Ιστολογική και υπερμικροσκοπική μελέτη της επίδρασης της ενδοϋαλοειδικής έγχυσης αντιμυκητιακών παραγόντων στην παρεγκεφαλίδα: πειραματική μελέτη
Creators: name: Ελευθεριάδης, Θεολόγος Παντελή Θυμιάκη
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2023
Subjects: Παρεγκεφαλίδα
Οπτικό και ηλεκτρονικό μικροσκόπιο
Αντιμυκητιακά φάρμακα
Cerebellum
Optical and electron microscope
Antifungal agents

description: Η μυκητιασική ενδοφθαλμίτιδα είναι μια σπάνια ενδοφθάλμια λοίμωξη η οποία αποτελεί ένα σημαντικό κλινικό πρόβλημα στην οφθαλμολογία λόγω των καταστροφικών συνεπειών της. Οι λοιμώξεις από μύκητες είναι δύσκολο να αντιμετωπιστούν λόγω των περιορισμένων θεραπευτικών επιλογών. Φάρμακα ευρέως χρησιμοποιούμενα στο παρελθόν, όπως η αμφοτερικίνη Β, τείνουν να χάσουν την θέση τους λόγω της σοβαρής τοξικότητάς τους, της σχετικά χαμηλής αποτελεσματικότητάς τους και φυσικά λόγω της ανάπτυξης ανθεκτικότητας στη δράση τους από πολλά είδη μυκήτων. Ως αποτέλεσμα, δημιουργήθηκε η ανάγκη χρήσης νέων, λιγότερο τοξικών και ευρύτερου φάσματος αντιμυκητιακών φαρμάκων. Η παρούσα έρευνα επικεντρώθηκε στην μελέτη δύο από τα νεότερα αυτά φάρμακα, τη βορικοναζόλη, από την οικογένεια των αζολών, και τη μικαφουγκίνη, από την οικογένεια των εχινοκανδινών. Υλοποιήθηκε πρωτόκολλο με τη χρήση κονίκλων albino New Zealand, οι οποίοι χωρίσθηκαν σε πειραματικές ομάδες και στους οποίους χορηγήθηκαν τα φάρμακα με ενδοϋαλοειδική έγχυση. Αναλυτικότερα, η ομάδα C αποτέλεσε την ομάδα ελέγχου και σε αυτή χορηγήθηκε μία έγχυση διαλύματος BSS. Οι υποομάδες V1,V2, Μ1 και Μ2 αποτέλεσαν τις ομάδες μελέτης για τη μονή και διπλή έγχυση βορικοναζόλης και μικαφουγκίνης, αντίστοιχα. Τέλος, στην ομάδα VM χορηγήθηκαν οι δύο φαρμακευτικοί παράγοντες συνδυαστικά. Η προγραμματισμένη θανάτωση των ζώων πραγματοποιήθηκε 10 ημέρες μετά την τελευταία έγχυση για κάθε πειραματική ομάδα. Ακολούθησε η αφαίρεση των παρεγκεφαλιδικών ιστών και η κατάλληλη επεξεργασία τους έτσι ώστε να καταστεί δυνατή η παρατήρηση αυτών στο οπτικό αλλά και στο ηλεκτρονικό μικροσκόπιο. Όσον αφορά τα αποτελέσματα, στο οπτικό μικροσκόπιο δεν παρατηρήθηκαν αλλοιώσεις σε καμία από τις πειραματικές ομάδες. Στο ηλεκτρονικό μικροσκόπιο, στις ομάδες των μονών εγχύσεων βορικοναζόλης και μικαφουγκίνης παρατηρήθηκε ήπια διαταραχή της μορφολογίας του ελύτρου της μυελίνης της λευκής ουσίας, ενώ τα κύτταρα του φλοιού της παρεγκεφαλίδας δεν εμφανίζουν σημαντικές αλλοιώσεις. Επιπλέον, παρατηρήθηκε μικρή αύξηση του μεσοκυττάριου χώρου. Στις ομάδες διπλών εγχύσεων παρατηρήθηκε μεγαλύτερου βαθμού διαταραχή της αρχιτεκτονικής του ελύτρου της μυελίνης σε σχέση με τις ομάδες μονής έγχυσης και μεγαλύτερη αύξηση του μεσοκυττάριου χώρου. Στην ομάδα συνδυαστικής χορήγησης παρατηρήθηκε μικρού βαθμού αλλοίωση του ελύτρου κατά τόπους αλλά όχι τόσο σημαντική αύξηση του μεσοκυττάριου χώρου όσο στις ομάδες των διπλών εγχύσεων και των δύο παραγόντων. Συμπερασματικά, από την εφαρμογή της χρώσης Αιματοξυλίνης - Εωσίνης δεν παρατηρήθηκαν μορφολογικές αλλοιώσεις πράγμα το οποίο συμφωνεί και με την απουσία κλινικών συμπτωμάτων στους κονίκλους και με τις έως τώρα κλινικές μελέτες. Η μελέτη των ιστών στο ηλεκτρονικό μικροσκόπιο αποκάλυψε ήπιες αλλοιώσεις κατά τόπους στο έλυτρο της μυελίνης των εμύελων νευραξόνων της λευκής ουσίας, κάτι το οποίο μας δημιουργεί το ερώτημα σχετικά με την ασφάλεια της χορηγούμενης δόσης των δύο αυτών φαρμάκων, συμπέρασμα το οποίο πρέπει να εξεταστεί με περαιτέρω έρευνα και μελέτη.
description: Fungal endophthalmitis is a rare intraocular infection that constitutes an important clinical problem in ophthalmology due to its devastating consequences. Fungal infections are difficult to treat due to limited treatment options. Drugs widely used in the past, such as amphotericin B, tend to lose their place due to their severe toxicity, their relatively low efficacy and of course due to the development of resistance to their action by many species of fungi. As a result, there is a need to use new, less toxic and with a broader spectrum antifungal drugs. The present research focused on the study of two of these newer drugs, voriconazole, from the azole family, and micafungin, from the echinocandin family. A protocol was implemented using albino New Zealand rabbits, which were divided into experimental groups and were administered the drugs by intravitreal injection. More specifically, group C was the control group and was given an infusion of BSS solution. Subgroups V1, V2, M1 and M2 constituted the study groups for the single and double infusion of voriconazole and micafungin, respectively. Finally, the VM group was administered the two pharmaceutical agents in combination. Scheduled killing of animals was performed 10 days after the last infusion for each experimental group. This was followed by the removal of the cerebellar tissues and their appropriate processing so that it was possible to observe them in the optical as well as in the electron microscope. Regarding the results, no lesions were observed in any of the experimental groups under the optical microscope. In the electron microscope, the voriconazole and micafungin single-injection groups showed mild disruption of white matter myelin sheath morphology, while cerebellar cortical cells showed no significant changes. In addition, a small increase in the intercellular space was observed. In the double injection groups, a greater degree of disruption of the architecture of the myelin sheath was observed than in the single injection groups and a greater increase in the intercellular space. In the group of combined administration, a slight alteration of the epithelium was observed in places, but not as significant an increase of the intercellular space as in the groups of double injections of both agents. In conclusion, no morphological changes were observed from the application of Hematoxylin-Eosin staining, which agrees with the absence of clinical symptoms in the rabbits and with the clinical studies so far. Electron microscopic examination of the tissues revealed mild localized lesions in the myelin sheath of white matter medullary axons, which raises the question of the safety of the administered dose of these two drugs, a conclusion that needs further research and study.