Προσδιορισμός φύλου εμβρύων χοίρου με τη μέθοδο της αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης
Creators: name: Κεσίδου, Ασπασία Αναστασίου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2016
Subjects: Προσδιορισμός φύλου
Αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης
Χοίρος
Sex identification
PCR-Polymerase chain reaction
Porcine

description: Στη σημερινή εποχή είναι πλέον εδραιωμένη η άποψη ότι ο προκαθορισμός του φύλου στους απογόνους των αγροτικών ζώων είναι ζωτικής σημασίας για τον αποδοτικό εφοδιασμό τροφίμων. Παρά το γεγονός ότι υπάρχουν διάφορες μέθοδοι για τον προσδιορισμό του φύλου, μεταξύ αυτών οι κυτταρογεννητικές αναλύσεις, τα αντιγόνα Η-Υ, οι μετρήσεις ενζύμων που συνδέονται με το Χ χρωμόσωμα και οι ανιχνευτές για το Υ χρωμόσωμα, η εφαρμογή της αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης (PCR) αλληλουχιών του DNAπου σχετίζονται με το φύλο είναι μια σχετικά απλή, γρήγορη, φθηνή και ακριβής μέθοδος. Ο μοριακός προσδιορισμός φύλου αρχικά βασιζόταν στην ενίσχυση του γονιδίου SRY. Παρόλα αυτά, πρόσφατες μελέτες επικεντρώνονται στην ενίσχυση γονιδίων που υπάρχουν και στα αρσενικά και στα θηλυκά ζώα. Στην παρούσα εργασία σχεδιάστηκε ένα συγκεκριμένο, μη εκφυλισμένο, ζευγάρι εκκινητών για την ενίσχυση του γονιδίου της αμελογενίνης (AMEL) των χοίρων, το οποίο υπάρχει και στο Χ (AMELX) και στο Υ (AMELY) χρωμόσωμα των χοίρων, που βασίζεται στις διαφορές των ιντρονίων των δυο αλληλομόρφων. Η αντίδρασηPCRπραγματοποιήθηκε σε DNAπου απομονώθηκε από 50 αρσενικούς και 50 θηλυκούς χοίρους και απέδειξε ότι η μέθοδος έχει 100% ακρίβεια, επιβεβαιώνοντας με επιτυχία το φύλο από όλα τα DNAδείγματα που εξετάστηκαν. Επιπλέον, εφαρμόστηκε με επιτυχία η μέθοδος για τον καθορισμό του φύλου εμβρύων χοίρων. Η παρούσα εργασία δείχνει ότι η συγκεκριμένη μέθοδος είναι απλή, φθηνή και 100% ακριβής για τον καθορισμό του φύλου στους χοίρους, η οποία μπορεί να εφαρμοστεί σε προγράμματα αναπαραγωγής με σκοπό την διευκόλυνση της διαχείρισης της αναλογίας φύλου των απογόνων.
description: It is now well established that pre-determination of sex in livestock offspring is of critical importance for the efficient production of the world’s food supply. Although several methods of sex identification exist, including cytogenetic analyses, H-Y antigen, measurement of X-linked enzymes and Y-chromosome-specific probes, polymerase chain reaction (PCR) amplification of sex specific DNA sequences is a relatively simple, rapid, inexpensive and highly accurate method. Molecular sexing was initially based on amplification of SRY gene. However, recent studies are focused on amplification of genes present in both males and females. In the present study we designed a specific non degenerate primer pair for amplification of the porcine amelogenin (AMEL) gene, which is present in both X (AMELX) and Y (AMELY) porcine chromosomes, based on the differences in the introns of the two alleles. PCR amplification performed in DNA extracted from 50 male and 50 female pigs revealed the 100% accuracy of this method, by successfully confirming the sex of each DNA sample tested. Furthermore, we successfully applied this PCR method for the sex determination of porcine embryos. This study shows that the present method is a simple, cheap and highly precise method for porcine sex identification, which can be applied in breeding programs to facilitate manipulation of the sex ratio of offspring.