Contribución al diagnóstico tradicional de Gaeumannomyces graminis var. graminis, patógeno del arroz en Cuba
Creators: name: Barrios, Luis Manuel
name: I.O. Pérez
Publisher: name: figshare
Year: 2018
Subjects: subject: 60504 Microbial Ecology
subject: FOS: Biological sciences
subject: FOS: Biological sciences
subject: Microbiology
subject: 60505 Mycology
subject: 60704 Plant Pathology
subject: 60207 Population Ecology

description: INTRODUCCIÓN<br>Los hongos han sido reportados como el grupo de microorganismos que más afecta al cultivo del<br>arroz, los cuales atacan las plántulas, área foliar, vainas y tallos, raíces, corona, y los granos. Las<br>enfermedades más importantes son las manchas foliares (Cochliobolus miyabeanus; Gerlachia<br>oryzae; Cercospora oryzae; Alternaria padwickii, otros), la piriculariosis (Magnaporthe grisea),<br>la marchitez de la vaina (Magnaporthe salvinii), pudrición del tallo (Rhizoctonia oryzae),<br>enfermedades en plántulas (Complejo Achlya, Pythium y Fusarium) y las decoloraciones en las<br>semillas (Curvularia, Fusarium, Sclerotium, Drechslera; otros), estas pueden afectar el cultivo<br>cuando las condiciones ambientales y culturales favorecen el desarrollo de la enfermedad<br>(Zillinsky, 1984). Un gran número de hongos han sido reportados como causantes de<br>enfermedades de menores importancias (Webster y Gunnell, 1992).<br>Gaeumannomyces graminis (Sacc.) Arx &amp; D. Oliver var. graminis causa la pudrición de la<br>vaina de la corona, conocida además, como pudrición oscura, pudrición del pie, mal del pie y<br>pudrición carmelita de las vainas (take-all), también provoca pudriciones de las raíces en los<br>cereales y pastos (Elliott, 2004; Bockus y Tisserat, 2000; Boland y Smith, 1991; Datnoff et. al,<br>1999). Los daños ocasionados por esta enfermedad son irreparables en las plantaciones de arroz<br>3<br>ya que puede provocar la pérdida de más del 50% de la cosecha (Torres, 2002; Schuman y<br>MacDonald, 1997; Elliott et. al, 1993).<br>En un estudio realizado por Torres, (2002) donde el autor realizó una caracterización<br>morfológica y cultural de varios aislamientos obtenidos de diferentes zonas arroceras en Cuba, el<br>mismo demostró que no existían variaciones morfogenéticas entre los diversos aislamientos<br>estudiados y concluyó que el mejor medio de cultivo para una óptima maduración de los<br>peritecios del hongo era Agar Papa (AP). Recomendó realizar otros estudios fisiológicos<br>complementarios del patógeno que pudieran aportar nuevos criterios para lograr un diagnóstico<br>más rápido y seguro bajo las condiciones imperantes en los laboratorios de sanidad vegetal de<br>Cuba donde anualmente se analizan cientos de muestras de arroz mediante las técnicas<br>convencionales o tradicionales de micología vegetal.<br>Para diagnosticar la presencia de G. graminis var. graminis es necesario aislar e identificar el<br>hongo en cultivo puro. Esto se puede lograr directo de los tallos o raíces enfermas del campo o<br>desde raíces de plántulas que son utilizadas como cebo en el campo (Shuman y MacDonald,<br>1997), siendo el criterio más fidedigno de identificación la formación de abundantes peritecios<br>en el substrato natural o en los medios de cultivo (CPC, 2000 y 2001; Elliott, 2004), pero este es<br>un proceso lento y engorroso, ya que los peritecios solo se forman en el medio de cultivo a partir<br>de los 37 días, mientras que en el substrato natural a partir de los 20 - 30 días (Torres, 2002), por<br>lo que se hace necesario optimizar las condiciones de incubación para que el diagnóstico<br>tradicional sea un proceso más rápido.<br>4<br>Debido al difícil diagnóstico de G. graminis var. graminis y a que en los últimos años la<br>incidencia de la enfermedad ha aumentado considerablemente en Cuba (CNSV, 1993-2004), se<br>hace necesario obtener nuevos criterios de trabajo para el diagnóstico rápido de la enfermedad<br>mediante técnicas tradicionales, siendo los objetivos de este trabajo: estudiar la influencia del<br>pH, temperatura, luminosidad y vitaminas del complejo B sobre las características culturales y en<br>la formación - maduración de los peritecios del hongo.<br>MATERIALES Y MÉTODOS<br>Se partió del lote de cepas almacenadas en la micoteca de Laboratorio de Central de Cuarentena<br>Vegetal. Se trabajó con la cepa LM833 anteriormente caracterizada por Torres, (2002) de la cual<br>se muestran los datos de esta en el Cuadro 1.<br>Cuadro 1. Información sobre la cepa LM833 de G. graminis var. graminis utilizada en el<br>estudio.<br>Lugar de<br>Aislamiento de la<br>cepa<br>Parte de la planta de<br>donde se aisló la cepa<br>Características de la colonia en<br>AP a los 7 días<br>Vertientes,<br>Camaguey<br>Pudrición en tallos y en<br>las vainas de los tallos<br>- Borde regulares.<br>- Micelio aéreo abundante.<br>- Micelio rastrero/algodonoso.<br>- Micelio Verde Oscuro.<br>5<br>- Ausencia del estado espermacial.<br>I. Influencia del pH en las características culturales y en la formación - maduración de los<br>peritecios de G. graminis var. graminis.<br>Se preparó el medio de cultivo Agar papa (AP) como óptimo para la rápida maduración de los<br>peritecios según Torres, (2002), el cual fue ajustado a los pH de 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, 7.5,<br>8, 8.5 y 9. Se realizaron 5 réplicas por tratamientos.<br>Las placas petri fueron inoculadas centralmente con discos de 0.5 cm de diámetro tomadas de<br>previa inoculación en placas petri con medio PDA a temperatura de 28°C; oscuridad continua y<br>pH=6.0 (Wong, 1983); los discos fueron tomados de la parte apical del crecimiento micelial, las<br>placas inoculadas se incubaron a 28°C y oscuridad continua.<br>II. Influencia de la luminosidad en las características culturales y en la formación -<br>maduración de los peritecios de G. graminis var. graminis.<br>De acuerdo a los resultados obtenidos en el experimento anterior se realizó la siguiente<br>experiencia. Se preparó el medio de cultivo AP y se ajustó a pH óptimo según los resultados<br>obtenidos en el experimento anterior. Se prepararon 5 réplicas por tratamiento. Las placas se<br>inocularon según Wong, (1983).<br>Las placas inoculadas fueron expuestas a luz continua, oscuridad continua y a períodos de<br>alternancia luz/oscuridad (8 horas de luz/16 de oscuridad), todos a temperatura de 22-24°C. Para<br>6<br>suministrarle la luminosidad se colocaron dos tubos de luz fluorescente de 40 watt ó su<br>equivalencia en tubos de 20 watt a la altura de 42 cm, a partir de la parte superior de las placas<br>petri.<br>III. Influencia de la temperatura en las características culturales y en la formaciónmaduración<br>de peritecios de G. graminis var. graminis.<br>Se preparó el medio de cultivo óptimo siguiendo la metodología establecida y se ajustó a pH<br>óptimo según los resultados obtenidos en el experimento I. Se prepararon 5 réplicas por<br>tratamiento. Las placas se inocularon según Wong, (1983). Las placas inoculadas se incubaron a<br>20, 22, 25, 28, 30, 32 y 34°C.<br>IV. Efecto de las vitaminas del complejo B en las características culturales y en la<br>formación - maduración de los peritecios de G. graminis var. graminis.<br>Se emplearon placas petri de 9.00 cm de diámetro, las cuales contenían agar papa, con la<br>modificación que a este medio le fue agregado 0.05 g de Tiamina (B1); Riboflabina (B2);<br>Piridoxina (B6) y Cianocobalamina (B12) (Deacon, 1974). El medio de cultivo fue ajustado al pH<br>óptimo (obtenido en experimentos anteriores). Se emplearon 5 réplicas por tratamiento. En cada<br>una de las réplicas se usaron placas controles sin vitaminas. Las placas se inocularon según<br>Wong, (1983). Las placas inoculadas fueron incubadas a la temperatura y luminosidad óptimas<br>(obtenido en experimentos anteriores).<br>En todos los experimentos las observaciones de las características de la colonia se realizaron bajo<br>el microscopio estereoscópico a los 3, 7, 14, 21 y 30 días. Se hicieron observaciones bajo el<br>7<br>microscopio óptico de las estructuras de reproducción una vez que comenzaron a formarse los<br>cuellos periteciales, a través de preparaciones en fresco con lactofenol. Si a los 30 días los<br>cuerpos permanecían inmaduros, entonces se procedió la observación cada 7 días con igual<br>metodología.<br>Los datos obtenidos de las medidas del crecimiento lineal del micelio fúngico fueron analizados<br>estadísticamente mediante la prueba de significación de Turkay.<br>RESULTADOS Y DISCUSIÓN<br>Como se observa en el Cuadro 2, el pH influye significativamente en las características<br>culturales de la colonia. Podemos observar que en un ámbito de pH entre 3.5 y 4.5 predominó el<br>micelio aéreo abundante con bordes regulares y verde muy pálido; a medida que el pH aumenta,<br>las características culturales cambian completamente, ya que a pH neutro el micelio aéreo es<br>escaso, continúan los bordes regulares, pero la colonia es verde oscuro existiendo una<br>combinación del micelio algodonoso con el rastrero, donde predomina el algodonoso.... (descargar texto)<br>