Ανάπτυξη Hucal αντισωμάτων απέναντι στην SRPK1. Μελέτη λειτουργικότητας και εξειδίκευσης:
Creators: name: Τσελίκη, Γεωργία Χρήστου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2011
Subjects: Κινάσες πρωτεϊνών
Hucal βιβλιοθήκη
Μονοκλωνικά αντισώματα
SRPK1a
Hucal library
Monoclonal antibodies

description: Τα αντισώματα ή ανοσοσφαιρίνες είναι πρωτεΐνες που προσφέρουν ανοσία, άμυνα δηλαδή έναντι στις διάφορες λοιμώξεις. Με τη βοήθεια της βιοτεχνολογίας δημιουργήθηκαν in vitro τα αντισώματα Hucal (Human Combinational Antibody Library) και οι αντίστοιχες βιβλιοθήκες. Την πατέντα των αντισωμάτων εμπορεύεται η Γερμανική βιοτεχνολογική εταιρία MorphoSys AG (www.morphosys.com). Η τεχνολογία Hucal είναι μια μοναδική και καινοτόμος μέθοδος για την παραγωγή in vitro πλήρως ανθρώπινων αντισωμάτων με υψηλή εξειδίκευση. Στην παρούσα εργασία δοκιμάστηκαν αντισώματα Hucal έναντι της κινάσης πρωτεινών σερίνης- αργινίνης SRPK1a. Οι κινάσες πρωτεϊνών σερίνης/αργινίνης αποτελούν μια σχετικά νέα οικογένεια πρωτεϊνικών κινασών, οι οποίες τροποποιούν τα υποστρώματά τους φωσφορυλιώνοντας σερίνες που αποτελούν μέρος μιας επαναλαμβανόμενης ακολουθίας διπεπτιδίων αργινίνης/σερίνης. Τα πιο καλά μελετημένα υποστρώματα της οικογένειας των πρωτεϊνικών κινασών σερίνης/αργινίνης αποτελούν οι παράγοντες ματίσματος, οι οποίοι περιέχουν στο μόριο τους επαναλαμβανόμενα διπεπτίδια αργινίνης/σερίνης (SR splicing factors), με πιο αντιπροσωπευτικό παράδειγμα τον ASF/SF2. Η δραστικότητα των Hucal αντισωμάτων μελετήθηκε με τεχνική Elisa και με τεχνική Western blotting χρησιμοποιώντας ως αντιγόνο το συνθετικό τμήμα των 171 αμινοξέων και το συνθετικό πεπτίδιο SRPK1a-N1. Επίσης έγινε εκτίμηση της δραστικότητας των Hucal αντισωμάτων με τεχνική Western blotting και ανοσοκατακρήμνιση απέναντι σε εκχυλίσματα ευκαρυωτικών κυττάρων που υπερεκφράζουν την SRPK1a. Η μελέτη έδειξε ότι ενώ τα Hucal αντισώματα είναι ενεργά απέναντι στο πεπτίδιο των 171 αμινοξέων (SRPK1a-N1), που συντέθηκε από την εταιρεία AbD serotec, δεν εμφανίζουν δραστικότητα απέναντι σε ολόκληρη την SRPK1a, όταν αυτή εκφράστηκε σε ευκαρυωτικά κύτταρα.
description: Antibodies or immunoglobulins are proteins that provide immunity in other words protection against various infections. In terms of biotechnology generated in vitro antibodies Hucal (Human Combinational Antibody Library) and the corresponding libraries. The patented antibodies marketed by the German biotechnology company MorphoSys AG (www.morphosys.com). Hucal technology is a unique and innovative method to produce in vitro fully human antibodies with high specificity. In the present study Hucal antibodies tested against serine-arginine protein kinase SRPK1a. The serine-arginine protein kinase SRPK1a is a relatively new family of protein kinases, which modify their substrates by phosphorylating serines that are part of a repeating sequence dipeptide arginine / serine. The most elaborated studied substrates of SRPK are splicing factors, which contain in their molecules the repeating dipeptide arginine/serine (SR splicing factors), with the ASF/SF2 being the more representative example. The activity of Hucal antibody technique was studied by Elisa and Western blotting technique using as antigen the synthetic portion of 171 amino acids and synthetic peptide SRPK1a-N1. Also the efficacy of Hucal antibodies was studied by Western blotting and immunoprecipitation against eukaryotic cell extracts overexpressing SRPK1a. The study showed that while Hucal antibodies are active against the peptide of 171 amino acids (SRPK1a-N1), which was developed by the company AbD serotec, they demonstrated no reactivity against the entire SRPK1a, when expressed in eukaryotic cells.