Φαρμακοτεχνική-φαρμακοκινητική μελέτη δραστικών φλαβονοειδών
Creators: name: Qanaze, Feras Imad
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2005
Subjects: Εκχύλιση, MS-DAD-ESI(+)
HPLC/ποσοτικός προσδιορισμός
Δισκία+καψάκια
Solid dispersions
Shilf life predection

description: Στη συγκεκριμένη μελέτη, επιλέχθηκαν οι φλούδες πορτοκαλιών(κρητικής προέλευσης), ως μια οικονομικά συμφέρουσα πρώτη ύλη. Ξηρής κονιοποιημένης δρόγης(φλούδες πορτοκαλιού, Ναβαλίνα, flavedo and albedo) εκχυλίσθηακν εξαντλητικά σε συσκευή Soxhlet, διαδοχικά με διχλωρομεθάνιο και μεθανόλη. Χρησιμοποιήθηκαν χρωματογραφικές παρασκευαστικές στήλες πολυαμιδίου από όπου απομονώθηκε η εσπεριδίνη ως κύριο συστατικό. Μετά την ποσοτική ανάλυση με HPLC βρέθηκε η εσπεριδίνη σε ποσότητα(47.78+_0.86 mg/g ή 4.8%, σε ξηρή δρόγη). Ακολούθως πραγματοποιήθηκαν έλεγχοι της αντιοξειδωτικής ικανότητας τόσο της απομονωθείσας κύριας ένωσης εσπεριδίνης όσο και των κλασμάτων, με τη μέθοδο του DPPH και της χημειοφωταύγειας. Από τα αποτελέσματα φαίνεται ότι οι γλυκοζιτικές μορφές εμφανίζουν μικρή αντιοξειδωτική ικανότητα συγκριτικά με τα άγλυκα. Για τον ταυτόχρονο ποσοτικό προσδιορισμό των τριών φλαβονοειδών γλυκοζιτών στις φλούδες και στους χυμούς εσπεριδοειδών, καθώς και στα φαρμακευτικά σκευάσματα που τους περιέχουν, αναπτύχθηκε και επικυρώθηκε μια νέα HPLC αναλυτική μέθοδος. Η κινητική φάση που χρησιμοποιήθηκε ήταν, τετραϋδροφουράνιο/νερό/οξικό οξύ(21:77:22, v/v/v) και θερμοκρασία στήλης 34οC χρησιμοποιώντας στήλη αντίστροφης φάσης C8. Για τον ταυτόχρονο ποσοτικό προσδιορισμό της ολικής(ελεύθερης+συζευγμένης) εσπερετίνης και ναριγγενίνης στο πλάσμα και στα ούρα αναπτύχθηκε μια έγκυρη HPLC αναλυτική μέθοδος με εκχύλιση στερεάς φάσης. Η κινητική φάση που χρησιμοποιήθηκε ήταν μίγμα μεθανόλης/νερού/οξικού οξέος(40:58:2, v/v/v) και η θερμοκρασία της στήλης 45οC, χρησιμοποιώντας στήλη αντίστροφης φάσης C8. Οι μέθοδοι ανάλυσης που αναπτύχθηκαν για τον ταυτόχρονο ποσοτικό προσδιορισμό της εσπερετίνης και της ναριγγενίνης στα δείγματα πλάσματος και ούρων ήταν ακριβείς, επαναλήψιμες, εκλεκτικές, ανθεκτικές και αρκετά ευαίσθητες και κατάλληλες για φαρμακοκινητικές μελέτες. Για την αύξηση τηα διαλυτότητας και της βιολογικής βιοδιαθεσιμότητας των γλυκοζιτών φλαβονοειδών ή των αγλύκων τους, παρασκευάστηκαν στερεά συστήματα διασποράς, χρησιμοποιώντας τη μέθοδο διάλυσης και εξάτμισης του διαλύτη. Ο χαρακτηρισμός αυτών των συστημάτων έγινε με διαφορική θερμιδομετρία σάρωσης(DSC), περίθλαση ακτίνων Χ κόνεων (XRD), φασματοσκοπία υπερύθρου-μετασχηματισμού Fourier(FTIR) και ηλεκτρονικό μικροσκόπιο σάρωσης(SEM). Η διαλυοποίηση των αγλύκων από τις στερεές διασπορές βελτιώθηκε πολύ. Παρασκευάστηκαν δισκία και σκληρά καψάκια από το στερεό σύστημα διασποράς(PVP-ναριγγενίνη/εσπεριτίνη, 80/20, ς/ς) για τη μελέτη του ρυμού διάλυσης και του αποδέσμευσης των άγλυκων φλαβανόνων, ναριγγενίνης και εσπεριτίνης. Το στερεό σύστημα διασποράς της PVP εμφάνιζε βελτιωμένη χημική και φυσική σταθερότητα και για τα δύο άγλυκα των φλεβανόνων με όλα τα έλδοχα κατά τη διάρκεια επιταχυνόμενης χημικής και φυσικής σταθερότητας για τρεις μήνες σε υψηλές θερμοκρασίες και υγρασία. Τέλος, με βάση την επικυρωμένη HPLC αναλυτική μέθοδο που αναπτύχθηκε για τον ταυτόχρονο ποσοτικό προσδιορισμό της εσπερετίνης και της ναριγγενίνης στο πλάσμα και στα ούρα, μελετήθηκαν οι φαρμακοκινητικές παράμετροι της εσπερίνης και της ναριγγενίνης κατά την εκτέλεση μιας φαρμακοκινητικής μελέτης σε 6 υγιείς εθελοντές, μετά την από του στόματος χορήγηση των φαρμακευτικών σκευασμάτων στερεού συστήματος διασποράς(PVP-εσπερετίνη/ναριγγενίτη, 80/20, w/w)(καψάκια)
description: In this thesis, orange peels(Greece-Crete) were selected as an economical raw material, Dried orange peels, flavedo and albedo, (Navel)were exhaustively extracted by a Soxhlet apparatus with dichloromethane and methanol, respectively. Preparative chromatographic columns of polymide were used, from which hesperidin was isolated as a main component. After the quantitative analysis with analytical HPLC, it was found that hesperidin is the main orange peel component(47.78+_0.86 mg/g of dry peels), that allows its relative cheap and quick extraction in the pharmaceutical industry. Afterwards, antioxidant activity of hesperidin, chromatographic fractions of orange peel extracts and thepharmaceutical formulation Daflon was studied with two methods, DPPH and chemiluminescence. From the results it appears that flavonoid glycosides have low antioxidant of the three flavonoid aglycones. For the simultaneous quantitative determination of the three flavonoid glycosides(diosmin, hesperidin and naringin) in the peel of citrus fruits and their juices as well as in the pharmaceutical formulations that contain them(e.g. Daflon), it was developed and validated a new HPLC analytic method. The mobile phase used was tetrahydrofuran/water.acetic acid(21:72:2, v/v/v)using a C8 reversed-phase analytical column at a temperature of 34oC. For the simultaneous quantitative determination of the total(free+conjucted) hesperetin and naringenin in plasma and urine samples, a C8 reversed-phase column at a temperature of 45oC. The analytical method which was developed and validated for the simultaneous quantitative determination of hesperetin and naringenin in plasma and urine samples was precise, accurate, selective, robust, enough sensitive and suitable for pharmacokinetic studies. Solid dispersion systems for flavanone glycosides, hesperidin and naringin, and their aglycones, hesperetin and naringenin, were prepared to increase their dissolution and bioavailability. They were prepared using the solvent evaporation mehtod in two different solvent systems. Characterization of these systems was done by differential scanning calorimeter(DSC), X-ray diffraction(XRD), Fourier transfer infrared spectroscopy(FT-IR) and scanning electron microscopy(SEM). Solubility of flavonone aglycones was dramatically enhanced. Tablets and hard gelatine capsules were prepared from the solid dispersion system of PVP-naringenin/hesperetin, (80/20, w/w) to study the rate and the mechanism of dissolution of the flavanone aglycones. The dissolution rate of hesperetin and naringenin released from capsules and tablets were dramatically increased by their formulation in the solid dispersion system of PVP-naringenin/hesperetin(80/20, w/w). The PVP solid dispersion system showed enhanced chemical and physical stability for both flavanone aglycones with all excipients during accelerated degradation analysis for three months at high moisture and temperature. Physical stability data(XRD) for 3 months did not show any crystallization of flavonone aglycones in the PVP solid dispersion or any change in their release profile. Finally, based on the validated HPLC analytical method that was developed for the simultaneous quantitative determination of hesperetin and naringenin in plasma and urine, the pharmacokinetic parameters of hesperetin and naringenin were studied after single oral administration of the pharmaceutical formulation of the solid dispersion system of PVP-hesperetin/naringenin, 80/20, w/w)(capsules) in 6 healthy volunteers, at a dose of 135 mg for each flavanone aglycone