1998R1459 — DA — 03.02.1999 — 001.001 — 1
Dette dokument er et dokumentationsredskab, og institutionerne påtager sig intet ansvar herfor
►B KOMMISSIONENS FORORDNING(EF) Nr. 1459/98
af 8. juli 1998
om referencemetoder til bestemmelse af vanillin i koncentreret smør, smør og fløde
(EFT L 193 af 9.7.1998, s. 16)
Ændret ved:
Tidende
nr. side dato
►M1 Kommissionens forordning (EF) nr. 175/1999 af 26. januar 1999 L 20 22 27.1.1999
1998R1459 — DA — 03.02.1999 — 001.001 — 2
▼B
KOMMISSIONENS FORORDNING(EF) Nr. 1459/98
af 8. juli 1998
om referencemetoder til bestemmelse af vanillin i koncentreret
smør, smør og fløde
KOMMISSIONEN FOR DE EUROPÆISKE FÆLLESSKABER HAR —
under henvisning til traktaten om oprettelse af Det Europæiske Fælles-skab,
under henvisning til Rådets forordning (EØF) nr. 804/68 af 27. juni
1968 om den fælles markedsordning for mælk og mejeriprodukter (
1),
senest ændret ved forordning (EF) nr. 1587/96 (2), særlig artikel 6, stk.
6, og artikel 12, stk. 3, og
ud fra følgende betragtninger:I Kommissionens forordning (EF) nr. 2571/97 af 15. december 1997 om
salg af smør til nedsat pris og ydelse af støtte for fløde, smør ogkoncentreret smør til fremstilling af konditorvarer, konsumis og andrelevnedsmidler (
3), kræves under visse omstændigheder tilsætning af
røbestof til fløde, smør og koncentreret smør for at sikre, at disseprodukters endelige anvendelse er korrekt;
vigtigheden af røbestoffer af hensyn til ordningens korrekte anvendelse
og for at sikre lige behandling af dem, der deltager i den, gør detønskeligt at fastsætte fællesmetoder til bestemmelse af de røbestoffer,der omhandles i forordning (EF) nr. 2571/97;
det er vanskeligt at opstille sådanne referencemetoder for alle røbe-
stoffer på samme tid; fastsættelsen af en referencemetode til bestem-melse af vanillin i koncentreret smør, smør og fløde er endnu et skridt idenne retning;
de i denne forordning fastsatte foranstaltninger er i overensstemmelse
med udtalelse fra Forvaltningskomitéen for Mælk og Mejeripro-dukter —
UDSTEDT FØLGENDE FORORDNING:
Artikel 1
Den i bilaget beskrevne analysemetode anvendes som referencemetode
til bestemmelse af vanillin i koncentreret smør, smør og fløde efterforordning (EF) nr. 2571/97.
Koncentreret smør, smør og fløde betragtes som tilsat røbestof i henhold
til artikel 6 i forordning (EF) nr. 2571/97, hvis resultaterne svarer tilspecifikationerne i bilagets punkt 8.
Artikel 2
Denne forordning træder i kraft på tredjedagen efter offentliggørelsen i
De Europæiske Fællesskabers Tidende .
Den anvendes fra 1. september 1998.
Denne forordning er bindende i alle enkeltheder og gælder umiddelbart
i hver medlemsstat.
(1) EFT L 148 af 28. 6. 1968, s. 13.
(2) EFT L 206 af 16. 8. 1996, s. 21.
(3) EFT L 350 af 20. 12. 1997, s. 3.
1998R1459 — DA — 03.02.1999 — 001.001 — 3
▼B
BILAG
Bestemmelseafindholdetafvanillinikoncentreretsmør,smørogflødeved
højtryksvæskekromatografi (HPLC)
1.Formål og anvendelsesområde
Kvantitativ bestemmelse af vanillin i koncentreret smør, smør og fløde.Metoden anvendes på prøver, der modtages efter forordning (EF) nr.
2571/97.
2.Princip
Ekstraktion af en kendt prøvemængde med en blanding af isopropanol/
ethanol/acetonitril (1:1:2). Udskillelse af størsteparten af fedtstofferne vedafkøling til mellem −15 °Co g− 2 0 °C efterfulgt af centrifugering. Efter
fortynding med vand bestemmes vanillinindholdet ved HPLC.
3.Apparatur
Sædvanligt laboratorieapparatur, herunder især følgende:
3.1. Fryser med en arbejdstemperatur mellem −15 °Co g− 2 0 °C
3.2. Injektionssprøjter, engangs, 2 ml3.3. Membranfiltre, porestørrelse 0,45 µm, modstandsdygtige over for en 5 %
opløsning af ekstraktionsmiddel (4.4)
3.4. Væskekromatografisk system bestående af pumpe (flow 1,0 ml/min),
injektionsenhed (20 µl injektion, automatisk eller manuel), UV-detektor
(306 nm, fuldt udslag 0,01 absorptionsenhed), skriver eller integrator samtkolonnetermostat indstillet til 25 °C
3.5. Analysekolonne (250 mm × 4,6 mm indvendig diameter) pakket med
LiChrospher RP 18 (Merck, 5 µm) eller tilsvarende
3.6. Beskyttelseskolonne (ca. 20 m m×3m m indvendig diameter) pakket tørt
med Perisorb RP 18 (30-40 µm) eller tilsvarende.
4.Reagenser
Alle reagenser skal være af anerkendt analysekvalitet
4.1. Isopropanol4.2. Ethanol, 96 % (v/v)4.3. Acetonitril4.4. Ekstraktionsmiddel
Isopropanol (4.1), ethanol (4.2) og acetonitril (4.3) blandes i forholdet
1:1:2 (v/v/v).
4.5. Vanillin (4-hydroxy-3-methoxybenzaldehyd)4.5.1. Vanillin-stamopløsning (=500 µg/ml)
Ca. 50 mg (»CM« mg) vanillin (4.5) afvejes med en nøjagtighed på 0,1
mg i en 100 ml målekolbe; der tilsættes 25 ml ekstraktionsmiddel (4.4) ogfyldes op med vand.
4.5.2. Vanillinstandardopløsning (=10 µg/ml)
Der afpipetteres 5,00 ml vanillinstamopløsning (4.5.1) i en 250 ml måle-
kolbe, hvorefter der fyldes op med vand.
4.6. Methanol, HPLC-kvalitet4.7. Iseddike4.8. Vand, HPLC-kvalitet4.9. Mobil fase til HPLC
300ml methanol (4.6), ca. 500 ml vand (4.8) og 20,0 ml iseddike (4.7)
blandes i en 1 000 ml målekolbe, og der fyldes op med vand (4.8).Blandingen filtreres gennem et 0,45 µm filter.
5.Fremgangsmåde
5.1. Prøveforberedelse
5.1.1. Smør
Prøven opvarmes, indtil den begynder at smelte. Lokal opvarmning over
40°C skal undgås. Når prøven er blevet tilstrækkeligt blød, homogeni-
seres den ved rystning. Der omrøres i 15 s, inden der udtages en analyse-
1998R1459 — DA — 03.02.1999 — 001.001 — 4
▼B
prøve. Med en nøjagtighed på 1 mg afvejes der i en 100 ml målekolbe en
analyseprøve på ca . 5 g (»SM« g).
5.1.2. Koncentreret smør
Umiddelbart inden prøveudtagningen anbringes beholderen med koncen-
treret smør i en ovn ved 40-50 °C, indtil smøret er fuldstændig smeltet.
Prøven blandes ved forsigtig rystning eller omrøring; voldsom omrøringmed dannelse af luftbobler bør undgås. Der afvejes med en nøjagtighed på1 mg ca. 4 g (»SM« g) koncentreret smør i en 100 ml målekolbe.
5.1.3. Fløde
Prøven opvarmes på vandbad eller i inkubator ved en temperatur på
35-40 °C. Fedtstoffet fordeles homogent ved forsigtig rystning og om
nødvendigt ved omrøring. Prøven afkøles hurtigt til 20 ± 2 °C. Prøven
skal fremtræde ensartet, ellers gentages proceduren. Der afvejes med ennøjagtighed på 1 mg ca. 10 g (»SM« g) fløde i en 100 ml målekolbe.
5.2. Fremstilling af prøveopløsning
Der tilsættes ca. 75 ml ekstraktionsmiddel (4.4) til prøveportionen (5.1.1,
5.1.2 eller 5.1.3), omrøres eller omrystes kraftigt i ca. 15 min og fyldes opmed ekstraktionsmiddel (4.4). Ca. 10 ml af dette ekstrakt overføres til etreagensglas med prop. Glasset stilles i fryseren (3.1) i ca. 30 min. Detafkølede ekstrakt centrifugeres i 5 min ved ca. 2 000 rpm, og der dekan-teres straks. Den dekanterede opløsning henstår, til den har nået stuetem-peratur. Der afpipetteres 5,00 ml heraf i en 100 ml målekolbe, og derfyldes op til mærket med vand. En delprøve heraf filtreres på membran-filter (3.3). Filtratet kan direkte anvendes til HPLC-analyse.
5.3. Kalibrering
Der afpipetteres 5,00 ml vanillinstandardopløsning (4.5.2) i en 100 ml
målekolbe. Der tilsættes 5,0 ml ekstraktionsmiddel (4.4) og fyldes op tilmærket med vand. Denne opløsning indeholder 0,5 µg vanillin pr. ml.
5.4. Bestemmelse ved HPLC
Kromatografisystemet stabiliseres i ca. 30 min. Der indsprøjtes standard-
opløsning (5.3). Dette gentages, indtil forskellen i topareal eller tophøjdemellem to på hinanden følgende indsprøjtninger er mindre end 2 %. Underde beskrevne betingelser har vanillin en retentionstid på ca. 9 min. Derforetages en dobbeltbestemmelse på standardopløsningen (5.3) medindsprøjtning af 20 µl. Der indsprøjtes 20 µl prøveopløsning (5.2). Arealet
eller højden af den fremkomne vanillintop bestemmes. Efter 10 indsprøjt-ninger af prøveopløsninger (5.2) gentages dobbeltbestemmelsen på stan-dardopløsningen (5.3).
6.Beregning af resultater
Det gennemsnitlige topareal (eller tophøjde) (»AC«) for de vanillintoppe,
der er fremkommet ved de to dobbeltbestemmelser før og efter hver batchaf prøveopløsninger (arealer i alt), beregnes.
Responsfaktoren R beregnes ved udtrykket:
R = AC/CM
hvor CM er massen af vanillin i mg (4.5.1).
Indholdet af vanillin (C) i analyseprøven (i mg/kg) beregnes ved
udtrykket:
C=AS × 20 × 0,96
S M×R
hvorAS = er arealet af vanillintoppen fra prøveopløsningen
▼
M1
SM = er massen af analyseprøve n i g (5.1.1, 5.1.2 eller 5.1.3).
Når fløden analyseres for vanillin, skal røbestofkoncentrationen
udtrykkes som mg røbestof/kg mælkefedt. Dette gøres ved, at manmultiplicerer C med 100/f, f er flødens fedtindhold i procent(m/m).
▼
B
20 = er en faktor, der tager hensyn til fortyndingen af standard- og
analyseprøven
0,96 = er korrektionsfaktoren for fedtindholdet ved første fortynding af
prøven.
1998R1459 — DA — 03.02.1999 — 001.001 — 5
▼B
Anmærkning:
I stedet for toparealer kan der benyttes tophøjder (se punkt 8.3).
7.Metodens nøjagtighed
7.1. Repeterbarhed (r)
Forskellen mellem to bestemmelser, der er udført hurtigst muligt efter
hinanden af samme person med samme apparatur på samme prøvemate-riale, må ikke overstige 16 mg/kg.
7.2. Reproducerbarhed (R)
Forskellen mellem to bestemmelser, der er udført af forskellige personer i
forskellige laboratorier med forskelligt apparatur på samme prøvemate-riale, må ikke overstige 27 mg/kg.
8.Grænseværdier
8.1. Der skal tages tre prøver fra produktet med røbestof for at kontrollere
homogeniteten.
8.2. Røbestof fra vanille eller syntetisk vanillin
▼
M1
8.2.1. Iblandingen af 4-hydroxy-3-methoxybenzaldehyd er 250 g pr. ton koncen-
treret smør eller smør. For fløde med røbestof er iblandingen 250 g pr. tonmælkefedt.
8.2.2. Resultaterne af analysen af de tre prøver af produktet anvendes til at
kontrollere mængden og homogeniteten af det iblandede røbestof, og detlaveste af disse resultater sammenholdes med følgende grænseværdier(under hensyntagen til den kritiske forskel for en 95 % sandsynligheds-grænse (CrD95)):
— 221,0 mg/kg (95 % af den mindste iblanding)
— 159,0 mg/kg (70 % af den mindste iblanding).
Røbestofkoncentrationen i den prøve, der giver det laveste resultat,
benyttes sammen med interpolering mellem 221,0 mg/kg og 159,0 mg/kg.
▼
B
8.3. Røbestof kun fra vanilleplantens frugt eller komplette ekstrakter heraf
▼M1
8.3.1 Iblandingen af 4-hydroxy-3-methoxybenzaldehyd er 100 g pr. ton koncen-
treret smør eller smør. For fløde med røbestof er iblandingen 100 g pr. tonmælkefedt.
8.3.2. Resultaterne af analysen af de tre prøver af produktet anvendes til at
kontrollere mængden og homogeniteten af det iblandede røbestof, og detlaveste af disse resultater sammenholdes med følgende grænseværdier(under hensyntagen til den kritiske forskel for en 95 % sandsynligheds-grænse (CrD95)):
— 79,0 mg/kg (95 % af den mindste iblanding)
— 54,0 mg/kg (70 % af den mindste iblanding).
Røbestofkoncentrationen i den prøve, der giver det laveste resultat,
benyttes sammen med interpolering mellem 79,0 mg/kg og 54,0 mg/kg.
▼
B
9.Anmærkninger
9.1. Repeterbarheden er den værdi, som den absolutte forskel mellem to
enkeltbestemmelser udført med samme metode på samme prøvematerialeunder samme forhold (samme apparatur, samme laboratorium og inden foret kort tidsinterval) kan ventes at ligge under med en bestemt sandsyn-lighed; når intet andet er anført, er denne sandsynlighed 95 %.
9.2. Reproducerbarheden er den værdi, som den absolutte forskel mellem to
enkeltbestemmelser udført med samme metode på samme prøvematerialemen under forskellige forhold (forskellige personer, forskelligt apparatur,forskellige laboratorier og/eller på forskellige tidspunkter) kan ventes atligge under med en bestemt sandsynlighed; når intet andet er anført, erdenne sandsynlighed 95 %.
9.3. Genfindingen af vanillin, der er tilsat i en mængde på 250 mg pr. kg
butteroil, varierer fra 97,0 % til 103,8 %. I gennemsnit er der fundet99,9 % med en standardafvigelse på 2,7 %.
1998R1459 — DA — 03.02.1999 — 001.001 — 6
▼B
9.4. Standardopløsningen indeholder 5 % ekstraktionsmiddel for at kompen-
sere for topforbredning som følge af, at prøveopløsningerne indeholder5 % ekstraktionsmiddel. Derved kan der ved den kvantitative bestemmelsebenyttes tophøjder.
9.5. Analysen bygger på en lineær kalibreringskurve, der går gennem
nulpunktet. Med passende fortyndinger af standardopløsningen (4.5.2) børlineariteten kontrolleres, første gang analysen udføres, og derefter regel-mæssigt og efter udskiftninger eller reparationer på HPLC-udstyret.