1992L0040 — ES — 01.05.2004 — 003.001 — 1
Estedocumentoesuninstrumentodedocumentaciónynocomprometelaresponsabilidaddelasinstituciones
►B DIRECTIVA92/40/CEEDELCONSEJO
de19demayode1992
porlaqueseestablecen medidascomunitariasparalaluchacontralainfluenzaaviar
(DO L 167 de 22.6.1992, p. 1)
Modificada por:
Diario Oficial
nopágina fecha
►M1Reglamento (CE) no806/2003 del Consejo de 14 de abril de 2003 L 122 1 16.5.2003
Modificada por:
►A1Acta de adhesión de Austria, de Finlandia y de Suecia C241 21 29.8.1994
(adaptada por Decisión 95/1/CE, Euratom, CECA del Consejo) L 1 1 1.1.1995
►A2Acta relativa a las condiciones de adhesión de la República Checa, la
República de Estonia, la República de Chipre, la República de Letonia,la República de Lituania, la República de Hungría, la República de
Malta, la República de Polonia, la República de Eslovenia y la República
Eslovaca, y a las adaptaciones de los Tratados en los que se fundamentala UniónL 236 33 23.9.2003
▼B
DIRECTIVA92/40/CEEDELCONSEJO
de19demayode1992
porlaqueseestablecenmedidascomunitariasparalaluchacontra
lainfluenzaaviar
EL CONSEJO DE LAS COMUNIDADES EUROPEAS,
Visto el Tratado constitutivo de la Comunidad Económica Europea y,en particular, su artículo 43,
Vista la propuesta de la Comisión (
1),
Visto el dictamen del Parlamento Europeo (2),
Visto el dictamen del Comité Económico y Social (3),
Considerando que el sector de las aves de corral figura en el Anexo II
del Tratado; que la comercialización de aves de corral constituye una
importante fuente de ingresos de la población agraria;
Considerando que, si se presentan brotes de influenza aviar de gran
patogenicidad, enfermedad producida por un virus de la influenza de
características especiales y que en lo sucesivo se denominará«influenza aviar», es necesario establecer a escala comunitaria medidasde lucha contra la misma con objeto de garantizar el desarrollonacional del sector de las aves de corral y de contribuir a la protección
de la salud animal en la Comunidad;
Considerando que los brotes de influenza aviar pueden adquirir rápida-
mente un carácter epizoótico y provocar una mortalidad y unas
perturbaciones tales que comprometan seriamente la rentabilidad delas explotaciones avícolas en su conjunto;
Considerando que es necesario tomar medidas en cuanto existan indi-
cios de esta enfermedad de manera que, si se confirma, sea posibleadoptar inmediatamente medidas eficaces de lucha contra la misma;
Considerando que, tan pronto como se declare un brote de esta enfer-
medad, es necesario impedir su propagación controlando de modoestricto el transporte de animales y la utilización de productos quepuedan estar contaminados y, en su caso, recurriendo a la vacunación;
Considerando que el diagnóstico de la enfermedad debe efectuarse bajo
los auspicios de los laboratorios nacionales responsables, que deberán
estar coordinados por un laboratorio comunitario de referencia;
Considerando que las medidas comunitarias de lucha contra la
influenza aviar constituyen la base para el mantenimiento de un nivel
uniforme de salud animal;
Considerando que las disposiciones del artículo 3 de la Decisión 90/
424/CEE del Consejo, de 26 de junio de 1990, relativa a determinadosgastos en el ámbito veterinario (
4) se aplican a la aparición de la
influenza aviar;
Considerando que es conveniente encomendar a la Comisión la tarea de
adoptar las medidas de aplicación necesarias,
HA ADOPTADO LA PRESENTE DIRECTIVA:
Artículo 1
La presente Directiva establece las medidas comunitarias para la lucha
contra la influenza aviar aplicables en caso de que esta enfermedad se1992L0040 — ES — 01.05.2004 — 003.001 — 2
(1)D O noC 231 de 5. 9. 1991, p. 4.
(2)D O noC 326 de 16. 12. 1991, p. 242.
(3)D O noC 79 de 30. 3. 1992, p. 8.
(4)D O noL 224 de 18. 8. 1990, p. 19; Decisión modificada por la Decisión 91/
133/CEE (DO noL 66 de 13. 3. 1991, p. 18).
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declare en aves de corral, sin perjuicio de las disposiciones comunita-
rias que regulan el comercio intracomunitario.
La presente Directiva no se aplicará en caso de que se detecte la
influenza aviar en otras aves. Sin embargo, los Estados miembrosdeberán informar a la Comisión de las medidas que hayan adoptado.
Artículo 2
A efectos de la presente Directiva, se utilizarán como proceda las defi-
niciones del artículo 2 de la Directiva 90/539/CEE del Consejo, de 15de octubre de 1990, relativa a las condiciones de policía sanitaria queregulan los intercambios intracomunitarios y las importaciones de aves
de corral y de huevos para incubar procedentes de países terceros (
1).
Además, se entenderá por:
a)ave de corral infectada:
— cualquier ave de corral en la que un examen por un laboratorio
autorizado haya permitido comprobar oficialmente la influenza
aviar tal como se define en el Anexo I, o
— tratándose de un segundo brote o de brotes subsiguientes, cual-
quier ave de corral en la que se hayan encontrado signos clínicos
o lesiones post mortem propios de la influenza aviar;
b)ave de corral sospechosa de estar infectada: toda ave de corral con
signos clínicos o lesiones post mortem tales que se pueda sospechar
justificadamente la presencia de la influenza aviar o en la que sehaya comprobado la presencia del subtipo H5 o H7 del virus de la
influenza A;
c)ave de corral sospechosa de estar contaminada: toda ave de corral
que haya podido estar, directa o indirectamente, en contacto con elvirus de la influenza aviar o con el subtipo H5 o H7 del virus de lainfluenza A;
d)autoridad competente: la autoridad competente con arreglo al punto
6 del artículo 2 de la Directiva 90/425/CEE (
2);
e)veterinario oficial: el veterinario designado por la autoridad compe-
tente.
Artículo 3
Los Estados miembros velarán por que se notifique obligatoria e inme-
diatamente toda sospecha de influenza aviar a la autoridad competente.
Artículo 4
1. Cuando en una explotación haya aves de corral sospechosas de
estar infectadas por la influenza aviar, los Estados miembros velaránpor que el veterinario oficial realice inmediatamente una investigación
oficial para confirmar o descartar la presencia de esta enfermedad; la
investigación deberá incluir tomas de muestras adecuadas para anali-zarlas en el laboratorio.
2. En cuanto se le notifique la sospecha de infección, la autoridad
competente pondrá la explotación bajo vigilancia oficial y ordenará,en particular, que:
a) se realice un censo de todas las aves de corral de la explotación en
el que se precise, por categorías, el número de aves de corralmuertas, cuántas presentan síntomas clínicos y cuántas no. Sedeberá actualizar el censo para tener en cuenta las aves nacidas y
muertas durante el período de sospecha, los datos de este censo
deberán actualizarse, y presentarse cuando se solicite, y podráncontrolarse en cada visita;1992L0040 — ES — 01.05.2004 — 003.001 — 3
(1)D O noL 303 de 31. 10. 1990, p. 6; Directiva modificada en último lugar por
la Directiva 91/496/CEE (DO noL 268 de 24. 9. 1991, p. 56).
(2)D O noL 224 de 18. 8. 1990, p. 29; Directiva modificada en último lugar por
la Directiva 91/496/CEE.
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b) se recluyan todas las aves de corral de la explotación dentro de sus
locales habituales o de cualquier otro lugar en el que quedenaisladas, sin ningún contacto con otras aves;
c) se prohíba tanto la entrada de aves de corral en la explotación como
la salida de las que se encuentren en ésta;
d) se subordina a la autorización de la autoridad competente:
— todo movimiento de personas, animales o vehículos cuyo destino
u origen sea la explotación,
— todo movimiento de carne o canales de aves de corral, piensos,
material, residuos, deyecciones, cama de paja, estiércol o cual-
quier otro elemento capaz de transmitir la influenza aviar;
e) se prohíba la salida de la explotación de huevos, salvo los huevos
enviados directamente a un establecimiento autorizado para la fabri-cación y/o el tratamiento de ovoproductos con arreglo a lo dispuestoen el punto 1 del artículo 6 de la Directiva 89/437/CEE (
1) y que
sean transportados de conformidad con una autorización expedidapor la autoridad competente. Esta autorización deberá cumplir los
requisitos establecidos en el Anexo I;
f) se utilicen medios de desinfección apropiados en las entradas y
salidas de la explotación y de los edificios en que se hallen las
aves de corral;
g) se realice una investigación epizootiológica con arreglo a lo dispu-
esto en el artículo 7.
3. Hasta que entren en vigor las medidas oficiales contempladas en
el apartado 2, el propietario o avicultor de toda explotación en la que
se sospeche la presencia de la enfermedad adoptará todas las medidas
razonables que garanticen el cumplimiento de las disposicionescontempladas en dicho apartado, con exclusión de la letra g).
4. La autoridad competente podrá hacer extensivas las medidas
previstas en el apartado 2 a otras explotaciones cuando su ubicación,
configuración o los contactos con la explotación en que se sospeche la
existencia de la enfermedad permitan sospechar una posible contamina-ción.
5. Las medidas contempladas en los apartados 1 y 2 dejarán de apli-
carse únicamente cuando el veterinario oficial descarte cualquier
sospecha de influenza aviar.
Artículo 5
1. En cuanto se confirme oficialmente que en una explotación se ha
declarado la influenza aviar, los Estados miembros velarán por que la
autoridad competente, además de las medidas mencionadas en el apar-tado 2 del artículo 4, ordene:
a) el sacrificio inmediato de todas las aves de corral que se hallen en
la explotación y la destrucción de las aves de corral muertas o sacri-
ficadas y de todos los huevos. Estas operaciones se efectuarán demanera que se limite al máximo el riesgo de propagación de laenfermedad;
b) la destrucción o el tratamiento apropiado de todas las materias o
residuos, como piensos, camas o estiércol, que puedan estar conta-minados. Este tratamiento deberá realizarse ateniéndose a lasinstrucciones del veterinario oficial y deberá garantizar la destruc-
ción total del virus de la influenza aviar;
c) en lo posible, la búsqueda y destrucción de la carne de las aves de
corral que hayan sido sacrificadas durante el supuesto período de
incubación de la enfermedad;
d) la búsqueda y destrucción de los huevos para incubar puestos
durante el supuesto período de incubación que hayan salido de laexplotación, quedando entendido que se someterán a vigilancia1992L0040 — ES — 01.05.2004 — 003.001 — 4
(1)D O noL 212 de 22. 7. 1989, p. 87; Directiva modificada por la Directiva
89/662/CEE (DO noL 395 de 30. 12. 1989, p. 13).
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oficial las aves de corral que hayan nacido de esos huevos; en lo
posible, la búsqueda y destrucción de los huevos destinados alconsumo puestos durante el supuesto período de incubación que
hayan salido de la explotación, salvo en el caso de que hayan sido
previamente desinfectados de forma correcta;
e) después de haberse llevado a cabo las operaciones indicadas en las
letras a) y b), la limpieza y desinfección, con arreglo a lo dispuestoen el artículo 11, de los edificios en que se alojen las aves de corraly de sus alrededores, de los vehículos de transporte y de todo mate-rial que pueda estar contaminado;
f) después de realizar las operaciones indicadas en la letra e), la inter-
posición de un período mínimo de veintiún días antes de volver aintroducir aves de corral en la explotación;
g) la realización de una investigación epidemiológica con arreglo a lo
dispuesto en el artículo 7.
2. La autoridad competente podrá aplicar las medidas previstas en el
apartado 1 a otras explotaciones cuando su ubicación, su configuracióno los contactos con la explotación en la que se haya confirmado laenfermedad permitan sospechar una posible contaminación.
Artículo 6
Cuando las explotaciones estén formadas por dos o más manadas inde-
pendientes, la autoridad competente, basándose en los criteriosestablecidos por la Comisión con arreglo al procedimiento establecidoen el artículo 21, podrá eximir de las medidas enunciadas en el apar-tado 1 del artículo 5 a las manadas sanas de una explotación
infectada, siempre que el veterinario oficial haya confirmado que las
operaciones que se realicen en ella reúnen unas características talesque las manadas permanecen completamente independientes desde elpunto de vista de su alojamiento, mantenimiento y alimentación, demodo que no hay peligro de que el virus se contagie de una manada aotra.
Artículo 7
1. La investigación epidemiológica estudiará los siguientes aspectos:
— duración del período de la posible presencia de la influenza aviar en
la explotación;
— posible origen de la influenza aviar en la explotación y localización
de las demás explotaciones en las que se encuentren aves de corralque hayan podido infectarse o contaminarse a partir del mismofoco;
— movimientos de personas, aves de corral u otros animales,
vehículos, huevos, carne, canales y cualquier utensilio o materialque haya podido transmitir el virus de la influenza aviar a la explo-tación afectada o propagarlo a partir de la misma.
2. A fin de coordinar todas las medidas necesarias para garantizar la
erradicación de la influenza aviar lo más rápidamente posible y con
objeto de realizar la investigación epidemiológica, se creará un centrode crisis.
El Consejo, pronunciándose a propuesta de la Comisión, aprobará las
disposiciones generales relativas a los centros de crisis nacionales y al
centro de crisis comunitario.
Artículo 8
1. Cuando el veterinario oficial disponga de indicios para sospechar
la contaminación de aves de corral de una explotación debida a movi-
mientos de personas, animales o vehículos o a cualquier otra
circunstancia, la explotación afectada se someterá a control oficial conarreglo a lo dispuesto en el apartado 2.
2. El control oficial tendrá como finalidad detectar inmediatamente
cualquier indicio de influenza aviar, llevar a cabo el censo de las aves1992L0040 — ES — 01.05.2004 — 003.001 — 5
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de corral, controlar sus movimientos y, en su caso, aplicar las medidas
establecidas en el apartado 3.
3. Cuando una explotación esté sometida al control oficial de
conformidad con lo dispuesto en los apartados 1 y 2, la autoridadcompetente prohibirá la salida de las aves de corral de la explotación
cuando no sea para su transporte directo a un matadero bajo control
oficial para su sacrificio inmediato. Antes de que pueda autorizarse talsalida, el veterinario oficial deberá haber efectuado un examen clínicode todas las aves de corral que demuestre que la explotación está librede influenza aviar. Las restricciones de movimientos mencionadas en elpresente artículo se aplicarán durante un período de veintiún días a
partir de la última fecha en que pueda haberse producido la contamina-
ción; no obstante, estas restricciones se aplicarán durante un períodomínimo de siete días.
4. Cuando considere que las condiciones lo permiten, la autoridad
competente podrá limitar la aplicación de las medidas establecidas enel presente artículo a una parte de la explotación y a las aves de corralque se hallen en ésta, siempre que hayan sido alojadas, mantenidas yalimentadas de forma totalmente separada y por diferente personal.
Artículo 9
1. Cuando el diagnóstico de la influenza aviar se haya confirmado
oficialmente, los Estados miembros velarán por que la autoridadcompetente delimite, alrededor de la explotación infectada, una zonade protección de un radio mínimo de tres kilómetros, ella mismainscrita en una zona de vigilancia de un radio mínimo de diez kilóme-
tros. Para la delimitación de estas zonas deberán tenerse en cuenta
aquellos factores geográficos, administrativos, ecológicos y epizoóticosrelacionados con la influenza aviar así como las estructuras de control.
2. En la zona de protección se aplicarán las siguientes medidas:
a) localización de todas las explotaciones de la zona con aves de
corral;
b) visitas periódicas a todas las explotaciones con aves de corral, con
exámenes clínicos de éstas y, en su caso, toma de muestras para suexamen en laboratorio; se llevará un registro de visitas y resultadosde los exámenes;
c) mantenimiento de todas las aves de corral en su alojamiento habi-
tual o en cualquier otro lugar que permita aislarlas;
d) utilización de sistemas de desinfección apropiadas en las entradas y
salidas de las explotaciones;
e) control de los desplazamientos dentro de la zona de las personas que
manipulen aves de corral, sus canales y huevos, así como de losvehículos utilizados para su transporte; en general, se prohibirá el
transporte de las aves, exceptuando el tránsito por las carreteras y
líneas férreas más importantes;
f) prohibición de sacar aves de corral y huevos para incubar de la
explotación en que se encuentren, salvo que la autoridad competentehaya autorizado el transporte:
i) de aves para su sacrificio inmediato, preferentemente a un mata-
dero situado en la zona infectada, o, de no ser posible, a uno
situado fuera de ésta y designado por la autoridad competente.
La carne resultante deberá llevar la marca sanitaria especialestablecida en el apartado 1 del artículo 5 de la Directiva 91/494/CEE (
1);
ii) de pollitos de un día de edad o de pollitas maduras para la
puesta a una explotación situada dentro de la zona de vigilanciay que no tenga otras aves de corral. Esta explotación estarásometida al control oficial establecido en el apartado 2 delartículo 8;1992L0040 — ES — 01.05.2004 — 003.001 — 6
(1)D O noL 268 de 24. 9. 1991, p. 35.
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iii) de huevos para incubar bien a una incubadora designada por la
autoridad competente; los huevos y sus envases deberán desin-fectarse antes de ser enviados. Los desplazamientos indicados
en los puntos i), ii) y iii) deberán ser realizados directamente
bajo control oficial y únicamente se autorizarán después de queel veterinario oficial haya efectuado una inspección sanitaria dela explotación. Los medios de transporte empleados deberánlimpiarse y desinfectarse antes y después de su utilización;
g) prohibición de retirar o esparcir sin autorización el estiércol de las
aves de corral o sus camas de paja;
h) prohibición de celebrar ferias, mercados, exposiciones y demás
concentraciones de aves de corral o de cualquier otro tipo de aves.
3. Las medidas aplicadas en la zona de protección se mantendrán al
menos durante veintiún días después de que se hayan efectuado en laexplotación infectada las operaciones preliminares de limpieza y desin-fección con arreglo a lo dispuesto en el artículo 11. Cuando se levanten
esas medidas, la zona de protección pasará a formar parte de la zona de
vigilancia.
4. En la zona de vigilancia se aplicarán las siguientes medidas:
a) localización de todas las explotaciones de la zona con aves de
corral;
b) control de los desplazamientos de las aves de corral y de los huevos
para incubar dentro de la zona;
c) prohibición de sacar aves de corral fuera de la zona durante los
quince primeros días, excepto para enviarlas directamente a un
matadero situado fuera de la zona de vigilancia y designado por laautoridad competente, en cuyo caso la carne de estas aves deberállevar la marca sanitaria especial establecida en el artículo 5 de laDirectiva 91/494/CEE;
d) prohibición de sacar huevos para incubar fuera de la zona de vigi-
lancia, salvo que se envíen a una incubadora designada por laautoridad competente. Antes de ser enviados, los huevos y susenvases deberán ser desinfectados;
e) prohibición de sacar estiércol de aves de corral o sus camas de paja
fuera de la zona;
f) prohibición de celebrar ferias, mercados, exposiciones y demás
concentraciones de aves de corral o de cualquier otro tipo de aves;
g) sin perjuicio de las disposiciones contempladas en las letras a) y b),
prohibición de transportar aves de corral, exceptuando el tránsito
por las carreteras y líneas férreas más importantes.
5. Las medidas aplicadas en la zona de vigilancia se mantendrán al
menos durante treinta días después de haberse realizado en la explota-ción infectada las operaciones preliminares de limpieza y desinfeccióncon arreglo a lo dispuesto en el artículo 11.
6. En caso de que las zonas estuvieran ubicadas en el territorio de
varios Estados miembros, las autoridades competentes de los Estadosmiembros afectados colaborarán con el fin de delimitar las zonas a lasque hace referencia en el apartado 1. En caso de que fuera necesario sedelimitarán, de todos modos, la zona de protección y la zona de vigi-lancia con arreglo al procedimiento que se prevé en el artículo 21.
Artículo 10
Los Estados miembros velarán por que:
a) la autoridad competente establezca las normas que le permitan
seguir los desplazamientos de huevos y de aves de corral;
b) a petición de la autoridad competente, el propietario o el avicultor
deba facilitarle los datos sobre las entradas y salidas de su explota-
ción de aves de corral;
c) cualquier persona que se dedique al transporte o al comercio de aves
de corral y de huevos pueda informar a la autoridad competente1992L0040 — ES — 01.05.2004 — 003.001 — 7
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sobre los desplazamientos de aves y huevos que haya transportado o
comercializado y aportar documentación detallada al respecto.
Artículo 11
Los Estados miembros velarán por que:
a) los desinfectantes que se vayan a utilizar así como su concentración
estén oficialmente autorizados por la autoridad competente;
b) las operaciones de limpieza y desinfección se efectuen bajo la
supervisión oficial y con arreglo:
i) a las instrucciones del veterinario oficial,
ii) al procedimiento previsto en el Anexo II para la limpieza y
desinfección de las explotaciones infectadas.
Artículo 12
Las tomas de muestras y los análisis de laboratorio que se efectúen
para detectar el virus de la influenza aviar deberán efectuarse con
arreglo a las disposiciones del Anexo III.
Artículo 13
Los Estados miembros velarán por que la autoridad competente adopte
todas las medidas necesarias y oportunas para que todos los habitantesde la zona de protección y de vigilancia estén completamente infor-mados de las restricciones vigentes y se atengan a todas las
disposiciones que se impongan para la aplicación adecuada de las
medidas correspondientes.
Artículo 14
1. Los Estados miembros velarán por que en cada Estado miembro
se designen:
a) un laboratorio nacional, que se mantendrá dotado de las instala-
ciones y el personal especializado necesarios, para realizar la
evaluación de la patogenicidad de los virus de la influenza que se
hayan aislado, con arreglo al capítulo 7 del Anexo III, y la identifi-cación de los subtipos H5 o H7 del virus de la influenza A;
b) un laboratorio nacional encargado de controlar los reactivos utili-
zados por los laboratorios regionales;
c) un instituto o laboratorio nacional en el cual las vacunas autorizadas
puedan ser controladas para verificar su conformidad con las especi-
ficaciones contempladas en la autorización de comercialización.
2. Los laboratorios nacionales indicados en el Anexo IV se encar-
garán de la coordinación de las normas y los métodos de diagnóstico,el uso de reactivos y el control de vacunas.
3. Los laboratorios nacionales indicados en el Anexo IV se encar-
garán de la coordinación de las normas y los métodos de diagnóstico
establecidos en cada laboratorio de diagnóstico de la influenza aviar
en el Estado miembro. A tal fin:
a) podrán proporcionar a los laboratorios nacionales reactivos para el
diagnóstico;
b) controlarán la calidad de todos los reactivos de diagnóstico utili-
zados en ese Estado miembro;
c) organizarán periódicamente pruebas comparativas;
d) mantendrán aislados virus de la influenza aviar recogidos de casos
confirmados en ese Estado miembro;
e) confirmarán los resultados positivos obtenidos en los laboratorios de
diagnóstico regionales.
4. Habrá una conexión entre los laboratorios nacionales indicados en
el Anexo IV y el laboratorio comunitario de referencia mencionado enel artículo 15.1992L0040 — ES — 01.05.2004 — 003.001 — 8
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Artículo 15
El laboratorio comunitario de referencia para la influenza aviar se
indica en el Anexo V. Sin perjuicio de lo dispuesto en la Decisión 90/424/CEE, y especialmente en su artículo 28, las competencias y
funciones de este laboratorio son las que figuran en dicho Anexo.
Artículo 16
La vacunación contra la influenza aviar con vacunas autorizadas por la
autoridad competente sólo podrá realizarse como complemento de las
medidas de control que se adopten cuando se declare la enfermedad y
de acuerdo con las disposiciones siguientes:
a) La Comisión, en colaboración con el Estado miembro afectado,
tomará la decisión de realizar la vacunación como complemento delas medidas de control, de conformidad con el procedimiento esta-blecido en el artículo 21. Tal decisión se basará principalmente enlos siguientes criterios:
— la concentración de aves de corral en la zona afectada;
— las características y composición de la vacuna utilizada;
— los procedimientos de supervisión de la distribución, el almace-
namiento y la utilización de las vacunas;
— las especies y categorías de aves de corral que vayan a ser vacu-
nadas;
— las zonas en que se vaya a efectuar la vacunación.
No obstante lo dispuesto en el párrafo primero, la decisión de llevar
a cabo la vacunación de emergencia en la zona alrededor del focopodrá ser adoptada por el Estado miembro de que se trate previa
notificación a la Comisión, siempre que no se perjudique a los inte-
reses fundamentales de la Comunidad. Dicha decisión será revisadainmediatamente en el marco del Comité veterinario permanente, conarreglo al procedimiento previsto en el artículo 21.
b) Cuando, de conformidad con la letra a) un Estado miembro esté
autorizado para recurrir a la vacunación de emergencia en una parte
limitada de su territorio, el estatuto del resto del territorio no se veráafectado, siempre que se apliquen las normas de inmovilización delos animales vacunados durante un período que se determinará porel procedimiento expuesto en el artículo 21.
Artículo 17
1. Cada Estado miembro preparará un plan de urgencia en el que se
especifiquen las medidas que deberán aplicarse a escala nacional encaso de que se registren brotes de influenza aviar.
Este plan deberá permitir el acceso a las instalaciones, equipo, personal
y cualquier otro material adecuado necesario para la rápida y eficaz
erradicación del brote.
2. Los criterios que deberán aplicarse para la elaboración de los
planes figuran en el Anexo VI.
3. Los planes elaborados con arreglo a los criterios enunciados en el
Anexo VI serán sometidos a la Comisión, a más tardar seis mesesdespués de la puesta en aplicación de la presente Directiva.
4. La Comisión examinará los planes para determinar si permiten
alcanzar el objetivo perseguido y sugerirá al Estado miembro en cues-tión cualquier modificación que sea necesario introducir, en particularpara que resulten compatibles con los de los demás Estados miembros.
La Comisión aprobará los planes, modificados si fuera necesario, con
arreglo al procedimiento establecido en el artículo 21.
Posteriormente, con arreglo al mismo procedimiento, podrán modifi-
carse o ampliarse según lo aconseje la evolución de la situación.1992L0040 — ES — 01.05.2004 — 003.001 — 9
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Artículo 18
1. Los expertos de la Comisión podrán realizar inspecciones sobre el
terreno, ello en la medida en que resulte necesario para una aplicación
uniforme de la presente Directiva y en colaboración con las autoridades
competentes. Para ello, podrán verificar, inspeccionando un porcentajerepresentativo de instalaciones, si las autoridades competentes estáncomprobando que en éstas se respeta lo dispuesto en la presente Direc-tiva. La Comisión comunicará a los Estados miembros los resultados dela investigación.
El Estado miembro en cuyo territorio se realice una inspección faci-
litará a los expertos la asistencia necesaria para el desempeño de sus
funciones.
Las normas de desarrollo del presente artículo se establecerán por el
procedimiento expuesto en el artículo 21.
Artículo 19
Las condiciones de participación financiera de la Comunidad en las
acciones relacionadas con la aplicación de la presente Directiva estándefinidas en la Decisión 90/424/CEE.
Artículo 20
Los Anexos serán modificados, cuando fuere necesario, por el Consejo
por mayoría cualificada, a propuesta de la Comisión, en particular paraadaptarlos a la evolución de las investigaciones y de los procedimientos
de diagnóstico.
Artículo 21
1. La Comisión estará asistida por el Comité permanente de la
cadena alimentaria y de sanidad animal, creado mediante el artículo 58del Reglamento (CE) n
o178/2002 (1).
2. En los casos en que se haga referencia al presente artículo, serán
de aplicación los artículos 5 y 7 de la Decisión 1999/468/CE (2).
El plazo contemplado en el apartado 6 del artículo 5 de la Decisión
1999/468/CE queda fijado en tres meses.
3. El Comité aprobará su reglamento interno.
Artículo 22
Los Estados miembros pondrán en vigor las disposiciones legales,
reglamentarias y administrativas necesarias para dar cumplimiento a lo
dispuesto en la presente Directiva antes del 1 de enero de 1993. Infor-marán de ello inmediatamente a la Comisión.
Cuando los Estados miembros adopten disposiciones, éstas contendrán
una referencia a la presente Directiva o irán acompañadas de dichareferencia en el momento de su publicación oficial. Las características
de tal referencia las determinarán los Estados miembros.
Artículo 23
Los destinatarios de la presente Directiva serán los Estados miembros.1992L0040 — ES — 01.05.2004 — 003.001 — 10
(1) DO L 31 de 1.2.2002, p. 1.
(2) DO L 184 de 17.7.1999, p. 23.▼M1
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ANEXO I
AUTORIZACIÓNPARAEXTRAERHUEVOSDEUNAEXPLOTACIÓN
QUE ESTÉ SUJETA A LAS CONDICIONES ESTABLECIDAS EN LA
LETRA e) DEL APARTADO 2 DEL ARTÍCULO 4 DE LA PRESENTE
DIRECTIVA
La autorización expedida por la autoridad competente a efectos de transporte de
huevos de una explotación sospechosa sujeta a lo dispuesto en la letra e) del
apartado 2 del artículo 4 hacia un establecimiento autorizado para la fabricación
y tratamiento de ovoproductos conforme a lo dispuesto en el apartado 1 del
artículo 6 de la Directiva 89/437/CEE, denominado en lo sucesivo «estableci-
miento designado», deberá ajustarse a los siguientes requisitos:
1) para que puedan extraerse huevos de la explotación sospechosa, éstos
deberán:
a) ajustarse a lo dispuesto en el capítulo IV del Anexo de la Directiva 89/
437/CEE;
b) ser directamente enviados de la explotación sospechosa al establecimiento
designado; el veterinario oficial de la explotación sospechosa deberá
precintar cada envío previamente a su salida, quedando éstos precintados
mientras dure el transporte hasta el establecimiento designado;
2) el veterinario oficial de la explotación sospechosa informará a la autoridad
competente del establecimiento designado de su intención de enviarle los
huevos;
3) la autoridad competente responsable del establecimiento designado se
cerciorará de que:
a) los huevos a que hace referencia la letra b) del punto 1 permenezcan
alejados de los demás huevos desde su llegada hasta su tratamiento;
b) las cáscaras de los mismos consideradas como material de alto riesgo con
arreglo a lo dispuesto en el apartado 2 del artículo 2 de la Directiva 90/
667/CEE (1) y serán tratadas conforme a lo dispuesto en el capítulo II de
la misma Directiva;
c) el material de embalaje, los vehículos utilizados para el transporte de los
huevos a que hace referencia la letra b) del punto 1, así como todos los
lugares que hayan entrado en contacto con los huevos deberán limpiarse y
desinfectarse de tal forma que quede eliminado todo virus de la influenza
aviaria;
d) el veterinario oficial de la explotación sospechosa sea informado de cual-
quier expedición de huevos tratados.1992L0040 — ES — 01.05.2004 — 003.001 — 11
(1)D O noL 363 de 27. 12. 1990, p. 51.
▼B
ANEXO II
PROCEDIMIENTODELIMPIEZAYDESINFECCIÓNDEUNAEXPLO-
TACIÓNINFECTADA
I.Limpiezapreviaydesinfección
a) En cuanto se retiren los canales de las aves con vistas a su eliminación,
las partes de los locales en que se hubieran encontrado dichas aves, así
como cualquier parte del edificio, corral, etc. contaminado durante el
sacrificio o la inspección post mortem deberán rociarse con desinfectante
autorizado conforme a lo dispuesto en el artículo 11 de la presente Direc-
tiva.
b) Todo tejido de ave y huevos que pudiera haber contaminado edificios,
corrales, utensilios, etc. deberá recogerse con cuidado a fin de que se
elimine junto con las canales.
c) El desinfectante utilizado deberá permanecer sobre la superficie tratada
durante al menos 24 horas.
II.Limpiezafinalydesinfección
a) Deberá eliminarse de cualquier superficie con un producto desengrasante
la grasa y las manchas que se lavarán posteriormente con agua.
b) Tras el lavado con agua que se menciona en la letra a), se rociarán
nuevamente las superficies con desinfectante.
c) Una vez transcurridos siete días, los locales deberán tratarse mediante un
producto desengrasante, enjuagarse con agua fría, rociarse con desinfec-
tante y enjuagarse de nuevo con agua.
d) El estiércol o pajazas utilizadas deberán tratarse mediante un método
idóneo para eliminar el virus. Dicho método deberá incluir una de las
siguientes manipulaciones:
i) se incinerarán o se tratarán por vapor a una temperatura de 70 ºC;
ii) se enterrarán a una profundidad que impida el acceso a parásitos y
aves salvajes;
iii) se amontonarán y humidificarán (si resultare necesario para facilitar
la fermentación), se cubrirán para mantener el calor de forma que se
alcance una temperatura de 20 ºC y se mantendrán cubiertos durante
42 días de modo que se evite el acceso de parásitos y aves salvajes.1992L0040 — ES — 01.05.2004 — 003.001 — 12
▼B
ANEXO III
MÉTODOS DE DIAGNÓSTICO PARA LA CONFIRMACIÓN Y
DIAGNÓSTICODIFERENCIALDELAINFLUENZAAVIAR
Los métodos de aislamiento y de caracterización de los virus de la influenza
aviar expuestos a continuación han de considerarse como directrices y consti-
tuyen los requisitos mínimos que deben aplicarse en el diagnóstico de dicha
enfermedad.
A efectos de los métodos de diagnóstico para la confirmación y el diagnóstico
diferencial de la influenza aviar, se empleará la siguiente definición:
Por «influenza aviar» se entiende una infección de las aves de corral producida
por cualquier virus de la influenza aviar A cuyo índice de patogenicidad intra-
venosa sea superior a 1,2 en pollitos de seis semanas de edad, o cualquier
infección provocada por virus del subtipo H5 o H7 de la influenza A cuya
secuenciación de nucleótidos haya demostrado la presencia de múltiples aminoá-
cidos básicos en el punto de corte de la hemaglutinina.
CAPÍTULO 1
Tomademuestrasytratamientodelasmismas
1.Muestras
Hisopos de cloaca (o materias fecales) e hisopos traqueales de aves enfermas;
materias fecales o contenido intestinal, tejido cerebral, tráquea, pulmones,
hígado, bazo y otros órganos manifiestamente afectados procedentes de aves
recién fallecidas.
2.Tratamiento de las muestras
Aunque los órganos y los tejidos mencionados en el punto 1 pueden
mezclarse, las materias fecales deberán tratarse por separado. Se sumergirán
completamente los hisopos en una cantidad suficiente de medio con antibió-
ticos. A su vez, las muestras de materias fecales y de órganos deberán
homogeneizarse (en un mezclador cerrado o utilizando un mortero y arena
esterilizada) en un medio con antibióticos para convertirlas en suspensiones
en ese medio al 10-20 % p/v. Posteriormente, esas suspensiones se dejarán
a temperatura ambiente durante dos horas aproximadamente (o durante más
tiempo a una temperatura de 4 ºC) y se clarificarán por centrifugación (por
ejemplo, de 800 a 1 000 g durante 10 minutos).
3.Medio con antibióticos
Diferentes laboratorios han utilizado distintos medios con antibióticos, obte-
niendo buenos resultados. En cada país, los laboratorios nacionales podrán
asesorar al respecto. Para las muestras de materias fecales es necesaria una
fuerte concentración de antibióticos; una mezcla típica es la siguiente:
10000 unidades/ml de penicilina, 10 mg/ml de estreptomicina, 0,25 mg/ml
de gentamicina y 5 000 unidades/ml de micostatina en una solución salina
amortiguadora de fosfato. Estos niveles pueden reducirse hasta cinco veces
cuando se trabaje con tejidos e hisopos traqueales. Para evitar el crecimiento
de Chlamydia, pueden añadirse 50 mg/ml de oxitetraciclina. Al elaborar el
medio, es imprescindible comprobar el pH después de añadir los antibióticos
y corregirlo hasta que fluctúe entre 7,0 y 7,4.
CAPÍTULO 2
Aislamientodelvirus
Aislamiento del virus en huevos embrionados de aves de corral
Deberán inocularse dosis de 0,1 a 0,2 ml del líquido sobrenadante clarificado
dentro de la cavidad alantoidea de al menos 4 huevos embrionados que hayan
sido incubados de 8 a 10 días. Es preferible que los huevos procedan de una
manada exenta de patógenos específicos, aunque, si ello no fuera posible,
podrán utilizarse huevos de una manada exenta de anticuerpos del virus de la
influenza aviar. Los huevos inoculados deberán mantenerse a 37 ºC y se exami-
narán al trasluz diariamente. Los huevos que contengan embriones muertos o
moribundos serán refrigerados a 4 ºC a medida que se vayan comprobando.
Los demás lo serán a la misma temperatura 6 días después de la inoculación.
Los fluidos alantoideos amnióticos se someterán además a la prueba de hema-
glutinación. Si ésta resultase negativa, deberá repetirse este procedimiento
utilizando fluido alantoideo o amniótico no diluido, como inóculo.1992L0040 — ES — 01.05.2004 — 003.001 — 13
▼B
Cuando la hemaglutinación sea positiva, deberá descartarse la posible presencia
de bacterias mediante la realización de un cultivo. Si se confirma la presencia de
bacterias, podrán filtrarse los fluidos con un filtro de membrana de 450 nm,
añadirse más antibióticos e inocularse en huevos embrionados como ya se
explicó anteriormente.
CAPÍTULO 3
Diagnósticodiferencial
1.Diferenciación preliminar
Teniendo en cuenta que es fundamental que se adopten medidas para limitar
la propagación del virus lo antes posible, cada laboratorio regional deberá
estar en condiciones de detectar cualquier virus hemaglutinante aislado, tales
como los del subtipo H5 o H7 de la influenza, además de los de la enfer-
medad de Newcastle. Los fluidos hemaglutinantes deberán someterse a las
pruebas de inhibición de la hemaglutinación descritas en los capítulos 5 y 6.
Una inhibición positiva, es decir de 24o más, con antisuero policlonal especí-
fico para los subtipos H5 o H7 de la influenza A (con un título de al menos
29), se considerará una identificación preliminar suficiente para imponer
medidas provisionales de control.
2.Confirmación de la identificación
Dado que hay 13 subtipos de hemaglutinina y 9 subtipos de neuraminidasa
del virus de la influenza y que en cada uno de ellos se presentan variaciones,
no es viable ni rentable que cada laboratorio nacional tenga antisueros que
posibiliten una caracterización antigénica completa del virus de la influenza.
No obstante, cada laboratorio nacional deberá:
i) confirmar que el microorganismo es un virus de la influenza A utilizando
una prueba de inmunodifusión doble para detectar el antígeno de grupo,
efectuada de acuerdo con el capítulo 9 (si así lo prefieren, los laborato-
rios nacionales podrán emplear técnicas de inmunofluorescencia o ELISA
para la detección de los antígenos de grupo);
ii) determinar si el virus aislado es o no del subtipo H5 o H7;
iii) realizar pruebas del índice de patogenicidad intravenosa en pollos de seis
semanas de edad, efectuadas de acuerdo con el capítulo 7 del presente
Anexo. Un índice de patogenicidad intravenosa superior a 1,2 es la señal
de que hay virus y de que es necesario aplicar a fondo las medidas de
control (sería útil que los laboratorios nacionales realizasen también
pruebas de determinación de la capacidad del virus para producir placas
en cultivos de células, efectuadas de acuerdo con el capítulo 8).
Los laboratorios nacionales deberán enviar inmediatamente todo el material
de la influenza aviar y de los subtipos H5 o H7 al laboratorio comunitario
de referencia para su caracterización total.
3.Tipificación y caracterización adicional del material
Los laboratorios nacionales enviarán al laboratorio comunitario de referencia
todos los virus hemaglutinantes y éste, en consonancia con las competencias
y funciones que le han sido asignadas, someterá esos virus a estudios antigé-
nicos y genéticos adicionales para llegar a un mejor conocimiento de la
epizootiología de la enfermedad o enfermedades en la Comunidad.
Además de esos cometidos, el laboratorio comunitario de referencia llevará a
cabo una tipificación antigénica completa de todos los virus de la influenza
que haya recibido. En cuanto a los virus H5 o H7 cuyos índices de patogeni-
cidad intravenosa no sean superiores a 1,2, deberá realizarse también la
secuenciación de nucleótidos del gen de hemaglutinina para determinar si
hay abundancia o no de aminoácidos básicos en el punto de corte de la
proteína de hemaglutinina. Los virus con aminoácidos básicos en el punto
de corte, aunque presenten índices de patogenicidad poco elevados, reque-
rirán que se apliquen, de manera adecuada, las medidas para luchar contra
la influenza aviar.
CAPÍTULO 4
Pruebas serológicas para la detección de anticuerpos del virus de la
influenzaaviar
1. Tratándose de programas de erradicación en los que el subtipo H del virus ya
se conoce, o cuando se utiliza el virus homólogo como antígeno, el control
serológico para poner de manifiesto la infección puede llevarse a cabo
mediante pruebas de inhibición de la hemaglutinación realizadas según el
método descrito en los capítulos 5 y 6.1992L0040 — ES — 01.05.2004 — 003.001 — 14
▼B
Si el subtipo de hemaglutinina no se conoce, la prueba de que la infección es
producida por virus de la influenza A podrá obtenerse detectando anticuerpos
dirigidos a los antígenos específicos del grupo.
Con ese fin podrá emplearse una prueba de inmunodifusión doble (tal como
se describe en el capítulo 9) o una prueba ELISA (ésta presenta el inconve-niente de la especificidad del hospedador de la prueba ya que depende de la
detección de las inmunoglobulinas del hospedador). Las aves acuáticas raras
veces dan resultados positivos al practicarse pruebas de inmunodifusión
doble y, a menos que se conozca el subtipo, es probable que tales aves sólo
puedan examinarse para comprobar la presencia de anticuerpos en los
subtipos H5 y H7.
2. a)Muestras
Deberán tomarse muestras de sangre de todas las aves cuando la manada
esté compuesta de menos de 20 animales y muestras de 20 aves cuando la
manada sea mayor (de este modo, la probabilidad de detectar al menos un
suero positivo será de 99 % si el 25 % o más de la manada es positivo,
independientemente del tamaño de ésta). Para la prueba, deberá dejarse
que la sangre se coagule y se extraerá el suero.
b)Detección de los anticuerpos
Convendría investigar la capacidad de las muestras individuales de suero
para inhibir el antígeno hemaglutinante del virus de la influenza aviar en
pruebas estándar de inhibición de la hemaglutinación efectuadas de
acuerdo con el capítulo 6.
Dado que las opiniones difieren en cuanto a la utilización de 4 u 8
unidades de hemaglutinina en la prueba de inhibición de la hemaglutina-
ción, y como al parecer ambas dosis son válidas, la elección debería
dejarse al arbitrio de los laboratorios nacionales.
Téngase en cuenta, sin embargo, que del antígeno utilizado dependerá el
nivel en el que un suero sea considerado positivo: con 4 unidades de
hemaglutinina un suero se considerará positivo cuando presente un título
superior o igual a 2
4, mientras que con 8 unidades el título deberá ser
igual o superior a 23.
CAPÍTULO 5
Pruebadehemaglutinación(HA)
Reactivos
1. Solución salina isotónica amortiguadora de fosfato (SSIAF) (0,05M) de pH
7,0 a 7,4.
2. Hematíes extraídos de un mínimo de 3 gallinas exentas de patógenos especí-
ficos (a falta de éstos, podrá utilizarse sangre de aves que hayan estado bajo
control regular y que se hayan reconocido como exentas de anticuerpos del
virus de la influenza aviar), reunidos y mezclados a partes iguales con solu-
ción de Alsever. Antes de utilizarlos, los hematíes deberán lavarse tres veces
en la solución salina isotónica amortiguadora de fosfato (SSIAF). Para la otra
prueba, se recomienda una suspensión en PBS al 1 % (valor de hematocrito).
3. El laboratorio comunitario de referencia suministrará virus H5 y H7 de bajo
poder patógeno o los recomendará para su utilización como antígenos
estándar.
Método
1. Distribuir 0,025 ml de SSIAF en cada uno de los pocillos de una placa de
microtitulación (utilizar pocillos con fondo en V).
2. Introducir 0,025 ml de suspensión de virus (es decir, fluido alantoideo) en el
primer pocillo.
3. Utilícese una micropipeta para hacer diluciones del virus posdesdoblamiento
(de 1:2a 1:4096) de un pocillo a otro.
4. Añadir otros 0,025 de PBS en cada pocillo.
5. Añadir 0,025 ml de una suspensión al 1 % de hematíes a cada pocillo.6. Homogeneizar golpeando ligeramente la placa y refrigerarla a 4 ºC.7. Examinar las placas después de 30 o 40 minutos cuando se hayan sedimen-
tado los hematíes de control. El examen se efectuará inclinando la placa y
observando la presencia o ausencia de un movimiento de los hematíes en
forma de lágrima. Los pocillos en los que no se haya producido la hemaglu-1992L0040 — ES — 01.05.2004 — 003.001 — 15
▼B
tinación deberán presentar un movimiento similar al de los pocillos de
control que no contengan virus.
8. El título de hemaglutinación será la mayor dilución que produzca la aglutina-
ción de los hematíes. Puede considerarse que tal dilución contiene una unidad
de hemaglutinación. Otro método más preciso para determinar el título de
hemaglutinación consiste en realizar pruebas de hemaglutinación con virus
de una gama completa de diluciones iniciales por ejemplo, 1:3, 1:4, 1:5,
1:6, etc. Este método se recomienda para preparar con gran precisión
antígenos para las pruebas de inhibición de la hemaglutinación (capítulo 6).
CAPÍTULO 6
Pruebadeinhibicióndelahemaglutinación(IH)
Reactivos
1. Solución amortiguadora de fosfato (SSIAF).2. Fluido alantoideo que contenga el virus, diluido con SSIAF hasta que
contenga 4 u 8 unidades de hemaglutinación por cada 0,025 ml.
3. Suspensión de hematíes de pollo al 1 %.4. Suero de pollo de control negativo.5. Suero de control positivo.
Método
1. Distribuir 0,025 ml de SSIAF en cada uno de los pocillos de una placa de
microtitulación de plástico (utilizar pocillos con fondo en V).
2. Introducir 0,025 ml de suero en el primer pocillo de la placa.
3. Utilizar una micropipeta para hacer diluciones a la mitad del suero en toda
la placa.
4. Añadir 0,025 ml de fluido alantoideo diluido que contenga 4 u 8 unidades
de hemaglutinación.
5. Homogeneizar golpeando ligeramente la placa y refrigerarla a 4 ºC durante
al menos 60 minutos o dejarla a temperatura ambiente durante 30 minutos
como mínimo.
6. Añadir 0,025 ml de suspensión de hematíes al 1 % a todos los pocillos.7. Homogeneizar golpeando ligeramente las placas y refrigerarlas a 4 ºC.8. Examinar las placas después de 30 a 40 minutos cuando se hayan sedimen-
tado los hematíes de control. El examen se efectuará inclinando las placas y
observando la presencia o ausencia de un movimiento en forma de lágrima
similar al de los pocillos de control que contengan hematíes (0,025 ml) y
SSIAF (0,05 ml) solamente.
9. El título de inhibición de la hemaglutinación será la mayor dilución del
antisuero que produzca una inhibición completa de 4 u 8 unidades de virus
(en todas las pruebas deberá incluirse una titulación de hemaglutinación
para confirmar la presencia de las unidades de hemaglutinación necesarias).
10. La validez de los resultados dependerá de la obtención de un título de
menos de 2
3para 4 unidades de hemaglutinación o de 22para 8 unidades
de hemaglutinación con el suero de control negativo y de un título que
esté entre el doble y la mitad (un orden de dilución) del título conocido
del suero de control positivo.
CAPÍTULO 7
Índicedepatogenicidadintravenosa(IVPI)
1. Diluir a 10−1fluido alantoideo infeccioso del pase más bajo posible, prefe-
rentemente del asliamiento inicial y sin selección alguna, en una solución
salina isotónica esterilizada.
2. Inyectar por vía intravenosa en cada uno de los diez pollitos de seis semanas
de edad (deberán utilizarse aves libres de patógenos específicos) 0,1 ml de
virus diluido.
3. Examinar las aves cada 24 horas durante diez días.4. Puntuar todas las aves en cada examen: 0 = normal, 1 = enferma, 2 = grave-
mente enferma y 3 = muerta.1992L0040 — ES — 01.05.2004 — 003.001 — 16
▼B
5. Anotar los resultados y calcular el índice del siguiente modo:
Síntomas clínicosDías después de la inoculación
Total puntuación
123456789 1 0
normal 10 2 0 0 0 0 0 0 0 0 12 × 0 = 0
enferma 0 4 2 0 0 0 0 0 0 0 6 × 1 = 6
gravemente
enferma (*)0222 000000 6 × 2 = 1 2
muerta 0 2 6 8 10 10 10 10 10 10 76 × 3 = 228
Total = 246
´Indice¼puntuaci´on media por ave y por observaci´ on :246
100¼2;46
(*) Se trata de un diagnóstico subjetivo que en general se aplicará a las aves que presenten más de uno de los
síntomas siguientes: problemas respiratorios, depresión, diarrea, cianosis en la piel no recubierta o en las
barbillas, edema en la cara o en la cabeza o signos nerviosos.
CAPÍTULO 8
Evaluacióndelacapacidaddeformacióndeplacas
1. Normalmente, lo más conveniente es utilizar una serie de diluciones del virus
a fin de obtener un número adecuado de placas en el cultivo. Bastará con
diluciones decimales hasta llegar a una concentración de 10−7en SSIAF.
2. Preparar capas monocelulares confluentes de células de embrión de pollito o
una línea celular apropiada (por ejemplo, la línea de riñón de bovino de
Madin-Darby) en placas de Petri de 5 cm de diámetro.
3. Introducir 0,2 ml de cada dilución de virus en dos placas de Petri y esperar
30 minutos para que el virus se absorba.
4. Tras lavar tres veces con SSIAF las células infectadas, se cubrirán con un
medio apropiado que contenga agar al 1 % p/v (también puede añadirse
0,01 mg/ml de tripsina). Es importante no añadir suero al medio de recubri-
miento.
5. Tras 72 horas de incubación a 37 ºC, las placas habrán alcanzado un tamaño
adecuado. Para observarlas, conviene retirar la capa de agar y teñir la capa
monocelular con violeta cristal (0,5 % p/v) en etanol al 25 % (v/v).
6. Todos los virus incubados con tripsina en el medio producirán placas claras.
Por el contrario, a falta de tripsina, sólo producirán placas los virus que
resulten virulentos para los pollitos.
CAPÍTULO 9
Inmunodifusióndoble
El método preferido para determinar la presencia del virus de la influenza A
consiste en demostrar la existencia de antígenos de la nucleocápsida o de la
matriz, que se hallan presentes en todos los virus de la influenza A. Tal demos-
tración se realiza generalmente mediante pruebas de inmunodifusión doble, para
las que se necesitan preparaciones de virus concentrados o extractos de
membranas corioalantoideas infectadas.
Una preparación adecuada de virus concentrados puede conseguirse sencilla-
mente centrifugando a alta velocidad fluido alantoideo infeccioso y
disgregando los virus con detergente de laurilsarcosinato sódico para liberar los
antígenos internos de la nucleocápsida y de la matriz. También puede recurrirse
a la precipitación ácida añadiendo CIH 1N al fluido alantoideo infeccioso hasta
obtener un pH final comprendido entre 3,5 y 4,0; se enfría luego durante al
menos una hora a 0 ºC y se centrifuga a baja velocidad (1 000 g) durante diez
minutos.
Se puede retirar el sobrenadante y resuspender el precipitado que contiene los
virus en un volumen mínimo de solución amortiguadora de glicinasarcosilo1992L0040 — ES — 01.05.2004 — 003.001 — 17
▼B
(laurilsarcosinato sódico al 1 % ajustado a pH 9,0 con glicina 0,5 M). Esta
preparación contiene antígenos de la nucleocápsida y de la matriz.
En 1970, Beard describió la preparación de un producto enriquecido en
antígenos de nucleocápsida a partir de membranas corioalantoideas procedentes
de huevos infectados. Este método comprende los siguientes pasos: retirar las
membranas corioalantoideas de huevos infectados que den positivo a la prueba
de hemaglutinina, triturar u homogeneizar las membranas, congelar y descon-
gelar tres veces y centrifugar a continuación a 1000 g durante diez minutos.
Se retira el precipitado y se trata el sobrenadante con formol al 0,1 % para utili-
zarlo como antígeno.
Cualquiera de estos dos antígenos puede utilizarse en las pruebas de inmunodi-
fusión doble empleando geles de agarosa o agar al 1 % que contengan un 8,0 %
de cloruro sódico en una solución amortiguadora de fosfato 0,1 M de pH 7,2. La
presencia del virus de la influenza A queda confirmada cuando las líneas de
precipitación formadas por el antígeno problema y el antígeno positivo conocido
frente al antisuero positivo conocido se unen para dar una línea de identidad.1992L0040 — ES — 01.05.2004 — 003.001 — 18
▼B
ANEXO IV
LISTADELABORATORIOSNACIONALESPARALAINFLUENZAAVIAR
Bélgica Institut National de Recherches Vétérinaires,
Groeselenberg 99, B-1180 Bruxelles
Dinamarca National Veterinary Laboratory, Poultry Disease Division,
Hangøvej 2, DK-8200 Aarhus N
República Federal de Alemania Institut für Kleintierzucht der Bundesforschungsanstalt für
Landwirtschaft,
Braunschweig-Völkenrode, Postfach 2 80, D-3100 Celle
Grecia ΙνστιτούτοΛοιµωδώνκαιΠαρασιτικώνΝοσηµάτων
66, 26ηςΟκτωβρίου, GR-54627Θεσσαλονίκη
Instituto de Enfermedades Infecciosas y Parasitarias
Calle del 26 de octubre, 66, 54627 — Tesalónica
España Centro Nacional de Referencia para la Peste Aviar — Labora-
torio Nacional de Sanidad y Producción Animal de Barcelona,
Zona Franca Circunvalación-Tramo 6, Esquina Calle 3. Barce-
lona
Francia Centre National d'Etudes Vétérinaires et Alimentaires — Labo-
ratoire Central de Recherches Avicoles et Porcines,
B.P. 53, F-22440 Ploufragan
Irlanda Veterinary Research Laboratory,
Abbotstown, Castleknock, Dublin 15
Italia Istituto Patologie Aviaire, Facoltà di Medicina Veterinaria,
Università di Napoli,
via Aniezzo, Falcone 394, I-80127 Napoli F Delpino 1
Luxemburgo Institut National de Recherches Vétérinaires,
Groeselenberg 99, B-1180 Bruxelles
Países Bajos Centraal Diergeneeskundig Instituut, Vestiging Virologie,
Houtribweg 39, NL-8221 RA Lelystad
Portugal Laboratório Nacional de Investigação Veterinária (LNIV),
Estrada de Benfica, 701, 1500 Lisboa
Reino Unido Central Veterinary Laboratory,
New Haw, Weybridge, GB-Surrey KT15 3NB
Austria Bundesanstalt für Virusseuchenbekämpfung, Wien-Hetzendorf
Finlandia Eläinlääkintä- ja elintarvikelaitos, Helsinki — Anstalten för
veterinärmedicin och livsmedel, Helsingfors
Suecia Statens Veterinärmedicinska anstalt, Uppsala
República Checa Státní veterinární ústav Praha, Sídlištní 24/136, 165 03 Praha 6
Estonia Veterinaar- ja Toidulaboratoorium, Väike-Paala 3, 11415
Tallinn
Chipre ΕργαστήριοΑναφοράςγιατιςΑσθένειεςτωνΖώων ,
ΚτηνιατρικέςΥπηρεσίες , 1417Λευκωσία (National Refe-
rence Laboratory for Animal Health Veterinary Services, CY-
1417 Nicosia)1992L0040 — ES — 01.05.2004 — 003.001 — 19
▼A1
▼A2
▼A2
Letonia Valsts veterin ārmedic īnas diagnostikas centrs, Lejupes iela 3,
LV-1076 R īga
Lituania Nacionalin ėveterinarijos laboratorija, J. Kairi ūkščio g. 10,
LT-2021 Vilnius
Hungría Országos Állategészségügyi Intézet (OÁI),
Pf. 2., Tábornok u. 2.,
H-1581 Budapest
Malta Istituto Zooprofilatico Sperimentale delle Venezie, Padova,
Italia
Polonia Laboratorium Zakładu Chorób Drobiu Pa ństwowego Instytutu
Weterynaryjnego, Al. Partyzantów 57,
PL-24-100 Puławy
Eslovenia Nacionalni veterinarski inštitut, Gerbi čeva 60,
SI-1000 Ljubljana
Eslovaquia Štátny veterinárny ústav, Pod dráhami 918,
SK-96086 Zvolen1992L0040 — ES — 01.05.2004 — 003.001 — 20
▼B
ANEXO V
LABORATORIO COMUNITARIO DE REFERENCIA PARA LA
INFLUENZAAVIAR
Nombre del laboratorio
Central Veterinary Laboratory
New Haw
Weybridge
Surrey KT 15 3NBReino Unido
Las competencias y funciones del laboratorio comunitario de referencia para la
influenza aviar son las siguientes:
1) coordinar, previa consulta a la Comisión, los métodos de diagnóstico de la
influenza aviar en los Estados miembros, especialmente, mediante:
a) la especificación, posesión y entrega de cepas del virus de la influenza
aviar para someterlas a las pruebas serológicas y preparar el antisuero;
b) la entrega de los sueros de referencia y de otros reactivos de referencia a
los laboratorios de referencia nacionales para armonizar las pruebas y los
reactivos empleados en cada Estado miembro;
c) la creación y conservación de una colección de cepas y de materia aislada
del virus de la influenza aviar;
d) la organización periódica de pruebas comparativas comunitarias de los
procedimientos de diagnóstico;
e) la recogida y selección de datos y todo tipo de información sobre los
métodos de diagnóstico utilizados y los resultados de las pruebas efec-
tuadas en la Comunidad;
f) la caracterización de la materia aislada del virus de la influenza aviar
mediante los métodos más avanzados para lograr una mejor comprensión
de la epizootiología de la influenza aviar;
g) el seguimiento de la evolución de la situación en todo el mundo del
control, epizootiología y prevención de la influenza aviar;
h) la realización de una serie de exámenes técnicos sobre el virus de la
influenza aviar y otros virus relacionados con éste para poder hacer un
diagnóstico diferencial rápido;
i) el conocimiento a fondo de la preparación y utilización de los productos
de medicina veterinaria inmunológica empleados para la erradicación y
control de la influenza aviar;
2) contribuir activamente a la identificación de los focos de influenza aviar en
los Estados miembros, estudiando la materia aislada del virus enviada para
confirmar el diagnóstico, proceder a su caracterización y a los estudios
epizootiológicos. Concretamente, el laboratorio debería ser capaz de analizar
la secuencia de los nucleótidos para poder así determinar la secuencia de los
ácidos aminados extraída en el lugar del corte de la molécula de hemagluti-
nina de los virus gripales de los subtipos H5 o H7;
3) facilitar la formación o readaptación profesional de los expertos en diagnós-
ticos de laboratorio para armonizar las técnicas de diagnóstico en toda la
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▼B
ANEXO VI
CRITERIOS MÍNIMOS APLICABLES A LOS PLANES DE INTER-
VENCIÓN
Los planes de intervención deberán establecer por lo menos:
1) la creación, a nivel nacional, de una célula de crisis destinada a coordinar
todas las medidas de urgencia en el Estado miembro afectado;
2) una lista de los centros locales de urgencia dotados del equipo adecuado
para coordinar las medidas de control a escala local;
3) informaciones detalladas sobre el personal encargado de las medidas de
urgencia, sus cualificaciones y responsabilidades;
4) la posibilidad, para cualquier centro local de urgencia, de establecer
contacto con las personas/organizaciones directa o indirectamente afectadas
por una infección;
5) la disponibilidad de los equipos y materiales necesarios para llevar a cabo
de forma apropiada las medidas de urgencia;
6) las instrucciones precisas relativas a las acciones que se deban adoptar
cuando se sospechen y confirmen casos de infección o de contaminación,
incluidos los medios de destrucción de los canales;
7) programas de formación para actualizar y desarrollar los conocimientos
relativos a los procedimientos sobre el terreno y a los procedimientos admi-
nistrativos;
8) para los laboratorios de diagnóstico, un servicio de examen post mortem, la
capacidad necesaria para los exámenes serológicos, histológicos, etc., y la
actualización de las técnicas de diagnóstico rápido (a estos efectos, procede
establecer disposiciones relativas al transporte rápido de muestras);
9) precisiones relativas a la cantidad de vacunas contra la influenza aviar que
se considera necesaria en caso de reinstauración de la vacunación de
urgencia;
10) disposiciones reglamentarias para la aplicación de los planes de interven-
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