Ανάπτυξη μεθόδου και προσδιορισμός βενζοδιαζεπινών σε δείγματα κυψελίδας αυτιού
Creators: name: Μαστρογιάννη Ορθοδοξία Κωνσταντίνου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2022
Subjects: κυψελίδα αυτιού
βενζοδιαζεπίνες
Συνδυασμένη Τεχνική Υγρής Χρωματογραφίας – Φασματοσκοπίας Μαζών σε Σειρά
cerumen
benzodiazepines
UPLC/MS/MS

description: Στην παρούσα μελέτη αναπτύχθηκε και επικυρώθηκε μια μέθοδος για την ταυτόχρονη ανίχνευση 8 βενζοδιαζεπινών στην κυψελίδα αυτιού. Η ανάλυση πραγματοποιήθηκε σε σύστημα SCIEX Triple Quad 6500+ μετά από εκχύλιση υγρού-υγρού. Ως διαλύτης εκχύλισης επιλέχθηκε μεθανόλη με 1% οξικό οξύ. Μετά την προσθήκη του διαλύτη, τα δείγματα αναδεύτηκαν, τοποθετήθηκαν σε λουτρό υπερήχων, φυγοκεντρήθηκαν και εγχύθηκαν απευθείας στο σύστημα LC-MS/MS. Η ίδια μέθοδος προκατεργασίας εφαρμόστηκε για τα τυφλά και επιμολυσμένα δείγματα. Η μέθοδος βρέθηκε να είναι εκλεκτική και ευαίσθητη (LOD: 0.17 ng/mg-0.33 ng/mg), η γραμμικότητα της μεθόδου ήταν άκρως ικανοποιητική για όλες τις αναλυόμενες ουσίες, με συντελεστή γραμμικής παλινδρόμησης που κυμαίνεται μεταξύ 0.9915-0.9993. Η ακρίβεια εντός της ανάλυσης(intra-day precision) ήταν μεταξύ 6.7% και 13.5% και η ακρίβεια μεταξύ της ανάλυσης (inter-day precision) μεταξύ 5.8 και 17.3%, με ακρίβεια εντός των αποδεκτών κριτηρίων για όλες τις αναλυόμενες ουσίες. Όλες οι αναλυόμενες ουσίες στα δείγματα εκχύλισης ήταν σταθερές για 48 ώρες στους 4oC και 72 ώρες στους -20oC, ενώ δεν παρατηρήθηκε σημαντική επίδραση από το υπόστρωμα ή μεταφορά ουσίας από το δείγμα υψηλής συγκέντρωσης. Η δυνατότητα εφαρμογής αποδείχθηκε με την ανάλυση δειγμάτων κυψελίδας από 25 νεκρούς με ιστορικό κατάχρησης ναρκωτικών. Όλες οι αναλυόμενες ουσίες ανιχνεύθηκαν σε πραγματικά δείγματα, επιβεβαιώνοντας έτσι την ευαισθησία της μεθόδου που αναπτύχθηκε. Σύμφωνα με τη βιβλιογραφία είναι η πρώτη φορά που αναπτύχθηκε μια μέθοδος για την ταυτόχρονη ανίχνευση 8 βενζοδιαζεπινών στην κυψελίδα αυτιού, επικυρώθηκε πλήρως και τελικά εφαρμόστηκε σε 25 μεταθανάτια δείγματα
description: In the present study a method for the detection of 8 benzodiazepines in cerumen was developed and validated. Analysis was performed on a SCIEX Triple Quad 6500+ System after Liquid-Liquid extraction. Methanol with 1% acetic acid was chosen as the extraction solvent. After the addition of the solvent, samples were vortexed, sonicated, centrifuged and directly injected into the LC-MS/MS system. The method was found to be selective and sensitive (LOD: 0.17ng-0.33 ng/mg), the assay was linear for all analytes with linear regression coefficient ranging 0.9915–0.9993. The intra-assay precision was between 6.7% and 13.5% and inter-assay precision between 5.8 and 17.3%, with accuracy within the acceptable criteria for all analytes. All analytes in cerumen specimens were stable for 48 hours at 4oC and 72 hours at -20oC, whilst no significant matrix effect or carryover was observed. Applicability was proven by analyzing cerumen samples from 25 deceased with a history of drug abuse. All analytes were detected in real samples, thus confirming the sensitivity of the developed method. According to our knowledge, it is the first time that a method for the simultaneous detection of 8 benzodiazepines in cerumen was developed, fully validated and finally applied to 25 postmortem samples