The purification of antibody to PR8 influenza A virus.

Summary 1 The solubility of human γ-globulin in presence of various polymethacrylate concentrations was studied as a function of pH and ionic strength. At pH 5.9 and at ionic strengths below 0.1 maximal precipitation occurred at a polymer/protein ratio of 0.1. Under the same conditions PR 8 influenza A virus was not precipitated. 2 When subjected to a similar treatment a complex of influenza A virus with its homologous antibody yielded one third of the antibody present in the starting material purified by a factor of 50. Though time-consuming and expensive this method is unique in that it permits the dissociation of antibody from a protein antigen in the inter-isoelectric range. 3 Instead of using polyelectrolyte the virus-antibody complex has also been dissociated at pH 3.2. In order to remove the virus the acidified solution has been centrifuged at 34 000 g. leaving the free antibody in the supernatant solution. The procedures (2) and (3) have been compared with the purification of antibody by adsorption on virus linked to an ion exchange resin and subsequent elution at pH 3.2. 4 The stability of antibodies has been studied as a function of pH and the efficiency of the methods with respect to yield and purity of antibodies is discussed. Resume 1° La solubilite de γ-globuline humaine en presence de differentes concentrations de polymethacrylate a ete etudiee en fonction du pH et de la concentration des ions. A un pH de 5,9 et a une concentration ionique inferieure a 0, 1, une precipitation maximum fut obtenue a une proportion polymere/proteine de 0,l. Dans ces mees conditions, le virus PR8 d'influenza A ne fut pas precipite. 2° Soumis a un traitement semblable, un complexe virus-anti-corps-homologue rendit un tiers de l'anticorps present dans le complexe, purifie par un facteur de 50. Bien que cette methode demande beaucoup de temps et qu'elle soit couteuse, elle est unique en ce qu'elle permet la dissociation d'un anticorps de son antigene protidique dans la zone inter-isoelectripue. 3° Le complexe virus-anticorps a pu aussi btre dissocie a un pH de 3,2. Ici, le virus fut seare par centrifugation a 34 000 g., laissant l'anticorps en solution. Les procedes (2) et (3) ont ete compares avec la purification de l'anticorps par absorption sur virus lie a une resine echangeur d'ions et eution a pH 3,2. 4° La stabilite des anticorps en fonction du pH a ete etudiee, et l'efficacite des methodes par rapport a la purete des anticorps obtenus, ainsi que leur rendement, sont discutes. Zusammenfassung 1 Die Loslichkeit humanen γ-Globulins wurde in Gegenwart eines kationischen Polyelektrolyten (Polymethacrylat) als Funktion des pH's und der Ionenstarke untersucht. Eine maximale Ausfallung erfolgte bei pH 5,9 und einem Verhiiltnis Polyelektrolyt/Eiweis von 0,1. Niedrige Ionenstarken begunstigen die Ausflockung. PR8 Influenza A Virus laat sich unter keinen der angewendeten Unter-suchungsbedingungen durch PolymethacryIat ausfallen. 2 Unter gleichartigen Bedingungen gelingt, es einen Komplex von Influenza A Virus mit dem homogenen Antiklorper zu spalten und ein Drittel des in der Ausgangslosung enthaltenen Antikorpers 50-fach angereichert daraustellen. Dieses Verfahren weicht insofern von fruheren Methoden ab, als es die Dissoziation eines Antikorpers von einem Eiweisantigen im interisoelektrischen Bereich ermoglicht. 3 Zum Vergleich wurde der Virus-Antikorper-Komplex statt mit Polyelektrolyt bei pH 3,2 dissoziert. Zur Entfernung des Virus wurde die Losung bei 34 000 g zentrifugiert und der freie Antikorper aus der uberstehenden Losung isoliert. 4 Die Stabilitat verschiedener Antikorper wurde in Abhangigkeit des pH's untersucht. Die Ausbeute und der Reinheitsgrad der mit den beschriebenen Methoden dargestellten Antikorperpraparate wurden verglichen.