DOI: 10.18150/kzqpii
title: Ocena immunohistochemiczna wybranych białek w nasieniaku jądra w porównaniu do tkanki kontrolnej

description: Celem działania naukowego była ocena udziału wybranych białek w tkance nowotworów złośliwych jąder – nasieniakach, w odniesieniu do tkanki kontrolnej.Nasieniaki jąder stanowią bardzo istotny problem kliniczny, szczególnie w grupie pacjentów między 30 a 40 rokiem życia. W tej grupie chorych są najczęściej występującym nowotworem złośliwym. Z uwagi na podstępny, często bezobjawowy przebieg guz ten może być rozpoznany w późnym stadium, z obecnymi przerzutami odległymi. Wzrost zachorowalności na nowotwory jądra zaobserwowano w ostatnich dziesięcioleciach głównie w krajach uprzemysłowionych. Złotym standardem w leczeniu guzów jąder jest operacyjne usunięcie zmienionego nowotworowo narządu.Ocenie poddano wybrane białka, na temat których nie odnaleziono wiele doniesień w literaturze naukowej, biorąc pod uwagę ich udział w nowotworach złośliwych jądra. Analizie poddano białko wiążące kalcyklinę - CacyBP/SIP (ang. calcyclin binding protein/Siah-1 interacting protein) oraz jego możliwy wpływ na działanie wybranych kinaz białkowych. Ocena nowej funkcji białka CacyBP/SIP, jako enzymu defosforylującego jest niepoznanym dotąd zagadnieniem. Stąd celem przeprowadzonego badania była analiza CacyBP/SIP, jako fosfatazy dla grupy kinaz białkowych aktywowanych mitogenami - MAPK (ang. mitogen-activated protein kinases) w zarodkowym nowotworze złośliwym jądra – nasieniaku, w porównaniu z tkanką nienowotworową. Ocenie poddane zostały dwa rodzaje MAPK: kinazy regulowane sygnałem zewnątrzkomórkowym - ERK1/2 (ang. extracellular signal-regulated kinase) oraz kinaza p38α.  Grupę badaną stanowiło 30 pacjentów z histopatologicznym rozpoznaniem nasieniaka, leczonych operacyjnie w Klinice Urologii Uniwersytetu Medycznego w Białymstoku. Pierwotnie miała być to grupa 60 pacjentów. Z uwagi na rygorystyczne kryteria doboru pacjentów, z całej grupy pacjentów do badania ostatecznie zakwalifikowano połowę. Wykluczono pacjentów, u których w badaniu histopatologicznym stwierdzono miejscowe zaawansowanie choroby, a także chorych z rozpoznanymi przerzutami. Materiał kontrolny stanowiły fragmenty tego samego jądra, pobrane z przeciwległego w stosunku do guza, bieguna narządu. Były to fragmenty, makroskopowo i histopatologicznie niewykazujące cech rozrostu nowotworowego.W pobranym materiale ze zmiany nowotworowej ocenie immunohistochemicznej poddano białka: CacyBP/SIP, p-ERK1/2 oraz p38. Ocena morfometryczna została przeprowadzona przy użyciu komputera klasy PC zaopatrzonego w oprogramowanie do komputerowej analizy obrazu, NIS-Elements Advanced Research firmy Nikon. Komputerowy program morfometrycznej analizy obrazu pozwolił ocenić intensywność reakcji immunohistochemicznych. Za pomocą techniki RT-qPCR została dokonana ocena ekspresji genów kodujących Cacybp, Mapk3, Mapk1 i Mapk14.Silną immunoreaktywność białka CacyBP/SIP stwierdzono w nienowotworowej tkance jądra, głównie w cytoplazmie komórek nabłonka kanalików nasiennych jąder. Immunoreaktywność CacyBP/SIP we wszystkich nasieniakach okazała się być bardzo niska. Jądrową lub cytoplazmatyczną lokalizację białka CacyBP/SIP zaobserwowano tylko w pojedynczych komórkach nowotworowych. Analiza immunohistochemiczna wykazała umiarkowaną reaktywność ERK 1/2 zarówno w cytoplazmie, jak i jądrach komórek nabłonka kanalików nasiennych w tkance kontrolnej, podczas gdy w nasieniakach reaktywne były tylko jądra komórkowe. Podobnie immunoreaktywność białka p38 w nasieniakach była znacząco osłabiona w porównaniu z tkankami nienowotworowymi. Analiza QRT-PCR wykazała istotny spadek ekspresji genów CacyBP/SIP, ERK 1/2 i p38 w nasieniaku w porównaniu z tkanką kontrolną. Wyniki QRT-PCR potwierdziły rezultaty analizy immunohistochemicznej.Przeprowadzona analiza białek CacyBP/SIP, ERK1/2 oraz p38 w nasieniakach jąder dostarczyła nowatorskich danych na temat ich udział w tym procesie karcynogenetycznym. Uzyskane wyniki nie pozostawiają żadnych wątpliwości odnośnie znaczącego udziału powyższych białek w patomechanizmie powstawania i rozwoju nasieniaków jąder. Przeprowadzone badanie może rzucić nowe światło na mechanizmy leżące u podstaw rozwoju nowotworu, migracji komórek indukowanych białkiem CacyBP/SIP, a tym samym na nowe spojrzenie diagnostyczno-terapeutyczne. Ponadto, mogą mieć nieocenioną wartość kliniczną z uwagi na możliwość wykorzystania oznaczanych parametrów, jako potencjalnych biomarkerów wczesnego wykrycia, a także, jako potencjalnego celu farmakoterapii. Obecnie wyniki te poddawane są wnikliwej analizie mającej na celu ich wzajemne powiązanie oraz ocenę oddziaływań badanych białek względem siebie. W przygotowaniu jest również manuskrypt opisujący uzyskane rezultaty.