1992L0040—ES—05.06.2003—002.001—1
Estedocumentoesuninstrumentodedocumentaciónynocomprometelaresponsabilidaddelasinstituciones
►B DIRECTIVA92/40/CEEDELCONSEJO
de19demayode1992
porlaqueseestablecen medidascomunitariasparalaluchacontralainfluenzaaviar
(DOL167de22.6.1992,p.1)
Modificadapor:
DiarioOficial
nopágina fecha
►M1Reglamento(CE)no806/2003delConsejode14deabrilde2003 L122 1 16.5.2003
Modificadapor:
►A1ActadeadhesióndeAustria,deFinlandiaydeSuecia C241 21 29.8.1994
(adaptadaporDecisión95/1/CE,Euratom,CECAdelConsejo) L1 1 1.1.1995
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DIRECTIVA92/40/CEEDELCONSEJO
de19demayode1992
porlaqueseestablecenmedidascomunitariasparalaluchacontra
lainfluenzaaviar
ELCONSEJODELASCOMUNIDADESEUROPEAS,
Visto el Tratado constitutivo de la Comunidad Económica Europea y,enparticular,suartículo43,
VistalapropuestadelaComisión(
1),
VistoeldictamendelParlamentoEuropeo(2),
VistoeldictamendelComitéEconómicoySocial(3),
ConsiderandoqueelsectordelasavesdecorralfiguraenelAnexoII
del Tratado; que la comercialización de aves de corral constituye una
importantefuentedeingresosdelapoblaciónagraria;
Considerando que, si se presentan brotes de influenza aviar de gran
patogenicidad, enfermedad producida por un virus de la influenza de
características especiales y que en lo sucesivo se denominará«influenzaaviar»,esnecesarioestableceraescalacomunitariamedidasde lucha contra la misma con objeto de garantizar el desarrollonacionaldelsectordelasavesdecorralydecontribuiralaprotección
delasaludanimalenlaComunidad;
Considerandoquelosbrotesdeinfluenzaaviarpuedenadquirirrápida-
mente un carácter epizoótico y provocar una mortalidad y unas
perturbaciones tales que comprometan seriamente la rentabilidad delasexplotacionesavícolasensuconjunto;
Considerando que es necesario tomar medidas en cuanto existan indi-
cios de esta enfermedad de manera que, si se confirma, sea posibleadoptarinmediatamente medidaseficacesdeluchacontralamisma;
Considerando que, tan pronto como se declare unbrote de esta enfer-
medad, es necesario impedir su propagación controlando de modoestricto el transporte de animales y la utilización de productos quepuedanestarcontaminadosy,ensucaso,recurriendoalavacunación;
Considerandoqueeldiagnósticodelaenfermedaddebeefectuarsebajo
los auspicios de los laboratorios nacionales responsables, que deberán
estarcoordinadosporunlaboratoriocomunitariodereferencia;
Considerando que las medidas comunitarias de lucha contra la
influenza aviar constituyen la base para el mantenimiento de un nivel
uniformedesaludanimal;
Considerando que las disposiciones del artículo 3 de la Decisión 90/
424/CEEdelConsejo,de26dejuniode1990,relativaadeterminadosgastos en el ámbito veterinario(
4) se aplican a la aparición de la
influenzaaviar;
ConsiderandoqueesconvenienteencomendaralaComisiónlatareade
adoptarlasmedidasdeaplicaciónnecesarias,
HAADOPTADOLAPRESENTEDIRECTIVA:
Artículo 1
LapresenteDirectivaestablecelasmedidascomunitariasparalalucha
contralainfluenzaaviaraplicables encasodequeestaenfermedad se1992L0040—ES—05.06.2003—002.001—2
(1)D OnoC231de5.9.1991,p.4.
(2)D OnoC326de16.12.1991,p.242.
(3)D OnoC79de30.3.1992,p.8.
(4)D OnoL224de18.8.1990,p.19;DecisiónmodificadaporlaDecisión91/
133/CEE(DOnoL66de13.3.1991,p.18).
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declare en aves de corral, sinperjuicio de las disposicionescomunita-
riasqueregulanelcomerciointracomunitario.
La presente Directiva no se aplicará en caso de que se detecte la
influenza aviar en otras aves. Sin embargo, los Estados miembrosdeberáninformaralaComisióndelasmedidasquehayanadoptado.
Artículo 2
AefectosdelapresenteDirectiva,seutilizaráncomoprocedalasdefi-
nicionesdelartículo 2delaDirectiva 90/539/CEEdelConsejo,de15de octubre de 1990, relativa a las condiciones de policía sanitaria queregulanlosintercambiosintracomunitarios ylasimportacionesdeaves
decorralydehuevosparaincubarprocedentesdepaísesterceros(
1).
Además,seentenderápor:
a)ave de corral infectada:
— cualquier ave decorral enlaqueunexamen porunlaboratorio
autorizado haya permitido comprobar oficialmente la influenza
aviartalcomosedefineenelAnexoI,o
— tratándose de un segundo brote o de brotes subsiguientes, cual-
quieravedecorralenlaquesehayanencontradosignosclínicos
olesiones post mortempropiosdelainfluenzaaviar;
b)ave de corral sospechosa de estar infectada: todaavedecorralcon
signosclínicosolesiones post mortemtalesquesepuedasospechar
justificadamente la presencia de la influenza aviar o en la que sehaya comprobado la presencia del subtipoH5oH7del virusde la
influenzaA;
c)ave de corral sospechosa de estar contaminada: todaavedecorral
quehayapodidoestar, directa oindirectamente, encontacto conelvirusdelainfluenzaaviaroconelsubtipoH5oH7delvirusdelainfluenzaA;
d)autoridad competente: laautoridadcompetenteconarregloalpunto
6delartículo2delaDirectiva90/425/CEE(
2);
e)veterinario oficial: elveterinariodesignadoporlaautoridadcompe-
tente.
Artículo 3
LosEstadosmiembrosvelaránporquesenotifiqueobligatoriaeinme-
diatamentetodasospechadeinfluenzaaviaralaautoridadcompetente.
Artículo 4
1. Cuando en una explotación haya aves de corral sospechosas de
estar infectadas por la influenza aviar, los Estados miembros velaránporqueelveterinario oficial realice inmediatamente unainvestigación
oficial para confirmar o descartar la presencia de esta enfermedad; la
investigación deberá incluir tomas de muestras adecuadas para anali-zarlasenellaboratorio.
2. En cuanto se le notifique la sospecha de infección, la autoridad
competente pondrá la explotación bajo vigilancia oficial y ordenará,enparticular,que:
a) serealiceuncensodetodaslasavesdecorraldelaexplotaciónen
el que se precise, por categorías, el número de aves de corralmuertas, cuántas presentan síntomas clínicos y cuántas no. Sedeberá actualizar el censo para tener en cuenta las aves nacidas y
muertas durante el período de sospecha, los datos de este censo
deberán actualizarse, y presentarse cuando se solicite, y podráncontrolarseencadavisita;1992L0040—ES—05.06.2003—002.001—3
(1)D OnoL303de31.10.1990,p.6;Directivamodificadaenúltimolugarpor
laDirectiva91/496/CEE(DOnoL268de24.9.1991,p.56).
(2)D OnoL224de18.8.1990,p.29;Directivamodificadaenúltimolugarpor
laDirectiva91/496/CEE.
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b) serecluyantodaslasavesdecorraldelaexplotacióndentrodesus
locales habituales o de cualquier otro lugar en el que quedenaisladas,sinningúncontactoconotrasaves;
c) seprohíbatantolaentradadeavesdecorralenlaexplotacióncomo
lasalidadelasqueseencuentrenenésta;
d) sesubordinaalaautorizacióndelaautoridadcompetente:
— todomovimientodepersonas,animalesovehículoscuyodestino
uorigensealaexplotación,
— todo movimiento de carne ocanales de aves de corral, piensos,
material, residuos, deyecciones, cama de paja, estiércol o cual-
quierotroelementocapazdetransmitirlainfluenzaaviar;
e) se prohíba la salida de la explotación de huevos, salvo los huevos
enviadosdirectamenteaunestablecimientoautorizadoparalafabri-cacióny/oeltratamientodeovoproductosconarregloalodispuestoen el punto 1 del artículo 6 de la Directiva 89/437/CEE(
1) y que
sean transportados de conformidad con una autorización expedidapor la autoridad competente. Esta autorización deberá cumplir los
requisitosestablecidosenelAnexoI;
f) se utilicen medios de desinfección apropiados en las entradas y
salidas de la explotación y de los edificios en que se hallen las
avesdecorral;
g) se realice una investigación epizootiológica con arreglo a lo dispu-
estoenelartículo7.
3. Hastaqueentren envigorlasmedidas oficiales contempladas en
el apartado 2, el propietario o avicultor de toda explotación en la que
se sospeche la presencia de la enfermedad adoptará todas las medidas
razonables que garanticen el cumplimiento de las disposicionescontempladasendichoapartado,conexclusióndelaletrag).
4. La autoridad competente podrá hacer extensivas las medidas
previstas en el apartado 2 a otras explotaciones cuando su ubicación,
configuraciónoloscontactosconlaexplotaciónenquesesospechela
existenciadelaenfermedadpermitansospecharunaposiblecontamina-ción.
5. Lasmedidascontempladasenlosapartados1y2dejarándeapli-
carse únicamente cuando el veterinario oficial descarte cualquier
sospechadeinfluenzaaviar.
Artículo 5
1. Encuantoseconfirmeoficialmentequeenunaexplotaciónseha
declarado la influenza aviar, los Estados miembros velarán por que la
autoridadcompetente, ademásdelasmedidasmencionadasenelapar-tado2delartículo4,ordene:
a) el sacrificio inmediato de todaslas aves de corral quesehallen en
laexplotaciónyladestruccióndelasavesdecorralmuertasosacri-
ficadas y de todos los huevos. Estas operaciones se efectuarán demanera que se limite al máximo el riesgo de propagación de laenfermedad;
b) la destrucción o el tratamiento apropiado de todas las materias o
residuos, como piensos, camas o estiércol, que puedan estar conta-minados. Este tratamiento deberá realizarse ateniéndose a lasinstrucciones del veterinario oficial y deberá garantizar la destruc-
cióntotaldelvirusdelainfluenzaaviar;
c) enloposible,labúsquedaydestrucción delacarne delasavesde
corral que hayan sido sacrificadas durante el supuesto período de
incubacióndelaenfermedad;
d) la búsqueda y destrucción de los huevos para incubar puestos
durante el supuesto período de incubación que hayan salido de laexplotación, quedando entendido que se someterán a vigilancia1992L0040—ES—05.06.2003—002.001—4
(1)D OnoL 212 de 22. 7. 1989, p. 87; Directiva modificada por la Directiva
89/662/CEE(DOnoL395de30.12.1989,p.13).
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oficial las aves de corral que hayan nacido de esos huevos; en lo
posible, la búsqueda y destrucción de los huevos destinados alconsumo puestos durante el supuesto período de incubación que
hayan salido dela explotación, salvoenel caso dequehayan sido
previamentedesinfectadosdeformacorrecta;
e) despuésdehaberse llevado a cabolasoperaciones indicadas enlas
letrasa)yb),lalimpiezaydesinfección,conarregloalodispuestoenelartículo11,delosedificiosenquesealojenlasavesdecorralydesusalrededores,delosvehículosdetransporteydetodomate-rialquepuedaestarcontaminado;
f) despuésderealizarlasoperacionesindicadasenlaletrae),lainter-
posición de un período mínimo de veintiún días antes de volver aintroduciravesdecorralenlaexplotación;
g) la realización deunainvestigación epidemiológica conarreglo a lo
dispuestoenelartículo7.
2. Laautoridadcompetentepodráaplicarlasmedidasprevistasenel
apartado1aotrasexplotacionescuandosuubicación,suconfiguracióno los contactos con la explotación en la que se haya confirmado laenfermedadpermitansospecharunaposiblecontaminación.
Artículo 6
Cuandolasexplotacionesesténformadaspordosomásmanadasinde-
pendientes, la autoridad competente, basándose en los criteriosestablecidos por la Comisión con arreglo al procedimiento establecidoen el artículo 21, podrá eximir de las medidas enunciadas en el apar-tado 1 del artículo 5 a las manadas sanas de una explotación
infectada, siempre que el veterinario oficial haya confirmado que las
operaciones que se realicen en ella reúnen unas características talesque las manadas permanecen completamente independientes desde elpunto de vista de su alojamiento, mantenimiento y alimentación, demodoquenohaypeligrodequeelvirussecontagiedeunamanadaaotra.
Artículo 7
1. Lainvestigaciónepidemiológicaestudiarálossiguientesaspectos:
— duracióndelperíododelaposiblepresenciadelainfluenzaaviaren
laexplotación;
— posibleorigendelainfluenzaaviarenlaexplotaciónylocalización
delasdemásexplotacionesenlasqueseencuentrenavesdecorralque hayan podido infectarse o contaminarse a partir del mismofoco;
— movimientos de personas, aves de corral u otros animales,
vehículos, huevos, carne, canales y cualquier utensilio o materialquehayapodidotransmitirelvirusdelainfluenzaaviaralaexplo-taciónafectadaopropagarloapartirdelamisma.
2. Afindecoordinartodaslasmedidasnecesariasparagarantizarla
erradicación de la influenza aviar lo más rápidamente posible y con
objeto de realizar la investigación epidemiológica, se creará uncentrodecrisis.
El Consejo, pronunciándose a propuesta de la Comisión, aprobará las
disposicionesgenerales relativasaloscentrosdecrisisnacionalesyal
centrodecrisiscomunitario.
Artículo 8
1. Cuandoelveterinariooficialdispongadeindiciosparasospechar
lacontaminación deavesdecorraldeunaexplotación debidaamovi-
mientos de personas, animales o vehículos o a cualquier otra
circunstancia,laexplotaciónafectadasesometeráacontroloficialconarregloalodispuestoenelapartado2.
2. El control oficial tendrá como finalidad detectar inmediatamente
cualquierindiciodeinfluenzaaviar,llevaracaboelcensodelasaves1992L0040—ES—05.06.2003—002.001—5
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decorral,controlarsusmovimientosy,ensucaso,aplicarlasmedidas
establecidasenelapartado3.
3. Cuando una explotación esté sometida al control oficial de
conformidad con lo dispuesto en los apartados 1 y 2, la autoridadcompetente prohibirá la salida de las aves de corral de la explotación
cuando no sea para su transporte directo a un matadero bajo control
oficialparasusacrificioinmediato.Antesdequepuedaautorizarsetalsalida, elveterinario oficial deberá haber efectuado unexamen clínicodetodaslasavesdecorralquedemuestrequelaexplotaciónestálibredeinfluenzaaviar.Lasrestriccionesdemovimientosmencionadasenelpresente artículo se aplicarán durante un período de veintiún días a
partirdelaúltimafechaenquepuedahaberseproducidolacontamina-
ción; no obstante, estas restricciones se aplicarán durante un períodomínimodesietedías.
4. Cuando considere que las condiciones lo permiten, la autoridad
competente podrá limitar la aplicación de las medidas establecidas enelpresenteartículoaunapartedelaexplotaciónyalasavesdecorralque se hallen en ésta, siempre que hayan sido alojadas, mantenidas yalimentadasdeformatotalmenteseparadaypordiferentepersonal.
Artículo 9
1. Cuando el diagnóstico de la influenza aviar se haya confirmado
oficialmente, los Estados miembros velarán por que la autoridadcompetente delimite, alrededor de la explotación infectada, una zonade protección de un radio mínimo de tres kilómetros, ella mismainscritaenunazonadevigilanciadeunradiomínimodediezkilóme-
tros. Para la delimitación de estas zonas deberán tenerse en cuenta
aquellosfactoresgeográficos,administrativos,ecológicosyepizoóticosrelacionadosconlainfluenzaaviarasícomolasestructurasdecontrol.
2. Enlazonadeprotecciónseaplicaránlassiguientesmedidas:
a) localización de todas las explotaciones de la zona con aves de
corral;
b) visitas periódicas a todas las explotaciones con aves de corral, con
exámenesclínicosdeéstasy,ensucaso,tomademuestrasparasuexamenenlaboratorio;sellevaráunregistrodevisitasyresultadosdelosexámenes;
c) mantenimiento de todas las aves de corral en su alojamiento habi-
tualoencualquierotrolugarquepermitaaislarlas;
d) utilizacióndesistemasdedesinfecciónapropiadasenlasentradasy
salidasdelasexplotaciones;
e) controldelosdesplazamientosdentrodelazonadelaspersonasque
manipulen aves de corral, sus canales y huevos, así como de losvehículos utilizados para su transporte; en general, se prohibirá el
transporte de las aves, exceptuando el tránsito por las carreteras y
líneasférreasmásimportantes;
f) prohibición de sacar aves de corral y huevos para incubar de la
explotaciónenqueseencuentren,salvoquelaautoridadcompetentehayaautorizadoeltransporte:
i) deavesparasusacrificioinmediato,preferentementeaunmata-
dero situado en la zona infectada, o, de no ser posible, a uno
situado fuera de ésta y designado por la autoridad competente.
La carne resultante deberá llevar la marca sanitaria especialestablecida en el apartado 1 del artículo 5 de la Directiva 91/494/CEE(
1);
ii) de pollitos de un día de edad o de pollitas maduras para la
puestaaunaexplotaciónsituadadentrodelazonadevigilanciay que no tenga otras aves de corral. Esta explotación estarásometida al control oficial establecido en el apartado 2 delartículo8;1992L0040—ES—05.06.2003—002.001—6
(1)D OnoL268de24.9.1991,p.35.
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iii) dehuevosparaincubarbienaunaincubadora designadaporla
autoridad competente; los huevos y sus envases deberán desin-fectarse antes de ser enviados. Los desplazamientos indicados
en los puntos i), ii) y iii) deberán ser realizados directamente
bajocontroloficialyúnicamenteseautorizarándespuésdequeelveterinariooficialhayaefectuadounainspecciónsanitariadela explotación. Los medios de transporte empleados deberánlimpiarseydesinfectarseantesydespuésdesuutilización;
g) prohibición de retirar o esparcir sin autorización el estiércol de las
avesdecorralosuscamasdepaja;
h) prohibición de celebrar ferias, mercados, exposiciones y demás
concentracionesdeavesdecorralodecualquierotrotipodeaves.
3. Lasmedidasaplicadasenlazonadeprotecciónsemantendránal
menos durante veintiún días después de que se hayan efectuado en laexplotacióninfectadalasoperacionespreliminaresdelimpiezaydesin-fecciónconarregloalodispuestoenelartículo11.Cuandoselevanten
esasmedidas,lazonadeprotecciónpasaráaformarpartedelazonade
vigilancia.
4. Enlazonadevigilanciaseaplicaránlassiguientesmedidas:
a) localización de todas las explotaciones de la zona con aves de
corral;
b) controldelosdesplazamientosdelasavesdecorralydeloshuevos
paraincubardentrodelazona;
c) prohibición de sacar aves de corral fuera de la zona durante los
quince primeros días, excepto para enviarlas directamente a un
matadero situado fuera dela zona de vigilancia ydesignado porlaautoridad competente, en cuyo caso la carne de estas aves deberállevar la marca sanitaria especial establecida en el artículo 5 de laDirectiva91/494/CEE;
d) prohibición de sacar huevos para incubar fuera de la zona de vigi-
lancia, salvo que se envíen a una incubadora designada por laautoridad competente. Antes de ser enviados, los huevos y susenvasesdeberánserdesinfectados;
e) prohibicióndesacarestiércoldeavesdecorralosuscamasdepaja
fueradelazona;
f) prohibición de celebrar ferias, mercados, exposiciones y demás
concentracionesdeavesdecorralodecualquierotrotipodeaves;
g) sinperjuiciodelasdisposicionescontempladasenlasletrasa)yb),
prohibición de transportar aves de corral, exceptuando el tránsito
porlascarreterasylíneasférreasmásimportantes.
5. Lasmedidasaplicadas enlazonadevigilancia semantendrán al
menosdurantetreintadíasdespuésdehaberserealizadoenlaexplota-cióninfectada lasoperaciones preliminares delimpieza ydesinfecciónconarregloalodispuestoenelartículo11.
6. En caso de que las zonas estuvieran ubicadas en el territorio de
varios Estados miembros, las autoridades competentes de los Estadosmiembrosafectadoscolaboraránconelfindedelimitarlaszonasalasquehacereferenciaenelapartado1.Encasodequefueranecesariosedelimitarán, de todos modos, la zona de protección y la zona de vigi-lanciaconarregloalprocedimientoqueseprevéenelartículo21.
Artículo 10
LosEstadosmiembrosvelaránporque:
a) la autoridad competente establezca las normas que le permitan
seguirlosdesplazamientosdehuevosydeavesdecorral;
b) a petición de la autoridad competente, el propietario o el avicultor
debafacilitarle losdatossobrelasentradasysalidasdesuexplota-
cióndeavesdecorral;
c) cualquierpersonaquesedediquealtransporteoalcomerciodeaves
de corral y de huevos pueda informar a la autoridad competente1992L0040—ES—05.06.2003—002.001—7
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sobrelosdesplazamientosdeavesyhuevosquehayatransportadoo
comercializadoyaportardocumentacióndetalladaalrespecto.
Artículo 11
LosEstadosmiembrosvelaránporque:
a) losdesinfectantesquesevayanautilizarasícomosuconcentración
esténoficialmenteautorizadosporlaautoridadcompetente;
b) las operaciones de limpieza y desinfección se efectuen bajo la
supervisiónoficialyconarreglo:
i) alasinstruccionesdelveterinariooficial,
ii) al procedimiento previsto en el Anexo II para la limpieza y
desinfeccióndelasexplotacionesinfectadas.
Artículo 12
Las tomas de muestras y los análisis de laboratorio que se efectúen
para detectar el virus de la influenza aviar deberán efectuarse con
arregloalasdisposicionesdelAnexoIII.
Artículo 13
LosEstadosmiembrosvelaránporquelaautoridadcompetenteadopte
todaslasmedidasnecesariasyoportunasparaquetodosloshabitantesde la zona de protección y de vigilancia estén completamente infor-mados de las restricciones vigentes y se atengan a todas las
disposiciones que se impongan para la aplicación adecuada de las
medidascorrespondientes.
Artículo 14
1. Los Estados miembros velarán por que en cada Estado miembro
sedesignen:
a) un laboratorio nacional, que se mantendrá dotado de las instala-
ciones y el personal especializado necesarios, para realizar la
evaluación de la patogenicidad de los virus de la influenza que se
hayanaislado,conarregloalcapítulo7delAnexoIII,ylaidentifi-cacióndelossubtiposH5oH7delvirusdelainfluenzaA;
b) un laboratorio nacional encargado de controlar los reactivos utili-
zadosporloslaboratoriosregionales;
c) uninstitutoolaboratorionacionalenelcuallasvacunasautorizadas
puedansercontroladasparaverificarsuconformidadconlasespeci-
ficacionescontempladasenlaautorizacióndecomercialización.
2. Los laboratorios nacionales indicados en el Anexo IV se encar-
garán de la coordinación de las normas y los métodos de diagnóstico,elusodereactivosyelcontroldevacunas.
3. Los laboratorios nacionales indicados en el Anexo IV se encar-
garán de la coordinación de las normas y los métodos de diagnóstico
establecidos en cada laboratorio de diagnóstico de la influenza aviar
enelEstadomiembro.Atalfin:
a) podrán proporcionar a los laboratorios nacionales reactivos para el
diagnóstico;
b) controlarán la calidad de todos los reactivos de diagnóstico utili-
zadoseneseEstadomiembro;
c) organizaránperiódicamentepruebascomparativas;
d) mantendrán aislados virus de la influenza aviar recogidos de casos
confirmadoseneseEstadomiembro;
e) confirmaránlosresultadospositivosobtenidosenloslaboratoriosde
diagnósticoregionales.
4. Habráunaconexiónentreloslaboratoriosnacionalesindicadosen
elAnexoIVyellaboratoriocomunitariodereferenciamencionadoenelartículo15.1992L0040—ES—05.06.2003—002.001—8
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Artículo 15
El laboratorio comunitario de referencia para la influenza aviar se
indicaenelAnexoV.SinperjuiciodelodispuestoenlaDecisión90/424/CEE, y especialmente en su artículo 28, las competencias y
funcionesdeestelaboratoriosonlasquefiguranendichoAnexo.
Artículo 16
Lavacunacióncontralainfluenzaaviarconvacunasautorizadasporla
autoridad competente sólo podrá realizarse como complemento de las
medidas decontrolqueseadopten cuandosedeclare laenfermedad y
deacuerdoconlasdisposicionessiguientes:
a) La Comisión, en colaboración con el Estado miembro afectado,
tomaráladecisiónderealizarlavacunacióncomocomplemento delas medidas de control, de conformidad con el procedimiento esta-blecido en el artículo 21. Tal decisión se basará principalmente enlossiguientescriterios:
— laconcentracióndeavesdecorralenlazonaafectada;
— lascaracterísticasycomposicióndelavacunautilizada;
— losprocedimientos desupervisióndeladistribución, elalmace-
namientoylautilizacióndelasvacunas;
— lasespeciesycategoríasdeavesdecorralquevayanaservacu-
nadas;
— laszonasenquesevayaaefectuarlavacunación.
Noobstantelodispuestoenelpárrafoprimero,ladecisióndellevar
a cabo la vacunación de emergencia en la zona alrededor del focopodrá ser adoptada por el Estado miembro de que se trate previa
notificaciónalaComisión,siemprequenoseperjudiquealosinte-
resesfundamentales delaComunidad.DichadecisiónserárevisadainmediatamenteenelmarcodelComitéveterinariopermanente,conarregloalprocedimientoprevistoenelartículo21.
b) Cuando, de conformidad con la letra a) un Estado miembro esté
autorizadopararecurriralavacunacióndeemergenciaenunaparte
limitadadesuterritorio,elestatutodelrestodelterritorionoseveráafectado, siempre que se apliquen las normas de inmovilización delos animales vacunados durante un período que se determinará porelprocedimientoexpuestoenelartículo21.
Artículo 17
1. CadaEstadomiembroprepararáunplandeurgenciaenelquese
especifiquen las medidas que deberán aplicarse a escala nacional encasodequeseregistrenbrotesdeinfluenzaaviar.
Esteplandeberápermitirelaccesoalasinstalaciones,equipo,personal
y cualquier otro material adecuado necesario para la rápida y eficaz
erradicacióndelbrote.
2. Los criterios que deberán aplicarse para la elaboración de los
planesfiguranenelAnexoVI.
3. Losplaneselaboradosconarregloaloscriteriosenunciadosenel
Anexo VI serán sometidos a la Comisión, a más tardar seis mesesdespuésdelapuestaenaplicacióndelapresenteDirectiva.
4. La Comisión examinará los planes para determinar si permiten
alcanzar elobjetivoperseguidoysugeriráalEstadomiembroencues-tión cualquier modificación que sea necesario introducir, en particularparaqueresultencompatiblesconlosdelosdemásEstadosmiembros.
La Comisión aprobará los planes, modificados si fuera necesario, con
arregloalprocedimientoestablecidoenelartículo21.
Posteriormente, con arreglo al mismo procedimiento, podrán modifi-
carseoampliarsesegúnloaconsejelaevolucióndelasituación.1992L0040—ES—05.06.2003—002.001—9
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Artículo 18
1. LosexpertosdelaComisiónpodránrealizarinspeccionessobreel
terreno,elloenlamedidaenqueresultenecesarioparaunaaplicación
uniformedelapresenteDirectivayencolaboraciónconlasautoridades
competentes. Paraello,podránverificar, inspeccionando unporcentajerepresentativo de instalaciones, si las autoridades competentes estáncomprobandoqueenéstasserespetalodispuestoenlapresenteDirec-tiva.LaComisióncomunicaráalosEstadosmiembroslosresultadosdelainvestigación.
El Estado miembro en cuyo territorio se realice una inspección faci-
litará a los expertos la asistencia necesaria para el desempeño de sus
funciones.
Las normas de desarrollo del presente artículo se establecerán por el
procedimientoexpuestoenelartículo21.
Artículo 19
Las condiciones de participación financiera de la Comunidad en las
acciones relacionadas con la aplicación de la presente Directiva estándefinidasenlaDecisión90/424/CEE.
Artículo 20
LosAnexosseránmodificados,cuandofuerenecesario,porelConsejo
pormayoríacualificada,apropuestadelaComisión,enparticularparaadaptarlosalaevolucióndelasinvestigacionesydelosprocedimientos
dediagnóstico.
Artículo 21
1. La Comisión estará asistida por el Comité permanente de la
cadenaalimentariaydesanidadanimal,creadomedianteelartículo58delReglamento(CE)n
o178/2002(1).
2. Enloscasosenquesehagareferenciaalpresenteartículo,serán
deaplicaciónlosartículos5y7delaDecisión1999/468/CE(2).
El plazo contemplado en el apartado 6 del artículo 5 de la Decisión
1999/468/CEquedafijadoentresmeses.
3. ElComitéaprobarásureglamentointerno.
Artículo 22
Los Estados miembros pondrán en vigor las disposiciones legales,
reglamentariasyadministrativasnecesariasparadarcumplimientoalo
dispuestoenlapresenteDirectivaantesdel1deenerode1993.Infor-marándeelloinmediatamente alaComisión.
Cuando losEstados miembros adopten disposiciones,éstas contendrán
una referencia a la presente Directiva o irán acompañadas de dichareferencia enelmomentodesupublicación oficial.Lascaracterísticas
detalreferencialasdeterminaránlosEstadosmiembros.
Artículo 23
LosdestinatariosdelapresenteDirectivaseránlosEstadosmiembros.1992L0040—ES—05.06.2003—002.001—10
(1) DOL31de1.2.2002,p.1.
(2) DOL184de17.7.1999,p.23.▼M1
▼B
▼B
ANEXO I
AUTORIZACIÓNPARAEXTRAERHUEVOSDEUNAEXPLOTACIÓN
QUE ESTÉ SUJETA A LAS CONDICIONES ESTABLECIDAS EN LA
LETRA e) DEL APARTADO 2 DEL ARTÍCULO 4 DE LA PRESENTE
DIRECTIVA
Laautorizaciónexpedidaporlaautoridadcompetenteaefectosdetransportede
huevos de una explotación sospechosa sujeta a lo dispuesto en la letra e) del
apartado2delartículo4haciaunestablecimientoautorizadoparalafabricación
y tratamiento de ovoproductos conforme a lo dispuesto en el apartado 1 del
artículo 6 de la Directiva 89/437/CEE, denominado en lo sucesivo «estableci-
mientodesignado»,deberáajustarsealossiguientesrequisitos:
1) para que puedan extraerse huevos de la explotación sospechosa, éstos
deberán:
a) ajustarse a lo dispuesto en el capítulo IV del Anexo de la Directiva 89/
437/CEE;
b) serdirectamenteenviadosdelaexplotaciónsospechosaalestablecimiento
designado; el veterinario oficial de la explotación sospechosa deberá
precintarcadaenvíopreviamenteasusalida,quedandoéstosprecintados
mientrasdureeltransportehastaelestablecimientodesignado;
2) el veterinario oficial de la explotación sospechosa informará a la autoridad
competente del establecimiento designado de su intención de enviarle los
huevos;
3) la autoridad competente responsable del establecimiento designado se
cerciorarádeque:
a) los huevos a que hace referencia la letra b) del punto 1 permenezcan
alejadosdelosdemáshuevosdesdesullegadahastasutratamiento;
b) lascáscarasdelosmismosconsideradascomomaterialdealtoriesgocon
arreglo alodispuesto enelapartado 2del artículo 2delaDirectiva 90/
667/CEE(1)yserántratadasconformealodispuestoenelcapítuloIIde
lamismaDirectiva;
c) elmaterialdeembalaje,losvehículosutilizadosparaeltransportedelos
huevos a que hace referencia la letra b) del punto1, así como todos los
lugaresquehayanentradoencontactoconloshuevosdeberánlimpiarsey
desinfectarsedetalformaquequedeeliminadotodovirusdelainfluenza
aviaria;
d) elveterinariooficialdelaexplotaciónsospechosaseainformadodecual-
quierexpedicióndehuevostratados.1992L0040—ES—05.06.2003—002.001—11
(1)D O noL363de27.12.1990,p.51.
▼B
ANEXO II
PROCEDIMIENTODELIMPIEZAYDESINFECCIÓNDEUNAEXPLO-
TACIÓNINFECTADA
I.Limpiezapreviaydesinfección
a) Encuanto seretiren loscanales delas avescon vistasasueliminación,
las partes de los locales en que se hubieran encontrado dichas aves, así
como cualquier parte del edificio, corral, etc. contaminado durante el
sacrificioolainspección post mortemdeberánrociarsecondesinfectante
autorizadoconformealodispuestoenelartículo11delapresenteDirec-
tiva.
b) Todo tejido de ave y huevos que pudiera haber contaminado edificios,
corrales, utensilios, etc. deberá recogerse con cuidado a fin de que se
eliminejuntoconlascanales.
c) El desinfectante utilizado deberá permanecer sobre la superficie tratada
durantealmenos24horas.
II.Limpiezafinalydesinfección
a) Deberáeliminarsedecualquiersuperficieconunproductodesengrasante
lagrasaylasmanchasqueselavaránposteriormenteconagua.
b) Tras el lavado con agua que se menciona en la letra a), se rociarán
nuevamentelassuperficiescondesinfectante.
c) Unaveztranscurridossietedías,loslocalesdeberántratarsemedianteun
producto desengrasante, enjuagarse con agua fría, rociarse con desinfec-
tanteyenjuagarsedenuevoconagua.
d) El estiércol o pajazas utilizadas deberán tratarse mediante un método
idóneo para eliminar el virus. Dicho método deberá incluir una de las
siguientesmanipulaciones:
i) seincineraránosetrataránporvaporaunatemperaturade70ºC;
ii) se enterrarán a una profundidad que impida el acceso a parásitos y
avessalvajes;
iii) se amontonarán y humidificarán (si resultare necesario para facilitar
lafermentación),secubriránparamantenerelcalordeformaquese
alcanceunatemperaturade20ºCysemantendráncubiertosdurante
42díasdemodoqueseeviteelaccesodeparásitosyavessalvajes.1992L0040—ES—05.06.2003—002.001—12
▼B
ANEXO III
MÉTODOS DE DIAGNÓSTICO PARA LA CONFIRMACIÓN Y
DIAGNÓSTICODIFERENCIALDELAINFLUENZAAVIAR
Los métodos de aislamiento y de caracterización de los virus de la influenza
aviar expuestos a continuación han de considerarse como directrices y consti-
tuyen los requisitos mínimos que deben aplicarse en el diagnóstico de dicha
enfermedad.
Aefectos de los métodos de diagnóstico para la confirmación y el diagnóstico
diferencialdelainfluenzaaviar,seemplearálasiguientedefinición:
Por«influenzaaviar»seentiendeunainfeccióndelasavesdecorralproducida
porcualquier virusdela influenza aviar Acuyo índice depatogenicidad intra-
venosa sea superior a 1,2 en pollitos de seis semanas de edad, o cualquier
infección provocada por virus del subtipo H5 o H7 de la influenza A cuya
secuenciacióndenucleótidoshayademostradolapresenciademúltiplesaminoá-
cidosbásicosenelpuntodecortedelahemaglutinina.
CAPÍTULO1
Tomademuestrasytratamientodelasmismas
1.Muestras
Hisoposdecloaca(omateriasfecales)ehisopostraquealesdeavesenfermas;
materias fecales o contenido intestinal, tejido cerebral, tráquea, pulmones,
hígado,bazoyotrosórganosmanifiestamente afectadosprocedentesdeaves
reciénfallecidas.
2.Tratamiento de las muestras
Aunque los órganos y los tejidos mencionados en el punto 1 pueden
mezclarse, lasmaterias fecales deberántratarse porseparado.Sesumergirán
completamente loshisoposenunacantidadsuficientedemedioconantibió-
ticos. A su vez, las muestras de materias fecales y de órganos deberán
homogeneizarse (en un mezclador cerrado o utilizando un mortero y arena
esterilizada) en un medio con antibióticos para convertirlas en suspensiones
en ese medio al 10-20 % p/v. Posteriormente, esas suspensiones se dejarán
a temperatura ambiente durante dos horas aproximadamente (o durante más
tiempo a una temperatura de 4 ºC) y se clarificarán por centrifugación (por
ejemplo,de800a1000gdurante10minutos).
3.Medio con antibióticos
Diferentes laboratorios han utilizado distintos medios conantibióticos, obte-
niendo buenos resultados. En cada país, los laboratorios nacionales podrán
asesorar al respecto. Para las muestras de materias fecales es necesaria una
fuerte concentración de antibióticos; una mezcla típica es la siguiente:
10000 unidades/ml de penicilina, 10 mg/ml de estreptomicina, 0,25 mg/ml
de gentamicina y 5000 unidades/ml de micostatina en una solución salina
amortiguadora de fosfato. Estos niveles pueden reducirse hasta cinco veces
cuandosetrabajecontejidosehisopostraqueales.Paraevitarelcrecimiento
de Chlamydia, pueden añadirse 50 mg/ml de oxitetraciclina. Al elaborar el
medio,esimprescindiblecomprobarelpHdespuésdeañadirlosantibióticos
ycorregirlohastaquefluctúeentre7,0y7,4.
CAPÍTULO2
Aislamientodelvirus
Aislamiento del virus en huevos embrionados de aves de corral
Deberán inocularse dosis de 0,1 a 0,2 ml del líquido sobrenadante clarificado
dentro de la cavidad alantoidea de al menos 4 huevos embrionados que hayan
sido incubados de 8 a 10 días. Es preferible que los huevos procedan de una
manada exenta de patógenos específicos, aunque, si ello no fuera posible,
podrán utilizarse huevos de una manada exenta de anticuerpos del virus de la
influenzaaviar.Loshuevosinoculadosdeberánmantenersea37ºCyseexami-
narán al trasluz diariamente. Los huevos que contengan embriones muertos o
moribundos serán refrigerados a 4 ºC a medida que se vayan comprobando.
Los demás lo serán a la misma temperatura 6 días después de la inoculación.
Los fluidos alantoideos amnióticos se someterán además a la prueba de hema-
glutinación. Si ésta resultase negativa, deberá repetirse este procedimiento
utilizandofluidoalantoideooamnióticonodiluido,comoinóculo.1992L0040—ES—05.06.2003—002.001—13
▼B
Cuandolahemaglutinaciónseapositiva,deberádescartarselaposiblepresencia
debacteriasmediantelarealizacióndeuncultivo.Siseconfirmalapresenciade
bacterias, podrán filtrarse los fluidos con un filtro de membrana de 450 nm,
añadirse más antibióticos e inocularse en huevos embrionados como ya se
explicóanteriormente.
CAPÍTULO3
Diagnósticodiferencial
1.Diferenciación preliminar
Teniendoencuentaqueesfundamentalqueseadoptenmedidasparalimitar
la propagación del virus lo antes posible, cada laboratorio regional deberá
estarencondicionesdedetectarcualquiervirushemaglutinanteaislado,tales
como los del subtipo H5 o H7 de la influenza, además de los de la enfer-
medad de Newcastle. Los fluidos hemaglutinantes deberán someterse a las
pruebasdeinhibicióndelahemaglutinacióndescritasenloscapítulos5y6.
Unainhibiciónpositiva,esdecirde24omás,conantisueropoliclonalespecí-
ficoparalossubtiposH5oH7delainfluenzaA(conuntítulodealmenos
29), se considerará una identificación preliminar suficiente para imponer
medidasprovisionalesdecontrol.
2.Confirmación de la identificación
Dado que hay 13 subtipos de hemaglutinina y 9 subtipos de neuraminidasa
delvirusdelainfluenzayqueencadaunodeellossepresentanvariaciones,
no es viable ni rentable que cada laboratorio nacional tenga antisueros que
posibilitenunacaracterización antigénicacompletadelvirusdelainfluenza.
Noobstante,cadalaboratorionacionaldeberá:
i) confirmarqueelmicroorganismoesunvirusdelainfluenzaAutilizando
unapruebadeinmunodifusióndobleparadetectar elantígenodegrupo,
efectuada deacuerdo con el capítulo 9 (siasí lo prefieren, loslaborato-
riosnacionalespodránempleartécnicasdeinmunofluorescenciaoELISA
paraladeteccióndelosantígenosdegrupo);
ii) determinarsielvirusaisladoesonodelsubtipoH5oH7;
iii) realizarpruebasdelíndicedepatogenicidadintravenosaenpollosdeseis
semanas de edad, efectuadas de acuerdo con el capítulo 7 del presente
Anexo.Uníndicedepatogenicidadintravenosasuperiora1,2eslaseñal
de que hay virus y de que es necesario aplicar a fondo las medidas de
control (sería útil que los laboratorios nacionales realizasen también
pruebasdedeterminación delacapacidad delvirusparaproducirplacas
encultivosdecélulas,efectuadasdeacuerdoconelcapítulo8).
Los laboratorios nacionales deberán enviar inmediatamente todo el material
de la influenza aviar y de los subtipos H5 o H7 al laboratorio comunitario
dereferenciaparasucaracterizacióntotal.
3.Tipificación y caracterización adicional del material
Loslaboratoriosnacionalesenviaránallaboratoriocomunitariodereferencia
todoslosvirushemaglutinantesyéste,enconsonanciaconlascompetencias
yfuncionesquelehansidoasignadas,someteráesosvirusaestudiosantigé-
nicos y genéticos adicionales para llegar a un mejor conocimiento de la
epizootiologíadelaenfermedadoenfermedadesenlaComunidad.
Ademásdeesoscometidos,ellaboratoriocomunitariodereferenciallevaráa
cabo una tipificación antigénica completa de todos los virusde la influenza
quehayarecibido.EncuantoalosvirusH5oH7cuyosíndicesdepatogeni-
cidad intravenosa no sean superiores a 1,2, deberá realizarse también la
secuenciación de nucleótidos del gen de hemaglutinina para determinar si
hay abundancia o no de aminoácidos básicos en el punto de corte de la
proteína de hemaglutinina. Los virus con aminoácidos básicos en el punto
de corte, aunque presenten índices de patogenicidad poco elevados, reque-
rirán que se apliquen, de manera adecuada, las medidas para luchar contra
lainfluenzaaviar.
CAPÍTULO4
Pruebas serológicas para la detección de anticuerpos del virus de la
influenzaaviar
1. TratándosedeprogramasdeerradicaciónenlosqueelsubtipoHdelvirusya
se conoce, o cuando se utiliza el virus homólogo como antígeno, el control
serológico para poner de manifiesto la infección puede llevarse a cabo
mediante pruebas de inhibición de la hemaglutinación realizadas según el
métododescritoenloscapítulos5y6.1992L0040—ES—05.06.2003—002.001—14
▼B
Sielsubtipodehemaglutininanoseconoce,lapruebadequelainfecciónes
producidaporvirusdelainfluenzaApodráobtenersedetectandoanticuerpos
dirigidosalosantígenosespecíficosdelgrupo.
Conesefinpodráemplearseunapruebadeinmunodifusióndoble(talcomo
sedescribeenelcapítulo9)ounapruebaELISA(éstapresentaelinconve-nientedelaespecificidaddelhospedadordelapruebayaquedependedela
deteccióndelasinmunoglobulinasdelhospedador).Lasavesacuáticas raras
veces dan resultados positivos al practicarse pruebas de inmunodifusión
dobley,amenosqueseconozcaelsubtipo,esprobablequetalesavessólo
puedan examinarse para comprobar la presencia de anticuerpos en los
subtiposH5yH7.
2. a)Muestras
Deberántomarsemuestrasdesangredetodaslasavescuandolamanada
estécompuestademenosde20animalesymuestrasde20avescuandola
manadaseamayor(deestemodo,laprobabilidaddedetectaralmenosun
sueropositivoserá de 99% siel 25% omás de lamanada es positivo,
independientemente del tamaño de ésta). Para la prueba, deberá dejarse
quelasangresecoaguleyseextraeráelsuero.
b)Detección de los anticuerpos
Convendríainvestigar lacapacidad delasmuestrasindividuales desuero
parainhibirelantígenohemaglutinante delvirusdelainfluenzaaviaren
pruebas estándar de inhibición de la hemaglutinación efectuadas de
acuerdoconelcapítulo6.
Dado que las opiniones difieren en cuanto a la utilización de 4 u 8
unidadesdehemaglutinina enlapruebadeinhibición delahemaglutina-
ción, y como al parecer ambas dosis son válidas, la elección debería
dejarsealarbitriodeloslaboratoriosnacionales.
Téngase encuenta, sinembargo, que delantígeno utilizado dependerá el
nivel en el que un suero sea considerado positivo: con 4 unidades de
hemaglutinina un sueroseconsiderará positivocuando presente un título
superior o igual a 2
4, mientras que con 8 unidades el título deberá ser
igualosuperiora23.
CAPÍTULO5
Pruebadehemaglutinación(HA)
Reactivos
1. Solución salina isotónica amortiguadora de fosfato (SSIAF) (0,05M) de pH
7,0a7,4.
2. Hematíesextraídosdeunmínimode3gallinasexentasdepatógenosespecí-
ficos(afaltadeéstos,podráutilizarsesangredeavesquehayanestadobajo
control regular y que se hayan reconocido como exentas de anticuerpos del
virusdelainfluenzaaviar),reunidosymezcladosapartesigualesconsolu-
cióndeAlsever.Antesdeutilizarlos,loshematíesdeberánlavarsetresveces
enlasoluciónsalinaisotónicaamortiguadoradefosfato(SSIAF).Paralaotra
prueba,serecomiendaunasuspensiónenPBSal1%(valordehematocrito).
3. Ellaboratoriocomunitariodereferencia suministrarávirusH5yH7debajo
poder patógeno o los recomendará para su utilización como antígenos
estándar.
Método
1. Distribuir 0,025 ml de SSIAF en cada uno de los pocillos de una placa de
microtitulación(utilizarpocillosconfondoenV).
2. Introducir0,025mldesuspensióndevirus(esdecir,fluidoalantoideo)enel
primerpocillo.
3. Utilíceseunamicropipetaparahacerdilucionesdelvirusposdesdoblamiento
(de1:2a1:4096)deunpocilloaotro.
4. Añadirotros0,025dePBSencadapocillo.
5. Añadir0,025mldeunasuspensiónal1%dehematíesacadapocillo.6. Homogeneizargolpeandoligeramentelaplacayrefrigerarlaa4ºC.7. Examinar lasplacas despuésde30o40minutos cuandosehayan sedimen-
tado los hematíes de control. El examen se efectuará inclinando la placa y
observando la presencia o ausencia de un movimiento de los hematíes en
formadelágrima.Lospocillosenlosquenosehayaproducidolahemaglu-1992L0040—ES—05.06.2003—002.001—15
▼B
tinación deberán presentar un movimiento similar al de los pocillos de
controlquenocontenganvirus.
8. Eltítulodehemaglutinaciónserálamayordiluciónqueproduzcalaaglutina-
cióndeloshematíes.Puedeconsiderarsequetaldilucióncontieneunaunidad
de hemaglutinación. Otro método más preciso para determinar el título de
hemaglutinación consiste en realizar pruebas de hemaglutinación con virus
de una gama completa de diluciones iniciales por ejemplo, 1:3, 1:4, 1:5,
1:6, etc. Este método se recomienda para preparar con gran precisión
antígenosparalaspruebasdeinhibicióndelahemaglutinación(capítulo6).
CAPÍTULO6
Pruebadeinhibicióndelahemaglutinación(IH)
Reactivos
1. Soluciónamortiguadoradefosfato(SSIAF).2. Fluido alantoideo que contenga el virus, diluido con SSIAF hasta que
contenga4u8unidadesdehemaglutinaciónporcada0,025ml.
3. Suspensióndehematíesdepolloal1%.4. Suerodepollodecontrolnegativo.5. Suerodecontrolpositivo.
Método
1. Distribuir0,025mldeSSIAFencadaunodelospocillos deuna placa de
microtitulacióndeplástico(utilizarpocillosconfondoenV).
2. Introducir0,025mldesueroenelprimerpocillodelaplaca.
3. Utilizarunamicropipetaparahacerdilucionesalamitaddelsueroentoda
laplaca.
4. Añadir0,025ml de fluido alantoideo diluido que contenga 4u 8unidades
dehemaglutinación.
5. Homogeneizargolpeandoligeramentelaplacayrefrigerarlaa4ºCdurante
al menos60 minutos o dejarla a temperatura ambiente durante 30minutos
comomínimo.
6. Añadir0,025mldesuspensióndehematíesal1%atodoslospocillos.7. Homogeneizargolpeandoligeramentelasplacasyrefrigerarlasa4ºC.8. Examinarlasplacasdespuésde30a40minutoscuandosehayansedimen-
tadoloshematíesdecontrol.Elexamenseefectuaráinclinandolasplacasy
observandolapresenciaoausenciadeunmovimientoenformadelágrima
similar al de los pocillos de control que contengan hematíes (0,025 ml) y
SSIAF(0,05ml)solamente.
9. El título de inhibición de la hemaglutinación será la mayor dilución del
antisueroqueproduzcaunainhibicióncompletade 4u8unidadesdevirus
(en todas las pruebas deberá incluirse una titulación de hemaglutinación
paraconfirmarlapresenciadelasunidadesdehemaglutinaciónnecesarias).
10. La validez de los resultados dependerá de la obtención de un título de
menos de 2
3para 4 unidades de hemaglutinación o de 22para 8 unidades
de hemaglutinación con el suero de control negativo y de un título que
esté entre el doble y la mitad (un orden de dilución) del título conocido
delsuerodecontrolpositivo.
CAPÍTULO7
Índicedepatogenicidadintravenosa(IVPI)
1. Diluira10−1fluidoalantoideo infecciosodelpasemásbajoposible,prefe-
rentemente del asliamiento inicial y sin selección alguna, en una solución
salinaisotónicaesterilizada.
2. Inyectarporvíaintravenosaencadaunodelosdiezpollitosdeseissemanas
de edad (deberán utilizarse aves libres de patógenos específicos) 0,1 ml de
virusdiluido.
3. Examinarlasavescada24horasdurantediezdías.4. Puntuartodaslasavesencadaexamen:0=normal,1=enferma,2=grave-
menteenfermay3=muerta.1992L0040—ES—05.06.2003—002.001—16
▼B
5. Anotarlosresultadosycalcularelíndicedelsiguientemodo:
SíntomasclínicosDíasdespuésdelainoculación
Totalpuntuación
1234567891 0
normal 10 2 0 0 0 0 0 0 0 0 12×0= 0
enferma 0 4 2 0 0 0 0 0 0 0 6×1= 6
gravemente
enferma(*)0222000000 6 × 2 = 1 2
muerta 0 2 6 8 10 10 10 10 10 10 76×3=228
Total=246
´Indice¼puntuaci´onmediaporaveyporobservaci´ on:246
100¼2;46
(*) Setratadeundiagnósticosubjetivo queengeneral seaplicaráalasavesquepresentenmásdeunodelos
síntomas siguientes: problemas respiratorios, depresión, diarrea, cianosis en la piel no recubierta o en las
barbillas,edemaenlacaraoenlacabezaosignosnerviosos.
CAPÍTULO8
Evaluacióndelacapacidaddeformacióndeplacas
1. Normalmente,lomásconvenienteesutilizarunaseriededilucionesdelvirus
a fin de obtener un número adecuado de placas en el cultivo. Bastará con
dilucionesdecimaleshastallegaraunaconcentraciónde10−7enSSIAF.
2. Prepararcapasmonocelularesconfluentesdecélulasdeembrióndepollitoo
una línea celular apropiada (por ejemplo, la línea de riñón de bovino de
Madin-Darby)enplacasdePetride5cmdediámetro.
3. Introducir 0,2mldecadadilución devirusendosplacas dePetriyesperar
30minutosparaqueelvirusseabsorba.
4. Tras lavar tres veces con SSIAF las células infectadas, se cubrirán con un
medio apropiado que contenga agar al 1 % p/v (también puede añadirse
0,01mg/mldetripsina).Esimportantenoañadirsueroalmedioderecubri-
miento.
5. Tras72horasdeincubacióna37ºC,lasplacashabránalcanzadountamaño
adecuado. Para observarlas, conviene retirar la capa de agar y teñir la capa
monocelularconvioletacristal(0,5%p/v)enetanolal25%(v/v).
6. Todoslosvirusincubadoscontripsinaenelmedioproduciránplacasclaras.
Por el contrario, a falta de tripsina, sólo producirán placas los virus que
resultenvirulentosparalospollitos.
CAPÍTULO9
Inmunodifusióndoble
El método preferido para determinar la presencia del virus de la influenza A
consiste en demostrar la existencia de antígenos de la nucleocápsida o de la
matriz,quesehallanpresentesentodoslosvirusdelainfluenzaA.Taldemos-
traciónserealizageneralmentemediantepruebasdeinmunodifusióndoble,para
las que se necesitan preparaciones de virus concentrados o extractos de
membranascorioalantoideasinfectadas.
Una preparación adecuada de virus concentrados puede conseguirse sencilla-
mente centrifugando a alta velocidad fluido alantoideo infeccioso y
disgregandolosviruscondetergentedelaurilsarcosinatosódicoparaliberarlos
antígenosinternosdelanucleocápsidaydelamatriz.Tambiénpuederecurrirse
alaprecipitaciónácidaañadiendoCIH1Nalfluidoalantoideoinfecciosohasta
obtener un pH final comprendido entre 3,5 y 4,0; se enfría luego durante al
menosunahora a0ºCysecentrifuga abajavelocidad (1000g)durante diez
minutos.
Se puede retirar el sobrenadante y resuspender el precipitado que contiene los
virus en un volumen mínimo de solución amortiguadora de glicinasarcosilo1992L0040—ES—05.06.2003—002.001—17
▼B
(laurilsarcosinato sódico al 1 % ajustado a pH 9,0 con glicina 0,5 M). Esta
preparacióncontieneantígenosdelanucleocápsidaydelamatriz.
En 1970, Beard describió la preparación de un producto enriquecido en
antígenosdenucleocápsida apartirdemembranascorioalantoideas procedentes
de huevos infectados. Este método comprende los siguientes pasos: retirar las
membranas corioalantoideas de huevosinfectados queden positivo a la prueba
de hemaglutinina, triturar u homogeneizar las membranas, congelar y descon-
gelar tres veces y centrifugar a continuación a 1000 g durante diez minutos.
Seretiraelprecipitadoysetrataelsobrenadanteconformolal0,1%parautili-
zarlocomoantígeno.
Cualquieradeestosdosantígenospuedeutilizarseenlaspruebasdeinmunodi-
fusióndobleempleandogelesdeagarosaoagaral1%quecontenganun8,0%
declorurosódicoenunasoluciónamortiguadoradefosfato0,1MdepH7,2.La
presencia del virus de la influenza A queda confirmada cuando las líneas de
precipitaciónformadasporelantígenoproblemayelantígenopositivoconocido
frentealantisueropositivoconocidoseunenparadarunalíneadeidentidad.1992L0040—ES—05.06.2003—002.001—18
▼B
ANEXO IV
LISTADELABORATORIOSNACIONALESPARALAINFLUENZAAVIAR
Bélgica InstitutNationaldeRecherchesVétérinaires,
Groeselenberg99,B-1180Bruxelles
Dinamarca NationalVeterinaryLaboratory,PoultryDiseaseDivision,
Hangøvej2,DK-8200AarhusN
RepúblicaFederaldeAlemania InstitutfürKleintierzuchtderBundesforschungsanstaltfür
Landwirtschaft,
Braunschweig-Völkenrode,Postfach280,D-3100Celle
Grecia Ινστιτούτο Λοιµωδών και Παρασιτικών Νοσηµάτων
66,26 ης Οκτωβρίου, GR-54627 Θεσσαλονίκη
InstitutodeEnfermedadesInfecciosasyParasitarias
Calledel26deoctubre,66,54627—Tesalónica
España CentroNacionaldeReferenciaparalaPesteAviar—Labora-
torioNacionaldeSanidadyProducciónAnimaldeBarcelona,
ZonaFrancaCircunvalación-Tramo6,EsquinaCalle3.Barce-
lona
Francia CentreNationald'EtudesVétérinairesetAlimentaires—Labo-
ratoireCentraldeRecherchesAvicolesetPorcines,
B.P.53,F-22440Ploufragan
Irlanda VeterinaryResearchLaboratory,
Abbotstown,Castleknock,Dublin15
Italia IstitutoPatologieAviaire,FacoltàdiMedicinaVeterinaria,
UniversitàdiNapoli,
viaAniezzo,Falcone394,I-80127NapoliFDelpino1
Luxemburgo InstitutNationaldeRecherchesVétérinaires,
Groeselenberg99,B-1180Bruxelles
PaísesBajos CentraalDiergeneeskundigInstituut,VestigingVirologie,
Houtribweg39,NL-8221RALelystad
Portugal LaboratórioNacionaldeInvestigaçãoVeterinária(LNIV),
EstradadeBenfica,701,1500Lisboa
ReinoUnido CentralVeterinaryLaboratory,
NewHaw,Weybridge,GB-SurreyKT153NB
Austria BundesanstaltfürVirusseuchenbekämpfung,Wien-Hetzendorf
Finlandia Eläinlääkintä-jaelintarvikelaitos,Helsinki—Anstaltenför
veterinärmedicinochlivsmedel,Helsingfors
Suecia StatensVeterinärmedicinskaanstalt,Uppsala1992L0040—ES—05.06.2003—002.001—19
▼A1
▼B
ANEXO V
LABORATORIO COMUNITARIO DE REFERENCIA PARA LA
INFLUENZAAVIAR
Nombre del laboratorio
CentralVeterinaryLaboratory
NewHaw
Weybridge
SurreyKT153NBReinoUnido
Lascompetencias yfuncionesdellaboratorio comunitario dereferencia parala
influenzaaviarsonlassiguientes:
1) coordinar, previa consulta a la Comisión, los métodos de diagnóstico de la
influenzaaviarenlosEstadosmiembros,especialmente,mediante:
a) la especificación, posesión y entrega de cepas del virus de la influenza
aviarparasometerlasalaspruebasserológicasyprepararelantisuero;
b) laentregadelossuerosdereferenciaydeotrosreactivosdereferenciaa
loslaboratoriosdereferencianacionalesparaarmonizarlaspruebasylos
reactivosempleadosencadaEstadomiembro;
c) lacreaciónyconservacióndeunacoleccióndecepasydemateriaaislada
delvirusdelainfluenzaaviar;
d) la organización periódica de pruebas comparativas comunitarias de los
procedimientosdediagnóstico;
e) la recogida y selección de datos y todo tipo de información sobre los
métodos de diagnóstico utilizados y los resultados de las pruebas efec-
tuadasenlaComunidad;
f) la caracterización de la materia aislada del virus de la influenza aviar
mediantelosmétodosmásavanzadosparalograrunamejorcomprensión
delaepizootiologíadelainfluenzaaviar;
g) el seguimiento de la evolución de la situación en todo el mundo del
control,epizootiologíayprevencióndelainfluenzaaviar;
h) la realización de una serie de exámenes técnicos sobre el virus de la
influenza aviar y otros virus relacionados con éste para poder hacer un
diagnósticodiferencialrápido;
i) elconocimiento afondodelapreparación yutilización delosproductos
de medicina veterinaria inmunológica empleados para la erradicación y
controldelainfluenzaaviar;
2) contribuir activamente ala identificación delosfocosdeinfluenza aviar en
los Estados miembros, estudiando la materia aislada del virus enviada para
confirmar el diagnóstico, proceder a su caracterización y a los estudios
epizootiológicos.Concretamente,ellaboratoriodeberíasercapazdeanalizar
lasecuenciadelosnucleótidosparapoderasídeterminarlasecuenciadelos
ácidosaminadosextraídaenellugardelcortedelamoléculadehemagluti-
ninadelosvirusgripalesdelossubtiposH5oH7;
3) facilitarlaformaciónoreadaptaciónprofesionaldelosexpertosendiagnós-
ticos de laboratorio para armonizar las técnicas de diagnóstico en toda la
Comunidad.1992L0040—ES—05.06.2003—002.001—20
▼B
ANEXO VI
CRITERIOS MÍNIMOS APLICABLES A LOS PLANES DE INTER-
VENCIÓN
Losplanesdeintervencióndeberánestablecerporlomenos:
1) la creación, a nivel nacional, de una célula de crisis destinada a coordinar
todaslasmedidasdeurgenciaenelEstadomiembroafectado;
2) una lista de los centros locales de urgencia dotados del equipo adecuado
paracoordinarlasmedidasdecontrolaescalalocal;
3) informaciones detalladas sobre el personal encargado de las medidas de
urgencia,suscualificacionesyresponsabilidades;
4) la posibilidad, para cualquier centro local de urgencia, de establecer
contactoconlaspersonas/organizacionesdirectaoindirectamenteafectadas
porunainfección;
5) la disponibilidad de losequipos y materiales necesarios para llevar a cabo
deformaapropiadalasmedidasdeurgencia;
6) las instrucciones precisas relativas a las acciones que se deban adoptar
cuando se sospechen y confirmen casos de infección o de contaminación,
incluidoslosmediosdedestruccióndeloscanales;
7) programas de formación para actualizar y desarrollar los conocimientos
relativosalosprocedimientossobreelterrenoyalosprocedimientosadmi-
nistrativos;
8) paraloslaboratoriosdediagnóstico,unserviciodeexamen post mortem,la
capacidad necesaria para los exámenes serológicos, histológicos, etc., y la
actualizacióndelastécnicasdediagnósticorápido(aestosefectos,procede
establecerdisposicionesrelativasaltransporterápidodemuestras);
9) precisionesrelativasalacantidaddevacunascontralainfluenzaaviarque
se considera necesaria en caso de reinstauración de la vacunación de
urgencia;
10) disposiciones reglamentarias para la aplicación de los planes de interven-
ción.1992L0040—ES—05.06.2003—002.001—21