Complement and the antiglobulin test.

Summary To study the specificity of antiglobulin reactions which are dependent upon C‘ uptake by the sensitized erythrocytes, “antisera to C’” were prepared by immunizing animals with washed specific precipitates containing bound C‘. These antisera, as well as antisera to whole human serum, agglutinated the red cells of cold hemolytic anemia, Lea sensitized red cells, and sensitized sheep erythrocytes exposed to sublytic doses of C’. Antisera to GAhuC‘ (specific precipitate with bound human complement) and antisera to whole human serum, were assayed for complement antiglobulin reactions by cross-titration with sensitized sheep cells (EA) exposed to decreasing sublytic amounts of human C’ (EAhuC‘). Because EAhuC’ red cells are agglutinable with anti-human γ globulin sera, reagents for cross-titration should first be freed of such antibodies by specific precipitation with human y globulin. In addition, heterophile (anti-sheep cell) antibodies should be absorbed from reagents and sources of C‘, and controls maintained to ensure absence of “rheumatoid” effect. Antisera to GAhuC' and to whole human serum agglutinated the erythrocytes from ordinary refrigerated clotted blood specimens of adults and some newborns. For this reason, these reagents are not generally applicable for compatibility testa involving clotted donor pilot tubes, or erythroblastosis tests where the clotted cord blood has been chilled. Complement, or an indistinguishable co-factor of C', or an antigen resulting from C' activity, appeared to be the specificity of those antiglobulin reactions that are positive only when there has been complement uptake by the sensitized erythrocytes. Therefore, the term complement antiglobulin test has been suggested for these reactions. Resume Pour etudier la specificite des reactions a l'anti-globuline qui se produisent a la suite de la fixation du complement sur des erythrocytes aensibilises, les auteurs ont prepare des anti-serums anti-complement (anti-C') en immunisant des animaux avec des precipites specifiques laves contenant du C'. Ces anti-serums, au meme titre que lee antisenuns anti-seums humains agglutinent les erythrocytes d'anemie hemolytique a autoanticorps froids, des erythrocytes sensibilises par l'anti Lea et lea erythrocytes de mouton sensibilises sur lesquels on a fixe du C' a des doses sublytiques. Les auteurs ont tente de pratiquer des reactions a l'anti-globuline pour le complement en testant des erythrocytes de mouton sensibilises EA sur lesquels ils ont fire des quantites decroissantes des complement humain sublytique (EAhuC') avec des anti-serums anti-GAhuC' (precipites specifiques contenant du complement humain) et des antiaerums anti-serum humain. Comme les erythrocytes EAhuC' sont agglutinables par les antiserums anti-gammaglobuline humaine, les reactifs utilises pour les titrations croisees doivent Btre debarrasses de ces anticorps par absorption prealable avec des gammaglobulines humaines. En outre, les reactifs et les substances utilisees comme source de complement doivent etre debarrasses des anticorps heterophiles anti-erythrocytes de mouton; enfin, il faut s'assurer que les reactifs sont depourvus du facteur rhumatolde de la PCE (polyarthrite chronique evolutive). Les autiserums anti-GAhuC' et anti-senuns humains agglutinent les erythrocytes provenant de sang d'adultes et de quelques nouveaux-nes coagule a froid selon la methode habituelle. C'est pour cette raison que ces reactifs ne sont generalement pas utilisables pour des tests de compatibilite pratiques avec des sangs recoltes dans les tubes pilotes ordinaires ou, dans les cas d'erythroblastose, avec des sangs du cordon prealablement refroidis. Le complement C', ou un facteur non decelable de C', ou nn antigene resultant de l'action de C' apparait etre responsable de la secificite de ces reactions a l'anti-globuline qui ne sont positives que lorsqu'on fixe le complement SUI des erythrocytes sensibilises. C'est pourquoi les auteurs suggerent d'appeler ce genre de reactions «complement antiglobulintest» (test a l'antiglobuline pour le complement). Zusammenfassung Zum Studium der Spezifitat der Antiglobulinreaktionen, die von der Fixation von C' durch die sensibilisierten Erythrozyten abhangig sind, wurden «Antiseren gegen C'» hergestellt, welche durch Immunisierung von Tieren mit gewaschenen Immunprazipitaten, welche C' gebunden hatten, gewonnen wurden. Diese Antiseren, sowie solche, welche durch Immunisierung mit Gesamtseren gewonnen wurden, agglutinierten Erythrozyten von Patienten mit kalteantikorperbedingter erworbener hamolytischer Anamie, Erythrozyten, welche mit Anti-Lea-Seren sensibilisiert worden waren sowie sensibilisierte Hammelerythrozyten, welche subhamolytische Mengen von menschlichem Komplement gebunden hatten. Mit den Antiseren gegen GAhuC' (Immunprazipitat mit gebundenem memchlichem Komplement) und den Antiseren gegen menschliches Gesamtserum wurden Komplement-Antiglobulinreaktionen an sensibilisierten Hammelerythrozyten (EA), welche su bhamolytische Mengen von menschlichem Komplement gebunden hatten (EAhuC'), durchgefuhrt. Da die EAhuC'-Erythrozyten durch Antiseren gegen menschliches γ-Globulin agglutiniert werden, mussen die bei solchen Titrationsversuchen verwendeten Antiseren vorgangig durch Immunprazipitation mit menschlichem γ-Globulin von ihren Anti-γ-Globulin-Antikorpern befreit werden. Auserdem mussen allfallig in den Antiseren oder den Komplementquellen enthaltene heterophile Anti-Hammel-erythrozyten-Antikorper wegabsorbiert werden. Im weiteren sind die verwendeten Reagenzien auf die Abwesenheit des «rheumatoiden» Effektes zu prufen. Die Antiseren gegen GAhuC' sowie diejenigen gegen menschliches Gesamtserum agglutinierten die Erythrozyten gekuhlter geronnener Blutproben von Erwachsenen und einiger Neugeborener. Aus diesem Grunde eignen sich diese Seren nicht ohne weiteree fur Vertraglichkeitsproben, bei denen geronnene Spenderblutproben verwendet werden. Dasselbe gilt fur serologische Untersuchungen an geronnenen und gekuhlten Nabelschnurblutproben im Rahmen der Abklarung von Morbus haemolyticus-Geburten. Das Komplement selbst, oder ein davon nicht unterscheidbarer Kofaktor, oder aber ein Antigen, welches bei der Komplementaktivierung in Erscheinung tritt. bilden das Substrat fur die Spezifitat derjenigen Antiglobulinreaktionen, welche nur dann positiv ausfallen, wenn die sensibilisierten Erythrozyten Komplement gebunden haben. Aus diesem Grunde wird fur diese Art Reaktion die Bezeichnung « Komplement-Antiglobulintest « vorgeschlagen.