Ανάπτυξη μεθόδου Αέριας Χρωματογταφίας – Φασματομετρίας Μαζών (GC – MS) για τον ταυτόχρονο προσδιορισμό αναισθητικών και οπιοειδών σε αίμα
Creators: name: Ζυμάρα, Κωνσταντίνα Αργυρίου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2021
Subjects: Αέρια Χρωματογραφία
Φασματομετρία Μαζών
Αναισθητικά
Gas Chromatography
Mass Spectrometry
Sedatives

description: Η προποφόλη, η θειοπεντάλη, η κεταμίνη, η μορφίνη και η φεντανύλη είναι κάποια από τα πιο χρησιμοποιούμενα κατασταλτικά φάρμακα στη ΜΕΘ. Στη παρούσα μελέτη περιγράφεται η ανάπτυξη μιας αξιόπιστης, εκλεκτικής και σύντομης μεθόδου για τον ταυτόχρονο προσδιορισμό τους σε βιολογικό δείγμα αίματος με την χρήση GC–MS. Η προκατεργασία των δειγμάτων πραγματοποιήθηκε με εκχύλιση υγρού υγρού ενός σταδίου, μειώνοντας το συνολικό χρόνο ανάλυσης. Για τον προσδιορισμό της μορφίνης χρησιμοποιήθηκε ως παράγοντας παραγωγοποίησης το MSTFA – 5% TMCS με βέλτιστες συνθήκες παραγωγοποίησης την θέρμανση στους 80οC για 45 min, ενώ στις υπόλοιπες ενώσεις δεν έγινε παραγωγοποίηση. Ακολούθησε βελτιστοποίηση της μεθόδου εκχύλισης ως προς τον διαλύτη, με τελική επιλογή του οξικού αιθυλεστέρα ως καταλληλότερου. Επίσης το pH ρυθμίστηκε στην περιοχή 8 με ρυθμιστικό διάλυμα όξινου φωσφορικού νατρίου και η αναλογία ποσότητας δείγματος και οργανικού διαλύτη ήταν 5/8 για τη μορφίνη και 2/1 για τις υπόλοιπες ενώσεις. Το στάδιο προκατεργασίας περιελάμβανε εξάτμιση και επαναδιάλυση με σκοπό τη προσυγκέντρωση και την αύξηση του σήματος του ανιχνευτή. Το εσωτερικό πρότυπο που χρησιμοποίηθηκε για τους ποσοτικούς υπολογισμούς ήταν η νορδιαζεπάμη-D5. Η ανάλυση έγινε με αέρια χρωματογραφία σε συνδυασμό με φασματοσκοπία μάζας. Η μέθοδος έχει συνολική διάρκεια 14,1 λεπτών. Έγινε επικύρωση της μεθόδου για όλες τις ενώσεις ως προς την ακρίβεια, την επαναληψιμότητα και τη γραμμικότητα και υπολογίστηκαν τα όρια ανίχνευσης (LOD) και ποσοτικού προσδιορισμού (LOQ).H εκλεκτικότητα ήταν ικανοποιητική και η γραμμικότητα (R2) κυμάνθηκε από 0,9961 (φεντανύλη) εώς 0,9999 (προποφόλη).Τα όρια LOD κυμάνθηκαν από 1,5 ng/mL (προποφόλη) εώς 30 ng/mL (μορφίνη) και τα όρια LOQ κυμάνθηκαν από 5 ng/mL (προποφόλη) εώς 100 ng/mL (μορφίνη). Η μέθοδος ήταν ακριβής και επαναλήψιμη (&lt; 11% για τις χαμηλές συγκεντρώσεις). Τέλος η αναλυτική μέθοδος εφαρμόστηκε σε πραγματικά κλινικά δείγματα αίματος, τα οποία προήλθαν από ασθενείς που νοσηλευόταν σε ΜΕΘ.
description: Propofol, thiopental, ketamine, morphine and fentanyl are some of the most widely used sedatives in the ICU. The present study describes the development of a reliable, selective and rapid method for the simultaneous determination of these substances in human blood samples using GC – MS. The sample preparation was performed by one step liquid-liquid extraction. For the determination of morphine, MSTFA - 5% TMCS was used as a derivatization agent with optimal derivatization conditions, heating at 80 οC for 45 min. The solvent extraction method was optimized, with final selection of ethyl acetate as the more appropriate solvent. The pH was also adjusted in region 8 with potassium carbonate buffer solution and the ratio of sample and organic solvent was 5/8 for morphine and 2/1 for the other compounds. After agitation by vortex and centrifugation of the sample, the organic phase was taken and was evaporated, followed by redissolution in order to be pre-concentrated. Then 1μL was directly injected into GC/MS. Nordiazepam-D5 was used as internal standard. The duration of the chromatographic analysis was 14,1 minutes. Accuracy, precision, linearity and limits of detection and quantification were estimated. Selectivity was satisfactory and the coefficient of determination (R2) was ranged from 0.9961 (fentanyl) to 0.9999 (propofol). LOD was between 1.5 ng/mL (propofol) to 30 ng/mL (morphine) and the LOQ between 5 ng/mL (propofol) to 100 ng/mL (morphine). The method was accurate and reproducible (&lt;11% at low concentrations). Finally, the analytical method was applied to real clinical blood samples from patients admitted to the ICU.