Ανάπτυξη μεθόδων ταυτόχρονου προσδιορισμού βιογενών αμινών με υγρή χρωματογραφία υψηλής πίεσης και εφαρμογή σε αλκοολούχα ποτά
Creators: name: Λούκου, Ζαχαρένια
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2003
Subjects: Παραγωγοποίηση
Φθορισμομετρική ανίχνευση
Φασματομετρία μαζών
Derivatization
Fluorescence
Mass spectrometry

description: Στην παρούσα διδακτορική διατριβή αναπτύχθηκαν χρωματογραφικές μέθοδοι για τον ταυτόχρονο προσδιορισμό έντεκα βιογενών αμινών σε αλκοολούχα ποτά, μετά από παραγωποίηση τους με ντανσυλοχλωρίδιο (Dns-Cl), παρουσία 1,7 διαμινοεπτανίου (εσωτερικό πρότυπο) και καθαρισμό των παραγώγων, από τα παραπροϊόντα της αντίδρασης, με εκχύλιση στερεάς φάσης-υγρού (SPE). Ο προσδιορισμός των ενώσεων αυτών βασίστηκε στο ιδιαίτερο χαρακτηριστικό που παρουσιάζουν τα ντανσυλοπαράγωγα των αμινών, να απορροφούν ισχυρά στην περιοχή του υπεριώδους και παράλληλα να φθορίζουν. Τα συστήματα φασματοφωτομετρικής και φθορισμομετρικής ανίχνευσης χρησιμοποιήθηκαν ανεξάρτητα, αλλά και σε σειρά. Βρέθηκαν οι βέλτιστες συνθήκες του χρωματογραφικού διαχωρισμού των αμινών, της αντίδρασης παραγωγοποίησης, των συνθηκών SPE. Τα αναλυτικά μήκη κύματος ήταν για το UV 254 nm και για το φθορισμό λex/λem=320/523 nm. Επίσης, πραγματοποιήθηκε βελτιστοποίηση των συνθηκών προκατεργασίας των δειγμάτων οίνων και ζύθων, με σκοπό την απομάκρυνση ενδογενών συστατικών των δειγμάτων, τα οποία παρεμποδίζουν τον προσδιορισμό των βιογενών αμινών. Η αξιοπιστία των μεθόδων που αναπτύχθηκαν, επιβεβαιώθηκε με τον έλεγχο της καθαρότητας και την ταυτοποίηση των κορυφών, με χρήση υγρής χρωματογραφίας και ανιχνευτή παράταξης φωτοδιόδων - σε συνδυασμό με φασματοφωτομετρία μαζών.
description: In this study, eleven of the most oenologically important biogenic amines have been determined simultaneously in alcoholic beverages by Reversed Phae High Performance Liquid Chromatography. The amines studied were pre-column derivatized with dansyl chloride, in the presence of 1,7-diaminoheptane (internal standard) and subsequently cleaned-up from derivatization by-products with solid-phase extraction (SPE) through C18 cartridges. The methods developed involve the use of an ultraviolet (UV) and fluorimetric detector used independently, as well as simultaneously, exploiting the unique feature of the dansyl derivatives of biogenic amines to absorb intensively in the UV region and at the same time to fluoresce. The separation of dansylamides was achieved on an Inertsil ODS-3 column (250x4 mm I.D., 5 μm) using a 35-min gradient elution with a binary system of acetonitrile-water, at a flow rate of 1 mL.min-1. UV detection was carried out at 254 nm, fluorescence detection at λex/λem=320/523 nm and simultaneous detection was performed with the use of both detection systems connected in series. The derivatization and SPE procedures as well as the detection conditions were optimized. The applied post-derivatization SPE procedures, increases the selectivity and sensitivity of the proposed methods. The identity and purity of the dansyl derivative peaks was confirmed by liquid chromatography-diode array/ atmospheric pressure chemical ionization mass spectrometry (HPLC-DAD-APCI/MS). The method was applied to alcoholic beverages of Greece origin.