1973L0405 — ES — 14.04.1982 — 001.001 — 1
Estedocumentoesuninstrumentodedocumentaciónynocomprometelaresponsabilidaddelasinstituciones
►B DIRECTIVADELCONSEJO
de22denoviembre de1973
referente a la aproximación de las legislaciones de los Estados miembros relativas a los métodos
decontroldelabiodegradabilidaddelostensioactivosaniónicos
(73/405/CEE)
(DO L 347 de 17.12.1973, p. 53)
Modificada por:
Diario Oficial
nopágina fecha
►M1Directiva del Consejo de 31 de marzo de 1982 (82/243/CEE) L 109 18 22.4.1982
▼B
DIRECTIVADELCONSEJO
de22denoviembre de1973
referente a la aproximación de las legislaciones de los Estados
miembros relativas a los métodos de control de la biodegradabi-
lidaddelostensioactivosaniónicos
(73/405/CEE)
EL CONSEJO DE LAS COMUNIDADES EUROPEAS,
Visto el Tratado constitutivo de la Comunidad Económica Europea y,
en particular, su artículo 100,
Vista la Directiva del Consejo, de 22 de noviembre de 1973, referente
a la aproximación de las legislaciones de los Estados miembros rela-
tivasa losdetergentes(1) y, en particular, su artículo 4,
Vista la propuesta de la Comisión,Visto el dictamen del Parlamento Europeo(
2),
Visto el dictamen del Comité económico y social(3),
Considerando que, para que los Estados miembros puedan determinar
losíndicesde biodegradabilidad de lostens ioactivosaniónicos , pareceacertado remitirse a los métodos de control ya utilizados con este fin envarios Estados miembros; que, no obstante, en caso de impugnación,sería necesario que el control de la biodegradabilidad se efectuase
según un método de referencia común;
Considerando que tal y como está previsto en el artículo 4 de la Direc-
tiva de 22 de noviembre de 1973, deben fijarse los márgenes detolerancia adecuadosen la determinación del índice de biodegradabi-lidad con el fin de evitar que lasinexactitudesde losmétodosdecontrol pudieran conducir a decisiones de rechazo del producto, conlas consiguientes repercusiones económicas; que sólo podrá adoptarse
una decisión de rechazo cuando el análisis indique un índice de biode-
gradabilidad inferior al 80%,
HA ADOPTADO LA PRESENTE DIRECTIVA:
Artículo 1
La presente Directiva se refiere a los métodos de control de la biode-
gradabilidad de lostens ioactivosaniónicos ►M1presentes en
detergentestalescomo loscontempladosen el artículo 1 de la Direc-tiva 73/404/CEE ◄.
Artículo 2
De conformidad con las disposiciones del artículo 4 de la Directiva 73/
404/CEE referente a los detergentes, los Estados miembros prohibiránla comercialización y uso en su territorio de un detergente si el índicede biodegradabilidad de lostens ioactivosaniónicoscontenidosen el
mismo fuere inferior al 80% y hubiere sido determinado mediante
alguno de los métodos siguientes:
— método OCDE, publicado en el informe técnico de la Organización
de Cooperatión (SIC! Cooperación) y de Desarrollo Económicos de11 de junio de 1976, «Propuesta de método para la determinaciónde la biodegradabilidad de lostens ioactivosen losdetergentes
sintéticos»,
— método en vigor en Alemania, establecido por la «Verordnung ber
(SIC! über) die Abbaubarkeit anionischer und nichtionischer grenz-1973L0405 — ES — 14.04.1982 — 001.001 — 2
(1)D O noL 347 de 17. 12. 1973, p. 51.
(2)D O noC 10 de 5. 2. 1972, p. 29.
(3)D O noC 89 de 23. 8. 1972, p. 13.▼M1
▼M1
fløchenaktiver (SIC! grenzflächenaktiver) Stoffe in Wasch- und
Reinigungsmitteln», de 30 de junio de 1977, publicado en elBundesgesetzblatt 1977, parte I, página 244, en la versión del
Reglamento por la que se modifica dicho reglamento, de 18 de
junio de 1980, publicado en el Bundesgesetzblatt 1980, parte I,
página 706,
— método en vigor en Francia, aprobado por Decreto de 28 de
diciembre de 1977 publicado en el Journal officiel de la République
française , de 18 de enero de 1978, páginas514 y 515, y (SIC! y
por) la Norma Experimental T 73-260 ( (de junio de 1981), editata
(SIC! editada) por la Association française de normalisation
(Afnor),
— método en vigor en el Reino Unido, llamado «PorousPot Tes t», y
descrito en el informe técnico n
o70 (1978) del Water Research
Centre.
Artículo 3
En el marco del procedimiento definido en el apartado 2, artículo 5 de
la Directiva 73/404/CEE, el dictamen del laboratorio en lo referente alos tensioactivos aniónicos deberá basarse en el método de referencia(prueba de confirmación) descrito en el Anexo a la presente Directiva.
Artículo 3 bis
Las modificaciones necesarias para adaptar el Anexo al progreso
técnico se adoptarán de conformidad con el procedimiento del artículo
7terde la Directiva 73/404/CEE.
Artículo 4
1. LosEs tadosmiembrosaplicarán, en un plazo de diez y ocho
meses a partir de su notificación, las disposiciones legales, reglamenta-rias y administrativas necesarias para cumplir a la (SIC! cumplir la)presente Directiva e informarán de ello inmediatamente a la Comisión.
2. Los Estados miembros comunicarán a la Comisión el texto de las
disposiciones básicas de Derecho interno que adopten en el ámbitoregulado por la presente Directiva.
Artículo 5
Los destinatarios de la presente Directiva serán los Estados miembros.1973L0405 — ES — 14.04.1982 — 001.001 — 3
▼B
▼M1
ANEXO
DETERMINACIÓN DE LA BIODEGRADABILIDAD DE LOS
TENSIOACTIVOSANTIÓNICOS(SIC!ANIÓNICOS)
Métododereferencia (pruebadeconfirmación)
CAPÍTULO I
1.1.Definición
A efectos de la presente Directiva, se considerarán tensioactivos anió-
nicos aquellos tensioactivos que, después de pasar por intercambiadores
de iones catiónicos y aniónicos, y separados mediante una elución frac-
cionada, se determinen como sustancia activa al azul de metileno
(MBAS) según el método de análisis descrito en el Capítulo 3 (SIC! III).
1.2.Equiponecesario
El método de medida se basará en el empleo de una pequeña planta de
lodos activados, cuyo esquema básico se representa en la figura 1 y, de
forma másdetallada, en la figura 2.
El equipo estará compuesto por un recipiente A para almacenar las
aguas residuales sintéticas, una bomba dosificadora B, una cuba de
aireación C, un decantador D, una bomba de aire comprimido E para
reciclar el lodo activado y un recipiente E para recoger el efluente
tratado.
Los recipientes A y F deberán ser de vidrio o de una materia plástica
apropiada y de una capacidad de 24 l, como mínimo. La bomba B
deberá asegurar un flujo constante de agua residual sintética hacia lacuba de aireación que, durante una operación normal, deberá contener
unos3 l de mezcla. En el vértice del cono interior dela (SIC! de la)
cuba C se suspenderá un difusor de vidrio fritado G para la aireación.
La cantidad de aire inyectado a través del dispositivo de aireación se
controlará con un caudalímetro H.
1.3.Aguaresidualsintética
Para efectuar el presente ensayo, se utilizará agua residual sintética.
Disolver en agua del grifo las siguientes sustancias. Por cada litro de
agua:
— 160 mg de peptona,
— 110 mg de extracto de carne,
— 30 mg de urea CO (NH
2)2,
— 7 mg de cloruro de sodio (NaCl),
— 4 mg de cloruro de calcio (CaCl2·2 H2O),
— 2 mg de sulfato de magnesio (MgSO4·7 H2O),
— 28 mg de monohidrógenofosfato (SIC! monohidrogenofosfato) de
potasio (K2HPO4),
— 20 2 (SIC! 20 +/− 2) mg de MBAS.
La MBAS se extraerá del producto a ensayar por el método indicado en
el Capítulo 2 (SIC! II). El agua residual sintética deberá prepararse de
nuevo cada día.
1.4.Preparación delasmuestras
Lostens ioactivosque no formen parte de un preparado podrán exami-
narse en su estado original.
1.4.1. Para preparar el agua residual sintética se deberá determinar previa-
mente el contenido en MBAS (1.3).
1.4.2. En el caso de formulaciones, se procederá a la determinación de los
contenidosen MBAS y en jabón. Se procederá a una extracción alcohó-
lica y a una separación de MBAS (ver Capítulo 2 (SIC! II)). Para
preparar el agua residual sintética se deberá determinar previamente el
contenido en MBAS del extracto.
1.5.Funcionamientodelainstalación
En primer lugar, se llenará la cuba de aireación C y el decantador D con
agua residual sintética. El decantador D deberá fijarse a la altura precisa
para que el volumen contenido en la cuba de aireación C sea de 3 l.1973L0405 — ES — 14.04.1982 — 001.001 — 4
▼M1
La inoculación se efectuará introduciendo 3 ml de un efluente secun-
dario de buena calidad, recién extraído de una planta de tratamiento
que trabaje principalmente con aguas residuales domésticas. El efluente
deberá mantener-se bajo condiciones aerobias durante el periodo (SIC!
período) de tiempo comprendido entre el muestreo y su aplicación.
Seguidamente se pondrán en funcionamiento el dispositivo de aireación
G, la bomba de aire comprimido E y la bomba dosificadora B. El agua
residual sintética pasar (SIC! debe pasar) a través dela (SIC! de la) cuba
de aireación C a razón de 1 l por hora, lo cual equivale a un tiempo
medio de retención de 3 horas.
Se regulará el ritmo de aireación de manera que el contenido de la cuba
C se mantenga constantemente en suspensión y que el contenido en
oxígeno disuelto sea de 2 mg/l como mínimo. Se impedirá la formación
de espuma por medios apropiados. No obstante, no se utilizarán anties-
pumantesque tengan una acción inhibidora s obre el lodo activado o que
contengan MBAS. La bomba E se regulará de manera que en la cuba de
aireación C el reciclaje del lodo activado procedente del decantador sea
continuo y regular. El lodo que se hubiere acumulado en la parte supe-
rior de la cuba de aireación C, en el fondo del decantador D, o en el
circuito de circulación, deberá ponerse de nuevo en circulación, al
menosuna vez al día, mediante un es cobillón o cualquier otro medio
apropiado. Cuando el lodo deje de sedimentar, se podrá favorecer la
decantación mediante la aportación, repetida si fuere necesario, de dosis
de 2 ml de una solución al 5% de cloruro férrico.
El efluente del decantador D recogido en el colector F permanecerá en
el mismo durante 24 horas, transcurridas las cuales, y previa homogenei-
zación de la mezcla, se tomará una muestra. Una vez efectuadas estas
operaciones se limpiará cuidadosamente el colector F.
1.6.Controldeldispositivodemedida
Inmediatamente antes de usar el agua residual sintética, se determinará
su contenido en MBAS (en mg/l).
El contenido en MBAS (en mg/l) del efluente retenido durante 24 horas
en el colector F se determinará, inmediatamente después de la toma,
utilizando el mismo método de análisis, si no se hiciere, las muestras
deberán preservarse, preferentemente por congelación. La concentración
se determinará con una aproximación de 0,1 mg MBAS/l.
Para comprobar la eficiencia del proceso, se determinará, al menos dos
vecespor s emana, la demanda química de oxígeno (DQO) o el carbono
orgánico disuelto (COD) del efluente acumulado en el colector F,
filtrado a través de fibra de vidrio, y del agua residual sintética filtrada
almacenada en la cuba A, también después de filtrado.
La disminución en la DQO o en el COD se estabilizará cuando la biode-
gradación diaria de la MBAS sea más o menos regular, es decir, al final
del periodo (SIC! período) inicial indicado en la figura 3.
El contenido en materiass ecasmineralesdel lodo activado de la cuba
de aireación se determinará dos veces por semana (en g/l). Si sobrepa-
sare 2,5 g/l, se eliminará el exceso de lodo activado.
El ensayo de biodegradación se efectuará a la temperatura ambiente;
dicha temperatura deberá ser regular y mantenerse entre 292 y 297 K
(19—24 C).
1.7.Cálculodelabiodegradabilidad
El porcentaje de biodegradación de MBAS se calculará diariamente a
partir del contenido en MBAS (expresado en mg/l) del agua residual
sintética y del efluente correspondiente recogido en el colector F.
Los valores obtenidos se representarán gráficamente, según se indica en
la figura 3.
La biodegradabilidad de MBAS se calculará tomando la media aritmé-
tica de losvaloresobtenidosen el curs o de los21 díass iguientesal
periodo (SIC! período) inicial, durante loscualesla biodegradación
deberá haber sido regular y la planta deberá haber funcionado sin
ninguna perturbación. La duración del periodo (SIC! período) inicial de
adaptación no será, en ningún caso, superior a seis semanas.
Los valores de biodegradación diarios se calcularán con una precisión de
0,1%, pero el resultado final se redondeará a (SIC! en) números entereos
(SIC! enteros).
En algunos casos, se podrá reducir la frecuencia del muestreo pero, para
calcular la media, se utilizarán, como mínimo, los resultados de 141973L0405 — ES — 14.04.1982 — 001.001 — 5
▼M1
tomasdis tribuidasa lo largo del periodo (SIC! período) de 21 díasque
sigue al periodo (SIC! período) inicial de adaptación.
CAPÍTULO 2 (SIC! II)
TRATAMIENTO PRELIMINAR DE LOS PRODUCTOS A EXAMINAR
2.1.Notaspreliminares
2.1.1.Tratamiento de las muestras
El tratamiento de lostens ioactivosaniónicosy de losdetergentes , previo
a la determinación de la biodegradabilidad por la prueba de confirma-
ción, será el siguente (SIC! siguiente):
ProductosTratamiento
Tensioactivos aniónicos Ninguno
DetergentesExtracción alcohólica s eguida de una
separación por intercambio de iones y de
una elución fraccional mediante inter-
cambiador de aniones
El objetivo de la extracción alcohólica será eliminar de los productos
comerciales los compuestos insolubles e inorgánicos que, en algunas
circunstancias, podrían interferir en el ensayo de biodegradabilidad.
2.1.2.Procedimiento de intercambio de iones
Para que los resultados de los ensayos de biodegradabilidad sean
correctos, se procederá a aislar y separar los tensioactivos aniónicos del
jabón y de los tensioactivos no iónicos y catiónicos.
Para ello se aplicará una técnica de intercambio de iones que utilice una
resina intercambiadora de aniones macro-porosa y los agentes de elución
apropiadosque permitan la elución fraccionada. El jabón y lostens ioac-
tivos aniónicos y no iónicos podrán, así, aislarse mediante una única
operación.
2.1.3.Control analítico
Después de la homogeneización, se determinará el contenido en
tensioactivos aniónicos del detergente sintético según el método de
análisis de MBAS. El contenido en jabón se determinará según un
método apropiado.
Este análisis del producto será necesario para calcular las cantidades que
se requerirán para la preparación de las dosis destinadas a los ensayos
de biodegradabilidad.
No será imprescindible una extracción cuantitativa; no obstante, se
extraerá, al menos, un 80% de los tensioactivos aniónicos. Normal-
mente, se obtendrá un 90% o más.
2.2.Principio
A partir de una muestra homogénea (polvos, pastas y líquidos dese-
cados), y mediante una extracción con etanol, se obtendrá un extracto
conteniendo los tensioactivos, el jabón y otros componentes solubles
del alcohol, de la muestra del detergente.
El extracto obtenido con el etanol se evaporará y disolverá en una
mezcla isopropanol/agua; a continuación, se hará pasar la solución resul-
tante a través de un dispositivo mixto de intercambio de cationes
fuertemente ácido/intercambio de aniones macroporosos, llevándose
hasta una temperatura de 323 K (50 ºC). Esta temperatura será necesaria
para impedir la precipitación de losácidosgras osen un medio ácido.
Los tensioactivos no iónicos se quedarán en el efluente.
Los ácidos grasos del jabón se separarán mediante una elución con
etanol que contenga dióxido de carbono. Lostens ioactivosaniónicosen
forma de sales de amonio se obtendrán mediante elución con una solu-
ción de bicarbonato de amonio en un mezcla isopropanol/agua. Dichas
sales de amonio de (SIC! se) utilizarán para el ensayo de biodegradabi-
lidad.1973L0405 — ES — 14.04.1982 — 001.001 — 6
▼M1
Los tensioactivos catiónicos, susceptibles de pertutbar (SIC! perturbar)
el ensayo de biodegradabilidad y el procedimiento análitico (SIC! analí-
tico), se eliminarán mediante el intercambiador de cationes, colocado
por encima del intercambiador de aniones.
2.3.Productosquimicos(SIC!químicos)yequipo
2.3.1. Agua desionizada2.3.2. Etanol, 95% (v/v) C
2H5OH (desnaturalizadores permitidos: metiletilce-
tona o metanol).
2.3.3. Mezcla isopropanol/agua (50/50 v/v):
— 50 partesde is opropanol (CH3CHOH — CH3),
— 50 partesde agua (2.3.1).
2.3.4. Solución de dióxido de carbono en etanol (aproximadamente 0,1% de
CO2): mediante un tubo de transferencia provisto de un disco de vidrio
fritado incorporado, hacer burbujear el dióxido de carbono (CO2)a
través del etanol (2.3.2) durante 10 minutos. La solución se prepará
(SIC! preparará) inmediatamente antesde s u utilización.
2.3.5. Solución de bicarbonato de amonio (60/40 v/v): 0,3 mol de NH4HCO3en 1 000 ml de una mezcla de isopropanol/agua constituida por 60
partesde is opropanol y por 40 partesde agua (2.3.1).
2.3.6. Intercambiador de cationes(KAT), fuertement (SIC! fuertemente) ácido,
resistente al alcohol (50—100 mesh).
2.3.7. Intercambiador de aniones(AAT), macroporos o, Merck Lewatit MP
7080 (70—150 mesh) o equivalente.
2.3.8. Ácido clorhídrico, 10% HCl (p/p).
2.3.9. Matraz esférico de fondo redondo de 2 000 ml con esmerilado cónico y
condensador de reflujo.
2.3.10. Filtro de succión de 90 mm de diámetro (que se pueda calentar) para
filtrosde papel.
2.3.11. Matracesde filtración al vacio (SIC! vacío) de 2 000 ml.2.3.12. Columnasde intercambio con manta calefactora y grifo: tubo interior de
60 mm de diámetro y de 450 mm de altura (figura 4).
2.3.13. Baño maria (SIC! maría).
2.3.14. Estufa de secado al vacio (SIC! vacío).2.3.15. Termostato.2.3.16. Rotavapor.2.4.Extracciónyseparacióndelostensioactivosaniónicos
2.4.1.Preparación del extracto
La cantidad de tensioactivos necesaria para la prueba de biodegradabi-
lidad será de unos 50 g de MBAS.
Normalmente la cantidad de producto a extraer no sobrepasará 1 000 g;
no obstante, podría ser necesario extraer cantidades suplementarias de la
muestra.
Por razones prácticas, en la mayoría de los casos, la cantidad de
producto utilizado en la preparación de losextractospara el ens ayo de
biodegradabilidad se limitará a 5 000 g.
La experiencia ha demostrado que una serie de extracciones limitadas es
preferible a la extracción de una gran cantidad de producto de una sola
vez. En lo que a intercambiadores se refiere, las cantidades especifi-
cadas serán suficientes para 600 a 700 mol de tensioactivos y de jabón.
2.4.2.Aislamiento de los componentes solubles en el alcohol
Añadir 250 g del detergente a analizar a 1 250 ml de etanol y llevar la
mezcla a ebullición, sometiéndola, después, a reflujo durante una hora,
sin dejar de agitar. Verter la solución alcohólica caliente en un filtro de
succión de poros anchos, llevar a una temperatura de 323 K (50 ºC), y
filtrar por succión. Lavar el matraz y el filtro de succión con unos
200 ml de etanol caliente. Recoger el filtrado y el líquido de lavado en
un matraz de filtración al vacío.
Cuando los productos a analizar sean pastas o líquidos, asegurarse de
que la muestra no contenga más de 55 g de tensioactivos aniónicos y1973L0405 — ES — 14.04.1982 — 001.001 — 7
▼M1
35 g de jabón. Una vez pesada la muestra, evaporar hasta desecación
completa. Disolver el residuo en 2 000 ml de etanol y proceder de nuevo
según lo indicado más arriba.
En el caso de polvos de escasa densidad aparente (< 300 g/l), es reco-
mendable aumentar la proporición (SIC! proporción) de etanol en la
relación 20/1.
Evaporar el filtrado de etanol hasta desecación completa, preferente-
mente mediante un rotovapor (SIC! rotavapor). Repetir la operación si
se necesitare una mayor cantidad de extracto. Disolver el residuo en
5 000 ml de una mezcla isopropanol/agua.
2.4.3.Preparación de las columnas intercambiadoras de iones
Columna de intercambio catiónicoColocar 600 ml de resina intercambiadora de cationes (2.3.6) en un vaso
de 3 000 ml y cubrir añadiendo 2 000 ml de ácido clorhídrico (2.3.8).
Dejar reposar durante un mínimo de 2 horas agitando de vez en cuando.
Decantar el ácido y transferir la resina a la columna (2.3.12) mediante
agua desionizada. La columna deberá estar provista de un tapón de
lana de vidrio. Lavar la columna con agua desionizada a una velocidad
de flujo de 10—30 ml/min hasta que el efluente esté libre de cloruros.
Desplazar el agua con 2 000 ml de una mezcla isopropanol/agua (2.3.3)
a una velocidad de flujo de 10—30 ml/min. Una vez finalizadoses tos
preparativos, la columna de intercambio estará lista para la operación.
Columna de intercambio aniónicoColocar 600 ml de resina intercambiadora de aniones (2.3.7) en un vaso
de 3 000 ml y cubrirla añadiendo 2 000 ml de agua desionizada. Dejar
en espera la resina durante, al menos 2 horas, para que se hinche. Trans-
ferir la resina a la columna mediante agua desionizada. En la columna
se colocará un tapón de lana de vidrio desionizada que servirá de
soporte a los intercambiadores.
Lavar la columna con una solución de 0,3 mol de bicarbonato de
amonio (2.3.5) hasta que quede libre de cloruros, para lo cual se reque-
rirán unos5 000 ml de s olución. Lavar a continuación con 2 000 ml de
agua desionizada. Desplazar el agua con 2 000 ml de una mezcla isopro-
panol/agua (2.3.3) a una velocidad de flujo de 10—30 ml/min. Una vez
finalizados estos preparativos, la columna de intercambio estará en
forma OH y lista para la operación.
2.4.4.Procedimiento de intercambio de iones
Conectar lascolumnasintercambiadorascolocándolasde forma que la
columna de intercambio catiónico se encuentre por encima de la
columna de intercambio aniónico. Poner lascolumnasa la temperatura
de 323 K (50 ºC) mediante un termostato. Calentar 5 000 ml del filtrado
obtenido en el punto 2.4.2 hasta 333 K (60 ºC) y hacerlo pasar a través
de ambascolumnasa una velocidad de flujo de 20 ml/min. Lavar las
columnascon 1 000 ml de una mezcla caliente de is opropanol/agua
(2.3.3).
Para obtener los tensioactivos aniónicos (MBAS), se desconectará la
columna KAT. Se procederá, entonces, a la elución de los ácidos grasos
del jabón de la columna KAT mediante 5 000 ml de una solución de
etonol/CO
2(SIC! etanol/CO2) (a 323 K; 50 ºC) (2.3.4). El eluyente
será desechado.
A continuación se procederá a la elución de las MBAS de la columna
AAT mediante 5 000 ml de solución de bicarbonato de amonio (2.3.5).
Evaporar el eluyente hasta desecación en un baño de vapor o en un rota-
vapor. Los residuos contienen las MBAS (en forma de sal de amonio) y,
en algún caso, productos aniónicos no tensioactivos que no perjudican el
ensayo de biodegradabilidad. Añadir agua desionizada hasta obtener un
volumen preciso y determinar el contenido en MBAS en una fracción
alícuota, de conformidad con el Capítulo 3 (SIC! III). La solución se
utilizará como solución madre de los detergentes aniónicos para el
ensayo de biodegradabilidad. La solución deberá mantenerse a una
temperatura inferior a 278 K (5 ºC).
2.4.5.Regeneración de las resinas de intercambio iónico
El intercambiador de cationes se tirará después de su uso.La resina de intercambio aniónico se regenerará haciendo pasar a través
de la columna una cantidad suplementaria de una solución de bicarbo-
nato de amonio (3.2.5) a una velocidad de flujo de unos10 ml/min
hasta que el efluente quede libre de tensioactivos aniónicos (ensayo a1973L0405 — ES — 14.04.1982 — 001.001 — 8
▼M1
azul de metileno). Lavar luego el intercambiador de anionescon
2 000 ml de una mezcla isopropanol/agua (2.3.3). El intercambiador de
aninones (SIC! aniones) podrá utilizarse de nuevo.
CAPÍTULO 3 (SIC! III)
DETERMINACIÓN DE LOS TENSIOACTIVOS ANIÓNICOS EN EL
ENSAYO DE BIODEGRADABILIDAD
3.1.Principio
El método se basa en la propiedad del azul de metileno, colorante catió-
nico, de formar con los tensioactivos aniónicos sales azules que pueden
extraerse mediante cloroformo. A fin de evitar las interferencias, la
extracción se efectuará, primero, a partir de una solución alcalina proce-
diéndose a continuación a agitar el extracto con una solución ácida de
azul de metileno. La absorbencia de la fase orgánica separada se medirá
por fotometría a la longitud de onda de absorción máxima de 650 nm.
3.2.Reactivosyequipo
3.2.1. Solución tampón ph 10: disolver 24 g de bicarbonato de sodio
(NaHCO3) grado analítico y 27 g de carbonato de sodio anhidro
(Na2CO3) grado analítico, en agua desionizada y diluir a 1 000 ml.
3.2.2. Solución neutra de azul de metileno: deisolver (SIC! disolver) 0,35 g de
azul de metileno grado analítico en agua desionizada y diluir a 1 000 ml.
Preparar la solución, al menos 24 horas antes de su uso. La absorbencia
de la fase cloroformo del ensayo en blanco, comparada con la del cloro-
formo puro, no deberá sobrepasar 0,015 por 1 cm de espesor de la capa
a 650 nm.
3.2.3. Solución ácida de azul de metileno: disolver 0,35 g de azul de metileno
grado analítico en 500 ml de agua desionizada y mezclar con 6,5 ml de
H2SO4(d = 1,84 g/ml). Diluir en 1 000 ml de agua desionizada. Preparar
la solución, al menos 24 horas antes de su uso. La absorbencia de la fase
de cloroformo del ensayo en blanco, comparada con la del cloroformo
puro, no deberá sobrepasar 0,015 por 1 cm de espesor de la capa a
650 nm.
3.2.4. Cloroformo (triclorometano) CHCl3grado analítico, recientemente desti-
lado.
3.2.5. Dodecilbenceno-metilester (SIC! metiléster) de ácido sulfónico.3.2.6. Solución de hidróxido de potasio en etanol, KOH 0,1 mol.3.2.7. Etanol puro (C
2H5OH).
3.2.8. Ácido sulfúrico (H2SO40,5 mol).
3.2.9. Solución de fenolftaleína: disolver 1 g de fenolftaleína en 50 ml de
etanol y añadir 50 ml de agua desionizada agitando continuamente.
Eliminar por filtración cualquier precipitado obtenido.
3.2.10. Ácido clorhídrico y metanol: 250 ml de ácido clorhídrico concetrado
(SIC! concentrado) grado analítico y 750 ml de metanol.
3.2.11. Embudo de decantación de 250 ml.
3.2.12. Matraz aforado de 50 ml.
3.2.13. Matraz aforado de 500 ml.3.2.14. Matraz aforado de 1 000 ml.3.2.15. Matraz esférico de fondo redondo con esmerilado cónico, condensador
de reflujo de 250 ml, granuladospara facilitar la ebullición.
3.2.16. pH-metro.3.2.17. Fotómetro para medidasa 650 nm, con célulasde 1 a 5 cm.3.2.18. Papel de filtro cualitativo.3.3.Método
Las muestras a analizar no deberán tomarse a través de una capa de
goma espuma.
Después de haber sido cuidadosamente limpiado con agua, el equipo
utilizado para el análisis se enjugará completamente con una solución
de ácido clorhídrico y de metanol (3.2.10), y con agua desionizada
inmediatamente antesde utilizarlo.1973L0405 — ES — 14.04.1982 — 001.001 — 9
▼M1
Filtrar losafluentesy efluetnes(SIC! efluentes ) de la planta de lodos
activados a examinar inmediatamente después de efectuado el muestreo.
Des echar losprimeros100 ml de losfiltrados .
Colocar un volumen medido de la muestra, neutralizado en caso nece-
sario, en un embudo de decantación de 250 ml (3.2.1). El volumen
dela (SIC! de la) muestra deberá contener entre 20 y 150 g de MBAS.
Si el contenido en MBAS fuere menor, se podrán utilizar hasta 100 ml
de la muestra. En caso de utilizar menos de 100 ml, se diluirá la muestra
en agua desionizada hasta obtener 100 ml. Añadir a la muestra 10 ml de
la solución tampón (3.2.1), 5 ml de la solución neutra de azul de meti-
leno (3.2.2) y 15 ml de cloroformo (3.2.4). Agitar la mezcla
uniformemente y sin demasiada energía durante un minuto. Después de
la separación de fases, se pasará la capa de cloroformo a un segundo
embudo de decantación que contenga 110 ml de agua desionizada y
5 ml de solución ácida de azul de metileno (3.2.3). Agitar la mezcla
durante un minuto. Hacer pasar la capa de cloroformo a través de un
filtro de algodón hidrófilo, previamente lavado con alcohol y empapado
de cloroformo, a un matraz aforado (3.2.12).
Extraer, por tres veces, las soluciones alcalinas y ácidas, realizando la
segunda y la tercera extracción mediante 10 ml de cloroformo. Filtrar
losextractoscombinadosde cloroformo a travésdel mis mo filtro de
algodón hidrófilo y diluir, hasta la marca de 50 ml del matraz (3.2.12),
con el cloroformo utilizado en el segundo lavado del algodón hidrófilo.
Medir la absorbencia de la solución de cloroformo con un fotómetro de
650 nm en célulasde 1 a 5 cm comparándola con la del cloroformo
puro. Hacer un ensayo de determinación en blanco utilizando el proceso.
3.4.Curvapatrón
Preparar una solución patrón a partir de la sustancia tipo de dodecilben-
ceno-metiléster de ácido sulfónico (tetrapropileno tio PM 340) depsués
(SIC! tipo PM 340) después) de saponificación en la sal de potasio. La
MBAS se expresará en dodecilbenceno sulfonato de sodio (PM 348).
Pesar de 400 a 450 mg de dodecilbenceno-metilester (SIC! metiléster)
de ácido sulfónico (3.2.5) con una aproximación de 0,1 mg en un matraz
esférico de fondo redondo y añadir 50 ml de solución de hidróxido de
potasio y de etanol (3.2.6) y algunos granulados para facilitar la ebulli-
ción. Después de montar el condensador de reflujo, hacer hervir durante
una hora. Una vez enfriado, lavar el condensador y la junta esmerilada
de vidrio con unos30 ml de etanol y añadir dichoslavadosal contenido
del matraz. Determinar la graduación de la solución de ácido sulfúrico
hasta la decoloración de la fenolftaleína. Transferir dicha solución a un
matraz aforado de 1 000 ml (3.2.14), completar el volumen diluyendo en
agua desionizada y mezclar.
A continuación volver a diluir una parte de esta solución madre del
tensioactivo. Sacar de la misma 25 ml y transferirlos a un matraz
aforado de 500 ml (3.2.13), completar el volumen diluyendo en agua
desionizada y mezclar.
Dicha solución tipo contendráE/C21;023
20000mg MBAS, donde E repre-
senta el peso de la muestra en mg.
Para establecer la curva patrón, extraer respecitivamente (SIC! respecti-
vamente) 1, 2, 4, 6y8m ld el as olución patrón y diluir cada una de
dichas tomas hasta 100 ml con agua desionizada. A continuación,
proceder como se indica en el punto 3.3 (incluyendo un ensayo de deter-
minacoín (SIC! determinación) en blanco).
3.5.Cálculodelosresultados
La curva patrón (3.4) indica la cantidad de tensioactivos aniónicos
(MBAS) de la muestra. El contenido en MBAS de la muestra se
obtendrá mediante la fórmula siguiente:
mg MBAS /C21000
V= MBAS mg/l
V = el volumen en ml de la muestra utilizada.
Los resultados se expresarán en dodecilbenceno sulfonato de sodio (PM
348).
3.6.Expresióndelosresultados
Los resultados deben expresarse en MBAS mg/l con una tolerancia de
0,1 mg.1973L0405 — ES — 14.04.1982 — 001.001 — 10
▼M1
Figura 1
A: Recipiente de almacenamiento inicial
B: Bomba dosificadora
C: Cuba de aireación (capacidad 3 l)D: Decantador
E: Bomba de aire comprimido
F: Colector de efluenteG: Difusor (vidrio fritado)H: Medidor de flujo de aire1973L0405 — ES — 14.04.1982 — 001.001 — 11
Figura 2
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Figura 3
Cálculodelabiodegradabilidad—Pruebadeconfirmación
▼M11973L0405 — ES — 14.04.1982 — 001.001 — 13
▼M1
Figura 4
Columnadeintercambiocalefactora
(Dimensiones en milimetros)
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