Μελέτη του αντιγονικού υποδοχέα BCR στη χρόνια λεμφοκυτταρική λευχαιμία
Creators: name: Δαγκλής, Αντώνης Α.
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2010
Subjects: Β κυτταρικές υποδοχέας
Μονοκλωνική Β λεμφοκυττάρωση
Χρόνια λεμφοκυτταρικά λευχαιμία
Διαγονιδιακά ζωϊκά μοντέλα στη ΧΛΛ
B cell receptor (BCR)
Monoclanal B lynphocytosis (MBL)
Transgenic mouse model
Chronic lymphocytic leukemia (CLL)

description: Η παρούσα διδακτορική εργασία αναζητεί απαντήσεις μέσω της ανοσογενετικής ανάλυσης της ΧΛΛ με βασικά θέματα: (i) συγκριτική ανάλυση του ρεπερτορίου των ανοσοσφαιρινών μεταξύ περιπτώσεων M/MD υποτύπου και G υποτύπου της νόσου, (ii) μελέτη ρεπερτορίου στη μονοκλωνική Β λεμφοκυττάρωση (ΜΒΛ), που πιθανολογείται ως πρόδρομη οντότητα της ΧΛΛ και (iii) μοριακή διερεύνηση ζωικών μοντέλων της ΧΛΛ. i) Συνήθως οι ανοσοσφαιρίνες των ΧΛΛ λεμφοκυττάρων φέρουν ισότυπο M/MD. Ωστόσο, σ’ ένα μικρό αριθμό περιπτώσεων οι ανοσοσφαιρίνες φέρουν ισότυπο G. Ακόμη δεν έχει καθοριστεί η προέλευση και η σχέση του σπάνιου ισοτύπου G με το πιο συχνό υποσύνολο M/MD, καθώς οι εργασίες που έχουν πραγματοποιηθεί μέχρι τώρα περιλάμβαναν μικρό αριθμό, δυσχεραίνοντας την εξαγωγή σαφών συμπερασμάτων. Στην παρούσα εργασία συμπεριλήφθηκαν 665 ασθενείς με ΧΛΛ, από τους οποίους οι 584 εξέφραζαν ανοσοσφαιρίνες ισότυπου M/MD ενώ οι 81 ανοσοσφαιρίνες ισότυπου G. Η συγκριτική ανάλυση του ρεπερτορίου των γονιδίων και των μοριακών χαρακτηριστικών των ανοσοσφαιρινών αποκάλυψε σημαντικές διαφορές μεταξύ των δύο υποομάδων, οι οποίες υποδηλώνουν ότι οι ασθενείς με ΧΛΛ που φέρουν ανοσοσφαιρίνες ισότυπου G αποτελούν ιδιαίτερη υποομάδα, με διακριτές κλινικές και βιολογικές ιδιότητες. ii) Η παρουσία ΜΒΛ πληθυσμών σε υγιή άτομα είναι γνωστή εδώ και αρκετά χρόνια. Αυτοί οι μονοκλωνικοί πληθυσμοί συνήθως έχουν παρόμοιο ανοσοφαινότυπο με τα κύτταρα της ΧΛΛ. Ωστόσο, παρά την ανοσοφαινοτυπική ομοιότητα δεν έχει αποσαφηνιστεί αν η ΜΒΛ αποτελεί προ-ΧΛΛ στάδιο ή απλώς είναι το αποτέλεσμα της γήρανσης του ανοσοποιητικού συστήματος. Στην παρούσα μελέτη εξετάστηκαν με κυτταρομετρία ροής 1725 υγιή άτομα για την ανίχνευση πληθυσμών ΜΒΛ. Βρέθηκαν συνολικά 89 περιπτώσεις ΜΒΛ τύπου ΧΛΛ, από τις οποίες οι περισσότερες έφεραν μικρό αριθμό Β λεμφοκυττάρων και κλωνικών Β λεμφοκυττάρων. Στη συνέχεια, αναλύθηκε το ρεπερτόριο των ανοσοσφαιρινών στη ΜΒΛ και έγινε συγκριτική ανάλυση με το αντίστοιχο ρεπερτόριο στη ΧΛΛ. Η σχετική ανάλυση έδειξε ότι στις περισσότερες περιπτώσεις οι ανοσοσφαιρίνες των ΜΒΛ πληθυσμών τύπου ΧΛΛ διαφέρουν πολύ από τις ανοσοσφαιρίνες της ΧΛΛ. Με βάση αυτά τ’ αποτελέσματα προτείνεται ότι ένα πολύ μικρό ποσοστό ΜΒΛ περιπτώσεων, πιθανότατα λόγω της δομής του BCR υποδοχέα και/ή επιπρόσθετων γενετικών βλαβών, μπορεί να μετασχηματιστούν σε ΧΛΛ. iii) Η ανάπτυξη ζωικών μοντέλων της ΧΛΛ είναι σημαντική για την κατανόηση των μηχανισμών της λευχαιμογένεσης. Πρόσφατα δημιουργήθηκε το διαγονιδικακό μοντέλο ποντικού TCL1tg, στο οποίο το πρωτο-ογκογονίδιο TCL1 του ανθρώπου υπερεκφράζεται στα Β λεμφοκύτταρα. Ανοσοφαινοτυπικές, μοριακές και κυτταρογενετικές μελέτες του συγκεκριμένου διαγονιδιακού μοντέλου έδειξαν ότι τα ποντίκια TCL1tg αναπτύσσουν νεοπλασία παρόμοια με την επιθετική μορφή της ΧΛΛ. Στην παρούσα εργασία, αναπτύχθηκε ένα καινούργιο διαγονιδιακό μοντέλο, το οποίο προέκυψε από τη διασταύρωση ποντικιών με γονότυπο TCL1tg και HS1-/-. Η ανοσοφαινοτυπική ανάλυση έδειξε ότι και το συγκεκριμένο διαγονιδιακό μοντέλο αναπτύσσει νεοπλασία παρόμοια με την επιθετική μορφή της ΧΛΛ. Συνολικά μελετήθηκαν 50 ποντίκια με γονότυπο TCL1tg και 21 ποντίκια με γονότυπο HS1-/-/TCL1tg με σκοπό τη συγκριτική ανάλυση των μοριακών χαρακτηριστικών των ανοσοσφαιρινών. Φάνηκε ότι οι ανοσοσφαιρίνες που εκφράζονται στα δύο διαγονιδιακά μοντέλα έχουν παρόμοια μοριακά χαρακτηριστικά. Ωστόσο, η νεοπλασία που αναπτύσσεται σε ποντίκια με γονότυπο HS1-/-/TCL1tg εξελίσσεται ταχύτερα και o λευχαιμικός πληθυσμός διηθεί το μυελό των οστών, καθιστώντας αυτό το μοντέλο χρήσιμο για τη μελέτη των μηχανισμών που εμπλέκονται στην ανάπτυξη της ΧΛΛ
description: In the present study, we sought answers through the immunogenetic analysis of CLL and related entities. In particular, the study can be subdivided in three parts: (i) comparison of the IG gene repertoire in CLL cases of the M/MD vs the G subtype; (ii) IG gene repertoire analysis of monoclonal B lymphocytosis (MBL), which is considered as a pre-leukemic state of CLL; and (iii) molecular investigation of CLL animal models. i) CLL cells express immunoglobulins of the M/MD and only rarely of the G isotype. The origin and ontogenetic relationship of the rare G isotype with the common M/MD isotype is not clear. In the present study we compared the IG gene repertoire of 584 cases carrying immunoglobulins of the M/MD isotype vs. 81 cases who carried immunoglobulins of the G isotype. This comparison revealed significant differences, indicating that CLL clones of the G isotype are a distinct subgroup with unique clinical and biological differences. Furthermore, the high frequency of stereotyped receptors and the restricted repertoire in this subgroup probably indicates that intense antigenic stimulation is responsible for IG class switch. ii) The presence of small MBL populations in healthy individuals was known for many decades. These monoclonal populations usually have CLL-like immunophenotype. The immunophenotypic similarity with CLL cells attracted the attention of investigators as it is not yet known if MBL clones are a pre-leukemic state or they simply represent an aspect of immune-senescence. We examined blood samples from 1725 healthy individuals in order to study the presence of MBL. Furthermore, we compared the gene repertoire and the molecular characteristics of the IGHV-D-J rearrangements in MBL vs. CLL. This comparison revealed that the molecular characteristics of the IGs in MBL differ significantly from those detected in CLL. Only a small fraction of MBL cases, due to e.g. IG gene features and/or additional cytogenetic abnormalities, can be transformed into CLL. iii) The study of animal models that develop blood disorders similar to CLL is important for the elucidation of early events taking place during CLL transformation. Recently, a mouse model was constructed in which the human TCL1 oncogene was overexpresed in B cells. Immunophenotypic, molecular and cytogenetic studies have shown that the TCL1tg mouse model can develop a blood disorder which resembles the aggressive form of CLL. We crossed the TCL1tg and the HS1-/- mouse model in order to define the impact of the HS1 protein deactivation in the TCL1tg mouse model. Immunophentotypic studies have shown that also in the HS1-/-/TCL1tg mouse model there is an expansion of monoclonal CLL-like B lymphocytes. In the present thesis, we studied 50 TCL1tg and 21 HS1-/-/TCL1tg mice in order to analyze and compare the IGHV-D-J rearrangements. The comparison revealed that the immunoglobulins in these mouse models have similar molecular characteristics. However, mice of the HS1-/-/TCL1tg genotype develop leukemia earlier compared to mice of the TCL1tg genotype; furthermore, the leukemic clone can penetrate faster in the bone marrow. These findings indicate that HS1-/-/TCL1tg transgenic mice may serve as model for the study of CLL