Ανοσοπροσδιορισμός αλλεργιογόνων σε ιχθύες με οικονομική αξία
Creators: name: Ζαφειράκογλου, Αρίστη Αδαμαντίου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2016
Subjects: Αλλεργιογόνα, Αλλεργιογόνα σε τρόφιμα, Αλλεργιογόνα σε ιχθύες
Παρβαλβουμίνες
Ανοσοπροσδιορισμός αλλεργιογόνων
Allergens, Food allergens, Allergens in fish
Parvalbumins
Immunodetection of allergens

description: Οι παρβαλβουμίνες αποτελούν ομάδα πρωτεϊνών μοριακού βάρους 12–14 kDa. Εμφανίζουν τουλάχιστον 3 ισομορφές (PV-I, PV-II, PV-III). Βιβλιογραφικά δεδομένα καταδεικνύουν τις παρβαλβουμίνες ως κυρίαρχο αλλεργιογόνο σε εδώδιμους ιχθύες. Παρά την παγκοσμιοποιημένη διακίνηση τροφίμων, η ανάπτυξη διατροφικών αλλεργιών είναι ανοσοαντιδράσεις συνδεδεμένες με την τοπική διάθεση τροφίμων. Δεν υπάρχουν επαρκή στοιχεία για το πρότυπο των ισομορφών των παρβαλβουμινών σε ιχθύες της ελληνικής αγοράς. Σκοπός της εργασίας υπήρξε η διερεύνηση της ύπαρξης και η ανίχνευση των παρβαλβουμινών, με ανοσοαποτύπωση κατά Western, σε αλιεύματα του Θερμαϊκού Κόλπου και της Χαλκιδικής. Η μέθοδος εφαρμόστηκε σε ομογενοποιήματα λευκού μυ 27 ειδών ιχθύων, για τα οποία έγιναν 3 βιολογικές επαναλήψεις στο ίδιο αλίευμα και 2 επαναλήψεις ανά άτομο. Η ηλεκτροφόρηση έγινε σε Πήγμα Πολυακρυλαμιδίου Υπό Μετουσιωτικές Συνθήκες (SDS PAGE) 20%, ακολούθησε ηλεκτρομεταφορά και ανοσοανίχνευση με χρήση των ειδικών μονοκλωνικών αντισωμάτων PARV – 19. Ανιχνεύθηκαν περισσότερες από 5 ισομορφές μοριακού βάρους 7–17 kDa, ενώ συνολικά ανιχνεύθηκαν 8 ζώνες από την ανάλυση κατά Western. Βιολογικές και τεχνικές επαναλήψεις επαλήθευσαν το πρότυπο ζωνών παρβαλβουμινών που δείχνει να είναι σταθερό και χαρακτηριστικό για κάθε είδος. Σε ποσοστό μεγαλύτερο του 80% των ειδών, παρουσιάστηκε μια επιπλέον ζώνη στην περιοχή των 46 kDa. Τα 15 είδη ανήκαν στην τάξη Perciformes, 6 από τα οποία ταξινομούνται στην οικογένεια Sparidae. Η στατιστική ανάλυση PCA έδειξε ομαδοποίηση των παρατηρούμενων ισομορφών σε σύνολα που ανήκουν στην ίδια τάξη ή και οικογένεια, όπως στην περίπτωση των συγγενικών Diplodus sargus sargus (σαργός), Sarpa salpa (σάλπα) και Diplodus annularis (σπάρος). Η σύγκριση αγρίων αλιευμάτων και καλλιεργούμενων ατόμων Dicentrarchus labrax (λαβράκι) έδειξε ότι το πρότυπο των ισομορφών των παρβαλβουμινών παραμένει σταθερό μεταξύ αγρίων και εκτρεφόμενων ατόμων του ίδιου είδους. Ομοίως, δεν παρατηρήθηκε διαφοροποίηση του προτύπου μεταξύ αγρίων και εκτρεφόμενων για το Sparus aurata (τσιπούρα). Τα 2 εκ των 27 ειδών ανήκαν στους Χονδριχθύες (Chondrichthyes), ενώ τα υπόλοιπα 25 στους Οστεϊχθύες (Osteichthyes) οι οποίοι καταλαμβάνουν το μεγαλύτερο τμήμα των εμπορικών βρώσιμων ιχθύων της ελληνικής αγοράς. Οι Χονδριχθύες δεν παρουσίασαν ζώνες στην περιοχή 7 – 17 kDa. Το είδος Galeorhinus galeus (γαλέος) δεν εμφάνισε καμία ζώνη. Το είδος Raja radula (βάτος) (Elasmobranchii) διαφοροποιήθηκε εμφανίζοντας 1 ζώνη στα 46 kDa. Τα 25 είδη (Actinopterygii) που μελετήθηκαν εμφάνιζαν τουλάχιστον 2 ισομορφές, με τουλάχιστον 1 ζώνη κάτω από τα 17 kDa. Συμπερασματικά, η μέθοδος που αναπτύχθηκε έδωσε τη δυνατότητα ανίχνευσης νέων ισομορφών παραβαλβουμινών σε ολικά ομογενοποιήματα μυ ιχθύων, διακρίνοντας το πρότυπο παραγωγής τους από είδος σε είδος. Η μέθοδος ανιχνεύει ισομορφές σε ολικά αδρά πρωτεϊνικά εκχυλίσματα επιτρέποντας πιθανή εφαρμογή της για την ανίχνευση πιθανά αλλεργιογόνων παρβαλβουμινών σε ιχθυοπροϊόντα της ελληνικής και ευρωπαϊκής αγοράς.
description: Parvalbumins constitute a protein family with a molecular weight of 12–14 kDa. At least 3 isoforms have been detected (PV-I, PV-II, PV-III). Literature indicates parvalbumins as the main allergen in edible fish. Despite the globalized food distribution, food allergies are immune responses related to local food markets. There is a lack of information concerning parvalbumin isoforms’ pattern of fish in Greece. We investigated the existence and the ability to detect parvalbumins among different fish catches of Thermaikos’ Gulf and Chalkidiki’s fishing regions. For this research, crude protein extracts of homogenized white muscle from 27 biological species ran electrophoresis in 20% SDS PAGE gels. Immunodetection using the specific monoclonal antibodies PARV – 19, showed more than 5 isoforms with molecular weight between 7 – 17 kDa, when there were revealed 8 bands in total. Three biological replications were conducted based on the same catch and two replications for each sample confirming a stable isoform model for each species. More than 80% of the species presented an extra protein band at around 46 kDa. In total, 15 species out of the 25 were classified in the Perciformes order, 6 of which were members of the same family (Sparidae). PCA analysis grouped our observations into sets of related species belonging in the same order or even the same family. The Diplodus sargus sargus (white seabream), Sarpa salpa (salema porgy) and Diplodus annularis (bream) form such an example, since they were classified in the same group. The comparison between wild and farmed Dicentrarchus labrax (seabass) fish showed that parvalbumin isoforms retain the same characteristic pattern. Likewise, wild and farmed Sparus aurata (gilt-head bream) fish revealed the same pattern. 2 out of the 27 biological species belong to the Chondrichthyes Class, while the remaining 25 belong to the Osteichthyes Class, which form the majority of edible fish with economical interest in Greece. Chondrichthyes did not reveal any bands between 7 – 17 kDa. Galeorhinus galeus (school – shark) did not show any band. Raja radula (rough – ray) (Elasmobranchii) only showed 1 protein band at 46 kDa, while the remaining 25 species (Actinopterygii) presented 2 or more isoforms, with at least 1 band below 17 kDa. In summary, the developed procedure provided the possibility to detect new parvalbumin isoforms in whole protein extracts, indicating the different isoforms’ pattern from one species to another. The following procedure might detect parvalbumin isoforms in raw extracts of fish products of the Greek and the European market.