KOMMISSIONENS BESLUTNING

af 2. juni 1992

om undersøgelse af fjerkræ for Newcastle disease inden flytning ved anvendelse af artikel 12 i Rådets direktiv 90/539/EØF

(92/340/EØF)

KOMMISSIONEN FOR DE EUROPÆISKE FÆLLESSKABER HAR -

under henvisning til Traktaten om Oprettelse af Det Europæiske Økonomiske Fællesskab,

under henvisning til Rådets direktiv 90/539/EØF af 15. oktober 1990 om dyresundhedsmæssige betingelser for samhandelen inden for Fællesskabet med fjerkræ og rugeæg samt for indførsel heraf fra tredjelande [1], senest ændret ved direktiv 91/496/EØF [2], særlig artikel 12, stk. 1, og

ud fra følgende betragtninger:

Metodikken for udførelse af serologiske undersøgelser for Newcastle disease og isolering af Newcastle disease-virus (NDV) må indeholde detaljer med hensyn til prøveudtagning, undersøgelsesmetode og fortolkning af undersøgelsesresultaterne;

de i denne beslutning fastsatte foranstaltninger er i overensstemmelse med udtalelse fra Den Stående Veterinærkomité -

VEDTAGET FØLGENDE BESLUTNING:

Artikel 1

Den repræsentative serologiske prøve til påvisning af Newcastle disease-antistoffer som omhandlet i artikel 12, stk. 1, litra c), tredje led, i direktiv 90/539/EØF skal imødekomme kravene i bilag I.

Artikel 2

Prøven med henblik på isolering af Newcastle disease-virus som omhandlet i artikel 12, stk. 1, litra d), andet led, i direktiv 90/539/EØF skal imødekomme kravene i bilag II.

Artikel 3

Denne beslutning er rettet til medlemsstaterne.

Udfærdiget i Bruxelles, den 2. juni 1992.

På Kommissionens vegne

Ray MAC SHARRY

Medlem af Kommissionen

[1] (1) EFT nr. L 303 af 31. 10. 1990, s. 6.

[2] (2) EFT nr. L 268 af 24. 9. 1991, s. 56.

--------------------------------------------------

BILAG I

Serologisk undersøgelse til påvisning af Newcastle disease-antistoffer i fjerkræ

1. Blodprøveudtagning

Fjerkræ, som er omfattet af betingelserne i dette bilag, skal have oprindelse i flokke, hvor der er taget blodprøver fra mindst 60 vilkårligt udvalgte dyr, som derefter er undersøgt ved hæmagglutinationsprøven (HI) efter metoden i punkt 2.

2. Metodik

a) Der afpipetteres 0,025 ml PBS i alle hullerne på en plastmikrotiter-plade (huller med V-bund).

b) Der anbringes 0,025 ml serum i det første hul på pladen.

c) Med mikrodiluter fremstilles tofoldsfortyndinger af serum i de øvrige huller.

d) Der tilsættes 0,025 ml fortyndet allantoisvæske, som indeholder 4 eller 8 HAU.

e) Indholdet blandes ved let banken på pladen, og den anbringes ved 4 °C i mindst 60 minutter eller ved rumtemperatur i mindst 30 minutter.

f) Der tilsættes 0,025 ml 1 %-suspension af røde blodlegemer i alle huller.

g) Indholdet blandes ved en let banken på pladen, og den anbringes ved 4 °C.

h) Pladerne aflæses efter 30 til 40 minutter, når kontrolblodlegemerne har sænket sig. Dette gøres ved at holde pladen skråt og kontrollere, om de (sænkede) røde blodlegemer løber i dråbeform (langs bunden) med samme hastighed som kontrolhullerne, der kun indeholder røde blodlegemer (0,025 ml) og PBS (0,05 ml).

i) HI-titren er den stærkeste fortynding af antiserum, der forårsager fuldstændig hæmning af fire eller otte enheder af virus (hver prøveopsætning bør omfatte en HA-titrering til bekræftelse af, at der er det ønskede indhold af HAU).

j) Resultaterne er kun gyldige, hvis der opnås en titer på under 23 med 4 HAU eller 22 med 8 HAU med det negative kontrolserum og en titer inden for én fortynding fra det positive kontrolserums kendte titer.

3. Fortolkning af resultaterne

Det anvendte antigen vil påvirke det niveau, hvor et serum betragtes som positivt: for 4 HAU er et positivt serum ethvert, der viser en titer på 24 eller derover, og for 8 HAU er et positivt serum ethvert, der viser en titer på 23 eller derover.

--------------------------------------------------

BILAG II

Isolering af Newcastle disease-virus fra slagtefjerkræ

Fjerkræ, som er omfattet af betingelserne i dette bilag, skal have oprindelse i flokke, der er blevet undersøgt for tilstedeværelse af Newcastle disease-virus (NDV) med negative resultater, og hvorfra intet virus er blevet isoleret efter nedenstående metode:

1. Prøveudtagning

Der udtages fra hver flok mindst 60 prøver omfattende svaberprøver fra kloakken eller fæces.

2. Behandling af prøver

Der må højst behandles fem prøver sammen. Svaberprøverne anbringes i så megen antibiotisk væske, at de er helt nedsænket. Fæcesprøver bør homogeniseres (i en lukket blender eller ved hjælp af pistil og morter og sterilt sand) i antibiotisk væske til en suspension på 10-20 % w/v i væsken. Suspensionerne henstår i omkring to timer ved rumtemperatur (eller længere ved 4° C) og klares derpå ved centrifugering (f.eks. 800 til 1 000 g i ti minutter).

Der kræves stærke koncentrationer af antibiotika til fæcesprøver, og en typisk blanding er: 10 000 enheder/ml penicillin, 10 mg/ml streptomycin, 0,25 mg/ml gentamycin og 5 000 enheder/ml mycostatin i fosfatbufferet saltopløsning. Til kontrol af Chlamydia-organismer kan der tilsættes 50 mg/ml oxytetracyclin pr. ml. Ved tilberedningen af væsken er det nødvendigt, at pH kontrolleres, efter at der er tilsat antibiotika, og justeres til pH 7,0-7,4.

3. Virusisolering i befrugtede hønseæg

Den klarede supernatant inokuleres i mængder på 0,1-0,2 ml i allantoishulen i mindst fire befrugtede hønseæg, som er blevet ruget i otte til ti dage. Ideelt bør æggene stamme fra en SPF-flok, men hvis dette ikke er muligt, er det acceptabelt at anvende æg fra en flok, der påviseligt er fri for NDV-anstistoffer. De inokulerede æg inkuberes ved 37° C og lyses dagligt. Æg med døde eller døende fostre nedkøles straks og alle resterende æg seks dage efter inokulationen til 4° C, og allantois-/amnionvæskerne undersøges for hæmagglutinerende egenskab. Hvis der ikke konstateres nogen hæmagglutination, gentages ovenstående med ufortyndet allantois-/amnionvæske som inokulat.

Hvis der konstateres hæmagglutination, bør det ved dyrkning undersøges, om der forekommer bakterier. Forekommer der bakterier, kan væskerne passeres gennem et 450 nm membranfilter, og der tilsættes yderligere antibiotika og inokuleres i befrugtede æg som ovenfor beskrevet.

--------------------------------------------------