1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 1
Estedocumentoesuninstrumentodedocumentaciónynocomprometelaresponsabilidaddelasinstituciones
►B REGLAMENTO(CEE)No2676/90DELACOMISIÓN
de17deseptiembrede1990
porelquesedeterminanlosmétodosdeanálisiscomunitariosaplicablesenelsectordelvino
(DO L 272 de 3.10.1990, p. 1)
Modificado por:
Diario Oficial
nopágina fecha
►M1Reglamento (CEE) no2645/92 de la Comisión de 11 de septiembre de
1992L 266 10 12.9.1992
►M2Reglamento (CE) no60/95 de la Comisión de 16 de enero de 1995 L 11 19 17.1.1995
►M3Reglamento (CE) no69/96 de la Comisión de 18 de enero de 1996 L 14 13 19.1.1996
►M4Reglamento (CE) no822/97 de la Comisión de 6 de mayo de 1997 L 117 10 7.5.1997
►M5Reglamento (CEE) no2348/91 de la Comisión de 29 de julio de 1991 L 214 39 2.8.1991
►M6 modificado por el Reglamento (CE) no1932/97 de la Comisión de 3
de octubre de 1997L 272 10 4.10.1997
►M7Reglamento (CE) no761/1999 de la Comisión de 12 de abril de 1999 L 99 4 14.4.1999
►M8Reglamento (CE) no440/2003 de la Comisión de 10 de marzo de 2003 L 66 15 11.3.2003
▼B
REGLAMENTO(CEE)No2676/90DELACOMISIÓN
de17deseptiembrede1990
porelquesedeterminanlosmétodosdeanálisiscomunitariosapli-
cablesenelsectordelvino
LA COMISIÓN DE LAS COMUNIDADES EUROPEAS,
Visto el Tratado constitutivo de la Comunidad Económica Europea,
Visto el Reglamento (CEE) no822/87 del Consejo, de 16 de marzo de
1987, por el que se establece la organización común del mercado viti-vinícola (
1), modificado por el Reglamento (CEE) no388/90 (2), y, en
particular, su artículo 74,
Considerando que el apartado 1 del artículo 74 del Reglamento (CEE)
no822/87 dispone la adopción de métodos de análisis que permitan
determinar la composición de los productos mencionados en el artículo1 de este Reglamento y de las normas que permitan establecer si talesproductos han sido sometidos a tratamientos que infrijan las prácticasenológicasautorizadas ;
Considerando que, si bien la Comunidad no ha establecido todavía los
límites, en cifras, de los elementos presentes característicos de la utili-zación de determinadasprácticasenológicas , ni lastablaspara lacomparación de losdatosanalíticos , procede autorizar a losEs tadosmiembrosa determinar loslímites ;
Considerando que el apartado 1 del artículo 13 del Reglamento (CEE)
n
o822/87 prevé un examen analítico que determine, como mínimo, los
valores de los elementos característicos del vcprd de que se trate, quefiguren entre losenumeradosen el Anexo de es te Reglamento;
Considerando que, para controlar las indicaciones recogidas en los
documentos relativos a los productos de que se trate, es necesario esta-
blecer métodosde anális isuniformesque garanticen la obtención de
datos precisos y comparables; que, en consecuencia, tales métodosdeben ser obligatorios para cualquier transacción comercial y cualquieroperación de control; que, habida cuenta de laspos ibilidadeslimitadasdel comercio, esconveniente admitir un número res tringido de procedi-
mientosus ualesque permitan una determinación rápida y
suficientemente segura de los elementos investigados;
Considerando que es pertinente seleccionar, en la medida de lo posible,
aquellosmétodosque gocen de reconocimiento general, como losdes a-rrolladosen el marco del Convenio internacional de 1954 para launificación de los métodos de análisis y evaluación de vinos, publi-
cadospor la Oficina Internacional de la Viña y el Vino en la
Recopilación de métodos internacionales de análisis de vinos;
Considerando que los métodos de análisis comunitarios aplicables en el
sector del vino han sido establecidos por el Reglamento (CEE) n
o1108/
82 de la Comisión (3); que el progreso científico ha hecho necesario
sustituir determinados métodos por otros más adecuados, modificar
algunos e introducir otros nuevos, en particular los que desde entonceshan sido aprobados por la Oficina Internacional de la Viña y el Vino;que por razón del gran número y complejidad de dichasadaptaciones ,esconveniente agrupar todoslosanális isen un nuevo reglamento yderogar el Reglamento (CEE) n
o1108/82;
Considerando que, para garantizar que los resultados obtenidos en apli-
cación de losmétodosde anális ismencionadosen el artículo 74 delReglamento (CEE) n
o822/87 son comparables, es conveniente atenerse,
respecto a la repetibilidad y reproductibilidad de esos resultados, a lasdefinicionesde la Oficina Internacional de la Viña y el Vino;1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 2
(1)D O noL 84 de 27. 3. 1987, p. 1.
(2)D O noL 42 de 16. 2. 1990, p. 9.
(3)D O noL 133 de 14. 5. 1982, p. 1.
▼B
Considerando que, a fin de tener en cuenta el progreso científico, por
un lado, y el material técnico de loslaboratoriosoficiales , por otro, ypara que el trabajo de estos laboratorios resulte más eficaz y rentable,
procede permitir la aplicación de métodosde anális isautomatizadosen
determinadas condiciones; que es importante precisar que en caso delitigio losmétodosautomatizadosno podrán reemplazar a losde refe-rencia ni a los usuales;
Considerando que los resultados de la medición de la densidad
mediante el método automatizado basado en el principio de un reso-
nador de flexión son, en cuanto a su exactitud, repetibilidad yreproductibilidad, igualespor lo menosa losres ultadosobtenidosconlosmétodosque figuran en el punto 1 del Anexo del pres ente Regla-mento, para medir la masa volúmica o la densidad relativa; que, en
virtud de lo dispuesto en el apartado 3 del artículo 74 del Reglamento
(CEE) n
o822/87, resulta, pues, indicado considerar el método automa-
tizado como equivalente a losque figuran en el Anexo del pres enteReglamento;
Considerando que el procedimiento descrito en el capítulo 25 en el
punto 2.2.3.3.2 del Anexo del presente Reglamento para analizar el
contenido en dióxido de azufre total de losvinosy de losmos tosconun contenido estimado de menos de 50 mg/l produce una mejor extrac-ción de esta sustancia que el procedimiento descrito en el capítulo 13,punto 13.4 del Anexo del Reglamento (CEE) n
o1108/82; que da lugar
a resultado más elevado en dióxido de azufre total de los productos
analizados que pueden sobrepasar, especialmente en el caso de ciertos
zumosde uvas ; que a fin de evitar dificultadespara la circulación deloszumosde fruta ya elaboradosen el momento de la entrada en vigordel presente Reglamento y en espera que los procedimientos de elabo-ración se adaptasen para conseguir una desulfitación más completa de
los mostos de uva apagados, es necesario permitir durante un período
transitorio que el modo operatorio descrito en el Reglamento antesmencionado se utilice todavía;
Considerando que las medidas previstas en el presente Reglamento se
ajustan al dictamen del Comité de gestión del vino,
HA ADOPTADO EL PRESENTE REGLAMENTO:
Artículo 1
1. Figuran en el Anexo del presente Reglamento los métodos de
análisis comunitarios aplicables en el sector del vino que permiten, enlastrans accionescomercialesy en cualquier operación de control:
— establecer la composición de los productos contemplados en el
artículo 1 del Reglamento (CEE) n
o822/87,
— comprobar si tales productos han sido sometidos a tratamientos que
infrinjan prácticasenológicasautorizadas .
2. Cuando se establezcan métodos de referencia y métodos usuales,
losres ultadosobtenidoscon losprimeross erán losque prevalezcan.
Artículo 2
Para la aplicación del presente Reglamento:
a) La repetibilidad representa el valor por debajo del cual está situado,
con una probabilidad especificada, el valor absoluto de la diferencia
de dosres ultadosindividualesobtenidosa partir de medidasefec-tuadas en las mismas condiciones (mismo operador, mismoaparato, mismo laboratorio y un corto intervalo de tiempo).
b) La reproductibilidad representa el valor por debajo del cual está
situado, con una probabilidad especificada, el valor absoluto de ladiferencia de dosres ultadosindividualesobtenidosen condicionesdiferentes(operadoresdiferentes , aparatosdiferentesy/o laborato-rios diferentes, y/o épocas diferentes).1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 3
▼B
El término «resultado individual» es el valor obtenido cuando se aplica,
una vez y por completo, el método de ensayo normalizado sobre unasola muestra.
En ausencia de indicación la probabilidad es del 95 %.
Artículo 3
1. Se admitirán métodos de análisis automatizados, bajo la responsa-
bilidad del director de laboratorio, a condición de que la exactitud, la
repetibilidad y la reproductibilidad de los resultados sean por lo menosequivalentesa lasde losobtenidosmediante losmétodosde anális isque figuran en el Anexo.
En caso de litigio, los métodos que figuran en el Anexo no podrán ser
sustituidos por los métodos automatizados.
2. El método automatizado para medir la densidad basado en el
principio de un resonador de flexión se considerará como equivalente
a losmétodosque figuran en el punto 1 del Anexo del pres ente Regla-
mento.
Artículo 4
Cuando se haga referencia al agua para las soluciones, diluciones o
lavados, se tratará de agua destilada o desmineralizada de pureza almenosequivalente. Todoslosproductosdeberán s er de calidad analí-tica, salvo que se especifique otra cosa.
Artículo 5
Queda derogado el Reglamento (CEE) n
o1108/82.
No obstante, el apartado 4 del artículo 1 del Reglamento antes citado
esaplicable has ta el 31 de diciembre de 1990.
Artículo 6
El presente Reglamento entrará en vigor el día de su publicación en el
Diario Oficial de las Comunidades Europeas .
Será aplicable a partir del 1 de octubre de 1990.
El presente Reglamento será obligatorio en todos sus elementos y
directamente aplicable en cada Estado miembro.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 4
▼B
ANEXO
1.MASAVOLÚMICAA20ºCYDENSIDADRELATIVAA20ºC
1. DEFINICIONES
La masa volúmica es el cociente de la masa de un determinado
volumen de vino o mosto a 20 ºC por ese volumen. Se expresa en
gramos por mililitro y su símbolo es ρ′20 ºC.
La densidad relativa a 20 ºC o densidad 20 ºC/20 ºC es la relación,
expresada en número decimal, entre la masa de un cierto volumen de
vino o de mosto a 20 ºC y la masa del mismo volumen de agua a la
misma temperatura. Su símbolo es d20 ºC20 ºC.
2. FUNDAMENTO DE LOS MÉTODOS
La masa volúmica y la densidad relativa a 20 ºC se determinan en la
muestra de ensayo:
bien por picnometría: método de referencia,
bien por areometría o densimetría con balanza hidrostática: métodos
usuales.
Nota:
En determinaciones muy precisas, debe corregirse la acción del
dióxido de azufre sobre la masa volúmica:
ρ2 0ºC = ρ′20 ºC − 0.006 · S,
ρ2 0ºC = masa volúmica corregida,
ρ′20 ºC = masa volúmica observada,
S = dióxido de azufre total en g/l.
3. TRATAMIENTO PREVIO DE LA MUESTRA
Si el vino o el mosto contiene cantidades importantes de dióxido de
carbono, eliminar la mayor cantidad posible agitando 250 ml de vino
en un enienmeyer 1 000 ml o filtrando a baja presión sobre 2 g de
algodón colocado en un soporte.
4. MÉTODO DE REFERENCIA4.1.Material
Material corriente de laboratorio, y en particular:
4.1.1. Picnómetro (
1), de vidrio pyrex, con una capacidad de 100 ml apro-
ximadamente y termómetro móvil con esmerilado, graduado en
décimas de grado, de 10 º a 30 ºC. Este termómetro debe estar
contrastado (figura 1).1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 5
(1) Puede utilizarse cualquier picnómetro de características equivalentes.
▼B
FIGURA 1
Picnómetroysufrascotara
Este picnómetro consta de un tubo lateral de 25 mm de longitud y
1 mm, como máximo, de diámetro interior, terminado en una parte
cónica esmerilada. El tubo lateral puede estar cubierto por un «tapón
receptor» constituido por un tubo cónico esmerilado terminado en
una parte afilada. Dicho tapón sirve de cámara de dilatación.
Las dos partes esmeriladas del aparato deben estar realizadas con
gran cuidado.
4.1.2. Frasco tara, del mismo volumen exterior (con una aproximación de 1
ml) que el picnómetro y de masa igual a la del picnómetro lleno de
líquido de densidad 1,01 (solución al 2 % (m/v) de cloruro sódico).
Recipiente termostatado que se ajuste exactamente al cuerpo del
picnómetro.
4.1.3. Balanza de dosplatosde una capacidad de 300 g por lo menosy una
sensibilidad de una décima de miligramo,
obalanza monoplato de una capacidad de 200 g por lo menosy una
sensibilidad de una décima de miligramo.
4.2.Calibradodelpicnómetro
El calibrado del picnómetro supone la determinación de las carac-
terísticas siguientes:
— la tara en vacío,
— el volumen a 20 ºC,— la masa del agua a 20 ºC.
4.2.1.Utilizacióndeunabalanzadedosplatos
Poner el frasco tara en el plato izquierdo de la balanza y el picnó-
metro limpio, seco y con su «tapón receptor» en el plato derecho,
equilibrar colocando al lado del picnómetro masas conocidas de p
gramos.
Llenar con cuidado el picnómetro con agua destilada a temperatura
ambiente y colocar el termómetro; secar cuidadosamente el picnó-
metro y colocarlo dentro del recipiente termostatado; agitar por
inversión hasta que el termómetro señale una temperatura constante.
Enrasar exactamente hasta el borde superior del tubo lateral. Secar
dicho tubo, colocar el tapón receptor; leer la temperatura t ºC con
cuidado y, en su caso, corregir la inexactitud de la escala del termó-
metro. Pesar el picnómetro lleno de agua; se denominará p' a la
masa en gramos com la que se consigue el equilibrio.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 6
▼B
Cálculos (1)
Tara del picnómetro vacío:Tara en vacío = p + mm = masa de aire contenida en el picnómetro
m = 0,0012 (p − p ′)
Volumen a 20 ºC:
V
20 ºC=( p+m−p ′)·Ft
Ft= factor tomado de la tabla I para la temperatura t ºC
V20 ºCdebe conocerse con una aproximación de ± 0,001 ml.
Masa de agua a 20 ºC:
M20 ºCV20 ºC· 0,998203
0,998203 = masa volúmica del agua a 20 ºC.
4.2.2. Utilización de una balanza monoplato
Determinar:
— la masa del picnómetro limpio y seco: P,
— la masa del picnómetro lleno de agua a t º C: P1, siguiendo las
indicacionesque figuran en 4.2.1,
— la masa del frasco tara To.
Cálculos(1)
Tara del picnómetro vacío:
Tara en vacío = P − mm = masa de aire contenida en el picnómetro
m = 0,0012 (P
1−P )
Volumen a 20 º C:
V20 º C=[ P1− (P − m)]. Ft
Ft= factor tomado de la tabla I para la temperatura t º C
El volumen a 20 º C debe conocerse con una aproximación de
± 0,001 ml.
Masa de agua a 20 º C:M
20 º C−V20 º C· 0,998203
0,998203 = masa volúmica del agua a 20 º C.
4.3.Procedimiento (1)
4.3.1.Utilización de una balanza de dos platos
Pesar el picnómetro lleno de la muestra preparada para el ensayo (3)
siguiendo las indicaciones que figuran en 4.2.1. Sea p“ la masa en
gramos con la que se consigue el equilibrio a t º C.
Masa del líquido contenido en el picnómetro = p + m − p“.
Masa volúmica aparente a t º C:
ρtº C¼pþm/C0p00
V20 ºC
Calcular la masa volúmica a 20 º C utilizando una de las tablas de
corrección que figuran a continuación, en función de la naturaleza
del líquido estudiado: vino seco (tabla II), mosto natural o concen-
trado (tabla III), vino dulce (tabla IV).
La densidad 20º C/ 20 º C del vino se expresa dividiendo la masa
volúmica a 20 º C por 0,998203.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 7
(1) En el punto 6 de este capítulo figura un ejemplo numérico.
▼B
4.3.2.Utilización de una balanza monoplato (1)
Pesar el frasco tara; sea su masa T1
Calcular dT = T1−To
Masa del picnómetro vacío en el momento de la medida = P − m +
dT
Pesar el picnómetro lleno de la muestra preparada para ensayo
siguiendo las indicaciones que figuran en 4.2.1. Sea P2su masa a t
ºC .
Masa del líquido contenido en el picnómetro a t º C = P2−( P−m+
dT)
Masa volúmica aparente a t º C:
ρtºC¼P2/C0P/C0mþdT ðÞ
V20 º C
Calcular la masa volúmica a 20 º C del líquido estudiado: vino seco,
mosto natural o concentrado y vino dulce, tal como se indica en
4.3.1.
La densidad 20 º C/20 º C se obtiene dividiendo la masa volúmica a
20 º C por 0,998203.
4.3.3. Repetibilidad en la masa volúmica
Para-los vinos secos y semisecos: r = 0,00010
Para losvinosdulces : r = 0,00018
4.3.4. Reproductibilidad en la masa volúmica
Para los vinos secos y semisecos: R = 0,00037
Para losvinosdulces : R = 0,00045
5. Métodosus uales
5.1.Areometría
5.1.1.Aparatos
5.1.1.1. Areómetro
Losareómetrosdeben cumplir laspres cripcionesde la ISO en
cuanto a sus dimensiones y graduación.
Deben tener un cuerpo cilíndrico y un tallo de sección circular de
3 mm de diámetro, como mínimo. Para los vinos secos, deben estar
graduados de 0,983 a 1,003 en milésimas y 1/5 de milésima. Entre
una milésima y la milésima siguiente debe haber, como mínimo,
5 mm. Para medir la densidad de los vinos desalcoholizados, vinos
dulces y mostos, se utilizará un juego de 5 areómetros graduados de
1,000 a 1,030; 1,030 a 1,060; 1,060 a 1,090; 1,090 a 1,120; 1,120 a
1,150. Estos aparatos deben estar graduados en masas volúmicas a
20 º C, en milésimas y medias milésimas, como mínimo, estando
separada cada milésima de la siguiente por 3 mm por lo menos.
Estos areómetros deben estar graduados de forma que la lectura se
efectúe en «la parte superior del menisco». La indicación de la
graduación en masa volúmica a 20 º C o en densidad relativa a 20 º
C y de la lectura en la «parte superior del menisco» se indicará, bien
sobre la escala graduada o bien con una banda de papel que irá en el
interior del cuerpo cilíndrico.
Estos aparatos deben estar contrastados por un servicio oficial.
5.1.1.2. Termómetro contrastado, graduado de medio grado Celsius, como
mínimo.
5.1.1.3. Probeta cilíndrica de 36 mm de diámetro interior y 320 mm de
altura, mantenida verticalmente mediante un soporte con tornillos
niveladores.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 8
(1) En el punto 6 de este capítulo figura un ejemplo numérico.
▼B
5.1.2.Procedimiento
5.1.2.1. Técnica de una medida
Verter, en la probeta 5.1.1.3, 250 ml de muestra preparada para el
ensayo (3), introducir el areómetro y el termómetro. Leer el termó-
metro un minuto después de haber agitado para obtener el equilibrio
de temperatura. Retirar el termómetro y leer la masa volúmica
aparente a t º C sobre el tallo del areómetro tras un minuto de
reposo.
Corregir la acción de la temperatura sobre la masa volúmica
aparente a t º C mediante las tablas que se aplican en los casos de
vinos secos (tabla V), mostos (tabla VI) y vinos que contienen
azúcar (tabla VII).
La densidad 20 º C/20 º C se obtiene dividiendo la masa volúmica a
20 º C por 0,998203.
5.2.Densimetríaconbalanzahidrostática
5.2.1.Material
5.2.1.1. Balanza hidrostáticaLa balanza hidrostática, de una capacidad máxima de 100 g, por lo
menos, debe tener una sensibilidad de una décima de mg.
Debajo de cada plato se fija un flotador de vidrio pyrex que tenga un
volumen de 20 ml, como mínimo. Estos dos flotadores idénticos se
suspenden de un hilo de diámetro inferior o igual a 0,1 mm.
El flotador suspendido debajo del plato de la derecha debe poder
introducirse en una probeta cilíndrica que lleve una marca de nivel.
Dicha probeta debe tener un diámetro interior superior en 6 mm,
como mínimo, al del flotador. Este último debe poder introducirse
por completo en el volumen de la probeta situada debajo de la
marca, debiendo atraversar la superficie del líquido únicamente elhilo de suspensión. La temperatura del líquido contenido en la
probeta se medirá mediante un termómetro graduado en 1/5 de
grado.
Una balanza hidrostática monoplato puede igualmente ser utilizada.
5.2.2.Procedimiento
5.2.2.1. Calibrado de una balanza hidrostática
Con los dos flotadores suspendidos, se equilibra la balanza colo-
cando sobre el plato de la derecha las masas p.
Se llena la probeta de agua pura hasta la marca, se mide la tempera-
tura t º C después de agitar y se deja reposar durante 2 o 3 minutos.
Se restablece el equilibrio mediante masas que se colocan en el plato
de la derecha; se denominará p' a estas masas.
Volumen del flotador a 20 º C:
V
20 º C= (p' − p) (F + 0,0012)
F = factor dado por la tabla I para la temperatura t º C.
pyV20son las características del flotador.
5.2.2.2. Procedimiento
El flotador de la derecha se sumerge en la probeta llena de vino (o
de mosto) hasta la marca. Leer la termperatura t º C del vino (o del
mosto); sean:
p“ las masas que restablecen el equilibrio,
ρt º C la masa volúmica aparente:
ρtº C¼p00/C0p ðÞ
Vþ0;0012
Referir esta masa volúmica a 20 º C utilizando una de las tablas II,
III o IV.
6. Ejemplo de cálculo de la masa volúmica a 20 º C y de la densidad
20 º C/20 º C (método de referencia)1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 9
▼B
6.1.Picnometríaconbalanzadedosplatos
6.1.1.Determinación de las constantes del picnómetro
1. Pesada del picnómetro limpio y seco:
Tara = picnómetro + p
p = 104,9454 g
2. Pesada del picnómetro lleno de agua a la temperatura t º C:
Tara = picnómetro + agua + p'
p' = 1,2396 g para t = 20,5 º C.
3. Cálculo de la masa de aire contenida en el picnómetro:
m = 0,0012 (p − p ′)
m = 0,0012 (104,9454 − 1,2396)m = 0,1244 g.
4. Características que deben anotarse
Tara del picnómetro vacío, p + m:
p + m = 104,9454 + 0,1244
p + m = 105,0698 g
Volumen a 20 ºC = (p + m − p ′)·F
tº C
F20,50 ºC= 1,001900
V20 ºC= (105,0698 − 1,2396) · 1,001900
V20 ºC= 104,0275 ml
Masa del agua a 20 ºC = V20 ºC· 0,998203
M20 ºC= 103,8405 g.
6.1.2.Determinación de la masa volúmica a 20 º Cy de la densidad 20 º
C/20 º C de un vino seco:
p″= 1,2622 a 17,80 ºC
ρ17;80 ºC¼105 ;0698 /C01;2622
104 ;0275
ρ17,80 ºC= 0,99788 g/ml
La tabla II permite calcular ρ20 ºCa partir de ρtº Cmediante la rela-
ción:
ρ20 ºC¼ρtº C±c
1000
Para t = 17,80 ºC y para un grado alcohólico de 11 % vol se
encuentra c = 0,54
ρ20 ºC¼0;99788 /C00;54
1000
ρ20 ºC= 0,99734 g/ml
d20 ºC
20 ºC¼0;99734
0;998203¼0;99913
6.2.Picnometríaconbalanzamonoplato
6.2.1.Determinación de las constantes del picnómetro
1. Pesada del picnómetro limpio y seco:
P = 67,7913 g1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 10
▼B
2. Pesada del picnómetro lleno de agua a la temperatura t ºC:
P1= 169,2715 a 21,65 ºC.
3. Cálculo de la masa de aire contenida en el picnómetro:
m = 0,0012 (P1−P )
m = 0,0012 × 101,4802m = 0,1218 g
4. Características que deben anotarse
Tara del picnómetro vacío: P − m
P − m = 67,7913 − 0,1218
P − m = 67,6695 g
Volumen a 20 ºC = [P
1− (P − m)] Ftº C
F21,65 ºC= 1,002140
V20 ºC= (169,2715 − 67,6695) · 1,002140
V20 ºC= 101,8194 ml
Masa del agua a 20 ºC = V20 ºC· 0,998203
M20 ºC= 101,6364 g
Masa del frasco tara: To
To= 171,9160 g.
6.2.2.Determinacióndelamasavolúmica a20ºCydeladensidad20ºC/
20 ºCde un vino seco:
T1= 171,9178 g
dT = 171,9178 − 171,9160 = + 0,0018 g
P − m + dT = 67,6695 + 0,0018 = 67,6713 g
P2= 169,2799 a 18 ºC
ρ18 ºC¼169 ;2799 /C067;6713
101 ;8194
ρ18 ºC= 0,99793 g/ml
La Tabla II permite calcular ρ2 0ºC a partir de ρtº Cmediante la
relación
ρ20 ºC¼ρtº C±c
1000
Para t = 18 ºC y para un grado alcohólico de 11 % vol, se encuentra
c = 0,49
ρ20 ºC¼0;99793 /C00;49
1000
ρ20 ºC= 0,99744 g/ml
d20 ºC
20 ºC¼0;99744
0;998203¼0;999231990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 11
▼B
TABLAI
TabladefactoresF
por losque hay que multiplicar la mas a del agua contenida en el picnómetro de vidrio pyrex a t ºC,
para calcular el volumen del picnómetro a 20 ºC
tºC F tºC F tºC F tºC F tºC F tºC F tºC F
10,0 1,000398 13,0 1,000691 16,0 1,001097 19,0 1,001608 22,0 1,002215 25,0 1,002916 28,0 1,003704
,1 1,000406 ,1 1,000703 ,1 1,001113 ,1 1,001627 ,1 1,002238 ,1 1,002941 ,1 1,003731
,2 1,000414 ,2 1,000714 ,2 1,001128 ,2 1,001646 ,2 1,002260 ,2 1,002966 ,2 1,003759
,3 1,000422 ,3 1,000726 ,3 1,001144 ,3 1,001665 ,3 1,002282 ,3 1,002990 ,3 1,003787
,4 1,000430 ,4 1,000738 ,4 1,001159 ,4 1,001684 ,4 1,002304 ,4 1,003015 ,4 1,003815
10,5 1,000439 13,5 1,000752 16,5 1,001175 19,5 1,001703 22,5 1,002326 25,5 1,003041 28,5 1,003843
,6 1,000447 ,6 1,000764 ,6 1,001191 ,6 1,001722 ,6 1,002349 ,6 1,003066 ,6 1,003871
,7 1,000456 ,7 1,000777 ,7 1,001207 ,7 1,001741 ,7 1,002372 ,7 1,003092 ,7 1,003899
,8 1,000465 ,8 1,000789 ,8 1,001223 ,8 1,001761 ,8 1,002394 ,8 1,003117 ,8 1,003928
,9 1,000474 ,9 1,000803 ,9 1,001239 ,9 1,001780 ,9 1,002417 ,9 1,003143 ,9 1,003956
11,0 1,000483 14,0 1,000816 17,0 1,001257 20,0 1,001800 23,0 1,002439 26,0 1,003168 29,0 1,003984
,1 1,000492 ,1 1,000829 ,1 1,001273 ,1 1,001819 ,1 1,002462 ,1 1,003194 ,1 1,004013
,2 1,000501 ,2 1,000842 ,2 1,001290 ,2 1,001839 ,2 1,002485 ,2 1,003222 ,2 1,004042
,3 1,000511 ,3 1,000855 ,3 1,001306 ,3 1,001859 ,3 1,002508 ,3 1,003247 ,3 1,004071
,4 1,000520 ,4 1,000868 ,4 1,001323 ,4 1,001880 ,4 1,002531 ,4 1,003273 ,4 1,004099
11,5 1,000530 14,5 1,000882 17,5 1,001340 20,5 1,001900 23,5 1,002555 26,5 1,003299 29,5 1,004128
,6 1,000540 ,6 1,000895 ,6 1,001357 ,6 1,001920 ,6 1,002578 ,6 1,003326 ,6 1,004158
,7 1,000550 ,7 1,000909 ,7 1,001374 ,7 1,001941 ,7 1,002602 ,7 1,003352 ,7 1,004187
,8 1,000560 ,8 1,000923 ,8 1,001391 ,8 1,001961 ,8 1,002625 ,8 1,003379 ,8 1,004216
,9 1,000570 ,9 1,000937 ,9 1,001409 ,9 1,001982 ,9 1,002649 ,9 1,003405 ,9 1,004245
12,0 1,000580 15,0 1,000951 18,0 1,001427 21,0 1,002002 24,0 1,002672 27,0 1,003432 30,0 1,004275
,1 1,000591 ,1 1,000965 ,1 1,001445 ,1 1,002023 ,1 1,002696 ,1 1,003458
,2 1,000601 ,2 1,000979 ,2 1,001462 ,2 1,002044 ,2 1,002720 ,2 1,003485
,3 1,000612 ,3 1,000993 ,3 1,001480 ,3 1,002065 ,3 1,002745 ,3 1,003513
,4 1,000623 ,4 1,001008 ,4 1,001498 ,4 1,002086 ,4 1,002769 ,4 1,003540
12,5 1,000634 15,5 1,001022 18,5 1,001516 21,5 1,002107 24,5 1,002793 27,5 1,003567
,6 1,000645 ,6 1,001037 ,6 1,001534 ,6 1,002129 ,6 1,002817 ,6 1,003594
,7 1,000656 ,7 1,001052 ,7 1,001552 ,7 1,002151 ,7 1,002842 ,7 1,003621
,8 1,000668 ,8 1,001067 ,8 1,001570 ,8 1,002172 ,8 1,002866 ,8 1,003649
,9 1,000679 ,9 1,001082 ,9 1,001589 ,9 1,002194 ,9 1,002891 ,9 1,0036761990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 12
▼B
TABLA II
Tabladecorreccionescdetemperaturasobrelamasavolúmicadevinossecosyvinossecosenlosqueseha
eliminadoelalcohol,medidaenunpicnómetrodevidriopyrexatºCparareferirelresultadoa20ºC
ρ20¼ρt±c
1000− si tº es inferior a 20 ºC
+ si tº es superior a 20 ºC
Gradosalcohólicos
056789 1 0 1 1 1 2 1 3 1 4 1 5 1 6 1 7 1 8 1 9 2 0 2 1 2 2 2 3 2 4 2 5 2 6 2 7TemperaturasºC10 1,59 1,64 1,67 1,71 1,77 1,84 1,91 2,01 2,11 2,22 2,34 2,46 2,60 2,73 2,88 3,03 3,19 3,35 3,52 3,70 3,87 4,06 4,25 4,44
11 1,48 1,53 1,56 1,60 1,64 1,70 1,77 1,86 1,95 2,05 2,16 2,27 2,38 2,51 2,63 2,77 2,91 3,06 3,21 3,36 3,53 3,69 3,86 4,03
12 1,36 1,40 1,43 1,46 1,50 1,56 1,62 1,69 1,78 1,86 1,96 2,05 2,16 2,27 2,38 2,50 2,62 2,75 2,88 3,02 3,16 3,31 3,46 3,61
13 1,22 1,26 1,28 1,32 1,35 1,40 1,45 1,52 1,59 1,67 1,75 1,83 1,92 2,01 2,11 2,22 2,32 2,44 2,55 2,67 2,79 2,92 3,05 3,18
14 1,08 1,11 1,13 1,16 1,19 1,23 1,27 1,33 1,39 1,46 1,52 1,60 1,67 1,75 1,84 1,93 2,03 2,11 2,21 2,31 2,42 2,52 2,63 2,74
15 0,92 0,96 0,97 0,99 1,02 1,05 1,09 1,13 1,19 1,24 1,30 1,36 1,42 1,48 1,55 1,63 1,70 1,78 1,86 1,95 2,03 2,12 2,21 2,3016 0,76 0,79 0,80 0,81 0,84 0,86 0,89 0,93 0,97 1,01 1,06 1,10 1,16 1,21 1,26 1,32 1,38 1,44 1,51 1,57 1,64 1,71 1,78 1,85
17 0,59 0,61 0,62 0,63 0,65 0,67 0,69 0,72 0,75 0,78 0,81 0,85 0,88 0,95 0,96 1,01 1,05 1,11 1,15 1,20 1,25 1,30 1,35 1,40
18 0,40 0,42 0,42 0,43 0,44 0,46 0,47 0,49 0,51 0,53 0,55 0,57 0,60 0,63 0,65 0,68 0,71 0,74 0,77 0,81 0,84 0,87 0,91 0,94
19 0,21 0,21 0,22 0,22 0,23 0,23 0,24 0,25 0,26 0,27 0,28 0,29 0,30 0,32 0,33 0,34 0,36 0,37 0,39 0,41 0,42 0,44 0,46 0,47
20
21 0,21 0,22 0,22 0,23 0,23 0,24 0,25 0,26 0,27 0,28 0,29 0,30 0,31 0,32 0,34 0,36 0,37 0,38 0,40 0,41 0,43 0,44 0,46 0,48
22 0,44 0,45 0,46 0,47 0,48 0,49 0,51 0,52 0,54 0,56 0,59 0,61 0,63 0,66 0,69 0,71 0,74 0,77 0,80 0,83 0,87 0,90 0,93 0,97
23 0,68 0,70 0,71 0,72 0,74 0,76 0,78 0,80 0,83 0,86 0,90 0,93 0,96 1,00 1,03 1,08 1,13 1,17 1,22 1,26 1,31 1,37 1,41 1,46
24 0,93 0,96 0,97 0,99 1,01 1,03 1,06 1,10 1,13 1,18 1,22 1,26 1,31 1,36 1,41 1,47 1,52 1,58 1,64 1,71 1,77 1,84 1,90 1,97
25 1,19 1,23 1,25 1,27 1,29 1,32 1,36 1,40 1,45 1,50 1,55 1,61 1,67 1,73 1,80 1,86 1,93 2,00 2,08 2,16 2,24 2,32 2,40 2,4826 1,47 1,51 1,53 1,56 1,59 1,62 1,67 1,72 1,77 1,83 1,90 1,96 2,03 2,11 2,19 2,27 2,35 2,44 2,53 2,62 2,72 2,81 2,91 3,01
27 1,75 1,80 1,82 1,85 1,89 1,93 1,98 2,04 2,11 2,18 2,25 2,33 2,41 2,50 2,59 2,68 2,78 2,88 2,98 3,09 3,20 3,31 3,42 3,53
28 2,04 2,10 2,13 2,16 2,20 2,25 2,31 2,38 2,45 2,53 2,62 2,70 2,80 2,89 3,00 3,10 3,21 3,32 3,45 3,57 3,69 3,82 3,94 4,07
29 2,34 2,41 2,44 2,48 2,53 2,58 2,65 2,72 2,81 2,89 2,99 3,09 3,19 3,30 3,42 3,53 3,65 3,78 3,92 4,05 4,19 4,33 4,47 4,61
30 2,66 2,73 2,77 2,81 2,86 2,92 3,00 3,08 3,17 3,27 3,37 3,48 3,59 3,72 3,84 3,97 4,11 4,25 4,40 4,55 4,70 4,85 4,92 5,17
Nota:Se puede utilizar esta tabla para transformar la densidad d20ten densidad d2020.
TABLA III
Tabladecorreccionescdetemperaturasobrelamasavolúmicademostosnaturalesyconcentradosmedidaat
ºCmedianteunpicnómetrodevidriopyrex,parareferirelresultadoa20ºC
ρ20¼ρt±c
1000− si tº es inferior a 20 ºC
+ si tº es superior a 20 ºC
Masas volúmicas
1,05 1,06 1,07 1,08 1,09 1,10 1,11 1,12 1,13 1,14 1,15 1,16 1,18 1,20 1,22 1,24 1,26 1,28 1,30 1,32 1,34 1,36TemperaturasºC10º 2,31 2,48 2,66 2,82 2,99 3,13 3,30 3,44 3,59 3,73 3,88 4,01 4,28 4,52 4,76 4,98 5,18 5,42 5,56 5,73 5,90 6,05
11º 2,12 2,28 2,42 2,57 2,72 2,86 2,99 3,12 3,25 3,37 3,50 3,62 3,85 4,08 4,29 4,48 4,67 4,84 5,00 5,16 5,31 5,45
12º 1,92 2,06 2,19 2,32 2,45 2,58 2,70 2,82 2,94 3,04 3,15 3,26 3,47 3,67 3,85 4,03 4,20 4,36 4,51 4,65 4,78 4,91
13º 1,72 1,84 1,95 2,06 2,17 2,27 2,38 2,48 2,58 2,69 2,78 2,88 3,05 3,22 3,39 3,55 3,65 3,84 3,98 4,11 4,24 4,36
14º 1,52 1,62 1,72 1,81 1,90 2,00 2,09 2,17 2,26 2,34 2,43 2,51 2,66 2,82 2,96 3,09 3,22 3,34 3,45 3,56 3,67 3,76
15º 1,28 1,36 1,44 1,52 1,60 1,67 1,75 1,82 1,89 1,96 2,04 2,11 2,24 2,36 2,48 2,59 2,69 2,79 2,88 2,97 3,03 3,10
16º 1,05 1,12 1,18 1,25 1,31 1,37 1,43 1,49 1,55 1,60 1,66 1,71 1,81 1,90 2,00 2,08 2,16 2,24 2,30 2,37 2,43 2,49
17º 0,80 0,86 0,90 0,95 1,00 1,04 1,09 1,13 1,18 1,22 1,26 1,30 1,37 1,44 1,51 1,57 1,62 1,68 1,72 1,76 1,80 1,84
18º 0,56 0,59 0,62 0,66 0,68 0,72 0,75 0,77 0,80 0,83 0,85 0,88 0,93 0,98 1,02 1,05 1,09 1,12 1,16 1,19 1,21 1,24
19º 0,29 0,31 0,32 0,34 0,36 0,37 0,39 0,40 0,42 0,43 0,44 0,45 0,48 0,50 0,52 0,54 0,56 0,57 0,59 0,60 0,61 0,62
20º21º 0,29 0,30 0,32 0,34 0,35 0,37 0,38 0,40 0,41 0,42 0,44 0,46 0,48 0,50 0,53 0,56 0,58 0,59 0,60 0,61 0,62 0,62
22º 0,58 0,61 0,64 0,67 0,70 0,73 0,76 0,79 0,81 0,84 0,87 0,90 0,96 1,00 1,05 1,09 1,12 1,15 1,18 1,20 1,22 1,23
23º 0,89 0,94 0,99 1,03 1,08 1,12 1,16 1,20 1,25 1,29 1,33 1,37 1,44 1,51 1,57 1,63 1,67 1,73 1,77 1,80 1,82 1,84
24º 1,20 1,25 1,31 1,37 1,43 1,49 1,54 1,60 1,66 1,71 1,77 1,82 1,92 2,01 2,10 2,17 2,24 2,30 2,36 2,40 2,42 2,44
25º 1,51 1,59 1,66 1,74 1,81 1,88 1,95 2,02 2,09 2,16 2,23 2,30 2,42 2,53 2,63 2,72 2,82 2,89 2,95 2,99 3,01 3,0526º 1,84 1,92 2,01 2,10 2,18 2,26 2,34 2,42 2,50 2,58 2,65 2,73 2,87 3,00 3,13 3,25 3,36 3,47 3,57 3,65 3,72 3,79
27º 2,17 2,26 2,36 2,46 2,56 2,66 2,75 2,84 2,93 3,01 3,10 3,18 3,35 3,50 3,66 3,80 3,93 4,06 4,16 4,26 4,35 4,42
28º 2,50 2,62 2,74 2,85 2,96 3,07 3,18 3,28 3,40 3,50 3,60 3,69 3,87 4,04 4,21 4,36 4,50 4,64 4,75 4,86 4,94 5,00
29º 2,86 2,98 3,10 3,22 3,35 3,47 3,59 3,70 3,82 3,93 4,03 4,14 4,34 4,53 4,72 4,89 5,05 5,20 5,34 5,46 5,56 5,64
30º 3,20 3,35 3,49 3,64 3,77 3,91 4,05 4,17 4,30 4,43 4,55 4,67 4,90 5,12 5,39 5,51 5,68 5,84 5,96 6,08 6,16 6,22
Nota:Se puede utilizar esta tabla para transformar la densidad d20ten densidad d2020.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 13
▼B
TABLA IV
Tabladecorreccionescdetemperaturasobrelamasavolúmicadevinosde13%volomásquecontengan
azúcarresidual,medidaconunpicnómetrodevidriopyrexatºCparareferirelresultadoa20ºC
ρ20¼ρt±c
1000− si tº es inferior a 20 ºC
+ si tº es superior a 20 ºC
Vinosde 13 % vol Vinosde 15 % vol Vinosde 17 % vol
Masas volúmicas Masas volúmicas Masas volúmicas
1,000 1,020 1,040 1,060 1,080 1,100 1,120 1,000 1,020 1,040 1,060 1,080 1,100 1,120 1,000 1,020 1,040 1,060 1,080 1,100 1,120TemperaturasºC10º 2,36 2,71 3,06 3,42 3,72 3,96 4,32 2,64 2,99 3,36 3,68 3,99 4,30 4,59 2,94 3,29 3,64 3,98 4,29 4,60 4,89
11º 2,17 2,49 2,80 2,99 3,39 3,65 3,90 2,42 2,73 3,05 3,34 3,63 3,89 4,15 2,69 3,00 3,32 3,61 3,90 4,16 4,41
12º 1,97 2,25 2,53 2,79 3,05 3,29 3,52 2,19 2,47 2,75 3,01 3,27 3,51 3,73 2,42 2,70 2,98 3,24 3,50 3,74 3,96
13º 1,78 2,02 2,25 2,47 2,69 2,89 3,09 1,97 2,21 2,44 2,66 2,87 3,08 3,29 2,18 2,42 2,64 2,87 3,08 3,29 3,49
14º 1,57 1,78 1,98 2,16 2,35 2,53 2,70 1,74 1,94 2,14 2,32 2,52 2,69 2,86 1,91 2,11 2,31 2,50 2,69 2,86 3,03
15º 1,32 1,49 1,66 1,82 1,97 2,12 2,26 1,46 1,63 1,79 1,95 2,10 2,25 2,39 1,60 1,77 1,93 2,09 2,24 2,39 2,5316º 1,08 1,22 1,36 1,48 1,61 1,73 1,84 1,18 1,32 1,46 1,59 1,71 1,83 1,94 1,30 1,44 1,58 1,71 1,83 1,95 2,06
17º 0,83 0,94 1,04 1,13 1,22 1,31 1,40 0,91 1,02 1,12 1,21 1,30 1,39 1,48 1,00 1,10 1,20 1,30 1,39 1,48 1,56
18º 0,58 0,64 0,71 0,78 0,84 0,89 0,95 0,63 0,69 0,76 0,83 0,89 0,94 1,00 0,69 0,75 0,82 0,89 0,95 1,00 1,06
19º 0,30 0,34 0,37 0,40 0,43 0,46 0,49 0,33 0,37 0,40 0,43 0,46 0,49 0,52 0,36 0,39 0,42 0,46 0,49 0,52 0,54
20º21º 0,30 0,33 0,36 0,40 0,43 0,46 0,49 0,33 0,36 0,39 0,43 0,46 0,49 0,51 0,35 0,39 0,42 0,45 0,48 0,51 0,54
22º 0,60 0,67 0,73 0,80 0,85 0,91 0,98 0,65 0,72 0,78 0,84 0,90 0,96 1,01 0,71 0,78 0,84 0,90 0,96 1,01 1,07
23º 0,93 1,02 1,12 1,22 1,30 1,39 1,49 1,01 1,10 1,20 1,29 1,38 1,46 1,55 1,10 1,19 1,29 1,38 1,46 1,55 1,63
24º 1,27 1,39 1,50 1,61 1,74 1,84 1,95 1,37 1,49 1,59 1,72 1,84 1,95 2,06 1,48 1,60 1,71 1,83 1,95 2,06 2,17
25º 1,61 1,75 1,90 2,05 2,19 2,33 2,47 1,73 1,87 2,02 2,17 2,31 2,45 2,59 1,87 2,01 2,16 2,31 2,45 2,59 2,73
26º 1,94 2,12 2,29 2,47 2,63 2,79 2,95 2,09 2,27 2,44 2,62 2,78 2,94 3,10 2,26 2,44 2,61 2,79 2,95 3,11 3,26
27º 2,30 2,51 2,70 2,90 3,09 3,27 3,44 2,48 2,68 2,87 3,07 3,27 3,45 3,62 2,67 2,88 3,07 3,27 3,46 3,64 3,81
28º 2,66 2,90 3,13 3,35 3,57 3,86 4,00 2,86 3,10 3,23 3,55 3,77 3,99 4,20 3,08 3,31 3,55 3,76 3,99 4,21 4,41
29º 3,05 3,31 3,56 3,79 4,04 4,27 4,49 3,28 3,53 3,77 4,02 4,26 4,49 4,71 3,52 3,77 4,01 4,26 4,50 4,73 4,95
30º 3,44 3,70 3,99 4,28 4,54 4,80 5,06 3,68 3,94 4,23 4,52 4,79 5,05 5,30 3,95 4,22 4,51 4,79 5,07 5,32 5,57
Vinosde 19 % vol Vinosde 21 % vol
Masas volúmicas Masas volúmicas
1,000 1,020 1,040 1,060 1,080 1,100 1,120 1,000 1,020 1,040 1,060 1,080 1,100 1,120TemperaturasºC10º 3,27 3,62 3,97 4,30 4,62 4,92 5,21 3,62 3,97 4,32 4,66 4,97 5,27 5,56
11º 2,99 3,30 3,61 3,90 4,19 4,45 4,70 3,28 3,61 3,92 4,22 4,50 4,76 5,01
12º 2,68 2,96 3,24 3,50 3,76 4,00 4,21 2,96 3,24 3,52 3,78 4,03 4,27 4,49
13º 2,40 2,64 2,87 3,09 3,30 3,51 3,71 2,64 2,88 3,11 3,33 3,54 3,74 3,95
14º 2,11 2,31 2,51 2,69 2,88 3,05 3,22 2,31 2,51 2,71 2,89 3,08 3,25 3,43
15º 1,76 1,93 2,09 2,25 2,40 2,55 2,69 1,93 2,10 2,26 2,42 2,57 2,72 2,8616º 1,43 1,57 1,70 1,83 1,95 2,08 2,18 1,56 1,70 1,84 1,97 2,09 2,21 2,32
17º 1,09 1,20 1,30 1,39 1,48 1,57 1,65 1,20 1,31 1,41 1,50 1,59 1,68 1,77
18º 0,76 0,82 0,88 0,95 1,01 1,06 1,12 0,82 0,88 0,95 1,01 1,08 1,13 1,18
19º 0,39 0,42 0,45 0,49 0,52 0,55 0,57 0,42 0,46 0,49 0,52 0,55 0,58 0,61
20º
21º 0,38 0,42 0,45 0,48 0,51 0,54 0,57 0,41 0,45 0,48 0,51 0,54 0,57 0,60
22º 0,78 0,84 0,90 0,96 1,02 1,07 1,13 0,84 0,90 0,96 1,02 1,08 1,14 1,19
23º 1,19 1,28 1,38 1,47 1,55 1,64 1,72 1,29 1,39 1,48 1,57 1,65 1,74 1,82
24º 1,60 1,72 1,83 1,95 2,06 2,18 2,29 1,73 1,85 1,96 2,08 2,19 2,31 2,42
25º 2,02 2,16 2,31 2,46 2,60 2,74 2,88 2,18 2,32 2,47 2,62 2,76 2,90 3,0426º 2,44 2,62 2,79 2,96 3,12 3,28 3,43 2,53 2,81 2,97 3,15 3,31 3,47 3,62
27º 2,88 3,08 3,27 3,42 3,66 3,84 4,01 3,10 3,30 3,47 3,69 3,88 4,06 4,23
28º 3,31 3,54 3,78 4,00 4,22 4,44 4,64 3,56 3,79 4,03 4,25 4,47 4,69 4,89
29º 3,78 4,03 4,27 4,52 4,76 4,99 5,21 4,06 4,31 4,55 4,80 5,04 5,27 5,48
30º 4,24 4,51 4,80 5,08 5,36 5,61 5,86 4,54 4,82 5,11 5,39 5,66 5,91 6,161990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 14
▼B
TABLA V
Tabladecorreccionescdetemperaturasobrelamasavolúmicadevinossecosyvinossecosenlosqueseha
eliminadoelalcohol,medidaatºCconunareómetroounpicnómetrodevidrioordinario,parareferirelresul-
tadoa20ºC
ρ20¼ρt±c
1000− si tº es inferior a 20 ºC
+ si tº es superior a 20 ºC
Gradosalcohólicos
0 5 6 7 8 9 1 01 11 21 31 41 51 61 71 81 92 02 12 22 32 42 52 62 7TemperaturasºC10º 1,45 1,51 1,55 1,58 1,64 1,70 1,78 1,88 1,98 2,09 2,21 2,34 2,47 2,60 2,75 2,90 3,06 3,22 3,39 3,57 3,75 3,93 4,12 4,31
11º 1,35 1,40 1,43 1,47 1,52 1,58 1,65 1,73 1,83 1,93 2,03 2,15 2,26 2,38 2,51 2,65 2,78 2,93 3,08 3,24 3,40 3,57 3,73 3,90
12º 1,24 1,28 1,31 1,34 1,39 1,44 1,50 1,58 1,66 1,75 1,84 1,94 2,04 2,15 2,26 2,38 2,51 2,63 2,77 2,91 3,05 3,19 3,34 3,49
13º 1,12 1,16 1,18 1,21 1,25 1,30 1,35 1,42 1,49 1,56 1,64 1,73 1,82 1,91 2,01 2,11 2,22 2,33 2,45 2,57 2,69 2,81 2,95 3,07
14º 0,99 1,03 1,05 1,07 1,11 1,14 1,19 1,24 1,31 1,37 1,44 1,52 1,59 1,67 1,75 1,84 1,93 2,03 2,13 2,23 2,33 2,44 2,55 2,66
15º 0,86 0,89 0,90 0,92 0,95 0,98 1,02 1,07 1,12 1,17 1,23 1,29 1,35 1,42 1,49 1,56 1,63 1,71 1,80 1,88 1,96 2,05 2,14 2,2316º 0,71 0,73 0,74 0,76 0,78 0,81 0,84 0,87 0,91 0,96 0,99 1,05 1,10 1,15 1,21 1,27 1,33 1,39 1,45 1,52 1,59 1,66 1,73 1,80
17º 0,55 0,57 0,57 0,59 0,60 0,62 0,65 0,67 0,70 0,74 0,77 0,81 0,84 0,88 0,92 0,96 1,01 1,05 1,11 1,15 1,20 1,26 1,31 1,36
18º 0,38 0,39 0,39 0,40 0,41 0,43 0,44 0,46 0,48 0,50 0,52 0,55 0,57 0,60 0,62 0,65 0,68 0,71 0,74 0,78 0,81 0,85 0,88 0,91
19º 0,19 0,20 0,20 0,21 0,21 0,22 0,23 0,24 0,25 0,26 0,27 0,28 0,29 0,30 0,32 0,33 0,35 0,36 0,38 0,39 0,41 0,43 0,44 0,46
20º21º 0,21 0,22 0,22 0,23 0,23 0,24 0,25 0,25 0,26 0,27 0,29 0,29 0,31 0,32 0,34 0,35 0,36 0,38 0,39 0,41 0,43 0,44 0,46 0,48
22º 0,43 0,45 0,45 0,46 0,47 0,49 0,50 0,52 0,54 0,56 0,58 0,60 0,63 0,65 0,68 0,71 0,73 0,77 0,80 0,83 0,86 0,89 0,93 0,96
23º 0,67 0,69 0,70 0,71 0,72 0,74 0,77 0,79 0,82 0,85 0,88 0,91 0,95 0,99 1,03 1,07 1,12 1,16 1,21 1,25 1,30 1,35 1,40 1,45
24º 0,91 0,93 0,95 0,97 0,99 1,01 1,04 1,07 1,11 1,15 1,20 1,24 1,29 1,34 1,39 1,45 1,50 1,56 1,62 1,69 1,76 1,82 1,88 1,95
25º 1,16 1,19 1,21 1,23 1,26 1,29 1,33 1,37 1,42 1,47 1,52 1,57 1,63 1,70 1,76 1,83 1,90 1,97 2,05 2,13 2,21 2,29 2,37 2,4526º 1,42 1,46 1,49 1,51 1,54 1,58 1,62 1,67 1,73 1,79 1,85 1,92 1,99 2,07 2,14 2,22 2,31 2,40 2,49 2,58 2,67 2,77 2,86 2,96
27º 1,69 1,74 1,77 1,80 1,83 1,88 1,93 1,98 2,05 2,12 2,20 2,27 2,35 2,44 2,53 2,63 2,72 2,82 2,93 3,04 3,14 3,25 3,37 3,48
28º 1,97 2,03 2,06 2,09 2,14 2,19 2,24 2,31 2,38 2,46 2,55 2,63 2,73 2,83 2,93 3,03 3,14 3,26 3,38 3,50 3,62 3,75 3,85 4,00
29º 2,26 2,33 2,37 2,40 2,45 2,50 2,57 2,64 2,73 2,82 2,91 2,99 3,11 3,22 3,34 3,45 3,58 3,70 3,84 3,97 4,11 4,25 4,39 4,54
30º 2,56 2,64 2,67 2,72 2,77 2,83 2,90 2,98 3,08 3,18 3,28 3,38 3,50 3,62 3,75 3,88 4,02 4,16 4,30 4,46 4,61 4,76 4,92 5,07
Nota:Se puede utilizar esta tabla para convertir la densidad d20ten densidad d2020.
TABLA VI
Tabladecorreccionescdetemperaturasobrelamasavolúmicademostosnaturalesymostosconcentrados
medidaatºCconunpicnómetroounareómetrodevidrioordinario,parareferirelresultadoa20ºC
ρ20¼ρt±c
1000− si tº es inferior a 20 ºC
+ si tº es superior a 20 ºC
Masas volúmicas
1,05 1,06 1,07 1,08 1,09 1,10 1,11 1,12 1,13 1,14 1,15 1,16 1,18 1,20 1,22 1,24 1,26 1,28 1,30 1,32 1,34 1,36TemperaturasºC10º 2,17 2,34 2,52 2,68 2,85 2,99 3,16 3,29 3,44 3,58 3,73 3,86 4,13 4,36 4,60 4,82 5,02 5,25 5,39 5,56 5,73 5,87
11º 2,00 2,16 2,29 2,44 2,59 2,73 2,86 2,99 3,12 3,24 3,37 3,48 3,71 3,94 4,15 4,33 4,52 4,69 4,85 5,01 5,15 5,29
12º 1,81 1,95 2,08 2,21 2,34 2,47 2,58 2,70 2,82 2,92 3,03 3,14 3,35 3,55 3,72 3,90 4,07 4,23 4,37 4,52 4,64 4,77
13º 1,62 1,74 1,85 1,96 2,07 2,17 2,28 2,38 2,48 2,59 2,68 2,77 2,94 3,11 3,28 3,44 3,54 3,72 3,86 3,99 4,12 4,24
14º 1,44 1,54 1,64 1,73 1,82 1,92 2,00 2,08 2,17 2,25 2,34 2,42 2,57 2,73 2,86 2,99 3,12 3,24 3,35 3,46 3,57 3,65
15º 1,21 1,29 1,37 1,45 1,53 1,60 1,68 1,75 1,82 1,89 1,97 2,03 2,16 2,28 2,40 2,51 2,61 2,71 2,80 2,89 2,94 3,0116º 1,00 1,06 1,12 1,19 1,25 1,31 1,37 1,43 1,49 1,54 1,60 1,65 1,75 1,84 1,94 2,02 2,09 2,17 2,23 2,30 2,36 2,42
17º 0,76 0,82 0,86 0,91 0,96 1,00 1,05 1,09 1,14 1,18 1,22 1,25 1,32 1,39 1,46 1,52 1,57 1,63 1,67 1,71 1,75 1,79
18º 0,53 0,56 0,59 0,63 0,65 0,69 0,72 0,74 0,77 0,80 0,82 0,85 0,90 0,95 0,99 1,02 1,06 1,09 1,13 1,16 1,18 1,20
19º 0,28 0,30 0,31 0,33 0,35 0,36 0,38 0,39 0,41 0,42 0,43 0,43 0,46 0,48 0,50 0,52 0,54 0,55 0,57 0,58 0,59 0,60
20º21º 0,28 0,29 0,31 0,33 0,34 0,36 0,37 0,39 0,40 0,41 0,43 0,44 0,46 0,48 0,51 0,54 0,56 0,57 0,58 0,59 0,60 0,60
22º 0,55 0,58 0,61 0,64 0,67 0,70 0,73 0,76 0,78 0,81 0,84 0,87 0,93 0,97 1,02 1,06 1,09 1,12 1,15 1,17 1,19 1,19
23º 0,85 0,90 0,95 0,99 1,04 1,08 1,12 1,16 1,21 1,25 1,29 1,32 1,39 1,46 1,52 1,58 1,62 1,68 1,72 1,75 1,77 1,79
24º 1,15 1,19 1,25 1,31 1,37 1,43 1,48 1,54 1,60 1,65 1,71 1,76 1,86 1,95 2,04 2,11 2,17 2,23 2,29 2,33 2,35 2,37
25º 1,44 1,52 1,59 1,67 1,74 1,81 1,88 1,95 2,02 2,09 2,16 2,22 2,34 2,45 2,55 2,64 2,74 2,81 2,87 2,90 2,92 2,96
26º 1,76 1,84 1,93 2,02 2,10 2,18 2,25 2,33 2,41 2,49 2,56 2,64 2,78 2,91 3,03 3,15 3,26 3,37 3,47 3,55 3,62 3,60
27º 2,07 2,16 2,26 2,36 2,46 2,56 2,65 2,74 2,83 2,91 3,00 3,07 3,24 3,39 3,55 3,69 3,82 3,94 4,04 4,14 4,23 4,30
28º 2,39 2,51 2,63 2,74 2,85 2,96 3,06 3,16 3,28 3,38 3,48 3,57 3,75 3,92 4,08 4,23 4,37 4,51 4,62 4,73 4,80 4,86
29º 2,74 2,86 2,97 3,09 3,22 3,34 3,46 3,57 3,69 3,80 3,90 4,00 4,20 4,39 4,58 4,74 4,90 5,05 5,19 5,31 5,40 5,48
30º 3,06 3,21 3,35 3,50 3,63 3,77 3,91 4,02 4,15 4,28 4,40 4,52 4,75 4,96 5,16 5,35 5,52 5,67 5,79 5,91 5,99 6,04
Nota:Se puede usar esta tabla para transformar la densidad d20ten densidad d2020.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 15
▼B
TABLA VII
Tabladecorreccionescdetemperaturasobrelamasavolúmicadevinosde13%volomásquecontengan
azúcarresidual,medidaatºCconunareómetroounpicnómetrodevidrioordinario,parareferirelresultado
a20ºC
ρ20¼ρt±c
1000− si tº es inferior a 20 ºC
+ si tº es superior a 20 ºC
Vinosde 13 % vol Vinosde 15 % vol Vinosde 17 % vol
Masas volúmicas Masas volúmicas Masas volúmicas
1,000 1,020 1,040 1,060 1,080 1,100 1,120 1,000 1,020 1,040 1,060 1,080 1,100 1,120 1,000 1,020 1,040 1,060 1,080 1,100 1,120TemperaturasºC10º 2,24 2,58 2,93 3,27 3,59 3,89 4,18 2,51 2,85 3,20 3,54 3,85 4,02 4,46 2,81 3,15 3,50 3,84 4,15 4,45 4,74
11º 2,06 2,37 2,69 2,97 3,26 3,53 3,78 2,31 2,61 2,93 3,21 3,51 3,64 4,02 2,57 2,89 3,20 3,49 3,77 4,03 4,28
12º 1,87 2,14 2,42 2,67 2,94 3,17 3,40 2,09 2,36 2,64 2,90 3,16 3,27 3,61 2,32 2,60 2,87 3,13 3,39 3,63 3,84
13º 1,69 1,93 2,14 2,37 2,59 2,80 3,00 1,88 2,12 2,34 2,56 2,78 2,88 3,19 2,09 2,33 2,55 2,77 2,98 3,19 3,39
14º 1,49 1,70 1,90 2,09 2,27 2,44 2,61 1,67 1,86 2,06 2,25 2,45 2,51 2,77 1,83 2,03 2,23 2,42 2,61 2,77 2,94
15º 1,25 1,42 1,59 1,75 1,90 2,05 2,19 1,39 1,56 1,72 1,88 2,03 2,11 2,32 1,54 1,71 1,87 2,03 2,18 2,32 2,47
16º 1,03 1,17 1,30 1,43 1,55 1,67 1,78 1,06 1,27 1,40 1,53 1,65 1,77 1,88 1,25 1,39 1,52 1,65 1,77 1,89 2,00
17º 0,80 0,90 1,00 1,09 1,17 1,27 1,36 0,87 0,98 1,08 1,17 1,26 1,35 1,44 0,96 1,06 1,16 1,26 1,35 1,44 1,52
18º 0,54 0,61 0,68 0,75 0,81 0,86 0,92 0,60 0,66 0,73 0,80 0,85 0,91 0,97 0,66 0,72 0,79 0,86 0,92 0,97 1,03
19º 0,29 0,33 0,36 0,39 0,42 0,45 0,48 0,32 0,36 0,39 0,42 0,45 0,48 0,51 0,35 0,38 0,41 0,45 0,48 0,51 0,53
20º21º 0,29 0,32 0,35 0,39 0,42 0,45 0,47 0,32 0,35 0,38 0,42 0,45 0,48 0,50 0,34 0,38 0,41 0,44 0,47 0,50 0,53
22º 0,57 0,64 0,70 0,76 0,82 0,88 0,93 0,63 0,69 0,75 0,81 0,87 0,93 0,98 0,68 0,75 0,81 0,87 0,93 0,99 1,04
23º 0,89 0,98 1,08 1,17 1,26 1,34 1,43 0,97 1,06 1,16 1,25 1,34 1,42 1,51 1,06 1,15 1,25 1,34 1,42 1,51 1,59
24º 1,22 1,34 1,44 1,56 1,68 1,79 1,90 1,32 1,44 1,54 1,66 1,78 1,89 2,00 1,43 1,56 1,65 1,77 1,89 2,00 2,11
25º 1,61 1,68 1,83 1,98 2,12 2,26 2,40 1,66 1,81 1,96 2,11 2,25 2,39 2,52 1,80 1,94 2,09 2,24 2,39 2,52 2,6626º 1,87 2,05 2,22 2,40 2,56 2,71 2,87 2,02 2,20 2,37 2,54 2,70 2,85 3,01 2,18 2,36 2,53 2,71 2,86 3,02 3,17
27º 2,21 2,42 2,60 2,80 3,00 3,18 3,35 2,39 2,59 2,78 2,98 3,17 3,35 3,52 2,58 2,78 2,97 3,17 3,36 3,54 3,71
28º 2,56 2,80 3,02 3,25 3,47 3,67 3,89 2,75 2,89 3,22 3,44 3,66 3,86 4,07 2,97 3,21 3,44 3,66 3,88 4,09 4,30
29º 2,93 3,19 3,43 3,66 3,91 4,14 4,37 3,16 3,41 3,65 3,89 4,13 4,36 4,59 3,40 3,66 3,89 4,13 4,38 4,61 4,82
30º 3,31 3,57 3,86 4,15 4,41 4,66 4,92 3,55 3,81 4,10 4,38 4,66 4,90 5,16 3,82 4,08 4,37 4,65 4,93 5,17 5,42
Vinosde 19 % vol Vinosde 21 % vol
Masas volúmicas Masas volúmicas
1,000 1,020 1,040 1,060 1,080 1,100 1,120 1,000 1,020 1,040 1,060 1,080 1,100 1,120TemperaturasºC10º 3,14 3,48 3,83 4,17 4,48 4,78 5,07 3,50 3,84 4,19 4,52 4,83 5,12 5,41
11º 2,87 3,18 3,49 3,78 4,06 4,32 4,57 3,18 3,49 3,80 4,09 4,34 4,63 4,88
12º 2,58 2,86 3,13 3,39 3,65 3,88 4,10 2,86 3,13 3,41 3,67 3,92 4,15 4,37
13º 2,31 2,55 2,77 2,99 3,20 3,41 3,61 2,56 2,79 3,01 3,23 3,44 3,65 3,85
14º 2,03 2,23 2,43 2,61 2,80 2,96 3,13 2,23 2,43 2,63 2,81 3,00 3,16 3,33
15º 1,69 1,86 2,02 2,18 2,33 2,48 2,62 1,86 2,03 2,19 2,35 2,50 2,65 2,8016º 1,38 1,52 1,65 1,78 1,90 2,02 2,13 1,51 1,65 1,78 1,91 2,03 2,15 2,26
17º 1,06 1,16 1,26 1,35 1,44 1,53 1,62 1,15 1,25 1,35 1,45 1,54 1,63 1,71
18º 0,73 0,79 0,85 0,92 0,98 1,03 1,09 0,79 0,85 0,92 0,98 1,05 1,10 1,15
19º 0,38 0,41 0,44 0,48 0,51 0,52 0,56 0,41 0,44 0,47 0,51 0,54 0,57 0,59
20º21º 0,37 0,41 0,44 0,47 0,50 0,53 0,56 0,41 0,44 0,47 0,51 0,54 0,57 0,59
22º 0,75 0,81 0,87 0,93 0,99 1,04 1,10 0,81 0,88 0,94 1,00 1,06 1,10 1,17
23º 1,15 1,30 1,34 1,43 1,51 1,60 1,68 1,25 1,34 1,44 1,63 1,61 1,70 1,78
24º 1,55 1,67 1,77 1,89 2,00 2,11 2,23 1,68 1,80 1,90 2,02 2,13 2,25 2,36
25º 1,95 2,09 2,24 2,39 2,53 2,67 2,71 2,11 2,25 2,40 2,55 2,69 2,83 2,9726º 2,36 2,54 2,71 2,89 3,04 3,20 3,35 2,55 2,73 2,90 3,07 3,22 3,38 3,54
27º 2,79 2,99 3,18 3,38 3,57 3,75 3,92 3,01 3,20 3,40 3,59 3,78 3,96 4,13
28º 3,20 3,44 3,66 3,89 4,11 4,32 4,53 3,46 3,69 3,93 4,15 4,36 4,58 4,77
29º 3,66 3,92 4,15 4,40 4,64 4,87 5,08 3,95 4,20 4,43 4,68 4,92 5,15 5,36
30º 4,11 4,37 4,66 4,94 5,22 5,46 5,71 4,42 4,68 4,97 5,25 5,53 5,77 6,021990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 16
▼B
2.EVALUACIÓN MEDIANTE REFRACTOMERÍA DEL CONTENIDO
EN AZÚCARES DE MOSTOS, MOSTOS CONCENTRADOS Y
MOSTOSCONCENTRADOSRECTIFICADOS
1. FUNDAMENTO DEL MÉTODO
El índice de refracción a 20 ºC, expresado de modo absoluto o como
porcentaje en masa de sacarosa, se lleva a la tabla correspondiente
para obtener el contenido en azúcaresen gramospor litro y en
gramos por kilogramo de mosto, mosto concentrado y mosto concen-
trado rectificado.
2. MATERIAL
2.1. Refractómetro del tipo Abbé
El refractómetro utilizado deberá estar provisto de una escala que
indique:
— el porcentaje en masa de sacarosa, con precisión de 0,1 %, o bien
— el índice de refracción con 4 decimales.
El refractómetro deberá estar provisto de un termómetro, cuya escala
estará graduada de + 15 ºC a + 25 ºC como mínimo, y de un dispo-
sitivo de circulación de agua que permita realizar las mediciones a
una temperatura de 20 ºC ± 5 ºC.
Deberán seguirse estrictamente las instrucciones sobre el manejo de
este instrumento, en particular, las concernientes al calibrado y a la
fuente luminosa.
3. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
3.1. Mostos y mostos concentrados
Puede pasarse el mosto a través de una gasa seca doblada en cuatro
y, trashaber eliminado lasprimerasgotasde filtrado, s e efectúa la
determinación sobre el producto filtrado.
3.2.Mostoconcentradorectificado
Utilizar, según su concentración, el mosto concentrado rectificado o
la solución obtenida añadiendo agua a 200 g de mosto concentrado
rectificado exactamente pesados hasta que aquélla alcance 500 g.
4. PROCEDIMIENTO
Llevar la muestra a una temperatura póxima a 20 ºC. Colocar unas
gotas de muestra en el prisma inferior del refractómetro procurando
que, estando los prismas en estrecho contacto, aquélla cubra unifor-
memente la superficie de vidrio, y efectuar la medición con arreglo a
lasins truccionesde manejo del aparato utilizado.
Medir el porcentaje en masa de sacarosa con una aproximación de
0,1 % o anotar el índice de refracción con 4 decimales.
Efectuar al menosdosdeterminacionesde cada mues tra preparada.
Anotar la temperatura t ºC.
5. CÁLCULOS5.1.Correccióndetemperatura
5.1.1. Aparatos graduados en % en masa de sacarosa. Utilizar la tabla I
para la corrección de temperatura.
5.1.2. Aparatosgraduadosen índicesde refracción; llevar el índice medido
a t ºC a la tabla II para obtener (columna 1) el valor correspondiente
del procentaje en masa de sacarosa a t ºC. Mediante la tabla I se
corregirá este valor expresándolo a 20 ºC.
5.2. Contenido en azúcares de mostos y mostos concentrados
Llevar el porcentaje en masa de sacarosa a 20 ºC a la tabla II para
obtener el contenido en azúcaresinvertidosen gramospor litro y en
gramospor kilogramo. Se expres ará con un decimal.
5.3. Contenido en azúcaresde mos to concentrado rectificado
Llevar el porcentaje en masa de sacarosa a 20 ºC a la tabla III para
obtener el contenido en azúcaresen gramospor litro y en gramos1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 17
▼B
por kilogramo. El contenido en azúcares se expresará en azúcar
invertido con 1 decimal.
Si la medición se ha efectuado con el mosto concentrado rectificado
diluido, se multiplicará el resultado por el factor de dilución.
5.4. Índice de refracción de mostos, mostos oncentrados y mostos
concentradosrectificados
Llevar el porcentaje en masa de sacarosa a 20 ºC a la tabla II para
obtener el índice de refracción a 20 ºC. Se expresará con 4 deci-
males.
TABLA I
Correcciónquedeberáefectuarsecuandoelporcentajeenmasadesacarosaseadeterminadoa
unatemperaturadiferentede20ºC
Temperatura ºCSacarosa en gramos por 100 gr de producto
5 1 01 52 03 04 05 06 07 07 5
Restar
15 0,25 0,27 0,31 0,31 0,34 0,35 0,36 0,37 0,36 0,36
16 0,21 0,23 0,27 0,27 0,29 0,31 0,31 0,32 0,31 0,23
17 0,16 0,18 0,20 0,20 0,22 0,23 0,23 0,23 0,20 0,1718 0,11 0,12 0,14 0,15 0,16 0,16 0,15 0,12 0,12 0,0919 0,06 0,07 0,08 0,08 0,08 0,09 0,09 0,08 0,07 0,05
Sumar
21 0,06 0,07 0,07 0,07 0,07 0,07 0,07 0,07 0,07 0,07
22 0,12 0,14 0,14 0,14 0,14 0,14 0,14 0,14 0,14 0,14
23 0,18 0,20 0,20 0,21 0,21 0,21 0,21 0,22 0,22 0,22
24 0,24 0,26 0,26 0,27 0,28 0,28 0,28 0,28 0,29 0,2925 0,30 0,32 0,32 0,34 0,36 0,36 0,36 0,36 0,36 0,37
Lasvariacionesde la temperatura con relación a 20 ºC no deberán
exceder de ± 5 ºC.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 18
▼B
TABLA II
Tabladelcontenidoenazúcar (1),engramosporlitroyengramosporkilogramo,demostosy
mostosconcentrados,determinadomedianteunrefractómetrograduadoenporcentajeenmasa
desacarosaa20ºCoeníndicederefraccióna20ºC.Figuratambiénlamasavolúmicaa20ºC.
Sacarosa
% (m/m)Índice de
refracción a
20 ºCMasa volúmica
a2 0º CAzúcar en
g/lAzúcar en
g/kgGrado
alcohólico
% vol a 20 ºC
10.0 1.34781 1.0390 82.3 79.2 4,89
10.1 1.34798 1.0394 83.4 80.2 4,95
10.2 1.34814 1.0398 84.5 81.3 5,02
10.3 1.34830 1.0402 85.6 82.2 5,09
10.4 1.34845 1.0406 86.6 83.2 5,14
10.5 1.34860 1.0410 87.6 84.1 5,20
10.6 1.34875 1.0414 88.6 85.1 5,26
10.7 1.34890 1.0419 89.7 86.1 5,33
10.8 1.34906 1.0423 90.8 87.1 5,39
10.9 1.34921 1.0427 91.8 88.1 5,45
11.0 1.34936 1.0431 92.9 89.1 5,52
11.1 1.34952 1.0435 94.0 90.0 5,58
11.2 1.34968 1.0439 95.0 91.0 5,64
11.3 1.34984 1.0443 96.1 92.0 5,71
11.4 1.34999 1.0447 97.1 92.9 5,77
11.5 1.35015 1.0452 98.2 94.0 5,83
11.6 1.35031 1.0456 99.3 95.0 5,90
11.7 1.35046 1.0460 100.3 95.9 5,96
11.8 1.35062 1.0464 101.4 96.9 6,02
11.9 1.35077 1.0468 102.5 97.9 6,09
12.0 1.35092 1.0473 103.6 98.9 6,15
12.1 1.35108 1.0477 104.7 99.9 6,22
12.2 1.35124 1.0481 105.7 100.8 6,28
12.3 1.35140 1.0485 106.8 101.9 6,35
12.4 1.35156 1.0489 107.9 102.9 6,41
12.5 1.35172 1.0494 109.0 103.8 6,47
12.6 1.35187 1.0498 110.0 104.8 6,53
12.7 1.35203 1.0502 111.1 105.8 6,60
12.8 1.35219 1.0506 112.2 106.8 6,66
12.9 1.35234 1.0510 113.2 107.8 6,73
13.0 1.35249 1.0514 114.3 108.7 6,79
13.1 1.35266 1.0519 115.4 109.7 6,86
13.2 1.35282 1.0523 116.5 110.7 6,92
13.3 1.35298 1.0527 117.6 111.7 6,99
13.4 1.35313 1.0531 118.6 112.6 7,05
13.5 1.35329 1.0536 119.7 113.6 7,11
13.6 1.35345 1.0540 120.8 114.6 7,18
13.7 1.35360 1.0544 121.8 115.6 7,24
13.8 1.35376 1.0548 122.9 116.5 7,30
13.9 1.35391 1.0552 124.0 117.5 7,37
14.0 1.35407 1.0557 125.1 118.5 7,43
14.1 1.35424 1.0561 126.2 119.5 7,50
14.2 1.35440 1.0565 127.3 120.5 7,56
14.3 1.35456 1.0569 128.4 121.5 7,63
14.4 1.35472 1.0574 129.5 122.5 7,69
14.5 1.35488 1.0578 130.6 123.4 7,76
14.6 1.35503 1.0582 131.6 124.4 7,82
14.7 1.35519 1.0586 132.7 125.4 7,88
14.8 1.35535 1.0591 133.8 126.3 7,95
14.9 1.35551 1.0595 134.9 127.3 8,011990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 19
(1) El contenido en azúcares está expresado en azúcar invertido.
▼B
Sacarosa
% (m/m)Índice de
refracción a
20 ºCMasa volúmica
a2 0º CAzúcar en
g/lAzúcar en
g/kgGrado
alcohólico
% vol a 20 ºC
15.0 1.35567 1.0599 136.0 128.3 8,08
15.1 1.35583 1.0603 137.1 129.3 8,15
15.2 1.35599 1.0608 138.2 130.3 8,21
15.3 1.35615 1.0612 139.3 131.3 8,27
15.4 1.35631 1.0616 140.4 132.3 8,34
15.5 1.35648 1.0621 141.5 133.2 8,41
15.6 1.35664 1.0625 142.6 134.2 8,47
15.7 1.35680 1.0629 143.7 135.2 8,54
15.8 1.35696 1.0633 144.8 136.2 8,60
15.9 1.35712 1.0638 145.9 137.2 8,67
16.0 1.35728 1.0642 147.0 138.1 8,73
16.1 1.35744 1.0646 148.1 139.1 8,80
16.2 1.35760 1.0651 149.2 140.1 8,86
16.3 1.35776 1.0655 150.3 141.1 8,93
16.4 1.35793 1.0660 151.5 142.1 9,00
16.5 1.35809 1.0664 152.6 143.1 9,06
16.6 1.35825 1.0668 153.7 144.1 9,13
16.7 1.35842 1.0672 154.8 145.0 9,20
16.8 1.35858 1.0677 155.9 146.0 9,26
16.9 1.35874 1.0681 157.0 147.0 9,33
17.0 1.35890 1.0685 158.1 148.0 9,39
17.1 1.35907 1.0690 159.3 149.0 9,46
17.2 1.35923 1.0694 160.4 150.0 9,53
17.3 1.35939 1.0699 161.5 151.0 9,59
17.4 1.35955 1.0703 162.6 151.9 9,66
17.5 1.35972 1.0707 163.7 152.9 9,73
17.6 1.35988 1.0711 164.8 153.9 9,79
17.7 1.36004 1.0716 165.9 154.8 9,86
17.8 1.36020 1.0720 167.0 155.8 9,92
17.9 1.36036 1.0724 168.1 156.8 9,99
18.0 1.36053 1.0729 169.3 157.8 10,06
18.1 1.36070 1.0733 170.4 158.8 10,12
18.2 1.36086 1.0738 171.5 159.7 10,19
18.3 1.36102 1.0742 172.6 160.7 10,25
18.4 1.36119 1.0746 173.7 161.6 10,32
18.5 1.36136 1.0751 174.9 162.6 10,39
18.6 1.36152 1.0755 176.0 163.6 10,46
18.7 1.36169 1.0760 177.2 164.6 10,53
18.8 1.36185 1.0764 178.3 165.6 10,59
18.9 1.36201 1.0768 179.4 166.6 10,66
19.0 1.36217 1.0773 180.5 167.6 10,72
19.1 1.36234 1.0777 181.7 168.6 10,80
19.2 1.36251 1.0782 182.8 169.5 10,86
19.3 1.36267 1.0786 183.9 170.5 10,93
19.4 1.36284 1.0791 185.1 171.5 11,00
19.5 1.36301 1.0795 186.3 172.5 11,07
19.6 1.36318 1.0800 187.4 173.5 11,13
19.7 1.36335 1.0804 188.6 174.5 11,21
19.8 1.36351 1.0809 189.7 175.5 11,27
19.9 1.36367 1.0813 190.8 176.5 11,341990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 20
▼B
Sacarosa
% (m/m)Índice de
refracción a
20 ºCMasa volúmica
a2 0º CAzúcar en
g/lAzúcar en
g/kgGrado
alcohólico
% vol a 20 ºC
20.0 1.36383 1.0817 191.9 177.4 11,40
20.1 1.36400 1.0822 193.1 178.4 11,47
20.2 1.36417 1.0826 194.2 179.4 11,54
20.3 1.36434 1.0831 195.3 180.4 11,60
20.4 1.36451 1.0835 196.5 181.4 11,67
20.5 1.36468 1.0840 197.7 182.3 11,75
20.6 1.36484 1.0844 198.8 183.3 11,81
20.7 1.36501 1.0849 200.0 184.3 11,88
20.8 1.36518 1.0853 201.1 185.3 11,96
20.9 1.36534 1.0857 202.2 186.2 12,01
21.0 1.36550 1.0862 203.3 187.2 12,08
21.1 1.36568 1.0866 204.5 188.2 12,15
21.2 1.36585 1.0871 205.7 189.2 12,22
21.3 1.36601 1.0875 206.8 190.2 12,29
21.4 1.36618 1.0880 207.9 191.1 12,35
21.5 1.36635 1.0884 209.1 192.1 12,42
21.6 1.36652 1.0889 210.3 193.1 12,49
21.7 1.36669 1.0893 211.4 194.1 12,56
21.8 1.36685 1.0897 212.5 195.0 12,63
21.9 1.36702 1.0902 213.6 196.0 12,69
22.0 1.36719 1.0906 214.8 196.9 12,76
22.1 1.36736 1.0911 216.0 198.0 12,83
22.2 1.36753 1.0916 217.2 199.0 12,90
22.3 1.36770 1.0920 218.3 199.9 12,97
22.4 1.36787 1.0925 219.5 200.9 13,04
22.5 1.36804 1.0929 220.6 201.8 13,11
22.6 1.36820 1.0933 221.7 202.8 13,17
22.7 1.36837 1.0938 222.9 203.8 13,24
22.8 1.36854 1.0943 224.1 204.8 13,31
22.9 1.36871 1.0947 225.2 205.8 13,38
23.0 1.36888 1.0952 226.4 206.7 13,45
23.1 1.36905 1.0956 227.6 207.7 13,52
23.2 1.36922 1.0961 228.7 208.7 13,59
23.3 1.36939 1.0965 229.9 209.7 13,66
23.4 1.36956 1.0970 231.1 210.7 13,73
23.5 1.36973 1.0975 232.3 211.6 13,80
23.6 1.36991 1.0979 233.4 212.6 13,87
23.7 1.37008 1.0984 234.6 213.6 13,94
23.8 1.37025 1.0988 235.8 214.6 14,01
23.9 1.37042 1.0993 237.0 215.6 14,08
24.0 1.37059 1.0998 238.2 216.6 14,15
24.1 1.37076 1.1007 239.3 217.4 14,22
24.2 1.37093 1.1011 240.3 218.2 14,28
24.3 1.37110 1.1016 241.6 219.4 14,35
24.4 1.37128 1.1022 243.0 220.5 14,44
24.5 1.37145 1.1026 244.0 221.3 14,50
24.6 1.37162 1.1030 245.0 222.1 14,56
24.7 1.37180 1.1035 246.4 223.2 14,64
24.8 1.37197 1.1041 247.7 224.4 14,72
24.9 1.37214 1.1045 248.7 225.2 14,781990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 21
▼B
Sacarosa
% (m/m)Índice de
refracción a
20 ºCMasa volúmica
a2 0º CAzúcar en
g/lAzúcar en
g/kgGrado
alcohólico
% vol a 20 ºC
25.0 1.37232 1.1049 249.7 226.0 14,84
25.1 1.37249 1.1053 250.7 226.8 14,90
25.2 1.37266 1.1057 251.7 227.6 14,96
25.3 1.37283 1.1062 253.0 228.7 15,03
25.4 1.37300 1.1068 254.4 229.9 15,11
25.5 1.37317 1.1072 255.4 230.7 15,17
25.6 1.37335 1.1076 256.4 231.5 15,23
25.7 1.37353 1.1081 257.8 232.6 15,32
25.8 1.37370 1.1087 259.1 233.7 15,39
25.9 1.37387 1.1091 260.1 234.5 15,45
26.0 1.37405 1.1095 261.1 235.3 15,51
26.1 1.37423 1.1100 262.5 236.4 15,60
26.2 1.37440 1.1106 263.8 237.5 15,67
26.3 1.37457 1.1110 264.8 238.3 15,73
26.4 1.37475 1.1114 265.8 239.2 15,79
26.5 1.37493 1.1119 267.2 240.3 15,88
26.6 1.37510 1.1125 268.5 241.4 15,95
26.7 1.37528 1.1129 269.5 242.2 16,01
26.8 1.37545 1.1133 270.5 243.0 16,07
26.9 1.37562 1.1138 271.8 244.1 16,15
27.0 1.37580 1.1144 273.2 245.2 16,23
27.1 1.37598 1.1148 274.2 246.0 16,29
27.2 1.37615 1.1152 275.2 246.8 16,35
27.3 1.37632 1.1157 276.5 247.9 16,43
27.4 1.37650 1.1163 277.9 249.0 16,51
27.5 1.37667 1.1167 278.9 249.8 16,57
27.6 1.37685 1.1171 279.9 250.6 16,63
27.7 1.37703 1.1176 281.3 251.6 16,71
27.8 1.37721 1.1182 282.6 252.7 16,79
27.9 1.37739 1.1186 283.6 253.5 16,85
28.0 1.37757 1.1190 284.6 254.3 16,91
28.1 1.37775 1.1195 286.0 255.4 16,99
28.2 1.37793 1.1201 287.3 256.5 17,07
28.3 1.37810 1.1205 288.3 257.3 17,13
28.4 1.37828 1.1209 289.3 258.1 17,19
28.5 1.37846 1.1214 290.7 259.2 17,27
28.6 1.37863 1.1220 292.0 260.3 17,35
28.7 1.37881 1.1224 293.0 261.0 17,41
28.8 1.37899 1.1228 294.0 261.8 17,47
28.9 1.37917 1.1233 295.3 262.9 17,55
29.0 1.37935 1.1239 296.7 264.0 17,63
29.1 1.37953 1.1244 298.1 265.1 17,71
29.2 1.37971 1.1250 299.4 266.1 17,79
29.3 1.37988 1.1254 300.4 266.9 17,85
29.4 1.38006 1.1258 301.4 267.7 17,91
29.5 1.38024 1.1263 302.8 268.8 17,99
29.6 1.38042 1.1269 304.1 269.9 18,07
29.7 1.38060 1.1273 305.1 270.6 18,13
29.8 1.38078 1.1277 306.1 271.4 18,19
29.9 1.38096 1.1282 307.4 272.5 18,261990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 22
▼B
Sacarosa
% (m/m)Índice de
refracción a
20 ºCMasa volúmica
a2 0º CAzúcar en
g/lAzúcar en
g/kgGrado
alcohólico
% vol a 20 ºC
30.0 1.38114 1.1288 308.8 273.6 18,35
30.1 1.38132 1.1293 310.0 274.5 18,42
30.2 1.38150 1.1298 311.2 275.5 18,49
30.3 1.38168 1.1302 312.4 276.4 18,56
30.4 1.38186 1.1307 313.6 277.3 18,63
30.5 1.38204 1.1312 314.8 278.3 18,70
30.6 1.38222 1.1317 316.0 279.2 18,77
30.7 1.38240 1.1322 317.2 280.2 18,85
30.8 1.38258 1.1327 318.4 281.1 18,92
30.9 1.38276 1.1332 319.6 282.0 18,99
31.0 1.38294 1.1336 320.8 283.0 19,06
31.1 1.38312 1.1341 322.0 283.9 19,13
31.2 1.38330 1.1346 323.2 284.9 19,20
31.3 1.38349 1.1351 324.4 285.8 19,27
31.4 1.38367 1.1356 325.6 286.8 19,35
31.5 1.38385 1.1361 326.8 287.7 19,42
31.6 1.38403 1.1366 328.1 288.6 19,49
31.7 1.38421 1.1371 329.3 289.6 19,56
31.8 1.38440 1.1376 330.5 290.5 19,64
31.9 1.38458 1.1380 331.7 291.5 19,71
32.0 1.38476 1.1385 332.9 292.4 19,78
32.1 1.38494 1.1391 334.2 293.4 19,86
32.2 1.38513 1.1396 335.5 294.4 19,93
32.3 1.38531 1.1401 336.7 295.4 20,00
32.4 1.38550 1.1406 338.0 296.4 20,08
32.5 1.38568 1.1411 339.3 297.3 20,16
32.6 1.38586 1.1416 340.6 298.3 20,24
32.7 1.38605 1.1422 341.9 299.3 20,31
32.8 1.38623 1.1427 343.1 300.3 20,38
32.9 1.38642 1.1432 344.4 301.3 20,46
33.0 1.38660 1.1437 345.7 302.3 20,54
33.1 1.38678 1.1442 346.9 303.2 20,61
33.2 1.38697 1.1447 348.1 304.1 20,68
33.3 1.38715 1.1452 349.3 305.0 20,75
33.4 1.38734 1.1457 350.5 305.9 20,82
33.5 1.38753 1.1461 351.7 306.9 20,90
33.6 1.38771 1.1466 352.9 307.8 20,97
33.7 1.38790 1.1471 354.1 308.7 21,04
33.8 1.38808 1.1476 355.3 309.6 21,11
33.9 1.38827 1.1481 356.5 310.5 21,18
34.0 1.38845 1.1486 357.7 311.4 21,25
34.1 1.38864 1.1491 359.0 312.4 21,33
34.2 1.38882 1.1496 360.3 313.4 21,41
34.3 1.38901 1.1501 361.5 314.3 21,48
34.4 1.38919 1.1506 362.8 315.3 21,55
34.5 1.38938 1.1512 364.1 316.3 21,63
34.6 1.38957 1.1517 365.4 317.3 21,71
34.7 1.38975 1.1522 366.7 318.2 21,79
34.8 1.38994 1.1527 367.9 319.2 21,86
34.9 1.39012 1.1532 369.2 320.2 21,941990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 23
▼B
Sacarosa
% (m/m)Índice de
refracción a
20 ºCMasa volúmica
a2 0º CAzúcar en
g/lAzúcar en
g/kgGrado
alcohólico
% vol a 20 ºC
35.0 1.39031 1.1537 370.5 321.1 22,01
35.1 1.39050 1.1543 371.8 322.1 22,09
35.2 1.39069 1.1548 373.0 323.0 22,16
35.3 1.39087 1.1553 374.3 324.0 22,24
35.4 1.39106 1.1558 375.6 325.0 22,32
35.5 1.39125 1.1563 376,9 325.9 22,39
35.6 1.39144 1.1568 378.1 326.9 22,45
35.7 1.39163 1.1573 379.4 327.8 22,54
35.8 1.39181 1.1579 380.7 328.8 22,62
35.9 1.39200 1.1584 381.9 329.7 22,69
36.0 1.39219 1.1589 383.2 330.7 22,77
36.1 1.39238 1.1594 384.5 331.6 22,85
36.2 1.39257 1.1599 385.8 332.6 22,92
36.3 1.39276 1.1604 387.0 333.5 22,99
36.4 1.39295 1.1610 388.3 334.5 23,07
36.5 1.39314 1.1615 389.6 335.4 23,15
36.6 1.39332 1.1620 390.9 336.4 23,22
36.7 1.39351 1.1625 392.2 337.3 23,30
36.8 1.39370 1.1630 393.4 338.3 23,37
36.9 1.39389 1.1635 394.7 339.2 23,45
37.0 1.39408 1.1641 396.0 340.2 23,53
37.1 1.39427 1.1646 397.3 341.1 23,60
37.2 1.39446 1.1651 398.6 342.1 23,68
37.3 1.39465 1.1656 399.8 343.0 23,75
37.4 1.39484 1.1661 401.1 344.0 23,83
37.5 1.39504 1.1666 402.4 344.9 23,91
37.6 1.39523 1.1672 403.7 345.9 23,99
37.7 1.39542 1.1677 405.0 346.8 24,06
37.8 1.39561 1.1682 406.2 347.7 24,13
37.9 1.39580 1.1687 407.5 348.7 24,21
38.0 1.39599 1.1692 408.8 349.6 24,29
38.1 1.39618 1.1698 410.1 350.6 24,37
38.2 1.39637 1.1703 411.3 351.5 24,44
38.3 1.39657 1.1708 412.6 352.4 24,51
38.4 1.39676 1.1713 413.9 353.4 24,59
38.5 1.39695 1.1718 415.2 354.3 24,67
38.6 1.39714 1.1723 416.4 355.2 24,74
38.7 1.39733 1.1728 417.7 356.1 24,82
38.8 1.39753 1.1733 419.0 357.1 24,90
38.9 1.39772 1.1739 420.2 358.0 24,97
39.0 1.39791 1.1744 421.5 358.9 25,04
39.1 1.39810 1.1749 422.8 359.8 25,12
39.2 1.39830 1.1754 424.1 360.8 25,20
39.3 1.39849 1.1759 425.3 361.7 25,27
39.4 1.39869 1.1764 426.6 362.6 25,35
39.5 1.39888 1.1770 427.9 363.6 25,42
39.6 1.39907 1.1775 429.2 364.5 25,50
39.7 1.39927 1.1780 430.5 365.4 25,58
39.8 1.39946 1.1785 431.7 366.3 25,65
39.9 1.39966 1.1790 433.0 367.3 25,731990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 24
▼B
Sacarosa
% (m/m)Índice de
refracción a
20 ºCMasa volúmica
a2 0º CAzúcar en
g/lAzúcar en
g/kgGrado
alcohólico
% vol a 20 ºC
40.0 1.39985 1.1796 434.3 368.2 25,80
40.1 1.40004 1.1801 435.6 369.2 25,88
40.2 1.40024 1.1806 437.0 370.1 25,96
40.3 1.40043 1.1812 438.3 371.1 26,04
40.4 1.40063 1.1817 439.7 372.1 26,12
40.5 1.40083 1.1823 441.0 373.0 26,20
40.6 1.40102 1.1828 442.3 374.0 26,28
40.7 1.40122 1.1833 443.7 374.9 26,36
40.8 1.40141 1.1839 445.0 375.9 26,44
40.9 1.40161 1.1844 446.4 376.9 26,52
41.0 1.40180 1.1850 447.7 377.8 26,60
41.1 1.40200 1.1855 449.0 378.7 26,68
41.2 1.40219 1.1860 450.2 379.6 26,75
41.3 1.40239 1.1865 451.5 380.5 26,83
41.4 1.40259 1.1870 452.8 381.4 26,90
41.5 1.40279 1.1875 454.1 382.3 26,98
41.6 1.40298 1.1881 455.3 383.2 27,05
41.7 1.40318 1.1886 456.6 384.2 27,13
41.8 1.40338 1.1891 457.9 385.1 27,21
41.9 1.40357 1.1896 459.1 386.0 27,28
42.0 1.40377 1.1901 460.4 386.9 27,35
42.1 1.40397 1.1907 461.7 387.8 27,43
42.2 1.40417 1.1912 463.1 388.8 27,52
42.3 1.40436 1.1917 464.4 389.7 27,59
42.4 1.40456 1.1923 465.8 390.7 27,68
42.5 1.40476 1.1928 467.2 391.6 27,76
42.6 1.40496 1.1934 468.5 392.6 27,84
42.7 1.40516 1.1939 469.9 393.5 27,92
42.8 1.40535 1.1945 471.2 394.5 28,00
42.9 1.40555 1.1950 472.6 395.4 28,08
43.0 1.40575 1.1956 473.9 396.4 28,16
43.1 1.40595 1.1961 475.2 397.3 28,23
43.2 1.40615 1.1967 476.6 398.3 28,32
43.3 1.40635 1.1972 477.9 399.2 28,40
43.4 1.40655 1.1977 479.3 400.1 28,48
43.5 1.40675 1.1983 480.6 401.1 28,56
43.6 1.40695 1.1988 481.9 402.0 28,63
43.7 1.40715 1.1994 483.3 402.9 28,72
43.8 1.40735 1.1999 484.6 403.9 28,79
43.9 1.40755 1.2005 486.0 404.8 28,88
44.0 1.40775 1.2010 487.3 405.7 28,95
44.1 1.40795 1.2015 488.6 406.7 29,03
44.2 1.40815 1.2021 490.0 407.6 29,11
44.3 1.40836 1.2026 491.3 408.5 29,19
44.4 1.40856 1.2032 492.7 409.5 29,27
44.5 1.40876 1.2037 494.0 410.4 29,35
44.6 1.40896 1.2042 495.3 411.3 29,43
44.7 1.40916 1.2048 496.7 412.3 29,51
44.8 1.40937 1.2053 498.0 413.2 29,59
44.9 1.40957 1.2059 499.4 414.1 29,671990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 25
▼B
Sacarosa
% (m/m)Índice de
refracción a
20 ºCMasa volúmica
a2 0º CAzúcar en
g/lAzúcar en
g/kgGrado
alcohólico
% vol a 20 ºC
45.0 1.40977 1.2064 500.7 415.0 29,75
45.1 1.40997 1.2070 502.1 416.0 29,83
45.2 1.41018 1.2076 503.5 417.0 29,92
45.3 1.41038 1.2081 504.9 417.9 30,00
45.4 1.41058 1.2087 506.3 418.9 30,08
45.5 1.41079 1.2093 507.8 419.9 30,17
45.6 1.41099 1.2098 509.2 420.9 30,25
45.7 1.41119 1.2104 510.6 421.8 30,34
45.8 1.41139 1.2110 512.0 422.8 30,42
45.9 1.41160 1.2115 513.4 423.7 30,50
46.0 1.41180 1.2121 514.8 424.7 30,59
46.1 1.41200 1.2127 516.1 425.6 30,66
46.2 1.41221 1.2132 517.5 426.5 30,75
46.3 1.41241 1.2137 518.8 427.5 30,82
46.4 1.41262 1.2143 520.2 428.4 30,91
46.5 1.41282 1.2148 521.5 429.3 30,99
46.6 1.41302 1.2154 522.8 430.2 31,06
46.7 1.41323 1.2159 524.2 431.1 31,15
46.8 1.41343 1.2165 525.5 432.0 31,22
46.9 1.41364 1.2170 526.9 432.9 31,31
47.0 1.41384 1.2175 528.2 433.8 31,38
47.1 1.41405 1.2181 529.6 434.8 31,47
47.2 1.41425 1.2187 531.0 435.7 31,55
47.3 1.41446 1.2192 532.4 436.7 31,63
47.4 1.41466 1.2198 533.8 437.6 31,72
47.5 1.41487 1.2204 535.3 438.6 31,81
47.6 1.41508 1.2210 536.7 439.5 31,89
47.7 1.41528 1.2215 538.1 440.5 31,97
47.8 1.41549 1.2221 539.5 441.4 32,05
47.9 1.41569 1.2227 540.9 442.4 32,14
48.0 1.41590 1.2232 542.3 443.3 32,22
48.1 1.41611 1.2238 543.6 444.2 32,30
48.2 1.41632 1.2243 545.0 445.1 32,38
48.3 1.41652 1.2249 546.3 446.0 32,46
48.4 1.41673 1.2254 547.7 446.9 32,59
48.5 1.41694 1.2260 549.1 447.8 32,63
48.6 1.41715 1.2265 550.4 448.7 32,70
48.7 1.41736 1.2271 551.8 449.7 32,79
48.8 1.41756 1.2276 553.1 450.6 32,86
48.9 1.41777 1.2282 554.5 451.4 32,95
49.0 1.41798 1.2287 555.8 452.3 33,02
49.1 1.41819 1.2293 557.2 453.3 33,11
49.2 1.41840 1.2298 558.6 454.2 33,19
49.3 1.41861 1.2304 560.0 455.1 33,27
49.4 1.41882 1.2310 561.4 456.1 33,36
49.5 1.41903 1.2315 562.8 457.0 33,44
49.6 1.41924 1.2321 564.2 457.9 33,52
49.7 1.41945 1.2327 565.6 458.8 33,61
49.8 1.41966 1.2332 567.0 459.8 33,69
49.9 1.41987 1.2338 568.4 460.7 33,771990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 26
▼B
Sacarosa
% (m/m)Índice de
refracción a
20 ºCMasa volúmica
a2 0º CAzúcar en
g/lAzúcar en
g/kgGrado
alcohólico
% vol a 20 ºC
50.0 1.42008 1.2344 569.8 461.6 33,86
50.1 1.42029 1.2349 571.2 462.5 33,94
50.2 1.42050 1.2355 572.6 463.5 34,02
50.3 1.42071 1.2361 574.0 464.4 34,10
50.4 1.42092 1.2366 575.4 465.3 34,19
50.5 1.42114 1.2372 576.9 466.2 34,28
50.6 1.42135 1.2378 578.3 467.2 34,36
50.7 1.42156 1.2384 579.7 468.1 34,44
50.8 1.42177 1.2389 581.1 469.0 34,53
50.9 1.42198 1.2395 582.5 469.9 34,61
51.0 1.42219 1.2401 583.9 470.9 34,69
51.1 1.42240 1.2407 585.4 471.8 34,78
51.2 1.42261 1.2413 586.9 472.8 34,87
51.3 1.42283 1.2419 588.3 473.8 34,95
51.4 1.42304 1.2425 589.8 474.7 35,04
51.5 1.42325 1.2431 591.3 475.7 35,13
51.6 1.42346 1.2437 592.8 476.6 35,22
51.7 1.42367 1.2443 594.3 477.6 35,31
51.8 1.42389 1.2449 595.7 478.6 35,39
51.9 1.42410 1.2455 597.2 479.5 35,48
52.0 1.42431 1.2461 598.7 480.5 35,57
52.1 1.42452 1.2466 600.1 481.4 35,65
52.2 1.42474 1.2472 601.5 482.3 35,74
52.3 1.42495 1.2478 602.9 483.2 35,82
52.4 1.42517 1.2483 604.3 484.1 35,91
52.5 1.42538 1.2489 605.8 485.0 35,99
52.6 1.42559 1.2495 607.2 485.9 36,08
52.7 1.42581 1.2500 608.6 486.8 36,16
52.8 1.42602 1.2506 610.0 487.7 36,24
52.9 1.42624 1.2512 611.4 488.6 36,33
53.0 1.42645 1.2518 612.8 489.6 36,41
53.1 1.42666 1.2524 614.3 490.5 36,50
53.2 1.42686 1.2530 615.8 491.4 36,59
53.3 1.42707 1.2536 617.2 492.4 36,67
53.4 1.42727 1.2542 618.7 493.3 36,76
53.5 1.42748 1.2548 620.2 494.3 36,85
53.6 1.42769 1.2554 621.7 495.2 36,94
53.7 1.42789 1.2560 623.2 496.2 37,03
53.8 1.42810 1.2566 624.6 497.1 37,11
53.9 1.42830 1.2571 626.1 498.0 37,20
54.0 1.42851 1.2577 627.6 499.0 37,29
54.1 1.42874 1.2583 629.0 499.9 37,37
54.2 1.42897 1.2589 630.4 500.8 37,45
54.3 1.42919 1.2595 631.8 501.7 37,54
54.4 1.42942 1.2600 633.2 502.6 37,62
54.5 1.42965 1.2606 634.7 503.5 37,71
54.6 1.42988 1.2612 636.1 504.3 37,79
54.7 1.43011 1.2617 637.5 505.2 37,88
54.8 1.43033 1.2623 638.9 506.1 37,96
54.9 1.43056 1.2629 640.3 507.0 38,041990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 27
▼B
Sacarosa
% (m/m)Índice de
refracción a
20 ºCMasa volúmica
a2 0º CAzúcar en
g/lAzúcar en
g/kgGrado
alcohólico
% vol a 20 ºC
55.0 1.43079 1.2635 641.7 507.9 38,11
55.1 1.43101 1.2640 643.2 508.8 38,22
55.2 1.43123 1.2646 644.6 509.7 38,30
55.3 1.43145 1.2652 646.1 510.7 38,39
55.4 1.43167 1.2658 647.6 511.6 38,48
55.5 1.43189 1.2664 649.1 512.5 38,57
55.6 1.43210 1.2670 650.5 513.4 38,65
55.7 1.43232 1.2676 652.0 514.3 38,74
55.8 1.43254 1.2682 653.5 515.3 38,83
55.9 1.43276 1.2688 654.9 516.2 38,91
56.0 1.43298 1.2694 656.4 517.1 39,00
56.1 1.43320 1.2700 657.9 518.0 39,09
56.2 1.43342 1.2706 659.4 518.9 39,18
56.3 1.43364 1.2712 660.8 519.9 39,26
56.4 1.43386 1.2718 662.3 520.8 39,35
56.5 1.43409 1.2724 663.8 521.7 39,44
56.6 1.43431 1.2730 665.3 522.6 39,53
56.7 1.43453 1.2736 666.8 523.5 39,62
56.8 1.43475 1.2742 668.2 524.4 39,70
56.9 1.43497 1.2748 669.7 525.4 39,79
57.0 1.43519 1.2754 671.2 526.3 39,88
57.1 1.43541 1.2760 672.7 527.2 39,97
57.2 1.43563 1.2766 674.3 528.2 40,06
57.3 1.43586 1.2773 675.8 529.1 40,15
57.4 1.43608 1.2779 677.4 530.1 40,25
57.5 1.43630 1.2785 678.9 531.0 40,34
57.6 1.43652 1.2791 680.4 532.0 40,43
57.7 1.43674 1.2797 682.0 532.9 40,52
57.8 1.43697 1.2804 683.5 533.8 40,61
57.9 1.43719 1.2810 685.1 534.8 40,70
58.0 1.43741 1.2816 686.6 535.7 40,80
58.1 1.43763 1.2822 688.1 536.6 40,88
58.2 1.43786 1.2828 689.6 537.5 40,97
58.3 1.43808 1.2834 691.0 538.4 41,06
58.4 1.43831 1.2840 692.5 539.3 41,14
58.5 1.43854 1.2846 694.0 540.2 41,23
58.6 1.43876 1.2852 695.5 541.1 41,32
58.7 1.43899 1.2858 697.0 542.0 41,41
58.8 1.43921 1.2864 698.4 542.9 41,50
58.9 1.43944 1.2870 699.9 543.8 41,58
59.0 1.43966 1.2876 701.4 544.7 41,67
59.1 1.43989 1.2882 702.9 545.7 41,76
59.2 1.44011 1.2888 704.5 546.6 41,86
59.3 1.44034 1.2895 706.0 547.5 41,95
59.4 1.44056 1.2901 707.6 548.5 42,04
59.5 1.44079 1.2907 709.1 549.4 42,13
59.6 1.44102 1.2913 710.6 550.3 42,22
59.7 1.44124 1.2920 712.2 551.2 42,32
59.8 1.44147 1.2926 713.7 552.2 42,41
59.9 1.44169 1.2932 715.3 553.1 42,501990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 28
▼B
Sacarosa
% (m/m)Índice de
refracción a
20 ºCMasa volúmica
a2 0º CAzúcar en
g/lAzúcar en
g/kgGrado
alcohólico
% vol a 20 ºC
60.0 1.44192 1.2938 716.8 554.0 42,59
60.1 1.44215 1.2944 718.3 554.9 42,68
60.2 1.44237 1.2950 719.8 555.8 42,77
60.3 1.44260 1.2956 721.2 556.7 42,85
60.4 1.44283 1.2962 722.7 557.6 42,94
60.5 1.44306 1.2968 724.2 558.4 43,03
60.6 1.44328 1.2974 725.7 559.3 43,12
60.7 1.44351 1.2980 727.2 560.2 43,21
60.8 1.44374 1.2986 728.6 561.1 43,29
60.9 1.44396 1.2992 730.1 562.0 43,38
61.0 1.44419 1.2998 731.6 562.8 43,47
61.1 1.44442 1.3004 733.1 563.8 43,56
61.2 1.44465 1.3011 734.7 564.7 43,65
61.3 1.44488 1.3017 736.2 565.6 43,74
61.4 1.44511 1.3023 737.8 566.5 43,84
61.5 1.44533 1.3030 739.4 567.4 43,93
61.6 1.44556 1.3036 740.9 568.4 44,02
61.7 1.44579 1.3042 742.5 569.3 44,12
61.8 1.44602 1.3048 744.0 570.2 44,21
61.9 1.44625 1.3055 745.6 571.1 44,30
62.0 1.44648 1.3061 747.1 572.0 44,39
62.1 1.44671 1.3067 748.6 572.9 44,48
62.2 1.44694 1.3073 750.2 573.8 44,57
62.3 1.44717 1.3080 751.7 574.7 44,66
62.4 1.44740 1.3086 753.3 575.6 44,76
62.5 1.44764 1.3092 754.8 576.5 44,85
62.6 1.44787 1.3098 756.3 577.4 44,94
62.7 1.44810 1.3104 757.9 578.3 45,03
62.8 1.44833 1.3111 759.4 579.2 45,12
62.9 1.44856 1.3117 761.0 580.1 45,21
63.0 1.44879 1.3123 762.5 581.0 45,31
63.1 1.44902 1.3130 764.1 582.0 45,40
63.2 1.44926 1.3136 765.7 582.9 45,49
63.3 1.44949 1.3143 767.3 583.8 45,59
63.4 1.44972 1.3149 768.9 584.8 45,69
63.5 1.44996 1.3156 770.6 585.7 45,79
63.6 1.45019 1.3162 772.2 586.6 45,88
63.7 1.45042 1.3169 773.8 587.6 45,98
63.8 1.45065 1.3175 775.4 588.5 46,07
63.9 1.45089 1.3182 777.0 589.4 46,17
64.0 1.45112 1.3188 778.6 590.4 46,26
64.1 1.45135 1.3195 780.1 591.3 46,35
64.2 1.45159 1.3201 781.7 592.1 46,45
64.3 1.45183 1.3207 783.2 593.0 46,53
64.4 1.45206 1.3213 784.8 593.9 46,63
64.5 1.45230 1.3219 786.3 594.8 46,72
64.6 1.45253 1.3226 787.8 595.7 46,81
64.7 1.45276 1.3232 789.4 596.6 46,90
64.8 1.45300 1.3238 790.9 597.5 46,99
64.9 1.45324 1.3244 792.5 598.3 47,091990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 29
▼B
Sacarosa
% (m/m)Índice de
refracción a
20 ºCMasa volúmica
a2 0º CAzúcar en
g/lAzúcar en
g/kgGrado
alcohólico
% vol a 20 ºC
65.0 1.45347 1.3251 794.0 599.2 47,18
65.1 1.45371 1.3257 795.6 600.1 47,27
65.2 1.45394 1.3264 797.2 601.1 47,37
65.3 1.45418 1.3270 798.8 602.0 47,46
65.4 1.45441 1.3277 800.4 602.9 47,56
65.5 1.45465 1.3283 802.1 603.8 47,66
65.6 1.45489 1.3290 803.7 604.7 47,75
65.7 1.45512 1.3296 805.3 605.6 47,85
65.8 1.45536 1.3303 806.9 606.6 47,94
65.9 1.45559 1.3309 808.5 607.5 48,04
66.0 1.45583 1.3316 810.1 608.4 48,13
66.1 1.45607 1.3322 811.6 609.3 48,22
66.2 1.45630 1.3328 813.2 610.1 48,32
66.3 1.45654 1.3335 814.8 611.0 48,41
66.4 1.45678 1.3341 816.3 611.9 48,50
66.5 1.45702 1.3347 817.9 612.8 48,60
66.6 1.45725 1.3353 819.4 613.6 48,69
66.7 1.45749 1.3360 820.9 614.5 48,77
66.8 1.45773 1.3366 822.5 615.4 48,87
66.9 1.45796 1.3372 824.1 616.2 48,97
67.0 1.45820 1.3378 825.6 617.1 49,05
67.1 1.45844 1.3385 827.2 618.0 49,15
67.2 1.45868 1.3391 828.8 618.9 49,24
67.3 1.45892 1.3398 830.4 619.8 49,34
67.4 1.45916 1.3404 832.0 620.7 49,43
67.5 1.45940 1.3411 833.7 621.6 49,53
67.6 1.45964 1.3418 835.3 622.5 49,63
67.7 1.45988 1.3424 836.9 623.4 49,73
67.8 1.46012 1.3431 838.5 624.3 49,82
67.9 1.46036 1.3437 840.1 625.2 49,92
68.0 1.46060 1.3444 841.7 626.1 50,01
68.1 1.46084 1.3450 843.4 627.0 50,11
68.2 1.46108 1.3457 845.1 628.0 50,21
68.3 1.46132 1.3464 846.7 628.9 50,31
68.4 1.46156 1.3471 848.4 629.8 50,41
68.5 1.46181 1.3478 850.1 630.8 50,51
68.6 1.46205 1.3484 851.8 631.7 50,61
68.7 1.46229 1.3491 853.5 632.6 50,71
68.8 1.46253 1.3498 855.1 633.5 50,81
68.9 1.46277 1.3505 856.8 634.5 50,91
69.0 1.46301 1.3512 858.5 635.4 51,01
69.1 1.46325 1.3518 860.1 636.3 51,10
69.2 1.46350 1.3525 861.7 637.2 51,20
69.3 1.46374 1.3531 863.3 638.0 51,29
69.4 1.46398 1.3538 864.9 638.9 51,39
69.5 1.46423 1.3544 866.6 639.8 51,49
69.6 1.46447 1.3551 868.2 640.7 51,58
69.7 1.46471 1.3557 869.8 641.6 51,68
69.8 1.46495 1.3564 871.4 642.4 51,78
69.9 1.46520 1.3570 873.0 643.3 51,871990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 30
▼B
Sacarosa
% (m/m)Índice de
refracción a
20 ºCMasa volúmica
a2 0º CAzúcar en
g/lAzúcar en
g/kgGrado
alcohólico
% vol a 20 ºC
70.0 1.46544 1.3577 874.6 644.2 51,97
70.1 1.46568 1.3583 876.2 645.1 52,06
70.2 1.46593 1.3590 877.8 645.9 52,15
70.3 1.46618 1.3596 879.4 646.8 52,25
70.4 1.46642 1.3603 881.0 647.7 52,35
70.5 1.46667 1.3609 882.7 648.6 52,45
70.6 1.46691 1.3616 884.3 649.4 52,54
70.7 1.46715 1.2622 885.9 650.3 52,64
70.8 1.46740 1.3629 887.5 651.2 52,73
70.9 1.46765 1.3635 889.1 652.1 52,83
71.0 1.46789 1.3642 890.7 652.9 52,92
71.1 1.46814 1.3649 892.4 653.8 53,02
71.2 1.46838 1.3655 894.1 654.7 53,12
71.3 1.46863 1.3662 895.7 655.6 53,22
71.4 1.46888 1.3669 897.4 656.5 53,32
71.5 1.46913 1.3676 899.1 657.4 53,42
71.6 1.46937 1.3683 900.8 658.3 53,52
71.7 1.46962 1.3689 902.5 659.2 53,62
71.8 1.46987 1.3696 904.1 660.1 53,72
71.9 1.47011 1.3703 905.8 661.0 53,82
72.0 1.47036 1.3710 907.5 661.9 53,92
72.1 1.47061 1.3717 909.2 662.8 54,02
72.2 1.47086 1.3723 910.8 663.7 54,12
72.3 1.47110 1.3730 912.5 664.6 54,22
72.4 1.47135 1.3737 914.2 665.5 54,32
72.5 1.47160 1.3744 915.9 666.4 54,42
72.6 1.47185 1.3750 917.5 667.3 54,51
72.7 1.47210 1.3757 919.2 668.2 54,62
72.8 1.47234 1.3764 920.9 669.0 54,72
72.9 1.47259 1.3771 922.5 669.9 54,81
73.0 1.47284 1.3777 924.2 670.8 54,91
73.1 1.47309 1.3784 925.9 671.7 55,01
73.2 1.47334 1.3791 927.6 672.6 55,11
73.3 1.47359 1.3798 929.2 673.5 55,21
73.4 1.47384 1.3804 930.9 674.4 55,31
73.5 1.47409 1.3811 932.6 675.2 55,41
73.6 1.47434 1.3818 934.3 676.1 55,51
73.7 1.47459 1.3825 936.0 677.0 55,61
73.8 1.47484 1.3832 937.6 677.9 55,71
73.9 1.47509 1.3838 939.3 678.8 55,81
74.0 1.47534 1.3845 941.0 679.7 55,91
74.1 1.47559 1.3852 942.7 680.5 56,01
74.2 1.47584 1.3859 944.4 681.4 56,11
74.3 1.47609 1.3866 946.0 682.3 56,21
74.4 1.47634 1.3872 947.7 683.2 56,31
74.5 1.47660 1.3879 949.4 684.0 56,41
74.6 1.47685 1.3886 951.1 684.9 56,51
74.7 1.47710 1.3893 952.8 685.8 56,61
74.8 1.47735 1.3900 954.4 686.7 56,71
74.9 1.47760 1.3906 956.1 687.5 56,811990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 31
▼B
TABLA III
Tabladelcontenidoenazúcar (1),engramosporlitroyengramosporkilogramo,demostos
concentradosrectificados,determinadomedianteunrefractómetrograduadoenporcentajeen
masadesacarosaa20ºCoeníndicederefraccióna20ºC.Figuratambiénlamasavolúmica
a20ºC
Sacarosa % (m/
m)
% (m/m)Índice de
refracción a
20 ºCMasa volúmica
a2 0º CAzúcar en
g/lAzúcar en
g/kgGrado
alcohólico
% vol a 20 ºC
50.0 1.42008 1.2342 627.6 508.5 37,28
50.1 1.42029 1.2348 629.3 509.6 37,38
50.2 1.42050 1.2355 630.9 510.6 37,48
50.3 1.42071 1.2362 632.4 511.6 37,56
50.4 1.42092 1.2367 634.1 512.7 37,66
50.5 1.42113 1.2374 635.7 513.7 37,76
50.6 1.42135 1.2381 637.3 514.7 37,85
50.7 1.42156 1.2386 638.7 515.7 37,94
50.8 1.42177 1.2391 640.4 516.8 38,04
50.9 1.42198 1.2396 641.9 517.8 38,13
51.0 1.42219 1.2401 643.4 518.8 38,22
51.1 1.42240 1.2406 645.0 519.9 38,31
51.2 1.42261 1.2411 646.5 520.9 38,40
51.3 1.42282 1.2416 648.1 522.0 38,50
51.4 1.42304 1.2421 649.6 523.0 38,59
51.5 1.42325 1.2427 651.2 524.0 38,68
51.6 1.42347 1.2434 652.9 525.1 38,78
51.7 1.42368 1.2441 654.5 526.1 38,88
51.8 1.42389 1.2447 656.1 527.1 38,97
51.9 1.42410 1.2454 657.8 528.2 39,07
52.0 1.42432 1.2461 659.4 529.2 39,17
52.1 1.42453 1.2466 661.0 530.2 39,26
52.2 1.42475 1.2470 662.5 531.3 39,35
52.3 1.42496 1.2475 664.1 532.3 39,45
52.4 1.42517 1.2480 665.6 533.3 39,54
52.5 1.42538 1.2486 667.2 534.4 39,63
52.6 1.42560 1.2493 668.9 535.4 39,73
52.7 1.42581 1.2500 670.5 536.4 39,83
52.8 1.42603 1.2506 672.2 537.5 39,93
52.9 1.42624 1.2513 673.8 538.5 40,02
53.0 1.42645 1.2520 675.5 539.5 40,12
53.1 1.42667 1.2525 677.1 540.6 40,22
53.2 1.42689 1.2530 678.5 541.5 40,30
53.3 1.42711 1.2535 680.2 542.6 40,40
53.4 1.42733 1.2540 681.8 543.7 40,50
53.5 1.42754 1.2546 683.4 544.7 40,59
53.6 1.42776 1.2553 685.1 545.8 40,69
53.7 1.42797 1.2560 686.7 546.7 40,79
53.8 1.42819 1.2566 688.4 547.8 40,89
53.9 1.42840 1.2573 690.1 548.9 40,99
54.0 1.42861 1.2580 691.7 549.8 41,09
54.1 1.42884 1.2585 693.3 550.9 41,18
54.2 1.42906 1.2590 694.9 551.9 41,28
54.3 1.42927 1.2595 696.5 553.0 41,37
54.4 1.42949 1.2600 698.1 554.0 41,47
54.5 1.42971 1.2606 699.7 555.1 41,56
54.6 1.42993 1.2613 701.4 556.1 41,66
54.7 1.43014 1.2620 703.1 557.1 41,76
54.8 1.43036 1.2625 704.7 558.2 41,86
54.9 1.43058 1.2630 706.2 559.1 41,951990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 32
(1) El contenido en azúcares está expresado en azúcar invertido.
▼B
Sacarosa % (m/
m)
% (m/m)Índice de
refracción a
20 ºCMasa volúmica
a2 0º CAzúcar en
g/lAzúcar en
g/kgGrado
alcohólico
% vol a 20 ºC
55.0 1.43079 1.2635 707.8 560.2 42,04
55.1 1.43102 1.2639 709.4 561.3 42,14
55.2 1.43124 1.2645 711.0 562.3 42,23
55.3 1.43146 1.2652 712.7 563.3 42,33
55.4 1.43168 1.2659 714.4 564.3 42,44
55.5 1.43189 1.2665 716.1 565.4 42,54
55.6 1.43211 1.2672 717.8 566.4 42,64
55.7 1.43233 1.2679 719.5 567.5 42,74
55.8 1.43255 1.2685 721.1 568.5 42,83
55.9 1.43277 1.2692 722.8 569.5 42,93
56.0 1.43298 1.2699 724.5 570.5 43,04
56.1 1.43321 1.2703 726.1 571.6 43,13
56.2 1.43343 1.2708 727.7 572.6 43,23
56.3 1.43365 1.2713 729.3 573.7 43,32
56.4 1.43387 1.2718 730.9 574.7 43,42
56.5 1.43409 1.2724 732.6 575.8 43,52
56.6 1.43431 1.2731 734.3 576.8 43,62
56.7 1.43454 1.2738 736.0 577.8 43,72
56.8 1.43476 1.2744 737.6 578.8 43,81
56.9 1.43498 1.2751 739.4 579.9 43,92
57.0 1.43519 1.2758 741.1 580.9 44,02
57.1 1.43542 1.2763 742.8 582.0 44,12
57.2 1.43564 1.2768 744.4 583.0 44,22
57.3 1.43586 1.2773 745.9 584.0 44,31
57.4 1.43609 1.2778 747.6 585.1 44,41
57.5 1.43631 1.2784 749.3 586.1 44,51
57.6 1.43653 1.2791 751.0 587.1 44,61
57.7 1.43675 1.2798 752.7 588.1 44,71
57.8 1.43698 1.2804 754.4 589.2 44,81
57.9 1.43720 1.2810 756.1 590.2 44,91
58.0 1.43741 1.2818 757.8 591.2 45,01
58.1 1.43764 1.2822 759.5 592.3 45,11
58.2 1.43784 1.2827 761.1 593.4 45,21
58.3 1.43809 1.2832 762.6 594.3 45,30
58.4 1.43832 1.2837 764.3 595.4 45,40
58.5 1.43854 1.2843 766.0 596.4 45,50
58.6 1.43877 1.2850 767.8 597.5 45,61
58.7 1.43899 1.2857 769.5 598.5 45,71
58.8 1.43922 1.2863 771.1 599.5 45,80
58.9 1.43944 1.2869 772.9 600.6 45,91
59.0 1.43966 1.2876 774.6 601.6 46,01
59.1 1.43988 1.2882 776.3 602.6 46,11
59.2 1.44011 1.2889 778.1 603.7 46,22
59.3 1.44034 1.2896 779.8 604.7 46,32
59.4 1.44057 1.2902 781.6 605.8 46,43
59.5 1.44079 1.2909 783.3 606.8 46,53
59.6 1.44102 1.2916 785.2 607.9 46,64
59.7 1.44124 1.2921 786.8 608.9 46,74
59.8 1.44147 1.2926 788.4 609.9 46,83
59.9 1.44169 1.2931 790.0 610.9 46,931990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 33
▼B
Sacarosa % (m/
m)
% (m/m)Índice de
refracción a
20 ºCMasa volúmica
a2 0º CAzúcar en
g/lAzúcar en
g/kgGrado
alcohólico
% vol a 20 ºC
60.0 1.44192 1.2936 791.7 612.0 47,03
60.1 1.44215 1.2942 793.3 613.0 47,12
60.2 1.44238 1.2949 795.2 614.1 47,23
60.3 1.44260 1.2956 796.9 615.1 47,34
60.4 1.44283 1.2962 798.6 616.1 47,44
60.5 1.44305 1.2969 800.5 617.2 47,55
60.6 1.44328 1.2976 802.2 618.2 47,65
60.7 1.44351 1.2981 803.9 619.3 47,75
60.8 1.44374 1.2986 805.5 620.3 47,85
60.9 1.44397 1.2991 807.1 621.3 47,94
61.0 1.44419 1.2996 808.7 622.3 48,04
61.1 1.44442 1.3002 810.5 623.4 48,14
61.2 1.44465 1.3009 812.3 624.4 48,25
61.3 1.44488 1.3016 814.2 625.5 48,36
61.4 1.44511 1.3022 815.8 626.5 48,46
61.5 1.44534 1.3029 817.7 627.6 48,57
61.6 1.44557 1.3036 819.4 628.6 48,67
61.7 1.44580 1.3042 821.3 629.7 48,79
61.8 1.44603 1.3049 823.0 630.7 48,89
61.9 1.44626 1.3056 824.8 631.7 48,99
62.0 1.44648 1.3062 826.6 632.8 49,10
62.1 1.44672 1.3068 828.3 633.8 49,20
62.2 1.44695 1.3075 830.0 634.8 49,30
62.3 1.44718 1.3080 831.8 635.9 49,40
62.4 1.44741 1.3085 833.4 636.9 49,50
62.5 1.44764 1.3090 835.1 638.0 49,60
62.6 1.44787 1.3095 836.8 639.0 49,71
62.7 1.44810 1.3101 838.5 640.0 49,81
62.8 1.44833 1.3108 840.2 641.0 49,91
62.9 1.44856 1.3115 842.1 642.1 50,02
63.0 1.44879 1.3121 843.8 643.1 50,12
63.1 1.44902 1.3128 845.7 644.2 50,23
63.2 1.44926 1.3135 847.5 645.2 50,34
63.3 1.44949 1.3141 849.3 646.3 50,45
63.4 1.44972 1.3148 851.1 647.3 50,56
63.5 1.44995 1.3155 853.0 648.4 50,67
63.6 1.45019 1.3161 854.7 649.4 50,77
63.7 1.45042 1.3168 856.5 650.4 50,88
63.8 1.45065 1.3175 858.4 651.5 50,99
63.9 1.45088 1.3180 860.0 652.5 51,08
64.0 1.45112 1.3185 861.6 653.5 51,18
64.1 1.45135 1.3190 863.4 654.6 51,29
64.2 1.45158 1.3195 865.1 655.6 51,39
64.3 1.45181 1.3201 866.9 656.7 51,49
64.4 1.45205 1.3208 868.7 657.7 51,60
64.5 1.45228 1.3215 870.6 658.8 51,71
64.6 1.45252 1.3221 872.3 659.8 51,81
64.7 1.45275 1.3228 874.1 660.8 51,92
64.8 1.45299 1.3235 876.0 661.9 52,03
64.9 1.45322 1.3241 877.8 662.9 52,141990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 34
▼B
Sacarosa % (m/
m)
% (m/m)Índice de
refracción a
20 ºCMasa volúmica
a2 0º CAzúcar en
g/lAzúcar en
g/kgGrado
alcohólico
% vol a 20 ºC
65.0 1.45347 1.3248 879.7 664.0 52,25
65.1 1.45369 1.3255 881.5 665.0 52,36
65.2 1.45393 1.3261 883.2 666.0 52,46
65.3 1.45416 1.3268 885.0 667.0 52,57
65.4 1.45440 1.3275 886.9 668.1 52,68
65.5 1.45463 1.3281 888.8 669.2 52,79
65.6 1.45487 1.3288 890.6 670.2 52,90
65.7 1.45510 1.3295 892.4 671.2 53,01
65.8 1.45534 1.3301 894.2 672.3 53,12
65.9 1.45557 1.3308 896.0 673.3 53,22
66.0 1.45583 1.3315 898.0 674.4 53,34
66.1 1.45605 1.3320 899.6 675.4 53,44
66.2 1.45629 1.3325 901.3 676.4 53,54
66.3 1.45652 1.3330 903.1 677.5 53,64
66.4 1.45676 1.3335 904.8 678.5 53,75
66.5 1.45700 1.3341 906.7 679.6 53,86
66.6 1.45724 1.3348 908.5 680.6 53,96
66.7 1.45747 1.3355 910.4 681.7 54,08
66.8 1.45771 1.3361 912.2 682.7 54,18
66.9 1.45795 1.3367 913.9 683.7 54,29
67.0 1.45820 1.3374 915.9 684.8 54,40
67.1 1.45843 1.3380 917.6 685.8 54,51
67.2 1.45867 1.3387 919.6 686.9 54,62
67.3 1.45890 1.3395 921.4 687.9 54,73
67.4 1.45914 1.3400 923.1 688.9 54,83
67.5 1.45938 1.3407 925.1 690.0 54,95
67.6 1.45962 1.3415 927.0 691.0 55,06
67.7 1.45986 1.3420 928.8 692.1 55,17
67.8 1.46010 1.3427 930.6 693.1 55,28
67.9 1.46034 1.3434 932.6 694.2 55,40
68.0 1.46060 1.3440 934.4 695.2 55,50
68.1 1.46082 1.3447 936.2 696.2 55,61
68.2 1.46106 1.3454 938.0 697.2 55,72
68.3 1.46130 1.3460 939.9 698.3 55,83
68.4 1.46154 1.3466 941.8 699.4 55,94
68.5 1.46178 1.3473 943.7 700.4 56,06
68.6 1.46202 1.3479 945.4 701.4 56,16
68.7 1.46226 1.3486 947.4 702.5 56,28
68.8 1.46251 1.3493 949.2 703.5 56,38
68.9 1.46275 1.3499 951.1 704.6 56,50
69.0 1.46301 1.3506 953.0 705.6 56,61
69.1 1.46323 1.3513 954.8 706.6 56,72
69.2 1.46347 1.3519 956.7 707.7 56,83
69.3 1.46371 1.3526 958.6 708.7 56,94
69.4 1.46396 1.3533 960.6 709.8 57,06
69.5 1.46420 1.3539 962.4 710.8 57,17
69.6 1.46444 1.3546 964.3 711.9 57,28
69.7 1.46468 1.3553 966.2 712.9 57,39
69.8 1.46493 1.3560 968.2 714.0 57,51
69.9 1.46517 1.3566 970.0 715.0 57,621990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 35
▼B
Sacarosa % (m/
m)
% (m/m)Índice de
refracción a
20 ºCMasa volúmica
a2 0º CAzúcar en
g/lAzúcar en
g/kgGrado
alcohólico
% vol a 20 ºC
70.0 1.46544 1.3573 971.8 716.0 57,72
70.1 1.46565 1.3579 973.8 717.1 57,84
70.2 1.46590 1.3586 975.6 718.1 57,95
70.3 1.46614 1.3593 977.6 719.2 58,07
70.4 1.46639 1.3599 979.4 720.2 58,18
70.5 1.46663 1.3606 981.3 721.2 58,29
70.6 1.46688 1.3613 983.3 722.3 58,41
70.7 1.46712 1.3619 985.2 723.4 58,52
70.8 1.46737 1.3626 987.1 724.4 58,63
70.9 1.46761 1.3633 988.9 725.4 58,74
71.0 1.46789 1.3639 990.9 726.5 58,86
71.1 1.46810 1.3646 992.8 727.5 58,97
71.2 1.46835 1.3653 994.8 728.6 59,09
71.3 1.46859 1.3659 996.6 729.6 59,20
71.4 1.46884 1.3665 998.5 730.7 59,31
71.5 1.46908 1.3672 1 000.4 731.7 59,42
71.6 1.46933 1.3678 1 002.2 732.7 59,53
71.7 1.46957 1.3685 1 004.2 733.8 59,65
71.8 1.46982 1.3692 1 006.1 734.8 59,76
71.9 1.47007 1.3698 1 008.0 735.9 59,88
72.0 1.47036 1.3705 1 009.9 736.9 59,99
72.1 1.47056 1.3712 1 012.0 738.0 60,11
72.2 1.47081 1.3718 1 013.8 739.0 60,22
72.3 1.47106 1.3725 1 015.7 740.0 60,33
72.4 1.47131 1.3732 1 017.7 741.1 60,45
72.5 1.47155 1.3738 1 019.5 742.1 60,56
72.6 1.47180 1.3745 1 021.5 743.2 60,68
72.7 1.47205 1.3752 1 023.4 744.2 60,79
72.8 1.47230 1.3758 1 025.4 745.3 60,91
72.9 1.47254 1.3765 1 027.3 746.3 61,02
73.0 1.47284 1.3772 1 029.3 747.4 61,14
73.1 1.47304 1.3778 1 031.2 748.4 61,25
73.2 1.47329 1.3785 1 033.2 749.5 61,37
73.3 1.47354 1.3792 1 035.1 750.5 61,48
73.4 1.47379 1.3798 1 037.1 751.6 61,60
73.5 1.47404 1.3805 1 039.0 752.6 61,72
73.6 1.47429 1.3812 1 040.9 753.6 61,83
73.7 1.47454 1.3818 1 042.8 754.7 61,94
73.8 1.47479 1.3825 1 044.8 755.7 62,06
73.9 1.47504 1.3832 1 046.8 756.8 62,18
74.0 1.47534 1.3838 1 048.6 757.8 62,28
74.1 1.47554 1.3845 1 050.7 758.9 62,41
74.2 1.47579 1.3852 1 052.6 759.9 62,52
74.3 1.47604 1.3858 1 054.6 761.0 62,64
74.4 1.47629 1.3865 1 056.5 762.0 62,76
74.5 1.47654 1.3871 1 058.5 763.1 62,87
74.6 1.47679 1.3878 1 060.4 764.1 62,99
74.7 1.47704 1.3885 1 062.3 765.1 63,10
74.8 1.47730 1.3892 1 064.4 766.2 63,23
74.9 1.47755 1.3898 1 066.3 767.2 63,33
75.0 1.47785 1.3905 1 068.3 768.3 63,461990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 36
▼B
3.GRADOALCOHÓLICOVOLUMÉTRICO
1. DEFINICIÓN
El grado alcohólico volumétrico esigual al número de litrosde
etanol contenidosen 100 litrosde vino, medidosambosvolúmenes
a la temperatura de 20 ºC. Su símbolo es «% vol».
Nota:El etanol, sus homólogos y los ésteres de ambos están comprendidos
en el grado alcohólico, por encontrarse en el destilado.
2. FUNDAMENTO DE LOS MÉTODOS
2.1. Destilación del vino alcalinizado mediante una suspensión de hidró-
xido de calcio. Determinación del grado alcohólico en el destilado.
2.2. Método de referencia: determinación de la masa volúmica del desti-
lado por picnometría.
2.3.Métodosusuales
2.3.1.Determinación del grado alcohólico del destilado por areometría
2.3.2.Determinación del grado alcohólico del destilado por densimetría
con balanza hidrostática
2.3.3.Determinacióndelgradoalcohólico deldestiladoporrefractometría
Nota:Para expresar el grado alcohólico a partir de la masa volúmica del
destilado, utilícense las tablas prácticas I, II, III que figuran en el
Anexo II de este capítulo. Se han calculado a partir de la tabla
alcohólica internacional publicada en 1972 por la Organización
internacional de Metrología Legal (OIML) en su Recomendación
n
o22 y fue adoptada por la OIV (Asamblea general de 1974).
En la tabla I (Anexo II) se da la ecuación general por la que se rela-
ciona el grado alcohólico volumétrico y la masa volúmica de las
mezclashidroalcohólicasen función de la temperatura.
3. OBTENCIÓN DEL DESTILADO3.1.Material
3.1.1. Aparato de destilación compuesto por:
— un matraz de fondo redondo de 1 litro de capacidad con esmeri-
lado normalizado,
— una columna rectificadora de una altura de unos20 cm o cual-
quier dispositivo para impedir el arrastre,
— una fuente de calor; debe evitarse toda pirogenación de las mate-
rias extractivas mediante un dispositivo adecuado,
— un refrigerante terminado en un tubo afilado que conduzca el
destilado al fondo del matraz aforado receptor que deberá
contener algunosmililitrosde agua.
3.1.2. Aparato de arrastre por vapor de agua, formado por:
1. un generador de vapor de agua,
2. un borboteador,3. una columna rectificadora,
4. un refrigerante.
Puede utilizarse cualquier otro modelo de aparato de destilación o
cualquier otro aparato de arrastre por vapor de agua siempre que
responda al ensayo siguiente:
Destilar 5 veces consecutivas una mezcla hidroalcohólica de 10 %
vol. Después de la quinta destilación, el destilado debe presentar un
grado alcohólico de 9,9 % vol, como mínimo, esdecir, no debe
producirse una pérdida de alcohol superior a 0,02 % vol durante
cada destilación.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 37
▼B
3.2.Reactivos
3.2.1.Suspensión de hidróxido de calcio 2 M
Se obtiene vertiendo, con cuidado, un litro de agua caliente (60-
70 ºC) sobre 120 g de cal viva CaO.
3.3.Preparacióndelamuestra
En los vinos jóvenes o espumosos debe eliminarse previamente la
mayor cantidad posible de dióxido de carbono, agitando 250-300 ml
de vino en un erienmeyer de 500 ml.
3.4.Procedimiento
Echar en un matraz aforado un volumen de vino de 200 ml.
Anotar la temperatura del vino.Verterlo en el matraz del aparato de destilación o en el borboteador
del aparato de arrastre por vapor de agua. Lavar el matraz aforado
cuatro veces con 5 ml de agua que se verterán en el matraz de desti-
lación o en el borboteador. Añadir 10 ml de hidróxido de calcio
(3.2.1) y algunosfragmentosde materia poros a inerte (piedra
pómez).
Recoger el destilado en el matraz aforado de 200 ml que ha servido
para medir el vino.
Debe recogerse un volumen igual a las tres cuartas partes, aproxima-
damente, del volumen inicial en el caso de la destilación, o 198-
199 ml de destilado en el caso de arrastre por vapor de agua.
Completar a 200 ml con agua destilada a una temperatura idéntica
a la temperatura inicial, con una aproximación de ± 2 ºC.
Mezciar con precaución, mediante un movimiento circular.
Nota:En el caso de vinos especialmente cargados de iones amoniacales,
efectuar una nueva destilación del destilado en las condiciones ante-
riormente descritas, sustituyendo la suspensión de hidróxido de
calcio por 1 ml de ácido sulfúrico al 10 % (v/v).
4. MÉTODO DE REFERENCIA
Determinación del grado alcohólico del destilado por picnometría.
4.1.Aparatos
4.1.1. Utilizar el picnómetro calibrado como se indica en el capítulo «Masa
volúmica».
4.2.Procedimiento
Determinar la masa volúmica aparente a T ºC del destilado (3.4),
como se indica en el capítulo «Masa volúmica», en 4.3.1 y 4.3.2;
seaρ
tdicha masa volúmica.
4.3.Expresióndelosresultados
4.3.1.Método de cálculo
Expresar el grado alcohólico a 20 ºC utilizando la tabla I. En la línea
horizontal de la tabla correspondiente a la temperatura T ºC expre-
sada en número entero buscar la menormasa volúmica superior a ρt.
Empléese la diferencia tabular leída debajo de esta masa volúmica
para calcular la masa volúmica ρa la temperatura T.
En la línea de la temperatura T, buscar la masa volúmica ρ′inme-
diatamente superior a ρy calcular la diferencia entre lasdosmas as
volúmicas ρyρ′. Esta diferencia se dividirá por la diferencia tabular
leída a la derecha de la masa volúmica ρ′. El cociente da la parte
decimal del grado alcohólico, mientrasque la parte entera de dicho
grado viene indicada en la cabecera de la columna en que se
encuentra la masa volúmica ρ′.
En el Anexo I de este capítulo figura un ejemplo de cálculo del
grado alcohólico.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 38
▼B
Nota:
Esta corrección de temperatura ha sido programada y, en su caso,
puede efectuarse automáticamente.
4.3.2.Repetibilidad (r):
r = 0,10 % vol
4.3.3.Reproductibilidad (R):
R = 0,19 % vol
5. MÉTODOS USUALES5.1.Areometría
5.1.1.Aparatos
5.1.1.1. Alcohómetro
El alcohómetro debe ajustarse a las especificaciones de los aparatos
de lasclas esI o II definidasen la recomendación internacional n
o44,
«Alcohómetrosy areómetrospara alcohol», de la OIML.
5.1.1.2. Termómetro graduado en gradosy décimasde grado de 0 º a 40 ºC,
con una aproximación comprobada de 1/20 de grado.
5.1.1.3. Probeta cilíndrica de 36 mm de diámetro y 320 mm de altura,
mantenida en posición vertical mediante un soporte con tornillos
niveladores.
5.1.2.Procedimiento
Verter el destilado (3.4) en la probeta cilíndrica. Mantener la probeta
en posición vertical. Introducir el termómetro y el alcohómetro.
Efectuar la lectura del termómetro 1 min., después de haber agitado
para igualar la temperatura de la probeta, del termómetro, del
alcohómetro y del destilado. Retirar el termómetro y leer el grado
alcohólico aparente tras1 min. de repos o. Realizar por lo menos
treslecturasutilizando una lupa. En el grado aparente medido a t
ºC debe corregirse la acción de la temperatura utilizando la tabla II.
Es necesario que la temperatura del líquido no se diferencie en
mucho de la temperatura ambiente (5 ºC de diferencia, como
máximo).
5.2.Densimetríaconbalanzahidrostática
5.2.1.Material
Utilizar la balanza hidrostática como se indica en el capítulo «Masa
volúmica».
5.2.2.Forma de operar
Proceder a la determinación de la masa volúmica aparente a t ºC del
destilado como se indica en el capítulo «Masa volúmica» en 5.2.2.
5.2.3.Expresión de los resultados
Expresar el grado alcohólico a 20 ºC siguiendo las indicaciones del
apartado 4.3.1 y utilizando la tabla I, si el flotador es en vidrio pyrex
y la tabla III si el flotador es en vidrio normal.
5.3.Refractometría
5.3.1.Material
5.3.1.1. Refractómetro que permita la medida de losíndicesde refracción
comprendidosentre 1,330 y 1,346.
En función del tipo de aparato, lasmedidasdeberán realizars e:
— bien a 20 ºC, con ayuda de un dispositivo adecuado;
— bien a temperatura ambiente t ºC, medida con un termómetro que
permita determinarla con una aproximación de 0,05 ºC, como
mínimo. Con el aparato se facilita una tabla de corrección de
temperatura.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 39
▼B
5.3.2.Procedimiento
La medida del índice de refracción se efectúa en el destilado de vino
(3.4), siguiendo el procedimiento prescrito para el tipo de aparato
utilizado.
5.3.3.Expresión de los resultados
El índice de refracción a 20 ºC se lleva a la tabla IV para obtener el
grado alcohólico.
Nota:
En la tabla IV figura la correspondencia entre los índices de refrac-
ción de lasmezclashidroalcohólicaspurasy de losdes tiladosde
vino. En el caso de destilados de vino, se tienen en cuenta las impu-
rezas del destilado (principalmente alcoholes superiores). La
presencia de metanol se traduce en la disminución del índice de
refracción y, por lo tanto, del grado alcohólico.
6. EJEMPLO DE CÁLCULO DEL GRADO ALCOHÓLICO DE UN
VINO
6.1.Picnometríaconbalanzadedosplatos
6.1.1. Las constantes del picnómetro se deben determinar y calcular como
se indica en el punto 6.1.1 del capítulo 1 «Masa volúmica y
densidad relativa».
6.1.2.Pesada del picnómetro lleno de destilado
Ejemplo numérico
Tara = picnómetro + destilado a t ºC + p ″/C144/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C145/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C146t ºC = 18,90 ºC
t ºC corregido = 18,70 ºC
p″ = 2,8074 g
p+m−p ″= masa del destilado a t ºC 105,0698 − 2,8074 = 102,2624 g
Masa volúmica aparente a t ºC
ρ
tpþm/C0p00
volumen del picn´ ometro a 20 ºC/C144/C147/C147/C147/C147/C147/C145/C147/C147/C147/C147/C147/C146ρ18 ;70ºC¼102 ;2624
104 ;0229¼0;983076
6.1.3.Cálculo del grado alcohólico
Se utiliza el cuadro de masas volúmicas
aparentesde lasmezclashidroalcohólicas
a diferentes temperaturas, como se indicó
anteriormente/C144/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C145/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C146En la línea 18 ºC de la tabla de masas
volúmicas aparentes, la menor masa
superior a la masa observada 0,983087
es0,98398, en la columna 11
La masa volúmica a 18 ºC es:
(98307,6 + 0,7 × 22) 10
−5= 0,98323
0,98398 − 0,98323 = 0,00075
La parte decimal del grado alcohólico es
75/114 = 0,65
El grado alcohólico es: 11,65 % vol
6.2.Picnometríaconbalanzamonoplato
6.2.1. Las constantes del picnómetro se han determinado y calculado en el
punto 6.2.1 del capítulo «Masa volúmica y densidad relativa».
6.2.2.Pesada del picnómetro lleno de destilado:
Peso del frasco tara en el momento de
la determinación: T1= 171,9178 g
Picnómetro lleno de destilado a
20,50 ºC: P2= 167,8438 g1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 40
▼B
Variación del empuje del aire: dT = 171,9178 − 171,9160
= + 0,0018
Masa del destilado a 20,50 ºC: Lt= 167,8438 − (67,6695 + 0,0018)
= 100,1725
Masa volúmica aparente del desti-
lado: ρ20 ;5ºC¼100 ;1725
101 ;8194¼0;983825
6.2.3.Cálculo del grado alcohólico:
Utilizar la tabla de masas volúmicas
aparentesde lasmezclashidroalcohólicas
a diferentes temperaturas, como se indicó
anteriormente/C144/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C145/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C146En la línea 20 ºC de la tabla de masas
volúmicas aparentes, la menor masa
superior a la masa observada 0,983825
es0,98471, en la columna 10 %
La masa volúmica a 20 ºC es:
(98382,5 + 0,50 × 24) 10
−5= 0,983945
0,98471 − 0,983945 = 0,000765
La parte decimal del grado alcohólico es:
76,5/119 = 0,64
El grado alcohólico es: 10,64 % vol1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 41
▼B
FÓRMULA PARA CALCULAR LAS TABLAS ALCOHÓLICAS DE LAS
MEZCLAS DE ALCOHOL ETÍLICO Y AGUA
La masa volúmica « ρ», expresada en kilogramos por metro cúbico (kg/m3), de
una mezcla de alcohol etílico y agua a la temperatura t, expresada en grados
Celsius, viene dada por la fórmula siguiente, en función de:
— el grado en masa p expresado por un número decimal, (1)
— la temperatura t expresada en grados Celsius, (EIPT 68)— loscoeficientesnuméricosque figuran a continuación.
La fórmula esválida para lastemperaturascomprendidasentre −20 ºC y +40 ºC
Coeficientesnuméricosde la fórmula
kAk
kg/m3Bk
1 9,982 012 300 · 102− 2,061 851 3 · 10−1kg/(m3· ºC)
2 − 1,929 769 495 · 102− 5,268 254 2 · 10−3kg/(m3·º C2)
3 3,891 238 958 · 1023,613 001 3 · 10−5kg/(m3·º C3)
4 − 1,668 103 923 · 103− 3,895 770 2 · 10−7kg/(m3·º C4)
5 1,352 215 441 · 1047,169 354 0 · 10−9kg/(m3·º C5)
6 − 8,829 278 388 · 104− 9,973 923 1 · 10−11kg/(m3·º C6)
7 3,062 874 042 · 105
8 − 6,138 381 234 · 105
9 7,470 172 998 · 105
10 − 5,478 461 354 · 105
11 2,234 460 334 · 105
12 − 3,903 285 426 · 104
k C1,k
kg/(m3· ºC)C2,k
kg/(m3·º C2)
1 1,693 443 461 530 087 · 10−1− 1,193 013 005 057 010 · 10−2
2 − 1,046 914 743 455 169 · 1012,517 399 633 803 461 · 10−1
3 7,196 353 469 546 523 · 101− 2,170 575 700 536 993
4 − 7,047 478 054 272 792 · 1021,353 034 988 843 029 · 101
5 3,924 090 430 035 045 · 103− 5,029 988 758 547 014 · 101
6 − 1,210 164 659 068 747 · 1041,096 355 666 577 570 · 102
7 2,248 646 550 400 788 · 104− 1,422 753 946 421 155 · 102
8 − 2,605 562 982 188 164 · 1041,080 435 942 856 230 · 102
9 1,852 373 922 069 467 · 104− 4,414 153 236 817 392 · 101
10 − 7,420 201 433 430 137 · 1037,442 971 530 188 783
11 1,285 617 841 998 974 · 103
k C3,k
kg/(m3·º C3)C4,k
kg/(m3·º C4)C5,k
kg/(m3·º C5)
1 − 6,802 995 733 503 803 · 10−44,075 376 675 622 027 · 10−6− 2,788 074 354 782 409 · 10−8
2 1,876 837 790 289 664 · 10−2− 8,763 058 573 471 110 · 10−61,345 612 883 493 354 · 10−8
3 − 2,002 561 813 734 156 · 10−16,515 031 360 099 368 · 10−6
4 1,022 992 966 719 220 − 1,515 784 836 987 210 · 10−6
5 − 2,895 696 483 903 638
6 4,810 060 584 300 675
7 − 4,672 147 440 794 683
8 2,458 043 105 903 461
9 − 5,411 227 621 436 812 · 10−11990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 42
(1) Ejemplo: para un grado en masa de 12 %: p = 0,12.
▼B
TABLA I
GRADO ALCOHÓLICO INTERNACIONAL A 20 ºC
TablademasasvolúmicasaparentesdemezclashidroalcohólicasPicnómetrodevidriopyrex
Masas volúmicas a t º, corregidas del empuje del aire
tºGrado alcohométrico volumetrico en %
01234567891 01 1
0º 999,64 1,50 998,14 1,44 996,70 1,40 995,30 1,35 993,95 1,30 992,65 1,24 991,41 1,19 990,22 1,14 989,08 1,10 987,98 1,05 986,93 1,00 985,93 0,95
−0,07 −0,06 −0,06 −0,06 −0,06 −0,06 −0,06 −0,05 −0,04 −0,03 −0,02 −0,01
1º 999,71 1,51 998,20 1,44 996,76 1,40 995,36 1,35 994,01 1,30 992,71 1,24 991,47 1,20 990,27 1,15 989,12 1,11 988,01 1,06 986,95 1,01 985,94 0,97
−0,05 −0,05 −0,04 −0,04 −0,04 −0,04 −0,03 −0,03 −0,02 −0,02 −0,01 0,00
2º 999,76 1,51 998,25 1,45 996,80 1,40 995,40 1,35 994,05 1,30 992,75 1,25 991,50 1,20 990,30 1,16 989,14 1,11 988,03 1,07 986,96 1,02 985,94 0,98
−0,03 −0,03 −0,03 −0,02 −0,02 −0,02 −0,02 −0,01 −0,01 0,00 0,01 0,02
3º 999,79 1,51 998,28 1,45 996,83 1,41 995,42 1,35 994,07 1,30 992,77 1,25 991,52 1,21 990,31 1,16 989,15 1,12 988,03 1,08 986,95 1,03 985,92 1,00
−0,02 −0,02 −0,01 −0,02 −0,01 −0,01 0,00 0,00 0,01 0,02 0,03 0,04
4º 999,81 1,51 998,30 1,46 996,84 1,40 995,44 1,36 994,08 1,30 992,78 1,26 991,52 1,21 990,31 1,17 989,14 1,13 988,01 1,09 986,92 1,04 985,88 1,00
0,00 0,00 0,00 0,00 0,01 0,02 0,02 0,02 0,02 0,03 0,04 0,05
5º 999,81 1,51 998,30 1,46 996,84 1,40 995,44 1,37 994,07 1,31 992,76 1,26 991,50 1,21 990,29 1,17 989,12 1,14 987,98 1,10 986,88 1,05 985,83 1,01
0,01 0,01 0,01 0,02 0,01 0,02 0,03 0,04 0,05 0,05 0,05 0,06
6º 999,80 1,51 998,29 1,46 996,83 1,41 995,42 1,36 994,06 1,32 992,74 1,27 991,47 1,22 990,25 1,18 989,07 1,14 987,93 1,10 986,83 1,06 985,77 1,03
0,03 0,03 0,03 0,03 0,04 0,04 0,04 0,05 0,06 0,07 0,08 0,09
7º 999,77 1,51 998,26 1,46 996,80 1,41 995,39 1,37 994,02 1,32 992,70 1,27 991,43 1,23 990,20 1,19 989,01 1,15 987,86 1,11 986,75 1,07 985,68 1,03
0,05 0,04 0,04 0,05 0,05 0,05 0,05 0,06 0,06 0,07 0,08 0,09
8º 999,72 1,50 998,22 1,46 996,76 1,42 995,34 1,37 993,97 1,32 992,65 1,27 991,38 1,24 990,14 1,19 988,95 1,16 987,79 1,12 986,67 1,08 985,59 1,05
0,05 0,06 0,06 0,06 0,06 0,06 0,07 0,07 0,08 0,09 0,10 0,11
9º 999,67 1,51 998,16 1,46 996,70 1,42 995,28 1,37 993,91 1,32 992,59 1,28 991,31 1,24 990,07 1,20 988,87 1,17 987,70 1,13 986,57 1,09 985,48 1,06
0,07 0,07 0,07 0,07 0,07 0,08 0,08 0,09 0,09 0,10 0,11 0,12
10º 999,60 1,51 998,09 1,46 996,63 1,42 995,21 1,37 993,84 1,33 992,51 1,28 991,23 1,25 989,98 1,20 988,78 1,17 987,60 1,14 986,46 1,10 985,36 1,06
0,09 0,09 0,09 0,08 0,09 0,09 0,10 0,10 0,11 0,11 0,12 0,13
11º 999,51 1,51 998,00 1,46 996,54 1,41 995,13 1,38 993,75 1,33 992,42 1,29 991,13 1,25 989,88 1,21 988,67 1,18 987,49 1,15 986,34 1,11 985,23 1,07
0,10 0,09 0,09 0,10 0,10 0,11 0,11 0,11 0,12 0,13 0,13 0,14
12º 999,41 1,50 997,91 1,46 996,45 1,42 995,03 1,38 993,65 1,34 992,31 1,29 991,02 1,25 989,77 1,22 988,55 1,19 987,36 1,15 986,21 1,12 985,09 1,09
0,11 0,11 0,11 0,11 0,11 0,11 0,12 0,12 0,13 0,14 0,15 0,16
13º 999,30 1,50 997,80 1,46 996,34 1,42 994,92 1,38 993,54 1,34 992,20 1,30 990,90 1,25 989,65 1,23 988,42 1,20 987,22 1,16 986,06 1,13 984,93 1,09
0,12 0,12 0,12 0,13 0,13 0,13 0,13 0,14 0,14 0,15 0,16 0,16
14º 999,18 1,50 997,68 1,46 996,22 1,43 994,79 1,38 993,41 1,34 992,07 1,30 990,77 1,26 989,51 1,23 988,28 1,21 987,07 1,17 985,90 1,13 984,77 1,11
0,13 0,14 0,14 0,13 0,13 0,14 0,14 0,15 0,16 0,16 0,17 0,18
15º 999,05 1,51 997,54 1,46 996,08 1,42 994,66 1,38 993,28 1,35 991,93 1,30 990,63 1,27 989,36 1,24 988,12 1,21 986,91 1,18 985,73 1,14 984,59 1,12
0,15 0,14 0,14 0,15 0,15 0,15 0,16 0,16 0,17 0,17 0,18 0,19
16º 998,90 1,50 997,40 1,46 995,94 1,43 994,51 1,38 993,13 1,35 991,78 1,31 990,47 1,27 989,20 1,25 987,95 1,21 986,74 1,19 985,55 1,15 984,40 1,13
0,16 0,16 0,16 0,16 0,16 0,17 0,17 0,18 0,18 0,19 0,19 0,20
17º 998,74 1,50 997,24 1,46 995,78 1,43 994,35 1,38 992,97 1,36 991,61 1,31 990,30 1,28 989,02 1,25 987,77 1,22 986,55 1,19 985,36 1,16 984,20 1,14
0,17 0,17 0,17 0,16 0,17 0,17 0,18 0,18 0,19 0,20 0,21 0,22
18º 998,57 1,50 997,07 1,46 995,61 1,42 994,19 1,39 992,80 1,36 991,44 1,32 990,12 1,28 988,84 1,26 987,58 1,23 986,35 1,20 985,15 1,17 983,98 1,14
0,18 0,18 0,18 0,19 0,19 0,19 0,19 0,20 0,20 0,20 0,21 0,22
19º 998,39 1,50 996,89 1,46 995,43 1,43 994,00 1,39 992,61 1,36 991,25 1,32 989,93 1,29 988,64 1,26 987,38 1,23 986,15 1,21 984,94 1,10 983,76 1,16
0,19 0,19 0,19 0,19 0,19 0,19 0,20 0,20 0,21 0,22 0,23 0,24
20º 998,20 1,50 996,70 1,46 995,24 1,43 993,81 1,39 992,42 1,36 991,06 1,33 989,73 1,29 988,44 1,27 987,17 1,24 985,93 1,22 984,71 1,19 983,52 1,16
tºGrado alcohométrico volumetrico en %
01234567891 01 1
20º 998,20 1,50 996,70 1,46 995,24 1,43 993,81 1,39 992,42 1,36 991,06 1,33 989,73 1,29 988,44 1,27 987,17 1,24 985,93 1,22 984,71 1,19 983,52 1,16
0,20 0,20 0,20 0,20 0,21 0,21 0,21 0,22 0,22 0,23 0,24 0,24
21º 998,00 1,50 996,50 1,46 995,04 1,43 993,61 1,40 992,21 1,36 990,85 1,33 989,52 1,30 988,22 1,27 986,95 1,25 985,70 1,23 984,47 1,19 983,28 1,18
0,21 0,21 0,21 0,21 0,21 0,22 0,22 0,23 0,24 0,24 0,24 0,26
22º 997,79 1,50 996,29 1,46 994,83 1,43 993,40 1,40 992,00 1,37 990,63 1,33 989,30 1,31 987,99 1,28 986,71 1,25 985,46 1,23 984,23 1,21 983,02 1,18
0,22 0,22 0,23 0,23 0,23 0,23 0,24 0,24 0,24 0,25 0,26 0,25
23º 997,57 1,50 996,07 1,47 994,60 1,43 993,17 1,40 991,77 1,37 990,40 1,34 989,06 1,31 987,75 1,28 986,47 1,26 985,21 1,24 983,97 1,20 982,77 1,20
0,24 0,23 0,23 0,23 0,24 0,24 0,24 0,25 0,26 0,26 0,27 0,29
24º 997,33 1,49 995,84 1,47 994,37 1,43 992,94 1,41 991,53 1,37 990,16 1,34 988,82 1,32 987,50 1,29 986,21 1,26 984,95 1,25 983,70 1,22 982,48 1,20
0,24 0,25 0,24 0,25 0,24 0,25 0,26 0,26 0,26 0,27 0,28 0,28
25º 997,09 1,50 995,59 1,46 994,13 1,44 992,69 1,40 991,29 1,38 989,91 1,35 988,56 1,32 987,24 1,29 985,95 1,27 984,68 1,26 983,42 1,22 982,20 1,21
0,25 0,25 0,26 0,25 0,26 0,26 0,26 0,26 0,28 0,28 0,28 0,30
26º 996,84 1,50 995,34 1,47 993,87 1,43 992,44 1,41 991,03 1,38 989,65 1,35 988,30 1,32 986,98 1,31 985,67 1,27 984,40 1,26 983,14 1,24 981,90 1,22
0,26 0,26 0,26 0,27 0,27 0,27 0,27 0,28 0,28 0,29 0,30 0,30
27º 996,58 1,50 995,08 1,47 993,61 1,44 992,17 1,41 990,76 1,38 989,38 1,35 988,03 1,33 986,70 1,31 985,39 1,28 984,11 1,27 982,84 1,24 981,60 1,23
0,27 0,27 0,27 0,27 0,28 0,28 0,29 0,29 0,29 0,30 0,31 0,32
28º 996,31 1,50 994,81 1,47 993,34 1,44 991,90 1,42 990,48 1,38 989,10 1,36 987,74 1,33 986,41 1,31 985,10 1,29 983,81 1,28 982,53 1,25 981,28 1,23
0,28 0,28 0,28 0,29 0,28 0,29 0,29 0,30 0,31 0,31 0,31 0,32
29º 996,03 1,50 994,53 1,47 993,06 1,45 991,61 1,41 990,20 1,39 988,81 1,36 987,45 1,34 986,11 1,32 984,79 1,29 983,50 1,28 982,22 1,26 980,96 1,24
0,28 0,29 0,29 0,29 0,30 0,30 0,31 0,31 0,31 0,32 0,32 0,33
30º 995,75 1,51 994,24 1,47 992,77 1,45 991,32 1,42 989,90 1,39 988,51 1,37 987,14 1,34 985,80 1,32 984,48 1,30 983,18 1,28 981,90 1,27 980,63 1,25
0,30 0,30 0,30 0,30 0,31 0,31 0,31 0,31 0,32 0,33 0,34 0,34
31º 995,45 1,51 993,94 1,47 992,47 1,45 991,02 1,43 989,59 1,39 988,20 1,37 986,83 1,34 985,49 1,33 984,16 1,31 982,85 1,29 981,56 1,27 980,29 1,26
0,31 0,31 0,31 0,32 0,31 0,32 0,32 0,33 0,33 0,34 0,35 0,36
32º 995,14 1,51 993,63 1,47 992,16 1,46 990,70 1,42 989,28 1,40 987,88 1,37 986,51 1,35 985,16 1,33 983,83 1,32 982,51 1,30 981,21 1,28 979,93 1,26
0,31 0,31 0,32 0,32 0,32 0,33 0,33 0,34 0,35 0,35 0,35 0,35
33º 994,83 1,51 993,32 1,48 991,84 1,46 990,38 1,42 988,96 1,41 987,55 1,37 986,18 1,36 984,82 1,34 983,48 1,32 982,16 1,30 980,86 1,28 979,58 1,28
0,32 0,33 0,33 0,33 0,35 0,34 0,35 0,35 0,34 0,35 0,36 0,37
34º 994,51 1,52 992,99 1,48 991,51 1,46 990,05 1,44 988,61 1,40 987,21 1,38 985,83 1,36 984,47 1,33 983,14 1,33 981,81 1,31 980,50 1,29 979,21 1,28
0,33 0,33 0,34 0,35 0,34 0,35 0,35 0,35 0,36 0,36 0,36 0,37
35º 994,18 1,52 992,66 1,49 991,17 1,47 989,70 1,43 988,27 1,41 986,86 1,38 985,48 1,36 984,12 1,34 982,78 1,33 981,45 1,31 980,14 1,30 978,84 1,29
0,34 0,35 0,35 0,35 0,35 0,35 0,35 0,36 0,36 0,37 0,37 0,38
36º 993,84 1,53 992,31 1,49 990,82 1,47 989,35 1,43 987,92 1,41 986,51 1,38 985,13 1,37 983,76 1,34 982,42 1,34 981,08 1,31 979,77 1,31 978,46 1,29
0,35 0,35 0,36 0,35 0,36 0,36 0,37 0,37 0,38 0,37 0,39 0,39
37º 993,49 1,53 991,96 1,50 990,46 1,46 989,00 1,44 987,56 1,41 986,15 1,39 984,76 1,37 983,39 1,35 982,04 1,33 980,71 1,33 979,38 1,31 978,07 1,30
0,36 0,36 0,36 0,37 0,37 0,37 0,37 0,37 0,38 0,39 0,38 0,39
38º 993,13 1,53 991,60 1,50 990,10 1,47 988,63 1,44 987,19 1,41 985,78 1,39 984,39 1,37 983,02 1,36 981,66 1,34 980,32 1,32 979,00 1,32 977,68 1,31
0,36 0,37 0,37 0,37 0,38 0,38 0,38 0,39 0,38 0,39 0,40 0,40
39º 992,77 1,54 991,23 1,50 989,73 1,47 988,26 1,45 986,81 1,41 985,40 1,39 984,01 1,38 982,63 1,35 981,28 1,35 979,93 1,33 978,60 1,32 977,28 1,32
0,37 0,37 0,38 0,39 0,38 0,39 0,39 0,39 0,40 0,39 0,40 0,41
40º 992,40 1,54 990,86 1,51 989,35 1,48 987,87 1,44 986,43 1,42 985,01 1,39 983,62 1,38 982,24 1,36 980,88 1,34 979,54 1,34 978,20 1,33 976,87 1,321990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 43
▼B
tºGrado alcohólico volumétrico en %
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21
0 986,93 1,00 985,93 0,95 984,98 0,92 984,06 0,88 983,18 0,84 982,34 0,80 981,54 0,78 980,76 0,75 980,01 0,73 979,28 0,72 978,56 0,70 977,86 0,70
−0,02 −0,01 0,01 0,01 0,03 0,04 0,07 0,08 0,10 0,12 0,14 0,17
1 986,95 1,01 985,94 0,97 984,97 0,92 984,05 0,90 983,15 0,85 982,30 0,83 981,47 0,79 980,68 0,77 979,91 0,75 979,16 0,74 978,42 0,73 977,69 0,72
−0,01 0,00 0,01 0,03 0,04 0,07 0,08 0,10 0,12 0,14 0,16 0,18
2 986,96 1,02 985,94 0,98 984,96 0,94 984,02 0,91 983,11 0,88 982,23 0,84 981,39 0,81 980,58 0,79 979,79 0,77 979,02 0,76 978,26 0,75 977,51 0,74
0,01 0,02 0,04 0,05 0,06 0,07 0,09 0,11 0,13 0,15 0,17 0,19
3 986,95 1,03 985,92 1,00 984,92 0,95 983,97 0,92 983,05 0,89 982,16 0,86 981,30 0,83 980,47 0,81 979,66 0,79 978,87 0,78 978,09 0,77 977,32 0,77
0,03 0,04 0,04 0,06 0,07 0,09 0,10 0,12 0,14 0,16 0,18 0,20
4 986,92 1,04 985,88 1,00 984,88 0,97 983,91 0,93 982,98 0,91 982,07 0,87 981,20 0,85 980,35 0,83 979,52 0,81 978,71 0,80 977,91 0,79 977,12 0,79
0,04 0,05 0,06 0,07 0,09 0,10 0,12 0,14 0,15 0,17 0,19 0,22
5 986,88 1,05 985,83 1,01 984,82 0,98 983,84 0,95 982,89 0,92 981,97 0,89 981,08 0,87 980,21 0,84 979,37 0,83 978,54 0,82 977,72 0,82 976,90 0,80
0,05 0,06 0,08 0,09 0,10 0,12 0,13 0,14 0,17 0,19 0,21 0,22
6 986,83 1,06 985,77 1,03 984,74 0,99 983,75 0,96 982,79 0,94 981,85 0,90 980,95 0,88 980,07 0,87 979,20 0,85 978,35 0,84 977,51 0,83 976,68 0,83
0,08 0,09 0,09 0,10 0,12 0,13 0,15 0,16 0,18 0,19 0,21 0,23
7 986,75 1,07 985,68 1,03 984,65 1,00 983,65 0,98 982,67 0,95 981,72 0,92 980,80 0,89 979,91 0,89 979,02 0,86 978,16 0,86 977,30 0,85 976,45 0,85
0,08 0,09 0,11 0,13 0,13 0,14 0,15 0,18 0,19 0,21 0,23 0,25
8 986,67 1,08 985,59 1,05 984,54 1,02 983,52 0,98 982,54 0,96 981,58 0,93 980,65 0,92 979,73 0,90 978,83 0,88 977,95 0,88 977,07 0,87 976,20 0,87
0,10 0,11 0,12 0,12 0,14 0,16 0,18 0,19 0,21 0,22 0,24 0,26
9 986,57 1,09 985,48 1,06 984,42 1,02 983,40 1,00 982,40 0,98 981,42 0,95 980,47 0,93 979,54 0,92 978,62 0,89 977,73 0,90 976,83 0,89 975,94 0,89
0,11 0,12 0,12 0,14 0,16 0,17 0,18 0,20 0,20 0,23 0,24 0,26
10 986,46 1,10 985,36 1,06 984,30 1,04 983,26 1,02 982,24 0,99 981,25 0,96 980,29 0,95 979,34 0,92 978,42 0,92 977,50 0,91 976,59 0,91 975,68 0,91
0,12 0,13 0,14 0,16 0,16 0,17 0,19 0,20 0,23 0,25 0,27 0,29
11 986,34 1,11 985,23 1,07 984,16 1,06 983,10 1,02 982,08 1,00 981,08 0,98 980,10 0,96 979,14 0,95 978,19 0,94 977,25 0,93 976,32 0,93 975,39 0,92
0,13 0,14 0,16 0,16 0,18 0,19 0,21 0,22 0,24 0,25 0,27 0,28
12 986,21 1,12 985,09 1,09 984,00 1,06 982,94 1,04 981,90 1,01 980,89 1,00 979,89 0,97 978,92 0,97 977,95 0,95 977,00 0,95 976,05 0,94 975,11 0,95
0,15 0,16 0,16 0,18 0,19 0,20 0,21 0,23 0,24 0,26 0,28 0,30
13 986,06 1,13 984,93 1,09 983,84 1,08 982,76 1,05 981,71 1,02 980,69 1,01 979,68 0,99 978,69 0,98 977,71 0,97 976,74 0,97 975,77 0,96 974,81 0,96
0,16 0,16 0,18 0,18 0,20 0,22 0,23 0,24 0,26 0,27 0,28 0,30
14 985,90 1,13 984,77 1,11 983,66 1,08 982,58 1,07 981,51 1,04 980,47 1,02 979,45 1,00 978,45 1,00 977,45 0,98 976,47 0,98 975,49 0,98 975,51 0,98
0,17 0,18 0,19 0,20 0,21 0,22 0,24 0,25 0,26 0,28 0,30 0,32
15 985,73 1,14 984,59 1,12 983,47 1,09 982,38 1,08 981,30 1,05 960,25 1,04 979,21 1,01 978,20 1,01 977,19 1,00 976,19 1,00 975,19 1,00 974,19 1,00
0,18 0,19 0,20 0,22 0,22 0,24 0,24 0,27 0,28 0,30 0,31 0,32
16 985,55 1,15 984,40 1,13 983,27 1,11 982,16 1,08 981,08 1,07 980,01 1,04 978,97 1,04 977,93 1,02 976,91 1,02 975,89 1,01 974,88 1,01 973,87 1,02
0,19 0,20 0,21 0,22 0,23 0,24 0,26 0,27 0,29 0,30 0,32 0,33
17 985,36 1,16 984,20 1,14 983,06 1,12 981,94 1,09 980,85 1,08 979,77 1,06 978,71 1,05 977,66 1,04 976,62 1,03 975,59 1,03 974,56 1,02 973,54 1,04
0,21 0,22 0,22 0,23 0,25 0,26 0,27 0,28 0,29 0,31 0,32 0,35
18 985,15 1,17 983,98 1,14 982,84 1,13 981,71 1,11 980,60 1,09 979,51 1,07 978,44 1,06 977,38 1,05 976,33 1,05 975,28 1,04 974,24 1,05 973,19 1,05
0,21 0,22 0,24 0,24 0,25 0,26 0,28 0,29 0,31 0,32 0,34 0,35
19 984,94 1,18 983,76 1,16 982,60 1,13 981,47 1,12 980,35 1,10 979,25 1,09 978,16 1,07 977,09 1,07 976,02 1,06 974,96 1,06 973,90 1,06 972,84 1,06
0,23 0,24 0,24 0,26 0,27 0,28 0,29 0,30 0,31 0,33 0,34 0,36
20 984,71 1,19 983,52 1,16 982,36 1,15 981,21 1,13 980,08 1,11 978,97 1,10 977,87 1,08 976,79 1,08 975,71 1,08 974,63 1,07 973,56 1,08 972,48 1,08
tºGrado alcohólico volumétrico en %
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21
20º 984,71 1,19 983,52 1,16 982,36 1,15 981,21 1,13 980,08 1,11 978,97 1,10 977,87 1,08 976,79 1,08 975,71 1,08 974,63 1,07 973,56 1,08 972,48 1,08
0,24 0,24 0,26 0,26 0,27 0,28 0,29 0,31 0,33 0,34 0,36 0,37
21º 984,47 1,19 983,28 1,18 982,10 1,15 980,95 1,14 978,81 1,12 978,69 1,11 977,58 1,10 976,48 1,10 975,38 1,09 974,29 1,09 973,20 1,09 972,11 1,09
0,24 0,26 0,28 0,29 0,30 0,31 0,33 0,33 0,35 0,35 0,36 0,37
22º 984,23 1,21 983,02 1,18 981,84 1,17 980,67 1,15 979,52 1,13 978,39 1,12 977,27 1,12 976,15 1,10 975,05 1,11 973,94 1,10 972,84 1,10 971,74 1,12
0,26 0,26 0,27 0,28 0,29 0,31 0,32 0,33 0,35 0,35 0,37 0,39
23º 983,97 1,20 982,77 1,20 981,57 1,18 980,39 1,16 979,23 1,15 978,08 1,13 976,95 1,13 975,82 1,12 974,70 1,11 973,59 1,12 972,47 1,12 972,47 1,12
0,27 0,29 0,29 0,29 0,30 0,31 0,33 0,33 0,35 0,37 0,38 0,40
24º 983,70 1,22 982,48 1,20 981,28 1,18 980,10 1,17 978,93 1,16 977,77 1,15 976,62 1,13 975,49 1,14 974,35 1,13 973,22 1,13 972,09 1,14 970,95 1,14
0,28 0,28 0,29 0,31 0,32 0,33 0,33 0,35 0,36 0,37 0,39 0,40
25º 983,42 1,22 982,20 1,21 980,99 1,20 979,79 1,18 978,61 1,17 977,44 1,15 976,29 1,15 975,14 1,15 973,99 1,14 972,85 1,15 971,70 1,15 970,55 1,16
0,28 0,30 0,31 0,31 0,32 0,33 0,35 0,36 0,37 0,39 0,40 0,41
26º 983,14 1,24 981,90 1,22 980,68 1,20 979,48 1,19 978,29 1,18 977,11 1,17 975,94 1,16 974,78 1,16 973,62 1,16 972,46 1,16 971,30 1,16 970,14 1,17
0,30 0,30 0,31 0,32 0,33 0,34 0,35 0,36 0,38 0,39 0,40 0,42
27º 982,84 1,24 981,60 1,23 980,37 1,21 979,16 1,20 977,96 1,19 976,77 1,18 975,59 1,17 974,42 1,18 973,24 1,17 972,07 1,17 970,90 1,18 969,72 1,18
0,31 0,32 0,32 0,33 0,34 0,35 0,36 0,38 0,38 0,40 0,41 0,43
28º 982,53 1,25 981,28 1,23 980,05 1,22 978,83 1,21 977,62 1,20 976,42 1,19 975,23 1,19 974,04 1,18 972,86 1,19 971,67 1,18 970,49 1,20 969,29 1,20
0,31 0,32 0,33 0,34 0,35 0,36 0,37 0,38 0,40 0,40 0,42 0,43
29º 982,22 1,26 980,96 1,24 979,72 1,23 978,49 1,22 977,27 1,21 976,06 1,20 974,86 1,20 973,66 1,20 972,46 1,19 971,27 1,20 970,07 1,21 968,86 1,22
0,32 0,33 0,34 0,35 0,36 0,37 0,38 0,40 0,41 0,43 0,44 0,45
30º 981,90 1,27 980,63 1,25 979,38 1,24 978,14 1,23 976,91 1,22 975,69 1,21 974,48 1,22 973,26 1,21 972,05 1,21 970,84 1,21 969,63 1,22 968,41 1,23
0,34 0,34 0,35 0,36 0,37 0,38 0,40 0,40 0,41 0,42 0,44 0,45
31º 981,56 1,27 980,29 1,26 979,03 1,25 977,78 1,24 976,54 1,23 975,31 1,23 974,08 1,22 972,86 1,22 971,64 1,22 970,42 1,23 969,19 1,23 967,96 1,24
0,35 0,36 0,36 0,37 0,38 0,39 0,39 0,40 0,42 0,43 0,44 0,46
32º 981,21 1,28 979,93 1,26 978,67 1,26 977,41 1,25 976,16 1,24 974,92 1,23 973,69 1,23 972,46 1,24 971,22 1,23 969,99 1,24 968,75 1,25 967,50 1,25
0,35 0,35 0,37 0,37 0,38 0,39 0,40 0,42 0,42 0,44 0,45 0,46
33º 980,86 1,28 979,58 1,28 978,30 1,26 977,04 1,26 975,78 1,25 974,53 1,24 973,29 1,25 972,04 1,24 970,80 1,25 969,55 1,25 968,30 1,26 967,04 1,27
0,36 0,37 0,37 0,38 0,39 0,40 0,41 0,42 0,43 0,44 0,46 0,47
34º 980,50 1,29 979,21 1,28 977,93 1,27 976,66 1,27 975,39 1,26 974,13 1,25 972,88 1,26 971,62 1,25 970,37 1,26 969,11 1,27 967,84 1,27 966,57 1,29
0,36 0,37 0,38 0,39 0,39 0,40 0,42 0,42 0,44 0,46 0,46 0,48
35º 980,14 1,30 978,84 1,29 977,55 1,28 976,27 1,27 975,00 1,27 973,73 1,27 972,46 1,26 971,20 1,27 969,93 1,28 968,65 1,27 967,38 1,29 966,09 1,30
0,37 0,38 0,38 0,39 0,40 0,41 0,42 0,44 0,45 0,45 0,47 0,48
36º 979,77 1,31 978,46 1,29 977,17 1,29 975,88 1,28 974,60 1,28 973,32 1,28 972,04 1,28 970,76 1,28 969,48 1,28 968,20 1,29 966,91 1,30 965,61 1,32
0,39 0,39 0,40 0,40 0,41 0,42 0,43 0,44 0,45 0,47 0,48 0,49
37º 978,38 1,31 978,07 1,30 976,77 1,29 975,48 1,29 974,19 1,29 972,90 1,29 971,61 1,29 970,32 1,29 969,03 1,30 967,73 1,30 966,43 1,31 965,12 1,33
0,38 0,39 0,40 0,41 0,42 0,43 0,44 0,45 0,46 0,47 0,49 0,50
38º 979,00 1,32 977,68 1,31 976,37 1,30 975,07 1,30 973,77 1,30 972,47 1,30 971,17 1,30 969,87 1,30 968,57 1,31 967,26 1,32 965,94 1,32 964,62 1,34
0,40 0,40 0,41 0,42 0,42 0,43 0,44 0,45 0,47 0,48 0,49 0,50
39º 978,60 1,32 977,28 1,32 975,96 1,31 974,65 1,30 973,35 1,31 972,04 1,31 970,73 1,31 969,42 1,32 968,10 1,32 966,78 1,33 965,45 1,33 964,12 1,36
0,40 0,41 0,41 0,42 0,43 0,44 0,45 0,46 0,47 0,48 0,49 0,51
40º 978,20 1,33 976,87 1,32 975,55 1,32 974,23 1,31 972,92 1,32 971,60 1,32 970,28 1,32 968,96 1,33 967,63 1,33 966,30 1,34 964,96 1,35 963,61 1,371990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 44
▼B
tºGrado alcohólico volumétrico en %
20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31
0 978,56 0,70 977,86 0,70 977,16 0,69 976,47 0,71 975,76 0,71 975,05 0,72 974,33 0,75 973,58 0,77 972,81 0,80 972,01 0,83 971,18 0,87 970,31 0,90
0,14 0,17 0,19 0,22 0,24 0,26 0,29 0,31 0,34 0,36 0,39 0,41
1 978,42 0,73 977,69 0,72 976,97 0,72 976,25 0,73 975,52 0,73 974,79 0,75 974,04 0,77 973,27 0,80 972,47 0,82 971,65 0,86 970,79 0,89 969,90 0,92
0,16 0,18 0,20 0,23 0,25 0,28 0,30 0,32 0,34 0,37 0,39 0,41
2 978,26 0,75 977,51 0,74 976,77 0,75 976,02 0,75 975,27 0,76 974,51 0,77 973,74 0,79 972,95 0,82 972,13 0,85 971,28 0,88 970,40 0,91 969,49 0,95
0,17 0,19 0,22 0,23 0,26 0,28 0,31 0,33 0,36 0,38 0,40 0,42
3 978,09 0,77 977,32 0,77 976,55 0,76 975,79 0,78 975,01 0,78 974,23 0,80 973,43 0,81 972,62 0,85 971,77 0,87 970,90 0,90 970,00 0,93 969,07 0,98
0,18 0,20 0,22 0,25 0,27 0,29 0,31 0,34 0,36 0,38 0,40 0,43
4 977,91 0,79 977,12 0,79 976,33 0,79 975,54 0,80 974,94 0,80 973,94 0,82 973,12 0,84 972,28 0,87 971,41 0,89 970,52 0,92 969,60 0,96 968,64 1,00
0,19 0,22 0,23 0,26 0,27 0,30 0,33 0,35 0,37 0,39 0,42 0,44
5 977,72 0,82 976,90 0,80 976,10 0,82 975,28 0,81 974,47 0,83 973,64 0,85 972,79 0,86 971,93 0,89 971,04 0,91 970,13 0,95 969,18 0,98 968,20 1,01
0,21 0,22 0,25 0,26 0,29 0,31 0,33 0,35 0,37 0,40 0,42 0,44
6 977,51 0,83 976,68 0,83 975,85 0,83 975,02 0,84 974,18 0,85 973,33 0,87 972,46 0,86 971,58 0,91 970,67 0,94 969,73 0,97 968,76 1,00 967,76 1,03
0,21 0,23 0,25 0,28 0,30 0,32 0,34 0,36 0,38 0,40 0,42 0,44
7 977,30 0,85 976,45 0,85 975,60 0,86 974,74 0,86 973,88 0,87 973,01 0,89 972,12 0,90 971,22 0,93 970,29 0,96 969,33 0,99 968,34 1,02 967,32 1,06
0,23 0,25 0,27 0,28 0,31 0,33 0,35 0,37 0,40 0,42 0,43 0,46
8 977,07 0,87 976,20 0,87 975,33 0,87 974,46 0,89 973,57 0,89 972,68 0,91 971,77 0,92 970,85 0,96 969,89 0,98 968,91 1,00 967,91 1,05 966,86 1,07
0,24 0,26 0,28 0,30 0,31 0,34 0,35 0,38 0,39 0,41 0,44 0,46
9 976,83 0,89 975,94 0,89 975,05 0,89 974,16 0,90 973,26 0,92 972,34 0,92 971,42 0,95 970,47 0,97 969,50 1,00 968,50 1,03 967,47 1,07 966,40 1,09
0,24 0,26 0,28 0,30 0,33 0,34 0,37 0,39 0,41 0,43 0,45 0,46
10 976,59 0,91 975,68 0,91 974,77 0,91 973,86 0,93 972,93 0,93 972,00 0,95 971,05 0,97 970,08 0,99 969,09 1,02 968,07 1,05 967,02 1,08 965,94 1,12
0,27 0,29 0,30 0,33 0,34 0,36 0,38 0,40 0,42 0,44 0,46 0,47
11 976,32 0,93 975,39 0,92 974,47 0,94 973,53 0,94 972,59 0,95 971,64 0,97 970,67 0,99 969,68 1,01 968,67 1,04 967,63 1,07 966,56 1,09 965,47 1,13
0,27 0,28 0,31 0,32 0,34 0,36 0,38 0,40 0,42 0,44 0,45 0,48
12 976,05 0,94 975,11 0,95 974,16 0,95 973,21 0,96 972,25 0,97 971,28 0,99 970,29 1,01 969,28 1,03 968,25 1,06 967,19 1,08 966,11 1,12 964,99 1,15
0,28 0,30 0,31 0,33 0,35 0,37 0,39 0,41 0,43 0,45 0,47 0,49
13 975,77 0,96 974,81 0,96 973,85 0,97 972,88 0,98 971,90 0,99 970,91 1,01 969,90 1,03 968,87 1,05 967,82 1,08 966,74 1,10 965,64 1,14 964,50 1,17
0,28 0,30 0,32 0,34 0,36 0,38 0,40 0,41 0,43 0,45 0,47 0,49
14 975,49 0,98 974,51 0,98 973,53 0,99 972,54 1,00 971,54 1,01 970,53 1,03 969,50 1,04 968,46 1,07 967,39 1,10 966,29 1,12 965,17 1,16 964,01 1,19
0,30 0,32 0,34 0,35 0,37 0,39 0,40 0,42 0,44 0,46 0,48 0,49
15 975,19 1,00 974,19 1,00 973,19 1,00 972,19 1,02 971,17 1,03 970,14 1,04 969,10 1,06 968,04 1,09 966,95 1,12 965,83 1,14 964,69 1,17 963,52 1,21
0,31 0,32 0,34 0,36 0,37 0,39 0,41 0,43 0,45 0,46 0,48 0,51
16 974,88 1,01 973,87 1,02 972,85 1,02 971,83 1,03 970,80 1,05 969,75 1,06 968,69 1,08 967,61 1,11 966,50 1,13 965,37 1,16 964,21 1,20 963,01 1,22
0,32 0,33 0,35 0,37 0,39 0,40 0,42 0,44 0,45 0,48 0,50 0,50
17 974,56 1,02 973,54 1,04 972,50 1,04 971,46 1,05 970,41 1,06 969,35 1,08 968,27 1,10 967,17 1,12 966,05 1,16 964,89 1,18 963,71 1,20 962,51 1,24
0,32 0,35 0,36 0,37 0,39 0,41 0,43 0,45 0,47 0,48 0,49 0,52
18 974,24 1,05 973,19 1,05 972,14 1,05 971,09 1,07 970,02 1,08 968,94 1,10 967,84 1,12 966,72 1,14 965,58 1,17 964,41 1,19 963,22 1,23 961,99 1,25
0,34 0,35 0,36 0,39 0,40 0,42 0,43 0,45 0,47 0,48 0,50 0,52
19 973,90 1,06 972,84 1,06 971,78 1,08 970,70 1,08 969,62 1,10 968,52 1,11 967,41 1,14 966,27 1,16 965,11 1,18 963,93 1,21 962,72 1,25 961,47 1,27
0,34 0,36 0,38 0,39 0,41 0,42 0,45 0,46 0,47 0,49 0,51 0,52
20 973,56 1,08 972,48 1,08 971,40 1,09 970,31 1,10 969,21 1,11 968,10 1,14 966,96 1,15 965,81 1,17 964,64 1,20 963,44 1,23 962,21 1,26 960,95 1,29
tºGrado alcohólico volumétrico en %
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21
20 973,56 1,08 972,48 1,08 971,40 1,09 970,31 1,10 969,21 1,11 968,10 1,14 966,96 1,15 965,81 1,17 964,64 1,20 963,44 1,23 962,21 1,26 960,95 1,29
0,36 0,37 0,38 0,40 0,42 0,44 0,45 0,46 0,49 0,50 0,52 0,53
21 973,20 1,09 972,11 1,09 971,02 1,11 969,91 1,12 968,79 1,13 967,66 1,15 966,51 1,16 965,35 1,20 964,15 1,21 962,94 1,25 961,69 1,27 960,42 1,31
0,36 0,37 0,40 0,41 0,42 0,44 0,45 0,48 0,49 0,51 0,52 0,54
22 972,84 1,10 971,74 1,12 970,62 1,12 969,50 1,13 968,37 1,15 967,22 1,16 966,06 1,19 964,87 1,21 963,66 1,23 962,43 1,26 961,17 1,29 959,88 1,32
0,37 0,39 0,40 0,42 0,43 0,45 0,47 0,48 0,49 0,51 0,53 0,55
23 972,47 1,12 971,35 1,13 970,22 1,14 969,08 1,14 967,94 1,17 966,77 1,18 965,59 1,20 964,39 1,22 963,17 1,25 961,92 1,28 960,64 1,31 959,33 1,33
0,38 0,40 0,41 0,42 0,44 0,45 0,47 0,49 0,51 0,52 0,54 0,55
24 972,09 1,14 970,95 1,14 969,81 1,15 968,66 1,16 967,50 1,18 966,32 1,20 965,12 1,22 963,90 1,24 962,66 1,26 961,40 1,30 960,10 1,32 958,78 1,35
0,39 0,40 0,42 0,43 0,45 0,47 0,48 0,49 0,51 0,53 0,54 0,55
25 971,70 1,15 970,55 1,16 969,39 1,16 968,23 1,18 967,05 1,20 965,85 1,21 964,64 1,23 963,41 1,26 962,15 1,28 960,87 1,31 959,56 1,33 958,23 1,37
0,40 0,41 0,42 0,44 0,46 0,47 0,49 0,50 0,51 0,53 0,54 0,57
26 971,30 1,16 970,14 1,17 968,97 1,18 967,79 1,20 966,59 1,21 965,38 1,23 964,15 1,24 962,91 1,27 961,64 1,30 960,34 1,32 959,02 1,36 957,66 1,38
0,40 0,42 0,43 0,45 0,46 0,48 0,49 0,51 0,53 0,54 0,56 0,56
27 970,90 1,18 969,72 1,18 968,54 1,20 967,34 1,21 966,13 1,23 964,90 1,24 963,66 1,26 962,40 1,29 961,11 1,31 959,80 1,34 958,46 1,36 957,10 1,40
0,41 0,43 0,45 0,46 0,47 0,48 0,50 0,52 0,54 0,56 0,57 0,59
28 970,49 1,20 969,29 1,20 968,09 1,21 966,88 1,22 965,66 1,24 964,42 1,26 963,16 1,28 961,88 1,31 960,57 1,33 959,24 1,35 957,89 1,38 956,51 1,41
0,42 0,43 0,45 0,47 0,49 0,50 0,52 0,53 0,53 0,55 0,56 0,58
29 970,07 1,21 968,86 1,22 967,64 1,23 966,41 1,24 965,17 1,25 963,92 1,28 962,64 1,29 961,35 1,31 960,04 1,35 958,69 1,36 957,33 1,40 955,93 1,42
0,44 0,45 0,46 0,47 0,49 0,50 0,51 0,53 0,55 0,55 0,58 0,58
30 969,63 1,22 968,41 1,23 967,18 1,24 965,94 1,26 964,68 1,26 963,42 1,29 962,13 1,31 960,82 1,33 959,49 1,35 958,14 1,39 956,75 1,40 955,35 1,44
0,44 0,45 0,46 0,48 0,49 0,51 0,52 0,53 0,55 0,57 0,58 0,60
31 969,19 1,23 967,96 1,24 966,72 1,26 965,46 1,27 964,19 1,28 962,91 1,30 961,61 1,32 960,29 1,35 958,94 1,37 957,57 1,40 956,17 1,42 954,75 1,44
0,44 0,46 0,47 0,48 0,50 0,51 0,53 0,54 0,55 0,57 0,58 0,59
32 968,75 1,25 967,50 1,25 966,25 1,27 964,98 1,29 963,69 1,29 962,40 1,32 961,08 1,33 959,75 1,36 958,39 1,39 957,00 1,41 955,59 1,43 954,16 1,46
0,45 0,46 0,48 0,49 0,50 0,52 0,53 0,55 0,57 0,57 0,59 0,61
33 968,30 1,26 967,04 1,27 965,77 1,28 964,49 1,30 963,19 1,31 961,88 1,33 960,55 1,35 959,20 1,38 957,82 1,39 956,43 1,43 955,00 1,45 953,55 1,47
0,46 0,47 0,49 0,50 0,51 0,53 0,54 0,56 0,56 0,59 0,59 0,60
34 967,84 1,27 966,57 1,29 965,28 1,29 963,99 1,31 962,68 1,33 961,35 1,34 960,01 1,37 958,64 1,38 957,26 1,42 955,84 1,43 954,41 1,46 952,95 1,49
0,46 0,48 0,49 0,51 0,52 0,53 0,55 0,56 0,58 0,58 0,60 0,62
35 967,38 1,29 966,09 1,30 964,79 1,31 963,48 1,32 962,16 1,34 960,82 1,36 959,46 1,38 958,08 1,40 956,68 1,42 955,26 1,45 953,81 1,48 952,33 1,50
0,47 0,48 0,50 0,51 0,53 0,54 0,55 0,57 0,58 0,60 0,61 0,62
36 966,91 1,30 965,61 1,32 964,29 1,32 962,97 1,34 961,63 1,35 960,28 1,37 958,91 1,40 957,51 1,41 956,10 1,44 954,66 1,46 953,20 1,49 951,71 1,51
0,48 0,49 0,50 0,52 0,53 0,55 0,56 0,57 0,59 0,60 0,61 0,62
37 966,43 1,31 965,12 1,33 963,79 1,34 962,45 1,35 961,10 1,37 959,73 1,38 958,35 1,41 956,94 1,43 955,51 1,45 954,06 1,47 952,59 1,50 951,09 1,53
0,49 0,50 0,51 0,52 0,54 0,55 0,57 0,58 0,59 0,60 0,62 0,63
38 965,94 1,32 964,62 1,34 963,28 1,35 961,93 1,37 960,56 1,38 959,18 1,40 957,78 1,42 956,36 1,44 954,92 1,46 953,46 1,49 951,97 1,51 950,46 1,54
0,49 0,50 0,52 0,53 0,54 0,56 0,57 0,58 0,60 0,61 0,62 0,64
39 965,45 1,33 964,12 1,36 962,76 1,36 961,40 1,38 960,02 1,40 958,62 1,41 957,21 1,43 955,78 1,46 954,32 1,47 952,85 1,50 951,35 1,53 949,82 1,55
0,49 0,51 0,52 0,54 0,55 0,56 0,58 0,59 0,60 0,62 0,63 0,64
40 964,96 1,35 963,61 1,37 962,24 1,38 960,86 1,39 959,47 1,41 958,06 1,43 956,63 1,44 955,19 1,47 953,72 1,49 952,23 1,51 950,72 1,54 949,18 1,571990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 45
▼B
TABLA II
GRADO ALCOHÓLICO INTERNACIONAL A 20 ºC
Tabladecorreccionesaefectuarsobreelgradoalcohólicoaparenteparacorregirlaaccióndelatemperatura
Sumar o restar al grado alcohólico aparente a t º (alcohómetro en vidrio ordinario) la corrección indicada en esta tabla
Gradosalcohólicosaparentesen t ºC
01234567891 0 1 1 1 2 1 3 1 4 1 51 6Temperaturas0º
añadir0,76 0,77 0,82 0,87 0,95 1,04 1,16 1,31 1,49 1,70 1,95 2,26 2,62 3,03 3,49 4,02 4,56
1º 0,81 0,83 0,87 0,92 1,00 1,09 1,20 1,35 1,52 1,73 1,97 2,26 2,59 2,97 3,40 3,87 4,36
2º 0,85 0,87 0,92 0,97 1,04 1,13 1,24 1,38 1,54 1,74 1,97 2,24 2,54 2,89 3,29 3,72 4,17
3º 0,88 0,91 0,95 1,00 1,07 1,15 1,26 1,39 1,55 1,73 1,95 2,20 2,48 2,80 3,16 3,55 3,95
4º 0,90 0,92 0,97 1,02 1,09 1,17 1,27 1,40 1,55 1,72 1,92 2,15 2,41 2,71 3,03 3,38 3,75
5º 0,91 0,93 0,98 1,03 1,10 1,17 1,27 1,39 1,53 1,69 1,87 2,08 2,33 2,60 2,89 3,21 3,54
6º 0,92 0,94 0,98 1,02 1,09 1,16 1,25 1,37 1,50 1,65 1,82 2,01 2,23 2,47 2,74 3,02 3,32
7º 0,91 0,93 0,97 1,01 1,07 1,14 1,23 1,33 1,45 1,59 1,75 1,92 2,12 2,34 2,58 2,83 3,108º 0,89 0,91 0,94 0,98 1,04 1,11 1,19 1,28 1,39 1,52 1,66 1,82 2,00 2,20 2,42 2,65 2,88
9º 0,86 0,88 0,91 0,95 1,01 1,07 1,14 1,23 1,33 1,44 1,57 1,71 1,87 2,05 2,24 2,44 2,65
10º 0,82 0,84 0,87 0,91 0,96 1,01 1,08 1,16 1,25 1,35 1,47 1,60 1,74 1,89 2,06 2,24 2,43
11º 0,78 0,79 0,82 0,86 0,90 0,95 1,01 1,08 1,16 1,25 1,36 1,47 1,60 1,73 1,88 2,03 2,20
12º 0,72 0,74 0,76 0,79 0,83 0,88 0,93 0,99 1,07 1,15 1,24 1,34 1,44 1,56 1,69 1,82 1,9613º 0,66 0,67 0,69 0,72 0,76 0,80 0,84 0,90 0,96 1,03 1,11 1,19 1,28 1,38 1,49 1,61 1,7314º 0,59 0,60 0,62 0,64 0,67 0,71 0,74 0,79 0,85 0,91 0,97 1,04 1,12 1,20 1,29 1,39 1,49
15º 0,51 0,52 0,53 0,55 0,58 0,61 0,64 0,68 0,73 0,77 0,83 0,89 0,95 1,02 1,09 1,16 1,24
16º 0,42 0,43 0,44 0,46 0,48 0,50 0,53 0,56 0,60 0,63 0,67 0,72 0,77 0,82 0,88 0,94 1,00
17º 0,33 0,33 0,34 0,35 0,37 0,39 0,41 0,43 0,46 0,48 0,51 0,55 0,59 0,62 0,67 0,71 0,75
18º 0,23 0,23 0,23 0,24 0,25 0,26 0,27 0,29 0,31 0,33 0,35 0,37 0,40 0,42 0,45 0,48 0,5119º 0,12 0,12 0,12 0,12 0,13 0,13 0,14 0,15 0,16 0,17 0,18 0,19 0,20 0,21 0,23 0,24 0,25
Gradosalcohólicosaparentesen t ºC
01234567891 0 1 1 1 2 1 3 1 4 1 51 6Temperaturas21º
sustraer0,13 0,13 0,13 0,14 0,14 0,15 0,16 0,17 0,18 0,19 0,19 0,20 0,22 0,23 0,25 0,26
22º 0,26 0,27 0,28 0,29 0,30 0,31 0,32 0,34 0,36 0,37 0,39 0,41 0,44 0,47 0,49 0,5223º 0,40 0,41 0,42 0,44 0,45 0,47 0,49 0,51 0,54 0,57 0,60 0,63 0,66 0,70 0,74 0,7824º 0,55 0,56 0,58 0,60 0,62 0,64 0,67 0,70 0,73 0,77 0,81 0,85 0,89 0,94 0,99 1,04
25º 0,69 0,71 0,73 0,76 0,79 0,82 0,85 0,89 0,93 0,97 1,02 1,07 1,13 1,19 1,25 1,3126º 0,85 0,87 0,90 0,93 0,96 1,00 1,04 1,08 1,13 1,18 1,24 1,30 1,36 1,43 1,50 1,57
27º 1,03 1,07 1,11 1,15 1,19 1,23 1,28 1,34 1,40 1,46 1,53 1,60 1,68 1,76 1,8428º 1,21 1,25 1,29 1,33 1,38 1,43 1,49 1,55 1,62 1,69 1,77 1,85 1,93 2,02 2,1129º 1,39 1,43 1,47 1,52 1,58 1,63 1,70 1,76 1,84 1,92 2,01 2,10 2,19 2,29 2,39
30º 1,57 1,61 1,66 1,72 1,78 1,84 1,91 1,98 2,07 2,15 2,25 2,35 2,45 2,56 2,67
31º 1,75 1,80 1,86 1,92 1,98 2,05 2,13 2,21 2,30 2,39 2,49 2,60 2,71 2,83 2,94
32º 1,94 2,00 2,06 2,13 2,20 2,27 2,35 2,44 2,53 2,63 2,74 2,86 2,97 3,09 3,22
33º 2,20 2,27 2,34 2,42 2,50 2,58 2,67 2,77 2,88 2,99 3,12 3,24 3,37 3,51
34º 2,41 2,48 2,56 2,64 2,72 2,81 2,91 3,02 3,13 3,25 3,38 3,51 3,65 3,79
35º 2,62 2,70 2,78 2,86 2,95 3,05 3,16 3,27 3,39 3,51 3,64 3,78 3,93 4,08
36º 2,83 2,91 3,00 3,09 3,19 3,29 3,41 3,53 3,65 3,78 3,91 4,05 4,21 4,37
37º 3,13 3,23 3,33 3,43 3,54 3,65 3,78 3,91 4,04 4,18 4,33 4,49 4,6538º 3,36 3,47 3,57 3,68 3,79 3,91 4,03 4,17 4,31 4,46 4,61 4,77 4,94
39º 3,59 3,70 3,81 3,93 4,05 4,17 4,30 4,44 4,58 4,74 4,90 5,06 5,23
40º 3,82 3,94 4,06 4,18 4,31 4,44 4,57 4,71 4,86 5,02 5,19 5,36 5,531990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 46
▼B
Gradosalcohólicosaparentesen t ºC
14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30Temperaturas0º
añadir3,49 4,02 4,56 5,11 5,65 6,16 6,63 7,05 7,39 7,67 7,91 8,07 8,20 8,30 8,36 8,39 8,40
1º 3,40 3,87 4,36 4,86 5,35 5,82 6,26 6,64 6,96 7,23 7,45 7,62 7,75 7,85 7,91 7,95 7,96
2º 3,29 3,72 4,17 4,61 5,05 5,49 5,89 6,25 6,55 6,81 7,02 7,18 7,31 7,40 7,47 7,51 7,533º 3,16 3,55 3,95 4,36 4,77 5,17 5,53 5,85 6,14 6,39 6,59 6,74 6,86 6,97 7,03 7,07 7,094º 3,03 3,38 3,75 4,11 4,48 4,84 5,17 5,48 5,74 5,97 6,16 6,31 6,43 6,53 6,59 6,63 6,66
5º 2,89 3,21 3,54 3,86 4,20 4,52 4,83 5,11 5,35 5,56 5,74 5,89 6,00 6,10 6,16 6,20 6,236º 2,74 3,02 3,32 3,61 3,91 4,21 4,49 4,74 4,96 5,16 5,33 5,47 5,58 5,67 5,73 5,77 5,80
7º 2,58 2,83 3,10 3,36 3,63 3,90 4,15 4,38 4,58 4,77 4,92 5,05 5,15 5,24 5,30 5,34 5,378º 2,42 2,65 2,88 3,11 3,35 3,59 3,81 4,02 4,21 4,38 4,52 4,64 4,74 4,81 4,87 4,92 4,959º 2,24 2,44 2,65 2,86 3,07 3,28 3,48 3,67 3,84 3,99 4,12 4,23 4,32 4,39 4,45 4,50 4,53
10º 2,06 2,24 2,43 2,61 2,80 2,98 3,16 3,33 3,48 3,61 3,73 3,83 3,91 3,98 4,03 4,08 4,11
11º 1,88 2,03 2,20 2,36 2,52 2,68 2,83 2,98 3,12 3,24 3,34 3,43 3,50 3,57 3,62 3,66 3,69
12º 1,69 1,82 1,96 2,10 2,24 2,38 2,51 2,64 2,76 2,87 2,96 3,04 3,10 3,16 3,21 3,25 3,27
13º 1,49 1,61 1,73 1,84 1,96 2,08 2,20 2,31 2,41 2,50 2,58 2,65 2,71 2,76 2,80 2,83 2,8514º 1,29 1,39 1,49 1,58 1,68 1,78 1,88 1,97 2,06 2,13 2,20 2,26 2,31 2,36 2,39 2,42 2,44
15º 1,09 1,16 1,24 1,32 1,40 1,48 1,56 1,64 1,71 1,77 1,83 1,88 1,92 1,96 1,98 2,01 2,03
16º 0,88 0,94 1,00 1,06 1,12 1,19 1,25 1,31 1,36 1,41 1,46 1,50 1,53 1,56 1,58 1,60 1,62
17º 0,67 0,71 0,75 0,80 0,84 0,89 0,94 0,98 1,02 1,05 1,09 1,12 1,14 1,17 1,18 1,20 1,2118º 0,45 0,48 0,51 0,53 0,56 0,59 0,62 0,65 0,68 0,70 0,72 0,74 0,76 0,78 0,79 0,80 0,81
19º 0,23 0,24 0,25 0,27 0,28 0,30 0,31 0,33 0,34 0,35 0,36 0,37 0,38 0,39 0,40 0,40 0,41
Gradosalcohólicosaparentesen t ºC
14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30Temperaturas21º
sustraer0,23 0,25 0,26 0,28 0,29 0,30 0,31 0,33 0,34 0,35 0,35 0,37 0,38 0,38 0,39 0,39 0,40
22º 0,47 0,49 0,52 0,55 0,57 0,60 0,62 0,65 0,67 0,70 0,72 0,74 0,75 0,76 0,78 0,79 0,8023º 0,70 0,74 0,78 0,82 0,86 0,90 0,93 0,97 1,01 1,04 1,07 1,10 1,12 1,15 1,17 1,18 1,1924º 0,94 0,99 1,04 1,10 1,15 1,20 1,25 1,29 1,34 1,39 1,43 1,46 1,50 1,53 1,55 1,57 1,59
25º 1,19 1,25 1,31 1,37 1,43 1,49 1,56 1,62 1,68 1,73 1,78 1,83 1,87 1,90 1,94 1,97 1,99
26º 1,43 1,50 1,57 1,65 1,73 1,80 1,87 1,94 2,01 2,07 2,13 2,19 2,24 2,28 2,32 2,35 2,38
27º 1,68 1,76 1,84 1,93 2,01 2,10 2,18 2,26 2,34 2,41 2,48 2,55 2,61 2,66 2,70 2,74 2,77
28º 1,93 2,02 2,11 2,21 2,31 2,40 2,49 2,58 2,67 2,76 2,83 2,90 2,98 3,03 3,08 3,13 3,1729º 2,19 2,29 2,39 2,50 2,60 2,70 2,81 2,91 3,00 3,09 3,18 3,26 3,34 3,40 3,46 3,51 3,55
30º 2,45 2,56 2,67 2,78 2,90 3,01 3,12 3,23 3,34 3,44 3,53 3,62 3,70 3,77 3,84 3,90 3,95
31º 2,71 2,83 2,94 3,07 3,19 3,31 3,43 3,55 3,67 3,78 3,88 3,98 4,07 4,15 4,22 4,28 4,33
32º 2,97 3,09 3,22 3,36 3,49 3,62 3,74 3,87 4,00 4,11 4,22 4,33 4,43 4,51 4,59 4,66 4,72
33º 3,24 3,37 3,51 3,65 3,79 3,92 4,06 4,20 4,33 4,45 4,57 4,68 4,79 4,88 4,97 5,04 5,10
34º 3,51 3,65 3,79 3,94 4,09 4,23 4,37 4,52 4,66 4,79 4,91 5,03 5,15 5,25 5,34 5,42 5,49
35º 3,78 3,93 4,08 4,23 4,38 4,53 4,69 4,84 4,98 5,12 5,26 5,38 5,50 5,61 5,71 5,80 5,87
36º 4,05 4,21 4,37 4,52 4,68 4,84 5,00 5,16 5,31 5,46 5,60 5,73 5,86 5,97 6,08 6,17 6,25
37º 4,33 4,49 4,65 4,82 4,98 5,15 5,31 5,48 5,64 5,80 5,95 6,09 6,22 6,33 6,44 6,54 6,6338º 4,61 4,77 4,94 5,12 5,29 5,46 5,63 5,80 5,97 6,13 6,29 6,43 6,57 6,69 6,81 6,92 7,01
39º 4,90 5,06 5,23 5,41 5,59 5,77 5,94 6,12 6,30 6,47 6,63 6,78 6,93 7,06 7,18 7,29 7,39
40º 5,19 5,36 5,53 5,71 5,90 6,08 6,26 6,44 6,62 6,80 6,97 7,13 7,28 7,41 7,54 7,66 7,761990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 47
▼B
TABLA III
GRADO ALCOHÓLICO INTERNACIONAL A 20 ºC
Tablademasasvolúmicasaparentesdemezclashidroalcohólicas.Aparatosenvidrioordinario
Masas volúmicas a t º corregidas del empuje del aire
tºGrado alcohólico volumétrico en %
01234567891 01 1
0 999,34 1,52 997,82 1,45 996,37 1,39 994,98 1,35 993,63 1,29 992,34 1,24 991,10 1,18 989,92 1,15 988,77 1,09 987,68 1,05 986,63 1,00 985,63 0,96
−0,09 −0,09 −0,09 −0,08 −0,08 −0,08 −0,07 −0,05 −0,05 −0,04 −0,03 −0,02
1 999,43 1,52 997,91 1,45 996,46 1,40 995,06 1,35 993,71 1,29 992,42 1,25 991,17 1,20 989,97 1,15 988,82 1,10 987,72 1,06 986,66 1,01 985,65 0,97
−0,06 −0,06 −0,06 −0,06 −0,06 −0,05 −0,05 −0,04 −0,03 −0,02 −0,02 −0,01
2 999,49 1,52 997,97 1,40 996,52 1,40 995,12 1,35 993,77 1,30 992,47 1,25 991,22 1,21 990,01 1,16 988,85 1,11 987,74 1,06 986,68 1,02 985,66 0,98
−0,05 −0,05 −0,04 −0,04 −0,04 −0,04 −0,03 −0,03 −0,03 −0,02 0,00 0,01
3 999,54 1,52 998,02 1,46 996,56 1,40 995,16 1,35 993,81 1,30 992,51 1,26 991,25 1,21 990,04 1,16 988,88 1,12 987,76 1,08 986,68 1,03 985,65 0,99
−0,03 −0,03 −0,03 −0,03 −0,02 −0,02 −0,02 −0,01 0,00 0,01 0,01 0,02
4 999,57 1,52 998,05 1,46 996,59 1,40 995,19 1,36 993,83 1,30 992,53 1,26 991,27 1,22 990,05 1,17 988,88 1,13 987,75 1,08 986,67 1,04 985,63 1,00
−0,02 −0,02 −0,02 −0,02 −0,02 −0,01 0,00 0,00 0,00 0,01 0,02 0,03
5 999,59 1,52 998,07 1,46 996,61 1,40 995,21 1,36 993,85 1,31 992,54 1,27 991,27 1,22 990,05 1,17 988,88 1,14 987,74 1,09 986,65 1,05 985,60 1,02
0,00 0,00 0,00 0,01 0,01 0,01 0,01 0,02 0,03 0,03 0,04 0,06
6 999,59 1,52 998,07 1,46 996,61 1,41 995,20 1,36 993,84 1,31 992,53 1,27 991,26 1,23 990,03 1,18 988,85 1,14 987,71 1,10 986,61 1,07 985,54 1,02
0,01 0,01 0,01 0,01 0,01 0,02 0,02 0,02 0,03 0,04 0,05 0,06
7 999,58 1,52 998,06 1,46 996,60 1,41 995,19 1,36 993,83 1,32 992,51 1,27 991,24 1,23 990,01 1,19 988,82 1,15 987,67 1,11 986,56 1,08 985,48 1,04
0,03 0,03 0,03 0,03 0,04 0,04 0,05 0,05 0,06 0,07 0,07 0,08
8 999,55 1,52 998,03 1,46 996,57 1,41 995,16 1,37 993,79 1,32 992,47 1,28 991,19 1,23 989,96 1,20 988,76 1,16 987,60 1,11 986,49 1,09 985,40 1,05
0,04 0,04 0,04 0,04 0,04 0,04 0,05 0,06 0,06 0,06 0,08 0,08
9 999,51 1,52 997,99 1,46 996,53 1,41 995,12 1,37 993,75 1,32 992,43 1,29 991,14 1,24 989,90 1,20 988,70 1,16 987,54 1,13 986,41 1,09 985,32 1,06
0,06 0,06 0,06 0,06 0,06 0,07 0,07 0,07 0,08 0,09 0,10 0,11
10 999,45 1,52 997,93 1,46 996,47 1,41 995,06 1,37 993,69 1,33 992,36 1,29 991,07 1,24 989,83 1,21 988,62 1,17 987,45 1,14 986,31 1,10 985,21 1,07
0,07 0,06 0,06 0,07 0,07 0,07 0,07 0,08 0,09 0,10 0,10 0,11
11 999,38 1,51 997,87 1,46 996,41 1,42 994,99 1,37 993,62 1,33 992,29 1,29 991,00 1,25 989,75 1,22 988,53 1,18 987,35 1,14 986,21 1,11 985,10 1,08
0,09 0,09 0,09 0,09 0,09 0,09 0,10 0,11 0,11 0,11 0,12 0,13
12 999,29 1,51 997,78 1,46 996,32 1,42 994,90 1,37 993,53 1,33 992,20 1,30 990,90 1,26 989,64 1,22 988,42 1,18 987,24 1,15 986,09 1,12 984,97 1,09
0,09 0,09 0,09 0,09 0,10 0,10 0,10 0,10 0,11 0,12 0,13 0,14
13 999,20 1,51 997,69 1,46 996,23 1,42 994,81 1,38 993,43 1,33 992,10 1,30 990,80 1,26 989,54 1,23 988,31 1,19 987,12 1,16 985,96 1,13 984,83 1,10
0,11 0,11 0,11 0,11 0,11 0,12 0,12 0,13 0,13 0,14 0,15 0,16
14 999,09 1,51 997,58 1,46 996,12 1,42 994,70 1,38 993,32 1,34 991,98 1,30 990,68 1,27 989,41 1,23 988,18 1,20 986,98 1,17 985,81 1,14 984,67 1,11
0,12 0,12 0,12 0,12 0,12 0,12 0,13 0,13 0,14 0,14 0,15 0,16
15 998,97 1,51 997,46 1,46 996,00 1,42 994,58 1,38 993,20 1,34 991,86 1,31 990,55 1,27 989,28 1,24 988,04 1,20 986,84 1,18 985,66 1,15 984,51 1,12
0,13 0,13 0,13 0,13 0,14 0,14 0,14 0,15 0,15 0,17 0,17 0,18
16 998,84 1,51 997,33 1,46 995,87 1,42 994,45 1,39 993,06 1,34 991,72 1,31 990,41 1,28 989,13 1,24 987,89 1,22 986,67 1,18 985,49 1,16 984,33 1,13
0,14 0,14 0,14 0,14 0,14 0,15 0,15 0,15 0,16 0,17 0,17 0,18
17 998,70 1,51 997,19 1,46 995,73 1,42 994,31 1,39 992,92 1,35 991,57 1,31 990,26 1,28 988,98 1,25 987,73 1,22 986,50 1,18 985,32 1,17 984,15 1,14
0,15 0,15 0,16 0,16 0,16 0,16 0,17 0,17 0,18 0,18 0,19 0,19
18 998,55 1,51 997,04 1,47 995,57 1,42 994,15 1,39 992,76 1,35 991,41 1,32 990,09 1,28 988,81 1,26 987,55 1,23 986,32 1,19 985,13 1,17 983,96 1,15
0,17 0,16 0,16 0,16 0,16 0,16 0,17 0,18 0,18 0,19 0,20 0,21
19 998,38 1,50 996,88 1,47 995,41 1,42 993,99 1,39 992,60 1,35 991,25 1,33 989,92 1,29 988,63 1,26 987,37 1,24 986,13 1,20 984,93 1,18 983,75 1,16
0,18 0,18 0,18 0,18 0,19 0,19 0,19 0,20 0,21 0,22 0,22 0,23
20 998,20 1,50 996,70 1,47 995,23 1,42 993,81 1,40 992,41 1,35 991,06 1,33 989,73 1,30 988,43 1,27 987,16 1,24 985,92 1,21 984,71 1,19 983,52 1,17
tºGrado alcohólico volumétrico en %
01234567891 01 1
20 998,20 1,50 996,70 1,47 995,23 1,42 993,81 1,40 992,41 1,35 991,06 1,33 989,73 1,30 988,43 1,27 987,16 1,24 985,92 1,21 984,71 1,19 983,52 1,17
0,19 0,19 0,19 0,19 0,19 0,20 0,20 0,21 0,21 0,22 0,23 0,23
21 998,01 1,50 996,51 1,47 995,04 1,42 993,62 1,40 992,22 1,36 990,86 1,33 989,53 1,31 988,22 1,27 986,95 1,25 985,70 1,22 984,48 1,19 983,29 1,17
0,20 0,20 0,19 0,20 0,20 0,20 0,21 0,21 0,22 0,22 0,23 0,24
22 987,81 1,50 996,31 1,46 994,85 1,43 993,42 1,40 992,02 1,36 990,66 1,34 989,32 1,31 988,01 1,28 986,73 1,25 985,48 1,23 984,25 1,20 983,05 1,18
0,21 0,21 0,21 0,21 0,21 0,22 0,22 0,22 0,23 0,24 0,24 0,25
23 997,60 1,50 996,10 1,46 994,64 1,43 993,21 1,40 991,81 1,37 990,44 1,34 989,10 1,31 987,79 1,29 986,50 1,26 985,24 1,23 984,01 1,21 982,80 1,19
0,21 0,21 0,22 0,22 0,22 0,22 0,23 0,23 0,23 0,24 0,25 0,26
24 997,39 1,50 995,89 1,47 994,42 1,43 992,99 1,40 991,59 1,37 990,22 1,35 988,87 1,31 987,56 1,29 986,27 1,27 985,00 1,24 983,76 1,22 982,54 1,20
0,23 0,23 0,23 0,23 0,24 0,24 0,24 0,25 0,25 0,25 0,26 0,27
25 997,16 1,50 995,66 1,47 994,19 1,43 992,76 1,41 991,35 1,37 989,98 1,35 988,63 1,32 987,31 1,29 986,02 1,27 984,75 1,25 983,50 1,23 982,27 1,21
0,23 0,23 0,23 0,24 0,24 0,24 0,24 0,25 0,26 0,27 0,27 0,28
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0,25 0,25 0,25 0,25 0,25 0,26 0,26 0,26 0,27 0,28 0,29 0,29
27 996,68 1,50 995,18 1,47 993,71 1,44 992,27 1,41 990,86 1,38 989,48 1,35 988,13 1,33 986,80 1,31 985,49 1,29 984,20 1,26 982,94 1,24 981,70 1,23
0,25 0,25 0,26 0,26 0,26 0,26 0,27 0,28 0,28 0,28 0,29 0,30
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0,26 0,27 0,27 0,27 0,27 0,28 0,28 0,28 0,29 0,29 0,30 0,31
29 996,17 1,51 994,66 1,48 993,18 1,44 991,74 1,41 990,33 1,39 988,94 1,36 987,58 1,34 986,24 1,32 984,92 1,29 983,63 1,28 982,35 1,26 981,09 1,24
0,27 0,27 0,27 0,28 0,28 0,28 0,28 0,29 0,29 0,30 0,31 0,32
30 995,90 1,51 994,39 1,48 992,91 1,45 991,46 1,41 990,05 1,39 988,66 1,37 987,29 1,34 985,95 1,32 984,63 1,30 983,33 1,29 982,04 1,27 980,77 1,25
0,29 0,29 0,29 0,29 0,30 0,30 0,30 0,31 0,31 0,32 0,32 0,32
31 995,61 1,51 994,10 1,48 992,62 1,45 991,17 1,42 989,75 1,39 988,36 1,37 986,99 1,35 985,64 1,33 984,31 1,30 983,01 1,29 981,72 1,27 980,45 1,26
0,29 0,29 0,29 0,29 0,30 0,31 0,31 0,31 0,31 0,32 0,33 0,34
32 995,32 1,51 993,81 1,48 992,33 1,45 990,88 1,42 989,45 1,40 988,05 1,37 986,68 1,35 985,33 1,33 984,00 1,31 982,69 1,30 981,39 1,28 980,11 1,26
0,30 0,31 0,31 0,31 0,31 0,31 0,31 0,32 0,33 0,33 0,34 0,34
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0,30 0,31 0,31 0,31 0,31 0,32 0,33 0,33 0,33 0,34 0,34 0,35
34 994,72 1,53 993,19 1,48 991,71 1,45 990,26 1,43 988,83 1,41 987,42 1,38 986,04 1,36 984,68 1,34 983,34 1,32 982,02 1,31 980,71 1,29 979,42 1,28
0,32 0,32 0,32 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,33 0,34 0,34 0,35
35 994,40 1,53 992,87 1,48 991,39 1,46 989,93 1,43 988,50 1,41 987,09 1,38 985,71 1,36 984,35 1,34 983,01 1,33 981,68 1,31 980,37 1,30 979,07 1,29
0,32 0,32 0,33 0,33 0,33 0,33 0,34 0,34 0,35 0,35 0,36 0,37
36 994,08 1,53 992,55 1,49 991,06 1,46 989,60 1,43 988,17 1,41 986,76 1,39 985,37 1,36 984,01 1,35 982,66 1,33 981,33 1,32 980,01 1,31 978,70 1,29
0,33 0,34 0,34 0,34 0,35 0,35 0,35 0,35 0,36 0,36 0,36 0,37
37 993,75 1,54 992,21 1,49 990,72 1,46 989,26 1,44 987,82 1,41 986,41 1,39 985,02 1,37 983,65 1,35 982,30 1,33 980,97 1,32 979,65 1,32 978,33 1,30
0,34 0,34 0,35 0,36 0,36 0,36 0,36 0,36 0,37 0,38 0,38 0,38
38 993,41 1,54 991,87 1,50 990,37 1,47 988,90 1,44 987,46 1,41 986,05 1,39 984,66 1,37 983,29 1,36 981,93 1,34 980,59 1,32 979,27 1,32 977,95 1,31
0,35 0,35 0,36 0,36 0,36 0,37 0,37 0,37 0,37 0,38 0,38 0,39
39 993,06 1,54 991,52 1,51 990,01 1,47 988,54 1,44 987,10 1,41 985,68 1,39 984,29 1,37 982,92 1,36 981,56 1,34 980,22 1,33 978,89 1,33 977,56 1,31
0,35 0,36 0,36 0,37 0,38 0,38 0,38 0,38 0,38 0,39 0,39 0,39
40 992,71 1,55 991,16 1,51 989,65 1,48 988,17 1,45 986,72 1,42 985,30 1,39 983,91 1,37 982,54 1,36 981,18 1,35 979,83 1,33 978,50 1,33 977,17 1,321990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 48
▼B
tºGrado alcohólico volumétrico en %
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21
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−0,03 −0,02 −0,01 0,00 0,02 0,04 0,05 0,07 0,09 0,11 0,13 0,15
1 986,66 1,01 985,65 0,97 984,68 0,93 983,75 0,89 982,86 0,86 982,00 0,82 981,18 0,79 980,39 0,77 979,62 0,75 978,87 0,74 978,13 0,72 977,41 0,72
−0,02 −0,01 0,00 0,01 0,03 0,04 0,06 0,08 0,10 0,12 0,14 0,17
2 986,68 1,02 985,66 0,98 984,68 0,94 983,74 0,91 982,83 0,87 981,96 0,84 981,12 0,81 980,31 0,79 979,52 0,77 978,75 0,76 977,99 0,75 977,24 0,74
0,00 0,01 0,02 0,04 0,05 0,06 0,08 0,10 0,12 0,14 0,16 0,18
3 986,68 1,03 985,65 0,99 984,66 0,96 983,70 0,92 982,78 0,88 981,90 0,86 981,04 0,83 980,21 0,81 979,40 0,79 978,61 0,78 977,83 0,77 977,06 0,76
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0,02 0,03 0,05 0,06 0,08 0,09 0,11 0,13 0,14 0,16 0,18 0,20
5 986,65 1,05 985,60 1,02 984,58 0,98 983,60 0,95 982,65 0,91 981,74 0,89 980,85 0,87 979,98 0,84 979,14 0,83 978,31 0,82 977,49 0,81 976,68 0,81
0,04 0,06 0,06 0,07 0,08 0,10 0,11 0,13 0,15 0,17 0,19 0,21
6 986,61 1,07 985,54 1,02 984,52 0,99 983,53 0,96 982,57 0,93 981,64 0,90 980,74 0,89 979,85 0,86 978,99 0,85 978,14 0,84 977,30 0,83 976,47 0,83
0,05 0,06 0,08 0,09 0,10 0,12 0,14 0,15 0,17 0,19 0,20 0,22
7 986,56 1,08 985,48 1,04 984,44 1,00 983,44 0,97 982,47 0,95 981,52 0,92 980,60 0,90 979,70 0,88 978,82 0,87 977,95 0,85 977,10 0,85 976,25 0,85
0,07 0,08 0,09 0,10 0,11 0,12 0,14 0,16 0,18 0,19 0,21 0,23
8 986,49 1,09 985,40 1,05 984,35 1,01 983,34 0,98 982,36 0,96 981,40 0,94 980,46 0,92 979,54 0,90 978,64 0,88 977,76 0,87 976,89 0,87 976,02 0,87
0,08 0,08 0,09 0,11 0,13 0,14 0,15 0,16 0,18 0,20 0,22 0,24
9 986,41 1,09 985,32 1,06 984,26 1,03 983,23 1,00 982,23 0,97 981,26 0,95 980,31 0,93 979,38 0,92 978,48 0,90 977,56 0,89 976,67 0,89 975,78 0,89
0,10 0,11 0,12 0,13 0,14 0,16 0,17 0,18 0,19 0,21 0,23 0,25
10 986,31 1,10 985,21 1,07 984,14 1,04 983,10 1,01 982,09 0,99 981,10 0,96 980,14 0,94 979,20 0,93 978,27 0,92 977,35 0,91 976,44 0,91 975,53 0,91
0,10 0,11 0,12 0,13 0,15 0,16 0,17 0,19 0,21 0,23 0,25 0,27
11 986,21 1,11 985,10 1,08 984,02 1,05 982,97 1,03 981,94 1,00 980,94 0,97 979,97 0,96 979,01 0,95 978,06 0,94 977,12 0,93 976,19 0,93 975,26 0,92
0,12 0,13 0,14 0,15 0,16 0,17 0,19 0,21 0,22 0,24 0,26 0,27
12 986,09 1,12 984,97 1,09 983,88 1,06 982,82 1,04 981,78 1,01 980,77 0,99 979,78 0,98 978,80 0,96 977,84 0,96 976,88 0,95 975,93 0,94 974,99 0,94
0,13 0,14 0,15 0,16 0,17 0,19 0,20 0,21 0,23 0,24 0,26 0,28
13 985,96 1,13 984,83 1,10 983,73 1,07 982,66 1,05 981,61 1,03 980,58 1,00 979,58 0,99 978,59 0,98 977,61 0,97 976,64 0,97 975,67 0,96 974,71 0,96
0,15 0,16 0,17 0,18 0,19 0,20 0,22 0,23 0,24 0,26 0,27 0,29
14 985,81 1,14 984,67 1,11 983,56 1,08 982,48 1,06 981,42 1,04 980,38 1,02 979,36 1,00 978,36 0,99 977,37 0,99 976,38 0,98 975,40 0,98 974,42 0,98
0,15 0,16 0,17 0,18 0,19 0,20 0,22 0,24 0,26 0,27 0,28 0,30
15 985,66 1,15 984,51 1,12 983,39 1,09 982,30 1,07 981,23 1,05 980,18 1,04 979,14 1,02 978,12 1,01 977,11 1,00 976,11 0,99 975,12 1,00 974,12 1,00
0,17 0,18 0,19 0,20 0,21 0,22 0,23 0,25 0,26 0,28 0,30 0,31
16 985,49 1,16 984,33 1,13 983,20 1,10 982,10 1,08 981,02 1,06 979,96 1,05 978,91 1,04 977,87 1,02 976,85 1,02 975,83 1,01 974,82 1,01 973,81 1,02
0,17 0,18 0,19 0,20 0,21 0,23 0,24 0,25 0,27 0,29 0,30 0,31
17 985,32 1,17 984,15 1,14 983,01 1,11 981,90 1,09 980,81 1,08 979,73 1,06 978,67 1,05 977,62 1,04 976,58 1,04 975,54 1,02 974,52 1,02 973,50 1,04
0,19 0,19 0,20 0,22 0,24 0,25 0,26 0,27 0,28 0,29 0,31 0,33
18 985,13 1,17 983,96 1,15 982,81 1,13 981,68 1,11 980,57 1,09 979,48 1,07 978,41 1,06 977,35 1,05 976,30 1,05 975,25 1,04 974,21 1,04 973,17 1,05
0,20 0,21 0,22 0,23 0,24 0,25 0,26 0,27 0,29 0,30 0,32 0,34
19 984,93 1,18 983,75 1,16 982,59 1,14 981,45 1,12 980,33 1,10 979,23 1,08 978,15 1,07 977,08 1,07 976,01 1,06 974,94 1,05 973,89 1,06 972,83 1,06
0,22 0,23 0,24 0,24 0,25 0,26 0,28 0,29 0,30 0,31 0,33 0,35
20 984,71 1,19 983,52 1,17 982,35 1,14 981,21 1,13 980,08 1,11 978,97 1,10 977,87 1,08 976,79 1,08 975,71 1,08 974,63 1,07 973,56 1,08 972,48 1,08
tºGrado alcohólico volumétrico en %
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21
20º 984,71 1,19 983,52 1,17 982,35 1,14 981,21 1,13 980,08 1,11 978,97 1,10 977,87 1,08 976,79 1,08 975,71 1,08 974,63 1,07 973,56 1,08 972,48 1,08
0,23 0,23 0,23 0,25 0,26 0,28 0,29 0,31 0,32 0,33 0,35 0,36
21º 984,48 1,19 983,29 1,17 982,12 1,16 980,96 1,14 979,82 1,13 978,69 1,11 977,58 1,10 976,48 1,09 975,39 1,09 974,30 1,09 973,21 1,09 972,12 1,09
0,23 0,24 0,25 0,26 0,27 0,28 0,29 0,31 0,32 0,33 0,35 0,36
22 984,25 1,20 983,05 1,18 981,97 1,17 980,70 1,15 979,55 1,14 978,41 1,12 977,29 1,12 976,17 1,10 975,07 1,10 973,97 1,10 972,86 1,10 971,76 1,11
0,24 0,25 0,26 0,27 0,28 0,29 0,30 0,31 0,33 0,34 0,35 0,37
23 984,01 1,21 982,80 1,19 981,61 1,18 980,43 1,16 979,27 1,15 978,12 1,13 976,99 1,13 975,86 1,12 974,74 1,11 973,63 1,12 972,51 1,12 971,39 1,13
0,25 0,26 0,27 0,28 0,29 0,30 0,31 0,32 0,33 0,35 0,36 0,38
24 983,76 1,22 982,54 1,20 981,34 1,19 980,15 1,17 978,98 1,16 977,82 1,14 976,68 1,14 975,54 1,13 974,41 1,13 973,28 1,13 972,15 1,14 971,01 1,14
0,26 0,27 0,28 0,29 0,30 0,31 0,32 0,33 0,35 0,36 0,38 0,39
25 983,50 1,23 982,27 1,21 981,06 1,20 979,86 1,18 978,68 1,17 977,51 1,16 976,36 1,15 975,21 1,15 974,06 1,14 972,92 1,15 971,77 1,15 970,62 1,15
0,27 0,28 0,29 0,29 0,30 0,31 0,33 0,34 0,35 0,37 0,38 0,39
26 983,23 1,24 981,99 1,22 980,77 1,20 979,57 1,19 978,38 1,18 977,20 1,17 976,03 1,16 974,87 1,16 973,71 1,16 972,55 1,16 971,39 1,16 970,23 1,17
0,29 0,29 0,30 0,31 0,32 0,33 0,34 0,36 0,37 0,38 0,39 0,41
27 982,94 1,24 981,70 1,23 980,47 1,21 979,26 1,20 978,06 1,19 976,87 1,18 975,69 1,18 974,51 1,17 973,34 1,17 972,17 1,17 921,00 1,18 969,82 1,18
0,29 0,30 0,30 0,31 0,32 0,33 0,35 0,36 0,38 0,39 0,40 0,41
28 982,65 1,25 981,40 1,23 980,17 1,22 978,95 1,21 977,74 1,20 976,54 1,20 975,34 1,19 974,15 1,19 972,96 1,18 971,78 1,18 970,60 1,19 969,41 1,20
0,30 0,31 0,32 0,33 0,34 0,35 0,36 0,37 0,38 0,39 0,40 0,42
29 982,35 1,26 981,09 1,24 979,85 1,23 978,62 1,22 977,40 1,21 976,19 1,21 974,98 1,20 973,78 1,20 972,58 1,19 971,39 1,19 970,20 1,21 968,99 1,21
0,31 0,32 0,33 0,34 0,35 0,36 0,37 0,38 0,38 0,40 0,42 0,43
30 982,04 1,27 980,77 1,25 979,52 1,24 978,28 1,23 977,05 1,22 975,83 1,21 974,62 1,21 973,41 1,21 972,20 1,21 970,99 1,21 969,78 1,22 968,56 1,23
0,32 0,32 0,33 0,34 0,35 0,36 0,37 0,38 0,39 0,40 0,42 0,43
31 981,72 1,27 980,45 1,26 979,19 1,25 977,94 1,24 976,70 1,23 975,47 1,22 974,25 1,22 973,03 1,22 971,81 1,22 970,59 1,23 969,36 1,23 968,13 1,24
0,33 0,34 0,34 0,35 0,36 0,37 0,38 0,39 0,40 0,42 0,43 0,45
32 981,39 1,28 980,11 1,26 978,85 1,26 977,59 1,25 976,34 1,24 975,10 1,23 973,87 1,23 972,64 1,23 971,41 1,24 970,17 1,24 968,93 1,25 967,68 1,26
0,34 0,34 0,35 0,35 0,36 0,37 0,39 0,40 0,41 0,42 0,43 0,45
33 981,05 1,28 979,77 1,27 978,50 1,26 977,24 1,26 975,78 1,25 974,73 1,25 973,48 1,24 972,24 1,24 971,00 1,25 969,75 1,25 968,50 1,27 967,23 1,27
0,34 0,35 0,36 0,37 0,38 0,39 0,40 0,41 0,42 0,43 0,45 0,45
34 980,71 1,29 979,42 1,28 978,14 1,27 976,87 1,27 975,60 1,26 974,34 1,26 973,08 1,25 971,83 1,25 970,58 1,26 969,32 1,27 968,05 1,27 966,78 1,29
0,34 0,35 0,36 0,37 0,38 0,39 0,40 0,41 0,43 0,44 0,45 0,47
35 980,37 1,30 979,07 1,29 977,78 1,28 976,50 1,28 975,22 1,27 973,95 1,27 972,68 1,26 971,42 1,27 970,15 1,27 968,88 1,28 967,60 1,29 966,31 1,30
0,36 0,37 0,37 0,38 0,38 0,39 0,40 0,42 0,43 0,44 0,45 0,47
36 980,01 1,31 978,70 1,29 977,41 1,29 976,12 1,28 974,84 1,28 973,56 1,28 972,28 1,28 971,00 1,28 969,72 1,28 968,44 1,29 967,15 1,31 965,84 1,31
0,36 0,37 0,38 0,39 0,40 0,41 0,42 0,43 0,44 0,45 0,46 0,47
37 979,65 1,32 978,33 1,30 977,03 1,30 975,73 1,29 974,44 1,29 973,15 1,29 971,86 1,29 970,57 1,29 969,28 1,29 967,99 1,30 966,69 1,32 965,37 1,32
0,38 0,38 0,39 0,39 0,40 0,41 0,42 0,43 0,44 0,46 0,47 0,48
38 979,27 1,32 977,95 1,31 976,64 1,30 975,34 1,30 974,04 1,30 972,74 1,30 971,44 1,30 970,14 1,30 968,84 1,31 967,53 1,31 966,22 1,33 964,89 1,34
0,38 0,39 0,39 0,40 0,41 0,42 0,43 0,44 0,45 0,46 0,48 0,49
39 978,89 1,33 977,56 1,31 976,25 1,31 974,94 1,31 973,63 1,31 972,32 1,31 971,01 1,31 969,70 1,31 968,39 1,32 967,07 1,33 965,74 1,34 964,40 1,36
0,39 0,39 0,40 0,41 0,42 0,42 0,43 0,45 0,47 0,48 0,49 0,50
40 978,50 1,33 977,17 1,32 975,85 1,32 974,53 1,32 973,21 1,31 971,90 1,32 970,58 1,33 969,25 1,33 967,92 1,33 966,59 1,34 965,25 1,35 963,90 1,371990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 49
▼B
tºGrado alcohólico volumétrico en %
20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31
0 978,26 0,70 977,56 0,70 976,86 0,69 976,17 0,70 975,47 0,72 974,75 0,72 974,03 0,74 973,29 0,77 972,52 0,80 971,72 0,83 970,89 0,87 970,02 0,90
0,13 0,15 0,17 0,20 0,22 0,24 0,27 0,30 0,32 0,35 0,37 0,39
1 978,13 0,72 977,41 0,72 976,69 0,72 975,97 0,72 975,25 0,74 974,51 0,75 973,76 0,77 972,99 0,79 972,20 0,83 971,37 0,85 970,52 0,89 969,63 0,93
0,14 0,17 0,19 0,21 0,24 0,26 0,29 0,31 0,34 0,36 0,38 0,41
2 977,99 0,75 977,24 0,74 976,50 0,74 975,76 0,75 975,01 0,76 974,25 0,78 973,47 0,79 972,68 0,82 971,86 0,85 971,01 0,87 970,14 0,92 960,22 0,96
0,16 0,18 0,20 0,23 0,25 0,27 0,29 0,32 0,34 0,36 0,38 0,40
3 977,83 0,77 977,06 0,76 976,30 0,77 975,53 0,77 974,76 0,78 973,98 0,80 973,18 0,82 972,36 0,84 971,52 0,87 970,65 0,89 969,76 0,94 968,82 0,98
0,16 0,18 0,21 0,23 0,25 0,28 0,30 0,32 0,34 0,36 0,39 0,42
4 977,67 0,79 976,88 0,79 976,09 0,79 975,30 0,79 974,51 0,81 973,70 0,82 972,88 0,84 972,04 0,86 971,18 0,89 970,29 0,92 969,37 0,96 968,40 1,00
0,18 0,20 0,22 0,24 0,26 0,28 0,30 0,33 0,35 0,38 0,40 0,41
5 977,49 0,81 976,68 0,81 975,87 0,81 975,06 0,81 974,25 0,83 973,42 0,84 972,58 0,86 971,71 0,88 970,83 0,92 969,91 0,94 968,97 0,98 967,99 1,02
0,19 0,21 0,23 0,25 0,27 0,30 0,33 0,34 0,37 0,39 0,41 0,43
6 977,30 0,83 976,47 0,83 975,64 0,83 974,81 0,84 973,97 0,85 973,12 0,87 972,25 0,88 971,37 0,91 970,46 0,94 969,52 0,96 968,56 1,00 967,56 1,04
0,20 0,22 0,24 0,26 0,28 0,30 0,32 0,35 0,37 0,39 0,41 0,43
7 976,10 0,85 976,25 0,85 975,40 0,85 974,55 0,86 973,69 0,87 972,82 0,89 971,93 0,91 971,02 0,93 970,09 0,96 969,13 0,98 968,15 1,02 967,13 1,06
0,21 0,23 0,25 0,27 0,29 0,31 0,33 0,35 0,37 0,39 0,42 0,44
8 976,89 0,87 976,02 0,87 975,15 0,87 974,28 0,88 973,40 0,89 972,51 0,91 971,60 0,93 970,67 0,95 969,72 0,98 968,74 1,01 967,73 1,04 966,69 1,08
0,22 0,24 0,26 0,28 0,30 0,32 0,34 0,36 0,39 0,41 0,43 0,45
9 976,67 0,89 975,78 0,89 974,89 0,89 974,00 0,90 973,10 0,91 972,19 0,93 971,26 0,95 970,31 0,98 969,33 1,00 968,33 1,03 967,30 1,06 966,24 1,09
0,23 0,25 0,27 0,29 0,31 0,33 0,35 0,37 0,39 0,41 0,43 0,45
10 976,44 0,91 975,53 0,91 974,62 0,91 973,71 0,92 972,79 0,93 971,86 0,95 970,91 0,97 969,94 1,00 968,94 1,02 967,92 1,05 966,87 1,08 965,79 1,11
0,25 0,27 0,28 0,30 0,32 0,34 0,36 0,38 0,40 0,42 0,44 0,45
11 976,11 0,93 975,26 0,92 974,34 0,93 973,41 0,94 972,47 0,95 971,52 0,97 970,55 0,99 969,56 1,02 968,54 1,04 967,50 1,07 966,43 1,09 965,34 1,13
0,26 0,27 0,29 0,31 0,33 0,35 0,37 0,39 0,40 0,42 0,44 0,46
12 975,93 0,94 974,99 0,94 974,05 0,95 973,10 0,96 972,14 0,97 971,17 0,99 970,18 1,01 969,17 1,03 968,14 1,06 967,08 1,09 965,99 1,11 964,88 1,15
0,26 0,28 0,30 0,32 0,34 0,36 0,38 0,39 0,41 0,43 0,45 0,47
13 975,67 0,96 974,71 0,96 973,75 0,97 972,78 0,98 971,80 0,99 970,81 1,01 969,80 1,02 968,78 1,05 967,73 1,08 966,65 1,11 965,54 1,13 964,41 1,17
0,27 0,29 0,31 0,33 0,35 0,37 0,38 0,40 0,42 0,44 0,45 0,47
14 975,40 0,98 974,42 0,98 973,44 0,99 972,45 1,00 971,45 1,01 970,44 1,02 969,42 1,04 968,38 1,07 967,31 1,10 966,21 1,12 965,09 1,15 963,94 1,19
0,28 0,30 0,32 0,33 0,35 0,37 0,39 0,41 0,43 0,45 0,47 0,49
15 975,12 1,00 974,12 1,00 973,12 1,00 972,12 1,02 971,10 1,03 970,07 1,04 969,03 1,06 967,97 1,09 966,88 1,12 965,76 1,14 964,62 1,17 963,45 1,20
0,30 0,31 0,33 0,35 0,36 0,38 0,40 0,42 0,44 0,45 0,47 0,49
16 974,82 1,01 973,81 1,02 972,79 1,02 971,77 1,03 970,74 1,05 969,69 1,06 968,63 1,08 967,55 1,11 966,44 1,13 965,31 1,16 964,15 1,19 962,96 1,22
0,30 0,31 0,33 0,35 0,37 0,38 0,40 0,42 0,43 0,45 0,47 0,49
17 974,52 1,02 973,50 1,04 972,46 1,04 971,42 1,05 970,37 1,06 969,31 1,08 968,23 1,10 967,13 1,12 966,01 1,15 964,86 1,18 963,68 1,21 962,47 1,24
0,31 0,33 0,34 0,36 0,38 0,40 0,42 0,43 0,45 0,47 0,48 0,50
18 974,21 1,04 973,17 1,05 972,12 1,06 971,06 1,07 969,99 1,08 968,91 1,10 967,81 1,11 966,70 1,14 965,56 1,17 964,39 1,19 963,20 1,23 961,97 1,26
0,32 0,34 0,35 0,36 0,38 0,40 0,42 0,44 0,46 0,47 0,49 0,50
19 973,89 1,06 972,83 1,06 971,77 1,07 970,70 1,09 969,61 1,10 968,51 1,11 967,39 1,13 966,26 1,16 965,10 1,18 963,92 1,21 962,71 1,24 961,47 1,28
0,33 0,35 0,37 0,39 0,40 0,41 0,42 0,45 0,46 0,48 0,50 0,52
20 973,56 1,08 972,48 1,08 971,40 1,09 970,31 1,10 969,21 1,11 968,10 1,13 966,97 1,14 965,81 1,17 964,64 1,20 963,44 1,23 962,21 1,26 960,95 1,29
tºGrado alcohólico volumétrico en %
20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31
20º 973,56 1,08 972,48 1,08 971,40 1,09 970,31 1,10 969,21 1,11 968,10 1,13 966,97 1,16 965,81 1,17 964,64 1,20 963,44 1,23 962,21 1,26 960,95 1,29
0,35 0,36 0,37 0,39 0,40 0,42 0,44 0,45 0,47 0,49 0,50 0,52
21º 973,21 1,09 972,12 1,09 971,03 1,11 969,92 1,11 968,81 1,13 967,68 1,15 966,53 1,17 965,36 1,19 964,17 1,22 962,95 1,24 961,71 1,28 960,43 1,31
0,35 0,36 0,38 0,39 0,41 0,43 0,44 0,46 0,48 0,49 0,51 0,52
22 972,86 1,10 971,76 1,11 970,65 1,12 969,53 1,13 968,40 1,15 967,25 1,16 966,09 1,19 964,90 1,21 963,69 1,23 962,46 1,26 961,20 1,29 959,91 1,32
0,35 0,37 0,39 0,40 0,42 0,43 0,45 0,46 0,48 0,50 0,52 0,53
23 972,51 1,12 971,39 1,13 970,26 1,13 969,13 1,15 967,98 1,16 966,82 1,18 965,64 1,20 964,44 1,23 963,21 1,25 961,96 1,28 960,68 1,30 959,38 1,33
0,36 0,38 0,39 0,41 0,42 0,44 0,46 0,48 0,49 0,51 0,53 0,54
24 972,15 1,14 971,01 1,14 969,87 1,15 968,72 1,16 967,56 1,18 966,38 1,20 965,18 1,22 963,96 1,24 962,72 1,27 961,45 1,29 960,16 1,32 958,84 1,34
0,38 0,39 0,40 0,42 0,44 0,45 0,46 0,48 0,50 0,51 0,53 0,54
25 971,77 1,15 970,62 1,15 969,47 1,17 968,30 1,18 967,12 1,19 965,93 1,21 964,72 1,24 963,48 1,26 962,22 1,28 960,94 1,31 959,63 1,33 958,30 1,36
0,38 0,39 0,41 0,42 0,44 0,46 0,48 0,49 0,50 0,52 0,53 0,55
26 971,39 1,16 970,23 1,17 969,06 1,18 967,88 1,20 966,68 1,21 965,47 1,23 964,24 1,25 962,99 1,27 961,72 1,30 960,42 1,32 959,10 1,35 957,75 1,38
0,39 0,41 0,42 0,44 0,45 0,46 0,48 0,50 0,51 0,52 0,53 0,55
27 971,00 1,18 969,82 1,18 968,64 1,20 967,44 1,21 966,23 1,22 965,01 1,25 963,76 1,27 962,49 1,28 961,21 1,31 959,90 1,33 958,57 1,37 957,20 1,40
0,40 0,41 0,43 0,44 0,46 0,48 0,49 0,50 0,52 0,53 0,55 0,56
28 970,60 1,19 969,41 1,20 968,21 1,21 967,00 1,23 965,77 1,24 964,53 1,26 963,27 1,28 961,99 1,30 960,69 1,32 959,37 1,35 958,02 1,38 956,64 1,41
0,40 0,42 0,43 0,45 0,46 0,48 0,49 0,50 0,52 0,54 0,55 0,56
29 970,20 1,21 968,99 1,21 967,78 1,23 966,55 1,24 965,31 1,26 964,05 1,27 962,78 1,29 961,49 1,32 960,17 1,34 958,83 1,36 957,47 1,39 956,08 1,43
0,42 0,43 0,45 0,46 0,47 0,48 0,50 0,52 0,53 0,54 0,56 0,58
30 969,78 1,22 968,56 1,23 967,33 1,24 966,09 1,25 964,84 1,27 963,57 1,29 962,28 1,31 960,97 1,33 959,64 1,35 958,29 1,38 956,91 1,41 955,50 1,44
0,42 0,43 0,44 0,45 0,47 0,49 0,51 0,52 0,53 0,55 0,56 0,58
31 969,36 1,23 968,13 1,24 966,89 1,25 965,64 1,27 964,37 1,29 963,08 1,31 961,77 1,32 960,45 1,34 959,11 1,37 957,74 1,39 956,35 1,43 954,92 1,45
0,43 0,45 0,46 0,48 0,49 0,50 0,51 0,52 0,54 0,56 0,57 0,58
32 968,93 1,25 967,68 1,25 966,43 1,27 965,16 1,28 963,88 1,30 962,58 1,32 961,26 1,33 959,93 1,36 958,57 1,39 957,18 1,40 955,78 1,44 954,34 1,47
0,43 0,45 0,47 0,48 0,50 0,51 0,52 0,54 0,55 0,56 0,58 0,59
33 968,50 1,27 967,23 1,27 965,96 1,28 964,68 1,30 963,38 1,31 962,07 1,33 960,74 1,35 959,39 1,37 958,02 1,40 956,62 1,42 955,20 1,45 953,75 1,48
0,45 0,45 0,47 0,49 0,50 0,51 0,52 0,54 0,55 0,56 0,58 0,60
34 968,05 1,27 966,78 1,29 965,49 1,30 964,19 1,31 962,88 1,32 961,56 1,34 960,22 1,37 958,85 1,38 957,47 1,41 956,06 1,44 954,62 1,47 953,15 1,49
0,45 0,47 0,48 0,49 0,50 0,52 0,54 0,55 0,57 0,58 0,59 0,60
35 967,60 1,29 996,31 1,30 965,01 1,31 963,70 1,32 962,38 1,34 961,04 1,36 959,68 1,38 958,30 1,40 956,90 1,42 955,48 1,45 954,03 1,48 952,55 1,50
0,45 0,47 0,48 0,49 0,51 0,53 0,54 0,55 0,57 0,59 0,60 0,61
36 967,15 1,31 965,84 1,31 964,53 1,32 963,21 1,34 961,87 1,36 960,51 1,37 959,14 1,39 957,75 1,42 956,33 1,44 954,89 1,46 953,43 1,49 951,94 1,51
0,46 0,47 0,48 0,50 0,52 0,53 0,55 0,56 0,57 0,58 0,60 0,61
37 966,69 1,32 965,37 1,32 964,05 1,34 962,71 1,36 961,35 1,37 959,98 1,39 958,59 1,40 957,19 1,43 955,76 1,45 954,31 1,48 952,83 1,50 951,33 1,52
0,47 0,48 0,50 0,51 0,52 0,54 0,55 0,57 0,58 0,59 0,60 0,61
38 966,22 1,33 964,89 1,34 963,55 1,35 962,20 1,37 960,83 1,39 959,44 1,40 958,04 1,42 956,62 1,44 955,18 1,46 953,72 1,49 952,23 1,51 950,72 1,54
0,48 0,49 0,51 0,52 0,53 0,54 0,56 0,57 0,58 0,60 0,61 0,62
39 965,74 1,34 964,40 1,36 963,04 1,36 961,68 1,38 960,30 1,40 958,90 1,42 957,48 1,43 956,05 1,45 954,60 1,48 953,12 1,50 951,62 1,52 950,10 1,55
0,49 0,50 0,51 0,53 0,54 0,55 0,56 0,58 0,60 0,61 0,62 0,64
40 965,25 1,35 963,90 1,37 962,53 1,38 961,15 1,39 959,76 1,41 958,35 1,43 956,92 1,45 955,47 1,47 954,00 1,49 952,51 1,51 951,00 1,54 949,49 1,561990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 50
▼B
TABLA IV
Tabladecorrespondenciaentrelosíndicesderefraccióna20ºCylosgradosalcohólicosa20ºCdelasmezclas
hidroalcohólicaspurasydedestilados
1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 51
▼B
4.EXTRACTOSECOTOTAL
Materiassecastotales
1. DEFINICIÓN
El extracto seco total o materias secas totales es el conjunto de todas
las substancias que no se volatilizan en determinadas condiciones
físicas. Estas condiciones físicas deben establecerse de tal forma
que las substancias que componen el extracto sufran el mínimo de
alteraciones.
El extracto no reductor esel extracto s eco total menoslosazúcares
totales.
El extracto reducido esel extracto s eco total menoslosazúcares
totales que exceden de 1 g/l, el sulfato potásico que exceda de 1 g/
l, el manitol, si lo hubiere, y todas las substancias químicas que se
hayan añadido al vino.
El resto del extracto el el extracto no reductor menos la acidez fija
expresada en ácido tartárico.
El extracto se expresa en gramos por litro y debe determinarse con
una aproximación de 0,5 g.
2. FUNDAMENTO DEL MÉTODO
Método único: método densimétrico.El extracto seco total se calcula indirectamente a partir del valor de
la densidaddel mosto y, tratándose de vino, a partir de la densidad
del vino desalcoholizado .
Este extracto se expresa como la cantidad de sacarosa que, disuelta
en una cantidad de agua suficiente para obtener un litro, da una solu-
ción con la misma densidad que el mosto o que el residuo del vino
sin alcohol. En la tabla I figura esa cantidad.
3. PROCEDIMIENTO
La densidad relativa d
2020del vino desalcoholizado (dr) se calcula
mediante la fórmula:
dr=dv−da+ 1,000
donde
dv= densidad relativa del vino a 20 ºC (corregida la acidez
volátil) (1);
da= densidad relativa a 20 ºC de la mezcla hidroalcohólica del
mismo grado alcohólico que el vino.
Puede asimismo calcularse dra partir de lasmas asvolúmicasa 20 ºC,
ρvdel vino y ρade la mezcla hidroalcohólica del mismo grado,
mediante la fórmula:
dr= 1,0018 ( ρv−ρa) + 1,000
donde el coeficiente 1,0018 puede prácticamente asimilarse a 1
cuando ρvsea inferior a 1,05, siendo este caso el más frecuente.
4. EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS
Llevar la densidad dr2020del vino desalcoholizado o la densidad d2020
del mosto de uva a la tabla I para obtener el peso de extracto seco
total en gramospor litro.
Este peso se expresará con 1 decimal.El peso del extracto seco total se expresa en g/l con 1 decimal.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 52
(1) Antes de hacer este cálculo, la densidad relativa (o la masa volúmica) del vino, medida
como se indica anteriormente, debe ser corregida de la acción de la acidez volátil segúnla fórmula:d
v=d2020− 0,0000086 a ó ρv=ρ20− 0,0000086 a siendo a la cantidad de acidez volátil
en miliequivalentespor litro.
▼B
TABLA I
paraelcálculodelcontenidoenextractosecototal(g/l)
Densidad relativa
con dosdeci-
malesTercera decimal de la densidad relativa
0123456789
Gramosde extracto por litro
1,00 0 2,6 5,1 7,7 10,3 12,9 15,4 18,0 20,6 23,2
1,01 25,8 28,4 31,0 33,6 36,2 38,8 41,3 43,9 46,5 49,1
1,02 51,7 54,3 56,9 59,5 62,1 64,7 67,3 69,9 72,5 75,1
1,03 77,7 80,3 82,9 85,5 88,1 90,7 93,3 95,9 98,5 101,1
1,04 103,7 106,3 109,0 111,6 114,2 116,8 119,4 122,0 124,6 127,2
1,05 129,8 132,4 135,0 137,6 140,3 142,9 145,5 148,1 150,7 153,3
1,06 155,9 158,6 161,2 163,8 166,4 169,0 171,6 174,3 176,9 179,5
1,07 182,1 184,8 187,4 190,0 192,6 195,2 197,8 200,5 203,1 205,81,08 208,4 211,0 213,6 216,2 218,9 221,5 224,1 226,8 229,4 232,0
1,09 234,7 237,3 239,9 242,5 245,2 247,8 250,4 253,1 255,7 258,4
1,10 261,0 263,6 266,3 268,9 271,5 274,2 276,8 279,5 282,1 284,8
1,11 287,4 290,0 292,7 295,3 298,0 300,6 303,3 305,9 308,6 311,2
1,12 313,9 316,5 319,2 321,8 324,5 327,1 329,8 332,4 335,1 337,8
1,13 340,4 343,0 345,7 348,3 351,0 353,7 356,3 359,0 361,6 364,3
1,14 366,9 369,6 372,3 375,0 377,6 380,3 382,9 385,6 388,3 390,9
1,15 393,6 396,2 398,9 401,6 404,3 406,9 409,6 412,3 415,0 417,6
1,16 420,3 423,0 425,7 428,3 431,0 433,7 436,4 439,0 441,7 444,4
1,17 447,1 449,8 452,4 455,2 457,8 460,5 463,2 465,9 468,6 471,3
1,18 473,9 476,6 479,3 482,0 484,7 487,4 490,1 492,8 495,5 498,2
1,19 500,9 503,5 506,2 508,9 511,6 514,3 517,0 519,7 522,4 525,1
1,20 527,8 —————————
Tabla intercalar
4adecimal de la
densidad relativaGramosde
extracto por litro4adecimal de la
densidad relativaGramosde
extracto por litro4adecimal de la
densidad relativaGramosde
extracto por litro
1 0,3 4 1,0 7 1,8
2 0,5 5 1,3 8 2,1
3 0,8 6 1,6 9 2,31990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 53
▼B
5.Azúcaresreductores
1. DEFINICIÓN
Los azúcares reductores están constituidos por el conjunto de los
azúcarescon función cetónica o aldehídica determinadospor s u
acción reductora sobre la solución cupro-alcalina.
2. FUNDAMENTO DE LOS MÉTODOS
2.1.Defecación
2.1.1. Método de referencia: paso del vino neutralizado y sin alcohol por
una columna intercambiadora donde sus aniones son cambiados por
iones acúticos, seguido de la defecación por acetato neutro de
plomo.
2.1.2. Métodos usuales: se trata el vino con uno de los reactivos siguientes:
2.1.2.1. Acetato neutro de plomo
2.1.2.2. Ferrocianuro de cinc
2.2.Determinación
2.2.1. Método único: después de hacer reaccionar el vino o el mosto defe-
cado con una cantidad determinada de solución cupro-alcalina, se
determina el exceso de iones cúpricos por yodometría.
3. DEFECACIÓN
El líquido en el que se van a determinar los azúcares debe presentar
un contenido en azúcarescomprendido entre 0,5 y 5 g/l.
Si el vino es seco, hay que evitar diluirlo durante la defecación; si es
dulce, hay que diluirlo mientras se le defeca, para conseguir un
contenido en azúcares comprendido entre dichos límites, según el
cuadro adjunto:
DenominaciónContenido en azúcares
comprendidosentre
(g/l)Masa volúmica
comprendida entreDilución que se prevé
(%)
Mostos y mistelas > 125 > 1,038 1
Vinosdulcesalcoho-
lizadoso no25 y 125 1,005 y 1,038 4
Vinos semisecos 5 y 25 0,997 y 1,005 20
Vinos secos menos de 5 < 0,997 sin dilución
3.1.Métododereferencia
3.1.1.Reactivos
3.1.1.1. Solución de ácido clorhídrico (Cl H), 1 M
3.1.1.2. Solución de hidróxido de sodio (Na OH), 1 M
3.1.1.3. Solución de ácido acético (CH3COOH), 4 M
3.1.1.4. Solución de hidróxido de sodio (Na OH), 2 M
3.1.1.5. Resina intercambiadora de aniones [tipo Dowex 3 (20 — 50 mallas)
o una resina equivalente].
Preparación de la columna de resina intercambiadora de aniones. En
el fondo de la bureta, se coloca un pequeño tapón de lana de vidrio y
15 ml de resina intercambiadora de aniones (3.1.1.5).
Para poder utilizar la resina, se la somete a dos ciclos completos de
regeneración, pasando alternativamente soluciones M de ácido
clorhídrico (3.1.1.1) y de hidróxido de sodio (3.1.1.2). Después delavar con 50 ml de agua destilada, se pasa la resina a un vaso cilín-
drico, se añaden 50 ml de solución 4 M de ácido acético (3.1.1.3) y
se agita durante 5 minutos. Se vuelve a llenar la bureta y se hacen
pasar a través de la columna 100 ml de solución 4 M de ácido
acético (3.1.1.3). (Es preferible tener una reserva de resina conser-1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 54
▼B
vada en un frasco lleno de solución 4 M de ácido acético.) Se lava la
columna con agua destilada hasta que el eluido sea neutro.
Regeneración de la resina. Se hacen pasar 150 ml de solución 2 M
de hidróxido sódico para eliminar los ácidos y gran parte de la
materia colorante fijada en la resina. Se lava con 100 ml de solución
4 M de ácido acético. Se lava la columna hasta que el eluido sea
neutro.
3.1.1.6. Solución de acetato neutro de plomo (aproximadamente saturada):
Acetato neutro de plomo Pb (CH3COO)2,3
H2O) 250 g
Agua muy caliente csp. 500 ml
Agitar hasta dilución.
3.1.1.7. Carbonato de calcio, Ca CO3
3.1.2.Procedimiento
3.1.2.1. Vinoss ecos
Se ponen 50 ml de vino en un vaso de precipitado de 10 a 12 cm de
diámetro, aproximadamente, y se añaden ½ (n − 0,5) ml de solución
M de hidróxido de sodio (3.1.1.2) (siendo n el volumen de una solu-
ción 0,1 M de hidróxido de sodio utilizado para la determinación dela acidez total de 10 ml de vino). Se evapora sobre un baño de agua
hirviendo, proyectando una corriente de aire caliente hasta que el
líquido se reduzca, aproximadamente, a 20 ml.
Hacer pasar este líquido a través de una columna de resina intercam-
biadora de anionesen forma de acetato (3.1.1.5), a razón de 3 ml
cada 2 minutos. El eluido se recoge en un matraz aforado de
100 ml. Lavar 6 veces el vaso y la columna con 10 ml de agua desti-
lada, añadir, agitando, 2,5 ml de solución saturada de acetato de
plomo (3.1.1.6) y 0,5 g de carbonato de calcio (3.1.1.7); agitar varias
veces y dejar reposar durante al menos 15 minutos; enrasar con
agua. Filtrar.
1 ml de este filtrado corresponde a 0,5 ml de vino.
3.1.2.2. Mostos, mistelas, vinos dulces y vinos semisecos
1.Mostos y mistelas
Diluir al 10 % el líquido que debe analizarse; tomar 10 ml de
dicha solución.
2.Vinos dulces, alcoholizados o no, cuya masa volúmica esté
comprendida entre 1,005 y 1,038. Tomar 20 ml del líquido que
deba analizarse, previamente diluido al 20 %.
3.Vinos semisecos, cuya masa volúmica esté comprendida entre
0,997 y 1,005. Tomar 20 ml de vino sin diluir.
Hacer pasar el volumen de vino o de mosto indicado anterior-
mente a travésde una columna intercambiadora de anionesen
forma de acetato, a razón de 3 ml cada 2 minutos. Recoger eleluido en un matraz aforado de 100 ml, lavar la columna con
agua hasta obtener, aproximadamente, 90 ml de eluido. Añadir
0,5 g de carbonato cálcico, 1 ml de acetato de plomo en solu-
ción saturada; agitar y dejar reposar durante al menos 15
minutos, agitando de vez en cuando; enrasar con agua. Filtrar.
Primer caso: 1 ml de filtrado corresponde a 0,01 ml de mosto o
de mistela.
Segundo caso: 1 ml de filtrado corresponde a 0,04 ml de vino
dulce.
Tercer caso:1 ml de filtrado corresponde a 0,20 ml de vino
semiseco.
3.2.Métodosusuales
3.2.1.Defecación con acetato neutro de plomo
3.2.1.1. Reactivos
Solución de acetato neutro de plomo (aproximadamente saturada)
(véase 3.1.1).1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 55
▼B
Carbonato de calcio.
3.2.1.2. Procedimiento
3.2.1.2.1.Vinos secos
Se ponen 50 ml de vino en un matraz aforado de 100 ml y se añade
1/2 (n − 0,5) ml de solución M de hidróxido de sodio, sea n el
volumen de solución 0,1 M utilizada para determinar la acidez total
de 10 ml de vino. Añadir, agitando, 2,5 ml de solución saturada de
acetato de plomo (3.1.1.6) y 0,5 g de carbonato cálcico (3.1.1.7);
agitar varias veces y dejar reposar al menos 15 minutos; enrasar
con agua y filtrar.
1 ml de este filtrado corresponde a 0,5 ml de vino.
3.2.1.2.2.Mostos, mistelas, vinos dulces y vinos semisecos
En un matraz aforado de 100 ml, colocar un volumen de vino (o de
mosto o de mistela) así definido; las diluciones que figuran a conti-
nuación se dan a título indicativo:
1.Mostos y mistelas:
diluir al 10 % el líquido que deba analizarse. Tomar 10 ml de
esta solución.
2.Vinos dulces, alcoholizados o no, cuya masa volúmica esté
comprendida entre 1,005 y 1,038. Tomar 20 ml de líquido que
deba analizarse previamente diluido al 20 %.
3.Vinos semisecos, cuya masa volúmica esté comprendida entre
0,997 y 1,005. Tomar 20 ml de vino sin diluir.
Añadir 0,5 g de carbonato de calcio, 60 ml de agua aproximada-
mente, y 0,5 — 1 o 2 ml de acetato de plomo en solución
saturada; agitar y dejar reposar durante al menos 15 minutos,
agitando de vez en cuando. Enrasar con agua y filtrar.
Primer caso: 1 ml de filtrado corresponde a 0,01 ml de mosto o
mistela.
Segundo caso: 1 ml de filtrado corresponde a 0,04 ml de vino
dulce.
Tercer caso: 1 ml de filtrado corresponde a 0,20 ml de vino
semiseco.
3.2.2.Defecación con hexacianoferrato (II) de cinc
Dicho procedimiento de defecación sólo deberá utilizarse para los
vinos blancos, vinos dulces poco coloreados y mostos.
3.2.2.1. Reactivos
3.2.2.1.1.Solución I de hexacianoferrato (II) de potasio
Hexacianoferrato (II) de potasio [K4Fe
(CN)6,3H2O] 150 g
Agua csp 1 000 ml
3.2.2.1.2.Solución II de sulfato de cinc:
Sulfato de cinc (Zn SO4·7H2O) 300 g
Agua csp 1 000 ml
3.2.2.2. Procedimiento
En un matraz aforado de 100 ml, poner un volumen de vino (o de
mosto o de mistela) así definido; las diluciones que figuran a conti-
nuación se dan a título indicativo:
1.Mostos y mistelas:
diluir al 10 % el líquido que deba analizarse, tomar 10 ml de
dicha solución.
2.Vinos dulces, alcoholizados o no, cuya masa volúmica esté
comprendida entre 1,005 y 1,038. Tomar 20 ml de líquido que
deba analizarse previamente diluido al 20 %.
3.Vinos semisecos, cuya masa volúmica esté comprendida entre
0,997 y 1,005. Tomar 20 ml de vino sin diluir.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 56
▼B
4.Vinos secos. Tomar 50 ml de vino sin diluir.
Añadir 5 ml de solución I de hexacianoferrato (II) de potasio
(3.2.2.1.1) y 5 ml de solución II de sulfato de cinc (3.2.2.1.2).
Mezclar. Enrasar con agua, esperar 10 minutos y filtrar.
Primer caso: 1 ml de filtrado corresponde a 0,01 ml de mosto o
de mistela.
Segundo caso: 1 ml de filtrado corresponde a 0,04 ml de vino
dulce.
Tercer caso: 1 ml de filtrado corresponde a 0,20 ml de vino
semiseco.
Cuarto caso: 1 ml de filtrado corresponde a 0,50 ml de vino
seco.
4. DETERMINACIÓN
4.1.Reactivos
4.1.1.Solución cupro-alcalina:
Sulfato de cobre puro (CuSO4·5H2O) 25 g
Ácido cítrico (C6H8O7·H2O) 50 g
Carbonato de sodio cristalizado (Na2CO3·1 0
H2O) 388 g
Agua csp 1 000 ml
Disolver el sulfato de cobre en 100 ml de agua, el ácido citrico en
300 ml de agua y el carbonato de sodio en 300 a 400 ml de agua
caliente. Mezclar la solución de ácido cítrico y la de carbonato de
sodio. Añadir después la solución de sulfato de cobre y llevar hasta
un litro.
4.1.2.Solución de yoduro de potasio al 30 %:
Yoduro de potasio (Kl) 30 g
Agua csp 100 ml
Conservar en un frasco de vidrio topacio.
4.1.3.Ácido sulfúrico al 25 %:
Ácido sulfúrico puro (H2SO4)ρ2 0= 1,84 g/ml 25 g
Agua csp 100 ml
Verter el ácido en el agua, dejar enfriar y llevar hasta 100 ml.
4.1.4.Engrudo de almidón de 5 g/l:
Disolver 5 g de almidón en 500 ml de agua aproximadamente.
Llevar a ebullición agitando y mantenerla durante 10 min.; añadir
200 g de cloruro sódico (Cl Na). Llevar hasta un litro una vez que
haya enfriado.
— Tiosulfato de sodio, solución 0,1 M
— Solución de azúcar invertido de 5 g/l:
esta solución debe utilizarse para verificar la técnica de la deter-
minación.
En un matraz aforado de 200 ml. se echa:
Sacarosa pura (C12H22O11) 4,75 g
Agua, aproximadamente 100 ml
Ácido clorhídrico puro (CIH) ρ
20= 1,16 − 1,19 g/ml) 5 ml
Poner el matraz al baño de agua a 60 º C durante tiempo suficiente
para que la temperatura de la solución alcance 50 º C, temperatura
que se matendrá durante 15 min. Dejar después que el matraz se
enfríe durante 30 min.; seguidamente, enfriarlo por inmersión en un
baño de agua fría. Se pasa a un matraz aforado de 1 litro y se enrasa.
Esta solución se conserva (esta solución tiene una acidez de 0,06 M,
aproximadamente), con una solución de hidróxido sódico.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 57
▼B
4.2.Procedimiento
En un erlenmeyer de 300 ml, poner 25 ml de solución cupro-alca-
lina, 15 ml de agua y 10 ml de solución de defecación. Este
volumen de solución azucarada no debe contener más de 60 mg de
azúcar invertido.
Añadir algunosgranosde piedra pómez. Acoplar al erlenmeyer un
refrigerante de reflujo y llevar a ebullición, que deberá alcanzarse
en 2 min. Mantener la ebullición durante 10 min. exactamente.
Enfriar inmediatamente bajo un chorro de agua fría. Una vez que se
haya enfriado completamente, añadir 10 ml de la solución de yoduro
de potasio al 30 % (4.1.2), 25 ml de ácido sulfúrico al 25 % (4.1.3)
y 2 ml de engrudo de almidón (4.1.4).
Valorar con la solución 0,1 M de tiosulfato de sodio (4.1.5). Sea n el
número de mililitrosutilizados .
Por otro lado, realizar una determinación testigo en la que los 10 ml
de solución azucarada se sustituyen por 10 ml de agua destilada. Sea
n' el volumen de tiosulfato empleado.
4.3.Expresióndelosresultados
4.3.1.Cálculos
La cantidad de azúcar, expresada en azúcar invertido, contenida en
la muestra se da en la tabla adjunta en función del número n' − n
de mililitros de tiosulfato utilizados.
Expresar el contenido del vino en gramos de azúcar invertido por
litro con 1 decimal, teniendo en cuenta lasdilucionesefectuadas
durante la defecación y el volumen de la muestra.
4.3.2.Repetibilidad
r = 0,015 xi
xi= concentración del azúcar invertido en g/l de la muestra
4.3.3.Reproductibilidad
R = 0,058 xi
xi= concentración del azúcar invertido en g/l de la muestra
Tabla de correspondencia entre el volumen de solución 0,1 M de tiosulfato de sodio: (n ′− n) ml, y la cantidad de
azúcaresreductoresen mg
Na2S2O3(ml 0,1 M)Azúcaresreductores(mg)Dife-
renciaNa2S2O3(ml 0,1 M)Azúcaresreductores(mg)Dife-
rencia
1 2,4 2,4 13 33,0 2,7
2 4,8 2,4 14 35,7 2,8
3 7,2 2,5 15 38,5 2,8
4 9,7 2,5 16 41,3 2,9
5 12,2 2,5 17 44,2 2,9
6 14,7 2,6 18 47,2 2,9
7 17,2 2,6 19 50,0 3,0
8 19,8 2,6 20 53,0 3,0
9 22,4 2,6 21 56,0 3,1
10 25,0 2,6 22 59,1 3,1
11 27,6 2,7 23 62,2
12 30,3 2,71990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 58
▼B
6.SACAROSA
1. FUNDAMENTO DE LOS MÉTODOS
1. Método de detección cualitativa por cromatografia en capa fina.
La sacarosa se separa de los otros azúcares por cromatografía en
capa fina, con placas de celulosa y se revela con el reactivo urea
— ácido clorhídrico en estufa a 105 º C.
II. Método de detección y determinación por cromatografía líquida
de alta resolución. La sacarosa se separa mediante una columna
de sílice con alquilamina y se detecta por refractometría. para
calcular la cantidad, se establece una comparación con un patrón
externo analizado en las mismas condiciones.
Notas:La autenticidad de un mosto o de un vino puede controlarse
mediante el método de RMN del deuterio, descrito para la detec-
ción del enriquecimiento de mostos, de mostos concentrados
rectificadosy de vinos .
Para la investigación y la dosificación de la sacarosa la cromato-
grafía en fase gaseosa descrita en el capítulo 42 letra f) puede
igualmente ser utilizada.
2. MÉTODO DE DETECCIÓN CUALITATIVA POR CROMATO-
GRAFÍA EN CAPA FINA
2.1.Material
2.1.1. Placas para cromatografía de capa fina de celulosa (véase 2.2.3).
2.1.2.Cubeta de cromatografía
2.1.3.Jeringa micrométrica o micropipeta
2.1.4.Estufa regulable a 105º C± 2º C
2.2.Reactivos
2.2.1.Carbón activo
2.2.2.Fase móvil: cloruro de metileno — ácido acético ( ρ
20= 1,05 g/ml)
— etanol — metanol — agua (50: 25: 9: 6: 10).
2.2.3.Revelador:
Urea 5 g
Ácido clorhídrico 2 M 20 ml
Etanol 100 ml
2.2.4.Solución de referencia
Glucosa 35 g
Fructosa 35 g
Sacarosa 0,5 g
Agua csp 1 000 ml
2.3.Procedimiento
2.3.1.Preparación de la muestra
Cuando el mosto o el vino tenga mucho color, la decoloración se
hará mediante tratamiento con carbón activo.
Tratándose de mosto concentrado rectificado, se utilizará la solución
cuyo contenido en azúcaress ea del 25 % (m/m) (25 º Brix), prepa-
rada tal como se indica en el punto 4.1.2 delmétodo «Determinación
del pH», y se diluirá añadiendo agua a 25 ml de esta solución en un
matraz aforado hasta alcanzar 100 ml.
2.3.2.Obtención del cromatograma
Depositar a 2,5 cm del borde inferior de la placa:
— 10 µl de la muestra
— 10 µl de la solución de referencia.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 59
▼B
Colocar la placa en la cubeta previamente saturada por los vapores
de la fase móvil, y dejar ascender el líquido hasta 1 cm del borde
superior. Retirar la placa de la cubeta, secarla con corriente de aire
caliente. Repetir dosvecesla migración s ecando la placa cada vez.
Pulverizar uniformemente la placa con 15 ml de revelador y mante-
nerla en la estufa a 105 º C durante 5 minutos.
2.4.Resultados
La sacarosa y la fructosa aparecen bajo forma de manchas de color
azul oscuro sobre fondo blanco; la glucosa da una mancha verdosa
menosintens a.
3. MÉTODO DE DETECCIÓN Y DETERMINACIÓN POR CROMA-
TOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA RESOLUCIÓN
Las condiciones cromatográficas se dan solo a título indicativo.
3.1.Material
3.1.1.Cromatógrafo de fase líquida de alta resolución dotado de:
1. Inyector con loop de 10 µl;
2. Detector refractómetro diferencial o refractómetro interferó-
metro;
3. Columna grupo AMINO (25 cm de longitud por 4 mm de
diámetro interno);
4. Precolumna de la misma fase;5. Un dispositivo para mantener aislado o a la misma temperatura
(30 º C) el conjunto formado por la precolumna y la columna.
6. Un registrador o, en su caso, un integrador.7. Flujo de la fase móvil: 1 ml/min.
3.1.2.Dispositivo de filtración por membrana (0,45 µm)
3.2.Reactivos
3.2.1.Agua bidestilada
3.2.2.Acetonitrilo (CH
3CN) de calidad HPLC
3.2.3.Fase móvil: acetonitrilo-agua, previamente filtrados por membrana
(0,45 µm), (80 — 20 v/v).
Antes de su utilización se deberá desgasificar.
3.2.4. Solución de referencia: solución acuosa de sacarosa de 1,2 g/l.
Filtrada por membrana (0,45 µm).
3.3.Procedimiento
3.3.1.Preparación de la muestra
— Vinos y mostos.
Filtrar por membrana (0,45 µm).
— Mostos concentrados rectificados. Utilizar la solución obtenida
diluyendo el mosto concentrado rectificado al 40 % (m/v), tal
como se indica en el punto 5.1.2 del método «Acidez total», y
filtrarla por membrana (0,45 µm).
3.3.2.Determinación cromatográfica
Inyectar sucesivamente en el cromatógrafo 10 µl de la solución de
referencia y 10 µl de la muestra preparada como se indica en el
punto 3.3.1. Repetir lasinyeccionesen el mis mo orden.
Registrar el cromatograma.
El tiempo de retención de la sacarosa es de unos 10 minutos.
3.4.Cálculos
Utilizar para el cálculo el promedio de 2 resultados de la solución de
referencia y de la muestra.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 60
▼B
3.4.1.Vinos y mostos
Calcular el contenido en gramospor litro.
3.4.2.Mostos concentrados rectificados
Sea C g/l el contenido en sacarosa de la solución de mosto concen-
trado rectificado al 40 % (m/v).
Contenido en sacarosa en gramos por kilogramo de mosto concen-
trado rectificado: 2,5. C
3.5.Expresióndelosresultados
El contenido en sacarosa de los vinos, mostos y mostos concentrados
rectificados se expresa en gramos por litro (vinos y mostos) y en
gramos por kilogramo (mostos concentrados rectificados) con 1
decimal.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 61
▼B
7.GLUCOSAYFRUCTOSA
1. DEFINICIÓN
La glucosa y la fructosa pueden determinarse por separado mediante
un método enzimático, con vistas únicamente a calcular la relación
glucosa/fructosa.
2. FUNDAMENTO
Se fosforila la glucosa y la fructosa con adenosín-trifostato (ATP)
mediante una reacción enzimática catalizada por la hexokinasa
(HK), dando como resultado glucosa-6-fosfato (G6P) y fructosa-6-
fosfato (F6P):
glucosa + ATP
 G6P + ADP
fructosa + ATP
 F6P + ADP
En un primer momento, la glucosa-6-fosfato se oxida a gluconato-6-
fosfato mediante la nicotinamida-adenin-dinucleótido-fosfato
(NADP) en presencia de la enzima glucosa-6-fosfato-deshidrogenasa
(G6PDH). La cantidad de nicotinamida-adenin-dinucleótido-fosfato
reducida (NADPH) que se origina corresponde a la cantidad de
glucosa-6-fosfato y, por lo tanto, a la de glucosa.
G6P + NADP+
gluconato-6-fosfato + NADPH + H+
La nicotinamida-adenin-dinucleótido-fosfato reducida se determina
por su absorción a 340 nm.
Una vez finalizada esta reacción, la fructosa-6-fosfato se transforma
en glucosa-6-fosfato por la acción de la fosfoglucosa-isomerasa
(PGI)
F6P
 G6P
La glucosa-6-fosfato reacciona nuevamente con la nicotinamida-
adenin-dinucleótido-fosfato para dar gluconato-6-fosfato y nicotina-
mida-adenin-dinucleótido-fosfato reducida, determinándose esta
última.
3. APARATOS
— Espectrofotómetro que permita efectuar medidas a 340 nm,
máximo de absorción del NADPH. Por tratarse de medidas abso-
lutas (no existe curva de calibrado, sino referencia al coeficiente
de extinición del NADPH), deben controlarse las escalas de las
longitudesde onda y de lasabs orbanciasdel aparato.
En su defecto, utilizar un espectrofotómetro de espectro discon-
tinuo que permita efectuar medidasa 334 nm o 365 nm.
— Cubetasde vidrio de 1 cm de recorrido óptico o cubetasde us o
único.
— Pipetaspara ens ayosenzimáticosde 0,02; 0,05; 0,1; 0,2 ml.
4. REACTIVOS
4.1.Solución 1: tampón (trietanolamina 0,3 M; pH = 7,6; 4 10−3M
Mg2+): se disuelven 11,2 g de clorhidrato de trietanolamina
(C2H5)3N · HCL) y 0,2 g de Mg SO4·7H2O en 150 ml de agua
bidestilada; añadir alrededor de 4 ml de solución 5 M de hidróxido
sódico (NaOH) para obtener un pH igual a 7,6 y llevar a 200 ml.
Esta solución tampón puede conservarse 4 semanas a + 4 ºC.
4.2.Solución 2: solución de nicotinamida-adenin-dinucleótido-fosfato
(11,5 10−3M aproximadamente): se disuelven 50 mg de nicotina-
mida-adenin-dinucleótido-fosfato disódico en 5 ml de agua
bidestilada.
Esta solución se conserva durante 4 semanas a + 4 ºC.
4.3.Solución3: solución de adenosin-5 ′-trifosfato (81 10−3M, aproxima-
damente): se disuelven 250 mg de adenosin-5 ′-trifosfato disódico y1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 62
▼B
250 mg de bicarbonato de sodio (Na HCO3) en 5 ml de agua bides-
tilada.
Esta solución se conserva durante 4 semanas a + 4 ºC.
4.4.Solución4: Hexoquinasa/glucosa-6-fosfato-deshidrogenasa: mezclar
0,5 ml de hexoquinasa (2 mg de proteína/ml, es decir 280 U/ml) y
0,5 ml de glucosa-6-fosfato-deshidrogenasa (1 mg de proteína por
ml).
Esta mezcla se conserva durante un año a + 4 ºC.
4.5.Solución5: Fosfoglucosa-isomerasa (2 mg de proteína por ml, es
decir 700 U/ml). La suspensión se utiliza sin dilución.
Conservación: un año a + 4 ºC.
Nota:
El conjunto de los reactivos necesarios para esta determinación es
comercializado.
5. PROCEDIMIENTO5.1.Preparacióndelamuestra
En función de la cantidad estimada de glucosa + fructosa por litro,
efectuar las diluciones siguientes:
Medida a 340 nm y 334 nm 365 nm Dilución con agua Factor F de dilución
hasta 0,4 g/l 0,8 g/l — —
hasta 4,0 g/l 8,0 g/l 1 + 9 10hasta 10,0 g/l 20,0 g/l 1 + 24 25hasta 20,0 g/l 40,0 g/l 1 + 49 50hasta 40,0 g/l 80,0 g/l 1 + 99 100
por encima de 40,0 g/l 80,0 g/l 1 + 999 1 000
5.2.Determinación
Regulando el espectrofotómetro a la longitud de onda de 340 nm,
efectuar las medidas con respecto al aire (sin cubeta en el trayecto
óptico) o con respecto al agua.
Temperatura, 20 a 25 ºC.
En doscubetasde 1 cm de trayecto óptico, introducir:
Testigo Determinación
Solución 1 (4.1) (a 20 ºC) 2,50 ml 2,50 ml
Solución 2 (4.2) 0,10 ml 0,10 ml
Solución 3 (4.3) 0,10 ml 0,10 ml
Muestra que va a determinarse 0,20 ml
Agua bidestilada 0,20 ml
Mezclar y, transcurridos 3 min. aproximadamente, leer la absor-
bancia de lass oluciones(A
1). Desencadenar la reacción, añadiendo:
Solución 4 (4.4) 0,02 ml 0,02 ml
Mezclar; esperar 15 min.; medir la absorbancia y verificar el cese de
la reacción cuando hayan pasado 2 min. (A2).
Inmediatamente, añadir:
Solución 5 (4.5) 0,02 ml 0,02 ml
Mezclar; leer al cabo de 10 min.; comprobar el cese de la reacción
después de 2 min. (A3).
Determinar lasdiferenciasde abs orbancia:
A2−A1correspondiente a la glucosa1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 63
▼B
A3−A2correspondiente a la fructosa
tanto para el testigo como para la determinación.
Deducir la diferencia de absorbancia del testigo ( ∆AT) y la de la
determinación ( ∆AD) y establecer:
para la glucosa: ∆AG=∆AD−∆AT
para la fructosa: ∆AF=∆AD−∆AT
Nota:
El tiempo necesario para la acción de las enzimas puede variar de un
lote a otro. Por lo que, arriba, sólo se da a título indicativo. Se reco-
mienda determinarlo para cada lote.
5.3.Expresióndelosresultados
5.3.1.Cálculo
La fórmula general para el cálculo de lasconcentracionesesla
siguiente:
C¼V/C1PM
ε/C1d/C1v/C11000∆Ag =lðÞ
V = volumen del ensayo (ml)
v = volumen de la muestra (ml)PM = masa molecular de la sustancia que va a determinarse
d = trayecto óptico de la cubeta (cm)
E = coeficiente de absorción del NADPH a 340 nm = 6,3
(mmole
−1·l·c m−1)
V = 2,92 ml para la determinación de la glucosa
V = 2,94 ml para la determinación de la fructosav = 0,20 mlPM = 180
d= 1 .
Se obtiene:
para la glucosa: Cg/l = 0,417 · ∆A
G
para la fructosa: Cg/l = 0,420 · ∆AF
Si al preparar la muestra se ha efectuado una dilución, multiplicar el
resultado por el factor F.
Nota:
Si lasmedidass e han tomado a longitudesde onda de 334 o 365 nm,
se obtiene:
— medida a 334 nm: E = 6,2 (mmole−1·l·c m−1)
para la glucosa: Cg/l = 0,425 · ∆AG
para la fructosa: Cg/l = 0,428 · ∆AF
— medida a 365 nm: E = 3,4 (mmole−1·l·c m−1)
para la glucosa: Cg/l = 0,773 · ∆AG
para la fructosa: Cg/l = 0,778 · ∆AF
5.3.2.Repetibilidad (r)
r = 0,056 xi
5.3.3.Reproductibilidad (R)
R = 0,12 + 0,076 xi
xi= contenido en glucosa o fructosa en gramos por litro.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 64
▼B
8.DETECCIÓN DEL AUMENTO DEL GRADO ALCOHÓLICO
NATURALDEMOSTOS,DEMOSTOSDEUVACONCENTRADOS,
DE MOSTOS DE UVA CONCENTRADOS RECTIFICADOS Y DE
VINOS POR APLICACIÓN DE LA RESONANCIA MAGNÉTICO-
NUCLEARDELDEUTERIO(RMN-FINS/SNIF-NMR)
1. DEFINICIÓN
Losátomosde deuterio contenidosen losazúcaresy el agua de un
mosto de uva se redistribuirán tras fermentación en las moléculas I,
II, III y IV del vino:
CH2DC H2OH CH3CHD OH
II I
CH3CH2OD HOD
III IV
La adición de azúcaresexógenos(chaptalización) antesde la
fermentación del mosto repercutirá en la redistribución del deuterio.
En comparación con losvaloresde losparámetrosrelativosde un
vino testigo natural de la misma región, el aumento artificial del
grado alcohólico natural con azúcar exógeno, se traducirá en las
variaciones siguientes:
Parámetros
Vino(D/H)I(D/H)II(D/H)WQR
— natural
— adición
— azúcar de remolacha
— azúcar de caña
/C148/C147/C147/C147/C149/C147/C147/C147/C150
 — azúcar de maíz
(D/H)I: relación isotópica de la molécula I
(D/H)II: relación isotópica en la molécula II
(D/H)WQ: relación isotópica del agua del vino.
R = 2(D/H)II/(D/H)I, expresa la distribución relativa del deuterio
en lasmoléculasI y II, R s e mide directamente a partir de
las intensidades h de las señales, y por tanto R = 3hII/hI.
La medida de (D/H)Icaracteriza principalmente la especie vegetal
sintetizadora del azúcar y, en menor medida, la geografía del lugar
de recolección (naturaleza del agua utilizada durante la fotosíntesis).
(D/H)IIrepresenta la climatología del lugar de producción de las
uvas(naturaleza del agua de lluvia y condicionesmeteorológicas )
y, en menor medida, la concentración de azúcar del mosto inicial.
(D/H)WQrepresenta la climatología del lugar de producción y la
riqueza en azúcar del mosto inicial.
2. FUNDAMENTO
Se efectúa la determinación de losparámetrosdefinidosanterior-
mente R; (D/H)I; (D/H)IImediante RMN del deuterio en el etanol
extraído del vino o de losproductosde fermentación del mos to, del
mosto concentrado y del mosto concentrado rectificado que se
obtienen en lascondicionesdadas . Se completa eventualmente la
determinación estableciendo la relación isotópica del agua extraída
del vino, (D/H)WQ, y la relación isotópica 13C/12Cdel etanol.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 65
▼M5
▼B
3. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA PARA EL ANÁLISIS
3.1.Extraccióndeletanolydelaguadelvino
Nota:Se puede utilizar cualquier dispositivo de extracción, con la condi-
ción que permita recuperar entre el 98 y 98,5 % del alcohol del
vino y que el título másico del destilado se encuentre entre el 92 y
el 93 % masa (95 % vol).
3.1.1.Material y reactivos
— Aparato para la extracción del etanol (figura 1), que incluye:
— calentador eléctrico con regulador de voltaje,
— matraz esmerilado de 1 litro;
— columna Cadiot de cinta helicoidal (parte móvil de teflón),
por ejemplo [Prolabo, ref. 06 (730-194)],
— matracescónicoses meriladosde 125 ml,— matracescon tapón de plás tico de 125 y 60 ml;
— Reactivospara la determinación del agua s egún la técnica de
Karl Fischer (por ejemplo Merck 9241 y 9243).
3.1.2.Procedimiento
3.1.2.1. Determinar el grado alcohólico del vino, con una precisión superior
al 0,05 % en volumen; se denominará este grado g
v.
3.1.2.2. Extracción del etanol
Introducir una muestra homogénea de 500 ml de vino de grado
alcohólico gv, en matraz del aparato de destilación con una relación
de reflujo constante próxima a 0,9; para recoger el destilado; colocar
un matraz cónico esmerilado de 125 ml pesado previamente.
Recoger el destilado con punto de ebullición entre 78,0 y 78,2 ºC,
aproximadamente de 40 a 60 ml. Cuando la temperatura sobrepase
los 78,5 ºC, suspender la toma durante 5 minutos.
Cuando la temperatura descienda a 78 ºC, volver a recoger el desti-
lado hasta que ascienda a 78,5 ºC, repitiendo esta operación hasta
que la temperatura, una vez interrumpida la recogida y funcionando
en circuito cerrado, no vuelva a bajar. La destilación completa dura
aproximadamente 5 horas. Operando de esta manera puede recupe-
rarse entre el 98 % y el 98,5 % del alcohol total del vino de un
destilado con un grado comprendido entre 92 y 93 % masa (95 %
vol) grado para el que se han establecido la condiciones de la
RMN descrita, en el apartado 4.
Se pesa el etanol recuperado.
Se conserva en un matraz de 60 ml una toma de muestra homogénea
de 60 ml de las partes finales de la destilación; esta toma repre-
sentará el agua del vino. Eventualmente se determinará su relación
isotópica.
Nota:
Si se dispone de un espectrómetro dotado de una sonda de 10 mm
(véase apartado 4) bastará una toma de muestra homogénea de
300 ml de vino.
3.1.2.3. Determinación del grado alcohólico del alc ohol extraído
Se determina mediante el método de Karl Fischer el contenido en
agua p′de una muestra de alcohol de aproximadamente 0,5 ml
cuyo peso p se conoce exactamente.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 66
▼B
Figura 1: Instalación por la extracción del etanol
El grado del etanol en peso vendrá dado por la fórmula
gD
m¼p/C0p0
p/C2100
3.2.Fermentación de mostos, de mostos concentrados y de mostos
concentradosrectificados
3.2.1.Material y reactivos
— Ácido tartárico.
— Base de nitrógeno para levadura sin aminoácido DIFCO.— Levadurass ecasactivas« Saccharomyces cerevisiae ».1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 67
▼B
Si se conoce la relación isotópica del agua del mosto, se pueden
reactivar laslevaduraspreviamente a realizar la s iembra, durante 15
minutos en el mínimo de agua tibia sin destilar (1 g en 50 ml), de
relación isotópica cercana, a la del agua del mosto.
Si no se conoce la relación isotópica del agua del mosto, es prefe-
rible realizar la siembra directamente.
La cantidad de levaduras secas que se deben utilizar es del orden de
1 g esto es, alrededor de 1010célulaspara 1 litro de mos to.
Recipiente para la fermentación, de una capacidad de 1,5 litro,
dotado de un dispositivo que permita manipular al resguardo del
aire y condensar los vapores de alcohol, ya que no deberá tolerarse
ninguna pérdida de etanol durante la fermentación. El índice de
conversión de los azúcares fermentables en etanol deberá ser supe-
rior al 98 %.
3.2.2.Procedimiento
3.2.2.1. Mostos
— Mostos frescos
Colocar 1 litro de mosto, cuya concentración en azúcares
fermentabless e ha determinado previamente, en el recipiente
previsto para la fermentación. Añadir 1 g de levaduras secas
previamente reactivadas. Colocar el dispositivo que permite
manipular al abrigo del aire. Llévese la fermentación a una
temperatura próxima a los 20 ºC hasta que se agoten los
azúcares. Tras determinar el grado alcohólico del producto de la
fermentación y una vez calculado el índice de conversión de los
azúcares en alcohol, se centrifuga el líquido fermentado y se
destila para extraer el etanol.
— Mostos conservados con dióxido de azufre
Desulfitar un volumen de mosto algo superior a 1 litro (1,2 litro)
haciendo burbujear una corriente de nitrógeno a travésdel mos to,
calentado al baño maría a reflujo hasta 70-80 ºC, hasta que el
contenido total de dióxido de azufre sea inferior a 200 mg/l.
Procúrese no provocar ninguna concentración de mosto por
evaporación de agua, empleando un refrigerante eficaz al
respecto.
Colocar 1 litro de mosto desulfitado en el recipiente de fermen-
tación y continuar como se ha indicado para los mostos frescos.
Nota:
Si se ha utilizado metabisulfito de potasio para sulfitar el
mosto, será necesario añadir a este ácido sulfúrico antes de
proceder al desulfitado, a razón de 0,25 ml de ácido sulfúrico
concentrado ( ρ20= 1,84 g/ml) por gramo de metabisulfito
utilizado por litro de mosto.
3.2.2.2. Mostos concentrados
Colocar en el recipiente de fermentación un volumen V ml de mosto
concentrado que contenga una cantidad de azúcarespróxima a los
170 g. Completar hasta 1 litro con (1 000 − V) ml de agua con la
misma relación isotópica que el agua del mosto natural testigo.
Sembrar de la misma forma que se indica en 3.2.1. Añadir 3 g de
base de nitrógeno para levaduras sin aminoácidos DIFCO. Homoge-
neizar y continuar como se ha descrito antes.
3.2.2.3. Mos tosde uva concentradosrectificados
Proceder como se ha descrito en 3..2.2.2 completando hasta 1 litro
con (1 000 − V) ml de agua con la misma relación isotópica que el
agua del mosto natural testigo, en los que se habrán disuelto 3 g de
ácido tartárico.
Nota:
Apartar un volumen de 50 ml de muestra de mosto o de mosto disul-
fitado, de mosto concentrado o de mosto concentrado rectificado
para efectuar la extracción eventual de agua y la determinación de
su relación isotópica (D/H)WQ. La extracción del agua de losmos tos
podrá efectuarse simplemente por destilación azeotrópica con
tolueno.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 68
▼B
3.3.PreparacióndelamuestradealcoholparasumedidaporRMN
3.3.1.Reactivos
N, N-tetrametilurea (TMU); utilizar una muestra de TMU de refe-
rencia, de relación isotópica D/H conocida y controlada. Podrá
obtenerse esta muestra de la Dirección General de Ciencia, Invetiga-
ción y Desarrollo, Oficina Comunitaria de Referencia, Rue de la Loi,
200, B-1049 Bruselas.
3.3.2.Procedimiento
— Sonda RMN de 15 mm de diámetro:
Verter en un frasco pesado previamente 7 ml de alcohol obtenido
según 3.1.2 pesándolo con precisión de 0,1 mg; se denominará a
este peso mA; se tomarán a continuación 3 ml del estándar
interno (TMU), pesándose con precisión de 0,1 mg; se deno-
minará a este peso mes. Homogeneizar por agitación.
— Sonda RMN de 10 mm de diámetro:
Bastan 3,2 ml de alcohol y 1,3 ml de TMU.Según el tipo de espectrómetro y de sonda utilizados (véase apar-
tado 4), se añadirá una cantidad suficiente de hexafluorobenceno
como sustancia de estabilización campo-frecuencia (lock).
EspectrómetroSonda
10 mm 15 mm
7,05 T 150 µl 200 µl
9 , 4T 3 5µ l 5 0µ l
3.4.PreeparacióndelamuestradeaguaparalamedicióndeRMN
convistasaladeterminacióneventualdesurelaciónisotópica
3.4.1.Reactivos
N, N,-tetrametilurea (TMU): véase 3.3.1.
3.4.2.Procedimiento
Colocar en un frasco ya pesado 3 ml de agua obtenida según 3.1.2 o
3.2 (nota), pesándolo con precisión de 0,1 mg. Se denominará a este
peso m′E; se tomará a continuación 4 ml del estándar interno (TMU)
pesándose con precisión de 0,1 mg; se denominará a este peso m ′es.
Homogeneizar agitando.
Nota:
Si el laboratorio dispone de un espectrómetro de masas de propor-
ciones isotópicas, la medición podrá realizarse con este
instrumento, a fin de disminuir la utilización del espectrómetro de
RMN, ya que, para cada serie de vinos estudiada, es necesario
contrastar la proporción TIV(5.2).
4. OBTENCIÓN DE LOS ESPECTROS RMN2H DEL ALCOHOL Y
DEL AGUA.
Determinación de los parámetros isotópicos.
4.1.Material
— Espectrómetro de RMN dotado de una sonda específica de
deuterio ajustada a la frecuencia característicaodel campo Bo(por ejemplo para Bo= 7,05 T,o= 46,5 MHz y para Bo= 9,4 T,
o= 61,4 MHz) y que posea un canal de desacoplamiento de
protón B2y un canal de estabilización campo-frecuencia (lock)
a la frecuencia del flúor.
La resolución medida en el espectro, transformada sin multiplica-
ción exponencial (esdecir LB = cero O) (figura 2 b) y expres ada
por la amplitud a media altura de lass eñalesde metilo y meti-
leno del etanol y de la señal de metilo del TMU, deberá ser
inferior a 0,5 Hz. La sensibilidad, medida con un factor de multi-
plicación exponencial LB = 2 (figura 2 a), deberá ser igual o
superior a 150 para la señal de metilo del etanol de un grado de
95 % vol (93,5 % m/m). En estas condiciones, el intervalo de
confianza en la medición de la altura de la señal, calculada para1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 69
▼B
una probabilidad de 97,5 % (test de una cola) y 10 repeticiones
del espectro, será de 0,35 %.
— Cambiador automático de muestras (eventualmente).— Programa de tratamiento de datos.— Tubos para muestra de 15 mm o de 10 mm, según las caracterís-
ticasdel es pectrómetro.
4.2.Regulacióndelespectrómetroyverificaciones
4.2.1.Regulación
Proceder a lasregulacioneshabitualesde homogeneidadesy de
sensibilidad según las indicaciones del constructor.
4.2.2.Verificación de la validez de las regulaciones
Utilizar etanolesde referencia, des ignadosmediante lasletras«C, V
y R», de un contenido isotópico diferente pero comprobado con
precisión. El significado de estas iniciales es el siguiente: C, alcohol
de caña de azúcar o de maíz; V, alcohol de vino, y R, alcohol de
remolacha. Las muestras pueden obtenerse en la Oficina Comuni-
taria de Referencia.
Según el procedimiento descrito en 4.3, determinar los valores isotó-
picos de estos alcoholes que se designarán anotando C
med,Vmed,Rmed(véase 5.3).
Comparar es tosvalorescon losvaloresde referencia corres pon-
dientes dados, que se designarán anotando Ces,Res,Ves(véase 5.3).
Figura 2 a
Espectro RMN2H del etanol del vino con referencia interna
(TMU: N,N-tetrametilurea)1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 70
▼B
Figura 2 b
Espectro2H del etanol realizado en lasmis mascondicionesque las
de la figura 2 a pero sin multiplicación exponencial (LB = o)
La desviación tipo de repetibilidad obtenida sobre la media de 10
repeticiones de cada espectro deberá ser inferior a 0,01 para la rela-
ción R o inferior a 0,3 ppm para (D/H)Iy para (D/H)II.
Losvaloresmediosobtenidospara losdiferentesparámetrosis otó-
picos[R, (D/H)I, (D/H)II)] deberán situarse dentro de la
correspondiente desviación estándar de repetibilidad, ofrecida por la
Oficina Comunitaria de Referencia para losparámetrosde lostres
alcoholes de referencia. En caso contrario, deberán repetirse las
regulaciones.
4.3.CondicionesparaobtenerlosespectrosRMN
Colocar la muestra de alcohol preparada según 3.3 o la muestra de
agua, preparada según 3.4 en un tubo de 10 o 15 mm e introducirla
en la sonda.
Las condiciones para obtener espectros RMN son las siguientes:
— La temperatura de la sonda (por ejemplo 302 K) deberá ser cons-
tante.
— Tiempo de adquisición, 6,8 segundos, como máximo, para
1 200 Hz de amplitud espectral (memoria 16 K), es decir, alre-
dedor de 20 ppm a 61,4 MHz o 27 ppm a 46,1 MHz.
— Impulso: 90 º.— Regular el tiempo de adquisición; su valor deberá ser del mismo
orden de magnitud que el tiempo de toma de muestras (dwell
time).
— Detección en cuadratura: fijar el offset01 entre lass eñalesde
referencia OD y CHD para el etanol y entre HOD y TMU para
el agua.
— Determinar el valor del offsetde desacoplamiento 02 a partir del
espectro protónico medido por la bobina de desacoplamiento
sobre el mismo tubo. Se obtiene un buen desacoplamiento
cuando 02 se halla situado en el centro del intervalo de
frecuencia existente entre los grupos CH
3—yC H2—. Utilizar el
modo de desacoplamiento mediante banda ancha.
Efectuar para cada espectro un número NS de acumulaciones que
baste para obtener la relación señal/ruido que figura en 4.1 y repetir
NE = 10 veces esta serie de NS acumulaciones. Los valores de NS
dependerán del tipo de espectrómetro y de sonda utilizados (véase
punto 4); se escogerá, por ejemplo:
EspectrómetroSonda
10 mm 15 mm
7,05 T NS = 304 NS = 2001990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 71
▼B
EspectrómetroSonda
10 mm 15 mm
9,04 T NS = 200 NS = 128
5. EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS
5.1.Etanol
Para cada uno de los 10 espectros (véase el espectro RMN del
etanol, figura 2 a), determinar:
—R¼3hII
hI¼3/C1altura de la se ˜nal II CH 3CHD OH ðÞ
altura de la se ˜nal I CH 2DC H 2OH ðÞ
—D=HðÞI¼1;5866 /C1TI/C1mes
mA/C1D=HðÞes
gD
m
—D=HðÞII¼2;3799 /C1TII/C1mes
mA/C1D=HðÞes
gD
m
donde:
—TI¼altura de la se ˜nal I CH 2DC H 2OH ðÞ
altura de la se ˜nal del est´ andar interno TMU ðÞ
—TII¼altura de la se ˜nal II CH 3T CHD OH ðÞ
altura de la se ˜nal del est´ andar interno TMU ðÞ
—C H3CHDOH mesymA: véase 3.3.2,
—gmD, véase 3.1.2.3,
— (D/H)es= proporción isotópica del estándar interno (TMU) indi-
cado sobre el frasco. El TMU puede obtenerse en la Oficina
Comunitaria de Referencia.
La utilización de lasalturasde lass eñalesen lugar de lass uperficies
medidas con menos precisión supone larguras de picos a media
altura iguales, lo que es una aproximación razonable (figura 26).
5.2.Agua
Cuando se determina la proporción isotópica del agua por RMN a
partir de la mezcla agua-TMU, se utiliza la relación siguiente:
—D=HðÞQ
W¼0;9306 /C1TIV/C1m0
es
m0E/C1D=HðÞes
donde
—TIV¼superficie de la se ˜nal HODðÞ del agua extra´ ıda del vino
superficie de la se ˜nal del est´ andar interno TMU ðÞ
—m′esym′E, véase 3.4.2.
— (D/H)es= proporción isotópica del estándar interno (TMU) indi-
cada sobre el frasco suministrado por la Oficina Comunitaria de
Referencia (BCR).
5.3. Para cada uno de los parámetros isotópicos, calcular la media de las
10 determinacionesy el intervalo de confianza.
Un programa opcional (por ejemplo, SNIF-NMR) adaptable al calcu-
lador del espectrómetro permite efectuar estos cálculos en línea.
Nota:
Si, tras la regulación del espectrómetro, subsiste una desviación
sistemática entre los valores medios obtenidos para las caracterís-
ticasis otópicasde losalcoholesde referencia (4.2.2) y losvalores
indicadospor la Oficina Comunitaria de Referencia, del orden de la
desviación-típica, podrá aplicarse la corrección siguiente para
obtener el verdadero valor de una muestra X cualquiera.
La interpolación se efectuará tomando los valores de las muestras de
referencia que se ajusten al de la muestra X.
Llamemos(D/H)iX
medal valor medido, y (D/H)iX
corr.al valor corregido
tendremos:(D/H)
iX
corr.= (D/H)iR
es+α[ (D/H)iX
med− (D/H)iR
med]1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 72
▼B
en donde:
α¼D=HðÞVes
i/C0D=HðÞRes
i
D=HðÞVmed
i/C0D=HðÞRmed
i
Ejemplo:
Muestras de referencia suministradas y calibradas por la Oficina
Comunitaria de Referencia:
(D/H)iV
es= 102,0 ppm (D/H)iR
es= 91,95 ppm
Muestras de referencia medidas por el Laboratorio:
(D/H)iV
med= 102,8 ppm (D/H)iR
med= 93,0 ppm
Muestra sospechosa no corregida:
(D/H)iX
med= 100,2 ppm
Se calcul = 1,0255 y (D/H)iX
corr= 99,3 ppm
6. INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Comparar el valor RXobtenido para la relación R de la muestra
sospechosa con las relaciones obtenidas para los vinos testigo. Si
RXpresenta una desviación superior a 2 desviaciones-típicas del
valor medio RTobtenido para los vinos testigo, puede presumirse
una adulteración.
6.1.Aumentoartificialdelgradoalcohóliconaturalmedianteazúcar
deremolacha,azúcardecañaoglucosademaíz
6.1.1.Vinos
RXess uperior a RT: presunción de adición de azúcar de remolacha.
RXinferior a RT: presunción de adición de azúcar de caña o de
azúcar de maíz.
Obsérvese que (D/H)IIXy (D/H)WQXhan aumentado.
Examinar (D/H)IXhabrá presunción de:
— azucarado mediante azúcar de remolacha:
si el valor (D/H)IXde la muestra sospechosa es inferior a (D/H)IT,
valor medio obtenido de la muestras testigo, en más 1 desvia-
ción-típica.
— azucarado mediante azúcar de caña o azúcar de maíz;
si el valor (D/H)IXess uperior a (D/H)ITen másuna des viación-
típica.
— Cálculo del aumento artificial del grado alcohólico natural A,
expresado en % vol de etanol.
Aumento mediante azúcar de remolacha:
A % vol ¼gVD=HðÞT
I/C0D=HðÞX
I
D=HðÞT
I/C0D=HðÞR
I
(D/H)IR= 92,5 (1)relación isotópica de la posición I del
alcohol de remolacha.
gV= grado alcohólico del vino analizado (X)
— Aumento mediante azúcar de caña o de maíz:
A % vol ¼gVD=HðÞX
I/C0D=HðÞT
I
D=HðÞC
I/C0D=HðÞT
I
(D/H)IC= 110,5 (1)relación isotópica de la posición I del
alcohol de caña de azúcar o de maíz.
gV= grado alcohólico del vino analizado (X).1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 73
(1) Estos valores se dan a la espera de la constitución de un banco de datos comunitario.
▼B
6.1.2.Mostos, mostos concentrados y mostos concentrados rectificados
Los valores de los parámetros isotópicos del alcohol extraído según
3.1 del producto fermentado obtenido (3.2) a partir del mosto, del
mosto concentrado o del mosto concentrado rectificado, se examinan
de acuerdo con lasindicacionesdadasen el punto 6 «interpretación
de los resultados», 6.1.1, comparándolos con el alcohol extraído del
producto de fermentación de mostos naturales testigo.
El aumento artificial del grado alcohólico natural, A % vol, expresa
el volumen de alcohol añadido al producto fermentado. Conocida la
dilución eventual efectuada antesde la fermentación (mos tos
concentradosy mos tosconcentradosrectificados ), y admitiendo que
16,83 g de azúcar dan 1 % vol del alcohol, calcular la cantidad en
masa de azúcar añadida por litro de mosto, de mosto concentrado o
de mosto concentrado rectificado.
6.2.Aumentoartificialdelgradoalcohóliconaturalmediantemezcla
deazúcarderemolachayazúcardecañaodeglucosademaíz
Lasrelacionesis otópicas(D/H)Iy R están menos modificadas que en
el caso del aumento con 1 solo tipo de azúcar.
(D/H)IIy (D/H)WQaumentan.
Pueden confirmarse estas adiciones determinando la relación 13C/
12C del etanol por espectrometría de masa; en este caso, la relación
aumenta.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 74
▼B
9.CENIZAS
1. DEFINICIÓN
Se denominan cenizasal conjunto de losproductosres ultantesde la
incineración del residuo de evaporación del vino, llevada a cabo de
manera que se obtenga la totalidad de los cationes (excluido el
amonio) en forma de carbonato y otras sales minerales anhidras.
2. FUNDAMENTO DEL MÉTODO
Incineración del extracto del vino llevada a cabo entre 500 y 550 ºC
hasta la combustión total del carbono.
3. APARATOS
3.1. Baño de agua a 100 ºC.
3.2. Balanza con una sensibilidad de una décima de miligramo.3.3. Placa calefactora o evaporador de infrarrojos.
3.4. Horno eléctrico con regulación de temperatura.
3.5. Desecador.3.6. Cápsula de platino de 70 mm de diámetro y de 25 mm de altura, de
fondo plano.
4. PROCEDIMIENTO
Colocar 20 ml de vino en una cápsula de platino previamente tarada
(P
og). Evaporar al baño de agua a 100 ºC y calentar el residuo sobre
una placa calefactora a 200 ºC o bajo el evaporador de infrarrojos
hasta la carbonización. Cuando el residuo no emita vapores, colocar
la cápsula en el horno eléctrico a 525 ºC ± 25 ºC. Después de 15
minutosde carbonización, retirar la cáps ula del horno, añadir 5 ml
de agua destilada que se evaporan luego al baño de agua o bajo el
evaporador de infrarrojos, y calentar de nuevo a 525 ºC durante 10
minutos.
Si la combustión de las partículas de carbono no es total, volver a
realizar lasoperacionesde lavado, evaporación del agua e incinera-
ción.
Para los vinos ricos en azúcares, se recomienda añadir al extracto
algunasgotasde aceite vegetal puro antesde proceder a la primera
incineración, para impedir que se desborde el contenido.
Después de enfriar la cápsula en un desecador, se pesa. Se deno-
minará a este peso P1g.
El peso p en g de las cenizas contenidas será: p = (P1−Po)g .
5. EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS
5.1. Modo de cálculo
El peso P de las cenizas expresado en gramos por litro con dos deci-
maless erá: P = 50 · p.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 75
▼B
10.ALCALINIDADDELASCENIZAS
1. DEFINICIÓN
Se denomina alcalinidad de las cenizas a la suma de los cationes,
distintos del amonio, combinados con los ácidos orgánicos del vino.
2. FUNDAMENTO DEL MÉTODO
Valoración por retroceso en presencia de naranja de metilo, de las
cenizas solubilizadas en caliente por un exceso conocido de ácido
valorado.
3. REACTIVOS Y MATERIAL
3.1. Solución 0,05 M de ácido sulfúrico (H2SO4)
3.2. Solución 0,1 M de hidróxido sódico (NaOH)
3.3. Solución de naranja de metilo al 0,1 % en agua destilada.3.4. Baño de agua a 100 ºC.
4. PROCEDIMIENTO
Añadir a la cápsula de platino que contiene las cenizas de 20 ml de
vino, 10 ml de solución 0,05 M de ácido sulfúrico (3.1); colocarla al
baño de agua a 100 ºC durante 15 min aproximadamente, rascando
el residuo con una varilla de vidrio para activar la disolución.
Añadir, a continuación, 2 gotasde s olución de naranja de metilo y
valorar el exceso de ácido sulfúrico con la solución 0,1 M de hidró-
xido de sodio (3.2), hasta que el indicador vire al color amarillo.
5. EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS
Modo de cálculo
La alcalinidad de lascenizasexpres ada en miliequivalentespor litro
con 1 decimal, será:
A = 5 (10−n)
n = número de mililitrosde hidróxido s ódico 0,1 M.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 76
▼B
11.CLORUROS
1. FUNDAMENTO DEL MÉTODO
Loscloruross e determinan directamente en el vino por potencio-
metría utilizando el electrodo Ag/AgCl.
2. MATERIAL
2.1. pH metro con escala de milivoltios graduada al menos de 2 en 2 mV.2.2. Agitador magnético.
2.3. Electrodo Ag/AgCl con una solución saturada de nitrato potásico
como electrolito.
2.4. Microbureta graduada en centésimas de mililitro.
2.5. Cronómetro.
3. REACTIVOS
3.1. Solución patrón de cloruros: 2,1027 g de cloruro potásico, KCl
(máx. 0,005 % de Br), desecado antes de su empleo por coservación
durante algunos días en un desecador se disuelven en agua destilada
y se completa a 1 litro 1 ml de esta solución contiene 1 mg de Cl.
3.2. Solución valorada de nitrato de plata: 4,7912 g de nitrato de plata,
AgNo
3, para análisis, se disuelven y se enrasan a 1 litro con una
solución alcohólica al 10 % (v/v): 1 ml de esta solución corresponde
a 1 mg de Cl−.
3.3. Ácido nítrico puro al menosdel 65 % (dens idad ( ρ20= 1,40 g/ml).
4. PROCEDIMIENTO
4.1. 5,0 ml de solución patrón de cloruros se introducen en un vaso de
precipitadosde 150 ml colocado s obre un agitador magnético,
diluidosa 100 ml con agua des tilada y acidificadoscon 1,0 ml de
ácido nítrico del 65 % como mínimo. Se sumerje el electrodo en el
vaso de precipitados y se determina añadiendo por medio de la
microbureta la solución valorada de nitrato de plata, la agitación
debe ser moderada.
Lasadicionesefectuadass on inicialmente de 1,00 ml para loscuatro
primeros ml, leer los valores correspondientes en milivoltios.
Después se adicionan los 2 ml siguientes en fracciones de 0,20 ml.
Finalmente se siguen las adiciones por fracciones de 1 ml hasta
llegar a un total de 10 ml. Después de cada adición se esperan alre-
dedor de 30 segundos antes de efectuar la correspondiente lectura en
milivoltios. Llevar los valores obtenidos sobre papel milimetrado en
función de los mililitros de la solución patrón correspondiente y se
determina el potencial del punto de inflexión de la curva obtenida.
4.2. 5 ml de la solución patrón de cloruros se introducen en un vaso de
precipitadosde 150 ml. Se añaden 95 ml de agua des tilada y 1 ml de
ácido nítrico del 65 % como mínimo. Se sumerge el electrodo y se
valora, agitando, hasta la obtención del potencial del punto de equi-
valencia.
Esta determinación se repite hasta que se haya obtenido una buena
concordancia de resultados. Se debe efectuar este control antes de
cada serie de determinaciones de cloruros en las muestras.
4.3. Se introducen 50 ml del vino a analizar en un vaso de precipitados
de 150 ml. Se añaden 50 ml de agua destilada y 1 ml de ácido
nítrico del 65 % como mínimo y se valora siguiendo el procedi-
miento del punto 4.2.
5. EXPRESIÓN DE RESULTADOS5.1.Cálculos
Si n representa el número de mililitros de solución patrón de nitrato
de plata, el contenido en cloruros de la muestra analizada es:
20 × n expresado en miligramos de Cl por litro
0,5633 × n expresado en miliequivalentes por litro1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 77
▼B
32,9 × n expresado en miligramos de cloruro sódico por litro.
5.2.REPETIBILIDAD(r)
r = 1,2 mg Cl por litro,
r = 0,03 meq por litro,r = 2,0 mg NaCl por litro.
5.3.Reproductibilidad(R)
R = 4,1 mg de Cl por litro,
R = 0,12 meq por litro,R = 6,8 mg NaCl por litro.
6.Observación:
para determinacionesmuy precis asHay que referirse a la curva de calibrado completa obtenida durante
la valoración del patrón de cloruroscon la s olución patrón de nitrato
de plata.
a) Poner 50 ml del vino a analizar en un vaso de precipitados de
150 ml. Añadir 50 ml de agua destilada y 1 ml de ácido nítrico
al menosdel 65 %. Valorar por medio de la s olución de nitrato
de plata, procediendo a adicionesde 0,5 ml y anotando los
correspondientes potenciales en milivoltios. De esta primera valo-
ración se deduce el volumen aproximado de solución de nitrato
de plata necesario.
b) Comenzar la valoración en las mismas condiciones. Proceder
primero con adicionesde 0,5 ml valorando has ta que el volumen
empleado sea inferior en 1,5 a 2 ml del volumen empleado en a).
Proceder a adicionesde 0,2 ml, continuar lasadicioneslenta-
mente hasta el punto de equivalencia aproximadamente obtenido
de una manera simétrica, por adición de 0,2 ml después de 0,5 ml.
El punto final de la valoración y el volumen de nitrato de plata
consumido exactamente se obtiene:
— Trazando la curva y determinando el punto de equivalencia.
— Por cálculo:
V¼V
0þ∆Vi∆∆E1
∆∆E1þ∆∆E2
V = volumen de solución valorada en el punto de equiva-
lencia.
V′ = volumen de solución valorada antes del mayor salto
de potencial.
∆Vi= volumen constante de las fracciones de solución valo-
rada añadidas, o sea 0,2 ml.
∆∆E1= segunda diferencia de potencial antes de la mayor
variación de potencial.
∆∆E2= segunda diferencia de potencial después de la mayor
variación de potencial.
Ejemplo:
Volumen solución patrón de
AgNO3Potencial E DiferenciaSegunda
Diferencia
0 204
4
0,2 208 0
4
0,4 212 2
6
0,6 218 0
6
0,8 224 0
61990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 78
▼B
Volumen solución patrón de
AgNO3Potencial E DiferenciaSegunda
Diferencia
1,0 230 2
8
1,2 238 4
12
1,4 250 10
22
1,6 272 22
44
1,8 316 10
34
2,0 350 8
26
2,2 376 6
20
2,4 396
En el ejemplo el punto final de la valoración se sitúa entre 1,6 y
1,8 ml; en este intervalo aparece el mayor salto de potencial ( ∆
= 44 mV). El volumen de solución valorada en nitrato de plata
consumido para determinar los cloruros en la muestra a analizar es:
V¼1;6þ0;222
22þ10¼1;74 ml1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 79
▼B
12.SULFATOS
1. PRINCIPIO DE LOS MÉTODOS1.1.Métododereferencia
Precipitación del sulfato de bario y pesada. El fosfato de bario preci-
pitado en lasmis mascondicioneseseliminado por lavado del
precipitado con ácido clorhídrico.
En caso de mostos o vinos ricos en dióxido de azufre, está indicado
un desulfitado previo por ebullición al abrigo del aire.
1.2.Métodorápidodeensayo
Clasificación de los vinos en varias categorías por el método
llamado de los límites, basado en la precipitación del sulfato de
bario mediante una solución valorada de ion bario.
2. MÉTODO DE REFERENCIA
2.1.Soluciones(Reactivos)
2.1.1. Ácido clorhídrico, solución 2 M.2.1.2. Cloruro bárico en solución 200 g/l de BaCl
2,2 H2O.
2.2.Procedimiento
2.2.1.Caso general
Introducir en un tubo de centrifuga de 50 ml, 40 ml de la muestra a
analizar, añadir 2 ml de ácido clorhídrico 2 M y 2 ml de solución de
cloruro de bario de 200 g/l. Agitar con una varilla de vidrio, lavar la
varilla con un poco de agua destilada y dejar en reposo durante 5
minutosCentrifugar durante 5 minutosy decantar con precaución el
líquido sobrenadante.
Lavar el precipitado de sulfato bárico de la forma siguiente: añadir
10 ml de ácido clorhídrico 2 M poner el precipitado en suspensión y
centrifugar durante 5 minutos. Separar con precaución el líquido
sobrenadante. Repetir 2 veces el lavado del precipitado en las
mismas condiciones con 15 ml de agua destilada cada vez.
Trasvasar cuantitativamente el precipitado, lavando con agua desti-
lada, a una cápsula de platino tarada y colocada en un baño maría
a 100 ºC hasta evaporación a sequedad. El precipitado desecado se
calcina varias veces brevemente sobre una llama hasta la obtención
de un residuo blanco. Dejar enfriar en un desecador y pesar.
Sea m la masa en miligramos de sulfato de bario obtenida.
2.2.2.Caso particular: mostos sulfitados y vino con un contenido elevado
de anhídrido sulfuroso.
Proceder a la eliminación del anhídrido sulfuroso.
En un matraz cónico de 500 ml provisto de un embudo de decanta-
ción y de un tubo de salida de vapor, introducir 25 ml de agua y 1 ml
de ácido clorhídrico puro (densidad 20 º = 1,15 − 1,18 g/ml). Hacer
hervir para expulsar el aire, e introducir por el embudo de decanta-
ción 100 ml de vino manteniendo la ebullición.
Continuar la ebullición hasta que el volumen del líquido contenido
en el matraz se reduzca a unos 75 ml y se trasvasa cuantitativa-
mente, después de enfriar a un matraz aforado de 100 ml.
Completar el volumen con agua. Proceder a la valoración de los
sulfatos sobre una muestra de ensayo de 40 ml como se indica en
2.2.1.
2.3.Expresióndelosresultados
El contenido en sulfatos expresado en miligramos por litro de sulfato
de potasio SO4K2es:
18,67 × mEl contenido en sulfatos de mostos o vino se expresa en miligramos
por litro de sulfato de potasio, sin decimales.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 80
▼B
2.3.2.Repetitividad
Hasta 1 000 mg/l: r = 27 mg/l
Alrededor de 1 500 mg/l: r = 41 mg/l
2.3.3.Reproductividad
Hasta 1 000 mg/l: R = 51 mg/l
Alrededor 1 500 mg/l: R = 81 mg/l
3. MÉTODO RÁPIDO DE ENSAYO3.1.Reactivos
3.1.1. Solución patrón de cloruro bárico
2 804 g de cloruro bárico, BaCl
2,2 H2O y 10 ml de ácido clorhídrico
(densidad 20 º = 1,15 = 1,18 g/ml) se disuelven en una cantidad de
agua suficiente para obtener 1 litro de disolución, 1 ml de esta solu-
ción precipita una cantidad de ioness ulfato equivalente a 2 mg de
sulfato potásico.
3.1.2. Ácido sulfúrico (densidad 20 º = 1,84 g/ml) en solución diluida 1/10
(m/v).
3.2.Procedimiento
En tres tubos de ensayo, colocar 10 ml de mosto o vino, añadir al
primero 3,5 ml, al segundo 5 ml y al tercero 10 ml de la solución
de cloruro de bario. Agitar y llevar a ebullición, dejar reposar de 1
a 2 horas. El líquido de cada tubo, decantado, se filtra y se divide en
dos mitades. En la primera mitad se añaden unas gotas de ácido
sulfúrico, en la segunda mitad se añaden unas gotas de la solución
de cloruro de bario. Examinar la limpidez o la turbidez de cada
tubo. La conclusión se da en la siguiente tabla.
Vino Cloruro BáricoVino filtrado +
Ácido Sulfúrico
diluidoSolución de
Cloruro de Bario
1erensayo(ml) (ml) Turbidez Limpidez
10 3,5menos0,7 g/l K2SO4Limpidez Turbidez
másde 0,7 g/l K2SO4
2oensayo 10 5Turbidez Limpidez
menosde 1 g/l K2SO4Limpidez Turbidez
másde 1 g/l K2SO4
3erensayo 10 10Turbidez Limpidez
menosde 2 g/l K2SO4Limpidez Turbidez
másde 2 g/l K2SO41990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 81
▼B
13.ACIDEZTOTAL
1. DEFINICIÓN
La acidez total es la suma de los ácidos valorables cuando se lleva el
pH a 7 añadiendo una solución alcalina valorada.
El dióxido de carbono no se incluye en la acidez total.
2. FUNDAMENTO DEL MÉTODO
Valoración potenciométrica o valoración en presencia de azul de
bromotimol como indicador del final de reacción, mediante compa-
ración con un patrón de coloración.
3. REACTIVOS
3.1. Solución tampón de pH 7,0:
Fosfato monopotásico (KH2PO4): 107,3 g
Solución M de hidróxido sódico (NaOH): 500 mlAgua csp: 1 000 ml.
También pueden utilizarse las soluciones comerciales como solución
tampón de referencia.
3.2. Solución 0,1 M de hidróxido sódico (NaOH).3.3. Solución de azul de bromotimol de 4 g/l.
Azul de bromotimol (C
27H28Br2O5S)… ............. 4g
Alcohol neutro 96 % vol … ........................ 200 ml
Una vez solubilizado, añadir:
Agua sin CO2… ................................... 200ml
Solución M de hidróxido sódicocsp coloración verdeazulada (pH 7) …............. 7,5 ml
Agua csp …....................................... 1 000 ml
4. APARATOS
4.1. Trompa de vacío.4.2. Matraz kitasato de 500 ml.4.3. Potenciómetro con escala graduada en unidades de pH y electrodos.
El electrodo de vidrio debe conservarse en agua destilada. El elec-
trodo de calomelanos de cloruro potásico saturado debe conservarse
en una solución saturada de cloruro potásico. Generalmente se
emplea un electrodo combinado, que se conserva en agua destilada.
4.4. Vasos de precipitados de 50 ml de capacidad (en caso de vinos) y de
100 ml de capacidad (en caso de mostos concentrados rectificados).
5. PROCEDIMIENTO5.1.Preparacióndelamuestra
5.1.1.Vino
Eliminación del dióxido de carbono. Colocar aproximadamente 50 ml
de vino, en un matraz kitasato; agitar y, al mismo tiempo, hacer el
vacío con una trompa de agua. La agitación debe durar de 1 a 2
minutos.
5.1.2.Mosto concentrado rectificado
Verter 200 g de mosto concentrado rectificado, exactamente pesado
en un matraz aforado de 500 ml. Enrasar con agua. Homogeneizar.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 82
▼B
5.2.Valoraciónpotenciométrica
5.2.1.Calibrado del pH-metro
La calibración del pH-metro se efectúa a 20 ºC, siguiendo las indi-
caciones del aparato que se utilice, mediante la solución tampón de
pH 7,00 a 20 ºC.
5.2.2.Técnica de una medida
En un vaso de precipitados (4.4) verter 10 ml, si se trata de vino, o
50 ml, en el caso del mosto concentrado rectificado de muestra
preparada, como se indica en (5.1). Añadir 10 ml de agua destilada,
aproximadamente, y verter con una bureta la solución 0,1 M de
hidróxido sódico (3.2) hasta que el pH sea igual a 7 a 20 ºC. La
adición de la solución alcalina debe realizarse lentamente, agitando
constantemente la solución. Se denominará n al número de mililitros
de NaOH 0,1 M vertidos.
5.3.Valoraciónconindicador (azul de bromotimol)
5.3.1.Ensayo previo: obtención del patrón de coloración
En un vaso de precipitados (4.4), echar 25 ml de agua destilada y
hervida, 1 ml de solución de azul de bromotimol (3.3) y 10 ml si
se trata de vino o 50 ml en el caso del mosto concentrado rectificado
de muestra preparada como se indica en (5.1). Añadir la solución
0,1 M de hidróxido de sodio (3.2) hasta obtener una coloración
verdeazulada. Añadir 5 ml de la solución tampón pH 7 (3.1).
5.3.2.Determinación
En un vaso de precipitados (4.4), echar 30 ml de agua destilada y
hervida, 1 ml de solución de azul de bromotimol (3.3) y 10 ml si
se trata de vino o 50 ml en el caso del mosto concentrado rectificado
de muestra preparada como se indica en (5.1). Añadir la solución
0,1 M de hidróxido sódico (3.2) hasta obtener una coloración idén-
tica a la obtenida en el ensayo previo (5.3.1). Se denominará n al
número de mililitros de solución de hidróxido sódico 0,1 M utili-
zados.
6. EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS6.1.Métododecálculo
6.1.1.Vino
La acidez total, expresada en miliequivalentes por litro, será:A = 10 nSe dará con 1 decimal.
La acidez total, expresada en gramos de ácido tartárico por litro,
será:
A′= 0,075 · A
Se dará con 1 decimal.
6.1.2.Mostos concentrados rectificados
— Acidez total expresada en miliequivalentes por kilogramo de
mosto concentrado rectificado: a = 5 · n
— Acidez total expresada en miliequivalentes por kilogramo de
azúcarestotales :
A¼
500/C1n
P
P = contenido en % (m/m) de azúcarestotales .
Se dará con 1 decimal.
6.2.Repetibilidad(r):paralavaloraciónconindicador(5.3):
r = 0,9 meq por litro
r = 0,07 g de ácido tartárico por litro
para los vinos blancos, rosados y tintos.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 83
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6.3.Reproductibilidad(R):paralavaloraciónconindicador(5.3)
Para los vinos blancos y rosados:
R = 3,6 meq por litro
R = 0,3 g de ácido tartárico por litro.
Para losvinostintos :R = 5,1 meq por litro
R = 0,4 g de ácido tartárico por litro.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 84
▼B
14.ACIDEZVOLÁTIL
1. DEFINICIÓN
La acidez volátil está constituida por los ácidos grasos pertenecientes
a la serie acética que se encuentran en los vinos, bien en estado
libre, bien en estado salificado.
2. FUNDAMENTO DEL MÉTODO
Valoración de los ácidos volátiles separados del vino por arrastre de
vapor de agua y rectificación de losvapores .
Previamente, debe eliminarse el dióxido de carbono del vino.La acidez del dióxido de azufre libre y combinado destilado en
dichas condiciones debe restarse de la acidez del destilado.
Debe restarse, asimismo, la acidez del ácido sórbico eventualmente
añadido al vino.
Nota:El ácido salicilico que en algunos países se utiliza para estabilizar
los vinos antes del análisis, se encuentra en parte en el destilado.
Es necesario valorarlo y restarlo de la acidez. El método de esta
determinación está en el apartado 7 de este capítulo.
3. REACTIVOS
3.1. Ácido tartárico cristalizado (C
4H6O6)
3.2. Solución 0,1 M de hidróxido sódico (NaOH)
3.3. Solución de fenolftaleína al 1 % en alcohol neutro de 96 % vol3.4. Ácido clorhídrico ( ρ
20= 1,18 a 1,19 g/ml) diluido 1/4 (v/v)
3.5. Solución 0,005 M de yodo (I2)
3.6. Yoduro potásico cristalizado (Kl)3.7. Engrudo de almidón de 5 g/l:
Diluir 5 g de almidón en 500 ml de agua, aproximadamente. Llevar
a ebullición agitando y mantenerla durante 10 minutos; añadir 200 gde cloruro sódico. Una vez frío enrasar hasta 1 litro.
3.8. Solución saturada de borato sódico (Na
2B4O7·1 0H2O) esdecir,
aproximadamente 55 g/l a 20º C.
4. APARATOS
4.1. Aparato de arrastre de vapor de agua, compuesto de:
1) Un generador de vapor de agua; el vapor de agua producido debe
estar exento de dióxido de carbono.
2) Un borboteador.3) Una columna rectificadora.4) Un refrigerante.
Este aparato debe responder a los tres ensayos siguientes:
a) Poner en el borboteador 20 ml de agua hervida; recoger
250 ml de destilado y añadirles 0,1 ml de solución 0,1 M de
hidróxido sódico (3.2) y 2 gotas de la solución de fenolfta-
leína (3.3); la coloración rosa debe permanecer estable
durante 10 segundos, por lo menos (vapor de agua exento de
dióxido de carbono).
b) Poner en el borboteador 20 ml de solución 0,1 M de ácido
acético. Recoger 250 ml de destilado. Valorar con la solución
0,1 M de hidróxido sódico (3.2). El volumenempleado deberá
ser igual a 19,9 ml, como mínimo. (Ácido acético arrastrado
≥99,5 %.)
c) Poner en el borboteador 20 ml de solución M de ácido láctico.
Recoger 250 ml de destilado y valorar su acidez con una solu-
ción 0,1 M de hidróxido sódico (3.2).
El volumen empleado debe ser inferior o igual a 1,0 ml.
(Ácido láctico destilado ≤0,5 %.)1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 85
▼B
Todo aparato o técnica que satisfaga estos tres ensayos consti-
tuye un aparato o una técnica oficial internacional.
4.2. Trompa de vacío.4.3. Matraz kitasato.
5. PROCEDIMIENTO
5.1.Preparacióndelamuestra: eliminación del dióxido de carbono.
Poner alrededor de 50 ml de vino en un matraz kitasato; agitar y, al
mismo tiempo, hacer el vacío por medio de la trompa de agua. La
agitación debe durar de 1 a 2 minutos
5.2.Arrastreporvapordeagua
Echar en el borboteador 20 ml de vino desprovisto de carbónico
como se indica en (5.1). Añadir 0,5 g de ácido tartárico (3.1) apro-
ximadamente. Recoger, por lo menos, 250 ml de destilado.
5.3.Valoración
Valorar con la solución 0,1 M de hidróxido sódico (3.2) en presencia
de 2 gotasde s olución de fenolftaleína (3.3). Se denominará n ml al
volumen utilizado.
Añadir 4 gotasde ácido clorhídrico diluido 1/4 (3.4), 2 ml de
engrudo de almidón (3.7) y algunos cristales de yoduro de potasio
(3.6). Valorar el dióxido de azufre libre con la solución 0,005 M de
yodo (3.5). Se denominará n ′ml al volumen utilizado.
Añadir la solución saturada de borato sódico (3.8) hasta que reapa-
rezca la coloración rosa. Valorar el dióxido de azufre combinado con
la solución 0,005 M de yodo (3.5). Se denominará n ″ml al volumen
utilizado.
6. EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS
6.1.Métododecálculo
La acidez volátil, expresada en miliequivalentes por litro, con 1
decimal, será:
A = 5 (n − 0,1 n ′− 0,05 n ″)
La acidez volátil, expresado en granos de ácido acético por litro, con
2 decimales, será:
0,300 (n − 0,1 n ′− 0,05 n ″)
6.2.Repetibilidad(r)
r = 0,7 meq por litro
r = 0,04 g de ácido acético por litro.
6.3.Reproductibilidad(R)
R = 1,3 meq por litro
R = 0,08 g de ácido acético por litro.
6.4.Casodeunvinoconadicióndeácidosórbico
Dado que el ácido sórbico se arrastra por vapor de agua en un 96 %
para un volumen de destilado de 250 ml, su acidez debe restarse de
la acidez volátil, sabiendo que 100 mg de ácido sórbico corres-
ponden a una acidez de 0,89 miliequivalenteso de 0,053 g de
ácido acético y conociendo el contenido en ácido sórbico (mg/l)
determinado previamente.
7. DETERMINACIÓN DEL ÁCIDO SALICÍLICO QUE SE HALLA
EN EL DESTILADO UTILIZADO PARA VALORAR LA ACIDEZ
VOLÁTIL
7.1.Fundamento
Una vez efectuada la determinación de la acidez volátil y la correc-
ción del dióxido de azufre, la presencia de ácido salicílico se1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 86
▼B
caracteriza por la aparición, previa acidificación, de una coloración
violeta trashaber añadido una s al de hierro III.
La determinación del ácido salicílico que se halla en el destilado se
efectuará con un segundo destilado cuyo volumen sea igual al del
utilizado para determinar la acidez volátil. En este destilado, el
ácido salicílico se determinará mediante un método colorimétrico
de comparación y se restará de la acidez volátil.
7.2.Reactivos
7.2.1. Ácido clorhídrico (HCl) ( ρ20= 1,18 a 1,19 g/ml).
7.2.2. Tiosulfato sódico (Na2S2O3·5H2O) 0,1 M.
7.2.3. Solución de sulfato de hierro III y de amonio (Fe2(SO4)3· (NH4)2SO4·2 4H2O) al 10 % (m/v).
7.2.4. Solución de salicilato de sodio (Na C7H5O3) 0,01 M que contenga
1,60 g/l.
7.3.Procedimiento
7.3.1.Caracterización del ácido salicílico en el destilado de la acidez
volátil
Inmediatamente después de haber efectuado la determinación de la
acidez volátil y la corrección del dióxido de azufre libre y combi-
nado, verter en el matraz erlenmeyer 0,5 ml de ácido clorhídrico
(7.2.1), 3 ml de solución 0,1 M de tiosulfato sódico (7.2.2) y 1 ml
de solución de sulfato de hierro III y de amonio (7.2.3).
En presencia de ácido salicílico, aparece una coloración violeta.
7.3.2.Determinación del ácido salicílico
En el matraz erlenmeyer anterior, indicar mediante una señal de
referencia el volumen del destilado. Vaciar y enjuagar el matraz.
Someter una nueva toma de ensayo de 20 ml de vino al arrastre por
vapor de agua y recoger el destilado en el matraz erlenmeyer hasta
la señal de referencia. Añadir 0,3 ml de ácido clorhídrico puro
(7.2.1) y 1 ml de solución de sulfato de hierro III y de amonio
(7.2.3). El contenido del matraz erlenmeyer adquiere una coloración
violeta.
En un matraz erlenmeyer idéntico al de la señal de referencia, verter
agua destilada hasta el mismo nivel que el del destilado. Añadir
0,3 ml de ácido clorhídrico puro (7.2.1), 1 ml de solución de sulfato
de hierro III y de amonio (7.2.3). Verter con una bureta la solución
de salicilato sódico 0,01 M (7.2.4) hasta que se obtenga una colora-
ción violeta de la misma intensidad que la del matraz erlenmeyer
que contiene el destilado de vino.
Se denominará n ″al número de mililitrosutilizados .
7.4.Correccióndelaacidezvolátil
Restar el volumen 0,1 · n /tripleprimeen ml, del volumen n, en ml de solución
de hidróxido sódico 0,1 M utilizado para valorar la acidez del desti-
lado en una determinación distinta de la de la acidez volátil.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 87
▼B
15.ACIDEZFIJA
1. FUNDAMENTO
La acidez fija se determina por la diferencia entre la acidez total y la
acidez volátil.
2. EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS
La acidez fija se expresa en:
— miliequivalentespor litro,
— gramosde ácido tartárico por litro.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 88
▼B
16.ÁCIDOTARTÁRICO
1. FUNDAMENTO DE LOS MÉTODOS1.1.Métododereferencia
El ácido tartárico precipitado en forma de racemato de calcio, se
determina gravimétricamente. Esta determinación puede completarse
con una determinación volumétrica de comparación. Lascondiciones
de precipitación: pH, volumen total empleado, concentración de los
ionesque precipitan, s on talesque el racemato cálcico precipita
totalmente mientrasque el D(−) tartrato de calcio queda en s olución.
Cuando se haya añadido al vino ácido metatartárico (lo que hace que
la precipitación del racemato de calcio sea incompleta), deberá
hidrolizarse previamente.
1.2.Métodousual
El ácido tartárico, aislado mediante una columna cambiadora de
aniones, se determina por espectrofotometría en el eluido por la
coloración roja que da con el ácido vanádico. Este eluido contiene
asimismo ácidos láctico y málico, que no interfieren.
2. MÉTODO DE REFERENCIA2.1.Métodogravimétrico
2.1.1.Reactivos
2.1.1.1. Solución de acetato cálcico que contenga 10 g/l de calcio:
Carbonato de calcio puro: (Ca CO
3)… ................ 25 g
Ácido acético (CH3COOH) ( ρ20= 1,05 g/ml) …....... 40 ml
Agua csp ….......................................... 1 l
2.1.1.2. Racemato de calcio cristalizado: (CaC4O6H4·4 H2O):
En un vaso de precipitados de 400 ml introducir 20 ml de una solu-
ción de ácido L(+) tartárico de 5 g/l, 20 ml de una solución de D(−)
tartrato amónico de 6,126 g/l y 6 ml de la solución de acetato
cálcico de 10 g de calcio por litro (2.1.1.1).
Dejar que precipite durante doshoras . Recoger el precipitado en un
crisol filtrante de porosidad no4, lavarlo tresvecescon 30 ml de
agua destilada. Secar en estufa a 70 ºC hasta lograr un peso cons-
tante. Con las cantidades de reactivos empleados, se obtienen
aproximadamente 340 mg de racemato de calcio cristalizado, con 4
moléculasde agua.
Conservar en un frasco tapado.
2.1.1.3. Licor de precipitación (pH: 4,75):
— Ácido D(−) tartárico … ......................... 122mg
— Solución de hidróxido de amonio 25 %
(ρ20= 0,97 g/ml) diluido al 25 % (v/v) …...... 0,3 ml
— Solución de acetato de calcio de 10 g de calcio
por litro........................................ 8,8 ml
— Agua csp … .................................... 1000ml
Disolver el ácido D(−) tartárico y añadir el hidróxido amónico,
llevar el volumen aproximadamente a 900 ml con agua; añadir
8,8 ml de solución de acetato cálcico (2.1.1.1), llevar hasta el litro
y ajustar el pH a 4,75 con ácido acético. Al ser el racemato cálcico
ligeramente soluble en este licor, es conveniente añadir 5 mg de
racemato de calcio por litro, agitar durante 12 horas(una noche) y
filtrar.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 89
▼B
2.1.2.Procedimiento
2.1.2.1. Vinosa losque no s e ha añadido ácido metatartárico
En un vaso de precipitados de 600 ml, echar 500 ml de licor de
precipitación y 10 ml de vino. Mezclar y ayudar la precipitación
frotando lasparedesdel vas o con la extremidad de una varilla de
vidrio. Dejar precipitar durante 12 horas(una noche).
Filtrar en el crisol filtrante de porosidad no4 tarado y colocado sobre
un kitasato, arrastrando el precipitado. Lavar el vaso donde se ha
realizado la precipitación con el filtrado y arrastrar las últimas partí-
culasde precipitado.
Secar en estufa a 70 ºC hasta lograr un peso constante. Pesar: se
denominará p al peso del racemato de calcio, CaC4O6H4cristalizado
con 4 moléculasde agua.
2.1.2.2. Vinosa losque s e ha añadido ácido metatartárico
Cuando se trate de un vino al que se haya añadido ácido metatar-
tárico o se suponga que ha habido tal adición, se procederá a la
hidrólisis de este ácido en las condiciones siguientes:
En un erlenmeyer de 50 ml, echar 10 ml de vino y 0,4 ml de ácido
acético puro (CH3COOH, ρ20= 1,05 g/ml). Cerrar el erlenmeyer con
un tapón provisto de un escape y llevar a ebullición durante 30
minutos. Una vez frío, pasar el líquido del erlenmeyer a un vaso de
precipitados; enjuagar el erlenmeyer 2 veces con 5 ml de agua y
continuar como se indica en el procedimiento anterior.
El ácido metatartárico se expresa como ácido tartárico en el resul-
tado de la determinación.
2.1.3.Expresión de los resultados
Una molécula de racemato cálcico corresponde a 1/2 molécula de
ácido (L+) tartárico del vino.
La cantidad de ácido tartárico por litro de vino será:384,5 p, expresada en miliequivalentes,28,84 p, expresada en gramos de ácido tartárico,
36,15 p, expresada en gramos de tartrato ácido de potasio.
Se dará con un decimal.
2.2.Determinaciónvolumétricadecomparación
2.2.1.Reactivos
2.2.1.1. Ácido clorhídrico (CIH) ( ρ
20= 1,18 a 1,19 g/ml) diluido a 1/5 (v/v).
2.2.1.2. Solución de EDTA, 0,05 M:
— EDTA (sal disódica bihidratada del ácido etilen-
diaminotetracético (C10H14N2O8Na2·2 H2O) ….... 18,61 g
— Agua destilada csp: …........................... 1 000 ml
2.2.1.3. Solución de hidróxido sódico al 40 % (m/v):
Hidróxido sódico (NaOH) … .......................... 40 g
Agua destilada csp … ................................. 100 ml
2.2.1.4. Indicador complexométrico del EDTA. 1 % (m/m):
Ácido calcon carbónico o ácido 2-hidroxi-4-sulfo-1-nafti-
lazo-3-naftoico (C21H14N2O7S·3 H2O) …................... 1g
Sulfato sódico anhidro (Na2SO4)…........................ 100g
2.2.2.Procedimiento
Después de pesado se vuelve a colocar el crisol con el precipitado de
racemato de calcio en el matraz de vacío y se disuelve el precipitado
en 10 ml de ácido clorhídrico diluido (2.2.1.1). Lavar el crisol
filtrante con 50 ml de agua destilada.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 90
▼B
Añadir 5 ml de hidróxido sódico al 40 % (2.2.1.3) y unos 30 mg del
indicador (2.2.1.4). Valorar con EDTA 0,05 M (2.2.1.2). Se deno-
minará n al número de mililitrosempleados .
2.2.3.Expresión de resultados
La cantidad de ácido tartárico por litro de vino expresado en milie-
quivalentesesigual a: 5 n.
El resultado se dará con 1 decimal.
La cantidad de ácido tartárico por litro de vino, expresado en gramos
de ácido tártrico esigual a: 0,375 n.
El resultado se dará con 1 decimal.
La cantidad de ácido tartárico por litro de vino, expresado en gramos
de tartrato ácido de potasio es igual a: 0,470 n.
El resultado se dará con 1 decimal.
3. MÉTODO USUAL3.1.Reactivos
3.1.1.Para el tratamiento preliminar del vino
3.1.1.1. Ácido acético (CH
3COOH, ρ20= 1,05 g/ml) diluido al 30 % (v/v).
3.1.1.2. Intercambiador de anionesde fuerte bas icidad (por ejemplo, inter-
cambiador de anionesIII de Merck de 20 a 50 mallas ) en forma de
acetato. Preparar una suspensión con el intercambiador (100 g apro-
ximadamente) en 200 ml de ácido acético diluido al 30 %
(3.1.1.1).Mantener en contacto durante 24 horas, como mínimo,
antes de su utilización. Conservar el intercambiador en ácido acético
diluido al 30 % para posteriores determinaciones.
3.1.1.3. Ácido acético (CH3COOH, ρ20= 1,05 g/ml) diluido al 0,5 % (v/v).
3.1.1.4. Solución de sulfato sódico (Na2SO4) al 7,1 g/100 ml (0,5 M).
Disolver 71 g de sulfato sódico anhidro (Na2SO4) en agua destilada
hasta alcanzar un volumen de 1 000 ml.
3.1.2.Para la determinación del ácido tartárico
3.1.2.1. Solución de acetato de sodio (NaCH3COO) al 27 % (m/v).
Disolver 270 g de acetato de sodio anhidro (NaCH3COO) en agua
destilada hasta alcanzar un volumen de 1 000 ml.
3.1.2.2. Reactivo vanádico
Disolver 10 g de metavanadato amónico (NH4VO3) en 150 ml de
solución de hidróxido sódico M (3.1.2.10). Pasar esta solución a un
matraz aforado de 500 ml y añadir 200 ml de solución de acetato de
sodio al 27 % (3.1.2.1). Enrasar a 500 ml con agua destilada.
3.1.2.3. Solución de H2SO41M .
3.1.2.4. Solución 0,5 M de H2SO4.
3.1.2.5. Solución 0,05 M de H2SO4.
3.1.2.6. Solución de ácido peryódico 0,05 M.
En un matraz aforado de 1 000 ml, introducir 10,696 g de peryodato
sódico (NaIO4), 50 ml de ácido sulfúrico 0,5 M (3.1.2.4) y añadir
agua destilada hasta obtener 1 000 ml.
3.1.2.7. Solución de glicerol al 10 % (m/v).
En un matraz aforado de 100 ml poner 10 g de glicerol (C3H8O3)y
añadir agua destilada hasta obtener 100 ml.
3.1.2.8. Solución de sulfato sódico al 7,1 g p. 100 ml (véase 3.1.1.4).
3.1.2.9. Solución de ácido tartárico (C4H6O5) de 1 g/l.
En un matraz aforado de 500 ml, poner 0,5 g de ácido tartárico,
6,66 ml de solución de hidróxido sódico M (3.1.2.10) y enrasar a
500 ml con la solución de sulfato de sodio al 7,1 % (3.1.1.4).
3.1.2.10. Solución de hidróxido sódico (NaOH) 1 M.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 91
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3.2.Aparatos
3.2.1. Columna de vidrio de 300 mm de longitud, aproximadamente, y de
10 a 11 mm de diámetro interior, provista de una llave.
3.2.2. Espectrofotómetro que permita medir la absorbancia a una longitud
de onda de 490 nm, con cubetasde 10 mm de recorrido óptico.
3.3.Procedimiento
3.3.1.Preparación de la columna intercambiadora de iones
Poner en la columna de vidrio un tapón de lana de vidrio por encima
de la llave (3.2.1). Impregnar el tapón con agua destilada. Verter en
la columna 10 ml de suspensión de intercambiadorde iones en fase
de acetato (3.1.1.2). Dejar decantar. Colocar un tapón de lana de
vidrio en la superficie del intercambiador depositado (para evitar
que, en posteriores lavados, el intercambiador vuelva a formar una
suspensión).
El intercambiador sólo deberá utilizarse una vez.
3.3.2.Aislamiento de los ácidos orgánicos
Con la llave abierta, dejar que salga la solución de ácido acético
hasta que rebase aproximadamente 2 a 3 mm del tapón de lana de
vidrio, colocado por encima del intercambiador.
Añadir 10 ml de solución de ácido acético al 0,5 % (3.1.1.3) y dejar
que salga el líquido hasta que llegue al mismo nivel de la vez ante-
rior. Repetir 4 vecesmásla operación de lavado.
Trasel último lavado, con la llave cerrada, verter s obre el intercam-
biador 10 ml de vino o de mosto. Dejar salir el vino gota a gota (a
razón de 1 gota por segundo) e interrumpir la salida cuando el
líquido se halle justo por encima del intercambiador. Volver a añadir
en la columna 10 ml de solución de ácido acético al 0,5 % (3.1.1.3),
dejar salir a la misma velocidad que la vez anterior y repetir el
lavado otras7 vecescon 10 ml de agua cada vez. En el último
lavado, cerrar la llave en cuanto el nivel del líquido se halle un
poco por encima del tapón superior de lana de vidrio.
Eluir los ácidos fijados sobre el intercambiador con la solución de
sulfato sódico al 7,1 % (3.1.1.4); recoger el eluido en un matraz
aforado de 100 ml hasta el enrase.
3.3.3.Determinación del ácido tartárico
3.3.3.1. Vinosa losque no s e ha añadido ácido metatartárico.
Introducir 20 ml de eluido en 2 matraceserlenmeyer « a»y«b».
El matraz erlenmeyer « a» sirve para efectuar la determinación, el
matraz erlenmeyer « b», en el que el ácido tartárico esdes truido por
el ácido peryódico, sirve de testigo.
Echar en el matraz erlenmeyer « a»:
— 2 ml de H2SO4M (3.1.2.3),
— 5 ml de H2SO40,05 M (3.1.2.5),
— 1 ml de glicerol al 10 % (3.1.2.7).
Echar en el matraz erlenmeyer « b»:
— 2 ml de H2SO4M (3.1.2.3),
— 5 ml de solución de ácido peryódico 0,05 M (3.1.2.6).
Esperar 15 minutos. Añadir:
1 ml de solución de glicerol al 10 % (3.1.2.7) para destruir el exceso
de ácido peryódico.
Esperar 2 minutos.
Verter entonces, agitando, primero en el matraz erlenmeyer « b», y
acto seguido en el matraz « a», 5 ml de reactivo vanádico (3.1.2.2).
Poner en marcha inmediatamente un cronómetro y colocar el conte-
nido de losmatraces« a»y«b» en lascubetasdel es pectrofotómetro.
Al cabo de 90 segundos medir la absorbancia, a 490 nm, del líquido
procedente del matraz erlenmeyer « a» (determinación), con relación
al testigo (matraz « b»). Si el eluido contiene mucho ácido tartárico y
por consiguiente la absorbancia es muy elevada, diluir el eluido con
la solución de sulfato sódico al 7,1 % y proceder a la medida de la
solución diluida.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 92
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3.3.3.2. Vinosa losque s e ha añadido ácido metatartárico.
Cuando se trate de un vino al que se ha añadido ácido metatartárico
o se suponga que ha habido tal adición, se procederá a la hidrólisis
de ese ácido tal como se indica para el método de referencia.
Una vez frío, se vierte el contenido del matraz erlenmeyer, así como
el agua de lavados(2 vecescon 5 ml cada vez), en la parte s uperior
de la columna de intercambiador. Continuar como se ha indicado
antes.
El ácido metatartárico está incluido como ácido tartárico en el resul-
tado de la determinación.
3.3.4.Obtención de la curva patrón
Verter 10, 20, 30, 40 y 50 ml de solución de ácido tartárico de 1 g/l
(3.1.2.9) en matraces aforados de 100 ml y enrasar con la solución
de sulfato de sodio al 7,1 % (3.1.1.4). Las concentraciones de estas
soluciones corresponden en las condiciones de trabajo a contenidos
en el vino de 1, 2, 3, 4y5gd e ácido tartárico por litro.
En 2 matraceserlenmeyer « a»y«b», verter 20 ml de estas solu-
cionesy continuar como s e ha indicado anteriormente para el
eluido de vino.
La representación gráfica de las absorbancias de estas soluciones en
función del contenido en ácido tartárico esuna recta que s e curva
ligeramente hacia el punto cero. Si fuera necesario precisar esta
parte de la curva, medir soluciones cuyo contenido sea inferior a
1,0 g/l.
3.3.5.Expresión de los resultados
Llevar a la curva patrón la absorbancia resultante de medir el eluido,
para obtener el contenido del vino en ácido tartárico expresado en
gramospor litro.
El contenido se indicará con 1 decimal.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 93
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17.ACIDOCÍTRICO
1. FUNDAMENTO DEL MÉTODO
El ácido cítrico se transforma en oxaloacetato y acetato en una reac-
ción catalizada por la citrato-liasa (CL):
citrato
 oxaloacetato + acetato
En presencia de malato-deshidrogenasa (MDH) y de lactato-deshi-
drogenasa (LDH), el oxaloacetato y su derivado de decarboxilación,
el piruvato, se reducen en L-malato y L-lactato por la nicotinamida-
adenina-dinucleótida reducida (NADH):Oxaloacetato + NADH + H+
L-malato + NAD+
Piruvato + NADH + H+
L-lactato + NAD+
La cantidad de NADH oxidada a NAD+en estas reacciones es
proporcional al citrato presente. La oxidación de la NADH se mide
mediante la disminución de su absorbancia a una longitud de onda
de 340 nm.
2. REACTIVOS
2.1. Tampón pH 7,8
(glicilglicina 0,51 M; pH = 7,8; Zn2+: 0,6 · 10−3M):
disolver 7,13 g de glicilglicina en 70 ml, aproximadamente, de agua
bidestilada; ajustar el pH a 7,8 con 13 ml, aproximadamente, de
solución de hidróxido de sodio 5 M; añadir 10 ml de solución de
cloruro de cinc ZnCl2de 80 mg en 100 ml y enrasar hasta 100 ml
con agua bidestilada.
La solución permanecerá estable durante 4 semanas, por lo menos, a
+ 4 ºC.
2.2. Solución de nicotinamida-adenin-dinucleótido reducida (NADH)
(aproximadamente 6 · 10−3M); disolver 30 mg de NADH y 60 mg
de NaHCO3con 6 ml de agua bidestilada.
2.3. Solución de malato-deshidrogenasa/lactato-deshidrogenasa (MDH/
LDH), (0,5 mg MDH/ml; 2,5 mg LDH/ml): se hace una mezcla de
0,1 ml MDH (5 mg MDH/ml) / 0,4 ml de solución de sulfato de
amonio (3,2 M) y 0,5 ml LDH (5 mg/ml). Esta solución semantendrá estable durante 1 año, por lo menos, a + 4 ºC.
2.4. Citrato-liasa CL (5 mg de proteína/ml). Disolver 168 mg de liofili-
zado en 1 ml de agua muy fría. La solución es estable por lo menos
durante 1 semana a + 4 ºC y durante 4 semanas congelada.
Antesde la determinación, s e recomienda proceder a la comproba-
ción de la actividad de la enzima.
2.5. Polivinil polipirrolidona (PVPP)
Nota:
El conjunto de estos reactivos se comercializan preparados.
3. MATERIAL
3.1. Espectrofotómetro que permita efectuar medidas a 340 nm, máximo
de absorción de la NADH.
En su defecto, fotómetro de espectro discontinuo que permita efec-
tuar medidasa 334 nm o a 365 nm. Dado que s e trata de medidas
absolutas de absorbancia (no existe gama de contraste, sino refe-
rencia al coeficiente de extinción de la NADH), deben controlarse
lases calasde laslongitudesde onda y de lasabs orbanciasdel
aparato.
3.2. Cubetasde vidrio de 1 cm de trayecto óptico o cubetasde us o único.
3.3. Micropípetasque permitan tomar volúmenescomprendidosentre
0,02 ml y 2 ml.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 94
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4. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
La determinación del citrato se efectúa directamente sobre el vino
sin decoloración previa y sin dilución, siempre que el contenido en
ácido cítrico sea inferior a 400 mg/l. Si no, proceder a la dilución
del vino de forma que la concentración de citrato se sitúe entre 20
y 400 mg/l (cantidad de citrato en la muestra comprendida entre
5 µg y 80 µg).
En el caso del vino tinto rico en compuestos fenólicos, se reco-
mienda tratarlo previamente con PVPP:
poner en suspensión en el agua alrededor de 0,2 g de PVPP y dejar
reposar 15 minutos. Filtrar sobre filtro de pliegues.
Añadir a 10 ml de vino colocado dentro de un erlenmeyer de 50 ml,
el PVPP húmedo extraído con la espátula del filtro. Agitar durante 2
a 3 minutosy filtrar.
5. PROCEDIMIENTO
Se ajusta la longitud de onda del espectrofotómetro a 340 nm y se
realizan lasmedidasde abs orbancia en cubetasde 1 cm, habiendo
ajustado el cero de absorbancia con respecto al aire (sin cubetas en
el trayecto óptico). Introducir en cubetasde 1 cm:
Testigo Muestra
Solución 2.1 1,00 ml 1,00 ml
Solución 2.2 0,10 ml 0,10 ml
Muestra — 0,20 ml
Agua bidestilada 2,00 ml 1,80 ml
Solución 2.3 0,02 ml 0,02 ml
Mezclar; transcurridos unos 5 minutos, leer las absorbancias de las
soluciones testigo y muestra (A1).
Añadir:
Solución 2.4 0,02 ml 0,02 ml
Mezclar; esperar a que finalice la reacción (unos 5 minutos) y leer
las absorbancias de las soluciones testigo y muestra (A2).
Determinar lasdiferenciasde abs orbancias(A1−A2) del testigo y de
la muestra.
Restar la diferencia de absorbancias del testigo de la diferencia de
absorbancias de la muestra:
∆A= ∆AM−∆AT
Nota:
El tiempo necesario para la acción de las enzimas puede variar de un
lote a otro. Únicamente se ha dado a título indicativo. Se recomienda
determinarlo para cada lote.
6. EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS
El contenido en ácido cítrico se expresa en miligramos por litro (mg/
l) sin decimales.
6.1.Métododecálculo
La concentración en miligramospor litro viene dada por la fórmula
general:
C¼V/C1PM
ε/C1d/C1v/C1∆A
Según las condiciones operatorias expresadas en el punto 5 serían:
V = volumen total en ml (3,14 ml)
V = volumen de la muestra en ml (0,2 ml)1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 95
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P M = masa molecular de la sustancia que va a determinarse
(ácido cítrico anhidro = 192,1)
d = trayecto óptico de la cubeta en cm (1 cm)
ε= coeficiente de extinción del NADH:
a 340 nm, ε= 6,3 mmol−1·l·c m−1.
Se obtiene:
C = 479 · ∆A
Si al preparar la muestra se ha efectuado una dilución, multiplicar el
resultado por el factor de dilución.
Nota:
a 334 nm: C = 488 · ∆A(ε= 6,2 mmol−1·l·c m−1)
a 365 nm: C = 887 · ∆A(ε= 3,4 mmol−1·l·c m−1)
6.2.Repetibilidad(r):
Contenido en ácido cítrico inferior a 400 mg/l: r = 14 mg/lContenido en ácido cítrico superior a 400 mg/l: r = 28 mg/l
6.3.Reproductibilidad(R):
Contenido en ácido cítrico inferior a 400 mg/l: R = 39 mg/l.
Contenido en ácido cítrico superior a 400 mg/l: R = 65 mg/l.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 96
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18.ÁCIDOLÁCTICO
1. FUNDAMENTO DE LOS MÉTODOS1.1.Métododereferencia:
En presencia de nicotinamida-adenin-dinucleótido (NAD), el ácido
láctico total (L-lactato y D-lactato) se oxida a piruvato en una reac-
ción catalizada por L-lactato deshidrogenasa (L-LDH) y D-lactato
deshidrogenasa (D-LDH).
El equilibrio de la reacción está desplazado en el sentido del lactato.
La eliminación del piruvato del medio de reacción desplaza el equi-
librio hacia la formación de piruvato.
En presencia de L-glutamato, el piruvato se transforma en L-alanina
en una reacción catalizada por la glutamato-piruvato-transaminasa
(GPT)
(1)L-lactato + NAD
+
piruvato + NADH + H+
(2)D-lactato + NAD+
piruvato + NADH + H+
(3)Piruvato + L-glutamato
 L-alanina + a cetogluta-
rato
La formación de NADH, medida por el aumento de la absorbancia a
una longitud de onda de 340 nm, esproporcional a la cantidad de
lactato presente.
Nota:El ácido L-láctico puede determinarse individualmente mediante las
reacciones(1) y (3).
El ácido D-láctico puede determinarse individualmente mediante las
reacciones(2) y (3).
1.2.Métodousual:
El ácido láctico, separado en una columna de resina cambiadora de
aniones, es oxidado a etanal y se determina por colorimetría después
de reaccionar con nitroprusiato y piperidina.
2. MÉTODO DE REFERENCIA2.1.Reactivos
2.1.1. Solución tampón pH 10 (glicilglicina 0,6 moles/l; L-glutamato
0,1 moles/l).
Disolver 4,75 g de glicilglicina, 0,88 g de ácido L-glutámico en unos
50 ml de agua bidestilada; ajustar el pH a 10 con solución de hidró-
xido de sodio 10 M y llevar a 60 ml con agua bidestilada.
La solución permanece estable por lo menos 12 semanas a + 4 ºC.
2.1.2. Solución de nicotinamida-adenin-dinucleótido (NAD) de alrededor
de 40 · 10
−3M; disolver 900 mg de NAD en 30 ml de agua bidesti-
lada. La solución permanece estable por lo menos 4 semanas a + 4 ºC.
2.1.3. Suspensión de glutamato-piruvato-transaminasa (GPT) de 20 mg/ml.
La suspensión es estable por lo menos 1 año a + 4 ºC.
2.1.4. Suspensión de L-lactato-deshidrogenasa (L-LDH) de 5 mg/ml. La
suspensión es estable por lo menos 1 año a + 4 ºC.
2.1.5. Suspensión de D-lactato-deshidrogenasa (D-LDH) de 5 mg/ml. La
solución es estable por lo menos 1 año a + 4 ºC.
Antesde proceder a la determinación, s e recomienda comprobar la
actividad de lasenzimas .
Nota:El conjunto de estos reactivos se comercializan preparados.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 97
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2.2.Material
2.2.1. Espectrofotómetro que permita efectuar las medidas de 340 nm,
máximo de absorción de la NADH.
En su defecto, fotómetro de espectro discontinuo que permita efec-
tuar medidasde 334 nm o a 365 nm.
Dado que se trata de medidas absolutas de absorbancia (no se utiliza
curva de calibrado sino el coeficiente de extinción de la NADH),
deben controlarse las escalas de las longitudes de onda y de las
absorbancias del aparato.
2.2.2. Cubetasde vidrio o des echablesde 1 cm de trayecto óptico.
2.2.3. Micropipetasque permitan tomar volúmenescomprendidosentre
0,02 ml y 2 ml.
2.3.Preparacióndelamuestra
Evítese tocar con los dedos la parte del vidrio que entre en contacto
con el medio reactivo, ya que podría ser causa de un aporte de ácido
L-láctico que falsearía el resultado.
Si la concentración en ácido láctico esinferior a 100 mg/l, la deter-
minación del lactato se efectúa directamente sobre el vino sin
decoloración previa ni dilución. Si la concentración del vino en
ácido láctico está comprendida entre:
100 mg/l y 1 g/l, diluir 1/10 con agua bidestilada,
1 g/l y 2,5 g/l, diluir 1/25 con agua bidestilada,
2,5 g/l y 5 g/l, diluir 1/50 con agua bidestilada.
2.4.Procedimiento
2.4.1.Determinación del ácido láctico total
La solución tampón debe llevarse a una temperatura entre 20—25º
antesde proceder a la dos ificación.
Se ajusta la longitud de onda del espectrofotómetro a 340 nm y se
realizan lasmedidasde abs orbancia en cubetasde 1 cm de trayecto
óptico, habiendo ajustado el cero de absorbancia con respecto al aire
(sin cubetas en el trayecto óptico) o con respecto al agua.
Introducir en lascubetasde 1 cm de trayecto óptico:
Blanco Muestra
Solución 2.1.1 1,00 ml 1,00 ml
Solución 2.1.2 0,20 ml 0,20 ml
Agua bidestilada 1,00 ml 0,80 ml
Suspensión 2.1.3 0,02 ml 0,02 ml
Muestra — 0,20 ml
Mezclar con un agitador de vidrio o con una varilla de material
sintético de punta plana; transcurridos 5 minutos, aproximadamente,
medir las absorbancias de las soluciones blanco y muestra (A1).
Añadir 0,02 ml de la solución 2.1.4 y 0,05 ml de la solución 2.1.5,
homogeneizar, esperar a que finalice la reacción (unos 30 minutos) y
medir las absorbancias de las soluciones blanco y muestra (A2).
Determinar lasdiferenciasde abs orbancia (A2−A1) para el blanco y
la muestra.
Restar la diferencia de absorbancias del blanco ( ∆AB) de la dife-
rencia de absorbancias de la muestra ( ∆AM).
∆A= ∆AM−∆AB
2.4.2.Determinación del ácido L-láctico y del ácido D-láctico
La determinación del ácido L-láctico y D-láctico puede realizarse
por separado aplicando el procedimiento indicado para el ácido
láctico total, pero operando trashaber determinado A1.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 98
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Añadir 0,02 ml de la solución 2.1.4, homogeneizar, esperar a que
finalice la reacción (alrededor de 20 minutos) y medir las absorban-
cias de las soluciones blanco y muestra (A2).
Añadir 0,05 ml de solución 2.1.5, homogeneizar, esperar a que fina-
lice la reacción (alrededor de 30 minutos) y medir las absorbancias
de las soluciones blanco y muestra (A3).
Determinar lasdiferenciasde abs orbancias(A2−A1) para el ácido
L-láctico y (A3−A2) para el ácido D-láctico en el caso del blanco
y en el caso de la muestra.
Restar la diferencia de absorbancias del blanco de la diferencia de
absorbancias de la muestra.
∆A= ∆AM−∆AB
Nota:
El tiempo necesario para la acción de las enzimas puede variar de un
lote a otro. Aquí sólo se ha dado a título indicativo. Se recomienda
determinarlo para cada lote. Si se determina únicamente el ácido L-
láctico, el tiempo de incubación trasla adición de la L-lactato-des hi-
drogenasa puede reducirse a 10 minutos.
2.5.Expresióndelosresultados
La concentración en ácido láctico se expresa en gramos por litro (g/
l) con 1 decimal.
2.5.1.Método de cálculo
La concentración en gramospor litro s e calcula con la fórmula
general:
C¼V/C1PM
ε/C1d/C1v/C11000/C1A
V = volumen total en mililitros(V = 2,24 ml de ácido L-láctico,
V = 2,29 ml de ácido D-láctico y ácido láctico total)
v = volumen de la muestra en mililitros (aquí: 0,2 ml)PM = masa molecular de la sustancia que va a determinarse (aquí:
ácido DL-láctico = 90,08).
d = trayecto óptico de la cubeta en centímetros(aquí: 1 cm)ε= coeficiente de extinción de la NADH a 340 nm
ε= 6,3 (mmol
−1·l·c m−1)
2.5.1.1. Ácido láctico total y ácido D-láctico
C = 0,164 · ∆A
Si al preparar la muestra se ha efectuado una dilución, multiplicar el
resultado por el factor de dilución.
Nota:
Medida a 334 nm: C = 0,167 · ∆A(ε= 6,2 mmol−1·l·c m−1)
Medida a 365 nm: C = 0,303 · ∆A(ε= 3,4 mmol−1·l·c m−1)
2.5.1.2. Ácido L-láctico
C = 0,160 · ∆A
Si al preparar la muestra se ha efectuado una dilución, multiplicar el
resultado por el factor de dilución.
Nota:
Medida a 334 nm: C = 0,163 · ∆A(ε= 6,2 mmol−1·l·c m−1)
Medida a 365 nm: C = 0,297 · ∆A(ε= 3,4 mmol−1·l·c m−1)
2.5.2.Repetibilidad (r)
r = 0,02 + 0,07 xig/l
xi= concentración en ácido láctico de la muestra en gramos por
litro.
2.5.3.Reproductibilidad(R)
R = 0,05 + 0,125 xig/l1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 99
▼B
xi= concentración en ácido láctico de la muestra en gramos por
litro.
3. MÉTODO USUAL
3.1.1.Para el tratamiento preliminar del vino
Véase el método del ácido tartárico (3.1.1. Método usual).
3.1.2.Para la determinación del ácido láctico
3.1.2.1. Solución 0,1 M de sulfato de cerio IV en ácido sulfúrico 0,35 M.
Disolver en frío 40,431 g de sulfato de cerio IV, Ce (SO4)2,4 H2O, en
350 ml de una solución M de ácido sulfúrico exactamente valorada
(3.1.2.4). Llevar a 1 000 ml con agua destilada.
3.1.2.2. Solución de hidróxido de sodio (NaOH) 2,5 M.3.1.2.3. Solución de acetato de sodio de 270 g por litro (preparada a partir de
acetato de sodio seco Na CH
3COO).
3.1.2.4. Solución de ácido sulfúrico (H2SO4)1M .
3.1.2.5. Solución de nitroprusiato de sodio [Na2(Fe (CN)5NO) · 2H2O] al 2 %
(m/v).
Conservar en un frasco bien cerrado y en la oscuridad.
Límite de conservación de la solución: 8 días.
3.1.2.6. Solución de piperidina (C5H11N) al 10 % (v/v).
3.1.2.7. Solución de ácido láctico M.
Diluir en 400 ml de agua 100 ml de ácido láctico (C3H6O3). Verter
esta solución en una cápsula y calentarla en un baño de agua
hirviendo durante 4 horas, completando de vez en cuando el
volumen con agua destilada. Llevar a un litro después de haber
enfriado. Valorar el ácido láctico en 10 ml de esta solución con una
solución de hidróxido de sodio M (3.1.2.8). Ajustar la solución hasta
1 M de ácido láctico (90 g).
3.1.2.8. Solución de hidróxido de sodio (NaOH) 1 M.
3.2.Material
3.2.1. Columna de vidrio de una longitud de aproximadamente 300 mm y
de un diámetro interno de 10 a 11 mm provista de un regulador de
flujo.
3.2.2. Baño de agua termostatado a 65 ºC.3.2.3. Espectrofotómetro que permita efectuar medidas de absorbancia a
una longitud de onda de 570 nm con cubetasde 1 cm de trayecto
óptico.
3.3.Procedimiento
3.3.1.Preparación de la columna cambiadora de iones
Véase el método «ácido tartárico» (3.3.1. Método usual).
3.3.2.Aislamiento de ácidos orgánicos
Véase el método «ácido tartárico» (3.3.2. Método usual).
3.3.3.Determinación del ácido láctico
Verter 10 ml de eluido en un tubo de vidrio de 50 ml de capacidad
provisto de un tapón esmerilado, añadir 10 ml de solución de sulfato
de cerio (3.1.2.1). Agitar; introducir el tubo en un baño de agua con
termostato a 65 ºC durante exactamente 10 minutos. Al efectuar la
inmersión, levantar durante algunos segundos el tapón de vidrio
para compensar la presión provocada por el calentamiento; seguida-
mente, cerrar herméticamente el tubo para evitar la pérdida del
etanal formado. Retirar el tubo, enfriar bajo un chorro de agua para
lograr una temperatura aproximada de 20 ºC, añadir 5 ml de la solu-
ción de hidróxido de sodio 2,5 M (3.1.2.2), mezclar y filtrar.
Extraer una muestra de 15 ml de filtrado y verterla en un matraz de
50 ml, con tapón esmerilado, en el que previamente se habrá vertido
una mezcla homogénea de 5 ml de solución de acetato de sodio al
27 % (3.1.2.3) y de 2 ml de ácido sulfúrico M (3.1.2.4). Añadir1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 100
▼B
5 ml de la solución de nitroprusiato de sodio (3.1.2.5), mezclar;
añadir a continuación 5 ml de la solución de piperidina (3.1.2.6),
mezclar rápidamente e introducir de inmediato esta solución en la
cubeta del espectrofotómetro. La coloración resultante, que varía
entre el verde y el violeta, se mide 570 nm con respecto al aire (sin
cubeta alguna en el trayecto óptico); la coloración aumenta disminu-
yendo rápidamente a continuación.
Seguir la evolución de la absorbancia correspondiente y escoger
como valor definitivo su valor máximo.
Si el eluido contiene demasiado ácido láctico y la absorbancia
resulta demasiado alta, diluir el eluido con la solución de sulfato de
sodio al 7,1 % (3.1.1) y medir la solución diluida.
3.3.4.Obtención de la curva patrón
Introducir 10 ml de la solución de ácido láctico 1 M (3.1.2.7) y 10 ml
de solución valorada de hidróxido de sodio 1 M (3.1.2.8) en un
matraz aforado de 1 000 ml y enrasar con la solución de sulfato de
sodio al 7,1 % (3.1.1). Extraer 5, 10, 15, 20 y 25 ml e introducirlos
en matraces aforados de 100 ml. Enrasar con la solución de sulfato
de sodio al 7,1 %. Tomar 10 ml de las soluciones obtenidas y deter-
minar en el caso de cada una el valor de la absorbancia siguiendo el
procedimiento utilizado para el eluido y que se describe en el punto
3.3.3.
Estas soluciones corresponden a los eluidos obtenidos a partir de
vinoscon un contenido de 0,45 — 0,9 — 1,35 — 1,80 y 2,25 g/l
de ácido láctico.
La representación gráfica de las absorbancias de estas soluciones en
función del contenido en ácido láctico esuna recta.
3.4.Expresióndelosresultados
Llevar la absorbancia medida en el eluido a la curva patrón para
obtener el contenido del vino en ácido láctico en gramospor litro.
Este contenido se expresa con 1 decimal.
Nota:Losvinoscon másde 250 mg/l de dióxido de azufre pueden
presentar un contenido en ácido etanalsulfúrico que se valora como
ácido láctico. En este caso, es preciso corregir el resultado de la
determinación con el del obtenido en la operación complementaria
siguiente: mezclar 15 ml de eluido en una probeta, provista de un
tapón esmerilado, con 5 ml de acetato de sodio al 27 % y 2 ml de
H
2SO40,775 M (77,5 ml de H2SO4M se enrasa a 100 ml con agua
destilada). A continuación, como al determinar el ácido láctico se
añaden 5 ml de nitroprusiato de sodio al 2 % y 5 ml de piperidina
al 10 %. Trashaber efectuado la mezcla, medir la abs orbancia en las
condiciones descritas para la determinación del ácido láctico. Tras-
ladar esta absorbancia a la curva de calibrado para obtener el valor
aparente B del ácido láctico en gramospor litro, debido al ácido
etanalsulfónico. Si L' es el contenido aparente del vino en ácido
láctico en gramospor litro, el contenido real L en ácido láctico s e
obtiene mediante la siguiente fórmula:
L = L' − B · 0,4 (g/l)1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 101
▼B
19.ÁCIDOL-MÁLICO
1. FUNDAMENTO DEL MÉTODO
En presencia de nicotinamida-adenin-dinucleótido (NAD), el ácido
L-málico (L-malato) se oxida en oxaloacetato en una reacción cata-
lizada por la L-malato-deshidrogenasa (L-MDH).
El equilibrio de la reacción está desplazado en el sentido del malato.
La eliminación del oxaloacetato del medio reactivo desplaza el equi-
librio de la reacción hacia la formación de oxaloacetato. En
presencia de L-glutamato, el oxaloacetato se transforma en L-aspar-
tato, reacción catalizada por el glutamato-oxaloacetato-transaminasa
(GOT).
(1)L-malato + NAD+
oxaloacetato + NADH + H+
(2)Oxaloacetato + L-glutamato
 L-aspartato + α−
cetoglutarato
La formación de NADH, medida por el aumento de la absorbancia a
la longitud de onda de 340 nm, esproporcional a la cantidad de L-
malato presente.
2. REACTIVOS
2.1. Solución tampón pH 10
(glicilglicina 0,60 M; L-glutamato 0,1 M)
Disolver 4,75 g de glicilglicina y 0,88 g de ácido L-glutámico en
unos 50 ml de agua bidestilada; ajustar el pH a 10 con unos 4,6 ml
de solución de hidróxido sódico 10 M y llevar hasta 60 ml con agua
bidestilada.
La solución permanecerá estable por lo menos 12 semanas a + 4 ºC.
2.2. Solución de nicotinamida-adenin-dinucleótido (NAD) de alrededor
de 47 · 10−3M: disolver 420 mg de NAD en 12 ml de agua bides-
tilada. La solución permanece estable por lo menos 4 semanas a
+ 4 ºC.
2.3. Suspensión de glutamato-oxaloacetato-transaminasa (GOT) de 2 mg/
ml. La suspensión es estable por lo menos 1 año a + 1 ºC.
2.4. Suspensión de L-malato-deshidrogenasa (L-MDH) de 5 mg/ml. La
suspensión es estable por lo menos 1 año a + 4 ºC.
Nota:
El conjunto de reactivos necesarios se comercializan preparado.
3. MATERIAL
3.1. Espectrofotómetro que permita efectuar medidas a 340 nm, máximo
de absorción de la NADH.
En su defecto, fotómetro de espectro discontinuo que permita efec-
tuar medidasa 334 nm o a 365 nm.
Dado que se trata de medidas absolutas de absorbancia (no se utiliza
curva de calibrado, sino el coeficiente de extinción de la NADH),
deben controlarse las escalas de las longitudes de onda y de lasabsorbancias del aparato.
3.2. Cubetasde vidrio o cubetasdes echablesde 1 cm de trayecto óptico.
3.3. Micropipetasque permitan tomar volúmenescomprendidosente 0,01
y 2 ml.
4. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
Normalmente, la determinación del L-malato se efectúa directamente
sobre el vino sin decoloración previa ni dilución, siempre que el
contenido en ácido L-málico sea inferior a350 mg/l (medidas a
365 nm). Si no, proceder a la dilución del vino con agua bidestilada
de forma que la concentración en L-malato se sitúe entre 30 y
350 mg/l (cantidad de L-malato en la muestra comprendida entre 3
y 35 µg.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 102
▼B
Si la concentración del vino en malato esinferior a 30 mg/l, el
volumen de la muestra puede aumentarse hasta 1 ml. En este caso,
se reducirá el volumen de agua que debe añadirse para que los volú-
menes totales sean iguales en las dos cubetas.
5. PROCEDIMIENTO
Se ajusta la longitud de onda del espectrofotómetro a 340 nm y se
realizan lasmedidasde abs orbancia en cubetasde 1 cm de trayecto
óptico, habiendo ajustado el cero de absorbancia con respecto al aire
(sin cubetas en el trayecto óptico) o con respecto al agua.
Introducir en lascubetasde 1 cm de trayecto óptico:
Blanco Muestra
Solución 2.1 1,00 ml 1,00 ml
Solución 2.2 0,20 ml 0,20 ml
Agua bidestilada 1,00 ml 0,90 ml
Suspensión 2.3 0,01 ml 0,01 ml
Muestra — 0,10 ml
Mezclar; transcurridos 3 minutos, aproximadamente, medir las
absorbancias de las soluciones blanco y muestra (A1).
Añadir:
Solución 2.4 0,01 ml 0,01 ml
Mezclar; esperar a que finalice la reacción (de 5 a 10 minutos) y
medir las absorbancias de las soluciones blanco y muestra (A2).
Determinar lasdiferenciasde abs orbancia (A2−A1) del blanco
(∆A8) y de la muestra ( ∆AM).
Restar la diferencia de absorbancias del blanco de la diferencia de
absorbancias de la muestra
∆A= ∆AM−∆AB
Nota:
El tiempo necesario para la acción de las enzimas puede variar de un
lote a otro. Aquí sólo se ha dado a título indicativo. Se recomienda
determinarlo para cada lote.
6. EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS
La concentración en ácido L-málico se expresa en gramos por litro
(g/l) con 1 decimal.
6.1.Métododecálculo
La concentración en gramospor litro s e calcula con la fórmula
general:
C¼V/C1PM
ε/C1d/C1v/C11000/C1∆A
V = volumen total en ml (aquí 2,22 ml)
v = volumen de la muestra en ml (aquí: 0,1 ml)
PM = masa molecular de la sustancia que va a determinarse (aquí:
ácido L-málico = 134,09)
d = trayecto óptico de la cubeta en cm (aquí: 1 cm)
ε= coeficiente de extinción de la NADH a 340 nm ε= 6,3 mmol−1·l·c m−1)
Para el L-malato se obtiene:
C = 0,473 · ∆A g/l
Si al preparar la muestra se ha efectuado una dilución, multiplicar el
resultado por el factor de dilución.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 103
▼B
Nota:
Medida a 334 nm: C = 0,482 × ∆A
Medida a 365 nm: C = 0,876 × ∆A
6.2.Repetibilidad(r)
r = 0,03 + 0,034 xi
xi= concentración en ácido málico de la muestra en gramos por
litro.
6.3.Reproductibilidad(R)
R = 0,05 + 0,071 xi
xi= concentración en ácido málico de la muestra en gramos por
litro.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 104
▼M7
20.ÁCIDOD-MÁLICO
DETERMINACIÓN POR MÉTODO ENZIMÁTICO
1. PRINCIPIO
En presencia de D-malato-deshidrogenasa (D-MDH), el ácido D-
málico (D-malato) se oxida a oxalacetato por la nicotinamida-
adenín-dinucleótido (NAD). El oxalacetato formado se transforma
en piruvato y dióxido de carbono.
D-malato þNADþ/harpoonleftrightD-MDHpiruvato þCO2þNADH þHþ
La formación de NADH, medida por el aumento de la absorbancia a
la longitud de onda de 334, 340 o 365 nm, esproporcional a lacantidad de D-malato presente.
2. REACTIVOS
En el comercio se presentan reactivos para unas 30 determinaciones
en estuches que contienen:
a) frasco 1 de unos 30 ml de solución tampon Hepes con ácido [N-
(2-hidroxietil)piperazina-N'-2-etano-sulfónico] pH = 9,0 y estabi-
lizadores;
b) frasco 2 de unos 210 mg de NAD liofilizado;
c) frasco 3 (en número de tres) de D-MDH liofilizado, para analizar
8 muestras.
Preparacióndelassoluciones
1. Utilizar el contenido del frasco 1 sin diluir. Llevar la solución a
20-25 ºC antesdel us o.
2. Disolver el contenido del frasco 2 en 4 ml de agua bidestilada.3. Disolver el contenido de uno de los frascos 3 en 0,6 ml de agua
bidestilada. Llevar la solución a 20-25 ºC antes del uso.
Estabilidaddelassoluciones
El contenido del frasco 1 se conserva al menos un año a + 4 ºC; la
solución 2 se conserva alrededor de 3 semanas a + 4 ºC y 2 meses a
− 20 ºC; la solución 3 se conserva 5 días a + 4 ºC.
3. MATERIAL
3.1. Un espectrofotómetro que permita efectuar medidas a 340 nm
(máximo de absorción del NADH). En su defecto, un fotómetro de
espectro discontinuo que permita efectuar las medidas a 334 nm y
365 nm. Dado que se trata de medidas absolutas de absorbancia (no
hay curva de calibrado, sino referencia al coeficiente de extinción
del NADH), lases calasde longitud de onda y lasabs orbanciasdel
aparato deben ser controladas.
3.2. Cubetasde 1 cm de trayecto óptico de vidrio o cubetasde un s olo
uso.
3.3. Micropipetasque permitan tomar volúmenescomprendidosentre
0,01 y 2 ml.
4. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
La determinación de D-malato se efectúa en general directamente en
el vino sin decoloración previa.
Como la cantidad de D-malato en la cubeta debe estar comprendida
entre 2 µgy5 0 µg, conviene diluir el vino de tal forma que la
concentración en malato esté comprendida entre 0,02 y 0,5 g/l o
0,02 y 0,3 g/l (según el equipo empleado).1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 105
▼M7
Cuadro de dilución:
Cantidad estimada de malato/litro
D-Dilución con
aguaFactor de dilu-
ciónMedida a:
340 or 334 nm 365 nm
< 0,3 g < 0,5 g — 1
0,3 - 3,0 g 0,5 - 5,0 g 1 + 9 10
5. PROCEDIMIENTO
El espectofotómetro se ajusta a la longitud de onda de 340 nm, las
medidas de absorbancia se hacen en las cubetas de 1 cm de trayecto
óptico y el cero de absorbancia se ajusta respecto al aire (sin cubeta
en el trayecto óptico) o respecto al agua.
En lascubetasde 1 cm de trayecto óptico, introducir:
Blanco Ensayo
Solución 1 1,00 ml 1,00 ml
Solución 2 0,10 ml 0,10 ml
Agua bidestilada 1,80 ml 1,70 ml
Muestra — 0,10 ml
Mezclar. Tras unos 6 minutos, medir las absorbancias de las solu-
cionesblanco y ens ayo (A1).
Añadir:
Blanco Ensayo
Solución 3 0,05 ml 0,05 ml
Mezclar; esperar el final de la reacción (unos 20 minutos) y medir
las absorbancias de las soluciones blanco y ensayo (A2).
Determinar lasdiferenciasde abs orbancia (A2−A1) del blanco
(∆AT) y del ensayo ( ∆AE). Deducir la diferencia de absorbancia del
blanco de la diferencia de absorbancia del ensayo: ∆A= ∆AE−∆AT.
Nota:
El tiempo necesario para la acción de las enzimas se da aquí a título
indicativo ya que puede variar de un lote a otro. Se recomienda
determinarlo para cada lote.
El ácido D-málico reacciona rápidamente. Una actividad comple-
mentaria de la enzima transforma también el ácido L-tartárico
aunque la velocidad sea mucho menor. Es la razón por la cual hay
una ligera reacción parásita que es posible corregir por extrapolación
(véase el apéndice A).
6. EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS
La concentración en miligramospor litro s e calcula mediante la
fórmula general:
C¼V/C2PM
ε/C2d/C2ν/C2∆A
V = volumen del ensayo en ml (en este caso, 2,95 ml)
υ= volumen de la muestra en ml (en este caso, 0,1 ml)
PM = masa molecular de la substancia estudiada (en este caso,
ácido D-málico = 134,09)
d = trayecto óptico de la cubeta en cm (en este caso, 1 cm)1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 106
▼M7
ε= coeficiente de absorción molar del NADH:
a 340 nm = 6,3 (1 mmol−1cm−1)
a 365 nm = 3,4 (1 mmol−1cm−1)
a 334 nm = 6,18 (1 mmol−1cm−1).
Si se ha efectuado una dilución durante la preparación de la muestra,
multiplicar el resultado por el factor de dilución.
La concentración en ácido D-málico se da en miligramos por litro
(mg/l) sin decimales.
7. FIDELIDAD
Losdetallesrelativosa la prueba interlaboratoriosen lo que atañe a
la fidelidad del método se resumen en el apéndice B. Los valores
derivadosde la prueba interlaboratoriospueden no s er aplicablesa
gamasde concentración del analito y a matricesdiferentesde las
que se dan en el apéndice B.
7.1.LIMITEDEREPETIBILIDAD
La diferencia absoluta entre dos resultados individuales obtenidos
con una materia idéntica sometida a ensayo, por un mismo operador,
empleando los mismos instrumentos, en el intervalo de tiempo más
corto, no sobrepasará el valor de repetibilidad r en más del 5 % de
los casos.
r = 11 mg/l.
7.2.LIMITEDEREPRODUCIBILIDAD
La diferencia absoluta entre dos resultados individuales obtenidos
con una materia idéntica sometida a ensayo en dos laboratorios dife-
rentes no sobrepasará el valor de reproducibilidad R en más del 5 %
de los casos.
R = 20 mg/l.
8. DETERMINACIÓN DEL ÁCIDO D-MÁLICO (D(+)-MÁLICO) EN
VINOS A BAJA CONCENTRACIÓN
8.1.Ámbitodeaplicación
El método descrito es aplicable a la determinación enzimática del
ácido D-málico de losvinosa concentracionesinferioresa 50 mg/l.
8.2.Principio
El fundamento del método se describe en el punto 1. La formación
de NADH, medida por el aumento de la absorbancia a la longitud de
onda de 340 nm, esproporcional a la cantidad de D-malato pres ente,
trasla introducción en la cubeta de medición de una cantidad de
ácido D-málico equivalente a 50 mg/l.
8.3.Reactivos
Solución de ácido D-málico de 0,199 g/l, ademásde losreactivos
indicadosen el punto 2.
8.4.Equipo
El equipo se indica en el punto 3.
8.5.Preparacióndelamuestra
La preparación de la muestra se indica en el punto 4.
8.6.Procedimiento
El procedimiento se indica en el punto 5, pero introduciendo en la
cubeta de medición de una cantidad de ácido D-málico equivalente
a 50 mg/l (introducción de 0,025 ml de una solución de ácido D-
málico de 0,199 g/l, en sustitución de un volumen equivalente de
agua); losvaloresobtenidoss e rebajan en 50 mg/l.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 107
▼M8
▼M8
8.7.Validacióninterna
El cuadro siguiente resume los datos de validación interna del
método de determinación del ácido D-málico previa adición de
50 mg/l de este isómero.
Gama de trabajo De 0 mg a 70 mg de ácido D-málico por litro.
Entre estos límites, el método es lineal, con un coeficiente
de correlación entre 0,990 y 0,994
Límite de cuantificación 24,4 mg/lLímite de detección 8,3 mg/lSensibilidad 0,0015 abs/mg/l
Tasa de recuperación De 87,5 a 115,0 % en los vinos blancos y de 75 a 105 %
en losvinostintos
Repetibilidad = 12,4 mg/l en losvinosblancos(s egún el método de la
OIV, = 12,5 mg/l)
= 12,6 mg/l en losvinostintos(s egún el método de la
OIV, = 12,7 mg/l)
Coeficiente de variación De 4,2% a 7,6 % (vinosblancosy vinostintos )Variabilidad intralaborato-
riosCV = 7,4 % (s=4,4 mg/l; media = 59,3 mg/l)1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 108
▼M7
Apéndice A
Cómo tratar lasreaccionesparás itas
Las reacciones parásitas se deben generalmente a reacciones secundarias de la
enzima, a la presencia de otras enzimas en la matriz de la muestra, o a la inte-
racción de uno o varioselementosde la matriz con un cofactor de la reacción
enzimática.
En la reacción normal, la absorbancia alcanza un valor constante al cabo de
cierto tiempo, generalmente entre 10 y 20 minutos, según la velocidad de la
reacción enzimática específica. Sin embargo, cuando se producen reacciones
secundarias, la absorbancia no alcanza un valor constante, sino que aumenta
regularmente con el tiempo; este tipo de proceso se llama corrientemente «reac-
ción parásita».
Cuando se plantea este problema, conviene medir la absorbancia de la solución
a intervalosregulares(de 2 min a 5 min), trasel tiempo neces ario para que la
solución patrón alcance su absorbancia final. Cuando la absorbancia aumenta
regularmente, proceder a 5 o 6 medidasy hacer des puésuna extrapolación
gráfica o mediante cálculo, para obtener la absorbancia que habría tenido la
solución en el momento en el que se ha añadido la enzima final (T0). La dife-
rencia de absorbancia extrapolada en este momento (Af − Ai) se utiliza para el
cálculo de la concentración del substrato.
Figura 1: Reacción parásita1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 109
▼M7
Apéndice B
Resultadosestadísticosdelapruebainterlaboratorios
Año de la prueba interlaboratorios: 1995
Número de laboratorios: 8
Número de muestras: 5 con adición de ácido D-málico
Muestra ABCDE
Número de laboratorioselegidostraseliminación de
los laboratorios que presentan resultados aberrantes 7 8 7 8 7
Número de laboratorioscon res ultadosaberrantes 1 — 1 — 1
Número de resultados aceptados 35 41 35 41 36
Valor medio ( χ-) (mg/l) 161,7 65,9 33,1 106,9 111,0
Desviación típica de la repetibilidad (sr) (mg/l) 4,53 4,24 1,93 4,36 4,47
Desviación típica relativa a la repetibilidad (RSDr) (%) 2,8 6,4 5,8 4,1 4,00
Límite de repetibilidad (r) (mg/l) 12,7 11,9 5,4 12,2 12,5Desviación típica de la reproducibilidad (s
R) (mg/l) 9,26 7,24 5,89 6,36 6,08
Desviación típica relativa a la reproducibilidad (RSDR)
(%) 5,7 11 17,8 5,9 5,5
Límite de reproducibilidad (R) (mg/l) 25,9 20,3 16,5 17,8 17,0
Tiposde mues tra:
A: vino tinto; B: vino tinto; C: vino blanco; D: vino blanco; E: vino blanco.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 110
▼B
21.ÁCIDOMÁLICOTOTAL
MÉTODO USUAL1. FUNDAMENTO DEL MÉTODO
El ácido málico aislado mediante una columna de resina cambiadora
de aniones, se determina colorimétricamente en el eluido, debido a
la coloración amarilla que da con ácido sulfúrico del 96 % y ácido
cromotrópico. Las sustancias contenidas en el eluido interfieren en
esta reacción. Pero estas sustancias reaccionan contrariamente al
ácido málico, con ácido sulfúrico del 86 % y ácido cromotrópico.
Para eliminar esta interferencia, es suficiente restar de la absorbancia
obtenida después de la reacción con el ácido cromotrópico y el ácido
sulfúrico del 96 %, la absorbancia obtenida después de la reacción
con ácido cromotrópico y ácido sulfúrico del 86 %.
2. MATERIAL
2.1. Columna de vidrio de 250 mm de longitud aproximada y 35 mm de
diámetro interior, provista de llave.
2.2. Columna de vidrio de 300 mm de longitud aproximada y 10 a 11 mm
de diámetro interior, provista de llave.
2.3 Baño de agua a 100 ºC.2.4. Espectrofotómetro que permita hacer lecturas de absorbancia a la
longitud de onda de 420 nm con cubetasde 10 mm de trayecto
óptico.
4. REACTIVOS
3.1. Cambiador de ionesde fuerte bas icidad (por ejemplo, Merck III).3.2. Hidróxido sódico al 5 % (m/v).
3.3. Ácido acético al 30 % (m/v).
3.4. Ácido acético al 0,5 % (m/v).3.5. Solución de sulfato sódico (Na
2SO4) al 10 % (m/v).
3.6. Ácido sulfúrico concentrado del 95 — 97 % (m/m).3.7. Ácido sulfúrico del 86 % (m/m).3.8. Solución de ácido cromotrópico al 5 % (m/v).
Esta solución se debe preparar inmediatamente antes de su utiliza-
ción, disolviendo 500 mg de sal disódica del ácido cromotrópico
(C
10H6NA2O8S2,2 H2O) en 10 ml de agua.
3.9. Solución de ácido dl-málico de 0,5 g/l.
Disolver 250 mg/l de ácido málico (C4H6O5) en una cantidad sufi-
ciente de sulfato sódico al 10 % (3,5) y enrasar en un matraz
aforado de 500 ml.
4. PROCEDIMIENTO4.1.Preparacióndelcambiadordeiones.
Colocar por encima de la llave de la columna de vidrio de
35 × 250 mm un tapón de lana de vidrio impregnado de agua desti-
lada. Echar en la columna el cambiador de ionespuesto en
suspensión en agua y de forma que quede un espacio libre de50 mm aproximadamente por encima de la superficie del intercam-
biador hasta el extremo superior de la columna. Después de pasar
1 000 ml de agua destilada, llenar la columna con la solución de
hidróxido de sodio al 5 % y dejar pasar el líquido hasta, aproxima-
damente, 2 a 3 mm por encima de la superficie del cambiador de
iones, repetir dos veces más esta operación y dejar en contacto
durante una hora. Lavar la columna con 1 000 ml de agua destilada.
Seguidamente llenar la columna con la solución de ácido acético al
30 %, dejar pasar el líquido hasta aproximadamente 2 a 3 mm por
encima de la superficie del cambiador de iones, repetir esta opera-
ción 2 vecesy dejar en contacto al menosdurante 24 horasantes
de emplearla. Conservar el cambiador de iones en ácido acético al
30 % para las determinaciones posteriores.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 111
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4.2.Preparacióndelacomlumnacambiadoradeiones.
Colocar en la columna de vidrio de 11 × 300 mm por encima de la
llave un tapón de lana de vidrio, añadir a la columna el cambiador
de iones preparado como se ha descrito en 4.1. hasta una altura de
10 cm. Estando la llave abierta, dejar pasar la solución de ácido
acético al 30 % hasta aproximadamente 2 a 3 mm por encima de la
superficie del cambiador. Lavar el cambiador con 50 ml de la solu-
ción de ácido acético al 0,5 %.
4.3.Alslamientodelácidodl-málico.
Añadir sobre el cambiador preparado como se ha descrito en 4.2
10 ml de vino o de mosto. Dejar pasar el vino gota a gota (flujo
medio, una gota por segundo) hasta aproximadamente 2 a 3 mm
por encima de la superficie del cambiador de iones. Llevar la
columna, primeramente con unos50 ml de s olución de ácido acético
al 0,5 % y después con 50 ml aproximadamente de agua destilada;
dejar pasar estos líquidos con la misma velocidad que el vino.
Eluir los ácidos fijados sobre el cambiador de iones, con la solución
de sulfato sódico al 10 % con la misma velocidad que las opera-
cionesprecedentes(1 gota/s egundo), recoger el eluido en un matraz
aforado de 100 ml hasta el enrase.
Se puede regenerar el cambiador de iones como se ha descrito en
4.1.
4.4.Determinacióndelácidomálico.
Tomar dostubosde boca ancha de 30 ml de capacidad con tapón
esmerilado «A» y «B». Introducir en cada tubo 1,0 ml de eluido y
1,0 ml de solución de ácido cromotrópico al 5 %. Añadir en el
tubo «A» 10,0 ml de ácido sulfúrico al 96 % (medida). Tapar y
agitar para obtener una homogeneidad perfecta sin mojar el esmeri-
lado. Sumergir lostubosdurante 10 minutosexactamente en un baño
de agua puesto previamente a ebullición. Enfriar los tubos a 20 ºC
en la oscuridad. Exactamente 90 minutos después del comienzo del
enfriamiento, medir la absorbancia del tubo «B» con relación al
testigo (tubo «A») a la longitud de onda de 420 nm en cubetas de
10 mm de trayecto óptico.
4.5.Obtencióndelacurvapatrón.
Tomar 5, 10, 15 y 20 ml de la solución de ácido DL-málico de 0,5 g/
l, introducirlosen matracesaforadosde 50 ml de capacidad, enras ar
con la solución de sulfato sódico al 10 %.
Las soluciones así obtenidas corresponden a eluidos obtenidos a
partir de vinosque contienen 0,5; 1,0; 1,5 y 2,0 g/l de ácido DL-
málico.
Continuar como se indica en 4.4.Los valores de las absorbancias obtenidos con estas soluciones
patrón se representan en función de los contenidos en ácido málico
correspondientes, obteniéndos una recta que pasa por el origen.
Dado que la intensidad de la coloración depende mucho de la
concentración de ácido sulfúrico, es necesario comprobar la curva
de calibrado al menosen un punto en cada s erie de medidaspara
poner de manifiesto un cambio eventual en la concentración del
ácido sulfúrico.
5. EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS
Llevar la absorbancia media para el eluido, sobre la curva de cali-
brado, para obtener el contenido en ácido DL-málico en gramospor
litro. Este contenido se expresa con un decimal.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 112
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Repetibilidad:
Contenido < 2 g/l: r = 0,1 g/l,
Contenido > 2 g/l: r = 0,2 g/l.
Reproductibilidad:
R = 0,3 g/l.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 113
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22.ÁCIDOSÓRBICO
1. FUNDAMENTO DE LOS MÉTODOS
1.1.Método de determinación por espectrofotometría de absorción
enelultravioleta
El ácido sórbico (ácido hexadieno -2,4 oico trans, trans) separado
por destilación con arrastre de vapor de agua se determina en el
destilado mediante espectrofotometría de absorción en el ultravio-
leta. Las sustancias que interfieren en la medida de la absorción en
el ultravioleta se eliminan por evaporación a sequedad del destilado
de la muestra, ligeramente alcalinizado por una solución de hidró-
xido de calcio. Loscontenidosinferioresa 20 mg/l deben
confirmarse por cromatografía en capa fina (sensibilidad: 1 mg/l).
1.2.Métododedeterminaciónporcromatografíadegases
El ácido sórbico extraído en éter etílico se determina por cromato-
grafía en fase gaseosa en presencia de un patrón interno.
1.3.Métododedeteccióndetrazasporcromatografíadecapafina
El ácido sórbico extraído en éter etílico se separa por cromatografía
en capa fina y se evalúa su concentración en forma semicuantitativa.
2. MÉTODO DE DETERMINACIÓN POR ESPECTROFOTOME-
TRÍA DE ABSORCIÓN EN EL ULTRAVIOLETA
2.1.Reactivos
2.1.1. Ácido tartárico C4H6O6cristalizado.
2.1.2. Solución de hidróxido de calcio CA (OH)2, aproximadamente 0,02 M.
2.1.3. Solución de referencia de ácido sórbico de 20 mg por litro.
Disolver 20 mg de ácido sórbico C6H8O2en 2 ml aproximadamente
de solución 0,1 M de hidróxido de sodio. Verter en un matraz
aforado de 1 000 ml, enrasar con agua. También pueden disolverse
26,8 mg de sorbato de potasio C6H7KO2en agua y completar con
agua hasta 1 000 ml.
2.2.Material
2.2.1. Aparato de destilación con arrastre de vapor de agua (véase «Acidez
volátil»).
2.2.2. Baño de agua a 100 ºC.2.2.3. Espectrofotómetro que permita efectuar medidas a una longitud de
onda de 256 nm con cubetasde cuarzo de 1 cm de trayecto óptico.
2.3.Procedimiento
2.3.1.Destilación
Introducir en el borboteador del aparato de arrastre de vapor de agua
10 ml de vino, añadir 1 a 2 g de ácido tartárico (2.1.1). Recoger
250 ml de destilado.
2.3.2.Curva patrón
Preparar mediante dilucionescon agua a partir de la s olución de
referencia (2.1.3) cuatro soluciones de referencia diluidas que
contengan respectivamente 0,5; 1; 2,5 y 5 mg deácido sórbico por
litro; medir con el espectrofotómetro sus respectivas absorbancias a
256 nm respecto al agua destilada. Trazar la curva de absorbancias
en función de la concentración de las soluciones. La relación es
lineal.
2.3.3.Determinación
Introducir en una cápsula de 55 mm de diámetro 5 ml de destilado,
añadir 1 ml de solución de hidróxido de calcio (2.1.2) y una gota de
solución de sulfato de cobre (2.1.3). Evaporar hasta sequedad en un
baño de agua hirviendo.
Recoger el residuo con algunos mililitros de agua destilada, arrastrar
cuantitativamente en un matraz aforado de 20 ml y enrasar con el1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 114
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agua de lavado. Medir la absorbancia a 256 nm con el espectrofotó-
metro en comparación con una solución testigo obtenida con 1 ml de
solución de hidróxido cálcico (2.1.2) y dilución a 20 ml con agua.
Llevar el valor de la absorbancia medida a la recta patrón y deducir
la concentración C de la solución en ácido sórbico.
Nota:
En la práctica corriente, esta evaporación a sequedad puede no ser
necesaria. Medir directamente la absorbancia en el destilado diluido
a 1/4 frente a agua destilada.
2.4.Expresióndelosresultados
2.4.1.Método de cálculo
La concentración en ácido sórbico del vino expresada en miligramos
por litro esigual a:
100 × C
C = concentración en ácido sórbico de la solución analizada
mediante espectrofotometría, expresada en miligramos por
litro.
3. MÉTODO DE DETERMINACIÓN POR CROMATOGRAFÍA EN
FASE GASEOSA
3.1.Reactivos
3.1.1. Éter etílico (C2H5)2O destilado en el momento de su utilización.
3.1.2. Solución del patrón interno: solución de ácido undecanoico C11H22O2en etanol al 95 % vol de 1 g por litro.
3.1.3. Solución acuosa de ácido sulfúrico H2SO4(ρ20= 1,84 g/ml) diluido
1/3 (v/v).
3.2.Material
3.2.1. Cromatógrafo de gases equipado con un detector de ionización de
llama. Columna de acero inoxidable (4 m × 1/8 de pulgada) previa-
mente tratada con dimetildicloro-silano y rellena con fase
estacionaria, compuesta por una mezcla de succinato de dietilen-
glicol (5 %) y ácido fosfórico (1 %) (DEGS-H3PO4) o por una
mezcla de adipato de dietilenglicol (7 %) y ácido fosfórico (1 %)
(DEGA — H3PO4). Soporte sólido de Gaschrom Q 80 a 100 mallas.
Para el tratamiento con dimetilidicloro-silano (DMDCS), hacer pasar
por la columna una solución al 2 — 3 g de DMDCS en tolueno,
lavar inmediatamente la columna con metanol y secar haciendo
pasar una corriente de nitrógeno, después de exano y de nuevo una
corriente de nitrógeno. Rellenarla a continuación.
Condicionesde trabajo:Temperatura del horno: 175 ºC.Temperatura del inyector y del detector: 230 ºC.
Gasportador: nitrógeno (flujo /asymptequal20 ml/min.).
3.2.2. Microjeringa de 10 microlitrosde capacidad graduada en 0,1 micro-
litros.
Observación:
Otrostiposde columnaspueden igualmente permitir una buena s epa-
ración, por ejemplo la columna capilar (FFAP).
El modo operatorio descrito arriba se da a título de ejemplo.
3.3.Modooperatorio
3.3.1.Preparación de la muestra para su análisis
Introducir 20 ml de vino en un tubo de vidrio con una capacidad de
unos 40 ml y provisto de un tapón esmerilado. Añadir 2 ml de solu-
ción del patrón interno (3.1.2) y 1 ml de solución diluida de ácido
sulfúrico (3.1.3).1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 115
▼B
Trasagitar el tubo invirtiéndolo variasveces , añadir al contenido
10 ml de éter etílico (3.1.1). Extraer el ácido sórbico en la fase
orgánica agitando el tubo durante 5 mintos. Dejar decantar.
3.3.2.Preparación de la solución de referencia
Seleccionar un vino cuyo cromatograma del extracto etéreo no
presente ningún pico en el tiempo de retención correspondiente al
ácido sórbico; añadir a este vino ácido sórbico hasta la concentración
de 100 mg por litro. Tratar 20 ml de la muestra según el procedi-
miento descrito en el apartado 3.3.1.
3.3.3.Cromatografía
Inyectar sucesivamente en el cromatógrafo 2 µl de la fase etérea
obtenida en el apartado 3.3.2 y 2 µl de la fase etérea obtenida en el
apartado 3.3.1.
Registrar los cromatogramas respectivos: comprobar la identidad de
los tiempos de retención respectivos del ácido sórbico y del patrón
interno. Medir la altura (o el área) de cada uno de lospicosregis -
trados.
3.4.Expresióndelosresultados
3.4.1.Método de cálculo
La concentración de ácido sórbico del vino analizado, expresada en
miligramospor litro, esigual a:
CS100/C1h
H/C1I
i
H = altura del pico del ácido sórbico en la solución de referencia,
h = altura del pico del ácido sórbico en la muestra para análisis,
I = altura del pico del patrón interno en la solución de referencia,i= altura del pico del patrón interno en la muestra para análisis.
Nota:
la concentración de ácido sórbico puede determinarse del mismo
modo a partir de las medidas de la superficie de los picos respec-
tivos.
4. MÉTODO DE DETECCIÓN DE TRAZAS DE ÁCIDO SÓRBICO
MEDIANTE CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA
4.1.Reactivos
4.1.1. Éter etílico, (C
2H5)2O
4.1.2. Solución acuosa de ácido sulfúrico H2SO4(ρ20= 1,84 g/ml) diluido
1/3 (v/v).
4.1.3. Solución de referencia de ácido sórbico en una mezcla hidroetanó-
lica a 10 % de etanol (vol) aproximadamente con 20 mg por litro.
4.1.4. Fase móvil: hexano — pentano — ácido acético (20:20:3)
(C6H14—C5H12—C H3COOH, ρ20= 1,05 g/ml).
4.2.Material
4.2.1. Placas para cromatografía de capa fina listas para su uso de
20 × 20 cm recubiertas de gel de poliamida (espesor: 0,15 mm), al
que se añadirá un indicador de fluorescencia.
4.2.2. Cubeta para cromatografía de capa fina.
4.2.3. Micropipeta o microjeringa que permitan obtener volúmenesde 5
microlitroscon una aproximación de ± 0,1 microlitros .
4.2.4. Lámpara de ultravioleta (254 nm).
4.3.Procedimiento
4.3.1.Preparación de la muestra para análisis
Introducir 10 ml de vino en un tubo de vidrio con una capacidad de
unos 25 ml y provisto de un tapón esmerilado. Añadir 1 ml de solu-1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 116
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ción de ácido sulfúrico diluido (4.1.2) y 5 ml de éter etílico (4.1.1).
Agitar el tubo invirtiéndolo variasveces . Dejar decantar.
4.3.2.Preparación de las soluciones diluidas de referencia
A partir de la solución 4.1.3, prepara mediante dilución cinco solu-
cionesdiluidasde referencia con 2, 4, 6, 8 y 10 mg de ácido s órbicopor litro, respectivamente.
4.3.3.Cromatografía
Utilizando una microjeringa o una micropipeta, depositar a 2 cm del
borde inferior de la placa 5 µl de fase etérea obtenida en 4.3.1 y 5 µl
de cada una de lass olucionesdiluidasde referencia (4.3.2); la
distancia entre los puntos será de 2 cm.
Introducir la fase móvil (4.1.4) en la cubeta para cromatografía a una
altura de aproximadamente 0,5 cm y dejar que la atmósfera de la
cubeta se sature de los vapores de los disolventes. Colocar la placa
en la cubeta. Dejar desarrollar el cromatograma entre 12 y 15 cm (la
duración del desarrollo es de unos 30 min.). Secar la placa bajo una
corriente de aire frío. Examinar el cromatograma bajo una lámpara
ultravioleta a 254 nm.
Las manchas de ácido sórbico, de color violeta oscuro, destacarán
sobre el fondo amarillo fluorescente de la placa.
4.4.Expresióndelosresultados
La comparación entre la intensidad de la mancha de la muestra para
análisis y las manchas de las soluciones de referencia permite
evaluar de manera semicuantitativa la concentración de ácido
sórbico entre 2 y 10 mg por litro. Podrá determinarse una concentra-
ción igual a 1 mg por litro con un depósito de 10 µl de solución de
la muestra para análisis.
Podrán determinarse concentraciones superiores a 10 mg por litro
con un volumen de depósito de la solución para análisis inferior a
5 µl (medido con una microjeringa).1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 117
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23.ÁCIDOL-ASCÓRBICO
1. FUNDAMENTO DE LOS MÉTODOS
Los métodos que se proponen permiten determinar el ácido L-ascór-
bico y el ácido dehidroascórbico presentes en vinos o mostos.
1.1.Métododereferencia(fluorimétrico)
El ácido L-ascórbico se oxida por la acción del carbón activo a ácido
dehidroascórbico. Este compuesto forma un compuesto fluorescente
por reacción con la ortofenilendiamina (OPDA). La realización de
una prueba testigo en presencia de ácido bórico permite determinar
la fluorescencia parásita (mediante la formación de un complejo de
ácido bórico — ácido dehidroascórbico) y deducirla de la determina-
ción fluorimétrica.
1.2.Métodousual(colorimétrico)
El ácido L-ascórbico se oxida con el yodo en ácido dehidroascór-
bico. Este compuesto se precipita con la 2,4 dinitrofenilhidrazina
comobis(2,4 — dinitrofenilhidrazona). Después de una separación
por cromatografía en capa fina y solubilización en medio acético,
este compuesto, de color rojo, se determina por espectrofotometría
a 500 nm.
2. MÉTODO DE REFERENCIA (MÉTODO FLUORIMÉTRICO)
2.1.Reactivos
2.1.1. Solución de dihidrocloruro de ortofenilendiamina (C6H10Cl2N2)a
0,02 g por 100 ml, preparada inmediatamente antesde s u empleo.
2.1.2. Solución de acetato de sodio trihidratado (CH3COONa. 3H2O) de
500 g/l.
2.1.3. Solución mixta de ácido bórico y acetato de sodio.
Disolver 3 g de ácido bórico H3BO3en 100 ml de solución de
acetato de sodio (2.1.2). Dicha solución debe prepararse inmediata-
mente antes de su uso.
2.1.4. Solución de ácido acético cristalizable CH3COOH ( ρ20= 1,05 g/ml)
diluida al 56 % (v/v). ajustada a un pH 1,2, aproximadamente.
2.1.5. Solución de referencia de ácido L-ascórbico de 1 g/l.
Disolver en el momento de su uso 50 mg de ácido L-ascórbico
C6H8O6, previamente deshidratado en un desecador fuera del alcance
de la luz, en 50 ml de solución de ácido acético (2.1.4).
2.1.6. Carbón activo muy puro para análisis (1)
Introducir en un matraz erlenmeyer cónico de 2 litrosde capacidad
100 g de carbón activo, añadir 500 ml de una solución de ácido
clorhídrico (HCl) ( ρ20= 1,19 g/ml) al 10 p. 100 (v/v). Llevar a
ebullición, filtrar sobre un filtro de vidrio fritado de porosidad 3.Recoger el carbón así tratado en un erlenmeyer de 2 litros de capa-
cidad, añadir 1 litro de agua, agitar y filtrar sobre un filtro de vidrio
fritado de porosidad 3. Repetir dos veces esta operación e introducir
el residuo en una estufa regulada a 115 ± 5 ºC durante 12 horas (una
noche, por ejemplo).
2.2.Materialyaparatos
2.2.1. Fluorímetro. Emplear un espectrofluorímetro equipado con una
lámpara de espectro continuo utilizando la potencia mínima de la
misma. Las longitudes de onda de excitación y emisión óptimas se
determinarán previamente y dependen del aparato utilizado. Se
puede decir, con carácter indicativo, que la longitud de onda de exci-
tación se sitúa aproximadamente en 350 nm y la de emisión en
430 nm. Cubascon 1 cm de trayecto óptico.
2.2.2. Filtro de vidrio poroso n
o3.
2.2.3. Tubosde ens ayo (diámetro /asymptequal10 mm).1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 118
(1) Una de lasdenominacionescomercialesde es te producto es«norite».
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2.2.4. Agitador para tubosde ens ayo.
2.3.Procedimiento
2.3.1.Preparación de la muestra de vino o mosto
Poner en un matraz aforado de 100 ml un volumen de vino o mosto
y enrasar con la solución de ácido acético al 56 % (2.1.4) con el fin
de obtener una solución cuya concentración de ácido L-ascórbico,
esté comprendida entre 0 y 60 mg/litro. Homogeneizar el contenido
del matraz aforado por agitación. Añadir 2 g de carbón activo (2.1.6)
y dejar en contacto durante 15 minutosagitando de vez en cuando.
Filtrar sobre papel de filtro ordinario, eliminando los primeros mili-
litrosde filtrado.
Introducir en dosmatracesaforadosde 100 ml, 5 ml de filtrado y,
respectivamente, 5 ml de solución mixta de ácido bórico y de
acetato de sodio (2.1.2) y 5 ml de solución de acetato de sodio
(2.1.2). Dejar en contacdo durante 15 min. agitando de vez en
cuando y enrasar con agua destilada.
Extraer 2 ml del contenido de cada uno de losmatraces , añadir 5 ml
de solución de ortofenilendiamina (2.1.1) y agitar; dejar en reposo en
la oscuridad durante 30 minutos para que la reacción tenga lugar y
medir con el espectrofluorímetro.
2.3.2.Curva patrón
En tresmatracesaforadosde 100 ml introducir, res pectivamente, 2,
4y6m ld es olución de referencia de ácido L-ascórbico (2.1.5),
completar hasta 100 ml con la solución de ácido acético (2.1.4) y
homogeneizar por agitación. Lass olucionesde referencia preparadas
contendrán, respectivamente, 2, 4 y 6 mg/100 ml.
Añadir 2 g de carbón activo (2.1.6) en cada uno de losmatracesy
dejar en contacto durante 15 minutos, agitando de vez en cuando.
Filtrar sobre papel filtro ordinario, eliminando los primeros milili-
tros. Introducir, respectivamente, 5 ml de cada uno de los filtrados
obtenidosen tresmatracesaforadosde 100 ml (primera s erie) yrepetir la operación en una segunda serie de tres matraces aforados.
Añadir en cada uno de los matraces de la primera serie (correspon-
diente al ensayo testigo) 5 ml de solución mixta de ácido bórico y de
acetato de sodio (2.1.3) y en cada uno de los matraces de la segunda
serie 5 ml de solución de acetato de sodio (2.1.2).
Dejar en contacto durante 15 minutos, agitando de vez en cuando y
completar hasta 100 ml con agua destilada. Extraer 2 ml del conte-
nido de cada uno de los matraces, añadir 5 ml de solución de
ortofenilendiamina (2.1.1), agitar y dejar en reposo en la oscuridad
durante 30 minutospara que la reacción tenga lugar y medir a conti-
nuación con el espectrofluorímetro.
2.3.3.Determinación fluorimétrica
Regular para cada solución de la curva patrón y para la solución del
problema el cero de la escala de medidas con la prueba testigo
correspondiente. Medir, a continuación, la intensidad de la fluores-
cencia de cada solución patrón y de la solución del problema.
Representar la curva patrón; ésta deberá ser lineal y pasar por el
origen. Trasladar a esta recta el valor del problema y deducir el
contenido C de ácido L-ascórbico + ácido dehidroascórbico de la
solución analizada.
2.3.4.Expresión de los resultados
La concentración de ácido L-ascórbico + ácido dehidroascórbico en
el vino o mosto, expresada en miligramos por litro, será la siguiente:
C. F
F = factor de dilución.
3. MÉTODO USUAL (COLORIMÉTRICO)3.1.Reactivos
3.1.1. Solución de ácido metafosfórico al 30 % (m/v).
Tomar 30 g de ácido metafosfórico (HPO
3)npreviamente triturado en
un mortero. Lavar rápidamente por inmersión y agitación en agua
destilada. Disolver el ácido lavado en agua destilada agitando esta1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 119
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solución en un matraz aforado de 100 ml y enrasar. La solución
obtenida contendrá aproximadamente un 30 % (m/v) de ácido meta-
fosfórico.
3.1.2. Solución de ácido metasfosfórico al 3 % (m/v) preparada inmediata-
mente antes de su empleo por dilución al 1/10 con agua destilada de
la solución 3.1.1.
3.1.3. Solución de ácido metafosfórico al 1 % (m/v) preparada inmediata-
mente antes de su empleo por dilución al 1/30 con agua destilada de
la solución 3.1.1.
3.1.4. Suspensión de poliamida
Poner en suspensión 10 g de polvo de poliamida para cromatografía
con 60 ml de agua destilada y dejar en contacto durante 2 horas. La
cantidad preparada será suficiente para 4 determinaciones.
3.1.5. Tiourea (H2NCSNH2)
3.1.6. Solución de yodo (I2) 0,05 M.
3.1.7. Solución de 2,4-dinitrofenilhidrazina al 6 % (m/v). Poner en suspen-
sión 6 g de 2,4-dinitrofenilhidrazina (C6H6N4O4) en 50 ml de ácido
acético glacial ( ρ20= 1,05 g/ml); añadir 50 ml de ácido sulfúrico
(ρ20= 1,84 g/ml); la 2,4-dinitrofenilhidrazina se disuelve por agita-
ción.
3.1.8. Acetato de etilo (C4H8O2) que contenga un 2 % (v/v) de ácido
acético glacial (3.1.12).
3.1.9. Cloroformo, CHCl3.
3.1.10. Solución acuosa de almidón al 0,5 % (m/v).
3.1.11. Fase móvil:
acetato de etilo …........................................ 50 vol.
cloroformo … ............................................. 60 vol.
ácido acético glacial …................................... 5 vol.
Dejar en reposo 12 horas antes de su uso.
3.1.12. Ácido acético glacial, CH3COOH ( ρ20= 1,05 g/ml).
3.1.13. Solución de ácido L-ascórbico al 0,1 g por 100 ml en solución de
ácido metafosfórico al 1 % (3.1.3).
3.2.Materialyaparatos
3.2.1. Centrifuga y tubosde centrifugación de 50 ml de capacidad con
tapones esmerilados.
3.2.2. Baño de agua refrigerada a una temperatura entre 5 y 10 ºC.3.2.3. Baño de agua refrigerada a una temperatura de 20 ºC.
3.2.4. Placas para cromatografía en capa fina dispuestas para el uso de
20 × 20 cm, recubiertas de gel de sílice G (espesor de 0,25 o
0,3 mm).
3.2.5. Cubeta para cromatografía.
3.2.6. Micropipeta que permita obtener volúmenesde 0,2 ml.
3.2.7. Espectrofotómetro que permita efectuar medidas de absorbancia a
500 nm, equipado con cubetas de 1 cm de espesor.
3.3.Procedimiento
3.3.1.Oxidación del ácido L-ascórbico en ácido dehidroascórbico
Introducir 50 ml de vino en un matraz aforado de 100 ml, añadir
15 ml de suspensión de poliamida (3.1.4) y enrasar con la solución
de ácido metafosfórico al 3 % (3.1.2). Dejar en contacto durante una
hora agitando con frecuencia. Filtrar por filtro de pliegues. Introducir
20 ml de filtrado en un tubo de centrifuga con tapón esmerilado,
añadir 1 ml de solución 0,05 M de yodo (3.1.6). Homogeneizar por
agitación y, tras1 minuto, reducir el exces o de yodo con 25 mg de
tiourea, aproximadamente.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 120
▼B
3.3.2.Formación y extracción de la bis(2.4-dinitrofenilhidrazona) del
ácido dicetogulónico)
Colocar el tubo en un baño da agua refrigerada entre 5 y 10 ºC,
añadir 4 ml de solución de 2,4-dinitrofenilhidrazina (3.1.7) y homo-
geneizar el contenido del tubo, evitando que se moje el tapón de
vidrio. Mantener el tubo bien cerrado en un baño de agua a 20 ºC
durante 16 horasaproximadamente (una noche, por ejemplo).
Añadir al contenido del tubo de centrifugación 15 ml de acetato de
etilo (3.1.8), taparlo, agitar durante 30 segundos y centrifugar
durante 5 minutosaplicando una fuerza centrifuga de 350 a 400 g.
Tomar con la pipeta 10 ml del acetato de etilo de extracción e intro-
ducirlosen un erlenmeyer con tapón es merilado. Añadir al contenido
del tubo de centrifugación 5 ml de acetato de etilo (3.1.8). Agitar
durante 30 segundos y centrifugar durante 5 minutos a la misma
velocidad. Tomar 5 ml del acetato de etilo de extracción y añadir
al erlenmeyer que contenga los10 ml de la primera extracción y
agitar.
3.3.3.Aislamiento de la bis(2.4-dinitrofenilhidrazona) por cromatografía:
deberá efectuarse en las 2 horas siguientes a la extracción (3.3.2)
Dejando un margen de 2 cm en laspartesinferior y lateral de la
placa, depositar sobre toda la línea de partida 0,2 ml del extracto
de acetato de etilo. Introducir la fase móvil (3.1.11) en la cubeta
hasta una altura de 1 cm y dejar que la atmósfera se sature de los
vapores del disolvente. Introducir la placa, dejar migrar el solvente
hasta el borde superior de la misma y secarla durante una hora bajo
una campana ventilada. Raspar con una espátula, perpendicularmente
a la dirección de migración, la zona de coloración roja característica
de la bis (2,4-dinitrofenilhydrazona). Recoger el sustrato sobre una
hoja de papel satinado y trasvasarlo cuantitativamente a un erlen-
meyer con tapón esmerilado, añadiendo 4 ml de ácido acético
(3.1.12). Dejar en contacto durante 30 minutosagitando con
frecuencia. Filtrar con papel filtro de pileguesdirectamente s obre la
cubeta del espectrofotómetro (3.2.7). El filtrado deberá estar perfec-
tamente limpio. Regular el cero de la escala de absorbancias a
500 nm con el ácido acético (3.1.12) y medir la absorbancia de la
solución.
3.3.4.Curva patrón
Introducir en 3 matracesaforadosde 100 ml 5, 10 y 15 ml, res pecti-
vamente, de solución de ácido L-ascórbico (3.1.13), enrasar con la
solución de ácido metafosfórico al 1 % (3.1.3). Las soluciones así
obtenidascontienen 50, 100 y 150 mg por litro de ácido as córbico,
respectivamente.
Tratar 50 ml de cada una de estas soluciones según el procedimiento
descrito en los apartados 3.3.1, 3.3.2 y 3.3.3. Trazar la curva patrón,
que deberá ser lineal y pasar por el origen.
3.3.5.Expresión de los resultados
La concentración del vino en ácido L-ascórbico + ácido dehidroas-
córbico se expresará en miligramos por litro.
3.3.5.1. Cálculo
Llevar a la curva patrón el valor de la absorbancia medida en el
apartado 3.3.3 y leer la concentración de ácido ascórbico + ácido
dehidroascórbico de la solución analizada.
Nota:Si la concentración de ácido L-ascórbico + ácido dehidroascórbico
es superior a 150 mg/litro, reducir el volumen tomado de muestra a
25,20 o 10 ml de vino y multiplicar el resultado obtenido por el
factor de dilución F.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 121
▼B
24.pH
1. FUNDAMENTO
Medida de la diferencia de potencial entre doselectrodoss umergidos
en el líquido que se estudia. Uno de los dos electrodos tiene un
potencial que esuna función definida del pH del líquido, el otro
tiene un potencial fijo y conocido y constituye el electrodo de refe-
rencia.
2. MATERIAL Y APARATOS
2.1. pH metro graduado en unidadesde pH que permita efectuar medidas
con una aproximación de 0,05 como mínimo.
2.2. Electrodos:2.2.1. Electrodo de vidrio, que deberá conservarse en agua destilada.2.2.2. Electrodo de referencia de calomelanos de cloruro potásico saturado,
que se conservará en una solución saturada de cloruro potásico.
2.2.3. O electrodo combinado, que deberá conservarse en agua destilada.
3. REACTIVOS
3.1. Solucionestampón:
3.1.1. Solución saturada de tartrato ácido de potasio, al menos de 5,7 g/l de
tartrato ácido de potasio (C
4H5KO6) a 20 ºC. Esta solución puede
conservarse hasta 2 meses en presencia de 0,1 g de timol por cada
200 ml).
pH/C144/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C145/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C1463,57 a 20 ºC
3,56 a 25 ºC
3,55 a 30 ºC
3.1.2. Solución 0,05 M de ftalato ácido de potasio. Solución con 10,211 g/l
de ftalato ácido de potasio (C
8H5KO4) a 20 ºC (duración máxima de
la solución: 2 meses).
pH/C144/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C145/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C1463,999 a 15 ºC
4,003 a 20 ºC
4,008 a 25 ºC4,015 a 30 ºC
3.1.3. Solución que contenga:
Fosfato monopotásico KH
2PO4…........................ 3,402 g
Fosfato bipotásico K2HP O4…........................... 4,354 g
Agua csp …............................................. 1 l
(Duración máxima de la solución: 2 meses)
pH/C144/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C145/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C147/C1466,90 a 15 ºC
6,88 a 20 ºC
6,86 a 25 ºC
6,85 a 30 ºC
Nota:
También pueden utilizarse soluciones tampones de referencia comer-
ciales.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 122
▼B
4. PROCEDIMIENTO
4.1.Preparacióndelamuestraparaanálisis
4.1.1.En el caso del mosto y el vino
Operar directamente sobre los mismos.
4.1.2.En el caso del mosto concentrado rectificado
Diluirlo con agua a fin de obtener una concentración de 25 ± 0,5 %
(m/m) en azúcarestotales(25 º Brix).
Si P esel contenido en % (m/m) en azúcarestotalesdel mos to
concentrado rectificado, pesar una masa igual a
2500
P
y completar con agua hasta 100 g. La conductividad del agua utili-
zada deberá ser inferior a 2 microsiemens por centímetro.
4.2.Puestaacerodelaparato
Se efectuará antes de cada medida, siguiendo las instrucciones dadas
para el aparato utilizado.
4.3.CalibradodelpHmetro
El calibrado se efectúa a 20 ºC siguiendo las indicaciones del
aparato utilizado, con lass olucionesde pH 6,88 y 3,57 a 20 ºC.
Utilizar la solución tampón de pH 4,00 a 20 ºC para controlar el
calibrado de la escala.
4.4.Medida
Introducir el electrodo en la muestra analizada, cuya temperatura
deberá estar comprendida entre 20 y 25 ºC y tan próxima como sea
posible a 20 ºC. Leer directamente el valor del pH.
Efectúense al menos 2 determinaciones de cada muestra.
Tomar como resultado la media aritmética de ambas determina-
ciones.
5. EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS
El pH del mosto, del vino o de la solución al 25 % (m/m) (25 º Brix)
del mosto concentrado rectificado se expresarán con 2 decimales.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 123
▼B
25.DIÓXIDODEAZUFRE
1. DEFINICIONES
Se denomina dióxido de azufre al dióxido de azufre presente en el
mosto o el vino en las formas siguientes: H2SO3,HS O 3-;cuyo equi-
librio esfunción del pH y de la temperatura:
H2SO3
H++ HSO 3-
H2SO3representa el dióxido de azufre molecular.
Se denomina dióxido de azufre total al conjunto de lasdis tintas
formas de dióxido de azufre presentes en el vino en estado libre o
combinado con sus componentes.
2. DIÓXIDO DE AZUFRE LIBRE Y TOTAL2.1.Fundamentodelosmétodos
2.1.1.Método de referencia
2.1.1.1. En el caso del vino y el mosto:
Arrastre del dióxido de azufre con una corriente de aire o de nitró-
geno; fijación y oxidación por borboteo en una solución diluida y
neutra de peróxido de hidrógeno. Valoración del ácido sulfúrico
formado con una solución valorada de hidróxido sódico.
El arrastre en frío (10 ºC) garantiza la extracción únicamente del
dióxido de azufre libre.
En caliente (100 ºC aproximadamente) se extrae el dióxido de azufre
total.
2.1.1.2. En el caso del mosto concentrado rectificado.
Se extrae el dióxido de azufre total por arrastre en caliente (aproxi-
madamente 100 ºC) del mosto concentrado rectificado previamente
diluido.
2.1.2.Método rápido de ensayo (vinos y mostos)
Determinación del dióxido de azufre libre por valoración yodomé-
trica directa.
Determinación del dióxido de azufre combinado por valoración
yodométrica tras hidrólisis alcalina. La suma del dióxido de azufre
libre y combinado permite obtener el dióxido de azufre total.
2.2.Métododereferencia
2.2.1.Material y aparatos
2.2.1.1. El material utilizado debe ajustarse al esquema que figura a conti-
nuación, principalmente en lo que se refiere al refrigerante.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 124
▼B
Figura 1
Las dimensiones están indicadas en milímetros. Los diámetros
internosdelos4tubosconcéntricosqueconstituyenelrefrige-
ranteson:45,34,27y10mm.
El tubo de conducción de losgas esal borboteador B termina en una
pequeña esfera de 1 cm de diámetro que lleva, en su mayor círculo
horizontal, 20 agujerosde 0,2 mm de diámetro. También puede
terminar en una placa de vidrio fritado que garantice la formación
de gran número de pequeñas burbujas, realizando así un buen
contacto entre las fases gaseosa y líquida.
El flujo de gasque debe recorrer el aparato debe s er de 40 l/h apro-
ximadamente. El frasco situado a la derecha del aparato de destina a
limitar de 20 a 30 cm de agua la depresión producida por la trompa
de agua. Para poder regular dicha depresión de forma que el caudal
sea el correcto, conviene colocar un medidor de flujo de tubo semi-
capilar entre el borboteador y el frasco.
2.2.1.2. Microbureta
2.2.2.Reactivos
2.2.2.1. Ácido fosfórico al 85 % H3PO4(ρ20= 1,71 g/ml).
2.2.2.2. Solución de peróxido de hidrógeno de 9,1 g/l H2O2(3 volúmenes).
2.2.2.3. Reactivo indicador:
rojo de metilo …........................................ 100 mg,
azul de metileno …...................................... 50 mg,
Alcohol de 50 % vol … .................................. 100ml.
2.2.2.4. Solución de hidróxido d e sodio (NaOH), 0,01 M.
2.2.3.Procedimiento
2.2.3.1. Determinación del dióxido de azufre libre
El vino debe mantenerse a 20 ºC en un frasco lleno y cerrado
durante 2 díasantesde la determinación.
— En el borboteador B, colocar de 2 a 3 ml de solución de peró-
xido de hidrógeno (2.2.2.2) y 2 gotasde reactivo indicador;
neutralizar la solución de peróxido de hidrógeno con la solución
0,01 M de hidróxido de sodio (2.2.2.4). Acoplar el borboteador
al aparato (2.2.1.1).
— En el matraz A de 250 ml del aparato de arrastre, introducir
50 ml de muestra y 15 ml de ácido fosfórico (2.2.2.1). Colocar
el matraz en su lugar.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 125
▼B
A continuación, hacer borbotear el aire (o el nitrógeno) durante
15 minutos. El dióxido de azufre libre arrastrado se oxida a ácido
sulfúrico. Retirar el borboteador del aparato y valorar el ácido
formado con la solución de hidróxido sódico 0,01 M (2.2.2.4).
Sea n el número de mililitrosutilizados .
2.2.3.2. Expresión de los resultados
Dióxido de azufre libre en mg/l sin decimales
2.2.3.2.1. Cálculo
Dióxido de azufre libre en miligramospor litro: 6,4 n.
2.2.3.3. Determinación del dióxido de azufre total.2.2.3.3.1. En el caso del mosto concentrado rectificado, utilizar la solución
obtenida diluyendo la muestra para analizar al 40 %(m/v) tal y
como se indica en el capítulo «Acidez total», en el apartado 5.1.2.
En el matraz A de 250 ml del aparato de arrastre introducir 50 ml
de esta solución y 5 ml de ácido fosfórico (2.2.2.1). Acoplar el
matraz al aparato 2.2.1.1.
2.2.3.3.2. Vinosy mos tos
Muestras en las que se suponga que el contenido en SO
2total sea
≤50 mg/l.
En el matraz A de 250 ml del aparato de arrastre introducir 50 ml de
muestra y 15 ml de ácido fosfórico (2.2.2.1). Acoplar el matraz alaparato (2.2.1.1).
Sin embargo, hasta el ►
M331 de agosto de 1996 ◄como fecha
límite, para analizar el contenido en dióxido de azufre de loszumos
de uva se emplea 5 ml de ácido fósfórico (2.2.2.1) diluido a 25 %
(m/V).
2.2.3.3.3. Muestras en las que se suponga que el contenido en SO2total sea
≥50 mg/l.
En el matraz A de 100 ml del aparato de arrastre introducir 20 ml de
muestra y 5 ml de ácido fosfórico (2.2.2.1). Acoplar el matraz al
aparato (2.2.1.1.).
Introducir en el borboteador B de 2 a 3 ml de solución de peróxido
de hidrógeno (2.2.2.2), neutralizarla como se hizo anteriormente,
llevar a ebullición el vino contenido en el matraz A con una pequeña
llama de 4 a 5 cm de altura que debe tocar ligeramente el fondo del
matraz. No colocar bajo el matraz ninguna tela metálica, sino depo-
sitarlo sobre un disco perforado con un agujero de 30 mm de
diámetro. Se evita así la pirogenación de las materias extractivas
del vino sobre las paredes del matraz.
Mantener la ebullición durante el paso de la corriente de aire (o de
nitrógeno). En 15 minutosel dióxido de azufre total habrá s ido
arrastrado y oxidado. Valorar el ácido sulfúrico formado con la solu-
ción 0,01 M de hidróxido sódico (2.2.2.4).
Sea n el número de mililitrosutilizados .
2.2.3.4. Expresión de los resultados
El dióxido de azufre total se expresa en miligramos por litro (mg/l) o
en miligramospor kilogramo (mg/kg) de azúcarestotaless in deci-
males.
2.2.3.4.1. Cálculo
Vinosy mos tosDióxido de azufre total en miligramospor litro:
— Muestras con bajo contenido en dióxido de azufre (muestra
50 ml):
6,4 · n
— Otras muestras (muestra 20 ml):
16 · n
Mosto concentrado rectificado
Dióxido de azufre en miligramospor kilo de azúcarestotales
(muestra: 50 ml de muestra preparada (2.2.3.3.1):1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 126
▼B
1600 /C1n
P
P = contenido en % (m/m) de azúcarestotales .
2.2.3.4.2. Repetibilidad (r)
Contenido < 50 mg/l (muestra de 50 ml), r = 1 mg/l.
Contenido > 50 mg/l (muestra de 20 ml), r = 6 mg/l.
2.2.3.4.3. Reproductibilidad (R)
Contenido < 50 mg/l (muestra de 50 ml), R = 9 mg/l.
Contenido > 50 mg/l (muestra de 20 ml), R = 15 mg/l
2.3.Métodorápidodeensayo
2.3.1.Reactivos
2.3.1.1. EDTA (complexona III): sal disódica del ácido etilen diamino tetra-
cético dihidratada (C10H14N2O8Na2·2H2O).
2.3.1.2. Solución 4 M de hidróxido sódico NAOH (160 g/l)2.3.1.3. Ácido sulfúrico H
2SO4(ρ20= 1,84 g/ml), solución a 1/10 (v/v)
2.3.1.4. Engrudo de almidón, solución de 5 g/l.
Disolver 5 g de almidón en 500 ml de agua aproximadamente.
Llevar a ebullición agitando y mantener la ebullición durante 10
minutos; añadir 200 g de cloruro sódico (NaCl). Enrasar hasta un
litro después de enfriar.
2.3.1.5. Solución 0,025 M yodo (I2).
2.3.2.Material
2.3.2.1. Erlenmeyer de 500 ml2.3.2.2. Bureta2.3.2.3. Pipetasde 1, 2, 5 y 50 ml2.3.3.Procedimiento
2.3.3.1. Dióxido de azufre libre
En un erlenmeyer de 500 ml, echar:
— 50 ml de vino
— 5 ml de engrudo de almidón (2.3.1.4)
— 30 mg de EDTA (complexona III) (2.3.1.1.)
— 3 ml de H
2SO4al 1/10 v/v (2.3.1.3)
Valorar inmediatamente con yodo 0,025 M (2.3.1.5) hasta que la
coloración azul se mantenga claramente durante 10 a 15 segundos.
Sea n ml el volumen de yodo utilizado.
2.3.3.2. Dióxido de azufre combinado
Añadir 8 ml de solución 4 M de hidróxido sódico (2.3.1.2), agitar
una sola vez y dejar 5 minutos en contacto. Verter de un golpe, y
agitando enérgicamente el contenido de un pequeño vaso en el que
se hayan echado 10 ml de ácido sulfúrico al 1/10 v/v (2.3.1.3).
Valorar inmediatamente con yodo 0,025 M (2.3.1.5). Sea n ′el
volumen de yodo empleado.
Añadir 20 ml de solución 4 M de hidróxido sódico (2.3.1.2), dejar en
contacto 5 minutos después de haber agitado una sola vez. Diluir
con 200 ml de agua lo másfría pos ible.
Agitando enérgicamente, verter de un golpe 30 ml de ácido sulfúrico
al 1/10 (2.3.1.3) previamente colocadosen una probeta. Valorar el
dióxido de azufre liberado con el yodo 0,025 M (2.3.1.5). Sea n ″el
volumen de yodo empleado.
2.3.4.Expresión de los resultados
2.3.4.1. Cálculo
Dióxido de azufre libre en miligramospor litro: 32 n.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 127
▼B
Dióxido de azufre total en miligramospor litro: 32 (n + n ′+n″).
Observaciones:1. En el caso de los vinos tintos con bajo contenido en SO
2,
conviene utilizar yodo másdiluido que 0,025 M, por ejemplo:
0,01 M. Sustituir el coeficiente 32 por 12,8 en las fórmulas ante-
riores.
2. En el caso de los vinos tintos, procede iluminar el vino por
debajo con un haz de luz amarilla obtenida con una lámpara eléc-
trica ordinaria y una solución de cromato de potasio, o con una
lámpara de vapor de sodio. Es preciso situarse en una cámara
oscura y observar la transparencia del vino, que se hará opaco
cuando se produzca el viraje del engrudo.
3. Cuando la cantidad de dióxido de azufre encontrada se aproxime
o supere el límite legal, es conveniente determinar el dióxido de
azufre total por el método de referencia.
4. Cuando se conceda especial importancia a la determinación del
dióxido de azufre, se operará de la forma convencional sobre
una muestra que se haya mantenido durante 4 días antes del
análisis al resguardo del aire y a una temperatura de 20 ºC; la
determinación deberá realizarse a esta misma temperatura.
5. Dado que el yodo oxida determinadas sustancias en medio ácido,
en determinaciones muy precisas será necesario evaluar la
cantidad de yodo así utilizado. Para ello, el dióxido de azufre
libre debe combinarse con un exceso de etanal o de propanal,
antesde efectuar la valoración con yodo. Añadir, a 50 ml de
vino colocadosen un erlenmeyer de 300 ml, 5 ml de s olución
de etanal (C2H4O) de 7 g/l o 5 ml de una solución de propanal
(C3H6O) de 10 g/l.
Tapar y dejar reposar durante 30 minutos por lo menos. Añadir
3 ml de ácido sulfúrico al 1/10 (2.3.1.3) y yodo 0,025 M
(2.3.1.5) en cantidad suficiente para que vire el engrudo de
almidón. Sea n'” el volumen de yodo empleado. Debe restarse
de n (dióxido de azufre libre) y de n + n' + n ″(dióxido de azufre
total). n/tripleprimeesgeneralmente bajo: 0,2 a 0,3 ml de yodo 0,025 M. Si
se ha añadido al vino ácido ascórbico, n /tripleprimeserá mucho más
elevado y, sabiendo que 1 ml de yodo 0,025 M oxida 4,4 mg de
ácido ascórbico, el valor de n /tripleprimepermitirá medir, por lo menos
aproximadamente, la cantidad de dicho producto. Así, con la
medida de n /tripleprimese pueden detectar sin dificultad los vinos a los
que se les ha añadido ácido ascórbico en cantidad superior a
20 mg/l y que no se ha transformado en productos de oxidación.
3. DIÓXIDO DE AZUFRE MOLECULAR3.1.Fundamentodemétodo
El porcentaje de dióxido de azufre molecular, H
2SO3, en el dióxido
de azufre libre se calcula en función del pH, del grado alcohólico y
de la temperatura.
Para una temperatura y grado alcohólico determinados:
H2SO3
H++ HSO 3-
(1) H2SO3 ½/C138 ¼L
10pH/C0pKM ðÞþ1
con
pKM=p K T/C0Aﬃﬃ
Ip
IþBﬃﬃ
Ip
L= [ H2SO3] + [HSO3−]
I = fuerza iónica,
A y B = coeficientesque varían con la temperatura y el grado
alcohólico,
KT= constante termodinámica de disociación; el valor de pkTviene dado en la tabla 1 en función del grado alcohólico
y de la temperatura,
K = constante mixta de disociación.
Tomando para la fuerza iónica I el valor medio 0,038, en la tabla 2
se dan los valores de pkMen función de la temperatura y del grado
alcohólico.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 128
▼B
El contenido en dióxido de azufre molecular calculado a partir de la
relación (1) viene dado en la tabla 3 en función del pH, de la tempe-
ratura y del grado alcohólico.
3.2.Cálculo
Conociendo el pH del vino y su grado alcohólico, el porcentaje de
dióxido de azufre molecular viene dado en la tabla 3 para la tempe-
ratura t ºC; sea X %.
Contenido en dióxido de azufre molecular en mg/l:
X·C
C = contenido en dióxido de azufre libre en mg/l.
TABLA 1
ValoresdelaconstantetermodinámicapKT
Alcohol
%
en volumenTemperatura (ºC)
20 25 30 35 40
0 1,798 2,000 2,219 2,334 2,493
5 1,897 2,098 2,299 2,397 2,527
10 1,997 2,198 2,394 2,488 2,606
15 2,099 2,301 2,503 2,607 2,728
20 2,203 2,406 2,628 2,754 2,895
TABLA 2
ValoresdelaconstantemixtapKM(I=0,038)
Alcohol
%
en volumenTemperatura (ºC)
20 25 30 35 40
0 1,723 1,925 2,143 2,257 2,416
5 1,819 2,020 2,220 2,317 2,446
10 1,916 2,116 2,311 2,405 2,522
15 2,014 2,216 2,417 2,520 2,640
20 2,114 2,317 2,538 2,663 2,803
TABLA 3
Dióxidode azufre molecular enporcentaje del dióxidodeazufre libre (I
=0,038)
pHT = 20 ºC
Alcohol % en volumen
0 5 10 15 20
2,8 7,73 9,46 11,55 14,07 17,09
2,9 6,24 7,66 9,40 11,51 14,07
3,0 5,02 6,18 7,61 9,36 11,51
3,1 4,03 4,98 6,14 7,58 9,36
3,2 3,22 3,99 4,94 6,12 7,58
3,3 2,58 3,20 3,98 4,92 6,12
3,4 2,06 2,56 3,18 3,95 4,92
3,5 1,64 2,04 2,54 3,16 3,95
3,6 1,31 1,63 2,03 2,53 3,16
3,7 1,04 1,30 1,62 2,02 2,53
3,8 0,83 1,03 1,29 1,61 2,021990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 129
▼B
pHT = 20 ºC
Alcohol % en volumen
0 5 10 15 20
T = 25 ºC
2,8 11,47 14,23 17,15 20,67 24,75
2,9 9,58 11,65 14,12 17,15 22,71
3,0 7,76 9,48 11,55 14,12 17,18
3,1 6,27 7,68 9,40 11,55 14,15
3,2 5,04 6,20 7,61 9,40 11,58
3,3 4,05 4,99 6,14 7,61 9,42
3,4 3,24 4,00 4,94 6,14 7,63
3,5 2,60 3,20 3,97 4,94 6,16
3,6 2,07 2,56 3,18 3,97 4,55
3,7 1,65 2,05 2,54 3,18 3,98
3,8 1,32 1,63 2,03 2,54 3,18
T = 30 ºC
2,8 18,05 20,83 24,49 29,28 35,36
2,9 14,89 17,28 20,48 24,75 30,29
3,0 12,20 14,23 16,98 20,71 25,66
3,1 9,94 11,65 13,98 17,18 21,52
3,2 8,06 9,48 11,44 14,15 17,88
3,3 6,51 7,68 9,30 11,58 14,75
3,4 5,24 6,20 7,53 9,42 12,08
3,5 4,21 4,99 6,08 7,63 9,84
3,6 3,37 4,00 4,89 6,16 7,98
3,7 2,69 3,21 3,92 4,95 6,44
3,8 2,16 2,56 3,14 3,98 5,19
T = 35 ºC
2,8 22,27 24,75 28,71 34,42 42,182,9 18,53 20,71 24,24 29,42 36,69
3,0 15,31 17,18 20,26 24,88 31,52
3,1 12,55 14,15 16,79 20,83 26,77
3,2 10,24 11,58 13,82 17,28 22,51
3,3 8,31 9,42 11,30 14,23 18,74
3,4 6,71 7,63 9,19 11,65 15,49
3,5 5,44 6,16 7,44 9,48 12,71
3,6 4,34 4,95 6,00 7,68 10,36
3,7 3,48 3,98 4,88 6,20 8,41
3,8 2,78 3,18 3,87 4,99 6,80
T = 40 ºC
2,8 29,23 30,68 34,52 40,89 50,14
2,9 24,70 26,01 29,52 35,47 44,74
3,0 20,67 21,83 24,96 30,39 38,85
3,1 17,15 18,16 20,90 25,75 33,54
3,2 14,12 14,98 17,35 21,60 28,62
3,3 11,55 12,28 14,29 17,96 24,15
3,4 9,40 10,00 11,70 14,81 20,19
3,5 7,61 8,11 9,52 12,13 16,73
3,6 6,14 6,56 7,71 9,88 13,77
3,7 4,94 5,28 6,22 8,01 11,25
3,8 3,97 4,24 5,01 6,47 9,151990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 130
▼B
26.SODIO
1. FUNDAMENTO DE LOS MÉTODOS
1.1.Métododereferencia:Espectrofotometríadeabsorciónatómica
El sodio se determina directamente en el vino mediante espectrofo-
tometría de absorción atómica, previa adición de un tampón
espectral de cloruro de cesio para evitar la ionización del sodio.
1.2.Métodousual:fotometríadellama
El sodio se determina directamente en el vino diluido al menos a 1/
10 por fotometría de llama.
2. MÉTODO DE REFERENCIA2.1.Reactivos
2.1.1.Solución de sodio de 1 g/l.
Utilizar una solución estándar de sodio comercial de 1 g/l. Esta solu-
ción puede prepararse disolviendo 2,542 g de cloruro sódico (NaCl)
desecado, en agua destilada y ajustando el volumen a 1 litro.
Conservar esta solución en un frasco de polietileno.
2.1.2.Solución de referencia:
Ácido cítrico (C
6H8O7,H2O)…...................... 3,5 g
Sacarosa (C12H22O11)….............................. 1,5 g
Glicerol (C3H8O3)… ................................. 5,0 g
Cloruro de calcio anhidro (Ca Cl2)… ................ 50 mg
Cloruro de magnesio anhidro (Mg Cl2)… ............ 50 mg
Alcohol absoluto (C2H5OH)… ....................... 50 mg
Agua csp …......................................... 500 ml
2.1.3.Solución de cloruro de cesio al 5 % en cesio.
Disolver 6,33 g de cloruro de cesio (Cs Cl) en 100 ml de agua desti-
lada.
2.2.Aparatos
2.2.1. Espectrofotómetro de absorción atómica provisto de un mechero
alimentado por aire y acetileno.
2.2.2. Lámpara de cátodo hueco de sodio.
2.3.Procedimiento
2.3.1.Preparación de la muestra
Tomar 2,5 ml de vino, echar en un matraz aforado de 50 ml, añadir
1 ml de la solución de cloruro de cesio (2.1.3) y enrasar con agua
destilada.
2.3.2.Calibrado
En una serie de matraces aforados de 100 ml introducir 5,0 ml de
solución de referencia, echar 0; 2,5; 5; 7,5 y 10 ml de la solución
de sodio de 1 g por litro (2.1.1) previamente diluida a 1/100, añadir
en todos los matraces 2 ml de la solución de cloruro de cesio (2.1.3)
y enrasar hasta 100 ml con agua destilada.
Lass olucionespatrón preparadastienen un contenido de 0; 0,25;
0,50; 0,75 y 1,00 mg de sodio por litro respectivamente y 1 g de
cesio por litro. Estas soluciones deberán conservarse en frascos de
polietileno.
2.3.3.Determinación
Seleccionar la longitud de onda 589,0 nm. Regular el cero de la
escala de absorbancias con la solución de calibrado que contiene 1 g
de cesio por litro (2.3.2). Aspirar directamente el vino diluido en el1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 131
▼B
mechero del espectrofotómetro, y seguidamente hacer lo mismo con
las soluciones patrón (2.3.2). Leer las absorbancias. Efectuar las
determinacionespor duplicado.
2.4.Expresióndelosresultados
2.4.1.Método de cálculo
Trazar la curva de variación de la absorbancia en función de la
concentración en sodio de las soluciones patrón.
Llevar a esta curva el valor medio de las absorbancias obtenidas de
la muestra y determinar la concentración C de sodio en miligramos
por litro.
La concentración de sodio expresada en miligramos por litro de vino
sin decimales será:
20 · C
2.4.2.Repetibilidad: r
r = 1 + 0,024 ximg/l
xi= concentración de sodio en la muestra en mg/l
2.4.3.Reproductibilidad: R
R = 2,5 + 0,05 ximg/l
xi= concentración de sodio en la muestra en mg/l.
3. MÉTODO USUAL
3.1.Reactivos
3.1.1.Solución patrón de sodio de 20 mg por litro.
Alcohol absoluto (C2H5OH)… ..................... 10 ml
Ácido cítrico (C6H8O7,H2O)….................... 700 mg
Sacarosa (C12H22O11)…............................ 300 mg
Glicerol (C3H8O3)… ............................... 1000 mg
Tartrato ácido de potasio (C4H5KO6) …............ 481,3 mg
Cloruro cálcico anhidro (Ca Cl2)… ................ 10 mg
Cloruro de magnesio anhidro (Mg Cl2)… .......... 10 mg
Cloruro sódico desecado (NaCl) … ................. 50,84 mg
Agua csp …....................................... 1 l
3.1.2.Solución de dilución
Alcohol absoluto (C2H5OH)… ..................... 10 ml
Ácido cítrico (C6H8O7,H2O)….................... 700 mg
Sacarosa (C12H22O11)…............................ 300 mg
Glicerol (C3H8O3)… ............................... 1000 mg
Tartrato ácido de potasio (C4H5KO6) …............ 481,3 mg
Cloruro cálcico anhidro (Ca Cl2)… ................ 10 mg
Cloruro de magnesio anhidro (Mg Cl2)… .......... 10 mg
Agua csp …....................................... 1 l
Para preparar las soluciones 3.1.1 y 3.1.2, disolver el tartrato ácido
de potasio en unos 500 ml de agua destilada muy caliente, mezclar
la solución con los demás compuestos previamente disueltos en
400 ml de agua destilada y enrasar a 1 litro. Las soluciones se
conservarán en frascos de polietileno, añadiendo 2 gotas de isotiocia-
nato de alilo.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 132
▼B
3.2.Aparato
3.2.1. Fotómetro de llama alimentado por una mezcla de aire y butano.
3.3.Procedimiento
3.3.1.Calibrado
En cinco matracesaforadosde 100 ml, echar 5, 10, 15, 20 y 25 ml
de la solución de sodio de 20 mg/l (3.1.1) y completar hasta 100 mlcon la solución de dilución (3.1.2). Se obtendrán soluciones con un
contenido de 1, 2, 3, 4y5m gd es odio por litro, respectivamente.
3.3.2.Determinación
Efectuar las medidas a 589,0 nm. Regular el 100 % de transmisión
con agua destilada. Aspirar directamente en el mechero del fotó-
metro las soluciones patrón (3.3.1), seguidamente hacer lo mismo
con el vino diluido a 1/10 con agua destilada y leer los porcentajes
de transmisión. Si fuera necesario, diluir el vino, ya diluido a 1/10,
con la solución de dilución (3.1.2).
3.4.Expresióndelosresultados
3.4.1.Método de cálculo
Trazar la curva de variaciones del porcentaje de transmisión en
función de la concentración de sodio de las soluciones patrón. Llevar
a esta curva la transmisión correspondiente a la muestra de vino
diluido y determinar la concentración C en sodio. La concentración
en miligramos de sodio por litro será:
C·F
F = factor de dilución.
3.4.2.Repetibilidad: r
(exceptovinosde licor)r = 1,4 mg/l
vinosde licor: r = 2,0 mg/l
3.4.3.Reproductibilidad: R
R = 4,7 + 0,08 x
img/l
xi= concentración de sodio en la muestra en mg/l.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 133
▼B
27.POTASIO
1. FUNDAMENTO DE LOS MÉTODOS1.1.Métododereferencia
Elpotasio se determina directamente en el vino diluido por espectro-
fotometría de absorción atómica previa adición de un tampón
espectral de cloruro de cesio para evitar la ionización del potasio,
especialmente cuando se utiliza la llama acetileno-aire.
1.2.Métodousual
El potasio se determina directamente en el vino diluido por foto-
metría de llama.
2. MÉTODO DE REFERENCIA2.1.Reactivos
2.1.1.Solución de potasio de 1 g/l
Utilizar una solución estándar de potasio comercial de 1 g/l. Esta
solución puede prepararse disolviendo 4,813 g de tartrato ácido de
potasio (C
4H5KO6) en agua destilada y ajustando el volumen a 1
litro.
2.1.2.Solución referencia
Ácido cítrico (C6H8O7,H2O)…...................... 3,5 g
Sacarosa (C12H22O11)….............................. 1,5 g
Glicerol (C3H8O3)… ................................. 5,0 g
Cloruro cálcico anhidro (Ca Cl2)… .................. 50 mg
Cloruro de magnesio anhidro (Mg Cl2)… ............ 50 mg
Alcohol absoluto (C2H5OH)… ....................... 50 ml
Agua csp …......................................... 500 ml
2.1.3.Solución de cloruro de cesio al 5 % en cesio
Disolver 6,330 g de cloruro de cesio (Cs Cl) en 100 ml de agua
destilada.
2.2.Material
2.2.1. Espectrofotómetro de absorción atómica, equipado con un mechero
alimentado por aire y acetileno.
2.2.2. Lámpara de cátodo hueco de potasio.
2.3.Procedimiento
2.3.1.Preparación de la muestra
Tomar 2,5 ml de vino (previamente diluido al 1/10), echarlosen un
matraz aforado de 50 ml, añadir 1 ml de la solución de cloruro de
cesio (2.1.3) y enrasar con agua destilada hasta la marca del aforo.
2.3.2.Calibrado
En una serie de matraces aforados de 100 ml introducir 5 ml de
solución referencia (2.1.2), echar 0; 2,0; 4,0; 6,0 y 8,0 ml de la solu-
ción de potasio de 1 g por litro (2.1.1) previamentediluida al 1/10,
añadir en todos los matraces 2 ml de la solución de cloruro de cesio
(2.1.3) y ajustar el volumen a 100 ml con agua destilada. Las solu-
cionespatrón preparadastienen un contenido de potas io de 0; 2; 4; 6
y 8 mg por litro respectivamente y 1 g de cesio por litro. Estas solu-
ciones deberán conservarse en frascos de polietileno.
2.3.3.Determinación
Seleccionar la longitud de onda 769,9 nm. Regular el cero de la
escala de absorbancia con la solución referencia que contiene 1 g
de cesio por litro (2.3.2). Aspirar directamente el vino diluido
(2.3.1) en el mechero del espectrofotómetro, y seguidamente hacer1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 134
▼B
lo mismo con las soluciones patrón (2.3.2); tomar las absorbancias.
Efectuar lasdeterminacionespor duplicado.
2.4.Expresióndelosresultados
2.4.1.Método de cálculo
Trazar la curva de variación de la absorbancia en función de la
concentración en potasio de las soluciones patrón. Llevar a esta
curva el valor medio de las absorbancias correspondientes a la
muestra de vino diluido y determinar la concentración C de potasio
en miligramospor litro.
La concentración de potasio, expresada en miligramos por litro de
vino, será:
F·CF = factor de dilución (aqui, 200).
2.4.2.Repetibilidad: r
r = 35 mg/l.
2.4.3.Reproductibilidad: R
R = 66 mg/l.
2.4.4.Otras expresiones de los resultados
— en miliequivalentespor litro: 0,256 · F · C
— en tartrato ácido de potasio en miligramos por litro:
4,813 · F · C
3. MÉTODO USUAL: ESPECTROFOTOMETRÍA DE LLAMA3.1.Reactivos
3.1.1.Solución de referencia de 100 mg de potasio por litro
Alcohol absoluto (C
2H5OH)… ..................... 10 ml
Ácido cítrico (C6H8O7,H2O)….................... 700 mg
Sacarosa (C12H22O11)…............................ 300 mg
Glicerol (C3H8O3)… ............................... 1000 mg
Cloruro de sodio (NaCl) …........................ 50,8 mg
Cloruro cálcico anhidro (Ca Cl2)… ................ 10 mg
Cloruro de magnesio anhidro (Mg Cl2)… .......... 10 mg
Tartrato ácido de potasio desecado (C4H5KO6) … ... 481,3 mg
Agua csp …....................................... 1 000 ml
Disolver el tartrato ácido de potasio en aproximadamente 500 ml de
agua destilada muy caliente, mezclar la solución con los demás
elementos previamente disueltos en 400 ml de agua destilada y
enrasar a 1 litro.
3.1.2.Solución de dilución
Alcohol absoluto (C2H5OH)… ..................... 10 ml
Ácido cítrico (C6H8O7,H2O)….................... 700 mg
Sacarosa (C12H22O11)…............................ 300 mg
Glicerol (C3H8O3)… ............................... 1000 mg
Cloruro de sodio (NaCl) …........................ 50,8 mg
Cloruro cálcico anhidro (Ca Cl2)… ................ 10 mg
Cloruro de magnesio anhidro (Mg Cl2)… .......... 10 mg
Ácido tartárico (C4H6O6)… ........................ 383 mg
Agua csp …....................................... 1 000 ml1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 135
▼B
Las soluciones se conservarán en frascos de polietileno, añadiendo 2
gotasde is otiocianato de alilo.
3.2.Material
3.2.1. Fotómetro de llama alimentado por una mezcla de aire y butano.
3.3.Procedimiento
3.3.1.Calibrado
En cuatro matracesaforadosde 100 ml, echar 25, 50, 75 y 100 ml
de la solución de referencia (3.1.1) y completar hasta 100 ml con la
solución de dilución (3.1.2). Se obtendrán soluciones con un conte-
nido de 25, 50, 75 y 100 mg por litro de potasio, respectivamente.
3.3.2.Determinación
Efectuar las medidas a 766 nm. Regular el 100 % de transmisión con
agua destilada. Aspirar directamente en el mechero del fotómetro las
soluciones patrón (3.3.1), seguidamente hacer lo mismo con el vino
diluido al 1/10 con agua destilada y tomar los porcentajes de trans-
misión. Si fuera necesario, diluir de nuevo el vino ya diluido a 1/10,
con la solución de dilución (3.1.2).
3.4.Expresióndelosresultados
3.4.1.Método de cálculo
Trazar la curva de variación de los porcentajes de transmisión en
función de la concentración en potasio de las soluciones patrón.
Llevar a esta curva la transmisión obtenida con la muestra de vino
diluido y determinar la concentración C en potasio.
La concentración en miligramos de potasio por litro será:
C·F
F = factor de dilución.
3.4.2.Repetibilidad: r
r= 17 mg/l.
3.4.3.Reproductibilidad: R
R= 66 mg/l.
3.4.4.Otras expresiones de los resultados:
— en miliequivalentespor litro: 0,0256 · F · C
— en tartrato ácido de potasio en miligramos por litro: 4,813 · F ·
C.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 136
▼B
28.MAGNESIO
1. FUNDAMENTO
El magnesio se determina directamente en el vino, convenientemente
diluido, por espectrofotometría de absorción atómica.
2. REACTIVOS
2.1.Soluciónpatrónconcentradademagnesioconuncontenidode
1gporlitro.
Utilizar una solución estándar de magnesio comercial.Dicha solución podrá prepararse disolviendo 8,3646 g de cloruro de
magnesio (MgCl
2,6H2O) en agua destilada y enrasando el volumen
a 1 litro.
2.2.Soluciónpatróndiluidademagnesio,conuncontenidode5mg
porlitro.
Nota:
Conservar las soluciones patrón de magnesio en frascos de polieti-
leno.
3. MATERIAL
3.1. Espectrofotómetro de absorción atómica equipado con un mechero
alimentado por aire y acetileno.
3.2. Lámpara de cátodo hueco de magnesio.
4. PROCEDIMIENTO
4.1.Preparacióndelamuestra
Diluir el vino a 1/100 con agua destilada.
4.2.Calibrado
En una serie de matraces aforados de 100 ml, echar 5, 10, 15 y 20 ml
de la solución 2.2 y enrasar a 100 ml con agua destilada. Las solu-
cionespreparadastienen un contenido de magnes io de 0,25, 0,50,
0,75 y 1 mg por litro respectivamente. Estas soluciones se conser-
varán en frascos de polietileno.
4.3.Determinación
Seleccionar la longitud de onda 285 nm.
Regular el cero de la escala de absorbancias con agua destilada.
Aspirar directamente el vino diluido en el mechero del espectrofotó-
metro, hacerlo a continuación con lass olucionespatrón preparadas
en 4.2.
Leer las absorbancias; efectuar las determinaciones por duplicado.
5. EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS
5.1.Métododecálculo
Trazar la curva de variación de la absorbancia en función de la
concentración en magnesio de las soluciones patrón.
Llevar a esta curva el valor medio de las absorbancias obtenidas con
la muestra de vino diluido y determinar la concentración C en
magnesio.
La concentración en magnesio, expresada en miligramos por litro de
vino sin decimales, será:
100 · C
5.2.Repetibilidad:r
r = 3 mg/l.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 137
▼B
5.3.Reproductibilidad:R
R = 8 mg/l.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 138
▼B
29.CALCIO
1. FUNDAMENTO
El calcio se determina directamente en el vino, convenientemente
diluido, por espectrofotometría de absorción atómica, previa adición
de un tampón espectral.
2. REACTIVOS
2.1.Soluciónpatróndecalcioconuncontenidode1gporlitro.
Utilizar una solución estándar de calcio comercial.
Dicha solución podrá prepararse disolviendo 2,5 g de carbonato de
calcio (Ca CO3) en la cantidad suficiente de HCl a 1/10 (v/v) para
obtener su disolución y enrasando el volumen a 1 litro con agua
destilada.
2.2.Soluciónpatróndiluidadecalcioconuncontenidode50mgpor
litro.
Nota:
Conservar las soluciones patrón de calcio en frascos de polietileno.
2.3.Solucióndeclorurodelantanode50g/lenlantano.
Disolver 13,369 g de cloruro de lantano (La Cl3,7H2O) en agua
destilada; añadir 1 ml de HCL diluido 1/10 (v/v) y enrasar a 100 ml.
3. MATERIAL
3.1. Espectrofotómetro de absorción atómica equipado con un mechero
alimentado por aire y acetileno.
3.2. Lámpara de cátodo hueco de calcio.
4. PROCEDIMIENTO
4.1.Preparacióndelamuestra
En un matraz aforado de 20 ml, echar 1 ml de vino, 2 ml de solu-
ción 2.3 y enrasar con agua destilada. El vino diluido a 1/20
contiene 5 g de lantano por litro.
Nota:
En el caso de vinos dulces, la concentración de 5 g de lantano por
litro será suficiente, siempre que la dilución lleve el contenido en
azúcaresa menosde 2,5 g por litro. Para concentracionesen
azúcares superiores, será necesario aumentar a 10 g por litro el
contenido en lantano.
4.2.Calibrado
En cinco matracesaforadosde 100 ml, echar 0, 5, 10, 15 y 20 ml de
la solución 2.2, añadir en todos los matraces 10 ml de la solución2.3 y enrasar a 100 ml con agua destilada. Las soluciones patrón
preparadastienen un contenido de calcio de 0, 2,5, 5, 7,5 y 10 mg
por litro respectivamente y5gd e lantano por litro. Estas soluciones
se conservarán en frascos de polietileno.
4.3.Determinación
Seleccionar la longitud de onda 422,7 nm. Regular el cero de la
escala de absorbancias con la solución que contiene 5 g de lantano
por litro (4.2). Aspirar directamente el vino diluido en el mechero
del espectrofotómetro, seguidamente hacer lo mismo con las solu-
ciones patrón preparadas en 4.2. Leer las absorbancias. Efectuar lasdeterminacionespor duplicado.
5. EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS
5.1.Métododecálculo
Trazar la curva de variación de la absorbancia en función de la
concentración en calcio de lass olucionespatrón.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 139
▼B
Llevar a esta curva el valor medio de las absorbancias obtenidas con
la muestra de vino diluido y determinar la concentración C en
calcio. La concentración en calcio, expresada en miligramos por litro
de vino sin decimales, será:
20 · C
5.2.Repetibilidad:r
contenido < 60 mg/l: r = 2,7 mg/l
contenido > 60 mg/l: r = 4 mg/l.
5.3.Reproductibilidad:R
R = 0,114 xi− 0,5
xi= concentración en mg/l de la muestra.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 140
▼B
30.HIERRO
1. FUNDAMENTO DE LOS MÉTODOS
Métododereferencia
El hierro se determina directamente por espectrofotometría de absor-
ción atómica, previa dilución del vino y eliminación del alcohol.
Métodousual
Después de la mineralización del vino con perhidrol, el hierro que se
encuentra en forma de hierro III se reduce al estado de hierro II y se
determina por la coloración roja que se produce con la ortofenantro-
lina.
2. MÉTODO DE REFERENCIA2.1.Reactivos
2.1.1. Solución patrón concentrada de hierro III, de 1 g/l.
Utilizar una solución estándar comercial. Esta solución puede prepa-
rarse disolviendo 8,6341 g de sulfato de hierro III [FeNH
4(SO4)2· 12H2O] y de amonio en agua destilada ligeramente acidificada
con ácido clorhídrico M y enrasando el volumen a 1 litro.
2.1.2. Solución patrón diluida de hierro, de 100 miligramospor litro.
2.2.Material
2.2.1. Rotavapor con baño de agua termostatado.2.2.2. Espectrofotómetro de absorción atómica equipado con un mechero
alimentado con aire y acetileno.
2.2.3. Lámpara de cátodo hueco de hierro.
2.3.Procedimiento
2.3.1.Preparación de la muestra
Eliminar el alcohol del vino mediante concentración del volumen de
la muestra a su mitad en un rotavapor (50-60 ºC). Completarlo a su
volumen inicial con agua destilada.
Si fuera necesario, efectuar una dilución previa a la determinación.
2.3.2.Calibrado
En una serie de matraces aforados de 100 ml, echar 1, 2, 3, 4 y 5 ml
de la solución de hierro de 100 miligramos por litro (2.1.2) y
completar hasta 100 ml con agua destilada. Las soluciones prepa-
radastendrán un contenido de hierro de 1, 2, 3, 4y5m gp o r litro.
Estas soluciones se conservarán en frascos de polietileno.
2.3.3.Determinación
Seleccionar la longitud de onda 248,3 nm. Regular el cero de la
escala de absorbancias con agua destilada. Aspirar directamente la
muestra diluida en el mechero del espectrofotómetro,seguidamente
hacer lo mismo con las soluciones patrón preparadas en 2.3.2. Leer
las absorbancias. Efectuar las determinaciones por duplicado.
2.4.Expresióndelosresultados
2.4.1.Método de cálculo
Trazar la curva de variación de la absorbancia en función de la
concentración de hierro de las soluciones patrón. Llevar a esta curva
el valor medio de la absorbancia obtenida con la muestra de vino
diluido y determinar la concentración en hierro C.
La concentración en hierro, expresada en miligramos por litro de
vino con 1 decimal, será:
C·FF = factor de dilución.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 141
▼B
3. MÉTODO USUAL
3.1.Reactivos
3.1.1. Solución de peróxido de hidrógeno (H2O2) al 30 % (m/v) exenta de
hierro.
3.1.2. Solución de ácido clorhídrico exento de hierro, 1 M.3.1.3. Hidróxido de amonio ( ρ
20= 0,92 g/ml).
3.1.4. Piedra pómez tratada con ácido clorhídrico a 1/2 hirviendo y lavada
con agua destilada.
3.1.5. Solución de hidroquinona (C6H6O2) al 2,5 %, acidificada con 1 ml de
ácido sulfúrico puro ( ρ20= 1,84 g/ml) para 100 ml de solución. Esta
solución se conservará en un frasco topacio en nevera y se sustituirá
en cuanto aparezca el másmínimo tono marrón.
3.1.6. Solución de sulfito de sodio (Na2SO3) al 20 % preparada a partir de
sulfito neutro y anhidro.
3.1.7. Solución de ortofenantrolina (C12H8N2·H2O) al 0,5 % en alcohol de
96 % vol.
3.1.8. Solución de acetato de amonio (CH3COONH4) al 20 % (m/v).
3.1.9. Solución de hierro III de 1 g de hierro por litro. Utilizar una solu-
ción estándar comercial. Esta solución puede prepararse disolviendo
8,6341 g de sulfato de hierro y de amonio [NH4Fe(SO4)2]. 12 H2Oe n
100 ml de solución 1 M de ácido clorhídrico (3.1.2) y enrasando el
volumen a 1 litro con la solución 1 M de ácido clorhídrico (3.1.2).
3.1.10. Solución patrón de hierro diluida, de 100 miligramospor litro.
3.2.Material
3.2.1. Matraz Kjeldahl de 100 ml.3.2.2. Espectrofotómetro que permita efectuar medidas a una longitud de
onda de 508 nm.
3.3.Procedimiento
3.3.1.Mineralización
3.3.1.1. Vino cuyo contenido en azúcaress ea inferior a 50 g/l:
Introducir en un matraz de Kjeldahl 25 ml de vino, 10 ml de solu-
ción de peróxido de hidrógeno (3.1.1) y algunosgranosde piedra
pómez (3.1.4). Concentrar el líquido hasta un volumen de 2 a 3 ml.
Una vez frío, añadir al residuo obtenido, sin mojar las paredes del
matraz, hidróxido de amonio (3.1.3) en la cantidad necesaria para
alcalinizar el medio y precipitar loshidróxidos .
Después de que se enfríe, añadir al líquido alcalino la solución 1 M
de ácido clorhídrico (3.1.2) en la cantidad necesaria para disolver el
precipitado de los hidróxidos y transvasar la solución obtenida a un
matraz aforado de 100 ml. Después de lavar el matraz de Kjeldahl
con la solución M de ácido clorhídrico (3.1.2), enrasar el volumen
a 100 ml con la misma solución.
3.3.1.2. Mostos y vinos cuyo contenido en azúcares sea superior a
50 g/l:
3.3.1.2.1. Contenido en azúcarescomprendido entre 50 y 200 g/l:
la muestra de 25 ml de mosto o de vino se tratará con 20 ml de solu-
ción de peróxido de hidrógeno (3.1.1).
Continuar como se describe en (3.3.1.1).
3.3.1.2.2. Contenido en azúcaress uperior a 200 g/l:
las muestras de mosto o de vino deberán diluirse previamente a 1/2
o incluso a 1/4 y tratarse como se indica en el procedimiento
3.3.1.2.1.
3.3.2.Ensayo en blanco
Efectuar un ensayo en blanco con agua destilada empleando el
mismo volumen de solución de peróxido de hidrógeno (3.1.1) que1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 142
▼B
el utilizado para la mineralización y siguiendo el protocolo experi-
mental descrito en 3.3.1.1.
3.3.3.Determinación
Tomar 20 ml de la solución clorhídrica del producto de mineraliza-
ción de la muestra (3.3.11) y 20 ml de la solución clorhídrica«ensayo en blanco» (3.3.2) e introducirlos en dos matraces aforados
de 50 ml. Añadir en cada matraz 2 ml de la solución de hidroqui-
nona (3.1.5), 2 ml de la solución de sulfito (3.1.6) y 1 ml de la
solución de ortofenantrolina (3.1.7). Dejar reposar durante 15
minutospara favorecer la reducción de Fe III en Fe II. Añadir
10 ml de la solución de acetato de amonio (3.1.8), completar el
volumen hasta 50 ml con agua destilada y agitar los dos matraces
aforados. Medir la absorbancia a 508 nm de la solución que va a
determinarse regulando el cero de la escala de absorbancias con la
solución procedente del ensayo en blanco.
3.3.4.Calibrado
En cuatro matracesaforadosde 50 ml, echar 0,5, 1, 1,5 y 2 ml de la
solución de 100 mg de hierro por litro (3.1.10) y 20 ml de agua
destilada; continuar como se indica en el procedimiento 3.3.3 y
medir la absorbancia de cada una de las soluciones patrón prepa-
radas, que corresponden, respectivamente, a 50, 100, 150 y 200
microgramosde hierro en la mues tra.
3.4.Expresióndelosresultados
3.4.1.Método de cálculo
Trazar la curva de lasvariacionesde la abs orbancia en función de la
concentración en hierro de las soluciones patrón. Leer la absorbancia
obtenida con la solución problema y determinar la concentración en
hierro C contenida en la muestra de 20 ml de solución clorhídrica de
mineralización, es decir en 5 ml de la muestra que va a analizarse.
La concentración de hierro, expresada en miligramos por litro de
vino, con 1 decimal, será:
200 · CSi el vino (o el mosto) ha sido diluido, la concentración de hierro
expresada en miligramos por litro de vino, con 1 decimal, será:
2 0 0·C·F
F = factor de dilución.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 143
▼B
31.COBRE
1. FUNDAMENTO DEL MÉTODO
Empleo de la espectrofotometría de absorción atómica.
2. MATERIAL
2.1. Cápsula de platino.2.2. Espectrofotómetro de absorción atómica.2.3. Lámpara de cátodo hueco de cobre.2.4. Gasde alimentación: aire, acetileno y/o protóxido de nitrógeno.
3. REACTIVOS
3.1. Cobre metálico.
3.2. Ácido nítrico concentrado al 65 % (HNO
3,ρ20= 1,38 g/ml).
3.3. Ácido nítrico diluido al 1/2 (v/v).
3.4.Solucióndecobrede1g/l
Utilizar una solución estándar de cobre comercial.Esta solución podrá prepararse pesando 1 000 g de cobre metálico y
transfiriendo cuantitativamente en un matraz aforado de 1 000 ml.
Añadir ácido nítrico diluido a 1/2 (3.3) en cantidad estrictamente
suficiente para disolver el metal, añadir 10 ml de ácido nítrico
concentrado (3.2) y enrasar con agua bidestilada.
3.5.Solucióndecobrede100mg/l.
Tomar 10 ml de la solución 3.4 e introducirlos en un matraz aforado
de 100 ml, completando el volumen con agua bidestilada.
4. PROCEDIMIENTO4.1.Preparacióndelamuestraydeterminacióndelcobre
En caso necesario, preparar una dilución adecuada con agua bidesti-
lada.
4.2.Calibrado
Tomar 0,5, 1, 2 ml de la solución 3.5 (100 mg de cobre por litro) e
introducirlosen matracesaforadosde 100 ml completando el
volumen con agua bidestilada; las soluciones obtenidas contendrán
respectivamente 0,5, 1, 2 mg/l de cobre. Con los valores de absor-
bancias de estas soluciones, medidas como se especifica en 4.1,
trazar la curva de calibrado.
4.3.Dosificación
Seleccionar la longitud de onda 324,8 nm. Ajustar a cero la escala
de las absorbancias con el agua bidestilada. Aspirar directamente la
muestra diluida en el mechero del espectrofotómetro, después suce-
sivamente las soluciones patrón preparadas en 4.2. Hallar las
absorbancias. Efectuar las determinaciones por duplicado.
5. EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS5.1.Mododecálculo
Construir la curva de variación de la absorbancia en función de la
concentración en hierro de lass olucionespatrón.
Trasladar a la curva patrón la absorbancia leída para la muestra de
vino diluido y hallar la concentración C en mg/l.
Si F esel factor de dilución el contenido de cobre del vino s erá en
miligramos por litro: F · C y se dará con 2 decimales.
Observaciones:
a) Las soluciones para establecer la curva patrón y las diluciones de
la muestra deben elegirse en función de la sensibilidad del1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 144
▼B
aparato utilizado y de la concentración del cobre presente en la
muestra.
b) Cuando en la muestra hay concentraciones muy bajas de cobre, el
procedimiento es el siguiente: echar 100 ml de muestra en una
cápsula de platino, evaporar en un baño de agua a 100 ºC hasta
que adquiera una consistencia de jarabe, añadir, gota a gota,
2,5 ml de ácido nítrico concentrado (3.2) intentando cubrir todo
el fondo de la cápsula. Incinerar con precaución el residuo en
una placa calentadora eléctrica o sobre una pequeña llama; intro-
ducir a continuación la cápsula en un horno de mufla regulado a
500 ºC ± 25 ºC, manteniéndola una hora aproximadamente.
Cuando se haya enfriado, humedecer las cenizas con 1 ml de
ácido nítrico concentrado (3.2), triturándolascon una pequeña
varilla de vidrio, evaporar e incinerar de nuevo como en el caso
anterior. Meter otra vez la cápsula en el horno durante 15
minutos; repetir tres veces, como mínimo, este tratamiento con
ácido nítrico concentrado. Solubilizar lascenizasañadiendo en
la cápsula 1 ml de ácido nítrico concentrado (3.2) y 2 ml de
agua bidestilada; pasar a un matraz aforado de 10 ml. Lavar la
cápsula tres veces con 2 ml de agua bidestilada cada vez y
enrasar con agua bidestilada.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 145
▼B
32.CADMIO
1. PRINCIPIO DEL MÉTODO
El cadmio se dosifica directamente en el vino por espectrofotometria
de absorción atómica sin llama.
2. MATERIAL
Todo el vidrio debe ser lavado antes de su uso con ácido nítrico
concentrado caliente (70 a 80 ºC) y enjuagado con agua bidestilada.
2.1. Espectrofotómetro de absorción atómica equipado con horno de
grafito, corrector de ruido de fondo y de un registrador multipoten-
ciométrico.
2.2. Lámpara de cátodo hueco de cadmio.
2.3. Micropipetas de 5 µl provistas de puntas desechables especiales para
medidasde abs orción atómica.
3. REACTIVOS
El agua utilizada debe ser agua bidestilada en un aparato de vidrio
borosilicatado o agua de pureza equivalente. Todos los reactivos
deben ser de pureza analítica reconocida y, en particular, estar
exentosde cadmio.
3.1. Ácido fosfórico del 85 % ( ρ20= 1,71 g/ml).
3.2. Solución de ácido fosfórico obtenido por dilución de 8 ml de ácido
fosfórico a 100 ml con agua.
3.3. Solución 0,02 M de la sal disódica del ácido etilendiaminotetracético
(EDTA).
3.4. Solución tampón de pH 9 obtenido disolviendo en un matraz aforado
de 100 ml 5,4 g de cloruro amónico en algunosmililitrosde agua, s e
añade 35 ml de solución de hidróxido amónico ( ρ20= 0,92 g/ml)
diluido a 25 % (v/v) y se enrasa con agua.
3.5. Negro de eriocromo T: dilución sólida al 1 % (m/m) en cloruro
sódico.
3.6.Sulfatodecadmio(3CdSO4,8H2O).
La pureza del sulfato de cadmio debe ser comprobada según el
siguiente procedimiento:
Pesar exactamente 102,6 mg de sulfato de cadmio, arrastrar con agua
cuantitativamente a un vaso de precipitado, agitar hasta que se
produzca la disolución, añadir 5 ml de la solución tampón de pH 9,
20 mg, aproximadamente, de negro de eriocromo T. Valorar con la
solución de EDTA, hasta que se produzca el virage del indicador al
azul.
El volumen de EDTA añadido debe ser igual a 20 ml. Si el volumen
difiere poco, corregir adecuadamente la pesada de sulfato de cadmio
utilizada para la preparación de la solución de referencia.
3.7.Solucióndereferenciade1gporlitrodecadmio.
Utilizar una solución estándar del comercio. Esta solución también
puede ser obtenida disolviendo 2,2820 g de sulfato de cadmio en
agua y enrasando a 1 litro con agua destilada. Conservar esta solu-
ción en un matraz de vidrio borosilicatado con tapón esmerilado.
4. PROCEDIMIENTO
4.1.Preparacióndelamuestra
Diluir el vino a 1/2 (v/v) con la solución de ácido fosfórico.
4.2.Preparacióndelassolucionesdelacurvadecalibrado.
A partir de la solución de referencia de cadmio, preparar por dilu-
ciones sucesivas soluciones de 2,5-5-10-15 microgramos por litro
de cadmio.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 146
▼B
4.3.Determinación
4.3.1.Programa del horno (se propone a título indicativo)
Secado a 100 ºC durante 30 segundos.Mineralización a 900 ºC durante 20 segundos.
Atomización a 2 250 ºC de 2 a 3 segundos.
Flujo de nitrógeno (gasde trans porte): 6 litrospor minuto.Nota:
Al final de la operación, subir la temperatura hasta 2 700 ºC, para
purgar el horno.
4.3.2.Medida en absorción atómica.
Seleccionar la longitud de onda a 228,8 nm. Ajustar el cero de la
escala de absorbancia con agua bidestilada. Inyectar en el horno,
mediante una micropipeta, tresveces5 µl cada una de lass oluciones
de la escala de patrones y de la solución de muestra que se va a
analizar. Registrar las absorbancias medidas. Calcular el valor medio
de la absorbancia a partir de los resultados relativos de las tres
inyecciones.
5. EXPRESIÓN DE RESULTADOS5.1.Cálculo
Representar la curva de las absorbancias en función de las concen-
traciones de cadmio de las soluciones de la escala de patrones. La
curva eslineal. Llevar el valor medio de la abs orbancia de la
muestra a analizar sobre la recta de calibrado, obteniendo la concen-
tración C de cadmio. La concentración en cadmio expresada en
microgramospor litro del vino esigual a:
2C1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 147
▼B
33.PLATA
1. FUNDAMENTO DEL MÉTODO
Empleo de la espectrofotometría de absorción atómica, previa mine-
ralización de la muestra.
2. MATERIAL
2.1. Cápsula de platino.
2.2. Baño de agua a una temperatura de 100 ºC.
2.3. Horno regulado de 500 a 525 ºC.2.4. Espectrofotómetro de absorción atómica.2.5. Lámpara de cátodo hueco de plata.2.6. Gasde alimentación: aire, acetileno.
3. REACTIVOS
3.1. Nitrato de plata (AgNO
3).
3.2. Ácido nítrico concentrado al 65 % (HNO3),ρ20= 1,38 g/ml).
3.3. Ácido nítrico diluido al 1/10 (v/v).
3.4.Solucióndeplatade1g/l.
Utilizar una solución estándar de plata comercial. Esta solución
puede prepararse disolviendo 1,575 g de nitrato de plata en ácido
nítrico diluido y enrasando hasta 1 000 ml con ácido nítrico diluido
(3.3).
3.5.Solucióndeplatade10mg/l
Se diluyen 10 ml de la solución 3.4 hasta 1 000 ml con ácido nítrico
diluido (3.3).
4. PROCEDIMIENTO4.1.Preparacióndelamuestra
Echar 20 ml de muestra en una cápsula de platino y evaporar a
sequedad en un baño de agua en ebullición. Incinerar hasta que se
conviertan en cenizasblancasen un horno eléctrico de 500 a
525 ºC. Recoger lascenizascon 1 ml de ácido nítrico concentrado
(3.2), evaporar en un baño de agua a 100 ºC, volver a añadir 1 ml
de ácido nítrico (3.2) y evaporar. Añadir 5 ml de ácido nítrico
diluido (3.3) y calentar ligeramente hasta disolución.
4.2.Calibrado
Echar 2, 4, 6, 8, 10 y 20 ml de solución (3.5) de 10 mg por litro de
plata en una serie de matraces aforados de 100 ml y enrasar con el
ácido nítrico diluido (3.3). Estas soluciones contienen 0,20; 0,40;
0,60; 0,80; 1,0 y 2,0 mg/l de plata.
4.3.Determinación
Seleccionar la longitud de onda 328, 1 nm. Ajustar el cero de la
escala de absorbancias con el ácido nítrico diluido (3.3). Aspirar
directamente el líquido obtenido según 4.1 en elmechero del espec-
trofotómetro y seguidamente las soluciones patrón. Anotar las
absorbancias. Efectuar las determinaciones por duplicado.
5. EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS5.1.Métododecálculo
Trazar la curva de variación de la absorbancia en función de la
concentración en plata de lass olucionespatrón.
Llevar la absorbancia leída para la solución obtenida según 4.1 sobre
la curva de calibrado y obtener la concentración Cen mg/l.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 148
▼B
El contenido de plata en el vino, expresado en mg/l es: 0,25 ºC; este
dato se da con 2 decimales.
Nota:
Lass olucionesde referencia para obtener la curva de calibrado, la
cantidad de muestra tomada y el volumen final de líquido, puedenmodificarse en función de la sensibilidad del aparato utilizado.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 149
▼B
34.CINC
1. FUNDAMENTO
El cinc se determina directamente en el vino desalcoholizado por
espectrofotometría de absorción atómica.
2. REACTIVOS
El agua utilizada debe ser agua bidestilada en un aparato de vidrio
borosilicatado o agua de pureza equivalente.
2.1. Solución patrón de cinc de 1 g por litro.
Utilizar una solución estándar de cinc comercial. Esta solución
puede prepararse disolviendo 4,3975 g de sulfato de cinc (Zn SO4,
7H2O) en agua y enrasando el volumen a 1 litro.
2.2. Solución patrón diluida de cinc de 100 miligramospor litro.
3. MATERIAL
3.1. Rotavapor con termostato.
3.2. Espectrofotómetro de absorción atómica equipado con un mechero
alimentado con aire y acetileno.
3.3. Lámpara de cátodo hueco de cinc.
4. PROCEDIMIENTO4.1.Preparacióndelamuestra
Eliminar el alcohol del vino mediante concentración al ½ de 100 ml
de vino en un rotavapor (temperatura: 50 a 60 ºC). Completar hasta
el volumen inicial de 100 ml con agua bidestilada.
4.2.Calibrado
En cuatro matracesaforadosde 100 ml, echar 0,5; 1; 1,5 y 2 ml de
la solución de cinc de 100 mg/l (2.2) y enrasar a la marca de aforo
con agua bidestilada. Las soluciones patrón corresponden respectiva-
mente a 0,5; 1; 1,5 y 2 mg de cinc por litro.
4.3.Determinación
Seleccionar la longitud de onda 213,9 nm. Regular el cero de la
escala de absorbancias con agua bidestilada. Aspirar directamente el
vino en el mechero del espectrofotómetro, seguidamente hacer lo
mismo con las soluciones patrón. Tomar las absorbancias. Efectuar
lasdeterminacionespor duplicado.
5. EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS5.1.Métododecálculo
Trazar la curva de variación de la absorbancia en función de la
concentración de cinc de las soluciones patrón. Trasladar el valor
medio de lasabs orbanciasobtenidascon el vino y determinar la
concentración de cinc en miligramospor litro de vino, con 1
decimal.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 150
▼B
35.PLOMO
1. PRINCIPIO DEL MÉTODO
El plomo esmedido directamente del vino por es pectrofotometría de
absorción atómica sin llama.
2. MATERIAL
Todo el material de vidrio se lavará con ácido nítrico concentrado
caliente (70 a 80 ºC) y aclarado con agua destilada.
2.1. Espectrofotometría de absorción atómica equipado con horno de
grafito, corrector de absorción no específica y registrador multipo-
tenciométrico.
2.2. Lámpara de plomo de cátodo hueco.
2.3. Micropipeta de 5 µl provista de puntas desechables para medidas de
absorción atómica.
3. REACTIVOS
Todoslosreactivosdeben s er de pureza analítica reconocida y en
particular estar exentos de plomo. El agua utilizada debe ser agua
bidestilada en un aparato de vidrio borosilicatado o agua de pureza
equivalente.
3.1. Ácido fosfórico 85 % ( ρ20= 1,71 g/ml).
3.2. Solución de ácido fosfórico obtenida por dilución de 8 ml de ácido
enrasados a 100 ml con agua destilada.
3.3. Ácido nítrico ( ρ20= 1,38 g/ml).
3.4. Solución de plomo a 1 g por litro.
Utilizar una solución estándar comercial. Esta solución puede obte-
nerse por disolución de 1 600 g de nitrato de plomo II, Pb(NO3)2en
ácido nítrico diluido al 1 % v/v y enrasar a 1 litro. Conservar la
solución en matraz de vidrio borosilicatado con tapón esmerilado.
4. PROCEDIMIENTO4.1.Preparacióndelamuestra
Diluir el vino a ½ o ⅓con la solución de ácido fosfórico según la
concentración esperada de plomo.
4.2.Preparacióndelassolucionesdelaescaladepatrones.
A partir de la solución de referencia de plomo, preparar por dilu-
ciones sucesivas con agua destilada las soluciones patrón que
contengan respectivamente 25, 50, 100 y 150 µg de plomo por litro.
4.3.Determinación
4.3.1.Programa del horno (propuesto a título indicativo).
Secado a 100 ºC durante 30 segundos.Mineralización a 900 ºC durante 20 segundos.
Atomización a 2 250 ºC de 2 a 3 segundos.
Flujo del nitrógeno (gasde trans porte) 6 litrospor minuto.Nota:Al final de la operación elevar la temperatura a 2 700 ºC para purgar
el horno.
4.3.2.Medidas
Seleccionar la longitud de onda a 217 nm. Regular el cero de la
escala de absorbancias con agua bidestilada. Inyectar en el horno
ya programado, con la ayuda de una micropipeta, tresveces5 µl de
cada una de las soluciones de la escala de patrones y de la solución
de la muestra a analizar. Registrar las medidas de absorbancia.
Calcular el valor medio de la absorbancia a partir de los resultados
de lastresinyecciones .1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 151
▼B
5. EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS
5.1.Cálculo
Representar la curva de los valores de absorbancia en función de las
concentraciones de plomo de las soluciones de la escala de patrones.
La variación eslineal. Llevar el valor medio de la abs orbancia de la
muestra a analizar sobre la recta de calibrado, sacar la concentración
C en plomo de la muestra. La concentración en plomo expresada en
microgramospor litro de vino esigual a:
C×F
F = factor de dilución.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 152
▼B
36.FLUORUROS
1. FUNDAMENTO DEL MÉTODO
El contenido en fluorurosdel vino, con adición de una s olución
tampón, se determina con ayuda de un electrodo específico con
membrana sólida. El potencial medido es proporcional al logaritmo
de la actividad de los iones fluoruro en el medio estudiado según la
relación:
E=Eo± S log aF
E = potencial del electrodo iónico específico medido con relación
al electrodo de referencia en el medio estudiado.
Eo= potencial patrón de la célula de medida.
S = pendiente del electrodo iónico específico (factor de Nernst).
A 25 ºC la pendiente teórica esigual a 59,2 mV.
aF= actividad de los iones fluoruro en la solución estudiada.
2. MATERIAL
2.1. Electrodo con membrana cristalina específica del ion flúor.
2.2. Electrodo de referencia (calomelanoso Ag/AgCl)2.3. Milivoltímetro (pH-metro con graduación en milivoltios) de preci-
sión 0,1 mV.
2.4. Agitador magnético con placa de aislante para proteger la solución
del calor del motor. Imán agitador recubierto de plástico (polietileno
o material equivalente).
2.5. Vasos de plástico de 30 o 50 ml y frascos de plástico (polietileno o
material equivalente).
2.6. Pipetasde precis ión (pipetasgraduadasen microlitrosu otrasequi-
valentes).
3. REACTIVOS
3.1. Solución madre de fluoruro de 1 g/l.
Utilizar una solución comercial estándar de 1 g/l. Esta solución
puede prepararse disolviendo 2,210 g de fluoruro sódico (desecado
a 105 ºC durante 3 o 4 horas) en agua destilada. Enrasar con agua
destilada a 1 l. La solución se conserva en frasco de plástico.
3.2. Las soluciones patrón de fluoruro de concentración apropiada se
preparan por dilución de la solución madre con agua destilada y
conservadas en frascos de plástico. Las soluciones patrón con un
contenido en fluoruro del orden de mg/l deben ser preparadas inme-
diatamente antesde s u empleo.
3.3. Solución tampón pH 5,5.
10 g de ácido ciclohexano-diamino (1,2) tetraacético (CDTA) se
disuelven en 50 ml de agua, añadir una solución que contenga 58 g
de cloruro sódico y 29,4 g de citrato trisódico en 700 ml de agua
destilada. El CDTA se disuelve añadiendo una solución de hidróxido
sódico al 32 % (m/v) (aproximadamente 6 ml).
Añadir 57 ml de ácido acético (densidad ρ
20= 1,05 g/ml) y ajustar
el pH a 5,5 con la solución de hidróxido sódico al 32 % (aproxima-
damente 45 ml). Dejar enfriar y llevar a 1 l con agua destilada.
4. PROCEDIMIENTO
Observación preliminar:
Debe tenerse la precaución de que todas las soluciones conserven
durante la medición una temperatura de 25 ± 1 ºC (una desviación
de ± 1 ºC provoca una modificación de ± 0,2 mV).
4.1.Métododirecto
En un vaso de plástico introducir un volumen de vino y un volumen
igual de solución tampón.
Se agita la solución moderadamente. Cuando el aparato de medida
esté estable (se obtiene la estabilidad cuando el potencial varíe1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 153
▼B
como máximo de 0,2 a 0,3 mV/3 min), leer el valor del potencial en
mV.
4.2.Métododeadicionesconocidas
Sin interrumpir la agitación, se añade a la muestra a analizar
mediante una pipeta de precisión un volumen conocido de solución
patrón de fluoruros. Cuando el aparato de medida esté estable, leer
el valor del potencial en mV.
Elegir la concentración de la solución patrón de la siguiente forma:
a) doblar o triplicar la concentración en fluoruro de la muestra estu-
diada;
b) el volumen del medio estudiado debe permanecer prácticamente
constante
(aumento de volumen ≤1 %).
(La condición b simplifica los cálculos; ver 5.)
La concentración aproximada del medio estudiado se lleva sobre una
recta de calibrado trazada en coordenadass emilogarítmicascon las
soluciones patrón que contengan 0,1; 0,2; 0,5; 1,0; 2,0 mg/l de fluo-
ruros.
Observación.
Si la concentración aproximada del medio sobrepasa la concentra-
ción de las soluciones patrón, diluir la muestra.
Ejemplo:
Sea 0,25 mg/l F−la concentración aproximada del medio estudiado
(volumen 20 ml); la concentración debe ser aumentada en 0,25 mg/
l. Para ello añadir, por ejemplo, a la solución, con la pipeta de preci-
sión adecuada 0,20 ml (= 1 %) de una solución patrón que contenga
25 mg/l F−o 0,050 ml de una solución patrón de 100 mg/l F−.
5. CÁLCULOS
El contenido en fluoruros del medio estudiado expresado en mili-
gramos por litro se obtiene mediante la siguiente fórmula:
CF¼Ca/C2Va
Vo/C21
antilog ∆E=S ðÞ /C0 1
F= concentración en fluoruro del medio estudiado (mg/l)
Ca= concentración de fluoruro añadido en mg/l en el medio estu-
diado (Va)
Va= volumen en ml de la solución patrón adicionada
Vo= volumen inicial del medio estudiado (antes de la adición)
∆E = diferencia entre lospotencialesE1yE2obtenidosen 4.1 y
4.2 en mV
S = pendiente del electrodo en la solución estudiada.
Si Vaesmuy próximo a Vo(véase 4.2) la fórmula se simplifica:
CF¼Ca/C21
antilog ∆E=S ðÞ /C0 1
El valor obtenido debe multiplicarse por el factor de dilución que
proviene de la adición del tampón.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 154
▼B
37.DIÓXIDODECARBONO
1. FUNDAMENTO DE LOS MÉTODOS1.1.Métododereferencia
1.1.1.Caso de vinos tranquilos (sobrepresión de CO
2≤0,5 · 105Pa) (1)
El volumen de vino tomado de la muestra y llevado a una tempera-
tura próxima a los 0 ºC se vierte en un exceso suficiente de solución
valorada de hidróxido de sodio para lograr un pH de 10 a 11. Se
valora con una solución ácida en presencia de anhidrasa carbónica.
El contenido en dióxido de carbono se deduce del volumen
empleado para pasar de pH 8,6 (forma carbonato ácido) a 4,0
(ácido carbónico). Una valoración testigo efectuada en las mismas
condiciones sobre el vino desprovisto de CO2permite tener en
cuenta el volumen de solución de hidróxido de sodio consumido
por losácidosdel vino.
1.1.2.Caso de vinos de aguja y vinos espumosos
Se lleva la muestra de vino que deba analizarse cerca de su punto de
congelación. Después de tomar un cierto volumen que servirá de
testigo una vez desprovisto de CO2, se alcaliniza el resto de la
botella para fijar todo el CO2en forma de Na2CO3. Se valora con
una solución ácida en presencia de anhidrasa carbónica. El contenido
en dióxido de carbono se deduce del volumen de solución ácida
empleado para pasar de pH 8,6 (forma carbonato ácido) a pH 4,0
en ácido carbónico. Una valoración testigo efectuada en las mismas
condiciones sobre el vino desprovisto de CO2permite tener en
cuenta el volumen de solución de hidróxido de sodio consumido
por losácidosdel vino.
1.2.Métodousual: en el caso de los vinos de aguja y espumosos
Método manométrico: medida de la sobrepresión de dióxido de
carbono directamente en la botella utilizando un afrómetro.
2. MÉTODO DE REFERENCIA
2.1. Caso de vinos tranquilos (sobrepresión de dióxido de carbono
≤0,5 · 105Pa).
2.1.1.Material
2.1.1.1. Agitador magnético.
2.1.1.2. pH-metro.
2.1.2.Reactivos
2.1.2.1. Solución de hidróxido de sodio (NaOH), 0,1 M.2.1.2.2. Solución de ácido sulfúrico (H
2SO4), 0,05 M.
2.1.2.3. Solución de 1 g/l de anhidrasa carbónica.
2.1.3.Procedimiento
Enfriar la muestra de vino hasta los 0 ºC, aproximadamente, así
como la pipeta de 10 ml que sirva para la toma de muestra.
Tomar en un vaso de precipitados de 100 ml, 25 ml de solución de
hidróxido de sodio (2.1.2.1); añadir 2 gotas de solución acuosa da
anhidrasa carbónica (2.1.2.3). Introducir 10 ml de vino con ayuda
de la pipeta enfriada a 0 ºC.
Poner el vaso de precipitados en el agitador magnético, colocar el
electrodo y la varilla magnética y llevar a cabo una agitación mode-
rada.
Cuando el líquido esté a la temperatura ambiente, echar, mediante
afusión lenta, la solución de ácido sulfúrico (2.1.2.2) hasta lograr el
pH 8,6.
Continuar las afusiones de ácido sulfúrico (2.1.2.2) hasta pH 4,0. Sea
n′ml el volumen utilizado entre el pH 8,6 y 4,0.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 155
(1)1 05pascal (Pa) = 1 bar.
▼B
Por otro lado, eliminar el CO2de 50 ml de vino, aproximadamente,
agitando bajo vacío durante tresminutosy calentando el matraz en
un baño de agua a 25 ºC aproximadamente.
Aplicar el procedimiento anterior a 10 ml de vino desprovisto de
CO2: sea n′ml el volumen utilizado.
2.1.4.Expresión de los resultados
1 ml de solución valorada de hidróxido de sodio 0,1 M corresponde
a 4,4 mg de CO2.
La cantidad de CO2en gramos por litro de vino se expresa mediante:
0,44 (n − n ′)
con 2 decimales.
Observación:
En el caso de vinos con bajo contenido de CO2(CO2< 1 g/l), no es
necesaria la adición de anhidrasa carbónica para catalizar la hidrata-
ción del CO2.
2.2.Casodevinosdeagujayvinosespumosos
2.2.1.Material
2.2.1.1. Agitador magnético.
2.2.1.2. pH-metro.
2.2.2.Reactivos
2.2.2.1. Solución de hidróxido de sodio al 50 % (m/m) (NaOH).
2.2.2.2. Solución de ácido sulfúrico (H2SO4), 0,05 M.
2.2.2.3. Solución de 1 g/l de anhidrasa carbónica.
2.2.3.Procedimiento
Trazar una marca, al nivel del llenado, sobre la botella de vino que
deba analizarse y enfriarla hasta el inicio de la congelación.
Dejar que la botella se caliente ligeramente, agitando hasta que
desparezcan los cristales de hielo.
Destapar rápidamente y apartar en una probeta graduada 45 a 50 ml
de vino que servirán para la determinación testigo. El volumen
exacto de esta toma, v ml, se determinará mediante lectura sobre la
probeta, cuando el vino esté a la temperatura ambiente.
Añadir, inmediatamente después de haber efectuado la toma, 20 ml
de solución de hidróxido de sodio (2.2.2.1) en la botella para un
contenido de 750 ml.
Esperar a que el vino esté de nuevo a temperatura ambiente.
Colocar en un vaso de precipitados de 100 ml, 30 ml de agua desti-
lada hervida y 2 gotas de solución de anhidrasa carbónica (2.2.2.3).
Añadir 10 ml de vino alcalinizado.
Poner el vaso en el agitador magnético, colocar el electrodo y la
varilla magnética y llevar a cabo una agitación moderada.
Echar, mediante afusión lenta, la solución (2.2.2.2) de ácido sulfú-
rico hasta lograr el pH 8,6.
Continuar las afusiones de ácido sulfúrico (2.2.2.2) hasta pH 4,0. Sea
n ml el volumen utilizado entre pH 8,6 y 4,0.
Por otro lado, eliminar el CO2de losv ml de vino apartadospara la
determinación testigo, agitando bajo vacío durante tres minutes y
calentando el matraz en un baño de agua a 25 ºC aproximadamente.
Tomar 10 ml de vino desprovisto de CO2en 30 ml de agua destilada
hervida, añadir 2 o 3 gotas de solución de hidróxido de sodio
(2.2.2.1) para llevar el pH a 10-11. Aplicar después el procedimiento
anterior. Sea n ′ml el volumen de ácido sulfúrico 0,05 M empleado.
2.2.4.Expresión de los resultados
1 ml de solución de ácido sulfúrico 0,1 M corresponde a 4,4 mg de
CO2.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 156
▼B
Vaciar la botella del vino alcalinizado y determinar con una aproxi-
mación de 1 ml el volumen inicial de vino, llenándola con agua
hasta la marca, sea V ml.
La cantidad de CO2en gramos por litro de vino se expresa mediante:
0;44 n /C0n0ðÞ /C1V/C0vþ20
V/C0v
y con 2 decimales.
2.3.Cálculodelasobrepresión
La sobrepresión a 20 ºC, Paph20, expresado en pascales, viene dada
por la fórmula:
Paph 20 ¼Q
1;951/C210/C050;86/C00;01 A ðÞ 1/C00;00144 S ðÞ/C0Patm
Siendo:
Q: contenido en gramosde CO2por litro de vino,
A: grado alcohólico del vino a 20 ºC,S: contenido en azúcaresdel vino en gramospor litro,Patm: presión atmosférica expresada en pascales.
3. MÉTODO USUAL (VINOS DE AGUJA Y ESPUMOSOS)
3.1.Material
3.1.1.Afrómetro
Es un aparato que sirve para medir la sobrepresión en las botellas de
vinos de aguja y espumosos; tiene distintas presentaciones que
dependen del tapón de la botella (cápsula metálica, corona, tapón
de corcho o de plástico; véanse figuras 1 y 2).
Están graduados en pascales (abreviatura: Pa) (
1). Resulta más
práctico utilizar el 105pascal (105Pa) o el kilopascal (kPa) como
unidad.
Pueden ser de distintas clases. La clase de un manómetro es la preci-
sión de la lectura respecto de la escala completa expresada en
términosporcentuales(ejemplo «manómetro 1 000 kPa clas e 1»
significa presión de utilización máxima 1 000 kPa lectura a
± 10 kPa). La clase 1 se recomienda para lecturas precisas.
Losafrómetrosdeben verificars e con regularidad (al menosuna vez
al año).
3.2.Procedimiento
La medida debe efectuarse en botellas cuya temperatura esté estabi-
lizada desde, como mímimo, 24 horas antes.
Tras haber perforado la cápsula o el tapón, la botella debe agitarse
vigorosamente hasta obtener una presión constante para efectuar la
lectura.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 157
(1) 1 pascal (Pa) = 1 N/m2=1 0−5bares.
▼B
Figura 1 — Afrómetro para cápsulas
 Figura 2 — Afrómetro para tapones
3.3.Expresióndelosresultados
La sobrepresión a 20 ºC (Paph20) se expresa en pascales (Pa) o kilo-
pascales (kPa).
Deberá concordar con la precisión del manómetro (ejemplo: 6,3 105
Pa o 6,3 kPa y no 6,33 105Pa o 633 kPa para un manómetro
1000 kPa de escala completa y de clase 1).
Cuando la temperatura de medida difiera de 20 ºC, resulta conve-
niente corregir multiplicando la presión medida por el coeficiente
Paph20
Papht;
indicado en la tabla 1 para volver a la temperatura de 20 ºC.
4. RELACIÓN ENTRE LA PRESIÓN Y LA CANTIDAD DE
DIÓXIDO DE CARBONO PRESENTE EN UN VINO ESPU-
MOSO (1)
A partir de la sobrepresión a 20 ºC (Paph20), se calcula la presión
absoluta a 20 ºC (Pabs20) de acuerdo con la fórmula:
Pabs20= Patm + Paph20
Patm = presión atmosférica expresada en pascales.La cantidad de dióxido de carbono contenida en un vino viene dada
por las siguientes relaciones:
— en litrosde CO
2por litro de vino:
0,987 · 10−5Pabs20(0,86 − 0,01A) (1 − 0,00144S)
— en gramosde CO2por litro de vino:
1,951 · 10−5Pabs20(0,86 − 0,01A) (1 − 0,00144S)
en lasque:1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 158
(1) No se tiene en cuenta la presencia de otros gases (O2,N2, etc.) en cantidadestan bajas
que no tengan influencias sobre la sobrepresión.
▼B
A = grado alcohólico del vino a 20 ºC.
S = contenido en azúcaresdel vino, expres ado en gramospor litro.
TABLA 1
RelaciónentrelasobrepresiónPaph20devinosdeagujayespumososa20ºC
alasobrepresiónPaphtaunatemperaturat
0 1,85 13 1,24
1 1,80 14 1,20
2 1,74 15 1,16
3 1,68 16 1,13
4 1,64 17 1,09
5 1,59 18 1,06
6 1,54 19 1,03
7 1,50 20 1,00
8 1,45 21 0,97
9 1,40 22 0,95
10 1,36 23 0,93
11 1,32 24 0,91
12 1,28 25 0,881990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 159
▼M7
38.CIANODERIVADOS
(Atención: Respetar las normas de seguridad para las manipulaciones de
productos químicos, para la cloramina T, la piridina, el cianuro potásico, ácido
clorhídrico, y ácido fosfórico; deshacerse de los productos empleados de manera
apropiada y compatible con lasnormasy reglamentosecológicosaplicables .
Precaución con el ácido cianhídrico liberado en el proceso de destilación del
vino acidulado).
1. PRINCIPIO DEL MÉTODO
El ácido cianhídrico libre y total del vino se libera por hidrólisis
ácida y se separa por destilación. Tras reaccionar con la cloramina
T y la piridina, el dialdehído glutacónico formado se determina
mediante colorimetría, graciasa la coloración azul que da con el
ácido 1,3-dimetilbarbitúrico.
2. MATERIAL
2.1.Aparatodedestilación
Utilizar el aparato de destilación descrito para la determinación del
grado alcohólico del vino.
2.2. Matraz redondo de esmerilado normalizado, de 500 ml.2.3. Baño de agua, que permita la regulación a 20 ºC.2.4. Espectrofotómetro que permita medir la absorbancia a una longitud
de onda de 590 nm.
2.5. Cubetas de vidrio o de un solo uso, de 20 mm de trayecto óptico.
3. REACTIVOS
3.1. Ácido fosfórico (H
3PO4) al 25 % (m/v).
3.2. Solución de cloramina T (C7H7ClNNa O2S, 3H2O) al 3 % (m/v).
3.3. Solución de ácido 1,3-dimetilbarbitúrico: disolver 3,658 g de ácido
1,3-dimetilbarbitúrico (C6H8N2O3) en 15 ml de piridina y 3 ml de
ácido clorhídrico ( ρ20= 1,19 g/ml) y enrasar a 50 ml con agua desti-
lada.
3.4. Cianuro de potasio (KCN).3.5. Solución de yoduro de potasio (KI) al 10 % (m/v).3.6. Solución de nitrato de plata (AgNO
3), 0,1 M.
4. PROCEDIMIENTO4.1.Destilación
En el matraz de 500 ml (2.2), colocar 25 ml de vino, 50 ml de agua
destilada, 1 ml de ácido fosfórico (3.1) y algunas perlas de vidrio.
Colocar inmediatamente el matraz en el aparato de destilación.
Recoger el destilado, mediante una alargadera, en un matraz aforado
de 50 ml que contenga 10 ml de agua y esté sumergido en agua
helada. Recoger de 30 a 35 ml de destilado (esto es, hasta que haya
en total unos45 ml de líquido en el matraz aforado).
Lavar la alargadera del refrigerante con algunosmililitrosde agua
destilada, llevar el destilado a 20 ºC y enrasar con agua destilada.
4.2.Medida
Poner 25 ml de destilado en un matraz Erlenmeyer de 50 ml provisto
de tapón esmerilado, añadir 1 ml de solución de cloramina T (3.2) y
cerrar herméticamente. Transcurridos 60 segundos exactamente,
añadir 3 ml de solución de ácido 1,3-dimetilbarbitúrico (3.3), cerrar
herméticamente y dejar en reposo durante 10 minutos. A continua-
ción, medir la absorbancia con relación al testigo (25 ml de agua
destilada en lugar de 25 ml de destilado) a una longitud de onda de
590 nm en lascubetasde 20 mm de trayecto óptico.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 160
▼M7
5. DETERMINACIÓN DE LA CURVA DE CALIBRADO
5.1.Valoraciónargentimétricadelcianurodepotasio
En un matraz aforado de 300 ml, disolver unos 0,2 g de KCN (3.4)
exactamente pesados en 100 ml de agua destilada. Añadir 0,2 ml de
solución de yoduro de potasio (3.5) y valorar con la solución de
nitrato de plata 0,1 M (3.6) hasta obtener una coloración amarillenta
estable.
Sabiendo que 1 ml de solución 0,1 M de nitrato de plata corresponde
a 13,2 mg de KCN, calcular la concentración de KCN de la muestra.
5.2.Curvapatrón
5.2.1.Preparación de soluciones patrón
Una vez determinada la concentración del KCN de acuerdo con el
punto 5.1, preparar una solución patrón que contenga 30 mg/l de
ácido cianhídrico (30 mg de HCN /approxorequal72,3 mg de KCN). Diluir esta
solución a 1/10.
Introducir 1,0, 2,0, 3,0, 4,0 y 5,0 ml de la solución patrón diluida en
matraces aforados de 100 ml y enrasar con agua destilada. Las solu-
cionespreparadascontienen 30, 60, 90, 120 y 150 µg/l de ácido
cianhídrico, respectivamente.
5.2.2.Determinación
Tomar 25 ml de las soluciones así obtenidas y continuar como se
indica en lospuntos4.1 y 4.2.
Los valores de absorbancia obtenidos con estas soluciones patrón,
representados frente a los contenidos en ácido cianhídrico correspon-
dientes, se alinean sobre una recta que pasa por el origen.
6. EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS
El ácido cianhídrico se expresa en microgramos por litro ( µg/l) sin
decimales.
6.1.Cálculo
Leer el contenido en ácido cianhídrico en la curva patrón. Si se ha
efectuado dilución, multiplicar el resultado por el factor de dilución.
Límite de repetibilidad (r) y reproducibilidad (R)
Vino blanco: = r = 3,l µg/l esdecir, aproximadamente 6 %· xi
R= 12 µg/l esdecir, aproximadamente 25 %· xi
Vino tinto: = r = 6,4 µg/l esdecir, aproximadamente 8 %· xi
R= 23 µg/l esdecir, aproximadamente 29 %· xi
xi= concentración media de HCN en el vino
xi= 48,4 µg/l en el caso del vino blanco
xi= 80,5 µg/l en el caso del vino tinto.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 161
▼B
39.ISOTIOCIANATODEALILO
1. FUNDAMENTO DEL MÉTODO
El isotiocianato de alilo, presente, en su caso, en el vino es recupe-
rado por destilación y se identifica mediante una técnica de
cromatografía en fase gaseosa.
2. REACTIVOS
2.1. Etanol absoluto.
2.2. Solución estándar: solución en alcohol absoluto de isotiocianato de
alilo con 15 mg/l de principio activo.
2.3. Mezcla refrigerante constituida por etanol y nieve carbónica (tempe-
ratura −60 ºC)
3. MATERIAL
3.1. Aparato de destilación por arrastre mediante corriente de nitrógeno
según la figura.
3.2. Envuelta termógena termorregulable.
3.3. Medidor de flujo.
3.4. Cromatógrafo de fase gaseosa con detector fotométrico de llama,
provisto de un filtro selectivo para los compuestos azufrados ( λ
= 394 nm), o cualquier otro detector apropiado para esta medida.
3.5. Columna de cromatografía de acero inoxidable, diámetro interno
3 mm, longitud 3 m; rellena de Carbowax 20 M al 10 % sobre chro-
mosorb WHP, 80 a 100 mallas
3.6. Microjeringa de 10 µl.
4. PROCEDIMIENTO
Tomar 2 l de vino e introducirlosen el matraz de des tilación. Echar
algunosml de etanol (2.1) en losdostubosde recuperación has ta
que se produzca la total inmersión de la parte porosa para la disper-
sión gaseosa. Enfriar, por la parte exterior, los dos tubos con la
mezcla refrigerante. Comunicar el matraz con losdostubosrecep-
toresy comenzar a enviar dentro del aparato una corriente de
nitrógeno de 3 l por hora, aproximadamente. Calentar el vino a
80 ºC regulando convenientemente la temperatura del recinto termó-
geno y recuperar en total 45 a 50 ml de destilado.
Estabilizar el cromatógrafo; es aconsejable tener las condiciones
operatorias siguientes:
— temperatura del inyector: 200 ºC,
— temperatura de la columna: 130 ºC,
— gasportador helio con un flujo de 20 ml por minuto.
Inyectar con la ayuda de la microjeringa una cantidad de solución
estándar tal que el pico correspondiente al isotiocianato de alilo
pueda ser fácilmente identificado sobre el cromatograma.
Inyectar, de la misma forma, una parte alícuota de destilado y
comprobar la correspondencia entre el tiempo de retención del
isotiocianato de alilo y el pico obtenido.
En las condiciones indicadas para el ensayo, ningún compuesto
natural del vino produce interferenciascorres pondientesal tiempo
de retención de la substancia investigada.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 162
▼B
Aparato de destilación bajo corriente de nitrógeno
1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 163
▼B
40.CARACTERÍSTICASCROMÁTICAS
1. VINOS Y MOSTOS1.1.Definiciones
Se consideran características cromáticas de un vino la luminosidad y
cromaticidad.
La luminosidad corresponde a la transmitancia y varía en razón
inversa a la intensidad colorante del vino.
La cromaticidad corresponde a la longitud de onda dominante (que
caracteriza la tonalidad) y a la pureza.
Convencionalmente y por razonesde comodidad, lascaracterís ticas
cromáticas de los vino tintos y rosados podrían ser definidas por la
intensidad colorante y la tonalidad, de acuerdo con un procedimiento
que se ha adoptado como método usual.
1.2.Fundamentodelosmétodos
1.2.1.Método de referencia
Método espectrofotométrico que permite el cálculo de los valores
triestimulares y de los coeficientes tricromáticos necesarios para
especificar el color en los términos de la Comisión Internacional
del Alumbrado (CIE).
1.2.2Método usual (aplicable a vinos tintos y rosados)
Método espectrofotométrico de acuerdo con el cual las caracterís-
ticas cromáticas se expresan convencionalmente como se indica a
continuación:
la intensidad viene dada por la suma de las absorbancias en cubetas
de 1 cm de trayecto óptico para lasradiacionesde longitudesde
onda igualesa 420, 520 y 620 nm,
la tonalidad se expresa por la relación entre la absorbancia a 420 nm
y la absorbancia a 520 nm.
1.3.Métododereferencia
1.3.1.Material
1.3.1.1. Espectrofotómetro que permita efectuar medidas entre 300 y 700 nm.1.3.1.2. Cubetas de vidrio, disponibles por parejas, de un trayecto óptico b,
igual a 0,1; 0,2; 0,5; 1,2 y 4 cm.
1.3.2.Procedimiento
1.3.2.1. Preparación de la muestra
Si el vino está turbio, debe clarificarse por centrifugación o por
filtración a travésde una membrana.
En los vinos jóvenes o espumosos debe eliminarse la mayor cantidad
posible de dióxido de carbono mediante agitación al vacío.
1.3.2.2. Medidas
El trayecto óptico b de lascubetasutilizadasdebe elegirs e de forma
que la absorbancia medida esté comprendida entre 0,3 y 0,7.
A título indicativo, se aconseja utilizar cubetas de 2 cm (o 4 cm) de
trayecto óptico para losvinosblancos , 1 cm para vinosros adosy
0,1 cm (o 0,2 cm) para losvinostintos .
Efectuar lasmedidases pectrofotométricasutilizando como líquido
de referencia agua destilada en una cubeta del mismo trayecto óptico
b, para regular el cero de la escala de absorbancias a las longitudes
de onda 445, 495, 550 y 625 nm.
Tomar, para el trayecto óptico b, lascuatro abs orbanciasobtenidas
para el vino A
445,A495,A550yA625(con 3 decimales).
1.3.3.Cálculos
Tomar los valores de las absorbancias para b expresados en cm de
trayecto óptico y buscar en la tabla I las transmitancias (T %) corres-
pondientes, es decir: T445,T495,T550,T625.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 164
▼B
— Calcular los valores triestimulares X, Y y Z, expresados en frac-
cionesdecimales :
X = 0,42 · T625+ 0,35 · T550+ 0,21 · T445
Y = 0,20 · T625+ 0,63 · T550+ 0,17 · T495
Z = 0,24 · T495+ 0,94 · T445
— Calcular lascoordenadasdel color x e y:
x¼X
XþYþZy¼Y
XþYþZ
1.3.4.Expresión de los resultados
1.3.4.1. La luminosidad relativa viene dada por el valor de Y expresado en
porcentaje. (En el caso del negro Y % = 0, en el caso del incoloro Y
% = 100.)
1.3.4.2. La cromaticidad se expresa por la longitud de onda dominante y la
pureza.
Para su determinación hay que recurrir al diagrama de cromaticidad,
delimitado por el spectrum locus , que se da en la figura 1. En él se
indica el punto 0 que corresponde a la fuente de luz blanca utilizada,
representada por el iluminante estándar C de coordenadas Xo= 0,3101 e Yo= 0,3163, correspondiente a la luz de un día mediana-
mente claro.
—Longitud de onda dominante
Situar en el diagrama el punto C de coordenadasx e y. Cuando
el punto C se sitúe fuera del triángulo AOB, trazar la recta de
unión entre el punto O y el punto C y prolongarla; cortará el
spectrum locus en un punto S que corresponde a la longitud de
onda dominante.
Cuando el punto C se encuentre dentro del triángulo AOB, trazar
una recta desde C hasta O; cortará el spectrumlocus en un punto
que corresponde a la longitud de onda del color complementario
del vino. Dicha longitud de onda se expresa por su valor seguido
de la letra C.
—Pureza
Cuando el punto C se encuentra fuera del triángulo AOB, la
pureza se expresa en porcentaje mediante la relación:
100/C1distancia del punto C al punto O
distancia del punto O al punto S
Cuando el punto C está dentro del triángulo AOB, la pureza se
expresa en porcentaje mediante la relación:
100 ·distancia del punto C al punto O (1)
distancia del punto O al punto P
Siendo P el punto en que la recta OC corta la línea de los
púrpuras.
La pureza también puede conocerse directamente a partir de los
diagramasde cromaticidad conociendo x e y (figuras2, 3, 4, 5 y
6).
1.3.4.3.Resultados
La luminosidad, la cromaticidad (expresada por la longitud de onda
dominante) y la pureza definen por completo el color de un vino.
Deben indicarse en el boletín de análisis con el valor del trayecto
óptico al que se hayan efectuado las medidas.
1.4.Métodousual
1.4.1.Material
1.4.1.1. Espectrofotómetro que permita medidas entre 300 y 700 nm.
1.4.1.2. Cubetas de vidrio, disponibles en parejas, de trayecto óptico b, igual
a 0,1; 0,2; 0,5 y 1 cm.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 165
(1) Esta distancia debe medirse en el sentido OC.
▼B
1.4.2.Tratamiento previo de la muestra
Si el vino está turbio, debe clarificarse por centrifugación o por
filtración a travésde una membrana.
En los vinos jóvenes o espumosos debe eliminarse la mayor cantidad
posible de dióxido de carbono mediante agitación al vacío.
1.4.3.Procedimiento
El trayecto óptico b de la cubeta de medida debe elegirse de forma
que la absorbancia A esté comprendida entre 0,3 y 0,7.
Efectuar lasmedidases pectrofotométricasutilizando como líquido
de referencia agua destilada en una cubeta del mismo trayecto óptico
b, para regular el cero de la escala de absorbancias a las longitudes
de onda 420, 520 y 620 nm.
1.4.4.Expresión de los resultados
1.4.4.1. Cálculos
Calcular lasabs orbanciasen cubetasde 1 cm de trayecto óptico para
las3 longitudesde onda, dividiendo entre b, expres ado en cm, las
absorbancias halladas, es decir, A420;A520yA620.
Convencionalmente, la intensidad viene dada por:
l=A420+A520+A620
Se expresa con 3 decimales.
Convencionalmente, la tonalidad viene dada por:
N¼A420
A520
Se expresa con 3 decimales.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 166
▼B
TABLA I
Transformacióndelasabsorbanciasentransmitancias(T%)
Instrucciones de uso:Leer la primera cifra decimal del valor de la absorbancia en la
columna vertical 1 y la segunda cifra decimal en la línea horizontal
2.
Tomar la cifra situada en su intersección. Para obtener la transmi-
tancia, esta cifra deberá dividirse entre 10 si la absorbancia tiene un
valor inferior a 1, entre 100 si está comprendida entre 1y2y entre
1 000 si está comprendida entre 2 y 3.
Nota:
La cifra situada en el ángulo superior derecho de cada casilla
permite tener en cuenta, por interpolación, la tercera cifra decimal
del valor de la absorbancia.
0123456789
0 1000
23977229552293321912218912087120851198321981319
1 79418776187591774117724167081669216676156611564615
2 63114617146031458914575135621354913537125251251312
3 50111490114791146811457104479436942710417104079
4 3989389938093718363835583478339833173248
5 3167309730272957288628272756269626362576
6 2516245524062345229522452195214520952045
7 1994195519041864182417841744170416641624
8 1583155415131484144414131383135313231293
9 1263123312031172115311221103107210531022
Ejemplo:
Absorbancia óptica: 0,47 1,47 2,47 3,47
T %: 33,9 % 3,4 % 0,3 % 0 %
Las transmitancias T % se expresarán con una aproximación de
0,1 %.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 167
▼B
Figura 1
Diagramadecromaticidadenelqueserepresentalalocalización
detodosloscoloresdelespectro1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 168
▼B
Figura 2
Diagrama de cromaticidad para los vinos tintos limpios y los
vinostintosdeteladecebolla1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 169
▼B
Figura 3
Diagrama de cromaticidad para los vinos tintos limpios y los
vinostintosdeteladecebolla1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 170
▼B
Figura 4
Diagrama de cromaticidad para los vinos tintos limpios y los
vinostintospúrpura1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 171
▼B
Figura 5
Diagrama de cromaticidad para los vinos tintos limpios y los
vinostintospúrpura1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 172
▼B
Figura 6
Diagramadecromaticidadparalosvinostintosteladecebollay
losvinostintospúrpura1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 173
▼B
2. MOSTO CONCENTRADO RECTIFICADO
2.1.Fundamento
Medida de la absorbancia, a 425 nm en cubetas de 1 cm de espesor,
del mosto concentrado rectificado cuya concentración en azúcares se
haya reducido al 25 % (m/m) (25º Brix).
2.2.Material
2.2.1. Espectrofotómetro que permita efectuar medidas entre 300 y 700 nm.
2.2.2. Cubetasde vidrio con un trayecto óptico de 1 cm.
2.2.3. Filtro con membrana y de una porosidad de 0,45 µm.
2.3.Procedimiento
2.3.1.Preparación de la muestra
Utilizar una solución cuyo valor en azúcares sea del 25 % (m/m)
(25º Brix) y que se habrá preparado del modo indicado en el
capítulo «pH» (4.1.2). Filtrarla en un filtro con membrana de una
porosidad de 0,45 µm.
2.3.2.Determinación de la absorbancia
Regular la absorbancia cero para la longitud de onda 425 nm en una
cubeta de 1 cm de trayecto óptico que contenga agua destilada.
Determinar la absorbancia A a esta longitud de onda de la solución
al 25 % de azúcares(25º Brix) obtenida en el apartado 2.3.1 y colo-
cada en una cubeta de 1 cm de trayecto óptico.
2.4.Expresióndelosresultados
La absorbancia a 425 nm del mosto concentrado rectificado en solu-
ción al 25 % (m/m) de azúcares (25º Brix) se expresará con 2
decimales.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 174
▼B
41.ÍNDICEDEFOLIN-CIOCALTEU
1. DEFINICIÓN
El índice de Folin-Ciocalteu esel res ultado de la aplicación del
método que se describe a continuación.
2. FUNDAMENTO
El conjunto de los compuestos fenólicos del vino se oxida por el
reactivo Folin-Ciocalteu. Este último está constituido por una mezcla
de ácido fosfotúngstico (H3PW12O40) y ácido fosfomolíbdico
(H3PMo12O40) que se reduce, por la oxidación de los fenoles, en una
mezcla de óxidosazulesde tungs teno (W8O23) y de molibdeno
(Mo8O23).
La coloración azul producida posee una absorción máxima en torno
a 750 nm. Es proporcional al porcentaje de compuestos fenólicos.
3. REACTIVOS
Los reactivos deben ser de calidad analítica. El agua utilizada será
agua destilada o agua de pureza equivalente.
3.1.ReactivodeFolin-Ciocalteu
Este reactivo se encuentra en el comercio listo para su empleo.
Puede prepararse de la forma siguiente: disolver en 700 ml de agua
destilada 100 g de tungstato de sodio Na2WO4·2 H2O y 25 g de
molibdato de sodio Na2MoO4·2 H2O; añadir 50 ml de ácido fosfó-
rico al 85 % ( ρ20= 1,71 g/ml), 100 ml de ácido clorhídrico
concentrado ( ρ20= 1,19 g/ml). Llevar a ebullición bajo reflujo
durante 10 horas, añadir a continuación 150 g de sulfato de litio,
algunasgotasde bromo y hervir de nuevo durante 15 minutos .
Enfriar y completar hasta 1 litro con agua destilada.
3.2. Carbonato de sodio (Na2CO3) anhidro en solución al 20 % (m/v).
4. MATERIAL
Material corriente de laboratorio, y en particular:
4.1. Matracesaforadosde 100 ml.
4.2. Espectrofotómetro que permita trabajar a 750 nm.
5. PROCEDIMIENTO
5.1.Casodelosvinostintos
En un matraz aforado de 100 ml (4.1), introducir respetando el orden
siguiente:
1 ml de vino diluido al /onefifth,
50 ml de agua destilada,
5 ml de reactivo de Folin-Ciocalteu (3.1),
20 ml de solución de carbonato de sodio (3.2).
Enrasar a 100 ml con agua destilada.
Agitar para homogeneizar. Esperar 30 minutos, para que se estabi-
lice la reacción. Determinar la absorbancia a 750 nm con una
cubeta de 1 cm con relación a un testigo preparado con agua desti-
lada en lugar del vino.
Si la absorbancia leída no está próxima a 0,3, hay que modificar la
dilución del vino para obtener dicha absorbancia.
5.2.Casodelosvinosblancos
Operar de la misma forma con 1 ml de vino sin diluir.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 175
▼B
5.3.Casodelmostoconcentradorectificado
5.3.1.Preparación de la muestra
Utilizar una solución cuyo contenido en azúcares sea del 25 % (m/
m) (25 º Brix), preparada del modo indicado en el capítulo «pH»
(4.1.2).
5.3.2.Medida
Proceder como en el caso de los vinos tintos (5.1) en 5 ml de
muestra preparada de acuerdo con el apartado 5.3.1, midiendo la
absorbancia en relación con un testigo preparado con 5 ml de solu-
ción de azúcar invertido al 25 % (m/m).
6. EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS6.1.Métododecálculo
El resultado se expresa en forma de un índice obtenido al multiplicar
la absorbancia por 100 en el caso de los vinos tintos diluidos al /onefifth(o
por el factor correspondiente a la dilución empleada) y por 20 en el
caso de los vinos blancos. En el caso de mostos concentrados recti-
ficados, la absorbancia hay que multiplicarla por 16.
6.2.Repetibilidad
La diferencia entre losres ultadosde dosdeterminacionesefectuadas
simultáneamente o inmediatamente una después de otra por el
mismo analista no debe ser superior a 1.
La buena repetibilidad de losres ultadosdepende de la utilización de
un instrumental (matraces aforados y cubetas del espectrofotómetro)
rigurosamente limpio.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 176
▼B
42.MÉTODOSDEANÁLISISESPECÍFICOSPARAMOSTOSDEUVA
CONCENTRADOSRECTIFICADOS
a) CATIONES TOTALES
1. FUNDAMENTO
Se trata la muestra con un intercambiador de cationes de elevada
acidez. Se intercambian loscationespor H+. Se expresan mediante
la diferencia la acidez total del efluente y la de la muestra.
2. MATERIAL
2.1. Columna de vidrio de aproximadamente 300 mm de longitud y 10 a
11 mm de diámetro interno, provista de un grifo.
2.2. pH metro graduado, como mínimo, en décimasde unidadespH2.3. Electrodos
— electrodo de vidrio, que deberá conservarse en agua destilada,
— electrodo de referencia de cloruro mercúrico de cloruro de
potasio saturado, que deberá conservarse en una solución satu-
rada de cloruro de potasio,
— electrodo combinado, que deberá conservarse en agua destilada.
3. REACTIVOS
3.1. Cambiador de cationesde acidez elevada, de forma H
+, preparada
previamente a su empleo, manteniéndola en agua, al menos durante
una noche para que se hinche.
3.2. Solución 0,1 M de hidróxido de sodio.
3.3. Papel indicador de pH.
4. PROCEDIMIENTO
4.1.Preparacióndelamuestra
Utilizar la solución que se haya obtenido diluyendo el mosto concen-
trado rectificado al 40 % (m/v), tal y como se indica en el capítulo
«Acidez total» (5.1.2).
4.2.Preparacióndelacolumnaintercambiadoradeiones
Introducir en la columna 10 ml, aproximadamente, de cambiador de
ionesen forma H+previamente hinchado; lavar la columna con agua
destilada hasta eliminar la acidez, que se controlará con el papel
indicador.
4.3.Cambiodeiones
Hacer pasar por la columna 100 ml de la solución de mosto concen-
trado rectificado, preparada del modo indicado en el apartado 4.1, a
razón de una gota por segundo. Recoger el efluente en un vaso de
precipitados. Lavar la columna con 50 ml de agua destilada. Valorar
la acidez del efluente (incluida el agua de lavado) con la solución
0,1 M de hidróxido de sodio hasta que se alcance un pH de 7 a
20 ºC. La adición de licor alcalino deberá efectuarse lentamente,
agitando continuamente la solución.
Sea n ml el volumen de solución 0,1 M de hidróxido de sodio
empleado.
5. EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS
Los cationes totales se expresan en miliequivalentes por kilo de
azúcarestotalescon 1 decimal.
5.1.Cálculos
— Acidez del efluente expresada en miliequivalentes por kilo de
mosto concentrado rectificado:
E = 2,5 · n
— Acidez total del mosto concentrado rectificado en miliequiva-
lentespor kilo (véas e «Acidez total» 6.1.2): a1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 177
▼B
— Cationestotalesen miliequivalentespor kilo de azúcarestotales :
2;5n/C0a
P/C1100
P = contenido % (m/m) en azúcarestotales .
b) CONDUCTIVIDAD
1. FUNDAMENTO
Medida de la conductividad eléctrica de una columna de líquido,
delimitada por doselectrodosde platino (que s e mantendrán para-
lelos), que constituye una de las ramas de un puente de Wheatstone.
La conductividad varía con la temperatura y se expresará a 20 ºC.
2. MATERIAL
2.1. Conductímetro que permita efectuar medidasde conductividad en un
sector comprendido entre 1 y 1 000 microsiemens por cm.
2.2. Baño de agua que permita alcanzar una temperatura de aproximada-
mente 20 ºC (20 ± 2 ºC).
3. REACTIVOS
3.1. Agua desmineralizada de conductividad específica inferior a 2
microsiemens por cm a 20 ºC.
3.2. Solución de cloruro de potasio de referencia.
Disolver en agua desmineralizada (3.1) 0,581 g de cloruro de
potasio, KCl, previamente secado hasta obtener una masa constante
a la temperatura de 105 ºC. Completar hasta 1 litro con agua desmi-
neralizada (3.1). Esta solución posee una conductividad de 1 000
microsiemens por cm a 20 ºC. Su período de conservación se limita
a 3 meses.
4. PROCEDIMIENTO4.1.Preparacióndelamuestraparaanálisis
Utilizar una solución con un contenido de azúcares totales del 25 %
(m/m) (25 º Brix), tal y como se indica en el capítulo «pH» (4.1.2).
4.2.Determinacióndelaconductividad
Poner la muestra para análisis a una temperatura de 20 ºC mediante
inmersión en un baño de agua. Comprobar la temperatura con una
aproximación de 0,1 ºC.
Lavar dosvecesla célula de medida del conductímetro con la s olu-
ción que vaya a analizarse.
Medir la conductividad expresada en microsiemens por centímetro.
5. EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS
La conductividad se expresa en microsiemens por centímetro
(µ5 cm
−1) a 20 ºC sin decimales para la solución al 25 % (m/m)
(25 ºC Brix) de mosto concentrado rectificado.
5.1.Cálculos
En caso de que el aparato no cuente con un compensador de tempe-
ratura, corregir la conductividad que se haya medido mediante la
tabla I. Si la temperatura esinferior a 20 ºC, añadir la corrección;
si la temperatura es superior a 20 ºC, restar la corrección.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 178
▼B
TABLA I
Correcciones de conductividad para temperaturas distintas de 20 ºC en microsiemens cm−1
Conducti-
vidadTemperaturas
20.2
19.820.4
19.620.6
19.420.8
19.221.0
19.021.2
18.821.4
18.621.6
18.421.8
18.222.0 (1)
18.0 (2)
0 000 000000 0
5 0 001 111122 2
1 0 0 011 223334 41 5 0 112 334556 72 0 0 123 345678 92 5 0 123 46789 1 01 13 0 0 134 5789 1 1 1 21 3350 1 3 5 6 8 9 11 12 14 15400 2 3 5 7 9 11 12 14 16 18
4 5 0 2 3 6 81 01 21 41 61 8 2 0
5 0 0 2 4 7 91 11 31 51 82 0 2 2550 2 5 7 10 12 14 17 19 22 24600 3 5 8 11 13 16 18 21 24 26
(1) Restar la corrección
(2) Sumar la corrección
c) HIDROXIMETILFURFURAL
1. FUNDAMENTO
1.1.Métodocolorimétrico
Losaldehídosderivadosdel furano, de loscualesel principal esel
hidroximetilfurfural, reaccionan con el ácido barbitúrico y la parato-
luidina, obteniéndose un compuesto rojo que se determina por
colorimetría a 550 nm.
1.2.Métodoporcromatografíalíquidadealtaresolución
Separación en columna de fase inversa y determinación a 280 nm.
2. MÉTODO COLORIMÉTRICO
2.1.Material
2.1.1. Espectrofotómetro que permita efectuar medidas entre 300 y 700 nm.
2.1.2. Cubeta de vidrio de trayecto óptico igual a 1 cm de espesor.
2.2.Reactivos
2.2.1.Ácido barbitúrico en solución al 0,5 % (m/v).
Disolver 500 mg de ácido barbitúrico, C4O3N2H4, en agua destilada
calentándolo ligeramente en un baño de agua a 100 ºC; enrasar hasta
100 ml con agua destilada. La solución se conserva aproximada-
mente una semana.
2.2.2.Paratoluidina en solución al 10 % (m/v).
Introducir 10 g de paratoluidina, C6H4(CH3)N H2, en un matraz
aforado de 100 ml; añadir 50 ml de isopropanol, CH3CH(OH)CH3y
10 ml de ácido acético glacial, CH3COOH ( ρ20 o= 1,05 g/ml);
completar hasta 100 ml con isopropanol. Esta solución debe prepa-
rarse diariamente.
2.2.3.Etanal (CH3CHO) en solución acuosa al 1 % (m/v).
Deberá prepararse inmediatamente antes de su empleo.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 179
▼B
2.2.4.Hidroximetilfurfural, C6O3H6, en solución acuosa de 1 g/l.
Preparar en diluciones sucesivas, soluciones con 5, 10, 20, 30 y
40 mg/l. La solución de 1 g/l y sus diluciones deberán estar prepa-
radas.
2.3.Procedimiento
2.3.1.Preparación de la muestra
Utilizar la solución obtenida diluyendo el mosto concentrado rectifi-
cado al 40 % (m/v), tal y como se indica en el capítulo «Acidez
total» (5.1.2). Efectuar la determinación con 2 ml de esta solución.
2.3.2.Determinación colorimétrica
Introducir 2 ml de muestra preparada del modo que se indica en el
apartado 2.3.1 en doserlenmeyer aybde 25 ml provistos de
tapones esmerilados. Verter en cada erlenmeyer 5 ml de solución
de paratoluidina (2.2.2); mezclar. Añadir en el erlenmeyer b(testigo)
1 ml de agua destilada y, en el erlenmeyer a(medida), 1 ml de solu-
ción de ácido barbitúrico (2.2.1). Agitar para homogeneizar.
Transvasar el contenido de los erlenmeyer en las cubetas de 1 cm
de trayecto óptico del espectrofotómetro. Regular el cero de la escala
de absorbancia con el contenido del erlenmeyer bpara una longitud
de onda 550 nm y determinar la absorbancia del contenido del erlen-
meyera; tomar su valor máximo A, que se alcanzará entre 2 y 5
minutos.
Las muestras cuyo contenido en hidroximetilfurfural sea superior a
30 mg/l deberán diluirse antes del análisis.
2.3.3.Curva patrón
Introducir en doserlenmeyer aybde 25 ml, 2 ml de cada una de
lass olucionesde hidroximetilfurfural de 5, 10, 20, 30 y 40 mg/l
(2.2.4) y aplicarlesel procedimiento des crito en el apartado 2.3.2.
La representación gráfica de las absorbancias en función de los
contenidosen miligramospor litro en hidroximetilfurfural de las
soluciones patrón deberá ser una recta que pasa por el origen.
2.4.Expresióndelosresultados
El contenido en hidroximetilfurfural del mosto concentrado rectifi-
cado se expresará en miligramos por kilogramo de azúcares totales.
2.4.1.Método de cálculo
El contenido C mg/l en hidroximetilfurfural de la muestra para
análisis se obtendrá llevando a la curva patrón la absorbancia A
determinada en esta muestra.
El contenido en hidroximetilfurfural expresado en miligramos por
kilogramo de azúcarestotalesesigual a:
250/C1C
P
P = contenido % (m/m) en azúcarestotalesdel mos to concentrado
rectificado.
3. MÉTODO POR CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA RESO-
LUCIÓN
3.1.Material
3.1.1.Cromatógrafo de fase líquida de alta resolución equipado con:
— un inyector con loop de 5 o 10 µl,
— un detector, espectrofotómetro que permita efectuar medidas a
280 nm,
— una columna de sílica dopada con octadecil (por ejemplo:
Bondapak C18Corasil, Waters Ass.),
— un registrador y, en su caso, un integrador,
flujo de la fase móvil: 1,5 ml/min.
3.1.2.Equipo de filtración de muestra y disolventes para eliminar partí-
culas superiores a 0,45 µm1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 180
▼B
3.2.Reactivos
3.2.1. Agua bidestilada.
3.2.2. Metanol, CH3OH destilado o de calidad HPLC.
3.2.3. Ácido acético, CH3COOH ( ρ20= 1,05 g/ml).
3.2.4. Fase móvil: agua-metanol (3.2.2) ácido acético (3.2.3) previamente
filtrado (0,45 µm), (40, 9, 1 v/v).
Esta fase móvil deberá prepararse diariamente y desgasificada antes
de su uso.
3.2.5. Solución de referencia de hidroximetilfurfural de 25 mg/l (m/v).
Introducir en un matraz aforado de 100 ml 25 mg exactamente
pesados de hidroximetilfurfural C6H3O6, y completar el volumen
con metanol (3.2.2). Diluir esta solución al 1/10 con metanol
(3.2.2) y filtrarla con una membrana (0,45 µm).
Esta solución se conservará de 2 a 3 meses si se introduce en un
frasco de vidrio topacio herméticamente cerrado y se mantiene refri-
gerada.
3.3.Procedimiento
3.3.1.Preparación de la muestra
Utilizar la solución que se haya obtenido diluyendo el mosto concen-
trado rectificado al 40 % (m/v) del modo indicado en el capítulo
«Acidez total» (5.1.2) y filtrarla con una membrana (0,45 µm).
3.3.2.Determinación cromatográfica
Inyectar en el cromatógrafo 5 (o 10) µl de la muestra preparada del
modo indicado en el apartado 3.3.1 y 5 (o 10) µl de solución de refe-
rencia de hidroximetilfurfural (3.2.5). Registrar el cromatograma.
El período de retención del hidroximetilfurfural se aproxima a 6 o 7
minutos.
3.4.EXPRESIÓNDELOSRESULTADOS
El contenido en hidroximetilfurfural del mosto concentrado rectifi-
cado se expresa en miligramos por kilogramo de azúcares totales.
3.4.1.Modo de cálculo
Sea C mg/l el contenido en hidroximetilfurfural de la solución de
mosto concentrado rectificado al 40 % (m/v).
El contenido en hidroximetilfurfural en miligramospor kilogramo de
azúcarestotalesviene expres ado por:
250/C1C
P
P = contenido % (m/m) en azúcarestotalesdel mos to concentrado
rectificado.
d) METALES PESADOS1. FUNDAMENTOSI.Métodorápidodeevaluacióndemetalespesados.
La presencia de los metales pesados se pone de manifiesto en el
mosto concentrado rectificado convenientemente diluido por la colo-
ración que da la formación de sulfuros. Se evalúan comparándolos a
una solución patrón de plomo correspondiente al contenido máximo
admisible.
II.Determinacióndelcontenidoenplomoporespectrofotometríade
absorciónatómica.
El quelato que se obtiene del plomo con pirrolidinditiocarbamato de
amonio se extrae con metilisobutilcetona, cuya absorbancia se mide
a 283,3 nm. El contenido en plomo se determina por el método de
adición.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 181
▼B
2. MÉTODO RÁPIDO DE EVALUACIÓN DE METALES PESADOS
2.1.Reactivos
2.1.1.Ácido clorhídrico diluido al 70 % (m/v)
Tomar 70 g de ácido clorhídrico (HCl), ( ρ= 1,16 — 1,19 g/ml) y
completar hasta 100 ml con agua.
2.1.2.Ácido clorhídrico diluido al 20 % (m/v)
Tomar 20 g de ácido clorhídrico (HCl) ( ρ= 1,16 — 1,19 g/ml) y
completar hasta 100 ml con agua.
2.1.3.Amoníaco diluido
Tomar 14 g de amoníaco, NH3(ρ= 0,931 — 0,934 g/ml) y
completar hasta 100 ml con agua.
2.1.4.Solución tampón pH 3,5
Disolver 25 g de acetato de amonio (CH3COONH4)e n2 5m ld e
agua y añadir 30 ml de ácido clorhídrico diluido (2.1.1). Ajustar el
pH en caso necesario con ácido clorhídrico diluido (2.1.2) o
amoníaco diluido (2.1.3) y completar hasta 100 ml con agua.
2.1.5.Solución de tioacetamida, (C2H5NS), al 4 % (m/v) .
2.1.6.Solución de glicerol (C3H8O3) al 85 % (m/v)
(nD20 ºC= 1,449 — 1,455).
2.1.7.Reactivo de tioacetamida
Añadir a 0,2 ml de solución de tioacetamida (2.1.5) 1 ml de una
mezcla de 5 ml de agua, 15 ml de hidróxido de sodio en solución
1 M y 20 ml de glicerol (2.1.6). Calentar en un baño de agua a
100 ºC durante 20 segundos. Preparar inmediatamente antes de su
empleo.
2.1.8.Solución de plomo de 0,002 g/l
Preparar una solución de 1 g/l de plomo disolviendo en agua 0,400 g
de nitrato de plomo, Pb (NO3)2y completar hasta 250 ml con agua.
Diluir con agua esta solución en el momento de su uso al 2 ‰ (v/v)
para obtener una solución de 0,002 g/l.
2.2.Procedimiento
Disolver una muestra de 10 g de mosto concentrado rectificado en
10 ml de agua. Añadir 2 ml de solución tampón pH 3,5 (2.1.4) y
mezclar. Añadir 1,2 ml de reactivo de tioacetamida (2.1.7) y mezclar
inmediatamente. Preparar el testigo en las mismas condiciones utili-
zando 10 ml de solución de 0,002 g/l de plomo (2.1.8).
Transcurridos 2 minutos, la posible coloración marrón de la solución
de mosto concentrado rectificado no deberá ser más intensa que la
del testigo.
2.3.Cálculos
El ensayo testigo corresponde en las condiciones de funcionamiento
a un contenido máximo admisible de metales pesados expresados en
plomo de 2 mg/kg de mosto concentrado rectificado.
3. DETERMINACIÓN DEL CONTENIDO EN PLOMO POR ESPEC-
TROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN ATÓMICA
3.1.Material
3.1.1. Espectrofotómetro de absorción atómica equipado con un mechero
alimentado por aire y acetileno.
3.1.2. Lámpara de cátodo hueco de plomo.
3.2.Reactivos
3.2.1. Ácido acético diluido.
Tomar 12 g de ácido acético glacial ( ρ20= 1,05 g/ml) y completar
hasta 100 ml con agua.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 182
▼B
3.2.2. Solución de pirrolidinditiocarbamato de amonio C5H12N2S2al 1 %
(m/v).
3.2.3. Metilisobutilcetona (CH3)2CHCH2COCH3.
3.2.4. Solución de plomo de 0,010 g/l de plomo.
Diluir al 1 % (v/v) la solución de plomo de 1 g/l (2.1.8).
3.3.Procedimiento
3.3.1.Solución para análisis
Disolver 10 g de mosto concentrado rectificado en una mezcla de
volúmenesigualesde ácido acético diluido (3.2.1) y agua y
completar hasta 100 ml con esta mezcla.
Añadir 2 ml de solución de pirrolidinditiocarbamato de amonio
(3.2.2) y 10 ml de metilisobutilcetona (3.2.3). Agitar al abrigo de la
luz viva durante 30 segundos. Dejar que se separen las dos capas.
Utilizar la capa de metilisobutilcetona.
3.3.2.Soluciones de referencia
Preparar 3 soluciones de referencia que contengan, además de los
10 g de mosto concentrado rectificado, 1, 2 y 3 ml de la solución
de plomo de 0,010 g/l (3.2.4), respectivamente. Seguir el mismo
procedimiento que con la solución para análisis.
3.3.3.Testigo
Preparar un testigo siguiendo los mismos pasos que en el apartado
3.3.1 con la solución para análisis, pero sin añadir mosto concen-
trado rectificado.
3.3.4.Determinación
Seleccionar la longitud de onda 283,3 nm.
Pulverizar en la llama la metilisobutilcetona procedente del ensayo
testigo y regular la absorbancia a cero.
Operando sobre sus solventes de extracción respectivos, determinar
las absorbancias correspondientes a la solución para análisis y a las
soluciones de referencia.
3.4.Expresióndelosresultados
Expresar el contenido en plomo en miligramos por kilogramo de
mosto concentrado rectificado con 1 decimal.
3.4.1.Cálculos
Trazar una curva que represente la variación de las absorbancias en
función de la concentración del plomo añadido a lass olucionesde
referencia, correspondiendo la concentración cero a la solución para
análisis.
Extrapolar la recta que une lospuntoshas ta que alcance el eje de las
concentraciones de la parte negativa. La distancia entre este punto y
el origen representa la concentración en plomo de la solución para
análisis.
e) DETERMINACIÓN QUÍMICA DEL ETANOL
Este método de análisis se utiliza para determinar el grado alcohó-
lico de líquidoscon poco contenido de alcohol, como el mos to, el
mosto concentrado y el mosto concentrado rectificado.
1. FUNDAMENTO
Destilación simple del líquido. Oxidación del etanol del destilado
mediante el dicromato de potasio. Valoración del exceso de dicro-
mato mediante una solución de hierro II.
2. MATERIAL
2.1. Utilizar el aparato de destilación que se describe en el apartado 3.2
del capítulo «Grado alcohólico».1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 183
▼B
3. REACTIVOS
3.1.Solucióndedicromatodepotasio
Disolver 33,600 g de dicromato de potasio (K2Cr2O7) en una
cantidad de agua suficiente para obtener 1 litro a 20 ºC.
Un mililitro de esta solución oxida 7,8924 mg de alcohol.
3.2.SolucióndesulfatodehierroIIyamonio
Disolver 135 g de sulfato de hierro II y de amonio, Fe (NH4)2(SO4)2·6 H2O en una cantidad suficiente de agua, añadir 20 ml de ácido
sulfúrico concentrado, H2SO4(ρ= 1,84 g/ml) y enrasar a 1 litro.
Esta solución se oxida lentamente. Cuando está recientemente prepa-
rada, un volumen de esta solución corresponde a medio volumen de
la solución de dicromato potásico.
3.3.Solucióndepermanganatodepotasio
Disolver 1,088 g de permanganato de potasio, KMnO4, en una
cantidad de agua suficiente para obtener 1 litro.
3.4.Ácidosulfúricodiluidoal1/2(v/v)
Añadir a 500 ml de agua, lentamente y agitando, 500 ml de ácido
sulfúrico, H2SO4(ρ20= 1,84 g/ml).
3.5.Reactivodeortofenantrolinaferrosa
Disolver 0,695 g de sulfato ferroso, FeSO4,7H2O en 100 ml de
agua, añadir 1,485 g de monohidrato de ortofenantrolina C12H8N2,
H2O. Calentar para favorecer la solución. Esta disolución es de color
rojo intenso y se conserva muy bien.
4. PROCEDIMIENTO4.1.Destilación
Introducir en el matraz de destilación 100 g de mosto concentrado
rectificado y 100 ml de agua. Recoger el destilado en un matraz
aforado de 100 ml y enrasar con agua.
4.2.Oxidación
En un frasco de 300 ml con tapón esmerilado, cuyo cuello termine
en una parte ensanchada, la cual permite lavar el cuello sin que se
produzcan pérdidas, introducir 20 ml de solución valorada de dicro-
mato de potasio y 20 ml de ácido sulfúrico diluido al 1/2 (v/v) (3.4)
y agitar. Añadir 20 ml de destilado. Tapar el frasco, agitar y esperar
al menos 30 minutos agitando de vez en cuando (frasco «muestra»).
Valorar la solución de sulfato de hierro II y amonio (3.2) en relación
con la solución de dicromato de potasio introduciendo en un frasco
idéntico las mismas cantidades de reactivos, pero sustituyendo los
20 ml de destilado por 20 ml de agua destilada (frasco «testigo»).
4.3.Valoración
Añadir 4 gotasde reactivo de ortofenantrolina (3.5) al contenido del
frasco «muestra». Valorar el exceso de dicromato introduciendo la
solución de sulfato de hierro II (3.2) y amonio. Dejar de añadir solu-
ción ferrosa cuando el medio pase de color azul-verdoso a marrón.
A fin de precisar el viraje, pasar del marrón al azul-verdoso con la
solución de permanganato de potasio (3.3). Restar la décima parte
del volumen empleado de esta solución del volumen de solución de
sulfato de hierro II vertido, sea n esta diferencia.
Seguir el mismo procedimiento con el frasco «testigo». Sea n ′la
diferencia.
5. EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS
El etanol se expresa en gramos por kilo de azúcares totales con 1
decimal.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 184
▼B
5.1.Métododecálculo
n′ml de solución ferrosa reducen 20 ml de solución de dicromato,
que oxidan 57,85 mg de etanol puro.
Un mililitro de solución de hierro II tiene el mismo poder reductor
que:
157 ;85
n0mg de etanol
n′− n ml de solución de hierro II tienen el mismo poder reductor
que:
157 ;85/C1n0/C0n
n0mg de etanol
Etanol en g/kg de mosto concentrado rectificado:
7;892/C1n0/C0n
n0
Etanol en g/kg de azúcarestotales :
789 ;2/C1n0/C0n
n0/C1P
siendo = contenido % (m/m) en azúcares totales.
f) MESO-INOSITOL, SCYLO-INOSITOL Y SACAROSA
1. FUNDAMENTO DEL MÉTODO
Cromatografía en fase gaseosa de derivados silanizados
2. REACTIVOS
2.1. Patrón interno: xilitol (solución acuosa aproximadamente de 10 g/l
adicionada de una punta de espátula de azida sódica)
2.2. Bistrimetilsililtrifluoroacetamida — BST FA—( C8H18F3NOSi2)
2.3. Trimetilclorosilano (C3H9Cl Si)
2.4. Piridina p. a. (C5H5N)
2.5. Meso-inositol (C6H12O6)
3. MATERIAL
3.1.Cromatógrafodegases,equipadocon:
3.2. Columna capilar (por ejemplo, sílice fundida, OV 1, espesor de
0,15 µ, longitud 25 m, diámetro interior 0,3 mm)
Condicionesoperatorias :
— gasportador: hidrógeno y helio,
— caudal del gasportador: 2 ml/minuto aproximadamente,
— temperatura del inyector y del detector: 300º C,
— programación de temperatura: 1 minuto a 160º C, 4º C/minuto
hasta 260º C, isoterma a 260º C durante 15 minutos,
— relación de split: 1 a 20.
3.3. Integrador
3.4. Microjeringa de 10 µl3.5. Micropipetasde 50, 100 y 200 µl3.6. Vialesde 2 ml con tapón de teflón
3.7. Estufa1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 185
▼B
4. PROCEDIMIENTO
Poner alrededor de 5 g de MCR (mosto concentrado rectificado),
pesado exactamente, en un matraz de 50 ml, añadir 1 ml de solución
patrón de xilitol y enrasar con agua. Después de homogeneizar la
muestra, tomar 100 µl de solución e introducir en un vial, secar con
una ligera corriente de aire después de haber añadido 100 µl de
etanol absoluto para facilitar la evaporación. Disolver cuidadosa-
mente el residuo en 100 µl de piridina (2.4) añadir 100 µl de
bistrimetilsililtrifluoroacetamida (2.2) y 10 µl de trimetilclorosilano
(2.3), cerrar el vial con el tapón de teflón y colocar en estufa a 60º
C durante una hora. Tomar 0,5 µl de líquido claro inyectando con
«aguja vacía y caliente» según la relación de split antes mencionada.
5. CÁLCULO DE LOS FACTORES DE RESPUESTA5.1.Prepararunasoluciónquecontenga:
60 g/l de glucosa, 60 g/l de fructosa, 1 g/l de meso-inositol y 1 g/l
de sacarosa.
Pesar 5 g de esta solución y proceder según el punto 4. A partir del
cromatograma obtenido, calcular los factores de respuesta del meso-
inositol y de la sacarosa en relación al xilitol.
Para el scylo-inositol, que no se comercializa y cuyo tiempo de
retención está comprendido entre el último pico de las formas
anoméricas de la glucosa y del mesro-inositol (véase figura adjunta),
utilizar el mismo factor de respuesta que del meso-inositol.
6. EXPRESIÓN DE RESULTADOS
6.1. El meso-inositol y el scylo-inositol se expresan en miligramos por
kilogramo de azúcares totales. La sacarosa se expresa en gramos
por kilogramo de mosto.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 186
▼B
Figura: Cromatograma del meso-inositol, del scylo-inositol y de la sacarosa por
cromatografía gaseosa.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 187
▼M4
43.DETERMINACIÓN DE LA RELACIÓN ISOTÓPICA18O/16O DEL
AGUADELVINO
I. DESCRIPCIÓN DEL MÉTODO
1.Objetivodelmétodo
El objetivo de este método es medir la relación isotópica18O/16Od e
aguas de diferentes orígenes. En relación isotópica18O/16O puede
expresarse como desviación δ‰ con respecto al valor de la relación
isotópica de la referencia internacional V.SMOW:
δiè0½/C138 ¼Ri
RSMOW/C0i/C20/C21
/C21000
2.Principio
La relación isotópica18O/16O se determina por espectrometría de
masa de las relaciones isotópicas (EMRI) a partir de las corrientes
iónicasm/z 46 (12C16O18O) y m/z 44 (12C16O2) producidaspor el
dióxido de carbono obtenido trasla s iguiente reacción con el agua
del vino:
C16O2+H218O↔C16O18O+H216O
El dióxido de carbono de la fase gaseosa se utiliza para el análisis.
3.Reactivos
— Dióxido de carbono para análisis.
— SMOW (Standard Mean Ocean Water).— GISP (Greenland Ice Sheet Precipitation).— SLAP (Standard Light Arctic Precipitation).
— Agua de referencia del laboratorio calibrada cuidadosamente con
relación a las muestras de referencia del Organismo Internacional
de la Energía Atómica (IAEA) de Viena.
4.Aparatos
— Espectrómetro de masa de relaciones isotópicas con una repetibi-
lidad interna de 0,05 ‰.
— Triple colector para el registro simultáneo de los iones m/z 44,
45 y 46 o, cuando menos, doble colector para medir los iones
m/z 44 y 46.
— Sistema termostático (± 0,5 ºC) para conseguir el equilibrio entre
el CO
2y el agua del vino.
— Bomba de vacío capaz de alcanzar una presión interna de 0,13 Pa.
— Matracespara lasmues trasde un volumen de 15 ml y un tubo
capilar anejo de un diámetro interior aproximado de 0,015 mm.
— Pipeta Eppendorf con punta de plástico de un solo uso.
5.Determinaciónexperimental
5.1.Método manual:
Método de equilibrado
Introducción de la muestra
— Tomar la pipeta Eppendorf de volumen fijo de 1,5 ml, adaptarle
una punta y pipetear con ella el líquido que se vaya a analizar
para introducirlo en un matraz redondo. Poner grasa de silicona
en el cuello del matraz y adaptar éste a la válvula asegurándose
de que esté bien cerrada.
— Repetir la operación con cada matraz de la batería de trabajo
introduciendo el agua de referencia del laboratorio en uno de
losmatraces .
Desgasificación de la batería
Se enfrían lasdosbateríascon nitrógeno líquido y s e purga todo el
sistema hasta 0,1 mm Hg abriendo las válvulas.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 188
▼M4
A continuación, se cierran las válvulas y se deja calentar el conjunto.
Se repite el ciclo de desgasificación hasta que deje de haber varia-
cionesde pres ión.
Equilibrado del agua y del CO2
Se enfría la batería de trabajo a − 70 ºC (mezcla de nitrógeno
líquido y de alcohol) para congelar el agua y se coloca el conjunto
al vacío. Una vez estabilizado el vacío, se aísla la batería mediante
la válvula y se purga el sistema de introducción del CO2. Se intro-
duce el CO2gaseoso en la batería de trabajo y, después de aislarla
del resto del sistema, se introduce la batería en el baño termostático
a 25 ºC (± 0,5 ºC), durante 12 horas(una noche). Para aprovechar el
tiempo necesario para que se produzca el equilibrado, se aconseja
preparar las muestras al final del día y dejar que el equilibrio se
produzca durante la noche.
Transferencia del CO2intercambiado en lascélulasde
medida
Al lado de la batería de trabajo, se adapta en la línea de vacío un
portamues trascon tantascélulasde medida como matraceshaya
con CO2intercambiado. Se purgan cuidadosamente las células vacías
y se transfieren sucesivamente los gases intercambiados de los
matracesa lascélulasde medida enfriadascon nitrógeno líquido. A
continuación, se deja que las células de medida se calienten a tempe-
ratura ambiente.
5.2.Utilización de aparatos de intercambio automático
Para obtener el equilibrado, se llenan los matraces de muestras con
2 ml de vino o con 2 ml de agua (referencia de trabajo del labora-
torio) y se enfrían a − 18 ºC. Se adaptan los portamuestras con los
productos congelados al sistema de equilibrado y, tras hacer el vacío
en el sistema, se introduce el dióxido de carbono a una presión de
800 hPa.
El equilibrio se alcanza a una temperatura de 22±0,5 ºC después de
un período mínimo de 5 horasy una agitación moderada. Como la
duración del equilibrado depende de la geometría del matraz, debe
determinarse previamente la duración óptima del sistema utilizado.
A continuación, se transfiere el dióxido de carbono de los matraces a
la cámara de introducción del espectrómetro de masa por un tubo
capilar y se efectúa la medida con arreglo al protocolo específico
del aparato.
6.Cálculoyexpresióndelosresultados
La diferencia relativa ( δ′) de la relación de lasintens idadesde los
ionesm/z 46 y 44 (I46/I44) entre la muestra y la referencia se expresa
en ‰ según la siguiente fórmula:
δ0muestra ¼I46=I44 ðÞ muestra
I46=I44 ðÞ referencia/C01/C20/C21
/C21000
El contenido en18O de la muestra con relación a la referencia
V.SMOW en la escala V.SMOW/SLAP viene dado por la fórmula:
δ018O ¼δ0muestra /C0δ0SMOW
δ0SMOW /C0δ0SLAP/C20/C21
/C255;5
El valor aceptado para el agua del SLAP esigual a − 55,5 ‰ del
V.SMOW. En relación isotópica de la referencia debe determinarse
después de cada serie de 10 medidas con muestras desconocidas.
7.Fidelidad
— La repetibilidad (r) esdel 0,24 ‰.
— La reproducibilidad (R) esdel 0,50 ‰.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 189
▼M7
44.DETERMINACIÓN DEL CARBAMATO DE ETILO EN EL VINO:
MÉTODODEDETECCIÓNSELECTIVAPORCROMATOGRAFÍA
ENFASEGASEOSA/ESPECTROMETRÍADEMASAS
(Aplicable a la determinación del carbamato de etilo para concentraciones
comprendidasentre 10 y 200 µg/l)
(Atención: Respetar las normas de seguridad para las manipulaciones de
productosquímicos , para el etanol, la acetona y losproductoscancerígenos :
carbamato de etilo y diclorometano; deshacerse de los disolventes empleados
de manera apropiada y compatible con lasnormasy reglamentosecológicos
aplicables).
A.Principiodelmétodo
El carbamato de propilo se añade a la muestra como patrón interno, la solu-
ción se diluye con agua y se sitúa en una columna de extracción en fase
sólida de 50 ml. El carbamato de etilo y el carbamato de propilo son eluidos
con diclorometano.
El eluido se concentra con ayuda de un evaporador rotativo al vacío. El
concentrado se analiza por cromatografía en fase gaseosa (CG) y la detec-
ción se realiza por espectrometría de masa por fragmentometría en modo
SIM (selected ions monitoring ).
B.Materialycondicionescromatográficas(dadascomoejemplo)
a) Cromatógrafo de gases/espectrómetro de masas (CG/EM) y eventual-
mente un inyector automático y un sistema de tratamiento de datos o
equivalente.
Columna capilar de sílice fundida 30 m (1) x 0,25 mm de diámetro
interno, 0,25 µm de película de tipo Carbowax 20M.
Procedimiento: inyector 180 ºC, gasportador helio a 1 ml/minuto, y a
25 ºC, inyección según el modo « Splitless/split ».
Programa de temperatura: 40 ºC durante 0,75 minutos; a continuación,
programación a 10 ºC/minutoshas ta 60 ºC; luego, 3 ºC/minutoshas ta
150 ºC (2), alcanzar los220 ºC y mantener a es a temperatura durante
4,25 minutos. El tiempo de retención específica del carbamato de etilo
esde 23-27 minutos ; el del carbamato de propilo esde 27-31 minutos .
Inrterfase de cromatografía de gases/espectrometría de masas (CG/EM):
línea de transferencia 220 ºC. Parámetros del espectómetro de masas
puestos a punto manualmente con perfluorotributilamina y optimizados
para una sensibilidad mayor a masas bajas, en modo adquisición SIM,
tiempo de espera para el solvente y comienzo de la adquisición 22
minutos, tiempo de mantenimiento/ión 100 ms.
b) Evaporador rotativo al vacío o sistema de concentración de tipo Kuderna
Danish
(NB.La tasa de recuperación del carbamato de etilo de la muestra
problema C [g)] debe estar comprendida entre un 99 y un 110 % durante
el proceso).
c) Matraz en forma de pera de 300 ml y cuello único esmerilado.
d) Tubo de concentración de 4 ml, graduado con junta con película de teflón
y tapón.
C.Reactivos
a) Acetona- calidad LC
NB:Verificar cada lote antes de su uso por CG/EM en lo que respecta a
la ausencia de respuesta para los iones de m/z 62, 74 y 89.
b) Diclorometano
NB:Analizar cada lote antes de su uso por CG/EM tras concentrar 200
veces, a fin de comprobar la ausencia de respuesta para los iones de m/
z 62, 74 y 89.
c) Etanol — anhidro1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 190
(1) En el caso de determinados vinos especialmente ricos, puede ser conveniente utilizar
una columna capilar de 50 m de largo.
(2) En el caso de determinados vinos especialmente ricos, puede ser conveniente realizar
una programación de temperatura de 2 ºC por minuto.
▼M7
d) Carbamato de etilo (CE), soluciones patrón
1. Solución «madre» — 1,00 mg/ml. Pesar 100 mg de CE ( ≥99 % de
pureza) en un matraz aforado de 100 ml y enrasar con acetona.
2. Solución patrón de trabajo — 10,0 µg/ml. Transferir 1 ml de la solu-
ción «madre» de CE a un matraz aforado de 100 ml y enrasar con
acetona.
e) Carbamato de propilo (CP), soluciones patrón:
1. Solución «madre» — 1,00 mg/ml. Pesar 100 mg de CP (calidad reac-
tivo) en un matraz aforado de 100 ml y enrasar con acetona.
2. Solución patrón de trabajo — 10,0 µg/ml. Transferir 1 ml de la solu-
ción «madre» de CP a un matraz aforado de 100 ml y enrasar con
acetona.
3. Solución de patrón interno de CP — 400 ng/ml. Transferir 4 ml de
solución patrón de trabajo de CP a un matraz aforado de 100 ml y
enrasar con agua.
f) Solucionespatrón calibradasde CE-CP
Diluir lass olucionespatrón de trabajo de CE, (d) (2) y CP (e) (2) con
diclorometano para obtener:
1. (100 ng CE y 400 ng CP)/ml,
2. (200 ng CE y 400 ng CP)/ml,
3. (400 ng CE y 400 ng CP)/ml,4. (800 ng CE y 400 ng CP)/ml,5. (1 600 ng CE y 400 ng CP)/ml.
g) Muestra de prueba — 100 ng CE/ml en 40 % de etanol.
Transferir 1 ml de las soluciones patrón de trabajo de CE, [d) 2] a un
matraz aforado de 100 ml y enrasar con etanol al 40 % en agua.
h) Columna de extracción en fase sólida — Material desechable, preenva-
sado con tierra de diatomeas, con una capacidad de 50 ml.
NB:Antes del análisis, debe comprobarse cada lote de columnas de
extracción respecto a la recuperación de CE y de CP y la ausencia de
respuesta para los iones de m/z 62, 74 y 89. Preparar 100 ng CE/ml de
muestra problema g). Analizar 5,00 ml de la muestra de prueba como se
describe en D [a),E y F. La recuperación de 90-110 ng de CE/ml es satis-
factoria. Losabs orbentescon un diámetro de partículasirregular pueden
producir flujosmuy lentosque afectan a la recuperación de CE y de CP.
Si, tras varios ensayos, no se obtiene el 90-110 % del valor de la muestra
de prueba, se debe cambiar la columna o utilizar una curva de calibración
corregida por la recuperación para cuantificar el CE. A fin de obtener la
curva de calibración corregida, se deben preparar soluciones patrón como
se describe en f) utilizando un etanol del 40 % en lugar de diclorome-
tano.
Analizar 1 ml de la solución patrón de calibrado como se describe en D,
EyF .
Construir una nueva curva de calibración utilizando la relación CE/CP de
lospatronesextraídos .
D.Preparacióndelamuestraproblema
Colocar el material problema en dos vasos separados de 100 ml utilizando
las cantidades siguientes:
a) Vino con másdel 14 % vol de alcohol: 5,00 ml ± 0,01 ml
b) Vinoscon un 14 % vol. de alcohol como máximo: 20,00 ml ± 0,01 ml.
En cada vaso, añadir 1 ml de solución CP de patrón interno, C [e), 3], y
agua, a fin de obtener un volumen total de 40 ml (o 40 g).
E.Extracción
Efectuar la extracción bajo la vitrina de gases con una ventilación adecuada.Transferir la preparación indicada en D a la columna de extracción.Lavar el vaso con 10 ml de agua y transferir el agua de lavado a la columna.
Dejar el líquido absorberse en la columna durante 4 minutos. Eluir con 2 x
80 ml de diclorometano. Recoger el eluido en un matraz Erlenmeyer de
300 ml.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 191
▼M7
Evaporar el eluido hasta que queden 2 o 3 ml con ayuda del evaporador
rotativo al baño María a 30 ºC ( NB:No dejar evaporar hasta sequedad total).
Transferir el residuo concentrado a un tubo graduado de 4 ml, con ayuda de
una pipeta Pasteur.
Lavar el recipiente con 1 ml de diclorometano y transferir el líquido de
lavado al tubo. Concentrar la muestra hasta 1 ml bajo una débil corriente
de nitrógeno.
Transvasar el concentrado a un recipiente del injector automático para
análisis por CG/EM.
F.AnálisisporCG/EM
a) Curva de calibración
Inyectar 1 µl de cada solución patrón de calibración C(f), en el sistema
CG/EM. Hacer el gráfico de relación de áreas CE-CP para la respuesta
del ion m/z 62 en el eje de ordenadas y llevar al de abscisas la cantidad
de CE en ng/ml (esdecir, 100, 200, 400, 800, 1 600 ng/ml).
b) CE cuantificación
Inyectar 1 µl de extracto concentrado de E en el sistema CG/SM y
calcular la relación de áreasCE — CP para el ion m/z 62. Determinar
la concentración de CE (ng/ml) en el extracto, utilizando la curva de cali-
bración, con patrón interno. Calcular la concentración de CE en la
muestra de prueba (ng/ml) dividiendo la cantidad de CE (ng) en el
extracto por el volumen de la muestra de prueba (ml).
c) Comprobación de la pureza del CE
Determinar si las respuestas para los iones de m/z 62, 74 y 89 aparecen al
tiempo de retención del CE. Estas respuestas son las características
respectivamente de los principales fragmentos (M - C2H2)+y( M-C H3)+
del ión molecular (M). La presencia de CE está confirmada si las propor-ciones relativas de estos iones no sobrepasa el 20 % de las proporciones
para el patrón en CE. Puede ser necesario reconcentrar el extracto a fin
de obtener una respuesta suficiente para el ión de m/z 89.
G.Análisiscolaborativo
En el cuadro figuran los distintos resultados relativos a la muestra de prueba
práctica y a losdostiposde vinos .
La aplicación de la prueba de Cochran ha tenido como consecuencia la
eliminación de un solo par de resultados, tanto para el vino cuyo grado
alcohólico ess uperior al 14 % vol como para el vino cuyo grado alcohólico
esinferior o igual al 14 % vol, de losque cada uno procede de un labora-
torio distinto.
La reproducibilidad relativa tiende a decrecer con el aumento de la concen-
tración de carbamato de etilo.
ResultadosdelmétododedeterminacióndelcarbamatodeetiloCEenlasbebidasalcohólicas
porCG/EM
MuestraMedia de
CE hallado
(ng/ml)Recupera-
ción de CE
añadido
(%)SrSRRSDr(%)RSDR(%)
Vino 14 % vol 40 1,59 4,77 4,01 12,02
80 89 3,32 7,00 4,14 8,74
162 90 8,20 11,11 5,05 6,84
Vino 14 % vol 11 0,43 2,03 3,94 18,47
25 93 1,67 2,67 6,73 10,73
48 93 1,97 4,25 4,10 8,861990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 192
▼M8
45.DETERMINACIÓN DE LA RELACIÓN ISOTÓPICA13C/12C POR
ESPECTROMETRÍA DE MASA ISOTÓPICA DEL ETANOL DEL
VINO O DEL ETANOL OBTENIDO POR FERMENTACIÓN DE
MOSTOS, MOSTOS CONCENTRADOS O MOSTOS CONCEN-
TRADOSRECTIFICADOS
1. ÁMBITO DE APLICACIÓN
El método permite la medición de la relación isotópica13C/12C del etanol
del vino y del etanol obtenido por fermentación de productosderivados
de la vid (mosto, mosto concentrado, mosto concentrado rectificado).
2. REFERENCIAS NORMATIVAS
ISO: 5725:1994 «Fidelidad de losmétodosde
ensayo: Determinación de la repetibilidad y de
la reproducibilidad de un método de ensayo
normalizado por ensayos interlaboratorios».
V-PDB: Belemnite Viena Pee-Dee (RPDB= 0,0112372).
Método 8 del anexo del presente Reglamento: «Detección del aumento del grado alcohólico
natural de mostos, mostos concentrados, mostos
concentradosrectificadosy vinospor aplicación
de la resonancia magnética nuclear del deuterio
(FINE-RMN)»
3. TERMINOLOGÍA Y DEFINICIONES
13C/12C: Relación de losis ótoposdel carbono 13 (13C) y del
carbono 12 (12C) en una muestra dada.
δ13C: Contenido en carbono 13 (13C) expresado en partes por
mil (‰).
FINE-RMN: Fraccionamiento isotópico natural específico estudiado por
resonancia magnética nuclear.
V-PDB: Belemnite Viena Pee-Dee. El PDB, referencia primaria
para la medición de lasvariacionesnaturalesde losconte-
nidosis otópicosen carbono 13, era un carbonato de calcio
procedente de un rostro de Belemnite del Cretácico, de la
formación Pee-Dee de Carolina del Sur (EEUU). Su rela-
ción isotópica13C/12CoRPDBesRPDB= 0,0112372. El PDB
está agotado desde hace mucho tiempo, pero sigue siendo
la referencia primaria para expresar las variaciones natu-
ralesde loscontenidosis otópicosen carbono 13, frente a
la que se calibran los materiales de referencia, disponibles
en el Organismo Internacional de la Energía Atómica
(OIEA) de Viena (Austria). Las determinaciones isotópicas
de la presencia natural de carbono 13 se expresan
entonces, por convención, respecto al V-PDB.
m/z: Relación masa/carga.
4. PRINCIPIO
En la fotosíntesis, la asimilación del gas carbónico por los vegetales se
efectúa según dos tipos principales de metabolismo, que son los metabo-
lismos C3(ciclo de Calvin) y C4(Hatch y Slack). Estos dos mecanismos
de fotosíntesis presentan un fraccionamiento isotópico diferente. De esta
manera, losproductosde lasplantasC4, como losazúcaresy el alcohol
obtenido por fermentación, presentan contenidos en carbono 13 más
elevadosque losde s ushomólogosprocedentesde plantasC3.La mayoría
de losvegetales , como la vid y la remolacha, pertenecen al grupo C3,
mientrasque la caña de azúcar y el maíz pertenecen al grupo C4.L a
medición del contenido en carbono 13 permite, así pues, la detección y
la evaluación del azúcar de origen C4(azúcar de caña o isoglucosa de
maíz) añadido a los productos derivados de la uva (mosto de uva, vinos,
etc.). La combinación de la información sobre el contenido en carbono 13
con la obtenida mediante FINE-RMN permite igualmente la cuantifica-
ción de la adición de mezclasde azúcareso de alcoholesprocedentesde
plantasC3yC4.
El contenido en carbono 13 se determina en el gas carbónico resultante
de la combustión completa de la muestra. La concentración de los princi-
pales isotopómeros de masas 44 (12C16O2), 45 (13C16O2y12C17O16O) y 46
(12C16O18O), resultado de las diferentes combinaciones posibles de los
isótopos18O,17O,16O,13Cy12C, se determina a partir de las corrientes
iónicasmedidasen trescolectoresdiferentesde un es pectrómetro de
masa isotópica. Las aportaciones de los isotopómeros13C17O16Oy12C17O21990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 193
▼M8
pueden despreciarse debido a su escasísima proporción. La corriente
iónica correspondiente a m/z = 45 se corrige para tener en cuenta la apor-
tación de12C17O16O, que se calcula en función de la intensidad de la
corriente medida correspondiente a m/z = 46, considerando las concentra-
cionesrelativasde18Oy17O (corrección de Craig). La comparación con
una referencia calibrada frente a la referencia internacional V-PDB
permite calcular el contenido en carbono 13 en la escala relativa de δ13C.
5. REACTIVOS
Las sustancias de referencia y los materiales fungibles dependen del
equipo (6) utilizado por el laboratorio. Los sistemas generalmente utili-
zados se basan en el analizador elemental. Este puede estar diseñado
para la introducción de muestras colocadas en cápsulas metálicas hermé-
ticamente cerradas, o para la inyección de muestras líquidas a través de
una membrana mediante una jeringa.
Según el tipo de instrumentación utilizado, pueden utilizarse las
siguientes sustancias de referencia, reactivos y materiales fungibles:
— Sustancias de referencia
— disponibles en el OIEA:
Nombre Sustancia δ13C frente a V-PDB (9)
— IAEA-CH-6 sacarosa - 10,4 ‰
— IAEA-CH-7 polietileno - 31,8 ‰
— NBS22 aceite - 29,7 ‰
— USGS24 grafito - 16,1 ‰
— disponibles en el IRMM de Geel (B) (Instituto de Materiales y
Medidasde Referencia):
Nombre Sustancia δ13C frente a V-PDB (9)
— CRM/BCR 656 alcohol de vino - 26,93 ‰
— CRM/BCR 657 glucosa - 10,75 ‰
— CRM/BCR 660 solución hidroalcohólica
(graduación alcohólica
12 % vol.)- 26,72 ‰
— Patrón de trabajo con una relación13C/12C conocida, calibrado frente a
materialesde referencia internacionales .
— La lista indicativa de materiales fungibles que figura a continuación
corresponde a los sistemas de flujo continuo:
— helio para análisis (CAS 07440-59-7),
— oxígeno para análisis (CAS 07440-44-7),— dióxido de carbono para análisis, utilizado como gas de referencia
secundaria del contenido en carbono 13 (CAS 00124-38-9),
— reactivo de oxidación para el horno del sistema de combustión,
como por ejemplo óxido de cobre (II) para análisis elemental
(CAS 1317-38-0),
— desecante para eliminar el agua producida por la combustión, por
ejemplo anhidrona para análisis elemental (perclorato de
magnesio) (CAS 10034-81-8) (innecesario en los equipos dotados
de un sistema de eliminación del agua por separación mediante el
frío o mediante un capilar con permeabilidad selectiva).
6. EQUIPO Y MATERIAL6.1.Espectrómetrodemasaderelaciónisotópica(EMRI)
Espectrómetro de masa de relación isotópica (EMRI), que permita deter-
minar el contenido natural relativo en
13C del gasCO2con una precisión
interna del 0,05 ‰ o mejor expresado en valor relativo (9). La precisióninterna se define aquí como la diferencia entre dos medidas de la misma
muestra de CO
2. El espectrómetro de masa, destinado a la medida de rela-
ciones isotópicas, está equipado generalmente con un colector triple para
medir simultáneamente las intensidades correspondientes a m/z = 44, 45
y 46. El espectrómetro de masa de relación isotópica debe estar equipado1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 194
▼M8
con un sistema de introducción doble para medir en alternancia la
muestra problema y una referencia, o bien utilizar un sistema integrado
que efectúe la combustión cuantitativa de las muestras y separe el dióxido
de carbono de losdemásproductosde combus tión antesde la medición
en el espectrómetro de masa.
6.2.Equipodecombustión
Equipo de combustión capaz de convertir cuantitativamente el etanol en
dióxido de carbono y de eliminar todoslosdemásproductosde combus -
tión, incluida el agua, sin ningún fraccionamiento isotópico. El equipo
puede ser un sistema de flujo continuo integrado en la instrumentación
de espectrometría de masa (6.2.1), o bien un sistema autónomo de
combustión (6.2.2). El equipo debe permitir la obtención de una precisión
al menosequivalente a la indicada en (11).
6.2.1.Sistemas de flujo continuo
Están constituidos por un analizador elemental o por un cromatógrafo de
fase gaseosa dotado de un sistema de combustión en línea.
En caso de sistemas equipados para la introducción de muestras conte-
nidas en cápsulas metálicas, se utiliza el material de laboratorio siguiente:
— microjeringa o micropipeta aforada con puntasapropiadas ,
— balanza con escala de lectura de 1 µg al menos,
— pinzaspara encaps ular,
— cápsulas de estaño para muestras líquidas,
— cápsulas de estaño para muestras sólidas.
Nota:A fin de limitar los riesgos de evaporación de las muestras de etanol, es
posible poner en las cápsulas un material absorbente (por ejemplo, chro-
mosorb W 45-60 mesh ) del cual se habrá comprobado previamente,
mediante un ensayo en blanco, que no lleva ninguna cantidad significa-
tiva de carbono que pueda alterar los resultados.
Si se emplea un analizador elemental dotado de inyector para líquidos o
en caso de sistema de preparación por cromatografía-combustión, se
utiliza el material de laboratorio siguiente:
— jeringa para líquidos,
— frascos provistos de cierres estancos y de membranas inertes.
Los materiales de laboratorio indicados en las listas anteriores se dan a
título de ejemplo y pueden sustituirse por otros materiales de caracterís-
ticas equivalentes según el tipo de equipo de combustión y de
espectrometría de masa utilizado por el laboratorio.
6.2.2.Sistemas autónomos de preparación
En este caso, las muestras de dióxido de carbono procedentes de la
combustión de las muestras problema y de la referencia se recogen en
ampollas que se instalan a continuación en el doble sistema de entrada
del espectrómetro para efectuar el análisis isotópico. Puede utilizarse
varios tipos de equipos de combustión descritos en la bibliografía:
— sistema cerrado de combustión llenado con gas oxígeno circulante,
— analizador elemental con flujo de helio y de oxígeno,
— ampolla herméticamente cerrada, de cristal, rellena de óxido de cobre
(II) como agente de oxidación.
7. PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS PROBLEMA
El etanol debe extraerse del vino antes de la determinación isotópica.
Esta extracción se efectúa mediante destilación del vino, como se
describe en el punto 3.1 del método n
o8 (FINE-RMN).
Cuando se trate de mosto de uva, de mosto de uva concentrado y de
mosto de uva concentrado rectificado, los azúcares deben fermentarse en
primer lugar para convertirse en etanol, como se describe en el punto 3.2
del método no8.
8. PROCEDIMIENTO
Todas las etapas preparatorias deben efectuarse evitando que se pierda
por evaporación cualquier cantidad significativa de etanol, lo que podría
cambiar la composición isotópica de la muestra.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 195
▼M8
La descripción que figura a continuación hace referencia a los procedi-
mientos utilizados generalmente para la combustión de muestras de
etanol por medio de sistemas automatizados de combustión presentes en
el comercio. Para la preparación del dióxido de carbono a finesde
análisis isotópico pueden convenir otros métodos, siempre que garanticen
que la muestra de etanol se convierte cuantitativamente en dióxido de
carbono, sin ninguna pérdida de etanol por evaporación.
Procedimiento experimental basado en la utilización de un analizador
elemental:
a) Encapsulado de las muestras
— utilizar cápsulas, pinzas y placa de preparación limpias,
— con ayuda de las pinzas, tomar una cápsula de dimensiones apro-
piadas,
— introducir el volumen necesario de líquido en la cápsula mediante
la micropipeta,
—Nota:
Para obtener 2 mg de carbono hacen falta 3,84 mg de etanol abso-
luto o 4,17 mg de destilado con un grado alcohólico de 92 % m/m.
Debe calcularse de la misma manera la cantidad adecuada de
destilado según la cantidad de carbono necesaria en función de la
sensibilidad del equipo de espectrometría de masa,
— cerrar la cápsula con ayuda de las pinzas,— cada cápsula debe cerrarse de forma totalmente hermética; en caso
contrario, hay que eliminar la cápsula defectuosa y preparar una
nueva,
— preparar dos cápsulas de cada muestra,
— poner las cápsulas en el lugar adecuado sobre la placa del intro-
ductor automático de muestras del analizador elemental; cada
cápsula debe identificarse cuidadosamente con un número de
orden,
— poner sistemáticamente cápsulas que contengan referencias de
trabajo al principio y al final de la serie de muestras,
— introducir regularmente muestras de control en la serie de mues-
tras.
b) Control y ajuste del equipo de análisis elemental y de espectrometría
de masa
— ajustar la temperatura de los hornos del analizador elemental y los
flujosde gasde helio y de oxígeno para una combus tión óptima de
la muestra,
— verificar la ausencia de fugas en el sistema de análisis elemental y
de espectrometría de masa (por ejemplo, controlando la corriente
iónica de m/z = 28, correspondiente al N
2),
— ajustar el espectrómetro de masa para medir las intensidades de las
corrientesiónicascorres pondientesa m/z = 44, 45 y 46,
— verificar el sistema con ayuda de muestras de control conocidas
antesde comenzar lasmedicionesde lasmues tras .
c) Desarrollo de una serie de mediciones
Se introducen sucesivamente las muestras situadas en el introductor
automático de muestras del analizador elemental (o del cromatógrafo).
El dióxido de carbono de cada combustión de una muestra se eluye
hacia el espectrómetro de masa que mide las corrientes iónicas. El
ordenador acoplado al equipo registra las intensidades de corriente
iónica y calcula losvalores δcorrespondientes a cada muestra (9).
9. CÁLCULO
El objetivo del método consiste en medir la relación isotópica13C/12C del
etanol extraído a partir del vino o a partir de productosderivadosde la
uva previa fermentación. La relación isotópica13C/12C puede expresarse
mediante su desviación respecto a una referencia de trabajo. La desvia-
ción isotópica del carbono 13 ( δ13C) se calcula entonces en una escala
delta por mil ( δ/1000) comparando losres ultadosobtenidoscon la
muestra problema frente a los de la referencia de trabajo, calibrada ante-
riormente respecto a la referencia primaria internacional (V-PDB). Los
valores δ13C se expresan respecto a la referencia de trabajo según la
fórmula siguiente:
δ13Cmuestra/ref‰ = 1 000 × (Rmuestra-Rref)/Rref
donde RmuestrayRrefson, respectivamente, las relaciones isotópicas13C/12C
de la muestra y del dióxido de carbono utilizado como gas de referencia.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 196
▼M8
Losvalores δ13C se expresan entonces respecto a la referencia V-PDB
según la fórmula siguiente:
δ13Cmuestra/V-PDB‰= δ13Cmuestra/ref+δ13Cref/V-PDB+(δ13Cmuestra/ref×δ13Cref/V-PDB)/
1 000,
donde δ13Cref/V-PDBes la desviación isotópica, determinada previamente, de
la referencia de trabajo respecto al V-PDB.
Durante la medición en línea, pueden observarse pequeñas desviaciones
debidas a la variación de las condiciones instrumentales. En este caso,
lasδ13C de las muestras deben corregirse en función de la diferencia
entre el valor δ13C medido con el patrón de trabajo y su verdadero valor,
calibrado previamente frente al V-PDB, comparando con uno de los
materiales de referencia internacionales.Puede aceptarse que, entre dos
mediciones del patrón de trabajo, son lineales la desviación y, por tanto,
la corrección que debe aplicarse a los resultados de las muestras. El
patrón de trabajo debe medirse al principio y al final de todas las series
de muestras. Después puede calcularse la corrección respecto a cada
muestra por medio de una interpolación lineal.
10. CONTROL Y GARANTÍA DE CALIDAD
Controlar que el valor13C de la referencia de trabajo no difiere en más
del 0,5 ‰ del valor admitido. En caso contrario, habrá que controlar los
ajustes del equipo de espectrometría y, eventualmente, proceder a un
reajuste.
Con cada muestra, verificar que la diferencia de resultados entre las dos
cápsulas medidas sucesivamente es inferior al 0,3 ‰. El resultado final
correspondiente a una muestra dada es el valor medio de las dos cápsulas.
Si la diferencia es superior al 0,3 ‰, debe repetirse la medición.
El control de la corrección de la medición puede basarse en la intensidad
de la corriente iónica correspondiente a m/z = 44, que es proporcional a
la cantidad de carbono inyectado en el analizador elemental. En condi-
ciones típicas, la intensidad de esta corriente iónica debería ser
prácticamente constante con las muestras analizadas. Una desviación
significativa debe hacer sospechar una evaporación de etanol (por
ejemplo, en caso de una cápsula mal cerrada) o bien una inestabilidad
del analizador elemental o del espectrómetro de masa.
11. CARACTERÍSTICAS DEL MÉTODO (PRECISIÓN)
Se realizó un primer estudio en colaboración (11.1) con destilados de
alcoholesde origen vínico, y de alcoholesde caña y de remolacha, as í
como diferentes mezclas de estos tres orígenes. Dado que este estudio
no tenía en cuenta la etapa de destilación, se ha prestado atención
asimismo a datos complementarios procedentes de otros ensayos interla-
boratoriosrealizadoscon vinos(11.2) y, es pecialmente, de gruposde
ensayos de aptitud (11.3) para las mediciones isotópicas. Los resultados
demuestran que los diferentes sistemas de destilación utilizados en condi-
ciones satisfactorias y, en particular, los aplicables en las mediciones
FINE-RMN no introducen una variabilidad significativa en las determina-
cionesde δ13C del etanol del vino. Losparámetrosde fidelidad
observados respecto a los vinos son casi idénticos a los obtenidos en el
estudio en colaboración (11.1) con los destilados.
11.1.Estudioencolaboraciónsobrelosdestilados
Año del estudio interlaboratorios: 1996
Número de laboratorios: 20
Número de muestras: 6 muestras con ocultación dobleAnalito: δ
13C del etanol
Código de lasmues trasAlcohol de origen
vínicoAlcohol de remolacha Alcohol de caña
A&G 8 0% 1 0% 1 0%
B & C 90 % 10 % 0 %
D & F 0 % 100 % 0 %E & I 90 % 0 % 10 %1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 197
▼M8
Código de lasmues trasAlcohol de origen
vínicoAlcohol de remolacha Alcohol de caña
H & K 100 % 0 % 0 %
J & L 0 % 0 % 100 %
Muestras A/G B/C D/F E/I H/K J/L
Número de laborato-
rioss eleccionados
previa eliminación de
losvaloresanómalos19 18 17 19 19 19
Número de resultados
aceptados38 36 34 38 38 38
Valor medio
(δ13C) ‰- 25,32 - 26,75 - 27,79 - 25,26 - 26,63 - 12,54
Sr20,0064 0,0077 0,0031 0,0127 0,0069 0,0041
Desviación típica de
la repetibilidad (Sr)‰0,08 0,09 0,06 0,11 0,08 0,06
Límite de repetibi-
lidad r (2,8 × Sr)‰0,22 0,25 0,16 0,32 0,23 0,18
SR20,0389 0,0309 0,0382 0,0459 0,0316 0,0584
Desviación típica de
la reproducibilidad
(SR)‰0,20 0,18 0,20 0,21 0,18 0,24
Límite de reproduci-
bilidad R (2,8 × SR)‰0,55 0,49 0,55 0,60 0,50 0,68
11.2.Estudiointerlaboratorioscondosvinosyunalcohol
Año del estudio interlaboratorios: 1996
Número de laboratorios: 14 respecto a la destilación de los
vinos, 7 de los cuales también
respecto a la medición de δ13C del
etanol de losvinos
8 respecto a la medición de δ13Cd e
la muestra de alcohol
Número de muestras: 3 (vino blanco de graduación 9,3 %
vol., vino blanco de graduación 9,6 %
vol. y alcohol de graduación 93 % m/
m).
Analito: δ13C del etanol
Muestras Vino tinto Vino blanco Alcohol
Número de laborato-
rios778
Número de resultados
aceptados778
Valor medio ( δ13C) ‰ - 26,20 - 26,20 - 25,08
Varianza de la repro-
ducibilidad SR20,0525 0,0740 0,09621990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 198
▼M8
Muestras Vino tinto Vino blanco Alcohol
Desviación típica de
la reproducibilidad
(SR)‰0,23 0,27 0,31
Límite de reproduci-
bilidad R (2,8 × SR)‰0,64 0,76 0,87
Los laboratorios participantes han utilizado diferentes sistemas de destila-
ción. Lasdeterminacionesis otópicasde δ13C realizadasen un s olo
laboratorio con el conjunto de losdes tiladosdevueltospor lospartici-
pantes no muestran ningún valor anómalo ni significativamente distinto
de los valores medios. La varianza de los resultados (S2= 0,0059) es
comparable a lasvarianzasde la repetibilidad Sr2del estudio en colabora-
ción sobre los destilados (11.1).
11.3.Resultadosdelosejerciciosdelosgruposdeaptitudparalosensayos
isotópicos
Desde diciembre de 1994 se organizan regularmente ejercicios internacio-
nalesde aptitud para lasdeterminacionesis otópicasde losvinosy
alcoholes (destilados de graduación 96 % vol.). Los resultados permiten
a los laboratorios participantes controlar la calidad de sus análisis. La
explotación estadística de los resultados permite apreciar la variabilidad
de lasdeterminacionesen condicionesde reproducibilidad y, de es ta
manera, estimar los parámetros de varianza y de límite de reproducibi-
lidad. Losres ultadosobtenidoscon lasdeterminacionesde δ13C del
etanol de los vinos y destilados se resumen en el cuadro siguiente:
FechaVinosDes tilados
NSRS2
RRNSRS2
RR
Diciembre 1994 6 0,210 0,044 0,59 6 0,151 0,023 0,42
Junio 1995 8 0,133 0,018 0,37 8 0,147 0,021 0,41
Diciembre 1995 7 0,075 0,006 0,21 8 0,115 0,013 0,32
Marzo 1996 9 0,249 0,062 0,70 11 0,278 0,077 0,78
Junio 1996 8 0,127 0,016 0,36 8 0,189 0,036 0,53
Septiembre 1996 10 0,147 0,022 0,41 11 0,224 0,050 0,63
Diciembre 1996 10 0,330 0,109 0,92 9 0,057 0,003 0,16
Marzo 1997 10 0,069 0,005 0,19 8 0,059 0,003 0,16
Junio 1997 11 0,280 0,079 0,78 11 0,175 0,031 0,49
Septiembre 1997 12 0,237 0,056 0,66 11 0,203 0,041 0,57
Diciembre 1997 11 0,127 0,016 0,36 12 0,156 0,024 0,44
Marzo 1998 12 0,285 0,081 0,80 13 0,245 0,060 0,69
Junio 1998 12 0,182 0,033 0,51 12 0,263 0,069 0,74
Septiembre 1998 11 0,264 0,070 0,74 12 0,327 0,107 0,91
Media ponderada 0,215 0,046 0,60 0,209 0,044 0,59
N: número de laboratoriosparticipantes
11.4.Límitesderepetibilidadydereproducibilidad
Así pues, los datos de los diferentes ejercicios interlaboratorios presen-
tados en los cuadros anteriores permiten establecer para el presente
método, incluyendo igualmente la etapa de destilación, los límites de
repetibilidad y de reproducibilidad siguientes:
Límite de repetibilidad r: 0,24
Límite de reproducibilidad R: 0,6.1990R2676 — ES — 18.03.2003 — 007.001 — 199