title: Enantioselektive Bioanalytik des Beta-Adrenozeptor-Antagonisten Carvedilol und seiner Metaboliten in Blutplasma mittels HPLC-Mehrsäulen Chromatographie
Creators: name: Gruber, Leonhard
Publisher: name: :none
Year: 2011

description: Es wurden zwei HPLC-Säulenschalt-Methoden für die enantioselektive Trennung und Bestimmung von (R)- und (S)-Carvedilol in Plasma ausgearbeitet. Eine Deproteinierung vom Plasma erfolgte entweder durch Dosieren einer verdünnten, angesäuerten Plasmaprobe auf eine LiChrospher® RP4 ADS-Trennsäule oder durch Flüssig-Flüssig-Extraktion mit Trichlormethan und Rückextraktion in 0,1 M Citronensäure. In beiden Fällen wurde eine Vortrennung mittels Gradientenelution durchgeführt und anschließend die Carvedilol Fraktion „on-line“ auf eine enantioselektive Teicoplanin-Trennsäule transferiert. Die Trennung der Enantiomere von Carvedilol wurde isokratisch mit einem Eluentengemisch von Methanol-Acetonitril-Triethylammoniumacetat (70:30:0,05; v/v/w) als mobile Phase durchgeführt. Mit der verwendeten Fluoreszenzdetektion wurde ein Quantifizierungslimit von 0,30 ng/mL für (R)-Carvedilol und 0,26 ng/mL für (S)-Carvedilol erreicht. Obwohl die Bedingungen für eine „on-line“ Vortrennung der Plasmaproteine mittels einer LiChrospher® RP 18 ADS-Trennsäule optimiert wurden, war die ausgearbeitete Methode nicht stabil genug für die Analyse einer großen Anzahl von Plasmaproben. Der Transfer von Plasmakomponenten, während des Schaltintervalls, führte zu einer zunehmenden Verschlechterung der enantioselektiven Trennleistung der Teicoplanin-Trennsäule. Als Alternative wurde eine Flüssig-Flüssig-Extraktionsmethode mit anschließender Mehrsäulen-Chromatographie ausgearbeitet. Diese Methode erwies sich in der Praxis als stabil und robust für die Analyse einer großen Anzahl von Plasmaproben.
description: There were two HPLC column-switching methods worked out for the enantioselective separation and determination of (R)- and (S)-carvedilol in plasma. A deproteinization of plasma was carried out either by feeding a dilute of, acidified plasma sample to a LiChrospher ® ADS RP4 column, or by liquid-liquid extraction and back extraction with trichloromethane in 0.1 M citric acid. In both cases, a preliminary separation was performed using gradient elution on the carvedilol group and subsequently transferred "on-line" to an enantioselective Teicoplanin column. The separation of the enantiomers of carvedilol was carried out isocratically with an eluent mixture of methanol-acetonitrile-triethylammonium (70:30:0,05, v / v / w) as the mobile phase. With the fluorescence detection used, a quantification limit of 0.30 ng / mL for (R)-carvedilol and 0.26 ng / mL for (S)-carvedilol was reached. Although the conditions for an "on-line" pre-separation of plasma proteins using a LiChrospher ® RP-18 ADS column were optimized, the elaborated method was not stable enough for the analysis of a large number of plasma samples. The transfer of plasma components during the switching interval, led to a progressive deterioration of the enantioselective separation efficiency of the teicoplanin column. Alternatively, a liquid-liquid extraction method with subsequent multi-column chromatography was developed. This method proved in practice to be stable and robust for the analysis of a large number of plasma samples.