ПРИЛОЖЕНИЕ III

Вземане на проби и изпитване в съответствие с членове 4 и 7

1. Вземането на проби и изпитването за целите на официалните наблюдения за откриване, посочени в член 4, параграфи 1 и 2, се извършват, както следва: Вземането на проби включва почвени проби със стандартна норма от най-малко 1 500 ml почва/ha, събрани от поне 100 убождания/ha, за предпочитане в правоъгълна решетка с не по-малко от 5 m ширина и не повече от 20 m дължина между точките на вземане на проби, обхващащи целия производствен обект. Цялата проба се използва за по-нататъшно изследване, т.е. екстракция на цисти, идентификация на вида и евентуално определяне на патотипа/вирулентната група. Изпитването включва следните методи за екстракция на посочения вредител, описани в съответните валидирани и международно признати диагностични протоколи: а) по отношение на екстракцията — методи на основата на апарата на Fenwick, центрофугата на Schuiling, елутриатора на Seinhorst или елутриатора на Kort; б) по отношение на откриването и идентифицирането — един от следните методи: i) изолиране на цисти на Globodera от остатъците въз основа на морфологията на цистите, последвано от идентификация на вида, основаваща се на морфологията на отделните цисти и ларви, в съчетание с конвенционалния PCR тест по Bulman & Marshall, 1997 (1) (в случай на съмнение за наличие на G. Tabacum допълнително може да се изпълни конвенционалният PCR тест по Skantar et al., 2007 (2)); ii) изолиране на цисти на Globodera от остатъците въз основа на морфологията на цистите, последвано от идентификация на вида, основаваща се на морфологията на отделните цисти и ларви, в съчетание с PCR в реално време по Gamel et al., 2017 (3); iii) изолиране на цисти на нематоди от остатъците, последвано от откриване на вида с PCR в реално време по Gamel et al., 2017 (3).

2. Вземането на проби за целите на официалното наблюдение за мониторинг, посочено в член 7, се извършва по един от следните методи: а) вземане на проби, посочено в точка 1, с минимална норма на пробовземане от най-малко 400 ml почва/ha; б) целенасочено вземане на проби от поне 400 ml почва след визуален преглед на корените, при наличието на видими симптоми; или в) вземане на проби от най-малко 400 ml почва от площи, от които е прибрана реколта от картофи, при условие че историята на производствения обект, в който са отгледани картофите, може да бъде проследена. Изпитването за целите на официалното наблюдение за мониторинг, посочено в член 7, се извършва в съответствие с точка 1.

3. Чрез дерогация от точка 1 стандартната норма на пробовземане може да бъде намалена до минимум 400 ml почва/ha във всеки от следните случаи: а) има документирано доказателство, че картофи или растения от изброените в точка 1 от приложение I, не са отглеждани и не са били налице в производствения обект през шестте години, предшестващи официалното наблюдение за откриване; б) при последните две последователни официални наблюдения за откриване не са открити екземпляри от посочения вредител в проби от 1 500 ml почва/ha и след първото извършено официално наблюдение за откриване не са отглеждани картофи или растения от изброените в точка 1 от приложение I, различни от тези, за които се изисква официално наблюдение за откриване в съответствие с член 4, параграф 1; в) при последното официално наблюдение за откриване, при което размерът на пробата трябва да е бил не по-малък от 1 500 ml почва/ha, не са открити екземпляри от посочения вредител или цисти на посочения вредител без живо съдържание и от последното извършено официално наблюдение за откриване в производствения обект не са отглеждани картофи или растения от изброените в точка 1 от приложение I, различни от тези, за които се изисква официално наблюдение за откриване в съответствие с член 4, параграф 1.

4. Нормата на пробовземане може да се намали за площи, съответно по-големи от 8 ha и 4 ha, във всеки от следните случаи: а) по отношение на стандартната норма, посочена в точка 1, проби от първите 8 ha се вземат при определената норма, която обаче може да се намали за всеки допълнителен хектар до минимум 400 ml почва/ha; б) по отношение на намалената норма, посочена в точка 3, проби от първите 4 ha се вземат при определената норма, която обаче може да се намали още за всеки допълнителен хектар до минимум 200 ml почва/ha.

5. Използването на намаления размер на пробата, посочен в точки 3 и 4, може да продължи при последващите официални наблюдения за откриване, посочени в член 3, параграф 1, докато в съответния производствен обект не бъдат открити посочените вредители.

6. Стандартният размер на пробата от почвата може да се намали до минимум 200 ml почва/ha, при условие че производственият обект е разположен в зона, обявена за свободна от посочения вредител, и е обозначен, поддържан и проверяван според съответните международни стандарти за фитосанитарни мерки (МСФМ № 4) (4).

7. Минималният размер на пробата от почвата във всички случаи е 200 ml почва от производствен обект.

(1) Bulman, S.R. & Marshall, J.W. (1997). Differentiation of Australasian potato cyst nematode (PCN) populations using the Polymerase Chain Reaction (PCR). New Zealand Journal of Crop and Horticultural Science 25, 123-129.

(2) Skantar, A.M., Handoo, Z.A., Carta, L.K., Chitwood, D.J. (2007). Morphological and molecular identification of Globodera pallida associated with Potato in Idaho. Journal of Nematology 39(2), 133-144.

(3) Gamel, S., Letort A., Fouville D., Folcher L., Grenier E. (2017). Development and validation of real-time PCR assays based on novel molecular markers for the simultaneous detection and identification of Globodera pallida, G. rostochiensis and Heterodera schachtii. Nematology 19 (7):789-804.

(4) МСФМ № 4. 1995. Requirements for the establishment of pest free areas. Rome, IPPC, FAO. https://www.ippc.int/en/publications/614/