Εφαρμογή της κυτταρομετρίας ροής για τον έλεγχο της λειτουργικότητας των λεμφοκυττάρων: μελέτη σε υγιή παιδιά και παιδιά με αυτοάνοσα ρευματικά νοσήματα
Creators: name: Ταπάρκου, Αννα Θ.
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2005
Subjects: Μιτογόνα
Νεανική ιδιοπαθής αρθρίτιδα
Mitogens
Juvenile idiopathic arthritis

description: Σκοπός της μελέτης ήταν να αντικαταστήσουμε τη συμβατική ραδιοανοσολογική μέθοδο εκτίμησης της βλαστογενετικής μεταμόρφωσης των λεμφοκυττάρων υπό την επίδραση μιτογόνων από μια μέθοδο που βασίζεται στην κυτταρομετρία ροής. Ως υλικό εφαρμογής της μεθόδου επιλέγησαν 25 υγιή παιδιά 2-16 ετών και 24 παιδιά με νεανική ιδιοπαθή αρθρίτιδα(ΝΙΑ) παρόμοιας ηλικίας. Ολοι οι ασθενείς με ΝΙΑ μελετήθηκαν σε ενεργό φάση της νόσου πριν και μετά 6 μήνες αντιρευματικής αγωγής. Προσδιορίσθηκε η έκφραση των δεικτών ενεργοποίησης CD69, CD71, CD25, HCA-DR και Ki-67 αλλά και των ενδοκυττάριων IL-2, IL-4, IFN-γ στα CD3+T κύτταρα με τη βοήθεια MoAb σημασμένων με PE, FITC και PE-Cy5. Η S-φάση του κυτταρικού κύκλου προσδιορίσθηκε με τη χρήση της φθορίζουσας χρωστικής ΡΙ και με το αντι-BrdUFITC. Από τα ευρήματα αυτής της μελέτης προκύπτει ότι μετά την επίδραση μιτογόνων, τα λεμφοκύτταρα του περιφερικού αίματος ασθενών με ΝΙΑ σε ενεργότητα της νόσου εκφράζουν σε μεγάλο ποσοστό επιφανειακούς δείκτες ενεργοποίησης που μετά 6 μήνες θεραπείας αποκαθλιστανται σε φυσιολογικά επίπεδα. Η βλαστογενετική απάντηση όμως των λεμφοκυττάρων σε μιτογόνα όπως φαίνεται από την εκτίμηση της S-φάσης είναι ελαττωμένη στους ασθενεί με ΝΙΑ σε σχέση με τους μάρτυρες και δεν βελτιώνεται στους 6 μήνες από την έναρξη της θεραπείας. Το ίδιο παρατηρήθηκε και για την έφκραση του Ki-67 και της παραγωγής ενδοκυττάρια των κυτταρονικών IL-2 και INF-γ. To γεγονός ότι τα ευρήματα της παρούσας μελέτης που βασίστηκαν στη χρήση κυτταρομετρίας ροής στους ασθενείς με ΝΙΑ συμφωνούν με τα ευρήματα προηγούμενων μελετών που χρησιμοποίησαν ραδιοανοσολογική μέθοδο σε ασθενείς με ΡΑ δείχνου ότι τα αποτελέσματα είναι αξιόπιστα και επομένως μπορεί να αντικαταστήσει τη συμβατική ραδιοϊσοτοπική μέθοδο
description: The aim of this study was to set up a method using flow cytometry which could replace the conventional radiommunoassay. 25 healthy children aged 2-16 yrs and 24 JIA patients aged 2,5-16yrs were studied. The healthy children served as controls. All JIA pts were investigated during the active phase of the disease and before initiation of any treatment as well as 6 months thearafter. The activation markers CD69, CD71, CD25, HLA-DR and Ki-67 and intracellular IL-2, IL-4, IFN-γ were PE, FITC and PE-Cy5. The fluorescent dye PI and anti-BrdUFITC were used to assess the S-phase of cell cycle. The findings of this study indicate that T cells of JIA pts under mitogen stimulation express surface activation markers in a great percentage at the time of the disease onset and they restore to normal values 6 months post-tratment.T cell blastogenic response to mitogen as observed during the evaluation of T cells in S phase was found to be decreased in JIA pts compared to the controls and did not significantly improved 6 months post-treatment. The same observation was recorded regarding the expression of Ki-67 and intracellular IL-2 and INF-γ. The findings of this study are in aggrement with findings of previous studies using radioimmunoassay. These indicate that the application of this method leads to reliable results and can replace the conventional radioimmunoassay