PRIMERA DIRECTIVA DE LA COMISIÓN

de 25 de octubre de 1985

relativa a métodos de análisis de caseínas y caseinatos alimentarios

( 85/503/CEE )

LA COMISIÓN DE LAS COMUNIDADES EUROPEAS ,

Visto el Tratado constitutivo de la Comunidad Económica Europea ,

Visto la Directiva 83/417/CEE del Consejo , de 25 de julio de 1983 , relativa a la aproximación de legislaciones de los Estados miembros sobre ciertas lactoproteínas ( caseínas y caseinatos ) destinadas a la alimentación humana (1) , y en particular la letra b ) de su artículo 9 ,

Considerando que la letra b ) del artículo 9 de la Directiva 83/417/CEE exige la determinación de métodos de análisis comunitarios a fin de controlar la composición de ciertas cafeínas y cafeinatos alimentarios ;

Considerando que es posible adoptar una primera serie de métodos para los que se han efectuado los correspondientes estudios ;

Considerando que las medidas establecidas por la presente Directiva concuerdan con el dictamen del Comité permanente de géneros alimentarios ,

HA ADOPTADO LA PRESENTE DIRECTIVA :

Artículo 1

Los Estados miembros tomarán todas las medidas que se precisen a fin de garantizar que los análisis necesarios para la verificación de los criterios indicados en el Anexo I se efectúen conforme a los métodos descritos en el Anexo II .

Artículo 2

Los Estados miembros aplicarán las disposiciones legales , reglamentarias y administrativas necesarias para cumplir la presente Directiva a más tardar el 1 de mayo de 1987 , e informarán de ello inmediatamente a la Comisión .

Artículo 3

Los destinatarios de la presente Directiva serán los Estados miembros .

Hecho en Bruselas , el 25 de octubre de 1985 .

Por la Comisión

COCKFIELD

Vicepresidente

(1) DO n º L 237 de 26 . 8 . 1983 , p. 25 .

ANEXO I

OBJETO DE LA PRESENTE DIRECTIVA COMUNITARIA SOBRE MÉTODOS DE ANÁLISIS DE CASEÍNAS Y CASEINATOS ALIMENTARIOS

I . Disposiciones generales

II . Determinación del contenido en humedad de :

- las caseínas ácidas , por el método 1 , Anexo II

- las caseínas - cuajos , por el método 1 , Anexo II

- los caseinatos , por el método 1 , Anexo II

III . Determinación del contenido en proteínas de :

- las caseínas ácidas , por el método 2 , Anexo II

- las caseínas - cuajos , por el método 2 , Anexo II

- los caseinatos , por el método 2 , Anexo II

IV . Determinación de la acidez valorable de :

- las caseínas ácidas , por el método 3 , Anexo II

V . Determinación de cenizas ( P2O5 ) incluido ) de :

- las caseínas ácidas , por el método 4 , Anexo II

- las caseínas - cuajos , por el método 5 , Anexo II

VI . Determinación del pH de :

- los caseinatos , por el método 6 , Anexo II

ANEXO II

MÉTODOS DE ANÁLISIS DE LA COMPOSICIÓN DE CASEÍNAS Y CASEINATOS ALIMENTARIOS

DISPOSICIONES GENERALES

1 . PREPARACIÓN DE LA MUESTRA DE ANÁLISIS

1.1 . Observación general

La masa de la muestra presentada al laboratorio a efectos de su análisis debe ser de 200 g como mínimo .

1.2 . Preparación de la muestra para el análisis en laboratorio

1.2.1 . Homogeneizar cuidadosamente la muestra de laboratorio , triturar los posibles grumos , sacudiendo y girando con frecuencia el recipiente ( si es necesario , tras haber transferido toda la muestra a un recipiente hermético al aire de capacidad doble del volumen de la muestra a fin de poder efectuar esta operación ) .

1.2.2 . Verter en el tamiz 3.3 una parte lo más representativa posible de la muestra cuidadosamente homogeneizada ( alrededor de 50 g ) .

1.2.3 . Si la totalidad de los 50 g atraviesa completa o casi completamente el tamiz ( un 95 % en peso , como mínimo ) , utilizar para la determinación la muestra preparada según 1.2.1 .

1.2.4 . Si no es así , moler los 50 g empleando el dispositivo de moler ( 3.4 ) hasta que cumplan el criterio de tamizado ( 1.2.3 ) . Pasar inmediatamente toda la muestra tamizada a un recipiente hermético al aire de capacidad doble del volumen de la muestra , y homogeneizar cuidadosamente agitando y girando continuamente . Durante estas operaciones , tomar precauciones para evitar toda modificación del contenido en agua del producto .

1.2.5 . Tras preparar la muestra para la prueba , proceder todo lo rápidamente posible a la determinación .

1.3 . Recipientes

La muestra debe mantenerse siempre en un recipiente hermético al aire y a la humedad .

2 . REACTIVOS

2.1 . Agua

2.1.1 . El agua utilizada para la preparación de solución , de dilución o de solución de lavado deberá ser agua destilada o agua desmineralizada de pureza al menos equivalente .

2.1.2 . Cada vez que se haga referencia a una « solución » o a una « dilución » sin otra indicación , se tratará de una « solución acuosa » o de una « dilución agua » .

2.2 . Sustancias químicas

Salvo cuando se indique lo contrario , todas las sustancias químicas deberán ser de calidad analítica reconocida .

3 . MATERIAL

3.1 . Lista de material

Las listas de material sólo comprenderán artículos que tengan un empleo determinado y que respondan a características particulares .

3.2 . Balanza analítica

Se entenderá por balanza analítica una balanza con una precisión de pesada de al menos 0,1 mg .

3.3 . Tamiz

El tamiz deberá poseer un diámetro de 200 mm e ir provisto de una tapa y un recipiente colector . La tela metálica del tamiz ha de tener una abertura nominal de 500 µm . Las tolerancias de abertura y el diámetro del hilo metálico corresponderán a los valores indicados en la norma ISO/3310/1 ( Tamiz para pruebas - normas técnicas y comprobación - primera parte : tela metálica ISO/3310/1 - 1975 , o la última edición de esta norma ) .

3.4 . Dispositivo moledor

Permite , si es necesario , moler la muestra de laboratorio sin provocar un calor excesivo y sin modificar la humedad ( 1.2.4 ) . No deberá utilizarse un moledor de martillo .

4 . EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS

4.1 . Resultados

Si se cumplen las condiciones de reproducibilidad aplicables a un método , se tomará como resultado la media aritmética de dos determinaciones .

4.2 . Cálculo de porcentaje

Salvo cuando se indique lo contrario , deberán calcularse los resultados como porcentaje en masa de la muestra .

5 . ACTA DE LA PRUEBA

El acta de la prueba precisará el método analítico empleado y los resultados obtenidos . Incluirá también todos los detalles del procedimiento no previstos en el método analítico o facultativos , así como todas las circunstancias que hayan podido influenciar los resultados obtenidos . El acta de la prueba dará todas informaciones necesarias para la identificación completa de la muestra .

MÉTODO 1

DETERMINACIÓN DEL CONTENIDO EN HUMEDAD

1 . OBJETO Y ÁMBITO DE APLICACIÓN

El presente método permite determinar el contenido en humedad de :

- las caseínas ácidas ,

- las caseínas - cuajos ,

- los caseinatos .

2 . DEFINICIÓN

Por contenido en humedad de caseínas y caseinatos se entenderá la pérdida de masa que se obtiene aplicando el método descrito a continuación .

3 . PRINCIPIO

Desecación a presión atmosférica , en una estufa a 102 ° C ± 1 ° C , de una muestra de prueba hasta obtener una masa constante . Se calcula la pérdida de masa como porcentaje en masa de la muestra .

4 . EQUIPO

4.1 . Balanza analítica

4.2 . Cápsulas

De fondo plano y de material inalterable en las condiciones de la prueba ( por ejemplo de níquel , aluminio , acero inoxidable o vidrio ) . Deben ir provistos de tapas que ajusten perfectamente pero que puedan retirarse rápidamente . Dimensiones adecuadas : diámetro de 60 a 80 mm y profundidad de unos 20 mm .

4.3 . Estufa a presión atmosférica

Bien ventilada y provista de un dispositivo de termoregulación ( temperatura : 102 ° C ± 1 ° C ) . La temperatura ha de ser uniforme en todo el interior de la estufa .

4.4 . Desecador

Deberá contener gel de sílice activado recientemente , provisto de un indicador hidrométrico , o un dispositivo de desecación equivalente .

4.5 . Instrumento para manipular las cápsulas

Por ejemplo , pinzas de laboratorio .

5 . PROCEDIMIENTO

5.1 . Preparación de la muestra para el ensayo

Véase el punto 1.2 de las « Disposiciones generales » .

5.2 . Preparación de las cápsulas

5.2.1 . Colocar la cápsula destapada y su tapa ( 4.2 ) en la estufa ( 4.3 ) , regulada a 102 ° C ± 1 ° C , durante al menos una hora .

5.2.2 . Colocar la tapa sobre la cápsula , introducir la cápsula así tapada en el desecador ( 4.4 ) , dejar enfriar a temperatura ambiente y pesar con precisión de 0,1 mg ( m0 ) .

5.3 . Muestra de prueba

Introducir de 3 a 5 g de la muestra para pruebas ( 5.1 ) en la cápsula , tapar ésta y pesar con precisión de 0,1 mg ( m1 ) .

5.4 . Determinación

5.4.1 . Destapar la cápsula y colocarla junto con la tapa en la estufa , regulada a 102 ° C ± 1 ° C ; dejarla allí durante 4 horas .

5.4.2 . Colocar la tapa sobre la cápsula , introducirla en el desecador , dejar enfriar a temperatura ambiente y pesar con precisión de 0,1 mg .

5.4.3 . Destapar la cápsula y colocarla junto con la tapa en la estufa durante una hora . Repetir a continuación la operación descrita en 5.4.2 .

5.4.4 . Si la masa obtenida según 5.4.3 es inferior en más de 1 mg a la obtenida según 5.4.2 , repetir la operación descrita en 5.4.3 .

Si se obtiene un aumento de la masa , utilizar para el cálculo la cifra más baja registrada ( 6.1 ) .

La duración total del secado no sobrepasa por lo general 6 horas .

Designemos como m2 la masa final registrada , en gramos .

6 . EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS

6.1 . Método de cálculo

La pérdida de masa de la muestra de prueba , expresada en porcentaje de masa , viene dado por la fórmula siguiente :

( m1 - m2 ) / ( m1 - m0 ) × 100

donde

m0 = masa en gramos de la cápsula y su tapa tras la operación 5.2 ,

m1 = masa en gramos de la cápsula , su tapa y la muestra de prueba antes del secado ( 5.3 ) ,

m2 = masa en gramos de la cápsula , su tapa y la muestra de prueba tras el secado ( 5.4.3 . o 5.4.4 ) .

Expresar el resultado final con precisión de 0,01 % .

6.2 . Reproducibilidad

La diferencia entre los resultados de dos determinaciones efectuadas simultáneamente con un breve intervalo sobre la misma muestra , en las mismas condiciones y por el mismo analista , no debe sobrepasar los 0,1 g de humedad por 100 g de producto .

La probabilidad de no sobrepasar este valor es del 95 % de los casos .

MÉTODO 2

DETERMINACIÓN DEL CONTENIDO EN PROTEÍNAS

1 . OBJETO Y ÁMBITO DE APLICACIÓN

El presente método permite determinar el contenido en proteínas de :

- las caseínas ácidas ,

- las caseínas - cuajos ,

- los caseinatos ,

con excepción de los caseinatos que contengan amonio u otros compuestos de amonio , o nitrógeno no proteico .

2 . DEFINICIÓN

Contenido en proteínas : contenido en nitrógeno determinado por el método aquí descrito , multiplicado por 6,38 y expresado como porcentaje en masa .

3 . PRINCIPIO

Se ataca una muestra de prueba con una mezcla de sulfato de potasio y de ácido sulfúrico en presencia de sulfato de cobre ( II ) como catalizador , a fin de transformar el nitrógeno orgánico en nitrógeno amoniacal . Se destila el amoniaco y se absorbe en una solución de ácido bórico . Se valora mediante una solución estándar de ácido clorhídrico . Se obtiene el contenido en proteínas multiplicando el contenido en nitrógeno por 6,38 .

4 . REACTIVOS

4.1 . Ácido sulfúrico concentrado , D20 1,84 g/ml

4.2 . Sulfato de potasio anhidro ( K2SO4 )

4.3 . Sulfato de cobre ( II ) pentahidratado ( CuSO4-5H2O )

4.4 . Sacarosa ( C12H22O11 )

4.5 . Ácido bórico , solución de 40 g/l .

4.6 . Hidróxido sódico , solución concentrada al 30 % en masa , exenta de carbonato .

4.7 . Ácido clorhídrico : solución estándar a 0,1 mol/l .

4.8 . Indicador mixto : mezclar a volúmenes iguales una solución de rojo de metilo de 2 g/l en etanol de al menos 95 % ( en volumen ) , y una solución de azul de metileno de 1 g/l en etanol de al menos 95 % ( en volumen ) .

5 . EQUIPO

5.1 . Balanza analítica

5.2 . Matraz de Kjeldahl , 500 ml

5.3 . Aparato de descomposición proteica

Debe permitir mantener inclinado el matraz de Kjeldahl ( 5.2 ) e ir provisto de un sistema de calentamiento que evite el calentamiento de la parte del matraz situada por encima del nivel del líquido .

5.4 . Condensador de tubo interior rectilíneo

5.5 . Tubo de salida

Con una ampolla de seguridad unída al extremo inferior del condensador ( 5.4 ) por una conexión en vidrio esmerilado o un tubo de goma . En este último caso , los extremos de vidrio han de hallarse próximos entre sí .

5.6 . Deflegmador

Unido al matraz de Kjeldahl ( 5.2 ) y al condensador ( 5.4 ) mediante tapones de goma bien ajustados .

5.7 . Matraz Erlenmeyer , 500 ml

5.8 . Probetas graduadas , 50 ml y 100 ml

5.9 . Bureta de 50 ml , graduaciones a 0,1 ml

5.10 . Reguladores de ebullición

5.10.1 . Para la descomposición proteica : trozos pequeños de porcelana o bolas de vidrio .

5.10.2 . Para la destilación : gránulos pequeños de piedra pómez .

6 . PROCEDIMIENTO

6.1 . Preparación de la muestra para la prueba

Véase el punto 1.2 de las « Disposiciones generales » .

6.2 . Demostración del nitrógeno amoniacal

Si se supone la presencia de caseinato de amonio o de otros compuestos amoniacales , efectuar la prueba siguiente : en un pequeño matraz Erlenmeyer , añadir a 1 g de muestra 10 ml de agua y 100 mg de óxido de magnesio . Enjuagar el óxido adherido a la pared de vidrio , tapar el matraz con un tapón de corcho , metiendo entre el tapón y el cuello del matraz una tira de papel tornasol humectada . Mezclar con cuidado el contenido del matraz y calentar éste en un baño a unos 60 ° C . Si el papel tornasol vira a azul en los 15 minutos siguientes , esto revela la presencia de amoniaco ; en este caso , el método no es aplicable ( véase el punto 1 ) .

6.3 . Prueba en blanco

Simultáneamente a la determinación del contenido en nitrógeno de la prueba , efectuar una prueba en blanco sustituyendo la muestra de prueba por 0,5 g de sacarosa ( 4.4 ) y utilizando el mismo equipo , las mismas cantidades de reactivo y el mismo procedimiento que los descritos en el punto 6.5 . Si en la prueba en blanco la valoración sobrepasa 0,5 ml de la solución ácida de 0,1 mol/l , deberán verificarse los reactivos y purificarse o sustituirse el reactivo o los reactivos impuros .

6.4 . Muestra de prueba

Introducir en el matraz de Kjeldahl ( 5.2 ) de 0,3 a 0,4 g de la muestra ( 6.1 ) , pesados con precisión de 0,1 mg .

6.5 . Determinación

6.5.1 . Introducir en el matraz algunos trozos de porcelana o algunas bolas de vidrio ( 5.10.1 ) , y aproximadamente 10 g de sulfato de potasio anhidro ( 4.2 ) .

Añadir 0,2 g de sulfato de cobre ( II ) ( 4.3 ) y enjuagar el cuello del matraz con un poco de agua . Añadir 20 ml de ácido sulfúrico concentrado ( 4.1 ) y mezclar el contenido del matraz .

Calentar suavemente sobre el aparato de descomposición ( 5.3 ) hasta que desaparezca la espuma . Hacer ebullir suavemente hasta que la solución esté limpia y persista el color verdiazul pálido . Agitar el matraz de tiempo en tiempo durante el calentamiento .

Proseguir la ebullición regulando el calentamiento , de forma que los vapores se condensen en el centro del cuello del matraz . Continuar calentando durante 90 minutos , evitando todo sobrecalentamiento local .

Dejar enfriar a temperatura ambiente . Añadir con precaución unos 200 ml de agua y algunos granos de piedra pómez ( 5.10.2 ) . Mezclar y dejar enfriar de nuevo .

6.5.2 . Introducir en el matraz Erlenmeyer ( 5.7 ) 50 ml de la solución de ácido bórico ( 4.5 ) y 4 gotas del indicador ( 4.8 ) . Mezclar . Colocar el matraz Erlenmeyer bajo el condensador ( 5.4 ) de manera que la extremidad del tubo de salida ( 5.5 ) esté sumergida en la solución de ácido bórico . Mediante una probeta graduada ( 5.8 ) introducir en el matraz de Kjeldahl 80 ml de la solución de hidróxido sódico ( 4.6 ) . Durante esta operación debe mantenerse el matraz inclinado de forma que la solución de hidróxido de sodio fluya a lo largo de la pared y forma una capa en la parte inferior del matraz .

Volver a acoplar inmediatamente el matraz de Kjeldahl al condensador por medio del deflegmador ( 5.6 ) .

Mezclar el contenido del matraz de Kjedahl haciéndolo girar suavemente . Hacer ebullir suavemente al principio , evitando toda formación de espuma . Continuar la destilación de forma que se obtengan 150 ml de destilado en 30 minutos , aproximadamente .

El destilado debe poseer una temperatura inferior a 25 ° C .

Unos dos minutos tras el término de la destilación , bajar el matraz Erlenmeyer de manera que el extremo del tubo de salida no esté ya sumergido en la solución ácida , y enjuagar dicho extremo con un poco de agua . Hacer cesar el calentamiento , levantar el tubo de salida y enjuagar sus paredes interiores y exteriores con un poco de agua , recogiendo el agua de enjuagado en el matraz Erlenmeyer .

6.5.3 . Valorar el destilado del matraz Erlenmeyer mediante la solución estándar de ácido clorhídrico ( 4.7 ) .

7 . EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS

7.1 . Modo de cálculo y fórmula

El contenido en proteínas de la muestra , expresado en porcentaje en masa , es igual a :

( ( V1 - V2 ) × T × 14 × 100 × 6,38 ) / ( m × 1 000 ) = 8,932 ( V1 - V2 ) × T ) /m

donde

V1 = volumen en ml de la solución estándar de ácido clorhídrico ( 4.7 ) utilizado para la determinación ( 6.5 ) ,

V2 = volumen en ml de la solución estándar de ácido clorhídrico ( 4.7 ) utilizada para el ensayo en blanco ,

T = concentración de la solución estándar de ácido clorhídrico ( 4.7 ) en mol/l ,

m = masa , en g , de la muestra de prueba .

Expresar el contenido en proteínas con precisión de 0,1 % .

7.2 . Reproducibilidad

La diferencia entre los resultados de dos determinaciones efectuadas simultáneamente o con un breve intervalo , en las mismas condiciones y por el mismo analista , no debe sobrepasar los 0,5 g de proteínas por 100 g de producto .

Este valor tiene una probabilidad de no sobrepasarse del 95 % de los casos , si el método se lleva a cabo de forma correcta .

MÉTODO 3

DETERMINACIÓN DE LA ACIDEZ VALORABLE

1 . OBJETO Y ÁMBITO DE APLICACIÓN

El presente método permite determinar la acidez valorable de las caseínas ácidas .

2 . DEFINICIÓN

Acidez valorable de las caseínas ácidas : volumen , en mililitros de solución de hidróxido sódico de 0,1 mol/l , necesario para neutralizar un extracto acuoso de 1 g de producto .

3 . PRINCIPIO

Preparación y filtración de un extracto acuoso de la muestra a 60 ° C . Valoración del filtrado mediante una solución estándar de hidróxido sódico , en presencia de fenolftaleína como indicador .

4 . REACTIVOS

El agua utilizada para la aplicación del método o la preparación de los reactivos debe estar exenta de anhídrido carbónico ( a tal fin , calentarla 10 minutos antes de usarla ) .

4.1 . Hidróxido sódico , solución a 0,1 mol/l .

4.2 . Fenolftaleína utilizada como indicador , solución de 1 g en 100 ml de etanol ( 95 % en volumen ) , neutralizada con relación a un indicador .

5 . EQUIPO

5.1 . Balanza analítica

5.2 . Matraz Erlenmeyer , 500 ml , con cuello y tapón esmerilados .

5.3 . Pipeta graduada a 100 ml .

5.4 . Pipeta , adecuada para medir 0,5 ml de la solución indicadora ( 4.2 ) .

5.5 . Matraz Erlenmeyer , 250 ml .

5.6 . Probeta graduada , 250 ml .

5.7 . Bureta con graduaciones de 0,1 ml .

5.8 . Baño de agua , regulable a una temperatura de 60 ± 2 ° C .

5.9 . Filtro adecuado

6 . PROCEDIMIENTO

6.1 . Para la preparación de la muestra para la prueba , véase el punto 1.2 de las « Disposiciones generales » .

6.2 . Muestra de prueba

Pesar unos 10 g de la muestra con precisión de 10 mg e introducirlos en el matraz Erlenmeyer ( 5.2 ) .

6.3 . Determinación

Mediante la probeta de 250 ml ( 5.6 ) , añadir 200 ml de agua recientemente ebullida y enfriada , calentada previamente a 60 ° C . Cerrar el matraz , mezclar por agitación de éste y colocarlo en el baño a 60 ° C ( 5.8 ) durante 30 minutos . Agitar el matraz cada 10 minutos , aproximadamente .

Filtrar y dejar enfriar el filtrado a unos 20 ° C . El filtrado debe ser límpido .

Tomar con la pipeta ( 5.3 ) 100 ml del filtrado enfriado e introducirlos en el matraz Erlenmeyer ( 5.5 ) . Añadir 0,5 ml de la solución indicadora de fenolftaleína ( 4.2 ) mediante la pipeta ( 5.4 ) . Valorar mediante la solución estándar de hidróxido sódico ( 4.1 ) hasta que aparezca un color rosa pálido persistente durante al menos 30 segundos . Anotar el volumen utilizado con precisión de a 0,01 ml .

7 . EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS

7.1 . Método y fórmula de cálculo

La acidez valorable de la caseína viene dada por la fórmula :

( 20 × V × T ) /m

donde

V = volumen en ml de la solución estándar de hidróxido sódico ( 4.1 ) utilizada ,

T = concentración , en mol/l , de la solución estándar de hidróxido sódico ( 4.1 ) ,

m = masa , en g , de la muestra de prueba .

Expresar la acidez valorable con dos decimales .

7.2 . Reproducibilidad

La diferencia entre los resultados de dos determinaciones efectuadas simultáneamente o con un breve intervalo sobre la misma muestra , en las mismas condiciones y por el mismo analista no debe sobrepasar 0,02 ml de solución de hidróxido sódico para 1 g de producto .

Este valor tiene una probabilidad de no ser sobrepasado del 95 % de los casos .

MÉTODO 4

DETERMINACIÓN DE CENIZAS ( P2O5 incluido )

1 . OBJETO Y ÁMBITO DE APLICACIÓN

El presente método permite determinar las « cenizas » de : las caseínas ácidas ( P2O5 incluido ) .

2 . DEFINICIÓN

Cenizas ( P2O5 incluido ) : sustancias determinadas según el método descrito a continuación , expresadas como porcentaje en masa .

3 . PRINCIPIO

Incineración de una muestra de prueba a 825 ° C ± 25 ° C en presencia de acetato de magnesio , destinado a fijar la totalidad del fósforo de origen orgánico . Se pesa el residuo y se sustrae la masa de cenizas procedente del acetato de magnesio .

4 . REACTIVOS

4.1 . Acetato de magnesio tetrahidratado

Mg (CH3CO2)2 , 4H2O , solución de 120 g/l .

5 . EQUIPO

5.1 . Balanza analítica

5.2 . Pipeta graduada a 5 ml .

5.3 . Cápsulas de silicio o platino , de unos 70 mm de diámetro y de 25 a 50 mm de profundidad .

5.4 . Estufa de secado regulable a 102 ° C ± 1 ° C .

5.5 . Horno eléctrico de circulación de aire , regulable a 825 ° C ± 25 ° C .

5.6 . Baño de agua en ebullición

5.7 . Desecador con gel de sílice recientemente activado , provisto de un indicador hidrométrico , o un deshidratante equivalente .

6 . PROCEDIMIENTO

6.1 . Preparación de la muestra para la prueba

Véase el punto 1.2 de las « Disposiciones generales » .

6.2 . Preparación de las cápsulas

Colocar 2 cápsulas ( 5.3 ) A y B en el horno eléctrico ( 5.5 ) , regulado a 825 ° C ± 25 ° C , durante 30 minutos . Dejarlas enfriar un poco antes de colocarlas en un desecador ( 5.7 ) hasta que se enfríen a la temperatura ambiente , y pesarlas con precisión de 0,1 mg .

6.3 . Muestra de prueba

Pesar con precisión de 0,1 mg unos 3 g de la muestra ( 6.1 ) , directamente sobre una de las cápsulas preparadas ( A ) .

6.4 . DETERMINACIÓN

Introducir en la cápsula A , mediante la pipeta ( 5.2 ) , 5 ml exactos de la solución de acetato de magnesio ( 4.1 ) , de manera que se humedezca toda la muestra de prueba , y dejar reposar durante 20 minutos .

En la otra cápsula preparada ( B ) , introducir con la pipeta ( 5.2 ) 5 ml exactos de la solución de acetato de magnesio ( 4.1 ) .

Evaporar hasta la sequedad el contenido de ambas cápsulas A y B , en el baño de agua en ebullición ( 5.6 ) .

Colocar las dos cápsulas en la estufa ( 5.4 ) , regulada a 102 ° C ± 1 ° C , durante 30 minutos .

Colocar la cápsula A , con su contenido , sobre una llama pequeña , una placa caliente o bajo una lámpara de infrarojos , hasta que la muestra esté completamente carbonizada y vigilando que ésta no arda .

Colocar las dos cápsulas A y B en un horno eléctrico ( 5.5 ) regulado a 825 ° C ± 25 ° C , y dejarlas allí durante al menos 1 hora , hasta que las partículas carbonosas de la cápsula A desaparezcan completamente . Dejar enfriar un poco ambas cápsulas y colocarlas en el desecador ( 5.7 ) hasta que alcancen la temperatura ambiente , pesándolas luego con precisión de 0,1 mg .

Repetir las operaciones de calentamiento durante unos 30 minutos en el horno eléctrico , de enfriamiento y de pesada hasta obtener una masa constante ( con precisión de 1 mg ) , anotando la masa mínima .

7 . EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS

7.1 . Método y fórmula de cálculo

Las cenizas ( P2O5 incluido ) de la muestra , expresadas como porcentaje en masa , vienen dadas por la fórmula :

( ( m1 - m2 ) - ( m3 - m4 ) ) /m0 × 100

donde

m0 = masa , en g , de la muestra de prueba ,

m1 = masa , en g , de la cápsula A con su contenido ,

m2 = masa , en g , de la cápsula A vacía ,

m3 = masa , en g , de la cápsula B con su contenido ,

m4 = masa , en g , de la cápsula B vacía .

Expresar el resultado final con precisión de 0,01 % .

7.2 . Reproducibilidad

La diferencia entre los resultados de dos determinaciones efectuadas simultáneamente o con un breve intervalo sobre la misma prueba , en las mismas condiciones y por el mismo analista , no debe sobrepasar 0,1 g por 100 g de producto .

Este valor tiene una probabilidad de no ser sobrepasado del 95 % de los casos .

MÉTODO 5

DETERMINACIÓN DE CENIZAS ( P2O5 incluido )

1 . OBJETO Y ÁMBITO DE APLICACIÓN

El presente método permite determinar el contenido en cenizas de las caseínas puras .

2 . DEFINICIÓN

Cenizas ( P2O5 incluido ) : sustancias determinadas según el método descrito a continuación y expresadas como porcentaje en masa .

3 . PRINCIPIO

Incineración de una muestra de prueba a 825 ° C ± 25 ° C hasta la obtención de una masa constante . Se pesa el residuo obtenido .

4 . EQUIPO

4.1 . Balanza analítica

4.2 . Cápsulas de silicio o platino , de aproximadamente 70 mm de diámetro y de 25 a 50 mm de profundidad .

4.3 . Horno eléctrico

Horno de circulación de aire , regulable a 825 ° C ± 25 ° C .

4.4 . Desecador

Con gel de sílice activado recientemente , provisto de un indicador hidrométrico , o cualquier deshidratante equivalente .

5 . PROCEDIMIENTO

5.1 . Preparación de la muestra para la prueba

Véase el punto 1.2 de las « Disposiciones generales » .

5.2 . Preparación de la cápsula

Colocar la cápsula ( 4.2 ) en el horno eléctrico ( 4.3 ) , regulado a 825 ° C ± 25 ° C durante 30 minutos . Dejar enfriar la cápsula en el desecador ( 4.4 ) hasta la temperatura ambiente . Pesar con precisión de 0,1 mg .

5.3 . Muestra de prueba

Pesar directamente en la cápsula preparada , con precisión de 0,1 mg , unos 3 g de la muestra ( 5.1 ) .

5.4 . Determinación

Calentar la cápsula , con su contenido , sobre una llama pequeña , una placa caliente o bajo una lámpara de infrarojos , hasta que la muestra esté completamente carbonizada y vigilando que ésta no arda .

Colocar la cápsula en un horno eléctrico ( 4.3 ) regulado a 825 ° C ± 25 ° C , y dejarla allí durante al menos 1 hora , hasta que las partículas carbonosas de la cápsula desaparezcan completamente . Dejar enfriar un poco la cápsula y colocarla en el desecador ( 4.4 ) hasta que alcance la temperatura ambiente , pesándola luego con precisión de 0,1 mg .

Repetir las operaciones de calentamiento durante unos 30 minutos en el horno eléctrico , de enfriamiento y de pesada hasta obtener una masa constante ( con precisión de 1 mg ) .

6 . EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS

6.1 . Método y fórmulas de cálculo

Las cenizas ( P2O5 incluido ) de la muestra , expresadas como porcentaje en masa , vienen dadas por la fórmula :

( m1 - m2 ) /m0 × 100

donde

m0 = masa , en g , de la muestra de prueba ,

m1 = masa , en g , de la cápsula con su contenido ,

m2 = masa , en g , de la cápsula vacía .

Expresar el resultado final con precisión de 0,01 % .

6.2 . Reproducibilidad

La diferencia entre los resultados de dos determinaciones efectuadas simultáneamente o con un breve intervalo sobre la misma prueba , en las mismas condiciones y por el mismo analista , no debe sobrepasar 0,15 g de cenizas por 100 g de producto .

Este valor tiene una probabilidad de no ser sobrepasado del 95 % de los casos .

MÉTODO 6

DETERMINACIÓN DEL pH

1 . OBJETO Y ÁMBITO DE APLICACIÓN

El presente método permite determinar el pH de los caseinatos .

2 . DEFINICIÓN

pH de los caseinatos : el pH a 20 ° C de una solución de caseinato , determinado según el método descrito a continuación .

3 . PRINCIPIO

Determinación electrométrica del pH de una solución de caseinato mediante un pHmetro .

4 . REACTIVOS

El agua utilizada para la preparación de reactivos o para la realización del método ( 6 ) debe ser agua recientemente destilada y protegida contra la absorción de anhídrido carbónico .

4.1 . Soluciones tampón para la calibración del pHmetro . Dos soluciones tampón patrones , de un pH dado a 20 ° C con precisión de dos cifras decimales y cuyo intervalo cubra el pH de la muestra ; por ejemplo , una solución tampón de ftalato , de pH próximo a 4 , y una solución tampón de bórax , de pH próximo a 9 .

5 . EQUIPO

5.1 . Balanza , sensibilidad de 0,1 g .

5.2 . pHmetro

Sensibilidad mínima : 0,05 pH , provisto de un electrodo de vidrio adecuado y de un electrodo de calomel u otro electrodo de referencia .

5.3 . Termómetro

Precisión : 0,5 ° C .

5.4 . Matraz Erlenmeyer

Capacidad de 100 ml , provisto de un tapón de vidrio esmerilado .

5.5 . Vaso de vidrio de 50 ml

5.6 . Agitador

5.7 . Vaso para el agitador ( 5.6 ) , capacidad mínima 250 ml .

6 . PROCEDIMIENTO

6.1 . Preparación de la muestra para la prueba

Véase el punto 1.2 de las « Disposiciones generales » .

6.2 . Determinación

6.2.1 . Calibración del pHmetro

Establecer la temperatura de las soluciones tampón ( 4.1 ) en 20 ° C y regular el pHmetro según las instrucciones del fabricante .

Observaciones

1 . El calibrado debe efectuarse introduciendo el electrodo durante 20 minutos en los matraces Erlenmeyer en reposo ( 6.2.2 ) .

2 . Si se efectúa el análisis de una serie de muestras , verificar el calibrado del pH al menos cada 30 minutos , con una o varias soluciones tampón patrones .

6.2.2 . Preparación de la solución de prueba

Introducir en el vaso de vidrio ( 5.6 ) 95 ml de agua , añadir 5,0 g de la muestra de prueba ( 6.1 ) y mezclar mediante el agitador ( 5.5 ) durante 30 segundos .

Dejar reposar durante 20 minutos a unos 20 ° C , con el vaso tapado con un vidrio de reloj .

6.2.3 . Medida del pH

6.2.3.1 . Verter unos 20 ml de la solución en el vaso ( 5.5 ) y determinar inmediatamente el pH de este líquido con el pHmetro ( 5.2 ) , tras haber enjuagado cuidadosamente los electrodos con agua .

6.2.3.2 . Medir el pH

7 . EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS

7.1 . Lectura del pH

Anotar el valor leído sobre la escala del pHmetro que corresponda al pH de la solución de caseinato , con dos cifras decimales como mínimo .

7.2 . Repetibilidad

La diferencia entre los resultados de dos determinaciones efectuadas simultáneamente o con un breve intervalo sobre la misma prueba , en las mismas condiciones y por el mismo analista , no debe sobrepasar 0,05 unidades de pH .

Este valor tiene una probabilidad de no ser sobrepasado del 95 % de los casos .