1977L0096 — ES — 01.05.2004 — 010.001 — 1
Este documento es un instrumento de documentación y no compromete la responsabilidad de las instituciones
►B DIRECTIVA DEL CONSEJO
de 21 de diciembre de 1976
relativa a la detección de triquinas en el momento de la importación, procedente de terceros
países, de carnes frescas procedentes de animales domésticos de la especie porcina
(77/96/CEE)
(DO L 26 de 31.1.1977, p. 67)
Modificada por:
Diario Oficial
nopágina fecha
►M1 Directiva 81/476/CEE del Consejo de 24 de junio de 1981 L 186 20 8.7.1981
►M2 Directiva 83/91/CEE del Consejo de 7 de febrero de 1983 L 59 34 5.3.1983
►M3 Directiva 84/319/CEE de la Comisión de 7 de junio de 1984 L 167 34 27.6.1984
►M4 Reglamento (CEE) no3768/85 del Consejo de 20 de diciembre de 1985 L 362 8 31.12.1985
►M5 Directiva 89/321/CEE de la Comisión de 27 de abril de 1989 L 133 33 17.5.1989
►M6 Directiva 94/59/CE de la Comisión de 2 de diciembre de 1994 L 315 18 8.12.1994
►M7 Reglamento (CE) no807/2003 del Consejo de 14 de abril de 2003 L 122 36 16.5.2003
Modificada por:
►A1 Acta de adhesión de Grecia L 291 17 19.11.1979
►A2 Acta de adhesión de Austria, de Finlandia y de Suecia C 241 21 29.8.1994
(adaptada por Decisión 95/1/CE, Euratom, CECA del Consejo) L 1 1 1.1.1995
►A3 Acta relativa a las condiciones de adhesión de la República Checa, la
República de Estonia, la República de Chipre, la República de Letonia,
la República de Lituania, la República de Hungría, la República deMalta, la República de Polonia, la República de Eslovenia y la RepúblicaEslovaca, y a las adaptaciones de los Tratados en los que se fundamentala UniónL 236 33 23.9.2003
▼B
DIRECTIVA DEL CONSEJO
de 21 de diciembre de 1976
relativa a la detección de triquinas en el momento de la importa-
ción, procedente de terceros países, de carnes frescas procedentes
de animales domésticos de la especie porcina
(77/96/CEE)
EL CONSEJO DE LAS COMUNIDADES EUROPEAS,
Visto el Tratado constitutivo de la Comunidad Económica Europea,
Vista la Directiva 72/462/CEE del Consejo, de 12 de diciembre de
1972, relativa a los problemas sanitarios y de policía sanitaria en laimportación de animales de las especies bovina y porcina y de lascarnes frescas procedentes de terceros países (
1), modificada en último
lugar por la Directiva 75/379/CEE (2), y, en particular, su artículo 21,
Vista la propuesta de la Comisión,
Considerando que en la Directiva 72/462/CEE el Consejo ha previsto,
en el artículo 21, la elaboración de un método y unas modalidades
necesarias para revelar la presencia de triquinas en las carnes frescas
de animales de la especie porcina;
Considerando que la aplicación de la Directiva 72/462/CEE no
producirá los efectos esperados mientras existan disparidades entre losEstados miembros en cuanto a las garantías exigidas en lo que serefiere a la detección de las triquinas en el momento de la importaciónde las carnes frescas procedentes de terceros países; que es necesario,
por consiguiente, establecer un régimen comunitario en la materia;
Considerando que, con objeto de proteger la salud del consumidor, es
necesario que la carne fresca de porcino sea sometida sistemáticamente
a un examen que aplique métodos reconocidos como eficaces, conobjeto de eliminar a la que contenga triquinas;
Considerando que, cuando el examen se efecture en el tercer país expe-
didor, debe hacerse en mataderos que respondan a determinadascondiciones y que cuenten en particular con un laboratorio de examenprovisto de un material de examen apropiado;
Considerando que, con objeto de poder distinguir las carnes exami-
nadas de las que no lo sean, es necesario prever la fijación de unamarca especial en las carnes cuyo examen haya resultado negativo;
Considerando que es conveniente confiar a un procedimiento por el que
se establezca una cooperación estrecha y eficaz entre la Comisión y los
Estados miembros, la evaluación sobre la oportunidad de admitir a
establecimientos que se encuentren en terceros países a la realizaciónde dicho examen o al trabajo de las carnes examinadas y que es conve-niente, además, confiar al mismo procedimiento la tarea de adaptar, enfunción de la evolución de la técnica y de la experiencia adquirida, las
disposiciones técnicas que se refieren en particular a los métodos de
examen, a las exigencias relativas a los laboratorios de examen y a lasmodalidades de marcado de las carnes examinadas;
Considerando que resulta oportuno autorizar a los Estados miembros a
que admitan las carnes frescas que no hayan sido objeto de un examende detección de triquinas en el tercer país expedidor siempre que sesometa a tales carnes a un tratamiento por frío, que garantice la inacti-vación de posibles triquinas presentes, en el tercer país expedidor o en
el Estado miembro destinatario; que, no obstante, dicho tratamiento
debe realizarse siguiendo determinadas modalidades bien definidas yen establecimientos que respondan a determinadas condiciones,1977L0096 — ES — 01.05.2004 — 010.001 — 2
(1)D O noL 302 de 31. 12. 1972, p. 28.
(2)D O noL 172 de 3. 7. 1975, p. 17.
▼B
HA ADOPTADO LA PRESENTE DIRECTIVA:
Artículo 1
La presente Directiva recoge las definiciones previstas en la Directiva
72/462/CEE.
Además, se entenderá por:
a) carnes frescas: las carnes frescas de los animales domésticos de la
especie porcina;
b) examen: el examen encaminado a detectar la presencia de triquinas
en las carnes frescas.
Artículo 2
1. Para poder se admitidas al tráfico intracomunitario, las carnes
frescas procedentes de terceros países que contengan músculos esquelé-ticos deberán ser sometidas a un examen efectuado bajo el control y laresponsabilidad de un veterinario oficial.
2. El examen deberá efectuarse de acuerdo con uno de los métodos
indicados en el Anexo I, sobre el animal entero o, en su defecto, sobrecada media canal, cuarto o trozo destinados a ser importados en laComunidad.
3. El examen deberá efectuarse en un matadero autorizado en el país
expedidor, con arreglo al artículo 4 de la Directiva 72/462/CEE, y
admitido a la ejecución de dicho examen, con arreglo al artículo 4 dela presente Directiva.
4. El examen deberá efectuarse antes de la colocación del marcado
de inspección veterinaria previsto en el capítulo X del Anexo B de la
Directiva 72/462/CEE.
5. Cuando el examen no pueda efectuarse en el país expedidor, el
Estado miembro destinatario podrá autorizar la importación de lascarnes frescas siempre que el examen se efectúe en su territorio en elmomento del control de inspección veterinaria previsto en el apartado 2
del artículo 24 de la Directiva 72/462/CEE, en un puesto de control con
arreglo a la letra b) del apartado 1 del artículo 27 de la mencionadaDirectiva.
6. a) Cuando el resultado del examen sea negativo, las carnes frescas
deberán marcarse inmediatamente después del final del examen,
con arreglo al Anexo III.
b) Para el marcado con tinta, procede utilizar un colorante con
arreglo al apartado 3 del artículo 17 de la Directiva 72/462/CEE.
Artículo 3
1. No obstante lo dispuesto en el artículo 2, el Estado miembro
destinatario podrá autorizar que carnes frescas procedentes de determi-nados terceros países o partes de estos puedan no ser sometidas aexamen, siempre que sean sometidas a un tratamiento por frío efec-
tuado con arreglo al Anexo IV.
2. Dicho tratamiento se efectuará en un establecimiento situado en
el territorio del tercer país expedidor y contemplado en el apartado 1del artículo 4.
La ejecución del tratamiento por frío en el tercer país expedidor deberá
ser objeto de una certificación por parte del veterinario oficial en loscertificados de inspección veterinaria que acompañan a las carnesfrescas y contemplados en el apartado 3 del artículo 22 de la Directiva72/462/CEE.
3. En caso de que dicho tratamiento no se efectúe en el tercer país
expedidor, deberá efectuarse en un puesto de control indicado en elapartado 5 del artículo 2.
La ejecución del tratamiento por frío en el Estado miembro deberá ser
objeto de una certificación por parte del veterinario oficial en los certi-1977L0096 — ES — 01.05.2004 — 010.001 — 3
▼B
ficados que acompañan a las carnes frescas contemplados en el artículo
25 de la Directiva 72/462/CEE.
Artículo 4
1. La admisión de un matadero a la ejecución del examen y la de
una sala de despiece al despiece o al deshuesado de las carnes frescasque hayan sido sometidas a dicho examen, o la admisión de un estable-
cimiento al tratamiento por frío contemplado en el artículo 3, se
decidirá de acuerdo con el procedimiento previsto en el artículo 9. Setendrán en cuenta, además de los requisitos previstos en el artículo 4 dela Directiva 72/462/CEE, las garantías que se ofrezcan en cuanto alrespeto de las disposiciones de la presente Directiva, y, en lo que se
refiere a los mataderos:
a) de la existencia de los locales y el instrumental necesario para la
ejecución del examen,
b) de la cualificación del personal asignado a la ejecución de dicho
examen.
La admisión de un matadero y de una sala de despiece únicamente
podrá producirse cuando las autoridades competentes del tercer paíshayan reconocido oficialmente que dicho matadero y dicha sala de
despiece están en condiciones de cumplir los requisitos previstos en el
artículo 5 y en el Anexo III; además, en lo que se refiere al matadero,que este dispone de un laboratorio que se ajusta a los requisitosprevistos en el capítulo I del Anexo II y que están en condiciones decumplir lo dispuesto en los demás capítulos de dicho Anexo II y en el
Anexo I.
La admisión de un establecimiento al tratamiento por frío únicamente
podrá producirse cuando las autoridades competentes del tercer paíshubieren reconocido oficialmente que dicho establecimiento está encondiciones de cumplir los requisitos previstos en el Anexo IV.
2. Se insertará una indicación especial en la lista o listas contem-
pladas en el apartado 4 del artículo 4 de la Directiva 72/462/CEErespecto de los nombre de los establecimientos admitidos con arreglo
al apartado 1.
Artículo 5
1. En los mataderos admitidos con arreglo al artículo 4, el sacrificio
de los porcinos cuyas carnes se destinen a la Comunidad deberá efec-
tuarse en locales o, en su defecto, en momentos diferentes de aquellos
en los que sean sacrificados los porcinos cuyas carnes no se destinen ala Comunidad, excepto si las carnes de dichos porcinos se sometieren aun examen efectuado de acuerdo con las mismas modalidades.
2. El despiece y el deshuesado de carnes que hayan sido objeto de
un examen cuyo resultado haya sido negativo y que se destinen a la
Comunidad deberán efectuarse en salas de despiece, con arreglo al
artículo 4.
En dichas salas de despiece, el despiece o el deshuesado de tales carnes
deberá efectuarse en locales o, en su defecto, en momentos diferentesde aquellos en los que se despiecen o deshuesen las carnes que no sedestinen a la Comunidad, excepto si tales carnes hubieren sido some-tidas a un examen de acuerdo con las mismas modalidades.
Artículo 6
Los controles en los terceros países previstos en el artículo 5 de la
Directiva 72/462/CEE tendrán asimismo por objeto verificar la aplica-ción de la presente Directiva.1977L0096 — ES — 01.05.2004 — 010.001 — 4
▼B
Artículo 7
Los Estados miembros establecerán y comunicarán a la Comisión la
lista de los puestos de control contemplados en el apartado 5 del
artículo 2 en los que podrán realizarse:
— el examen,
— el tratamiento por frío previsto en el artículo 3.
Velarán por que dichos puestos dispongan de las instalaciones necesa-
rias para la ejecución de las operaciones correspondientes.
Artículo 8
A fin de tener en cuenta la evolución tecnológica, podrá decidirse las
adaptaciones o complementos a los anexos de la presente Directivasegún el procedimiento previsto en el artículo 9; las decisiones que setomen a este respecto deberán asegurar el mantenimiento del nivel de
las garantías sanitarias existentes.
Artículo 9
1. La Comisión estará asistida por el Comité Permanente de la
Cadena Alimentaria y de Sanidad Animal creado por el artículo 58del Reglamento (CE) n
o178/2002 (1).
2. En los casos en que se haga referencia al presente artículo, serán
de aplicación los artículos 5 y 7 de la Decisión 1999/468/CE (2).
El plazo contemplado en el apartado 6 del artículo 5 de la Decisión
1999/468/CE queda fijado en tres meses.
3. El Comité aprobará su reglamento interno.
Artículo 11
Los Estados miembros aplicarán, a más tardar el 1 de enero de 1979,
las disposiciones legales, reglamentarias y administrativas necesariaspara cumplir la presente Directiva. Informarán de ello inmediatamentea la Comisión.
Artículo 12
Los destinatarios de la presente Directiva serán los Estados miembros.1977L0096 — ES — 01.05.2004 — 010.001 — 5
(1) DO L 31 de 1.2.2002, p. 1.
(2) DO L 184 de 17.7.1999, p. 23.▼M2
▼M7
▼M1
▼B
▼B
ANEXO I
MÉTODOS DE DETECCIÓN DE TRIQUINAS
I. EXAMEN TRIQUINOSCÓPICO
a)Instrumental
Triquinoscopio de lámpara incandescente que permita un aumento de
50 y 80 a 100 veces.
Compresor, formado por dos plaquetas de vidrio que puedan compri-
mirse una contra otra, una de las cuales estará dividida en zonas
iguales, unas tijeras pequeños curvas, una pinza pequeña, un cuchillo
para cortar las muestras, pequeños recipientes numerados destinados a
recoger las muestras, un cuentagotas, un vaso que contenga ácido
acético y otro que contenga una solución de potasa caústica para aclarar
en caso de posible calcificación o para ablander la carne seca.
b)Toma de muestras
Cuando la canal esté entera, deberá tomarse por lo menos una muestra
del grosor de una avellana de cada uno de los pilares del diafragma en
la zona de transición entre la parte muscular y la parte tendinosa.
Cuando únicamente se disponga de un pilar del diafragma, habrá que
tomar de él una muestra que tenga un grosor doble que el de una
avellana. A falta de ambos pilares del diafragma, habrá que tomar dos
muestras del grosor aproximado de una avellana de la parte del
diafragma situada cerca de las costillas o del esternón o de la muscula-
tura de la lengua o de los músculos masticadores o incluso de los
músculos abdominales.
Para los trozos de carne: de cada trozo, tres muestras de músculos
esqueléticos, que contengan poca grasa, si es posible del tamaño de
una avellana y tomadas en puntos diferentes, en la medida de lo posible
cerca de los huesos o de los tendones.
c)Modo de operar
De cada una de las muestras tomadas de canales enteras, anteriormente
descritas, el controlador de las triquinas deberá cortar, en caso de que se
disponga de ambos pilares del diafragma, siete fragmentos del tamaño
de un grano de avena, es decir catorce fragmentos en total, y en caso de
que se cuente únicamente con uno de los pilares del diafragma, catorce
fragmentos, en diferentes lugares y si es posible en la zona intermedia
entre músculo y tendón, y comprimirlos entre las láminas de vidrio del
compresor de forma que puedan leerse facilimente a través de las
preparaciones los caracteres de imrenta normales. Cuando la carne de
los trozos que vayan a examinarse esté seca y envejecida, las prepara-
ciones deberán empaparse durante diez a veinte minutos en una
solución de potasa diluída en dos volúmenes de agua antes de compri-
mirlos.
Cuando, en el caso de las canales enteras, las muestras procedan de la
parte del diafragma situada cerca de las costillas o del esternón, de la
musculatura de la lengua o de los músculos masticadores o incluso de
los músculos abdominales, deberán cortarse catorce fragmentos del
tamaño de un grano de avena de cada muestra, es decir veintiocho frag-
mentos en total.
De cada una de las muestras tomadas de los trozos de carne, el contro-
lador de las triquinas deberá cortar cuatro fragmentos del tamaño de un
grano de avena, es decir doce fragmentos en total.
El examen en el triquinosciopio deberá hacerse de modo que cada
preparado sea examinado lenta y cuidadosamente. Cuando, durante el
examen triquinoscópico se detecten lugares sospechosos cuya naturaleza
no pueda determinarse con certeza, ni siquiera con ayuda del mayor
aumento del triquinoscopio, deberá procederse a un examen de control
con ayuda del microscopio.
El examen microscópico deberá hacerse de modo que cada preparación
sea examinada lenta y cuidadosamente con un aumento de 30 a 40
veces.
En caso de duda, deberá proseguirse el examen con otras muestras y
preparados, si es necesario con aumentos superiores, hasta que se1977L0096 — ES — 01.05.2004 — 010.001 — 6
▼B
obtengan las precisiones deseadas. El examen triquinoscópico deberá
durar por lo menos tres minutos.
En caso de que se utilicen muestras de reserva procedentes de la parte
del diafragma situada cerca de las costillas o del esternón, de la muscu-
latura de la lengua o de los músculos masticadores o de los músculos
abdominales, el examen triquinoscópico deberá durar por lo menos 6
minutos.
El tiempo mínimo establecido para el examen no incluye el tiempo
necesario para la toma de las muestras ni para la confección de las
preparaciones.
En general, un controlador no debería examinar en el triquinoscopio
más de 840 fragmentos por día, pudiendo no obstante elevarse excep-
cionalmente dicho número a 1 050.
II. MÉTODO DE LA DIGESTIÓN ARTIFICIAL
a)Instrumental y material
— Cuchillo para la toma de las muestras.
— Pequeños recipientes numerados que puedan ser cerrados para la
conservación de las muestras, en su caso hasta la repetición de los
exámenes.
— Estufa.
— Embudo de vidrio de dos a tres litros con soporte y tubo de cone-
xión de caucho, pinzas para separar el tubo de conexión.
— Tamiz de plástico (diámetro de 18 cm aproximadamente, mallas de
1 mm aproximadamente).
— Cedazo.
— Tubo ahusado de punta soldada.
— Cubeta.— Picadora de carne.
— Estereomicroscopio (aumento de 15 a 40 veces) que disponga de
una iluminación adecuada.
— Líquido de digestión compuesto de la siguiente manera: 10 g de
pepsina [80 U/g FIP (Federación Internacional de Farmacia)], 5ml
de HCl (37 %, por lo menos), llevar a un litro con agua corriente.
b)Toma de las muestras
1. Cuando las canales están enteras, tomar una muestra de 20 gramos
por lo menos en uno de los pilares del diafragma en la zona de tran-
sición entre la parte muscular y la parte tendinosa; cuando no se
disponga del pilar del diafragma, tomar la misma cantidad de la
parte del diafragma situada cerca de las costillas o del esternón o
de la musculatura de la lengua o de los músculos masticadores, o
incluso de la musculatura abdominal.
2. Para los trozos de carne, tomar una muestra de 20 gramos por lo
menos de los músculos esqueléticos que contenga poca grasa y, en
la medida de lo posible, cerca de los huesos o de los tendones.
c)Método
Para el examen de una muestra colectiva procedente de 10 cerdos, se
tomará una muestra que pese 10 gramos de cada muestra individual
(20 gramos). Los 10 gramos restantes se conservarán para un examen
individual que pudiera ser necesario.
Se reunirán 10 muestras de 10 gramos cada una en una muestra colec-
tiva, se machacarán por medio de una picadora de carne (diámetro de
los agujeros: 2 mm) y se colocarán, sin aplastar, en el tamiz provisto
de un cedazo. Se suspenderá entonces el tamiz en un embudo unido
por un trozo de tubo de caucho a un tubo ahusado, de punta soldada;
se llenará el embudo con el líquido de digestión hasta que el material
de análisis esté completamente recubierto. La relación material de
análisis/líquido de digestión deberá 1/20 a 1/30 aproximadamente.
Después de una incubación de 18 a 20 horas a una temperatura de 37 a
39º C, se separará el tubo ahusado. Eliminar con precaución el líquido
que sobrenade en dicho tubo y recoger en una cápsula el sedimento, que
será cuidadosamente aclarado. Buscar la presencia de triquinas con
ayuda del estereomicroscopio con un aumento de 20 a 40 veces.1977L0096 — ES — 01.05.2004 — 010.001 — 7
▼M3
▼B
▼B
En caso de resultado positivo o dudoso del análisis de una muestra
colectiva, analizar individualmente las muestras restantes a las que se
a ãnadirán 20 gramos tomados de cada cerdo o, en caso de que se trate
de trozos de carne, 20 gramos tomados de cada trozo, con arreglo a la
letra b).
III. MÉTODO DE LA DIGESTIÓN ARTIFICIAL DE MUESTRAS COLEC-
TIVAS
a)Instrumental y reactivos
— Un cuchillo y pinzas para la toma de muestras.
— Una máquina de picar carne cuyos agujeros deberán tener un
diámetro comprendido entre 2y3m m .
— Un matraz Erlenmeyer de 3 l provisto de un tapón de goma o de
guata.
— Un embudo cónico de separación de una capacidad de 2 000 ml.— Un soporte normal con el pie en forma de A, de 28 cm de longitud,
provisto de una varilla de 80 cm.
— Un anillo de 10 a 11 cm que pueda fijarse al soporte.
— Una pinza provista de una boca chata (23/40 mm) que pueda suje-
tarse al soporte mediante un manguito doble.
— Un tamiz (finura de la malla: 177 µ) de un diámetro exterior de
11 cm, provisto de una rejilla de latón o de acero inoxidable.
— Un embudo de un diámetro interior, mínimo, de 12 cm.
— Probetas graduadas de 100 ml.
— Un estereomicroscopio (aumento de 15 a 40 veces), que disponga de
una iluminación adecuada, o un triquinoscopio provisto de una tabla
horizontal para el compresor, que disponga de una iluminación
adecuada.
— En caso de utilización del triquinoscopio: una cubeta para el
cómputo de larvas, que se podrá describir de la siguiente manera:
una cubeta formada por placas acrílicas de un espesor de 3 mm y
que reúna las siguientes características:
i) fondo de la cubeta: 180 × 40 mm, dividido en cuadrados;
ii) placas laterales: 230 × 20 mm;
iii) placas frontales: 40 × 20 mm.
El fondo y las placas frontales deberán estar fijos entre las placas
laterales, de manera que formen una cubeta provista de 2 pequeñas
asas en los dos extremos. La parte superior del fondo deberá estar
entre 7 y 9 mm más elevada con relación a la base del cuadrado
formado por las placas laterales y frontales. La placas deberán
fijarse mediante una cola adecuada al material.
— En caso de utilización del estereomicroscopio, una serie de placas
de Petri de un diámetro de 9 cm, cuyo fondo esté dividido en
cuadrados de examen de 10 × 10 mm, mediante un instrumento
puntiagudo.
— Varios cubos de 10 l que se utilizarán en el momento de la descon-
taminación de los instrumentos, mediante un tratamiento como el
formol, y para el jugo digestivo que quede, en caso de resultado
positivo.
— Acido clorhídrico concentrado (37 %).— Concentración de pepsina: 1: 10 000 NF (US National Formulary),
correspondiente a 1: 12 500 BP (British Pharmacopea), correspon-
diente a 2 000 FIP (Federación International de Farmacia).
— Un número de bandejas que puedan contener 50 muestras, de apro-
ximadamente, 2 g cada una.
— Una balanza de precisión de 0,1 g.
b)Toma de muestras
1. Cuando las canales están enteras, tomar una muestra, de aproximada-
mente 2 g, en uno de los pilares del diafragma, en la zona de
transición entre la parte muscular y la parte tendinosa; si no hubiere
pilar del diafragma, tomar la misma cantidad en la parte del
diafragma situada cerca de las costillas o del esternón, o en la
musculatura de la lengua, o en los músculos masticadores, o también
en la musculatura abdominal.1977L0096 — ES — 01.05.2004 — 010.001 — 8
▼M3
▼M3
2. Para los trozos de carne, tomar una muestra, de aproximadamente
2 g, en los músculos esquelétricos que contengan poca grasa y en
la medida que sea posible, cerca de los huesos o de los tendones.
c)Método
1. i) Grupos completos de muestras ( 1 0 0al av e z )
Se tomará una muestra, de aproximadamente 1 g, de cada una de
las 100 muestras individuales procedentes de los cerdos. La
muestra colectiva se pasará una vez por la máquina de picar
carne.
La carne picada se colocará en el matraz Erlenmeyer de 3 l, al
mismo tiempo que 7 g de pepsina y se cubrirá con 2 l de agua
de grifo calentada a una temperatura aproximada de 40 a 41 ºC,
y con 25 ml de ácido clorhídrico concentrado. Agitar la mezcla
para disolver la pepsina.
El pH de la solución será, entonces, de aproximadamente 1,5 a 2.
— Para la digestión, el matraz Erlenmeyer se colocará en una
estufa a 40-41 ºC durante 4 horas aproximadamente. Durante
este tiempo, se agitará regularmente como mínimo, dos veces
por hora.
— Digerida la solución, se filtrará, mediante un tamiz, a través
del embudo cónico de separación de 2 l y se dejará en reposo
sobre el soporte durante, por lo menos, una hora.
— Se trasegará a una probeta graduada, un volumen total de
aproximadamente 45 ml, y se distribuirá en tres placas de
Petri, cuyos fondos estarán divididos en cuadrados de 15 ml
por placa.
— Cada placa de Petri se exeminará minuciosamente en el este-
reomicroscopio, con el fin de descubrir las larvas
— En caso de utilización de cubetas para el cómputo de larvas,
los 45 ml se distribuirán en dos cubetas y se examinarán en el
triquinoscopio.
Las larvas aparecerán en el sedimento como unos organismos
identificables y si el agua estuviera tibia, frecuentemente se
podrán observar los enrollados y desenrrollados de la espiral.
— Los líquidos de digestión se deberán exeminar desde el
momento en que estén dispuestos. En ningún caso se podrá
postergar el examen para el día siguiente. Si los liquidos de
digestión ho fueran lo suficientemente transparentes, o si no
se examinaran en el plazo de 30 minutos siguiente a su prepa-
ración, se deberán clarificar de la siguiente manera: verter la
muestra final de 45 ml en una probeta graduada y dejar sedi-
mentar durante 10 minutos. Después de dicho tiempo, quitar,
por aspiración, 30 ml del líquido sobrenadante y agregar agua
de grifo a los 15 ml restantes hasta obtener un volumen total
de 45 ml. Después de un nuevo período de reposo de 10
minutos, quitar, por aspiración, 30 ml del líquido sobrena-
dante, verter los 15 ml restantes en una placa de Petri, o en
una cubeta para el cómputo de las larvas, con vistas a su
examen. Lavar la probeta graduada con 10 ml de agua de
grifo; agregar el líquido obtenido a la muestra en la placa de
Petri, o en la cubeta para cómputo de larvas y examinar.
ii) Grupos de menos de 100 muestras
Se podrá agregar un máximo de 15 muestras individuales a un
grupo completo de 100 muestras para examinarlas al mismo
tiempo que estas últimas. Si el número de muestras que se deban
examinar es superior a 15 e inferior a 100, el líquido de digestión
se deberá reducir proporcionalmente.
2. En caso de resultado positivo o dudoso del examen de una muestra
colectiva, se deberá tomar una muestra de 20 g, de cada cerdo, de
acuerdo con las indicaciones contempladas en la anterior letra b).
Las muestras de 20 g procedentes de 5 cerdos se deberán reunir y
examinar de acuerdo con el método arriba descrito. De esta forma
se examinarán las muestras de 20 grupos de 5 cerdos. Si se descu-
brieran las triquinas en un grupo de muestras de 5 cerdos, se
deberán tomar las muestras de 20 g de cada animal que pertenezca
a dicho grupo y se deberán examinar de acuerdo con el método
arriba descrito1977L0096 — ES — 01.05.2004 — 010.001 — 9
▼M3
IV. MÉTODO DE LA DIGESTIÓN DE MUESTRAS COLECTIVAS CON
ASISTENCIA MECÁNICO/TÉCNICA DE LA SEDIMENTACIÓN
a)Instrumental y reactivos
— Un cuchillo o tijeras para cortar las muestras.
— Bandejas divididas en 50 cuadrados que puedan contener, cada uno,
las muestras de carne, de aproximadamente 2 g.
— Un Stomacher Lab-blender 3 500, Thermo model.— Bolsas de plástico adaptadas al Stomacher Lab-blender.
— Embudos de separación cónicos de una capacidad de 2 l, preferente-
mente provistos de llaves de seguridad de Teflon
— Soportes con anillos y fijaciones.
— Tamices, finura de malla 177 µ, de un diámetro exterior de 11 cm,
provistos de una rejilla de acero inoxidable.
— Embudos de un diámetro interior mínimo de 12 cm, cuyo destino
será recibir los tamices.
— Probetas graduadas de 100 ml.
— Un dosificador de 25 ml.— Vasos de precipitados de una capacidad de 3 l.
— Una cuchara o una varilla de vidrio para agitar el liquido de diges-
tión en el vaso de precipitados.
— Una jeringa de plástico y un tubo de aspiración.
— Una cuchara graduada de 6 g.— Un termómetro de una precisión de ± 0,5 ºC con una graduación de
1 a 100 ºC.
— Un vibrador, por ejemplo, una afeitadora eléctrica sin cabeza.
— Un relé que se encienda y apague cada minuto.
— Un triquinoscopio provisto de una tabla horizontal o un estereomi-
croscopio que disponga de una iluminación adecuada.
— Una cubeta para el cómputo de larvas (en caso de utilización de un
triquinoscopio).
La cubeta deberá estar formada por placas acrílicas de un espesor de
3 mm y deberá presentar las siguientes características:
i) fondo de la cubeta: 180 × 40 mm, dividido en cuadrados;
ii) placas laterales: 230 × 20 mm;
iii) placas frontales: 40 × 20 mm.
El fondo y las placas frontales deberán estar fijos entre las placas
laterales, de manera que formen dos pequeñas asas en los dos
extremos. La parte superior del fondo deberá estar entre 7 y 9 mm
más elevada con relación a la base del cuadrado formado por las
placas laterales y frontales. Fijar las placas mediante una cola
adecuada al material.
— En caso de utilización del estereomicroscopio, varias placas de Petri
de un diámetro de 9 cm, cuyo fondo esté dividido en cuadrados de
10 × 10 mm, mediante un instrumento puntiagudo.
— Solución de ácido clorhídrico de 17,5 %.
— Concentración de pepsina: 1: 10 000 NF (US National Formulary),
correspondiente a 1: 12 500 BP (British Pharmacopea), correspon-
diente a 2 000 FIP (Federación Internacional de Farmacia).
— Varios cubos de 10 l que se utilizarán en el momento de la descon-
taminación del instrumental, mediante un tratamiento como el
formol y para el jugo digestivo que quede, en caso de resultado
positivo.
— Una balanza de una precisión de 0,1 g.
b)Toma de muestras
1. Cuando las canales están enteras, tomar una muestra, de aproximada-
mente 2 g, en uno de los pilares del diafragma, en la zona de
transición entre la parte muscular y la parte tendinosa; si no hubiere
pilar del diafragma, tomar la misma cantidad en la parte del
diafragma situada cerca de las costillas o del esternón, o en la
musculatura de la lengua, o en los músculos masticadores, o también
en la musculatura abdominal.
2. Para los trozos de carne, tomar una mestra, de aproximadamente 2 g,
en los músculos esqueléticos que contengan poca grasa y en la
medida que sea posible, cerca de los huesos o de los tendones.1977L0096 — ES — 01.05.2004 — 010.001 — 10
▼M3
c)Método
1. Procedimiento de digestión
i) Grupos completos de muestras ( 1 0 0al av e z )
— Proveer al Stomacher Lab-blender 3 500 de una pequeña
bolsa doble de plástico y regular la temperatura en 40-41 ºC.
— Verter un litro y medio de agua caliente a 32-35 ºC en la
pequeña bolsa interior y llevarla a 40-41 ºC
— Trasladar a la pequeña bolsa 25 ml de la solución de ácido
clorhídrico de 17,5 %.
— Luego, agregar 100 muestras, de aproximadamente 1 g cada
una (a 25-30 ºC) tomadas de cada una de las muestras indivi-
duales, de acuerdo con el procedimiento contemplado en la
letra b).
— Por último, agregar 6 g de pepsina. Respetar escrupulosa-
mente el orden de las operaciones, para evitar la
descomposición de la pepsina.
— Triturar en el Stomacher durante 25 minutos.— Quitar la pequeña bolsa de plástico del Stomacher, filtrar el
líquido de digestión a través de un tamiz y dejarlo pasar a
un vaso de precipitados de 3 l.
— Lavar la pequeña bolsa de plástico con 100 ml de agua, apro-
ximadamente, que luego se utilizará para enjuagar el tamiz y
se agregará al filtrado que contenga el vaso de precipitados.
Se podrá agragar un máximo de 15 muestras individuales a
un grupo completo de 100 muestras para examinarlas al
mismo tiempo que estas últimas.
ii) Grupos de menos de 100 muestras
— Proveer al Stomacher Lab-blender 3 500 de una pequeña
bolsa doble de plástico y regular la temperatura en 40-41 ºC.
— Preparar un líquido de digestión mezclando, aproximada-
mente, un litro y medio de agua y 25 ml de ácido
clorhídrico de 17,5 %. Agregar 6 g de pepsina y mezclar
todo a una temperatura de 40-41 ºC. Respetar escrupulosa-
mente el orden de las operaciones para evitar la
descomposición de la pepsina.
— Determinar un volumen de líquido de digestión correspon-
diente a 15 ml por g de muestra (así, para 30 muestras,
habrá que extraer 30 × 15 ml = 450 ml) y traspasarlo a la
pequeña bolsa de plástico interior, al mismo tiempo que las
muestras de carne de aproximadamente 1 g (a 25-30 ºC)
tomadas de cada una de las muestras individuales, de acuerdo
con el procedimiento contemplado en la letra b).
— Verter el agua a aproximadamente 41 ºC, en la pequeña bolsa
exterior hasta obtener un volumen total de un litro y medio enlas dos pequeñas bolsas.
— Triturar en el Stomacher durante 25 minutos.
— Quitar la pequeña bolsa de plástico del Stomacher, filtrar el
líquido de digestión a través de un tamiz y dejarlo pasar a
un vaso de precipitados de 3 l.
— Lavar la pequeña bolsa de plástico con 100 ml de agua, apro-
ximadamente, que luego se utilizará para enjuagar el tamiz y
que se añadirá al filtrado que contenga el vaso de prescipi-
tados.
2. Aislamiento de las larvas por sedimentación
— Agregar al líquido de digestión 300-400 g de hielo en laminillas,
o de hielo triturado para obtener un volumen de 2 l, aproximada-
mente. Agitar hasta que el hielo se funda. En el caso de grupos
más pequeños [ver letra ii)], la cantidad de hielo deberá reducirse
proporcionalmente.
— Traspasar el líquido de digestión enfriado a un embudo de sepa-
ración de 2 l provisto de un vibrador que se habrá fijado
mediante una pinza suplementaria.
— Para la sedimentación, dejar el líquido en el embudo de separa-
ción durante 30 minutos, alternando un minuto de vibración y un
minuto de pausa.
— Después de los 30 minutos, introducir rápidamente 60 ml de
sedimento en una probeta graduada de 100 ml. (Después de su
utilización, enjuagar el embudo con una solución detergente).1977L0096 — ES — 01.05.2004 — 010.001 — 11
▼M3
— Dejar reposar la muestra de, por lo menos, 60 ml, quitar, por
aspiración, el líquido sobrenadante hasta dejar en la probeta un
volumen de 15 ml que se examinará para investigar la presencia
de larvas.
— Para la aspiración, utilizar una jeringa de plástico desechable,
provista de un tubo de plástico.
La longitud del tubo deberá permitir que en la probeta graduada
queden 15 ml del líquido cuando el cuello de la jeringa se
encuentre al nivel del borde del cilindro.
— Introducir los 15 ml restantes en una cubeta para el cómputo de
larvas, o en dos placas de Petri y examinarlas en el triquinos-
copio o en el estereomicroscopio.
— Los líquidos de digestión se deberán examinar desde el momento
en que stén dispuestos. En ningún caso se podrá postergar el
examen para el día siguiente. Si los líquidos de digestión no
fueran lo suficientemente transparentes, o si no se examinaran
en el plazo de 30 minutos siguiente a su preparación, se deberán
clarificar de la siguiente manera: verter la muestra final de 60 ml
en una probeta graduada y dejar sedimentar durante 10 minutos.
Después de dicho tiempo, quitar, por aspiración, 45 ml dellíquido sobrenadante y agregar agua de grifo a los 15 ml
restantes hasta obtener un volumen total de 45 ml. Después de
un nuevo período de reposo de 10 minutos, quitar, por aspira-
ción, 30 ml del líquido sobrenadante, verter los 15 ml restantes
en una placa de Petri, o en una cubeta para el cómputo de las
larvas, con vistas a su examen. Lavar la probeta graduada con
10 ml de agua de grifo; agregar el líquido obtenido a la muestra
en la placa de Petri, o en la cubeta para cómputo de larvas y
examinar.
3. En caso de resultado positivo o dudoso del examen de una muestra
colectiva, se deberá tomar una muestra de 20 g, de cada cerdo, de
acuerdo con las indicaciones contempladas en la anterior letra b).
Las muestras de 20 g procedentes de 5 cerdos se deberán reunir y
examinar de acuerdo con el método arriba descrito. De esta forma
se examinarán las muestras de 20 grupos de 5 cerdos. Si se descu-
brieran las triquinas en un grupo de muestras de 5 cerdos, se
deberán tomar las muestras de 20 g de cada animal que pertenezca
a dicho grupo y se deberán examinar de acuerdo con el método
arriba descrito.
V. MÉTODO DE LA DIGESTIÓN DE MUESTRAS COLECTIVAS CON
ASISTENCIA MECÁNICO/TÉCNICA DEL AISLAMIENTO POR
FILTRACIÓN
a)Instrumental y reactivos
Los mismos que los de la letra a) del método IV, más:
— Un embudo Gelman de un litro con soporte para filtro (diámetro del
soporte: 45 mm).
— Discos filtrantes compuestos de:
una rejilla redonda de acero inoxidable, finura de la malla de 35 µ,
diámetro del disco: 45 mm;
dos anillos de goma de 1 mm de espesor; diámetro exterior: 45 mm;
diámetro interior: 38 mm.
La rejilla se deberá colocar entre los anillos y se fijará con una cola
de dos componentes que se adapte a los dos materiales.
— Un matraz Erlenmeyer de 3 l provisto de un tubo lateral para aspi-
ración.
— Una bomba de filtración.— Bolsas pequeñas de plástico de una capacidad mínima de 80 ml.
— Un saco de sosa
— «Rennilase» 1: 150 000 unidades Soxlet por g
b)Toma de muestras
Ver letra b) del método IV.
c)Método
1. Procedimiento de digestión
i)Grupos completos de muestras (100 a la vez)
Ver letra i) del punto 1 de la letra c) del título IV.1977L0096 — ES — 01.05.2004 — 010.001 — 12
▼M3
ii) Grupos de menos de 100 muestras
Ver letra ii) del punto 1 de la letra c) del título IV.
2. Aislamiento de las larvas por filtración
— Agregar al líquido de digestión 300-400 g de hielo en laminillas
o de hielo triturado para obtener un volumen de, aproximada-
mente, 2 l. En el caso de grupos más pequeños, la cantidad de
hielo deberá reducirse proporcionalmente.
— Agitar el líquido de digestión hasta que el hielo se funda. Dejar
reposar el líquido de digestión enfriado durante 3 minutos por lo
menos, para que las larvas puedan enrrollarse.
— Colocar el embudo Gelman provisto de un soporte para filtro, en
el cual se encuentra un disco filtrante, sobre un matraz Erlen-
meyer conectado a una bomba de filtración.
— Introducir el líquido de digestión en el embudo Gelman y filtrar.
Hacia el final, se podrá acelerar el paso del líquido a través del
filtro procediendo a una aspiración mediante la bomba de filtra-
ción. Terminar la aspiración exactamente antes de que el filtro se
seque, es decir, cuando queden entre 2y5m ld e líquido en el
embudo.
— Después de la filtración de todo el líquido de digestión, quitar el
disco filtrante y colocarlo en una pequeña bolsa de plástico de
80 ml agregando de 15 a 20 ml de solución de «rennilase».
Para obtener la solución de «rennilase» se introducirán 2 g de
«rennilase» en 100 ml de agua de grifo.
— Practicar una doble soldadura en la pequeña bolsa de plástico y
colocarla en el Stomacher entre la pequeña bolsa interior y la
pequeña bolsa exterior.
— Triturar en el Stomacher durante 3 minutos, por ejemplo; entre-
tanto, el aparato se utilizará para el análisis de un grupo
completo o incompleto de muestras.
— Después de 3 minutos, quitar del Stomacher la pequeña bolsa de
plástico que contiene el disco filtrante y la solución de «renni-
lase» y abrirla con la ayuda de tijeras. Introducir el líquido en
una cubeta para el cómputo de las larvas, o en una placa de Petri.
Lavar la pequeña bolsa con 5 ó 10 ml de agua, que luego se
introducirá en la cubeta para la triquinoscopia, o en una placa
de Petri para examen en el estereomicroscopio.
— Los líquidos de digestión deberán examinarse desde el momento
en que estén dispuestos. En ningún caso se podrá postergar el
examen para el día siguiente.
NotaNo utilizar nunca discos filtrantes que no estén perfectamente
limpios. No secar nunca discos filtrantes si no están limpios.
Para limpiar los discos, es preciso dejarlos en una solución de
«rennilase» durante la noche. Antes de su utilización, se deberán
lavar en el Stomacher en una solución de «rennilase».
3. En caso de resultado positivo o dudoso del examen de una muestra
colectiva, se deberá tomar una muestra de 20 g de cada cerdo, de
acuerdo con las indicaciones contempladas en la anterior letra b).
Se deberán reunir las muestras de 20 g procedentes de 5 cerdos y
examinarlas de acuerdo con el método anterior. De esta forma, se
examinarán las muestras de 20 grupos de 5 cerdos. Si se descu-
brieran las triquinas en un grupo de muestras de 5 cerdos, se
deberán tomar las muestras de 20 g de cada animal que pertenezca
a dicho grupo y se examinarán de acuerdo con el método arriba
descrito.
VI. MÉTODO DE LA DIGESTIÓN DE MUESTRAS COLECTIVAS CON
UTILIZACIÓN DE UN AGITADOR MAGNÉTICO.
a)Instrumental y reactivos
— Un cuchillo y pinzas para la toma de muestras.
— Bandejas divididas en 50 cuadrados que puedan contener, cada uno,
muestras de carne de 2 g, aproximadamente.
— Un molinillo.— Un agitador magnético provisto de una placa térmica de temperatura
controlada y una barra magnética (recurbierta de Teflón) de 5 cm,
aproximadamente.
— Embudos de sparación cónicos de una capacidad de 2 l.1977L0096 — ES — 01.05.2004 — 010.001 — 13
▼M3
— Soportes con anillos y fijaciones.
— Tamices, finura de la malla 177 µ, de un diámetro exterior de 11 cm,
provistos de una rejilla de acero inoxidable.
— Embudos de un diámetro interior mínimo de 12 cm, destinados a
recibir el tamiz.
— Un vaso de precipitados de 3 l.— Probetas graduadas de una capacidad aproximada de 50 ml, o tubos
de centrifugación.
— Un triquinoscopio de una table horizontal, o un estereomicroscopio
que disponga de una iluminación aducuada
— Una cubeta para el cómputo de larvas (en caso de utilización de un
triquinoscopio).
La cubeta deberá estar formada por placas acrílicas de un espresor
de 3 mm y deberá presentar las siguientes características:
i) fondo de la cubeta: 180 × 40 mm, dividido en cuadrados,
ii) placas laterales: 230 × 20 mm,
iii) placas frontales: 40 × 20 mm.
El fondo y las placas frontales deberán estar fijos entre las placas
laterales de manera que formen dos pequeñas asas en los dos
extremos. La parte superior del fondo deberá estar entre 7 y 9 mm
más elevada con relación a la base del cuadrado formado por las
placas laterales y frontales.
Fijar las placas con una cola adecuada al material.
— Varias placas de Petri, en caso de utilización de un estereomicros-
copio, cuyo fondo se ha dividido en cuadrados de 10 × 10 mm,
mediante un instrumento puntiagudo.
— Una hoja de aluninio.— Acido clorhídrico de 25 %.— Concentración de pepsina: 1: 10 000 NF (US National Formulary);
correspondiente a 1: 12 500 BP (British Pharmacopea),correspondiente a 2 000 FIP (Federación Internacional de Farmacia).
— Agua de grifo calentada a una temperatura de 46-48 ºC.
— Varios cubos de 10 l que se utilizarán en el momento de la descon-
taminación del instrumental, mediante un tratamiento como el
formol, y para el jugo digestivo que quede en caso de resultado
positivo.
— Una balanza de precisión de 0,1 g.
b)Toma de muestras
1. Cuando las canales están enteras, tomar una muestra, de aproximada-
mente 2 g, en uno de los pilares del diafragma, en la zona de
transición entre la parte muscular y la parte tendinosa; si no hubiere
pilar del diafragma, tomar la misma cantidad en la parte del
diafragma situada cerca de las costillas o del esternón, o en la
musculatura de la lengua, o en los músculos masticadores, o también
en la musculatura abdominal.
2. Para los trozos de carne, tomar una muestra, de aproximadamente
2 g, en los músculos esqueléticos que contengan poca grasa y en la
medida que sea posible, cerca de los huesos o de los tendones.
c)Método
1. i) Grupos completos de muestras ( 1 0 0al av e z )
— Triturar en el molinillo 100 muestras, de aproximadamente
1 g, tomadas de cada muestra individual, de acuerdo con las
indicaciones de la letra b). Hacer funcionar el aparato tres o
cuatro veces durante un segundo.
— Llevar la carne picada a un vaso de precipitados de 3 l y
espolvorearla con 10 g de pepsina. Introducir en el vaso de
preicpitados 2 l de agua de grifo calentada a una temperatura
de 46-48 ºC y agregar 16 ml de ácido clorhídrico.
— Introducir varias veces el dispositivo de triturado del moli-
nillo en el líquido de digestión que se encuentre en el vaso
de precipitados para quitar de él las sustancias que aún tenga
adheridas.
— Colocar la barra magnética en el vaso de precipitados y
cubrirlo con una hoja de aluminio.
— Colocar el vaso de precipitados en la placa precalentada del
agitador magnético y comenzar la agitación. Antes de1977L0096 — ES — 01.05.2004 — 010.001 — 14
▼M3
empezar el proceso de agitación, se deberá regular el agitador
magnético de tal forma, que durante el funcionamiento pueda
mantenerse una temperatura constante de 44-47 ºC. Durante
el proceso de agitación, el líquido de digestión deberá girar
a una velocidad lo sufucientemente elevada que permita la
formación de un profundo remolino central sin provocar
salpicaduras.
— Agitar el líquido de digestión durante 30 minutos, parar el
aparato; filtrar el líquido de digestión a través de un tamiz
colocado en un embudo y recoger el filtrado en un embudo
de separación.
— Dejar el líquido de digestión en el embudo de separación
durante 30 minutos.
— Después de 30 minutos, traspasar rápidamente una muestra de
40 ml del líquido de digestión a la probeta graduada, o al
tubo de centrifugación.
— Dejar reposar la muestra de 40 ml durante 10 minutos y luego
aspirar 30 ml de líquido sobrenadante dejando, así, un
volumen de 10 ml.
— La muesta de 10 ml del sedimento restante se verterá en una
cubeta para el cómputo de larvas, o en una placa de Petri.
— Ejuagar la probeta graduada o el tubo de centrifugación con
aproximadamente 10 ml de agua de grifo que se agregará a
la muestra en la cubeta de cómputo de larvas o en la placa
de Petri. Luego, proceder a la observación en el triquinos-
copio, o al examen en el estereomicroscopio, según el caso.
— Los líquidos de digestión deberán observarse desde el
momento en que estén dispuestos. En ningún caso se podrá
postergar el examen para el día siguiente. Si los líquidos de
digestíon no se examinan en el plazo de 30 minutos siguiente
a su preparación, se deberán clarificar de la siguiente manera:
verter la muestra final, de aproximadamente 40 ml, en una
probeta graduada y dejar sedimentar durante 10 minutos.
Después de dicho tiempo, quitar 30 ml del líquido sobrena-
dante con el fin de obtener un volumen de 10 ml. Dicho
volumen se llevará a 40 ml con agua de grifo. Después de
un nuevo período de reposo de 10 minutos, quitar, por aspira-
ción, 30 ml del líquido sobrenadante para obtener un volumen
de 10 ml que se examinará en una placa de Petri, o en una
cubeta para cómputo de larvas. Lavar la probeta graduada
con 10 ml de agua de grifo y agregar el líquido obtenido a
la muestra en la placa de Petri, o en la cubeta para el
cómputo de larvas, para su examen.
Si el examen revela que el sedimento no está claro, se deberá
verter la muestra en una probeta graduada y con agua de grifo
se deberá llevar su volumen a 40 ml. Luego, se aplicará el
método arriba mencionado.
ii) Grupos de menos de 100 muestras
Eventualmente, se podrán agregar 15 muestras, de 1 g cada una,
a un grupo de 100 muestras y se podrán examinar al mismo
tiempo que estas últimas, de acuerdo con el método descrito en
la letra c). Se deberán examinar más de 15 muestras en calidad
de grupo completo. En el caso de grupos que lleguen hasta las
50 muestras, los líquidos de digestión se podrán reducir a 1 l.
2. En caso de resultado positivo o dudoso del examen de una muestra
colectiva, se deberá tomar una muestra de 20 g de cada cerdo, de
acuerdo con las indicaciones contempladas en la anterior letra b).
Las muestras de 20 g procedentes de 5 cerdos se deberán reunir y
examinar de acuerdo con el método arriba descrito. De esta forma
se examinarán las muestras de 20 grupos de 5 cerdos. Si se detectan
las triquinas en un grupo de muestras de 5 cerdos, se deberán tomar
las muestras de 20 g de cada animal que pertenezca a dicho grupo y
se deberán examinar de acuerdo con el método arriba descrito
VII. MÉTODO DE DIGESTIÓN AUTOMÁTICA DE MUESTRAS COLEC-
TIVAS DE HASTA 35 G
a)Instrumental y reactivos
— cuchillo o tijeras para cortar las muestras,
— bandejas divididas en 50 cuadrados que puedan contener, cada uno
de ellos, muestras de carne de 2 g aproximadamente,1977L0096 — ES — 01.05.2004 — 010.001 — 15
▼M5
▼M5
— mezclador Trichomátic 35 con pieza de filtración,
— solución de ácido clorhídrico de 8,5 % ± 0,5 % en peso,— filtros de membrana de policarbonato transparente de 50 mm de
diámetro con poros de 14 micrometros,
— concentración de pepsina: 1: 10 000 NF (US National Formulary),
correspondiente a 1: 12 500 BP (British Pharmacopoea),
correspondiente a 2 000 FIP (Federación Internacional de Farmacia),
— balanza de precisión de 0,1 g,— pinzas planas,— varios portaobjetos de microscopio de 5 cm de lado como mínimo o
varias placas de Petri de al menos 6 cm de diámetro, cuyo fondo
esté dividido en cuadrados de 10 × 10 mm mediante un instrumento
puntiagudo,
— (estéreo) microscopio de transmisión de luz (de 15 a 60 aumentos) o
triquinoscopio provisto de una tabla horizontal,
— cubo para la recogida de líquidos residuales,— varios cubos de 10 l que se utilizarán en el momento de la desinfec-
ción del instrumental, mediante un tratamiento cómo el formol, y
para el jugo digestivo sobrante, en caso de resultado positivos.
b)Toma de muestras
1. Cuando las canales estén enteras, tomar una muestra, de aproximada-
mente 2 g, en uno de los pilares del diafragma, en la zona de
transición entre la parte muscular y la parte tendinosa; si no hubiere
pilar del diafragma, tomar la misma cantidad en el borde costal del
esternón, en parte del diafragma, en los músculos masticadores, o
bien en la musculatura abdominal.
2. Para los trozos de carne, tomar una muestra, de aproximadamente
2 g, en los músculos esqueléticos que contengan poca grasa y, en la
medida que sea posible, cerca de los huesos o de los tendones.
c)Método
1. Procedimiento de digestión
— Colocar el mezclador con la pieza de filtración, conectar el tubo
de desagüe y conducir el tubo al cubo de residuos.
— Al encender el mezclador, se inicia el calentamiento.
— Antes de comenzar, se deberá abrir y cerrar la válvula del fondo,
situada bajo la cámara de reacción.
— A continuación, agregar un máximo de 35 muestras de aproxima-
damente 1 g cada una (a 25-30 ºC) tomadas de cada una de las
distintas muestras, según lo dispuesto en la letra b). Asegurarse
de que se han eliminado los trozos de tendón de mayor tamaño,
ya que pueden obstruir el filtro de membrana.
— Llenar de agua, hasta el borde, la cámara de líquidos conectada
al mezclador (400 ml, aproximadamente).
— Verter 30 ml, aproximadamente, de ácido clorhídrico (8,5 %),
hasta el borde de la cámara de líquidos más pequeña, que
también estará conectada.
— Colocar un filtro de membrana bajo el filtro grueso en el soporte
para filtro de la pieza de filtración.
— Por último, agregar ►
M6 7g◄de pepsina. Respetar escrupu-
losamente el orden de las operaciones para evitar la
descomposición de la pepsina.
— Cerrar la tapa de la cámara de reacción y de líquidos.— Seleccionar el tiempo de duración de la digestión: un período de
digestión corto (5 minutos), en el caso de cerdos en edad normal
de sacrificio, y un período prolongado (8 minutos) para las mues-
tras restantes.
— La distribución automática comienza al oprimir el botón de
puesta en marcha del mezclador; la digestión y la filtración
subsiguiente tienen lugar de forma automática. El proceso fina-
liza entre 10 y 13 minutos después y se detiene automáticamente.
— Abrir la tapa de la cámara de reacción y comprobar que ésta se
halla vacía. Si en la cámara hay espuma o líquidos de digestión,
repetir el procedimiento descrito en el punto 4 de la letra c).
2. Recuperación de larvas
— Desmontar el soporte para filtro y trasladar el filtro de membrana
a un portaobjetos o a una placa de Petri.1977L0096 — ES — 01.05.2004 — 010.001 — 16
▼M5
— Examinar el filtro de membrana con microscopio o triquinos-
copio.
3. Limpieza del material
— En caso de resultado positivo, llenar de agua hirviendo dos
tercios de la cámara de reacción del mezclador. Llenar de aguacorriente la cámara de líquidos conectora hasta cubrir el sensor
de nivel inferior. A continuación tiene lugar el programa auto-
mático de limpieza. Desinfectar el soporte para filtro y el
material restante, por ejemplo, utilizando formol.
— Al finalizar la jornada laboral, llenar de agua la cámara de
líquidos del mezclador y llevar a cabo un programa estándar.
4. Uso de filtros de membrana
Cada filtro de membrana de policarbonato no podrá usarse más de
cinco veces. Deberá darse la vuelta al filtro después de cada uso.
Igualmente, después de cada uso se comprobará que el filtro no
haya sufrido daño alguno que lo haga inservible.
►
M6 5.◄ Método de que deberá aplicarse cuando la disgestión sea
incompleta y, en consecuencia, no se pueda efectuar la filtración.
Cuando se efectúe el procedimiento automático del mezclador de
conformidad con el punto 1 de la letra c), abrir la tapa de la cámara
de reacción y comprobar si hay espuma o líquido en ella. En ese
caso, llevar a cabo el procedimiento siguiente:
— Cerrar la válvula del fondo, situada bajo la cámara de reacción.
— Desmontar el soporte para filtro y trasladar el filtro de membrana
a un portaobjetos o a una placa de Petri.
— Poner un nuevo filtro de membrana en el soporte para filtro y
montar este soporte.
— Llenar de agua la cámara de líquidos del mezclador hasta cubrir
el sensor de nivel inferior.
— Llevar a cabo el programa automático de limpieza.— Una vez finalizado el programa de limpieza, abrir la tapa de la
cámara de reacción y comprobar si hay restos de líquido.
— Si la cámara está vacía, desmontar el soporte para filtro y tras-
ladar el filtro de membrana, con ayuda de unas pinzas, a un
portaobjetos o una placa de Petri.
— Examinar los dos filtros de membrana de conformidad con lo
dispuesto en el punto 2 de la letra c). Si no es posible examinar
los filtros, repetir todo el procedimiento de digestión, aplicando
un período de digestión prolongado, de conformidad con el punto
1 de la letra c).
►
M6 6.◄ Si los resultados del examen de una muestra colectiva
fuesen positivos o dudosos, se tomarán nuevas muestras de 20 g de
cada uno de los cerdos, de acuerdo con el procedimiento descrito en
la letra b).
Estas muestras se examinarán por separado, de acuerdo con el
método citado anteriormente.1977L0096 — ES — 01.05.2004 — 010.001 — 17
▼M6
▼M5
▼B
ANEXO II
CAPÍTULO I
CONDICIONES QUE DEBEN CUMPLIR LOS LABORATORIOS DE
DETECCIÓN DE TRIQUINAS
1. Los laboratorios de detección de triquinas deberán encontrarse en los alrede-
dores inmediatos de los locales de sacrificio de los cerdos y deberán disponer
por lo menos:
a) de un local suficientemente equipado, que pueda cerrarse con llave, para
la confección de las preparaciones; sus paredes serán lisas, y estarán
revestidas o pintadas con pintura lavable y clara hasta una altura de dos
metros.
Se dispondrá de un local de preparación para cada método de examen
utilizado;
b) de un local de examen suficientemente equipado, cerrado con llave, ocul-
table, en el caso de utilización de un triquinoscopio;
c) de equipos de ventilación suficientes y, en caso necesario, de una instala-
ción de aire acondicionado que permita conseguir una temperatura
ambiente que no sobrepase los 25 ºC sobre cero;
d) de una iluminación natural o artificial suficiente que no modifique los
colores; deberá evitarse la luz solar intensa;
e) de equipos suficientes para la limpieza y la desinfección de las manos en
el local donde se realizan las preparaciones;
►M3 f)◄ en su caso, de una instalación frigorífica para la conservación
de las muestras de carne;
g) de un aseo para la limpieza y desinfección del material de examen (po
ejemplo, recipientes de muestras, compresores, cuchillos y tijeras)
provisto:
— de un revestimiento de suelo impermeable e inalterable, fácil de
limpiar y desinfectar,
— de paredes lisas revocadas hasta una altura mínima de 2 m, con un
revestimiento o una pintura lavable y clara.
Dicha disposición no será obligatoria en caso de aplicación de los
métodos contemplados en los títulos II, III, IV, V, VI del Anexo I,
siempre que los laboratorios dispongan de un gran sumidero conectado
con las canalizaciones;
►M3 h)◄ de vestuarios, lavabos y cuartos de estar así como de excusados
equipados con cisterna;
►M3 i)◄ de lavabos alimentados de agua potable corriente, fría y
caliente, provistos de productos de limpieza y de desinfección y de
toallas de usar y tirar;
►M3 j)◄ de recipientes estancos, que resistan a la corrosión, provistos de
tapaderas que cierren herméticamente, concebidos de modo que impidan
toda toma no autorizada del contenido, destinadosa recoger los restos de
muestras;
►M3 k)◄ de instalaciones que suministren una cantidad suficiente de
agua potable, fría o caliente;
►M3 l)◄ de un dispositivo de evacuación de las aguas residuales con
arreglo a las prescripciones que regulen la autorización de los mataderos;
►M3 m)◄ de dispositivos apropiados de protección contra los animales
indeseables tales como insectos, roedores, etc.1977L0096 — ES — 01.05.2004 — 010.001 — 18
▼M3
▼B
▼M3
▼B
▼M3
▼B
▼B
CAPÍTULO II
DISPOSICIONES APLICABLES AL PERSONAL, A LOS LOCALES, AL
MATERIAL Y A LOS INSTRUMENTOS DE LOS LABORATORIOS DE
DETECCIÓN DE TRIQUINAS
2. Se exigirá en todo momento un estado de limpieza absoluta del personal del
laboratorio, de los locales, del material y de los instrumentos.
a) El personal deberá, en particular llevar ropa de trabajo limpia y lavarse
las manos varias veces durante una misma jornada de trabajo, así como
a cada reinicio del trabajo;
b) ningún animal deberá penetrar en los laboratorios de detección de
triquinas;
c) el material y los instrumentos utilizados para el trabajo deberán conser-
varse en buen estado de mantenimiento y de limpieza; deberán limpiarse
y desinfectarse cuidadosamente varias veces durante una misma jornada
de trabajo así como al final de las operaciones de la jornada.
3. Se exigirá la utilización de agua potable para todos los usos.
4. En lo que se refiere al estado de salud del personal asignado a la toma de
muestras de carne para el examen, se aplicarán las disposiciones previstas
en los números 11 y 12 del capítulo IV del Anexo B de la Directiva 72/
462/CEE.
5. Las muestras de carne necesarias para el examen deberán tomarse inmediata-
mente después del sacrificio y examinarse sin demora en el laboratorio de
detección de triquinas del matadero.
Queda prohibido proceder a dicho examen fuera del matadero en el que
hayan sido sacrificados los animales.
6. Para prevenir la fatiga y sus consecuencias, deberán concederse al personal
de control breves interrupciones de trabajo.
CAPÍTULO III
DISPOSICIONES RELATIVAS A LOS TRIQUINOSCOPIOS
La concepción y el tipo de los triquinoscopios deberán responder a los criterios
mínimos siguientes:
1. Facilidad de uso2. Iluminación potente
— es preciso que los resultados del control sean seguros incluso si los
locales no se encuentran completamente a oscuras,
— la fuente luminosa será una lámpara de proyección de 100 W (12 V).
3. Aumentos suficientes
— para el trabajo normal serán necesarios 50 aumentos,
— para una identificación segura de los objetos que no sean claramente
identificables con los aumentos de trabajo normal, serán necesarios de
80 a 100 aumentos.
4. Poder separador
— cada aumento deberá dar una imagen clara, precisa, de color neto.
5. Dispositivo de conmutación
— todo cambio de aumento deberá ir acompañado de un ajuste automático
de la luminosidad de la imagen.
6. Aumento del contraste
— el condensador deberá ir equipado de un diafragma de iris que permita
reforzar los contrastes para el examen profundo de los casos delicados,
— el diafragma de iris deberá ser de fácil regulación (por ejemplo mediante
una palanca de control fijada a la mesa del triquinoscopio).
7. Facilidad de enfoque
— enfoque rápido mediante anillo regulador,
— enfoque fino mediante palanca de mando.
8. Regulación de la tensión
— que permita obtener la luminosidad deseada en la situación dada.
9. Desplazamiento del compresor en sentido único1977L0096 — ES — 01.05.2004 — 010.001 — 19
▼B
— un sistema de bloqueo automático deberá garantizar el desplazamiento
del compresor en un solo sentido para impedir todo desplazamiento
intempestivo.
10. Campo visual libre en dirección hacia la superficie de proyección.
11. Superficie de proyección
— diámetro de 54 cm como mínimo,
— alto poder de reflexión,
— duradera,
— desmontable,— fácil le limpiar.1977L0096 — ES — 01.05.2004 — 010.001 — 20
▼B
ANEXO III
MARCADO DE LAS CARNES QUE HAYAN SIDO OBJETO DEL
EXAMEN DE DETECCIÓN DE TRIQUINAS
1. El marcado de las carnes deberá efectuarse bajo la responsabilidad del vete-
rinario oficial. A este efecto, este tendrá en su posesión y conservará:
— los instrumentos destinados al marcado; únicamente podrá remitirlos al
personal auxiliar en el momento mismo del marcado y durante el lapso
de tiempo necesario para ello,
— los marchamos en forma de placas que se mencionan en el número 5.
Dichos marchamos en forma de placas se remitirán al personal auxiliar
en el momento mismo en el que deban utilizarse y en número que corres-
ponda a las necesidades.
2. La marca deberá ser un sello de forma redonda de 2,5 cms de diámetro.
En el sello deberán figurar las indicaciones siguientes, en caracteres perfecta-
mente legibles:
— hacia el centro, la letra T mayúscula, cuyas barras tendrán un centímetro
de longitud y 0,2 cms de anchura,
— bajo la letra T anteriormente citada, una de las siguientes siglas: CEE,
EEG, EWG, EØF, EOK, EEC, ETY, EHS, EMÜ, EEK, EEB, EGK,
KEE, o EGS. Las letras deberán tener una altura de 0,4 cm.
3. Las canales se marcarán con tinta o al fuego, en la cara interna de los muslos
con arreglo al apartado 2.
4. Las cabezas se marcarán con tinta o al fuego, con ayuda de una marca que
responda a lo prescrito en el apartado 2.
Los trozos, con excepción de los excluidos del marcado de inspección vete-
rinaria en virtud del apartado 43 del capítulo X del Anexo B de la Directiva
72/462/CEE, obtenidos en las salas de despiece a partir de canales regular-
mente marcadas, deberán, en la medida en que no lleven estampilla alguna,
ser marcados, antes de la colocación del marcado de veterinaria, con arreglo
al apartado 2.
La etiqueta prevista en el párrafo segundo del apartado 43 anteriormente
mencionado deberá responder a las condiciones establecidas en el apartado
6 del presente Anexo.
5. El marcado podrá efectuarse también con ayuda de un marchamo redondo en
forma de chapa. Dicho marchamo en forma de chapa se fijará en cada trozo
o en cada canal y deberá ser tal que su sustitución resulte imposible; deberá
ser de materiales resistentes, que cumplan todos los requisitos de la higiene.
Sobre el marchamo en forma de placa deberán figurar las indicaciones
siguientes en caracteres perfectamente legibles:
— hacia el centro, la letra T mayúscula,
— bajo la letra T anteriormente citada, una de las siguientes siglas: CEE,
EEG, EWG, EØF, EOK, EEC, ETY, EHS, EMÜ, EEK, EEB, EGK,
KEE, o EGS. Las letras deberán tener una altura de 0,2 cm.
6. Sobre la etiqueta prevista en el apartado 44 del capítulo X del Anexo B de la
Directiva mencionada en el número 4 deberá figurar, además de la marca de
inspección veterinaria, una marca bien legible que sea la réplica de la marca
prevista en el apartado 2.1977L0096 — ES — 01.05.2004 — 010.001 — 21
▼A3
▼B
▼A3
▼B
▼B
ANEXO IV
TRATAMIENTO POR FRÍO
I. Método 1
1. Las carnes importadas en estado congelado deberán conservarse en dicho
estado.
2. La instalación técnica y la alimentación en energía de la cámara frigorí-
fica deberán ser tales que la temperatura contemplada en el número 6
pueda alcanzarse en el plazo más breve posible y mantenerse en todas
las partes de la cámara frigorífica así como de la carne.
3. Antes de la congelación deberán quitarse todos los embalajes aislantes,
excepto en lo que se refiere a la carne que, en el momento de la intro-
ducción en la cámara frigorífica, haya alcanzado ya en todas sus partes la
temperatura contemplada en el número 6.
4. Los lotes deberán conservarse por separado en la cámara frigorífica y
guardarse bajo llave.
5. Deberán anotarse, para cada lote, el día y la hora de su introducción en
la cámara frigorífica.
6. La temperatura en la cámara frigorífica deberá alcanzar por lo menos los
25 ºC bajo cero; deberá verificarse mediante aparatos de medida termoe-
léctrica homologados y registrarse constantemente. No deberá medirse en
las corrientes de aire frío. Los aparatos de medida deberán guardarse
bajo llave. Los gráficos deberán llevar la indicación de los números
correspondientes del registro de la inspección de las carnes a la importa-
ción así como del día y de la hora del comienzo y del final de la
congelación, y conservarse durante un año.
7. Las carnes cuyo diámetro o cuyo espesor sea igual o inferior a 25 cm
deberán congelarse, sin interrupción, durante 240 horas por lo menos,
aquellas cuyo diámetro o cuyo espesor esté comprendido entre 25 y
50 cm, durante 480 horas por lo menos. Las carnes cuyo diámetro o
cuyo espesor sea superior a dichas dimensiones no deberán ser sometidas
a dicho proceso de congelación. El período de congelación se calculará a
partir del momento en que se alcance en la cámara de congelación la
temperatura contemplada en número 6.
II. Método 2
Se deberán cumplir las normas generales de los números 1 a 5 del
método 1 y se aplicarán las siguientes combinaciones de temperatura y
tiempo:
1. La carne con un diámetro o espesor inferior 15 cm se congelará según
una de las siguientes combinaciones:
— 20 días a − 15 ºC,
— 10 días a − 23 ºC,— 6 días a − 29 ºC.
2. La carne de un diámetro o espesor situado entre 15 y 50 cm se congelará
según una de las siguientes combinaciones:
— 30 días a − 15 ºC,
— 20 días a − 25 ºC,
— 12 días a − 29 ºC.
La temperatura dentro de la cámara frigorífica no podrá ser superior a la
temperatura de inactivación elegida. Deberá medirse con instrumentos
termoeléctricos calibrados y registrarse constantemente. No deberá
medirse directamente en el flujo de aire frío. Los aparatos de medida se
guardarán bajo llave. Los gráficos deberán llevar los números correspon-
dientes del registro de inspección de la carne importada así como la
fecha y la hora del comienzo y del final de la congelación y se conser-
varán durante un año.
III. Método 3
Control de temperatura en el centro de las piezas de carne.1977L0096 — ES — 01.05.2004 — 010.001 — 22
▼M6
▼B
▼M6
▼M6
1. Cuando se controle la temperatura en el centro de las piezas se aplicarán
las siguientes combinaciones de temperatura y tiempo y se cumplirán los
requisitos de los apartados 2 a 6:
— 106 horas a − 18 ºC,
— 82 horas a − 21 ºC,— 63 horas a − 23,5 ºC,— 48 horas a − 26 ºC,— 35 horas a − 29 ºC,
— 22 horas a − 32 ºC,
— 8 horas a − 35 ºC,— 1/2 hora a − 37 ºC.
2. La carne que llegue en estado congelado deberá conservarse en dicho
estado.
3. Los lotes deberán conservarse por separado en la cámara frigorífica y
guardarse bajo llave.
4. Se anotarán el día y la hora de introducción de cada lote en la cámara
frigorífica.
5. La instalación técnica y el suministro de energía de la cámara frigorífica
deberán ser tales que la temperatura indicada en el apartado 1 pueda
alcanzarse muy rápidamente y mantenerse en la totalidad de la pieza.
6. La temperatura deberá medirse con instrumentos termoeléctricos cali-
brados y registrarse constantemente. La sonda del termómetro se
colocará en el centro de una pieza de carne calibrada de un tamaño que
no podrá ser inferior al de la pieza más gruesa que se vaya a congelar.
La pieza de carne calibrada se colocará en el lugar menos favorable de la
cámara frigorífica, alejada del sistema de refrigeración y sin que esté
directamente bajo el flujo de aire frío. Los aparatos de medida se guar-
darán bajo llave. Los gráficos deberán llevar los números
correspondientes del registro de inspección de la carne importada así
como la fecha y la hora del comienzo y del final de la congelación y se
conservarán durante un año.1977L0096 — ES — 01.05.2004 — 010.001 — 23
▼M6
ANEXO V
INSPECCIÓN Y CONGELACIÓN DE CARNE DE CABALLO
1.Inspección
La inspección de carne de caballo se realizará según uno de los métodos de
digestión indicados en el Anexo I, pero con estas modificaciones:
— Se tomarán muestras de 10 g como mínimo de los músculos linguales o
de los músculos masticadores. Cuando no se disponga de éstos, se tomará
una muestra del mismo tamaño de un pilar del diafragma en la zona de
transición hacia la parte tendinosa. Los músculos estarán exentos de
tejido conjuntivo y de grasa.
— Si se utiliza el método de la digestión artificial de muestras colectivas de
los apartados III a VII del Anexo I, se utilizará una muestra de 5 g que se
digerirá para la inspección. Para cada digestión, el peso total de músculo
a examen no deberá exceder 100 g para los métodos III, IV, V y VI del
Anexo I o 35 g para el método VII del Anexo I.
— En caso de resultado positivo, se tomará otra muestra de 10 g para un
posterior análisis independiente.
2.Congelación de carne de caballo
Para eliminar las triquinas por congelación, se someterá la carne de caballo a
un tratamiento frigorífico de acuerdo con uno de los métodos descritos en el
Anexo IV.1977L0096 — ES — 01.05.2004 — 010.001 — 24