1971L0393 — ES — 15.12.1972 — 001.001 — 1
Estedocumentoesuninstrumentodedocumentaciónynocomprometelaresponsabilidaddelasinstituciones
►B SEGUNDADIRECTIVADELACOMISIÓN
de18denoviembre de1971
por la que se establecen métodos de análisis comunitarios para el control oficial de los alimentos
paraanimales
(71/393/CEE)
(DO L 279 de 20.12.1971, p. 7)
Modificada por:
Diario Oficial
nopágina fecha
►M1Directiva 73/47/CEE de la Comisión de 5 de diciembre de 1972 L 83 35 30.3.1973
▼B
SEGUNDADIRECTIVADELACOMISIÓN
de18denoviembre de1971
por la que se establecen métodos de análisis comunitarios para el
controloficial delosalimentosparaanimales
(71/393/CEE)
LA COMISIÓN DE LAS COMUNIDADES EUROPEAS,
Visto el Tradado constitutivo de la Comunidad Económica Europea,Vista la Directiva del Consejo, de 20 de julio de 1970, relativa a la
introducción de métodos de toma de muestras, de métodos de análisis
comunitarios para el control oficial de los alimentos para animales (
1),
y, en particular, su artículo 2,
Considerando que la Directiva mencionada prevé que los controles
oficiales de los alimentos para animales para comprobar si se cumplenlas condiciones establecidas en virtud de las disposiciones legales,reglamentarias o administrativas relativas a la calidad y la composiciónde los alimentos para animales deben seguir métodos de toma de mues-
tras y métodos de análisis comunitarios;
Considerando que la Directiva n
o71/250/CEE de la Comisión, de 15 de
junio de 1971 (2), ha establecido ya determinados métodos de análisis
comunitarios; que, habida cuenta del estado de los trabajos efectuadosdesde entonces, es conveniente adoptaruna segunda ser ie de métodos;
Considerando que las medidas previstas en la presente Directiva se
ajustan al dictamen del Comité permanente de la alimentación animal,
HA ADOPTADO LA PRESENTE DIRECTIVA:
Artículo 1
Los Estados miembros dispondrán que los análisis para los controles
oficiales de los alimentos para animales, respecto de su contenido en
humedad, bases nitrogenadas, volátiles, fósforo total y materias grasas
brutas se efectúen de acuerdo con los métodos descritos en el Anexo dela presente Directiva.
Serán aplicables a los métodos descritos en el Anexo de la presente
Directiva las disposiciones generales que figuran en la Parte 1 delAnexo (Introducción) de la Primera Directiva n
o71/250/CEE de la
Comisión, de 15 de junio de 1971, porla que se establecen métodos
de análisis comunitarios para el control oficial de los alimentos paraanimales.
Artículo 2
Los Estados miembros aplicarán, a más tardar el 1 de enero de 1973,
las disposiciones legales, reglamentarias o administrativas necesariaspara cumplir las disposiciones de la presente Directiva. Informarán deello inmediatamente a la Comisión.
Artículo 3
Los destinatarios de la presente Directiva serán los Estados miembros.1971L0393 — ES — 15.12.1972 — 001.001 — 2
(1)D O noL 170 de 3. 8. 1970, p. 2.
(2)D O noL 155 de 12. 7. 1971, p. 13.
▼B
ANEXO
1.DETERMINACIÓNDELAHUMEDAD
1.Objetivoyámbitodeaplicación
El método permite determinar el contenido en humedad de los alimentos para
animales. ►M1No afecta al análisis de los productos lácteos en tanto que
piensos simples para animales, al análisis de sustancias minerales y de
mezclas compuestas fundamentalmente de sustancias minerales, al análisisde grasas y aceites minerales, así como al análisis de semillas y frutos olea-
ginosos definidos en el Reglamento N
o136/66/CEE del Consejo, de 22 de
septiembre de 1966, sobre establecimiento de una organización común de
mercado en el sector de las grasas(1).◄
La determinación del contenido en humedad de las semillas y frutos oleagi-
nosos se regula en el Anexo III del Reglamento (CEE) no1470/68 de la
Comisión, de 23 de septiembre de 1968, relativo a la toma y reducción de
muestras a la determinación del contenido en aceite, en impurezas y en
humedad de las semillas oleaginosas (2).
2.Principio
La muestra se somete a desecación en las condiciones definidas, que varía en
función de la naturaleza del alimento. La pérdida de masa se determina
mediante pesada. Es necesario proceder a una predesecación cuando se trate
alimentos sólidos que tengan un elevado contenido en humedad.
3.Equipo
3.1. Triturador construido de material que no absorba la humedad, fácil de
limpiar, que permita un triturado rápido y uniforme sin provocar un
recalentamiento sensible, evite al máximo el contacto con el aire exte-
rior y cumpla los requisitos indicados en 4.1.1 y 4.1.2 (por ej.,
microtituradoras de martillos o de enfriamiento por agua, molinos de
conos desmontables, trituradoras de movimiento lento o de discos
dentados).
3.2. Balanza analítica, precisión 0,5 mg.
3.3. Recipientes secos de metal inoxidable o de cristal, provistos de tapadera
que garantice un cierre hermético; superficie útil que permita obtener un
reparto de la muestra del orden de 0,3 g por cm2.
3.4. Estufa isoterma (± 1 ºC) de calentamiento eléctrico, que garantice una
regulación rápida de la temperatura y convenientemente ventilada (3).
3.5. Estufa de vacío, de calentamiento eléctrico regulable, provista de una
bomba de aceite y de un dispositivo para la introdución de aire calientedeshidratado o de un deshidratante (por ej., óxido de calcio).
3.6. Desecador de placa de metal o de porcelana, gruesa, perforada, que
contenga un deshidratante eficaz.
4.Métodooperativo
NB: Las operaciones descritas en este capítulo deben efectuarse inmedita-
maente después de la apertura de los envases que contienen las
muestras.
Los análisis deben efectuarse por lo menos por duplicado.
4.1.Preparación
4.1.1. Alimentos excepto los mencionados en 4.1.2 y 4.1.3
Tomar por los menos 50 g de la muestra. Si fuera necesario, tritu-
rarla o dividirla de forma adecuada para evitar cualquier
variación del contenido en humedad (ver 6).1971L0393 — ES — 15.12.1972 — 001.001 — 3
(1)D O no172 de 30. 9. 1966, p. 3025/66.
(2)D O noL 239 de 28. 9. 1968, p. 2.
(3) Para la desecación de los cereales y de las harinas, grañones y sémolas, la estufa debe
tener una capacidad calorífica tal que, regulada previamente a una temperatura de 13 ºC,
puede alcanzar de nuevo dicha temperatura en menos de 45 minutos después de lacolocación del número máximo de muestras que deban secarse simultáneamente. Debetener una ventilación tal que, secando durante dos horas, todas las muestras de trigoblando que pueda contener, los resultados presenten una diferencia inferior al 0,15 %
con respecto a los resultados obtenidos después de cuatro horas de secado.
▼B
4.1.2. Cereales y grañones
Tomar por lo menos 50 g de la muestra. Moler en partículas de
forma que por lo menos el 50 % pase por un tamiz de mallas de
0,5 mm y no queden más del 10 % sobre el tamiz de mallas
redondas de 1 mm.
4.1.3. Alimentos líquidos o pastosos, alimentos contituidos esencial-
mente por materias grasas
Tomar la muestra y pesar, con precisión de 10 mg, 25 g aproxi-
madamente de la misma, añadiruna cantidad adecuada de ar ena
anhidra, pesada con una precisión de 10 mg, y mezclar hasta
obtenerun pr oducto homogéneo.
4.2.Desecación
4.2.1. Alimentos, excepto los mencionados en 4.2.2 y 4.2.3
Tarar, con una precisión de 0,5 mg, un recipiente (3.3) provisto
de tapadera. Pesar, con precisión de 1 mg, en el recipiente tarado
5 g aproximadamente de la muestra y repartirla uniformemente.
Colocar el recipiente en la estufa previamente calentada 103 ºC,
con la tapadera levantada. Para evitar que la temperatura de la
estufa descienda demasiado, introducir el recipiente en un tiempo
mínimo. Dejar secar durante cuatro horas a partir del momento en
que la estufa haya alcanzado de nuevo la temperatura de 102 ºC.
Volver a colocar la tapadera sobre el recipiente, retirarlo de la
estufa, dejar enfriar durante 30 a 45 minutos en el desecador
(3.6) y pesar, con precisión de 1 mg.
En el caso de los alimentos constituidos esencialmente pormate-
rias grasas, efectuar una desecación complementaria de 30
minutos en la estufa a 103 ºC. La diferencia entre las dos pesadas
no deberá exceder del 0,1 % de humedad.
4.2.2. Cereales, harinas, grañones y sémolas
Tarar, con precisión de 0,5 mg, un recipiente (3.3) provisto de
tapadera. Pesa, con precisión de 1 mg, en el recipiente tarado 5 g
aproximadamente de la muestra triturada y repartirla unifome-
mente. Colocar el recipiente en la estufa previamente calentada
a 130 ºC, con la tapadera levantada. Para evitar que la tempera-
tura de la estufa descienda demasiado, introducir el recipiente en
un tiempo mínimo. Dejar secar durante dos horas a partir del
momento en que la estufa haya alcanzado de nuevo la tempera-
tura de 130 ºC. Volver a colocar la tapadera sobre el recipiente,
retirarlo de la estufa, dejar enfriar de 30 a 45 minutos en el dese-
cador(3.6) y pesarcon una pr ecisión de 1 mg.
4.2.3. Piensos compuestos con un contenido mayor del 4 % de sacarosa
o de lactosa: alimentos simples tales como algarrobos, productos
de cereales hidrolizados, gérmenes de malta, peladuras de remo-
lacha, solubles de pescado, azúcares; piensos compuestos con un
contenido mayor del 25 % de sales minerales que contengan
agua de cristalización
Tarar, con precisión de 0,5 mg, un recipiente (3.3) provisto de
tapadera. Pesar, con precisión de 1 mg, en el recipiente tarado
5 g aproximadamente de la muestra y repartirla uniformemente.
Colocar el recipiente en la estufa de vacío (3.5) previamente
calentada a una temperaturade 80 a 85 ºC, con la tapadera levan-
tada. Para evitar que la temperatura de la estufa descienda en
exceso, introducir el recipiente en un tiempo mínimo.
Llevar la presión a 100 Torrs y dejar secar a dicha presión
durante cuatro horas, bien bajo una corriente de aire seco y
caliente, bien mediante la utilización de un deshidratante (300 g
aproximadamente para 20 muestras). En este último caso, inte-
rrumpir la conexión con la bomba de vacío cuando se haya
alzanzado la presión establecida. Contar la duración del secado a
partir del momento en que la estufa haya alcanzado de nuevo la
temperatura de 80 a 85 ºC. A continuación, y con precaución,
restablecer la presión atmosférica en la estufa. Abrir la estufa,
cubrir inmediatamente el recipiente con su tapadera, retirar elrecipiente de la estufa, dejar enfriar durante 30 a 45 minutos en
el desecador (3.6) y pesar con precisión de 1 mg. Proceder a una
desecación complementaria de 30 minutos en la estufa de vacío a
la temperatura de 80 a 85 ºC y pesar de nuevo. La diferencia
entre las dos pesadas no deberá exceder del 0,1 % de humedada.1971L0393 — ES — 15.12.1972 — 001.001 — 4
▼B
4.3.Predesecación
4.3.1. Alimentos, excepto los mencionados en 4.3.2
Los alimentos sólidos, de contenido en humedad elevado y que
por tanto hacen difícil el triturado, deben predesecarse tal como
se indica a continuación. Pesar, con precisión de 10 mg, 50 g de
la muestra no triturada (si fuere necesario, puede efectuarse una
división elemental, en el caso de alimentos comprimidos o aglo-merados) en un recipiente apropiado (por ejemplo, placa de
aluminio de 20 × 12 cm con un borde de 0,5 cm). Dejar secar
en una estufa a temperatura de 60 a 70 ºC, hasta que el contenido
en humedad se reduzca a un valor comprendido entre el 8 y el
12 %. Retirar de la estufa, dejar enfriar al descubierto en el labo-
ratorio durante una hora y pesar con una precisión de 10 mg.
Triturar inmediatamente después, tal como se indica en 4.1.1 y
efectuarla desecación como se indica en 4.2.1 o en 4.2.3, según
la naturaleza del alimento.
4.3.2. Cereales
Las semillas con un índice de humedad inferior al 17 % deben
predesecarse tal como se indica a continuación:
Pesar, con precisión de 10 mg, 50 g de la semilla sin moler en un
recipiente adecuado (por ejemplo, placa de aluminio de 20 × 12 cm
con un borde de 0,5 cm). Dejar secar en una estufa durante 5 a 7
minutos a una temperatura de 130 ºC. Retirar de la estufa, dejar
enfriar al descubierto en el laboratorio durante dos horas y pesar
con precisión de 10 mg. Moler inmediatamente después, tal como
se indica en 4.1.2 y efectuarla desecación como se indica en
4.2.2.
5.Cálculodelosresultados
El contenido en humedad, en porcentaje de muestra, se calcula con las
fórmulas siguientes:
5.1. Desecación sin predesecación
E/C0m ðÞ /C1 100
E
donde:
E = masa inicial, en gramos, de la muestra,
m = masa, en gramos, de la muestra seca.
5.2.Desecación con predesecación
M0/C0m ðÞ M
M0 þE/C0M/C20/C21
/C1100
E¼100 1 /C0Mm
EM0/C18/C19
donde:
E = masa inicial, en gramos, de la muestra,
M = masa, en gramos de la muestra después de la predesecación,
M′= masa, en gramos, de la muestra después de triturada o molida,
m = masa, en gramos, de la muestra seca.
5.3Repetibilidad
La diferencia entre los resultados de dos determinaciones paralelas efec-
tuadas sobre una misma muestra no deberá exceder del 0,2 % de
humedad.
6.Observación
Cuando resulte necesario efectuar una trituración y ésta implique una varia-
ción del contenido en humedad del producto, los resultados del análisis
relativo a los componentes del alimento deben convertirse con arreglo al
contenido en humedad de la muestra inicial.1971L0393 — ES — 15.12.1972 — 001.001 — 5
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2.DETERMINACIÓNDELASBASESNITROGENADASVOLÁTILES
A. POR MICRODIFUSIÓN
1.Objetivoyámbitodeaplicación
El método permite determinar el contenido en bases nitrogenadas volátiles,
expresadas en amoníaco de los alimentos para animales.
2.Principio
La muestra se extrae con agua, la solución se defeca y se filtra. Las bases
nitrogenadas volátiles se desplazan con una solución de carbonato de potasio
por microdifusión, se recogen en una solución de ácido bórico y se trituran
con ácido sulfúrico.
3.Reactivos
3.1. Solución al 20 % (p/v) de ádico tricloracético.3.2. Indicador: disolver 33 mg de verde de bromocresol y 65 mg de rojo de
metilo en 100 ml de etanol al 95-96 % (v/v).
3.3. Solución de ácido bórico: en un matraz aforado de 1 l, disolver 10 g de
ácido bórico p.a. en 200 ml de etanol al 95-96 % (v/v) y 700 ml de
agua. Añadir10 ml de indicador(3.2). Mezclary ajustarsi fuer a nece-
sario la coloración de la solución al rojo claro por adición de una
solución de hidróxido de sodio. 1 ml de esta solución permite fijar
como máximo 300 µg de NH
3.
3.4. Solución saturada de carbonato de potasio: disolver 100 g de carbonato
de potasio p.a. en 100 ml de agua en ebullición. Dejar enfriar y filtrar.
3.5. Acido sulfúrico 0,02 N.
4.Equipo
4.1. Mezclador (balancín): de aproximadamente 35 a 40 revoluciones por
minuto.
4.2. Celulas de Conway (v. esquema), de vidrio o de material plástico.
4.3. Microburetas, graduadas a 1/100 ml.
5.Métodooperatorio
Pesar, con precisión de 1 mg, 10 g de la muestra e introducirlos en un matraz
aforado de 200 ml con 100 ml de agua. Mezclar durante 30 minutos en el
balancín. Añadir 50 ml de solución ácida tricloroacética (3.1), completar al
volumen con agua, agitar con fuerza y filtrar sobre un filtro de pliegues.
Introducir con la pipeta en la parte central de la célula de Conway 1 ml de
solución de ácido bórico (3.3) y en la corona de la célula 1 ml del filtrado de
la muestra. Cubrir parcialmente con ayuda de una tapadera engrasada. Dejar
caer rápidamente en la corona 1 ml de solución saturada de carbonato de
potasio (3.4) y cerrar la tapadera herméticamente. Remover con precaución
la célula proporcionándole un movimiento de rotación al plano horizontal,
con objeto de garantizar la mezcla de los dos reactivos. Dejar incubar bien
durante cuatro horas por lo menos a la temperatura ambiente, bien durante
una hora a 40 ºC.
Titular las bases volátiles en la solución de ácido bórico con ácido sulfúrico
0,02 N (3.5) empleando una microcubeta (4.3).
Efectuar una prueba en blanco aplicando el mismo método operatorio, sin la
muestra que deba analizarse.
6.Cálculodelosresultados
1m ld eH2SO40,02 N corresponde a 0,34 mg de amoníaco.
Expresar el resultado en porcentaje de la muestra.
Repetibilidad
La diferencia entre los resultados de dos determinaciones paralelas efectuadas
sobre una misma muestra no debe exceder:1971L0393 — ES — 15.12.1972 — 001.001 — 6
▼B
del 10 % en valor relativo para los contenidos en amoníaco inferiores al
1,0 %; 0,1 en valorabsoluto par a los contenidos en amoníaco iguales o supe-
riores al 1,0 %.
7.Observación
Si el contenido en amoníaco de la muestra fuere superior al 0,6 % diluir el
filtrado inicial.1971L0393 — ES — 15.12.1972 — 001.001 — 7
▼B
CÉLULA DE CONWAY
Escala 1/1
1971L0393 — ES — 15.12.1972 — 001.001 — 8
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B. POR DESTILACIÓN
1.Objetivoyámbitoaplicación
El método permite determinar el contenido de bases nitrogenadas
volátiles, expresadas en amoníaco, de las harinas de pescado que no
contengan prácticamente urea. Únicamente es aplicable para contenidos
en amoníaco inferiores al 0,25 %.
2.Principio
La muestra se extrae con agua, la solución se defeca y se filtra. Las bases
nitrogenadas volátiles se desplazan mediante ebullición por adición de
óxido de magnesio y se recogen en una cantidad determinada de ácido
sulfúrico cuyo exceso se titula con una solución de hidróxido de sodio.
3.Reactivos
3.1. solución al 20 % (p/v) de ácido tricloracético.
3.2. Oxido de magnesio p.a.
3.3. Emulsión de antiespuma (porej.: silicona).3.4. Acido sulfúrico 0,1 N.
3.5. Solución de hidróxido de sodio 0,1 N.
3.6. Solución al 0,3 % (p/v) de rojo de metilo en el etanol al 95-96 % (v/
v).
4.Equipo
4.1. Mezclador (balancín): de 35 a 40 revoluciones por minuto aproxima-
damente.
4.2 Aparato de destilación del tipo Kjeldahl.
5.Modooperatorio
Pesar, con precisión de 1 mg, 10 g, de la muestra e introducirlos con
100 ml de agua en un matraz aforado de 200 ml. Mezclar durante 30
minutos en el balancín. Añadir 50 ml de solución de ácido tricloracético
(3.1), completar el volumen con agua, agitar con fuerza y filtrar sobre un
filtro de pliegues.
Tomaruna cantidad de filtr ado límpida en función del contenido supuesto
en bases nitrogenadas volátiles (100 ml son convenientes, en general).
Diluiren 200 ml y añadir2 g de óxido de magnesio (3.2) y algunas gotas
de emulsión antiespuma (3.3). La solución debe seralcalina en el papel de
tornasol; si no lo es, añadir óxido de magnesio (3.2). Destilar 150 ml
aproximadamente de la solución en un aparato del tipo Kjeldahl y recoger
el destilado en un erlenmeyer que contenga un volumen exactamente
medido (25 a 50 ml) de ácido sulfúrico 0,1 N (3.4). Durante la destilación,
evitar un recalentamiento de las paredes. Llevar la solución sulfúrica a
ebullición durante 2 minutos, enfriar y titular el exceso de ácido sulfúrico
con la solución de hidróxido de sodio 0,1 N (3.5) en presencia del indi-
cadoral r ojo de metilo (3.6).
Efectuar un ensayo en blanco aplicando el mismo método operatorio, sin
la muestra que debe analizarse.
6.Cálculodelosresultados
1m ld eH
2SO40,1 N corresponde a 1,7 mg de amoníaco.
Expresar el resultado en porcentaje de muestra.
Repetibilidad
La diferencia entre los resultados de dos determinaciones paralelas efec-
tuades sobre una misma muestra no debe exceder, en valor relativo, del
10 % de amoníaco.1971L0393 — ES — 15.12.1972 — 001.001 — 9
▼B
3.DETERMINACIÓNDELFÓSFOROTOTAL
Método fotométrico
1.Objetivoyámbitodeaplicación
El método permite determinar el contenido en fósforo total de los alimentos
para animales. Está indicado, en particular, para el análisis de los productos
pobres en fósforo. En determinados casos (productos ricos en fósforo), puede
aplicarse un método gravimétrico.
2.Principio
La muestra se mineraliza, bien por vía seca (para los alimentos orgánicos),
bien por vía húmeda (para los compuestos minerales y los alimentos
líquidos) y se pone en solución ácida. La solución de trata con el reactivo
vanado-molíbdico. La densidad óptica de la solución amarilla así formada
se mide en el espectrofotómetro de 430 nm.
3.Reactivos
3.1. Cabarnato de calcio p.a.3.2. Ácido clorhídrico p.a., d: 1,1 (6 N aproximadamente).3.3. Ácido nítrico p.a., d: 1,045.3.4. Ácido nítrico p.a., d: 1,38 a 1,42.3.5. Ácido sulfúrico p.a., d: 1,84.3.6. Reactivo vanado-molíbdico: mezclar200 ml de solución de heptamolib-
dato de amonio (3.6.1), 200 ml de solución de monovanadato de amonio
(3.6.2) y 134 ml de ácido nítrico (3.4) en un matraz aforado de 1 l.
Completarel volumen con agua.
3.6.1. Solución de heptamolibdato de amonio: Disolveren agua caliente
100 g de heptamolibdato de amonio p. a. (NH
4) 6Mo7O24·4H2O.
Añadir10 ml de amoníaco (d: 0,91) y completarhasta 1 l con
agua.
3.6.2. Solución de monovanadato de amonio: Disolveren 400 ml de
agua caliente 2,35 g de monovanadato de amonio p.a. NH4VO3.
Añadirlentamente y agitándolo al mismo tiempo 20 ml de ácido
nítrico diluido (7 ml de HNO3(3.4) + 13 ml de H2O) y completar
a 1 l con agua.
3.7. Solución patrón de 1 mg de fósforo por ml: Disolver en el agua 4,387 g
de dihidrogenofosfato de potasio p.a. KH2PO4. Completarhasta 1 l con
agua.
4.Equipo
4.1. Crisoles de incineración, de cuarzo o porcelana.4.2. Horno para barro eléctrico, provisto de un termostato regulado a 550 ºC.4.3. Matraz de Kjeldahl, 250 ml.4.4. Matraces aforados y pipetas de precisión.4.5. Espectrofotómetro.4.6. Tubos de ensayo, diámetro: 16 mm aproximadamente, de esmerilado
normalizado 14,5; capacidad: 25 a 30 ml.
5.Métodooperatorio
5.1.Preparación de la solución
Según la naturaleza de la muestra, preparar una solución como se indica
en 5.1.1 o 5.1.2.
5.1.1. Caso general
Pesar, con precisión de 1 mg, 1 g o más de la muestra. Introducir
la muestra en un matraz de Kjeldahl, añadir 20 ml de ácido sulfú-
rico (3.5), agitar para impregnar completamente la materia de
ácido y evitar que ésta se adhiera a las paredes del matraz,
calentary mantenerdur ante 10 minutos en ebullición. Dejar
enfriar ligeramente, añadir 2 ml de ácido nítrico (3.4), calentar
suavemente, dejar enfriar ligeramente, añadir de nuevo un poco1971L0393 — ES — 15.12.1972 — 001.001 — 10
▼B
de ácido nítrico (3.4) y llevar a ebullición, añadir un poco de
agua, transvasar el líquido a un matraz aforado de 500 ml enjua-
gando el matraz con agua caliente. Dejar enfriar, completar el
volumen con agua, homogeneizar y filtrar.
5.1.2. Muestras que contengan materias orgánicas y que estén exentas
de dihidrogenofosfatos de calcio y de magnesio
Pesar, con una precisión de 1 mg, 2,5 g aproximadamente de la
muestra en un crisol de incineración. Mezclar íntimamente la
muestra con 1 g de carbonato de calcio (3.1). Calcinar en el
horno a 550 ºC ± 5 ºC hasta obtener cenizas blancas o grises
(una pequeña cantidad de carbón no crea molestias).
Transvasar las cenizas a un vaso de 250 ml. Añadir 20 ml de
agua y de ácido clorhídrico (3.2) hasta que cese la efervescencia.
Añadir a continuación 10 ml de ácido clorhídrico (3.2) en exceso.
Llevar el vaso sobre un baño de arena y evaporar en seco para
insolubilizar la sílice. Recuperar el residuo con 10 ml de ácido
nítrico (3.3) y llevar a ebullición durante 5 minutos sobre el
baño de arena, sin evaporar en seco. Transvasar el líquido a un
matraz aforado de 500 ml enjuagando el vaso varias veces con
agua caliente. Dejar enfriar, completar el volumen con agua,
homogeneizar y filtrar.
5.2.Desarrolo de la coloración y medida de la densidad óptica
Diluir una parte alícuota del filtrado obtenido en 5.1.1 o 5.1.2 para
obtener una concentración en fósforo que alcance como máximo 40 µg/
ml. Introducir 10 ml de dicha solución en un tubo de ensayo (4.6) y
añadir10 ml del r eactivo vanadomolíbdico (3.6). Homogeneizary dejar
reposar 10 minutos por lo menos a una temperatura de 20 ºC. Medir la
densidad óptica mediante el espectrofotómetro a 430 mm por compara-
ción con una solución obtenida poradición de 10 ml del r eactivo
vanadomolíbdico (3.6) en 10 ml de agua.
5.3.Curva de calibrado
Preparar a partir de la solución de calibrado (3.7) soluciones que
contengan respectivamente 5, 10, 20, 30 y 40 µg de fósforo por ml.
Tomar10 ml de cada una de dichas soluciones y añadir10 ml del r eac-
tivo vanadomolíbdico (3.6). Homogeneizary dejarr eposar10 minutos
por lo menos a una temperatura de 20 ºC. Medir las densidades ópticas
en las condiciones indicadas en 5.2.
Trazar la curva de calibrado llevando a la ordenada los valores de la
densidad óptica y a la abscisa las cantidades correspondientes de
fósforo. La curva es lineal para las concentraciones comprendidas entre
0 y 40 µg/ml.
6.Cálculodelosresultados
Determinar la cantidad de fósforo de la toma de muestra refiriéndose a la
curva de calibrado.
Expresar el resultado en porcentaje de muestra.
Repetibilidad
La diferencia entre los resultados de las determinaciones paralelas efectuadas
sobre una misma muestra no debe exceder del:
3 % en valor relativo para los contenidos en fósforo inferiores al 5 %;
0,15 en valor absoluto para los contenidos en fósforo iguales o superiores al
5% .
4.DETERMINACIÓNDELASMATERIASGRASASBRUTAS
1.Objetivoyámbitodeaplicación
El método permite determinar el contenido en materias grasas brutas de los
alimentos para animales. No se refiere al análisis de las semillas y frutos
oleaginosos definidos en el Reglamento 136/66/CEE del Consejo, de 22 de
septiembre de 1966. La determinación del contenido en aceite de dichos
productos está regulada en el Anexo V del Reglamento (CEE) no1470/68
de la Comisión, de 23 de septiembre de 1968.
Se prevén dos procedimientos, en función de la naturaleza del alimento.1971L0393 — ES — 15.12.1972 — 001.001 — 11
▼B
1.1.Procedimiento A (extracto etéreo): aplicado a todos los alimentos salvo
a los mencionados en 1.2.
1.2.Procedimiento B: aplicado a los alimentos cuyas materias grasas no
puedan ser extraídas totalmente por el éter dietílico sin hidrólisis previa,
a los alimentos de oxígeno animal, gluten, pulpas de patata desecadas,
residuos desecados de cervecería y de la destilería, levaduras desecadas,
desechos de galletería, de pan y alimentos cocidos, productos lácteos y
alimentos que contengan una elevada proporción de los mismos (al
menos en 40 %) y a los piensos compuestos enriquecidos en grasas.
2.Principio
2.1.Procedimiento A: Las materias grasas se extraen con éter dietílico. El
disolvente se elimina y el residuo se seca y se pesa.
2.2.Procedimiento B: La muestra se hidroliza en frío mediante ácido clorhí-
drico. La solución se enfría y se filtra. El residuo, lavado y secado, se
somete a la extracción con éter dietílico según el procedimiento A.
3.Reactivos
3.1. Éter dietílico, anhidro, d: 0,720, 34,5 ºC prácticamente exento de paró-
xidos.
3.2. Sulfato de sodio, p.a., anhidro.
3.3. Ácido clorhídrico 3 N.
3.4. Adyuvante de filtración, por ej. tierra de diatomeas, Hiflo-supercel.3.5. Tetracloruro de carbono p.a.
4.Equipo
4.1. Extractor según Soxhlet o aparato equivalente.
4.2. Aparato de calentamiento a temperatura regulable, anti-deflagrante.
4.3. Estufa de desecación por vacío (menos de 100 Torrs).
5.Métodooperatorio
5.1.Procedimiento A (verobser vación 7.1)
Pesar, con precisión de 1 mg, 5 g de la muestra y mezclarlos con 2 a 3 g
(o más, si fuere necesario) de sulfato de sodio anhidro (3.2). Introducir
la mezcla en un cartucho de extracción exento de materias grasas y
recubrir con un tampón de algodón desgrasado. (La mezcla puede
hacerse, si llega el caso, en el cartucho.)
Colocar el cartucho en un extractor (4.1) y extraer durante seis horas
mediante el éterdietílico (3.1). Si se emplea un extr actorde Soxhlet,
regular el calentamiento para obtener 15 sifonados por lo menos por
hora. Recoger el extracto etéreo en un matraz seco, provisto de algunos
fragmentos de piedra póme (
1) y tarado.
Eliminarel éterpordestilación y secara continuación el r esiduo de
evaporación durante una hora y media en la estufa de desecación al
vacío (4.3) a temperatura de 75 ºC. Enfriar en un desecador y pesar.
Efectuar una segunda desecación durante 30 minutos para asegurarse
de que el peso de la materia grasa se mantiene constante (la pérdida de
peso debe serinfer iora 1 mg).
5.2.Procedimiento B
Pesar, con precisión de 1 mg, 2,5 g de la muestra (ver observación 7.2)
e introducirlos en un vaso de 400 ml o en un erlenmeyer de 300 ml.
Añadir 100 ml de ácido clorhídrido 3 N (3.3) y algunos fragmentos de
piedra pómez. Volver a tapar el vaso con un cristal de reloj o dotar el
erlenmeyer de un refrigerante de reflujo. Llevar la mezcla a ebullición
suave, con una pequeña llama o una placa calorífera, y mantenerla
durante una hora. Evitar que el producto se adhiera a las paredes del
recipiente.1971L0393 — ES — 15.12.1972 — 001.001 — 12
(1) Sustituir los fragmentos de piedra pómez por partes de cristal cuando la materia grasa
deba serobjeto de exámenes cualitativos poster ior es.
▼B
Enfriar y añadir una cantidad de adyuvante de filtración (3.4) suficiente
para evitar cualquier pérdida de materia grasa al realizar la filtración.
Filtrar sobre un papel de filtro doble humedecido, exento de materias
grasas. Lavar el residuo con agua fría hasta que desaparezca la reacción
ácida. Comprobar que el filtrado no contiene materias grasas. La
presencia de éstas en el filtrado indica que debe efectuarse antes de la
hidrólisis una extracción de la muestra con éter dietílico, según el proce-
dimiento indicado en 5.1.
Colocar el papel de filtro doble que contiene el residuo sobre un cristal
de reloj y secar durante una hora y media en la estufa a la temperatura
de 95 a 98 ºC.
Introducir el doble filtro y el residuo seco en el cartucho de extracción,
extraer con éter dietílico y continuar el método operatorio tal como se
indica en el párrafo segundo del punto 5.1.
6.Cálculodelosresultados
Expresar el resultado en porcentaje de muestra.
Repetibilidad
La diferencia entre los resultados de dos determinaciones paralelas efectuadas
sobre una misma muestra no debe rebasar el 0,3 % de materia grasa.
7.Observaciones
7.1. Para los productos de elevado contenido en materias grasas, difíciles de
triturar o no apropiadas para la toma de una muestra reducida homo-
génea, proceder como se indica. Pesar, con precisión de 1 mg, 20 g de
la muestra y mezclarlos con 10 g o más de sulfato de sodio anhidro
(3.2). Proceder a la extracción con éter dietílico (3.1) como se indica
en 5.1. Completar el extracto obtenido hasta 500 ml con un tetracloruro
de carbono (3.5) y homogeneizar. Tomar 50 ml de la solución y colo-
carlos en un pequeño matraz seco, provisto de algunos fragmentos de
piedra pómez (1) y tarado. Eliminar el disolvente mediante destilación,
secary continuarcon el método del pr oducto 5.1. Eliminarel disolvente
del residuo de extracción que se encuentre en el cartucho y triturar el
residuo con una finura de 1 mm. Colocar de nuevo el producto en el
cartucho de extracción (no añadir sulfato de sodio), extraer mediante
éter dietílico y continuar con el método operatorio tal como se indica
en los párrafos segundo y tercero del punto 5.1.
Calcular el resultado en porcentaje de muestra, teniendo en cuenta la
parte alícuota empleada al realizar la primera extracción de acuerdo
con la fórmula siguiente:
(10 a + b) · 5
enlaque:
a) = extracto etéreo en gramos de la parte alícuota, tras la primera
extracción,
b) = extracto etéreo en gramos tras la segunda extracción.
7.2. La muestra de los productos pobres en materias grasas y puede aumen-
tarse a 5 g.1971L0393 — ES — 15.12.1972 — 001.001 — 13
(1) Sustituir los fragmentos de piedra pómez por perlas de cristal cuando la materia grasa
debe ser objeto de exámenes cualitativos ulteriores.