2002L0069 — ES — 10.05.2004 — 001.001 — 1
Estedocumentoesuninstrumentodedocumentaciónynocomprometelaresponsabilidaddelasinstituciones
►B DIRECTIVA2002/69/CEDELACOMISIÓN
de►C1 30dejuliode2002 ◄
por la que se establecen los métodos de muestreo y de análisis para el control oficial de las
dioxinasyladeterminación dePCBsimilares alasdioxinasenlosproductosalimenticios
(TextopertinenteaefectosdelEEE)
(DO L 209 de 6.8.2002, p. 5)
Modificada por:
Diario Oficial
nopágina fecha
►M1Directiva 2004/44/CE de la Comisión de 13 de abril de 2004 L 113 17 20.4.2004
Rectificada por:
►C1Rectificación, DO L 252 de 20.9.2002, p. 40 (2002/69/CE)
▼B
DIRECTIVA2002/69/CEDELACOMISIÓN
de►C1 30dejuliode2002 ◄
porlaqueseestablecenlosmétodosdemuestreoydeanálisispara
el control oficial de las dioxinas y la determinación de PCB simi-
lares alasdioxinasenlosproductosalimenticios
(TextopertinenteaefectosdelEEE)
LA COMISIÓN DE LAS COMUNIDADES EUROPEAS,
Visto el Tratado constitutivo de la Comunidad Europea,
Vista la Directiva 85/591/CEE del Consejo, de 20 de diciembre de
1985, referente a la introducción de modos de toma de muestras y demétodos de análisis comunitarios para el control de los productos desti-nados a la alimentación humana (
1)►C1y, en particular, sus artículos
1y4 ,◄
Considerando lo siguiente:
(1) El Reglamento (CE) no466/2001 de la Comisión (2), cuya última
modificación la constituye el Reglamento (CE) no563/2002 (3), y
modificado porel Reglamento (CE) no2375/2001 del
Consejo (4), establece los niveles máximos de dioxinas y furanos
en determinados productos alimenticios.
(2) La Directiva 89/397/CEE del Consejo, de 14 de junio de 1989,relativa al control oficial de los productos alimenticios (
5), esta-
blece los principios generales para la realización del control de
dichos productos. La Directiva 93/99/CEE del Consejo, de 29
de octubre de 1993, sobre medidas adicionales relativas alcontrol oficial de los productos alimenticios (
6), introduce un
sistema de normas de calidad para los laboratorios a los que losEstados miembros han confiado el control oficial de losproductos alimenticios.
(3) La Directiva 85/591/CEE estableció criterios generales para losmétodos de muestreo y de análisis. No obstante, en algunoscasos es necesario establecer criterios y/o requisitos más especí-ficos que debería cumplir el método de análisis con el fin degarantizar que los laboratorios utilizan métodos de análisis conniveles de eficacia comparables.
(4) Las disposiciones que se refieren a la toma de muestras y a losmétodos de análisis se han elaborado basándose en los conoci-mientos actuales y podrán adaptarse a fin de tener en cuenta laevolución de los conocimientos científicos y tecnológicos.
(5) Las disposiciones establecidas en la presente Directiva serefieren únicamente al muestreo y al análisis de las dioxinas ylos PCB similares a las dioxinas a efectos de la aplicación del
Reglamento (CE) n
o466/2001 y no afectan a la estrategia de
muestreo ni a los niveles y frecuencia de muestreo especificadosen los anexos III y IV de la Directiva 96/23/CE del Consejo, de29 de abril de 1996, relativa a las medidas de control aplicablesa determinadas sustancias y sus residuos en los animales vivos y
sus productos, por la que se derogan las Directivas 85/358/CEE
y 86/469/CEE y las Decisiones 89/187/CEE y 91/664/CEE (
7).
Dichas disposiciones tampoco afectan a los criterios de selecciónrelativos a la toma de muestras, establecidos en la Decisión 98/179/CE de la Comisión, de 23 de febrero de 1998, por la que sefijan normas específicas relativas a la toma de muestras oficiales2002L0069 — ES — 10.05.2004 — 001.001 — 2
(1) DO L 372 de 31.12.1985, p. 50.
(2) DO L 77 de 16.3.2001, p. 1.
(3) DO L 86 de 3.4.2002, p. 5.
(4) DO L 321 de 6.12.2001, p. 1.
(5) DO L 186 de 30.6.1989, p. 23.
(6) DO L 290 de 24.11.1993, p. 14.
(7) DO L 125 de 23.5.1996, p. 10.
▼B
para el control de determinadas sustancias y sus residuos en los
animales vivos y sus productos (1).
(6) Deberá adoptarse un enfoque activo que permita obtener datoscompletos y fiables sobre la presencia de PCB similares a lasdioxinas en los productos alimenticios. Se considera, por tanto,necesario establecer requisitos para los métodos de análisis utili-
zados en la determinación de la presencia de PCB similares a las
dioxinas en los productos alimenticios.
(7) Podría utilizarse un método analítico de cribado de gran eficacia,cuya validez se haya demostrado y sea ampliamente aceptable,
para seleccionar las muestras con niveles significativos de
dioxinas. Posteriormente, los niveles de dioxinas en estas mues-tras deberán determinarse mediante un método analítico deconfirmación. Se considera, por tanto, necesario establecer requi-sitos estrictos para los métodos analíticos de confirmación yrequisitos mínimos para el método de cribado.
(8) Las medidas previstas en la presente Directiva se ajustan aldictamen del Comité permanente de la cadena alimentaria y desanidad animal.
HA ADOPTADO LA PRESENTE DIRECTIVA:
Artículo 1
Los Estados miembros deberán garantizar que la toma de muestras a
fines del control oficial de los niveles de dioxinas y furanos y la deter-
minación de los niveles de PCB similares a las dioxinas en los
productos alimenticios se realiza conforme a los métodos descritos enel anexo I.
Artículo 2
Los Estados miembros deberán garantizar que la preparación de las
muestras y los métodos de análisis utilizados para el control oficial delos niveles de dioxinas y furanos y la determinación de los niveles dePCB similares a las dioxinas en los productos alimenticios cumplen los
criterios establecidos en el anexo II.
Artículo 3
Los Estados miembros pondrán en vigor las disposiciones legales,
reglamentarias y administrativas necesarias para dar cumplimiento a la
presente Directiva, a más tardar el 28 de febrero de 2003. Informaráninmediatamente de ello a la Comisión.
Cuando los Estados miembros adopten dichas disposiciones, éstas
harán referencia a la presente Directiva o irán acompañadas de dichareferencia en su publicación oficial. Los Estados miembros estable-cerán las modalidades de la mencionada referencia.
Artículo 4
La presente Directiva entrará en vigor el vigésimo día siguiente al de
su publicación en el Diario Oficial de las Comunidades Europeas .
Artículo 5
Los destinatarios de la presente Directiva serán los Estados miembros.2002L0069 — ES — 10.05.2004 — 001.001 — 3
(1) DO L 65 de 5.3.1998, p. 31.
▼B
ANEXO I
MÉTODOS DE MUESTREO PARA EL CONTROL OFICIAL DE LOS
NIVELES DE DIOXINAS (PCDD/PCDF) Y LA DETERMINACIÓN DE
PCB SIMILARES A LAS DIOXINAS EN DETERMINADOS
PRODUCTOSALIMENTICIOS
1.Objetoyámbitodeaplicación
Las muestras destinadas al control oficial de los niveles de contenido de
dioxinas (PCDD/PCDF), así como a la determinación del contenido de
PCB (1) similares a las dioxinas en los productos alimenticios, se tomarán
de conformidad con los métodos descritos a continuación. Las muestras
globales así obtenidas se considerarán representativas de los lotes o
sublotes de los que se obtengan. El cumplimiento de los niveles máximos
establecidos en el Reglamento (CE) no466/2001 porel que se fija el conte-
nido máximo de determinados contaminantes en los productos alimenticios,
se determinará en función de los niveles hallados en las muestras de labo-
ratorio.2002L0069 — ES — 10.05.2004 — 001.001 — 4
(1) Cuadro FET fijado por la OMS a fines de la evaluación del riesgo para la salud
humana, basado en las conclusiones de la reunión de la OMS celebrada en Estocolmo(Suecia) del 15 al 18 de junio de 1997 [Van den Berg y otros., (1998). Factores deequivalencia tóxica (FET) para los PCB, PCDD y PCDF en seres humanos y animales.Environmental Health Perspectives, 106(12), 775].
Congéneres Valor FET
Dibenzo-p-dioxinas («PCDD»)
2,3,7,8-TCDD 1
1,2,3,7,8-PeCDD 1
1,2,3,4,7,8-HxCDD 0,1
1,2,3,6,7,8-HxCDD 0,11,2,3,7,8,9-HxCDD 0,1
1,2,3,4,6,7,8-HpCDD 0,01
OCDD 0,0001
Dibenzofuranos («PCDF»)
2,3,7,8-TCDF 0,1
1,2,3,7,8-PeCDF 0,05
2,3,4,7,8-PeCDF 0,5
1,2,3,4,7,8-HxCDF 0,1
1,2,3,6,7,8-HxCDF 0,1
1,2,3,7,8,9-HxCDF 0,1
2,3,4,6,7,8-HxCDF 0,11,2,3,4,6,7,8-HpCDF 0,01
1,2,3,4,7,8,9-HpCDF 0,01
OCDF 0,0001
PCB «similares a las dioxinas» PCBno-orto+PCBmono-orto
PCBno-orto
PCB 77 0,0001
PCB 81 0,0001
PCB 126 0,1
PCB 169 0,01
PCBmono-orto
PCB 105 0,0001
PCB 114 0,0005
PCB 118 0,0001
PCB 123 0,0001
PCB 156 0,0005
PCB 157 0,0005PCB 167 0,00001
PCB 189 0,0001
Abreviaturas utulizadas: T = tetra; Pe = penta; Hx = hexa; Hp = hepta; O = octo;
CDD = clorodibenzodioxina; CDF = clorobibenzofurano; CB = clorobifenilo.
▼B
2.Definiciones
Lote: cantidad identificable de alimento entregada en una misma vez y que
presenta, a juicio del agente responsable, características comunes, tales
como el origen, la variedad, el tipo de embalaje, el envasador, el expedidor
o el etiquetado. En el caso del pescado y de los productos pesqueros
también deberá ser comparable su tamaño.
«Sublote»: parte de un lote más grande designada para aplicar sobre ella el
método de toma de muestras. Cada sublote deberá estar separado física-
mente y seridentificable.
«Muestra elemental»: cantidad de material tomado en un único lugar del
lote o sublote.
«Muestra global»: el total combinado de todas las muestras elementales
tomadas del lote o sublote.
«Muestra de laboratorio»: una parte/cantidad representativa de la muestra
global destinada al laboratorio.
3.Disposicionesgenerales
3.1.Personal
La toma de muestras deberá ser efectuada por una persona cualificada auto-
rizada a tal efecto, según especifique el Estado miembro.
3.2.Muestreo del producto
Todo lote para analizar será objeto de un muestreo separado.
3.3.Precauciones
Durante el muestreo y la preparación de las muestras de laboratorio,
deberán tomarse precauciones con el fin de evitar toda alteración que pueda
modificarel contenido en dioxinas y PCB similar es a las dioxinas, o afectar
a los análisis o a la representatividad de la muestra global.
3.4.Muestras elementales
En la medida de lo posible, las muestras elementales se tomarán en
distintos puntos del lote o sublote. Toda excepción a esta norma deberá
señalarse en el acta contemplada en el punto 3.8.
3.5.Preparación de la muestra global
La muestra global se obtiene por mezcla de todas las muestras elementales.
Deberá pesar al menos 1 kg, a menos que no sea posible, por ejemplo,
cuando sólo se haya tomado muestra de un envase.
3.6.Subdivisión de la muestra global en muestras de laboratorio con fines
sancionadores, comerciales o de arbitraje
Las muestras de laboratorio con eventuales efectos sancionadores, comer-
ciales o de arbitraje se tomarán de la muestra global homogeneizada,
excepto si ello se opusiera a las normas de los Estados miembros en
materia de muestreo. El tamaño de las muestras de laboratorio susceptibles
de servir a efectos sancionadores será suficiente para que puedan hacerse al
menos dos análisis.
3.7.Acondicionamiento y envío de las muestras globales y de laboratorio
Cada muestra global y cada muestra de laboratorio deberá colocarse en un
recipiente limpio, de material inerte, que ofrezca protección adecuada
contra todo factor de contaminación, contra la pérdida de analitos por
adsorción a la pared interna del contenedor y contra todo daño que pudiera
ocasionar el transporte. Han de tomarse también todas las precauciones
necesarias para evitar cualquier modificación de la composición de las
muestras globales y de laboratorio que pudiera ocurrir durante el transporte
o el almacenamiento.
3.8.Cierre y etiquetado de las muestras globales y de laboratorio
Cada muestra tomada para su uso oficial se sellará en el lugar del muestreo
y se identificará según las disposiciones vigentes en los Estados miembros.
Para cada toma de muestras, deberá establecerse un acta de muestreo que
per mita identificarsin ambigüedad el lote e identificarla fecha y el lugar2002L0069 — ES — 10.05.2004 — 001.001 — 5
▼B
del muestreo, así como toda información adicional que pueda resultar útil
al analista.
4.Planesdemuestreo
El método de muestreo utilizado garantizará que la muestra global sea
representativa del lote que vaya a controlarse.
Número de muestras elementales
En el caso de la leche y los aceites, para los que se supone una distribución
homogénea de los contaminantes en cuestión en un lote determinado,
bastará con tomar tres muestras elementales para cada lote que forme la
muestra global. Deberá indicarse el número de lote. Para los demás
productos, el número mínimo de muestras elementales que deben tomarse
del lote será el indicado en el cuadro 1.
El peso de la muestra global, que incluye todas las muestras elementales,
deberá ser de al menos 1 kg. (véase el punto 3.5). Las muestras elementales
serán de un peso similar. El peso de una muestra elemental deberá ser de al
menos 100 gramos, y depende del tamaño de las partículas del lote. Toda
excepción a esta norma debe señalarse en el acta contemplada en el punto
3.8. Con arreglo a lo dispuesto en la Decisión 97/747/CE de la Comisión,
de 27 de octubre de 1997, por la que se fijan los niveles y frecuencias de
muestreo previstas en la Directiva 96/23/CE del Consejo, con vistas al
control de determinadas sustancias y sus residuos en determinados
productos animales (1), el tamaño de la muestra para los huevos de gallina
es de 12 huevos o más (para lotes a granel, así como para paquetes indivi-
duales, cuadros 1 y 2).
CUADRO 1
Númeromínimodemuestraselementales quedebentomarsedellote
Peso del lote (expresado en kg)Número mínimo de muestras elemen-
tales que deben tomarse
<5 0 3
50 a 500 5
> 500 10
Si el lote está formado por envases individuales, el número de envases que
han de tomarse para formar la muestra global se indica en el cuadro 2.
CUADRO 2
Número de envases (muestras elementales) que deben tomarse para
formar una muestra global si el lote está formado por envases indivi-
duales
Número de envases o unidades del loteNúmero de envases o unidades que
deben tomarse
1 a 25 1 envase o unidad
26 a 100 un 5 %, un mínimo de 2 envases
o unidades
> 100 un 5 %, como máximo 10
envases o unidades2002L0069 — ES — 10.05.2004 — 001.001 — 6
(1) DO L 303 de 6.11.1997, p. 12.
▼M1
4.1.Disposiciones específicas para el muestreo de lotes que contengan peces
enteros
El número de muestras elementales que deben tomarse del lote se define en
el cuadro 1. La muestra global que mezcle todas las muestras elementales
deberá ser de un mínimo de 1 kg (véase el punto 3.5).
— En caso de que el lote que vaya a serobjeto de muestr eo contenga
peces pequeños (cada uno con un peso inferior a 1 kg), se tomará el
pez entero como muestra elemental para formar la muestra global. En
caso de que la muestra global resultante pese más de 3 kg, las muestras
elementales podrán tomarse de la parte media, con un peso mínimo de
100 gramos, de los peces que formen la muestra global. La parte
completa a la que sea aplicable el nivel máximo se utilizará para homo-
geneizarla muestr a.
— En caso de que el lote que vaya a serobjeto de muestr eo contenga
peces de mayortamaño (cada uno con un peso super iora 1 kg), la
muestra elemental se tomará de la parte media del pez. Cada muestra
elemental deberá pesar como mínimo 100 gramos. En caso de que el
lote que vaya a ser objeto de muestreo consista en peces de muy gran
tamaño (por ejemplo > 6 kg) y la extracción de un trozo de la parte
media del pez provoque una importante pérdida económica, podrá
considerarse suficiente la extracción de tres muestras elementales de
un mínimo de 350 gramos cada una, con independencia del tamaño
del lote.
5.Conformidaddelloteosubloteconlaespecificación.
El lote se aceptará si el resultado analítico de un único análisis no supera el
nivel máximo respectivo establecido en el Reglamento (CE) no466/2001
teniendo en cuenta la incertidumbre de medición.
Se considerará que el lote incumple el nivel máximo establecido en el
Reglamento (CE) no466/2001 si el resultado analítico confirmado por el
análisis porduplicado y calculado como media de un mínimo de dos deter -
minaciones independientes supera el nivel máximo más allá de cualquier
duda razonable teniendo en cuenta la incertidumbre de medición.
La incertidumbre de medición podrá tenerse en cuenta con arreglo a uno de
los enfoques siguientes:
— calculando la incertidumbre expandida mediante la utilización de un
factor de cobertura de 2, lo que da un nivel de confianza del 95 % apro-
ximadamente,
— estableciendo el límite de decisión (CC α)con arreglo a las disposi-
ciones de la Decisión 2002/657/CE de la Comisión, de 12 de agosto
de 2002, porla que se aplica la Dir ectiva 96/23/CE del Consejo en
cuanto al funcionamiento de los métodos analíticos y la interpretación
de los resultados (1) (punto 3.1.2.5 del anexo — caso de las sustancias
para las que se ha establecido un nivel permitido).
Las actuales normas de interpretación se aplican al resultado analítico obte-
nido a partir de la muestra para control oficial. En caso de análisis con
fines de defensa o arbitraje, se aplicarán las normas nacionales.2002L0069 — ES — 10.05.2004 — 001.001 — 7
(1) DO L 221 de 17.8.2002, p. 8, Decisión cuya última modificación la constituye la Deci-
sión 2004/25/CE de la Comisión (DO L 6 de 10.1.2004, p. 38).
▼B
ANEXO II
PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS Y REQUISITOS PARA LOS
MÉTODOS DE ANÁLISIS UTILIZADOS EN EL CONTROL OFICIAL
DE LOS NIVELES DE DIOXINAS (PCDD/PCDF) Y EN LA DETERMI-
NACIÓN DE PCB SIMILARES A LAS DIOXINAS EN
DETERMINADOSPRODUCTOSALIMENTICIOS
1.Objetivoyámbitodeaplicación
Estos requisitos deberán aplicarse en el análisis de los productos alimenti-
cios realizado a efectos del control oficial del nivel de dioxinas [dibenzo-p-
dioxinas policloradas (PCDD) y dibenzofuranos policlorados (PCDF)] y de
la determinación de PCB similares a las dioxinas.
El control de la presencia de dioxinas en los productos alimenticios puede
efectuarse mediante una estrategia que incluya un método de detección
selectiva a fin de seleccionarlas muestr as cuyo contenido en dioxinas y
PCB similares a las dioxinas sea menos de un 30-40 % inferior al nivel
considerado o exceda de dicho nivel. El contenido de dioxinas en esas
muestras deberá determinarse/confirmarse mediante un método de confir-
mación.
Los métodos de detección selectiva son los que se utilizan para detectar la
presencia de dioxinas y PCB similares a dioxinas en el nivel considerado.
Estos métodos se caracterizan por su capacidad de analizar un elevado
número de muestras en poco tiempo con el fin de detectar posibles posi-
tivos. Están específicamente diseñados para evitar resultados falsos
negativos.
Son métodos de confirmación los que proporcionan una información
completa o complementaria que permite la identificación y cuantificación
inequívoca de las dioxinas y los PCB similares a las dioxinas en el nivel
considerado.
2.Contexto
Habida cuenta de que las muestras ambientales y biológicas (incluidas las
muestras de productos alimenticios) contienen, por lo general, mezclas
complejas de diferentes congéneres de dioxinas, se ha desarrollado el
concepto de factores de equivalencia tóxica (FET) a fin de facilitar la
evaluación de los riesgos. Estos FET permiten expresar concentraciones
de mezclas de PCDD y PCDF sustituidos en posiciones 2,3,7 y 8, y, más
recientemente, de algunas formas de PCB con cloros sustituidos en posi-
ciones no-orto y mono-orto que presentan una actividad similar a las
dioxinas en equivalentes tóxicos (EQT) de 2,3,7,8-TCDD (véase la nota 1
del anexo I).
Las concentraciones de cada sustancia en una muestra dada se multiplican
por sus respectivos FET y se suman a continuación para obtener la concen-
tración total de compuestos similares a dioxinas expresados en EQT.
El concepto de «límite superior» exige la utilización del límite de cuantifi-
cación para la contribución de cada congénere no cuantificado al EQT.
El concepto de «límite inferior» exige la utilización de cero para la contri-
bución de cada congénere no cuantificado al EQT.
El concepto de «límite intermedio» exige la utilización de la mitad del
límite de cuantificación para calcular la contribución de cada congénere
no cuantificado al EQT.
Exclusivamente a efectos de la presente Directiva, el límite específico
aceptado de cuantificación de un congénere individual será la concentra-
ción de un analito en el extracto de una muestra que produzca una
respuesta instrumental a dos iones diferentes, que se controlará con una
relación señal/ruido (S/R) de 3:1 para la señal menos sensible y el cumpli-
miento de requisitos básicos tales como, por ejemplo, el tiempo de
retención y la relación isotópica con arreglo al procedimiento de determina-
ción descrito en el método EPA 1613, revisión B.2002L0069 — ES — 10.05.2004 — 001.001 — 8
▼M1
▼B
3.Requisitosdegarantíadecalidadquehandecumplirseenlaprepara-
cióndelasmuestras
— Deberán tomarse las medidas pertinentes para evitar la contaminación
cruzada en cada fase del procedimiento de toma de muestras y de
análisis.
— Las muestras deberán ser almacenadas y transportadas en recipientes de
vidrio, aluminio, polipropileno o polietileno. Deberán eliminarse del
recipiente que contiene la muestra los restos de polvo de papel. Los
recipientes de vidrio deberán lavarse con disolventes previamente some-
tidos a un control de detección de dioxinas.
— El almacenamiento y el transporte de las muestras deberá realizarse de
modo que se preserve la integridad de la muestra de producto alimen-ticio.
— En la medida en que sea pertinente, cada muestra de laboratorio deberá
triturarse finamente y mezclarse minuciosamente utilizando un procedi-
miento reconocido que garantice una homogeneización completa (por
ejemplo trituración que permita pasar a través de un tamiz de 1 mm);
en caso de que el contenido de humedad sea demasiado elevado, las
muestras deberán secarse antes de proceder a su trituración.
— Efectuar un análisis en blanco para lo cual se realizará todo el procedi-
miento analítico omitiendo únicamente la muestra.
— El peso de la muestra utilizada para la extracción deberá ser el sufi-
ciente para que se cumplan los requisitos relativos a la sensibilidad.
— Existen muchos procedimientos específicos para la preparación de
muestras que son satisfactorios y pueden utilizarse para los productos
considerados. Los procedimientos deberán ser validados con arreglo a
las directrices aceptadas internacionalmente.
4.Requisitosquedebencumplirloslaboratorios
— Los laboratorios deberán demostrar la eficacia de un método en el nivel
considerado, por ejemplo 0,5, 1 y 2 veces el nivel considerado con un
coeficiente de variación aceptable para análisis repetidos. Por lo que se
refiere a los criterios de validez, véase el punto 5.
— El límite de cuantificación en un método de confirmación deberá
situarse en un intervalo de aproximadamente un quinto del nivel consi-
derado, a fin de garantizar coeficientes de variación aceptables en el
intervalo de referencia.
— Como medidas internas de garantía de calidad, deberán realizarse regu-
larmente controles en blanco y experimentos con muestras enriquecidas
o análisis de muestras de control (de preferencia, si existe, material de
referencia certificado).
— La participación con éxito en estudios entre laboratorios que evalúan la
competencia del laboratorio es la mejor manera de demostrar la aptitud
de éste para efectuar análisis específicos. No obstante, la participación
con éxito en estudios entre laboratorios cuando se trata, por ejemplo, de
muestras de suelos o de aguas residuales no prueba necesariamente la
competencia en el ámbito de las muestras de alimentos o piensos, que
presentan niveles de contaminación más bajos. Por lo tanto, la partici-
pación continua en estudios entre laboratorios para la detección de
dioxinas y PCB similares a las dioxinas en las matrices de alimentos/
piensos es obligatoria.
— De conformidad con lo dispuesto en la Directiva 93/99/CEE, los labo-
ratorios deberán estar acreditados por un organismo reconocido que
opere de conformidad con la Guía ISO 58, a fin de garantizar que
cumplen la garantía de calidad analítica. Dicha acreditación debe ser
conforme a la norma ISO/IEC/17025:1999.
5.Requisitosparalosprocedimientosanalíticosaplicablesalasdioxinasy
alosPCBsimilares alasdioxinas
Requisitos básicos de aceptación de los procedimientos analíticos:
—Sensibilidad elevada y límites de detección bajos . En el caso de los
PCDD y PCDF, los umbrales de detección deben situarse en el pico-
gramo EQT (10
-12g) habida cuenta de la extrema toxicidad de algunos
de estos compuestos. Se sabe que los PCB suelen presentarse en canti-
dades más elevadas que los PCDD y PCDF. Para la mayoría de los
congéneres del grupo de los PCB, es suficiente una sensibilidad en el
intervalo de nanogramos (10-9g). No obstante, para medir los congé-
neres de PCB similares a las dioxinas más tóxicos (en particular, los
congéneres sustituidos no-orto) es preciso conseguir la misma sensibi-
lidad que para los PCDD y los PCDF.
—Selectividad elevada (especificidad) . Es necesario establecer una distin-
ción entre los PCDD, los PCDF y los PCB similares a las dioxinas, y2002L0069 — ES — 10.05.2004 — 001.001 — 9
▼B
una multitud de otros compuestos extraídos simultáneamente de la
muestra, capaces de interferir, y que están presentes en concentraciones
de hasta varios órdenes de magnitud superiores a las de los analitoss
considerados. Por lo que respecta a los métodos de cromatografía de
gases/espectrometría de masas (GC/MS), es necesario distinguir entre
varios congéneres, en particular entre los tóxicos (es decir, los diecisiete
PCDD y PCDF sustituidos en 2,3,7 y 8 y los PCB similares a las
dioxinas) y otros congéneres. Los bioensayos deberían permitir una
determinación selectiva de los valores EQT como suma de PCDD,
PCDF y PCB similares a las dioxinas.
—Exactitud elevada (veracidad y precisión) . La determinación debería
proporcionar una estimación válida de la concentración real en una
muestra. A fin de evitar que el resultado del análisis de una muestra
sea rechazado debido a la escasa fiabilidad de la estimación de EQT,
es necesario lograr un alto grado de exactitud (exactitud de la medición:
grado de concordancia entre el resultado de la medición y el valor real
o atribuido de la medición). La exactitud se expresa como veracidad
(diferencia entre el valor medio medido para un analito en un material
certificado y su valor certificado, expresado en porcentaje de dicho
valor) y como precisión (la precisión suele calcularse como desviación
típica; incluye la repetibilidad y la reproducibilidad e indica la dife-
rencia entre los resultados obtenidos aplicando varias veces el
procedimiento experimental en condiciones establecidas).
Los métodos de cribado pueden incluir bioensayos y métodos GC/MS;
los métodos de confirmación son métodos de cromatografía de gases de
alta resolución/espectometría de masas de alta resolución (HRGC/
HRMS). Deben cumplirse los siguientes criterios para el valor EQT
total:
Métodos de cribadoMétodos de confirma-
ción
Porcentaje de falsos
negativos<1%
Veracidad – 20 % a + 20 %
CV (coeficiente de
variación)<3 0% <1 5%
6.RequisitosespecíficosquedebencumplirlosmétodosGC/MSutilizados
confinesdecribadoodeconfirmación
— A fin de validar el procedimiento analítico, es preciso añadir patrones
internos de PCDD/F marcados con13C y con cloros sustituidos en
2,3,7 y 8 (y patrones internos de PCB similares a las dioxinas marcados
con13C, cuando sea necesario determinar los PCB similares a las
dioxinas) desde el inicio o antes de comenzarel método analítico, por
ejemplo previamente a la fase de extracción. Deberá añadirse al menos
un congénere para cada grupo homólogo de PCDD/F tetra a octoclo-
rados (y al menos un congénere para cada uno de los grupos
homólogos de PCB similares a las dioxinas, cuando sea necesario deter-
minar los PCB similares a las dioxinas) (alternativamente, deberá
utilizarse para el control de PCDD/F y de PCB similares a las dioxinas
al menos un congénere para cada función de registro de iones seleccio-
nados para la espectrometría de masas). Se recomienda utilizar, sobre
todo en los métodos de confirmación, el conjunto de los diecisiete
patrones internos de PCDD/F sustituidos en 2,3,7 y 8 y marcados con
13C, así como la totalidad de los doce patrones internos de PCB simi-
lares a las dioxinas marcados con13C (en caso de que sea necesario
determinar los PCB similares a dioxinas).
Habrán de determinarse asimismo los factores de respuesta relativos en
el caso de los congéneres para los que no se añade ningún análogo
marcado con13C, mediante la utilización de soluciones de calibración
apropiadas.
— Para los productos alimenticios de origen vegetal y los productos
alimenticios de origen animal con un contenido de grasa inferior al
10 %, es obligatorio añadir patrones internos antes de proceder a laextracción. Por lo que respecta a los productos alimenticios de origen
animal con un contenido de grasa superior al 10 %, los patrones
internos podrán añadirse antes de la fase de extracción o después de la
extracción de grasas. Conviene validar adecuadamente la eficacia de la
extracción, en función de la fase en la que se introduzcan los patrones2002L0069 — ES — 10.05.2004 — 001.001 — 10
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internos y de si los resultados notificados se refieren al producto o a las
grasas.
— Previamente al análisis mediante GC/MS, deberán añadirse uno o dos
patrones de recuperación (sustituto).
— Es preciso realizar un control de recuperación. Para los métodos de
confirmación, los porcentajes de recuperación de cada patrón interno
deberán situarse en un intervalo del 60 % al 120 %. En el caso de
congéneres individuales, en particular para algunas dibenzodioxinas y
dibenzofuranos hepta y octoclorados, podrían aceptarse porcentajes de
recuperación inferiores o superiores siempre y cuando su contribución
al valorEQT no super e el 10 % del valortotal de EQT (teniendo única-
mente en cuenta los PCDD/F). Para los métodos de cribado los
porcentajes de recuperación deberán situarse en un intervalo del 30 %
al 140 %.
— Es conveniente separar las dioxinas de los compuestos clorados interfe-
rentes, tales como los PCB y los éteres difenílicos clorados, mediante
técnicas de cromatografía adecuadas (de preferencia con una columna
de florisil, alúmina y/o carbono).
— La separación de los isómeros por cromatografía de gases debería ser
suficiente (< 25 % de pico a pico entre 1,2,3,4,7,8-HxCDF y
1,2,3,6,7,8-HxCDF).
— La determinación deberá realizarse con arreglo al método EPA 1613,
revisión B: dioxinas y furanos tetra a octoclorados por dilución de
isótopos con HRGC/HRMS u otro método con criterios de realización
equivalentes.
— La diferencia entre el límite superior y el límite inferior de determina-
ción no debe exceder el 20 % para los productos alimenticios cuya
contaminación pordioxinas sea de apr oximadamente 1 pg EQT-OMS/
g grasa (teniendo únicamente en cuenta los PCDD/PCDF). En el caso
de los productos alimenticios con bajo contenido de grasa, deberán apli-
carse los mismos requisitos para niveles de contaminación del orden de
1 pg EQT-OMS/g de producto. Para niveles de contaminación infe-
riores, por ejemplo 0,50 pg. de producto EQT-OMS/g, la diferencia
entre el límite superior y el límite inferior podrá situarse en un intervalo
del 25 % al 40 %.
7.Métodosanalíticosdedetecciónselectiva
7.1.Introducción
Es posible aplicardistintos enfoques analíticos en un método de detección
selectiva: un enfoque exclusivamente de cribado y un enfoque cuantitativo.
Técnica de cribado
La respuesta de las muestras se compara con la de una muestra de refe-
rencia en el nivel considerado. Las muestras cuya respuesta es inferior a
la de la muestra de referencia se consideran negativas, y las muestras
cuya respuesta es superior se consideran positivas. Requisitos:
— En cada serie de ensayos deberán utilizarse blancos y muestras de refe-
rencia, extraídas y analizadas al mismo tiempo y en condiciones
idénticas. La respuesta de la muestra de referencia debe ser claramente
superior a la del blanco.
— Deberán incluirse otras muestras de referencia con una concentración
equivalente a 0,5 veces y 2 veces el nivel considerado a fin de demos-
trar la eficacia del ensayo en el intervalo de referencia para el control
del nivel considerado.
— Cuando se analicen otras matrices, deberá demostrarse la validez de las
muestras de referencia, utilizando de preferencia muestras cuya concen-
tración en EQT, establecida mediante un método HRGC/HRMS, sea
similar a la de la muestra de referencia o, en su defecto, de un blanco
enriquecido hasta concentraciones del mismo orden.
— Puesto que en los bioensayos no pueden utilizarse patrones internos, las
pruebas de repetibilidad son muy importantes para obtener datos sobre
la desviación típica en una serie de ensayos. El coeficiente de variación
debe serinfer ioral 30 %.
— En el caso de los bioensayos, deberán identificarse claramente los
compuestos diana, las posibles interferencias y los niveles máximos
tolerables de blanco.
Enfoque cuantitativo
El enfoque cuantitativo exige varias series de diluciones del patrón,
procesos de limpieza y mediciones dobles o triples, así como ensayos en
blanco y controles de recuperación. El resultado podrá expresarse en EQT,
dando porsentado que los compuestos r esponsables de la señal cumplen el2002L0069 — ES — 10.05.2004 — 001.001 — 11
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principio de EQT. Para ello, puede utilizarse el TCDD (o una mezcla de
patrones de dioxinas/furanos) a fin de producir una curva de calibración
que permita calcular el nivel de EQT en el extracto y, por lo tanto, en la
muestra. A continuación, este resultado se corrige con el nivel de EQT
calculado para un blanco (para tener en cuenta las impurezas procedentes
de los disolventes o productos químicos utilizados) y para la recuperación
(calculada a partir del nivel de EQT en una muestra de control de calidad
próxima al límite considerado). Es fundamental tener en cuenta que parte
de la pérdida de recuperación aparente puede deberse a efectos matriciales
y/o a diferencias entre los valores de FET en los bioensayos y los valores
oficiales de FET definidos porla OMS.
7.2.Requisitos aplicables a los métodos analíticos de cribado
— El cribado puede realizarse utilizando métodos analíticos GC/MS o
bioensayos. Para los métodos GC/MS deben utilizarse los criterios esta-
blecidos en el punto 6. Por lo que se refiere a los bioensayos celulares y
los bioensayos realizados con kits, los requisitos específicos aplicables
figuran, respectivamente, en los puntos 7.3 y 7.4.
— Es necesario proporcionar información sobre el número de resultados
falsos positivos y falsos negativos obtenidos para una amplia serie de
muestras por debajo y por encima del nivel máximo o umbral de inter-
vención, en comparación con el contenido en EQT determinado
mediante un método analítico de confirmación. Los porcentajes reales
de falsos negativos deben ser inferiores al 1 %. La tasa de falsas mues-
tras positivas debe ser lo suficientemente baja para que el método de
cribado resulte eficaz.
— Los resultados positivos deberán confirmarse siempre mediante un
método analítico de confirmación (HRGC/HRMS). Además, las mues-
tras correspondientes a una amplia gama de EQT deberán ser
confirmadas por un método HRGC/HRMS (aproximadamente 2 % a
10 % de las muestras negativas). Deberá facilitarse información sobre
la correspondencia entre los resultados de los bioensayos y los del
método HRGC/HRMS.
7.3.Requisitos específicos aplicables a los bioensayos celulares
— Cuando se efectúe un bioensayo, deberá utilizarse en cada prueba una
serie de concentraciones de referencia de TCDD o una mezcla de
dioxinas/furanos (curva de respuesta con un R2> 0,95 para una dosis
completa). Sin embargo, a efectos del cribado, puede utilizarse en el
análisis de las muestras de baja concentración una curva detallada en
los niveles bajos.
— Para los resultados del bioensayo en un intervalo de tiempo constante,
conviene utilizar una concentración de referencia de TCDD (aproxima-
damente 3 veces el límite de cuantificación) en una ficha de control de
calidad. Otra posibilidad sería utilizar la respuesta relativa de una
muestra de referencia comparada con una línea de calibración de
TCDD, habida cuenta de que la respuesta de las células depende de
múltiples factores.
— Se recomienda registrar y verificar los gráficos de control de calidad
(QC) para cada tipo de material de referencia, a fin de garantizar que
el resultado es conforme a las indicaciones establecidas.
— El punto de entrada de la dilución de la muestra utilizada debe situarse
en la parte lineal de la curva de respuesta, en particular para los
cálculos cuantitativos. Las muestras situadas por encima de la parte
lineal de la curva de respuesta deberán diluirse y analizarse de nuevo.
Por esta razón, se aconseja realizar el análisis con tres o más diluciones
a la vez.
— La desviación típica no debe sersuper ioral 15 % cuando se lleva a
cabo una determinación en triplicado para cada dilución de la muestra,
ni superior al 30 % para tres análisis independientes.2002L0069 — ES — 10.05.2004 — 001.001 — 12
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— El límite de detección podrá fijarse en 3 veces la desviación típica del
blanco de disolvente o de la respuesta de fondo. Otro método consistiría
en aplicar una respuesta superior a la respuesta de fondo (factor de
inducción 5 veces superior al blanco de disolvente) calculada a partir
de la curva de calibración del día. El límite de cuantificación podrá
fijarse en 5 a 6 veces la desviación típica del blanco de disolvente o
de la respuesta de fondo o aplicar una respuesta superior a la respuesta
de fondo (factorde inducción 10 veces super ioral blanco de disolvente)
calculada a partir de la curva de calibración del día.
7.4.Requisitos específicos aplicables a los bioensayos realizados por medio de
kits(1)
— Deberán respetarse las instrucciones del fabricante por lo que respecta a
la preparación de las muestras y los análisis.
— No deberán utilizarse los kits después de la fecha de caducidad indi-
cada.
— No deberán utilizarse materiales o componentes previstos para otros
kits.
— Los kits deberán conservarse y utilizarse en las condiciones de tempe-
ratura de conservación y de utilización indicadas.
— El límite de detección aceptable para los inmunoensayos se define
como 3 veces la desviación típica, para una serie de diez análisis repe-
tidos del blanco, dividido porel valorde la pendiente de la ecuación de
regresión lineal.
— Conviene utilizar patrones de referencia para los análisis de laboratorio,
a fin de garantizar que la capacidad de respuesta al patrón se sitúa en
un intervalo aceptable.
8.Notificacióndelosresultados
En la medida en que el procedimiento analítico lo permita, los resultados
del análisis deberán incluir los niveles de los congéneres individuales de
PCDD/F y PCB e indicarse como límite inferior, límite superior y límite
intermedio, a fin de incluir el máximo de información posible en la notifi-
cación de los resultados. Ello permitirá interpretar los resultados en función
de los requisitos específicos.
El informe deberá indicar asimismo el contenido en lípidos de la muestra,
así como el método utilizado para su extracción.
Deberán indicarse los porcentajes de recuperación de cada patrón interno
en caso de que dichos porcentajes estén fuera del intervalo mencionado en
el punto 6, en caso de que se supere el nivel máximo, y en los demás casos
cuando se soliciten.2002L0069 — ES — 10.05.2004 — 001.001 — 13
(1) Hasta la fecha, los bioensayos realizados mediante kits disponibles en el mercado no
han demostrado la suficiente sensibilidad y fiabilidad para poder ser utilizados a finesde detección de la presencia de dioxinas en los niveles exigidos para las muestras de
productos alimenticios y de piensos.