Συγκριτική πρωτεομική ανάλυση του ορού του αίματος σε σκύλους με ιδιοπαθή και με επίκτητη επιληψία
Creators: name: Μπάκα, Ουρανία Δ.
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2023
Subjects: Ιδιοπαθής επιληψία
Πρωτεομική ανάλυση
Απτοσφαιρίνη
Ειδική ανοσοενζυμική μέθοδος ELISA
Idiopathic epilepsy
Proteomic analysis
Haptoglobin
Specific ELISA assay

description: Οι επιληπτικές κρίσεις αποτελούν τη συχνότερη νευρολογική διαταραχή στα ζώα συντροφιάς με την ιδιοπαθή επιληψία να αποτελεί την επικρατέστερη διάγνωση στους νεαρούς σκύλους καθαρόαιμων και μη φυλών. Η μελέτη έγινε σε τέσσερις ομάδες σκύλων. Η ομάδα Α περιλάμβανε κλινικά υγιείς σκύλους και οι υπόλοιπες τρεις ομάδες περιλάμβαναν σκύλους με επιληπτικές κρίσεις. Πιο συγκεκριμένα στην ομάδα Β περιλήφθηκαν σκύλοι με τη διάγνωση της ιδιοπαθούς επιληψίας που λάμβαναν αντιεπιληπτικά φάρμακα (ΑΕΦ) κατά την προσκόμιση τους, στην ομάδα Γ σκύλοι με διάγνωση ιδιοπαθούς επιληψίας που δεν λάμβαναν ΑΕΦ κατά την προσκόμιση τους και στην ομάδα Δ σκύλοι με επίκτητη επιληψία. Η συγκριτική πρωτεωμική ανάλυση των δειγμάτων έγινε με την μέθοδο σχετικής ποσοτικοποίησης Tandem Mass Tag χρησιμοποιώντας υγρή χρωματογραφία νάνο-ροής υψηλής αποδόσεως συζευγμένη σε σειρά με φασματόμετρο μάζας Q Exactive Mass με δυνατότητα διαδοχικής φασματομετρίας μάζας (nLC-ESI-MS/MS). Η ανίχνευση και η σχετική ποσοτικοποίηση των πρωτεϊνών έγινε με τη χρήση του προγράμματος Proteome Discoverer και η ανάλυση των δεδομένων έγινε με τη γλώσσα προγραμματισμού R. Η ανάλυση των γονιδίων έγινε χρησιμοποιώντας τη βάση δεδομένων για το Canis lupus familiaris. Τα δεδομένα είναι διαθέσιμα μέσω του ProteomeXchange με κωδικό εύρεσης PXD041129. Σκοπός της μελέτης ήταν η συγκριτική πρωτεωμική ανάλυση του ορού του αίματος στους σκύλους των τεσσάρων ομάδων. Μετά το τέλος της πρωτεωμικής ανάλυσης, απομονώθηκαν 81 πρωτεΐνες με μεταβολές στην αφθονία τους (ρύθμιση προς τα πάνω/κάτω), από τις οποίες 25 ήταν κύριες πρωτεΐνες (p&lt;0.05). Η κλαστερίνη ή απολιποπρωτεΐνη J (CLU) και η απολιποπρωτεΐνη Α1 (APOA1) ήταν ρυθμισμένες προς τα πάνω στις τρεις ομάδες των σκύλων με επιληπτικές κρίσεις (ομάδες Β, Γ, Δ) σε σχέση με τους κλινικά υγιείς σκύλους (ομάδα Α). Η αμινική οξειδάση (AOC3) παρουσίαζε ρύθμιση προς τα πάνω στην ομάδα Β συγκριτικά με τις ομάδες Γ και Δ και ρύθμιση προς τα κάτω στην ομάδα Β συγκριτικά με την ομάδα Α. Η αδιπονεκτίνη (ADIPOQ) παρουσίαζε ρύθμιση προς τα πάνω στην ομάδα Γ συγκριτικά με την ομάδα Α. Η αδιπονεκτίνη (ADIPOQ) και η φιμπρονεκτίνη (FN1) παρουσιάζουν ρύθμιση προς τα πάνω στην ομάδα Γ συγκριτικά με τις ομάδες Β και Δ. Η δοκιμή της υπεροξειδάσης χρησιμοποιήθηκε προκειμένου να εντοπίσει τις μεταβολές της συγκέντρωσης της απτοσφαιρίνης (HP) στις τέσσερις ομάδες, και ως μέσο επικύρωσης των αποτελεσμάτων της πρωτεωμικής ανάλυσης, με τα αποτελέσματα της να συσχετίζονται ικανοποιητικά με τα αντίστοιχα της πρωτεωμικής ανάλυσης (r=0.8796). Η πρωτεωμική ανάλυση στον ορό του αίματος των επιληπτικών σκύλων συμβάλλει στην ανίχνευση πιθανών προγνωστικών βιοδεικτών της επιληψίας (CLU), πρωτεϊνών που συμμετέχουν στην αποκατάσταση του νευρικού ιστού μετά από βλάβη του (APOA1), καθώς και παραγόντων που εμπλέκονται στην επιληπτογένεση (AOC3). Τα ΑΕΦ μεταβάλλουν τις πρωτεΐνες του εξωκυττάριου χώρου (FN1). Η αφθονία της αδιπονεκτίνης (ADIPOQ) επηρεάζεται αρνητικά με την πάροδο του χρόνου στους σκύλους με επιληψία.
description: Idiopathic epilepsy is the most common neurological disorder affecting companion animals. This study included four groups of dogs (group A: healthy controls, group B: idiopathic epilepsy receiving antiepileptic medication (AEM) on admission, group C: idiopathic epilepsy without AEM administration, group D: structural epilepsy). Comparative quantitative proteomic analysis of serum samples among the groups was the main target of the study. Samples were analyzed by a quantitative Tandem-Mass-Tags approach on the Q-Exactive-Plus Hybrid Quadrupole-Orbitrap mass-spectrometer. Identification and relative quantification were performed in Proteome Discoverer. Data were analyzed using R. Gene ontology terms were analyzed based on Canis lupus familiaris database. Data are available via ProteomeXchange with identifier PXD041129. Eighty-one proteins with different relative abundance were identified in the four groups and 25 were master proteins (p&lt;0.05). Clusterin (CLU), and apolipoprotein A1 (APOA1) had higher abundance in the three groups of dogs (groups B, C, D) compared to controls. Amine oxidase (AOC3) was higher in abundance in group B compared to groups C and D, and lower in group A. Adiponectin (ADIPOQ) had higher abundance in groups C compared to group A. ADIPOQ and fibronectin (FN1) had higher abundance in group B compared to group C and D. Peroxidase activity assay was used to quantify HP abundance change, validating and correlating with proteomic analysis (r=0.8796). The proteomic analysis of serum samples from epileptic dogs indicated potential markers of epilepsy (CLU), proteins that may contribute to nerve tissue regeneration (APOA1), and contributing factors to epileptogenesis (AOC3). AEM could alter extracellular matrix proteins (FN1). Illness (epilepsy) severity could influence ADIPOQ abundance.
description: Γνωστικό αντικείμενο της έρευνας: Η σύγκριση των αποτελεσμάτων της μελέτης του συνόλου των πρωτεϊνών δειγμάτων ορού αίματος σκύλων που προσκομίστηκαν με επιληπτικές κρίσεις. Οι σκύλοι με επιληπτικές κρίσεις, μετά την ενδελεχή διαγνωστική διερεύνηση για τον προσδιορισμό της αιτιολογίας των επιληπτικών κρίσεων (μετά τη διάγνωση τους), ταξινομήθηκαν σε τρεις κατηγορίες (σκύλοι με ιδιοπαθή επιληψία που λάμβαναν αντιεπιληπτική φαρμακευτική αγωγή, σκύλοι με ιδιοπαθή επιληψία που δεν λάμβαναν αντιεπιληπτική αγωγή στην προσκόμιση και σκύλοι με επίκτητη επιληψία). Τα αποτελέσματα των τριών ομάδων συγκρίθηκαν με τα αντίστοιχα αποτελέσματα του συνόλου των πρωτεϊνών υγιών σκύλων που αποτέλεσαν τους μάρτυρες της μελέτης (τέταρτη ομάδα της μελέτης) της παρούσας διατριβής.