Μοριακή ανάλυση του ρεπερτορίου του Τ κυτταρικού υποδοχέα σε ασθενείς με αιματολογικά νοσήματα:
Creators: name: Σταλίκα, Ευαγγελία Αθανασίου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2013
Subjects: Τ λεμφοκύτταρο
Χρόνια Ιδιοπαθής Ουδετεροπενία
Αντιγόνο
T lymphocytes
Chronic Idiopathic Neutropenia
Antigen

description: Δεδομένα από σειρά μελετών σε νοσήματα που σχετίζονται με σύνδρομα μυελικής ανεπάρκειας όπως είναι η Απλαστική Αναιμία, T-LGL λευχαιμία και τα μυελοδυσπλαστικά σύνδρομα, συγκλίνουν στην παρουσία αυτοάνοσων διαδικασιών, που έχουν ως αποτέλεσμα κλωνικές εκπτύξεις Τ λεμφοκυττάρων που πιθανά στρέφονται έναντι διαφόρων προβαθμίδων της μυελικής σειράς. Στην παρούσα μελέτη πραγματοποιήθηκε κλωνοποίηση των αναδιατάξεων των γονιδίων της β αλυσίδας του Τ κυτταρικού υποδοχέα σε έξι ασθενείς με Χρόνια Ιδιοπαθή Ουδετεροπενία. Επιδίωξη της μελέτης ήταν να αναζητηθούν ανοσογενετικές ενδείξεις για την παθογένεση του φαινομένου. Προιόντα RT-PCR TRBV-TRBD-TRBJ υποβλήθηκαν σε κλασική ανάλυση υποκλωνοποίησης (cloning). Εξετάσθηκαν 184 κλώνοι στο σύνολο των ασθενών (19-39 κλωνοι συνολικά, Δm=28κλώνοι/ασθενή) και η βιοπληροφορική επεξεργασία των αποτελεσμάτων πραγματοποιήθηκε με το εργαλείο V-QUEST/IMGT. Σε προηγούμενη μελέτη αναλύθηκε το ρεπερτόριο των γονιδίων της β αλυσίδας του Τ κυτταρικού υποδοχέα τόσο στο αίμα όσο και στο μυελό των ασθενών αυτών με κυυταρομετρία ροής (IO Test Beta Mark Kit, Beckman Coulter) και ακολούθησε μοριακή φασματομετρική ανάλυση της περιοχής CDR3 των Τ λεμφοκυττάρων. Στην παρούσα μελέτη διευρύναμε τα αποτελέσματα με μοριακή ανάλυση του ρεπερτορίου των γονιδίων της β αλυσίδας του Τ κυτταρικού υποδοχέα γεγονός που μας οδήγησε σε ανακάλυψη κοινών αναδιατάξεων μεταξύ των ασθενών, τεκμηρίωσε έντονη επιλεκτικότητα των TCRb γονιδίων και οδήγησε σε ανακάλυψη προτύπων ολγο/μονο κλωνικών εκπτύξεων των Τ λεμφοκυττάρων. Συμπερασματικά οι ασθενείς με Χρόνια Ιδιοπαθή Ουδετεροπενία εμφανίζουν επιλεκτική ανάπτυξη Τ λεμφοκυτταρικών πληθυσμών στο αίμα αλλά και στο μυελό. Η ανωμαλία αυτή υποδηλώνει υποκείμενο αντιγονικό ερεθισμό που σχετίζεται πιθανότατα με την παθογένεια της νόσου.
description: Chronic Idiopathic Neutropeniais a bone marrow disorder characterized by increased apoptosis of the granulocytic progenitor cells and presence of activated T lymphocytes in the peripheral blood and bone marrow. A T cell mediated immune process has been postulated for the pathogenesis of CIN on the basis of data showing presence of T lymphocytes with activated phenotype in patients’ BM and PB, suppression of normal granulocytic progenitors cells by patient T lymphocytes in vitro and increased expression of intracellular INF-γ. In the present study, we report results from detailed analysis of six patients with Chronic Idiopathic Neutropenia . We have systematically analyzed the patterns of TRBV genes rearrangements in a large cohort of CIN patients seeking especially for immunodominant expansions that might imply antigen- driven T cell responses with possible pathogenetic/ pathophysiologic significance. TRBV-J RT-PCR products were submitted to classic subcloning analysis. 184 clones from the six patients were analyzed. Sequence data were analyzed using the V-QUEST/IMGT. Our data showing that there is a skewing of the T cell receptor gene repertoire within CD8+T lymphocytes. Nevertheless, the markedly increased frequency of dominant oligoclonal/monoclonal TRBV expansion within the CD8+ cells in CIN patients might be recognized as an additional pathophysiologic feature of this disease entity. In conclusion, our study demonstrates that these cell expansions are probably related to the disease pathogenesis rather than to underlying infectious processes as they seem to remain longitudinally stable. In addition, infectious complications are extremely rare in CIN and none of the patients was clinically infected at the time of PB or BM sampling. The identification of oligoclonal/ monoclonal T-cell expansions strongly suggests that antigendriven immune responses may be implicated in the pathogenesis of CIN and substantiate our hypothesis that CIN could represent the mild form of the spectrum of immune mediated BM failure syndromes. We are currently gauging the TCR-CDR3 molecular fingerprinting of individual cell expansions which may serve as a surrogate for the recognition of possible “private” or “public” antigens that might trigger the immune responses in these patients. From the clinical point of view, this novel perspective into the pathogenesis of CIN might eventually lead to the introduction of T-cell immunosuppressive therapies for the severely neutropenic patients who experience frequent infections.