1990L0426—ES—05.06.2003—008.001—1
Estedocumentoesuninstrumentodedocumentaciónynocomprometelaresponsabilidaddelasinstituciones
►B DIRECTIVADELCONSEJO
de26dejuniode1990
relativaalascondicionesdepolicíasanitariaqueregulanlosmovimientosdeéquidosylasimpor-
tacionesdeéquidosprocedentesdepaísesterceros
(90/426/CEE)
(DOL224de18.8.1990,p.42)
Modificadapor:
DiarioOficial
nopágina fecha
►M1Directiva90/425/CEEdelConsejode26dejuniode1990 L224 29 18.8.1990
►M2DirectivadelConsejode15dejuliode1991 L268 56 24.9.1991
►M3Decisión92/130/CEEdelaComisiónde13defebrerode1992 L47 26 22.2.1992
►M4Directiva92/36/CEEdelConsejode29deabrilde1992 L157 28 10.6.1992
►M5Decisión2001/298/CEdelaComisiónde30demarzode2001 L102 63 12.4.2001
►M6Decisión2002/160/CEdelaComisiónde21defebrerode2002 L53 37 23.2.2002
►M7Reglamento(CE)no806/2003delConsejode14deabrilde2003 L122 1 16.5.2003
Modificadapor:
►A1ActadeadhesióndeAustria,deFinlandiaydeSuecia C241 21 29.8.1994
(adaptadaporDecisión95/1/CE,Euratom,CECAdelConsejo) L1 1 1.1.1995
Rectificadapor:►
C1Rectificación,DOL296de27.10.1990,p.66(90/426/CEE)
▼B
DIRECTIVADELCONSEJO
de26dejuniode1990
relativaalascondicionesdepolicíasanitariaqueregulanlosmovi-
mientos de équidos y las importaciones de équidos procedentes de
paísesterceros
(90/426/CEE)
ELCONSEJODELASCOMUNIDADESEUROPEAS,
Visto el Tratado constitutivo de la Comunidad Económica Europea y,
enparticular,suartículo43,
VistalapropuestadelaComisión(1),
VistoeldictamendelParlamentoEuropeo(2),
VistoeldictamendelComitéEconómicoySocial(3),
Considerando que los équidos, por cuanto se trata de animales vivos,
estánincluidosenlalistadelosproductosenumeradosenelAnexoII
delTratado;
Considerandoque,paragarantizarundesarrolloracionaldelaproduc-
ción de équidos e incrementar así la productividad de este sector, esnecesariofijaranivelcomunitarionormasqueregulenlosmovimientosdeloséquidosenlosintercambiosintracomunitarios;
Considerando que la cría de équidos y, en particular, de caballos, se
integra de modo general en el marco de las actividades agrarias; que
constituye una fuente de ingresos para una parte de la poblaciónagraria;
Considerando que es conveniente eliminar las disparidades existentes
enlosEstadosmiembros enmateria depolicía sanitaria, conelfindefavorecerlosintercambiosintracomunitariosdeéquidos;
Considerando que, para permitir el desarrollo armonioso de los inter-
cambios intracomunitarios, es necesario definir un régimencomunitario aplicable a las importaciones procedentes de paísesterceros;
Considerando que respecto de los équidos registrados provistos de un
documento de identificación, conviene igualmente regular las condi-
cionesdesusmovimientosenelterritorionacional;
Considerando que, para participar en los intercambios, los équidos
deben satisfacer determinadas exigencias de policía sanitaria, con elfin de evitar la propagación de enfermedades contagiosas; que pareceoportuno, en particular, prever una posible regionalización de lasmedidasrestrictivas;
Considerandoque,conestemismopropósito,esasimismoconveniente
fijarlascondicionesdetransporte;
Considerando que, para garantizar el cumplimiento de las exigencias
previstas, resulta necesario prever queunveterinario oficial expida uncertificado sanitario que acompañe a los équidos hasta su lugar dedestino;
Considerandoquelaorganización ylasconsecuenciasdeloscontroles
que el Estado miembro de destino debe efectuar, y las medidas deprotección que deben adoptarse, deben ser fijadas en el marco de lanormativa queseapruebesobreloscontrolesveterinariosenlosinter-cambios intracomunitarios de animales vivos en la perspectiva de larealizacióndelmercadointerior;1990L0426—ES—05.06.2003—008.001—2
(1)D OnoC327de30.12.1989,p.61.
(2)D OnoC149de18.6.1990.
(3)D OnoC62de12.3.1990,p.46.
▼B
ConsiderandoqueesconvenientepreverquelaComisióntengalaposi-
bilidadderealizarcontroles;quedichoscontrolesdebenserefectuadosencolaboraciónconlasautoridadesnacionalescompetentes;
Considerandoqueladefinicióndeunrégimencomunitarioaplicable a
lasimportaciones procedentes detercerospaísesimplica laconfección
deunalistadelostercerospaísesopartesdelostercerospaísesdesdelosquepuedenimportarseéquidos;
Considerando que la selección de dichos países debe estar basada en
criteriosdecaráctergeneral,talescomoelestadosanitariodelganado,la organización y competencias de los servicios veterinarios y lanormativasanitariavigente;
Considerando,porotraparte,queesprecisonoautorizarlaimportación
de équidos procedentes de países infectados o indemnes desde hacepoco tiempo de enfermedades contagiosas de los animales que
supongan un peligro para el ganado comunitario; que lo mismo cabe
decir para las importaciones procedentes de países terceros donde sepractiquenvacunacionescontradichasenfermedades;
Considerando que será necesario completar las condiciones generales
aplicables a las importaciones procedentes de países terceros concondiciones particulares establecidas en función de la situación sani-taria de cada uno de ellos; que el carácter técnico y la diversidad de
criterios en los que deben basarse dichas condiciones particulares
requieren, para sudefinición, unprocedimiento comunitarioflexible yrápido en el que colaboren estrechamente la Comisión y los Estadosmiembros;
Considerandoquelapresentación,enlaimportacióndeéquidos,deun
certificado que se ajuste a un modelo común constituye uno de losmedios más eficaces para comprobar la aplicación de la normativa
comunitaria; que dicha normativa podrá incluir disposiciones particu-
lares, que podrán variar según el país tercero de que se trate, y quedeberá tenerse en cuenta esta circunstancia al establecer los modelosdecertificado;
Considerando que es conveniente encargar a los veterinarios de la
Comunidad latarea decomprobar si,sobretodoporloquerespecta alospaísestercerossecumplenlosrequisitosdelapresenteDirectiva;
Considerando que el control de la importación debe centrarse en el
origenyestadosanitariodeloséquidos;
Considerando que las normas generales aplicables a los controles a
efectuarenlaimportacióndebenserdefinidosenunmarcoglobal;
ConsiderandoquetodoEstadomiembrodebepoderprohibirenelacto
las importaciones procedentes de un país tercero cuando éstas puedan
poner en peligro la salud de los animales; que en tal caso es preciso,
sinperjuiciodelaseventualesmodificacionesdelalistadepaísesauto-rizados para exportar a la Comunidad, garantizar sin demora lacoordinación de la actitud de los Estados miembros respecto de dichopaístercero;
ConsiderandoquelasdisposicionesdelapresenteDirectivadeberánser
revisadasenelmarcodelaplenarealizacióndelmercadointerior;
Considerandoquehayquepreverunprocedimientoqueestablezcauna
cooperación estrecha y eficaz entre los Estados miembros y la Comi-siónenelsenodelComitéveterinariopermanente,1990L0426—ES—05.06.2003—008.001—3
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HAADOPTADOLAPRESENTEDIRECTIVA:
CAPÍTULOI
Disposicionesgenerales
Artículo 1
La presente Directiva define las condiciones de policía sanitaria que
regulan los movimientos de équidos entre Estados miembros y lasimportacionesdeéquidosprocedentesdepaísesterceros.
Artículo 2
AefectosdelapresenteDirectivaseentenderápor:
a) «explotación»: el establecimiento agrario o de entrenamiento, la
cuadrao,engeneral,cualquierlocaloinstalaciónenquesetengan
osecríenhabitualmenteéquidos,independientementedelusoalqueselesdestine;
b) «équidos»: los animales domésticos o salvajes de las especies
equinas—incluidaslascebras—yasnalylosanimalesresultantes
delcrucedelasmismas;
c) «équidosregistrados»:todoéquidoregistradotalcomosedefineen
laDirectiva90/427/CEE(
1),identificadomedianteundocumentode
identificación expedido por la autoridad ganadera o cualquier otraautoridadcompetentedelpaísdeorigendeléquidoencargadadelallevanza del libro genealógico o del registro de la raza de dichoéquido, o por toda asociación u organización internacional encar-gadadelcontroldeloscaballos destinadosalascompeticiones oa
lascarreras.
d) «équidos de abasto»: los équidos destinados al matadero para ser
sacrificados, bien directamente o bien después de pasar por unmercadooporcentrodeagrupamientoautorizado;
e) «équidosdecrianzayderenta»:loséquidosnomencionadosenlas
letrasc)yd);
f) «Estado miembro o país tercero indemne de peste equina»: cual-
quier Estado miembro o país tercero en cuyo territorio ningunaevidencia clínica, serológica enloséquidosnovacunados,oepide-miológica haya permitido comprobar la presencia de peste equinadurante los dosúltimos años yen el que, durante losdoce últimos
meses, no se haya efectuado vacuna alguna contra dicha enfer-
medad;
g) «enfermedades de declaración obligatoria»: las enfermedades
enumeradasenelAnexoA;
h) «veterinario oficial»: el veterinario designado por la autoridad
centralcompetentedelEstadomiembroodeunpaístercero;
i) «admisión temporal»: situación de un équido registrado procedente
de unpaís tercero yadmitido en el territorio de la Comunidad porun período no superior a noventa días que deberá determinar laComisión, según el procedimiento previsto en el artículo 24 en
funcióndelasituaciónsanitariadelpaísdeorigen.
CAPÍTULOII
Normassobrelosmovimientosdeéquidos
Artículo 3
LosEstadosmiembrossólopodránautorizarelmovimientodeéquidos
registradosensuterritorioyenviaraotroEstadomiembroéquidosquecumplanlosrequisitosdefinidosenlosartículos4y5.1990L0426—ES—05.06.2003—008.001—4
(1)D OnoL224de18.8.1990,p.55.
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No obstante, las autoridades competentes de los Estados miembros de
destinopodránconcederdispensasgeneralesolimitadasparalosmovi-mientosdeéquidos:
— quesemontenollevenconfinesdeportivosorecreativosporrutas
situadascercadelasfronterasinterioresdelaComunidad;
— queparticipen en manifestaciones culturales osimilares, oen acti-
vidades organizadas por organismos locales autorizados situados
cercadelasfronterasinterioresdelaComunidad;
— destinadosexclusivamentealpastooaltrabajo,deformatemporal,
cercadelasfronterasinterioresdelaComunidad.
LosEstadosmiembrosquehaganusodeestaautorizacióninformarána
laComisiónsobrelostérminosdelasdispensasconcedidas.
Artículo 4
1. Enelmomentodelainspección,loséquidosnodeberánpresentar
ningún síntoma de enfermedad. La inspección deberá llevarse a cabo
eneltranscursodelascuarentayochohorasanterioresalembarqueola carga. No obstante y sin perjuicio de lo dispuesto en el artículo 6,dichainspecciónseexigiráenelcasodeloséquidosregistradosúnica-menteparalosintercambiosintracomunitarios.
2. Sinperjuicio delosrequisitosprevistosenelapartado5paralas
enfermedades de declaración obligatoria, el veterinario oficial deberáasegurarse al hacer la inspección de que no existe ningún hecho —
basándoseinclusoenlasdeclaraciones delpropietarioodelcriador—
que permita concluir que los équidos hayan estado en contacto conéquidos afectados por una infección o una enfermedad contagiosa enlosúltimosquincedíasanterioresalainspección.
3. Los équidos no deberán estar incluidos entre los animales que
hayaqueeliminarydestruirencumplimientodeunprogramadeerra-dicacióndeenfermedadcontagiosaaplicadoenunEstadomiembro.
4. Los équidos deberán ser sometidos a identificación, la cual se
llevaráacabo:
i) paraloscaballosregistrados,pormediodeundocumentodeidenti-
ficación establecido por la Directiva 90/427/CEE(
1), que deberá
certificar enparticular quesecumple lodispuestoenlosapartados
5 y 6 del artículo 5. La validez de dicho documento deberá sersuspendidaporelveterinariooficialduranteelperíododelasprohi-biciones contempladas en el apartado 5 o en el artículo 5. Deberárestituirse, una vez sacrificado el caballo registrado, a la autoridadque lo haya expedido. La Comisión aprobará las normas de desa-
rrollo del presente apartado con arreglo al procedimiento
establecidoenelartículo24;
ii) paraloséquidosdereproducciónoenproducción,segúnunmétodo
de identificación que deberá elaborar la Comisión, con arreglo al
procedimientoestablecidoenelartículo24.
Hasta el momento en que comience a aplicarse dicho método,
seguiránaplicándoselosmétodosdeidentificación nacionalesreco-nocidosoficialmente,siemprequeseannotificadosalaComisióny
a los demás Estados miembros dentro de un plazo de tres meses a
partirdelafechadeadopcióndelapresenteDirectiva.
5. Ademásdelrequisitoestablecido enelartículo 5,loséquidosno
deberán proceder de una explotación que haya sido objeto de una delasmedidasdeprohibiciónsiguientes:
a) Encasodeanimalesdelasespeciesexpuestasalaenfermedadque
seencuentren enlaexplotación nohayansidosacrificados osupri-midosensutotalidad,laduracióndelaprohibiciónquerecaesobrelaexplotacióndeprocedenciadeberáserdealmenos:
— seis meses en el caso de équidos que infundan la sospecha de
padecer durina, a partir de la fecha del último contacto o de la1990L0426—ES—05.06.2003—008.001—5
(1)D OLno224de18.8.1990,p.55.
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posibilidad de contacto con unéquido enfermo. No obstante, si
setratadeunsemental,laprohibicióndeberáaplicarsehastasucastración;
— seis meses en el caso de muermo y encefalomielitis equina, a
partirdelafechaenqueloséquidosenfermoshayansidoelimi-nados;
— enelcasodeanemia infecciosa, deberáterminarenlafechaen
que, tras haber sido sacrificados los équidos afectados, los
animales restantes hayan reaccionado negativamente a dospruebasdeCogginsefectuadasconunintervalode3meses;
— seismesesenelcasodeestomatitisvesiculosa;— unmesapartirdelúltimocasoderabiacomprobada;
— quincedíasapartirdelúltimocasodeenfermedad decarbunco
bacteridianocomprobada.
b) En el caso de que se hayan sacrificado o suprimido todos los
animales delasespecies expuestas alaenfermedad queseencuen-trenenlaexplotación,ysehayandesinfectadotodosloslocales,laduracióndelaprohibiciónserádetreintadíasapartirdelafechaen
quelosanimaleshayansidoeliminadosydesinfectadosloslocales,
salvosisetratadelcarbuncobacteridiano,enrelaciónconelcuallaprohibicióntendráunaduracióndequincedías.
Las autoridades competentes podrán conceder dispensas a dichas
medidas de prohibición para los hipódromos y campos de carreras y
deberán informar a la Comisión, del carácter de las dispensas conce-didas.
6. EnelsupuestodequeunEstadomiembroestablezcaohayaesta-
blecido un programa facultativo u obligatorio de lucha contra una
enfermedad a la que sean sensibles los équidos podrá presentar dichoprogramaalaComisióndentrodelosseismesessiguientesalanotifi-cacióndelapresenteDirectiva,haciendomención,enparticulara:
— lasituacióndelaenfermedadensuterritorio;
— lajustificación delprograma,teniendoencuentalaimportancia de
laenfermedadysusventajasdesdeelpuntodevistadelarelación
coste/beneficio;
— lazonageográficaenlaquesevaaaplicarelprograma;— los diferentes estatutos aplicables a las granjas y las normas que
deberán alcanzarse en cada categoría, así como losprocedimientosdeprueba;
— losprocedimientosdecontroldedichoprograma;
— lasconsecuenciasquedebendeducirsedelapérdidadelestatutode
laexplotación,porelmotivoquefuere;
— las medidas a tomar en el caso de observarse resultados positivos
duranteloscontrolesrealizadosconarregloalprograma;
— elcarácternodiscriminatorioentrelosintercambiosenelterritorio
delEstadomiembrodequesetrateylosintercambiosintracomuni-tarios.
La Comisión examinará los programas comunicados por los Estados
miembros.Losaprobaráensucaso,respetandoloscriteriosenunciadosen el párrafo primero con arreglo al procedimiento previsto en elartículo 24. Con arreglo al mismo procedimiento, podrán precisarselas garantías complementarias generales o limitadas que podrán
exigirse en los intercambios intracomunitarios. Dichas garantías
deberánequivaler,comomáximo,alasqueelEstadomiembroapliqueenelámbitonacional.
LosprogramaspresentadosporelEstadomiembropodránmodificarse
o completarse con arreglo al procedimiento previsto en el artículo 25.Conarregloalmismoprocedimiento, podráaprobarsecualquier modi-ficación o adición respecto de un programa anteriormente aprobado yrespectodelasgarantíasdefinidasdeconformidadconlodispuestoenelpárrafosegundo.1990L0426—ES—05.06.2003—008.001—6
▼M4
Artículo 5
1. Los Estados miembros que no estén indemnes de peste equina,
con arreglo a la letra f) del artículo 2, sólo podrán enviar équidos
procedentes de la parte de territorio que se considere infectada con
arreglo al apartado 2 del presente artículo en las condiciones fijadasenelapartado3delpresenteartículo.
2. a) Se considerará infectada de peste equina una parte del territorio
deunEstadomiembrosiempreque:
— se haya comprobado la peste equina en losdosúltimos años
mediante una evidencia clínica, serológica (en los animales
novacunados)y/oepidemiológica;o
— se haya practicado la vacuna contra la peste equina en los
doceúltimosmeses.
b) Lapartedelterritorioqueseconsidereinfectadadepesteequina
deberácomponersealmenosde:
— unazonadeproteccióndeunradiode100kmcomomínimo
entornoacualquierfoco;
— una zona de vigilancia de al menos 50 km de fondo que
empezaráenloslímitesdelazonadeprotecciónyenlaquenosehayapracticadovacunaciónalgunaenlosúltimosdocemeses.
c) Las normas de control de las medidas de lucha relativas a los
territorios y zonas contemplados en las letras a) y b) así comolas excepciones a las mismas se especifican en la Directiva 92/35/CEE(
1).
d) Todoéquidovacunadoqueseencuentreenlazonadeprotección
deberá quedar registrado e identificado conforme a lo dispuestoenelapartado1delartículo6delaDirectiva92/35/CEE.
Lamencióndedichavacunacióndeberáconstardemaneraclara
eneldocumentodeidentificacióny/oenelcertificadosanitario.
3. UnEstadomiembrosólopodráexpedirdelterritoriomencionado
en la letra b) del apartado 2 los équidos que cumplan los siguientesrequisitos:
a) Ser expedidos únicamente en determinados períodos del año, en
funcióndelaactividaddelosinsectosvectores,quedeberánfijarsedeconformidadconelprocedimientoprevistoenelartículo25.
b) No presentar ningún síntoma clínico de peste equina el día de la
inspeccióncontempladaenelapartado1delartículo4.
c) — Sinohansidovacunadoscontralapesteequina,quehayansido
sometidos con reacción negativa a una prueba de fijación del
complemento para la peste equina tal como se describe en elAnexoD,endosocasiones,conunintervalocomprendidoentreveintiún y treinta días, debiendo haberse efectuado la segundapruebaenlosdiezdíasanterioresalenvío.
— Si han sido vacunados, no deben haberlo sido durante los
últimosdosmesesydebenhabersidosometidosalapruebadefijacióndescritaenelAnexoDconlosintervaloscitadossinque
sehayaevidenciadounaumentodelosanticuerpos.Conarreglo
al procedimiento establecido en el artículo 24, la Comisión,previo dictamen del Comité científico veterinario, podrá reco-nocerotrosmétodosdecontrol.
d) Haber sido mantenidos en un lugar de cuarentena durante un
períododealmenoscuarentadíasantesdelenvío.
e) habersidoprotegidosdelosinsectosvectoresduranteelperíodode
cuarentena y durante el transporte del lugar de cuarentena al lugardeenvío.1990L0426—ES—05.06.2003—008.001—7
(1)D OnoL157de10.6.1992,p.19
▼B
Artículo 6
LosEstadosmiembros queapliquen unrégimen alternativo decontrol
que ofrezca garantías equivalentes a las previstas en el apartado 5 delartículo4paralosmovimientosensuterritoriodeloséquidosydeloséquidosregistrados,enparticularmedianteeldocumentodeidentifica-ción, podrán concederse, en régimen de reciprocidad, una dispensa alasdisposicionesdelasegundafrasedelapartado1delartículo4yal
segundoguióndelapartado1delartículo8.
InformarándeelloalaComisión.
Artículo 7
1. Enelmásbreveplazo,loséquidosdeberánserconducidosdesde
laexplotacióndeprocedenciahaciaellugardedestino,obiendirecta-mente o bien a través de un mercado o centro de reagrupamientoautorizado tal como se definen en el apartado 6 del artículo 3 de la
Directiva64/432/CEE,utilizandomediosdetransporteydecontención
periódicamentelimpiadosydesinfectadosconundesinfectantesegúnlafrecuencia que deberá fijar el Estado miembro de expedición. Losvehículos de transporte deberán ir acondicionados de forma que lasheces, la yacija o el forraje de los équidos no puedan deslizarse ocaerfueradelvehículoduranteeltransporte.Eltransportedeberáefec-
tuarse de forma que se garantice una protección sanitaria eficaz y el
bienestardeloséquidos.
2. El Estado miembro de destino podrá, de manera general o limi-
tada, conceder una dispensa a determinados requisitos del apartado 5
del artículo 4, siempre que el animal lleve una marca especial que
indique que está destinado al sacrificio y que la mención de dichadispensafigureenelcertificadosanitario.
Siseconcededichadispensaloséquidosdeabastodeberánsercondu-
cidos directamente al matadero designado para ser sacrificados en un
plazoquenosuperecincodíasapartirdelallegadaalmatadero.
3. El veterinario oficial deberá anotar en un registro el número de
identificación oelnúmerodeldocumento deidentificación deléquido
sacrificadoytransmitiralaautoridadcompetente dellugardeexpedi-
ción,apeticióndeésta,unadeclaraciónquecertifiqueelsacrificiodeléquido.
Artículo 8
1. LosEstadosmiembrosvelaránporque:
— en caso de que salgan de su explotación, los équidos registrados
deban ir acompañados del documento de identificación establecidoenelapartado4delartículo4,ysiestándestinadosaintercambiosintracomunitarios, completados por el certificado previsto en elAnexoB;
— durantesutransporte,loséquidosdereproducción,deproduccióny
de abasto deberán ir acompañados de un certificado sanitarioconformealAnexoC.
Elcertificado o,cuandosetratedeundocumentodeidentificación, la
hoja en que figuren los datos sanitarios, deberán, sin perjuicio de lo
dispuesto en el artículo 6, expedirse dentro de las 48 horas anterioresal embarque o,a más tardar, el último día laborable previo al mismo,en la o las lenguas oficiales del Estado miembro de expedición y dedestino. El certificado tendrá un período de validez de diez días ydeberáconstardeunasolahoja.
2. Las importaciones de équidos no registrados podrán efectuarse
mediante un solo certificado sanitario por lote, en lugar de llevarse acabo mediante el certificado individual a que se hace mención en elsegundoguióndelapartado1.1990L0426—ES—05.06.2003—008.001—8
▼M1
Artículo 9
LasnormasdelaDirectiva90/425/CEEdelConsejo,de26dejuniode
1990, relativa a los controles veterinarios y zootécnicos aplicables enlos intercambios intracomunitarios de determinados animales vivos yproductos, con vistas a la realización del mercado interior(
1), se apli-
carán en particular en lo relativo a los controles en origen, a la
organización y a la continuación que se dará de los controles quedeba realizar el Estado miembro de destino y a las medidas de salva-guardiaquedebanaplicarse.
Artículo 10
Enlamedidaenqueresultenecesarioparalaaplicaciónuniformedela
presente Directiva, y en colaboración con las autoridades nacionalescompetentes, los expertos veterinarios de la Comisión podrán efectuarcontroles in situ. La Comisión informará a los Estados miembros delresultadodeloscontrolesefectuados.
El Estado miembro en cuyo territorio se realice un control deberá
prestaralosexpertostodalaayudanecesariaparaelcumplimiento desumisión.
Lasnormasdedesarrollodelpresenteartículoseadoptaránconarreglo
alprocedimientoestablecidoenelartículo24.
CAPÍTULOIII
Normasparalasimportaciones procedentesdepaísesterceros
Artículo 11
1. Los équidos importados en la Comunidad deberán cumplir las
condicionesfijadasenlosartículos12a16.
2. Hastalafechadeentradaenvigordelasdecisionesadoptadasen
aplicación de los artículos 12 a 16, los Estados miembros aplicarán alas importaciones de équidos procedentes de países terceros condi-ciones al menos equivalentes a las que resulten de la aplicación delcapítuloII.
Artículo 12
1. Parapoderserimportadosloséquidosdeberánprocederdepaíses
terceros o de partes de países terceros que figuren en una lista quedeberá incluirse en una columna especial que deberá insertarse en lalista elaborada de conformidad con lo dispuesto en el artículo 3 de laDirectiva72/462/CEE.
2. Los procedimientos y criterios de elaboración, modificación y
publicacióndelalistadelospaísestercerosopartesdepaísesterceros
establecidosenelartículo 3delaDirectiva 72/462/CEE,seránaplica-
blesalalistaválidaparalasimportacionesdeéquidos.
Artículo 13
1. Loséquidosdeberánprocederdeunpaístercero:
a) indemnedepesteequina;
b) indemnedesdedosañosantesdeencefalomielitisequinavenezolana
(VEE);
c) indemnedesdeseismesesantes,dedurinaydemuermo;
2. La Comisión, con arreglo al procedimiento establecido en el
artículo24podrá:
a) decidirquelasdisposicionesdelapartado1sóloseapliquenenuna
partedelterritoriodeunpaístercero.1990L0426—ES—05.06.2003—008.001—9
(1)D OnoL224de18.8.1990,p.29.▼B
▼B
En caso de regionalización de los requisitos para la peste equina
deberánrespetarsecomomínimolasmedidasprevistasenlosapar-tados2y3delartículo5.
b) exigir garantías suplementarias para enfermedades exóticas en la
Comunidad.
Artículo 14
AntesdeldíadesucargaparasuenvíoalEstadomiembrodedestino,
loséquidosdeberánhaberpermanecidosininterrupciónenelterritorioopartedelterritoriodeunpaísterceroo,encasoderegionalizaciónenlapartedelterritoriodefinidaenaplicacióndelaletraa)delapartado2delartículo13duranteunperíodoquedeberáfijarseenelmomentode
la adopción de las decisiones que se establezcan en aplicación del
artículo15.
Deberánprocederdeunaexplotacióncolocadabajocontrolveterinario.
Artículo 15
La importación de équidos del territorio de un país tercero o de una
parte de territorio de un país tercero definida con arreglo a la letra a)
del apartado 2 del artículo 13 que figure en la lista establecida conarreglo al apartado 1 del artículo 12 sólo se autorizará si, además delosrequisitosestablecidosenelartículo13:
a) cumplen las condiciones sanitarias adoptadas, conarreglo alproce-
dimiento previsto en el artículo 24, para las importaciones de
équidos de países considerados según la especie de que se trate y
lascategoríasdeéquidos.
Paradeterminarlascondicionesdepolicíasanitariadeconformidad
conelpárrafoprimero,labasedereferenciautilizadaseráladelasnormasprevistasenlosartículos4y5;y
b) cuando se trate de países terceros no indemnes de estomatitis
vesiculosa o de arteritis viral durante al menos seis meses, loséquidossatisfaganlossiguientesrequisitos:
i) los équidos deberán proceder de una explotación indemne de
estomatitis vesiculosa desde al menos seis meses antes y haber
reaccionado negativamente a un análisis serológico antes de suexpedición;
ii) en el caso de la arteritis viral, los équidos machos deberán, sin
perjuicio de lo dispuesto en el punto ii) del artículo 19, haberreaccionado negativamente a un análisis serológico, a un virusde aislamiento o a cualquier otra prueba reconocida según elprocedimiento del artículo 24, que garantice que el animal está
indemnedeestaenfermedad.
Según el procedimiento establecido en el artículo 24, previo
dictamen del Comité veterinario científico, la Comisión podrá
delimitar las categorías de équidos machos a los que será apli-
cadaelcitadorequisito.
Artículo 16
1. Los équidos deberán quedar identificados de conformidad con el
apartado 4delartículo 4eiracompañadosdeuncertificado expedidopor un veterinario oficial del país tercero exportador. El certificadodeberá:
a) expedirseeldíadelacargadeloséquidosparasuenvíoalEstado
miembro de destino o, cuando se trate de caballos registrados, elúltimodíalaborableantesdelembarque;
b) estarredactadoenunaalmenosdelaslenguasoficialesdelEstado
miembro de destino y en una de las del Estado miembro donde seefectúeelcontroldeimportación;
c) acompañaraloséquidos,enejemplaroriginal;1990L0426—ES—05.06.2003—008.001—10
▼B
d) certificarqueloséquidoscumplenlosrequisitosestablecidosporla
presente Directiva, así como las que se hayan fijado en aplicacióndelamismaparalasimportacionesprocedentesdepaísesterceros;
e) constardeunasolahoja;
f) expedirse para un solo destinatario o, en el caso de équidos de
abasto,paraunlotedebidamentemarcadoeidentificado.
LosEstadosmiembrosquerecurranaestaposibilidadinformaránde
elloalaComisión.
2. Elcertificadodeberáserredactadoenunimpresoqueseajusteal
modelo fijado con arreglo al procedimiento establecido en el artículo24.
Artículo 17
Expertosveterinarios delosEstadosmiembrosydelaComisiónefec-
tuaráncontrolessobreelterrenoparaverificarsilasdisposicionesdelapresente Directiva, y en particular las recogidas en el apartado 2 del
artículo12secumplenefectivamente.
Si enel transcurso de unainspección efectuada en virtud del presente
artículo, se detectaran hechos graves en una explotación, la Comisióninformará inmediatamente de ello a los Estados miembros y adoptaráinmediatamente una decisión que incluya la suspensión provisional dela autorización. La decisión final a este respecto se adoptará según el
procedimientoestablecidoenelartículo25.
La Comisión designará, a propuesta de los Estados miembros, a los
expertosdelosEstadosmiembrosencargadosdeestoscontroles.
Se realizarán dichos controles por cuenta de la Comunidad, a cuyo
cargocorreránlosgastoscorrespondientes.
Laperiodicidadylasmodalidadesdedichoscontrolessedeterminarán
segúnelprocedimientoprevistoenelartículo24.
Artículo 18
1. Nada más llegar al Estado miembro de destino, los équidos de
abasto deberán ser conducidos a un matadero, ya sea directamente obiendespuésdehaberpasadoporunmercadooporuncentrodeagru-pación y, de acuerdo con los requisitos de policía sanitaria, sersacrificados en un plazo que deberá ser fijado en el momento de laadopcióndelasdecisionesquedebantomarseenaplicacióndelartículo
15.
2. Sin perjuicio de las condiciones particulares que puedan fijarse
conarregloalprocedimientoestablecidoenelartículo24,laautoridadcompetente del Estado miembro de destino estará facultada, siempreque lo exijan razones de policía sanitaria para desginar el matadero
haciaelquedebandirigirsedichoséquidos.
Artículo 19
La Comisión, con arreglo al procedimiento establecido en el artículo
24:
i) podrálimitarlaimportaciónprocedentedeunpaísterceroodeuna
parte de un país tercero a determinadas especies o categorías de
équidos;
ii) fijará, no obstante lo dispuesto en el artículo 15, las condiciones
particulares en que pueda efectuarse la admisión temporal en elterritorio de la Comunidad o la reintroducción en dicho territorioprevia exportación temporal de los équidos registrados o de loséquidosdestinadosausosparticulares;
iii) determinará las condiciones que permitan convertir una admisión
temporalenadmisióndefinitiva.1990L0426—ES—05.06.2003—008.001—11
▼M2
CAPÍTULOIV
Disposicionesfinales
Artículo 22
Las disposiciones de la presente Directiva, y en particular las de la
segundafrasedelapartado1delartículo4ydelosartículos6,8y21seránsometidasarevisiónantesdel1deenerode1993enelmarcodelaspropuestasdestinadasagarantizarlaplenarealización delmercadointerior, sobrelascuales elConsejosepronunciará pormayoría cuali-ficada.
Artículo 23
Los Anexos del presente Reglamento serán modificados por la Comi-
sión,deconformidadconelprocedimientoprevistoenelartículo25.
Artículo 24
1. La Comisión estará asistida por el Comité permanente de la
cadenaalimentariaydesanidadanimal,creadomedianteelartículo58delReglamento(CE)n
o178/2002(1).
2. Enloscasosenquesehagareferenciaalpresenteartículo,serán
deaplicaciónlosartículos5y7delaDecisión1999/468/CE(2).
El plazo contemplado en el apartado 6 del artículo 5 de la Decisión
1999/468/CEquedafijadoentresmeses.
3. ElComitéaprobarásureglamentointerno.
Artículo 25
1. La Comisión estará asistida por el Comité permanente de la
cadenaalimentariaydesanidadanimal.
2. Enloscasosenquesehagareferenciaalpresenteartículo,serán
deaplicaciónlosartículos5y7delaDecisión1999/468/CE.
El plazo contemplado en el apartado 6 del artículo 5 de la Decisión
1999/468/CEquedafijadoenquincedías.
Artículo 26
Las disposiciones del artículo 34 de la Directiva 72/462/CEE serán
aplicables a los requisitos definidos en el Capítulo III de la presenteDirectiva.
Artículo 27
Los Estados miembros pondrán en vigor las disposiciones legales,
reglamentariasyadministrativasnecesariasparadarcumplimientoalodispuestoenlapresenteDirectiva,amástardarel1deenerode1992.
InformarándeelloalaComisión.
Artículo 28
LosdestinatariosdelapresenteDirectivasonlosEstadosmiembros.1990L0426—ES—05.06.2003—008.001—12
(1) DOL31de1.2.2002,p.1.
(2) DOL184de17.7.1999,p.23.▼B
▼M7
▼B
▼B
ANEXO A
ENFERMEDADESDEDECLARACIÓNOBLIGATORIA
Estaránsometidasadeclaraciónobligatorialassiguientesenfermedades:
— Durina
— Muermo— Encefalomielitisequina(entodassusvariedadesincluidalaVEE)— Anemiainfecciosa— Rabia
— Carbuncobacteridiano
— Pesteequina— Estomatitisvesiculosa.1990L0426—ES—05.06.2003—008.001—13
▼M3
ANEXO B
►(1)M51990L0426—ES—05.06.2003—008.001—14
▼M3
ANEXO C
1990L0426—ES—05.06.2003—008.001—15
▼M3
►(1)A1
►(2)M51990L0426—ES—05.06.2003—008.001—16
▼M6
ANEXO D
PESTEEQUINA
DIAGNÓSTICO
Los reactivos para las pruebas de inmunoabsorción enzimática (ELISA)
descritos a continuación pueden obtenerse del Laboratorio de referencia de la
ComunidadEuropeaodeloslaboratoriosdereferenciadelaOIEparalapeste
equina.
1. TÉCNICAELISADECOMPETICIÓNPARALADETECCIÓNDEANTI-
CUERPOS CONTRA EL VIRUS DE LA PESTE EQUINA (VPE)
(PRUEBARECOMENDADA)
LatécnicaELISAdecompeticiónseutilizaparadetectaranticuerposespecí-
ficos contra el virus de la peste equina presentes en sueros de cualquier
especiedeéquidos.Elantisuerodecobayacontraelvirusdelapesteequina,
policlonal y de amplio espectro (en lo sucesivo, denominado «antisuero de
cobaya»), tiene especificidad de serogrupo y puede detectar todos los sero-
tiposconocidosdelvirusdelapesteequina.
El principio de la prueba es la interrupción, mediante una muestra de suero
problema, delareacción entreelantígeno delvirusdelapesteequina yun
antisuerodecobaya.Losanticuerposcontraelvirusdelapesteequinaconte-
nidos en la muestra de suero problema competirán con los del antisuero de
cobaya,deloqueresultaráunareduccióndelcoloresperado(traslaadición
deanticuerposanti-cobayamarcadosconlaenzimaydesustrato).Lossueros
puedenanalizarse aunasoladiluciónal1/5(método parasuerosaunasola
dilución) o a una serie de diluciones para determinar el título (método de
titulación delsuero).Losvalores de inhibición superioresal 50%seconsi-
deranpositivos.
ElprotocolodelapruebadescritoacontinuaciónseutilizaenelLaboratorio
regionaldereferenciaparalapesteequinadePirbright(ReinoUnido).
1.1.Procedimiento delaprueba
1.1.1.Preparación de las placas
1.1.1.1. Recubrir las placas ELISA con antígeno del virus de la peste
equina extraído de cultivos celulares infectados y diluido en
una solución amortiguadora de carbonato/bicarbonato, pH 9,6.
IncubarlasplacasELISAdurantetodalanochea4ºC.
1.1.1.2. Lavar las placas 3 veces llenando y vaciando los pocillos con
solución salina fosfatada (PBS), pH 7,2-7,4 y secar en papel
absorbente.
1.1.2.Pocillos control
1.1.2.1. Ponerenlaprimeracolumnaelsuerocontrolpositivohaciendo
diluciones dobles, desde la 1/5 hasta la 1/640, en solución
salinadebloqueo(PBSquecontengaun0,05%(v/v)deTween
20, un 5 % (p/v) de leche desnatada en polvo (Cadbury's
MarvelTM) y un 1 % (v/v) de suero de bovino adulto, hasta
llegaraunvolumenfinalde50 µlporpocillo.
1.1.2.2. Añadir50 µldesuerocontrolnegativodiluidoal1/5(10 µlde
suero+40 µldesolucióndebloqueo)enlospocillosAyBde
lacolumna2.
1.1.2.3. Poner100 µl/pocillodesoluciónsalinadebloqueoenlospoci-
llosCyDdelacolumna2(blanco).
1.1.2.4. Añadir50 µldesoluciónsalinadebloqueoenlospocillosE,F,
GyHdelacolumna2(controlcobaya).
1.1.3.Método para sueros a una sola dilución (1/5)
1.1.3.1. Hacer una dilución al 1/5 de cada suero problema en solución
salina de bloqueo; dispensar por duplicado en los pocillos de
lacolumna3ala12(10 µldelsuero+40 µldesoluciónsalina
debloqueo).
obien1990L0426—ES—05.06.2003—008.001—17
▼M6
1.1.4.Método de titulación del suero
1.1.4.1. Preparar una serie de diluciones dobles de cada muestra
problema(desde1/5hasta1/640)ensoluciónsalinadebloqueo,
ponerenochopocillosdelacolumna3ala12.
después
1.1.5. Añadir 50 µl de antisuero de cobaya, previamente diluido en
solución salina de bloqueo, a todos los pocillos de la placa,exceptoalosdelblanco(trasestaoperación,todoslospocillos
contienenunvolumenfinalde100 µl).
1.1.5.1. Incubarduranteunahoraa37ºCenunagitadororbital.
1.1.5.2. Lavarlasplacastresvecesysecarenpapelcomoantes.
1.1.5.3. Añadir a cada pocillo 50 µl de suero anticobaya obtenido en
conejo, conjugado con peroxidara de rábano y previamente
diluidoensoluciónsalinadebloqueo.
1.1.5.4. Incubarduranteunahoraa37ºCenunagitadororbital.1.1.5.5. Lavarlasplacastresvecesysecarenpapelcomoantes.
1.1.6.Cromógeno
Preparar la solución de cromógeno OD (OD = orto-fenildia-
mina) según las instrucciones del fabricante (0,4 mg/ml en
agua destilada estéril) inmediatamente antes de su utilización.
Añadir sustrato (peróxido de hidrógeno = H
2O2) para llegar a
una concentración final de 0,05 % (v/v) (1/2000 de una solu-ciónal 30%deH
2O2).Añadir50 µldelasolución deOFDa
cadapocilloydejarlasplacasdurante10minutosenlamesay
a temperatura ambiente. Detener la reacción añadiendo a cada
pocillo50 µldeácidosulfúrico1M(H2SO4).
1.1.7.Lectura
Leerconespectrofotómetroa492nmdelongituddeonda.
1.2.Expresióndelosresultados
1.2.1. Haciendo uso de un programa informático, imprimir los valores
de densidad óptica (DO) y del porcentaje de inhibición (PI) de
lossuerosproblemaydelossueroscontrolbasándoseenelvalor
medioregistradoenloscuatropocillosdecontroldecobaya.Los
datos expresados como valores de DO y de PI se emplean para
determinar silaprueba funciona dentro delímites aceptables. El
límite delvalorsuperioryellímite delvalorinferiordelcontrol
de cobaya tiene que estar entre valores de DO de 1,4 y 0,4
respectivamente.Eltítulodelcontrolpositivo,basadoenel50%
del porcentaje de inhibición debería ser de 1/240 (dentro de una
gama que varía desde 1/120 a 1/480). Deberá rechazarse toda
placaquenocumplaloscriterioscitados.Noobstante,sieltítulo
del suero del control positivo es superior a 1/480 y las muestras
problemaresultannegativas,seaceptaráncomonegativas.
Lospocillos duplicadosdel suerocontrol negativo ylospocillos
duplicados del blanco deberán registrar unos valores de PI
comprendidosentre+25%y–25%,yentre+95%y+105%,
respectivamente. Si los valores no están situados entre estos
límites, laplaca noqueda invalidada, peroelloindica queexiste
uncolordefondo.
1.2.2. El umbral de diagnóstico (punto de corte o «cut off») de los
suerosproblemaesel50%(PI50%).Lasmuestrasqueregistren
valoresdePIsuperioresal50%sonpositivas.Lasmuestrasque
registrenvaloresdePIinferioresal50%sonnegativas.
Seconsideraquesondudosaslasmuestrasqueregistrenunvalor
de PI por encima y otro por debajo del punto de corte en cada
unodelospocillosduplicados.Dichasmuestraspuedenvolvera
analizarse otravez enlaprueba aunasoladilución yportitula-
ción. Las muestras positivas pueden también titularse para
conocerelgradodepositividad.1990L0426—ES—05.06.2003—008.001—18
▼M6
Presentacióndelosresultadosdelapruebaaunasoladilución(1/5)
1 2 34567891 0 1 1 1 2
C+ Suerosproblema
A 1:5 C– 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40
B 1:10 C– 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40C 1:20 Blanco
D 1:40 Blanco
E 1:80 CC
F 1:160 CC
G 1:320 CC 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
H 1:640 CC 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
C– = controlnegativo
C+ = controlpositivo
CC = controldecobaya
Presentacióndelosresultadosdelatitulacióndelsuero
1 2 34567891 0 1 11 2
C+ Suerosproblema
A 1:5 C– 1:5 1:5
B 1:10 C– 1:10 1:10C 1:20 Blanco 1:20 1:20
D 1:40 Blanco 1:40 1:40
E 1:80 CC 1:80 1:80
F 1:160 CC 1:160 1:160
G 1:320 CC 1:320 1:320H 1:640 CC 1:640 1:640
C– = controlnegativo
C+ = controlpositivo
CC = controldecobaya
2. TÉCNICA ELISA INDIRECTA PARA LA DETECCIÓN DE ANTI-
CUERPOS CONTRA EL VIRUS DE LA PESTE EQUINA (VPE)
(PRUEBARECOMENDADA)
Lapruebaquesedescribeacontinuaciónseajustaaladescripciónrecogida
enelcapítulo2.1.11delacuartaedición(2000)delManualdenormaspara
pruebasdediagnósticoyvacunasdelaOIE.
Se utiliza la proteína VP7 recombinante como antígeno para determinar la
presenciadeanticuerposcontraelvirusdelapesteequinaconunaltoíndice
desensibilidadyespecificidad.Tieneademáslasventajasdeserestableyno
infecciosa.1990L0426—ES—05.06.2003—008.001—19
▼M6
2.1.Procedimiento delaprueba
2.1.1.Fase sólida
2.1.1.1. Recubrir las placas ELISA con proteína VP7 recombinante de
lacepa4delvirus(VPE-4),diluidaensoluciónamortiguadora
de carbonato/bicarbonato, pH 9,6. Incubar las placas toda la
nochea4ºC.
2.1.1.2. Lavar las placas cinco veces con agua destilada que contenga
0,01%(v/v)deTween20(solucióndelavado).Golpearsuave-
mentelasplacascontraunmaterialabsorbenteparaeliminarlos
restosdesolucióndelavadoquepudieranquedar.
2.1.1.3. Bloquear las placas poniendo en cada pocillo 200 µl de solu-
ción salina fosfatada (PBS) + 5 % (p/v) de leche desnatada
(leche desnatada en polvo de NestléTM), y dejar una hora a
37ºC.
2.1.1.4. Eliminar la solución de bloqueo y golpear suavemente las
placascontraunmaterialabsorbente.
2.1.2.Muestras problema
2.1.2.1. Diluirlossuerosproblemaylossueroscontrolpositivoynega-
tivo al 1/25 en PBS+5 % (p/v) de leche desnatada +0,05 %
(v/v) de Tween 20, hasta alcanzar un volumen de 100 µl por
pocillo.Incubarunahoraa37ºC.
Paralatitulación,hacerunaseriededilucionesdoblesdesde1/
25 (100 µl por pocillo), un suero por columna de la placa, y
hacer la misma operación con los controles positivos y nega-
tivos.Incubarduranteunahoraa37ºC.
2.1.2.2. Lavarlasplacassiguiendolasindicacionesdelpunto2.1.1.2.2.1.3.Conjugado
2.1.3.1. Poner en cada pocillo 100 µl de gammaglobulina anti-caballo
conjugada con peroxidasa de rábano diluida en PBS+ 5 % de
leche+0,05%deTween20,pH7,2.Incubarduranteunahora
a37ºC.
2.1.3.2. Lavarlasplacassiguiendolasindicacionesdelpunto2.1.1.2.2.1.4.Cromógeno/sustrato
2.1.4.1. Añadiracadapocillo200 µldesolucióndecromógeno/sustrato
[10 ml de solución 80,6 mM de DMAB (dimetil-
aminobenzaldehído) + 10 ml de solución 1,56 mM de MBTH
(clorhidrato3-metil-2-benzotiazolina-hidrazona) +5 µlH
2O2].
Laformacióndecolorsedetieneañadiendo50 µldeH2SO43N
trasunoscincoodiezminutosaproximadamente (antesdeque
elcontrolnegativocomienceatomarcolor).
PuedenutilizarsetambiénotroscromógenoscomoABTS(ácido
2,2'-azino-bis-[3-etilbenzotiazolina-6-sulfónico]), TMB (tetra-
metil-bencidina)uOPD(orto-fenildiamina).
2.1.4.2. Leerlasplacasa600nm(o620nm).
2.2.Interpretacióndelosresultados
2.2.1. Calcular el valor del punto de corte añadiendo 0,6 al valor del
controlnegativo(0,6esladesviacióntípicaderivadadeungrupo
de30suerosnegativos).
2.2.2. Las muestras problema que presenten valores de absorbancia
inferioresalpuntodecorteseconsiderannegativas.
2.2.3. Las muestras problema que presenten valores de absorbancia
superioresalpuntodecorte+0,15seconsideranpositivas.
2.2.4. Las muestras problema que presenten valores de absorbancia
intermedios sondudosas,porlo quedebe emplearse otra técnica
paraconfirmarelresultado.
3. TÉCNICA ELISA DE BLOQUEO PARA LA DETECCIÓN DE ANTI-
CUERPOS CONTRA EL VIRUS DE LA PESTE EQUINA (VPE)
(PRUEBARECOMENDADA)
La técnica ELISA de bloqueo tiene como finalidad detectar anticuerpos
específicoscontraelvirusdelapesteequinaensuerosprocedentesdecual-1990L0426—ES—05.06.2003—008.001—20
▼M6
quierespeciesusceptible.LaVP7eslaprincipalproteínaantigénicadelvirus
delapesteequinayesconstanteenlosnueveserotipos.Teniendoencuenta
que el anticuerpo monoclonal también va dirigido contra la VP7, el ensayo
presenta un alto nivel de sensibilidad y especificidad. Además, el antígeno
VP7 recombinante es completamente inocuo, por lo que garantiza un alto
niveldeseguridad.
El principio de la prueba es la interrupción de la reacción entre la proteína
VP7 recombinante, como antígeno adsorbido a la placa ELISA, y el anti-
cuerpo monoclonal conjugado específico de la VP7. Los anticuerpos del
sueroproblemabloqueanlareacciónentreelantígenoyelanticuerpomono-
clonal,loquesematerializaenunareduccióndelcolor.
Lapruebaquesedescribeacontinuación eslaqueutilizaelLaboratoriode
referenciadelaComunidadEuropeaparalapesteequinadeAlgete(España).
3.1.Procedimiento delaprueba
3.1.1.Placas ELISA
3.1.1.1. Recubrir las placas con proteína VP7 recombinante de VPE-4
diluida en solución amortiguadora de carbonato/bicarbonato,
pH9,6.Incubartodalanochea4ºC.
3.1.1.2. Lavarlasplacascincovecesconsoluciónsalinaamortiguadora
fosfatada (PBS) que contenga 0,05 % (v/v) de Tween 20
(PBST).
3.1.1.3. Estabilizarlaplacamediantetratamientoconunasoluciónesta-
bilizadora(paraprolongareltiempodealmacenamiento a4ºC
sinpérdidadeactividad).Secarsobrematerialabsorbente.
3.1.2.Muestras problema y controles
3.1.2.1. Paraladetección: Diluir los sueros problema y los controles
al1/10directamente enlaplaca conPBST
hasta alcanzar un volumen final de 100 µl
porpocillo.Incubarunahoraa37ºC.
3.1.2.2. Paralatitulación: Preparar una serie de diluciones dobles de
lossuerosproblemaydeloscontrolesposi-
tivos (100 µl por pocillo) desde 1/10 hasta
1/1280, en ocho pocillos. El control nega-
tivoseanalizaaladilución1/10.
3.1.3.Conjugado
Añadir previamente diluido 50 µl por pocillo de anticuerpo
monoclonal específico de VP7 conjugado con peroxidasa de
rábano a cada uno de los pocillos y agitar suavemente para
asegurarlahomogeneidad.Incubartreintaminutosa37ºC.
3.1.4. LavarlasplacascincovecesconPBSTysecarcomoseindica
arriba.
3.1.5.Cromógeno/sustrato
Añadiracadapocillo100 µldesolucióndecromógeno/sustrato
[1 ml de ABTS (ácido 2,2'-azino-bis-[3-etilbenzotiazolina-6-
sulfónico]) 5 mg/ml + 9 ml de solución amortiguadora de
sustrato (0,1 M de solución amortiguadora fosfato/citrato de
pH 4 que contenga 0,03 % H2O2) e incubar durante diez
minutosatemperaturaambiente.Detenerlaformacióndecolor
añadiendo100 µl/pocillodeSDS(dodecil-sulfatosódico)al2%
(p/v).
3.1.6.Lectura
Leerlosresultadosa405nmenunlectorELISA.
3.2.Interpretacióndelosresultados
3.2.1.Validación del ensayo
La prueba es válida cuando la densidad óptica (DO) del control
negativo (CN) es superior a 1,0 y la densidad óptica del control
positivo(CP)esinferiora0,2.
3.2.2.Cálculo del punto de corte
Valordelpuntodecortepositivo = CN-((CN-CP)×0,3)
Valordelpuntodecortenegativo = CN-((CN-CP)×0,2)1990L0426—ES—05.06.2003—008.001—21
▼M6
CNesladensidadópticadelcontrolnegativoyCPesladensidad
ópticadelcontrolpositivo.
3.2.3.Interpretación de los resultados
Lasmuestrasconunadensidadóptica inferioralvalordelpunto
decortepositivodebenconsiderarsepositivasparaanticuerposdeVPE.
Lasmuestrasconunadensidadópticasuperioralvalordelpunto
de corte negativo deben considerarse negativas para anticuerpos
deVPE.
Las muestras con una densidad óptica situada entre estos dos
valores deben considerarse dudosas, por lo que se deben volver
atomarmuestrasdelosanimalesdedosatressemanasdespués.1990L0426—ES—05.06.2003—008.001—22