Συσχέτιση των πολυμορφισμών του TLR4 και CD14 με τη βρογχιολίτιδα στα βρέφη και νήπια:
Creators: name: Γκουτάκη, Μυροφόρα Αργυρίου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2009
Subjects: Βρογχιολίτιδα
Πολυμορφισμός
Ιός αναπνευτστικού συγκυτίου
Bronciolitis
Polymorphisms (SNP)
Respiratory syncytial virus RSV
TLR4
CD14

description: Με τον όρο οξεία βρογχιολίτιδα αναφερόμαστε στο κλινικό σύνδρομο που χαρακτηρίζεται από αναπνευστική δυσχέρεια και εισπνευστικό συριγμό στα πλαίσια μιας ιογενούς λοίμωξης του κατώτερου αναπνευστικού, σε ασθενείς μικρότερους των 2 ετών. Ο RSV αποτελεί το συχνότερο αίτιο της νόσου, προσβάλλοντας το 100% των παιδιών στα πρώτα 2 έτη ζωής. Οι κλινικές εκδηλώσεις της RSV λοίμωξης ποικίλλουν από αυτές με την ελάχιστη συμπτωματολογία έως και τη σοβαρή βρογχιολίτιδα. Οι διαφορές στη βαρύτητα των κλινικών εκδηλώσεων της RSV λοίμωξης, πιθανά να οφείλονται στη κατάσταση των μηχανισμών άμυνας του ξενιστή, η οποία είναι γενετικά καθορισμένη. Το δομικό σύμπλοκο TLR4/CD14 συμμετέχει στην αναγνώριση του ιού ως κομμάτι της φυσικής ανοσιακής απάντησης του οργανισμού και συμβάλλει στη σύνδεση της με την επίκτητη ανοσιακή απάντηση.Σκοπός της μελέτης είναι η διερεύνηση του ρόλου των πολυμορφισμών TLR4-299, TLR4-399 και CD14-159 του υποδοχέα TLR4 και της πρωτεΐνης CD14 αντίστοιχα, στην παθογένεια της λοίμωξης βρεφών και νηπίων από τον RSV. Μελετήθηκαν 50 παιδιά, 27 άρρενα και 23 θήλεα, ηλικίας 15 ημερών έως 2 ετών, με κλινικές εκδηλώσεις οξείας βρογχιολίτιδας τα οποία νοσηλεύτηκαν σε παιδιατρική κλινική κατά το διάστημα ενός έτους. Η ομάδα ελέγχου περιελάμβανε 99 υγιή παιδιά (66 αγόρια και 33 κορίτσια) ηλικίας 4 έως 14 ετών που δεν ανέφεραν στο ιστορικό τους κάποια σοβαρή λοίμωξη του αναπνευστικού ή υποτροπές συρίττουσας αναπνοής μέχρι και την ημέρα ελέγχου.Η ταυτοποίηση του αναπνευστικού συγκυτιακού ιού έγινε μέσω αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης (PCR) σε γενετικό υλικό που εκχυλίστηκε από δείγματα ρινοφαρυγγικού επιχρίσματος των ασθενών. Γινόταν απομόνωση του DNA και με τη μέθοδο PCR-RFLP προσδιοριζόταν οι δύο πολυμορφισμοί του TLR4 SNP -299A/G και SNP -399C/T και ο πολυμορφισμός της πρωτεΐνης CD14 -159C/T. Από τη στατιστική ανάλυση δε προκύπτει συσχέτιση μεταξύ των πολυμορφισμών TLR4 -299Α/G, -399C/T και της εκδήλωσης RSV βρογχιολίτιδας που χρήζει νοσηλείας καθώς επίσης με το φύλο και με την ηλικία. Στη παρούσα μελέτη οι δυο πολυμορφισμοί δε βρέθηκαν σε ανισσοροπία σύνδεσης, αντίθετα με άλλες υπάρχουσες μελέτες πιθανώς λόγω της γενετικής ετερογένειας μεταξύ των διαφορετικών εθνοτήτων. Η συνολική συχνότητα (ασθενείς + ομάδα ελέγχου) των φερόντων τον πολυμορφισμό -299 A/G ατόμων κυμάνθηκε στο 7,38% ενώ για τον πολυμορφισμό -399 C/T έφτασε το 44,97%. Επίσης δεν βρέθηκε συσχέτιση μεταξύ των τύπων Α και Β του ιού RSV και των πολυμορφισμών του TLR4.Όσο αφορά τη συσχέτιση του πολυμορφισμού -159C/T του γονιδίου της πρωτεΐνης CD-14 με τη βρογχιολίτιδα η παρούσα μελέτη υποδεικνύει την ύπαρξη στατιστικά σημαντικής διαφοράς στη συχνότητα τόσο των γενοτύπων (p=0.05) όσο και των αλληλομόρφων (p=0.04). Δε βρέθηκε όμως στατιστικά σημαντική διαφορά στη συσχέτιση του πολυμορφισμού με την RSV βρογχιολίτιδα, παρά μόνο μία ένδειξη ότι ο πολυμορφισμός είναι συχνότερος στην ομάδα των ασθενών από την ομάδα ελέγχου. Στη μελέτη αυτή έγινε επίσης σύγκριση της συχνότητας των τριών πολυμορφισμών ανάμεσα σε παιδιά με ταυτοποιημένη RSV βρογχιολίτιδα και σε παιδιά με κλινικά διαγνωσμένη βρογχιολίτιδα όπου ταυτοποιήθηκε ή δεν ταυτοποιήθηκε κάποιο άλλο παθογόνο. Δε βρέθηκε καμιά στατιστικά σημαντική διαφορά στη σύγκριση αυτή.Συμπερασματικά με βάση τα αποτελέσματα αυτής της μελέτης, είναι πιθανό ότι η πρωτεΐνη CD14 έχει λειτουργικό ρόλο κατά την σύνδεση των ιών με το δομικό σύμπλοκο TLR4/CD14. Η συσχέτιση που βρέθηκε ανάμεσα στον CD14 -159C/T και την εκδήλωση βρογχιολίτιδας, στη παρούσα μελέτη, υποδεικνύει ότι η βαρύτητα στην ανάπτυξη της νόσου δε καθορίζεται αποκλειστικά από το αίτιο. Φαίνεται ότι βασικό ρόλο παίζει η ανοσιακή απάντηση του ξενιστή. Για το λόγο αυτό πιθανώς η ενεργοποίηση των ανοσιακών μηχανισμών που περιγράφηκαν λαμβάνει χώρα κατά την προσβολή του οργανισμού και την ανάπτυξη βρογχιολίτιδας και από άλλα παθογόνα. Η εξαγωγή όμως ασφαλών συμπερασμάτων χρήζει περισσότερο εκτεταμένες πολυκεντρικές μελέτες.
description: The term acute bronchiolitis is used to describe the clinical syndrome that consists of respiratory distress and wheezing from a viral lower respiratory tract infection in children until the age of two years. RSV is the most common pathogen and it affects nearly 100% of children in the first two years of life. The clinical manifestations of RSV infection vary from minimum to serious bronchiolitis. These great variations in the severity of RSV infection may be a result of the genetically predisposed status of immune mechanisms of each individual host. The structural complex of TLR4/CD14 participates in the virus recognition as a component of natural immune response and contributes to the activation of the innate immune system.The aim of this study is to identify the role of polymorphisms -299A/G and -399C/T of TLR4 and -159C/T of protein CD14 to the pathogenesis of RSV infection in infants and small children. Fifty children (27 boys and 23 girls), aged 15 days to 2 years that have been hospitalized during a year were studied. Control group consisted of 99 previously healthy children, 4 to 14 years old, without a history of a serious respiratory tract infection or remissions of wheezing.RSV was indentified by PCR of genetic material that was extracted from nasopharyngeal samples, collected from all patients. Blood samples were used to extract DNA and by using PRC- RFLP method we indentified the two TLR4 -299A/G and -399C/T as well as the CD14 -159C/T polymorphisms.Statistical analysis didn’t show any correlation between the two TLR4 polymorphisms and the development of RSV bronchiolitis that requires hospitalization as well as between them and age and sex. In the present study, there wasn’t proven any linkage disequilibrium between the two TLR4 polymorphisms, unlike the results of other studies, possibly because of the genetic heterogeneity among the different nationalities. The percentage of people, both patients and healthy, carrying the polymorphisms was found about 7,38% for the -299A/G SNP and 44,97% for the -399C/T SNP. Νo correlation was found also between the RSV serotypes A and B and the TLR4 polymorphisms.Concerning the correlation of SNP CD14 -159C/T with bronchiolitis, the present study points out the presence of a statistically significant difference in both the genotype (p=0,05) and the allele (p=0,04) frequency. Nevertheless, there wasn’t found any significant difference between the polymorphism and RSV bronchiolitis, but only an indication that the polymorphism is more frequent in the patients group comparing to the control group. In this study the frequencies of the three polymorphisms were also compared between children with RSV and nonRSV bronchiolitis and no statistically significant difference was found.In conclusion, according to the results of this study it is possible that protein CD14 has a functional role in the viral conjunction to the structural complex TLR4/CD14. The correlation that was found between the SNP -159C/T and the manifestation of bronchiolitis, in this study, points out that the severity in the development of the disease is not specified exclusively by the pathogen. It seems that immune response of the host plays a primary role. For that reason, it is possible that the activation of the immunological mechanisms that were described is taking place during the invasion of other pathogens also and the development of bronchiolitis. More extensive multicentric studies need to take place to lead to more safe conclusions.