C18 o equivalente , y la segunda con Vydac , TM-301-SB o equivalente .

5 . PROCEDIMIENTO

5.1 . Preparación de la muestra

5.1.1 . Muestras fluidas ( champúes )

Pesar con precisión alrededor de 1,0 g de muestra en un matraz aforado de 10 ml con tapón esmerilado . Completar con agua hasta la marca de enrase y mezclar . En caso necesario filtrar la solución . Determinar la cantidad de yodato en la solución por HPLC siguiendo el punto 5.2 .

5.1.2 . Muestras sólidas ( jabón )

Dividir finalmente una parte de la muestra y pesar con precisión alrededor de 1,0 g en una probeta graduada de 100 ml un tapón esmerilado . Completar con agua hasta 50 ml y agitar enérgicamente durante 1 minuto . Centrifugar y filtrar a través de un filtro de papel ( 4.1 ) o bien dejar reposar la mezcla durante una noche al menos , agitar enérgicamente la solución gelatinosa y filtrarla por un filtro de papel ( 4.1 ) .

Determinar el yodato en el filtrado por HPLC siguiendo el punto 5.2 .

5.2 . Cromatografía

Flujo : 1 ml/min .

Longitud de onda del detector : 210 nm .

Volumen inyectado : 10 µl .

Medida : área del pico .

5.3 . Calibración

Pipetear respectivamente 1,0 , 2,0 , 5,0 , 10,0 y 20,0 ml de la solución madre de yodato sódico ( 3.3 ) en matraces aforados de 50 ml , completar hasta la marca de enrase con agua y agitar . Las soluciones así obtenidas contienen respectivamente 0,01 , 0,02 , 0,05 , 0,10 y 0,20 mg de yodato sódico por ml . Inyectar 10 µl de cada solución patrón en el cromatográfo ( 4.2 ) . Determinar el área del pico del yodato y trazar la curva de calibración relacionando el área del pico del yodato con la concentración de yodato sódico .

6 . CÁLCULO

Calcular el contenido en yodato sódico como porcentaje en masa según la fórmula :

% ( m/m ) de yodato sódico = V c/10 m

donde :

m = masa de la muestra ( 5.1 ) , expresada en g ,

V = volumen total , expresado en ml , de la solución de la muestra obtenida según el punto 5.1 ,

c = concentración de yodato sódico , expresada en mg/ml , obtenida a partir de la curva de calibración .

7 . REPRODUCIBILIDAD (1)

Para un contenido en yodato sódico del 0,1 % ( m/m ) , la diferencia entre los resultados de dos determinaciones paralelas realizadas con la misma muestra no debe pasar del 0,002 % .

8 . CONFIRMACIÓN

8.1 . Principio

En una disolución acidificada de un producto cosmético , el yodato ( IO3 - ) se reduce a yoduro ( I - ) por la acción del sulfito y la solución obtenida se examina por HPLC . Si hay algún pico con un tiempo de retención que corresponde al tiempo de retención del yodato y desaparece después de tratar con sulfito , el pico original puede considerarse de yodato con la mayor probabilidad .

8.2 . Procedimiento

Pipetear en un matraz Erlenmeyer 5 ml de la solución problema obtenida en el punto 5.1 . Ajustar el pH de la solución a un valor inferior o igual a 3 utilizando ácido clorhídrico ( 3.1 ) y papel indicador universal ( 3.7 ) . Añadir tres gotas de la solución de sulfito sódico ( 3.2 ) y agitar . Inyectar 10 µl de la solución en el cromatógrafo ( 4.2 ) . Comparar el cromatograma con el obtenido de la forma descrita en el punto 5 para la misma muestra .

(1) Según la norma ISO 5725 .