Επαναλαμβανόμενη Απώλεια Κύησης: Ανοσοϊστοχημική Διερεύνηση της έκφρασης του δείκτη IL-33 σε Πλακουντιακό Ιστό
Creators: name: Κοκκάλου, Ελένη Αλέξανδρου-Μάριου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2023
Subjects: Αυτόματες αποβολές
Ιντερλευκίνη-33
Ανοσοϊστοχημεία
Spontaneous abortions
Interleukin-33
Immunohistochemistry

description: Η υπογονιμότητα, αποτελεί ένα από τα σημαντικότερα προβλήματα της σημερινής εποχής που επηρεάζει αναμφισβήτητα πολλά ζευγάρια σε ολόκληρο τον πλανήτη. Ουσιαστικά, η υπογονιμότητα αποτελεί την αδυναμία ενός ζευγαριού να συλλάβει και να ολοκληρώσει επιτυχημένα μια κύηση. Υπάρχουν πολλοί λόγοι που μπορεί να οφείλονται για την ανικανότητα του ζευγαριού να επιτύχει μια σύλληψη. Ένα σημαντικό αίτιο που οδηγεί στην υπογονιμότητα είναι οι αυτόματες αποβολές. Ως αυτόματη αποβολή ορίζεται η απώλεια του εμβρύου πριν την 20η εβδομάδα κύησης. Οι αυτόματες αποβολές μπορεί να οφείλονται σε διάφορα αίτια που αφορούν το κύημα, τη μητέρα, το πατέρα αλλά και τη μίξη αιτίων, δηλαδή από το συνδυασμό των παραπάνω. Φυσικά, υπάρχει και μια κατηγορία αποβολών, η οποία είναι η αγνώστου αιτιολογίας, δηλαδή οι γνωστές ως «ανεξήγητες αποβολές» ή «ιδιοπαθείς αποβολές». Οι ιδιοπαθείς αποβολές σχετίζονται άμεσα με την ανοσολογία της κύησης και είναι αυτές που έχουν προσελκύσει πολύ την επιστημονική κοινότητα, καθώς τα αίτια που προκαλούν αυτού του είδους τις αποβολές δεν είναι προφανή. Οι μελέτες που έχουν πραγματοποιηθεί για την ανοσοανοχή κατά τη διάρκεια της κύησης εστιάζονται κυρίως στον προσδιορισμό των μηχανισμών για τη δημιουργία ενός ανοσολογικού προνομίου εντός της μήτρας. Βασικό ρόλο στη μητρική ανοχή έχουν οι εμβρυϊκές τροφοβλάστες, εξαιτίας της παραγωγής των κυτοκίνων. Η ιντερλευκίνη-33 (IL-33) είναι μια πλειοτροπική κυτοκίνη και αποτελεί το πιο πρόσφατο μέλος της IL-1 οικογένειας. Εκφράζεται κυρίως στα ενδοθηλιακά και λεία μυϊκά κύτταρα του πλακούντα και τον ομφάλιο λώρο. Ενισχύει τις Th1, Th2 κυτοκίνες, όσο και τις Th17 ανοσοαποκρίσεις. Ο λειτουργικός ρόλος της IL-33 μπορεί να είναι ποικίλος, αλλά είναι ισχυρός επαγωγέας της Τh2 ανοσοαπόκρισης. Ο σκοπός της συγκεκριμένης ερευνητικής εργασίας ήταν η διερεύνηση της αιτιολογίας των ανεξήγητων αυτόματων αποβολών, μέσω της μελέτης της έκφρασης της κυτοκίνης IL-33 σε υλικό αποβολών. Το υλικό του πειράματος συντελέστηκε από δυο ομάδες, την ομάδα μελέτης και την ομάδα ελέγχου. Η ομάδα μελέτης περιελάμβανε 10 γυναίκες με ιστορικό αυτόματων αποβολών κατά το 1ο τρίμηνο της κύησής τους, ενώ η ομάδα ελέγχου αποτελούνταν από 10 γυναίκες που είχαν προχωρήσει σε εκλεκτική διακοπή της κύησής τους μεταξύ της 6ης και 12ης εβδομάδας. Χρησιμοποιήθηκαν μονοκλωνικά αντισώματα έναντι της Cytokeratin 7 και της προλακτίνης για τη διάκριση μεταξύ των τροφοβλαστικών και των κυττάρων του φθαρτού στην εμβρυομητρική επιφάνεια. Στη συνέχεια, εφαρμόστηκε ανοσοϊστοχημική χρώση για το δείκτη IL-33. Η πυρηνική έκφραση της IL-33 θεωρήθηκε θετική. Όλα τα ιστοτεμάχια παρατηρήθηκαν στο οπτικό μικροσκόπιο και αξιολογήθηκαν από τουλάχιστον 2 ανεξάρτητους παρατηρητές. Η ένταση της ανοσοϊστοχημικής χρώσης αξιολογήθηκε με την κλίμακα των σταυρών: αρνητική (-), ήπια (+), μέτρια (++) και ισχυρή (+++) Η στατιστική ανάλυση έγινε με το μέθοδο R studio. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι η έκφραση της IL-33 ανιχνεύθηκε πιο έντονη στην ομάδα μελέτης από ότι στην ομάδα ελέγχου, με την ίδια ένταση τόσο στο βασικό φθαρτό όσο και στη τροφοβλάστη. Συμπερασματικά, στην παρούσα μελέτη η έκφραση της IL-33 μεταξύ των ομάδων ελέγχου και μελέτης, καταδεικνύει μια πιθανή εμπλοκή της κυτοκίνης στους παθογενετικούς μηχανισμούς των αυτόματων αποβολών. Ωστόσο, περαιτέρω μελέτη απαιτείται ώστε να καταδείξει τα ακριβή παθογενετικά μονοπάτια που εμπλέκονται στην εμφάνιση των αυτόματων αποβολών μέσω της δράσης της IL-33.
description: Infertility is one of the most important problems of today's era that undoubtedly affects many couples all over the planet. Essentially, infertility is the inability of a couple to successfully carry a pregnancy to term. There are many reasons that may account for a couple's inability to conceive. A significant reason leading to infertility is spontaneous abortions. Spontaneous abortion is defined as the loss of the fetus before 20 weeks of pregnancy. Spontaneous abortions can be due to various causes concerning the fetus itself, the mother, the father, but also a mixture of causes. Of course, there is also a category of miscarriages, which is known as "unexplained miscarriages" or "idiopathic miscarriages". Idiopathic miscarriages are directly related to the immunology of pregnancy and are the ones that have attracted the scientific community, since the causes that cause this type of miscarriages are not obvious. The studies that have been carried out on immune tolerance during pregnancy are mainly focused on determining the mechanisms for establishing an immune privilege within the uterus. Fetal trophoblasts play a key role in maternal tolerance, due to the production of cytokines. Interleukin-33 (IL-33) is a pleiotropic cytokine and is the newest member of the IL-1 family. It is mainly expressed in the endothelial and muscle cells of the placenta and the umbilical cord. It enhances Th1, Th2 cytokines, as well as Th17 immune responses. The functional role of IL-33 may be varied, but it is a potent inducer of the Th2 immune response. The purpose of the thesis was to investigate the etiology of unexplained spontaneous abortions, by studying the expression of cytokine IL-33 in abortion material. The material of the experiment was composed by two groups, the study group and the control group. The study group included 10 women with a history of spontaneous abortions during the 1st trimester of their pregnancy, while the control group consisted of 10 women who had undergone an elective termination of their pregnancy between the 6th and 12th week. Monoclonal antibodies against Cytokeratin 7 and prolactin were used to distinguish between trophoblasts and stromal cells on the embryo-uterine surface. Then, immunohistochemical staining for the IL-33 marker was applied. Nuclear expression of IL-33 was considered positive. All tissue sections were observed under the optical microscope and evaluated by at least 2 independent observers. The intensity of immunohistochemical staining was evaluated by the scale of the crosses: negative (-), mild (+), moderate (++) and strong (+++). Statistical analysis was done with the R studio method. The results showed that the expression of IL-33 was detected more intensively in the study group than in the control group, with the same intensity in both decidua and trophoblast. In conclusion, in the present study the expression of IL-33 between the control and study groups, demonstrates a possible involvement of the cytokine in the pathogenic mechanisms of spontaneous abortions. However, further study is required to demonstrate the exact pathogenetic pathways involved in the occurrence of spontaneous abortions through the action of IL-33.