Ανάπτυξη και επικύρωση HPLC-DAD μεθόδου για τον προσδιορισμό μη στεροειδών αντιφελγμονωδών φαρμάκων σε δείγματα μητρικού γάλακτος μετά από εκχύλιση στερεάς φάσης με χρήση μοριακά αποτυπωμένων πολυμερών
Creators: name: Καψάλη, Βασιλική Αντωνίου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2023
Subjects: Αντιφλεγμονώδη φάρμακα
Χρωματογραφία
Μητρικό Γάλα
Anti-inflamatory drugs
Chromatography
Breastmilk

description: Το μητρικό γάλα αποτελεί ζωτική πηγή θρεπτικών ουσιών για τα βρέφη, παρέχοντας απαραίτητα θρεπτικά συστατικά και ανοσολογικούς παράγοντες που βοηθούν στην ανάπτυξή τους. Ωστόσο, η παρουσία ορισμένων φαρμάκων σε αυτό, όπως τα αντιφλεγμονώδη, συχνά δημιουργεί ανησυχίες που σχετίζονται με τυχόν κινδύνους για την υγεία των βρεφών. Η παρούσα εργασία επικεντρώνεται στην ανάπτυξη και επικύρωση μιας μεθόδου Υγρής Χρωματογραφίας Υψηλής Πίεσης, (High Pressure Liquid Chromatography, HPLC), με ανιχνευτή παράταξης φωτοδιόδων (DAD) για τον προσδιορισμό τεσσάρων αντιφλεγμονωδών ουσιών σε δείγματα ανθρώπινου μητρικού γάλακτος. Οι ενώσεις που μελετήθηκαν ήταν η ιβουπροφαίνη, η κετοπροφαίνη, η ναπροξένη και η δικλοφαινάκη. Η προκατεργασία των δειγμάτων έγινε με εκχύλιση στερεάς φάσης (Solid Phase Extraction - SPE) σε συνδυασμό με μοριακά αποτυπωμένο πολυμερές (Molecularly Imprinted Polymer - MIP) ως υλικό πλήρωσης (MIPSPE). Η φάση ανάπτυξης της μεθόδου περιλαμβάνει την βελτιστοποίηση διαφόρων παραμέτρων τόσο στην προκατεργασία του δείγματος όσο και στη διάρκεια της ανάλυσής του. Μελετήθηκαν και βελτιστοποιήθηκαν τα εξής: η μάζα του προσροφητικού υλικού, ο χρόνος φόρτωσης δείγματος, o όγκος φόρτωσης του δείγματος, ο τύπος του διαλύτη έκλουσης, ο όγκος του διαλύτη έκλουσης, ο χρόνος της έκλουσης, όπως και ο τρόπος προκατεργασίας του γάλακτος. Τα αποτελέσματα της επικύρωσης δείχνουν ότι η αναπτυχθείσα μέθοδος HPLC-DAD είναι ακριβής και ευαίσθητη. Ένα από τα μεγαλύτερα πλεονεκτήματα της μεθόδου είναι η εκλεκτικότητα που επιτυγχάνεται με τη βοήθεια των MIP κατά την προκατεργασία. Επιπλέον, τα ποσοστά ανάκτησης των επιθυμητών φαρμάκων από δείγματα μητρικού γάλακτος είναι ικανοποιητικά, υποδεικνύοντας την αποτελεσματικότητα της εκχύλισης στερεάς φάσης. Τα MIPs δίνουν την δυνατότητα επαναχρησιμοποίησης για πολλές επαναλήψεις, πράγμα που καθιστά τη μέθοδο οικονομική. Συνολικά, η μέθοδος αποτελεί ένα αξιόπιστο εργαλείο για τον προσδιορισμό των αντιφλεγμονωδών ενώσεων σε δείγματα ανθρώπινου μητρικού γάλακτος. Η εφαρμογή της μπορεί να συμβάλει στην αξιολόγηση της δυνητικής έκθεσης των θηλαζόντων βρεφών σε αυτά τα φάρμακα και να βοηθήσει στην αξιολόγηση της ασφάλειάς τους. Συνοψίζοντας, μπορεί να διευκολύνει την περαιτέρω έρευνα σχετικά με τη μεταφορά φαρμάκων μέσω του μητρικού γάλακτος και τις επιπτώσεις της στην υγεία του βρέφους.
description: Breast milk constitutes a vital source of nutrients for infants, providing essential nutritional components and immunological factors that support their development. However, the presence of certain drugs in breast milk, such as non-steroidal anti-inflammatory agents, often raises concerns regarding potential risks to infant health. This study focuses on the development and validation of a High-Pressure Liquid Chromatography (HPLC) method with a Diode Array Detector (DAD) for the determination of four anti-inflammatory substances in human breast milk samples. The compounds studied were ibuprofen, ketoprofen, naproxen, and diclofenac. Sample preparation was performed using Solid Phase Extraction (SPE) combined with Molecularly Imprinted Polymers (MIP) as the filling material (MIPSPE). The method development phase involved optimizing various parameters both in the sample preparation and during the analysis. The following parameters were studied and optimized: mass of the adsorbent material, sample loading time, sample loading volume, elution solvent type, elution solvent volume, elution time, as well as the milk pre-treatment method. The validation results demonstrate that the developed HPLC-DAD method is accurate and sensitive. One of the major advantages of the method is the selectivity achieved using MIPs during the sample preparation. Furthermore, the recovery rates of the desired drugs from breast milk samples are satisfactory, indicating the effectiveness of solid-phase extraction. The MIPs allow for multiple reusability, making the method cost-effective. Overall, the method represents a reliable tool for the determination of anti-inflammatory substances in human breast milk samples. Its application can contribute to assessing the potential exposure of breastfeeding infants to these drugs and aid in evaluating their safety. In summary, it can facilitate further research on drug transfer through breast milk and its implications for infant health.