Antibacterial effect of N‐acetylcysteine on common canine otitis externa isolates

Background N-Acetylcysteine (NAC) has the potential to be a useful therapeutic agent for the treatment of otitis externa due to its antimicrobial and mucolytic properties, as well as its ability to disrupt bacterial biofilm. Hypothesis/Objectives To determine the antibacterial activity of NAC against common bacterial isolates associated with canine otitis externa. Animals Twenty two isolates from canine clinical cases of otitis externa were identified and tested, including five Staphylococcus pseudintermedius, six Pseudomonas aeruginosa, five Corynebacterium spp. and six β-haemolytic Streptococcus spp. isolates. Methods Each isolate was grown on blood agar for 24 h and transferred to Mueller Hinton Broth (MHB) to achieve a final concentration of 5 × 105 CFU/mL. NAC was diluted in MHB to a starting concentration of 160 mg/mL and serial two-fold microdilution assays were performed in triplicate with negative controls for all isolates tested. Concentrations of NAC tested ranged from 0.125 to 80 mg/mL. A 50 μL volume of bacterial suspension was used to inoculate each well. Results The minimum inhibitory concentration (MIC) of NAC for all isolates tested ranged from 5 to 20 mg/mL. Conclusions and Clinical Relevance N-Acetylcysteine inhibits clinically relevant and drug resistant bacteria in vitro, and has potential for use as a novel agent for treatment of otitis externa. Resume Contexte La N-Acetylcysteine (NAC) a le potentiel d'etre un agent therapeutique utile dans le traitement des otites externes en raison de ses proprietes antimicrobiennes et mucolytiques ainsi que ses capacites d'alterer le biofilm bacterien. Hypotheses/Objectifs Determiner l'activite antibacterienne du NAC contre les souches bacteriennes frequemment associees aux otites externes canines. Sujets Vingt-deux souches d'otites externes canines ont ete identifiees et testees, incluant cinq souches de Staphylococcus pseudintermedius, six Pseudomonas aeruginosa, cinq Corynebacterium spp. et six β-haemolytic Streptococcus spp. Methodes Chaque souche a ete mise en culture sur blood-agar pendant 24h et transferee sur MHB (Mueller Hinton broth) pour atteindre une concentration finale de 5 9 105 CFU/mL. NAC a ete dilue dans MHB a une concentration initiale de 160 mg/mL et des tests en serie de double microdilution ont ete realises en triple exemplaire avec des controles negatifs pour tous les isolats testes. Les concentrations de NAC testees etaient de 0.125 a 80 mg/mL. Un volume de suspension bacterienne de 50 lL a ete utilise pour inocule chaque isolat. Resultats La concentration minimale inhibitrice (MIC) de NAC pour tous les isolats testes allaient de 5 a 20 mg/ml. Conclusions et importance clinique La N-Acetylcysteine inhibe les bacteries cliniquement pertinentes et les bacteries resistantes in vitro et a le potentiel d'etre utilisee comme un nouvel agent de traitement des otites externes. Resumen Introduccion la N-acetil cisteina (NAC) tiene el potencial de ser un agente terapeutico util para el tratamiento de la otitis externa debido a sus propiedades antimicrobiana es y mucoliticas, asi como la habilidad de distorsionar las peliculas bacterianas. Hipotesis/Objetivos determinar la actividad antibacteriana de NAC frente a aislados bacterianos comunes asociados con la otitis canina externa Animales 22 aislados de casos clinicos caninos de otitis externa se identificaron y probaron, incluyendo cinco de Staphylococcus pseudintermedius, seis de Pseudomonas aeruginosa, cinco de Corynebacterium spp. y seis de Streptococcus beta hemolitico. Metodos cada aislado se crecio en agar de sangre durante 24 horas y se transfirio a un caldo de Mueller-Hinton (MHB) para obtener una concentracion final de 5,9 × 105 CFU/mL. NAC se diluyo en MHB a una concentracion inicial de 160 mg/mL y se realizaron ensayos con micro diluciones dobladas por triplicado con controles negativos para todos los aislados probados. Las concentraciones de NAC probadas variaron entre 0,125 a 80 mg/mL. Un volumen de 50 μl de suspension bacteriana se utilizo para inocular cada pocillo. Resultados la concentracion minima inhibitoria (MIC) de N AC para los aislados probados vario entre 5 a 20 mg/mL. Conclusion e importancia clinica la N-acetil- cisteina inhibe bacterias clinicamente relevantes y resistentes a otros farmacos in vitro, y tiene el potencial de ser utilizado como un agente novedoso para el tratamiento de la otitis externa canina. Zusammenfassung Hintergrund N-Acetylcystein (NAC) hat aufgrund seiner antimikrobiellen und mucolytischen Eigenschaften Potential als sinnvoller therapeutischer Wirkstoff fur die Behandlung einer Otitis externa, sowie die Fahigkeit einen bakteriellen Biofilm zu zerstoren. Hypothese/Ziele Die Bestimmung der antibakteriellen Wirksamkeit von NAC gegenuber gangigen bakteriellen Isolaten im Zusammenhang mit Otitis externa beim Hund. Tiere Zweiundzwanzig Isolate von klinischen Fallen von Hunden mit Otitis externa wurden identifiziert und untersucht. Die Isolate bestanden aus funf Staphylococcus pseudintermedius, sechs Pseudomonas aeruginosa, funf Corynebacterium spp. und sechs β-hamolytischen Streptococcus spp. Isolaten. Methoden Jedes Isolat wurde auf Blutagar fur 24h angezuchtet und auf Mueller Hinton Bouillon (MHB) transferiert um eine Endkonzentration von 5 9 105 CFU/ml zu erreichen. NAC wurde in MHB zu einer Startkonzentration von 160 mg/ml verdunnt und im Microverdunnungsassay wurde eine Serie von jeweils zweifacher Verdunnung mit den Proben im Triplikat mit Negativkontrollen fur alle getesteten Isolate durchgefuhrt. Die getesteten Konzentrationen von NAC reichten von 0,125 bis 80 mg/ml. Ein 50 Il Volumen einer bakteriellen Suspension wurde zur Inokulation eines jeden Rohrchens verwendet. Ergebnisse Die minimale inhibitorische Konzentration (MIC) von NAC fur alle Isolate reichte von 5 bis 20 mg/ml. Schlussfolgerungen und klinische Bedeutung N-Acetylcystein hemmt klinisch relevante und Medikamenten-resistente Bakterien in vitro, und hat Potential als neuer Wirkstoff fur die Behandlung einer Otitis externa. 要約 背景 N−アセチルシステイン(NAC)はその抗菌性および粘液溶解性だけでなく、細菌のバイオフィルムの破壊能力によって、耳炎のための治療薬となりうる。 仮説/目的 イヌの外耳炎に関連する一般的な分離細菌に対するNACの抗菌活性を究明すること。 供与動物 イヌの外耳炎の臨床症例から、5つのStaphylococcus pseudintermedius、6つのPseudomonas aeruginosa 、5つのCorynebacterium spp.ならびに6つのβ-溶血性 Streptococcus spp.を含む22の分離株を同定し検査した。 方法 それぞれの分離株を24時間血液寒天培地で培養し、5 9 105 CFU/mLの最終濃度を得るためにミューラーヒントン培地(MHB)に継代した。検査した全ての分離株に対して、NACはMHBで160 mg/mLの開始濃度で希釈し、系列2倍微量希釈分析と陰性コントロールの3つの検査を一組として分析を行った。検査したNAC濃度は0.125から80 mg/mLの範囲であった。それぞれのウェルを培養するために50IL量の細菌希釈液を使用した。 結果 検査したすべての分離株に対するNACの最小阻止濃度(MIC)は5〜30mg/mLの範囲であった。 結論および臨床的な関連性 N-アセチルシステインは、in vitroで臨床的に関連する細菌や薬物耐性菌を抑制し、さらに外耳炎の治療のための新規物質として使用できる可能性がある。 摘要 背景 N-乙酰半胱氨酸(NAC)具有抗菌性、粘液溶解力以及破坏菌膜的能力,因此可做为外耳炎的治疗药物。 假设/目的 确定NAC对犬外耳炎常见菌的抗菌活性。 动物 鉴定和检测22个犬外耳炎病例的分离菌株,包括五株假中间型葡萄球菌、六株假单胞菌、五株棒状杆菌以及六株β-溶血性链球菌。 方法 每株细菌均在血琼脂中培养24h,并转移到米勒赫顿肉汤(MHB)中,使得最后的浓度为5 9 105 CFU/mL。NAC在MHB中稀释,起始浓度为160 mg/mL,在阴性对照和试验组应用连续双倍微稀释法。试验NAC浓度为0.125到80 mg/mL。每组接种50 lL细菌悬浮液。 结果 NAC对所有试验菌株最小抑菌浓度(MIC)为5到20 mg/mL。 总结与临床意义 N-乙酰半胱氨酸在体外实验中可抑制临床相关且耐药的细菌,有做为外耳炎治疗用药的潜力。