1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—1
Estedocumentoesuninstrumentodedocumentaciónynocomprometelaresponsabilidaddelasinstituciones
►B REGLAMENTO(CEE)No2676/90DELACOMISIÓN
de17deseptiembrede1990
porelquesedeterminanlosmétodosdeanálisiscomunitariosaplicablesenelsectordelvino
(DOL272de3.10.1990,p.1)
Modificadopor:
DiarioOficial
nopágina fecha
►M1Reglamento (CEE) no2645/92 de la Comisión de 11 de septiembre de
1992L266 10 12.9.1992
►M2Reglamento(CE)no60/95delaComisiónde16deenerode1995 L11 19 17.1.1995
►M3Reglamento(CE)no69/96delaComisiónde18deenerode1996 L14 13 19.1.1996
►M4Reglamento(CE)no822/97delaComisiónde6demayode1997 L117 10 7.5.1997
►M5Reglamento(CEE)no2348/91delaComisiónde29dejuliode1991 L214 39 2.8.1991
►M6modificado por el Reglamento (CE) no1932/97 de la Comisión de 3
deoctubrede1997L272 10 4.10.1997
►M7Reglamento(CE)no761/1999delaComisiónde12deabrilde1999 L99 4 14.4.1999
▼B
REGLAMENTO(CEE)No2676/90DELACOMISIÓN
de17deseptiembrede1990
porelquesedeterminanlosmétodosdeanálisiscomunitariosapli-
cablesenelsectordelvino
LACOMISIÓNDELASCOMUNIDADESEUROPEAS,
VistoelTratadoconstitutivodelaComunidadEconómicaEuropea,
VistoelReglamento(CEE)no822/87delConsejo,de16demarzode
1987,porelqueseestablecelaorganización comúndelmercadoviti-vinícola(
1), modificado por el Reglamento (CEE) no388/90(2), y, en
particular,suartículo74,
Considerandoqueelapartado1delartículo74delReglamento (CEE)
no822/87 dispone la adopción de métodos de análisis que permitan
determinarlacomposicióndelosproductosmencionadosenelartículo1deesteReglamento ydelasnormasquepermitanestablecer sitalesproductos han sido sometidos a tratamientos que infrijan las prácticasenológicasautorizadas;
Considerandoque,sibienlaComunidadnohaestablecido todavíalos
límites,encifras,deloselementospresentescaracterísticos delautili-zación de determinadas prácticas enológicas, ni las tablas para lacomparación de los datos analíticos, procede autorizar a los Estadosmiembrosadeterminarloslímites;
Considerandoqueelapartado1delartículo13delReglamento (CEE)
n
o822/87prevéunexamenanalíticoquedetermine,comomínimo,los
valores de loselementos característicos del vcprd de que se trate, quefigurenentrelosenumeradosenelAnexodeesteReglamento;
Considerando que, para controlar las indicaciones recogidas en los
documentosrelativosalosproductosdequesetrate,esnecesarioesta-
blecer métodos de análisis uniformes que garanticen la obtención de
datos precisos y comparables; que, en consecuencia, tales métodosdebenserobligatoriosparacualquiertransaccióncomercialycualquieroperacióndecontrol;que,habidacuentadelasposibilidadeslimitadasdelcomercio,esconvenienteadmitirunnúmerorestringidodeprocedi-
mientos usuales que permitan una determinación rápida y
suficientementeseguradeloselementosinvestigados;
Considerandoqueespertinenteseleccionar,enlamedidadeloposible,
aquellosmétodosquegocendereconocimientogeneral,comolosdesa-rrollados en el marco del Convenio internacional de 1954 para launificación de los métodos de análisis y evaluación de vinos, publi-
cados por la Oficina Internacional de la Viña y el Vino en la
Recopilacióndemétodosinternacionalesdeanálisisdevinos;
Considerandoquelosmétodosdeanálisiscomunitariosaplicablesenel
sectordelvinohansidoestablecidosporelReglamento(CEE)n
o1108/
82 de la Comisión(3); que el progreso científico ha hecho necesario
sustituir determinados métodos por otros más adecuados, modificar
algunoseintroducirotrosnuevos,enparticularlosquedesdeentonceshansidoaprobadosporlaOficina Internacional de laViñayelVino;queporrazón del grannúmero ycomplejidad dedichas adaptaciones,es conveniente agrupar todos los análisis en un nuevo reglamento yderogarelReglamento(CEE)n
o1108/82;
Considerandoque,paragarantizarquelosresultadosobtenidosenapli-
cación de los métodos de análisis mencionados en el artículo 74 delReglamento(CEE)n
o822/87soncomparables,esconvenienteatenerse,
respecto alarepetibilidad yreproductibilidad deesosresultados,alasdefinicionesdelaOficinaInternacionaldelaViñayelVino;1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—2
(1)D OnoL84de27.3.1987,p.1.
(2)D OnoL42de16.2.1990,p.9.
(3)D OnoL133de14.5.1982,p.1.
▼B
Considerando que, a fin de tener en cuenta el progreso científico, por
unlado, yel material técnico de loslaboratorios oficiales, porotro, ypara queel trabajo deestoslaboratorios resulte máseficaz yrentable,
procedepermitirlaaplicacióndemétodosdeanálisisautomatizadosen
determinadas condiciones; que es importante precisar que en caso delitigio losmétodos automatizados nopodrán reemplazar a losde refe-rencianialosusuales;
Considerando que los resultados de la medición de la densidad
mediante el método automatizado basado en el principio de un reso-
nador de flexión son, en cuanto a su exactitud, repetibilidad yreproductibilidad, iguales por lo menos a los resultados obtenidos conlos métodos que figuran en el punto 1 del Anexo del presente Regla-mento, para medir la masa volúmica o la densidad relativa; que, en
virtuddelodispuestoenelapartado3delartículo74delReglamento
(CEE)n
o822/87,resulta,pues,indicadoconsiderarelmétodoautoma-
tizado como equivalente a los que figuran en el Anexo del presenteReglamento;
Considerando que el procedimiento descrito en el capítulo 25 en el
punto 2.2.3.3.2 del Anexo del presente Reglamento para analizar el
contenido endióxidodeazufre total delosvinosydelosmostosconuncontenidoestimadodemenosde50mg/lproduceunamejorextrac-cióndeestasustanciaqueelprocedimiento descritoenelcapítulo13,punto13.4delAnexodelReglamento(CEE)n
o1108/82;quedalugar
a resultado más elevado en dióxido de azufre total de los productos
analizados quepueden sobrepasar, especialmente enelcasodeciertos
zumos de uvas; que a fin de evitar dificultades para la circulación deloszumosdefrutayaelaboradosenelmomentodelaentradaenvigordelpresenteReglamentoyenesperaquelosprocedimientosdeelabo-ración se adaptasen para conseguir una desulfitación más completa de
los mostos de uva apagados, es necesario permitir durante un período
transitorio que el modo operatorio descrito en el Reglamento antesmencionadoseutilicetodavía;
Considerando que las medidas previstas en el presente Reglamento se
ajustanaldictamendelComitédegestióndelvino,
HAADOPTADOELPRESENTEREGLAMENTO:
Artículo 1
1. Figuran en el Anexo del presente Reglamento los métodos de
análisiscomunitarios aplicables enelsectordelvinoquepermiten, enlastransaccionescomercialesyencualquieroperacióndecontrol:
— establecer la composición de los productos contemplados en el
artículo1delReglamento(CEE)n
o822/87,
— comprobarsitalesproductoshansidosometidosatratamientosque
infrinjanprácticasenológicasautorizadas.
2. Cuandoseestablezcan métodosdereferencia ymétodosusuales,
losresultadosobtenidosconlosprimerosseránlosqueprevalezcan.
Artículo 2
ParalaaplicacióndelpresenteReglamento:
a) Larepetibilidadrepresentaelvalorpordebajodelcualestásituado,
conunaprobabilidadespecificada,elvalorabsolutodeladiferencia
de dos resultados individuales obtenidos a partir de medidas efec-tuadas en las mismas condiciones (mismo operador, mismoaparato,mismolaboratorioyuncortointervalodetiempo).
b) La reproductibilidad representa el valor por debajo del cual está
situado, con una probabilidad especificada, el valor absoluto de ladiferencia de dos resultados individuales obtenidos en condicionesdiferentes (operadores diferentes, aparatos diferentes y/o laborato-riosdiferentes,y/oépocasdiferentes).1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—3
▼B
Eltérmino«resultadoindividual»eselvalorobtenidocuandoseaplica,
una vez y por completo, el método de ensayo normalizado sobre unasolamuestra.
Enausenciadeindicaciónlaprobabilidadesdel95%.
Artículo 3
1. Seadmitiránmétodosdeanálisisautomatizados,bajolaresponsa-
bilidad del director de laboratorio, a condición de que la exactitud, la
repetibilidadylareproductibilidaddelosresultadosseanporlomenosequivalentes a las de los obtenidos mediante los métodos de análisisquefiguranenelAnexo.
Encasodelitigio,losmétodosquefiguranenelAnexonopodránser
sustituidosporlosmétodosautomatizados.
2. El método automatizado para medir la densidad basado en el
principio de un resonador de flexión se considerará como equivalente
alosmétodosquefiguranenelpunto1delAnexodelpresenteRegla-
mento.
Artículo 4
Cuando se haga referencia al agua para las soluciones, diluciones o
lavados, se tratará de agua destilada o desmineralizada de pureza almenos equivalente. Todos los productos deberán ser de calidad analí-tica,salvoqueseespecifiqueotracosa.
Artículo 5
QuedaderogadoelReglamento(CEE)n
o1108/82.
No obstante, el apartado 4 del artículo 1 del Reglamento antes citado
esaplicablehastael31dediciembrede1990.
Artículo 6
ElpresenteReglamentoentraráenvigoreldíadesupublicaciónenel
Diario Oficial de las Comunidades Europeas .
Seráaplicableapartirdel1deoctubrede1990.
El presente Reglamento será obligatorio en todos sus elementos y
directamenteaplicableencadaEstadomiembro.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—4
▼B
ANEXO
1.MASAVOLÚMICAA20ºCYDENSIDADRELATIVAA20ºC
1. DEFINICIONES
La masa volúmica es el cociente de la masa de un determinado
volumen de vino o mosto a 20 ºC por ese volumen. Se expresa en
gramospormililitroysusímboloes ρ′20ºC.
Ladensidadrelativa a20ºCodensidad20ºC/20ºCeslarelación,
expresadaennúmerodecimal,entrelamasadeunciertovolumende
vinoodemostoa20ºCylamasadelmismovolumendeaguaala
mismatemperatura.Susímboloesd20ºC20ºC.
2. FUNDAMENTODELOSMÉTODOS
Lamasavolúmicayladensidadrelativaa20ºCsedeterminanenla
muestradeensayo:
bienporpicnometría:métododereferencia,
bienporareometríaodensimetríaconbalanzahidrostática:métodos
usuales.
Nota:
En determinaciones muy precisas, debe corregirse la acción del
dióxidodeazufresobrelamasavolúmica:
ρ2 0ºC= ρ′20ºC−0.006·S,
ρ2 0ºC = masavolúmicacorregida,
ρ′20ºC = masavolúmicaobservada,
S = dióxidodeazufretotaleng/l.
3. TRATAMIENTOPREVIODELAMUESTRA
Sielvinooelmostocontienecantidadesimportantesdedióxidode
carbono,eliminarlamayorcantidadposibleagitando250mldevino
en un enienmeyer 1000 ml o filtrando a baja presión sobre 2 g de
algodóncolocadoenunsoporte.
4. MÉTODODEREFERENCIA4.1.Material
Materialcorrientedelaboratorio,yenparticular:
4.1.1. Picnómetro(
1),devidriopyrex,conunacapacidad de100mlapro-
ximadamente y termómetro móvil con esmerilado, graduado en
décimas de grado, de 10 º a 30 ºC. Este termómetro debe estar
contrastado(figura1).1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—5
(1) Puedeutilizarsecualquierpicnómetrodecaracterísticas equivalentes.
▼B
FIGURA 1
Picnómetroysufrascotara
Este picnómetro consta de un tubo lateral de 25 mm de longitud y
1 mm, como máximo, de diámetro interior, terminado en una parte
cónicaesmerilada.Eltubolateralpuedeestarcubiertoporun«tapón
receptor» constituido por un tubo cónico esmerilado terminado en
unaparteafilada.Dichotapónsirvedecámaradedilatación.
Las dos partes esmeriladas del aparato deben estar realizadas con
grancuidado.
4.1.2. Frascotara,delmismovolumenexterior(conunaaproximaciónde1
ml)queelpicnómetroydemasaigualaladelpicnómetrollenode
líquidodedensidad1,01(soluciónal2%(m/v)declorurosódico).
Recipiente termostatado que se ajuste exactamente al cuerpo del
picnómetro.
4.1.3. Balanzadedosplatosdeunacapacidadde300gporlomenosyuna
sensibilidaddeunadécimademiligramo,
obalanza monoplato de una capacidad de 200 g por lo menos y una
sensibilidaddeunadécimademiligramo.
4.2.Calibradodelpicnómetro
El calibrado del picnómetro supone la determinación de las carac-
terísticassiguientes:
— lataraenvacío,
— elvolumena20ºC,— lamasadelaguaa20ºC.
4.2.1.Utilizacióndeunabalanzadedosplatos
Poner el frasco tara en el plato izquierdo de la balanza y el picnó-
metro limpio, seco y con su «tapón receptor» en el plato derecho,
equilibrar colocando al lado del picnómetro masas conocidas de p
gramos.
Llenar con cuidado el picnómetro con agua destilada a temperatura
ambiente y colocar el termómetro; secar cuidadosamente el picnó-
metro y colocarlo dentro del recipiente termostatado; agitar por
inversiónhastaqueeltermómetroseñaleunatemperaturaconstante.
Enrasar exactamente hasta el borde superior del tubo lateral. Secar
dicho tubo, colocar el tapón receptor; leer la temperatura t ºC con
cuidadoy,ensucaso,corregirlainexactituddelaescaladeltermó-
metro. Pesar el picnómetro lleno de agua; se denominará p' a la
masaengramoscomlaqueseconsigueelequilibrio.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—6
▼B
Cálculos(1)
Taradelpicnómetrovacío:Taraenvacío=p+mm = masadeairecontenidaenelpicnómetro
m= 0,0012(p−p ′)
Volumena20ºC:
V
20ºC=(p+m−p ′)·Ft
Ft= factortomadodelatablaIparalatemperaturatºC
V20ºCdebeconocerseconunaaproximaciónde±0,001ml.
Masadeaguaa20ºC:
M20ºCV20ºC·0,998203
0,998203 = masavolúmicadelaguaa20ºC.
4.2.2. Utilizacióndeunabalanzamonoplato
Determinar:
— lamasadelpicnómetrolimpioyseco:P,
— la masa del picnómetro lleno de agua a t º C: P1, siguiendo las
indicacionesquefiguranen4.2.1,
— lamasadelfrascotaraTo.
Cálculos(1)
Taradelpicnómetrovacío:
Taraenvacío=P−mm = masadeairecontenidaenelpicnómetro
m= 0,0012(P
1−P)
Volumena20ºC:
V20ºC=[P1−(P−m)].Ft
Ft= factortomadodelatablaIparalatemperaturatºC
El volumen a 20 º C debe conocerse con una aproximación de
±0,001ml.
Masadeaguaa20ºC:M
20ºC−V20ºC·0,998203
0,998203 = masavolúmicadelaguaa20ºC.
4.3.Procedimiento (1)
4.3.1.Utilización de una balanza de dos platos
Pesarelpicnómetrollenodelamuestrapreparadaparaelensayo(3)
siguiendo las indicaciones que figuran en 4.2.1. Sea p“ la masa en
gramosconlaqueseconsigueelequilibrioatºC.
Masadellíquidocontenidoenelpicnómetro=p+m−p“.
MasavolúmicaaparenteatºC:
ρtºC¼pþm/C0p00
V20ºC
Calcular la masa volúmica a 20 º C utilizando una de las tablas de
corrección que figuran a continuación, en función de la naturaleza
del líquido estudiado: vino seco (tabla II), mosto natural o concen-
trado(tablaIII),vinodulce(tablaIV).
La densidad 20º C/ 20 º C del vino se expresa dividiendo la masa
volúmicaa20ºCpor0,998203.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—7
(1) Enelpunto6deestecapítulofiguraunejemplonumérico.
▼B
4.3.2.Utilización de una balanza monoplato (1)
Pesarelfrascotara;seasumasaT1
CalculardT=T1−To
Masadelpicnómetrovacíoenelmomentodelamedida=P−m+
dT
Pesar el picnómetro lleno de la muestra preparada para ensayo
siguiendo las indicaciones que figuran en 4.2.1. Sea P2su masa a t
ºC.
MasadellíquidocontenidoenelpicnómetroatºC=P2−(P−m+
dT)
MasavolúmicaaparenteatºC:
ρtºC¼P2/C0P/C0mþdT ðÞ
V20ºC
Calcularlamasavolúmicaa20ºCdellíquidoestudiado:vinoseco,
mosto natural o concentrado y vino dulce, tal como se indica en
4.3.1.
Ladensidad20ºC/20ºCseobtienedividiendolamasavolúmicaa
20ºCpor0,998203.
4.3.3. Repetibilidadenlamasavolúmica
Para-losvinossecosysemisecos:r=0,00010
Paralosvinosdulces:r=0,00018
4.3.4. Reproductibilidadenlamasavolúmica
Paralosvinossecosysemisecos:R=0,00037
Paralosvinosdulces:R=0,00045
5. Métodosusuales
5.1.Areometría
5.1.1.Aparatos
5.1.1.1. Areómetro
Los areómetros deben cumplir las prescripciones de la ISO en
cuantoasusdimensionesygraduación.
Deben tener un cuerpo cilíndrico y un tallo de sección circular de
3mmdediámetro,comomínimo.Paralosvinossecos,debenestar
graduados de 0,983 a 1,003 en milésimas y 1/5 de milésima. Entre
una milésima y la milésima siguiente debe haber, como mínimo,
5 mm. Para medir la densidad de los vinos desalcoholizados, vinos
dulcesymostos,seutilizaráunjuegode5areómetrosgraduadosde
1,000a1,030;1,030a1,060;1,060a1,090;1,090a1,120;1,120a
1,150. Estos aparatos deben estar graduados en masas volúmicas a
20 º C, en milésimas y medias milésimas, como mínimo, estando
separadacadamilésimadelasiguientepor3mmporlomenos.
Estos areómetros deben estar graduados de forma que la lectura se
efectúe en «la parte superior del menisco». La indicación de la
graduaciónenmasavolúmicaa20ºCoendensidadrelativaa20º
Cydelalecturaenla«partesuperiordelmenisco»seindicará,bien
sobrelaescalagraduadaobienconunabandadepapelqueiráenel
interiordelcuerpocilíndrico.
Estosaparatosdebenestarcontrastadosporunserviciooficial.
5.1.1.2. Termómetro contrastado, graduado de medio grado Celsius, como
mínimo.
5.1.1.3. Probeta cilíndrica de 36 mm de diámetro interior y 320 mm de
altura, mantenida verticalmente mediante un soporte con tornillos
niveladores.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—8
(1) Enelpunto6deestecapítulofiguraunejemplonumérico.
▼B
5.1.2.Procedimiento
5.1.2.1. Técnica de una medida
Verter, en la probeta 5.1.1.3, 250 ml de muestra preparada para el
ensayo (3),introducir el areómetro y el termómetro. Leer el termó-
metrounminutodespuésdehaberagitadoparaobtenerelequilibrio
de temperatura. Retirar el termómetro y leer la masa volúmica
aparente a t º C sobre el tallo del areómetro tras un minuto de
reposo.
Corregir la acción de la temperatura sobre la masa volúmica
aparente a t º C mediante las tablas que se aplican en los casos de
vinos secos (tabla V), mostos (tabla VI) y vinos que contienen
azúcar(tablaVII).
Ladensidad20ºC/20ºCseobtienedividiendolamasavolúmicaa
20ºCpor0,998203.
5.2.Densimetríaconbalanzahidrostática
5.2.1.Material
5.2.1.1.BalanzahidrostáticaLabalanza hidrostática, de unacapacidad máxima de 100g,porlo
menos,debetenerunasensibilidaddeunadécimademg.
Debajodecadaplatosefijaunflotadordevidriopyrexquetengaun
volumen de 20ml, como mínimo. Estosdosflotadores idénticos se
suspendendeunhilodediámetroinferioroiguala0,1mm.
El flotador suspendido debajo del plato de la derecha debe poder
introducirseenunaprobetacilíndrica quelleveunamarcadenivel.
Dicha probeta debe tener un diámetro interior superior en 6 mm,
como mínimo, al del flotador. Este último debe poder introducirse
por completo en el volumen de la probeta situada debajo de la
marca, debiendo atraversar la superficie del líquido únicamente elhilo de suspensión. La temperatura del líquido contenido en la
probeta se medirá mediante un termómetro graduado en 1/5 de
grado.
Unabalanzahidrostáticamonoplatopuedeigualmenteserutilizada.
5.2.2.Procedimiento
5.2.2.1. Calibrado de una balanza hidrostática
Con los dos flotadores suspendidos, se equilibra la balanza colo-
candosobreelplatodeladerechalasmasasp.
Sellenalaprobetadeaguapurahastalamarca,semidelatempera-
turatºCdespuésdeagitarysedejareposardurante2o3minutos.
Serestableceelequilibriomediantemasasquesecolocanenelplato
deladerecha;sedenominaráp'aestasmasas.
Volumendelflotadora20ºC:
V
20ºC=(p'−p)(F+0,0012)
F = factordadoporlatablaIparalatemperaturatºC.
pyV20sonlascaracterísticasdelflotador.
5.2.2.2. Procedimiento
Elflotador deladerecha sesumergeenlaprobeta llena devino(o
demosto)hastalamarca.LeerlatermperaturatºCdelvino(odel
mosto);sean:
p“lasmasasquerestablecenelequilibrio,
ρtºClamasavolúmicaaparente:
ρtºC¼p00/C0p ðÞ
Vþ0;0012
Referirestamasavolúmica a20ºCutilizandounadelastablasII,
IIIoIV.
6. Ejemplo decálculo dela masavolúmica a20ºCydeladensidad
20ºC/20ºC(métododereferencia)1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—9
▼B
6.1.Picnometríaconbalanzadedosplatos
6.1.1.Determinación de las constantes del picnómetro
1. Pesadadelpicnómetrolimpioyseco:
Tara = picnómetro+p
p = 104,9454g
2. PesadadelpicnómetrollenodeaguaalatemperaturatºC:
Tara = picnómetro+agua+p'
p' = 1,2396gparat=20,5ºC.
3. Cálculodelamasadeairecontenidaenelpicnómetro:
m= 0,0012(p−p ′)
m= 0,0012(104,9454−1,2396)m= 0,1244g.
4. Característicasquedebenanotarse
Taradelpicnómetrovacío,p+m:
p+m= 104,9454+0,1244
p+m= 105,0698g
Volumena20ºC=(p+m−p ′)·F
tºC
F20,50ºC= 1,001900
V20ºC= (105,0698−1,2396)·1,001900
V20ºC= 104,0275ml
Masadelaguaa20ºC=V20ºC·0,998203
M20ºC=103,8405g.
6.1.2.Determinación de la masa volúmica a 20 º Cy de la densidad 20 º
C/20 º C de un vino seco:
p″=1,2622a17,80ºC
ρ17;80ºC¼105 ;0698 /C01;2622
104 ;0275
ρ17,80ºC=0,99788g/ml
La tabla II permite calcular ρ20 ºCa partir de ρtº Cmediante la rela-
ción:
ρ20ºC¼ρtºC±c
1000
Para t = 17,80 ºC y para un grado alcohólico de 11 % vol se
encuentrac=0,54
ρ20ºC¼0;99788 /C00;54
1000
ρ20ºC=0,99734g/ml
d20ºC
20ºC¼0;99734
0;998203¼0;99913
6.2.Picnometríaconbalanzamonoplato
6.2.1.Determinación de las constantes del picnómetro
1. Pesadadelpicnómetrolimpioyseco:
P=67,7913g1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—10
▼B
2. PesadadelpicnómetrollenodeaguaalatemperaturatºC:
P1=169,2715a21,65ºC.
3. Cálculodelamasadeairecontenidaenelpicnómetro:
m= 0,0012(P1−P)
m= 0,0012×101,4802m= 0,1218g
4. Característicasquedebenanotarse
Taradelpicnómetrovacío:P−m
P−m= 67,7913−0,1218
P−m= 67,6695g
Volumena20ºC=[P
1−(P−m)]FtºC
F21,65ºC= 1,002140
V20ºC= (169,2715−67,6695)·1,002140
V20ºC= 101,8194ml
Masadelaguaa20ºC=V20ºC·0,998203
M20ºC=101,6364g
Masadelfrascotara:To
To=171,9160g.
6.2.2.Determinacióndelamasavolúmica a20ºCydeladensidad20ºC/
20 ºCde un vino seco:
T1=171,9178g
dT=171,9178−171,9160=+0,0018g
P−m+dT=67,6695+0,0018=67,6713g
P2=169,2799a18ºC
ρ18ºC¼169 ;2799 /C067;6713
101 ;8194
ρ18ºC=0,99793g/ml
La Tabla II permite calcular ρ2 0ºC a partir de ρtº Cmediante la
relación
ρ20ºC¼ρtºC±c
1000
Parat=18ºCyparaungradoalcohólicode11%vol,seencuentra
c=0,49
ρ20ºC¼0;99793 /C00;49
1000
ρ20ºC=0,99744g/ml
d20ºC
20ºC¼0;99744
0;998203¼0;999231990R2676—ES—21.04.1999—006.001—11
▼B
TABLAI
TabladefactoresF
porlosquehayquemultiplicar lamasadelaguacontenida enelpicnómetro devidriopyrexatºC,
paracalcularelvolumendelpicnómetroa20ºC
tºC F tºC F tºC F tºC F tºC F tºC F tºC F
10,0 1,000398 13,0 1,000691 16,0 1,001097 19,0 1,001608 22,0 1,002215 25,0 1,002916 28,0 1,003704
,1 1,000406 ,1 1,000703 ,1 1,001113 ,1 1,001627 ,1 1,002238 ,1 1,002941 ,1 1,003731
,2 1,000414 ,2 1,000714 ,2 1,001128 ,2 1,001646 ,2 1,002260 ,2 1,002966 ,2 1,003759
,3 1,000422 ,3 1,000726 ,3 1,001144 ,3 1,001665 ,3 1,002282 ,3 1,002990 ,3 1,003787
,4 1,000430 ,4 1,000738 ,4 1,001159 ,4 1,001684 ,4 1,002304 ,4 1,003015 ,4 1,003815
10,5 1,000439 13,5 1,000752 16,5 1,001175 19,5 1,001703 22,5 1,002326 25,5 1,003041 28,5 1,003843
,6 1,000447 ,6 1,000764 ,6 1,001191 ,6 1,001722 ,6 1,002349 ,6 1,003066 ,6 1,003871
,7 1,000456 ,7 1,000777 ,7 1,001207 ,7 1,001741 ,7 1,002372 ,7 1,003092 ,7 1,003899
,8 1,000465 ,8 1,000789 ,8 1,001223 ,8 1,001761 ,8 1,002394 ,8 1,003117 ,8 1,003928
,9 1,000474 ,9 1,000803 ,9 1,001239 ,9 1,001780 ,9 1,002417 ,9 1,003143 ,9 1,003956
11,0 1,000483 14,0 1,000816 17,0 1,001257 20,0 1,001800 23,0 1,002439 26,0 1,003168 29,0 1,003984
,1 1,000492 ,1 1,000829 ,1 1,001273 ,1 1,001819 ,1 1,002462 ,1 1,003194 ,1 1,004013
,2 1,000501 ,2 1,000842 ,2 1,001290 ,2 1,001839 ,2 1,002485 ,2 1,003222 ,2 1,004042
,3 1,000511 ,3 1,000855 ,3 1,001306 ,3 1,001859 ,3 1,002508 ,3 1,003247 ,3 1,004071
,4 1,000520 ,4 1,000868 ,4 1,001323 ,4 1,001880 ,4 1,002531 ,4 1,003273 ,4 1,004099
11,5 1,000530 14,5 1,000882 17,5 1,001340 20,5 1,001900 23,5 1,002555 26,5 1,003299 29,5 1,004128
,6 1,000540 ,6 1,000895 ,6 1,001357 ,6 1,001920 ,6 1,002578 ,6 1,003326 ,6 1,004158
,7 1,000550 ,7 1,000909 ,7 1,001374 ,7 1,001941 ,7 1,002602 ,7 1,003352 ,7 1,004187
,8 1,000560 ,8 1,000923 ,8 1,001391 ,8 1,001961 ,8 1,002625 ,8 1,003379 ,8 1,004216
,9 1,000570 ,9 1,000937 ,9 1,001409 ,9 1,001982 ,9 1,002649 ,9 1,003405 ,9 1,004245
12,0 1,000580 15,0 1,000951 18,0 1,001427 21,0 1,002002 24,0 1,002672 27,0 1,003432 30,0 1,004275
,1 1,000591 ,1 1,000965 ,1 1,001445 ,1 1,002023 ,1 1,002696 ,1 1,003458
,2 1,000601 ,2 1,000979 ,2 1,001462 ,2 1,002044 ,2 1,002720 ,2 1,003485
,3 1,000612 ,3 1,000993 ,3 1,001480 ,3 1,002065 ,3 1,002745 ,3 1,003513
,4 1,000623 ,4 1,001008 ,4 1,001498 ,4 1,002086 ,4 1,002769 ,4 1,003540
12,5 1,000634 15,5 1,001022 18,5 1,001516 21,5 1,002107 24,5 1,002793 27,5 1,003567
,6 1,000645 ,6 1,001037 ,6 1,001534 ,6 1,002129 ,6 1,002817 ,6 1,003594
,7 1,000656 ,7 1,001052 ,7 1,001552 ,7 1,002151 ,7 1,002842 ,7 1,003621
,8 1,000668 ,8 1,001067 ,8 1,001570 ,8 1,002172 ,8 1,002866 ,8 1,003649
,9 1,000679 ,9 1,001082 ,9 1,001589 ,9 1,002194 ,9 1,002891 ,9 1,0036761990R2676—ES—21.04.1999—006.001—12
▼B
TABLAII
Tabladecorreccionescdetemperaturasobrelamasavolúmicadevinossecosyvinossecosenlosqueseha
eliminadoelalcohol,medidaenunpicnómetrodevidriopyrexatºCparareferirelresultadoa20ºC
ρ20¼ρt±c
1000−sitºesinferiora20ºC
+sitºessuperiora20ºC
Gradosalcohólicos
0567891 0 1 1 1 2 1 3 1 4 1 5 1 6 1 7 1 8 1 9 2 0 2 1 2 2 2 3 2 4 2 5 2 6 2 7Temperaturas ºC10 1,59 1,64 1,67 1,71 1,77 1,84 1,91 2,01 2,11 2,22 2,34 2,46 2,60 2,73 2,88 3,03 3,19 3,35 3,52 3,70 3,87 4,06 4,25 4,44
11 1,48 1,53 1,56 1,60 1,64 1,70 1,77 1,86 1,95 2,05 2,16 2,27 2,38 2,51 2,63 2,77 2,91 3,06 3,21 3,36 3,53 3,69 3,86 4,03
12 1,36 1,40 1,43 1,46 1,50 1,56 1,62 1,69 1,78 1,86 1,96 2,05 2,16 2,27 2,38 2,50 2,62 2,75 2,88 3,02 3,16 3,31 3,46 3,61
13 1,22 1,26 1,28 1,32 1,35 1,40 1,45 1,52 1,59 1,67 1,75 1,83 1,92 2,01 2,11 2,22 2,32 2,44 2,55 2,67 2,79 2,92 3,05 3,18
14 1,08 1,11 1,13 1,16 1,19 1,23 1,27 1,33 1,39 1,46 1,52 1,60 1,67 1,75 1,84 1,93 2,03 2,11 2,21 2,31 2,42 2,52 2,63 2,74
15 0,92 0,96 0,97 0,99 1,02 1,05 1,09 1,13 1,19 1,24 1,30 1,36 1,42 1,48 1,55 1,63 1,70 1,78 1,86 1,95 2,03 2,12 2,21 2,3016 0,76 0,79 0,80 0,81 0,84 0,86 0,89 0,93 0,97 1,01 1,06 1,10 1,16 1,21 1,26 1,32 1,38 1,44 1,51 1,57 1,64 1,71 1,78 1,85
17 0,59 0,61 0,62 0,63 0,65 0,67 0,69 0,72 0,75 0,78 0,81 0,85 0,88 0,95 0,96 1,01 1,05 1,11 1,15 1,20 1,25 1,30 1,35 1,40
18 0,40 0,42 0,42 0,43 0,44 0,46 0,47 0,49 0,51 0,53 0,55 0,57 0,60 0,63 0,65 0,68 0,71 0,74 0,77 0,81 0,84 0,87 0,91 0,94
19 0,21 0,21 0,22 0,22 0,23 0,23 0,24 0,25 0,26 0,27 0,28 0,29 0,30 0,32 0,33 0,34 0,36 0,37 0,39 0,41 0,42 0,44 0,46 0,47
20
21 0,21 0,22 0,22 0,23 0,23 0,24 0,25 0,26 0,27 0,28 0,29 0,30 0,31 0,32 0,34 0,36 0,37 0,38 0,40 0,41 0,43 0,44 0,46 0,48
22 0,44 0,45 0,46 0,47 0,48 0,49 0,51 0,52 0,54 0,56 0,59 0,61 0,63 0,66 0,69 0,71 0,74 0,77 0,80 0,83 0,87 0,90 0,93 0,97
23 0,68 0,70 0,71 0,72 0,74 0,76 0,78 0,80 0,83 0,86 0,90 0,93 0,96 1,00 1,03 1,08 1,13 1,17 1,22 1,26 1,31 1,37 1,41 1,46
24 0,93 0,96 0,97 0,99 1,01 1,03 1,06 1,10 1,13 1,18 1,22 1,26 1,31 1,36 1,41 1,47 1,52 1,58 1,64 1,71 1,77 1,84 1,90 1,97
25 1,19 1,23 1,25 1,27 1,29 1,32 1,36 1,40 1,45 1,50 1,55 1,61 1,67 1,73 1,80 1,86 1,93 2,00 2,08 2,16 2,24 2,32 2,40 2,4826 1,47 1,51 1,53 1,56 1,59 1,62 1,67 1,72 1,77 1,83 1,90 1,96 2,03 2,11 2,19 2,27 2,35 2,44 2,53 2,62 2,72 2,81 2,91 3,01
27 1,75 1,80 1,82 1,85 1,89 1,93 1,98 2,04 2,11 2,18 2,25 2,33 2,41 2,50 2,59 2,68 2,78 2,88 2,98 3,09 3,20 3,31 3,42 3,53
28 2,04 2,10 2,13 2,16 2,20 2,25 2,31 2,38 2,45 2,53 2,62 2,70 2,80 2,89 3,00 3,10 3,21 3,32 3,45 3,57 3,69 3,82 3,94 4,07
29 2,34 2,41 2,44 2,48 2,53 2,58 2,65 2,72 2,81 2,89 2,99 3,09 3,19 3,30 3,42 3,53 3,65 3,78 3,92 4,05 4,19 4,33 4,47 4,61
30 2,66 2,73 2,77 2,81 2,86 2,92 3,00 3,08 3,17 3,27 3,37 3,48 3,59 3,72 3,84 3,97 4,11 4,25 4,40 4,55 4,70 4,85 4,92 5,17
Nota:Sepuedeutilizarestatablaparatransformarladensidadd20tendensidadd2020.
TABLAIII
Tabladecorreccionescdetemperaturasobrelamasavolúmicademostosnaturalesyconcentradosmedidaat
ºCmedianteunpicnómetrodevidriopyrex,parareferirelresultadoa20ºC
ρ20¼ρt±c
1000−sitºesinferiora20ºC
+sitºessuperiora20ºC
Masasvolúmicas
1,05 1,06 1,07 1,08 1,09 1,10 1,11 1,12 1,13 1,14 1,15 1,16 1,18 1,20 1,22 1,24 1,26 1,28 1,30 1,32 1,34 1,36TemperaturasºC10º 2,31 2,48 2,66 2,82 2,99 3,13 3,30 3,44 3,59 3,73 3,88 4,01 4,28 4,52 4,76 4,98 5,18 5,42 5,56 5,73 5,90 6,05
11º 2,12 2,28 2,42 2,57 2,72 2,86 2,99 3,12 3,25 3,37 3,50 3,62 3,85 4,08 4,29 4,48 4,67 4,84 5,00 5,16 5,31 5,45
12º 1,92 2,06 2,19 2,32 2,45 2,58 2,70 2,82 2,94 3,04 3,15 3,26 3,47 3,67 3,85 4,03 4,20 4,36 4,51 4,65 4,78 4,91
13º 1,72 1,84 1,95 2,06 2,17 2,27 2,38 2,48 2,58 2,69 2,78 2,88 3,05 3,22 3,39 3,55 3,65 3,84 3,98 4,11 4,24 4,36
14º 1,52 1,62 1,72 1,81 1,90 2,00 2,09 2,17 2,26 2,34 2,43 2,51 2,66 2,82 2,96 3,09 3,22 3,34 3,45 3,56 3,67 3,76
15º 1,28 1,36 1,44 1,52 1,60 1,67 1,75 1,82 1,89 1,96 2,04 2,11 2,24 2,36 2,48 2,59 2,69 2,79 2,88 2,97 3,03 3,10
16º 1,05 1,12 1,18 1,25 1,31 1,37 1,43 1,49 1,55 1,60 1,66 1,71 1,81 1,90 2,00 2,08 2,16 2,24 2,30 2,37 2,43 2,49
17º 0,80 0,86 0,90 0,95 1,00 1,04 1,09 1,13 1,18 1,22 1,26 1,30 1,37 1,44 1,51 1,57 1,62 1,68 1,72 1,76 1,80 1,84
18º 0,56 0,59 0,62 0,66 0,68 0,72 0,75 0,77 0,80 0,83 0,85 0,88 0,93 0,98 1,02 1,05 1,09 1,12 1,16 1,19 1,21 1,24
19º 0,29 0,31 0,32 0,34 0,36 0,37 0,39 0,40 0,42 0,43 0,44 0,45 0,48 0,50 0,52 0,54 0,56 0,57 0,59 0,60 0,61 0,62
20º21º 0,29 0,30 0,32 0,34 0,35 0,37 0,38 0,40 0,41 0,42 0,44 0,46 0,48 0,50 0,53 0,56 0,58 0,59 0,60 0,61 0,62 0,62
22º 0,58 0,61 0,64 0,67 0,70 0,73 0,76 0,79 0,81 0,84 0,87 0,90 0,96 1,00 1,05 1,09 1,12 1,15 1,18 1,20 1,22 1,23
23º 0,89 0,94 0,99 1,03 1,08 1,12 1,16 1,20 1,25 1,29 1,33 1,37 1,44 1,51 1,57 1,63 1,67 1,73 1,77 1,80 1,82 1,84
24º 1,20 1,25 1,31 1,37 1,43 1,49 1,54 1,60 1,66 1,71 1,77 1,82 1,92 2,01 2,10 2,17 2,24 2,30 2,36 2,40 2,42 2,44
25º 1,51 1,59 1,66 1,74 1,81 1,88 1,95 2,02 2,09 2,16 2,23 2,30 2,42 2,53 2,63 2,72 2,82 2,89 2,95 2,99 3,01 3,0526º 1,84 1,92 2,01 2,10 2,18 2,26 2,34 2,42 2,50 2,58 2,65 2,73 2,87 3,00 3,13 3,25 3,36 3,47 3,57 3,65 3,72 3,79
27º 2,17 2,26 2,36 2,46 2,56 2,66 2,75 2,84 2,93 3,01 3,10 3,18 3,35 3,50 3,66 3,80 3,93 4,06 4,16 4,26 4,35 4,42
28º 2,50 2,62 2,74 2,85 2,96 3,07 3,18 3,28 3,40 3,50 3,60 3,69 3,87 4,04 4,21 4,36 4,50 4,64 4,75 4,86 4,94 5,00
29º 2,86 2,98 3,10 3,22 3,35 3,47 3,59 3,70 3,82 3,93 4,03 4,14 4,34 4,53 4,72 4,89 5,05 5,20 5,34 5,46 5,56 5,64
30º 3,20 3,35 3,49 3,64 3,77 3,91 4,05 4,17 4,30 4,43 4,55 4,67 4,90 5,12 5,39 5,51 5,68 5,84 5,96 6,08 6,16 6,22
Nota:Sepuedeutilizarestatablaparatransformarladensidadd20tendensidadd2020.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—13
▼B
TABLAIV
Tabladecorreccionescdetemperaturasobrelamasavolúmicadevinosde13%volomásquecontengan
azúcarresidual,medidaconunpicnómetrodevidriopyrexatºCparareferirelresultadoa20ºC
ρ20¼ρt±c
1000−sitºesinferiora20ºC
+sitºessuperiora20ºC
Vinosde13%vol Vinosde15%vol Vinosde17%vol
Masasvolúmicas Masasvolúmicas Masasvolúmicas
1,000 1,020 1,040 1,060 1,080 1,100 1,120 1,000 1,020 1,040 1,060 1,080 1,100 1,120 1,000 1,020 1,040 1,060 1,080 1,100 1,120Temperaturas ºC10º 2,36 2,71 3,06 3,42 3,72 3,96 4,32 2,64 2,99 3,36 3,68 3,99 4,30 4,59 2,94 3,29 3,64 3,98 4,29 4,60 4,89
11º 2,17 2,49 2,80 2,99 3,39 3,65 3,90 2,42 2,73 3,05 3,34 3,63 3,89 4,15 2,69 3,00 3,32 3,61 3,90 4,16 4,41
12º 1,97 2,25 2,53 2,79 3,05 3,29 3,52 2,19 2,47 2,75 3,01 3,27 3,51 3,73 2,42 2,70 2,98 3,24 3,50 3,74 3,96
13º 1,78 2,02 2,25 2,47 2,69 2,89 3,09 1,97 2,21 2,44 2,66 2,87 3,08 3,29 2,18 2,42 2,64 2,87 3,08 3,29 3,49
14º 1,57 1,78 1,98 2,16 2,35 2,53 2,70 1,74 1,94 2,14 2,32 2,52 2,69 2,86 1,91 2,11 2,31 2,50 2,69 2,86 3,03
15º 1,32 1,49 1,66 1,82 1,97 2,12 2,26 1,46 1,63 1,79 1,95 2,10 2,25 2,39 1,60 1,77 1,93 2,09 2,24 2,39 2,5316º 1,08 1,22 1,36 1,48 1,61 1,73 1,84 1,18 1,32 1,46 1,59 1,71 1,83 1,94 1,30 1,44 1,58 1,71 1,83 1,95 2,06
17º 0,83 0,94 1,04 1,13 1,22 1,31 1,40 0,91 1,02 1,12 1,21 1,30 1,39 1,48 1,00 1,10 1,20 1,30 1,39 1,48 1,56
18º 0,58 0,64 0,71 0,78 0,84 0,89 0,95 0,63 0,69 0,76 0,83 0,89 0,94 1,00 0,69 0,75 0,82 0,89 0,95 1,00 1,06
19º 0,30 0,34 0,37 0,40 0,43 0,46 0,49 0,33 0,37 0,40 0,43 0,46 0,49 0,52 0,36 0,39 0,42 0,46 0,49 0,52 0,54
20º21º 0,30 0,33 0,36 0,40 0,43 0,46 0,49 0,33 0,36 0,39 0,43 0,46 0,49 0,51 0,35 0,39 0,42 0,45 0,48 0,51 0,54
22º 0,60 0,67 0,73 0,80 0,85 0,91 0,98 0,65 0,72 0,78 0,84 0,90 0,96 1,01 0,71 0,78 0,84 0,90 0,96 1,01 1,07
23º 0,93 1,02 1,12 1,22 1,30 1,39 1,49 1,01 1,10 1,20 1,29 1,38 1,46 1,55 1,10 1,19 1,29 1,38 1,46 1,55 1,63
24º 1,27 1,39 1,50 1,61 1,74 1,84 1,95 1,37 1,49 1,59 1,72 1,84 1,95 2,06 1,48 1,60 1,71 1,83 1,95 2,06 2,17
25º 1,61 1,75 1,90 2,05 2,19 2,33 2,47 1,73 1,87 2,02 2,17 2,31 2,45 2,59 1,87 2,01 2,16 2,31 2,45 2,59 2,73
26º 1,94 2,12 2,29 2,47 2,63 2,79 2,95 2,09 2,27 2,44 2,62 2,78 2,94 3,10 2,26 2,44 2,61 2,79 2,95 3,11 3,26
27º 2,30 2,51 2,70 2,90 3,09 3,27 3,44 2,48 2,68 2,87 3,07 3,27 3,45 3,62 2,67 2,88 3,07 3,27 3,46 3,64 3,81
28º 2,66 2,90 3,13 3,35 3,57 3,86 4,00 2,86 3,10 3,23 3,55 3,77 3,99 4,20 3,08 3,31 3,55 3,76 3,99 4,21 4,41
29º 3,05 3,31 3,56 3,79 4,04 4,27 4,49 3,28 3,53 3,77 4,02 4,26 4,49 4,71 3,52 3,77 4,01 4,26 4,50 4,73 4,95
30º 3,44 3,70 3,99 4,28 4,54 4,80 5,06 3,68 3,94 4,23 4,52 4,79 5,05 5,30 3,95 4,22 4,51 4,79 5,07 5,32 5,57
Vinosde19%vol Vinosde21%vol
Masasvolúmicas Masasvolúmicas
1,000 1,020 1,040 1,060 1,080 1,100 1,120 1,000 1,020 1,040 1,060 1,080 1,100 1,120Temperaturas ºC10º 3,27 3,62 3,97 4,30 4,62 4,92 5,21 3,62 3,97 4,32 4,66 4,97 5,27 5,56
11º 2,99 3,30 3,61 3,90 4,19 4,45 4,70 3,28 3,61 3,92 4,22 4,50 4,76 5,01
12º 2,68 2,96 3,24 3,50 3,76 4,00 4,21 2,96 3,24 3,52 3,78 4,03 4,27 4,49
13º 2,40 2,64 2,87 3,09 3,30 3,51 3,71 2,64 2,88 3,11 3,33 3,54 3,74 3,95
14º 2,11 2,31 2,51 2,69 2,88 3,05 3,22 2,31 2,51 2,71 2,89 3,08 3,25 3,43
15º 1,76 1,93 2,09 2,25 2,40 2,55 2,69 1,93 2,10 2,26 2,42 2,57 2,72 2,8616º 1,43 1,57 1,70 1,83 1,95 2,08 2,18 1,56 1,70 1,84 1,97 2,09 2,21 2,32
17º 1,09 1,20 1,30 1,39 1,48 1,57 1,65 1,20 1,31 1,41 1,50 1,59 1,68 1,77
18º 0,76 0,82 0,88 0,95 1,01 1,06 1,12 0,82 0,88 0,95 1,01 1,08 1,13 1,18
19º 0,39 0,42 0,45 0,49 0,52 0,55 0,57 0,42 0,46 0,49 0,52 0,55 0,58 0,61
20º
21º 0,38 0,42 0,45 0,48 0,51 0,54 0,57 0,41 0,45 0,48 0,51 0,54 0,57 0,60
22º 0,78 0,84 0,90 0,96 1,02 1,07 1,13 0,84 0,90 0,96 1,02 1,08 1,14 1,19
23º 1,19 1,28 1,38 1,47 1,55 1,64 1,72 1,29 1,39 1,48 1,57 1,65 1,74 1,82
24º 1,60 1,72 1,83 1,95 2,06 2,18 2,29 1,73 1,85 1,96 2,08 2,19 2,31 2,42
25º 2,02 2,16 2,31 2,46 2,60 2,74 2,88 2,18 2,32 2,47 2,62 2,76 2,90 3,0426º 2,44 2,62 2,79 2,96 3,12 3,28 3,43 2,53 2,81 2,97 3,15 3,31 3,47 3,62
27º 2,88 3,08 3,27 3,42 3,66 3,84 4,01 3,10 3,30 3,47 3,69 3,88 4,06 4,23
28º 3,31 3,54 3,78 4,00 4,22 4,44 4,64 3,56 3,79 4,03 4,25 4,47 4,69 4,89
29º 3,78 4,03 4,27 4,52 4,76 4,99 5,21 4,06 4,31 4,55 4,80 5,04 5,27 5,48
30º 4,24 4,51 4,80 5,08 5,36 5,61 5,86 4,54 4,82 5,11 5,39 5,66 5,91 6,161990R2676—ES—21.04.1999—006.001—14
▼B
TABLAV
Tabladecorreccionescdetemperaturasobrelamasavolúmicadevinossecosyvinossecosenlosqueseha
eliminadoelalcohol,medidaatºCconunareómetroounpicnómetrodevidrioordinario,parareferirelresul-
tadoa20ºC
ρ20¼ρt±c
1000−sitºesinferiora20ºC
+sitºessuperiora20ºC
Gradosalcohólicos
0 5 6 7 8 91 01 11 21 31 41 51 61 71 81 92 02 12 22 32 42 52 62 7TemperaturasºC10º 1,45 1,51 1,55 1,58 1,64 1,70 1,78 1,88 1,98 2,09 2,21 2,34 2,47 2,60 2,75 2,90 3,06 3,22 3,39 3,57 3,75 3,93 4,12 4,31
11º 1,35 1,40 1,43 1,47 1,52 1,58 1,65 1,73 1,83 1,93 2,03 2,15 2,26 2,38 2,51 2,65 2,78 2,93 3,08 3,24 3,40 3,57 3,73 3,90
12º 1,24 1,28 1,31 1,34 1,39 1,44 1,50 1,58 1,66 1,75 1,84 1,94 2,04 2,15 2,26 2,38 2,51 2,63 2,77 2,91 3,05 3,19 3,34 3,49
13º 1,12 1,16 1,18 1,21 1,25 1,30 1,35 1,42 1,49 1,56 1,64 1,73 1,82 1,91 2,01 2,11 2,22 2,33 2,45 2,57 2,69 2,81 2,95 3,07
14º 0,99 1,03 1,05 1,07 1,11 1,14 1,19 1,24 1,31 1,37 1,44 1,52 1,59 1,67 1,75 1,84 1,93 2,03 2,13 2,23 2,33 2,44 2,55 2,66
15º 0,86 0,89 0,90 0,92 0,95 0,98 1,02 1,07 1,12 1,17 1,23 1,29 1,35 1,42 1,49 1,56 1,63 1,71 1,80 1,88 1,96 2,05 2,14 2,2316º 0,71 0,73 0,74 0,76 0,78 0,81 0,84 0,87 0,91 0,96 0,99 1,05 1,10 1,15 1,21 1,27 1,33 1,39 1,45 1,52 1,59 1,66 1,73 1,80
17º 0,55 0,57 0,57 0,59 0,60 0,62 0,65 0,67 0,70 0,74 0,77 0,81 0,84 0,88 0,92 0,96 1,01 1,05 1,11 1,15 1,20 1,26 1,31 1,36
18º 0,38 0,39 0,39 0,40 0,41 0,43 0,44 0,46 0,48 0,50 0,52 0,55 0,57 0,60 0,62 0,65 0,68 0,71 0,74 0,78 0,81 0,85 0,88 0,91
19º 0,19 0,20 0,20 0,21 0,21 0,22 0,23 0,24 0,25 0,26 0,27 0,28 0,29 0,30 0,32 0,33 0,35 0,36 0,38 0,39 0,41 0,43 0,44 0,46
20º21º 0,21 0,22 0,22 0,23 0,23 0,24 0,25 0,25 0,26 0,27 0,29 0,29 0,31 0,32 0,34 0,35 0,36 0,38 0,39 0,41 0,43 0,44 0,46 0,48
22º 0,43 0,45 0,45 0,46 0,47 0,49 0,50 0,52 0,54 0,56 0,58 0,60 0,63 0,65 0,68 0,71 0,73 0,77 0,80 0,83 0,86 0,89 0,93 0,96
23º 0,67 0,69 0,70 0,71 0,72 0,74 0,77 0,79 0,82 0,85 0,88 0,91 0,95 0,99 1,03 1,07 1,12 1,16 1,21 1,25 1,30 1,35 1,40 1,45
24º 0,91 0,93 0,95 0,97 0,99 1,01 1,04 1,07 1,11 1,15 1,20 1,24 1,29 1,34 1,39 1,45 1,50 1,56 1,62 1,69 1,76 1,82 1,88 1,95
25º 1,16 1,19 1,21 1,23 1,26 1,29 1,33 1,37 1,42 1,47 1,52 1,57 1,63 1,70 1,76 1,83 1,90 1,97 2,05 2,13 2,21 2,29 2,37 2,4526º 1,42 1,46 1,49 1,51 1,54 1,58 1,62 1,67 1,73 1,79 1,85 1,92 1,99 2,07 2,14 2,22 2,31 2,40 2,49 2,58 2,67 2,77 2,86 2,96
27º 1,69 1,74 1,77 1,80 1,83 1,88 1,93 1,98 2,05 2,12 2,20 2,27 2,35 2,44 2,53 2,63 2,72 2,82 2,93 3,04 3,14 3,25 3,37 3,48
28º 1,97 2,03 2,06 2,09 2,14 2,19 2,24 2,31 2,38 2,46 2,55 2,63 2,73 2,83 2,93 3,03 3,14 3,26 3,38 3,50 3,62 3,75 3,85 4,00
29º 2,26 2,33 2,37 2,40 2,45 2,50 2,57 2,64 2,73 2,82 2,91 2,99 3,11 3,22 3,34 3,45 3,58 3,70 3,84 3,97 4,11 4,25 4,39 4,54
30º 2,56 2,64 2,67 2,72 2,77 2,83 2,90 2,98 3,08 3,18 3,28 3,38 3,50 3,62 3,75 3,88 4,02 4,16 4,30 4,46 4,61 4,76 4,92 5,07
Nota:Sepuedeutilizarestatablaparaconvertirladensidadd20tendensidadd2020.
TABLAVI
Tabladecorreccionescdetemperaturasobrelamasavolúmicademostosnaturalesymostosconcentrados
medidaatºCconunpicnómetroounareómetrodevidrioordinario,parareferirelresultadoa20ºC
ρ20¼ρt±c
1000−sitºesinferiora20ºC
+sitºessuperiora20ºC
Masasvolúmicas
1,05 1,06 1,07 1,08 1,09 1,10 1,11 1,12 1,13 1,14 1,15 1,16 1,18 1,20 1,22 1,24 1,26 1,28 1,30 1,32 1,34 1,36Temperaturas ºC10º 2,17 2,34 2,52 2,68 2,85 2,99 3,16 3,29 3,44 3,58 3,73 3,86 4,13 4,36 4,60 4,82 5,02 5,25 5,39 5,56 5,73 5,87
11º 2,00 2,16 2,29 2,44 2,59 2,73 2,86 2,99 3,12 3,24 3,37 3,48 3,71 3,94 4,15 4,33 4,52 4,69 4,85 5,01 5,15 5,29
12º 1,81 1,95 2,08 2,21 2,34 2,47 2,58 2,70 2,82 2,92 3,03 3,14 3,35 3,55 3,72 3,90 4,07 4,23 4,37 4,52 4,64 4,77
13º 1,62 1,74 1,85 1,96 2,07 2,17 2,28 2,38 2,48 2,59 2,68 2,77 2,94 3,11 3,28 3,44 3,54 3,72 3,86 3,99 4,12 4,24
14º 1,44 1,54 1,64 1,73 1,82 1,92 2,00 2,08 2,17 2,25 2,34 2,42 2,57 2,73 2,86 2,99 3,12 3,24 3,35 3,46 3,57 3,65
15º 1,21 1,29 1,37 1,45 1,53 1,60 1,68 1,75 1,82 1,89 1,97 2,03 2,16 2,28 2,40 2,51 2,61 2,71 2,80 2,89 2,94 3,0116º 1,00 1,06 1,12 1,19 1,25 1,31 1,37 1,43 1,49 1,54 1,60 1,65 1,75 1,84 1,94 2,02 2,09 2,17 2,23 2,30 2,36 2,42
17º 0,76 0,82 0,86 0,91 0,96 1,00 1,05 1,09 1,14 1,18 1,22 1,25 1,32 1,39 1,46 1,52 1,57 1,63 1,67 1,71 1,75 1,79
18º 0,53 0,56 0,59 0,63 0,65 0,69 0,72 0,74 0,77 0,80 0,82 0,85 0,90 0,95 0,99 1,02 1,06 1,09 1,13 1,16 1,18 1,20
19º 0,28 0,30 0,31 0,33 0,35 0,36 0,38 0,39 0,41 0,42 0,43 0,43 0,46 0,48 0,50 0,52 0,54 0,55 0,57 0,58 0,59 0,60
20º21º 0,28 0,29 0,31 0,33 0,34 0,36 0,37 0,39 0,40 0,41 0,43 0,44 0,46 0,48 0,51 0,54 0,56 0,57 0,58 0,59 0,60 0,60
22º 0,55 0,58 0,61 0,64 0,67 0,70 0,73 0,76 0,78 0,81 0,84 0,87 0,93 0,97 1,02 1,06 1,09 1,12 1,15 1,17 1,19 1,19
23º 0,85 0,90 0,95 0,99 1,04 1,08 1,12 1,16 1,21 1,25 1,29 1,32 1,39 1,46 1,52 1,58 1,62 1,68 1,72 1,75 1,77 1,79
24º 1,15 1,19 1,25 1,31 1,37 1,43 1,48 1,54 1,60 1,65 1,71 1,76 1,86 1,95 2,04 2,11 2,17 2,23 2,29 2,33 2,35 2,37
25º 1,44 1,52 1,59 1,67 1,74 1,81 1,88 1,95 2,02 2,09 2,16 2,22 2,34 2,45 2,55 2,64 2,74 2,81 2,87 2,90 2,92 2,96
26º 1,76 1,84 1,93 2,02 2,10 2,18 2,25 2,33 2,41 2,49 2,56 2,64 2,78 2,91 3,03 3,15 3,26 3,37 3,47 3,55 3,62 3,60
27º 2,07 2,16 2,26 2,36 2,46 2,56 2,65 2,74 2,83 2,91 3,00 3,07 3,24 3,39 3,55 3,69 3,82 3,94 4,04 4,14 4,23 4,30
28º 2,39 2,51 2,63 2,74 2,85 2,96 3,06 3,16 3,28 3,38 3,48 3,57 3,75 3,92 4,08 4,23 4,37 4,51 4,62 4,73 4,80 4,86
29º 2,74 2,86 2,97 3,09 3,22 3,34 3,46 3,57 3,69 3,80 3,90 4,00 4,20 4,39 4,58 4,74 4,90 5,05 5,19 5,31 5,40 5,48
30º 3,06 3,21 3,35 3,50 3,63 3,77 3,91 4,02 4,15 4,28 4,40 4,52 4,75 4,96 5,16 5,35 5,52 5,67 5,79 5,91 5,99 6,04
Nota:Sepuedeusarestatablaparatransformarladensidadd20tendensidadd2020.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—15
▼B
TABLAVII
Tabladecorreccionescdetemperaturasobrelamasavolúmicadevinosde13%volomásquecontengan
azúcarresidual,medidaatºCconunareómetroounpicnómetrodevidrioordinario,parareferirelresultado
a20ºC
ρ20¼ρt±c
1000−sitºesinferiora20ºC
+sitºessuperiora20ºC
Vinosde13%vol Vinosde15%vol Vinosde17%vol
Masasvolúmicas Masasvolúmicas Masasvolúmicas
1,000 1,020 1,040 1,060 1,080 1,100 1,120 1,000 1,020 1,040 1,060 1,080 1,100 1,120 1,000 1,020 1,040 1,060 1,080 1,100 1,120TemperaturasºC10º 2,24 2,58 2,93 3,27 3,59 3,89 4,18 2,51 2,85 3,20 3,54 3,85 4,02 4,46 2,81 3,15 3,50 3,84 4,15 4,45 4,74
11º 2,06 2,37 2,69 2,97 3,26 3,53 3,78 2,31 2,61 2,93 3,21 3,51 3,64 4,02 2,57 2,89 3,20 3,49 3,77 4,03 4,28
12º 1,87 2,14 2,42 2,67 2,94 3,17 3,40 2,09 2,36 2,64 2,90 3,16 3,27 3,61 2,32 2,60 2,87 3,13 3,39 3,63 3,84
13º 1,69 1,93 2,14 2,37 2,59 2,80 3,00 1,88 2,12 2,34 2,56 2,78 2,88 3,19 2,09 2,33 2,55 2,77 2,98 3,19 3,39
14º 1,49 1,70 1,90 2,09 2,27 2,44 2,61 1,67 1,86 2,06 2,25 2,45 2,51 2,77 1,83 2,03 2,23 2,42 2,61 2,77 2,94
15º 1,25 1,42 1,59 1,75 1,90 2,05 2,19 1,39 1,56 1,72 1,88 2,03 2,11 2,32 1,54 1,71 1,87 2,03 2,18 2,32 2,47
16º 1,03 1,17 1,30 1,43 1,55 1,67 1,78 1,06 1,27 1,40 1,53 1,65 1,77 1,88 1,25 1,39 1,52 1,65 1,77 1,89 2,00
17º 0,80 0,90 1,00 1,09 1,17 1,27 1,36 0,87 0,98 1,08 1,17 1,26 1,35 1,44 0,96 1,06 1,16 1,26 1,35 1,44 1,52
18º 0,54 0,61 0,68 0,75 0,81 0,86 0,92 0,60 0,66 0,73 0,80 0,85 0,91 0,97 0,66 0,72 0,79 0,86 0,92 0,97 1,03
19º 0,29 0,33 0,36 0,39 0,42 0,45 0,48 0,32 0,36 0,39 0,42 0,45 0,48 0,51 0,35 0,38 0,41 0,45 0,48 0,51 0,53
20º21º 0,29 0,32 0,35 0,39 0,42 0,45 0,47 0,32 0,35 0,38 0,42 0,45 0,48 0,50 0,34 0,38 0,41 0,44 0,47 0,50 0,53
22º 0,57 0,64 0,70 0,76 0,82 0,88 0,93 0,63 0,69 0,75 0,81 0,87 0,93 0,98 0,68 0,75 0,81 0,87 0,93 0,99 1,04
23º 0,89 0,98 1,08 1,17 1,26 1,34 1,43 0,97 1,06 1,16 1,25 1,34 1,42 1,51 1,06 1,15 1,25 1,34 1,42 1,51 1,59
24º 1,22 1,34 1,44 1,56 1,68 1,79 1,90 1,32 1,44 1,54 1,66 1,78 1,89 2,00 1,43 1,56 1,65 1,77 1,89 2,00 2,11
25º 1,61 1,68 1,83 1,98 2,12 2,26 2,40 1,66 1,81 1,96 2,11 2,25 2,39 2,52 1,80 1,94 2,09 2,24 2,39 2,52 2,6626º 1,87 2,05 2,22 2,40 2,56 2,71 2,87 2,02 2,20 2,37 2,54 2,70 2,85 3,01 2,18 2,36 2,53 2,71 2,86 3,02 3,17
27º 2,21 2,42 2,60 2,80 3,00 3,18 3,35 2,39 2,59 2,78 2,98 3,17 3,35 3,52 2,58 2,78 2,97 3,17 3,36 3,54 3,71
28º 2,56 2,80 3,02 3,25 3,47 3,67 3,89 2,75 2,89 3,22 3,44 3,66 3,86 4,07 2,97 3,21 3,44 3,66 3,88 4,09 4,30
29º 2,93 3,19 3,43 3,66 3,91 4,14 4,37 3,16 3,41 3,65 3,89 4,13 4,36 4,59 3,40 3,66 3,89 4,13 4,38 4,61 4,82
30º 3,31 3,57 3,86 4,15 4,41 4,66 4,92 3,55 3,81 4,10 4,38 4,66 4,90 5,16 3,82 4,08 4,37 4,65 4,93 5,17 5,42
Vinosde19%vol Vinosde21%vol
Masasvolúmicas Masasvolúmicas
1,000 1,020 1,040 1,060 1,080 1,100 1,120 1,000 1,020 1,040 1,060 1,080 1,100 1,120TemperaturasºC10º 3,14 3,48 3,83 4,17 4,48 4,78 5,07 3,50 3,84 4,19 4,52 4,83 5,12 5,41
11º 2,87 3,18 3,49 3,78 4,06 4,32 4,57 3,18 3,49 3,80 4,09 4,34 4,63 4,88
12º 2,58 2,86 3,13 3,39 3,65 3,88 4,10 2,86 3,13 3,41 3,67 3,92 4,15 4,37
13º 2,31 2,55 2,77 2,99 3,20 3,41 3,61 2,56 2,79 3,01 3,23 3,44 3,65 3,85
14º 2,03 2,23 2,43 2,61 2,80 2,96 3,13 2,23 2,43 2,63 2,81 3,00 3,16 3,33
15º 1,69 1,86 2,02 2,18 2,33 2,48 2,62 1,86 2,03 2,19 2,35 2,50 2,65 2,8016º 1,38 1,52 1,65 1,78 1,90 2,02 2,13 1,51 1,65 1,78 1,91 2,03 2,15 2,26
17º 1,06 1,16 1,26 1,35 1,44 1,53 1,62 1,15 1,25 1,35 1,45 1,54 1,63 1,71
18º 0,73 0,79 0,85 0,92 0,98 1,03 1,09 0,79 0,85 0,92 0,98 1,05 1,10 1,15
19º 0,38 0,41 0,44 0,48 0,51 0,52 0,56 0,41 0,44 0,47 0,51 0,54 0,57 0,59
20º21º 0,37 0,41 0,44 0,47 0,50 0,53 0,56 0,41 0,44 0,47 0,51 0,54 0,57 0,59
22º 0,75 0,81 0,87 0,93 0,99 1,04 1,10 0,81 0,88 0,94 1,00 1,06 1,10 1,17
23º 1,15 1,30 1,34 1,43 1,51 1,60 1,68 1,25 1,34 1,44 1,63 1,61 1,70 1,78
24º 1,55 1,67 1,77 1,89 2,00 2,11 2,23 1,68 1,80 1,90 2,02 2,13 2,25 2,36
25º 1,95 2,09 2,24 2,39 2,53 2,67 2,71 2,11 2,25 2,40 2,55 2,69 2,83 2,9726º 2,36 2,54 2,71 2,89 3,04 3,20 3,35 2,55 2,73 2,90 3,07 3,22 3,38 3,54
27º 2,79 2,99 3,18 3,38 3,57 3,75 3,92 3,01 3,20 3,40 3,59 3,78 3,96 4,13
28º 3,20 3,44 3,66 3,89 4,11 4,32 4,53 3,46 3,69 3,93 4,15 4,36 4,58 4,77
29º 3,66 3,92 4,15 4,40 4,64 4,87 5,08 3,95 4,20 4,43 4,68 4,92 5,15 5,36
30º 4,11 4,37 4,66 4,94 5,22 5,46 5,71 4,42 4,68 4,97 5,25 5,53 5,77 6,021990R2676—ES—21.04.1999—006.001—16
▼B
2.EVALUACIÓN MEDIANTE REFRACTOMERÍA DEL CONTENIDO
EN AZÚCARES DE MOSTOS, MOSTOS CONCENTRADOS Y
MOSTOSCONCENTRADOSRECTIFICADOS
1. FUNDAMENTODELMÉTODO
Elíndicederefraccióna20ºC,expresadodemodoabsolutoocomo
porcentaje en masa de sacarosa, se lleva a la tabla correspondiente
para obtener el contenido en azúcares en gramos por litro y en
gramosporkilogramodemosto,mostoconcentradoymostoconcen-
tradorectificado.
2. MATERIAL
2.1. RefractómetrodeltipoAbbé
El refractómetro utilizado deberá estar provisto de una escala que
indique:
— elporcentajeenmasadesacarosa,conprecisiónde0,1%,obien
— elíndicederefraccióncon4decimales.
Elrefractómetrodeberáestarprovistodeuntermómetro,cuyaescala
estarágraduadade+15ºCa+25ºCcomomínimo,ydeundispo-
sitivo de circulación de agua que permita realizar las mediciones a
unatemperaturade20ºC±5ºC.
Deberánseguirseestrictamente lasinstruccionessobreelmanejo de
esteinstrumento, enparticular, lasconcernientes alcalibrado yala
fuenteluminosa.
3. PREPARACIÓNDELAMUESTRA
3.1. Mostosymostosconcentrados
Puedepasarseelmostoatravésdeunagasasecadobladaencuatro
y, tras haber eliminado las primeras gotas de filtrado, se efectúa la
determinaciónsobreelproductofiltrado.
3.2.Mostoconcentradorectificado
Utilizar,segúnsuconcentración, elmostoconcentradorectificado o
la solución obtenida añadiendo agua a 200g de mosto concentrado
rectificadoexactamentepesadoshastaqueaquéllaalcance500g.
4. PROCEDIMIENTO
Llevar la muestra a una temperatura póxima a 20 ºC. Colocar unas
gotasdemuestraenelprismainferiordelrefractómetro procurando
que,estandolosprismasenestrechocontacto,aquélla cubraunifor-
mementelasuperficiedevidrio,yefectuarlamediciónconarregloa
lasinstruccionesdemanejodelaparatoutilizado.
Medir el porcentaje en masa de sacarosa con una aproximación de
0,1%oanotarelíndicederefraccióncon4decimales.
Efectuar al menos dos determinaciones de cada muestra preparada.
AnotarlatemperaturatºC.
5. CÁLCULOS5.1.Correccióndetemperatura
5.1.1. Aparatos graduados en % en masa de sacarosa. Utilizar la tabla I
paralacorreccióndetemperatura.
5.1.2. Aparatosgraduadoseníndicesderefracción;llevarelíndicemedido
atºCalatablaIIparaobtener(columna1)elvalorcorrespondiente
del procentaje en masa de sacarosa a t ºC. Mediante la tabla I se
corregiráestevalorexpresándoloa20ºC.
5.2. Contenidoenazúcaresdemostosymostosconcentrados
Llevar elporcentaje en masa de sacarosa a20ºC ala tabla IIpara
obtenerelcontenidoenazúcaresinvertidosengramosporlitroyen
gramosporkilogramo.Seexpresaráconundecimal.
5.3. Contenidoenazúcaresdemostoconcentradorectificado
Llevarelporcentajeenmasadesacarosaa20ºCalatablaIIIpara
obtener el contenido en azúcares en gramos por litro y en gramos1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—17
▼B
por kilogramo. El contenido en azúcares se expresará en azúcar
invertidocon1decimal.
Silamediciónsehaefectuadoconelmostoconcentradorectificado
diluido,semultiplicaráelresultadoporelfactordedilución.
5.4. Índice de refracción de mostos, mostos oncentrados y mostos
concentradosrectificados
Llevar elporcentaje en masa de sacarosa a20ºC ala tabla IIpara
obtener el índice de refracción a 20 ºC. Se expresará con 4 deci-
males.
TABLAI
Correcciónquedeberáefectuarsecuandoelporcentajeenmasadesacarosaseadeterminadoa
unatemperaturadiferentede20ºC
TemperaturaºCSacarosaengramospor100grdeproducto
51 01 52 03 04 05 06 07 07 5
Restar
15 0,25 0,27 0,31 0,31 0,34 0,35 0,36 0,37 0,36 0,36
16 0,21 0,23 0,27 0,27 0,29 0,31 0,31 0,32 0,31 0,23
17 0,16 0,18 0,20 0,20 0,22 0,23 0,23 0,23 0,20 0,1718 0,11 0,12 0,14 0,15 0,16 0,16 0,15 0,12 0,12 0,0919 0,06 0,07 0,08 0,08 0,08 0,09 0,09 0,08 0,07 0,05
Sumar
21 0,06 0,07 0,07 0,07 0,07 0,07 0,07 0,07 0,07 0,07
22 0,12 0,14 0,14 0,14 0,14 0,14 0,14 0,14 0,14 0,14
23 0,18 0,20 0,20 0,21 0,21 0,21 0,21 0,22 0,22 0,22
24 0,24 0,26 0,26 0,27 0,28 0,28 0,28 0,28 0,29 0,2925 0,30 0,32 0,32 0,34 0,36 0,36 0,36 0,36 0,36 0,37
Las variaciones de la temperatura con relación a 20 ºC no deberán
excederde±5ºC.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—18
▼B
TABLAII
Tabladelcontenidoenazúcar (1),engramosporlitroyengramosporkilogramo,demostosy
mostosconcentrados,determinadomedianteunrefractómetrograduadoenporcentajeenmasa
desacarosaa20ºCoeníndicederefraccióna20ºC.Figuratambiénlamasavolúmicaa20ºC.
Sacarosa
%(m/m)Índicede
refraccióna
20ºCMasavolúmica
a20ºCAzúcaren
g/lAzúcaren
g/kgGrado
alcohólico
%vola20ºC
10.0 1.34781 1.0390 82.3 79.2 4,89
10.1 1.34798 1.0394 83.4 80.2 4,95
10.2 1.34814 1.0398 84.5 81.3 5,02
10.3 1.34830 1.0402 85.6 82.2 5,09
10.4 1.34845 1.0406 86.6 83.2 5,14
10.5 1.34860 1.0410 87.6 84.1 5,20
10.6 1.34875 1.0414 88.6 85.1 5,26
10.7 1.34890 1.0419 89.7 86.1 5,33
10.8 1.34906 1.0423 90.8 87.1 5,39
10.9 1.34921 1.0427 91.8 88.1 5,45
11.0 1.34936 1.0431 92.9 89.1 5,52
11.1 1.34952 1.0435 94.0 90.0 5,58
11.2 1.34968 1.0439 95.0 91.0 5,64
11.3 1.34984 1.0443 96.1 92.0 5,71
11.4 1.34999 1.0447 97.1 92.9 5,77
11.5 1.35015 1.0452 98.2 94.0 5,83
11.6 1.35031 1.0456 99.3 95.0 5,90
11.7 1.35046 1.0460 100.3 95.9 5,96
11.8 1.35062 1.0464 101.4 96.9 6,02
11.9 1.35077 1.0468 102.5 97.9 6,09
12.0 1.35092 1.0473 103.6 98.9 6,15
12.1 1.35108 1.0477 104.7 99.9 6,22
12.2 1.35124 1.0481 105.7 100.8 6,28
12.3 1.35140 1.0485 106.8 101.9 6,35
12.4 1.35156 1.0489 107.9 102.9 6,41
12.5 1.35172 1.0494 109.0 103.8 6,47
12.6 1.35187 1.0498 110.0 104.8 6,53
12.7 1.35203 1.0502 111.1 105.8 6,60
12.8 1.35219 1.0506 112.2 106.8 6,66
12.9 1.35234 1.0510 113.2 107.8 6,73
13.0 1.35249 1.0514 114.3 108.7 6,79
13.1 1.35266 1.0519 115.4 109.7 6,86
13.2 1.35282 1.0523 116.5 110.7 6,92
13.3 1.35298 1.0527 117.6 111.7 6,99
13.4 1.35313 1.0531 118.6 112.6 7,05
13.5 1.35329 1.0536 119.7 113.6 7,11
13.6 1.35345 1.0540 120.8 114.6 7,18
13.7 1.35360 1.0544 121.8 115.6 7,24
13.8 1.35376 1.0548 122.9 116.5 7,30
13.9 1.35391 1.0552 124.0 117.5 7,37
14.0 1.35407 1.0557 125.1 118.5 7,43
14.1 1.35424 1.0561 126.2 119.5 7,50
14.2 1.35440 1.0565 127.3 120.5 7,56
14.3 1.35456 1.0569 128.4 121.5 7,63
14.4 1.35472 1.0574 129.5 122.5 7,69
14.5 1.35488 1.0578 130.6 123.4 7,76
14.6 1.35503 1.0582 131.6 124.4 7,82
14.7 1.35519 1.0586 132.7 125.4 7,88
14.8 1.35535 1.0591 133.8 126.3 7,95
14.9 1.35551 1.0595 134.9 127.3 8,011990R2676—ES—21.04.1999—006.001—19
(1) Elcontenidoenazúcaresestáexpresadoenazúcarinvertido.
▼B
Sacarosa
%(m/m)Índicede
refraccióna
20ºCMasavolúmica
a20ºCAzúcaren
g/lAzúcaren
g/kgGrado
alcohólico
%vola20ºC
15.0 1.35567 1.0599 136.0 128.3 8,08
15.1 1.35583 1.0603 137.1 129.3 8,15
15.2 1.35599 1.0608 138.2 130.3 8,21
15.3 1.35615 1.0612 139.3 131.3 8,27
15.4 1.35631 1.0616 140.4 132.3 8,34
15.5 1.35648 1.0621 141.5 133.2 8,41
15.6 1.35664 1.0625 142.6 134.2 8,47
15.7 1.35680 1.0629 143.7 135.2 8,54
15.8 1.35696 1.0633 144.8 136.2 8,60
15.9 1.35712 1.0638 145.9 137.2 8,67
16.0 1.35728 1.0642 147.0 138.1 8,73
16.1 1.35744 1.0646 148.1 139.1 8,80
16.2 1.35760 1.0651 149.2 140.1 8,86
16.3 1.35776 1.0655 150.3 141.1 8,93
16.4 1.35793 1.0660 151.5 142.1 9,00
16.5 1.35809 1.0664 152.6 143.1 9,06
16.6 1.35825 1.0668 153.7 144.1 9,13
16.7 1.35842 1.0672 154.8 145.0 9,20
16.8 1.35858 1.0677 155.9 146.0 9,26
16.9 1.35874 1.0681 157.0 147.0 9,33
17.0 1.35890 1.0685 158.1 148.0 9,39
17.1 1.35907 1.0690 159.3 149.0 9,46
17.2 1.35923 1.0694 160.4 150.0 9,53
17.3 1.35939 1.0699 161.5 151.0 9,59
17.4 1.35955 1.0703 162.6 151.9 9,66
17.5 1.35972 1.0707 163.7 152.9 9,73
17.6 1.35988 1.0711 164.8 153.9 9,79
17.7 1.36004 1.0716 165.9 154.8 9,86
17.8 1.36020 1.0720 167.0 155.8 9,92
17.9 1.36036 1.0724 168.1 156.8 9,99
18.0 1.36053 1.0729 169.3 157.8 10,06
18.1 1.36070 1.0733 170.4 158.8 10,12
18.2 1.36086 1.0738 171.5 159.7 10,19
18.3 1.36102 1.0742 172.6 160.7 10,25
18.4 1.36119 1.0746 173.7 161.6 10,32
18.5 1.36136 1.0751 174.9 162.6 10,39
18.6 1.36152 1.0755 176.0 163.6 10,46
18.7 1.36169 1.0760 177.2 164.6 10,53
18.8 1.36185 1.0764 178.3 165.6 10,59
18.9 1.36201 1.0768 179.4 166.6 10,66
19.0 1.36217 1.0773 180.5 167.6 10,72
19.1 1.36234 1.0777 181.7 168.6 10,80
19.2 1.36251 1.0782 182.8 169.5 10,86
19.3 1.36267 1.0786 183.9 170.5 10,93
19.4 1.36284 1.0791 185.1 171.5 11,00
19.5 1.36301 1.0795 186.3 172.5 11,07
19.6 1.36318 1.0800 187.4 173.5 11,13
19.7 1.36335 1.0804 188.6 174.5 11,21
19.8 1.36351 1.0809 189.7 175.5 11,27
19.9 1.36367 1.0813 190.8 176.5 11,341990R2676—ES—21.04.1999—006.001—20
▼B
Sacarosa
%(m/m)Índicede
refraccióna
20ºCMasavolúmica
a20ºCAzúcaren
g/lAzúcaren
g/kgGrado
alcohólico
%vola20ºC
20.0 1.36383 1.0817 191.9 177.4 11,40
20.1 1.36400 1.0822 193.1 178.4 11,47
20.2 1.36417 1.0826 194.2 179.4 11,54
20.3 1.36434 1.0831 195.3 180.4 11,60
20.4 1.36451 1.0835 196.5 181.4 11,67
20.5 1.36468 1.0840 197.7 182.3 11,75
20.6 1.36484 1.0844 198.8 183.3 11,81
20.7 1.36501 1.0849 200.0 184.3 11,88
20.8 1.36518 1.0853 201.1 185.3 11,96
20.9 1.36534 1.0857 202.2 186.2 12,01
21.0 1.36550 1.0862 203.3 187.2 12,08
21.1 1.36568 1.0866 204.5 188.2 12,15
21.2 1.36585 1.0871 205.7 189.2 12,22
21.3 1.36601 1.0875 206.8 190.2 12,29
21.4 1.36618 1.0880 207.9 191.1 12,35
21.5 1.36635 1.0884 209.1 192.1 12,42
21.6 1.36652 1.0889 210.3 193.1 12,49
21.7 1.36669 1.0893 211.4 194.1 12,56
21.8 1.36685 1.0897 212.5 195.0 12,63
21.9 1.36702 1.0902 213.6 196.0 12,69
22.0 1.36719 1.0906 214.8 196.9 12,76
22.1 1.36736 1.0911 216.0 198.0 12,83
22.2 1.36753 1.0916 217.2 199.0 12,90
22.3 1.36770 1.0920 218.3 199.9 12,97
22.4 1.36787 1.0925 219.5 200.9 13,04
22.5 1.36804 1.0929 220.6 201.8 13,11
22.6 1.36820 1.0933 221.7 202.8 13,17
22.7 1.36837 1.0938 222.9 203.8 13,24
22.8 1.36854 1.0943 224.1 204.8 13,31
22.9 1.36871 1.0947 225.2 205.8 13,38
23.0 1.36888 1.0952 226.4 206.7 13,45
23.1 1.36905 1.0956 227.6 207.7 13,52
23.2 1.36922 1.0961 228.7 208.7 13,59
23.3 1.36939 1.0965 229.9 209.7 13,66
23.4 1.36956 1.0970 231.1 210.7 13,73
23.5 1.36973 1.0975 232.3 211.6 13,80
23.6 1.36991 1.0979 233.4 212.6 13,87
23.7 1.37008 1.0984 234.6 213.6 13,94
23.8 1.37025 1.0988 235.8 214.6 14,01
23.9 1.37042 1.0993 237.0 215.6 14,08
24.0 1.37059 1.0998 238.2 216.6 14,15
24.1 1.37076 1.1007 239.3 217.4 14,22
24.2 1.37093 1.1011 240.3 218.2 14,28
24.3 1.37110 1.1016 241.6 219.4 14,35
24.4 1.37128 1.1022 243.0 220.5 14,44
24.5 1.37145 1.1026 244.0 221.3 14,50
24.6 1.37162 1.1030 245.0 222.1 14,56
24.7 1.37180 1.1035 246.4 223.2 14,64
24.8 1.37197 1.1041 247.7 224.4 14,72
24.9 1.37214 1.1045 248.7 225.2 14,781990R2676—ES—21.04.1999—006.001—21
▼B
Sacarosa
%(m/m)Índicede
refraccióna
20ºCMasavolúmica
a20ºCAzúcaren
g/lAzúcaren
g/kgGrado
alcohólico
%vola20ºC
25.0 1.37232 1.1049 249.7 226.0 14,84
25.1 1.37249 1.1053 250.7 226.8 14,90
25.2 1.37266 1.1057 251.7 227.6 14,96
25.3 1.37283 1.1062 253.0 228.7 15,03
25.4 1.37300 1.1068 254.4 229.9 15,11
25.5 1.37317 1.1072 255.4 230.7 15,17
25.6 1.37335 1.1076 256.4 231.5 15,23
25.7 1.37353 1.1081 257.8 232.6 15,32
25.8 1.37370 1.1087 259.1 233.7 15,39
25.9 1.37387 1.1091 260.1 234.5 15,45
26.0 1.37405 1.1095 261.1 235.3 15,51
26.1 1.37423 1.1100 262.5 236.4 15,60
26.2 1.37440 1.1106 263.8 237.5 15,67
26.3 1.37457 1.1110 264.8 238.3 15,73
26.4 1.37475 1.1114 265.8 239.2 15,79
26.5 1.37493 1.1119 267.2 240.3 15,88
26.6 1.37510 1.1125 268.5 241.4 15,95
26.7 1.37528 1.1129 269.5 242.2 16,01
26.8 1.37545 1.1133 270.5 243.0 16,07
26.9 1.37562 1.1138 271.8 244.1 16,15
27.0 1.37580 1.1144 273.2 245.2 16,23
27.1 1.37598 1.1148 274.2 246.0 16,29
27.2 1.37615 1.1152 275.2 246.8 16,35
27.3 1.37632 1.1157 276.5 247.9 16,43
27.4 1.37650 1.1163 277.9 249.0 16,51
27.5 1.37667 1.1167 278.9 249.8 16,57
27.6 1.37685 1.1171 279.9 250.6 16,63
27.7 1.37703 1.1176 281.3 251.6 16,71
27.8 1.37721 1.1182 282.6 252.7 16,79
27.9 1.37739 1.1186 283.6 253.5 16,85
28.0 1.37757 1.1190 284.6 254.3 16,91
28.1 1.37775 1.1195 286.0 255.4 16,99
28.2 1.37793 1.1201 287.3 256.5 17,07
28.3 1.37810 1.1205 288.3 257.3 17,13
28.4 1.37828 1.1209 289.3 258.1 17,19
28.5 1.37846 1.1214 290.7 259.2 17,27
28.6 1.37863 1.1220 292.0 260.3 17,35
28.7 1.37881 1.1224 293.0 261.0 17,41
28.8 1.37899 1.1228 294.0 261.8 17,47
28.9 1.37917 1.1233 295.3 262.9 17,55
29.0 1.37935 1.1239 296.7 264.0 17,63
29.1 1.37953 1.1244 298.1 265.1 17,71
29.2 1.37971 1.1250 299.4 266.1 17,79
29.3 1.37988 1.1254 300.4 266.9 17,85
29.4 1.38006 1.1258 301.4 267.7 17,91
29.5 1.38024 1.1263 302.8 268.8 17,99
29.6 1.38042 1.1269 304.1 269.9 18,07
29.7 1.38060 1.1273 305.1 270.6 18,13
29.8 1.38078 1.1277 306.1 271.4 18,19
29.9 1.38096 1.1282 307.4 272.5 18,261990R2676—ES—21.04.1999—006.001—22
▼B
Sacarosa
%(m/m)Índicede
refraccióna
20ºCMasavolúmica
a20ºCAzúcaren
g/lAzúcaren
g/kgGrado
alcohólico
%vola20ºC
30.0 1.38114 1.1288 308.8 273.6 18,35
30.1 1.38132 1.1293 310.0 274.5 18,42
30.2 1.38150 1.1298 311.2 275.5 18,49
30.3 1.38168 1.1302 312.4 276.4 18,56
30.4 1.38186 1.1307 313.6 277.3 18,63
30.5 1.38204 1.1312 314.8 278.3 18,70
30.6 1.38222 1.1317 316.0 279.2 18,77
30.7 1.38240 1.1322 317.2 280.2 18,85
30.8 1.38258 1.1327 318.4 281.1 18,92
30.9 1.38276 1.1332 319.6 282.0 18,99
31.0 1.38294 1.1336 320.8 283.0 19,06
31.1 1.38312 1.1341 322.0 283.9 19,13
31.2 1.38330 1.1346 323.2 284.9 19,20
31.3 1.38349 1.1351 324.4 285.8 19,27
31.4 1.38367 1.1356 325.6 286.8 19,35
31.5 1.38385 1.1361 326.8 287.7 19,42
31.6 1.38403 1.1366 328.1 288.6 19,49
31.7 1.38421 1.1371 329.3 289.6 19,56
31.8 1.38440 1.1376 330.5 290.5 19,64
31.9 1.38458 1.1380 331.7 291.5 19,71
32.0 1.38476 1.1385 332.9 292.4 19,78
32.1 1.38494 1.1391 334.2 293.4 19,86
32.2 1.38513 1.1396 335.5 294.4 19,93
32.3 1.38531 1.1401 336.7 295.4 20,00
32.4 1.38550 1.1406 338.0 296.4 20,08
32.5 1.38568 1.1411 339.3 297.3 20,16
32.6 1.38586 1.1416 340.6 298.3 20,24
32.7 1.38605 1.1422 341.9 299.3 20,31
32.8 1.38623 1.1427 343.1 300.3 20,38
32.9 1.38642 1.1432 344.4 301.3 20,46
33.0 1.38660 1.1437 345.7 302.3 20,54
33.1 1.38678 1.1442 346.9 303.2 20,61
33.2 1.38697 1.1447 348.1 304.1 20,68
33.3 1.38715 1.1452 349.3 305.0 20,75
33.4 1.38734 1.1457 350.5 305.9 20,82
33.5 1.38753 1.1461 351.7 306.9 20,90
33.6 1.38771 1.1466 352.9 307.8 20,97
33.7 1.38790 1.1471 354.1 308.7 21,04
33.8 1.38808 1.1476 355.3 309.6 21,11
33.9 1.38827 1.1481 356.5 310.5 21,18
34.0 1.38845 1.1486 357.7 311.4 21,25
34.1 1.38864 1.1491 359.0 312.4 21,33
34.2 1.38882 1.1496 360.3 313.4 21,41
34.3 1.38901 1.1501 361.5 314.3 21,48
34.4 1.38919 1.1506 362.8 315.3 21,55
34.5 1.38938 1.1512 364.1 316.3 21,63
34.6 1.38957 1.1517 365.4 317.3 21,71
34.7 1.38975 1.1522 366.7 318.2 21,79
34.8 1.38994 1.1527 367.9 319.2 21,86
34.9 1.39012 1.1532 369.2 320.2 21,941990R2676—ES—21.04.1999—006.001—23
▼B
Sacarosa
%(m/m)Índicede
refraccióna
20ºCMasavolúmica
a20ºCAzúcaren
g/lAzúcaren
g/kgGrado
alcohólico
%vola20ºC
35.0 1.39031 1.1537 370.5 321.1 22,01
35.1 1.39050 1.1543 371.8 322.1 22,09
35.2 1.39069 1.1548 373.0 323.0 22,16
35.3 1.39087 1.1553 374.3 324.0 22,24
35.4 1.39106 1.1558 375.6 325.0 22,32
35.5 1.39125 1.1563 376,9 325.9 22,39
35.6 1.39144 1.1568 378.1 326.9 22,45
35.7 1.39163 1.1573 379.4 327.8 22,54
35.8 1.39181 1.1579 380.7 328.8 22,62
35.9 1.39200 1.1584 381.9 329.7 22,69
36.0 1.39219 1.1589 383.2 330.7 22,77
36.1 1.39238 1.1594 384.5 331.6 22,85
36.2 1.39257 1.1599 385.8 332.6 22,92
36.3 1.39276 1.1604 387.0 333.5 22,99
36.4 1.39295 1.1610 388.3 334.5 23,07
36.5 1.39314 1.1615 389.6 335.4 23,15
36.6 1.39332 1.1620 390.9 336.4 23,22
36.7 1.39351 1.1625 392.2 337.3 23,30
36.8 1.39370 1.1630 393.4 338.3 23,37
36.9 1.39389 1.1635 394.7 339.2 23,45
37.0 1.39408 1.1641 396.0 340.2 23,53
37.1 1.39427 1.1646 397.3 341.1 23,60
37.2 1.39446 1.1651 398.6 342.1 23,68
37.3 1.39465 1.1656 399.8 343.0 23,75
37.4 1.39484 1.1661 401.1 344.0 23,83
37.5 1.39504 1.1666 402.4 344.9 23,91
37.6 1.39523 1.1672 403.7 345.9 23,99
37.7 1.39542 1.1677 405.0 346.8 24,06
37.8 1.39561 1.1682 406.2 347.7 24,13
37.9 1.39580 1.1687 407.5 348.7 24,21
38.0 1.39599 1.1692 408.8 349.6 24,29
38.1 1.39618 1.1698 410.1 350.6 24,37
38.2 1.39637 1.1703 411.3 351.5 24,44
38.3 1.39657 1.1708 412.6 352.4 24,51
38.4 1.39676 1.1713 413.9 353.4 24,59
38.5 1.39695 1.1718 415.2 354.3 24,67
38.6 1.39714 1.1723 416.4 355.2 24,74
38.7 1.39733 1.1728 417.7 356.1 24,82
38.8 1.39753 1.1733 419.0 357.1 24,90
38.9 1.39772 1.1739 420.2 358.0 24,97
39.0 1.39791 1.1744 421.5 358.9 25,04
39.1 1.39810 1.1749 422.8 359.8 25,12
39.2 1.39830 1.1754 424.1 360.8 25,20
39.3 1.39849 1.1759 425.3 361.7 25,27
39.4 1.39869 1.1764 426.6 362.6 25,35
39.5 1.39888 1.1770 427.9 363.6 25,42
39.6 1.39907 1.1775 429.2 364.5 25,50
39.7 1.39927 1.1780 430.5 365.4 25,58
39.8 1.39946 1.1785 431.7 366.3 25,65
39.9 1.39966 1.1790 433.0 367.3 25,731990R2676—ES—21.04.1999—006.001—24
▼B
Sacarosa
%(m/m)Índicede
refraccióna
20ºCMasavolúmica
a20ºCAzúcaren
g/lAzúcaren
g/kgGrado
alcohólico
%vola20ºC
40.0 1.39985 1.1796 434.3 368.2 25,80
40.1 1.40004 1.1801 435.6 369.2 25,88
40.2 1.40024 1.1806 437.0 370.1 25,96
40.3 1.40043 1.1812 438.3 371.1 26,04
40.4 1.40063 1.1817 439.7 372.1 26,12
40.5 1.40083 1.1823 441.0 373.0 26,20
40.6 1.40102 1.1828 442.3 374.0 26,28
40.7 1.40122 1.1833 443.7 374.9 26,36
40.8 1.40141 1.1839 445.0 375.9 26,44
40.9 1.40161 1.1844 446.4 376.9 26,52
41.0 1.40180 1.1850 447.7 377.8 26,60
41.1 1.40200 1.1855 449.0 378.7 26,68
41.2 1.40219 1.1860 450.2 379.6 26,75
41.3 1.40239 1.1865 451.5 380.5 26,83
41.4 1.40259 1.1870 452.8 381.4 26,90
41.5 1.40279 1.1875 454.1 382.3 26,98
41.6 1.40298 1.1881 455.3 383.2 27,05
41.7 1.40318 1.1886 456.6 384.2 27,13
41.8 1.40338 1.1891 457.9 385.1 27,21
41.9 1.40357 1.1896 459.1 386.0 27,28
42.0 1.40377 1.1901 460.4 386.9 27,35
42.1 1.40397 1.1907 461.7 387.8 27,43
42.2 1.40417 1.1912 463.1 388.8 27,52
42.3 1.40436 1.1917 464.4 389.7 27,59
42.4 1.40456 1.1923 465.8 390.7 27,68
42.5 1.40476 1.1928 467.2 391.6 27,76
42.6 1.40496 1.1934 468.5 392.6 27,84
42.7 1.40516 1.1939 469.9 393.5 27,92
42.8 1.40535 1.1945 471.2 394.5 28,00
42.9 1.40555 1.1950 472.6 395.4 28,08
43.0 1.40575 1.1956 473.9 396.4 28,16
43.1 1.40595 1.1961 475.2 397.3 28,23
43.2 1.40615 1.1967 476.6 398.3 28,32
43.3 1.40635 1.1972 477.9 399.2 28,40
43.4 1.40655 1.1977 479.3 400.1 28,48
43.5 1.40675 1.1983 480.6 401.1 28,56
43.6 1.40695 1.1988 481.9 402.0 28,63
43.7 1.40715 1.1994 483.3 402.9 28,72
43.8 1.40735 1.1999 484.6 403.9 28,79
43.9 1.40755 1.2005 486.0 404.8 28,88
44.0 1.40775 1.2010 487.3 405.7 28,95
44.1 1.40795 1.2015 488.6 406.7 29,03
44.2 1.40815 1.2021 490.0 407.6 29,11
44.3 1.40836 1.2026 491.3 408.5 29,19
44.4 1.40856 1.2032 492.7 409.5 29,27
44.5 1.40876 1.2037 494.0 410.4 29,35
44.6 1.40896 1.2042 495.3 411.3 29,43
44.7 1.40916 1.2048 496.7 412.3 29,51
44.8 1.40937 1.2053 498.0 413.2 29,59
44.9 1.40957 1.2059 499.4 414.1 29,671990R2676—ES—21.04.1999—006.001—25
▼B
Sacarosa
%(m/m)Índicede
refraccióna
20ºCMasavolúmica
a20ºCAzúcaren
g/lAzúcaren
g/kgGrado
alcohólico
%vola20ºC
45.0 1.40977 1.2064 500.7 415.0 29,75
45.1 1.40997 1.2070 502.1 416.0 29,83
45.2 1.41018 1.2076 503.5 417.0 29,92
45.3 1.41038 1.2081 504.9 417.9 30,00
45.4 1.41058 1.2087 506.3 418.9 30,08
45.5 1.41079 1.2093 507.8 419.9 30,17
45.6 1.41099 1.2098 509.2 420.9 30,25
45.7 1.41119 1.2104 510.6 421.8 30,34
45.8 1.41139 1.2110 512.0 422.8 30,42
45.9 1.41160 1.2115 513.4 423.7 30,50
46.0 1.41180 1.2121 514.8 424.7 30,59
46.1 1.41200 1.2127 516.1 425.6 30,66
46.2 1.41221 1.2132 517.5 426.5 30,75
46.3 1.41241 1.2137 518.8 427.5 30,82
46.4 1.41262 1.2143 520.2 428.4 30,91
46.5 1.41282 1.2148 521.5 429.3 30,99
46.6 1.41302 1.2154 522.8 430.2 31,06
46.7 1.41323 1.2159 524.2 431.1 31,15
46.8 1.41343 1.2165 525.5 432.0 31,22
46.9 1.41364 1.2170 526.9 432.9 31,31
47.0 1.41384 1.2175 528.2 433.8 31,38
47.1 1.41405 1.2181 529.6 434.8 31,47
47.2 1.41425 1.2187 531.0 435.7 31,55
47.3 1.41446 1.2192 532.4 436.7 31,63
47.4 1.41466 1.2198 533.8 437.6 31,72
47.5 1.41487 1.2204 535.3 438.6 31,81
47.6 1.41508 1.2210 536.7 439.5 31,89
47.7 1.41528 1.2215 538.1 440.5 31,97
47.8 1.41549 1.2221 539.5 441.4 32,05
47.9 1.41569 1.2227 540.9 442.4 32,14
48.0 1.41590 1.2232 542.3 443.3 32,22
48.1 1.41611 1.2238 543.6 444.2 32,30
48.2 1.41632 1.2243 545.0 445.1 32,38
48.3 1.41652 1.2249 546.3 446.0 32,46
48.4 1.41673 1.2254 547.7 446.9 32,59
48.5 1.41694 1.2260 549.1 447.8 32,63
48.6 1.41715 1.2265 550.4 448.7 32,70
48.7 1.41736 1.2271 551.8 449.7 32,79
48.8 1.41756 1.2276 553.1 450.6 32,86
48.9 1.41777 1.2282 554.5 451.4 32,95
49.0 1.41798 1.2287 555.8 452.3 33,02
49.1 1.41819 1.2293 557.2 453.3 33,11
49.2 1.41840 1.2298 558.6 454.2 33,19
49.3 1.41861 1.2304 560.0 455.1 33,27
49.4 1.41882 1.2310 561.4 456.1 33,36
49.5 1.41903 1.2315 562.8 457.0 33,44
49.6 1.41924 1.2321 564.2 457.9 33,52
49.7 1.41945 1.2327 565.6 458.8 33,61
49.8 1.41966 1.2332 567.0 459.8 33,69
49.9 1.41987 1.2338 568.4 460.7 33,771990R2676—ES—21.04.1999—006.001—26
▼B
Sacarosa
%(m/m)Índicede
refraccióna
20ºCMasavolúmica
a20ºCAzúcaren
g/lAzúcaren
g/kgGrado
alcohólico
%vola20ºC
50.0 1.42008 1.2344 569.8 461.6 33,86
50.1 1.42029 1.2349 571.2 462.5 33,94
50.2 1.42050 1.2355 572.6 463.5 34,02
50.3 1.42071 1.2361 574.0 464.4 34,10
50.4 1.42092 1.2366 575.4 465.3 34,19
50.5 1.42114 1.2372 576.9 466.2 34,28
50.6 1.42135 1.2378 578.3 467.2 34,36
50.7 1.42156 1.2384 579.7 468.1 34,44
50.8 1.42177 1.2389 581.1 469.0 34,53
50.9 1.42198 1.2395 582.5 469.9 34,61
51.0 1.42219 1.2401 583.9 470.9 34,69
51.1 1.42240 1.2407 585.4 471.8 34,78
51.2 1.42261 1.2413 586.9 472.8 34,87
51.3 1.42283 1.2419 588.3 473.8 34,95
51.4 1.42304 1.2425 589.8 474.7 35,04
51.5 1.42325 1.2431 591.3 475.7 35,13
51.6 1.42346 1.2437 592.8 476.6 35,22
51.7 1.42367 1.2443 594.3 477.6 35,31
51.8 1.42389 1.2449 595.7 478.6 35,39
51.9 1.42410 1.2455 597.2 479.5 35,48
52.0 1.42431 1.2461 598.7 480.5 35,57
52.1 1.42452 1.2466 600.1 481.4 35,65
52.2 1.42474 1.2472 601.5 482.3 35,74
52.3 1.42495 1.2478 602.9 483.2 35,82
52.4 1.42517 1.2483 604.3 484.1 35,91
52.5 1.42538 1.2489 605.8 485.0 35,99
52.6 1.42559 1.2495 607.2 485.9 36,08
52.7 1.42581 1.2500 608.6 486.8 36,16
52.8 1.42602 1.2506 610.0 487.7 36,24
52.9 1.42624 1.2512 611.4 488.6 36,33
53.0 1.42645 1.2518 612.8 489.6 36,41
53.1 1.42666 1.2524 614.3 490.5 36,50
53.2 1.42686 1.2530 615.8 491.4 36,59
53.3 1.42707 1.2536 617.2 492.4 36,67
53.4 1.42727 1.2542 618.7 493.3 36,76
53.5 1.42748 1.2548 620.2 494.3 36,85
53.6 1.42769 1.2554 621.7 495.2 36,94
53.7 1.42789 1.2560 623.2 496.2 37,03
53.8 1.42810 1.2566 624.6 497.1 37,11
53.9 1.42830 1.2571 626.1 498.0 37,20
54.0 1.42851 1.2577 627.6 499.0 37,29
54.1 1.42874 1.2583 629.0 499.9 37,37
54.2 1.42897 1.2589 630.4 500.8 37,45
54.3 1.42919 1.2595 631.8 501.7 37,54
54.4 1.42942 1.2600 633.2 502.6 37,62
54.5 1.42965 1.2606 634.7 503.5 37,71
54.6 1.42988 1.2612 636.1 504.3 37,79
54.7 1.43011 1.2617 637.5 505.2 37,88
54.8 1.43033 1.2623 638.9 506.1 37,96
54.9 1.43056 1.2629 640.3 507.0 38,041990R2676—ES—21.04.1999—006.001—27
▼B
Sacarosa
%(m/m)Índicede
refraccióna
20ºCMasavolúmica
a20ºCAzúcaren
g/lAzúcaren
g/kgGrado
alcohólico
%vola20ºC
55.0 1.43079 1.2635 641.7 507.9 38,11
55.1 1.43101 1.2640 643.2 508.8 38,22
55.2 1.43123 1.2646 644.6 509.7 38,30
55.3 1.43145 1.2652 646.1 510.7 38,39
55.4 1.43167 1.2658 647.6 511.6 38,48
55.5 1.43189 1.2664 649.1 512.5 38,57
55.6 1.43210 1.2670 650.5 513.4 38,65
55.7 1.43232 1.2676 652.0 514.3 38,74
55.8 1.43254 1.2682 653.5 515.3 38,83
55.9 1.43276 1.2688 654.9 516.2 38,91
56.0 1.43298 1.2694 656.4 517.1 39,00
56.1 1.43320 1.2700 657.9 518.0 39,09
56.2 1.43342 1.2706 659.4 518.9 39,18
56.3 1.43364 1.2712 660.8 519.9 39,26
56.4 1.43386 1.2718 662.3 520.8 39,35
56.5 1.43409 1.2724 663.8 521.7 39,44
56.6 1.43431 1.2730 665.3 522.6 39,53
56.7 1.43453 1.2736 666.8 523.5 39,62
56.8 1.43475 1.2742 668.2 524.4 39,70
56.9 1.43497 1.2748 669.7 525.4 39,79
57.0 1.43519 1.2754 671.2 526.3 39,88
57.1 1.43541 1.2760 672.7 527.2 39,97
57.2 1.43563 1.2766 674.3 528.2 40,06
57.3 1.43586 1.2773 675.8 529.1 40,15
57.4 1.43608 1.2779 677.4 530.1 40,25
57.5 1.43630 1.2785 678.9 531.0 40,34
57.6 1.43652 1.2791 680.4 532.0 40,43
57.7 1.43674 1.2797 682.0 532.9 40,52
57.8 1.43697 1.2804 683.5 533.8 40,61
57.9 1.43719 1.2810 685.1 534.8 40,70
58.0 1.43741 1.2816 686.6 535.7 40,80
58.1 1.43763 1.2822 688.1 536.6 40,88
58.2 1.43786 1.2828 689.6 537.5 40,97
58.3 1.43808 1.2834 691.0 538.4 41,06
58.4 1.43831 1.2840 692.5 539.3 41,14
58.5 1.43854 1.2846 694.0 540.2 41,23
58.6 1.43876 1.2852 695.5 541.1 41,32
58.7 1.43899 1.2858 697.0 542.0 41,41
58.8 1.43921 1.2864 698.4 542.9 41,50
58.9 1.43944 1.2870 699.9 543.8 41,58
59.0 1.43966 1.2876 701.4 544.7 41,67
59.1 1.43989 1.2882 702.9 545.7 41,76
59.2 1.44011 1.2888 704.5 546.6 41,86
59.3 1.44034 1.2895 706.0 547.5 41,95
59.4 1.44056 1.2901 707.6 548.5 42,04
59.5 1.44079 1.2907 709.1 549.4 42,13
59.6 1.44102 1.2913 710.6 550.3 42,22
59.7 1.44124 1.2920 712.2 551.2 42,32
59.8 1.44147 1.2926 713.7 552.2 42,41
59.9 1.44169 1.2932 715.3 553.1 42,501990R2676—ES—21.04.1999—006.001—28
▼B
Sacarosa
%(m/m)Índicede
refraccióna
20ºCMasavolúmica
a20ºCAzúcaren
g/lAzúcaren
g/kgGrado
alcohólico
%vola20ºC
60.0 1.44192 1.2938 716.8 554.0 42,59
60.1 1.44215 1.2944 718.3 554.9 42,68
60.2 1.44237 1.2950 719.8 555.8 42,77
60.3 1.44260 1.2956 721.2 556.7 42,85
60.4 1.44283 1.2962 722.7 557.6 42,94
60.5 1.44306 1.2968 724.2 558.4 43,03
60.6 1.44328 1.2974 725.7 559.3 43,12
60.7 1.44351 1.2980 727.2 560.2 43,21
60.8 1.44374 1.2986 728.6 561.1 43,29
60.9 1.44396 1.2992 730.1 562.0 43,38
61.0 1.44419 1.2998 731.6 562.8 43,47
61.1 1.44442 1.3004 733.1 563.8 43,56
61.2 1.44465 1.3011 734.7 564.7 43,65
61.3 1.44488 1.3017 736.2 565.6 43,74
61.4 1.44511 1.3023 737.8 566.5 43,84
61.5 1.44533 1.3030 739.4 567.4 43,93
61.6 1.44556 1.3036 740.9 568.4 44,02
61.7 1.44579 1.3042 742.5 569.3 44,12
61.8 1.44602 1.3048 744.0 570.2 44,21
61.9 1.44625 1.3055 745.6 571.1 44,30
62.0 1.44648 1.3061 747.1 572.0 44,39
62.1 1.44671 1.3067 748.6 572.9 44,48
62.2 1.44694 1.3073 750.2 573.8 44,57
62.3 1.44717 1.3080 751.7 574.7 44,66
62.4 1.44740 1.3086 753.3 575.6 44,76
62.5 1.44764 1.3092 754.8 576.5 44,85
62.6 1.44787 1.3098 756.3 577.4 44,94
62.7 1.44810 1.3104 757.9 578.3 45,03
62.8 1.44833 1.3111 759.4 579.2 45,12
62.9 1.44856 1.3117 761.0 580.1 45,21
63.0 1.44879 1.3123 762.5 581.0 45,31
63.1 1.44902 1.3130 764.1 582.0 45,40
63.2 1.44926 1.3136 765.7 582.9 45,49
63.3 1.44949 1.3143 767.3 583.8 45,59
63.4 1.44972 1.3149 768.9 584.8 45,69
63.5 1.44996 1.3156 770.6 585.7 45,79
63.6 1.45019 1.3162 772.2 586.6 45,88
63.7 1.45042 1.3169 773.8 587.6 45,98
63.8 1.45065 1.3175 775.4 588.5 46,07
63.9 1.45089 1.3182 777.0 589.4 46,17
64.0 1.45112 1.3188 778.6 590.4 46,26
64.1 1.45135 1.3195 780.1 591.3 46,35
64.2 1.45159 1.3201 781.7 592.1 46,45
64.3 1.45183 1.3207 783.2 593.0 46,53
64.4 1.45206 1.3213 784.8 593.9 46,63
64.5 1.45230 1.3219 786.3 594.8 46,72
64.6 1.45253 1.3226 787.8 595.7 46,81
64.7 1.45276 1.3232 789.4 596.6 46,90
64.8 1.45300 1.3238 790.9 597.5 46,99
64.9 1.45324 1.3244 792.5 598.3 47,091990R2676—ES—21.04.1999—006.001—29
▼B
Sacarosa
%(m/m)Índicede
refraccióna
20ºCMasavolúmica
a20ºCAzúcaren
g/lAzúcaren
g/kgGrado
alcohólico
%vola20ºC
65.0 1.45347 1.3251 794.0 599.2 47,18
65.1 1.45371 1.3257 795.6 600.1 47,27
65.2 1.45394 1.3264 797.2 601.1 47,37
65.3 1.45418 1.3270 798.8 602.0 47,46
65.4 1.45441 1.3277 800.4 602.9 47,56
65.5 1.45465 1.3283 802.1 603.8 47,66
65.6 1.45489 1.3290 803.7 604.7 47,75
65.7 1.45512 1.3296 805.3 605.6 47,85
65.8 1.45536 1.3303 806.9 606.6 47,94
65.9 1.45559 1.3309 808.5 607.5 48,04
66.0 1.45583 1.3316 810.1 608.4 48,13
66.1 1.45607 1.3322 811.6 609.3 48,22
66.2 1.45630 1.3328 813.2 610.1 48,32
66.3 1.45654 1.3335 814.8 611.0 48,41
66.4 1.45678 1.3341 816.3 611.9 48,50
66.5 1.45702 1.3347 817.9 612.8 48,60
66.6 1.45725 1.3353 819.4 613.6 48,69
66.7 1.45749 1.3360 820.9 614.5 48,77
66.8 1.45773 1.3366 822.5 615.4 48,87
66.9 1.45796 1.3372 824.1 616.2 48,97
67.0 1.45820 1.3378 825.6 617.1 49,05
67.1 1.45844 1.3385 827.2 618.0 49,15
67.2 1.45868 1.3391 828.8 618.9 49,24
67.3 1.45892 1.3398 830.4 619.8 49,34
67.4 1.45916 1.3404 832.0 620.7 49,43
67.5 1.45940 1.3411 833.7 621.6 49,53
67.6 1.45964 1.3418 835.3 622.5 49,63
67.7 1.45988 1.3424 836.9 623.4 49,73
67.8 1.46012 1.3431 838.5 624.3 49,82
67.9 1.46036 1.3437 840.1 625.2 49,92
68.0 1.46060 1.3444 841.7 626.1 50,01
68.1 1.46084 1.3450 843.4 627.0 50,11
68.2 1.46108 1.3457 845.1 628.0 50,21
68.3 1.46132 1.3464 846.7 628.9 50,31
68.4 1.46156 1.3471 848.4 629.8 50,41
68.5 1.46181 1.3478 850.1 630.8 50,51
68.6 1.46205 1.3484 851.8 631.7 50,61
68.7 1.46229 1.3491 853.5 632.6 50,71
68.8 1.46253 1.3498 855.1 633.5 50,81
68.9 1.46277 1.3505 856.8 634.5 50,91
69.0 1.46301 1.3512 858.5 635.4 51,01
69.1 1.46325 1.3518 860.1 636.3 51,10
69.2 1.46350 1.3525 861.7 637.2 51,20
69.3 1.46374 1.3531 863.3 638.0 51,29
69.4 1.46398 1.3538 864.9 638.9 51,39
69.5 1.46423 1.3544 866.6 639.8 51,49
69.6 1.46447 1.3551 868.2 640.7 51,58
69.7 1.46471 1.3557 869.8 641.6 51,68
69.8 1.46495 1.3564 871.4 642.4 51,78
69.9 1.46520 1.3570 873.0 643.3 51,871990R2676—ES—21.04.1999—006.001—30
▼B
Sacarosa
%(m/m)Índicede
refraccióna
20ºCMasavolúmica
a20ºCAzúcaren
g/lAzúcaren
g/kgGrado
alcohólico
%vola20ºC
70.0 1.46544 1.3577 874.6 644.2 51,97
70.1 1.46568 1.3583 876.2 645.1 52,06
70.2 1.46593 1.3590 877.8 645.9 52,15
70.3 1.46618 1.3596 879.4 646.8 52,25
70.4 1.46642 1.3603 881.0 647.7 52,35
70.5 1.46667 1.3609 882.7 648.6 52,45
70.6 1.46691 1.3616 884.3 649.4 52,54
70.7 1.46715 1.2622 885.9 650.3 52,64
70.8 1.46740 1.3629 887.5 651.2 52,73
70.9 1.46765 1.3635 889.1 652.1 52,83
71.0 1.46789 1.3642 890.7 652.9 52,92
71.1 1.46814 1.3649 892.4 653.8 53,02
71.2 1.46838 1.3655 894.1 654.7 53,12
71.3 1.46863 1.3662 895.7 655.6 53,22
71.4 1.46888 1.3669 897.4 656.5 53,32
71.5 1.46913 1.3676 899.1 657.4 53,42
71.6 1.46937 1.3683 900.8 658.3 53,52
71.7 1.46962 1.3689 902.5 659.2 53,62
71.8 1.46987 1.3696 904.1 660.1 53,72
71.9 1.47011 1.3703 905.8 661.0 53,82
72.0 1.47036 1.3710 907.5 661.9 53,92
72.1 1.47061 1.3717 909.2 662.8 54,02
72.2 1.47086 1.3723 910.8 663.7 54,12
72.3 1.47110 1.3730 912.5 664.6 54,22
72.4 1.47135 1.3737 914.2 665.5 54,32
72.5 1.47160 1.3744 915.9 666.4 54,42
72.6 1.47185 1.3750 917.5 667.3 54,51
72.7 1.47210 1.3757 919.2 668.2 54,62
72.8 1.47234 1.3764 920.9 669.0 54,72
72.9 1.47259 1.3771 922.5 669.9 54,81
73.0 1.47284 1.3777 924.2 670.8 54,91
73.1 1.47309 1.3784 925.9 671.7 55,01
73.2 1.47334 1.3791 927.6 672.6 55,11
73.3 1.47359 1.3798 929.2 673.5 55,21
73.4 1.47384 1.3804 930.9 674.4 55,31
73.5 1.47409 1.3811 932.6 675.2 55,41
73.6 1.47434 1.3818 934.3 676.1 55,51
73.7 1.47459 1.3825 936.0 677.0 55,61
73.8 1.47484 1.3832 937.6 677.9 55,71
73.9 1.47509 1.3838 939.3 678.8 55,81
74.0 1.47534 1.3845 941.0 679.7 55,91
74.1 1.47559 1.3852 942.7 680.5 56,01
74.2 1.47584 1.3859 944.4 681.4 56,11
74.3 1.47609 1.3866 946.0 682.3 56,21
74.4 1.47634 1.3872 947.7 683.2 56,31
74.5 1.47660 1.3879 949.4 684.0 56,41
74.6 1.47685 1.3886 951.1 684.9 56,51
74.7 1.47710 1.3893 952.8 685.8 56,61
74.8 1.47735 1.3900 954.4 686.7 56,71
74.9 1.47760 1.3906 956.1 687.5 56,811990R2676—ES—21.04.1999—006.001—31
▼B
TABLAIII
Tabladelcontenidoenazúcar (1),engramosporlitroyengramosporkilogramo,demostos
concentradosrectificados,determinadomedianteunrefractómetrograduadoenporcentajeen
masadesacarosaa20ºCoeníndicederefraccióna20ºC.Figuratambiénlamasavolúmica
a20ºC
Sacarosa%(m/
m)
%(m/m)Índicede
refraccióna
20ºCMasavolúmica
a20ºCAzúcaren
g/lAzúcaren
g/kgGrado
alcohólico
%vola20ºC
50.0 1.42008 1.2342 627.6 508.5 37,28
50.1 1.42029 1.2348 629.3 509.6 37,38
50.2 1.42050 1.2355 630.9 510.6 37,48
50.3 1.42071 1.2362 632.4 511.6 37,56
50.4 1.42092 1.2367 634.1 512.7 37,66
50.5 1.42113 1.2374 635.7 513.7 37,76
50.6 1.42135 1.2381 637.3 514.7 37,85
50.7 1.42156 1.2386 638.7 515.7 37,94
50.8 1.42177 1.2391 640.4 516.8 38,04
50.9 1.42198 1.2396 641.9 517.8 38,13
51.0 1.42219 1.2401 643.4 518.8 38,22
51.1 1.42240 1.2406 645.0 519.9 38,31
51.2 1.42261 1.2411 646.5 520.9 38,40
51.3 1.42282 1.2416 648.1 522.0 38,50
51.4 1.42304 1.2421 649.6 523.0 38,59
51.5 1.42325 1.2427 651.2 524.0 38,68
51.6 1.42347 1.2434 652.9 525.1 38,78
51.7 1.42368 1.2441 654.5 526.1 38,88
51.8 1.42389 1.2447 656.1 527.1 38,97
51.9 1.42410 1.2454 657.8 528.2 39,07
52.0 1.42432 1.2461 659.4 529.2 39,17
52.1 1.42453 1.2466 661.0 530.2 39,26
52.2 1.42475 1.2470 662.5 531.3 39,35
52.3 1.42496 1.2475 664.1 532.3 39,45
52.4 1.42517 1.2480 665.6 533.3 39,54
52.5 1.42538 1.2486 667.2 534.4 39,63
52.6 1.42560 1.2493 668.9 535.4 39,73
52.7 1.42581 1.2500 670.5 536.4 39,83
52.8 1.42603 1.2506 672.2 537.5 39,93
52.9 1.42624 1.2513 673.8 538.5 40,02
53.0 1.42645 1.2520 675.5 539.5 40,12
53.1 1.42667 1.2525 677.1 540.6 40,22
53.2 1.42689 1.2530 678.5 541.5 40,30
53.3 1.42711 1.2535 680.2 542.6 40,40
53.4 1.42733 1.2540 681.8 543.7 40,50
53.5 1.42754 1.2546 683.4 544.7 40,59
53.6 1.42776 1.2553 685.1 545.8 40,69
53.7 1.42797 1.2560 686.7 546.7 40,79
53.8 1.42819 1.2566 688.4 547.8 40,89
53.9 1.42840 1.2573 690.1 548.9 40,99
54.0 1.42861 1.2580 691.7 549.8 41,09
54.1 1.42884 1.2585 693.3 550.9 41,18
54.2 1.42906 1.2590 694.9 551.9 41,28
54.3 1.42927 1.2595 696.5 553.0 41,37
54.4 1.42949 1.2600 698.1 554.0 41,47
54.5 1.42971 1.2606 699.7 555.1 41,56
54.6 1.42993 1.2613 701.4 556.1 41,66
54.7 1.43014 1.2620 703.1 557.1 41,76
54.8 1.43036 1.2625 704.7 558.2 41,86
54.9 1.43058 1.2630 706.2 559.1 41,951990R2676—ES—21.04.1999—006.001—32
(1) Elcontenidoenazúcaresestáexpresadoenazúcarinvertido.
▼B
Sacarosa%(m/
m)
%(m/m)Índicede
refraccióna
20ºCMasavolúmica
a20ºCAzúcaren
g/lAzúcaren
g/kgGrado
alcohólico
%vola20ºC
55.0 1.43079 1.2635 707.8 560.2 42,04
55.1 1.43102 1.2639 709.4 561.3 42,14
55.2 1.43124 1.2645 711.0 562.3 42,23
55.3 1.43146 1.2652 712.7 563.3 42,33
55.4 1.43168 1.2659 714.4 564.3 42,44
55.5 1.43189 1.2665 716.1 565.4 42,54
55.6 1.43211 1.2672 717.8 566.4 42,64
55.7 1.43233 1.2679 719.5 567.5 42,74
55.8 1.43255 1.2685 721.1 568.5 42,83
55.9 1.43277 1.2692 722.8 569.5 42,93
56.0 1.43298 1.2699 724.5 570.5 43,04
56.1 1.43321 1.2703 726.1 571.6 43,13
56.2 1.43343 1.2708 727.7 572.6 43,23
56.3 1.43365 1.2713 729.3 573.7 43,32
56.4 1.43387 1.2718 730.9 574.7 43,42
56.5 1.43409 1.2724 732.6 575.8 43,52
56.6 1.43431 1.2731 734.3 576.8 43,62
56.7 1.43454 1.2738 736.0 577.8 43,72
56.8 1.43476 1.2744 737.6 578.8 43,81
56.9 1.43498 1.2751 739.4 579.9 43,92
57.0 1.43519 1.2758 741.1 580.9 44,02
57.1 1.43542 1.2763 742.8 582.0 44,12
57.2 1.43564 1.2768 744.4 583.0 44,22
57.3 1.43586 1.2773 745.9 584.0 44,31
57.4 1.43609 1.2778 747.6 585.1 44,41
57.5 1.43631 1.2784 749.3 586.1 44,51
57.6 1.43653 1.2791 751.0 587.1 44,61
57.7 1.43675 1.2798 752.7 588.1 44,71
57.8 1.43698 1.2804 754.4 589.2 44,81
57.9 1.43720 1.2810 756.1 590.2 44,91
58.0 1.43741 1.2818 757.8 591.2 45,01
58.1 1.43764 1.2822 759.5 592.3 45,11
58.2 1.43784 1.2827 761.1 593.4 45,21
58.3 1.43809 1.2832 762.6 594.3 45,30
58.4 1.43832 1.2837 764.3 595.4 45,40
58.5 1.43854 1.2843 766.0 596.4 45,50
58.6 1.43877 1.2850 767.8 597.5 45,61
58.7 1.43899 1.2857 769.5 598.5 45,71
58.8 1.43922 1.2863 771.1 599.5 45,80
58.9 1.43944 1.2869 772.9 600.6 45,91
59.0 1.43966 1.2876 774.6 601.6 46,01
59.1 1.43988 1.2882 776.3 602.6 46,11
59.2 1.44011 1.2889 778.1 603.7 46,22
59.3 1.44034 1.2896 779.8 604.7 46,32
59.4 1.44057 1.2902 781.6 605.8 46,43
59.5 1.44079 1.2909 783.3 606.8 46,53
59.6 1.44102 1.2916 785.2 607.9 46,64
59.7 1.44124 1.2921 786.8 608.9 46,74
59.8 1.44147 1.2926 788.4 609.9 46,83
59.9 1.44169 1.2931 790.0 610.9 46,931990R2676—ES—21.04.1999—006.001—33
▼B
Sacarosa%(m/
m)
%(m/m)Índicede
refraccióna
20ºCMasavolúmica
a20ºCAzúcaren
g/lAzúcaren
g/kgGrado
alcohólico
%vola20ºC
60.0 1.44192 1.2936 791.7 612.0 47,03
60.1 1.44215 1.2942 793.3 613.0 47,12
60.2 1.44238 1.2949 795.2 614.1 47,23
60.3 1.44260 1.2956 796.9 615.1 47,34
60.4 1.44283 1.2962 798.6 616.1 47,44
60.5 1.44305 1.2969 800.5 617.2 47,55
60.6 1.44328 1.2976 802.2 618.2 47,65
60.7 1.44351 1.2981 803.9 619.3 47,75
60.8 1.44374 1.2986 805.5 620.3 47,85
60.9 1.44397 1.2991 807.1 621.3 47,94
61.0 1.44419 1.2996 808.7 622.3 48,04
61.1 1.44442 1.3002 810.5 623.4 48,14
61.2 1.44465 1.3009 812.3 624.4 48,25
61.3 1.44488 1.3016 814.2 625.5 48,36
61.4 1.44511 1.3022 815.8 626.5 48,46
61.5 1.44534 1.3029 817.7 627.6 48,57
61.6 1.44557 1.3036 819.4 628.6 48,67
61.7 1.44580 1.3042 821.3 629.7 48,79
61.8 1.44603 1.3049 823.0 630.7 48,89
61.9 1.44626 1.3056 824.8 631.7 48,99
62.0 1.44648 1.3062 826.6 632.8 49,10
62.1 1.44672 1.3068 828.3 633.8 49,20
62.2 1.44695 1.3075 830.0 634.8 49,30
62.3 1.44718 1.3080 831.8 635.9 49,40
62.4 1.44741 1.3085 833.4 636.9 49,50
62.5 1.44764 1.3090 835.1 638.0 49,60
62.6 1.44787 1.3095 836.8 639.0 49,71
62.7 1.44810 1.3101 838.5 640.0 49,81
62.8 1.44833 1.3108 840.2 641.0 49,91
62.9 1.44856 1.3115 842.1 642.1 50,02
63.0 1.44879 1.3121 843.8 643.1 50,12
63.1 1.44902 1.3128 845.7 644.2 50,23
63.2 1.44926 1.3135 847.5 645.2 50,34
63.3 1.44949 1.3141 849.3 646.3 50,45
63.4 1.44972 1.3148 851.1 647.3 50,56
63.5 1.44995 1.3155 853.0 648.4 50,67
63.6 1.45019 1.3161 854.7 649.4 50,77
63.7 1.45042 1.3168 856.5 650.4 50,88
63.8 1.45065 1.3175 858.4 651.5 50,99
63.9 1.45088 1.3180 860.0 652.5 51,08
64.0 1.45112 1.3185 861.6 653.5 51,18
64.1 1.45135 1.3190 863.4 654.6 51,29
64.2 1.45158 1.3195 865.1 655.6 51,39
64.3 1.45181 1.3201 866.9 656.7 51,49
64.4 1.45205 1.3208 868.7 657.7 51,60
64.5 1.45228 1.3215 870.6 658.8 51,71
64.6 1.45252 1.3221 872.3 659.8 51,81
64.7 1.45275 1.3228 874.1 660.8 51,92
64.8 1.45299 1.3235 876.0 661.9 52,03
64.9 1.45322 1.3241 877.8 662.9 52,141990R2676—ES—21.04.1999—006.001—34
▼B
Sacarosa%(m/
m)
%(m/m)Índicede
refraccióna
20ºCMasavolúmica
a20ºCAzúcaren
g/lAzúcaren
g/kgGrado
alcohólico
%vola20ºC
65.0 1.45347 1.3248 879.7 664.0 52,25
65.1 1.45369 1.3255 881.5 665.0 52,36
65.2 1.45393 1.3261 883.2 666.0 52,46
65.3 1.45416 1.3268 885.0 667.0 52,57
65.4 1.45440 1.3275 886.9 668.1 52,68
65.5 1.45463 1.3281 888.8 669.2 52,79
65.6 1.45487 1.3288 890.6 670.2 52,90
65.7 1.45510 1.3295 892.4 671.2 53,01
65.8 1.45534 1.3301 894.2 672.3 53,12
65.9 1.45557 1.3308 896.0 673.3 53,22
66.0 1.45583 1.3315 898.0 674.4 53,34
66.1 1.45605 1.3320 899.6 675.4 53,44
66.2 1.45629 1.3325 901.3 676.4 53,54
66.3 1.45652 1.3330 903.1 677.5 53,64
66.4 1.45676 1.3335 904.8 678.5 53,75
66.5 1.45700 1.3341 906.7 679.6 53,86
66.6 1.45724 1.3348 908.5 680.6 53,96
66.7 1.45747 1.3355 910.4 681.7 54,08
66.8 1.45771 1.3361 912.2 682.7 54,18
66.9 1.45795 1.3367 913.9 683.7 54,29
67.0 1.45820 1.3374 915.9 684.8 54,40
67.1 1.45843 1.3380 917.6 685.8 54,51
67.2 1.45867 1.3387 919.6 686.9 54,62
67.3 1.45890 1.3395 921.4 687.9 54,73
67.4 1.45914 1.3400 923.1 688.9 54,83
67.5 1.45938 1.3407 925.1 690.0 54,95
67.6 1.45962 1.3415 927.0 691.0 55,06
67.7 1.45986 1.3420 928.8 692.1 55,17
67.8 1.46010 1.3427 930.6 693.1 55,28
67.9 1.46034 1.3434 932.6 694.2 55,40
68.0 1.46060 1.3440 934.4 695.2 55,50
68.1 1.46082 1.3447 936.2 696.2 55,61
68.2 1.46106 1.3454 938.0 697.2 55,72
68.3 1.46130 1.3460 939.9 698.3 55,83
68.4 1.46154 1.3466 941.8 699.4 55,94
68.5 1.46178 1.3473 943.7 700.4 56,06
68.6 1.46202 1.3479 945.4 701.4 56,16
68.7 1.46226 1.3486 947.4 702.5 56,28
68.8 1.46251 1.3493 949.2 703.5 56,38
68.9 1.46275 1.3499 951.1 704.6 56,50
69.0 1.46301 1.3506 953.0 705.6 56,61
69.1 1.46323 1.3513 954.8 706.6 56,72
69.2 1.46347 1.3519 956.7 707.7 56,83
69.3 1.46371 1.3526 958.6 708.7 56,94
69.4 1.46396 1.3533 960.6 709.8 57,06
69.5 1.46420 1.3539 962.4 710.8 57,17
69.6 1.46444 1.3546 964.3 711.9 57,28
69.7 1.46468 1.3553 966.2 712.9 57,39
69.8 1.46493 1.3560 968.2 714.0 57,51
69.9 1.46517 1.3566 970.0 715.0 57,621990R2676—ES—21.04.1999—006.001—35
▼B
Sacarosa%(m/
m)
%(m/m)Índicede
refraccióna
20ºCMasavolúmica
a20ºCAzúcaren
g/lAzúcaren
g/kgGrado
alcohólico
%vola20ºC
70.0 1.46544 1.3573 971.8 716.0 57,72
70.1 1.46565 1.3579 973.8 717.1 57,84
70.2 1.46590 1.3586 975.6 718.1 57,95
70.3 1.46614 1.3593 977.6 719.2 58,07
70.4 1.46639 1.3599 979.4 720.2 58,18
70.5 1.46663 1.3606 981.3 721.2 58,29
70.6 1.46688 1.3613 983.3 722.3 58,41
70.7 1.46712 1.3619 985.2 723.4 58,52
70.8 1.46737 1.3626 987.1 724.4 58,63
70.9 1.46761 1.3633 988.9 725.4 58,74
71.0 1.46789 1.3639 990.9 726.5 58,86
71.1 1.46810 1.3646 992.8 727.5 58,97
71.2 1.46835 1.3653 994.8 728.6 59,09
71.3 1.46859 1.3659 996.6 729.6 59,20
71.4 1.46884 1.3665 998.5 730.7 59,31
71.5 1.46908 1.3672 1000.4 731.7 59,42
71.6 1.46933 1.3678 1002.2 732.7 59,53
71.7 1.46957 1.3685 1004.2 733.8 59,65
71.8 1.46982 1.3692 1006.1 734.8 59,76
71.9 1.47007 1.3698 1008.0 735.9 59,88
72.0 1.47036 1.3705 1009.9 736.9 59,99
72.1 1.47056 1.3712 1012.0 738.0 60,11
72.2 1.47081 1.3718 1013.8 739.0 60,22
72.3 1.47106 1.3725 1015.7 740.0 60,33
72.4 1.47131 1.3732 1017.7 741.1 60,45
72.5 1.47155 1.3738 1019.5 742.1 60,56
72.6 1.47180 1.3745 1021.5 743.2 60,68
72.7 1.47205 1.3752 1023.4 744.2 60,79
72.8 1.47230 1.3758 1025.4 745.3 60,91
72.9 1.47254 1.3765 1027.3 746.3 61,02
73.0 1.47284 1.3772 1029.3 747.4 61,14
73.1 1.47304 1.3778 1031.2 748.4 61,25
73.2 1.47329 1.3785 1033.2 749.5 61,37
73.3 1.47354 1.3792 1035.1 750.5 61,48
73.4 1.47379 1.3798 1037.1 751.6 61,60
73.5 1.47404 1.3805 1039.0 752.6 61,72
73.6 1.47429 1.3812 1040.9 753.6 61,83
73.7 1.47454 1.3818 1042.8 754.7 61,94
73.8 1.47479 1.3825 1044.8 755.7 62,06
73.9 1.47504 1.3832 1046.8 756.8 62,18
74.0 1.47534 1.3838 1048.6 757.8 62,28
74.1 1.47554 1.3845 1050.7 758.9 62,41
74.2 1.47579 1.3852 1052.6 759.9 62,52
74.3 1.47604 1.3858 1054.6 761.0 62,64
74.4 1.47629 1.3865 1056.5 762.0 62,76
74.5 1.47654 1.3871 1058.5 763.1 62,87
74.6 1.47679 1.3878 1060.4 764.1 62,99
74.7 1.47704 1.3885 1062.3 765.1 63,10
74.8 1.47730 1.3892 1064.4 766.2 63,23
74.9 1.47755 1.3898 1066.3 767.2 63,33
75.0 1.47785 1.3905 1068.3 768.3 63,461990R2676—ES—21.04.1999—006.001—36
▼B
3.GRADOALCOHÓLICOVOLUMÉTRICO
1. DEFINICIÓN
El grado alcohólico volumétrico es igual al número de litros de
etanol contenidos en 100 litros de vino, medidos ambos volúmenes
alatemperaturade20ºC.Susímboloes«%vol».
Nota:Eletanol,sushomólogosylosésteresdeambosestáncomprendidos
enelgradoalcohólico,porencontrarseeneldestilado.
2. FUNDAMENTODELOSMÉTODOS
2.1. Destilacióndelvinoalcalinizado medianteunasuspensióndehidró-
xidodecalcio.Determinacióndelgradoalcohólicoeneldestilado.
2.2. Métododereferencia:determinacióndelamasavolúmicadeldesti-
ladoporpicnometría.
2.3.Métodosusuales
2.3.1.Determinación del grado alcohólico del destilado por areometría
2.3.2.Determinación del grado alcohólico del destilado por densimetría
con balanza hidrostática
2.3.3.Determinacióndelgradoalcohólico deldestiladoporrefractometría
Nota:Para expresar el grado alcohólico a partir de la masa volúmica del
destilado, utilícense las tablas prácticas I, II, III que figuran en el
Anexo II de este capítulo. Se han calculado a partir de la tabla
alcohólica internacional publicada en 1972 por la Organización
internacional de Metrología Legal (OIML) en su Recomendación
n
o22yfueadoptadaporlaOIV(Asambleageneralde1974).
EnlatablaI(AnexoII)sedalaecuacióngeneralporlaqueserela-
ciona el grado alcohólico volumétrico y la masa volúmica de las
mezclashidroalcohólicasenfuncióndelatemperatura.
3. OBTENCIÓNDELDESTILADO3.1.Material
3.1.1. Aparatodedestilacióncompuestopor:
— unmatrazdefondoredondode1litrodecapacidadconesmeri-
ladonormalizado,
— una columna rectificadora de una altura de unos 20 cm o cual-
quierdispositivoparaimpedirelarrastre,
— unafuentedecalor;debeevitarsetodapirogenacióndelasmate-
riasextractivasmedianteundispositivoadecuado,
— un refrigerante terminado en un tubo afilado que conduzca el
destilado al fondo del matraz aforado receptor que deberá
conteneralgunosmililitrosdeagua.
3.1.2. Aparatodearrastreporvapordeagua,formadopor:
1. ungeneradordevapordeagua,
2. unborboteador,3. unacolumnarectificadora,
4. unrefrigerante.
Puede utilizarse cualquier otro modelo de aparato de destilación o
cualquier otro aparato de arrastre por vapor de agua siempre que
respondaalensayosiguiente:
Destilar 5 veces consecutivas una mezcla hidroalcohólica de 10 %
vol.Despuésdelaquintadestilación,eldestiladodebepresentarun
grado alcohólico de 9,9 % vol, como mínimo, es decir, no debe
producirse una pérdida de alcohol superior a 0,02 % vol durante
cadadestilación.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—37
▼B
3.2.Reactivos
3.2.1.Suspensión de hidróxido de calcio 2 M
Se obtiene vertiendo, con cuidado, un litro de agua caliente (60-
70ºC)sobre120gdecalvivaCaO.
3.3.Preparacióndelamuestra
En los vinos jóvenes o espumosos debe eliminarse previamente la
mayorcantidadposiblededióxidodecarbono,agitando250-300ml
devinoenunerienmeyerde500ml.
3.4.Procedimiento
Echarenunmatrazaforadounvolumendevinode200ml.
Anotarlatemperaturadelvino.Verterloenelmatrazdelaparatodedestilaciónoenelborboteador
del aparato de arrastre por vapor de agua. Lavar el matraz aforado
cuatrovecescon5mldeaguaqueseverteránenelmatrazdedesti-
lación o en el borboteador. Añadir 10 ml de hidróxido de calcio
(3.2.1) y algunos fragmentos de materia porosa inerte (piedra
pómez).
Recogereldestiladoenelmatrazaforadode200mlquehaservido
paramedirelvino.
Deberecogerseunvolumenigualalastrescuartaspartes,aproxima-
damente, del volumen inicial en el caso de la destilación, o 198-
199 ml de destilado en el caso de arrastre por vapor de agua.
Completar a 200 ml con agua destilada a una temperatura idéntica
alatemperaturainicial,conunaaproximaciónde±2ºC.
Mezciarconprecaución,medianteunmovimientocircular.
Nota:En el caso de vinos especialmente cargados de iones amoniacales,
efectuarunanuevadestilacióndeldestiladoenlascondicionesante-
riormente descritas, sustituyendo la suspensión de hidróxido de
calciopor1mldeácidosulfúricoal10%(v/v).
4. MÉTODODEREFERENCIA
Determinacióndelgradoalcohólicodeldestiladoporpicnometría.
4.1.Aparatos
4.1.1. Utilizarelpicnómetrocalibradocomoseindicaenelcapítulo«Masa
volúmica».
4.2.Procedimiento
Determinar la masa volúmica aparente a T ºC del destilado (3.4),
como se indica en el capítulo «Masa volúmica», en 4.3.1 y 4.3.2;
seaρ
tdichamasavolúmica.
4.3.Expresióndelosresultados
4.3.1.Método de cálculo
Expresarelgradoalcohólicoa20ºCutilizandolatablaI.Enlalínea
horizontal de la tabla correspondiente a la temperatura T ºC expre-
sadaennúmeroenterobuscarlamenormasavolúmicasuperiora ρt.
Empléese la diferencia tabular leída debajo de esta masa volúmica
paracalcularlamasavolúmica ρalatemperaturaT.
En la línea de la temperatura T, buscar la masa volúmica ρ′inme-
diatamente superiora ρycalcular ladiferencia entrelasdosmasas
volúmicas ρyρ′.Estadiferenciasedividiráporladiferenciatabular
leída a la derecha de la masa volúmica ρ′. El cociente da la parte
decimal del gradoalcohólico, mientras quela parte entera de dicho
grado viene indicada en la cabecera de la columna en que se
encuentralamasavolúmica ρ′.
En el Anexo I de este capítulo figura un ejemplo de cálculo del
gradoalcohólico.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—38
▼B
Nota:
Esta corrección de temperatura ha sido programada y, en su caso,
puedeefectuarseautomáticamente.
4.3.2.Repetibilidad (r):
r=0,10%vol
4.3.3.Reproductibilidad (R):
R=0,19%vol
5. MÉTODOSUSUALES5.1.Areometría
5.1.1.Aparatos
5.1.1.1. Alcohómetro
Elalcohómetro debeajustarsealasespecificaciones delosaparatos
delasclasesIoIIdefinidasenlarecomendacióninternacionaln
o44,
«Alcohómetrosyareómetrosparaalcohol»,delaOIML.
5.1.1.2. Termómetrograduadoengradosydécimasdegradode0ºa40ºC,
conunaaproximacióncomprobadade1/20degrado.
5.1.1.3. Probeta cilíndrica de 36 mm de diámetro y 320 mm de altura,
mantenida en posición vertical mediante un soporte con tornillos
niveladores.
5.1.2.Procedimiento
Vertereldestilado(3.4)enlaprobetacilíndrica.Mantenerlaprobeta
en posición vertical. Introducir el termómetro y el alcohómetro.
Efectuarlalecturadeltermómetro1min.,despuésdehaberagitado
para igualar la temperatura de la probeta, del termómetro, del
alcohómetro y del destilado. Retirar el termómetro y leer el grado
alcohólico aparente tras 1 min. de reposo. Realizar por lo menos
tres lecturas utilizando una lupa. En el grado aparente medido a t
ºCdebecorregirselaaccióndelatemperaturautilizandolatablaII.
Es necesario que la temperatura del líquido no se diferencie en
mucho de la temperatura ambiente (5 ºC de diferencia, como
máximo).
5.2.Densimetríaconbalanzahidrostática
5.2.1.Material
Utilizarlabalanzahidrostáticacomoseindicaenelcapítulo«Masa
volúmica».
5.2.2.Forma de operar
ProcederaladeterminacióndelamasavolúmicaaparenteatºCdel
destiladocomoseindicaenelcapítulo«Masavolúmica»en5.2.2.
5.2.3.Expresión de los resultados
Expresarelgradoalcohólico a20ºCsiguiendolasindicaciones del
apartado4.3.1yutilizandolatablaI,sielflotadoresenvidriopyrex
ylatablaIIIsielflotadoresenvidrionormal.
5.3.Refractometría
5.3.1.Material
5.3.1.1. Refractómetro que permita la medida de los índices de refracción
comprendidosentre1,330y1,346.
Enfuncióndeltipodeaparato,lasmedidasdeberánrealizarse:
— biena20ºC,conayudadeundispositivoadecuado;
— bienatemperaturaambientetºC,medidaconuntermómetroque
permita determinarla con una aproximación de 0,05 ºC, como
mínimo. Con el aparato se facilita una tabla de corrección de
temperatura.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—39
▼B
5.3.2.Procedimiento
Lamedidadelíndicederefracciónseefectúaeneldestiladodevino
(3.4), siguiendo el procedimiento prescrito para el tipo de aparato
utilizado.
5.3.3.Expresión de los resultados
Elíndicederefraccióna20ºCsellevaalatablaIVparaobtenerel
gradoalcohólico.
Nota:
EnlatablaIVfiguralacorrespondenciaentrelosíndicesderefrac-
ción de las mezclas hidroalcohólicas puras y de los destilados de
vino.Enelcasodedestiladosdevino,setienenencuentalasimpu-
rezas del destilado (principalmente alcoholes superiores). La
presencia de metanol se traduce en la disminución del índice de
refraccióny,porlotanto,delgradoalcohólico.
6. EJEMPLO DE CÁLCULO DEL GRADO ALCOHÓLICO DE UN
VINO
6.1.Picnometríaconbalanzadedosplatos
6.1.1. Lasconstantesdelpicnómetrosedebendeterminar ycalcular como
se indica en el punto 6.1.1 del capítulo 1 «Masa volúmica y
densidadrelativa».
6.1.2.Pesada del picnómetro lleno de destilado
Ejemplonumérico
Tara=picnómetro+destiladoatºC+p ″/C144/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C145/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C146tºC =18,90ºC
tºCcorregido =18,70ºC
p″=2,8074g
p+m−p ″=masadeldestiladoatºC 105,0698−2,8074=102,2624g
MasavolúmicaaparenteatºC
ρ
tpþm/C0p00
volumendelpicn´ ometroa20ºC/C144/C147/C147/C147/C147/C147/C145/C147/C147/C147/C147/C147/C146ρ18 ;70ºC¼102 ;2624
104 ;0229¼0;983076
6.1.3.Cálculo del grado alcohólico
Se utiliza el cuadro de masas volúmicas
aparentesdelasmezclashidroalcohólicas
adiferentestemperaturas,comoseindicó
anteriormente/C144/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C145/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C146En la línea 18 ºC de la tabla de masas
volúmicas aparentes, la menor masa
superior a la masa observada 0,983087
es0,98398,enlacolumna11
Lamasavolúmicaa18ºCes:
(98307,6+0,7×22)10
−5=0,98323
0,98398−0,98323=0,00075
La parte decimal del gradoalcohólico es
75/114=0,65
Elgradoalcohólicoes:11,65%vol
6.2.Picnometríaconbalanzamonoplato
6.2.1. Lasconstantesdelpicnómetrosehandeterminadoycalculadoenel
punto6.2.1delcapítulo«Masavolúmicaydensidadrelativa».
6.2.2.Pesada del picnómetro lleno de destilado:
Pesodelfrascotaraenelmomentode
ladeterminación: T1=171,9178g
Picnómetro lleno de destilado a
20,50ºC: P2=167,8438g1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—40
▼B
Variacióndelempujedelaire: dT =171,9178−171,9160
=+0,0018
Masadeldestiladoa20,50ºC: Lt=167,8438−(67,6695+0,0018)
=100,1725
Masa volúmica aparente del desti-
lado: ρ20 ;5ºC¼100 ;1725
101 ;8194¼0;983825
6.2.3.Cálculo del grado alcohólico:
Utilizar la tabla de masas volúmicas
aparentesdelasmezclashidroalcohólicas
adiferentestemperaturas,comoseindicó
anteriormente/C144/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C145/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C146En la línea 20 ºC de la tabla de masas
volúmicas aparentes, la menor masa
superior a la masa observada 0,983825
es0,98471,enlacolumna10%
Lamasavolúmicaa20ºCes:
(98382,5+0,50×24)10
−5=0,983945
0,98471−0,983945=0,000765
Lapartedecimaldelgradoalcohólicoes:
76,5/119=0,64
Elgradoalcohólicoes:10,64%vol1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—41
▼B
FÓRMULA PARA CALCULAR LAS TABLAS ALCOHÓLICAS DE LAS
MEZCLASDEALCOHOLETÍLICOYAGUA
La masa volúmica « ρ», expresada en kilogramos pormetro cúbico (kg/m3), de
una mezcla de alcohol etílico y agua a la temperatura t, expresada en grados
Celsius,vienedadaporlafórmulasiguiente,enfunciónde:
— elgradoenmasapexpresadoporunnúmerodecimal,(1)
— latemperaturatexpresadaengradosCelsius,(EIPT68)— loscoeficientesnuméricosquefiguranacontinuación.
Lafórmulaesválidaparalastemperaturascomprendidasentre−20ºCy+40ºC
Coeficientesnuméricosdelafórmula
kAk
kg/m3Bk
1 9,982012300·102−2,0618513·10−1kg/(m3·ºC)
2 −1,929769495·102−5,2682542·10−3kg/(m3·ºC2)
3 3,891238958·1023,6130013·10−5kg/(m3·ºC3)
4 −1,668103923·103−3,8957702·10−7kg/(m3·ºC4)
5 1,352215441·1047,1693540·10−9kg/(m3·ºC5)
6 −8,829278388·104−9,9739231·10−11kg/(m3·ºC6)
7 3,062874042·105
8 −6,138381234·105
9 7,470172998·105
10 −5,478461354·105
11 2,234460334·105
12 −3,903285426·104
kC1,k
kg/(m3·ºC)C2,k
kg/(m3·ºC2)
1 1,693443461530087·10−1−1,193013005057010·10−2
2 −1,046914743455169·1012,517399633803461·10−1
3 7,196353469546523·101−2,170575700536993
4 −7,047478054272792·1021,353034988843029·101
5 3,924090430035045·103−5,029988758547014·101
6 −1,210164659068747·1041,096355666577570·102
7 2,248646550400788·104−1,422753946421155·102
8 −2,605562982188164·1041,080435942856230·102
9 1,852373922069467·104−4,414153236817392·101
10 −7,420201433430137·1037,442971530188783
11 1,285617841998974·103
kC3,k
kg/(m3·ºC3)C4,k
kg/(m3·ºC4)C5,k
kg/(m3·ºC5)
1 −6,802995733503803·10−44,075376675622027·10−6−2,788074354782409·10−8
2 1,876837790289664·10−2−8,763058573471110·10−61,345612883493354·10−8
3 −2,002561813734156·10−16,515031360099368·10−6
4 1,022992966719220 −1,515784836987210·10−6
5 −2,895696483903638
6 4,810060584300675
7 −4,672147440794683
8 2,458043105903461
9 −5,411227621436812·10−11990R2676—ES—21.04.1999—006.001—42
(1) Ejemplo:paraungradoenmasade12%:p=0,12.
▼B
TABLAI
GRADOALCOHÓLICOINTERNACIONALA20ºC
TablademasasvolúmicasaparentesdemezclashidroalcohólicasPicnómetrodevidriopyrex
Masasvolúmicasatº,corregidasdelempujedelaire
tºGradoalcohométricovolumetricoen%
01234567891 01 1
0º 999,641,50998,141,44996,701,40995,301,35993,951,30992,651,24991,411,19990,221,14989,081,10987,981,05986,931,00985,93 0,95
−0,07 −0,06 −0,06 −0,06 −0,06 −0,06 −0,06 −0,05 −0,04 −0,03 −0,02 −0,01
1º 999,711,51998,201,44996,761,40995,361,35994,011,30992,711,24991,471,20990,271,15989,121,11988,011,06986,951,01985,94 0,97
−0,05 −0,05 −0,04 −0,04 −0,04 −0,04 −0,03 −0,03 −0,02 −0,02 −0,01 0,00
2º 999,761,51998,251,45996,801,40995,401,35994,051,30992,751,25991,501,20990,301,16989,141,11988,031,07986,961,02985,94 0,98
−0,03 −0,03 −0,03 −0,02 −0,02 −0,02 −0,02 −0,01 −0,01 0,00 0,01 0,02
3º 999,791,51998,281,45996,831,41995,421,35994,071,30992,771,25991,521,21990,311,16989,151,12988,031,08986,951,03985,92 1,00
−0,02 −0,02 −0,01 −0,02 −0,01 −0,01 0,00 0,00 0,01 0,02 0,03 0,04
4º 999,811,51998,301,46996,841,40995,441,36994,081,30992,781,26991,521,21990,311,17989,141,13988,011,09986,921,04985,88 1,00
0,00 0,00 0,00 0,00 0,01 0,02 0,02 0,02 0,02 0,03 0,04 0,05
5º 999,811,51998,301,46996,841,40995,441,37994,071,31992,761,26991,501,21990,291,17989,121,14987,981,10986,881,05985,83 1,01
0,01 0,01 0,01 0,02 0,01 0,02 0,03 0,04 0,05 0,05 0,05 0,06
6º 999,801,51998,291,46996,831,41995,421,36994,061,32992,741,27991,471,22990,251,18989,071,14987,931,10986,831,06985,77 1,03
0,03 0,03 0,03 0,03 0,04 0,04 0,04 0,05 0,06 0,07 0,08 0,09
7º 999,771,51998,261,46996,801,41995,391,37994,021,32992,701,27991,431,23990,201,19989,011,15987,861,11986,751,07985,68 1,03
0,05 0,04 0,04 0,05 0,05 0,05 0,05 0,06 0,06 0,07 0,08 0,09
8º 999,721,50998,221,46996,761,42995,341,37993,971,32992,651,27991,381,24990,141,19988,951,16987,791,12986,671,08985,59 1,05
0,05 0,06 0,06 0,06 0,06 0,06 0,07 0,07 0,08 0,09 0,10 0,11
9º 999,671,51998,161,46996,701,42995,281,37993,911,32992,591,28991,311,24990,071,20988,871,17987,701,13986,571,09985,48 1,06
0,07 0,07 0,07 0,07 0,07 0,08 0,08 0,09 0,09 0,10 0,11 0,12
10º 999,601,51998,091,46996,631,42995,211,37993,841,33992,511,28991,231,25989,981,20988,781,17987,601,14986,461,10985,36 1,06
0,09 0,09 0,09 0,08 0,09 0,09 0,10 0,10 0,11 0,11 0,12 0,13
11º 999,511,51998,001,46996,541,41995,131,38993,751,33992,421,29991,131,25989,881,21988,671,18987,491,15986,341,11985,23 1,07
0,10 0,09 0,09 0,10 0,10 0,11 0,11 0,11 0,12 0,13 0,13 0,14
12º 999,411,50997,911,46996,451,42995,031,38993,651,34992,311,29991,021,25989,771,22988,551,19987,361,15986,211,12985,09 1,09
0,11 0,11 0,11 0,11 0,11 0,11 0,12 0,12 0,13 0,14 0,15 0,16
13º 999,301,50997,801,46996,341,42994,921,38993,541,34992,201,30990,901,25989,651,23988,421,20987,221,16986,061,13984,93 1,09
0,12 0,12 0,12 0,13 0,13 0,13 0,13 0,14 0,14 0,15 0,16 0,16
14º 999,181,50997,681,46996,221,43994,791,38993,411,34992,071,30990,771,26989,511,23988,281,21987,071,17985,901,13984,77 1,11
0,13 0,14 0,14 0,13 0,13 0,14 0,14 0,15 0,16 0,16 0,17 0,18
15º 999,051,51997,541,46996,081,42994,661,38993,281,35991,931,30990,631,27989,361,24988,121,21986,911,18985,731,14984,59 1,12
0,15 0,14 0,14 0,15 0,15 0,15 0,16 0,16 0,17 0,17 0,18 0,19
16º 998,901,50997,401,46995,941,43994,511,38993,131,35991,781,31990,471,27989,201,25987,951,21986,741,19985,551,15984,40 1,13
0,16 0,16 0,16 0,16 0,16 0,17 0,17 0,18 0,18 0,19 0,19 0,20
17º 998,741,50997,241,46995,781,43994,351,38992,971,36991,611,31990,301,28989,021,25987,771,22986,551,19985,361,16984,20 1,14
0,17 0,17 0,17 0,16 0,17 0,17 0,18 0,18 0,19 0,20 0,21 0,22
18º 998,571,50997,071,46995,611,42994,191,39992,801,36991,441,32990,121,28988,841,26987,581,23986,351,20985,151,17983,98 1,14
0,18 0,18 0,18 0,19 0,19 0,19 0,19 0,20 0,20 0,20 0,21 0,22
19º 998,391,50996,891,46995,431,43994,001,39992,611,36991,251,32989,931,29988,641,26987,381,23986,151,21984,941,10983,76 1,16
0,19 0,19 0,19 0,19 0,19 0,19 0,20 0,20 0,21 0,22 0,23 0,24
20º 998,201,50996,701,46995,241,43993,811,39992,421,36991,061,33989,731,29988,441,27987,171,24985,931,22984,711,19983,52 1,16
tºGradoalcohométricovolumetricoen%
01234567891 01 1
20º 998,201,50996,701,46995,241,43993,811,39992,421,36991,061,33989,731,29988,441,27987,171,24985,931,22984,711,19983,52 1,16
0,20 0,20 0,20 0,20 0,21 0,21 0,21 0,22 0,22 0,23 0,24 0,24
21º 998,001,50996,501,46995,041,43993,611,40992,211,36990,851,33989,521,30988,221,27986,951,25985,701,23984,471,19983,28 1,18
0,21 0,21 0,21 0,21 0,21 0,22 0,22 0,23 0,24 0,24 0,24 0,26
22º 997,791,50996,291,46994,831,43993,401,40992,001,37990,631,33989,301,31987,991,28986,711,25985,461,23984,231,21983,02 1,18
0,22 0,22 0,23 0,23 0,23 0,23 0,24 0,24 0,24 0,25 0,26 0,25
23º 997,571,50996,071,47994,601,43993,171,40991,771,37990,401,34989,061,31987,751,28986,471,26985,211,24983,971,20982,77 1,20
0,24 0,23 0,23 0,23 0,24 0,24 0,24 0,25 0,26 0,26 0,27 0,29
24º 997,331,49995,841,47994,371,43992,941,41991,531,37990,161,34988,821,32987,501,29986,211,26984,951,25983,701,22982,48 1,20
0,24 0,25 0,24 0,25 0,24 0,25 0,26 0,26 0,26 0,27 0,28 0,28
25º 997,091,50995,591,46994,131,44992,691,40991,291,38989,911,35988,561,32987,241,29985,951,27984,681,26983,421,22982,20 1,21
0,25 0,25 0,26 0,25 0,26 0,26 0,26 0,26 0,28 0,28 0,28 0,30
26º 996,841,50995,341,47993,871,43992,441,41991,031,38989,651,35988,301,32986,981,31985,671,27984,401,26983,141,24981,90 1,22
0,26 0,26 0,26 0,27 0,27 0,27 0,27 0,28 0,28 0,29 0,30 0,30
27º 996,581,50995,081,47993,611,44992,171,41990,761,38989,381,35988,031,33986,701,31985,391,28984,111,27982,841,24981,60 1,23
0,27 0,27 0,27 0,27 0,28 0,28 0,29 0,29 0,29 0,30 0,31 0,32
28º 996,311,50994,811,47993,341,44991,901,42990,481,38989,101,36987,741,33986,411,31985,101,29983,811,28982,531,25981,28 1,23
0,28 0,28 0,28 0,29 0,28 0,29 0,29 0,30 0,31 0,31 0,31 0,32
29º 996,031,50994,531,47993,061,45991,611,41990,201,39988,811,36987,451,34986,111,32984,791,29983,501,28982,221,26980,96 1,24
0,28 0,29 0,29 0,29 0,30 0,30 0,31 0,31 0,31 0,32 0,32 0,33
30º 995,751,51994,241,47992,771,45991,321,42989,901,39988,511,37987,141,34985,801,32984,481,30983,181,28981,901,27980,63 1,25
0,30 0,30 0,30 0,30 0,31 0,31 0,31 0,31 0,32 0,33 0,34 0,34
31º 995,451,51993,941,47992,471,45991,021,43989,591,39988,201,37986,831,34985,491,33984,161,31982,851,29981,561,27980,29 1,26
0,31 0,31 0,31 0,32 0,31 0,32 0,32 0,33 0,33 0,34 0,35 0,36
32º 995,141,51993,631,47992,161,46990,701,42989,281,40987,881,37986,511,35985,161,33983,831,32982,511,30981,211,28979,93 1,26
0,31 0,31 0,32 0,32 0,32 0,33 0,33 0,34 0,35 0,35 0,35 0,35
33º 994,831,51993,321,48991,841,46990,381,42988,961,41987,551,37986,181,36984,821,34983,481,32982,161,30980,861,28979,58 1,28
0,32 0,33 0,33 0,33 0,35 0,34 0,35 0,35 0,34 0,35 0,36 0,37
34º 994,511,52992,991,48991,511,46990,051,44988,611,40987,211,38985,831,36984,471,33983,141,33981,811,31980,501,29979,21 1,28
0,33 0,33 0,34 0,35 0,34 0,35 0,35 0,35 0,36 0,36 0,36 0,37
35º 994,181,52992,661,49991,171,47989,701,43988,271,41986,861,38985,481,36984,121,34982,781,33981,451,31980,141,30978,84 1,29
0,34 0,35 0,35 0,35 0,35 0,35 0,35 0,36 0,36 0,37 0,37 0,38
36º 993,841,53992,311,49990,821,47989,351,43987,921,41986,511,38985,131,37983,761,34982,421,34981,081,31979,771,31978,46 1,29
0,35 0,35 0,36 0,35 0,36 0,36 0,37 0,37 0,38 0,37 0,39 0,39
37º 993,491,53991,961,50990,461,46989,001,44987,561,41986,151,39984,761,37983,391,35982,041,33980,711,33979,381,31978,07 1,30
0,36 0,36 0,36 0,37 0,37 0,37 0,37 0,37 0,38 0,39 0,38 0,39
38º 993,131,53991,601,50990,101,47988,631,44987,191,41985,781,39984,391,37983,021,36981,661,34980,321,32979,001,32977,68 1,31
0,36 0,37 0,37 0,37 0,38 0,38 0,38 0,39 0,38 0,39 0,40 0,40
39º 992,771,54991,231,50989,731,47988,261,45986,811,41985,401,39984,011,38982,631,35981,281,35979,931,33978,601,32977,28 1,32
0,37 0,37 0,38 0,39 0,38 0,39 0,39 0,39 0,40 0,39 0,40 0,41
40º 992,401,54990,861,51989,351,48987,871,44986,431,42985,011,39983,621,38982,241,36980,881,34979,541,34978,201,33976,87 1,321990R2676—ES—21.04.1999—006.001—43
▼B
tºGradoalcohólicovolumétricoen%
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21
0 986,931,00985,930,95984,980,92984,060,88983,180,84982,340,80981,540,78980,760,75980,010,73979,280,72978,560,70977,86 0,70
−0,02 −0,01 0,01 0,01 0,03 0,04 0,07 0,08 0,10 0,12 0,14 0,17
1 986,951,01985,940,97984,970,92984,050,90983,150,85982,300,83981,470,79980,680,77979,910,75979,160,74978,420,73977,69 0,72
−0,01 0,00 0,01 0,03 0,04 0,07 0,08 0,10 0,12 0,14 0,16 0,18
2 986,961,02985,940,98984,960,94984,020,91983,110,88982,230,84981,390,81980,580,79979,790,77979,020,76978,260,75977,51 0,74
0,01 0,02 0,04 0,05 0,06 0,07 0,09 0,11 0,13 0,15 0,17 0,19
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0,03 0,04 0,04 0,06 0,07 0,09 0,10 0,12 0,14 0,16 0,18 0,20
4 986,921,04985,881,00984,880,97983,910,93982,980,91982,070,87981,200,85980,350,83979,520,81978,710,80977,910,79977,12 0,79
0,04 0,05 0,06 0,07 0,09 0,10 0,12 0,14 0,15 0,17 0,19 0,22
5 986,881,05985,831,01984,820,98983,840,95982,890,92981,970,89981,080,87980,210,84979,370,83978,540,82977,720,82976,90 0,80
0,05 0,06 0,08 0,09 0,10 0,12 0,13 0,14 0,17 0,19 0,21 0,22
6 986,831,06985,771,03984,740,99983,750,96982,790,94981,850,90980,950,88980,070,87979,200,85978,350,84977,510,83976,68 0,83
0,08 0,09 0,09 0,10 0,12 0,13 0,15 0,16 0,18 0,19 0,21 0,23
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0,08 0,09 0,11 0,13 0,13 0,14 0,15 0,18 0,19 0,21 0,23 0,25
8 986,671,08985,591,05984,541,02983,520,98982,540,96981,580,93980,650,92979,730,90978,830,88977,950,88977,070,87976,20 0,87
0,10 0,11 0,12 0,12 0,14 0,16 0,18 0,19 0,21 0,22 0,24 0,26
9 986,571,09985,481,06984,421,02983,401,00982,400,98981,420,95980,470,93979,540,92978,620,89977,730,90976,830,89975,94 0,89
0,11 0,12 0,12 0,14 0,16 0,17 0,18 0,20 0,20 0,23 0,24 0,26
10 986,461,10985,361,06984,301,04983,261,02982,240,99981,250,96980,290,95979,340,92978,420,92977,500,91976,590,91975,68 0,91
0,12 0,13 0,14 0,16 0,16 0,17 0,19 0,20 0,23 0,25 0,27 0,29
11 986,341,11985,231,07984,161,06983,101,02982,081,00981,080,98980,100,96979,140,95978,190,94977,250,93976,320,93975,39 0,92
0,13 0,14 0,16 0,16 0,18 0,19 0,21 0,22 0,24 0,25 0,27 0,28
12 986,211,12985,091,09984,001,06982,941,04981,901,01980,891,00979,890,97978,920,97977,950,95977,000,95976,050,94975,11 0,95
0,15 0,16 0,16 0,18 0,19 0,20 0,21 0,23 0,24 0,26 0,28 0,30
13 986,061,13984,931,09983,841,08982,761,05981,711,02980,691,01979,680,99978,690,98977,710,97976,740,97975,770,96974,81 0,96
0,16 0,16 0,18 0,18 0,20 0,22 0,23 0,24 0,26 0,27 0,28 0,30
14 985,901,13984,771,11983,661,08982,581,07981,511,04980,471,02979,451,00978,451,00977,450,98976,470,98975,490,98975,51 0,98
0,17 0,18 0,19 0,20 0,21 0,22 0,24 0,25 0,26 0,28 0,30 0,32
15 985,731,14984,591,12983,471,09982,381,08981,301,05960,251,04979,211,01978,201,01977,191,00976,191,00975,191,00974,19 1,00
0,18 0,19 0,20 0,22 0,22 0,24 0,24 0,27 0,28 0,30 0,31 0,32
16 985,551,15984,401,13983,271,11982,161,08981,081,07980,011,04978,971,04977,931,02976,911,02975,891,01974,881,01973,87 1,02
0,19 0,20 0,21 0,22 0,23 0,24 0,26 0,27 0,29 0,30 0,32 0,33
17 985,361,16984,201,14983,061,12981,941,09980,851,08979,771,06978,711,05977,661,04976,621,03975,591,03974,561,02973,54 1,04
0,21 0,22 0,22 0,23 0,25 0,26 0,27 0,28 0,29 0,31 0,32 0,35
18 985,151,17983,981,14982,841,13981,711,11980,601,09979,511,07978,441,06977,381,05976,331,05975,281,04974,241,05973,19 1,05
0,21 0,22 0,24 0,24 0,25 0,26 0,28 0,29 0,31 0,32 0,34 0,35
19 984,941,18983,761,16982,601,13981,471,12980,351,10979,251,09978,161,07977,091,07976,021,06974,961,06973,901,06972,84 1,06
0,23 0,24 0,24 0,26 0,27 0,28 0,29 0,30 0,31 0,33 0,34 0,36
20 984,711,19983,521,16982,361,15981,211,13980,081,11978,971,10977,871,08976,791,08975,711,08974,631,07973,561,08972,48 1,08
tºGradoalcohólicovolumétricoen%
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21
20º 984,711,19983,521,16982,361,15981,211,13980,081,11978,971,10977,871,08976,791,08975,711,08974,631,07973,561,08972,48 1,08
0,24 0,24 0,26 0,26 0,27 0,28 0,29 0,31 0,33 0,34 0,36 0,37
21º 984,471,19983,281,18982,101,15980,951,14978,811,12978,691,11977,581,10976,481,10975,381,09974,291,09973,201,09972,11 1,09
0,24 0,26 0,28 0,29 0,30 0,31 0,33 0,33 0,35 0,35 0,36 0,37
22º 984,231,21983,021,18981,841,17980,671,15979,521,13978,391,12977,271,12976,151,10975,051,11973,941,10972,841,10971,74 1,12
0,26 0,26 0,27 0,28 0,29 0,31 0,32 0,33 0,35 0,35 0,37 0,39
23º 983,971,20982,771,20981,571,18980,391,16979,231,15978,081,13976,951,13975,821,12974,701,11973,591,12972,471,12972,47 1,12
0,27 0,29 0,29 0,29 0,30 0,31 0,33 0,33 0,35 0,37 0,38 0,40
24º 983,701,22982,481,20981,281,18980,101,17978,931,16977,771,15976,621,13975,491,14974,351,13973,221,13972,091,14970,95 1,14
0,28 0,28 0,29 0,31 0,32 0,33 0,33 0,35 0,36 0,37 0,39 0,40
25º 983,421,22982,201,21980,991,20979,791,18978,611,17977,441,15976,291,15975,141,15973,991,14972,851,15971,701,15970,55 1,16
0,28 0,30 0,31 0,31 0,32 0,33 0,35 0,36 0,37 0,39 0,40 0,41
26º 983,141,24981,901,22980,681,20979,481,19978,291,18977,111,17975,941,16974,781,16973,621,16972,461,16971,301,16970,14 1,17
0,30 0,30 0,31 0,32 0,33 0,34 0,35 0,36 0,38 0,39 0,40 0,42
27º 982,841,24981,601,23980,371,21979,161,20977,961,19976,771,18975,591,17974,421,18973,241,17972,071,17970,901,18969,72 1,18
0,31 0,32 0,32 0,33 0,34 0,35 0,36 0,38 0,38 0,40 0,41 0,43
28º 982,531,25981,281,23980,051,22978,831,21977,621,20976,421,19975,231,19974,041,18972,861,19971,671,18970,491,20969,29 1,20
0,31 0,32 0,33 0,34 0,35 0,36 0,37 0,38 0,40 0,40 0,42 0,43
29º 982,221,26980,961,24979,721,23978,491,22977,271,21976,061,20974,861,20973,661,20972,461,19971,271,20970,071,21968,86 1,22
0,32 0,33 0,34 0,35 0,36 0,37 0,38 0,40 0,41 0,43 0,44 0,45
30º 981,901,27980,631,25979,381,24978,141,23976,911,22975,691,21974,481,22973,261,21972,051,21970,841,21969,631,22968,41 1,23
0,34 0,34 0,35 0,36 0,37 0,38 0,40 0,40 0,41 0,42 0,44 0,45
31º 981,561,27980,291,26979,031,25977,781,24976,541,23975,311,23974,081,22972,861,22971,641,22970,421,23969,191,23967,96 1,24
0,35 0,36 0,36 0,37 0,38 0,39 0,39 0,40 0,42 0,43 0,44 0,46
32º 981,211,28979,931,26978,671,26977,411,25976,161,24974,921,23973,691,23972,461,24971,221,23969,991,24968,751,25967,50 1,25
0,35 0,35 0,37 0,37 0,38 0,39 0,40 0,42 0,42 0,44 0,45 0,46
33º 980,861,28979,581,28978,301,26977,041,26975,781,25974,531,24973,291,25972,041,24970,801,25969,551,25968,301,26967,04 1,27
0,36 0,37 0,37 0,38 0,39 0,40 0,41 0,42 0,43 0,44 0,46 0,47
34º 980,501,29979,211,28977,931,27976,661,27975,391,26974,131,25972,881,26971,621,25970,371,26969,111,27967,841,27966,57 1,29
0,36 0,37 0,38 0,39 0,39 0,40 0,42 0,42 0,44 0,46 0,46 0,48
35º 980,141,30978,841,29977,551,28976,271,27975,001,27973,731,27972,461,26971,201,27969,931,28968,651,27967,381,29966,09 1,30
0,37 0,38 0,38 0,39 0,40 0,41 0,42 0,44 0,45 0,45 0,47 0,48
36º 979,771,31978,461,29977,171,29975,881,28974,601,28973,321,28972,041,28970,761,28969,481,28968,201,29966,911,30965,61 1,32
0,39 0,39 0,40 0,40 0,41 0,42 0,43 0,44 0,45 0,47 0,48 0,49
37º 978,381,31978,071,30976,771,29975,481,29974,191,29972,901,29971,611,29970,321,29969,031,30967,731,30966,431,31965,12 1,33
0,38 0,39 0,40 0,41 0,42 0,43 0,44 0,45 0,46 0,47 0,49 0,50
38º 979,001,32977,681,31976,371,30975,071,30973,771,30972,471,30971,171,30969,871,30968,571,31967,261,32965,941,32964,62 1,34
0,40 0,40 0,41 0,42 0,42 0,43 0,44 0,45 0,47 0,48 0,49 0,50
39º 978,601,32977,281,32975,961,31974,651,30973,351,31972,041,31970,731,31969,421,32968,101,32966,781,33965,451,33964,12 1,36
0,40 0,41 0,41 0,42 0,43 0,44 0,45 0,46 0,47 0,48 0,49 0,51
40º 978,201,33976,871,32975,551,32974,231,31972,921,32971,601,32970,281,32968,961,33967,631,33966,301,34964,961,35963,61 1,371990R2676—ES—21.04.1999—006.001—44
▼B
tºGradoalcohólicovolumétricoen%
20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31
0 978,560,70977,860,70977,160,69976,470,71975,760,71975,050,72974,330,75973,580,77972,810,80972,010,83971,180,87970,31 0,90
0,14 0,17 0,19 0,22 0,24 0,26 0,29 0,31 0,34 0,36 0,39 0,41
1 978,420,73977,690,72976,970,72976,250,73975,520,73974,790,75974,040,77973,270,80972,470,82971,650,86970,790,89969,90 0,92
0,16 0,18 0,20 0,23 0,25 0,28 0,30 0,32 0,34 0,37 0,39 0,41
2 978,260,75977,510,74976,770,75976,020,75975,270,76974,510,77973,740,79972,950,82972,130,85971,280,88970,400,91969,49 0,95
0,17 0,19 0,22 0,23 0,26 0,28 0,31 0,33 0,36 0,38 0,40 0,42
3 978,090,77977,320,77976,550,76975,790,78975,010,78974,230,80973,430,81972,620,85971,770,87970,900,90970,000,93969,07 0,98
0,18 0,20 0,22 0,25 0,27 0,29 0,31 0,34 0,36 0,38 0,40 0,43
4 977,910,79977,120,79976,330,79975,540,80974,940,80973,940,82973,120,84972,280,87971,410,89970,520,92969,600,96968,64 1,00
0,19 0,22 0,23 0,26 0,27 0,30 0,33 0,35 0,37 0,39 0,42 0,44
5 977,720,82976,900,80976,100,82975,280,81974,470,83973,640,85972,790,86971,930,89971,040,91970,130,95969,180,98968,20 1,01
0,21 0,22 0,25 0,26 0,29 0,31 0,33 0,35 0,37 0,40 0,42 0,44
6 977,510,83976,680,83975,850,83975,020,84974,180,85973,330,87972,460,86971,580,91970,670,94969,730,97968,761,00967,76 1,03
0,21 0,23 0,25 0,28 0,30 0,32 0,34 0,36 0,38 0,40 0,42 0,44
7 977,300,85976,450,85975,600,86974,740,86973,880,87973,010,89972,120,90971,220,93970,290,96969,330,99968,341,02967,32 1,06
0,23 0,25 0,27 0,28 0,31 0,33 0,35 0,37 0,40 0,42 0,43 0,46
8 977,070,87976,200,87975,330,87974,460,89973,570,89972,680,91971,770,92970,850,96969,890,98968,911,00967,911,05966,86 1,07
0,24 0,26 0,28 0,30 0,31 0,34 0,35 0,38 0,39 0,41 0,44 0,46
9 976,830,89975,940,89975,050,89974,160,90973,260,92972,340,92971,420,95970,470,97969,501,00968,501,03967,471,07966,40 1,09
0,24 0,26 0,28 0,30 0,33 0,34 0,37 0,39 0,41 0,43 0,45 0,46
10 976,590,91975,680,91974,770,91973,860,93972,930,93972,000,95971,050,97970,080,99969,091,02968,071,05967,021,08965,94 1,12
0,27 0,29 0,30 0,33 0,34 0,36 0,38 0,40 0,42 0,44 0,46 0,47
11 976,320,93975,390,92974,470,94973,530,94972,590,95971,640,97970,670,99969,681,01968,671,04967,631,07966,561,09965,47 1,13
0,27 0,28 0,31 0,32 0,34 0,36 0,38 0,40 0,42 0,44 0,45 0,48
12 976,050,94975,110,95974,160,95973,210,96972,250,97971,280,99970,291,01969,281,03968,251,06967,191,08966,111,12964,99 1,15
0,28 0,30 0,31 0,33 0,35 0,37 0,39 0,41 0,43 0,45 0,47 0,49
13 975,770,96974,810,96973,850,97972,880,98971,900,99970,911,01969,901,03968,871,05967,821,08966,741,10965,641,14964,50 1,17
0,28 0,30 0,32 0,34 0,36 0,38 0,40 0,41 0,43 0,45 0,47 0,49
14 975,490,98974,510,98973,530,99972,541,00971,541,01970,531,03969,501,04968,461,07967,391,10966,291,12965,171,16964,01 1,19
0,30 0,32 0,34 0,35 0,37 0,39 0,40 0,42 0,44 0,46 0,48 0,49
15 975,191,00974,191,00973,191,00972,191,02971,171,03970,141,04969,101,06968,041,09966,951,12965,831,14964,691,17963,52 1,21
0,31 0,32 0,34 0,36 0,37 0,39 0,41 0,43 0,45 0,46 0,48 0,51
16 974,881,01973,871,02972,851,02971,831,03970,801,05969,751,06968,691,08967,611,11966,501,13965,371,16964,211,20963,01 1,22
0,32 0,33 0,35 0,37 0,39 0,40 0,42 0,44 0,45 0,48 0,50 0,50
17 974,561,02973,541,04972,501,04971,461,05970,411,06969,351,08968,271,10967,171,12966,051,16964,891,18963,711,20962,51 1,24
0,32 0,35 0,36 0,37 0,39 0,41 0,43 0,45 0,47 0,48 0,49 0,52
18 974,241,05973,191,05972,141,05971,091,07970,021,08968,941,10967,841,12966,721,14965,581,17964,411,19963,221,23961,99 1,25
0,34 0,35 0,36 0,39 0,40 0,42 0,43 0,45 0,47 0,48 0,50 0,52
19 973,901,06972,841,06971,781,08970,701,08969,621,10968,521,11967,411,14966,271,16965,111,18963,931,21962,721,25961,47 1,27
0,34 0,36 0,38 0,39 0,41 0,42 0,45 0,46 0,47 0,49 0,51 0,52
20 973,561,08972,481,08971,401,09970,311,10969,211,11968,101,14966,961,15965,811,17964,641,20963,441,23962,211,26960,95 1,29
tºGradoalcohólicovolumétricoen%
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21
20 973,561,08972,481,08971,401,09970,311,10969,211,11968,101,14966,961,15965,811,17964,641,20963,441,23962,211,26960,95 1,29
0,36 0,37 0,38 0,40 0,42 0,44 0,45 0,46 0,49 0,50 0,52 0,53
21 973,201,09972,111,09971,021,11969,911,12968,791,13967,661,15966,511,16965,351,20964,151,21962,941,25961,691,27960,42 1,31
0,36 0,37 0,40 0,41 0,42 0,44 0,45 0,48 0,49 0,51 0,52 0,54
22 972,841,10971,741,12970,621,12969,501,13968,371,15967,221,16966,061,19964,871,21963,661,23962,431,26961,171,29959,88 1,32
0,37 0,39 0,40 0,42 0,43 0,45 0,47 0,48 0,49 0,51 0,53 0,55
23 972,471,12971,351,13970,221,14969,081,14967,941,17966,771,18965,591,20964,391,22963,171,25961,921,28960,641,31959,33 1,33
0,38 0,40 0,41 0,42 0,44 0,45 0,47 0,49 0,51 0,52 0,54 0,55
24 972,091,14970,951,14969,811,15968,661,16967,501,18966,321,20965,121,22963,901,24962,661,26961,401,30960,101,32958,78 1,35
0,39 0,40 0,42 0,43 0,45 0,47 0,48 0,49 0,51 0,53 0,54 0,55
25 971,701,15970,551,16969,391,16968,231,18967,051,20965,851,21964,641,23963,411,26962,151,28960,871,31959,561,33958,23 1,37
0,40 0,41 0,42 0,44 0,46 0,47 0,49 0,50 0,51 0,53 0,54 0,57
26 971,301,16970,141,17968,971,18967,791,20966,591,21965,381,23964,151,24962,911,27961,641,30960,341,32959,021,36957,66 1,38
0,40 0,42 0,43 0,45 0,46 0,48 0,49 0,51 0,53 0,54 0,56 0,56
27 970,901,18969,721,18968,541,20967,341,21966,131,23964,901,24963,661,26962,401,29961,111,31959,801,34958,461,36957,10 1,40
0,41 0,43 0,45 0,46 0,47 0,48 0,50 0,52 0,54 0,56 0,57 0,59
28 970,491,20969,291,20968,091,21966,881,22965,661,24964,421,26963,161,28961,881,31960,571,33959,241,35957,891,38956,51 1,41
0,42 0,43 0,45 0,47 0,49 0,50 0,52 0,53 0,53 0,55 0,56 0,58
29 970,071,21968,861,22967,641,23966,411,24965,171,25963,921,28962,641,29961,351,31960,041,35958,691,36957,331,40955,93 1,42
0,44 0,45 0,46 0,47 0,49 0,50 0,51 0,53 0,55 0,55 0,58 0,58
30 969,631,22968,411,23967,181,24965,941,26964,681,26963,421,29962,131,31960,821,33959,491,35958,141,39956,751,40955,35 1,44
0,44 0,45 0,46 0,48 0,49 0,51 0,52 0,53 0,55 0,57 0,58 0,60
31 969,191,23967,961,24966,721,26965,461,27964,191,28962,911,30961,611,32960,291,35958,941,37957,571,40956,171,42954,75 1,44
0,44 0,46 0,47 0,48 0,50 0,51 0,53 0,54 0,55 0,57 0,58 0,59
32 968,751,25967,501,25966,251,27964,981,29963,691,29962,401,32961,081,33959,751,36958,391,39957,001,41955,591,43954,16 1,46
0,45 0,46 0,48 0,49 0,50 0,52 0,53 0,55 0,57 0,57 0,59 0,61
33 968,301,26967,041,27965,771,28964,491,30963,191,31961,881,33960,551,35959,201,38957,821,39956,431,43955,001,45953,55 1,47
0,46 0,47 0,49 0,50 0,51 0,53 0,54 0,56 0,56 0,59 0,59 0,60
34 967,841,27966,571,29965,281,29963,991,31962,681,33961,351,34960,011,37958,641,38957,261,42955,841,43954,411,46952,95 1,49
0,46 0,48 0,49 0,51 0,52 0,53 0,55 0,56 0,58 0,58 0,60 0,62
35 967,381,29966,091,30964,791,31963,481,32962,161,34960,821,36959,461,38958,081,40956,681,42955,261,45953,811,48952,33 1,50
0,47 0,48 0,50 0,51 0,53 0,54 0,55 0,57 0,58 0,60 0,61 0,62
36 966,911,30965,611,32964,291,32962,971,34961,631,35960,281,37958,911,40957,511,41956,101,44954,661,46953,201,49951,71 1,51
0,48 0,49 0,50 0,52 0,53 0,55 0,56 0,57 0,59 0,60 0,61 0,62
37 966,431,31965,121,33963,791,34962,451,35961,101,37959,731,38958,351,41956,941,43955,511,45954,061,47952,591,50951,09 1,53
0,49 0,50 0,51 0,52 0,54 0,55 0,57 0,58 0,59 0,60 0,62 0,63
38 965,941,32964,621,34963,281,35961,931,37960,561,38959,181,40957,781,42956,361,44954,921,46953,461,49951,971,51950,46 1,54
0,49 0,50 0,52 0,53 0,54 0,56 0,57 0,58 0,60 0,61 0,62 0,64
39 965,451,33964,121,36962,761,36961,401,38960,021,40958,621,41957,211,43955,781,46954,321,47952,851,50951,351,53949,82 1,55
0,49 0,51 0,52 0,54 0,55 0,56 0,58 0,59 0,60 0,62 0,63 0,64
40 964,961,35963,611,37962,241,38960,861,39959,471,41958,061,43956,631,44955,191,47953,721,49952,231,51950,721,54949,18 1,571990R2676—ES—21.04.1999—006.001—45
▼B
TABLAII
GRADOALCOHÓLICOINTERNACIONALA20ºC
Tabladecorreccionesaefectuarsobreelgradoalcohólicoaparenteparacorregirlaaccióndelatemperatura
Sumarorestaralgradoalcohólicoaparenteatº(alcohómetroenvidrioordinario)lacorrecciónindicadaenestatabla
GradosalcohólicosaparentesentºC
01234567891 0 1 1 1 2 1 3 1 4 1 51 6Temperaturas0º
añadir0,76 0,77 0,82 0,87 0,95 1,04 1,16 1,31 1,49 1,70 1,95 2,26 2,62 3,03 3,49 4,02 4,56
1º 0,81 0,83 0,87 0,92 1,00 1,09 1,20 1,35 1,52 1,73 1,97 2,26 2,59 2,97 3,40 3,87 4,36
2º 0,85 0,87 0,92 0,97 1,04 1,13 1,24 1,38 1,54 1,74 1,97 2,24 2,54 2,89 3,29 3,72 4,17
3º 0,88 0,91 0,95 1,00 1,07 1,15 1,26 1,39 1,55 1,73 1,95 2,20 2,48 2,80 3,16 3,55 3,95
4º 0,90 0,92 0,97 1,02 1,09 1,17 1,27 1,40 1,55 1,72 1,92 2,15 2,41 2,71 3,03 3,38 3,75
5º 0,91 0,93 0,98 1,03 1,10 1,17 1,27 1,39 1,53 1,69 1,87 2,08 2,33 2,60 2,89 3,21 3,54
6º 0,92 0,94 0,98 1,02 1,09 1,16 1,25 1,37 1,50 1,65 1,82 2,01 2,23 2,47 2,74 3,02 3,32
7º 0,91 0,93 0,97 1,01 1,07 1,14 1,23 1,33 1,45 1,59 1,75 1,92 2,12 2,34 2,58 2,83 3,108º 0,89 0,91 0,94 0,98 1,04 1,11 1,19 1,28 1,39 1,52 1,66 1,82 2,00 2,20 2,42 2,65 2,88
9º 0,86 0,88 0,91 0,95 1,01 1,07 1,14 1,23 1,33 1,44 1,57 1,71 1,87 2,05 2,24 2,44 2,65
10º 0,82 0,84 0,87 0,91 0,96 1,01 1,08 1,16 1,25 1,35 1,47 1,60 1,74 1,89 2,06 2,24 2,43
11º 0,78 0,79 0,82 0,86 0,90 0,95 1,01 1,08 1,16 1,25 1,36 1,47 1,60 1,73 1,88 2,03 2,20
12º 0,72 0,74 0,76 0,79 0,83 0,88 0,93 0,99 1,07 1,15 1,24 1,34 1,44 1,56 1,69 1,82 1,9613º 0,66 0,67 0,69 0,72 0,76 0,80 0,84 0,90 0,96 1,03 1,11 1,19 1,28 1,38 1,49 1,61 1,7314º 0,59 0,60 0,62 0,64 0,67 0,71 0,74 0,79 0,85 0,91 0,97 1,04 1,12 1,20 1,29 1,39 1,49
15º 0,51 0,52 0,53 0,55 0,58 0,61 0,64 0,68 0,73 0,77 0,83 0,89 0,95 1,02 1,09 1,16 1,24
16º 0,42 0,43 0,44 0,46 0,48 0,50 0,53 0,56 0,60 0,63 0,67 0,72 0,77 0,82 0,88 0,94 1,00
17º 0,33 0,33 0,34 0,35 0,37 0,39 0,41 0,43 0,46 0,48 0,51 0,55 0,59 0,62 0,67 0,71 0,75
18º 0,23 0,23 0,23 0,24 0,25 0,26 0,27 0,29 0,31 0,33 0,35 0,37 0,40 0,42 0,45 0,48 0,5119º 0,12 0,12 0,12 0,12 0,13 0,13 0,14 0,15 0,16 0,17 0,18 0,19 0,20 0,21 0,23 0,24 0,25
GradosalcohólicosaparentesentºC
01234567891 0 1 1 1 2 1 3 1 4 1 51 6Temperaturas21º
sustraer0,13 0,13 0,13 0,14 0,14 0,15 0,16 0,17 0,18 0,19 0,19 0,20 0,22 0,23 0,25 0,26
22º 0,26 0,27 0,28 0,29 0,30 0,31 0,32 0,34 0,36 0,37 0,39 0,41 0,44 0,47 0,49 0,5223º 0,40 0,41 0,42 0,44 0,45 0,47 0,49 0,51 0,54 0,57 0,60 0,63 0,66 0,70 0,74 0,7824º 0,55 0,56 0,58 0,60 0,62 0,64 0,67 0,70 0,73 0,77 0,81 0,85 0,89 0,94 0,99 1,04
25º 0,69 0,71 0,73 0,76 0,79 0,82 0,85 0,89 0,93 0,97 1,02 1,07 1,13 1,19 1,25 1,3126º 0,85 0,87 0,90 0,93 0,96 1,00 1,04 1,08 1,13 1,18 1,24 1,30 1,36 1,43 1,50 1,57
27º 1,03 1,07 1,11 1,15 1,19 1,23 1,28 1,34 1,40 1,46 1,53 1,60 1,68 1,76 1,8428º 1,21 1,25 1,29 1,33 1,38 1,43 1,49 1,55 1,62 1,69 1,77 1,85 1,93 2,02 2,1129º 1,39 1,43 1,47 1,52 1,58 1,63 1,70 1,76 1,84 1,92 2,01 2,10 2,19 2,29 2,39
30º 1,57 1,61 1,66 1,72 1,78 1,84 1,91 1,98 2,07 2,15 2,25 2,35 2,45 2,56 2,67
31º 1,75 1,80 1,86 1,92 1,98 2,05 2,13 2,21 2,30 2,39 2,49 2,60 2,71 2,83 2,94
32º 1,94 2,00 2,06 2,13 2,20 2,27 2,35 2,44 2,53 2,63 2,74 2,86 2,97 3,09 3,22
33º 2,20 2,27 2,34 2,42 2,50 2,58 2,67 2,77 2,88 2,99 3,12 3,24 3,37 3,51
34º 2,41 2,48 2,56 2,64 2,72 2,81 2,91 3,02 3,13 3,25 3,38 3,51 3,65 3,79
35º 2,62 2,70 2,78 2,86 2,95 3,05 3,16 3,27 3,39 3,51 3,64 3,78 3,93 4,08
36º 2,83 2,91 3,00 3,09 3,19 3,29 3,41 3,53 3,65 3,78 3,91 4,05 4,21 4,37
37º 3,13 3,23 3,33 3,43 3,54 3,65 3,78 3,91 4,04 4,18 4,33 4,49 4,6538º 3,36 3,47 3,57 3,68 3,79 3,91 4,03 4,17 4,31 4,46 4,61 4,77 4,94
39º 3,59 3,70 3,81 3,93 4,05 4,17 4,30 4,44 4,58 4,74 4,90 5,06 5,23
40º 3,82 3,94 4,06 4,18 4,31 4,44 4,57 4,71 4,86 5,02 5,19 5,36 5,531990R2676—ES—21.04.1999—006.001—46
▼B
GradosalcohólicosaparentesentºC
14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30Temperaturas0º
añadir3,49 4,02 4,56 5,11 5,65 6,16 6,63 7,05 7,39 7,67 7,91 8,07 8,20 8,30 8,36 8,39 8,40
1º 3,40 3,87 4,36 4,86 5,35 5,82 6,26 6,64 6,96 7,23 7,45 7,62 7,75 7,85 7,91 7,95 7,96
2º 3,29 3,72 4,17 4,61 5,05 5,49 5,89 6,25 6,55 6,81 7,02 7,18 7,31 7,40 7,47 7,51 7,533º 3,16 3,55 3,95 4,36 4,77 5,17 5,53 5,85 6,14 6,39 6,59 6,74 6,86 6,97 7,03 7,07 7,094º 3,03 3,38 3,75 4,11 4,48 4,84 5,17 5,48 5,74 5,97 6,16 6,31 6,43 6,53 6,59 6,63 6,66
5º 2,89 3,21 3,54 3,86 4,20 4,52 4,83 5,11 5,35 5,56 5,74 5,89 6,00 6,10 6,16 6,20 6,236º 2,74 3,02 3,32 3,61 3,91 4,21 4,49 4,74 4,96 5,16 5,33 5,47 5,58 5,67 5,73 5,77 5,80
7º 2,58 2,83 3,10 3,36 3,63 3,90 4,15 4,38 4,58 4,77 4,92 5,05 5,15 5,24 5,30 5,34 5,378º 2,42 2,65 2,88 3,11 3,35 3,59 3,81 4,02 4,21 4,38 4,52 4,64 4,74 4,81 4,87 4,92 4,959º 2,24 2,44 2,65 2,86 3,07 3,28 3,48 3,67 3,84 3,99 4,12 4,23 4,32 4,39 4,45 4,50 4,53
10º 2,06 2,24 2,43 2,61 2,80 2,98 3,16 3,33 3,48 3,61 3,73 3,83 3,91 3,98 4,03 4,08 4,11
11º 1,88 2,03 2,20 2,36 2,52 2,68 2,83 2,98 3,12 3,24 3,34 3,43 3,50 3,57 3,62 3,66 3,69
12º 1,69 1,82 1,96 2,10 2,24 2,38 2,51 2,64 2,76 2,87 2,96 3,04 3,10 3,16 3,21 3,25 3,27
13º 1,49 1,61 1,73 1,84 1,96 2,08 2,20 2,31 2,41 2,50 2,58 2,65 2,71 2,76 2,80 2,83 2,8514º 1,29 1,39 1,49 1,58 1,68 1,78 1,88 1,97 2,06 2,13 2,20 2,26 2,31 2,36 2,39 2,42 2,44
15º 1,09 1,16 1,24 1,32 1,40 1,48 1,56 1,64 1,71 1,77 1,83 1,88 1,92 1,96 1,98 2,01 2,03
16º 0,88 0,94 1,00 1,06 1,12 1,19 1,25 1,31 1,36 1,41 1,46 1,50 1,53 1,56 1,58 1,60 1,62
17º 0,67 0,71 0,75 0,80 0,84 0,89 0,94 0,98 1,02 1,05 1,09 1,12 1,14 1,17 1,18 1,20 1,2118º 0,45 0,48 0,51 0,53 0,56 0,59 0,62 0,65 0,68 0,70 0,72 0,74 0,76 0,78 0,79 0,80 0,81
19º 0,23 0,24 0,25 0,27 0,28 0,30 0,31 0,33 0,34 0,35 0,36 0,37 0,38 0,39 0,40 0,40 0,41
GradosalcohólicosaparentesentºC
14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30Temperaturas21º
sustraer0,23 0,25 0,26 0,28 0,29 0,30 0,31 0,33 0,34 0,35 0,35 0,37 0,38 0,38 0,39 0,39 0,40
22º 0,47 0,49 0,52 0,55 0,57 0,60 0,62 0,65 0,67 0,70 0,72 0,74 0,75 0,76 0,78 0,79 0,8023º 0,70 0,74 0,78 0,82 0,86 0,90 0,93 0,97 1,01 1,04 1,07 1,10 1,12 1,15 1,17 1,18 1,1924º 0,94 0,99 1,04 1,10 1,15 1,20 1,25 1,29 1,34 1,39 1,43 1,46 1,50 1,53 1,55 1,57 1,59
25º 1,19 1,25 1,31 1,37 1,43 1,49 1,56 1,62 1,68 1,73 1,78 1,83 1,87 1,90 1,94 1,97 1,99
26º 1,43 1,50 1,57 1,65 1,73 1,80 1,87 1,94 2,01 2,07 2,13 2,19 2,24 2,28 2,32 2,35 2,38
27º 1,68 1,76 1,84 1,93 2,01 2,10 2,18 2,26 2,34 2,41 2,48 2,55 2,61 2,66 2,70 2,74 2,77
28º 1,93 2,02 2,11 2,21 2,31 2,40 2,49 2,58 2,67 2,76 2,83 2,90 2,98 3,03 3,08 3,13 3,1729º 2,19 2,29 2,39 2,50 2,60 2,70 2,81 2,91 3,00 3,09 3,18 3,26 3,34 3,40 3,46 3,51 3,55
30º 2,45 2,56 2,67 2,78 2,90 3,01 3,12 3,23 3,34 3,44 3,53 3,62 3,70 3,77 3,84 3,90 3,95
31º 2,71 2,83 2,94 3,07 3,19 3,31 3,43 3,55 3,67 3,78 3,88 3,98 4,07 4,15 4,22 4,28 4,33
32º 2,97 3,09 3,22 3,36 3,49 3,62 3,74 3,87 4,00 4,11 4,22 4,33 4,43 4,51 4,59 4,66 4,72
33º 3,24 3,37 3,51 3,65 3,79 3,92 4,06 4,20 4,33 4,45 4,57 4,68 4,79 4,88 4,97 5,04 5,10
34º 3,51 3,65 3,79 3,94 4,09 4,23 4,37 4,52 4,66 4,79 4,91 5,03 5,15 5,25 5,34 5,42 5,49
35º 3,78 3,93 4,08 4,23 4,38 4,53 4,69 4,84 4,98 5,12 5,26 5,38 5,50 5,61 5,71 5,80 5,87
36º 4,05 4,21 4,37 4,52 4,68 4,84 5,00 5,16 5,31 5,46 5,60 5,73 5,86 5,97 6,08 6,17 6,25
37º 4,33 4,49 4,65 4,82 4,98 5,15 5,31 5,48 5,64 5,80 5,95 6,09 6,22 6,33 6,44 6,54 6,6338º 4,61 4,77 4,94 5,12 5,29 5,46 5,63 5,80 5,97 6,13 6,29 6,43 6,57 6,69 6,81 6,92 7,01
39º 4,90 5,06 5,23 5,41 5,59 5,77 5,94 6,12 6,30 6,47 6,63 6,78 6,93 7,06 7,18 7,29 7,39
40º 5,19 5,36 5,53 5,71 5,90 6,08 6,26 6,44 6,62 6,80 6,97 7,13 7,28 7,41 7,54 7,66 7,761990R2676—ES—21.04.1999—006.001—47
▼B
TABLAIII
GRADOALCOHÓLICOINTERNACIONALA20ºC
Tablademasasvolúmicasaparentesdemezclashidroalcohólicas.Aparatosenvidrioordinario
Masasvolúmicasatºcorregidasdelempujedelaire
tºGradoalcohólicovolumétricoen%
01234567891 01 1
0 999,341,52997,821,45996,371,39994,981,35993,631,29992,341,24991,101,18989,921,15988,771,09987,681,05986,631,00985,63 0,96
−0,09 −0,09 −0,09 −0,08 −0,08 −0,08 −0,07 −0,05 −0,05 −0,04 −0,03 −0,02
1 999,431,52997,911,45996,461,40995,061,35993,711,29992,421,25991,171,20989,971,15988,821,10987,721,06986,661,01985,65 0,97
−0,06 −0,06 −0,06 −0,06 −0,06 −0,05 −0,05 −0,04 −0,03 −0,02 −0,02 −0,01
2 999,491,52997,971,40996,521,40995,121,35993,771,30992,471,25991,221,21990,011,16988,851,11987,741,06986,681,02985,66 0,98
−0,05 −0,05 −0,04 −0,04 −0,04 −0,04 −0,03 −0,03 −0,03 −0,02 0,00 0,01
3 999,541,52998,021,46996,561,40995,161,35993,811,30992,511,26991,251,21990,041,16988,881,12987,761,08986,681,03985,65 0,99
−0,03 −0,03 −0,03 −0,03 −0,02 −0,02 −0,02 −0,01 0,00 0,01 0,01 0,02
4 999,571,52998,051,46996,591,40995,191,36993,831,30992,531,26991,271,22990,051,17988,881,13987,751,08986,671,04985,63 1,00
−0,02 −0,02 −0,02 −0,02 −0,02 −0,01 0,00 0,00 0,00 0,01 0,02 0,03
5 999,591,52998,071,46996,611,40995,211,36993,851,31992,541,27991,271,22990,051,17988,881,14987,741,09986,651,05985,60 1,02
0,00 0,00 0,00 0,01 0,01 0,01 0,01 0,02 0,03 0,03 0,04 0,06
6 999,591,52998,071,46996,611,41995,201,36993,841,31992,531,27991,261,23990,031,18988,851,14987,711,10986,611,07985,54 1,02
0,01 0,01 0,01 0,01 0,01 0,02 0,02 0,02 0,03 0,04 0,05 0,06
7 999,581,52998,061,46996,601,41995,191,36993,831,32992,511,27991,241,23990,011,19988,821,15987,671,11986,561,08985,48 1,04
0,03 0,03 0,03 0,03 0,04 0,04 0,05 0,05 0,06 0,07 0,07 0,08
8 999,551,52998,031,46996,571,41995,161,37993,791,32992,471,28991,191,23989,961,20988,761,16987,601,11986,491,09985,40 1,05
0,04 0,04 0,04 0,04 0,04 0,04 0,05 0,06 0,06 0,06 0,08 0,08
9 999,511,52997,991,46996,531,41995,121,37993,751,32992,431,29991,141,24989,901,20988,701,16987,541,13986,411,09985,32 1,06
0,06 0,06 0,06 0,06 0,06 0,07 0,07 0,07 0,08 0,09 0,10 0,11
10 999,451,52997,931,46996,471,41995,061,37993,691,33992,361,29991,071,24989,831,21988,621,17987,451,14986,311,10985,21 1,07
0,07 0,06 0,06 0,07 0,07 0,07 0,07 0,08 0,09 0,10 0,10 0,11
11 999,381,51997,871,46996,411,42994,991,37993,621,33992,291,29991,001,25989,751,22988,531,18987,351,14986,211,11985,10 1,08
0,09 0,09 0,09 0,09 0,09 0,09 0,10 0,11 0,11 0,11 0,12 0,13
12 999,291,51997,781,46996,321,42994,901,37993,531,33992,201,30990,901,26989,641,22988,421,18987,241,15986,091,12984,97 1,09
0,09 0,09 0,09 0,09 0,10 0,10 0,10 0,10 0,11 0,12 0,13 0,14
13 999,201,51997,691,46996,231,42994,811,38993,431,33992,101,30990,801,26989,541,23988,311,19987,121,16985,961,13984,83 1,10
0,11 0,11 0,11 0,11 0,11 0,12 0,12 0,13 0,13 0,14 0,15 0,16
14 999,091,51997,581,46996,121,42994,701,38993,321,34991,981,30990,681,27989,411,23988,181,20986,981,17985,811,14984,67 1,11
0,12 0,12 0,12 0,12 0,12 0,12 0,13 0,13 0,14 0,14 0,15 0,16
15 998,971,51997,461,46996,001,42994,581,38993,201,34991,861,31990,551,27989,281,24988,041,20986,841,18985,661,15984,51 1,12
0,13 0,13 0,13 0,13 0,14 0,14 0,14 0,15 0,15 0,17 0,17 0,18
16 998,841,51997,331,46995,871,42994,451,39993,061,34991,721,31990,411,28989,131,24987,891,22986,671,18985,491,16984,33 1,13
0,14 0,14 0,14 0,14 0,14 0,15 0,15 0,15 0,16 0,17 0,17 0,18
17 998,701,51997,191,46995,731,42994,311,39992,921,35991,571,31990,261,28988,981,25987,731,22986,501,18985,321,17984,15 1,14
0,15 0,15 0,16 0,16 0,16 0,16 0,17 0,17 0,18 0,18 0,19 0,19
18 998,551,51997,041,47995,571,42994,151,39992,761,35991,411,32990,091,28988,811,26987,551,23986,321,19985,131,17983,96 1,15
0,17 0,16 0,16 0,16 0,16 0,16 0,17 0,18 0,18 0,19 0,20 0,21
19 998,381,50996,881,47995,411,42993,991,39992,601,35991,251,33989,921,29988,631,26987,371,24986,131,20984,931,18983,75 1,16
0,18 0,18 0,18 0,18 0,19 0,19 0,19 0,20 0,21 0,22 0,22 0,23
20 998,201,50996,701,47995,231,42993,811,40992,411,35991,061,33989,731,30988,431,27987,161,24985,921,21984,711,19983,52 1,17
tºGradoalcohólicovolumétricoen%
01234567891 01 1
20 998,201,50996,701,47995,231,42993,811,40992,411,35991,061,33989,731,30988,431,27987,161,24985,921,21984,711,19983,52 1,17
0,19 0,19 0,19 0,19 0,19 0,20 0,20 0,21 0,21 0,22 0,23 0,23
21 998,011,50996,511,47995,041,42993,621,40992,221,36990,861,33989,531,31988,221,27986,951,25985,701,22984,481,19983,29 1,17
0,20 0,20 0,19 0,20 0,20 0,20 0,21 0,21 0,22 0,22 0,23 0,24
22 987,811,50996,311,46994,851,43993,421,40992,021,36990,661,34989,321,31988,011,28986,731,25985,481,23984,251,20983,05 1,18
0,21 0,21 0,21 0,21 0,21 0,22 0,22 0,22 0,23 0,24 0,24 0,25
23 997,601,50996,101,46994,641,43993,211,40991,811,37990,441,34989,101,31987,791,29986,501,26985,241,23984,011,21982,80 1,19
0,21 0,21 0,22 0,22 0,22 0,22 0,23 0,23 0,23 0,24 0,25 0,26
24 997,391,50995,891,47994,421,43992,991,40991,591,37990,221,35988,871,31987,561,29986,271,27985,001,24983,761,22982,54 1,20
0,23 0,23 0,23 0,23 0,24 0,24 0,24 0,25 0,25 0,25 0,26 0,27
25 997,161,50995,661,47994,191,43992,761,41991,351,37989,981,35988,631,32987,311,29986,021,27984,751,25983,501,23982,27 1,21
0,23 0,23 0,23 0,24 0,24 0,24 0,24 0,25 0,26 0,27 0,27 0,28
26 996,931,50995,431,47993,961,44992,521,41991,111,37989,741,35988,391,33987,061,30985,761,28984,481,25983,231,24981,99 1,22
0,25 0,25 0,25 0,25 0,25 0,26 0,26 0,26 0,27 0,28 0,29 0,29
27 996,681,50995,181,47993,711,44992,271,41990,861,38989,481,35988,131,33986,801,31985,491,29984,201,26982,941,24981,70 1,23
0,25 0,25 0,26 0,26 0,26 0,26 0,27 0,28 0,28 0,28 0,29 0,30
28 996,431,50994,931,48993,451,44992,011,41990,601,38989,221,36987,861,34986,521,31985,211,29983,921,27982,651,25981,40 1,23
0,26 0,27 0,27 0,27 0,27 0,28 0,28 0,28 0,29 0,29 0,30 0,31
29 996,171,51994,661,48993,181,44991,741,41990,331,39988,941,36987,581,34986,241,32984,921,29983,631,28982,351,26981,09 1,24
0,27 0,27 0,27 0,28 0,28 0,28 0,28 0,29 0,29 0,30 0,31 0,32
30 995,901,51994,391,48992,911,45991,461,41990,051,39988,661,37987,291,34985,951,32984,631,30983,331,29982,041,27980,77 1,25
0,29 0,29 0,29 0,29 0,30 0,30 0,30 0,31 0,31 0,32 0,32 0,32
31 995,611,51994,101,48992,621,45991,171,42989,751,39988,361,37986,991,35985,641,33984,311,30983,011,29981,721,27980,45 1,26
0,29 0,29 0,29 0,29 0,30 0,31 0,31 0,31 0,31 0,32 0,33 0,34
32 995,321,51993,811,48992,331,45990,881,42989,451,40988,051,37986,681,35985,331,33984,001,31982,691,30981,391,28980,11 1,26
0,30 0,31 0,31 0,31 0,31 0,31 0,31 0,32 0,33 0,33 0,34 0,34
33 995,021,52993,501,48992,021,45990,571,43989,141,40987,741,37986,371,36985,011,34983,671,31982,361,31981,051,28979,77 1,27
0,30 0,31 0,31 0,31 0,31 0,32 0,33 0,33 0,33 0,34 0,34 0,35
34 994,721,53993,191,48991,711,45990,261,43988,831,41987,421,38986,041,36984,681,34983,341,32982,021,31980,711,29979,42 1,28
0,32 0,32 0,32 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,34 0,34 0,35
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0,33 0,34 0,34 0,34 0,35 0,35 0,35 0,35 0,36 0,36 0,36 0,37
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0,34 0,34 0,35 0,36 0,36 0,36 0,36 0,36 0,37 0,38 0,38 0,38
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0,35 0,35 0,36 0,36 0,36 0,37 0,37 0,37 0,37 0,38 0,38 0,39
39 993,061,54991,521,51990,011,47988,541,44987,101,41985,681,39984,291,37982,921,36981,561,34980,221,33978,891,33977,56 1,31
0,35 0,36 0,36 0,37 0,38 0,38 0,38 0,38 0,38 0,39 0,39 0,39
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▼B
tºGradoalcohólicovolumétricoen%
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21
0 986,631,00985,630,96984,670,92983,750,87982,880,84982,040,81981,230,77980,460,75979,710,73978,980,72978,260,70977,56 0,70
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−0,02 −0,01 0,00 0,01 0,03 0,04 0,06 0,08 0,10 0,12 0,14 0,17
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0,10 0,11 0,12 0,13 0,15 0,16 0,17 0,19 0,21 0,23 0,25 0,27
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0,12 0,13 0,14 0,15 0,16 0,17 0,19 0,21 0,22 0,24 0,26 0,27
12 986,091,12984,971,09983,881,06982,821,04981,781,01980,770,99979,780,98978,800,96977,840,96976,880,95975,930,94974,99 0,94
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13 985,961,13984,831,10983,731,07982,661,05981,611,03980,581,00979,580,99978,590,98977,610,97976,640,97975,670,96974,71 0,96
0,15 0,16 0,17 0,18 0,19 0,20 0,22 0,23 0,24 0,26 0,27 0,29
14 985,811,14984,671,11983,561,08982,481,06981,421,04980,381,02979,361,00978,360,99977,370,99976,380,98975,400,98974,42 0,98
0,15 0,16 0,17 0,18 0,19 0,20 0,22 0,24 0,26 0,27 0,28 0,30
15 985,661,15984,511,12983,391,09982,301,07981,231,05980,181,04979,141,02978,121,01977,111,00976,110,99975,121,00974,12 1,00
0,17 0,18 0,19 0,20 0,21 0,22 0,23 0,25 0,26 0,28 0,30 0,31
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0,17 0,18 0,19 0,20 0,21 0,23 0,24 0,25 0,27 0,29 0,30 0,31
17 985,321,17984,151,14983,011,11981,901,09980,811,08979,731,06978,671,05977,621,04976,581,04975,541,02974,521,02973,50 1,04
0,19 0,19 0,20 0,22 0,24 0,25 0,26 0,27 0,28 0,29 0,31 0,33
18 985,131,17983,961,15982,811,13981,681,11980,571,09979,481,07978,411,06977,351,05976,301,05975,251,04974,211,04973,17 1,05
0,20 0,21 0,22 0,23 0,24 0,25 0,26 0,27 0,29 0,30 0,32 0,34
19 984,931,18983,751,16982,591,14981,451,12980,331,10979,231,08978,151,07977,081,07976,011,06974,941,05973,891,06972,83 1,06
0,22 0,23 0,24 0,24 0,25 0,26 0,28 0,29 0,30 0,31 0,33 0,35
20 984,711,19983,521,17982,351,14981,211,13980,081,11978,971,10977,871,08976,791,08975,711,08974,631,07973,561,08972,48 1,08
tºGradoalcohólicovolumétricoen%
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21
20º 984,711,19983,521,17982,351,14981,211,13980,081,11978,971,10977,871,08976,791,08975,711,08974,631,07973,561,08972,48 1,08
0,23 0,23 0,23 0,25 0,26 0,28 0,29 0,31 0,32 0,33 0,35 0,36
21º 984,481,19983,291,17982,121,16980,961,14979,821,13978,691,11977,581,10976,481,09975,391,09974,301,09973,211,09972,12 1,09
0,23 0,24 0,25 0,26 0,27 0,28 0,29 0,31 0,32 0,33 0,35 0,36
22 984,251,20983,051,18981,971,17980,701,15979,551,14978,411,12977,291,12976,171,10975,071,10973,971,10972,861,10971,76 1,11
0,24 0,25 0,26 0,27 0,28 0,29 0,30 0,31 0,33 0,34 0,35 0,37
23 984,011,21982,801,19981,611,18980,431,16979,271,15978,121,13976,991,13975,861,12974,741,11973,631,12972,511,12971,39 1,13
0,25 0,26 0,27 0,28 0,29 0,30 0,31 0,32 0,33 0,35 0,36 0,38
24 983,761,22982,541,20981,341,19980,151,17978,981,16977,821,14976,681,14975,541,13974,411,13973,281,13972,151,14971,01 1,14
0,26 0,27 0,28 0,29 0,30 0,31 0,32 0,33 0,35 0,36 0,38 0,39
25 983,501,23982,271,21981,061,20979,861,18978,681,17977,511,16976,361,15975,211,15974,061,14972,921,15971,771,15970,62 1,15
0,27 0,28 0,29 0,29 0,30 0,31 0,33 0,34 0,35 0,37 0,38 0,39
26 983,231,24981,991,22980,771,20979,571,19978,381,18977,201,17976,031,16974,871,16973,711,16972,551,16971,391,16970,23 1,17
0,29 0,29 0,30 0,31 0,32 0,33 0,34 0,36 0,37 0,38 0,39 0,41
27 982,941,24981,701,23980,471,21979,261,20978,061,19976,871,18975,691,18974,511,17973,341,17972,171,17921,001,18969,82 1,18
0,29 0,30 0,30 0,31 0,32 0,33 0,35 0,36 0,38 0,39 0,40 0,41
28 982,651,25981,401,23980,171,22978,951,21977,741,20976,541,20975,341,19974,151,19972,961,18971,781,18970,601,19969,41 1,20
0,30 0,31 0,32 0,33 0,34 0,35 0,36 0,37 0,38 0,39 0,40 0,42
29 982,351,26981,091,24979,851,23978,621,22977,401,21976,191,21974,981,20973,781,20972,581,19971,391,19970,201,21968,99 1,21
0,31 0,32 0,33 0,34 0,35 0,36 0,37 0,38 0,38 0,40 0,42 0,43
30 982,041,27980,771,25979,521,24978,281,23977,051,22975,831,21974,621,21973,411,21972,201,21970,991,21969,781,22968,56 1,23
0,32 0,32 0,33 0,34 0,35 0,36 0,37 0,38 0,39 0,40 0,42 0,43
31 981,721,27980,451,26979,191,25977,941,24976,701,23975,471,22974,251,22973,031,22971,811,22970,591,23969,361,23968,13 1,24
0,33 0,34 0,34 0,35 0,36 0,37 0,38 0,39 0,40 0,42 0,43 0,45
32 981,391,28980,111,26978,851,26977,591,25976,341,24975,101,23973,871,23972,641,23971,411,24970,171,24968,931,25967,68 1,26
0,34 0,34 0,35 0,35 0,36 0,37 0,39 0,40 0,41 0,42 0,43 0,45
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0,34 0,35 0,36 0,37 0,38 0,39 0,40 0,41 0,42 0,43 0,45 0,45
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0,34 0,35 0,36 0,37 0,38 0,39 0,40 0,41 0,43 0,44 0,45 0,47
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0,36 0,37 0,37 0,38 0,38 0,39 0,40 0,42 0,43 0,44 0,45 0,47
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0,36 0,37 0,38 0,39 0,40 0,41 0,42 0,43 0,44 0,45 0,46 0,47
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0,38 0,38 0,39 0,39 0,40 0,41 0,42 0,43 0,44 0,46 0,47 0,48
38 979,271,32977,951,31976,641,30975,341,30974,041,30972,741,30971,441,30970,141,30968,841,31967,531,31966,221,33964,89 1,34
0,38 0,39 0,39 0,40 0,41 0,42 0,43 0,44 0,45 0,46 0,48 0,49
39 978,891,33977,561,31976,251,31974,941,31973,631,31972,321,31971,011,31969,701,31968,391,32967,071,33965,741,34964,40 1,36
0,39 0,39 0,40 0,41 0,42 0,42 0,43 0,45 0,47 0,48 0,49 0,50
40 978,501,33977,171,32975,851,32974,531,32973,211,31971,901,32970,581,33969,251,33967,921,33966,591,34965,251,35963,90 1,371990R2676—ES—21.04.1999—006.001—49
▼B
tºGradoalcohólicovolumétricoen%
20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31
0 978,260,70977,560,70976,860,69976,170,70975,470,72974,750,72974,030,74973,290,77972,520,80971,720,83970,890,87970,02 0,90
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0,23 0,25 0,27 0,29 0,31 0,33 0,35 0,37 0,39 0,41 0,43 0,45
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0,25 0,27 0,28 0,30 0,32 0,34 0,36 0,38 0,40 0,42 0,44 0,45
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0,26 0,28 0,30 0,32 0,34 0,36 0,38 0,39 0,41 0,43 0,45 0,47
13 975,670,96974,710,96973,750,97972,780,98971,800,99970,811,01969,801,02968,781,05967,731,08966,651,11965,541,13964,41 1,17
0,27 0,29 0,31 0,33 0,35 0,37 0,38 0,40 0,42 0,44 0,45 0,47
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0,28 0,30 0,32 0,33 0,35 0,37 0,39 0,41 0,43 0,45 0,47 0,49
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0,30 0,31 0,33 0,35 0,36 0,38 0,40 0,42 0,44 0,45 0,47 0,49
16 974,821,01973,811,02972,791,02971,771,03970,741,05969,691,06968,631,08967,551,11966,441,13965,311,16964,151,19962,96 1,22
0,30 0,31 0,33 0,35 0,37 0,38 0,40 0,42 0,43 0,45 0,47 0,49
17 974,521,02973,501,04972,461,04971,421,05970,371,06969,311,08968,231,10967,131,12966,011,15964,861,18963,681,21962,47 1,24
0,31 0,33 0,34 0,36 0,38 0,40 0,42 0,43 0,45 0,47 0,48 0,50
18 974,211,04973,171,05972,121,06971,061,07969,991,08968,911,10967,811,11966,701,14965,561,17964,391,19963,201,23961,97 1,26
0,32 0,34 0,35 0,36 0,38 0,40 0,42 0,44 0,46 0,47 0,49 0,50
19 973,891,06972,831,06971,771,07970,701,09969,611,10968,511,11967,391,13966,261,16965,101,18963,921,21962,711,24961,47 1,28
0,33 0,35 0,37 0,39 0,40 0,41 0,42 0,45 0,46 0,48 0,50 0,52
20 973,561,08972,481,08971,401,09970,311,10969,211,11968,101,13966,971,14965,811,17964,641,20963,441,23962,211,26960,95 1,29
tºGradoalcohólicovolumétricoen%
20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31
20º 973,561,08972,481,08971,401,09970,311,10969,211,11968,101,13966,971,16965,811,17964,641,20963,441,23962,211,26960,95 1,29
0,35 0,36 0,37 0,39 0,40 0,42 0,44 0,45 0,47 0,49 0,50 0,52
21º 973,211,09972,121,09971,031,11969,921,11968,811,13967,681,15966,531,17965,361,19964,171,22962,951,24961,711,28960,43 1,31
0,35 0,36 0,38 0,39 0,41 0,43 0,44 0,46 0,48 0,49 0,51 0,52
22 972,861,10971,761,11970,651,12969,531,13968,401,15967,251,16966,091,19964,901,21963,691,23962,461,26961,201,29959,91 1,32
0,35 0,37 0,39 0,40 0,42 0,43 0,45 0,46 0,48 0,50 0,52 0,53
23 972,511,12971,391,13970,261,13969,131,15967,981,16966,821,18965,641,20964,441,23963,211,25961,961,28960,681,30959,38 1,33
0,36 0,38 0,39 0,41 0,42 0,44 0,46 0,48 0,49 0,51 0,53 0,54
24 972,151,14971,011,14969,871,15968,721,16967,561,18966,381,20965,181,22963,961,24962,721,27961,451,29960,161,32958,84 1,34
0,38 0,39 0,40 0,42 0,44 0,45 0,46 0,48 0,50 0,51 0,53 0,54
25 971,771,15970,621,15969,471,17968,301,18967,121,19965,931,21964,721,24963,481,26962,221,28960,941,31959,631,33958,30 1,36
0,38 0,39 0,41 0,42 0,44 0,46 0,48 0,49 0,50 0,52 0,53 0,55
26 971,391,16970,231,17969,061,18967,881,20966,681,21965,471,23964,241,25962,991,27961,721,30960,421,32959,101,35957,75 1,38
0,39 0,41 0,42 0,44 0,45 0,46 0,48 0,50 0,51 0,52 0,53 0,55
27 971,001,18969,821,18968,641,20967,441,21966,231,22965,011,25963,761,27962,491,28961,211,31959,901,33958,571,37957,20 1,40
0,40 0,41 0,43 0,44 0,46 0,48 0,49 0,50 0,52 0,53 0,55 0,56
28 970,601,19969,411,20968,211,21967,001,23965,771,24964,531,26963,271,28961,991,30960,691,32959,371,35958,021,38956,64 1,41
0,40 0,42 0,43 0,45 0,46 0,48 0,49 0,50 0,52 0,54 0,55 0,56
29 970,201,21968,991,21967,781,23966,551,24965,311,26964,051,27962,781,29961,491,32960,171,34958,831,36957,471,39956,08 1,43
0,42 0,43 0,45 0,46 0,47 0,48 0,50 0,52 0,53 0,54 0,56 0,58
30 969,781,22968,561,23967,331,24966,091,25964,841,27963,571,29962,281,31960,971,33959,641,35958,291,38956,911,41955,50 1,44
0,42 0,43 0,44 0,45 0,47 0,49 0,51 0,52 0,53 0,55 0,56 0,58
31 969,361,23968,131,24966,891,25965,641,27964,371,29963,081,31961,771,32960,451,34959,111,37957,741,39956,351,43954,92 1,45
0,43 0,45 0,46 0,48 0,49 0,50 0,51 0,52 0,54 0,56 0,57 0,58
32 968,931,25967,681,25966,431,27965,161,28963,881,30962,581,32961,261,33959,931,36958,571,39957,181,40955,781,44954,34 1,47
0,43 0,45 0,47 0,48 0,50 0,51 0,52 0,54 0,55 0,56 0,58 0,59
33 968,501,27967,231,27965,961,28964,681,30963,381,31962,071,33960,741,35959,391,37958,021,40956,621,42955,201,45953,75 1,48
0,45 0,45 0,47 0,49 0,50 0,51 0,52 0,54 0,55 0,56 0,58 0,60
34 968,051,27966,781,29965,491,30964,191,31962,881,32961,561,34960,221,37958,851,38957,471,41956,061,44954,621,47953,15 1,49
0,45 0,47 0,48 0,49 0,50 0,52 0,54 0,55 0,57 0,58 0,59 0,60
35 967,601,29996,311,30965,011,31963,701,32962,381,34961,041,36959,681,38958,301,40956,901,42955,481,45954,031,48952,55 1,50
0,45 0,47 0,48 0,49 0,51 0,53 0,54 0,55 0,57 0,59 0,60 0,61
36 967,151,31965,841,31964,531,32963,211,34961,871,36960,511,37959,141,39957,751,42956,331,44954,891,46953,431,49951,94 1,51
0,46 0,47 0,48 0,50 0,52 0,53 0,55 0,56 0,57 0,58 0,60 0,61
37 966,691,32965,371,32964,051,34962,711,36961,351,37959,981,39958,591,40957,191,43955,761,45954,311,48952,831,50951,33 1,52
0,47 0,48 0,50 0,51 0,52 0,54 0,55 0,57 0,58 0,59 0,60 0,61
38 966,221,33964,891,34963,551,35962,201,37960,831,39959,441,40958,041,42956,621,44955,181,46953,721,49952,231,51950,72 1,54
0,48 0,49 0,51 0,52 0,53 0,54 0,56 0,57 0,58 0,60 0,61 0,62
39 965,741,34964,401,36963,041,36961,681,38960,301,40958,901,42957,481,43956,051,45954,601,48953,121,50951,621,52950,10 1,55
0,49 0,50 0,51 0,53 0,54 0,55 0,56 0,58 0,60 0,61 0,62 0,64
40 965,251,35963,901,37962,531,38961,151,39959,761,41958,351,43956,921,45955,471,47954,001,49952,511,51951,001,54949,49 1,561990R2676—ES—21.04.1999—006.001—50
▼B
TABLAIV
Tabladecorrespondenciaentrelosíndicesderefraccióna20ºCylosgradosalcohólicosa20ºCdelasmezclas
hidroalcohólicaspurasydedestilados
1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—51
▼B
4.EXTRACTOSECOTOTAL
Materiassecastotales
1. DEFINICIÓN
Elextractosecototalomateriassecastotaleseselconjuntodetodas
las substancias que no se volatilizan en determinadas condiciones
físicas. Estas condiciones físicas deben establecerse de tal forma
que las substancias que componen el extracto sufran el mínimo de
alteraciones.
Elextracto noreductor eselextracto secototalmenoslosazúcares
totales.
El extracto reducido es el extracto seco total menos los azúcares
totalesqueexcedende1g/l,elsulfatopotásicoqueexcedade1g/
l, el manitol, si lo hubiere, y todas las substancias químicas que se
hayanañadidoalvino.
El resto del extracto elel extracto noreductor menos la acidez fija
expresadaenácidotartárico.
El extracto se expresa en gramos porlitro y debe determinarse con
unaaproximaciónde0,5g.
2. FUNDAMENTODELMÉTODO
Métodoúnico:métododensimétrico.Elextractosecototalsecalcula indirectamente apartirdelvalorde
ladensidaddel mosto y, tratándose de vino, a partir de la densidad
del vino desalcoholizado .
Este extracto se expresa como la cantidad de sacarosa que,disuelta
enunacantidaddeaguasuficienteparaobtenerunlitro,daunasolu-
ciónconlamismadensidadqueelmostooqueelresiduodelvino
sinalcohol.EnlatablaIfiguraesacantidad.
3. PROCEDIMIENTO
La densidad relativa d
2020del vino desalcoholizado (dr) se calcula
mediantelafórmula:
dr=dv−da+1,000
donde
dv= densidad relativa del vino a 20 ºC (corregida la acidez
volátil)(1);
da= densidad relativa a 20 ºC de la mezcla hidroalcohólica del
mismogradoalcohólicoqueelvino.
Puedeasimismocalcularsedrapartirdelasmasasvolúmicasa20ºC,
ρvdel vino y ρade la mezcla hidroalcohólica del mismo grado,
mediantelafórmula:
dr=1,0018( ρv−ρa)+1,000
donde el coeficiente 1,0018 puede prácticamente asimilarse a 1
cuando ρvseainferiora1,05,siendoestecasoelmásfrecuente.
4. EXPRESIÓNDELOSRESULTADOS
Llevarladensidaddr2020delvinodesalcoholizadooladensidadd2020
del mosto de uva a la tabla I para obtener el pesode extracto seco
totalengramosporlitro.
Estepesoseexpresarácon1decimal.Elpesodelextractosecototalseexpresaeng/lcon1decimal.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—52
(1) Antesdehacerestecálculo,ladensidadrelativa(olamasavolúmica)delvino,medida
comoseindicaanteriormente,debesercorregidadelaaccióndelaacidezvolátilsegúnlafórmula:d
v=d2020−0,0000086aó ρv=ρ20−0,0000086asiendoalacantidaddeacidezvolátil
enmiliequivalentesporlitro.
▼B
TABLAI
paraelcálculodelcontenidoenextractosecototal(g/l)
Densidadrelativa
condosdeci-
malesTerceradecimaldeladensidadrelativa
0123456789
Gramosdeextractoporlitro
1,00 0 2,6 5,1 7,7 10,3 12,9 15,4 18,0 20,6 23,2
1,01 25,8 28,4 31,0 33,6 36,2 38,8 41,3 43,9 46,5 49,1
1,02 51,7 54,3 56,9 59,5 62,1 64,7 67,3 69,9 72,5 75,1
1,03 77,7 80,3 82,9 85,5 88,1 90,7 93,3 95,9 98,5 101,1
1,04 103,7 106,3 109,0 111,6 114,2 116,8 119,4 122,0 124,6 127,2
1,05 129,8 132,4 135,0 137,6 140,3 142,9 145,5 148,1 150,7 153,3
1,06 155,9 158,6 161,2 163,8 166,4 169,0 171,6 174,3 176,9 179,5
1,07 182,1 184,8 187,4 190,0 192,6 195,2 197,8 200,5 203,1 205,81,08 208,4 211,0 213,6 216,2 218,9 221,5 224,1 226,8 229,4 232,0
1,09 234,7 237,3 239,9 242,5 245,2 247,8 250,4 253,1 255,7 258,4
1,10 261,0 263,6 266,3 268,9 271,5 274,2 276,8 279,5 282,1 284,8
1,11 287,4 290,0 292,7 295,3 298,0 300,6 303,3 305,9 308,6 311,2
1,12 313,9 316,5 319,2 321,8 324,5 327,1 329,8 332,4 335,1 337,8
1,13 340,4 343,0 345,7 348,3 351,0 353,7 356,3 359,0 361,6 364,3
1,14 366,9 369,6 372,3 375,0 377,6 380,3 382,9 385,6 388,3 390,9
1,15 393,6 396,2 398,9 401,6 404,3 406,9 409,6 412,3 415,0 417,6
1,16 420,3 423,0 425,7 428,3 431,0 433,7 436,4 439,0 441,7 444,4
1,17 447,1 449,8 452,4 455,2 457,8 460,5 463,2 465,9 468,6 471,3
1,18 473,9 476,6 479,3 482,0 484,7 487,4 490,1 492,8 495,5 498,2
1,19 500,9 503,5 506,2 508,9 511,6 514,3 517,0 519,7 522,4 525,1
1,20 527,8 —————————
Tablaintercalar
4adecimaldela
densidadrelativaGramosde
extractoporlitro4adecimaldela
densidadrelativaGramosde
extractoporlitro4adecimaldela
densidadrelativaGramosde
extractoporlitro
1 0,3 4 1,0 7 1,8
2 0,5 5 1,3 8 2,1
3 0,8 6 1,6 9 2,31990R2676—ES—21.04.1999—006.001—53
▼B
5.Azúcaresreductores
1. DEFINICIÓN
Los azúcares reductores están constituidos por el conjunto de los
azúcares con función cetónica o aldehídica determinados por su
acciónreductorasobrelasolucióncupro-alcalina.
2. FUNDAMENTODELOSMÉTODOS
2.1.Defecación
2.1.1. Método de referencia: paso del vino neutralizado y sin alcohol por
unacolumna intercambiadora dondesusanionessoncambiados por
iones acúticos, seguido de la defecación por acetato neutro de
plomo.
2.1.2. Métodosusuales:setrataelvinoconunodelosreactivossiguientes:
2.1.2.1. Acetatoneutrodeplomo
2.1.2.2. Ferrocianurodecinc
2.2.Determinación
2.2.1. Métodoúnico:despuésdehacerreaccionarelvinooelmostodefe-
cado con una cantidad determinada de solución cupro-alcalina, se
determinaelexcesodeionescúpricosporyodometría.
3. DEFECACIÓN
Ellíquidoenelquesevanadeterminarlosazúcaresdebepresentar
uncontenidoenazúcarescomprendidoentre0,5y5g/l.
Sielvinoesseco,hayqueevitardiluirloduranteladefecación;sies
dulce, hay que diluirlo mientras se le defeca, para conseguir un
contenido en azúcares comprendido entre dichos límites, según el
cuadroadjunto:
DenominaciónContenidoenazúcares
comprendidosentre
(g/l)Masavolúmica
comprendidaentreDiluciónqueseprevé
(%)
Mostosymistelas >125 >1,038 1
Vinosdulcesalcoho-
lizadosono25y125 1,005y1,038 4
Vinossemisecos 5y25 0,997y1,005 20
Vinossecos menosde5 <0,997 sindilución
3.1.Métododereferencia
3.1.1.Reactivos
3.1.1.1. Solucióndeácidoclorhídrico(ClH),1M
3.1.1.2. Solucióndehidróxidodesodio(NaOH),1M
3.1.1.3. Solucióndeácidoacético(CH3COOH),4M
3.1.1.4. Solucióndehidróxidodesodio(NaOH),2M
3.1.1.5. Resinaintercambiadoradeaniones[tipoDowex3(20—50mallas)
ounaresinaequivalente].
Preparacióndelacolumnaderesinaintercambiadoradeaniones.En
elfondodelabureta,secolocaunpequeñotapóndelanadevidrioy
15mlderesinaintercambiadoradeaniones(3.1.1.5).
Parapoderutilizarlaresina,selasometeadoscicloscompletosde
regeneración, pasando alternativamente soluciones M de ácido
clorhídrico (3.1.1.1) y de hidróxido de sodio (3.1.1.2). Después delavarcon50mldeaguadestilada,sepasalaresinaaunvasocilín-
drico,seañaden50mldesolución4Mdeácidoacético(3.1.1.3)y
se agita durante 5 minutos. Se vuelve a llenar la bureta y se hacen
pasar a través de la columna 100 ml de solución 4 M de ácido
acético (3.1.1.3). (Es preferible tener una reserva de resina conser-1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—54
▼B
vadaenunfrascollenodesolución4Mdeácidoacético.)Selavala
columnaconaguadestiladahastaqueeleluidoseaneutro.
Regeneración de la resina. Se hacen pasar 150ml de solución 2 M
de hidróxido sódico para eliminar los ácidos y gran parte de la
materiacolorantefijadaenlaresina.Selavacon100mldesolución
4 M de ácido acético. Se lava la columna hasta que el eluido sea
neutro.
3.1.1.6. Solucióndeacetatoneutrodeplomo(aproximadamentesaturada):
Acetato neutro de plomo Pb (CH3COO)2,3
H2O) 250g
Aguamuycalientecsp. 500ml
Agitarhastadilución.
3.1.1.7. Carbonatodecalcio,CaCO3
3.1.2.Procedimiento
3.1.2.1. Vinos secos
Seponen50mldevinoenunvasodeprecipitadode10a12cmde
diámetro,aproximadamente,yseañaden½(n−0,5)mldesolución
Mdehidróxidodesodio(3.1.1.2)(siendonelvolumendeunasolu-
ción0,1Mdehidróxidodesodioutilizadoparaladeterminacióndelaacideztotalde10mldevino).Seevaporasobreunbañodeagua
hirviendo, proyectando una corriente de aire caliente hasta que el
líquidosereduzca,aproximadamente,a20ml.
Hacerpasarestelíquidoatravésdeunacolumnaderesinaintercam-
biadora de aniones en forma de acetato (3.1.1.5), a razón de 3 ml
cada 2 minutos. El eluido se recoge en un matraz aforado de
100ml.Lavar6veceselvasoylacolumnacon10mldeaguadesti-
lada, añadir, agitando, 2,5 ml de solución saturada de acetato de
plomo(3.1.1.6)y0,5gdecarbonatodecalcio(3.1.1.7);agitarvarias
veces y dejar reposar durante al menos 15 minutos; enrasar con
agua.Filtrar.
1mldeestefiltradocorrespondea0,5mldevino.
3.1.2.2. Mostos, mistelas, vinos dulces y vinos semisecos
1.Mostos y mistelas
Diluir al 10 % el líquido que debe analizarse; tomar 10 ml de
dichasolución.
2.Vinos dulces, alcoholizados o no, cuya masa volúmica esté
comprendida entre1,005y1,038.Tomar20mldellíquidoque
debaanalizarse,previamentediluidoal20%.
3.Vinos semisecos, cuya masa volúmica esté comprendida entre
0,997y1,005.Tomar20mldevinosindiluir.
Hacer pasar el volumen de vino o de mosto indicado anterior-
mente a través de una columna intercambiadora de aniones en
forma de acetato, a razón de 3 ml cada 2 minutos. Recoger eleluido en un matraz aforado de 100 ml, lavar la columna con
agua hasta obtener, aproximadamente, 90 ml de eluido. Añadir
0,5 g de carbonato cálcico, 1 ml de acetato de plomo en solu-
ción saturada; agitar y dejar reposar durante al menos 15
minutos,agitandodevezencuando;enrasarconagua.Filtrar.
Primercaso:1mldefiltradocorrespondea0,01mldemostoo
demistela.
Segundo caso: 1 ml de filtrado corresponde a 0,04 ml de vino
dulce.
Tercer caso:1 ml de filtrado corresponde a 0,20 ml de vino
semiseco.
3.2.Métodosusuales
3.2.1.Defecación con acetato neutro de plomo
3.2.1.1. Reactivos
Solución de acetato neutro de plomo (aproximadamente saturada)
(véase3.1.1).1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—55
▼B
Carbonatodecalcio.
3.2.1.2. Procedimiento
3.2.1.2.1.Vinos secos
Seponen50mldevinoenunmatrazaforadode100mlyseañade
1/2 (n − 0,5) ml de solución M de hidróxido de sodio, sea n el
volumendesolución0,1Mutilizadaparadeterminarlaacideztotal
de10mldevino.Añadir,agitando, 2,5mldesoluciónsaturada de
acetato de plomo (3.1.1.6) y 0,5 g de carbonato cálcico (3.1.1.7);
agitar varias veces y dejar reposar al menos 15 minutos; enrasar
conaguayfiltrar.
1mldeestefiltradocorrespondea0,5mldevino.
3.2.1.2.2.Mostos, mistelas, vinos dulces y vinos semisecos
Enunmatrazaforadode100ml,colocarunvolumendevino(ode
mostoodemistela)asídefinido;lasdilucionesquefiguranaconti-
nuaciónsedanatítuloindicativo:
1.Mostos y mistelas:
diluir al 10 % el líquido que deba analizarse. Tomar 10 ml de
estasolución.
2.Vinos dulces, alcoholizados o no, cuya masa volúmica esté
comprendida entre 1,005 y 1,038. Tomar 20 ml de líquido que
debaanalizarsepreviamentediluidoal20%.
3.Vinos semisecos, cuya masa volúmica esté comprendida entre
0,997y1,005.Tomar20mldevinosindiluir.
Añadir0,5gdecarbonatodecalcio,60mldeaguaaproximada-
mente, y 0,5 — 1 o 2 ml de acetato de plomo en solución
saturada; agitar y dejar reposar durante al menos 15 minutos,
agitandodevezencuando.Enrasarconaguayfiltrar.
Primercaso:1mldefiltradocorrespondea0,01mldemostoo
mistela.
Segundo caso: 1 ml de filtrado corresponde a 0,04 ml de vino
dulce.
Tercer caso: 1 ml de filtrado corresponde a 0,20 ml de vino
semiseco.
3.2.2.Defecación con hexacianoferrato (II) de cinc
Dicho procedimiento de defecación sólo deberá utilizarse para los
vinosblancos,vinosdulcespococoloreadosymostos.
3.2.2.1. Reactivos
3.2.2.1.1.Solución I de hexacianoferrato (II) de potasio
Hexacianoferrato (II) de potasio [K4Fe
(CN)6,3H2O] 150 g
Aguacsp 1000 ml
3.2.2.1.2.Solución II de sulfato de cinc:
Sulfatodecinc(ZnSO4·7H2O) 300 g
Aguacsp 1000 ml
3.2.2.2. Procedimiento
En un matraz aforado de 100 ml, poner un volumen de vino (o de
mostoodemistela)asídefinido;lasdilucionesquefiguranaconti-
nuaciónsedanatítuloindicativo:
1.Mostos y mistelas:
diluir al 10 % el líquido que deba analizarse, tomar 10 ml de
dichasolución.
2.Vinos dulces, alcoholizados o no, cuya masa volúmica esté
comprendida entre 1,005 y 1,038. Tomar 20 ml de líquido que
debaanalizarsepreviamentediluidoal20%.
3.Vinos semisecos, cuya masa volúmica esté comprendida entre
0,997y1,005.Tomar20mldevinosindiluir.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—56
▼B
4.Vinos secos.Tomar50mldevinosindiluir.
Añadir 5 ml de solución I de hexacianoferrato (II) de potasio
(3.2.2.1.1) y 5 ml de solución II de sulfato de cinc (3.2.2.1.2).
Mezclar.Enrasarconagua,esperar10minutosyfiltrar.
Primercaso:1mldefiltradocorrespondea0,01mldemostoo
demistela.
Segundo caso: 1 ml de filtrado corresponde a 0,04 ml de vino
dulce.
Tercer caso: 1 ml de filtrado corresponde a 0,20 ml de vino
semiseco.
Cuarto caso: 1 ml de filtrado corresponde a 0,50 ml de vino
seco.
4. DETERMINACIÓN
4.1.Reactivos
4.1.1.Solución cupro-alcalina:
Sulfatodecobrepuro(CuSO4·5H2O) 25 g
Ácidocítrico(C6H8O7·H2O) 50 g
Carbonatodesodiocristalizado (Na2CO3·10
H2O) 388 g
Aguacsp 1000 ml
Disolver el sulfato de cobre en 100 ml de agua, el ácido citrico en
300 ml de agua y el carbonato de sodio en 300 a 400 ml de agua
caliente. Mezclar la solución de ácido cítrico y la de carbonato de
sodio.Añadirdespuéslasolucióndesulfatodecobreyllevarhasta
unlitro.
4.1.2.Solución de yoduro de potasio al 30 %:
Yodurodepotasio(Kl) 30 g
Aguacsp 100 ml
Conservarenunfrascodevidriotopacio.
4.1.3.Ácido sulfúrico al 25 %:
Ácidosulfúricopuro(H2SO4)ρ2 0=1,84g/ml 25 g
Aguacsp 100 ml
Verterelácidoenelagua,dejarenfriaryllevarhasta100ml.
4.1.4.Engrudo de almidón de 5 g/l:
Disolver 5 g de almidón en 500 ml de agua aproximadamente.
Llevar a ebullición agitando y mantenerla durante 10 min.; añadir
200 g de cloruro sódico (Cl Na). Llevar hasta un litro una vez que
hayaenfriado.
— Tiosulfatodesodio,solución0,1M
— Solucióndeazúcarinvertidode5g/l:
estasolucióndebeutilizarseparaverificarlatécnicadeladeter-
minación.
Enunmatrazaforadode200ml.seecha:
Sacarosapura(C12H22O11) 4,75 g
Agua,aproximadamente 100 ml
Ácido clorhídrico puro (CIH) ρ
20=1,16−1,19g/ml) 5 ml
Ponerelmatrazalbañodeaguaa60ºCdurantetiemposuficiente
para que la temperatura de la solución alcance 50 º C, temperatura
que se matendrá durante 15 min. Dejar después que el matraz se
enfríedurante30min.;seguidamente,enfriarloporinmersiónenun
bañodeaguafría.Sepasaaunmatrazaforadode1litroyseenrasa.
Estasoluciónseconserva(estasolucióntieneunaacidezde0,06M,
aproximadamente),conunasolucióndehidróxidosódico.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—57
▼B
4.2.Procedimiento
En un erlenmeyer de 300 ml, poner 25 ml de solución cupro-alca-
lina, 15 ml de agua y 10 ml de solución de defecación. Este
volumen desolución azucarada nodebe contener más de60 mgde
azúcarinvertido.
Añadir algunos granos de piedra pómez. Acoplar al erlenmeyer un
refrigerante de reflujo y llevar a ebullición, que deberá alcanzarse
en2min.Mantenerlaebullicióndurante10min.exactamente.
Enfriarinmediatamentebajounchorrodeaguafría.Unavezquese
hayaenfriadocompletamente,añadir10mldelasolucióndeyoduro
depotasioal30%(4.1.2),25mldeácidosulfúricoal25%(4.1.3)
y2mldeengrudodealmidón(4.1.4).
Valorarconlasolución0,1Mdetiosulfatodesodio(4.1.5).Seanel
númerodemililitrosutilizados.
Porotrolado,realizarunadeterminacióntestigoenlaquelos10ml
desoluciónazucaradasesustituyenpor10mldeaguadestilada.Sea
n'elvolumendetiosulfatoempleado.
4.3.Expresióndelosresultados
4.3.1.Cálculos
La cantidad de azúcar, expresada en azúcar invertido, contenida en
la muestra se da en la tabla adjunta en función del número n' − n
demililitrosdetiosulfatoutilizados.
Expresar el contenido del vino en gramos de azúcar invertido por
litro con 1 decimal, teniendo en cuenta las diluciones efectuadas
duranteladefecaciónyelvolumendelamuestra.
4.3.2.Repetibilidad
r = 0,015xi
xi= concentracióndelazúcarinvertidoeng/ldelamuestra
4.3.3.Reproductibilidad
R = 0,058xi
xi= concentracióndelazúcarinvertidoeng/ldelamuestra
Tabladecorrespondenciaentreelvolumendesolución0,1Mdetiosulfatodesodio:(n ′−n)ml,ylacantidadde
azúcaresreductoresenmg
Na2S2O3(ml0,1M)Azúcaresreductores(mg)Dife-
renciaNa2S2O3(ml0,1M)Azúcaresreductores(mg)Dife-
rencia
1 2,4 2,4 13 33,0 2,7
2 4,8 2,4 14 35,7 2,8
3 7,2 2,5 15 38,5 2,8
4 9,7 2,5 16 41,3 2,9
5 12,2 2,5 17 44,2 2,9
6 14,7 2,6 18 47,2 2,9
7 17,2 2,6 19 50,0 3,0
8 19,8 2,6 20 53,0 3,0
9 22,4 2,6 21 56,0 3,1
10 25,0 2,6 22 59,1 3,1
11 27,6 2,7 23 62,2
12 30,3 2,71990R2676—ES—21.04.1999—006.001—58
▼B
6.SACAROSA
1. FUNDAMENTODELOSMÉTODOS
1. Método de detección cualitativa por cromatografia en capa fina.
Lasacarosaseseparadelosotrosazúcaresporcromatografíaen
capafina,conplacasdecelulosayserevelaconelreactivourea
—ácidoclorhídricoenestufaa105ºC.
II. Método de detección y determinación por cromatografía líquida
de alta resolución. La sacarosa se separa mediante una columna
de sílice con alquilamina y se detecta por refractometría. para
calcularlacantidad,seestableceunacomparaciónconunpatrón
externoanalizadoenlasmismascondiciones.
Notas:La autenticidad de un mosto o de un vino puede controlarse
medianteelmétododeRMNdeldeuterio,descritoparaladetec-
ción del enriquecimiento de mostos, de mostos concentrados
rectificadosydevinos.
Paralainvestigaciónyladosificacióndelasacarosalacromato-
grafía en fase gaseosa descrita en el capítulo 42 letra f) puede
igualmenteserutilizada.
2. MÉTODO DE DETECCIÓN CUALITATIVA POR CROMATO-
GRAFÍAENCAPAFINA
2.1.Material
2.1.1. Placasparacromatografíadecapafinadecelulosa(véase2.2.3).
2.1.2.Cubeta de cromatografía
2.1.3.Jeringa micrométrica o micropipeta
2.1.4.Estufa regulable a 105º C± 2º C
2.2.Reactivos
2.2.1.Carbón activo
2.2.2.Fase móvil:clorurodemetileno—ácidoacético ( ρ
20=1,05g/ml)
—etanol—metanol—agua(50:25:9:6:10).
2.2.3.Revelador:
Urea 5 g
Ácidoclorhídrico2M 20 ml
Etanol 100 ml
2.2.4.Solución de referencia
Glucosa 35 g
Fructosa 35 g
Sacarosa 0,5 g
Aguacsp 1000 ml
2.3.Procedimiento
2.3.1.Preparación de la muestra
Cuando el mosto o el vino tenga mucho color, la decoloración se
harámediantetratamientoconcarbónactivo.
Tratándosedemostoconcentradorectificado,seutilizarálasolución
cuyocontenido enazúcaresseadel25%(m/m) (25ºBrix),prepa-
radatalcomoseindicaenelpunto4.1.2delmétodo«Determinación
delpH»,ysediluiráañadiendoaguaa25mldeestasoluciónenun
matrazaforadohastaalcanzar100ml.
2.3.2.Obtención del cromatograma
Depositara2,5cmdelbordeinferiordelaplaca:
— 10µldelamuestra
— 10µldelasolucióndereferencia.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—59
▼B
Colocar la placa en la cubeta previamente saturada por los vapores
de la fase móvil, y dejar ascender el líquido hasta 1 cm del borde
superior.Retirar la placa de la cubeta, secarla con corriente de aire
caliente. Repetir dosveces la migración secando la placa cada vez.
Pulverizaruniformementelaplacacon15mldereveladorymante-
nerlaenlaestufaa105ºCdurante5minutos.
2.4.Resultados
Lasacarosaylafructosaaparecen bajoformademanchas decolor
azul oscuro sobre fondo blanco; la glucosa da una mancha verdosa
menosintensa.
3. MÉTODODEDETECCIÓNYDETERMINACIÓNPORCROMA-
TOGRAFÍALÍQUIDADEALTARESOLUCIÓN
Lascondicionescromatográficassedansoloatítuloindicativo.
3.1.Material
3.1.1.Cromatógrafo de fase líquida de alta resolución dotado de:
1. Inyectorconloopde10µl;
2. Detector refractómetro diferencial o refractómetro interferó-
metro;
3. Columna grupo AMINO (25 cm de longitud por 4 mm de
diámetrointerno);
4. Precolumnadelamismafase;5. Undispositivoparamantener aislado oalamisma temperatura
(30ºC)elconjuntoformadoporlaprecolumnaylacolumna.
6. Unregistradoro,ensucaso,unintegrador.7. Flujodelafasemóvil:1ml/min.
3.1.2.Dispositivo de filtración por membrana (0,45 µm)
3.2.Reactivos
3.2.1.Agua bidestilada
3.2.2.Acetonitrilo (CH
3CN) de calidad HPLC
3.2.3.Fase móvil: acetonitrilo-agua, previamente filtrados por membrana
(0,45 µm), (80 — 20 v/v).
Antes de su utilización se deberá desgasificar.
3.2.4. Solución de referencia: solución acuosa de sacarosa de 1,2 g/l.
Filtradapormembrana(0,45µm).
3.3.Procedimiento
3.3.1.Preparación de la muestra
— Vinosymostos.
Filtrarpormembrana(0,45µm).
— Mostos concentrados rectificados. Utilizar la solución obtenida
diluyendo el mosto concentrado rectificado al 40 % (m/v), tal
como se indica en el punto 5.1.2 del método «Acidez total», y
filtrarlapormembrana(0,45µm).
3.3.2.Determinación cromatográfica
Inyectar sucesivamente en el cromatógrafo 10 µl de la solución de
referencia y 10 µl de la muestra preparada como se indica en el
punto3.3.1.Repetirlasinyeccionesenelmismoorden.
Registrarelcromatograma.
Eltiempoderetencióndelasacarosaesdeunos10minutos.
3.4.Cálculos
Utilizarparaelcálculoelpromediode2resultadosdelasoluciónde
referenciaydelamuestra.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—60
▼B
3.4.1.Vinos y mostos
Calcularelcontenidoengramosporlitro.
3.4.2.Mostos concentrados rectificados
SeaCg/lelcontenidoensacarosadelasolucióndemostoconcen-
tradorectificadoal40%(m/v).
Contenido en sacarosa en gramos por kilogramo de mosto concen-
tradorectificado:2,5.C
3.5.Expresióndelosresultados
Elcontenidoensacarosadelosvinos,mostosymostosconcentrados
rectificados se expresa en gramos por litro (vinos y mostos) y en
gramos por kilogramo (mostos concentrados rectificados) con 1
decimal.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—61
▼B
7.GLUCOSAYFRUCTOSA
1. DEFINICIÓN
Laglucosaylafructosapuedendeterminarseporseparadomediante
un método enzimático, con vistas únicamente a calcular la relación
glucosa/fructosa.
2. FUNDAMENTO
Se fosforila la glucosa y la fructosa con adenosín-trifostato (ATP)
mediante una reacción enzimática catalizada por la hexokinasa
(HK), dando como resultado glucosa-6-fosfato (G6P) y fructosa-6-
fosfato(F6P):
glucosa+ATP
 G6P+ADP
fructosa+ATP
 F6P+ADP
Enunprimermomento,laglucosa-6-fosfatoseoxidaagluconato-6-
fosfato mediante la nicotinamida-adenin-dinucleótido-fosfato
(NADP)enpresenciadelaenzimaglucosa-6-fosfato-deshidrogenasa
(G6PDH). La cantidad de nicotinamida-adenin-dinucleótido-fosfato
reducida (NADPH) que se origina corresponde a la cantidad de
glucosa-6-fosfatoy,porlotanto,aladeglucosa.
G6P+NADP+
gluconato-6-fosfato+NADPH+H+
La nicotinamida-adenin-dinucleótido-fosfato reducida se determina
porsuabsorcióna340nm.
Unavezfinalizadaestareacción,lafructosa-6-fosfatosetransforma
en glucosa-6-fosfato por la acción de la fosfoglucosa-isomerasa
(PGI)
F6P
 G6P
La glucosa-6-fosfato reacciona nuevamente con la nicotinamida-
adenin-dinucleótido-fosfato para dar gluconato-6-fosfato y nicotina-
mida-adenin-dinucleótido-fosfato reducida, determinándose esta
última.
3. APARATOS
— Espectrofotómetro que permita efectuar medidas a 340 nm,
máximodeabsorcióndelNADPH.Portratarsedemedidasabso-
lutas(noexistecurvadecalibrado,sinoreferenciaalcoeficiente
de extinición del NADPH), deben controlarse las escalas de las
longitudesdeondaydelasabsorbanciasdelaparato.
En sudefecto, utilizar un espectrofotómetro de espectro discon-
tinuoquepermitaefectuarmedidasa334nmo365nm.
— Cubetasdevidriode1cmderecorrido ópticoocubetasdeuso
único.
— Pipetasparaensayosenzimáticosde0,02;0,05;0,1;0,2ml.
4. REACTIVOS
4.1.Solución 1:tampón (trietanolamina 0,3 M; pH = 7,6; 4 10−3M
Mg2+): se disuelven 11,2 g de clorhidrato de trietanolamina
(C2H5)3N · HCL) y 0,2 g de Mg SO4·7H2O en 150 ml de agua
bidestilada; añadir alrededor de4ml de solución5 Mdehidróxido
sódico(NaOH)paraobtenerunpHiguala7,6yllevara200ml.
Estasolucióntampónpuedeconservarse4semanasa+4ºC.
4.2.Solución 2: solución de nicotinamida-adenin-dinucleótido-fosfato
(11,5 10−3M aproximadamente): se disuelven 50 mg de nicotina-
mida-adenin-dinucleótido-fosfato disódico en 5 ml de agua
bidestilada.
Estasoluciónseconservadurante4semanasa+4ºC.
4.3.Solución3:solucióndeadenosin-5 ′-trifosfato(8110−3M,aproxima-
damente): se disuelven 250 mg de adenosin-5 ′-trifosfato disódico y1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—62
▼B
250mgdebicarbonatodesodio(NaHCO3)en5mldeaguabides-
tilada.
Estasoluciónseconservadurante4semanasa+4ºC.
4.4.Solución4:Hexoquinasa/glucosa-6-fosfato-deshidrogenasa: mezclar
0,5 ml de hexoquinasa (2 mg de proteína/ml, es decir 280 U/ml) y
0,5 ml de glucosa-6-fosfato-deshidrogenasa (1 mg de proteína por
ml).
Estamezclaseconservaduranteunañoa+4ºC.
4.5.Solución5:Fosfoglucosa-isomerasa (2 mg de proteína por ml, es
decir700U/ml).Lasuspensiónseutilizasindilución.
Conservación:unañoa+4ºC.
Nota:
El conjunto de los reactivos necesarios para esta determinación es
comercializado.
5. PROCEDIMIENTO5.1.Preparacióndelamuestra
En función de la cantidad estimada de glucosa + fructosa por litro,
efectuarlasdilucionessiguientes:
Medidaa340nmy334nm 365nm Diluciónconagua FactorFdedilución
hasta0,4g/l 0,8g/l — —
hasta4,0g/l 8,0g/l 1+9 10hasta10,0g/l 20,0g/l 1+24 25hasta20,0g/l 40,0g/l 1+49 50hasta40,0g/l 80,0g/l 1+99 100
porencimade40,0g/l 80,0g/l 1+999 1000
5.2.Determinación
Regulando el espectrofotómetro a la longitud de onda de 340 nm,
efectuar las medidas con respecto al aire (sin cubeta en el trayecto
óptico)oconrespectoalagua.
Temperatura,20a25ºC.
Endoscubetasde1cmdetrayectoóptico,introducir:
Testigo Determinación
Solución1(4.1)(a20ºC) 2,50ml 2,50ml
Solución2(4.2) 0,10ml 0,10ml
Solución3(4.3) 0,10ml 0,10ml
Muestraquevaadeterminarse 0,20ml
Aguabidestilada 0,20ml
Mezclar y, transcurridos 3 min. aproximadamente, leer la absor-
banciadelassoluciones(A
1).Desencadenarlareacción,añadiendo:
Solución4(4.4) 0,02ml 0,02ml
Mezclar;esperar15min.;medirlaabsorbanciayverificarelcesede
lareaccióncuandohayanpasado2min.(A2).
Inmediatamente,añadir:
Solución5(4.5) 0,02ml 0,02ml
Mezclar; leer al cabo de 10min.; comprobar el cese dela reacción
despuésde2min.(A3).
Determinarlasdiferenciasdeabsorbancia:
A2−A1correspondientealaglucosa1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—63
▼B
A3−A2correspondientealafructosa
tantoparaeltestigocomoparaladeterminación.
Deducir la diferencia de absorbancia del testigo ( ∆AT) y la de la
determinación( ∆AD)yestablecer:
paralaglucosa: ∆AG=∆AD−∆AT
paralafructosa: ∆AF=∆AD−∆AT
Nota:
Eltiemponecesarioparalaaccióndelasenzimaspuedevariardeun
loteaotro.Porloque,arriba,sólosedaatítuloindicativo.Sereco-
miendadeterminarloparacadalote.
5.3.Expresióndelosresultados
5.3.1.Cálculo
La fórmula general para el cálculo de las concentraciones es la
siguiente:
C¼V/C1PM
ε/C1d/C1v/C11000∆Ag =lðÞ
V = volumendelensayo(ml)
v = volumendelamuestra(ml)PM = masamoleculardelasustanciaquevaadeterminarse
d = trayectoópticodelacubeta(cm)
E = coeficiente de absorción del NADPH a 340 nm= 6,3
(mmole
−1·l·cm−1)
V = 2,92mlparaladeterminacióndelaglucosa
V = 2,94mlparaladeterminacióndelafructosav = 0,20mlPM = 180
d= 1 .
Seobtiene:
paralaglucosa:Cg/l=0,417· ∆A
G
paralafructosa:Cg/l=0,420· ∆AF
Sialprepararlamuestrasehaefectuadounadilución,multiplicarel
resultadoporelfactorF.
Nota:
Silasmedidassehantomadoalongitudesdeondade334o365nm,
seobtiene:
— medidaa334nm:E=6,2(mmole−1·l·cm−1)
paralaglucosa:Cg/l=0,425· ∆AG
paralafructosa:Cg/l=0,428· ∆AF
— medidaa365nm:E=3,4(mmole−1·l·cm−1)
paralaglucosa:Cg/l=0,773· ∆AG
paralafructosa:Cg/l=0,778· ∆AF
5.3.2.Repetibilidad (r)
r=0,056xi
5.3.3.Reproductibilidad (R)
R = 0,12+0,076xi
xi= contenidoenglucosaofructosaengramosporlitro.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—64
▼B
8.DETECCIÓN DEL AUMENTO DEL GRADO ALCOHÓLICO
NATURALDEMOSTOS,DEMOSTOSDEUVACONCENTRADOS,
DE MOSTOS DE UVA CONCENTRADOS RECTIFICADOS Y DE
VINOS POR APLICACIÓN DE LA RESONANCIA MAGNÉTICO-
NUCLEARDELDEUTERIO(RMN-FINS/SNIF-NMR)
1. DEFINICIÓN
Losátomosde deuterio contenidos en losazúcares yel agua de un
mostodeuvaseredistribuirántrasfermentación enlasmoléculasI,
II,IIIyIVdelvino:
CH2DCH2OH CH3CHDOH
II I
CH3CH2OD HOD
III IV
La adición de azúcares exógenos (chaptalización) antes de la
fermentacióndelmostorepercutiráenlaredistribucióndeldeuterio.
En comparación con los valores de los parámetros relativos de un
vino testigo natural de la misma región, el aumento artificial del
grado alcohólico natural con azúcar exógeno, se traducirá en las
variacionessiguientes:
Parámetros
Vino(D/H)I(D/H)II(D/H)WQR
— natural
— adición
— azúcarderemolacha
— azúcardecaña
/C148/C147/C147/C147/C149/C147/C147/C147/C150
 — azúcardemaíz
(D/H)I: relaciónisotópicadelamoléculaI
(D/H)II: relaciónisotópicaenlamoléculaII
(D/H)WQ: relaciónisotópicadelaguadelvino.
R = 2(D/H)II/(D/H)I, expresa la distribución relativa del deuterio
en las moléculas I y II, R se mide directamente a partir de
lasintensidadeshdelasseñales,yportantoR=3hII/hI.
La medida de (D/H)Icaracteriza principalmente la especie vegetal
sintetizadora del azúcar y, en menor medida, la geografía del lugar
derecolección(naturalezadelaguautilizadadurantelafotosíntesis).
(D/H)IIrepresenta la climatología del lugar de producción de las
uvas (naturaleza del agua de lluvia y condiciones meteorológicas)
y,enmenormedida,laconcentracióndeazúcardelmostoinicial.
(D/H)WQrepresenta la climatología del lugar de producción y la
riquezaenazúcardelmostoinicial.
2. FUNDAMENTO
Se efectúa la determinación de los parámetros definidos anterior-
mente R; (D/H)I; (D/H)IImediante RMN del deuterio en el etanol
extraídodelvinoodelosproductosdefermentacióndelmosto,del
mosto concentrado y del mosto concentrado rectificado que se
obtienen en las condiciones dadas. Se completa eventualmente la
determinación estableciendo la relación isotópica del agua extraída
delvino,(D/H)WQ,ylarelaciónisotópica13C/12Cdeletanol.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—65
▼M5
▼B
3. PREPARACIÓNDELAMUESTRAPARAELANÁLISIS
3.1.Extraccióndeletanolydelaguadelvino
Nota:Se puede utilizar cualquier dispositivo de extracción, con la condi-
ción que permita recuperar entre el 98 y 98,5 % del alcohol del
vinoyqueel título másico deldestilado se encuentre entre el 92y
el93%masa(95%vol).
3.1.1.Material y reactivos
— Aparatoparalaextraccióndeletanol(figura1),queincluye:
— calentadoreléctricoconreguladordevoltaje,
— matrazesmeriladode1litro;
— columna Cadiot de cinta helicoidal (parte móvil de teflón),
porejemplo[Prolabo,ref.06(730-194)],
— matracescónicosesmeriladosde125ml,— matracescontapóndeplásticode125y60ml;
— Reactivos para la determinación del agua según la técnica de
KarlFischer(porejemploMerck9241y9243).
3.1.2.Procedimiento
3.1.2.1. Determinar elgradoalcohólico delvino,conunaprecisiónsuperior
al0,05%envolumen;sedenominaráestegradog
v.
3.1.2.2. Extracción del etanol
Introducir una muestra homogénea de 500 ml de vino de grado
alcohólico gv,enmatraz delaparatodedestilación conunarelación
dereflujoconstantepróximaa0,9;pararecogereldestilado;colocar
un matraz cónico esmerilado de 125 ml pesado previamente.
Recoger el destilado con punto de ebullición entre 78,0 y 78,2 ºC,
aproximadamente de 40 a 60 ml. Cuando la temperatura sobrepase
los78,5ºC,suspenderlatomadurante5minutos.
Cuandolatemperaturadesciendaa78ºC,volverarecogereldesti-
lado hasta que ascienda a 78,5 ºC, repitiendo esta operación hasta
quelatemperatura, unavezinterrumpidalarecogidayfuncionando
encircuitocerrado,novuelvaabajar.Ladestilación completadura
aproximadamente 5 horas. Operando de esta manera puede recupe-
rarse entre el 98 % y el 98,5 % del alcohol total del vino de un
destilado con un grado comprendido entre 92 y 93 % masa (95 %
vol) grado para el que se han establecido la condiciones de la
RMNdescrita,enelapartado4.
Sepesaeletanolrecuperado.
Seconservaenunmatrazde60mlunatomademuestrahomogénea
de 60 ml de las partes finales de la destilación; esta toma repre-
sentará el agua del vino. Eventualmente se determinará su relación
isotópica.
Nota:
Si se dispone de un espectrómetro dotado de una sonda de 10 mm
(véase apartado 4) bastará una toma de muestra homogénea de
300mldevino.
3.1.2.3. Determinación del grado alcohólico del alc oholextraído
Se determina mediante el método de Karl Fischer el contenido en
agua p′de una muestra de alcohol de aproximadamente 0,5 ml
cuyopesopseconoceexactamente.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—66
▼B
Figura1:Instalaciónporlaextraccióndeletanol
Elgradodeletanolenpesovendrádadoporlafórmula
gD
m¼p/C0p0
p/C2100
3.2.Fermentación de mostos, de mostos concentrados y de mostos
concentradosrectificados
3.2.1.Material y reactivos
— Ácidotartárico.
— BasedenitrógenoparalevadurasinaminoácidoDIFCO.— Levadurassecasactivas« Saccharomyces cerevisiae ».1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—67
▼B
Si se conoce la relación isotópica del agua del mosto, se pueden
reactivarlaslevaduraspreviamentearealizarlasiembra,durante15
minutos en el mínimo de agua tibia sin destilar (1 g en 50 ml), de
relaciónisotópicacercana,aladelaguadelmosto.
Si no se conoce la relación isotópica del agua del mosto, es prefe-
riblerealizarlasiembradirectamente.
Lacantidaddelevadurassecasquesedebenutilizaresdelordende
1gestoes,alrededorde1010célulaspara1litrodemosto.
Recipiente para la fermentación, de una capacidad de 1,5 litro,
dotado de un dispositivo que permita manipular al resguardo del
aire ycondensarlosvaporesde alcohol, yaque nodeberá tolerarse
ninguna pérdida de etanol durante la fermentación. El índice de
conversión de los azúcares fermentables en etanol deberá ser supe-
rioral98%.
3.2.2.Procedimiento
3.2.2.1. Mostos
— Mostosfrescos
Colocar 1 litro de mosto, cuya concentración en azúcares
fermentables se ha determinado previamente, en el recipiente
previsto para la fermentación. Añadir 1 g de levaduras secas
previamente reactivadas. Colocar el dispositivo que permite
manipular al abrigo del aire. Llévese la fermentación a una
temperatura próxima a los 20 ºC hasta que se agoten los
azúcares.Trasdeterminarelgradoalcohólicodelproductodela
fermentaciónyunavezcalculadoelíndicedeconversióndelos
azúcares en alcohol, se centrifuga el líquido fermentado y se
destilaparaextraereletanol.
— Mostosconservadoscondióxidodeazufre
Desulfitarunvolumendemostoalgosuperiora1litro(1,2litro)
haciendoburbujearunacorrientedenitrógenoatravésdelmosto,
calentado al baño maría a reflujo hasta 70-80 ºC, hasta que el
contenido total de dióxido de azufre sea inferior a 200 mg/l.
Procúrese no provocar ninguna concentración de mosto por
evaporación de agua, empleando un refrigerante eficaz al
respecto.
Colocar1litrodemostodesulfitadoenelrecipiente defermen-
taciónycontinuarcomosehaindicadoparalosmostosfrescos.
Nota:
Si se ha utilizado metabisulfito de potasio para sulfitar el
mosto, será necesario añadir a este ácido sulfúrico antes de
proceder al desulfitado, a razón de 0,25 ml de ácido sulfúrico
concentrado ( ρ20= 1,84 g/ml) por gramo de metabisulfito
utilizado por litro de mosto.
3.2.2.2. Mostos concentrados
ColocarenelrecipientedefermentaciónunvolumenVmldemosto
concentrado que contenga una cantidad de azúcares próxima a los
170 g. Completar hasta 1 litro con (1000 − V) ml de agua con la
misma relación isotópica que el agua del mosto natural testigo.
Sembrar de la misma forma que se indica en 3.2.1. Añadir 3 g de
basedenitrógenoparalevadurassinaminoácidosDIFCO.Homoge-
neizarycontinuarcomosehadescritoantes.
3.2.2.3. Mostos de uva concentrados rectificados
Proceder como se ha descrito en 3..2.2.2 completando hasta 1 litro
con(1000−V)mldeaguaconlamismarelaciónisotópicaqueel
aguadelmostonaturaltestigo,enlosquesehabrándisuelto3gde
ácidotartárico.
Nota:
Apartarunvolumende50mldemuestrademostoodemostodisul-
fitado, de mosto concentrado o de mosto concentrado rectificado
para efectuar la extracción eventual de agua y la determinación de
surelaciónisotópica(D/H)WQ.Laextraccióndelaguadelosmostos
podrá efectuarse simplemente por destilación azeotrópica con
tolueno.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—68
▼B
3.3.PreparacióndelamuestradealcoholparasumedidaporRMN
3.3.1.Reactivos
N, N-tetrametilurea (TMU); utilizar una muestra de TMU de refe-
rencia, de relación isotópica D/H conocida y controlada. Podrá
obtenerseestamuestradelaDirecciónGeneraldeCiencia,Invetiga-
ciónyDesarrollo,OficinaComunitariadeReferencia,RuedelaLoi,
200,B-1049Bruselas.
3.3.2.Procedimiento
— SondaRMNde15mmdediámetro:
Verterenunfrascopesadopreviamente7mldealcoholobtenido
según3.1.2pesándoloconprecisiónde0,1mg;sedenominaráa
este peso mA; se tomarán a continuación 3 ml del estándar
interno (TMU), pesándose con precisión de 0,1 mg; se deno-
minaráaestepesomes.Homogeneizarporagitación.
— SondaRMNde10mmdediámetro:
Bastan3,2mldealcoholy1,3mldeTMU.Segúneltipodeespectrómetroydesondautilizados(véaseapar-
tado4),seañadiráunacantidadsuficientedehexafluorobenceno
comosustanciadeestabilizacióncampo-frecuencia(lock).
EspectrómetroSonda
10mm 15mm
7,05T 150µl 200µl
9,4T 35µl 50µl
3.4.PreeparacióndelamuestradeaguaparalamedicióndeRMN
convistasaladeterminacióneventualdesurelaciónisotópica
3.4.1.Reactivos
N,N,-tetrametilurea(TMU):véase3.3.1.
3.4.2.Procedimiento
Colocarenunfrascoyapesado3mldeaguaobtenidasegún3.1.2o
3.2(nota),pesándoloconprecisiónde0,1mg.Sedenominaráaeste
pesom′E;setomaráacontinuación4mldelestándarinterno(TMU)
pesándoseconprecisiónde0,1mg;sedenominará aestepesom ′es.
Homogeneizaragitando.
Nota:
Si el laboratorio dispone de un espectrómetro de masas de propor-
ciones isotópicas, la medición podrá realizarse con este
instrumento, a fin de disminuir la utilización del espectrómetro de
RMN, ya que, para cada serie de vinos estudiada, es necesario
contrastarlaproporciónTIV(5.2).
4. OBTENCIÓNDELOSESPECTROSRMN2HDELALCOHOLY
DELAGUA.
Determinacióndelosparámetrosisotópicos.
4.1.Material
— Espectrómetro de RMN dotado de una sonda específica de
deuterio ajustada a la frecuencia característicaodel campo Bo(porejemploparaBo=7,05T,o=46,5MHzyparaBo=9,4T,
o= 61,4 MHz) y que posea un canal de desacoplamiento de
protón B2y un canal de estabilización campo-frecuencia (lock)
alafrecuenciadelflúor.
Laresoluciónmedidaenelespectro,transformadasinmultiplica-
ciónexponencial(esdecirLB=ceroO)(figura2b)yexpresada
por la amplitud a media altura de las señales de metilo y meti-
leno del etanol y de la señal de metilo del TMU, deberá ser
inferiora0,5Hz.Lasensibilidad,medidaconunfactordemulti-
plicación exponencial LB = 2 (figura 2 a), deberá ser igual o
superiora150paralaseñaldemetilodeletanoldeungradode
95 % vol (93,5 % m/m). En estas condiciones, el intervalo de
confianzaenlamedicióndelaalturadelaseñal,calculadapara1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—69
▼B
unaprobabilidad de97,5%(testde unacola) y10repeticiones
delespectro,seráde0,35%.
— Cambiadorautomáticodemuestras(eventualmente).— Programadetratamientodedatos.— Tubosparamuestrade15mmode10mm,segúnlascaracterís-
ticasdelespectrómetro.
4.2.Regulacióndelespectrómetroyverificaciones
4.2.1.Regulación
Proceder a las regulaciones habituales de homogeneidades y de
sensibilidadsegúnlasindicacionesdelconstructor.
4.2.2.Verificación de la validez de las regulaciones
Utilizaretanolesdereferencia,designadosmediantelasletras«C,V
y R», de un contenido isotópico diferente pero comprobado con
precisión.Elsignificadodeestasinicialeseselsiguiente:C,alcohol
de caña de azúcar o de maíz; V, alcohol de vino, y R, alcohol de
remolacha. Las muestras pueden obtenerse en la Oficina Comuni-
tariadeReferencia.
Segúnelprocedimientodescritoen4.3,determinarlosvaloresisotó-
picosdeestosalcoholesquesedesignaránanotandoC
med,Vmed,Rmed(véase5.3).
Comparar estos valores con los valores de referencia correspon-
dientesdados,quesedesignaránanotandoCes,Res,Ves(véase5.3).
Figura2a
EspectroRMN2Hdeletanoldelvinoconreferenciainterna
(TMU:N,N-tetrametilurea)1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—70
▼B
Figura2b
Espectro2Hdel etanol realizado en las mismas condiciones que las
delafigura2aperosinmultiplicaciónexponencial(LB=o)
La desviación tipo de repetibilidad obtenida sobre la media de 10
repeticionesdecadaespectrodeberáserinferiora0,01paralarela-
ciónRoinferiora0,3ppmpara(D/H)Iypara(D/H)II.
Los valores medios obtenidos para los diferentes parámetros isotó-
picos [R, (D/H)I, (D/H)II)] deberán situarse dentro de la
correspondientedesviaciónestándarderepetibilidad, ofrecidaporla
Oficina Comunitaria de Referencia para los parámetros de los tres
alcoholes de referencia. En caso contrario, deberán repetirse las
regulaciones.
4.3.CondicionesparaobtenerlosespectrosRMN
Colocar la muestra de alcohol preparada según 3.3 o la muestra de
agua,preparadasegún3.4enuntubode10o15mmeintroducirla
enlasonda.
LascondicionesparaobtenerespectrosRMNsonlassiguientes:
— Latemperaturadelasonda(porejemplo302K)deberásercons-
tante.
— Tiempo de adquisición, 6,8 segundos, como máximo, para
1200 Hz de amplitud espectral (memoria 16 K), es decir, alre-
dedorde20ppma61,4MHzo27ppma46,1MHz.
— Impulso:90º.— Regulareltiempodeadquisición;suvalordeberáserdelmismo
orden de magnitud que el tiempo de toma de muestras (dwell
time).
— Detección en cuadratura: fijar el offset01 entre las señales de
referencia ODy CHDpara el etanol y entre HODy TMUpara
elagua.
— Determinarelvalordel offsetdedesacoplamiento02apartirdel
espectro protónico medido por la bobina de desacoplamiento
sobre el mismo tubo. Se obtiene un buen desacoplamiento
cuando 02 se halla situado en el centro del intervalo de
frecuenciaexistenteentrelosgruposCH
3—yCH2—.Utilizarel
mododedesacoplamientomediantebandaancha.
Efectuar para cada espectro un número NS de acumulaciones que
basteparaobtenerlarelaciónseñal/ruidoquefiguraen4.1yrepetir
NE=10veces esta serie deNSacumulaciones. Losvalores de NS
dependerán del tipo de espectrómetro y de sonda utilizados (véase
punto4);seescogerá,porejemplo:
EspectrómetroSonda
10mm 15mm
7,05T NS=304 NS=2001990R2676—ES—21.04.1999—006.001—71
▼B
EspectrómetroSonda
10mm 15mm
9,04T NS=200 NS=128
5. EXPRESIÓNDELOSRESULTADOS
5.1.Etanol
Para cada uno de los 10 espectros (véase el espectro RMN del
etanol,figura2a),determinar:
—R¼3hII
hI¼3/C1alturadelase ˜nalII CH 3CHDOH ðÞ
alturadelase ˜nalI CH2DCH2OH ðÞ
—D=HðÞI¼1;5866 /C1TI/C1mes
mA/C1D=HðÞes
gD
m
—D=HðÞII¼2;3799 /C1TII/C1mes
mA/C1D=HðÞes
gD
m
donde:
—TI¼alturadelase ˜nalI CH2DCH2OH ðÞ
alturadelase ˜naldelest´andarinterno TMU ðÞ
—TII¼alturadelase ˜nalII CH 3TCHDOH ðÞ
alturadelase ˜naldelest´andarinterno TMU ðÞ
—C H3CHDOHmesymA:véase3.3.2,
—gmD,véase3.1.2.3,
— (D/H)es= proporción isotópica del estándar interno (TMU) indi-
cado sobre el frasco. El TMU puede obtenerse en la Oficina
ComunitariadeReferencia.
Lautilizacióndelasalturasdelasseñalesenlugardelassuperficies
medidas con menos precisión supone larguras de picos a media
alturaiguales,loqueesunaaproximaciónrazonable(figura26).
5.2.Agua
Cuando se determina la proporción isotópica del agua por RMN a
partirdelamezclaagua-TMU,seutilizalarelaciónsiguiente:
—D=HðÞQ
W¼0;9306 /C1TIV/C1m0
es
m0E/C1D=HðÞes
donde
—TIV¼superficiedelase ˜nal HODðÞdelaguaextra´ıdadelvino
superficiedelase ˜naldelest´andarinterno TMU ðÞ
—m′esym′E,véase3.4.2.
— (D/H)es= proporción isotópica del estándar interno (TMU) indi-
cadasobreelfrascosuministradoporlaOficinaComunitaria de
Referencia(BCR).
5.3. Paracadaunodelosparámetrosisotópicos,calcularlamediadelas
10determinacionesyelintervalodeconfianza.
Unprogramaopcional(porejemplo,SNIF-NMR)adaptablealcalcu-
ladordelespectrómetropermiteefectuarestoscálculosenlínea.
Nota:
Si, tras la regulación del espectrómetro, subsiste una desviación
sistemática entre los valores medios obtenidos para las caracterís-
ticas isotópicas de los alcoholes de referencia (4.2.2) y los valores
indicadosporlaOficinaComunitariadeReferencia,delordendela
desviación-típica, podrá aplicarse la corrección siguiente para
obtenerelverdaderovalordeunamuestraXcualquiera.
Lainterpolaciónseefectuarátomandolosvaloresdelasmuestrasde
referenciaqueseajustenaldelamuestraX.
Llamemos(D/H)iX
medalvalormedido,y(D/H)iX
corr.alvalorcorregido
tendremos:(D/H)
iX
corr.=(D/H)iR
es+α[ (D/H)iX
med−(D/H)iR
med]1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—72
▼B
endonde:
α¼D=HðÞVes
i/C0D=HðÞRes
i
D=HðÞVmed
i/C0D=HðÞRmed
i
Ejemplo:
Muestras de referencia suministradas y calibradas por la Oficina
ComunitariadeReferencia:
(D/H)iV
es=102,0ppm(D/H)iR
es=91,95ppm
MuestrasdereferenciamedidasporelLaboratorio:
(D/H)iV
med=102,8ppm(D/H)iR
med=93,0ppm
Muestrasospechosanocorregida:
(D/H)iX
med=100,2ppm
Secalcul=1,0255y(D/H)iX
corr=99,3ppm
6. INTERPRETACIÓNDERESULTADOS
Comparar el valor RXobtenido para la relación R de la muestra
sospechosa con las relaciones obtenidas para los vinos testigo. Si
RXpresenta una desviación superior a 2 desviaciones-típicas del
valor medio RTobtenido para los vinos testigo, puede presumirse
unaadulteración.
6.1.Aumentoartificialdelgradoalcohóliconaturalmedianteazúcar
deremolacha,azúcardecañaoglucosademaíz
6.1.1.Vinos
RXessuperioraRT:presuncióndeadicióndeazúcarderemolacha.
RXinferior a RT: presunción de adición de azúcar de caña o de
azúcardemaíz.
Obsérveseque(D/H)IIXy(D/H)WQXhanaumentado.
Examinar(D/H)IXhabrápresunciónde:
— azucaradomedianteazúcarderemolacha:
sielvalor(D/H)IXdelamuestrasospechosaesinferiora(D/H)IT,
valor medio obtenido de la muestras testigo, en más 1 desvia-
ción-típica.
— azucaradomedianteazúcardecañaoazúcardemaíz;
siel valor(D/H)IXessuperiora(D/H)ITenmásuna desviación-
típica.
— Cálculo del aumento artificial del grado alcohólico natural A,
expresadoen%voldeetanol.
Aumentomedianteazúcarderemolacha:
A%vol ¼gVD=HðÞT
I/C0D=HðÞX
I
D=HðÞT
I/C0D=HðÞR
I
(D/H)IR= 92,5(1)relación isotópica de la posición I del
alcoholderemolacha.
gV= gradoalcohólicodelvinoanalizado(X)
— Aumentomedianteazúcardecañaodemaíz:
A%vol ¼gVD=HðÞX
I/C0D=HðÞT
I
D=HðÞC
I/C0D=HðÞT
I
(D/H)IC= 110,5(1)relación isotópica de la posición I del
alcoholdecañadeazúcarodemaíz.
gV= gradoalcohólicodelvinoanalizado(X).1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—73
(1) Estosvaloressedanalaesperadelaconstitucióndeunbancodedatoscomunitario.
▼B
6.1.2.Mostos, mostos concentrados y mostos concentrados rectificados
Losvaloresdelosparámetros isotópicosdelalcohol extraído según
3.1 del producto fermentado obtenido (3.2) a partir del mosto, del
mostoconcentradoodelmostoconcentradorectificado,seexaminan
deacuerdoconlasindicaciones dadasenelpunto6«interpretación
delosresultados»,6.1.1,comparándolosconelalcoholextraídodel
productodefermentacióndemostosnaturalestestigo.
Elaumentoartificialdelgradoalcohóliconatural,A%vol,expresa
elvolumendealcoholañadidoalproductofermentado.Conocidala
dilución eventual efectuada antes de la fermentación (mostos
concentradosymostosconcentradosrectificados),yadmitiendoque
16,83 g de azúcar dan 1 % vol del alcohol, calcular la cantidad en
masadeazúcarañadidaporlitrodemosto,demostoconcentradoo
demostoconcentradorectificado.
6.2.Aumentoartificialdelgradoalcohóliconaturalmediantemezcla
deazúcarderemolachayazúcardecañaodeglucosademaíz
Lasrelacionesisotópicas(D/H)IyRestánmenosmodificadasqueen
elcasodelaumentocon1solotipodeazúcar.
(D/H)IIy(D/H)WQaumentan.
Pueden confirmarse estas adiciones determinando la relación 13C/
12Cdeletanolporespectrometríademasa;enestecaso,larelación
aumenta.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—74
▼B
9.CENIZAS
1. DEFINICIÓN
Sedenominancenizasalconjuntodelosproductosresultantesdela
incineración delresiduodeevaporación delvino,llevada acabode
manera que se obtenga la totalidad de los cationes (excluido el
amonio)enformadecarbonatoyotrassalesmineralesanhidras.
2. FUNDAMENTODELMÉTODO
Incineracióndelextractodelvinollevadaacaboentre500y550ºC
hastalacombustióntotaldelcarbono.
3. APARATOS
3.1. Bañodeaguaa100ºC.
3.2. Balanzaconunasensibilidaddeunadécimademiligramo.3.3. Placacalefactoraoevaporadordeinfrarrojos.
3.4. Hornoeléctricoconregulacióndetemperatura.
3.5. Desecador.3.6. Cápsuladeplatinode70mmdediámetroyde25mmdealtura,de
fondoplano.
4. PROCEDIMIENTO
Colocar20mldevinoenunacápsuladeplatinopreviamentetarada
(P
og).Evaporaralbañodeaguaa100ºCycalentarelresiduosobre
una placa calefactora a 200 ºC o bajo el evaporador de infrarrojos
hastalacarbonización.Cuandoelresiduonoemitavapores,colocar
la cápsula en el horno eléctrico a 525 ºC ± 25 ºC. Después de 15
minutos de carbonización, retirar la cápsula del horno, añadir 5 ml
de agua destilada que se evaporan luego al baño de agua o bajo el
evaporador de infrarrojos, y calentar de nuevo a 525ºC durante 10
minutos.
Si la combustión de las partículas de carbono no es total, volver a
realizar lasoperacionesdelavado,evaporación delaguaeincinera-
ción.
Para los vinos ricos en azúcares, se recomienda añadir al extracto
algunasgotasdeaceite vegetal puroantes deproceder alaprimera
incineración,paraimpedirquesedesbordeelcontenido.
Después de enfriar la cápsula en un desecador, se pesa. Se deno-
minaráaestepesoP1g.
Elpesopengdelascenizascontenidasserá:p=(P1−Po)g.
5. EXPRESIÓNDELOSRESULTADOS
5.1.Mododecálculo
ElpesoPdelascenizasexpresadoengramosporlitrocondosdeci-
malesserá:P=50·p.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—75
▼B
10.ALCALINIDADDELASCENIZAS
1. DEFINICIÓN
Se denomina alcalinidad de las cenizas a la suma de los cationes,
distintosdelamonio,combinadosconlosácidosorgánicosdelvino.
2. FUNDAMENTODELMÉTODO
Valoración por retroceso en presencia de naranja de metilo, de las
cenizas solubilizadas en caliente por un exceso conocido de ácido
valorado.
3. REACTIVOSYMATERIAL
3.1. Solución0,05Mdeácidosulfúrico(H2SO4)
3.2. Solución0,1Mdehidróxidosódico(NaOH)
3.3. Solucióndenaranjademetiloal0,1%enaguadestilada.3.4. Bañodeaguaa100ºC.
4. PROCEDIMIENTO
Añadiralacápsuladeplatinoquecontienelascenizasde20mlde
vino,10mldesolución0,05Mdeácidosulfúrico(3.1);colocarlaal
baño de agua a 100 ºC durante 15 min aproximadamente, rascando
el residuo con una varilla de vidrio para activar la disolución.
Añadir, a continuación, 2 gotas de solución de naranja de metilo y
valorarelexcesodeácidosulfúricoconlasolución0,1Mdehidró-
xidodesodio(3.2),hastaqueelindicadorvirealcoloramarillo.
5. EXPRESIÓNDELOSRESULTADOS
Mododecálculo
Laalcalinidaddelascenizasexpresadaenmiliequivalentesporlitro
con1decimal,será:
A=5(10−n)
n = númerodemililitrosdehidróxidosódico0,1M.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—76
▼B
11.CLORUROS
1. FUNDAMENTODELMÉTODO
Los cloruros se determinan directamente en el vino por potencio-
metríautilizandoelelectrodoAg/AgCl.
2. MATERIAL
2.1. pHmetroconescalademilivoltiosgraduadaalmenosde2en2mV.2.2. Agitadormagnético.
2.3. Electrodo Ag/AgCl con una solución saturada de nitrato potásico
comoelectrolito.
2.4. Microburetagraduadaencentésimasdemililitro.
2.5. Cronómetro.
3. REACTIVOS
3.1. Solución patrón de cloruros: 2,1027 g de cloruro potásico, KCl
(máx.0,005%deBr),desecadoantesdesuempleoporcoservación
durantealgunosdíasenundesecadorsedisuelvenenaguadestilada
ysecompletaa1litro1mldeestasolucióncontiene1mgdeCl.
3.2. Solución valorada de nitrato de plata: 4,7912 g de nitrato de plata,
AgNo
3, para análisis, se disuelven y se enrasan a 1 litro con una
soluciónalcohólicaal10%(v/v):1mldeestasolucióncorresponde
a1mgdeCl−.
3.3. Ácidonítricopuroalmenosdel65%(densidad( ρ20=1,40g/ml).
4. PROCEDIMIENTO
4.1. 5,0 ml de solución patrón de cloruros se introducen en un vaso de
precipitados de 150 ml colocado sobre un agitador magnético,
diluidos a 100 ml con agua destilada y acidificados con 1,0 ml de
ácidonítricodel65%comomínimo.Sesumerjeelelectrodo enel
vaso de precipitados y se determina añadiendo por medio de la
microbureta la solución valorada de nitrato de plata, la agitación
debesermoderada.
Lasadicionesefectuadassoninicialmentede1,00mlparaloscuatro
primeros ml, leer los valores correspondientes en milivoltios.
Despuésse adicionan los2 ml siguientes en fracciones de 0,20 ml.
Finalmente se siguen las adiciones por fracciones de 1 ml hasta
llegarauntotalde10ml.Despuésdecadaadiciónseesperanalre-
dedorde30segundosantesdeefectuarlacorrespondientelecturaen
milivoltios.Llevarlosvaloresobtenidossobrepapelmilimetradoen
función de los mililitros de la solución patrón correspondiente y se
determinaelpotencialdelpuntodeinflexióndelacurvaobtenida.
4.2. 5mldela soluciónpatrón declorurosseintroducen enunvasode
precipitadosde150ml.Seañaden95mldeaguadestiladay1mlde
ácido nítrico del 65%comomínimo. Sesumerge elelectrodo yse
valora,agitando,hastalaobtencióndelpotencialdelpuntodeequi-
valencia.
Esta determinación se repite hasta que se haya obtenido una buena
concordancia de resultados. Se debe efectuar este control antes de
cadaseriededeterminacionesdeclorurosenlasmuestras.
4.3. Seintroducen 50ml del vinoa analizar en unvasodeprecipitados
de 150 ml. Se añaden 50 ml de agua destilada y 1 ml de ácido
nítrico del 65 % como mínimo y se valora siguiendo el procedi-
mientodelpunto4.2.
5. EXPRESIÓNDERESULTADOS5.1.Cálculos
Sinrepresentaelnúmerodemililitrosdesoluciónpatróndenitrato
deplata,elcontenidoenclorurosdelamuestraanalizadaes:
20×n expresadoenmiligramosdeClporlitro
0,5633×n expresadoenmiliequivalentesporlitro1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—77
▼B
32,9×n expresadoenmiligramosdeclorurosódicoporlitro.
5.2.REPETIBILIDAD(r)
r = 1,2mgClporlitro,
r = 0,03meqporlitro,r = 2,0mgNaClporlitro.
5.3.Reproductibilidad(R)
R = 4,1mgdeClporlitro,
R = 0,12meqporlitro,R = 6,8mgNaClporlitro.
6.Observación:
paradeterminacionesmuyprecisasHayquereferirsealacurvadecalibradocompletaobtenidadurante
lavaloracióndelpatróndeclorurosconlasoluciónpatróndenitrato
deplata.
a) Poner 50 ml del vino a analizar en un vaso de precipitados de
150ml. Añadir 50ml de agua destilada y 1 ml de ácido nítrico
al menos del 65 %. Valorar por medio de la solución de nitrato
de plata, procediendo a adiciones de 0,5 ml y anotando los
correspondientespotencialesenmilivoltios.Deestaprimeravalo-
ración se deduce el volumen aproximado de solución de nitrato
deplatanecesario.
b) Comenzar la valoración en las mismas condiciones. Proceder
primeroconadicionesde0,5mlvalorandohastaqueelvolumen
empleadoseainferioren1,5a2mldelvolumenempleadoena).
Proceder a adiciones de 0,2 ml, continuar las adiciones lenta-
mente hasta elpuntodeequivalencia aproximadamente obtenido
deunamanerasimétrica,poradiciónde0,2mldespuésde0,5ml.
El punto final de la valoración y el volumen de nitrato de plata
consumidoexactamenteseobtiene:
— Trazandolacurvaydeterminandoelpuntodeequivalencia.
— Porcálculo:
V¼V
0þ∆Vi∆∆E1
∆∆E1þ∆∆E2
V = volumendesoluciónvaloradaenelpuntodeequiva-
lencia.
V′= volumen de solución valorada antes del mayor salto
depotencial.
∆Vi= volumenconstantedelasfraccionesdesoluciónvalo-
radaañadidas,osea0,2ml.
∆∆E1= segunda diferencia de potencial antes de la mayor
variacióndepotencial.
∆∆E2= segundadiferencia depotencial despuésdelamayor
variacióndepotencial.
Ejemplo:
Volumensoluciónpatrónde
AgNO3PotencialE DiferenciaSegunda
Diferencia
0 204
4
0,2 208 0
4
0,4 212 2
6
0,6 218 0
6
0,8 224 0
61990R2676—ES—21.04.1999—006.001—78
▼B
Volumensoluciónpatrónde
AgNO3PotencialE DiferenciaSegunda
Diferencia
1,0 230 2
8
1,2 238 4
12
1,4 250 10
22
1,6 272 22
44
1,8 316 10
34
2,0 350 8
26
2,2 376 6
20
2,4 396
En el ejemplo el punto final de la valoración se sitúa entre 1,6 y
1,8 ml; en este intervalo aparece el mayor salto de potencial ( ∆
= 44 mV). El volumen de solución valorada en nitrato de plata
consumidoparadeterminarlosclorurosenlamuestraaanalizares:
V¼1;6þ0;222
22þ10¼1;74ml1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—79
▼B
12.SULFATOS
1. PRINCIPIODELOSMÉTODOS1.1.Métododereferencia
Precipitacióndelsulfatodebarioypesada.Elfosfatodebariopreci-
pitado en las mismas condiciones es eliminado por lavado del
precipitadoconácidoclorhídrico.
Encasodemostosovinosricosendióxidodeazufre,estáindicado
undesulfitadoprevioporebulliciónalabrigodelaire.
1.2.Métodorápidodeensayo
Clasificación de los vinos en varias categorías por el método
llamado de los límites, basado en la precipitación del sulfato de
bariomedianteunasoluciónvaloradadeionbario.
2. MÉTODODEREFERENCIA
2.1.Soluciones(Reactivos)
2.1.1. Ácidoclorhídrico,solución2M.2.1.2. Clorurobáricoensolución200g/ldeBaCl
2,2H2O.
2.2.Procedimiento
2.2.1.Caso general
Introducirenuntubodecentrifugade50ml,40mldelamuestraa
analizar,añadir2mldeácidoclorhídrico2My2mldesoluciónde
clorurodebariode200g/l.Agitarconunavarilladevidrio,lavarla
varilla con un poco de agua destilada y dejar en reposo durante 5
minutosCentrifugardurante5minutosydecantarconprecauciónel
líquidosobrenadante.
Lavar el precipitado de sulfato bárico de la forma siguiente: añadir
10mldeácidoclorhídrico2Mponerelprecipitadoensuspensióny
centrifugar durante 5 minutos. Separar con precaución el líquido
sobrenadante. Repetir 2 veces el lavado del precipitado en las
mismascondicionescon15mldeaguadestiladacadavez.
Trasvasar cuantitativamente el precipitado, lavando con agua desti-
lada, a una cápsula de platino tarada y colocada en un baño maría
a 100 ºC hasta evaporación a sequedad. El precipitado desecado se
calcina varias veces brevemente sobreuna llama hasta la obtención
deunresiduoblanco.Dejarenfriarenundesecadorypesar.
Seamlamasaenmiligramosdesulfatodebarioobtenida.
2.2.2.Caso particular: mostossulfitadosyvinoconuncontenidoelevado
deanhídridosulfuroso.
Procederalaeliminacióndelanhídridosulfuroso.
Enunmatraz cónicode500mlprovistodeunembudodedecanta-
ciónydeuntubodesalidadevapor,introducir25mldeaguay1ml
deácidoclorhídricopuro(densidad20º=1,15−1,18g/ml).Hacer
hervir paraexpulsarelaire, eintroducir porelembudodedecanta-
ción100mldevinomanteniendolaebullición.
Continuar la ebullición hasta que el volumen del líquido contenido
en el matraz se reduzca a unos 75 ml y se trasvasa cuantitativa-
mente, después de enfriar a un matraz aforado de 100 ml.
Completar el volumen con agua. Proceder a la valoración de los
sulfatos sobre una muestra de ensayo de 40 ml como se indica en
2.2.1.
2.3.Expresióndelosresultados
Elcontenidoensulfatosexpresadoenmiligramosporlitrodesulfato
depotasioSO4K2es:
18,67×mElcontenidoensulfatosdemostosovinoseexpresaenmiligramos
porlitrodesulfatodepotasio,sindecimales.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—80
▼B
2.3.2.Repetitividad
Hasta1000mg/l:r=27mg/l
Alrededorde1500mg/l:r=41mg/l
2.3.3.Reproductividad
Hasta1000mg/l:R=51mg/l
Alrededor1500mg/l:R=81mg/l
3. MÉTODORÁPIDODEENSAYO3.1.Reactivos
3.1.1. Soluciónpatróndeclorurobárico
2804gdeclorurobárico,BaCl
2,2H2Oy10mldeácidoclorhídrico
(densidad20º=1,15=1,18g/ml)sedisuelvenenunacantidadde
aguasuficienteparaobtener1litrodedisolución,1mldeestasolu-
ción precipita una cantidad de iones sulfato equivalente a 2 mg de
sulfatopotásico.
3.1.2. Ácidosulfúrico(densidad20º=1,84g/ml)ensolucióndiluida1/10
(m/v).
3.2.Procedimiento
En tres tubos de ensayo, colocar 10 ml de mosto o vino, añadir al
primero 3,5 ml, al segundo 5 ml y al tercero 10 ml de la solución
de cloruro de bario. Agitar y llevar a ebullición, dejar reposar de 1
a2horas.Ellíquidodecadatubo,decantado,sefiltraysedivideen
dos mitades. En la primera mitad se añaden unas gotas de ácido
sulfúrico, en la segunda mitad se añaden unas gotas de la solución
de cloruro de bario. Examinar la limpidez o la turbidez de cada
tubo.Laconclusiónsedaenlasiguientetabla.
Vino CloruroBáricoVinofiltrado+
ÁcidoSulfúrico
diluidoSoluciónde
ClorurodeBario
1erensayo(ml) (ml) Turbidez Limpidez
10 3,5menos0,7g/lK2SO4Limpidez Turbidez
másde0,7g/lK2SO4
2oensayo 10 5Turbidez Limpidez
menosde1g/lK2SO4Limpidez Turbidez
másde1g/lK2SO4
3erensayo 10 10Turbidez Limpidez
menosde2g/lK2SO4Limpidez Turbidez
másde2g/lK2SO41990R2676—ES—21.04.1999—006.001—81
▼B
13.ACIDEZTOTAL
1. DEFINICIÓN
Laacideztotaleslasumadelosácidosvalorablescuandosellevael
pHa7añadiendounasoluciónalcalinavalorada.
Eldióxidodecarbononoseincluyeenlaacideztotal.
2. FUNDAMENTODELMÉTODO
Valoración potenciométrica o valoración en presencia de azul de
bromotimol como indicador del final de reacción, mediante compa-
raciónconunpatróndecoloración.
3. REACTIVOS
3.1. SolucióntampóndepH7,0:
Fosfatomonopotásico(KH2PO4):107,3g
SoluciónMdehidróxidosódico(NaOH):500mlAguacsp:1000ml.
Tambiénpuedenutilizarselassolucionescomercialescomosolución
tampóndereferencia.
3.2. Solución0,1Mdehidróxidosódico(NaOH).3.3. Solucióndeazuldebromotimolde4g/l.
Azuldebromotimol(C
27H28Br2O5S)…............. 4g
Alcoholneutro96%vol…........................ 200ml
Unavezsolubilizado,añadir:
AguasinCO2… ................................... 200ml
SoluciónMdehidróxidosódicocspcoloraciónverdeazulada(pH7)…............. 7,5ml
Aguacsp…....................................... 1000ml
4. APARATOS
4.1. Trompadevacío.4.2. Matrazkitasatode500ml.4.3. PotenciómetroconescalagraduadaenunidadesdepHyelectrodos.
El electrodo de vidrio debe conservarse en agua destilada. El elec-
trododecalomelanos decloruropotásicosaturadodebeconservarse
en una solución saturada de cloruro potásico. Generalmente se
empleaunelectrodocombinado,queseconservaenaguadestilada.
4.4. Vasosdeprecipitadosde50mldecapacidad(encasodevinos)yde
100mldecapacidad(encasodemostosconcentradosrectificados).
5. PROCEDIMIENTO5.1.Preparacióndelamuestra
5.1.1.Vino
Eliminacióndeldióxidodecarbono.Colocaraproximadamente50ml
de vino, en un matraz kitasato; agitar y, al mismo tiempo, hacer el
vacío con una trompa de agua. La agitación debe durar de 1 a 2
minutos.
5.1.2.Mosto concentrado rectificado
Verter200gdemostoconcentrado rectificado, exactamente pesado
enunmatrazaforadode500ml.Enrasarconagua.Homogeneizar.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—82
▼B
5.2.Valoraciónpotenciométrica
5.2.1.Calibrado del pH-metro
La calibración del pH-metro seefectúa a 20 ºC,siguiendo las indi-
caciones delaparato queseutilice, mediante lasolucióntampón de
pH7,00a20ºC.
5.2.2.Técnica de una medida
Enunvasodeprecipitados(4.4)verter10ml,sisetratadevino,o
50 ml, en el caso del mosto concentrado rectificado de muestra
preparada,comoseindicaen(5.1).Añadir10mldeaguadestilada,
aproximadamente, y verter con una bureta la solución 0,1 M de
hidróxido sódico (3.2) hasta que el pH sea igual a 7 a 20 ºC. La
adición de la solución alcalina debe realizarse lentamente, agitando
constantementelasolución.Sedenominaránalnúmerodemililitros
deNaOH0,1Mvertidos.
5.3.Valoraciónconindicador (azuldebromotimol)
5.3.1.Ensayo previo: obtención del patrón de coloración
En un vaso de precipitados (4.4), echar 25 ml de agua destilada y
hervida, 1 ml de solución de azul de bromotimol (3.3) y 10 ml si
setratadevinoo50mlenelcasodelmostoconcentradorectificado
de muestra preparada como se indica en (5.1). Añadir la solución
0,1 M de hidróxido de sodio (3.2) hasta obtener una coloración
verdeazulada.Añadir5mldelasolucióntampónpH7(3.1).
5.3.2.Determinación
En un vaso de precipitados (4.4), echar 30 ml de agua destilada y
hervida, 1 ml de solución de azul de bromotimol (3.3) y 10 ml si
setratadevinoo50mlenelcasodelmostoconcentradorectificado
de muestra preparada como se indica en (5.1). Añadir la solución
0,1 Mde hidróxido sódico (3.2) hasta obtener una coloración idén-
tica a la obtenida en el ensayo previo (5.3.1). Se denominará n al
número de mililitros de solución de hidróxido sódico 0,1 M utili-
zados.
6. EXPRESIÓNDELOSRESULTADOS6.1.Métododecálculo
6.1.1.Vino
Laacideztotal,expresadaenmiliequivalentesporlitro,será:A=10nSedarácon1decimal.
La acidez total, expresada en gramos de ácido tartárico por litro,
será:
A′=0,075·A
Sedarácon1decimal.
6.1.2.Mostos concentrados rectificados
— Acidez total expresada en miliequivalentes por kilogramo de
mostoconcentradorectificado:a=5·n
— Acidez total expresada en miliequivalentes por kilogramo de
azúcarestotales:
A¼
500/C1n
P
P = contenidoen%(m/m)deazúcarestotales.
Sedarácon1decimal.
6.2.Repetibilidad(r):paralavaloraciónconindicador(5.3):
r = 0,9meqporlitro
r = 0,07gdeácidotartáricoporlitro
paralosvinosblancos,rosadosytintos.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—83
▼B
6.3.Reproductibilidad(R):paralavaloraciónconindicador(5.3)
Paralosvinosblancosyrosados:
R = 3,6meqporlitro
R = 0,3gdeácidotartáricoporlitro.
Paralosvinostintos:R = 5,1meqporlitro
R = 0,4gdeácidotartáricoporlitro.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—84
▼B
14.ACIDEZVOLÁTIL
1. DEFINICIÓN
Laacidezvolátilestáconstituidaporlosácidosgrasospertenecientes
a la serie acética que se encuentran en los vinos, bien en estado
libre,bienenestadosalificado.
2. FUNDAMENTODELMÉTODO
Valoracióndelosácidosvolátilesseparadosdelvinoporarrastrede
vapordeaguayrectificacióndelosvapores.
Previamente,debeeliminarseeldióxidodecarbonodelvino.La acidez del dióxido de azufre libre y combinado destilado en
dichascondicionesdeberestarsedelaacidezdeldestilado.
Debe restarse, asimismo, la acidez del ácido sórbico eventualmente
añadidoalvino.
Nota:El ácido salicilico que en algunos países se utiliza para estabilizar
los vinos antes del análisis, se encuentra en parte en el destilado.
Es necesario valorarlo y restarlo de la acidez. El método de esta
determinaciónestáenelapartado7deestecapítulo.
3. REACTIVOS
3.1. Ácidotartáricocristalizado(C
4H6O6)
3.2. Solución0,1Mdehidróxidosódico(NaOH)
3.3. Solucióndefenolftaleínaal1%enalcoholneutrode96%vol3.4. Ácidoclorhídrico( ρ
20=1,18a1,19g/ml)diluido1/4(v/v)
3.5. Solución0,005Mdeyodo(I2)
3.6. Yoduropotásicocristalizado(Kl)3.7. Engrudodealmidónde5g/l:
Diluir5gdealmidónen500mldeagua,aproximadamente.Llevar
aebulliciónagitandoymantenerladurante10minutos;añadir200gdeclorurosódico.Unavezfríoenrasarhasta1litro.
3.8. Solución saturada de borato sódico (Na
2B4O7·1 0H2O) es decir,
aproximadamente55g/la20ºC.
4. APARATOS
4.1. Aparatodearrastredevapordeagua,compuestode:
1) Ungeneradordevapordeagua;elvapordeaguaproducidodebe
estarexentodedióxidodecarbono.
2) Unborboteador.3) Unacolumnarectificadora.4) Unrefrigerante.
Esteaparatodeberesponderalostresensayossiguientes:
a) Poner en el borboteador 20 ml de agua hervida; recoger
250ml dedestilado yañadirles 0,1ml desolución0,1Mde
hidróxido sódico (3.2) y 2 gotas de la solución de fenolfta-
leína (3.3); la coloración rosa debe permanecer estable
durante 10segundos,porlomenos(vapordeagua exentode
dióxidodecarbono).
b) Poner en el borboteador 20 ml de solución 0,1 M de ácido
acético.Recoger250mldedestilado.Valorarconlasolución
0,1Mdehidróxidosódico(3.2).Elvolumenempleadodeberá
ser igual a 19,9 ml, como mínimo. (Ácido acético arrastrado
≥99,5%.)
c) Ponerenelborboteador20mldesoluciónMdeácidoláctico.
Recoger250mldedestiladoyvalorarsuacidezconunasolu-
ción0,1Mdehidróxidosódico(3.2).
El volumen empleado debe ser inferior o igual a 1,0 ml.
(Ácidolácticodestilado ≤0,5%.)1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—85
▼B
Todoaparatootécnicaquesatisfagaestostresensayosconsti-
tuyeunaparatoounatécnicaoficialinternacional.
4.2. Trompadevacío.4.3. Matrazkitasato.
5. PROCEDIMIENTO
5.1.Preparacióndelamuestra: eliminacióndeldióxidodecarbono.
Poneralrededorde50mldevinoenunmatrazkitasato;agitary,al
mismo tiempo, hacer el vacío por medio de la trompa de agua. La
agitacióndebedurarde1a2minutos
5.2.Arrastreporvapordeagua
Echar en el borboteador 20 ml de vino desprovisto de carbónico
como seindica en(5.1).Añadir0,5gdeácido tartárico (3.1)apro-
ximadamente.Recoger,porlomenos,250mldedestilado.
5.3.Valoración
Valorarconlasolución0,1Mdehidróxidosódico(3.2)enpresencia
de2gotasdesolucióndefenolftaleína(3.3).Sedenominaránmlal
volumenutilizado.
Añadir 4 gotas de ácido clorhídrico diluido 1/4 (3.4), 2 ml de
engrudo de almidón (3.7) y algunos cristales de yoduro de potasio
(3.6).Valorareldióxidodeazufrelibreconlasolución0,005Mde
yodo(3.5).Sedenominarán ′mlalvolumenutilizado.
Añadir la solución saturada de borato sódico (3.8) hasta que reapa-
rezcalacoloraciónrosa.Valorareldióxidodeazufrecombinadocon
lasolución0,005Mdeyodo(3.5).Sedenominarán ″mlalvolumen
utilizado.
6. EXPRESIÓNDELOSRESULTADOS
6.1.Métododecálculo
La acidez volátil, expresada en miliequivalentes por litro, con 1
decimal,será:
A=5(n−0,1n ′−0,05n ″)
Laacidezvolátil,expresadoengranosdeácidoacéticoporlitro,con
2decimales,será:
0,300(n−0,1n ′−0,05n ″)
6.2.Repetibilidad(r)
r = 0,7meqporlitro
r = 0,04gdeácidoacéticoporlitro.
6.3.Reproductibilidad(R)
R = 1,3meqporlitro
R = 0,08gdeácidoacéticoporlitro.
6.4.Casodeunvinoconadicióndeácidosórbico
Dadoqueelácidosórbicosearrastraporvapordeaguaenun96%
paraunvolumendedestiladode250ml,suacidezdeberestarsede
la acidez volátil, sabiendo que 100 mg de ácido sórbico corres-
ponden a una acidez de 0,89 miliequivalentes o de 0,053 g de
ácido acético y conociendo el contenido en ácido sórbico (mg/l)
determinadopreviamente.
7. DETERMINACIÓN DEL ÁCIDO SALICÍLICO QUE SE HALLA
ENELDESTILADOUTILIZADOPARAVALORARLAACIDEZ
VOLÁTIL
7.1.Fundamento
Unavezefectuadaladeterminacióndelaacidezvolátilylacorrec-
ción del dióxido de azufre, la presencia de ácido salicílico se1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—86
▼B
caracteriza por la aparición, previa acidificación, de una coloración
violetatrashaberañadidounasaldehierroIII.
Ladeterminación delácidosalicílico quesehallaeneldestiladose
efectuará con un segundo destilado cuyo volumen sea igual al del
utilizado para determinar la acidez volátil. En este destilado, el
ácido salicílico se determinará mediante un método colorimétrico
decomparaciónyserestarádelaacidezvolátil.
7.2.Reactivos
7.2.1. Ácidoclorhídrico(HCl)( ρ20=1,18a1,19g/ml).
7.2.2. Tiosulfatosódico(Na2S2O3·5H2O)0,1M.
7.2.3. SolucióndesulfatodehierroIIIydeamonio(Fe2(SO4)3·(NH4)2SO4·24H2O)al10%(m/v).
7.2.4. Solución de salicilato de sodio (Na C7H5O3) 0,01 M que contenga
1,60g/l.
7.3.Procedimiento
7.3.1.Caracterización del ácido salicílico en el destilado de la acidez
volátil
Inmediatamente después de haber efectuado la determinación de la
acidez volátil y la corrección del dióxido de azufre libre y combi-
nado, verter en el matraz erlenmeyer 0,5 ml de ácido clorhídrico
(7.2.1), 3 ml de solución 0,1 M de tiosulfato sódico (7.2.2) y 1 ml
desolucióndesulfatodehierroIIIydeamonio(7.2.3).
Enpresenciadeácidosalicílico,apareceunacoloraciónvioleta.
7.3.2.Determinación del ácido salicílico
En el matraz erlenmeyer anterior, indicar mediante una señal de
referenciaelvolumendeldestilado.Vaciaryenjuagarelmatraz.
Someterunanuevatomadeensayode20mldevinoalarrastrepor
vaporde agua yrecoger el destilado en el matraz erlenmeyer hasta
la señal de referencia. Añadir 0,3 ml de ácido clorhídrico puro
(7.2.1) y 1 ml de solución de sulfato de hierro III y de amonio
(7.2.3).Elcontenidodelmatrazerlenmeyeradquiereunacoloración
violeta.
Enunmatrazerlenmeyeridénticoaldelaseñaldereferencia,verter
agua destilada hasta el mismo nivel que el del destilado. Añadir
0,3mldeácidoclorhídricopuro(7.2.1),1mldesolucióndesulfato
dehierroIIIydeamonio(7.2.3).Verterconunaburetalasolución
desalicilatosódico0,01M(7.2.4)hastaqueseobtengaunacolora-
ción violeta de la misma intensidad que la del matraz erlenmeyer
quecontieneeldestiladodevino.
Sedenominarán ″alnúmerodemililitrosutilizados.
7.4.Correccióndelaacidezvolátil
Restarelvolumen0,1·n /tripleprimeenml,delvolumenn,enmldesolución
dehidróxidosódico0,1Mutilizadoparavalorarlaacidezdeldesti-
ladoenunadeterminacióndistintadeladelaacidezvolátil.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—87
▼B
15.ACIDEZFIJA
1. FUNDAMENTO
Laacidezfijasedeterminaporladiferenciaentrelaacideztotalyla
acidezvolátil.
2. EXPRESIÓNDELOSRESULTADOS
Laacidezfijaseexpresaen:
— miliequivalentesporlitro,
— gramosdeácidotartáricoporlitro.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—88
▼B
16.ÁCIDOTARTÁRICO
1. FUNDAMENTODELOSMÉTODOS1.1.Métododereferencia
El ácido tartárico precipitado en forma de racemato de calcio, se
determinagravimétricamente.Estadeterminaciónpuedecompletarse
conunadeterminaciónvolumétricadecomparación.Lascondiciones
de precipitación: pH,volumen total empleado, concentración de los
iones que precipitan, son tales que el racemato cálcico precipita
totalmentemientrasqueelD(−)tartratodecalcioquedaensolución.
Cuandosehayaañadidoalvinoácidometatartárico(loquehaceque
la precipitación del racemato de calcio sea incompleta), deberá
hidrolizarsepreviamente.
1.2.Métodousual
El ácido tartárico, aislado mediante una columna cambiadora de
aniones, se determina por espectrofotometría en el eluido por la
coloración roja que da con el ácido vanádico. Este eluido contiene
asimismoácidoslácticoymálico,quenointerfieren.
2. MÉTODODEREFERENCIA2.1.Métodogravimétrico
2.1.1.Reactivos
2.1.1.1. Solucióndeacetatocálcicoquecontenga10g/ldecalcio:
Carbonatodecalciopuro:(CaCO
3)…................ 25g
Ácidoacético(CH3COOH)( ρ20=1,05g/ml)…....... 40 ml
Aguacsp….......................................... 1 l
2.1.1.2. Racematodecalciocristalizado:(CaC4O6H4·4H2O):
Enunvasodeprecipitadosde400mlintroducir20mldeunasolu-
cióndeácidoL(+)tartáricode5g/l,20mldeunasolucióndeD(−)
tartrato amónico de 6,126 g/l y 6 ml de la solución de acetato
cálcicode10gdecalcioporlitro(2.1.1.1).
Dejarqueprecipite durantedoshoras.Recogerelprecipitadoenun
crisol filtrante de porosidad no4, lavarlo tres veces con 30 ml de
agua destilada. Secar en estufa a 70 ºC hasta lograr un peso cons-
tante. Con las cantidades de reactivos empleados, se obtienen
aproximadamente 340mg deracemato decalcio cristalizado, con 4
moléculasdeagua.
Conservarenunfrascotapado.
2.1.1.3. Licordeprecipitación(pH:4,75):
— ÁcidoD(−)tartárico… ......................... 122mg
— Solucióndehidróxidodeamonio25%
(ρ20=0,97g/ml)diluidoal25%(v/v)…...... 0,3ml
— Solución deacetato de calcio de 10g de calcio
porlitro........................................ 8,8ml
— Aguacsp… .................................... 1000ml
Disolver el ácido D(−) tartárico y añadir el hidróxido amónico,
llevar el volumen aproximadamente a 900 ml con agua; añadir
8,8 ml de solución de acetato cálcico (2.1.1.1), llevar hasta el litro
yajustarelpHa4,75conácidoacético.Alserelracemato cálcico
ligeramente soluble en este licor, es conveniente añadir 5 mg de
racemato de calcio por litro, agitar durante 12 horas (una noche) y
filtrar.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—89
▼B
2.1.2.Procedimiento
2.1.2.1. Vinos a los que no se ha añadido ácido metatartárico
En un vaso de precipitados de 600 ml, echar 500 ml de licor de
precipitación y 10 ml de vino. Mezclar y ayudar la precipitación
frotando las paredes del vaso con la extremidad de una varilla de
vidrio.Dejarprecipitardurante12horas(unanoche).
Filtrarenelcrisolfiltrantedeporosidadno4taradoycolocadosobre
un kitasato, arrastrando el precipitado. Lavar el vaso donde se ha
realizadolaprecipitaciónconelfiltradoyarrastrarlasúltimaspartí-
culasdeprecipitado.
Secar en estufa a 70 ºC hasta lograr un peso constante. Pesar: se
denominarápalpesodelracematodecalcio,CaC4O6H4cristalizado
con4moléculasdeagua.
2.1.2.2. Vinos a los que se ha añadido ácido metatartárico
Cuando se trate de un vino al que se haya añadido ácido metatar-
tárico o se suponga que ha habido tal adición, se procederá a la
hidrólisisdeesteácidoenlascondicionessiguientes:
Enunerlenmeyerde50ml,echar10mldevinoy0,4mldeácido
acéticopuro(CH3COOH, ρ20=1,05g/ml).Cerrarelerlenmeyercon
un tapón provisto de un escape y llevar a ebullición durante 30
minutos.Unavezfrío,pasarellíquidodelerlenmeyeraunvasode
precipitados; enjuagar el erlenmeyer 2 veces con 5 ml de agua y
continuarcomoseindicaenelprocedimientoanterior.
El ácido metatartárico se expresa como ácido tartárico en el resul-
tadodeladeterminación.
2.1.3.Expresión de los resultados
Una molécula de racemato cálcico corresponde a 1/2 molécula de
ácido(L+)tartáricodelvino.
Lacantidaddeácidotartáricoporlitrodevinoserá:384,5p,expresadaenmiliequivalentes,28,84p,expresadaengramosdeácidotartárico,
36,15p,expresadaengramosdetartratoácidodepotasio.
Sedaráconundecimal.
2.2.Determinaciónvolumétricadecomparación
2.2.1.Reactivos
2.2.1.1. Ácidoclorhídrico(CIH)( ρ
20=1,18a1,19g/ml)diluidoa1/5(v/v).
2.2.1.2. SolucióndeEDTA,0,05M:
— EDTA (sal disódica bihidratada del ácido etilen-
diaminotetracético (C10H14N2O8Na2·2H2O)….... 18,61 g
— Aguadestiladacsp:…........................... 1000 ml
2.2.1.3. Solucióndehidróxidosódicoal40%(m/v):
Hidróxidosódico(NaOH)….......................... 40 g
Aguadestiladacsp…................................. 100 ml
2.2.1.4. IndicadorcomplexométricodelEDTA.1%(m/m):
Ácido calcon carbónico o ácido 2-hidroxi-4-sulfo-1-nafti-
lazo-3-naftoico(C21H14N2O7S·3H2O)…................... 1g
Sulfatosódicoanhidro(Na2SO4)…........................ 100g
2.2.2.Procedimiento
Despuésdepesadosevuelveacolocarelcrisolconelprecipitadode
racematodecalcioenelmatrazdevacíoysedisuelveelprecipitado
en 10 ml de ácido clorhídrico diluido (2.2.1.1). Lavar el crisol
filtrantecon50mldeaguadestilada.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—90
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Añadir5mldehidróxidosódicoal40%(2.2.1.3)yunos30mgdel
indicador (2.2.1.4). Valorar con EDTA 0,05 M (2.2.1.2). Se deno-
minaránalnúmerodemililitrosempleados.
2.2.3.Expresión de resultados
Lacantidad deácidotartárico porlitrodevinoexpresadoenmilie-
quivalentesesiguala:5n.
Elresultadosedarácon1decimal.
Lacantidaddeácidotartáricoporlitrodevino,expresadoengramos
deácidotártricoesiguala:0,375n.
Elresultadosedarácon1decimal.
Lacantidaddeácidotartáricoporlitrodevino,expresadoengramos
detartratoácidodepotasioesiguala:0,470n.
Elresultadosedarácon1decimal.
3. MÉTODOUSUAL3.1.Reactivos
3.1.1.Para el tratamiento preliminar del vino
3.1.1.1. Ácidoacético(CH
3COOH, ρ20=1,05g/ml)diluidoal30%(v/v).
3.1.1.2. Intercambiador de aniones de fuerte basicidad (por ejemplo, inter-
cambiadordeanionesIIIdeMerckde20a50mallas)enformade
acetato.Prepararunasuspensiónconelintercambiador(100gapro-
ximadamente) en 200 ml de ácido acético diluido al 30 %
(3.1.1.1).Mantener en contacto durante 24 horas, como mínimo,
antesdesuutilización.Conservarelintercambiadorenácidoacético
diluidoal30%paraposterioresdeterminaciones.
3.1.1.3. Ácidoacético(CH3COOH, ρ20=1,05g/ml)diluidoal0,5%(v/v).
3.1.1.4. Solucióndesulfatosódico(Na2SO4)al7,1g/100ml(0,5M).
Disolver 71g de sulfato sódicoanhidro (Na2SO4)en agua destilada
hastaalcanzarunvolumende1000ml.
3.1.2.Para la determinación del ácido tartárico
3.1.2.1. Solucióndeacetatodesodio(NaCH3COO)al27%(m/v).
Disolver 270 g de acetato de sodio anhidro (NaCH3COO) en agua
destiladahastaalcanzarunvolumende1000ml.
3.1.2.2. Reactivovanádico
Disolver 10 g de metavanadato amónico (NH4VO3) en 150 ml de
solucióndehidróxidosódicoM(3.1.2.10).Pasarestasoluciónaun
matrazaforadode500mlyañadir200mldesolucióndeacetatode
sodioal27%(3.1.2.1).Enrasara500mlconaguadestilada.
3.1.2.3. SolucióndeH2SO41M.
3.1.2.4. Solución0,5MdeH2SO4.
3.1.2.5. Solución0,05MdeH2SO4.
3.1.2.6. Solucióndeácidoperyódico0,05M.
Enunmatrazaforadode1000ml,introducir10,696gdeperyodato
sódico (NaIO4), 50 ml de ácido sulfúrico 0,5 M (3.1.2.4) y añadir
aguadestiladahastaobtener1000ml.
3.1.2.7. Solucióndeglicerolal10%(m/v).
Enunmatraz aforadode100mlponer10gdeglicerol (C3H8O3)y
añadiraguadestiladahastaobtener100ml.
3.1.2.8. Solucióndesulfatosódicoal7,1gp.100ml(véase3.1.1.4).
3.1.2.9. Solucióndeácidotartárico(C4H6O5)de1g/l.
En un matraz aforado de 500 ml, poner 0,5 g de ácido tartárico,
6,66 ml de solución de hidróxido sódico M (3.1.2.10) y enrasar a
500mlconlasolucióndesulfatodesodioal7,1%(3.1.1.4).
3.1.2.10. Solucióndehidróxidosódico(NaOH)1M.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—91
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3.2.Aparatos
3.2.1. Columnadevidrio de300mmdelongitud,aproximadamente, yde
10a11mmdediámetrointerior,provistadeunallave.
3.2.2. Espectrofotómetro que permita medir la absorbancia a una longitud
deondade490nm,concubetasde10mmderecorridoóptico.
3.3.Procedimiento
3.3.1.Preparación de la columna intercambiadora de iones
Ponerenlacolumnadevidriountapóndelanadevidrioporencima
delallave(3.2.1).Impregnareltapónconaguadestilada.Verteren
la columna 10 ml de suspensión de intercambiadorde iones en fase
de acetato (3.1.1.2). Dejar decantar. Colocar un tapón de lana de
vidrio en la superficie del intercambiador depositado (para evitar
que, en posteriores lavados, el intercambiador vuelva a formar una
suspensión).
Elintercambiadorsólodeberáutilizarseunavez.
3.3.2.Aislamiento de los ácidos orgánicos
Con la llave abierta, dejar que salga la solución de ácido acético
hasta que rebase aproximadamente 2 a 3 mm del tapón de lana de
vidrio,colocadoporencimadelintercambiador.
Añadir10mldesolucióndeácidoacéticoal0,5%(3.1.1.3)ydejar
quesalgaellíquidohastaquelleguealmismoniveldelavezante-
rior.Repetir4vecesmáslaoperacióndelavado.
Traselúltimolavado,conlallavecerrada,vertersobreelintercam-
biador10mldevinoodemosto.Dejarsalirelvinogotaagota(a
razón de 1 gota por segundo) e interrumpir la salida cuando el
líquidosehallejustoporencimadelintercambiador.Volveraañadir
enlacolumna10mldesolucióndeácidoacéticoal0,5%(3.1.1.3),
dejar salir a la misma velocidad que la vez anterior y repetir el
lavado otras 7 veces con 10 ml de agua cada vez. En el último
lavado, cerrar la llave en cuanto el nivel del líquido se halle un
pocoporencimadeltapónsuperiordelanadevidrio.
Eluir los ácidos fijados sobre el intercambiador con la solución de
sulfato sódico al 7,1 % (3.1.1.4); recoger el eluido en un matraz
aforadode100mlhastaelenrase.
3.3.3.Determinación del ácido tartárico
3.3.3.1. Vinos a los que no se ha añadido ácido metatartárico.
Introducir20mldeeluidoen2matraceserlenmeyer« a»y«b».
El matraz erlenmeyer « a» sirve para efectuar la determinación, el
matrazerlenmeyer« b»,enelqueelácidotartáricoesdestruidopor
elácidoperyódico,sirvedetestigo.
Echarenelmatrazerlenmeyer« a»:
—2mld eH2SO4M(3.1.2.3),
—5mld eH2SO40,05M(3.1.2.5),
— 1mldeglicerolal10%(3.1.2.7).
Echarenelmatrazerlenmeyer« b»:
—2mld eH2SO4M(3.1.2.3),
— 5mldesolucióndeácidoperyódico0,05M(3.1.2.6).
Esperar15minutos.Añadir:
1mldesolucióndeglicerolal10%(3.1.2.7)paradestruirelexceso
deácidoperyódico.
Esperar2minutos.
Verter entonces, agitando, primero en el matraz erlenmeyer « b», y
acto seguido en el matraz « a»,5 ml de reactivo vanádico (3.1.2.2).
Ponerenmarchainmediatamente uncronómetroycolocarelconte-
nidodelosmatraces« a»y«b»enlascubetasdelespectrofotómetro.
Alcabode90segundosmedirlaabsorbancia,a490nm,dellíquido
procedentedelmatrazerlenmeyer« a»(determinación),conrelación
altestigo(matraz« b»).Sieleluidocontienemuchoácidotartáricoy
porconsiguientelaabsorbanciaesmuyelevada,diluireleluidocon
lasolucióndesulfatosódicoal7,1%yprocederalamedidadela
solucióndiluida.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—92
▼B
3.3.3.2. Vinos a los que se ha añadido ácido metatartárico.
Cuandosetratedeunvinoalquesehaañadidoácidometatartárico
osesupongaquehahabidotal adición,seprocederá alahidrólisis
deeseácidotalcomoseindicaparaelmétododereferencia.
Unavezfrío,sevierteelcontenidodelmatrazerlenmeyer,asícomo
elaguadelavados(2vecescon5mlcadavez),enlapartesuperior
de la columna de intercambiador. Continuar como se ha indicado
antes.
Elácidometatartáricoestáincluidocomoácidotartáricoenelresul-
tadodeladeterminación.
3.3.4.Obtención de la curva patrón
Verter10,20,30,40y50mldesolucióndeácidotartáricode1g/l
(3.1.2.9) en matraces aforados de 100 ml y enrasar con la solución
desulfatodesodioal7,1%(3.1.1.4).Lasconcentraciones deestas
soluciones corresponden en las condiciones de trabajo a contenidos
enelvinode1,2,3, 4y5gdeácidotartáricoporlitro.
En 2 matraces erlenmeyer « a»y«b», verter 20 ml de estas solu-
ciones y continuar como se ha indicado anteriormente para el
eluidodevino.
Larepresentacióngráficadelasabsorbanciasdeestassolucionesen
función del contenido en ácido tartárico es una recta que se curva
ligeramente hacia el punto cero. Si fuera necesario precisar esta
parte de la curva, medir soluciones cuyo contenido sea inferior a
1,0g/l.
3.3.5.Expresión de los resultados
Llevaralacurvapatrónlaabsorbanciaresultantedemedireleluido,
para obtener el contenido del vino en ácido tartárico expresado en
gramosporlitro.
Elcontenidoseindicarácon1decimal.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—93
▼B
17.ACIDOCÍTRICO
1. FUNDAMENTODELMÉTODO
Elácidocítricosetransformaenoxaloacetatoyacetatoenunareac-
cióncatalizadaporlacitrato-liasa(CL):
citrato
 oxaloacetato+acetato
En presencia de malato-deshidrogenasa (MDH) y de lactato-deshi-
drogenasa(LDH),eloxaloacetato ysuderivadodedecarboxilación,
elpiruvato,sereducenenL-malatoyL-lactatoporlanicotinamida-
adenina-dinucleótida reducida(NADH):Oxaloacetato+NADH+H+
L-malato+NAD+
Piruvato+NADH+H+
L-lactato+NAD+
La cantidad de NADH oxidada a NAD+en estas reacciones es
proporcional alcitrato presente. Laoxidación delaNADHsemide
mediante la disminución de su absorbancia a una longitud de onda
de340nm.
2. REACTIVOS
2.1. TampónpH7,8
(glicilglicina0,51M;pH=7,8;Zn2+:0,6·10−3M):
disolver7,13gdeglicilglicinaen70ml,aproximadamente,deagua
bidestilada; ajustar el pH a 7,8 con 13 ml, aproximadamente, de
solución de hidróxido de sodio 5 M; añadir 10 ml de solución de
cloruro de cinc ZnCl2de 80 mg en 100ml y enrasar hasta 100ml
conaguabidestilada.
Lasoluciónpermaneceráestabledurante4semanas,porlomenos,a
+4ºC.
2.2. Solución de nicotinamida-adenin-dinucleótido reducida (NADH)
(aproximadamente 6·10−3M);disolver30mgdeNADHy60mg
deNaHCO3con6mldeaguabidestilada.
2.3. Solución de malato-deshidrogenasa/lactato-deshidrogenasa (MDH/
LDH), (0,5 mg MDH/ml; 2,5 mg LDH/ml): se hace una mezcla de
0,1 ml MDH (5 mg MDH/ml) / 0,4 ml de solución de sulfato de
amonio (3,2 M) y 0,5 ml LDH (5 mg/ml). Esta solución semantendráestabledurante1año,porlomenos,a+4ºC.
2.4. Citrato-liasa CL (5 mg de proteína/ml). Disolver 168 mg de liofili-
zadoen1mldeaguamuyfría.Lasoluciónesestableporlomenos
durante1semanaa+4ºCydurante4semanascongelada.
Antes de la determinación, se recomienda proceder a la comproba-
cióndelaactividaddelaenzima.
2.5. Polivinilpolipirrolidona(PVPP)
Nota:
Elconjuntodeestosreactivossecomercializanpreparados.
3. MATERIAL
3.1. Espectrofotómetroquepermitaefectuarmedidasa340nm,máximo
deabsorcióndelaNADH.
En su defecto, fotómetro de espectro discontinuo que permita efec-
tuar medidas a 334 nm o a 365 nm. Dado que se trata de medidas
absolutas de absorbancia (no existe gama de contraste, sino refe-
rencia al coeficiente de extinción de la NADH), deben controlarse
las escalas de las longitudes de onda y de las absorbancias del
aparato.
3.2. Cubetasdevidriode1cmdetrayectoópticoocubetasdeusoúnico.
3.3. Micropípetas que permitan tomar volúmenes comprendidos entre
0,02mly2ml.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—94
▼B
4. PREPARACIÓNDELAMUESTRA
La determinación del citrato se efectúa directamente sobre el vino
sindecoloración previa y sin dilución, siempre que el contenido en
ácido cítrico sea inferior a 400 mg/l. Si no, proceder a la dilución
del vino de forma que la concentración de citrato se sitúe entre 20
y 400 mg/l (cantidad de citrato en la muestra comprendida entre
5µgy80µg).
En el caso del vino tinto rico en compuestos fenólicos, se reco-
miendatratarlopreviamenteconPVPP:
ponerensuspensiónenelaguaalrededorde0,2gdePVPPydejar
reposar15minutos.Filtrarsobrefiltrodepliegues.
Añadira10mldevinocolocadodentrodeunerlenmeyerde50ml,
elPVPPhúmedoextraídoconlaespátuladelfiltro.Agitardurante2
a3minutosyfiltrar.
5. PROCEDIMIENTO
Se ajusta la longitud de onda del espectrofotómetro a 340 nm y se
realizan las medidas de absorbancia en cubetas de 1 cm, habiendo
ajustado elcero deabsorbancia conrespecto al aire (sincubetas en
eltrayectoóptico).Introducirencubetasde1cm:
Testigo Muestra
Solución2.1 1,00ml 1,00ml
Solución2.2 0,10ml 0,10ml
Muestra — 0,20ml
Aguabidestilada 2,00ml 1,80ml
Solución2.3 0,02ml 0,02ml
Mezclar; transcurridos unos 5 minutos, leer las absorbancias de las
solucionestestigoymuestra(A1).
Añadir:
Solución2.4 0,02ml 0,02ml
Mezclar; esperar a que finalice la reacción (unos 5 minutos) y leer
lasabsorbanciasdelassolucionestestigoymuestra(A2).
Determinarlasdiferenciasdeabsorbancias(A1−A2)deltestigoyde
lamuestra.
Restar la diferencia de absorbancias del testigo de la diferencia de
absorbanciasdelamuestra:
∆A= ∆AM−∆AT
Nota:
Eltiemponecesarioparalaaccióndelasenzimaspuedevariardeun
loteaotro.Únicamentesehadadoatítuloindicativo.Serecomienda
determinarloparacadalote.
6. EXPRESIÓNDELOSRESULTADOS
Elcontenidoenácidocítricoseexpresaenmiligramosporlitro(mg/
l)sindecimales.
6.1.Métododecálculo
Laconcentración enmiligramosporlitrovienedadaporlafórmula
general:
C¼V/C1PM
ε/C1d/C1v/C1∆A
Segúnlascondicionesoperatoriasexpresadasenelpunto5serían:
V = volumentotalenml(3,14ml)
V = volumendelamuestraenml(0,2ml)1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—95
▼B
PM = masa molecular de la sustancia que va a determinarse
(ácidocítricoanhidro=192,1)
d = trayectoópticodelacubetaencm(1cm)
ε= coeficientedeextincióndelNADH:
a340nm, ε=6,3mmol−1·l·cm−1.
Seobtiene:
C=479· ∆A
Sialprepararlamuestrasehaefectuadounadilución,multiplicarel
resultadoporelfactordedilución.
Nota:
a334nm:C=488· ∆A(ε=6,2mmol−1·l·cm−1)
a365nm:C=887· ∆A(ε=3,4mmol−1·l·cm−1)
6.2.Repetibilidad(r):
Contenidoenácidocítricoinferiora400mg/l:r=14mg/lContenidoenácidocítricosuperiora400mg/l:r=28mg/l
6.3.Reproductibilidad(R):
Contenidoenácidocítricoinferiora400mg/l:R=39mg/l.
Contenidoenácidocítricosuperiora400mg/l:R=65mg/l.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—96
▼B
18.ÁCIDOLÁCTICO
1. FUNDAMENTODELOSMÉTODOS1.1.Métododereferencia:
En presencia de nicotinamida-adenin-dinucleótido (NAD), el ácido
lácticototal(L-lactato yD-lactato)seoxidaapiruvatoenunareac-
ción catalizada por L-lactato deshidrogenasa (L-LDH) y D-lactato
deshidrogenasa(D-LDH).
Elequilibriodelareacciónestádesplazadoenelsentidodellactato.
Laeliminacióndelpiruvatodelmediodereaccióndesplazaelequi-
libriohacialaformacióndepiruvato.
EnpresenciadeL-glutamato,elpiruvatosetransformaenL-alanina
en una reacción catalizada por la glutamato-piruvato-transaminasa
(GPT)
(1)L-lactato+NAD
+
piruvato+NADH+H+
(2)D-lactato+NAD+
piruvato+NADH+H+
(3)Piruvato+L-glutamato
 L-alanina +acetogluta-
rato
LaformacióndeNADH,medidaporelaumentodelaabsorbanciaa
una longitud de onda de 340 nm, es proporcional a la cantidad de
lactatopresente.
Nota:ElácidoL-láctico puededeterminarse individualmente mediante las
reacciones(1)y(3).
ElácidoD-lácticopuededeterminarseindividualmentemediantelas
reacciones(2)y(3).
1.2.Métodousual:
El ácido láctico, separadoen una columna deresina cambiadora de
aniones,esoxidadoaetanalysedeterminaporcolorimetríadespués
dereaccionarconnitroprusiatoypiperidina.
2. MÉTODODEREFERENCIA2.1.Reactivos
2.1.1. Solución tampón pH 10 (glicilglicina 0,6 moles/l; L-glutamato
0,1moles/l).
Disolver4,75gdeglicilglicina,0,88gdeácidoL-glutámicoenunos
50mldeaguabidestilada;ajustarelpHa10consolucióndehidró-
xidodesodio10Myllevara60mlconaguabidestilada.
Lasoluciónpermaneceestableporlomenos12semanasa+4ºC.
2.1.2. Solución de nicotinamida-adenin-dinucleótido (NAD) de alrededor
de40·10
−3M;disolver900mgdeNADen30mldeaguabidesti-
lada.Lasoluciónpermaneceestableporlomenos4semanasa+4ºC.
2.1.3. Suspensióndeglutamato-piruvato-transaminasa (GPT)de20mg/ml.
Lasuspensiónesestableporlomenos1añoa+4ºC.
2.1.4. Suspensión de L-lactato-deshidrogenasa (L-LDH) de 5 mg/ml. La
suspensiónesestableporlomenos1añoa+4ºC.
2.1.5. Suspensión de D-lactato-deshidrogenasa (D-LDH) de 5 mg/ml. La
soluciónesestableporlomenos1añoa+4ºC.
Antes de proceder a la determinación, se recomienda comprobar la
actividaddelasenzimas.
Nota:Elconjuntodeestosreactivossecomercializanpreparados.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—97
▼B
2.2.Material
2.2.1. Espectrofotómetro que permita efectuar las medidas de 340 nm,
máximodeabsorcióndelaNADH.
En su defecto, fotómetro de espectro discontinuo que permita efec-
tuarmedidasde334nmoa365nm.
Dadoquesetratademedidasabsolutasdeabsorbancia(noseutiliza
curva de calibrado sino el coeficiente de extinción de la NADH),
deben controlarse las escalas de las longitudes de onda y de las
absorbanciasdelaparato.
2.2.2. Cubetasdevidrioodesechablesde1cmdetrayectoóptico.
2.2.3. Micropipetas que permitan tomar volúmenes comprendidos entre
0,02mly2ml.
2.3.Preparacióndelamuestra
Evítesetocarconlosdedoslapartedelvidrioqueentreencontacto
conelmedioreactivo,yaquepodríasercausadeunaportedeácido
L-lácticoquefalsearíaelresultado.
Silaconcentraciónenácidolácticoesinferiora100mg/l,ladeter-
minación del lactato se efectúa directamente sobre el vino sin
decoloración previa ni dilución. Si la concentración del vino en
ácidolácticoestácomprendidaentre:
100mg/ly1g/l,diluir1/10conaguabidestilada,
1g/ly2,5g/l,diluir1/25conaguabidestilada,
2,5g/ly5g/l,diluir1/50conaguabidestilada.
2.4.Procedimiento
2.4.1.Determinación del ácido láctico total
La solución tampón debe llevarse a una temperatura entre 20—25º
antesdeprocederaladosificación.
Se ajusta la longitud de onda del espectrofotómetro a 340 nm y se
realizan lasmedidasdeabsorbanciaencubetasde1cmdetrayecto
óptico,habiendoajustadoelcerodeabsorbanciaconrespectoalaire
(sincubetaseneltrayectoóptico)oconrespectoalagua.
Introducirenlascubetasde1cmdetrayectoóptico:
Blanco Muestra
Solución2.1.1 1,00ml 1,00ml
Solución2.1.2 0,20ml 0,20ml
Aguabidestilada 1,00ml 0,80ml
Suspensión2.1.3 0,02ml 0,02ml
Muestra — 0,20ml
Mezclar con un agitador de vidrio o con una varilla de material
sintéticodepuntaplana;transcurridos5minutos,aproximadamente,
medirlasabsorbanciasdelassolucionesblancoymuestra(A1).
Añadir0,02mldelasolución2.1.4y0,05ml delasolución2.1.5,
homogeneizar,esperaraquefinalicelareacción(unos30minutos)y
medirlasabsorbanciasdelassolucionesblancoymuestra(A2).
Determinarlasdiferenciasdeabsorbancia(A2−A1)paraelblancoy
lamuestra.
Restar la diferencia de absorbancias del blanco ( ∆AB) de la dife-
renciadeabsorbanciasdelamuestra( ∆AM).
∆A= ∆AM−∆AB
2.4.2.Determinación del ácido L-láctico y del ácido D-láctico
La determinación del ácido L-láctico y D-láctico puede realizarse
por separado aplicando el procedimiento indicado para el ácido
lácticototal,perooperandotrashaberdeterminadoA1.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—98
▼B
Añadir 0,02 ml de la solución 2.1.4, homogeneizar, esperar a que
finalicelareacción(alrededorde20minutos)ymedirlasabsorban-
ciasdelassolucionesblancoymuestra(A2).
Añadir0,05mldesolución2.1.5,homogeneizar,esperaraquefina-
lice la reacción (alrededor de 30 minutos) y medir las absorbancias
delassolucionesblancoymuestra(A3).
Determinar las diferencias de absorbancias (A2−A1) para el ácido
L-láctico y (A3−A2) para el ácido D-láctico en el caso del blanco
yenelcasodelamuestra.
Restar la diferencia de absorbancias del blanco de la diferencia de
absorbanciasdelamuestra.
∆A= ∆AM−∆AB
Nota:
Eltiemponecesarioparalaaccióndelasenzimaspuedevariardeun
loteaotro.Aquísólosehadadoatítuloindicativo. Serecomienda
determinarloparacadalote.SisedeterminaúnicamenteelácidoL-
láctico,eltiempodeincubacióntraslaadicióndelaL-lactato-deshi-
drogenasapuedereducirsea10minutos.
2.5.Expresióndelosresultados
Laconcentraciónenácidolácticoseexpresaengramosporlitro(g/
l)con1decimal.
2.5.1.Método de cálculo
La concentración en gramos por litro se calcula con la fórmula
general:
C¼V/C1PM
ε/C1d/C1v/C11000/C1A
V = volumentotalenmililitros(V=2,24mldeácidoL-láctico,
V=2,29mldeácidoD-lácticoyácidolácticototal)
v = volumendelamuestraenmililitros(aquí:0,2ml)PM = masamoleculardelasustanciaquevaadeterminarse(aquí:
ácidoDL-láctico=90,08).
d = trayectoópticodelacubetaencentímetros(aquí:1cm)ε= coeficientedeextincióndelaNADHa340nm
ε=6,3(mmol
−1·l·cm−1)
2.5.1.1. Ácido láctico total y ácido D-láctico
C=0,164· ∆A
Sialprepararlamuestrasehaefectuadounadilución,multiplicarel
resultadoporelfactordedilución.
Nota:
Medidaa334nm:C=0,167· ∆A(ε=6,2mmol−1·l·cm−1)
Medidaa365nm:C=0,303· ∆A(ε=3,4mmol−1·l·cm−1)
2.5.1.2. Ácido L-láctico
C=0,160· ∆A
Sialprepararlamuestrasehaefectuadounadilución,multiplicarel
resultadoporelfactordedilución.
Nota:
Medidaa334nm:C=0,163· ∆A(ε=6,2mmol−1·l·cm−1)
Medidaa365nm:C=0,297· ∆A(ε=3,4mmol−1·l·cm−1)
2.5.2.Repetibilidad (r)
r = 0,02+0,07xig/l
xi= concentración en ácido láctico de la muestra en gramos por
litro.
2.5.3.Reproductibilidad(R)
R = 0,05+0,125xig/l1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—99
▼B
xi= concentración en ácido láctico de la muestra en gramos por
litro.
3. MÉTODOUSUAL
3.1.1.Para el tratamiento preliminar del vino
Véaseelmétododelácidotartárico(3.1.1.Métodousual).
3.1.2.Para la determinación del ácido láctico
3.1.2.1. Solución0,1MdesulfatodecerioIVenácidosulfúrico0,35M.
Disolverenfrío40,431gdesulfatodecerioIV,Ce(SO4)2,4H2O,en
350ml deuna soluciónMde ácido sulfúrico exactamente valorada
(3.1.2.4).Llevara1000mlconaguadestilada.
3.1.2.2. Solucióndehidróxidodesodio(NaOH)2,5M.3.1.2.3. Solucióndeacetatodesodiode270gporlitro(preparadaapartirde
acetatodesodiosecoNaCH
3COO).
3.1.2.4. Solucióndeácidosulfúrico(H2SO4)1M.
3.1.2.5. Solucióndenitroprusiatodesodio[Na2(Fe(CN)5NO)·2H2O]al2%
(m/v).
Conservarenunfrascobiencerradoyenlaoscuridad.
Límitedeconservacióndelasolución:8días.
3.1.2.6. Solucióndepiperidina(C5H11N)al10%(v/v).
3.1.2.7. SolucióndeácidolácticoM.
Diluir en 400ml de agua 100 ml de ácido láctico (C3H6O3). Verter
esta solución en una cápsula y calentarla en un baño de agua
hirviendo durante 4 horas, completando de vez en cuando el
volumen con agua destilada. Llevar a un litro después de haber
enfriado.Valorarelácidolácticoen10mldeestasoluciónconuna
solucióndehidróxidodesodioM(3.1.2.8).Ajustarlasoluciónhasta
1Mdeácidoláctico(90g).
3.1.2.8. Solucióndehidróxidodesodio(NaOH)1M.
3.2.Material
3.2.1. Columnadevidrio deunalongituddeaproximadamente 300mmy
deundiámetro interno de10a11mm provistadeunregulador de
flujo.
3.2.2. Bañodeaguatermostatadoa65ºC.3.2.3. Espectrofotómetro que permita efectuar medidas de absorbancia a
una longitud de onda de 570 nmcon cubetas de 1 cmde trayecto
óptico.
3.3.Procedimiento
3.3.1.Preparación de la columna cambiadora de iones
Véaseelmétodo«ácidotartárico»(3.3.1.Métodousual).
3.3.2.Aislamiento de ácidos orgánicos
Véaseelmétodo«ácidotartárico»(3.3.2.Métodousual).
3.3.3.Determinación del ácido láctico
Verter10mldeeluidoenuntubodevidriode50mldecapacidad
provistodeuntapónesmerilado,añadir10mldesolucióndesulfato
decerio(3.1.2.1).Agitar;introducireltuboenunbañodeaguacon
termostato a 65 ºC durante exactamente 10 minutos. Al efectuar la
inmersión, levantar durante algunos segundos el tapón de vidrio
paracompensarlapresiónprovocadaporelcalentamiento; seguida-
mente, cerrar herméticamente el tubo para evitar la pérdida del
etanalformado.Retirareltubo,enfriarbajounchorrodeaguapara
lograrunatemperaturaaproximadade20ºC,añadir5mldelasolu-
cióndehidróxidodesodio2,5M(3.1.2.2),mezclaryfiltrar.
Extraerunamuestrade15mldefiltradoyverterlaenunmatrazde
50ml,contapónesmerilado,enelquepreviamentesehabrávertido
una mezcla homogénea de 5 ml de solución de acetato de sodio al
27 % (3.1.2.3) y de 2 ml de ácido sulfúrico M (3.1.2.4). Añadir1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—100
▼B
5 ml de la solución de nitroprusiato de sodio (3.1.2.5), mezclar;
añadir a continuación 5 ml de la solución de piperidina (3.1.2.6),
mezclar rápidamente e introducir de inmediato esta solución en la
cubeta del espectrofotómetro. La coloración resultante, que varía
entreelverdeyelvioleta,semide570nmconrespectoalaire(sin
cubetaalgunaeneltrayectoóptico);lacoloraciónaumentadisminu-
yendorápidamenteacontinuación.
Seguir la evolución de la absorbancia correspondiente y escoger
comovalordefinitivosuvalormáximo.
Si el eluido contiene demasiado ácido láctico y la absorbancia
resultademasiadoalta,diluireleluidoconlasolucióndesulfatode
sodioal7,1%(3.1.1)ymedirlasolucióndiluida.
3.3.4.Obtención de la curva patrón
Introducir10mldelasolucióndeácidoláctico1M(3.1.2.7)y10ml
de solución valorada de hidróxido de sodio 1 M (3.1.2.8) en un
matraz aforado de1000ml yenrasar conla solucióndesulfato de
sodioal7,1%(3.1.1).Extraer5,10,15,20y25mleintroducirlos
enmatraces aforadosde 100ml. Enrasar con lasoluciónde sulfato
desodioal7,1%.Tomar10mldelassolucionesobtenidasydeter-
minarenelcasodecadaunaelvalordelaabsorbanciasiguiendoel
procedimientoutilizadoparaeleluidoyquesedescribeenelpunto
3.3.3.
Estas soluciones corresponden a los eluidos obtenidos a partir de
vinos con un contenido de 0,45 — 0,9 — 1,35 — 1,80 y 2,25 g/l
deácidoláctico.
Larepresentacióngráficadelasabsorbanciasdeestassolucionesen
funcióndelcontenidoenácidolácticoesunarecta.
3.4.Expresióndelosresultados
Llevar la absorbancia medida en el eluido a la curva patrón para
obtenerelcontenidodelvinoenácidolácticoengramosporlitro.
Estecontenidoseexpresacon1decimal.
Nota:Los vinos con más de 250 mg/l de dióxido de azufre pueden
presentar un contenido en ácido etanalsulfúrico que se valora como
ácido láctico. En este caso, es preciso corregir el resultado de la
determinación con el del obtenido en la operación complementaria
siguiente: mezclar 15 ml de eluido en una probeta, provista de un
tapón esmerilado, con 5 ml de acetato de sodioal 27 % y 2 ml de
H
2SO40,775 M (77,5 ml de H2SO4M se enrasa a 100 ml con agua
destilada). A continuación, como al determinar el ácido láctico se
añaden 5 ml de nitroprusiato de sodio al 2 % y 5 ml de piperidina
al10%.Trashaberefectuadolamezcla,medirlaabsorbanciaenlas
condiciones descritas para la determinación del ácido láctico. Tras-
ladar esta absorbancia a la curva de calibrado para obtener el valor
aparente B del ácido láctico en gramos por litro, debido al ácido
etanalsulfónico. Si L' es el contenido aparente del vino en ácido
láctico en gramos por litro, el contenido real L en ácido láctico se
obtienemediantelasiguientefórmula:
L=L'−B·0,4(g/l)1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—101
▼B
19.ÁCIDOL-MÁLICO
1. FUNDAMENTODELMÉTODO
En presencia de nicotinamida-adenin-dinucleótido (NAD), el ácido
L-málico (L-malato) seoxidaenoxaloacetato enunareacción cata-
lizadaporlaL-malato-deshidrogenasa(L-MDH).
Elequilibriodelareacciónestádesplazadoenelsentidodelmalato.
Laeliminacióndeloxaloacetatodelmedioreactivodesplazaelequi-
librio de la reacción hacia la formación de oxaloacetato. En
presenciadeL-glutamato, eloxaloacetato setransformaenL-aspar-
tato, reacción catalizada por el glutamato-oxaloacetato-transaminasa
(GOT).
(1)L-malato+NAD+
oxaloacetato+NADH+H+
(2)Oxaloacetato + L-glutamato
 L-aspartato + α−
cetoglutarato
LaformacióndeNADH,medidaporelaumentodelaabsorbanciaa
lalongituddeondade340nm,esproporcionalalacantidad deL-
malatopresente.
2. REACTIVOS
2.1. SolucióntampónpH10
(glicilglicina0,60M;L-glutamato0,1M)
Disolver 4,75 g de glicilglicina y 0,88 g de ácido L-glutámico en
unos50mldeaguabidestilada;ajustarelpHa10conunos4,6ml
desolucióndehidróxidosódico10Myllevarhasta60mlconagua
bidestilada.
Lasoluciónpermaneceráestableporlomenos12semanasa+4ºC.
2.2. Solución de nicotinamida-adenin-dinucleótido (NAD) de alrededor
de47·10−3M:disolver420mgdeNADen12mldeaguabides-
tilada. La solución permanece estable por lo menos 4 semanas a
+4ºC.
2.3. Suspensióndeglutamato-oxaloacetato-transaminasa (GOT)de2mg/
ml.Lasuspensiónesestableporlomenos1añoa+1ºC.
2.4. Suspensión de L-malato-deshidrogenasa (L-MDH) de 5 mg/ml. La
suspensiónesestableporlomenos1añoa+4ºC.
Nota:
Elconjuntodereactivosnecesariossecomercializanpreparado.
3. MATERIAL
3.1. Espectrofotómetroquepermitaefectuarmedidasa340nm,máximo
deabsorcióndelaNADH.
En su defecto, fotómetro de espectro discontinuo que permita efec-
tuarmedidasa334nmoa365nm.
Dadoquesetratademedidasabsolutasdeabsorbancia(noseutiliza
curva de calibrado, sino el coeficiente de extinción de la NADH),
deben controlarse las escalas de las longitudes de onda y de lasabsorbanciasdelaparato.
3.2. Cubetasdevidrioocubetasdesechablesde1cmdetrayectoóptico.
3.3. Micropipetasquepermitantomarvolúmenescomprendidosente0,01
y2ml.
4. PREPARACIÓNDELAMUESTRA
Normalmente,ladeterminacióndelL-malatoseefectúadirectamente
sobre el vino sin decoloración previa ni dilución, siempre que el
contenido en ácido L-málico sea inferior a350 mg/l (medidas a
365nm).Sino,procederaladilucióndelvinoconaguabidestilada
de forma que la concentración en L-malato se sitúe entre 30 y
350 mg/l (cantidad de L-malato en la muestra comprendida entre 3
y35µg.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—102
▼B
Si la concentración del vino en malato es inferior a 30 mg/l, el
volumen de la muestra puede aumentarse hasta 1 ml. En este caso,
sereduciráelvolumendeaguaquedebeañadirseparaquelosvolú-
menestotalesseanigualesenlasdoscubetas.
5. PROCEDIMIENTO
Se ajusta la longitud de onda del espectrofotómetro a 340 nm y se
realizan lasmedidasdeabsorbanciaencubetasde1cmdetrayecto
óptico,habiendoajustadoelcerodeabsorbanciaconrespectoalaire
(sincubetaseneltrayectoóptico)oconrespectoalagua.
Introducirenlascubetasde1cmdetrayectoóptico:
Blanco Muestra
Solución2.1 1,00ml 1,00ml
Solución2.2 0,20ml 0,20ml
Aguabidestilada 1,00ml 0,90ml
Suspensión2.3 0,01ml 0,01ml
Muestra — 0,10ml
Mezclar; transcurridos 3 minutos, aproximadamente, medir las
absorbanciasdelassolucionesblancoymuestra(A1).
Añadir:
Solución2.4 0,01ml 0,01ml
Mezclar; esperar a que finalice la reacción (de 5 a 10 minutos) y
medirlasabsorbanciasdelassolucionesblancoymuestra(A2).
Determinar las diferencias de absorbancia (A2−A1) del blanco
(∆A8)ydelamuestra( ∆AM).
Restar la diferencia de absorbancias del blanco de la diferencia de
absorbanciasdelamuestra
∆A= ∆AM−∆AB
Nota:
Eltiemponecesarioparalaaccióndelasenzimaspuedevariardeun
loteaotro.Aquísólosehadadoatítuloindicativo. Serecomienda
determinarloparacadalote.
6. EXPRESIÓNDELOSRESULTADOS
La concentración en ácido L-málico se expresa en gramos por litro
(g/l)con1decimal.
6.1.Métododecálculo
La concentración en gramos por litro se calcula con la fórmula
general:
C¼V/C1PM
ε/C1d/C1v/C11000/C1∆A
V = volumentotalenml(aquí2,22ml)
v = volumendelamuestraenml(aquí:0,1ml)
PM = masamoleculardelasustanciaquevaadeterminarse(aquí:
ácidoL-málico=134,09)
d = trayectoópticodelacubetaencm(aquí:1cm)
ε= coeficientedeextincióndelaNADHa340nm ε=6,3mmol−1·l·cm−1)
ParaelL-malatoseobtiene:
C=0,473· ∆Ag/l
Sialprepararlamuestrasehaefectuadounadilución,multiplicarel
resultadoporelfactordedilución.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—103
▼B
Nota:
Medidaa334nm:C=0,482× ∆A
Medidaa365nm:C=0,876× ∆A
6.2.Repetibilidad(r)
r = 0,03+0,034xi
xi= concentración en ácido málico de la muestra en gramos por
litro.
6.3.Reproductibilidad(R)
R = 0,05+0,071xi
xi= concentración en ácido málico de la muestra en gramos por
litro.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—104
▼M7
20.ÁCIDOD-MÁLICO
DETERMINACIÓNPORMÉTODOENZIMÁTICO
1. PRINCIPIO
En presencia de D-malato-deshidrogenasa (D-MDH), el ácido D-
málico (D-malato) se oxida a oxalacetato por la nicotinamida-
adenín-dinucleótido (NAD). El oxalacetato formado se transforma
enpiruvatoydióxidodecarbono.
D-malato þNADþ/harpoonleftrightD-MDHpiruvato þCO2þNADH þHþ
LaformacióndeNADH,medidaporelaumentodelaabsorbanciaa
la longitud de onda de 334, 340 o 365 nm, es proporcional a lacantidaddeD-malatopresente.
2. REACTIVOS
Enelcomerciosepresentanreactivosparaunas30determinaciones
enestuchesquecontienen:
a) frasco1deunos30mldesolucióntamponHepesconácido[N-
(2-hidroxietil)piperazina-N'-2-etano-sulfónico] pH=9,0yestabi-
lizadores;
b) frasco2deunos210mgdeNADliofilizado;
c) frasco3(ennúmerodetres)deD-MDHliofilizado,paraanalizar
8muestras.
Preparacióndelassoluciones
1. Utilizarelcontenidodelfrasco1sindiluir.Llevarlasolucióna
20-25ºCantesdeluso.
2. Disolverelcontenidodelfrasco2en4mldeaguabidestilada.3. Disolverelcontenidodeunodelosfrascos3en0,6mldeagua
bidestilada.Llevarlasolucióna20-25ºCantesdeluso.
Estabilidaddelassoluciones
Elcontenidodelfrasco1seconservaalmenosunañoa+4ºC;la
solución2seconservaalrededorde3semanasa+4ºCy2mesesa
−20ºC;lasolución3seconserva5díasa+4ºC.
3. MATERIAL
3.1. Un espectrofotómetro que permita efectuar medidas a 340 nm
(máximo de absorción del NADH).En su defecto, un fotómetro de
espectro discontinuo que permita efectuar las medidas a 334 nm y
365nm.Dadoquesetratademedidasabsolutasdeabsorbancia(no
hay curva de calibrado, sino referencia al coeficiente de extinción
del NADH),las escalas de longitud de onda y las absorbancias del
aparatodebensercontroladas.
3.2. Cubetas de 1 cmde trayecto óptico de vidrio o cubetas de un solo
uso.
3.3. Micropipetas que permitan tomar volúmenes comprendidos entre
0,01y2ml.
4. PREPARACIÓNDELAMUESTRA
LadeterminacióndeD-malatoseefectúaengeneraldirectamenteen
elvinosindecoloraciónprevia.
ComolacantidaddeD-malatoenlacubetadebeestarcomprendida
entre 2 µgy5 0 µg, conviene diluir el vino de tal forma que la
concentración en malato esté comprendida entre 0,02 y 0,5 g/l o
0,02y0,3g/l(segúnelequipoempleado).1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—105
▼M7
Cuadrodedilución:
Cantidadestimadademalato/litro
D-Dilucióncon
aguaFactordedilu-
ciónMedidaa:
340or334nm365nm
<0,3g <0,5g — 1
0,3-3,0g 0,5-5,0g 1+9 10
5. PROCEDIMIENTO
El espectofotómetro se ajusta a la longitud de onda de 340nm, las
medidasdeabsorbanciasehacenenlascubetasde1cmdetrayecto
ópticoyelcerodeabsorbanciaseajustarespectoalaire(sincubeta
eneltrayectoóptico)orespectoalagua.
Enlascubetasde1cmdetrayectoóptico,introducir:
Blanco Ensayo
Solución1 1,00ml 1,00ml
Solución2 0,10ml 0,10ml
Aguabidestilada 1,80ml 1,70ml
Muestra — 0,10ml
Mezclar. Tras unos 6 minutos, medir las absorbancias de las solu-
cionesblancoyensayo(A1).
Añadir:
Blanco Ensayo
Solución3 0,05ml 0,05ml
Mezclar; esperar el final de la reacción (unos 20 minutos) y medir
lasabsorbanciasdelassolucionesblancoyensayo(A2).
Determinar las diferencias de absorbancia (A2−A1) del blanco
(∆AT)ydelensayo( ∆AE).Deducirladiferencia deabsorbanciadel
blancodeladiferenciadeabsorbanciadelensayo: ∆A= ∆AE−∆AT.
Nota:
Eltiemponecesarioparalaaccióndelasenzimassedaaquíatítulo
indicativo ya que puede variar de un lote a otro. Se recomienda
determinarloparacadalote.
El ácido D-málico reacciona rápidamente. Una actividad comple-
mentaria de la enzima transforma también el ácido L-tartárico
aunque la velocidad sea mucho menor. Es la razón por la cual hay
unaligerareacciónparásitaqueesposiblecorregirporextrapolación
(véaseelapéndiceA).
6. EXPRESIÓNDELOSRESULTADOS
La concentración en miligramos por litro se calcula mediante la
fórmulageneral:
C¼V/C2PM
ε/C2d/C2ν/C2∆A
V = volumendelensayoenml(enestecaso,2,95ml)
υ= volumendelamuestraenml(enestecaso,0,1ml)
PM = masa molecular de la substancia estudiada (en este caso,
ácidoD-málico=134,09)
d = trayectoópticodelacubetaencm(enestecaso,1cm)1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—106
▼M7
ε= coeficientedeabsorciónmolardelNADH:
a340nm = 6,3(1mmol−1cm−1)
a365nm = 3,4(1mmol−1cm−1)
a334nm = 6,18(1mmol−1cm−1).
Sisehaefectuadounadilucióndurantelapreparacióndelamuestra,
multiplicarelresultadoporelfactordedilución.
La concentración en ácido D-málico se da en miligramos por litro
(mg/l)sindecimales.
7. FIDELIDAD
Losdetallesrelativosalapruebainterlaboratoriosenloqueatañea
la fidelidad del método se resumen en el apéndice B. Los valores
derivados de la prueba interlaboratorios pueden no ser aplicables a
gamas de concentración del analito y a matrices diferentes de las
quesedanenelapéndiceB.
7.1.LIMITEDEREPETIBILIDAD
La diferencia absoluta entre dos resultados individuales obtenidos
conunamateriaidénticasometidaaensayo,porunmismooperador,
empleando losmismos instrumentos, en el intervalo de tiempo más
corto,nosobrepasará el valor derepetibilidad renmás del5%de
loscasos.
r = 11mg/l.
7.2.LIMITEDEREPRODUCIBILIDAD
La diferencia absoluta entre dos resultados individuales obtenidos
conunamateriaidénticasometidaaensayoendoslaboratoriosdife-
rentesnosobrepasaráelvalordereproducibilidadRenmásdel5%
deloscasos.
R = 20mg/l.
8. OBSERVACIONES
Habida cuenta de la precisión del método, los valores de ácido D-
málico inferiores a 50 mg/l deben ser confirmados por medio de
otro método de análisis utilizando otro principio de medida, como
porejemploeldePrzyborski et al.(Mitteilungen Klosterneuburg 43,
1993; 215-218. 1993 ).
Lamuestradevinoenlacubetanodebesersuperiora0,1mlpara
evitareventualesinhibicionesdelaactividadenzimáticaporlospoli-
fenoles.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—107
▼M7
Apéndice A
Cómotratarlasreaccionesparásitas
Las reacciones parásitas se deben generalmente a reacciones secundarias de la
enzima,alapresenciadeotrasenzimasenlamatrizdelamuestra,oalainte-
racción de uno o varios elementos de la matriz con un cofactor de la reacción
enzimática.
En la reacción normal, la absorbancia alcanza un valor constante al cabo de
cierto tiempo, generalmente entre 10 y 20 minutos, según la velocidad de la
reacción enzimática específica. Sin embargo, cuando se producen reacciones
secundarias, la absorbancia no alcanza un valor constante, sino que aumenta
regularmenteconeltiempo;estetipodeprocesosellamacorrientemente«reac-
ciónparásita».
Cuandoseplanteaesteproblema,convienemedirlaabsorbanciadelasolución
a intervalos regulares (de 2 min a 5 min), tras el tiempo necesario para que la
solución patrón alcance su absorbancia final. Cuando la absorbancia aumenta
regularmente, proceder a 5o6medidas y hacer después una extrapolación
gráfica o mediante cálculo, para obtener la absorbancia que habría tenido la
soluciónenelmomento enelquesehaañadidolaenzima final(T0).Ladife-
renciadeabsorbanciaextrapoladaenestemomento(Af−Ai)seutilizaparael
cálculodelaconcentracióndelsubstrato.
Figura1:Reacciónparásita1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—108
▼M7
Apéndice B
Resultadosestadísticosdelapruebainterlaboratorios
Añodelapruebainterlaboratorios: 1995
Númerodelaboratorios: 8
Númerodemuestras: 5conadicióndeácidoD-málico
Muestra ABCDE
Número de laboratorios elegidos tras eliminación de
loslaboratoriosquepresentanresultadosaberrantes 7 8 7 8 7
Númerodelaboratoriosconresultadosaberrantes 1 — 1 — 1
Númeroderesultadosaceptados 35 41 35 41 36
Valormedio( χ-)(mg/l) 161,7 65,9 33,1 106,9 111,0
Desviacióntípicadelarepetibilidad(sr)(mg/l) 4,53 4,24 1,93 4,36 4,47
Desviacióntípicarelativaalarepetibilidad(RSDr)(%) 2,8 6,4 5,8 4,1 4,00
Límitederepetibilidad(r)(mg/l) 12,7 11,9 5,4 12,2 12,5Desviacióntípicadelareproducibilidad(s
R)(mg/l) 9,26 7,24 5,89 6,36 6,08
Desviacióntípicarelativaalareproducibilidad(RSDR)
(%) 5,7 11 17,8 5,9 5,5
Límitedereproducibilidad(R)(mg/l) 25,9 20,3 16,5 17,8 17,0
Tiposdemuestra:
A:vinotinto;B:vinotinto;C:vinoblanco;D:vinoblanco;E:vinoblanco.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—109
▼B
21.ÁCIDOMÁLICOTOTAL
MÉTODOUSUAL1. FUNDAMENTODELMÉTODO
Elácidomálicoaisladomedianteunacolumnaderesinacambiadora
de aniones, se determina colorimétricamente en el eluido, debido a
la coloración amarilla que da con ácido sulfúrico del 96 % y ácido
cromotrópico. Las sustancias contenidas en el eluido interfieren en
esta reacción. Pero estas sustancias reaccionan contrariamente al
ácido málico, con ácido sulfúrico del 86 % y ácido cromotrópico.
Paraeliminarestainterferencia,essuficienterestardelaabsorbancia
obtenidadespuésdelareacciónconelácidocromotrópicoyelácido
sulfúrico del 96 %, la absorbancia obtenida después de la reacción
conácidocromotrópicoyácidosulfúricodel86%.
2. MATERIAL
2.1. Columnadevidriode250mmdelongitudaproximaday35mmde
diámetrointerior,provistadellave.
2.2. Columnadevidriode300mmdelongitudaproximaday10a11mm
dediámetrointerior,provistadellave.
2.3 Bañodeaguaa100ºC.2.4. Espectrofotómetro que permita hacer lecturas de absorbancia a la
longitud de onda de 420 nmcon cubetas de 10 m mde trayecto
óptico.
4. REACTIVOS
3.1. Cambiadordeionesdefuertebasicidad(porejemplo,MerckIII).3.2. Hidróxidosódicoal5%(m/v).
3.3. Ácidoacéticoal30%(m/v).
3.4. Ácidoacéticoal0,5%(m/v).3.5. Solucióndesulfatosódico(Na
2SO4)al10%(m/v).
3.6. Ácidosulfúricoconcentradodel95—97%(m/m).3.7. Ácidosulfúricodel86%(m/m).3.8. Solucióndeácidocromotrópicoal5%(m/v).
Esta solución se debe preparar inmediatamente antes de su utiliza-
ción, disolviendo 500 mg de sal disódica del ácido cromotrópico
(C
10H6NA2O8S2,2H2O)en10mldeagua.
3.9. Solucióndeácidodl-málicode0,5g/l.
Disolver 250 mg/l de ácido málico (C4H6O5) en una cantidad sufi-
ciente de sulfato sódico al 10 % (3,5) y enrasar en un matraz
aforadode500ml.
4. PROCEDIMIENTO4.1.Preparacióndelcambiadordeiones.
Colocar por encima de la llave de la columna de vidrio de
35×250mmuntapóndelanadevidrioimpregnadodeaguadesti-
lada. Echar en la columna el cambiador de ionespuesto en
suspensión en agua y de forma que quede un espacio libre de50 mm aproximadamente por encima de la superficie del intercam-
biador hasta el extremo superior de la columna. Después de pasar
1000 ml de agua destilada, llenar la columna con la solución de
hidróxidodesodioal5%ydejarpasarellíquido hasta,aproxima-
damente, 2 a 3 mm por encima de la superficie del cambiador de
iones, repetir dos veces más esta operación y dejar en contacto
duranteunahora.Lavarlacolumnacon1000mldeaguadestilada.
Seguidamente llenar la columna conlasolucióndeácido acético al
30 %, dejar pasar el líquido hasta aproximadamente 2 a 3 mm por
encima de la superficie del cambiador de iones, repetir esta opera-
ción 2 veces y dejar en contacto al menos durante 24 horas antes
de emplearla. Conservar el cambiador de iones en ácido acético al
30%paralasdeterminacionesposteriores.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—110
▼B
4.2.Preparacióndelacomlumnacambiadoradeiones.
Colocarenlacolumnadevidriode11×300mmporencimadela
llave un tapón de lana de vidrio, añadir a la columna el cambiador
de iones preparado como se ha descrito en 4.1. hasta una altura de
10 cm. Estando la llave abierta, dejar pasar la solución de ácido
acéticoal30%hastaaproximadamente2a3mmporencimadela
superficiedelcambiador.Lavarelcambiador con50mldelasolu-
cióndeácidoacéticoal0,5%.
4.3.Alslamientodelácidodl-málico.
Añadir sobre el cambiador preparado como se ha descrito en 4.2
10 ml de vino o de mosto. Dejar pasar el vino gota a gota (flujo
medio, una gota por segundo) hasta aproximadamente 2 a 3 mm
por encima de la superficie del cambiador de iones. Llevar la
columna,primeramenteconunos50mldesolucióndeácidoacético
al 0,5 % y después con 50 ml aproximadamente de agua destilada;
dejarpasarestoslíquidosconlamismavelocidadqueelvino.
Eluirlosácidosfijadossobreelcambiadordeiones,conlasolución
de sulfato sódico al 10 % con la misma velocidad que las opera-
cionesprecedentes(1gota/segundo),recogereleluidoenunmatraz
aforadode100mlhastaelenrase.
Se puede regenerar el cambiador de iones como se ha descrito en
4.1.
4.4.Determinacióndelácidomálico.
Tomar dos tubos de boca ancha de 30 ml de capacidad con tapón
esmerilado «A» y «B». Introducir en cada tubo 1,0 ml de eluido y
1,0 ml de solución de ácido cromotrópico al 5 %. Añadir en el
tubo «A» 10,0 ml de ácido sulfúrico al 96 % (medida). Tapar y
agitarparaobtenerunahomogeneidad perfecta sinmojarelesmeri-
lado.Sumergirlostubosdurante10minutosexactamenteenunbaño
de agua puesto previamente a ebullición. Enfriar los tubos a 20 ºC
en laoscuridad. Exactamente 90minutos después del comienzo del
enfriamiento, medir la absorbancia del tubo «B» con relación al
testigo (tubo «A») a la longitud de onda de 420 nmen cubetas de
10mmdetrayectoóptico.
4.5.Obtencióndelacurvapatrón.
Tomar5,10,15y20mldelasolucióndeácidoDL-málicode0,5g/
l,introducirlosenmatracesaforadosde50mldecapacidad,enrasar
conlasolucióndesulfatosódicoal10%.
Las soluciones así obtenidas corresponden a eluidos obtenidos a
partir de vinos que contienen 0,5; 1,0; 1,5 y 2,0 g/l de ácido DL-
málico.
Continuarcomoseindicaen4.4.Los valores de las absorbancias obtenidos con estas soluciones
patrón se representan en función de los contenidos en ácido málico
correspondientes,obteniéndosunarectaquepasaporelorigen.
Dado que la intensidad de la coloración depende mucho de la
concentración de ácido sulfúrico, es necesario comprobar la curva
de calibrado al menos en un punto en cada serie de medidas para
poner de manifiesto un cambio eventual en la concentración del
ácidosulfúrico.
5. EXPRESIÓNDELOSRESULTADOS
Llevar la absorbancia media para el eluido, sobre la curva de cali-
brado,paraobtenerelcontenidoenácidoDL-málicoengramospor
litro.Estecontenidoseexpresaconundecimal.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—111
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Repetibilidad:
Contenido<2g/l:r = 0,1g/l,
Contenido>2g/l:r = 0,2g/l.
Reproductibilidad:
R=0,3g/l.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—112
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22.ÁCIDOSÓRBICO
1. FUNDAMENTODELOSMÉTODOS
1.1.Método de determinación por espectrofotometría de absorción
enelultravioleta
El ácido sórbico (ácido hexadieno -2,4 oico trans, trans) separado
por destilación con arrastre de vapor de agua se determina en el
destilado mediante espectrofotometría de absorción en el ultravio-
leta. Las sustancias que interfieren enla medida de la absorciónen
elultravioleta seeliminanporevaporaciónasequedaddeldestilado
de la muestra, ligeramente alcalinizado por una solución de hidró-
xido de calcio. Los contenidos inferiores a 20 mg/l deben
confirmarseporcromatografíaencapafina(sensibilidad:1mg/l).
1.2.Métododedeterminaciónporcromatografíadegases
El ácido sórbico extraído en éter etílico se determina por cromato-
grafíaenfasegaseosaenpresenciadeunpatróninterno.
1.3.Métododedeteccióndetrazasporcromatografíadecapafina
Elácidosórbicoextraídoenéteretílicoseseparaporcromatografía
encapafinayseevalúasuconcentraciónenformasemicuantitativa.
2. MÉTODO DE DETERMINACIÓN POR ESPECTROFOTOME-
TRÍADEABSORCIÓNENELULTRAVIOLETA
2.1.Reactivos
2.1.1. ÁcidotartáricoC4H6O6cristalizado.
2.1.2. SolucióndehidróxidodecalcioCA(OH)2,aproximadamente0,02M.
2.1.3. Solucióndereferenciadeácidosórbicode20mgporlitro.
Disolver20mgdeácido sórbicoC6H8O2en2mlaproximadamente
de solución 0,1 M de hidróxido de sodio. Verter en un matraz
aforado de 1000 ml, enrasar con agua. También pueden disolverse
26,8 mg de sorbato de potasio C6H7KO2en agua y completar con
aguahasta1000ml.
2.2.Material
2.2.1. Aparatodedestilaciónconarrastredevapordeagua(véase«Acidez
volátil»).
2.2.2. Bañodeaguaa100ºC.2.2.3. Espectrofotómetro que permita efectuar medidas a una longitud de
ondade256nmconcubetasdecuarzode1cmdetrayectoóptico.
2.3.Procedimiento
2.3.1.Destilación
Introducirenelborboteadordelaparatodearrastredevapordeagua
10 ml de vino, añadir 1 a 2 g de ácido tartárico (2.1.1). Recoger
250mldedestilado.
2.3.2.Curva patrón
Preparar mediante diluciones con agua a partir de la solución de
referencia (2.1.3) cuatro soluciones de referencia diluidas que
contengan respectivamente 0,5; 1; 2,5 y 5 mg deácido sórbico por
litro; medir con el espectrofotómetro susrespectivas absorbancias a
256 nmrespecto al agua destilada. Trazar la curva de absorbancias
en función de la concentración de las soluciones. La relación es
lineal.
2.3.3.Determinación
Introducirenunacápsulade55mmdediámetro5mldedestilado,
añadir1mldesolucióndehidróxidodecalcio(2.1.2)yunagotade
solucióndesulfatodecobre(2.1.3).Evaporarhastasequedadenun
bañodeaguahirviendo.
Recogerelresiduoconalgunosmililitrosdeaguadestilada,arrastrar
cuantitativamente en un matraz aforado de 20 ml y enrasar con el1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—113
▼B
aguadelavado.Medirlaabsorbanciaa256nmconelespectrofotó-
metroencomparaciónconunasolucióntestigoobtenidacon1mlde
solucióndehidróxidocálcico(2.1.2)ydilucióna20mlconagua.
Llevarelvalordelaabsorbanciamedidaalarectapatrónydeducir
laconcentraciónCdelasoluciónenácidosórbico.
Nota:
En la práctica corriente, esta evaporación a sequedad puede no ser
necesaria.Medirdirectamente laabsorbanciaeneldestiladodiluido
a1/4frenteaaguadestilada.
2.4.Expresióndelosresultados
2.4.1.Método de cálculo
Laconcentraciónenácidosórbicodelvinoexpresadaenmiligramos
porlitroesiguala:
100×C
C = concentración en ácido sórbico de la solución analizada
mediante espectrofotometría, expresada en miligramos por
litro.
3. MÉTODO DE DETERMINACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN
FASEGASEOSA
3.1.Reactivos
3.1.1. Éteretílico(C2H5)2Odestiladoenelmomentodesuutilización.
3.1.2. Solucióndelpatróninterno:solucióndeácidoundecanoicoC11H22O2enetanolal95%volde1gporlitro.
3.1.3. SoluciónacuosadeácidosulfúricoH2SO4(ρ20=1,84g/ml)diluido
1/3(v/v).
3.2.Material
3.2.1. Cromatógrafo de gases equipado con un detector de ionización de
llama.Columnadeaceroinoxidable(4m×1/8depulgada)previa-
mente tratada con dimetildicloro-silano y rellena con fase
estacionaria, compuesta por una mezcla de succinato de dietilen-
glicol (5 %) y ácido fosfórico (1 %) (DEGS-H3PO4) o por una
mezcla de adipato de dietilenglicol (7 %) y ácido fosfórico (1 %)
(DEGA—H3PO4).SoportesólidodeGaschromQ80a100mallas.
Paraeltratamientocondimetilidicloro-silano(DMDCS),hacerpasar
por la columna una solución al 2 — 3 g de DMDCS en tolueno,
lavar inmediatamente la columna con metanol y secar haciendo
pasar unacorriente de nitrógeno, despuésde exano ydenuevouna
corrientedenitrógeno.Rellenarlaacontinuación.
Condicionesdetrabajo:Temperaturadelhorno:175ºC.Temperaturadelinyectorydeldetector:230ºC.
Gasportador:nitrógeno(flujo /asymptequal20ml/min.).
3.2.2. Microjeringade10microlitrosdecapacidadgraduadaen0,1micro-
litros.
Observación:
Otrostiposdecolumnaspuedenigualmentepermitirunabuenasepa-
ración,porejemplolacolumnacapilar(FFAP).
Elmodooperatoriodescritoarribasedaatítulodeejemplo.
3.3.Modooperatorio
3.3.1.Preparación de la muestra para su análisis
Introducir20mldevinoenuntubodevidrioconunacapacidadde
unos40mlyprovistodeuntapónesmerilado.Añadir2mldesolu-
ción del patrón interno (3.1.2) y 1 ml de solución diluida de ácido
sulfúrico(3.1.3).1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—114
▼B
Tras agitar el tubo invirtiéndolo varias veces, añadir al contenido
10 ml de éter etílico (3.1.1). Extraer el ácido sórbico en la fase
orgánicaagitandoeltubodurante5mintos.Dejardecantar.
3.3.2.Preparación de la solución de referencia
Seleccionar un vino cuyo cromatograma del extracto etéreo no
presente ningún pico en el tiempo de retención correspondiente al
ácidosórbico;añadiraestevinoácidosórbicohastalaconcentración
de 100 mg por litro. Tratar 20 ml de la muestra según el procedi-
mientodescritoenelapartado3.3.1.
3.3.3.Cromatografía
Inyectar sucesivamente en el cromatógrafo 2 µl de la fase etérea
obtenidaenelapartado3.3.2y2µldelafaseetéreaobtenidaenel
apartado3.3.1.
Registrarloscromatogramas respectivos: comprobarla identidad de
los tiempos de retención respectivos del ácido sórbico y del patrón
interno. Medir la altura (o el área) de cada uno de los picos regis-
trados.
3.4.Expresióndelosresultados
3.4.1.Método de cálculo
Laconcentración deácido sórbicodelvinoanalizado, expresada en
miligramosporlitro,esiguala:
CS100/C1h
H/C1I
i
H = alturadelpicodelácidosórbicoenlasolucióndereferencia,
h = alturadelpicodelácidosórbicoenlamuestraparaanálisis,
I = alturadelpicodelpatróninternoenlasolucióndereferencia,i= alturadelpicodelpatróninternoenlamuestraparaanálisis.
Nota:
la concentración de ácido sórbico puede determinarse del mismo
modo a partir de las medidas de la superficie de los picos respec-
tivos.
4. MÉTODO DE DETECCIÓN DE TRAZAS DE ÁCIDO SÓRBICO
MEDIANTECROMATOGRAFÍADECAPAFINA
4.1.Reactivos
4.1.1. Éteretílico,(C
2H5)2O
4.1.2. SoluciónacuosadeácidosulfúricoH2SO4(ρ20=1,84g/ml)diluido
1/3(v/v).
4.1.3. Solución de referencia de ácido sórbico en una mezcla hidroetanó-
licaa10%deetanol(vol)aproximadamentecon20mgporlitro.
4.1.4. Fasemóvil:hexano—pentano—ácidoacético(20:20:3)
(C6H14—C5H12—CH3COOH, ρ20=1,05g/ml).
4.2.Material
4.2.1. Placas para cromatografía de capa fina listas para su uso de
20 ×20 cm recubiertas de gel de poliamida (espesor: 0,15 mm), al
queseañadiráunindicadordefluorescencia.
4.2.2. Cubetaparacromatografíadecapafina.
4.2.3. Micropipeta o microjeringa que permitan obtener volúmenes de 5
microlitrosconunaaproximaciónde±0,1microlitros.
4.2.4. Lámparadeultravioleta(254nm).
4.3.Procedimiento
4.3.1.Preparación de la muestra para análisis
Introducir10mldevinoenuntubodevidrioconunacapacidadde
unos25mlyprovistodeuntapónesmerilado.Añadir1mldesolu-1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—115
▼B
cióndeácidosulfúricodiluido(4.1.2)y5mldeéteretílico(4.1.1).
Agitareltuboinvirtiéndolovariasveces.Dejardecantar.
4.3.2.Preparación de las soluciones diluidas de referencia
Apartir de la solución 4.1.3,prepara mediante dilución cinco solu-
cionesdiluidasdereferenciacon2,4,6,8y10mgdeácidosórbicoporlitro,respectivamente.
4.3.3.Cromatografía
Utilizandounamicrojeringaounamicropipeta,depositara2cmdel
bordeinferiordelaplaca5µldefaseetéreaobtenidaen4.3.1y5µl
de cada una de las soluciones diluidas de referencia (4.3.2); la
distanciaentrelospuntosseráde2cm.
Introducirlafasemóvil(4.1.4)enlacubetaparacromatografíaauna
altura de aproximadamente 0,5 cm y dejar que la atmósfera de la
cubeta se sature de losvapores de losdisolventes. Colocar la placa
enlacubeta.Dejardesarrollarelcromatogramaentre12y15cm(la
duracióndeldesarrolloesdeunos30min.).Secarlaplacabajouna
corriente de aire frío. Examinar el cromatograma bajo una lámpara
ultravioletaa254nm.
Las manchas de ácido sórbico, de color violeta oscuro, destacarán
sobreelfondoamarillofluorescentedelaplaca.
4.4.Expresióndelosresultados
Lacomparaciónentrelaintensidaddelamanchadelamuestrapara
análisis y las manchas de las soluciones de referencia permite
evaluar de manera semicuantitativa la concentración de ácido
sórbicoentre2y10mgporlitro.Podrádeterminarseunaconcentra-
cióniguala1mgporlitroconundepósitode10µldesoluciónde
lamuestraparaanálisis.
Podrán determinarse concentraciones superiores a 10 mg por litro
con un volumen de depósito de la solución para análisis inferior a
5µl(medidoconunamicrojeringa).1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—116
▼B
23.ÁCIDOL-ASCÓRBICO
1. FUNDAMENTODELOSMÉTODOS
LosmétodosqueseproponenpermitendeterminarelácidoL-ascór-
bicoyelácidodehidroascórbicopresentesenvinosomostos.
1.1.Métododereferencia(fluorimétrico)
ElácidoL-ascórbicoseoxidaporlaaccióndelcarbónactivoaácido
dehidroascórbico. Este compuesto forma un compuesto fluorescente
por reacción con la ortofenilendiamina (OPDA). La realización de
una prueba testigo en presencia de ácido bórico permite determinar
la fluorescencia parásita (mediante la formación de un complejo de
ácidobórico—ácidodehidroascórbico)ydeducirladeladetermina-
ciónfluorimétrica.
1.2.Métodousual(colorimétrico)
El ácido L-ascórbico se oxida con el yodo en ácido dehidroascór-
bico. Este compuesto se precipita con la 2,4 dinitrofenilhidrazina
comobis(2,4 — dinitrofenilhidrazona). Despuésde una separación
por cromatografía en capa fina y solubilización en medio acético,
este compuesto, de color rojo, se determina por espectrofotometría
a500nm.
2. MÉTODODEREFERENCIA(MÉTODOFLUORIMÉTRICO)
2.1.Reactivos
2.1.1. Solución de dihidrocloruro de ortofenilendiamina (C6H10Cl2N2)a
0,02gpor100ml,preparadainmediatamenteantesdesuempleo.
2.1.2. Solución de acetato de sodio trihidratado (CH3COONa. 3H2O) de
500g/l.
2.1.3. Soluciónmixtadeácidobóricoyacetatodesodio.
Disolver 3 g de ácido bórico H3BO3en 100 ml de solución de
acetato de sodio (2.1.2). Dicha solución debe prepararse inmediata-
menteantesdesuuso.
2.1.4. SolucióndeácidoacéticocristalizableCH3COOH( ρ20=1,05g/ml)
diluidaal56%(v/v).ajustadaaunpH1,2,aproximadamente.
2.1.5. SolucióndereferenciadeácidoL-ascórbicode1g/l.
Disolver en el momento de su uso 50 mg de ácido L-ascórbico
C6H8O6,previamentedeshidratadoenundesecadorfueradelalcance
delaluz,en50mldesolucióndeácidoacético(2.1.4).
2.1.6. Carbónactivomuypuroparaanálisis(1)
Introducir en un matraz erlenmeyer cónico de 2 litros de capacidad
100 g de carbón activo, añadir 500 ml de una solución de ácido
clorhídrico (HCl) ( ρ20= 1,19 g/ml) al 10 p. 100 (v/v). Llevar a
ebullición, filtrar sobre un filtro de vidrio fritado de porosidad 3.Recogerelcarbónasítratadoenunerlenmeyerde2litrosdecapa-
cidad,añadir1litrodeagua,agitaryfiltrarsobreunfiltrodevidrio
fritadodeporosidad3.Repetirdosvecesestaoperacióneintroducir
elresiduoenunaestufareguladaa115±5ºCdurante12horas(una
noche,porejemplo).
2.2.Materialyaparatos
2.2.1. Fluorímetro. Emplear un espectrofluorímetro equipado con una
lámpara de espectro continuo utilizando la potencia mínima de la
misma. Las longitudes de onda de excitación y emisión óptimas se
determinarán previamente y dependen del aparato utilizado. Se
puededecir,concarácterindicativo,quelalongituddeondadeexci-
tación se sitúa aproximadamente en 350 nm y la de emisión en
430nm.Cubascon1cmdetrayectoóptico.
2.2.2. Filtrodevidrioporoson
o3.
2.2.3. Tubosdeensayo(diámetro /asymptequal10mm).1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—117
(1) Unadelasdenominacionescomercialesdeesteproductoes«norite».
▼B
2.2.4. Agitadorparatubosdeensayo.
2.3.Procedimiento
2.3.1.Preparación de la muestra de vino o mosto
Ponerenunmatrazaforadode100mlunvolumendevinoomosto
yenrasarconlasolucióndeácidoacéticoal56%(2.1.4)conelfin
de obtener una solución cuya concentración de ácido L-ascórbico,
estécomprendida entre0y60mg/litro.Homogeneizar elcontenido
delmatrazaforadoporagitación.Añadir2gdecarbónactivo(2.1.6)
ydejar en contacto durante 15 minutos agitando de vez en cuando.
Filtrarsobrepapeldefiltroordinario,eliminando losprimerosmili-
litrosdefiltrado.
Introducir en dos matraces aforados de 100 ml, 5 ml de filtrado y,
respectivamente, 5 ml de solución mixta de ácido bórico y de
acetato de sodio (2.1.2) y 5 ml de solución de acetato de sodio
(2.1.2). Dejar en contacdo durante 15 min. agitando de vez en
cuandoyenrasarconaguadestilada.
Extraer2mldelcontenidodecadaunodelosmatraces,añadir5ml
desolucióndeortofenilendiamina(2.1.1)yagitar;dejarenreposoen
la oscuridad durante 30 minutos para que la reacción tenga lugar y
medirconelespectrofluorímetro.
2.3.2.Curva patrón
Entresmatraces aforadosde100mlintroducir, respectivamente, 2,
4y6mld e solución de referencia de ácido L-ascórbico (2.1.5),
completar hasta 100 ml con la solución de ácido acético (2.1.4) y
homogeneizarporagitación.Lassolucionesdereferenciapreparadas
contendrán,respectivamente,2, 4y6mg/100ml.
Añadir 2 g de carbón activo (2.1.6) en cada uno de los matraces y
dejar en contacto durante 15 minutos, agitando de vez en cuando.
Filtrar sobre papel filtro ordinario, eliminando los primeros milili-
tros. Introducir, respectivamente, 5 ml de cada uno de los filtrados
obtenidos en tres matraces aforados de 100 ml (primera serie) yrepetirlaoperaciónenunasegundaseriedetresmatracesaforados.
Añadirencada unodelosmatraces delaprimera serie(correspon-
dientealensayotestigo)5mldesoluciónmixtadeácidobóricoyde
acetatodesodio(2.1.3)yencadaunodelosmatracesdelasegunda
serie5mldesolucióndeacetatodesodio(2.1.2).
Dejarencontactodurante15minutos,agitandodevezencuandoy
completar hasta100mlconagua destilada. Extraer 2mldel conte-
nido de cada uno de los matraces, añadir 5 ml de solución de
ortofenilendiamina (2.1.1), agitar y dejar en reposo en la oscuridad
durante30minutosparaquelareaccióntengalugarymediraconti-
nuaciónconelespectrofluorímetro.
2.3.3.Determinación fluorimétrica
Regularparacadasolucióndelacurvapatrónyparalasolucióndel
problema el cero de la escala de medidas con la prueba testigo
correspondiente. Medir, a continuación, la intensidad de la fluores-
cenciadecadasoluciónpatrónydelasolucióndelproblema.
Representar la curva patrón; ésta deberá ser lineal y pasar por el
origen. Trasladar a esta recta el valor del problema y deducir el
contenido C de ácido L-ascórbico + ácido dehidroascórbico de la
soluciónanalizada.
2.3.4.Expresión de los resultados
Laconcentración deácido L-ascórbico +ácido dehidroascórbico en
elvinoomosto,expresadaenmiligramosporlitro,serálasiguiente:
C.F
F = factordedilución.
3. MÉTODOUSUAL(COLORIMÉTRICO)3.1.Reactivos
3.1.1. Solucióndeácidometafosfóricoal30%(m/v).
Tomar30gdeácidometafosfórico(HPO
3)npreviamentetrituradoen
un mortero. Lavar rápidamente por inmersión y agitación en agua
destilada. Disolver el ácido lavado en agua destilada agitando esta1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—118
▼B
solución en un matraz aforado de 100 ml y enrasar. La solución
obtenidacontendráaproximadamenteun30%(m/v)deácidometa-
fosfórico.
3.1.2. Solucióndeácidometasfosfóricoal3%(m/v)preparadainmediata-
menteantesdesuempleopordiluciónal1/10conaguadestiladade
lasolución3.1.1.
3.1.3. Solucióndeácido metafosfórico al 1%(m/v) preparada inmediata-
menteantesdesuempleopordiluciónal1/30conaguadestiladade
lasolución3.1.1.
3.1.4. Suspensióndepoliamida
Ponerensuspensión10gdepolvodepoliamidaparacromatografía
con60mldeaguadestiladaydejarencontactodurante2horas.La
cantidadpreparadaserásuficientepara4determinaciones.
3.1.5. Tiourea(H2NCSNH2)
3.1.6. Solucióndeyodo(I2)0,05M.
3.1.7. Soluciónde2,4-dinitrofenilhidrazinaal6%(m/v).Ponerensuspen-
sión 6 g de 2,4-dinitrofenilhidrazina (C6H6N4O4) en 50 ml de ácido
acético glacial ( ρ20= 1,05 g/ml); añadir 50 ml de ácido sulfúrico
(ρ20=1,84g/ml);la2,4-dinitrofenilhidrazina sedisuelveporagita-
ción.
3.1.8. Acetato de etilo (C4H8O2) que contenga un 2 % (v/v) de ácido
acéticoglacial(3.1.12).
3.1.9. Cloroformo,CHCl3.
3.1.10. Soluciónacuosadealmidónal0,5%(m/v).
3.1.11. Fasemóvil:
acetatodeetilo…........................................ 50vol.
cloroformo…............................................. 60vol.
ácidoacéticoglacial…................................... 5vol.
Dejarenreposo12horasantesdesuuso.
3.1.12. Ácidoacéticoglacial,CH3COOH( ρ20=1,05g/ml).
3.1.13. Solución de ácido L-ascórbico al 0,1 g por 100 ml en solución de
ácidometafosfóricoal1%(3.1.3).
3.2.Materialyaparatos
3.2.1. Centrifuga y tubos de centrifugación de 50 ml de capacidad con
taponesesmerilados.
3.2.2. Bañodeaguarefrigeradaaunatemperaturaentre5y10ºC.3.2.3. Bañodeaguarefrigeradaaunatemperaturade20ºC.
3.2.4. Placas para cromatografía en capa fina dispuestas para el uso de
20 × 20 cm, recubiertas de gel de sílice G (espesor de 0,25 o
0,3mm).
3.2.5. Cubetaparacromatografía.
3.2.6. Micropipetaquepermitaobtenervolúmenesde0,2ml.
3.2.7. Espectrofotómetro que permita efectuar medidas de absorbancia a
500nm,equipadoconcubetasde1cmdeespesor.
3.3.Procedimiento
3.3.1.Oxidación del ácido L-ascórbico en ácido dehidroascórbico
Introducir 50 ml de vino en un matraz aforado de 100 ml, añadir
15 ml desuspensiónde poliamida (3.1.4)y enrasar con la solución
deácidometafosfóricoal3%(3.1.2).Dejarencontactoduranteuna
horaagitandoconfrecuencia.Filtrarporfiltrodepliegues.Introducir
20 ml de filtrado en un tubo de centrifuga con tapón esmerilado,
añadir1mldesolución0,05Mdeyodo(3.1.6).Homogeneizar por
agitación y,tras1minuto,reducirelexcesodeyodocon25mgde
tiourea,aproximadamente.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—119
▼B
3.3.2.Formación y extracción de la bis(2.4-dinitrofenilhidrazona) del
ácido dicetogulónico)
Colocar el tubo en un baño da agua refrigerada entre 5 y 10 ºC,
añadir4mldesoluciónde2,4-dinitrofenilhidrazina (3.1.7)yhomo-
geneizar el contenido del tubo, evitando que se moje el tapón de
vidrio. Mantener el tubo bien cerrado en un baño de agua a 20 ºC
durante16horasaproximadamente(unanoche,porejemplo).
Añadiralcontenido del tubode centrifugación 15mlde acetato de
etilo (3.1.8), taparlo, agitar durante 30 segundos y centrifugar
durante 5 minutos aplicando una fuerza centrifuga de 350 a 400 g.
Tomarconlapipeta10mldelacetatodeetilodeextraccióneintro-
ducirlosenunerlenmeyercontapónesmerilado.Añadiralcontenido
del tubo de centrifugación 5 ml de acetato de etilo (3.1.8). Agitar
durante 30 segundos y centrifugar durante 5 minutos a la misma
velocidad. Tomar 5 ml del acetato de etilo de extracción y añadir
al erlenmeyer que contenga los 10 ml de la primera extracción y
agitar.
3.3.3.Aislamiento de la bis(2.4-dinitrofenilhidrazona) por cromatografía:
deberá efectuarse en las 2 horas siguientes a la extracción (3.3.2)
Dejando un margen de 2 cm en las partes inferior y lateral de la
placa, depositar sobre toda la línea de partida 0,2 ml del extracto
de acetato de etilo. Introducir la fase móvil (3.1.11) en la cubeta
hasta una altura de 1 cmy dejar que la atm ósfera se sature de los
vapores del disolvente. Introducir la placa, dejar migrar el solvente
hastaelbordesuperiordelamismaysecarladuranteunahorabajo
unacampanaventilada.Rasparconunaespátula,perpendicularmente
aladireccióndemigración,lazonadecoloraciónrojacaracterística
de la bis (2,4-dinitrofenilhydrazona). Recoger el sustrato sobre una
hoja de papel satinado y trasvasarlo cuantitativamente a un erlen-
meyer con tapón esmerilado, añadiendo 4 ml de ácido acético
(3.1.12). Dejar en contacto durante 30 minutos agitando con
frecuencia.Filtrarconpapelfiltrodepileguesdirectamente sobrela
cubetadelespectrofotómetro(3.2.7).Elfiltradodeberáestarperfec-
tamente limpio. Regular el cero de la escala de absorbancias a
500 nmcon el ácido acético (3.1.12) y m edir la absorbancia de la
solución.
3.3.4.Curva patrón
Introduciren3matracesaforadosde100ml5,10y15ml,respecti-
vamente, de solución de ácido L-ascórbico (3.1.13), enrasar con la
solución de ácido metafosfórico al 1 % (3.1.3). Las soluciones así
obtenidas contienen 50,100y 150mg porlitro de ácido ascórbico,
respectivamente.
Tratar50mldecadaunadeestassolucionessegúnelprocedimiento
descritoenlosapartados3.3.1,3.3.2y3.3.3.Trazarlacurvapatrón,
quedeberáserlinealypasarporelorigen.
3.3.5.Expresión de los resultados
La concentración del vino en ácido L-ascórbico + ácido dehidroas-
córbicoseexpresaráenmiligramosporlitro.
3.3.5.1. Cálculo
Llevar a la curva patrón el valor de la absorbancia medida en el
apartado 3.3.3 y leer la concentración de ácido ascórbico + ácido
dehidroascórbicodelasoluciónanalizada.
Nota:Si la concentración de ácido L-ascórbico + ácido dehidroascórbico
essuperiora150mg/litro,reducirelvolumentomadodemuestraa
25,20 o 10 ml de vino y multiplicar el resultado obtenido por el
factordediluciónF.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—120
▼B
24.pH
1. FUNDAMENTO
Medidadeladiferenciadepotencialentredoselectrodossumergidos
en el líquido que se estudia. Uno de los dos electrodos tiene un
potencial que es una función definida del pH del líquido, el otro
tiene unpotencial fijoyconocidoyconstituyeelelectrododerefe-
rencia.
2. MATERIALYAPARATOS
2.1. pHmetrograduadoenunidadesdepHquepermitaefectuarmedidas
conunaaproximaciónde0,05comomínimo.
2.2. Electrodos:2.2.1. Electrododevidrio,quedeberáconservarseenaguadestilada.2.2.2. Electrododereferenciadecalomelanosdecloruropotásicosaturado,
queseconservaráenunasoluciónsaturadadecloruropotásico.
2.2.3. Oelectrodocombinado,quedeberáconservarseenaguadestilada.
3. REACTIVOS
3.1. Solucionestampón:
3.1.1. Soluciónsaturadadetartratoácidodepotasio,almenosde5,7g/lde
tartrato ácido de potasio (C
4H5KO6) a 20 ºC. Esta solución puede
conservarse hasta 2 meses en presencia de 0,1 g de timol por cada
200ml).
pH/C144/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C145/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C1463,57a20ºC
3,56a25ºC
3,55a30ºC
3.1.2. Solución0,05Mdeftalatoácidodepotasio.Solucióncon10,211g/l
deftalatoácidodepotasio(C
8H5KO4)a20ºC(duraciónmáximade
lasolución:2meses).
pH/C144/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C145/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C1463,999a15ºC
4,003a20ºC
4,008a25ºC4,015a30ºC
3.1.3. Soluciónquecontenga:
FosfatomonopotásicoKH
2PO4…........................ 3,402 g
FosfatobipotásicoK2HPO4…........................... 4,354 g
Aguacsp…............................................. 1 l
(Duraciónmáximadelasolución:2meses)
pH/C144/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C145/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C1466,90a15ºC
6,88a20ºC
6,86a25ºC
6,85a30ºC
Nota:
Tambiénpuedenutilizarsesolucionestamponesdereferenciacomer-
ciales.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—121
▼B
4. PROCEDIMIENTO
4.1.Preparacióndelamuestraparaanálisis
4.1.1.En el caso del mosto y el vino
Operardirectamentesobrelosmismos.
4.1.2.En el caso del mosto concentrado rectificado
Diluirloconaguaafindeobtenerunaconcentraciónde25±0,5%
(m/m)enazúcarestotales(25ºBrix).
Si P es el contenido en % (m/m) en azúcares totales del mosto
concentradorectificado,pesarunamasaiguala
2500
P
ycompletar con agua hasta 100g.La conductividad del agua utili-
zadadeberáserinferiora2microsiemensporcentímetro.
4.2.Puestaacerodelaparato
Seefectuaráantesdecadamedida,siguiendolasinstruccionesdadas
paraelaparatoutilizado.
4.3.CalibradodelpHmetro
El calibrado se efectúa a 20 ºC siguiendo las indicaciones del
aparato utilizado, con las soluciones de pH 6,88 y 3,57 a 20 ºC.
Utilizar la solución tampón de pH 4,00 a 20 ºC para controlar el
calibradodelaescala.
4.4.Medida
Introducir el electrodo en la muestra analizada, cuya temperatura
deberáestarcomprendidaentre20y25ºCytanpróximacomosea
posiblea20ºC.LeerdirectamenteelvalordelpH.
Efectúensealmenos2determinacionesdecadamuestra.
Tomar como resultado la media aritmética de ambas determina-
ciones.
5. EXPRESIÓNDELOSRESULTADOS
ElpHdelmosto,delvinoodelasoluciónal25%(m/m)(25ºBrix)
delmostoconcentradorectificadoseexpresaráncon2decimales.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—122
▼B
25.DIÓXIDODEAZUFRE
1. DEFINICIONES
Se denomina dióxido de azufre al dióxido de azufre presente en el
mostooelvinoenlasformassiguientes:H2SO3,HSO3-;cuyoequi-
librioesfuncióndelpHydelatemperatura:
H2SO3
H++HSO3-
H2SO3representaeldióxidodeazufremolecular.
Se denomina dióxido de azufre total al conjunto de las distintas
formas de dióxido de azufre presentes en el vino en estado libre o
combinadoconsuscomponentes.
2. DIÓXIDODEAZUFRELIBREYTOTAL2.1.Fundamentodelosmétodos
2.1.1.Método de referencia
2.1.1.1. En el caso del vino y el mosto:
Arrastredel dióxido deazufre conuna corriente de aire ode nitró-
geno; fijación y oxidación por borboteo en una solución diluida y
neutra de peróxido de hidrógeno. Valoración del ácido sulfúrico
formadoconunasoluciónvaloradadehidróxidosódico.
El arrastre en frío (10 ºC) garantiza la extracción únicamente del
dióxidodeazufrelibre.
Encaliente(100ºCaproximadamente)seextraeeldióxidodeazufre
total.
2.1.1.2. En el caso del mosto concentrado rectificado.
Seextraeeldióxidodeazufretotalporarrastreencaliente (aproxi-
madamente 100 ºC) del mosto concentrado rectificado previamente
diluido.
2.1.2.Método rápido de ensayo (vinosymostos)
Determinación del dióxido de azufre libre por valoración yodomé-
tricadirecta.
Determinación del dióxido de azufre combinado por valoración
yodométrica tras hidrólisis alcalina. La suma del dióxido de azufre
libreycombinadopermiteobtenereldióxidodeazufretotal.
2.2.Métododereferencia
2.2.1.Material y aparatos
2.2.1.1. El material utilizado debe ajustarse al esquema que figura a conti-
nuación,principalmenteenloqueserefierealrefrigerante.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—123
▼B
Figura 1
Las dimensiones están indicadas en milímetros. Los diámetros
internosdelos4tubosconcéntricosqueconstituyenelrefrige-
ranteson:45,34,27y10mm.
EltubodeconduccióndelosgasesalborboteadorBterminaenuna
pequeñaesferade1cmdediámetro quelleva, ensumayorcírculo
horizontal, 20 agujeros de 0,2 mm de diámetro. También puede
terminar en una placa de vidrio fritado que garantice la formación
de gran número de pequeñas burbujas, realizando así un buen
contactoentrelasfasesgaseosaylíquida.
Elflujodegasquedeberecorrerelaparatodebeserde40l/hapro-
ximadamente.Elfrascosituadoaladerechadelaparatodedestinaa
limitarde20a30cmdeagualadepresiónproducidaporlatrompa
deagua.Parapoderregulardichadepresióndeformaqueelcaudal
seaelcorrecto,convienecolocarunmedidordeflujodetubosemi-
capilarentreelborboteadoryelfrasco.
2.2.1.2. Microbureta
2.2.2.Reactivos
2.2.2.1. Ácidofosfóricoal85%H3PO4(ρ20=1,71g/ml).
2.2.2.2. Solucióndeperóxidodehidrógenode9,1g/lH2O2(3volúmenes).
2.2.2.3. Reactivoindicador:
rojodemetilo…........................................ 100mg,
azuldemetileno…...................................... 50mg,
Alcoholde50%vol… .................................. 100ml.
2.2.2.4. Solucióndehidróxidodesodio(NaOH),0,01M.
2.2.3.Procedimiento
2.2.3.1. Determinación del dióxido de azufre libre
El vino debe mantenerse a 20 ºC en un frasco lleno y cerrado
durante2díasantesdeladeterminación.
— En el borboteador B, colocar de 2 a 3 ml de solución de peró-
xido de hidrógeno (2.2.2.2) y 2 gotas de reactivo indicador;
neutralizarlasolucióndeperóxidodehidrógenoconlasolución
0,01 M de hidróxido de sodio (2.2.2.4). Acoplar el borboteador
alaparato(2.2.1.1).
— En el matraz A de 250 ml del aparato de arrastre, introducir
50 ml de muestra y 15 ml de ácido fosfórico (2.2.2.1). Colocar
elmatrazensulugar.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—124
▼B
A continuación, hacer borbotear el aire (o el nitrógeno) durante
15minutos.Eldióxidodeazufrelibrearrastradoseoxidaaácido
sulfúrico. Retirar el borboteador del aparato y valorar el ácido
formadoconlasolucióndehidróxidosódico0,01M(2.2.2.4).
Seanelnúmerodemililitrosutilizados.
2.2.3.2. Expresión de los resultados
Dióxidodeazufrelibreenmg/lsindecimales
2.2.3.2.1. Cálculo
Dióxidodeazufrelibreenmiligramosporlitro:6,4n.
2.2.3.3. Determinación del dióxido de azufre total.2.2.3.3.1. En el caso del mosto concentrado rectificado, utilizar la solución
obtenida diluyendo la muestra para analizar al 40 %(m/v) tal y
como se indica en el capítulo «Acidez total», en el apartado 5.1.2.
En el matraz A de 250 ml del aparato de arrastre introducir 50 ml
de esta solución y 5 ml de ácido fosfórico (2.2.2.1). Acoplar el
matrazalaparato2.2.1.1.
2.2.3.3.2. Vinosymostos
Muestras en las que se suponga que el contenido en SO
2total sea
≤50mg/l.
EnelmatrazAde250mldelaparatodearrastreintroducir50mlde
muestra y 15 ml de ácido fosfórico (2.2.2.1). Acoplar el matraz alaparato(2.2.1.1).
Sin embargo, hasta el ►
M331 de agosto de 1996 ◄como fecha
límite,paraanalizarelcontenidoendióxidodeazufredeloszumos
de uva se emplea 5 ml de ácido fósfórico (2.2.2.1) diluido a 25 %
(m/V).
2.2.3.3.3. Muestras en las que se suponga que el contenido en SO2total sea
≥50mg/l.
EnelmatrazAde100mldelaparatodearrastreintroducir20mlde
muestra y 5 ml de ácido fosfórico (2.2.2.1). Acoplar el matraz al
aparato(2.2.1.1.).
IntroducirenelborboteadorBde2a3mldesolucióndeperóxido
de hidrógeno (2.2.2.2), neutralizarla como se hizo anteriormente,
llevaraebulliciónelvinocontenidoenelmatrazAconunapequeña
llamade4a5cmdealturaquedebetocarligeramenteelfondodel
matraz.Nocolocarbajoelmatrazningunatelametálica,sinodepo-
sitarlo sobre un disco perforado con un agujero de 30 mm de
diámetro. Se evita así la pirogenación de las materias extractivas
delvinosobrelasparedesdelmatraz.
Mantener laebullición durante elpasodelacorriente de aire(ode
nitrógeno). En 15 minutos el dióxido de azufre total habrá sido
arrastradoyoxidado.Valorarelácidosulfúricoformadoconlasolu-
ción0,01Mdehidróxidosódico(2.2.2.4).
Seanelnúmerodemililitrosutilizados.
2.2.3.4. Expresión de los resultados
Eldióxidodeazufretotalseexpresaenmiligramosporlitro(mg/l)o
en miligramos por kilogramo (mg/kg) de azúcares totales sin deci-
males.
2.2.3.4.1. Cálculo
VinosymostosDióxidodeazufretotalenmiligramosporlitro:
— Muestras con bajo contenido en dióxido de azufre (muestra
50ml):
6,4·n
— Otrasmuestras(muestra20ml):
16·n
Mostoconcentradorectificado
Dióxido de azufre en miligramos por kilo de azúcares totales
(muestra:50mldemuestrapreparada(2.2.3.3.1):1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—125
▼B
1600 /C1n
P
P = contenidoen%(m/m)deazúcarestotales.
2.2.3.4.2. Repetibilidad(r)
Contenido<50mg/l(muestrade50ml),r = 1mg/l.
Contenido>50mg/l(muestrade20ml),r = 6mg/l.
2.2.3.4.3. Reproductibilidad(R)
Contenido<50mg/l(muestrade50ml),R = 9mg/l.
Contenido>50mg/l(muestrade20ml),R = 15mg/l
2.3.Métodorápidodeensayo
2.3.1.Reactivos
2.3.1.1. EDTA(complexonaIII):saldisódicadelácidoetilendiaminotetra-
céticodihidratada(C10H14N2O8Na2·2H2O).
2.3.1.2. Solución4MdehidróxidosódicoNAOH(160g/l)2.3.1.3. ÁcidosulfúricoH
2SO4(ρ20=1,84g/ml),solucióna1/10(v/v)
2.3.1.4. Engrudodealmidón,soluciónde5g/l.
Disolver 5 g de almidón en 500 ml de agua aproximadamente.
Llevar a ebullición agitando y mantener la ebullición durante 10
minutos; añadir 200 g de cloruro sódico (NaCl). Enrasar hasta un
litrodespuésdeenfriar.
2.3.1.5. Solución0,025Myodo(I2).
2.3.2.Material
2.3.2.1. Erlenmeyerde500ml2.3.2.2. Bureta2.3.2.3. Pipetasde1,2,5y50ml2.3.3.Procedimiento
2.3.3.1. Dióxido de azufre libre
Enunerlenmeyerde500ml,echar:
— 50mldevino
— 5mldeengrudodealmidón(2.3.1.4)
— 30mgdeEDTA(complexonaIII)(2.3.1.1.)
—3mld eH
2SO4al1/10v/v(2.3.1.3)
Valorar inmediatamente con yodo 0,025 M (2.3.1.5) hasta que la
coloración azul se mantenga claramente durante 10 a 15 segundos.
Seanmlelvolumendeyodoutilizado.
2.3.3.2. Dióxido de azufre combinado
Añadir 8 ml de solución 4 M de hidróxido sódico (2.3.1.2), agitar
una sola vez y dejar 5 minutos en contacto. Verter de un golpe, y
agitando enérgicamente el contenido de un pequeño vaso en el que
se hayan echado 10 ml de ácido sulfúrico al 1/10 v/v (2.3.1.3).
Valorar inmediatamente con yodo 0,025 M (2.3.1.5). Sea n ′el
volumendeyodoempleado.
Añadir20mldesolución4Mdehidróxidosódico(2.3.1.2),dejaren
contacto 5 minutos después de haber agitado una sola vez. Diluir
con200mldeagualomásfríaposible.
Agitandoenérgicamente,verterdeungolpe30mldeácidosulfúrico
al 1/10 (2.3.1.3) previamente colocados en una probeta. Valorar el
dióxidodeazufreliberadoconelyodo0,025M(2.3.1.5).Sean ″el
volumendeyodoempleado.
2.3.4.Expresión de los resultados
2.3.4.1. Cálculo
Dióxidodeazufrelibreenmiligramosporlitro:32n.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—126
▼B
Dióxidodeazufretotalenmiligramosporlitro:32(n+n ′+n″).
Observaciones:1. En el caso de los vinos tintos con bajo contenido en SO
2,
conviene utilizar yodo más diluido que 0,025 M, por ejemplo:
0,01M.Sustituirelcoeficiente32por12,8enlasfórmulasante-
riores.
2. En el caso de los vinos tintos, procede iluminar el vino por
debajoconunhazdeluzamarillaobtenidaconunalámparaeléc-
trica ordinaria y una solución de cromato de potasio, o con una
lámpara de vapor de sodio. Es preciso situarse en una cámara
oscura y observar la transparencia del vino, que se hará opaco
cuandoseproduzcaelvirajedelengrudo.
3. Cuandolacantidaddedióxidodeazufreencontradaseaproxime
osupereel límite legal, esconveniente determinar eldióxido de
azufretotalporelmétododereferencia.
4. Cuando se conceda especial importancia a la determinación del
dióxido de azufre, se operará de la forma convencional sobre
una muestra que se haya mantenido durante 4 días antes del
análisis al resguardo del aire y a una temperatura de 20 ºC; la
determinacióndeberárealizarseaestamismatemperatura.
5. Dadoqueelyodooxidadeterminadassustanciasenmedioácido,
en determinaciones muy precisas será necesario evaluar la
cantidad de yodo así utilizado. Para ello, el dióxido de azufre
libre debe combinarse con un exceso de etanal o de propanal,
antes de efectuar la valoración con yodo. Añadir, a 50 ml de
vino colocados en un erlenmeyer de 300 ml, 5 ml de solución
de etanal (C2H4O) de 7 g/l o 5 ml de una solución de propanal
(C3H6O)de10g/l.
Tapar y dejar reposar durante 30 minutos por lo menos. Añadir
3 ml de ácido sulfúrico al 1/10 (2.3.1.3) y yodo 0,025 M
(2.3.1.5) en cantidad suficiente para que vire el engrudo de
almidón. Sea n'” el volumen de yodo empleado. Debe restarse
den(dióxidodeazufrelibre)yden+n'+n ″(dióxidodeazufre
total).n/tripleprimeesgeneralmentebajo:0,2a0,3mldeyodo0,025M.Si
se ha añadido al vino ácido ascórbico, n /tripleprimeserá mucho más
elevadoy,sabiendoque1mldeyodo0,025Moxida4,4mgde
ácido ascórbico, el valor de n /tripleprimepermitirá medir, por lo menos
aproximadamente, la cantidad de dicho producto. Así, con la
medida de n /tripleprimese pueden detectar sin dificultad los vinos a los
que se les ha añadido ácido ascórbico en cantidad superior a
20mg/lyquenosehatransformadoenproductosdeoxidación.
3. DIÓXIDODEAZUFREMOLECULAR3.1.Fundamentodemétodo
El porcentaje de dióxido de azufre molecular, H
2SO3,en el dióxido
deazufrelibresecalculaenfuncióndelpH,delgradoalcohólicoy
delatemperatura.
Paraunatemperaturaygradoalcohólicodeterminados:
H2SO3
H++HSO3-
(1) H2SO3 ½/C138 ¼L
10pH/C0pKM ðÞþ1
con
pKM=p KT/C0Aﬃﬃ
Ip
IþBﬃﬃ
Ip
L= [ H2SO3]+[HSO3−]
I = fuerzaiónica,
AyB = coeficientes que varían con la temperatura y el grado
alcohólico,
KT= constante termodinámica de disociación; el valor de pkTviene dadoen latabla 1en funcióndel gradoalcohólico
ydelatemperatura,
K = constantemixtadedisociación.
TomandoparalafuerzaiónicaIelvalormedio0,038,enlatabla2
sedanlosvalores depkMenfuncióndelatemperatura ydelgrado
alcohólico.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—127
▼B
Elcontenidoendióxidodeazufremolecularcalculadoapartirdela
relación(1)vienedadoenlatabla3enfuncióndelpH,delatempe-
raturaydelgradoalcohólico.
3.2.Cálculo
Conociendo el pH del vino y su grado alcohólico, el porcentaje de
dióxidodeazufremolecularvienedadoenlatabla3paralatempe-
raturatºC;seaX%.
Contenidoendióxidodeazufremolecularenmg/l:
X·C
C = contenidoendióxidodeazufrelibreenmg/l.
TABLA1
ValoresdelaconstantetermodinámicapKT
Alcohol
%
envolumenTemperatura (ºC)
20 25 30 35 40
0 1,798 2,000 2,219 2,334 2,493
5 1,897 2,098 2,299 2,397 2,527
10 1,997 2,198 2,394 2,488 2,606
15 2,099 2,301 2,503 2,607 2,728
20 2,203 2,406 2,628 2,754 2,895
TABLA2
ValoresdelaconstantemixtapKM(I=0,038)
Alcohol
%
envolumenTemperatura (ºC)
20 25 30 35 40
0 1,723 1,925 2,143 2,257 2,416
5 1,819 2,020 2,220 2,317 2,446
10 1,916 2,116 2,311 2,405 2,522
15 2,014 2,216 2,417 2,520 2,640
20 2,114 2,317 2,538 2,663 2,803
TABLA3
Dióxidode azufre molecular enporcentaje del dióxidodeazufre libre (I
=0,038)
pHT=20ºC
Alcohol%envolumen
0 5 10 15 20
2,8 7,73 9,46 11,55 14,07 17,09
2,9 6,24 7,66 9,40 11,51 14,07
3,0 5,02 6,18 7,61 9,36 11,51
3,1 4,03 4,98 6,14 7,58 9,36
3,2 3,22 3,99 4,94 6,12 7,58
3,3 2,58 3,20 3,98 4,92 6,12
3,4 2,06 2,56 3,18 3,95 4,92
3,5 1,64 2,04 2,54 3,16 3,95
3,6 1,31 1,63 2,03 2,53 3,16
3,7 1,04 1,30 1,62 2,02 2,53
3,8 0,83 1,03 1,29 1,61 2,021990R2676—ES—21.04.1999—006.001—128
▼B
pHT=20ºC
Alcohol%envolumen
0 5 10 15 20
T=25ºC
2,8 11,47 14,23 17,15 20,67 24,75
2,9 9,58 11,65 14,12 17,15 22,71
3,0 7,76 9,48 11,55 14,12 17,18
3,1 6,27 7,68 9,40 11,55 14,15
3,2 5,04 6,20 7,61 9,40 11,58
3,3 4,05 4,99 6,14 7,61 9,42
3,4 3,24 4,00 4,94 6,14 7,63
3,5 2,60 3,20 3,97 4,94 6,16
3,6 2,07 2,56 3,18 3,97 4,55
3,7 1,65 2,05 2,54 3,18 3,98
3,8 1,32 1,63 2,03 2,54 3,18
T=30ºC
2,8 18,05 20,83 24,49 29,28 35,36
2,9 14,89 17,28 20,48 24,75 30,29
3,0 12,20 14,23 16,98 20,71 25,66
3,1 9,94 11,65 13,98 17,18 21,52
3,2 8,06 9,48 11,44 14,15 17,88
3,3 6,51 7,68 9,30 11,58 14,75
3,4 5,24 6,20 7,53 9,42 12,08
3,5 4,21 4,99 6,08 7,63 9,84
3,6 3,37 4,00 4,89 6,16 7,98
3,7 2,69 3,21 3,92 4,95 6,44
3,8 2,16 2,56 3,14 3,98 5,19
T=35ºC
2,8 22,27 24,75 28,71 34,42 42,182,9 18,53 20,71 24,24 29,42 36,69
3,0 15,31 17,18 20,26 24,88 31,52
3,1 12,55 14,15 16,79 20,83 26,77
3,2 10,24 11,58 13,82 17,28 22,51
3,3 8,31 9,42 11,30 14,23 18,74
3,4 6,71 7,63 9,19 11,65 15,49
3,5 5,44 6,16 7,44 9,48 12,71
3,6 4,34 4,95 6,00 7,68 10,36
3,7 3,48 3,98 4,88 6,20 8,41
3,8 2,78 3,18 3,87 4,99 6,80
T=40ºC
2,8 29,23 30,68 34,52 40,89 50,14
2,9 24,70 26,01 29,52 35,47 44,74
3,0 20,67 21,83 24,96 30,39 38,85
3,1 17,15 18,16 20,90 25,75 33,54
3,2 14,12 14,98 17,35 21,60 28,62
3,3 11,55 12,28 14,29 17,96 24,15
3,4 9,40 10,00 11,70 14,81 20,19
3,5 7,61 8,11 9,52 12,13 16,73
3,6 6,14 6,56 7,71 9,88 13,77
3,7 4,94 5,28 6,22 8,01 11,25
3,8 3,97 4,24 5,01 6,47 9,151990R2676—ES—21.04.1999—006.001—129
▼B
26.SODIO
1. FUNDAMENTODELOSMÉTODOS
1.1.Métododereferencia:Espectrofotometríadeabsorciónatómica
El sodiose determina directamente en el vinomediante espectrofo-
tometría de absorción atómica, previa adición de un tampón
espectraldeclorurodecesioparaevitarlaionizacióndelsodio.
1.2.Métodousual:fotometríadellama
Elsodiosedeterminadirectamenteenelvinodiluidoalmenosa1/
10porfotometríadellama.
2. MÉTODODEREFERENCIA2.1.Reactivos
2.1.1.Solución de sodio de 1 g/l.
Utilizarunasoluciónestándardesodiocomercialde1g/l.Estasolu-
ciónpuedeprepararsedisolviendo2,542gdeclorurosódico(NaCl)
desecado,enaguadestiladayajustandoelvolumena1litro.
Conservarestasoluciónenunfrascodepolietileno.
2.1.2.Solución de referencia:
Ácidocítrico(C
6H8O7,H2O)…...................... 3,5g
Sacarosa(C12H22O11)….............................. 1,5g
Glicerol(C3H8O3)…................................. 5,0g
Clorurodecalcioanhidro(CaCl2)…................ 50 mg
Clorurodemagnesioanhidro(MgCl2)…............ 50 mg
Alcoholabsoluto(C2H5OH)…....................... 50 mg
Aguacsp…......................................... 500 ml
2.1.3.Solución de cloruro de cesio al 5 % en cesio.
Disolver6,33gdeclorurodecesio(CsCl)en100mldeaguadesti-
lada.
2.2.Aparatos
2.2.1. Espectrofotómetro de absorción atómica provisto de un mechero
alimentadoporaireyacetileno.
2.2.2. Lámparadecátodohuecodesodio.
2.3.Procedimiento
2.3.1.Preparación de la muestra
Tomar2,5mldevino,echarenunmatrazaforadode50ml,añadir
1 ml de la solución de cloruro de cesio (2.1.3) y enrasar con agua
destilada.
2.3.2.Calibrado
En una serie de matraces aforados de 100 ml introducir 5,0 ml de
solución de referencia, echar 0; 2,5; 5; 7,5 y 10 ml de la solución
desodiode1gporlitro(2.1.1)previamentediluidaa1/100,añadir
entodoslosmatraces2mldelasolucióndeclorurodecesio(2.1.3)
yenrasarhasta100mlconaguadestilada.
Las soluciones patrón preparadas tienen un contenido de 0; 0,25;
0,50; 0,75 y 1,00 mg de sodio por litro respectivamente y 1 g de
cesio por litro. Estas soluciones deberán conservarse en frascos de
polietileno.
2.3.3.Determinación
Seleccionar la longitud de onda 589,0 nm. Regular el cero de la
escaladeabsorbanciasconlasolucióndecalibradoquecontiene1g
decesioporlitro(2.3.2).Aspirardirectamente elvinodiluidoenel1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—130
▼B
mecherodelespectrofotómetro,yseguidamentehacerlomismocon
las soluciones patrón (2.3.2). Leer las absorbancias. Efectuar las
determinacionesporduplicado.
2.4.Expresióndelosresultados
2.4.1.Método de cálculo
Trazar la curva de variación de la absorbancia en función de la
concentraciónensodiodelassolucionespatrón.
Llevaraestacurvaelvalormediodelasabsorbanciasobtenidasde
lamuestra ydeterminar laconcentración Cde sodioenmiligramos
porlitro.
Laconcentracióndesodioexpresadaenmiligramosporlitrodevino
sindecimalesserá:
20·C
2.4.2.Repetibilidad: r
r = 1+0,024ximg/l
xi= concentracióndesodioenlamuestraenmg/l
2.4.3.Reproductibilidad: R
R = 2,5+0,05ximg/l
xi= concentracióndesodioenlamuestraenmg/l.
3. MÉTODOUSUAL
3.1.Reactivos
3.1.1.Solución patrón de sodio de 20 mg por litro.
Alcoholabsoluto(C2H5OH)…..................... 10 ml
Ácidocítrico(C6H8O7,H2O)….................... 700 mg
Sacarosa(C12H22O11)…............................ 300 mg
Glicerol(C3H8O3)…............................... 1000 mg
Tartratoácidodepotasio(C4H5KO6)…............ 481,3 mg
Clorurocálcicoanhidro(CaCl2)…................ 10 mg
Clorurodemagnesioanhidro(MgCl2)….......... 10 mg
Clorurosódicodesecado(NaCl)… ................. 50,84 mg
Aguacsp…....................................... 1 l
3.1.2.Solución de dilución
Alcoholabsoluto(C2H5OH)…..................... 10 ml
Ácidocítrico(C6H8O7,H2O)….................... 700 mg
Sacarosa(C12H22O11)…............................ 300 mg
Glicerol(C3H8O3)…............................... 1000 mg
Tartratoácidodepotasio(C4H5KO6)…............ 481,3 mg
Clorurocálcicoanhidro(CaCl2)…................ 10 mg
Clorurodemagnesioanhidro(MgCl2)….......... 10 mg
Aguacsp…....................................... 1 l
Para preparar las soluciones 3.1.1 y 3.1.2, disolver el tartrato ácido
de potasioen unos500ml de agua destilada muycaliente, mezclar
la solución con los demás compuestos previamente disueltos en
400 ml de agua destilada y enrasar a 1 litro. Las soluciones se
conservaránenfrascosdepolietileno,añadiendo2gotasdeisotiocia-
natodealilo.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—131
▼B
3.2.Aparato
3.2.1. Fotómetrodellamaalimentadoporunamezcladeaireybutano.
3.3.Procedimiento
3.3.1.Calibrado
Encincomatracesaforadosde100ml,echar5,10,15,20y25ml
delasolucióndesodiode20mg/l(3.1.1)ycompletarhasta100mlconla soluciónde dilución (3.1.2).Seobtendrán soluciones con un
contenidode1,2,3, 4y5mgdesodioporlitro,respectivamente.
3.3.2.Determinación
Efectuar las medidas a 589,0nm. Regular el 100% de transmisión
con agua destilada. Aspirar directamente en el mechero del fotó-
metro las soluciones patrón (3.3.1), seguidamente hacer lo mismo
conelvinodiluido a1/10conagua destilada yleer losporcentajes
detransmisión. Si fuera necesario, diluir el vino,ya diluido a 1/10,
conlasolucióndedilución(3.1.2).
3.4.Expresióndelosresultados
3.4.1.Método de cálculo
Trazar la curva de variaciones del porcentaje de transmisión en
funcióndelaconcentracióndesodiodelassolucionespatrón.Llevar
a esta curva la transmisión correspondiente a la muestra de vino
diluido ydeterminar la concentración Censodio.La concentración
enmiligramosdesodioporlitroserá:
C·F
F = factordedilución.
3.4.2.Repetibilidad: r
(exceptovinosdelicor)r = 1,4mg/l
vinosdelicor:r = 2,0mg/l
3.4.3.Reproductibilidad: R
R = 4,7+0,08x
img/l
xi= concentracióndesodioenlamuestraenmg/l.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—132
▼B
27.POTASIO
1. FUNDAMENTODELOSMÉTODOS1.1.Métododereferencia
Elpotasiosedeterminadirectamenteenelvinodiluidoporespectro-
fotometría de absorción atómica previa adición de un tampón
espectral de cloruro de cesio para evitar la ionización del potasio,
especialmentecuandoseutilizalallamaacetileno-aire.
1.2.Métodousual
El potasio se determina directamente en el vino diluido por foto-
metríadellama.
2. MÉTODODEREFERENCIA2.1.Reactivos
2.1.1.Solución de potasio de 1 g/l
Utilizar una solución estándar de potasio comercial de 1 g/l. Esta
solución puede prepararse disolviendo 4,813 g de tartrato ácido de
potasio (C
4H5KO6) en agua destilada y ajustando el volumen a 1
litro.
2.1.2.Solución referencia
Ácidocítrico(C6H8O7,H2O)…...................... 3,5g
Sacarosa(C12H22O11)….............................. 1,5g
Glicerol(C3H8O3)…................................. 5,0g
Clorurocálcicoanhidro(CaCl2)….................. 50 mg
Clorurodemagnesioanhidro(MgCl2)…............ 50 mg
Alcoholabsoluto(C2H5OH)…....................... 50 ml
Aguacsp…......................................... 500 ml
2.1.3.Solución de cloruro de cesio al 5 % en cesio
Disolver 6,330 g de cloruro de cesio (Cs Cl) en 100 ml de agua
destilada.
2.2.Material
2.2.1. Espectrofotómetro de absorción atómica, equipado con un mechero
alimentadoporaireyacetileno.
2.2.2. Lámparadecátodohuecodepotasio.
2.3.Procedimiento
2.3.1.Preparación de la muestra
Tomar2,5mldevino(previamentediluidoal1/10),echarlosenun
matraz aforado de 50 ml, añadir 1 ml de la solución de cloruro de
cesio(2.1.3)yenrasarconaguadestiladahastalamarcadelaforo.
2.3.2.Calibrado
En una serie de matraces aforados de 100 ml introducir 5 ml de
soluciónreferencia(2.1.2),echar0;2,0;4,0;6,0y8,0mldelasolu-
ción de potasio de 1 g por litro (2.1.1) previamentediluida al 1/10,
añadirentodoslosmatraces2mldelasolucióndeclorurodecesio
(2.1.3)yajustar elvolumena100mlconagua destilada. Lassolu-
cionespatrónpreparadastienenuncontenidodepotasiode0;2;4;6
y8mgporlitrorespectivamentey1gdecesioporlitro.Estassolu-
cionesdeberánconservarseenfrascosdepolietileno.
2.3.3.Determinación
Seleccionar la longitud de onda 769,9 nm. Regular el cero de la
escala de absorbancia con la solución referencia que contiene 1 g
de cesio por litro (2.3.2). Aspirar directamente el vino diluido
(2.3.1) en el mechero del espectrofotómetro, y seguidamente hacer1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—133
▼B
lo mismo con las soluciones patrón (2.3.2); tomar las absorbancias.
Efectuarlasdeterminacionesporduplicado.
2.4.Expresióndelosresultados
2.4.1.Método de cálculo
Trazar la curva de variación de la absorbancia en función de la
concentración en potasio de las soluciones patrón. Llevar a esta
curva el valor medio de las absorbancias correspondientes a la
muestra devinodiluidoydeterminar laconcentración Cdepotasio
enmiligramosporlitro.
La concentración de potasio, expresada en miligramos por litro de
vino,será:
F·CF = factordedilución(aqui,200).
2.4.2.Repetibilidad: r
r=35mg/l.
2.4.3.Reproductibilidad: R
R=66mg/l.
2.4.4.Otras expresiones de los resultados
— enmiliequivalentesporlitro:0,256·F·C
— entartratoácidodepotasioenmiligramosporlitro:
4,813·F·C
3. MÉTODOUSUAL:ESPECTROFOTOMETRÍADELLAMA3.1.Reactivos
3.1.1.Solución de referencia de 100 mg de potasio por litro
Alcoholabsoluto(C
2H5OH)…..................... 10 ml
Ácidocítrico(C6H8O7,H2O)….................... 700 mg
Sacarosa(C12H22O11)…............................ 300 mg
Glicerol(C3H8O3)…............................... 1000 mg
Clorurodesodio(NaCl)…........................ 50,8 mg
Clorurocálcicoanhidro(CaCl2)…................ 10 mg
Clorurodemagnesioanhidro(MgCl2)….......... 10 mg
Tartratoácidodepotasiodesecado(C4H5KO6)…... 481,3 mg
Aguacsp…....................................... 1000 ml
Disolvereltartratoácidodepotasioenaproximadamente500mlde
agua destilada muy caliente, mezclar la solución con los demás
elementos previamente disueltos en 400 ml de agua destilada y
enrasara1litro.
3.1.2.Solución de dilución
Alcoholabsoluto(C2H5OH)…..................... 10 ml
Ácidocítrico(C6H8O7,H2O)….................... 700 mg
Sacarosa(C12H22O11)…............................ 300 mg
Glicerol(C3H8O3)…............................... 1000 mg
Clorurodesodio(NaCl)…........................ 50,8 mg
Clorurocálcicoanhidro(CaCl2)…................ 10 mg
Clorurodemagnesioanhidro(MgCl2)….......... 10 mg
Ácidotartárico(C4H6O6)…........................ 383 mg
Aguacsp…....................................... 1000 ml1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—134
▼B
Lassolucionesseconservaránenfrascosdepolietileno,añadiendo2
gotasdeisotiocianatodealilo.
3.2.Material
3.2.1. Fotómetrodellamaalimentadoporunamezcladeaireybutano.
3.3.Procedimiento
3.3.1.Calibrado
En cuatro matraces aforados de 100 ml, echar 25, 50, 75 y 100 ml
delasolucióndereferencia(3.1.1)ycompletarhasta100mlconla
solución de dilución (3.1.2).Se obtendrán soluciones con un conte-
nidode25,50,75y100mgporlitrodepotasio,respectivamente.
3.3.2.Determinación
Efectuarlasmedidasa766nm.Regularel100%detransmisióncon
aguadestilada.Aspirardirectamenteenelmecherodelfotómetrolas
solucionespatrón(3.3.1),seguidamente hacerlomismoconelvino
diluido al1/10conagua destilada ytomar losporcentajes detrans-
misión.Sifueranecesario,diluirdenuevoelvinoyadiluidoa1/10,
conlasolucióndedilución(3.1.2).
3.4.Expresióndelosresultados
3.4.1.Método de cálculo
Trazar la curva de variación de los porcentajes de transmisión en
función de la concentración en potasio de las soluciones patrón.
Llevar a esta curva la transmisión obtenida con la muestra de vino
diluidoydeterminarlaconcentraciónCenpotasio.
Laconcentraciónenmiligramosdepotasioporlitroserá:
C·F
F = factordedilución.
3.4.2.Repetibilidad: r
r=17mg/l.
3.4.3.Reproductibilidad: R
R=66mg/l.
3.4.4.Otras expresiones de los resultados:
— enmiliequivalentesporlitro:0,0256·F·C
— en tartrato ácido de potasio en miligramos por litro: 4,813 · F·
C.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—135
▼B
28.MAGNESIO
1. FUNDAMENTO
Elmagnesiosedeterminadirectamenteenelvino,convenientemente
diluido,porespectrofotometríadeabsorciónatómica.
2. REACTIVOS
2.1.Soluciónpatrónconcentradademagnesioconuncontenidode
1gporlitro.
Utilizarunasoluciónestándardemagnesiocomercial.Dichasoluciónpodráprepararsedisolviendo8,3646gdeclorurode
magnesio(MgCl
2,6H2O)enaguadestiladayenrasandoelvolumen
a1litro.
2.2.Soluciónpatróndiluidademagnesio,conuncontenidode5mg
porlitro.
Nota:
Conservar las soluciones patrón de magnesio en frascos de polieti-
leno.
3. MATERIAL
3.1. Espectrofotómetro de absorción atómica equipado con un mechero
alimentadoporaireyacetileno.
3.2. Lámparadecátodohuecodemagnesio.
4. PROCEDIMIENTO
4.1.Preparacióndelamuestra
Diluirelvinoa1/100conaguadestilada.
4.2.Calibrado
Enunaseriedematracesaforadosde100ml,echar5,10,15y20ml
delasolución2.2yenrasar a100mlconaguadestilada. Lassolu-
ciones preparadas tienen un contenido de magnesio de 0,25, 0,50,
0,75 y 1 mg por litro respectivamente. Estas soluciones se conser-
varánenfrascosdepolietileno.
4.3.Determinación
Seleccionarlalongituddeonda285nm.
Regular el cero de la escala de absorbancias con agua destilada.
Aspirardirectamenteelvinodiluidoenelmecherodelespectrofotó-
metro, hacerlo a continuación con las soluciones patrón preparadas
en4.2.
Leerlasabsorbancias;efectuarlasdeterminacionesporduplicado.
5. EXPRESIÓNDELOSRESULTADOS
5.1.Métododecálculo
Trazar la curva de variación de la absorbancia en función de la
concentraciónenmagnesiodelassolucionespatrón.
Llevaraestacurvaelvalormediodelasabsorbanciasobtenidascon
la muestra de vino diluido y determinar la concentración C en
magnesio.
Laconcentraciónenmagnesio,expresadaenmiligramosporlitrode
vinosindecimales,será:
100·C
5.2.Repetibilidad:r
r=3mg/l.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—136
▼B
5.3.Reproductibilidad:R
R=8mg/l.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—137
▼B
29.CALCIO
1. FUNDAMENTO
El calcio se determina directamente en el vino, convenientemente
diluido,porespectrofotometría deabsorciónatómica,previaadición
deuntampónespectral.
2. REACTIVOS
2.1.Soluciónpatróndecalcioconuncontenidode1gporlitro.
Utilizarunasoluciónestándardecalciocomercial.
Dicha solución podrá prepararse disolviendo 2,5 g de carbonato de
calcio (Ca CO3) en la cantidad suficiente de HCl a 1/10 (v/v) para
obtener su disolución y enrasando el volumen a 1 litro con agua
destilada.
2.2.Soluciónpatróndiluidadecalcioconuncontenidode50mgpor
litro.
Nota:
Conservarlassolucionespatróndecalcioenfrascosdepolietileno.
2.3.Solucióndeclorurodelantanode50g/lenlantano.
Disolver 13,369 g de cloruro de lantano (La Cl3,7H2O) en agua
destilada;añadir1mldeHCLdiluido1/10(v/v)yenrasara100ml.
3. MATERIAL
3.1. Espectrofotómetro de absorción atómica equipado con un mechero
alimentadoporaireyacetileno.
3.2. Lámparadecátodohuecodecalcio.
4. PROCEDIMIENTO
4.1.Preparacióndelamuestra
En un matraz aforado de 20 ml, echar 1 ml de vino, 2 ml de solu-
ción 2.3 y enrasar con agua destilada. El vino diluido a 1/20
contiene5gdelantanoporlitro.
Nota:
En el caso de vinos dulces, la concentración de 5 g de lantano por
litro será suficiente, siempre que la dilución lleve el contenido en
azúcares a menos de 2,5 g por litro. Para concentraciones en
azúcares superiores, será necesario aumentar a 10 g por litro el
contenidoenlantano.
4.2.Calibrado
Encincomatracesaforadosde100ml,echar0,5,10,15y20mlde
la solución 2.2, añadir en todos los matraces 10 ml de la solución2.3 y enrasar a 100 ml con agua destilada. Las soluciones patrón
preparadas tienen un contenido de calcio de 0, 2,5, 5, 7,5 y 10 mg
porlitrorespectivamente y5gdelantanoporlitro.Estassoluciones
seconservaránenfrascosdepolietileno.
4.3.Determinación
Seleccionar la longitud de onda 422,7 nm. Regular el cero de la
escala de absorbancias con la solución que contiene 5 g de lantano
por litro (4.2). Aspirar directamente el vino diluido en el mechero
del espectrofotómetro, seguidamente hacer lo mismo con las solu-
ciones patrón preparadasen4.2.Leer lasabsorbancias. Efectuar lasdeterminacionesporduplicado.
5. EXPRESIÓNDELOSRESULTADOS
5.1.Métododecálculo
Trazar la curva de variación de la absorbancia en función de la
concentraciónencalciodelassolucionespatrón.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—138
▼B
Llevaraestacurvaelvalormediodelasabsorbanciasobtenidascon
la muestra de vino diluido y determinar la concentración C en
calcio.Laconcentraciónencalcio,expresadaenmiligramosporlitro
devinosindecimales,será:
20·C
5.2.Repetibilidad:r
contenido<60mg/l:r = 2,7mg/l
contenido>60mg/l:r = 4mg/l.
5.3.Reproductibilidad:R
R = 0,114xi−0,5
xi= concentraciónenmg/ldelamuestra.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—139
▼B
30.HIERRO
1. FUNDAMENTODELOSMÉTODOS
Métododereferencia
Elhierrosedeterminadirectamenteporespectrofotometríadeabsor-
ciónatómica,previadilucióndelvinoyeliminacióndelalcohol.
Métodousual
Despuésdelamineralizacióndelvinoconperhidrol,elhierroquese
encuentraenformadehierroIIIsereducealestadodehierroIIyse
determinaporlacoloraciónrojaqueseproduceconlaortofenantro-
lina.
2. MÉTODODEREFERENCIA2.1.Reactivos
2.1.1. SoluciónpatrónconcentradadehierroIII,de1g/l.
Utilizarunasoluciónestándarcomercial.Estasoluciónpuedeprepa-
rarse disolviendo 8,6341 g de sulfato de hierro III [FeNH
4(SO4)2· 12H2O] y de amonio en agua destilada ligeramente acidificada
conácidoclorhídricoMyenrasandoelvolumena1litro.
2.1.2. Soluciónpatróndiluidadehierro,de100miligramosporlitro.
2.2.Material
2.2.1. Rotavaporconbañodeaguatermostatado.2.2.2. Espectrofotómetro de absorción atómica equipado con un mechero
alimentadoconaireyacetileno.
2.2.3. Lámparadecátodohuecodehierro.
2.3.Procedimiento
2.3.1.Preparación de la muestra
Eliminarelalcoholdelvinomedianteconcentracióndelvolumende
lamuestraasumitadenunrotavapor(50-60ºC).Completarloasu
volumeninicialconaguadestilada.
Sifueranecesario,efectuarunadiluciónpreviaaladeterminación.
2.3.2.Calibrado
Enunaseriedematracesaforadosde100ml,echar1,2,3,4y5ml
de la solución de hierro de 100 miligramos por litro (2.1.2) y
completar hasta 100 ml con agua destilada. Las soluciones prepa-
radastendránuncontenidodehierrode1,2,3, 4y5mgpor litro.
Estassolucionesseconservaránenfrascosdepolietileno.
2.3.3.Determinación
Seleccionar la longitud de onda 248,3 nm. Regular el cero de la
escala de absorbancias con agua destilada. Aspirar directamente la
muestra diluida en el mechero del espectrofotómetro,seguidamente
hacer lomismocon lassoluciones patrón preparadas en2.3.2.Leer
lasabsorbancias.Efectuarlasdeterminacionesporduplicado.
2.4.Expresióndelosresultados
2.4.1.Método de cálculo
Trazar la curva de variación de la absorbancia en función de la
concentracióndehierrodelassolucionespatrón.Llevaraestacurva
el valor medio de la absorbancia obtenida con la muestra de vino
diluidoydeterminarlaconcentraciónenhierroC.
La concentración en hierro, expresada en miligramos por litro de
vinocon1decimal,será:
C·FF = factordedilución.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—140
▼B
3. MÉTODOUSUAL
3.1.Reactivos
3.1.1. Solucióndeperóxidodehidrógeno(H2O2)al30%(m/v)exentade
hierro.
3.1.2. Solucióndeácidoclorhídricoexentodehierro,1M.3.1.3. Hidróxidodeamonio( ρ
20=0,92g/ml).
3.1.4. Piedrapómeztratadaconácidoclorhídricoa1/2hirviendoylavada
conaguadestilada.
3.1.5. Solucióndehidroquinona(C6H6O2)al2,5%,acidificadacon1mlde
ácidosulfúricopuro( ρ20=1,84g/ml)para100mldesolución.Esta
soluciónseconservaráenunfrascotopacioenneveraysesustituirá
encuantoaparezcaelmásmínimotonomarrón.
3.1.6. Solucióndesulfitodesodio(Na2SO3)al20%preparadaapartirde
sulfitoneutroyanhidro.
3.1.7. Solucióndeortofenantrolina(C12H8N2·H2O)al0,5%enalcoholde
96%vol.
3.1.8. Solucióndeacetatodeamonio(CH3COONH4)al20%(m/v).
3.1.9. Solución de hierro III de 1 g de hierro por litro. Utilizar una solu-
ciónestándarcomercial. Estasoluciónpuedeprepararsedisolviendo
8,6341gdesulfatodehierroydeamonio[NH4Fe(SO4)2].12H2Oen
100mldesolución1Mdeácidoclorhídrico (3.1.2)yenrasandoel
volumena1litroconlasolución1Mdeácidoclorhídrico(3.1.2).
3.1.10. Soluciónpatróndehierrodiluida,de100miligramosporlitro.
3.2.Material
3.2.1. MatrazKjeldahlde100ml.3.2.2. Espectrofotómetro que permita efectuar medidas a una longitud de
ondade508nm.
3.3.Procedimiento
3.3.1.Mineralización
3.3.1.1. Vino cuyo contenido en azúcares sea inferior a 50 g/l:
Introducir en un matraz de Kjeldahl 25 ml de vino, 10 ml de solu-
ción de peróxido de hidrógeno (3.1.1) y algunos granos de piedra
pómez(3.1.4).Concentrarellíquidohastaunvolumende2a3ml.
Una vez frío, añadir al residuo obtenido, sin mojar las paredes del
matraz, hidróxido de amonio (3.1.3) en la cantidad necesaria para
alcalinizarelmedioyprecipitarloshidróxidos.
Despuésdequeseenfríe,añadirallíquidoalcalinolasolución1M
deácidoclorhídrico(3.1.2)enlacantidadnecesariaparadisolverel
precipitado deloshidróxidosytransvasarlasoluciónobtenida aun
matraz aforado de 100 ml. Después de lavar el matraz de Kjeldahl
con la solución M de ácido clorhídrico (3.1.2), enrasar el volumen
a100mlconlamismasolución.
3.3.1.2. Mostos y vinos cuyo contenido en azúcares sea superior a
50g/l:
3.3.1.2.1. Contenidoenazúcarescomprendidoentre50y200g/l:
lamuestrade25mldemostoodevinosetratarácon20mldesolu-
cióndeperóxidodehidrógeno(3.1.1).
Continuarcomosedescribeen(3.3.1.1).
3.3.1.2.2. Contenidoenazúcaressuperiora200g/l:
lasmuestrasdemostoodevinodeberándiluirsepreviamente a1/2
o incluso a 1/4 y tratarse como se indica en el procedimiento
3.3.1.2.1.
3.3.2.Ensayo en blanco
Efectuar un ensayo en blanco con agua destilada empleando el
mismo volumen de solución de peróxido de hidrógeno (3.1.1) que1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—141
▼B
el utilizado para la mineralización y siguiendo el protocolo experi-
mentaldescritoen3.3.1.1.
3.3.3.Determinación
Tomar20mldelasoluciónclorhídrica delproductodemineraliza-
ción de la muestra (3.3.11) y 20 ml de la solución clorhídrica«ensayoenblanco»(3.3.2)eintroducirlosendosmatracesaforados
de 50 ml. Añadir en cada matraz 2 ml de la solución de hidroqui-
nona (3.1.5), 2 ml de la solución de sulfito (3.1.6) y 1 ml de la
solución de ortofenantrolina (3.1.7). Dejar reposar durante 15
minutos para favorecer la reducción de Fe III en Fe II. Añadir
10 ml de la solución de acetato de amonio (3.1.8), completar el
volumen hasta 50 ml con agua destilada y agitar los dos matraces
aforados. Medir la absorbancia a 508 nmde la solución que va a
determinarse regulando el cero de la escala de absorbancias con la
soluciónprocedentedelensayoenblanco.
3.3.4.Calibrado
Encuatromatracesaforadosde50ml,echar0,5,1,1,5y2mldela
solución de 100 mg de hierro por litro (3.1.10) y 20 ml de agua
destilada; continuar como se indica en el procedimiento 3.3.3 y
medir la absorbancia de cada una de las soluciones patrón prepa-
radas, que corresponden, respectivamente, a 50, 100, 150 y 200
microgramosdehierroenlamuestra.
3.4.Expresióndelosresultados
3.4.1.Método de cálculo
Trazarlacurvadelasvariacionesdelaabsorbanciaenfuncióndela
concentraciónenhierrodelassolucionespatrón.Leerlaabsorbancia
obtenidaconlasoluciónproblemaydeterminarlaconcentraciónen
hierroCcontenidaenlamuestrade20mldesoluciónclorhídricade
mineralización,esdeciren5mldelamuestraquevaaanalizarse.
La concentración de hierro, expresada en miligramos por litro de
vino,con1decimal,será:
200·CSi el vino (o el mosto) ha sido diluido, la concentración de hierro
expresadaenmiligramosporlitrodevino,con1decimal,será:
200·C·F
F = factordedilución.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—142
▼B
31.COBRE
1. FUNDAMENTODELMÉTODO
Empleodelaespectrofotometríadeabsorciónatómica.
2. MATERIAL
2.1. Cápsuladeplatino.2.2. Espectrofotómetrodeabsorciónatómica.2.3. Lámparadecátodohuecodecobre.2.4. Gasdealimentación:aire,acetilenoy/oprotóxidodenitrógeno.
3. REACTIVOS
3.1. Cobremetálico.
3.2. Ácidonítricoconcentradoal65%(HNO
3,ρ20=1,38g/ml).
3.3. Ácidonítricodiluidoal1/2(v/v).
3.4.Solucióndecobrede1g/l
Utilizarunasoluciónestándardecobrecomercial.Estasoluciónpodráprepararsepesando1000gdecobremetálicoy
transfiriendo cuantitativamente en un matraz aforado de 1000 ml.
Añadir ácido nítrico diluido a 1/2 (3.3) en cantidad estrictamente
suficiente para disolver el metal, añadir 10 ml de ácido nítrico
concentrado(3.2)yenrasarconaguabidestilada.
3.5.Solucióndecobrede100mg/l.
Tomar10mldelasolución3.4eintroducirlosenunmatrazaforado
de100ml,completandoelvolumenconaguabidestilada.
4. PROCEDIMIENTO4.1.Preparacióndelamuestraydeterminacióndelcobre
Encasonecesario,prepararunadiluciónadecuadaconaguabidesti-
lada.
4.2.Calibrado
Tomar0,5,1,2mldelasolución3.5(100mgdecobreporlitro)e
introducirlos en matraces aforados de 100 ml completando el
volumen con agua bidestilada; las soluciones obtenidas contendrán
respectivamente 0,5, 1, 2 mg/l de cobre. Con los valores de absor-
bancias de estas soluciones, medidas como se especifica en 4.1,
trazarlacurvadecalibrado.
4.3.Dosificación
Seleccionar la longitud de onda 324,8 nm. Ajustar a cero la escala
delasabsorbancias conelaguabidestilada. Aspirardirectamente la
muestra diluida en el mechero del espectrofotómetro, despuéssuce-
sivamente las soluciones patrón preparadas en 4.2. Hallar las
absorbancias.Efectuarlasdeterminacionesporduplicado.
5. EXPRESIÓNDELOSRESULTADOS5.1.Mododecálculo
Construir la curva de variación de la absorbancia en función de la
concentraciónenhierrodelassolucionespatrón.
Trasladar a la curva patrón la absorbancia leída para la muestra de
vinodiluidoyhallarlaconcentraciónCenmg/l.
SiFeselfactordedilución elcontenido decobredelvinoseráen
miligramosporlitro:F·Cysedarácon2decimales.
Observaciones:
a) Lassolucionesparaestablecerlacurvapatrónylasdilucionesde
la muestra deben elegirse en función de la sensibilidad del1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—143
▼B
aparato utilizado y de la concentración del cobre presente en la
muestra.
b) Cuandoenlamuestrahayconcentracionesmuybajasdecobre,el
procedimiento es el siguiente: echar 100 ml de muestra en una
cápsula de platino, evaporar en un baño de agua a 100ºC hasta
que adquiera una consistencia de jarabe, añadir, gota a gota,
2,5 ml de ácido nítrico concentrado (3.2) intentando cubrir todo
el fondo de la cápsula. Incinerar con precaución el residuo en
unaplacacalentadoraeléctricaosobreunapequeñallama;intro-
duciracontinuaciónlacápsulaenunhornodemuflareguladoa
500 ºC ± 25 ºC, manteniéndola una hora aproximadamente.
Cuando se haya enfriado, humedecer las cenizas con 1 ml de
ácido nítrico concentrado (3.2), triturándolas con una pequeña
varilla devidrio,evaporareincinerar denuevocomoenelcaso
anterior. Meter otra vez la cápsula en el horno durante 15
minutos; repetir tres veces, como mínimo, este tratamiento con
ácido nítrico concentrado. Solubilizar las cenizas añadiendo en
la cápsula 1 ml de ácido nítrico concentrado (3.2) y 2 ml de
agua bidestilada; pasar a un matraz aforado de 10 ml. Lavar la
cápsula tres veces con 2 ml de agua bidestilada cada vez y
enrasarconaguabidestilada.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—144
▼B
32.CADMIO
1. PRINCIPIODELMÉTODO
Elcadmiosedosificadirectamenteenelvinoporespectrofotometria
deabsorciónatómicasinllama.
2. MATERIAL
Todo el vidrio debe ser lavado antes de su uso con ácido nítrico
concentradocaliente(70a80ºC)yenjuagadoconaguabidestilada.
2.1. Espectrofotómetro de absorción atómica equipado con horno de
grafito, corrector de ruido de fondoy de un registrador multipoten-
ciométrico.
2.2. Lámparadecátodohuecodecadmio.
2.3. Micropipetasde5µlprovistasdepuntasdesechablesespecialespara
medidasdeabsorciónatómica.
3. REACTIVOS
El agua utilizada debe ser agua bidestilada en un aparato de vidrio
borosilicatado o agua de pureza equivalente. Todos los reactivos
deben ser de pureza analítica reconocida y, en particular, estar
exentosdecadmio.
3.1. Ácidofosfóricodel85%( ρ20=1,71g/ml).
3.2. Solucióndeácidofosfóricoobtenidopordilución de8mldeácido
fosfóricoa100mlconagua.
3.3. Solución0,02Mdelasaldisódicadelácidoetilendiaminotetracético
(EDTA).
3.4. SolucióntampóndepH9obtenidodisolviendoenunmatrazaforado
de100ml5,4gdecloruroamónicoenalgunosmililitrosdeagua,se
añade 35 ml de solución de hidróxido amónico ( ρ20= 0,92 g/ml)
diluidoa25%(v/v)yseenrasaconagua.
3.5. Negro de eriocromo T: dilución sólida al 1 % (m/m) en cloruro
sódico.
3.6.Sulfatodecadmio(3CdSO4,8H2O).
La pureza del sulfato de cadmio debe ser comprobada según el
siguienteprocedimiento:
Pesarexactamente102,6mgdesulfatodecadmio,arrastrarconagua
cuantitativamente a un vaso de precipitado, agitar hasta que se
produzcaladisolución,añadir5mldelasolucióntampóndepH9,
20 mg,aproximadamente, de negro de eriocromo T. Valorar con la
solucióndeEDTA,hastaqueseproduzcaelviragedelindicadoral
azul.
ElvolumendeEDTAañadidodebeseriguala20ml.Sielvolumen
difierepoco,corregiradecuadamentelapesadadesulfatodecadmio
utilizadaparalapreparacióndelasolucióndereferencia.
3.7.Solucióndereferenciade1gporlitrodecadmio.
Utilizar una solución estándar del comercio. Esta solución también
puede ser obtenida disolviendo 2,2820 g de sulfato de cadmio en
agua y enrasando a 1 litro con agua destilada. Conservar esta solu-
ciónenunmatrazdevidrioborosilicatadocontapónesmerilado.
4. PROCEDIMIENTO
4.1.Preparacióndelamuestra
Diluirelvinoa1/2(v/v)conlasolucióndeácidofosfórico.
4.2.Preparacióndelassolucionesdelacurvadecalibrado.
A partir de la solución de referencia de cadmio, preparar por dilu-
ciones sucesivas soluciones de 2,5-5-10-15 microgramos por litro
decadmio.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—145
▼B
4.3.Determinación
4.3.1.Programa del horno (se propone a título indicativo)
Secadoa100ºCdurante30segundos.Mineralizacióna900ºCdurante20segundos.
Atomizacióna2250ºCde2a3segundos.
Flujodenitrógeno(gasdetransporte):6litrosporminuto.Nota:
Al final de la operación, subir la temperatura hasta 2700 ºC, para
purgarelhorno.
4.3.2.Medida en absorción atómica.
Seleccionar la longitud de onda a 228,8 nm. Ajustar el cero de la
escala de absorbancia con agua bidestilada. Inyectar en el horno,
medianteunamicropipeta,tresveces5µlcadaunadelassoluciones
de la escala de patrones y de la solución de muestra que se va a
analizar.Registrarlasabsorbanciasmedidas.Calcularelvalormedio
de la absorbancia a partir de los resultados relativos de las tres
inyecciones.
5. EXPRESIÓNDERESULTADOS5.1.Cálculo
Representar la curva de las absorbancias en función de las concen-
traciones de cadmio de las soluciones de la escala de patrones. La
curva es lineal. Llevar el valor medio de la absorbancia de la
muestraaanalizarsobrelarectadecalibrado,obteniendolaconcen-
tración C de cadmio. La concentración en cadmio expresada en
microgramosporlitrodelvinoesiguala:
2C1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—146
▼B
33.PLATA
1. FUNDAMENTODELMÉTODO
Empleodelaespectrofotometríadeabsorciónatómica,previamine-
ralizacióndelamuestra.
2. MATERIAL
2.1. Cápsuladeplatino.
2.2. Bañodeaguaaunatemperaturade100ºC.
2.3. Hornoreguladode500a525ºC.2.4. Espectrofotómetrodeabsorciónatómica.2.5. Lámparadecátodohuecodeplata.2.6. Gasdealimentación:aire,acetileno.
3. REACTIVOS
3.1. Nitratodeplata(AgNO
3).
3.2. Ácidonítricoconcentradoal65%(HNO3),ρ20=1,38g/ml).
3.3. Ácidonítricodiluidoal1/10(v/v).
3.4.Solucióndeplatade1g/l.
Utilizar una solución estándar de plata comercial. Esta solución
puede prepararse disolviendo 1,575 g de nitrato de plata en ácido
nítricodiluidoyenrasandohasta1000mlconácidonítricodiluido
(3.3).
3.5.Solucióndeplatade10mg/l
Sediluyen10mldelasolución3.4hasta1000mlconácidonítrico
diluido(3.3).
4. PROCEDIMIENTO4.1.Preparacióndelamuestra
Echar 20 ml de muestra en una cápsula de platino y evaporar a
sequedad en un baño de agua en ebullición. Incinerar hasta que se
conviertan en cenizas blancas en un horno eléctrico de 500 a
525 ºC. Recoger las cenizas con 1 ml de ácido nítrico concentrado
(3.2), evaporar en un baño de agua a 100 ºC, volver a añadir 1 ml
de ácido nítrico (3.2) y evaporar. Añadir 5 ml de ácido nítrico
diluido(3.3)ycalentarligeramentehastadisolución.
4.2.Calibrado
Echar2,4,6,8,10y20mldesolución(3.5)de10mgporlitrode
plata enunaseriedematraces aforadosde100mlyenrasar conel
ácido nítrico diluido (3.3). Estas soluciones contienen 0,20; 0,40;
0,60;0,80;1,0y2,0mg/ldeplata.
4.3.Determinación
Seleccionar la longitud de onda 328, 1 nm. Ajustar el cero de la
escala de absorbancias con el ácido nítrico diluido (3.3). Aspirar
directamente el líquido obtenido según4.1enelmechero del espec-
trofotómetro y seguidamente las soluciones patrón. Anotar las
absorbancias.Efectuarlasdeterminacionesporduplicado.
5. EXPRESIÓNDELOSRESULTADOS5.1.Métododecálculo
Trazar la curva de variación de la absorbancia en función de la
concentraciónenplatadelassolucionespatrón.
Llevarlaabsorbancialeídaparalasoluciónobtenidasegún4.1sobre
lacurvadecalibradoyobtenerlaconcentraciónCenmg/l.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—147
▼B
Elcontenidodeplataenelvino,expresadoenmg/les:0,25ºC;este
datosedacon2decimales.
Nota:
Las soluciones de referencia para obtener la curva de calibrado, la
cantidad de muestra tomada y el volumen final de líquido, puedenmodificarseenfuncióndelasensibilidaddelaparatoutilizado.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—148
▼B
34.CINC
1. FUNDAMENTO
El cinc se determina directamente en el vino desalcoholizado por
espectrofotometríadeabsorciónatómica.
2. REACTIVOS
El agua utilizada debe ser agua bidestilada en un aparato de vidrio
borosilicatadooaguadepurezaequivalente.
2.1. Soluciónpatróndecincde1gporlitro.
Utilizar una solución estándar de cinc comercial. Esta solución
puede prepararse disolviendo 4,3975 g de sulfato de cinc (Zn SO4,
7H2O)enaguayenrasandoelvolumena1litro.
2.2. Soluciónpatróndiluidadecincde100miligramosporlitro.
3. MATERIAL
3.1. Rotavaporcontermostato.
3.2. Espectrofotómetro de absorción atómica equipado con un mechero
alimentadoconaireyacetileno.
3.3. Lámparadecátodohuecodecinc.
4. PROCEDIMIENTO4.1.Preparacióndelamuestra
Eliminarelalcoholdelvinomedianteconcentraciónal½de100ml
devinoenunrotavapor(temperatura: 50a60ºC).Completarhasta
elvolumeninicialde100mlconaguabidestilada.
4.2.Calibrado
Encuatromatracesaforadosde100ml,echar0,5;1;1,5y2mlde
lasolucióndecincde100mg/l(2.2)yenrasaralamarcadeaforo
conaguabidestilada.Lassolucionespatróncorrespondenrespectiva-
mentea0,5;1;1,5y2mgdecincporlitro.
4.3.Determinación
Seleccionar la longitud de onda 213,9 nm. Regular el cero de la
escaladeabsorbanciasconaguabidestilada.Aspirardirectamenteel
vino en el mechero del espectrofotómetro, seguidamente hacer lo
mismo con las soluciones patrón. Tomar las absorbancias. Efectuar
lasdeterminacionesporduplicado.
5. EXPRESIÓNDELOSRESULTADOS5.1.Métododecálculo
Trazar la curva de variación de la absorbancia en función de la
concentración de cinc de las soluciones patrón. Trasladar el valor
medio de las absorbancias obtenidas con el vino y determinar la
concentración de cinc en miligramos por litro de vino, con 1
decimal.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—149
▼B
35.PLOMO
1. PRINCIPIODELMÉTODO
Elplomoesmedidodirectamentedelvinoporespectrofotometríade
absorciónatómicasinllama.
2. MATERIAL
Todo el material de vidrio se lavará con ácido nítrico concentrado
caliente(70a80ºC)yaclaradoconaguadestilada.
2.1. Espectrofotometría de absorción atómica equipado con horno de
grafito, corrector de absorción no específica y registrador multipo-
tenciométrico.
2.2. Lámparadeplomodecátodohueco.
2.3. Micropipetade5µlprovistadepuntasdesechablesparamedidasde
absorciónatómica.
3. REACTIVOS
Todos los reactivos deben ser de pureza analítica reconocida y en
particular estar exentos de plomo. El agua utilizada debe ser agua
bidestilada en un aparato de vidrio borosilicatado o agua de pureza
equivalente.
3.1. Ácidofosfórico85%( ρ20=1,71g/ml).
3.2. Solución deácido fosfóricoobtenida pordilución de8ml de ácido
enrasadosa100mlconaguadestilada.
3.3. Ácidonítrico( ρ20=1,38g/ml).
3.4. Solucióndeplomoa1gporlitro.
Utilizar una solución estándar comercial. Esta solución puede obte-
nersepordisoluciónde1600gdenitratodeplomoII,Pb(NO3)2en
ácido nítrico diluido al 1 % v/v y enrasar a 1 litro. Conservar la
soluciónenmatrazdevidrioborosilicatadocontapónesmerilado.
4. PROCEDIMIENTO4.1.Preparacióndelamuestra
Diluir el vino a ½ o ⅓con la solución de ácido fosfórico según la
concentraciónesperadadeplomo.
4.2.Preparacióndelassolucionesdelaescaladepatrones.
A partir de la solución de referencia de plomo, preparar por dilu-
ciones sucesivas con agua destilada las soluciones patrón que
contenganrespectivamente25,50,100y150µgdeplomoporlitro.
4.3.Determinación
4.3.1.Programa del horno (propuesto a título indicativo).
Secadoa100ºCdurante30segundos.Mineralizacióna900ºCdurante20segundos.
Atomizacióna2250ºCde2a3segundos.
Flujodelnitrógeno(gasdetransporte)6litrosporminuto.Nota:Alfinaldelaoperaciónelevarlatemperaturaa2700ºCparapurgar
elhorno.
4.3.2.Medidas
Seleccionar la longitud de onda a 217 nm. Regular el cero de la
escala de absorbancias con agua bidestilada. Inyectar en el horno
yaprogramado,conlaayudadeunamicropipeta,tresveces5µlde
cadaunadelassolucionesdelaescaladepatronesydelasolución
de la muestra a analizar. Registrar las medidas de absorbancia.
Calcular el valor medio de la absorbancia a partir de losresultados
delastresinyecciones.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—150
▼B
5. EXPRESIÓNDELOSRESULTADOS
5.1.Cálculo
Representarlacurvadelosvaloresdeabsorbanciaenfuncióndelas
concentracionesdeplomodelassolucionesdelaescaladepatrones.
Lavariacióneslineal.Llevarelvalormediodelaabsorbanciadela
muestraaanalizarsobrelarectadecalibrado,sacarlaconcentración
Cenplomodelamuestra.Laconcentraciónenplomoexpresadaen
microgramosporlitrodevinoesiguala:
C×F
F = factordedilución.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—151
▼B
36.FLUORUROS
1. FUNDAMENTODELMÉTODO
El contenido en fluoruros del vino, con adición de una solución
tampón, se determina con ayuda de un electrodo específico con
membrana sólida. El potencial medido es proporcional al logaritmo
delaactividaddelosionesfluoruroenelmedioestudiadosegúnla
relación:
E=Eo±SlogaF
E = potencialdelelectrodoiónicoespecíficomedidoconrelación
alelectrododereferenciaenelmedioestudiado.
Eo= potencialpatróndelacélulademedida.
S = pendiente del electrodo iónico específico (factor de Nernst).
A25ºClapendienteteóricaesiguala59,2mV.
aF= actividaddelosionesfluoruroenlasoluciónestudiada.
2. MATERIAL
2.1. Electrodoconmembranacristalinaespecíficadelionflúor.
2.2. Electrododereferencia(calomelanosoAg/AgCl)2.3. Milivoltímetro (pH-metro con graduación en milivoltios) de preci-
sión0,1mV.
2.4. Agitador magnético con placa de aislante para proteger la solución
delcalordelmotor.Imánagitadorrecubiertodeplástico(polietileno
omaterialequivalente).
2.5. Vasosdeplásticode30o50mlyfrascosdeplástico(polietilenoo
materialequivalente).
2.6. Pipetas de precisión (pipetas graduadas en microlitros u otras equi-
valentes).
3. REACTIVOS
3.1. Soluciónmadredefluorurode1g/l.
Utilizar una solución comercial estándar de 1 g/l. Esta solución
puede prepararse disolviendo 2,210 g de fluoruro sódico (desecado
a 105 ºC durante 3 o 4 horas) en agua destilada. Enrasar con agua
destiladaa1l.Lasoluciónseconservaenfrascodeplástico.
3.2. Las soluciones patrón de fluoruro de concentración apropiada se
preparan por dilución de la solución madre con agua destilada y
conservadas en frascos de plástico. Las soluciones patrón con un
contenidoenfluorurodelordendemg/ldebenserpreparadasinme-
diatamenteantesdesuempleo.
3.3. SolucióntampónpH5,5.
10 g de ácido ciclohexano-diamino (1,2) tetraacético (CDTA) se
disuelvenen50mldeagua,añadirunasoluciónquecontenga58g
de cloruro sódico y 29,4 g de citrato trisódico en 700 ml de agua
destilada.ElCDTAsedisuelveañadiendounasolucióndehidróxido
sódicoal32%(m/v)(aproximadamente6ml).
Añadir57mldeácidoacético(densidad ρ
20=1,05g/ml)yajustar
elpHa5,5conlasolucióndehidróxidosódicoal32%(aproxima-
damente45ml).Dejarenfriaryllevara1lconaguadestilada.
4. PROCEDIMIENTO
Observación preliminar:
Debe tenerse la precaución de que todas las soluciones conserven
durante la medición una temperatura de 25 ± 1 ºC (una desviación
de±1ºCprovocaunamodificaciónde±0,2mV).
4.1.Métododirecto
Enunvasodeplásticointroducirunvolumendevinoyunvolumen
igualdesolucióntampón.
Se agita la solución moderadamente. Cuando el aparato de medida
esté estable (se obtiene la estabilidad cuando el potencial varíe1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—152
▼B
comomáximode0,2a0,3mV/3min),leerelvalordelpotencialen
mV.
4.2.Métododeadicionesconocidas
Sin interrumpir la agitación, se añade a la muestra a analizar
mediante una pipeta de precisión un volumen conocido de solución
patrón de fluoruros. Cuando el aparato de medida esté estable, leer
elvalordelpotencialenmV.
Elegirlaconcentracióndelasoluciónpatróndelasiguienteforma:
a) doblarotriplicarlaconcentraciónenfluorurodelamuestraestu-
diada;
b) el volumen del medio estudiado debe permanecer prácticamente
constante
(aumentodevolumen ≤1%).
(Lacondiciónbsimplificaloscálculos;ver5.)
Laconcentraciónaproximadadelmedioestudiadosellevasobreuna
recta de calibrado trazada en coordenadas semilogarítmicas con las
solucionespatrónquecontengan0,1;0,2;0,5;1,0;2,0mg/ldefluo-
ruros.
Observación.
Si la concentración aproximada del medio sobrepasa la concentra-
cióndelassolucionespatrón,diluirlamuestra.
Ejemplo:
Sea 0,25 mg/l F−la concentración aproximada del medio estudiado
(volumen20ml);laconcentración debeseraumentadaen0,25mg/
l.Paraelloañadir,porejemplo,alasolución,conlapipetadepreci-
siónadecuada0,20ml(=1%)deunasoluciónpatrónquecontenga
25mg/lF−o0,050mldeunasoluciónpatrónde100mg/lF−.
5. CÁLCULOS
El contenido en fluoruros del medio estudiado expresado en mili-
gramosporlitroseobtienemediantelasiguientefórmula:
CF¼Ca/C2Va
Vo/C21
antilog ∆E=S ðÞ /C0 1
F= concentraciónenfluorurodelmedioestudiado(mg/l)
Ca= concentracióndefluoruroañadidoenmg/lenelmedioestu-
diado(Va)
Va= volumenenmldelasoluciónpatrónadicionada
Vo= volumeninicialdelmedioestudiado(antesdelaadición)
∆E = diferencia entre los potenciales E1yE2obtenidos en 4.1 y
4.2enmV
S = pendientedelelectrodoenlasoluciónestudiada.
SiVaesmuypróximoaVo(véase4.2)lafórmulasesimplifica:
CF¼Ca/C21
antilog ∆E=S ðÞ /C0 1
El valor obtenido debe multiplicarse por el factor de dilución que
provienedelaadicióndeltampón.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—153
▼B
37.DIÓXIDODECARBONO
1. FUNDAMENTODELOSMÉTODOS1.1.Métododereferencia
1.1.1.Caso de vinos tranquilos (sobrepresióndeCO
2≤0,5·105Pa)(1)
Elvolumendevinotomadodelamuestrayllevadoaunatempera-
turapróximaalos0ºCsevierteenunexcesosuficientedesolución
valorada de hidróxido de sodio para lograr un pH de 10 a 11. Se
valora con una solución ácida en presencia de anhidrasa carbónica.
El contenido en dióxido de carbono se deduce del volumen
empleado para pasar de pH 8,6 (forma carbonato ácido) a 4,0
(ácido carbónico). Una valoración testigo efectuada en las mismas
condiciones sobre el vino desprovisto de CO2permite tener en
cuenta el volumen de solución de hidróxido de sodio consumido
porlosácidosdelvino.
1.1.2.Caso de vinos de aguja y vinos espumosos
Sellevalamuestradevinoquedebaanalizarsecercadesupuntode
congelación. Después de tomar un cierto volumen que servirá de
testigo una vez desprovisto de CO2, se alcaliniza el resto de la
botella para fijar todo el CO2en forma de Na2CO3. Se valora con
unasoluciónácidaenpresenciadeanhidrasacarbónica.Elcontenido
en dióxido de carbono se deduce del volumen de solución ácida
empleado para pasar de pH 8,6 (forma carbonato ácido) a pH 4,0
enácidocarbónico.Unavaloración testigoefectuada enlasmismas
condiciones sobre el vino desprovisto de CO2permite tener en
cuenta el volumen de solución de hidróxido de sodio consumido
porlosácidosdelvino.
1.2.Métodousual: enelcasodelosvinosdeagujayespumosos
Método manométrico: medida de la sobrepresión de dióxido de
carbonodirectamenteenlabotellautilizandounafrómetro.
2. MÉTODODEREFERENCIA
2.1. Caso de vinos tranquilos (sobrepresión de dióxido de carbono
≤0,5·105Pa).
2.1.1.Material
2.1.1.1. Agitadormagnético.
2.1.1.2. pH-metro.
2.1.2.Reactivos
2.1.2.1. Solucióndehidróxidodesodio(NaOH),0,1M.2.1.2.2. Solucióndeácidosulfúrico(H
2SO4),0,05M.
2.1.2.3. Soluciónde1g/ldeanhidrasacarbónica.
2.1.3.Procedimiento
Enfriar la muestra de vino hasta los 0 ºC, aproximadamente, así
comolapipetade10mlquesirvaparalatomademuestra.
Tomarenunvasodeprecipitados de100ml,25mldesoluciónde
hidróxido de sodio (2.1.2.1); añadir 2 gotas de solución acuosa da
anhidrasa carbónica (2.1.2.3). Introducir 10 ml de vino con ayuda
delapipetaenfriadaa0ºC.
Poner el vaso de precipitados en el agitador magnético, colocar el
electrodoylavarillamagnéticayllevaracabounaagitaciónmode-
rada.
Cuando el líquido esté a la temperatura ambiente, echar, mediante
afusiónlenta,lasolucióndeácidosulfúrico(2.1.2.2)hastalograrel
pH8,6.
Continuarlasafusionesdeácidosulfúrico(2.1.2.2)hastapH4,0.Sea
n′mlelvolumenutilizadoentreelpH8,6y4,0.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—154
(1)1 05pascal(Pa)=1bar.
▼B
Porotrolado,eliminar elCO2de50mldevino,aproximadamente,
agitando bajo vacío durante tres minutos y calentando el matraz en
unbañodeaguaa25ºCaproximadamente.
Aplicar el procedimiento anterior a 10 ml de vino desprovisto de
CO2:sean′mlelvolumenutilizado.
2.1.4.Expresión de los resultados
1mldesoluciónvaloradadehidróxidodesodio0,1Mcorresponde
a4,4mgdeCO2.
LacantidaddeCO2engramosporlitrodevinoseexpresamediante:
0,44(n−n ′)
con2decimales.
Observación:
EnelcasodevinosconbajocontenidodeCO2(CO2<1g/l),noes
necesarialaadicióndeanhidrasacarbónicaparacatalizarlahidrata-
cióndelCO2.
2.2.Casodevinosdeagujayvinosespumosos
2.2.1.Material
2.2.1.1. Agitadormagnético.
2.2.1.2. pH-metro.
2.2.2.Reactivos
2.2.2.1. Solucióndehidróxidodesodioal50%(m/m)(NaOH).
2.2.2.2. Solucióndeácidosulfúrico(H2SO4),0,05M.
2.2.2.3. Soluciónde1g/ldeanhidrasacarbónica.
2.2.3.Procedimiento
Trazarunamarca,alniveldelllenado,sobrelabotelladevinoque
debaanalizarseyenfriarlahastaeliniciodelacongelación.
Dejar que la botella se caliente ligeramente, agitando hasta que
desparezcanloscristalesdehielo.
Destaparrápidamenteyapartarenunaprobetagraduada45a50ml
de vino que servirán para la determinación testigo. El volumen
exactodeestatoma,vml,sedeterminará mediante lectura sobrela
probeta,cuandoelvinoestéalatemperaturaambiente.
Añadir, inmediatamente después de haber efectuado la toma, 20 ml
de solución de hidróxido de sodio (2.2.2.1) en la botella para un
contenidode750ml.
Esperaraqueelvinoestédenuevoatemperaturaambiente.
Colocarenunvasodeprecipitadosde100ml,30mldeaguadesti-
ladaherviday2gotasdesolucióndeanhidrasacarbónica (2.2.2.3).
Añadir10mldevinoalcalinizado.
Poner el vaso en el agitador magnético, colocar el electrodo y la
varillamagnéticayllevaracabounaagitaciónmoderada.
Echar, mediante afusión lenta, la solución (2.2.2.2) de ácido sulfú-
ricohastalograrelpH8,6.
Continuarlasafusionesdeácidosulfúrico(2.2.2.2)hastapH4,0.Sea
nmlelvolumenutilizadoentrepH8,6y4,0.
Porotrolado,eliminarelCO2delosvmldevinoapartadosparala
determinación testigo, agitando bajo vacío durante tres minutes y
calentandoelmatrazenunbañodeaguaa25ºCaproximadamente.
Tomar10mldevinodesprovistodeCO2en30mldeaguadestilada
hervida, añadir 2 o 3 gotas de solución de hidróxido de sodio
(2.2.2.1)parallevarelpHa10-11.Aplicardespuéselprocedimiento
anterior.Sean ′mlelvolumendeácidosulfúrico0,05Mempleado.
2.2.4.Expresión de los resultados
1mldesolucióndeácidosulfúrico0,1Mcorrespondea4,4mgde
CO2.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—155
▼B
Vaciarlabotelladelvinoalcalinizado ydeterminarconunaaproxi-
mación de 1 ml el volumen inicial de vino, llenándola con agua
hastalamarca,seaVml.
LacantidaddeCO2engramosporlitrodevinoseexpresamediante:
0;44n /C0n0ðÞ /C1V/C0vþ20
V/C0v
ycon2decimales.
2.3.Cálculodelasobrepresión
La sobrepresión a 20 ºC, Paph20, expresado en pascales, viene dada
porlafórmula:
Paph20 ¼Q
1;951/C210/C050;86/C00;01A ðÞ 1/C00;00144S ðÞ/C0Patm
Siendo:
Q: contenidoengramosdeCO2porlitrodevino,
A: gradoalcohólicodelvinoa20ºC,S: contenidoenazúcaresdelvinoengramosporlitro,Patm: presiónatmosféricaexpresadaenpascales.
3. MÉTODOUSUAL(VINOSDEAGUJAYESPUMOSOS)
3.1.Material
3.1.1.Afrómetro
Esunaparatoquesirveparamedirlasobrepresiónenlasbotellasde
vinos de aguja y espumosos; tiene distintas presentaciones que
dependen del tapón de la botella (cápsula metálica, corona, tapón
decorchoodeplástico;véansefiguras1y2).
Están graduados en pascales (abreviatura: Pa)(
1). Resulta más
práctico utilizar el 105pascal (105Pa) o el kilopascal (kPa) como
unidad.
Puedenserdedistintasclases.Laclasedeunmanómetroeslapreci-
sión de la lectura respecto de la escala completa expresada en
términos porcentuales (ejemplo «manómetro 1000 kPa clase 1»
significa presión de utilización máxima 1000 kPa lectura a
±10kPa).Laclase1serecomiendaparalecturasprecisas.
Losafrómetrosdebenverificarseconregularidad(almenosunavez
alaño).
3.2.Procedimiento
Lamedidadebeefectuarseenbotellascuyatemperaturaestéestabi-
lizadadesde,comomímimo,24horasantes.
Tras haber perforado la cápsula o el tapón, la botella debe agitarse
vigorosamente hasta obtener una presión constante para efectuar la
lectura.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—156
(1) 1pascal(Pa)=1N/m2=10−5bares.
▼B
Figura1—Afrómetroparacápsulas
 Figura2—Afrómetroparatapones
3.3.Expresióndelosresultados
Lasobrepresióna20ºC(Paph20)seexpresaenpascales(Pa)okilo-
pascales(kPa).
Deberáconcordarconlaprecisióndelmanómetro(ejemplo:6,3105
Pa o 6,3 kPa y no 6,33 105Pa o 633 kPa para un manómetro
1000kPadeescalacompletaydeclase1).
Cuando la temperatura de medida difiera de 20 ºC, resulta conve-
nientecorregirmultiplicandolapresiónmedidaporelcoeficiente
Paph20
Papht;
indicadoenlatabla1paravolveralatemperaturade20ºC.
4. RELACIÓN ENTRE LA PRESIÓN Y LA CANTIDAD DE
DIÓXIDO DE CARBONO PRESENTE EN UN VINO ESPU-
MOSO(1)
A partir de la sobrepresión a 20 ºC (Paph20), se calcula la presión
absolutaa20ºC(Pabs20)deacuerdoconlafórmula:
Pabs20=Patm+Paph20
Patm=presiónatmosféricaexpresadaenpascales.Lacantidaddedióxidodecarbonocontenidaenunvinovienedada
porlassiguientesrelaciones:
— enlitrosdeCO
2porlitrodevino:
0,987·10−5Pabs20(0,86−0,01A)(1−0,00144S)
— engramosdeCO2porlitrodevino:
1,951·10−5Pabs20(0,86−0,01A)(1−0,00144S)
enlasque:1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—157
(1) Nosetieneencuentalapresenciadeotrosgases(O2,N2,etc.)encantidadestanbajas
quenotenganinfluenciassobrelasobrepresión.
▼B
A=gradoalcohólicodelvinoa20ºC.
S=contenidoenazúcaresdelvino,expresadoengramosporlitro.
TABLA1
RelaciónentrelasobrepresiónPaph20devinosdeagujayespumososa20ºC
alasobrepresiónPaphtaunatemperaturat
0 1,85 13 1,24
1 1,80 14 1,20
2 1,74 15 1,16
3 1,68 16 1,13
4 1,64 17 1,09
5 1,59 18 1,06
6 1,54 19 1,03
7 1,50 20 1,00
8 1,45 21 0,97
9 1,40 22 0,95
10 1,36 23 0,93
11 1,32 24 0,91
12 1,28 25 0,881990R2676—ES—21.04.1999—006.001—158
▼M7
38.CIANODERIVADOS
(Atención:Respetar las normas de seguridad para las manipulaciones de
productosquímicos, paralacloramina T,lapiridina,elcianuro potásico, ácido
clorhídrico,yácidofosfórico;deshacersedelosproductosempleadosdemanera
apropiada y compatible con las normas y reglamentos ecológicos aplicables.
Precaución con el ácido cianhídrico liberado en el proceso de destilación del
vinoacidulado).
1. PRINCIPIODELMÉTODO
El ácido cianhídrico libre y total del vino se libera por hidrólisis
ácida y se separa por destilación. Tras reaccionar con la cloramina
T y la piridina, el dialdehído glutacónico formado se determina
mediante colorimetría, gracias a la coloración azul que da con el
ácido1,3-dimetilbarbitúrico.
2. MATERIAL
2.1.Aparatodedestilación
Utilizar el aparato de destilación descrito para la determinación del
gradoalcohólicodelvino.
2.2. Matrazredondodeesmeriladonormalizado,de500ml.2.3. Bañodeagua,quepermitalaregulacióna20ºC.2.4. Espectrofotómetro que permita medir la absorbancia a una longitud
deondade590nm.
2.5. Cubetasdevidrioodeunsolouso,de20mmdetrayectoóptico.
3. REACTIVOS
3.1. Ácidofosfórico(H
3PO4)al25%(m/v).
3.2. SolucióndecloraminaT(C7H7ClNNaO2S,3H2O)al3%(m/v).
3.3. Solución de ácido 1,3-dimetilbarbitúrico: disolver 3,658 g de ácido
1,3-dimetilbarbitúrico (C6H8N2O3) en 15 ml de piridina y 3 ml de
ácidoclorhídrico( ρ20=1,19g/ml)yenrasara50mlconaguadesti-
lada.
3.4. Cianurodepotasio(KCN).3.5. Solucióndeyodurodepotasio(KI)al10%(m/v).3.6. Solucióndenitratodeplata(AgNO
3),0,1M.
4. PROCEDIMIENTO4.1.Destilación
Enelmatrazde500ml(2.2),colocar25mldevino,50mldeagua
destilada, 1 ml de ácido fosfórico (3.1) y algunas perlas de vidrio.
Colocar inmediatamente el matraz en el aparato de destilación.
Recogereldestilado,medianteunaalargadera,enunmatrazaforado
de 50 ml que contenga 10 ml de agua y esté sumergido en agua
helada.Recogerde30a35mldedestilado(estoes,hastaquehaya
entotalunos45mldelíquidoenelmatrazaforado).
Lavar la alargadera del refrigerante con algunos mililitros de agua
destilada,llevareldestiladoa20ºCyenrasarconaguadestilada.
4.2.Medida
Poner25mldedestiladoenunmatrazErlenmeyerde50mlprovisto
detapónesmerilado,añadir1mldesolucióndecloraminaT(3.2)y
cerrar herméticamente. Transcurridos 60 segundos exactamente,
añadir3mldesolucióndeácido1,3-dimetilbarbitúrico (3.3),cerrar
herméticamente y dejar en reposo durante 10 minutos. A continua-
ción, medir la absorbancia con relación al testigo (25 ml de agua
destiladaenlugarde25mldedestilado)aunalongituddeondade
590nmenlascubetasde20mmdetrayectoóptico.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—159
▼M7
5. DETERMINACIÓNDELACURVADECALIBRADO
5.1.Valoraciónargentimétricadelcianurodepotasio
Enunmatrazaforadode300ml,disolverunos0,2gdeKCN(3.4)
exactamentepesadosen100mldeaguadestilada.Añadir0,2mlde
solución de yoduro de potasio (3.5) y valorar con la solución de
nitratodeplata0,1M(3.6)hastaobtenerunacoloraciónamarillenta
estable.
Sabiendoque1mldesolución0,1Mdenitratodeplatacorresponde
a13,2mgdeKCN,calcularlaconcentracióndeKCNdelamuestra.
5.2.Curvapatrón
5.2.1.Preparación de soluciones patrón
Una vez determinada la concentración del KCN de acuerdo con el
punto 5.1, preparar una solución patrón que contenga 30 mg/l de
ácidocianhídrico(30mgdeHCN /approxorequal72,3mgdeKCN).Diluiresta
solucióna1/10.
Introducir1,0,2,0,3,0,4,0y5,0mldelasoluciónpatróndiluidaen
matracesaforadosde100mlyenrasarconaguadestilada.Lassolu-
ciones preparadas contienen 30, 60, 90, 120 y 150 µg/l de ácido
cianhídrico,respectivamente.
5.2.2.Determinación
Tomar 25 ml de las soluciones así obtenidas y continuar como se
indicaenlospuntos4.1y4.2.
Los valores de absorbancia obtenidos con estas soluciones patrón,
representadosfrentealoscontenidosenácidocianhídricocorrespon-
dientes,sealineansobreunarectaquepasaporelorigen.
6. EXPRESIÓNDELOSRESULTADOS
El ácido cianhídrico se expresa en microgramos por litro ( µg/l) sin
decimales.
6.1.Cálculo
Leer el contenido en ácido cianhídrico en la curva patrón. Si se ha
efectuadodilución,multiplicarelresultadoporelfactordedilución.
Límite de repetibilidad (r) y reproducibilidad (R)
Vinoblanco: = r= 3,l µg/lesdecir,aproximadamente6%·xi
R=12 µg/lesdecir,aproximadamente25%·xi
Vinotinto: = r= 6,4 µg/lesdecir,aproximadamente8%·xi
R=23 µg/lesdecir,aproximadamente29%·xi
xi= concentraciónmediadeHCNenelvino
xi= 48,4 µg/lenelcasodelvinoblanco
xi= 80,5 µg/lenelcasodelvinotinto.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—160
▼B
39.ISOTIOCIANATODEALILO
1. FUNDAMENTODELMÉTODO
Elisotiocianato dealilo,presente,ensucaso,enelvinoesrecupe-
rado por destilación y se identifica mediante una técnica de
cromatografíaenfasegaseosa.
2. REACTIVOS
2.1. Etanolabsoluto.
2.2. Solución estándar:solución en alcohol absoluto de isotiocianato de
alilocon15mg/ldeprincipioactivo.
2.3. Mezclarefrigeranteconstituidaporetanolynievecarbónica(tempe-
ratura−60ºC)
3. MATERIAL
3.1. Aparato de destilación por arrastre mediante corriente de nitrógeno
segúnlafigura.
3.2. Envueltatermógenatermorregulable.
3.3. Medidordeflujo.
3.4. Cromatógrafo de fase gaseosa con detector fotométrico de llama,
provisto de un filtro selectivo para los compuestos azufrados ( λ
=394nm),ocualquierotrodetectorapropiadoparaestamedida.
3.5. Columna de cromatografía de acero inoxidable, diámetro interno
3mm,longitud3m;rellenadeCarbowax20Mal10%sobrechro-
mosorbWHP,80a100mallas
3.6. Microjeringade10µl.
4. PROCEDIMIENTO
Tomar2ldevinoeintroducirlosenelmatrazdedestilación.Echar
algunos ml de etanol (2.1) en los dos tubos de recuperación hasta
queseproduzcalatotalinmersióndelaparteporosaparaladisper-
sión gaseosa. Enfriar, por la parte exterior, los dos tubos con la
mezcla refrigerante. Comunicar el matraz con los dos tubos recep-
tores y comenzar a enviar dentro del aparato una corriente de
nitrógeno de 3 l por hora, aproximadamente. Calentar el vino a
80ºCregulandoconvenientementelatemperaturadelrecintotermó-
genoyrecuperarentotal45a50mldedestilado.
Estabilizar el cromatógrafo; es aconsejable tener las condiciones
operatoriassiguientes:
— temperaturadelinyector:200ºC,
— temperaturadelacolumna:130ºC,
— gasportadorhelioconunflujode20mlporminuto.
Inyectar con la ayuda de la microjeringa una cantidad de solución
estándar tal que el pico correspondiente al isotiocianato de alilo
puedaserfácilmenteidentificadosobreelcromatograma.
Inyectar, de la misma forma, una parte alícuota de destilado y
comprobar la correspondencia entre el tiempo de retención del
isotiocianatodealiloyelpicoobtenido.
En las condiciones indicadas para el ensayo, ningún compuesto
natural del vino produce interferencias correspondientes al tiempo
deretencióndelasubstanciainvestigada.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—161
▼B
Aparatodedestilaciónbajocorrientedenitrógeno
1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—162
▼B
40.CARACTERÍSTICASCROMÁTICAS
1. VINOSYMOSTOS1.1.Definiciones
Seconsiderancaracterísticascromáticasdeunvinolaluminosidady
cromaticidad.
La luminosidad corresponde a la transmitancia y varía en razón
inversaalaintensidadcolorantedelvino.
La cromaticidad corresponde a la longitud de onda dominante (que
caracterizalatonalidad)yalapureza.
Convencionalmente y por razones de comodidad, las características
cromáticas de losvino tintos y rosadospodrían serdefinidas porla
intensidadcoloranteylatonalidad,deacuerdoconunprocedimiento
quesehaadoptadocomométodousual.
1.2.Fundamentodelosmétodos
1.2.1.Método de referencia
Método espectrofotométrico que permite el cálculo de los valores
triestimulares y de los coeficientes tricromáticos necesarios para
especificar el color en los términos de la Comisión Internacional
delAlumbrado(CIE).
1.2.2Método usual (aplicable a vinos tintos y rosados)
Método espectrofotométrico de acuerdo con el cual las caracterís-
ticas cromáticas se expresan convencionalmente como se indica a
continuación:
laintensidadvienedadaporlasumadelasabsorbanciasencubetas
de 1 cmde trayecto óptico para las radiaciones de longitudes de
ondaigualesa420,520y620nm,
latonalidadseexpresaporlarelaciónentrelaabsorbanciaa420nm
ylaabsorbanciaa520nm.
1.3.Métododereferencia
1.3.1.Material
1.3.1.1. Espectrofotómetroquepermitaefectuarmedidasentre300y700nm.1.3.1.2. Cubetas de vidrio, disponibles por parejas, de un trayecto óptico b,
iguala0,1;0,2;0,5;1,2y4cm.
1.3.2.Procedimiento
1.3.2.1. Preparación de la muestra
Si el vino está turbio, debe clarificarse por centrifugación o por
filtraciónatravésdeunamembrana.
Enlosvinosjóvenesoespumososdebeeliminarselamayorcantidad
posiblededióxidodecarbonomedianteagitaciónalvacío.
1.3.2.2. Medidas
Eltrayectoópticobdelascubetasutilizadasdebeelegirsedeforma
quelaabsorbanciamedidaestécomprendidaentre0,3y0,7.
Atítuloindicativo,seaconsejautilizarcubetasde2cm(o4cm)de
trayecto óptico para los vinos blancos, 1 cmpara vinos rosados y
0,1cm(o0,2cm)paralosvinostintos.
Efectuar las medidas espectrofotométricas utilizando como líquido
dereferenciaaguadestiladaenunacubetadelmismotrayectoóptico
b,pararegularelcerodelaescaladeabsorbanciasalaslongitudes
deonda445,495,550y625nm.
Tomar, para el trayecto óptico b, las cuatro absorbancias obtenidas
paraelvinoA
445,A495,A550yA625(con3decimales).
1.3.3.Cálculos
Tomar los valores de las absorbancias para b expresados en cm de
trayectoópticoybuscarenlatablaIlastransmitancias(T%)corres-
pondientes,esdecir:T445,T495,T550,T625.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—163
▼B
— CalcularlosvalorestriestimularesX,YyZ,expresadosenfrac-
cionesdecimales:
X=0,42·T625+0,35·T550+0,21·T445
Y=0,20·T625+0,63·T550+0,17·T495
Z=0,24·T495+0,94·T445
— Calcularlascoordenadasdelcolorxey:
x¼X
XþYþZy¼Y
XþYþZ
1.3.4.Expresión de los resultados
1.3.4.1. La luminosidad relativa viene dada por el valor de Yexpresado en
porcentaje.(EnelcasodelnegroY%=0,enelcasodelincoloroY
%=100.)
1.3.4.2. La cromaticidad se expresa porla longitud de onda dominante yla
pureza.
Parasudeterminaciónhayquerecurriraldiagramadecromaticidad,
delimitadoporel spectrum locus ,quesedaenlafigura1.Enélse
indicaelpunto0quecorrespondealafuentedeluzblancautilizada,
representada por el iluminante estándar C de coordenadas Xo=0,3101eYo=0,3163,correspondientealaluzdeundíamediana-
menteclaro.
—Longitud de onda dominante
Situareneldiagrama elpuntoCdecoordenadasxey.Cuando
el punto C se sitúe fuera del triángulo AOB, trazar la recta de
unión entre el punto O y el punto C y prolongarla; cortará el
spectrum locus en un punto S que corresponde a la longitud de
ondadominante.
CuandoelpuntoCseencuentredentrodeltriánguloAOB,trazar
unarectadesdeChastaO;cortaráel spectrumlocus enunpunto
quecorrespondealalongituddeondadelcolorcomplementario
delvino.Dichalongituddeondaseexpresaporsuvalorseguido
delaletraC.
—Pureza
Cuando el punto C se encuentra fuera del triángulo AOB, la
purezaseexpresaenporcentajemediantelarelación:
100/C1distanciadelpuntoCalpuntoO
distanciadelpuntoOalpuntoS
Cuando el punto C está dentro del triángulo AOB, la pureza se
expresaenporcentajemediantelarelación:
100·distanciadelpuntoCalpuntoO(1)
distanciadelpuntoOalpuntoP
Siendo P el punto en que la recta OC corta la línea de los
púrpuras.
Lapureza también puede conocerse directamente apartir delos
diagramasdecromaticidadconociendoxey(figuras2,3,4,5y
6).
1.3.4.3.Resultados
Laluminosidad,lacromaticidad (expresadaporlalongituddeonda
dominante)ylapurezadefinenporcompletoelcolordeunvino.
Deben indicarse en el boletín de análisis con el valor del trayecto
ópticoalquesehayanefectuadolasmedidas.
1.4.Métodousual
1.4.1.Material
1.4.1.1. Espectrofotómetroquepermitamedidasentre300y700nm.
1.4.1.2. Cubetasdevidrio,disponiblesenparejas,detrayectoópticob,igual
a0,1;0,2;0,5y1cm.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—164
(1) EstadistanciadebemedirseenelsentidoOC.
▼B
1.4.2.Tratamiento previo de la muestra
Si el vino está turbio, debe clarificarse por centrifugación o por
filtraciónatravésdeunamembrana.
Enlosvinosjóvenesoespumososdebeeliminarselamayorcantidad
posiblededióxidodecarbonomedianteagitaciónalvacío.
1.4.3.Procedimiento
Eltrayecto ópticobdelacubeta demedidadebeelegirse deforma
quelaabsorbanciaAestécomprendidaentre0,3y0,7.
Efectuar las medidas espectrofotométricas utilizando como líquido
dereferenciaaguadestiladaenunacubetadelmismotrayectoóptico
b,pararegularelcerodelaescaladeabsorbanciasalaslongitudes
deonda420,520y620nm.
1.4.4.Expresión de los resultados
1.4.4.1. Cálculos
Calcularlasabsorbanciasencubetasde1cmdetrayectoópticopara
las 3 longitudes de onda, dividiendo entre b, expresado en cm, las
absorbanciashalladas,esdecir,A420;A520yA620.
Convencionalmente,laintensidadvienedadapor:
l=A420+A520+A620
Seexpresacon3decimales.
Convencionalmente,latonalidadvienedadapor:
N¼A420
A520
Seexpresacon3decimales.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—165
▼B
TABLAI
Transformacióndelasabsorbanciasentransmitancias(T%)
Instrucciones de uso:Leer la primera cifra decimal del valor de la absorbancia en la
columnavertical1ylasegundacifradecimalenlalíneahorizontal
2.
Tomar la cifra situada en su intersección. Para obtener la transmi-
tancia,estacifradeberádividirseentre10silaabsorbanciatieneun
valorinferiora1,entre100siestácomprendidaentre 1y2yentre
1000siestácomprendidaentre2y3.
Nota:
La cifra situada en el ángulo superior derecho de cada casilla
permite tener en cuenta, por interpolación, la tercera cifra decimal
delvalordelaabsorbancia.
0123456789
0 1000
23977229552293321912218912087120851198321981319
1 79418776187591774117724167081669216676156611564615
2 63114617146031458914575135621354913537125251251312
3 50111490114791146811457104479436942710417104079
4 3989389938093718363835583478339833173248
5 3167309730272957288628272756269626362576
6 2516245524062345229522452195214520952045
7 1994195519041864182417841744170416641624
8 1583155415131484144414131383135313231293
9 1263123312031172115311221103107210531022
Ejemplo:
Absorbanciaóptica: 0,47 1,47 2,47 3,47
T%: 33,9% 3,4% 0,3% 0%
Las transmitancias T % se expresarán con una aproximación de
0,1%.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—166
▼B
Figura1
Diagramadecromaticidadenelqueserepresentalalocalización
detodosloscoloresdelespectro1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—167
▼B
Figura2
Diagrama de cromaticidad para los vinos tintos limpios y los
vinostintosdeteladecebolla1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—168
▼B
Figura3
Diagrama de cromaticidad para los vinos tintos limpios y los
vinostintosdeteladecebolla1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—169
▼B
Figura4
Diagrama de cromaticidad para los vinos tintos limpios y los
vinostintospúrpura1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—170
▼B
Figura5
Diagrama de cromaticidad para los vinos tintos limpios y los
vinostintospúrpura1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—171
▼B
Figura6
Diagramadecromaticidadparalosvinostintosteladecebollay
losvinostintospúrpura1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—172
▼B
2. MOSTOCONCENTRADORECTIFICADO
2.1.Fundamento
Medidadelaabsorbancia,a425nmencubetasde1cmdeespesor,
delmostoconcentradorectificadocuyaconcentraciónenazúcaresse
hayareducidoal25%(m/m)(25ºBrix).
2.2.Material
2.2.1. Espectrofotómetroquepermitaefectuarmedidasentre300y700nm.
2.2.2. Cubetasdevidrioconuntrayectoópticode1cm.
2.2.3. Filtroconmembranaydeunaporosidadde0,45µm.
2.3.Procedimiento
2.3.1.Preparación de la muestra
Utilizar una solución cuyo valor en azúcares sea del 25 % (m/m)
(25º Brix) y que se habrá preparado del modo indicado en el
capítulo «pH» (4.1.2). Filtrarla en un filtro con membrana de una
porosidadde0,45µm.
2.3.2.Determinación de la absorbancia
Regularlaabsorbanciaceroparalalongituddeonda425nmenuna
cubetade1cmdetrayectoópticoquecontengaaguadestilada.
Determinar laabsorbanciaAaestalongituddeondadelasolución
al25%deazúcares(25ºBrix)obtenidaenelapartado2.3.1ycolo-
cadaenunacubetade1cmdetrayectoóptico.
2.4.Expresióndelosresultados
Laabsorbanciaa425nmdelmostoconcentradorectificadoensolu-
ción al 25 % (m/m) de azúcares (25º Brix) se expresará con 2
decimales.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—173
▼B
41.ÍNDICEDEFOLIN-CIOCALTEU
1. DEFINICIÓN
El índice de Folin-Ciocalteu es el resultado de la aplicación del
métodoquesedescribeacontinuación.
2. FUNDAMENTO
El conjunto de los compuestos fenólicos del vino se oxida por el
reactivoFolin-Ciocalteu.Esteúltimoestáconstituidoporunamezcla
de ácido fosfotúngstico (H3PW12O40) y ácido fosfomolíbdico
(H3PMo12O40)quesereduce,porlaoxidacióndelosfenoles,enuna
mezcla de óxidos azules de tungsteno (W8O23) y de molibdeno
(Mo8O23).
Lacoloraciónazulproducidaposeeunaabsorciónmáximaentorno
a750nm.Esproporcionalalporcentajedecompuestosfenólicos.
3. REACTIVOS
Los reactivos deben ser de calidad analítica. El agua utilizada será
aguadestiladaoaguadepurezaequivalente.
3.1.ReactivodeFolin-Ciocalteu
Este reactivo se encuentra en el comercio listo para su empleo.
Puedeprepararsedelaformasiguiente:disolveren700mldeagua
destilada 100 g de tungstato de sodio Na2WO4·2 H2O y 25 g de
molibdato de sodio Na2MoO4·2 H2O; añadir 50 ml de ácido fosfó-
rico al 85 % ( ρ20= 1,71 g/ml), 100 ml de ácido clorhídrico
concentrado ( ρ20= 1,19 g/ml). Llevar a ebullición bajo reflujo
durante 10 horas, añadir a continuación 150 g de sulfato de litio,
algunas gotas de bromo y hervir de nuevo durante 15 minutos.
Enfriarycompletarhasta1litroconaguadestilada.
3.2. Carbonatodesodio(Na2CO3)anhidroensoluciónal20%(m/v).
4. MATERIAL
Materialcorrientedelaboratorio,yenparticular:
4.1. Matracesaforadosde100ml.
4.2. Espectrofotómetroquepermitatrabajara750nm.
5. PROCEDIMIENTO
5.1.Casodelosvinostintos
Enunmatrazaforadode100ml(4.1),introducirrespetandoelorden
siguiente:
1 mldevinodiluidoal /onefifth,
50 mldeaguadestilada,
5 mldereactivodeFolin-Ciocalteu(3.1),
20 mldesolucióndecarbonatodesodio(3.2).
Enrasara100mlconaguadestilada.
Agitar para homogeneizar. Esperar 30 minutos, para que se estabi-
lice la reacción. Determinar la absorbancia a 750 nm con una
cubeta de1cmconrelación auntestigopreparado conaguadesti-
ladaenlugardelvino.
Silaabsorbancia leída noestá próxima a0,3,hayquemodificar la
dilucióndelvinoparaobtenerdichaabsorbancia.
5.2.Casodelosvinosblancos
Operardelamismaformacon1mldevinosindiluir.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—174
▼B
5.3.Casodelmostoconcentradorectificado
5.3.1.Preparación de la muestra
Utilizar una solución cuyo contenido en azúcares sea del 25 % (m/
m) (25 º Brix), preparada del modo indicado en el capítulo «pH»
(4.1.2).
5.3.2.Medida
Proceder como en el caso de los vinos tintos (5.1) en 5 ml de
muestra preparada de acuerdo con el apartado 5.3.1, midiendo la
absorbancia enrelación conuntestigo preparado con5mldesolu-
cióndeazúcarinvertidoal25%(m/m).
6. EXPRESIÓNDELOSRESULTADOS6.1.Métododecálculo
Elresultadoseexpresaenformadeuníndiceobtenidoalmultiplicar
laabsorbanciapor100enelcasodelosvinostintosdiluidosal /onefifth(o
porelfactorcorrespondientealadiluciónempleada)ypor20enel
casodelosvinosblancos.Enelcasodemostosconcentradosrecti-
ficados,laabsorbanciahayquemultiplicarlapor16.
6.2.Repetibilidad
Ladiferenciaentrelosresultadosdedosdeterminacionesefectuadas
simultáneamente o inmediatamente una después de otra por el
mismoanalistanodebesersuperiora1.
Labuenarepetibilidaddelosresultadosdependedelautilizaciónde
uninstrumental(matracesaforadosycubetasdelespectrofotómetro)
rigurosamentelimpio.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—175
▼B
42.MÉTODOSDEANÁLISISESPECÍFICOSPARAMOSTOSDEUVA
CONCENTRADOSRECTIFICADOS
a) CATIONESTOTALES
1. FUNDAMENTO
Se trata la muestra con un intercambiador de cationes de elevada
acidez. Se intercambian los cationes por H+. Se expresan mediante
ladiferencialaacideztotaldelefluenteyladelamuestra.
2. MATERIAL
2.1. Columnadevidriodeaproximadamente300mmdelongitudy10a
11mmdediámetrointerno,provistadeungrifo.
2.2. pHmetrograduado,comomínimo,endécimasdeunidadespH2.3. Electrodos
— electrododevidrio,quedeberáconservarseenaguadestilada,
— electrodo de referencia de cloruro mercúrico de cloruro de
potasio saturado, que deberá conservarse en una solución satu-
radadeclorurodepotasio,
— electrodocombinado,quedeberáconservarseenaguadestilada.
3. REACTIVOS
3.1. Cambiador de cationes de acidez elevada, de forma H
+, preparada
previamente asuempleo,manteniéndola enagua,almenosdurante
unanocheparaquesehinche.
3.2. Solución0,1Mdehidróxidodesodio.
3.3. PapelindicadordepH.
4. PROCEDIMIENTO
4.1.Preparacióndelamuestra
Utilizarlasoluciónquesehayaobtenidodiluyendoelmostoconcen-
tradorectificado al40%(m/v),tal ycomoseindicaenelcapítulo
«Acideztotal»(5.1.2).
4.2.Preparacióndelacolumnaintercambiadoradeiones
Introducirenlacolumna10ml,aproximadamente,decambiadorde
ionesenformaH+previamentehinchado;lavarlacolumnaconagua
destilada hasta eliminar la acidez, que se controlará con el papel
indicador.
4.3.Cambiodeiones
Hacerpasarporlacolumna100mldelasolucióndemostoconcen-
tradorectificado,preparadadelmodoindicadoenelapartado4.1,a
razón de una gota por segundo. Recoger el efluente en un vaso de
precipitados.Lavarlacolumnacon50mldeaguadestilada.Valorar
la acidez del efluente (incluida el agua de lavado) con la solución
0,1 M de hidróxido de sodio hasta que se alcance un pH de 7 a
20 ºC. La adición de licor alcalino deberá efectuarse lentamente,
agitandocontinuamentelasolución.
Sea n ml el volumen de solución 0,1 M de hidróxido de sodio
empleado.
5. EXPRESIÓNDELOSRESULTADOS
Los cationes totales se expresan en miliequivalentes por kilo de
azúcarestotalescon1decimal.
5.1.Cálculos
— Acidez del efluente expresada en miliequivalentes por kilo de
mostoconcentradorectificado:
E=2,5·n
— Acidez total del mosto concentrado rectificado en miliequiva-
lentesporkilo(véase«Acideztotal»6.1.2):a1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—176
▼B
— Cationestotalesenmiliequivalentesporkilodeazúcarestotales:
2;5n/C0a
P/C1100
P = contenido%(m/m)enazúcarestotales.
b) CONDUCTIVIDAD
1. FUNDAMENTO
Medida de la conductividad eléctrica de una columna de líquido,
delimitada por dos electrodos de platino (que se mantendrán para-
lelos),queconstituyeunadelasramasdeunpuentedeWheatstone.
Laconductividadvaríaconlatemperaturayseexpresaráa20ºC.
2. MATERIAL
2.1. Conductímetroquepermitaefectuarmedidasdeconductividadenun
sectorcomprendidoentre1y1000microsiemensporcm.
2.2. Bañodeaguaquepermitaalcanzarunatemperaturadeaproximada-
mente20ºC(20±2ºC).
3. REACTIVOS
3.1. Agua desmineralizada de conductividad específica inferior a 2
microsiemensporcma20ºC.
3.2. Solucióndeclorurodepotasiodereferencia.
Disolver en agua desmineralizada (3.1) 0,581 g de cloruro de
potasio, KCl, previamente secado hasta obtener una masa constante
alatemperaturade105ºC.Completarhasta1litroconaguadesmi-
neralizada (3.1). Esta solución posee una conductividad de 1000
microsiemensporcma20ºC.Superíododeconservaciónselimita
a3meses.
4. PROCEDIMIENTO4.1.Preparacióndelamuestraparaanálisis
Utilizarunasoluciónconuncontenidodeazúcarestotalesdel25%
(m/m)(25ºBrix),talycomoseindicaenelcapítulo«pH»(4.1.2).
4.2.Determinacióndelaconductividad
Ponerlamuestraparaanálisisaunatemperaturade20ºCmediante
inmersión en un baño de agua. Comprobar la temperatura con una
aproximaciónde0,1ºC.
Lavardosveceslacélula demedidadelconductímetro conlasolu-
ciónquevayaaanalizarse.
Medirlaconductividadexpresadaenmicrosiemensporcentímetro.
5. EXPRESIÓNDELOSRESULTADOS
La conductividad se expresa en microsiemens por centímetro
(µ5 cm
−1) a 20 ºC sin decimales para la solución al 25 % (m/m)
(25 ºC Brix) de mosto concentrado rectificado.
5.1.Cálculos
Encasodequeelaparatonocuenteconuncompensadordetempe-
ratura, corregir la conductividad que se haya medido mediante la
tabla I. Si la temperatura es inferior a 20 ºC, añadir la corrección;
silatemperaturaessuperiora20ºC,restarlacorrección.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—177
▼B
TABLAI
Correccionesdeconductividadparatemperaturasdistintasde20ºCenmicrosiemenscm−1
Conducti-
vidadTemperaturas
20.2
19.820.4
19.620.6
19.420.8
19.221.0
19.021.2
18.821.4
18.621.6
18.421.8
18.222.0(1)
18.0(2)
0 0000000000
5 0 0011111222
1 0 0 01122333441 5 0 11233455672 0 0 12334567892 5 0 12346789 1 01 13 0 0 1345789 1 1 1 21 3350 1 3 5 6 8 9 11 12 14 15400 2 3 5 7 9 11 12 14 16 18
4 5 0 2 3 6 81 01 21 41 61 82 0
5 0 0 2 4 7 91 11 31 51 82 02 2550 2 5 7 10 12 14 17 19 22 24600 3 5 8 11 13 16 18 21 24 26
(1) Restarlacorrección
(2) Sumarlacorrección
c) HIDROXIMETILFURFURAL
1. FUNDAMENTO
1.1.Métodocolorimétrico
Los aldehídos derivados del furano, de los cuales el principal es el
hidroximetilfurfural,reaccionanconelácidobarbitúricoylaparato-
luidina, obteniéndose un compuesto rojo que se determina por
colorimetríaa550nm.
1.2.Métodoporcromatografíalíquidadealtaresolución
Separaciónencolumnadefaseinversaydeterminacióna280nm.
2. MÉTODOCOLORIMÉTRICO
2.1.Material
2.1.1. Espectrofotómetroquepermitaefectuarmedidasentre300y700nm.
2.1.2. Cubetadevidriodetrayectoópticoiguala1cmdeespesor.
2.2.Reactivos
2.2.1.Ácido barbitúrico en solución al 0,5 % (m/v).
Disolver 500 mg de ácido barbitúrico, C4O3N2H4, en agua destilada
calentándololigeramenteenunbañodeaguaa100ºC;enrasarhasta
100 ml con agua destilada. La solución se conserva aproximada-
menteunasemana.
2.2.2.Paratoluidina en solución al 10 % (m/v).
Introducir 10 g de paratoluidina, C6H4(CH3)N H2, en un matraz
aforadode100ml;añadir50mldeisopropanol,CH3CH(OH)CH3y
10 ml de ácido acético glacial, CH3COOH ( ρ20 o= 1,05 g/ml);
completar hasta 100 ml con isopropanol. Esta solución debe prepa-
rarsediariamente.
2.2.3.Etanal (CH3CHO) en solución acuosa al 1 % (m/v).
Deberáprepararseinmediatamenteantesdesuempleo.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—178
▼B
2.2.4.Hidroximetilfurfural, C6O3H6, en solución acuosa de 1 g/l.
Preparar en diluciones sucesivas, soluciones con 5, 10, 20, 30 y
40 mg/l. La solución de 1g/l ysusdiluciones deberán estar prepa-
radas.
2.3.Procedimiento
2.3.1.Preparación de la muestra
Utilizarlasoluciónobtenidadiluyendoelmostoconcentradorectifi-
cado al 40 % (m/v), tal y como se indica en el capítulo «Acidez
total»(5.1.2).Efectuarladeterminacióncon2mldeestasolución.
2.3.2.Determinación colorimétrica
Introducir 2ml de muestra preparada del modo que se indica en el
apartado 2.3.1 en dos erlenmeyer aybde 25 ml provistos de
tapones esmerilados. Verter en cada erlenmeyer 5 ml de solución
deparatoluidina(2.2.2);mezclar.Añadirenelerlenmeyer b(testigo)
1mldeaguadestiladay,enelerlenmeyer a(medida),1mldesolu-
ción de ácido barbitúrico (2.2.1). Agitar para homogeneizar.
Transvasar el contenido de los erlenmeyer en las cubetas de 1 cm
detrayectoópticodelespectrofotómetro.Regularelcerodelaescala
deabsorbanciaconelcontenidodelerlenmeyer bparaunalongitud
deonda550nmydeterminarlaabsorbanciadelcontenidodelerlen-
meyera; tomar su valor máximo A, que se alcanzará entre 2 y 5
minutos.
Las muestras cuyo contenido en hidroximetilfurfural sea superior a
30mg/ldeberándiluirseantesdelanálisis.
2.3.3.Curva patrón
Introducir en doserlenmeyer aybde 25 ml, 2 ml de cada una de
las soluciones de hidroximetilfurfural de 5, 10, 20, 30 y 40 mg/l
(2.2.4)yaplicarleselprocedimientodescritoenelapartado2.3.2.
La representación gráfica de las absorbancias en función de los
contenidos en miligramos por litro en hidroximetilfurfural de las
solucionespatróndeberáserunarectaquepasaporelorigen.
2.4.Expresióndelosresultados
El contenido en hidroximetilfurfural del mosto concentrado rectifi-
cadoseexpresaráenmiligramosporkilogramodeazúcarestotales.
2.4.1.Método de cálculo
El contenido C mg/l en hidroximetilfurfural de la muestra para
análisis se obtendrá llevando a la curva patrón la absorbancia A
determinadaenestamuestra.
El contenido en hidroximetilfurfural expresado en miligramos por
kilogramodeazúcarestotalesesiguala:
250/C1C
P
P = contenido%(m/m)enazúcarestotalesdelmostoconcentrado
rectificado.
3. MÉTODOPORCROMATOGRAFÍALÍQUIDADEALTARESO-
LUCIÓN
3.1.Material
3.1.1.Cromatógrafo de fase líquida de alta resolución equipado con:
— uninyectorconloopde5o10µl,
— un detector, espectrofotómetro que permita efectuar medidas a
280nm,
— una columna de sílica dopada con octadecil (por ejemplo:
BondapakC18Corasil,WatersAss.),
— unregistradory,ensucaso,unintegrador,
flujodelafasemóvil:1,5ml/min.
3.1.2.Equipo de filtración de muestra y disolventes para eliminar partí-
culas superiores a 0,45 µm1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—179
▼B
3.2.Reactivos
3.2.1. Aguabidestilada.
3.2.2. Metanol,CH3OHdestiladoodecalidadHPLC.
3.2.3. Ácidoacético,CH3COOH( ρ20=1,05g/ml).
3.2.4. Fase móvil: agua-metanol (3.2.2) ácido acético (3.2.3) previamente
filtrado(0,45µm),(40,9,1v/v).
Estafasemóvildeberáprepararsediariamente ydesgasificada antes
desuuso.
3.2.5. Solucióndereferenciadehidroximetilfurfuralde25mg/l(m/v).
Introducir en un matraz aforado de 100 ml 25 mg exactamente
pesados de hidroximetilfurfural C6H3O6, y completar el volumen
con metanol (3.2.2). Diluir esta solución al 1/10 con metanol
(3.2.2)yfiltrarlaconunamembrana(0,45µm).
Esta solución se conservará de 2 a 3 meses si se introduce en un
frascodevidriotopacioherméticamentecerradoysemantienerefri-
gerada.
3.3.Procedimiento
3.3.1.Preparación de la muestra
Utilizarlasoluciónquesehayaobtenidodiluyendoelmostoconcen-
trado rectificado al 40 % (m/v) del modo indicado en el capítulo
«Acideztotal»(5.1.2)yfiltrarlaconunamembrana(0,45µm).
3.3.2.Determinación cromatográfica
Inyectarenelcromatógrafo5(o10)µldelamuestrapreparadadel
modoindicadoenelapartado3.3.1y5(o10)µldesoluciónderefe-
renciadehidroximetilfurfural(3.2.5).Registrarelcromatograma.
Elperíododeretencióndelhidroximetilfurfuralseaproximaa6o7
minutos.
3.4.EXPRESIÓNDELOSRESULTADOS
El contenido en hidroximetilfurfural del mosto concentrado rectifi-
cadoseexpresaenmiligramosporkilogramodeazúcarestotales.
3.4.1.Modo de cálculo
Sea C mg/l el contenido en hidroximetilfurfural de la solución de
mostoconcentradorectificadoal40%(m/v).
Elcontenidoenhidroximetilfurfuralenmiligramosporkilogramode
azúcarestotalesvieneexpresadopor:
250/C1C
P
P = contenido%(m/m)enazúcarestotalesdelmostoconcentrado
rectificado.
d) METALESPESADOS1. FUNDAMENTOSI.Métodorápidodeevaluacióndemetalespesados.
La presencia de los metales pesados se pone de manifiesto en el
mostoconcentradorectificadoconvenientementediluidoporlacolo-
raciónquedalaformacióndesulfuros.Seevalúancomparándolosa
unasoluciónpatróndeplomocorrespondientealcontenidomáximo
admisible.
II.Determinacióndelcontenidoenplomoporespectrofotometríade
absorciónatómica.
Elquelatoqueseobtienedelplomoconpirrolidinditiocarbamatode
amonioseextraeconmetilisobutilcetona, cuyaabsorbancia semide
a 283,3 nm. El contenido en plomo se determina por el método de
adición.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—180
▼B
2. MÉTODORÁPIDODEEVALUACIÓNDEMETALESPESADOS
2.1.Reactivos
2.1.1.Ácido clorhídrico diluido al 70 % (m/v)
Tomar 70 g de ácido clorhídrico (HCl), ( ρ= 1,16 — 1,19 g/ml) y
completarhasta100mlconagua.
2.1.2.Ácido clorhídrico diluido al 20 % (m/v)
Tomar 20 g de ácido clorhídrico (HCl) ( ρ= 1,16 — 1,19 g/ml) y
completarhasta100mlconagua.
2.1.3.Amoníaco diluido
Tomar 14 g de amoníaco, NH3(ρ= 0,931 — 0,934 g/ml) y
completarhasta100mlconagua.
2.1.4.Solución tampón pH 3,5
Disolver 25 g de acetato de amonio (CH3COONH4)e n2 5mld e
agua y añadir 30 ml de ácido clorhídrico diluido (2.1.1). Ajustar el
pH en caso necesario con ácido clorhídrico diluido (2.1.2) o
amoníacodiluido(2.1.3)ycompletarhasta100mlconagua.
2.1.5.Solución de tioacetamida, (C2H5NS),al4%(m/v) .
2.1.6.Solución de glicerol (C3H8O3)al85%(m/v)
(nD20ºC=1,449—1,455).
2.1.7.Reactivo de tioacetamida
Añadir a 0,2 ml de solución de tioacetamida (2.1.5) 1 ml de una
mezcla de 5 ml de agua, 15 ml de hidróxido de sodio en solución
1 M y 20 ml de glicerol (2.1.6). Calentar en un baño de agua a
100 ºC durante 20 segundos. Preparar inmediatamente antes de su
empleo.
2.1.8.Solución de plomo de 0,002 g/l
Prepararunasoluciónde1g/ldeplomodisolviendoenagua0,400g
denitratodeplomo,Pb(NO3)2ycompletar hasta250mlconagua.
Diluirconaguaestasoluciónenelmomentodesuusoal2‰(v/v)
paraobtenerunasoluciónde0,002g/l.
2.2.Procedimiento
Disolver una muestra de 10 g de mosto concentrado rectificado en
10 ml de agua. Añadir 2 ml de solución tampón pH 3,5 (2.1.4) y
mezclar.Añadir1,2mldereactivodetioacetamida(2.1.7)ymezclar
inmediatamente. Preparareltestigoenlasmismascondicionesutili-
zando10mldesoluciónde0,002g/ldeplomo(2.1.8).
Transcurridos2minutos,laposiblecoloraciónmarróndelasolución
de mosto concentrado rectificado no deberá ser más intensa que la
deltestigo.
2.3.Cálculos
Elensayotestigocorrespondeenlascondicionesdefuncionamiento
auncontenidomáximoadmisibledemetalespesadosexpresadosen
plomode2mg/kgdemostoconcentradorectificado.
3. DETERMINACIÓNDELCONTENIDOENPLOMOPORESPEC-
TROFOTOMETRÍADEABSORCIÓNATÓMICA
3.1.Material
3.1.1. Espectrofotómetro de absorción atómica equipado con un mechero
alimentadoporaireyacetileno.
3.1.2. Lámparadecátodohuecodeplomo.
3.2.Reactivos
3.2.1. Ácidoacéticodiluido.
Tomar 12gdeácido acético glacial ( ρ20=1,05g/ml) ycompletar
hasta100mlconagua.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—181
▼B
3.2.2. Solución de pirrolidinditiocarbamato de amonio C5H12N2S2al 1 %
(m/v).
3.2.3. Metilisobutilcetona(CH3)2CHCH2COCH3.
3.2.4. Solucióndeplomode0,010g/ldeplomo.
Diluiral1%(v/v)lasolucióndeplomode1g/l(2.1.8).
3.3.Procedimiento
3.3.1.Solución para análisis
Disolver 10 g de mosto concentrado rectificado en una mezcla de
volúmenes iguales de ácido acético diluido (3.2.1) y agua y
completarhasta100mlconestamezcla.
Añadir 2 ml de solución de pirrolidinditiocarbamato de amonio
(3.2.2)y10mldemetilisobutilcetona (3.2.3).Agitaralabrigodela
luz viva durante 30 segundos. Dejar que se separen las dos capas.
Utilizarlacapademetilisobutilcetona.
3.3.2.Soluciones de referencia
Preparar 3 soluciones de referencia que contengan, además de los
10 g de mosto concentrado rectificado, 1, 2 y 3 ml de la solución
de plomo de 0,010 g/l (3.2.4), respectivamente. Seguir el mismo
procedimientoqueconlasoluciónparaanálisis.
3.3.3.Testigo
Preparar un testigo siguiendo los mismos pasos que en el apartado
3.3.1 con la solución para análisis, pero sin añadir mosto concen-
tradorectificado.
3.3.4.Determinación
Seleccionarlalongituddeonda283,3nm.
Pulverizar en la llama la metilisobutilcetona procedente del ensayo
testigoyregularlaabsorbanciaacero.
Operando sobre sus solventes de extracción respectivos, determinar
lasabsorbanciascorrespondientes alasoluciónparaanálisis yalas
solucionesdereferencia.
3.4.Expresióndelosresultados
Expresar el contenido en plomo en miligramos por kilogramo de
mostoconcentradorectificadocon1decimal.
3.4.1.Cálculos
Trazarunacurvaquerepresentelavariacióndelasabsorbanciasen
función de la concentración del plomo añadido a las soluciones de
referencia,correspondiendolaconcentración ceroalasoluciónpara
análisis.
Extrapolarlarectaqueunelospuntoshastaquealcanceelejedelas
concentracionesdelapartenegativa.Ladistanciaentreestepuntoy
el origen representa la concentración en plomo de la solución para
análisis.
e) DETERMINACIÓNQUÍMICADELETANOL
Este método de análisis se utiliza para determinar el grado alcohó-
lico de líquidos con poco contenido de alcohol, como el mosto, el
mostoconcentradoyelmostoconcentradorectificado.
1. FUNDAMENTO
Destilación simple del líquido. Oxidación del etanol del destilado
mediante el dicromato de potasio. Valoración del exceso de dicro-
matomedianteunasolucióndehierroII.
2. MATERIAL
2.1. Utilizar elaparato dedestilación quesedescribe enelapartado 3.2
delcapítulo«Gradoalcohólico».1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—182
▼B
3. REACTIVOS
3.1.Solucióndedicromatodepotasio
Disolver 33,600 g de dicromato de potasio (K2Cr2O7) en una
cantidaddeaguasuficienteparaobtener1litroa20ºC.
Unmililitrodeestasoluciónoxida7,8924mgdealcohol.
3.2.SolucióndesulfatodehierroIIyamonio
Disolver135gdesulfatodehierroIIydeamonio,Fe(NH4)2(SO4)2·6 H2O en una cantidad suficiente de agua, añadir 20 ml de ácido
sulfúrico concentrado, H2SO4(ρ= 1,84 g/ml) y enrasar a 1 litro.
Estasoluciónseoxidalentamente.Cuandoestárecientementeprepa-
rada,unvolumendeestasolucióncorrespondeamediovolumende
lasolucióndedicromatopotásico.
3.3.Solucióndepermanganatodepotasio
Disolver 1,088 g de permanganato de potasio, KMnO4, en una
cantidaddeaguasuficienteparaobtener1litro.
3.4.Ácidosulfúricodiluidoal1/2(v/v)
Añadir a 500 ml de agua, lentamente y agitando, 500 ml de ácido
sulfúrico,H2SO4(ρ20=1,84g/ml).
3.5.Reactivodeortofenantrolinaferrosa
Disolver 0,695 g de sulfato ferroso, FeSO4,7H2O en 100 ml de
agua, añadir 1,485 g de monohidrato de ortofenantrolina C12H8N2,
H2O.Calentarparafavorecerlasolución.Estadisoluciónesdecolor
rojointensoyseconservamuybien.
4. PROCEDIMIENTO4.1.Destilación
Introducir en el matraz de destilación 100 g de mosto concentrado
rectificado y 100 ml de agua. Recoger el destilado en un matraz
aforadode100mlyenrasarconagua.
4.2.Oxidación
En un frasco de 300 ml con tapón esmerilado, cuyo cuello termine
en una parte ensanchada, la cual permite lavar el cuello sin que se
produzcanpérdidas,introducir20mldesoluciónvaloradadedicro-
matodepotasioy20mldeácidosulfúricodiluidoal1/2(v/v)(3.4)
yagitar.Añadir20mldedestilado.Taparelfrasco,agitaryesperar
almenos30minutosagitandodevezencuando(frasco«muestra»).
ValorarlasolucióndesulfatodehierroIIyamonio(3.2)enrelación
con lasolución de dicromato de potasiointroduciendo en unfrasco
idéntico las mismas cantidades de reactivos, pero sustituyendo los
20mldedestiladopor20mldeaguadestilada(frasco«testigo»).
4.3.Valoración
Añadir4gotasdereactivodeortofenantrolina(3.5)alcontenidodel
frasco «muestra». Valorar el exceso de dicromato introduciendo la
solucióndesulfatodehierroII(3.2)yamonio.Dejardeañadirsolu-
ciónferrosacuandoelmediopasedecolorazul-verdosoamarrón.
Afin de precisar el viraje, pasar del marrón al azul-verdoso con la
solución de permanganato de potasio (3.3). Restar la décima parte
delvolumenempleadodeestasolucióndelvolumendesoluciónde
sulfatodehierroIIvertido,seanestadiferencia.
Seguir el mismo procedimiento con el frasco «testigo». Sea n ′la
diferencia.
5. EXPRESIÓNDELOSRESULTADOS
El etanol se expresa en gramos por kilo de azúcares totales con 1
decimal.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—183
▼B
5.1.Métododecálculo
n′ml de solución ferrosa reducen 20 ml de solución de dicromato,
queoxidan57,85mgdeetanolpuro.
Un mililitro de solución de hierro II tiene el mismo poder reductor
que:
157 ;85
n0mgdeetanol
n′− n ml de solución de hierro II tienen el mismo poder reductor
que:
157 ;85/C1n0/C0n
n0mgdeetanol
Etanoleng/kgdemostoconcentradorectificado:
7;892/C1n0/C0n
n0
Etanoleng/kgdeazúcarestotales:
789 ;2/C1n0/C0n
n0/C1P
siendo = contenido%(m/m)enazúcarestotales.
f) MESO-INOSITOL,SCYLO-INOSITOLYSACAROSA
1. FUNDAMENTODELMÉTODO
Cromatografíaenfasegaseosadederivadossilanizados
2. REACTIVOS
2.1. Patrón interno: xilitol (solución acuosa aproximadamente de 10 g/l
adicionadadeunapuntadeespátuladeazidasódica)
2.2. Bistrimetilsililtrifluoroacetamida —BST FA—(C8H18F3NOSi2)
2.3. Trimetilclorosilano(C3H9ClSi)
2.4. Piridinap.a.(C5H5N)
2.5. Meso-inositol(C6H12O6)
3. MATERIAL
3.1.Cromatógrafodegases,equipadocon:
3.2. Columna capilar (por ejemplo, sílice fundida, OV 1, espesor de
0,15µ,longitud25m,diámetrointerior0,3mm)
Condicionesoperatorias:
— gasportador:hidrógenoyhelio,
— caudaldelgasportador:2ml/minutoaproximadamente,
— temperaturadelinyectorydeldetector:300ºC,
— programación de temperatura: 1 minuto a 160º C, 4º C/minuto
hasta260ºC,isotermaa260ºCdurante15minutos,
— relacióndesplit:1a20.
3.3. Integrador
3.4. Microjeringade10µl3.5. Micropipetasde50,100y200µl3.6. Vialesde2mlcontapóndeteflón
3.7. Estufa1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—184
▼B
4. PROCEDIMIENTO
Poner alrededor de 5 g de MCR (mosto concentrado rectificado),
pesadoexactamente,enunmatrazde50ml,añadir1mldesolución
patrón de xilitol y enrasar con agua. Después de homogeneizar la
muestra,tomar100µldesolucióneintroducirenunvial,secarcon
una ligera corriente de aire después de haber añadido 100 µl de
etanol absoluto para facilitar la evaporación. Disolver cuidadosa-
mente el residuo en 100 µl de piridina (2.4) añadir 100 µl de
bistrimetilsililtrifluoroacetamida (2.2) y 10 µl de trimetilclorosilano
(2.3),cerrarelvialconeltapóndeteflónycolocarenestufaa60º
C durante una hora. Tomar 0,5 µl de líquido claro inyectando con
«agujavacíaycaliente»segúnlarelacióndesplitantesmencionada.
5. CÁLCULODELOSFACTORESDERESPUESTA5.1.Prepararunasoluciónquecontenga:
60g/l de glucosa, 60g/l de fructosa, 1 g/l demeso-inositol y 1g/l
desacarosa.
Pesar5gdeestasoluciónyprocedersegúnelpunto4.Apartirdel
cromatogramaobtenido,calcularlosfactoresderespuestadelmeso-
inositolydelasacarosaenrelaciónalxilitol.
Para el scylo-inositol, que no se comercializa y cuyo tiempo de
retención está comprendido entre el último pico de las formas
anoméricasdelaglucosaydelmesro-inositol(véasefiguraadjunta),
utilizarelmismofactorderespuestaquedelmeso-inositol.
6. EXPRESIÓNDERESULTADOS
6.1. El meso-inositol y el scylo-inositol se expresan en miligramos por
kilogramo de azúcares totales. La sacarosa se expresa en gramos
porkilogramodemosto.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—185
▼B
Figura:Cromatogramadelmeso-inositol,delscylo-inositolydelasacarosapor
cromatografíagaseosa.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—186
▼M4
43.DETERMINACIÓN DE LA RELACIÓN ISOTÓPICA18O/16O DEL
AGUADELVINO
I. DESCRIPCIÓNDELMÉTODO
1.Objetivodelmétodo
Elobjetivodeestemétodoesmedirlarelaciónisotópica18O/16Ode
aguas de diferentes orígenes. En relación isotópica18O/16O puede
expresarsecomodesviación δ‰conrespectoalvalordelarelación
isotópicadelareferenciainternacionalV.SMOW:
δiè0½/C138 ¼Ri
RSMOW/C0i/C20/C21
/C21000
2.Principio
La relación isotópica18O/16O se determina por espectrometría de
masa de las relaciones isotópicas (EMRI) a partir de las corrientes
iónicas m/z 46 (12C16O18O) y m/z 44 (12C16O2) producidas por el
dióxido de carbono obtenido tras la siguiente reacción con el agua
delvino:
C16O2+H218O↔C16O18O+H216O
Eldióxidodecarbonodelafasegaseosaseutilizaparaelanálisis.
3.Reactivos
— Dióxidodecarbonoparaanálisis.
— SMOW(StandardMeanOceanWater).— GISP(GreenlandIceSheetPrecipitation).— SLAP(StandardLightArcticPrecipitation).
— Aguadereferenciadellaboratoriocalibradacuidadosamentecon
relaciónalasmuestrasdereferenciadelOrganismoInternacional
delaEnergíaAtómica(IAEA)deViena.
4.Aparatos
— Espectrómetrodemasaderelacionesisotópicasconunarepetibi-
lidadinternade0,05‰.
— Triple colector para el registro simultáneo de los iones m/z 44,
45 y 46 o, cuando menos, doble colector para medir los iones
m/z44y46.
— Sistematermostático(±0,5ºC)paraconseguirelequilibrioentre
elCO
2yelaguadelvino.
— Bombadevacíocapazdealcanzarunapresióninternade0,13Pa.
— Matraces para las muestras de un volumen de 15 ml y un tubo
capilaranejodeundiámetrointerioraproximadode0,015mm.
— PipetaEppendorfconpuntadeplásticodeunsolouso.
5.Determinaciónexperimental
5.1.Método manual:
Métododeequilibrado
Introduccióndelamuestra
— TomarlapipetaEppendorfdevolumenfijode1,5ml,adaptarle
una punta y pipetear con ella el líquido que se vaya a analizar
para introducirlo en un matraz redondo. Poner grasa de silicona
enelcuellodelmatraz yadaptaréstealaválvulaasegurándose
dequeestébiencerrada.
— Repetir la operación con cada matraz de la batería de trabajo
introduciendo el agua de referencia del laboratorio en uno de
losmatraces.
Desgasificacióndelabatería
Seenfrían lasdosbaterías connitrógenolíquido ysepurgatodoel
sistemahasta0,1mmHgabriendolasválvulas.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—187
▼M4
Acontinuación,secierranlasválvulasysedejacalentarelconjunto.
Se repite el ciclo de desgasificación hasta que deje de haber varia-
cionesdepresión.
EquilibradodelaguaydelCO2
Se enfría la batería de trabajo a − 70 ºC (mezcla de nitrógeno
líquido y de alcohol) para congelar el agua y se coloca el conjunto
al vacío. Unavez estabilizado el vacío, seaísla labatería mediante
la válvula y se purga el sistema de introducción del CO2. Se intro-
duce el CO2gaseoso en la batería de trabajo y, después de aislarla
delrestodelsistema,seintroducelabateríaenelbañotermostático
a25ºC(±0,5ºC),durante12horas(unanoche).Paraaprovecharel
tiempo necesario para que se produzca el equilibrado, se aconseja
preparar las muestras al final del día y dejar que el equilibrio se
produzcadurantelanoche.
Transferencia del CO2intercambiado en las células de
medida
Al lado de la batería de trabajo, se adapta en la línea de vacío un
portamuestras con tantas células de medida como matraces haya
conCO2intercambiado.Sepurgancuidadosamentelascélulasvacías
y se transfieren sucesivamente los gases intercambiados de los
matracesalascélulasdemedidaenfriadasconnitrógenolíquido.A
continuación,sedejaquelascélulasdemedidasecalientenatempe-
raturaambiente.
5.2.Utilización de aparatos de intercambio automático
Para obtener el equilibrado, se llenan losmatraces de muestras con
2 ml de vinoo con 2 ml de agua (referencia de trabajo del labora-
torio) y se enfrían a −18 ºC. Se adaptan losportamuestras con los
productoscongeladosalsistemadeequilibradoy,trashacerelvacío
en el sistema, se introduce el dióxido de carbono a una presión de
800hPa.
Elequilibriosealcanzaaunatemperatura de22±0,5ºCdespuésde
un período mínimo de 5 horas y una agitación moderada. Como la
duración del equilibrado depende de la geometría del matraz, debe
determinarsepreviamenteladuraciónóptimadelsistemautilizado.
Acontinuación,setransfiereeldióxidodecarbonodelosmatracesa
la cámara de introducción del espectrómetro de masa por un tubo
capilar y se efectúa la medida con arreglo al protocolo específico
delaparato.
6.Cálculoyexpresióndelosresultados
La diferencia relativa ( δ′) de la relación de las intensidades de los
ionesm/z46y44(I46/I44)entrelamuestraylareferenciaseexpresa
en‰segúnlasiguientefórmula:
δ0muestra ¼I46=I44 ðÞmuestra
I46=I44 ðÞreferencia/C01/C20/C21
/C21000
El contenido en18O de la muestra con relación a la referencia
V.SMOWenlaescalaV.SMOW/SLAPvienedadoporlafórmula:
δ018O ¼δ0muestra /C0δ0SMOW
δ0SMOW /C0δ0SLAP/C20/C21
/C255;5
El valor aceptado para el agua del SLAP es igual a − 55,5 ‰ del
V.SMOW.En relación isotópica de la referencia debe determinarse
despuésdecadaseriede10medidasconmuestrasdesconocidas.
7.Fidelidad
— Larepetibilidad(r)esdel0,24‰.
— Lareproducibilidad(R)esdel0,50‰.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—188
▼M7
44.DETERMINACIÓN DEL CARBAMATO DE ETILO EN EL VINO:
MÉTODODEDETECCIÓNSELECTIVAPORCROMATOGRAFÍA
ENFASEGASEOSA/ESPECTROMETRÍADEMASAS
(Aplicable a la determinación del carbamato de etilo para concentraciones
comprendidasentre10y200 µg/l)
(Atención:Respetar las normas de seguridad para las manipulaciones de
productos químicos, para el etanol, la acetona y los productos cancerígenos:
carbamato de etilo y diclorometano; deshacerse de los disolventes empleados
de manera apropiada y compatible con las normas y reglamentos ecológicos
aplicables).
A.Principiodelmétodo
Elcarbamatodepropiloseañadealamuestracomopatróninterno,lasolu-
ción se diluye con agua y se sitúa en una columna de extracción en fase
sólidade50ml.Elcarbamatodeetiloyelcarbamatodepropilosoneluidos
condiclorometano.
El eluido se concentra con ayuda de un evaporador rotativo al vacío. El
concentrado se analiza por cromatografía en fase gaseosa (CG) y la detec-
ción se realiza por espectrometría de masa por fragmentometría en modo
SIM(selected ions monitoring ).
B.Materialycondicionescromatográficas(dadascomoejemplo)
a) Cromatógrafo de gases/espectrómetro de masas (CG/EM) y eventual-
mente un inyector automático y un sistema de tratamiento de datos o
equivalente.
Columna capilar de sílice fundida 30 m(1) x 0,25 mm de diámetro
interno,0,25 µmdepelículadetipoCarbowax20M.
Procedimiento: inyector 180 ºC, gas portador helio a 1 ml/minuto, y a
25ºC,inyecciónsegúnelmodo« Splitless/split».
Programa de temperatura: 40 ºC durante 0,75 minutos; a continuación,
programación a 10 ºC/minutos hasta 60 ºC; luego, 3 ºC/minutos hasta
150 ºC(2), alcanzar los 220 ºC y mantener a esa temperatura durante
4,25 minutos. El tiempo de retención específica del carbamato de etilo
esde23-27minutos;eldelcarbamatodepropiloesde27-31minutos.
Inrterfase de cromatografía de gases/espectrometría de masas (CG/EM):
línea de transferencia 220 ºC. Parámetros del espectómetro de masas
puestos a punto manualmente con perfluorotributilamina y optimizados
para una sensibilidad mayor a masas bajas, en modo adquisición SIM,
tiempo de espera para el solvente y comienzo de la adquisición 22
minutos,tiempodemantenimiento/ión100ms.
b) EvaporadorrotativoalvacíoosistemadeconcentracióndetipoKuderna
Danish
(NB.La tasa de recuperación del carbamato de etilo de la muestra
problemaC[g)]debeestarcomprendidaentreun99yun110%durante
elproceso).
c) Matrazenformadeperade300mlycuelloúnicoesmerilado.
d) Tubodeconcentraciónde4ml,graduadoconjuntaconpelículadeteflón
ytapón.
C.Reactivos
a) Acetona-calidadLC
NB:VerificarcadaloteantesdesuusoporCG/EMenloquerespectaa
laausenciaderespuestaparalosionesdem/z62,74y89.
b) Diclorometano
NB:Analizar cada lote antes de su uso por CG/EM tras concentrar 200
veces, afinde comprobarla ausencia derespuestapara losionesdem/
z62,74y89.
c) Etanol—anhidro1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—189
(1) En el caso de determinados vinos especialmente ricos, puede ser conveniente utilizar
unacolumnacapilarde50mdelargo.
(2) En el caso de determinados vinos especialmente ricos, puede ser conveniente realizar
unaprogramacióndetemperaturade2ºCporminuto.
▼M7
d) Carbamatodeetilo(CE),solucionespatrón
1. Solución«madre» —1,00mg/ml. Pesar100mg deCE( ≥99%de
pureza)enunmatrazaforadode100mlyenrasarconacetona.
2. Soluciónpatróndetrabajo—10,0 µg/ml.Transferir1mldelasolu-
ción «madre» de CE a un matraz aforado de 100 ml y enrasar con
acetona.
e) Carbamatodepropilo(CP),solucionespatrón:
1. Solución«madre»—1,00mg/ml.Pesar100mgdeCP(calidadreac-
tivo)enunmatrazaforadode100mlyenrasarconacetona.
2. Soluciónpatróndetrabajo—10,0 µg/ml.Transferir1mldelasolu-
ción «madre» de CP a un matraz aforado de 100 ml y enrasar con
acetona.
3. Solución de patrón interno de CP — 400 ng/ml. Transferir 4 ml de
solución patrón de trabajo de CP a un matraz aforado de 100 ml y
enrasarconagua.
f) SolucionespatróncalibradasdeCE-CP
Diluir las soluciones patrón de trabajo de CE, (d) (2) y CP (e) (2) con
diclorometanoparaobtener:
1. (100ngCEy400ngCP)/ml,
2. (200ngCEy400ngCP)/ml,
3. (400ngCEy400ngCP)/ml,4. (800ngCEy400ngCP)/ml,5. (1600ngCEy400ngCP)/ml.
g) Muestradeprueba—100ngCE/mlen40%deetanol.
Transferir 1 ml de las soluciones patrón de trabajo de CE, [d) 2] a un
matrazaforadode100mlyenrasarconetanolal40%enagua.
h) Columna de extracción en fase sólida — Material desechable, preenva-
sadocontierradediatomeas,conunacapacidadde50ml.
NB:Antes del análisis, debe comprobarse cada lote de columnas de
extracción respecto a la recuperación de CE y de CP y la ausencia de
respuesta para los iones de m/z 62, 74 y 89. Preparar 100 ng CE/ml de
muestraproblemag).Analizar5,00mldelamuestradepruebacomose
describeenD[a),EyF.Larecuperaciónde90-110ngdeCE/mlessatis-
factoria. Losabsorbentescon undiámetro departículas irregular pueden
producirflujosmuylentosqueafectanalarecuperacióndeCEydeCP.
Si,trasvariosensayos,noseobtieneel90-110%delvalordelamuestra
deprueba,sedebecambiarlacolumnaoutilizarunacurvadecalibración
corregidaporlarecuperaciónparacuantificarelCE.Afindeobtenerla
curvadecalibracióncorregida,sedebenprepararsolucionespatróncomo
se describe en f) utilizando un etanol del 40 % en lugar de diclorome-
tano.
Analizar1mldelasoluciónpatróndecalibradocomosedescribeenD,
EyF.
ConstruirunanuevacurvadecalibraciónutilizandolarelaciónCE/CPde
lospatronesextraídos.
D.Preparacióndelamuestraproblema
Colocar el material problema en dos vasos separados de 100 ml utilizando
lascantidadessiguientes:
a) Vinoconmásdel14%voldealcohol:5,00ml±0,01ml
b) Vinosconun14%vol.dealcoholcomomáximo:20,00ml±0,01ml.
En cada vaso, añadir 1 ml de solución CP de patrón interno, C [e), 3], y
agua,afindeobtenerunvolumentotalde40ml(o40g).
E.Extracción
Efectuarlaextracciónbajolavitrinadegasesconunaventilaciónadecuada.TransferirlapreparaciónindicadaenDalacolumnadeextracción.Lavarelvasocon10mldeaguaytransferirelaguadelavadoalacolumna.
Dejarellíquidoabsorberseenlacolumnadurante4minutos.Eluircon2x
80 ml de diclorometano. Recoger el eluido en un matraz Erlenmeyer de
300ml.1990R2676—ES—21.04.1999—006.001—190
▼M7
Evaporar el eluido hasta que queden 2 o 3 ml con ayuda del evaporador
rotativoalbañoMaríaa30ºC( NB:Nodejarevaporarhastasequedadtotal).
Transferirelresiduoconcentradoauntubograduadode4ml,conayudade
unapipetaPasteur.
Lavar el recipiente con 1 ml de diclorometano y transferir el líquido de
lavado al tubo. Concentrar la muestra hasta 1 ml bajo una débil corriente
denitrógeno.
Transvasar el concentrado a un recipiente del injector automático para
análisisporCG/EM.
F.AnálisisporCG/EM
a) Curvadecalibración
Inyectar 1 µl de cada solución patrón de calibración C(f), en el sistema
CG/EM. Hacer el gráfico de relación de áreas CE-CP para la respuesta
delionm/z62enelejedeordenadasyllevaraldeabscisaslacantidad
deCEenng/ml(esdecir,100,200,400,800,1600ng/ml).
b) CEcuantificación
Inyectar 1 µl de extracto concentrado de E en el sistema CG/SM y
calcular la relación de áreas CE — CP para el ion m/z 62. Determinar
laconcentracióndeCE(ng/ml)enelextracto,utilizandolacurvadecali-
bración, con patrón interno. Calcular la concentración de CE en la
muestra de prueba (ng/ml) dividiendo la cantidad de CE (ng) en el
extractoporelvolumendelamuestradeprueba(ml).
c) ComprobacióndelapurezadelCE
Determinarsilasrespuestasparalosionesdem/z62,74y89aparecenal
tiempo de retención del CE. Estas respuestas son las características
respectivamente delosprincipales fragmentos(M-C2H2)+y(M-CH3)+
deliónmolecular(M).LapresenciadeCEestáconfirmadasilaspropor-cionesrelativasdeestosionesnosobrepasael20%delasproporciones
para el patrón en CE. Puede ser necesario reconcentrar el extracto a fin
deobtenerunarespuestasuficienteparaelióndem/z89.
G.Análisiscolaborativo
Enelcuadrofiguranlosdistintosresultadosrelativosalamuestradeprueba
prácticayalosdostiposdevinos.
La aplicación de la prueba de Cochran ha tenido como consecuencia la
eliminación de un solo par de resultados, tanto para el vino cuyo grado
alcohólicoessuperioral14%volcomoparaelvinocuyogradoalcohólico
esinferior oigual al 14 % vol, de losque cada unoprocede de unlabora-
toriodistinto.
Lareproducibilidad relativatiendeadecrecer conelaumentodelaconcen-
tracióndecarbamatodeetilo.
ResultadosdelmétododedeterminacióndelcarbamatodeetiloCEenlasbebidasalcohólicas
porCG/EM
MuestraMediade
CEhallado
(ng/ml)Recupera-
cióndeCE
añadido
(%)SrSRRSDr(%)RSDR(%)
Vino14%vol 40 1,59 4,77 4,01 12,02
80 89 3,32 7,00 4,14 8,74
162 90 8,20 11,11 5,05 6,84
Vino14%vol 11 0,43 2,03 3,94 18,47
25 93 1,67 2,67 6,73 10,73
48 93 1,97 4,25 4,10 8,861990R2676—ES—21.04.1999—006.001—191