cyanic-selkie/wikianc huggingface dataset:
سنجر الجولي
محافظ غزة وفلسطين
بعد وفاة السلطان في عام 1341، وفترة وجيزة لثلاثة سلاطين مختلفين لم يدم طويلا، عيّن نجل الناصر محمد، عماد الدين إسماعيل، الذي أصبح سلطانًا عام 1342، الجولي نائباً (واليًا) لحماة، وهو المنصب الذي شغله لمدة ثلاثة أشهر تقريبًا قبل إعادة تعيينه محافظًا على غزة حيث خدم أيضًا لمدة ثلاثة أشهر تقريبًا.
مهنة في القاهرة والموت
بعد تكليفه بغزة، تم استدعاؤه إلى القاهرة، عاصمة المماليك، للعمل في مختلف المناصب الرفيعة داخل السلطنة، وأبرزها مشرف بيمارستان. تم إرساله من القاهرة لسحق تمرد من قبل شقيق إسماعيل الناصر أحمد في الكرك. حاصر الجولي قلعة الكرك ودمر جزء من سورها ونجح في القبض على أحمد حياً. وبذلك قطع رأسه وأرسل رأسه إلى إسماعيل. استأنف الجولي مهامه كمشرف بعد عودته إلى القاهرة. خلال هذا الوقت، وبعد أن كان يدرس الشريعة الإسلامية بالفعل، كتب تفسيرًا لأعمال الإمام الشافعي. حصل الجولي على مكانة عالية بما فيه الكفاية في علماء المسلمين لدرجة أنه تم تكليفه بسلطة إصدار الفتاوى وفقًا للمذهب الشافعي.
في 14 يناير 1345، توفي الجولي بسلام عن عمر يناهز 90 عامًا. دفن في ضريح داخل المدرسة وخانقاه سالار وسنجر، التي بناها في القاهرة عام 1304. قبره يجلس بجانب قبر سالار.
تراث معماري
خلال فترة ولايته لفلسطين، شرع الجولي في سلسلة من المشاريع المعمارية، لا سيما في عاصمته غزة ولكن في المدن الداخلية أيضًا. كما شيد العديد من المباني في القاهرة حيث عاش في أواخر حياته.
على طول شارع الصليبة في القاهرة المعز بالقرب من مسجد ابن طولون، أسس الجولي مسجد ومدرسة سنجر الجاولي في عام 1304. كان المجمع الواسع الذي تم تصميمه على الطراز المعماري الحلبي بمثابة مسجد ومدرسة للمذهب الشافعي خانقاه للمجتمع الصوفي وضريح مشترك للجولي وصديقه القديم سيف الدين سالار كان الجولي قد بني قبر سالار بشكل أكبر وأكثر زخرفة من قبره كدليل على احترامه لسالار.
في غزة، أمر الجولي ببناء مسجد الحلوة الذي تم تدميره لاحقًا. بعد هدمه، تم نقل النقش الذي يتضمن تاريخ الجامع ومؤسسه إلى مسجد الشمعة الواقع في جزء آخر من المدينة. قبل توليه منصب الحاكم، دمر المغول المسجد العمري الكبير (غزة) خلال غزوهم القصير عام 1260. في عام 1318 كلف الجولي بإعادة بناء الجامع الكبير ووقف باسمه وعلى اسم الناصر محمد. في عام 1320 قام ببناء حمام السمرة في حي الزيتون بغزة وهو اليوم بمثابة الحمام التركي الوحيد العامل في المدينة. تشمل الأعمال الأخرى بناء مدرسة (مدرسة الشريعة الإسلامية) للمذهب الشافعي، وخان (كارافانساري) وماريستان. تم منح هذا الأخير باسم السلطان الناصر محمد آنذاك، وتم النص على أن المستشفى يجب أن يكون دائمًا تحت إشراف محافظي غزة.
قام الجولي بتنفيذ مشاريع بناء أخرى في جميع أنحاء فلسطين. وفي الخليل، بنى مسجد الجوالي، الذي سمي باسمه، بسقف من "الحجر الجميل" بحسب المقريزي. في بلدة السهل الساحلي قاقون الجولي أمر ببناء بيت متنقل كبير في عام 1315. في عام 1320 أسس المدرسة الجولية في القدس. قام الجولي ببناء بيت متنقل أصغر في قرية الخطيب، وهي نقطة توقف بين القدس وأريحا، وفي غابة أرسوف تم بناء ممر (القناطر). في الحمرا، بالقرب من بلدة بيسان، أمر الجولي ببناء خان سالار (قافلة سالار)، على شرف صديقه سالار، القائد السابق لجيش المماليك.
تيموثي ترومان
تيموثي ترومان (9 فبراير 1956، غاولي بريدج في الولايات المتحدة)؛ كاتب سيناريو وروائي أمريكي. درس في جامعة وست فرجينيا.
جيليان غريفيثس
جيليان غريفيثس هي عالمة مناعة بريطانية،  حصلت على ميدالية بوكانان عام 2019، حيثُ استلمت الجائزة في اجتماعِ يوم الذكرى السنوية للجمعية المُوافق 29 نوفمبر 2019، وحصلت عليها لوضعها الآليات البيولوجية الأساسية للخلايا التي تدفع إلى قتل الخلايا التائية السامة للخلايا، ووضعها أسس التطبيق الواعي للعلاج المناعي للسرطان.
المراقبة الشرطية في مصر
المراقبة الشرطية أو الوضع تحت مراقبة الشرطة هي إجراء مقيِّد للحرية وعقوبة في القانون المصري تأتي حصرا وفقا لأحكام قضائية. توسعت المحاكم المصرية في السنوات الأخيرة بالحكم بالمراقبة الشرطية كعقوبة تكميلية لأحكام》السجن في قضايا ذات طابع سياسي، وهو ما يعتبره الحقوقيون هادفا «تضييق الخناق على النشطاء السياسيين ومتابعة أنشطتهم المعارضة للسلطة»، بالذات حيث أن القانون يترك للمراقَب حرية اختيار مكان سكناه إلا في حال عدم قدرة الشخص على أن يتخذ سكن، أو امتناع الشخص عن أن يتخذ سكنا أو اتخذ سكنا يرى مكتب البوليس انه يصعب مراقبته فيه، فإن التطبيق العملي للمراقبة ينطوي في تلك الحالات على قضاء الليل في مراكز وأقسام الشرطة.
تاريخ
ورد في قانون العقوبات الأهلي الصادر عام 1883 عقاب كان يسمى «الوضع تحت ملاحظة الضبطية القضائية الكبرى»، وتغير المسمى «الوضح تحت ملاحظة البوليس» ثم «الوضع تحت مراقبة البوليس»
لويس فالديز
لويس فالديز هو كاتب مسرحي وكاتب وكاتب سيناريو ومخرج وممثل أمريكي، ولد في 26 يونيو 1940 بديلانو في الولايات المتحدة. من الجوائز التي نالها الميدالية الوطنية للفنون سنة 2015 والجوائز الأميركية للكتاب سنة 2011.
البارجة الألمانية شارنهورست
شارنهورست سفينة رئيسية ألمانية، وصفت بدلا من ذلك بمثابة يارجة أو طراد معركة، تابعة لبحرية ألمانيا النازية كريغسمرينه. كانت السفينة الرائدة في فئتها، والتي ضمت سفينة أخرى هي البارجة الألمانية غيسيناو. تم بناء السفينة في حوض بناء السفن كريكسمارينفيفت في فيلهلمسهافن. تم وضع عارضتها في 15 يونيو 1935 وبدأ ببنائها بعد عام وأربعة أشهر في 3 أكتوبر 1936. تم الانتهاء منها في يناير 1939، سلحت السفينة ببطارية رئيسية من تسعة مدافع من عيار 28 سم (11 إنش) سي/34 بثلاثة أبراج ثلاثية. خطط لاستبدال هذه المدافع بستة مدافع من عيار 38 سم (15 إنش) أس كيه سي/34 في برجين توأمين لكنهم لم يفعلو.
شارك كلا من شارنهورست وغيسيناو بجزء كبير في الفترة المبكرة ث من الحرب العالمية الثانية، بما في ذلك طلعات جوية في المحيط الأطلسي لمهاجمة سفن التجارية البريطانية. خلال عمليتها الأولى، أغرقت شارنهورست الطراد البريطاني المساعد في أشتباك قصير (نوفمبر 1939). شاركت شارنهورست وغيسيناو في عملية فيزروبونغ (من أبريل إلى يونيو 1940)، والغزو الألماني للنرويج. خلال عملياتهم خارج النرويج، أشتبكت السفينتين مع الطرادات وأغرقو حاملة الطائرات  والمدمرات  و. في هذا الاشتباك حقق شارنهورست واحدة من أطول الإصابات البحرية في التاريخ.
البناء والخصائص
أمر ببناء شارنهورست تحت Ersatz Elsass كبديل بارجة ما قبل-دريدنوت القديمة، تحت عقد اسم «دي.»  مُنحت كريكسمارينفيفت في فيلهلمسهافن العقد، حيث تم وضع العارضة في 16 يوليو 1935. تم إطلاق السفينة في 3 أكتوبر 1936، وشهدها أدولف هتلر، وزير الحرب جنرال فيلدمارشايل فيرنر فون بلومبرج، وأرملة <a href="./%D9%83%D8%A7%D8%A8%D8%AA%D9%86%20%D8%A7%D8%AA%20%D8%B3%D9%8A" rel="mw:WikiLink">كابتن ات سي</a> Schultz، قائد الطراد المدرع ، الذي غرق في معركة جزر فوكلاند خلال الحرب العالمية الأولى. تم الانتهاء منه بحلول يناير 1939. تم تكليف شارنهورست في الأسطول في 9 يناير لإجراء تجارب بحرية، والتي كشفت عن ميل خطير لشحن كميات كبيرة من المياه في البحار الثقيلة. تسبب هذا فيضان في القوس والأنظمة الكهربائية التالفة في برج بندقية إلى الأمام. نتيجة لذلك، عادت إلى حوض بناء السفن لتعديل القوس على نطاق واسع. تم استبدال الساق المستقيمة الأصلية بقوس أطلسي مرتفع. كما تم تركيب غطاء قمع غير مهذب أثناء إعادة الإعمار، إلى جانب حظيرة طائرات موسعة؛ تم نقل الصاري الرئيسي أيضا مزيد من الخلف. تم الانتهاء من التعديلات بحلول نوفمبر 1939، وفي ذلك الوقت كانت السفينة تعمل بشكل كامل.
منجة (الرستاق)
منجة منطقة سكنية تقع في ولاية الرستاق، التابعة لمحافظة جنوب الباطنة في سلطنة عمان. يقدر عدد سكانها بـ 15 نسمة حسب إحصاء عام 2010 التابع للمركز الوطني للإحصاء والمعلومات الحكومي. رمز المنطقة هو 70130247.
ميخائيل ماغيري
ميخائيل ماغيري هو لاعب كرة القدم الأيرلندية، ولد في 1965 في أيرلندا.
ألين فرديناند أوين
ألين فرديناند أوين هو محامي وسياسي أمريكي، ولد في 9 أكتوبر 1816 في مقاطعة ويلكس في الولايات المتحدة، وتوفي في 7 أبريل 1865 في كولومبوس في الولايات المتحدة. حزبياً، نشط في الحزب الديمقراطي. وقد انتخب عضو مجلس نواب جورجيا وانتخب عضو مجلس النواب الأمريكي.
منتخب ماكاو لكرة الطائرة للسيدات
منتخب ماكاو لكرة الطائرة للسيدات هو ممثل ماكاو الرسمي في المنافسات الدولية في كرة طائرة للسيدات .
كييتا قوتو
كييتا قوتو (باليابانية: 五島慶太؛ بالكانا: ごとう けいた) هو شخصية أعمال ياباني، ولد في 18 أبريل 1882 في في اليابان، وتوفي في 14 أغسطس 1959.
لوطية (أولاد حمودة)
لوطية هو دُوَّار يقع بجماعة سيدي أتيجي، إقليم آسفي، جهة مراكش آسفي في المملكة المغربية. ينتمي الدوّار لمشيخة أولاد حمودة التي تضم 19 دوار. يقدر عدد سكانه بـ 399 نسمة حسب الإحصاء الرسمي للسكان والسكنى لسنة 2004.
مؤشر بورصة أمستردام
مؤشر بورصة أمستردام AEX، هو مؤشر بورصة يتألف من الشركات الهولندية التي تتاجر في بورصة نيويورك يورونكست أمستردام، وكانت تعرف سابقا باسم بورصة أمستردام. بدأت في عام 1983، ويتكون المؤشر من بحد أقصى 25 من السندات الأكثر تداولاً في البورصة. وهو واحد من المؤشرات الوطنية الرئيسية لمجموعة بورصة نيويورك يورونكست جنبا إلى جنب مع بروكسل BEL20 ،كاك 40 في باريس ولشبونة PSI-20.
برانش
برانش هي مدينة تقع في مقاطعة فرانكلين، أركنسو بولاية أركنساس في الولايات المتحدة. تبلغ مساحة هذه المدينة 9.2 (كم²)، وترتفع عن سطح البحر 142 م، بلغ عدد سكانها 357 نسمة في عام 2000 حسب إحصاء مكتب تعداد الولايات المتحدة.
تعداد عام 2000
بلغ عدد سكان برانش 357 نسمة بحسب تعداد عام 2000 ، وبلغ عدد الأسر 141 أسرة وعدد العائلات 106 عائلة مقيمة في المدينة. في حين سجلت الكثافة السكانية. وبلغ عدد الوحدات السكنية 155 وحدة بمتوسط كثافة قدره. وتوزع التركيب العرقي للمدينة بنسبة 96.08% من البيض و1.68% من الأمريكيين الأصليين و0.84% من الأمريكيين ذوي الأصول الآسيوية و0.56% من الأعراق الأخرى و0.84% من عرقين مختلطين أو أكثر و0.56% من الهسبانيون أو اللاتينيون من أي عرق.
بلغ عدد الأسر 141 أسرة كانت نسبة 34% منها لديها أطفال تحت سن الثامنة عشر تعيش معهم، وبلغت نسبة الأزواج القاطنين مع بعضهم البعض 63.8% من أصل المجموع الكلي للأسر، ونسبة 6.4% من الأسر كان لديها معيلات من الإناث دون وجود شريك، بينما كانت نسبة 5% من الأسر لديها معيلون من الذكور دون وجود شريكة وكانت نسبة 24.8% من غير العائلات. تألفت نسبة 21.3% من أصل جميع الأسر من عدة أفراد يعيشون في نفس المنزل ونسبة 7.8% كانت تتألف من شخص يعيش بمفرده يبلغ من العمر 65 عاماً أو أكثر. وبلغ متوسط حجم الأسرة المعيشية 2.53، أما متوسط حجم العائلات فبلغ 2.92.
بلغ العمر الوسطي للسكان 37.3 عاماً. وكانت نسبة 24.4% من القاطنين تحت سن الثامنة عشر، وكانت نسبة 7% بين الثامنة عشر والرابعة والعشرين عاماً، ونسبة 29.7% كانت واقعةً في الفئة العمرية ما بين الخامسة والعشرين والرابعة والأربعين عاماً، ونسبة 24.6% كانت ما بين الخامسة والأربعين والرابعة والستين، ونسبة 14.3% كانت ضمن فئة الخامسة والستين عاماً فما فوق. يوجد لكل 100 أنثى 108.8 ذكر، ويوجد لكل 100 أنثى في الثامنة عشر من عمرها فما فوق 103.0 ذكر.
بلغ متوسط دخل الأسرة في المدينة 29,531 دولارًا، أما متوسط دخل العائلة فبلغ 33,750 دولارًا. وكان متوسط دخل الذكور 21,875 دولارًا مقابل 17,266 دولارًا للإناث. وسجل دخل الفرد الخاص بالمدينة 15,317 دولارًا. وكانت نسبة 6.9% من العائلات ونسبة 9.9% من السكان تحت خط الفقر، وكان من هؤلاء نسبة 16.9% تحت سن الثامنة عشر ونسبة 0% في الخامسة والستين من العمر وما فوق.
تعداد عام 2010
بلغ العمر الوسطي للسكان 43.1 عاماً. وكانت نسبة 22.3% من القاطنين تحت سن الثامنة عشر، وكانت نسبة 8.7% بين الثامنة عشر والرابعة والعشرين عاماً، ونسبة 20.4% كانت واقعةً في الفئة العمرية ما بين الخامسة والعشرين والرابعة والأربعين عاماً، ونسبة 30.2% كانت ما بين الخامسة والأربعين والرابعة والستين، ونسبة 18.3% كانت ضمن فئة الخامسة والستين عاماً فما فوق. وتوزع التركيب الجنسي للسكان بنسبة 51.2% ذكور و48.8% إناث.
هيلين إدواردز
هيلين إدواردز (و. 1936 – 2016 م) هي فيزيائية، ومهندسة من الولايات المتحدة الأمريكية. وكانت عضوة في الأكاديمية الأمريكية للفنون والعلوم، والأكاديمية الوطنية للهندسة. توفيت عن عمر يناهز 80 عاماً.
جوائز
حصلت على جوائز منها:
محمد أحمد محمد ورق
محمد أحمد محمد ورق برلماني يمني، عضو في مجلس النواب، عن الدورة البرلمانية 2003-2009 والكتلة البرلمانية للمستقلين عن الدائرة الانتخابية رقم (176) بمحافظة أبين.
فترة المجلس
باتفاق عرف بأسم «إتفاق فبراير» تمددت فترة المجلس لمدة عامين، وبقيام ثورة الشباب اليمنية لم تُجرَ الانتخابات، وبحسب إتفاق المبادرة الخليجية تمددت لمدة عامين آخرين حتى 2013.
ياء النسب
ياء النسب: هي ياء مشددة، أصلها ياءان، الأولى ساكنة مدغومة في الياء الثانية، تلحق آخر الأسماء المنسوبة، والياء هي الأصل في النسب، واستعملَ العربَ صيغاً أخرى في النسب، وهي استعمالات سَماعية لا يقاس عليها، بهذه الياء يستطيع المتكلم أن ينسب الإنسانَ إلى قبيلته أو مذهبه أو وطنه، من أمثلة ذلك:
متغيرات النسب
قال أبو حيان "باب النسب بُنيَ على ثلاث تغييرات:
اجتماع أداتَي نسب
لا تجتمع في العربية اثنتان من أدوات النسب أو الصفة في كلمة واحدة، وقد شذّ عن ذلك قولهم «والدهرُ بالإنسان دَواريّ»، فكلمة «دَوّاري» معناها كثير الدوران، وقد زادوا الياء على كلمة «دَوّار» شذوذاً، ويشتدّ المنع إذا اجتمعت أداة النسب الأعجمية وأداة النسب العربية، فلا يقال «أمريكاني»، لأنه يقبح اجتماع أداة النسب «ان an-» الإنكليزية، وأداة النسب «ي» العربية في كلمة واحدة، بل يجب أن يقال «أمريكي».
استعمال آخر
قد تُستعمل الياء المشددة للمبالغة والقوة وإشباع معنى الصفة، قال الزمخشري في الكشاف عند الآية (فاتخذتموهم سخْريّاً): «السخريّ بضم السين أو بكسرها هو مصدر الفعل سخر، إلا أنّ في النسب زيادة قوة في الفعل، كما قيل الخصوصية في الخصوص». قال ابن جني «الاحتياط في إشباع معنى الصفة كقولهم: والدهرُ بالإنسان دوّاريّ»، والمعنى دوّار، وأضيفت الياء لتقوية معنى الصفة.
سالم خليفة (توضيح)
قد يقصد من «سالم خليفة» :
عبد العزيز بن عبد المحسن التويجري
عبد العزيز بن عبد المحسن التويجري، (1912 - 10 يونيو 2007) كاتب ومسؤول سعودي كان نائباً لرئيس الحَرس الوطني السعودي المساعد بمرتبة وزير.
حياته المبكرة
ولد في حوطة سدير في سنة يُقال لها سنة الرحمة عام 1337هـ ، ثم انتقل من حوطة سدير إلى المجمعة وعمره عشر سنوات. والدته هي نورة بنت حماد العشري من أهالي حوطة سدير، وعاش في كنف جده من أمه الشيخ حماد بن عشري بعد وفاة والده وهو صغير ومن ثم انتقل إلى المجمعة بطلب من أخيه الأكبر حمد الأخ غير شقيق وعمره عشر سنوات. بدأ عمله متطوعاً في صفوف جيش الملك عبد العزيز بن عبد الرحمن آل سعود.
كتب لم تَصدر له
للشيخ عبد العزيز بن عبد المحسن التويجري عدد مِنَ الكتب حبيسة الأدراج لم تصدر بعد ولم يمهله الموت أن يخرجها إلى النور.
وفاته
توفى الشيخ عبد العزيز بن عبد المحسن التويجري فجر يوم الأحد 10 يونو 2007 م الموافق 24 جمادى الأولى 1428هـ عن عمر يناهز 95 عاماً.
سام كولينز (توضيح)
قد يقصد من «سام كولينز» :
لنسنغ إفريقي
لنسنغ أفريقي (الاسم العلمي:Poiana richardsonii) هو  من الثدييات يتبع  اللنسنغ البوياني من ال الزبادية.
حمرا
الوضع القانوني
يعتبر المجتمع الدولي المستوطنات الإسرائيلية في الضفة الغربية غير قانونية بموجب القانون الدولي، لكن الحكومة الإسرائيلية تعارض ذلك.
شوتزتروبه
Schutztruppe ( ، "قوة الحماية") كان الاسم الرسمي للقوات الاستعمارية في الأراضي الأفريقية للإمبراطورية الاستعمارية الألمانية من أواخر القرن 19 إلى 1918. على غرار الجيوش الاستعمارية الأخرى، تألفت شوتزروبن من الضباط الأوروبيين المتطوعين وغير المفوضين، والضباط الطبيين والبيطريين. تم تجنيد معظم صفوف المجندين من المجتمعات الأصلية داخل المستعمرات الألمانية أو من أي مكان آخر في أفريقيا.
رامون غونزاليس
رامون غونزاليس (25 نوفمبر 1974 مالاجون إسبانيا - ) هو لاعب كرة قدم إسباني، يلعب كمدافع.
شوتزتروبه
النشر
يعود اسم القوة الاستعمارية الألمانية إلى تعبير المستشار أوتو فون بسمارك، الذي استخدم مصطلح Schutzgebiete، "المحميات"، المستخدمة بدلاً من المستعمرات. نشأت وحدات الشوتزتروبه من قوات الشرطة المحلية أو الوحدات شبه العسكرية الخاصة، حيث واجه المستعمرون الألمان مقاومة أقوى.
شرق أفريقيا الألمانية
كانت السرية ما قبل الحرب مؤلفة من 160 رجلاً (قابلين للتوسعة إلى 200) في ثلاث فصائل [Züge] من 50 إلى 60 رجلاً لكل منهم، بما في ذلك فريقان من الرشاشات. كان لدى كل سرية من السريات الـ 14 ما لا يقل عن 250 رجلًا، فضلاً عن غير النظاميين الأصليين المعروفين باسم Ruga-Ruga من وحداتبنفس الحجم تقريبًا.
خلود محمد
خلود محمد ( -)، ممثلة سعودية مثلت في الكويت. درست في المعهد العالي للفنون المسرحية مثلت العديد من المسلسلات والمسرحيات التجارية والاكاديمية، وايضًا قدمت عدة برامج تلفزيونية.
ألم الاعتلال العصبي
ألم الاعتلال العصبي هو الألم الناجم عن تلف أو مرض مؤثر في الجهاز العصبي الحسي الجسدي. قد يرتبط ألم الاعتلال العصبي مع حالة الأحاسيس غير الطبيعية التي تُدعى عسر الحس أو مع الألم الناشئ عن تنبيه غير مؤلم في الحالات العادية (الألم الخيفي). قد يظهر ألم الاعتلال العصبي مكونات مستمرة و/أو دورية (انتيابية). تشبه الأخيرة ألم الطعن أو الصعق الكهربائي. تشمل الصفات الشائعة للألم كلًا من إحساس الحرق أو البرودة، وأحاسيس «الدبابيس والإبر»، والخدر والحكة.
عوف
عوف هي إحدى بلديات ولاية معسكر الجزائرية.
ألم الاعتلال العصبي
تصل نسبة الإصابة بألم الاعتلال العصبي إلى 7-8% من سكان أوروبا، ويكون شديدًا لدى 5% منهم. قد يحدث ألم الاعتلال العصبي نتيجة اضطرابات في الجهاز العصبي المحيطي أو الجهاز العصبي المركزي (الدماغ والنخاع الشوكي). يمكن تقسيم ألم الاعتلال العصبي بالتالي إلى ألم الاعتلال العصبي المحيطي، وألم الاعتلال العصبي المركزي وألم الاعتلال العصبي المختلط (المحيطي والمركزي). يظهر ألم الاعتلال العصبي إما لوحده أو بالترافق مع أشكال أخرى من الألم. تركز العلاجات الطبية على تحديد السبب الكامن وتخفيف الألم. في حالات اعتلال الأعصاب، قد يتحول الألم إلى فقد الحساسية.
السبب
يُلاحظ حدوث ألم الاعتلال العصبي المركزي في إصابات النخاع الشوكي، والتصلب المتعدد وبعض حالات السكتة الدماغية. يحدث ألم الاعتلال العصبي المحيطي بشكل شائع نتيجة السكري، والاضطرابات الأيضية، والعدوى بالهربس النطاقي، والاعتلالات العصبية المتعلقة بفيروس «إتش آي في»، والعيوب التغذوية، والذيفانات، وتظاهرات الخباثات البعيدة عن الورم الأولي، والاضطرابات المتوسطة مناعيًا والإصابات الرضية للجذع العصبي. يحدث ألم الاعتلال العصبي بشكل شائع في السرطانات كنتيجة مباشرة للسرطان على الأعصاب المحيطية (على سبيل المثال، الضغط الناتج عن الورم)، أو كأحد الآثار الجانبية للعلاج الكيميائي (اعتلال الأعصاب المحيطية المحرض بالعلاج الكيميائي) أو الإصابة الشعاعية أو الجراحة.
المراضة المرافقة
يسبب ألم الاعتلال العصبي تأثيرات فيزيولوجية عميقة على الدماغ، إذ تتظاهر هذه التأثيرات كاضطرابات نفسية. تشير نماذج القوارض، التي يمكن من خلالها عزل التأثيرات الاجتماعية للألم المزمن عن العوامل الأخرى، إلى تسبب الألم المزمن المحرض بأعراض الاكتئاب والقلق، بالإضافة إلى وجود صلة مباشرة لبعض الدارات المحددة في الدماغ. قد يمتلك ألم الاعتلال العصبي علاقة ثنائية الاتجاه مع الاكتئاب، وقد يؤدي تخفيف الاكتئاب المرضي المرافق إلى بعض الفعالية العلاجية لمضادات الاكتئاب في ألم الاعتلال العصبي. يخلق ألم الاعتلال العصبي تأثيرات هامة على الرفاهية الاجتماعية، التي لا يجب تجاهلها. قد يختبر الأشخاص الذين يعانون من ألم الاعتلال العصبي صعوبات في العمل مع إظهار مستويات أعلى من العمل أثناء المرض، والتغيب عن العمل والبطالة، ومستويات أعلى من إساءة استخدام الأدوية (الذي قد يرتبط بمحاولة العلاج الدوائي الذاتي)، بالإضافة إلى صعوبات في التفاعل الاجتماعي. علاوة على ذلك، يُعد ألم الاعتلال العصبي غير المضبوط أحد عوامل خطر الانتحار الهامة. قد تسبب بعض فئات ألم الاعتلال العصبي تأثيرات ضارة خطيرة ما يحتم دخول المستشفى، على سبيل المثال، قد يظهر ألم العصب ثلاثي التوائم على شكل أزمة شديدة، إذ قد يختبر المريض صعوبة في الكلام، والأكل والشرب. نظرًا إلى إمكانية حدوث ألم الاعتلال العصبي كمراضة مترافقة مع السرطان، يمتلك في بعض الحالات تأثيرًا هامًا في حصر الجرعات على فئات محددة من العلاج الكيميائي.
الأسباب الشائعة
الأسباب المحتملة الأخرى
هارون مايكل ميتسحاك
هارون مايكل ميتسحاك هو ممثل أمريكي، ولد في 22 أبريل 1980 بسان كليمينتي في الولايات المتحدة.
جون بينيت دوسن
جون بينيت دوسن هو قاضي وسياسي أمريكي، ولد في 17 مارس 1798 في ناشفيل في الولايات المتحدة، وتوفي في 26 يونيو 1845 في الولايات المتحدة. حزبياً، نشط في الحزب الديمقراطي. وقد انتخب عضو مجلس نواب لويزيانا وانتخب عضو مجلس النواب الأمريكي.
سفين مونتجومري
سفين مونتجومري هو دراج سويسري، ولد في 10 مايو 1976 في دتمولد في ألمانيا.
الدروع (حزم العدين)
الدروع محلة تابعة لقرية القصيع، التابعة لعزلة الابعون بمديرية حزم العدين إحدى مديريات محافظة إب في الجمهورية اليمنية ، بلغ تعداد سكانها 20 حسب تعداد اليمن لعام 2004.
عبد الله عبده علي أحمد اهيف
عبد الله عبده علي أحمد اهيف برلماني يمني، عضو في مجلس النواب، عن الدورة البرلمانية 2003-2009 والكتلة البرلمانية لنواب حزب المؤتمر الشعبي العام عن الدائرة الانتخابية رقم (177) بمحافظة أبين.
فترة المجلس
باتفاق عرف بأسم «إتفاق فبراير» تمددت فترة المجلس لمدة عامين، وبقيام ثورة الشباب اليمنية لم تُجرَ الانتخابات، وبحسب إتفاق المبادرة الخليجية تمددت لمدة عامين آخرين حتى 2013.
جيرارد وودورد
جيرارد وودورد هو شاعر بريطاني، ولد في 1961 في لندن في المملكة المتحدة.
الكسندر بلاك روبرتسون
الكسندر بلاك روبرتسون هو سياسي كندي، ولد في 1847. انتخب عضو برلمان مقاطعة أونتاريو.
أشخر
الأشْخَر  أو دُوتسِيّة أو دُتْزِيَة ، مُعَرَّبَة؛ مهداة إلى أحد العلماء الهولنديين Deutz من مدينة أمستردام (1763-1822)  جنس نباتات مُزهرة من فصيلة الهدرانجية، يضم 60 نوعًا. أعطانها في شرق ووسط آسيا (من جبال الحملايا شرقًا إلى اليابان والفلبين)، وأمريكا الوسطى وأيضًا أوروبا.أعلى تنوع الأنواع لهُ في الصين، حيث يوجد 50 نوع.
ليزي ليند أف هاغبي
إيميلي أوغوستا لويز «ليزي» ليند أف هاغبي (20 سبتمبر 1878 – 26 ديسمبر 1963) هي ناشطة نسوية سويدية بريطانية ومدافعة عن حقوق الحيوان، أصبحت ناشطة بارزة مناهضة لتشريح الأحياء في إنجلترا في أوائل القرن العشرين.
ولدت لعائلة سويدية مرموقة، التحقت ليند أف هاغبي وناشطة سويدية أخرى بمدرسة لندن الطبية للنساء في عام 1902 لتعزيز تعليمهن المناهض لتشريح الأحياء. حضرتا عمليات التشريح في كلية لندن الجامعية، وفي عام 1903 نشرتا مذكراتهما، بعنوان فوضى العلم: مقتطفات من مذكرات طالبتين من طلاب علم وظائف الأعضاء، والتي اتهمت الباحثين بتشريح كلب دون تخدير كافٍ. تضمنت الفضيحة التالية، المعروفة باسم قضية الكلب البني، محاكمة تشهير، وتعويضات لأحد الباحثين، وقيام طلاب الطب بأعمال شغب في لندن.
في عام 1906، شاركت ليند أف هاغبي في تأسيس جمعية الدفاع عن الحيوانات ومناهضة تشريح الأحياء، وأدارت لاحقًا ملجأً للحيوانات في فيرن هاوس في دورست مع دوقة هاملتون. أصبحت مواطنة بريطانية في عام 1912، وأمضت بقية حياتها في الكتابة والتحدث عن حماية الحيوان والصلة بين ذلك والنسوية. كانت خطيبة ماهرة، حطمت الرقم القياسي في عام 1913 لعدد الكلمات المنطوقة في أثناء المحاكمة، عندما ألقت 210,000 كلمة وسألت 20,000 سؤال خلال دعوى تشهير فاشلة رفعتها ضد جريدة بال مول غازيت، التي انتقدت حملاتها. وصفتها ذا نيشن بأنها «أذكى دعوة عرفتها نقابة المحامين منذ زمن راسل، رغم أنها أُجريت بالكامل بواسطة امرأة.»
الحياة المبكرة
ولدت  في أسرة سويدية غنية ونبيلة، كانت ليند أف هاغبي حفيدة حاجب ملك السويد، وابنة المحامي البارز إميل ليند أف هاغبي. تلقت تعليمها في كلية شلتنهام للسيدات في إنجلترا، ما أتاح لها الوصول إلى نوع تعليم غير متاح لمعظم النساء في ذلك الوقت. مكنها هذا، إلى جانب دخل خاص من أسرتها، من مواصلة نشاطها السياسي والكتابة والسفر في جميع أنحاء العالم لإلقاء المحاضرات، أولاً في معارضة عمل الأطفال والبغاء، ثم لدعم تحرير المرأة، ولاحقًا لحقوق الحيوان. كتبت ليزا غولمارك أن ليند أف هاغبي خرجت إلى الشوارع، ونظمت المسيرات والخطابات، عندما كان متوقعًا أن تبقى النساء في المنزل يطرزن.
عندما تحدثت ليند أف هاغبي إلى جمعية غلاسكو فيجيتيريان في عام 1914، ذكر صحفي في ديلي ميل أنه كان يتوقع أن يجد امرأة «عريضة الفكين، وعالية الجبين، وهزيلة قليلًا، وذات مظهر صارم ومقتصد فكريًا»، ولكن بدلًا من ذلك وجد «امرأة جميلة، وصغيرة، وممتلئة، ذات عيون بنية لطيفة ومتلألئة... لم تعوزها الأناقة والزينة. كان فستانها الأزرق... جميلًا كما يتمناه أي شخص» وكتب أنه «تحول تقريبًا إلى نباتي» من خلال «منطقها الثابت والمستقيم».
بعد الجامعة، أمضت ليند أف هاغبي وقتًا في باريس في عام 1900، حيث زارت مع صديقتها السويدية، ليزا كاثرين شارتاو، معهد باستور. شعرتا بالأسى إزاء التشريح الذي رأتاه هناك، وعندما عادتا إلى السويد انضمتا إلى جمعية دول الشمال المناهضة لتشريح الأحياء. أصبحت ليند أف هاغبي رئيسة فخرية لها عام 1901. وفي عام 1902 قررتا الالتحاق بمدرسة لندن الطبية للنساء للحصول على التعليم الطبي الذي احتاجتا إليه لتدريب نفسيهما كناشطاتين مناهضاتين للتشريح.
فوضى العلم
احتفظت الامرأتان بمذكرات، وفي أبريل 1903 عرضتاها على ستيفن كوليردج، سكرتير الجمعية الوطنية البريطانية المناهضة للتشريح. احتوت المخطوطة المكونة من 200 صفحة على ادعاء واحد، في فصل بعنوان «تسلية»، الذي لفت انتباهه، ذُكر فيه أن العديد من الباحثين أُجروا عدة عمليات على كلب ترير بني على مدى شهرين، ثم شُرح -بدون تخدير، بحسب المذكرات- أمام جمهور من طلاب الطب الضاحكين: حمل المعيد ومعاون المختبر كلب كبير، ممدود على ظهره على لوحة العمليات، إلى غرفة المحاضرات. ثُبتت ساقاه على اللوحة، وثُبت رأسه بإحكام بالطريقة المعتادة، وكُمم بإحكام.
كان هناك شق كبير في جانب الرقبة، يكشف عن الغدة. أظهر الحيوان كل علامات المعاناة الشديدة؛ وفي صراعه، رفع جسده مرارًا وتكرارًا عن اللوحة، وقام بمحاولات قوية للتحرر. إذا كان هذا صحيحًا، فإن الادعاءات تعني أن التجربة انتهكت قانون القسوة على الحيوانات لعام 1876، الذي يوجب تخدير الحيوان لهذا النوع من الإجراءات واستخدامه مرة واحدة قبل أن يقتل. (سمحت تراخيص أخرى بتشريح حيوانات واعية.) اتهم كوليردج بيليس علنًا بانتهاك القانون. ورد بيليس بدعوى قضائية.
بدأت المحاكمة في نوفمبر 1903، وفي ذلك الوقت نشر إرنست بيل من كوفنت غاردن المذكرات، أولاً تحت عنوان شهود عيان (آي ويتنسس)، ولاحقًا بعنوان فوضى العلوم: مقتطفات من مذكرات طالبتين من طلاب علم وظائف الأعضاء. شهدت ليند أف هاغبي وسيشترناو أنهما شاهدتا الكلب أُحضر إلى مسرح المحاضرات، وقالتا إنهما لم يشموا أو يشاهدوا أي جهاز يوصِل مزيج الكحول والكلوروفورم والأثير الذي يستخدم عادةً كمخدر. وشهدتا بأن الكلب قام بتحركات اعتبرتاها «عنيفة وهادفة». بينما شهد بيليس أن الكلب خُدر وكان يعاني من الرقاص، وهو مرض تسبب في تقلصات لا إرادية.
قبلت هيئة المحلفين بيان بيليس ومنحته 2,000 جنيه إسترليني مع قيمة تكاليف بلغت 3,000 جنيه إسترليني. سحب الناشر المذكرات وسلم جميع النسخ المتبقية لمحامي بيليس. أعادت ليند أف هاغبي نشرها لاحقًا دون فصل «تسلية»، ومع فصل جديد عن المحاكمة، طُبعت طبعة خامسة بحلول عام 1913. ودفعت الفضيحة المطولة الحكومة إلى إنشاء اللجنة الملكية الثانية للتشريح في عام 1907؛ عينت عمال تشريح للجنة وسمحت لها بالعمل بسرية.
جمعية الدفاع عن الحيوان ومكافحة التشريح
شاركت ليند أف هاغبي في تأسيس جمعية الدفاع عن الحيوانات ومناهضة تشريح الأحياء (إيه دي إيه إف إس) في عام 1906 مع دوقة هاميلتون، بالإضافة إلى متجر ومكتب في 170 بيكاديللي، لندن. صاغت ليند أف هاغبي، كجزء من عمل الجمعية، عريضة في عام 1906 أو نحوه، وهي إعلان مناهض للتشريح، وزعت في جميع أنحاء العالم، وترجمت إلى عدة لغات، ووقع عليها مناهضو التشريح. في يوليو 1909، نظمت أول مؤتمر دولي لمناهضة التشريح في لندن. كتبت ماري آن إلستون أن المؤتمر عزز التدرج في المعركة لإنهاء التشريح.
نعران
نعران  كيبوتس استيطاني إسرائيلي، أُقيم في 18 يونيو 1971 في غور الأردن على أراضي بلدة العوجا في محافظة أريحا. يقع إداريًا ضمن اختصاص مجلس غور الأردن الإقليمي، وبلغ عدد سكانه نحو 92 مستوطنًا في عام 2018.
الوضع القانوني
يعتبر المجتمع الدولي المستوطنات الإسرائيلية في الضفة الغربية غير قانونية بموجب القانون الدولي، لكن الحكومة الإسرائيلية تعارض ذلك.
مايكل كارتر ويليامز
مايكل كارتر ويليامز مواليد 10 أكتوبر 1991، هو لاعب كرة سلة أمريكي يلعب مع فريق ميلووكي باكز في الرابطة الوطنية لكرة السلة ويحمل الرقم 5. يبلغ طوله.
جيونجانو
جيونجانو، ، (كامبانيل:Jungane)، هي بلدة و(بلدية) في مقاطعة ساليرنو، في منطقة كامبانيا، بجنوب غرب إيطاليا.
السكان
في سنة 1861 بلغ عدد السكان 835 نسمة، وتطور العدد ليصل في سنة 2011 لـ 1,249 نسمة.
اكني (آيت بويعقوب)
اكني هو دُوَّار يقع بجماعة الزاوية النحلية، إقليم شيشاوة، جهة مراكش آسفي في المملكة المغربية. ينتمي الدوّار لمشيخة آيت بويعقوب التي تضم 27 دوار. يقدر عدد سكانه بـ 242 نسمة حسب الإحصاء الرسمي للسكان والسكنى لسنة 2004.
توماس هيكس
توماس هيكس (و. ) هو عداء مراثوني، وعداء مسافات طويلة، ومنافس ألعاب قوى أمريكي، ولد في برمينغهام، شارك في الألعاب الأولمبية الصيفية 1904، توفي في وينيبيغ، عن عمر يناهز 76 عاماً.
1989 في المكسيك
فيما يلي قوائم الأحداث التي وقعت خلال عام 1989 في المكسيك.
دم الاخوين (مرجان)
دَم الأخَوين (الاسم العلمي Tubipora musica) نوع من المرجان.
يوزو فوناكوشي
يوزو فوناكوشي مواليد 12 يونيو 1977 في كوبه، هو لاعب كرة قدم ياباني سابق كان يلعب كمهاجم.
تقنيات النسخ
تقنيات النسخ: هي التقنيات المستخدمة لدراسة نسخة الكائن الحي، وهي مجموعة نسخ الحمض النووي الريبي (RNA) الخاصة به. يتم تسجيل محتوى المعلومات للكائن الحي في الحمض النووي لجينومه ويتم التعبير عنه من خلال النسخ. هنا يعمل (mRNA) كجزيء وسيط عابر في شبكة المعلومات بينما تؤدي (RNAs) الغير مشفرة وظائف متنوعة إضافية. تعمل التقنية على أخذ لقطة من النص في وقت إجمالي النصوص الموجودة في الخلية.
توفر تقنيات النسخ على نطاق واسع العمليات الخلوية النشطة والخاملة. يكمن التحدي الرئيسي في علم الأحياء الجزيئي في فهم كيف يمكن أن يؤدي نفس الجينوم إلى ظهور أنواع مختلفة من الخلايا وكيف يتم تنظيم التعبير الجيني. بدأت المحاولات الأولى لدراسة النصوص الكاملة في بداية التسعينيات، حيث أدت التطورات التكنولوجية اللاحقة منذ أواخر التسعينيات إلى تغيير المجال بشكل مستمر، وجعلت مجال تقنيات النسخ تخصصًا واسع الانتشار في العلوم البيولوجية. هناك نوعان من التقنيات المعاصرة الرئيسية في هذا المجال: المصفوفات الدقيقة ، وهي التي تحدد مجموعة من المتواليات المحددة مسبقًا، و (RNA-Seq) ، التي تستخدم التسلسل عالي الإنتاجية لتسجيل جميع النصوص. مع تطور التكنولوجيا، زاد حجم البيانات التي تنتجها كل تجربة نسخ. نتيجة لذلك، تم تكييف طرق تحليل البيانات بشكل طردي لتحليل كميات كبيرة بشكل متزايد من البيانات حيث تكون أكثر دقة وكفاءة. نمت قواعد بيانات النسخ وزادت فائدتها مع جمع المزيد من النسخ النصية ومشاركتها من قبل الباحثين. سيكون من المستحيل تقريبًا تفسير المعلومات الواردة في النسخة النصية بدون السيرعلى سياق التجارب السابقة.
إن قياس التعبير عن جينات الكائن الحي في الأنسجة أو الظروف والأوقات المختلفة، يعطي معلومات حول كيفية تنظيم الجينات ويكشف عن تفاصيل بيولوجيا الكائن الحي. يمكن استخدامه أيضًا لاستنتاج وظائف الجينات التي لم يتم توضيحها مسبقًا. مكّن تحليل تقنيات النسخ من دراسة كيفية تغير التعبير الجيني في الكائنات الحية المختلفة وكان له دور فعال في فهم الأمراض التي تصيب الإنسان. يسمح تحليل التعبير الجيني في مجمله باكتشاف اتجاهات منسقة واسعة لا يمكن تمييزها بمقايسات أكثر استهدافًا.
تاريخ تقنيات النسخ
تميز علم النسخ أنه أعاد صياغة ما هو ممكن في كل عقد وزمن، وجعلت التقنيات السابقة عفا عليها الزمن. نُشرت المحاولة الأولى لالتقاط نسخة جزئية من نسخة بشرية في عام 1991 وأبلغت عن وجود (609) تسلسل من (mRNA) من الدماغ البشري. في عام 2008 ، تم نشر نسختين بشريتين، مؤلفة من ملايين التسلسلات المشتقة من النسخ والتي تغطي (16000) جينًا، وبحلول عام 2015 تم نشر النسخ لمئات الأفراد. يتم الآن بشكل روتيني إنشاء نسخ من حالات المرض المختلفة أو الأنسجة أو حتى الخلايا المفردة. هذا التطور الكبير في علم النسخ ما كان إلا نتاج تطور التكنولوجيا الحديثة بشكل دقيق ونمو الاقتصاد بشكل ملحوظ وكبير. ما قبل تقنيات النسخ:
تم إجراء دراسات على النصوص الفردية قبل عدة سنوات من ظهورمنهج تقنيات النسخ. تم جمع مكتبات نصوص (silkmoth mRNA) وتحويلها إلى حمض نووي تكميلي (cDNA) للتخزين باستخدام النسخ العكسي في أواخر السبعينيات. أما في الثمانينيات، تم استخدام التسلسل منخفض الإنتاجية باستخدام طريقة (Sanger) لتسلسل النصوص العشوائية، وإنتاج علامات تسلسل معبر عنها بصيغة (ESTs) (expressed sequence tags). كانت طريقة (Sanger) للتسلسل سائدة حتى ظهور طرق عالية الإنتاجية مثل التسلسل بالتوليف (Solexa / Illumina). برزت (ESTs) خلال التسعينيات كطريقة فعالة لتحديد المحتوى الجيني للكائن الحي دون تسلسل الجينوم بأكمله. تم قياس كميات النصوص الفردية باستخدام النشاف الشمالي، ومصفوفات غشاء النايلون، وأساليب النسخ العكسي الكمي (PCR ،RT-qPCR) لاحقًا، ولكن هذه الطرق شاقة ويمكنها فقط التقاط قسم فرعي صغير من النسخة. وبالتالي، فإن الطريقة التي يتم بها التعبير عن النص ككل وتنظيمه ظلت غير معروفة حتى تم تطوير تقنيات إنتاجية أعلى وأكثر فعالية.
التجارب الحديثة
تم استخدام كلمة «ترانسكريبتوم» التي تعني تقنيات التسخ لأول مرة في التسعينيات. في عام 1995 ، تم تطوير واحدة من أقدم طرق النسخ المستندة إلى التسلسل، وهي التحليل التسلسلي للتعبير الجيني (SAGE) (serial analysis of gene expression)، والتي عملت من خلال تسلسل سانجر (Sanger sequencing) لشظايا النسخ العشوائية المتسلسلة. تم تحديد النصوص من خلال مطابقة الأجزاء مع الجينات المعروفة. تم أيضًا استخدام متغير من (SAGE) باستخدام تقنيات التسلسل عالية التطور والإنتاجية يسمى ب التحليل التعبير الجيني الرقمي ، لفترة وجيزة. ومع ذلك، فقد تم تجاوز هذه الأساليب إلى حد كبير من خلال التسلسل عالي الإنتاجية للنصوص الكاملة، والتي قدمت معلومات إضافية حول بنية النص مثل متغيرات لصق وغيره.
تطور التقنيات المعاصرة
تم تطوير التقنيات المعاصرة السائدة، المصفوفات الدقيقة (microarrays) و تسلسل RNA ، في منتصف التسعينيات والعقد الأول من القرن الحادي والعشرين. تم نشر المصفوفات الدقيقة التي تقيس وفرة مجموعة محددة من النصوص من خلال تهجينها إلى مجموعة من المجسات التكميلية لأول مرة في عام (1995). سمحت تقنية المصفوفات الدقيقة بفحص آلاف النسخ في وقت واحد وبتكلفة مخفضة بشكل كبير لكل جين وتوفير الأيدي العاملة. كانت كل من مصفوفات أليغنوكليوتيد المرقطة (spotted oligonucleotide arrays) ومصفوفات أفيميتريكس (Affymetrix) عالية الكثافة هي الطريقة الفضلى للتنميط النسخي حتى أواخر العقد الأول من القرن الحادي والعشرين. خلال هذه الفترة، تم إنتاج مجموعة من المصفوفات الدقيقة لتغطية الجينات المعروفة في الكائنات الحية النموذجية أو ذات الأهمية الاقتصادية. أدى التقدم في تصميم وتصنيع المصفوفات إلى تحسين خصوصية المجسات والسماح باختبار المزيد من الجينات على مجموعة واحدة. أدى التقدم في الكشف عن التألق إلى زيادة دقة وحساسية القياس النصوص ذات الوفرة المنخفضة.
يتم إنشاء تسلسل RNA عن طريق النسخ العكسي لـ كلًا من RNA و وتسلسل (cDNAs) الناتجة في المختبر يتم اشتقاق وفرة النسخ الناتجة من عدد التهم من كل نص. لذلك فقد تأثرت هذه التقنية بشكل كبير بتطوير تقنيات التسلسل عالية الإنتاجية. كان تسلسل التوقيع المتوازي (MPSS) مثالًا مبكرًا يعتمد على توليد من 16-20 متواليات bp عبر سلسلة معقدة من التهجين، واستخدمت في عام (2004) للتحقق من صحة التعبير عن عشرة آلاف جين في (Arabidopsis thaliana). تم نشر أقدم عمل لتسلسل RNA في عام 2006 مع مائة ألف نسخة متسلسلة باستخدام تقنية 454. كانت هذه تغطية كافية لتحديد وفرة النسخ النسبية. بدأت شعبية RNA-Seq في الزيادة بعد عام 2008 عندما سمحت تقنيات Solexa / Illumina الجديدة بتسجيل مليار تسلسل نسخ. يسمح هذا العائد الآن بتحديد ومقارنة النسخ البشرية.
جمع البيانات
يمكن توليد البيانات عن نصوص الحمض النووي الريبي (mRNA) من خلال واحد من مبدأين مهمين: تسلسل النصوص الفردية ( ESTs ، أو RNA-Seq) أو تهجين النصوص إلى مجموعة مرتبة من تحقيقات النيوكليوتيدات (المصفوفات الدقيقة) (microarray).
ستيف بويل
ستيف بويل هو لاعب اتحاد الرغبي بريطاني، ولد في 9 أغسطس 1953.
تقنيات النسخ
علامات التسلسل المعبر عنها
علامة التسلسل المعبر عنها (EST) هي تسلسل نيوكليوتيد قصير يتم إنشاؤه من نسخة واحدة من RNA. يتم نسخ الحمض النووي الريبي (RNA) أولاً على أنه DNA تكميلي (cDNA) بواسطة إنزيم النسخ العكسي قبل تسلسل cDNA الناتج. نظرًا لأنه يمكن جمع ESTs دون معرفة مسبقة بالكائن الحي الذي أتت منه، فيمكن صنعها من خليط من الكائنات الحية أو العينات البيئية. على الرغم من استخدام طرق الإنتاجية العالية الآن، إلا أن مكتبات EST تقدم معلومات تسلسل لتصميمات المصفوفات الدقيقة المبكرة ؛ على سبيل المثال، تم تصميم ميكروأري الشعير من 350.000 EST متسلسلة مسبقًا.
التحليل التسلسلي والغطاء للتعبير الجيني (SAGE / CAGE)
كان التحليل( التسلسلي للتعبير الجيني (SAGE) تطويرًا لمنهجية EST لزيادة إنتاجية العلامات التي تم إنشاؤها والسماح بدخول بعض التقدير الكمي لوفرة النص. cDNA يتم توليدها من الحمض النووي الريبي mRNA ولكن بعد ذلك يتم هضمها إلى 11 pp tag باستخدام إنزيمات التقييد التي تقطع الحمض النووي في تسلسل معين، و 11 زوج من القاعدة على طول هذا التسلسل. بعد ذلك يتم ضم cDNA في سلاسل (> 500 bp) ومتسلسلة باستخدام طرق منخفضة، ولكن قراءة طويلة المدى مثل تسلسل Sanger . ثم يتم تقسيم التسلسلات مرة أخرى إلى علامات 11 نقطة أساس باستخدام برامج الكمبيوتر في عملية تسمى deconvolution . إذا كان الجينوم المرجعي متاحًا، فقد تتطابق هذه العلامات مع الجين المقابل في الجينوم. إذا كان الجينوم المرجعي غير متاح، فيمكن استخدام العلامات مباشرة كعلامات تشخيصية إذا وجد أنه يتم التعبير عنها بشكل مختلف في حالة المرض.
مصطلح التعبير الجيني لتحليل الغطاء (CAGE) هي أحد أشكال SAGE التي تسلسل العلامات من نهاية 5 ' من نسخة mRNA فقط. لذلك، يمكن تحديد موقع بدء نسخ الجينات عند محاذاة العلامات إلى جينوم مرجعي. يعد تحديد مواقع بدء الجينات مفيدًا لتحليل المروج واستنساخ cDNAs كاملة الطول.
تنتج طرق كلًا من SAGE و CAGE معلومات عن جينات أكثر مما كان ممكنًا في السابق عند تسلسل ESTs الفردية، ولكن تحضير العينات وتحليل البيانات عادة ما يكونان أكثر كثافة في العمل.
المبادئ والتطورات
تتكون المصفوفات الدقيقة من أوليغومرات نيوكليوتيد قصيرة، تُعرف باسم «المجسات» ، والتي يتم ترتيبها عادةً في شبكة على شريحة زجاجية. يتم تحديد وفرة نسخة عن طريق تهجين النصوص المسمى فلوريسنتلي لهذه التحقيقات. تشير شدة التألق في كل موقع مسبار على الصفيف إلى وفرة النسخ لتسلسل التحقيق هذا.
تتطلب المصفوفات الدقيقة بعض المعرفة الجينومية من الكائن الحي محل الاهتمام، على سبيل المثال، في شكل تسلسل الجينوم المشروح، أو مكتبة من ESTs التي يمكن استخدامها لإنشاء تحقيقات للمصفوفة.
طرق
عادةً ما تندرج المصفوفات الدقيقة الخاصة بالنسخ في إحدى فئتين عريضتين: المصفوفات المرقطة منخفضة الكثافة أو المصفوفات القصيرة عالية الكثافة. يتم الاستدلال على وفرة النسخ من شدة التألق المستمدة من النصوص ذات العلامات الفلورية التي ترتبط بالمصفوفة.
تتميز المصفوفات ذات الكثافة المنخفضة المرقطة عادةً بقطرات بيكوليتر لمجموعة من cDNAs المنقى والمصفوفة على سطح شريحة زجاجية. هذه المجسات أطول من تلك الخاصة بالمصفوفات عالية الكثافة ولا يمكنها تحديد أحداث الربط البديلة. تستخدم المصفوفات المرقطة نوعين مختلفين من الفلوروفور لتسمية عينات الاختبار والتحكم، وتستخدم نسبة التألق لحساب مقياس نسبي للوفرة. تستخدم المصفوفات عالية الكثافة تسمية فلورية واحدة، ويتم تهجين كل عينة واكتشافها على حدة. وقد شاع صفائف عالية الكثافة من قبل Affymetrix GeneChip مجموعة، حيث يتم كميا كل محضر من قبل العديد من القصير 25 -mer تحقيقات أن معا مقايسة جين واحد.
كانت صفائف NimbleGen عبارة عن مصفوفة عالية الكثافة تم إنتاجها بواسطة طريقة الكيمياء الضوئية بدون قناع، والتي سمحت بتصنيع مرن للمصفوفات بأعداد صغيرة أو كبيرة. كانت هذه المصفوفات تحتوي على 100000s من 45 إلى 85 مير وتم تهجينها بعينة ذات لون واحد لتحليل التعبير. تضمنت بعض التصميمات ما يصل إلى 12 مصفوفة مستقلة لكل شريحة.
المبادئ والتطورات
يشير RNA-Seq إلى مزيج من منهجية التسلسل عالية الإنتاجية مع الأساليب الحسابية لالتقاط وقياس النصوص الموجودة في مستخلص الحمض النووي الريبي. يبلغ طول تسلسل النوكليوتيدات الناتج حوالي 100 نقطة أساس، ولكن يمكن أن يتراوح من 30 نقطة أساس إلى أكثر من 10000 نقطة أساس اعتمادًا على طريقة التسلسل المستخدمة. يستفيد RNA-Seq من أخذ عينات عميقة للنسخة مع العديد من الأجزاء القصيرة من نسخة للسماح بإعادة البناء الحسابي لنسخة RNA الأصلية عن طريق محاذاة القراءات مع جينوم مرجعي أو مع بعضها البعض ( تجميع de novo ). يمكن قياس كمية الرنا منخفضة الوفرة وعالية الوفرة في تجربة RNA-Seq ( نطاق ديناميكي من 5 أوامر من حيث الحجم ) - وهي ميزة رئيسية على نسخ المصفوفات الدقيقة. بالإضافة إلى ذلك، فإن كميات إدخال الحمض النووي الريبي (RNA) أقل بكثير بالنسبة لـ RNA-Seq (كمية نانوجرام) مقارنة بالمصفوفات الدقيقة (كمية ميكروغرام) ، مما يسمح بفحص أدق للهياكل الخلوية وصولاً إلى مستوى الخلية المفردة عند دمجها مع التضخيم الخطي لـ cDNA. من الناحية النظرية، لا يوجد حد أعلى للقياس الكمي في RNA-Seq ، وضوضاء الخلفية منخفضة جدًا لقراءات 100 نقطة أساس في المناطق غير المتكررة.
يمكن استخدام RNA-Seq لتحديد الجينات داخل الجينوم ، أو تحديد الجينات النشطة في نقطة زمنية معينة، ويمكن استخدام أعداد القراءة لنمذجة مستوى التعبير الجيني النسبي بدقة. لقد تحسنت منهجية RNA-Seq باستمرار، في المقام الأول من خلال تطوير تقنيات تسلسل الحمض النووي لزيادة الإنتاجية والدقة وطول القراءة. منذ الأوصاف الأولى في عامي 2006 و 2008 ، تم اعتماد RNA-Seq بسرعة وتجاوز المصفوفات الدقيقة باعتبارها تقنية النسخ السائدة في عام 2015.
أدى البحث عن بيانات النسخ على مستوى الخلايا الفردية إلى حدوث تقدم في أساليب إعداد مكتبة RNA-Seq ، مما أدى إلى تطورات مثيرة في الحساسية. يتم الآن وصف نسخ الخلية المفردة بشكل جيد وقد تم تمديدها إلى RNA-Seq في الموقع حيث يتم استجواب نسخ الخلايا الفردية مباشرة في الأنسجة الثابتة.
طرق
تم إنشاء RNA-Seq بالتنسيق مع التطور السريع لمجموعة من تقنيات تسلسل الحمض النووي عالية الإنتاجية. ومع ذلك، قبل تسلسل نسخ RNA المستخرجة، يتم تنفيذ عدة خطوات معالجة رئيسية. تختلف الطرق في استخدام إثراء النص، والتجزئة، والتضخيم، والتسلسل الفردي أو المزدوج، وما إذا كان يجب الحفاظ على معلومات الخيوط.
يمكن زيادة حساسية تجربة RNA-Seq عن طريق إثراء فئات من الحمض النووي الريبي (RNA) ذات الأهمية واستنفاد الحمض النووي الريبي المعروف الوفير. يمكن فصل جزيئات mRNA باستخدام تحقيقات oligonucleotides التي تربط ذيول poly-A الخاصة بها. بدلا من ذلك، RIBO استنفاد يمكن استخدامها لإزالة تحديدا وفيرة ولكن غير المفيدة الرنا الريباسي (rRNAs) من خلال التهجين لتحقيقات مصممة خصيصا ل الأصنوفة في تسلسل الريباسي محددة (على سبيل المثال الثدييات الريباسي، مصنع الريباسي). ومع ذلك، يمكن أن يؤدي استنفاد الضلع أيضًا إلى بعض التحيز عبر الاستنفاد غير المحدد للنصوص غير المستهدفة. يمكن تنقية RNAs الصغيرة، مثل micro RNAs ، بناءً على حجمها عن طريق الرحلان الكهربائي للهلام والاستخراج.
أثناء التحضير للتسلسل، يمكن تضخيم نسخ (كدنا) من النصوص بواسطة تفاعل البوليميراز المتسلسل لإثراء الأجزاء التي تحتوي على تسلسل المحول المتوقع 5 'و 3'. يستخدم التضخيم أيضًا للسماح بتسلسل كميات إدخال منخفضة جدًا من RNA ، وصولاً إلى أقل من 50 بيكوغرام في التطبيقات المتطرفة. يمكن استخدام ضوابط الزيادة في RNAs المعروفة لتقييم مراقبة الجودة للتحقق من إعداد المكتبة وتسلسلها، من حيث محتوى GC ، وطول الجزء، بالإضافة إلى التحيز بسبب موضع التجزئة داخل النص. المعرّفات الجزيئية الفريدة (UMIs) عبارة عن تسلسلات عشوائية قصيرة تُستخدم لتمييز أجزاء التسلسل بشكل فردي أثناء إعداد المكتبة بحيث يكون كل جزء مميز فريدًا. توفر UMIs مقياسًا مطلقًا للتقدير الكمي، وفرصة لتصحيح تحيز التضخيم اللاحق الذي تم تقديمه أثناء إنشاء المكتبة، وتقدير حجم العينة الأولي بدقة. تعتبر UMIs مناسبة بشكل خاص لنسخة RNA-Seq أحادية الخلية، حيث يتم تقييد كمية إدخال الحمض النووي الريبي (RNA) والتضخيم الموسع للعينة مطلوبًا.
بمجرد أن يتم تحضير جزيئات النص، يمكن تسلسلها في اتجاه واحد فقط (طرف واحد) أو كلا الاتجاهين (نهاية مزدوجة). عادةً ما يكون إنتاج التسلسل أحادي النهاية أسرع، وأرخص من التسلسل ثنائي النهاية وكافٍ لتقدير مستويات التعبير الجيني. ينتج عن التسلسل المزدوج النهاية محاذاة / تجميعات أكثر قوة، وهو أمر مفيد للتعليق التوضيحي للجينات واكتشاف الشكل الإسوي للنسخ. تحافظ أساليب RNA-Seq الخاصة بالجدار على معلومات حبلا لنسخة متسلسلة. بدون معلومات الخيط، يمكن محاذاة القراءات مع موضع الجين ولكن لا تخبر في أي اتجاه يتم نسخ الجين. يعد Stranded-RNA-Seq مفيدًا لفك تشفير النسخ للجينات التي تتداخل في اتجاهات مختلفة ولإجراء تنبؤات جينية أكثر قوة في الكائنات غير النموذجية. يعتمد RNA-Seq حاليًا على نسخ جزيئات RNA إلى جزيئات cDNA قبل التسلسل ؛ لذلك، الأنظمة الأساسية اللاحقة هي نفسها بالنسبة للبيانات الجينية والنسخية. وبالتالي، كان تطوير تقنيات تسلسل الحمض النووي سمة مميزة لـ RNA-Seq. التسلسل المباشر للحمض النووي الريبي باستخدام التسلسل النانوي يمثل أحدث تقنيات RNA-Seq الحالية. يمكن للتسلسل النانوي للحمض النووي الريبي أن يكتشف القواعد المعدلة التي يمكن إخفاؤها بطريقة أخرى عند تسلسل cDNA وأيضًا يلغي خطوات التضخيم التي يمكن أن تؤدي إلى التحيز.
تعتمد حساسية ودقة تجربة RNA-Seq على عدد القراءات التي تم الحصول عليها من كل عينة. هناك حاجة إلى عدد كبير من القراءات لضمان التغطية الكافية للنسخة، مما يتيح الكشف عن النصوص منخفضة الوفرة. يزداد التصميم التجريبي تعقيدًا عن طريق تقنيات التسلسل ذات نطاق الإخراج المحدود، والكفاءة المتغيرة لإنشاء التسلسل، وجودة التسلسل المتغير. يضاف إلى هذه الاعتبارات أن كل نوع لديه عدد مختلف من الجينات وبالتالي يتطلب إنتاج تسلسل مخصص لنسخة فعالة. حددت الدراسات المبكرة عتبات مناسبة تجريبيًا، ولكن مع نضوج التكنولوجيا، تم التنبؤ بالتغطية المناسبة حسابياً عن طريق تشبع النسخ. الطريقة الأكثر فاعلية لتحسين الكشف عن التعبير التفاضلي في الجينات منخفضة التعبير هي إضافة المزيد من التكرارات البيولوجية بدلاً من إضافة المزيد من القراءات. المعايير الحالية التي أوصى بها مشروع Encyclopedia of DNA Elements (ENCODE) هي لتغطية الإكسوم 70 ضعفًا لمعيار RNA-Seq وتغطية exome تصل إلى 500 ضعف لاكتشاف النصوص والأشكال الإسوية النادرة.
تحليل البيانات
طرق النسخ متوازية للغاية وتتطلب حسابًا كبيرًا لإنتاج بيانات ذات مغزى لكل من تجارب ميكروأري و RNA-Seq. يتم تسجيل بيانات Microarray كصور عالية الدقة ، مما يتطلب اكتشاف الميزات والتحليل الطيفي. يبلغ حجم كل من ملفات الصور الأولية Microarray حوالي 750 ميجابايت، بينما يبلغ حجم الشدة المعالجة حوالي 60 ميجابايت. يمكن أن تكشف التحقيقات القصيرة المتعددة التي تتطابق مع نسخة واحدة عن تفاصيل حول بنية intron - exon ، مما يتطلب نماذج إحصائية لتحديد مصداقية الإشارة الناتجة. تنتج دراسات RNA-Seq المليارات من سلاسل الحمض النووي القصيرة، والتي يجب أن تتماشى مع الجينومات المرجعية المكونة من ملايين إلى مليارات أزواج القواعد. يتطلب تجميع القراءات <i id="mwApQ">De novo</i> داخل مجموعة البيانات إنشاء رسوم بيانية تسلسلية معقدة للغاية. عمليات RNA-Seq متكررة للغاية وتستفيد من الحساب المتوازي ولكن الخوارزميات الحديثة تعني أن أجهزة الحوسبة الاستهلاكية كافية لتجارب النسخ البسيطة التي لا تتطلب تجميعًا جديدًا للقراءات. يمكن التقاط نسخة بشرية بدقة باستخدام RNA-Seq مع 30 مليون تسلسل 100 نقطة أساس لكل عينة. قد يتطلب هذا المثال ما يقرب من 1.8 جيجا بايت من مساحة القرص لكل عينة عند تخزينها بتنسيق fastq مضغوط. ستكون بيانات العد المعالج لكل جين أصغر بكثير، أي ما يعادل شدة ميكروأري المعالجة. قد يتم تخزين بيانات التسلسل في مستودعات عامة، مثل أرشيف قراءة التسلسل (SRA). يمكن تحميل مجموعات بيانات RNA-Seq عبر Gene Expression Omnibus.
معالجة الصورة
يجب أن تحدد معالجة الصور بالميكروأري بشكل صحيح الشبكة العادية للميزات داخل صورة وأن تحدد بشكل مستقل شدة التألق لكل ميزة. بالإضافة إلى ذلك، يجب تحديد القطع الأثرية للصورة وإزالتها من التحليل العام. تشير شدة الإسفار مباشرة إلى وفرة كل تسلسل، حيث أن تسلسل كل مسبار في الصفيف معروف بالفعل.
تتضمن الخطوات الأولى لـ RNA-seq أيضًا معالجة صور مماثلة ؛ ومع ذلك، عادةً ما يتم التعامل مع تحويل الصور إلى بيانات متسلسلة تلقائيًا بواسطة برنامج الجهاز. ينتج عن طريقة تسلسل Illumina بالتخليق مجموعة من المجموعات الموزعة على سطح خلية التدفق. يتم تصوير خلية التدفق حتى أربع مرات خلال كل دورة تسلسل، مع عشرات إلى مئات الدورات في المجموع. تتشابه مجموعات خلايا التدفق مع بقع ميكروأري ويجب تحديدها بشكل صحيح خلال المراحل المبكرة من عملية التسلسل. في طريقة Roche للتسلسل الحراري ، تحدد شدة الضوء المنبعث عدد النيوكليوتيدات المتتالية في تكرار البوليمر المتجانس. هناك العديد من المتغيرات في هذه الطرق ، ولكل منها ملف تعريف خطأ مختلف للبيانات الناتجة.
تحليل بيانات تسلسل RNA
تولد تجارب RNA-Seq حجمًا كبيرًا من قراءات التسلسل الأولي التي يجب معالجتها للحصول على معلومات مفيدة. يتطلب تحليل البيانات عادةً مجموعة من أدوات برمجيات المعلوماتية الحيوية (انظر أيضًا قائمة أدوات المعلوماتية الحيوية RNA-Seq ) التي تختلف وفقًا للتصميم والأهداف التجريبية. يمكن تقسيم العملية إلى أربع مراحل: مراقبة الجودة والمحاذاة والتقدير والتعبير التفاضلي. يتم تشغيل معظم برامج RNA-Seq الشائعة من واجهة سطر الأوامر ، إما في بيئة Unix أو ضمن البيئة الإحصائية R / Bioconductor.
رقابة الجودة
قراءات التسلسل ليست مثالية ، لذلك يجب تقدير دقة كل قاعدة في التسلسل لتحليلات المصب. يتم فحص البيانات الأولية للتأكد من: درجات الجودة للمكالمات الأساسية عالية ، ومحتوى GC يطابق التوزيع المتوقع ، والزخارف المتسلسلة القصيرة ( k-mers ) ليست ممثلة بشكل زائد ، ومعدل تكرار القراءة منخفض بشكل مقبول. توجد عدة خيارات برمجية لتحليل جودة التسلسل ، بما في ذلك FastQC و FaQCs. يمكن إزالة التشوهات (التشذيب) أو تمييزها بمعاملة خاصة أثناء العمليات اللاحقة.
توضيح
من أجل ربط تسلسل قراءة الوفرة بالتعبير عن جين معين ، يتم محاذاة تسلسل النص إلى جينوم مرجعي أو <i id="mwAtc">دي نوفو</i> محاذي لبعضها البعض إذا لم يتوفر مرجع. تتضمن التحديات الرئيسية لبرمجيات المحاذاة سرعة كافية للسماح بمحاذاة مليارات من التسلسلات القصيرة في إطار زمني ذي مغزى ، والمرونة في التعرف على التضفير الداخلي للـ mRNA والتعامل معه ، والتخصيص الصحيح للقراءات التي تعينها على مواقع متعددة. عالجت التطورات البرمجية هذه المشكلات بشكل كبير ، كما أن الزيادات في طول قراءة التسلسل تقلل من فرصة محاذاة القراءة الغامضة. يحتفظ EBI بقائمة بمحاذاة التسلسل عالية الإنتاجية المتوفرة حاليًا.
يمكن استخدام تجميع De novo لمحاذاة القراءات مع بعضها البعض لإنشاء تسلسلات نصية كاملة الطول دون استخدام جينوم مرجعي. تشمل التحديات الخاصة بتجميع de novo متطلبات حسابية أكبر مقارنة بنسخة مرجعية ، والتحقق الإضافي من المتغيرات الجينية أو الأجزاء ، والشرح الإضافي للنصوص المجمعة. لقد ثبت أن المقاييس الأولى المستخدمة لوصف تجميعات النسخ ، مثل N50 ، مضللة وأن طرق التقييم المحسنة متاحة الآن. مقاييس تعتمد على الشرح وتقييم أفضل من اكتمال التجميع، مثل contig متبادلة أفضل ضرب العد. بمجرد تجميع de novo ، يمكن استخدام التجميع كمرجع لطرق محاذاة التسلسل اللاحقة وتحليل التعبير الجيني الكمي. RAM - ذاكرة الوصول العشوائي ؛ MPI - واجهة تمرير الرسائل ؛ EST - علامة التسلسل المعبر عنها.
تحديد الكميات
يمكن إجراء التحديد الكمي لمحاذاة التسلسل على مستوى الجين أو إكسون أو نسخة. تتضمن المخرجات النموذجية جدولًا بأعداد القراءة لكل ميزة يتم توفيرها للبرنامج ؛ على سبيل المثال ، للجينات في ملف تنسيق ميزة عامة. يمكن حساب عدد قراءة الجينات والإكسون بسهولة تامة باستخدام HTSeq ، على سبيل المثال. يعتبر التحديد الكمي على مستوى النص أكثر تعقيدًا ويتطلب طرقًا احتمالية لتقدير وفرة النص الإسوي من معلومات القراءة القصيرة ؛ على سبيل المثال ، باستخدام برنامج أزرار الكم. يجب تحديد القراءات التي تتماشى جيدًا مع مواقع متعددة وإما إزالتها أو محاذاتها مع أحد المواقع المحتملة أو مواءمتها مع الموقع الأكثر احتمالًا.
بمجرد توفر التعداد الكمي لكل نص ، يتم قياس التعبير الجيني التفاضلي عن طريق تطبيع البيانات والنمذجة والتحليل الإحصائي لها. ستقرأ معظم الأدوات جدولًا للجينات وتقرأ الأعداد كمدخلات لها ، لكن بعض البرامج ، مثل cuffdiff ، ستقبل تنسيق خريطة المحاذاة الثنائية كمدخلات. النواتج النهائية لهذه التحليلات هي قوائم الجينات المصحوبة باختبارات زوجية مرتبطة بالتعبير التفاضلي بين العلاجات وتقديرات احتمالية هذه الاختلافات. mRNA - messenger RNA.
التحقق من الصحة
يمكن التحقق من صحة تحليلات النسخ باستخدام تقنية مستقلة ، على سبيل المثال ، PCR الكمي (qPCR) ، والتي يمكن التعرف عليها وتقييمها إحصائيًا. يتم قياس التعبير الجيني مقابل معايير محددة لكل من الجينات المعنية والجينات الضابطة. القياس بواسطة qPCR مشابه للقياس الذي حصل عليه RNA-Seq حيث يمكن حساب قيمة لتركيز المنطقة المستهدفة في عينة معينة. ومع ذلك ، فإن qPCR مقصور على amplicons أصغر من 300 نقطة أساس ، وعادةً ما تكون باتجاه الطرف 3 'من منطقة التشفير ، مع تجنب 3'UTR. إذا كان التحقق من صحة الأشكال الإسوية للنسخة مطلوبًا ، فيجب أن يشير فحص محاذاة قراءة RNA-Seq إلى المكان الذي يمكن فيه وضع بادئات qPCR للتمييز الأقصى. ينتج عن قياس جينات التحكم المتعددة جنبًا إلى جنب مع الجينات ذات الأهمية مرجعًا ثابتًا ضمن سياق بيولوجي. أظهر التحقق من صحة qPCR لبيانات RNA-Seq عمومًا أن طرق RNA-Seq المختلفة مترابطة بشكل كبير.
يعد التحقق الوظيفي للجينات الرئيسية من الاعتبارات المهمة للتخطيط بعد النسخ. قد تكون أنماط التعبير الجيني لوحظت ترتبط وظيفيا إلى النمط الظاهري عن طريق مستقلة تدق إلى أسفل / الإنقاذ الدراسة في الكائن الحي من الفائدة.