title: Impact of wnt-signalling blockade on survival pathways in colorectal tumour cells
Creators: name: Koll, Philipp
Publisher: name: :none
Year: 2012

description: Dickdarmkrebs ist der dritthäufigste Krebs weltweit. Er entwickelt sich in einem schrittweisen Prozess dessen erster Schritt häufig eine APC Mutation ist. Die Konsequenz dieser Mutation ist die progressive Hochregulation des wnt Signalweges, weshalb dieser ein bedeutendes Ziel der Therapie ist. Sulindac ist ein Medikament, welches den wnt Signalweg inhibiert und bereits in der Präventionstherapie erfolgreich eingesetzt wird. In der humanen Colon Adenoma Zelllinie LT97 wurde eine CD44+ Subpopulation identifiziert, welche FGF18 und Survivin hochexprimiert und IGF-bindendes Protein IGFBP3 herunterreguliert. Es ist noch nicht bekannt, ob diese Ereignisse kausal mit dem wnt Signalweg in Beziehung stehen. In meiner Diplomarbeit erforschte ich den Einfluss von Sulindac auf die RNA und Protein Spiegel von Survivin, FGF18 und IGFBP3 in LT97 Zellen und in der Dickdarmkrebs Zelllinie HT29. Sulindac verursachte eine Herunterregulierung des wnt Zielgenes Survivin auf 28% bzw 61% der Kontrolle in HT29 und LT97 Zellen. Das Medikament veränderte den IGFBP3 Spiegel in LT97 Zellen nicht. In HT29 Zellen konnte ein leichter stimulierender Effekt von Sulindac auf den IGFBP3 Spiegel beobachtet werden. Eine dominant negative Tcf4 Mutante wurde in ein adenovirales Konstrukt kloniert um eine spezifische Positivkontrolle für die wnt Blockade herzustellen. Das ermöglicht die Überexpression der Mutante in allen humanen Zelllinien. HT29 und LT97 Zellen wurden mit dem Virus transduziert wodurch eine 4,7 fache bzw 1,7 fache Erhöhung der Expression von Tcf4 in LT97 und HT29 Zellen verursacht wurde. Signifikante Effekte auf Survivin, FGF18 und IGFBP3 konnten nicht detektiert werden. Die Sulindac Ergebnisse zeigten dass Survivin aber nicht FGF18 und IGFBP3 in einer wnt-abhängigen Weise reguliert werden. Mechanistische Experimente mit dem neu produzierten Tcf4 Virus sind notwendig um eine wnt-abhängige Reaktion zu demonstrieren.
description: Colorectal cancer is the third most common cancer worldwide. The APC mutation is the first crucial step initiating tumor development in the colon. The consequence of this mutation is the progressive up-regulation of the wnt pathway. Consequently, this pathway is a prominent target of therapy. Sulindac is a drug inhibiting wnt-signalling that is already used in prevention therapy. In the human colon adenoma cell line LT97 a CD44+ subpopulation was identified that express high FGF18 and survivin and down-regulate the IGF-binding protein 3 (IGFBP3). Whether these events are causally related to wnt-signalling activity is not yet known, however. In my diploma thesis I studied the impact of sulindac treatment on the RNA and protein expression levels of survivin, FGF18 and IGFBP3 in LT97 adenoma cells and in the colorectal cancer cell line HT29. Sulindac caused a down-regulation of the wnt target gene survivin to 28% and 61% of the control in HT29 and LT97 cells respectively. The drug did not change IGFBP3 RNA levels in LT97 cells. In HT29 cells sulindac caused a slight elevation of IGFBP3 RNA levels. In order to obtain a specific positive control for wnt blockade a dominant-negative Tcf4 mutant was cloned into an adenoviral construct. The resulting virus facilitates the transduction of all human cell lines. HT29 and LT97 cells were transduced with this adenovirus. Tcf4 was expressed 4.7-fold and 1.7-fold in LT97 and HT29 cells respectively. No other significant effects on survivin, FGF18 and IGFBP3 could be detected. The sulindac results showed that survivin but not FGF18 and IGFBP3 is regulated in a wnt-dependent manner. Mechanistic experiments with the newly produced Tcf4 virus will be necessary to actually demonstrate the wnt dependent reaction.