1998R1459 — ES — 03.02.1999 — 001.001 — 1
Este documento es un instrumento de documentación y no compromete la responsabilidad de las instituciones
►B REGLAMENTO (CE) No1459/98 DE LA COMISIÓN
de 8 de julio de 1998
por el que se establece un método de referencia para la determinación de la vainillina en la
mantequilla concentrada, la mantequilla o la nata
(DO L 193 de 9.7.1998, p. 16)
Modificado por:
Diario Oficial
no página fecha
►M1 Reglamento (CE) no175/1999 de la Comisión de 26 de enero de 1999 L 20 22 27.1.1999
1998R1459 — ES — 03.02.1999 — 001.001 — 2
▼B
REGLAMENTO (CE) No1459/98 DE LA COMISIÓN
de 8 de julio de 1998
por el que se establece un método de referencia para la determina-
ción de la vainillina en la mantequilla concentrada, la mantequilla o
la nata
LA COMISIÓN DE LAS COMUNIDADES EUROPEAS,
Visto el Tratado constitutivo de la Comunidad Europea,
Visto el Reglamento (CEE) no804/68 del Consejo, de 27 de junio de
1968, por el que se establece la organización común de mercados en elsector de la leche y de los productos lácteos (
1), cuya última modifica-
ción la constituye el Reglamento (CE) no1587/96 (2), y, en particular, el
apartado 6 de su artículo 6 y el apartado 3 de su artículo 12,
Considerando que el Reglamento (CE) no2571/97 de la Comisión, de
15 de diciembre de 1997, relativo a la venta de mantequilla a precioreducido y a la concesión de una ayuda para la nata, la mantequilla y lamantequilla concentrada destinadas a la fabricación de productos depastelería, helados y otros productos alimenticios (
3), establece la
adición de marcadores a la nata, la mantequilla y la mantequilla concen-trada en determinadas circunstancias, con objeto de garantizar lacorrecta utilización final de esos productos;
Considerando que, dada la importancia que la adición de marcadores
reviste para el adecuado funcionamiento del régimen y con objeto degarantizar que los agentes económicos que participan en él reciban untrato equitativo, es conveniente establecer métodos comunes para ladeterminación de los marcadores a que se hace referencia en el Regla-mento (CE) n
o2571/97;
Considerando que resulta difícil establecer simultáneamente tales
métodos de referencia para todos los marcadores; que el establecimientode un método de referencia para la determinación de la vainillina en lamantequilla concentrada, la mantequilla o la nata constituye un avanceen la consecución de ese objetivo;
Considerando que las medidas previstas en el presente Reglamento se
ajustan al dictamen del Comité de gestión de la leche y de los productoslácteos,
HA ADOPTADO EL PRESENTE REGLAMENTO:
Artículo 1
El método de análisis que figura en el anexo será el método de refe-
rencia utilizado para la determinación de la vainillina en la mantequillaconcentrada, la mantequilla o la nata, con arreglo a lo dispuesto en elReglamento (CE) n
o2571/97.
Se considerará que la adición de marcadores a la mantequilla concen-
trada, la mantequilla o la nata se ha efectuado de conformidad con lodispuesto en el artículo 6 del Reglamento (CE) n
o2571/97 cuando los
resultados obtenidos se ajusten a lo indicado en el punto 8 del anexo.
Artículo 2
El presente Reglamento entrará en vigor el tercer día siguiente al de su
publicación en el Diario Oficial de las Comunidades Europeas .
Será aplicable a partir del 1 de septiembre de 1998.
El presente Reglamento será obligatorio en todos sus elementos y
directamente aplicable en cada Estado miembro.
(1) DO L 148 de 28. 6. 1968, p. 13.
(2) DO L 206 de 16. 8. 1996, p. 21.
(3) DO L 350 de 20. 12. 1997, p. 3.
1998R1459 — ES — 03.02.1999 — 001.001 — 3
▼B
ANEXO
Determinación del contenido de vainillina en la mantequilla concentrada, la
mantequilla o la nata mediante cromatografía de líquidos de alto rendi-
miento
1.Objeto y ámbito de aplicación
El presente método decribe un procedimiento para la determinación cuan-
titativa de la vainillina en la mantequilla concentrada, la mantequilla o lanata.
Es aplicable a las muestras remitidas en cumplimiento de lo dispuesto en
el Reglamento (CE) n
o2571/97.
2.Principio
Extracción de una cantidad conocida de muestra mediante una mezcla de
isopropanol/etanol/acetonitrilo (1:1:2). Precipitación de la mayor parte dela grasa mediante enfriamiento a una temperatura que oscile entre −15 °C
y −20 °C, seguida de centrifugación.
Previa dilución en agua, determinación del contenido de vainillina
mediante cromatografía de líquidos de alto rendimiento (HPLC).
3.Aparatos
Instrumental habitual de laboratorio y, en particular, el siguiente:
3.1. congelador, que pueda funcionar a una temperatura comprendida entre
−15 °C y −20 °C;
3.2. jeringas desechables de 2 ml de capacidad;3.3. microfiltros de membrana de 0,45 µm de tamaño de poro, resistentes a una
solución que contenga un 5 % de la solución de extracción (4.4);
3.4. cromatógrafo de líquidos provisto de una bomba (flujo de 1,0 ml/min), un
inyector (inyección automática o manual de 20 µl), un detector de UV
(regulado a 306 nm, escala completa de 0,01 AU), un registrador ointegrador y un progamador de la temperaura de la columna regulado a25°C;
3.5. columna analítica (250 mm × 4,6 mm de diámetro interior), rellenada con
LiChrospher RP 18 (Merck, 5 µm), o equivalente;
3.6. precolumna (aproximadamente 20 m m×3m md e diámetro interior) con
un relleno seco de Perisorb RP 18 (30-40 µm), o equivalente.
4.Reactivos
Todos los reactivos utilizados deberán ser de calidad pura para análisis.
4.1. Isopropanol4.2. Etanol 96 % (v/v)4.3. Acetonitrilo4.4. Solución de extracción
Mezclar isopropanol (4.1), etanol (4.2) y acetonitrilo (4.3) en la propor-
ción de 1:1:2 (V/V).
4.5. Vainillina (4-hidroxi-3-metoxi-benzaldehído)4.5.1. Solución madre de vainillina (=500 µg/ml)
En un matraz aforado de 100 ml pesar, con una precisión de 0,1 mg, unos
50 mg (CM mg) de vainillina (4.5), añadir 25 ml de la solución deextracción (4.4) y enrasar con agua.
4.5.2. Solución patrón de vainillina (=10 µg/ml).
En un matraz aforado de 250 ml introducir con una pipeta 5,00 ml de la
solución madre de vainillina (4.5.1) y enrasar con agua.
4.6. Metanol de calidad para HPLC.4.7. Ácido acético glacial.4.8. Agua de calidad para HPLC.4.9. Fase móvil para la HPLC.
En un matraz aforado de 1 000 ml mezclar 300 ml de metanol (4.6), 500
ml aproximadamente de agua (4.8) y 20,0 ml de ácido acético (4.7) y
1998R1459 — ES — 03.02.1999 — 001.001 — 4
▼B
enrasar con agua (4.8). Filtrar utilizando un filtro de 0,45 µm de tamaño
de poro.
5.Procedimiento
5.1. Preparación de la muestra problema
5.1.1. Mantequilla
Calentar la muestra hasta que comience a derretirse. Evitar un calenta-
miento local excesivo por encima de 40 °C. Cuando la muestra alcance
una plasticidad suficiente, agitar para homogeneizarla. Remover la mante-quilla durante 15 segundos antes de tomar la muestra. En un matrazaforado de 100 ml pesar, con una precisión de 1 mg, aproximadamente 5 g(SM g) de mantequilla.
5.1.2. Mantequilla concentrada
Inmediatamente antes de tomar la muestra, introducir el recipiente con la
mantequilla concentrada en una estufa regulada a 40-50 °C hasta que se
encuentre totalmente derretida. Agitar o remover la muestra para homoge-neizarla, aunque no enérgicamente con el fin de evitar la formación deburbujas de aire. En un matraz aforado de 100 ml pesar, con precisión de1 mg, aproximadament e 4 g (SM g) de mantequilla concentrada.
5.1.3. Nata
Calentar la muestra en un baño de agua o en una incubadora a 35-40 °C
de temperatura. Agitar para obtener una distribución homogénea de lagrasa y, si es necesario, remover. Enfriar rápidamente la muestra a unatemperatura de 20 ± 2 °C. Si la muestra no presenta un aspecto homo-
géneo, debe repetirse el procedimiento. En un matraz aforado de 100 ml,pesar, con precisión de 1 mg, aproximadamente 10 g (SM g) de nata.
5.2. Preparación de la solución problema
Añadir unos 75 ml de la solución de extracción (4.4) a la muestra
problema (5.1.1, 5.1.2 o 5.1.3), remover o agitar enérgicamente durante 15minutos aproximadamente y enrasar con la solución de extracción (4.4).Transferir unos 10 ml de esta solución a un tubo de ensayo provisto de untapón. Colocar el tubo de ensayo en el congelador (3.1) y mantenerlo allídurante 30 minutos aproximadamente. Centrifugar la solución fría durante5 minutos a 2 000 rpm aproximadamente y decantar de inmediato. Esperara que la solución decantada alcance la temperatura ambiente. En unmatraz aforado de 100 ml introducir con una pipeta 5,00 ml de la solucióndecantada y enrasar con agua. Filtrar una alícuota utilizando un microfiltrode membrana (3.3). El filtrado obtenido ya está listo para efectuar ladeterminación mediante HPLC.
5.3. Calibrado
En un matraz aforado de 100 ml introducir con una pipeta 5,00 ml de la
solución patrón de vainillina (4.5.2). Añadir 5,0 ml de la solución deextracción (4.4) y enrasar con agua. Esta solución contiene 0,5 µg/ml de
vainillina.
5.4. Det erminación mediante HPLC
Dejar estabilizarse el sistema cromatográfico durante 30 minutos aproxi-
madamente. Inyectar la solución patrón (5.3). Repetir la operación hastaque la diferencia de superficie de los picos o de altura de los picos entredos inyecciones sucesivas sea inferior al 2 %. En las condicionesdescritas, el tiempo de retención de la vainillina es de 9 minutos aproxi-madamente. Analizar la solución patrón (5.3) por duplicado inyectando 20µl. Inyectar 20 µl de las soluciones problema (5.2). Determinar la super-
ficie o la altura del pico obtenido para la vainillina. Repetir el duplicadode la solución patrón (5.3) después de efectuar 10 inyecciones de lasmuestras problema (5.2).
6.Cálculo de los resultados
Calcular la superficie (o altura) media (AC) de los picos de vainillina
asociados al conjunto de inyecciones efectuadas por duplicado con cadalote de soluciones problema (4 superficies en total).
Calcular el factor de respuesta (R):
R = AC/CM
siendo CM la masa de vainillina expresada en mg (4.5.1).
El contenido (mg/kg) de vainillina (C) en la muestra problema viene dado
por la fórmula:
1998R1459 — ES — 03.02.1999 — 001.001 — 5
▼B
C=AS × 20 × 0,96
S M×R
siendo:AS = superficie del pico de vainillina de la muestra problema,
▼
M1
SM = masa de la muestra problema en g (5.1.1, 5.1.2 o 5.1.3).
Cuando se analiza la nata para determinar la vainillina, la concen-
tración de marcador debe expresarse en mg de marcador/kg degrasa láctea. Esto se calcula multiplicando C por 100/f, siendo f elcontenido de grasa de la nata en porcentaje (m/m)
▼
B
20 = factor que tiene en cuenta las diluciones del patrón y de la
muestra problema,
0,96 = factor de corrección del contenido de grasa en la primera dilución
de la muestra problema.
Nota:
En lugar de la superficie del pico puede utilizarse la altura del pico (véase
el punto 8.3).
7.Exactitud del método
7.1. Repetibilidad (r)
La diferencia entre los resultados obtenidos en dos determinaciones efec-
tuadas con el menor intervalo posible de tiempo por el mismo analista,utilizando los mismos aparatos y el mismo material de ensayo, no debe sersuperior a 16 mg/kg.
7.2. Reproducibilidad (R)
La diferencia ente los resultados obtenidos en dos determinaciones efec-
tuadas por analistas de distintos laboratorios, utilizando diferentes aparatospero el mismo material de ensayo, no debe ser superior a 27 mg/kg.
8.Tolerancia
8.1. Deben tomarse tres muestras del producto marcado para comprobar su
homogeneidad.
8.2. Marcador obtenido a partir de vainilla o de vainillina sintética:
▼
M1
8.2.1. La proporción de incorporación de 4-hidroxi-3-metoxibenzaldehído es de
250 gramos por tonelada de mantequilla concentrada o mantequilla. Si lanata está marcada, la proporción de incorporación es de 250 gramos portonelada de grasa láctea.
8.2.2. Los resultados de las tres muestras obtenidos del análisis del producto se
utilizarán para comprobar la proporción y la homogeneidad de la incorpo-ración del marcador y el resultado más bajo se comparará con los límitessiguientes [teniendo en cuenta la diferencia crítica de un nivel de probabi-lidad del 95 % (CrD95)]:
— 221,0 mg/kg (el 95 % de la proporción de incorporación mínima),
— 159,0 mg/kg (el 70 % de la proporción de incorporación mínima).
La concentración de marcador de la muestra que proporcione el resultado
más bajo se utilizará junto con la interpolación entre 221,0 mg/kg y 159,0mg/kg.
▼
B
8.3. Marcador obtenido exclusivamente a partir de vainas de vainilla o de sus
extractos integrales:
▼M1
8.3.1. La proporción de incorporación de 4-hidroxi-3-metoxibenzaldehído es de
100 gramos por tonelada de mantequilla concentrada o mantequilla. Si lanata está marcada, la proporción de incorporación es de 100 gramos portonelada de grasa láctea.
8.3.2. Los resultados de las tres muestras obtenidos del análisis del producto se
utilizarán para comprobar la proporción y la homogeneidad de la incorpo-ración del marcador y el resultado más bajo se comparará con los límitessiguientes [teniendo en cuenta la diferencia crítica de un nivel de probabi-lidad del 95 % (CrD95)]:
1998R1459 — ES — 03.02.1999 — 001.001 — 6
▼M1
— 79,0 mg/kg (el 95 % de la proporción de incorporación mínima),
— 54,0 mg/kg (el 70 % de la proporción de incorporación mínima).
La concentración de marcador de la muestra que proporcione el resultado
más bajo se utilizará junto con la interpolación entre 79,0 mg/kg y 54,0mg/kg.
▼
B
9.Notas
9.1. La repetibilidad (r) es el valor por debajo del cual puede esperarse que se
sitúe, con una probabilidad determinada, la diferencia absoluta entre losresultados de dos ensayos individuales realizados con el mismo método eidéntico material de ensayo y en las mismas condiciones (los mismosaparatos y el mismo laboratorio, en un intervalo breve de tiempo); salvo sise indica lo contrario, la probabilidad es del 95 %.
9.2. La reproducibilidad (R) es el valor por debajo del cual puede esperarse
que se sitúe, con una probabilidad determinada, la diferencia absolutaentre los resultados de dos ensayos individuales realizados con el mismométodo e idéntico material de ensayo pero en condiciones diferentes(distintos analistas, distintos aparatos, distintos laboratorios o momentosdistintos); salvo si se indica lo contrario, la probabilidad es del 95 %.
9.3. La recuperación de la vainillina añadida a un nivel de 250 mg/kg de
«butteroil» oscila entre 97,0 y 103,8. El contenido medio hallado fue del99,9 %, con una desviación típica del 2,7 %.
9.4. La solución patrón contiene un 5 % de la solución de extracción para
compensar el ensanchamiento de los picos provocado por la presencia deun 5 % de solución de extracción de las muestras problema. Ello permiteefectuar cuantificación a través de la altura de los picos.
9.5. El análisis se basa en una curva de calibrado lineal con una ordenada en el
origen igual a cero. La linealidad debe ser comprobada, utilizando dilu-ciones apropiadas de la solución patrón (4.5.2), la primera vez que serealice el análisis y, además, a intervalos regulares y cada vez que sealtere o repare el equipo de HPLC.