Συμβολή των γονιδίων ato στη βιοσύνθεση των πολυϋδροξυαλκανοϊκών οξέων
Creators: name: Θεοδώρου, Μαρίνα
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2005
Subjects: Αντιένζυμο
Οπερόνιο atoDAEB
Πολυϋδροξυαλκανοϊκά οξέα
Antizyme
Response regulator AtoC
Polyhydroxyalkanoic acids

description: Στα πλαίσια της παρούσας διδακτορικής διατριβής μελετήθηκε η συμβολή του συστήματος μετάδοσης δύο συστατικών AtoS-AtoC/Az στη βιοσύνθεση του πολυϋδροξυβουτυρικού οξέος(CPHB) στο E.coli. Το Atos-AtocC/Az εργάζεται από το ακετοξικό οξύ και ρυθμίζει θετικά τη μεταγραφή του οπερονίου atoDAEB που κωδικοποιεί τα ένζυμα καταβολισμού λιπαρών οξέων μικρής αλυσίδας. Το cPHB συμμετέχει στην ομοιόσταση του ασβεστίου, στην ανάπτυξη γενετικής επιδεκτικότητας του E.coli, στην προστασία πρωτεϊνών από πρωττόλυση και στην οργάνωση του DNA. Στελέχη E.coli ελέχθηκαν για την παραγωγή του CPHB με την ημιποσοτική μεθοδοχρώση αποικιών με το NileRtd. Η ποσοτική ανίχνευση του cPHB επιτεύχθηκε μέσου της μέτρησης του κροτονικού οξέος, παραγώγου του cPHB, με HPLC. Η υπερπαραγωγή των AtoS και AtoC/Az, μέσω κατάλληλου πλασμαδίου, ενισχύει σημαντικά τη βιοσύνθεση του cPHB, μόνο κατά την επαγωγή του συστήματος ακετοξικό. Η απαλοιφή των γονιδίων atoS και atoC από το γένωμα του E.coli, μειώνει τα ποσά του cPHB σε σχέση με τα ισογενικά atoSC+ στελέχη. Η μειωμένη σύνθεση συμπληρώνεται με την in trans εισαγωγλη άγριου τύπου γονιδίων atoSC στα κύτταρα ΔαtoSC. Η υπεραπαραγωγή της AtoS ή της AtoC/Az, μέσω πλασμιδίων που κατασκευάστηκαν, δεν αποκαθιστά τα βασικά επίπεδα του cPHB στα ΔαtoSc. Η σπερμιδίνη και η N8-ακετυλοσπερμιδίνη ενισχύουν το cPHB μόνο σε atoSC+ κύτταρα, σε ανάλογα επίπεδα με την προσθήκη εκετοξικού, μόνο για τη σπερμιδίνη. Το AtoS-AtoC/Az ενισχύει τη βιοσύνθεση του cPHB, μέσω τηε επίδρασης του στο οπερόνιο atoDAEB
description: During this thesis experimental evidence was provided on the involvement of the AtoS-AtoC/Az two-component signal transduction system on cPHB biosynthesis in E.coli. The AtoS-AtoC/Az system regulates positively the expression of the atoDAEB operon encoding the enzymes that control short-chain fatty acid catabolism upon acetoacetate induction. cPHB participates in calcium homeostasis, competence for genetic trans formation of E.coli, protection of proteins from proteolysis and DNA organization. E.coli strains were studied for cPHB biosynthesis by the semiquantitative method of colonystaining by Nile Red. cPHB was quantatively determined via crotonic acid measurement, the cPHB by product, by HPLC. The over production of AtoS and AtoC/Az, on a multicopy plasmid, enhances the cPHB biosynthesis only on induction of the system by acetoacetate. Deletion of atoSC genes resulted in decreased levels of cPHB compared to the atoSC+ isogenic strain. The diminished synthesis of cPHB was complemented by the in-trans introduction of the wild type atoSC genes, on a multicopy plasmid. The over production of AtoS or AtoC/Az alone, by plasmids that were constructed, failed to complent the amounts of cPHB in ΔαtoSc. Spermidine and N8-acetyl-spermidine enhance cPHB only in atoSC+ strains, on equal levels upon acetoacetate induction, only for spermidine. The Atos-AtoC/Az systems enhances cPHB biosynthesis upon acetoacetate induction through its effects on atoDAEB operon