Χαρακτηρισμός φιλμ χιτοζάνης ενισχυμένο με πεπτίδια RGD και μεσεγχυματικά βλαστοκύτταρα λίπους ως επίθεμα ανάπλασης δέρματος
Creators: name: Καμάτσου, Αλεξάνδρα Πίνδαρου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2023
Subjects: Χιτοζάνη
Μεσεγχυματικά βλαστοκύτταρα λίπους
Πεπτίδιο RGD
Chitosan
Adipose derived stem cells
Peptide RGD

description: Η επούλωση των τραυμάτων είναι μία διαδικασία, η οποία ρυθμίζεται από διαφορετικούς παράγοντες, μεταξύ των οποίων κύτταρα, αυξητικοί παράγοντες, εξωκυττάρια ουσία και αποτελείται από διαδοχικά στάδια. Η ανάπτυξη πληθώρας επιθεμάτων, με ξεχωριστά χαρακτηριστικά αποτελεί αντικείμενο απασχόλησης της επιστημονικής έρευνας τα τελευταία χρόνια και βασίζεται στους μηχανισμούς της επούλωσης, με σκοπό την αντιμετώπιση χρόνιων πληγών. Σκοπός της παρούσας διπλωματικής εργασίας είναι ο χαρακτηρισμός βιοδραστικού επιθέματος, το οποίο αποτελείται χιτοζάνη (CS) και SBMA, ο συνδυασμός των οποίων προσδίδει αυξημένη αντιμικροβιακή δραστικότητα. Το βιοϋλικό ενισχύθηκε με τριπεπτίδια (Arg-Gly-Asp) (RGD) και μεσεγχυματικά βαλτοκύτταρα από τον λιπώδη ιστό (ASCs). Κατά την πειραματική διαδικασία, ελέγχθηκε η βιοσυμβατότητα του βιοϋλικού CS-SBMA μέσω δοκιμασίας ΜΤΤ. Έπειτα, εξετάστηκε η επίδραση διαφορετικών συγκεντρώσεων πεπτιδίου RGD (10, 20, 50μg/ml) στην κυτταρική προσκόλληση των ASCs στο υλικό μέσω crystal violet adhesion assay, στην κυτταρική βιωσιμότητα τους, μέσω ΜΤΤ assay και στην επαγωγή γονιδίων που σχετίζονται με την αγγειογένεση με τη μέθοδο qPCR. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η ικανότητα κυτταρικής προσκόλλησης σχετίζεται με την επίστρωση πεπτιδίου RGD με μία σχέση δόσης-απόκρισης. Αντίθετα, η κυτταρική βιωσιμότητα αποδείχθηκε ότι είναι αντιστρόφως ανάλογη με τη συγκέντρωση του πεπτιδίου RGD. Για αυτό το λόγο, ως βέλτιστη συγκέντρωση επιλέχθηκε η μικρότερη συγκέντρωση του πεπτιδίου (10μg/ml). Επιπλέον, η επαγωγή των γονιδίων που σχετίζονται με την έκφραση των παραγόντων VEGF, Ang-1 εμφανίζεται μεγαλύτερη, παρουσία του πεπτιδίου RGD. Συνεπώς, το επίθεμα CS-SBMA όταν ενισχύεται με το πεπτίδιο RGD παρουσιάζει βελτιωμένες ιδιότητες για την επούλωση δερματικού τραύματος. Οι περιορισμοί θα μπορούσαν να μειωθούν χάρη στην εναλλακτική μέθοδο χορήγησης του πεπτιδίου στο βιοϋλικό.
description: Wound healing is a biologic process involving different factors, such as cells, growth factors, extracellular matrix and based on successive stages. The development of a wide array of bioactive patches, according to wound healing mechanisms has been the centre stage in many research projects worldwide, aiming to skin regeneration of chronic wounds. The present study will focus on the characterization of a bioactive patch, consisted of chitosan (CS) and SBMA, which improve the antimicrobial properties and speed up wound healing. The biomaterial was enhanced by tripeptides (Arg-Gly-Asp) (RGD) and adipose derived mesenchymal stem cells (ASCs). Biocompatibility of CS-SBMA was examined by MTT assay. The optimization of the conditions for a better bioactivity of the biomaterial included the examination of the response of ASCs to different concentrations of RGD peptide (10, 20, 50 μg/ml), considering the cell adhesion by crystal violet cell adhesion assay, the cytotoxicity and proliferation by MTT assay and the expression of genes related to angiogenesis of ASCs by qPCR. As a result, the induction of cell adhesion, RGD present in a dose-response was identified. Cell viability and proliferation, however, were inversely proportional to the RGD concentration. Therefore, the minimum RGD concentration (10μg/ml) supposed to be the best condition of the final bioactive patch. The expression of genes related to angiogenetic factors VEGF, Ang-1 tends to be induced by the presence of RGD. In conclusion, CS-SBMA patch enhanced by RGD exhibits improved bioactive properties which make it suitable for the wound healing process. Further accomplishments could overcome the difficulties, by examining alternative methods of incorporation of RGD peptide.