Εντοπισμός μοριακών δεικτών στο αίμα μικρών μηρυκαστικών που σχετίζονται με τη μόλυνση με λεντι-ιούς
Creators: name: Χαρικλέους, Μυρσίνη Κωνσταντίνου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2021
Subjects: Προϊούσα πνευμονία
Λεντι-ιός
Μοριακοί δείκτες
Maedi - Visna
Lenti-virus
Molecular markers

description: Η προϊούσα πνευμονία (Maedi-Visna) είναι μία χρόνια, πολυσυστημική και πιθανώς θανατηφόρα νόσος των προβάτων που προκαλείται από μόλυνση με το λεντιιό MVV (Maedi-Visna virus). Είναι εξαπλωμένη στις περισσότερες χώρες παγκοσμίως και απασχολεί πολύ τόσο από επιστημονικής, όσο και από οικονομικής άποψης, γι’ αυτό και τα τελευταία χρόνια οι σχετικές μελέτες ολοένα και αυξάνονται. Στην παρούσα εργασία προσπαθήσαμε να εστιάσουμε στον τρόπο ανοσολογικής απόκρισης του οργανισμού των ζώων που έχουν προσβληθεί από τον MVV, μελετώντας με την τεχνική της Αλυσιδωτής Αντίδρασης Πολυμεράσης πραγματικού χρόνου (qPCR), τις μεταβολές στην έκφραση σημαντικών γονιδίων του ανοσοποιητικού συστήματος, με απώτερο στόχο τον εντοπισμό δυνητικών μοριακών δεικτών που σχετίζονται με αυτή τη μόλυνση. Παράλληλα έγινε μία προσπάθεια σύγκρισης της μοριακής μεθόδου της Αλυσιδωτής Αντίδρασης Πολυμεράσης (PCR) και των ορολογικών μεθόδων της ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay) και του Western Blot ως προς την αποτελεσματικότητά τους στον εντοπισμό παραγόντων που υποδηλώνουν την ύπαρξη της ασθένειας, καθώς και της συμβατότητας των αποτελεσμάτων τους. Τα αποτελέσματα, ύστερα και από στατιστική ανάλυση, έδειξαν ένα από τα οκτώ γονίδια που μελετήθηκαν συνολικά, το MyD88, να παρουσιάζει στατιστικά σημαντική αύξηση της έκφρασής τους στα μολυσμένα από τον MVV ζώα σύμφωνα με τις μεθόδους της ELISA και της PCR. Παράλληλα, τρία από τα γονίδια τα οποία μελετήθηκαν (και πιο συγκεκριμένα τα CCR5, TLR7 &amp; SSC5D) έδειξαν να έχουν υψηλό βαθμό συσχέτισης όσον αφορά την έκφρασή τους. Και τα τρία παρουσιάζουν παρόμοιο μοτίβο έκφρασης κατά την ομαδοποίησή τους σύμφωνα με τις τρείς μεθόδους διάγνωσης που εφαρμόστηκαν. Αναφορικά με το ποσοστό συμφωνίας των μεθόδων της ELISA, της PCR και του Western Blot, υψηλότερη σύγκλιση παρατηρείται μεταξύ της PCR και της ELISA, χαμηλότερη μεταξύ Western blot και PCR και ακόμα πιο χαμηλή μεταξύ Western blot και ELISA. Ωστόσο, η ομαδοποίηση των δειγμάτων κατά Western blot παρουσίαζε διαφοροποιήσεις, ανάλογα με το ποιος ιστός χρησιμοποιούταν κάθε φορά ως αντιγόνο (πνεύμονας, λευκά αιμοσφαίρια ολικού περιφερικού αίματος). Μελέτη μεγαλύτερου αριθμού δειγμάτων από διαφορετικές εκτροφές και με περισσότερα δεδομένα για τα ζώα προτείνονται ώστε να εξαχθούν εγκυρότερα συμπεράσματα.
description: Maedi-Visna is a chronic polysystemic and possibly fatal disease of small ruminants caused by infection with the MVV (Maedi-Visna virus) lentivirus. It is spread in most countries worldwide and concerns intensely both the scientific community and the professional stockbreeders. That is the reason why, the last years, more and more studies penetrate into this subject. The aim of the current study was to try to define the way that the immune system of the animals infected by MVV responses, by studying the relative expression of related genes, using the method of the Real-time Polymerase Chain Reaction (qPCR), in order to identify potential molecular markers associated with the infection. At the same time we tried to compare the molecular method of the PCR (Polymerase Chain Reaction) with that of the serological methods of ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay) and Western Blot in terms of the effectiveness in detecting factors that indicate the existence of the disease, as well as the compatibility of their results. Our results, based also on statistical analysis, showed for one out of the eight genes studied in total, MyD88, a statistically significant increase of its expression in MVV-infected animals, according to ELISA and PCR. At the same time, three of the genes studied (CCR5, TLR7 &amp; SSC5D) appeared to show high correlation in terms of their relative expression. All three of them show a similar pattern of relative expression when grouped according to the three diagnostic methods used. However, the clustering of the samples according to the results of Western blot varied, depending on which tissue was used as an antigen (lung, white blood cells). Concerning the percentage of agreement of the three methods used (ELISA, PCR and Western Blot), higher agreement was observed between PCR and ELISA, lower between Western blot and PCR and even lower between Western blot and ELISA. We propose the study of more samples from different farms, including more data about the animals in order to draw more valid conclusions.