Pseudomonas: Μηχανισμοί Παθογένειας:
Creators: name: Μπαμπέτσα, Μαρία Ευθυμίου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2013
Subjects: Ψευδομονάδα
Παθογονικότητα
Εκκριτικό Σύστημα Τύπου VI
Pseudomonas
Pathogenicity
Secretion System Type VI

description: Σκοπός της παρούσας μελέτης ήταν η ταξινόμηση του βακτηριακού στελέχους Pseudomonas A1 (Ρ.Α1) στο επίπεδο του είδους και η διερεύνηση της παθογονικότητας του. Μετά από φυλογενετική ανάλυση που έγινε με την χρήση των γονιδίων 16S rRNA, gyrB, ropB και ropD, αλλά και με βάση τα βιοχημικά και φυσιολογικά χαρακτηριστικά του, διαπιστώθηκε ότι το στέλεχος P.A1 δεν ανήκει σε κανένα ταυτοποιήμενο είδος του γένους Pseudomonas και επομένως είναι ένα νέο είδος. Τα γονίδια vgrG και hcp ανιχνεύθηκαν με PCR στο βακτηριακό στέλεχος P.A1. Τα παραπάνω συντηρημένα γονίδια βρίσκονται σε ένα οπερόνιο,το οποίο κωδικοποιεί το εκκριτικό σύστημα τύπου VI (T6SS) και επομένως το στέλεχος P.A1 διαθέτει το T6SS, που είναι υπεύθυνο για τη μόλυνση ευκαρυωτικών και προκαρυωτικών κυττάρων. Το στέλεχος P.A1 προσκολλήθηκε και διείσδυσε σε τρις ευκαρυωτικές κυτταρικές σειρές (οστεοβλάστες, HuH-7, NH3T3) που εξετάστηκαν. Το ποσοστό διείσδυσης του στελέχους P.A1 σε κύτταρα οστεοβλαστών, NH3T3 και HuH-7 κυμάνθηκε από 0,7% έως 7% , ενώ το υψηλότερο ποσοστό παρατηρήθηκε στους κύτταρα HuH-7. Με ηλεκτρονικό μικροσκόπιο συνεστιακής σάρωσης με λέιζερ διαπιστώθηκε ότι το μεγαλύτερο ποσοστό των κυττάρων του στελέχους P.A1 εντοπίστηκε ενδοκυτταρικά στον πυρήνα των κυττάρων NH3T3, και μπορεί να προκαλέσει τροποποιήσεις στην μεταγραφική συσκευή του ξενιστικού κυττάρου. Στα πρώτα 10 λεπτά της μόλυνσης παρατηρήθηκε με ηλεκτρονική μικροσκοπία σάρωσης (SEM) ότι δημιουργούνται οπές στην κυτταρική μεμβράνη των κυττάρων HuH-7, οι οποίες πιθανόν προκαλούνται κατά τη διείσδυση του βακτηρίου στα κύτταρα, δεδομένου ότι η διάμετρος της οπής (1,20 μm) είναι μεγαλύτερη από την διάμετρο του βακτηρίου (0,846 μm). Ωστόσο απαιτείται περαιτέρω διερεύνηση. Το βακτηριακό στέλεχος P.A1 προσκολλάται και στη συνέχεια θανατώνει Gram-θετικά βακτηρία, με θερμο-εξαρτώμενο τρόπο. Το στέλεχος P.A1 προκάλεσε μείωση της βιωσιμότητας του B.thuringiensis κατά 37%, 17% και 15% στους 37oC, 30oC και 25oC αντίστοιχα. Επίσης, μείωσε την βιωσιμότητα του S.aureus κατά 32%, 25% και 12% στους 37oC, 30oC και 25oC.
description: The purpose of the present study was the identification of bacterial strain Pseudomonas A1 (Ρ.Α1) at the genus level and the investigation of its pathogenic properties. After phylogenetic analysis with the use of genes16S rRNA, gyrB, ropB and ropD, as well as based on its biochemical and physiological properties, it was found that the strain P.A1 does not belong to any identified species of the genus Pseudomonas and therefore is a new species. The genes vgrG and hcp were detected by PCR in the bacterial strain P.A1. The above conserved genes were located in an operon, which encodes the secretion system VI (T6SS) and therefore the strain P.A1 contains the T6SS, which is responsible for infection of eukaryotic and prokaryotic cells. Strain P.A1 was attached to and penetrated three eukaryotic cell lines (osteoblast, HuH-7, NH3T3) which were examined. The penetration rate of the strain P.A1 ranged from 0.7% to 7%, for osteoblasts, NH3T3 and Huh-7 cells, while highest rate was observed in HuH-7. Confocal microscopy revealed that the higher percentage of P.A1 cells was located in the nucleus of infected cells, and may cause alterations to the host’s transcriptome. During the first 10 min of infection it was observed by SEM the creation of holes in the cell membrane of HuH-7 cells, which probably were caused by the penetration of bacteria into the cells, since the diameter of hole (1.20 μm) is greater than the diameter of the bacterium (0,846μm). Ηowever, additional investigation is needed,. Τhe bacterial strain P.A1 attaches to and then kills Gram positive bacteria, with temperature-depended manner. The strain P.A1 caused reduction of B.thuringiensis viability by 38%, 17% and 15% at 37oC, 30oC and 25oC respectively. In addition it caused reduction of S.aureus viability by 31%, 25% and 12% at 37oC, 30oC and 25oC.