1971L0393 — ES — 09.10.1998 — 004.001 — 1
Estedocumentoesuninstrumentodedocumentaciónynocomprometelaresponsabilidaddelasinstituciones
►B SEGUNDADIRECTIVADELACOMISIÓN
de18denoviembre de1971
por la que se establecen métodos de análisis comunitarios para el control oficial de los alimentos
paraanimales
(71/393/CEE)
(DO L 279 de 20.12.1971, p. 7)
Modificada por:
Diario Oficial
nopágina fecha
►M1Directiva 73/47/CEE de la Comisión de 5 de diciembre de 1972 L 83 35 30.3.1973
►M2Directiva 81/680/CEE de la Comisión de 30 de julio de 1981 L 246 32 29.8.1981
►M3Directiva 84/4/CEE de la Comisión de 20 de diciembre de 1983 L 15 28 18.1.1984
►M4Directiva 98/64/CE de la Comisión de 3 de septiembre de 1998 L 257 14 19.9.1998
▼B
SEGUNDADIRECTIVADELACOMISIÓN
de18denoviembre de1971
por la que se establecen métodos de análisis comunitarios para el
controloficial delosalimentosparaanimales
(71/393/CEE)
LA COMISIÓN DE LAS COMUNIDADES EUROPEAS,
Visto el Tradado constitutivo de la Comunidad Económica Europea,Vista la Directiva del Consejo, de 20 de julio de 1970, relativa a la
introducción de métodos de toma de muestras, de métodos de análisis
comunitarios para el control oficial de los alimentos para animales(
1),
y, en particular, su artículo 2,
Considerando que la Directiva mencionada prevé que los controles
oficiales de los alimentos para animales para comprobar si se cumplenlas condiciones establecidas en virtud de las disposiciones legales,reglamentarias o administrativas relativas a la calidad y la composiciónde los alimentos para animales deben seguir métodos de toma de mues-
tras y métodos de análisis comunitarios;
Considerando que la Directiva n
o71/250/CEE de la Comisión, de 15 de
junio de 1971(2), ha establecido ya determinados métodos de análisis
comunitarios; que, habida cuenta del estado de los trabajos efectuadosdesde entonces, es conveniente adoptar una segunda serie de métodos;
Considerando que las medidas previstas en la presente Directiva se
ajustan al dictamen del Comité permanente de la alimentación animal,
HA ADOPTADO LA PRESENTE DIRECTIVA:
Artículo 1
Los Estados miembros dispondrán que los análisis para los controles
oficiales de los alimentos para animales, respecto de su contenido en
humedad, bases nitrogenadas, volátiles, fósforo total y materias grasas
brutas se efectúen de acuerdo con los métodos descritos en el Anexo dela presente Directiva.
Artículo 2
Los Estados miembros aplicarán, a más tardar el 1 de enero de 1973,
las disposiciones legales, reglamentarias o administrativas necesarias
para cumplir las disposiciones de la presente Directiva. Informarán deello inmediatamente a la Comisión.
Artículo 3
Los destinatarios de la presente Directiva serán los Estados miembros.1971L0393 — ES — 09.10.1998 — 004.001 — 2
(1)D O noL 170 de 3. 8. 1970, p. 2.
(2)D O noL 155 de 12. 7. 1971, p. 13.▼M2
▼B
▼B
ANEXO
1.DETERMINACIÓNDELAHUMEDAD
1.Objetivoyámbitodeaplicación
El método permite determinar el contenido en humedad de los alimentos para
animales. ►M1No afecta al análisis de los productos lácteos en tanto que
piensos simples para animales, al análisis de sustancias minerales y de
mezclas compuestas fundamentalmente de sustancias minerales, al análisisde grasas y aceites minerales, así como al análisis de semillas y frutos olea-
ginosos definidos en el Reglamento N
o136/66/CEE del Consejo, de 22 de
septiembre de 1966, sobre establecimiento de una organización común de
mercado en el sector de las grasas(1).◄
La determinación del contenido en humedad de las semillas y frutos oleagi-
nosos se regula en el Anexo III del Reglamento (CEE) no1470/68 de la
Comisión, de 23 de septiembre de 1968, relativo a la toma y reducción de
muestras a la determinación del contenido en aceite, en impurezas y en
humedad de las semillas oleaginosas(2).
2.Principio
La muestra se somete a desecación en las condiciones definidas, que varía en
función de la naturaleza del alimento. La pérdida de masa se determina
mediante pesada. Es necesario proceder a una predesecación cuando se trate
alimentos sólidos que tengan un elevado contenido en humedad.
3.Equipo
3.1. Triturador construido de material que no absorba la humedad, fácil de
limpiar, que permita un triturado rápido y uniforme sin provocar un
recalentamiento sensible, evite al máximo el contacto con el aire exte-
rior y cumpla los requisitos indicados en 4.1.1 y 4.1.2 (por ej.,
microtituradoras de martillos o de enfriamiento por agua, molinos de
conos desmontables, trituradoras de movimiento lento o de discos
dentados).
3.2. Balanza analítica, precisión 0,5 mg.
3.3. Recipientes secos de metal inoxidable o de cristal, provistos de tapadera
que garantice un cierre hermético; superficie útil que permita obtener un
reparto de la muestra del orden de 0,3 g por cm2.
3.4. Estufa isoterma (± 1 ºC) de calentamiento eléctrico, que garantice una
regulación rápida de la temperatura y convenientemente ventilada(3).
3.5. Estufa de vacío, de calentamiento eléctrico regulable, provista de una
bomba de aceite y de un dispositivo para la introdución de aire calientedeshidratado o de un deshidratante (por ej., óxido de calcio).
3.6. Desecador de placa de metal o de porcelana, gruesa, perforada, que
contenga un deshidratante eficaz.
4.Métodooperativo
NB: Las operaciones descritas en este capítulo deben efectuarse inmedita-
maente después de la apertura de los envases que contienen las
muestras.
Los análisis deben efectuarse por lo menos por duplicado.
4.1.Preparación
4.1.1. Alimentos excepto los mencionados en 4.1.2 y 4.1.3
Tomar por los menos 50 g de la muestra. Si fuera necesario, tritu-
rarla o dividirla de forma adecuada para evitar cualquier
variación del contenido en humedad (ver 6).1971L0393 — ES — 09.10.1998 — 004.001 — 3
(1)D O no172 de 30. 9. 1966, p. 3025/66.
(2)D O noL 239 de 28. 9. 1968, p. 2.
(3) Para la desecación de los cereales y de las harinas, grañones y sémolas, la estufa debe
tener una capacidad calorífica tal que, regulada previamente a una temperatura de 13 ºC,
puede alcanzar de nuevo dicha temperatura en menos de 45 minutos después de lacolocación del número máximo de muestras que deban secarse simultáneamente. Debetener una ventilación tal que, secando durante dos horas, todas las muestras de trigoblando que pueda contener, los resultados presenten una diferencia inferior al 0,15 %
con respecto a los resultados obtenidos después de cuatro horas de secado.
▼B
4.1.2. Cereales y grañones
Tomar por lo menos 50 g de la muestra. Moler en partículas de
forma que por lo menos el 50 % pase por un tamiz de mallas de
0,5 mm y no queden más del 10 % sobre el tamiz de mallas
redondas de 1 mm.
4.1.3. Alimentos líquidos o pastosos, alimentos contituidos esencial-
mente por materias grasas
Tomar la muestra y pesar, con precisión de 10 mg, 25 g aproxi-
madamente de la misma, añadir una cantidad adecuada de arena
anhidra, pesada con una precisión de 10 mg, y mezclar hasta
obtener un producto homogéneo.
4.2.Desecación
4.2.1. Alimentos, excepto los mencionados en 4.2.2 y 4.2.3
Tarar, con una precisión de 0,5 mg, un recipiente (3.3) provisto
de tapadera. Pesar, con precisión de 1 mg, en el recipiente tarado
5 g aproximadamente de la muestra y repartirla uniformemente.
Colocar el recipiente en la estufa previamente calentada 103 ºC,
con la tapadera levantada. Para evitar que la temperatura de la
estufa descienda demasiado, introducir el recipiente en un tiempo
mínimo. Dejar secar durante cuatro horas a partir del momento en
que la estufa haya alcanzado de nuevo la temperatura de 102 ºC.
Volver a colocar la tapadera sobre el recipiente, retirarlo de la
estufa, dejar enfriar durante 30 a 45 minutos en el desecador
(3.6) y pesar, con precisión de 1 mg.
En el caso de los alimentos constituidos esencialmente por mate-
rias grasas, efectuar una desecación complementaria de 30
minutos en la estufa a 103 ºC. La diferencia entre las dos pesadas
no deberá exceder del 0,1 % de humedad.
4.2.2. Cereales, harinas, grañones y sémolas
Tarar, con precisión de 0,5 mg, un recipiente (3.3) provisto de
tapadera. Pesa, con precisión de 1 mg, en el recipiente tarado 5 g
aproximadamente de la muestra triturada y repartirla unifome-
mente. Colocar el recipiente en la estufa previamente calentada
a 130 ºC, con la tapadera levantada. Para evitar que la tempera-
tura de la estufa descienda demasiado, introducir el recipiente en
un tiempo mínimo. Dejar secar durante dos horas a partir del
momento en que la estufa haya alcanzado de nuevo la tempera-
tura de 130 ºC. Volver a colocar la tapadera sobre el recipiente,
retirarlo de la estufa, dejar enfriar de 30 a 45 minutos en el dese-
cador (3.6) y pesar con una precisión de 1 mg.
4.2.3. Piensos compuestos con un contenido mayor del 4 % de sacarosa
o de lactosa: alimentos simples tales como algarrobos, productos
de cereales hidrolizados, gérmenes de malta, peladuras de remo-
lacha, solubles de pescado, azúcares; piensos compuestos con un
contenido mayor del 25 % de sales minerales que contengan
agua de cristalización
Tarar, con precisión de 0,5 mg, un recipiente (3.3) provisto de
tapadera. Pesar, con precisión de 1 mg, en el recipiente tarado
5 g aproximadamente de la muestra y repartirla uniformemente.
Colocar el recipiente en la estufa de vacío (3.5) previamente
calentada a una temperaturade 80 a 85 ºC, con la tapadera levan-
tada. Para evitar que la temperatura de la estufa descienda en
exceso, introducir el recipiente en un tiempo mínimo.
Llevar la presión a 100 Torrs y dejar secar a dicha presión
durante cuatro horas, bien bajo una corriente de aire seco y
caliente, bien mediante la utilización de un deshidratante (300 g
aproximadamente para 20 muestras). En este último caso, inte-
rrumpir la conexión con la bomba de vacío cuando se haya
alzanzado la presión establecida. Contar la duración del secado a
partir del momento en que la estufa haya alcanzado de nuevo la
temperatura de 80 a 85 ºC. A continuación, y con precaución,
restablecer la presión atmosférica en la estufa. Abrir la estufa,
cubrir inmediatamente el recipiente con su tapadera, retirar elrecipiente de la estufa, dejar enfriar durante 30 a 45 minutos en
el desecador (3.6) y pesar con precisión de 1 mg. Proceder a una
desecación complementaria de 30 minutos en la estufa de vacío a
la temperatura de 80 a 85 ºC y pesar de nuevo. La diferencia
entre las dos pesadas no deberá exceder del 0,1 % de humedada.1971L0393 — ES — 09.10.1998 — 004.001 — 4
▼B
4.3.Predesecación
4.3.1. Alimentos, excepto los mencionados en 4.3.2
Los alimentos sólidos, de contenido en humedad elevado y que
por tanto hacen difícil el triturado, deben predesecarse tal como
se indica a continuación. Pesar, con precisión de 10 mg, 50 g de
la muestra no triturada (si fuere necesario, puede efectuarse una
división elemental, en el caso de alimentos comprimidos o aglo-merados) en un recipiente apropiado (por ejemplo, placa de
aluminio de 20 × 12 cm con un borde de 0,5 cm). Dejar secar
en una estufa a temperatura de 60 a 70 ºC, hasta que el contenido
en humedad se reduzca a un valor comprendido entre el 8 y el
12 %. Retirar de la estufa, dejar enfriar al descubierto en el labo-
ratorio durante una hora y pesar con una precisión de 10 mg.
Triturar inmediatamente después, tal como se indica en 4.1.1 y
efectuar la desecación como se indica en 4.2.1 o en 4.2.3, según
la naturaleza del alimento.
4.3.2. Cereales
Las semillas con un índice de humedad inferior al 17 % deben
predesecarse tal como se indica a continuación:
Pesar, con precisión de 10 mg, 50 g de la semilla sin moler en un
recipiente adecuado (porejemplo, placa de aluminio de 20×12cm
con un borde de 0,5 cm). Dejar secar en una estufa durante 5 a 7
minutos a una temperatura de 130 ºC. Retirar de la estufa, dejar
enfriar al descubierto en el laboratorio durante dos horas y pesar
con precisión de 10 mg. Moler inmediatamente después, tal como
se indica en 4.1.2 y efectuar la desecación como se indica en
4.2.2.
5.Cálculodelosresultados
El contenido en humedad, en porcentaje de muestra, se calcula con las
fórmulas siguientes:
5.1. Desecación sin predesecación
E/C0m ðÞ /C1 100
E
donde:
E = masa inicial, en gramos, de la muestra,
m = masa, en gramos, de la muestra seca.
5.2.Desecación con predesecación
M0/C0m ðÞ M
M0 þE/C0M/C20/C21
/C1100
E¼100 1 /C0Mm
EM0/C18/C19
donde:
E = masa inicial, en gramos, de la muestra,
M = masa, en gramos de la muestra después de la predesecación,
M′= masa, en gramos, de la muestra después de triturada o molida,
m = masa, en gramos, de la muestra seca.
5.3Repetibilidad
La diferencia entre los resultados de dos determinaciones paralelas efec-
tuadas sobre una misma muestra no deberá exceder del 0,2 % de
humedad.
6.Observación
Cuando resulte necesario efectuar una trituración y ésta implique una varia-
ción del contenido en humedad del producto, los resultados del análisis
relativo a los componentes del alimento deben convertirse con arreglo al
contenido en humedad de la muestra inicial.1971L0393 — ES — 09.10.1998 — 004.001 — 5
▼B
2.DETERMINACIÓNDELASBASESNITROGENADASVOLÁTILES
A. POR MICRODIFUSIÓN
1.Objetivoyámbitodeaplicación
El método permite determinar el contenido en bases nitrogenadas volátiles,
expresadas en amoníaco de los alimentos para animales.
2.Principio
La muestra se extrae con agua, la solución se defeca y se filtra. Las bases
nitrogenadas volátiles se desplazan con una solución de carbonato de potasio
por microdifusión, se recogen en una solución de ácido bórico y se trituran
con ácido sulfúrico.
3.Reactivos
3.1. Solución al 20 % (p/v) de ádico tricloracético.3.2. Indicador: disolver 33 mg de verde de bromocresol y 65 mg de rojo de
metilo en 100 ml de etanol al 95-96 % (v/v).
3.3. Solución de ácido bórico: en un matraz aforado de 1 l, disolver 10 g de
ácido bórico p.a. en 200 ml de etanol al 95-96 % (v/v) y 700 ml de
agua. Añadir 10 ml de indicador (3.2). Mezclar y ajustar si fuera nece-
sario la coloración de la solución al rojo claro por adición de una
solución de hidróxido de sodio. 1 ml de esta solución permite fijar
como máximo 300 µg de NH
3.
3.4. Solución saturada de carbonato de potasio: disolver 100 g de carbonato
de potasio p.a. en 100 ml de agua en ebullición. Dejar enfriar y filtrar.
3.5. Acido sulfúrico 0,02 N.
4.Equipo
4.1. Mezclador (balancín): de aproximadamente 35 a 40 revoluciones por
minuto.
4.2. Celulas de Conway (v. esquema), de vidrio o de material plástico.
4.3. Microburetas, graduadas a 1/100 ml.
5.Métodooperatorio
Pesar, con precisión de 1 mg, 10 g de la muestra e introducirlos en un matraz
aforado de 200 ml con 100 ml de agua. Mezclar durante 30 minutos en el
balancín. Añadir 50 ml de solución ácida tricloroacética (3.1), completar al
volumen con agua, agitar con fuerza y filtrar sobre un filtro de pliegues.
Introducir con la pipeta en la parte central de la célula de Conway 1 ml de
solución de ácido bórico (3.3) y en la corona de la célula 1 ml del filtrado de
la muestra. Cubrir parcialmente con ayuda de una tapadera engrasada. Dejar
caer rápidamente en la corona 1 ml de solución saturada de carbonato de
potasio (3.4) y cerrar la tapadera herméticamente. Remover con precaución
la célula proporcionándole un movimiento de rotación al plano horizontal,
con objeto de garantizar la mezcla de los dos reactivos. Dejar incubar bien
durante cuatro horas por lo menos a la temperatura ambiente, bien durante
una hora a 40 ºC.
Titular las bases volátiles en la solución de ácido bórico con ácido sulfúrico
0,02 N (3.5) empleando una microcubeta (4.3).
Efectuar una prueba en blanco aplicando el mismo método operatorio, sin la
muestra que deba analizarse.
6.Cálculodelosresultados
1m ld eH2SO40,02 N corresponde a 0,34 mg de amoníaco.
Expresar el resultado en porcentaje de la muestra.
Repetibilidad
La diferencia entre los resultados de dos determinaciones paralelas efectuadas
sobre una misma muestra no debe exceder:1971L0393 — ES — 09.10.1998 — 004.001 — 6
▼B
del 10 % en valor relativo para los contenidos en amoníaco inferiores al
1,0 %; 0,1 en valor absoluto para los contenidos en amoníaco iguales o supe-
riores al 1,0 %.
7.Observación
Si el contenido en amoníaco de la muestra fuere superior al 0,6 % diluir el
filtrado inicial.1971L0393 — ES — 09.10.1998 — 004.001 — 7
▼B
CÉLULA DE CONWAY
Escala 1/1
1971L0393 — ES — 09.10.1998 — 004.001 — 8
▼B
B. POR DESTILACIÓN
1.Objetivoyámbitoaplicación
El método permite determinar el contenido de bases nitrogenadas
volátiles, expresadas en amoníaco, de las harinas de pescado que no
contengan prácticamente urea. Únicamente es aplicable para contenidos
en amoníaco inferiores al 0,25 %.
2.Principio
La muestra se extrae con agua, la solución se defeca y se filtra. Las bases
nitrogenadas volátiles se desplazan mediante ebullición por adición de
óxido de magnesio y se recogen en una cantidad determinada de ácido
sulfúrico cuyo exceso se titula con una solución de hidróxido de sodio.
3.Reactivos
3.1. solución al 20 % (p/v) de ácido tricloracético.
3.2. Oxido de magnesio p.a.
3.3. Emulsión de antiespuma (por ej.: silicona).3.4. Acido sulfúrico 0,1 N.
3.5. Solución de hidróxido de sodio 0,1 N.
3.6. Solución al 0,3 % (p/v) de rojo de metilo en el etanol al 95-96 % (v/
v).
4.Equipo
4.1. Mezclador (balancín): de 35 a 40 revoluciones por minuto aproxima-
damente.
4.2 Aparato de destilación del tipo Kjeldahl.
5.Modooperatorio
Pesar, con precisión de 1 mg, 10 g, de la muestra e introducirlos con
100 ml de agua en un matraz aforado de 200 ml. Mezclar durante 30
minutos en el balancín. Añadir 50 ml de solución de ácido tricloracético
(3.1), completar el volumen con agua, agitar con fuerza y filtrar sobre un
filtro de pliegues.
Tomar una cantidad de filtrado límpida en función del contenido supuesto
en bases nitrogenadas volátiles (100 ml son convenientes, en general).
Diluir en 200 ml y añadir 2 g de óxido de magnesio (3.2) y algunas gotas
de emulsión antiespuma (3.3). La solución debe ser alcalina en el papel de
tornasol; si no lo es, añadir óxido de magnesio (3.2). Destilar 150 ml
aproximadamente de la solución en un aparato del tipo Kjeldahl y recoger
el destilado en un erlenmeyer que contenga un volumen exactamente
medido (25 a 50 ml) de ácido sulfúrico 0,1 N (3.4). Durante la destilación,
evitar un recalentamiento de las paredes. Llevar la solución sulfúrica a
ebullición durante 2 minutos, enfriar y titular el exceso de ácido sulfúrico
con la solución de hidróxido de sodio 0,1 N (3.5) en presencia del indi-
cador al rojo de metilo (3.6).
Efectuar un ensayo en blanco aplicando el mismo método operatorio, sin
la muestra que debe analizarse.
6.Cálculodelosresultados
1m ld eH
2SO40,1 N corresponde a 1,7 mg de amoníaco.
Expresar el resultado en porcentaje de muestra.
Repetibilidad
La diferencia entre los resultados de dos determinaciones paralelas efec-
tuades sobre una misma muestra no debe exceder, en valor relativo, del
10 % de amoníaco.1971L0393 — ES — 09.10.1998 — 004.001 — 9
▼B
3.DETERMINACIÓNDELFÓSFOROTOTAL
Método fotométrico
1.Objetivoyámbitodeaplicación
El método permite determinar el contenido en fósforo total de los alimentos
para animales. Está indicado, en particular, para el análisis de los productos
pobres en fósforo. En determinados casos (productos ricos en fósforo), puede
aplicarse un método gravimétrico.
2.Principio
La muestra se mineraliza, bien por vía seca (para los alimentos orgánicos),
bien por vía húmeda (para los compuestos minerales y los alimentos
líquidos) y se pone en solución ácida. La solución de trata con el reactivo
vanado-molíbdico. La densidad óptica de la solución amarilla así formada
se mide en el espectrofotómetro de 430 nm.
3.Reactivos
3.1. Cabarnato de calcio p.a.3.2. Ácido clorhídrico p.a., d: 1,1 (6 N aproximadamente).3.3. Ácido nítrico p.a., d: 1,045.3.4. Ácido nítrico p.a., d: 1,38 a 1,42.3.5. Ácido sulfúrico p.a., d: 1,84.3.6. Reactivo vanado-molíbdico: mezclar 200 ml de solución de heptamolib-
dato de amonio (3.6.1), 200 ml de solución de monovanadato de amonio
(3.6.2) y 134 ml de ácido nítrico (3.4) en un matraz aforado de 1 l.
Completar el volumen con agua.
3.6.1. Solución de heptamolibdato de amonio: Disolver en agua caliente
100 g de heptamolibdato de amonio p. a. (NH
4) 6Mo7O24·4H2O.
Añadir 10 ml de amoníaco (d: 0,91) y completar hasta 1 l con
agua.
3.6.2. Solución de monovanadato de amonio: Disolver en 400 ml de
agua caliente 2,35 g de monovanadato de amonio p.a. NH4VO3.
Añadir lentamente y agitándolo al mismo tiempo 20 ml de ácido
nítrico diluido (7 ml de HNO3(3.4) + 13 ml de H2O) y completar
a 1 l con agua.
3.7. Solución patrón de 1 mg de fósforo por ml: Disolver en el agua 4,387 g
de dihidrogenofosfato de potasio p.a. KH2PO4. Completar hasta 1 l con
agua.
4.Equipo
4.1. Crisoles de incineración, de cuarzo o porcelana.4.2. Horno para barro eléctrico, provisto de un termostato regulado a 550 ºC.4.3. Matraz de Kjeldahl, 250 ml.4.4. Matraces aforados y pipetas de precisión.4.5. Espectrofotómetro.4.6. Tubos de ensayo, diámetro: 16 mm aproximadamente, de esmerilado
normalizado 14,5; capacidad: 25 a 30 ml.
5.Métodooperatorio
5.1.Preparación de la solución
Según la naturaleza de la muestra, preparar una solución como se indica
en 5.1.1 o 5.1.2.
5.1.1. Caso general
Pesar, con precisión de 1 mg, 1 g o más de la muestra. Introducir
la muestra en un matraz de Kjeldahl, añadir 20 ml de ácido sulfú-
rico (3.5), agitar para impregnar completamente la materia de
ácido y evitar que ésta se adhiera a las paredes del matraz,
calentar y mantener durante 10 minutos en ebullición. Dejar
enfriar ligeramente, añadir 2 ml de ácido nítrico (3.4), calentar
suavemente, dejar enfriar ligeramente, añadir de nuevo un poco1971L0393 — ES — 09.10.1998 — 004.001 — 10
▼B
de ácido nítrico (3.4) y llevar a ebullición, añadir un poco de
agua, transvasar el líquido a un matraz aforado de 500 ml enjua-
gando el matraz con agua caliente. Dejar enfriar, completar el
volumen con agua, homogeneizar y filtrar.
5.1.2. Muestras que contengan materias orgánicas y que estén exentas
de dihidrogenofosfatos de calcio y de magnesio
Pesar, con una precisión de 1 mg, 2,5 g aproximadamente de la
muestra en un crisol de incineración. Mezclar íntimamente la
muestra con 1 g de carbonato de calcio (3.1). Calcinar en el
horno a 550 ºC ± 5 ºC hasta obtener cenizas blancas o grises
(una pequeña cantidad de carbón no crea molestias).
Transvasar las cenizas a un vaso de 250 ml. Añadir 20 ml de
agua y de ácido clorhídrico (3.2) hasta que cese la efervescencia.
Añadir a continuación 10 ml de ácido clorhídrico (3.2) en exceso.
Llevar el vaso sobre un baño de arena y evaporar en seco para
insolubilizar la sílice. Recuperar el residuo con 10 ml de ácido
nítrico (3.3) y llevar a ebullición durante 5 minutos sobre el
baño de arena, sin evaporar en seco. Transvasar el líquido a un
matraz aforado de 500 ml enjuagando el vaso varias veces con
agua caliente. Dejar enfriar, completar el volumen con agua,
homogeneizar y filtrar.
5.2.Desarrolo de la coloración y medida de la densidad óptica
Diluir una parte alícuota del filtrado obtenido en 5.1.1 o 5.1.2 para
obtener una concentración en fósforo que alcance como máximo 40 µg/
ml. Introducir 10 ml de dicha solución en un tubo de ensayo (4.6) y
añadir 10 ml del reactivo vanadomolíbdico (3.6). Homogeneizar y dejar
reposar 10 minutos por lo menos a una temperatura de 20 ºC. Medir la
densidad óptica mediante el espectrofotómetro a 430 mm por compara-
ción con una solución obtenida por adición de 10 ml del reactivo
vanadomolíbdico (3.6) en 10 ml de agua.
5.3.Curva de calibrado
Preparar a partir de la solución de calibrado (3.7) soluciones que
contengan respectivamente 5, 10, 20, 30 y 40 µg de fósforo por ml.
Tomar 10 ml de cada una de dichas soluciones y añadir 10 ml del reac-
tivo vanadomolíbdico (3.6). Homogeneizar y dejar reposar 10 minutos
por lo menos a una temperatura de 20 ºC. Medir las densidades ópticas
en las condiciones indicadas en 5.2.
Trazar la curva de calibrado llevando a la ordenada los valores de la
densidad óptica y a la abscisa las cantidades correspondientes de
fósforo. La curva es lineal para las concentraciones comprendidas entre
0 y 40 µg/ml.
6.Cálculodelosresultados
Determinar la cantidad de fósforo de la toma de muestra refiriéndose a la
curva de calibrado.
Expresar el resultado en porcentaje de muestra.
Repetibilidad
La diferencia entre los resultados de las determinaciones paralelas efectuadas
sobre una misma muestra no debe exceder del:
3 % en valor relativo para los contenidos en fósforo inferiores al 5 %;
0,15 en valor absoluto para los contenidos en fósforo iguales o superiores al
5% .
4.DETERMINACIÓNDELASMATERIASGRASASBRUTAS
1.Objetoyámbitodeaplicación
El método sirve para determinar el contenido de materias grasas brutas de los
piensos. No es válido para el análisis de las semillas y frutos oleaginosos
definidos en el Reglamento no136/66/CEE del Consejo, de 22 de septiembre
de 1996.
La aplicación de uno u otro de los dos procedimientos que se describen a
continuación dependerá de la naturaleza y composición del pienso y de la
razón por la que se lleva a cabo el análisis.1971L0393 — ES — 09.10.1998 — 004.001 — 11
▼M4
▼M4
1.1.Procedimiento A. Materias grasas directamente extraíbles
El procedimiento es aplicable a las materias simples de origen vegetal,
excepto las incluidas en el ámbito de aplicación del procedimiento B.
1.2.Procedimiento B. Materias grasas brutas totales
El procedimiento es aplicable a los piensos simples de origen animal, así
como a los piensos compuestos. Se ha de utilizar para todos los mate-
riales cuyas materias grasas no puedan extraerse completamente sin
hidrólisis previa, por ejemplo, los glútenes, las levaduras, las proteínas
de patatas y los productos sujetos a procesos como la extrusión, flocula-
ción y calentamiento.
1.3.Interpretación de los resultados
Aquellos casos en los que el resultado obtenido con el procedimiento B
sea mejor que el obtenido con el procedimiento A se aceptarán como el
valor real.
2.Principio
2.1.Procedimiento A
Se extrae la muestra por medio de éter de petróleo. Se destila el disol-
vente y se seca y pesa el resiudo.
2.2.Procedimiento B
Se trata la muestra en caliente mediante ácido clorhídrico. Se enfría y
filtra la mezcla. Después de lavarlo y secarlo, el residuo se somete al
análisis según el procedimiento A.
3.Reactivos
3.1. Éter de petróleo, intervalo de ebullición: 40 a 60 ºC. El índice de bromo
debe ser inferior a 1 y el residuo en evaporación inferior a 2 mg/100 ml.
3.2. Sulfato de sodio, anhidro.3.3. Ácido clorhídrico 3 M.3.4. Coadyudante de filtración, como, por ejemplo, tierra de diatomeas,
Hiflo-supercel.
4.Aparatos
4.1. Extractor. Si el aparato está provisto de un sifón (aparato Soxhtel), el
caudal de reflujo debe regularse de forma que se obtengan por lo menos
10 ciclos por hora. Si se trata de un aparato sin sifón, el caudal líquido
refluido debe ser de alrededor de 10 ml por minuto.
4.2. Cartuchos de extracción, exentos de sustancias solubles en el éter de
petróleo, cuya porosidad sea compatible con las exigencias del punto
4.1.
4.3. Estufa de secado, bien por vacío a 75 ºC ± 3 ºC, bien a presión atmos-
férica a 100 ºC ± 3 ºC.
5.Mododeoperación
5.1.Procedimiento A (véase la observación 8.1)
Pesar, con error no superior a 1 mg, 5 g de muestra, introducirlos en un
cartucho de extracción (4.2) y cubrirlos con una torunda de algodón
desgrasado.
Colocar el cartucho en un extractor (4.1) y extraer durante seis horas por
medio de éter de petróleo (3.1). Recoger el extracto de éter de petróleo
en un matraz seco provisto de piedra pómez(
1) y tarado.
Eliminar el disolvente por destilación. Secar el residuo mediante coloca-
ción del matraz durante una hora y media en una estufa de secado (4.3).
Dejar enfriar en un secador y pesar. Secar de nuevo durante treinta
minutos para asegurarse de que el peso de la materia grasa se mantiene1971L0393 — ES — 09.10.1998 — 004.001 — 12
(1) Sustitúyanse los fragmentos de piedra pómez por perlas de vidrio cuando la materia
grasa deba someterse a exámenes cualitativos ulteriores.
▼M4
constante (la pérdida de peso entre dos pesadas sucesivas debe ser infe-
rior a 1 mg).
5.2.Procedimiento B
Pesar, con error inferior a 1 mg, 2,5 g de la muestra (véase la observa-
ción 8.2), introducirlos en un cilindro de 400 ml o en un matraz cónico
de 300 ml y añadir 100 ml de ácido clorhídrico 3 M (3.3) y algunos
fragmentos de piedra pómez. Cubrir el cilindro con un vidrio de reloj o
dotar al matraz cónico de un refrigerador de reflujo. Llevar la mezcla a
ebullición suave con ayuda de una llama pequeña o de una placa eléc-
trica, y mantenerla así durante una hora. Evitar que el producto se pegue
a las paredes del recipiente.
Enfriar y añadir una cantidad de coadyudante de filtración (3.4) sufi-
ciente para evitar cualquier pérdida de materia grasa en el momento de
la filtración. Filtrar en un papel filtro doble humedecido, exento de
materias grasas. Lavar el residuo con agua fría hasta la neutralidad del
filtrado. Comprobar que el filtrado no contiene materias grasas. La
presencia de éstas indica que debe efectuarse una extracción, de la
muestra mediante éter de petróleo, según el procedimiento A, antes de
la hidrólisis.
Colocar el papel filtro doble que contiene el residuo en un vidrio de
reloj, y secar durnate una hora y media en la estufa a 100 ºC ± 3 ºC.
Introducir el papel filtro doble que contiene el residuo seco en un
cartucho de extracción (4.2) y cubrirlo con una torunda de algodón
desgrasado. Colocar el cartucho en un extractor (4.1) y continuar la
operación tal como se indica en los párrafos segundo y tercero del punto
5.1.
6.Cálculodelosresultados
Expresar el resultado de la pesada en partes por ciento de muestra.
7.Repetibilidad
La diferencia entre dos determinaciones paralelas efectuadas en una misma
muestra miediante el mismo análisis no debe superar:
— 0,2 % en valor absoluto, para los contenidos de materias grasas brutas
inferiores al 5 %,
— 4,0 % del resultado más elevado para los contenidos del 5 al 10 %,
— 0,4 % en valor absoluto, para los contenidos superiores al 10 %.
8.Observaciones
8.1. Para los productos con alto contenido de materias grasas, difíciles de
desleír o no apropiados para la obtención de una muestra de ensayo
reducida homogénea, ha de procederse del modo siguiente:
Pesar, con un error inferior a 1 mg, 20 g de la muestra y mezclarlos con
10 g o más de sulfato de sodio anhidro (3.2). Extraer mediante éter de
petróleo (3.1) tal como se indica en el punto 5.1. Completar el extracto
obtenido hasta 500 ml con éter de petróleo (3.1) y mezclarlo. Introducir
50 ml de la solución en un matraz pequeño seco, provisto de algunos
fragmentos de piedra pómez(1) y tarado. Eliminar el disolvente por
destilación, secar y continuar la operación tal como se indica en el
último párrafo del punto 5.1.
Eliminar el disolvente del residuo de extracción presente en el cartucho,
reducir el residuo a una finura de 1 mm, colocarlo de nuevo en el
cartucho (no añadir suflato de sodio) y continuar la operación tal como
se indica en los párrafos segundo y tercero del punto 5.1.
El contenido de materias grasas brutas en partes por ciento de muestras
se determina mediante la fórmula:
(10 a + b) × 5
en la que:a = masa, en gramos, del residuo de la primera extracción (parte
alícuota del extracto)1971L0393 — ES — 09.10.1998 — 004.001 — 13
(1) Sustitúyanse los fragmentos de piedra pómez por perlas de vidrio cuando la materia
grasa deba someterse a exámenes cualitativos ulteriores.
▼M4
b = masa, en gramos, del residuo de la segunda extracción.
8.2. La cantidad para ensayo de los productos pobres en materias grasas
puede aumentarse a 5 g.
8.3. Es posible que los piensos para animales de compañía con un alto conte-
nido en agua deban ser mezclados con sulfato de sodio anhidro antes dela hidrólisis y extracción realizada según el procedimiento B.
8.4. En el punto 5.2, el uso de agua caliente en vez de agua fría para lavar
los residuos tras la filtración puede resultar más efectivo.
8.5. Puede que se necesite ampliar el tiempo de secado una hora y media
para algunos piensos. Se debe evitar el secado en exceso ya que puede
producir bajos resultados. También se puede utilizar un horno
microondas.
8.6. Se recomienda utilizar la pre-extracción por medio del procedimiento A
antes de la hidrólisis y la re-extracción por medio del procedimiento B,
si el contenido en materias grasas brutas es superior al 15 %. Hasta
cierto punto, esto depende de la naturaleza de los piensos y de la natu-
raleza de las materias grasas de éstos.1971L0393 — ES — 09.10.1998 — 004.001 — 14