Διερεύνηση της αλληλεπίδρασης των πρωτεϊνών TRAF3 και GMEB1:
Creators: name: Κερσελίδου, Δέσποινα Βασιλείου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2014
Subjects: Απόπτωση
GMEB1
TRAF3
Apoptosis

description: Η TRAF3 πρωτεΐνη, ανήκει στην οικογένεια των TRAFs (TNF Receptor-Associated Factors) πρωτεϊνών και αλληλεπιδρά με τις κυτταροπλασματικές ουρές των υποδοχέων της υπερ-οικογένειας TNF που περιλαμβάνει υποδοχείς όπως ο CD40, ο υποδοχέας της λεμφοτοξίνης-β (LTβR) αλλά και τους ΟΧ40, CD27, CD30, Herpes Virus Entry Mediator (HVEM), Receptor Activator του NF-κB (RANK) αλλά και με την LMP1 (Latent Membrane Protein 1) του ιού Epstein-Barr (EBV), η οποία είναι ογκογόνος. Η συμμετοχή της TRAF3 στη μεταγωγή σήματος μέσω διαφορετικών υποδοχέων αντανακλά τον σημαντικό ανοσολογικό της ρόλο στην άμυνα του ξενιστή. Πράγματι, η έλλειψη της TRAF3 έχει συνδεθεί με κακοήθειες, όπως το πολλαπλό μυέλωμα, τα λεμφώματα στο ποντίκι και η αυξημένη ευπάθεια στην εγκεφαλίτιδα που επάγεται από τον HSV-1 (Herpes Simplex Virus-1) στον άνθρωπο. Προκειμένου να χαρακτηρίσουμε καλύτερα το μοριακό μηχανισμό σηματοδότησης της TRAF3, σε προηγούμενη έρευνα στο εργαστήριο διεξήχθηκαν πειράματα δύο-υβριδίων στο ζυμομύκητα για την ταυτοποίηση πρωτεϊνών που αλληλεπιδρούν με την TRAF3. Από αυτήν την προσέγγιση προέκυψε η αλληλεπίδραση με την πρωτεΐνη GMEB1 (Glucocorticoid Modulatory Element-Binding Protein 1). Προηγούμενες μελέτες έδειξαν ότι η GMEB1 λειτουργεί ως ισχυρός αναστολέας της ενεργοποίησης των κασπασών και της απόπτωσης. Ο σκοπός της παρούσας εργασίας είναι να διερευνήσει τη συμμετοχή της TRAF3 πρωτεΐνης στην αναστολή της απόπτωσης από την GMEB1 πρωτεΐνη. Επομένως, αρχικά επιβεβαιώθηκε ότι η TRAF3 πρωτεΐνη αλληλεπιδρά με την GMEB1 πρωτεΐνη σε κυτταρικές σειρές θηλαστικών. Δείχθηκε ότι η δομή της επικράτειας RING και η περιοχή TRAF από μόνες τους δεν είναι απαραίτητες για την αλληλεπίδραση αυτή. Επιπλέον, διερευνήθηκε η επίδραση της υπέρ-έκφρασης της πρωτεΐνης TRAF3 στην αναστολή της απόπτωσης από την GMEB1 σε διαφορετικές χρονικές στιγμές και βρέθηκε ότι η TRAF3 πρωτεΐνη πιθανόν ενισχύει τον αντι-αποπτωτικό ρόλο της GMEB1.
description: TRAF3 protein, a member of TNF Receptor-Associated Factors (TRAFs) family, interacts with the cytoplasmic tails of TNF receptor family members, such as CD40, lymphotoxin β-receptor (LTβR), OX40, CD27, CD30, Herpes Virus Entry Mediator (HVEM), Receptor Activator of NF-κB (RANK) and the latent membrane protein 1 (LMP1) of Epstein-Barr virus (EBV), which is an oncogene. The participation of TRAF3 in signal transduction from diverse receptors reflects its major immunological role in host defense. Indeed, TRAF3 deficiency has been linked to malignancies, such as multiple myeloma, lymphoid defects in the mouse and increased susceptibility to herpes simplex virus-1 (HSV-1)-induced encephalitis (HSE) in humans. In order to characterize the molecular mechanisms of TRAF3 signaling, yeast two-hybrid assay was used previously in the lab to identify proteins that interact with TRAF3. From this approach, GMEB1 (Glucocorticoid Modulatory Element-Binding Protein 1) protein was identified. Previous studies propose that GMEB1 functions as a potent inhibitor of caspase activation and apoptosis. The objective of this work is to investigate the involvement of TRAF3 in the inhibition of apoptosis by GMEB1. Firstly, we confirmed that TRAF3 protein interacts with GMEB1 protein in mammalian cell lines. The results show that the structure of the RING domain and the TRAF domain alone are not necessary for this interaction. Moreover, we investigated the effect of the over-expression of TRAF3 protein in the prevention of apoptosis by GMEB1 during different time points and we concluded that TRAF3 protein may enhances the anti-apoptotic role of GMEB1.