Isolation and immunological characterization of human glomerular basement membrane antigens

Isolation and immunological characterization of human glomerular basement membrane antigens. About 5% of the cases of human glomerulonephritis are mediated by antiglomerular basement membrane (GBM) antibodies produced by the patient and capable of reacting with his own GBM antigen(s). To elucidate the nature of the antigen(s) in human antiGBM nephritis that reacts with antiGBM antibodies, insoluble human GBM was rendered soluble by digestion of the basement membrane collagen with collagenase or by extraction with 3.5 M KBr. Collagenase digestion and dialysis effectively solubilized over 98% of the GBM, while KBr extraction resulted in the solubilization of 23% of the dry membrane. The immunochemical characterization of the resultant GBM proteins with rabbit antiGBM antiserum absorbed with human plasma indicated the presence of at least seven distinct GBM specific antigens. Both collagenase-solubilized GBM and its KBr extract are antigenically reactive with renal eluates from patients with antiGBM nephritis as demonstrated by 1) absorption experiments, 2) double diffusion analysis and 3) a radioimmune assay. Further purification of the nephritogenic antigen(s) has been achieved by affinity chromatography with specific rabbit antiGBM antibodies. To obtain such antibodies, rabbits were immunized with the immunoprecipitate formed between the KBr extract and antiGBM antibodies eluted from a nephritic kidney. The rabbit antisera were absorbed with human serum and then used in affinity chromatography to isolate the nephritogenic GBM antigens. Isolement et caracterisation immunologique de l'antigene de membrane base glomerulaire humaine. Environ 5% des glomerulonephrites humaines ont comme mediateurs des anticorps anti membrane basale glomerulaire (GBM)s produits par le malade et susceptibles de reagir avec le ou les antigenes de sa GBM. Pour elucider la nature du ou des antigenes qui, dans la nephrite humaine par antiGBM, reagissent avec les anticorps antiGBM, de la GBM humaine insoluble a ete solubilisee par digestion du collagene de la membrane basale par la collagenase ou l'extraction au moyen de KBr 3,5 M. La digestion par la collagenase et la dialyse ont solubilise plus de 98% de la GBM, cependant que l'extraction par KBr avait pour resultat la solubilisation de 23% de la membrane seche. La caracterisation immunochimique de la proteine de la GBM etudiee au moyen d'un antiserum de lapin antiGBM absorbe sur plasma humain indique la presence d'au moins sept antigenes distincts specifiques GBM. La GBM solubilisee par le collagenase et l'extrait KBr sont antigeniquement reactifs avec les eluats renaux de malades atteints de nephrites par antiGBM comme cela est montre par 1) des experiences d'absorption, 2) l'analyse par double diffusion et 3) l'essai radioimmunologique. Une meilleure purification du ou des antigenes a ete realisee par chromatographie d'affinite avec des anticorps specifiques antiGBM de lapin. Pour obtenir ces anticorps ces lapins ont ete immunises au moyen d'immunprecipites formes avec l'extrait KBr et les anticorps antiGBM elues a partir d'un rein nephritique. L'antiserum de lapin a ete absorbe par du serum humain puis utilise en chromatographie d'affinite pour isoler les antigenes GBM nephritogenes.