Piastra di agar

Unapiastra di agarè unaPiastra di Petriche contiene l'agarcometerreno di colturasolido più nutriente, utilizzato per lacoltura di microrganismi. A volte vengono aggiunti composti selettivi, per influenzare la crescita, come gliantibiotici.
I singoli microrganismi posti sulla piastra cresceranno in singolecolonie, ognunaclonegeneticamente identico al singolo organismo antenato (ad eccezione del basso, inevitabile tasso dimutazione). Pertanto, la piastra può essere utilizzata per stimare la concentrazione di organismi in unacoltura liquidao per un'adeguata diluizione di tale cultura usando un contatore di colonie o per generare colture geneticamente pure da una coltura mista di organismi geneticamente diversi.
Sono disponibili diversi metodi per placcare le celle. Una tecnica è nota come "striatura". In questa tecnica, una goccia della coltura all'estremità di un sottile filosterile, a volte noto come inoculatore, viene strisciata sulla superficie dell'agar lasciando aderire gli organismi, un numero più elevato all'inizio della striscia e un numero inferiore alla fine. Ad un certo punto, nel caso di una "striscia" ben preparata, il numero di organismi depositati sarà tale che cresceranno colonie individuali distinte, in quell'area, che possono essere rimosse per ulteriore coltura, usando un altro anello sterile. È fondamentale lavorare in ambiente sterile per prevenire la contaminazione delle piastre.
Un altro modo di placcare gli organismi, accanto alla striatura, è l'analisi spot. Questo tipo di analisi viene spesso utilizzata per verificare la vitalità delle cellule ed eseguita conpinner(aghispesso chiamati anchefrogger). Una terza tecnica utilizzata è l'uso di perline di vetro sterili per placcare le cellule. In questa tecnica le cellule vengono coltivate in una coltura liquida di cui viene pipettato un piccolo volume sulla piastra di agar e quindi distribuito con le perline.La placcatura di replicaè un'altra tecnica per placcare le cellule su piastre di agar. Queste quattro tecniche sono le più comuni, ma ce ne sono anche altre. È fondamentale lavorare in modo sterile per prevenire la contaminazione delle piastre di agar. La placcatura viene quindi spesso eseguita in unacappa a flusso laminareo sul banco di lavoro accanto a unbecco di Bunsen.
Nel 1881,Fanny Hesse, che lavorava come tecnico per suo marito Walther Hesse nel laboratorio diRobert Koch, suggerì l'agar come efficace agente di presa, poiché era stato un ingrediente comune nella produzione di marmellate per un certo tempo.
Come altriterreni di coltura, le formulazioni di agar utilizzate nelle piastre possono essere classificate come "definite" o "non definite". Un mezzo definito viene sintetizzato dalle singole sostanze chimiche richieste dall'organismo in modo da conoscere l'esatta composizione molecolare, mentre un mezzo indefinito è costituito da prodotti naturali come l'estratto di lievito, dove la composizione precisa è sconosciuta.
Le piastre di agar possono essere formulate come permissive, con l'intento di consentire la crescita di qualunque organismo sia presente, o restrittive o selettive, con l'intenzione di consentire solo la crescita di un particolare sottoinsieme di tali organismi.Ciò può assumere la forma di un fabbisogno nutrizionale, ad esempio fornendo un particolare composto come illattosiocome unica fonte dicarbonioe selezionando quindi solo organismi in grado dimetabolizzarequel composto, o includendo un particolare antibiotico o altra sostanza per selezionare solo organismi che sonoresistentia quella sostanza. Ciò si correla, in una certa misura, con mezzi definiti e non definiti. I mezzi non definiti, realizzati con prodotti naturali e contenenti una combinazione sconosciuta di moltissime molecole organiche, sono in genere più permissivi in termini di fornitura dei bisogni di una più ampia varietà di organismi, mentre i mezzi definiti possono essere adattati con precisione per selezionare organismi con proprietà specifiche.
Le piastre di agar possono anche essere piastre di indicatore, in cui gli organismi non sono selezionati sulla base della crescita, ma sono invece distinti da un cambiamento di colore in alcune colonie, tipicamente causato dall'azione di unenzimasu un composto aggiunto al terreno.
Le piastre vengono incubate per 12 ore e fino a diversi giorni a seconda del test da eseguire.
Alcuni tipi di piastre di agar comunemente usati sono:
Le piastre agar sangue (BAP) contengonosanguedi mammifero (solitamente pecora o cavallo), in genere ad una concentrazione del 5-10%. I BAP sono terreni arricchiti e differenziali utilizzati per isolare organismi esigenti e rilevare l'attività emolitica. L'attività β-emolitica mostrerà lalisie la completa digestione dei contenuti deiglobuli rossiche circondano una colonia. Gli esempi includono loStreptococcus haemolyticus. L'α-emolisi provoca solo una lisi parziale dei globuli rossi (lamembrana cellulareviene lasciata intatta) e apparirà verde o marrone, a causa della conversione dell'emoglobinainmetemoglobina. Un esempio di questo sarebbe loStreptococcus viridans. Y-emolisi (o non emolitico) è il termine riferito a una mancanza di attività emolitica.I BAP contengono anche estratto di carne,triptone,cloruro di sodioe agar.
Agar cioccolatoè un tipo di piastra di agar sangue in cui le cellule del sangue sono statelisateriscaldandole a 56 °C. È usata per coltivare batteri respiratori fastidiosi, come l'Haemophilus influenzae. In realtà ilcioccolatonon è contenuto nella piastra, è così chiamata solo per la sua colorazione.
L'agar sangue di cavallo è un tipo di terreno di coltura microbiologica arricchito di sangue. Essendo arricchito, consente la crescita di alcuni batteri difficili e consente l'indicazione dell'attività emolitica in queste colture batteriche.
L'agar Thayer-Martin è un agar cioccolato progettato per isolare laNeisseria gonorrhoeae.
L'agar tiosolfato-citrato-sali biliari-saccarosiomigliora la crescita diVibrio, tra cui ilVibrio cholerae.