Ταυτόχρονος προσδιορισμός των χρωμοφόρων ενώσεων της πορφύρας σε δείγματα κοχυλιακής χρωστικής με Υγρή Χρωματογραφία Υψηλής πίεσης και ανιχνευτή παράταξης φωτοδιόδων
Creators: name: Βασιλειάδου, Αθηνά Αθανασίου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2016
Subjects: Πορφύρα
Προσδιορισμός χρωμοφόρων
Tyrian purple
HPLC-DAD
Determination of colouring components

description: Η ινδικοτίνη, η ινδιρουβίνη, η 6-βρωμο-ινδικοτίνη, 6'-βρωμο-ινδιρουβίνη, 6-βρωμο-ινδιρουβίνη, 6,6'-διβρωμο-ινδικοτίνη και η 6,6'-διβρωμο-ινδιρουβίνη, οι χρωμοφόρες ενώσεις της πορφύρας, προσδιορίστηκαν με μια αποτελεσματική μέθοδο HPLC σε συνδυασμό με ανιχνευτή παράταξης φωτοδιόδων. Οι ενώσεις ανιχνεύθηκαν στα 288nm, με βαθμωτή έκλουση 22min σε στήλη C18 (Alltima, 250mmx3,0mm id. 5μm), θερμοστατούμενη στους 35°C, κινητή φάση που αποτελούταν από τους διαλύτες (Α) H2O + 0,1% (ν/ν) τριφθοροοξικό οξύ και (Β) ακετονιτρίλιο + 0,1% (ν/ν) τριφθοροξικό οξύ και ροή 0,5 ml min-1. Η μέθοδος ελέγχθηκε σε σχέση με τη γραμμικότητα, τα όρια ανίχνευσης και ποσοτικού προσδιορισμού, την πιστότητα, την ακρίβεια και την ευρωστία, η οποία ελέγχθηκε προκαλώντας μικρές αλλαγές στην ταχύτητα ροής, στη θερμοκρασία της στήλης, στο ρΗ και στη σύνθεση του οργανικού διαλύτη της κινητής φάσης. Υπό ιδανικές συνθήκες, το αναλυτικό σύστημα προσφέρει όρια ανίχνευσης στην περιοχή των 0.02-0.05μg ml-1 και ικανοποιητική γραμμικότητα έως τα 2.5μg mL-1 για όλες τις προσδιοριζόμενες ενώσεις. Η μέθοδος αποδείχθηκε εκλεκτική και εύρωστη. Τέσσερα δείγματα από τον υποβραγχικό αδένα μαλακίων του είδους Hexaplex trunculus, υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με θερμό DMSO (80°C για 15 λεπτά) και αναλύθηκαν με την καθιερωμένη HPLC μέθοδο, χρησιμοποιώντας καμπύλη βαθμονόμησης σταθερής προσθήκης προτύπου. Για να αξιολογηθεί η επίδραση του υποστρώματος, πραγματοποιήθηκε η σύγκριση των κλίσεων των καμπυλών των πρότυπων διαλυμάτων με εκείνες των καμπυλών βαθμονόμησης σταθερής προσθήκης προτύπου, με Student’s t-test. Η ακρίβεια αξιολογήθηκε από την ανάκτηση, με εύρος τιμών από 92,8-120%. Οι ποσότητες των χρωμοφόρων ενώσεων στα κοχυλιακά δείγματα κυμαίνονταν μεταξύ 0,01 - 12,2 μg mg-1.
description: Indigotin, indirubin, 6-bromoindigotin, 6'-bromoindirubin, 6-bromoindirubin, 6,6'-dibromoindigotin and 6,6'-dibromoindirubin, the colouring components of Tyrian purple, are quantified by an efficient HPLC method coupled to a diode array detector. The compounds were detected at 288nm, following a 22min gradient elution on a RP-column (Alltima, 250mmx3.0mm i.d., 5μm), thermostated at 35°C, with a mobile phase consisting of solvents (Α) H2O + 0.1% (v/v) trifluoroacetic acid and (Β) acetonitrile + 0.1% (v/v) trifluoroacetic acid, at a flow rate of 0.5mL min-1. The method was validated in terms of linearity, detection and quantification limits, precision, accuracy and robustness, the latter with respect to small changes in flow rate, column temperature and pH and solvent composition of the mobile phase. Under optimal conditions, the developed analytical scheme offers limits of detection in the range 0.02-0.05μg mL-1 and satisfactory linearity up to 2.5μg mL-1 for all analytes. The method proved also to be equally selective and robust. Four samples produced from the hypobranchial glands of Hexaplex trunculus molluscs were treated with hot DMSO (80 °C for 15min) and analyzed by the established HPLC method, using the standards addition approach. To evaluate the matrix effect, a comparison of the slopes of the standard regression curves with those of the standard addition curves, using the Student’s t-test was carried out. The accuracy was evaluated by recovery experiments resulting in the range of 92.8 -120 %. Amounts of colouring components ranging between 0.01 to 12.2μg mg-1 were found in the DMSO extracts of the four molluscan samples.