*****

KOMMISSIONENS DIREKTIV

af 4. april 1990

om aendring af det andet direktiv 82/434/EOEF om indbyrdes tilnaermelse af medlemsstaternes lovgivning om analysemetoderne for kontrol af kosmetiske midlers sammensaetning

(90/207/EOEF)

KOMMISSIONEN FOR DE EUROPAEISKE

FAELLESSKABER HAR -

under henvisning til Traktaten om Oprettelse af Det Europaeiske OEkonomiske Faellesskab, og

ud fra foelgende betragtninger:

I Kommissionens andet direktiv 82/434/EOEF af 14. maj 1982 om indbyrdes tilnaermelse af medlemsstaternes lovgivning om analysemetoderne for kontrol af kosmetiske midlers sammensaetning (1) er der fastsat en faelles analysemetode til identifikation og bestemmelse af frit formaldehyd;

de nye videnskabelige og tekniske oplysninger har vist, at det er noedvendigt at aendre denne analysemetode;

foranstaltningerne i dette direktiv er i overensstemmelse med udtalelsen fra Udvalget for Tilpasning til Den Tekniske Udvikling af Direktiverne om Fjernelse af De Tekniske Handelshindringer i Sektoren for Kosmetiske Midler -

UDSTEDT FOELGENDE DIREKTIV:

Artikel 1

Kapitel IV i bilaget til direktiv 82/434/EOEF erstattes med bilaget til naervaerende direktiv.

Artikel 2

Medlemsstaterne saetter de fornoedne love eller administrative bestemmelser i kraft for senest den 31. december 1990 at efterkomme dette direktiv. De underretter straks Kommissionen herom.

I love og bestemmelser, der vedtages i henhold til foerste afsnit, henvises udtrykkeligt til dette direktiv.

Artikel 3

Dette direktiv er rettet til medlemsstaterne.

Udfaerdiget i Bruxelles, den 4. april 1990.

Paa Kommissionens vegne

Karel VAN MIERT

Medlem af Kommissionen

(1) EFT nr. L 185 af 30. 6. 1982, s. 1.

BILAG

»IV. IDENTIFIKATION OG BESTEMMELSE AF FRIT FORMALDEHYD

1.2 // 1. // FORMAAL OG ANVENDELSESOMRAADE // // Denne metode bestaar af en identifikation og to kvantitative bestemmelser af formaldehyd afhaengig af tilstedevaerelsen eller ej af formaldehyddonor. Metoden kan anvendes til alle kosmetiske produkter. // 1.1. // Identifikation // 1.2. // Generel bestemmelse ved kolorimetri (acetylacetone) // // Denne metode anvendes, naar formaldehyd anvendes alene eller sammen med andre konserveringsmidler, som ikke afgiver formaldehyd. // // I modsat fald, og saafremt resultatet overstiger den maksimalt tilladte koncentration i det faerdige produkt, anvendes den efterfoelgende metode til verifikation. // 1.3. // Bestemmelse under tilstedevaerelse af stoffer, som afgiver formaldehyd // // I den foregaaende metode spaltes formaldehyddonorer, under derivatisering, hvilket foerer til et for hoejt resultat (frit og bundet formaldehyd). Det er derfor noedvendigt at adskille frit formaldehyd fra formaldehyddonor ved vaeskekromatografi. // 2. // DEFINITION // // Proevens indhold af frit formaldehyd, bestemt efter denne metode, udtrykkes som masseprocent af formaldehyd. // 3. // IDENTIFIKATION // 3.1. // Princip // // Frit og bundet formaldehyd giver i svovlsyreoploesning lyseroed eller violet farvning med Schiffs reagens. // 3.2. // Reagenser // // Alle reagenser skal vaere af analysekvalitet. Vandet skal vaere demineraliseret eller destilleret. // 3.2.1. // Fuchsin // 3.2.2. // Natriumsulfit, 7H2O // 3.2.3. // Koncentreret saltsyre (d = 1,19) // 3.2.4. // Svovlsyre, ca. 1 M // 3.2.5. // Schiffs reagens // // 100 mg fuchsin (3.2.1) afvejes i et baegerglas og oploeses i 75,00 ml vand ved 80° C. Efter afkoeling tilsaettes 2,5 g natriumsulfit (3.2.2) og 1,5 ml saltsyre (3.2.3). Der fyldes op til 100 ml. Reagenset er holdbart i to uger. // 3.3. // Fremgangsmaade // 3.3.1. // Ca. 2 g proeve afvejes i et 10 ml baegerglas. // 3.3.2. // Der tilsaettes 2 draaber H2SO4 (3.2.4) og 2,00 ml Schiffs reagens (3.2.5). // // Dette reagens skal vaere fuldstaendig farveloest paa anvendelsestidspunktet. // // Der omrystes, og blandingen henstaar i fem minutter. // 3.3.3. // Konstateres der efter fem minutter en rosa eller violet farve, er den tilstedevaerende maengde formaldehyd over 0,01 %. Der fortsaettes i saa fald med bestemmelsen af frit og bundet formaldehyd efter punkt 4 og om noedvendigt efter punkt 5. // 4. // GENEREL BESTEMMELSE VED KOLORIMETRI (ACETYLACETONE) // 4.1. // Princip // // Formaldehyd reagerer med acetylacetone i naervaerelse af ammoniumacetat under dannelse af 3,5-diacetyl-1,4-dihydrolutidin, som ekstraheres med 1-butanol; ekstraktets absorbans ved 410 nm maales. // 4.2. // Reagenser // // Alle reagenser skal vaere af analysekvalitet. Vandet skal vaere demineraliseret. // 4.2.1. // Ammoniumacetat, vandfrit // 4.2.2. // Iseddikesyre (d204 = 1,05) // 4.2.3. // Acetylacetone, som er frisk vacuum-destilleret, og som ikke maa udvise nogen absorption ved 410 nm. // 4.2.4. // 1-Butanol // 4.2.5. // Saltsyre, 1 M // 4.2.6. // Saltsyre, ca. 0,1 M // 4.2.7. // Natriumhydroxid, 1 M // 4.2.8. // Frisk stivelsesoploesning, fremstillet efter Europaeisk Pharmacopé (1 g/50 ml vand) // 4.2.9. // Formaldehyd, 37 til 40 % // 4.2.10. // Standard iodoploesning, 0,05 M // 4.2.11. // Standard natriumthiosulfatoploesning, 0,1 M // 4.2.12. // Acetylacetonereagens // // I en 1 000 ml maalekolbe oploeses: // // - 150 g ammoniumacetat (4.2.1), // // - 2,00 ml acetylacetone (4.2.3), // // - 3,00 ml iseddikesyre (4.2.2). // // Der fyldes op til 1 000 ml med vand (oploesningens pH: ca. 6,4). // // Dette reagens skal vaere frisk fremstillet. // 4.2.13. // Reagens (4.2.12) uden acetylacetone. // 4.2.14. // Formaldehydstandard: stamoploesning // // 5 g formaldehyd (4.2.9) afvejes i en 1 000 ml maalekolbe, som fyldes op til maerket med vand. // // Oploesningens styrke bestemmes saaledes: der udtages 10,00 ml, hvortil der tilsaettes 25,00 ml standard iodoploesning (4.2.10) og 10,00 ml natriumhydroxidoploesning (4.2.7). // // Efter henstand i fem minutter tilsaettes 11,00 ml 1 M saltsyre (4.2.5), og det overskydende iod titreres med natriumthiosulfatoploesning (4.2.11) med stivelsesoploesning (4.2.8) som indikator. // // 1,00 ml 0,05 M iodoploesning (4.2.10) svarer til 1,5 mg formaldehyd. // 4.2.15. // Formaldehydstandard: fortyndet oploesning // // Stamoploesningen fortyndes med vand, foerst i forholdet 1: 20 og dernaest i forholdet 1: 100. // // 1 ml af denne oploesning indeholder ca. 1 mg formaldehyd. // // Det noejagtige indhold beregnes. // 4.3. // Apparatur // 4.3.1. // Saedvanligt laboratorieudstyr // 4.3.2. // Faseseparationsfilter, Whatman 1 PS (eller tilsvarende) // 4.3.3. // Centrifuge // 4.3.4. // Vandbad indstillet til 60° C // 4.3.5. // Spektrofotometer // 4.3.6. // Glaskuvetter med en lysvej paa 1 cm // 4.4. // Fremgangsmaade // 4.4.1. // Proeveoploesning // // En proevemaengde paa m gram (med en noejagtighed paa 0,001 g), der formodes at indeholde ca. 150 mg formaldehyd, afvejes i en 100 ml maalekolbe. Der fyldes op til 100 ml med vand og blandes (oploesning S). (Det kontrolleres, at pH er ca. 6. I modsat fald foretages fortyndingen med saltsyreoploesningen (4.2.6)). // // I en 50 ml Erlenmeyer-kolbe afpipetteres: // // - 10,00 ml af oploesningen S // // - 5,00 ml acetylacetonereagens (4.2.12) // // - vand til et samlet volumen paa 30,00 ml. // 4.4.2. // Referenceoploesning // // Eventuel interferens fra baggrundsfarve i proeven imoedegaas med foelgende referenceoploesning: // // I en 50 ml Erlenmeyer-kolbe afpipetteres: // // - 10,00 ml af oploesningen S // // - 5,00 ml referencereagens (4.2.13) // // - vand til et samlet volumen paa 30,00 ml. // 4.4.3. // Blindproeve // // I en 50 ml Erlenmeyer-kolbe afpipetteres: // // - 5,0 ml acetylacetonereagens (4.2.12). // // - vand til et samlet volumen paa 30,00 ml. // 4.4.4. // Bestemmelse // 4.4.4.1. // Blandingerne fra 4.4.1, 4.4.2 og 4.4.3 rystes og nedsaenkes i vandbad ved 60° C i noejagtig ti minutter. Derefter afkoeles disse i to minutter i et isbad. // 4.4.4.2 // Kolbernes indhold (4.4.4.1) overfoeres til hver sin 50 ml skilletragt, der indeholder noejagtigt 10,00 ml 1-butanol (4.2.4). Kolberne skylles med 3 til 5 ml vand, og blandingen rystes kraftigt i noejagtigt 30 sekunder, hvorefter skilletragtene henstaar, saa faserne skiller ad. // 4.4.4.3. // Butanolen filtreres gennem et faseseparationsfilter (4.3.2) ned i en maalekuvette. // // Centrifugering (3 000 g i fem minutter) kan ligeledes foretages. // 4.4.4.4. // Absorbansen ved 410 nm af ekstraktet af proeveoploesningen (4.4.1) maales mod ekstraktet af referenceoploesningen (4.4.2) og benaevnes A1. // 4.4.4.5. // Tilsvarende maales absorbansen A2 af ekstraktet af blindproeven (4.4.3) mod 1-butanol. // // Bemaerkning: Alle maalingerne skal foretages inden 25 minutter, efter at Erlenmeyer-kolberne er anbragt i vandbad ved 60° C. // 4.4.5. // Kalibreringskurve // 4.4.5.1. // I en 50 ml Erlenmeyer-kolbe afpipetteres: // // - 5,00 ml af den fortyndede standardoploesning (4.2.15) // // - 5,00 ml acetylacetonereagens (4.2.12) // // - vand til et samlet volumen paa 30,00 ml. // 4.4.5.2. // Der fortsaettes som beskrevet under punkt 4.4.4, idet absorbansen maales mod 1-butanol (4.2.4). // 4.4.5.3. // Proceduren gentages med 10, 15, 20 og 25 ml fortyndet standardoploesning (4.2.15). // 4.4.5.4. // Til fastlaeggelse af nulpunktet (der svarer til reagensernes egen farve) foelges samme procedure som under punkt 4.4.4.5. // 4.4.5.5. // Kalibreringskurven optegnes, efter at nulpunktsvaerdien er trukket fra hver af de under punkt 4.4.5.1 og 4.4.5.3 maalte absorbanser. Beers lov gaelder for op til 30 mg formaldehyd. // 4.5. // Beregninger // 4.5.1. // A2 traekkes fra A1, og paa kalibreringskurven (4.4.5.5) aflaeses formaldehydmaengden C i mikrogram i proeveoploesningen (4.4.1) // 4.5.2. // Proevens formaldehydindhold (% m/m) beregnes efter formlen: 1.2.3 // // formaldehyd % = // C 103 ; m 1.2 // // ioor: // // m = prthoemaengen i gram.

1.2 // 4.6. // Repeterbarhed (1) // // Ved et formaldehydindhold paa 0,2 % maa forskellen mellem resultaterne af to parallelt udfoerte bestemmelser paa samme proeve ikke overstige 0,005 % ved kolorimetrisk bestemmelse efter reaktion med acetylacetone. // // Hvis bestemmelsen af frit formaldehyd foerer til resultater, som ligger over de i direktiv 76/768/EOEF fastsatte maximumskoncentrationer dvs.: // // a) mellem 0,05 og 0,2 % for produkter uden maerkning // // b) over 0,2 % for produkter uanset maerkning // // skal der foretages bestemmelse efter den under punkt 5 beskrevne metode. // 5. // BESTEMMELSE UNDER TILSTEDEVAERELSE AF STOFFER, SOM AFGIVER FORMALDEHYD // 5.1. // Princip // // Frit formaldehyd adskilles fra formaldehyddonor ved vaeskekromatografi. // // Den adskilte formaldehyd til et gult lutidin-derivat med acetylacetone i en efterkolonne-reaktor. Det dannede derivat bestemmes ved absorbans ved 420 nm. // 5.2. // Reagenser // // Alle reagenser skal vaere af analysekvalitet. Vandet skal vaere demineraliseret. // 5.2.1. // Vand af HPLC-kvalitet // 5.2.2. // Vandfrit ammoniumacetat // 5.2.3. // Iseddikesyre (d204 = 1,05) // 5.2.4. // Acetylacetone (opbevares ved 4 °C) // 5.2.5. // Dinatriumphosphat, vandfrit // 5.2.6. // 85 % orthophosphorsyre (d204 = 1,7) // 5.2.7. // Methanol // 5.2.8. // Dichlormethan // 5.2.9. // Formaldehyd, 37 til 40 % // 5.2.10. // Natriumhydroxid 1 M // 5.2.11. // Saltsyre 1 M // 5.2.12. // Saltsyre 0,002 M // 5.2.13. // Frisk stivelsesoploesning, fremstillet efter Europaeisk Pharmacopé (1 g/ 50 ml vand) // 5.2.14. // Standard iodoploesning 0,05 M // 5.2.15. // Standard natriumthiosulfatoploesning 0,1 M // 5.2.16. // Mobil fase // // Vandig oploesning af dinatriumphosphat (5.2.5), 0,006 M, indstillet til pH = 2,1 med orthophosphorsyre (5.2.6). // 5.2.17. // Efterkolonne-reagens: // // I en 1 000 ml maalekolbe oploeses: // // - 62,5 g ammoniumacetat (5.2.2) // // - 7,5 ml eddikesyre (5.2.3) // // - 5 ml acetylacetone (5.2.4). // // Der fyldes op til 1 000 ml med vand (5.2.1). // // Dette reagens opbevares i moerke. // // Holdbarhed: tre dage ved stuetemperatur. Reagenset skal vaere farveloest. // 5.2.18. // Formaldehydstandard: stamoploesning // // 10 g formaldehyd (5.2.9) afvejes i en 1 000 ml maalekolbe, og der fyldes op til 1 000 ml med vand. // // Oploesningens styrke bestemmes saaledes: // // Der udtages 5,00 ml, hvortil der tilsaettes 25,00 ml standard iodoploesning (5.2.14) og 10,00 ml natriumhydroxidoploesning (5.2.10). Efter henstand i 5 minutter tilsaettes 11,00 ml 1 M saltsyre (5.2.11), og det overskydende iod titreres med natriumthiosulfat (5.2.15) med stivelsesoploesning (5.2.13) som indikator. // // 1 ml 0,05 M iodoploesning (5.2.14) svarer

(1) Ifoelge ISO 5725.

// 5.2.19. // Formaldehydstandard: fortyndet oploesning // // Stamoploesningen fortyndes i forholdet 1:100 med den mobile fase (5.2.16). // // 1 ml af denne oploesning indeholder ca. 37 mg formaldehyd. // // Det noejagtige indhold beregnes. // 5.3. // Apparatur // 5.3.1. // Saedvanligt laboratorieudstyr // 5.3.2. // Ikke-pulserende HPLC-pumpe // 5.3.3. // Ikke-pulserende lavtrykspumpe til reagenset (eller en HPLC-pumpe med samme specifikationer som den foerste). // 5.3.4. // Injektionsventil med en 10 ml loop // 5.3.5. // Efterkolonne-reaktor bestaaende af foelgende dele: // // en trehalset kolbe paa 1 L // // + en tilhoerende elektrisk varmekappe // // + to Vigreux-kolonner med mindst ti bunde (luftkoelede) // // + rustfrit staal staalroer (til varmeafgivelse) 1,6 mm - indvendig diameter 0,23 mm, L = 400 mm // // + teflonslange 1,6 mm - indvendig diameter 0,30 mm, L = 5 m (hestetoemme, se tillaeg I) // // + et T-formet roer uden doedvolumen (Valco eller tilsvarende) // // + tre Union-samlinger uden doedvolumen // // eller efterkolonne-reaktor (Applied Biosystems PCRS 520) eller tilsvarende, (kapacitet 1 ml). // 5.3.6. // Membranfilter 0,45 m // 5.3.7. // SEPR C18 Patron (eller tilsvarende) // 5.3.8. // Faerdigfremstillede kolonner // // - Bischoff hypersil RP 18 (type NC ref. C 25.46 1805) (5 m, L = 250 mm, indvendig diameter 4,6 mm) // // - eller Dupont, Zorbax ODS (5 m, L = 250 mm, indvendig diameter 4,6 mm) // // - eller Phase SEP, sphérisorb ODS 2 (5m, L = 250 mm, indvendig diameter 4,6 mm) // 5.3.9 // Forkolonne // // Bischoff K1 hypersil RP 18 (ref. K1 G 6301 1805) // // (5m, L1 = 10 mn) eller tilsvarende // 5.3.10 // Kolonnen og forkolonnen forbindes via et Ecotube (ref. A 15020508 Bischoff) system eller tilsvarende. // 5.3.11. // Apparaturet (5.3.5) samles som vist paa skemaet i tillaeg 2. Forbindelserne efter injektionsventilen skal vaere saa korte som muligt. Det rustfri roer mellem reaktoren og detektoren har til formaal at afkoele blandingen inden detekteringen. Temperaturen i detektoren kendes ikke, men er konstant. // 5.3.12. // UV-VIS detektor // 5.3.13. // Skriver // 5.3.14. // Centrifuge // 5.3.15 // Ultralydbad // 5.3.16. // Rysteapparat (Vortex eller tilsvarende). // 5.4. // Fremgangsmaade // 5.4.1. // Kalibreringskurve // // Der optegnes en kalibreringskurve over sammenhaengen mellem tophoejder og formaldehyd koncentrationer. Standardoploesningerne fremstilles ved fortynding af den fortyndede standard formaldehydoploesning (5.2.19) med den mobile fase (5.2.16). // // - 1,00 ml standardoploesning (5.2.19) fortyndet til 20 ml - ca. 185 mg/100 ml // // - 2,00 ml standardoploesning (5.2.19) fortyndet til 20 ml - ca. 370 mg/100 ml // // - 5,00 ml standardoploesning (5.2.19) fortyndet til 25 ml - ca. 740 mg/100 ml // // - 5,00 ml standardoploesning (5.2.19) fortyndet til 20 ml - ca. 925 mg/100 ml // // Standardoploesningerne henstaar i en time ved laboratorietemperatur og skal vaere frisk fremstillede. // // Kalibreringskurven er lineaer for koncentrationer fra 100 til 1 500 mg/100 ml. // 5.4.2. // Tilberedning af proeverne // 5.4.2.1. // Emulsioner (creme, underlagscreme og eyeliner) // // En proevemaengde paa m gram, der formodes at indeholde ca. 100 mg formaldehyd, afvejes (med en noejagtighed paa 0,001 g) i en 100 ml maalekolbe med prop. // // Der tilsaettes 20 ml dichlormethan (5.2.8) og 20,00 ml saltsyre (5.2.12). // // Der blandes paa rysteapparat (5.3.16) og paa ultralydbad (5.3.15). De to faser adskilles ved centrifugering (3 000 g i to minutter). // // En patron (5.3.7) skylles med 2 ml methanol (5.2.7) og konditioneres derefter med 5 ml vand (5.2.1). // // 4 ml af den vandige fase af ekstraktet ledes gennem den konditionerede patron. (5.3.7), idet man kasserer de foerste 2 ml og opsamler den efterfoelgende fraktion. // 5.4.2.2. // Lotioner og shampooer // // En proevemaengde paa m gram, der formodes at indeholde ca. 500 mg formaldehyd, afvejes (med en noejagtighed paa 0,001 g) i en maalekolbe med prop. Der fyldes op til 100 ml med den mobile fase (5.2.16). // // Oploesningen filtreres gennem et membranfilter (5.3.6) og indsproejtes i eller ledes gennem en patron (5.3.7), der er tilberedt paa samme maade som ovenfor (5.4.2.1). Alle oploesninger skal indsproejtes straks eller tilberedningen. // 5.4.3. // Kromatograferingsbetingelser // // - Mobile fase: 1 ml/min. // // - Reagens: 0,5 ml/min. // // - Total flow ved detektorens udloeb: 1,5 ml/min. // // - Injektionsvolumen: 10 ml // // - Elueringstemperatur: altid 0 °C, naar adskillelsen er vanskelig. Til dette formaal nedsaenkes kolonnen i et isbad, og indstillingen af temperaturligevaegten afventes (15 til 20 minutter) // // - Efterkolonnens reaktionstemperatur: 100 °C // // - Detektion: 420 nm. // // Bemaerkning: Hele kromatografi - og efterkolonnesystemet skylles med vand (5.2.1) efter brugen. I tilfaelde af en pause paa over to dages varighed foretages ligeledes en skylning med methanol (5.2.7). Foer systemet atter tages i brug, ledes der vand igennem for at undgaa omkrystallisering. // 5.5. // Beregninger // // Emulsioner (5.4.2.1): // // Formaldehydindhold i procent (m/m): 1.2.3.4 // // C ; 10-6 ; 100 5 m // = // C ; 10-4 5 m 1.2 // // Lotioner og siampooer (5.4.2.2): // // Formaldeivdindiold 1.2.3.4 // // PS ; 10-6 ; 100 m // = // C ; 10-4 m 1.2 // // ioor // // m = analyseprthoens masse i gram (5.4.2.1) // // PS = formaldeivdkonpsentrationen i mg/100 ml aflaest paa kalibreringskurven (5.4.1). // 5.6. // Repeterbarhed (1) // // Ved et formaldehydindhold paa 0,05 % maa forskellen mellem resultaterne af to parallelt udfoerte bestemmelser paa samme proeve ikke overstige 0,001 %. // // Ved et formaldehydindhold paa 0,2 % maa forskellen mellem resultaterne af to parallelt udfoerte bestemmelser paa samme proeve ikke overstige 0,005 %.« til 1,5 mg formaldehyd.

(1) Ifoelge ISO 5725.

Tillaeg 1

FREMSTILLING AF EN »HESTETOEMME«

HJAELPEMIDLER

- en trisse af trae:

med udvendig diameter 5 cm og med et hul i midten paa 1,5 cm. Der anbringes fire staalstifter med lige stor indbyrdes afstand rundt om hullet (se figur 1 og 2). Afstanden mellem stifterne 1,8 cm, afstand til hullet 0,5 cm.

- en stiv stang (formet som en haeklenaal) til fremstilling af loekkerne med teflonslangen.

- teflonslange 1,6 mm, indvendig diameter 0,3 mm, laengde 5 meter

UDFOERELSE

Hestetoemmen paabegyndes ved at stikke teflonslangen ned gennem hullet i trissen (den skal rage ca. 10 cm ud forneden, saa toemmen kan traekkes til, mens den laves), hvorefter den foeres rundt om hver enkelt stift (foerste omgang, se figur 3).

Begge ender af hestetoemmen forsynes med kompressionsfittings, idet man passer paa ikke at klemme materialet i stykker.

I anden omgang foeres slangen rundt om stifterne (se figur 4), hvorefter der dannes en loekke ved hver stift paa foelgende maade:

- den nederste slange loeftes op over den oeverste med »haeklenaalen«.

Dette gentages ved hver stift i samme raekkefoelge, indtil de 5 m er brugt, eller den oenskede laengde er naaet.

Der efterlades ca. 10 cm slange til lukning af arbejdet ved, at slangen traekkes gennem de fire loekker, hvorefter der traekkes til.

Bemaerkning: Faerdighaeklet hestetoemme til efterkolonnersaktionen kan faas paa markedet (Supelco). Skitser af trissen

1.2.3 // Figur 1 Figur 2 // // Figur 3 foerste omgang Figur 4 anden omgang Loekken dannes ved, at den nederste slange (fuldt optrukket linje) loeftes op over den anden slange (punkteret linje) Figur 5

Tillaeg 2

1.2 // 1 // = HPLC-pumpe (5.3.2) // 2 // = Indsproejtningsventil (5.3.4) // 3 // = Kolonne med forkolonne // 4 // = Reagenspumpe // 5 // = T-formet roer uden doedvolumen // 5' // = T-formet roer (Vortex) // 6-6' // = Union samling uden doedvolumen // 7 // = Hestetoemme // 7' // = Reaktor // 8 // = Trehalset kolbe med kogende vand // 9 // = Varmekappe // 10 // = Svaler // 11 // = Rustfrit staalroer til varmeafgivelse // 11' // = Varmeveksler // 12 // = Detektor for ultraviolet/synligt lys // 13 // = Efterkolonne-modul PCRS 520

5.3.5.

5.3.6.

Elueringsvaeske Reagens«

Der fyldes op til 1 000 ml med vand ( 5.2.1 ). //

Dette reagens opbevares i moerke . //

Holdbarhed : tre dage ved stuetemperatur . Reagenset skal vaere farveloest .

5.2.18 .

Formaldehydstandard : stamoploesning //

10 g formaldehyd ( 5.2.9 ) afvejes i en 1 000 ml maalekolbe, og der fyldes op til 1 000 ml med vand . //

Oploesningens styrke bestemmes saaledes : //

Der udtages 5,00 ml, hvortil der tilsaettes 25,00 ml standard iodoploesning ( 5.2.14 ) og 10,00 ml natriumhydroxidoploesning ( 5.2.10 ). Efter henstand i 5 minutter tilsaettes 11,00 ml 1 M saltsyre ( 5.2.11 ), og det overskydende iod titreres med natriumthiosulfat ( 5.2.15 ) med stivelsesoploesning ( 5.2.13 ) som indikator . //

1 ml 0,05 M iodoploesning ( 5.2.14 ) svarer til 1,5 mg

( 1 ) Ifoelge ISO 5725 .

5.2.19 .

Formaldehydstandard : fortyndet oploesning //

Stamoploesningen fortyndes i forholdet 1:100 med den mobile fase ( 5.2.16 ). //

1 ml af denne oploesning indeholder ca . 37 *g formaldehyd . //

Det noejagtige indhold beregnes .

5.3 .

Apparatur

5.3.1 .

Saedvanligt laboratorieudstyr

5.3.2 .

Ikke-pulserende HPLC-pumpe

5.3.3 .

Ikke-pulserende lavtrykspumpe til reagenset ( eller en HPLC-pumpe med samme specifikationer som den foerste ).

5.3.4 .

Injektionsventil med en 10 *l loop

5.3.5 .

Efterkolonne-reaktor bestaaende af foelgende dele : //

en trehalset kolbe paa 1 L //

+ en tilhoerende elektrisk varmekappe //

+ to Vigreux-kolonner med mindst ti bunde ( luftkoelede ) //

+ rustfrit staal staalroer ( til varmeafgivelse ) 1,6 mm _ indvendig diameter 0,23 mm, L = 400 mm //

+ teflonslange 1,6 mm _ indvendig diameter 0,30 mm, L = 5 m ( hestetoemme, se tillaeg I ) //

+ et T-formet roer uden doedvolumen ( Valco eller tilsvarende ) //

+ tre Union-samlinger uden doedvolumen //

eller efterkolonne-reaktor ( Applied Biosystems PCRS 520 ) eller tilsvarende, ( kapacitet 1 ml ).

5.3.6 .

Membranfilter 0,45 * 5.3.7 .

SEPR C18 Patron ( eller tilsvarende )

5.3.8 .

Faerdigfremstillede kolonner //

_ Bischoff hypersil RP 18 ( type NC ref . C 25.46 1805 ) ( 5 *, L = 250 mm, indvendig diameter 4,6 mm ) //

_ eller Dupont, Zorbax ODS ( 5 *, L = 250 mm, indvendig diameter 4,6 mm ) //

_ eller Phase SEP, sphérisorb ODS 2 ( 5*, L = 250 mm, indvendig diameter 4,6 mm )

5.3.9

Forkolonne //

Bischoff K1 hypersil RP 18 ( ref . K1 G 6301 1805 ) //

( 5*, L1 = 10 mn ) eller tilsvarende

5.3.10

Kolonnen og forkolonnen forbindes via et Ecotube ( ref . A 15020508 Bischoff ) system eller tilsvarende .

5.3.11 .

Apparaturet ( 5.3.5 ) samles som vist paa skemaet i tillaeg 2 . Forbindelserne efter injektionsventilen skal vaere saa korte som muligt . Det rustfri roer mellem reaktoren og detektoren har til formaal at afkoele blandingen inden detekteringen . Temperaturen i detektoren kendes ikke, men er konstant .

5.3.12 .

UV-VIS detektor

5.3.13 .

Skriver

5.3.14 .

Centrifuge

5.3.15

Ultralydbad

5.3.16 .

Rysteapparat ( Vortex eller tilsvarende ).

5.4 .

Fremgangsmaade

5.4.1 .

Kalibreringskurve //

Der optegnes en kalibreringskurve over sammenhaengen mellem tophoejder og formaldehyd koncentrationer . Standardoploesningerne fremstilles ved fortynding af den fortyndede standard formaldehydoploesning ( 5.2.19 ) med den mobile fase ( 5.2.16 ). //

_ 1,00 ml standardoploesning ( 5.2.19 ) fortyndet til 20 ml _ ca . 185 *g/100 ml //

_ 2,00 ml standardoploesning ( 5.2.19 ) fortyndet til 20 ml _ ca . 370 *g/100 ml //

_ 5,00 ml standardoploesning ( 5.2.19 ) fortyndet til 25 ml _ ca . 740 *g/100 ml //

_ 5,00 ml standardoploesning ( 5.2.19 ) fortyndet til 20 ml _ ca . 925 *g/100 ml //

Standardoploesningerne henstaar i en time ved laboratorietemperatur og skal vaere frisk fremstillede . //

Kalibreringskurven er lineaer for koncentrationer fra 100 til 1 500 *g/100 ml .

5.4.2 .

Tilberedning af proeverne

5.4.2.1 .

Emulsioner ( creme, underlagscreme og eyeliner ) //

En proevemaengde paa m gram, der formodes at indeholde ca . 100 *g formaldehyd, afvejes ( med en noejagtighed paa 0,001 g ) i en 100 ml maalekolbe med prop . //

Der tilsaettes 20 ml dichlormethan ( 5.2.8 ) og 20,00 ml saltsyre ( 5.2.12 ). //

Der blandes paa rysteapparat ( 5.3.16 ) og paa ultralydbad ( 5.3.15 ). De to faser adskilles ved centrifugering ( 3 000 g i to minutter ). //

En patron ( 5.3.7 ) skylles med 2 ml methanol ( 5.2.7 ) og konditioneres derefter med 5 ml vand ( 5.2.1 ). //

4 ml af den vandige fase af ekstraktet ledes gennem den konditionerede patron . ( 5.3.7 ), idet man kasserer de foerste 2 ml og opsamler den efterfoelgende fraktion .

5.4.2.2 .

Lotioner og shampooer //

En proevemaengde paa m gram, der formodes at indeholde ca . 500 *g formaldehyd, afvejes ( med en noejagtighed paa 0,001 g ) i en maalekolbe med prop . Der fyldes op til 100 ml med den mobile fase ( 5.2.16 ). //

Oploesningen filtreres gennem et membranfilter ( 5.3.6 ) og indsproejtes i eller ledes gennem en patron ( 5.3.7 ), der er tilberedt paa samme maade som ovenfor ( 5.4.2.1 ). Alle oploesninger skal indsproejtes straks eller tilberedningen .

5.4.3 .

Kromatograferingsbetingelser //

_ Mobile fase : 1 ml/min . //

_ Reagens : 0,5 ml/min . //

_ Total flow ved detektorens udloeb : 1,5 ml/min . //

_ Injektionsvolumen : 10 *l //

_ Elueringstemperatur : altid 0 *C, naar adskillelsen er vanskelig . Til dette formaal nedsaenkes kolonnen i et isbad, og indstillingen af temperaturligevaegten afventes ( 15 til 20 minutter ) //

_ Efterkolonnens reaktionstemperatur : 100 *C //

_ Detektion : 420 nm . //

Bemaerkning : Hele kromatografi _ og efterkolonnesystemet skylles med vand ( 5.2.1 ) efter brugen . I tilfaelde af en pause paa over to dages varighed foretages ligeledes en skylning med methanol ( 5.2.7 ). Foer systemet atter tages i brug, ledes der vand igennem for at undgaa omkrystallisering .

5.5 .

Beregninger //

Emulsioner ( 5.4.2.1 ): //

Formaldehydindhold i procent ( m/m ):

1.2.3.4 //

C 10-6 100 5 m

=

C 10-4 5 m

1.2 // ******** ** ********* ******************

1.2.3.4 // * // 10-6 100 m

=

C 10-4 m

1.2 // **** * ************** ***** * **** * ************************** *

*g/100 ml aflaest paa kalibreringskurven ( 5.4.1 ).

5.6 .

Repeterbarhed ( 1 ) //

Ved et formaldehydindhold paa 0,05 % maa forskellen mellem resultaterne af to parallelt udfoerte bestemmelser paa samme proeve ikke overstige 0,001 %. //

Ved et formaldehydindhold paa 0,2 % maa forskellen mellem resultaterne af to parallelt udfoerte bestemmelser paa samme proeve ikke overstige 0,005 %." formaldehyd .

( 1 ) Ifoelge ISO 5725 .

Tillaeg 1

FREMSTILLING AF EN "HESTETOEMME"

HJAELPEMIDLER

_ en trisse af trae :

med udvendig diameter 5 cm og med et hul i midten paa 1,5 cm . Der anbringes fire staalstifter med lige stor indbyrdes afstand rundt om hullet ( se figur 1 og 2 ). Afstanden mellem stifterne 1,8 cm, afstand til hullet 0,5 cm .

_ en stiv stang ( formet som en haeklenaal ) til fremstilling af loekkerne med teflonslangen .

_ teflonslange 1,6 mm, indvendig diameter 0,3 mm, laengde 5 meter

UDFOERELSE

Hestetoemmen paabegyndes ved at stikke teflonslangen ned gennem hullet i trissen ( den skal rage ca . 10 cm ud forneden, saa toemmen kan traekkes til, mens den laves ), hvorefter den foeres rundt om hver enkelt stift ( foerste omgang, se figur 3 ).

Begge ender af hestetoemmen forsynes med kompressionsfittings, idet man passer paa ikke at klemme materialet i stykker .

I anden omgang foeres slangen rundt om stifterne ( se figur 4 ), hvorefter der dannes en loekke ved hver stift paa foelgende maade :

_ den nederste slange loeftes op over den oeverste med "haeklenaalen ".

Dette gentages ved hver stift i samme raekkefoelge, indtil de 5 m er brugt, eller den oenskede laengde er naaet .

Der efterlades ca . 10 cm slange til lukning af arbejdet ved, at slangen traekkes gennem de fire loekker, hvorefter der traekkes til .

Bemaerkning : Faerdighaeklet hestetoemme til efterkolonnersaktionen kan faas paa markedet ( Supelco ).

Skitser af trissen

1.2.3Figur 1 Figur 2

Figur 3 foerste omgang Figur 4 anden omgang Loekken dannes ved, at den nederste slange ( fuldt optrukket linje ) loeftes op over den anden slange ( punkteret linje ) Figur 5

Tillaeg 2

1.21

= HPLC-pumpe ( 5.3.2 )

2

= Indsproejtningsventil ( 5.3.4 )

3

= Kolonne med forkolonne

4

= Reagenspumpe

5

= T-formet roer uden doedvolumen

5'

= T-formet roer ( Vortex )

6-6'

= Union samling uden doedvolumen

7

= Hestetoemme

7'

= Reaktor

8

= Trehalset kolbe med kogende vand

9

= Varmekappe

10

= Svaler

11

= Rustfrit staalroer til varmeafgivelse

11'

= Varmeveksler

12

= Detektor for ultraviolet/synligt lys

13

= Efterkolonne-modul PCRS 520

5.3.5 .

5.3.6 .

Elueringsvaeske Reagens"