Διαφοροποίηση της σηματοδότησης του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα σε kras μεταλλαγμένη κυτταρική σειρά και δημιουργία κατάλληλου εργαλείου οπτογενετικής για τη μελέτη του μεμβρανικού δυναμικού σε καρκινικά κύτταρα
Creators: name: Καραστέργιου, Ευαγγελία Στέφανου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2018
Subjects: Οπτογενετική
Σηματοδότηση καρκινικών κυττάρων
Επιδερμικός Αυξητικός Παράγοντας
Optogenetics
Cancer cell signaling
Epidermal Growth Factor

description: Ο επιδερμικός αυξητικός παράγοντας ενεργοποιεί πληθώρα διαφορετικών διεργασιών μέσα στα κύτταρα και παίζει σημαντικό ρόλο στον πολλαπλασιασμό και τη διαφοροποίηση των κυττάρων καθώς και στο μεμβρανικό δυναμικό. Συμβάλει στην εξέλιξη του οργανισμού κατά την εμβρυογένεση ωστόσο, σε παθολογικές καταστάσεις τα κύτταρα οδηγούνται σε ανεξέλεγκτο πολλαπλασιασμό με αποτέλεσμα τη δημιουργία των όγκων. Μία πολύ σημαντική μετάλλαξη στη σηματοδότηση του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα είναι αυτή που εμφανίζεται στην πρωτεΐνη kras και ασθενείς που φέρουν τη μετάλλαξη αυτή φαίνεται να έχουν μικρότερο προσδόκιμο επιβίωσης και να εμφανίζουν ανθεκτικότητα στις μέχρι τώρα θεραπείες. Στην παρούσα εργασία μελετήθηκε η έκφραση των πρωτεϊνών erk1/2 σε φυσιολογικά και καρκινικά κύτταρα και δημιουργήθηκαν παράλληλα τα κατάλληλα πρωτόκολλα για την εισαγωγή ειδικών γενετικά τροποποιημένων τασεο-ευαίσθητων πρωτεϊνών προκειμένου να γίνουν στο μέλλον οπτικές καταγραφές του ηλεκτρικού δυναμικού καρκινικών κυττάρων. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν αυξημένη έκφραση των πρωτεϊνών erk1/2 σε κύτταρα τα οποία φέρουν μεταλλαγμένο kras , το οποίο στην περίπτωση αυτή είναι μονίμως ενεργοποιημένο. Τέλος, με την εισαγωγή των πλασμιδίων αυτών ευελπιστούμε ότι θα ανοίξουν νέοι δρόμοι για τη διασύνδεση της ηλεκτροφυσιολογίας των καρκινικών κυττάρων με τα υπάρχοντα δεδομένα που σχετίζονται με τη σηματοδότηση των πρωτεϊνών και στην ανάπτυξη νέων θεραπευτικών προσεγγίσεων
description: The epidermal growth factor activates a variety of different processes within the cells and plays an important role in the proliferation and differentiation of cells as well as in the membrane potential. It contributes to the evolution of the organism during embryogenesis, however, in pathogenic conditions the cells are led to an unintentional proliferation resulting in the formation of tumors. A very important mutation in epidermal growth factor signaling is that present in the kras protein where patients carrying this mutation seem to have minimum survival expectancy and present resistance to current treatments. This study investigated the expression of erk1 / 2 proteins in normal and cancer cells, and we established the appropriate protocols for transfecting cells with genetically encoded voltage-sensitive proteins, in order to make visual recordings of the electrical potential of cancer cells in the future. Our results show increased expression of the erk1 / 2 proteins in cells bearing mutant kras, which in this case is permanently activated. Finally, with the insertion of these plasmids, we hope that new pathways will be opened for the interconnection of cancer cell electrophysiology with the existing data related to protein signaling and to promote the development of new therapeutic approaches