Πρωτόκολλο της ευρωπαϊκής συμφωνίας

περί ανταλλαγής αντιδραστηρίων για τον προσδιορισμό των ομάδων αίματος

ΓΕΝΙΚΕΣ ΔΙΑΤΑΞΕΙΣ

1. Ειδικότητες

Ένα αντιδραστήριο για τον προσδιορισμό των ομάδων αίματος πρέπει να αντιδρά με όλα τα δείγματα αίματος που εξετάσθηκαν και που περιέχουν το ομόλογο αντιγόνο του αντισώματος ή άλλων ουσιών που αναφέρονται στην επιγραφή.

Όταν ένα αντιδραστήριο χρησιμοποιηθεί σύμφωνα με την τεχνική που συνιστάται από τον παραγωγό, δεν πρέπει να υπάρξουν ενδείξεις κανενός από τους ακόλουθους παράγοντες ή φαινόμενα:

α) αιμολυτικές ιδιότητες·

β) αντισώματα ή άλλες ουσίες εκτός από αυτές που αναφέρονται στην επιγραφή·

γ) βακτηριδιακά προϊόντα επιδεκτικών να προκαλέσουν λανθασμένες αντιδράσεις, θετικές ή αρνητικές·

δ) ψευδο-συγκολλήσεως με το σχηματισμό στήλης ερυθροκυττάρων·

ε) φαινόμενα προζώνης.

2. Δραστικότητα

Ο τίτλος μετριέται πραγματοποιώντας αλλεπάλληλες αραιώσεις με διπλές ανελίξεις του αντιδραστηρίου υπό εξέταση μέσα σε ένα κατάλληλο περιβάλλον. Σε κάθε αραίωση προστίθεται ένας ίσος όγκος εναιωρήματος ερυθρών κυττάρων. Ο τίτλος είναι το αντίστροφο του αριθμού που αντιπροσωπεύει την ισχυρότερη αραίωση στην οποία μπορεί να παρατηρηθεί αντίδραση, της αραιώσεως μετρούμενης χωρίς να συμπεριληφθεί ο όγκος του κυτταρικού εναιωρήματος στον συνολικό όγκο.

Στην περίπτωση των αντι-Α και αντι-B και άλλων αντιδραστηρίων που προορίζονται να χρησιμοποιηθούν σε αντικειμενοφόρες πλάκες, η απληστία εκφράζεται μέσω του χρόνου που απαιτείται για τη συγκόλληση επάνω σε μια αντικειμενοφόρα πλάκα.

3. Διεθνή πρότυπα και διεθνείς μονάδες

Διεθνή πρότυπα έχουν καθιερωθεί από τον Παγκόσμιο Οργανισμό Υγείας για τα αντιδραστήρια για τον προσδιορισμό των ομάδων αίματος αντι-Α και αντι-Β, καθώς και ημιτελή για αντι-D, πρόκειται δε να καθιερωθούν και για αντιδραστήρια για τον προσδιορισμό των ομάδων αίματος με άλλα χαρακτηριστικά. Ένα διεθνές πρότυπο παρασκεύασμα περιέχει, εξ ορισμού, έναν ορισμένο αριθμό διεθνών μονάδων ανά mg ή ml και ο ορισμός αυτός είναι ανεξάρτητος των τίτλων που παρατηρήθηκαν σε ειδικά παρασκευάσματα ερυθρών κυττάρων [1].

4. Σταθερότητα και ημερομηνία λήξεως χρήσεως

Κάθε αντιδραστήριο, όταν συντηρείται υπό τις συνθήκες αποθηκεύσεως που συνιστά ο κατασκευαστής, θα πρέπει να διατηρήσει τις απαραίτητες ιδιότητες για ένα τουλάχιστον έτος.

Για αντιδραστήρια που βρίσκονται σε υγρά κατάσταση, η ημερομηνία λήξεως χρήσεως που αναγράφεται στην επιγραφή δεν θα είναι μεταγενέστερη του ενός έτους από την ημερομηνία του τελευταίου ικανοποιητικού ελέγχου δραστικότητας. Η ημερομηνία λήξεως χρήσεως μπορεί να παραταθεί και για περαιτέρω περιόδους του ενός έτους επαναλαμβάνοντας τους ελέγχους δραστικότητας.

Για αντιδραστήρια που βρίσκονται σε στερεά κατάσταση, η ημερομηνία λήξεως χρήσεως που αναγράφεται στην επιγραφή θα είναι σύμφωνη με τα αποτελέσματα πειραμάτων σχετικών με τη σταθερότητα και θα εγκρίνεται από τις εθνικές αρχές ελέγχου.

5. Συντήρηση

Τα αντιδραστήρια για τον προσδιορισμό των ομάδων αίματος μπορούν να συντηρούνται σε υγρή ή σε αποξηραμένη κατάσταση. Αποξηραμένα αντιδραστήρια θα διατηρούνται σε περιβάλλον αδρανούς αερίου ή σε κενό, στο φιαλίδιο μέσα στο οποίο αποξηράνθηκαν και το οποίο θα κλεισθεί έτσι ώστε να αποκλείεται η υγρασία. Ένα αποξηραμένο αντιδραστήριο δεν πρέπει να χάνει περισσότερο από 0,5 % του βάρους του όταν εξετασθεί μετά από περαιτέρω αποξήρανση με φωσφορικό ανυδρίτη (πεντοξείδιο του φωσφόρου) υπό πίεση που δεν θα υπερβαίνει τα 0,02 χιλιοστά υδραργύρου επί 24 ώρες.

Τα αντιδραστήρια θα παρασκευάζονται με ασηπτικές προφυλάξεις και δεν θα έχουν μολυνθεί από βακτηρίδια. Για να αποφευχθεί η βακτηριακή ανάπτυξη, η αρμόδια εθνική αρχή μπορεί να αποφασίσει ότι θα πρέπει να προστεθεί ένα αντισηπτικό ή/και ένα αντιβιοτικό στο αντιδραστήριο (ή σε κάθε διαλυτικό μέσο που παρέχεται με τα αποξηραμένα αντιδραστήρια), υπό την προϋπόθεση ότι, με την παρουσία της προστιθέμενης ουσίας, το αντιδραστήριο εξακολουθεί να ανταποκρίνεται προς τις απαιτήσεις ιδιάζοντων χαρακτηριστικών και δραστικότητας.

Οι οροί ανθρώπινης προελεύσεως για την ομαδοποίηση του αίματος πρέπει να περιέχουν τουλάχιστον 2,5 mg πρωτεϊνικού αζώτου ανά ml υγρού ή επανασυσταθέντος ορού.

Τα αντιδραστήρια, είτε είναι σε υγρή κατάσταση είτε έχουν επανασυσταθεί, πρέπει να είναι διαφανή και δεν πρέπει να περιέχουν καθιζήσεις, κολλοειδή ή ορατά σωματίδια.

6. Χρωματισμός

Είναι προτιμότερο, τα αντιδραστήρια για τον προσδιορισμό των ομάδων αίματος που προορίζονται για διεθνείς ανταλλαγές να μην έχουν χρωματισθεί τεχνητά, τουλάχιστον ώσπου να υπάρξει μια διεθνής συμφωνία για ένα ενιαίο σύστημα. Οποιαδήποτε χρωστική ουσία προστεθεί δεν πρέπει να έχει καμιά επίπτωση επί των ειδικών αντιδράσεων.

7. Διανομή και όγκος

Τα αντιδραστήρια για τον προσδιορισμό των ομάδων αίματος πρέπει να διανέμονται με τέτοιο τρόπο και σε τέτοιους όγκους ώστε το αντιδραστήριο που περιέχεται σε ένα φιαλίδιο να επαρκεί για τη διεξαγωγή των εξετάσεων με θετικά και αρνητικά κύτταρα μάρτυρες, επιπλέον των εξετάσεων που θα γίνουν με άγνωστα κύτταρα. Ο όγκος ενός φιαλιδίου πρέπει να είναι τέτοιος ώστε το περιεχόμενο, εάν χρειασθεί, να μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τη διεξαγωγή των εξετάσεων δραστικότητας που περιγράφονται στο παρόν πρωτόκολλο.

8. Βιβλία και δείγματα

Το εργαστήριο παραγωγής πρέπει να καταγράφει στα βιβλία του όλα τα στάδια της παραγωγής και ελέγχου των αντιδραστηρίων για τον προσδιορισμό των ομάδων αίματος. Θα διατηρείται ένας επαρκής αριθμός δειγμάτων όλων των αντιδραστηρίων που διανέμονται από το εργαστήριο ώσπου να μπορεί λογικά να υποτεθεί ότι η παρτίδα δεν χρησιμοποιείται πλέον.

9. Κατάταξη των αντιδραστηρίων

Τα αντιδραστήρια που χρησιμοποιούνται για τον προσδιορισμό των ομάδων αίματος μπορούν να περιέχουν ουσίες ανθρώπινης, ζωικής, φυτικής (ή ορυκτής) προελεύσεως, από τις οποίες μερικές αποτελούν το ενεργό συστατικό και άλλες είναι επικουρικές για την ενίσχυση της δραστηριότητας και για τη διατήρηση της σταθερότητας του αντιδραστηρίου.

Για λόγους τεχνικούς, τα αντιδραστήρια αυτά έχουν χωρισθεί σε τρεις κατηγορίες, αναλόγως της προελεύσεως του ενεργού των συστατικού. Αυτό δεν σημαίνει ότι αντιδραστήρια ανθρώπινης προελεύσεως περιέχουν αποκλειστικά μόνο ουσίες ανθρώπινης προελεύσεως ή ότι ζωικά ή φυτικά αντιδραστήρια δεν μπορούν να περιέχουν ουσίες ανθρώπινης προελεύσεως.

10. Επιγραφές, έντυπα και πιστοποιητικά

Μια επιγραφή στην αγγλική και στη γαλλική, τυπωμένη με μαύρα στοιχεία επάνω σε άσπρο χαρτί, θα είναι προσαρτημένη σε κάθε τελικό φιαλίδιο και θα περιέχει τις ακόλουθες πληροφορίες:

1. Όνομα και διεύθυνση του παραγωγού.

2. Όνομα του αντιδραστηρίου, όπως εμφανίζεται στον τίτλο των αντιστοίχων προδιαγραφών.

3. Όνομα και ποσότητα αντισηπτικού ή/και αντιβιοτικού, εάν υπάρχει, ή ένδειξη απουσίας του.

4. Ο όγκος ή, εάν το αντιδραστήριο είναι αποξηραμένο, ο όγκος και η σύνθεση του υγρού που απαιτείται για την επανασύσταση.

5. Ημερομηνία λήξεως χρήσεως.

6. Αριθμός παρτίδας.

Επιπλέον, η επιγραφή αυτή, ή οι επιγραφές στο δέμα που περιλαμβάνει πολλά τελικά φιαλίδια, ή το έντυπο που συνοδεύει τα φιαλίδια, θα περιέχουν τις ακόλουθες πληροφορίες:

1. Όνομα και διεύθυνση του παραγωγού.

2. Όνομα του αντιδραστηρίου, όπως εμφανίζεται στον τίτλο των αντιστοίχων προδιαγραφών.

3. Όνομα και ποσότητα αντισηπτικού ή/και αντιβιοτικού, εάν υπάρχει, ή ένδειξη απουσίας του.

4. Ημερομηνία της τελευταίας εξετάσεως δραστικότητας.

5. Ημερομηνία λήξεως χρήσεως (εάν υπάρχει).

6. Αριθμός παρτίδας.

7. Κατάλληλη περιγραφή της μεθόδου χρήσεως που συνιστάται από τον παραγωγό.

8. Συνθήκες αποθηκεύσεως μη ανοιγμένων φυσιγγίων και προφυλάξεις που πρέπει να παρθούν μετά το άνοιγμα.

9. Ακριβής σύνθεση, συμπεριλαμβανομένου (εάν υπάρχει) του αντισηπτικού ή/και του αντιβιοτικού.

10. Ένδειξη της παρουσίας ή απουσίας προϊόντων ανθρώπινης προελεύσεως.

Κάθε αποστολή θα συνοδεύεται με ένα πιστοποιητικό, όπως προβλέπεται από το άρθρο 4 της συμφωνίας και το παράρτημα του παρόντος πρωτοκόλλου. Παραδείγματα επιγραφών και εντύπων είναι συνημμένα στο παρόν πρωτόκολλο.

ΕΙΔΙΚΕΣ ΔΙΑΤΑΞΕΙΣ

Α. ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ ΑΝΘΡΩΠΙΝΗΣ ΠΡΟΕΛΕΥΣΕΩΣ ΓΙΑ ΤΟΝ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟ ΤΩΝ ΟΜΑΔΩΝ ΑΙΜΑΤΟΣ

α) ΟΡΟΙ ΑΝΘΡΩΠΙΝΗΣ ΠΡΟΕΛΕΥΣΕΩΣ ΓΙΑ ΟΜΑΔΟΠΟΙΗΣΗ ΑΙΜΑΤΟΣ ΑΒ0

i) Ορός αντι-Α για ομαδοποίηση αίματος (ανθρώπινος)

Ο ορός αντι-Α προέρχεται από το αίμα επιλεγμένων ατόμων της ομάδας Β, οι οποίοι μπορεί, ή και όχι, να έχουν ανοσοποιηθεί με ερυθροκύτταρα ομάδας Α ή με ειδικές ουσίες ομάδας Α. Ο ορός αντι-Α συγκολλεί τα ανθρώπινα ερυθροκύτταρα που περιέχουν τα αντιγόνα Α, δηλαδή αυτά των ομάδων αίματος Α και ΑΒ, συμπεριλαμβανομένων και των υπο-ομάδων Α1, Α2, Α1 Β και Α2Β, και δεν συγκολλεί ανθρώπινα ερυθροκύτταρα τα οποία δεν περιέχουν τα αντιγόνα Α, δηλαδή αυτά των ομάδων αίματος 0 και Β.

Δραστικότητα

Τιτλοποίηση

Ο ορός αντι-Α θα τιτλοποιείται χωριστά σε εναιωρήματα από κύτταρα Α1, Α2 και Α2Β, παράλληλα με το επανασυσταθέν αλλά όχι αραιωθέν διεθνές πρότυπο παρασκεύασμα ορού ομάδος αίματος αντι-Α ή ένα άλλο ισοδύναμο παρασκεύασμα αναφοράς. Η δραστικότητα του ορού, σε κάθε περίπτωση, δεν πρέπει να είναι λιγότερη από 64 διεθνείς μονάδες ανά ml.

Προσδιορισμός χημικής έλξεως

Μετά τη μείξη, επάνω σε μια αντικειμενοφόρο πλάκα, ορού αντι-Α με ίσο όγκο εναιωρήματος κυττάρων Α1, Α2 και Α2Β ενός κλάσματος όγκου 0,05 έως 0,1, η συγκόλληση του κάθε εναιωρήματος πρέπει να εμφανισθεί για πρώτη φορά σε χρόνο μικρότερο του διπλασίου που χρειάζεται όταν η ίδια εξέταση πραγματοποιείται με επανασυσταθέν αλλά μη αραιωθέν διεθνές πρότυπο παρασκεύασμα ορού ομάδας αίματος αντι-Α ή με ένα πρότυπο αναφοράς της ιδίας χημικής έλξεως.

ii) Ορός αντι-Β για ομαδοποίηση αίματος (ανθρώπινος)

Ο ορός αντι-Β προέρχεται από το αίμα επιλεγμένων ατόμων της ομάδας Α, οι οποίοι μπορεί, ή και όχι, να έχουν ανοσοποιηθεί με ερυθροκύτταρα ομάδας Β ή με ειδικές ουσίες Β. Ο ορός αντι-Β συγκολλεί τα ανθρώπινα ερυθροκύτταρα που περιέχουν τα αντιγόνα Β, δηλαδή αυτά των ομάδων αίματος Β και ΑΒ, και δεν συγκολλεί ανθρώπινα ερυθροκύτταρα τα οποία δεν περιέχουν τα αντιγόνα Β, δηλαδή αυτά των ομάδων 0 και Α.

Δραστικότητα

Τιτλοποίηση

Ο ορός αντι-Β θα τιτλοποιείται σε εναιωρήματα από κύτταρα ομάδας Β παράλληλα με το επανασυσταθέν αλλά όχι αραιωθέν διεθνές πρότυπο παρασκεύασμα ορού ομάδας αίματος αντι-Β ή ένα άλλο ισοδύναμο παρασκεύασμα αναφοράς. Η δραστικότητα του ορού δεν πρέπει να είναι λιγότερη από 64 διεθνείς μονάδες ανά ml.

Προσδιορισμός χημικής έλξεως

Μετά τη μείξη, επάνω σε μια αντικειμενοφόρο πλάκα, ορού αντι-Β με ίσο όγκο εναιωρήματος κυττάρων Β ενός κλάσματος όγκου 0,05 έως 0,1, η συγκόλληση πρέπει να εμφανισθεί για πρώτη φορά σε χρόνο μικρότερο του διπλασίου που χρειάζεται όταν η ίδια εξέταση πραγματοποιείται με επανασυσταθέν αλλά μη αραιωθέν διεθνές πρότυπο παρασκεύασμα ορού ομάδας αίματος αντι-Β ή με ένα πρότυπο αναφοράς της ιδίας χημικής έλξεως.

iii) Ορός αντι-Α + αντι-Β για ομαδοποίηση αίματος (ανθρώπινος)

Ο ορός αντι-Α + αντι-Β (ομάδα 0) προέρχεται από το αίμα επιλεγμένων ατόμων της ομάδας 0, οι οποίοι μπορεί, ή και όχι, να έχουν ανοσοποιηθεί με ερυθροκύτταρα ομάδας Α και ομάδας Β ή με ειδικές ουσίες ομάδας Α και ομάδας Β. Ο ορός αντι-Α + αντι-Β (ομάδα 0) συγκολλεί τα ανθρώπινα ερυθροκύτταρα που περιέχουν τα αντιγόνα Α ή Β ή και τα δύο, δηλαδή αυτά της ομάδας αίματος Α συμπεριλαμβανομένων και των υπο-ομάδων Α1 και Α2, και της ομάδας Β και ομάδας ΑΒ συμπεριλαμβανομένων και των υπο-ομάδων Α1Β και Α2Β, και δεν συγκολλεί ανθρώπινα ερυθροκύτταρα τα οποία δεν περιέχουν συγκολλητινογόνα Α ή Β, δηλαδή αυτά της ομάδας 0. Συγκολλεί ανθρώπινα ερυθροκύτταρα που περιέχουν τα αντιγόνα Αx (Αy ή Αo) (τα οποία γενικώς δεν συγκολλούντα από ορό αντι-Α προερχόμενο από δότες ομάδας Β).

Δραστικότητα

Τιτλοποίηση

Ο ορός αντι-Α + αντι-Β (ομάδα 0) θα τιτλοποιείται χωριστά σε εναιωρήματα κυττάρων Α1 και Α2, παράλληλα με το επανασυσταθέν αλλά όχι αραιωθέν διεθνές πρότυπο παρασκεύασμα ορού ομάδας αίματος αντι-Α ή ένα άλλο ισοδύναμο παρασκεύασμα αναφοράς. Θα τιτλοποιείται επίσης σε εναιώρημα κυττάρων ομάδας Β παράλληλα με το επανασυσταθέν αλλά όχι αραιωθέν διεθνές πρότυπο παρασκεύασμα ορού ομάδας αίματος Β ή ένα άλλο ισοδύναμο παρασκεύασμα αναφοράς.

Η δραστικότητα του ορού, σε κάθε περίπτωση, δεν θα είναι λιγότερη από 64 διεθνείς μονάδες ανά ml.

Ο ορός αντι-Α + αντι-Β (ομάδα 0) χρησιμοποιούμενος χωρίς αραίωση θα δώσει ευκόλως παρατηρούμενη συγκόλληση κυττάρων ομάδας Αx (Αy ή Αo).

Προσδιορισμός χημικής έλξεως

Μετά τη μείξη, επάνω σε μια αντικειμενοφόρο πλάκα, ορού αντι-Α + αντι-Β (ομάδα 0) με ίσους όγκους εναιωρημάτων κυττάρων Α1 και Α2 ενός κλάσματος όγκου 0,05 έως 0,1, η συγκόλληση πρέπει να εμφανισθεί για πρώτη φορά σε χρόνο μικρότερο του διπλάσιου που χρειάζεται όταν οι ίδιες εξετάσεις πραγματοποιούνται με επανασυσταθέν αλλά όχι αραιωθέν διεθνές πρότυπο παρασκεύασμα ορού ομάδας αίματος αντι-Α ή με ένα πρότυπο αναφοράς της ιδίας απληστίας. Μετά τη μείξη, επάνω σε μια αντικειμενοφόρο πλάκα, ορού αντι-Α + αντι-Β (ομάδα 0) με ίσο όγκο εναιωρήματος κυττάρων Β ενός κλάσματος όγκου 0,05 έως 0,1, η συγκόλληση πρέπει να εμφανισθεί για πρώτη φορά σε χρόνο μικρότερο του διπλασίου που χρειάζεται όταν η ίδια εξέταση πραγματοποιείται με επανασυσταθέν αλλά όχι αραιωθέν διεθνές πρότυπο παρασκεύασμα ορού ομάδας αίματος αντι-Β ή ένα πρότυπο αναφοράς της ιδίας χημικής έλξεως. Μετά τη μείξη, επάνω σε μια αντι-κειμενοφόρα πλάκα, ορού αντι-Α + αντι-Β με ίσο όγκο εναιωρήματος κυττάρων Αx (Αy ή Αo) ενός κλάσματος όγκου 0,05 έως 0,1, η συγκόλληση πρέπει να εμφανισθεί για πρώτη φορά σε χρόνο μικρότερο από 5 λεπτά, σε θερμοκρασία μεταξύ 18 και 25 oC.

β) ΟΡΟΙ ΑΝΘΡΩΠΙΝΗΣ ΠΡΟΕΛΕΥΣΕΩΣ ΓΙΑ ΟΜΑΔΟΠΟΙΗΣΗ ΑΙΜΑΤΟΣ Rh

Οι οροί για ομαδοποίηση αίματος Rh, ασχέτως των ιδιαζόντων χαρακτήρων, μπορεί να είναι δύο ποικιλιών που διαφέρουν ως προς τις συνθήκες υπό τις οποίες επιτυγχάνεται η συγκόλληση ομολόγων κυττάρων. Ορισμένοι οροί, λεγόμενοι "πλήρεις" συγκολλούν κύτταρα αιωρούμενα σε αλατούχο περιβάλλον. Άλλοι, λεγόμενοι "ελλιπείς", είναι ικανοί να προκαλέσουν συγκόλληση μόνο με παρουσία ορισμένων κολλοϊδών, όπως βόειος λευκωματίνη, ή μέσω άλλων ειδικών τεχνικών. Οι οροί πρέπει να χρησιμοποιούνται υπό τις συνθήκες που καθορίζει το εργαστήριο που τους παρασκεύασε.

Μερικοί "ελλιπείς" οροί θα συγκολλήσουν επίσης ομόλογα ερυθροκύτταρα, αιωρούμενα στο δικό τους ορό ή πλάσμα, επάνω σε αντικειμενοφόρες πλάκες.

Οι ακόλουθες απαιτήσεις δραστικότητας για ορούς για ομαδοποίηση Rh μπορεί να χρειασθούν αναθεώρηση όταν τα διεθνή πρότυπα παρασκευάσματα γίνουν διαθέσιμα.

i) Ορός αντι-D (αντι-Rho) για ομαδοποίηση αίματος (ανθρώπινος)

Ο ορός αντι-D προέρχεται από το αίμα ενός ή περισσοτέρων ατόμων που έχουν ανοσοποιηθεί με αντιγόνο D του συστήματος Rh. Αντιδρά με ανθρώπινα ερυθροκύτταρα που περιέχουν αντιγόνο D, αλλά όχι με ανθρώπινα ερυθροκύτταρα που δεν περιέχουν αντιγόνο D.

Δραστικότητα

Τιτλοποίηση

Οι "πλήρεις" οροί αντι-D δεν πρέπει να έχουν ένα τίτλο κατώτερο του 32 σε κύτταρα CcDee σε διάλυμα που περιέχει 9 γραμμάρια χλωριούχου νατρίου ανά λίτρο.

Οι "ελλιπείς" οροί αντι-D πρέπει να τιτλοποιηθούν σε κύτταρα CcDee παράλληλα με το επανασυσταθέν αλλά όχι αραιωθέν διεθνές πρότυπο παρασκεύασμα ελλιπούς αντι-D (αντι-Rhο) ή ένα ισοδύναμο παρασκεύασμα αναφοράς. Θα πρέπει να έχει δραστικότητα τουλάχιστον 32 διεθνείς μονάδες. Εκτός από την αντίδραση που παρουσιάζει με ερυθροκύτταρα που περιέχουν το αντιγόνο D, ο ορός θα πρέπει, όσο είναι δυνατό, να αντιδρά με κύτταρα που περιέχουν το αντιγόνο Du.

Προσδιορισμός χημικής έλξεως

Οι οροί αντι-D που προορίζονται για την εξέταση Diamond και Αbelson επάνω σε αντικειμενοφόρα πλάκα πρέπει, μετά τη μείξη επάνω σε μια πλάκα με έναν ίσο όγκο από 40 έως 50 % εναιώρημα κυττάρων CcDee σε περίπου 40 oC, να παρουσιάσουν ορατή συγκόλληση εντός 30 δευτερολέπτων, και η συγκόλληση θα πρέπει να είναι πλήρης εντός 120 δευτερολέπτων.

ii) Ορός αντι-C (αντι-Rh') για ομαδοποίηση αίματος (ανθρώπινος)

Ο ορός αντι-C προέρχεται από το αίμα ενός ή περισσοτέρων ατόμων που έχουν ανοσοποιηθεί με το συγκολλητινογόνο C του συστήματος Rh. Συγκολλεί εναιωρήματα με ανθρώπινα εναιωρήματα ερυθροκυττάρων που περιέχουν το αντιγόνο C, αλλά όχι με ανθρώπινα ερυθροκύτταρα που δεν περιέχουν το αντιγόνο C. Το αντιγόνο C θεωρείται ότι περιέχει το αντιγόνο Cw.

Οι περισσότεροι των διαγνωστικών ορών αντι-C περιέχουν ένα αντίσωμα αντι-C "πλήρες" καθώς και ένα αντισώμα αντι-D "πλήρες". Οι οροί αυτοί είναι επομένως ειδικοί για το αντιγόνο C, μόνο όταν τα υπό εξέταση κύτταρα είναι αραιωμένα σε ένα διάλυμα που περιέχει 9 γραμμάρια χλωριούχου νατρίου ανά λίτρο.

Δραστηριότητα

Τιτλοποίηση

Οι οροί αντι-C ("πλήρεις" ή "ελλιπείς") πρέπει να έχουν έναν τίτλο τουλάχιστον 8 σε κύτταρα Ccddee.

Προσδιορισμός χημικής έλξεως

Οι οροί αντι-C που προορίζονται για την εξέταση Diamond και Abelson επάνω σε αντικειμενοφόρα πλάκα (και οι οποίοι δεν πρέπει να περιέχουν καμιά μορφή του αντι-D) πρέπει, μετά τη μείξη επάνω σε μια πλάκα με έναν ίσο όγκο ενός εναιωρήματος κυττάρων Ccddee ενός κλάσματος όγκου 0,4 έως 0,5 σε περίπου 40 oC, να παρουσιάσουν ορατή συγκόλληση εντός 30 δευτερολέπτων, και η συγκόλληση θα πρέπει να είναι πλήρης εντός 120 δευτερολέπτων.

iii) Ορός αντι-Ε (αντι-Rh'') για ομαδοποίηση αίματος (ανθρώπινος)

Ο ορός αντι-Ε προέρχεται από το αίμα ενός ή περισσοτέρων ατόμων που έχουν ανοσοποιηθεί με το αντιγόνο Ε του συστήματος Rh. Αντιδρά με ανθρώπινα ερυθροκύτταρα που περιέχουν το αντιγόνο Ε.

Δραστηριότητα

Τιτλοποίηση

Οι οροί αντι-Ε ("πλήρεις" ή "ελλιπείς") πρέπει να έχουν ένα τίτλο τουλάχιστον 8 σε κύτταρα ccddEe.

Προσδιορισμός χημικής έλξεως

Οι οροί αντι-Ε που προορίζονται για την εξέταση Diamond και Abelson επάνω σε αντικειμενοφόρα πλάκα (και οι οποίοι δεν πρέπει να περιέχουν καμιά μορφή του αντι-D) πρέπει, μετά τη μείξη επάνω σε μια πλάκα με έναν ίσο όγκο ενός εναιωρήματος ccddEe ενός κλάσματος όγκου 0,4 έως 0,5 σε περίπου 40o C, να παρουσιάσουν ορατή συγκόλληση εντός 30 δευτερολέπτων, και η συγκόλληση θα πρέπει να είναι πλήρης εντός 120 δευτερολέπτων.

iv) Ορός αντι-D + C (αντι-Rh') για ομαδοποίηση αίματος (ανθρώπινος)

Ορός αντι-D + Ε (αντι-Rh'') για ομαδοποίηση αίματος (ανθρώπινος)

Οι οροί με ιδιάζοντα χαρακτήρα αντι-D + C και ιδιάζοντα χαρακτήρα αντι-D + Ε μπορούν να προέρχονται απευθείας από το αίμα ανοσοποιημένων ατόμων ή μπορούν να παρασκευάζονται με τη μείξη ορού αντι-D με ορό αντι-C ή αντι-Ε. Σε ένα δεδομένο ορό και τα δύο αντισώματα πρέπει να είναι ταυτοχρόνως ενεργά υπό τις συνθήκες αντιδράσεως που καθορίζει ο παραγωγός. Κάθε ορός πρέπει να αντιδρά με όλους τους τύπους των ερυθροκυττάρων που θα αντιδρούσαν με το ένα ή το άλλο από τα συνιστώντα αντισώματα, και δεν θα πρέπει να αντιδρά με ερυθροκύτταρα που δεν περιέχουν ούτε το C ούτε το D από τα αντισώματα στην περίπτωση του ορού αντι-D + C, και ούτε το D ούτε το Ε από τα αντισώματα στην περίπτωση του ορού αντι-D + Ε. Οι τίτλοι δεν πρέπει να είναι κατώτεροι από αυτούς που καθορίζονται για τα συνιστώντα αντισώματα, αλλά στην περίπτωση του αντι-D + C (που είναι ένας συχνός συνδυασμός στον ορό των ανοσοποιημένων ατόμων) είναι επιθυμητό όπως ο τίτλος του αντι-C να μην είναι κατώτερος του 32, και στην περίπτωση του αντι-D + Ε είναι επιθυμητό όπως ο τίτλος του αντι-Ε να μην είναι κατώτερος του 8. Όπου ο ορός προορίζεται για την εξέταση Diamond και Abelson οι χρόνοι συγκολλήσεως για όλους τους αντιδρώντες τύπους ερυθροκυττάρων δεν θα πρέπει να είναι κατώτεροι από αυτούς που καθορίζονται για τα συνιστώντα αντισώματα.

Β. ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ ΜΗ ΑΝΘΡΩΠΙΝΗΣ ΠΡΟΕΛΕΥΣΕΩΣ

α) ΟΡΟΙ ΖΩΙΚΗΣ ΠΡΟΕΛΕΥΣΕΩΣ

i) Ορός αντι-Α για την ομαδοποίηση αίματος (ζωικός)

Ο ορός αντι-Α παράγεται από το αίμα ζώων που μπορεί, ή και όχι, να έχουν ανοσοποιηθεί με ερυθροκύτταρα ομάδας Α ή με ειδικές ουσίες ομάδας Α. Ο ορός αντι-Α συγκολλεί ανθρώπινα ερυθροκύτταρα που περιέχουν αντιγόνα Α, δηλαδή αυτά των ομάδων αίματος Α και ΑΒ, συμπεριλαμβανομένων και των υπό-ομάδων Α1, Α2 και Α2Β, και δεν συγκολλεί ανθρώπινα ερυθροκύτταρα τα οποία δεν περιέχουν τα αντιγόνα Α, δηλαδή των ομάδων 0 και Β.

Δραστικότητα

Τιτλοποίηση

Ο ορός αντι-Α θα τιτλοποιείται χωριστά σε εναιωρήματα από κύτταρα Α1, Α2 και Α2Β, παράλληλα με το επανασυσταθέν αλλά όχι αραιωθέν διεθνές πρότυπο παρασκεύασμα [2] ορού ομάδας αίματος αντι-Α ή ένα άλλο ισοδύναμο παρασκεύασμα αναφοράς. Η δραστικότητα του ορού, σε κάθε περίπτωση, δεν πρέπει να είναι λιγότερη από 64 διεθνείς μονάδες ανά ml.

Προσδιορισμός χημικής έλξεως

Μετά τη μείξη, επάνω σε μια αντικειμενοφόρο πλάκα, ορού αντι-Α με ίσο όγκο εναιωρήματος κυττάρων Α1, Α2 και Α2Β ενός κλάσματος όγκου 0,05 έως 0,1, η συγκόλληση του κάθε εναιωρήματος πρέπει να εμφανισθεί για πρώτη φορά σε χρόνο μικρότερο του διπλασίου που χρειάζεται όταν η ίδια εξέταση πραγματοποιείται με επανασυσταθέν αλλά μη αραιωθέν διεθνές πρότυπο παρασκεύασμα ορού ομάδας αίματος αντι-Α ή με ένα πρότυπο αναφοράς της ιδίας χημικής έλξεως.

ii) Ορός αντι-Β για ομαδοποίηση αίματος (ζωικός)

Ο ορός αντι-Β προέρχεται από το αίμα ζώων που μπορεί, ή και όχι, να έχουν ανοσοποιηθεί με ερυθροκύτταρα ομάδας Β ή με ειδικές ουσίες ομάδας Β. Ο ορός αντι-Β συγκολλεί τα ανθρώπινα ερυθροκύτταρα που περιέχουν τα αντιγόνα Β, δηλαδή αυτά των ομάδων αίματος Β και ΑΒ, και δεν συγκολλεί ανθρώπινα ερυθροκύτταρα τα οποία δεν περιέχουν τα αντιγόνα Β, δηλαδή αυτά των ομάδων 0 και Α.

Δραστικότητα

Τιτλοποίηση

Ο ορός αντι-Β θα τιτλοποιείται σε εναιωρήματα από κύτταρα ομάδας Β παράλληλα με το επανασυσταθέν αλλά όχι αραιωθέν διεθνές πρότυπο παρασκεύασμα ορού ομάδας αίματος αντι-Β ή ένα άλλο ισοδύναμο παρασκεύασμα αναφοράς. Η δραστικότητα του ορού δεν πρέπει να είναι λιγότερη από 64 διεθνείς μονάδες ανά ml.

Προσδιορισμός χημικής έλξεως

Μετά τη μείξη, επάνω σε μια αντικειμενοφόρο πλάκα, ορού αντι-Β με ίσο όγκο εναιωρήματος κυττάρων Β ενός κλάσματος όγκου 0,05 έως 0,1, η συγκόλληση πρέπει να εμφανισθεί για πρώτη φορά σε χρόνο μικρότερο του διπλασίου που χρειάζεται όταν η ίδια εξέταση πραγματοποιείται με επανασυσταθέν αλλά μη αραιωθέν διεθνές πρότυπο παρασκεύασμα ορού ομάδας αίματος αντι-Β ή με ένα πρότυπο αναφοράς της ιδίας χημικής έλξεως.

iii) Ορός ανθρώπινης αντι-σφαιρίνης (ζωικός) [3]

Ο ορός ανθρώπινης αντι-σφαιρίνης για χρήση στην ορολογία των ομάδων αίματος πρέπει να περιέχει συγκολλητικά αντισώματα κατά IgG και συγκολλητικά αντισώματα κατά συμπληρωματικών παραγόντων. Προέρχεται από το αίμα ζώων που έχουν ανοσοποιηθεί με έγχυση ανθρωπίνων οροϊκών πρωτεϊνών. Πρέπει να συγκολλεί όλα τα ανθρώπινα ερυθροκύτταρα επενδυμένα με ανθρώπινο ΙgG ή/και με συμπληρωματικούς παράγοντες. Όταν χρησιμοποιείται σύμφωνα με τις υποδείξεις του κατασκευαστού δεν συγκολλεί μη επενδυμένα ανθρώπινα ερυθροκύτταρα, ασχέτως της ομάδας στην οποία ανήκουν.

Ειδικότητα

Η ειδικότητα ενός ορού ανθρώπινης αντι-σφαιρίνης για χρήση στην όρολογία των ομάδων αίματος πρέπει να εξετασθεί με ανθρώπινα ερυθροκύτταρα επενδυμένα με μια ποικιλία αντισωμάτων δηλαδή ερυθροκύτταρα ευαισθητοποιημένα με ανθρώπινα ελλιπή αντισώματα αντί-D, αντί-Κ και αντι-Fγa, ερυθροκύτταρα ευαισθητοποιημένα με ελλιπή αντισώματα που προσδένουν το συμπλήρωμα του αντι-Lea σε παρουσία νωπού ανθρώπινου ορού, και ερυθροκύτταρα με τα ονομαζόμενα "ελλιπή αντισώματα κρύου τύπου" και με σκούρα ερυθρoκύτταρα ευαισθητοποιημένα με ανθρώπινο ΙgG και, τελικά με 10 διάφορα δείγματα μη επενδύμενα ανθρώπινα ερυθροκύτταρα με και χωρίς αντιγόνα Α και Β.

Δραστικότητα

Τιτλοποίηση

Ένας ορός ανθρώπινης αντι-σφαιρίνης, είτε όπως παρέχεται είτε στην αραίωση που συνιστάται στην επιγραφή, πρέπει να συγκολλεί ισχυρώς τα ανθρώπινα ερυθροκύτταρα ευαισθητοποιημένα με έναν ανθρώπινο ελλιπή ορό αντι-D, του οποίου ο τίτλος είναι ίσος προς 4 (ή λιγότερο) όταν τιτλοποιείται σε ερυθροκύτταρα D-θετικά με τη μέθοδο "αντικαταστάσεως λευκωματίνης". Με την ίδια αραίωση, πρέπει να συγκολλεί τα ανθρώπινα ερυθροκύτταρα Κ-θετικά ευαισθητοποιημένα με επιλεγμένα αδύναμα αντισώματα αντι-Κ και τα ερυθροκύτταρα Fγa ευαισθητοποιημένα με επιλεγμένα αδύναμα αντισώματα αντι-Fγa.

Πρέπει επίσης, με την ίδια ή διαφορετική αραίωση (εάν αυτό καθορίζεται στην επιγραφή), να συγκολλεί ανθρώπινα ερυθροκύτταρα ευαισθητοποιημένα με αδύναμα ελλιπή αντισώματα που προσδένουν το συμπλήρωμα του αντι-Lea σε παρουσία νωπού ανθρώπινου ορού.

Για την συνήθη κλινική χρήση, είναι επιθυμητό όπως η ευαισθητοποίηση με όλους τους τύπους των ελλιπών αντισωμάτων που αναφέρθηκαν παραπάνω, να είναι εντοπίσημη με μία μόνο αραίωση του ορού ανθρώπινων αντι-σφαιρινών.

β) ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ ΓΙΑ ΟΜΑΔΟΠΟΙΗΣΗ ΑΙΜΑΤΟΣ ΦΥΤΙΚΗΣ ΠΡΟΕΛΕΥΣΕΩΣ

i) Ορός αντι-Α για την ομαδοποίηση αίματος (φυτικός)

Ο ορός αντι-Α παράγεται με εκχύλιση από σπόρους ή άλλα μέρη ενός καταλλήλου φυτού ακολουθούμενη, εάν χρειάζεται, από καθαρισμό. Το αντιδραστήριο αντι-Α συγκολλεί ανθρώπινα ερυθροκύτταρα που περιέχουν αντιγόνα Α, δηλαδή αυτά των ομάδων αίματος Α και ΑΒ, συμπεριλαμβανομένων και των υπο-ομάδων Α1, Α2, Α1 Β και Α2Β και δεν συγκολλεί ανθρώπινα ερυθροκύτταρα που δεν περιέχουν αντιγόνα Α, δηλαδή αυτά των ομάδων 0 και Β.

Δραστικότητα

Τιτλοποίηση

Ο ορός αντι-Α τιτλοποιείται χωριστά σε εναιωρήματα από κύτταρα Α1, Α2 και Α2Β, παράλληλα με το επανασυσταθέν αλλά όχι αραιωθέν διεθνές πρότυπο παρασκεύασμα [4] ορού ομάδας αίματος αντι-Α ή ένα άλλο ισοδύναμο παρασκεύασμα αναφοράς.

Η δραστικότητα του ορού, σε κάθε περίπτωση, δεν πρέπει να είναι λιγότερη από 64 διεθνείς μονάδες ανά ml.

Προσδιορισμός χημικής έλξεως

Μετά τη μείξη, επάνω σε μια αντικειμενοφόρο πλάκα, ορού αντι-Α με ίσο εναιωρήματος κυττάρων Α1, Α2 και Α2Β ενός κλάσματος όγκου 0,05 έως 0,1, η συγκόλληση του κάθε εναιωρήματος πρέπει να εμφανισθεί για πρώτη φορά σε χρόνο μικρότερο του διπλασίου που χρειάζεται όταν η ίδια εξέταση πραγματοποιείται με επανασυσταθέν αλλά μη αραιωθέν διεθνές πρότυπο παρασκεύασμα ορού ομάδας αίματος αντι-Α ή με ένα πρότυπο αναφοράς της ιδίας χημικής έλξεως.

ii) Ορός αντι-Β για ομαδοποίηση αίματος (φυτικός)

Ο ορός αντι-Β παράγεται με εκχύλιση από σπόρους ή άλλα μέρη ενός κατάλληλου φυτού ακολουθούμενη, εάν χρειάζεται, από καθαρισμό. Το αντιδραστήριο αντι-Β συγκολλεί τα ανθρώπινα ερυθροκύτταρα που περιέχουν τα αντιγόνα Β, δηλαδή αυτά των ομάδων αίματος Β και ΑΒ, και δεν συγκολλεί ανθρώπινα ερυθροκύτταρα τα οποία δεν περιέχουν τα αντιγόνα Β, δηλαδή αυτά των ομάδων 0 και Α.

Δραστικότητα

Τιτλοποίηση

Ο ορός αντι-Β θα τιτλοποιείται σε εναιωρήματα από κύτταρα ομάδας Β παράλληλα με το επανασυσταθέν αλλά όχι αραιωθέν διεθνές πρότυπο παρασκεύασμα ορού ομάδας αίματος αντι-Β ή ένα άλλο ισοδύναμο παρασκεύασμα αναφοράς [4]. Η δραστικότητα του ορού δεν πρέπει να είναι λιγότερη από 64 διεθνείς μονάδες ανά ml.

Προσδιορισμός χημικής έλξεως

Μετά τη μείξη, επάνω σε μια αντικειμενοφόρο πλάκα, ορού αντι-Β με ίσο όγκο εναιωρήματος κυττάρων Β ενός κλάσματος όγκου 0,05 έως 0,1, η συγκόλληση πρέπει να εμφανισθεί για πρώτη φορά σε χρόνο μικρότερο του διπλασίου που χρειάζεται όταν η ίδια εξέταση πραγματοποιείται με επανασυσταθέν αλλά μη αραιωθέν διεθνές πρότυπο παρασκευάσματος ορού ομάδας αίματος αντι-Β ή με ένα πρότυπο αναφοράς της ίδιας χημικής έλξεως.

[1] Η δραστικότητα των αντιδραστηρίων για τον προσδιορισμό των ομάδων αίματος που συγκαταλέγονται στα περισσότερα ιδιάζοντα χαρακτηριστικά εκφράζεται από τον τίτλο συγκολλήσεως που παρατηρείται σε μια σειρά αραιώσεων σε ένα εναιώρημα ερυθρών κυττάρων. Ο τίτλος υποδηλώνει το αραίωμα του αντιδραστηρίου στο τελευταίο μείγμα της σειράς που παρουσιάζει συγκόλληση (ορατή στο μικροσκόπιο).Η δραστικότητα αντιδραστηρίων για τον προσδιορισμό των ομάδων αίματος για τα οποία υπάρχουν διεθνή πρότυπα παρασκευάσματα (προς το παρόν αντι-Α και αντι-Β και ημιτελή αντί-D) μπορεί να εκφρασθεί σε διεθνείς μονάδες (βλέπε Bull, Wld. Ηlth. Org. 1954, 10, 937, 941 — 1950, 3, 301) βάσει του τίτλου αγνώστου αντιδραστηρίου σε σύγκριση με το διεθνές πρότυπο, ή ένα εθνικό υπο-πρότυπο.Τα διεθνή πρότυπα παρασκευάσματα ορών για την ομαδοποίηση αίματος διαθέτονται σε φυσίγγια που περιέχουν αποξηραμένο ανθρώπινο ορό. Μετά την επανασύσταση σε όγκο του 1 ml, οι οροί αντι-Α και αντι-Β περιέχουν εξ ορισμού 256 διεθνείς μονάδες ανά ml. Παρέχονται δωρεάν, από το Διεθνές Εργαστήριο Βιολογικών Προτύπων του ΠΟΥ, Statens Seruminstitut, Copenhagen.Ο ακόλουθος πίνακας δίνει ένα παράδειγμα μιας συγκριτικής τιτλοποιήσεως του διεθνούς προτύπου ορού αντι-Α (S) και ενός "αγνώστου" αντιδραστηρίου αντι-Α (U) με ερυθροκύτταρα Α1 και ερυθροκύτταρα Α2Β.

[2] Το διεθνές πρότυπο παρασκεύασμα είναι ανθρώπινης προελεύσεως. Ένα ισοδύναμο παρασκεύασμα αναφοράς, εάν χρησιμοποιηθεί, μπορεί να είναι ανθρώπινης ή μη ανθρώπινης προελεύσεως.

[3] Coombs, R. R. Α., Mourant, Α. Ε. and Race, R. R. (1945), Lancet, iii5. Combs, R. R. A., Mourant, Α. Ε. and Race, R. R. (1945), Βrit. J. exp. Path, 26, 255.

[4] Το διεθνές πρότυπο παρασκεύασμα είναι ανθρώπινης προελεύσεως. Ένα ισοδύναμο παρασκεύασμα αναφοράς, εάν χρησιμοποιηθεί, μπορεί να είναι ανθρώπινης ή μη ανθρώπινης προελεύσεως.

--------------------------------------------------

ΠΑΡΑΔΕΙΓΜΑ ΕΠΙΓΡΑΦΗΣ

ΣΥΜΒΟΥΛΙΟ ΤΗΣ ΕΥΡΩΠΗΣ

ΕΥΡΩΠΑΪΚΗ ΣΥΜΦΩΝΙΑ ΠΕΡΙ ΑΝΤΑΛΛΑΓΗΣ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΩΝ ΓΙΑ ΤΟΝ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟ ΤΩΝ ΟΜΑΔΩΝ ΑΙΜΑΤΟΣ

α)Υγρός ορός |

1.Εργαστήριο Χ, Άμστερνταμ |

2.Ορός αντι-Α (ανθρώπινος) |

3.Αζωτούχο νάτριο 0,1 % |

4.5 ml |

5. 7 Σεπτεμβρίου 1965 |

6.Αριθ. 1 2 3 4 |

β)Αποξηραμένος ορός |

1.Εργαστήριο Χ, Άμστερνταμ |

2.Ορός αντί-Β (ζωικός) |

3.Mersalate 0,1 % |

4.Να επανασυσταθεί με 5 ml αποσταγμένο νερό |

5. 31 Δεκεμβρίου 1968 |

6.Αριθ. 4 3 2 1 |

--------------------------------------------------

ΠΑΡΑΔΕΙΓΜΑ ΕΝΤΥΠΟΥ

ΣΥΜΒΟΥΛΙΟ ΤΗΣ ΕΥΡΩΠΗΣ

ΕΥΡΩΠΑΪΚΗ ΣΥΜΦΩΝΙΑ ΠΕΡΙ ΑΝΤΑΛΛΑΓΗΣ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΩΝ ΓΙΑ ΤΟΝ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟ ΤΩΝ ΟΜΑΔΩΝ ΑΙΜΑΤΟΣ

1. Κεντρικό Εργαστήριο Μεταγγίσεως Αίματος, 1 Μain Street, Metropolis, Westland

2. Ορός αντι-Ε (αντι-rh") (ανθρώπινος)

3. 10 ml

4. Ημερομηνία του τελευταίου ελέγχου δραστηριότητας: 30 Μαΐου 1961

5. Ημερομηνία λήξεως χρήσεως: 30 Μαΐου 1962

6. Αριθ. 5432

7. Τα ερυθροκύτταρα που θα εξετασθούν πρέπει να πλυθούν μία ή περισσότερες φορές με ένα διάλυμα NaCl 9 g/l. Ένα εναιώρημα με κλάσμα όγκου περίπου 0,03 παρασκευάζεται κατόπιν με μείξη ενός όγκου ή μια σταγόνα καθιζημένων ερυθροκυττάρων με 30 όγκους ή σταγόνες ισοτονικού διαλύματος ΝaCΙ. Με λίγη εξάσκηση, η συμπύκνωση ενός εναιωρήματος μπορεί να κριθεί με το μάτι κατά τρόπο ικανοποιητικό.

Μια μικρή σταγόνα του ορού τοποθετείται σε ένα σωλήνα ιζηματίνης (6 mm × 30 mm) με μια πιπέτα Παστέρ, και προστίθεται μια παρόμια σταγόνα εναιωρήματος ερυθροκυττάρων. (Με λίγη εξάσκηση μπορεί να υπάρξει σημαντική οικονομία παρέχοντας τον ορό και το εναιώρημα με πιπέτες που έχουν βαθμολογηθεί σε μl.) Το περιεχόμενο του σωλήνα αναμειγνύεται και επωάζεται σε 37 oC για δύο ώρες. Το περιεχόμενο του σωλήνα μεταφέρεται κατόπιν με προσοχή σε μια αντικειμενοφόρα πλάκα μικροσκοπίου και απλώνεται με προσοχή. Εάν η συγκόλληση δεν είναι εμφανώς ορατή με γυμνό μάτι, η πλάκα εξετάζεται στο μικροσκόπιο για να διαπιστωθεί εάν έχει επιτευχθεί η συγκόλληση καθώς και ο βαθμός της.

8. Συντηρήσετε σε μια θερμοκρασία - 20 oC ή κατώτερη. Εάν το προϊόν δεν χρησιμοποιηθεί την ίδια μέρα που ανοίχθηκε, προσθέσετε 0,1 ml ενός διαλύματος αζωτούχου νατρίου συμπυκνώσεως 100 g/l.

9. Ορός αντι-E (αντι-rh") ανθρώπινος: 5 ml. Διάλυμα που περιέχει 300 g βόειας λευκωματίνης ανά λίτρο: 5 ml

10. Το αντιδραστήριο αυτό περιέχει ουσία ανθρώπινης προελεύσεως.

--------------------------------------------------

ΠΑΡΑΡΤΗΜΑ ΤΟΥ ΠΡΩΤΟΚΟΛΛΟΥ

ΣΥΜΒΟΥΛΙΟ ΤΗΣ ΕΥΡΩΠΗΣ

ΕΥΡΩΠΑΪΚΗ ΣΥΜΦΩΝΙΑ ΠΕΡΙ ΑΝΤΑΛΛΑΓΗΣ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΩΝ ΓΙΑ ΤΟΝ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟ ΤΩΝ ΟΜΑΔΩΝ ΑΙΜΑΤΟΣ

ΠΙΣΤΟΠΟΙΗΤΙΚΟ

(Άρθρο 4)

+++++ TIFF +++++

--------------------------------------------------