Glutatione s-trasferasi p1-1 come possibile bersaglio per lo sviluppo di nuovi chemioterapici: un approccio bivalente
Creators: name: PEZZOLA, SILVIA
Publisher: name: Università degli Studi di Roma "Tor Vergata"
Year: 2010
Subjects: subject: gluatione S-trasferasi; NBDHEX; chemioterapici; brostallicina; osteosarcoma; GSTP1-1; farmacoresistenza
subject: gluatione S-trasferasi
subject: NBDHEX
subject: chemioterapici
subject: brostallicina
subject: osteosarcoma
subject: GSTP1-1
subject: farmacoresistenza

description: 22. ciclo
description: 1. Introduzione - 1. Glutatione s-trasferasi e resistenza ai farmaci chemioterapici - 1.1 Struttura delle Glutatione S-trasferasi - 1.1.2 Coniugazione di composti elettrofili al GSH. 1.1.3 Le GST possono legare e trasportare ligandi non substrato - 1.2 Lâ iperespressione delle GST induce farmaco-resistenza - 1.3 Le GST sono regolatori endogeni delle MAP chinasi - 1.4 GST come bersagli terapeutici - 1.4.1 Modulatori dellâ attivitÃ enzimatica. - 2. Nuovi chemioterapici che superano la resistenza: 2.1 NBDHEX Ã¨ un modulatore dellâ attivazione di JNK - 2.2 La Brostallicina sfrutta il potenziale catalitico delle GST - 2. Progetti di ricerca - 2.1 GSTP1-1Ile104/Val GSTP1-1Ile104/Ala e nuovi derivati dellâ NBDHEX - 2.2 Ruolo delle Glutatione Trasferasi nel meccanismo di attivazione della brostallicina. - 3. MATERIALI E METODI - 3.1 Materiali e reagenti - 3.2 Enzimi - 3.3 Legame dellâ NBDHEX alle GST - 3.4 Analisi Spettrofotometrica. - 3.5 Sintesi e caratterizzazione del 6(7-sulfo-2,1,3-benzossadiazol-4- iltio)esanolo - 3.6 Studi di inibizione delle GST - 3.7 Linee cellulari e metodi utilizzati per le prove di efficacia in vitro - 3.8. Cinetica di ingresso dellâ SBDHEX - 3.9. Analisi in HPLC-UV/MS della reazione tra GSH e brostallicina. - 3.10. Analisi HPLC-MS degli addotti brostallicina-GSH (composti 6 e 7) - 3.11. Analisi spettrofluorimentrica della reazione tra brostallicina e GSH. - 3.12. Determinazione del meccanismo della reazione brostallicina-GSH catalizzata dalla GSTP1-1. - 3.13. Impiego della Taq polimerasi stop assay. - 4. Risultatti - 4.1. GSTP1-1Ile104/Val GSTP1-1Ile104/Ala E NUOVI DERIVATI DELLâ NBDHEX - 4.1.1.1 La mutazione Ile104/Val aumenta lâ affinitÃ della GSTP1-1 per lâ NBDHEX - 4.1.1.2 Un modello per il disegno di nuovi inibitori - 4.1.2.1. Sintesi e caratterizzazione del il 6-(7-sulfo-2,1,3-benzossadiazol-4-iltio)esanolo - 4.1.2.2 Verifica della sintesi e determinazione della purezza del composto: Spettroscopia 1HNMR e analisi cromatografica mediante HPLC. - 4.1.2.3 Lâ SBDHEX Ã¨ piÃ¹ solubile dellâ NBDHEX - 4.1.2.4 Lâ SBDHEX Ã¨ meno affine per la GSTP1-1 rispetto allâ NBDHEX - 4.1.2.5 Lâ SBDHEX non forma il complesso-Ï - 4.1.2.6 Lâ SBDHEX non ha un effetto citotossico - 4.1.2.7 Lâ SBDHEX non Ã¨ in grado di attraversare il doppio strato fosfolipidico - 4.1.3.1 Analoghi del NBDHEX che presentano una sostituzione del gruppo legato al C4 dellâ anello benzossadiazolico - 4.1.3.2.1 Sostituzione dellâ esanolo con il benzene, studi di solubilitÃ - 4.1.3.2.2 Sostituzione dellâ esanolo con il benzene, studi di interazione con le GST - 4.1.3.3.1 Sostituzione dellâ esanolo con un gruppo benzen-carbossilico, studi di solubilitÃ - 4.1.3.3.2 Sostituzione dellâ esanolo con un gruppo benzen-carbossilico, studi di affinitÃ con le GST - 4.1.3.3.3 Analisi spettrofotometrica della formazione del complesso-Ï - 4.1.3.3.4 Determinazione dellâ LD50 - 4.1.3.4.1. Sostituzione dellâ esanolo con un gruppo benzen-carbossilico esterificato, - 4.1.3.5.1 Sostituzione dellâ esanolo con un gruppo benzen-ammidico, studi di solubilitÃ - 4.1.3.5.2 Sostituzione dellâ esanolo con un gruppo benzen-ammidico, studi di affinitÃ con le GST - 4.1.3.5.3 Analisi spettrofotometrica dellâ interazione con il GSH - 4.1.3.5.4 La formazione dellâ addotto 2876-GSH non influenza lâ affinitÃ per la GSTP1-1 - 4.1.3.5.5 Determinazione dellâ LD50 - 4.2. Ruolo delle glutatione trasferasi nel meccanismo dâ attivazione della brostallicina - 4.2.1. Le cellule che iperesprimono sia la GST Pi che la GST Mu sono piÃ¹ sensibili alla brostallicina - 4.2.2 Analisi HPLC-UV/MS della reazione tra brostallicina e il GSH - 4.2.3. La brostallicina e i suoi derivati inibiscono la GSTP1-1 e la GSTM2-2. - 4.2.4 La brostallicina e i suoi addotti con il GSH non inibiscono irreversibilmente la GSTP1-1e la GSTM2-2 - 4.2.5 La reazione tra brostallicina e GSH si puÃ² seguire spettrofluoriemetricamente - 4.2.6 Analisi cinetica della reazione brostallicina-GSH catalizzata dalla GSTP1-1 - 4.2.7. Studi a pH fisiologico:per lâ attivazione della brostallicina Ã¨ necessaria la GST mentre lâ a-cloro derivato5 lega covalentemente il DNA anche in assenza di GSH/GST. - 5. Discussioni e conclusioni. - 6. Bibliografia