title: Untersuchung der Expression des nukleären Onkogens SKI und des Transkriptionsrepressors GFI bei der akuten myeloischen Leukämie
title: Analysis of expression of the nuclear oncongene SKI and transcriptionrepressor GFI in acute myeloid leucemia
Creators: name: Nagy, Alexandra
Publisher: name: Philipps-Universität Marburg
Year: 2015
Subjects: GFI
SKI
Medical sciences, Medicine
Medizin, Gesundheit
Onkogen , Transkriptionsfaktor
Leukämie

description: Die Akute myeloische Leukämie (AML)
      ist eine seltene maligne Erkrankung des Blutsystems mit
      überwiegend schlechter Prognose. Die Myelopoese wird durch
      ein komplexes Zusam-men¬spiel aus Transkriptionsfaktoren
      reguliert. Das Verständnis dieser Regulation kann zum
      Verständnis der AML-Entstehung beitragen und eröffnet so
      neue, spezifische Therapie-möglichkeiten. Sloan Kettering
      Interferring Protein (SKI) und Growth Factor Inhibitory-1
      (GFI-1) sind zwei Onkogene, die eine wesentliche Rolle in der
      Hämatopoese spielen. SKI und GFI-1 interagieren mit gleichen
      Interaktionspartnern und besitzen die gleichen Zielgene.
      Da-her sollte in dieser Arbeit eine mögliche Interaktion des
      Onkogens SKI als Korepressor für GFI-1 untersucht werden.
      Dafür wurden 73 AML-Patientenproben auf ihre SKI und GFI-1
      Expression mittels RT-PCR untersucht und entsprechend ihrer
      Karyotypen in Risikogruppen eingeteilt. Die Ergebnisse der
      vorliegenden Arbeit zeigen ein tendenziell kürzeres Überleben
      für Patienten mit über-durch¬schnittlicher SKI Expression.
      Außerdem ergab sich eine signifikant höhere SKI Ex-pression
      in der Hochrisiko-Gruppe im Vergleich zur
      Niedrigrisiko-Gruppe. AML-Patienten mit
      unterdurchschnittlicher GFI-1 Expression wiesen ein
      tendenziell kürzeres Überleben auf, als Patienten mit
      überdurchschnittlicher GFI-1 Expression (keine Signifikanz).
      Für GFI-1 konnte zudem kein Zusammenhang zwischen der
      Risikogruppeneinteilung und dem Ausmaß der RNA-Expression
      detektiert werden. Eine Spearman Korrelationsanalyse für die
      SKI/GFI-1 Expression in AML-Patientenproben wies keine
      Korrelation auf. Weiter wurde die SKI Ex-pression durch
      Transfektion von U937- und HL60-Zellen mit siRNA gegen SKI
      und durch Behandlung von HL60- Zellen mit VPA supprimiert.
      Mittels RT-PCR und Western Blot wur-den die RNA- und
      Proteinkonzentrationen von SKI und GFI-1 bestimmt. In
      U937-Zellen wurde zusätzlich die PU.1 und Interferon Sequence
      Binding Protein (ICSBP) Expression nach SKI Suppression durch
      Transfektion mit siRNA gegen SKI analysiert. Schon bei
      leichter SKI Suppression kam es zu einer GFI-1
      Überexpression. Nach Transfektion mit größeren Mengen siRNA
      war diese jedoch rückläufig. Die PU.1 und ICSBP Expression
      war im Vergleich zur Kontrolle unverändert. Die Ergebnisse
      dieser Arbeit bestätigen den aktuellen Kenntnisstand der
      Literatur und zeigen eine mögliche Interaktion des Onkogens
      SKI mit dem Transkriptionrepressor GFI-1 auf. Als Modell kann
      ein Feed-Forward-Loop angenommen werden. Demnach inhibiert
      GFI-1 Zielge-ne (z.B. miRNA21), welche die SKI Expression
      regulieren. SKI wiederum interagiert als Ko-repressor mit
      GFI-1 und hat so möglicherweise Einfluss auf seine eigene
      Expression. Eine genauere Untersuchung dieses
      Feed-Forward-Loops könnte Bestandteil zukünftiger
      Experi-mente sein.
description: AML is a rare malignant disease of
      the hematopoietic cell system that affects the older mem-bers
      of the population. Hematopoiesis is regulated by a complex
      interaction between the tran-scription factors, oncogenes,
      tumorsupressors and receptors. Further investigation of these
      pathways in signal transduction have produced results in new
      insights of pathogenesis and could point to new possibilities
      of a new and more specific treatment of AML. These findings
      have resulted in transcription factors being a central issue
      in the scientific research of hema-tooncology. Two
      transcription factors are the oncogene SKI and the
      transcription re¬pressor GFI-1 that represent important
      regulators of hematopoiesis. SKI and GFI-1 interact with the
      same interaction partners and have the same target genes. As
      a result of the interacting genes and target genes being the
      same, a possible interaction of the oncogene ski as
      corepressor for GFI-1 is investigated in this work. First 74
      AML patient samples were analyzed for their SKI and GFI 1
      expression. The samples were classified in risk groups
      according to WHO criteria. It was investigated whether there
      is a connection between the SKI and GFI-1 expression with
      regard to the survival or the risk classification. The SKI
      and GFI-1 expression were also tested for correlation in the
      74 AML patient samples. The results of the present study show
      a trend toward a worse survival for patients that express
      more SKI than the average. In addition, there is a higher
      expression of SKI in high and intermediate risk group. These
      results are confirmed within current literature. Regarding
      the GFI-1 expression; AML patients which had a lower GFI-1
      expression than the average, show a shorter survival than
      patients who express GFI-1 above average (not signifi-cant)
      and no relationship between the risk group classification and
      the GFI-1 expression. There was neither a positive nor a
      negative correlation of SKI and GFI-1 expression in AML
      patients. The second part of the presented work was
      functional experiments. SKI expression was sup-pressed by
      transfection of siRNA against SKI and treatment of HL60 cells
      with VPA. The GFI 1 expression was then investigated by
      western blot and RT-PCR. Also the PU.1- and ICSBP expression
      after SKI suppression by transfection of U937 cells with
      siRNA against SKI was determined. As expected, SKI was
      successfully suppressed. There was an overex-pression of
      GFI-1 even at the slightest SKI suppression. Especially after
      transfection with larger quantities of siRNA, GFI-1
      expression was regressed. Compared to the control the PU.1-
      and ICSBP expression were unchanged. The results of this
      study reflect current knowledge as represented in the most
      recent literature. It can be assumed that there is an
      interaction of the oncogene SKI with the transcription
      re-pressor GFI 1, especially in view of a feed-forward loop.
      Therefore GFI-1 inhibits target genes (e.g. miRNA 21) that
      regulate SKI expression. In turn SKI interacts directly as a
      core-pressor with GFI 1 and so may affect its own expression.
      The importance of the feed-forward loop remains unclear, but
      a closer examination of this feed-forward loop could be part
      of fu-ture experiment.