EXPRESSION ANALYSIS OF MICRORNA IN PROSTATE CANCER AND�IDENTIFICATION�OF NOVEL DIAGNOSTIC BIOMARKER
Creators: name: FORNO, IRENE
Publisher: name: Universit� degli Studi di Milano
Year: 2014

description: Introduzione: Il tumore alla prostata (PCa) � una delle neoplasie pi� comuni tra gli uomini nel mondo occidentale e, globalmente, rappresenta la sesta causa di morte dovuta a cancro. L'approccio diagnostico attuale si basa sulla misurazione dei livelli sierici dell?antigene prostatico PSA (prostate specific antigen), nonostante recenti studi clinici abbiano dimostrato che questo marcatore non riduce significativamente la mortalit� associata a PCa. In questo scenario abbiamo ipotizzato che i microRNA possano essere nuovi potenziali biomarcatori di PCa. Scopo del lavoro: L'identificazione di microRNA, coinvolti nella progressione neoplastica del tumore prostatico come nuovi biomarcatori diagnostici aggiuntivi al PSA, prognostici e predittivi di aggressivit� tumorale. La nostra strategia sperimentale ha previsto l?uso di linee cellulari di prostata non tumorigeniche e a diverso grado di malignit�, modelli murini di carcinoma prostatico e casistiche di pazienti affetti da PCa. Materiali e metodi: Linee cellulari commerciali: analisi dell'espressione globale dei miRNA tramite piattaforma low-density array nelle linee di PCa (LNCap, PC3, DU145), normali o iperplastiche (RWPE-1 e BPH-1). Casistiche cliniche: analisi di miRNA selezionati, in un set di pazienti (n=58) nei tessuti di parenchima normale, pre-neoplastico (prostatic intraepithelial neoplasia, PIN) e tumorale. I risultati ottenuti sono stati correlati a parametri clinicopatologici dei pazienti. I potenziali target proteici dei miRNA selezionati sono stati valutati in una casistica pi� ampia mediante tissue micro-array (TMA). Modello murino transgenico TRAMP: analisi globale di espressione dei miRNA in ghiandole di PIN e tumorali, e nello stroma associato. Linee cellulari primarie: ottenimento di linee di fibroblasti derivate da resezioni chirurgiche di PCa (n=10). Risultati: Dallo screening nelle linee cellulari abbiamo selezionato 23 miRNA poi valutati nei 58 pazienti. Tredici miRNA hanno mostrato differenze di espressione significative (p&lt;0.05). In particolare, nove miRNA (miR-135b,-193a-5p,-205,-224,-22,-34b,-34c-5p,-452,miR-886-3p) sono risultati progressivamente diminuiti nella progressione neoplastica (N-PIN-PCa). Viceversa, i miR-130a, -218, -532, -542-5p, -489 e let-7c hanno mostrato una diminuzione di espressione nel PIN rispetto al tessuto normale. � noto che i miR-205, miR-218, miR-224 abbiano come bersaglio proteico RUNX2 (Runt-related transcription factor 2), un fattore di trascrizione coinvolto nel tropismo osseo di cellule metastatiche. La valutazione di RUNX2 nei TMA di prostata ha rivelato che la positivit� nucleare � specifica delle cellule tumorali (p&lt;0.0001) e correla con l?estensione del tumore e con l'invasione capsulare. Inoltre il confronto tra l?espressione dei miRNA e RUNX2 ha mostrato correlazione inversa significativa. Dall?analisi del modello TRAMP abbiamo identificato un pannello di miRNA differenzialmente espressi tra le componenti epiteliali e stromali associate a PIN o PCa (n=52). Conclusioni: I nostri risultati mostrano una sinergica perdita di miRNA con funzione oncosoppressiva e contemporaneo aumento di RUNX2 nei tessuti di PCa. Questo dato ha importanti implicazioni a livello di progressione di malattia che sar� valutata in una successiva fase del progetto. Le nostre analisi hanno indicato il miR-205 come potenziale marcatore di aggressivit� di malattia. Hanno inoltre identificato 9 miRNA precocemente persi nelle lesioni precancerose (PIN) rispetto al parenchima sano. Studi in casistiche indipendenti potranno confermare queste molecole come nuovi biomarcatori di neoplasia da affiancare alla valutazione del PSA. Inoltre lo studio dei miRNA ?stromali? ha evidenziato una profonda deregolazione di queste molecole nel microambiente tumorale rispetto a quello non neoplastico. Questo risultato sottolinea dal punto di vista molecolare l?importanza dello stroma nel sostenere la sopravvivenza e la crescita tumorale e fornisce una possibile strategia terapeutica alternativa, mirata alle cellule stromali anzich� epiteliali per indurre regressione di malattia. Saranno necessari ulteriori studi per valutare il ruolo dei miRNA nell?interazione tra epitelio tumorale e stroma circostante.