1987R4154 — ES — 18.02.1998 — 001.001 — 1
Estedocumentoesuninstrumentodedocumentaciónynocomprometelaresponsabilidaddelasinstituciones
►B REGLAMENTO(CEE)No4154/87DELACOMISIÓN
de22dediciembrede1987
porelquesedefinenlosmétodosdeanálisisyotrasdisposicionesdecaráctertécniconecesarios
para la aplicación del Reglamento (CEE) no3033/80 del Consejo por el que se determina el
régimendeintercambiosaplicableadeterminadasmercancíasresultantesdelatransformación
(DO L 392 de 31.12.1987, p. 19)
Modificado por:
Diario Oficial
nopágina fecha
►M1Reglamento (CE) no203/98 de la Comisión de 26 de enero de 1998 L 21 6 28.1.1998
▼B
REGLAMENTO(CEE)No4154/87DELACOMISIÓN
de22dediciembrede1987
porelquesedefinenlosmétodosdeanálisisyotrasdisposiciones
de carácter técnico necesarios para la aplicación del Reglamento(CEE)n
o3033/80delConsejoporelquesedeterminaelrégimen
de intercambios aplicable a determinadas mercancías resultantes
delatransformación
LA COMISIÓN DE LAS COMUNIDADES EUROPEAS;
Visto el Tratado constitutivo de la Comunidad Económica Europea,
Visto el Reglamento (CEE) no2658/87 del Consejo, de 23 de julio de
1987, relativo a la nomenclatura aranceleria y estadística y al aranceladuanero común(
1) modificado por el Reglamento (CEE) no3985/
87(2), y en particular, su artículo 9,
Considerando que el Reglamento (CEE) no1061/69 de la Comisión(3),
cuya última modificación la constituye el Reglamento (CEE) no1822/
86(4), define losmétodosde anális ispara la aplicación del Reglamento
(CEE) no1059/69 del Consejo(5); que el Reglamento (CEE) no1059/69
ha sido derogado y sustituido por el Reglamento (CEE) no3033/80 del
Consejo(6), cuya última modificación la constituye el Reglamento
(CEE) no3743/87(7);
Considerando que, en lo que se refiere a las importaciones, las modali-
dadesde aplicación del Reglamento (CEE) no3033/80 se establecen en
el Reglamento (CEE) no3034/80 del Consejo, de 11 de noviembre de
1980, por el que se determinan las cantidades de productos de base quese consideran incluidas en la fabricación de mercancías reguladas porel Reglamento (CEE) n
o3033/80 y por el que se modifica el Regla-
mento (CEE) no950/68 relativo al arancel aduanero común(8), cuya
última modificación la constituye el Reglamento (CEE) no4091/87(9);
Considerando que con el fin de tener en cuenta la evolución científica
y técnica de los métodos de análisis y continuar asegurando un trata-
miento uniforme a la importación en la Comunidad de lasmercancíasa lascualess e aplica el Reglamento (CEE) n
o3033/80, procede derogar
y sustituir el Reglamento (CEE) no1061/69;
Considerando que las medidas previstas en el presente Reglamento se
ajustan al dictamen del Comité de nomenclatura,
HA ADOPTADO EL PRESENTE REGLAMENTO:
Artículo 1
El presente Reglamento define los métodos de análisis comunitarios
necesarios para la aplicación de los Reglamentos (CEE) no3033/80
(en lo que se refiere a las importaciones) y (CEE) no3034/80 o, en su
defecto, la naturaleza de lasoperacionesanalíticasque deberán efec-tuarse o el principio de un método que deberá aplicarse.
Artículo 2
De acuerdo con lasdefinicionesque s e incluyen en el Anexo III del
Reglamento (CEE) n
o3034/80 sobre el contenido en almidón/glucosa
y el contenido en sacarosa/azúcar invertido/isoglucosa, y para la aplica-1987R4154 — ES — 18.02.1998 — 001.001 — 2
(1)D O noL 256 de 7. 9. 1987, p. 1.
(2)D O noL 376 de 31. 12. 1987, p. 1.
(3)D O noL 141 de 12. 6. 1969, p. 24.
(4)D O noL 158 de 13. 6. 1986, p. 1.
(5)D O noL 141 de 12. 6. 1969, p. 1.
(6)D O noL 323 de 29. 11. 1980, p. 1.
(7)D O noL 352 de 15. 12. 1987, p. 29.
(8)D O noL 323 de 29. 11. 1980, p. 7.
(9)D O noL 382 de 31. 12. 1987, p. 27.
▼B
ción de los Anexos II y III de este mismo Reglamento, se utilizarán las
fórmulas, procedimientos y métodos siguientes:
1.Contenido en almidón/glucosa:
(expresado en almidón 100 %, producto seco, sobre la mercancía tal
como se presenta)
a) (Z − F) × 0,9,
cuando el contenido en glucosa sea superior o igual al de fruc-
tosa,
b) (Z − G) × 0,9,
cuando el contenido en glucosa sea inferior al de fructosa,
donde:
Z = contenido en glucosa determinado por el método descrito en
el Anexo I del presente Reglamento;
F = contenido en fructosa determinado por HPLC (cromatografía
líquida de alta precisión);
G = contenido en glucosa determinado por HPLC
En el caso del punto 1 letra a), si se declara la presencia de un
hidrolizado de lactosa y/o se descubren cantidades de lactosa y degalactosa, un contenido en glucosa (determinado por HPLC), equi-
valente al de galactoza (determinado por HPLC) se deducirá del
contenido de glucosa (Z) antes de efectuar cualquier cálculo.
2.Contenido en sacarosa/azúcar invertido/isoglucosa:
expresado en sacarosa, sobre la mercancía tal como se presenta)
a) S + (2F) × 0,95,
cuando el contenido en glucosa sea superior o igual al de fruc-
tosa,
b) S + (G + F) × 0,95,
cuando el contenido en glucosa sea inferior al de fructosa,
donde:
S = contenido en sacarosa determinado por HPLC (cromato-
grafía líquida de alta precisión);
F = contenido en fructosa determinado por HPLC;
G = contenido en glucosa determinado por HPLC.
Si se declara la presencia de un hidrolizado de lactosa y/o se descu-
bren cantidades de lactosa y de galactosa, un contenido en glucosa,
equivalente al de galactosa (determinado por HPLC) se deducirá delcontenido de glucosa (G) antes de efectuar cualquier cálculo.
3.Contenido en materias grasas de leche:
a) Sin perjuicio de lo dispuesto en la letra b) del punto 2, el conte-
nido en peso de materias grasas de leche de la mercancía tal
como se presenta se determinará mediante la extracción con éterde petróleo trashidrólis iscon ácido clorhídrico.
b) Si en la composición de la mercancía se declaran además de las
materias grasas de leche, otras materias grasas distintas de las deleche se aplicará el procedimiento siguiente:
— El contenido en peso en (%) en materia grasa (total) de la
mercancía tal como se presenta se determinará tal como seindica en la letra a).
— Para la determinación de lasmateriasgras asprocedentesde la
leche, se aplicará un método que utilice la extracción con éterde petróleo, precedido por una hidrólisis por ácido clorhídricoy seguido por cromatografía en fase gaseosa de los ésteres
metílicos de los ácidos grasos. Siempre que se descubra
presencia de materia grasa procedente de la leche, su porcen-taje se calculará multiplicando el porcentaje de butirato demetilo por 25 y el valor así obtenido se multiplicará por elcontenido total en peso en % de materia grasa de lamercancía tal como se presenta y dividido por 100.1987R4154 — ES — 18.02.1998 — 001.001 — 3
▼M1
▼B
4. Contenido en proteínasde leche:
a) Sin perjuicio de lo dispuesto en la letra b) de este punto, el
contenido en proteínasde leche de la mercancía tal como s epresenta se calculará multiplicando el contenido en nitrógeno
(determinado por el método Kjeldahl) por el factor 6,38.
b) Si en la composición de la mercancía se declaran además de las
proteínasde leche, otroscomponentesque contengan proteínas
distintas de las proteínas de leche:
— El contenido en nitrógeno total (en porcentaje en peso) se
determinará por el método Kjeldahl.
— El contenido en proteínas de leche se calculará tal como se
indica en la letra a) restando del contenido en nitrógeno total
(en porcentaje en peso) el contenido en nitrógeno correspon-
diente a lasproteínasdis tintasde lasde leche.
Artículo 3
Para la aplicación del Anexo I del Reglamento (CEE) n
o3034/80 se
utilizarán los métodos y/o procedimientos siguientes:
1. Para lasclas ificación de losproductosincluidosen lass ubpartidas
0403 10 51 a 0403 10 59, 0403 10 91 a 0403 10 99, 0403 90 71 a
0403 90 79, 0403 90 91 y 0403 90 99 de la nomenclatura combi-nada, la determinación del contenido en peso de las materias grasasprocedentes de leche se efectuará según el método descrito en elpunto 3 del artículo 2.
2. Para la clasificación de los productos incluidos en las subpartidas
1704 10 11 a 1704 10 19 y 1905 20 10 a 1905 20 90 de la nomencla-tura combinada, la determinación de la sacarosa, incluido el azúcar
invertido calculado en sacarosa se efectuará según un método
HPLC: Por azúcar invertido calculado en sacarosa se entenderá lasuma aritmética de los contenidos en glucosa y fructosa en partesigualesmultiplicado por 0,95.
3. Para la clasificación de los productos incluidos en las subpartidas
1806 10 10 a 1806 10 90 de la nomenclatura combinada, la determi-nación de la sacarosa/azúcar invertido/isoglucosa, se efectuará según
las fórmulas, método y procedimientos que se mencionan en el
punto 2 del artículo 2.
4. Para la clasificación de los productos incluidos en las subpartidas
3505 20 10 a 3505 20 90 de la nomenclatura combinada, la determi-nación del almidón o fécula, de dextrinaso de otrosalmidonesoféculas modificadas se efectuará según el método que se indica enel Anexo II.
5. Para la classificación de los productos incluidos en las subpartidas
3809 10 10 a 3809 10 90 de la nomenclatura combinada, la determi-
nación de materias amiláceas se efectuará según el método que seindica en el Anexo II.
6. Para la clasificación de los productos incluidos en las subpartidas
1901 90 11 y 1901 90 19 de la nomenclatura combinada, la distin-ción entre las dos subpartidas se hará sobre la base de ladeterminación del extracto seco que se haya efectuado mediante
secado a la temperatura de 103 ± 2 ºC hasta peso constante.
7. Para la clasificación de los productos en las subpartidas 1902 19 10
y 1902 19 90 de la nomenclatura combinada, la presencia de harinas
y sémolas de trigo blando en las pastas alimenticias se averiguarásegún el método que se indica en el Anexo III.
8. El contenido en manitol y en D-glucitol (sorbitol) de las mercancías
de lass ubpartidas2905 44 11 a 2905 44 99 y 3823 60 11 a3823 60 99, de la nomenclatura combinada se determinará según unmétodo basado en la cromatografía líquida de alta precisión
(HPLC).
Artículo 4
1. Se establecerá un boletín de análisis.1987R4154 — ES — 18.02.1998 — 001.001 — 4
▼B
2. El boletín de análisis deberá contener en particular:
— todaslasindicacionesrelativasa la identificación de la mues tra.
— el método comunitario utilizado y la referencia exacta del texto
legal correspondiente; o, en su caso la referencia a un método deta-llado que reseñe la naturaleza de las operaciones analíticas quedeberán efectuarse o el principio de un método que deberá apli-
carse, indicados en el presente Reglamento;
— los elementos que puedan haber influido en los resultados;
— los resultados del análisis habida cuenta de su expresión en el
método utilizado y de la expresión dictada las necesidades de los
servicios aduaneros o de gestión que hayan solicitado el análisis.
Artículo 5
Queda derogado el Reglamento (CEE) n
o1061/69.
Artículo 6
El presente Reglamento entrará en vigor el 1 de enero de 1988.
El presente Reglamento será obligatorio en todos sus elementos y
directamente aplicable en cada Estado miembro.1987R4154 — ES — 18.02.1998 — 001.001 — 5
▼B
ANEXO I
DETERMINACIÓN DEL CONTENIDO EN PESO DE ALMIDÓN, SUS
PRODUCTOSDEDEGRADACIÓNINCLUIDALAGLUCOSA
1.Objetoyámbitodeaplicación
a) El método permite determinar el contenido en peso de almidón o
fécula, sus productos de degradación incluida la glucosa, abajo
llamada «almidón».
b) El contenido en peso de «almidón» es igual al valor E tal como se
calcula en el punto 6.
2.Principio
La muestra se desagrega con hidróxido de sodio y se escinde el
«almidón» en unidades de glucosa con amiloglucosidasa. La dosificación
de la glucosa se efectúa por vía enzimática.
3.Reactivos
Se utilizará agua bidestilada.
3.1. Disolución de hidróxido de sodio 0,5 N (0,5 mol/l).
3.2. Ácido acético (glacial) al 96 %, como mínimo.
3.3. Disolución de la amiloglucosidasa:
Inmediatamente antes de la utilización, se disuelven aproximadamente 10
mg de amiloglucosidasa (EC 3.2.1.3) (6 U/mg) en 1 ml de agua(1).
3.4. Tampón trietanolamina:
Se disuelven 14,0 g de clorhidrato de trietanolamina cloruro de tris (2-
hidroxiethil) amonio y 0,25 g de sulfato de magnesio (MgSO47H2O) en
80 ml de agua; se le añadirán aproximadamente 5 ml de disolución de
hidróxido de sodio 5 N (5 mol/l) y se ajustan a pH 7,6 mediante una diso-
lución de hidróxido de sodio 1 N (1 mol/l). Se completa hasta 100 ml con
agua bidestilada. Dicho tampón se conservará a + 4 ºC durante 4
semanas, como mínimo.
3.5. Disolución de NADP (Nicotinamida Adenina Dinicleotida fosfato, sal
disódica):
Se disuelven 60 mg de NADP en 6 ml de agua. Esta disolución se
conservará a + 4 ºC durante 4 semanas, como mínimo.
3.6. Disolución de ATP (Adenosina-5'-trifosfato, sal disódica):
Se disuelven 300 mg de ATP 3H2O y 300 mg de hidrogenocarbonato de
sodio (NaHCO3) en 6 ml de agua. Esta disolución se conservará a + 4 ºC
durante 4 semanas, como mínimo.
3.7. Suspensión de HK/G6P-DH (Hexokinasa-EC 2.7.1.1) y de glucosa-6-
fosfato deshidrogenasa (EC 1.1.1.49):
Se ponen en suspensión 280 U de HK y 140 U de G6P-DH en 1 ml de
disolución de sulfato de amonio (c = 3,2 mol/l). Esta suspensión se
conservará a + 4 ºC durante un año, como mínimo.
4.Equipo
4.1. Agitador magnético con baño maría a 60 ºC.
4.2. Barrillasmagnéticas .
4.3. Espectrofotómetro UV provisto de cubetas de 1 cm.4.4. Pipetaspara el anális isenzimático.1987R4154 — ES — 18.02.1998 — 001.001 — 6
(1) U esla unidad internacional de la actividad enzimática.
▼B
5.Métodooperativo
5.1.Desagregación mediante hidróxido de sodio e hidrólisis enzimática del
almidón:
5.1.1. Según el presunto contenido de «almidón», elíjanse las siguientes pesadas
(el contenido en «almidón» no debería superar 0,4 g por pesada):
Presunto contenido de
«almidón» del producto
en 100 gPesada aproximativa (p)
en gVolumen del matraz
aforado
en mlFactor de dilución hasta
el litro
(f)
> 70 0,35-0,4 500 2
20-70 máx 0,5 500 2
5-20 máx 1 250 4
< 5 máx 2 200 5
5.1.2. Se pesa (con una precisión de 0,1 mg) la muestra
5.1.3. Se añaden 50 ml de disolución de hidróxido de sodio 0,5 N (3.1) y se
mantiene bajo agitación continua durante 30 minutosen el baño maría
del agitador magnético (4.1) a 60 ºC.
5.1.4. Se ajusta a pH 4,6 a 4,8 con algunos ml de ácido acético concentrado
(3.2).
5.1.5. Se coloca en el baño maría del agitador magnético (4.1) a 60 ºC, se añade
1,0 ml de la disolución de la enzima (3.3) y se deja reaccionar durante 30
minutos, bajo agitación.
5.1.6. Después de enfriar, se transvasa al mencionado matraz aforado (5.1.1) y
se rellena hasta la marca con agua.
5.1.7. En caso necesario se filtra a través de un filtro plegado (véase más abajo
observación 1).
5.2.Dosificación de la glucosa:
5.2.1. La disolución de ensayo debe contener de 100 a 1 000 mg de glucosa por
litro, lo que corresponde a un ∆Ε340que se sitúa entre 0,1-1,0.
La disolución de ensayo diluida en una proporción de 1 + 30 con el agua
no debe presentar a 340 nm, una absorbancia superior a 0,4 (medida en
comparación con el aire).
5.2.2. Se lleva el tampón (3.4) hasta la temperatura ambiente (20 ºC).5.2.3. La temperatura de la reacción y de la muestra deberá estar comprendida
entre 20 y 25 ºC.
5.2.4. Se mide la absorbancia a 340 nm en comparación con el aire (sin cubeta
en el trayecto óptico de referencia).
5.2.5. Pipeteado según el esquema indicado a continuación:
Introducción en lascubetas Referencia (ml)Prueba
(ml)
Tampón (reactivo 3.4) 1,00 1,00
NADP ( reactivo 3.5) 0,10 0,10ATP (reactivo 3.6) 0,10 0,10Disolución de prueba (5.1.6 o
7)— 0,10
Agua bidestilada 2,00 1,90
Se mezcla y al cabo de aproximadamente 3 min se mide la absorbancia de las disoluciones
(E
1). Se provoca la reacción añadiendo:
HK/G6P-DH (reactivo 3.7) 0,02 0,021987R4154 — ES — 18.02.1998 — 001.001 — 7
▼B
Introducción en lascubetas Referencia (ml)Prueba
(ml)
Se mezcla, se espera que se termine la reacción (aproximadamente 15 minutos) y se mide la
absorbancia de las disoluciones (E2). Se tienen en cuenta posibles reacciones secundarias. Si
la reacción no se ha terminado después de 15 minutos se continúa leyendo las absorbancias
cada 5 minutos hasta que el aumento de la absorbancia sea constante en 5 minutos y, a conti-
nuación, se extrapola la absorbancia al tiempo de la adición de la suspensión 3.7 (véase más
abajo observación 2).
5.2.6. Para la referencia de la prueba, se calcula la diferencia de absorbancia E2—E1. Se sustrae la diferencia de absorbancia de la referencia de la
prueba (= ∆Ε):
∆Ε=∆Εprueba−∆Εreferencia
A partir de esta diferencia, se obtiene el contenido en glucosa de la diso-
lución de prueba:
Contenido en glucosa, en g/l de disolución de prueba
Gl¼3;22/C2180 ;16
6;3/C21/C20;1/C21000/C2∆Ε340¼0;921/C2∆Ε340
[3,22: volumen de la solución para medir (ml); 1: trayectoria de la luz en
el recipiente (cm); 0,1: volumen de la solución de la muestra (ml); Masa
molecular de glucosa = 180,16]
5.2.7. Si la medida de la absorbancia a 340 nm no fuera posible, la medida
podrá efectuarse a la longitud de onda de 365 nm o 334 nm. En este
caso la cifra 6,3 de la fórmula Gl anterior se sustituirá por la cifra 3,5 o
6,18, respectivamente.
6.Cálculodelcontenidoen«almidón»(E)oen«glucosa»(Z):
a) Contenido en «almidón» (E) en g/100 g:
E¼100/C20;9/C2Glu
p/C2f
b) contenido en «glucosa» (Z) en g/100 g:
Z¼100/C2Glu
p/C2f
donde:
Glu = glucosa, en g/l (5.2.6);
f = factor de dilución (5.1.1);p = pesada de la muestra, en g;0,9 = factor de conversión de la glucosa en el almidón.
Observaciones
1. En caso de constatar que no se puede filtrar la solución según 5.1.7, el
químico debe tomar lasmedidasapropiadas .
2. En caso de constatar una inhibición de las enzimas, se aconseja utilizar el
método de «adiciones» utilizando almidón puro.1987R4154 — ES — 18.02.1998 — 001.001 — 8
▼B
ANEXO II
DETERMINACIÓN DEL CONTENIDO EN ALMIDÓN O FÉCULA,
DEXTRINA U OTROS ALMIDONES Y FÉCULAS MODIFICADOS,
CONTENIDOS EN LAS MERCANCÍAS DE LAS SUBPARTIDAS
35052010 A 35052090 DE LA NOMENCLATURA COMBINADA, ASÍ
COMOENMATERIASAMILÁCEASCONTENIDASENLASMERCAN-
CÍAS DE LAS SUBPARTIDAS 38091010 A 38091090 DE LA
NOMENCLATURACOMBINADA
I.Principio
Por hidrólisis ácida, el almidón se transforma en azúcares reductores, que se
valoran volumétricamente con licor de Fehling.
II.Materialyreactivos
1. Matraz de 250 ml aproximadamente;
2. Matraz aforado de 200 ml;3. Bureta graduada de 25 ml;
4. Ácido clorhídrico de densidad 1,19;
5. Disolución de potasa cáustica;6. Carbón decolorante;
7. Licor de Fehling;
8. Disolución de azul de metileno al 1 %.
III.Métodooperativo
En un matraz de unos 250 ml, se introduce una muestra correspondiente a
una cantidad de almidón aproximadamente de 1 gramo. Se añaden 100 ml
de agua destilada y 2 ml de ácido clorhídrico. Se calienta hasta la ebullición
a reflujo durante 3 horas.
Se trasvasa el contenido del matraz, así como el producto del enjuagado a
un matraz aforado de 200 ml y se añade la disolución de potasa cáustica
hasta reacción ligeramente ácida. Se lleva con agua destilada a 200 ml y
se filtra el total con un poco de carbón decolorante.
Acto seguido, se vierte la disolución en una bureta graduada y se reducen
10 ml de licor de Fehling por el método siguiente:
En un matraz de fondo plano de aproximadamente 250 ml, se vierten 10 ml
de licor de Fehling (5 ml de disolución A y 5 ml de disolución B). Se agita
hasta obtener una solución clara, después se añaden 40 ml de agua desti-
lada, así como una pequeña cantidad de cuarzo o de piedra pómez.
Se coloca el matraz sobre una placa de amianto de forma cuadrada perfo-
rada en su centro con una abertura circular de 6 cm de diámetro,
aproximadamente, que descanse sobre una tela metálica. Se calienta el
matraz de manera que el líquido comience a hervir al cabo de 2 minutos
aproximadamente.
Con una bureta, se añaden al liquido hirviendo, cantidades sucesivas de la
disolución azucarada hasta que el color azul del licor de Fehling sea apenas
perceptible: se añaden entonces, como indicador, 2 o 3 gotasde la dis olu-
ción de azul de metileno y después se completa la valoración añadiendo
gota a gota una nueva cantidad de disolución azucarada hasta que desapa-
rezca el color azul del indicador.
Para mayor precisión, se repite la valoración en las mismas condiciones
añadiendo, sin embargo, de una sola vez, la casi totalidad de la solución
azucarada necesaria para la reducción del licor de Fehling. En esta segunda
valoración, la reducción del licor de Fehling deberá hacerse en un período
de 3 minutos.
Continuar la ebullición durante exactamente 2 minutos. Efectuar la valora-
ción añadiendo gota a gota durante el tercer minuto hasta que desaparezca
el color azul del indicador.
El porcentaje en peso de almidón de la muestra se determinará por medio
de la fórmula siguiente:
almid´on %¼
T/C2200/C2100
n/C2p/C20;951987R4154 — ES — 18.02.1998 — 001.001 — 9
▼B
en la cual:
T: representa la cantidad en gramos de dextrosa anhidra correspon-
diente a 10 ml de licor de Fehling (5 ml de disolución A + 5 ml
de disolución B). Este valor es de 0,04945 g de dextrosa anhidra
cuando la solución A contenga 17,636 g de cobre por litro;
n: representa el número de ml de la solución azucarada utilizada para
la valoración;
p: representa el peso de la muestra de ensayo;0,95: representa la relación de conversión de la dextrosa anhidra en
almidón.
IV.PreparacióndellicordeFehling
Disolución A: En un matraz aforado, se disuelven en agua destilada
69,278 g de sulfato de cobre cristalizado puro para
análisis (CuSO
4·5H2O) exento de hierro y se completa
la disolución con agua destilada hasta un volumen de un
litro. La concentración exacta de esta disolución deberá
comprobarse por medio de una determinación cuantitativa
del cobre.
Disolución B: En un matraz aforado se disuelven en agua destilada 100
g de hidróxido de sodio y 346 g de tartrato doble de sodio
y de potasio (sal de Seignette) y se completa la disolución
con agua destilada hasta un volumen de un litro.
Las dos disoluciones A y B deberán mezclarse en volumenes iguales, inme-
diatamente antesde la utilización. Si s e trabaja en lascondicionesindicadas
en III, 10 ml de licor de Fehling (5 ml de disolución A + 5 ml de disolución
B) serán reducidos completamente por 0,04945 g de dextrosa anhidra.1987R4154 — ES — 18.02.1998 — 001.001 — 10
▼B
ANEXO III
DETECCIÓN DE LA PRESENCIA DE HARINA O DE SÉMOLA DE
TRIGOBLANDOENLASPASTASALIMENTICIAS
(por el método Young y Gilles, modificado por Bernaerts y Gruner)
I.Principio
Utilizando un disolvente no polar, se preparará un extracto de la muestra de
las pastas alimenticias.
Este extracto se someterá a cromatografía en capa fina de gel de sílice, de
manera que se separen, en forma de bandas, los esteroles presentes en las
diferentesfracciones .
Según el número de bandas intensas reveladas, se podrá determinar si el
producto examinado se ha fabricado, bien exclusivamente a partir de trigo
duro o de trigo blando, o bien a partir de una mezcla de estos dos
productos. Es igualmente posible determinar si se han añadido huevos a
estas primeras materias.
II.Materialyreactivos
1. Homogeneizador o triturador que permita obtener un producto que pase
a travésde un tamiz normalizado con una abertura de mallasde 0,2
mm.
2. Tamiz normalizado con una abertura de mallasde 0,2 mm;
3. Evaporador a presión reducida con baño maría.;4. Placa de vidrio, hoja de aluminio u otro soporte apropiado de 20 cm x
20 cm recubierto de una capa fina de gel de sílice. Si se prepara uno
mismo la capa fina, se utilizará gel de sílice mezclado aproximada-
mente con 13 % de yeso y se aplicará sobre la placa de vidrio en capa
de 0,25 mm con un instrumento adecuado y siguiendo las instrucciones
del fabricante.
5. Micropipeta que permita medir 20 microlitros.
6. Cubeta con tapa adecuada para revelar crómatogramas.7. Atomizador.8. Éter de petróleo con punto de ebullición comprendido entre 40 y 60 º C
redestilado antes de emplearlo.
9. Éter etílico anhídrido p. a.
10. Tetracloruro de carbono para cromatografía redestilado antes de
emplearlo.
11. Ácido fosfomolibdico p. a.
12. Alcohol etílico 94º.
III.Métodooperativo
Se muelen unos veinte gramos de la muestra de manera que pasen en su
totalidad a travésdel tamiz. Se introduce la mues tra molida en un matraz
Erlenmeyer y se recubre con 150 ml de éter de petróleo. Se deja a la tempe-
ratura ambiente hasta el día siguiente. Se agita de vez en cuando
Se filtra después en el embudo B όchner provisto de una capa de adyuvante
de la filtración o sobre filtro plegado. La solución límpida obtenida se tras-
vasa, poco a poco, a un matraz tarado de 100 ml. Se evapora el disolvente a
presión reducida calentando el matraz al baño maría a 40—50 ºC. Después
de la evaporación del disolvente, se sigue calentando a presión reducida
durante 10 minutos.
Después de enfriar el matraz, se determina el peso del extracto. Se diluye el
extracto en éter etílico a razón de 1 ml de éter etílico por 60 mg de
extracto.
Se activan lascapasfinascalentándolasa 130 ºC durante 3 horas . Se deja
enfriar en un desecador que contenga gel de sílice. Las placas que no se
vayan a utilizar inmediatamente se conservarán en el mismo desecador.
Se aplican sobre una capa, preferentemente recién activada, 20 microlitros
de la solución límpida en forma de una banda de ancho constante de 3 cm
de larga formada por gotitas yuxtapuestas y se deja evaporar el disolvente.1987R4154 — ES — 18.02.1998 — 001.001 — 11
▼B
Se desarrolla el cromatograma a la temperatura ambiente con el tetracloruro
de carbono utilizando una cubeta cromatográfica recubierta en lasparedes
de papel filtro empapado de disolvente. Después de una hora aproximada-
mente, el disolvente habrá alcanzado una altura de 18 cm. Se quita la placa
y se deja evaporar el disolvente al aire. Se desarrolla por segunda vez el
cromatograma con el fin de separar mejor las bandas y se deja evaporar de
nuevo el disolvente al aire.
Se atomiza la capa fina de gel de sílice con una disolución de 20 % de
ácido fosfomolíbdico en alcohol etílico. El color de la capa debe ser unifor-
memente amarillo. Se revelan lasbandasmanteniendo la placa atomizada
durante 5 minutosa 110 ºC.
IV.Interpretacióndelcromatograma
Si el cromatograma presenta una sola banda principal intensa con un Rf de
aproximadamente 0,4—0,5, el trigo utilizado para la fabricación de la pasta
alimenticia estrigo duro. Si, por el contrario, aparecen dosbandasprinci-
pales, de igual intensidad, la materia prima utilizada es trigo blando. Las
mezclasde trigo duro y de trigo blando pueden apreciars e valorando la
intensidad relativa de las, dos bandas.
Si se observa la presencia de tres bandas (dos bandas a la altura de las
bandaspricipalesdel trigo blando, másuna banda intermedia), hay adición
de huevos a la pasta. En este caso, la materia prima utilizada es trigo duro,
si la banda superior es menos intensa que la banda intermedia. Al contrario,
si la banda superior es más intensa que la intermedia, la primera materia
utilizada estrigo blando.1987R4154 — ES — 18.02.1998 — 001.001 — 12