Χρωματομετρική μέθοδος προσδιορισμού θρομβίνης και παράγοντα Xa και εφαρμογές:
Creators: name: Φάκα, Ανθή Δημητρίου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2011
Subjects: Θρομβίνη
Χρωματομετρική μέθοδος
Πήξη αίματος
Thrombin
Chromatometric method
Blood coagulation

description: Ο μηχανισμός της πήξης περιλαμβάνει μια σειρά αλληλοδιάδοχων πρωτεολυτικών αντιδράσεων που οδηγούν στην τελική αντίδραση της μετατροπής της προθρομβίνης σε θρομβίνη. Oι παράγοντες VIIa και X κατέχουν ιδιαίτερη θέση στο σύνολο του μηχανισμού. Ο VIIa μπορεί να ενεργοποιήσει τον παράγοντα X και τον παράγοντα IX. Άλλωστε είναι γενικώς αποδεκτό ότι ο πήξη αρχίζει in vivo όταν εκλυθεί ο ιστικός παράγοντας (TF) και δημιουργηθεί το σύμπλοκο FVIIa-TF. Η παρούσα εργασία εστιάστηκε περισσότερο στην αντίδραση της δημιουργίας θρομβίνης μέσα από την οποία μελετήθηκε ο μηχανισμός της πήξης και έγινε μια προσπάθεια διασαφήνισης του τρόπου δράσης της περίσσειας του παράγοντα VIIa. Αρχικά, αναπτύχθηκε μια χρωματομετρική μέθοδος η οποία έδωσε τη δυνατότητα παρακολούθησης της κινητικής μετατροπής της προθρομβίνης σε θρομβίνη. Εστιάσαμε ιδιαίτερα στην βελτιστοποίηση μιας ήδη υπάρχουσας και ευρέως χρησιμοποιούμενης τεχνικής με σκοπό την ανάπτυξη μιας όσο το δυνατόν σύντομης και απλοποιημένης, αλλά ταυτόχρονα αξιόπιστης μεθόδου, που στόχο έχει την αυτοματοποιημένη εφαρμογή της, ώστε να αποτελέσει μια ταχύτατη μέθοδο ρουτίνας στην καθημερινή πρακτική. Ένα από τα κύρια πλεονεκτήματα της μεθόδου που αναπτύχθηκε είναι ότι κατέστη δυνατό για πρώτη φορά να γίνει παρακολούθηση της κινητικής παραγωγής θρομβίνης σε μια πλειάδα βιολογικών δειγμάτων. Μετά τη βελτιστοποίηση της συγκεκριμένης μεθόδου, μελετήθηκαν κάποιες εφαρμογές μέσω της παρακολούθησης της κινητικής παραγωγής θρομβίνης, αλλά και της παραγωγής του παράγοντα Χa . Οι εφαρμογές ήταν οι εξής: Έγινε μια προσπάθεια διαλεύκανσης του τρόπου δράσης του παράγοντα VIIa, σε σχέση με την τελική παραγωγή της θρομβίνης και τη σχέση του με τον παράγοντα X. Για το σκοπό αυτό χρησιμοποιήθηκε μια σειρά δειγμάτων και διερευνήθηκε η επίπτωση της προσθήκης του FVIIa στην κινητική μετατροπής της θρομβίνης, αλλά και στην κινητική παραγωγής του παράγοντα X σύμφωνα με τη μέθοδο που αναπτύχθηκε. Ακόμη, ένας από τους στόχους της εργασίας ήταν η μελέτη της επίδρασης της χορήγησης αντιπηκτικών σε άτομα που πάσχουν από καρδιαγγειακά νοσήματα. Για το λόγο αυτό, αρχικά έγινε μελέτη της κινητικής για κάθε δείγμα χωριστά και στη συνέχεια πραγματοποιήθηκε στατιστική επεξεργασία για όλα τα υπό μελέτη δείγματα. Τέλος, μελετήθηκαν οι μεταβολές στα επίπεδα της θρομβίνης και του παράγοντα Χα σε υγιή πληθυσμό αθλουμένων πριν την έναρξη της άσκησης, δεκαπέντε λεπτά μετά από το τέλος της άσκησης και δυο ώρες μετά.
description: Blood coagulation mechanism consists of sequential reactions leading to the reaction where prothrombin is transformed into thrombin. Factor VIIa has culminant position in this mechanism, given its ability to activate both factor IX and X. It is well known today that in vivo coagulation is triggered after the release of tissue factor and the subsequent formation of complex FVIIa-TF. The present work was mainly focused to thrombin generation via the study of the aforementioned reaction. We studied the mechanism of coagulation, and, more particularly, the mechanism of action of FVIIa in excess. We developed initially a chromatometric method. This method allowed the monitoring of the kinetics of thrombin generation. The method that we proposed, has as a purpose to optimize a rapid kinetic photometric thrombin activity assay so as to use thrombin generation method as a rapid and in a routine clinical laboratory. One of the main advantages of the method is that thrombin generation can be monitored in a variety of biological samples directly. After all necessary optimization the method, it was carried out, some applications based on the observation of the kinetics of the thrombin and factor Xa generations. The applications were the following: Initially, it was made an effort of clarification of the way of action of factor VIIa, in combination with the final production of thrombin and its relation with factor X. For this aim was used number of samples for which, it was investigated the effect of addition of FVIIa in the kinetics of thrombin generation, but also in the kinetics of production of factor X according to the method that was developed. Also, one of the objectives of our work was the study of effect of anticoagulants in individuals, that suffer from cardiovascular deseases. For this reason, initially it was studied the kinetics on each sample separately and afterwards it was applied a statistical analysis for all the 117 study samples. Finally, were studied the changes in the levels of thrombin and factor Xa in healthy population before the beginning of exercise, fifteen minutes after the end of exercise and two hours afterwards.