1990L0426 — ES — 23.02.2002 — 007.001 — 1
Estedocumentoesuninstrumentodedocumentaciónynocomprometelaresponsabilidaddelasinstituciones
►B DIRECTIVADELCONSEJO
de26dejuniode1990
relativaalascondicionesdepolicíasanitariaqueregulanlosmovimientosdeéquidosylasimpor-
tacionesdeéquidosprocedentesdepaísesterceros
(90/426/CEE)
(DO L 224 de 18.8.1990, p. 42)
Modificada por:
Diario Oficial
nopágina fecha
►M1Directiva 90/425/CEE del Consejo de 26 de junio de 1990 L 224 29 18.8.1990
►M2Directiva del Consejo de 15 de julio de 1991 L 268 56 24.9.1991
►M3Decisión 92/130/CEE de la Comisión de 13 de febrero de 1992 L 47 26 22.2.1992
►M4Directiva 92/36/CEE del Consejo de 29 de abril de 1992 L 157 28 10.6.1992
►M5Decisión 2001/298/CE de la Comisión de 30 de marzo de 2001 L 102 63 12.4.2001
►M6Decisión 2002/160/CE de la Comisión de 21 de febrero de 2002 L 53 37 23.2.2002
Modificada por:
►A1Acta de adhesión de Austria, de Finlandia y de Suecia C 241 21 29.8.1994
(adaptada porDecisión 95/1/CE, Eur atom, CECA del Consejo) L 1 1 1.1.1995
Rectificada por:►
C1Rectificación, DO L 296 de 27.10.1990, p. 66 (90/426/CEE)
▼B
DIRECTIVADELCONSEJO
de26dejuniode1990
relativaalascondicionesdepolicíasanitariaqueregulanlosmovi-
mientos de équidos y las importaciones de équidos procedentes de
paísesterceros
(90/426/CEE)
EL CONSEJO DE LAS COMUNIDADES EUROPEAS,
Visto el Tratado constitutivo de la Comunidad Económica Europea y,
en particular, su artículo 43,
Vista la propuesta de la Comisión (1),
Visto el dictamen del Parlamento Europeo (2),
Visto el dictamen del Comité Económico y Social (3),
Considerando que los équidos, por cuanto se trata de animales vivos,
están incluidos en la lista de los productos enumerados en el Anexo II
del Tratado;
Considerando que, para garantizar un desarrollo racional de la produc-
ción de équidos e incrementar así la productividad de este sector, esnecesario fijar a nivel comunitario normas que regulen los movimientosde los équidos en los intercambios intracomunitarios;
Considerando que la cría de équidos y, en particular, de caballos, se
integra de modo general en el marco de las actividades agrarias; que
constituye una fuente de ingresos para una parte de la poblaciónagraria;
Considerando que es conveniente eliminar las disparidades existentes
en los Estados miembros en materia de policía sanitaria, con el fin defavorecer los intercambios intracomunitarios de équidos;
Considerando que, para permitir el desarrollo armonioso de los inter-
cambios intracomunitarios, es necesario definir un régimencomunitario aplicable a las importaciones procedentes de paísesterceros;
Considerando que respecto de los équidos registrados provistos de un
documento de identificación, conviene igualmente regular las condi-
ciones de sus movimientos en el territorio nacional;
Considerando que, para participar en los intercambios, los équidos
deben satisfacer determinadas exigencias de policía sanitaria, con elfin de evitar la propagación de enfermedades contagiosas; que pareceoportuno, en particular, prever una posible regionalización de lasmedidas restrictivas;
Considerando que, con este mismo propósito, es asimismo conveniente
fijar las condiciones de transporte;
Considerando que, para garantizar el cumplimiento de las exigencias
previstas, resulta necesario prever que un veterinario oficial expida uncertificado sanitario que acompañe a los équidos hasta su lugar dedestino;
Considerando que la organización y las consecuencias de los controles
que el Estado miembro de destino debe efectuar, y las medidas deprotección que deben adoptarse, deben ser fijadas en el marco de lanormativa que se apruebe sobre los controles veterinarios en los inter-cambios intracomunitarios de animales vivos en la perspectiva de larealización del mercado interior;1990L0426 — ES — 23.02.2002 — 007.001 — 2
(1)D O noC 327 de 30. 12. 1989, p. 61.
(2)D O noC 149 de 18. 6. 1990.
(3)D O noC 62 de 12. 3. 1990, p. 46.
▼B
Considerando que es conveniente prever que la Comisión tenga la posi-
bilidad de realizar controles; que dichos controles deben ser efectuadosen colaboración con las autoridades nacionales competentes;
Considerando que la definición de un régimen comunitario aplicable a
las importaciones procedentes de terceros países implica la confección
de una lista de los terceros países o partes de los terceros países desdelos que pueden importarse équidos;
Considerando que la selección de dichos países debe estar basada en
criterios de carácter general, tales como el estado sanitario del ganado,la organización y competencias de los servicios veterinarios y lanormativa sanitaria vigente;
Considerando, por otra parte, que es preciso no autorizar la importación
de équidos procedentes de países infectados o indemnes desde hacepoco tiempo de enfermedades contagiosas de los animales que
supongan un peligro para el ganado comunitario; que lo mismo cabe
decir para las importaciones procedentes de países terceros donde sepractiquen vacunaciones contra dichas enfermedades;
Considerando que será necesario completar las condiciones generales
aplicables a las importaciones procedentes de países terceros concondiciones particulares establecidas en función de la situación sani-taria de cada uno de ellos; que el carácter técnico y la diversidad de
criterios en los que deben basarse dichas condiciones particulares
requieren, para su definición, un procedimiento comunitario flexible yrápido en el que colaboren estrechamente la Comisión y los Estadosmiembros;
Considerando que la presentación, en la importación de équidos, de un
certificado que se ajuste a un modelo común constituye uno de losmedios más eficaces para comprobar la aplicación de la normativa
comunitaria; que dicha normativa podrá incluir disposiciones particu-
lares, que podrán variar según el país tercero de que se trate, y quedeberá tenerse en cuenta esta circunstancia al establecer los modelosde certificado;
Considerando que es conveniente encargar a los veterinarios de la
Comunidad la tarea de comprobar si, sobre todo por lo que respecta alos países terceros se cumplen los requisitos de la presente Directiva;
Considerando que el control de la importación debe centrarse en el
origen y estado sanitario de los équidos;
Considerando que las normas generales aplicables a los controles a
efectuar en la importación deben ser definidos en un marco global;
Considerando que todo Estado miembro debe poder prohibir en el acto
las importaciones procedentes de un país tercero cuando éstas puedan
poner en peligro la salud de los animales; que en tal caso es preciso,
sin perjuicio de las eventuales modificaciones de la lista de países auto-rizados para exportar a la Comunidad, garantizar sin demora lacoordinación de la actitud de los Estados miembros respecto de dichopaís tercero;
Considerando que las disposiciones de la presente Directiva deberán ser
revisadas en el marco de la plena realización del mercado interior;
Considerando que hay que prever un procedimiento que establezca una
cooperación estrecha y eficaz entre los Estados miembros y la Comi-sión en el seno del Comité veterinario permanente,1990L0426 — ES — 23.02.2002 — 007.001 — 3
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HA ADOPTADO LA PRESENTE DIRECTIVA:
CAPÍTULO I
Disposicionesgenerales
Artículo 1
La presente Directiva define las condiciones de policía sanitaria que
regulan los movimientos de équidos entre Estados miembros y lasimportaciones de équidos procedentes de países terceros.
Artículo 2
A efectos de la presente Directiva se entenderá por:
a) «explotación»: el establecimiento agrario o de entrenamiento, la
cuadra o, en general, cualquier local o instalación en que se tengan
o se críen habitualmente équidos, independientemente del uso al quese les destine;
b) «équidos»: los animales domésticos o salvajes de las especies
equinas — incluidas las cebras — y asnal y los animales resultantes
del cruce de las mismas;
c) «équidos registrados»: todo équido registrado tal como se define en
la Directiva 90/427/CEE (
1), identificado mediante un documento de
identificación expedido por la autoridad ganadera o cualquier otraautoridad competente del país de origen del équido encargada de lallevanza del libro genealógico o del registro de la raza de dichoéquido, o por toda asociación u organización internacional encar-gada del control de los caballos destinados a las competiciones o a
las carreras.
d) «équidos de abasto»: los équidos destinados al matadero para ser
sacrificados, bien directamente o bien después de pasar por unmercado o por centro de agrupamiento autorizado;
e) «équidos de crianza y de renta»: los équidos no mencionados en las
letras c) y d);
f) «Estado miembro o país tercero indemne de peste equina»: cual-
quier Estado miembro o país tercero en cuyo territorio ningunaevidencia clínica, serológica en los équidos no vacunados, o epide-miológica haya permitido comprobar la presencia de peste equinadurante los dos últimos años y en el que, durante los doce últimos
meses, no se haya efectuado vacuna alguna contra dicha enfer-
medad;
g) «enfermedades de declaración obligatoria»: las enfermedades
enumeradas en el Anexo A;
h) «veterinario oficial»: el veterinario designado por la autoridad
central competente del Estado miembro o de un país tercero;
i) «admisión temporal»: situación de un équido registrado procedente
de un país tercero y admitido en el territorio de la Comunidad porun período no superior a noventa días que deberá determinar laComisión, según el procedimiento previsto en el artículo 24 en
función de la situación sanitaria del país de origen.
CAPÍTULO II
Normassobrelosmovimientosdeéquidos
Artículo 3
Los Estados miembros sólo podrán autorizar el movimiento de équidos
registrados en su territorio y enviar a otro Estado miembro équidos quecumplan los requisitos definidos en los artículos 4 y 5.1990L0426 — ES — 23.02.2002 — 007.001 — 4
(1)D O noL 224 de 18. 8. 1990, p. 55.
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No obstante, las autoridades competentes de los Estados miembros de
destino podrán conceder dispensas generales o limitadas para los movi-mientos de équidos:
— que se monten o lleven con fines deportivos o recreativos por rutas
situadas cerca de las fronteras interiores de la Comunidad;
— que participen en manifestaciones culturales o similares, o en acti-
vidades organizadas por organismos locales autorizados situados
cerca de las fronteras interiores de la Comunidad;
— destinados exclusivamente al pasto o al trabajo, de forma temporal,
cerca de las fronteras interiores de la Comunidad.
Los Estados miembros que hagan uso de esta autorización informarán a
la Comisión sobre los términos de las dispensas concedidas.
Artículo 4
1. En el momento de la inspección, los équidos no deberán presentar
ningún síntoma de enfermedad. La inspección deberá llevarse a cabo
en el transcurso de las cuarenta y ocho horas anteriores al embarque ola carga. No obstante y sin perjuicio de lo dispuesto en el artículo 6,dicha inspección se exigirá en el caso de los équidos registrados única-mente para los intercambios intracomunitarios.
2. Sin perjuicio de los requisitos previstos en el apartado 5 para las
enfermedades de declaración obligatoria, el veterinario oficial deberáasegurarse al hacer la inspección de que no existe ningún hecho —
basándose incluso en las declaraciones del propietario o del criador —
que permita concluir que los équidos hayan estado en contacto conéquidos afectados poruna infección o una enfer medad contagiosa enlos últimos quince días anteriores a la inspección.
3. Los équidos no deberán estar incluidos entre los animales que
haya que eliminar y destruir en cumplimiento de un programa de erra-dicación de enfermedad contagiosa aplicado en un Estado miembro.
4. Los équidos deberán ser sometidos a identificación, la cual se
llevará a cabo:
i) para los caballos registrados, por medio de un documento de identi-
ficación establecido porla Dir ectiva 90/427/CEE (
1), que deberá
certificar en particular que se cumple lo dispuesto en los apartados
5 y 6 del artículo 5. La validez de dicho documento deberá sersuspendida por el veterinario oficial durante el período de las prohi-biciones contempladas en el apartado 5 o en el artículo 5. Deberárestituirse, una vez sacrificado el caballo registrado, a la autoridadque lo haya expedido. La Comisión aprobará las normas de desa-
rrollo del presente apartado con arreglo al procedimiento
establecido en el artículo 24;
ii) para los équidos de reproducción o en producción, según un método
de identificación que deberá elaborar la Comisión, con arreglo al
procedimiento establecido en el artículo 24.
Hasta el momento en que comience a aplicarse dicho método,
seguirán aplicándose los métodos de identificación nacionales reco-nocidos oficialmente, siempre que sean notificados a la Comisión y
a los demás Estados miembros dentro de un plazo de tres meses a
partir de la fecha de adopción de la presente Directiva.
5. Además del requisito establecido en el artículo 5, los équidos no
deberán proceder de una explotación que haya sido objeto de una delas medidas de prohibición siguientes:
a) En caso de animales de las especies expuestas a la enfermedad que
se encuentren en la explotación no hayan sido sacrificados o supri-midos en su totalidad, la duración de la prohibición que recae sobrela explotación de procedencia deberá ser de al menos:
— seis meses en el caso de équidos que infundan la sospecha de
padecer durina, a partir de la fecha del último contacto o de la1990L0426 — ES — 23.02.2002 — 007.001 — 5
(1)D O L no224 de 18. 8. 1990, p. 55.
▼B
posibilidad de contacto con un équido enfermo. No obstante, si
se trata de un semental, la prohibición deberá aplicarse hasta sucastración;
— seis meses en el caso de muermo y encefalomielitis equina, a
partir de la fecha en que los équidos enfermos hayan sido elimi-nados;
— en el caso de anemia infecciosa, deberá terminar en la fecha en
que, tras haber sido sacrificados los équidos afectados, los
animales restantes hayan reaccionado negativamente a dospruebas de Coggins efectuadas con un intervalo de 3 meses;
— seis meses en el caso de estomatitis vesiculosa;— un mes a partir del último caso de rabia comprobada;
— quince días a partir del último caso de enfermedad de carbunco
bacteridiano comprobada.
b) En el caso de que se hayan sacrificado o suprimido todos los
animales de las especies expuestas a la enfermedad que se encuen-tren en la explotación, y se hayan desinfectado todos los locales, laduración de la prohibición será de treinta días a partir de la fecha en
que los animales hayan sido eliminados y desinfectados los locales,
salvo si se trata del carbunco bacteridiano, en relación con el cual laprohibición tendrá una duración de quince días.
Las autoridades competentes podrán conceder dispensas a dichas
medidas de prohibición para los hipódromos y campos de carreras y
deberán informar a la Comisión, del carácter de las dispensas conce-didas.
6. En el supuesto de que un Estado miembro establezca o haya esta-
blecido un programa facultativo u obligatorio de lucha contra una
enfermedad a la que sean sensibles los équidos podrá presentar dichoprograma a la Comisión dentro de los seis meses siguientes a la notifi-cación de la presente Directiva, haciendo mención, en particular a:
— la situación de la enfermedad en su territorio;
— la justificación del programa, teniendo en cuenta la importancia de
la enfermedad y sus ventajas desde el punto de vista de la relación
coste/beneficio;
— la zona geográfica en la que se va a aplicar el programa;— los diferentes estatutos aplicables a las granjas y las normas que
deberán alcanzarse en cada categoría, así como los procedimientosde prueba;
— los procedimientos de control de dicho programa;
— las consecuencias que deben deducirse de la pérdida del estatuto de
la explotación, porel motivo que fuer e;
— las medidas a tomar en el caso de observarse resultados positivos
durante los controles realizados con arreglo al programa;
— el carácter no discriminatorio entre los intercambios en el territorio
del Estado miembro de que se trate y los intercambios intracomuni-tarios.
La Comisión examinará los programas comunicados por los Estados
miembros. Los aprobará en su caso, respetando los criterios enunciadosen el párrafo primero con arreglo al procedimiento previsto en elartículo 24. Con arreglo al mismo procedimiento, podrán precisarselas garantías complementarias generales o limitadas que podrán
exigirse en los intercambios intracomunitarios. Dichas garantías
deberán equivaler, como máximo, a las que el Estado miembro apliqueen el ámbito nacional.
Los programas presentados por el Estado miembro podrán modificarse
o completarse con arreglo al procedimiento previsto en el artículo 25.Con arreglo al mismo procedimiento, podrá aprobarse cualquier modi-ficación o adición respecto de un programa anteriormente aprobado yrespecto de las garantías definidas de conformidad con lo dispuesto enel párrafo segundo.1990L0426 — ES — 23.02.2002 — 007.001 — 6
▼M4
Artículo 5
1. Los Estados miembros que no estén indemnes de peste equina,
con arreglo a la letra f) del artículo 2, sólo podrán enviar équidos
procedentes de la parte de territorio que se considere infectada con
arreglo al apartado 2 del presente artículo en las condiciones fijadasen el apartado 3 del presente artículo.
2. a) Se considerará infectada de peste equina una parte del territorio
de un Estado miembro siempre que:
— se haya comprobado la peste equina en los dos últimos años
mediante una evidencia clínica, serológica (en los animales
no vacunados) y/o epidemiológica; o
— se haya practicado la vacuna contra la peste equina en los
doce últimos meses.
b) La parte del territorio que se considere infectada de peste equina
deberá componerse al menos de:
— una zona de protección de un radio de 100 km como mínimo
en torno a cualquier foco;
— una zona de vigilancia de al menos 50 km de fondo que
empezará en los límites de la zona de protección y en la queno se haya practicado vacunación alguna en los últimos docemeses.
c) Las normas de control de las medidas de lucha relativas a los
territorios y zonas contemplados en las letras a) y b) así comolas excepciones a las mismas se especifican en la Directiva 92/35/CEE (
1).
d) Todo équido vacunado que se encuentre en la zona de protección
deberá quedar registrado e identificado conforme a lo dispuestoen el apartado 1 del artículo 6 de la Directiva 92/35/CEE.
La mención de dicha vacunación deberá constar de manera clara
en el documento de identificación y/o en el certificado sanitario.
3. Un Estado miembro sólo podrá expedir del territorio mencionado
en la letra b) del apartado 2 los équidos que cumplan los siguientesrequisitos:
a) Ser expedidos únicamente en determinados períodos del año, en
función de la actividad de los insectos vectores, que deberán fijarsede conformidad con el procedimiento previsto en el artículo 25.
b) No presentar ningún síntoma clínico de peste equina el día de la
inspección contemplada en el apartado 1 del artículo 4.
c) — Si no han sido vacunados contra la peste equina, que hayan sido
sometidos con reacción negativa a una prueba de fijación del
complemento para la peste equina tal como se describe en elAnexo D, en dos ocasiones, con un intervalo comprendido entreveintiún y treinta días, debiendo haberse efectuado la segundaprueba en los diez días anteriores al envío.
— Si han sido vacunados, no deben haberlo sido durante los
últimos dos meses y deben habersido sometidos a la pr ueba defijación descrita en el Anexo D con los intervalos citados sin que
se haya evidenciado un aumento de los anticuerpos. Con arreglo
al procedimiento establecido en el artículo 24, la Comisión,previo dictamen del Comité científico veterinario, podrá reco-nocer otros métodos de control.
d) Haber sido mantenidos en un lugar de cuarentena durante un
período de al menos cuarenta días antes del envío.
e) haber sido protegidos de los insectos vectores durante el período de
cuarentena y durante el transporte del lugar de cuarentena al lugarde envío.1990L0426 — ES — 23.02.2002 — 007.001 — 7
(1)D O noL 157 de 10. 6. 1992, p. 19
▼B
Artículo 6
Los Estados miembros que apliquen un régimen alternativo de control
que ofrezca garantías equivalentes a las previstas en el apartado 5 delartículo 4 para los movimientos en su territorio de los équidos y de loséquidos registrados, en particular mediante el documento de identifica-ción, podrán concederse, en régimen de reciprocidad, una dispensa alas disposiciones de la segunda frase del apartado 1 del artículo 4 y al
segundo guión del apartado 1 del artículo 8.
Informarán de ello a la Comisión.
Artículo 7
1. En el más breve plazo, los équidos deberán ser conducidos desde
la explotación de procedencia hacia el lugar de destino, o bien directa-mente o bien a través de un mercado o centro de reagrupamientoautorizado tal como se definen en el apartado 6 del artículo 3 de la
Directiva 64/432/CEE, utilizando medios de transporte y de contención
periódicamente limpiados y desinfectados con un desinfectante según lafrecuencia que deberá fijar el Estado miembro de expedición. Losvehículos de transporte deberán ir acondicionados de forma que lasheces, la yacija o el forraje de los équidos no puedan deslizarse ocaer fuera del vehículo durante el transporte. El transporte deberá efec-
tuarse de forma que se garantice una protección sanitaria eficaz y el
bienestarde los équidos.
2. El Estado miembro de destino podrá, de manera general o limi-
tada, conceder una dispensa a determinados requisitos del apartado 5
del artículo 4, siempre que el animal lleve una marca especial que
indique que está destinado al sacrificio y que la mención de dichadispensa figure en el certificado sanitario.
Si se concede dicha dispensa los équidos de abasto deberán ser condu-
cidos directamente al matadero designado para ser sacrificados en un
plazo que no supere cinco días a partir de la llegada al matadero.
3. El veterinario oficial deberá anotar en un registro el número de
identificación o el número del documento de identificación del équido
sacrificado y transmitir a la autoridad competente del lugar de expedi-
ción, a petición de ésta, una declaración que certifique el sacrificio deléquido.
Artículo 8
1. Los Estados miembros velarán por que:
— en caso de que salgan de su explotación, los équidos registrados
deban iracompañados del documento de identificación establecidoen el apartado 4 del artículo 4, y si están destinados a intercambiosintracomunitarios, completados por el certificado previsto en elAnexo B;
— durante su transporte, los équidos de reproducción, de producción y
de abasto deberán ir acompañados de un certificado sanitarioconforme al Anexo C.
El certificado o, cuando se trate de un documento de identificación, la
hoja en que figuren los datos sanitarios, deberán, sin perjuicio de lo
dispuesto en el artículo 6, expedirse dentro de las 48 horas anterioresal embarque o, a más tardar, el último día laborable previo al mismo,en la o las lenguas oficiales del Estado miembro de expedición y dedestino. El certificado tendrá un período de validez de diez días ydeberá constar de una sola hoja.
2. Las importaciones de équidos no registrados podrán efectuarse
mediante un solo certificado sanitario por lote, en lugar de llevarse acabo mediante el certificado individual a que se hace mención en elsegundo guión del apartado 1.1990L0426 — ES — 23.02.2002 — 007.001 — 8
▼M1
Artículo 9
Las normas de la Directiva 90/425/CEE del Consejo, de 26 de junio de
1990, relativa a los controles veterinarios y zootécnicos aplicables enlos intercambios intracomunitarios de determinados animales vivos yproductos, con vistas a la realización del mercado interior (
1), se apli-
carán en particular en lo relativo a los controles en origen, a la
organización y a la continuación que se dará de los controles quedeba realizar el Estado miembro de destino y a las medidas de salva-guardia que deban aplicarse.
Artículo 10
En la medida en que resulte necesario para la aplicación uniforme de la
presente Directiva, y en colaboración con las autoridades nacionalescompetentes, los expertos veterinarios de la Comisión podrán efectuarcontroles in situ. La Comisión informará a los Estados miembros delresultado de los controles efectuados.
El Estado miembro en cuyo territorio se realice un control deberá
prestar a los expertos toda la ayuda necesaria para el cumplimiento desu misión.
Las normas de desarrollo del presente artículo se adoptarán con arreglo
al procedimiento establecido en el artículo 24.
CAPÍTULO III
Normasparalasimportaciones procedentesdepaísesterceros
Artículo 11
1. Los équidos importados en la Comunidad deberán cumplir las
condiciones fijadas en los artículos 12 a 16.
2. Hasta la fecha de entrada en vigor de las decisiones adoptadas en
aplicación de los artículos 12 a 16, los Estados miembros aplicarán alas importaciones de équidos procedentes de países terceros condi-ciones al menos equivalentes a las que resulten de la aplicación delcapítulo II.
Artículo 12
1. Para poder ser importados los équidos deberán proceder de países
terceros o de partes de países terceros que figuren en una lista quedeberá incluirse en una columna especial que deberá insertarse en lalista elaborada de conformidad con lo dispuesto en el artículo 3 de laDirectiva 72/462/CEE.
2. Los procedimientos y criterios de elaboración, modificación y
publicación de la lista de los países terceros o partes de países terceros
establecidos en el artículo 3 de la Directiva 72/462/CEE, serán aplica-
bles a la lista válida para las importaciones de équidos.
Artículo 13
1. Los équidos deberán proceder de un país tercero:
a) indemne de peste equina;
b) indemne desde dos años antes de encefalomielitis equina venezolana
(VEE);
c) indemne desde seis meses antes, de durina y de muermo;
2. La Comisión, con arreglo al procedimiento establecido en el
artículo 24 podrá:
a) decidirque las disposiciones del apar tado 1 sólo se apliquen en una
parte del territorio de un país tercero.1990L0426 — ES — 23.02.2002 — 007.001 — 9
(1)D O noL 224 de 18. 8. 1990, p. 29.▼B
▼B
En caso de regionalización de los requisitos para la peste equina
deberán respetarse como mínimo las medidas previstas en los apar-tados 2 y 3 del artículo 5.
b) exigir garantías suplementarias para enfermedades exóticas en la
Comunidad.
Artículo 14
Antes del día de su carga para su envío al Estado miembro de destino,
los équidos deberán haber permanecido sin interrupción en el territorioo parte del territorio de un país tercero o, en caso de regionalización enla parte del territorio definida en aplicación de la letra a) del apartado 2del artículo 13 durante un período que deberá fijarse en el momento de
la adopción de las decisiones que se establezcan en aplicación del
artículo 15.
Deberán proceder de una explotación colocada bajo control veterinario.
Artículo 15
La importación de équidos del territorio de un país tercero o de una
parte de territorio de un país tercero definida con arreglo a la letra a)
del apartado 2 del artículo 13 que figure en la lista establecida conarreglo al apartado 1 del artículo 12 sólo se autorizará si, además delos requisitos establecidos en el artículo 13:
a) cumplen las condiciones sanitarias adoptadas, con arreglo al proce-
dimiento previsto en el artículo 24, para las importaciones deéquidos de países considerados según la especie de que se trate ylas categorías de équidos.
Para determinar las condiciones de policía sanitaria de conformidad
con el párrafo primero, la base de referencia utilizada será la de las
normas previstas en los artículos 4 y 5; y
b) cuando se trate de países terceros no indemnes de estomatitis
vesiculosa o de arteritis viral durante al menos seis meses, loséquidos satisfagan los siguientes requisitos:
i) los équidos deberán proceder de una explotación indemne de
estomatitis vesiculosa desde al menos seis meses antes y haberreaccionado negativamente a un análisis serológico antes de suexpedición;
ii) en el caso de la arteritis viral, los équidos machos deberán, sin
perjuicio de lo dispuesto en el punto ii) del artículo 19, haberreaccionado negativamente a un análisis serológico, a un virusde aislamiento o a cualquier otra prueba reconocida según elprocedimiento del artículo 24, que garantice que el animal está
indemne de esta enfermedad.
Según el procedimiento establecido en el artículo 24, previo
dictamen del Comité veterinario científico, la Comisión podrádelimitar las categorías de équidos machos a los que será apli-
cada el citado requisito.
Artículo 16
1. Los équidos deberán quedar identificados de conformidad con el
apartado 4 del artículo 4 e ir acompañados de un certificado expedidopor un veterinario oficial del país tercero exportador. El certificadodeberá:
a) expedirse el día de la carga de los équidos para su envío al Estado
miembro de destino o, cuando se trate de caballos registrados, elúltimo día laborable antes del embarque;
b) estarr edactado en una al menos de las lenguas oficiales del Estado
miembro de destino y en una de las del Estado miembro donde seefectúe el control de importación;1990L0426 — ES — 23.02.2002 — 007.001 — 10
▼B
c) acompañara los équidos, en ejemplaror iginal;
d) certificar que los équidos cumplen los requisitos establecidos por la
presente Directiva, así como las que se hayan fijado en aplicaciónde la misma para las importaciones procedentes de países terceros;
e) constarde una sola hoja;
f) expedirse para un solo destinatario o, en el caso de équidos de
abasto, para un lote debidamente marcado e identificado.
Los Estados miembros que recurran a esta posibilidad informarán de
ello a la Comisión.
2. El certificado deberá ser redactado en un impreso que se ajuste al
modelo fijado con arreglo al procedimiento establecido en el artículo
24.
Artículo 17
Expertos veterinarios de los Estados miembros y de la Comisión efec-
tuarán controles sobre el terreno para verificar si las disposiciones de lapresente Directiva, y en particular las recogidas en el apartado 2 delartículo 12 se cumplen efectivamente.
Si en el transcurso de una inspección efectuada en virtud del presente
artículo, se detectaran hechos graves en una explotación, la Comisión
informará inmediatamente de ello a los Estados miembros y adoptará
inmediatamente una decisión que incluya la suspensión provisional dela autorización. La decisión final a este respecto se adoptará según elprocedimiento establecido en el artículo 25.
La Comisión designará, a propuesta de los Estados miembros, a los
expertos de los Estados miembros encargados de estos controles.
Se realizarán dichos controles por cuenta de la Comunidad, a cuyo
cargo correrán los gastos correspondientes.
La periodicidad y las modalidades de dichos controles se determinarán
según el procedimiento previsto en el artículo 24.
Artículo 18
1. Nada más llegaral Estado miembr o de destino, los équidos de
abasto deberán ser conducidos a un matadero, ya sea directamente o
bien después de haber pasado por un mercado o por un centro de agru-pación y, de acuerdo con los requisitos de policía sanitaria, sersacrificados en un plazo que deberá ser fijado en el momento de laadopción de las decisiones que deban tomarse en aplicación del artículo
15.
2. Sin perjuicio de las condiciones particulares que puedan fijarse
con arreglo al procedimiento establecido en el artículo 24, la autoridadcompetente del Estado miembro de destino estará facultada, siempreque lo exijan razones de policía sanitaria para desginar el mataderohacia el que deban dirigirse dichos équidos.
Artículo 19
La Comisión, con arreglo al procedimiento establecido en el artículo
24:
i) podrá limitar la importación procedente de un país tercero o de una
parte de un país tercero a determinadas especies o categorías deéquidos;
ii) fijará, no obstante lo dispuesto en el artículo 15, las condiciones
particulares en que pueda efectuarse la admisión temporal en elterritorio de la Comunidad o la reintroducción en dicho territorioprevia exportación temporal de los équidos registrados o de loséquidos destinados a usos particulares;
iii) determinará las condiciones que permitan convertir una admisión
temporal en admisión definitiva.1990L0426 — ES — 23.02.2002 — 007.001 — 11
▼M2
CAPÍTULO IV
Disposicionesfinales
Artículo 22
Las disposiciones de la presente Directiva, y en particular las de la
segunda frase del apartado 1 del artículo 4 y de los artículos 6, 8 y 21serán sometidas a revisión antes del 1 de enero de 1993 en el marco delas propuestas destinadas a garantizar la plena realización del mercadointerior, sobre las cuales el Consejo se pronunciará por mayoría cuali-ficada.
Artículo 23
Los Anexos del presente Reglamento serán modificados por la Comi-
sión, de conformidad con el procedimiento previsto en el artículo 25.
Artículo 24
1. En caso de que se haga referencia al procedimiento del presente
artículo, el presidente, por su propia iniciativa o a instancia del repre-sentante de un Estado miembro, someterá el asunto sin demora alComité veterinario permanente creado en virtud de la Decisión 68/361/CEE (
1), denominado en lo sucesivo «Comité».
2. El representante de la Comisión someterá al Comité un proyecto
de medidas. El Comité emitirá su dictamen sobre dicho proyecto dentrodel plazo que el presidente haya establecido según la urgencia del caso.
El dictamen se emitirá por la mayoría establecida en el apartado 2 del
artículo 148 del Tratado para la adopción de las decisiones que elConsejo deba adoptara pr opuesta de la Comisión. En la votación enel seno del Comité, los votos de los representantes de los Estadosmiembros se ponderarán de la forma prevista en el citado artículo. El
presidente no tomará parte en la votación.
3. La Comisión adoptará las medidas previstas cuando se ajusten al
dictamen del Comité.
4. Cuando las medidas previstas no se ajusten al dictamen del
Comité, o en ausencia de dictamen, la Comisión someterá sin demora
al Consejo una propuesta relativa a las medidas que deban adoptarse.El Consejo se pronunciará por mayoría cualificada.
Si, transcurrido un plazo de tres meses a partir de la fecha en que se
haya recurrido al Consejo, éste no se hubiere pronunciado, la Comisiónadoptará las medidas propuestas, salvo en el caso de que el Consejo sehaya pronunciado por mayoría simple en contra de dichas medidas.
Artículo 25
1. En caso de que se haga referencia al procedimiento del presente
artículo, el presidente, por su propia iniciativa o a instancia del repre-sentante de un Estado miembro, someterá el asunto sin demora alComité.
2. El representante de la Comisión someterá al Comité un proyecto
de medidas. El Comité emitirá un dictamen sobre dicho proyectodentro del plazo de dos días. El dictamen se emitirá según la mayoría
prevista en el apartado 2 del artículo 148 del Tratado para la adopción
de las decisiones que el Consejo deba adoptara pr opuesta de la Comi-sión. En la votación del Comité, los votos de los representantes de losEstados miembros se ponderarán de la forma prevista en el citadoartículo. El presidente no tomará parte en la votación.
3. La Comisión adoptará las medidas previstas cuando se ajusten al
dictamen del Comité.1990L0426 — ES — 23.02.2002 — 007.001 — 12
(1)D O noL 255 de 18. 10. 1968, p. 23.▼B
▼B
4. Cuando las medidas previstas no se ajusten al dictamen del
Comité, o en ausencia de dictamen, la Comisión someterá sin demoraal Consejo una propuesta relativa a las medidas que deban adoptarse.
El Consejo se pronunciará por mayoría cualificada.
Si, transcurrido un plazo de quince días a partir de la fecha en que el
Consejo haya sido llamado a pronunciarse, éste no hubiere adoptadouna decisión, la Comisión adoptará las medidas propuestas salvo en elcaso de que el Consejo se haya pronunciado por mayoría simple encontra de dichas medidas.
Artículo 26
Las disposiciones del artículo 34 de la Directiva 72/462/CEE serán
aplicables a los requisitos definidos en el Capítulo III de la presente
Directiva.
Artículo 27
Los Estados miembros pondrán en vigor las disposiciones legales,
reglamentarias y administrativas necesarias para dar cumplimiento a lodispuesto en la presente Directiva, a más tardar el 1 de enero de 1992.Informarán de ello a la Comisión.
Artículo 28
Los destinatarios de la presente Directiva son los Estados miembros.1990L0426 — ES — 23.02.2002 — 007.001 — 13
▼B
ANEXO A
ENFERMEDADESDEDECLARACIÓNOBLIGATORIA
Estarán sometidas a declaración obligatoria las siguientes enfermedades:
— Durina
— Muermo— Encefalomielitis equina (en todas sus variedades incluida la VEE)— Anemia infecciosa— Rabia
— Carbunco bacteridiano
— Peste equina— Estomatitis vesiculosa.1990L0426 — ES — 23.02.2002 — 007.001 — 14
▼M3
ANEXO B
►(1)M51990L0426 — ES — 23.02.2002 — 007.001 — 15
▼M3
ANEXO C
1990L0426 — ES — 23.02.2002 — 007.001 — 16
▼M3
►(1)A1
►(2)M51990L0426 — ES — 23.02.2002 — 007.001 — 17
▼M6
ANEXO D
PESTEEQUINA
DIAGNÓSTICO
Los reactivos para las pruebas de inmunoabsorción enzimática (ELISA)
descritos a continuación pueden obtenerse del Laboratorio de referencia de la
Comunidad Europea o de los laboratorios de referencia de la OIE para la peste
equina.
1. TÉCNICA ELISA DE COMPETICIÓN PARA LA DETECCIÓN DE ANTI-
CUERPOS CONTRA EL VIRUS DE LA PESTE EQUINA (VPE)
(PRUEBA RECOMENDADA)
La técnica ELISA de competición se utiliza para detectar anticuerpos especí-
ficos contra el virus de la peste equina presentes en sueros de cualquier
especie de équidos. El antisuero de cobaya contra el virus de la peste equina,
policlonal y de amplio espectro (en lo sucesivo, denominado «antisuero de
cobaya»), tiene especificidad de serogrupo y puede detectar todos los sero-
tipos conocidos del virus de la peste equina.
El principio de la prueba es la interrupción, mediante una muestra de suero
problema, de la reacción entre el antígeno del virus de la peste equina y un
antisuero de cobaya. Los anticuerpos contra el virus de la peste equina conte-
nidos en la muestra de suero problema competirán con los del antisuero de
cobaya, de lo que resultará una reducción del color esperado (tras la adición
de anticuerpos anti-cobaya marcados con la enzima y de sustrato). Los sueros
pueden analizarse a una sola dilución al 1/5 (método para sueros a una sola
dilución) o a una serie de diluciones para determinar el título (método de
titulación del suero). Los valores de inhibición superiores al 50 % se consi-
deran positivos.
El protocolo de la prueba descrito a continuación se utiliza en el Laboratorio
regional de referencia para la peste equina de Pirbright (Reino Unido).
1.1.Procedimiento delaprueba
1.1.1.Preparación de las placas
1.1.1.1. Recubrir las placas ELISA con antígeno del virus de la peste
equina extraído de cultivos celulares infectados y diluido en
una solución amortiguadora de carbonato/bicarbonato, pH 9,6.
Incubarlas placas ELISA dur ante toda la noche a 4 ºC.
1.1.1.2. Lavarlas placas 3 veces llenando y vaciando los pocillos con
solución salina fosfatada (PBS), pH 7,2-7,4 y secaren papel
absorbente.
1.1.2.Pocillos control
1.1.2.1. Poner en la primera columna el suero control positivo haciendo
diluciones dobles, desde la 1/5 hasta la 1/640, en solución
salina de bloqueo (PBS que contenga un 0,05 % (v/v) de Tween
20, un 5 % (p/v) de leche desnatada en polvo (Cadbury's
MarvelTM) y un 1 % (v/v) de suero de bovino adulto, hasta
llegara un volumen final de 50 µl porpocillo.
1.1.2.2. Añadir50 µl de suero control negativo diluido al 1/5 (10 µld e
suero + 40 µl de solución de bloqueo) en los pocillos A y B de
la columna 2.
1.1.2.3. Poner100 µl/pocillo de solución salina de bloqueo en los poci-
llos C y D de la columna 2 (blanco).
1.1.2.4. Añadir50 µl de solución salina de bloqueo en los pocillos E, F,
G y H de la columna 2 (control cobaya).
1.1.3.Método para sueros a una sola dilución (1/5)
1.1.3.1. Hacer una dilución al 1/5 de cada suero problema en solución
salina de bloqueo; dispensarporduplicado en los pocillos de
la columna 3 a la 12 (10 µl del suero + 40 µl de solución salina
de bloqueo).
o bien1990L0426 — ES — 23.02.2002 — 007.001 — 18
▼M6
1.1.4.Método de titulación del suero
1.1.4.1. Preparar una serie de diluciones dobles de cada muestra
problema (desde 1/5 hasta 1/640) en solución salina de bloqueo,
poneren ocho pocillos de la columna 3 a la 12.
después
1.1.5. Añadir50 µl de antisuero de cobaya, previamente diluido en
solución salina de bloqueo, a todos los pocillos de la placa,
excepto a los del blanco (tras esta operación, todos los pocillos
contienen un volumen final de 100 µl).
1.1.5.1. Incubar durante una hora a 37 ºC en un agitador orbital.1.1.5.2. Lavarlas placas tr es veces y secaren papel como antes.1.1.5.3. Añadira cada pocillo 50 µl de suero anticobaya obtenido en
conejo, conjugado con peroxidara de rábano y previamente
diluido en solución salina de bloqueo.
1.1.5.4. Incubar durante una hora a 37 ºC en un agitador orbital.1.1.5.5. Lavarlas placas tr es veces y secaren papel como antes.1.1.6.Cromógeno
Preparar la solución de cromógeno OD (OD = orto-fenildia-
mina) según las instrucciones del fabricante (0,4 mg/ml en
agua destilada estéril) inmediatamente antes de su utilización.
Añadir sustrato (peróxido de hidrógeno = H
2O2) para llegar a
una concentración final de 0,05 % (v/v) (1/2000 de una solu-
ción al 30 % de H2O2). Añadir50 µl de la solución de OFD a
cada pocillo y dejarlas placas dur ante 10 minutos en la mesa y
a temperatura ambiente. Detener la reacción añadiendo a cada
pocillo 50 µl de ácido sulfúrico 1 M (H2SO4).
1.1.7.Lectura
Leer con espectrofotómetro a 492 nm de longitud de onda.
1.2.Expresióndelosresultados
1.2.1. Haciendo uso de un programa informático, imprimir los valores
de densidad óptica (DO) y del porcentaje de inhibición (PI) de
los sueros problema y de los sueros control basándose en el valor
medio registrado en los cuatro pocillos de control de cobaya. Los
datos expresados como valores de DO y de PI se emplean para
determinar si la prueba funciona dentro de límites aceptables. El
límite del valor superior y el límite del valor inferior del control
de cobaya tiene que estar entre valores de DO de 1,4 y 0,4
respectivamente. El título del control positivo, basado en el 50 %
del porcentaje de inhibición debería ser de 1/240 (dentro de una
gama que varía desde 1/120 a 1/480). Deberá rechazarse toda
placa que no cumpla los criterios citados. No obstante, si el título
del suero del control positivo es superior a 1/480 y las muestras
problema resultan negativas, se aceptarán como negativas.
Los pocillos duplicados del suero control negativo y los pocillos
duplicados del blanco deberán registrar unos valores de PI
comprendidos entre + 25 % y – 25 %, y entre + 95 % y + 105 %,
respectivamente. Si los valores no están situados entre estos
límites, la placa no queda invalidada, pero ello indica que existe
un colorde fondo.
1.2.2. El umbral de diagnóstico (punto de corte o «cut off») de los
sueros problema es el 50 % (PI 50 %). Las muestras que registren
valores de PI superiores al 50 % son positivas. Las muestras que
registren valores de PI inferiores al 50 % son negativas.
Se considera que son dudosas las muestras que registren un valor
de PI por encima y otro por debajo del punto de corte en cada
uno de los pocillos duplicados. Dichas muestras pueden volver a
analizarse otra vez en la prueba a una sola dilución y por titula-
ción. Las muestras positivas pueden también titularse para
conocerel gr ado de positividad.1990L0426 — ES — 23.02.2002 — 007.001 — 19
▼M6
Presentación de los resultados de la prueba a una sola dilución (1/5)
1 2 3456789 1 0 1 1 1 2
C + Sueros problema
A 1:5 C – 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40
B 1:10 C – 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40
C 1:20 Blanco
D 1:40 Blanco
E 1:80 CC
F 1:160 CC
G 1:320 CC 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
H 1:640 CC 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
C – = control negativo
C + = control positivo
CC = control de cobaya
Presentación de los resultados de la titulación del suero
1 2 3 456789 1 0 1 11 2
C + Sueros problema
A 1:5 C – 1:5 1:5
B 1:10 C – 1:10 1:10
C 1:20 Blanco 1:20 1:20
D 1:40 Blanco 1:40 1:40
E 1:80 CC 1:80 1:80
F 1:160 CC 1:160 1:160
G 1:320 CC 1:320 1:320H 1:640 CC 1:640 1:640
C – = control negativo
C + = control positivo
CC = control de cobaya
2. TÉCNICA ELISA INDIRECTA PARA LA DETECCIÓN DE ANTI-
CUERPOS CONTRA EL VIRUS DE LA PESTE EQUINA (VPE)
(PRUEBA RECOMENDADA)
La prueba que se describe a continuación se ajusta a la descripción recogida
en el capítulo 2.1.11 de la cuarta edición (2000) del Manual de normas para
pruebas de diagnóstico y vacunas de la OIE.
Se utiliza la proteína VP7 recombinante como antígeno para determinar la
presencia de anticuerpos contra el virus de la peste equina con un alto índice
de sensibilidad y especificidad. Tiene además las ventajas de serestable y no
infecciosa.1990L0426 — ES — 23.02.2002 — 007.001 — 20
▼M6
2.1.Procedimiento delaprueba
2.1.1.Fase sólida
2.1.1.1. Recubrir las placas ELISA con proteína VP7 recombinante de
la cepa 4 del virus (VPE-4), diluida en solución amortiguadora
de carbonato/bicarbonato, pH 9,6. Incubar las placas toda la
noche a 4 ºC.
2.1.1.2. Lavarlas placas cinco veces con agua destilada que contenga
0,01 % (v/v) de Tween 20 (solución de lavado). Golpearsuave-
mente las placas contra un material absorbente para eliminar los
restos de solución de lavado que pudieran quedar.
2.1.1.3. Bloquearlas placas poniendo en cada pocillo 200 µl de solu-
ción salina fosfatada (PBS) + 5 % (p/v) de leche desnatada
(leche desnatada en polvo de NestléTM), y dejaruna hor a a
37 ºC.
2.1.1.4. Eliminarla solución de bloqueo y golpearsuavemente las
placas contra un material absorbente.
2.1.2.Muestras problema
2.1.2.1. Diluir los sueros problema y los sueros control positivo y nega-
tivo al 1/25 en PBS + 5 % (p/v) de leche desnatada + 0,05 %
(v/v) de Tween 20, hasta alcanzarun volumen de 100 µl por
pocillo. Incubaruna hor a a 37 ºC.
Para la titulación, hacer una serie de diluciones dobles desde 1/
25 (100 µl porpocillo), un suer o porcolumna de la placa, y
hacer la misma operación con los controles positivos y nega-
tivos. Incubar durante una hora a 37 ºC.
2.1.2.2. Lavarlas placas siguiendo las indicaciones del punto 2.1.1.2.2.1.3.Conjugado
2.1.3.1. Poneren cada pocillo 100 µl de gammaglobulina anti-caballo
conjugada con peroxidasa de rábano diluida en PBS + 5 % de
leche + 0,05 % de Tween 20, pH 7,2. Incubar durante una hora
a 37 ºC.
2.1.3.2. Lavarlas placas siguiendo las indicaciones del punto 2.1.1.2.2.1.4.Cromógeno/sustrato
2.1.4.1. Añadira cada pocillo 200 µl de solución de cromógeno/sustrato
[10 ml de solución 80,6 mM de DMAB (dimetil-
aminobenzaldehído) + 10 ml de solución 1,56 mM de MBTH
(clorhidrato 3-metil-2-benzotiazolina-hidrazona) + 5 µlH
2O2].
La formación de color se detiene añadiendo 50 µld eH2SO43N
tras unos cinco o diez minutos aproximadamente (antes de que
el control negativo comience a tomar color).
Pueden utilizarse también otros cromógenos como ABTS (ácido
2,2'-azino-bis-[3-etilbenzotiazolina-6-sulfónico]), TMB (tetra-
metil-bencidina) u OPD (orto-fenildiamina).
2.1.4.2. Leerlas placas a 600 nm (o 620 nm).
2.2.Interpretacióndelosresultados
2.2.1. Calcularel valordel punto de cor te añadiendo 0,6 al valordel
control negativo (0,6 es la desviación típica derivada de un grupo
de 30 sueros negativos).
2.2.2. Las muestras problema que presenten valores de absorbancia
inferiores al punto de corte se consideran negativas.
2.2.3. Las muestras problema que presenten valores de absorbancia
superiores al punto de corte + 0,15 se consideran positivas.
2.2.4. Las muestras problema que presenten valores de absorbancia
intermedios son dudosas, por lo que debe emplearse otra técnica
para confirmar el resultado.
3. TÉCNICA ELISA DE BLOQUEO PARA LA DETECCIÓN DE ANTI-
CUERPOS CONTRA EL VIRUS DE LA PESTE EQUINA (VPE)
(PRUEBA RECOMENDADA)
La técnica ELISA de bloqueo tiene como finalidad detectaranticuer pos
específicos contra el virus de la peste equina en sueros procedentes de cual-1990L0426 — ES — 23.02.2002 — 007.001 — 21
▼M6
quier especie susceptible. La VP7 es la principal proteína antigénica del virus
de la peste equina y es constante en los nueve serotipos. Teniendo en cuenta
que el anticuerpo monoclonal también va dirigido contra la VP7, el ensayo
presenta un alto nivel de sensibilidad y especificidad. Además, el antígeno
VP7 recombinante es completamente inocuo, por lo que garantiza un alto
nivel de seguridad.
El principio de la prueba es la interrupción de la reacción entre la proteína
VP7 recombinante, como antígeno adsorbido a la placa ELISA, y el anti-
cuerpo monoclonal conjugado específico de la VP7. Los anticuerpos del
suero problema bloquean la reacción entre el antígeno y el anticuerpo mono-
clonal, lo que se materializa en una reducción del color.
La prueba que se describe a continuación es la que utiliza el Laboratorio de
referencia de la Comunidad Europea para la peste equina de Algete (España).
3.1.Procedimiento delaprueba
3.1.1.Placas ELISA
3.1.1.1. Recubrir las placas con proteína VP7 recombinante de VPE-4
diluida en solución amortiguadora de carbonato/bicarbonato,
pH 9,6. Incubartoda la noche a 4 ºC.
3.1.1.2. Lavar las placas cinco veces con solución salina amortiguadora
fosfatada (PBS) que contenga 0,05 % (v/v) de Tween 20
(PBST).
3.1.1.3. Estabilizarla placa mediante tr atamiento con una solución esta-
bilizadora (para prolongar el tiempo de almacenamiento a 4 ºC
sin pérdida de actividad). Secar sobre material absorbente.
3.1.2.Muestras problema y controles
3.1.2.1. Para la detección: Diluir los sueros problema y los controles al
1/10 directamente en la placa con PBST
hasta alcanzarun volumen final de 100 µl
porpocillo. Incubaruna hor a a 37 ºC.
3.1.2.2. Para la titulación: Preparar una serie de diluciones dobles de
los sueros problema y de los controles posi-
tivos (100 µl porpocillo) desde 1/10 hasta 1/
1 280, en ocho pocillos. El control negativo
se analiza a la dilución 1/10.
3.1.3.Conjugado
Añadirpr eviamente diluido 50 µl porpocillo de anticuer po
monoclonal específico de VP7 conjugado con peroxidasa de
rábano a cada uno de los pocillos y agitar suavemente para
asegurar la homogeneidad. Incubar treinta minutos a 37 ºC.
3.1.4. Lavarlas placas cinco veces con PBST y secarcomo se indica
arriba.
3.1.5.Cromógeno/sustrato
Añadira cada pocillo 100 µl de solución de cromógeno/sustrato
[1 ml de ABTS (ácido 2,2'-azino-bis-[3-etilbenzotiazolina-6-
sulfónico]) 5 mg/ml + 9 ml de solución amortiguadora de
sustrato (0,1 M de solución amortiguadora fosfato/citrato de
pH 4 que contenga 0,03 % H2O2) e incubardur ante diez
minutos a temperatura ambiente. Detener la formación de color
añadiendo 100 µl/pocillo de SDS (dodecil-sulfato sódico) al 2 %
(p/v).
3.1.6.Lectura
Leerlos r esultados a 405 nm en un lectorELISA.
3.2.Interpretacióndelosresultados
3.2.1.Validación del ensayo
La prueba es válida cuando la densidad óptica (DO) del control
negativo (CN) es superior a 1,0 y la densidad óptica del control
positivo (CP) es inferior a 0,2.
3.2.2.Cálculo del punto de corte
Valordel punto de cor te positivo = CN - ((CN - CP) × 0,3)
Valordel punto de cor te negativo = CN - ((CN - CP) × 0,2)1990L0426 — ES — 23.02.2002 — 007.001 — 22
▼M6
CN es la densidad óptica del control negativo y CP es la densidad
óptica del control positivo.
3.2.3.Interpretación de los resultados
Las muestras con una densidad óptica inferior al valor del punto
de corte positivo deben considerarse positivas para anticuerpos deVPE.
Las muestras con una densidad óptica superior al valor del punto
de corte negativo deben considerarse negativas para anticuerpos
de VPE.
Las muestras con una densidad óptica situada entre estos dos
valores deben considerarse dudosas, por lo que se deben volver
a tomar muestras de los animales de dos a tres semanas después.1990L0426 — ES — 23.02.2002 — 007.001 — 23