Λειτουργική και μοριακή ανάλυση σε ποντικούς με απενεργοποίηση της CYLD στα καρδιομυοκύτταρα μετά από επαγωγή σηπτικού πλήγματος
Creators: name: Λιώλιου, Αναστασία Βασιλείου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2017
Subjects: subject: Γενετική
subject: Μοριακή βιολογία
subject: Βιοδιαγνωστιπή
subject: Genetics
subject: FOS: Biological sciences
subject: Molecular biology
subject: Biodiagnostics

description: Η καρδιακή ανεπάρκεια συνεχίζει να αποτελεί μία από τις κυριότερες αιτίες νοσηρότητας και θνησιμότητας παγκοσμίως και οι παράγοντες που μπορεί να οδηγήσουν σε αυτή ποικίλουν. Οι κυτταρικοί και μοριακοί μηχανισμοί που εμπλέκονται στη νόσο δεν έχουν διερευνηθεί σε όλο τους το εύρος. Οι αποουβικουιτινάσες αποτελούν μια κατηγορία ενζύμων που καταλύουν την απομάκρυνση της ουβικουιτίνης, από συγκεκριμένα υποστρώματα πρωτεϊνών και τα τελευταία χρόνια έχουν αναδειχθεί ως βασικοί ρυθμιστές πολλαπλών κυτταρικών διεργασιών όπως ο πολλαπλασιασμός, η μετανάστευση η απόπτωση και οι φλεγμονώδεις αποκρίσεις. Αν και υπάρχουν κάποια πρόσφατα δεδομένα σχετικά με την ανάμιξη της αποουβικουιτινάσης CYLD στην παθογένεια καρδιαγγειακών παθήσεων, δεν έχει εξακριβωθεί ο ακριβής της ρόλος στην καρδιά. Επιπλέον, από πειραματικά δεδομένα του εργαστηρίου μας προτάθηκε ένας νέος μηχανισμός επαγωγής της αποουβικουιτινάσης της CYLD στην καρδιά μέσω του PPAR-α. Με στόχο την αποσαφήνιση του ρόλου της αποουβικουιτινάσης CYLD στην καρδιά δημιουργήθηκαν αΜΗC-MerCreMer CYLD fl/fl πειραματόζωα. Από αυτά προέκυψε μία ομάδα ελέγχου (H-CYLD+) και μία ομάδα ζώων στα οποία χορηγήθηκε ταμοξιφαίνη ώστε να πραγματοποιηθεί υπό όρους ιστοειδική απενεργοποίηση του γονιδίου της CYLD στα καρδιομυοκύτταρα (H-CYLDΔ9). Επίσης, τα πειραματόζωα υποβλήθηκαν σε έντονο στρες με τη χορήγηση λιποπολυσακχαρίτη LPS για τη δημιουργία ενός μοντέλου σηπτικής καρδιοπάθειας. Στην παρούσα εργασία μελετήθηκε αρχικά το κατά πόσο επηρεάζεται η καρδιακή λειτουργία σε συνθήκες σηπτικού σοκ από την απενεργοποίηση του γονιδίου της CYLD στην καρδιά. Σύμφωνα με τα αποτελέσματα της ηχωκαρδιογραφίας τα H-CYLDΔ9 ποντίκια εμφάνιζαν βελτιωμένη καρδιακή λειτουργία σε σχέση με την ομάδα ελέγχου στη σήψη. Στη συνέχεια, πραγματοποιήθηκαν πειράματα με στόχο τη μελέτη των επιπέδων φλεγμονής στις δύο ομάδες πειραματοζώων. Η φλεγμονή αποτελεί αναπόσπαστο χαρακτηριστικό της σήψης και διερευνήθηκε το ενδεχόμενο να εμπλέκεται η CYLD στο μηχανισμό αυτό. Τα αποτελέσματα έδειξαν κάποιες διαφοροποιήσεις ανάμεσα στις δύο ομάδες πειραματοζώων αλλά δε μπόρεσε να εξαχθεί κάποιο συμπέρασμα σχετικά με τον ακριβή ρόλο της CYLD στη φλεγμονή.Ακολούθησε μία σειρά πειραμάτων για τη μελέτη γονιδίων που συμμετέχουν στον ενεργειακό μεταβολισμό στην καρδιά. Η σηπτική καρδιοπάθεια χαρακτηρίζεται από γενικευμένη πτώση της ενέργειας του μυοκαρδίου, γεγονός που οφείλεται κυρίως στη μειωμένη οξείδωση λιπαρών οξέων. Από τα αποτελέσματα μπορούμε να πούμε πως υπάρχουν κάποιες ενδείξεις για τη συμμετοχή της CYLD στη ρύθμιση γονιδίων του μεταβολισμού, θα χρειαστούν όμως επιπλέον πειράματα για την πλήρη αποσαφήνιση του ρόλου της
description: Heart failure continues to be one of the main causes of morbidity and mortality worldwide and the factors that can lead to it vary. The cellular and molecular mechanisms involved in the disease have not been explored in their entirety. Deubiquitinases are a class of enzymes that catalyze the removal of ubiquitin from specific protein substrates, and have in recent years been shown to be key regulators of multiple cellular processes such as proliferation, migration, apoptosis and inflammatory responses. Although there is some recent data on the association of CYLD deubiquitinase to the pathogenesis of cardiovascular disease, its exact role in the heart has not been established. In addition, from our experimental data, we proposed a new mechanism of induction of CYLD deubiquitinase in the heart through PPAR-α. In order to clarify the role of CYLD deletion in the heart, αΜΗC-MerCreMer CYLD fl/fl mice were generated. One of these resulted in a control group (H-CYLD+) and a group of animals administered tamoxifen to conditionally conditionally silenced the CYLD gene in cardiomyocytes(H-CYLDΔ9). Also, the animals were subjected to intense stress by administering LPS lipopolysaccharide to create a model of septic cardiopathy. In the present study, it was first studied whether the cardiac function is affected in septic shock conditions by the CYLD gene silencing in the heart. According to echocardiography results H-CYLDΔ9 mice showed improved cardiac function compared to the control group in sepsis. Experiments were then carried out to study the levels of inflammation in the two groups of mice. Inflammation is an integral feature of sepsis and it was investigated that CYLD might be involved in this mechanism. The results showed some differences between the two groups of animals, but no conclusion could be drawn about the exact role of CYLD in inflammation. There followed a series of experiments to study genes involved in energy metabolism in the heart. Septic heart disease is characterized by a generalized decline in myocardial energy, which is mainly due to reduced fatty acid oxidation. From the results we proprose that there are some indications for CYLD's involvement in gene regulation of metabolism, but further experiments will be needed to fully clarify its role