Πολυμορφισμοί γονιδίων κυτταροκινών σε έλληνες ασθενείς με υποτροπιάζουσες άφθες
Creators: name: Κουνούπης, Βασίλειος Α.
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2018
Subjects: Υποτροπιάζουσες άφθες
Κυτταροκίνες
Πολυμορφισμοί γονιδίων
Βλεννογόνος στόματος
Recurrent aphthae
Cytokines
Genes polymorphisms
Oral mucosa

description: Σκοπός της μελέτης αποτέλεσε η διερεύνηση πολυμορφισμών γονιδίων κυτταροκινών σε δείγμα 60 Ελλήνων ασθενών με εκδήλωση υποτροπιαζουσών αφθών στο βλεννογόνο του στόματος και η συσχέτιση των πολυμορφισμών με την εκδήλωση της νόσου. Οι 40 ασθενείς εκδήλωσαν μικρές υποτροπιάζουσες άφθες, οι 10 μεγάλες και οι υπόλοιποι 10 ερπητικού τύπου. Την ομάδα ελέγχου αποτέλεσαν 40 άτομα Ελληνικής καταγωγής και εθνικότητας, αντίστοιχης ηλικίας και φύλου. Συγκεκριμένα, στο δείγμα μελετήθηκαν πολυμορφισμοί γονιδίων των προφλεγμονωδών κυτταροκινών IL-1α, IL-1β, IL-12B, TNF-α, IFN-γ, του υποδοχέα IL-1R, της ενεργής υπομονάδας του υποδοχέα IL-4Rα, του ανταγωνιστή του υποδοχέα IL-1RA, των αντιφλεγμονωδών κυτταροκινών IL-4, IL-10, TGF-β, καθώς και των κυτταροκινών με διπλή δράση IL-2 και IL-6. Από τη συχνότητα κατανομής των γονοτύπων μεταξύ των υγιών μαρτύρων και των ασθενών διερευνήθηκε η επίδρασή τους στη ρύθμιση του κλινικού αποτελέσματος, καθώς και η μεγαλύτερη πιθανότητα συμμετοχής τους στην εκδήλωση κάποιας μορφής της νόσου. Απώτερος σκοπός της μελέτης αποτέλεσε η εύρεση αξιόπιστων ανοσογενετικών δεικτών, ώστε να προβλεφθούν οι κίνδυνοι επανεμφάνισης επεισοδίων της νόσου. Οι ασθενείς και οι υγιείς μάρτυρες ενημερώθηκαν με τις λεπτομέρειες της έρευνας, ενώ η ερευνητική μελέτη εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας της Οδοντιατρικής Σχολής του Α.Π.Θ. Η καταγραφή και συλλογή των στοιχείων διενεργήθηκαν στο Εργαστήριο Στοματολογίας του Οδοντιατρικού Τμήματος του Α.Π.Θ. Οι αιμοληψίες των ασθενών και τα εργαστηριακά μέσα, τα οποία διατέθηκαν για την τέλεση των μοριακών τεχνικών, διενεργήθηκαν στο χώρο της Α' Παθολογικής Κλινικής του νοσοκομείου Α.Χ.Ε.Π.Α. Στους επιλεχθέντες ασθενείς λήφθηκε 5ml ολικού αίματος, στη συνέχεια απομονώθηκε το DNA και μελετήθηκαν 22 πολυμορφισμοί γονιδίων. Στους επιλεχθέντες ασθενείς και μάρτυρες προσδιορίστηκαν οι πολυμορφισμοί με τη μέθοδο της αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης με ειδικές ολιγονουκλεοτιδικές αφετηρίες (PCR-SSP). Ως κριτήρια αποκλεισμού ορίστηκαν περιπτώσεις ασθενών με αυτοάνοσα νοσήματα (ομαλός λειχήνας, πέμφιγα, καλόηθες πεμφιγοειδές των βλεννογόνων, πομφολυγώδες πεμφιγοειδές, ερυθηματώδης λύκος, σύνδρομο Sjögren), νόσοι του γαστρεντερικού συστήματος (νόσος του Crohn, ιδιοπαθής φλεγμονώδης νόσος του εντέρου), κοκκιωματώσεις (σαρκοείδωση, στοματοπροσωπική κοκκιωμάτωση), περιπτώσεις με αναιμία (σιδηροπενική αναιμία, αναιμία από έλλειψη φολικού οξέος ή B12), αυτοφλεγμονώδη νοσήματα (σύνδρομο PFAPA, HIDS και TRAPS), πολύμορφο ερύθημα, σύνδρομο Stevens-Johnson, σακχαρώδης διαβήτης, σύνδρομο Αδαμαντιάδη-Behçet, κυκλική ουδετεροπενία, σύνδρομο Sweet, σύνδρομο Reiter και HIV-λοίμωξη. Επίσης, εξαιρέθηκαν από τη μελέτη ασθενείς θετικοί στο ελικοβακτηρίδιο του πυλωρού του στομάχου (H. pylori) μετά από ανοσολογικό έλεγχο (τίτλος αντισωμάτων IgG, IgA), καθώς και από τις διαγνωστικές δοκιμασίες Helicobacter test INFAI με τη δραστική ουσία 13C-ουρία και HpSA Test (Helicobacter Pylori Stool Antigen) με την ανίχνευση του αντιγόνου του ελικοβακτηριδίου στα κόπρανα. Στην κατανομή των γονότυπων καταγράφηκαν στατιστικώς σημαντικές διαφορές για τις κυτταροκίνες IL-1α-889, IL-1β-511, +3954, IL-2+166, -330, IL-6 -174, IL-10-592, -819, IL-12-1188, TNF-α -238 και TGF-β1κωδικόνιο10, υποδεικνύοντας συμμετοχή του γενετικού παράγοντα στην εκδήλωση της νόσου.
description: The aim of this thesis was the investigation of gene polymorphisms for cytokines, receptors and receptor antagonist (IL-1α, IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12B, IFN-γ, TGF-β1, TNF-α IL-1R, IL-4Rα, IL-1RA) in a sample of 60 Greek patients who were examined in the department of Oral Medicine/Pathology of Aristotle University. The 40 patients affected by minor aphthous ulcers, 10 patients did demonstrate major aphthous ulcers and the rest herpetiform ulcers. Forty age and sex matched control subjects were included in this study. Exclusion criteria included cases with autoimmune diseases (lichen planus, pemphigus, mucous membrane pemphigoid, lupus erythematosus, Sjögren syndrome), gastrointestinal disorders (Crohn’s disease, idiopathic inflammatory bowel disease), granulomatosis (sarcoidosis, orofacial granulomatosis), cases with anemia (iron-deficiency anemia, B12 and folic acid deficiencies), Adamantiades-Behçet's syndrome, autoinflammatory disorders (PFAPA syndrome, HIDS and TRAPS syndromes), erythema multiform, Stevens-Johnson syndrome, diabetes mellitus, cyclic neutropenia, Sweet syndrome, Reiter syndrome and HIV-infection. Also, Helicobacter pylori-infected patients were excluded from our study. The diagnosis of HP infection was based on the detection of speciﬁc immunoglobulin G (IgG), and immunoglubulin A (IgA) antibodies in the serum of the patients. Another reliable non-invasive diagnostic tests for H. pylori detection were INFAI 13C-Urea Breath Test and Helicobacter Pylori Stool detection. The department of Stomatology was in collaboration with A' Pathological Clinic of the hospital A.H.E.P.A in which, apart from blood samples collection, molecular methods were carried out such as DNA extraction and genotyping with sequence-specific primers (SSP)-based polymerase chain reaction (PCR). The frequency of IL-1α C/C genotype at position -889 was significantly different between herpetiform aphtous ulcerations and controls. A significant increased in the IL-1β-511 homozygous genotype (CC) was detected in minor, major and herpetiform aphtous ulcerations. With regard to IL-1β gene polymorphism at position +3954, a complete distribution of (C/C) genotype was detected in patients with herpetiform aphthous ulcerations. The genotype frequencies of the -174G&gt;C polymorphism showed statistically significant differences between all patients and controls. In patients with minor aphthous ulcerations, we recorded significant differences in allele frequencies and genotypes distribution IL-10 (C/A) at position -592 between patients and controls and significant difference in genotypes distribution IL-10 (C/T) at position -819 as compared to controls. A significant difference was observed in the distribution of genotypes of the polymorphism IL-12B A/C at the position -1188 between patients with major aphthous ulcerations and controls. Moreover, the distribution of TNF-α (G/A) genotypes at position -238 was statistically different between controls and patients with minor, major, herpetiform aphtous ulcerations. According to our investigation, in patients with minor and herpetiform aphthous ulcerations was demonstrated that heterozygous genotype CT at codon 10 is associated with increased risk of recurrent aphthous stomatitis (RAS) manifestation. The results demonstrated the genetic predisposition and the presence of cytokine gene polymorphisms in RAS manifestation. Our study supports the postulation that cytokine gene polymorphisms regulate the clinical course of the disease.