Μελέτη των μη πτητικών συστατικών του φυτού Dittrichia viscosa. Εκτίμηση της ικανότητας αναστολής των ενζύμων 5-LOX και ALR2 εκχυλισμάτων του φυτού
Creators: name: Ανδρέου, Βασιλική Κωνσταντίνου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2016
Subjects: Διττρίχια η ιξώδης
Ακονιζιά
Δι-καφεοϋλοκινικά οξέα
Dittrichia viscosa
Yellow fleabane
Di-caffeoylquinic acid

description: Στη συγκεκριμένη διπλωματική εργασία έγινε προσπάθεια διερεύνησης των χημικών συστατικών εκχυλισμάτων του φυτού Dittrichia viscosa. Η εκχύλιση έγινε με δύο τρόπους. Αρχικά έγιναν εξαντλητικές διαδοχικές εκχυλίσεις εν θερμώ με τη συσκευή Soxhlet με διαλύτες πετρελαϊκό αιθέρα, διχλωρομεθάνιο, μεθανόλη και το ξηρό μεθανολικό εκχύλισμα μετά από καθαρισμό χλωροφυλλών με ζέων ύδωρ υποβλήθηκε σε διαδικασία κατανομών σε διαχωριστική χοάνη με τους διαλύτες διαιθυλαιθέρα, οξικό αιθυλεστέρα και n-βουτανόλη. Το εκχύλισμα από την κατανομή με τον οξικό αιθυλεστέρα χρωματογραφήθηκε σε στήλη Sephadex με διαλύτη μεθανόλη και τα κλάσματα που προέκυψαν αναλύθηκαν με φασματογράφο LC-MS. H δεύτερη μέθοδος εκχύλισης περιλαμβάνει την εξαντλητική εκχύλιση του φυτικού υλικού με διαλύτη μεθανόλη και τη βοήθεια λουτρού υπερήχων. Το κλάσμα που προέκυψε αναλύθηκε επίσης με φασματογράφο LC-MS. Από την ανάλυση ταυτοποιήθηκαν κατά προσέγγιση το 7-Ο-γλυκουρονίδιο της κερσετίνης, μίγμα τεσσάρων δι-καφεοϋλο κινικών οξέων που δίνουν διαδοχικές κορυφές στο φάσμα μάζας, ένα από τα τρία φλαβονοειδή αξιλαρίνη, τομεντίνη ή σπινασετίνη και το ιλικικό οξύ. Στη συνέχεια έγινε προσπάθεια να εκτιμηθεί η ικανότητα των εκχυλισμάτων του φυτού για αναστολή του ενζύμου αναγωγάση της αλδόζης(ALR2), που σχετίζεται με το διαβήτη. Στο πείραμα χρησιμοποιήθηκαν φακοί από επίμυες Wistar καθώς το ένζυμο εμφανίζει σε υψηλό ποσοστό ομολογία στην αλληλουχία των αμινοξέων με το ανθρώπινο. Δοκιμάστηκαν και τα τέσσερα κλάσματα που προέκυψαν από τις κατανομές και διαπιστώθηκε ικανότητα των κλασμάτων για αναστολή του ενζύμου σε ποσοστό 93% για το διαιθυλαιθέρα, 91% για τον οξικό αιθυλεστέρα, 63% για τη βουτανόλη και 0,5% για το υδατικό. Τέλος, έγινε προσπάθεια να εκτιμηθεί η ικανότητα των παραπάνω εκχυλισμάτων για αναστολή του ενζύμου λιποξυγονάση 5-LOX. Έχει αποδειχθεί ότι η αναστολή της δράσης της λιποξυγονάσης φυτικής προέλευσης είναι ποιοτικά παρόμοια με την αναστολή που παρατηρείται στη δράση αυτής των κυττάρων συνδετικού ιστού επίμυος, οπότε στο πείραμα χρησιμοποιήθηκε λιποξυγονάση σόγιας. Μελετήθηκε η δράση των ίδιων κλασμάτων και διαπιστώθηκε ικανότητα για αναστολή του ενζύμου σε ποσοστό 100% για το διαιθυλαιθέρα και τον οξικό αιθυλεστέρα , 71% για τη βουτανόλη και περίπου 3% για το νερό. Τα αποτελέσματα των βιολογικών πειραμάτων είναι ενθαρρυντικά για περαιτέρω διερεύνηση της υπογλυκαιμικής και αντιφλεγμονώδους δράσης των εκχυλισμάτων του φυτού και της απόδοσης αυτών στα συστατικά των εκχυλισμάτων.
description: In this thesis we have tried to analysed the non volatile constituents of the plant Dittrichia viscosa. Two different ways of extractions have been used. The first one includes the Soxhlet apparatus and exhaustive extraction of the plant with heat and solvents with increased polarity such as petroleum ether, dichloromethane, methanol. The dry methanolic extract had its chlorophylls removed with boiled water and after that was taken for further extraction in a separation funnel with the solvents diethylether, ethyl acetate and n-butanol. The dry ethyl acetate extract was submitted in column chromatography with Sephadex and methanol as solvent. The fractions that came out of the column were analyzed with LC-MS technique. The second way of extraction included exhaustive extraction of the plant with methanol in a sonicator and low temperature of the water. The fraction that came out of the sonication was also analyzed with LC-MS technique. The substances that have been tendatively identified are 7-O- quercetin glucuronate, a mixture of four different dicaffeoylquinic acids, one of the three flavonoids axilarin, tomentin or spinacetin and ilicic acid. Furthermore, we tried to evaluate the activity of the extracts against aldose reductase(ALR2), an enzyme that is involved in the compications of diabetes mellitus. There have been used lenses from Wistar rats as the enzyme from the lenses is identical to the human. All four extracts that were separated were tested against ALR2 and the results show 93% enzyme-inhibition of diethylether extract, 91% enzyme-inhibition of ethyl acetate extract, 63% enzyme-inhibition of butanol extract and 0.5% enzyme-inhibition of the aqueous extract. Also, we tried to evaluate the activity of the extracts against lipoxygenase (5-LOX). There has been used lipoxygenase of plant origin (soyabean lipoxygenase) which shows strong similarity with the enzyme that comes from connective tissue of rats. The same extracts as above were tested and it has been observed 100% enzyme inhibition capacity of diethylether and ethyl acetate extract, 71% enzyme inhibition capacity of butanol extract and 3% for the aqueous extract. The results that come from the biological experiments in vitro are very promising and need to be further investigated.