Ανάπτυξη μεθόδου χρωματογραφικού προσδιορισμού πέντε λιπόφιλων δραστικών ουσιών σε κρέμα με αντιγηραντικές ιδιότητες
Creators: name: Καραβαλάση, Αθανασία Στυλιανού
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2024
Subjects: Ανάπτυξη χρωματογραφικής μεθόδου
Λιπόφιλες δραστικές ουσίες
Αντιγηραντική κρέμα
Development of a chromatographic method
Lipophilic active substances
Antiaging cream

description: Η γήρανση του δέρματος, είναι μία σταδιακά εξελισσόμενη διαδικασία που επηρεάζει την ποιότητα ζωής του ατόμου, με αποτέλεσμα όλο και περισσότερο η κοσμετολογία να στρέφεται στη παρασκευή σκευασμάτων με αντιγηραντικές ιδιότητες. Η ραγδαία αύξηση της χρήσης καλλυντικών προϊόντων, αποτελούμενων από ένα μεγάλο εύρος συστατικών, δημιουργεί την ανάγκη για εύρεση επικυρωμένων αναλυτικών μεθόδων για τον έλεγχο της ποιότητάς τους. Η παρούσα διπλωματική εργασία ασχολείται με την ανάπτυξη και επικύρωση χρωματογραφικής μεθόδου για τον ποσοτικό προσδιορισμό πέντε λιπόφιλων συστατικών, με αντιγηραντικές ιδιότητες, σε καλλυντική κρέμα. Για τον σκοπό αυτό παρασκευάστηκε βάση κρέμας, cold cream (w/o), στην οποία ενσωματώθηκαν πέντε λιπόφιλες ουσίες, η ρεσβερατρόλη, το φερουλικό οξύ, η κουερσετίνη, η ρετινόλη και η α-τοκοφερόλη που διαθέτουν αντιγηραντικές και αντιοξειδωτικές ιδιότητες. Για την παρασκευή της κρέμας δόθηκε ιδιαίτερη βαρύτητα στην παραλαβή (με εκχύλιση) της ρεσβερατρόλης, από υπόστρωμα σταφυλιών (ποικιλίες Μοσχάτο, Ράλυ και Σουλτανί Κορίνθου), η οποία και στη συνέχεια θα προστίθονταν στο σκεύασμα. Λόγω της πολύ χαμηλής ανάκτησης της δραστικής, χρησιμοποιήθηκε ανάλογο εκχύλισμα προερχόμενο από εμπορικό σκεύασμα. Η μέθοδος προσδιορισμού των δραστικών ήταν η χρωματογραφία υγρού υψηλής απόδοσης (HPLC), συζευγμένη με ανιχνευτή υπεριώδους, όπου το μήκος κύματος ανίχνευσης ορίστηκε στα 320nm, 370nm, 326nm, 290nm αντίστοιχα. Για τον διαχωρισμό των δραστικών χρησιμοποιήθηκε ως στατική φάση μια στήλη C18 (25 cm Χ 4,6 mm), 5μm, σε θερμοκρασία 40 οC. Η κινητή φάση περιείχε Ακετονιτρίλιο/Φορμικό οξύ 0,2% και Η2Ο /Φορμικό οξύ 0,2% σε βαθμιδωτή έκλουση, με ροή 1,5 ml/min. Τα δείγματα στην τελική τους αραίωση διαλύθηκαν σε Μεθανόλη/ Ακετονιτρίλιο/ Φορμικό οξύ 0,2%. Η αναλυτική μέθοδος επικυρώθηκε διεξοδικά, σύμφωνα με τις κατευθυντήριες οδηγίες της ICH Q2(R2). Αξιολογήθηκε η παράμετρος της γραμμικότητας (r2 ≥ 0,998), της επιλεκτικότητας, της ακρίβειας (%Recovery 97,10-101,98). της επαναληψιμότητας, το όριο ανίχνευσης (LOD), το όριο ποσοτικοποίησης (LOQ), το εύρος συγκεντρώσεων και η ευρωστία. Η επεξεργασία των δειγμάτων για την ανάκτηση των πέντε ουσιών από την κρέμα διερευνήθηκε με πειραματικό σχεδιασμό και την τεχνική D-optimal, όπου ένα μίγμα (mixture component) συσχετίστηκε με την επίδραση δυο παραγόντων (factors). Ως παράγοντες υπό διερεύνηση ορίστηκαν ο χρόνος παραμονής του δείγματος στους υπερήχους και ο χρόνος κατάψυξης του, ενώ παράλληλα (ως μίγμα) μελετήθηκε η χρήση δυο διαλυτών εκχύλισης σε διάφορες αναλογίες (μεθανόλη και ακετονιτρίλιο). Τα δεδομένα υπέστησαν στατιστική επεξεργασία και ελέγχθηκε η σημαντικότητα της επίδρασης των παραγόντων ή του μείγματος στις αποκρίσεις. Η προτεινόμενη (βάση πειραματικού σχεδιασμού) διαδικασία εκχύλισης εφαρμόστηκε για την ανάκτηση των πέντε δραστικών από το σκεύασμα (n=5) και αποδείχτηκε αξιόπιστη ( (%Recovery 98,48-102,87, %RSD &lt;2%).
description: Skin aging is a gradually evolving process that affects the quality of life. As a result, cosmetology is increasingly turning to preparations with anti-aging properties. The rapid increase in the use of cosmetic products, consisting of a wide range of ingredients, creates the need to find valid analytical methods to control their quality. This thesis deals with the development and validation of a chromatographic method for the quantitative determination of five lipophilic components, with anti-aging properties, in a cosmetic cream. For this purpose, a cold cream (w/o) was prepared and five lipophilic substances (resveratrol, ferulic acid, quercetin, retinol and α-tocopherol) with anti-aging and antioxidant properties were incorporated. For the preparation of the cream, special importance was given to the extraction (by extraction) of resveratrol, from a substrate of grapes (Moschato, Raleigh and Corinthian Sultani variety), which would then be added to the formulation. Due to the very low recovery of the active substance, an analogous extract derived from a commercial formulation was used. The analysis was carried out with high performance liquid chromatography (HPLC), coupled with a UV detector, where the detection wavelength was set at 320nm, 370nm, 326nm, 290nm respectively. A C18 column (25 cm X 4.6 mm), 5 µm, at a temperature of 40 °C was used as a stationary phase for the separation of the substances. The mobile phase contained Acetonitrile/Formic acid 0.2% and H2O/Formic acid 0.2% in gradient elution program, with a flow rate of 1.5 ml/min. The samples, in their final dilution, were dissolved in Methanol/Acetonitrile/Formic acid 0 .2%. The analytical method was thoroughly validated in accordance with ICH Q2(R2) guidelines. The parameters of linearity (r2 ≥ 0.998), selectivity, precision (%Recovery 97.10-101.98), repeatability, (limit of detection (LOD), limit of quantification (LOQ), concentration range and robustness were evaluated. The processing of the samples to recover the five substances from the cream was investigated with experimental design and the D-optimal methodologie, where a mixture (mixture component) was associated with the effect of two factors. The factors, under investigation, were defined as the time of the sample remained in the ultrasound, and its freezing time, while at the same time (as a mixture) the use of two extraction solvents in different ratios (methanol and acetonitrile) was studied. The data were statistically processed and the significance of the effect of the factors or mixture on the responses was checked. The proposed extraction procedure was applied to recover the five active substances from the formulation (n=5) and based on the results, it proved to be reliable (%Recovery 98.48-102.87, %RSD &lt;2%).