1994D0577—ES—01.05.2004—003.001—1
Estedocumentoesuninstrumentodedocumentaciónynocomprometelaresponsabilidaddelasinstituciones
►B DECISIÓNDELACOMISIÓN
de15dejuliode1994
relativa a las condiciones sanitarias y a la certificación veterinaria para la importación de
espermadeanimalesdelaespeciebovinaprocedentedetercerospaíses
(94/577/CE)
(DOL221de26.8.1994,p.26)
Modificadapor:
DiarioOficial
nopágina fecha
►M1Decisión1999/495/CEdelaComisiónde1dejuliode1999 L192 56 24.7.1999
►M2Decisión2004/52/CEdelaComisiónde9deenerode2004 L10 67 16.1.2004
Modificadapor:
►A1Acta relativa a las condiciones de adhesión de la República Checa, la
República de Estonia, la República de Chipre, la República de Letonia,
la República de Lituania, la República de Hungría, la República de
Malta,laRepúblicadePolonia,laRepúblicadeEsloveniaylaRepúblicaEslovaca,yalasadaptacionesdelosTratadosenlosquesefundamentalaUniónL236 33 23.9.2003
▼B
DECISIÓNDELACOMISIÓN
de15dejuliode1994
relativa alascondicionessanitariasyalacertificación veterinaria
para la importación de esperma de animales de la especie bovina
procedentedetercerospaíses
(94/577/CE)
LACOMISIÓNDELASCOMUNIDADESEUROPEAS,
VistoelTratadoconstitutivodelaComunidadEuropea,
Vista la Directiva 88/407/CEE del Consejo, de 14 de junio de 1988,
por la que se fijan las exigencias de policía sanitaria aplicables a los
intercambios intracomunitarios y a las importaciones de esperma deanimales de la especie bovina(
1), cuya última modificación la consti-
tuyelaDirectiva93/60/CEE(2),y,enparticular,susartículos10y11,
Considerando que la Decisión 90/14/CEE de la Comisión(3), cuya
últimamodificaciónlaconstituyelaDecisión91/276/CEE(4),establece
lalistadetercerospaísesdelosquelosEstadosmiembrosautorizanlaimportacióndeespermadeanimalesdelaespeciebovina,enadelante,
listadetercerospaíses;
Considerando que, dada la situación sanitaria de Israel, se han tenido
queprohibir,porlaDecisión91/277/CEEdelaComisión(
5)lasimpor-
tacionesprocedentesdeestepaís;
Considerando que las Decisiones 91/479/CEE(6), 91/549/CEE(7), 92/
123/CEE(8), 92/124/CEE(9), 92/125/CEE(10), 92/126/CEE(11), 92/
127/CEE(12), 92/128/CEE(13), 92/386/CEE(14), 92/387/CEE(15)y 92/
445/CEE(16)de la Comisión establecen las condiciones sanitarias y la
certificación veterinaria para la importación de esperma de animalesde la especie bovina procedente de los Estados Unidos de América,Canadá, Polonia, Finlandia, Nueva Zelanda, Austria, Suiza, Suecia,Hungría,NoruegayChecoslovaquia,respectivamente;
Considerando que la Directiva 93/60/CEE del Consejo, que tiene que
aplicarseenlosEstadosmiembrosantesdel1dejuliode1994,modi-fica la Directiva 88/407/CEE, por lo que es necesario modificar lasDecisiones relativas a los terceros países arriba mencionados; que,
para simplificar y precisar la normativa comunitaria aplicable en este
sector, es necesario agrupar las Decisiones antes mencionadas yderogarlasqueserefieranalospaísesindividualmente;
Considerando que, dadas las disposiciones del Acuerdo sobre el
EspacioEconómicoEuropeo,noesnecesariomantenerloscertificadosveterinarios para las importaciones de esperma de ganado bovinoprocedentedeAustria,Finlandia,NoruegaySuecia;
Considerandoque,deconformidad coneldictamen delComitécientí-
ficoveterinario, esnecesario introducir unapruebasuplementaria paraladeteccióndelaenfermedadenzoóticahemorrágica;1994D0577—ES—01.05.2004—003.001—2
(1)D OnoL194de22.7.1988,p.10.
(2)D OnoL186de28.7.1993,p.28.
(3)D OnoL8de11.1.1990,p.71.
(4)D OnoL135de30.5.1991,p.58.
(5)D OnoL135de30.5.1991,p.60.
(6)D OnoL258de16.9.1991,p.1.
(7)D OnoL298de29.10.1991,p.6.
(8)D OnoL48de22.2.1992,p.1.
(9)D OnoL48de22.2.1992,p.10.
(10)D OnoL48de22.2.1992,p.19.
(11)D OnoL48de22.2.1992,p.28.
(12)D OnoL48de22.2.1992,p.37.
(13)D OnoL48de22.2.1992,p.46.
(14)D OnoL204de21.7.1992,p.13.
(15)D OnoL204de21.7.1992,p.22.
(16)D OnoL247de27.8.1992,p.1.
▼B
Considerando que únicamente en el caso de Canadá se efectuán antes
de la recolección del esperma pruebas de rutina para la detección deesa enfermedad a intervalos de seis meses; que, por consiguiente, es
necesario establecer un período transitorio para la aplicación de la
presente Decisión con respecto a Canadá a fin de que las autoridadeszoosanitarias canadienses dispongan de tiempo suficiente para intro-ducirlanuevapruebaensuprogramaderutina;
Considerando,además,quearaízdelosavancesquesehanproducido
recientementeenelconocimientodelaepidemiologíadelafiebrecata-
rral, en la actualidad puede permitirse la importación de esperma de
animalesdelaespeciebovinaprocedentedeAustralia;
Considerando que la situación zoosanitaria en los terceros países que
figuranenlalistadetercerospaísesesbuenayescontroladaporservi-ciosveterinariosorganizadosybienestructuradosenloquerespectaalasenfermedadestransmisiblesporelesperma;
Considerando que las autoridades zoosanitarias competentes de los
tercerospaísesquefiguranenlalistadetercerospaísessehancompro-
metidoaconfirmaralaComisiónyalosEstadosmiembrosportélexotelefax y en el plazo de 24 horas, la aparición de cualesquiera de lasenfermedades que figuran en la lista A de la Oficina Internacional deEpizootias(OIE),asícomodecualquiermodificaciónqueseproduzcaenlapolíticadevacunacionesenrelaciónconalgunadeellaso,enun
plazo de tiempo adecuado, de la aparición de alguna de las enferme-
dades que figuran en la lista B de la OIE, así como cualquierpropuesta de modificación de las normas de importación aplicables alosanimalesdomésticosoalespermaylosembrionesdeéstos;
Considerando que las autoridades zoosanitarias competentes de los
tercerospaísesquefiguranenlalistadetercerospaísessehancompro-
metido a supervisar oficialmente la expedición de certificados en
aplicacióndelapresenteDecisión,yagarantizarquetodosloscertifi-cados, excepciones y resultados de laboratorio en los que se hayanpodido basar estos certificados se conserven en un archivo oficialdurante 12 meses, como mínimo, después del envío del esperma al
queserefieran;
Considerando que las autoridades zoosanitarias competentes de los
tercerospaísesquefiguranenlalistadetercerospaísessehancompro-metidoaautorizaroficialmentecentrosderecoleccióndeespermaparalaexportacióndeespermabovinoalaComunidad,deconformidadconelartículo9delaDirectiva88/407/CEE;
Considerando que las condiciones sanitarias y la certificación veteri-
nariadebenadaptarsealasituaciónzoosanitariadeltercerpaísdeque
setrate;
Considerando que las medidas previstas en la presente Decisión se
ajustanaldictamendelComitéveterinariopermanente,
HAADOPTADOLAPRESENTEDECISIÓN:
Artículo 1
Los Estados miembros autorizarán la importación de esperma de
animales de la especie bovina que cumpla las condiciones indicadasenloscertificadoscontenidosenlaprimerapartedelosAnexosA,B,CyDyqueprocedanúnicamentedelostercerospaísesquefiguranen
lasegundapartededichosAnexos.
No obstante, los Estados miembros autorizarán, hasta el 31 de
diciembre de 1994, las importaciones procedentes de Canadá deesperma de animales de la especie bovina recolectado y transformadodeconformidadconlaDecisión91/549/CEE.
Artículo 2
Quedan derogadas la Decisiones 91/479/CEE, 92/123/CEE, 92/124/
CEE, 92/125/CEE, 92/126/CEE, 92/127/CEE, 92/128/CEE, 92/386/CEE,92/387/CEEy92/445/CEE.1994D0577—ES—01.05.2004—003.001—3
▼B
Quedaderogada,conefectosapartirdel1deenerode1995,laDeci-
sión91/549/CEE.
Artículo 3
Las disposiciones del párrafo primero del artículo 1 serán aplicables
conrespectoaCanadáapartirdel1deenerode1995.
Artículo 4
LosdestinatariosdelapresenteDecisiónseránlosEstadosmiembros.1994D0577—ES—01.05.2004—003.001—4
▼B
ANEXOA
PRIMERAPARTE
CERTIFICADOZOOSANITARIO
paralaimportacióndeespermadeanimalesdelaespeciebovina
1994D0577—ES—01.05.2004—003.001—5
▼B
1994D0577—ES—01.05.2004—003.001—6
▼B
►(1)(2)M11994D0577—ES—01.05.2004—003.001—7
▼A1
SEGUNDAPARTE
Lista de países autorizados para utilizar el modelo de certificado zoosani-
tariodelaprimerapartedelAnexoA
NUEVAZELANDA
RUMANIA
SUIZA1994D0577—ES—01.05.2004—003.001—8
▼B
ANEXOB
PRIMERAPARTE
CERTIFICADOZOOSANITARIO
paralaimportacióndelosEstadosUnidosdeAméricadeespermadeanimalesdelaespeciebovina
1994D0577—ES—01.05.2004—003.001—9
▼B
1994D0577—ES—01.05.2004—003.001—10
▼B
►(1)(2)M11994D0577—ES—01.05.2004—003.001—11
▼B
SEGUNDAPARTE
Lista de países autorizados para utilizar el modelo de certificado zoosani-
tariodelaprimerapartedelAnexoB
ESTADOSUNIDOSDEAMÉRICA1994D0577—ES—01.05.2004—003.001—12
▼B
ANEXOC
PRIMERAPARTE
CERTIFICADOZOOSANITARIO
paralaimportacióndeespermadeanimalesdelaespeciebovina
1994D0577—ES—01.05.2004—003.001—13
▼B
1994D0577—ES—01.05.2004—003.001—14
▼B
►(1)(2)M11994D0577—ES—01.05.2004—003.001—15
▼B
SEGUNDAPARTE
Lista de países autorizados para utilizar el modelo de certificado zoosani-
tariodelaprimerapartedelAnexoC
CANADÁ: ConexclusióndelaregióndelValledeOkanagan(ColumbiaBritá-
nica),queeslazonadelimitadaporunalíneaqueunelossiguientespuntos:unpuntodelafronteraentreCanadáylosEstadosUnidosa
120º 15 ′de longitud y 49º de latitud, un punto situado al norte a
119º 35 ′de longitud y 50º 30 ′de latitud, un punto situado al
nordestea119ºdelongitudy50º45 ′delatitud,yunpuntosituado
alsurenlafrontera entreCanadá ylosEstadosUnidosa118º15 ′
delongitudy49ºdelatitud.1994D0577—ES—01.05.2004—003.001—16
▼B
ANEXOD
PRIMERAPARTE
CERTIFICADOZOOSANITARIO
paralaimportacióndeespermadeanimalesdelaespeciebovina
1994D0577—ES—01.05.2004—003.001—17
▼B
1994D0577—ES—01.05.2004—003.001—18
▼B
►(1)(2)M11994D0577—ES—01.05.2004—003.001—19
▼B
SEGUNDAPARTE
Lista de terceros países autorizados para utilizar el modelo de certificado
zoosanitariodelaprimerapartedelAnexoD
AUSTRALIA1994D0577—ES—01.05.2004—003.001—20
▼B
ANEXOE
Normas para la prueba de inmunoabsorción enzimática de bloqueo o
competitiva mediante un anticuerpo monoclonal específico de grupo para
ladeteccióndelosanticuerposdelvirusdelafiebrecatarralovina
PRUEBA ELISA COMPETITIVA DE LA FIEBRE CATARRAL OVINA
MEDIANTEELANTICUERPOMONOCLONAL3-17-A3
Mediante esta prueba se pueden detectar los anticuerpos de todos los serotipos
conocidosdelvirusdelafiebrecatarralovina(BTV).
LapruebasebasaenlainterrupcióndelareacciónentreelantígenoBTVyun
anticuerpo monoclonal específico de grupo (3-17-A3) mediante la adición de
diluciones de suero problema. Los anticuerpos del BTV presentes en el suero
problemabloqueanlareactividaddelanticuerpomonoclonal(Mab),dandolugar
aunareducciónenelcoloresperadoalañadirseelsustratoenzimático.
MATERIALESYREACTIVOS
1. Microplacasdefondoplano.
2. Antígeno:preparadosegúnsedescribeacontinuación.
3. Amortiguador de bloqueo: 5% (p/v) de leche en polvodesecada «Marvel»,
0,1 % (v/v) de Tween-20 (suministrado en forma de jarabe de monolaurato
depolioxietilensorbitol)enPBS(soluciónamortiguadoradefosfatos).
4. Anticuerpo monoclonal: 3-17-A3 (suministrado como sobrenadante del
cultivo-tejido de hibridoma) almacenado a una temperatura de − 20 ºC o
liofilizado,diluidoal1/50conamortiguadordebloqueoantesdesuempleo,
dirigidocontraelpolipéptidoespecíficodegrupop7.
5. Conjugado:anticuerpodeconejoantiglobulinaderatón(adsorbidoyeluido)
conjugadoconperoxidasaderábanoyguardadoenlaoscuridadaunatempe-
raturade4ºC.
6. Sustrato y cromógeno: 0,2 g de ortofenilendiamina (OPD) disuelta en una
solución amortiguadora consistente en 2,553 g de ácido cítrico, 4,574 g de
ortofosfatoácidodisódicoyaguadestiladahasta500ml,sedivideenpartes
alícuotasde25mlyseconservaenlaoscuridadaunatemperaturade−20
ºC,con12 µl/25mldeperóxidodehidrógeno(30%p/v)añadidoinmedia-
tamenteantesdesuempleo.
TRATAR LA OPD CON CUIDADO— USAR GUANTES DE GOMA —
POSIBLEMUTÁGENO.
7. Ácido sulfúrico molar: 26,6 ml de ácido añadido a 473,4 ml de agua desti-
lada.
RECUÉRDESE QUE SIEMPRE HAY QUE AÑADIR ÁCIDO AL AGUA,
NUNCAAGUAALÁCIDO.
8. Agitadororbital.
9. LectordeplacaELISA(lapruebapuedeleersevisualmente).1994D0577—ES—01.05.2004—003.001—21
▼B
FORMATODELAPRUEBA
1994D0577—ES—01.05.2004—003.001—22
▼B
NORMASDELAPRUEBA
Controlenblanco
Lafila1A-HesuncontrolenblancoconsistenteenantígenodeBTVyconju-
gado.PuedeutilizarseparaajustarellectorELISA.
ControlMabLa fila 2 A - H es el control del anticuerpo monoclonal y se compone de
antígeno de BTV, anticuerpo monoclonal y conjugado. Se trata de un control
negativo.Elpromediodelaslecturasdedensidadópticadeestafiladecontrol
representaelvalor0%deinhibición.
ControlpositivoLa fila 3 A- H es el control positivo. Se compone de antígeno de BTV,dilu-
ciones de antisuero positivo de BTV, Mab y conjugado. Se incluye como
indicadordequelapruebafuncionaadecuadamente,debiéndoseobtenerniveles
similaresdeinhibicióndeunapruebaaotra.
SuerosproblemaEn el formato de la prueba arriba indicado, pueden probarse 18 sueros en una
seriededilucionesde1/2,1/4,1/8y1/16.Estoserviráparaobtenerunaindica-
ción del título del anticuerpo de los sueros problema. El margen de dilución
puedeampliarsehastaobtenerlostítulosdepuntofinaldeladilucióndelsuero.
Deformaalternativayenestudiosserológicosdemayorenvergadura,lossueros
podrán probarse en una sola dilución (1/4) o en dos diluciones (1/2 y 1/4) a
mododepruebadedetecciónrápida.
PROCEDIMIENTO
1. DiluirelantígenodelBTVenunaconcentraciónpretituladaenPBS,someter
ladiluciónbrevementeaultrasonidosparadispersarelvirusagregado(sino
se dispone del instrumento, pipetear enérgicamente) y poner 50 µl en todos
lospocillosdelaplaca ELISA.Golpearlosladosdelaplaca paradispersar
elantígeno.
2. Incubar durante 60minutosa37ºCenunagitador orbital. Lavar lasplacas
tresvecesllenandoyvaciandolospocillosconPBSnoestérilysecarenun
papelabsorbente.
3. Añadir 50 µl de amortiguador de bloqueo por pocillo. Añadir los sueros
problema y el suero positivo a los pocillos adecuados y diluir en la placa
mediante una pipeta multicanal. Noañadir suerosal control en blanco ni al
controlMab.
4. Inmediatamentedespuésdehaberañadidolossuerosproblema,diluirelMab
enelamortiguadordebloqueo(paraladiluciónpretitulada)yañadir50 µla
todoslospocillosdelaplacaexceptolosdecontroldeblanco.
5. Incubardurante 60minutosa37ºCenunagitadororbital. Lavartresveces
conPBSysecarconunpapelabsorbente.
6. Diluir el conjugado de anticuerpo de conejo de antiglobulina de ratón al 1/
5000 en el amortiguador de bloqueo y añadir 50 µl a todos los pocillos de
laplaca.
7. Incubardurante 60minutosa37ºCenunagitadororbital. Lavartresveces
conPBSysecarconunagenteabsorbente.
8. DescongelarlaOPDy,justoantesdeutilizarla, añadir12 µldeperóxidode
hidrógeno al30%acada fracción de 25mldeOPD.Añadir50 µlatodos
lospocillosdelaplaca.Dejarqueelcolorsedesarrolle durante10minutos
aproximadamente y detener la reacción con ácido sulfúrico 1 M (50 µl por
pocillo). El color deberá desarrollarse en los pocillos de control Mab y en
lospocillosquecontengansuerossinningúnanticuerpodelBTV.
9. Examinar y marcar las placas visualmente o bien mediante un lector espec-
trofotométrico.
ANÁLISISDELOSRESULTADOS
Calcular la lectura media de DO de los controles Mab. Este resultado repre-
sentará el valor de inhibición del 0 %. Las lecturas de densidad óptica de los
sueros problema se expresarán como valores de porcentaje de inhibición
mediantelasiguientefórmula:
Valordelporcentajedeinhibici´ on¼100/C0
DOenpresenciadelsueroproblema
DOenausenciadelsueroproblema/C21001994D0577—ES—01.05.2004—003.001—23
▼B
Losvaloresdeinhibiciónsuperioresal40%enunadilucióndesueroal1/4se
consideraránpositivos.Seráposiblelalecturavisual,dadoqueel40%deinhi-
bicióneselvalormínimodiscerniblefácilmentealavista.1994D0577—ES—01.05.2004—003.001—24
▼B
PREPARACIÓN DEL ANTÍGENO DEL VIRUS DE LA FIEBRE CATA-
RRALOVINA(BTV)PARALAPRUEBAELISA
1. Lavar10frascosdeRouxdecultivoscelularesconfluentesdeBHK-21tres
vecesconmediodeEaglesinsueroeinocularelvirusdelafiebrecatarral
ovinadelserotipo1enmediodeEaglesinsuero.
2. Incubara37ºCyexaminardiariamenteelefectocitopático(cpe).3. Cuandoseveaelefectocitopáticoenun80-90%delacapacelulardecada
frasco de Roux, recoger el virus desprendiendo por agitación todas las
célulasdelcristal.
4. Centrifugara2000-3000rpmparaquesedimentenlascélulas.
5. Eliminarelsobrenadanteyvolverasuspenderlascélulasen30mlaproxi-
madamente de PBS con un 1 % de «Sarkosyl» y 2 ml de fluoruro de
fenolmetilsulfonilo (amortiguador de lisis). Esto puede provocar que las
células formen un gel, efecto que podrá reducirse añadiendo más amorti-
guadorde lisis. Adviértase que el fluoruro de fenilmetilsulfonilo es nocivo
ydebemanejarseconmuchocuidado.
6. Romperlascélulasdurante60segundosmedianteunasondaultrasónicacon
unaamplitudde30micras.
7. Centrifugara10000rpmdurante10minutos.
8. Almacenar el sobrenadante a + 4 ºC y volver a suspender el sedimento
celularrestanteen10-20mldeamortiguadordelisis.
9. Someteraultrasonidosyclarificartresveces,almacenandoelsobrenadante
decadafase.
10. Juntarlossobrenadantesycentrifugar a24000rpmdurante120minutosa
+ 4 ºC encima de una almohadilla de 5 ml de sacarosa al 40 % (p/v en
PBS) utilizando tubos de centrifugado Beckmann de 30 ml y un rotor 28
SW.
11. Eliminar el sobrenadante, escurrir bien los tubos y volver a suspender el
sedimentoenPBSmedianteunbañodeultrasonidos.Almacenarelantígeno
enpartesalícuotasa−70ºC.
TITULACIÓN DEL ANTÍGENO DEL VIRUS DE LA FIEBRE CATA-
RRALOVINAPARALAPRUEBAELISA
ElantígenodelafiebrecatarralovinaparalapruebaELISAsetitulamediante
el método ELISA indirecto. Se titulan diluciones al 1/2 de antígeno ante una
dilución constante (1/50) del anticuerpo monoclonal 3-17-A3. El proceso es el
siguiente:
PROCEDIMIENTO
1. DiluirelantígenodelvirusdelafiebrecatarralovinaenPBSenlaplacade
microtitulaciónenunaseriededilucionesal1/2(50 µl/pocillo)medianteuna
pipetamulticanal.
2. Incubardurante1horaa37ºCenunagitadororbital.
3. LavarlasplacastresvecesconPBS.4. Añadir 50 µl de anticuerpo monoclonal 3-17-A3 (diluido al 1/50) en cada
pocillodelaplacademicrotitulación.
5. Incubardurante1horaa37ºCenunagitadororbital.6. LavarlasplacastresvecesconPBS.7. Añadir 50 µl de anticuerpo de conejo antiglobulina de ratón conjugado con
peroxidasa de rábano, diluido a una concentración óptima pretitulada, en
cadapocillodelaplacademicrotitulación.
8. Incubardurante1horaa37ºCenunagitadororbital.
9. Añadir el substrato y el cromógeno del modo expuesto anteriormente.
Detener la reacción después de 10 minutos mediante la adición de ácido
sulfúricomolar(50 µl/pocillo).
En el método competitivo, el anticuerpo monoclonal debe hallarse en exceso;
para ello se escoge una dilución de antígeno incluida en la curva de titulación
(noenlaregiónplana)quealcabode10minutosdéaproximadamente0,8DO.1994D0577—ES—01.05.2004—003.001—25
▼B
Normasparalapruebadeinmunodifusiónengeldeagarparaladetección
delosanticuerposdelaenfermedadenzoóticahemorrágica
La prueba de inmunodifusión engel de agar deberá efectuarse deconformidad
conelsiguienteprocedimiento:
MATERIALESYREACTIVOS
1. Antígeno
El antígeno precipitante deberá prepararse en un cultivo celular que favo-
rezca la multiplicación rápida del serotipo (o serotipos) adecuado(s) de la
enfermedad enzoótica hemorrágica. Se recomienda la utilización de células
BHKoVero.Alfinalizarelcrecimiento delvirus,elantígenoseencontrará
enellíquido sobrenadante, peroparaseractivo deberá tener unaconcentra-
ciónde50a100veces,loquesepodráobteneraplicandounprocedimiento
normalizado de concentración de las proteínas. El virus existente en el
antígeno podrá inactivarse con la adición de 0,3 % (v/v) de betapropiolac-
tona.
2. Suerodecontrolpositivoconocido
Con el suero y el antígeno de referencia internacionales, preparar un suero
patrónnacionalnormalizadoconrelaciónalsuerodereferenciainternacional
para obtener una proporción óptima, liofilizarlo y emplearlo como suero de
controlpositivoconocidoencadaprueba.
3. Sueroproblema
PROCEDIMIENTO
1. Preparar una solución de agarosa al 1 % en un tampón de borato o de
barbitol sódico con un pH de 8,5 a 9,0, y verter en una placa Petri hasta
unaalturamínimade3mm.
2. Perforar en el agar siete pocillos libres de humedad de 5 mm de diámetro
cada uno, dispuestos del siguiente modo: un pocillo central, rodeado de los
otrosseispocillos,formandouncírculode3mmderadio.
3. Llenarelpocillocentralconelantígenoestándar,lospocillosperiféricos2,4
y 6 con el suero positivo conocido, y los pocillos 1, 3 y 5 con el suero
problema.
4. Incubar durante 72 horas como máximo a temperatura ambiente en una
cámaracerradayhúmeda.
INTERPRETACIÓN
Elsueroproblemaespositivosiformaunalíneadeprecipitinaespecíficaconel
antígeno y una línea completa de identidad con el suero de control. El suero
problema es negativo si no forma una línea específica con el antígeno y no
desvía lalínea delsuerodecontrol.LasplacasPetri deberánexaminarse sobre
fondooscuroconiluminaciónindirecta.1994D0577—ES—01.05.2004—003.001—26