Ρόλος της δομής του μεταγραφικού παράγοντα HNF-Ga στη γονιδιακή ρύθμιση των απολιπροπρωτεϊνών
Creators: name: Ιορδανίδου, Παναγιώτα Σ.
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2005
Subjects: Μεταγραφή
Απολιποπρωτεϊνες
Ηπαρ
Transcription
Apolipoproteins
Liver

description: Η ανάλυση που διεξήχθη είχε ως πρώτο στόχο τη διερεύνηση αμινοξέων, που είναι καθοριστικά για την ενεργότητα της LBD περιοχής του HNF-4α. Για το σκοπό αυτό εισήχθησαν επιλεγμένες σημειακές μεταλλάξεις σε αμινοξέα της LBD περιοχής, που είχε δεχθεί ότι είναι κρίσιμα για την αλληλεπίδραση με το συνδέτη σε άλλους πυρηνικούς υποδοχείς. Η ενεργότητα της LBD περιοχής εξαρτάται από την πρόσδεση του συνδέτη στην πλειοψηφία των πυρηνικών υποδοχέων, που έχουν εξεταστεί. Ωστόσο ο HNE-4α δε διαφοροποιεί τη δραστηριότητά του ως απόκριση στην παρουσία εξωγενών μορίων-συνδετών. Αντίθετα, φαίνεται ότι δρα ως "ιδιοσυστατικός" ενεργοποιητής της μεταγραφής. Το σκεπτικό ήταν να διερευνηθεί κατά πόσο ομόλογα αμινοξέα με αυτά άλλων πυρηνικών υποδοχέων θα συμμετείχαν στην κοιλότητα πρόσδεσης του συνδέτη, σε περίπτωση που υπήρχε κάποιος ενδογενής συνδέτης για τον HNF-4α. Τα αποτελέσματατης παρούσας εργασίας αποδεικνύουν τη λειτουργική σημασία των αμινοξέων λευκίνη 220, αργινίνη 226, ισολευκίνη 338 και ισολευκίνη 346 της LBD περιοχής για την ενεργοποίηση της μεταγραφής από τον HNF-4α. Επιπλέον, βοηθούν στη διάκριση αμινοξέων, που είναι καθοριστικά για την ενεργότητα της LBD περιοχής κάτω από διαφορετικές συνθήκες. Ετσι, μετάλλαξη της ισολευκίνης 338 οδηγεί σε ανεπανόρθωτη απώλεια της ενεργότητας : του μεταγραφικού παράγοντα, ενώ η απώλεια ενεργότητας που παρατηρείται στην περίπτωση της μετάλλαξης R222G είναι δυνατόν να αντιστραφεί παρουσία συνεργοποιητών. Ο δεύτερος στόχος της εργασίας ήταν η διερεύνηση της σημασίας ευρύτερων περιοχών του LBD του HNF-4α, όπως η περιοχή D, για τη μεταγραφική δραστηριότητα του υποδοχέα και την ενίσχυση από τους συνεργοποιητές. Η παρούσα μελέτη επιβεβαίωσε τη σημασία της D περιοχής για την ενεργότητα του HNF-4α και την αλληλεπίδρασή του με τους συνεργοποιητές, σε συμφωνία με ότι έχει δειχθεί ότι συμβαίνει και σε άλλους πυρηνικούς υποδοχείς
description: The present study aimed at investigated amino acid residues in the LBD region of nuclear receptor HNF-4a that are critical for its activity. For this purpose selected point mutations were introduced into residues of the LBD region that were previously shown to be important for interactions with the ligand in other nuclear receptor molecular. Receptor activity depends on the presence of a ligand in the majority of nuclear receptor molecular. Receptor activity depends on the presence of a ligand in the majority of nuclear receptors examined. However, HNF-4a is not known to alter its activity in response to an exogenous ligand. It rather seems to act as a constitute activator of transaction. The rationale was to test whether amino acids homologous to those of other nuclear receptors would participate in formation of the ligand binding pocket, in case there was an endogenous ligand for HNF-4a. The results of this study confirm the functional importance of residues leucine 220, arginine 226, isoleucine 338 and isoleucine 346 of the LBD region in HNF-4a mediated activation of transcription. Furthermore, they hepl discriminate between residues of the LBD region that are critical for HNF-4a activity in the absence or presence of coactivators. In this context, mutation of isoleucine 338 results in complete loss of function by the receptor, whereas the observed loss of activity in the case of mutant R226G can be reversed by tha action of coactivators. The significance of broader HNF-4a regions, such as the ddomain, for transcriptions activation by the receptor was also examined. The data emerging from the study confirm the significant of the D region for HNF-4a transcriptional activity and interaction with coactivators, in agreement to what was found for other nuclear receptors