*****

ΚΑΝΟΝΙΣΜΟΣ (ΕΟΚ) αριθ. 2426/90 ΤΗΣ ΕΠΙΤΡΟΠΗΣ

της 21ης Αυγούστου 1990

για την τροποποίηση του κανονισμού (ΕΟΚ) αριθ. 1725/79 περί της παροχής ενισχύσεων στο αποκορυφωμένο γάλα που χρησιμοποιείται σε σύνθετες τροφές και στο αποκορυφωμένο γάλα που προορίζεται για τη διατροφή των μόσχων

Η ΕΠΙΤΡΟΠΗ ΤΩΝ ΕΥΡΩΠΑΪΚΩΝ ΚΟΙΝΟΤΗΤΩΝ,

Έχοντας υπόψη:

τη συνθήκη για την ίδρυση της Ευρωπαϊκής Οικονομικής Κοινότητας,

τον κανονισμό (ΕΟΚ) αριθ. 804/68 του Συμβουλίου της 27ης Ιουνίου 1968 περί κοινής οργανώσεως αγοράς στον τομέα του γάλακτος και των γαλακτοκομικών προϊόντων (1), όπως τροποποιήθηκε τελευταία από τον κανονισμό (ΕΟΚ) αριθ. 3879/89 (2), και ιδίως το άρθρο 10 παράγραφος 3,

Εκτιμώντας:

ότι το άρθρο 1 παράγραφος 2 στοιχείο α) του κανονισμού (ΕΟΚ) αριθ. 1725/79 της Επιτροπής (3), όπως τροποποιήθηκε τελευταία από τον κανονισμό (ΕΟΚ) αριθ. 3368/88 (4), καθορίζει ότι το αποκορυφωμένο γάλα σε σκόνη, κατά την έννοια του άρθρου 1 παράγραφος 1, πρέπει να ανταποκρίνεται στα κριτήρια που καθορίζονται στο άρθρο 1 του κανονισμού (ΕΟΚ) αριθ. 986/68 του Συμβουλίου (5), όπως τροποποιήθηκε τελευταία από τον κανονισμό (ΕΟΚ) αριθ. 1115/89 (6), και ότι πρέπει να παράγεται χωρίς καμία άλλη προσθήκη·

ότι η παράνομη προσθήκη ξηρού εκχυλίσματος γαλακτο-ορού του αποκορυφωμένου γάλακτος που χρησιμοποιείται για την παραγωγή σκόνης αποκορυφωμένου γάλακτος ή μόνον σκόνης, είναι αντίθετη προς τις διατάξεις που αναφέρονται παραπάνω· ότι, λόγω απουσίας επίσημης κοινοτικής μεθόδου ανίχνευσης της σκόνης γαλακτο-ορού στη σκόνη αποκορυφωμένου γάλακτος που μπορεί να περιέχει οξύγαλα σε σκόνη, ο κανονισμός (ΕΟΚ) αριθ. 1725/79 δεν προβλέπει ειδικούς κανόνες για την ανίχνευση του σκληρού εκχυλίσματος γαλακτο-ορού· ότι πρέπει να επιβληθεί αυτή η μέθοδος στο πλαίσιο του κανονισμού που αναφέρεται παραπάνω·

ότι τα μέτρα που προβλέπονται στον παρόντα κανονισμό είναι σύμφωνα με τη γνώμη της Επιτροπής Διαχείρισης Γάλακτος και Γαλακτοκομικών Προϊόντων,

ΕΞΕΔΩΣΕ ΤΟΝ ΠΑΡΟΝΤΑ ΚΑΝΟΝΙΣΜΟ:

Άρθρο 1

Ο κανονισμός (ΕΟΚ) αριθ. 1725/79 τροποποιείται ως εξής:

1. Στο πρώτο εδάφιο του άρθρου 10 παράγραφος 3 πρέπει να προστεθεί το ακόλουθο κείμενο:

« Στην περίπτωση που οι εν λόγω έλεγχοι αφορούν το αποκορυφωμένο γάλα σε σκόνη που χρησιμοποιείται ως έχει ή υπό μορφή μείγματος, η απουσία σκόνης γαλακτο-ορού αποδεικνύεται με τη διαδικασία που ορίζεται στο παράρτημα IV.»

2. Στο παράρτημα Ι κεφάλαιο Α σημείο 2, το στοιχείο η) αντικαθίσταται από το ακόλουθο κείμενο:

«η) λοιπά και ιδίως οξύς ορός γάλακτος του οποίου η ανίχνευση απαιτείται από τις εθνικές αρχές.»

3. Το παράρτημα του παρόντος κανονισμού προστίθεται και αποτελεί παράρτημα IV.

Άρθρο 2

Ο παρών κανονισμός αρχίζει να ισχύει την ημέρα της δημοσίευσής του στην Επίσημη Εφημερίδα των Ευρωπαϊκών Κοινοτήτων.

Εφαρμόζεται από τη 1η Μαρτίου 1991.

Ο παρών κανονισμός είναι δεσμευτικός ως προς όλα τα μέρη του και ισχύει άμεσα σε κάθε κράτος μέλος.

Βρυξέλλες, 21 Αυγούστου 1990.

Για την Επιτροπή

Ray MAC SHARRY

Μέλος της Επιτροπής

(1) ΕΕ αριθ. L 148 της 28. 6. 1968, σ. 13.

(2) ΕΕ αριθ. L 378 της 27. 12. 1989, σ. 1.

(3) ΕΕ αριθ. L 199 της 7. 8. 1979, σ. 1.

(4) ΕΕ αριθ. L 296 της 29. 10. 1988, σ. 50.

(5) ΕΕ αριθ. L 169 της 18. 7. 1968, σ. 4.

(6) ΕΕ αριθ. L 118 της 29. 4. 1989, σ. 7.

ΠΑΡΑΡΤΗΜΑ

«ΠΑΡΑΡΤΗΜΑ IV

Ο ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟΣ ΤΩΝ ΞΗΡΩΝ ΕΚΧΥΛΙΣΜΑΤΩΝ ΟΡΟΥ ΓΑΛΑΚΤΟΣ ΠΟΥ ΠΡΟΚΥΠΤΕΙ ΜΕΤΑ ΑΠΟ ΠΗΞΗ, ΣΤΟ ΑΠΟΚΟΡΥΦΩΜΕΝΟ ΓΑΛΑ ΣΕ ΣΚΟΝΗ ΚΑΙ ΤΑ ΜΕΙΓΜΑΤΑ ΠΟΥ ΑΝΑΦΕΡΟΝΤΑΙ ΣΤΟΝ ΚΑΝΟΝΙΣΜΟ (ΕΟΚ) αριθ. 1725/79.

1.2 // 1. // Στόχος: ανίχνευση προσθήκης ξηρών εκχυλισμάτων ορού γάλακτος που προκύπτει μετά από πήξη στα ακόλουθα προϊόντα: // // α) αποκορυφωμένο γάλα σε σκόνη που ορίζεται στο άρθρο 1 του κανονισμού (ΕΟΚ) αριθ. 986/68 και // // β) τα μείγματα που ορίζονται στο άρθρο 1 παράγραφος 3 του κανονισμού (ΕΟΚ) αριθ. 1725/79. // 2. // Αναφορές: Διεθνής προδιαγραφή ISO 707 // // Γάλα και γαλακτοκομικά προϊόντα: μέθοδοι δειγματοληψίας σύμφωνα με τις ενδείξεις που εμφαίνονται στο παράρτημα 1 παράγρφος 2 στοιχείο γ) του κανονισμού (ΕΟΚ) αριθ. 625/78 // 3. // Ορισμός // // Η περιεκτικότητα σε ξηρά εκχυλίσματα του ορού γάλακτος που προκύπτει μετά από πήξη ορίζεται ως η ποσοστιαία αναλογία (κατά μάζα) που προσδιορίζεται με την παραπάνω τεχνική. // 4. // Αρχή // // Προσδιορισμός της ποσότητας σε γλυκομακροπεπτίδια Α με τον κανονισμό (ΕΟΚ) αριθ. 625/78 παράρτημα V. Τα δείγματα που δίδουν θετικά αποτελέσματα υποβάλλονται σε ανάλυση για την ανίχνευση των γλυκομακροπεπτιδίων Α με υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης ανεστραμμένης φάσεως (τεχνική HPLC). Η εκτίμηση του λαμβανόμενου αποτελέσματος σε σχέση με τα πρότυπα δείγματα είναι σε αποκορυφωμένο γάλα σε σκόνη με ή χωρίς προσθήκη γνωστής ποσότητας ορού γάλακτος σε σκόνη. Τα αποτελέσματα που υπερβαίνουν το 1 % (m/m) αποδεικνύουν την παρουσία ξηρών εκχυλισμάτων ορού γάλακτος που προκύπτει μετά από πήξη. // 5. // Αντιδραστήρια // // Όλα τα αντιδραστήρια πρέπει να είναι αναγνωρισμένης αναλυτικής καθαρότητας. Το νερό που χρησιμοποιείται πρέπει να είναι αποσταγμένο ή νερό ισοδύναμης καθαρότητας. Το ακετονιτρίλιο πρέπει να είναι φασματοσκοπικής καθαρότητας ή HPLC. // // Τα αντιδραστήρια που χρησιμοποιούνται για την τεχνική που περιγράφεται στον κανονισμό (ΕΟΚ) αριθ. 625/78 περιγράφονται στο παράρτημα V του παρόντος κανονισμού. // // Αντιδραστήρια για την τεχνική HPLC ανεστραμμένης φάσεως. // 5.1. // Διάλυμα τριχλωροξικού οξέος // // διαλύονται 240 γραμμάρια τριχλωροξικού οξέος ( CCL3COOH) σε νερό και ο όγκος συμπληρώνεται μέχρι 1 000 ml. // 5.2. // Εκλούσματα Α και Β // // Έκλουσμα Α: σε 150 ml ακετονιτριλίου (CCl3CN), σε 20 ml ισοπροπανώλης (CH3CHOHCH3) και σε 1,00 ml τριφθοροξικού οξέος (TFA, CF3COOH) προστίθεται επαρκεί ποσότητα νερού για να συμπληρωθεί ο όγκος μέχρι 1 000 ml . Έκλουσμα Β: σε 550 ml ακετονιτριλίου, σε 20 ml ισοπροπανώλης και 1,00 ml του TFA, προστίθεται επαρξής ποσότητα νερού για να συμπληρωθεί ο όγκος μέχρι 1 000 ml. Το εκρέον διάλυμα διηθείται πριν από τη χρησιμοποίηση με μια διηθητική μεμβράνη που έχει διάμετρο πόρων 0,45 μικρομέτρων. // 5.3. // Διατήρηση της στήλης // // Μετά τις αναλύσεις η στήλη εκπλύνεται με το έκλουσμα Β (με τη βοήθεια κλίσης παροχών) κατόπιν εκπλύνεται με το ακετονιτρίλιο (με τη βοήθεια κλίσης παροχών κατά τη διάρκεια 30 λεπτών). Η στήλη διατηρείται σε ακετονιτρίλιο. // 5.4. // Δείγματα μάρτυρες // 5.4.1. // Αποκορυφωμένο γάλα σε σκόνη που ανταποκρίνεται στις απαιτήσεις του κανονισμού (ΕΟΚ) αριθ. 625/78, δηλαδή (0). // 5.4.2. // Το ίδιο αποκορυφωμένο γάλα σε σκόνη αναμεμειγμένο με 5 % (m/m) με τον ορό γάλακτος σε σκόνη που προκύπτει μετά από πήξη, πρότυπης σύνθεσης, δηλαδή (5). // 5.4.3. // Το ίδιο αποκορυφωμένο γάλα σε σκόνη αναμεμειγμένο με 50 % (m/m) με τον ορό γάλακτος σε σκόνη που προκύπτει μετά από πήξη, πρότυπης σύνθεσης, δηλαδή (50) (*). // 6. // Εργαστηριακά σκεύη και όργανα // // Ο εξοπλισμός που απαιτείται για τον τρόπο εργασίας που αναφέρεται στον κανονισμό (ΕΟΚ) αριθ. 625/78 περιγράφεται στο παράρτημα V του παρόντος κανονισμού.

// 6.1. // Αναλυτική πλάστιγγα // 6.2. // Φυγοκεντρική μηχανή που μπορεί να επιτύχει μια κεντρόφυγο δύναμη 2 200 γραμμαρίων και εξοπλισμένη με κεντρόφυγους σωλήνες με πώμα, χωρητικότητας περίπου 50 ml. // 6.3. // Μηχανικός αναδευτήρας με δυνατότητα λειτουργίας στους 50° C. // 6.4. // Μαγνητικός αναδευτήρας. // 6.5. // Γυάλινα χωνιά διαμέτρου περίπου 7 εκατοστών. // 6.6. // Διηθητικά χαρτιά μέσης διηθητικής ικανότητας διαμέτρου περίπου 12,5 εκατοστών. // 6.7. // Διάταξη γυάλινης διήθησης εξοπλισμένης με διηθητική μεμβράνη της οποίας η διάμετρος πόρων είναι 0,45 μικρόμετρα. // 6.8. // Βαθμολογικά σιφώνια που επιτρέπουν την παροχή 10 ml (ISO 648, κατηγορίας Α ή ISO/R 835) ή σύστημα που μπορεί να παρέχει 10,0 ml σε δύο λεπτά. // 6.9. // Θερμοστατούμενο υδρόλουτρο που ρυθμίζεται στους 25 ± 0,5° C . // 6.10. // Εξοπλισμός HPLC που περιλαμβάνει: // 6.10.1. // Αντλία διπλής κλήσεως παροχών. // 6.10.2. // Διάταξη έκχυσης χειροκίνητη ή αυτόματη, δυναμικότητας 15 έως 30 ml. // 6.10.3. // Στήλη Dupont Protein Plus (μήκος 25 εκατοστών εσωτερικής διαμέτρου 0,46 εκατοστών) ή ισοδύναμη στήλη ανεστραμμένης φάσεως με βάση διοξείδιο του πυριτίου με διευρυμένους πόρους. // 6.10.4. // Κλίβανος με θερμοστατημένη στήλη που ρυθμίζεται σε 35±1° C. // 6.10.5. // Ανιχνευτή UV με μεταβλητό μήκος κύματος που επιτρέπει μετρήσεις έως 210 nm (σε περίπτωση ανάγκης μπορεί να χρησιμοποιηθεί ένα μήκος κύματος μεγαλύτερο το οποίο μπορεί να επιτύχει 220 nm) με ευαισθησία 0,02 AA. // 6.10.6 // o 'nOE o Laeld C Loe k'nh Pk'nae C OE TAE dijLPAEd C OEdOE 'n o 'nOE o Lae C lPAEdAE AEk C 'n OE'nOE o C AEHAE d OE'nOE o C AEHAE. // // R LP C OEldL: // // k'nae C OE OEAET C OEoe TAE ae a AEdL C OE P dd C L o oe k'nh HOEAEdLae'n C hTdAEOE d LaeP'nOEaeAEd C OEAE kaeOED C AE o o 'nTd'noe hk C 'n d'nT C 'nae'n C 'ndOE L LaeP'nOEaeAEd C OEAE AEhd C L HT kAEae'nhdOE C AEIJOE HOEAEOEhP C AETdOEoe P a AE o C hdaeoe d'nh 1° C· αλλιώς, διαπιστώνονται μεγάλες μεταβολές στο χρόνο κατακράτησης των GMPA. // 7. // Δειγματοληψία // 7.1. // Διεθνής προδιαγραφή ISO 707 - Γάλα και γαλακτοκομικά προϊόντα - Μέθοδοι δειγματοληψίας σύμφωνα με τις ενδείξεις που εμφαίνονται στο σημείο 2 στοιχείο γ) του παραρτήματος Ι του κανονισμού (ΕΟΚ) αριθ. 625/78. // 7.2. // Το δείγμα διατηρείται σε συνθήκες κατάλληλες ώστε να μη προκληθεί αλλοίωση ή μεταβολή της σύνθεσης. // 8. // Τρόπος εργασίας // 8.1. // Παρασκευή του δείγματος για δοκοιμή. // // Το γάλα σε σκόνη μεταγγίζεται σε δοχείο χωρητικότητας διπλής περίπου του όγκου της σκόνης, εξοπλισμένου με αεροστεγές πώμα. Το δοχείο κλείνεται αμέσως. Το γάλα σε σκόνη αναμειγνύεται κατά με διαδοχικές αναστροφές του δοχείου. // 8.2. // Δείγμα δοκιμής // // Σε φυγόκεντρους σωλήνες ζυγίζονται 2 ± 0,001 γραμμάρια δείγματος για δοκιμή (6.2) ή σε κατάλληλη σφαιρική φιάλη, με σμυρισμένο πώμα. (50 ml). // 8.3. // Απομάκρυνση των λιπαρών ουσιών και των πρωτεϊνών. // 8.3.1. // Στο δείγμα δοκιμής προστίθενται 20,0 γραμμάρια ζεστού νερού (50° C ). Η σκόνη διαλύεται με ανακίνηση πέντε λεπτών με τη βοήθεια ενός αναδευτήρα ή κατα τη διάρκεια 30 λεπτών, στην περίπτωση του ξυνόγαλου, με τη βοήθεια μηχανικού αναδευτήρα (6.3). Ο σωλήνας τοποθετείται σε υδατόλουτρο (6.9) και ρυθμίζεται η θερμοκρασία του σωλήνα σε 25° C. // 8.3.2. // Σε δύο λεπτά προστίθενται 10,0 ml διαλύματος τριχλωροξικού οξέος στους 25° C (5.1) ανακοινώντας ζωηρά με τη βοήθεια μαγνητικού αναδευτήρα (6.4). Ο σωλήνας τοποθετείται σε υδατόλουτρο (6.9) και διατηρείται σ' αυτό κατά τη διάρκεια 60 λεπτών. // 8.3.3. // Φυγοκέντριση (6.2) 2.200 γραμμάρια κατά τη διάρκεια 10 λεπτών ή διήθηση σε χαρτί (6.6), και απορρίπτονται τα πέντε πρώτα ml του διηθήματος. // 8.4. // Χρωματογραφικός προσδιορισμός // 8.4.1. // Η ανάλυση HPLL πραγματοποιείται όπως περιγράφεται στον κανονισμό (ΕΟΚ) αριθ. 625/78 παράρτημα V . Εάν προκύψει αρνητικό αποτέλεσμα αυτό σημαίνει ότι το αναλυόμενο δείγμα δεν περιέχει ξηρά εκχυλίσματα ορού γάλακτος που προέκυψε από πήξεις σε ανιχνεύσιμες ποσότητες. Σε περίπτωση θετικών αποτελεσμάτων πρέπει να εφαρμοστεί η τεχνική CLHP ανεστραμμένης φάσεως που περιγράφεται παρακάτω. Η παρουσία οξέος γάλακτος σε σκόνη μπορεί να δώσει ψευδοθετικά αποτελέσματα. Η μέθοδος CLHP ανεστραμμένης φάσεως αποκλείει αυτήν τη δυνατότητα. // 8.4.2. // Πριν να εφαρμοστεί η ανάλυση CLHP ανεστραμμένης φάσεως, πρέπει να βελτιστοποιηθούν οι συνθήκες της κλήσης παροχών. Ο ιδανικός χρόνος κατακράτησης για τα συστήματα της κλήσης παροχών νεκρού όγκου περίπου 6 ml (όγκος του σημείο όπου τα διαλύματα βρίσκονται στον όγκο του: δακτυλίου της διάταξης έγχυσης) είναι 26 λεπτά ± 2 λεπτά για τα GMPA. Στην περίπτωση των συστημάτων κλήσης παροχών που έχουν νεκρό όγκο χαμηλότερο (για παράδειγμα 2 ml) πρέπει να εφαρμοσθεί ως ιδανικός χρόνος κατακράτησης ο χρόνος των 22 λεπτών. // // Τα διαλύματα των τύπων δειγμάτων λαμβάνονται (5.4) με ή χωρίς ορό γάλακτος που προκύπτει μετά τη πήξη κατά 50 %. // // Στη διάταξη CLHP εκχύονται 100 μl υπερκείμενου υγρού ή διηθήματος (8.3.3) με τη χρησιμοποίηση συνθηκών κλήσεως παροχών αναφοράς που αναφέρονται στον πίνακα 1. // // Πίνακας 1. Συνθήκες κλήσεως παροχών αναφοράς για τη βελτιστοποίηση της χρωματογραφίας.

1.2.3.4.5 // // // // // // Χρόνος

(σε λεπτά)

// Παροχή

(ml/λεπτό) // % Α // % Β // Καμπύλη // // // // // // INIT // 1,0 // 90 // 10 // * // 27 // 1,0 // 60 // 40 // lin // 32 // 1,0 // 10 // 90 // lin // 37 // 1,0 // 10 // 90 // lin // 42 // 1,0 // 90 // 10 // lin // // // // // 1.2 // // Μια σύγκριση των δύο χρωματογραφημάτων θα έπρεπε να φαίνεται εκεί όπου βρίσκεται η κορυφή των GMPA. // // Με τη βοήθεια του τύπου που αναφέρεται παρακάτω, η σύνθεση του αρχικού διαλύματος που θα χρησιμοποιηθεί για την κανονική κλήση παροχών (8.4.3) μπορεί να υπολογισθεί ως εξής: // // % Β = 10 - 2.5 + (13.5 + (RTgmpA -26)/6)*30/27 // // % Β = 7.5 + (13.5 + (RTgmpA - 26)/6)*1.11. // // όπου: 1.2.3 // // RTgmpA: // χρόνος κατακράτησης του GMPA στην κλήση παροχών αναφοράς // // 10: // το αρχικό ποσοστό Β της κλήσης παροχών αναφοράς // // 2,5: // το ποσοστό Β στο κεντρικό σημείο μείον το ποσοστό Β στην αρχή στην κανονική κλήση παροχών // // 13,5: // ο χρόνος στα μισά της διαδρομής της κλήσης παροχών αναφοράς // // 26: // αναγκαίος χρόνος κατακράτησης για τα GMPA // // 6: // λόγος των κλήσεων παροχών αναφοράς και της κανονικής κλήσης παροχών // // 30: // ποσοστό Β στην αρχή μείον το ποσοστό Β σε 27 λεπτά. Στην κλήση παροχών αναφοράς // // 27: // χρόνος διαδρομής της κλήσης παροχών αναφοράς. 1.2 // 8.4.3. // Λήψη διαλυμάτων των δοκιμών // // Στο σκεύος CLHP εκχύονται ακριβώς 100 ml υπερκείμενου υγρού ή διηθήματος (8.3.3) και παροχή 1,0 ml ρέοντος διαλύματος (5.2) ανά λεπτό. // // Η σύνθεση του εκλούσματος στην αρχή της ανάλυσης προκύπτει από το 8.4.2. Προσεγγίζει συνήθως το Α: Β = 76: 24 (5.2). Αμέσως μετά την έγχυση αρχίζει μια γραμμική κλήση παροχών που δίδει μετά από 25 λεπτά ποσοστό Β μεγαλύτερο του 5 %. Στη συνέχεια αρχίζει μια γραμμική κλήση παροχών που οδηγεί στη σύνθεση του εκλούσματος μέχρι 95 % του Β σε διάστημα 5 λεπτών. Η σύνθεση αυτή διατηρείται κατά τη διάρκεια 5 λεπτών, στη συνέχεια μεταβάλλεται η σύνθεση με γραμμική κλήση παροχής 5 λεπτών για να επιτευχθεί η αρχική σύνθεση. Σύμφωνα με τον εσωτερικό όγκο του συστήματος άντλησης, η επόμενη έγχυση μπορεί να γίνει σε 15 λεπτά αφού έχουν επιτευχθεί οι αρχικές συνθήκες. // // Παρατηρήσεις // // 1. Ο χρόνος κατακράτησης των γλυκομακροπεπτιδίων θα έπρεπε να είναι 26 λεπτά ± 2 λεπτά, γεγονός που μπορεί να επιτευχθεί με τη μεταβολή των αρχικών συνθηκών και των τελικών συνθηκών της πρώτης κλήσης παροχών. Ωστόσο η διαφορά στο % Β για τις αρχικές συνθήκες και τις τελικές συνθήκες της πρώτης κλήσης παροχών πρέπει να παραμείνουν στο 5 % Β. // // 2. Τα εκλούσματα πρέπει να απαερώνονται επαρκώς και επίσης να διατηρούνται απαερωμένα. Αυτό είναι απαραίτητο για την καλή λειτουργία του συστήματος άντλησης της κλήσης παροχών. Η τυπική απόκλιση που αφορά το χρόνο κατακράτησης στην κορυφή του GMP πρέπει να είναι κατώτερη από 0,1 λεπτό (n = 10). // // 3. Για όλα τα πέντε δείγματα πρέπει να εγχυθεί και να χρησιμοποιηθεί το δείγμα αναφοράς (5) για να υπολογισθεί ο νέος συντελεστής απόκρισης R (9.1.1). // 8.4.4. // Τα αποτελέσματα της χρωματογραφικής ανάλυσης του δείγματος για δοκιμή (Ε) λαμβάνονται με τη μορφή χρωματογραφήματος όπου κάθε κορυφή GMP αναγνωρίζεται από το χρόνο κατακράτησης περίπου 26 λεπτών. // // Ο ολοκληρωτής (6.10.1) υπολογίζει αυτόματα το ύψος της κορυφής Η της κορυφής GPM. Η βασική γραμμή πρέπει να επαληθευθεί σε κάθε χρωματογράφημα. Η ανάλυση ή το ολοκλήρωμα θα έπρεπε να επαναληφθούν εάν η γραμμή δεν είναι σωστή. // // Για την ανίχνευση των ενδεχόμενων ανωμαλιών που οφείλονται είτε στην κακή λειτουργία του εξοπλισμού ή στη στήλη, είτε στη φύση του αναλυόμενου δείγματος, είναι αναγκαίο να εξεταστεί η μορφή κάθε χρωματογραφήματος πριν από κάθε ποσοτική ερμηνεία. Σε περίπτωση αμφιβολίας θα επαναληφθεί η ανάλυση. // 8.5. // Καμπύλη αναφοράς // 8.5.1. // Να εφαρμοσθεί επακριβώς στα δείγματα μάρτυρες (5.4.1-5.4.2) ο τρόπος εργασίας που περιγράφεται στο σημείο 8.2 στο σημείο 8.4.4. Να χρησιμοποιηθούν πρόσφατα παρασκευασμένα διαλύματα διότι τα GMP αποικοδομούνται σε τριχλωροξικό περιβάλλον μέχρι ποσοστού 8 %, σε θερμοκρασία περιβάλλοντος. Σε 4° C το διάλυμα παραμένει σταθερό κατά τη διάρκεια 24 ωρών. Στην περίπτωση μακρών σειρών ανάλυσης είναι σκόπιμο να χρησιμοποιηθεί ένας ψυχόμενος δίσκος δειγμάτων στην αυτόματη διάταξη έγχυσης. // // Σημείωση: // // Το σημείο 8.4.2 μπορεί να παραληφθεί εάν το % Β στις αρχικές συνθήκες είναι γνωστό από προηγούμενες αναλύσεις. Το χρωματογράφημα του δείγματος αναφοράς (5) πρέπει να είναι σύμφωνο με το σχέδιο 1. Σ' αυτήν τη γραφική αναπαράσταση, η κορυφή του GMPA ακολουθεί μετά από δύο μικρές κορυφές. Είναι αναγκαίο να γίνει ένας συγκρίσιμος διαχωρισμός. // 8.5.2. // Πριν από κάθε χρωματογραφικό προσδιορισμό των δειγμάτων, να χυθούν 100 μικρολίτρα του προτύπου δείγματος χωρίς ορό γάλακτος (0) (5.4.1). Το χρωματογράφημα δεν θα έπρεπε να παρουσιάζει κορυφή στο χρόνο κατακράτησης της κορυφής του GMPA. // 8.5.3. // Να προσδιοριστούν οι συντελεστές απόκρισης R με έγχυση του ιδίου όγκου διηθήματος (8.5.1) όπως και για τα δείγματα. // 9. // Αποτέλεσμα // 9.1. // Τρόπος υπολογισμού και τύποι // 9.1.1. // Υπολογισμός του συντελεστή απόκρισης R: // // Κορυφή GMP: R = W/H // // όπου: 1.2.3 // // R // = ο συντελεστής απόκρισης της κορυφής GMP // // Η // = στο ύψος της κορυφής GMP // // W // = η ποσότητα του ορού γάλακτος που περιέχεται στο δείγμα μάρτυρα (5) 1.2 // 9.2. // Υπολογισμός του ποσού του ορού γάλακτος που προκύπτει μετά τη πήξη και βρίσκεται μέσα στο δείγμα: // // W(E) = R x H(E) // // όπου: // // W(E) = το ποσοστό του ορού γάλακτος που προκύπτει μετά από πήξη και βρίσκεται στο δείγμα (Ε) // // R = ο συντελεστής απόκρισης της κορυφής GMP (9.1.1) // // Η(Ε) = το ύψος της κορυφής GMP του δείγματος (Ε). 1.2 // // Εάν W(E) είναι ανώτερο από 1 % και η διαφορά μεταξύ του χρόνου κατακράτησης και του χρόνου του δείγματος μάρτυρα (5) είναι κατώτερος από 0,2 λεπτά, αποδεικνύεται η παρουσία ξηρών εκχυλισμάτων ορού γάλακτος. // 9.3. // Ακρίβεια της μεθόδου // 9.3.1. // Επαναλήπτικότητα // // Η διαφορά μεταξύ των αποτελεσμάτων των δύο προσδιορισμών που πραγματοποιήθηκαν ταυτόχρονα ή με μικρό χρονικό διάστημα από τον ίδιο τεχνικό εργαστηρίου που χρησιμοποίησε τον ίδιο εξοπλισμό, επί της ίδιας δειγματοληψίας δεν μπορεί να υπερβαίνει το 0,2 % m/m. // 9.3.2. // Αναπαραγωγιμότητα // // Δεν έχει προσδιοριστεί ακόμα. // 9.3.3. // Γραμμικότητα // // Έως ποσοστού 16 % ορού γάλακτος μετά από πήξη θα ληφθεί μια γραμμική σχέση με συντελεστή συσχέτισης μεγαλύτερου του 0,99. // 9.4. // Ερμηνεία // 9.4.1. // Αποδεικνύεται η παρουσία του ορού γάλακτος εάν το αποτέλεσμα που λαμβάνεται στο σημείο 9.2 είναι μεγαλύτερο από 1 % m/m και εάν ο χρόνος κατακράτησης της κορυφής GMP διαφέρει κατά 0,2 τουλάχιστον λεπτά από εκείνον του πρότυπου δείγματος (5). Το Το όριο του 1 % καθορίζεται σύμφωνα με τις διατάξεις του κανονισμού (ΕΟΚ) αριθ. 625/78 παράρτημα V σημεία 9.2 και 9.4.1.

Απορροφητικότητα (220 nm)

»

(*) Ο ορός γάλακτος σε σκόνη που προκύπτει μετά από πήξη, πρότυπης σύνθεσης και επίσης η σκόνη του αναμεμειγμένου αποκορυφωμένου γάλακτος μπορούν να ληφθούν στη NIZO, Kernhemseweg 2, PO Box 20 - NL-6710 BA.

Ωστόσο, μπορούν να χρησιμοποιηθούν οι σκόνες που μπορούν να παρέχουν ισοδύναμα αποτελέσματα με αυτά που δίδουν οι σκόνες ΝΙΖΟ.