Μελέτη της έκφρασης των υποδοχέων Toll-like στην οξεία και χρόνια νόσο του μοσχεύματος κατά του ξενιστή, μετά από αλλογενή μεταμόσχευση αρχέγονων αιμοποιητικών κυττάρων:
Creators: name: Ζώγας, Νικόλαος Δημητρίου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2011
Subjects: TLRs
GvHD
Μελέτη
Study

description: Σκοπός της διατριβής ήταν η κατανόηση των μηχανισμών δράσης της νόσου του μοσχεύματος κατά του ξενιστή (GvHD) και η διερεύνηση πιθανής εμπλοκής των TLRs στην ανάπτυξη της νόσου αλλά και στην ανακάλυψη στρατηγικών πρόληψης ή νέων θεραπευτικών προσεγγίσεων βασιζόμενων στη δράση τους. Στo πλαίσιο των παραπάνω, μελετήθηκε η έκφραση των TLR2, TLR4, TLR7 και TLR9 τόσο σε εμπύρηνα κύτταρα όσο και σε επιμέρους λεμφοκυτταρικούς υποπληθυσμούς από περιφερικό αίμα ασθενών, όπου με βάση την κλινική τους εικόνα ομαδοποιήθηκαν σε οξύ GvHD (aGvHD) και χρόνιο GvHD (cGvHD). Παράλληλα ως ομάδες ελέγχου χρησιμοποιήθηκαν ένα σύνολο υγιή εθελοντών (Normal) και άτομα που υπήρξαν στο παρελθόν αιματολογικοί ασθενείς, υποβλήθηκαν σε μεταμόσχευση αλλά ή δεν εμφάνισαν κανενός τύπου GvHD ή εμφάνισαν GvHD η οποία στην πορεία υποχώρησε (No GvHD). Η ανάλυση πραγματοποιήθηκε τόσο σε επίπεδο μεταγράφων RNA όσο και σε πρωτεϊνικό επίπεδο. Επιπλέον, λαμβάνοντας υπόψη τα αντίστοιχα σηματοδοτικά μονοπάτια μελετήθηκε η ενεργοποίηση των TLR2 και TLR4 παρουσία αγωνιστή, μεταξύ υγιών εθελοντών και ασθενών με οξεία GvHD. Δείχνουμε στην παρούσα έρευνα ότι οι TLR2 and TLR4 υπερεκφράζονται στο GvHD (TLR2: aGvHD, TLR4: aGvHD+cGvHD), ειδικά στον υποπληθυσμό των Β-λεμφοκυττάρων, ενώ ο TLR7 υποεκφράζεται και στις δύο μορφές της νόσου, σε σχέση με τις ομάδες ελέγχου. Αν και ο TLR9 εμφανίζει μειωμένη έκφραση τόσο στην οξεία όσο και στη χρόνια μορφή της νόσου, παράδοξα, αυτό συμβαίνει μόνο ως προς την ομάδα των υγιών εθελοντών ενώ στην ομάδα Νo GvHD ο TLR9 υποεκφράζεται επίσης. Αποδεικνύουμε επίσης ότι τα μονοπύρηνα ασθενών με aGvHD εμφανίζονται υποαντιδραστικά μετά από ενεργοποίηση των TLR2 και TLR4 με τον ειδικό προσδέτη. Συνολικά, φαίνεται ότι στη διαδικασία της GvHD εμπλέκονται συγκεκριμένοι TLRs και ότι από τη στιγμή που θα εγκατασταθεί η aGvHD τα κύτταρα αναπτύσσουν ανοχή σε επακόλουθη ενεργοποίηση των TLRs. Η τελευταία παρατήρηση ανοίγει νέα προοπτική έρευνας για την επαγωγή ανοχής σε ειδικούς TLRs πριν απ’τη μεταμόσχευση με στόχο την πρόληψη της GvHD.
description: The aim of the present thesis was the in-depth understanding of the mechanisms of action of TLRs led to the implication of TLRs in Graft versus Host disease (GvHD) pathogenesis or the association of specific TLR polymorphisms with GvHD incidence, as well as to the investigation of potential preventive strategies or therapeutic approaches based on their function.We investigated in this study, the TLR2, TLR4, TLR7 και TLR9 expression in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) and B- and T- lymphocyte subsets from patients with acute (aGvHD group) and chronic GvHD (cGvHD group) after allo-HSCT. Healthy volunteers (Normal group) as well as patients who underwent allo-HCT and never developed GvHD or those who experienced GvHD which was successfully treated and resolved (No GvHD group), were used as control groups.We tested TLR expression both in terms of mRNA and protein. In addition, based on signal pathways, the TLR2 και TLR4 ligand-induced stimulation was analyzed. We demonstrate that TLR2 and TLR4 are upregulated during GvHD (TLR2: aGvHD, TLR4: aGvHD+cGvHD) especially in the B-lymphocyte compartment, whereas TLR7 is downregulated during acute and chronic GvHD as compared to control groups. TLR9 is downregulated in patients with both forms of the disease as compared to healthy individuals but paradoxically, No GvHD subjects exhibited also reduced TLR9 expression. Interestingly, the PBMCs of patients with acute GvHD presented hyporesponsive or tolerant after TLR2,4 ligand-induced stimulation.Overall, it seems that specific TLRs are involved in the GvHD process and that, after aGvHD establishment, the cells become tolerant to subsequent TLR stimulation. The latter opens up a new perspective for the investigation of induction tolerance pre-transplant to specific TLRs in order to prevent aGvHD.