Ταυτοποίηση μαύρων Ασπεργίλλων (Aspergillus spp) από αμπελώνες της Β. Ελλάδας και της Κύπρου και διερεύνηση της ικανότητας παραγωγής φουμονισίνης Β2 (FB2)
Creators: name: Σαρμής, Γεώργιος Δημητρίου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2018
Subjects: Ασπέργιλλος
Ωχρατοξίνη Α
Φουμονισίνη Β2
Aspergillus
Ochratoxin A
Fumonisin B2

description: Η μαύρη σήψη των σταφυλιών που προκαλείται από τον μύκητα Aspergillus spp., αποτελεί μια σημαντική ασθένεια της καλλιέργειας της αμπέλου και επιφέρει δυσμενείς επιπτώσεις στην παραγωγή και την ποιότητα των καρπών. Τα είδη του μύκητα που ανήκουν στο άθροισμα Nigri (Μαύροι Ασπέργιλλοι) αποτελούν την κύρια αιτία πρόκλησης της ασθένειας. Οι ποιοτικές απώλειες που καταγράφονται από την παραγωγή μυκοτοξινών, αποτελούν πιθανό κίνδυνο για την δημόσια υγεία λόγω της ανίχνευσή τους σε προϊόντα καθημερινής κατανάλωσης όπως είναι το κρασί και ο χυμός σταφυλιού. Σκοπός της εργασίας ήταν ο προσδιορισμός της συχνότητας παρουσίας του μύκητα Aspergillus spp. σε αμπελώνες διαφόρων αμπελοπαραγωγικών περιοχών της Ελλάδας και της Κύπρου, η μοριακή ταυτοποίηση, σε επίπεδο είδους, των απομονώσεων του παθογόνου, όπως επίσης και η διερεύνηση της ικανότητας παραγωγής μυκοτοξινών. Για τις ανάγκες της παρούσας μελέτης επιλέχθηκαν οι λευκές ποικιλίες Chardonnay και Sauvignon blanc ενώ από ερυθρές οι Cabernet, Syrah, η ποικιλία Ξινόμαυρο από την Ελλάδα και η ποικιλία Μαύρο από την Κύπρο. Αρχικά, πραγματοποιήθηκε η καταγραφή των μαύρων Ασπεργίλλων από την κάθε περιοχή με βάση τα μορφολογικά χαρακτηριστικά των απομονώσεων. Έπειτα, ακολούθησε μοριακή ταυτοποίηση 140 απομονώσεων από την κάθε χώρα με αλληλούχιση των γονιδίων της καλμοδουλίνης και της β – τουμπουλίνης, όπου επιβεβαιώθηκε και η αρχική ταυτοποίησή τους με βάση τα φαινοτυπικά χαρακτηριστικά τους, στο άθροισμα Nigri. Κυρίαρχο είδος για την Ελλάδα αποτέλεσε το Aspergillus niger ενώ για την Κύπρο το είδος Aspergillus tubingensis. Στην συνέχεια, επιλέχθηκαν συνολικά 110 απομονώσεις και από τις δύο χώρες και μελετήθηκε η ικανότητα παραγωγής των μυκοτοξινών ωχρατοξίνη Α (ΟΤΑ) και φουμονισίνη Β2 (FB2). Και οι δυο μυκοτοξίνες συνδέονται με σοβαρές ασθένειες του ανθρώπου και των ζώων. Η προετοιμασία των δειγμάτων έγινε με εφαρμογή της μεθόδου της εκχύλισης στερεάς φάσης (solid phase extraction; SPE), ενώ η ανίχνευση έγινε με υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης (high performance liquid chromatography; HPLC) με ανιχνευτή φθορισμού. Από τα αποτελέσματα που προέκυψαν, περισσότερα στελέχη καταγράφηκαν να παράγουν την μυκοτοξίνη φουμονισίνη Β2, ενώ ορισμένα στελέχη παρήγαγαν και τις δυο μυκοτοξίνες
description: Black rot of grapes caused by the genus Aspergillus is considered to be one of the most important diseases in vineyards which has adverse effects on the production and quality of the fruit. The species which belong to section Nigri (black Aspergilli) are considered to be the main cause of the disease. Quality losses caused by mycotoxin production are potential risk for public health due to their detection in daily consumption products such as wine and grape juice. The aim of this study was the determination of the incidence Aspergillus in different vineyards of Greece and Cyprus, the molecular identification at species level of the isolates of this pathogen as well as the investigation of the ability to produce mycotoxins. The white varieties Chardonnay and Sauvignon blanc were selected for the purposes of this study and from red varieties Cabernet, Syrah, the local variety Xinomavro from Greece and the local variety Mavro from Cyprus. Initially, the presence of Aspergillus was recorded in each area, based on the morphological characteristics of the isolates. Afterwards, the molecular identification of 140 isolates from each country followed, sequencing the calmodulin and b-tubulin genes, where their initial classifications in section Nigri was confirmed based on their phenotypic characteristics. The dominant species in Greece was Aspergillus niger while in Cyprus the species Aspergillus tubingensis. Then, a total of 110 isolates were selected from each country to determine the ability of producing the mycotoxins ochratoxin A (OTA) and fumonisin B2 (FB2). Both mycotoxins are linked with major human and animal diseases. Sample preparation was performed using the solid phase extraction (SPE) method, while the detection was done using the high performance liquid chromatography (HPLC) separation method with fluorescence detector. From the results obtained, most of the strains were recorded to produce the mycotoxin fumonisin B2, while some strains produced both mycotoxins