Μελέτη παραγωγοποίησης σουλφοναμιδίων: νάπτυξη και επικύρωση μεθόδων ταυτόχρονου προσδιορισμού τους με υγρή χρωματογραφία υψηλής πίεσης και εφαρμογή σε βιολογικά δείγματα και τρόφιμα
Creators: name: Βασιλειάδου, Χριστίνα
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2010
Subjects: Σουλφοναμίδια
Παραγωγοποίηση
Τρόφιμα
Μονολιθική στήλη
Sulfonamides
Derivatization
Foods
Monolithic column

description: Στην παρούσα Διδακτορική Διατριβή αναπτύχθηκαν χρωματογραφικές μέθοδοι για τον ταυτόχρονο προσδιορισμό μιγμάτων σουλφοναμιδίων σε βιολογικά υγρά και τρόφιμα, μετά από παραγωγοποίησή με φλορεσκαμίνη. Τα σουλφοναμίδια που μελετήθηκαν ήταν τα εξής: σουλφαγουανιδίνη, σουλφανιλαμίδιο, σουλφισομιδίνη, σουλφαδιαζίνη,σουλφαθειαζόλη, σουλφαμεραζίνη, σουλφαμεθαζίνη, σουλφαμεθοξυ-πυριδαζίνη, σουλφαμονομεθοξίνη, σουλφαμεθοξαζόλιο, σουλφαδιμεθοξίνη και σουλφακινοξαλίνη. Πραγματοποιήθηκε χρήση δύο διαφορετικών χρωματογραφικών στηλών, μιας συμβατικής στήλης silica, αντίστροφης φάσης, και μιας μονολιθικής στήλης silica. Βρέθηκαν οι επιλεγμένες συνθήκες του χρωματογραφικού διαχωρισμού, για κάθε στήλη χωριστά, της αντίδρασης παραγωγοποίησης και της φθορισμομετρικής ανίχνευσης. Επίσης, πραγματοποιήθηκε μελέτη και επιλογή των συνθηκών προκατεργασίας και εκχύλισης στερεάς φάσης των δειγμάτων ορού, ούρων, μυϊκού ιστού γαλοπούλας και αυγού κότας, με σκοπό την απομάκρυνση των συστατικών που παρεμποδίζουν στον προσδιορισμό των σουλφοναμιδίων. Η ακρίβεια, η επαναληψιμότητα και η ανάκτηση των προτεινόμενων μεθόδων ελέγθηκαν, για όλα τα δείγματα και για τις πρότυπες ενώσεις. Η σύγκριση των δύο χρωματογραφικών στηλών αφορά στα οκτώ από τα δώδεκα σουλφοναμίδια, διότι μόνο αυτά προσδιορίστηκαν με τις δύο στήλες. H δυνατότητα εφαρμογής υψηλής τιμής ροής στις μονολιθικές στήλες,, δίχως να προκαλούν αύξηση της πίεσης, έχει ως αποτέλεσμα τη λήψη χρωματογραφημάτων καλύτερης ποιότητας και μεγαλύτερου αριθμού ενώσεων, σε μικρότερους χρόνους. Επίσης προκλήθηκε μείωση του ορίου ανίχνευσης της μεθόδου, που εκφράστηκε με τον υποδιπλασιασμό των ορίων ανίχνευσης, ενώ δεν υπήρξε επίδραση στην πιστότητα και την ακρίβεια της μεθόδου. Οι προτεινόμενες μέθοδοι χαρακτηρίζονται από:α)απλή και σύντομη διαδικασία παραγωγοποίησης, με σταθερά παράγωγα, χωρίς κανένα φθορίζον παραπροϊόν, β)χρήση απλού, συστήματος βαθμωτής έκλουσης με ικανοποιητικούς και εκλεκτικούς διαχωρισμούς σε μικρό χρόνο ανάλυσης, γ)απλή προκατεργασία δειγμάτων με δυνατότητα προσυγκέντρωσης, δ)ικανοποιητική ακρίβεια και επαναληψιμότητα και ε)υψηλή ευαισθησία (χαμηλότερα όρια ανίχνευσης από το Ανώτατο Όριο Καταλοίπου της Ευρωπαϊκής Ένωσης. Η πρωτοτυπία της παρούσας Διδακτορικής Διατριβής έγκειται στον ταυτόχρονο φθορισμομετρικό προσδιορισμό σουλφοναμιδίων με χρήση μονολιθικής στήλης και παραγωγοποίηση με φλορεσκαμίνη και στην εφαρμογή των νέων μεθόδων σε βιολογικά υγρά, μυϊκό ιστό γαλοπούλας και αυγό κότας και με τις δύο στήλες.
description: In this study, two new, sensitive and selective LC methods have been developed and validated for the simultaneous determination of several sulfonamides, in the presence of putrescine as internal standard, after pre-column derivatization with fluorescamine. In the first method, the derivatives of sulfaguinidine, sulfanilamide, sulfisomidine, sulfathiazole, sulfamerazine, sulfamethazine, sulfamethoxypyridazine and sulfamethoxazole were separated on a reversed-phase column, Inertsil ODS-3 (250x4 mm I.D., 5μm) using a 20 min gradient elution with a binary system of methanol–0.05 mol L-1 acetate buffer (pH 3.4) and fluorescence detection at excitation and emission wavelengths of 406 and 496 nm respectively. The following conditions that influence the pre-column derivatization of sulfonamides, such as: reaction medium pH-value, fluorescamine concentration and reaction time were examined. Linearity of derivatization was obtained for concentrations from 1.0 to 300 μg L-1 in standard solutions. The within- and between-day relative standard deviations (RSDs) ranged from 0.8 to 3.4% and 1.0 to 3.8% respectively. The method was applied in human serum and urine and in poultry muscle and eggs, after solid-phase extraction and subsequent derivatization of the extracts. The procedure was validated according to the European Union Decision 2002/657/EC for the determination of sulfonamides in foods. The detection limits varied from 0.25 to 0.30 μg L-1 in serum, 0.10 to 0.25 μg L-1 in urine, 1.0 το 8.0 μg kg-1 in poultry muscle and 1.0 to 5.0 μg kg-1 in egg samples. In the second method, the derivatives of twelve sulfonamides (sulfadiazine, sulfamonomethoxine, sulfadimethoxine and sulfaquinoxaline were also added) were separated on a monolithic silica column, Chromolith Performance RP-18 (100 x 4.6 mm) using methanol-0.05 mol L-1 acetate buffer pH 3.4), but with different gradient elution programme. Linearity of derivatization ranged from 3.0 to 300 μg L-1 in standard solutions. The within- and between-day RSDs ranged from 0.6 to 3.2% and 0.9 to 3.3% respectively. The whole procedure was validated, according to the European Union Decision 2002/657/EC, for the determination of sulfonamides in poultry muscle and eggs following solid-phase extraction. The method was also applied in human serum and urine. The detection limits varied from 2.0 to 17.0 μg kg-1 in poultry muscle, 2.0 to 15.0 μg kg-1 in egg, 0.30 to 5.0 μg L-1 in human serum and 0.25 to 2.5 μg L-1 in urine samples.