Nr.L306/34 DeEuropæiske Fællesskabers Tidende 15.11.80
BERIGTIGELSER
Berigtigelse tilKommissionens forordning (EØF)nr.2851/80af31.oktober1980omæn­
dringafforordning (EØF)nr.1725/79omnærmerereglerforstøttetilskummetmælk ,der
forarbejdes tilfoderblandinger ,ogtilskummetmælkspulver tilkalvefoder
(DeEuropæiske Fællesskabers Tidendenr.L296af5.november 1980)
Side10,bilag:
Bilagetlæsessomfølger:
BILAG
».BILAGIII
KVANTITATIV BESTEMMELSE AFSKUMMETMÆLKSPULVER IFODERBLANDIN ­
GERVEDENZYMATISK KOAGULATION AFPARA-KASEIN
1.Formal
Kvantitativ bestemmelse afskummetmælkspulver ifoderblandinger vedkoagulering afpara-ka­
seinetvedhjælpafløbe-enzymer .
2.Anvendelsesområde
Dennemetodeanvendesvedanalyseaffoderblandinger ,somindeholder mindst50%skum­
metmælkspulver .Tilstedeværelsen afstoremængderkærnemælk(spulver )og/ellervisseikke­
mælkeproteiner kanforårsageinterferens .
3.Princip
3.1.Kaseinet ifoderblandingen opløsesvedekstraktion medennatriumcitratopløsing .
3.2.Kalciumionkoncentrationen justerestildetniveau,derernødvendigt forudfældningen afpara­
kasein.Vedtilsætning afløbeomdannes kaseinettilpara-kasein .
3.3.Kvælstofindholdet idetudfældede para-kasein bestemmes vedhjælpafKjeldahl-metoden ,
somerbeskrevet iKommissionens direktiv72/199/EØFaf27.april1972,ogresultatetbereg­
nespåbasisafetmindsteindholdpå27,5%kaseiniskummetmælkspulver .
4.Reagenser
Deranvendesreagenser afanalysekvalitet .Vandetskalentenværedestilleret elleraftilsva­
renderenhed .Alleanvendtereagenserogopløsninger skalværefriforkvælstofmedundta­
gelseafløbe-enzymet (4.5).
4.1.Trinatriumcitrat 2-hydrat (1%vægt/vol.opløsning )
4.2.Kalciumklorid (vandigopløsningmættetved20°C.),fremstillet vedopløsning af90gvandfrit
kalciumklorid i100mldestilleretvandvedletopvarmning ogomrøring .Efterhenstandnat­
tenoverved20°C.dannesetbundfald afkrystaller .Udebliver udfældningen ,tilsættesder
merekalciumklorid ogprocessengentages .Denfølgendedagfiltreresopløsningen ,somderef­
teropbevares ienlukketflaskeved20°C.
4.3.0,1Nnatriumhydroxid
4.4.0,1Nsaltsyre
4.5.Opløsning afkalve-løbe 1:10000.Opbevares ikøleskabved4-6C.
4.6.Reagenser tilbestemmelse afkvælstofindholdet somanførtforKjeldahl-metoden iKommissio­
nensdirektiv72/199/EØFaf27.april1972.

15.11.80 DeEuropæiske Fællesskabers Tidende Nr.L306/35
5.Apparatur
Sædvanligt laboratorieudstyr ogisær:
5.1.Morterellermølle
5.2.Analysevægt
5.3.Bordcentrifuge (2000—3000omdr./min.),udstyretmedcentrifugerør på50ml.
5.4.Magnetomrører medmagnetpinde på10-15mm
5.5.150—200mlbægerglas
5.6.250—500mlerlenmeyerkolber
5.7.Glastragte medendiameterpå60-80mm
5.8.Hurtigfiltrerende askefrirundfiltremedendiameterpå150mm(S.S.5892,S.S.5951/2)
5.9.Pipetterafforskelligstørrelse
5.10.Termostatreguleret vandbadindstilletpå37°C.
5.11.pH-meter
5.12.Kjeldahl-apparatur
5.13.25mlburette
5.14.Plastiksprøjteflaske tildestilleret vand
5.15.Rustfristålspatel
5.16.Termometre
5.17.Varmeskab medtemperaturregulering .
6.Udførelse
6.1.Tilberedning afprøven10-20gafprøvenformales imorterellermølleforatopnåenhomo­
genblanding .
6.2.Opløsning afmælkepulveret ogudskillelse afdetuopløselige bundfald .
6.2.1.1000±0.002gafdenhomogeniserede foderblanding (6.1)afvejesdirekteiet50mlcentrifuge­
rør.Dertilsættes30mltrinatriumcitratopløsning (4.1),somiforvejeneropvarmettil45°C.,
ogomrøres imindst5min.påmagnetomrører .
6.2.2.Dercentrifugeres 500gved2000—3000omdr./min.i10min.,hvorefterdenklare,vandige
opløsning dekanteres overiet150-200mlbægerglas .Undgåatoverføreuopløselige partikler
frabundenafcentrifugerøret .
6.2.3.Derforetagesyderligere toekstrationer påbundfaldet eftersammefremgangsmåde ,oghver
gangdekanteres derovenidenførsteopløsning .
6.2.4.Dersomdervisersigetlagaffedtstofpåoverfladen afdenopsamlede dekanterede opløsning ,
anbringesopløsningen ikøleskab ,indtilfedteterstørknet,ogdetfjernesdereftervedhjælpaf
enspatel.
6.3.Koagulering afkaseinetvedhjælpafløbe-enzymer
6.3.1.1mlmættetkalciumklorid (4.2)tilsættesdråbevisunderomrøring tildensamledeopløsning
(ca.100ml).pH-værdien justerestil6,4-6,5vedtilsætning affortyndede opløsninger afnatri­
umhydroxid (4.3)ellersaltsyre(4.4).Opløsningen sættesiettermostatreguleret vandbadved
37°C.i15-20min.foratopnåsaltbalance .Dettevisersigved,atopløsningen blivermælke­
hvid.
6.3.2.Dannesderbundfald ,børdetfjernesvedcentrifugering ved1000omdr./min.i5min.Dekan­
terderefterforsigtigttilbagetilbægerglasset udenatoverførebundfaldet .
6.3.3.Umiddelbart efteratekstrakten ertagetudafdettermostatregulerede vandbad ,tilsættes0,5ml
løbe(4.5)dråbevisunderomrøring .Koaguleringen indtræderefter1-2min.

Nr.L306/36 DeEuropæiske Fællesskabers Tidende 15.11.80
6.3.4.Efter10-15minuttershenstandved20-37C.skilleskoagletvedomrøring .Kaseinetoverføres
kvantitativt påethurtigtvirkende filter(5.8)ogvaskes3gangemed15mlvand(3x15ml),
ml).
Filtreringen skalværeafsluttetpåhøjsttotimer.
6.4.Bestemmelse afkvælstof
6.4.1.Efterfiltreringen anbringes filteretienkjeldahlkolbe ,ogderforetagesenbestemmelse afkvæl­
stofefterdeniKommissionens direktiv72/199/EØFaf27.april1972anførtemetode .
7.Blindbestemmelse
7.1.Derforetagesregelmæssig enblindbestemmelse påetaskefritfilter(5.2),dererfugtetmeden
blandingaf90mlnatriumcitratopløsning (4.1),1mlmættetkalciumkloridopløsning (4.2),0,5
5mlflydendeløbe(4.5)ogdereftervaskesmed3x15mlvand,indendetdestrueres ifølge
Kjeldahl-metoden somanførtiKommissionens direktiv72/199/EØFaf27.april1972.
7.2.Forbruget afsyrevedtitreringen afblindprøven fratrækkes denmængde (4.4),dereranvendt
vedtitreringafprøven .
8.Kontrolforsøg
8.1.Tilkontrolafanalyseogreagenserforetagesenbestemmelse påbasisafenstandard-foderblan ­
ding,hvisindholdafskummetmælkspulver erbestemtvedencollaborativ analyse.
Gennemsnitsresultatet vedendobbeltbestemmelse påstandardfoderblandingen måikkeafvige
mereend1%fradetresultat,dererfundetveddencollaborative analyse .
9.Beregning afresultaterne
9.1.Procenten afskummetmælkspulver ifoderblandinger beregnesvedhjælpaffølgendeformel
Nx6,38%Skmp.=27,5x100
hvorNerdetfundneindholdafpara-kasein kvælstof iblandingen ,udtrykt iprocent,mens
27,5erenfaktortilomregning afdenfundnekaseinmængde tilskummetmælkspulver .
10.Metodens nøjagtighed
10.1.Repetérbarhed
Imereend90%afdeundersøgte tilfældehardensammeprøveanalyseret afsammeanalyti­
kerisammelaboratorium vedtobestemmelser ikkegivetenstørreafvigelseend2gskummet­
mælkspulver pr.100gfoderblanding .
10.2.Reproducerbarhed
Imereend90%afdeundersøgte tilfældehardensammeprøveanalyseret aftoforskellige
laboratorier ikkegivetenstørreafvigelseend5gskummetmælkspulver pr.100gfoderblan­
ding.
11.Bemærkninger
11.1.Tilstedeværelse afenstorprocentdel afvisseikke-mælkeproteiner ogspecieltsojaprotein kan,
forsåvidtdeerblevetopvarmetmedmælkepulveret ,medføreforhøjeresultater ,fordideud­
fældessammenmedpara-kasein .
11.2.Tilstedeværelse afkærnemælkspulver kanundertiden medføreforlaveresultater ,dabestemmel­
senkunomfatterdenfedtfriedelafprøven .Tilstedeværelse afsurkærnemælk kangivemeget
laveresultaterpågrundafenufuldstændig opløsning icitrat-koncentrationen .
11.3.Tilstedeværelse afmereend0,5%lecithinkanligeledesmedføreforlaveresultater .
11.4.Foderblandinger medindholdafskummetmælkspulver ,derharværetopvarmettilhøjetempe­
raturer(highheat),kangiveforhøjeresultaterpågrundaf,atvissemælkeserumproteiner ud­
fældessammenmedpara-kaseinet .