cyanic-selkie/wikianc huggingface dataset:
جريمة الفصل العنصري
يتم تعريف جريمة الفصل العنصري من قبل نظام روما الأساسي لعام 2002 للمحكمة الجنائية الدولية عن الأفعال اللاإنسانية ذات الطابع المماثل لغيرها من الجرائم ضد الإنسانية «التي ارتكبت في سياق نظام مؤسسي قائم على القمع والسيطرة بصورة منهجية من جانب جماعة عرقية واحدة على أي مجموعات أو مجموعات عنصرية أخرى وترتكب بنية الإبقاء على ذلك النظام».
في 30 نوفمبر 1973 افتتحت الجمعية العامة للأمم المتحدة للتوقيع والتصديق على الاتفاقية الدولية لقمع ومعاقبة جريمة الفصل العنصري. تعريف جريمة الفصل العنصري بأنها «أعمال غير إنسانية ارتكبت لغرض إنشاء وإدامة هيمنة فئة عنصرية من الأشخاص على أية مجموعة عرقية أخرى أو أشخاص وقمعهم بشكل منهجي». وتتضمن هذه الاتفاقية 19 مادة وتتضمن هذه الاتفاقية في موادها كالتالى: كل إنسان أن يتمتع بجميع الحقوق والحريات دون تمييز من أي نوع، والتمييز بسبب العرق أو اللون أو الأصل القومي، وتأخذ بعين الاعتبار إعلان منح الاستقلال للبلدان والشعوب المستعمرة، الذي أعلنت فيه الجمعية العامة أنه لا يمكن مقاومة مسار حركة التحرر أو عكس وجهتها، وأن من الواجب، خدمة للكرامة الإنسانية والتقدم والعدالة، وضع حد للاستعمار وجميع أساليب العزل والتمييز، وتلاحظ أن الدول كما تقول الاتفاقية الدولية للقضاء علي جميع أشكال التمييز العنصري، ترفض بصفة خاصة العزل العنصري والفصل العنصري وتتعهد بمنع وحظر وإزالة كل الممارسات المماثلة في الأقاليم الداخلة في ولايتها، وتلاحظ أن اتفاقية منع جريمة الإبادة الجماعية والمعاقبة عليها قد نصت علي أن بعض الأفعال التي يمكن وصفها أيضا بأنها من أفعال الفصل العنصري تشكل جريمة بنظر القانون الدولي، و أن اتفاقية عدم تقادم جرائم الحرب والجرائم المرتكبة ضد الإنسانية تصف «الأفعال اللاإنسانية الناجمة عن سياسة الفصل العنصري» بأنها جرائم ضد الإنسانية، و أن الجمعية العامة للأمم المتحدة قد اتخذت عددا من القرارات شجبت فيها سياسات الفصل العنصري وممارساته بوصفها جرائم ضد الإنسانية، و أن مجلس الأمن قد شدد علي أن الفصل العنصري ومواصلة تعميقه وتوسيع مجالاته أمور خطيرة التعكير والتهديد للسلم والأمن الدوليين، واقتناعا منها بأن من أمرها عقد اتفاقية دولية لقمع جريمة الفصل العنصري والمعاقبة عليها أن يمكن من اتخاذ تدبير أفعل علي المستويين الدولي والقومي، بهدف قمع جريمة الفصل العنصري ومعاقبة من يرتكبها.
رافاييل إدري
رافاييل إدري (من مواليد 10 سبتمبر 1937) هو سياسي إسرائيلي سابق، شغل منصب وزير البيئة ووزير بدون حقيبة وزارية بين عامي 1988 و1990.
سيرته الذاتية
وُلِد إدري في الدار البيضاء بالمغرب، وهاجر ضمن عليا في عام 1956. في عام 1965، عُرِف باسم رافاييل كوهين وعمل كمهندس شركة نفطية، تزوج من آني-كلود عمار، ابنة رجل الأعمال اليهودي المغربي ديفيد عمار، بحضور اثنين من أعضاء الحكومة المغربية، والعديد من الوزراء السابقين ورئيس الشرطة الوطنية. وقد تُوفِّيت في 6 أغسطس 1993.
انضم إدري إلى حزب العمل وشغل منصب رئيس المجلس المحلي لحتسور هجليليت. بعيداً عن السياسة، كان إدري اللجنة التنفيذية لسولل بونه، وعمل كمدير عام ورئيس مجلس إدارة شيكون أوفدم، وترأس الجمعية العالمية لليهود المغاربيين في إسرائيل.
في عام 1981، اُنتخِب في قائمة الكنيست عن حزب معراخ. وقد أُعِيد انتخابه في عام 1984 وشغل منصب رئيس مجموعة معراخ البرلمانية وائتلاف حكومة الوحدة الوطنية. أُعِيد انتخابه مرة أخرى في عام 1988، وعُيِّن وزيراً بدون حقيبة وزارية في حكومة الوحدة الوطنية لعام 1988. غادر الحكومة في عام 1990 عندما انسحب حزب معراخ من الائتلاف. بعد إعادة انتخابه في عام 1992 أصبح نائباً لرئيس الكنيست، وهو المنصب الذي تقلده بعد انتخابات 1996. وخسر مقعده في انتخابات عام 1999.
سيلينا جيتلي
سيلينا جيتلي مواليد 24 نوفمبر 1981 في شيملا، هيماشال براديش، الهند، هي ممثلة، نموذج، صاحبة المشروع، الكاتبهندية بدأت مسيرتها الفنية عام 2001، بعدما فازت بملكة جمال الهند عام2001.
التافيلا إيربينا (إيطاليا)
ألتافيلا إيربينا هي كومونا في مقاطعة أفيلينو ، كامبانيا ، جنوب إيطاليا.
التاريخ
وفقا لبعض العلماء ، فإنه يتزامن مع Poetilia التي ذكرها فيرجيل في Aeneid. كان للمدينة أسماء أخرى مثل سكانديانو ، ألتاكودا ، سينو حتى الوقت الحالي ، وهي مشتقة من عائلة نورمان هوتفيل.
سان بنديتو في بريليس
سان بنديتو في بريليس هي بلدية في مقاطعة لاكويلا في إقليم أبروتسو الإيطالي.
السكان
في سنة 1861 بلغ عدد السكان 668 نسمة، وتطور العدد ليصل في سنة 2011 لـ 127 نسمة.
بيتي كلاي
بيتي سانت كلير كلاي (16 أبريل 1917 - 24 أبريل 2004) كانت الإبنه الصغرى لمؤسس الحركة الكشفية روبرت بادن باول وزوجته أولاف بادن باول.
حبيب غلوم
حبيب غلوم (19 نوفمبر 1963 -)، مخرج وممثل إماراتي. وعضو مؤسس لمسرح رأس الخيمة الوطني. مثل عدد كبير من الأعمال المسرحية منها : واقدساه، المهرجون، الخوف، الطوفة، حكاية لم ترويها شهرزاد وما كان لأحمد بنت سليمان، شارك في العديد من الأعمال الإذاعية والتلفزيون ممثلا ً ومخرجا، أشرف على العديد من الدورات المسرحية التدريبيةًً مشرفا ً ومحاضرا، يشغل منصب مدير المراكز الثقافية في وزارة الاعلام والثقافة في دولة الإمارات.
ريتشارد كوبر (لاعب كريكت بريطاني)
ريتشارد كوبر (7 أغسطس 1972 في المملكة المتحدة - ) هو لاعب كريكت بريطاني. لعب مع.
هندرسون (تكساس)
هندرسون هي مدينة أمريكية تقع في ولاية تكساس.تبلغ مساحة هذه المدينة 31.1 (كم²)،ويبلغ عدد سكانها 11727 نسمة حسب إحصاء سنة 2010 م. تشير إحصاءات سنة 2000م بأن الكثافة السكانية في هذه المدينة تقدر بـ(365.9) نسمة/كم2.
التركيبة السكانية
حدّد مكتب تعداد الولايات المتحدة بيانات التركيبة السكانية لهندرسون في تعداد الولايات المتحدة. في ما يلي، التركيبة السكانية حسب تعدادي 2000 و2010.
تعداد عام 2000
بلغ عدد سكان هندرسون 11,273 نسمة بحسب تعداد عام 2000 ، وبلغ عدد الأسر 4,350 أسرة وعدد العائلات 2,969 عائلة مقيمة في المدينة. في حين سجلت الكثافة السكانية. وبلغ عدد الوحدات السكنية 4,831 وحدة بمتوسط كثافة قدره. وتوزع التركيب العرقي للمدينة بنسبة 68.98% من البيض و22.34% من الأمريكيين الأفارقة و0.27% من الأمريكيين الأصليين و0.47% من الأمريكيين ذوي الأصول الآسيوية و0.01% من سكان جزر المحيط الهادئ و6.80% من الأعراق الأخرى و1.13% من عرقين مختلطين أو أكثر و11.80% من الهسبانيون أو اللاتينيون من أي عرق.
بلغ عدد الأسر 4,350 أسرة كانت نسبة 36.6% منها لديها أطفال تحت سن الثامنة عشر تعيش معهم، وبلغت نسبة الأزواج القاطنين مع بعضهم البعض 51.3% من أصل المجموع الكلي للأسر، ونسبة 13.7% من الأسر كان لديها معيلات من الإناث دون وجود شريك، بينما كانت نسبة 3.3% من الأسر لديها معيلون من الذكور دون وجود شريكة وكانت نسبة 31.7% من غير العائلات. تألفت نسبة 28.9% من أصل جميع الأسر من عدة أفراد يعيشون في نفس المنزل ونسبة 17.1% كانت تتألف من شخص يعيش بمفرده يبلغ من العمر 65 عاماً أو أكثر. وبلغ متوسط حجم الأسرة المعيشية 2.52، أما متوسط حجم العائلات فبلغ 3.12.
جوزيف هيندريكس
جوزيف هيندريكس هو لاعب كرة قدم غاني، ولد في 19 يونيو 1979 في كوماسي في غانا. شارك مع منتخب غانا لكرة القدم. أما مع النوادي، فقد لعب مع أشانتي غولد وأشانتي كوتوكو.
هندرسون (تكساس)
تعداد عام 2000
بلغ العمر الوسطي للسكان 36.7 عاماً. وكانت نسبة 26.9% من القاطنين تحت سن الثامنة عشر، وكانت نسبة 8.7% بين الثامنة عشر والرابعة والعشرين عاماً، ونسبة 25.6% كانت واقعةً في الفئة العمرية ما بين الخامسة والعشرين والرابعة والأربعين عاماً، ونسبة 19.4% كانت ما بين الخامسة والأربعين والرابعة والستين، ونسبة 16.8% كانت ضمن فئة الخامسة والستين عاماً فما فوق. يوجد لكل 100 أنثى 87.6 ذكر، ويوجد لكل 100 أنثى في الثامنة عشر من عمرها فما فوق 81.5 ذكر.
بلغ متوسط دخل الأسرة في المدينة 31,766 دولارًا، أما متوسط دخل العائلة فبلغ 38,095 دولارًا. وكان متوسط دخل الذكور 31,285 دولارًا مقابل 19,473 دولارًا للإناث. وسجل دخل الفرد الخاص بالمدينة 19,491 دولارًا. وكانت نسبة 12% من العائلات ونسبة 15.9% من السكان تحت خط الفقر، وكان من هؤلاء نسبة 25.2% تحت سن الثامنة عشر ونسبة 11.2% في الخامسة والستين من العمر وما فوق.
تعداد عام 2010
بلغ عدد سكان هندرسون 13,712 نسمة بحسب تعداد عام 2010 ، وبلغ عدد الأسر 4,368 أسرة وعدد العائلات 3,010 عائلة مقيمة في المدينة. في حين سجلت الكثافة السكانية. وبلغ عدد الوحدات السكنية 4,859 وحدة بمتوسط كثافة قدره. وتوزع التركيب العرقي للمدينة بنسبة 64.51% من البيض و23.88% من الأمريكيين الأفارقة و0.42% من الأمريكيين الأصليين و0.74% من الأمريكيين ذوي الأصول الآسيوية و0.08% من سكان جزر المحيط الهادئ و8.58% من الأعراق الأخرى و1.79% من عرقين مختلطين أو أكثر و18.04% من الهسبانيون أو اللاتينيون من أي عرق.
بلغ عدد الأسر 4,368 أسرة كانت نسبة 37.2% منها لديها أطفال تحت سن الثامنة عشر تعيش معهم، وبلغت نسبة الأزواج القاطنين مع بعضهم البعض 47.3% من أصل المجموع الكلي للأسر، ونسبة 16.7% من الأسر كان لديها معيلات من الإناث دون وجود شريك، بينما كانت نسبة 4.9% من الأسر لديها معيلون من الذكور دون وجود شريكة وكانت نسبة 31.1% من غير العائلات. تألفت نسبة 27.4% من أصل جميع الأسر من عدة أفراد يعيشون في نفس المنزل ونسبة 13.6% كانت تتألف من شخص يعيش بمفرده يبلغ من العمر 65 عاماً أو أكثر. وبلغ متوسط حجم الأسرة المعيشية 2.59، أما متوسط حجم العائلات فبلغ 3.15.
بلغ العمر الوسطي للسكان 37.5 عاماً. وكانت نسبة 22.6% من القاطنين تحت سن الثامنة عشر، وكانت نسبة 9.8% بين الثامنة عشر والرابعة والعشرين عاماً، ونسبة 28.3% كانت واقعةً في الفئة العمرية ما بين الخامسة والعشرين والرابعة والأربعين عاماً، ونسبة 25.1% كانت ما بين الخامسة والأربعين والرابعة والستين، ونسبة 14.2% كانت ضمن فئة الخامسة والستين عاماً فما فوق. وتوزع التركيب الجنسي للسكان بنسبة 52.7% ذكور و47.3% إناث.
بئر باحشوان (وادي العين)
' بئر باحشوان هي إحدى قرى عزلة حوره بمديرية وادي العين التابعة لمحافظة حضرموت، بلغ تعداد سكانها 28 نسمة حسب تعداد اليمن لعام 2004.
ميغيل فارغاس
ميغيل فارغاس (15 يونيو 1996 بسانتياغو في تشيلي - ) هو لاعب كرة قدم تشيلي في مركز حراسة المرمى. شارك مع منتخب تشيلي تحت 20 سنة لكرة القدم. أما مع النوادي، فقد لعب مع نادي أونيفرسيداد كاتوليكا.
مستشفيات ومراكز مغربي
تأسّست مستشفيات ومراكز مغربي في عام 1955، بدأت كمستشفى للعيون في جدة، بالمملكة العربية السعودية. كان أول مستشفى متخصص بالشرق الأوسط وشمال إفريقيا. أصبح أكبر وأول شبكة رعاية صحية متخصصة في المنطقة، حيث يُوفّر العناية بالعيون لأكثر من 500 ألف مريض وتُجرى أكثر من 50.000 عملية جراحية لتصحيح البصر سنويًا.
في أواخر سبعينيات القرن العشرين، قررت مستشفيات ومراكز مغربي توسيع خدماتها عن طريق الحصول على تخصصات طب الأنف والأذن والحنجرة وطب الأسنان.
في عام 1997 دخلت مستشفيات ومراكز مغربي في شراكة مع «إيه إم آي السعودية المحدودة» (AMI Saudi Arabia Limited)، وهي إحدى شركات مجموعة زينل ومن أكبر شركات إدارة المستشفيات بالشرق الأوسط.
في عام 2009 عقدت مؤسسة التمويل الدولية، وهي عضو في مجموعة البنك الدولي، شراكة مع مستشفيات ومراكز مغربي لتوسيع العناية بالعيون في منطقة الشرق الأوسط وشمال أفريقيا، لتلبية الحاجة إلى خدمات طب العيون، وتقديم الرعاية السريرية في المنطقة.
تعمل مستشفيات ومراكز مغربي في تسع دول في الشرق الأوسط وأفريقيا. لديها 32 مستشفى ومركز، 8 منها خيرية و300 طبيب و600 ممرضة. تستضيف المنشآت 40 غرفة تشغيل.
== جوائز وأوسمة ==
إليانا دي كروز
إليانا دي كروز (بالتيلوغوية: ఇలియానా) هي ممثلة وعارضة هندية من مواليد 1 نوفمبر 1987 بمدينة مومباي بالهند.
بدأت مسيرتها كعارضة أزياء وبعدها دخلت عالم التمثيل في سينما جنوب الهند (التيلوغو) عام 2006 من خلال عدة أفلام، كان أول هذه الأعمال فيلم ديفاداسو، خاتارناك و راخي، وكانت بداية شهرتها في هذه المرحلة أي السينما التيلوغوية، وفي نفس السنة أي 2006، كان أول ظهور أيضا لإليانا دي كروز في السينما التاميلية من خلال فيلم كيدي مع غريمتها في الساحة تامانا. بعدها زادت شهرتها من خلال العديد من الأعمال في جنوب الهند.
الحياة المبكّرة
ولدت في مومباي، ولها ثلاثة أشقاء، الشقيقة الكبرى فرح وأَخّ أصغر رايز والأخت الأصغر أيلين. بينما تكْبرُ، عاشتْ في غوا لمدة سبع سَنَواتِ تقريباً، خلال تلك الفترة مدير الفندق الذي كانت امها تعمل فيه اقترح أن لإليانا وجه جميل مع ابتسامة حيوية ويَجِبُ أَنْ تكون عارضة، وعمل على اجتماع مع مارك روبنسون، كانت مترددة في البداية ولكنها اقنعت في النهاية وتم إنشاء أول محفظة لها في يناير 2003، الذي وصفته بأنه «كارثة». بَدأتْ بكَسْب المُلاحظةِ خلال إلتقاطِ الصور وعرض الأزياء وحقيبتِها الثانيةِ بُدِأتْ السنة التاليةَ، التي عملت فيها إعلاناتَها ترويجية لبعض الشركات. والمخرج راكيش روشان أب الممثل المعروف هريتيك روشان جلب لها العديد من العروض للتمثيل في الأفلام الروائية.
الحياة المهنية
بدأت مسيرتها الفنية في أفلام التيليغو، وقد فازت بجائزة الفيلمفيلر جنوب الهند لأفضل ظهور لأول مرّةِ نسائيِ لفيلم التيليغو ديفاداسو، وأيضا ظهرت في أفلام مثل، كيك، وأسست نفسها كأفضل الممثلات في سينما تيلوغو. كما ظهرت دي كروز في فيلم كيدي في السينما التاميلية وفيلم نانبان ، وأخيرا دخلت لبوليود في فيلم بارفي (فيلم) والذي أخرجه انوراغ باسو، وقد نالت التقدير النقدي وجائزة فيلمفير لأفضل ظهور لأول مرّةِ في الساحة السينمائية البوليوودية.
من 2012 حتى الآن
في أوائل عام 2012، أخذت إليانا دور البطولة في فيلم (Nanban)، وهذا الأخير هو نسخة عن الفيلم البوليوودي ثلاثة حمقى الذي صدر في 2009. حصل الفيلم على نقذ أيجابي من كلا الجمهور والنقاد الفنيين، وكان فيلمها التالي في هذه الفترة فيلم التيلوغو جولاي الذي حصل هو الآخر على قبول جماهيري متميز، إلا أنه كان ثالت المتضررين دخلا في عام 2012. بعد ذلك لعبت دور كوميدي في فيلم ديفودو شيسينا مانوشولو رفقة الممثل رافي تيجا، في هذا الفيلم لعبت إليانا دور سائقة سيارة أجرة الفيلم تلقى ردود فعل متباينة في نهاية المطاف ولم ينجح كثيرا في شباك التذاكر.
ودخلت دي كروز إلى بوليوود لأول مرة في عام 2012 عن طريق فيلم بارفي!، تمثل دور البطولة في بريانكا تشوبرا ورانفير سينغ، وإليانا كانت قد لعبت دور الراوي أيضا في قصة الفيلم. الفيلم كان قد صدر في 14 أيلول 2012، وقد كان من الأوائل في شباك التذاكر كونه حصل على قبول جماهيري كبير ونقد إيجابي للغاية من النقاد، وكان قد حصل على نجاح تجاري كبير، حيث كسب 1.75 مليار ₹ أي ما يعادل (26 مليون دولار) في جميع أنحاء العالم، من خلال هذا الفيلم حصلت إليانا دي كروز على جائزة فيلم فير لأفضل دور نسائي لأول مرة، فضلا عن الترشيح لجائزة فيلم فير لأفضل ممثلة مساعدة. وقد صرح بعض المخرجين والفنانين أن إليانا تركت لأول مرة انطباع جيد عنها من خلال هذا الدور، على عكس ما قدمته في السينما التيلوغوية والتاميلية. وتم عرض الفيلم في مهرجان بوسان السينمائي وكذا مهرجان مراكش السينمائي، واختير الفيلم الرسمي للهند في حفل توزيع جوائز الأوسكار الخامس والثمانون.
الطيبة (جنين)
قرية الطيبة قرية فلسطينية تقع أقصى شمال غرب مدينة جنين تبعد حوالي 17 كم من المدينة وهي تابعة لمحافظة جنين، معظم اراضيها جبلية تشتهر بزراعة الزيتون، انشئت القرية عام 1948م اثر حرب النكبة حيث سكنها اللاجئين إليها من ام الفحم وهم من العائلات الفحماوية (عائلة الجبارين وعائلة المحاميد وعائلة الاغبارية وعائلة المحاجنة), يوجد في القرية مجلس قروي يوفر الخدمات العامة من الكهرباء والماء وتعبيد الطرق. وابنية القرية حديثة البناء مما أدى بالمسؤولين إطلاق عليها اسم (عاصمة قرى جنين)كما يوجد فيها مدرستان للذكور والإناث يعمل سكان القرية بالزراعة والوظائف الحكومية والعمل داخل الأراضي المحتل عام 1948.
سكان القرية
يبلغ عدد السكان داخل قرية الطيبة حوالي2100 نسمة جميعهم من اللاجئين الفلسطينيين الذين كانوا يعتمدون على العمل داخل الخط ولكن بعد إكمال عملية بناء السياج الإسرائيلي أصبحوا في قائمة العاطلين عن العمل وينقسم السكان داخل قرية الطيبة حسب النسب:
معاناة القرية من الجدار الفصل العنصري الإسرائيلي
تقع القرية بمحاذاة السياج الإسرائيلي (Fence The) الذي صادر جزء من أراضي القرية واقتلع الأشجار وحرم الأهل من مصدر الرزق وفصلهم عن أهلهم داخل الخط الأخضر إذ أن السكان في قرية الطيبة ينحدرون من أصول فحماوية (محاميد، جبارين، اغبارية، محاجنة) كما وان السياج الإسرائيلي صادر ملعب كرة القدم التابع للقرية وهو المكان الوحيد الذي كان يعتبر متنفساً وحيدا لقضاء وقت الفراغ لكن الحلم لم يكتمل مع مصادرة الملعب الوحيد للقرية لصالح بناء السياج الإسرائيلي. ومما يزيد الوضع خطورة في قرية الطيبة هو أن مدرسة الطيبة الثانوية للبنين التي يبلغ عدد طلابها حوالي 140 طالب لا تبعد سوى (25 ؟ 30) متر عن السياج الإسرائيلي مما يعرض الطلاب للخطر بشكل دائم.
مدارس القرية
يوجد في قرية الطيبة مدرستين للذكور ومدرسة للإناث إضافة إلى روضتين للأطفال، ويبلغ عدد الطلاب حوالي 600 طالب وطالبة، يواجة الطلاب والطالبات معاناة حقيقية في حياتهم فهم يدرسون في مدارس القرية حتى الصف الحادي عشر ومن ثم يضطرون إلى دراسة الصف الثاني عشر في مدارس أخرى خارج القرية
احتياجات القرية
تفتقر قرية الطيبة إلى العديد من الاحتياجات الإنسانية الضرورية للحياة اليومية الدائمة منها العيادة الصحية الحكومية، المراكز الاجتماعية الثقافية من مكتبات علمية، المراكز العلمية من مختبرات حاسوب، المراكز الشبابية التي تسد جزء من وقت الفراغ للشباب، كما وان القرية بحاجة إلى ترميم واسع للبنية التحتية داخل القرية.
تيمقيت (إيميني)
تيمقيت هو دُوَّار يقع بجماعة أمرزڭان، إقليم ورززات، جهة درعة تافيلالت في المملكة المغربية. ينتمي الدوّار لمشيخة إيميني التي تضم 9 دواوير. يقدر عدد سكانه بـ 575 نسمة حسب الإحصاء الرسمي للسكان والسكنى لسنة 2004.
استشراب السائل رفيع الإنجاز
شرح النظرية
يتم ادخال المادة المراد تحليلها في تيار الطور المتحرك. سرعة تحرك المادة المنحلة داخل العمود تتحدد بكم الروابط الفيزيائية أو الكيميائية بينها وبين الطور (الساكن أو الثابت). كمية المادة المنحلة المنحبسة تعتمد على تركيب المادة وتركيب الطور الثابت والطور الناقل أو المتحرك. الوقت الذي تستغرقه المادة المنحبسة داخل العمود لكي تصل للطرف الآخر للعمود وتظهر على الكاشف يسمي وقت الاحتباس أو الاحتفاظ.
إن أجهزة الـ HPLC متوفرة بسهولة لأنها تستخدم في مجالات متعددة منها مجال التقنية الحيوية والتقنية الطبية السريرية والتحاليل الصيدلانية. إضافة إلى استخدامها في الكيمياء ومستحضرات التجميل وفي في مجال الطاقة والبيئة والصناعات الغذائية. كما أن توافر أجهزة بأسعار مقبولة وذات كفاءة متطورة وموثوقة قد جعل أجهزة الـHPLC هي الطريقة المفضلة في التحاليل الصيدلانية وذلك بدءً من إنشاء تركيب الدواء أو فصل مكوناته أو ضبط جودته. لقد تطور استخدام الـHPLC بشكل كبير خلال العقود الماضية ففي الستينات تم وضع الأسس والمبادئ النظرية لهذه التقنية، وأدى التطور في مواد تعبئة عمود الاستشراب (أعمدة الكروماتوغرافيا) في السبعينات إلى تطور الاستشراب بالطور العكوس. وفي الثمانينات أدى التطور في الحواسيب والأتمتة والبرمجيات إلى سهولة استخدام الـ HPLC. وفي التسعينات طورت أعمدة الاستشراب الميكرونية (الصغيرة) وأعمدة الاستشراب المتخصصة لاستعمال محدد، والكواشف Detector المتنوعة، بالإضافة إمكانات الحصول على البيانات المتكاملة وتخزينها واسترجاعها، مما أدى إلى الزيادة الكبيرة في فعالية وسرعة أجهزة الـ HPLC.
التطور التاريخي لتقانة الكروماتوغرافيا السائلة HPLC
قبل أن يستخدم العلماء والخبراء في الكيمياء التحليلية تقنيات الكروماتوغرافية السائلة القياسية، كانت أنظمة الكروماتوغرافيا السائلة غير فعالة إلى حد كبير بسبب معدل تدفق المذيبات التي تعتمد على الجاذبية. وكانت تستغرق عمليات الفصل الكروماتوغرافي ساعات عديدة، وأحيانًا أيامًا حتى تكتمل. كانت كروماتوغرافيا الغازية (Gas chromatography (GC في ذلك الوقت أقوى من الكروماتوغرافيا السائلة (liquid chromatography (LC، ومع ذلك، كان يُعتقد أن فصل الطور الغازي وتحليل البوليمرات الحيوية القطبية ذات الوزن الجزيئي العالي أمر مستحيل. كانت كروماتوغرافيا الغازية GC غير فعالة بالنسبة للعديد من علماء الكيمياء الحيوية بسبب عدم الاستقرار الحراري للمواد المذابة المراد تحليلها. نتيجة لذلك، تم افتراض طرق بديلة والتي أدت مع الوقت إلى تطوير تقانة HPLC. بعد العمل الأساسي الذي قام به Martin و Synge في عام 1941، تنبأ Cal Giddings و Josef Huber وآخرون في الستينيات من القرن التاسع العشر أنه يمكن تشغيل LC في وضع عالي الكفاءة عن طريق تقليل أقطار حبيبات التعبئة (الحشوة) إلى حد كبير أقل مما كان في حالة الكروماتوغرافيا السائلة LC النموذجية (وحالة الكروماتوغرافيا الغازية GC) التي تستخدم حبيبات بأقطار تصل لحوالي 150 ميكرومتر وأيضاً باستخدام ضغوط خارجية لزيادة سرعة الطور المتحرك. وخضعت هذه التنبؤات لتجارب ودراسات مكثفة لفترة امتدت من سنوات الستينيات إلى السبعينيات. وبدأت الأبحاث التطويرية المبكرة في تحسين حبيبات حشوة أعمدة الكروماتوغرافيا السائلة LC، وكان اختراع حبيبات من نوع Zipax، وهو جسيم مسامي سطحيًا، واعدًا لتقنية HPLC. جلبت أعوام السبعينيات العديد من التطورات في الأجهزة والبرمجيات المتعلقة بتقانة الكروماتوغرافيا السائلة ذات الأداء العالي. بدأ الباحثون في استخدام المضخات والحاقن لعمل تصميم أولي لنظام تقانة HPLC. كانت مضخات تضخيم الغاز مثالية Gas amplifier pumps لأنها تعمل بضغط ثابت ولا تتطلب سدادات مانعة للتسرب leak-free seals أو صمامات فحص check valves لتدفق ثابت وكميات جيدة. تم وضع معالم الأجهزة في قسم البوليمرات الصناعية Dupont IPD (Industrial Polymers Division) مثل جهاز التدرج ذي الحجم المنخفض الذي يتم استخدامه بالإضافة إلى استبدال الحاقن الحاجز septum injector بصمام الحقن الحلقي loop injection valve.
بينما كانت التطورات مهمة على مستوى الأجهزة، فإن تاريخ تقانة HPLC يتعلق في المقام الأول بتاريخ وتطور تكنولوجيا الحبيبات أو الجسيمات particle technology. بعد إدخال حبيبات ذات الطبقة المسامية porous layer particles، كان هناك اتجاه ثابت لتقليل حجم تلك الجسيمات لتحسين الكفاءة. ولكن مع تقليل حجم الجسيمات، نشأت مشاكل جديدة. نشأت المشاكل العملية من فرق الضغط المفرط اللازم لدفع السائل المتحرك عبر العمود وأيضاُ صعوبة تحضير حشوة منتظمة التراص والتعبئة من المواد الحبيبية الصغيرة للغاية. في كل مرة يتم تقليل حجم الجسيمات بشكل كبير، يجب أن تحدث جولة أخرى من تطوير الأدوات والأجهزة للتعامل مع فرق الضغط الناشء بين طرفي العمود.
مفاهيم وتعاريف أساسية، ونظرية الكروماتوغرافيا
الطور المتحرك (mobile phase): لفصل مكونات مزيج ما، ندخل السائل المراد فصل مكوناته في تدفق متتابع، وهذا ما يسمى بالطور المتحرك (mobile phase).
الطور الثابت أو الساكن (stationary phase) وتترك الحلالة (المادة المنحلة) لتعبر خلال طبقة عمود الاستشراب الحاوي على مواد (جزيئات) أقطارها صغيرة جداً مما يمنحها سطح تماس كبير، وهذا ما ندعوه بالطور الثابت stationary phase.
الماد المذابة أو الحلالة (الذوائب solutes) وطالما تعبر جزيئات الحلالة عمود الاستشراب محمولة في الطور المتحرك فإنه يتم تأثر Interaction مستمر بين جزيئات الحلالة (أو الذوائب solutes) وبين الطور الثابت وكذلك أيضاً مع الطور المتحرك، وينتج عن هذا توازن ديناميكي dynamic equilibrium. كما يؤدي اختلاف عمليات التوازن هذه إلى فصل مكونات هذا المزيج.
(الإمرار) المتماثل isocratic elution أو الشطف بالطور المتحرك ذي التركيب الثابت وعندما تتم عملية فصل مواد المزيج مع المحافظة على التركيب الثابت لمكونات الطور المتحرك، فإننا ندعو هذه العملية بالشطف (الإمرار) المتماثل isocratic elution.
الشطف المتدرج gradient elution فهو التغير المستمر لتركيب الطور المتحرك كنسبة نوع أو أكثر من المذيبات في الطور المتحرك كتابع للزمن.
كاشف detector عندما تخرج جزيئات الحلالة من مناطق الطور المتحرك فإنها تمر عبر كاشف detector أو سلسلة من الكواشف (المتحريات). وتستجيب إشارات الكاشف كدالة على تركيز الحليلة (المادة المذابة) في قطفات الطور المتحرك التي تخرج من العمود مع الزمن.
برامج تحليل بيانات data processors ترسل هذه الإشارات إلى برامج تحليل بيانات data processors والذي يرسم الخطوط البيانية plot كدالة مع الزمن.
المخطط الاستشرابي chromatogram ويدعى المخطط الذي يظهر هذه الإشارات بالمخطط الاستشرابي chromatogram، وتدعى مناطق المكونات لكل مركب بالقمم الاستشرابية chromatographic peaks. وتتميز هذه القمم بالمعايير (المتثابتات) parameters التالية: العرض، المساحة، ارتفاع القمة، ومدى التذييل tailing، وزمن العبور (الاحتفاظ) retention time. ويدعى الجهاز الذي يقوم بهذ العمل جهاز مخطط الاستشراب (مخطاط الاستشرابي) chromatograph. المحقن injector في الـ HPLC تدخل الجزيئات الذائبة ضمن سيل الطور المتحرك. ويمر هذا السيل عبر مدخل inlet وينبثق عبر مخرج outlet العمود.
المضخة عالية الضغط pump وبما أن أبعاد الأجزاء صغيرة جداً (حوالي 10 ميكرون أو أقل) والعمود مملوء بشكل كامل فإنه لا بد من دفع حركة الطور المتحرك باستخدام مضخات عالية الضغط. وإن الجزيئات الذائبة فقط هي التي تنتقل عبر الطور المتحرك. والجزيئات التي تتفاعل مع سطح العمود سيحدث لها عرقلة impeded بالخروج، والعصبة الناشئة عنها سيحدث لها لفظ متأخر عن لفظ العصبة التي تتثبت جزيئاتها بشكل أضعف. إن النزوح النسبي للذائبة يعتمد على خواصها الحركية والترموديناميكية.
الكواشف
تنقسم أجهزة الكشف عن HPLC إلى فئتين رئيسيتين: عالمية أو انتقائية. تقيس أجهزة الكشف العالمية عادةً خاصية الكتلة (على سبيل المثال، معامل الانكسار) عن طريق قياس اختلاف الخاصية المادية بين الطور المتحرك والطور المتحرك باستخدام المذاب بينما تقيس الكاشفات الانتقائية خاصية المذاب (على سبيل المثال، امتصاص الأشعة فوق البنفسجية) عن طريق الاستجابة ببساطة إلى الخصائص الفيزيائية أو الكيميائية للمذاب. [18] يستخدم HPLC بشكل شائع كاشف امتصاص UV-Vis ، ومع ذلك، يمكن استخدام مجموعة واسعة من أجهزة الكشف عن اللوني. كاشف عالمي يكمل الكشف عن امتصاص الأشعة فوق البنفسجية المرئية هو كاشف الأيروسول المشحون (CAD). يشتمل نوع من الكاشفات المستخدمة بشكل شائع على كاشفات معامل الانكسار، والتي توفر قراءات عن طريق قياس التغيرات في معامل الانكسار للشاطف أثناء تحركه عبر خلية التدفق. في حالات معينة، من الممكن استخدام أجهزة كشف متعددة، على سبيل المثال LCMS يجمع عادةً بين UV-Vis مع مطياف الكتلة.
العوامل المؤثرة على كفاءة الفصل
إن مدى وكفاءة الفصل بين قمتي لفظ متقاربتين يعبَّر عنها بعامل الاحتباس أو عامل السعة (retention (or capacity) factor (k’) ، وعامل الاصطفاء selectivity factor ، و عدد الطبقات النظرية N. إن عامل السعة هو قياس زمن التصاق جزيئات الذائبة بأجزاء العمود مقارنة مع زمن التصاقها بالطور المتحرك. لذلك كلما كبرت قيمة K’ كلما زاد التثبت على أجزاء العمود.
كروماتوغرافيا التقسيم Partition chromatography
كانت كروماتوغرافيا التقسيم (التشارك أو التوزع) Partition chromatography أحد الأنواع الأولى للكروماتوغرافيا التي طورها الكيميائيون. تم تطبيق مبدأ معامل التقسيم partition coefficient في كروماتوغرافيا الورق وكروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة والطور الغازي وتطبيقات فصل سائل ــ سائل. حصل Archer John Porter Martin و Richard Laurence Millington Synge على جائزة نوبل في الكيمياء لعام 1952 لتطويرهما لهذه التقنية، والتي كانت تستخدم لفصل الأحماض الأمينية. يستخدم كروماتوغرافيا التقسيم مذيبًا محتفظًا به، على السطح أو داخل حبيبات أو ألياف مصفوفة داعمة صلبة «خاملة» كما هو الحال مع كروماتوغرافيا الورق؛ أو يستفيد من بعض تأثيرات الكولومبية (الكهربائية الساكنة) و/ أو الهيدروجين مع الطور الثابت. تنقسم مكونات العينة بين الطور الثابت السائل والطور المتحرك eluent. تمامًا كما هو الحال في كروماتوغرافيا التفاعل المحبة للماء (HILIC ؛ تقنية فرعية داخل HPLC)، تفصل هذه الطريقة مكونات المزيج المراد تحليله بناءً على الاختلافات في قطبيتها. غالبًا ما يستخدم HILIC طورًا ثابتًا قطبيًا مرتبطًا وطورًا متحركًا مصنوعًا بشكل أساسي من الأسيتونيتريل مع الماء كمكون قوي. تم استخدام قسم HPLC تاريخيًا على دعامات السيليكا أو الألومينا غير المربوطة unbonded silica. يعمل كل منها بشكل فعال لفصل مكونات العينة المراد تحليلها عن طريق الاختلافات القطبية النسبية. تتميز الأطوار المرتبطة بـ HILIC بميزة فصل المواد المذابة الحمضية والقاعدية والمحايدة في مسار كروماتوغرافي واحد.
تنتشر المواد المنحلة القطبية polar analytes في طبقة مائية ثابتة مرتبطة بالطور القطبي الثابت، وبالتالي يتم الاحتفاظ بها. كلما زادت قوة التفاعلات بين المواد المنحلة القطبية والطور القطبي الثابت (بالنسبة إلى الطور المتحرك)، زاد وقت الشطف elution time. تعتمد قوة التأثير أو التفاعل على طبيعة جزء المجموعات الوظيفية من البنية الجزيئية للمواد المنحلة، مع مجموعات أكثر استقطابًا (على سبيل المثال، هيدروكسيل-) ومجموعات قادرة على الارتباط الهيدروجيني الذي يؤدي إلى مزيد من الاحتفاظ. يمكن أن تزيد التاثيرات الكولومبية (الكهروستاتيكية) أيضًا من الاحتفاظ. سيؤدي استخدام المزيد من المذيبات القطبية في الطور المتحرك إلى تقليل وقت الاحتفاظ بالمواد المنحلة، بينما تميل إضافة المزيد من المذيبات الكارهة للماء إلى زيادة أوقات الاستبقاء.
كروماتوغرافيا الطور العادي
كان كروماتوغرافيا الطور الطبيعي أحد الأنواع الأولى من HPLC التي طورها الكيميائيون. تُعرف هذه الطريقة أيضًا باسم HPLC من النوع العادي (NP-HPLC)، حيث تفصل هذه الطريقة المواد المنحلة المراد فصلها بناءً على تقاربها مع سطح قطبي ثابت مثل السيليكا، ومن ثم فهي تعتمد على قدرة التحليل على الانخراط في التأثيرات القطبية (مثل الترابط الهيدروجيني أو ثنائي القطب) مع السطح الماص. يستخدم NP-HPLC طورًا متحركًا غير قطبي وغير مائي (على سبيل المثال، الكلوروفورم)، ويعمل بشكل فعال لفصل المواد المنحلة القابلة للذوبان بسهولة في المذيبات غير القطبية. يرتبط التحليل بالطورالثابت القطبي ويتم الاحتفاظ بها. تزداد قوة الامتزاز مع زيادة قطبية المواد المنحلة. لا تعتمد قوة التأثير فقط على المجموعات الوظيفية الموجودة في بنية جزيء المواد المنحلة، بل تعتمد أيضًا على العوامل الاستراتجية. يسمح تأثير العائق الفراغي على قوة التأثير لهذه الطريقة بحل أيزومرات بنيوية (منفصلة). سيؤدي استخدام المزيد من المذيبات القطبية في الطور المتحرك إلى تقليل وقت الاحتفاظ بالمواد المنحلة، في حين تميل المزيد من المذيبات الكارهة للماء إلى إحداث شطف أبطأ (زيادة أوقات الاحتفاظ). تميل المذيبات القطبية للغاية مثل آثار الماء في الطور المتحرك إلى الامتصاص إلى السطح الصلب للطور الثابت مكونًا طبقة ثابتة (مائية) والتي تلعب دورًا نشطًا في الاحتفاظ. هذا السلوك غريب إلى حد ما بالنسبة لكروماتوغرافيا الطور الطبيعي لأنه محكوم بشكل حصري تقريبًا بآلية امتزاز (على سبيل المثال، تتفاعل المواد المنحلة مع سطح صلب بدلاً من الطبقة المذابة ليجند متصل بالسطح الماص؛ انظر أيضًا HPLC ذو المرحلة العكسية أدناه). لا يزال كروماتوغرافيا الامتزاز مستخدمة على نطاق واسع لفصل الأيزومرات الهيكلية في كل من تنسيقات كروماتوغرافيا العمود والطبقة الرقيقة على دعامات السيليكا أو الألومينا المنشط (المجفف). فشلت أنواع الكروماتوغرافية التقسيمية و NP-HPLC في السبعينيات مع تطوير كروماتوغرافيا HPLC ذات الأطوار العكسية بسبب ضعف استنساخ نتائج أوقات الاحتفاظ بسبب وجود طبقة مذيبات عضوية مائية أو بروتونية على سطح السيليكا أو وسط كروماتوغراف الألومينا. تتغير هذه الطبقة مع أي تغييرات في تكوين الطور المتحرك (على سبيل المثال، مستوى الرطوبة) مما يتسبب في أوقات استبقاء الانجراف. في الآونة الأخيرة، أصبح الفصل الكروماتوغرافي شائعًا مرة أخرى مع تطور مراحل الارتباط الهيليك "Hilic" التي تُظهر تحسين استنساخ نتائج، ونتيجة لفهم أفضل لنطاق فائدة هذه التقنية.
كروماتوغرافيا الإزاحة
المبدأ الأساسي لكروماتوغرافيا الإزاحة displacement chromatography هو: إن الجزيء ذو الألفة العالية لركازة الكروماتوغرافيا (المزيح displacer) سوف يتنافس بفعالية على مواقع الربط، وبالتالي يزيح جميع الجزيئات ذات الألفة الأقل. هناك اختلافات واضحة بين كروماتوغرافيا الإزاحة وكروماتوغرافيا الشطف elution chromatography. في وضع كروماتوغرافيا الشطف، تظهر المواد عادةً من عمود في قمم غاوسية ضيقة Gaussian peaks. مطلوب فصل واسع للقمم، مفضل عن خط الأساس baseline، من أجل تحقيق أقصى تنقية. تعتمد السرعة التي ينتقل بها أي مكون من خليط إلى أسفل العمود في وضع كروماتوغرافيا الشطف على العديد من العوامل. ولكن لكي تنتقل مادتان بسرعات مختلفة، وبالتالي يتم حلهما، يجب أن تكون هناك اختلافات جوهرية في بعض التفاعلات بين الجزيئات الحيوية وركازة الكروماتوغرافيا. يتم ضبط متحولات التشغيل لتعظيم تأثير هذا الاختلاف. في كثير من الحالات، لا يمكن تحقيق الفصل الأساسي للقمم إلا من خلال شطف التدرج وتحميل العمود المنخفض. وبالتالي، هناك عيبان في كروماتوغرافيا وضع الشطف، خاصة في المقياس التحضيري، وهما التعقيد التشغيلي، بسبب ضخ المذيبات المتدرج، والإنتاجية المنخفضة، بسبب التحميل المنخفض للعمود. يتميز كروماتوغرافيا الإزاحة بمزايا تفوق كروماتوغرافيا الشطف حيث يتم حل المكونات في مناطق متتالية من المواد النقية بدلاً من «القمم». نظرًا لأن العملية تستفيد من عدم خطية متساوي الحرارة، يمكن فصل تغذية عمود أكبر على عمود معين مع استرداد المكونات النقية بتركيز أعلى بكثير.
كروماتوغرافيا السائلة ذات الطور العكسي
تحتوي HPLC ذات الطور العكسي (RP-HPLC) على طور ثابت غير قطبي وطور متحرك مائي قطبي معتدل. إحدى الأطور الثابتة الشائعة هي السيليكا التي تم تعديل سطحها باستخدام المادة RMe2SiCl، حيث R عبارة عن مجموعة ألكيل مستقيمة مثل C18H37 أو C8H17. مع مثل هذه الأطوار الثابتة، يكون وقت الاستبقاء أطول للجزيئات الأقل قطبية، بينما يتم التخلص من الجزيئات القطبية بسهولة أكبر (في وقت مبكر من التحليل). يمكن للمحلل المخبري زيادة أوقات الاحتفاظ عن طريق إضافة المزيد من الماء إلى الطور المتحرك؛ مما يجعل ألفة المادة التحليلية الكارهة للماء للطورالثابت الكاره للماء أقوى مقارنة بالطور المتحرك الأكثر مقاومة للماء الآن. وبالمثل، يمكن للمحلل المخبري تقليل وقت الاحتفاظ عن طريق إضافة المزيد من المذيبات العضوية إلى الطور المتحرك eluent. يتم استخدام RP-HPLC بشكل شائع لدرجة أنه غالبًا ما يشار إليه بشكل غير صحيح باسم "HPLC" دون مزيد من المواصفات. تستخدم صناعة الأدوية بانتظام نوع الكروماتوغرافيا RP-HPLC لضمان جودة الأدوية قبل إطلاقها. يعمل RP-HPLC على مبدأ التفاعلات الكارهة للماء، والتي تنشأ من التناظر العالي في بنية الماء ثنائي القطب ويلعب الدور الأكثر أهمية في جميع العمليات في علوم الحياة. يسمح RP-HPLC بقياس هذه القوى التفاعلية. يتناسب ارتباط المادة المنحلة بالطور الثابت مع مساحة سطح التلامس حول الجزء غير القطبي من جزيء المادة المنحلة عند الارتباط بالرابط في الطورالثابت. هذا التأثير المضاد للذوبان تهيمن عليه قوة الماء من أجل «تقليل التجويف» حول المادة المنحلة وسلسلة C18 مقابل مجمع كليهما. الطاقة المنبعثة في هذه العملية تتناسب طرديًا مع التوتر السطحي للشاطف (الماء: 7.3 × 10 /6 جول / سم 2، الميثانول: 2.2 × 10 /6 جول / سم 2) والسطح الكارهة للماء من الحليلة والمرتبطة (المعقد) ligand على التوالي. يمكن تقليل الاحتباس عن طريق إضافة مذيب أقل قطبية (ميثانول، أسيتونتريل) إلى الطور المتحرك لتقليل التوتر السطحي للماء. يستخدم شطف التدرج هذا التأثير عن طريق التقليل التلقائي للقطبية والتوتر السطحي للطور المتحرك المائية أثناء التحليل. تلعب الخصائص الهيكلية للجزيء المادة المنحلة دورًا مهمًا في خصائص الاحتفاظ به. بشكل عام، يتم الاحتفاظ بالتحليل ذي المساحة السطحية الكارهة للماء (C-H ، C-C ، والروابط الذرية غير القطبية عمومًا، مثل S-S وغيرها) لفترة أطول لأنه لا يتفاعل مع بنية الماء. من ناحية أخرى، فإن المواد المنحلة ذات المساحة السطحية القطبية الأعلى (التي يمنحها وجود المجموعات القطبية، مثل -OH أو -NH2 أو COO− أو -NH3 + في هيكلها) أقل احتفاظًا بها حيث يتم دمجها بشكل أفضل في الماء. تخضع مثل هذه التفاعلات لتأثيرات فراغية في تلك الجزيئات الكبيرة جدًا قد يكون لها وصول محدود فقط إلى مسام الطورالثابت، حيث تحدث التفاعلات مع الروابط السطحية (سلاسل الألكيل). عادة ما ينتج عن عائق السطح هذا احتباس أقل.
يزيد وقت الاستبقاء مع مساحة السطح الكارهة للماء (غير القطبية). تتخلص مركبات السلاسل المتفرعة بسرعة أكبر من الأيزومرات الخطية المقابلة لها بسبب تناقص مساحة السطح الإجمالية. وبالمثل يتم التخلص من المركبات العضوية ذات الروابط C-C المفردة في وقت لاحق من تلك التي تحتوي على رابطة ثلاثية C = C أو C-C ، حيث أن الرابطة المزدوجة أو الثلاثية أقصر من رابطة C-C مفردة.
بصرف النظر عن التوتر السطحي للطور المتحرك (القوة التنظيمية في هيكل eluent)، يمكن أن تؤثر معدلات الطور المتحرك الأخرى على الاحتفاظ بالمادة المنحلة. على سبيل المثال، تؤدي إضافة الأملاح غير العضوية إلى زيادة خطية معتدلة في التوتر السطحي للمحاليل المائية (حوالي 1.5 × 10 J7 جول/سم2 لكل مول لكلوريد الصوديوم، 2.5 × 10−7 جول/ سم2 لكل مول لـ (NH4) 2SO4)، ولأن إنتروبية entropy سطح التماس بين المذيبات والمادة المنحلة يتم التحكم فيها عن طريق التوتر السطحي، فإن إضافة الأملاح تميل إلى زيادة وقت الاستبقاء. تُستخدم هذه التقنية للفصل الطفيف واستعادة البروتينات وحماية نشاطها البيولوجي في تحليل البروتين (كروماتوغرافيا التفاعل الكارهة للماء، HIC).
عامل مهم آخر هو درجة الحموضة في الطور المتحرك لأنه يمكن أن يغير الطبيعة الكارهة للماء للمادة المنحلة. لهذا السبب، تستخدم معظم الطرق عامل تخزين مؤقت، مثل فوسفات الصوديوم، للتحكم في درجة الحموضة. تخدم المحاليل الموقية Buffers أغراضًا متعددة: التحكم في الأس الهيدروجيني، وتحييد الشحنة على سطح السيليكا في الطورالثابت والعمل كعوامل إقران أيون لتحييد شحنة التحليل. يضاف فورمات الأمونيوم بشكل شائع في قياس الطيف الكتلي لتحسين الكشف عن بعض المواد المنحلة عن طريق تكوين مقاربات الأمونيوم التحليلية. غالبًا ما يضاف حمض عضوي متطاير مثل حمض الأسيتيك، أو حمض الفورميك الأكثر شيوعًا، إلى الطور المتحرك إذا تم استخدام مقياس الطيف الكتلي لتحليل العمود المائل. يستخدم حمض Trifluoroacetic بشكل غير منتظم في تطبيقات قياس الطيف الكتلي نظرًا لثباته في الكاشف ونظام توصيل المذيبات، ولكن يمكن أن يكون فعالًا في تحسين الشبكية ntion من المواد المنحلة مثل الأحماض الكربوكسيلية في التطبيقات التي تستخدم أجهزة الكشف الأخرى، حيث أنه حمض عضوي قوي إلى حد ما. تختلف تأثيرات الأحماض والمحاليل الموقية باختلاف التطبيق ولكنها تعمل بشكل عام على تحسين دقة الكروماتوغرافيا.
من الصعب جدًا إتلاف أعمدة الطور المعكوس مقارنةً بأعمدة السيليكا العادية ؛ ومع ذلك، تتكون العديد من أعمدة الطور المعكوس من جزيئات السيليكا المشتقة من الألكيل ولا يجب استخدامها مع القواعد المائية لأنها ستدمر جسيم السيليكا الأساسي. يمكن استخدامها مع حمض مائي، ولكن لا ينبغي أن يتعرض العمود للحمض لفترة طويلة، حيث يمكن أن يؤدي ذلك إلى تآكل الأجزاء المعدنية لجهاز HPLC. يجب شطف أعمدة RP-HPLC بمذيب نظيف بعد استخدامها لإزالة الأحماض المتبقية أو المحاليل، وتخزينها في تركيبة مناسبة من المذيب. يجب أن يظل المحتوى المعدني لأعمدة HPLC منخفضًا إذا كان يجب الاحتفاظ بأفضل قدرة ممكنة لفصل المواد. الاختبار الجيد للمحتوى المعدني للعمود هو حقن عينة عبارة عن خليط من 2,2'- و 4,4'-bipyridine. نظرًا لأن 2,2'-bipy يمكن أن يخلب المعدن، فسيتم تشويه شكل ذروة 2,2'-bipy (ذيول) عندما توجد أيونات معدنية على سطح السيليكا. [بحاجة لمصدر] ..
كروماتوغرافيا الاستبعاد الحجمي
كروماتوغرافيا الاستبعاد الحجمي (SEC)، والمعروفة أيضًا باسم كروماتوغرافيا نفاذية الهلام أو كروماتوغرافيا الترشيح الهلامي، تفصل الجسيمات على أساس الحجم الجزيئي (في الواقع بواسطة نصف قطر ستوكس للجسيم). وهو بشكل عام كروماتوغرافيا منخفضة الدقة، وبالتالي فإنه غالبًا ما يكون محجوزة لخطوة «التصفية» النهائية للتنقية. كما أنها مفيدة في تحديد البنية الثلاثية والبنية الرباعية للبروتينات المنقاة. تستخدم SEC بشكل أساسي لتحليل الجزيئات الكبيرة مثل البروتينات أو البوليمرات. تعمل SEC عن طريق محاصرة هذه الجزيئات الأصغر في مسام الجسيم. تمر الجزيئات الأكبر ببساطة عبر المسام لأنها أكبر من أن تدخل المسام. وبالتالي، فإن الجزيئات الأكبر تتدفق عبر العمود بشكل أسرع من الجزيئات الأصغر، أي أنه كلما كان الجزيء أصغر، زاد وقت الاحتفاظ.
تستخدم هذه التقنية على نطاق واسع لتحديد الوزن الجزيئي للسكريات. SEC هي التقنية الرسمية (التي اقترحها دستور الأدوية الأوروبي) لمقارنة الوزن الجزيئي لمختلف الهيبارين منخفض الوزن الجزيئي المتاح تجاريًا.
كروماتوغرافيا التبادل الأيوني
في كروماتوغرافيا التبادل الأيوني (IC)، يعتمد الاستبقاء على التجاذب بين الأيونات المنحلة والمواقع المشحونة المرتبطة بالطور الثابت. يتم استبعاد الأيونات المذابة بنفس الشحنة مثل المواقع المشحونة بالعمود من الربط، بينما يتم الاحتفاظ بالأيونات المذابة للشحنة المعاكسة للمواقع المشحونة للطور الثابت في العمود. يمكن التخلص من الأيونات المذابة التي يتم الاحتفاظ بها في الطور الثابت من العمود عن طريق تغيير شروط المذيب في الطور المتحرك الشاطف (على سبيل المثال، زيادة التأثير الأيوني لنظام المذيب عن طريق زيادة تركيز الملح في المحلول، وزيادة درجة حرارة العمود، وتغيير الرقم الهيدروجيني للمذيب، إلخ).
بشكل عام، تفضل المبادلات الأيونية ربط الأيونات ذات الشحنة الأعلى ونصف القطر الأصغر.
زيادة تركيز الأيون المضاد (فيما يتعلق بالمجموعات الوظيفية في الراتنجات) يقلل من وقت الاستبقاء. يقلل انخفاض الرقم الهيدروجيني من وقت الاستبقاء في تبادل الكاتيونات بينما تقلل الزيادة في الرقم الهيدروجيني من وقت الاحتفاظ في تبادل الأنيون. عن طريق خفض الرقم الهيدروجيني للمذيب في عمود التبادل الكاتيوني، على سبيل المثال، يتوفر المزيد من أيونات الهيدروجين للتنافس على المواضع على الطور الثابت الأنيوني، وبالتالي سيتم شطف الكاتيونات ضعيفة الارتباط.
يستخدم هذا النمط من الكروماتوغرافيا على نطاق واسع في التطبيقات التالية: تنقية المياه، والتركيز المسبق للمكونات النزرة، وكروماتوغرافيا التبادل الترابطي، وكروماتوغرافيا التبادل الأيوني للبروتينات، وكروماتوغرافيا التبادل الأنيوني عالي الحموضة للكربوهيدرات والسكريات قليلة الحموضة، وغيرها.
كروماتوغرافيا ذات الألفة الحيوية
تعتمد هذه العملية الكروماتوغرافية على خاصية المواد النشطة بيولوجيا لتشكيل معقدات complexes مستقرة ومحددة وقابلة للعكس. يتضمن تكوين هذه المعقدات مشاركة القوى الجزيئية المشتركة مثل تأثيرات قوى فاندر فالس Van der Waals والتأثير الكهروستاتيكي وتأثير ثنائي القطب والألفة الهيدروفيلية ورابطة الهيدروجين. يتم تكوين رابطة بيولوجية فعالة ونوعية من خلال اجتماع متضافر للعديد من هذه القوى في مواقع النشطة التفاعلية في الطور الكروماتوغرافي.
كروماتوغرافيا الطور العادي المائي
كروماتوغرافيا الطور العادي المائي وبالإنكليزية Aqueous normal-phase chromatography (ANP) هي تقنية كروماتوغرافية تشمل منطقة الطور المتحرك (خيارات تركيب الطور المتحرك) بين كروماتوغرافيا الطور العكسي reversed-phase chromatography (RP) __التي فيها الطور المتحرك هو أكثر قطبية من الطور الثابت__ وكروماتوغرافيا الطور الطبيعي العضوي organic normal phase chromatography (ONP) التي يتصف الطور المتحرك بقطبية أقل من الطور الثابت. تُستخدم هذه التقنية لتحقيق انتقائية فريدة للمركبات المحبة للماء (هيدروفيلية)، مما يُظهر قدرة الشطف للطور العادي باستخدام مذيبات عضوية عكسية الطور. [بحاجة لمصدر]
الشطف مع طور متحرك إيزوقراطي ومتدرج
بالإنكليزية (Isocratic and gradient elution) يُطلق على الفصل الذي يظل فيه تكوين الطور المتحرك ثابتًا طوال الإجراء اسمًا إيزوقراطيًا Isocratic(يعني التكوين الثابت). (على سبيل المثال، ستبقى النسبة المئوية للميثانول طوال الإجراء ثابتة ، أي 10٪) الكلمة صاغها سابا هورفاث Csaba Horvath الذي كان أحد رواد تقانة HPLC. [بحاجة لمصدر]،
لا يجب أن يظل تكوين الطور المتحرك ثابتًا. يوصف الفصل الذي يتغير فيه تكوين الطور المتحرك أثناء عملية الفصل بأنه شطف متدرج. أحد الأمثلة هو التدرج اللوني الذي يبدأ عند 10٪ ميثانول وينتهي عند 90٪ ميثانول بعد 20 دقيقة. ويطلق على عنصري الطور المتحرك اسم "A" و "B"؛ A هو المذيب «الضعيف» الذي يسمح للمذاب (المادة المنحلة) بالتخلص ببطء فقط، بينما B هو المذيب «القوي» الذي يزيل المواد المذابة بسرعة من العمود. في كروماتوغرافيا الطور العكسي، غالبًا ما يكون المذيب A عبارة عن ماء أو محلول مائي ، بينما B عبارة عن مذيب عضوي قابل للامتزاج بالماء، مثل الأسيتونتريل أو الميثانول أو رباعي هيدرو الفوران THF أو الأيزوبروبانول.
في الشطف المتساوي ، يزداد عرض الذروة مع زمن الاستبقاء خطيًا وفقًا لمعادلة N ، عدد الصفائح النظرية. هذا يؤدي إلى عيب أن القمم المتأخرة تصبح مسطحة وواسعة للغاية. قد يمنعها شكلها وعرضها من التعرف عليها على أنها قمم. يقلل شطف التدرج من الاحتفاظ بمكونات التصفية اللاحقة بحيث تتم إزالتها بشكل أسرع، مما يعطي قممًا أضيق (وأطول) لمعظم المكونات. يعمل هذا أيضًا على تحسين شكل الذروة للقمم الذيلية ، حيث يدفع التركيز المتزايد للشاطف العضوي جزء الذيل من الذروة إلى الأمام. يؤدي هذا أيضًا إلى زيادة ارتفاع الذروة (تبدو القمة «أكثر حدة»)، وهو أمر مهم في تحليل التتبع. قد يتضمن برنامج التدرج زيادات مفاجئة «خطوة» في النسبة المئوية للمكون العضوي ، أو منحدرات مختلفة في أوقات مختلفة - كل ذلك وفقًا للرغبة في الفصل الأمثل في أقل وقت ممكن. في الشطف المتساوي ، لا تتغير الانتقائية إذا تغيرت أبعاد العمود (الطول والقطر الداخلي) - أي يتم فصل القمم بنفس الترتيب. في شطف التدرج ، قد يتغير ترتيب الشطف مع تغير الأبعاد أو معدل التدفق. [بحاجة لمصدر]
تنشأ القوة الدافعة في كروماتوغرافيا الطور المعكوس في الترتيب العالي لهيكل الماء. يتمثل دور المكون العضوي في الطور المتحرك في تقليل هذا الترتيب المرتفع وبالتالي تقليل قوة التثبيط للمكون المائي.
التشغيل
يتم إدخال خليط العينة المراد فصله وتحليله، في حجم صغير منفصل (عادةً ميكروليتر)، في تيار الطور المتحرك المتسرب عبر العمود. تتحرك مكونات العينة عبر العمود بسرعات مختلفة، وهي تابعة لتأثيرات فيزيائية محددة مع مادة الامتصاص (وتسمى أيضًا الطور الساكن أو الثابت stationary phase). تعتمد سرعة كل مكون على طبيعته الكيميائية وعلى طبيعة الكيميائية للطور الساكن في العمود وعلى تركيب الطور المتحرك. يُطلق على الوقت الذي يتم فيه فصل مادة تحليلية معينة elution (يخرج من العمود) اسم وقت الاحتفاظ أو الاستبقاء retention time. وقت الاستبقاء المقاس في ظل ظروف معينة هو خاصية تعريف لتحليل معين. تتوفر العديد من أنواع الأعمدة المختلفة، المليئة بمواد ممتزة متفاوتة في حجم الجسيمات وطبيعة سطحها («كيمياء السطح»). يتطلب استخدام مواد التعبئة ذات الأحجام الصغيرة للجسيمات استخدام ضغط تشغيلي أعلى (الضغط الخلفي backpressure) وعادة ما يحسن دقة الفصل الكروماتوغرافية (درجة الفصل للذروة بين مكونات المتتالية الخارجة من العمود). قد تكون الجسيمات الممتزة كارهة للماء hydrophobic أو قطبية بطبيعتها.
تشتمل الأطوار المتحركة الشائعة الاستخدام على أي مزيج قابل للامتزاج من الماء مع المذيبات العضوية المختلفة (الأكثر شيوعًا هي الأسيتونيتريل والميثانول). تستخدم بعض تقنيات HPLC أطوار متحركة خالية من الماء (انظر كروماتوغرافيا الطور الطبيعي normal-phase chromatography أدناه). قد يحتوي المكون المائي للطور المتحرك على أحماض (مثل حمض الفورميك أو الفوسفوريك أو ثلاثي فلورو أسيتيك) أو أملاح للمساعدة في فصل مكونات العينة. قد يظل تركيب الطور المتحرك ثابتًا (وضع الشطف المتساوي isocratic elution mode) أو متغيراً (وضع الشطف المتدرج gradient elution mode) أثناء التحليل الكروماتوغرافي. عادة ما يكون الشطف المتساوي فعالًا في فصل مكونات العينة التي تختلف اختلافًا كبيرًا في ألفتها الكيميائية مع الطور الثابت. في الشطف المتدرج، يتنوع تركيب الطور المتحرك نموذجيًا من قوة الشطف المنخفضة إلى عالية. تنعكس قوة الشطف للطور المتحرك من خلال أزمنة احتفاظ ذات قوة تصفية عالية والتي تنتج شطفًا سريعًا (أزمنة احتفاظ قصيرة). نموذجياً يمكن أن يبدأ برنامج التدرج للطور المتحرك في كروماتوغرافيا الطور المعكوس عند 5٪ أسيتونيتريل (في الماء أو محلول موقي مائي aqueous buffer) ويرتفع خطيًا إلى 95٪ أسيتونيتريل خلال 5-25 دقيقة. قد تكون فترات ثبات تركيب الطور المتحرك جزءًا من برنامج التدرج التشغيلي. على سبيل المثال، يمكن الاحتفاظ بتركيب الطور المتحرك ثابتًا عند تركيب 5٪ أسيتونيتريل لمدة 1-3 دقائق، ثم يجري تغيير خطي يصل إلى 95٪ أسيتونيتريل.
يعتمد التركيب المختار للطور المتحرك (ويسمى أيضًا الشاطف eluent) على شدة التفاعلات بين مكونات العينة المختلفة (analytes) والطور الساكن (على سبيل المثال، التفاعلات الكارهة للماء في كروماتوغرافيا السائلة ذات الطور المعكوس). اعتمادًا على الفتهم الكيميائية مع الطورين المتحرك والساكن تتوزع partition مكونات العينة المختلفة بين الاثنين أثناء عملية الفصل التي تحدث في العمود. تشبه عملية التوزيع partition تلك التي تحدث أثناء الاستخلاص السائل ـ السائل liquid–liquid extraction ولكنها مستمرة وليست تتم عبر مراحل تشغيلية step-wise. في هذا المثال، باستخدام التدرج اللوني للماء/الأسيتونتريل، ستتم إزالة المزيد من المكونات الكارهة للماء (الهيدروفوبية) من الطور الساكن (أي تخرج من العمود) في وقت متأخر، بمجرد أن يصبح الطور المتحرك أكثر تركيزًا في الأسيتونيتريل (أي في الطور المتحرك ذي قوة التصفية العالية من جراء تزايد هيدروفوبية المحلول الشاطف). يعتمد اختيار مكونات الطور المتحرك والإضافات (مثل الأملاح أو الأحماض) وشروط التدرج على طبيعة العمود ومكونات العينة. غالبًا ما يتم إجراء سلسلة من العمليات التجريبية مع العينة من أجل إيجاد طريقة HPLC التي تعطي فصلًا مناسبًا.
روج (مستحضر تجميلي)
روج ويسمى أيضًا أحمر الخدود، هو مستحضر تجميل لتلوين الخدين بظلال مختلفة. يتم تطبيقه على شكل مسحوق أو كريم.
استشراب السائل رفيع الإنجاز
في مجال تصنيع المواد Manufacturing
هناك تطبيقات عديدة لتقانة الكروماتوغرافيا السائلة ذات الأداء العالي HPLC في العلوم المختبرية والسريرية. إنها تقنية شائعة تستخدم في تطوير المنتجات الصيدلانية، لأنها طريقة يمكن الاعتماد عليها للحصول على نقاوة المنتج وضمان جودته. بينما يمكن أن تنتج تقانة HPLC منتجات عالية الجودة (نقية)، إلا أنه ليس دائمًا الطريقة الأساسية المستخدمة في إنتاج مواد الأدوية السائبة bulk drug materials. وفقًا لدستور الأدوية الأوروبي European pharmacopoeia، يتم استخدام HPLC في 15.5٪ فقط من التركيبات (الاصطناعات) syntheses. According to the European pharmacopoeia, HPLC is used in only 15.5% of syntheses. ومع ذلك، فإنه يلعب دورًا في 44٪ من التركيبات في دستور الأدوية في الولايات المتحدة United States pharmacopoeia. قد يكون هذا بسبب الاختلافات في القيود النقدية والزمنية، حيث يمكن أن تكون تقانة HPLC على نطاق التطبيق الأوسع تقنية باهظة الثمن. إن الزيادة في الخصوصية والدقة والدقة التي تحدث مع تقانة HPLC تقابل للأسف زيادة في التكلفة.
روج (مستحضر تجميلي)
تاريخ
عُرِفَ المصريون القدماء بإبداعهم في مستحضرات التجميل، ولا سيما استخدامهم للشفتين. تظهر الرسوم الصورية المصرية القديمة الرجال و النساء الذين يرتدون أحمر الشفتين والخدود. قاموا بخلط الدهون مع مغرة حمراء لخلق بقعة حمراء اللون. حاكى الرجال والنساء اليونانيون في النهاية ذلك المظهر، باستخدام التوت المسحوق أو عصير البنجر الأحمر أو الفراولة المسحوقة أو القطيفة الحمراء لعمل معجون. كان يُنظر إلى أولئك الذين كانوا يرتدون الماكياج على أنهم أغنياء واعتبرت رمزا للمكانة العالية لأن مستحضرات التجميل كانت مكلفة.
استشراب السائل رفيع الإنجاز
في مجال الرقابة القانونية
تُستخدم هذه التقنية أيضًا للكشف عن العقاقير غير المشروعة في البول. الطريقة الأكثر شيوعًا للكشف عن المخدرات هي المقايسة المناعية مقايسة مناعية. هذه الطريقة أكثر ملاءمة. ومع ذلك، تأتي الراحة على حساب خصوصية وتغطية مجموعة واسعة من الأدوية. نظرًا لأن HPLC هي طريقة لتحديد (وربما زيادة) النقاء، فإن استخدام HPLC وحده في تقييم تراكيز الأدوية غير كافٍ إلى حد ما. مع هذا، غالبًا ما يتم إجراء تحليل HPLC في هذا السياق جنبًا إلى جنب مع قياس الطيف الكتلي mass spectrometry (MS). استخدام الكروماتوغرافيا السائلة بدلاً من كروماتوغرافيا الغاز بالتزامن مع مطيافية الكتلة MS يتحايل على ضرورة الاشتقاق باستخدام عوامل الأسيتيل أو الألكلة، والتي يمكن أن تكون خطوة إضافية مرهقة. تم استخدام هذه التقنية للكشف عن مجموعة متنوعة من العوامل مثل المنشطات doping agents، ومستقلبات الأدوية ، وتقارن الجلوكورونيد glucuronide conjugates، والأمفيتامينات amphetamines، والمواد الأفيونية opioids، والكوكايين cocaine، و BZDs ، والكيتامين ketamine، و LSD ، والقنب cocaine، والمبيدات الحشرية pesticides. يؤدي أداء HPLC جنبًا إلى جنب مع قياس الطيف الكتلي إلى تقليل الحاجة المطلقة إلى إجراء المعايرة standardization في عمليات التشغيل التجريبية لـ HPLC.
في مجال الابحاث
يمكن إجراء فحوصات مماثلة لأغراض البحث، والكشف عن تراكيز مواد السريرية المحتملة مثل الأدوية المضادة للفطريات anti-fungal والربو asthma drugs. من الواضح أن هذه التقنية مفيدة في مراقبة الأنواع المتعددة في العينات التي تم جمعها أيضًا، ولكنها تتطلب استخدام محاليل عيارية قياسية محلول قياسي عند البحث عن معلومات حول هوية الأنواع. يتم استخدامه كطريقة لتأكيد نتائج التفاعلات التركيبية synthesis reactions ، حيث أن النقاوة purity ضرورية في هذا النوع من البحث. ومع ذلك، لا يزال قياس الطيف الكتلي mass spectrometry هو الطريقة الأكثر موثوقية لتحديد الأنواع.