Προσδιορισμός Δισφαινολών, Παραβενίων και Τρικλοζάνης σε Δείγματα Ούρων με Χρήση Αέριας Χρωματογραφίας Διαδοχικής Φασματομετρίας Μάζας- Βιοπαρακολούθηση των Ενώσεων Στόχων σε Πραγματικά Δείγματα
Creators: name: Συκιώτου, Μαριάνθη Νικολάου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2020
Subjects: Βιοπαρακολούθηση
Ούρα
Αέρια χρωματογραφία διαδοχικής φασματομετρίας μάζας
Biomonitoring
Urine samples
GC/MS-MS

description: Στην παρούσα εργασία αναπτύχθηκε αναλυτική μέθοδος ώστε να προσδιοριστούν οι Δισφαινόλες BPA, BPS, BPF, τα παραβένια MeP, EtP, PrP, iPrP, BuP, iBuP και η Τρικλοζάνη , TCS σε δείγματα ούρων. Σε προηγούμενη μέθοδο προκατεργασίας, Εκχύλισης Στερεάς Φάσης (SPE) για τις δισφαινόλες (Snoj Tratnik et al., 2019) εντάχθηκαν τα παραβένια και η Τρικλοζάνη έχοντας καλή επίδοση. Αναπτύχθηκε ενιαία μέθοδος προσδιορισμού στο GC-MS/MS για τις μελετώμενες ενώσεις. Βρέθηκαν οι χρόνοι κατακράτησης, οι ιοντικές μεταβάσεις, καθώς και οι βέλτιστες ενέργειες σύγκρουσης. Η μέθοδος εμφάνισε καλή γραμμικότητα, επαναληψιμότητα και αναπαραγωγιμότητα. Τα όρια ανίχνευσης κυμάνθηκαν μεταξύ 0.010-0.57 ng/mL και τα όρια ποσοτικοποίησης 0.030-1.9 ng/mL.Πραγματοποιήθηκε εφαρμογή της μεθόδου με την συλλογή δειγμάτων (11) από ανθρώπους ηλικιακής ομάδας 18-29, με σκοπό να γίνει μιας μικρής κλίμακας έρευνα βιοπαρακολούθησης. Αναπτύχθηκαν επίσης ερωτηματολόγια προκειμένου να σκιαγραφηθεί το προφίλ των συμμετεχόντων τόσο για τις γενικές τους συνήθειες όσο και για τις τελευταίες 24 ώρες πριν την δειγματοληψία. Τα ποσοστά ανίχνευσης για τις δισφαινόλες BPA, BPF, BPS ήταν 100%, 91 %, 27%, για τα παραβένια ΜeP, EtP, PrP, BuP ήταν 100% ,56% 46%, 73% αντίστοιχα και για την TCS 36%. Το MeP ήταν το πιο άφθονο από τις ενώσεις που ανιχνεύτηκαν, με τα PrP, BuP, BPA, EtP ,BPF, TCS, BPS να ακολουθούν. Οι ενώσεις iBuP και iPrP δεν ανιχνεύτηκαν καθόλου, πιθανώς γιατί έχουν απαγορευτεί από την νομοθεσία στην Ευρωπαϊκή Ένωση. Επιπρόσθετα η TCS είχε επίσης αρκετά χαμηλά ποσοστά ανίχνευσης, γεγονός που μπορεί να σχετίζεται με το ότι έχει απαγορευτεί στα τρόφιμα από το 2010. Οι πηγές έκθεσης φαίνεται να είναι δύσκολο να καθοριστούν ακριβώς λόγω του ότι οι ενώσεις αυτές είναι πλέον πανταχού παρούσες πολύ πιθανό να εκτιθόμαστε από διάφορες πηγές μη ιχνηλατήσιμες για τις οποίες ακόμα δεν έχουν γίνει πολλές μελέτες (όπως πόσιμο νερό και σκόνη). Άλλοι περιορισμοί είναι οι διαφορές στην φαρμακοκινητική και το μεταβολισμό μεταξύ των ατόμων, καθώς και οι διαφορές στην ταχύτητα απέκκρισης και υδρόλυσης μεταξύ των ενώσεων (μεταξύ χαμηλού και υψηλού μοριακού βάρους). Ακόμα τα ούρα αποτυπώνουν την βραχεία έκθεση πριν την δειγματοληψία και πολύ πιθανό να υποτιμάται η ολική έκθεση των ατόμων. Καλό θα ήταν οι μελέτες βιοπαρακολούθησης να λαμβάνουν και άλλα υποστρώματα πέραν των ούρων καθώς και να ερευνηθούν οι και άλλες πιθανές πηγές έκθεσης, όπως το νερό ή η σκόνη.
description: In the current master’s thesis, an analytical method was developed for the identification of Bisphenols (BPA, BPS, BPF), Parabens (MeP, EtP, PrP, iPrP, BuP, iBuP) and Triclosan (TCS) in human urine samples. Based on a previous method for bisphenols (Snoj Tratnik et al., 2019) parabens and triclosan were introduced, resulting in the method development for a simultaneous analysis of Bisphenols, Parabens and Triclosan. For the sample preparation SPE was used and for the identification GC-MS/MS. Retention times, ions transitions and optimized collision energies were studied. The method showed good linearity, repeatability reproducibility and recoveries. The LODs were ranged between 0.010-0.57 ng/mL and LOQs 0.030-1.9 ng/mL. The method was applied to real samples. For this purpose, 11 samples were collected from young adults in the age group of 18-29 years old for simulated a small-scale human biomonitoring study. Questionnaires for the inquiring of personal consuming habits and other personal details were developed. The detection rates for the bisphenols, BPA, BPF and BPS were 100%, 91 %, 27% accordingly, while for parabens, ΜeP, EtP, PrP, BuP were 100% ,56% 46%, 73% and for Triclosan 36%. MeP paraben was the most abundant from the identified compounds followed by PrP, BuP, BPA, EtP, BPF, TCS, BPS in terms of the level of concentration that were detected. The compounds iBuP and iPrP were not detected in any of the samples, probably since are banned in the European Union. Furthermore, the detected rate of TCS was low, can be attributed to the fact that TCS has been banned from foods in the European Union since 2010. The sources of exposure are a challenging process since many of these compounds are quite abundant in foods and material we use nowadays. It is also possible for humans to be exposed to these chemicals by sources that are not yet adequately studied (drinking water and domestic dust). Implications and bias regarding the identification of the sources of exposure are introduced due to the inter-personal differences in pharmacokinetics and metabolism and the difference of the excretion and hydrolysis time of the compound ( higher excretion time for compounds of higher molecular weight) resulting in possible underestimation of high molecular weight compounds. Additionally, urine samples reflect the exposure of some hours before the samples. That can possibly lead to the underestimation of daily exposure. It is advised for human biomonitoring studies to include samples other that urine (tissues, sweat) which are related to bioaccumulation. Also, more studies need to be done for the identification of these compounds in sources such domestic dust and drinking water.