title: Binding partners of the neuroexophilin-neurexin complex identified in Nxph1-GFP tg/- and Nxph3-GFP tg/- mice
Creators: name: Frasoński, Mikołaj
Publisher: name: University of Muenster, Institutional Repository MIAMI
Year: 2022
Subjects: subject: 570 Biology

description: In meiner Doktorarbeit konzentriere ich mich auf Neurexophiline, spezifische a-Neurexine-Liganden. Neurexophiline werden von vier Genen codiert (nxph1-4), und trotzdem, dass sie seit über 30 Jahren untersucht werden, ist ihre Funktion weiterhin unbekannt. In dieser Arbeit konnte ich nachweisen, dass Neurexophiline zwar in verschiedenen Teilen des Gehirns exprimiert werden, sich aber dennoch ähnlich verhalten, indem sie dasselbe Epitop der LNS2-Nrxn1a-Domäne binden. Ich habe die Funktion von Neurexophilinen untersucht, indem ich Pulldown-Screenings von transgenen Mausgehirnen durchgeführt habe, die Nxph1-GFP und Nxph3-GFP überexprimieren. In meiner Arbeit fand ich heraus, dass der Nrxn-Nxph-Komplex in einer altersabhängigen Weise an NMDA-, GABAB-, mGluR3- und mGluR5-Rezeptoren bindet. Schliesslich konnte ich auch nachweisen, dass die GluN1-Domäne des NMDA-Rezeptors direkt an die LNS6/bNrxn-Domänen von Neurexinen bindet.
description: Introduction ..... 9 1.1 Synapses ..... 9 1.2 Cell adhesion molecules ..... 9 1.2.1 Synaptic cell adhesion molecules: Neurexins ..... 10 1.2.2 The function of neurexins ..... 11 1.2.3 The structure of neurexins and their binding partners ..... 12 1.3 Neurexophlins ..... 15 1.3.1 Expression of neurexophilins ..... 15 1.3.2 The structure and properties of neurexophilins ..... 16 1.3.3 Function of neurexophilins ..... 21 1.4 The aim of the study ..... 22 2. Materials and Methods ..... 23 2.1 Materials ..... 23 2.1.1 Animals ..... 23 2.1.2 Antibodies ..... 24 2.1.3 Apparatus ..... 25 2.1.4 Cell cultures ..... 26 2.1.5 Chemicals ..... 27 2.1.6 Media and Supplements ..... 28 2.1.7 Solutions and media for cell culture ..... 29 2.1.8 Molecular biology kits ..... 31 2.1.9 Oligonucleotides ..... 31 2.1.10 Plasmids ..... 33 2.1.11 Software ..... 34 2.2 Methods ..... 35 2.2.1 Molecular biology methods ..... 35 2.2.2 Biochemical procedures ..... 44 3. Results ..... 51 3.1 The differences between neurexophilins ..... 51 3.1.1 Nxph1 ..... 51 3.1.2 Nxph2 ..... 52 3.1.3 Nxph3 ..... 53 3.1.4 Nxph4 ..... 54 3.2 All neurexophilin isoforms bind to the same epitope of Neurexin1α ..... 55 3.3 Searching for novel binding partners of the neurexophilin/neurexin complex..... 59 3.4 GluN1 binds to neurexins in adult brains ..... 64 3.5 NMDAR, GABABR, LRRTM2, Nlgn1, mGluR3 and mGluR5 interact with Nxph3-GFP/αNrxn complex during different stages of development ..... 69 3.6 Recombinant GluN1-GFP binds to neurexins ..... 74 4. Discussion..... 79 4.1 All neurexophilins bind to the same epitope of Nrxn1α ..... 79 4.2 NMDAR is a novel binding partner of neurexins..... 80 4.3 NMDAR interacts with α-neurexin/neurexophilin complex in mature brains ..... 82 4.4 Other age-dependent interactions..... 82 4.5 Limitations and recommendations ..... 86 4.6 Conclusion and outlook ..... 88 5. References ..... 91 6. Summary ..... 122 8. Abbrevations ..... 123 9. List of figures ..... 125 10. List of tables..... 125 11. Lebenslauf ..... 127 12. Acknowledgment ..... 128