Tes deteksi antigen malaria

Tes deteksi antigen malaria adalah sekelompok tes diagnostik cepat yang tersedia secara komersial dari jenis tes antigen cepat yang memungkinkan diagnosis cepat malaria oleh orang yang tidak ahli dalam teknik laboratorium tradisional untuk mendiagnosis malaria atau dalam situasi di mana peralatan tersebut tidak tersedia. Saat ini ada lebih dari 20 tes semacam itu yang tersedia secara komersial (pengujian produk WHO 2008). Antigen malaria pertama yang cocok sebagai target untuk tes tersebut adalah enzim glikolitik Glutamat dehidrogenase yang larut. Tak satu pun dari tes cepat saat ini sesensitif film darah tebal, atau semurah. Kelemahan utama dalam penggunaan semua metode dipstick saat ini adalah bahwa hasilnya pada dasarnya bersifat kualitatif. Namun, di banyak daerah endemik Afrika tropis, penilaian kuantitatif parasitemia penting, karena sebagian besar populasi akan dites positif dalam uji kualitatif apa pun.
Malaria adalah penyakit yang dapat disembuhkan jika pasien memiliki akses ke diagnosis dini dan pengobatan yang tepat. Tes diagnostik cepat (RDT) berbasis antigen memiliki peran penting di pinggiran kemampuan layanan kesehatan karena banyak klinik pedesaan tidak memiliki kemampuan untuk mendiagnosis malaria di tempat karena kurangnya mikroskop dan teknisi terlatih untuk mengevaluasi film darah. Selain itu, di daerah di mana penyakit ini tidak endemik, teknologi laboratorium memiliki pengalaman yang sangat terbatas dalam mendeteksi dan mengidentifikasi parasit malaria. Semakin meningkat jumlah pelancong dari daerah beriklim sedang setiap tahun mengunjungi negara-negara tropis dan banyak dari mereka kembali dengan infeksi malaria. Tes RDT masih dianggap sebagai pelengkap mikroskop konvensional tetapi dengan beberapa perbaikan mungkin menggantikan mikroskop. Pengujiannya sederhana dan prosedurnya dapat dilakukan di tempat dalam kondisi lapangan. Tes ini menggunakan finger-stick atau darah vena, tes selesai memakan waktu total 15-20 menit, dan laboratorium tidak diperlukan. Ambang deteksi dengan tes diagnostik cepat ini berada pada kisaran 100 parasit/µl darah dibandingkan dengan 5 parasit dengan mikroskop film tebal.
Plasmodium Glutamat dehydrogenase (pGluDH) yang diendapkan oleh antibodi inang Diagnosis yang akurat menjadi semakin penting, mengingat meningkatnya resistensi Plasmodium falciparum dan tingginya harga alternatif klorokuin. Enzim pGluDH tidak terjadi pada sel darah merah inang dan direkomendasikan sebagai enzim penanda untuk spesies Plasmodium oleh Picard-Maureau et al. pada tahun 1975. Tes enzim penanda malaria cocok untuk pekerjaan rutin dan sekarang menjadi tes standar di sebagian besar departemen yang menangani malaria. Kehadiran pGluDH diketahui mewakili kelangsungan hidup parasit dan tes diagnostik cepat menggunakan pGluDH sebagai antigen akan memiliki kemampuan untuk membedakan organisme hidup dari organisme mati. RDT lengkap dengan pGluDH sebagai antigen telah dikembangkan di Cina dan sekarang sedang menjalani uji klinis. GluDHs adalah enzim di mana-mana yang menempati titik cabang penting antara metabolisme karbon dan nitrogen. Kedua nicotinamide adenine dinucleotide (NAD) [EC 1.4.1.2] dan nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADP) tergantung GluDH [EC 1.4.1.4] enzim yang hadir di Plasmodia; GluDH yang bergantung pada NAD relatif tidak stabil dan tidak berguna untuk tujuan diagnostik. Glutamat dehidrogenase menyediakan sumber karbon teroksidasi yang digunakan untuk produksi energi serta pembawa elektron tereduksi, NADH. Glutamat adalah donor amino utama untuk asam amino lain dalam reaksi transaminasi berikutnya. Peran ganda glutamat dalam keseimbangan nitrogen membuatnya menjadi pintu gerbang antara amonia bebas dan gugus amino dari sebagian besar asam amino. Struktur kristalnya diterbitkan. Aktivitas GluDH pada P.vivax, P.ovale dan P. malariae belum pernah diuji, tetapi mengingat pentingnya GluDH sebagai enzim titik cabang, setiap sel harus memiliki konsentrasi GluDH yang tinggi. Telah diketahui dengan baik bahwa enzim dengan berat molekul tinggi (seperti GluDH) memiliki banyak isozim, yang memungkinkan diferensiasi regangan (diberikan antibodi monoklonal yang tepat). Tuan rumah menghasilkan antibodi terhadap enzim parasit yang menunjukkan identitas urutan rendah.
Protein kaya histidin II (HRP II) adalah protein larut air yang kaya histidin dan alanin, yang terlokalisasi di beberapa kompartemen sel termasuk sitoplasma parasit. Antigen diekspresikan hanya oleh trofozoit P. falciparum. HRP II dari P. falciparum telah terlibat dalam biokristalisasi hemozoin, suatu bentuk kristalin ferriprotoporphyrin IX (Fe(3+)-PPIX) yang inert yang diproduksi oleh parasit. Sejumlah besar HRP II disekresikan oleh parasit ke dalam aliran darah inang dan antigen dapat dideteksi dalam eritrosit, serum, plasma, cairan serebrospinal dan bahkan urin sebagai protein larut air yang disekresikan. Antigen ini bertahan dalam sirkulasi darah setelah parasitemia telah hilang atau telah sangat berkurang. Biasanya dibutuhkan sekitar dua minggu setelah pengobatan yang berhasil untuk tes berbasis HRP2 menjadi negatif, tetapi mungkin memakan waktu hingga satu bulan, yang mengurangi nilainya dalam mendeteksi infeksi aktif. Hasil dipstick positif palsu dilaporkan pada pasien dengan rheumatoid arthritis faktor-positif rheumatoid. Karena HRP-2 hanya diekspresikan oleh P. falciparum, tes ini akan memberikan hasil negatif dengan sampel yang hanya mengandung P. vivax, P. ovale, atau P. malariae; banyak kasus malaria non-falciparum karena itu dapat salah didiagnosis sebagai malaria negatif (beberapa strain P.falciparum juga tidak memiliki HRP II). Variabilitas hasil RDT berbasis pHRP2 terkait dengan variabilitas antigen target.
P. falciparum lactate dehydrogenase (PfLDH) adalah oksidoreduktase 33 kDa [EC 1.1.1.27]. Ini adalah enzim terakhir dari jalur glikolitik, penting untuk pembentukan ATP dan salah satu enzim paling melimpah yang diekspresikan oleh P. falciparum. Plasmodium LDH (pLDH) dari P. vivax, P. malariae, dan P. ovale) menunjukkan identitas 90-92% terhadap PfLDH dari P. falciparum. tingkat pLDH telah terlihat berkurang dalam darah lebih cepat setelah pengobatan daripada HRP2. Dalam hal ini, pLDH mirip dengan pGluDH. Namun demikian, sifat kinetik dan kepekaan terhadap inhibitor yang ditargetkan ke situs pengikatan kofaktor berbeda secara signifikan dan dapat diidentifikasi dengan mengukur konstanta disosiasi untuk inhibitor yang berbeda hingga 21 kali lipat.
Fruktosa-bifosfat aldolase [EC 4.1.2.13] mengkatalisis reaksi kunci dalam glikolisis dan produksi energi dan diproduksi oleh keempat spesies. P.falciparum aldolase adalah protein 41 kDa dan memiliki kesamaan urutan 61-68% dengan aldolase eukariotik yang diketahui. Struktur kristalnya telah dipublikasikan. Kehadiran antibodi terhadap p41 dalam serum manusia dewasa yang sebagian kebal terhadap malaria menunjukkan bahwa p41 terlibat dalam respon imun protektif terhadap parasit.