1977L0096—ES—05.06.2003—009.001—1
Estedocumentoesuninstrumentodedocumentaciónynocomprometelaresponsabilidaddelasinstituciones
►B DIRECTIVADELCONSEJO
de21dediciembre de1976
relativa a la detección de triquinas en el momento de la importación, procedente de terceros
países,decarnesfrescasprocedentesdeanimalesdomésticosdelaespecieporcina
(77/96/CEE)
(DOL26de31.1.1977,p.67)
Modificadapor:
DiarioOficial
nopágina fecha
►M1Directiva81/476/CEEdelConsejode24dejuniode1981 L186 20 8.7.1981
►M2Directiva83/91/CEEdelConsejode7defebrerode1983 L59 34 5.3.1983
►M3Directiva84/319/CEEdelaComisiónde7dejuniode1984 L167 34 27.6.1984
►M4Reglamento(CEE)no3768/85delConsejode20dediciembrede1985 L362 8 31.12.1985
►M5Directiva89/321/CEEdelaComisiónde27deabrilde1989 L133 33 17.5.1989
►M6Directiva94/59/CEdelaComisiónde2dediciembrede1994 L315 18 8.12.1994
►M7Reglamento(CE)no807/2003delConsejode14deabrilde2003 L122 36 16.5.2003
Modificadapor:
►A1ActadeadhesióndeGrecia L291 17 19.11.1979
►A2ActadeadhesióndeAustria,deFinlandiaydeSuecia C241 21 29.8.1994
(adaptadaporDecisión95/1/CE,Euratom,CECAdelConsejo) L1 1 1.1.1995
▼B
DIRECTIVADELCONSEJO
de21dediciembre de1976
relativa a la detección de triquinas en el momento de la importa-
ción, procedente de terceros países, de carnes frescas procedentes
deanimalesdomésticosdelaespecie porcina
(77/96/CEE)
ELCONSEJODELASCOMUNIDADESEUROPEAS,
VistoelTratadoconstitutivodelaComunidadEconómicaEuropea,
Vista la Directiva 72/462/CEE del Consejo, de 12 de diciembre de
1972, relativa a los problemas sanitarios y de policía sanitaria en laimportación de animales de las especies bovina y porcina y de lascarnes frescas procedentes deterceros países(
1),modificada en último
lugarporlaDirectiva75/379/CEE(2),y,enparticular,suartículo21,
VistalapropuestadelaComisión,
Considerando que en la Directiva 72/462/CEE el Consejo ha previsto,
en el artículo 21, la elaboración de un método y unas modalidades
necesarias para revelar la presencia de triquinas en las carnes frescas
deanimalesdelaespecieporcina;
Considerando que la aplicación de la Directiva 72/462/CEE no
producirá losefectos esperadosmientras existan disparidades entre losEstados miembros en cuanto a las garantías exigidas en lo que serefierealadeteccióndelastriquinasenelmomentodelaimportaciónde las carnes frescas procedentes de terceros países; que es necesario,
porconsiguiente,establecerunrégimencomunitarioenlamateria;
Considerando que, con objeto de proteger la salud del consumidor, es
necesarioquelacarnefrescadeporcinoseasometidasistemáticamente
a un examen que aplique métodos reconocidos como eficaces, conobjetodeeliminaralaquecontengatriquinas;
Considerandoque,cuandoelexamenseefectureeneltercerpaísexpe-
didor, debe hacerse en mataderos que respondan a determinadascondiciones yquecuentenenparticular conunlaboratorio deexamenprovistodeunmaterialdeexamenapropiado;
Considerando que, con objeto de poder distinguir las carnes exami-
nadas de las que no lo sean, es necesario prever la fijación de unamarcaespecialenlascarnescuyoexamenhayaresultadonegativo;
Considerandoqueesconvenienteconfiaraunprocedimientoporelque
seestablezcaunacooperaciónestrechayeficazentrelaComisiónylos
Estados miembros, la evaluación sobre la oportunidad de admitir a
establecimientos que se encuentren en terceros países a la realizacióndedichoexamenoaltrabajodelascarnesexaminadasyqueesconve-niente,además,confiaralmismoprocedimientolatareadeadaptar,enfuncióndelaevolucióndelatécnicaydelaexperienciaadquirida,las
disposiciones técnicas que se refieren en particular a los métodos de
examen,alasexigenciasrelativasaloslaboratoriosdeexamenyalasmodalidadesdemarcadodelascarnesexaminadas;
ConsiderandoqueresultaoportunoautorizaralosEstadosmiembrosa
queadmitanlascarnesfrescasquenohayansidoobjetodeunexamende detección de triquinas en el tercer país expedidor siempre que sesometaatalescarnesauntratamientoporfrío,quegaranticelainacti-vacióndeposiblestriquinaspresentes,eneltercerpaísexpedidoroen
el Estado miembro destinatario; que, no obstante, dicho tratamiento
debe realizarse siguiendo determinadas modalidades bien definidas yenestablecimientosquerespondanadeterminadascondiciones,1977L0096—ES—05.06.2003—009.001—2
(1)D OnoL302de31.12.1972,p.28.
(2)D OnoL172de3.7.1975,p.17.
▼B
HAADOPTADOLAPRESENTEDIRECTIVA:
Artículo 1
La presente Directiva recoge las definiciones previstas en la Directiva
72/462/CEE.
Además,seentenderápor:
a) carnes frescas: las carnes frescas de los animales domésticos de la
especieporcina;
b) examen: elexamenencaminado adetectar lapresenciadetriquinas
enlascarnesfrescas.
Artículo 2
1. Para poder se admitidas al tráfico intracomunitario, las carnes
frescasprocedentesdetercerospaísesquecontenganmúsculosesquelé-ticosdeberánsersometidasaunexamenefectuadobajoelcontrolylaresponsabilidaddeunveterinariooficial.
2. Elexamendeberáefectuarse deacuerdoconunodelosmétodos
indicadosenelAnexoI,sobreelanimalenteroo,ensudefecto,sobrecada media canal, cuarto o trozo destinados a ser importados en laComunidad.
3. Elexamendeberáefectuarseenunmataderoautorizadoenelpaís
expedidor, con arreglo al artículo 4 de la Directiva 72/462/CEE, y
admitido a laejecución de dicho examen, con arreglo al artículo 4delapresenteDirectiva.
4. El examen deberá efectuarse antes de la colocación del marcado
de inspección veterinaria previsto en el capítulo Xdel AnexoB de la
Directiva72/462/CEE.
5. Cuando el examen no pueda efectuarse en el país expedidor, el
Estado miembro destinatario podrá autorizar la importación de lascarnes frescas siempre que el examen se efectúe en suterritorio en elmomentodelcontroldeinspecciónveterinariaprevistoenelapartado2
delartículo24delaDirectiva72/462/CEE,enunpuestodecontrolcon
arreglo a la letra b) del apartado 1 del artículo 27 de la mencionadaDirectiva.
6. a) Cuando el resultado del examen sea negativo, las carnes frescas
deberán marcarse inmediatamente después del final del examen,
conarregloalAnexoIII.
b) Para el marcado con tinta, procede utilizar un colorante con
arregloalapartado3delartículo17delaDirectiva72/462/CEE.
Artículo 3
1. No obstante lo dispuesto en el artículo 2, el Estado miembro
destinatariopodráautorizarquecarnesfrescasprocedentesdedetermi-nados terceros países o partes de estos puedan no ser sometidas aexamen, siempre que sean sometidas a un tratamiento por frío efec-
tuadoconarregloalAnexoIV.
2. Dicho tratamiento se efectuará en un establecimiento situado en
el territorio del tercer país expedidor y contemplado en el apartado 1delartículo4.
Laejecucióndeltratamientoporfríoeneltercerpaísexpedidordeberá
ser objeto de una certificación por parte del veterinario oficial en loscertificados de inspección veterinaria que acompañan a las carnesfrescasycontempladosenelapartado3delartículo22delaDirectiva72/462/CEE.
3. En caso de quedicho tratamiento noseefectúe en el tercer país
expedidor, deberá efectuarse en un puesto de control indicado en elapartado5delartículo2.
LaejecucióndeltratamientoporfríoenelEstadomiembrodeberáser
objetodeunacertificaciónporpartedelveterinariooficialenloscerti-1977L0096—ES—05.06.2003—009.001—3
▼B
ficadosqueacompañanalascarnesfrescascontempladosenelartículo
25delaDirectiva72/462/CEE.
Artículo 4
1. La admisión de un matadero a la ejecución del examen y la de
unasaladedespiecealdespieceoaldeshuesadodelascarnesfrescasquehayansidosometidasadichoexamen,olaadmisióndeunestable-
cimiento al tratamiento por frío contemplado en el artículo 3, se
decidirá de acuerdo con el procedimiento previsto en el artículo 9. Setendránencuenta,ademásdelosrequisitosprevistosenelartículo4dela Directiva 72/462/CEE, las garantías que se ofrezcan en cuanto alrespeto de las disposiciones de la presente Directiva, y, en lo que se
refierealosmataderos:
a) de la existencia de los locales y el instrumental necesario para la
ejecucióndelexamen,
b) de la cualificación del personal asignado a la ejecución de dicho
examen.
La admisión de un matadero y de una sala de despiece únicamente
podrá producirse cuando las autoridades competentes del tercer paíshayan reconocido oficialmente que dicho matadero y dicha sala de
despieceestánencondicionesdecumplirlosrequisitosprevistosenel
artículo5yenelAnexoIII;además,enloqueserefierealmatadero,que este dispone de un laboratorio que se ajusta a los requisitosprevistos en el capítulo I del Anexo II y que están en condiciones decumplirlodispuestoenlosdemáscapítulosdedichoAnexoIIyenel
AnexoI.
La admisión de un establecimiento al tratamiento por frío únicamente
podrá producirse cuando las autoridades competentes del tercer paíshubieren reconocido oficialmente que dicho establecimiento está encondicionesdecumplirlosrequisitosprevistosenelAnexoIV.
2. Se insertará una indicación especial en la lista o listas contem-
pladas en el apartado 4 del artículo 4 de la Directiva 72/462/CEErespecto de los nombre de los establecimientos admitidos con arreglo
alapartado1.
Artículo 5
1. Enlosmataderosadmitidosconarregloalartículo4,elsacrificio
delosporcinoscuyascarnessedestinen alaComunidad deberá efec-
tuarseenlocaleso,ensudefecto,enmomentosdiferentesdeaquellos
enlosqueseansacrificadoslosporcinoscuyascarnesnosedestinenalaComunidad,exceptosilascarnesdedichosporcinossesometierenaunexamenefectuadodeacuerdoconlasmismasmodalidades.
2. El despiece y el deshuesado de carnes que hayan sido objeto de
un examen cuyo resultado haya sido negativo y que se destinen a la
Comunidad deberán efectuarse en salas de despiece, con arreglo al
artículo4.
Endichassalasdedespiece,eldespieceoeldeshuesadodetalescarnes
deberá efectuarse en locales o, en su defecto, en momentos diferentesde aquellos en los que se despiecen o deshuesen las carnes que no sedestinen a la Comunidad, excepto si tales carnes hubieren sido some-tidasaunexamendeacuerdoconlasmismasmodalidades.
Artículo 6
Los controles en los terceros países previstos en el artículo 5 de la
Directiva 72/462/CEE tendrán asimismo porobjeto verificar laaplica-cióndelapresenteDirectiva.1977L0096—ES—05.06.2003—009.001—4
▼B
Artículo 7
Los Estados miembros establecerán y comunicarán a la Comisión la
lista de los puestos de control contemplados en el apartado 5 del
artículo2enlosquepodránrealizarse:
— elexamen,
— eltratamientoporfríoprevistoenelartículo3.
Velarán porquedichospuestosdispongandelasinstalaciones necesa-
riasparalaejecucióndelasoperacionescorrespondientes.
Artículo 8
A fin de tener en cuenta la evolución tecnológica, podrá decidirse las
adaptaciones o complementos a los anexos de la presente Directivasegúnelprocedimiento previstoenelartículo 9;lasdecisionesquesetomen a este respecto deberán asegurar el mantenimiento del nivel de
lasgarantíassanitariasexistentes.
Artículo 9
1. La Comisión estará asistida por el Comité Permanente de la
Cadena Alimentaria y de Sanidad Animal creado por el artículo 58delReglamento(CE)n
o178/2002(1).
2. Enloscasosenquesehagareferenciaalpresenteartículo,serán
deaplicaciónlosartículos5y7delaDecisión1999/468/CE(2).
El plazo contemplado en el apartado 6 del artículo 5 de la Decisión
1999/468/CEquedafijadoentresmeses.
3. ElComitéaprobarásureglamentointerno.
Artículo 11
Los Estados miembros aplicarán, a más tardar el 1 de enero de 1979,
las disposiciones legales, reglamentarias y administrativas necesariasparacumplir lapresente Directiva. InformarándeelloinmediatamentealaComisión.
Artículo 12
LosdestinatariosdelapresenteDirectivaseránlosEstadosmiembros.1977L0096—ES—05.06.2003—009.001—5
(1) DOL31de1.2.2002,p.1.
(2) DOL184de17.7.1999,p.23.▼M2
▼M7
▼M1
▼B
▼B
ANEXO I
MÉTODOSDEDETECCIÓNDETRIQUINAS
I. EXAMENTRIQUINOSCÓPICO
a)Instrumental
Triquinoscopio de lámpara incandescente que permita un aumento de
50y80a100veces.
Compresor, formado por dos plaquetas de vidrio que puedan compri-
mirse una contra otra, una de las cuales estará dividida en zonas
iguales, unas tijeras pequeños curvas, una pinza pequeña, un cuchillo
para cortar las muestras, pequeños recipientes numerados destinados a
recoger las muestras, un cuentagotas, un vaso que contenga ácido
acéticoyotroquecontengaunasolucióndepotasacaústicaparaaclarar
encasodeposiblecalcificaciónoparaablanderlacarneseca.
b)Tomademuestras
Cuandolacanal estéentera,deberátomarseporlomenosunamuestra
delgrosordeunaavellanadecadaunodelospilaresdeldiafragmaen
lazonadetransiciónentrelapartemuscularylapartetendinosa.
Cuando únicamente se disponga de un pilar del diafragma, habrá que
tomar de él una muestra que tenga un grosor doble que el de una
avellana. Afalta de ambospilares del diafragma, habrá quetomar dos
muestras del grosor aproximado de una avellana de la parte del
diafragmasituadacercadelascostillasodelesternónodelamuscula-
tura de la lengua o de los músculos masticadores o incluso de los
músculosabdominales.
Para los trozos de carne: de cada trozo, tres muestras de músculos
esqueléticos, que contengan poca grasa, si es posible del tamaño de
unaavellanaytomadasenpuntosdiferentes,enlamedidadeloposible
cercadeloshuesosodelostendones.
c)Mododeoperar
Decadaunadelasmuestrastomadasdecanalesenteras,anteriormente
descritas,elcontroladordelastriquinasdeberácortar,encasodequese
disponga de ambos pilares del diafragma, siete fragmentos del tamaño
deungranodeavena,esdecircatorcefragmentosentotal,yencasode
quesecuenteúnicamenteconunodelospilaresdeldiafragma,catorce
fragmentos, endiferentes lugares ysiesposibleenla zonaintermedia
entremúsculoytendón,ycomprimirlosentrelasláminasdevidriodel
compresor de forma que puedan leerse facilimente a través de las
preparaciones los caracteres de imrenta normales. Cuando la carne de
lostrozos que vayan a examinarse esté seca y envejecida, las prepara-
ciones deberán empaparse durante diez a veinte minutos en una
solucióndepotasadiluídaendosvolúmenesdeaguaantesdecompri-
mirlos.
Cuando,enelcasodelascanales enteras,lasmuestrasprocedan dela
parte del diafragma situada cerca de las costillas o del esternón, de la
musculatura de la lengua o de losmúsculos masticadores o incluso de
los músculos abdominales, deberán cortarse catorce fragmentos del
tamañodeungranodeavenadecadamuestra,esdecirveintiochofrag-
mentosentotal.
Decadaunadelasmuestrastomadasdelostrozosdecarne,elcontro-
ladordelastriquinasdeberácortarcuatrofragmentosdeltamañodeun
granodeavena,esdecirdocefragmentosentotal.
El examen en el triquinosciopio deberá hacerse de modo que cada
preparado sea examinado lenta y cuidadosamente. Cuando, durante el
examentriquinoscópicosedetectenlugaressospechososcuyanaturaleza
no pueda determinarse con certeza, ni siquiera con ayuda del mayor
aumento deltriquinoscopio, deberá procederseaunexamen decontrol
conayudadelmicroscopio.
Elexamenmicroscópicodeberáhacersedemodoquecadapreparación
sea examinada lenta y cuidadosamente con un aumento de 30 a 40
veces.
En caso de duda, deberá proseguirse el examen con otras muestras y
preparados, si es necesario con aumentos superiores, hasta que se1977L0096—ES—05.06.2003—009.001—6
▼B
obtengan las precisiones deseadas. El examen triquinoscópico deberá
durarporlomenostresminutos.
Encasodequeseutilicen muestrasdereservaprocedentesdelaparte
deldiafragmasituadacercadelascostillasodelesternón,delamuscu-
latura de la lengua o de los músculos masticadores o de los músculos
abdominales, el examen triquinoscópico deberá durar por lo menos 6
minutos.
El tiempo mínimo establecido para el examen no incluye el tiempo
necesario para la toma de las muestras ni para la confección de las
preparaciones.
En general, un controlador no debería examinar en el triquinoscopio
más de 840 fragmentos por día, pudiendo no obstante elevarse excep-
cionalmentedichonúmeroa1050.
II. MÉTODODELADIGESTIÓNARTIFICIAL
a)Instrumentalymaterial
— Cuchilloparalatomadelasmuestras.
— Pequeños recipientes numerados que puedan ser cerrados para la
conservación de las muestras, en su caso hasta la repetición de los
exámenes.
— Estufa.
— Embudo de vidrio de dos a tres litros con soporte y tubo de cone-
xióndecaucho,pinzasparaseparareltubodeconexión.
— Tamizdeplástico(diámetrode18cmaproximadamente, mallasde
1mmaproximadamente).
— Cedazo.
— Tuboahusadodepuntasoldada.
— Cubeta.— Picadoradecarne.
— Estereomicroscopio (aumento de 15 a 40 veces) que disponga de
unailuminaciónadecuada.
— Líquido de digestión compuesto de la siguiente manera: 10 g de
pepsina [80 U/g FIP (Federación Internacional de Farmacia)], 5ml
deHCl(37%,porlomenos),llevaraunlitroconaguacorriente.
b)Tomadelasmuestras
1. Cuando las canales están enteras, tomar una muestra de 20 gramos
porlomenosenunodelospilaresdeldiafragmaenlazonadetran-
sición entre la parte muscular y la parte tendinosa; cuando no se
disponga del pilar del diafragma, tomar la misma cantidad de la
parte del diafragma situada cerca de las costillas o del esternón o
de la musculatura de la lengua o de los músculos masticadores, o
inclusodelamusculaturaabdominal.
2. Para los trozos de carne, tomar una muestra de 20 gramos por lo
menos de los músculos esqueléticos que contenga poca grasa y, en
lamedidadeloposible,cercadeloshuesosodelostendones.
c)Método
Para el examen de una muestra colectiva procedente de 10 cerdos, se
tomará una muestra que pese 10 gramos de cada muestra individual
(20 gramos). Los 10 gramos restantes se conservarán para un examen
individualquepudierasernecesario.
Sereunirán10muestrasde10gramoscadaunaenunamuestracolec-
tiva, se machacarán por medio de una picadora de carne (diámetro de
los agujeros: 2 mm) y se colocarán, sin aplastar, en el tamiz provisto
de un cedazo. Se suspenderá entonces el tamiz en un embudo unido
por un trozo de tubo de caucho a un tubo ahusado, de punta soldada;
se llenará el embudo con el líquido de digestión hasta que el material
de análisis esté completamente recubierto. La relación material de
análisis/líquidodedigestióndeberá1/20a1/30aproximadamente.
Despuésdeunaincubaciónde18a20horasaunatemperaturade37a
39ºC,seseparará eltuboahusado.Eliminar conprecaución ellíquido
quesobrenadeendichotuboyrecogerenunacápsulaelsedimento,que
será cuidadosamente aclarado. Buscar la presencia de triquinas con
ayudadelestereomicroscopioconunaumentode20a40veces.1977L0096—ES—05.06.2003—009.001—7
▼M3
▼B
▼B
En caso de resultado positivo o dudoso del análisis de una muestra
colectiva, analizar individualmente las muestras restantes a las que se
aãnadirán20gramostomadosdecadacerdoo,encasodequesetrate
detrozosdecarne,20gramostomadosdecadatrozo,conarregloala
letrab).
III. MÉTODO DE LA DIGESTIÓN ARTIFICIAL DE MUESTRAS COLEC-
TIVAS
a)Instrumentalyreactivos
— Uncuchilloypinzasparalatomademuestras.
— Una máquina de picar carne cuyos agujeros deberán tener un
diámetrocomprendidoentre 2y3mm.
— Un matraz Erlenmeyer de 3 l provisto de un tapón de goma o de
guata.
— Unembudocónicodeseparacióndeunacapacidadde2000ml.— UnsoportenormalconelpieenformadeA,de28cmdelongitud,
provistodeunavarillade80cm.
— Unanillode10a11cmquepuedafijarsealsoporte.
— Unapinza provista de una boca chata (23/40 mm) que pueda suje-
tarsealsoportemedianteunmanguitodoble.
— Un tamiz (finura de la malla: 177 µ) de un diámetro exterior de
11cm,provistodeunarejilladelatónodeaceroinoxidable.
— Unembudodeundiámetrointerior,mínimo,de12cm.
— Probetasgraduadasde100ml.
— Unestereomicroscopio(aumentode15a40veces),quedispongade
unailuminaciónadecuada,ountriquinoscopioprovistodeunatabla
horizontal para el compresor, que disponga de una iluminación
adecuada.
— En caso de utilización del triquinoscopio: una cubeta para el
cómputodelarvas,quesepodrádescribirdelasiguientemanera:
una cubeta formada por placas acrílicas de un espesor de 3 mm y
quereúnalassiguientescaracterísticas:
i) fondodelacubeta:180×40mm,divididoencuadrados;
ii) placaslaterales:230×20mm;
iii) placasfrontales:40×20mm.
El fondo y las placas frontales deberán estar fijos entre las placas
laterales, demaneraqueformenunacubetaprovistade2pequeñas
asas en los dos extremos. La parte superior del fondo deberá estar
entre 7 y 9 mm más elevada con relación a la base del cuadrado
formado por las placas laterales y frontales. La placas deberán
fijarsemedianteunacolaadecuadaalmaterial.
— En caso de utilización del estereomicroscopio, una serie de placas
de Petri de un diámetro de 9 cm, cuyo fondo esté dividido en
cuadrados de examen de 10 × 10 mm, mediante un instrumento
puntiagudo.
— Varioscubosde10lqueseutilizaránenelmomentodeladescon-
taminación de los instrumentos, mediante un tratamiento como el
formol, y para el jugo digestivo que quede, en caso de resultado
positivo.
— Acidoclorhídricoconcentrado(37%).— Concentracióndepepsina:1:10000NF(USNationalFormulary),
correspondiente a 1: 12500 BP (British Pharmacopea), correspon-
dientea2000FIP(FederaciónInternationaldeFarmacia).
— Unnúmerodebandejasquepuedancontener50muestras,deapro-
ximadamente,2gcadauna.
— Unabalanzadeprecisiónde0,1g.
b)Tomademuestras
1. Cuandolascanalesestánenteras,tomarunamuestra,deaproximada-
mente 2 g, en uno de los pilares del diafragma, en la zona de
transiciónentrelapartemuscularylapartetendinosa;sinohubiere
pilar del diafragma, tomar la misma cantidad en la parte del
diafragma situada cerca de las costillas o del esternón, o en la
musculaturadelalengua,oenlosmúsculosmasticadores,otambién
enlamusculaturaabdominal.1977L0096—ES—05.06.2003—009.001—8
▼M3
▼M3
2. Para los trozos de carne, tomar una muestra, de aproximadamente
2 g, en los músculos esquelétricos que contengan poca grasa y en
lamedidaqueseaposible,cercadeloshuesosodelostendones.
c)Método
1. i)Grupos completos de muestras (100alavez)
Setomaráunamuestra,deaproximadamente1g,decadaunade
las 100 muestras individuales procedentes de los cerdos. La
muestra colectiva se pasará una vez por la máquina de picar
carne.
La carne picada se colocará en el matraz Erlenmeyer de 3 l, al
mismo tiempo que 7 g de pepsina y se cubrirá con 2 l de agua
degrifocalentada aunatemperatura aproximada de40a41ºC,
y con 25 ml de ácido clorhídrico concentrado. Agitar la mezcla
paradisolverlapepsina.
ElpHdelasoluciónserá,entonces,deaproximadamente1,5a2.
— Para la digestión, el matraz Erlenmeyer se colocará en una
estufaa40-41ºCdurante4horasaproximadamente.Durante
estetiempo,seagitaráregularmentecomomínimo,dosveces
porhora.
— Digerida la solución, se filtrará, mediante un tamiz, a través
delembudocónicodeseparaciónde2lysedejaráenreposo
sobreelsoportedurante,porlomenos,unahora.
— Se trasegará a una probeta graduada, un volumen total de
aproximadamente 45 ml, y se distribuirá en tres placas de
Petri, cuyos fondos estarán divididos en cuadrados de 15 ml
porplaca.
— CadaplacadePetriseexeminaráminuciosamenteeneleste-
reomicroscopio,conelfindedescubrirlaslarvas
— Encasodeutilización decubetasparaelcómputodelarvas,
los45mlsedistribuiránendoscubetasyseexaminaránenel
triquinoscopio.
Laslarvasapareceránenelsedimentocomounosorganismos
identificables y si el agua estuviera tibia, frecuentemente se
podránobservarlosenrolladosydesenrrolladosdelaespiral.
— Los líquidos de digestión se deberán exeminar desde el
momento en que estén dispuestos. En ningún caso se podrá
postergar el examen para el día siguiente. Si los liquidos de
digestión ho fueran lo suficientemente transparentes, o si no
seexaminaranenelplazode30minutossiguienteasuprepa-
ración,sedeberánclarificar delasiguiente manera:verterla
muestrafinalde45mlenunaprobetagraduadaydejarsedi-
mentardurante10minutos.Despuésdedichotiempo,quitar,
poraspiración,30mldellíquidosobrenadanteyagregaragua
degrifoalos15mlrestanteshastaobtenerunvolumentotal
de 45 ml. Después de un nuevo período de reposo de 10
minutos, quitar, por aspiración, 30 ml del líquido sobrena-
dante, verter los 15 ml restantes en una placa de Petri, o en
una cubeta para el cómputo de las larvas, con vistas a su
examen. Lavar la probeta graduada con 10 ml de agua de
grifo;agregarellíquidoobtenidoalamuestraenlaplacade
Petri,oenlacubetaparacómputodelarvasyexaminar.
ii)Grupos de menos de 100 muestras
Se podrá agregar un máximo de 15 muestras individuales a un
grupo completo de 100 muestras para examinarlas al mismo
tiempoqueestasúltimas.Sielnúmerodemuestrasquesedeban
examinaressuperiora15einferiora100,ellíquidodedigestión
sedeberáreducirproporcionalmente.
2. Encaso deresultado positivoodudosodel examen de unamuestra
colectiva, se deberá tomar una muestra de 20 g, de cada cerdo, de
acuerdo con las indicaciones contempladas en la anterior letra b).
Las muestras de 20 g procedentes de 5 cerdos se deberán reunir y
examinar de acuerdo con el método arriba descrito. De esta forma
se examinarán las muestras de 20 grupos de 5 cerdos. Si se descu-
brieran las triquinas en un grupo de muestras de 5 cerdos, se
deberán tomar las muestras de 20 g de cada animal que pertenezca
a dicho grupo y se deberán examinar de acuerdo con el método
arribadescrito1977L0096—ES—05.06.2003—009.001—9
▼M3
IV. MÉTODO DE LA DIGESTIÓN DE MUESTRAS COLECTIVAS CON
ASISTENCIAMECÁNICO/TÉCNICADELASEDIMENTACIÓN
a)Instrumentalyreactivos
— Uncuchillootijerasparacortarlasmuestras.
— Bandejasdivididasen50cuadradosquepuedancontener,cadauno,
lasmuestrasdecarne,deaproximadamente2g.
— UnStomacherLab-blender3500,Thermomodel.— BolsasdeplásticoadaptadasalStomacherLab-blender.
— Embudosdeseparacióncónicosdeunacapacidadde2l,preferente-
menteprovistosdellavesdeseguridaddeTeflon
— Soportesconanillosyfijaciones.
— Tamices, finurademalla 177µ,deundiámetroexteriorde11cm,
provistosdeunarejilladeaceroinoxidable.
— Embudos de un diámetro interior mínimo de 12 cm, cuyo destino
serárecibirlostamices.
— Probetasgraduadasde100ml.
— Undosificadorde25ml.— Vasosdeprecipitadosdeunacapacidadde3l.
— Unacucharaounavarilladevidrioparaagitarelliquidodediges-
tiónenelvasodeprecipitados.
— Unajeringadeplásticoyuntubodeaspiración.
— Unacucharagraduadade6g.— Untermómetrodeunaprecisiónde±0,5ºCconunagraduaciónde
1a100ºC.
— Unvibrador,porejemplo,unaafeitadoraeléctricasincabeza.
— Unreléqueseenciendayapaguecadaminuto.
— Un triquinoscopio provisto de una tabla horizontal o un estereomi-
croscopioquedispongadeunailuminaciónadecuada.
— Unacubetaparaelcómputodelarvas(encasodeutilizacióndeun
triquinoscopio).
Lacubetadeberáestarformadaporplacasacrílicasdeunespesorde
3mmydeberápresentarlassiguientescaracterísticas:
i) fondodelacubeta:180×40mm,divididoencuadrados;
ii) placaslaterales:230×20mm;
iii) placasfrontales:40×20mm.
El fondo y las placas frontales deberán estar fijos entre las placas
laterales, de manera que formen dos pequeñas asas en los dos
extremos. Lapartesuperiordelfondodeberá estarentre7y9mm
más elevada con relación a la base del cuadrado formado por las
placas laterales y frontales. Fijar las placas mediante una cola
adecuadaalmaterial.
— Encasodeutilizacióndelestereomicroscopio,variasplacasdePetri
deundiámetrode9cm,cuyofondoestédivididoencuadradosde
10×10mm,medianteuninstrumentopuntiagudo.
— Solucióndeácidoclorhídricode17,5%.
— Concentracióndepepsina:1:10000NF(USNationalFormulary),
correspondiente a 1: 12500 BP (British Pharmacopea), correspon-
dientea2000FIP(FederaciónInternacionaldeFarmacia).
— Varioscubosde10lqueseutilizaránenelmomentodeladescon-
taminación del instrumental, mediante un tratamiento como el
formol y para el jugo digestivo que quede, en caso de resultado
positivo.
— Unabalanzadeunaprecisiónde0,1g.
b)Tomademuestras
1. Cuandolascanalesestánenteras,tomarunamuestra,deaproximada-
mente 2 g, en uno de los pilares del diafragma, en la zona de
transiciónentrelapartemuscularylapartetendinosa;sinohubiere
pilar del diafragma, tomar la misma cantidad en la parte del
diafragma situada cerca de las costillas o del esternón, o en la
musculaturadelalengua,oenlosmúsculosmasticadores,otambién
enlamusculaturaabdominal.
2. Paralostrozosdecarne,tomarunamestra,deaproximadamente2g,
en los músculos esqueléticos que contengan poca grasa y en la
medidaqueseaposible,cercadeloshuesosodelostendones.1977L0096—ES—05.06.2003—009.001—10
▼M3
c)Método
1.Procedimiento de digestión
i)Grupos completos de muestras (100alavez)
— Proveer al Stomacher Lab-blender 3500 de una pequeña
bolsadobledeplásticoyregularlatemperaturaen40-41ºC.
— Verter un litro y medio de agua caliente a 32-35 ºC en la
pequeñabolsainterioryllevarlaa40-41ºC
— Trasladar a la pequeña bolsa 25 ml de la solución de ácido
clorhídricode17,5%.
— Luego, agregar 100 muestras, de aproximadamente 1 g cada
una(a25-30ºC)tomadasdecadaunadelasmuestrasindivi-
duales, de acuerdo con el procedimiento contemplado en la
letrab).
— Por último, agregar 6 g de pepsina. Respetar escrupulosa-
mente el orden de las operaciones, para evitar la
descomposicióndelapepsina.
— TriturarenelStomacherdurante25minutos.— Quitar la pequeña bolsa de plástico del Stomacher, filtrar el
líquido de digestión a través de un tamiz y dejarlo pasar a
unvasodeprecipitadosde3l.
— Lavarlapequeñabolsadeplásticocon100mldeagua,apro-
ximadamente, queluegoseutilizaráparaenjuagareltamizy
seagregaráalfiltradoquecontengaelvasodeprecipitados.
Se podrá agragar un máximo de 15 muestras individuales a
un grupo completo de 100 muestras para examinarlas al
mismotiempoqueestasúltimas.
ii)Grupos de menos de 100 muestras
— Proveer al Stomacher Lab-blender 3500 de una pequeña
bolsadobledeplásticoyregularlatemperaturaen40-41ºC.
— Preparar un líquido de digestión mezclando, aproximada-
mente, un litro y medio de agua y 25 ml de ácido
clorhídrico de 17,5 %. Agregar 6 g de pepsina y mezclar
todo a una temperatura de 40-41 ºC. Respetar escrupulosa-
mente el orden de las operaciones para evitar la
descomposicióndelapepsina.
— Determinar un volumen de líquido de digestión correspon-
diente a 15 ml por g de muestra (así, para 30 muestras,
habrá que extraer 30 × 15 ml = 450 ml) y traspasarlo a la
pequeña bolsa de plástico interior, al mismo tiempo que las
muestras de carne de aproximadamente 1 g (a 25-30 ºC)
tomadasdecadaunadelasmuestrasindividuales,deacuerdo
conelprocedimientocontempladoenlaletrab).
— Verterelaguaaaproximadamente41ºC,enlapequeñabolsa
exteriorhastaobtenerunvolumentotaldeunlitroymedioenlasdospequeñasbolsas.
— TriturarenelStomacherdurante25minutos.
— Quitar la pequeña bolsa de plástico del Stomacher, filtrar el
líquido de digestión a través de un tamiz y dejarlo pasar a
unvasodeprecipitadosde3l.
— Lavarlapequeñabolsadeplásticocon100mldeagua,apro-
ximadamente, queluegoseutilizaráparaenjuagareltamizy
que se añadirá al filtrado que contenga el vaso de prescipi-
tados.
2.Aislamiento de las larvas por sedimentación
— Agregarallíquidodedigestión300-400gdehieloenlaminillas,
odehielotrituradoparaobtenerunvolumende2l,aproximada-
mente. Agitar hasta que elhielo sefunda.En elcaso degrupos
máspequeños[verletraii)],lacantidaddehielodeberáreducirse
proporcionalmente.
— Traspasarellíquidodedigestiónenfriadoaunembudodesepa-
ración de 2 l provisto de un vibrador que se habrá fijado
medianteunapinzasuplementaria.
— Para la sedimentación, dejar el líquido en el embudo de separa-
cióndurante30minutos,alternandounminutodevibraciónyun
minutodepausa.
— Después de los 30 minutos, introducir rápidamente 60 ml de
sedimento en una probeta graduada de 100 ml. (Después de su
utilización,enjuagarelembudoconunasolucióndetergente).1977L0096—ES—05.06.2003—009.001—11
▼M3
— Dejar reposar la muestra de, por lo menos, 60 ml, quitar, por
aspiración, el líquido sobrenadante hasta dejar en la probeta un
volumende15mlqueseexaminaráparainvestigarlapresencia
delarvas.
— Para la aspiración, utilizar una jeringa de plástico desechable,
provistadeuntubodeplástico.
Lalongituddeltubodeberápermitirqueenlaprobetagraduada
queden 15 ml del líquido cuando el cuello de la jeringa se
encuentrealniveldelbordedelcilindro.
— Introducirlos15mlrestantesenunacubetaparaelcómputode
larvas, o en dos placas de Petri y examinarlas en el triquinos-
copiooenelestereomicroscopio.
— Loslíquidosdedigestiónsedeberánexaminardesdeelmomento
en que stén dispuestos. En ningún caso se podrá postergar el
examen para el día siguiente. Si los líquidos de digestión no
fueran lo suficientemente transparentes, o si no se examinaran
enelplazode30minutossiguienteasupreparación,sedeberán
clarificardelasiguientemanera:verterlamuestrafinalde60ml
enunaprobetagraduadaydejarsedimentardurante10minutos.
Después de dicho tiempo, quitar, por aspiración, 45 ml dellíquido sobrenadante y agregar agua de grifo a los 15 ml
restantes hasta obtener un volumen total de 45 ml. Después de
un nuevo período de reposo de 10 minutos, quitar, por aspira-
ción, 30 ml del líquido sobrenadante, verter los 15 ml restantes
en una placa de Petri, o en una cubeta para el cómputo de las
larvas, con vistas a su examen. Lavar la probeta graduada con
10mldeaguadegrifo;agregarellíquidoobtenidoalamuestra
en la placa de Petri, o en la cubeta para cómputo de larvas y
examinar.
3. Encaso deresultado positivoodudosodel examen de unamuestra
colectiva, se deberá tomar una muestra de 20 g, de cada cerdo, de
acuerdo con las indicaciones contempladas en la anterior letra b).
Las muestras de 20 g procedentes de 5 cerdos se deberán reunir y
examinar de acuerdo con el método arriba descrito. De esta forma
se examinarán las muestras de 20 grupos de 5 cerdos. Si se descu-
brieran las triquinas en un grupo de muestras de 5 cerdos, se
deberán tomar las muestras de 20 g de cada animal que pertenezca
a dicho grupo y se deberán examinar de acuerdo con el método
arribadescrito.
V. MÉTODO DE LA DIGESTIÓN DE MUESTRAS COLECTIVAS CON
ASISTENCIA MECÁNICO/TÉCNICA DEL AISLAMIENTO POR
FILTRACIÓN
a)Instrumentalyreactivos
Losmismosquelosdelaletraa)delmétodoIV,más:
— UnembudoGelmandeunlitroconsoporteparafiltro(diámetrodel
soporte:45mm).
— Discosfiltrantescompuestosde:
unarejillaredondadeaceroinoxidable,finuradelamallade35µ,
diámetrodeldisco:45mm;
dosanillosdegomade1mmdeespesor;diámetroexterior:45mm;
diámetrointerior:38mm.
Larejillasedeberácolocarentrelosanillosysefijaráconunacola
dedoscomponentesqueseadaptealosdosmateriales.
— Unmatraz Erlenmeyer de3lprovistodeuntubolateral paraaspi-
ración.
— Unabombadefiltración.— Bolsaspequeñasdeplásticodeunacapacidadmínimade80ml.
— Unsacodesosa
— «Rennilase»1:150000unidadesSoxletporg
b)Tomademuestras
Verletrab)delmétodoIV.
c)Método
1.Procedimiento de digestión
i)Grupos completos de muestras (100alavez)
Verletrai)delpunto1delaletrac)deltítuloIV.1977L0096—ES—05.06.2003—009.001—12
▼M3
ii)Grupos de menos de 100 muestras
Verletraii)delpunto1delaletrac)deltítuloIV.
2.Aislamiento de las larvas por filtración
— Agregarallíquidodedigestión300-400gdehieloenlaminillas
o de hielo triturado para obtener un volumen de, aproximada-
mente, 2 l. En el caso de grupos más pequeños, la cantidad de
hielodeberáreducirseproporcionalmente.
— Agitar ellíquido dedigestión hastaqueelhielosefunda.Dejar
reposarellíquidodedigestiónenfriadodurante3minutosporlo
menos,paraquelaslarvaspuedanenrrollarse.
— ColocarelembudoGelmanprovistodeunsoporteparafiltro,en
el cual se encuentra un disco filtrante, sobre un matraz Erlen-
meyerconectadoaunabombadefiltración.
— IntroducirellíquidodedigestiónenelembudoGelmanyfiltrar.
Hacia el final, sepodráacelerar elpasodellíquido através del
filtro procediendoaunaaspiración mediante labombadefiltra-
ción.Terminarlaaspiraciónexactamenteantesdequeelfiltrose
seque, es decir, cuando queden entre 2y5mld elíquido en el
embudo.
— Despuésdelafiltracióndetodoellíquidodedigestión,quitarel
disco filtrante y colocarlo en una pequeña bolsa de plástico de
80 ml agregando de 15 a 20 ml de solución de «rennilase».
Para obtener la solución de «rennilase» se introducirán 2 g de
«rennilase»en100mldeaguadegrifo.
— Practicar una doble soldadura en la pequeña bolsa de plástico y
colocarla en el Stomacher entre la pequeña bolsa interior y la
pequeñabolsaexterior.
— Triturar en el Stomacher durante 3 minutos,por ejemplo; entre-
tanto, el aparato se utilizará para el análisis de un grupo
completooincompletodemuestras.
— Despuésde3minutos,quitardelStomacherlapequeñabolsade
plástico que contiene el disco filtrante y la solución de «renni-
lase» y abrirla con la ayuda de tijeras. Introducir el líquido en
unacubetaparaelcómputodelaslarvas,oenunaplacadePetri.
Lavar la pequeña bolsa con 5 ó 10 ml de agua, que luego se
introducirá en la cubeta para la triquinoscopia, o en una placa
dePetriparaexamenenelestereomicroscopio.
— Loslíquidosdedigestióndeberánexaminarsedesdeelmomento
en que estén dispuestos. En ningún caso se podrá postergar el
examenparaeldíasiguiente.
NotaNo utilizar nunca discos filtrantes que no estén perfectamente
limpios.Nosecarnuncadiscosfiltrantessinoestánlimpios.
Para limpiar los discos, es preciso dejarlos en una solución de
«rennilase» durante la noche. Antes de su utilización, se deberán
lavarenelStomacherenunasoluciónde«rennilase».
3. Encaso deresultado positivoodudosodel examen de unamuestra
colectiva, se deberá tomar una muestra de 20 g de cada cerdo, de
acuerdo con las indicaciones contempladas en la anterior letra b).
Se deberán reunir las muestras de 20 g procedentes de 5 cerdos y
examinarlas de acuerdo con el método anterior. De esta forma, se
examinarán las muestras de 20 grupos de 5 cerdos. Si se descu-
brieran las triquinas en un grupo de muestras de 5 cerdos, se
deberán tomar las muestras de 20 g de cada animal que pertenezca
a dicho grupo y se examinarán de acuerdo con el método arriba
descrito.
VI. MÉTODO DE LA DIGESTIÓN DE MUESTRAS COLECTIVAS CON
UTILIZACIÓNDEUNAGITADORMAGNÉTICO.
a)Instrumentalyreactivos
— Uncuchilloypinzasparalatomademuestras.
— Bandejasdivididasen50cuadradosquepuedancontener,cadauno,
muestrasdecarnede2g,aproximadamente.
— Unmolinillo.— Unagitadormagnéticoprovistodeunaplacatérmicadetemperatura
controlada y una barra magnética (recurbierta de Teflón) de 5 cm,
aproximadamente.
— Embudosdesparacióncónicosdeunacapacidadde2l.1977L0096—ES—05.06.2003—009.001—13
▼M3
— Soportesconanillosyfijaciones.
— Tamices,finuradelamalla177µ,deundiámetroexteriorde11cm,
provistosdeunarejilladeaceroinoxidable.
— Embudos de un diámetro interior mínimo de 12 cm, destinados a
recibireltamiz.
— Unvasodeprecipitadosde3l.— Probetasgraduadasdeunacapacidadaproximadade50ml,otubos
decentrifugación.
— Untriquinoscopio deunatable horizontal, ounestereomicroscopio
quedispongadeunailuminaciónaducuada
— Unacubetaparaelcómputodelarvas(encasodeutilizacióndeun
triquinoscopio).
La cubeta deberá estar formada por placas acrílicas de un espresor
de3mmydeberápresentarlassiguientescaracterísticas:
i) fondodelacubeta:180×40mm,divididoencuadrados,
ii) placaslaterales:230×20mm,
iii) placasfrontales:40×20mm.
El fondo y las placas frontales deberán estar fijos entre las placas
laterales de manera que formen dos pequeñas asas en los dos
extremos. Lapartesuperiordelfondodeberá estarentre7y9mm
más elevada con relación a la base del cuadrado formado por las
placaslateralesyfrontales.
Fijarlasplacasconunacolaadecuadaalmaterial.
— Varias placas de Petri, en caso de utilización de un estereomicros-
copio, cuyo fondo se ha dividido en cuadrados de 10 × 10 mm,
medianteuninstrumentopuntiagudo.
— Unahojadealuninio.— Acidoclorhídricode25%.— Concentracióndepepsina:1:10000NF(USNationalFormulary);
correspondientea1:12500BP(BritishPharmacopea),correspondientea2000FIP(FederaciónInternacionaldeFarmacia).
— Aguadegrifocalentadaaunatemperaturade46-48ºC.
— Varioscubosde10lqueseutilizaránenelmomentodeladescon-
taminación del instrumental, mediante un tratamiento como el
formol, y para el jugo digestivo que quede en caso de resultado
positivo.
— Unabalanzadeprecisiónde0,1g.
b)Tomademuestras
1. Cuandolascanalesestánenteras,tomarunamuestra,deaproximada-
mente 2 g, en uno de los pilares del diafragma, en la zona de
transiciónentrelapartemuscularylapartetendinosa;sinohubiere
pilar del diafragma, tomar la misma cantidad en la parte del
diafragma situada cerca de las costillas o del esternón, o en la
musculaturadelalengua,oenlosmúsculosmasticadores,otambién
enlamusculaturaabdominal.
2. Para los trozos de carne, tomar una muestra, de aproximadamente
2g,enlosmúsculosesqueléticos quecontenganpocagrasayenla
medidaqueseaposible,cercadeloshuesosodelostendones.
c)Método
1. i)Grupos completos de muestras (100alavez)
— Triturar en el molinillo 100 muestras, de aproximadamente
1g,tomadas decada muestra individual, deacuerdo conlas
indicaciones de la letra b). Hacer funcionar el aparato tres o
cuatrovecesduranteunsegundo.
— Llevar la carne picada a un vaso de precipitados de 3 l y
espolvorearla con 10 g de pepsina. Introducir en el vaso de
preicpitados2ldeaguadegrifocalentadaaunatemperatura
de46-48ºCyagregar16mldeácidoclorhídrico.
— Introducir varias veces el dispositivo de triturado del moli-
nillo en el líquido de digestión que se encuentre en el vaso
deprecipitadosparaquitardeéllassustanciasqueaúntenga
adheridas.
— Colocar la barra magnética en el vaso de precipitados y
cubrirloconunahojadealuminio.
— Colocar el vaso de precipitados en la placa precalentada del
agitador magnético y comenzar la agitación. Antes de1977L0096—ES—05.06.2003—009.001—14
▼M3
empezarelprocesodeagitación,sedeberáregularelagitador
magnéticodetalforma,queduranteelfuncionamientopueda
mantenerse una temperatura constante de 44-47 ºC. Durante
el proceso de agitación, el líquido de digestión deberá girar
a una velocidad lo sufucientemente elevada que permita la
formación de un profundo remolino central sin provocar
salpicaduras.
— Agitar el líquido de digestión durante 30 minutos, parar el
aparato; filtrar el líquido de digestión a través de un tamiz
colocado en un embudo y recoger el filtrado en un embudo
deseparación.
— Dejar el líquido de digestión en el embudo de separación
durante30minutos.
— Despuésde30minutos,traspasarrápidamenteunamuestrade
40 ml del líquido de digestión a la probeta graduada, o al
tubodecentrifugación.
— Dejarreposarlamuestrade40mldurante10minutosyluego
aspirar 30 ml de líquido sobrenadante dejando, así, un
volumende10ml.
— Lamuestade10mldelsedimentorestanteseverteráenuna
cubetaparaelcómputodelarvas,oenunaplacadePetri.
— Ejuagar la probeta graduada o el tubo de centrifugación con
aproximadamente 10 ml de agua de grifo que se agregará a
la muestra en la cubeta de cómputo de larvas o en la placa
de Petri. Luego, proceder a la observación en el triquinos-
copio,oalexamenenelestereomicroscopio,segúnelcaso.
— Los líquidos de digestión deberán observarse desde el
momento en que estén dispuestos. En ningún caso se podrá
postergar el examen para el día siguiente. Si los líquidos de
digestíonnoseexaminanenelplazode30minutossiguiente
asupreparación,sedeberánclarificardelasiguientemanera:
verter la muestra final, de aproximadamente 40 ml, en una
probeta graduada y dejar sedimentar durante 10 minutos.
Después de dicho tiempo, quitar 30 ml del líquido sobrena-
dante con el fin de obtener un volumen de 10 ml. Dicho
volumen se llevará a 40 ml con agua de grifo. Después de
unnuevoperíododereposode10minutos,quitar,poraspira-
ción,30mldellíquidosobrenadanteparaobtenerunvolumen
de 10 ml que se examinará en una placa de Petri, o en una
cubeta para cómputo de larvas. Lavar la probeta graduada
con 10 ml de agua de grifo y agregar el líquido obtenido a
la muestra en la placa de Petri, o en la cubeta para el
cómputodelarvas,parasuexamen.
Sielexamenrevelaqueelsedimentonoestáclaro,sedeberá
verterlamuestraenunaprobetagraduadayconaguadegrifo
se deberá llevar su volumen a 40 ml. Luego, se aplicará el
métodoarribamencionado.
ii)Grupos de menos de 100 muestras
Eventualmente, sepodránagregar15muestras,de1gcadauna,
a un grupo de 100 muestras y se podrán examinar al mismo
tiempo que estas últimas, de acuerdo con el método descrito en
la letra c). Se deberán examinar más de 15 muestras en calidad
de grupo completo. En el caso de grupos que lleguen hasta las
50muestras,loslíquidosdedigestiónsepodránreducira1l.
2. Encaso deresultado positivoodudosodel examen de unamuestra
colectiva, se deberá tomar una muestra de 20 g de cada cerdo, de
acuerdo con las indicaciones contempladas en la anterior letra b).
Las muestras de 20 g procedentes de 5 cerdos se deberán reunir y
examinar de acuerdo con el método arriba descrito. De esta forma
seexaminaránlasmuestrasde20gruposde5cerdos.Sisedetectan
lastriquinasenungrupodemuestrasde5cerdos,sedeberántomar
lasmuestrasde20gdecadaanimalquepertenezcaadichogrupoy
sedeberánexaminardeacuerdoconelmétodoarribadescrito
VII. MÉTODO DE DIGESTIÓN AUTOMÁTICA DE MUESTRAS COLEC-
TIVASDEHASTA35G
a)Instrumentalyreactivos
— cuchillootijerasparacortarlasmuestras,
— bandejas divididasen50cuadrados quepuedan contener, cada uno
deellos,muestrasdecarnede2gaproximadamente,1977L0096—ES—05.06.2003—009.001—15
▼M5
▼M5
— mezcladorTrichomátic35conpiezadefiltración,
— solucióndeácidoclorhídricode8,5%±0,5%enpeso,— filtros de membrana de policarbonato transparente de 50 mm de
diámetroconporosde14micrometros,
— concentracióndepepsina:1:10000NF(USNationalFormulary),
correspondientea1:12500BP(BritishPharmacopoea),
correspondientea2000FIP(FederaciónInternacionaldeFarmacia),
— balanzadeprecisiónde0,1g,— pinzasplanas,— variosportaobjetosdemicroscopiode5cmdeladocomomínimoo
varias placas de Petri de al menos 6 cm de diámetro, cuyo fondo
estédivididoencuadradosde10×10mmmedianteuninstrumento
puntiagudo,
— (estéreo)microscopiodetransmisióndeluz(de15a60aumentos)o
triquinoscopioprovistodeunatablahorizontal,
— cuboparalarecogidadelíquidosresiduales,— varioscubosde10lqueseutilizaránenelmomentodeladesinfec-
ción del instrumental, mediante un tratamiento cómo el formol, y
paraeljugodigestivosobrante,encasoderesultadopositivos.
b)Tomademuestras
1. Cuandolascanalesesténenteras,tomarunamuestra,deaproximada-
mente 2 g, en uno de los pilares del diafragma, en la zona de
transiciónentrelapartemuscularylapartetendinosa;sinohubiere
pilardel diafragma, tomar lamisma cantidad enel bordecostal del
esternón, en parte del diafragma, en los músculos masticadores, o
bienenlamusculaturaabdominal.
2. Para los trozos de carne, tomar una muestra, de aproximadamente
2g,enlosmúsculosesqueléticosquecontenganpocagrasay,enla
medidaqueseaposible,cercadeloshuesosodelostendones.
c)Método
1.Procedimiento de digestión
— Colocarelmezcladorconlapiezadefiltración,conectareltubo
dedesagüeyconducireltuboalcuboderesiduos.
— Alencenderelmezclador,seiniciaelcalentamiento.
— Antesdecomenzar,sedeberáabrirycerrarlaválvuladelfondo,
situadabajolacámaradereacción.
— Acontinuación,agregarunmáximode35muestrasdeaproxima-
damente 1 gcada una (a 25-30ºC)tomadas de cada una delas
distintas muestras, según lo dispuesto en la letra b). Asegurarse
dequesehaneliminadolostrozosdetendóndemayortamaño,
yaquepuedenobstruirelfiltrodemembrana.
— Llenar de agua, hasta el borde, la cámara de líquidos conectada
almezclador(400ml,aproximadamente).
— Verter 30 ml, aproximadamente, de ácido clorhídrico (8,5 %),
hasta el borde de la cámara de líquidos más pequeña, que
tambiénestaráconectada.
— Colocarunfiltrodemembranabajoelfiltrogruesoenelsoporte
parafiltrodelapiezadefiltración.
— Porúltimo,agregar ►
M67g◄depepsina.Respetarescrupu-
losamente el orden de las operaciones para evitar la
descomposicióndelapepsina.
— Cerrarlatapadelacámaradereacciónydelíquidos.— Seleccionareltiempodeduracióndeladigestión:unperíodode
digestióncorto(5minutos),enelcasodecerdosenedadnormal
desacrificio,yunperíodoprolongado(8minutos)paralasmues-
trasrestantes.
— La distribución automática comienza al oprimir el botón de
puesta en marcha del mezclador; la digestión y la filtración
subsiguiente tienen lugar de forma automática. El proceso fina-
lizaentre10y13minutosdespuésysedetieneautomáticamente.
— Abrirlatapa delacámara de reacción ycomprobar queésta se
hallavacía.Sienlacámarahayespumaolíquidosdedigestión,
repetirelprocedimientodescritoenelpunto4delaletrac).
2.Recuperación de larvas
— Desmontarelsoporteparafiltroytrasladarelfiltrodemembrana
aunportaobjetosoaunaplacadePetri.1977L0096—ES—05.06.2003—009.001—16
▼M5
— Examinar el filtro de membrana con microscopio o triquinos-
copio.
3.Limpieza del material
— En caso de resultado positivo, llenar de agua hirviendo dos
tercios de la cámara de reacción del mezclador. Llenar de aguacorriente la cámara de líquidos conectora hasta cubrir el sensor
de nivel inferior. A continuación tiene lugar el programa auto-
mático de limpieza. Desinfectar el soporte para filtro y el
materialrestante,porejemplo,utilizandoformol.
— Al finalizar la jornada laboral, llenar de agua la cámara de
líquidosdelmezcladoryllevaracabounprogramaestándar.
4.Uso de filtros de membrana
Cada filtro de membrana de policarbonato no podrá usarse más de
cinco veces. Deberá darse la vuelta al filtro después de cada uso.
Igualmente, después de cada uso se comprobará que el filtro no
hayasufridodañoalgunoquelohagainservible.
►
M65.◄Método de que deberá aplicarse cuando la disgestión sea
incompleta y, en consecuencia, no se pueda efectuar la filtración.
Cuando se efectúe el procedimiento automático del mezclador de
conformidadconelpunto1delaletrac),abrirlatapadelacámara
de reacción y comprobar si hay espuma o líquido en ella. En ese
caso,llevaracaboelprocedimientosiguiente:
— Cerrarlaválvuladelfondo,situadabajolacámaradereacción.
— Desmontarelsoporteparafiltroytrasladarelfiltrodemembrana
aunportaobjetosoaunaplacadePetri.
— Poner un nuevo filtro de membrana en el soporte para filtro y
montarestesoporte.
— Llenardeagualacámaradelíquidosdelmezcladorhastacubrir
elsensordenivelinferior.
— Llevaracaboelprogramaautomáticodelimpieza.— Una vez finalizado el programa de limpieza, abrir la tapa de la
cámaradereacciónycomprobarsihayrestosdelíquido.
— Si la cámara está vacía, desmontar el soporte para filtro y tras-
ladar el filtro de membrana, con ayuda de unas pinzas, a un
portaobjetosounaplacadePetri.
— Examinar los dos filtros de membrana de conformidad con lo
dispuestoenelpunto2delaletrac).Sinoesposibleexaminar
los filtros, repetir todo el procedimiento de digestión, aplicando
unperíododedigestiónprolongado,deconformidadconelpunto
1delaletrac).
►
M66.◄Si los resultados del examen de una muestra colectiva
fuesenpositivosodudosos,setomarán nuevasmuestrasde20gde
cadaunodeloscerdos,deacuerdoconelprocedimientodescritoen
laletrab).
Estas muestras se examinarán por separado, de acuerdo con el
métodocitadoanteriormente.1977L0096—ES—05.06.2003—009.001—17
▼M6
▼M5
▼B
ANEXO II
CAPÍTULOI
CONDICIONES QUE DEBEN CUMPLIR LOS LABORATORIOS DE
DETECCIÓNDETRIQUINAS
1. Loslaboratoriosdedeteccióndetriquinasdeberánencontrarseenlosalrede-
doresinmediatosdeloslocalesdesacrificiodeloscerdosydeberándisponer
porlomenos:
a) deunlocalsuficientementeequipado,quepuedacerrarseconllave,para
la confección de las preparaciones; sus paredes serán lisas, y estarán
revestidasopintadasconpintura lavable yclara hastaunaalturadedos
metros.
Se dispondrá de un local de preparación para cada método de examen
utilizado;
b) deunlocaldeexamensuficientementeequipado,cerradoconllave,ocul-
table,enelcasodeutilizacióndeuntriquinoscopio;
c) deequiposdeventilaciónsuficientesy,encasonecesario,deunainstala-
ción de aire acondicionado que permita conseguir una temperatura
ambientequenosobrepaselos25ºCsobrecero;
d) de una iluminación natural o artificial suficiente que no modifique los
colores;deberáevitarselaluzsolarintensa;
e) deequipossuficientesparalalimpiezayladesinfeccióndelasmanosen
ellocaldondeserealizanlaspreparaciones;
►M3f)◄en su caso, de una instalación frigorífica para la conservación
delasmuestrasdecarne;
g) de un aseo para la limpieza y desinfección del material de examen (po
ejemplo, recipientes de muestras, compresores, cuchillos y tijeras)
provisto:
— de un revestimiento de suelo impermeable e inalterable, fácil de
limpiarydesinfectar,
— de paredes lisas revocadas hasta una altura mínima de 2 m, con un
revestimientoounapinturalavableyclara.
Dicha disposición no será obligatoria en caso de aplicación de los
métodos contemplados en los títulos II, III, IV, V, VI del Anexo I,
siempre que los laboratorios dispongan de un gran sumidero conectado
conlascanalizaciones;
►M3h)◄devestuarios,lavabosycuartosdeestarasícomodeexcusados
equipadosconcisterna;
►M3i)◄de lavabos alimentados de agua potable corriente, fría y
caliente, provistos de productos de limpieza y de desinfección y de
toallasdeusarytirar;
►M3j)◄derecipientesestancos,queresistanalacorrosión,provistosde
tapaderasquecierrenherméticamente, concebidosdemodoqueimpidan
todatomanoautorizadadelcontenido,destinadosarecogerlosrestosde
muestras;
►M3k)◄de instalaciones que suministren una cantidad suficiente de
aguapotable,fríaocaliente;
►M3l)◄de un dispositivo de evacuación de las aguas residuales con
arregloalasprescripcionesqueregulenlaautorizacióndelosmataderos;
►M3m)◄de dispositivos apropiados de protección contra los animales
indeseablestalescomoinsectos,roedores,etc.1977L0096—ES—05.06.2003—009.001—18
▼M3
▼B
▼M3
▼B
▼M3
▼B
▼B
CAPÍTULOII
DISPOSICIONESAPLICABLESAL PERSONAL,A LOS LOCALES, AL
MATERIAL Y A LOS INSTRUMENTOS DE LOS LABORATORIOS DE
DETECCIÓNDETRIQUINAS
2. Seexigiráentodomomentounestadodelimpiezaabsolutadelpersonaldel
laboratorio,deloslocales,delmaterialydelosinstrumentos.
a) El personal deberá, en particular llevar ropa de trabajo limpia y lavarse
las manos varias veces durante una misma jornada de trabajo, así como
acadareiniciodeltrabajo;
b) ningún animal deberá penetrar en los laboratorios de detección de
triquinas;
c) el material y los instrumentos utilizados para el trabajo deberán conser-
varseenbuenestadodemantenimiento ydelimpieza; deberán limpiarse
y desinfectarse cuidadosamente varias veces durante una misma jornada
detrabajoasícomoalfinaldelasoperacionesdelajornada.
3. Seexigirálautilizacióndeaguapotableparatodoslosusos.
4. En lo que se refiere al estado de salud del personal asignado a la toma de
muestras de carne para el examen, se aplicarán las disposiciones previstas
en los números 11 y 12 del capítulo IV del Anexo B de la Directiva 72/
462/CEE.
5. Lasmuestrasdecarnenecesariasparaelexamendeberántomarseinmediata-
mente después del sacrificio y examinarse sin demora en el laboratorio de
deteccióndetriquinasdelmatadero.
Queda prohibido proceder a dicho examen fuera del matadero en el que
hayansidosacrificadoslosanimales.
6. Para prevenir la fatiga y sus consecuencias, deberán concederse al personal
decontrolbrevesinterrupcionesdetrabajo.
CAPÍTULOIII
DISPOSICIONESRELATIVASALOSTRIQUINOSCOPIOS
Laconcepciónyeltipodelostriquinoscopiosdeberánresponderaloscriterios
mínimossiguientes:
1. Facilidaddeuso2. Iluminaciónpotente
— es preciso que los resultados del control sean seguros incluso si los
localesnoseencuentrancompletamenteaoscuras,
— lafuenteluminosaseráunalámparadeproyecciónde100W(12V).
3. Aumentossuficientes
— paraeltrabajonormalseránnecesarios50aumentos,
— para una identificación segura de los objetos que no sean claramente
identificables con los aumentos de trabajo normal, serán necesarios de
80a100aumentos.
4. Poderseparador
— cadaaumentodeberádarunaimagenclara,precisa,decolorneto.
5. Dispositivodeconmutación
— todocambiodeaumentodeberáiracompañadodeunajusteautomático
delaluminosidaddelaimagen.
6. Aumentodelcontraste
— el condensador deberá ir equipadode undiafragma de irisque permita
reforzarloscontrastesparaelexamenprofundodeloscasosdelicados,
— eldiafragmadeirisdeberáserdefácilregulación(porejemplomediante
unapalancadecontrolfijadaalamesadeltriquinoscopio).
7. Facilidaddeenfoque
— enfoquerápidomedianteanilloregulador,
— enfoquefinomediantepalancademando.
8. Regulacióndelatensión
— quepermitaobtenerlaluminosidaddeseadaenlasituacióndada.
9. Desplazamientodelcompresorensentidoúnico1977L0096—ES—05.06.2003—009.001—19
▼B
— un sistema de bloqueo automático deberá garantizar el desplazamiento
del compresor en un solo sentido para impedir todo desplazamiento
intempestivo.
10. Campovisuallibreendirecciónhacialasuperficiedeproyección.
11. Superficiedeproyección
— diámetrode54cmcomomínimo,
— altopoderdereflexión,
— duradera,
— desmontable,— fácillelimpiar.1977L0096—ES—05.06.2003—009.001—20
▼B
ANEXO III
MARCADO DE LAS CARNES QUE HAYAN SIDO OBJETO DEL
EXAMENDEDETECCIÓNDETRIQUINAS
1. Elmarcadodelascarnesdeberáefectuarsebajolaresponsabilidaddelvete-
rinariooficial.Aesteefecto,estetendráensuposesiónyconservará:
— los instrumentos destinados al marcado; únicamente podrá remitirlos al
personal auxiliar en el momento mismo del marcado y durante el lapso
detiemponecesarioparaello,
— los marchamos en forma de placas que se mencionan en el número 5.
Dichos marchamos en forma de placas se remitirán al personal auxiliar
enelmomentomismoenelquedebanutilizarseyennúmeroquecorres-
pondaalasnecesidades.
2. Lamarcadeberáserunsellodeformaredondade2,5cmsdediámetro.
Enelsellodeberánfigurarlasindicacionessiguientes,encaracteresperfecta-
mentelegibles:
— haciaelcentro,laletraTmayúscula,cuyasbarrastendránuncentímetro
delongitudy0,2cmsdeanchura,
— bajolaletra Tanteriormente citada,unadelassiglasCEE,EEG,EWG,
EØF, EEC ►A1, EOK◄o►A2ETY◄. Las letras deberán tener
unaalturade0,4cm.
3. Lascanalessemarcaráncontintaoalfuego,enlacarainternadelosmuslos
conarregloalapartado2.
4. Las cabezas se marcarán con tinta o al fuego, con ayuda de una marca que
respondaaloprescritoenelapartado2.
Lostrozos,conexcepción delosexcluidosdelmarcadodeinspección vete-
rinariaenvirtuddelapartado43delcapítuloXdelAnexoBdelaDirectiva
72/462/CEE, obtenidos en las salas de despiece a partir de canales regular-
mente marcadas, deberán, en la medida en que no lleven estampilla alguna,
sermarcados,antesdelacolocacióndelmarcadodeveterinaria,conarreglo
alapartado2.
La etiqueta prevista en el párrafo segundo del apartado 43 anteriormente
mencionado deberá responder a las condiciones establecidas en el apartado
6delpresenteAnexo.
5. Elmarcadopodráefectuarsetambiénconayudadeunmarchamoredondoen
formadechapa.Dichomarchamoenformadechapasefijaráencadatrozo
oencadacanalydeberásertalquesusustituciónresulteimposible;deberá
serdematerialesresistentes,quecumplantodoslosrequisitosdelahigiene.
Sobre el marchamo en forma de placa deberán figurar las indicaciones
siguientesencaracteresperfectamentelegibles:
— haciaelcentro,laletraTmayúscula,
— bajolaletra Tanteriormente citada,unadelassiglasCEE,EEG,EWG,
EØF, EEC ►A1, EOK◄o►A2ETY◄. Las letras deberán tener
unaalturade0,2cm.
6. Sobrelaetiquetaprevistaenelapartado44delcapítuloXdelAnexoBdela
Directivamencionadaenelnúmero4deberáfigurar,ademásdelamarcade
inspecciónveterinaria,unamarcabienlegiblequesealaréplicadelamarca
previstaenelapartado2.1977L0096—ES—05.06.2003—009.001—21
▼B
ANEXO IV
TRATAMIENTOPORFRÍO
I.Método1
1. Lascarnesimportadasenestadocongeladodeberánconservarseendicho
estado.
2. Lainstalacióntécnicaylaalimentaciónenenergíadelacámarafrigorí-
fica deberán ser tales que la temperatura contemplada en el número 6
pueda alcanzarse en el plazo más breve posible y mantenerse en todas
laspartesdelacámarafrigoríficaasícomodelacarne.
3. Antes de la congelación deberán quitarse todos los embalajes aislantes,
excepto en lo que se refiere ala carne que, en el momento de la intro-
ducciónenlacámarafrigorífica,hayaalcanzadoyaentodassuspartesla
temperaturacontempladaenelnúmero6.
4. Los lotes deberán conservarse por separado en la cámara frigorífica y
guardarsebajollave.
5. Deberánanotarse,paracadalote,eldíaylahoradesuintroducción en
lacámarafrigorífica.
6. Latemperaturaenlacámarafrigoríficadeberáalcanzarporlomenoslos
25ºCbajocero;deberáverificarsemedianteaparatosdemedidatermoe-
léctricahomologadosyregistrarseconstantemente.Nodeberámedirseen
las corrientes de aire frío. Los aparatos de medida deberán guardarse
bajo llave. Los gráficos deberán llevar la indicación de los números
correspondientesdelregistrodelainspeccióndelascarnesalaimporta-
ción así como del día y de la hora del comienzo y del final de la
congelación,yconservarseduranteunaño.
7. Las carnes cuyo diámetro o cuyo espesor sea igual o inferior a 25 cm
deberán congelarse, sin interrupción, durante 240 horas por lo menos,
aquellas cuyo diámetro o cuyo espesor esté comprendido entre 25 y
50 cm, durante 480 horas por lo menos. Las carnes cuyo diámetro o
cuyoespesorseasuperioradichasdimensionesnodeberánsersometidas
adichoprocesodecongelación.Elperíododecongelaciónsecalcularáa
partir del momento en que se alcance en la cámara de congelación la
temperaturacontempladaennúmero6.
II.Método2
Se deberán cumplir las normas generales de los números 1 a 5 del
método 1 y se aplicarán las siguientes combinaciones de temperatura y
tiempo:
1. La carne con un diámetro o espesor inferior 15 cm se congelará según
unadelassiguientescombinaciones:
— 20díasa−15ºC,
— 10díasa−23ºC,— 6díasa−29ºC.
2. Lacarnedeundiámetrooespesorsituadoentre15y50cmsecongelará
segúnunadelassiguientescombinaciones:
— 30díasa−15ºC,
— 20díasa−25ºC,
— 12díasa−29ºC.
Latemperaturadentrodelacámarafrigoríficanopodrásersuperiorala
temperatura de inactivación elegida. Deberá medirse con instrumentos
termoeléctricos calibrados y registrarse constantemente. No deberá
medirsedirectamente enelflujodeairefrío.Losaparatosdemedidase
guardaránbajollave.Losgráficosdeberánllevarlosnúmeroscorrespon-
dientes del registro de inspección de la carne importada así como la
fecha ylahoradelcomienzo ydelfinaldelacongelación yseconser-
varánduranteunaño.
III.Método3
Controldetemperaturaenelcentrodelaspiezasdecarne.1977L0096—ES—05.06.2003—009.001—22
▼M6
▼B
▼M6
▼M6
1. Cuandosecontrolelatemperaturaenelcentrodelaspiezasseaplicarán
lassiguientescombinacionesdetemperaturaytiempoysecumpliránlos
requisitosdelosapartados2a6:
— 106horasa−18ºC,
— 82horasa−21ºC,— 63horasa−23,5ºC,— 48horasa−26ºC,— 35horasa−29ºC,
— 22horasa−32ºC,
— 8horasa−35ºC,— 1/2horaa−37ºC.
2. La carne que llegue en estado congelado deberá conservarse en dicho
estado.
3. Los lotes deberán conservarse por separado en la cámara frigorífica y
guardarsebajollave.
4. Se anotarán el día y la hora de introducción de cada lote en la cámara
frigorífica.
5. Lainstalacióntécnicayelsuministrodeenergíadelacámarafrigorífica
deberán ser tales que la temperatura indicada en el apartado 1 pueda
alcanzarsemuyrápidamenteymantenerseenlatotalidaddelapieza.
6. La temperatura deberá medirse con instrumentos termoeléctricos cali-
brados y registrarse constantemente. La sonda del termómetro se
colocaráenelcentrodeunapiezadecarnecalibradadeuntamañoque
no podrá ser inferior al de la pieza más gruesa que se vaya a congelar.
Lapiezadecarnecalibradasecolocaráenellugarmenosfavorabledela
cámara frigorífica, alejada del sistema de refrigeración y sin que esté
directamente bajo elflujo deaire frío.Losaparatos demedida seguar-
darán bajo llave. Los gráficos deberán llevar los números
correspondientes del registro de inspección de la carne importada así
comolafechaylahoradelcomienzoydelfinaldelacongelaciónyse
conservaránduranteunaño.1977L0096—ES—05.06.2003—009.001—23
▼M6
ANEXO V
INSPECCIÓNYCONGELACIÓNDECARNEDECABALLO
1.Inspección
Lainspeccióndecarnedecaballoserealizará segúnunodelosmétodosde
digestiónindicadosenelAnexoI,peroconestasmodificaciones:
— Setomarán muestrasde 10gcomo mínimo delosmúsculoslinguales o
delosmúsculosmasticadores.Cuandonosedispongadeéstos,setomará
una muestra del mismo tamaño de un pilar del diafragma en la zona de
transición hacia la parte tendinosa. Los músculos estarán exentos de
tejidoconjuntivoydegrasa.
— Siseutilizaelmétododeladigestiónartificialdemuestrascolectivasde
losapartadosIIIaVIIdelAnexoI,seutilizaráunamuestrade5gquese
digeriráparalainspección.Paracadadigestión,elpesototaldemúsculo
aexamennodeberáexceder100gparalosmétodosIII,IV,VyVIdel
AnexoIo35gparaelmétodoVIIdelAnexoI.
— En caso de resultado positivo, se tomará otra muestra de 10 g para un
posterioranálisisindependiente.
2.Congelacióndecarnedecaballo
Paraeliminarlastriquinasporcongelación,sesometerálacarnedecaballoa
untratamientofrigoríficodeacuerdoconunodelosmétodosdescritosenel
AnexoIV.1977L0096—ES—05.06.2003—009.001—24