*****

KOMMISSIONENS FORORDNING (EOEF) Nr. 1822/86

af 30. maj 1986

om aendring af forordning (EOEF) nr. 1061/69 for saa vidt angaar analysemetoder til bestemmelse af stivelsesindholdet i sojaproteinkoncentrater og varer, der indeholder saadanne produkter

KOMMISSIONEN FOR DE EUROPAEISKE

FAELLESSKABER HAR -

under henvisning til traktaten om oprettelse af Det europaeiske oekonomiske Faellesskab,

under henvisning til Raadets forordning (EOEF) nr. 97/69 af 16. januar 1969 om de noedvendige foranstaltninger for ensartet anvendelse af den faelles toldtarifs nomenklatur (1), senest aendret ved forordning (EOEF) nr. 2055/84 (2), saerlig artikel 3, og

ud fra foelgende betragtninger:

I artikel 1 i Kommissionens forordning (EOEF) nr. 1061/69 (3) senest aendret ved forordning (EOEF) nr. 419/77 (4), fastlaegges det, hvilke analysemetoder der skal anvendes i forbindelse med Raadets forordning (EOEF) nr. 3033/80 (5) af 11. november 1980 om en handelsordning for visse af landbrugsprodukter fremstillede varer;

undersoegelser har vist, at det er noedvendigt at erstatte den foreskrevne analysemetode med en mere egnet metode, naar formaalet er at bestemme stivelsesindholdet i sojaproteinkoncentrater og i varer, der indeholder saadanne produkter;

den metode, der er beskrevet i bilaget, giver stoerre sikkerhed;

en raekke kemiske betegnelser boer aendres;

de i denne forordning fastsatte foranstaltninger er i overensstemmelse med udtalelse fra Nomenklaturudvalget for den faelles Toldtarif -

UDSTEDT FOELGENDE FORORDNING:

Artikel 1

I forordning (EOEF) nr. 1061/69 foretages foelgende aendringer:

1. Artikel 1 affattes saaledes:

»Artikel 1

1. Er tariferingen af en i artikel 1 i forordning (EOEF) nr. 3033/80 naevnt vare afhaengig af varens stivelsesindhold, beregnet i vaegtprocent, bestemmes dette indhold som indholdet af vandfri stivelse.

2. Stivelsesindholdet, beregnet i vaegtprocent, i sojaproteinkoncentrater og i varer, der indeholder saadanne produkter, bestemmes efter den i bilag V beskrevne enzymatiske metode.

3. Stivelsesindholdet, beregnet i vaegtprocent, i andre varer end de i stk. 2 omhandlede bestemmes efter den modificerede EWERS-metode, som er beskrevet i bilag I, kapitel 1, i Kommissionens tredje direktiv 72/199/EOEF (1).

Saafremt den paagaeldende vare indeholder omdannet stivelse uden samtidig at indeholde hverken saccharose eller invertsukker, bestemmes varens stivelsesindhold dog efter den i bilag I i naevnte direktiv beskrevne metode.

Ved anvendelse af dette stykke betragtes dextrin som omdannet stivelse.

(1) EFT nr. L 123 af 29. 5. 1972, s. 6.«

2. Artikel 4 affattes saaledes:

»Artikel 4

Indholdet af D-mannitol, beregnet paa grundlag af indholdet af D-glucitol (sorbitol), i varer henhoerende under pos. 29.04 C III og 38.19 T i den faelles toldtarif bestemmes efter den i bilag IV beskrevne metode.«

3. I bilag IV i foretages foelgende aendringer:

a) Titlen affattes saaledes:

»METODE TIL BESTEMMELSE AF D-MANNITOLINDHOLDET I VARER HENHOERENDE UNDER POS. 29.04 C III OG 38.19 T I DEN FAELLES TOLDTARIF, I RELATION TIL DERES INDHOLD AF D-GLUCITOL.«

b) Afsnit I affattes saaledes:

»I. Metodens princip

Til bestemmelse af D-mannitol-indholdet i varer henhoerende under pos. 29.04 C III og 28.19 T i den faelles toldtarif, i relation til deres indhold af D-glucitol, anvendes gaskromatografisk analyse. Med henblik herpaa maa produkterne, der ikke er flygtige, foerst omdannes til deres acetylderivater.«

c) Afsnit III, litra b), affattes saaledes:

»b) Gennemfoerelsen af den gaskromatografiske analyse:

Indsproejtningsbloktemperatur: 300 °C

Soejletemperatur: 210 °C

Baeregassens stroemningshastighed (f.eks. kvaelstof): 25 ml/minut

Brintens stroemningshastighed: 25 ml/minut

Indsproejtet maengde: 1 microliter

Den foerste peak, der viser sig, er D-mannitol, den naeste er D-glucitol.

Til bestemmelse af D-mannitol-indholdet i de analyserede varer, i relation til deres indhold af D-glucitol, er det tilstraekkeligt at beregne forholdet mellem arealerne af de to peaks.«

4. Bilaget til denne forordning indsaettes som bilag V.

Artikel 2

Denne forordning traeder i kraft den enogtyvende dag efter offentliggoerelsen i De Europaeiske Faellesskabers Tidende.

Denne forordning er bindende i alle enkeltheder og gaelder umiddelbart i hver medlemsstat.

Udfaerdiget i Bruxelles, den 30. maj 1986.

Paa Kommissionens vegne

COCKFIELD

Naestformand

(1) EFT nr. L 14 af 21. 1. 1969, s. 1.

(2) EFT nr. L 191 af 19. 7. 1984, s. 1.

(3) EFT nr. L 141 af 12. 6. 1969, s. 24.

(4) EFT nr. L 56 af 1. 3. 1977, s. 46.

(5) EFT nr. L 323 af 29. 11. 1980, s. 1.

BILAG

»BILAG V

1.2 // 1. // Formaal og anvendelse // // Metoden tillader bestemmelse af stivelsesindholdet i sojaproteinkoncentrater, og i varer der indeholder sojaproteinkoncentrater. // 2. // Definition // // »Stivelsesindhold« i produkter naevnt under (1) er defineret som vaerdien »T«, og udregnes som beskrevet i paragraf 7 i dette bilag. // 3. // Princip // // Proeven vaskes med ethanol (40 % vol.) for at fjerne oploeseligt sukker og oploeselige nedbrydningsprodukter fra stivelsen. Remanensen oplukkes ved hjaelp af natriumhydroxid, og stivelsen spaltes i glucoseenheder med amyloglucosidase. Glucosen betemmes enzymatisk. // 4. // Reagenser // // (Brug dobbelt-destilleret vand) // 4.1. // Ethanol i vand 40 % vol. // 4.2. // 0,5 N (0,5 mol/l) natriumhydroxidoploesning. // 4.3. // 96 % (min.) iseddikesyre. // 4.4. // Amyloglucosidaseoploesning: Umiddelbart foer brug oploeses ca. 10 mg amyloglucosidase (EC 3.2.1.3.) (6 U pr. mg) i 1 ml vand (1). // 4.5. // Triethanolaminpufferoploesning: 14,0 g triethanolaminchlorhydrat (tris(2-hydroxyethyl)ammoniumchlorid) og 0,25 g magnesiumsulfat (MgSO4.7H2O) oploeses i 80 ml vand. Der tilsaettes ca. 5 ml 5 Na (5 mol/l) natriumhydroxidoploesning, og indstilles til pH 7,6 ved hjaelp af 1 N (1 mol/l) natriumhydroxidoploesning. Der fyldes op til 100 ml med (dobbelt-destilleret) vand. Denne pufferoploesning holder sig i mindst 4 uger ved 4 °C. // 4.6. // NADP-(Nicotinamid-adenin-dinucleotidphosphat, dinatriumsalt) oploesning: 60 mg NADP oploeses i 6 ml vand. Denne oploesning er holdbar i mindst 4 uger ved 4 °C. // 4.7. // ATP-(Adenosin-5'-triphosphat, dinatriumsalt) oploesning: 300 mg ATP, 3 H2O og 300 mg natriumhydrogencarbonat (NaHCO3) oploeses i 6 ml vand. Denne oploesning er holdbar i mindst 4 uger ved 4 °C. // 4.8. // HK/G6P-DH-(Hexokinase (EC 2.7.1.1.) og glucose-6-phosphatdehydrogenase (EC 1.1.1.49)): 280 U HK og 140 U G6P-DH suspenderes i 1 ml 3,2 M ammoniumsulfatoploesning. Denne suspension er holdbar i mindst 1 aar ved 4 °C. // 5. // Apparatur // 5.1. // Centrifuge med mindst 1000 ; g (beregnet midt paa centrifugeglasset). // 5.2. // 100 ml centrifugeglas af glas. // 5.3. // Magnetomroerertermostat (60 °C). // 5.4. // Magnetstave. // 5.5. // UV-spectrofotometer med 1 cm kuvetter. // 5.6.

(1) Hvor U er den internationale enhed for enzym-aktivitet.

// 6. // Metode // 6.1. // Proeven udvaskes med ethanol, oplukkes ved hjaelp af natriumhydroxid, og stivelsen underkastes enzymatisk hydrolyse. // 6.1.1. // De afvejede proevemaengder vaelges efter det formodede indhold af stivelse som anfoert i nedenstaaende tabel (stivelsesindholdet i hver afvejet maengde maa ikke overstige 0,4 g): 1.2.3.4 // // // // // Produktets formodede stivelsesindhold i g/100 g // Omtrentlig afvejet proevemaengde i g // Maalekolbens volumen i ml // Fortyndingsfaktor op til hel liter // // // // // >70 // 0,35-0,4 // 500 // 2 // 20-70 // max. 0,5 // 500 // 2 // 5-20 // max. 1,0 // 250 // 4 // < 5 // max. 2,0 // 200 // 5 // // // // 1.2 // 6.1.2. // Proeven afvejes med en noejagtighed paa 0,1 mg i et centrifugeglas (5.2), og tilsaettes 50 ml ethanol, 40 % vol. (4.1). // 6.1.3. // Der omroeres med magnetomroerer i 20 min. ved stuetemperatur. // 6.1.4. // Lad magnetstaven forblive i glasset og centrifugér i 5 min. // 6.1.5. // Vandfasen fjernes ved forsigtig sugning (vandstraalepumpe eller pasteurpipette). // 6.1.6. // Remanensen vaskes ved omroering med 25 ml ethanol, 40 % vol. (4.1). // 6.1.7. // Centrifugér og opsug igen vaeskefasen. // 6.1.8. // Gentag 6.1.6 og 6.1.7 mindst een gang til. // 6.1.9. // Remanensen tilsaettes 50 ml 0,5 N natriumhydroxidoploesning (4.2), hvorefter der omroeres konstant i 30 min. med magnetomroereren i vandbad (5.3) ved 60 °C. // 6.1.10. // Der indstilles til pH 4,6-4,8 med nogle faa ml koncentreret iseddikesyre (4.3). // 6.1.11. // Centrifugeglasset anbringes i vandbadet med magnetomroereren ved 60 °C. Der tilsaettes 1,0 ml enzymoploesning (4.4), hvorefter man lader blandingen reagere i 30 min. under konstant omroering. // 6.1.12. // Efter afkoeling overfoeres indholdet kvantitativt til en maalekolbe (6.1.1.), som fyldes op til maerket med vand. // 6.1.13. // Om noedvendigt filtreres gennem et foldefilter. // 6.2. // Kvantitativ bestemmelse af glucose. // 6.2.1. // Proeveoploesningen skal indeholde 100-1 000 mg glucose pr. liter, hvilket svarer til en D E-340-vaerdi paa 0,1-1,0. // // Absorbansen af proeveoploesningen, der fremstilles ved, at 1 del proeveoploesning fortyndes med 30 dele vand, maa ikke overstige 0,4 (maalt mod luft) ved 340 nm. // 6.2.2. // Pufferoploesningen (4.5) indstilles til stuetemperatur (20 °C). // 6.2.3. // Reagensernes og proevens temperatur skal ligge mellem 20° og 25 °C. // 6.2.4. // Absorbansen maales ved 340 nm i forhold til luft (ingen kuvette i referencestraalen). // 6.2.5. // Gaa frem efter nedenstaaende afpipetteringsskema: 1.2.3 // // // // Kuvetterne paafyldes // Blindproeve (ml) // Maaleproeve (ml) // // // // Puffer (reagens 4.5) // 1,00 // 1,00 // NADP (reagens 4.6) // 0,10 // 0,10 // ATP (reagens 4.7) // 0,10 // 0,10 // Proeveoploesning (6.1.12 eller 13) // - // 0,10 // Dobbelt-destilleret vand // 2,00 // 1,90 // // // 1.2 // // Vaeskerne blandes. Efter ca. 3 min. maales oploesningernes absorbans (E1). // // Reaktionen paabegyndes ved tilsaetning af: 1.2.3 // // // // HK/G6P-DH(reagens 4.8) // 0,02 // 0,02 // // // 1.2 // // Vaeskerne blandes, reaktionens afslutning afventes (ca. 15 min.), og oploesningernes absorbans (E2) maales. Hvis reaktionen ikke er loebet til ende efter 15 min., maales absorbansen med 5 minutters intervaller, til stigningen er konstant. Saa ekstrapoleres der baglaens til tidspunktet for tilsaetning af suspensionen (4.8). // // // 6.2.6. // Absorbsionsforskellen (E2 - E1) udregnes for blindproeven og maaleproeven. // // Blindproevens absorbsionsforskel (DEblind) fratraekkes maaleproeven (DEproeve): // // DE340 = DEproeve - DEblind // // Denne forskel giver glucoseindholdet i proeveoploesningen i g/l: // // Glucoseindhold i proeveoploesningen, g/l 1.2.3.4 // // G = // 3,22 × 180,16 6,3 × 1 × 0,1 × 1 000 // × DE340 = 0,921 × D E340 1.2 // // Molvaegten af glucose er 180,16 (g/mol). // 6.2.7. // Hvis det, af en eller anden aarsag, ikke er muligt at maale ved 340 nm, kan man maale ved 365 nm eller 334 nm, blot man erstatter tallet 6,3 i formlen for G med tallet 3,5 henholdsvis 6,18. // 7. // Beregning af stivelsesindholdet T 1.2.3 // // T = stivelsesindhold i g/100 g = // 100 × 0,9 × G p × f // // hvor // 1.2.3 // // G // = glucose i g/l (6.2.6) // // f // = fortyndingsfaktor (6.1.1) // // p // = afvejet maengde proeve i g // // 0,9 // = omregningsfaktor fra glucose til stivelse.« // Pipetter til enzymatisk analyse.