Ανάπτυξη και επικύρωση μεθόδου προσδιορισμού παραγώγων ακρυλικού, μεθοξυκινναμωμικού, βενζοϊκού και σαλικυλικού οξέος με την τεχνική της υγρής χρωματογραφίας υψηλής απόδοσης – φασματομετρίας μαζών σε σειρά
Creators: name: Παφίλη, Αναστασία Ευθυμίου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2020
Subjects: Υγρή χρωματογραφία υψηλής απόδοσης
Φασματομετρία μαζών σε σειρά
Οργανικά φίλτρα υπεριώδους ακτινοβολίας
High performance liquid chromatography
Tandem mass spectrometry
Organic UV filters

description: Στη παρούσα διπλωματική εργασία αναπτύχθηκε και επικυρώθηκε μιας αξιόπιστη μέθοδος Υγρής Χρωματογραφίας Υψηλής Απόδοσης (HPLC), συζευγμένης με Φασματομετρία Μαζών σε σειρά (MS/MS) για τον ταυτόχρονο προσδιορισμό τεσσάρων ευρέως διαδεδομένων οργανικών φίλτρων υπεριώδους ακτινοβολίας, τα οποία χρησιμοποιούνται ως συστατικά σε αντηλιακά και καλλυντικά προϊόντα. Η χρωματογραφία βελτιστοποιήθηκε, ώστε να επιτευχθεί ο αποτελεσματικός διαχωρισμός των τεσσάρων εξεταζόμενων ενώσεων, με σύστημα βαθμωτής έκλουσης συνολικής διάρκειας 4,5 λεπτών. Η τεχνική σάρωσης που επιλέχθηκε ήταν αυτή της παρακολούθησης πολλαπλών αντιδράσεων θραυσματοποίησης ιόντων (MRM-MS/MS) για την ακριβή ποσοτικοποίηση των ενώσεων με τη χρήση ιονισμού με ηλεκτροψεκασμό σε θετικό ιονισμό.. Η χρωματογραφική στήλη που χρησιμοποιήθηκε ήταν η XTerra MS C18 (2,1mm × 50mm, 3,5μm), ενώ οι κινητές φάσεις αποτελούνταν από το διαλύτη (Α) ο οποίος εμπεριείχε νερό και 10 mM μυρμηκικό αμμώνιο σε pH=5,5 (προσαρμοσμένο με 5 Μ μυρμηκικό οξύ) και το διαλύτη (Β) που εμπεριείχε μεθανόλη μαζί με ρυθμιστικό διάλυμα 0,1% μυρμηκικού οξέος. Η ταχύτητα ροής καθορίστηκε σε 0,5 ml/min. Η επικύρωση της μεθόδου πραγματοποιήθηκε με τη μελέτη των ορίων ανίχνευσης (LOD) και ποσοτικού προσδιορισμού (LOQ), τα εύρη γραμμικότητας, την ακρίβεια, τη πιστότητα και τη σταθερότητα κάθε ένωσης σε πρότυπα διαλύματα. Για όλες τις ενώσεις, τα αποτελέσματα της επικύρωσης ήταν ικανοποιητικά. Η μέθοδος εφαρμόστηκε σε εκχυλίσματα από ex-vivo πειράματα που πραγματοποιήθηκαν για την εκτίμηση της διαπερατότητας των τεσσάρων αυτών οργανικών φίλτρων υπεριώδους ακτινοβολίας στον ανθρώπινο οργανισμό. Κατά το στάδιο της προκατεργασίας κρίθηκε απαραίτητη η αλλαγή του διαλύτη των δειγμάτων και η προσυγκέντρωσή τους. Η δοκιμασία Student’s test χρησιμοποιήθηκε για την αξιολόγηση της επίδρασης του υποστρώματος, μέσω της σύγκρισης των κλίσεων των ευθειών παλινδρόμησης των καμπυλών αναφοράς σε διαλύτη και των καμπυλών αναφοράς του υποστρώματος. Η ποσοτική αποτίμηση των δειγμάτων εν τέλει, πραγματοποιήθηκε με τη χάραξη μεθανολικών καμπυλών αναφοράς. Η ανάκτηση της μεθόδου κυμάνθηκε από 94,37% έως 108,76%. Από τα 28 δείγματα που αναλύθηκαν συνολικά, μόνο στα δείγματα που λήφθηκαν έπειτα από 24 ώρες ανιχνεύτηκαν συγκεντρώσεις από τις προσδιοριζόμενες ενώσεις.
description: A novel High Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry (HPLC-MS/MS) method has been developed for the determination of four organic UV filters in extracts from permeability studies. The target compounds were analyzed by the HPLC-MS/MS method under the positive ion (ESI) mode using the Multiple Reaction Monitoring (MRM) mode. The chromatographic separation was performed on a XTerra MS C18 (2.1mm × 50mm, 3.5μm) column with a mobile phase consisting of solvent (A): water with 5 M formic acid and 10 mM ammonium formate and solvent (B): methanol with 0.1% formic acid. The proposed method was validated in terms of the detection (LOD) and quantification limits (LOQ), the linearity ranges, the intra- and inter- day precision and the accuracy of the analysis. The stability of the target compounds in solutions was also studied. Finally, the method was successfully applied to the analysis of the four organic UV filters in extracts from permeability studies, which were carried out at the Department of Pharmacy in Aristotle University of Thessaloniki. The samples were analyzed with a simple pretreatment procedure achieving solvent’s change and pre-concentration. To evaluate the matrix effect, a comparison of the slopes of the standard regression curves with those of the matrix-matched calibration curves, using the Student’s t-test, was carried out. The quantitative evaluation of the samples was finally performed by plotting the external methanolic calibration curves. The accuracy was evaluated by recovery experiments, resulting in the range of 94.37-108.76%. The target compounds were detected in low concentration in the 28 samples