title: Planare Zellpolarität in humanen respiratorischen Epithelzellen
Creators: name: Salamun, Helena
Publisher: name: University of Muenster, Institutional Repository MIAMI
Year: 2023
Subjects: subject: 610 Medicine and health

description: Die Zilienschlagrichtung auf der apikalen Membran humaner respiratorischer Epithelzellen (hRECs) ist durch planare Zellpolarität (PCP) über Zellgrenzen hinweg gewebeweit orientiert. PCP-Proteine sind asymmetrisch an der distalen und proximalen Membran lokalisiert und interagieren interzellulär. Die PCP-Protein-Crescents richten die ziliären Basalkörper über Verbindung mit dem Zytoskelett aus. Relevante PCP-Proteine wurden in hRECs von Gesundkontrollen aus Air-Liquid-Interface-Kulturen (ALI) mit indirekter Immunfluoreszenzfärbung in den Zellen lokalisiert: Die Crescent-Proteine VANGL1, FZD6, DVL2 und PK2 wurden an der subapikalen lateralen Membran lokalisiert, ohne, dass eine spezifische Membranseite bestimmbar ist. Die Proteine der Zilie und ihrer akzessorischen Strukturen Basalkörper, CETN2, CROCC, TUBG1, CEP164 und ODF2 wurde an der Zilienbasis lokalisiert. Eine gemeinsame Orientierung der Basalfüße (TUBG1) in Bezug auf die jeweiligen Transitionsfasern (CEP164) ist zu erkennen.
description: Abkürzungsverzeichnis ..... 1 1 Einleitung ..... 5 1.1 Aufbau und Funktion des humanen respiratorischen Epithels ..... 5 1.2 Zilien ..... 7 1.3 PCP-Schlüsselproteine ..... 9 1.3.1 Der PCP/Wnt-Signalweg initiiert die Planare Zellpolarität ..... 14 1.3.2 Komponenten der Crescents ..... 16 1.3.2.1 Vangl1 ..... 17 1.3.2.2 Fzd6 ..... 17 1.3.2.3 Dvl2 ..... 18 1.3.2.4 Pk2 ..... 19 1.4 Ausrichtung der Zilien über das Zytoskelett ..... 20 1.4.1 Basalkörper..... 23 1.4.2 Centrin2 ..... 24 1.4.3 CROCC..... 24 1.4.4 γ-Tubulin ..... 25 1.4.5 CEP164 ..... 25 1.4.6 ODF2 ..... 26 1.5 Ziel und Inhalt dieser Arbeit ..... 27 2 Material ..... 28 2.1 Chemikalien, Enzyme und Antikörper ..... 28 2.1.1 Chemikalien ..... 28 2.1.2 Primäre Antikörper ..... 30 2.1.3 Sekundäre Antikörper ..... 32 2.2 Verbrauchsmaterialien ..... 33 2.3 Geräte und Programme ..... 34 2.3.1 Geräte ..... 34 2.3.2 Verwendete Programme ..... 35 3 Methoden ..... 37 3.1 ALI-Zellkultur ..... 37 3.2 Herstellung von ALI-Kryoschnitten ..... 38 3.3 Immunfluoreszenz-Färbung auf ALI-Kryoschnitten ..... 39 3.4 Western Blot ..... 40 4 Ergebnisse ..... 43 4.1 Komponenten der Crescents ..... 43 4.1.1 Van-Gogh-Like1 ..... 43 4.1.2 Frizzled6 ..... 45 4.1.3 Dishevelled-Like2 ..... 47 4.1.4 Prickle2 ..... 51 4.2 Ausrichtung der Zilien ..... 53 4.2.1 Basalkörper ..... 53 4.2.2 Centrin2 ..... 55 4.2.3 CROCC ..... 58 4.2.4 γ-Tubulin ..... 61 4.2.5 CEP164 ..... 63 4.2.6 ODF2 ..... 66 5 Diskussion ..... 68 5.1 Diskussion der jeweiligen Ergebnisse ..... 68 5.1.1 VANGL1, FZD6 und PK2 lokalisieren asymmetrisch an der Zellmembran ..... 68 5.1.1.1 VANGL1 lokalisiert auch in Zellkernen ..... 69 5.1.2 DVL2 lokalisiert asymmetrisch an der Zellmembran ..... 70 5.1.3 Ziliogenesebezug der PCP ..... 73 5.1.4 Basalkörperassoziierte Komponenten ..... 74 5.1.4.1 CETN2 als Basalkörpermarker ..... 74 5.1.4.2 CROCC als Marker für die quergestreiften Wurzelfasern ..... 75 5.1.4.3 TUBG1 als Marker für die Basalfüße ..... 75 5.1.4.4 CEP164 als Marker für die Transitionsfasern ..... 76 5.1.4.5 CEP164 und TUBG1 ermöglichen eine Darstellung der Basalfußorientierung ..... 76 5.1.4.6 Humane respiratorische Epithelzellen polarisieren unter ALIBedingungen ..... 77 5.2 Methodische Verbesserungen ..... 77 5.3 Nutzen der etablierten Antikörper in der PCD-Forschung ..... 78 6 Literaturverzeichnis ..... 81 7 Abbildungsverzeichnis ..... 100 8 Tabellenverzeichnis ..... 103 9 Danksagung ..... 104 10 Lebenslauf ..... 105 11 Anhang ..... I