Comparative laboratory methods for assaying behavioral responses of Rhagoletis pomonella flies to host marking pheromone

In tests on Rhagoletis pomonella flies, we compared previously-reported laboratory approaches used in assaying behavioral responses of tephritid flies to host marking pheromone with new approaches described here. The foremost criterion used in choosing the most effective assay approach was that of a very high degree of fly discrimination between pheromone-treated and untreated oviposition sites. Other criteria accentuated a comparatively low amount of time, a low amount of pheromone, a low number of flies, and a low number of oviposition sites (real or artificial fruit) required to conduct an assay. The method that proved to fulfill these criteria to the greatest degree involved: placing 15 treated Crataegus viridis host fruit and 15 untreated C. viridis fruit simultaneously in a test cage with a single continuously-observed female for up to 60 min, recording whether the female accepted for oviposition or rejected each fruit visited, and removing the female from each accepted fruit just before initiation of ovipositor dragging and deposition of contaminating marking pheromone. In conducting assays associated with chemical purification and identification of pheromonal components, we found this method to be very effective when the 15 treated fruit consisted of 5 sets of 3 fruit, one set treated with crude pheromone (as a standard) and each of the other sets treated with a different chromatographic fraction of pheromone. Zusammenfassung Untersuchungen zur Reaktion von Rhagoletis pomonella (Walsh) (Dipt., Tephritidae) auf ihr Markie-rungspheromon unter Berucksichtigung verschiedener Labormethoden Im Rahmen von Untersuchungen uber die Reaktion von Rhagoletis pomonella auf das Wirt-Markierungspheromon wurden bereits bekannte Labormethoden mit neuen, hier beschriebenen Methoden verglichen. Das wichtigste Kriterium bei der Wahl der effektivsten Untersuchungsmethode war ein sehr hoher Unterscheidungsgrad der Fliegen zwischen pheromonbehandelten und unbehandelten Eiablageorten. Als weitere Bewertungskriterien wurden ein relativ geringer Zeitaufwand, geringer Pheromonverbrauch sowie eine geringe Anzahl an Versuchstieren und Eiablageorten (echte sowie kunstliche) bei der Versuchsdurchfuhrung herangezogen. Die Methode, die alle Voraussetzungen am besten erfullte, war folgende: je 15 behandelte und unbehandelte Crataegus viridis-Fruchte wurden gleichzeitig in einen Zuchtkafig gegeben, und ein Weibchen, das unter standiger Beobachtung stand, wurde fur 60 min in diesen Kafig gesetzt. Dabei wurde aufgezeichnet, ob das Weibchen die jeweils besuchte Frucht zur Eiablage annahm oder ablehnte. Sobald das Weibchen eine Frucht fur die Eiablage akzeptierte, wurde es - bevor es den Ovipositor ausstulpen und mit der Pheromonabgabe beginnen konnte - aus dem Kafig entfernt. Bei Untersuchungen zur chemischen Reinigung und Identifikation der Pheromonkomponenten zeigte sich, das diese Methode sehr effektiv war, wenn sich die 15 behandelten Fruchte aus 5 Gruppen a 3 Fruchten zusammensetzten, von denen eine Gruppe mit dem naturlichen Pheromon (als Standard) und die anderen mit verschiedenen chromatographisch erhaltenen Fraktionen behandelt waren.