Ανάπτυξη μεθόδου προσδιορισμού του αντιβιοτικού κολιστίνη σε πλάσμα αίματος με υγρή χρωματογραφία – φασματομετρίας μαζών και φθορισμομετρική ανίχνευση
Creators: name: Κονδύλη-Σαρίκα Φοίβη, Γεωργίου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2021
Subjects: Κολιστίνη
Υγρή χρωματογραφία
Πλάσμα αίματος
Colistin
Liquid chromatography
Blood plasma

description: Το αντιβιοτικό κολιστίνη είναι ένα αντιβιοτικό με βακτηριοκτόνο δράση ενάντια σε Gram(-) βακίλους και είναι ιδιαίτερα αποτελεσματικό ενάντια σε λοιμώξεις. Δεδομένης όμως της νεφροτοξικότητας, εδώ και αρκετά χρόνια χρησιμοποιείται μόνο σε σχήματα έσχατης λύσης, εκεί που ηπιότερα αντιβιοτικά αποτυγχάνουν. Σε αυτές τις περιπτώσεις, η παρακολούθηση της θεραπευτικής δράσης του φαρμάκου με στόχο τον επανακαθορισμό των δοσολογικών σχημάτων έχει μεγάλη σημασία. Στη παρούσα εργασία επιχειρήθηκε η ανάπτυξη μεθόδου με στόχο τον προσδιορισμό του αντιβιοτικού κολιστίνινη σε πλάσμα αίματος νεογνών, χρησιμοποιώντας αρχικά υγρή χρωματογραφία υψηλής πίεσης συζευγμένη με φασματομετρία μάζας (HPLC-MS/MS), ενώ στη συνέχεια, λόγω περιορισμών που προέκυψαν, πραγματοποιήθηκε ανάπτυξη και επικύρωση μεθόδου υγρής χρωματογραφίας υψηλής πίεσης συζευγμένης με ανιχνευτή φθορισμού (HPLC-FLD) με τον ίδιο σκοπό. Η ανάπτυξη της παραπάνω μεθόδου, περιελάμβανε την υδρόλυση πλάσματος για την ολική μετατροπή του προφαρμάκου, την ανακίνηση, την εκχύλιση στερεάς φάσης και την επαναδιάλυση. Ο χρωματογραφικός διαχωρισμός πραγματοποιήθηκε σε αναλυτική στήλη HyperSil Gold C18 με κινητή φάση MeCN:THF:H2O (80:12:8). Η ανάπτυξη της μεθόδου αφορούσε την βελτιστοποίηση των συνθηκών στον ανιχνευτή φθορισμού. Παράλληλα αξιολογήθηκε η ακρίβεια, η επαναληψιμότητα, η αναπαραγωγιμότητα του προσδιοριζόμενου συστατικού και η ανάκτηση της μεθόδου. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η μέθοδος έχει καλή γραμμικότητα (R2: 0,998) σε περιοχή συγκεντρώσεων από 0,1 έως 5 μg/mL, ενώ η επαναληψιμότητα ήταν 5,70% RSD και η αναπαραγωγιμότητα 8,46%. Η ακρίβεια της μεθόδου βρέθηκε να είναι ±0,51 %. Η μέση ανάκτηση βρέθηκε να είναι 104,3% , ενώ η ουσία βρέθηκε να είναι σταθερή σε εκχυλίσματα πλάσματος στους -80 ⁰C. Το όριο ανίχνευσης (LOD) ήταν 0,03 μg/ml και το όριο ποσοτικοποίησης (LOQ) 0,10 μg/ml. Μετά την επιτυχή επικύρωση της μεθόδου, ακολούθησε εφαρμογή της μεθόδου που αφορούσε τον ποσοτικό προσδιορισμό και φαρμακοκινητική μελέτη της κολιστίνης σε δείγματα πλάσματος νεογνών. Συνολικά, η μέθοδος αποδείχθηκε ότι θα μπορούσε να αποτελέσει χρήσιμο εργαλείο για τον προσδιορισμό της κολιστίνης σε φαρμακοκινητικές μελέτες, αλλά και για τον έλεγχο των δοσολογικών σχημάτων σε νεογνά
description: Colistin (CS) is very effective wide range antibiotic frequently used as last resort to treat infections caused by multidrug resistant (MDR) bacterial strains (e.g. Acinetobacter baumannii, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa). Α high pressure liquid chromatography (HPLC-FLD) method utilizing a fluorescence detector was developed and validated for the detection and quantification of Colistin (CMS) in plasma for a pharmacokinetic study performed in new born infants with serious bacterial infections. Available Pharmacokinetic studies of CMS in neonatal population is very limited making the development of a sensitive and reliable method method for monitoring levels of this antibiotic in plasma invaluable. The developed method provided quantitative data over a linearity range of 0.1 μg/mL to 5μg/mL with LOQ 0.03 μg/mL and LOD 0.1 μg/mL for total CMS. Method accuracy was more than ±0,51 %. The method was applied in 67 plasma samples from neonates divided in subgroups in 5 time points to support pharmacokinetic data. Analysis provided useful data on dose frequencies, while demonstrating that this method is be fast and reliable, allowing the quantification of Colistin concentration levels in plasma during therapy in the sensitive group of infants admitted in Intensive Care Unit