Επίπεδα παραγόντων βλαστικότητας σε κύτταρα μονοκυτταρικής προέλευσης
Creators: name: Καρακώτα, Μαρία Αστερίου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2019
Subjects: Βλαστοκύτταρα
Μονοκύτταρα
Γονίδια βλαστικότητας
Πολυδύναμα κύτταρα αίματος
Φίλτρα λευκαφαίρεσης
Stem cells
Stem cells factors
Monocytes
Multipotencial blood cells
Leukapheresis
MOMCs

description: Τα πολυδύναμα κύτταρα μονοκυτταρικής προέλευσης (Monocyte-derived multipotential cells-MOMCs) είναι ένας υποπληθυσμός των μονοκυττάρων που μπορεί να διαφοροποιηθεί σε διάφορους κυτταρικούς πληθυσμούς πέραν των φαγοκυττάρων. Τα MOMCs εκφράζουν στην επιφάνειά τους δείκτες βλαστοκυττάρων και πρόδρομων αιμοποιητικών κυττάρων. Παρά το γεγονός ότι τα MOMCs εμφανίζουν χαρακτηριστικά πολυδύναμων κυττάρων, δεν έχει μελετηθεί ακόμα η έκφραση γονίδιων που συσχετίζονται με την πολυδυναμικότητα τους. Έχει αποδειχθεί ότι η έκφραση των γονιδίων NANOG, OCT4, c-MYC, SOX2, KLF4, SALL4, ESRRB, ZNF214 και ZNF878 ενεργοποιεί κυτταρικά δίκτυα που σχετίζονται με την πολυδυναμικότητα, τον επαναπρογραμματισμό και τη διαφοροποίηση των κυττάρων. Προκειμένου να αξιολογηθεί η πολυδυναμικότητα των ΜΟΜCs μελετήθηκε η έκφραση των παραπάνω γονιδίων. Για την απομόνωση των MOMCs χρησιμοποιήθηκαν φίλτρα λευκαφαίρεσης, που χρησιμοποιούνται στην Υπηρεσία Αιμοδοσίας για την απομάκρυνση των λευκοκυττάρων από μονάδες αίματος. Τα λευκοκύτταρα ανακτήθηκαν από τα φίλτρα, απομονώθηκαν με τη χρήση φικόλης και μεταφέρθηκαν σε τρυβλία όπου και καλλιεργήθηκαν σε πλήρες θρεπτικό μέσο (DMEM) εμπλουτισμένο με SDF-1a. Ο μοριακός χαρακτηρισμός των MOMCs έγινε με PCR-αντίστροφης μεταγραφάσης πραγματικού χρόνου (qRT-PCR). Από τη μελέτη προκύπτει πως τα MOMCs εκφράζουν όλα τα γονίδια που έχουν συσχετιστεί με την πολυδυναμικότητα των βλαστικών κυττάρων. Μάλιστα, συγκριτικά με τα κύτταρα της ουσίας του Wharton, που χρησιμοποιήθηκαν ως ομάδα ελέγχου, τα γονίδια NANOG και ESRRB εκφράζονται μέχρι και 108 και 1219 φορές αντίστοιχα περισσότερο στα MOMCs, Συμπερασματικά, τα φίλτρα λευκαφαίρεσης αποδείχθηκαν μια εξαιρετική πηγή απομόνωσης των MOMCs από τα κύτταρα του περιφερικού αίματος, αφού η απομόνωση γίνεται εύκολα, με ελάχιστα επεμβατικό τρόπο, ενώ παράλληλα δίνει τη δυνατότητα απομόνωσης ενός μεγάλου αριθμού λευκοκυττάρων. Επιπρόσθετα η έκφραση των υπό μελέτη γονιδίων βλαστικότητας ενισχύει την άποψη πως τα MOMCs έχουν πολυδυναμικό χαρακτήρα και μπορούν να διαφοροποιηθούν σε πολλούς κυτταρικούς τύπους. Τα παραπάνω σε συνδυασμό με τη γρήγορη αναγέννηση των MOMCs από τα μονοκύτταρα καθιστούν τα κύτταρα αυτά υποψήφια για μελλοντικές θεραπευτικές εφαρμογές στην αναγέννηση ιστών
description: Monocyte-derived multipotential cells (MOMCs) are a subpopulation of monocytes that appear capable to be differentiated into many cell populations beside phagocytes. MOMCs express on their surface markers of stem cells and hematopoietic progenitor cells. Although MOMCs exhibit polypotent cell characteristics, the expression of genes associated with multipotency in this subpopulation has not been studied. The expression of NANOG, OCT4, c-MYC, SOX2, KLF4, SALL4, ESRRB, ZNF214 and ZNF878 genes have been shown to activate networks that are associated with cellular multipotency, reprogramming and differentiation. The multipotency of MOMCs was studied by evaluating the expression of these genes in MOMCs. MOMCs were isolated from leukapheresis filters, are used either pre-storage or poststorage in order to remove blood donor leukocytes from blood units. The leukocytes were collected after centrifugation with Ficoll and the isolated cells were cultured in Dulbecco’s modified Eagle medium (DMEM) supplemented with FBS and SDF-1a. For the molecular characterization of MOMCs we evaluated the expression of the above multipotency genes by real time reverse transcription PCR (qRT-PCR). MOMCs expressed all the examined factors that are responsible to activate the networks of pluripotency, differentiation and reprogramming of cells. Interestingly, the NANOG and ESRRB genes are over expressed 108 and 1219 fold respectively more in MOMSc, compared to Wharton jelly cells, which were used as control. In conclusion, leukapheresis filters have proved to be an excellent and easy source for MOMSc isolation, since we used a minimally invasive method and were able to isolate sufficient number of cells. Moreover, the expression of several stem cell factors in MOMCs, strengthens the theory that MOMCs can probably differentiate into several distinct mesenchymal lineages. These facts together with quick generation of MOMCs from monocytes make them potential candidates as cell source for future therapeutic interventions for tissue regeneration