Εκτίμηση των νεότερων μοριακών τεχνικών στην εργαστηριακή διάγνωση της βρουκέλλωσης
Creators: name: Μήτκα, Στέλλα Α.
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2005
Subjects: Βρουκέλλα
Εμβόλιο Rev. 1
Ζωονόσος
Brucella
PCR-Brucella
Rev. 1 strain
Zoonoses

description: Σκοπός της παρούσας μελέτης είναι η εφαρμογή των νεότερων μοριακών μεθόδων παράλληλα με τις κλασικές για τη διάγνωση της βρουκέλλωσης σε όλες τις μορφές της νόσου, η αξιολόγηση των μεθόδων αυτών στην παρακολούθηση της πορείας της νόσου, στον έλεγχο της αποτελεσματικότητας της θεραπείας και στη διάκριση των φυσικών στελεχών βρουκέλλας από το στέλεχος του εμβολίου Rev.1. Οι τεχνικές που εφαρμόστηκαν είναι: PCR, PCR-RFLP, DNA sequencing, αιματοκαλλιέργεια και οι ορολογικές δοκιμασίες Wright, Coombs και Σύνδεση Συμπληρώματος. Εξετάστηκαν 3902 κλινικά δείγματα (ολικό αίμα, ορός, λευκά αιμοσφαίρια, ΕΝΥ και υλικά βιοψιών) από 202 ασθενείς με κλινικά συμπτώματα της νόσου που νοσηλεύτηκαν στο Νοσοκομείο Ειδικών Παθήσεων Θεσσαλονίκης κατά τα έτη 1998-2002. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η PCR είναι πιο ευαίσθητη από την αιματοκαλλιέργεια και από τις κλασικές ορολογικές μεθόδους για τη διάγνωση όλων των μορφών βρουκέλλωσης. Η αναλυτική ευαισθησία των τεσσάρων PCR ήταν 10-25 fg DNΑ βρουκέλλας, η αναλυτική ειδικότητα 100%. Η PCR είναι θετική νωρίς με την έναρξη των συμπτωμάτων της νόσου σε όλες τις περιπτώσεις βρουκέλλωσης ενώ οι αιματοκαλλιέργειες και οι ορολογικές δοκιμασίες θετικοποιούνται αργότερα. Η PCR είναι καλός προγνωστικός δείκτης της αποτελεσματικότητας της θεραπείας. Παραμένει θετική στις χρόνιες μορφές της νόσου και σε όλες τις περιπτώσεις υποτροπών, ενώ οι αιματοκαλλιέργειες και οι ορολογικές μέθοδοι είναι αρνητικές. Η PCR είναι ευαίσθητη σε υλικά βιοψιών συνεισφέροντας στη διάγνωση της εντοπισμένης νόσου (νευροβρουκέλλωση, ενδοκαρδίτιδα) ενώ οι κλασικές μέθοδοι αδυνατούν. Στη μελέτη αυτή επιβεβαιώθηκε για πρώτη φορά η νόσηση ανθρώπων από το στέλεχος Rev.1 στην Ελλάδα
description: The objective of this study was to develop PCR-based techniques for the rapid diagnosis of human brucellosis in all acute, chronic, relapsed and focal forms, to investigate the contribution of the molecular techniques in human brucellosis diagnosis in comparison with conventional diagnostic methods and to differentiate the Rev.1 vaccine strain from the natural Brucella strains in humans with PCR technique and digestion with restriction endonuclease. The methods that have been used in this study were four PCR-assays, the PCR-RFLP method, the DNA sequencing, the blood culture and serological methods. For these purposes, 3902 clinical specimens (whole blood, serum, buffy coat, CSF, and tissue biopsy samples) were collected from 202 patients with clinical findings of the disease who were admitted to Hospital of Infectious Disease of Thessaloniki between 1998-2002. We conclude that PCR has been shown to be a more sensitive technique than blood cultures and more specific than conventional serological tests. The analytical sensitivity of the four PCRs has been shown to be 10-25 fg of Brucella DNA. The analytical specificity of the four PCRs has been shown to be 100%. The PCRs become positive earlier than the blood culture and the serological methods in the acute disease. The PCR assay is a very good predictive marker for the course of the disease and the treatment follow-up. The PCRs remain positive during chronic brucelosis and in all cases of relapses whereas the blood cultures and serological methods often become negative. The PCRs are sensitive in tissue biopsy samples, contributing to the diagnosis of focal disease. The results of this study confirmed, for the first time, that the strain Rev.1 causes human disease in Greece