Interactions of murine leukemia virus (MuLV) with isolated lymphocytes. II. Infection of B and T cells with friend virus complex in diffusion chambers and in vitro: Effect of polyclonal mitogens

The infection of isolated B and T cells by a murine leukemia virus (Friend) (MuLV-F) was studied both in vitro and in vitro with an implanted diffusion chamber system. Lymphocytes were obtained from pools of normal spleen cells by filtration of the cell suspension through a nylon-wool column. The purity for both Ig positive and theta-positive cells varied between 85% and 90% in the B-cell and T-cell fractions; both lymphocyte fractions responded very well to stimulation with their respective specific polyclonal mitogens, bacterial lipopolysaccharide (LPS) and concanavalin A (Con A). Lymphocytes were infected by incubating pelleted cells in 2–6 × 104 FFU MuLV for 1 h at 4°C and were then cultured for 5–10 days. Cells releasing infectious MuLV were enumerated as infectious centers (IC). IC were readily detectable in the cultures of infected B-cells but none were found in the T-cell cultures. Addition of LPS to the culture medium increased the number of IC in B-cell fractions up to 1,000-fold. Furthermore, in T-cell cultures with LPS, IC also appeared in numbers which approximately correlated with the contaminating Ig+ cells of the T-cell fraction. In contrast, Con A had no consistent effect on the infection of either B or T cells. In the absence of MuLV-F, mitogenic stimulation alone did not elicit any endogenous IC. In subsequent experiments, purified lymphocytes were infected in diffusion chambers in vivo. The number of IC in infected B cells increased 1,000-fold as compared to infection in tissue culture. The peak of infection at 10 days was followed by a slight decline. Infected cells were also found in diffusion chambers containing T-cell fractions; these IC had very similar kinetics to those in B-cell-containing chambers, but their number was 10 times lower, suggesting that the infected cells were B cells, which comprised about 10% of the T-cell fraction. The virus-related antigens were detectable by immunofluorescence on the membrane of cells recovered from B-cell-bearing chambers but not on cells from T-cell-bearing chambers. Interactions Du Virus De La LeuceMie Murine (Mulv) Avec Des Lymphocytes Isoles. II. Infection Des Cellules B Et T Avec Le Complexe Du Virus De Friend Dans Des Chambres De Diffusion Et In Vitro: Effet Des Mitogenes Polyclonaux Les auteurs ont etudie in vitro et in vitro avec un systeme d'implantation de chambres de diffusion, l'infection de cellules B et T isolees par un virus de la leucemie murine souche Friend (MuLV-F). Les lymphocytes provenaient de pools de cellules spleniques normales et ont ete obtenus par filtrage de la suspension cellulaire sur une colonne de laine de nylon. La teneur en cellules Ig-positives et theta-positives variait entre 85 et 90% dans les fractions de cellules B et T; les deux fractions de lymphocytes repondaient tres bien a la stimulation avec les mitogenes polyclonaux specifiques, respectivement un lipopolysaccharide bacterien (LPS) et la concanavaline A (Con A). Pour infecter les lymphocytes, on a incube les cellules agglomerees en pellets dans 2–6 × 104 uff de MuLV pendant 1 h a 4°C, puis on les a cultivees pendant 5 a 10 jours. Les cellules qui liberaient du MuLV infectieux ont ete comptees comme centres infectieux (IC). Les IC sont facilement decelables dans les cultures de cellules B infectees mais on n'en a pas trouve dans les cultures de cellules T. L'addition de LPS au milieu de culture a donne jusqu'a mille fois plus d'IC dans les fractions de cellules B. En outre, dans les cultures de cellules T contenant le LPS, le nombre d'IC correspondait a peu pres a celui des cellules contaminantes Ig+ de la fraction de cellules T. Par contre, la Con A n'avait pas d'effet regulier sur l'infection des cellules B ou T. En l'absence de MuLV-F, la stimulation mitogene ne produisait a elle seule aucun IC endogene. Dans des experiences subsequentes, les lymphocytes purifies ont ete infectes dans des chambres de diffusion in vivo. Le nombre d'IC dans les cellules B infectees est mille fois plus eleve que lorsque ce sont des cultures de tissu qui sont infectees. L'infection atteint un maximum au bout de 10 jours puis diminue legerement. On a aussi trouve des cellules infectees dans les chambres de diffusion contenant des fractions de cellules T; leur cinetique etait tres semblable e celle que l'on a observee dans les chambres contenant des cellules B, mais leur nombre etait dix fois plus faible, ce qui donne a penser que les cellules infectees sont des cellules B, qui constituent environ 10% de la fraction de cellules T. Les antigenes lies au virus ont ete detectes par immunofluorescence sur la membrane des cellules recueillies dans les chambres contenant des cellules B, mais pas dans celles qui contenaient des cellules T.