1994D0577—ES—19.01.2004—002.001—1
Estedocumentoesuninstrumentodedocumentaciónynocomprometelaresponsabilidaddelasinstituciones
►B DECISIÓNDELACOMISIÓN
de15dejuliode1994
relativa a las condiciones sanitarias y a la certificación veterinaria para la importación de
espermadeanimalesdelaespeciebovinaprocedentedetercerospaíses
(94/577/CE)
(DOL221de26.8.1994,p.26)
Modificadapor:
DiarioOficial
nopágina fecha
►M1Decisión1999/495/CEdelaComisiónde1dejuliode1999 L192 56 24.7.1999
►M2Decisión2004/52/CEdelaComisiónde9deenerode2004 L10 67 16.1.2004
▼B
DECISIÓNDELACOMISIÓN
de15dejuliode1994
relativa alascondicionessanitariasyalacertificación veterinaria
para la importación de esperma de animales de la especie bovina
procedentedetercerospaíses
(94/577/CE)
LACOMISIÓNDELASCOMUNIDADESEUROPEAS,
VistoelTratadoconstitutivodelaComunidadEuropea,
Vista la Directiva 88/407/CEE del Consejo, de 14 de junio de 1988,
por la que se fijan las exigencias de policía sanitaria aplicables a los
intercambios intracomunitarios y a las importaciones de esperma deanimales de la especie bovina(
1), cuya última modificación la consti-
tuyelaDirectiva93/60/CEE(2),y,enparticular,susartículos10y11,
Considerando que la Decisión 90/14/CEE de la Comisión(3), cuya
últimamodificaciónlaconstituyelaDecisión91/276/CEE(4),establece
lalistadetercerospaísesdelosquelosEstadosmiembrosautorizanlaimportacióndeespermadeanimalesdelaespeciebovina,enadelante,
listadetercerospaíses;
Considerando que, dada la situación sanitaria de Israel, se han tenido
queprohibir,porlaDecisión91/277/CEEdelaComisión(
5)lasimpor-
tacionesprocedentesdeestepaís;
Considerando que las Decisiones 91/479/CEE(6), 91/549/CEE(7), 92/
123/CEE(8), 92/124/CEE(9), 92/125/CEE(10), 92/126/CEE(11), 92/
127/CEE(12), 92/128/CEE(13), 92/386/CEE(14), 92/387/CEE(15)y 92/
445/CEE(16)de la Comisión establecen las condiciones sanitarias y la
certificación veterinaria para la importación de esperma de animalesde la especie bovina procedente de los Estados Unidos de América,Canadá, Polonia, Finlandia, Nueva Zelanda, Austria, Suiza, Suecia,Hungría,NoruegayChecoslovaquia,respectivamente;
Considerando que la Directiva 93/60/CEE del Consejo, que tiene que
aplicarseenlosEstadosmiembrosantesdel1dejuliode1994,modi-fica la Directiva 88/407/CEE, por lo que es necesario modificar lasDecisiones relativas a los terceros países arriba mencionados; que,
para simplificar y precisar la normativa comunitaria aplicable en este
sector, es necesario agrupar las Decisiones antes mencionadas yderogarlasqueserefieranalospaísesindividualmente;
Considerando que, dadas las disposiciones del Acuerdo sobre el
EspacioEconómicoEuropeo,noesnecesariomantenerloscertificadosveterinarios para las importaciones de esperma de ganado bovinoprocedentedeAustria,Finlandia,NoruegaySuecia;
Considerandoque,deconformidad coneldictamen delComitécientí-
ficoveterinario, esnecesario introducir unapruebasuplementaria paraladeteccióndelaenfermedadenzoóticahemorrágica;1994D0577—ES—19.01.2004—002.001—2
(1)D OnoL194de22.7.1988,p.10.
(2)D OnoL186de28.7.1993,p.28.
(3)D OnoL8de11.1.1990,p.71.
(4)D OnoL135de30.5.1991,p.58.
(5)D OnoL135de30.5.1991,p.60.
(6)D OnoL258de16.9.1991,p.1.
(7)D OnoL298de29.10.1991,p.6.
(8)D OnoL48de22.2.1992,p.1.
(9)D OnoL48de22.2.1992,p.10.
(10)D OnoL48de22.2.1992,p.19.
(11)D OnoL48de22.2.1992,p.28.
(12)D OnoL48de22.2.1992,p.37.
(13)D OnoL48de22.2.1992,p.46.
(14)D OnoL204de21.7.1992,p.13.
(15)D OnoL204de21.7.1992,p.22.
(16)D OnoL247de27.8.1992,p.1.
▼B
Considerando que únicamente en el caso de Canadá se efectuán antes
de la recolección del esperma pruebas de rutina para la detección deesa enfermedad a intervalos de seis meses; que, por consiguiente, es
necesario establecer un período transitorio para la aplicación de la
presente Decisión con respecto a Canadá a fin de que las autoridadeszoosanitarias canadienses dispongan de tiempo suficiente para intro-ducirlanuevapruebaensuprogramaderutina;
Considerando,además,quearaízdelosavancesquesehanproducido
recientementeenelconocimientodelaepidemiologíadelafiebrecata-
rral, en la actualidad puede permitirse la importación de esperma de
animalesdelaespeciebovinaprocedentedeAustralia;
Considerando que la situación zoosanitaria en los terceros países que
figuranenlalistadetercerospaísesesbuenayescontroladaporservi-ciosveterinariosorganizadosybienestructuradosenloquerespectaalasenfermedadestransmisiblesporelesperma;
Considerando que las autoridades zoosanitarias competentes de los
tercerospaísesquefiguranenlalistadetercerospaísessehancompro-
metidoaconfirmaralaComisiónyalosEstadosmiembrosportélexotelefax y en el plazo de 24 horas, la aparición de cualesquiera de lasenfermedades que figuran en la lista A de la Oficina Internacional deEpizootias(OIE),asícomodecualquiermodificaciónqueseproduzcaenlapolíticadevacunacionesenrelaciónconalgunadeellaso,enun
plazo de tiempo adecuado, de la aparición de alguna de las enferme-
dades que figuran en la lista B de la OIE, así como cualquierpropuesta de modificación de las normas de importación aplicables alosanimalesdomésticosoalespermaylosembrionesdeéstos;
Considerando que las autoridades zoosanitarias competentes de los
tercerospaísesquefiguranenlalistadetercerospaísessehancompro-
metido a supervisar oficialmente la expedición de certificados en
aplicacióndelapresenteDecisión,yagarantizarquetodosloscertifi-cados, excepciones y resultados de laboratorio en los que se hayanpodido basar estos certificados se conserven en un archivo oficialdurante 12 meses, como mínimo, después del envío del esperma al
queserefieran;
Considerando que las autoridades zoosanitarias competentes de los
tercerospaísesquefiguranenlalistadetercerospaísessehancompro-metidoaautorizaroficialmentecentrosderecoleccióndeespermaparalaexportacióndeespermabovinoalaComunidad,deconformidadconelartículo9delaDirectiva88/407/CEE;
Considerando que las condiciones sanitarias y la certificación veteri-
nariadebenadaptarsealasituaciónzoosanitariadeltercerpaísdeque
setrate;
Considerando que las medidas previstas en la presente Decisión se
ajustanaldictamendelComitéveterinariopermanente,
HAADOPTADOLAPRESENTEDECISIÓN:
Artículo 1
Los Estados miembros autorizarán la importación de esperma de
animales de la especie bovina que cumpla las condiciones indicadasenloscertificadoscontenidosenlaprimerapartedelosAnexosA,B,CyDyqueprocedanúnicamentedelostercerospaísesquefiguranen
lasegundapartededichosAnexos.
No obstante, los Estados miembros autorizarán, hasta el 31 de
diciembre de 1994, las importaciones procedentes de Canadá deesperma de animales de la especie bovina recolectado y transformadodeconformidadconlaDecisión91/549/CEE.
Artículo 2
Quedan derogadas la Decisiones 91/479/CEE, 92/123/CEE, 92/124/
CEE, 92/125/CEE, 92/126/CEE, 92/127/CEE, 92/128/CEE, 92/386/CEE,92/387/CEEy92/445/CEE.1994D0577—ES—19.01.2004—002.001—3
▼B
Quedaderogada,conefectosapartirdel1deenerode1995,laDeci-
sión91/549/CEE.
Artículo 3
Las disposiciones del párrafo primero del artículo 1 serán aplicables
conrespectoaCanadáapartirdel1deenerode1995.
Artículo 4
LosdestinatariosdelapresenteDecisiónseránlosEstadosmiembros.1994D0577—ES—19.01.2004—002.001—4
▼B
ANEXOA
PRIMERAPARTE
CERTIFICADOZOOSANITARIO
paralaimportacióndeespermadeanimalesdelaespeciebovina
1994D0577—ES—19.01.2004—002.001—5
▼B
1994D0577—ES—19.01.2004—002.001—6
▼B
►(1)(2)M11994D0577—ES—19.01.2004—002.001—7
▼M2
SEGUNDAPARTE
Lista de países autorizados para utilizar el modelo de certificado zoosani-
tariodelaprimerapartedelanexoA
CódigoISO País Observaciones
CH Suiza
NZ NuevaZelanda
RO RumaniaCY Chipre (*)
CZ RepúblicaCheca (*)
EE Estonia (*)
HU Hungría (*)
LT Lituania (*)
LV Letonia (*)
MT Malta (*)
PL Polonia (*)
SI Eslovenia (*)
SK Eslovaquia (*)
(*) Aplicable sólo hasta que este Estado adherente se convierta en Estado miembro de la
Comunidad.1994D0577—ES—19.01.2004—002.001—8
▼B
ANEXOB
PRIMERAPARTE
CERTIFICADOZOOSANITARIO
paralaimportacióndelosEstadosUnidosdeAméricadeespermadeanimalesdelaespeciebovina
1994D0577—ES—19.01.2004—002.001—9
▼B
1994D0577—ES—19.01.2004—002.001—10
▼B
►(1)(2)M11994D0577—ES—19.01.2004—002.001—11
▼B
SEGUNDAPARTE
Lista de países autorizados para utilizar el modelo de certificado zoosani-
tariodelaprimerapartedelAnexoB
ESTADOSUNIDOSDEAMÉRICA1994D0577—ES—19.01.2004—002.001—12
▼B
ANEXOC
PRIMERAPARTE
CERTIFICADOZOOSANITARIO
paralaimportacióndeespermadeanimalesdelaespeciebovina
1994D0577—ES—19.01.2004—002.001—13
▼B
1994D0577—ES—19.01.2004—002.001—14
▼B
►(1)(2)M11994D0577—ES—19.01.2004—002.001—15
▼B
SEGUNDAPARTE
Lista de países autorizados para utilizar el modelo de certificado zoosani-
tariodelaprimerapartedelAnexoC
CANADÁ: ConexclusióndelaregióndelValledeOkanagan(ColumbiaBritá-
nica),queeslazonadelimitadaporunalíneaqueunelossiguientespuntos:unpuntodelafronteraentreCanadáylosEstadosUnidosa
120º 15 ′de longitud y 49º de latitud, un punto situado al norte a
119º 35 ′de longitud y 50º 30 ′de latitud, un punto situado al
nordestea119ºdelongitudy50º45 ′delatitud,yunpuntosituado
alsurenlafrontera entreCanadá ylosEstadosUnidosa118º15 ′
delongitudy49ºdelatitud.1994D0577—ES—19.01.2004—002.001—16
▼B
ANEXOD
PRIMERAPARTE
CERTIFICADOZOOSANITARIO
paralaimportacióndeespermadeanimalesdelaespeciebovina
1994D0577—ES—19.01.2004—002.001—17
▼B
1994D0577—ES—19.01.2004—002.001—18
▼B
►(1)(2)M11994D0577—ES—19.01.2004—002.001—19
▼B
SEGUNDAPARTE
Lista de terceros países autorizados para utilizar el modelo de certificado
zoosanitariodelaprimerapartedelAnexoD
AUSTRALIA1994D0577—ES—19.01.2004—002.001—20
▼B
ANEXOE
Normas para la prueba de inmunoabsorción enzimática de bloqueo o
competitiva mediante un anticuerpo monoclonal específico de grupo para
ladeteccióndelosanticuerposdelvirusdelafiebrecatarralovina
PRUEBA ELISA COMPETITIVA DE LA FIEBRE CATARRAL OVINA
MEDIANTEELANTICUERPOMONOCLONAL3-17-A3
Mediante esta prueba se pueden detectar los anticuerpos de todos los serotipos
conocidosdelvirusdelafiebrecatarralovina(BTV).
LapruebasebasaenlainterrupcióndelareacciónentreelantígenoBTVyun
anticuerpo monoclonal específico de grupo (3-17-A3) mediante la adición de
diluciones de suero problema. Los anticuerpos del BTV presentes en el suero
problemabloqueanlareactividaddelanticuerpomonoclonal(Mab),dandolugar
aunareducciónenelcoloresperadoalañadirseelsustratoenzimático.
MATERIALESYREACTIVOS
1. Microplacasdefondoplano.
2. Antígeno:preparadosegúnsedescribeacontinuación.
3. Amortiguador de bloqueo: 5% (p/v) de leche en polvodesecada «Marvel»,
0,1 % (v/v) de Tween-20 (suministrado en forma de jarabe de monolaurato
depolioxietilensorbitol)enPBS(soluciónamortiguadoradefosfatos).
4. Anticuerpo monoclonal: 3-17-A3 (suministrado como sobrenadante del
cultivo-tejido de hibridoma) almacenado a una temperatura de − 20 ºC o
liofilizado,diluidoal1/50conamortiguadordebloqueoantesdesuempleo,
dirigidocontraelpolipéptidoespecíficodegrupop7.
5. Conjugado:anticuerpodeconejoantiglobulinaderatón(adsorbidoyeluido)
conjugadoconperoxidasaderábanoyguardadoenlaoscuridadaunatempe-
raturade4ºC.
6. Sustrato y cromógeno: 0,2 g de ortofenilendiamina (OPD) disuelta en una
solución amortiguadora consistente en 2,553 g de ácido cítrico, 4,574 g de
ortofosfatoácidodisódicoyaguadestiladahasta500ml,sedivideenpartes
alícuotasde25mlyseconservaenlaoscuridadaunatemperaturade−20
ºC,con12 µl/25mldeperóxidodehidrógeno(30%p/v)añadidoinmedia-
tamenteantesdesuempleo.
TRATAR LA OPD CON CUIDADO— USAR GUANTES DE GOMA —
POSIBLEMUTÁGENO.
7. Ácido sulfúrico molar: 26,6 ml de ácido añadido a 473,4 ml de agua desti-
lada.
RECUÉRDESE QUE SIEMPRE HAY QUE AÑADIR ÁCIDO AL AGUA,
NUNCAAGUAALÁCIDO.
8. Agitadororbital.
9. LectordeplacaELISA(lapruebapuedeleersevisualmente).1994D0577—ES—19.01.2004—002.001—21
▼B
FORMATODELAPRUEBA
1994D0577—ES—19.01.2004—002.001—22
▼B
NORMASDELAPRUEBA
Controlenblanco
Lafila1A-HesuncontrolenblancoconsistenteenantígenodeBTVyconju-
gado.PuedeutilizarseparaajustarellectorELISA.
ControlMabLa fila 2 A - H es el control del anticuerpo monoclonal y se compone de
antígeno de BTV, anticuerpo monoclonal y conjugado. Se trata de un control
negativo.Elpromediodelaslecturasdedensidadópticadeestafiladecontrol
representaelvalor0%deinhibición.
ControlpositivoLa fila 3 A- H es el control positivo. Se compone de antígeno de BTV,dilu-
ciones de antisuero positivo de BTV, Mab y conjugado. Se incluye como
indicadordequelapruebafuncionaadecuadamente,debiéndoseobtenerniveles
similaresdeinhibicióndeunapruebaaotra.
SuerosproblemaEn el formato de la prueba arriba indicado, pueden probarse 18 sueros en una
seriededilucionesde1/2,1/4,1/8y1/16.Estoserviráparaobtenerunaindica-
ción del título del anticuerpo de los sueros problema. El margen de dilución
puedeampliarsehastaobtenerlostítulosdepuntofinaldeladilucióndelsuero.
Deformaalternativayenestudiosserológicosdemayorenvergadura,lossueros
podrán probarse en una sola dilución (1/4) o en dos diluciones (1/2 y 1/4) a
mododepruebadedetecciónrápida.
PROCEDIMIENTO
1. DiluirelantígenodelBTVenunaconcentraciónpretituladaenPBS,someter
ladiluciónbrevementeaultrasonidosparadispersarelvirusagregado(sino
se dispone del instrumento, pipetear enérgicamente) y poner 50 µl en todos
lospocillosdelaplaca ELISA.Golpearlosladosdelaplaca paradispersar
elantígeno.
2. Incubar durante 60minutosa37ºCenunagitador orbital. Lavar lasplacas
tresvecesllenandoyvaciandolospocillosconPBSnoestérilysecarenun
papelabsorbente.
3. Añadir 50 µl de amortiguador de bloqueo por pocillo. Añadir los sueros
problema y el suero positivo a los pocillos adecuados y diluir en la placa
mediante una pipeta multicanal. Noañadir suerosal control en blanco ni al
controlMab.
4. Inmediatamentedespuésdehaberañadidolossuerosproblema,diluirelMab
enelamortiguadordebloqueo(paraladiluciónpretitulada)yañadir50 µla
todoslospocillosdelaplacaexceptolosdecontroldeblanco.
5. Incubardurante 60minutosa37ºCenunagitadororbital. Lavartresveces
conPBSysecarconunpapelabsorbente.
6. Diluir el conjugado de anticuerpo de conejo de antiglobulina de ratón al 1/
5000 en el amortiguador de bloqueo y añadir 50 µl a todos los pocillos de
laplaca.
7. Incubardurante 60minutosa37ºCenunagitadororbital. Lavartresveces
conPBSysecarconunagenteabsorbente.
8. DescongelarlaOPDy,justoantesdeutilizarla, añadir12 µldeperóxidode
hidrógeno al30%acada fracción de 25mldeOPD.Añadir50 µlatodos
lospocillosdelaplaca.Dejarqueelcolorsedesarrolle durante10minutos
aproximadamente y detener la reacción con ácido sulfúrico 1 M (50 µl por
pocillo). El color deberá desarrollarse en los pocillos de control Mab y en
lospocillosquecontengansuerossinningúnanticuerpodelBTV.
9. Examinar y marcar las placas visualmente o bien mediante un lector espec-
trofotométrico.
ANÁLISISDELOSRESULTADOS
Calcular la lectura media de DO de los controles Mab. Este resultado repre-
sentará el valor de inhibición del 0 %. Las lecturas de densidad óptica de los
sueros problema se expresarán como valores de porcentaje de inhibición
mediantelasiguientefórmula:
Valordelporcentajedeinhibici´ on¼100/C0
DOenpresenciadelsueroproblema
DOenausenciadelsueroproblema/C21001994D0577—ES—19.01.2004—002.001—23
▼B
Losvaloresdeinhibiciónsuperioresal40%enunadilucióndesueroal1/4se
consideraránpositivos.Seráposiblelalecturavisual,dadoqueel40%deinhi-
bicióneselvalormínimodiscerniblefácilmentealavista.1994D0577—ES—19.01.2004—002.001—24
▼B
PREPARACIÓN DEL ANTÍGENO DEL VIRUS DE LA FIEBRE CATA-
RRALOVINA(BTV)PARALAPRUEBAELISA
1. Lavar10frascosdeRouxdecultivoscelularesconfluentesdeBHK-21tres
vecesconmediodeEaglesinsueroeinocularelvirusdelafiebrecatarral
ovinadelserotipo1enmediodeEaglesinsuero.
2. Incubara37ºCyexaminardiariamenteelefectocitopático(cpe).3. Cuandoseveaelefectocitopáticoenun80-90%delacapacelulardecada
frasco de Roux, recoger el virus desprendiendo por agitación todas las
célulasdelcristal.
4. Centrifugara2000-3000rpmparaquesedimentenlascélulas.
5. Eliminarelsobrenadanteyvolverasuspenderlascélulasen30mlaproxi-
madamente de PBS con un 1 % de «Sarkosyl» y 2 ml de fluoruro de
fenolmetilsulfonilo (amortiguador de lisis). Esto puede provocar que las
células formen un gel, efecto que podrá reducirse añadiendo más amorti-
guadorde lisis. Adviértase que el fluoruro de fenilmetilsulfonilo es nocivo
ydebemanejarseconmuchocuidado.
6. Romperlascélulasdurante60segundosmedianteunasondaultrasónicacon
unaamplitudde30micras.
7. Centrifugara10000rpmdurante10minutos.
8. Almacenar el sobrenadante a + 4 ºC y volver a suspender el sedimento
celularrestanteen10-20mldeamortiguadordelisis.
9. Someteraultrasonidosyclarificartresveces,almacenandoelsobrenadante
decadafase.
10. Juntarlossobrenadantesycentrifugar a24000rpmdurante120minutosa
+ 4 ºC encima de una almohadilla de 5 ml de sacarosa al 40 % (p/v en
PBS) utilizando tubos de centrifugado Beckmann de 30 ml y un rotor 28
SW.
11. Eliminar el sobrenadante, escurrir bien los tubos y volver a suspender el
sedimentoenPBSmedianteunbañodeultrasonidos.Almacenarelantígeno
enpartesalícuotasa−70ºC.
TITULACIÓN DEL ANTÍGENO DEL VIRUS DE LA FIEBRE CATA-
RRALOVINAPARALAPRUEBAELISA
ElantígenodelafiebrecatarralovinaparalapruebaELISAsetitulamediante
el método ELISA indirecto. Se titulan diluciones al 1/2 de antígeno ante una
dilución constante (1/50) del anticuerpo monoclonal 3-17-A3. El proceso es el
siguiente:
PROCEDIMIENTO
1. DiluirelantígenodelvirusdelafiebrecatarralovinaenPBSenlaplacade
microtitulaciónenunaseriededilucionesal1/2(50 µl/pocillo)medianteuna
pipetamulticanal.
2. Incubardurante1horaa37ºCenunagitadororbital.
3. LavarlasplacastresvecesconPBS.4. Añadir 50 µl de anticuerpo monoclonal 3-17-A3 (diluido al 1/50) en cada
pocillodelaplacademicrotitulación.
5. Incubardurante1horaa37ºCenunagitadororbital.6. LavarlasplacastresvecesconPBS.7. Añadir 50 µl de anticuerpo de conejo antiglobulina de ratón conjugado con
peroxidasa de rábano, diluido a una concentración óptima pretitulada, en
cadapocillodelaplacademicrotitulación.
8. Incubardurante1horaa37ºCenunagitadororbital.
9. Añadir el substrato y el cromógeno del modo expuesto anteriormente.
Detener la reacción después de 10 minutos mediante la adición de ácido
sulfúricomolar(50 µl/pocillo).
En el método competitivo, el anticuerpo monoclonal debe hallarse en exceso;
para ello se escoge una dilución de antígeno incluida en la curva de titulación
(noenlaregiónplana)quealcabode10minutosdéaproximadamente0,8DO.1994D0577—ES—19.01.2004—002.001—25
▼B
Normasparalapruebadeinmunodifusiónengeldeagarparaladetección
delosanticuerposdelaenfermedadenzoóticahemorrágica
La prueba de inmunodifusión engel de agar deberá efectuarse deconformidad
conelsiguienteprocedimiento:
MATERIALESYREACTIVOS
1. Antígeno
El antígeno precipitante deberá prepararse en un cultivo celular que favo-
rezca la multiplicación rápida del serotipo (o serotipos) adecuado(s) de la
enfermedad enzoótica hemorrágica. Se recomienda la utilización de células
BHKoVero.Alfinalizarelcrecimiento delvirus,elantígenoseencontrará
enellíquido sobrenadante, peroparaseractivo deberá tener unaconcentra-
ciónde50a100veces,loquesepodráobteneraplicandounprocedimiento
normalizado de concentración de las proteínas. El virus existente en el
antígeno podrá inactivarse con la adición de 0,3 % (v/v) de betapropiolac-
tona.
2. Suerodecontrolpositivoconocido
Con el suero y el antígeno de referencia internacionales, preparar un suero
patrónnacionalnormalizadoconrelaciónalsuerodereferenciainternacional
para obtener una proporción óptima, liofilizarlo y emplearlo como suero de
controlpositivoconocidoencadaprueba.
3. Sueroproblema
PROCEDIMIENTO
1. Preparar una solución de agarosa al 1 % en un tampón de borato o de
barbitol sódico con un pH de 8,5 a 9,0, y verter en una placa Petri hasta
unaalturamínimade3mm.
2. Perforar en el agar siete pocillos libres de humedad de 5 mm de diámetro
cada uno, dispuestos del siguiente modo: un pocillo central, rodeado de los
otrosseispocillos,formandouncírculode3mmderadio.
3. Llenarelpocillocentralconelantígenoestándar,lospocillosperiféricos2,4
y 6 con el suero positivo conocido, y los pocillos 1, 3 y 5 con el suero
problema.
4. Incubar durante 72 horas como máximo a temperatura ambiente en una
cámaracerradayhúmeda.
INTERPRETACIÓN
Elsueroproblemaespositivosiformaunalíneadeprecipitinaespecíficaconel
antígeno y una línea completa de identidad con el suero de control. El suero
problema es negativo si no forma una línea específica con el antígeno y no
desvía lalínea delsuerodecontrol.LasplacasPetri deberánexaminarse sobre
fondooscuroconiluminaciónindirecta.1994D0577—ES—19.01.2004—002.001—26