MARCATORI MOLECOLARI AD IMPATTO TRASLAZIONALE NEL CARCINOMA EPATOCELLULARE
Creators: name: SPAGNUOLO, GAIA
Publisher: name: Universit� degli Studi di Milano
Year: 2013

description: L?epatocarcinoma (EC) � un tumore maligno ad elevata morbilit� e mortalit� la cui speranza di cura � basata su diagnosi precoce e terapia individualizzata. Ad oggi il trattamento di elezione � rappresentato dalla chirurgia e l?unico farmaco con comprovata efficacia terapeutica � un presidio biologico di recente introduzione ad azione anti-tirosinochinasica (Sorafenib). La gestione ottimale del paziente con EC � sempre pi� influenzata dalla possibilit� di disporre di marcatori molecolari da utilizzarsi nella pratica clinica a significato diagnostico, prognostico e predittivo. Il presente lavoro si propone come contributo all?identificazione e validazione di specifici indicatori biologici nella diagnostica del piccolo EC, predizione della recidiva del tumore resecato e della sensibilit� individuale alla risposta al trattamento farmacologico nella forma avanzata. E gi� stato dimostrato che l?accuratezza della diagnosi precoce di EC su biopsia epatica puo? essere migliorata in maniera significativa dalla valuatazione dell?espressione combinata di alcuni marcatori recentmente proposti e gi� utilizzati nella pratica clinica. Abbiamo cercato di ottimizzare questo pannello valutando il contributo aggiuntivo della catena pesante della clatrina (CHC) che � componente essenziale nel sistema di trasporto vescicolare intra ed extracellulare, gi� segnalato come sovraregolato negli epatociti tumorali maligni. Utilizzando una casistica di EC di piccole dimensioni e di lesioni precancerose di controllo e documentando l?espressione della molecola con tecnica immunocitochimica, abbiamo verificato la sua efficacia in termini di accuratezza diagnostica. In particolare l?introduzione di CHC si � dimostrata in grado di incrementare la sensibilit� del pannello dal 46,8% al 63,8% a fronte del mantenimento di una specificit� assoluta. E? noto come il processo di carcinogenesi epatica origini anche sulla base di alterazioni delle vie molecolari che governano i processi di tipo ossidativo, con importante ruolo di protezione svolto dalla famiglia dei citocromi. Alcuni studi di espressione genica hanno gi� evidenziato che la recidiva di malattia tumorale nel fegato sia influenzata dalla disregolazione di alcuni citocromi, tra cui CYP1A2. Abbiamo inteso verificare e validare il ruolo del citocromo CYP1A2 nella qualit� di possibile marcatore ad impatto traslazionale nella recidiva dell?EC attraverso il suo dosaggio immuncitochimico nel parenchima epatico non tumorale. Utilizzando una casistica omogenea di pazienti portatori di EC ad eziologia virale (virus C dell?epatite) e a follow-up noto, il dosaggio di CYP1A2 � risultato associato in maniera statisticamente significativa, sia in analisi univariata che multivariata al tempo libero da recidiva tumorale (p=0.012). In particolare la ridotta espressione del citocromo negli epatociti non tumorali, interpretabile come background pi� suscettibile alla trasformazione neoplastica ?de novo?, risultava in grado di predire una pi� rapida ripresa della malattia. La terapia farmacologica dell?EC � attualmente somministrata a pazienti portatori di forme avanzate senza tenere conto della reale e individuale suscettibilit� all?azione del farmaco. Vi � una forte esigenza clinica di selezionare i pazienti candidabili al trattamento anche per gli elevati costi della terapia, ma nessun marcatore, sia esso tissutale o sierologico, si � rivelato ad oggi capace di soddisfare questi requisiti. Abbiamo inteso esplorare se i miRNA, che costituiscono una famiglia eterogenea ma fondamentale di molecole regolatrici della traduzione, potessero a loro volta candidarsi a possibili marcatori biologici di predizione della sensibilit� al trattamento farmacologico dell?EC. A questo scopo, partendo da un pool amplissimo di miRNA, abbiamo proceduto ad una loro progressiva selezione sulla base della loro disregolazione nonch� associazione con il tempo di progressione della malattia dopo trattamento. Lo studio � stato condotto su biopsie epatiche pretrattamento di EC di pazienti omogeneamente trattati con Sorafenib. La selezione delle molecole e la validazione delle stesse � stata condotta in due casistiche distinte di cui la seconda utilizzata come coorte di validazione. Abbiamo cosi potuto individuare un unico miRNA con meccanismo di azione e geni targets poco conosciuti, il cui sovradosaggio valutato con tecnica di real-time PCR risultava fortemente e statisticamente associato ad una prolungata stabilizzazione della malattia tumorale (p=0.009). L?insieme di questi risultati dimostra che la crescente domanda di marcatori di medicina personalizzata per ottimizzare la gestione del paziente oncologico (con EC nel nostro caso), possa essere soddisfatta attraverso l?applicazione di tecniche relativamente semplici e riproducibili quali l?immunocitochimica e l?analisi quantitativa del messaggero, condotte sia su tessuti tumorali che non tumorali. Naturalmente affinch� il dosaggio di una molecola possa entrare nella pratica clinica corrente, candidandosi come un autentico marcatore molecolare, � necessaria, come nei nostri casi, un?ulteriore validazione in studi di tipo prospettico.