Προσδιορισμός μετφορμίνης σε ούρα με Υγρή Χρωματογραφία – Φασματομετρία Μάζας
Creators: name: Γκαντανίδου Μαργαρίτα Μαρία Κωνσταντίνου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2023
Subjects: Μετφορμίνη
Υγρή χρωματογραφία Υδρόφιλων Αλληλεπιδράσεων
Φασματομετρία Μάζας
Metformin
Liquid Chromatography of Ηydrophilic Interactions
Tandem Mass Spectrometry

description: Η μετφορμίνη αποτελεί την πιο διαδεδομένη φαρμακοθεραπεία ενάντια στο σακχαρώδη διαβήτη παγκοσμίως. Κατέχει δικαίως την πρώτη θέση αφού τα αποτελέσματα της είναι άμεσα. Ανήκει στην κατηγορία των διγουανιδίων και φαίνεται ότι φέρει τα επιθυμητά αποτελέσματα, χωρίς σοβαρές παρενέργειες, ενώ δεν είναι τοξική για τον ανθρώπινο οργανισμό. Στην παρούσα διπλωματική εργασία, αναπτύχθηκε και επικυρώθηκε μια νέα μέθοδος προσδιορισμού μετφορμίνης σε δείγματα ούρων, ούτως ώστε να διερευνηθεί η απέκκριση του φαρμάκου με ή χωρίς άσκηση. Για το σκοπό αυτό, αθλητές του ΣΕΦΑΑ Θεσσαλονίκης, έλαβαν δισκία μετφορμίνης υπό συνθήκες άσκησης και ηρεμίας και λήφθηκαν δείγματα, σε συγκεκριμένα χρονικάσημεία. Τα ούρα, αποτελούν το βιολογικό υλικό το οποίο μπορεί να μας δώσει πληροφορίες για το ρυθμό απέκκρισης του φαρμάκου.. Η ανάλυση των ούρων έγινε με τη χρήση υγρής χρωματογραφίας υπερ υψηλής απόδοσης(UPLC) συζευγμένης με Φασματομετρία μάζας σε σειρά (MS/MS). Λόγω της πολικότητας του μορίου της μετφορμίνης, επιλέχθηκε η χρήση της Υγρής Χρωματογραφίας Υδρόφιλων Αλληλεπιδράσεων (ΗΙLIC). Πραγματοποιήθηκε προκατεργασία των δειγμάτων ούρων πριν την εισαγωγή τους στο σύστημα ανάλυσης με μια σειρά βημάτων που περιγράφονται αναλυτικά στο πειραματικό μέρος τηςεργασίας. Η μέθοδος αναπτύχθηκε και επικυρώθηκε σύμφωνα με τις οδηγίες του Διεθνούς Συμβουλίου για την Εναρμόνιση των Τεχνικών απαιτήσεων για την Καταχώρηση Φαρμακευτικών Προϊόντων ανθρώπινης χρήσης (ICH). Εξετάστηκαν όλες οι παράμετροι που απαιτούνται για την επικύρωση της μεθόδου. Ελέγχθηκε η γραμμικότητα με την τιμή του συντελεστή συσχέτισης να ανέρχεται σε R2: 0,993. Η ακρίβεια βρέθηκε ικανοποιητική με τις τιμές της να κυμαίνονται από 98.1% έως 105.6%. Οι τιμές των ανακτήσεων για όλες τις αναλύσεις κυμαίνονται από 82.1% έως 111.9%, ενώ η πιστότητα έλαβε τιμές από 0.1 έως 7.8%. Το όριο ανίχνευσης (LOD) βρέθηκε ότι είναι 0,30 mg/L ενώ το όριο ποσοτικού προσδιορισμού (LOQ) προσδιορίστηκε σε 1 mg/L. Η επίδραση υποστρώματος έλαβε τιμές από 95,3% έως 104,9%. Επίσης, διεξήχθη μελέτη σταθερότητας του φαρμάκου σε δείγματα ούρων τα οποία διατηρήθηκαν αποθηκευμένα στους -20oC και παρατηρήθηκε ικανοποιητική σταθερότητα της ένωσης μετά από κατάψυξη και διατήρησή των δειγμάτων σε αυτές τις συνθήκες
description: Metformin is the most widely used pharmacotherapy against diabetes mellitus worldwide. It rightly holds the first place since its effects are immediate, and from the class of diguanides to which it belongs, it brings the desired results without serious side effects and, most importantly, it is not toxic to the human body. In this thesis, a method was developed and validated, in which the amount of metformin in urine samples of athletes was determined, to investigate the excretion of metformin with or without exercise. For this purpose, athletes of the Thessaloniki University of Physical Education and Sports received metformin tablets under conditions of exercise and rest and samples were collected at specific time points. Urine is the most appropriate specimen to investigate excretion of the drug. Urine samples were analyzed using liquid chromatography in a UPLC system coupled with tandem mass spectrometry(MS/MS). Due to the high polarity of the metformin the use of Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography was chosen. Urine samples collected were processed prior to introduction into the analysis system using a series of steps described in the experimental part of the thesis. It is also important to note that the method was developed and validated in accordance with the guidelines of the International Council for Harmonization of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use. (ICH). The linearity of the method was evaluated with calibration curves prepared by spiking the metformin standard at ten concentration levels in urine and curve with a correlation coefficient of R2=0.993 was obtained. The accuracy was evaluated and found satisfactory with values ranging from 98.1% to 105,6%. The recovery values for all analyses ranged from 102,9% to 111.9% while the precision received values from 0.1 to 7.8 %. The limit of detection (LOD) was found to be 0.30 mg/L while the limit of quantification (LOQ) was determined to be 1 mg/L. The matrix effect received values from 953% to 104,9%. Also, a stability study of the drug was carried out in urine samples which were stored at -20oC resulting to satisfactory stability of the compound after freezing and preservation under these conditions