1971L0250—ES—13.08.1998—002.001—1
Estedocumentoesuninstrumentodedocumentaciónynocomprometelaresponsabilidaddelasinstituciones
►B PRIMERADIRECTIVADELACOMISIÓN
de15dejuniode1971
porlaquesedeterminanmétodosdeanálisiscomunitariosparaelcontroloficialdelosalimentos
paraanimales
(71/250/CEE)
(DOL155de12.7.1971,p.13)
Modificadapor:
DiarioOficial
nopágina fecha
►M1Directiva81/680/CEEdelaComisiónde30dejuliode1981 L246 32 29.8.1981
►M2Directiva98/54/CEdelaComisiónde16dejuliode1998 L208 49 24.7.1998
▼B
PRIMERADIRECTIVADELACOMISIÓN
de15dejuniode1971
porlaquesedeterminanmétodosdeanálisiscomunitariosparael
controloficialdelosalimentosparaanimales
(71/250/CEE)
LACOMISIÓNDELASCOMUNIDADESEUROPEAS,
VistoelTratadoconstitutivodelaComunidadEconómicaEuropea,Vista la Directiva del Consejo de 20 de julio de 1970 relativa a la
introducción de métodos de toma de muestras y de análisis comunita-
rios para el control oficial de los alimentos para animales(
1)y ,e n
particular,suartículo2,
Considerando que la Directiva antes mencionada prevé que los
controles oficiales de los alimentos para animales dirigidos acomprobar si se respetan las condicionas establecidas en virtud de lasdisposiciones legales, reglamentarias y administrativas relativas a lacalidad y la composición de los alimentos mencionados se efectuarán
segúnmétodosdetomademuestrasydeanálisiscomunitarios;
Considerando que es conveniente establecer lo antes posible todos los
métodos de análisis necesarios, y que una primera etapa está consti-tuidaporelestablecimento delosmétodosdedeterminacióndelácidocianhídirico,delcalcio,deloscarbonatos,delascenizasbrutas,delascenizas insolubles en HCl, del cloro de los cloruros, de la esencia de
mostaza, de la lactosa, del potasio, del sodio, de los azúcares, de la
teobromina, y de la urea, así como de los métodos de determinaciónde los alcaloides de los altramuces y de la actividad ureásica de losproductosdelasoja;
Considerando que las medidas previstas en la presente Directiva se
ajustanaldictamendelComitépermanentedelaalimentaciónanimal,
HAADOPTADOLAPRESENTEDIRECTIVA:
Artículo 1
Los Estados miembros dispondrán que los análisis para los controles
oficiales de los alimentos para animales, en lo que se refiere a sus
contenidos en ácido cianhídrico, calcio, carbonato, cenizas brutas,
cenizas insolubles en HCl, cloro de cloruros, esencia de mostaza,lactosa, potasio, sodio, azúcares, teobromina y urea, así como a►
M2 ◄la actividad ureásica de los productos de soja,
se efectúen según los métodos descritos en el Anexo de la presenteDirectiva.
Lasdisposicionesgeneralesquefiguranenelpunto1delAnexoserán
aplicables a los métodos de análisis adoptados según la Directiva 70/373/CEEdelConsejo.
Artículo 2
Los Estados miembros aplicarán, a más tardar, el 1 de julio de 1972,
las disposiciones legales, reglamentarias o administrativas necesariaspara cumplir las disposiciones de la presente Directiva. Informarán de
elloinmediatamente alaComisión.
Artículo 3
LosdestinatariosdelapresenteDirectivaseránlosEstadosmiembros.1971L0250—ES—13.08.1998—002.001—2
(1)D OnoL170de3.8.1970,p.2.▼M1
▼B
▼B
ANEXO
MÉTODOS DE ANÁLISIS DE LOS COMPONENTES DE LOS
ALIMENTOSPARAANIMALES
1. DISPOSICIONES GENERALES REFERENTES A LOS MÉTODOS DE
ANÁLISISDELOSPIENSOSPARAANIMALES
A. PREPARACIÓNDELASMUESTRASPARAELANÁLISIS
1.Objeto
Lasmodalidadesdescritasacontinuación serefierenalapreparación para
elanálisisdelasmuestrasfinales,transmitidasaloslaboratoriosdecontrol
después de haber sido tomadas de acuerdo con las disposiciones de la
primera Directiva 76/371/CEE de la Comisión, de 1 de marzo de 1976,
sobre la determinación de las formas comunitarias de toma de muestras
paraelcontroloficialdelospiensosparaanimales(1).
La preparación de dichas muestras debe permitir quelas tomas deespecí-
menes previstas en los métodos de análisis sean homogéneas y
representativasdelasmuestrasfinales.
2.Precaucionesquesehandetomar
Efectuartodaslasoperacionesdemaneraqueseevite,enlamedidadelo
posible,unacontaminacióndelamuestraomodificacionesdesucomposi-
ción.Efectuarlasmoliendas,lasmezclasyloscernidoslomásrápidamente
posible,exponiendolomínimolamuestraalaluzyalpolvo.Evitareluso
demolinosodetrituradorasquepuedanproduciruncalentamientonotable
delamuestra.Serecomiendaelmolidomanualparalospiensosparticular-
mente sensibles al calor. Velar, por otra parte, para que el instrumental
mismonoseaunafuentedecontaminaciónenoligoelementos.
Sinopudieraprepararse lamuestrasinvariación sensibledesucontenido
enhumedad,determinardichocontenidoantesydespuésdelapreparación
porelmétodoestablecidoenelpunto1delAnexodelasegundaDirectiva
71/393/CEE de laComisión,de 18denoviembre de 1971,sobrela deter-
minacióndemétodoscomunitariosdeanálisisparaelcontroloficialdelos
piensos para animales(2), modificada por la Directiva 73/47/CEE de la
Comisión,de5dediciembrede1972(3),
3.Mododeoperar
Mezclar estrechamente la muestra final, ya sea mecánica o manualmente.
Dividir en dos porciones iguales (si fuera posible por el método de los
cuartos).Conservarunadelasporcionesenunrecipienteadecuado,limpio
y seco, provisto de un cierre hermético, y preparar la otra porción o una
parte representativa de ella, de al menos 100 gramos, como se indica a
continuación.
3.1.Alimentos que se puedan moler en su estado natural
Salvo indicación específica en los métodos de análisis, cribar la totalidad
de la muestra sobre un tamiz de mallas cuadradas de 1 mm. de lado (de
acuerdo con la recomendación ISO R565) después de haberla molido si
fueranecesario.Evitartodamoliendasuperflua.
Mezclarlamuestracribadayguardarlaenunrecipienteadecuado,limpioy
seco, provisto de un cierre hermético. Mezclar de nuevo inmediatamente
antesdetomarlamuestraparalaprueba.
3.2.Alimentos que se puedan moler tras un desecado
Salvoindicaciónespecífica enlosmétodosdeanálisis,desecarlamuestra,
de manera que su contenido en humedad llegue a 8-12 %, aplicando el
procedimiento de predesecación indicado en el punto 4.3 del método de
determinación de la humedad mencionado en el punto 2 precedente.
Despuésprocedercomoseindicaenelpunto3.1.1971L0250—ES—13.08.1998—002.001—3
(1)D O noL102de15.4.1976,p.1.
(2)D O noL279de20.12.1971,p.7.
(3)D O noL83de30.3.1973,p.35.▼M1
▼M1
3.3.Alimentos líquidos y semilíquidos
Recoger la muestra en un recipiente adecuado, limpio y seco, provisto de
un cierre hermético. Mezclar cuidadosamente antes de tomar las muestras
paralaprueba.
3.4.Otros alimentos
Silamuestranopudieraprepararsesegúnunodelosprocedimientosantes
descritos,seaplicarácualquierotroprocedimientodepreparaciónadecuado
que permita obtener tomas homogéneas para las pruebas y representativas
delasmuestrasfinales.
4.Conservacióndelasmuestras
Conservarlasmuestrasaunatemperatura quenopuedaalterar sucompo-
sición. Usar recipientes de cristal ahumado para las muestras que se
destinen al análisis de vitaminas o de substancias especialmente sensibles
alaluz.
B. DISPOSICIONES REFERENTES A LOS REACTIVOS Y AL INSTRU-
MENTALUTILIZADOENMÉTODOSDEANÁLISIS
1. Salvoindicación específica en losmétodosde análisis, todoslosreactivos
deberánserdecalidad«paraanálisis»(pa).Paraelanálisisdelosoligoele-
mentos, deberá controlarse la pureza de los reactivos con una
determinación en blanco. Según el resultado obtenido, podrá requerirse
unapurificaciónsuplementaria.
2. Las operaciones de preparación de las soluciones, de disolución, de acla-
rado o de lavado mencionadas en los métodos de análisis, sin indicación
sobre la naturaleza del solvente o del diluyente, implican que hay que
utilizaragua.Comonormageneral,elaguadeberáestardesmineralizadao
destilada. En casos particulares, indicados en los métodos de análisis,
deberásersometidaaprocedimientosespecíficosdepurificación
3. Habida cuenta del equipamiento usual de los laboratorios de control, sólo
se mencionarán en los métodos de análisis los instrumentos y aparatos
especiales o que deban responder a condiciones muy específicas. Dicho
materialdeberálimpiarsebien,muyespecialmenteparalasdeterminaciones
decantidadesmuypequeñasdesubstancias.
C. APLICACIÓN DE LOS MÉTODOS DE ANÁLISIS Y EXPRESIÓN DE
LOSRESULTADOS
1. Engeneralsóloseestableceráunmétododeanálisisparaladeterminación
de una substancia en los piensos para animales. Cuando se den varios
métodos, deberá mencionarse el método aplicado por el laboratorio de
controlenelpartedeanálisis.
2. Elresultadoindicadoenelpartedeanálisisseráelvalormedioobtenidoa
partir de al menos dos determinaciones, efectuadas sobre muestras dife-
rentes,ycuyarepetitividadseasatisfactoria.
Dicho resultado deberá expresarse de acuerdo con las indicaciones que se
denenelmétododeanálisisconunnúmeroapropiadodecifrassignifica-
tivas,ycorregirse,sifueranecesario,enfuncióndelcontenidoenhumedad
delespecimenfinal,previoalapreparación.
2. DETERMINACIÓNDELÁCIDOCIANHÍDRICO
1.Objetivoyámbitodeaplicación
El método permite determinar el contenido en ácido cianhídrico libre y
combinadoenformadeglucósidosdelaalimentaciónanimaly,enparticular,
de los productos de semillas de lino, de harina de mandioca y de determi-
nadasespeciesdejudías.
2.Principio
La muestra se suspende en el agua. El ácido cianhídrico se libera bajo la
accióndefermentos,searrastrapordestilaciónalvapordeaguayserecoge
en un volumen determinado de solución de nitrato de plata acidificada. El
cianuro de plata se separa por filtrado y el exceso de nitrato de plata se
valoramedianteunasolucióndetioacinatoalamonio.1971L0250—ES—13.08.1998—002.001—4
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▼B
3.Reactivos
3.1. Suspensióndealmendrasdulces:triturar20almendrasdulceslimpiadas
en 100 ml de agua a una temperatura de 37 a 40 ºC. Comprobar la
ausencia de ácido cianhídrico sobre10 ml de la suspensión,con ayuda
de un papel picro-sódico o efectuando una prueba en blanco como se
indicaen5enelúltimoapartado.
3.2. Soluciónal10%(p/v)deacetatodesodio,neutroalafenolftaleína.
3.3. Emulsióndeantiespuma(silicona,porejemplo).3.4. Acidonítrico,d:1,40.
3.5. Solucióndenitratodeplata:0,02N.
3.6. Solucióndetiocianatodeamonio:0,02N.
3.7. Soluciónsaturadadesulfatodeamonioférrico.
3.8. Amoniaco,d:0,958.
4.Equipo
4.1. Estufaprovistadeuntermostatoreguladoa38ºC.
4.2. Aparato de destilación porproducción al vapor de agua provisto de un
refrigeranteconalargaderacurvada.
4.3. Matracesdefondoplanode100mldetapónesmerilado.
4.4. Bañodeaceite.
4.5. Buretagraduadaa1/20ml.
5.Métodooperatorio
Pesar,conprecisiónde5mg,20gdelamuestra,introducirlosenunmatraz
de 1 l de fondo plano y añadir 50 ml de agua y 10 ml de suspensión de
almendrasdulces(3.1).Taparelmatrazymantenerlodurantedieciséishoras
en la estufa a 38 ºC. Refrigerar a continuación a la temperatur ambiente y
añadir 80 ml de agua, 10 ml de solución de acetato de sodio (3.2) y una
gotadeemulsiónantiespuma(3.3).
Conectarelmatrazalaparatodedestilaciónalvaporysituarloenunbañode
aceitepraviamentellevadoaunatemperaturaligeramentesuperiora100ºC.
Destilar de 200a 300ml de líquido haciendo pasar en el matraz una pode-
rosacorriente devaporycalentando suavemente elbañodeaceite. Recoger
eldestiladoenunerlenmeyer situadoalresguardodelaluzyquecontenga
50 ml exactamente de solución de nitrato de plata 0,02 N (3.5) y 1 ml de
ácidonítrico(3.4)Prestaratenciónparaquelaalargaderadelrefrigerantese
sumerjaenlasolucióndenitratodeplata.
Trasvasar el contenido del erlenmeyer a un matraz aforado de 500 ml,
completar el volumen con agua, agitar y filtrar. Tomar 250 ml del filtrado,
añadir1mlaproximadamentedesolucióndesulfatodeamonioférrico(3.7)
yvalorarenretrocesoelexcesodenitratodeplataporlasolucióndetiocia-
natodeamonio0,02N(3.6)suministradaporlaburetagraduadaa1/20ml.
Efectuarenelcasoenquefueranecesariounensayoenblancoaplicandoel
mismométodooperatorioa10mldesuspensióndealmendrasblandas(3.1),
afaltademuestraparaanalizar.
6.Cálculodelosresultados
Silapruebaenblancoindicaunconsumodelasolucióndenitratodeplata
0,02 N, sustraer este valor del volumen consumido por el destilado de la
muestra.
1mldeAgNO
30,02Ncorrespondea0,54mgdeHCN.Expresarelresultado
enporcentajedelamuestra.
7.Observaciones
Silamuestracontieneunacantidadimportantedesulfuros(judías,poej.),se
formaunprecipitadonegrodesulfurodeplataquesefiltraconelsedimento
decianurodeplata.Laformacióndeesteprecipitadoentrañaunapérdidade
solución de nitrato de plata 0,02 N cuyo volumen debe sustraerse del
volumen tomado en consideración para el cálculo del contenido en HCN.
Contalfin,procedercomoseindicaacontinuación.
Tratarelsedimentosobreelfiltropor50mldeamoniaco(3.8)paradisolver
elcianurodeplata.Lavarelresiduomedianteamoniacodiluidoyprocedera1971L0250—ES—13.08.1998—002.001—5
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ladeterminacióndesucontenidoenplata.Convertirelvalorobtenidoenml
desolucióndenitratodeplata0,02N.
ElcontenidoenHCNdelamuestrapuededeterminarseigualmentemediante
titulacióndelfiltradoamoniacalacidificadoporelácidonítrico.
3. DETERMINACIÓNDELCALCIO
1.Objetivoyámbitodeaplicación
El método permite determinar el contenido en calcio total de los alimentos
paraanimales.
2.Principio
Lamuestraseincinera,lascenizassetratanconácidoclorhídricoyelcalcio
seprecipitaenformadaoxalatodecalcio.Despuésdedisolverelprecipitado
en el ácido sulfúrico, el ácido oxálico formado se titula mediante una solu-
cióndepermanganatodepotasio.
3.Reactivos
3.1. Ácidoclorhídricop.a.,d:1,14.3.2. Ácidonítricop.a.,d:1,40.
3.3. Ácidosulfúricop.a.,d:1,13.
3.4. Amoniacop.a.,d:0,98.
3.5. Soluciónsaturadaenfríodeoxalatodeamoniop.a.
3.6. Soluciónal30%(p/v)deácidocítricop.a.
3.7. Soluciónal5%(p/v)declorurodeamoniop.a.
3.8. Soluciónal0,04%(p/v)deverdedebromocresol.
3.9. Solucióndepermanganatodepotasio0,1N.
4.Equipo
4.1. Hornoeléctrico,decirculacióndeaireytermostato.
4.2. Crisolesdeincineracióndeplatino,cuarzooporcelana.
4.3. Crisolesfiltrantesdecristal,porosidadG
4.
5.Métodooperatorio
Pasar,conprecisiónde1mg,aproximadamente 5gdelamuestra(omássi
fuera necesario), calcinarlos a 550 ºC y trasvasar las cenizas a un vaso de
250 ml. Añadir 40 ml de ácido clorhídrico (3.1), 6 ml de agua y algunas
gotasdeácidomítrico(3.2).Llevaraebulliciónymantenerladurantetreinta
minutos. Refrigerar, trasvasar la solución a un matraz aforado de 280 ml.
Lavar, completar el volumen hasta enrasar con el indicador de nivel con
agua,homogeneizaryfiltrar.
Tomar con una pipeta, según el contenido supuesto en calcio, una cantidad
alícuota que contenga de 10 a 40 mg de calcio e introducir en un vaso de
250 ml. Añadir 1 ml de solución de ácido cítrico (3.6) y 5 ml de solución
de cloruro de amonio (3.7). Completar el volumen a 100 ml aproximada-
mente mediante agua. Llevar a ebullición, añadir de 8 a 10 gotas de
solución de verda de bromocresol (3.8) y 30 ml de solución caliente de
oxalato de amonio (3.5). Si aparece un precipitado, disolverlo mediante
adicióndealgunasgotasdeácidoclorhídrico(3.1)
Neutralizar a continuación muy lentamente mediante amoniaco (3.4),
agitando constantemente, hasta la obtención de un pH del orden de 4,4 a
4,6 (virado del indicador). Colocar el vaso en un baño de agua hirviendo,
mantenerlo durante treinta minutos para dejar reposar el precipitado que se
haya formado. Retirar el vaso del baño de agua. Dejar reposar durante una
horayfiltrarenuncrisolfiltranteG4.
Lavar el vaso y el crisol con agua hasta eliminar el exceso de oxalato de
amonio (la ausencia de cloruro en las aguas de lavado indica que el lavado
hasidosuficiente).
Disolverelprecipitadosobreelfiltromediante50mldeácidosulfúrico(3.3)
caliente.Lavarelcrisolconaguacalienteyllevarelfiltradoa100mlapro-
ximadamente.Llevarlatemperaturaa70-80ºCytitulargotaagotamediante1971L0250—ES—13.08.1998—002.001—6
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lasolucióndepermanganatodepotasio(3.9)hastalaobtencióndeunacolo-
raciónrosapersistenteduranteunminuto.
6.Cálculodelosresultados
1 ml de permanganato de potasio 0,1 N corresponde a 2,004 mg de calcio.
Expresarelresultadoobtenidoenporcentajedelamuestra.
7.Observaciones
7.1. Para los contenidos muy bajos en calcio, proceder como se indica a
continuación. Filtrar el precipitado de oxalato de calcio sobre un papel
filtrosincenizas.Despuésdelavarlo,secarelfiltroycalcinarloa550ºC
en un crisol de platino. Recoger el residuo mediante algunas gotas de
ácido sulfúrico (3.3), evaporar en seco, calcinar de nuevo a 550 ºC y
pesar.Siprepresentaelpesodesulfatodecalcioobtenido,elcontenido
encalciodelacantidadalícuotatomada=p×0,2944.
7.2. Si la muestra está constituida únicamente por materias minerales,
proceder aladisoluciónmediante ácidoclorhídrico sinpreviaincinera-
ción. Para los productos tales como los fosfatos aluminocálcicos,
difícilesdedisolverenlosácidos,procedercomoseindicaaunafusión
alcalina antes de la disolución. Mezclar íntimamente en un crisol de
platino la toma de muestra, con una mezcla de aproximadamente 5
vecessupeso,apartesiguales,decarbonatodepotasioycarbonato de
sodio. Calentar con precaución hasta la fusión completa de la mezcla.
Despuésdeenfriar,disolvermedianteácidoclorhídrico.
7.3. Si el contenido en magnesio de la muestra es elevado, proceder a una
segundaprecipitacióndeloxalatodecalcio.
4. DETERMINACIÓNDELOSCARBONATOS
1.Objetivoyámbitodeaplicación
Elmétodopermitedeterminarloscarbonatos,convencionalmenteexpresados
encarbonatocálcico,enlosalimentosparaanimales.Endeterminadoscasos,
sin embargo (carbonato de hierro, por ejemplo), es necesario emplear un
métodoparticular.
2.Principio
Los carbonatos se descomponen por el ácido clorhídrico; el gas carbónico
liberadoserecogeenuntubograduadoysuvolumensecomparaalliberado,
en las mismas condiciones, por una cantidad conocida de carbonato cálcico
p.a.
3.Reactivos
3.1. Acidoclorhídrico,d:1,10.
3.2. Carbonatocálcicop.a.
3.3. Acidosulfúrico0,1Naproximadamente,coloreadoporrojodemetilo.
4.Equipo
AparatosegúnScheibler-Dietrich(v.esquema)oaparatosimilar.
5.Métodooperativo
Segúnelcontenido encarbonatosdelamuestra,pesarunatomademuestra
talcomoseindicaacontinuación:
0,5g para los productos que contengan del 50 a 100 % de carbonatos,
expresadosencarbonatocálcico;
1g para los productos que contengan del 10 a 50 % de carbonatos,
expresadosencarbonatocálcico;
2g a3gparaelrestodelosproductos.
Introducir la toma demuestra en el frascoespecial (4) del aparato, provisto
de un pequeño tubo de material irrompible con 10 ml de ácido clorhídrico
(3.1),yconectarelfrascoalaparato.Girarelgrifodetresvías(5)deforma
queeltubo(1)comuniqueconelexterior.Conayudadeuntubomóvil(2),
con ácido sulfúrico coloreado en su interior (3.3) y conectado al tubo
graduado (1), llevar el nivel del líquido a la graduación cero. Girar el grifo1971L0250—ES—13.08.1998—002.001—7
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(5), de forma que se pongan en comunicación los tubos (1) y (2), y
comprobarelnivelcero.
Dejar correr lentamente el ácido clorhídrico (3.1) sobre la toma de muestra
inclinando el frasco (4). Igualar la presión bajando el tubo (2). Agitar el
frasco(4)hastaqueceseeldesprendimientodegascarbónico.
Restablecer lapresiónllevando ellíquido almismonívelenlostubos(1)y
(2).Hacerlalecturadespuésdealgunosminutos,cuandoelvolumengaseoso
sehayahechoconstante.
Efectuar enlasmismas condiciones unaprueba decomparación sobre0,5g
decarbonatocálcico(3.2).
6.Cálculodelosresultados
El contenido en gde carbonatos, expresados en carbonato cálcico, porcada
ciendemuestravendrádadoporlarelación:
V/C2100
T/C22P
enelque:
V=mld eC O2desprendidosporlatomademuestra.
T=mld eC O2desprendidospor0,5gdeCaCO3p.a.
P = pesodelatomademuestraeng.
7.Observaciones
7.1. Cuandolamuestraseasuperiora2kg,introducirpreviamente15mlde
agua destilada en el frasco (4) y mezclar antes de comenzar la prueba.
Emplearelmismovolumendeaguaparalamezcladecomparación.
7.2. Si se emplea un aparato de un volumen diferente del de Scheibler-
Dietrich,seránecesarioadaptaradichoaparatolamuestraylasustancia
decomparaciónasícomoelcálculodelosresultados.1971L0250—ES—13.08.1998—002.001—8
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APARATOSEGUNSCHEIBLER-DIETRICHPARADETERMINARELCO2
(Medidasenmm)
5. DETERMINACIÓNDELASCENIZASBRUTAS
1.Objetivoyámbitodeaplicación
Elmétodopermitedeterminarelcontenidoencenizasbrutasdelosalimentos
paraanimales.
2.Principio
Lamuestraseincineraa550ºC;elresiduosepesa.
3.Reactivos
Soluciónal20%(p/v)denitratodeamonio.
4.Equipo
4.1. Placacalorífera.4.2. Hornoeléctrico,contermostato.4.3. Crisolesdeincineracióndeplatinoodealeacióndeplatinoyoro(10%
Pt,90%An),rectangulares (60×40×25mm) oredondos(diámetro:
60a75mm,altura:20a25mm).1971L0250—ES—13.08.1998—002.001—9
▼B
5.Métodooperatorio
Pesar,conprecisiónde1mg,5gaproximadamentedelamuestra(2,5gpara
losproductosquetengantendenciaahincharse)enuncrisoldeincineración
previamente calcinado y tarado. Situar el crisol sobre la placa carolífera y
calentar progresivamente hasta la carbonización de la materia. Introducir el
crisol en el horno regulado a 550 ºC ± 5 ºC. Mantener a dicha temperatura
hastaobtenercenizasblancas,grisclaroorojizas,aparentementedesprovistas
de partículas carbonosas. Situar el crisol en un desecador, dejar refrigerar y
pesarinmediatamente.
6.Cálculodelosresultados
Calcularelpesodelresíduodeduciendolatara.
Expresarelresultadoenporcentajedelamuestra.
7.Observaciones
7.1. Las cenizas de las materias difíciles de quemar deben someterse a una
primera incineración de tres horas al menos, refrigerarse y añadirlas
algunasgotasdeunasoluciónal20%denitratodeamonio(prudente-
mente, para evitarladispersióopegadura delascenizas). Continuarla
calcinacióndespuesdedesecarlaestufa.
Repetirsifueranecesariolaoperaciónhastalacompletaincineración.
7.2. Para las materias que resistan el tratamiento indicado en 7.1, operar
como se indica a continuación. Después de una incineración de tres
horas, recoger las cenizas mediante agua caliente y filtrar sobre un
pequeñofiltrosincenizas.Incinerarelfiltroysucontenidoenelcrisol
inicial. Llevar el filtrado al crisol refrigerado, evaporar en seco, inci-
nerarypesar.
7.3. Enelcasodeaceitesygrasas,pesarconexactitudunatomademuestra
delordende25genuncrisoldecapacidadapropiada.Carbonizarinfla-
mando la materia por medio de una mezcla de papel filtro sincenizas.
Despuésdelacombustión,humedecermedianteelmínimonecesariode
agua.Secareincinerarcomoseindicaen5.
6. DETERMINACIÓN DE LAS CENIZAS INSOLUBLES EN EL ÁCIDO
CLORHÍDRICO
1.Objetivoyámbitodeaplicación
Elmétodo permite determinar elcontenido enmaterias minerales insolubles
enelácidoclorhídricodelosalimentosparaanimales.Seprevendosproce-
dimientosenfuncióndelanaturalezadelamuestra.
1.1.Procedimiento A: aplicable a los alimentos orgánicos simples y a la
mayorpartedelospiensoscompuestoscompletos;
1.2.Procedimiento B: aplicable a los compuestos y mezclas mineralas, así
como a lospiensos compuestos completos cuyo contenido en insoluble
clorhídrico,determinadosegúnelprocedimientoA,seasuperioral1%.
2.Principio
2.1.Procedimiento A: seincineralamuestra,setratanlascenizasporebulli-
ción mediante el ácido clorhídrico y el residuo insoluble se filtra y se
pesa.
2.2.Procedimiento B: lamezclasetratamedianteácidoclorhídrico.Lasolu-
ción se filtra, el residuo se incinera y las cenizas obtenidas se tratan
comoelprocedimientoA.
3.Reactivos
3.1. Acidoclorhídrico3N.3.2. Soluciónal20%(p/v)deácidotricloracético.3.3. Soluciónal1%(p/v)deácidotricloracético.
4.Equipo
4.1. Placacalorífera.
4.2. Hornoeléctrico,contermostato.1971L0250—ES—13.08.1998—002.001—10
▼B
4.3. Crisolesdeincineracióndeplatinoodealeacióndeplatinoyoro(10%
Pt,90%Au),rectangulares (60×40×25mm) oredondos(diámetro:
60a75mm,altura:20a25mm).
5.Métodooperatorio
5.1.Procedimiento A
Incinerarlatomademuestrasegúnelmétodooperatoriodescritoparala
determinación de las cenizas brutas. Se podrán emplear igualmente las
cenizasobtenidasalefectuardichadeterminación.
Introducirlascenizas enunvasode250a400mldeácidoclorhídrico
3N(3.1).Llevarellíquidoconprudenciaaebulliciónsuaveymantener
ésta durante quince minutos. Filtrar la solución caliente sobreun papel
defiltrosincenizasylavarelresiduoconaguacalientehastaladesapa-
rición de reacción ácida. Secar el filtro que contiene al residuo e
incinerarenuncrisoltaradoaunatemperaturade550ºCcomomínimo
yde700ºCcomomáximo.Refrigerarendesecadorypesar.
5.2.Procedimiento B
Pesar, con precisión de 1 mg, 5 g de la muestra e introducirlos en un
vaso de 250 a 400 ml. Añadir sucesivamente 25 ml de agua y 25 ml
deácidoclorhídrico3N(3.1),mezclar yesperarelfinaldelaeferves-
cencia.Añadir50mldeácidoclorhídrico3N(3.1).Esperaralfinalde
unposibledesprendimientodegases,colocaracontinuación elvasoen
un baño de agua hirviendo y mantenerlo allí curante treinta minutos o
más, si fuera necesario, con el fin de hidrolizar completamente el
almidónquepuedaestarpresente.
Filtrarencalientesobrefiltrosincenizasylavarelfiltromediante50ml
de agua caliente (v. observación 7). Colocar el filtro que contiene el
residuoenuncrisoldeincineración,secareincineraraunatemperatura
de550ºCcomomínimoy700ºCcomomáximo.Introduciracontinua-
ción las cenizas en un vasode 250a 400 ml mediante 75 ml de ácido
clorhídrico 3 N (3.1); continuar tal como se indica an 5.1, párrafo
segundo.
6.Cálculodelosresultados
Calcular el peso del residuo deduciendo la tara. Expresar el resultado en
porcentajedelamuestra.
7.Observaciones
Silafiltraciónsemostraradifícil,volveracomenzarladeterminaciónsusti-
tuyendolos50mldeácidoclorhídrico3Npor50mldeácidotrcloracético
al20%(3.2)ylavandoelfiltroconayudadeunasolucióncalientedeácido
tricloracéticoal1%(3.3).
7. DETERMINACIÓNDELCLORODELOSCLORUROS
1.Objetivoyámbitodeaplicación
El método permite determinar el cloro de los cloruros solubles en el agua,
expresado convencionalmente en cloruro de sodio. Es aplicable a los
alimentosparaanimalesenconjunto.
2.Principio
Los cloruros se disuelven en agua. Si el producto contiene materias
orgánicas,seprocedeaunadefecación.Lasoluciónseacidifica ligeramente
medianteelácidonítricoylosclorurosseprecipitanenformadeclorurode
plata conayudadeunasolucióndénitratodeplata. Elexcesodenitrato de
plata se titula mediante una solución de tiocianato de amonio, según el
métododeVolhard.
3.Reactivos
3.1. Solucióndetiocianatodeamonio0,1N.
3.2. Solucióndenitratodeplata0,1N.
3.3. Soluciónsaturadadesulfatodeamonioférrico.
3.4. Acidonítrico,d:1,38.3.5. Eterdietílicop.a.1971L0250—ES—13.08.1998—002.001—11
▼B
3.6. Acetonap.a.
3.7. Solución de Carrez I: disolver en agua 24 g de acetato de zinc, Zn
(CH3COO)2·2H2Oy3gdeácidoacéticoglacial.Completara100ml
conagua.
3.8. Solución de Carrez II: disolver en agua 10,6 g de ferrocianuro de
potasioK4(Fe(CN)6)·3H2O.Completara100mlconagua.
3.9. Carbónactivop.a.exentodeclorurosynoabsorbente.
4.Equipo
Mezclador(balancín):deaproximadamente35a40revolucionesporminuto.
5.Métodooperatorio
5.1.Preparación de la solución
Segúnlanaturalezadelamuestra,prepararunasolucióncomoseindica
en5.1.1.,5.1.2.o5.1.3.
Efectuar en paralelo una prueba en blanco exenta de muestra para
analizar.
5.1.1.Muestras exentas de materia orgánica
Pesar, con precisión de 1 mg, una toma de muestra (no más de
10g),quenocontengamásde3gdecloroenformadecloruros
eintroducirlaenunfrascoaforadode500mlcon400mldeagua
a20ºCaproximadamente. Mezclardurantetreinta minutosenel
balancín,completaralvolumen,homogeneizaryfiltrar.
5.1.2.Muestras que contengan materias orgánicas, excepto los
productos mencionados en 5.1.3
Pesar,conprecisiónde1mg,5gaproximadamentedelamuestra
eintroducirloscon1gdecarbónactivoenunfrascoaforadode
500ml.Añadir400mldeaguaa20ºCaproximadamentey5ml
desolucióndeCarrezI(3.7),agitaryañadiracontinuación5ml
desolucióndeCarrezII(3.8).Mezclardurantetreintaminutosen
elbalancín,completaralvolumen,homogeneizaryfiltrar.
5.1.3.Alimentos cocidos, torta y harina de lino, productos ricos en
harina de lino y el resto de los productos ricos en mucílagos o
en substancias coloidales (por ejemplo, almidón dextrinado)
Prepara la solución como se indica en 5.1.2. pero no filtrar.
Decantar (si fuera necesario, centrifugar), tomar 100 ml del
líquido sobrenadante e introducirlos en un matraz aforado de200 ml. Mezclar con acetona, (3.6) y completar el volumen con
dichodisolvente,homogeneizaryfiltrar.
5.2.Titulación
Introducir mediante la pipeta en un erlenmeyer de 25 a 100 ml del
filtrado (según el contenido supuesto en cloro) obtenido en 5.1.1.,
5.1.2.o5.1.3.Laporciónalícuota nodebecontenermásde150mgde
cloro(Cl).Diluir,sifueranecesario,a50mlcomomínimoconelagua,
añadir5mldeácidonítrico(3,4),20mldesoluciónsaturadadesulfato
deamonioférrico(3.3)ydosgotasdesolucióndetriocianatodeamonio
(3.1) suministradas mediante una bureta llena hasta la marca de aforo
cero. Suministrar a continuación mediante una bureta la solución de
nitratodeplata(3.2)deformaquesepuedaobtenerunexcesode5ml.
Añadir5mldeéterdietílico (3.5)yagitar fuertemente para concentrar
elprecipitado.
Titular el exceso de nitrato de plata mediante la solución de tiocianato
deamonio(3.1)hastaqueelviradoalocrepersistaduranteunminuto.
6.Cálculodelosresultados
La cantidad de cloro (p), expresada en cloruro de sodio, presente en el
volumen de filtrado tomado para la titulación viene dada por la fórmula
siguiente:
p=5,845(V
1−V2)mg
donde: V1= mldesolucióndenitratodeplata0,1añadidos
V2= ml de solución de tiocianato de amonio 0,1 N empleados al
efectuarlatitulación.1971L0250—ES—13.08.1998—002.001—12
▼B
Si la prueba en blanco indica un consumo de solución de nitrato de plata
0,1N,restardichovalordelvolumen(V1−V2).
Expresarelresultadoenporcentajedelamuestra.
7.Observaciones
7.1. Latitulaciónpodráigualmenteefectuarsemediantepotenciometria;
7.2. Para los productos muy ricos en materias grasas, proceder a un desen-
grasadopreviomedianteeléterdietílicooeléterdepetroleo;
7.3. Para las harinas de pescado, la titulación puede efectuarse mediante el
métododeMohr.
8. DETERMINACIÓNDELAESENCIADEMOSTAZA
1.Objetivoyámbitodeaplicación
Elmétodopermitedeterminar elcontenidoenesenciademostazaarrastable
por el vapor de agua, expresado en isotiocianato de alilo, de la torta de las
especies Brassica y Sinapis y de los piensos completos compuestos que la
contienen.
2.Principio
La muestra se pone en suspensión en agua. Las esencias de mostaza se
liberanbajolaaccióndefermentos,searrastranpordestilaciónenpresencia
de etanol y se recogen en el amoniaco diluido. La solución se trata en
calienteconunvolumendeterminadodesolucióndenitratodeplata,refrige-
radoyfiltrado.Elexcesodenitratodeplatasetitulamedianteunasolución
detiocianatodeamonio.
3.Reactivos
3.1. Mostazablanca(Sinapisalba).
3.2. Etanol,del95al96%(v/v).
3.3. Emulsióndeantiespuma(silicona,porejemplo).
3.4. Amoniaco,d:0,958.
3.5. Solucióndenitratodeplata0,1N.
3.6. Solucióndetiocianatodeamonio0,1N.
3.7. Acidonítrico,d:1,40.
3.8. Soluciónsaturadadesulfatodeamonioférrico.
4.Equipo
4.1. Matracesde500ml,defondoplanoytapónesmerilado.
4.2. Aparato de destilar provisto de un refrigerante y de un dispositivo de
permitaevitarelarrastredegotitas.
5.Métodooperatorio
Pesar,conprecisiónen1mg,10gdelamuestra,introducirlosenunmatraz
de500mldefondoplanoyañadir2gdemostazablancatrituradafinamente
(fuente de fermento) (3.1) y 200 ml de agua a 20 ºC. Tapar el matraz y
mantenerlo durante doshorasaproximadamente a20ºC agitándolo frecuen-
temente.Añadiracontinuación40mldeetanol(3.2)yunagotadeemulsiónantiespuma(3.3).Destilar150mlaproximadamenteyrecogereldestiladoen
un matraz aforado de 250 ml que contenga 20 ml de amoniaco (3.4) pres-
tando atención para que la extremidad del refrigerante se sumerja en el
líquido.Añadiralasoluciónamoniacal50mldesolucióndenitratodeplata
0,1 N (3.5) (o más si fuera necesario), coronar el matraz aforado con un
pequeñoembudoycalentar lamezcla durante unahoraenunbañodeagua
hirviendo. Dejar enfriar, completar al volumen con agua, agitar y filtrar.
Tomar100mldelfiltradolímpido,añadir5mldeácidonítrico(3.7)y5ml
aproximadamente de solución de sulfato de amonio férrico (3.8). Titular en
retroceso el exceso de nitrato de plata por la solución de tiocianato de
amonio0,1N(3.6).
Efectuar una prueba en blanco aplicanto el mismo método operatorio a 2 g
demostazablancatrituradafinamente,afaltdelamezclaporanalizar.1971L0250—ES—13.08.1998—002.001—13
▼B
6.Cálculodelosresultados
Sustraer el volumen de solución de nitrato de plata 0,1 N consumido en la
pruebaenblancodelconsumidoporlasolucióndelamuestra.Elvalorobte-
nido da el número de ml de solución de nitrato de plata 0,1 N consumidos
por la esencia de mostaza de la toma de muestra. 1 ml de AgNO30,1 N
corresponde a 4,956 mg de isotiocianato de alilo. Expresar el resultado en
porcentajedelamuestra.
9. DETERMINACIÓNDELALACTOSA
1.Objetivoyámbitodeaplicación
Elmétodopermitedeterminarelcontenidoenlactosadelosalimentoscons-
tituidosenmásdel0,5%poresteelemento.
2.Principio
Los azúcares se disuelven en el agua. La solución se somete a la fermenta-
ción por la levadura Saccharomycers cerevisiae, que deja intacta la lactosa.
Previa defecación de la filtración, el contenido en lactosa del filtrado se
determinaporelmétodoLuff-Schoorl.
3.Reactivos
3.1. Suspensiónde Saccharomycers cerevisiae: Ponerensuspensión25gde
levadura fresca en 100 ml de agua. La suspensión se conserva una
semanacomomáximoenelrefrigerador.
3.2. SoluciónCarrezI:
Disolverenagua 24gdeacetato decinc Zn(CH3COO)2·2H2Oy3g
deácidoacéticoglacial.Completara100mlconagua.
3.3 Solución de Carrez II: Disolver en agua 10,6 g de ferrocianuro de
potasioK4(Fe(CN6))·3H2O.Completara100mlconagua.
3.4. ReactivosegúnLuff-Schoorl:
Verter, agitando siempre con prudencia, la solución de ácido cítrico
(3.4.2)enlasolucióndecarbonatodesodio(3.4.3).Añadiracontinua-
ciónlasolucióndesulfatodecobre(3.4.1)ycompletara1lconagua.
Dejar reposar una noche y filtrar. Controlar la normalidad del reactivo
asíobtenido(Cu0,1N;Na2CO32N).ElpHdelasolucióndeberáser
9,4aproximadamente.
3.4.1. Solución de sulfato de cobre: Disolver 25 g de sulfato de cobre
p.a.CuSO4·5H2O,exentodehierro,en100mldeagua.
3.4.2. Solucióndeácidocítrico:
Disolver 50 g de ácido cítrico p.a. C6H8O7·H2Oe n5 0mld e
agua.
3.4.3. Solucióndecarbonatodesodio:Disolver143,8gdecarbonatode
sodioanhidrop.a.en300mlaproximadamente deaguacaliente.
Dejarenfriar.
3.5. Granuladosdepiedrapómezhervidosenelácidoclorhídrico,lavadosen
elaguaysecados.
3.6. Soluciónal30%(p/v)deyodurodepotasio.
3.7. Acidosulfúrico6N.
3.8. Solucióndetiosulfatodesodio0,1N.3.9. Solucióndealmidón: Añadirunamezcla de5gdealmidón solubleen
30 ml de agua a 1 l de agua hirviendo. Hacer hervir durante tres
minutos,dejarenfriar,añadirsifueranecesario10mgdeyoduromercú-
ricocomoagenteconservador.
4.Equipo
Bañodeaguaprovistodeuntermostato,reguladode38a40ºC.
5.Métodooperatorio
Pesar, con precisión de 1 g, 1 g de la muestra e introducir esta toma de
muestra en un matraz aforado. Añadir de 25 a 30 ml de agua. Colocar el
matraz durante treinta minutos en un baño de agua hirviendo y refrigerar a
continuación a35ºCaproximadamente. Añadir5mldesuspensióndeleva-1971L0250—ES—13.08.1998—002.001—14
▼B
dura(3.1)yhomogeneizar. Dejarreposarelmatraz durantedoshorasenun
bañodeagua,alatemperaturade38a40ºC.Refrigeraracontinuaciónhasta
20ºCaproximadamente.
Añadir2,5mldesolucióndeCarrezI(3.2)yagitardurantetreintasegundos;
añadiracontinuación2,5mldesolucióndeCarrezII(3.3)yagitardenuevo
durante treinta segundos. Completar a 100 ml con agua mezclar y filtrar.
Tomarconlapipetaunacantidaddefiltradoquenoexcedade25mlyque
contenga con preferencia de 40 a 80 mg de lactosa e introducir ésta en un
erlenmeyerde300ml.Sifueranecesario,completara25mlconagua.
Procederdelamismamaneraaunensayoenblancoen5mldesuspensión
delevadura(3.1).
Determinar tal como se indica el contenido en lactosa según Luff-Schoorl.
Añadir25mlexáctamentedelreactivosgúnLuff-Schoorl(3.4)ydosgranu-
lados de piedra pómez (3.5). Calentar, agitando manualmente, sobre una
llama libre de media altura y llevar el líquido a ebullición durante dos
minutosaproximadamente. Colocarinmediatamente elerlenmeyer sobreuna
telametálicaprovistadeunapantalladeamiantoconunagujerode6cmde
diámetro aproximadamente, bajo la que se ha encendido previamente una
llama.Estasereguladeformaquesólosecalienteelfondodelerlenmeyer.
Adaptaracontinuaciónunrefrigeranteareflujosobreelerlenmeyer.Apartir
deestemomento,hacerhervirdurantediezminutosexáctamente. Refrigerar
inmediatamente enaguafríay,despuésdeaproximadamente cincominutos,
titulartalcomoseindica:
Añadir 10 ml de solución de yoduro de potasio (3.6) er inmediatamente
después, y con prudencia (debido al riesgo de formación de espuma abun-
dante), 25 ml de ácido sulfúrico 6 N (3.7). Titular a continuación con la
solucióndetiosulfatodesodio0,1N(3.8)hastalasaparicióndeunacolora-
ción amarilla clara, añadir el indicador al almidón (3.9) y concluir la
titulación.
Efectuarlamismatitulaciónsobreunamezclamedidaconexactitudde25ml
de reactivo según Luff-Schoorl (3.4) y 25 ml de agua, después de haber
añadido10mldesolucióndeyodurodepotasio(3.6)y25mldeácidosulfú-
rico6N(3.7),sinllevaraebullición.
6.Cálculodelosresultados
Establecer mediante la tabla aneja la cantidad de lactosa en mg que corres-
pondaaladiferencia entrelosresultadosdelasdostitulaciones, expresados
enmldetiosulfatodesodio0,1N.
Expresar los resultados en partes de lactosa anhidro por cada cien de la
muestra.
7.Observaciones
Para los productos que contengan más del 40 por ciento de los azúcares
fermentados,emplearmásde5mldesuspensióndelevadura(3.1)
Tabladevalorespara25mldereactivosegúnLuff-Schoorl
mldeNa2S2O30,1N,dosminutosdecalentamiento,diezdeebullición
Na2S2O30,1NGlucosa,fructosa,
azucaresinvertidos
C6H12O6Lactosa
C12H22O11Maltosa
C12H22O11Na2S2O30,1N
ml mg diferencia mg diferencia mg diferencia ml
1 2,4 2,4 3,6 3,7 3,9 3,9 1
2 4,8 2,4 7,3 3,7 7,8 3,9 23 7,2 2,5 11,0 3,7 11,7 3,9 3
4 9,7 2,5 14,7 3,7 15,6 4,0 4
5 12,2 2,5 18,4 3,7 19,6 3,9 56 14,7 2,5 22,1 3,7 23,5 4,0 6
7 17,2 2,6 25,8 3,7 27,5 4,0 7
8 19,8 2,6 29,5 3,7 31,5 4,0 89 22,4 2,6 33,2 3,8 35,5 4,0 9
10 25,0 2,6 37,0 3,8 39,5 4,0 10
11 27,6 2,7 40,8 3,8 43,5 4,0 1112 30,3 2,7 44,6 3,8 47,5 4,1 1213 33,0 2,7 48,4 3,8 51,6 4,1 13
14 35,7 2,8 52,2 3,8 55,7 4,1 14
15 38,5 2,8 56,0 3,9 59,8 4,1 151971L0250—ES—13.08.1998—002.001—15
▼B
Na2S2O30,1NGlucosa,fructosa,
azucaresinvertidos
C6H12O6Lactosa
C12H22O11Maltosa
C12H22O11Na2S2O30,1N
ml mg diferencia mg diferencia mg diferencia ml
16 41,3 2,9 59,9 3,9 63,9 4,1 16
17 44,2 2,9 63,8 3,9 68,0 4,2 17
18 47,1 2,9 67,7 4,0 72,2 4,3 18
19 50,0 3,0 71,7 4,0 76,5 4,4 1920 53,0 3,0 75,7 4,1 80,9 4,5 2021 56,0 3,1 79,8 4,1 85,4 4,6 21
22 59,1 3,1 83,9 4,1 90,0 4,6 22
23 62,2 3,1 88,0 94,6 23
10. DETERMINACIÓNDELPOTASIO
1.Objetivoyámbitodeaplicación
Elmétodopermite determinar elcontenido enpotasiodelosalimentos para
animales
2.Principio
La muestra se incinera y las cenizas se ponen en solución en ácido clorhí-
drico.Elcontenidoenpotasiodelasoluciónsedeterminaporfotometríade
llama en presencia de cloruro de cesio y de nitrato de aluminio. La adición
de dichas substancias elimina, en una amplia medida, la interferancia de
elementosperturbadores.
3.Reactivos
3.1. Ácidoclorhídricop.a.,d:1,12.
3.2. Clorurodecesiop.a.3.3. NitratodealuminioAl(NO
3)3·9H2O,químicamentepuro.
3.4. Clorurodepotasiop.a.,anhidro.
3.5. Solución tampón: disolver en el agua 50 g de cloruro de cesio (3.2) y
250gdenitratodealuminio(3.3),completara1lconaguayhomoge-
neizar.Conservarenfrascosdematerialplástico.
3.6. Solución patrón de potasio: disolver en el agua 1,907 g de cloruro de
potasio(3.4),añadiendo5mldeácidoclorhídrico(3.1),completara1l
con agua y homogeneizar. Conservar en frascos de material plástico.
1mldedichasolucióncontinen1,00mgdepotasio.
4.Equipo
4.1. Crisoles de incineración de platino, cuarzo o porcelana, en su caso
provistosdetapaderas.
4.2. Hornoeléctrico,contermostato.
4.3. Fotómatrodellama.
5.Métodooperatorio
5.1.Análisis de la muestra
Pesar,comonormageneral,conprecisiónde10mg,10gdelamuestra,
en un crisol de incineración e incinerar la substancia a 450 ºC durante
treshoras.Despuésderefrigerar,transvasarcuantitativamenteelresiduo
de incineración con la ayuda de 250 a 300 ml de agua, y después de
50 ml de ácido clorhídrico (3.1), a un matraz aforado de 500 ml.
Despuésdecesarelposibledesprendimiento degascarbónico, calentar
lasoluciónymantenerladurantedoshorasaunatemperaturacercanaa
los90ºC,agitandodevezencuando.Dejarrefrigeraralatemperaturaambiente, anrasar, agitar y filtrar. Introducir en un matraz aforado de
100 ml una parte alícuota de filtrado que contenga como máximo
1,0 mg de potasio, añadir 10,0 ml de solución tampón (3.5), enrasar
con agua y homogeneizar. En presencia de más altos contenidos en
potasio,diluirlasoluciónporanalizarenproporcionesadecuadas,antes
de la adición de la solución tampón. El cuadro siguiente se da a título
indicativoparaunatomademuestrasde10gaproximadamente.1971L0250—ES—13.08.1998—002.001—16
▼B
Contenidosupuestodelamuestra
enpotasio
(%K)Factordedilución Partealícuotaenmldelasolución
hasta0,1 — 50
0,1a0,5 — 100,5a1,0 — 5
1,0a5,0 1:10 10
5,0a10,0 1:10 5
10,0a20,0 1:20 5
Efectuar la medición por fotometría de llama a la longitud de onda de
768nm.Calcularelresultadoconayudadelacurvadecalibrado.
5.2.Curva de calibrado
Introducir 10 ml exactamente de la solución de calibrado (3.6) en un
matrazaforadode250ml,enrasarconaguayhomogeneizar.Introducir
en matraces aforados de 100 ml exáctamente 5, 10, 15, 20 y 25 ml de
dicha solución, que corresponden respectivamente a cantidades de
potasiode0,2,04,0,6,0,8y1,0mg.Completarlaserieporunmatraz
testigoexentodesolucióndecalibrado.Añadirencadamatraz10,0ml
desolucióntampón(3.5),enrasarconaguayhomogeneizar.Efectuarlas
madidascomoseindicaen5.1.Eltrazadodelacurvadecalibradoesen
generallinealhastaunaconcentraciónenpotasiode1mgen100mlde
solución.
6.Cálculodelosresultados
Expresarelresultadoenporcentajedelamuestra.
7.Observaciones
La adición de solución tampón (3.5) para eliminar la interferencia de
elementosperturbadoresnoessiemprenecesaria.
11. DETERMINACIÓNDELSODIO
1.Objetivoyámbitodeaplicación
El método permite determinar el contenido en sodio de los alimentos para
animales.
2.Principio
Lamuestraseincineraylascenizasseponenensoluciónenelácidoclorhí-
drico. El contenido en sodio de la solución se determina por fotometría de
llama en presencia de cloruro de cesio y de nitrato de aluminio. La adición
de estas substancias elimina, en una amplia medida, la interferencia de
elementosperturbadores.
3.Reactivos
3.1. Acidoclorhídricop.a.,d:1,12.
3.2. Clorurodecesio,p.a.3.3. NitratodealuminioAl(NO
3)3.9H2O,químicamentepuro.
3.4. Clorurodesodiop.a.,anhidro.3.5. Solución tampón: disolver en el agua 50 g de cloruro de cesio (3.2) y
250gdenitratodealuminio(3.3),completara1lconaguayhomoge-
neizar.Conservarenfrascosdematrialplástico.
3.6. Solución de calibrado de sodio. disolver en el agua 2,542 g de cloruro
desodio(3.4)añadiendo5mldeácidoclorhídrico(3.1),completara1l
con agua y homogeneizar. Conservar en frascos de material plástico.
1mldedichasolucióncontiene1,00mgdesodio.
4.Equipo
4.1. Crisoles de incieneración de platino, cuarzo o porcelana, en su caso
provistosdetapaderas.
4.2. Hornoeléctrico,contermostato.1971L0250—ES—13.08.1998—002.001—17
▼B
4.3. Fotómetrodellama.
5.Métodooperatorio
5.1.Análisis de la muestra
Pesar,comonormageneral,10gdelamuestraconprecisiónde10mg
enuncrisoldeincineracióndeincinerarlasubstanciaa450ºCdurante
treshoras.Evitarelrecalentamiento (inflamación). Previoenfriamiento,
transvasar cuantitativamante el residuo de incineración con ayuda de
250a300mldeagua,ydespuéscon50mldeácidoclorhídrico (3.1),
aunmatrazaforadode500ml.
Después de haber cesado el posible desprendimiento de gas carbónico,
calentar la solución y mantenerla durente dos horas a una temperatura
cercanaa90ºC,agitandodevezencuando.Dejarrefrigeraralatempe-
ratraambiente,enrasarconaguaagitaryfiltrar.Introducirenunmatraz
aforado de 100 ml na parte alícuota del filtrado qe contenga como
máximo1,0mgdesolucióntampón(3.5),enrasarconaguayhomoge-
neizar.Enpresenciadecontenidosmásaltosensodio,diluirlasolución
qedebaanalizarseenproporcionesadecuadas,antesdelaadicióndela
solucióntampón. Latabla siguiente sedaatítulo informativo parauna
tomademuestrasde10gaproximadamente
Contenidosupuestodelamuestra
ensolución
(%Na)Factordedilución Partealícuotaenmldelasolución
hasta0,1 — 50
0,1a0,5 — 10
0,5a1,0 — 51,0a5,0 1:10 105,0a10,0 1:10 5
10,0a20,0 1:20 5
Efectuar la medición mediante fotometría de llama a una longitud de
ondade589mm.
Calcularelresultadodecalibrado.
5.2.Curva de calibrado
Introducir 10 ml exáctamente de la solución patrón (3.6) en un matraz
aforado de 250 ml, enrasar con agua y homogeneizar. Introducir en
matracesaforadosde100mlexáctamente5,10,15,20y25mldedicha
soluciónquecorrespondarespectivamenteaunascantidadesdesodiode
0,2, 0,4, 0,6, 0,8 y 1,0 mg. Completar la serie mediante un matraz
testigo exento de solución patrón. Añadir en cada matraz 10,0 ml de
solución tampón (3.5), enrasar con agua y homogeneizar. Efectuar las
mediciones como se indica en 5.1. El trazado de la curva de muestro
es en general lineal hasta una concentración en sodio de 1 mg en
100mldesolución.
6.Cálculoderesultados
Expresarelresultadoenporcentajedelamuestra.
7.Observaciones
7.1. Para los productos cuyo centenido en sodio sea superior al 4 %, es
preferibleincinerarlasubstanciadurantedoshorasenuncrisolprovisto
de una tapadera. Después de proceder a un enfriamiento, añadir agua,
ponerelresiduoensuspensiónconlaayudadeunhilodeplatino,secar
eincinerardenuevodurantedoshorasenelcrisolprovistodesutapa-
dera.
7.2. Sie la muestra está constituida únicamente por materiales minerales,
procederaladisolución,sinpreviaincineración.
12. DETERMINACIÓNDELOSAZUCARES
1.Objetivosyámbitodeaplicación
El método permite determinar losazúcares reductores ylosazúcares totales
previa inversión, expresados en glucosa o, en su caso en sacarosa, por
conversiónconayudadelfactor0,95.Estemétodoesaplicablealospiensos
completos compuestos. Se prevén modalidades especiales para otros1971L0250—ES—13.08.1998—002.001—18
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alimentos. En sucaso, procede determinar por separado la lactosa y tenerlo
encuentaalcalcularlosresultados.
2.Principio
Los azúcares se disuelven en etanol diluido; la solución se defeca mediante
losreactivosdeCarrezIyII.Traslaeliminacióndeletanol,seefectúanlas
determinaciones antes y después de la inversión, según el método de Luff-
Schoorl.
3.Reactivos
3.1. Etanolal40%(v/v),d:0,948a20ºC,llevadoalpuntodeviradodela
fenolftaleína.
3.2. SolucióndeCarrezI:
Disolverenagua24gdeacetatodecincZn(CH3COO)2·2H2Oy3g
deácidoacéticoglacial.Competara100mlconagua.
2H2Oy3gdeácidoacéticoglacial.Completara100mlconagua.
3.3. Solución de Carrez II: Disolver en agua 10,6 g de ferrocianuro de
potasioK4[Fe(CN6)]3H2O.Competara100mlconagua.
3.4. Soluciónal0,1%(p/v)denaranjademetilo.3.5. Acidoclorhídrico4N.3.6. Acidoclorhídrico0,1N.3.7. Solucióndehidróxidodesodio0,1N.3.8. ReactivosegúnLuff-Schoorl:
Verter, agitando siempre con prudencia, la solución de ácido cítrico
(3.8.2)enlasolucióndecarbonatodesodio(3.8.3).Añadiracontinua-
ciónlasolucióndesulfatodecobre(3.8.1)ycompletara1lconagua.
Dejarreposarunanocheyfiltrar.Controlarlanormalidaddelreactivo
obtenido de esta forma Cu 0,1 N: Na
2CO32N). El pH de la solución
debeserde9,4aproximadamente.
3.8.1. Solución desulfatode cobre: disolver 25gdesulfatode cobre
p.a.,CuSO4·5H2O,exentodehierro,en100mldeagua.
3.8.2. Solución de ácido cítrico: disolver 50 g de ácido cítrico p.a.
C6H8O7·H2O,en50mldeagua.
3.8.3. Solución de carbonato de sodio: disolver 143,8 g de carbonato
de sodio anhidro p.a. en 300 ml aproximadamente de agua
caliente.Dejarenfriar.
3.9. Solucióndetiosulfatodesodio0,1N.3.10. Solucióndealmidón:Añadirunamezclade5gdealmidónsolubleen
30 ml de agua a 1 l de agua hirviendo. Hacer hervir durante tres
minutos, dejar enfriar, añadir en su caso 10 mg de yoduro mercúrico
comoagenteconservador.
3.11. Acidosulfúrico6N.3.12. Soluciónal30%(p/v)deyodurodepotasio.
3.13. Granulados de piedra pómez hervidos en el ácido clorhídrico, lavados
conaguaysecados.
3.14. Isopentanol.
4.Equipo
Mezclador(balancín):aproximadamentede35a40revolucionesporminuto.
5.Métodooperatorio
5.1.Puesta en solución
Pesar,conprecisiónde1mg,2,5gdelamuestra,eintroducirlosenun
matraz aforado de 250 ml. Añadir 200 ml de etanol (3.1) y mezclar
durante una hora en el belancín. Añadir 5 ml de solución de Carrez
(3.3)yagitardenuevoduranteunminuto.Llevaralvolumenconetanol
(3.1),homogeneizaryfiltrar.Tomar200mldelfiltradoyevaporaralre-
dedordelamitaddelvolumen,conelfindeeliminarlamayorpartedel
etanol. Transvasar cuantitativamente el residuo de evaporación, con la
ayudadeaguacaliente,aunmatrazaforadode200ml,refrigerar,llevar1971L0250—ES—13.08.1998—002.001—19
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el volumen con agua, homogensizar y filtrar si fuera necesario. Dicha
solución se empleará para la determinación de los azúcares reductores
y,previainversión,paraladeterminacióndelosazúcarestotales.
5.2.Determinación de los azúcares reductores
Tomar pormedio de la pipeta una cantidad de solución que no exceda
de25mlyquecontengamenosde60mgdeazúcaresreductores,expre-
sados en glucosa. Si fuere necesario, completar a 25 ml con agua
destilada y determinar el contenido en azúcares reductores según Luff-
Schoorl.Elresultadoseexpresaráenglucosaporciento.
5.3.Determinación de los azúcares totales tras inversión
Tomar por medio de la pioeta 50 ml de solución y llevarlos en un
matrazaforadode100ml.Añadiralgunasgotasdesolucióndenaranjade metilo (3.4) después, agitando siempre con prudencia, de ácido
clorhídrico 4N(3.5) hasta virado claro al rojo.Añadir 15ml de ácido
clorhídrico0,1N(3.6),sumergirelmatrazenunbañodeaguaenfuerte
ebullición y mantenerlo allí durante treinta minutos. Refrigerar rápide-
mente a 20 ºC aproximadamente y añadir 15 ml de solución de
hidróxidodesodio0,1N(3.7).Completar a100mlconaguayhomo-
geneizar. Tomar una cantidad que no exceda de 25 ml y que contenga
menos de 60 mg de azúcares reductores, expresandos en glucosa. Si
fuera necesario, completar a 25 ml con agua destilada y determinar el
contenido en azúcares reductores según Luff-Schoorl. El resultado se
expresaenglucosaporcientoo,ensucaso,ensacarosa,multiplicando
porelfactor0,95.
5.4.Titulación según Luff-Schoorl
Tomar por medio de la pipeta 25 ml del reactivo según Luff-Schoorl
(3.8) y llevarlos a un Erlenmeyer de 300 ml; añadir 25 ml, medidos
con exactitud, de la solución defecada de azúcares. Añadir dos granu-
lados de piedra pómez (3.13), calentar, agitando manualmente, sobre
una llama libre de altura media y llevar el líquido a ebullición en dos
minutosaproximadamente.Colocarinmediatamenteelerlenmeyersobre
unatelametálicaprovistadeunapantalladeamiantoconunagujerode6 cm aproximadamente de diámetro, bajo cuya tela se ha encendido
previamente una llama. Esta seregula de forma que sólosecaliente el
fondodelerlenmeyer.Adaptaracontinuaciónunrefrigerantedereflujo
sobreelerlenmeyer.Aaprtirdeestemomento,hacerhervirdurantediez
minutosexáctamente.Refrigerarinmediatamenteenaguafríay,después
de aproximadamente cinco minutos, titular tal como se indica a conti-
nuación:
Añadir10mldesolucióndeyodurodepotasio(3.12)e,inmediatamente
después y con prudencia (debido al riesgo de formación de espumaabundante),25mldeácidosulfúrico6N(3.11).Titularacontinuación
por la solución de tiosulfato de sodio 0,1 N(3.9) hasta la aparición de
una coloración amarilla clara, añadir el indicador al almidón (3.10) y
concluirlatitulación.
Efectuar la misma titulación sobre una mezcla exáctamente medida de
25 ml de reactivo según Luff-Schoorl (3.8) y 25 ml de agua, después
de haber añadido 10 ml de solución de yoduro de potasio (3.12) y
25mldeácidosulfúrico6N(3.11)sinllevaraebullición.
6.Cálculodelosresultados
Establecerconlaayudadelatablalacantidaddeglucosaenmgcorrespon-
dientealadiferenciaentrelosvaloresdelasdostitulaciones,expresadosen
mldetiosulfatodesodio0,1N.
Expresarelresultadoenporcentajedelamuestra.
7.Métodosoperatoriosparticulares
7.1. Paralosalimentosmuyricosenmelazayotrosalimentospocohomogé-
neos,pesar20geintroducirlosenunmatrazaforadode1lcon500ml
deagua.Mezclarduranteunahoraenelbalancín.Defecarpormediode
los reactivos de Carrez I (3.2) y II (3.3) tal como se describe en 5.1.
empleando, sin embargo, una cantidad 4 veces más elevada de cada
reactivo.Llevaralvolumenconeletanolal80%(v/v).
Homogeneizar y filtrar. Eliminar el etanol tal como sedescribe en5.1.
En ausencia de almidón dextrinado, llevar al volumen con agua desti-
lada.
7.2. Para las melazas y los alimentos simples, ricos en azúcares y práctica-
mente exentos de almidón (algarrobos, peladuras desecadas de1971L0250—ES—13.08.1998—002.001—20
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remolachas,etc.)pesar5gintroducirlosenunmatrazaforadode250ml,
añadir 200 ml de agua destilada y mezclar durente una hora o más, si
fuera necesario, en el balancín. Defecar a continuación por medio de
los reactivos de Carrez I (3.2) y II (3.3), tal como se describe en 5.1
llevaralvolumenconagua,homogeneizaryfiltrar.Paradeterminarlos
azúcarestotales,actuartalcomosedescribeen5.3.
8.Observaciones
8.1. Serecomiendaañadiraproximadamente 1mldeisopentanol(3.14)(sin
tomar el volumen en consideración) antes de la ebullición con el reac-
tivodeLuff-Schoorl,conelfindeevitarlaformacióndeespuma.
8.2. Ladiferenciaentreelcontenidoenazúcarestotalesdespuésdelainver-
sión, expresados en glucosa, y el contenido en azúcares reductores,
expresados en glucosa, multiplicada por 0,95, da el contenido en saco-
rosaporciento.
8.3. Paradeterminarelcontenidoenazúcaresreductores,excluida,lalactosa
podránadoptarsedosvías:
9.3.1. Para un cálculo aproximativo, se multiplica por 0,675 el conte-
nidoenlactosaestablecidoparaunadeterminaciónseparadayse
restaelresultadoobtenidodelcontenidoenazúcaresreductores.
8.3.2. Para un cálculo preciso de los aceites reductores, excluida la
lactosa, es necesario partir de la misma toma de muestras para
las dos determinaciones finales. Uno de los análisis se efectúa
sobreunaparteenlasoluciónobtenidaen5.1.enotrosobreuna
partedelasoluciónobtenidaalrealizarse ladeterminación dela
lactosasegúnelmétodoprevistocontalfin(previafermentación
delasotrasespeciesdeazúcaresydefecación).
En ambos casos, la cantidad de azucar presente se determina según el
métododeLuff-Schoorlysecalculaenmgdeglucosa.Losdosvalores
se restan el unodel otro y la diferencia se expresa en porcentaje de la
muestra.
Ejemplo
Losdosvalores tomadoscorresponden, para cada determinación, auna
tomademuestrasde250mg.
Enelprimercaso,seconsumen17mldesolucióndetiosulfatodesodio
0,1 N, lo que corresponde a 44,2 mg de glucos, en el segundo caso
11ml,loquecorrespondea27,6mgdeglucosa.
Ladiferenciaseelevaa16,6mgdeglucosa.Elcontenidoenazúcaresreductores(exceptuando lalactosa),calculado
englucosaespuesde:
4/C216;6
10¼6;64%
Tabladelosvalorespara25mldereactivosegúnLuff-Schoorl
mldeNa2S2O30,1N,dosminutosdecalentamiento,diezdeebullición.
Na2S3O30,1NGlucosa,fructosa,
azucaresinvertidos
C6H12O6Lactosa
C12H22O11Maltosa
C12H22O11Na2S2O30,1N
ml mg diferencia mg diferencia mg diferencia ml
1 2,4 2,4 3,6 3,7 3,9 3,9 1
2 4,8 2,4 7,3 3,7 7,8 3,9 23 7,2 2,5 11,0 3,7 11,7 3,9 3
4 9,7 2,5 14,7 3,7 15,6 4,0 4
5 12,2 2,5 18,4 3,7 19,6 3,9 56 14,7 2,5 22,1 3,7 23,5 4,0 6
7 17,2 2,6 25,8 3,7 27,5 4,0 7
8 19,8 2,6 29,5 3,7 31,5 4,0 89 22,4 2,6 33,2 3,8 35,5 4,0 9
10 25,0 2,6 37,0 3,8 39,5 4,0 10
11 27,6 2,7 40,8 3,8 43,5 4,0 11
12 30,3 2,7 44,6 3,8 47,5 4,1 121971L0250—ES—13.08.1998—002.001—21
▼B
Na2S3O30,1NGlucosa,fructosa,
azucaresinvertidos
C6H12O6Lactosa
C12H22O11Maltosa
C12H22O11Na2S2O30,1N
ml mg diferencia mg diferencia mg diferencia ml
13 33,0 2,7 48,4 3,8 51,6 4,1 13
14 35,7 2,8 52,2 3,8 55,7 4,1 14
15 38,5 2,8 56,0 3,9 59,8 4,1 15
16 41,3 2,9 59,9 3,9 63,9 4,1 1617 44,2 2,9 63,8 3,9 68,0 4,2 1718 47,1 2,9 67,7 4,0 72,2 4,3 18
19 50,0 3,0 71,7 4,0 76,5 4,4 19
20 53,0 3,0 75,7 4,1 80,9 4,5 2021 56,0 3,1 79,8 4,1 85,4 4,6 21
22 59,1 3,1 83,9 4,1 90,0 4,6 22
23 62,2 88,0 94,6 23
13. DETERMINACIÓNDELATEOBROMINA
1.Objetivoyámbitodeaplicación
El método permite determinar el contenido en teobromina de los subpro-
ductosdetransformacióndegranosdecacao.
2.Principio
La teobromina se extrae mediante el cloroformo. El extracto se evapora en
seco, se pone en solución agua y se trata por un volumen determinado de
solucióndenitratodeplata.
Elácidonítricoliberadosetitulaporunasolucióndehidróxidodesodio.
3.Reactivos
3.1. Cloroformop.a.3.2 Amoniaco,d:0,958.3.3 Sulfatodesodiop.a.,anhídrido.3.4. Solucióndehidrócidodesodio0,1N.
3.5. Solucióndenitratodeplata0,1N.
3.6. Soluciónetanólicaal1%(p/v)derojodefenol.3.7. Eterdietílico.
4.Equipo
Matracesde500mldefondoplanoytapónesmerilado.
5.Métodooperatorio
Pesar,conprecisiónde1mg,unatomademuestrasde10gcomomáximo,
que no contenga más de 80 mg de teobromina. Introducir la toma en un
matrazde500mldefondoplanoytapónesmerilado,añadir270mldecloro-
formo (3.1) y 10 ml de amoniaco (3.2) Tapar el matraz y agitar
enérgicamente durantecincominutos.Añadiracontinuación12gdesulfeto
desodioanhidro(3.3),agitardenuevoydejarreposarhastaeldíasiguiente.
Filtrar enunerlenmeyer de500mlylavar elresiduocon100ml decloro-
formo (3.1). Destilar el disolvente y eliminar de él los últimos restos en un
baño de agua hirviendo. Volver a tomar el extracto por 50 ml de agua y
llevaraebullición.
Refrigerar, neutralizar exactamente por la solución de hidróxido de sodio
(3.4) en presencia de 0,5 ml de solución de rojo de fenol (3.6) Añadir a
continuación 20 ml de solución de nitrato de plata (3.5). Titular el ácido
nítrico liberado por la solución de hicróxido de sodio (3.4) hasta el virado
delindicador(pH7,4).
6.Cálculodelosresultados
1mldeNaOH0,1Ncorrespondea18mgdeteobromina.Expresarelresultadoenporcentajedelamuestra.1971L0250—ES—13.08.1998—002.001—22
▼B
7.Observaciones
Los productos cuyo contenido en materias grasas brutas exceda del 8 %
deben ser previamente desgrasados por extracción durante seis horas con
éterdepetróleo(Eb.40ºC).
14. DETERMINACIÓNDELAUREA
1.Objetivoycampodeaplicación
El método permite determinar el contenido en urea de los alimentos para
animales
2.Principio
Lamuestraseponeensuspensiónenaguaenpresenciadeundefecante.La
suspensión se filtra. El contenido en urea del filtrado se determina, tras la
adiciónde4-dimetilaminobenzaldehido(4-DMAB),pormediodeladensidad
ópticaalalongituddeondade420mm.
3.Reactivos
3.1. Solución de 4-dimetilaminobenzaldehido: disolver 1,6 g de 4-DMAB
p.a. en 100 ml de etanol al 96 % y añadir 10 ml de ácido clorhídrico
p.a. (D: 1,19). Dicho reactivo se conserva como máximo durante dos
semanas.
3.2. SolucióndeCarrezI:
disolverenagua24gdeacetatodecinc,Zn(CH3COO)2·2H2Oy3g
deácidoacéticoglacial.Completara100mlconagua.
3.3. Solución de Carrez II: disolver en agua 10,6 g de ferrocianuro de
potasioK4Fe(CN)6·3H2O.Completara100mlconagua.
3.4. Carbónactivop.a.,quenoabsorbalaurea(quehabrádecontrolarse)3.5. Soluciónal0,1%(p/v)deureap.a.
4.Equipo
4.1. Mezclador(balancín):dealrededorde35a40revolucionesporminuto.
4.2. Tubosdeensayo:160×16mm,detaponesesmerilados.
4.3. Espectrofotómetro.
5.Métodooperatorio
5.1.Análisis de la muestra
Pesar,conprecisiónde1mg,2gdelamuestraeintroducirloscon1g
decarbónactivo(3.4)enunfrascoaforadode500ml.Añadir400mlde
agua y 5 ml de las soluciones de Carrez I (3.2) y II (3.3). Mezclar
durantetreintaminutosenelbalancín.Completaralvolumenconagua,
agitaryfiltrar.
Tomar 5 ml de los filtrados límpidos e incoloros, introducirlos en los
tubos de ensayo de tapón esmerilado, añadir 5 ml de solución de 4-
DMAB(3.1)ymezclar.Colocarlostubosenunbañodeaguaa20ºC.
Tras quince minutos, medir la densidad óptica de la solución de la
muestra al espedtómetro a 420 mm por comparación con la solución
delensayoenblancodelosreactivos.
5.2.Curva de calibrado
Tomar volúmenes de 1, 2, 4, 5 y 10 ml de la solución de urea (3.5),
introducirlos en los matraces esmerilados de 100 ml y completar al
volumen con agua. Tomar 5 ml de cada solución, añadir respectiva-
mente 5 ml de solución de 4-DMAB (3.1) homogeneizar y medir la
densidad óptoca como se indica más arriba por comparación con una
solucióntestigoquecontenga6mlde4-DMABy5mldeagua,exenta
deurea.Trazarlacurvadecalibrado.
6.Cálculodelosresultados
Determinarlacantidaddeureadelatomademuestraenloqueserefierea
lacurvadecalibrado.
Expresarelresultadoenporcentajedelamuestra.1971L0250—ES—13.08.1998—002.001—23
▼B
7.Observaciones
7.1. Para los contenidos de urea superiores al 3 %, reducir la muestra de
ensayoa1godiluirlasolucióninicialparaquenohayamásde50mg
deureaen500ml.
7.2. Paralospequeñoscontenidosdeurea,aumentarlamuestradeensayo,si
bienelfiltradodebeserlímpidoeincoloro.
7.3. Si la muestra contiene compuestos nitrogenados simples, tales como
aminoácidos, es conveniente realizar la medida de la densidad óptica a
435nm.
16. DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD UREASICA DE PRODUCTOS
DERIVADOSDELASOJA
1.Objetivoycampodeaplicación
La prueba permite determinar la actividad de ureasa de los productos deri-
vados de la soja y poner de manifiesto la cocción insuficiente de dichos
productos.
2.Principio
La actividad ureásica se determina por la contidad de nitrógeno amoniacal
liberadopor1gdeproductoenunminuto,a30ºC,apartirdeunasolución
deurea.
3.Reactivos
3.1 Acidoclorhídrico0,1N.3.2 Solucióndehidróxidodesodio0,1N.3.3 Solución tampón de fosfatos 0,05 M conteniendo en 100 ml 4,45 g de
fosfato disódico (Na
2HPO4·2H2O) y 3,40 g de fosfato monopotásico
(KH2PO4).
3.4 Solucióntamponadadeurea,preparadarecientemente,conteniendo30,0g
deureapor1000mldesolucióntampón(3.3);pH6,9-7,0.
4.Equipo
4.1 Aparato de titulación potenciométrica o pH-metro muy sensible
(0,02pH),conagitadormagnético.
4.2 Bañodeaguaprovistodeuntermostatoreguladoa30ºCexactamente.4.3 Tubosdeensayo:150×18mm,contaponesesmerilados.
5.Métodooperatorio
Triturar (en un molino de café, por ejemplo) 10 g aproximadamente de la
muestra, de forma que pase a través de un tamiz de mallas de 0,2 mm. En
untubodeensayodetapónesmerilado,pesar,conprecisiónde1mg,0,2g
de la muestra triturada y añadir 10 ml de la solución tamponada de urea
(3.4). Tapar inmediatamente y agitar vigorosamente. Llevar el tubo al baño
de agua regulado a 30 ºCexactamente y dejarlo allí treinta minutos exácta-
mente. Inmediatamente después, añadir 10 ml de ácido clorhídrico 0,1 N
(3.1),refrigerarrápidamentea20ºCytransvasarcuantitativamenteelconte-
nidodeltuboaunrecipiente detitulación, limpiando dosvecescon5mlde
agua. Titular inmediatamente y con rapidez por medio de la solucíon de
hidróxidodesodio0,1N(3.2)porelectrometríaconlaayudadeunelectrodo
decristal,hastapH4,7.
Efectuarunapruebaenblanco,operandotalcomoseindica.
Introducirrapidaysucesivamenteenuntubodeensayodetapónesmerilado
unatomademuestrasde0,2g,pesadaconprecisiónde1mg,10mldeácido
clorhídrico 0,1N(3.1)y10mldesolucióntamponada deurea(3.4).Refri-
gerar inmediatamente el tubo en agua helada y dejarlo allí treinta minutos.
Transvasar a continuación, en las condiciones indicadas anteriormente, el
contenido del tubo al recipiente de titulación por medio de la solución de
hidróxidodesodio0,1N(3.2)hastapH4,7.1971L0250—ES—13.08.1998—002.001—24
▼M2
▼B
▼B
6.Cálculodelosresultados
Laactividadureásicavienedadaporlafórmula:
mgN
gmin :a30ºC ¼1;4b/C0a ðÞ
30/C1E
donde a = ml de solución de hidróxido de sodio 0,1 N consumidos por la
tomademuestras.
b = ml de solución de hidróxido de sodio 0,1 N consumidos por la
tomademuestrasenblanco.
E = tomademuestraseng.
7.Observaciones
7.1. El método es conveniente para una actividad ureásica que pueda
alcanzar 1 mg de N/g min a 30 ºC. Para productos más activos, la
tomademuestraspuedereducirsehasta50mg.
7.2. Los productos cuyo contenido en materias grasas brutas sobrepase el
10%debenhabersidodesgrasadosenfríopreviamente.1971L0250—ES—13.08.1998—002.001—25