title: Die Inhibition des Transkriptionsfaktors Snail durch PEG und GN25 in Zelllinien des humanen duktalen Adenokarzinoms des Pankreas (SUIT-2/007 und SUIT-2/028)
Creators: name: Dengler, Janina
Publisher: name: Philipps-Universität Marburg
Year: 2018
Subjects: Snail
Medical sciences, Medicine
Medizin, Gesundheit
Pankreaskarzinom

description: Hintergrund: Die Gründe für die schlechte Prognose des duktalen Pankreaskarzinoms sind vor allem auch seine Resistenz gegen Chemotherapeutika und seine frühe Metastasierung. Hierbei spielt die epithelial-mesenchymale Transition (EMT) eine entscheidende Rolle, die mit dem Verlust von Zell-Zell-Verbindungen, der Zellpolarität und der Expression von E-Cadherin einhergeht. Ein wichtiger Mediator der EMT ist der Transkriptionsfaktor Snail, der über verschiedene Signalwege die Expression von E-Cadherin hemmt. Therapieansätze zur Hemmung von Snail sind derzeit jedoch noch kaum vorhanden. In dieser Arbeit untersuchten wir in vitro die Inhibiton von Snail durch PEG und GN25 in den Pankreaskarzinomzelllinien Suit2-007 und Suit2-028. Material und Methoden: Für die Untersuchungen wurden die Zelllinien Suit-2 bzw. ihre Subzelllinien Suit-2/007 und Suit-2/028. Suit-2/007 (Zelllinie mit hohem Metastasierungspotential) und Suit-2/028 (Zelllinie mit geringem Metastasierungspotential) verwendet. Kultiviert wurden die Zellen in RPMI/10%FCS-Medium. Nach Austestung der erforderlichen Zellzahl erfolgte die Beimpfung der Zelllinien mit den Inhibitoren PEG und GN25 über je 24h, 72h und 144h und mit verschiedenen Konzentrationen (PEG: 5% und 10%; GN:25 0,5 µM, 1µM, 2µM, 4µM, 5µM, 6µM, 8µM und 10µM). Nach den entsprechenden Zeiträumen erfolgte die Messung der vitalen Zellen mittels MTT-Assay im ELISA-Reader bei 570nm und 630nm. Ergebnisse: Die Inhibition der Zelllinien mit PEG zeigte eine dosisabhängige Wachstumshemmung beider Zelllinien, wobei eine signifikante Verminderung der Zellzahl erst bei einer Inkubationszeit von 144 Stunden festgestellt werden konnte (p&lt;0,001). Der Effekt auf die beiden unterschiedlichen Zelllinien war vergleichbar. Noch deutlicher war die Inhibition der Zellen durch die Beimpfung mit GN25. Hier zeigte sich jedoch bereits eine deutliche Wachstumshemmung nach 72 Stunden Inkubation, welche nach 144 Stunden noch immer zu beobachten war (p&lt;0,001). Zudem zeigte sich ein hoch signifikanter Abfall der Zellkonzentration ab einer Dosis von 5µM (p&lt; 0,001). Auch hier war die Wirkung auf beide Zelllinien vergleichbar. Schlussfolgerung: PEG und GN25 verursachen eine signifikante dosisabhängige Inhibition von Snail beim Pankreaskarzinom in vitro, wobei die Wachstumshemmung der Zellen durch GN25 deutlich schneller und in geringeren Dosen auftrat, als bei der Hemmung mit PEG. PEG und insbesondere GN25 stellen potentielle neue Ansätze für die Therapie des metastasierten Pankreaskarzinoms dar.
description: Background The major reasons for the fatal prognosis of the ductal pancreatic adenocarcinoma are its chemoresistance and its early metastasis. Thereby the epithelial-to-mesenchymal transition (EMT) plays an important role, which is characterized by the loss of cell-cell-junctions, cell polarity and the expression of E-Cadherin. A crucial mediator of EMT is the transcription factor Snail, which represses the expression of E-Cadherin by multiple pathways. Unfortunately, therapeutic strategies for inhibition of Snail are barely available. In this study we examined the in vitro inhibition of Snail by PEG and GN25 in the human pancreatic cancer cell lines SUIT-2/007 and SUIT-2/028. Materials and methods For our research we employed subcell lines of SUIT-2, SUIT-2/007 (cell line with high metastatic potential) and SUIT-2/028 (cell line with poor metastatic potential) which were cultured at RPMI/10% FBS. After assessing the required number of cells, the cell lines were incubated with the inhibitors PEG and GN25 over 24h, 72h and 144h with ascending concentrations (PEG: 5% ans 10%; GN25: 0,5µM, 1µM, 2µM, 4µM, 5µM, 6µM, 8µM, 10µM). After the appropriate period of incubation cell vitality has been measured via MTT assay at the ELISA reader at 570nm and 630nm. Results The inhibition of the cell lines with PEG showed a dose dependent growth repression of both cell lines, whereupon significant reduction of viable cells could be seen only after 144 hours of incubation (p&lt;0,001). This effect was comparable between the two different cell lines. Even more obvious was the inhibition of the cell lines seen by treatment with GN25. There we could observe a significant repression of growth after 72 hours of incubation, which was still present after 144 hours (p&lt;0,001). Moreover, there was a highly significant decrease of viable cells starting from 5µM (p&lt;0,05). This effect was comparable between the two cell lines, too. Conclusion PEG and GN25 showed a significant dose dependent inhibition of Snail at pancreatic cancer cells in vitro, whereupon GN25 induced repression of cell growth occured faster and in lower doses compared to the inhibition by PEG. PEG and particularly GN25 represent potential new approaches for the therapy of metastatic pancreatic cancer.