Analisi di espressione di microRNA in Tumore a Cellule Giganti: identificazione dei target con ruolo di potenziali biomarcatori
Analysis of microRNA expression in Giant Cell Tumor: identification of targets with a potential biomarkers role
Creators: name: Quattrini, Irene <1979>
Publisher: name: Alma Mater Studiorum - Università di Bologna
Year: 2014
Subjects: BIO/12 Biochimica clinica e biologia molecolare e clinica

description: Il Tumore a Cellule Giganti dell’osso (TCG) è una rara neoplasia che rappresenta il 5% dei tumori di natura ossea; sebbene venga considerato un tumore a decorso benigno può manifestare caratteri di aggressività locale dando origine a recidive locali nel 10-25% dei casi, e nel 2-4% dei casi metastatizza a livello polmonare. In questo studio è stata valutata l’espressione dei miRNA mediante miRNA microarray in 10 pazienti affetti da TCG, 5 con metastasi e 5 liberi da malattia; sono stati riscontrati miRNA differenzialmente espressi tra i 2 gruppi di pazienti e la successiva validazione mediante Real Time PCR ha confermato una differenza significativa per il miR-136 (p=0.04). Mediante analisi bioinformatica con il software TargetScan abbiamo identificato RANK e NF1B come target del miR-136 e ne abbiamo studiato l’espressione mediante Real Time PCR su una più ampia casistica di pazienti affetti da TCG, metastatico e non, evidenziando una maggior espressione di NF1B nel gruppo di pazienti metastatici, mentre RANK non ha dimostrato una differenza significativa. L’analisi di Western Blot ha rilevato una maggiore espressione di entrambe le proteine nei pazienti metastatici rispetto ai non metastatici. Successivamente è stato condotto uno studio di immunoistochimica su TMA di 163 campioni di pazienti affetti da TCG a diverso decorso clinico che ha dimostrato una maggiore e significativa espressione di entrambe i target nei pazienti con metastasi rispetto ai non metastatici; le analisi di popolazione mediante Kaplan-Meier hanno confermato la correlazione tra over-espressione di RANK, NF1B e ricaduta con metastasi (p=0.001 e p&lt;0.0005 rispettivamente). Lo studio di immunoistochimica è stato ampliato alle proteine maggiormente coinvolte nell’osteolisi che risultano avere un significato prognostico; tuttavia mediante analisi di ROC, la co-over-espressione di RANK, RANKL e NF1B rappresenta il migliore modello per predire la comparsa di metastasi (AUC=0.782, p&lt;0.0005).
description: Giant Cell Tumor of bone (GCTb) is a rare locally aggressive tumour representing 5% of all bone tumors. Local recurrences occur in 10-25% of cases, and it may occasionally give lung metastases in 2-5% of cases. In this study, the expression of miRNAs was evaluated using miRNA microarray analysis in 10 patients with GCTb, 5 with lung metastases and 5 disease-free; several miRNAs were differentially expressed between the 2 groups of patients and the subsequent validation by Real Time PCR confirmed a significant difference for miR-136 (p=0.04. Using bioinformatic analysis with the TargetScan software, we identified RANK and NF1B as miR-136 targets and their expression was analysed by Real Time PCR on a larger series of GCTb, showing higher levels of NF1B in metastatic than in disease-free patients. RANK didn’t show any difference. Western Blot analysis revealed an increased expression of both NF1B and RANK in the first group and an immunohistochemistry study performed on TMA sections of 163 GCTb samples with different clinical course included other proteins involved in osteolysis. A significant higher expression of both targets NF1B and RANK was seen in metastatic compared to disease-free patients; the Kaplan-Meier analysis confirmed the correlation between over-expression of RANK and NF1B and probability of metastasis occurrence (Log Rank p=0.001 and p&lt;0.0005 respectively). Although other proteins involved in osteolysis presented a prognostic impact, ROC curve revealed that the simultaneous over-expression of RANK, RANKL and NF1B was the best model to predict the risk of metastases (AUC=0.782, p&lt;0.0005 ).