1971L0250 — ES — 26.05.1999 — 003.001 — 1
Estedocumentoesuninstrumentodedocumentaciónynocomprometelaresponsabilidaddelasinstituciones
►B PRIMERADIRECTIVADELACOMISIÓN
de15dejuniode1971
porlaquesedeterminanmétodosdeanálisiscomunitariosparaelcontroloficialdelosalimentos
paraanimales
(71/250/CEE)
(DO L 155 de 12.7.1971, p. 13)
Modificada por:
Diario Oficial
nopágina fecha
►M1Directiva 81/680/CEE de la Comisión de 30 de julio de 1981 L 246 32 29.8.1981
►M2Directiva 98/54/CE de la Comisión de 16 de julio de 1998 L 208 49 24.7.1998
►M3Directiva 1999/27/CE de la Comisión de 20 de abril de 1999 L 118 36 6.5.1999
▼B
PRIMERADIRECTIVADELACOMISIÓN
de15dejuniode1971
porlaquesedeterminanmétodosdeanálisiscomunitariosparael
controloficialdelosalimentosparaanimales
(71/250/CEE)
LA COMISIÓN DE LAS COMUNIDADES EUROPEAS,
Visto el Tratado constitutivo de la Comunidad Económica Europea,Vista la Directiva del Consejo de 20 de julio de 1970 relativa a la
introducción de métodos de toma de muestras y de análisis comunita-
rios para el control oficial de los alimentos para animales (
1)y ,e n
particular, su artículo 2,
Considerando que la Directiva antes mencionada prevé que los
controles oficiales de los alimentos para animales dirigidos acomprobar si se respetan las condicionas establecidas en virtud de lasdisposiciones legales, reglamentarias y administrativas relativas a lacalidad y la composición de los alimentos mencionados se efectuarán
según métodos de toma de muestras y de análisis comunitarios;
Considerando que es conveniente establecer lo antes posible todos los
métodos de análisis necesarios, y que una primera etapa está consti-tuida porel establecimento de los métodos de deter minación del ácidocianhídirico, del calcio, de los carbonatos, de las cenizas brutas, de lascenizas insolubles en HCl, del cloro de los cloruros, de la esencia de
mostaza, de la lactosa, del potasio, del sodio, de los azúcares, de la
teobromina, y de la urea, así como de los métodos de determinaciónde los alcaloides de los altramuces y de la actividad ureásica de losproductos de la soja;
Considerando que las medidas previstas en la presente Directiva se
ajustan al dictamen del Comité permanente de la alimentación animal,
HA ADOPTADO LA PRESENTE DIRECTIVA:
Artículo 1
Los Estados miembros dispondrán que los análisis para los controles
oficiales de los alimentos para animales, en lo que se refiere a sus
contenidos en ácido cianhídrico, calcio, carbonato, cenizas brutas,
cenizas insolubles en HCl, cloro de cloruros, ►M3 ◄
lactosa, potasio, sodio, azúcares ►M3 ◄y urea, así
como a►M2 ◄la actividad ureásica de los productos
de soja, se efectúen según los métodos descritos en el Anexo de lapresente Directiva.
Las disposiciones generales que figuran en el punto 1 del Anexo serán
aplicables a los métodos de análisis adoptados según la Directiva 70/373/CEE del Consejo.
Artículo 2
Los Estados miembros aplicarán, a más tardar, el 1 de julio de 1972,
las disposiciones legales, reglamentarias o administrativas necesariaspara cumplir las disposiciones de la presente Directiva. Informarán de
ello inmediatamente a la Comisión.
Artículo 3
Los destinatarios de la presente Directiva serán los Estados miembros.1971L0250 — ES — 26.05.1999 — 003.001 — 2
(1)D O noL 170 de 3. 8. 1970, p. 2.▼M1
▼B
▼B
ANEXO
MÉTODOS DE ANÁLISIS DE LOS COMPONENTES DE LOS
ALIMENTOSPARAANIMALES
1. DISPOSICIONES GENERALES REFERENTES A LOS MÉTODOS DE
ANÁLISIS DE LOS PIENSOS PARA ANIMALES
A. PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS PARA EL ANÁLISIS
1.Objeto
Las modalidades descritas a continuación se refieren a la preparación para
el análisis de las muestras finales, transmitidas a los laboratorios de control
después de habersido tomadas de acuer do con las disposiciones de la
primera Directiva 76/371/CEE de la Comisión, de 1 de marzo de 1976,
sobre la determinación de las formas comunitarias de toma de muestras
para el control oficial de los piensos para animales (1).
La preparación de dichas muestras debe permitir que las tomas de especí-
menes previstas en los métodos de análisis sean homogéneas y
representativas de las muestras finales.
2.Precaucionesquesehandetomar
Efectuar todas las operaciones de manera que se evite, en la medida de lo
posible, una contaminación de la muestra o modificaciones de su composi-
ción. Efectuar las moliendas, las mezclas y los cernidos lo más rápidamente
posible, exponiendo lo mínimo la muestra a la luz y al polvo. Evitar el uso
de molinos o de trituradoras que puedan producir un calentamiento notable
de la muestra. Se recomienda el molido manual para los piensos particular-
mente sensibles al calor. Velar, por otra parte, para que el instrumental
mismo no sea una fuente de contaminación en oligoelementos.
Si no pudiera prepararse la muestra sin variación sensible de su contenido
en humedad, determinar dicho contenido antes y después de la preparación
porel método establecido en el punto 1 del Anexo de la segunda Dir ectiva
71/393/CEE de la Comisión, de 18 de noviembre de 1971, sobre la deter-
minación de métodos comunitarios de análisis para el control oficial de los
piensos para animales (2), modificada porla Dir ectiva 73/47/CEE de la
Comisión, de 5 de diciembre de 1972 (3),
3.Mododeoperar
Mezclar estrechamente la muestra final, ya sea mecánica o manualmente.
Dividir en dos porciones iguales (si fuera posible por el método de los
cuartos). Conservar una de las porciones en un recipiente adecuado, limpio
y seco, provisto de un cierre hermético, y preparar la otra porción o una
parte representativa de ella, de al menos 100 gramos, como se indica a
continuación.
3.1.Alimentos que se puedan moler en su estado natural
Salvo indicación específica en los métodos de análisis, cribar la totalidad
de la muestra sobre un tamiz de mallas cuadradas de 1 mm. de lado (de
acuerdo con la recomendación ISO R565) después de haberla molido si
fuera necesario. Evitar toda molienda superflua.
Mezclar la muestra cribada y guardarla en un recipiente adecuado, limpio y
seco, provisto de un cierre hermético. Mezclar de nuevo inmediatamente
antes de tomar la muestra para la prueba.
3.2.Alimentos que se puedan moler tras un desecado
Salvo indicación específica en los métodos de análisis, desecarla muestr a,
de manera que su contenido en humedad llegue a 8-12 %, aplicando el
procedimiento de predesecación indicado en el punto 4.3 del método de
determinación de la humedad mencionado en el punto 2 precedente.
Después proceder como se indica en el punto 3.1.1971L0250 — ES — 26.05.1999 — 003.001 — 3
(1)D O noL 102 de 15. 4. 1976, p. 1.
(2)D O noL 279 de 20. 12. 1971, p. 7.
(3)D O noL 83 de 30. 3. 1973, p. 35.▼M1
▼M1
3.3.Alimentos líquidos y semilíquidos
Recoger la muestra en un recipiente adecuado, limpio y seco, provisto de
un cierre hermético. Mezclar cuidadosamente antes de tomar las muestras
para la prueba.
3.4.Otros alimentos
Si la muestra no pudiera prepararse según uno de los procedimientos antes
descritos, se aplicará cualquier otro procedimiento de preparación adecuado
que permita obtener tomas homogéneas para las pruebas y representativas
de las muestras finales.
4.Conservacióndelasmuestras
Conservar las muestras a una temperatura que no pueda alterar su compo-
sición. Usar recipientes de cristal ahumado para las muestras que se
destinen al análisis de vitaminas o de substancias especialmente sensibles
a la luz.
B. DISPOSICIONES REFERENTES A LOS REACTIVOS Y AL INSTRU-
MENTAL UTILIZADO EN MÉTODOS DE ANÁLISIS
1. Salvo indicación específica en los métodos de análisis, todos los reactivos
deberán ser de calidad «para análisis» (pa). Para el análisis de los oligoele-
mentos, deberá controlarse la pureza de los reactivos con una
determinación en blanco. Según el resultado obtenido, podrá requerirse
una purificación suplementaria.
2. Las operaciones de preparación de las soluciones, de disolución, de acla-
rado o de lavado mencionadas en los métodos de análisis, sin indicación
sobre la naturaleza del solvente o del diluyente, implican que hay que
utilizar agua. Como norma general, el agua deberá estar desmineralizada o
destilada. En casos particulares, indicados en los métodos de análisis,
deberá ser sometida a procedimientos específicos de purificación
3. Habida cuenta del equipamiento usual de los laboratorios de control, sólo
se mencionarán en los métodos de análisis los instrumentos y aparatos
especiales o que deban responder a condiciones muy específicas. Dicho
material deberá limpiarse bien, muy especialmente para las determinaciones
de cantidades muy pequeñas de substancias.
C. APLICACIÓN DE LOS MÉTODOS DE ANÁLISIS Y EXPRESIÓN DE
LOS RESULTADOS
1. En general sólo se establecerá un método de análisis para la determinación
de una substancia en los piensos para animales. Cuando se den varios
métodos, deberá mencionarse el método aplicado por el laboratorio de
control en el parte de análisis.
2. El resultado indicado en el parte de análisis será el valor medio obtenido a
partir de al menos dos determinaciones, efectuadas sobre muestras dife-
rentes, y cuya repetitividad sea satisfactoria.
Dicho resultado deberá expresarse de acuerdo con las indicaciones que se
den en el método de análisis con un número apropiado de cifras significa-
tivas, y corregirse, si fuera necesario, en función del contenido en humedad
del especimen final, previo a la preparación.
2. DETERMINACIÓN DEL ÁCIDO CIANHÍDRICO
1.Objetivoyámbitodeaplicación
El método permite determinar el contenido en ácido cianhídrico libre y
combinado en forma de glucósidos de la alimentación animal y, en particular,
de los productos de semillas de lino, de harina de mandioca y de determi-
nadas especies de judías.
2.Principio
La muestra se suspende en el agua. El ácido cianhídrico se libera bajo la
acción de fermentos, se arrastra por destilación al vapor de agua y se recoge
en un volumen determinado de solución de nitrato de plata acidificada. El
cianuro de plata se separa por filtrado y el exceso de nitrato de plata se
valora mediante una solución de tioacinato al amonio.1971L0250 — ES — 26.05.1999 — 003.001 — 4
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▼B
3.Reactivos
3.1. Suspensión de almendras dulces: triturar 20 almendras dulces limpiadas
en 100 ml de agua a una temperatura de 37 a 40 ºC. Comprobar la
ausencia de ácido cianhídrico sobre 10 ml de la suspensión, con ayuda
de un papel picro-sódico o efectuando una prueba en blanco como se
indica en 5 en el último apartado.
3.2. Solución al 10 % (p/v) de acetato de sodio, neutro a la fenolftaleína.
3.3. Emulsión de antiespuma (silicona, porejemplo).3.4. Acido nítrico, d: 1,40.
3.5. Solución de nitrato de plata: 0,02 N.
3.6. Solución de tiocianato de amonio: 0,02 N.
3.7. Solución saturada de sulfato de amonio férrico.
3.8. Amoniaco, d: 0,958.
4.Equipo
4.1. Estufa provista de un termostato regulado a 38 ºC.
4.2. Aparato de destilación por producción al vapor de agua provisto de un
refrigerante con alargadera curvada.
4.3. Matraces de fondo plano de 100 ml de tapón esmerilado.
4.4. Baño de aceite.
4.5. Bureta graduada a 1/20 ml.
5.Métodooperatorio
Pesar, con precisión de 5 mg, 20 g de la muestra, introducirlos en un matraz
de 1 l de fondo plano y añadir50 ml de agua y 10 ml de suspensión de
almendras dulces (3.1). Tapar el matraz y mantenerlo durante dieciséis horas
en la estufa a 38 ºC. Refrigerar a continuación a la temperatur ambiente y
añadir80 ml de agua, 10 ml de solución de acetato de sodio (3.2) y una
gota de emulsión antiespuma (3.3).
Conectar el matraz al aparato de destilación al vapor y situarlo en un baño de
aceite praviamente llevado a una temperatura ligeramente superior a 100 ºC.
Destilarde 200 a 300 ml de líquido haciendo pasaren el matr az una pode-
rosa corriente de vapor y calentando suavemente el baño de aceite. Recoger
el destilado en un erlenmeyer situado al resguardo de la luz y que contenga
50 ml exactamente de solución de nitrato de plata 0,02 N (3.5) y 1 ml de
ácido nítrico (3.4) Prestar atención para que la alargadera del refrigerante se
sumerja en la solución de nitrato de plata.
Trasvasar el contenido del erlenmeyer a un matraz aforado de 500 ml,
completar el volumen con agua, agitar y filtrar. Tomar 250 ml del filtrado,
añadir 1 ml aproximadamente de solución de sulfato de amonio férrico (3.7)
y valorar en retroceso el exceso de nitrato de plata por la solución de tiocia-
nato de amonio 0,02 N (3.6) suministrada por la bureta graduada a 1/20 ml.
Efectuar en el caso en que fuera necesario un ensayo en blanco aplicando el
mismo método operatorio a 10 ml de suspensión de almendras blandas (3.1),
a falta de muestra para analizar.
6.Cálculodelosresultados
Si la prueba en blanco indica un consumo de la solución de nitrato de plata
0,02 N, sustraer este valor del volumen consumido por el destilado de la
muestra.
1 ml de AgNO
30,02 N corresponde a 0,54 mg de HCN. Expresar el resultado
en porcentaje de la muestra.
7.Observaciones
Si la muestra contiene una cantidad importante de sulfuros (judías, po ej.), se
forma un precipitado negro de sulfuro de plata que se filtra con el sedimento
de cianuro de plata. La formación de este precipitado entraña una pérdida de
solución de nitrato de plata 0,02 N cuyo volumen debe sustraerse del
volumen tomado en consideración para el cálculo del contenido en HCN.
Con tal fin, proceder como se indica a continuación.
Tratar el sedimento sobre el filtro por 50 ml de amoniaco (3.8) para disolver
el cianuro de plata. Lavar el residuo mediante amoniaco diluido y proceder a1971L0250 — ES — 26.05.1999 — 003.001 — 5
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la determinación de su contenido en plata. Convertir el valor obtenido en ml
de solución de nitrato de plata 0,02 N.
El contenido en HCN de la muestra puede determinarse igualmente mediante
titulación del filtrado amoniacal acidificado por el ácido nítrico.
3. DETERMINACIÓN DEL CALCIO
1.Objetivoyámbitodeaplicación
El método permite determinar el contenido en calcio total de los alimentos
para animales.
2.Principio
La muestra se incinera, las cenizas se tratan con ácido clorhídrico y el calcio
se precipita en forma da oxalato de calcio. Después de disolver el precipitado
en el ácido sulfúrico, el ácido oxálico formado se titula mediante una solu-
ción de permanganato de potasio.
3.Reactivos
3.1. Ácido clorhídrico p.a., d: 1,14.3.2. Ácido nítrico p.a., d: 1,40.
3.3. Ácido sulfúrico p.a., d: 1,13.
3.4. Amoniaco p.a., d: 0,98.
3.5. Solución saturada en frío de oxalato de amonio p.a.
3.6. Solución al 30 % (p/v) de ácido cítrico p.a.
3.7. Solución al 5 % (p/v) de cloruro de amonio p.a.
3.8. Solución al 0,04 % (p/v) de verde de bromocresol.
3.9. Solución de permanganato de potasio 0,1 N.
4.Equipo
4.1. Horno eléctrico, de circulación de aire y termostato.
4.2. Crisoles de incineración de platino, cuarzo o porcelana.
4.3. Crisoles filtrantes de cristal, porosidad G
4.
5.Métodooperatorio
Pasar, con precisión de 1 mg, aproximadamente 5 g de la muestra (o más si
fuera necesario), calcinarlos a 550 ºC y trasvasar las cenizas a un vaso de
250 ml. Añadir 40 ml de ácido clorhídrico (3.1), 6 ml de agua y algunas
gotas de ácido mítrico (3.2). Llevar a ebullición y mantenerla durante treinta
minutos. Refrigerar, trasvasar la solución a un matraz aforado de 280 ml.
Lavar, completar el volumen hasta enrasar con el indicador de nivel con
agua, homogeneizar y filtrar.
Tomarcon una pipeta, según el contenido supuesto en calcio, una cantidad
alícuota que contenga de 10 a 40 mg de calcio e introducir en un vaso de
250 ml. Añadir1 ml de solución de ácido cítr ico (3.6) y 5 ml de solución
de cloruro de amonio (3.7). Completar el volumen a 100 ml aproximada-
mente mediante agua. Llevara ebullición, añadirde 8 a 10 gotas de
solución de verda de bromocresol (3.8) y 30 ml de solución caliente de
oxalato de amonio (3.5). Si aparece un precipitado, disolverlo mediante
adición de algunas gotas de ácido clorhídrico (3.1)
Neutralizar a continuación muy lentamente mediante amoniaco (3.4),
agitando constantemente, hasta la obtención de un pH del orden de 4,4 a
4,6 (virado del indicador). Colocar el vaso en un baño de agua hirviendo,
mantenerlo durante treinta minutos para dejar reposar el precipitado que se
haya formado. Retirar el vaso del baño de agua. Dejar reposar durante una
hora y filtrar en un crisol filtrante G4.
Lavarel vaso y el cr isol con agua hasta eliminarel exceso de oxalato de
amonio (la ausencia de cloruro en las aguas de lavado indica que el lavado
ha sido suficiente).
Disolver el precipitado sobre el filtro mediante 50 ml de ácido sulfúrico (3.3)
caliente. Lavar el crisol con agua caliente y llevar el filtrado a 100 ml apro-
ximadamente. Llevar la temperatura a 70-80 ºC y titular gota a gota mediante1971L0250 — ES — 26.05.1999 — 003.001 — 6
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la solución de permanganato de potasio (3.9) hasta la obtención de una colo-
ración rosa persistente durante un minuto.
6.Cálculodelosresultados
1 ml de permanganato de potasio 0,1 N corresponde a 2,004 mg de calcio.
Expresar el resultado obtenido en porcentaje de la muestra.
7.Observaciones
7.1. Para los contenidos muy bajos en calcio, proceder como se indica a
continuación. Filtrar el precipitado de oxalato de calcio sobre un papel
filtro sin cenizas. Después de lavarlo, secar el filtro y calcinarlo a 550 ºC
en un crisol de platino. Recoger el residuo mediante algunas gotas de
ácido sulfúrico (3.3), evaporar en seco, calcinar de nuevo a 550 ºC y
pesar. Si p representa el peso de sulfato de calcio obtenido, el contenido
en calcio de la cantidad alícuota tomada = p × 0,2944.
7.2. Si la muestra está constituida únicamente por materias minerales,
proceder a la disolución mediante ácido clorhídrico sin previa incinera-
ción. Para los productos tales como los fosfatos aluminocálcicos,
difíciles de disolveren los ácidos, pr ocedercomo se indica a una fusión
alcalina antes de la disolución. Mezclaríntimamente en un cr isol de
platino la toma de muestra, con una mezcla de aproximadamente 5
veces su peso, a partes iguales, de carbonato de potasio y carbonato de
sodio. Calentarcon pr ecaución hasta la fusión completa de la mezcla.
Después de enfriar, disolver mediante ácido clorhídrico.
7.3. Si el contenido en magnesio de la muestra es elevado, proceder a una
segunda precipitación del oxalato de calcio.
4. DETERMINACIÓN DE LOS CARBONATOS
1.Objetivoyámbitodeaplicación
El método permite determinar los carbonatos, convencionalmente expresados
en carbonato cálcico, en los alimentos para animales. En determinados casos,
sin embargo (carbonato de hierro, por ejemplo), es necesario emplear un
método particular.
2.Principio
Los carbonatos se descomponen por el ácido clorhídrico; el gas carbónico
liberado se recoge en un tubo graduado y su volumen se compara al liberado,
en las mismas condiciones, poruna cantidad conocida de car bonato cálcico
p.a.
3.Reactivos
3.1. Acido clorhídrico, d: 1,10.
3.2. Carbonato cálcico p.a.
3.3. Acido sulfúrico 0,1 N aproximadamente, coloreado por rojo de metilo.
4.Equipo
Aparato según Scheibler-Dietrich (v. esquema) o aparato similar.
5.Métodooperativo
Según el contenido en carbonatos de la muestra, pesar una toma de muestra
tal como se indica a continuación:
0,5 g para los productos que contengan del 50 a 100 % de carbonatos,
expresados en carbonato cálcico;
1 g para los productos que contengan del 10 a 50 % de carbonatos,
expresados en carbonato cálcico;
2 g a 3 g para el resto de los productos.
Introducir la toma de muestra en el frasco especial (4) del aparato, provisto
de un pequeño tubo de material irrompible con 10 ml de ácido clorhídrico
(3.1), y conectar el frasco al aparato. Girar el grifo de tres vías (5) de forma
que el tubo (1) comunique con el exterior. Con ayuda de un tubo móvil (2),
con ácido sulfúrico coloreado en su interior (3.3) y conectado al tubo
graduado (1), llevar el nivel del líquido a la graduación cero. Girar el grifo1971L0250 — ES — 26.05.1999 — 003.001 — 7
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(5), de forma que se pongan en comunicación los tubos (1) y (2), y
comprobar el nivel cero.
Dejar correr lentamente el ácido clorhídrico (3.1) sobre la toma de muestra
inclinando el frasco (4). Igualar la presión bajando el tubo (2). Agitar el
frasco (4) hasta que cese el desprendimiento de gas carbónico.
Restablecerla pr esión llevando el líquido al mismo nível en los tubos (1) y
(2). Hacerla lectur a después de algunos minutos, cuando el volumen gaseoso
se haya hecho constante.
Efectuar en las mismas condiciones una prueba de comparación sobre 0,5 g
de carbonato cálcico (3.2).
6.Cálculodelosresultados
El contenido en g de carbonatos, expresados en carbonato cálcico, por cada
cien de muestra vendrá dado por la relación:
V/C2100
T/C22P
en el que:
V = ml de CO2desprendidos por la toma de muestra.
T = ml de CO2desprendidos por 0,5 g de CaCO3p.a.
P = peso de la toma de muestra en g.
7.Observaciones
7.1. Cuando la muestra sea superior a 2 kg, introducir previamente 15 ml de
agua destilada en el frasco (4) y mezclar antes de comenzar la prueba.
Emplear el mismo volumen de agua para la mezcla de comparación.
7.2. Si se emplea un aparato de un volumen diferente del de Scheibler-
Dietrich, será necesario adaptar a dicho aparato la muestra y la sustancia
de comparación así como el cálculo de los resultados.1971L0250 — ES — 26.05.1999 — 003.001 — 8
▼B
APARATO SEGUN SCHEIBLER-DIETRICH PARA DETERMINAR EL CO2
(Medidasenmm)
5. DETERMINACIÓN DE LAS CENIZAS BRUTAS
1.Objetivoyámbitodeaplicación
El método permite determinar el contenido en cenizas brutas de los alimentos
para animales.
2.Principio
La muestra se incinera a 550 ºC; el residuo se pesa.
3.Reactivos
Solución al 20 % (p/v) de nitrato de amonio.
4.Equipo
4.1. Placa calorífera.4.2. Horno eléctrico, con termostato.4.3. Crisoles de incineración de platino o de aleación de platino y oro (10 %
Pt, 90 % An), rectangulares (60 × 40 × 25 mm) o redondos (diámetro:
60 a 75 mm, altura: 20 a 25 mm).1971L0250 — ES — 26.05.1999 — 003.001 — 9
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5.Métodooperatorio
Pesar, con precisión de 1 mg, 5 g aproximadamente de la muestra (2,5 g para
los productos que tengan tendencia a hincharse) en un crisol de incineración
previamente calcinado y tarado. Situar el crisol sobre la placa carolífera y
calentar progresivamente hasta la carbonización de la materia. Introducir el
crisol en el horno regulado a 550 ºC ± 5 ºC. Mantener a dicha temperatura
hasta obtener cenizas blancas, gris claro o rojizas, aparentemente desprovistas
de partículas carbonosas. Situar el crisol en un desecador, dejar refrigerar y
pesarinmediatamente.
6.Cálculodelosresultados
Calcular el peso del resíduo deduciendo la tara.
Expresar el resultado en porcentaje de la muestra.
7.Observaciones
7.1. Las cenizas de las materias difíciles de quemar deben someterse a una
primera incineración de tres horas al menos, refrigerarse y añadirlas
algunas gotas de una solución al 20 % de nitrato de amonio (prudente-
mente, para evitar la dispersió o pegadura de las cenizas). Continuar la
calcinación despues de desecarla estufa.
Repetir si fuera necesario la operación hasta la completa incineración.
7.2. Para las materias que resistan el tratamiento indicado en 7.1, operar
como se indica a continuación. Después de una incineración de tres
horas, recoger las cenizas mediante agua caliente y filtrar sobre un
pequeño filtro sin cenizas. Incinerar el filtro y su contenido en el crisol
inicial. Llevar el filtrado al crisol refrigerado, evaporar en seco, inci-
nerar y pesar.
7.3. En el caso de aceites y grasas, pesar con exactitud una toma de muestra
del orden de 25 g en un crisol de capacidad apropiada. Carbonizar infla-
mando la materia por medio de una mezcla de papel filtro sin cenizas.
Después de la combustión, humedecermediante el mínimo necesar io de
agua. Secare inciner arcomo se indica en 5.
6. DETERMINACIÓN DE LAS CENIZAS INSOLUBLES EN EL ÁCIDO
CLORHÍDRICO
1.Objetivoyámbitodeaplicación
El método permite determinar el contenido en materias minerales insolubles
en el ácido clorhídrico de los alimentos para animales. Se preven dos proce-
dimientos en función de la naturaleza de la muestra.
1.1.Procedimiento A: aplicable a los alimentos orgánicos simples y a la
mayorpar te de los piensos compuestos completos;
1.2.Procedimiento B: aplicable a los compuestos y mezclas mineralas, así
como a los piensos compuestos completos cuyo contenido en insoluble
clorhídrico, determinado según el procedimiento A, sea superior al 1 %.
2.Principio
2.1.Procedimiento A: se incinera la muestra, se tratan las cenizas por ebulli-
ción mediante el ácido clorhídrico y el residuo insoluble se filtra y se
pesa.
2.2.Procedimiento B: la mezcla se trata mediante ácido clorhídrico. La solu-
ción se filtra, el residuo se incinera y las cenizas obtenidas se tratan
como el procedimiento A.
3.Reactivos
3.1. Acido clorhídrico 3 N.3.2. Solución al 20 % (p/v) de ácido tricloracético.3.3. Solución al 1 % (p/v) de ácido tricloracético.
4.Equipo
4.1. Placa calorífera.
4.2. Horno eléctrico, con termostato.1971L0250 — ES — 26.05.1999 — 003.001 — 10
▼B
4.3. Crisoles de incineración de platino o de aleación de platino y oro (10 %
Pt, 90 % Au), rectangulares (60 × 40 × 25 mm) o redondos (diámetro:
60 a 75 mm, altura: 20 a 25 mm).
5.Métodooperatorio
5.1.Procedimiento A
Incinerar la toma de muestra según el método operatorio descrito para la
determinación de las cenizas brutas. Se podrán emplear igualmente las
cenizas obtenidas al efectuardicha deter minación.
Introducir las cenizas en un vaso de 250 a 400 ml de ácido clorhídrico
3 N (3.1). Llevarel líquido con pr udencia a ebullición suave y mantener
ésta durante quince minutos. Filtrar la solución caliente sobre un papel
de filtro sin cenizas y lavar el residuo con agua caliente hasta la desapa-
rición de reacción ácida. Secar el filtro que contiene al residuo e
incinerar en un crisol tarado a una temperatura de 550 ºC como mínimo
y de 700 ºC como máximo. Refrigerar en desecador y pesar.
5.2.Procedimiento B
Pesar, con precisión de 1 mg, 5 g de la muestra e introducirlos en un
vaso de 250 a 400 ml. Añadirsucesivamente 25 ml de agua y 25 ml
de ácido clorhídrico 3 N (3.1), mezclar y esperar el final de la eferves-
cencia. Añadir 50 ml de ácido clorhídrico 3 N (3.1). Esperar al final de
un posible desprendimiento de gases, colocar a continuación el vaso en
un baño de agua hirviendo y mantenerlo allí curante treinta minutos o
más, si fuera necesario, con el fin de hidrolizar completamente el
almidón que pueda estarpr esente.
Filtrar en caliente sobre filtro sin cenizas y lavar el filtro mediante 50 ml
de agua caliente (v. observación 7). Colocar el filtro que contiene el
residuo en un crisol de incineración, secar e incinerar a una temperatura
de 550 ºC como mínimo y 700 ºC como máximo. Introducir a continua-
ción las cenizas en un vaso de 250 a 400 ml mediante 75 ml de ácido
clorhídrico 3 N (3.1); continuar tal como se indica an 5.1, párrafo
segundo.
6.Cálculodelosresultados
Calcular el peso del residuo deduciendo la tara. Expresar el resultado en
porcentaje de la muestra.
7.Observaciones
Si la filtración se mostrara difícil, volver a comenzar la determinación susti-
tuyendo los 50 ml de ácido clorhídrico 3 N por 50 ml de ácido trcloracético
al 20 % (3.2) y lavando el filtro con ayuda de una solución caliente de ácido
tricloracético al 1 % (3.3).
7. DETERMINACIÓN DEL CLORO DE LOS CLORUROS
1.Objetivoyámbitodeaplicación
El método permite determinar el cloro de los cloruros solubles en el agua,
expresado convencionalmente en cloruro de sodio. Es aplicable a los
alimentos para animales en conjunto.
2.Principio
Los cloruros se disuelven en agua. Si el producto contiene materias
orgánicas, se procede a una defecación. La solución se acidifica ligeramente
mediante el ácido nítrico y los cloruros se precipitan en forma de cloruro de
plata con ayuda de una solución dé nitrato de plata. El exceso de nitrato de
plata se titula mediante una solución de tiocianato de amonio, según el
método de Volhard.
3.Reactivos
3.1. Solución de tiocianato de amonio 0,1 N.
3.2. Solución de nitrato de plata 0,1 N.
3.3. Solución saturada de sulfato de amonio férrico.
3.4. Acido nítrico, d: 1,38.3.5. Eterdietílico p.a.1971L0250 — ES — 26.05.1999 — 003.001 — 11
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3.6. Acetona p.a.
3.7. Solución de Carrez I: disolver en agua 24 g de acetato de zinc, Zn
(CH3COO)2·2H2Oy3gd e ácido acético glacial. Completara 100 ml
con agua.
3.8. Solución de Carrez II: disolver en agua 10,6 g de ferrocianuro de
potasio K4(Fe (CN)6)·3H2O. Completara 100 ml con agua.
3.9. Carbón activo p.a. exento de cloruros y no absorbente.
4.Equipo
Mezclador (balancín): de aproximadamente 35 a 40 revoluciones por minuto.
5.Métodooperatorio
5.1.Preparación de la solución
Según la naturaleza de la muestra, preparar una solución como se indica
en 5.1.1., 5.1.2. o 5.1.3.
Efectuar en paralelo una prueba en blanco exenta de muestra para
analizar.
5.1.1.Muestras exentas de materia orgánica
Pesar, con precisión de 1 mg, una toma de muestra (no más de
10 g), que no contenga más de 3 g de cloro en forma de cloruros
e introducirla en un frasco aforado de 500 ml con 400 ml de agua
a 20 ºC aproximadamente. Mezclar durante treinta minutos en el
balancín, completar al volumen, homogeneizar y filtrar.
5.1.2.Muestras que contengan materias orgánicas, excepto los
productos mencionados en 5.1.3
Pesar, con precisión de 1 mg, 5 g aproximadamente de la muestra
e introducirlos con 1 g de carbón activo en un frasco aforado de
500 ml. Añadir400 ml de agua a 20 ºC apr oximadamente y 5 ml
de solución de Carrez I (3.7), agitar y añadir a continuación 5 ml
de solución de Carrez II (3.8). Mezclar durante treinta minutos en
el balancín, completar al volumen, homogeneizar y filtrar.
5.1.3.Alimentos cocidos, torta y harina de lino, productos ricos en
harina de lino y el resto de los productos ricos en mucílagos o
en substancias coloidales (por ejemplo, almidón dextrinado)
Prepara la solución como se indica en 5.1.2. pero no filtrar.
Decantar (si fuera necesario, centrifugar), tomar 100 ml del
líquido sobrenadante e introducirlos en un matraz aforado de200 ml. Mezclarcon acetona, (3.6) y completarel volumen con
dicho disolvente, homogeneizar y filtrar.
5.2.Titulación
Introducir mediante la pipeta en un erlenmeyer de 25 a 100 ml del
filtrado (según el contenido supuesto en cloro) obtenido en 5.1.1.,
5.1.2. o 5.1.3. La porción alícuota no debe contener más de 150 mg de
cloro (Cl). Diluir, si fuera necesario, a 50 ml como mínimo con el agua,
añadir 5 ml de ácido nítrico (3,4), 20 ml de solución saturada de sulfato
de amonio férrico (3.3) y dos gotas de solución de triocianato de amonio
(3.1) suministradas mediante una bureta llena hasta la marca de aforo
cero. Suministrar a continuación mediante una bureta la solución de
nitrato de plata (3.2) de forma que se pueda obtener un exceso de 5 ml.
Añadir 5 ml de éter dietílico (3.5) y agitar fuertemente para concentrar
el precipitado.
Titularel exceso de nitr ato de plata mediante la solución de tiocianato
de amonio (3.1) hasta que el virado al ocre persista durante un minuto.
6.Cálculodelosresultados
La cantidad de cloro (p), expresada en cloruro de sodio, presente en el
volumen de filtrado tomado para la titulación viene dada por la fórmula
siguiente:
p = 5,845 (V
1−V2)m g
donde: V1= ml de solución de nitrato de plata 0,1 añadidos
V2= ml de solución de tiocianato de amonio 0,1 N empleados al
efectuarla titulación.1971L0250 — ES — 26.05.1999 — 003.001 — 12
▼B
Si la prueba en blanco indica un consumo de solución de nitrato de plata
0,1 N, restar dicho valor del volumen (V1−V2).
Expresar el resultado en porcentaje de la muestra.
7.Observaciones
7.1. La titulación podrá igualmente efectuarse mediante potenciometria;
7.2. Para los productos muy ricos en materias grasas, proceder a un desen-
grasado previo mediante el éter dietílico o el éter de petroleo;
7.3. Para las harinas de pescado, la titulación puede efectuarse mediante el
método de Mohr.
9. DETERMINACIÓN DE LA LACTOSA
1.Objetivoyámbitodeaplicación
El método permite determinar el contenido en lactosa de los alimentos cons-
tituidos en más del 0,5 % poreste elemento.
2.Principio
Los azúcares se disuelven en el agua. La solución se somete a la fermenta-
ción porla levadur a Saccharomycers cerevisiae, que deja intacta la lactosa.
Previa defecación de la filtración, el contenido en lactosa del filtrado se
determina por el método Luff-Schoorl.
3.Reactivos
3.1. Suspensión de Saccharomycers cerevisiae: Poneren suspensión 25 g de
levadura fresca en 100 ml de agua. La suspensión se conserva una
semana como máximo en el refrigerador.
3.2. Solución Carrez I:
Disolveren agua 24 g de acetato de cinc Zn(CH3COO)2·2H2Oy3g
de ácido acético glacial. Completara 100 ml con agua.
3.3 Solución de Carrez II: Disolver en agua 10,6 g de ferrocianuro de
potasio K4(Fe (CN6))·3 H2O. Completara 100 ml con agua.
3.4. Reactivo según Luff-Schoorl:
Verter, agitando siempre con prudencia, la solución de ácido cítrico
(3.4.2) en la solución de carbonato de sodio (3.4.3). Añadir a continua-
ción la solución de sulfato de cobre (3.4.1) y completar a 1 l con agua.
Dejar reposar una noche y filtrar. Controlar la normalidad del reactivo
así obtenido (Cu 0,1 N; Na2CO32 N). El pH de la solución deberá ser
9,4 aproximadamente.
3.4.1. Solución de sulfato de cobre: Disolver 25 g de sulfato de cobre
p.a. Cu SO4·5H2O, exento de hierro, en 100 ml de agua.
3.4.2. Solución de ácido cítrico:
Disolver50 g de ácido cítr ico p.a. C6H8O7·H2Oe n5 0m ld e
agua.
3.4.3. Solución de carbonato de sodio: Disolver 143,8 g de carbonato de
sodio anhidro p.a. en 300 ml aproximadamente de agua caliente.
Dejar enfriar.
3.5. Granulados de piedra pómez hervidos en el ácido clorhídrico, lavados en
el agua y secados.
3.6. Solución al 30 % (p/v) de yoduro de potasio.3.7. Acido sulfúrico 6 N.
3.8. Solución de tiosulfato de sodio 0,1 N.
3.9. Solución de almidón: Añadiruna mezcla de 5 g de almidón soluble en
30 ml de agua a 1 l de agua hirviendo. Hacer hervir durante tres
minutos, dejar enfriar, añadir si fuera necesario 10 mg de yoduro mercú-
rico como agente conservador.1971L0250 — ES — 26.05.1999 — 003.001 — 13
▼M3
▼B
▼B
4.Equipo
Baño de agua provisto de un termostato, regulado de 38 a 40 ºC.
5.Métodooperatorio
Pesar, con precisión de 1 g, 1 g de la muestra e introducir esta toma de
muestra en un matraz aforado. Añadir de 25 a 30 ml de agua. Colocar el
matraz durante treinta minutos en un baño de agua hirviendo y refrigerar a
continuación a 35 ºC aproximadamente. Añadir 5 ml de suspensión de leva-
dura (3.1) y homogeneizar. Dejar reposar el matraz durante dos horas en un
baño de agua, a la temperatura de 38 a 40 ºC. Refrigerar a continuación hasta
20 ºC aproximadamente.
Añadir 2,5 ml de solución de Carrez I (3.2) y agitar durante treinta segundos;
añadir a continuación 2,5 ml de solución de Carrez II (3.3) y agitar de nuevo
durante treinta segundos. Completar a 100 ml con agua mezclar y filtrar.
Tomarcon la pipeta una cantidad de filtr ado que no exceda de 25 ml y que
contenga con preferencia de 40 a 80 mg de lactosa e introducir ésta en un
erlenmeyer de 300 ml. Si fuera necesario, completar a 25 ml con agua.
Proceder de la misma manera a un ensayo en blanco en 5 ml de suspensión
de levadura (3.1).
Determinar tal como se indica el contenido en lactosa según Luff-Schoorl.
Añadir 25 ml exáctamente del reactivo sgún Luff-Schoorl (3.4) y dos granu-
lados de piedra pómez (3.5). Calentar, agitando manualmente, sobre una
llama libre de media altura y llevar el líquido a ebullición durante dos
minutos aproximadamente. Colocar inmediatamente el erlenmeyer sobre una
tela metálica provista de una pantalla de amianto con un agujero de 6 cm de
diámetro aproximadamente, bajo la que se ha encendido previamente una
llama. Esta se regula de forma que sólo se caliente el fondo del erlenmeyer.
Adaptar a continuación un refrigerante a reflujo sobre el erlenmeyer. A partir
de este momento, hacer hervir durante diez minutos exáctamente. Refrigerar
inmediatamente en agua fría y, después de aproximadamente cinco minutos,
titulartal como se indica:
Añadir10 ml de solución de yodur o de potasio (3.6) erinmediatamente
después, y con prudencia (debido al riesgo de formación de espuma abun-
dante), 25 ml de ácido sulfúrico 6 N (3.7). Titular a continuación con la
solución de tiosulfato de sodio 0,1 N (3.8) hasta las aparición de una colora-
ción amarilla clara, añadir el indicador al almidón (3.9) y concluir la
titulación.
Efectuarla misma titulación sobr e una mezcla medida con exactitud de 25 ml
de reactivo según Luff-Schoorl (3.4) y 25 ml de agua, después de haber
añadido 10 ml de solución de yoduro de potasio (3.6) y 25 ml de ácido sulfú-
rico 6 N (3.7), sin llevar a ebullición.
6.Cálculodelosresultados
Establecer mediante la tabla aneja la cantidad de lactosa en mg que corres-
ponda a la diferencia entre los resultados de las dos titulaciones, expresados
en ml de tiosulfato de sodio 0,1 N.
Expresar los resultados en partes de lactosa anhidro por cada cien de la
muestra.
7.Observaciones
Para los productos que contengan más del 40 por ciento de los azúcares
fermentados, emplear más de 5 ml de suspensión de levadura (3.1)
Tabladevalorespara25mldereactivosegúnLuff-Schoorl
ml de Na2S2O30,1 N, dos minutos de calentamiento, diez de ebullición
Na2S2O30,1 NGlucosa, fructosa,
azucares invertidos
C6H12O6Lactosa
C12H22O11Maltosa
C12H22O11Na2S2O30,1 N
ml mg diferencia mg diferencia mg diferencia ml
1 2,4 2,4 3,6 3,7 3,9 3,9 1
2 4,8 2,4 7,3 3,7 7,8 3,9 2
3 7,2 2,5 11,0 3,7 11,7 3,9 34 9,7 2,5 14,7 3,7 15,6 4,0 4
5 12,2 2,5 18,4 3,7 19,6 3,9 5
6 14,7 2,5 22,1 3,7 23,5 4,0 67 17,2 2,6 25,8 3,7 27,5 4,0 71971L0250 — ES — 26.05.1999 — 003.001 — 14
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Na2S2O30,1 NGlucosa, fructosa,
azucares invertidos
C6H12O6Lactosa
C12H22O11Maltosa
C12H22O11Na2S2O30,1 N
ml mg diferencia mg diferencia mg diferencia ml
8 19,8 2,6 29,5 3,7 31,5 4,0 8
9 22,4 2,6 33,2 3,8 35,5 4,0 9
10 25,0 2,6 37,0 3,8 39,5 4,0 10
11 27,6 2,7 40,8 3,8 43,5 4,0 1112 30,3 2,7 44,6 3,8 47,5 4,1 1213 33,0 2,7 48,4 3,8 51,6 4,1 13
14 35,7 2,8 52,2 3,8 55,7 4,1 14
15 38,5 2,8 56,0 3,9 59,8 4,1 1516 41,3 2,9 59,9 3,9 63,9 4,1 16
17 44,2 2,9 63,8 3,9 68,0 4,2 17
18 47,1 2,9 67,7 4,0 72,2 4,3 1819 50,0 3,0 71,7 4,0 76,5 4,4 19
20 53,0 3,0 75,7 4,1 80,9 4,5 20
21 56,0 3,1 79,8 4,1 85,4 4,6 2122 59,1 3,1 83,9 4,1 90,0 4,6 2223 62,2 3,1 88,0 94,6 23
10. DETERMINACIÓN DEL POTASIO
1.Objetivoyámbitodeaplicación
El método permite determinar el contenido en potasio de los alimentos para
animales
2.Principio
La muestra se incinera y las cenizas se ponen en solución en ácido clorhí-
drico. El contenido en potasio de la solución se determina por fotometría dellama en presencia de cloruro de cesio y de nitrato de aluminio. La adición
de dichas substancias elimina, en una amplia medida, la interferancia de
elementos perturbadores.
3.Reactivos
3.1. Ácido clorhídrico p.a., d: 1,12.
3.2. Cloruro de cesio p.a.
3.3. Nitrato de aluminio Al (NO
3)3·9H2O, químicamente puro.
3.4. Cloruro de potasio p.a., anhidro.3.5. Solución tampón: disolver en el agua 50 g de cloruro de cesio (3.2) y
250 g de nitrato de aluminio (3.3), completar a 1 l con agua y homoge-
neizar. Conservar en frascos de material plástico.
3.6. Solución patrón de potasio: disolver en el agua 1,907 g de cloruro de
potasio (3.4), añadiendo 5 ml de ácido clorhídrico (3.1), completar a 1 l
con agua y homogeneizar. Conservar en frascos de material plástico.
1 ml de dicha solución continen 1,00 mg de potasio.
4.Equipo
4.1. Crisoles de incineración de platino, cuarzo o porcelana, en su caso
provistos de tapaderas.
4.2. Horno eléctrico, con termostato.4.3. Fotómatro de llama.
5.Métodooperatorio
5.1.Análisis de la muestra
Pesar, como norma general, con precisión de 10 mg, 10 g de la muestra,
en un crisol de incineración e incinerar la substancia a 450 ºC durante
tres horas. Después de refrigerar, transvasar cuantitativamente el residuo
de incineración con la ayuda de 250 a 300 ml de agua, y después de
50 ml de ácido clorhídrico (3.1), a un matraz aforado de 500 ml.
Después de cesar el posible desprendimiento de gas carbónico, calentar1971L0250 — ES — 26.05.1999 — 003.001 — 15
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la solución y mantenerla durante dos horas a una temperatura cercana a
los 90 ºC, agitando de vez en cuando. Dejar refrigerar a la temperatura
ambiente, anrasar, agitar y filtrar. Introducir en un matraz aforado de
100 ml una parte alícuota de filtrado que contenga como máximo
1,0 mg de potasio, añadir10,0 ml de solución tampón (3.5), enr asar
con agua y homogeneizar. En presencia de más altos contenidos en
potasio, diluir la solución por analizar en proporciones adecuadas, antes
de la adición de la solución tampón. El cuadro siguiente se da a título
indicativo para una toma de muestras de 10 g aproximadamente.
Contenido supuesto de la muestra
en potasio
(% K)Factorde dilución Par te alícuota en ml de la solución
hasta 0,1 — 50
0,1 a 0,5 — 10
0,5 a 1,0 — 51,0 a 5,0 1: 10 10
5,0 a 10,0 1: 10 5
10,0 a 20,0 1: 20 5
Efectuarla medición porfotometr ía de llama a la longitud de onda de
768 nm. Calcular el resultado con ayuda de la curva de calibrado.
5.2.Curva de calibrado
Introducir 10 ml exactamente de la solución de calibrado (3.6) en un
matraz aforado de 250 ml, enrasar con agua y homogeneizar. Introducir
en matraces aforados de 100 ml exáctamente 5, 10, 15, 20 y 25 ml de
dicha solución, que corresponden respectivamente a cantidades de
potasio de 0,2, 04, 0,6, 0,8 y 1,0 mg. Completar la serie por un matraz
testigo exento de solución de calibrado. Añadir en cada matraz 10,0 ml
de solución tampón (3.5), enrasar con agua y homogeneizar. Efectuar las
madidas como se indica en 5.1. El trazado de la curva de calibrado es en
general lineal hasta una concentración en potasio de 1 mg en 100 ml de
solución.
6.Cálculodelosresultados
Expresar el resultado en porcentaje de la muestra.
7.Observaciones
La adición de solución tampón (3.5) para eliminar la interferencia de
elementos perturbadores no es siempre necesaria.
11. DETERMINACIÓN DEL SODIO
1.Objetivoyámbitodeaplicación
El método permite determinar el contenido en sodio de los alimentos para
animales.
2.Principio
La muestra se incinera y las cenizas se ponen en solución en el ácido clorhí-
drico. El contenido en sodio de la solución se determina por fotometría de
llama en presencia de cloruro de cesio y de nitrato de aluminio. La adición
de estas substancias elimina, en una amplia medida, la interferencia de
elementos perturbadores.
3.Reactivos
3.1. Acido clorhídrico p.a., d: 1,12.
3.2. Cloruro de cesio, p.a.
3.3. Nitrato de aluminio Al (NO
3)3.9H2O, químicamente puro.
3.4. Cloruro de sodio p.a., anhidro.
3.5. Solución tampón: disolver en el agua 50 g de cloruro de cesio (3.2) y
250 g de nitrato de aluminio (3.3), completar a 1 l con agua y homoge-
neizar. Conservar en frascos de matrial plástico.
3.6. Solución de calibrado de sodio. disolver en el agua 2,542 g de cloruro
de sodio (3.4) añadiendo 5 ml de ácido clorhídrico (3.1), completar a 1 l1971L0250 — ES — 26.05.1999 — 003.001 — 16
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con agua y homogeneizar. Conservar en frascos de material plástico.
1 ml de dicha solución contiene 1,00 mg de sodio.
4.Equipo
4.1. Crisoles de incieneración de platino, cuarzo o porcelana, en su caso
provistos de tapaderas.
4.2. Horno eléctrico, con termostato.
4.3. Fotómetro de llama.
5.Métodooperatorio
5.1.Análisis de la muestra
Pesar, como norma general, 10 g de la muestra con precisión de 10 mg
en un crisol de incineración de incinerar la substancia a 450 ºC durante
tres horas. Evitar el recalentamiento (inflamación). Previo enfriamiento,
transvasar cuantitativamante el residuo de incineración con ayuda de
250 a 300 ml de agua, y después con 50 ml de ácido clorhídrico (3.1),
a un matraz aforado de 500 ml.
Después de haber cesado el posible desprendimiento de gas carbónico,
calentar la solución y mantenerla durente dos horas a una temperatura
cercana a 90 ºC, agitando de vez en cuando. Dejar refrigerar a la tempe-
ratra ambiente, enrasar con agua agitar y filtrar. Introducir en un matraz
aforado de 100 ml na parte alícuota del filtrado qe contenga como
máximo 1,0 mg de solución tampón (3.5), enrasar con agua y homoge-
neizar. En presencia de contenidos más altos en sodio, diluir la solución
qe deba analizarse en proporciones adecuadas, antes de la adición de la
solución tampón. La tabla siguiente se da a título informativo para una
toma de muestras de 10 g aproximadamente
Contenido supuesto de la muestra
en solución
(% Na)Factorde dilución Par te alícuota en ml de la solución
hasta 0,1 — 50
0,1 a 0,5 — 100,5 a 1,0 — 51,0 a 5,0 1: 10 10
5,0 a 10,0 1: 10 5
10,0 a 20,0 1: 20 5
Efectuarla medición mediante fotometr ía de llama a una longitud de
onda de 589 mm.
Calcular el resultado de calibrado.
5.2.Curva de calibrado
Introducir 10 ml exáctamente de la solución patrón (3.6) en un matraz
aforado de 250 ml, enrasar con agua y homogeneizar. Introducir en
matraces aforados de 100 ml exáctamente 5, 10, 15, 20 y 25 ml de dicha
solución que corresponda respectivamente a unas cantidades de sodio de
0,2, 0,4, 0,6, 0,8 y 1,0 mg. Completar la serie mediante un matraz
testigo exento de solución patrón. Añadir en cada matraz 10,0 ml de
solución tampón (3.5), enrasar con agua y homogeneizar. Efectuar las
mediciones como se indica en 5.1. El trazado de la curva de muestro
es en general lineal hasta una concentración en sodio de 1 mg en
100 ml de solución.
6.Cálculoderesultados
Expresar el resultado en porcentaje de la muestra.
7.Observaciones
7.1. Para los productos cuyo centenido en sodio sea superior al 4 %, es
preferible incinerar la substancia durante dos horas en un crisol provisto
de una tapadera. Después de proceder a un enfriamiento, añadir agua,
ponerel r esiduo en suspensión con la ayuda de un hilo de platino, secar
e incinerar de nuevo durante dos horas en el crisol provisto de su tapa-
dera.
7.2. Sie la muestra está constituida únicamente por materiales minerales,
proceder a la disolución, sin previa incineración.1971L0250 — ES — 26.05.1999 — 003.001 — 17
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12. DETERMINACIÓN DE LOS AZUCARES
1.Objetivosyámbitodeaplicación
El método permite determinar los azúcares reductores y los azúcares totales
previa inversión, expresados en glucosa o, en su caso en sacarosa, por
conversión con ayuda del factor 0,95. Este método es aplicable a los piensos
completos compuestos. Se prevén modalidades especiales para otros
alimentos. En su caso, procede determinar por separado la lactosa y tenerlo
en cuenta al calcularlos r esultados.
2.Principio
Los azúcares se disuelven en etanol diluido; la solución se defeca mediante
los reactivos de Carrez I y II. Tras la eliminación del etanol, se efectúan las
determinaciones antes y después de la inversión, según el método de Luff-
Schoorl.
3.Reactivos
3.1. Etanol al 40 % (v/v), d: 0,948 a 20 ºC, llevado al punto de virado de la
fenolftaleína.
3.2. Solución de Carrez I:
Disolveren agua 24 g de acetato de cinc Zn (CH3COO)2·2H2Oy3g
de ácido acético glacial. Competara 100 ml con agua.
2H2Oy3gd e ácido acético glacial. Completara 100 ml con agua.
3.3. Solución de Carrez II: Disolver en agua 10,6 g de ferrocianuro de
potasio K4[Fe(CN6)] 3 H2O. Competara 100 ml con agua.
3.4. Solución al 0,1 % (p/v) de naranja de metilo.3.5. Acido clorhídrico 4 N.3.6. Acido clorhídrico 0,1 N.3.7. Solución de hidróxido de sodio 0,1 N.
3.8. Reactivo según Luff-Schoorl:
Verter, agitando siempre con prudencia, la solución de ácido cítrico
(3.8.2) en la solución de carbonato de sodio (3.8.3). Añadir a continua-
ción la solución de sulfato de cobre (3.8.1) y completar a 1 l con agua.
Dejar reposar una noche y filtrar. Controlar la normalidad del reactivo
obtenido de esta forma Cu 0,1 N: Na
2CO32N). El pH de la solución
debe serde 9,4 apr oximadamente.
3.8.1. Solución de sulfato de cobre: disolver 25 g de sulfato de cobre
p.a., Cu SO4·5H2O, exento de hierro, en 100 ml de agua.
3.8.2. Solución de ácido cítrico: disolver 50 g de ácido cítrico p.a.
C6H8O7·H2O, en 50 ml de agua.
3.8.3. Solución de carbonato de sodio: disolver 143,8 g de carbonato
de sodio anhidro p.a. en 300 ml aproximadamente de agua
caliente. Dejar enfriar.
3.9. Solución de tiosulfato de sodio 0,1 N.3.10. Solución de almidón: Añadiruna mezcla de 5 g de almidón soluble en
30 ml de agua a 1 l de agua hirviendo. Hacer hervir durante tres
minutos, dejar enfriar, añadir en su caso 10 mg de yoduro mercúrico
como agente conservador.
3.11. Acido sulfúrico 6 N.3.12. Solución al 30 % (p/v) de yoduro de potasio.3.13. Granulados de piedra pómez hervidos en el ácido clorhídrico, lavados
con agua y secados.
3.14. Isopentanol.
4.Equipo
Mezclador (balancín): aproximadamente de 35 a 40 revoluciones por minuto.1971L0250 — ES — 26.05.1999 — 003.001 — 18
▼B
5.Métodooperatorio
5.1.Puesta en solución
Pesar, con precisión de 1 mg, 2,5 g de la muestra, e introducirlos en un
matraz aforado de 250 ml. Añadir 200 ml de etanol (3.1) y mezclar
durante una hora en el belancín. Añadir 5 ml de solución de Carrez
(3.3) y agitarde nuevo dur ante un minuto. Llevaral volumen con etanol
(3.1), homogeneizar y filtrar. Tomar 200 ml del filtrado y evaporar alre-
dedorde la mitad del volumen, con el fin de eliminarla mayorpar te del
etanol. Transvasar cuantitativamente el residuo de evaporación, con la
ayuda de agua caliente, a un matraz aforado de 200 ml, refrigerar, llevar
el volumen con agua, homogensizar y filtrar si fuera necesario. Dicha
solución se empleará para la determinación de los azúcares reductores
y, previa inversión, para la determinación de los azúcares totales.
5.2.Determinación de los azúcares reductores
Tomarpormedio de la pipeta una cantidad de solución que no exceda
de 25 ml y que contenga menos de 60 mg de azúcares reductores, expre-
sados en glucosa. Si fuere necesario, completar a 25 ml con agua
destilada y determinar el contenido en azúcares reductores según Luff-
Schoorl. El resultado se expresará en glucosa por ciento.
5.3.Determinación de los azúcares totales tras inversión
Tomarpormedio de la pioeta 50 ml de solución y llevar los en un
matraz aforado de 100 ml. Añadir algunas gotas de solución de naranja
de metilo (3.4) después, agitando siempre con prudencia, de ácido
clorhídrico 4 N (3.5) hasta virado claro al rojo. Añadir 15 ml de ácido
clorhídrico 0,1 N (3.6), sumergir el matraz en un baño de agua en fuerte
ebullición y mantenerlo allí durante treinta minutos. Refrigerar rápide-
mente a 20 ºC aproximadamente y añadir 15 ml de solución de
hidróxido de sodio 0,1 N (3.7). Completar a 100 ml con agua y homo-
geneizar. Tomar una cantidad que no exceda de 25 ml y que contenga
menos de 60 mg de azúcares reductores, expresandos en glucosa. Si
fuera necesario, completar a 25 ml con agua destilada y determinar el
contenido en azúcares reductores según Luff-Schoorl. El resultado se
expresa en glucosa por ciento o, en su caso, en sacarosa, multiplicando
porel factor0,95.
5.4.Titulación según Luff-Schoorl
Tomar por medio de la pipeta 25 ml del reactivo según Luff-Schoorl
(3.8) y llevarlos a un Erlenmeyer de 300 ml; añadir 25 ml, medidos
con exactitud, de la solución defecada de azúcares. Añadir dos granu-
lados de piedra pómez (3.13), calentar, agitando manualmente, sobre
una llama libre de altura media y llevar el líquido a ebullición en dos
minutos aproximadamente. Colocar inmediatamente el erlenmeyer sobre
una tela metálica provista de una pantalla de amianto con un agujero de
6 cm aproximadamente de diámetro, bajo cuya tela se ha encendido
previamente una llama. Esta se regula de forma que sólo se caliente el
fondo del erlenmeyer. Adaptar a continuación un refrigerante de reflujo
sobre el erlenmeyer. A aprtir de este momento, hacer hervir durante diez
minutos exáctamente. Refrigerar inmediatamente en agua fría y, después
de aproximadamente cinco minutos, titular tal como se indica a conti-
nuación:
Añadir10 ml de solución de yodur o de potasio (3.12) e, inmediatamente
después y con prudencia (debido al riesgo de formación de espuma
abundante), 25 ml de ácido sulfúrico 6 N (3.11). Titular a continuación
porla solución de tiosulfato de sodio 0,1 N (3.9) hasta la apar ición de
una coloración amarilla clara, añadir el indicador al almidón (3.10) y
concluirla titulación.
Efectuarla misma titulación sobr e una mezcla exáctamente medida de
25 ml de reactivo según Luff-Schoorl (3.8) y 25 ml de agua, después
de haberañadido 10 ml de solución de yodur o de potasio (3.12) y
25 ml de ácido sulfúrico 6 N (3.11) sin llevar a ebullición.
6.Cálculodelosresultados
Establecer con la ayuda de la tabla la cantidad de glucosa en mg correspon-
diente a la diferencia entre los valores de las dos titulaciones, expresados en
ml de tiosulfato de sodio 0,1 N.
Expresar el resultado en porcentaje de la muestra.1971L0250 — ES — 26.05.1999 — 003.001 — 19
▼B
7.Métodosoperatoriosparticulares
7.1. Para los alimentos muy ricos en melaza y otros alimentos poco homogé-
neos, pesar 20 g e introducirlos en un matraz aforado de 1 l con 500 ml
de agua. Mezclar durante una hora en el balancín. Defecar por medio de
los reactivos de Carrez I (3.2) y II (3.3) tal como se describe en 5.1.
empleando, sin embargo, una cantidad 4 veces más elevada de cada
reactivo. Llevar al volumen con el etanol al 80 % (v/v).
Homogeneizar y filtrar. Eliminar el etanol tal como se describe en 5.1.
En ausencia de almidón dextrinado, llevar al volumen con agua desti-
lada.
7.2. Para las melazas y los alimentos simples, ricos en azúcares y práctica-
mente exentos de almidón (algarrobos, peladuras desecadas de
remolachas, etc.) pesar 5 g introducirlos en un matraz aforado de
250 ml, añadir 200 ml de agua destilada y mezclar durente una hora o
más, si fuera necesario, en el balancín. Defecar a continuación por
medio de los reactivos de Carrez I (3.2) y II (3.3), tal como se describe
en 5.1 llevar al volumen con agua, homogeneizar y filtrar. Para deter-
minar los azúcares totales, actuar tal como se describe en 5.3.
8.Observaciones
8.1. Se recomienda añadir aproximadamente 1 ml de isopentanol (3.14) (sin
tomar el volumen en consideración) antes de la ebullición con el reac-
tivo de Luff-Schoorl, con el fin de evitar la formación de espuma.
8.2. La diferencia entre el contenido en azúcares totales después de la inver-
sión, expresados en glucosa, y el contenido en azúcares reductores,
expresados en glucosa, multiplicada por 0,95, da el contenido en saco-
rosa por ciento.
8.3. Para determinar el contenido en azúcares reductores, excluida, la lactosa
podrán adoptarse dos vías:
9.3.1. Para un cálculo aproximativo, se multiplica por 0,675 el conte-
nido en lactosa establecido para una determinación separada y se
resta el resultado obtenido del contenido en azúcares reductores.
8.3.2. Para un cálculo preciso de los aceites reductores, excluida la
lactosa, es necesario partir de la misma toma de muestras para
las dos determinaciones finales. Uno de los análisis se efectúa
sobre una parte en la solución obtenida en 5.1. en otro sobre una
parte de la solución obtenida al realizarse la determinación de la
lactosa según el método previsto con tal fin (previa fermentación
de las otras especies de azúcares y defecación).
En ambos casos, la cantidad de azucar presente se determina según el
método de Luff-Schoorl y se calcula en mg de glucosa. Los dos valores
se restan el uno del otro y la diferencia se expresa en porcentaje de la
muestra.
EjemploLos dos valores tomados corresponden, para cada determinación, a una
toma de muestras de 250 mg.
En el primer caso, se consumen 17 ml de solución de tiosulfato de sodio
0,1 N, lo que corresponde a 44,2 mg de glucos, en el segundo caso
11 ml, lo que corresponde a 27,6 mg de glucosa.
La diferencia se eleva a 16,6 mg de glucosa.El contenido en azúcares reductores (exceptuando la lactosa), calculado
en glucosa es pues de:
4/C216;6
10¼6;64 %1971L0250 — ES — 26.05.1999 — 003.001 — 20
▼B
Tabladelosvalorespara25mldereactivosegúnLuff-Schoorl
ml de Na2S2O30,1 N, dos minutos de calentamiento, diez de ebullición.
Na2S3O30,1 NGlucosa, fructosa,
azucares in vertidos
C6H12O6Lactosa
C12H22O11Maltosa
C12H22O11Na2S2O30,1 N
ml mg diferencia mg diferencia mg diferencia ml
1 2,4 2,4 3,6 3,7 3,9 3,9 1
2 4,8 2,4 7,3 3,7 7,8 3,9 2
3 7,2 2,5 11,0 3,7 11,7 3,9 3
4 9,7 2,5 14,7 3,7 15,6 4,0 45 12,2 2,5 18,4 3,7 19,6 3,9 56 14,7 2,5 22,1 3,7 23,5 4,0 6
7 17,2 2,6 25,8 3,7 27,5 4,0 7
8 19,8 2,6 29,5 3,7 31,5 4,0 89 22,4 2,6 33,2 3,8 35,5 4,0 9
10 25,0 2,6 37,0 3,8 39,5 4,0 10
11 27,6 2,7 40,8 3,8 43,5 4,0 1112 30,3 2,7 44,6 3,8 47,5 4,1 12
13 33,0 2,7 48,4 3,8 51,6 4,1 13
14 35,7 2,8 52,2 3,8 55,7 4,1 1415 38,5 2,8 56,0 3,9 59,8 4,1 1516 41,3 2,9 59,9 3,9 63,9 4,1 16
17 44,2 2,9 63,8 3,9 68,0 4,2 17
18 47,1 2,9 67,7 4,0 72,2 4,3 1819 50,0 3,0 71,7 4,0 76,5 4,4 19
20 53,0 3,0 75,7 4,1 80,9 4,5 20
21 56,0 3,1 79,8 4,1 85,4 4,6 2122 59,1 3,1 83,9 4,1 90,0 4,6 22
23 62,2 88,0 94,6 23
14. DETERMINACIÓN DE LA UREA
1.Objetivoycampodeaplicación
El método permite determinar el contenido en urea de los alimentos para
animales
2.Principio
La muestra se pone en suspensión en agua en presencia de un defecante. La
suspensión se filtra. El contenido en urea del filtrado se determina, tras la
adición de 4-dimetilaminobenzaldehido (4-DMAB), pormedio de la densidad
óptica a la longitud de onda de 420 mm.
3.Reactivos
3.1. Solución de 4-dimetilaminobenzaldehido: disolver1,6 g de 4-DMAB
p.a. en 100 ml de etanol al 96 % y añadir 10 ml de ácido clorhídrico
p.a. (D: 1,19). Dicho reactivo se conserva como máximo durante dos
semanas.
3.2. Solución de Carrez I:
disolveren agua 24 g de acetato de cinc, Zn (CH3COO)2·2H2Oy3g
de ácido acético glacial. Completara 100 ml con agua.
3.3. Solución de Carrez II: disolver en agua 10,6 g de ferrocianuro de
potasio K4Fe(CN)6·3H2O. Completara 100 ml con agua.
3.4. Carbón activo p.a., que no absorba la urea (que habrá de controlarse)
3.5. Solución al 0,1 % (p/v) de urea p.a.
4.Equipo
4.1. Mezclador (balancín): de alrededor de 35 a 40 revoluciones por minuto.
4.2. Tubos de ensayo: 160 × 16 mm, de tapones esmerilados.1971L0250 — ES — 26.05.1999 — 003.001 — 21
▼M3
▼B
▼B
4.3. Espectrofotómetro.
5.Métodooperatorio
5.1.Análisis de la muestra
Pesar, con precisión de 1 mg, 2 g de la muestra e introducirlos con 1 g
de carbón activo (3.4) en un frasco aforado de 500 ml. Añadir 400 ml de
agua y 5 ml de las soluciones de Carrez I (3.2) y II (3.3). Mezclar
durante treinta minutos en el balancín. Completar al volumen con agua,
agitar y filtrar.
Tomar 5 ml de los filtrados límpidos e incoloros, introducirlos en los
tubos de ensayo de tapón esmerilado, añadir 5 ml de solución de 4-
DMAB (3.1) y mezclar. Colocar los tubos en un baño de agua a 20 ºC.
Tras quince minutos, medir la densidad óptica de la solución de la
muestra al espedtómetro a 420 mm por comparación con la solución
del ensayo en blanco de los reactivos.
5.2.Curva de calibrado
Tomarvolúmenes de 1, 2, 4, 5 y 10 ml de la solución de ur ea (3.5),
introducirlos en los matraces esmerilados de 100 ml y completar al
volumen con agua. Tomar5 ml de cada solución, añadirr espectiva-
mente 5 ml de solución de 4-DMAB (3.1) homogeneizary medirla
densidad óptoca como se indica más arriba por comparación con una
solución testigo que contenga 6 ml de 4-DMAB y 5 ml de agua, exenta
de urea. Trazar la curva de calibrado.
6.Cálculodelosresultados
Determinar la cantidad de urea de la toma de muestra en lo que se refiere a
la curva de calibrado.
Expresar el resultado en porcentaje de la muestra.
7.Observaciones
7.1. Para los contenidos de urea superiores al 3 %, reducir la muestra de
ensayo a 1 g o diluirla solución inicial par a que no haya más de 50 mg
de urea en 500 ml.
7.2. Para los pequeños contenidos de urea, aumentar la muestra de ensayo, si
bien el filtrado debe ser límpido e incoloro.
7.3. Si la muestra contiene compuestos nitrogenados simples, tales como
aminoácidos, es conveniente realizar la medida de la densidad óptica a
435 nm.
16. DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD UREASICA DE PRODUCTOS
DERIVADOS DE LA SOJA
1.Objetivoycampodeaplicación
La prueba permite determinar la actividad de ureasa de los productos deri-
vados de la soja y ponerde manifiesto la cocción insuficiente de dichos
productos.
2.Principio
La actividad ureásica se determina por la contidad de nitrógeno amoniacal
liberado por 1 g de producto en un minuto, a 30 ºC, a partir de una solución
de urea.
3.Reactivos
3.1 Acido clorhídrico 0,1 N.3.2 Solución de hidróxido de sodio 0,1 N.3.3 Solución tampón de fosfatos 0,05 M conteniendo en 100 ml 4,45 g de
fosfato disódico (Na
2HPO4·2H2O) y 3,40 g de fosfato monopotásico
(KH2PO4).
3.4 Solución tamponada de urea, preparada recientemente, conteniendo 30,0 g
de urea por 1 000 ml de solución tampón (3.3); pH 6,9-7,0.1971L0250 — ES — 26.05.1999 — 003.001 — 22
▼M2
▼B
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4.Equipo
4.1 Aparato de titulación potenciométrica o pH-metro muy sensible
(0,02 pH), con agitadormagnético.
4.2 Baño de agua provisto de un termostato regulado a 30 ºC exactamente.
4.3 Tubos de ensayo: 150 × 18 mm, con tapones esmerilados.
5.Métodooperatorio
Triturar (en un molino de café, por ejemplo) 10 g aproximadamente de la
muestra, de forma que pase a través de un tamiz de mallas de 0,2 mm. En
un tubo de ensayo de tapón esmerilado, pesar, con precisión de 1 mg, 0,2 g
de la muestra triturada y añadir 10 ml de la solución tamponada de urea
(3.4). Taparinmediatamente y agitarvigor osamente. Llevarel tubo al baño
de agua regulado a 30 ºC exactamente y dejarlo allí treinta minutos exácta-
mente. Inmediatamente después, añadir 10 ml de ácido clorhídrico 0,1 N
(3.1), refrigerar rápidamente a 20 ºC y transvasar cuantitativamente el conte-
nido del tubo aun recipiente de titulación, limpiando dos veces con 5 ml de
agua. Titularinmediatamente y con r apidez pormedio de la solucíon de
hidróxido de sodio 0,1 N (3.2) por electrometría con la ayuda de un electrodo
de cristal, hasta pH 4,7.
Efectuar una prueba en blanco, operando tal como se indica.Introducir rapida y sucesivamente en un tubo de ensayo de tapón esmerilado
una toma de muestras de 0,2 g, pesada con precisión de 1 mg, 10 ml de ácido
clorhídrico 0,1 N (3.1) y 10 ml de solución tamponada de urea (3.4). Refri-
gerar inmediatamente el tubo en agua helada y dejarlo allí treinta minutos.
Transvasar a continuación, en las condiciones indicadas anteriormente, el
contenido del tubo al recipiente de titulación por medio de la solución de
hidróxido de sodio 0,1 N (3.2) hasta pH 4,7.
6.Cálculodelosresultados
La actividad ureásica viene dada por la fórmula:
mg N
g min :a3 0º C ¼1;4b/C0a ðÞ
30/C1E
donde a = ml de solución de hidróxido de sodio 0,1 N consumidos por la
toma de muestras.
b = ml de solución de hidróxido de sodio 0,1 N consumidos por la
toma de muestras en blanco.
E = toma de muestras en g.
7.Observaciones
7.1. El método es conveniente para una actividad ureásica que pueda
alcanzar 1 mg de N/g min a 30 ºC. Para productos más activos, la
toma de muestras puede reducirse hasta 50 mg.
7.2. Los productos cuyo contenido en materias grasas brutas sobrepase el
10 % deben haber sido desgrasados en frío previamente.1971L0250 — ES — 26.05.1999 — 003.001 — 23