++++

RAADETS DIREKTIV

af 31 . marts 1982

om aendring af direktiv 73/405/EOEF om harmonisering af medlemsstaternes lovgivning om kontrolmetoderne for de anionaktive overfladeaktive stoffers biologiske nedbrydningsevne

( 82/243/EOEF )

RAADET FOR DE EUROPAEISKE FAELLESSKABER HAR -

under henvisning til traktaten om oprettelse af Det europaeiske oekonomiske Faellesskab , saerlig artikel 100 ,

under henvisning til forslag fra Kommissionen ( 1 ) ,

under henvisning til udtalelse fra Europa-Parlamentet ( 2 ) ,

under henvisning til udtalelse fra Det oekonomiske og sociale Udvalg ( 3 ) , og

ud fra foelgende betragtninger :

direktiv 73/405/EOEF ( 4 ) maa tilpasses den nyeste videnskabelige og tekniske udvikling ; derfor maa :

- referencerne for de i artikel 2 opfoerte metoder ajourfoeres ;

- direktivets artikel 2 udvides med endnu en maalemetode , nemlig den i Det forenede Kongerige anvendte metode ;

- den i tilfaelde af tvist foreskrevne referencemetode ( kontrolproeve ) forbedres ;

som foreskrevet i artikel 4 i Raadets direktiv 73/404/EOEF af 22 . november 1973 om harmonisering af medlemsstaternes lovgivning om vaske - og rengoeringsmidler ( 5 ) boer der fastsaettes passende tolerancer for maaling af den biologiske nedbrydelighed for at sikre , at kontrolmetodernes usikkerhed ikke foerer til beslutninger om kassering med betydelige oekonomiske konsekvenser til foelge ; en beslutning om kassering boer kun tages , naar resultaterne af en af de i artikel 2 i direktiv 73/405/EOEF naevnte metoder viser en grad af biologisk nedbrydelighed paa mindre end 80 % ;

der er opstaaet en vis uklarhed omkring raekkevidden af direktiv 73/405/EOEF , og det er derfor noedvendigt at praecisere , at direktivet kun omfatter overfladeaktive stoffer i rengoeringsmidler ; det er ogsaa noedvendigt at praecisere , at det er den biologiske nedbrydelighed af anioniske overfladeaktive stoffer indeholdt i et rengoeringsmiddel , og ikke den biologiske nedbrydelighed i selve rengoeringsmidlet , som behandles i artikel 2 ;

aendringer af og tilfoejelser til bilaget til direktiv 73/405/EOEF vil blive foretaget efter fremgangsmaaden i direktivets artikel 3a -

USTEDT FOELGENDE DIREKTIV :

Artikel 1

I direktiv 73/405/EOEF foretages foelgende aendringer :

1 . I artikel 1 tilfoejes : " i vaske - og rengoeringsmidler , saaledes som disse er omhandlet i artikel 1 i direktiv 73/404/EOEF " .

2 . Artikel 2 og 3 affattes saaledes :

" Artikel 2

I overensstemmelse med bestemmelserne i artikel 4 i direktiv 73/404/EOEF forbyder medlemsstaterne markedsfoering og anvendelse paa deres omraade af et vaske - og rengoeringsmiddel , saafremt maaling af graden af biologisk nedbrydelighed for de anioniske overfladeaktive stoffer indeholdt i dette vaske - og rengoeringsmiddel giver et resultat paa mindre end 80 % , idet denne maaling foretages efter en af foelgende metoder :

- OECD-metoden , offentliggjort i OECDs tekniske rapport af 11 . juni 1976 om " Proposed method for the determination of the biodegradability of surfactants used in synthetic detergents " ;

- metode gaeldende i Forbundsrepublikken Tyskland , stadfaestet ved " Verordnung ueber die Abbaubarkeit anionischer und nichtanionischer grenzflaechenaktiver Stoffe in Wasch - und Reinigungsmittel " af 30 . januar 1977 , offentliggjort i " Bundesgesetzblatt " , 1977 , 1 . del , s . 244 , som den foreligger i forordningen om aendring af denne forordning af 18 . juni 1980 , offentliggjort i " Bundesgesetzblatt " , 1980 , 1 . del , side 706 ;

- metode gaeldende i Frankrig , stadfaestet ved arrèté af 28 . december 1977 offentliggjort i " Journal Officiel de la République Française " af 18 . januar 1978 , s . 514-515 , og forsoegsnorm T 73-260 , juni 1981 , offentliggjort af Det franske Standardiseringsraad ( AFNOR ) ;

- metode gaeldende i Det forenede Kongerige , benaevnt " Porous Pot Test " og beskrevet i teknisk rapport nr . 70 ( 1978 ) fra " Water Research Centre " .

Artikel 3

Ved anvendelse af fremgangsmaaden i artikel 5 , stk . 2 , i direktiv 73/404/EOEF fremsaettes laboratoriets erklaering med hensyn til anioniske overfladeaktive stoffer paa grundlag af den referencemetode ( kontrolproeve ) , der er beskrevet i bilaget til dette direktiv . " ;

3 . Foelgende artikel indfoejes :

" Artikel 3a

De aendringer , der er noedvendige for at tilpasse bilagene til den tekniske udvikling , vedtages i overensstemmelse med proceduren i artikel 7b i direktiv 73/404/EOEF . " ;

4 . Bilaget erstattes af bilaget til dette direktiv .

Artikel 2

Medlemsstaterne saetter de noedvendige bestemmelser i kraft for at efterkomme dette direktiv inden for en frist paa atten maaneder fra dets meddelelse . De underretter straks Kommissionen derom .

Artikel 3

Dette direktiv er rettet til medlemsstaterne .

Udfaerdiget i Bruxelles , den 31 . marts 1982 .

Paa Raadets vegne

P . de KEERSMAEKER

Formand

( 1 ) EFT nr . C 112 af 14 . 5 . 1981 , s . 4 .

( 2 ) EFT nr . C 172 af 13 . 7 . 1981 , s . 111 .

( 3 ) EFT nr . C 310 af 30 . 11 . 1981 , s . 7 .

( 4 ) EFT nr . L 347 af 17 . 12 . 1973 , s . 53 .

( 5 ) EFT nr . L 347 af 17 . 12 . 1973 , s . 51 .

BILAG

BESTEMMELSE AF ANIONISKE OVERFLADEAKTIVE STOFFERS BIOLOGISKE NEDBRYDELIGHED

Referencemetode ( kontrolproeve )

KAPITEL 1

1.1 . Definition

Ved anioniske overfladeaktive stoffer forstaas i dette direktiv de overfladeaktive stoffer , der efter passage gennem kation - og anionbyttere adskilles ved fraktionseluering og bestemmes som methylenblaat aktivt stof ( MBAS ) ifoelge den analytiske fremgangsmaade , der er beskrevet i kapitel 3 .

1.2 . Noedvendigt udstyr

Maalemetoden er baseret paa anvendelse af et renseanlaeg med aktiveret slam , der er skematiseret i fig . 1 og naermere beskrevet i fig . 2 .

Udstyret bestaar af en beholder A til opbevaring af det kunstige spildevand , en doseringspumpe B , en beluftningsbeholder C , en sedimentationsbeholder D , en airliftpumpe E til returloeb af det aktiverede slam og en beholder F til opsamling af det behandlede spildevand .

Beholderne A og F skal enten vaere af glas eller af et egnet plastmateriale og rumme mindst 24 liter . Pumpen B skal sikre en konstant tilfoersel af kunstigt spildevand til beluftningsbeholderen ; under normale anvendelsesforhold skal denne beholder indeholde 3 liter blanding . Et sintret glas G , der benyttes til beluftning , er anbragt i beholderen C oeverst i dennes nedre kegle . Den luftmaengde , der blaeses ind af beluftningsanordningen , skal registreres ved hjaelp af et flowmeter H .

1.3 . Kunstigt spildevand

Til udfoerelse af denne test anvendes kunstigt spildevand .

Der oploeses pr . liter vandvaerksvand :

160 mg pepton ,

110 mg koedekstrakt ,

30 mg urinstof CO(NH2)2 ,

7 mg natriumchlorid NaCl ,

4 mg calciumchlorid CaCl2 * 2H2O ,

2 mg magnesiumsulfat MgSO4 * 7H2O ,

28 mg dikaliumhydrogenphosphat K2HPO4 , og

20 mere aller mindre 2mg MBAS .

MBAS ekstraheres fra det produkt , der skal undersoeges , ifoelge den i kapitel 2 angivne metode . Det kunstige spildevand skal fremstilles hver dag .

1.4 . Tilberedning af proever

1.4.1 . Ikke-sammensatte overfladeaktive stoffer kan undersoeges uden forbehandling . MBAS-indholdet maa bestemmes , for at fremstillingen af det kunstige spildevand ( 1.3 ) kan finde sted .

1.4.2 . Sammensatte produkter analyseres for MBAS - og saebeindhold . De underkastes en alkoholisk ekstraktion og fraseparering af MBAS ( se kapitel 2 ) . Ekstraktets indhold af MBAS maa kendes , for at det kunstige spildevand kan fremstilles .

1.5 . Anlaeggets virkemaade

Foerst fylder man beluftningsbeholderen C og sedimentationsbeholderen D med kunstigt spildevand . Sedimentationsbeholderen D skal fastgoeres i en saaden hoejde , at beluftningsbeholderen C indeholder 3 liter . Podning foretages ved at tilsaette 3 ml sekundaert afloeb af en god kvalitet , nylig opsamlet fra et rensningsanlaeg , der fortrinsvis behandler husspildevand . Afloebsproeven maa opbevares under aerobe betingelser i perioden fra udtagningen til anvendelsen . Derefter saetter man lufttilfoerselsanordningen G , airliftpumpen E og doseringspumpen B i gang . Det kunstige spildevand maa passere gennem beluftningsbeholderen C med en hastighed paa 1 liter pr . time svarende til en gennemsnitlig opholdstid paa 3 timer .

Beluftningen justeres paa en saadan maade , at indholdet i beholderen C konstant holdes opslemmet , og at koncentrationen af oploest ilt er mindst 2 mg/l . Skumdannelse forhindres med passende midler ; man maa dog ikke anvende skumdaempningsmidler , der kan haemme det aktiverede slam eller som indeholder MBAS . Airliftpumpen E justeres paa en saadan maade , at der opretholdes en kontinuerlig og regelmaessig recirkulation af aktiveret slam fra sedimentationsbeholderen D til beluftningsbeholderen C . Slam , der har samlet sig oeverst i beluftningsbeholderen C , paa bunden af sedimentationsbeholderen D eller i slangerne , skal igen bringes i cirkulation mindst én gang daglig ved hjaelp af boerstning eller en anden egnet fremgangsmaade . Saafremt slammet ikke saetter sig , kan man oege sedimentationsevnen ved at tilsaette 2 ml portioner af en 5 % ferrichloridoploesning , om noedvendigt flere gange .

Overloebet fra sedimentationsbeholderen D opsamles i beholderen F i loebet af 24 timer ; derefter udtages en proeve efter en omhyggelig opblanding . Beholderen F renses herefter omhyggeligt .

1.6 . Kontrol af maaleudstyr

Det kunstige spildevands indhold af MBAS ( udtrykt i mg/l ) bestemmes umiddelbart foer anvendelsen .

Indholdet af MBAS ( udtrykt i mg/l ) i overloebet , der er opsamlet i loebet af 24 timer i beholderen F , skal analyseres efter samme metode umiddelbart efter opsamlingen ; hvis dette ikke er muligt , maa proeverne opbevares , saa de ikke nedbrydes , helst ved frysning . Koncentrationen skal maales med en noejagtighed paa 0,1 mg MBAS pr . l .

For at kontrollere , at processen forloeber tilfredsstillende , maaler man mindst to gange om ugen det kemiske iltforbrug ( COD ) eller koncentrationen af oploest organisk kulstof ( DOC ) i det gennem glasfiber filtrerede overloeb , der er opsamlet i beholderen F og i det filtrerede kunstige spildevand i beholderen A .

Produktionen af COD og DOC vil blive konstant , naar en nogenlunde regelmaessig nedbrydning af MBAS opnaas , det vil sige ved slutningen af indkoeringsfasen angivet i fig . 3 .

Indholdet af uorganisk toerstof i det aktiverede slam i beluftningstanken skal bestemmes to gange om ugen ( udtrykt i g/l ) . Hvis dette er mere end 2,5 g/l , maa den overskydende maengde aktiveret slam fjernes .

Bionedbrydningstesten udfoeres ved stuetemperatur , der skal vaere nogenlunde konstant og holdes mellem 292 og 297 K ( 19-24 * C ) .

1.7 . Beregning af den biologiske nedbrydelighed

Nedbrydningsgraden af MBAS udtrykt i procent skal beregnes dagligt paa grundlag af MBAS-indholdet i det kunstige spildevand ( udtrykt i mg/l ) og i det tilsvarende overloeb opsamlet i beholderen F . De nedbrydningstal , man faar , skal fremstilles grafisk som vist i fig . 3 .

MBAS' biologiske nedbrydelighed skal beregnes som det aritmetiske gennemsnit af de tal , der er opnaaet i loebet af de 21 dage , som foelger efter indkoeringsfasen . Inden for de 21 dage skal nedbrydningen have vaeret regelmaessig , og anlaegget skal have virket problemfrit . Indkoeringsfasen maa under ingen omstaendigheder overstige 6 uger .

De daglige vaerdier for nedbrydeligheden beregnes med en noejagtighed paa 0,1 % , men det endelige resultat afrundes til naermeste hele procenttal .

I visse tilfaelde kan proeveudtagningshyppigheden reduceres , men til beregning af gennemsnittet skal dog benyttes mindst 14 resultater , opnaaet i loebet af de 21 dage , der foelger efter indkoeringsfasen .

KAPITEL 2

FORBEHANDLING AF DE PRODUKTER , DER SKAL UNDERSOEGES

2.1 . Indledende bemaerkninger

2.1.1 . Behandling af proeverne

Anioniske overfladeaktive stoffer og sammensatte vaske - og rengoeringsmidler behandles forud for bestemmelsen af den biologiske nedbrydelighed ved kontroltesten , som foelger :

Produkt * Behandling *

Anioniske overfladeaktive stoffer * Ingen *

Sammensatte vaske - og rengoeringsmidler * Alkoholisk ekstraktion efterfulgt af fraseparering af de anioniske overfladeaktive stoffer ved ionbytning *

Formaalet med den alkoholiske ekstraktion er at fjerne de uoploeselige og uorganiske bestanddele af handelsprodukter , da de under visse omstaendigheder kan virke forstyrrende paa nedbrydningstesten .

2.1.2 . Ionbytningsproceduren

Isolering og fraseparering af anioniske overfladeaktive stoffer fra saebe , nonioniske og kationiske overfladeaktive stoffer er noedvendig for at sikre en noejagtig bestemmelse af den biologiske nedbrydelighed .

Dette opnaas ved en ionbytningsteknik , hvor der anvendes et makroporoest ionbyttermateriale og elueringsvaesker egnede til fraktioneringseluering . Man kan saaledes isolere saebe , anioniske og nonioniske overfladeaktive stoffer ved én proces .

2.1.3 . Analytisk kontrol

Efter homogenisering bestemmes koncentrationen af anioniske overfladeaktive stoffer i vaske - eller rengoeringsmidlet i overensstemmelse med analysemetoderne til bestemmelse af MBAS . Saebeindholdet bestemmes ved en passende analytisk metode . Disse analyser af produktet er noedvendige for at beregne , hvor store maengder , det er noedvendigt at anvende for at fremstille fraktionerne til proevning af den biologiske nedbrydelighed .

En kvantitativ ekstraktion er ikke noedvendig ; man boer imidlertid tilsigte at faa mindst 80 % af de anioniske overfladeaktive stoffer ekstraheret . Normalt opnaas 90 % eller mere .

2.2 . Princip

Fra en homogen proeve ( pulver , pasta eller toerret vaeske ) fremstilles et ethanolekstrakt , der vil indeholde de overfladeaktive stoffer , saebe og andre alkoholoploeselige bestanddele af proeven af vaske - eller rengoeringsmidlet .

Ethanolekstraktet inddampes til toerhed , oploeses i en isopropanol/vand-blanding , og den opnaaede oploesning sendes gennem en kombineret staerkt sur kationbytter/makroporoes anionbytter , der er opvarmet til 323 K ( 50 * C ) . Denne temperatur er noedvendig for at undgaa udfaeldning af fede syrer i det sure miljoe .

De nonioniske overfladeaktive stoffer forbliver i gennemloebet .

Saebens fedtsyrer adskilles ved eluering med ethanol indeholdende CO2 . De anioniske overfladeaktive stoffer faas derefter som ammoniumsalte ved eluering med en vandig isopropanoloploesning af ammoniumbicarbonat . Disse ammoniumsalte anvendes til bionedbrydelighedstesten .

Kationiske overfladeaktive stoffer , der kan forstyrre bionedbrydelighedstesten og de analytiske procedurer , fjernes af kationbytteren , der er placeret oven paa anionbytteren .

2.3 . Kemikalier og udstyr

2.3.1 . Deioniseret vand .

2.3.2 . Ethanol , 95 % ( v/v ) C2H5OH , ( tilladt denatureringsmiddel : methylethylketon eller methanol ) .

2.3.3 . Isopropanol/vand-blanding ( 50/50 v/v ) :

50 rumfangsdele isopropanol ( CH3CHOH-CH3 ) , og 50 rumfangsdele vand ( 2.3.1 . ) .

2.3.4 . Oploesning af kuldioxid i vand ( ca . 0,1 % CO2 ) :

under anvendelse af et roer med indbygget glasfilter ledes kuldioxid ( CO2 ) gennem ethanolen ( 2.3.2 ) i 10 minutter . Anvend kun frisklavede oploesninger .

2.3.5 . Ammoniumbicarbonatoploesning ( 60/40 v/v ) :

0,3 mol NH4HCO3 i 1 000 ml af en isopropanol/vand-blanding , der bestaar af 60 rumfangsdele isopropanol og 40 rumfangsdele vand ( 2.3.1 ) .

2.3.6 . Kationbytter ( KAT ) , staerkt sur , resistent mod alkohol ( 50-100 mesh ) .

2.3.7 . Anionbytter ( AAT ) , makroporoes , Merck Lewatit MP 7080 ( 70-150 mesh ) eller tilsvarende .

2.3.8 . Saltsyre , 10 % HCl ( w/w ) .

2.3.9 . 2 000 ml rundbundet kolbe med slib og tilbagesvaler .

2.3.10 . 90 mm ( diameter ) sugefilterholder ( som kan opvarmes ) til papirfiltre .

2.3.11 . 2 000 ml sugekolbe .

2.3.12 . Ionbytterkolonne med varmekappe og hane :

Indre diameter 60 mm og indre hoejde 450 mm ( fig . 4 ) .

2.3.13 . Vandbad .

2.3.14 . Vacuumtoerre * vn .

2.3.15 . Termostat .

2.3.16 . Rotationsfordamper .

2.4 . Fremstilling af ekstrakt og fraseparering af anioniske overfladeaktive stoffer

2.4.1 . Fremstilling af ekstrakt

Den maengde overfladeaktive stoffer , der er noedvendig til nedbrydningstesten , er ca . 50 g MBAS .

Normalt vil den maengde af produktet , der skal ekstraheres , ikke overstige 1 000 g , men det kan vaere noedvendigt at ekstrahere yderligere proevemaengder .

Af praktiske grunde vil der i de fleste tilfaelde vaere tale om hoejst 5 000 g ved fremstilling af ekstrakter til nedbrydningstesten .

Erfaringen har vist , at det er en fordel at foretage et antal mindre ekstraktioner fremfor een stoerre ekstraktion . De opgivne ionbytteregenskaber er beregnet paa en arbejdskapacitet paa 600-700 m mol overfladeaktive stoffer og saebe .

2.4.2 . Isolering af alkoholoploeselige bestanddele

Til 1 250 ml ethanol saettes 250 g af det vaske - eller rengoeringsmiddel , der skal analyseres . Blandingen opvarmes til kogning , og der koges med omroering og tilbagesvaling i 1 time . Den varme alkoholoploesning haeldes over paa et i forvejen til 323 K ( 50 * C ) opvarmet groft poret sugefilter , mens der suges kraftigt . Kolben og sugefiltret vaskes med ca . 200 ml varm ethanol . Filtratet og vaskevaesken opsamles i en sugekolbe .

I tilfaelde af , at det er en pasta eller et flydende produkt , der skal analyseres , sikres det , at der ikke er mere end 55 g anioniske overfladeaktive stoffer og 35 g saebe i proeven . Denne vejede proeve inddampes til toerhed . Remanensen oploeses i 2 000 ml ethanol og behandles som beskrevet ovenfor .

I tilfaelde af pulvere med lav rumvaegt ( < 300 g/l ) anbefales det at oege ethanolmaengden til forholdet 20 : 1 .

Det ethanoliske filtrat inddampes til toerhed , helst ved hjaelp af en rotationsfordamper . Denne operationen gentages , hvis en stoerre maengde ekstrakt kraeves . Remanensen oploeses i 5 000 ml isopropanol/vand-blanding .

2.4.3 . Fremstilling af ionbytterkolonner

Kationbytterkolonne

600 ml kationbytter ( 2.3.6 . ) haeldes op i et 3 000 ml baegerglas og daekkes ved tilsaetning af 2 000 ml saltsyre ( 2.3.8 ) . Blandingen henstaar i mindst 2 timer under lejlighedsvis omroering . Syren fradekanteres , og ionbyttermaterialet overfoeres til kolonnen ( 2.3.12 ) ved hjaelp af deioniseret vand . Kolonnen boer vaere forsynet med en prop af glasuld . Kolonnen udvaskes med deioniseret vand med en vaeskehastighed paa 10-30 ml/min . , indtil eluatet er chloridfrit . Vandet fortraenges ved hjaelp af 2 000 ml isopropanol/vand-blanding ( 2.3.3 ) , der tilsaettes med en hastighed paa 10-30 ml/minutter . Ionbytterkolonnen er au klar .

Anionbytterkolonne

600 ml anionbytter ( 2.3.7 ) haeldes op i et 3 000 ml baegerglas og daekkes ved tilsaetning af 2 000 ml deioniseret vand . Ionbytteren henstaar til kvaeldning i mindst 2 timer . Ionbyttermaterialet overfoeres til kolonnen ved hjaelp af deioniseret vand . Kolonnen boer vaere forsynet med en prop af glasuld .

Kolonnen udvaskes med 0,3 M ammoniumhydrogencarbonatoploesning ( 2.3.5 ) , indtil eluatet er chloridfrit . Dette kraever ca . 5 000 ml oploesning . Der udvaskses igen med 2 000 ml deioniseret vand . Vandet fortraenges med 2 000 ml isopropanol/vand-blanding ( 2.3.3 ) med en hastighed paa 10-30 ml/min . Ionbytterkolonnen er nu paa OH-form og klar til brug .

2.4.4 . Ionbytningsproceduren

Ionbytterkolonnerne forbindes saaledes , at kationbytterkolonnen er anbragt oven paa anionbytterkolonnen . Kolonnerne opvarmes til 323 K ( 50 * C ) ved hjaelp af en termostat . 5 000 ml af oploesningen , der er fremstillet under ( 2.4.2 ) , opvarmes til 333 K ( 60 * C ) og sendes gennem ionbytterkolonnerne med en hastighed paa 20 ml/min . Kolonnerne udvaskes med 1 000 ml varm isopropanol/vand-blanding ( 2.3.3 ) .

For at isolere de anioniske overfladeaktive stoffer ( MBAS ) adskilles KAT-kolonnen fra AAT-kolonnen . Ved anvendelse af 5 000 ml ethanol/CO2 oploesning ( 323 K ( 50 * C ) ( 2.3.4 ) elueres saebens fedtsyrer ud af AAT-kolonnen . Eluatet bortkastes .

Derefter el * res MBAS ud af AAT-kolonnen med 5 000 ml ammoniumbicarbonatoploesning ( 2.3.3 ) , og eluatet inddampes til toerhed paa et dampbad eller en rotationsfordamper . Remanensen indeholder MBAS ( som ammoniumsalt ) og muligvis ikke-overfladeaktive anioner , som ikke har nogen skadelig indvirkning paa bionedbrydelighedstesten . Der tilsaettes deioniseret vand , indtil et defineret rumfang er opnaaet , og MBAS-indholdet bestemmes ifoelge kapitel 3 i en proeve . Oploesningen anvendes som en standardoploesning af anioniske overfladeaktive stoffer til bionedbrydelighedstesten . Oploesningen skal opbevares ved en temperatur paa under 278 K ( 5 * C ) .

2.4.5 . Regenering af ionbyttermaterialet

Kationbytteren bortkastes efter brug .

Anionbyttermaterialet kan regenereres ved at sende yderligere ammoniumbicarbonatoploesning ( 2.3.5 ) gennem kolonnen med en vaeskehastighed paa ca . 10 ml/min . , indtil eluatet er fri for anioniske overfladeaktive stoffer ( methylenblaat test ) . For at vaske sendes derefter 2 000 ml isopropanol/vand-blanding ( 2.3.3 ) gennem anionbytteren . Anionbytteren er herefter igen klar til brug .

KAPITEL 3

BESTEMMELSE AF ANIONISKE OVERFLADEAKTIVE STOFFER I FORBINDELSE MED BIONEDBRYDELIGHEDSUNDERSOEGELSE

3.1 . Princip

Metoden er baseret paa det faktum , at det kationiske farvestof methylenblaat danner blaa salte med anioniske overfladeaktive stoffer , som kan ekstraheres med chloroform . For at eliminere interferenser gennemfoeres ekstraktionen foerst fra en alkalisk oploesning , hvorefter ekstraktet rystes med en sur oploesning af methylenblaat . Absorbansen af den udskilte organiske fast maales fotometrisk ved boelgelaengden med maksimal absorption , 650 nm .

3.2 . Reagenser og udstyr

3.2.1 . Bufferoploesning , pH = 10 :

24 g natriumbicarbonat ( NaHCO3 ) P.A . og 27 g vandfri natriumcarbonat ( Na2CO3 ) P.A . oploeses i deioniseret vand og fortyndes til 1 000 ml .

3.2.2 . Neutral oploesning af methylenblaat :

0,35 g methylenblaat P.A . oploeses i deioniseret vand og fortyndes til 1 000 ml . Oploesningen tilberedes mindst 24 timer foer brug . Absorbansen af den klare chloroformfase , maalt i forhold til chloroform , maa ikke overstige 0,015 pr . cm lagtykkelse ved 650 nm .

3.2.3 . Sur oploesning af methylenblaat :

0,35 g methylenblaat P.A . oploeses i 500 ml deioniseret vand og blandes med 6,5 ml H2SO4 ( d = 1,84 g/ml ) . Der fortyndes med deioniseret vand til 1 000 ml . Oploesningen tilberedes mindst 24 timer foer brug . Absorbansen af den klare chloroformfase , maalt i forhold til chloroform , maa ikke overstige 0,015 pr . cm lagtykkelse ved 650 nm .

3.2.4 . Chloroform ( trichlormethan ) CHCl3 P.A . , frisk destilleret .

3.2.5 . Dodecylbenzensulfonsyremethylester .

3.2.6 . Kaliumhydroxidoploesning i ethanol , KOH 0,1 M .

3.2.7 . Ren ethanol , C2H5OH .

3.2.8 . Svovlsyre , H2SO4 , 0,5 M .

3.2.9 . Phenolphtaleinoploesning :

1 g phenolphtalein oploeses i 50 ml ethanol og tilsaettes 50 ml deioniseret vand under stadig omroering . Eventuelt bundfald frafiltreres .

3.2.10 . Saltsyre i methanol : 250 ml koncentreret saltsyre P.A . og 750 ml methanol .

3.2.11 . Skilletragt , 250 ml .

3.2.12 . Maalekolbe , 50 ml .

3.2.13 . Maalekolbe , 500 ml .

3.2.14 . Maalekolbe , 1000 ml .

3.2.15 . Rundbundet kolbe med slib og tilbageloebssvaler , 250 ml , granulat til hindring af stoedkogning .

3.2.16 . pH-meter .

3.2.17 . Fotometer til maalinger ved 650 nm , med kuvetter paa 1-5 cm .

3.2.18 . Kvatitativt filtrerpapir .

3.3 . Fremgangsmaade

Analyseproeverne maa ikke udtages gennem et skumlag .

Efter grundig rensning med vand skylles det apparatur , der anvendes til analysen , grundigt med saltsyre i methanol ( 3.2.10 ) og derefter med deioniseret vand inden brug .

Filtrer tilloeb og afloeb fra det aktiverede slamanlaeg umiddelbart efter proeveudtagning . De foerste 100 ml af filtraterne bortkastes .

En afmaalt proevemaengde , om noedvendigt neutraliseret , anbringes i en 250 ml skilletragt ( 3.2.11 ) . Proevemaengden boer indeholde mellem 20 og 150 mg MBAS . Med et MBAS-indhold i den lavere ende kan anvendes op til 100 ml af proeven . Anvendes mindre end 100 ml , fortyndes til 100 ml med deioniseret vand . Der tilsaettes 10 ml af bufferoploesning ( 3.2.1 ) , 5 ml neutral oploesning af methylenblaat ( 3.2.2 ) og 15 ml chloroform eller trichloromethan ( 3.2.4 ) . Blandingen rystes regelmaessigt og ikke for voldsomt i et minut . Efter faseadskillelse overfoeres chloroformlaget til en anden skilletragt indeholdende 110 ml deioniseret vand og 5 ml sur oploesning af methylenblaat ( 3.2.3 ) . Blandingen rystes i et minut . Chloroformlaget haeldes gennem en chloroformvaedet bomuldsfilter , der i forvejen er renset i alkohol , over i en maalekolbe ( 3.2.12 ) .

De alkaliske og sure oploesninger ekstraheres tre gange , idet der anvendes 10 ml chloroform til den anden og tredje ekstraktion . De kombinerede chloroformekstrakter filtreres gennem samme bomuldsfilter og fortyndes op til maerket i 50 ml kolben ( 3.2.12 ) med den chloroform , der er benyttet til rensning af bomulden . Chloroformoploesningens absorbans maales med et fotometer ved 650 nm i 1-5 cm kuvetter i forhold til chloroform . Under hele proceduren foretages en blindvaerdibestemmelse .

3.4 . Kalibreringskurve

Der tilberedes en kalibreringsoploesning fra standardoploesningen af dodecylbenzensulfonsyremethylester ( tetrapropylen type molekylevaegt 340 ) efter forsaebning til kaliumsaltet . Indholdet af MBAS beregnes som natriumdodecylbenzensulfonat ( molekylevaegt 348 ) .

Der afvejes 400-450 mg dodecylbenzensulfonsyremethylester ( 3.2.5 ) med 0,1 mg noejagtighed i en rundbundet kolbe og tilsaettes 50 ml kaliumhydroxidoploesning i ethanol ( 3.2.6 ) og noget granulat til hindring af stoedkogning . Tilbageloebssvaleren anbringes , og der koges i en time . Efter afkoeling vaskes svaleren og samleleddet af glas med ca . 30 ml ethanol , og dette ethanol tilsaettes til kolbens indhold . Oploesningen titreres med svovlsyre med phenolphtalein som indikator , indtil denne bliver farveloes . Oploesningen overfoeres til en 1 000 ml maalekolbe ( 3.2.14 ) , fortyndes op til maerket med deioniseret vand og blandes .

En del af denne stamoploesning fortyndes derefter yderligere . Der udtages 25 ml , som overfoeres til en 500 ml maalekolbe ( 3.2.13 ) , fortyndes til maerket med deioniseret vand og blandes .

Denne standardoploesning indeholder E gange 1,023/20 000 mg MBAS pr . ml , hvor E er proevens vaegt i mg .

Med henblik paa fremstilling af kalibreringskurven udtages 1 , 2 , 4 , 6 og 8 ml af standardoploesningen og fortyndes til 100 ml med deioniseret vand . Derefter fortsaettes som under 3.3 , herunder en blindproevebestemmelse .

3.5 . Beregning af resultater

Indholdet af anioniske overfladeaktive stoffer i proeven som MBAS aflaeses af kalibreringskurven ( 3.4 ) . MBAS-indholdet i proeven er givet ved :

mg MBAS gange 1 000/V = mg MBAS/l ,

hvor V = volumen i ml af den anvendte proeve .

Resultaterne udtrykkes som natriumdodecylbenzensulfonat ( molekylevaegt 348 ) .

3.6 . Angivelse af resultater

Resultatet udtrykkes som mg MBAS/l med en noejagtighed paa 0,1 .

Fig . 1 , 2 , 3 og 4 : JFR . EFT