Μελέτη και ανάπτυξη αναλυτικών μεθόδων προσδιορισμού κατεχολαμινών σε δείγματα πλάσματος ασθενών με χρήση LC-MS/MS
Creators: name: Γκίνα, Βαρβάρα Κωνσταντίνου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2020
Subjects: Κλινική Φαρμακολογία
Βιομηχανική Φαρμακολογία
Κλινική Τοξικολογία
Καταγραφή
Clinical Pharmacology
Industrial Pharmacology
Clinical Toxicology
Reference

description: Οι κατεχολαμίνες είναι νευροδιαβιβαστές του ΣΝΣ και συμμετέχουν σε ρυθμιστικά συστήματα και μεταβολικές διαδικασίες. Αυτές οι ουσίες μπορούν να χρησιμοποιηθούν ως βιοδείκτες σε νευρολογικές και καρδιολογικές παθήσεις είτε για τη διάγνωση αυτών ή για τη θεραπεία. Έχουν αναπτυχθεί πολλές διαφορετικοί μέθοδοι για τον προσδιορισμό τους, όμως υπάρχει ακόμη μεγάλο επιστημονικό ενδιαφέρον.Οι συγκεντρώσεις των κατεχολαμινών στα βιολογικά δείγματα είναι σε πολύ χαμηλά επίπεδα, με αποτέλεσμα να απαιτείται χρήση πολύ ευαίσθητων βιοαναλυτικών μεθόδων. Η παρούσα εργασία έχει ως σκοπό τη διερεύνηση μεθόδων, με τις οποίες μπορούν να προσδιορισθούν οι κατεχολαμίνες στο πλάσμα, καθώς και οι μετρήσεις δειγμάτων πλάσματος πριν και μετά την επέμβαση, από ασθενείς που υποβλήθεισαν σε θυροειδεκτομή. Ωστόσο, δεν ήταν δυνατόν να επιτευχθεί μέθοδος για τον ταυτόχρονο προσδιορισμό και των τριών ουσιών που θέλαμε να μελετήσουμε. Έτσι, αναπτύχθηκαν δύο διαφορετικές μέθοδοι, μία για τον προσδιορισμό της ντοπαμίνης και της επινεφρίνης και μια δεύτερη για τον προσδιορισμό της νορεπινεφρίνης. Η πρώτη μέθοδος πραγματοποιήθηκε με χρωματογραφία υδρόφιλης αλληλεπίδρασης HILIC, ενώ η δεύτερη με χρωματογραφία αντίστροφης φάσης. Tα επίπεδα της νορεπινεφρίνης στο αίμα είναι περίπου 300 pg/ml. Τα επίπεδα της επινεφρίνης, φυσιολογικά κυμαίνονται περίπου στα 30 pg/ml ενώ η ντοπαμίνη στο πλάσμα κυμαίνεται σε επίπεδα περίπου 35 pg/ml. Οι μετρήσεις που πραγματοποιήθηκαν για να αξιολογηθεί η ευαισθησία των μεθόδων, έδειξαν ότι δεν ήταν δυνατόν να επιτευχθούν τόσο χαμηλά όρια ανίχνευσης και ποσοτικοποίησης ώστε να μπορούν να εφαρμοστούν για τη μέτρηση των συγκεντρώσεων των κατεχολαμινών στο αίμα. Επομένως, οι προσδιορισμοί των ενώσεων αυτών σε δείγματα ασθενών δεν ήταν εφικτοί με την εν λόγω τεχνική και για τον λόγο αυτό οι μετρήσεις θα πραγματοποιηθούν με τη μέθοδο ELISA σε μελλοντική εργασία.
description: Catecholamines are neurotransmitters of Sympathetic nervous system and they participate in different systems and metabolic procedures. These substances can be used as biomarkers in neurological cardiovascular diseases either for diagnosis or for therapy. A lot of methods have been developed for the determination of catecholamines, however there is still a huge scientific interest. Their concentrations in the biological samples are low and as a result for their determination, use of sensitive bioanalytical methods is required. The aim of this project is the research of different analytical methods that can be used for the determination of catecholamines in plasma and the plasma samples measurements of patients before and after surgical technique of thyroidectomy. However, it was impossible to develop a method for the simultaneous determination of the three substances. The result is that we developed two different methods, one for the determination of Dopamine and Epinephrine and the second for the determination of Norepinephrine. We used Hilic Chromatography in the first method and Reversed Phase Chromatography in the second method. The level of concentration of Norepinephrine in plasma is about 300 pg/ml, of Epinephrine is about 30pg/ml and of Dopamine is about 35 pg/ml. The measurements about the sensitivity of the methods, showed that it is not possible to obtain such low limits of detection and quantification for measurement of catecholamines in plasma. The conclusion is that the determination of these substances in patients samples was not feasible using this technique and this is the reason that the measurements will be carried out by using ELISA in future project.