Studies of I131 Tagged Rh Antibody of D Specificity

Summary 1 The anti-D antibody of one donor has been tagged with I131 and partially separated from other proteins by adsorption to and elution from the stroma of D positive red cells. 2 D positive cells presumed to be homozygous for the D antigen adsorbed more labelled anti-D antibody than did heterozygous cells. The presence of the C antigen depressed the uptake of anti-D antibody by D positive cells. 3 The agglutination of D positive cells sensitized by I131 tagged D antibody in dilutions of antiglobulin serum was more intense and occurred at higher dilution as the concentration of adsorbed D antibody was increased. However, when a certain intensity of agglutination in dilutions of the antiglobulin serum was reached a manyfold addition of I131 tagged anti-D antibody did not increase the intensity of agglutination. 4 When antibody-coated cells were incubated with normal cells, antibody dissociated spontaneously and transferred to normal cells. The rate of transfer of I131 tagged antibody was directly related to the concentrations of antibody on the donor cells. 5 When cells coated with I131 tagged antibody were incubated in large volumes of medium the percentage loss of antibody was directly related to the concentration of the antibody adsorbed to the cell and to the volume of medium. The rate of spontaneous dissociation was greatest at 37°C and was progressively reduced at 25°C and 5°C. 6 Cells coated with I131 tagged antibody lost antibody more rapidly when untagged antibody was present in the surrounding medium, and the rate of loss was directly related to the concentration of unlabelled antibody in the surrounding medium. Observations of progressive dissociation of antibody indicate that antigen antibody binding is not homogeneous since a residual of bound antibody dissociated less rapidly than the majority. Resume 1 ° L'anticorps anti-D d'un donneur a ete marque au I131 et partiellement separe des autres proteines par absorption et elution sur et a partir d'un stroma d'erythrocytes D positif 2 ° Les erythrocytes D positif presumes homozygotes quant a l'antigene D absorbent davantage d'anti-D marque que les heterozygotes. La presence de l'antigene C a une action depressive sur la fixation de l'anti-D sur les erythrocytes D positifs 3 ° L'agglutination des erythrocytes D positifs sensibilises par l'anti-D marque au I131 par des dilutions de serum antiglobuline est d'autant plus forte et a des dilutions d'autant plus elevees que l'anti-D absorbe est plus concentre. Cependant, quand un certain degre d'agglutination est atteint avec des dilutions du serum anti-globuline, un surcroit d'anticorps anti-D marque au I131 n'augmente pas l'intensite de la reaction 4 ° Quand les erythrocytes sensibilises sont incubes avec des erythrocytes normaux, l'anticorps se dissocie et se fixe aux erythrocytes normaux. Le degre de fixation aux erythrocytes normaux est directement proportionnel a la concentration d'anticorps fixes aux erythrocytes donneeurs 5 ° Lorsque les erythrocytes sensibilises par I'anticorps marque au I131 sont incubes dans de grandes quantites du milieu la diminution d'anticorps en pour cent est directement proportionnelle a la concentration de l'anticorps absorbe a l'erythrocyte et au volume du milieu. Le degre de dissociation spontanee est le plus fort a 37°C et diminue progressivement a 25°C et 5°C 6 ° Les erythrocytes sensibilises par l'anticorps marque au I131 perdent l'anticorps plus rapidement quand il se trouve dans le milieu ambiant un anticorps non marque; le degre de perte est directement proportionnel a la concentration de l'anticorps non marque se trouvant dans le milieu ambiant. Ces observations sur la dissociation progressive de l'anticorps indiquent que la liaison antigene-anticorps n'est pas homogene puisque un residu d'anticorps lie se dissocie moins rapidement que la plus grande partie de l'anticorps. Zusammenfussung 1 Der Anti-D-Antikorper eines Einzelspenders wurde mit I131 markiert und durch Adsorption-Elution an Stroma D-positiver Erythrozyten teilweise von Begleitproteinen befreit. 2 Homozygote D-positive Zellen adsorbierten grosere Mengen dieses markierten Anti-D-Antikorpers als heterozygote Zellen. Die Adsorption von Anti-D durch D-positive Zellen wurde durch die Anwesenheit von C-Antigen gehemmt. 3 Die Agglutination von I131-Anti-D-sensibilisierten D-positiven Zellen durch stufenweise verdunntes Antiglobulinserum war abhangig von der Konzentration der an der Zelloberflache adsorbierten Antikorper. Stark beladene Zellen wurden durch hohere Verdunnungen des Antiglobulinserums agglutiniert als schwach beladene. Diese Reaktion zeigte insofern einen oberen Grenzwert als eine gewisse Agglutinationsstarke auch bei Zugabe eines Uberschusses von I131-Anti-D nicht uberschritten werden konnte. 4 Bei Vermischung antikorperbeladener Zellen mit Normalzellen erfolgte eine Spontandissoziation des Antikorpers mit Ubergang desselben auf die Normalzellen. Die Transfergeschwindigkeit des Antikorpers stand in direkter Beziehung zur Antikorperkonzentration an der Oberflache der «Spenderzellen«. 5 Bei Inkubation von I131-Anti-D-sensibilisierten Zellen in grosen Mengen Aufschwemmungsflussigkeit findet eine Antikorperabgabe von den Zellen an die Flussigkeit statt. Die abgegebene Menge steht in direkter Beziehung einerseits zur Menge der an der Zelloberflache adsorbierten Antikorper und andererseits zum Flussigkeitsvolumen. Bei 37° C war die Spontandissoziationsrate am grosten; bei tieferen Temperaturen nahm sie progressiv ab. 6 Bei Anwesenheit unmarkierter Antikorper in der Aufschwemmungsflussigkeit war die Dissoziation der markierten Antikorper von der Zelloberflache erheblich erhoht. Die abgegebene Menge stand in direkter Beziehung zur Antikorper-Konzentration in der Aufschwemmungsflussigkeit. Beobachtungen uber den fortlaufenden Antikorperschwund von der Zelloberflache deuten auf eine Inhomogenitat der Antigen-Antikorperbindung hin, indem eine kleine Restmenge fester als die Hauptmenge des Antikorpers gebunden blieb.