Ανάπτυξη μεθόδου αέριας χρωματογραφίας-φασματομετρίας μαζών (GC-MS) για τον ταυτόχρονο προσδιορισμό βενζοδιαζεπινών και αντιψυχωσικών φαρμάκων σε αίμα
Creators: name: Ζιάνα, Βασιλική Ιωάννη
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2021
Subjects: Αέρια Χρωματογραφία-Φασματομετρία Μάζας
Βενζοδιαζεπίνες
Αντιψυχωσικά
Gas Chromatography-Mass Spectrometry
Benzodiazepines
Antipsychotics

description: Κατά τη νοσηλεία των ασθενών στη Μονάδα Εντατικής Θεραπείας (ΜΕΘ) χορηγούνται κατασταλτικά και άλλα ψυχοδραστικά φάρμακα. Οι βενζοδιαζεπίνες χρησιμοποιούνται ευρέως ως κατασταλτικά φάρμακα στη ΜΕΘ σε συνεχή ή διαλείπουσα χορήγηση. Σε μικρές δόσεις έχουν αγχολυτική δράση, ενώ σε μεγαλύτερες επιτυγχάνουν καταστολή και αναδρομική αμνησία. Επιπλέον, τα αντιψυχωσικά χρησιμοποιούνται για την αντιμετώπιση του παραληρήματος ασθενών που βρίσκονται σε συγχυτικοδιεγερτική κατάσταση. Στην παρούσα διπλωματική εργασία έγινε ανάπτυξη μεθόδου Αέριας Χρωματογραφίας-Φασματομετρίας Μαζών (GC-MS) για τον ταυτόχρονο προσδιορισμό ουσιών που χρησιμοποιούνται σε ασθενείς κατά τη νοσηλεία τους στην ΜΕΘ για καταστολή και συγκεκριμένα τριών βενζοδιαζεπινών, της λοραζεπάμης, της διαζεπάμης, της μιδαζολάμης καθώς και ενός αντιψυχωσικού της αλοπεριδόλης σε αίμα. Για τον ποσοτικό προσδιορισμό των ουσιών χρησιμοποιήθηκε επιλεκτική παρακολούθηση ιόντων (SIM mode) και κρίθηκε απαραίτητη η χρήση παράγοντα παραγωγοποίησης MSTFA 5%TMCS για την αύξηση της ευαισθησίας της μεθόδου. Κατά το στάδιο της προκατεργασίας (εκχύλιση υγρού-υγρού) έγινε βελτιστοποίηση διάφορων παραμέτρων όπως η θερμοκρασία και ο χρόνος παραγωγοποίησης, το pH, ο διαλυτής εκχύλισης και η αναλογία αυτού σε σχέση με την ποσότητα του δείγματος. Η μέθοδος που αναπτύχθηκε, στη συνέχεια επικυρώθηκε και αποδείχτηκε ότι είναι εκλεκτική ως προς τις προσδιοριζόμενες ενώσεις, γραμμική (R2=0.999 για τη λοραζεπάμη, R2=0.9995 για τη διαζεπάμη, R2=0.9997 για τη μιδαζολάμη και R2=0.9986 για την αλοπεριδόλη), επαναλήψιμη (RSD%= 3.6-4.9 % για τη λοραζεπάμη, RSD%= 2.9-6.1 % για τη διαζεπάμη, RSD%= 3.1-6.3 % για τη μιδαζολάμη και RSD%=1.7-7.1 % για την αλοπεριδόλη) και ακριβής (ανάκτηση R % = 82-102 % για τη λοραζεπάμη, R= 84-110 % για τη διαζεπάμη και R= 82-117% για την αλοπεριδόλη). Το όριο ανίχνευσης (LOD) υπολογίστηκε στα 1.5 ng/mL για τη λοραζεπάμη και τη μιδαζολάμη και στα 3 ng/mL για τη διαζεπάμη και την αλοπεριδόλη, ενώ το όριο ποσοτικοποίησης (LOQ) υπολογίστηκε στα 5 ng/mL για τη λοραζεπάμη και τη μιδαζολάμη και στα 10 ng/mL για τη διαζεπάμη και την αλοπεριδόλη. Τέλος έγινε εφαρμογή της μεθόδου για την ανάλυση δειγμάτων ασθενών που νοσηλεύονταν στη ΜΕΘ σε νοσοκομεία της Θεσσαλονίκης
description: Benzodiazepines are widely used as CNS suppressants in continuous or intermittent administration. In small doses they have an anxiolytic effect, while in larger doses they achieve suppression and retrospective amnesia. Antipsychotics are used to treat the delirium of patients who are in a confusing state. A gas chromatographic method combined with mass spectrometric detection was developed, optimized and validated for the determination of lorazepam, diazepam, midazolam and haloperidol in blood. Selected Ion Monitoring (SIM mode) was used for the quantitation of the drugs. This method includes liquid–liquid extraction with ethyl acetate at pH 8 and a derivatization step with MSTFA 5%TMCS. The recoveries was R=84–117% for the four substances. The calibration curves were linear within the dynamic range of each substance with a correlation coefficient higher than 0.9937. The limits of detection and quantification for each analyte were statistically calculated from the relative calibration curves and found to be LOD=1.5 ng/mL for lorazepam and midazolam and 3 ng/mL for diazepam and haloperidol and LOQ=5 ng/mL for lorazepam and midazolam and 10 ng/mL for diazepam and haloperidol. Accuracy and precision were also calculated and were found to be R%=84-117 % and RSD%=1.7-7.1%. The developed method was successfully applied for the quantitation of the above drugs in clinical samples from different hospitals in Thessaloniki. This project took place in the Laboratory of Forensic Medicine and Toxicology, Department of Medicine Aristotle University of Thessaloniki