title: Protein- und Gewebsbindung von neuen Anthrachinonen
Creators: name: Wilthaner, Julia
Publisher: name: :none
Year: 2017

description: In dieser Diplomarbeit wurden mit in-vitro Transil XL Testsystemen der Firma Sovicell präklinische Versuche durchgeführt, um neue Anthrachinone hinsichtlich ihrer Proteinbindung und Gewebsbindung zu charakterisieren. Es handelt sich um Anthrachinonderivate, die aufgrund ihrer Grundstruktur lipophile Eigenschaften haben. Während der Probenvorbereitung konnten Charakteristika der Substanzen festgestellt werden. Die gefärbten, photosensitiven Substanzen haben sich im Molekulargewicht stark unterschieden, jedoch waren sie alle gut in DMSO löslich, was daran liegen könnte, dass sie in 100% DMSO gelöst und die Lösung anschließend mit Puffer aufgefüllt wurde . Bei AC 1 und AC 4 konnte eine ungewöhnliche Farbveränderung während des schrittweise Auffüllens mit Pufferlösung beobachtet werden, die allerdings wieder zurückging sobald mehr Pufferlösung zugesetzt wurde. Die Absorptionsmaxima waren bei allen Testsubstanzen im Bereich von 230-270nm.An der Gesamtübersicht in Tabelle 5 zeigt sich, dass die Qualität der Analysen, die durch den Transil Quality Index ausgewiesen wird, durchwegs sehr gut war. Nur die Analyse der mikrosomalen Bindung von AC 1 war von mittlerer Qualität mit einem TQI von 6,5, da hier mutmaßlich durch einen Pipettierfehler ein sehr stark abweichender Wert gemessen wurde. Mit der Ausnahme von 2 guten Werten mit einem TQI von 7,4 bzw 7,6 waren alle übrigen Analysen mit Werten über 8,2 sehr gut. Alle fünf Testsubstanzen zeigten hohe Bindungsraten an Plasmaproteine. Die Bindung an AGP und HSA gleichzeitig (fb PPB) sowie die Bindung an HSA (fb HSA) waren besonders stark ausgeprägt. Die Substanzen AC 4 und AC 5 und ganz besonders AC 3 zeigenaußerdem auch hohe Affinität zu AGP. Der ungebundene Anteil überstieg bei keinem dieser Versuche 6%. Das Testsystem wurde mit der Substanz Linezolid validiert und die Ergebnisse waren etwas höher als jene der Literatur. [25] Mittels der Ergebnisse zur Plasmaproteinbindung konnte in Folge durch Kombination mit den Resultaten der intestinalen Absorption das Verteilungsvolumen der Substanzen bestimmt werden, wobei sich für die Substanzen AC 3 und AC 5 die höchsten Werte ergaben. Die Versuche mit dem Microsomal Binding Kit zeigen, dass die getesteten Anthrachinonderivate generell geringe Affinität zu Lebermikrosomen aufweisen, weshalb sie stärker der Metabolisierung unterliegen. Die Werte der Membranaffinität von AC 2 und AC 4 liegen allerdings unter den für valide Ergebnisse nötigen 2,5. Der freie Anteil von AC 3 war überraschend hoch mit über 71 % obwohl AC 3 gute Membranaffinität aufwies. Die Membranaffinität der Testsubstanzen zu mikrosomalen Membranen fiel besser aus, als jene bei der zu intestinalen und Gehirnmembranen. AC 1, AC 3 und AC 5 zeigen höhere Werte bei der intestinalen Absorption, AC 2 und AC 4 liegen auch bei diesem Versuch unter der angegebenen Grenze der Membranaffinität für valide Messergebnisse. Außerdem haben AC 1 und AC 3 haben sehr hohe Permeabilitätskoeffizienten, AC 5 liegt mit einem Wert von 6,9 noch im mittleren Bereich, wohingegen AC 2 und AC 4 sehr geringe Werte haben und folglich auch eine geringe Bioverfügbarkeit. Bei dem Testkit der Gehirn Absorption liegen nur die Ergebnisse der Membranaffinität von AC 3 und AC 5 über dem Mindestwert von 2, der für eine genaue Messung nötig sind. Der freie Anteil im Gehirn ist bei AC 3 mit 4,7 % gering, allerdings mehr als dreimal so hoch wie jener von AC 5.
description: In this diploma thesis in–vitro test kits were used to perform preclinical analysis to characterize new anthrachinones in terms of binding to plasma proteins and membranes. During the preparation for analysis some physicochemical attributes were shown. The coloured substances were photosensitive, and their solubility in DMSO was good, maybe because the substances were solved in 100% DMSO an the buffer was added bit by bit afterwards. Two substances showed a colour change from yellow to red and back to yellow while the buffer was added. The measured absorption maxima were between 230 and 270 nm. The Overview shows that all measures were precise. Only one trial had an average score of 6.5 at the transil quality index, maybe that’s because of a mistake during pipetting. Except for two measures that scored “good” all the trails scored excellent in terms of TQI. All five substances bound with high affinity rates to plasmaproteins, most to HSA combined with AGP or to HSA only. The substances AC 4 and AC 5 and especially AC 3 showed high affinity to AGP too. The unbound fraction was less than 6% in all plasmaprotein trials. The Testkit was validated with Linezolid and the results where a bit higher than in literature. [25] The volume of distribution could be calculated with the results of plasma protein binding and intestinal absorption. AC 3 and AC 5 had the highest results for volume of distribution. Anthrachinones exhibit low affinity to microsomal membranes and so they underlie metabolism more. The results of AC 2 and AC 4 where too low for being measured accurately. The unbound fraction of AC 3 what suprisingly high, because it ad good affinity to microsomal membranes too. The affinity to microsomal membranes was higher than to intestinal and brain membranes. AC 1, AC 3 and AC 5 showed high results on intestinal absorption assay, AC 2’s and AC 4’s affinity was again too low for valide results. The intestinal permeabilitycoefficient was high at AC 1 and AC 3 and average at AC 5. AC 2 and AC 4 have very low results and therefore less bioavailability. For the brain absorption kit only AC 3 and AC 5 have high enough affinity to the membranes, the unbound fraction in brain of AC 3 was low, but at least 3 times higher than of AC 5.