++++

KOMMISSIONENS FOERSTE DIREKTIV

af 13 . november 1979

om fastlaeggelse af faellesskabsanalysemetoder til kontrol af visse former for konserveret helt eller delvist inddampet maelk bestemt til konsum

( 79/1067/EOEF )

KOMMISSIONEN FOR DE EUROPAEISKE FAELLESSKABER HAR -

under henvisning til traktaten om oprettelse af Det europaeiske oekonomiske Faellesskab ,

under henvisning til Raadets direktiv 76/118/EOEF af 18 . december 1975 om indbyrdes tilnaermelse af medlemsstaternes lovgivning vedroerende visse former for konserveret helt eller delvist inddampet maelk bestemt til menneskefoede ( 1 ) , saerlig artikel 11 , og

ud fra foelgende betragtninger :

I henhold til artikel 11 i direktiv 76/118/EOEF skal sammensaetningen af visse former for konserveret helt eller delvist inddampet maelk kontrolleres efter faellesskabsanalysemetoder ;

en foerste raekke af metoder , for hvilke undersoegelserne er sluttet , boer vedtages ;

de i dette direktiv fastsatte foranstaltninger er i overensstemmelse med udtalelse fra Den staaende Levnedsmiddelkomité -

UDSTEDT FOELGENDE DIREKTIV :

Artikel 1

Medlemsstaterne foreskriver , at de fornoedne analyser til efterproevning af de i bilag I angivne egenskaber , udfoeres efter de i bilag II beskrevne metoder .

Artikel 2

Naar der er anfoert alternative metoder for en enkelt bestemmelse , kan analysen foretages efter hvilken metode , der oenskes . Den i bilag II omhandlede afproevningsrapport skal angive , hvilken metode der er anvendt .

Artikel 3

Medlemsstaterne saetter de noedvendige administrativt eller ved lov fastsatte bestemmelser i kraft for senest 18 maaneder efter dets meddelelse at efterkomme dette direktiv . De underretter straks Kommissionen herom .

Artikel 4

Dette direktiv er rettet til medlemsstaterne .

Udfaerdiget i Bruxelles , den 13 . november 1979 .

Paa Kommissionens vegne

Etienne DAVIGNON

Medlem af Kommissionen

( 1 ) EFT nr . L 24 af 30 . 1 . 1976 , s . 49 .

BILAG I

ANVENDELSESOMRAADET FOR DE FOERSTE FAELLESSKABSANALYSEMETODER SOM ANVENDES I DIREKTIVET FOR VISSE FORMER FOR KONSERVERET HELT ELLER DELVIS INDDAMPET MAELK

I . Almindelige bestemmelser

II . Bestemmelse af toerstof i :

- kondenseret maelk med hoejt fedtindhold eller usukret kondenseret maelk med hoejt fedtindhold ( under anvendelse af metode 1 , bilag II ) ,

- kondenseret maelk , usukret kondenseret maelk eller kondenseret soedmaelk ( under anvendelse af metode 1 , bilag II ) ,

- kondenseret delvis skummet maelk eller usukret kondenseret delvis skummet maelk ( under anvendelse af metode 1 , bilag II ) ,

- kondenseret skummetmaelk eller usukret kondenseret skummetmaelk ( under anvendelse af metode 1 , bilag II ) ,

- sukret kondenseret maelk eller sukret kondenseret soedmaelk ( under anvendelse af metode 1 , bilag II ) ,

- sukret kondenseret delvis skummet maelk ( under anvendelse af metode 1 , bilag II ) ,

- sukret kondenseret skummetmaelk ( under anvendelse af metode 1 , bilag II ) .

III . Bestemmelse af vandindhold i :

- maelkepulver med hoejt fedtindhold ( under anvendelse af metode 2 , bilag II ) ,

- maelkepulver eller soedmaelkspulver ( under anvendelse af metode 2 , bilag II ) ,

- pulver af delvis skummet maelk ( under anvendelse af metode 2 , bilag II ) ,

- skummetmaelkspulver ( under anvendelse af metode 2 , bilag II ) .

IV . Bestemmelse af fedt i :

- kondenseret maelk med hoejt fedtindhold eller usukret kondenseret maelk med hoejt fedtindhold ( under anvendelse af metode 3 , bilag II ) ,

- kondenseret maelk , usukret kondenseret maelk eller kondenseret soedmaelk ( under anvendelse af metode 3 , bilag II ) ,

- kondenseret delvis skummet maelk eller usukret kondenseret delvis skummet maelk ( under anvendelse af metode 3 , bilag II ) ,

- kondenseret skummetmaelk eller usukret kondenseret skummetmaelk ( under anvendelse af metode 3 , bilag II ) ,

- sukret kondenseret maelk eller sukret kondenseret soedmaelk ( under anvendelse af metode 3 , bilag II ) ,

- sukret kondenseret delvis skummet maelk ( under anvendelse af metode 3 , bilag II ) ,

- sukret kondenseret skummetmaelk ( under anvendelse af metode 3 , bilag II ) ,

- maelkepulver med hoejt fedtindhold ( under anvendelse af metode 4 , bilag II ) ,

- maelkepulver eller soedmaelkspulver ( under anvendelse af metode 4 , bilag II ) ,

- pulver af delvist skummet maelk ( under anvendelse af metode 4 , bilag II ) ,

- skummetmaelkspulver ( under anvendelse af metode 4 , bilag II ) .

V . Bestemmelse af saccharose i :

- sukret kondenseret maelk eller sukret kondenseret soedmaelk ( under anvendelse af metode 5 , bilag II ) ,

- sukret kondenseret delvis skummet maelk ( under anvendelse af metode 5 , bilag II ) ,

- sukret kondenseret skummetmaelk ( under anvendelse af metode 5 , bilag II ) .

VI . Bestemmelse af maelkesyre og laktater i :

- maelkepulver med hoejt fedtindhold ( under anvendelse af metode 6 , bilag II ) ,

- maelkepulver eller soedmaelkspulver ( under anvendelse af metode 6 , bilag II ) ,

- pulver af delvis skummet maelk ( under anvendelse af metode 6 , bilag II ) ,

- skummetmaelkspulver ( under anvendelse af metode 6 , bilag II ) .

VII . Bestemmelse af phosphataseaktivitet i :

- maelkepulver med hoejt fedtindhold ( under anvendelse af metode 7 eller 8 , bilag II ) ,

- maelkepulver eller soedmaelkspulver ( under anvendelse af metode 7 eller 8 , bilag II ) ,

- pulver af delvis skummet maelk ( under anvendelse af metode 7 eller 8 , bilag II ) ,

- skummetmaelkspulver ( under anvendelse af metode 7 eller 8 , bilag II ) .

BILAG II

ANALYSEMETODER I FORBINDELSE MED FORBRUGET AF VISSE FORMER FOR KONSERVERET HELT ELLER DELVIS INDDAMPET MAELK BESTEMT TIL KONSUM

ALMINDELIGE BESTEMMELSER

1 . FREMSTILLING AF PROEVE TIL KEMISKE ANALYSER

1.1 . Kondenseret maelk med hoejt fedtindhold eller usukret kondenseret maelk med hoejt fedtindhold

Kondenseret maelk , usukret kondenseret maelk eller kondenseret soedmaelk

Kondenseret delvis skummet maelk eller usukret kondenseret delvis skummet maelk

Kondenseret skummetmaelk eller usukret kondenseret skummetmaelk

Den lukkede daase omrystes og vendes . Daasen aabnes og maelken haeldes langsomt op i en anden beholder , der kan lukkes hermetisk , og der blandes ved gentagne omhaeldninger . Det sikrer , at tilbagebleven maelk og fedt , der sidder fast paa daasens side og ender , blandes op i proeven . Beholderen lukkes . Hvis indholdet ikke er homogent , varmes beholderen paa et vandbad ved 40 * . Der omrystes omhyggeligt hvert 15 . min . Efter 2 timer fjernes beholderen fra vandbadet , og den afkoeles til stuetemperatur . Laaget fjernes og der blandes omhyggeligt med en ske eller en spatel ( hvis fedtet er udskilt , kan proeven ikke analyseres ) . Proeven opbevares koeligt .

1.2 . Sukret kondenseret maelk eller sukret kondenseret soedmaelk

Sukret kondenseret delvis skummet maelk

Sukret kondenseret skummetmaelk

Daaser : Den lukkede daase opvarmes paa et vandbad ved 30 - 40 * C i ca . 30 min . Daasen aabnes og indholdet blandes omhyggeligt med en spatel eller en ske , idet der foretages bevaegelser op og ned og rundt for at opnaa en god opblanding af de oevre og nedre lag med det oevrige indhold . Det sikres , at den tilbageblevne maelk , der sidder fast paa daasens vaegge og ender er blandet op i proeven . Om muligt haeldes indholdet over i en anden beholder , der er udstyret med et lufttaet laag . Beholderen lukkes og opbevares koeligt .

Tuber : Enden skaeres af og indholdet haeldes over i en anden beholder , der er udstyret med et lufttaet laag . Tuben skaeres dernaest op paa langs . Al materiale , der sidder fast indvendigt skrabes af og blandes omhyggeligt op i resten af indholdet . Beholderen opbevares koeligt .

1.3 . Maelkepulver med hoejt fedtindhold

Maelkepulver eller soedmaelkspulver

Pulver af delvis skummet maelk

Skummetmaelkspulver

Maelkepulveret overfoeres til en ren , toer beholder ( med lufttaet laag ) med et rumfang paa to gange rumfanget af pulveret . Beholderen lukkes straks , og maelkepulveret blandes omhyggeligt , idet beholderen gentagne gange rystes og vendes . Under fremstillingen af proeven maa maelkepulver ikke bringes i kontakt med atmosfaeren mere end hoejst noedvendigt for at minimere optagelsen af fugt .

2 . REAGENSER

2.1 . Vand

2.1.1 . Hvor der naevnes vand til oploesning , fortynding eller udvaskning , skal der anvendes destilleret vand eller demineraliseret vand af mindst samme kvalitet .

2.1.2 . Hvor der refereres til " oploesning " , " en oploesning " eller " fortynding " uden yderligere angivelse , menes der " oploesning i vand " , " en vandig oploesning " og " fortynding med vand " .

2.2 . Kemikalier

Alle kemikalier skal vaere af anerkendt analysekvalitet , medmindre andet er specificeret .

3 . APPARATUR

3.1 . Udstyrsliste

Udstyrslisterne indeholder kun de ting , der anvendes til noget specielt , og de ting , der skal vaere af en speciel kvalitet .

3.2 . Analysevaegt

Ved en analysevaegt forstaas en vaegt , der kan veje med en noejagtighed paa 0,1 mg .

4 . PRAESENTATION AF RESULTATERNE

4.1 . Beregning af procentindhold

Medmindre andet er anfoert , skal resultaterne beregnes som en procentdel paa vaegtbasis af proeven , som den er modtaget af laboratoriet .

4.2 . Antal betyden cifre

Resultatet skal ikke indeholde flere betydende cifre , end det kan retfaerdiggoeres ud fra noejagtigheden af den anvendte analysemetode .

5 . AFPROEVNINGSRAPPORT

Afproevningsrapporten skal angive den anvendte analysemetode samt de opnaaede resultater . Derudover skal den anfoere alle de detaljer i fremgangsmaaden , der ikke er specificeret i analysemetoden , eller som er valgfrie , samt de omstaendigheder , der kan have oevet indflydelse paa det opnaaede resultat .

Afproevningsrapporten skal indeholde alle de oplysninger , der er noedvendige til en fuldstaendig identifikation af proeven .

METODE 1 : BESTEMMELSE AF TOERSTOFINDHOLD

( ovn ved 99 * C )

1 . OMFANG OG ANVENDELSESOMRAADE

Denne metode anvendes ved bestemmelse af toerstofindhold i :

- kondenseret maelk med hoejt fedtindhold eller usukret kondenseret maelk med hoejt fedtindhold ,

- kondenseret maelk , usukret kondenseret maelk eller kondenseret soedmaelk ,

- kondenseret delvis skummet maelk eller usukret kondenseret delvis skummet maelk ,

- kondenseret skummetmaelk eller usukret kondenseret skummetmaelk ,

- sukret kondenseret maelk eller sukret kondenseret soedmaelk ,

- sukret kondenseret delvis skummet maelk ,

- sukret kondenseret skummetmaelk .

2 . DEFINITION

Toerstofindholdet i kondenseret maelk : toerstofindholdet som det bestemmes ved den specificerede metode .

3 . PRINCIP

En kendt maengde af proeven fortyndes med vand , blandes med sand og toerres ved en temperatur paa 99 mere aller mindre 1 * C . Vaegten efter toerringen er toerstofvaegten og beregnes som en vaegtprocentdel af proeven .

4 . REAGENSER

Quartssand eller havsand , behandlet med saltsyre ( kornstoerrelse : 0,18 - 0,35 mm , det vil sige , at det skal passere gennem en sigte med 500 micronmasker og holdes tilbage af en sigte med 180 micronmasker ) . Det skal opfylde foelgende kontrolproeve :

Ca . 25 g sand opvarmes 2 timer i toerreovn ( 5.3 . ) som beskrevet under 6.1 . til 6.3 . Derefter tilsaettes 5 ml vand , og der opvarmes igen i ovnen i 2 timer . Efter afkoeling vejes og forskellen mellem de to vaegte maa ikke overstige 0,5 mg .

Sandet behandles om noedvendigt med en 25 % saltsyreoploesning i tre dage ; der blandes lejlighedsvis . Vask med vand , indtil der ikke laengere er syrereaktion , eller indtil vaskevandet er chloridfrit . Der toerres ved 160 * C og foretages ny afproevning som ovenfor .

5 . APPARATUR

5.1 . Analysevaegt

5.2 . Metalskaale , fortrinsvis af nikkel , aluminium eller rustfrit staal . Skaalene skal have laag , der passer godt , men som let kan fjernes . Passende dimensioner er : diameter 60 - 80 mm og dybde ca . 25 mm .

5.3 . Toerreovn ved atmosfaeretryk , godt ventileret , termostatreguleret med temperaturen reguleret til 99 mere aller mindre 1 * C . Temperaturen skal vaere den samme i hele ovnen .

5.4 . Ekssikator , indeholdende frisk aktiveret silica gel med en indikator for vandindhold eller et tilsvarende toerremiddel .

5.5 . Glasstave , fladtrykte i den ene ende og af en saadan laengde , at de kan ligge inden i metalskaalene ( 5.2 . ) .

5.6 . Vandbad , kogende .

6 . FREMGANGSMAADE

6.1 . Ca . 25 g sand ( 4 ) og en kort glasstav ( 5.5 . ) anbringes i skaalen ( 5.2 . ) .

6.2 . Uden at daekke skaalen og indholdet med laaget , anbringes skaalen , indholdet og laaget i ovnen ( 5.3 . ) i 2 timer .

6.3 . Laaget paasaettes , og skaalen flyttes over i ekssikkatoren ( 5.4 . ) . Man lader den afkoele til stuetemperatur , og den vejes med en noejagtighed paa 0,1 mg ( M0 ) .

6.4 . Idet laaget vippes , rystes sandet over til den ene side i skaalen . Ca . 1,5 g af proeven fyldes ned i det tomme rum , hvis det er sukret kondenseret maelk , og ca . 3,0 g , hvis det er usukret kondenseret maelk . Laaget paasaetes igen , og der vejes med en noejagtighed paa 0,1 mg ( M1 ) .

6.5 . Laaget fjernes , 5 ml vand tilsaettes , hvorefter foerst vaesken og derpaa sandet og vaesken blandes ved hjaelp af glasstaven . Staven efterlades i blandingen .

6.6 . Skaalen anbringes paa et kogende vandbad . ( 5.6 . ) , indtil vandet er fordampet ; dette tager saedvanligvis ca . 20 min . Roer fra tid til anden i blandingen med staven , saaledes at massen ikke danner en kage . Laeg staven inde i skaalen .

6.7 . Anbring skaalen og laaget i ovnen i ca . 1 time og 30 min .

6.8 . Laaget paasaettes igen , skaalen flyttes over i ekssikkatoren , man lader den afkoele til stuetemperatur og der vejes med en noejagtighed paa 0,1 mg .

6.9 . Skaalen og laaget anbringes atter i ovnen , laaget tages af skaalen og den og laaget opvarmes i yderligere 1 time .

6.10 . Procedure 6.8 . gentages .

6.11 . Procedure 6.9 . og 6.10 . gentages indtil forskellen mellem to paa hinanden foelgende vejninger er mindre end 0,5 mg eller indtil vaegten stiger . Hvis der forekommer en stigning i vaegten , anvendes den laveste vaegt ( 7.1 . ) . Den sidste vaegt kaldes M2 g .

7 . PRAESENTATION AF RESULTATERNE

7.1 . Beregningsmetode

Toerstofindholdet beregnet som en vaegtprocent af proeven er givet ved :

( M2 - M0 ) / ( M1 - M0 ) gange 100

hvor :

M0 = vaegten i g af skaal , laag og sand efter procedure 6.3 . ;

M1 = vaegten i g af skaal , laag , sand og proeve efter procedure 6.4 . ;

M2 = vaegten i g af skaal , laag , sand og toerret proeve efter procedure 6.11 .

7.2 . Repetitionsevne

Forskellen mellem resultaterne for to bestemmelser udfoert samtidigt eller hurtigt efter hinanden af den samme analytiker , der anvender den samme proeve under de samme betingelser , maa ikke overstige 0,2 g toerstof pr . 100 g produkt .

8 . BEREGNING AF TOTALT MAELKETOERSTOF OG FEDTFRIT MAELKETOERSTOF

8.1 . Totalt maelketoerstofindhold af sukret kondenseret maelk er givet ved :

Totalt toerstof ( opnaaet ifoelge metode 1 , bilag II ) - saccharose ( opnaaet ifoelge metode 5 , bilag II ) .

8.2 . Fedtfrit maelketoerstofindhold af sukret kondenseret maelk er givet ved :

Totalt toerstof ( opnaaet ifoelge metode 1 , bilag II ) - ( saccharoseindhold opnaaet ifoelge metode 5 , bilag II ) og fedtindhold ( opnaaet ifoelge metode 3 , bilag II ) .

8.3 . Fedtfrit maelketoerstofindhold af usukret kondenseret maelk er givet ved :

Totalt toerstof ( opnaaet ifoelge metode 1 , bilag II ) - fedtindhold ( opnaaet ifoelge metode 3 , bilag II ) .

METODE 2 : BESTEMMELSE AF VANDINDHOLD ( 102 * C OVN )

1 . OMFANG OG ANVENDELSESOMRAADE

Denne metode anvendes ved bestemmelse af vandindhold :

- maelkepulver med hoejt fedtindhold ,

- maelkepulver eller soedmaelkspulver ,

- Pulver af delvis skummet maelk ,

- skummetmaelkspulver .

2 . DEFINITION

Vandindhold = vaegttabet ved toerring bestemt som specificeret i metoden .

3 . PRINCIP

Restvaegten af en proevemaengde bestemmes efter toerring ved atmosfaerisk tryk i en ovn ved 102 mere aller mindre 1 * C til konstant vaegt . Vaegttabet beregnes som en vaegtprocent af proeven .

4 . APPARATUR

4.1 . Analysevaegt .

4.2 . Skaale , fortrinsvis af nikkel , aluminium , rustfrit staal eller glas . Skaalene skal have laag , der passer godt , men som let kan fjernes . Passende dimensioner er : diameter 60 - 60 mm og dybde ca . 25 mm .

4.3 . Toerreovn ved atmosfaeretryk , godt ventileret , termostatreguleret med temperaturen reguleret til 102 mere aller mindre 1 * C . Temperaturen skal vaere den samme i hele ovnen .

4.4 . Ekssikkator , indeholdende friskt aktiveret silicagel med en indikator for vandindhold eller et tilsvarende toerremiddel .

5 . FREMGANGSMAADE

5.1 . Laaget tages af skaalen ( 4.2 . ) , og denne og laaget anbringes i ovnen ( 4.3 . ) og opvarmes i ca . en time .

5.2 . Laaget saettes paa skaalen , og den lukkede skaal flyttes over i ekssikkatoren ( 4.4 . ) . Man lader den afkoele til stuetemperatur , og der vejes med en noejagtighed paa 0,1 mg ( M0 ) .

5.3 . Ca . 2 g af pulverproeven overfoeres til skaalen , skaalen lukkes med laaget , og den lukkede skaal vejes saa hurtigt som muligt med en noejagtighed paa 0,1 mg ( M1 ) .

5.4 . Laaget tages af skaalen , og denne og laaget anbringes i ovnen i 2 timer .

5.5 . Laaget saettes paa igen , den lukkede skaal overflyttes til ekssikkatoren ; man lader den afkoele til stuetemperatur , og der vejes saa hurtigt som muligt med en noejagtighed paa 0,1 mg .

5.6 . Laaget tages af skaalen , og denne og laaget opvarmes i 1 time i ovnen .

5.7 . Procedure 5.5 . gentages .

5.8 . Procedurerne 5.6 . og 5.5 . gentages indtil faldet i vaegten mellem to paa hinanden foelgende vejninger ikke overstiger 0,5 mg eller indtil vaegten stiger . Hvis der forekommer en stigning i vaegten , anvendes den laveste vaegt , der er opnaaet , ved beregningerne ( 6.1 . ) . Sidstnaevnte vaegt benaevnes M2 g .

6 . PRAESENTATION AF RESULTATERNE

6.1 . Beregningsmetode

Vaegttabet beregnes ved toerringen af proeven , udtrykt som en vaegtprocent ved hjaelp af foelgende formel :

( M1 - M2 ) / ( M1 - M0 ) gange 100

hvor :

M0 = vaegten i g af skaalen og dens laag efter procedure 5.2 . ;

M1 = vaegten i g af skaalen , dens laag og proeven efter procedure 5.3 . ;

M2 = vaegten i g af skaalen , dens laag og slutproeven efter procedure 5.5 .

6.2 . Repetitionsevne

Forskellen mellen resultaterne for to bestemmelser udfoert samtidigt eller hurtigt efter hinanden af den samme analytiker der anvender den samme proeve under de samme betingelser , maa ikke overstige 0,1 g vand pr . 100 g produkt .

METODE 3 : BESTEMMELSE AF FEDTINDHOLD ( ROESE-GOTTLIEB METODEN )

1 . OMFANG OG ANVENDELSESOMRAADE

Denne metode anvendes ved bestemmelse af fedtindholdet i :

- kondenseret maelk med hoejt fedtindhold eller usukret kondenseret maelk med hoejt fedtindhold ,

- kondenseret maelk , usukret kondenseret maelk eller kondenseret soedmaelk ,

- kondenseret delvis skummet maelk eller usukret kondenseret delvis skummet maelk ,

- kondenseret skummetmaelk eller usukret kondenseret skummetmaelk ,

- sukret kondenseret maelk eller sukret kondenseret soedmaelk ,

- sukret kondenseret delvis skummet maelk ,

- sukret kondenseret skummetmaelk .

2 . DEFINITION

Fedtindholdet i kondenseret maelk : fedtindholdet som det bestemmes ved den specificerede metode .

3 . DEFINITION

Fedtindholdet bestemmes ved ekstraktion af fedtet fra en ammoniakalsk alkoholisk oploesning af proeven med diethylether og petroleumsether efterfulgt af afdampning af oploesningsmidlerne og vejning af resten og beregning som en vaegtprocent af proeven , svarende til Roese-Gottliebs princip .

4 . REAGENSER

Alle reagenser skal opfylde de krav , der er specificeret i blindproeven ( 6.1 . ) Om noedvendigt maa oploesningsmidlerne redestilleres under tilstedevaerelsen af ca . 1 g smoerfedt pr . 100 ml oploesningsmiddel .

4.1 . Ammoniakoploesning , ca . 25 % ( m/m ) NH3 ( vaegtfylde ved 20 * C ca . 0,91 g/ml ) , eller en staerkere oploesning af kendt koncentration .

4.2 . Ethanol , 96 mere aller mindre 2 % ( v/v ) eller , hvis dette ikke er tilgaengeligt , ethanol denatureret med methanol , ethylmethylketon eller petroleumsether .

4.3 . Diethylether , peroxidfri .

Note 1 :

For at undersoege for peroxider , tilsaettes til 10 ml ether i et lille cylinderglas med glasprop og forskyllet med ether , 1 ml frisk fremstillet 10 % kaliumjodidoploesning . Blandingen rystes og henstilles i 1 minut . Der maa ikke kunne ses gul farve i noget af lagene .

Note 2 :

Diethylether kan holdes fri for peroxider ved at tilsaette vaadt zinkfolie , der har vaeret fuldstaendigt neddyppet i en fortyndet sur kobbersulfatoploesning i 1 min . og derefter vasket med vand . Der anvendes ca . 8 000 mm2 zinkfolie pr . liter ; det klippes i strimler , der er lange nok til at naa mindst halvt op i beholderen .

4.4 . Petroleumsether med kogepunkt mellem 30 og 60 * C .

4.5 . Blandet oploesningsmiddel , fremstillet kort foer brugen ved at blande lige store rumfang af diethylether ( 4.3 . ) og petroleumsether ( 4.4 . ) ( hvor der er anfoert brug af blandet oploesningsmiddel , kan det erstattes af enten diethylether eller petroleumsether alene ) .

5 . APPARATUR

5.1 . Analysevaegt

5.2 . Passende ekstraktionsroer eller kolber , udstyret med glasslibpropper , eller andet lukkeudstyr , der ikke paavirkes af de anvendte oploesningsmidler .

5.3 . Kolber , tyndvaeggede og fladbundede , rumfang paa 150 - 250 ml .

5.4 . Toerreovn ved atmosfaeretryk , godt ventileret og termostatreguleret ( indstillet til 102 mere aller mindre 1 * C ) .

5.5 . Antistoedkogningskorn , fedtfrie , ikke poroese , ikke-smuldrende ved anvendelsen , f.eks . smaa glaskugler eller stykker af siliciumcarbid ( anvendelsen af dette materiale er valgfrit ; se paragraf 6.2.1 . ) .

5.6 . Haevert , der passer til ekstraktionsroererne .

5.7 . Centrifuge

6 . FREMGANGSMAADE

6.1 . Blind proeve

Samtidig med bestemmelsen af fedtindholdet udfoeres en blindbestemmelse paa 10 ml vand , idet der anvendes samme type af ekstraktionsudstyr , de samme reagenser i de samme maengder og den samme fremgangsmaade , bortset fra paragraf 6.2.2 . Hvis blindproeven overstiger 0,5 mg , skal reagenserne undersoeges og de(t ) urene reagens(er ) skal renses eller udskiftes .

6.2 . Bestemmelse

6.2.1 . En kolbe ( 5.3 . ) ( samt , hvis det er noedvendigt , nogle antistoedkogningskorn ( 5.5 . ) til at sikre en langsom kogning ved den efterfoelgende fjernelse af oploesningsmidler ) toerres i ovnen ( 5.4 . ) i 1/2 - 1 time . Man lader kolben afkoele til temperaturen i vejerummet og den afkoelede kolbe vejes med en noejagtighed paa 0,1 mg .

6.2.2 . Den fremstillede proeve paa 5 g omroeres og der afvejes straks 2 - 2,5 g proeve ( eller 4 - 5 g , naar det drejer sig om skummetmaelksprodukter ) med en noejagtighed paa 1 mg direkte , eller ved difference , i ektraktionsapparaturet ( 5.2 . ) . Der tilsaettes vand op til 10,5 ml og rystes forsigtigt under svag opvarmning ( 40 - 50 * C ) , indtil produktet er fuldstaendigt dispergeret . Proeven skal vaere fuldstaendigt dispergeret , i modsat fald maa bestemmelsen gentages .

6.2.3 . Der tilsaettes 1,5 ml ammoniak ( 25 % ) ( 4.1 . ) eller en tilsvarende maengde af en staerkere oploesning og der blandes omhyggeligt .

6.2.4 . Der tilsaettes 10 ml ethanol ( 4.2 . ) og vaeskerne blandes forsigtigt , men omhyggeligt i det ulukkede apparatur .

6.2.5 . Der tilsaettes 25 ml diethylether ( 4.3 . ) og der afkoeles under rindende vand . Apparaturet lukkes og rystes kraftigt , og det vendes gentagne gange i 1 minut .

6.2.6 . Proppen fjernes forsigtigt , og der tilsaettes 25 ml petroleumsether ( 4.4 . ) , idet de foerste faa mililiter anvendes til at skylle proppen og den indvendige side af apparatets krave med , og skyllevaesken faar lov til at loebe ned i apparaturet . Der lukkes ved at saettes proppen paa igen , og apparatet rystes og vendes gentagne gange i 30 sek . Der maa ikke rystes for voldsomt , hvis der ikke anvendes centrifugering under 6.2.7 .

6.2.7 . Apparaturet henstilles , indtil det oeverste lag er blevet klart og det tydeligt har adskilt sig fra det underste lag . Alternativt kan separeringen ske ved hjaelp af en centrifuge af passende art ( 5.7 . )

Note :

Hvis der anvendes en centrifuge , der ikke drives af en trefaset motor , kan der forekomme gnistdannelse , og der maa udvises forsigtighed for at undgaa en eksplosion eller brand af etherdamp , der f.eks . kommer fra et ituslaaet centrifugeglas .

6.2.8 . Proppen fjernes , og denne og indersiden af apparaturets krave skylles med faa ml blandet oploesningsmiddel ( 4.5 . ) ; skyllevaesken faar lov til at loebe ned i apparaturet . Saa meget som muligt at det oeverste lag overfoeres omhyggeligt enten ved dekantering eller ved hjaelp af en haevert ( 5.6 . ) til den forberedte kolbe ( 6.2.1 . ) .

Note :

Hvis overfoerselen ikke sker ved hjaelp af en haevert , kan det vaere noedvendigt at tilsaette en smule vand for at haeve skillefladen mellem de to lag og saaledes lette dekanteringen .

6.2.9 . Ydersiden og indersiden af kraven paa apparaturet eller spidsen af haeverten skylles med faa ml blandet oploesningsmiddel . Skyllevaeskerne fra ydersiden af apparaturet faar lov til at loebe ned i kolben , og skyllevaesken fra undersiden af kraven og fra haevertens spids loeber ned i ekstraktionsapparaturet .

6.2.10 . Ekstraktion nummer to foretages ved at gentage procedurerne fra 6.2.5 . til 6.2.9 . inklusive , men der anvendes kun 15 ml diethylether og 15 ml petroleumsether .

6.2.11 . En tredje ekstraktion foretages ved at gentage procedure 6.2.10 . , men den sidste skylning ( 6.2.9 . ) , udelades .

Note :

Det er ikke paakraevet at udfoere denne tredje ekstraktion , naar der analyseres paa usukret kondenseret skummetmaelk og sukret kondenseret skummet maelk .

6.2.12 . Saa meget oploesningsmiddel ( inklusive ethanol ) som muligt afdampes eller afdestilleres forsigtigt . Hvis kolbens rumfang er for lille , vil det vaere noedvendigt at fjerne noget af oploesningsmidlet som ovenfor efter hver ekstraktion .

6.2.13 . Naar der ikke laengere er tydelig lugt af oploesningsmiddel , placeres kolben paa siden i ovnen og opvarmes i en time .

6.2.14 . Kolben fjernes fra ovnen , man lader den afkoele til vejerummets temperatur , og den vejes med en noejagtighed paa 0,1 mg .

6.2.15 . Gentag 6.2.15 . og 6.2.14 . med varmeperioder paa 30 - 60 min . , indtil faldet i vaegten mellem to paa hinanden foelgende vejninger ikke overstiger 0,5 mg eller indtil vaegten stiger . Hvis der forekommer en stigning i vaegten , anvendes den laveste vaegt , der er opnaaet , ved beregningerne ( 7.1 . ) . Sidstnaevnte vaegt benaevnes M1 g .

6.2.16 . 15 - 25 ml petroleumsether tilsaettes for at bekraefte , at det ekstraherede materiale er helt oploeseligt . Der opvarmes forsigtigt , og oploesningsmidlet drejes rundt , indtil alt fedt er oploest .

6.2.16.1 . Hvis det ekstraherede materiale er helt oploeseligt i petroleumsether , er vaegten af fedtet differencen mellem vaegtene , der er bestemt i 6.2.1 . og 6.2.15 .

6.2.16.2 . Hvis der er uoploeseligt materiale til stede , eller saafremt der er tvivl ekstraheres fedtet fuldstaendigt fra kolben ved gentagne udvaskninger med varm petroleumsether , idet man lader det uoploeste materiale bundfaelde sig inden hver dekantering . Ydersiden af kolbens krave skylles tre gange . Kolben opvarmes placeret paa siden i 1 time i ovnen , man lader den afkoele til vejerummets temperatur som foer ( 6.2.1 ) , og den vejes med en noejagtighed paa 0,1 mg . Vaegten af fedtet er differencen mellem vaegten opnaaet i 6.2.15 . og denne sidste vaegt .

7 . PRAESENTATION AF RESULTATERNE

7.1 . Beregning

Vaegten i g af ekstraheret fedt er :

( M1 - M2 ) - ( B1 - B2 )

og fedtindholdet i proeven , udtrykt som procentdel er :

( ( M1 - M2 ) - ( B1 - B2 ) ) /S gange 100

hvor :

M1 = vaegten i g af kolben M med fedt efter trin 6.2.15 ;

M2 = vaegten i g af kolben M efter trin 6.2.1 . eller i tilfaelde af uoploest materiale eller tvivl trin 6.2.16.2 ;

B1 = vaegten i g af kolben B ved blindvaerdien efter trin 6.2.15 ;

B2 = vaegten i g af kolben B efter trin 6.2.1 . eller i tilfaelde af uoploest materiale eller tvivl efter trin 6.2.16.2 ;

S = vaegten i g af anvendt proeve .

7.2 . Repetitionsevne

Forskellen mellem resultaterne for to bestemmelser udfoert samtidigt eller hurtigt efter hinanden af den samme analytiker , der anvender den samme proeve , maa ikke overstige 0,05 g fedt pr . 100 g produkt .

METODE 4 : BESTEMMELSE AF FEDTINDHOLD ( ROESE-GOTTLIEB METODE )

1 . OMFANG OG ANVENDELSESOMRAADE

Denne metode anvendes ved bestemmelse af fedtindholdet i :

- maelkepulver med hoejt fedtindhold ,

- maelkepulver eller soedmaelkspulver ,

- pulver af delvis skummet maelk ,

- skummetmaelkspulver .

2 . DEFINITION

Fedtindholdet i maelkepulver : fedtindholdet som det bestemmes ved den specificerede metode .

3 . PRINCIP

Fedtindholdet bestemmes ved ekstraktion af fedtet fra en ammoniakalsk alkoholisk oploesning af proeven med diethylether og petroleumsether efterfulgt af afdampning af oploesningsmidlerne og vejning af resten og beregning som en vaegtprocent af proeven , svarende til Roese-Gottliebs princip .

4 . REAGENSER

Alle reagenser skal opfylde de krav , der er specificeret i blindproeven ( 6.1 . ) . Om noedvendigt maa reagenserne redestilles under tilstedevaerelsen af ca . 1 g smoerfedt pr . 100 ml oploesningsmiddel .

4.1 . Ammoniakoploesning , ca . 25 % ( m/m ) NH3 ( vaegtfylde ved 20 * C ca . 0,91 g/ml ) , eller en staerkere oploesning af kendt koncentration .

4.2 . Ethanol , 96 mere aller mindre 2 % ( v/v ) eller , hvis dette ikke er tilgaengeligt , ethanol denatureret med methanol , ethylmethylketon eller petroleumsether .

4.3 . Diethylether , peroxidfri .

Note 1 :

For at undersoege for peroxider tilsaettes til 10 ml ether i et lille cylinderglas lukket med glasprop og forskyllet med ether , 1 ml frisk fremstillet 10 % kaliumjodidoploesning . Blandingen rystes og henstilles i 1 minut . Der maa ikke kunne ses gul farve i noget af lagene .

Note 2 :

Diethylether kan holdes fri for peroxider ved at tilsaette vaadt zinkfolie , der har vaeret fuldstaendigt neddyppet i en fortyndet sur kobbersulfatoploesning i 1 min . og derefter med vand . Der anvendes ca . 8 000 mm2 zinkfolie pr . liter ; det klippes i strimler , der er lange nok til at naa mindst halvt op i beholderen .

4.4 . Petroleumsether med kogepunkt mellem 30 og 60 * C .

4.5 . Blandet oploesningsmiddel , fremstillet kort foer brugen ved at blande lige store rumfang af diethylether ( 4.3 . ) og petroleumsether ( 4.4 . ) ( hvor der er anfoert brug af blandet oploesningsmiddel , kan det erstattes af enten diethylether eller letbenzin alene ) .

5 . APPARATUR

5.1 . Analysevaegt

5.2 . Passende ekstraktionsroer eller kolber , udstyret med glasslibpropper , eller andet lukkeudstyr , der ikke paavirkes af de anvendte oploesningsmidler .

5.3 . Kolber , tyndvaeggede og fladbundede , rumfang paa 150 - 250 ml .

5.4 . Toerreovn ved atmosfaeretryk , godt ventileret og termostatreguleret ( indstillet til 102 mere aller mindre 1 * C ) .

5.5 . Antistoedkogningskorn , fedtfrie , ikke poroese , ikke-smuldrende ved anvendelsen , f.eks . smaa glaskugler eller stykker af siliciumcarbid ( anvendelsen af dette materiale er valgfrit ; se paragraf 6.2.1 ) .

5.6 . Vandbad , ved 60 - 70 * C .

5.7 . Haevert , der passer til ekstraktionsroerene .

5.8 . Centrifuge

6 . FREMGANGSMAADE

6.1 . Blindproeve

Samtidig med bestemmelsen af fedtindholdet i proeven udfoeres en blindbestemmelse paa 10 ml vand , idet der anvendes samme type af ekstraktionsudstyr , de samme reagenser i de samme maengder og den samme fremgangsmaade , bortset fra paragraf 6.2.2 . Hvis blindproeven overstiger 0,5 mg , skal reagenserne undersoeges og de(t ) urene reagens(er ) skal renses eller udskiftes .

6.2 . Bestemmelse

6.2.1 . En kolbe ( 5.3 . ) ( samt , hvis det er noedvendigt nogle antistoedkogningskorn ( 5.5 . ) til at sikre en langsom kogning ved den efterfoelgende fjernelse af oploesningsmidler ) toerres i ovnen ( 5.4 . ) i 1/2 - 1 time . Man lader kolben afkoele til temperaturen i vejerummet og den afkoelede kolbe vejes med en noejagtighed paa 0,1 mg .

6.2.2 . Ca . 1 g soedmaelkspulver eller ca . 1,5 g pulver af delvis skummet maelk eller skummetmaelkspulver afvejes direkte i eller ved difference i ekstraktionsapparatet ( 5.2 . ) med en noejagtighed paa 1 mg . 10 ml vand tilsaettes , og der rystes forsigtigt , indtil maelkepulveret er fuldstaendigt dispergeret ( det kan vaere noedvendigt at opvarme nogle proever ) .

6.2.3 . 1,5 ml ammoniak ( 25 % ) ( 4.1 . ) eller en tilsvarende maengde af en staerkere oploesning tilsaettes , og der opvarmes paa et vandbad i 15 min . ved 60 - 70 * C , idet der lejlighedsvis omrystes . Der afkoeles , f.eks . under rindende vand .

6.2.4 . 10 ml ethanol ( 4.2 . ) tilsaettes , og vaeskerne blandes forsigtigt men omhyggeligt i det ulukkede apparatur .

6.2.5 . 25 ml diethylether ( 4.3 . ) tilsaettes . Der afkoeles under rindende vand . Apparaturet lukkes og rystes kraftigt ; det vendes gentagne gange i 1 minut .

6.2.6 . Proppen fjernes forsigtigt , og der tilsaettes 25 ml petroleumsether ( 4.4 . ) , idet de foerste faa milliliter anvendes til at skylle proppen og den indvendige side af apparatets krave med , og skyllevaesken faar lov til at loebe ned i apparaturet . Der lukkes ved at saette proppen paa igen , og apparatet rystes og vendes gentagne gange i 30 sek . Der maa ikke rystes for voldsomt , hvis der ikke anvendes centrifugering under 6.2.7 .

6.2.7 . Apparaturet henstilles , indtil det oeverste lag er blevet klart og det tydeligt har adskilt sig fra det underste lag . Alternativt kan separeringen ske ved hjaelp af en centrifuge af passende art ( 5.8 . ) .

Note :

Hvis der anvendes en centrifuge , der ikke drives af en trefaset motor , kan der forekomme gnistdannelse , og der maa udvises forsigtighed for at undgaa en eksplosion eller brand af etherdampe , der f.eks . kommer fra et ituslaaet centrifugeglas .

6.2.8 . Proppen fjernes , og denne og indersiden af apparaturets krave skylles med faa ml blandet oploesningsmiddel ( 4.5 . ) ; skyllevaesken faar lov til at loebe ned i apparaturet . Saa meget som muligt af det oeverste lag overfoeres omhyggeligt enten ved dekantering eller ved hjaelp af en haevert ( 5.7 . ) til den forberedte kolbe ( 6.2.1 . ) .

Note :

Hvis overfoerselen ikke sker ved hjaelp af en haevert , kan det vaere noedvendigt at tilsaette en smule vand for at haeve skillefladen mellem de to lag og saaledes lette dekanteringen .

6.2.9 . Ydersiden og indersiden af kraven paa apparaturet eller spidsen af haeverten skylles med faa ml blandet oploesningsmiddel . Skyllevaeskerne fra ydersiden af apparaturet faar lov til at loebe ned i kolben , og skyllevaesken fra indersiden af kraven og fra haevertens spids loeber ned i ekstraktionsapparaturet .

6.2.10 . Ekstraktion nummer to foretages ved at gentage procedurerne fra 6.2.5 . til 6.2.9 . inklusive , men der anvendes kun 15 ml diethylether og 15 ml petroleumsether .

6.2.11 . En tredje ekstraktion foretages ved at gentage procedure 6.2.10 . , men den sidste skylning ( 6.2.9 . ) udelades .

Note :

Det er ikke paakraevet at udfoere denne tredje ekstraktion , naar analysen foretages paa skummetmaelkspulver .

6.2.12 . Saa meget oploesningsmiddel ( inklusive ethanol ) som muligt afdampes eller afdestilleres forsigtigt . Hvis kolbens rumfang er for lille , vil det vaere noedvendigt at fjerne noget af oploesningsmidlet som oven for efter hver ekstraktion .

6.2.13 . Naar der ikke laengere er tydelig lugt af oploesningsmiddel , placeres kolben paa siden i ovnen , og den opvarmes i en time .

6.2.14 . Kolben fjernes fra ovnen , man lader den afkoele til vejerummets temperatur som tidligere ( 6.2.1 . ) , og den vejes med en noejagtighed paa 0,1 mg .

6.2.15 . Gentag operationerne 6.2.13 . og 6.2.14 . med varmeperioder paa 30 - 60 min . , indtil faldet i vaegten mellem to paa hinanden foelgende vejninger ikke overstiger 0,5 mg eller indtil vaegten stiger . Hvis der forekommer en stigning i vaegten , anvendes den laveste vaegt , der er opnaaet , ved beregningerne ( 7.1 . ) . Sidstnaevnte benaevnes M1 g .

6.2.16 . 15 - 25 ml petroleumsether tilsaettes for at bekraefte , at det ekstraherede materiale er helt oploeseligt . Der opvarmes forsigtigt , og oploesningsmidlet drejes rundt , indtil alt fedt er oploest .

6.2.16.1 . Hvis det ekstraherede materiale er helt oploeseligt i petroleumsether er vaegten af fedtet differencen mellem vaegtene , der er bestemt i 6.2.1 . og 6.2.15 .

6.2.16.2 . Hvis der er uoploeseligt materiale til stede , eller saafremt der er tvivl ekstraheres fedtet fuldstaendigt fra kolben ved gentagne udvaskninger med varm petroleumsether , idet man lader det uoploeste materiale bundfaelde sig inden hver dekantering . Ydersiden af kolbens krave skylles tre gange .

Kolben opvarmes placeret paa siden i 1 time i ovnen , man lader den afkoele til vejerummets temperatur som foer ( 6.2.1 . ) , og den vejes med en noejagtighed paa 0,1 mg . Vaegten af fedtet er differencen mellem vaegten opnaaet i 6.2.15 . og denne sidste vaegt .

7 . PRAESENTATION AF RESULTATERNE

7.1 . Beregning

Vaegten i g af ekstraheret fedt er :

( M1 - M2 ) - ( B1 - B2 )

og fedtindholdet i proeven , udtrykt som procentdel er :

( M1 - M2 ) - ( B1 - B2 )/S gange 100

hvor :

M1 = vaegten i g af kolben M med fedt efter trin 6.2.15 ;

M2 = vaegten i g af kolben M efter trin 6.2.1 . eller i tilfaelde af uoploest materiale eller tvivl trin 6.2.16.2 ;

B1 = vaegten i g af kolben B ved blindvaerdien efter trin 6.2.15 ;

B2 = vaegten i g af kolben B efter trin 6.2.1 . eller i tilfaelde af uoploest materiale eller tvivl efter trin 6.2.16.2 ;

S = vaegten i g af anvendt proeve .

7.2 . Repetitionsevne

Forskellen mellem resultaterne for to bestemmelser udfoert samtidigt eller hurtigt efter hinanden af den samme analytiker der anvender den samme proeve under de samme betingelser , maa ikke overstige 0,2 g fedt pr . 100 g produkt , for skummetmaelkspulver dog 0,1 g fedt pr . 100 g produkt .

METODE 5 : BESTEMMELSE AF SACCHAROSEINDHOLD ( POLARIMETRISK METODE )

1 . OMFANG OG ANVENDELSESOMRAADE

Denne metode anvendes ved bestemmelse af saccharoseindholdet i :

- sukret kondenseret maelk eller sukret kondenseret soedmaelk ,

- sukret kondenseret delvis skummet maelk ,

- sukret kondenseret skummetmaelk .

Proeverne maa ikke indeholde invertsukker .

2 . DEFINITION

Saccharoseindholdet i sukret kondenseret maelk : saccharoseindholdet som det bestemmes ved den specificerede metode .

3 . PRINCIP

Metoden er baseret paa Clerget inversionsprincippet , en mild behandling af proeven med syre , der giver en fuldstaendig hydrolyse af saccharose , men naesten ingen af lactose eller andre sukkerarter . Saccharoseindholdet opnaas ud fra aendringen i oploesningens drejningsevne .

Et klart filtrat af oploesningen , uden mutarotation af lactose , fremstilles ved behandling med ammoniak efterfulgt af neutralisation og klaring ved efterfoelgende tilsaetning af zinkacetat - og kaliumhexacyanoferrat(II)-oploesninger .

Paa en del af filtratet hydrolyseres saccharosen paa en specificeret maade .

Ud fra rotationen af filtratet foer og efter inversionen kan saccharoseindholdet beregnes ved at anvende passende formler .

4 . REAGENSER

4.1 . Zinkacetatoploesning , M1 : 21,9 g krystallinsk zinkacetatdihydrat Zn(C2H3O2)3 * 2H2O og 3 ml iseddike oploeses i vand , og der fyldes op til 100 ml med vand .

4.2 . Kaliumhexacyanoferrat(II)oploesning , 0,25 M1 : 10,6 g krystallinsk kaliumhexacyanoferrat(II)-trihydrat K4(Fe(CN)6 ) * 3H2O oploeses i vand , og der fyldes op til 100 ml med vand .

4.3 . Saltsyreoploesning , 6,35 mere aller mindre 0,20 M1 ( 20 - 22 % ) eller 5,0 mere aller mindre 0,2 mol * 1 -1 16 - 18 % ) .

4.4 . Ammoniakoploesning , 2,0 mere aller mindre 0,2 M1 ( 3,5 % ) .

4.5 . Eddikesyreoploesning , 2,0 mere aller mindre 0,2 M1 ( 12 % ) .

4.6 . Bromothylmolblaat , indikator , 1 % ( m/v ) oploesning i ethanol .

5 . APPARATUR

5.1 . Vaegt , med en foelsomhed paa 10 mg .

5.2 . Polarimeterroer , 2 dm , med noejagtig kalibreret laengde .

5.3 . Polarimeter eller saccharimeter .

a ) Polarimeter med natriumlys eller groent kviksoelvlys ( kviksoelvdamplampe med prisme eller den specielle Wratten Screen nr . 77 A ) , der kan aflaeses med en noejagtighed paa mindst 0,05 vinkelgrader .

b ) Saccharimeter med international sukkerskala , der anvender hvidt lys , som passerer et filter paa 15 mm af en 6 % oploesning af kaliumdichromat , eller natriumlys , og som kan aflaeses med en noejagtighed paa mindst 0,1 * paa den internationale sukkerskala .

5.4 . Vandbad , reguleret til 60 mere aller mindre 1 * C .

6 . FREMGANGSMAADE

6.1 . Kontrolbestemmelse

For at standardisere fremgangsmaaden , reagenserne og apparaturet udfoeres en dobbelt kontrolbestemmelse som anfoert nedenfor , idet der anvendes 100 g maelk og 18,00 g ren saccharose eller en blanding af 110 g skummetmaelk og 18,00 g ren saccharose , svarende til 40,00 g kondenseret maelk indeholdende 45 % saccharose . Sukkerindholdet beregnes ved at anvende formlerne i 7 , idet M , F og P i formel 1 erstattes med henholdsvis maengden af maelk , der er taget i brug , og fedt - og proteinindholdet i denne maelk , og i formel 2 indsaettes for M vaerdien 40,00 . Gennemsnittet af de fundne vaerdier maa ikke afvige mere end 0,2 % fra 45,0 % .

6.2 . Bestemmelse

6.2.1 . Med en noejagtighed paa 10 mg afvejes 40 g af den godt blandede proeve i baegerglas paa 100 ml . 50 ml varmt vand ( 80 - 90 * C ) tilsaettes og der blandes godt .

6.2.2 . Blandingen overfoeres kvantitativt til en 200 ml maalekolbe , idet baegerglasset skylles gentagne gange med 60 * C varmt vand , indtil rumfanget er 120 - 150 ml . Der blandes og afkoeles til stuetemperatur .

6.2.3 . Der tilsaettes 5 ml fortyndet ammoniakoploesning ( 4.4 . ) . Der blandes igen , og blandingen henstilles derefter i 15 min .

6.2.4 . Ammoniakken neutraliseres ved at tilsaette en aekvivalent maengde af den fortyndede eddikesyreoploesning ( 4.5 . ) . Det noejagtige antal ml bestemmes paa forhaand ved at titrere ammoniakoploesningen , idet bromothylmolblaat ( 4.6 . ) anvendes som indikator . Der blandes .

6.2.5 . 12,5 ml zinkacetatoploesning ( 4.1 . ) tilsaettes forsigtigt under omroering , opnaaet ved at rotere kolben , der holdes skraatstillet .

6.2.6 . 12,5 ml kaliumhexacyanoferrat(II)oploesning ( 4.2 . ) tilsaettes paa samme maade som for acetatoploesningen .

6.2.7 . Kolbeindholdets temperatur justeres til 20 * C , og der fyldes op til 200 ml-maerket med 20 * C vand .

Note :

Under alle trin , der er beskrevet indtil nu , skal tilsaetning af vand eller reagenser foretages paa en saadan maade , at det undgaas at faa dannet luftbobler , og med samme sigte for oeje boer alle blandinger udfoeres ved rotation af kolben fremfor ved omrystning . Hvis der findes luftbobler i kolben , foer der fyldes op til 200 ml-maerket , kan man bidrage til at faa dem fjernet ved kortvarigt at forbinde kolben til en vacuumpumpe under rotation af kolben .

6.2.8 . Kolben lukkes med en toer prop , og der blandes omhyggeligt ved kraftig rystning .

6.2.9 . Blandingen henstilles i faa minutter , og der filtreres derefter gennem et toert filtrerpapir , idet de foerste 25 ml filtrat bortkastes .

6.2.10 . Direkte polarisation : Bestem den optiske drejning af filtratet ved 20 mere aller mindre 1 * C .

6.2.11 . Inversion : 40 ml af det ovenfor opnaaede filtrat afpipetteres i en 50 ml maalekolbe . 6,0 ml 6,35 M1 saltsyre ( 4.3 . ) eller 7,6 ml 5,00 M1 saltsyre ( 4.3 . ) tilsaettes .

Kolben anbringes paa vandbad ved 60 * C i 15 min . , idet det sikres , at hele kolbens indhold er neddyppet . Der blandes ved at foretage cirkulerende bevaegelser i de foerste 5 min . , inden for hvilken tid kolben boer antage badets temperatur . Der afkoeles til 20 * C og fyldes op til maerket med vand ved 20 * C . Der blandes , og blandingen henstilles i 1 time ved denne temperatur .

6.2.12 . Invert polarisation

Drejningen af den inverterede oploesning bestemmes ved 20 mere aller mindre 0,2 * C . ( Hvis temperatur T af vaesken , der skal polariseres , afviger mere end 0,2 * C fra 20 * C under maalingen , maa den temperaturkorrektion , der refereres til under 7.2 . , anvendes ) .

7 . PRAESENTATION AF RESULTATERNE

7.1 . Beregningsmetode

Saccharoseindholdet beregnes ved hjaelp af foelgende formler :

1 . v = M/100 ( 1,08 F + 1,55 P )

2 . S = ( D - 1,25 I )/Q gange V - v/V gange V/L gange M %

hvor :

S = saccharoseindholdet ,

M = vaegten i g af afvejet proeve ,

F = procent fedt i proeven ,

P = procent protein ( N gange 6,38 ) i proeven ,

V = rumfanget i ml , som proeven er fortyndet op til inden filtreringen ,

v = korrektion i ml for rumfanget af bundfaldet , der dannes under klaringen ,

D = direkte polarimeterafkoelning ( polarisering foer inversion ) ,

I = polarimeterafloesning efter inversion ,

L = laengden i dm af polarimeterroeret ,

Q = inversionsfaktor , hvis vaerdi er angivet nedenfor .

Bemaerkninger :

a ) Naar der afvejes noejagtig 40,00 g kondenseret maelk og der anvendes et polarimeter med natriumlys , vinkelgrader og et 2 dm polarimeterroer ved 20,0 mere aller mindre 0,1 * C , kan saccharoseindholdet i normalt kondenseret maelk ( C = 9 ) beregnes ud fra foelgende formel :

S = ( D - 1,25 I ) ( 2,833 - 0,00612 F - 0,00878 P )

b ) Hvis inverspolarisationen maales ved en anden temperatur end 20 * C , skal tallene multipliceres med :

( 1 + 0,0037 ( T - 20 ) ) .

7.2 . Vaerdier for inversionsfaktoren Q

De foelgende formler giver noejagtige vaerdier for Q for forskellige lyskilder og indeholder korrektioner for koncentration og temperatur :

Natriumlys og polarimeter med vinkelgrader :

Q = 0,8825 + 0,0006 ( C - 9 ) - 0,0033 ( T - 20 )

Groent kviksoelvlys og polarimeter med vinkelgrader :

Q = 1,0392 + 0,0007 ( C - 9 ) - 0,0095 ( T - 20 )

Hvidt lys med dichromatfilter og saccharimeter med internationale sukkerskalagrader :

Q = 2,549 + 0,0017 ( C - 9 ) - 0,0095 ( T - 20 ) .

I de ovenfor anfoerte formler er :

C = procent total sukker i de inverterede proever , som de polariseres .

T = Temperaturen af den inverterede oploesning , naar den polariseres .

Note 1 :

Det procentmaessige indhold af totalt sukker , C , i den inverterede oploesning kan beregnes ud fra den direkte aflaesning og aendringen ved inversionen paa den saedvanlige maade , idet de normale vaerdier for saccharose , lactose og invertsukkers specifikke rotation anvendes .

Korrektionen 0,0006 ( C - 9 ) osv . er kun noejagtig , naar C er ca . 9 ; for normalt kondenseret maelk kan denne korrektion negligeres , idet C er naesten 9 .

Note 2 :

Variationen i temperaturen fra 20 * C paa 1 * C goer ikke nogen stor forskel ved den direkte aflaesning , men en variation paa over 0,2 * C ved den inverte aflaesning noedvendiggoer en korrektion . Korrektionen - 0,0033 ( T - 20 ) osv . er kun noejagtig mellem 18 og 22 * C .

7.3 . Repetitionsevne

Forskellen mellem resultaterne for to bestemmelser udfoert samtidigt eller hurtigt efter hinanden af den samme analytiker der anvender den samme proeve under de samme betingelser , maa ikke overstige 0,3 g saccharose pr . 100 g kondenseret maelk .

METODE 6 : BESTEMMELSE AF MAELKESYRE - OG LACTATINDHOLD

1 . OMFANG OG ANVENDELSESOMRAADE

Denne metode anvendes ved bestemmelse af indholdet af maelkesyre og lactater udtrykt som maelkesyre i :

- maelkepulver med hoejt fedtindhold ,

- maelkepulver eller soedmaelkspulver ,

- pulver af delvis skummet maelk ,

- skummetmaelkspulver .

2 . DEFINITION

Indholdet af maelkesyre og lactater i maelkepulvere : indholdet af maelkesyre og lactater udtrykt som maelkesyre som det bestemmes ved den specificerede metode .

3 . PRINCIP

Fedt , protein og lactose fjernes samtidigt fra en oploesning af proeven ved tilsaetning af kobbersulfat og calciumhydroxid efterfulgt af filtrering .

Maelkesyren og lactaterne i filtratet omdannes til acetaldehyd med koncentreret svovlsyre under tilstedevaerelse af kobbersulfat .

Maelkesyreindholdet bestemmes kolorimetrisk ved anvendelse af p-hydroxydiphenyl .

Indholdet af maelkesyre og lactater udtrykkes som mg maelkesyre pr . 100 g fedtfrit toerstof .

4 . REAGENSER

4.1 . Kobber(II)sulfatoploesning : 250 g kobber(II)sulfat ( CuSO4 * 5HO2O ) oploeses i vand , og der fortyndes til 1 000 ml med vand .

4.2.1 . Calciumhydroxidsuspension : 300 g calciumhydroxid ( Ca(OH)2 ) formales i en morter med vand , idet der anvendes i alt 900 ml . Suspensionen boer fremstilles umiddelbart foer anvendelsen .

4.2.2 . Calciumhydroxidsuspension : 300 g calciumhydroxid ( Ca(OH)2 ) formales i en morter med vand , idet der anvendes i alt 1 400 ml . Suspensionen boer fremstilles umiddelbart foer anvendelsen .

4.3 . Svovlsyre-kobber(II)sulfatoploesning : 0,5 ml kobber(II)sulfatoploesning ( 4.1 . ) tilsaettes 300 ml 95,5 - 97,0 % ( m/m ) H2SO4 ) .

4.4 . p-hydroxydiphenyl * ( C6H5C6H4OH)-oploesning : under svag opvarmning og omrystning oploeses 0,75 g p-hydroxydiphenyl i 5 ml af en vandig oploesning af natriumhydroxid , der indeholder 5 g NaOH pr . 100 ml . Der fortyndes til 50 ml med vand i en maalekolbe . Oploesningen opbevares i en brun farvet flaske paa et moerkt og koeligt sted . Anvendes ikke , hvis der forekommer farveaendringer eller uklarhed . Maximal holdbarhed er 72 timer .

4.5 . Maelkesyrestandardoploesning : kort foer brugen oploeses 0,1067 g lithiumlactat ( CH3CHOH-COOLi ) i vand , og der fortyndes til 1 000 ml i en maalekolbe . 1 ml af denne oploesning svarer til 0,1 mg maelkesyre .

4.6 . Standard rekonstitueret maelk : paa forhaand analyseres nogle proever af maelkepulver af hoej kvalitet . Til fremstilling af standardkurven udvaelges den proeve , der har det laveste maelkesyreindhold , idet den ikke maa indeholde mere end 30 mg maelkesyre pr . 100 g fedtfrit toerstof . Foelg fremgangsmaaden under 6.2.1 . og 6.2.2 . nedenfor .

5 . APPARATUR

5.1 . Analysevaegt .

5.2 . Spektrofotometer , der kan anvendes til aflaesninger ved en boelgelaengde paa 570 mm .

5.3 . Vandbad ved 30 mere aller mindre 2 * C .

5.4 . Morter og stoeder .

5.5 . Filtrerpapir ( Schleicher og Schull 595 , Whatman 1 eller tilsvarende ) .

5.6 . Reagensglas , pyrex eller tilsvarende ( dimensioner 25 - 150 mm ) .

Note :

Alle glasvarer skal vaere perfekt rengjorte og kan kun beregnes at skulle anvendes til bestemmelse af maelkesyre og lactat . Glasudstyr indeholdende bundfaldrester skylles med koncentreret saltsyre , inden det vaskes af .

6 . FREMGANGSMAADE

6.1 . Blindproeve

Der udfoeres en blindproeve ved at fylde 30 ml vand i en 50 ml maalekolbe ; kolben behandles som beskrevet under 6.2.4 . - 6.2.11 . inklusive . Hvis blindvaerdien maalt mod vand overstiger en vaerdi svarende til 20 mg maelkesyre pr . 100 g fedtfrit toerstof , boer reagenserne undersoeges og de(t ) urene reagens(er ) erstattes . Blindvaerdien udfoeres samtidigt med analyseproevernes gennemfoerelse .

6.2 . Bestemmelse

Note : Undgaa tilsmudsning med urenheder isaer af spyt og sved .

6.2.1 . Det fedtfrie toerstofindhold , a g , i proeven bestemmes ved at traekke fedtindholdet ( bestemt ved metode 4 ) og vandindholdet ( bestemt ved metode 2 ) fra 100 .

6.2.2 . Med en noejagtighed paa 0,1 mg afvejes ( 1000 / ( a - 10 ) ) g proeve . Til denne maengde saettes 100 ml vand , og der blandes omhyggeligt .

6.2.3 . 5 ml af oploesningen afpipetteres i et 50 ml maaleglas , og der fortyndes med vand til ca . 30 ml .

6.2.4 . Under omrystning tilsaettes langsomt 5 ml kober(II)sulfatoploesning ( 4.1 . ) , og blandingen henstilles i 10 min .

6.2.5 . Under omrystning tilsaettes langsomt 5 ml calciumhydroxidsuspension ( 4.2.1 . ) , eller 10 ml hydroxidsuspension ( 4.2.2 . ) .

6.2.6 . Der fortyndes til 50 ml vand og rystes kraftigt ; henstilling i 10 min . og derefter filtrering . De foerste gennemloeb bortkastes .

6.2.7 . 1 ml filtrat afpipetteres i et reagensglas ( 5.6 . ) .

6.2.8 . 6,0 ml svovlsyrekobber(II)sulfatoploesning ( 4.3 . ) tilsaettes til reagensglasset ved hjaelp af en burette eller en gradueret pipette . Der blandes .

6.2.9 . Opvarmning paa kogende vandbad i 5 min . Afkoeling til stuetemperatur under rindende vand .

6.2.10 . 2 draaber 4-hydroxidiphenylreagens ( 4.4 . ) tilsaettes , og der rystes kraftigt for at fordele reagenset jaevnt i hele vaesken . Reagensglasset anbringes paa vandbadet ved 30 mere aller mindre 2 * C ; henstand 15 min . med lejlighedsvis omrystning .

6.2.11 . Reagensglasset anbringes paa kogende vandbad i 90 sek . Det afkoeles til stuetemperatur under rindende vand .

6.2.12 . Den optiske taethed maales mod blindproeven ( 6.1 . ) ved den boelgelaengde , der er specificeret i 5.2 . , inden der er gaaet 3 timer .

6.2.13 . Hvis den optiske taethed er stoerre end det hoejeste punkt paa standardkurven , gentages bestemmelsen med en passende fortynding af filtratet 6.2.2 .

6.3 . Fremstilling af standardkurve

6.3.1 . 5 ml rekonstitueret maelk ( 4.6 . ) afpipetteres i fem 50 ml maaleglas . I disse glas afpipetteres 0 , 1 , 2 , 3 , og 4 ml af standardoploesningen ( 4.5 . ) , saaledes at der opnaas et standardomraade svarende til 0 , 20 , 40 , 60 og 80 mg maelkesyre sat til 100 g fedtfrit toerstof i maelkepulveret .

6.3.2 . Fortynd med vand til ca . 30 ml , og proeven behandles som beskrevet under 6.2.4 . til 6.2.11 . inklusive .

6.3.3 . De optiske taetheder af standarderne ( 6.3.1 . ) maales mod blindproeven ( 6.1 . ) ved den boelgelaengde , der er specificeret under 5.2 . I et diagram afbildes de optiske taetheder mod maengderne af maelkesyre , der er angivet under 6.3.1 . , dvs . 0 , 20 , 40 , 60 og 80 g mg pr . 100 g fedtfrit toerstof . Den bedst passende rette linje traekkes gennem punkterne , og standardkurven frembringes ved at parallelforskyde denne linje paa en saadan maade , at den kommer til at gaa gennem begyndelsespunktet .

7 . PRAESENTATION AF RESULTATERNE

7.1 . Beregningsmetode

De optiske taetheder , der er maalt under 6.2.12 . eller 6.2.13 . , omsaettes til mg maelkesyre pr . 100 g fedtfrit toerstof i proeven ved hjaelp af standardkurven . Dette resultat multipliceres med fortyndingsfaktoren , hvor filtratet har vaeret fortyndet som under 6.2.13 .

7.2 . Repetitionsevne

Forskellen mellem resultaterne for to bestemmelser , der er udfoert samtidigt eller hurtigt efter hinanden af den samme analytiker , der anvender den samme proeve under de samme betingelser , maa ikke overstige 8 mg pr . 100 g fedtfrit toerstof for indhold op til 80 mg . For hoejere vaerdier boer forskellen ikke overstige 10 % af den laveste vaerdi .

METODE 7 : BESTEMMELSE AF PHOSPHATASEAKTIVITET ( MODIFICERET SANDERS OG SAGER METODE )

1 . OMFANG OG ANVENDELSESOMRAADE

Denne metode anvendes ved bestemmelse af phosphataseaktiviteten i :

- maelkepulver med hoejt fedtindhold ,

- maelkepulver eller soedmaelkspulver ,

- pulver af delvis skummet maelk ,

- skummetmaelkspulver .

2 . DEFINITION

Phosphataseaktiviteten i maelkepulver er et maal for maengden af aktiv alkalisk phosphatase , der findes . Den udtrykkes som den maengde phenol i mg , der frigoeres af 1 ml rekonstitueret maelk som bestemt ved metoden nedenfor .

3 . PRINCIP

Phosphataseaktiviteten af maelkepulvere bestemmes ved phosphatasens evne til at frigoere phenol fra dinatriumphenylphosphat . Maengden af phenol , der frigoeres under de beskrevne betingelser , bestemmes ved en spektrofotometrisk maaling af farven , der fremkommer med Gibbs' reagens .

4 . REAGENSER

4.1 . Oploesning A

Bariumborathydroxidpuffer : pH 10,6 mere aller mindre 0,1 ved 20 * C .

25,0 g bariumhodroxid ( Ba(OH)2 , 8H2O ) oploeses i vand , og der fortyndes til 500 ml .

11,0 g borsyre ( H3BO3 ) oploeses i vand , og der fortyndes til 500 ml .

De to oploesninger opvarmes til 50 * C og blandes sammen .

Der omrystes og afkoeles til stuetemperatur . pH justeres til 10,6 mere aller mindre 0,1 med bariumhydroxid , derefter filtrering . Oploesningen opbevares til en taet tillukket beholder . Foer anvendelsen fortyndes pufferen med et tilsvarende volumen vand .

4.2 . Oploesning B

Farvefremkaldelsespuffer .

6,0 g natriummetaborat ( NaBO2 ) ( eller 1i,6 g NaBO2 . 4H2O ) og 20,0 g natriumchlorid ( NaCl ) oploeses i vand , og der fortyndes til 1 000 ml med vand .

4.3 . Oploesning C

Puffersubstratoploesning .

4.3.1 . 0,5 g dinatriumphenylphosphat ( Na2C6H5PO4 . 2H2O ) oploeses i 4,5 ml af oploesning B ( 4.2 . ) . Der tilsaettes 2 draaber af oploesning E ( 4.5 . ) , og oploesningen henstilles i 30 min . Farven ekstraheres med 2,5 ml butanol ( 4.10 . ) . Ekstraktionen gentages om noedvendigt . Efter adskillelse bortkastes butanolen . Oploesningen kan opbevares i adskillige dage i koeleskab . Farven fremkaldes og ekstraheres en gang mere inden anvendelsen .

4.3.2 . 1 ml af denne oploesning afpipetteres i en 100 ml maalekolbe , og der fyldes op til maerket med oploesning A . Pufferoploesningen fremstilles umiddelbart foer anvendelsen .

4.4 . Oploesning D

Bundfaeldningsmiddel .

3,0 g zinksulfat ( ZnSO4 . 7H2O ) og 0,6 g kobber(II)sulfat ( CuSO4 , 5H2O ) oploeses i vand , og der fyldes op til 100 ml med vand .

4.5 . Oploesning E

Gibbs' reagens .

0,040 g 2,6-dibromoquinon-1,2-chloroimid ( 0-C6H2Br2 , NCl ) oploeses i 10 ml 96 % ethanol . Oploesningen opbevares i en moerk glasflaske , der opbevares i koeleskab . Reagenset bortkastes , hvis det er blevet misfarvet .

4.6 . Farvefortyndingspuffer .

10 ml af oploesning B ( 4.2 . ) , farvefremkaldelsespuffer , fortyndes til 100 ml med vand .

4.7 . Kobber(II)sulfatoploesning .

0,05 g kobber(II)sulfat ( CuSO4 , 5H2O ) oploeses i vand , og der fyldes op til 100 ml med vand .

4.8 . Phenolstandardoploesning .

0,200 mere aller mindre 0,001 g ren phenol oploeses i vand , og der fyldes op til 100 ml i en maalekolbe med vand . Denne oploesning kan opbevares i adskillige maaneder i koeleskab . 10 ml af denne oploesning fortyndes til 100 ml med vand . Denne fortyndede oploesning indeholder 200 mg phenol pr . ml og kan anvendes til at fremstille mere fortyndede oploesninger .

4.9 . Kogt destilleret vand .

4.10 . n-butanol .

5 . APPARATUR

5.1 . Analysevaegt .

5.2 . Vandbad , termostatreguleret ved 37 mere aller mindre 1 * C .

5.3 . Spektrofotometer , der kan anvendes til aflaesninger ved en boelgelaengde paa 610 nm .

5.4 . Filtrerpapir ( Schleicher og Schull 597 , Whatman 42 eller tilsvarende papir ) .

5.5 . Vandbad , kogende .

5.6 . Aluminiumsfolie .

6 . FREMGANGSMAADE

Forholdsregler :

1 . Undgaa direkte udsaettelse for sollys .

2 . Alt glasudstyr , propper og andet materiale skal vaere perfekt rengjort . Det anbefales , at det skylles og koges med vand eller dampbehandles .

3 . Undgaa plastmaterialer ( propper f.eks . ) , da de kan indeholde phenoler .

4 . Spyt indeholder phosphatase ; til smudsning med spor af spyt maa derfor omhyggeligt undgaas .

6.1 . Fremstilling af proeve

6.1.1 . Med en noejagtighed paa 0,1 g afvejes 10 g proeve , som oploeses i 90 ml vand . Under oploesningen af pulveret maa temperaturen under ingen omstaendigheder overstige 35 * C .

6.2 . Bestemmelse

6.2.1 . Til hver af to reagensglas saettes 1 ml rekonstitueret maelk fremstillet som beskrevet i 6.1.1 .

6.2.2 . Det ene glas opvarmes paa kogende vandbad i 2 min . Reagensglasset og vandbadet ( 5.5 . ) , eller f.eks . et baegerglas , overdaekkes med aliminiumsfolie ( 6.5 . ) for at sikre , at hele glasset bliver opvarmet . Der afkoeles i koldt vand til stuetemperatur . Dette reagensglas anvendes til blindproeven . Ved alle efterfoelgende operationer behandles de to glas identisk .

6.2.3 . 10 ml oploesning C ( 4.3.2 . ) tilsaettes . Blanding og anbringelse paa vandbadet ved 37 * C ( 5.2 . ) .

6.2.4 . Inkuber i 60 min . i vandbadet , idet der lejlighedsvis omrystes .

6.2.5 . Glassene overfoeres straks til et kogende vandbad ( 5.5 . ) og de opvarmes i 2 min . ; afkoeling til stuetemperatur i koldt vand .

6.2.6 . 1 ml oploesning D ( 4.4 . ) tilsaettes , og der blandes og filtreres gennem et toert filtrerpapir ; den foerste del af filtratet bortkastes , indtil der opnaas en klar vaeske .

6.2.7 . 5 ml af hvert filtrat afpippeteres i reagensglas , 5 ml oploesning B ( 4.2 . ) og 0,1 ml oploesning E ( 4.5 . ) tilsaettes . Der blandes .

6.2.8 . Man lader farven fremkalde i 30 min . ved stuetemperatur ikke udsat for direkte sollys .

6.2.9 . Den optiske taethed af proeveoploesningen maales mod blindvaerdien ved den boelgelaengde , der er angivet i 5.3 .

6.2.10 . Bestemmelsen gentages , hvis den optiske taethed af oploesningen er over taetheden for standardproeven med 20 mg phenol , fremstillet som beskrevet i 7 .

Hvis denne graense er overskredet , fortyndes et passende rumfang rekonstitueret maelk som beskrevet i 6.1.1 . med et passende rumfang af denne maelk omhyggeligt kogt som beskrevet i 6.2.2 . for at inaktivere tilstedevaerende phosphatase .

7 . FREMSTILLING AF STANDARDKURVE

7.1 . I fire 100 ml maalekolber afpipetteres 1 , 3 , 5 og 10 ml standardoploesning , fortyndet som beskrevet i 4.8 . og der fyldes op til maerket med vand ; disse oploesninger indeholder 2 , 6 , 10 og 20 mg phenol pr . ml .

7.2 . 1 ml af hver standardoploesning ( 7.1 . ) afpipetteres i reagensglas for at opnaa en serie af proever indeholdende 0 ( blindvaerdien faas ved afpipettering af 1 ml vand ) , 2 , 6 , 10 og 20 mg phenol .

7.3 . I hvert reagensglas afpipetteres efter hinanden 1 ml kobber(II)sulfatoploesning ( 4.7 . ) , 5 ml fortyndingspuffer ( 4.6 . ) , 3 ml vand og 0,1 ml oploesning E . Der blandes .

7.4 . Reagensglassene henstilles i 30 min . ved stuetemperatur , vaek fra direkte sollys .

7.5 . Absorptioner af oploesningerne i hvert reagensglas maales mod blindvaerdien ved den boelgelaengde , der er angivet i 5.3 .

7.6 . Standardkurven frembringes ved at afbilde absorptionsvaerdierne mod de maengder af phenol i mg , der blev angivet i 7.2 .

8 . PRAESENTATION AF RESULTATERNE

8.1 . Beregning

8.1.1 . De tal , der er fremkommet under 6.2.9 . , omregnes til mg phenol ved hjaelp af standardkurven .

8.1.2 . Phosphataseaktiviteten udtrykt som mg phenol pr . ml rekonstitueret maelk beregnes ud fra foelgende formel :

phosphataseaktivitet = 2,4 gange P ,

hvor P = phenolmaengden i mg som beskrevet i 8.1.1 .

8.1.3 . Hvis det som angivet under 6.2.10 . var noedvendigt at fortynde , skal resultatet fra 8.1.2 . multipliceres med fortyndingsfaktoren .

8.2 . Repetitionsevne

Forskellen mellem resultaterne for to bestemmelser , der er udfoert samtidigt eller hurtigt efter hinanden af den samme analytiker , der anvender den samme proeve under de samme betingelser , maa ikke overstige 2 mg phenol frigjort pr . 1 ml rekonstitueret maelk .

METODE 8 : BESTEMMELSE AF PHOSPHATASEAKTIVITET ( ASCHAFFENBURG OG MULLEN-PROCEDUREN )

1 . OMFANG OG ANVENDELSESOMRAADE

Denne metode anvendes ved bestemmelse af phosphataseaktivitet i :

- maelkepulver med hoejt fedtindhold ,

- maelkepulver eller soedmaelkspulver ,

- pulver af delvis skummet maelk ,

- skummetmaelkspulver .

2 . DEFINITION

Phosphataseaktiviteten i maelkepulvere er et maal for maengden af aktiv alkalisk phosphatase , der findes i produktet . Den udtrykkes som maengden af p-nitrophenol , der frigoeres af 1 ml af den rekonstituerede proeve under de beskrevne betingelser .

3 . PRINCIP

Den rekonstituerede proeve fortyndes med et buffersubstrat ved pH 10,2 og inkuberes ved en temperatur paa 37 * C i 2 timer . Alkalisk phosphatase , der findes i proven , vil under disse omstaendigheder frigoere p-nitrophenol fra det tilsatte dinatrium-p-nitrophenylphosphat . Den frigjorte p-nitrophenol bestemmes ved direkte sammenligning med standardfarvede glasplader i en simpel komparator under anvendelse af reflekteret lys .

4 . REAGENSER

4.1 . Natriumcarbonat-bicarbonatpufferoploesning .

3,5 g vandfrit natriumcarbonat og 1,5 g natriumbicarbonat oploeses i vand , og der fortyndes til 1 000 ml i en maalekolbe med vand .

4.2 . Puffersubstrat .

1,5 g dinatrium-p-nitrophenylphosphat oploeses i natriumcarbonat-bicarbonatpufferen ( 4.1 . ) , og der fortyndes til 1 000 ml i en maalekolbe med pufferen .

Denne oploesning er stabil i en maaned , hvis den opbevares i koeleskab ( * 4 * C ) , men der boer udfoeres en farvekontrolundersoegelse paa saadanne opbevarede oploesninger - jf . 6 , forholdsregel 3 .

4.3 . Klaringsoploesninger .

4.3.1 . Zinksulfatoploesning .

30 g zinksulfat ( ZnSO4 oploeses i vand , og der fortyndes til 100 ml i en maalekolbe med vand .

4.3.2 . Kaliumhexacyanoferrat(II)trihydrat ( KuF2%CN)6 * 3H2O ) oploeses i vand , og der fortyndes til 100 ml i en maalekolbe med vand .

5 . APPARATUR

5.1 . Analysevaegt .

5.2 . Vandbad , termostatreguleret ved 37 mere aller mindre 1 * C .

5.3 . Komparator , med speciel skive indeholdende standardfarvede glas , kalibrerede i mg p-nitrophenol pr . ml maelk og 2 gange 25 mm kuvette .

6 . FREMGANGSMAADE

Forholdsregler :

1 . Efter brugen maa reagensglassene toemmes , skylles i vand , vaskes i varmt vand , indeholdende et alkalisk opvaskemiddel , efterfulgt af en omhyggeligt skylning i rent , varmt hanevand . Sluttelig skal de skylles og toerres foer brugen .

Pipetter skylles omhyggeligt i rent koldt hanevand umiddelbart efter brugen , efterfulgt af skylning i vand ; de toerres foer brugen .

2 . Reagensglaspropperne skylles omhyggeligt i varmt hanevand umiddelbart efter brugen , efterfulgt af kogning i 2 min . i vand .

3 . Puffersubstratoploesningen ( 4.2 . ) boer holde sig stabil i mindst 1 maaned , hvis den opbevares i koeleskab ved 4 * C eller lavere . Ustabilitet bemaerkes ved dannelsen af en gul farve . Medens proeven altid maales mod en kogt produktkontrol , der indeholder den samme puffersubstratoploesning , anbefales det , at oploesningen ikke anvendes , saafremt den giver en farveaflaesning paa over 10 mg , naar den aflaeses i en 25 mm kuvette i komparatoren mod destilleret vand i den anden 25 mm kuvette .

4 . Anvend en separat pipette til hver proeve og undgaa forurening af pipetten med spyt .

5 . Proeven maa ikke udsaettes for direkte sollys .

6.1 . Fremstilling af proeve .

10 g pulver oploeses i 90 ml vand . Temperaturen maa under oploesningen ikke overstige 35 * C .

6.2 . Bestemmelse

6.2.1 . 15 ml puffersubstrat ( 4.2 . ) afpipetteres i et rent , toert reagensglas efterfulgt af 2 ml af den rekonstituerede proeve ( 6.1 . ) , der skal undersoeges . Glasset lukkes , og der blandes ved vending ; placering i vandbadet ved 37 * C ( 5.2 . ) .

6.2.2 . Samtidigt placeres i vandbadet et kontrolglas , der indeholder 15 ml puffersubstrat og 2 ml kogt rekonstitueret proeve som den , der undersoeges .

6.2.3 . Efter 2 timer fjernes begge reagensglas fra vandbadet , der tilsaettes 0,5 ml zinksulfatbundfaeldningsmiddel ( 4.3.1 . ) , proppen saettes paa igen og der rystes kraftigt , henstilling i 3 min . 0,5 ml kaliumhexacyanoferrat(II)bundfaeldningsmiddel ( 4.3.2 . ) tilsaettes , og der blandes omhyggeligt ; filtrering gennem foldefilterpapir ( 5.4 . ) , det klare filtrat samles i det rene reagensglas .

6.2.4 . Filtratet overfoeres til en 25 mm celle og sammenlignes med filtratet fra den kogte kontrolproeve i komparatoren , idet den specielle skive anvendes ( 5.3 . ) .

7 . PRAESENTATION AF RESULTATERNE

7.1 . Beregning

De direkte aflaesninger under 6.2.4 . noteres som mg p-nitrophenol pr . ml proeve eller pr . ml rekonstitueret proeve .

7.2 . Repetitionsevne

Forskellen mellem resultaterne for to bestemmelser udfoert samtidigt eller hurtigt efter hinanden af den samme analytiker , der anvender den samme proeve under de samme betingelser , maa ikke overstige 2 mg p-nitrophenol frigjort pr . ml rekonstitueret maelk .