1982L0434 — ES — 10.04.1990 — 001.001 — 1
Estedocumentoesuninstrumentodedocumentaciónynocomprometelaresponsabilidaddelasinstituciones
►B SEGUNDADIRECTIVADELACOMISIÓN
de14demayode1982
sobre la aproximación de las legislaciones de los métodos de Estados miembros relativas a los
análisisnecesariosparaelcontroldelacomposicióndelosproductoscosméticos
(82/434/CEE)
(DO L 185 de 30.6.1982, p. 1)
Modificada por:
Diario Oficial
nopágina fecha
►M1Directiva 90/207/CEE de la Comisión de 4 de abril de 1990 L 108 92 28.4.1990
▼B
SEGUNDADIRECTIVADELACOMISIÓN
de14demayode1982
sobre la aproximación de las legislaciones de los métodos de
Estadosmiembrosrelativasalosanálisisnecesariosparaelcontrol
delacomposicióndelosproductoscosméticos
(82/434/CEE)
LA COMISIÓN DE LAS COMUNIDADES EUROPEAS,
Visto el Tratado constitutivo de la Comunidad Económica Europea,
Vista la Directiva 76/768/CEE del Consejo, de 27 de julio de 1976,
relativa a la aproximación de las legislaciones de los Estados miembrosen materia de productos cosméticos(
1), modificada porla Dir ectiva 79/
661/CEE (2) y, en particular, el apartado 1 del artículo 8,
Considerando que la Directiva 76/768/CEE prevé unos controles
oficiales de los productos cosméticos tendentes a comprobar que secumplen las condiciones previstas por las disposiciones comunitariasrelativas a la composición de los productos cosméticos;
Considerando que conviene establecer, a la mayor brevedad, todos los
métodos de análisis necesarios y que habiéndose realizado la primeraetapa para alcanzar este objetivo mediante la fijación de determinadosmétodos en la Directiva 80/1335/CEE de la Comisión (
3), la fijación de
los métodos de identificación de los agentes de oxidación y de determi-
nación del peróxido de hidrógeno en los productos capilares, de
identificación y de determinación semicuantitativa de determinadoscolorantes de oxidación en los tintes para el cabello, de identificacióny de determinación de los nitritos, de identificación y de determinacióndel formaldehído libre, de determinación de la resorcina en los cham-
púes y en las lociones capilares, de determinación del metanol con
relación al etanol o al propanol-2, constituyen una segunda etapa;
Considerando que las medidas previstas en la presente Directiva se
atienen al dictamen del Comité para la adaptación al progreso técnicode la Directiva 76/768/CEE,
HA ADOPTADO LA PRESENTE DIRECTIVA:
Artículo 1
Los Estados miembros adoptarán todas las medidas apropiadas para
que, al realizar los controles oficiales de los productos cosméticos:
— la identificación de los agentes de oxidación y la determinación del
peróxido de hidrógeno en los productos capilares,
— la identificación y la determinación semicuantitativa de determi-
nados colorantes de oxidación en los tintes para el cabello,
— la identificación y la determinación de los nitritos,— la identificación y la determinación del formaldehído libre,— la determinación de la resorcina en los chapúes y en las lociones
capilares,
— la determinación del metanol con relación al etanol y al propanol-2,
se efectúen de acuerdo con los métodos descritos en el Anexo.
Artículo 2
Los Estados miembros aplicarán las disposiciones legales, reglamenta-
rias o administrativas necesarias para cumplir las disposiciones de lapresente Directiva, a más tardar el 31 de diciembre de 1983 e infor-marán de ello inmediatamente a la Comisión.1982L0434 — ES — 10.04.1990 — 001.001 — 2
(1)D O noL 262 de 27. 9. 1976, p. 169.
(2)D O noL 192 de 31. 7. 1979, p. 35.
(3)D O noL 383 de 31. 12. 1980, p. 27.
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Artículo 3
Los destinatarios de la presente Directiva serán los Estados miembros.1982L0434 — ES — 10.04.1990 — 001.001 — 3
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ANEXO
I.IDENTIFICACION DE LOS AGENTES DE OXIDACION Y DETER-
MINACION DEL PEROXIDO DE HIDROGENO EN LOS
PRODUCTOSCAPILARES
OBJETO Y CAMPO DE APLICACION
La determinación yodométrica del peróxido de hidrógeno en los productos
cosméticos es posible en ausencia de cualquierotr o agente de oxidación que
reaccione con los yoduros para formar yodo. Antes de emprender la determina-ción yodométrica del peróxido de hidrógeno es, por tanto, indispensable detectar
e identificarlos demás agentes de oxidación eventualmente pr esentes. Dicha
identifación se efectúa en dos operaciones, la primera se refiere a los persul-
fatos, los bromatos y el peróxido de hidrógeno, la segunda al peróxido de bario.
A. IDENTIFICACION DE LOS PERSULFATOS, DE LOS BROMATOS Y
DEL PEROXIDO DE HIDROGENO
1. PRINCIPIO
El persulfato de sodio, de potasio y de amonio, el bromato de potasio
y de sodio y el peróxido de hidrógeno, provengan o no del peróxido
de bario, se identifican por cromatografía descendente sobre papel
con ayuda de dos disolventes de desarrollo.
2. REACTIVOS
Todos los reactivos deben ser de calidad analítica.
2.1 Soluciones acuosas de referencia al 0,5 % (m/v) de los compuestos
siguientes:
2.1.1. persulfato de sodio2.1.2. persulfato de potasio2.1.3. persulfato de amonio2.1.4. bromato de potasio2.1.5. bromato de sodio2.1.6. peróxido de hidrógeno2.2. Disolvente de desarrollo A, etanol al 80% (v/v)2.3. Disolvente de desarrollo B, benceno-metanol-alcohol isomílico-agua
(34-38-18-10, v)
2.4. Reactivo A, solución acuosa de yoduro de potasio al 10 % (m/v)2.5. Reactivo B, solución acuosa de almidón al 1 % (m/v)2.6. Reactivo C, ácido clorhídrico al 10 % (m/m)
2.7 Acido clorhídrico 4 N
3. APARATOS
3.1. papel para cromatogafía (Whatman n
o3yno4, o equivalente)
3.2 micropipeta de un µl3.3 matraces aforados de 100 ml3.4 filtros plegados3.5 material habitual para cromatografía descendente sobre papel
4. PREPARACION DE LA MUESTRA
4.1.Productossolublesenagua
Preparar dos soluciones de la muestra disolviendo 1 y 5 g respectiva-
mente del producto en 100 ml de agua. Para realizar la cromatografía1982L0434 — ES — 10.04.1990 — 001.001 — 4
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sobre papel descrita en el punto 5, utilizar 1 µl de cada una de estas
dos soluciones.
4.2Productosparcialmentesolublesenagua
4.2.1. Pesar1 y5gd el a muestra, ponerlos en suspensión en 50 ml de
agua, completar el volumen hasta 100 ml y mezclar. Filtrar las dos
suspensiones con ayuda de un filtro plegado (punto 3.4) y utilizar µl
de cada uno de los dos filtrados para realizar la cromatografía sobre
papel descrita en el punto 5.
4.2.2. Preparar dos nuevas suspensiones de 1 y 5 g de la muestra en 50 ml
de agua, acidificar con ácido clorhídrico diluido (punto 2.7),completar el volumen hasta 100 ml con agua y mezclar. Filtrar las
suspensiones con ayuda de un filtro plegado (punto 3.4) y utilizar
1 µl de cada uno de los dos filtrados para realizar la cromatografía
sobre papel descrita en el punto 5.
4.3.CREMAS
Homogeneizar por separado 5 y 20 g del producto en 100 ml de agua
y utilizar las dispersiones para realizar la cromatografía sobre papel
descrita en el punto 5.
5. PROCEDIMIENTO
5.1. En dos cubetas para cromatografía descendente sobre papel, poner
una cierta cantidad de los disolventes de desarrollo A (punto 2.2) y
B (punto 2.3.). Saturar las cubetas con los vapores de disolvente
durante al menos 24 h.
5.2. En una cinta de papel para cromatografía (Whatman n
o3 o equiva-
lente) de 40 cm de largo y 20 cm de ancho (punto 3.1) o de otro
formato apropiado, depositar en cada punto de partida 1 µl de una
de las soluciones (o suspensiones filtradas) de la muestra y de refe-
rencia preparadas en los puntos 4 y 2.1 y hacer que el disolvente se
evapore al aire.
5.3. Colocarla cinta (punto 5.2) en la cubeta llena del disolvente A (punto
5.1) y cromatografiar hasta que el frente del disolvente haya recorrido
35 cm (unas 15 h).
5.4. Repetir las operaciones descritas en los puntos 5.2 y 5.3 con papel
para cromatografía (Whatman no4 o equivalente) (punto 3.1) y el
disolvente B (punto 2.3). Cromatografiar hasta que el disolvente de
desarrollo haya recorrido 35 cm (unas 5 h).
5.5. Después del desarrollo, sacar las cintas de papel de las cubetas y
secarlas al aire.
5.6. Detectarlas manchas pulver izando:5.6.1. el reactivo A (punto 2.4) e inmediatamente después el reactivo B
(punto 2.5). En el cromatograma aparecen en primer lugar las
manchas de persulfatos, seguidas por las del peróxido de hidrógeno.
Marcar estas manchas por medio de un lápiz.
5.6.2. el reactivo C (punto 2.6) sobre los cromatogramas obtenidos en el
punto 5.6.1. Aparecen unas manchas de color gris azulado, que
indican la presencia de bromatos.
5.7. En las condiciones indicadas anteriormente para los disolventes A
(punto 2.2) y B (punto 2.3), los valores Rf de las soluciones de refe-
rencia (punto 2.1) son los siguientes:
Disolvente A
(punto 2.2)Disolvente B
(punto 2.3)
Persulfato de sodio 0,40 0,10
Persulfato de potasio 0,40 0,02 + 0,05
Persulfato de amonio 0,50 0,10 + 0,20Bromato de sodio 0,40 0,20
Bromato de potasio 0,40 0,10 + 0,20
Peróxido de hidrógeno 0,80 0,801982L0434 — ES — 10.04.1990 — 001.001 — 5
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B. IDENTIFICACION DEL PEROXIDO DE BARIO
1. PRINCIPIO
La presencia de peróxido de bario se evidencia:
— por una parte, por formación del peróxido de hidrógeno después
de la acidificacion de la muestra (título A, punto 4.2),
— por otra parte, por la identificación del ión bario.
En ausencia de persulfatos (título A): se añade ácido sulfúrico diluido
a una parte de la soluión de muestra ácida (título B, punto 4.1), lo
que provoca la formación de un precipitado blanco de sulfato de
bario. La presencia de ión bario en la solución de muestra (punto
4.1) se confirma por cromatografía sobre papel como se indica en el
punto 5 siguiente.
En caso de presencia simultánea de peróxido de bario y de persul-
fatos (título B, punto 4.2), después de fusión alcalina del residuo del
disolvente y disolución en ácido clorhídrico, se establece la presencia
del ión bario por cromatografía y/o por precipitación al estado de
sulfato.
2. REACTIVOS
2.1. Metanol2.2. Acido clorhídrico concentrado al 36 % (m/m)
2.3. Acido clorhídrico 6 N
2.4. Acido sulfúrico2.5. Rodizonato disódico2.6. Cloruro de bario (BaCl
2H2O
2.7. Carbonato de sodio anhidro
2.8. Solución acuosa de cloruro de bario al 1 % (m/v)
2.9. Disolvente de desarrollo, metanol-ácido clorhídrico concentrado al
36 % — agua (80 + 10 + 10, v)
2.10. Reactivo, solución acuosa de rodizonato disódico al 0,1 % (m/v);
preparar la solución justamente antes de su utilización.
3. APARATOS
3.1. Micropipeta de 5 µl3.2. Crisoles de platino3.3. Matraces aforados de 100 ml
3.4. Papel para cromatografía (Schleicher y Schüll 2043 b o equivalente).
Poner durante una noche en la cubeta para cromatografía (título A,
punto 3.5) que contiene el disolvente (título B, punto 2.9) y secar.
3.5. Filtros plegados3.6. Material habitual para la cromatografía ascendente sobre papel
4. PREPARACION DE LA MUESTRA
4.1.Productosquenocontienenpersulfatos
4.1.1. Homogeneizaro disolver2 g del pr oducto en 50 ml de agua y, por
medio de ácido clorhídrico (título B, punto 2.3), llevar el pH de la
solución a 1 aproximadamente.
4.1.2. Trasvasar la solución (suspensión) a un matraz aforado de 100 ml.
Completarhasta la señal con agua y mezclar . Utilizaresta solución
para realizar la cromatografía sobre papel descrita en el punto 5 y
para identificar el bario por precipitación del sulfato.
4.2.Productosquecontienenpersulfatos
4.2.1. Homogeneizaro disolver2 g del pr oducto en 100 ml de agua y
filtrar.1982L0434 — ES — 10.04.1990 — 001.001 — 6
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4.2.2. Añadir al residuo secado 7 a 10 veces su peso de carbonato de sodio
(título B, punto 2.7) mezclary fundirla mezcla en un cr isol de
platino (título B, punto 3.2) durante una media hora.
4.2.3. Enfriar a la temperatura ambiente, poner en suspensión el producto de
la fusión en 50 ml de agua y filtrar (título B, punto 3.5).
4.2.4. Disolver en ácido clorhídrico 6 N (título B, punto 2.3) y llevar hasta
100 ml con agua. Utilizar esta solución para realizar la cromatografía
sobre papel descrita en el punto 5 y para identificar el bario por
precipitación del sulfato.
5. PROCEDIMIENTO
5.1. En una cubeta para cromatografía ascendente sobre papel, poner una
determinada cantidad de disolvente (título B, punto 2.9) y saturar la
cubeta durante al menos 15 h.
5.2. Sobre una hoja de papel para cromatografía, previamente tratada
como se ha indicado (título B, punto 3.4) depositarr espectivamente
en tres puntos de partida 5 µl de cada una de las soluciones prepa-
radas (título B, punto 4.1.2.) y (título B, punto 4.2.4.) y de la
solución de referencia (título B, punto 2.8).
5.3. Hacer evaporar el disolvente al aire y cromatografiar verticalmente
hasta que el disolvente de desarrollo haya recorrido 30 cm.
5.4. Sacar el cromatograma de la cubeta y secarlo al aire.
5.5. Hacer que aparezcan las manchas en el cromatograma pulverizándolo
con el reactivo (título B, punto 2.10).
En presencia de bario, aparecen manchas rojas de Rf 0,10 aproxima-
damente.
C. DETERMINACION DEL PEROXIDO DE HIDROGENO
1. PRINCIPIO
La determinación yodométrica del peróxido de hidrógeno se basa en
la reacción siguiente:
H2O2+2 H++2 1−→I2+2 H2O
Se trata de una reacción lenta, pero que puede ser acelerada añadién-
dole molibdato amónico. El yodo formado, determinado por
procedimientos titulometricos mediante una solución de tiosulfato de
sodio, permite calcular el contenido de peróxido de hidrógeno.
2. DEFINICION
El contenido de la muestra en peróxido de hidrógeno determinado por
este método se expresa en porcentaje de masa del producto.
3. REACTIVOS
Todos los reactivos deben ser de calidad analítica.
3.1. Acido sulfúrico 2 N
3.2. Yoduro de potasio3.3. Molibdato amónico
3.4. Solución de tiosulfato de sodio 0,1 N
3.5. Solución de yoduro de potasio al 10 % (m/v). Preparar la solución
extemporaneamente
3.6. Solución de molibdato amónico al 20 % (m/v)
3.7. Solución de almidón al 1 %(m/v)
4. APARATOS
4.1. Vasos de vidrio de 100 ml1982L0434 — ES — 10.04.1990 — 001.001 — 7
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4.2. Bureta de 50 ml
4.3. Matraces aforados de 250 ml
4.4. Probetas graduadas de 25 y 100 ml4.5. Pipetas aforadas de 10 ml
4.6. Matraces cónicos de 250 ml
5. PROCEDIMIENTO
5.1 En un vaso de 100 ml, pesar una cantidad gramos (m) del producto
equivalente a 0,6 g aproximadamente de peróxido de hidrógeno; tras-
vasarlos cuantitativamente a un matraz aforado a 250 ml con ayuda
de una pequeña cantidad de agua, completarhasta la señal con agua
y mezclar.
5.2 Con una pipeta echar10 ml de la solución de muestr a (punto 5.1) a
un matraz cónico de 250 ml (punto 4.6) y añadir sucesivamente
100 ml de ácido sulfúrico 2 N (punto 3.1), 20 ml de yoduro de
potasio (punto 3.5) y tres gotas de solución de molibdato amónico
(punto 3.6).
5.3 Titularinmediatamente el yodo for mado con ayuda de la solución de
tiosulfato de sodio 0,1 N (punto 3.4) y, justamente antes de alcanzar
el punto de equivalencia, añadiralgunos ml de solución de almidón
como indicador. Anotar la cantidad en ml de tiosulfato de sodio
0,1 N utilizada (V).
5.4. Según el procedimiento indicado en los puntos 5.2 y 5.3, efectuar una
determinación en blanco, sustituyendo los 10 ml de solución de
muestra por 10 ml de agua. Anotar la cantidad en ml de tiosulfato
de sodio 0,1 N utilizada (Vo).
6. CALCULO
Calcular el contenido de peróxido de hidrógeno en el producto, en
porcentaje de masa (% m/m), mediante la fórmula:
% de per´ oxido de hidr´ ogeno ¼
V/C0Vo ðÞ /C2 1;7008 /C2250/C2100
m/C210/C21000
% de per´ oxido de hidr´ ogeno ¼V/C0Vo ðÞ /C2 4;252
m
donde:
m = cantidad en g de producto examinado (punto 5.1),
Vo = cantidad en ml de solución de tiosulfato 0.1 N utilizada en la
determinación en blanco (punto 5.4),
V = cantidad en ml de solución de tiosulfato 0.1 N utilizada en la
titulación de la solución de muestra (punto 5.3).
7. REPETIBILIDAD(1)
Para un contenido de peróxido de hidrógeno del orden del 6 % (m/
m), la diferencia entre los resultados de dos determinaciones paralelas
efectuadas sobre la misma muestra, no debe superar el 0,2 %.1982L0434 — ES — 10.04.1990 — 001.001 — 8
(1) Según la norma ISO 5725.
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II.IDENTIFICACIÓN Y DETERMINACIÓN SEMICUANTISTATIVA
DE DETERMINADOS COLORANTES DE OXIDACION EN LOS
TINTESPARAELCABELLO
1. OBJETO Y CAMPO DE APLICACION
Este método permite la identificación y la determinación semicuanti-
tativa de las sustancias siguientes en los tintes para el cabello en
forma de crema y de líquido:
Denominación de la sustancia Símbolo
diaminobencenos
1-2 diaminobenceno (o. fenilendiamina) (OPD)
1-3 diaminobenceno (m. fenilendiamina) (MPD)
1-4 diaminobenceno (p. fenilendiamina) (PPD)
diaminotoluenos
3-4 diaminotolueno (o. toluilendiamina) (OTD)
2-4 diaminotolueno (m. toluilendiamina) (MTD)2-5 diaminotolueno (p. toluilendiamina) (PTD)
diaminofenoles
2-4 diaminofenol (DAP)
hidroquinona
1-4 dihidroxibenceno (H)
α-naftol (αN)
Pirogalol
1-2-3 trihidroxibenceno (P)
Resorcina
1-3 dihidroxibenceno (R)
2. PRINCIPIO
Los colorantes de oxidación se extraen, a un pH de 10, de los tintes
en forma de crema o de líquido con etanol de 96º y se identifican por
cromatografía en capa fina monodimensional (punto 5) y/o bidimen-
sional (punto 6)
A fin de efectuarla deter minación semicuantitativa de las sustancias
se compara la imagen cromatográfica de las muestras obtenida
mediante cuatro sistemas de desarrollo con la de las soluciones de
productos de referencia cromatografiadas.
3. REACTIVOS
Todos los reactivos deben ser de calidad analítica.
3.1. Etanol absoluto
3.2. Acetona
3.3. Etanol de 96º (v/v)3.4. Amoníaco al 25 % (d
420+ 0,91)
3.5. L (+) ácido ascórbico3.6. Cloroformo3.7. Ciclohexano3.8. Nitrógeno técnico3.9. Tolueno3.10. Benceno1982L0434 — ES — 10.04.1990 — 001.001 — 9
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3.11. Butanol 1
3.12 Butanol 2
3.13 Ácido hipofosforoso al 50 %3.14 Reactivo diazoico: se podrá utilizar bien:
— el 4-nitro-1-bencendiazonio salificado y estabilizado por el ión
clorobenceno sulfonato, por ejemplo (rojo 2 JN de francolor o
equivalente), bien
— 2-cloro-4-nitro-1-bencendiazonio salificado y estabilizado por el
ión naftalenbenzoato, porejemplo (NNCD Reagent — Ref.
n
o74150 de FLUKA o equivalente).
3.15 Nitrato de plata3.16 p-dimetilaminobenzaldehído3.17 2-5-dimetilfenol
3.18 Cloruro férrico 6 H
2O
3.19 Ácido clorhídrico sl 10 % (m/v)
3.20Sustanciasdereferencia
Las sustancias de referencia son las indicadas en el Título 1 «Objeto
y campo de aplicación».
En el caso de compuestos aminados, la sustancia de referencia debe
estar constituida exclusivamente por la forma clorhidrato (mono o di)
o porla for ma de base.
3.21Solucionesdereferencia al0,5%(m/v)
Preparar una solución al 0,5 % (m/v) de cada una de las sustancias de
referencia (punto 3.20).
Pesar 50 mg ± 1 mg de sustancia de referencia en un matraz aforado
de 10 ml.
Añadir5 ml de etanol de 96º (punto 3.3).
Añadir250 mg de ácido ascór bico (punto 3.5).Alcalinizarmediante la solución amoniacal (punto 3.4) hasta un pH
aparente de 10.
Completarhasta 10 ml con etanol de 96º y mezclar .Observaciones
Las soluciones pueden conservarse durante una semana en un sitio
fresco, protegidas de la luz.
En ciertos casos, cuando se añade ácido ascórbico y amoníaco, puede
producirse un precipitado. En este caso, conviene dejar que se
decante antes de proceder a la toma de muestras.
3.22.Disolventededesarrollo
3.22.1. Acetona-cloroformo-tolueno: 35-25-40 6 (v/v)
3.22.2. Cloroformo-ciclohexano-etanol absoluto-amoníaco al 25 % 80-10-10-
1 (v/v)
3.22.3. Benceno-butanol secundario-agua: 50-25-25 (v/v). Agitar bien la
mezcla y tomarla fase super iordespués de la decantación a la tempe-
ratura del laboratorio (entre 20 y 25 ºC).
3.22.4. Butanol I-cloroformo y reactivo M: 7-70-23 (v/v). Dejar decantar
cuidadosamente a 20-25º y tomar la fase inferior.
Preparación del reactivo M
NH
4OH al 25 % (v/v) (punto 3.4) 24 volúmenes
Acido hipofosforoso al 50 % (punto 3.13) 1 volúmen
H2O 75 volúmenes1982L0434 — ES — 10.04.1990 — 001.001 — 10
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Observación
Los disolventes de desarrollo que contienen amoníaco deben agitarse
bien inmediatamente antes de su empleo.
3.23.Reveladores
3.23.1. Reactivo diazoico
Preparar una solución acuosa al 5 % (m/v) del reactivo (punto 3.14)
elegido. Esta solución debe prepararse en el momento de su empleo.
3.23.2. Reactivo de Ehrlich
Disolver2 g de p-dimetilaminobenzaldehído (punto 3.16) en 100 ml
de ácido clorhídrico al 10 % (m/v) acuoso (punto 3.19).
3.23.3. 2-5 Dimetilfenol-cloruro férrico 6H2O
Solución 1:disolver1 g de dimetilfenol (punto 3.17) en 100 ml de etanol de 96º
(punto 3.3).
Solución 2:disolver 4 g de cloruro férrico 6 H
2O (punto 3.18) en 100 ml de
etanol de 96º (punto 3.3).
En el momento del revelado se pulveriza separadamente en primer
lugarla solución 1, y después la solución 2.
3.23.4. Nitrato de plata amoniacal
A una solución acuosa al 5 % (m/v) de nitrato de plata (punto 3.15)
añadiramoníaco al 25 % (punto 3.4) hasta la disolución del pr ecipi-
tado. Este reactivo se preparará en el momento de su utilización. No
conservarlo.
4. APARATOS
4.1. Equipo de laboratorio para cromatografía en capa fina.
4.1.1. Recipiente de plástico o de vidrio que permita mantener la placa
cromatográfica bajo nitrógeno durante el depósito y hasta el desa-
rrollo. Esta precaución es necesaria por la gran oxidabilidad de
determinados colorantes.
4.1.2. Jeringa de 10 µl, graduada de 0,2 en 0,2 µl con una aguja de sección
recta o mejor «repeating dispenser», 50 µl, montado sobre soporte, a
fin de podercolocarla placa bajo nitr ógeno.
4.1.3. Capas finas de sílice listas para el empleo, espesor 0,25 mm, formato
20 × 20 cm (Macherey y Nagel Silice G-HR o equivalente).
4.2. Centrífuga de 4000 r.p.m.
4.3. Tubos de centrífuga de 10 ml cerrados por tapón de rosca.
5. PROCEDIMIENTO5.1.Tratamientodelasmuestras
Al abrir el tubo, eliminar los 2 ó 3 primeros cm de crema.En un tubo de centrifugar (punto 4.3), previamente purgado con
nitrógeno, introducir:
— 300 mg de ácido ascórbico,
—3gd ec re m aó3gd e líquido homogeneizado.
Añadirunas gotas de amoníaco (punto 3.4) si el pH es infer iora 10 y
completarhata 10 ml con etanol de 96º (punto 3.3).
Homogeneizar bajo nitrógeno, tapar, y centrifugar después a
4 000 r.p.m. durante 10 min.
Utilizarla solución sobr enadante.1982L0434 — ES — 10.04.1990 — 001.001 — 11
▼B
5.2.Cromatografía
5.2.1. Depósito
Depositarbajo nitr ógeno, en una placa de sílice (punto 4.1.3) y en 9
puntos de partida, 1 µl de cada una de las 11 soluciones de referencia.
Estas soluciones de referencia se distribuyen así:
123456789
R P H PPD DAP PTD OPD OTD MPD
MTD αN
Por otra parte, depositar en los puntos décimo y undécimo 2 µl de las
soluciones de muestra obtenidas en el punto 5.1.
Conservar la placa bajo nitrógeno hasta el momento en que sea
cromatografiada.
5.2.2. Desarrollo
Introducir la placa en una cubeta previamente purgada con nitrógeno,
saturada con uno de los disolventes adecuados (puntos 3.22) y dejar
desarrollar a la temperatura ambiente (20º a 25º) y en la oscuridad
hasta que el frente del disolvente haya recorrido unos 15 cm desde
la línea de partida:
Sacar la placa y secarla bajo nitrógeno a la temperatura ambiente.
5.2.3. Revelado
Pulverizar inmediatamente la placa con uno de los 4 reveladores
citados en el punto 3.23.
5.2.4. Identificación
Se comparan los Rf y las coloraciones obtenidas para la muestra con
las de las sustancias de referencia depositadas. El cuadro I da, a título
indicativo, los Rf y las coloraciones obtenidos para cada sustancia de
referencia en función del disolvente de desarrollo y de los revela-
dores.
En caso de identificación dudosa se puede a veces obteneruna confir -
mación añadiendo a la muestra la sustancia de referencia
correspondiente.
5.2.5. Determinación semicuantitativa
Comparar visualmente la intensidad de las manchas correspondientes
a cada sustancia identificada en el punto 5.2.4 con una gama patrón
de concentración conocida y apropiada obtenida a partir de la
sustancia de referencia correspondiente.
Cuando la concentración del componente de la muestra es demasiado
elevada, diluirla solución que hay que depositary pr ocedera una
nueva determinación.1982L0434 — ES — 10.04.1990 — 001.001 — 12
CUADRO I
ValoresRfycoloracionesobtenidasinmediatamentedespuésdelrevelado
Productus de
referencia
(3.20)Disolventes de desarrollo Reveladores
Rf Coloraciones
3.22.1 3.22.2 3.22.3 3.22.4Reactivo de diazoico
(3.22.1)Reactivo de Ehrlich
(3.23.2)Reactivo de dimetil-
fenol-cloruro férrico
(3.23.3)Reactivo de nitrato de
plata
(3.23.4)
OPD 0,62 0,60 0,30 0,57 Marrón claro — — Marrón claro
MPD 0,40 0,60 0,47 0,48 Marrón violáceo
(*)Amarillo Marrón claro Marrón claro
PPD 0,20 0,50 0,30 0,48 Marrón Rojo vivo (*) Violáceo Gris
OTP 0,60 0,60 0,53 0,60 Marrón (*) Anaranjado claro Marrón claro Marrón grisáceo
MTP 0,40 0,67 0,45 0,60 Marrón rojizo (*) Amarillo Marrón Negro
PTD 0,33 0,65 0,37 0,70 Marrón Anaranjado Violáceo (*) Gris
DAP 0,07 — 0 0,05 Marrón (*) Anaranjado Violáceo Marrón
H 0,50 0,35 0,80 0,20 — Anaranjado Violáceo Negro (*)
αN 0,90 0,80 0,90 0,75 Anaranjado
marrón— Violáceo Negro
P 0,37 — 0,67 0,05 Marrón Violáceo Marrón muy claro Marrón (*)
R 0,50 0,37 0,80 0,17 Anaranjado (*) Violáceo Marrón muy claro Marrón claro
Notas: 1. La OPD se revela débilmente, por lo que el disolvente (punto 3.22.3) debe ser utilizado para separarlo netamente de la OTD.
2. (*) indica el mejorr evelado.▼B1982L0434 — ES — 10.04.1990 — 001.001 — 13
▼B
6. EXAMEN POR CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA BIDIMEN-
SIONAL
La cromatografía en capa fina bidimensional que se describe aquí,
necesita el uso de los reactivos siguientes:
6.1.Sustanciasysolucionesdereferencia
6.1.1. Beta-naftol ( β-N)
6.1.2. 2-aminofenol (OAP)
6.1.3. 3-aminofenol (MAP)6.1.4. 4-aminofenol (PAP)
6.1.5. 2-nitro-p-fenilendiamina (2 NPPD)
6.1.6. 4-nitro-o-fenilendiamina (4 NOPD)
Preparar una solución al 0,5 % (m/v) de cada una de las sustancias de
referencia suplementarias como se indica en el punto 3.2.1.
6.2.Disolventededesarrollo
6.2.1. Acetato de etilo-ciclohexano-amoníaco el 25 % (65-35-0,5, v)
6.3.Revelador
Colocar un recipiente de vidrio en una cubeta de desarrollo para
cromatografía en capa fina, introducir en el recipiente unos 2 g de
yodo cristalizado y tapar la cubeta.
6.4.Cromatografía
6.4.1. Trazar como se indica en la figura 1, dos líneas en la capa absorbente
de una placa para cromatografía en capa fina (punto 4.1.3).
6.4.2. Depositar bajo nitrógeno en el punto de partida 1 (figura 1) de 1 a 4 µl
de extracto (punto 5.1). La cantidad depende de la intensidad de las
manchas obtenidas en el cromatograma (punto 5.2).
6.4.3. Depositar, distribuidos entre los puntos 2 y 3 (figura 1), los colorantes
de oxidación identificados (o supuestamente identificados) en el
punto 5.2. Distancia entre los puntos: 1,5 cm. Depositar 2 µl de cada
una de las soluciones de referencia, con la excepción del DAP, del
que es necesario depositar 6 µl. Realizar la operación bajo nitrógeno.
6.4.4. Volver a empezar la operación descrita en el punto 6.4.3 para los
puntos de partida 4 y 5 (figura 1) y conservar la placa bajo nitrógeno
hasta la cromatografía.
6.4.5. Purgar con nitrógeno una cubeta para cromatografía e introducir una
cantidad adecuada de disolvente de desarrollo (punto 3.22.2). Colocar
la placa (punto 6.4.4) en la cubeta y cromatografíar en la primera
dirección de elución (figura 1) en la oscuridad. Cromatografiar hasta
que el frente del disolvente haya recorrido el menos 13 cm.
6.4.6. Sacarla placa de la cubeta y colocar la en la cubeta (punto 4.1)
purgada con nitrógeno para evaporar los restos de disolvente (durante
un mínimo de 60 min.)
6.4.7. Introducir con una probeta graduada una cantidad adecuada de disol-
vente (punto 6.2.1) en una cubeta purgada con nitrógeno, colocar la
placa girada 90º respecto a la primera dirección de elución (punto
6.4.6) en la cubeta y cromatografiar en la segunda dirección en la
oscuridad hasta que el frente del disolvente haya alcanzado la línea
trazada en la capa absorbente. Retirar la placa de la cubeta y evaporar
el disolvente al aire.
6.4.8. Exponer la placa durante 10 min en la cubeta de cromatografiar a los
vapores de yodo (punto 6.3) e interpretar el cromatograma bidimen-
sional mediante las referencias cromatografiadas al mismo tiempo
(cuadro II).
Observación
Para obtener una coloración máxima de las manchas, dejar el croma-
tograma al aire durante media hora después del revelado.
6.4.9. La presencia de los colorantes de oxidación encontrados en el punto
6.4.8 puede confirmarse sin posibilidad de error repitiendo las mani-
pulaciones descritas en los puntos 6.4.1 a 6.4.8 incluidos, cuidando de1982L0434 — ES — 10.04.1990 — 001.001 — 14
▼B
añadir en el punto de partida I, además de la cantidad de extracto
prescrita en el punto 6.4.2, 1 µl de las sustancias de referencia identi-
ficadas en el punto 6-4-8.
Si no se encuentra ninguna otra mancha, la interpretación del croma-
tograma primitivo es exacta.1982L0434 — ES — 10.04.1990 — 001.001 — 15
▼B
CUADRO II
Color de las sustancias de referencia después de la cromatografía y del
revelado convaporesdeyodo
Sustancias de refe-
renciaColor después del revelado con vapores de yodo
R Beige
P Marrón
alfa-N Violáceo
beta-N Marrón claro
H Violáceo marrón
MPD Amarillo marrón
PPD Violáceo marrón
MTD Marrón oscuro
PTD Amarillo marrón
DAP Marrón oscuro
AOP Anaranjado
MAP Amarillo marrón
PAP Violáceo marrón
2-NPPD Marrón
4-NOPD Anaranjado
Figura 1
1982L0434 — ES — 10.04.1990 — 001.001 — 16
▼B
III.IDENTIFICACIONYDETERMINACIONDELOSNITRITOS
A. IDENTIFICACION
1. OBJETO Y CAMPO DE APLICACION
Este método es conveniente para la identificación de los nitritos en
los productos cosméticos.
Es aplicable en particular a las cremas, a los productos en pasta y a
los dentífricos.
2. PRINCIPIO
La caracterización de los nitritos se realiza mediante la 2-aminoben-
zaldehido fenil-hidrazona.
3. REACTIVOS
Todos los reactivos deben ser de calidad analítica.
3.1. Acido sulfúrico diluido: diluir 2 ml de ácido sulfúrico concentrado
(d420= 1,84) en 11 ml de agua destilada.
3.2. Acido clorhídrico diluido: diluir 1 ml de ácido clorhídrico concen-
trado (d420= 1,19) en 11 ml de agua destilada.
3.3. Metanol3.4. Solución de 2-aminobenzaldehido-fenil-hidrazon (reactivo nitrina R)
en metanol.
Pesar 2 g de Nitrina R c introducirlos en un matraz aforado de 100 ml.
Añadir gota a gota 4 ml de ácido clorhídrico diluido (punto 3.2) y
agitar. Completar con metanol y mezclar hasta que la solución quede
totalmente límplida. Conservar la solución en un frasco de vidrio
topacio (punto 4.3).
4. APARATOS
4.1. Vasos de 50 ml4.2. Matraz aforado de 100 ml4.3. Frasco de vidrio topacio de 125 ml4.4. Plaquita de vidrio de 10 × 10 cm4.5. Espátula de materia sintética4.6 Papel de filtro de 10 × 10 cm
5. PROCEDIMIENTO
5.1. Extender uniformemente una parte de la muestra que vaya a exami-
narse sobre la placa de vidrio (punto 4.4.) Cuidar de que el espesor
de la capa no supere 1 cm.
5.2 Empaparen agua destilada una hoja de papel de filtr o (punto 4.6) y
depositar sobre la muestra aplicándola convenientemente con la
espátula (punto 4.5).
5.3. Esperar alrededor de 1 min y echar en el centro del papel de filtro:
— 2 gotas de ácido sulfúrico diluido (punto 3.1) y luego
— 2 gotas de la solución de nitrina (punto 3.4)
5.4. Después de 5 a 10 s, retirar el papel de filtro y examinarlo a la luz
del día. Una coloración rojo violácea indica la presencia de nitritos.
Cuando el contenido de nitritos es poco elevado, la coloración
violácea vira al amarillo en 5 a 15 s. Este viraje sólo ocurre al cabo
de uno o dos minutos, en presencia de cantidades mas importantes de
nitritos.1982L0434 — ES — 10.04.1990 — 001.001 — 17
▼B
6. OBSERVACION
La intensidad de la coloración violácea, así como la duración del
viraje a amarillo, puede dar una indicación del contenido del nitrito
de la muestra.
B. DETERMINACIÓN
1. OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN
El método indicado a continuación está adaptado a la determinación
de los nitritos en los productos cosméticos.
2. DEFINICIÓN
El contenido de nitrito de la muestra, determinado por este método,
se expresa en porcentaje de la masa de nitrito de sodio.
3. PRINCIPIO
Después de dilución y clarificación de la muestra, se realiza una reac-
ción colorimétrica con N(alfa-naftil-etilendiamina) y la intensidad de
la coloración obtenida se mide a 538 nm.
4. REACTIVOS
Todos los reactivos deben ser de calidad analítica.
4.1. Reactivos de clarificación (estos reactivos no pueden ser utilizados
más de una semana después de su preparación).
4.1.1. Reactivo I (Carrez I): disolver 106 g de ferrocianuro de potasio K4Fe
(CN)63H2O en agua destilada y completarhasta 1000 ml.
4.1.2. Reactivo II (Carrez II) disolver 219,5 g de acetato de cinc Zn
(CH3COO)22H2O y 30 ml de ácido acético glacial en agua destilada
y completarhasta 1000 ml.
4.2. Solución de nitrito de sodio: en un matraz aforado de 1000 ml,
disolveren agua destilada 0,500 g de nitr ito de sodio y completar
hasta la señal. Diluir10,0 ml de esta solución madr e hasta 500 ml.
1 ml de esta última solución = 10µg de NaNo2.
4.3. Solución de hidróxido de sodio normal.
4.4. Solución al 0,2% de clorhidrato de sulfanilamida: disolver 2 g de
sulfanilamida en 800 ml de agua calentando. Enfriar y añadir 100 ml
de HCI concentrado y agitando. Completar hasta 1000 ml.
4.5. Acido clorhídrico 5 N.4.6. Reactivo al N-(alfa-naftil): esta solución se preparará el mismo día de
su utilización.
Disolver 0,1 g de diclorhidrato de N — (alfa-naftil etilendiamina) en
agua y completarhasta 100 ml.
5. APARATOS
5.1. Balanza analítica
5.2. Matraces aforados de 100, 250, 500 y 1000 ml
5.3. Pipetas aforadas5.4. Probetas de 100 ml5.5. Filtro plegado exento de nitrito, de 15 cm de diámetro
5.6. Baño de María
5.7. Espectrofotómetro con cubetas de 1 cm de trayecto óptico5.8. Medidorde pH5.9. Microbureta de 10 ml5.10. Vaso de 50 ml1982L0434 — ES — 10.04.1990 — 001.001 — 18
▼B
6. PROCEDIMIENTO
6.1. Pesar con una precisión de 0,1 mg aproximadamente 0,5 g (m) de la
muestra homogeneizada e introducirlos en un vaso de 250 ml. Diluir
hasta un volumen de aproximadamente 150 ml con agua destilada
caliente. Colocar el vaso durante media hora en baño de María a
80 ºC y agitar de forma intermitente.
6.2. Enfriar a la temperatura ambiente y añadir sucesivamente sin dejar de
agitar, 2 ml del reactivo de Carraz I (punto 4.1.1) y 2 ml del reactivo
de Carrez II (punto 4.1.2).
6.3. Ajustarel pH a 8,3 en el medidorde pH, con una solución N de
hidróxido de sodio. Trasvasar cuantitativamente a un matraz aforado
de 250 ml y completarhasta la señal con agua destilada.
6.4. Mezclar y filtrar en filtro plegado (punto 5.5).
6.5. Con una pipeta echar una cantidad adecuada (V ml) del filtrado claro
que no supere los 25 ml en una matraz aforado de 100 ml; diluir con
agua destilada hasta 60 ml.
6.6. Mezclar, añadir 10,0 ml de clorhidrato de sulfanilamida (punto 4.4) y
después 6,0 ml de ácido clorhídrico 5 N (punto 4.5). Mezclar y dejar
reposar durante 5 min. Añadir 2,0 ml del reactivo N — (alfa-naftil)
(punto 4.6), mezclar y dejar reposar durante 3 min. Completar hasta
100 ml y mezclar.
6.7. Preparar una prueba en blanco repitiendo las operaciones efectuadas
en los puntos 6.5 y 6.6 sin añadirel r eactivo N (alfa-naftil) (punto
4.6).
6.8. Medir(punto 5.7) la densidad óptica a 538 nm de la solución de la
muestra (punto 6.6) en relación con la prueba en blanco (punto 6.7).
6.9. Leer en la curva patrón (punto 6.10) el contenido de nitrito de sodio
en µg por100 ml de solución (m1) correspondiente a la densidad
óptica encontrada para la muestra (punto 6.8).
6.10. Curva patrón. Preparar con ayuda de la solución de nitrito de sodio
(punto 4.2) una curva patrón en la gama de 0-20-40-60-80-100 µg
de nitrito de sodio por 100 ml.
7. CALCULO
Calcular el contenido de nitrito de sodio de la muestra en porcentaje
de la masa mediante la fórmula siguiente:
% NaNO 2¼20250
V/C2m1/C210/C06/C2100
m¼m1
V/C2m/C240
en donde:
m = masa en g de la muestra sometida al análisis (punto 6.1),
m1= contenido de nitrito de sodio en microgramos determinado de
acuerdo con las indicaciones del punto 6.9,
V = número de ml de filtrado utilizado para la medida (punto
6.5).
8. REPETIBILIDAD(1)
Para un contenido de nitrito de sodio del 0,2 %, la diferencia entre
los resultados de 2 determinaciones paralelas efectuadas sobre la
misma muestra, no debe superar el 0,005 %.
IV.IDENTIFICACIÓN Y DETERMINACIÓN DEL FORMALDEHÍDO
LIBRE
1. OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN
El método describe una identificación y dos determinaciones según la
presencia o no de donadores de formaldehído. Se aplica a todos los
productos cosméticos.1982L0434 — ES — 10.04.1990 — 001.001 — 19
(1) Según la norma ISO 5725.▼M1
▼M1
1.1.Identificación
1.2.Determinación globalporcolorimetría conacetilacetona:
Se aplica este método cuando el formaldehído se utiliza solo o con
otros conservantes no donadores de formaldehído.
En caso contrario, y si el resultado sobrepasa la concentración
máxima autorizada en el producto acabado, se utiliza el método de
confirmación siguiente.
1.3.Determinación enpresenciadedonadoresdeformaldehído:
En el método precedente en el proceso de formación del derivado los
donadores (donantes) de formaldehído se separan y conducen a resul-
tados demasiado elevados (formaldehído libre y combinado).
Es necesario separar el formaldehído libre por medio de una cromato-
grafía líquida.
2. DEFINICIÓN
El contenido en formaldehído libre de la muestra, determinado con
arreglo a este método, se expresa en porcentaje de la masa de formal-
dehído.
3. IDENTIFICACIÓN3.1.Principio
En medio sulfúrico, el formaldehído libre y combinado da una colo-
ración rosa o malva en presencia del reactivo de Schiff.
3.2.Reactivos
Todos los reactivos deben ser de calidad analítica y el agua ha de ser
desmineralizada.
3.2.1. Fucsina
3.2.2. Sulfito de sodio hidratado 7H
2O
3.2.3. Ácido clorhídrico concentrado (d=1,19)3.2.4. Ácido sulfúrico aproximadamente 1 M
3.2.5. Reactivo de Schiff
En un vaso, pesar100 mg de fucsina (3.2.1). Disolver los en 75 ml de
agua a 80 ºC. Después de enfriar, añadir 2,5 g de sulfito de sodio
(3.2.2) y 1,5 ml de ácido clorhídrico (3.2.3). Completar hasta 100 ml.
Tiempo de conservación: 2 semanas.
3.3.Procedimiento
3.3.1. En un vaso de 10 ml, introducir aproximadamente 2 g de muestra.
3.3.2. Añadirdos gotas de H
2SO4(3.2.4) y 2 ml de reactivo Schiff (3.2.5).
Este reactivo debe estar rigurosamente incoloro en el momento de su
empleo.
Agitar, dejar en contacto durante 5 minutos.
3.3.3. Si en un plazo de 5 minutos se observa una coloración rosa o malva,
la cantidad de formaldehído presente es superior al 0,01 %. Proceder
entonces a la determinación libre y combinada siguiendo el procedi-
miento del punto 4 y, si es necesario, el del punto 5.
4. DETERMINACIÓN COLORIMÉTRICA CON ACETILACETONA4.1.Principio
El formaldehído reacciona con la acetilacetona en presencia de
acetato de amonio para formar la 3-5-diacetil-1-4-dihidrolutidina.
Ésta se extrae con el butanol-1. La absorbancia del extracto se mide
a 410 nm.1982L0434 — ES — 10.04.1990 — 001.001 — 20
▼M1
4.2.Reactivos
Todos los reactivos deben ser de calidad analítica y el agua ha de ser
desmineralizada.
4.2.1. Acetato de amonio anhidro4.2.2. Ácido acético concentrado d
204 = 1,05
4.2.3. Acetilacetona recién destilada a presión reducida 25 mm Hg 25º, no
debiendo presentar ninguna absorción a 410 nm.
4.2.4. Butanol-14.2.5. Ácido clorhídrico 1 M4.2.6. Ácido clorhídrico aproximadamente 0,1 M4.2.7. Hidróxido de sodio 1 M4.2.8. Engrudo de almidón recién preparado, según la Farmacopea Europea,
segunda edición 1980, parte I-VII-1-1 (1 g/50 ml de agua)
4.2.9. Formaldehído al 37-40 %4.2.10. Solución valorada de iodo 0,05 M4.2.11. Solución valorada de tiosulfato de sodio 0,1 M
4.2.12. Reactivo de acetilacetona
En un matraz aforado de 1 000 ml, disolver:
— 150 g de acetato de amonio (4.2.1),
— 2 ml de acetilacetona (4.2.3),
— 3 ml de ácido acético (4.2.2).
Completarhasta 1 000 ml con agua (pH de la solución apr oximada-
mente 6,4).
Este reactivo debe estar recién preparado.
4.2.13. Reactivo (4.2.12) sin acetilacetona
4.2.14. Formaldehído-patrón: disolución madre
En un matraz aforado de 1000 ml, introducir 5 g de formaldehído
(4.2.9) y completarhasta 1000 ml.
Determinación de la concentración de la disolución madre.Partir 10,00 ml, añadir 25,00 ml de disolución valorada iodo (4.2.10)
y 10 ml de solución de hidróxido de sodio 1 M (4.2.7).
Dejar reposar durante 5 minutos.Acidificarcon 11 ml HCL 1M (4.2.5) y deter minarel iodo en exceso
con una solución titulada de tiosulfato de sodio (4.2.11) en presencia
de engrudo de almidón como indicador.
1 ml de solución de iodo 0,1N(4.2.10) consumido corresponde a
1,5 mg de formaldehído.
4.2.15. Formaldehído patrón: solución diluida
Realizarsucesivamente una dilución a 1/20 y después una dilución a
una centésima parte de la solución madre en agua desmineralizada.
1 ml de esta solución contiene aproximadamente 1 µg de formal-
dehído.
Calcularsu contenido exacto.
4.3.Aparatos
4.3.1. Material habitual de laboratorio4.3.2. Filtro «separador de fases» ref. Whatman 1 PS (o equivalente)4.3.3. Centrífuga4.3.4. Baño de María regulado a 60 ºC4.3.5. Espectrofotómetro4.3.6. Cubetas de vidrio de 1 cm de recorrido óptico1982L0434 — ES — 10.04.1990 — 001.001 — 21
▼M1
4.4.Procedimiento
4.4.1. Solución de muestra
En un matraz aforado de 100 ml, pesar con una precisión de 0,001 g
aproximadamente una masa de muestra para ensayo (g) correspon-
diente a una cantidad supuesta de formaldehído de unos 150 µ g.
Completarhasta 100 ml con agua y mezclar
[Comprobar que el pH es cercano a 6; en caso contrario, efectuar la
dilución en la solución de ácido clorhídrico (4.2.6)]
En un matraz cónico de 50 ml, añadir:
— 10,00 ml de solución S,
— 5,00 ml de reactivo de acetilacetona (4.2.12) y agua desminerali-
zada para obtener un volumen de 30 ml.
4.4.2. Disolución testigo
La posible interferencia de una coloración de fondo en la muestra
para ensayo se elimina de la manera siguiente:
En un matraz cónico de 50 ml, añadir:
— 10,0 ml de disolución S,
— 5,0 ml del reactivo (4.2.13) y agua desmineralizada para obtener
un volumen de 30 ml.
4.4.3. Ensayo en blanco
En un matraz cónico de 50 ml, añadir:
— 5,0 ml de reactivo de acetilacetona (4.2.12) y agua desminerali-
zada para obtener un volumen de 30 ml.
4.4.4. Determinación
4.4.4.1. Agitar las mezclas preparadas en 4.4.1, 4.4.2 y 4.4.3 sumergir los
matraces cónicos en un baño de María a 60 ºC durante 10 minutos
exactamente. Enfriar durante dos minutos en un baño de agua helada.
4.4.4.2. Trasvasar a una ampolla de decantación de 50 ml que contenga exac-
tamente 10 ml de butanol-1 (4.2.4). Enjuagarcon 3 a 5 ml de agua.
Agitar enérgicamente la mezcla durante treinta segundos exacta-
mente.
Dejardecantar .
4.4.4.3. Filtrar la fase butanólica en filtro «separador de fases» (4.3.2) en las
cubetas de medida. Se puede realizar también una centrifugación
(3000 r.p.m. durante cinco minutos).
4.4.4.4. Medirla absor bancia A1a 410 nm del extracto de la solución de
muestra obtenida en el punto (4.4.1). Frente el extracto de la solución
testigo del punto (4.4.2).
4.4.4.5. De la misma manera, medir la absorbancia A2del extracto del ensayo
en blanco obtenido en el punto (4.4.3) Frente butanol-1.
NB: Todas estas operaciones deben ejecutarse en un plazo de veinti-
cinco minutos a partir del momento en que el matraz cónico se
coloca en el baño de María a 60 ºC.
4.4.5. Curva patrón
4.4.5.1. En un matraz cónico de 50 ml introducir:
— 5,00 ml de solución patrón diluida (4.2.15)
— 5,00 ml de reactivo de acetilacetona (4.2.12) y agua desminerali-
zada para obtener un volumen final de 30 ml.
4.4.5.2. Continuarsegún las indicaciones del punto (4.4.4) y medirla absor -
bancia con relación al butanol-1 (4.2.4).
4.4.5.3. Repetir el proceso con 10, 15, 20 y 25 ml de solución patrón diluida
(4.2.15).
4.4.5.4. Para obtener el valor del punto 0 (que corresponde a la coloración de
los reactivos) proceder como en el punto 4.4.4.5.1982L0434 — ES — 10.04.1990 — 001.001 — 22
▼M1
4.4.5.5. Construir la curva patrón después de restar el valor del punto 0 de
cada una de las absorbencias obtenidas en los puntos 4.4.5.1 y
4.4.5.3. La ley de Beer se respecta hasta 30 µg de formaldehído.
4.5.Cálculos
4.5.1. RestarA2de A1y leer en la curva patrón (4.4.5.5) la cantidad C
expresada en microgramos de formaldehído contenida en la solución
del punto 4.4.1.
4.5.2. El contenido de formaldehído de la muestra (% m/m) se calcula
mediante la fórmula:
% de formaldeh´ ıdo % ¼C
103/C1m
donde:
m = masa en g de la toma de ensayo.
4.6.Repetibilidad (1)
Para un contenido en formaldehído del 0,2 %, la diferencia entre los
resultados de dos determinaciones paralelas efectuadas sobre la
misma muestra no debe superar el 0,005 % para la determinación
colorimétrica con acetilacetona.
Si la determinación del formaldehído libre conduce a resultados supe-
riores a los previstos en la Directiva 76/768/CEE, a saber:
a) comprendidos entre el 0,05 % y el 0,2 % del producto no etique-
tado,
b) superiores al 0,2 % del producto etiquetado o no;
es obligatorio proceder con arreglo al método descrito en el punto
5.
5. DETERMINACIÓN EN PRESENCIA DE DONADORES DE
FORMALDEHÍDO
5.1.Principio
El formaldehído libre se separa por cromatografía líquida de alto
rendimiento.
Para evitar la separación de los donadores de formaldehído en el
momento de la derivatización, previamente se procede a una croma-
tografía líquida, el fomaldehído separado se transforma en derivado
lutidínico amarillo por reacción en línea con la acetilacetona en un
reactor postcolumna y el derivado formado se detecta por absorbencia
a 420 nm.
5.2.Reactivos
Todos los reactivos deben ser de calidad analítica y el agua ha de ser
desmineralizada.
5.2.1. Agua Bakero de calidad equivalente5.2.2. Acetato de amonio anhidro
5.2.3. Ácido acético concentrado
5.2.4. Acetilacetona (conservada a 4 ºC)5.2.5. Fosfato disódico anhidro5.2.6. Ácido ortofosfórico al 85 % (d = 1,7)5.2.7. Metanol de calidad espectro5.2.8. Diclorometano de calidad espectro5.2.9. Formaldehído al 37-40 %5.2.10. Hidróxido de sodio 1 M5.2.11. Ácido clorhídrico 1 M1982L0434 — ES — 10.04.1990 — 001.001 — 23
(1) Según la norma ISO 5725.
▼M1
5.2.12. Ácido clorhídrico 0,002 M
5.2.13. Engrudo de almidón recientemente preparado conforme con la
Farmacopea Europea
5.2.14. Solución titulada de iodo 0,1 M5.2.15. Solución titulada de tiosulfato de sodio 0,1 M
5.2.16. Fase móvil
Solución acuosa de fosfato disódico (5.2.5) 0,006 M ajustada a un pH
2,1 con ácido ortofosfórico (5.2.6).
5.2.17. Reactivo postcolumna
Disolver en un matraz aforado de 1 000 ml:
— 62,5 g de acetato de amonio (5.2.2),
— 7,5 ml de ácido acético (5.2.3),
— 5 ml de acetilacetona (5.2.4).
Completarhasta 1 000 ml con agua (5.2.1).
Mantener este reactivo al abrigo de la luz.Conservación: tres días a 25 ºC.No debe observarse evolución en el color.
5.2.18. Formaldehído patrón: solución madre
En un matraz aforado de 1 000 ml, introducir 10 g de formaldehído
(5.2.9.) y completarhasta 1 000 ml con agua.
Determinación del título de la solución madre:Extraer 5,00 ml, añadir 25 ml de la solución titulada de iodo (5.2.14)
y 10 ml de solución de hidróxido de sodio (5.2.10).
Dejar reposar durante cinco minutos.
Acidificarcon 11 ml de HCL (5.2.11) y deter minarel iodo en exceso
con una solución titulada de tiosulfato de sodio (5.2.15) en presencia
de engrudo de almidón como indicador.
1 ml de solución de iodo consumida (5.2.14) corresponde a 1,5 mg de
formaldehído.
5.2.19. Formaldehído patrón: solución diluida
Realizaruna dilución al 1/100 de la solución madr e en la fase móvil
(5.2.16).
1 ml de esta solución contiene aproximadamente 37 µg de formal-
dehído. Calcularsu contenido exacto.
5.3.Aparatos
5.3.1. Material habitual de laboratorio5.3.2. Una bomba HPLC sin pulsaciones5.3.3. Una bomba de baja presión sin pulsaciones para el reactivo (o una
segunda bomba HPLC).
5.3.4. Una válvula de inyección provista de un bucle de 10 µ,l5.3.5. Reactorpost-columna incluyendo los elementos siguientes:
1 bombona tritubular de 1 litro,
+ 1 calienta bombonas de 1 litro
+ 2 columnas Vigreux con 10 platos mínimo (refrigeración por aire)
+ tubo inoxidable (para intercambio térmico) de 1,6 mm — diámetro
interior 0,23 mm L = 400 mm
+ tubo de teflón de 1,6 mm — diámetro interior 0,30 mm — L = 5 m,
(Tricotin) (ver apéndice 1)
+ 1 pieza en T sin volumen muerto (Valco o equivalente)
+ 3 racores Union sin volumen muerto1982L0434 — ES — 10.04.1990 — 001.001 — 24
▼M1
O:un módulo post-columna de tipo Applied Biosystems PCRS 520 o
equivalente provisto de un reactor de 1 ml
5.3.6. Filtro acrodiscoRCR 0,45 µ
5.3.7. Cartucho SEPPAKRC18
5.3.8. Columnas listas para el empleo:
— Bischoff hypersil RP 18 (tipo NC ref. C 25.46 1805)
(5 µ - L = 250 mm - 0 int. = 4,6 mm)
— o Dupont, Zorbax ODS
(5 µ - L = 250 mm - 0 int. = 4,6 mm)
— o Phase SEP, esferisorbe ODS 2
(5µ - L = 250 mm — 0 int. = 4,0 mm)
5.3.9. Precolumna
— Bischoff K1hypersil RP 18 (ref. KL G 6301 1805) 5µ - L = 10 mm,
o equivalente
5.3.10. La columna y la precolumna se conectarán por medio de un sistema
Ecotube (ref. A 15020508 Bischoff) o equivalente.
5.3.11. Realizarel montaje (5.3.5) según el esquema del apéndice 2.
Las conexiones después de la válvula de inyección deben serlo más
cortas posible.
En el caso de utilizar(5.3.6), el tubo inoxidable colocado entr e la
salida del reactor y la entrada del detector tiene por finalidad enfriar
la mezcla antes de la detección y la temperatura en el detector no es
conocida pero es constante.
5.3.12. Detector, U.V. visible5.3.13. Registradora5.3.14. Centrífuga5.3.15. Baño de ultrasonidos5.3.16. Agitador vibratorio (tipo Vortex o equivalente)
5.4.Procedimiento
5.4.1. Curva patrón
Las soluciones estándar se preparan por dilución de la solución
diluida de formaldehído patrón (5.2.19) con la fase móvil (5.2.16).
— 1 ml de solución patrón (5.2.19) diluida a 20,00 ml aproximada-
mente 185 µg/100 ml
— 2 ml de solución patrón (5.2.19) diluida a 20,00 ml aproximada-
mente 370 µg/100 ml
— 5 ml de solución patrón (5.2.19) diluida a 25,00 ml aproximada-
mente 740 µg/100 ml
— 5 ml de solución patrón (5.2.19) diluida a 20,00 ml aproximada-
mente 925 µg/100 ml
Las soluciones estándar se almacenan durante una hora a la tempera-
tura del laboratorio y deben estar recién preparadas.
La linearidad de la curva patrón es buena para concentraciones de
100 a 1 500 µg/ml
5.4.2. Preparación de las muestras
5.4.2.1. Caso de las emulsiones (cremas — maquillajes de base — delinea-
dores de ojos)
Pesar en un frasco con tapón, con una precisión de 0,001 g, una masa
(m) de muestra para ensayo (en g) correspondiente a una cantidad
supuesta de formaldehído de unos 100 µg.
Añadir 20,00 ml de diclorometano (5.2.8) y 20,00 ml de ácido clorhí-
drico (5.2.12) medidos exactamente.
Mezclar por medio del agitador vibratorio (5.3.16) y de los ultraso-
nidos (5.3.15).1982L0434 — ES — 10.04.1990 — 001.001 — 25
▼M1
Separar las dos fases por centrifugación (3 000 r.p.m. durante 2
minutos).
Por otra parte, lavar un cartucho (5.3.7) con 2 ml de metanol (5.2.7) y
después acondicionarcon 5 ml de agua (5.2.1).
Hacer pasar 4 ml de la fase acuosa del extracto a través del cartucho
(5.3.8), eliminar los primeros 2 ml y recuperar la fracción siguiente.
5.4.2.2. Caso de las lociones y champúes
Pesar con una precisión de 0,001 g una masa (m) de muestra para
ensayo (en g) correspondiente a una cantidad supuesta de formal-
dehído de unos 500 µg.
Completarhasta 100 ml con la fase móvil (5.2.16).La solución se filtra a través de un filtro (5.3.6) y se inyecta o se pasa
a través de un cartucho (5.3.7) acondicionado como en el caso ante-
rior (5.4.2.1)
Todas las soluciones deben serinyectadas extempor áneamente.
5.4.3. Condiciones cromatográficas
— caudal de la fase móvil: 1 ml/min
— caudal del reactivo: 0,5 ml/min
— caudal total a la salida del detector: 1,5 ml/min
— volumen inyectado: 10 µl— temperatura de elución: en las separaciones difíciles, la columna
se sumerge en un baño de hielo fundente y se espera el equilibrio
de las temperaturas.
— temperatura reacción post-columna: 100 ºC
— detección: 420 nm
— atenuación: 0,32 escala plena— registrador: 10 mv escala plena desarrollo 10 mm/min.
NB:El conjunto del sistema cromatográfico y post-columna debe
enjuagarse con agua después de utilizado (5.2.1). En el caso de
una parada superior a dos días, a este enjuagado le sigue un
enjuagado con metanol (5.2.7).
Antes de reacondicionar el sistema, efectuar una pasada de agua para
evitar las recristalizaciones.
5.5.Cálculo
Caso de las emulsiones
Contenido en % de formaldehído (m/m):
C/C110/C06/C1100
5m¼C/C110/C04
5/C1m
Caso de las lociones y champús
La fórmula pasa a ser:
C/C110/C06/C1100
m¼C/C110/C04
m
donde
m = la masa en g de la muestra sometida a análisis
C = la concentración de formaldehído en µg/100ml leída en la
curva maestra (5.4.1.)1982L0434 — ES — 10.04.1990 — 001.001 — 26
▼M1
5.6.Repetibilidad (1)
Para un contenido de formaldehído del 0,05 % la diferencia entre los
resultados de 2 determinaciones paralelas efectuadas en la misma
muestra no debe superar el 0,001 %.
Para un contenido de formaldehído del 0,2 %, la diferencia entre los
resultados de 2 determinaciones paralelas efectuadas en la misma
muestra no debe superar el 0,005 %.
V.DETERMINACIONDELARESORCINAENLOSCHAMPUESYEN
LASLOCIONESCAPILARES
1. OBJETO Y CAMPO DE APLICACION
Este método describe la determinación de la resorcina en los cham-
púes y lociones capilares por cromatografía en fase gaseosa. Se
aplica a concentraciones del 0,1 al 2,0 % de la masa del producto.
2. DEFINICION
El contenido en resorcina determinado según este método se expresa
en porcentaje de la masa de resorcinol.
3. PRINCIPIO
La resorcina y el 3,5-dihidroxitolueno utilizado como patrón interno,
se aíslan de la muestra por cromatografía en capa fina. Los dos
compuestos se aíslan mediante raspado de la placa de capa fina y
extracción con metanol. A continuación se secan los residuos, se
sililan y se determinan por cromatografía en fase gaseosa.
4. REACTIVOS
Todos los reactivos deben ser de calidad analítica:
4.1. Acido clorhídrico al 25 % (m/m)4.2 Metanol4.3. Etanol al 96 % (v/v)
4.4 Placas de sílice sobre soporte plástico o aluminio, con indicador fluo-
rescente listas para el empleo y desactivadas.
Preparar como sigue: vaporizar agua sobre las placas de sílice hasta
que queden brillantes. Secarlas a temperatura ambiente durante 1 a 3
horas.
NB:Si las placas no son desactivadas, puede haber pérdidas de resor-
cina por adsorción irreversible sobre la sílice.
4.5. Disolvente de desarrollo: acetona — cloroformo — ácido acético (20
—7 5—5v ) .
4.6 Solución patrón de resorcina; disolver 400 mg de resorcina en 100 ml
de etanol al 96 % (1 ml corresponde a 4000 µg de resorcina).
4.7 Solución de patrón interno; disolver 400 mg de 3,5-dihidroxitolueno
(DHT) en 100 ml de etanol al 96 % (1 ml corresponde a 4000 µg de
DHT):
4.8. Mezcla patrón: mezclar 10 ml de solución del punto 4.6 y 10 ml de
solución del punto 4.7 en un matraz aforado de 100 ml, completar
hasta volumen con etanol al 96 % y mezclar (1 ml corresponde a
400 µg de resorcina y 400 µg de DHT).
4.9. Reactivos de sililación:4.9.1. N, O-bis-(trimetilsilil) trifluoroacetamida (BSTFA)4.9.2. Hexametildisilazano (HMDS)4.9.3. Trimetilclorosilano (TMCS)1982L0434 — ES — 10.04.1990 — 001.001 — 27
(1) Según la norma ISO 5725.▼B
▼B
5. APARATOS
5.1. Equipo habitual de cromatografía en capa fina y en fase gaseosa
5.2. Instrumental de vidrio de laboratorio
6. PROCEDIMIENTO
6.1.Preparación delamuestra
6.1.1. Pesarcon pr ecisión en un vaso de 150 ml una toma de ensayo del
producto (gramos m) que contenga de 20 a 50 mg aproximadamente
de resorcina.
6.1.2. Acidificar con ácido clorhídrico (punto 4.1) (aproximadamente 2 a
4 ml). Añadir10 ml (40 mg de DHT) de solución inter na (punto
4.7) y mezclar. Trasvasar a un matraz aforado de 100 ml con ayuda
de etanol. Completarhasta volumen con etanol (punto 4.3) y mezclar .
6.1.3. Depositar250 µl de la solución del punto 6.1.2 en una placa de sílice
desactivada (punto 4.4) en una línea continua de aproximadamente
8 cm de longitud. Tratar de conseguir una banda lo más fina posible.
6.1.4. Depositarde la misma maner a (punto 6.1.3), en la misma placa,
250 µl de mezcla patrón (punto 4.8).
6.1.5. En la línea de partida, depositar 2 puntos de 5 µl de cada solución de
los puntos 4.6 y 4.7 para facilitar la localización después del revelado
de la placa.
6.1.6. En una cubeta no saturada, desarrollar la placa con el disolvente de
desarrollo (punto 4.5) hasta que haya recorrido 12 cm desde la línea
de partida (45 min).Secar la placa al aire y localizar la zona resor-
cina/DHT bajo luz UV a 254 nm. Ambos compuestos tienen
aproximadamente el mismo valor de Rf.
Retirar las bandas así localizadas, reunir el adsorbente de cada una de
ellas en un matraz de 10 ml.
6.1.7. Extraer el adsorbente que contiene la muestra y el que contiene la
mezcla patrón de la muestra siguiente:
Añadir 2 ml de metanol (punto 4.2) y extraer durante 1 hora agitando
de manera continua. Filtrar la mezcla y repetir la extracción durante
15 min con 2 ml de metanol (punto 4.2).
6.1.8. Evaporar el disolvente de la totalidad de los extractos colocándolos
durante la noche en un desecador en vacío, lleno de un desecante
adecuado. No evaporar en caliente.
6.1.9. Sililarlos r esiduos (punto 6.1.8) como se indica en 6.1.9.1 o en el
punto 6.1.9.2.
6.1.9.1. Añadir200 µl de BSTFA (punto 4.9.1) y dejarla mezcla en un r eci-
piente tapado a temperatura ambiente, durante 12 horas.
6.1.9.2. Añadirsucesivamente 200 µl de HMDS (punto 4.9.2) y 100 µl de
TMCS (punto 4.9.3) y calentarla mezcla dur ante 30 min a 60 ºC en
un recipiente tapado. Enfriar.
6.2.Cromatografíaenfasegaseosa
6.2.1. Condiciones para la cromatografía
La fase estacionaria debe dar un grado de resolución igual o superior
a 1,5.
R¼2d0R2/C0d0R1
W1þW2
en donde
R1yR2= tiempo de retención expresado en min de 2 picos,
W1yW2= anchura de los mismos picos a media altura,
d′ = velocidad de avance del papel en mm/min.
Las condiciones operativas siguientes, permiten obtener este resul-
tado:1982L0434 — ES — 10.04.1990 — 001.001 — 28
▼B
columna: acero inoxidable,
longitud: 200 cm,
diámetro: =3 (1/8″),
llenado: 10 % OV 17 en chromosorb WAW
100 — 120 mallas.
detectorde ionización de llama
temperaturas:
columna: 185 ºC (isotermo)
inyector: 250 ºCdetector: 250 ºC
gas vector: nitrógeno,
caudal 45: ml/min.
para ajustar el caudal de hidrógeno y de aire seguir las instrucciones
del fabricante.
6.2.2. Inyectar1 a 3 µl de las soluciones obtenidas en el punto 6.1.9.
Realizar 5 inyecciones para cada solución. Medir la superficie de los
picos de manera precisa y calcular la relación de las superficies:
S = superficie del pico de resorcina/superficie del pico del DHT.
7. CALCULO
La concentración en resorcina de la muestra, expresada en porcentaje
de masa (% m/m), viene dada por:
% de resorcina ¼
4
M/C2S muestra
S mezcla patr´ on
donde:
M = toma de ensayo en gramos (punto 6.1.1),
S muestra = relación media obtenida para los picos de la
solución muestra,
S mezcla patrón = relación media obtenida para los picos de la
mezcla patrón según el punto 6.2.2.
8. REPETIBILIDAD(1)
Para un contenido de resorcina del 0,5 % la diferencia entre los resul-
tados de 2 determinaciones paralelas efectuadas sobre la misma
muestra, no debe superar el 0,025 %.
VI.DETERMINACIONDELMETANOLCONRELACIONALETANOL
OALPROPANOL-2
1. OBJETO Y CAMPO DE APLICACION
Este método describe la determinación del metanol por cromatografía
en fase gaseosa en todos los tipos de productos cosméticos (incluidos
los aerosoles). Se aplica a concentraciones relativas del 0 al 10 %.
2. DEFINICION
El contenido en metanol determinado de acuerdo con este método se
expresa en porcentaje de masa de metanol con relación a la masa de
etanol o de propanol-2.
3. PRINCIPIO
La determinación se efectúa por cromatografía en fase gaseosa.1982L0434 — ES — 10.04.1990 — 001.001 — 29
(1) Según la norma ISO 5725.
▼B
4. REACTIVOS
Todos los reactivos deben ser de calidad analítica.
4.1. Metanol4.2. Etanol absoluto4.3. Propanol-24.4. Cloroformo, enjuagado con agua para eliminar los alcoholes
5. APARATOS
5.1. Cromatógrafo en fase gaseosa con detector catarométrico (para las
muestras de productos en aerosoles).
Cromatógrafo en fase gaseosa con detector de ionización de llama
(para las muestras de otros productos).
5.2. Matraces aforados de 100 ml5.3. Pipetas graduadas (2 ml, 20 ml, 0-1 ml)5.4. Microjeringas de 0 a 100 µl y 0 a 5 µl
Para las muestras de productos en aerosol solamente, jeringa de gas
especial con válvula deslizante (figura 5 del método de muestreo) (
1)
6. PROCEDIMIENTO6.1.Preparación delasmuestras
6.1.1. Los productos en aerosol se tratan como se indica en el Capítulo II
del Anexo de la Directiva de la Comisión 80/1335/CEE de 22 de
diciembre de 1980 (
1) y después se analizan por cromatografía en
fase gaseosa en las condiciones prescritas en el punto 6.2.1.
6.1.2. Los demás productos tratados como se indica en el Capítulo II antes
mencionado se diluyen en agua hasta una concentración del 1 al 2 %
de etanol o de propanol-2, después se analizan por cromatografía en
fase gaseosa en las condiciones prescritas en el punto 6.2.2.
6.2.Condicionesdelacromatografía enfasegaseosa
6.2.1. Para las muestras de productos en aerosol6.2.1.1. Se utilizará una columna llena con un 10 % de Hallcomid M 18 en
chromosorb W de 100 — 120 mallas y un detector catarométrico.
6.2.1.2. La fase estacionaria debe dar un grado de resolución igual o superior
a 1.5:
R¼2
d0R2/C0d0R1
W1þW2
en donde:
R1yR2= tiempo de retención expresado en min de 2 picos,
W1yW2= anchura de los mismos picos a media altura,
d′ = velocidad de avance del papael en mm/min.
6.2.1.3. Las condiciones siguientes permiten obtener estos resultados:
Tipo de la columna: acero inoxidable
longitud: 3,5 mdiámetro: 3 mm
Corriente del detector
catarométrico: 150 mAGas vector: Helio — presión: 2,5 bares;
caudal: 45 ml/min.1982L0434 — ES — 10.04.1990 — 001.001 — 30
(1)D O noL 383 de 31. 12. 1980, p. 27.
▼B
Temperaturas:
inyector: 150 ºC
detector: 150 ºC
columna: 65 ºC
6.2.2. Para las muestras de otros productos:
6.2.2.1. Se utilizará una columna llena de chromosorb 105 o de porapak QS y
un detectorde ionización de llama.
6.2.2.2. La fase estacionaria debe tener un grado de resolución igual o supe-
rior a 1,5:
R¼2d0R2/C0d0R1
W1þW2
en donde
R1yR2= tiempo de retención expresado en min de 2 picos,
W1yW2= anchura de los mismos picos a media altura,
d′ = velocidad de avance del papel en mm/min.
6.2.2.3. Las condiciones siguientes permiten obtener estos resultados
Tipo de columna: acero inoxidable
longitud: 2 mdiámetro: 3 mm
electrómetro: sensibilidad de 8.10
−10A
gas vector: nitrógeno — presión: 2,1 bares;
caudal: 40 ml/min
auxiliar: hidrógeno — presión: 1,5 bares;
caudal: 20 ml/min
Temperaturas:
inyector: 150 ºCdetector: 230 ºC
columna: 120 ºC ó 130 ºC
7. CURVAS PATRON
7.1. En las condiciones prescritas en el punto 6.2.1. (columna Hallcomid
M 18) Utilizarlas mezclas patr ón que se definen a continuación.
Preparar estas mezclas por medida volumétrica, pero determinar la
cantidad exacta pesando inmediatamente después de cada adición.
Concentración relativa
% m/mMetanol
mlEtanol
ml
(o
propan-
ol-2)Cloroformo hasta
un volumen de
2,5 % aproximadamente 0,5 20 100 ml
5,0 % aproximadamente 1,0 20 100 ml
7,5 % aproximadamente 1,5 20 100 ml
10,0 % aproximadamente 2,0 20 100 ml
Inyectar de 2 a 3 µl en el cromatógrafo de acuerdo con las condi-
ciones prescritas en el punto 6.2.1. Calcular la relación de las
superficies de los picos (metanol/etanol) o (metanol/propanol-2) de
cada mezcla. Trazar la curva patrón utilizando:1982L0434 — ES — 10.04.1990 — 001.001 — 31
▼B
como eje de las abscisas: el porcentaje de metanol en relación al
etanol o al propanol-2,
como eje de las ordenadas: la relación de las superficies de los
picos (metanol/etanol) o (metanol/
propanol-2).
7.2 En las condiciones prescritas en el punto 6.2.2 (Porapak QS o Chro-
mosorb 105) utilizar las mezclas patrón que se definen a
continuación. Preparar estas mezclas por medida volumétrica, pero
determinar la cantidad exacta pesando inmediatamente después de
cada adición.
Concentración relativa
% m/mMetanol
µlEtanol
ml
(o
propan-
ol-2)Agua hasta un
volumen de
2,5 % aproximadamente 50 2 100 ml
5,0 % aproximadamente 100 2 100 ml
7,5 % aproximadamente 150 2 100 ml
10,0 % aproximadamente 200 2 100 ml
Inyectar 2 a 3 µl en el cromatógrafo de acuerdo con las condicioens
prescritas en el punto 6.2.2. Calcular la relación de las superficies de
los picos (metanol/etanol) o (metanol/propanol-2) de cada mezcla.
Trazar la curva patrón utilizando:
como eje de las abscisas: el porcentaje de metanol en relación al
etanol o al propanol-2,
como eje de las ordenadas: la relación de las superficies de los
picos (metanol/etanol) o (metanol/
propanol-2).
7.3. En ambos casos la curva patrón deberá ser una recta.
8. REPETIBILIDAD(1)
Para los contenidos en metanol del 5 % en relación al etanol o al
propanol-2, la diferencia entre los resultados de dos determinaciones
paralelas efectuadas sobre la misma muestra no deberá sobrepasar el
0,25 %.1982L0434 — ES — 10.04.1990 — 001.001 — 32
(1) Según la norma ISO 5725.
▼M1
Apéndice 1
CONFECCIÓNDEUNSERPENTÍN
ACCESORIOS UTILIZADOS PARA LA REALIZACIÓN DEL «SERPENTÍN»
— 1 bobina de madera:
de un diámetro exterior de 5 cm, en medio de la cual se practicará un
agujero de 1,5 cm. Se plantarán cuatro puntas de acero equidistantes (ver
esquema de la bobina en la figura 1 y figura 2). La separación entre dos
puntas será de 1,8 cm; las puntas se plantarán a 0,5 cm del agujero.
— 1 vástago rígido (del tipo gancho) para realizar los bucles a partir del tubo
de Teflon
— tubo de Teflon de 1,6 mm — Ø int. 0,3 mm — Longitud: 5 metros
REALIZACIÓN DEL «SERPENTÍN»
Para poner en marcha el serpentín, es preciso enhebrar el tubo de Teflon de
arriba a abajo por el agujero central de la bobina (dejando que el tubo sobre-
salga aproximadamente unos 10 cm por debajo de la cara inferior, lo que
permitirá tirar ligeramente de la cadenilla durante la confección) y después enro-
llar el tubo alrededor de cada una de las cuatro puntas para completar la primera
vuelta (véase figura 3).
La entrada y la salida del serpentín estarán guarnecidas con abrazaderas y torni-
llos de compresión, por lo que es preciso proceder con atención para no aplastar
el Teflon al realizar el engarce.
A partir de la segunda hilera, hacer pasar el tubo por el exterior de cada punta
para formar a continuación un bucle de la manera siguiente:
— hacer pasar el tubo de la hilera inferior por encima del tubo de la hilera
superior con ayuda del vástago rígido (véase figura 4).
Se repetirá dicho trabajo en cada una de las puntas respetando el orden 1 - 2 - 3
- 4, hasta el máximo de los 5 metros o de la longitud deseada.
Dejar aproximadamente 10 cm de tubo para cerrar la cadenilla. Pasar el tubo por
cada uno de los 4 bucles y tirar ligeramente: así la cadenilla queda cerrada.
NB:Existen Tricotins en el mercado confeccionados para las reaciones post-
columna (Supelco)1982L0434 — ES — 10.04.1990 — 001.001 — 33
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Esquemas de la bobina
1982L0434 — ES — 10.04.1990 — 001.001 — 34
▼M1
Apéndice 2
1 = bomba HPLC
2 = válvula de inyección
3 = columna con precolumna4 = bomba reactiva
5 = pieza en forma de T sin volumen muerto
5′= pieza en forma de T (Vortex)
6-6′= raccord Union sin volumen muerto
7 = serpentín
7′= reactor
8 = globo de tres tubuladuras con agua hirviendo9 = calientaglobo
10 = refrigerador
11 = tubo inoxidable intercambiador térmico11′= intercambiador térmico
12 = detectorUV/visible
13 = módulo postcolumna PCRS 520
5.3.5.
5.3.6.
1982L0434 — ES — 10.04.1990 — 001.001 — 35