Effect of prolonged cultivation of SV40-transformed mouse cells in bromodeoxyuridine or pretreatment with mitomycin C on rescue of SV40

A series of clonal lines (mKS-U) of mouse kidney cells transformed by UV-irradiated SV40 have been propagated serially in medium containing 5-bromodeoxyuridine (dBU). Most of the mKS-U lines became resistant to dBU during serial passage and became deficient in thymidine (dT) kinase activity. The dT kinase-deficient mKS-U lines were unable to grow in medium containing HATG (10−4 M hypoxanthine, 10−5 M aminopterin, 4 × 10−5 M thymidine, and 10−5 M glycine; Littlefield, 1965) because they were unable to utilize exogenous thymidine as a source of thymidylate when de novo synthesis of thymidylate was blocked by aminopterin. Growth in dBU medium did not increase the buoyant density of the DNA of mKS-U lines deficient in dT kinase activity, demonstrating that dBU was not incorporated into the DNA of the cells. These observations show that a heritable change had occurred in the dBU-grown mKS-U cell lines. However, two dBU-adapted cell lines, mKS-U1 (BU) and mKS-U2 (BU), did retain appreciable dT kinase activity even after 97 and 98 passages in dBU. The DNAs from mKS-U1 (BU) and mKS-U2 (BU) grown in dBU had buoyant densities greater than those of the DNAs from mouse cells grown in medium lacking dBU and the mKS-U1 (BU) and mKS-U2 (BU) lines were able to grow normally in HATG medium. Serial passage of poor, average, or good yielder transformed lines in dBU did not significantly change the frequency of induction of SV40 in fusion experiments with African green monkey kidney (CV-1) cells. However, the SV40 rescued in fusion experiments with two poor yielders after serial passage in dBU tended to produce larger plaques than those rescued prior to passage in dBU. Serial passage in dBU did not permit rescue of SV40 from heterokaryons of the rare yielders or non-yielders. The SV40 antigen was present in all the cell lines, even after prolonged cultivation in dBU, indicating that the SV40 genome was retained. Pretreatment of mKS-U lines with mitomycin C prior to fusion with CV-1 cells did not alter the virus yield from a good yielder, mKS-U13, after fusion with CV-1, and did not permit rescue of SV40 from rare or non-yielder lines. EFFET DE LA CULTURE PROLONGEE DE CELLULES DE SOURIS TRANSFORMEES PAR LE SV40 DANS DE LA BROMODESOXYURIDINE OU D'UN PRETRAITEMENT A LA MITOMYCINE C SUR LA RECUPERATION DU SV40 Plusieurs lignees clonales (mKS-U) de cellules renales de souris transformees par du SV40 irradie aux UV ont ete propagees en serie dans un milieu contenant de la bromo-5 desoxyuridine (dBU). La plupart des lignees mKS-U ont acquis une resistance a la dBU au cours des passages en serie et sont devenues deficientes au point de vue de l'activite de la thymidine (dT) kinase. Les lignees mKS-U deficientes en dT kinase ne pouvaient ětre cultivees dans un milieu contenant du HATG (10−4 M hypoxanthine, 10−5 M aminopterine, 4 X 10−5 M thymidine et 10−5 M glycine; Littlefield, 1965) car elles etaient incapables d'utiliser la thymidine exogene comme source de thymidylate lorsque la synthese du thymidylate etait a nouveau bloquee par l'aminopterine. La culture en milieu dBU n'augmentait pas la densite de l'ADN des lignees mKS-U deficientes du point de vue de l'activite de la dT kinase, ce qui prouve que la dBU ne s'incorporait pas a l'ADN des cellules. Ces observations montrent qu'une modification hereditaire est intervenue dans les lignees cellulaires mKS-U cultivees dans la dBU. Toutefois, pour deux lignees adaptees a la dBU, mKS-U1 (BU) et mKS-U2 (BU), l'activite de la dT kinase est restee considerable apres 97 et 98 passages dans la dBU. L'ADN des lignees mKS-U1 (BU) et mKS-U2 (BU) cultivees dans la dBU avait une densite plus elevee que celle de l'ADN des cellules de souris cultivees dans un milieu depourvu de dBU et les lignees mKS-U1 (BU) et mKS-U2 (BU) ont pu se developper normalement dans un milieu HATG. Les passages en serie dans la dBU de lignees transformees dont le rendement etait bon, moyen ou faible n'ont pas beaucoup modifie la frequence d'induction du SV40 au cours d'experiences de fusion avec des cellules (CV-1) de rein de singe vert africain. Toutefois, le SV40 recueilli lors des experiences de fusion avec deux lignees a faible rendement apres passages en serie dans la dBU avait tendance a former des plaques plus grandes que celles qui avaient ete recuperees avant le passage dans la dBU. Les passages en serie dans la dBU n'ont pas permis de recueillir du SV40 dans les noyaux cellulaires hybrides des lignees a rendement faible ou nul. L'antigene T du SV40 etait present dans toutes les lignees cellulaires, měme apres une culture prolongee dans la dBU, ce qui indique la presence constante du genome SV40. Le pretraitement des lignees mKS-U a la mitomycine C avant la fusion avec les cellules CV-1 n'a pas altere le rendement viral d'une lignee a bon rendement, mKS-U13, apres fusion avec les CV-1, et n'a pas permis d'extraire du SV40 des lignees a rendement faible ou nul.