DOI: 10.18150/2yvqsg
title: Analiza zawartości ksantohumolu (XN), izoksantohumolu (IXN) i 8 prenylonaringeniy (8PN) za pomocą wysokosprawnej chromatografii cieczowej HPLC w wychmielinach

description: Dane stanowią wyniki badań przeprowadzonych w ramach Działania 1.1.1. Badania przemysłowe i prace rozwojowe realizowane przez przedsiębiorstwa, Programu Operacyjnego Inteligentny Rozwój 2014-2020 współfinansowanego ze środków Europejskiego Funduszu Rozwoju Regionalnego pt. „Stworzenie technologii przemysłowego otrzymywania fitoestrogenu z chmielu o największej aktywności biologicznej” Nr POIR: POIR.01.01.01-00-0956/18-00 realizowanego przez SYNKOL SPÓŁKA Z OGRANICZONĄ ODPOWIEDZIALNOŚCIĄ SPÓŁKA KOMANDYTOWA wykonane, w ramach umowy o podwykonawstwo, na Uniwersytecie Przyrodniczym we Wrocławiu.Oznaczono zawartość ksantohumolu (XN), izoksantohumolu (IXN) i 8‑prenylonaringeniy (8PN) w wychmielinach, które były odpadem poprodukcyjnym powstałym z ekstrakcji nadkrytycznym dwutlenkiem węgla chmielu odmiany Hallertauer-Magnum pochodzenia Polskiego ze zbioru 2019 r. Wykorzystano w tym celu wysokosprawną chromatografię cieczową HPLC. Pobrano próbki z różnych głębokości i miejsc otrzymanych wychmielin do kolby stożkowej na 300 mL, wymieszano i przechowywano w temperaturze pokojowej bez dostępu światła. Ta porcja wychmielin służyła do pomiaru zawartości wody oraz głównych flawonoidów chmielu. Analizę zawartości flawonoidów przeprowadzono w 3 powtórzeniach, w T=22°C, mieszając na mieszadle magnetycznym przez 2h 100 mg wychmielin z 10 mL metanolu w zakręconych wialkach na 15 mL. Następnie zawartość, wraz z osadem, przeniesiono ilościowo do kolb miarowych na 25mL i dopełniono metanolem do kreski. Po 2 h, kiedy osadł opadł i górna warstwa metanolowa w szyjce kolby była przeźroczysta, pobrano po 2mL roztworu do trzech wialek HPLC na 2 mL sącząc go przez filtr teflonowy 13 x 0,45 um. Do analizy HPLC wykorzystano chromatograf cieczowy Waters 2690 z detektorem PhotodiodeArryDetector Waters 996. Użyto kolumnę z odwróconą fazą C-18 (Kinetex 5u XB-C18 100A). Kolumna była termostatowana w 28°C, a analizowane próbki w 12°C. Użyto dwuskładnikowy eluent: A- 1% obj. kwasu mrówkowego w wodzie; B- 1% obj. kwasu mrówkowego w acetonitrylu. Program: 65%A- 10 min., 65%A do 10%A- 8 min., 10%A- 4 min., 10%A do 65%A- 1min., 65%A 7 min. Natężenie przepływu wynosiło 1,5 mL/min. W analizie stosowano wzorzec zewnętrzny IXN, 8PN i XN o stężeniach odpowiednio 16,06, 8,02 i 16,91 mg/L. Do obliczenia zawartości procentowej IXN, 8PN i XN wykorzystano program Graph- do wykreślenia prostej wzorcowej (SetupGraph-4.4.2.exe, https://www.padowan.dk/download/) oraz arkusz kalkulacyjny Excell 2016.Zawartość procentowa poszczególnych flawonoidów, w wychmielinach o wilgotności 7,152 %, wynosiła IXN: 0,0088% ±0,0004%; 8PN: 0,0053% ±0,0001%; IXN:0,6446% ±0,0095%. Materiał zatem charakteryzował się bardzo dużą zawartością ksantohumolu (około 645 g w 100 kg wychmielin) i około 120 krotnie mniejszą 8-prenylonaringeniny.W celu oznaczenia stopnia ekstrakcji XN i oznaczenia koniecznego czasu procesu ekstrakcji przemysłowej, który zapewniałby satysfakcjonującą wydajność, wykonano ekstrakcję wychmielin w czasie za pomocą acetonu. Wykonano ją dla stosunku ilościowego 1:4 V/V w dwóch wariantach ciężarów nasypowych: wariant 1- 351,2 g/L i wariant 2- 456,9 g/L, które przyjęto jako graniczne. Założono, że ciężar nasypowy dla ekstrakcji przemysłowej będzie się mieścił w powyższym zakresie. W wariancie pierwszym 8,78 g wychmielin ekstrahowano na mieszadle magnetycznym za pomocą 100 mL acetonu w kolbie stożkowej ze szlifem o pojemności 250 mL. W drugim wariancie masa wychmielin wynosiła 11,42 g. Próbki pobierano po 10, 20, 30, 60, 90, 120 i 210 min. i przechowywano w -24°C aż do wykonania analizy HPLC. W badaniu założono, że pobrany 1 mL próbki do analizy ma niewielki wpływ na dalszą ekstrakcję XN dlatego doświadczenie zostało tak skonstruowane, aby z dużej objętości roztworu pobierać niewielką objętość do analizy.Przygotowano wykresy przedstawiające zależność masy wyekstrahowanego analitu w przeliczeniu na 100 g wychmielin od czasu ekstrakcji. Dlatego można je porównać do wyznaczonej zawartości procentowej IXN: 0,0088%; 8PN: 0,0053%; IXN:0,6446% [g/100g]. Dla najdłuższego czasu ekstrakcji równego 210 min., za pomocą acetonu, wynosiły one: wariant 1 - IXN: 0,0071%; 8PN: 0,0046%; XN: 0,5771% oraz wariant 2 - IXN: 0,0083%; 8PN: 0,0043%; XN: 0,5912% [g/100g].