Συγκριτική μελέτη της επάρκειας των αραιωτικών του εμπορίου για τη διατήρηση της γονιμότητας του σπέρματος του κάπρου
Creators: name: Καραγεωργίου, Μαρίνα Αναστασία Κωνσταντίνου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2013
Subjects: Σπέρμα κάπρου
Αραιωτικά
Ποιότητα
Boar sperm
Extenders
Quality

description: Η εφαρμογή της Τεχνητής Σπερματέγχυσης ως μεθόδου γονιμοποίησης των συών, συντέλεσε στην ανάπτυξη της παγκόσμιας χοιροτροφίας. Η συνήθης πρακτική γονιμοποίησης που εφαρμόζεται είναι η σπερματέγχυση με νωπό αραιωμένο σπέρμα κάπρου που συντηρείται στους 16-18°C. Στην παρούσα μελέτη, συγκρίθηκαν τα ποιοτικά χαρακτηριστικά του σπέρματος μετά από αραίωση με βραχείας, μέσης και μακράς διάρκειας αραιωτικά. Μετά τη συλλογή και επεξεργασία, μέρος του σπέρματος χρησιμοποιήθηκε για σπερματέγχυση 90 συνολικά συών της εκμετάλλευσης (30 ανά είδος αραιωτικού). Το υπόλοιπο μεταφερόταν στο εργαστήριο βιοτεχνολογίας αναπαραγωγής της Κλινικής Παραγωγικών Ζώων, εντός 1 ώρας, σε συνθήκες ελεγχόμενης θερμοκρασίας (16-18°C). Ακολουθούσε η εργαστηριακή εξέτασή του την πρώτη και την τρίτη ημέρα από τη συλλογή. Οι παράμετροι που εκτιμήθηκαν σε κάθε δείγμα ήταν: ζωτικότητα, κινητικότητα και επί μέρους κινήσεις των σπερματοζωαρίων καθώς και μορφολογία και ακεραιότητα του DNA του πυρήνα τους. Η εκτίμηση της ζωτικότητας έγινε μετά από εφαρμογή διπλής χρώσης εοσίνης-νιγροσίνης. Η κινητικότητα και οι επί μέρους μορφές κίνησης των σπερματοζωαρίων εξετάζονταν με αναλυτή υποβοηθούμενο από ηλεκτρονικό υπολογιστή (CASA). Η χρωστική sperm-blue χρησιμοποιήθηκε για την εκτίμηση της μορφολογίας των σπερματοζωαρίων ενώ η δοκιμή της πορτοκαλόχρωμης ακριδίνης (ΑΟΤ-Acridine Orange Test) για τον έλεγχο της ακεραιότητας του DNA του πυρήνα τους. Η στατιστική ανάλυση πραγματοποιήθηκε με τη χρήση του λογισμικού Statistical Analysis Systems version 9.0 (SAS Institute Inc., 1996, Cary, N.C., U.S.A.). Ως επίπεδο σημαντικότητας ορίστηκε το p&lt;0,05. Διαπιστώθηκε ότι η ζωτικότητα μειώθηκε σημαντικά μετά από 3ημερη συντήρηση, ανεξάρτητα από το αραιωτικό που χρησιμοποιήθηκε αλλά υπήρξαν διαφορές μεταξύ των αραιωτικών την 1η και 3η ημέρα. Το ποσοστό των μη κινούμενων σπερματοζωαρίων αυξήθηκε στα αραιωτικά βραχείας και μέσης διάρκειας και ήταν σημαντικά μεγαλύτερο από το αντίστοιχο ποσοστό στο αραιωτικό μακράς διάρκειας την 3η ημέρα. Ακόμη, οι περισσότερες επιμέρους μορφές κίνησης των σπερματοζωαρίων εμφάνισαν υψηλότερες τιμές την 3η ημέρα στο μακράς διάρκειας αραιωτικό συγκριτικά με τα άλλα δύο. Σε ό,τι αφορά στη μορφολογία, το ποσοστό των φυσιολογικών σπερματοζωαρίων μειώθηκε την 3η ημέρα και στα τρία αραιωτικά. Τέλος, σημαντική μείωση ως προς το χρόνο παρατηρήθηκε στην ακεραιότητα της χρωματίνης του πυρήνα των σπερματοζωαρίων (DNA) μεταξύ 1ης και 3ης ημέρας και για τρία αραιωτικά. Το συμπέρασμα που προκύπτει, είναι ότι το μακράς διάρκειας αραιωτικό που χρησιμοποιήθηκε, υπερτερεί έναντι των βραχείας και μέσης διάρκειας στην in vitro διατήρηση των επιμέρους μορφών κίνησης και στη ζωτικότητα των σπερματοζωαρίων του κάπρου μετά από 3ήμερη συντήρηση του σπέρματος στους 16-18°C. Ο έλεγχος της in vivo γονιμότητας όμως, έδειξε ότι η ευεργετική αυτή επίδραση στα ποιοτικά χαρακτηριστικά του σπέρματος δεν συνάδει με τα αποτελέσματα που προέκυψαν από τη χρησιμοποίηση του σπέρματος για σπερματέγχυση συών σε συνθήκες εκτροφής. Συγκεκριμένα διαπιστώθηκε ότι μετά από εφαρμογή συμβατικής σπερματέγχυσης, εντός 2ημέρου από τη συλλογή και αραίωση του σπέρματος με μέσης διάρκειας αραιωτικά, τα ποσοστά των τοκετών και ο αριθμός των ζωντανών γεννηθέντων χοιριδίων ήταν μεγαλύτερα σε σύγκριση με εκείνα που επιτεύχθηκαν με τα βραχείας και μακράς διάρκειας αραιωτικά. Φαίνεται λοιπόν, πως κατά την in vivo γονιμοποίηση υπεισέρχονται παράγοντες οι οποίοι δεν σχετίζονται μόνο με τα ποιοτικά χαρακτηριστικά του σπέρματος που μπορούν να εκτιμηθούν στο εργαστήριο, γεγονός που χρήζει περαιτέρω διερεύνησης.
description: The application of Artificial Insemination as a fertilization method for sows contributed to the development of the global pig industry. Usual applied practice is the insemination with fresh diluted boar semen, preserved at 16-18°C for 2-3 days. The present study compared boar semen quality characteristics, when diluted with three types of extenders, which differed on preservation time (short-medium-long term). After collection and dilution, a part of the semen was used for AI in the farm (90 sows) while the remaining was transferred to the laboratory within 1 hour, under a controlled temperature (16-18°C). Diluted and preserved semen was assessed on the 1st and 3rd day after the collection. The parameters that were estimated for each sample of semen were: viability, motility and the individual kinetic parameters of spermatozoa, morphology and DNA fragmentation. Vitality was estimated after the application of double staining eosin-nigrosin. Motility and kinetic characteristics of spermatozoa were examined by computer assisted semen analyzer (CASA). Sperm-blue staining was used for the assessment of spermatozoa’s morphology, while the Acridine Orange Test (AOT) was used for the evaluation of sperm nuclear chromatin integrity. Collected data were analyzed with the use of a General Linear Mixed Model by the statistical software: Statistical Analysis Systems version 9.0 (SAS Institute Inc., 1996, Cary, N.C., U.S.A.). The level of significance was set at p&lt;0.05. It was found that viability was significantly reduced after 3 days of storage, independently of the extender. Differences were observed among diluents on both day 1 and day 3, with long term extenders be superior compared to the other two. The percentage of static spermatozoa increased for the short and medium-term mediums and was significantly higher on day 3 from the percentage that corresponded to the long-term extender. Additionally, most of the kinetic parameters of mobility showed higher values for the long-term medium compared to those that showed the short and medium-term diluents. In regard to morphology, the percentage of normal spermatozoa decreased on day 3 for all of the extenders. Finally, a significant reduction of the sperm nuclear chromatin integrity was observed between the first and the third day for all diluents. The conclusion coming out of the results is that the long-term extender that had been used outweighs the short and medium-term ones, in the in vitro preservation of the individual kinetic parameters and vitality of boar spermatozoa after 3 day of semen storage at 16-18°C. Nevertheless, the assessment of the in vivo fertility showed that the beneficial effect on sperm quality characteristics was not reflected in the in vivo results. Based on the farrowing rate and number of live piglets, it was found that the medium-term diluents are more effective than the short and long-term ones after the application of a conventional AI within 2 days from the collection and dilution of semen. It seems that the in vivo fertilization involves factors that are not only related to the quality parameters of sperm that can be assessed in the laboratory and that require further research.