Πρωτόκολλο της Ευρωπαϊκής συμφωνίας

Περί ανταλλαγής θεραπευτικών ουσιών ανθρώπινης προελεύσεως

ΜΕΡΟΣ ΠΡΩΤΟ

ΓΕΝΙΚΕΣ ΔΙΑΤΑΞΕΙΣ

Α. ΕΠΙΓΡΑΦΗ

Κάθε δοχείο ή εξάρτημα θα εφοδιάζεται, πριν από την αποστολή του, με μια τυπωμένη επιγραφή στην αγγλική και γαλλική, κατά το αντίστοιχο υπόδειγμα που αναφέρεται στα παραρτήματα 2 έως 10 του παρόντος πρωτοκόλλου.

Β. ΣΥΣΚΕΥΑΣΙΑ ΚΑΙ ΑΠΟΣΤΟΛΗ

Το ολικό ανθρώπινο αίμα θα αποστέλλεται πάντοτε σε συσκευασία που θα εξασφαλίζει θερμοκρασία 4 έως 6 oC η οποία και θα διαρκεί σε όλο το διάστημα της αποστολής.

Η προϋπόθεση αυτή δεν απαιτείται για τα παράγωγα που προβλέπονται στο πρωτόκολλο.

Γ. ΠΡΟΪΟΝΤΑ ΚΑΙ ΕΞΑΡΤΗΜΑΤΑ

Τα προϊόντα και εξαρτήματα που αναφέρονται στο μέρος II του παρόντος πρωτοκόλλου θα είναι αποστειρωμένα, απυρετογόνα και μη τοξικά.

Συνιστάται η προσθήκη στις αποστολές των αναγκαίων εξαρτημάτων για τη χρησιμοποίηση του ανθρώπινου αίματος και των παραγώγων αυτού καθώς και των διαλυτικών για τα ξηρά προϊόντα.

Δ. ΑΒΛΑΒΕΙΑ ΤΟΥ ΕΞΟΠΛΙΣΜΟΥ ΜΕΤΑΓΓΙΣΕΩΣ ΑΙΜΑΤΟΣ ΑΠΟ ΤΟΞΙΚΟΤΗΤΑ ΠΛΑΣΤΙΚΩΝ ΥΛΩΝ

Ο εξοπλισμός θα είναι σύμφωνος με τις διατάξεις που προβλέπονται στο παράρτημα 11 του παρόντος πρωτοκόλλου.

ΜΕΡΟΣ ΔΕΥΤΕΡΟ

ΓΕΝΙΚΕΣ ΔΙΑΤΑΞΕΙΣ

1. ΟΛΙΚΟ ΑΝΘΡΩΠΙΝΟ ΑΙΜΑ

Το ολικό ανθρώπινο αίμα είναι αίμα που έχει αναμειχθεί με κατάλληλο αντιπηκτικό, μετά την αιματοληψία από φυσιολογικό άνθρωπο. Το αίμα δεν θα λαμβάνεται από άτομο:

α) για το οποίο είναι γνωστό ότι πάσχει ή είχε προσβληθεί από συφιλίδα ή ηπατίτιδα·

β) του οποίου η ανάλυση του αίματος για συφιλίδα δεν αποδείχθηκε αρνητική, ή

γ) το οποίο δεν είναι απαλλαγμένο νόσου που μπορεί να μεταδοθεί με τη μετάγγιση του αίματος κατά το μέτρο που είναι δυνατό να εξακριβωθεί με ιατρική εξέταση και μελέτη του ιστορικού του.

Το αίμα παίρνεται ασύπτως, με κλειστό και αποστειρωμένο σωλήνα, μέσα σε αποστειρωμένο φιαλίδιο που περιέχει το αντιπηκτικό διάλυμα προ της αποστειρώσεώς του. Ο εξοπλισμός που χρησιμοποιείται πρέπει να είναι απυρετογόνος. Μετά το τέλος της αιματοληψίας, το φιαλίδιο πωματίζεται αμέσως και ψύχεται μέχρι τη θερμοκρασία των 4 έως 6 oC, και δεν θα ανοιχθεί πλέον παρά αμέσως πριν από τη χρησιμοποίηση του αίματος.

Το αίμα συλλέγεται σε μια κιτρικιούχο όξινη διάλυση που περιέχει γλυκόζη. Δεν πρέπει να προστίθεται καμιά αντισηπτική ή βακτηριοστατική ουσία. Ο όγκος του αντιπηκτικού διαλύματος δεν πρέπει να υπερβαίνει τα 220 ml ανά λίτρο ολικού ανθρώπινου αίματος, η δε περιεκτικότητα σε αιμοσφαιρίνη δεν πρέπει να είναι κατώτερη από 97 γραμμάρια ανά λίτρο.

Ομάδα αίματος

Η ομάδα αίματος του συστήματος ΑΒ0 πρέπει να έχει προσδιορισθεί με εξέταση των αιμοσφαιρίων και του ορού, και η ομάδα του συστήματος Rh με εξέταση των αιμοσφαιρίων, χρησιμοποιώντας χωριστό δείγμα του αίματος του αιμοδότη. Όπου υπάρχει εθνικό πρότυπο ή συνιστώμενη εθνική τεχνική για την εξέταση της ομάδας του αίματος, η τεχνική αυτή θα πρέπει να χρησιμοποιείται.

Ο όρος "Rh αρνητικό" χρησιμοποιείται μόνο όταν ειδικές εξετάσεις έχουν καταδείξει την απουσία των αντιγόνων C, D, Du και Ε. Όλα τα άλλα αίματα πρέπει να φέρουν την επιγραφή "Rh θετικό".

Η ανταλλαγή αίματος σύμφωνα με την παρούσα συμφωνία θα πρέπει να χρησιμοποιείται μόνο για άτομα της αντίστοιχης ομάδας ΑΒ0.

Συντήρηση

Το ολικό ανθρώπινο αίμα πρέπει να διατηρείται σε αποστειρωμένο σφραγισμένο δοχείο έτσι ώστε να προφυλάσσεται από μικροοργανισμούς και να διατηρείται στη θερμοκρασία των 4 έως 6 oC μέχρι της χρησιμοποιήσεώς του, εκτός του απαιτούμενου χρόνου για την εξέταση και τη μεταφορά του σε υψηλότερη θερμοκρασία, οι οποίες περίοδοι δεν πρέπει να υπερβαίνουν τα 30 λεπτά με τα οποία το αίμα πρέπει να ψύχεται πάλι στους 4 έως 6 oC.

Επιγραφή

Η επιγραφή του φιαλιδίου θα δίνει όλες τις πληροφορίες που δείχνονται στην επιγραφή του υποδείγματος (παράρτημα 2). Η ομάδα Rhesus θα αναγράφεται ως "Positive" ("Θετικό"), "Negative" ("Αρνητικό") ή, συντομευμένα, "POS" ή "ΝΕG".

1 α. ΣΥΜΠΥΚΝΩΣΗ ΑΝΘΡΩΠΙΝΩΝ ΕΡΥΘΡΟΚΥΤΤΑΡΩΝ

Η συμπύκνωση ανθρώπινων ερυθροκυττάρων είναι μια μονάδα ολικού ανθρώπινου αίματος από το οποίο έχει αφαιρεθεί το περισσότερο πλάσμα.

Περιέχει όλα τα ερυθροκύτταρα από τη μονάδα από την οποία παρασκευάσθηκε. Μπορεί να υπάρχουν και άλλα συστατικά κυττάρων ή μπορεί να έχουν μερικώς αφαιρεθεί.

Το περιεχόμενο υγρού στη συμπύκνωση θα συνίσταται είτε από υπολειπόμενο πλάσμα, ή από ένα κατάλληλο ισότονο τεχνητό υδατοδιάλυμα προστιθέμενο μετά την αφαίρεση του πλάσματος. Ο όγκος των ερυθροκυττάρων, πρέπει να αποτελεί μεταξύ του 65 και 75 % του συνολικού όγκου του προϊόντος, αλλά, εάν χρησιμοποιείται μεγαλύτερη συμπύκνωση ερυθροκυττάρων, το κατά προσέγγιση ποσοστό του όγκου ερυθροκυττάρων (αιματοκρίτης) θα αναγράφεται στην επιγραφή.

Όλες οι διαδικασίες που απαιτούνται για την παρασκευή θα γίνονται υπό ασηπτικές συνθήκες: η μετάγγιση θα γίνεται χρησιμοποιώντας ένα αποστειρωμένο κλειστό σύστημα και μόνον υπό συμπίεση. Δεν θα προστίθεται καμιά ουσία αντισηπτική ή βακτηριοστατική.

Ομάδα αίματος και συντήρηση

Όπως και για το ολικό ανθρώπινο αίμα.

Επιγραφή

Η επιγραφή του φιαλιδίου θα δίνει όλες τις πληροφορίες που δείχνονται στην απιγραφή του υποδείγματος (παράρτημα 2 α). Η ομάδα Rhesus θα αναγράφεται ως "Positive" ("Θετικό") ή "Negative" ("Αρνητικό") ή, συντομευμένα, "POS" ή "NEG". Εάν έχει προστεθεί ένα τεχνητό υδατοδιάλυμα, η επιγραφή πρέπει να αναφέρει επίσης τον όγκο του και τη σύνθεσή του.

2. ΑΠΟΞΗΡΑΜΕΝΟ ΑΝΘΡΩΠΙΝΟ ΠΛΑΣΜΑ

Το αποξηραμένο ανθρώπινο πλάσμα παρασκευάζεται με αποξήρανση του επιπλέοντος υγρού που διαχωρίζεται με φυγοκέντρηση ή καθίζηση του ολικού ανθρώπινου αίματος.

Κατά την παρασκευή δεν θα προστίθεται καμιά αντισηπτική ή βακτηριοστατική ή άλλη ουσία. Το αποξηραμένο ανθρώπινο πλάσμα θα παρέχεται με λυοφιλοποίηση ή με οποιαδήποτε άλλη μέθοδο με την οποία αποφεύγεται η αλλοίωση των πρωτεϊνών. Το αποξηραμένο προϊόν θα είναι εύκολα διαλυτό σε ποσότητα νερού ίση με τον όγκο του υγρού από το οποίο έχει παρασκευασθεί η ουσία. Η συγκέντρωση πρωτεΐνης στο διάλυμα που παρασκευάσθηκε με τον τρόπο αυτό δεν πρέπει να είναι λιγότερη από 45 γραμμάρια ανά λίτρο και δεν πρέπει να παρουσιάζει εμφανή σήματα αιμολύσεως. Ο τίτλος της αιμοσυγκολλητίνης δεν πρέπει να είναι μεγαλύτερος από 1: 32.

Αποξηραμένο ανθρώπινο πλάσμα παρασκευασμένο από μία ή δύο χωριστές αιμοληψίες

Αιμοληψίες που δείχνουν ότι περιέχουν επικίνδυνες στάθμες ισοαιμολυσινών (καθοριζομένων με τη χρήση δείγματος νωπού ορού) ή τυχόν άνοσες αιμοσυγκολλητίνες θα αποκλείονται. Εκτός εάν το πλάσμα έχει ληφθεί και καταψυχθεί εντός 48 ωρών από τη συλλογή του αίματος, η στειρότητα κάθε μονάδας θα ελέγχεται με καλλιέργεια όχι λιγότερο των 10 ml.

Αποξηραμένο ανθρώπινο πλάσμα παρασκευασμένο από μείξη περισσοτέρων των δύο χωριστών αιμοληψιών

Τα μείγματα που δείχνουν ότι περιέχουν επικίνδυνες στάθμες άνοσων αιμοσυγκολλητινών ή ισοαιμολυσινών θα αποκλείονται. Για να αποφεύγονται οι βλαβερές επιπτώσεις που οφείλονται σε προϊόντα βακτηριακής αναπτύξεως στο πλάσμα, δεν θα χρησιμοποιείται καμιά συγκεκριμένη χωριστή αιμοληψία εάν υπάρχουν στοιχεία βακτηριακής μολύνσεως, η δε στειρότητα κάθε μείγματος θα εξετάζεται με καλλιέργεια όχι λιγότερο των 10 ml. Για την ελαχιστοποίηση του κινδύνου της μεταδόσεως λοιμώδους ηπατίτιδας, το πλάσμα πρέπει να παρασκευάζεται από μείγματα που αντιστοιχούν σε όχι περισσότερες από δώδεκα χωριστές αιμοληψίες, ή με οποιαδήποτε άλλη μέθοδο γνωστή ότι μειώνει εξίσου τον κίνδυνο αυτό.

Διαλυτότητα στο νερό

Προσθέτουμε ποσότητα νερού ίση με τον όγκο του υγρού από το οποίο παρασκευάσθηκε το δείγμα. Η ουσία διαλύεται πλήρως μέσα σε 10 λεπτά σε θερμοκρασία 15 έως 20 oC.

Έλεγχος ταυτότητας

Διαλύουμε μια δεδομένη ποσότητα του προϊόντος σε όγκο νερού ίσο με τον όγκο του υγρού από το οποίο έχει παρασκευασθεί. Το διάλυμα πρέπει να πληροί τα ακόλουθα κριτήρια:

i) τα κριτήρια κατακρημνίσεως με ειδικούς αντιορούς να δείχνουν μόνο πρωτεΐνες ανθρώπινου ορού.

ii) σε 1 ml προστίθεται η κατάλληλη ποσότητα θρομβίνης ή χλωριούχου ασβεστίου. Προκαλείται πήξη που μπορεί να επισπευθεί με επώαση σε θερμοκρασία 37 oC.

Απώλεια βάρους με αποξήρανση

Η αποξήρανση με φωσφορικό ανυδρίτη (πεντοξείδιο του φωσφόρου), υπό πίεση που δεν υπερβαίνει τα 0,02 χιλιοστά υδραργύρου επί 24 ώρες, δεν πρέπει να προκαλέσει απώλεια βάρους του αποξηραμένου ανθρώπινου πλάσματος περισσότερο από 0,5 % του βάρους του.

Αποστείρωση

Το τελικό προϊόν, μετά την αποκατάστασή του, πρέπει να είναι αποστειρωμένο όταν εξετάζεται με μια κατάλληλη βακτηριολογική μέθοδο.

Συντήρηση

Το αποξηραμένο ανθρώπινο πλάσμα πρέπει να τοποθετείται σε ατμόσφαιρα αζώτου ή σε κενό μέσα σε ένα αποστειρωμένο και σφραγισμένο φιαλίδιο έτσι ώστε να αποκλείει κάθε μικροοργανισμό και, όσο είναι δυνατόν, υγρασία, να προφυλάσσεται δε από το φως και να διατηρείται σε μια θερμοκρασία κάτω των 20 oC.

Επιγραφή

Η επιγραφή του φιαλιδίου θα δίνει όλες τις πληροφορίες που δείχνονται στην επιγραφή του υποδείγματος (παράρτημα 3).

3. ΑΝΘΡΩΠΙΝΟ ΛΕΥΚΩΜΑ ΚΑΙ ΣΤΑΘΕΡΑ ΔΙΑΛΥΜΑΤΑ ΠΡΩΤΕΪΝΩΝ ΑΝΘΡΩΠΙΝΟΥ ΠΛΑΣΜΑΤΟΣ

Το ανθρώπινο λεύκωμα και τα σταθερά διαλύματα πρωτεϊνών ανθρώπινου πλάσματος είναι παρασκευάσματα της πρωτεϊνικής συνθέσεως που αποτελούν περίπου 60 % των ολικών πρωτεϊνών στο πλάσμα του ολικού ανθρώπινου αίματος.

Η μέθοδος παρασκευής που χρησιμοποιείται είναι τέτοια ώστε να παράγεται ένα τελικό προϊόν που να ανταποκρίνεται στις απαιτήσεις που περιγράφονται παρακάτω. Ανεξαρτήτως του εάν το τελικό προϊόν είναι υγρό ή ξηρό, το παρασκεύασμα, μετά την προσθήκη ενός κατάληλου σταθεροποιητού ή σταθεροποιητών, πρέπει να θερμανθεί στην υγρά κατάσταση μέσα στο τελικό φιαλίδιο σε 60 oC ±0,5 oC επί 10 ώρες για να αδρανοποιηθεί το αίτιο της λοιμώδους ηπατίτιδας. Κατά τη διάρκεια της παρασκευής δεν πρέπει να προστεθεί καμιά αντισηπτική ή βακτηριοστατική ουσία.

Σε παρασκευάσματα ανθρώπινου λευκώματος, όχι λιγότερο από 95 % της μάζας των πρωτεϊνών που βρίσκονται εκεί θα είναι λεύκωμα. Σε παρασκευάσματα σταθερών διαλυμάτων πρωτεϊνών ανθρώπινου πλάσματος, όχι λιγότερο από 85 % της μάζας των πρωτεϊνών θα είναι λεύκωμα. Και στα δύο παρασκευάσματα, θα υπάρχουν περισσότερα από 10 χιλιοστά γραμμομορίου ανοσοποιημένης γ-σφαιρίνης ανά γραμμάριο προϊόντος. Όταν το τελικό προϊόν λυοφιλοποιηθεί, δεν θα πρέπει να περιέχει λιγότερο από 950 χιλιοστά γραμμομορίου πρωτεϊνών ανά γραμμάριο προϊόντος.

Τα σταθερά διαλύματα πρωτεϊνών ανθρώπινου πλάσματος θα πρέπει να έχουν μια ολική συγκέντρωση πρωτεϊνών μεταξύ 45 και 50 γραμμαρίων ανά λίτρο. Όταν το ανθρώπινο λεύκωμα παρασκευασθεί ως διάλυμα, θα πρέπει να έχει μια ολική συγκέντρωση πρωτεϊνών όχι λιγότερη από 45 γραμμάρια ανά λίτρο.

Διαλυτότητα του ξηρού προϊόντος

Προσθέτουμε νερό μέχρι του υποδεικνυόμενου όγκου. Το ξηρό παρασκεύασμα πρέπει να είναι τελείως διαλυτό.

Σταθερότητα

Συγκρίνοντας τα διαλύματα προτού και αφού θερμανθούν, δεν πρέπει να υπάρχουν ενδείξεις σημαντικής μετουσιώσεως των διαλυμένων πρωτεϊνών προκύπτουσες από μετρήσεις ιξώδους και θολώσεως, καθώς και με υπερφυγοκέντρηση και ηλεκτροφόρηση. Το διάλυμα θα πρέπει ουσιαστικά να μην περιέχει ορατά σωματίδια μετά από θέρμανση στους 57 oC και μετά από μηχανική ανατάραξη επί 6 ώρες στη θερμοκρασία αυτή.

Έλεγχος ταυτότητας

i) Αμφότερα τα παρασκευάσματα πρέπει να αποκαλύπτουν μόνον πρωτεΐνες ανθρώπινου πλάσματος μετά από δοκιμές κατακρημνίσεως με ειδικούς αντιορούς.

ii) H ηλεκτροφόρηση, εφαρμοζόμενη με την τεχνική ελευθέρου πεδίου υπό παραδεκτές και κατάλληλες συνθήκες, πρέπει να δείχνει ότι το κλάσμα των πρωτεϊνών με κινητικότητα του λευκωματώδους συστατικού του φυσιολογικού ανθρώπινου πλάσματος, είναι τουλάχιστον 95 % της μάζας πρωτεϊνών σε παρασκευάσματα ανθρώπινου λευκώματος, και τουλάχιστον 85 % της μάζας πρωτεϊνών σε παρασκευάσματα σταθερών διαλυμάτων πρωτεϊνών ανθρώπινου πλάσματος.

Περιεκτικότητα νατρίου και συμπύκνωση νατρίου

Η περιεκτικότητα νατρίου "πτωχού σε άλας" ανθρώπινου λευκώματος δεν πρέπει να υπερβαίνει τα 0,61 χιλιοστά γραμμομορίου ανά γραμμάριο λευκώματος. Σε άλλα παρασκευάσματα ανθρώπινου λευκώματος και σταθερών διαλυμάτων πρωτεϊνών ανθρώπινου πλάσματος, η συμπύκνωση νατρίου δεν πρέπει να υπερβαίνει τα 0,15 γραμμομόρια ανά λίτρο διαλύματος ή αναπλασμένου ξηρού προϊόντος.

Συμπύκνωση καλίου

Η συμπύκνωση καλίου σε σταθερά διαλύματα πρωτεϊνών ανθρώπινου πλάσματος, δεν πρέπει να υπερβαίνει 2 χιλιοστά γραμμομορίου ανά λίτρο διαλύματος ή αναπλασμένου ξηρού προϊόντος.

Οξύτητα

Το pΗ αμφοτέρων των παρασκευασμάτων θα πρέπει να είναι 6,8±0,2, μετρούμενο σε μια θερμοκρασία από 15 έως 25 oC, σε ένα αραιωμένο διάλυμα σε πρωτεϊνική συμπύκνωση 10 γραμμαρίων ανά λίτρο μέσω ενός διαλύματος που περιέχει 0,15 γραμμομόρια χλωριούχου νατρίου ανά λίτρο.

Απώλεια μάζας με αποξήρανση

Ξηρά παρασκευάσματα, όταν έχουν αποξηρανθεί με φωσφορικό ανυδρίτη (πεντοξείδιο φωσφόρου) υπό πίεση που δεν υπερβαίνει τα 0,02 χιλιοστά υδραργύρου επί 24 ώρες, δεν πρέπει να έχουν χάσει περισσότερο από 0,5 % του βάρους τους.

Αποστείρωση

Το τελικό προϊόν θα είναι αποστειρωμένο όταν εξετάζεται με κατάλληλη βακτηριολογική μέθοδο.

Συντήρηση

Το ξηρό ανθρώπινο λεύκωμα πρέπει να τοποθετείται σε ατμόσφαιρα αζώτου ή σε κενό σε ένα αποστειρωμένο φιαλίδιο σφραγισμένο έτσι ώστε να αποκλείονται μικροοργανισμοί και, όσο είναι δυνατόν, η υγρασία, να προφυλάσσεται δε από το φως και να διατηρείται σε μια θερμοκρασία κάτω των 20 oC.

Τα διαλύματα ανθρώπινου λευκώματος και τα σταθερά διαλύματα πρωτεϊνών ανθρώπινου πλάσματος πρέπει να διατηρούνται σε αποστειρωμένα φιαλίδια σφραγισμένα έτσι ώστε να αποκλείονται μικροοργανισμοί και, όσο είναι δυνατόν, η υγρασία, να προφυλάσσονται δε από το φως και να διατηρούνται σε μια θερμοκρασία μεταξύ 4 και 6 oC.

Επιγραφή

Η επιγραφή του φιαλιδίου θα δίνει όλες τις πληροφορίες που δείχνονται στην επιγραφή του υποδείγματος (παράρτημα 4). Για τα διαλύματα, η ημερομηνία του παρασκευάσματος είναι η ημερομηνία της θερμικής επεξεργασίας στο τελικό φιαλίδιο.

4. ΑΝΘΡΩΠΙΝΗ ΦΥΣΙΟΛΟΓΙΚΗ ΑΝΟΣΟΠΟΙΗΤΙΚΗ γ-ΣΦΑΙΡΙΝΗ

Η ανθρώπινη φυσιολογική ανοσοποιητική γ-σφαιρίνη είναι ένα παρασκεύασμα πλασματικών πρωτεϊνών προερχομένων από ολικό ανθρώπινο αίμα, που περιέχει τα αντισώματα φυσιολογικών και ανηλίκων ατόμων. Αποκτάται με ανάμειξη υγρού πλάσματος από τουλάχιστον 1000 δότες.

Η μέθοδος που χρησιμοποιείται για την παρασκευή πρέπει να είναι τέτοια ώστε να παράγει ένα υλικό που να ανταποκρίνεται στις απαιτήσεις που περιγράφονται παρακάτω και η οποία προλαμβάνει τη μετάδοση της λοιμώδους ηπατίτιδας διά του τελικού προϊόντος. Επιπλέον, η μέθοδος παρασκευής θα πρέπει να είναι τέτοια ώστε τα αντισώματα που περιέχονται στο αρχικό υλικό θα είναι συμπυκνωμένα σε κατάλληλη ποσότητα στο τελικό προϊόν. Θα πρέπει να καταδεικνύεται ότι η διαδικασία, για κάθε τελικό παρασκεύασμα, ανταποκρίνεται προς τα παραπάνω διά τιτλοποι-ήσεως, στο αρχικό υλικό και στο τελικό προϊόν, αντισωμάτων τουλάχιστον για έναν ιό και μια βακτηριακή τοξίνη. Τα αντισώματα που θα επιλέγονται θα είναι αυτά για τα οποία υπάρχουν αναγνωρισμένες μέθοδοι τιτλοποιήσεως.

Κατά την παρασκευή καμιά άλλη αντισηπτική ή βακτηριοστατική ουσία δεν πρέπει να προστεθεί. Στο τελικό παρασκεύασμα μπορεί να προστεθεί ένα κατάλληλο συντηρητικό και μία σταθεροποιητική ουσία για να διατηρηθεί η βακτηριακή στειρότητα και η σταθερότητα του τελικού προϊόντος.

Το τελικό προϊόν παραδίδεται ως διάλυμα στο οποίο η συγκέντρωση της ανοσοποιητικής γ-σφαιρίνης είναι μεταξύ 100 και 170 γραμμαρίων ανά λίτρο.

Έλεγχος ταυτότητας

i) Δοκιμές κατακρημνίσεως με ειδικούς αντιορούς πρέπει να αποκαλύψουν μόνον πρωτεΐνες ανθρώπινου πλάσματος.

ii) H ηλεκτροφόρηση, εφαρμοζόμενη με την τεχνική ελευθέρου πεδίου υπό παραδεκτές και κατάλληλες συνθήκες, πρέπει να δείχνει ότι τουλάχιστον 90 % της μάζας των πρωτεϊνών έχουν την κινητικότητα του συστατικού γάμμα της σφαιρίνης σε φυσιολογικό ανθρώπινο πλάσμα.

Σταθερότητα

Δεν πρέπει να υπάρχει κανένα φανερό σημείο κατακρημνίσεως ή θολώσεως ούτε πριν ούτε μετά τη θέρμανση του τελικού διαλύματος σε 37 oC επί επτά ημέρες. Συνιστάται επίσης να γίνουν δοκιμές χρησιμοποιώντας μια υπερφυγοκεντρική μέθοδο για να προσδιορισθεί η έκταση του υποβιβασμού του προϊόντος σε συστατικά μικρότερου μοριακού βάρους. Η μέθοδος που θα χρησιμοποιηθεί πρέπει να είναι εγκεκριμένη από την εθνική αρχή ελέγχου.

Οξύτητα

Το pΗ του τελικού διαλύματος θα πρέπει να είναι 6,8±0,4, μετρούμενο σε μια θερμοκρασία από 15 έως 25 oC σε ένα αραιωμένο διάλυμα σε πρωτεϊνική συμπύκνωση 10 γραμμαρίων ανά λίτρο μέσω ενός διαλύματος που περιέχει 0,15 γραμμομόρια χλωριούχου νατρίου ανά λίτρο.

Αποστείρωση

Το τελικό προϊόν πρέπει να είναι αποστειρωμένο όταν εξετάζεται με μια κατάλληλη βακτηριολογική μέθοδο.

Συντήρηση

Η ανθρώπινη ανοσοποιητική γ-σφαιρίνη υπό μορφή διαλύματος πρέπει να τοποθετείται σε αποστειρωμένο φιαλίδιο σφραγισμένο έτσι ώστε να αποκλείονται μικροοργανισμοί, να προφυλάσσεται δε από το φως και να διατηρείται σε μια θερμοκρασία μεταξύ 4 και 6 oC.

Επιγραφή

Η επιγραφή του φιαλιδίου θα πρέπει να δίνει όλες τις πληροφορίες που δείχνονται στην επιγραφή του υποδείγματος (παράρτημα 5). Η ημερομηνία του παρασκευάσματος είναι η ημερομηνία της πληρώσεως του τελικού φιαλιδίου.

5. ΑΝΘΡΩΠΙΝΕΣ ΕΙΔΙΚΕΣ ΑΝΟΣΟΠΟΙΗΤΙΚΕΣ γ-ΣΦΑΙΡΙΝΕΣ

Οι ανθρώπινες ειδικές ανοσοποιητικές γ-σφαιρίνες περιέχουν αντισώματα κατά καθορισμένων ιογόνων και βακτηριογόνων ουσιών. Μπορούν επομένως να παρασκευασθούν από ανάμειξη περιορισμένου αριθμού χωριστών αιμολήψεων.

Οι ακόλουθες ανθρώπινες ειδικές ανοσοποιητικές γ-σφαιρίνες περιλαμβάνονται σε αυτές τις απαιτήσεις:

- ανθρώπινη ανοσοποιητική αντι-τετανική γ-σφαιρίνη,

- ανθρώπινη ανοσοποιητική αντι-δαμαλική γ-σφαιρίνη.

Μπορούν να αναπτυχθούν και άλλες ειδικές ανοσοποιητικές γ-σφαιρίνες και, όταν υπάρξουν τα κατάλληλα διεθνή πρότυπα, θα ελέγχονται σε σχέση με το πρότυπο αυτό και η δραστικότητά τους θα εκφράζεται σε διεθνείς μονάδες (IU).

Η ανθρώπινη ανοσοποιητική αντι-δαμαλική γ-σφαιρίνη θα περιέχει τουλάχιστον 500 IU ανά ml αντισώματος δαμαλίδας, προσδιοριζόμενων με δοκιμές ουδετεροποιήσεως σε χοριοαλλαντοϊκές μεμβράνες ή σε καλλιέργεια ιστών. Η ανθρώπινη ανοσοποιητική αντι-τετανική γ-σφαιρίνη θα περιέχει τουλάχιστον 50 IU ανά ml αντιτοξίνης τετάνου προσδιοριζομένων με δοκιμές ουδετεροποιήσεως σε ζώα.

Οι ανθρώπινες ανοσοποιητικές γ-σφαιρίνες πρέπει επιπλέον να ανταποκρίνονται στις απαιτήσεις που περιγράφονται στην παράγραφο 4, "ανθρώπινη φυσιολογική ανοσοποιητική γ-σφαιρίνη".

Αναλόγως της περιεκτικότητας σε αντισώματα, η συγκέντρωση της ανοσοποιητικής γ-σφαιρίνης στο τελικό διάλυμα μπορεί να κυμαίνεται μεταξύ 100 και 170 γραμμαρίων ανά λίτρο.

Επιγραφή

Η επιγραφή του φιαλιδίου θα δίνει όλες τις πληροφορίες που δείχνονται στην επιγραφή του υποδείγματος (παράρτημα 5).

Επιπλέον, η επιγραφή θα αναφέρει τη δραστικότητα σε διεθνείς μονάδες σχετικά με το σχετικό διεθνές πρότυπο ή διεθνείς παρασκευές αναφοράς.

6. ΑΠΟΞΗΡΑΜΕΝΟ ΑΝΘΡΩΠΙΝΟ ΙΝΩΔΟΓΟΝΟ

Το αποξηραμένο ανθρώπινο ινωδογόνο είναι ένα αποξηραμένο παρασκεύασμα που περιέχει τα διαλυτά συστατικά του υγρού ανθρώπινου πλάσματος που, με την προσθήκη θρομβίνης, μετατρέπεται σε ινώδες. Η μέθοδος που θα χρησιμοποιηθεί για την παρασκευή πρέπει να είναι τέτοια ώστε να παράγει ένα υλικό που να ανταποκρίνεται στις απαιτήσεις που περιγράφονται παρακάτω και η οποία ελαχιστοποιεί τον κίνδυνο της μεταδόσεως λοιμώδους ηπατίτιδας. Αναμείξεις πλάσματος που χρησιμοποιούνται για την παρασκευή ινωδογόνου πρέπει να περιέχουν όσο το δυνατόν λιγότερες χωριστές αιμοληψίες.

Κατά την παρασκευή δεν πρέπει να προστίθεται καμιά αντισηπτική ή βακτηριοστατική ουσία. Το τελικό προϊόν θα λυοφιλιούται.

Διαλυτότητα

Προσθέτομε νερό μέχρι του υποδεικνυομένου όγκου. Το αποξηραμένο παρασκεύασμα πρέπει να είναι τελείως διαλυτό. Δεν πρέπει να υπάρξει καμιά κατα-κρήμνιση εντός 60 λεπτών από την επανασύσταση.

Έλεγχος ταυτότητας

i) Δοκιμές κατακρημνίσεως με ειδικούς αντιορούς πρέπει να αποκαλύψουν μόνον πρωτεΐνες ανθρώπινου πλάσματος.

ii) To προϊόν που προέρχεται από μια πρόσφατη επανασύσταση έχει την ιδιότητα να πήγνεται με την προσθήκη θρομβίνης. Όταν η θρομβίνη προστίθεται σε ένα διάλυμα ανθρώπινου ινωδογόνου της ιδίας συμπυκνώσεως, όπως και του νωπού φυσιολογικού πλάσματος, η πήξη θα λάβει χώρα σε χρόνο που δεν υπερβαίνει το διπλάσιο χρόνο που απαιτείται για την πήξη του νωπού φυσιολογικού πλάσματος μετά την προσθήκη θρομβίνης.

iii) Πήξιμη πρωτεΐνη. Όχι λιγότερο από 50 % της ολικής πρωτεΐνης θα είναι πήξιμη με θρομβίνη.

Απώλεια μάζας με αποξήρανση

Με αποξήρανση με φωσφορικό ανυδρίτη (πεντοξείδιο του φωσφόρου) υπό πίεση που δεν υπερβαίνει τα 0,02 χιλιοστά υδραργύρου επί 24 ώρες, δεν πρέπει τα παρασκευάσματα να χάσουν περισσότερο από 0,5 % του βάρους τους.

Αποστείρωση

Το τελικό προϊόν μετά την επανασύσταση θα είναι αποστειρωμένο όταν εξετάζεται με μια κατάλληλη βακτηριολογική μέθοδο.

Συντήρηση

Το ανθρώπινο ινωδογόνο πρέπει να τοποθετείται σε ατμόσφαιρα αζώτου ή σε κενό σε αποστειρωμένο φιαλίδιο σφραγισμένο, έτσι ώστε να αποκλείονται μικροοργανισμοί και, όσο είναι δυνατόν, η υγρασία, να προφυλάσσεται δε από το φως και να διατηρείται στην υποδεικνυόμενη θερμοκρασία.

Επιγραφή

Η επιγραφή του φιαλιδίου θα δίνει όλες τις πληροφορίες που δείχνονται στην επιγραφή του υποδείγματος (παράρτημα 6). Η ημερομηνία του παρασκευάσματος είναι η ημερομηνία κατά την οποία παρασκευάσθηκε το τελικό διάλυμα πριν από τη λυοφιλοποίηση.

7. ΑΠΟΞΗΡΑΜΕΝΟΣ Ή ΚΑΤΕΨΥΓΜΕΝΟΣ ΑΝΘΡΩΠΙΝΟΣ ΠΑΡΑΓΩΝ VIII ΠΗΞΕΩΣ

Ι. Απαιτήσεις σχετικά με τους δότες

Οι δότες πρέπει να είναι υγιείς και ιδιαιτέρως, απαλλαγμένοι από οποιαδήποτε μεταδοτική νόσο, σύμφωνα με τα κριτήρια που έχουν υιοθετηθεί για αποξηραμένο ανθρώπινο πλάσμα.

II. Απαιτήσεις σχετικά με τα παρασκευάσματα

Στειρότητα και ατοξικότητα

Το τελικό προϊόν πρέπει να είναι στείρο και απυ-ρετογόνο. Όπου εφαρμόζεται ψυχροκατακρήμνι-ση σε πλαστικές σακούλες, το προϊόν δεν πρέπει να περιέχει οργανικές διαλυτικές ουσίες ή άλλες ξένες ουσίες παρούσες στο καταψυκτικό μείγμα. Η διείσδυση τέτοιων προϊόντων διά μέσου των τοιχωμάτων της πλαστικής σακούλας μπορεί να αποφευχθεί τοποθετώντας τη σακούλα μέσα σε μια δεύτερη αδιαπέραστη σακούλα καθ' όλη την περίοδο της εμβαπτίσεως. Ο κίνδυνος του σχισίματος της πλαστικής σακούλας κατά τη συντήρηση σε κατεψυγμένη κατάσταση μειώνεται εάν κάθε σακούλα τοποθετηθεί μέσα σε ένα προστατευτικό κουτί.

Ερυθροκύτταρα, λευκοκύτταρα και αιμοπετάλια

Η φυγοκέντρηση πρέπει να είναι τέτοια ώστε να απομακρύνονται τα μορφούμενα στοιχεία του αίματος όσο το δυνατόν γρηγορότερα και πληρέστερα μετά τη δειγματοληψία.

Διαλυτότητα

Η προσθήκη της υποδεικνυόμενης ποσότητας του κατάλληλου διαλυτικού μέσου πρέπει να έχει ως αποτέλεσμα την πλήρη διάλυση του αποξηραμένου προϊόντος σε λιγότερο από 30 λεπτά σε 37 oC. Μπορεί να παραμένουν μικρά και ευκόλως διαχωριζόμενα συμπυκνώματα ινωδογόνου.

Σταθερότητα

Το παρασκεύσμα διατηρούμενο σε 20 oC δεν πρέπει να παρουσιάζει κανένα σημείο κατακρημνίσεως επί τρεις ώρες μετά τη διάλυση.

Δραστικότητα

Το επανασυσταθέν παρασκεύασμα πρέπει να περιέχει την υποδεικνυόμενη ποσότητα παράγοντος VIII, μια μονάδα αντιστοιχούσα σε δραστικότητα 1 ml μέσου φυσιολογικού νωπού πλάσματος, της δραστικότητας προσδιοριζόμενης με μια μέθοδο εγκεκριμένη από την αρμόδια εθνική αρχή.

Απουσία ανωμάλων αντισωμάτων και, εάν το παρασκεύασμα προορίζεται για ασθενείς οποιασδήποτε ομάδας ΑΒ0, ένας τίτλος αντι-Α και αντι-Β αντισωμάτων που δεν υπερβαίνει τα 32.

Έλεγχος ταυτότητας

Δοκιμές κατακρημνίσεως με ειδικούς αντιορούς πρέπει να αποκαλύψουν μόνον πρωτεΐνες ανθρώπινου πλάσματος.

Απώλεια μάζας με αποξήρανση

Λυοφιλοποιημένα παρασκευάσματα που έχουν αποξηρανθεί με φωσφορικό ανυδρίτη (πεντοξείδιο του φωσφόρου) υπό πίεση που δεν υπερβαίνει τα 0,02 χιλιοστά υδραργύρου επί 24 ώρες, δεν πρέπει να χάσουν περισσότερο από 1,5 % του βάρους τους.

Συντήρηση

Ο ανθρώπινος παράγων VIII πρέπει να συντηρείται σε μια κατάσταση βαθιάς καταψύξεως σε θερμοκρασία κάτω των – 30 oC, και στην κατάσταση της λυοφιλοποιήσεως κάτω των 5 oC, θα προστατεύεται δε από το φως. Το αποξηραμένο παρασκεύασμα θα τοποθετείται σε ατμόσφαιρα αζώτου ή σε κενό σε αποστειρωμένο φιαλίδιο σφραγισμένο έτσι ώστε να αποκλείονται μικροοργανισμοί και, όσο είναι δυνατόν, η υγρασία. Η συντήρηση στην κατεψυγμένη κατάσταση δεν θα υπερβαίνει τους έξι μήνες, στην δε αποξηραμένη κατάσταση ένα χρόνο, εκτός εάν το παρασκεύασμα έχει επανεξετασθεί για την ελάχιστη απαιτούμενη δραστικότητα.

III. Επιγραφή

Η επιγραφή του φιαλιδίου θα δίνει όλες τις πληροφορίες που δείχνονται στην επιγραφή του υποδείγματος (παράρτημα 7).

8. ΑΠΟΞΗΡΑΜΕΝΟΙ ΑΝΡΩΠΙΝΟΣ ΠΑΡΑΓΩΝ IX ΠΗΞΕΩΣ

Ι. Απαιτήσεις σχετικές με τους δότες

Οι δότες πρέπει να είναι υγιείς και, ιδιαιτέρως, απαλλαγμένοι από οποιαδήποτε μεταδοτική νόσο, σύμφωνα με τα κριτήρια που έχουν υιοθετηθεί για αποξηραμένο ανθρώπινο πλάσμα.

II. Απαιτήσεις σχετικά με τη συμπύκνωση

Στειρότητα και ατοξικότητα

Το τελικό προϊόν, εξεταζόμενο με κατάλληλες μεθόδους πρέπει να είναι στείρο, απυρετογόνο και απαλλαγμένο από ανεπιθύμητες αγγειοδιασταλτικές ή αναπνευστικές επιδράσεις. Η εξέταση σχετικά με την απουσία αγγειοδιασταλτικών επιδράσεων, θα πρέπει να γίνεται σε ένα σκύλο ή μία γάτα.

Διαλυτότητα

Η προσθήκη της υποδεικνυόμενης ποσότητας του διαλυτικού μέσου πρέπει να έχει ως αποτέλεσμα την πλήρη διάλυση μέσα σε 10 λεπτά σε 37 oC.

Θρομβοπλαστινική δραστηριότητα και απουσία ελεύθερης θρομβίνης

Ο χρόνος επαναποτιτανώσεως ενός φυσιολογικού πλάσματος σε 37 oC, υπό την παρουσία ίσου όγκου διαφόρων διαλύσεων του επανασυσταθέντος προϊόντος, δεν πρέπει να είναι λιγότερος από 40 δευτερόλεπτα. Το επανασυσταθέν προϊόν με την προσθήκη ίσου όγκου ινωδογόνου (3 γραμμάρια ανά λίτρο) δεν πρέπει να πήξει μέσα σε έξι ώρες σε 37 oC.

Δραστικότητα

Το επανασυσταθέν παρασκεύασμα πρέπει να περιέχει την υποδεικνυόμενη ποσότητα παράγοντος IX, μια μονάδα αντιστοιχούσα σε δραστικότητα 1 ml μέσου φυσιολογικού νωπού πλάσματος, της δραστικότητας προσδιοριζομένης με μια μέθοδο εγκεκριμένη από την αρμόδια εθνική αρχή.

Απόδοση και σταθερότητα in vivo

Η μέθοδος παρασκευής πρέπει να είναι τέτοια ώστε η ταχεία χορήγηση με ενδοφλέβια ένεση μιας δόσεως 50 μονάδων ανά χιλιόγραμμο βάρους σώματος, χρησιμοποιώντας πολλές παρτίδες υλικού σε πολλούς ασθενείς, θα προκαλεί, μέσα σε 15 λεπτά, με απουσία ειδικού ανασταλτικού και υπό βασικές συνθήκες, μια μέση άνοδο τουλάχιστον 300 μονάδων ανά λίτρο πλάσματος, και σε εμμονή, μετά από 24 ώρες, μια μέση άνοδο τουλάχιστον 60 μονάδων ανά λίτρο πλάσματος.

Έλεγχος ταυτότητας

Δοκιμές κατακρημνίσεως με ειδικούς αντιορούς πρέπει να αποκαλύψουν μόνον πρωτεΐνες ανθρώπινου πλάσματος.

Απώλεια μάζας με αποξήρανση

Με αποξήρανση με φωσφορικό ανυδρίτη (πεντοξείδιο του φωσφόρου) υπό πίεση που δεν υπερβαίνει τα 0,02 χιλιοστά υδραργύρου επί 24 ώρες, δεν πρέπει το προϊόν να χάσει περισσότερο από 1,5 % του βάρους του.

Συντήρηση

Τα παρασκευάσματα πρέπει να συντηρούνται ξηρά σε μια θερμοκρασία κάτω των 5 oC. H περίοδος της συντηρήσεως δεν πρέπει να υπερβεί τα δύο χρόνια, εκτός εάν η δραστικότητα του παρασκευάσματος έχει επανεξετασθεί.

III. Παρουσίαση

Η επιγραφή του φιαλιδίου θα δίνει όλες τις πληροφορίες που δείχνονται στην επιγραφή του υποδείγματος (παράρτημα 8).

--------------------------------------------------

ΠΑΡΑΡΤΗΜΑ 1 ΤΟΥ ΠΡΩΤΟΚΟΛΛΟΥ

ΣΥΜΒΟΥΛΙΟ ΤΗΣ ΕΥΡΩΠΗΣ

ΕΥΡΩΠΑΪΚΗ ΣΥΜΦΩΝΙΑ ΠΕΡΙ ΑΝΤΑΛΛΑΓΗΣ ΘΕΡΑΠΕΥΤΙΚΩΝ ΟΥΣΙΩΝ ΑΝΘΡΩΠΙΝΗΣ ΠΡΟΕΛΕΥΣΕΩΣ

ΠΙΣΤΟΠΟΙΗΤΙΚΟ

(Άρθρο 4)

+++++ TIFF +++++

--------------------------------------------------

ΠΑΡΑΡΤΗΜΑ 2 ΤΟΥ ΠΡΩΤΟΚΟΛΛΟΥ

ΣΥΜΒΟΥΛΙΟ ΤΗΣ ΕΥΡΩΠΗΣ

ΕΥΡΩΠΑΪΚΗ ΣΥΜΦΩΝΙΑ ΠΕΡΙ ΑΝΤΑΛΛΑΓΗΣ ΘΕΡΑΠΕΥΤΙΚΩΝ ΟΥΣΙΩΝ ΑΝΘΡΩΠΙΝΗΣ ΠΡΟΕΛΕΥΣΕΩΣ

+++++ TIFF +++++

--------------------------------------------------

ΠΑΡΑΡΤΗΜΑ 2α ΤΟΥ ΠΡΩΤΟΚΟΛΛΟΥ

ΣΥΜΒΟΥΛΙΟ ΤΗΣ ΕΥΡΩΠΗΣ

ΕΥΡΩΠΑΪΚΗ ΣΥΜΦΩΝΙΑ ΠΕΡΙ ΑΝΤΑΛΛΑΓΗΣ ΘΕΡΑΠΕΥΤΙΚΩΝ ΟΥΣΙΩΝ ΑΝΘΡΩΠΙΝΗΣ ΠΡΟΕΛΕΥΣΕΩΣ

+++++ TIFF +++++

--------------------------------------------------

ΠΑΡΑΡΤΗΜΑ 3 ΤΟΥ ΠΡΩΤΟΚΟΛΛΟΥ

ΣΥΜΒΟΥΛΙΟ ΤΗΣ ΕΥΡΩΠΗΣ

ΕΥΡΩΠΑΪΚΗ ΣΥΜΦΩΝΙΑ ΠΕΡΙ ΑΝΤΑΛΛΑΓΗΣ ΘΕΡΑΠΕΥΤΙΚΩΝ ΟΥΣΙΩΝ ΑΝΘΡΩΠΙΝΗΣ ΠΡΟΕΛΕΥΣΕΩΣ

+++++ TIFF +++++

--------------------------------------------------

ΠΑΡΑΡΤΗΜΑ 4 ΤΟΥ ΠΡΩΤΟΚΟΛΛΟ

ΣΥΜΒΟΥΛΙΟ ΤΗΣ ΕΥΡΩΠΗΣ

ΕΥΡΩΠΑΪΚΗ ΣΥΜΦΩΝΙΑ ΠΕΡΙ ΑΝΤΑΛΛΑΓΗΣ ΘΕΡΑΠΕΥΤΙΚΩΝ ΟΥΣΙΩΝ ΑΝΘΡΩΠΙΝΗΣ ΠΡΟΕΛΕΥΣΕΩΣ

+++++ TIFF +++++

--------------------------------------------------

ΠΑΡΑΡΤΗΜΑ 4 (συνέχεια 1)

ΣΥΜΒΟΥΛΙΟ ΤΗΣ ΕΥΡΩΠΗΣ

ΕΥΡΩΠΑΪΚΗ ΣΥΜΦΩΝΙΑ ΠΕΡΙ ΑΝΤΑΛΛΑΓΗΣ ΘΕΡΑΠΕΥΤΙΚΩΝ ΟΥΣΙΩΝ ΑΝΘΡΩΠΙΝΗΣ ΠΡΟΕΛΕΥΣΕΩΣ

+++++ TIFF +++++

--------------------------------------------------

ΠΑΡΑΡΤΗΜΑ 4 (συνέχεια 2)

ΣΥΜΒΟΥΛΙΟ ΤΗΣ ΕΥΡΩΠΗΣ

ΕΥΡΩΠΑΪΚΗ ΣΥΜΦΩΝΙΑ ΠΕΡΙ ΑΝΤΑΛΛΑΓΗΣ ΘΕΡΑΠΕΥΤΙΚΩΝ ΟΥΣΙΩΝ ΑΝΘΡΩΠΙΝΗΣ ΠΡΟΕΛΕΥΣΕΩΣ

+++++ TIFF +++++

--------------------------------------------------

ΠΑΡΑΡΤΗΜΑ 5 ΤΟΥ ΠΡΩΤΟΚΟΛΛΟΥ

ΣΥΜΒΟΥΛΙΟ ΤΗΣ ΕΥΡΩΠΗΣ

ΕΥΡΩΠΑΪΚΗ ΣΥΜΦΩΝΙΑ ΠΕΡΙ ΑΝΤΑΛΛΑΓΗΣ ΘΕΡΑΠΕΥΤΙΚΩΝ ΟΥΣΙΩΝ ΑΝΘΡΩΠΙΝΗΣ ΠΡΟΕΛΕΥΣΕΩΣ

+++++ TIFF +++++

--------------------------------------------------

ΠΑΡΑΡΤΗΜΑ 6 ΤΟΥ ΠΡΩΤΟΚΟΛΛΟΥ

ΣΥΜΒΟΥΛΙΟ ΤΗΣ ΕΥΡΩΠΗΣ

ΕΥΡΩΠΑΪΚΗ ΣΥΜΦΩΝΙΑ ΠΕΡΙ ΑΝΤΑΛΛΑΓΗΣ ΘΕΡΑΠΕΥΤΙΚΩΝ ΟΥΣΙΩΝ ΑΝΘΡΩΠΙΝΗΣ ΠΡΟΕΛΕΥΣΕΩΣ

+++++ TIFF +++++

--------------------------------------------------

ΠΑΡΑΡΤΗΜΑ 7 ΤΟΥ ΠΡΩΤΟΚΟΛΛΟΥ

ΣΥΜΒΟΥΛΙΟ ΤΗΣ ΕΥΡΩΠΗΣ

ΕΥΡΩΠΑΪΚΗ ΣΥΜΦΩΝΙΑ ΠΕΡΙ ΑΝΤΑΛΛΑΓΗΣ ΘΕΡΑΠΕΥΤΙΚΩΝ ΟΥΣΙΩΝ ΑΝΘΡΩΠΙΝΗΣ ΠΡΟΕΛΕΥΣΕΩΣ

+++++ TIFF +++++

--------------------------------------------------

ΠΑΡΑΡΤΗΜΑ 8 ΤΟΥ ΠΡΩΤΟΚΟΛΛΟΥ

ΣΥΜΒΟΥΛΙΟ ΤΗΣ ΕΥΡΩΠΗΣ

ΕΥΡΩΠΑΪΚΗ ΣΥΜΦΩΝΙΑ ΠΕΡΙ ΑΝΤΑΛΛΑΓΗΣ ΘΕΡΑΠΕΥΤΙΚΩΝ ΟΥΣΙΩΝ ΑΝΘΡΩΠΙΝΗΣ ΠΡΟΕΛΕΥΣΕΩΣ

+++++ TIFF +++++

--------------------------------------------------

ΠΑΡΑΡΤΗΜΑ 9 ΤΟΥ ΠΡΩΤΟΚΟΛΛΟΥ

ΣΥΜΒΟΥΛΙΟ ΤΗΣ ΕΥΡΩΠΗΣ

ΕΥΡΩΠΑΪΚΗ ΣΥΜΦΩΝΙΑ ΠΕΡΙ ΑΝΤΑΛΛΑΓΗΣ ΘΕΡΑΠΕΥΤΙΚΩΝ ΟΥΣΙΩΝ ΑΝΘΡΩΠΙΝΗΣ ΠΡΟΕΛΕΥΣΕΩΣ

1. Όνομα και διεύθυνση του παραγωγού: …

…

2. Αποστειρωμένο, απυρετογόνο, αποσταγμένο νερό

Για την επανασύσταση | του αποξηραμένου ανθρώπινου πλάσματος του αποξηραμένου ανθρώπινου λευκώματος του αποξηραμένου ανθρώπινου ινωδογόνου ή των αποξηραμένων ανθρώπινων παραγόντων VIII και IX πήξεως. |

3. Ποσότητα: ………… ml.

--------------------------------------------------

ΠΑΡΑΡΤΗΜΑ 10 ΤΟΥ ΠΡΩΤΟΚΟΛΛΟΥ

ΣΥΜΒΟΥΛΙΟ ΤΗΣ ΕΥΡΩΠΗΣ

ΕΥΡΩΠΑΪΚΗ ΣΥΜΦΩΝΙΑ ΠΕΡΙ ΑΝΤΑΛΛΑΓΗΣ ΘΕΡΑΠΕΥΤΙΚΩΝ ΟΥΣΙΩΝ ΑΝΘΡΩΠΙΝΗΣ ΠΡΟΕΛΕΥΣΕΩΣ

1. Όνομα και διεύθυνση του παραγωγού:…

…

2. Όργανο για την ένεση.

Όργανο για τη χορήγηση ολικού ανθρώπινου αίματος, επανασυσταθέντος αποξηραμένου ανθρώπινου πλάσματος, ανθρώπινου λευκώματος, σταθερών διαλυμάτων πρωτεϊνών ανθρώπινου πλάσματος, ανθρώπινου ινωδογόνου ή αποξηραμένου ή κατεψυγμένου ανθρώπινου παράγοντος VIII πήξεως ή αποξηραμένου ανθρώπινου παράγοντος IX πήξεως.

--------------------------------------------------

ΠΑΡΑΡΤΗΜΑ 11 ΤΟΥ ΠΡΩΤΟΚΟΛΛΟΥ

ΣΥΜΒΟΥΛΙΟ ΤΗΣ ΕΥΡΩΠΗΣ

ΕΥΡΩΠΑΪΚΗ ΣΥΜΦΩΝΙΑ ΠΕΡΙ ΑΝΤΑΛΛΑΓΗΣ ΘΕΡΑΠΕΥΤΙΚΩΝ ΟΥΣΙΩΝ ΑΝΘΡΩΠΙΝΗΣ ΠΡΟΕΛΕΥΣΕΩΣ

ΑΒΛΑΒΕΙΑ ΤΟΥ ΕΞΟΠΛΙΣΜΟΥ ΜΕΤΑΓΠΣΕΩΣ ΑΙΜΑΤΟΣ ΑΠΟ ΤΟΞΙΚΟΤΗΤΑ ΠΛΑΣΤΙΚΩΝ ΥΛΩΝ

Ι. ΧΗΜΙΚΕΣ ΕΞΕΤΑΣΕΙΣ

Οι εξετάσεις προορίζονται για εφαρμογή σε πλαστικό εξοπλισμό μεγαγγίσεως αίματος. Ο εξοπλισμός αυτός αποτελείται από δύο κύριες κατηγορίες:

1. πλαστικά φιαλίδια για τη συλλογή, διαχωρισμό και συντήρηση αίματος και προϊόντων αίματος,

2. πλαστικό εξοπλισμό για την αιμοληψία και τη χορήγηση αίματος.

Οι εξετάσεις των υλικών θα λάβουν χώρα αφού πρώτα αποστειρωθούν με τη μέθοδο που χρησιμοποιείται για την τελική αποστείρωση του εξοπλισμού. Τα υλικά αυτά περιλαμβάνουν:

1. τις πλαστικές ύλες που χρησιμοποιούνται για την κατασκευή των φιαλιδίων,

2. τους σωλήνες που βρίσκονται μέσα στα φιαλίδια και

3. τον εξοπλισμό για την αιμοληψία και τη χορήγηση αίματος.

Οι εξετάσεις επί των φιαλιδίων θα λάβουν χώρα προτού πληρωθούν τα φιαλίδια με το αντιπηκτικό διάλυμα. Εάν όμως οι εξετάσεις γίνουν σε φιαλίδια που έχουν πληρωθεί με αντιπηκτικό διάλυμα, θα πρέπει να ληφθούν υπόψη οι οριακές εξετάσεις, που περιγράφονται στο κεφάλαιο III, επί του ιδίου του αντιπηκτικού διαλύματος, όταν αξιολογούνται τα αποτελέσματα των εξετάσεων επί ενός συγκεκριμένου φιαλιδίου.

Ο κατασκευαστής του εξοπλισμού μεταγγίσεως είναι υποχρεωμένος να καταστήσει γνωστούς στην αρμόδια υγειονομική αρχή τους λεπτομερείς τύπους της πλαστικής ύλης ή υλών και άλλων υλικών που χρησιμοποιούνται για την κατασκευή του εξοπλισμού, την πηγή των συστατικών του υλικού ή των υλικών και τις μεθόδους κατασκευής τους (ή, εναλλακτικά, τους αριθμούς αναφοράς των συνθετικών), λεπτομέρειες της κατασκευής του εξοπλισμού, τη φύση όλων των πρόσθετων και συγκολλητικών ουσιών που χρησιμοποιούνται κατά τη διεργασία και τη μέθοδο της αποστειρώσεως. Δεν θα επιτραπεί καμιά αλλαγή σε κανένα από τα ανωτέρω χωρίς την πρότερη υποβολή τους και έγκριση από την αρμόδια υγειονομική αρχή.

Κάθε παρτίδα πρώτης ύλης που χρησιμοποιείται στην κατασκευή του εξοπλισμού θα επισημαίνεται με έναν αριθμό παρτίδας, ο οποίος θα καταγράφεται από τον κατασκευαστή του εξοπλισμού μαζί με τους αριθμούς αναγνωρίσεως όλων των παρτίδων του εξοπλισμού μεταγγίσεως που κατασκευάζεται από την πρώτη αυτή ύλη και τα αποτελέσματα όλων των αναλύσεων των σχετικών με τις παρτίδες αυτές.

Όλες οι εφικτές προφυλάξεις πρέπει να ληφθούν για να μειωθεί ο κίνδυνος τυχαίων μολύνσεων σε κάθε στάδιο της κατασκευαστικής διεργασίας.

Α. Παρασκευή του εκχυλίσματος και της ουσίας-μάρτυρα

α) Μια πλήρης εξέταση όπως περιγράφεται παρακάτω απαιτεί 1250 cm2 πλαστικών (συνολική επιφάνεια, και από τις δύο πλευρές, ενός δείγματος πλαστικού σε φύλλο επιφανείας 625 cm2). To δείγμα, που δεν θα φέρει καμιά τυπωμένη επιγραφή ή ετικέτα, πρέπει να κοπεί σε τεμάχια όχι μεγαλύτερα από 10 cm2.

Για σωλήνες, το μήκος (L) σε cm υπολογίζεται ως εξής:

L=

D

+D

2

D1 = η εσωτερική διάμετρος σε cm,

D2 = η εξωτερική διάμετρος σε cm.

Οι σωλήνες πρέπει να κοπούν κατά μήκος σε τμήματα των 10 cm περίπου. Για την εκχύλιση χρησιμοποιούνται 10 ml νερού ανά επιφάνεια 50 cm2.

β) Τα τεμάχια πλαστικών μεμβρανών ή σωλήνων πρέπει να τοποθετούνται σε ένα δοχείο από βοριούχο πυριτικό γυαλί με 250 ml απυρετογόνο αποσταγμένο νερό προερχόμενο από έναν αποτελεσματικό διυλιστήρα με γυάλινες επιφάνειες συμπυκνώσεως και σωλήνες συλλογής [1]. Το άνοιγμα του δοχείου σκεπάζεται με ένα ανεστραμμένο κύπελλο και το δοχείο θερμαίνεται σε κορεσμένο ατμό σε 110 oC για 30 λεπτά (κλιβανισμός) και μετά ψύχεται γρήγορα σε θερμοκρασία δωματίου και ρυθμίζεται ο όγκος σε 250 ml με απυρετογόνο αποσταγμένο νερό. Δεν έχει σημασία εάν τα δείγματα των πλαστικών τείνουν να κολλήσουν λίγο μεταξύ τους. Τα πλαστικά που είναι ευαίσθητα στη θερμότητα μπορούν να θερμανθούν σε 70 oC για 72 ώρες αντί σε κλίβανο.

Η αντίστοιχη ουσία-μάρτυρας παρασκευάζεται με ανάλογο τρόπο χωρίς τα πλαστικά υλικά.

B. Εξετάσεις επί του εκχυλίσματος

1. Οξειδούμενη ύλη

Σε 20 ml εκχυλίσματος σε μια φιάλη Erlenmeyer από βοριούχο πυριτικό γυαλί, προσθέσετε 20 ml διαλύματος των 2 χιλιοστών γραμμομορίου υπερμαγγανικού καλίου ανά λίτρο και 1,0 ml θειικού οξέος του 1 γραμμαρίου ανά λίτρο και βράσετε το μείγμα επί 3 λεπτά. Ψύξετε χρήγορα το διάλυμα και προσδέσετε 0,1 γραμμαρίου ιωδιούχου καλίου και 5 σταγόνες αμυλώδους διαλύματος. Τιτλοδοτήσετε με ένα διάλυμα που περιέχει 10 χιλιοστά χραμμομορίου θειοθει-ικού νατρίου ανά λίτρο. Ταυτοχρόνως τιτλοδοτήσετε ένα διάλυμα-μάρτυρα. Η διαφορά σε όγκο του θειοθειτκού νατρίου που χρησιμοποιήθηκε στις δύο τιτλοδοτήσεις δεν υπερβαίνει τα 2,00 ml ενός διαλύματος που περιέχει 10 χιλιοστά γραμμομορίου θειοθειικού νατρίου ανά λίτρο.

2. Χλωρίδιο

Το εκχύλισμα ανταποκρίνεται με μια εξέταση ορίου για χλωρίδια που αντιστοιχούν σε ένα μέγιστο 11,2 χιλιοστά γραμμομορίου χλωριδίου ανά λίτρο.

3. Αμμωνία

Το εκχύλισμα ανταποκρίνεται με μια εξέταση ορίου για αμμωνία που αντιστοιχεί σε ένα μέγιστο 120 μικρογραμμομόρια ΝΗ3 ανά λίτρο.

4. Φωσφορικό οξύ — φωσφορικό άλας

Το εκχύλισμα ανταποκρίνεται με την εξέταση ορίου για φωσφορικό άλας.

Εξέταση ορίου για φωσφορικό άλας

Εξατμίσετε 25 ml του εκχυλίσματος σχεδόν μέχρι ξηρής καταστάσεως σε μια φιάλη Kjeldahl, ψύξετε το υπόλειμμα, προσθέσετε 2 σταγόνες θειικού οξέος και 1 ml νιτρικού οξέος, θερμάνετε το μείγμα ώσπου να παρουσιασθούν λευκοί ατμοί, και μετά ψύξετε. Προσθέσετε 1 σταγόνα υπερχλω-ρικού οξέος και θερμάνετε σιγανά για μισή ώρα. Ψύξετε το υπόλειμμα και προσθέσετε νερό για να αποκτήσετε 25 ml. Μεταφέρετε 10 ml του διαλύματος σε μια φιάλη τιτλοποιήσεως των 25 ml, προσθέσετε 8 ml διαλύματος μολυβδαινικού αμμωνίου-θειικού οξέος και 2 ml προσφάτως παρασκευασθέντος διαλύματος ασκορβικού οξέος συμπυκνώσεως 100 g/l. Θερμάνετε σε ένα υδατόλουτρο σε 50 oC για 30 λεπτά, ψύξετε και αραιώσετε το μείγμα μέχρι 25 ml. To πράσινο ή το μπλε χρώμα του διαλύματος δεν είναι περισσότερο έντονο από αυτό που επιτυγχάνεται με την επεξεργασία 251 του διαλύματος-μάρτυρα με τον ίδιο τρόπο.

5. Οξύτητα ή αλκαλικότητα

10 ml του εκχυλίσματος δεν προσλαμβάνουν ένα κόκκινο χρώμα με την προσθήκη 2 σταγόνων διαλύματος φαινολοφθαλεΐνης και απαιτούν όχι περισσότερο από 0,4 ml διαλύματος των 10 χιλιοστών γραμμομορίου υδροξειδίου του νατρίου ανά λίτρο για να επιτευχθεί ένα κόκκινο χρώμα.

Μετά την εξαφάνιση του χρώματος αυτού με την προσθήκη 0,8 ml διαλύματος των 10 χιλιοστών γραμμομορίου υδροχλωρικού οξέος ανά λίτρο, η προσθήκη 5 σταγονών διαλύματος ερυθρού του μεθυλίου δίνει κόκκινο ή κοκκινο-πορτοκαλί χρώμα.

6. Υπόλειμμα από εξάτμιση

Εξατμίσετε 100 ml του εκχυλίσματος μέχρι ξηρής καταστάσεως σε ένα υδατόλουτρο και ξηράνετε σε 105 oC μέχρι σταθεροποιήσεως του βάρους. Το υπόλειμμα ζυγίζει όχι περισσότερο από 5,0 g.

7. Διαύγεια και χρώμα

Όταν το εκχύλισμα παρατηρείται διαμέσου πάχους 5 cm είναι διαυγές και άχρουν.

8. Γεύση και οσμή

Το εκχύλισμα συγκρινόμενο με το διάλυμα-μάρτυρα θα είναι άγευστο και άοσμο.

9. Ειδικά στοιχεία

Το εκχύλισμα ανταποκρίνεται με κατάλληλες εξετάσεις ορίου για:

i) οποιοδήποτε από τα ακόλουθα στοιχεία: αρσενικό, χρώμιο, χαλκό, μόλυβδο, πυρίτιο, άργυρο και κασσίτερο, αντιστοιχούντα σε 1 μg/g.

ii) κάδμιο, αντιστοιχούν σε 0,1 μg/g.

10. Υπόλειμμα σε αποτέφρωση

1,0 g του πλαστικού υλικού, αποτεφρούμενο μέχρι σταθεροποιήσεως του βάρους δεν αφήνει περισσότερο από 1 mg υπόλειμμα.

11. Βαρέα μέταλλα

Διαλύσετε το υπόλειμμα αποτεφρώσεως σε μια ελάχιστη ποσότητα διαλύματος των 2 γραμμομορίων υδροχλωρικού οξέος ανά λίτρο, θερμαίνοντας εάν χρειασθεί. Διενεργήσετε μια κατάλληλη εξέταση ορίου για βαρέα μέταλλα. Το πλαστικό υλικό ανταποκρίνεται με ένα όριο που δεν υπερβαίνει τα 5 μg/g υπολογιζόμενο όπως για το Pb.

ΙI. ΒΙΟΛΟΓΙΚΕΣ ΑΝΑΛΥΣΕΙΣ

1. Θα διενεργηθεί μια εξέταση για υπερβολική οξύτητα κατά την αρχική ανάλυση των πλαστικών συνθέσεων που προορίζονται για την κατασκευή των φιαλιδίων και του εξοπλισμού αιμοληψίας και χορηγήσεως αίματος, χρησιμοποιώντας εκχύλισμα Α, και σε κάθε νέα παρτίδα υλικών εγκεκριμένων συνθέσεων, χρησιμοποιώντας εκχύλισμα Β, με τη διαδικασία που καθορίζεται από την εθνική φαρμακοποιία ή κάποια άλλη μέθοδο εγκεκριμένη από την εθνική αρχή ελέγχου. (Τα εκχυλίσματα Α και Β καθορίζονται στη σημείωση παρακάτω.)

2. Ένας έλεγχος για μη παρουσία πυρετογόνων θα διενεργηθεί κατά την αρχική ανάλυση των πλαστικών συνθέσεων που προορίζονται για την κατασκευή των φιαλιδίων και του εξοπλισμού αιμοληψίας και χορηγήσεως αίματος, χρησιμοποιώντας εκχύλισμα Α, και σε κάθε νέα παρτίδα υλικών εγκεκριμένων συνθέσεων, χρησιμοποιώντας εκχύλισμα Γ, καθώς και στον τρέχοντα έλεγχο των φιαλιδίων και του εξοπλισμού αιμοληψίας και χορηγήσεως αίματος, χρησιμοποιώντας εκχύλισμα Γ, με τη διαδικασία που καθορίζεται από την εθνική φαρμακοποιία ή κάποια άλλη μέθοδο εγκεκριμένη από την εθνική αρχή ελέγχου.

Η συχνότητα ελέγχου πυρετογόνων, χρησιμοποιώντας εκχύλισμα Γ, θα αποφασίζεται από την εθνική αρχή ελέγχου. (Τα εκχυλίσματα Α και Γ καθορίζονται στη σημείωση παρακάτω.)

3. Η ανάλυση για τις αιμολυτικές επιπτώσεις σε συστήματα με ρυθμιστικά διαλύματα θα διενεργηθεί κατά την αρχική ανάλυση των πλαστικών συνθέσεων που προορίζονται για την κατασκευή των φιαλιδίων και του εξοπλισμού αιμοληψίας και χορηγήσεως αίματος και σε κάθε νέα παρτίδα υλικών εγκεκριμένων συνθέσεων χρησιμοποιώντας το εκχύλισμα που καθορίζετει στην παραπάνω παράγραφο Ι Α. (Για τη μέθοδο και το όριο που είναι αποδεκτά, βλέπε συμπλήρωμα στο παρόν παράρτημα.)

4. Μια εξέταση για την επιβίωση in vivo των ερυθροκυττάρων θα διενεργηθεί κατά την αρχική ανάλυση των πλαστικών συνθέσεων που προορίζονται για την κατασκευή των φιαλιδίων αίματος. Εάν επέλθει αλλαγή στη συμφωνηθείσα σύνθεση, η εξέταση θα επαναληφθεί. (Για υποδεικνυόμενες μεθόδους και αποδεκτά όρια, βλέπε συμπλήρωμα στο παρόν παράρτημα.)

Σημείωση

Το εκχύλισμα Α παρασκευάζεται προσθέτοντας στο εκχύλισμα που καθορίζεται στην παραπάνω παράγραφο Ι Α, απυρετογόνο χλωριούχο νάτριο ώσπου να επιτευχθεί μια συμπύκνωση 9 g/l.

Εκχύλισμα Β:

Συσκευή μεταγγίσεως. Πληρώσετε μια συσκευή μεταγγίσεως όσο το δυνατόν περισσότερο με ένα αποστειρωμένο και απυρετογόνο διάλυμα που περιέχει 9 γραμμάρια χλωριούχου νατρίου ανά λίτρο, συσφίγξετε καλά τα άκρα και βυθίσετε τη γεμάτη συσκευή τελείως επί μία ώρα σε νερό διατηρούμενο σε 85 oC. Παραλάβετε το περιεχόμενο της συσκευής.

Πλαστικό φιαλίδιο. Εάν το φιαλίδιο είναι γεμάτο με ένα αντιπηκτικό διάλυμα, πρέπει να αδειάσει και να ξεπλυθεί δύο φορές με 250 ml αποστειρωμένου, απυρετογενούς, αποσταγμένου νερού θερμοκρασίας 20 oC. Πληρώσετε το φιαλίδιο με 100 ml αποστειρωμένου απυρετογενούς διαλύματος που περιέχει 9 γραμμάρια χλωριούχου νατρίου ανά λίτρο, κλείστε το καλά και βυθίστε το επί μία ώρα σε οριζόντια θέση σε νερό που διατηρείται σε 85 oC. Παραλάβετε το περιεχόμενο του φιαλιδίου.

Εκχύλισμα Γ:

Συσκευή μεταγγίσεως. Περάσετε δόσεις των 40 ml αποστειρωμένου απυρετογενούς διαλύματος χλωριούχου νατρίου συμπυκνώσεως 9 g/l, σε θερμοκρασία δωματίου μέσα από τουλάχιστον δέκα συσκευές μεταγγίσεως με ρυθμό παροχής περίπου 10 ml ανά λεπτό και παραλάβετε τις εκροές. Αναλύσετε το διάλυμα που παράχθηκε με τον τρόπο αυτό.

Πλαστικό φιαλίδιο. Άδειο. Περάσετε δόσεις 100 ml αποστειρωμένου απυρετογενούς διαλύματος που περιέχει 9,0 γραμμάρια χλωριούχου νατρίου ανά λίτρο, σε θερμοκρασία δωματίου μέσα από τους σωλήνες συλλογής τουλάχιστον τεσσάρων πλαστικών φιαλιδίων, αφήσετε να παραμείνει μέσα στα φιαλίδια για δέκα λεπτά και παραλάβετε τις εκροές αδειάζοντας διά μέσου των σωλήνων μεταφοράς. Αναλύσετε το διάλυμα που παράχθηκε με τον τρόπο αυτό.

Πλαστικό φιαλίδιο με αντιπηκτικό (βλέπε παράγραφο III).

ΙII. ΑΠΑΙΤΗΣΕΙΣ ΓΙΑ ΑΝΤΙΠΗΚΤΙΚΟ ΔΙΑΛΥΜΑ ΣΕ ΠΛΑΣΤΙΚΑ ΦΙΑΛΙΔΙΑ

Κάθε φιαλίδιο θα περιέχει την ποσότητα και τη σύνθεση του αντιπηκτικού διαλύματος που περιέχεται στην επιγραφή για τον όγκο του αίματος που θα συλλεχθεί.

Το αντιπηκτικό διάλυμα ή/και τα συστατικά που χρησιμοποιούνται για την παρασκευή του πρέπει να ανταποκρίνονται στις απαιτήσεις της εθνικής φαρμακοποιίας της ενδιαφερομένης χώρας.

Το αντιπηκτικό διάλυμα θα ανταποκρίνεται στις απαιτήσεις της εθνικής φαρμακοποιίας της ενδιαφερομένης χώρας σχετικά με τα όρια για βαρέα μέταλλα, την απουσία στερεών ουσιών, μη ύπαρξη τοξικών και πυρετογόνων ουσιών.

[1] Εάν τα πλαστικά έχουν έρθει σε επαφή με ένα αντιπηκτικό διάλυμα, τα τεμάχια θα πρέπει πρώτα να τοποθετηθούν σε ένα παρόμοιο δοχείο με κρύο αποσταγμένο νερό (100 ml) και να τιναχθούν πολλές φορές. Η διαδικασία αυτή πρέπει να επαναληφθεί μία φορά.

--------------------------------------------------

Συμπλήρωμα

ΒΙΟΛΟΓΙΚΗ ΑΝΑΛΥΣΗ: ΟΡΙΑ ΚΑΙ ΜΕΘΟΔΟΙ

Α. Ανάλυση σχετικώς με την έρευνα για υπερβολική τοξικότητα

(Βλέπε παραπάνω II 1 του παραρτήματος): Όριο όπως καθορίζεται από την εθνική φαρμακοποιία.

Β. Ανάλυση σχετικώς με τον έλεγχο της μη παρουσίας πυρετογόνων

(Βλέπε παραπάνω II 2 του παραρτήματος): Όριο όπως καθορίζεται από την εθνική φαρμακοποιία.

Γ. Ανάλυση των αιμολυτικών επιπτώσεων σε συστήματα με ρυθμιστικά διαλύματα

(Βλέπε παραπάνω II 3 του παραρτήματος):

α) Όριο:

Ένα διάλυμα άλατος ισοδύναμο με ένα διάλυμα που περιέχει 5,0 g NaCl ανά λίτρο (η ισοδυναμία αφορά την οσμωτική δραστηριότητα του ηλεκτρολύτου) δεν πρέπει να παράγει μια τιμή αιμολύσεως υψηλότερη από 10 %, και 4,0 g ενός διαλύματος άλατος δεν θα διαφέρει περισσότερο από 10 % σε τιμή αιμολύσεως από το αντίστοιχο διάλυμαμάρτυρας.

β) Μέθοδος:

Χρησιμοποιώντας το πρωτογενές ρυθμιστικό διάλυμα για αιμόλυση, παρασκευάζονται τρία διαλύματα: 30 ml ρυθμιστικού διαλύματος και 10 ml νερό (διάλυμα αo), 30 ml ρυθμιστικού διαλύματος και 20 ml νερό (διάλυμα βo) και 15 ml ρυθμιστικού διαλύματος και 85 ml νερό (διάλυμα γo).

Προσθέτονται σε καθένα από τρεις φυγοκεντρικούς σωλήνες (1,2 και 3), 1,40 ml εκχυλίσματος. Στο σωλήνα 1 προστίθενται 0,10 ml αo, στο σωλήνα 2, 0,10 ml βo και στο σωλήνα 3, 0,10 ml γo αποκτώντας έτσι διαλύματα άλατος ισοδύναμα με διαλύματα με συμπύκνωση 5,0 (σωλήνας 1), 4,0 (σωλήνας 2) και 1,0 g NaCl ανά λίτρο (σωλήνας 3) (η ισοδυναμία αφορά την οσμωτική δραστηριότητα του ηλεκτρολύτου). Σε κάθε σωλήνα προστίθενται 20 μl από νωπό και καλά αναμειγμένο ανθρώπινο αίμα με προσθήκη ηπαρίνης. Οι σωλήνες τοποθετούνται σε ένα υδατόλουτρο σε 30 oC (± 1 oC) για 40 λεπτά. Μετά παρασκευάζονται τρία διαλύματα που περιέχουν 3,0 ml αo, και 12,0 ml νερό (διάλυμα α,), 4,0 ml βo και 11,0 ml νερό (διάλυμα β1), και 4,75 ml γo και 10,25 ml νερό (διάλυμα γ1).

Στον πρώτο σωλήνα προστίθενται 1,50 ml του α1, στο δεύτερο 1,50 ml του β1 και στον τρίτο 1,50 ml του γ1. Οι σωλήνες φυγοκεντρούνται για 5 λεπτά στις 2000 έως 2500 στροφές ανά λεπτό σε μια φυγοκεντρική μηχανή "swing-out". Παράλληλα, παρασκευάζονται διαλύματα-μάρτυρες, όπου το εκχύλισμα έχει αντικατασταθεί με νερό, για κάθε συμπύκνωση.

Μετράται η απόσβεση σε 540 nm του υγρού στρώματος. Για την αιμόλυση χρησιμοποιείται το ρυθμιστικό διάλυμα ως διάλυμα-μάρτυρας. Η τιμή αιμολύσεως (%) υπολογίζεται σύμφνωα με τον τύπο:

E

×100

E

όπου E100 % = η απόσβεση για το διάλυμα που περιέχει ένα ισοδύναμο 1,0 g άλας ανά λίτρο.

και Εexp = η απόσβεση των διαλυμάτων που περιέχουν αντιστοίχως ένα ισοδύναμο 4,0 και 5,0 g άλας ανά λίτρο.

Ρυθμιστικό διάλυμα για αιμόλυση

90,0 g χλωριούχου νατρίου, 13,7 g ανύδρου φωσφορικού δισθενούς νατρίου και 1,90 g ανύδρου φωσφορικού μονοσθενούς νατρίου διαλύονται σε αποσταγμένο νερό, και ο όγκος ρυθμίζεται στα 1000,0 ml.

Δ. Εξέταση επιβιώσεως in vivo των ερυθροκυττάρων

(Βλέπε παραπάνω II 4 του παραρτήματος):

α) Όριο:

Τουλάχιστον 70 % των ερυθροκυττάρων σε ολικό ανθρώπινο αίμα με αντιπηκτικό διάλυμα ACD, που έχει συντηρηθεί επί 21 ημέρες σε 4 έως 6 oC, πρέπει να έχουν επιβιώσει 24 ώρες μετά την μετάγγιση. Αυτό μπορεί να εξακριβωθεί σύμφωνα με μία από τις μεθόδους που προτείνονται στο στοιχείο β) παρακάτω.

β) Προτεινόμενες μέθοδοι:

1. Μέθοδος ISO/TC/76/WGD/3, Αpp. Ε.

2. Ashby Technique — Ashby, W. The determination of the length of life of transfused blood corpuscules in man.

J. Exp. Med. 29: 267—82. 1919.

Young, L. E., Platzer, R. F., and Rafferty, J. A. Differential agglutination of human erythrocytes.

J. Lab. Clin. Med. 32: 489—501, 1947.

3. The Gibson-Scheitlin method — Gibson, J. G. and Scheitlin, W. A. A method employing radio-active chromium for assaying the viability of human erythrocytes returned to the circulation after refrigerated storage.

J. Lab. Clin. Med. 46: 679—88, 1955.

4. The Strumia method — Strumia, M. M., Taylor, L., Sample A. B., Colwell, L. S. and Dugan, A. Uses and limitations of survival studies of erythrocytes tagged with Cr51.

Blood 10: 429—40, 1955.

5. Cr51 — I125 technique — Button, L. N., Gibson, J. G. and Walter, C. W. Simultaneous determination of the volume of red cells and plasma for survival studies of stored blood.

Transfusion 5: 143—148, 1965.

6. Recommended method for radioisotope red cell survival studies Brit. J. Haemat. 21: 241, 1971.

Έγινε στο Στρασβούργο, στις 19 Απριλίου 1982.

Franz Arasek

Γενικός Γραμματέας

Επικυρωμένο αντίγραφο του μοναδικού πρωτοτύπου στη γαλλική και αγγλική γλώσσα, το οποίο είναι κατατεθειμένο στα αρχεία του Συμβουλίου της Ευρώπης.

Erik Harremoes

Διευθυντής Νομικών Υποθέσεων του Συμβουλίου της Ευρώπης

--------------------------------------------------