Η επίδραση του laser χαμηλής ισχύος στις βιολογικές ιδιότητες βλαστικών κυττάρων από ανθρώπινα εξαχθέντα νεογιλά δόντια (SHED - Stem cells from Human Exfoliated Deciduous Teeth): εργαστηριακή μελέτη
Creators: name: Πασχαλίδου, Μαρία Λάζαρου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2018
Subjects: Laser Χαμηλής Ισχύος
Βλαστικά κύτταρα
οδοντινοβλαστική διαφοροποίηση
Low level laser
stem cells
odontogenic differentiation

description: Σκοπός της παρούσας διπλωματικής εργασίας είναι η μελέτη της επίδρασης του Laser Χαμηλής Ισχύος (Low Level Laser-LLL) στις βιολογικές λειτουργίες βλαστικών κυττάρων από τον πολφό ανθρώπινων νεογιλών δοντιών (Stem cells from Human Exfoliated Deciduous Teeth-SHED). Για το σκοπό αυτό αρχικά, κύτταρα SHED ακτινοβολήθηκαν με Laser Χαμηλής Ισχύος (LLL) σε σταθερές παραμέτρους (InGaAP, 940nm, 200 mW, συνεχής ενέργεια) και με διαφορετική πυκνότητα ενέργειας: 4, 8, 16 J/cm2 σε κάθε ομάδα μελέτης. Στη συνέχεια μελετήθηκε ο πολλαπλασιασμός (δοκιμασίας αναγωγής άλατος του τετραζολίου- ΜΤΤ), η ικανότητα μετανάστευσης (διαμέσου μεμβράνης, Transwell Migration Assay), η όστεο/ οδοντινοβλαστική διαφοροποίηση μέσω της έκφρασης σχετικών γονιδίων (ALP, BMP-2, BGLAP, DSPP, MSX2, RUNX2) με τη χρήση RT-PCR και η in vitro βιοεναλάτωση των SHED μέσω της χρώσης αλιζαρίνης με οπτική φασματοφωτομετρία τύπου ELISA. Η στατιστική ανάλυση έγινε με το πρόγραμμα Prism 6.0 Software σε δύο επίπεδα στατιστικής σημαντικότητας (p&lt;0.05 και p&lt;0.01). Όλες οι ενέργειες (4, 8, 16 J/cm2) παρουσίασαν στατιστικώς σημαντική αύξηση του πολλαπλασιασμού ενώ η ενέργεια 8 J/cm2 επίδρασε στην αύξηση έκφρασης πολλών από τα μελετόμενα γονίδια όπως και σε στατιστικώς σημαντικότερη επαγωγή της μετανάστευσης και της in vitro βιοεναλάτωσης των κυττάρων SHED. Η χρήση LLL προάγει τις βιολογικές λειτουργίες των κυττάρων SHED ενώ η ενέργεια 8 J/cm2 εμφανίζει συνολικότερα τα πιο ενθαρρυντικά αποτελέσματα
description: The aim of the study is to investigate the effects of Low Level Laser Irradiation (LLLI) on viability/proliferation, osteo/odontogenic differentiation, migration and in-vitro biomineralization of Stem cells from Human Exfoliated Deciduous Teeth (SHED). SHED cultures were established by enzymatic dissociation from pulps of deciduous teeth of children 3-8 years old. SHED were seeded in 24-well plates and irradiated with a diode laser (EPIC DIODE LASER/BIOLASE; 940nm; 0.2W, continuous mode) at energy densities: 4, 8, 16 J/cm2 in the dark. The laser beam was directed towards the wells in a standard distance. Non-irradiated cultures served as control. Cell viability/proliferation was evaluated by MTT assay. Osteo/odontogenesis related genes expression (ALP, BMP-2, BGLAP, DSPP, MSX2, RUNX2) were e xamined by Real Time-PCR. SHEDs migratory capacity evaluated with the Transwell Migration Assay. In-vitro biomineralization was measured with ELISA spectrophotometry after Alizarin Red staining. Statistical analysis was conducted (Prism6) in two levels of statistical significance (p&lt;0.05 and p&lt;0.01). Statistically significant stimulation (p&lt;0.01) of cell proliferation was observed at 4 and 16J/cm2. Although 8 J/cm2 showed a minor significant stimulatory effect on proliferation, succeeded upregulation of various odontogenesis-related genes, in some cases with statistical significance. Moreover, the 8J/cm2 energy density showed a statistically significant increase of migration and in-vitro biomineralization in comparison with the other fluences. LLLI proved beneficial in inducing SHED biological processes. Overall, 8 J/cm2 reported the most beneficiary effects. These results could trigger further experiments to establish a clinical protocol of LLLI application in vital pulp therapies of primary teeth