2)

En el capítulo III se añade la parte siguiente: «III.3. DETERMINACIÓN DE LA ACIDEZ VOLÁTIL DE LAS BEBIDAS ESPIRITUOSAS 1. Ámbito de aplicación El método ha sido validado en un estudio interlaboratorios para el ron, el brandy, el orujo y los aguardientes de frutas, en niveles que oscilan entre 30 mg/l y 641 mg/l. 2. Referencias normativas ISO 3696: 1987 Agua para uso en análisis de laboratorio. Especificación y métodos de ensayo. 3. Definiciones 3.1. La acidez volátil se calcula deduciendo la acidez fija de la acidez total. 3.2. La acidez total es la suma de acideces valorables. 3.3. La acidez fija es la acidez del residuo después de haber evaporado la bebida espirituosa a sequedad. 4. Principio La acidez total y la acidez fija se determinan mediante valoración o mediante potenciometría. 5. Reactivos y materiales Para el análisis, salvo indicación contraria, deben utilizarse solo reactivos de categoría analítica identificada y agua al menos de categoría 3 como se define en ISO 3696:1987. 5.1. Solución de hidróxido de sodio (NaOH) 0,01 M. 5.2. Solución de indicador mixto: Pesar 0,1 g de carmín de índigo y 0,1 g de rojo de fenol. Disolver en 40 ml de agua y completar hasta 100 ml con etanol. 6. Instrumental y equipo Instrumental indirecto de laboratorio, material de vidrio de clase A y lo siguiente: 6.1. Bomba de agua 6.2. Evaporador rotatorio o baño ultrasónico 6.3. Aparatos para titulación por potenciometría (opcional) 7. Muestras y toma de muestras Las muestras se almacenan a temperatura ambiente antes del análisis. 8. Procedimiento 8.1. Acidez total 8.1.1. Preparación de la muestra La bebida espirituosa se irradia con ultrasonidos (ultrasonicación) o se agita dos minutos al vacío para librarla del anhídrido carbónico, si fuera necesario. 8.1.2. Valoración Introducir con una pipeta 25 ml de bebida espirituosa en un matraz Erlenmeyer de 500 ml. Añadir aproximadamente 200 ml de agua destilada hervida y enfriada (preparada el mismo día) y de 2 a 6 gotas de la solución de indicador mixto (5.2). Valorar con la solución de hidróxido de sodio 0,01 M (5.1) hasta que el color verde amarillento cambie a violeta en el caso de bebidas espirituosas incoloras, o el color amarillo amarronado cambie a rojo amarronado en el caso de las bebidas espirituosas de color marrón, respectivamente. La valoración puede igualmente efectuarse por potenciometría a pH 7,5. Sea n1 ml el volumen añadido de la solución de hidróxido de sodio 0,01 M. 8.1.3. Cálculo La acidez total (TA) expresada en miliequivalentes por litro de la bebida espirituosa es igual a 0,4 × n1. La acidez total (TA′) expresada en mg de ácido acético por litro de la bebida espirituosa es igual a 24 × n1. 8.2. Acidez fija 8.2.1. Preparación de la muestra Evaporar 25 ml de la bebida espirituosa a sequedad: Introducir con una pipeta 25 ml de bebida espirituosa en una cápsula de evaporación cilíndrica de fondo plano de 55 mm de diámetro. Durante la primera hora de evaporación, la cápsula de evaporación se coloca sobre la tapa de un baño de agua hirviente de modo que el líquido no hierva, ya que esto podría ocasionar pérdidas por salpicaduras. Terminar el secado colocando la cápsula de evaporación en una estufa a 105 °C durante dos horas. Dejar que la cápsula de evaporación se enfríe en un desecador. 8.2.2. Valoración Disolver el residuo de la evaporación con agua destilada hervida y refrigerada (preparada el mismo día), completar hasta un volumen aproximado de 100 ml y añadir 2-6 gotas de la solución de indicador mixto (5.2). Valorar con la solución de hidróxido de sodio de 0,01 M (5.1). La valoración puede igualmente efectuarse por potenciometría a pH 7,5. Sea n2 ml el volumen añadido de la solución de hidróxido de sodio 0,01 M. 8.2.3. Cálculo La acidez fija (FA) expresada en miliequivalentes por litro de bebida espirituosa es igual a 0,4 × n2. La acidez fija (FA) expresada en mg de ácido acético por litro de bebida espirituosa es igual a 24 × n2. 9. Cálculo de la acidez volátil 9.1. Expresión en miliequivalentes por litro: Es decir: TA = acidez total en miliequivalentes por litro FA = acidez fija en miliequivalentes por litro La acidez volátil, VA, en miliequivalentes por litro es igual a: TA – FA 9.2. Expresión en mg de ácido acético por litro: Es decir: TA′ = acidez total en mg de ácido acético por litro FA′ = acidez fija en mg de ácido acético por litro La acidez volátil, VA, en mg de ácido acético por litro es igual a: TA′ – FA′ 9.3. La expresión en g de ácido acético por hl de alcohol puro al 100 % vol. es igual a: donde A es el grado alcoholimétrico por volumen de la bebida espirituosa. 10. Características de rendimiento del método (precisión) 10.1. Resultados estadísticos del estudio interlaboratorios Los datos siguientes han sido obtenidos a partir de un estudio internacional de rendimiento del método efectuado según los procedimientos reconocidos internacionalmente [1] [2]. Año del estudio interlaboratorios 2000 Número de laboratorios 18 Número de muestras 6

Muestras A B C D E F Número de laboratorios seleccionados tras la eliminación de los valores anómalos 16 18 18 14 18 18 Número de valores anómalos (laboratorios) 2 4 Número de resultados aceptados 32 36 36 28 36 36 Mean value [mg/L] 272* 241* 30 591* 641* 46 107 492 Desviación estándar de repetibilidad, sr [mg/l] 8,0 3,6 15,0 3,7 6,7 8,5 Desviación estándar relativa de repetibilidad, RSDr [%] 3,1 11,8 2,4 8,0 6,2 1,7 Límite de repetibilidad, r [mg/l] 23 10 42 10 19 24 Desviación estándar de reproducibilidad, sR [mg/l] 8,5 8,4 25,0 4,55 13,4 24,4 Desviación estándar relativa de reproducibilidad, RSDR [%] 3,3 27,8 4,1 9,9 12,5 5,0 Límite de reproducibilidad, R [mg/l] 24 23 70 13 38 68 Tipos de muestras: A Aguardiente de ciruelas nivel de fraccionamiento (split) * B Ron I; duplicados ciegos C Ron II; nivel de fraccionamiento (split) * D Slivovitz; duplicados ciegos E Brandy; duplicados ciegos F Aguardiente de orujo; duplicados ciegos [1] “Protocol for the Design, Conduct and Interpretation of Method- Performance Studies”, Horwitz, W. (1995) Pure and Applied Chemistry 67, 332-343. [2] Horwitz, W. (1982) “Analytical Chemistry 54, 67A-76A”.».