1990L0426 — DA — 23.02.2002 — 007.001 — 1
Dette dokument er et dokumentationsredskab, og institutionerne påtager sig intet ansvar herfor
►B RÅDETS DIREKTIV
af 26. juni 1990
om dyresundhedsmæssige betingelser for enhovede dyrs bevægelser og indførsel af enhovede dyr
fra tredjelande
(90/426/EØF)
(EFT L 224 af 18.8.1990, s. 42)
Ændret ved:
Tidende
nr. side dato
►M1Rådets direktiv 90/425/EØF af 26. juni 1990 L 224 29 18.8.1990
►M2Rådets direktiv 91/496/EØF af 15. juli 1991 L 268 56 24.9.1991
►M3Kommissionens beslutning 92/130/EØF af 13. februar 1992 L 47 26 22.2.1992
►M4Rådets direktiv 92/36/EØF af 29. april 1992 L 157 28 10.6.1992
►M5Kommissionens beslutning 2001/298/EF af 30. marts 2001 L 102 63 12.4.2001
►M6Kommissionens beslutning 2002/160/EF af 21. februar 2002 L 53 37 23.2.2002
Ændret ved:
►A1Tiltrædelsesakt for Østrig, Finland og Sverige C241 21 29.8.1994
(tilpasset ved Rådets beslutning 95/1/EF, Euratom, EKSF) L 1 1 1.1.1995
Berigtiget ved:►
C1Berigtigelse, EFT L 296 af 27.10.1990, s. 66 (90/426/EØF)
▼B
RÅDETS DIREKTIV
af 26. juni 1990
om dyresundhedsmæssige betingelser for enhovede dyrs bevægelser
og indførsel af enhovede dyr fra tredjelande
(90/426/EØF)
RÅDET FOR DE EUROPÆISKE FÆLLESSKABER HAR —
under henvisning til Traktaten om Oprettelse af Det Europæiske
Økonomiske Fællesskab, særlig artikel 43,
under henvisning til forslag fra Kommissionen (1),
under henvisning til udtalelse fra Europa-Parlamentet (2),
under henvisning til udtalelse fra Det Økonomiske og Sociale
Udvalg (3), og
ud fra følgende betragtninger:
Enhovede dyr er som levende dyr medtaget på listen over de varer, der
er anført i bilag II til Traktaten;
med henblik på at sikre en rationel udvikling i produktionen af enho-
vede dyr og dermed forøge produktiviteten inden for denne sektor bør
der på fællesskabsplan fastsættes regler for enhovede dyrs bevægelsermellem medlemsstaterne;
opdrætning af enhovede dyr, især heste, indgår generelt i landbrugsak-
tiviteterne; den udgør en indkomstkilde for en del aflandbrugsbefolkningen;
forskellene mellem medlemsstaternes dyresundhedsmæssige bestem-
melser bør fjernes for at fremme samhandelen med enhovede dyrinden for Fællesskabet;
med henblikpå en harmoniskudvik ling af samhandelen inden for
Fællesskabet bør der fastlægges en fællesskabsordning for indførselfra tredjelande;
der bør, for så vidt angår registrerede enhovede dyr, der er forsynet
med et identifikationsdokument, ligeledes opstilles regler med betin-gelser for deres bevægelser på nationalt område;
for at indgå i samhandelen skal enhovede dyr opfylde visse dyresund-
hedsmæssige krav med det formål at undgå udbredelse af smitsommesygdomme; det vil i særdeleshed være hensigtsmæssigt at åbnemulighed for områdevis fastsættelse af restriktive foranstaltninger;
af samme grund bør der ligeledes fastsættes betingelser for transporten;for at sikre overholdelsen af sådanne krav bør der fastsættes bestem-
melser om et sundhedscertifikat, som udstedes af en embedsdyrlæge,og som ledsager dyrene til bestemmelsesstedet;
tilrettelæggelsen og opfølgningen af den kontrol, der skal gennemføres
af bestemmelsesmedlemsstaten, samt de beskyttelsesforanstaltninger,der skal iværksættes, skal fastsættes inden for rammerne af deforskrifter, der skal vedtages for veterinærkontrollen i samhandelenmed levende dyr inden for Fællesskabet med henblik på gennem-førelsen af det indre marked;
der bør åbnes mulighed for, at Kommissionen kan foretage kontrol;
denne kontrol skal gennemføres i samarbejde med de kompetente nati-onale myndigheder,1990L0426 — DA — 23.02.2002 — 007.001 — 2
(1) EFT nr. C 327 af 30. 12. 1989, s. 61.
(2) EFT nr. C 149 af 18. 6. 1990.
(3) EFT nr. C 62 af 12. 3. 1990, s. 46.
▼B
fastlæggelse af en fællesskabsordning for indførsel fra tredjelande
forudsætter opstilling af en liste over de tredjelande eller dele af tredje-lande, fra hvilke enhovede dyr kan indføres;
valget af disse lande bør ske ud fra generelle kriterier, såsom dyrenes
sundhedstilstand, veterinærtjenestens organisering og beføjelser og dengældende veterinærlovgivning;
endvidere er det vigtigt ikke at tillade indførsel af enhovede dyr fra
lande, som ikke er eller i et for kort tidsrum har været fri for smit-
somme dyresygdomme, der udgør en fare for bestanden inden forFællesskabet; disse betragtninger gælder ligeledes indførsel fra tredje-lande, i hvilke der gennemføres vaccinationer mod sådanne sygdomme;
de almindelige betingelser for indførsel fra tredjelande bør suppleres
med særlige betingelser, der fastsættes ud fra den sundhedsmæssige
situation i de enkelte tredjelande; den tekniske karakter og mangfoldig-heden af de kriterier, der skal danne grundlag for disse særligebetingelser, kræver for deres fastsættelse en smidig og hurtig fælles-skabsprocedure, under hvilken Kommissionen og medlemsstaterne haret snævert samarbejde;
fremlæggelse ved indførsel af enhovede dyr af et certifikat, der er i
overensstemmelse med en fælles model, er et effektivt middel til atefterprøve gennemførelsen af fællesskabsforskrifterne; disse forskrifterkan omfatte særlige bestemmelser, der kan variere alt efter de enkelttredjelande, og modellerne til certifikatet bør udarbejdes herefter;
Fællesskabets veterinærsagkyndige bør efterprøve, herunder også i tred-
jelande, om kravene i dette direktiv overholdes;
kontrollen ved indførsel skal omfatte de enhovede dyrs oprindelse og
sundhedstilstand;
de generelle regler for den kontrol, der skal finde sted ved indførsel,
skal fastsættes inde for en samlet ramme;
medlemsstaterne må have mulighed for omgående at forbyde indførsel
fra et tredjeland, når denne kan frembyde fare for dyrs sundhed; i såfald er det vigtigt, med forbehold af eventuelle ændringer i listen over
lande, der har tilladelse til at udføre til Fællesskabet, omgående at sikre
koordineringen af medlemsstaternes holdning over for dette tredjeland;
bestemmelserne i denne forordning bør tages op til fornyet behandling
som led i gennemførelsen af det indre marked;
der bør fastsættes en procedure, der sikrer et snævert og effektivt
samarbejde mellem medlemsstaterne og Kommissionen i Den Stående
Veterinærkomité —
UDSTEDT FØLGENDE DIREKTIV:
KAPITEL I
Almindelige bestemmelser
Artikel 1
I dette direktiv fastlægges de dyresundhedsmæssige betingelser for
enhovede dyrs bevægelser mellem medlemsstaterne og indførsel afenhovede dyr fra tredjelande.
Artikel 2
I dette direktiv forstås ved:
a) bedrift: en landbrugs- eller træningsvirksomhed, en stald eller gene-
relt ethvert lokale eller anlæg, hvor enhovede dyr på sædvanligmåde holdes eller opdrættes, uanset deres anvendelse
b) enhovede dyr: husdyr eller vildtlevende dyr af hestearten — her-
under også zebraer — eller æselarter eller dyr, der fremkommerved krydsning heraf1990L0426 — DA — 23.02.2002 — 007.001 — 3
▼B
c) registrerede enhovede dyr: alle registrerede enhovede dyr, som defi-
neret i direktiv 90/427/EØF (1), der er identificeret ved hjælp af et
identifikationsdokument udstedt af den avlsorganisation eller enhver
anden kompetent myndighed i dyrets oprindelsesland, som fører
stambogen eller raceregistret for det pågældende enhovede dyr, ellerenhver sammenslutning eller international organisation, der admini-strerer konkurrence- eller væddeløbsheste
d) slagtedyr: enhovede dyr, der enten direkte eller via et godkendt
marked eller opsamlingssted skal føres til slagteriet for at slagtes dér
e) enhovede dyr til opdræt og som brugsdyr: andre enhovede dyr end
dem, der er nævnt under litra c) og d)
f) medlemsstat eller tredjeland, der er frit for hestepest: enhver
medlemsstat eller ethvert tredjeland, på hvis område der ikke ernoget klinisk, serologisk (hos dyr, der ikke er vaccineret) eller
epidemiologisk bevis på, at der har kunnet konstateres hestepest i
løbet af de sidste to år, og hvor der ikke er blevet vaccineret imoddenne sygdom i løbet af de sidste tolv måneder
g) obligatoriskanmeldepligtige sygdomme: de i bilag A nævnte
sygdomme
h) embedsdyrlæge: dyrlæge, der er udpeget af den kompetente central-
myndighed i en medlemsstat eller et tredjeland
i) midlertidig indførsel: status for et registreret enhovet dyr fra et tred-
jeland, indført på Fællesskabets område for et tidsrum på mindreend 90 dage, som skal fastsættes af Kommissionen efter frem-gangsmåden i artikel 24 på grundlag af de dyresundhedsmæssigeforhold i oprindelseslandet.
KAPITEL II
Regler for enhovede dyrs bevægelser
Artikel 3
En medlemsstat giver kun tilladelse til bevægelser på sit område for så
vidt angår registrerede enhovede dyr og sender kun enhovede dyr til deøvrige medlemsstaters områder, hvis de opfylder betingelserne somfastsat i artikel 4 og 5.
De kompetente myndigheder i bestemmelsesmedlemsstaterne kan dog
indrømme generelle eller begrænsede undtagelser for bevægelser for
så vidt angår enhovede dyr:
— der til sportsmæssige eller rekreative formål rides eller føres på veje
i nærheden af Fællesskabets indre grænser
— der deltager i kulturelle eller lignende foranstaltninger eller i aktivi-
teter, der tilrettelægges af hertil beføjede lokale organisationer i
nærheden af Fællesskabets indre grænser
— der udelukkende skal græsse eller arbejde midlertidigt i nærheden
af Fællesskabets indre grænser.
De medlemsstater, som udsteder en sådan tilladelse, giver Kommission-
en meddelelse om indholdet af de indrømmede undtagelser.
Artikel 4
1. De enhovede dyr må ikke udvise noget klinisk tegn på sygdom
ved kontrollen. Kontrollen skal for enhovede dyr finde sted inden forde sidste 48 timer før indladning. I forbindelse med registrerede enho-
vede dyr stilles der dog, med forbehold af artikel 6, kun krav om en
sådan kontrol, hvis der er tale om handel inden for Fællesskabet.
2. Med forbehold af kravene i stk. 5 for obligatorisk anmeldepligtige
sygdomme skal embedsdyrlægen ved kontrollen sikre sig, at intetforhold — herunder også på grundlag af erklæringer fra ejeren elleropdrætteren — viser, at de enhovede dyr har været i kontakt med andre1990L0426 — DA — 23.02.2002 — 007.001 — 4
(1) Se side 55 i denne Tidende.
▼B
enhovede dyr, der er angrebet af en infektion eller en smitsom sygdom,
inden for de sidste 15 dage før kontrollen.
3. Dyrene må ikke skulle udskilles i forbindelse med et nationalt
program for udryddelse af en smitsom sygdom.
4. Dyrene skal identificeres, hvilket skal ske:
i) for registrerede heste, ved et identifikationsdokument som
omhandlet i direktiv 90/427/EØF, idet dette dokument navnlig skalgodtgøre, at stk. 5 og 6, og artikel 5 er overholdt. Gyldigheden afdokumentet skal suspenderes af embedsdyrlægen i den periode,hvor der gælder et forbud som omhandlet i stk. 5 eller artikel 5.Det skal efter slagtning af det registrerede dyr tilbageleveres til
den myndighed, der har udstedt det. Gennemførelsesbestemmelserne
til dette nummer fastsættes af Kommissionen efter fremgangsmådeni artikel 24
ii) for enhovede dyr til opdræt og som brugsdyr, efter en identifikati-
onsmetode, der skal fastlægges af Kommissionen efter
fremgangsmåden i artikel 24.
Indtil iværksættelsen af denne metode kan de officielt godkendte
nationale identifikationsmetoder fortsat anvendes, forudsat at demeddeles Kommissionen og de øvrige medlemsstater inden for en
frist på tre måneder fra datoen for vedtagelsen af dette direktiv.
5. Ud over kravet i artikel 5 må dyrene ikke stamme fra en bedrift,
der er omfattet af et af følgende forbud:
a) hvis alle dyr af arter, der er modtagelige for den pågældende
sygdom, og som er til stede på bedriften, ikke er blevet slagtet ellerslået ned, skal det forbud, der er indført for bedriften, hvorfra dyretkommer, i det mindste gælde:
— med hensyn til dyr, der mistænkes for at være angrebet af
dourine, i seks måneder regnet fra datoen for den seneste kontakt
eller mulighed for kontakt med et sygt enhovet dyr. Hvis detdrejer sig om en hingst, skal forbuddet dog gælde, indtil dyretkastreres
— med hensyn til snive og equin encephalomyelitis, i seks måneder
regnet fra den dato, på hvilken de angrebne dyr er blevet udskilt
— med hensyn til infektiøs anæmi, i den periode, der — fra datoen
for udskillelsen af de angrebne dyr — er nødvendig for at deresterende dyr har reageret negativt på to Coggings-tests fore-taget med tre måneders mellemrum
— i seks måneder regnet fra det seneste tilfælde af vesikulær
stomatitis
— i én måned regnet fra det senest konstaterede tilfælde af rabies
— i 15 dage regnet fra det senest konstaterede tilfælde af miltbrand
b) hvis alle dyr af arter, der er modtagelige for den pågældende
sygdom, og som er til stede på bedriften, er blevet slagtet ellerslået ned og lokalerne desinficeret, gælder forbuddet i tredive dageregnet fra den dato, på hvilken dyrene er blevet fjernet og lokalernedesinficeret, undtagen med hensyn til miltbrand, hvor forbuddetgælder i 15 dage.
De kompetente myndigheder kan fravige disse forbudsbestemmelser for
så vidt angår hippodromer og væddeløbsbaner og underretter Kommis-sionen om karakteren af de indrømmede fravigelser.
6. Såfremt en medlemsstat opstiller eller har opstillet et fakultativt
eller obligatorisk program til bekæmpelse af en sygdom, som kanramme enhovede dyr, kan den forelægge Kommissionen dette programinden seks måneder regnet fra meddelelsen af dette direktiv med oplys-
ning, navnlig om følgende:
— situationen med hensyn til den pågældende sygdom på dens område
— programmets berettigelse under hensyn til sygdommens alvor og
programmets cost/benefit-fordele
— det geografiske område, hvor programmet skal anvendes1990L0426 — DA — 23.02.2002 — 007.001 — 5
▼B
— de forskellige former for status gældende for virksomhederne, de
normer, der skal opfyldes for hver enkelt art, og undersøgelsespro-cedurerne
— procedurerne for kontrollen med programmet— konsekvenserne af, at en bedrift mister sin status, uanset årsagen
— de foranstaltninger, der skal træffes, såfremt der ved kontrol,
gennemført i henhold til programmet, konstateres positive resultater
— den ikke-diskriminerende karakter af forholdet mellem handelen på
den pågældende medlemsstats område og handelen inden forFællesskabet.
Kommissionen gennemgår de programmer, medlemsstaterne fore-
lægger. I givet fald godkender den dem under overholdelse afkriterierne i første afsnit og efter fremgangsmåden i artikel 24. Eftersamme fremgangsmåde kan de generelle eller begrænsede supplerende
garantier, som kan kræves i samhandelen mellem medlemsstaterne,
præciseres. Disse garantier må ikke være mere omfattende end dem,som medlemsstaten gennemfører på nationalt plan.
De af medlemsstaterne forelagte programmer kan ændres eller
suppleres efter fremgangsmåden i artikel 25. Efter samme frem-gangsmåde kan der godkendes ændringer af eller tillæg til et tidligeregodkendt program eller garantier fastsat i henhold til andet afsnit.
Artikel 5
1. Medlemsstater, der ikke er fri for hestepest i henhold til artikel 2,
litra f), kan kun sende enhovede dyr fra den del af deres område, derbetragtes som angrebet i henhold til stk. 2 i nærværende artikel, hvis deopfylder betingelserne som fastsat i stk. 3 i nærværende artikel.
2. a) En del af en medlemsstats område betragtes som angrebet af
hestepest, hvis:
— der er et klinisk, serologisk (hos dyr, der ikke er vaccineret)
og/eller epidemiologisk bevis på, at der har kunnet konsta-teres hestepest i løbet af de sidste to år, eller
— der er blevet vaccineret mod hestepest i løbet af de sidste tolv
måneder.
b) Den del af området, der betragtes som angrebet af hestepest, skal
bestå af mindst:
— et iagttagelsesdistrikt med en radius på mindst 100 km
omkring ethvert sted med udbrud af sygdommen
— et overvågningsområde af en bredde på mindst 50 km
omkring iagttagelsesdistriktet, hvor der ikke er blevet vacci-
neret i løbet af de sidste tolv måneder.
c) Reglerne for kontrol med bekæmpelsesforanstaltningerne i de i
litra a) og b) nævnte områder og distrikter samt undtagelsesbe-stemmelser i forbindelse hermed er nærmere fastlagt i direktiv92/35/EØF (
1).
d) Alle vaccinerede enhovede dyr i iagttagelsesdistriktet skal regi-
streres og identificeres i overensstemmelse med artikel 6, stk. 1,i direktiv 92/35/EØF.
Det skal af identifikationsdokumentet og/eller sundhedscertifi-
katet klart fremgå, at der er foretaget vaccination.
3. En medlemsstat må fra det i stk. 2, litra b), omhandlede iagttagel-
sesdistrikt og overvågningsområde kun sende enhovede dyr, deropfylder følgende krav:
a) de må kun sendes i visse perioder af året, afhængig af de smittebæ-
rende insekters aktivitet; perioderne fastsættes efterfremgangsmåden i artikel 251990L0426 — DA — 23.02.2002 — 007.001 — 6
(1) EFT nr. L 157 af 10. 6. 1992, s.19.▼M4
▼M4
b) de må ikke udvise noget klinisk tegn på hestepest den dag,
kontrollen som omhandlet i artikel 4, stk. 1, finder sted
c) — hvis de ikke er blevet vaccineret mod hestepest, skal de have
reageret negativt på en komplementbindingstest for hestepestsom beskrevet i bilag D to gange med et interval på mellemenogtyve og tredive dage, idet test nr. 2 skal være foretaget iløbet af de sidste ti dage inden afsendelsen
— hvis de er blevet vaccineret, må det ikke være sket inden for de
seneste to måneder, og der må heller ikke være foretaget den i
bilag D beskrevne komplementbindingstest med de nævnte inter-
valler, uden at der har været konstateret en stigning i mængdenaf antistoffer. Kommissionen kan efter fremgangsmåden i artikel24 og efter udtalelse fra Den Videnskabelige Veterinærkomitégodkende andre kontrolmetoder
d) de skal have været tilbageholdt på en karantænestation i en periode
på mindst 40 dage inden afsendelsen
e) de skal have været beskyttet mod smittebærende insekter i karantæ-
neperioden og under transporten fra karantænestationen til
afsendelsesstedet.
Artikel 6
De medlemsstater, der iværksætter en alternativ kontrolordning, som
giver garantier svarende til dem, der i artikel 4, stk. 5, foreskrives forenhovede dyrs og registrerede enhovede dyrs bevægelser inden forderes område, navnlig på grundlag af identifikationsdokumentet, kan
som en gensidig foranstaltning indrømme hinanden en fravigelse af
artikel 4, stk. 1, andet punktum, og artikel 8, stk. 1, andet led.
De underretter Kommissionen herom.
Artikel 7
1. De enhovede dyr skal sendes hurtigst muligt fra den bedrift, hvor
de opholder sig, enten direkte eller via et godkendt marked elleropsamlingssted, som defineret i artikel 3, stk. 6, i direktiv 64/432/EØFtil bestemmelsesstedet ved hjælp af transportmidler og transportkasser,
der regelmæssigt rengøres og desinficeres med et desinficerende middel
med en hyppighed, der skal fastsættes af afsendermedlemsstaten.Transportkøretøjerne skal være indrettet på en sådan måde, at dyrenesfæces, strøelse eller foder ikke kan sive eller falde ud af køretøjet undertransporten. Transporten skal foregå på en sådan måde, at dyrenessundhedstilstand sikres effektivt, og at der tages hensyn til deres
velfærd.
2. Bestemmelsesmedlemsstaten kan generelt eller begrænset
indrømme en fravigelse af visse af kravene i artikel 4, stk. 5, forudsatat dyret er forsynet med et særligt mærke, der angiver, at det er bestemttil slagtning, og at det af sundhedscertifikatet fremgår, at der erindrømmet en sådan fravigelse.
Er der indrømmet en sådan fravigelse skal slagtedyr sendes direkte til
det udpegede slagteri og slagtes der inden for en frist på højst fem dage
fra ankomsten til slagteriet.
3. Embedsdyrlægen skal i et register indføre identifikationsnummer
eller identifikationsdokumentets nummer for det enhovede dyr, der erslagtet, og på anmodning af den kompetente myndighed på afsendelses-stedet til denne fremsende en attest, hvorved det bekræftes, at dyret er
slagtet.
Artikel 8
1. Medlemsstaterne drager omsorg for:
— at registrerede enhovede dyr, hvis de forlader bedriften, ledsages af
det i artikel 4, stk. 4, omhandlede identifikationsdokument og, hvisde er bestemt til handel inden for Fællesskabet, af dette identifika-tionsdokument suppleret med den i bilag B omhandlede attest1990L0426 — DA — 23.02.2002 — 007.001 — 7
▼B
▼B
— at enhovede dyr til opdræt eller som brugs- eller slagtedyr under
transporten skal være ledsaget af et dyresundhedscertifikat, der er ioverensstemmelse med bilag C.
Certifikatet, eller, i tilfælde af et identifikationsdokument, bladet med
de sundhedsmæssige oplysninger, skal med forbehold af artikel 6udstedes inden for de sidste 48 timer eller senest sidste arbejdsdag førindladningen, på det eller de officielle sprog i afsendelsesmedlems-staten og bestemmelsesmedlemsstaten. Certifikatet er gyldigt i ti dage.
Det består af et enkelt blad.
2. Indførsel af andre enhovede dyr end registrerede enhovede dyr
kan finde sted med et enkelt sundhedscertifikat pr. sending i stedet formed det i stk. 1, andet led, omhandlede individuelle certifikat.
Artikel 9
Bestemmelserne i Rådets direktiv 90/425/EØF af den 26. juni om vete-
rinærkontrol i samhandelen med visse levende dyr og produkter inden
for Fællesskabet med henblik på gennemførelse af det indre marked (
1)
finder især anvendelse med hensyn til kontrol på oprindelsesstedet,tilrettelæggelse og opfølgning af den kontrol, som bestemmelsesmed-lemsstaten skal foretage, samt med hensyn til de
beskyttelsesforanstaltninger, der skal iværksættes.
Artikel 10
Kommissionens veterinærsagkyndige kan, i det omfang det er nødven-
digt for en ensartet anvendelse af dette direktiv og i samarbejde med dekompetente nationale myndigheder, gennemføre kontrol på stedet.Kommissionen underretter medlemsstaterne om resultatet af den
gennemførte kontrol.
Den medlemsstat, på hvis område der gennemføres en sådan kontrol,
yder de sagkyndige al den hjælp, der er nødvendig for udførelsen afderes opgave.
Gennemførelsesbestemmelserne til denne artikel fastsættes efter frem-
gangsmåden i artikel 24.
KAPITEL III
Regler for indførsel fra tredjelande
Artikel 11
1. Enhovede dyr, der indføres i Fællesskabet, skal opfylde betingel-
serne som anført i artikel 12 til 16.
2. Indtil ikrafttrædelsesdatoen for de afgørelser, der i så henseende
træffes i henhold til artikel 12 til 16, anvender medlemsstaterne, for så
vidt angår indførsel af enhovede dyr fra tredjelande, betingelser, dermindst er lige så omfattende som dem, der følger af anvendelsen afkapitel II.
Artikel 12
1. For at kunne indføres skal enhovede dyr komme fra tredjelande
eller dele af tredjelande, der er opført på en liste, som skal anføres i
en særlig kolonne, der skal indsættes i den i overensstemmelse med
artikel 3 i direktiv 72/462/EØF opstillede liste.
2. De i artikel 3 i direktiv 72/462/EØF fastsatte fremgangsmåder og
kriterier for opstilling, ændring og offentliggørelse af listen over tredje-lande eller dele af tredjelande, finder anvendelse på den liste, dergælder for indførsel af enhovede dyr.1990L0426 — DA — 23.02.2002 — 007.001 — 8
(1) EFT nr. L 224 af 18. 8. 1990, s. 29.▼M1
▼B
▼B
Artikel 13
1. Enhovede dyr skal komme fra tredjelande, som:
a) er fri for hestepest
b) i to år har været fri for venezuelanskencephalomyelitis (VEE)
c) i seks måneder har været fri for dourine og snive.
2. Kommissionen kan efter fremgangsmåden i artikel 24:
a) træffe afgørelse om, at stk. 1 kun finder anvendelse på en del af et
tredjelands område.
Fastsættes kravene angående hestepest områdevis, skal de i artikel
5, stk. 2 og 3, fastsatte foranstaltninger overholdes som et minimum;
b) kræve yderligere garantier for sygdomme, der i Fællesskabet anses
for eksotiske.
Artikel 14
Enhovede dyr skal inden dagen for deres indladning med henblik på
forsendelse til bestemmelsesmedlemsstaten uafbrudt have opholdt sigpå et tredjelands område eller en del af et tredjelands område eller,såfremt området er opdelt, på den del af området, der er fastsat i
henhold til artikel 13, stk. 2, litra a), i en periode, der fastsættes i
forbindelse med vedtagelsen af de afgørelser, der skal træffes i henholdtil artikel 15.
De skal komme fra en bedrift, som er under dyrlægekontrol.
Artikel 15
Indførsel af enhovede dyr fra et tredjelands område eller en del af et
tredjelands område, fastsat i henhold til artikel 13, stk. 2, litra a), derer opført på den liste, som er opstillet i henhold til artikel 12, stk. 1,
er kun tilladt, hvis de, foruden kravene i artikel 13:
a) opfylder de sundhedsmæssige betingelser, der efter fremgangsmåden
i artikel 24 er vedtaget for indførsel af enhovede dyr fra det pågæl-dende land, alt efter den pågældende art og kategorier af enhovededyr.
Ved fastsættelsen af de dyresundhedsmæssige betingelser i henhold
til første afsnit anvendes som referencebasis de normer, der erfastsat i artikel 4 og 5; og
b) når der er tale om tredjelande, der ikke i mindst seks måneder har
været fri for vesikulær stomatitis eller viralarthritis, men med
hensyn til de enhovede dyr opfylder følgende krav:
i) de enhovede dyr skal komme fra en bedrift, der i mindst seks
måneder har været fri for vesikulær stomatitis, og inden deres
afsendelse have reageret negativt på en serologisktest
ii) for så vidt angår viralarthritis skal de enhovede dyr af hankøn,
med forbehold af artikel 19, nr. ii), have reageret negativt på enserologisktest eller et isolationsvirus eller enhver anden test,som er godkendt efter fremgangsmåden i artikel 24, og somgaranterer, at dyret ikke er smittet med denne sygdom.
Kommissionen kan efter fremgangsmåden i artikel 24 og efter
udtalelse fra Den Videnskabelige Veterinærkomité begrænse dekategorier af enhovede dyr af hankøn, for hvilke dette krav skal
gælde.
Artikel 16
1. Enhovede dyr skal identificeres i overensstemmelse med artikel 4,
stk. 4, og ledsages af et certifikat, der er udfærdiget af en embedsdyr-læge i eksporttredjelandet. Certifikatet skal:
a) være udstedt på dagen for dyrenes indladning med henblikpå
forsendelse til bestemmelsesmedlemsstaten, eller, når det drejer sigom registrerede heste, på sidste arbejdsdag inden indladning1990L0426 — DA — 23.02.2002 — 007.001 — 9
▼B
b) være affattet på mindst et af bestemmelsesmedlemsstatens officielle
sprog og mindst et af de officielle sprog i den medlemsstat, hvorimportkontrollen gennemføres
c) ledsage dyrene i originaleksemplaret
d) bekræfte, at dyrene opfylder betingelserne i dette direktiv og de til
direktivets gennemførelse fastsatte betingelser for indførsel fra tred-jelandet
e) bestå af et enkelt blad
f) være bestemt for en enkelt modtager eller, for slagtedyrs vedkom-
mende, for en behørigt mærket og identificeret sending.
Medlemsstaterne underretter Kommissionen, hvis de gør brug af
denne mulighed.
2. Certifikatet skal udfærdiges på en formular, som er i overensstem-
melse med en model udarbejdet efter fremgangsmåden i artikel 24.
Artikel 17
Medlemsstaternes og Kommissionens veterinære sagkyndige efterpr-
øver ved kontrol på stedet, om bestemmelserne i dette direktiv, særligbestemmelserne i artikel 12, stk. 2, faktisk overholdes.
Hvis en kontrol foretaget i medfør af denne artikel afslører alvorlige
mangler på en bedrift, underretter Kommissionen straks medlemssta-terne herom og vedtager omgående en afgørelse, der suspendererautorisationen midlertidigt. En endelig afgørelse træffes efter frem-gangsmåden i artikel 25.
Medlemsstaternes sagkyndige, der har til opgave at foretage denne
kontrol, udpeges af Kommissionen på forslag af medlemsstaterne.
Denne kontrol foretages på Fællesskabets vegne, og dette afholder de
dertil svarende omkostninger.
Hyppigheden af og de nærmere regler for denne kontrol fastsættes efter
fremgangsmåden i artikel 24.
Artikel 18
1. Slagtedyr skal straks efter ankomsten til bestemmelsesmedlems-
staten føres til et slagteri, enten direkte eller via et marked eller et
opsamlingssted, og i overensstemmelse med de dyresundhedsmæssigekrav slagtes inden for en frist, der fastsættes i forbindelse med vedta-gelsen af de afgørelser, der skal træffes i henhold til artikel 15.
2. Med forbehold af de særlige betingelser, der eventuelt fastsættes
efter fremgangsmåden i artikel 24, kan den kompetente myndighed i
bestemmelsesmedlemsstaten af dyresundhedsmæssige grunde udpegedet slagteri, hvortil disse enhovede dyr skal sendes.
Artikel 19
Kommissionen kan efter fremgangsmåden i artikel 24:
i) begrænse indførslen fra et tredjeland eller en del af et tredjeland til
særlige arter eller kategorier af enhovede dyr
ii) uanset artikel 15 fastsætte de særlige betingelser, hvorpå midler-
tidig indførsel til Fællesskabets område eller genindførsel til
nævnte område efter midlertidig udførsel af registrerede enhovededyr eller enhovede dyr, der skal anvendes til særlige formål, kanfinde sted
iii) fastsætte betingelserne for, hvorledes en midlertidig indførsel kan
ændres til endelig indførsel.1990L0426 — DA — 23.02.2002 — 007.001 — 10
▼M2
KAPITEL IV
Afsluttende bestemmelser
Artikel 22
Bestemmelserne i dette direktiv, herunder navnlig bestemmelserne i
artikel 4, stk. 1, andet punktum, samt artikel 6, 8 og 21, skal tages optil fornyet behandling inden den 1. januar 1993 som led i forslagenemed henblik på gennemførelsen af det indre marked, om hvilke Rådettræffer afgørelse med kvalificeret flertal.
Artikel 23
Bilagene til dette direktiv ændres af Kommissionen efter frem-
gangsmåden i artikel 25.
Artikel 24
1. Når der henvises til fremgangsmåden i denne artikel indbringer
formanden omgående sagen for Den Stående Veterinærkomité, nedsat
ved afgørelse 68/361/EØF (
1), i det følgende benævnt »komitéen«,
enten på eget initiativ eller efter anmodning fra en medlemsstats repræ-sentant.
2. Kommissionens repræsentant forelægger komitéen et udkast til de
foranstaltninger, der skal træffes. Komitéen afgiver udtalelse om detteudkast inden for en frist, som formanden fastsætter under hensyn til,hvor meget sagen haster. Udtalelsen vedtages med det flertal, som er
fastsat i Traktatens artikel 148, stk. 2, for vedtagelse af de afgørelser,
som Rådet skal træffe på forslag af Kommissionen. Under afstem-ningen i komitéen tildeles de stemmer, der afgives af repræsentanternefor medlemsstaterne, den vægt, der er fastsat i nævnte artikel.Formanden deltager ikke i afstemningen.
3. Kommissionen vedtager de påtænkte foranstaltninger, når de er i
overensstemmelse med komitéens udtalelse.
4. Når de påtænkte foranstaltninger ikke er i overensstemmelse med
komitéens udtalelse, eller når der ikke er afgivet nogen udtalelse, fore-
lægger Kommissionen omgående Rådet et forslag til de
foranstaltninger, der skal træffes. Rådet træffer afgørelse med kvalifi-ceret flertal.
Såfremt Rådet ikke har truffet nogen afgørelse inden udløbet af en frist
på tre måneder fra den dato, på hvilken det har fået sagen forelagt,vedtages de foreslåede foranstaltninger af Kommissionen, medmindreRådet med simpelt flertal har udtalt sig imod de pågældende foranstalt-ninger.
Artikel 25
1. Når der henvises til fremgangsmåden i denne artikel, indbringer
formanden omgående sagen for komitéen enten på eget initiativ ellerefter anmodning fra en medlemsstats repræsentant.
2. Kommissionens repræsentant forelægger komitéen et udkast til de
foranstaltninger, der skal træffes. Komitéen afgiver udtalelse om detteudkast inden for en frist på to dage. Udtalelsen vedtages med det
flertal, som er fastsat i Traktatens artikel 148, stk. 2, for vedtagelse af
de afgørelser, som Rådet skal træffe på forslag af Kommissionen.Under afstemningen i komitéen tildeles de stemmer, der afgives afrepræsentanterne for medlemsstaterne, den vægt, der er fastsat i nævnteartikel. Formanden deltager ikke i afstemningen.
3. Kommissionen vedtager de påtænkte foranstaltninger, når de er i
overensstemmelse med komitéens udtalelse.1990L0426 — DA — 23.02.2002 — 007.001 — 11
(1) EFT nr. L 255 af 18. 10. 1968, s. 23.▼B
▼B
4. Når de påtænkte foranstaltninger ikke er i overensstemmelse med
komitéens udtalelse, eller når der ikke er afgivet nogen udtalelse, fore-lægger Kommissionen omgående Rådet et forslag til de
foranstaltninger, der skal træffes. Rådet træffer afgørelse med kvalifi-
ceret flertal.
Såfremt Rådet ikke har truffet nogen afgørelse inden udløbet af en frist
på femten dage fra den dato, på hvilken det har fået sagen forelagt,vedtages de foreslåede foranstaltninger af Kommissionen, medmindreRådet med simpelt flertal har udtalt sig imod de pågældende foranstalt-
ninger.
Artikel 26
Bestemmelserne i artikel 34 i direktiv 72/462/EØF finder anvendelse
på kravene som fastsat i kapitel III i nærværende direktiv.
Artikel 27
Medlemsstaterne sætter de nødvendige love og administrative bestem-
melser i kraft for at efterkomme dette direktiv senest den 1. januar1992. De underretter Kommissionen derom.
Artikel 28
Dette direktiv er rettet til medlemsstaterne.1990L0426 — DA — 23.02.2002 — 007.001 — 12
▼B
BILAG A
ANMELDEPLIGTIGE SYGDOMME
Følgende sygdomme er underkastet obligatorisk anmeldepligt:
— Dourine
— Snive— Equin encephalomyelitis (i alle former, herunder også VEE)— Infektiøs anæmi— Rabies
— Miltbrand
— Hestepest— Vesikulær stomatitis.1990L0426 — DA — 23.02.2002 — 007.001 — 13
▼M3
BILAG B
►(1)M51990L0426 — DA — 23.02.2002 — 007.001 — 14
▼M3
BILAG C
1990L0426 — DA — 23.02.2002 — 007.001 — 15
▼M3
►(1)A1
►(2)M51990L0426 — DA — 23.02.2002 — 007.001 — 16
▼M6
BILAG D
AFRIKANSK HESTEPEST
DIAGNOSE
Reagenser til de ELISA'er, der er beskrevet nedenfor, fås hos EF-referencelabo-
ratoriet eller OIE-referencelaboratorierne for afrikansk hestepest.
1. KOMPETITIV ELISA TIL PÅVISNING AF ANTISTOFFER MOD AFRI-
KANSK HESTEPESTVIRUS (AHSV) (FORESKREVET TEST)
Kompetitiv ELISA anvendes til påvisning af specifikt AHSV-antistof i sera
fra alle arter enhovede dyr. Det bredspektrede, polyklonale immunanti-
AHSV-marsvineserum (i det følgende betegnet »marsvineantiserum«) er
serumgruppespecifikt og kan påvise alle kendte serotyper af AHS-virus.
Testprincippet er at afbryde reaktionen mellem AHSV-antigen og et marsvi-
neantiserum ved hjælp af en testserumprøve. AHSV-antistofferne i
testserumprøven vil konkurrere med antistofferne i marsvineantiserummet,
hvilket medfører, at farven bliver mindre kraftig end forventet (efter tilsæt-
ning af enzymmærket antimarsvineantistof og substrat). Der kan testes sera i
en enkelt fortynding på 1:5 (spottestmetode), eller der kan titreres (serumti-
treringsmetode) til fortyndingsendepunkterne. Hæmningsværdier på over 50 %
kan betragtes som positive.
Den testprotokol, der er beskrevet i det efterfølgende, anvendes på Regional
Reference Laboratory for African horse sickness i Pirbright, Det Forenede
Kongerige.
1.1.Testprocedure
1.1.1.Fremstilling af plader
1.1.1.1. ELISA-plader påføres AHSV-antigen, der er udvundet af infice-
rede cellekulturer og fortyndet med carbonat-bicarbonatbuffer,
pH-værdi 9,6. ELISA-pladerne inkuberes natten over ved 4 ºC.
1.1.1.2. Pladerne skylles 3 gange ved, at hullerne overhældes med
fosfatbufferet saltopløsning (PBS), pH-værdi 7,2-7,4, tømmes
og tørres med absorberende papir.
1.1.2.Kontrolhuller
1.1.2.1. De positive kontrolsera titreres i en tofolds fortyndingsrække
mellem 1:5 og 1:640 tværs over kolonne 1 i blokerende buffer
(PBS indeholdende 0,05 % (v/v) Tween-20, 5,0 % (w/v) skum-
metmælkspulver (Cadbury's MarvelTM) og 1 % (v/v) serum fra
voksent kvæg) til en slutmængde på 50 µl/hul.
1.1.2.2. Der tilsættes 50 µl negativt kontrolserum i en fortynding på 1:5
(10µl serum + 40 µl blokerende buffer) til hul A og B i
kolonne 2.
1.1.2.3. Der tilsættes 100 µl/hul blokerende buffer til hul C og D i
kolonne 2 (BLANK).
1.1.2.4. Der tilsættes 50 µl blokerende buffer til hul E, F, G og H i
kolonne 2 (marsvinekontrol).
1.1.3.Spottestmetode
1.1.3.1. Der tilsættes en 1:5-fortynding af hvert testserum i blokerende
buffer til huller til dobbeltbestemmelse i kolonne 3 til 12 (10 µl
sera + 40 µl blokerende buffer).
eller
1.1.4.Serumtitreringsmetode
1.1.4.1. Der tilberedes en tofolds fortyndingsrække af hver prøve
(mellem 1:5 og 1:640) i blokerende buffer over otte huller i
hver kolonne (3 til 12).
derefter
1.1.5. Der tilsættes 50 µl marsvineantisera, som forinden er fortyndet
med blokerende buffer, til alle huller bortset fra BLANK-
hullerne i ELISA-pladen (alle huller indeholder nu en slut-
mængde på 100 µl).1990L0426 — DA — 23.02.2002 — 007.001 — 17
▼M6
1.1.5.1. Der inkuberes i 1 time ved 37 ºC på en orbitalryster.
1.1.5.2. Pladerne skylles tre gange og tørres som før.
1.1.5.3. Der tilsættes 50 µl kanin-antimarsvin peberrodsperoxidase-
konjugat (HRP), som forinden er fortyndet med blokerende
buffer, til hvert hul.
1.1.5.4. Der inkuberes i 1 time ved 37 ºC på en orbitalryster.
1.1.5.5. Pladerne skylles tre gange og tørres som før.
1.1.6.Kromogen
Kromogen-OPD-opløsningen (OPD = ortho-phenyldiamin)
tilberedes efter fabrikantens anvisninger (0,4 mg/ml i steriliseret
destilleret vand) lige inden brug. Der tilsættes substrat
(hydrogenperoxid = H2O2) til en slutkoncentration på 0,05 %
(v/v) (1: 2 000 af en 30 % opløsning af H2O2). Der tilsættes
50µl af OPD-opløsningen til hvert hul, og pladerne henstår på
bordet i 10 minutter ved omgivelsestemperatur. Reaktionen
standses ved, at der tilsættes 50 µl/hul 1 M svovlsyre (H2SO4).
1.1.7.Aflæsning
Aflæses spektrofotometrisk ved 492 nm.
1.2.Angivelse af resultater
1.2.1. Ved hjælp af en programpakke udprintes værdierne for absorbans
(OD) og den procentvise hæmning (PI) for test- og kontrolsera
baseret på gennemsnitsværdien for de fire marsvinekontrolhuller.
Dataene udtrykt som OD- og PI-værdier anvendes til bestem-
melse af, om testen er udført pålideligt nok. De øvre
kontrolgrænser (UCL) og nedre kontrolgrænser (LCL) for marsvi-
nekontrollen ligger henholdsvis mellem OD-værdierne 1,4 og 0,4.
Endepunktstiteren for den positive kontrol baseret på 50 % PI bør
være 1:240 (mellem 1:120 og 1:480). Plader, der ikke opfylder de
ovennævnte kriterier, må kasseres. Hvis titeren for det positivekontrolserum er større end 1:480 og prøverne stadig er negative,
kan de negative prøver dog accepteres.
Hullerne med negativt kontrolserum til dobbeltbestemmelse og
blankhullerne til dobbeltbestemmelse bør henholdsvis give PI-
værdier mellem + 25 % og – 25 % og mellem + 95 % og
+ 105 %. Resultater uden for disse grænser er ikke ensbetydende
med, at pladen må kasseres, men tyder på, at der er ved at
udvikle sig baggrundsfarve.
1.2.2. Den diagnostiske tærskel (cut-off-værdi) for testsera er 50 % (PI
50 %). Prøver, der giver PI-værdier over 50 %, registreres som
positive. Prøver, der giver PI-værdier under 50 %, registreres
som negative.
Prøver, der giver PI-værdier over og under tærsklen for hullerne
til dobbeltbestemmelse, betragtes som tvivlsomme. Sådanne
prøver kan gentestes i spottesten og ved titrering. Positive prøver
kan også titreres, så der fås en indikation af, hvor positive de er.
Spottestskema
1 2 3456789 1 0 1 1 1 2
+ve.
Cont.Testsera
A 1:5 –ve. Cont. 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40
B 1:10 –ve. Cont. 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40C 1:20 Blank
D 1:40 Blank
E 1:80 GP Cont.
F 1:160 GP Cont.1990L0426 — DA — 23.02.2002 — 007.001 — 18
▼M6
1 2 3456789 1 0 1 1 1 2
+ve.
Cont.Testsera
G 1:320 GP Cont. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
H 1:640 GP Cont. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
–ve. Cont. = negativ kontrol.
+ve. Cont. = positiv kontrol.
GP Cont. = marsvinekontrol.
Serumtitreringsskema
1 2 3 456789 1 0 1 11 2
+ve.
Cont.Testsera
A 1:5 –ve. Cont. 1:5 1:5
B 1:10 –ve. Cont. 1:10 1:10C 1:20 Blank1:20 1:20
D 1:40 Blank1:40 1:40
E 1:80 GP Cont. 1:80 1:80
F 1:160 GP Cont. 1:160 1:160
G 1:320 GP Cont. 1:320 1:320H 1:640 GP Cont. 1:640 1:640
–ve. Cont. = negativ kontrol.
+ve. Cont. = positiv kontrol.
GP Cont. = marsvinekontrol.
2. INDIREKTE ELISA TIL PÅVISNING AF ANTISTOFFER MOD AFRI-
KANSK HESTEPESTVIRUS (AHSV) (FORESKREVET TEST)
Den nedenfor beskrevne test er i overensstemmelse med testbeskrivelsen i
kapitel 2.1.11 i OIE's Manual of Standards for Diagnostic Tests and
Vaccines, 4. udgave, 2000.
Det rekombinante VP7-protein er blevet anvendt som antigen til bestemmelse
af AHS-virusantistof på grund af dets store følsomhed og specificitet. Andre
fordele er, at det er stabilt og ikke infektiøst.
2.1.Testprocedure
2.1.1.Fast fase
2.1.1.1. ELISA-plader påføres rekombinant AHSV-4 VP7 fortyndet med
carbonat-bicarbonatbuffer, pH-værdi 9,6. Pladerne inkuberes
natten over ved 4 ºC.
2.1.1.2. Pladerne skylles fem gange med destilleret vand indeholdende
0,01 % (v/v) Tween 20 (skylleopløsning). Pladerne bankes
forsigtigt mod absorberende materiale, så eventuel resterende
skylleopløsning fjernes.
2.1.1.3. Pladerne blokeres med fosfatbufferet saltopløsning(PBS) + 5 %
(w/v) skummetmælk (skummetmælkspulver fra NestléTM),
200µl/hul, i 1 time ved 37 ºC.
2.1.1.4. Den blokerende opløsning fjernes, og pladerne bankes forsigtigt
mod absorberende materiale.1990L0426 — DA — 23.02.2002 — 007.001 — 19
▼M6
2.1.2.Prøver
2.1.2.1. De serumprøver, der skal testes, og positive og negative
kontrolsera fortyndes 1:25 med PBS + 5 % (w/v)skummetmælk + 0,05 % (v/v) Tween 20, 100 µl pr. hul. Der
inkuberes i 1 time ved 37 ºC.
Ved titrering tilberedes tofolds fortyndingsrækker fra 1:25
(100 µl/hul), ét serum pr. pladekolonne, og det samme gøres
med de positive og negative kontroller. Der inkuberes i 1 time
ved 37 ºC.
2.1.2.2. Pladerne skylles som beskrevet på trin 2.1.1.2.2.1.3.Konjugat
2.1.3.1. Der overføres 100 µl/hul peberrodsperoxidasekonjugeret (HRP)
antihestegammaglobulin fortyndet med PBS + 5 %
mælk+ 0,05 % Tween 20, pH-værdi 7,2. Der ink uberes i 1
time ved 37 ºC.
2.1.3.2. Pladerne skylles som beskrevet på trin 2.1.1.2.2.1.4.Kromogen/substrat
2.1.4.1. Der tilsættes 200 µl/hul kromogen-/substratopløsning
[10 ml 80,6 mM DMAB (dimethyl
aminobenzaldehyd) + 10 ml 1,56 mM MBTH (3-methyl-2-
benzo-thiazolin-hydrazonhydro-chlorid) + 5 µlH
2O2].
Farveudviklingen standses ved tilsætning af 50 µl3NH2SO4efter ca. 5-10 minutter (inden den negative kontrol begynder at
antage farve).
Andre kromogener såsom ABTS (2,2'-azino-bis-[3-ethylbenzo-
thiazolin-6-sulfonsyre]), TMB (tetramethylbenzidin) eller OPD
(ortho-phenyldiamin) kan også benyttes.
2.1.4.2. Pladerne aflæses ved 600 nm (eller 620 nm).
2.2.Fortolkning af resultater
2.2.1. Cut-off-værdien beregnes ved, at der lægges 0,6 til værdien af
den negative kontrol (0,6 er den afledte standardafvigelse for en
gruppe på 30 negative sera).
2.2.2. Prøver, der giver absorbansværdier, som ligger under cut-off,
betragtes som negative.
2.2.3. Prøver, der giver absorbansværdier, som ligger over cut-off + 0,15,
betragtes som positive.
2.2.4. Prøver, der giver mellemliggende absorbansværdier, er tvivl-
somme, og resultatet skal bekræftes ved en anden metode.
3. BLOKERENDE ELISA TIL PÅVISNING AF ANTISTOFFER MOD AFRI-
KANSK HESTEPESTVIRUS (AHSV) (FORESKREVET TEST)
Den blokerende ELISA kan påvise specifikke AHSV-antistoffer i sera fra alle
modtagelige arter. VP7 er det vigtigste AHSV-antigenprotein og findes inden
for de ni serotyper. Da det monoklonale antistof (Mab) også er rettet mod
VP7, vil testen udvise stor følsomhed og specificitet. Desuden er det rekom-
binante VP7-antigen helt uskadeligt og garanterer derfor en høj grad af
sikkerhed.
Testprincippet er at afbryde reaktionen mellem det rekombinante VP7, det
antigen, der er bundet til ELISA-pladen, og det VP7-specifikke konjugerede
Mab. Antistoffet i testseraene vil blokere reaktionen mellem antigenet og
Mab, hvilket medfører, at farven bliver mindre kraftig.
Den nedenfor beskrevne test udføres på EF-referencelaboratoriet for afri-
kansk hestepest i Algete, Spanien.
3.1.Testprocedure
3.1.1.ELISA-plader
3.1.1.1. Pladerne påføres rekombinant AHSV-4 VP7, som er fortyndet
med carbonat-bicarbonatbuffer, pH-værdi 9,6. Der inkuberes
natten over ved 4 ºC.
3.1.1.2. Pladerne skylles 5 gange med fosfatbufferet saltopløsning (PBS)
indeholdende 0,05 % (v/v) Tween 20 (PBST).1990L0426 — DA — 23.02.2002 — 007.001 — 20
▼M6
3.1.1.3. Pladerne stabiliseres ved behandling med en stabiliserende
opløsning (så de kan opbevares i lang tid ved 4 ºC uden tab af
aktivitet) og tørres med absorberende materiale.
3.1.2.Prøver og kontroller
3.1.2.1. Ved screening: Testsera og kontroller fortyndes 1:10 direkte på
pladen med PBST til en slutmængde på 100 µl/
hul. Der inkuberes i 1 time ved 37 ºC.
3.1.2.2. Ved titrering: Der tilberedes en tofolds fortyndingsrække af
testsera og positive kontroller (100 µl/hul)
mellem 1:10 og 1: 1 280 over otte huller.
Negativ kontrol testes ved en fortynding på
1:10.
3.1.3.Konjugat
Der tilsættes 50 µl/hul forfortyndet peberrodsperoxidasekonju-
geret (HRP) Mab (monoklonale antistoffer, der er specifikke
for VP7) til hvert hul og blandes forsigtigt, så der opnås homo-
genitet. Der inkuberes i 30 minutter ved 37 ºC.
3.1.4. Pladerne skylles fem gange med PBST og tørres som før.
3.1.5.Kromogen/substrat
Der tilsættes 100 µl/hul kromogen-/substratopløsning [1 ml
ABTS (2,2'-azino-bis-[3-ethylbenzothiazolin-6-sulfonsyre] 5 mg/
ml ± 9 ml substratbuffer (0,1 M fosfat-citratbuffer med en pH-
værdi på 4 indeholdende 0,03 % H2O2) og inkuberes i 10
minutter ved stuetemperatur. Farveudviklingen standses ved
tilsætning af 100 µl/hul 2 % (w/v) SDS (natriumdodecylsulfat).
3.1.6.Aflæsning
Der aflæses ved 405 nm i en ELISA-læser.
3.2.Fortolkning af resultater
3.2.1.Validering af prøven
Testen er pålidelig, når absorbansen (OD) af den negative kontrol
(NC) er højere end 1,0, og OD af den positive kontrol (PC) er
lavere end 0,2.
3.2.2.Beregning af cut-off
Positiv cut-off = NC - ((NC-PC) × 0,3)
Negativ cut-off = NC - ((NC-PC) × 0,2)
hvor NC er OD af den negative kontrol, og PC er OD af den
positive kontrol.
3.2.3.Fortolkning af resultater
Prøver med lavere OD end den positive cut-off bør betragtes som
positive for AHSV-antistoffer.
Prøver med højere OD end den negative cut-off bør betragtes som
negative for AHSV-antistoffer.
Prøver med OD mellem disse to værdier bør betragtes som tvivl-
somme, og der bør tages endnu en prøve fra dyrene efter 2-3
uger.1990L0426 — DA — 23.02.2002 — 007.001 — 21