Επίδραση ανοσολογικών παραγόντων στη γονιδιακή έκφραση της τσιπούρας (Sparus aurata, Linnaeus 1758), με έμφαση στους υποδοχείς που ενεργοποιούνται από πολλαπλασιαστές των υπεροξειδιοσωμάτων (PPAR).:
Creators: name: Καϊτετζίδου, Ελισάβετ Ευσταθίου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2011
Subjects: PPAR
Μicroarray
ανοσοποιητικό σύστημα ψαριών
Fish immune system

description: Το πλούσιο σε βακτηριακά παθογόνα περιβάλλον σε συνδυασμό με τις συνθήκες που επικρατούν στις υδατοκαλλιέργειες ανάγουν την άμυνα των εκτρεφόμενων ιχθύων σε σημαντικό παράγοντα επιβίωσης. Αν και η τσιπούρα είναι από τα πιο διαδεδομένα εκτρεφόμενα είδη στην Ελλάδα, ελάχιστα είναι γνωστά για το ανοσοποιητικό της σύστημα. Το ερευνητικό ενδιαφέρον για το ρόλο των μεταγραφικών παραγόντων PPAR (υποδοχείς που ενεργοποιούνται από πολλαπλασιαστές των υπεροξειδιοσωμάτων) στο ανοσοποιητικό σύστημα των θηλαστικών οδήγησε στην ανάγκη να διερευνηθεί η ανάλογη συμμετοχή τους στο ανοσοποιητικό σύστημα των ψαριών και συγκεκριμένα της τσιπούρας. Ο κύριος σκοπός της παρούσας μεταπτυχιακής διπλωματικής εργασίας ήταν η διερεύνηση των μηχανισμών του ανοσοποιητικού συστήματος της τσιπούρας μετά από την επίδραση ανοσολογικού ενεργοποιητή, μέσω της ανάλυσης της γονιδιακής έκφρασης με έμφαση στην έκφραση των PPAR. Ως εκ τούτου, μετά από in vivo επίδραση LPS παρατηρήθηκε η μεταβολή της έκφρασης και των τριών ισότυπων PPAR που μελετήθηκε με Real Time PCR, στο λευκό και ερυθρό μυ, στο ήπαρ, στα βράγχια, στην άνω μοίρα εντέρου και το λιπώδη ιστό της τσιπούρας, ενώ η in vitro LPS χορήγηση φάνηκε να επηρεάζει μόνο την έκφραση του PPAR γ. Επιπλέον, η χορήγηση του LPS επηρέασε την έκφραση της κυτοκίνης TNF α αλλά και τη φωσφορυλίωση της p38. Από τη διερεύνηση του μεταγραφικού προτύπου έκφρασης του μυϊκού ιστού της τσιπούρας μετά από in vivo επίδραση LPS και με τη χρήση ειδικά σχεδιασμένων cDNA πλακών μικροσυστοιχιών (microarrays), διαπιστώθηκαν μεταβολές στην έκφραση πολλών γονιδίων που μετέχουν σε ποικίλες κυτταρικές λειτουργίες, ενώ η λειτουργική κατηγοριοποίησή τους έδειξε ότι πολλά από τα γονίδια που καταστέλλονται ανήκουν σε ομάδες που ρυθμίζουν την απόπτωση, αλλά και τους αμυντικούς μηχανισμούς. Τα αποτελέσματα της παρούσας εργασίας επιβεβαιώνουν την εμπλοκή των συγκεκριμένων πυρηνικών υποδοχέων στη ρύθμιση των αμυντικών αντιδράσεων της τσιπούρας και τον αντι-φλεγμονώδη ρόλο συγκεκριμένα του PPAR γ, ενώ η ανάλυση των αποτελεσμάτων των μικροσυστοιχιών αποδεικνύει ότι η επιβολή του ανοσολογικού ενεργοποιητή διεγείρει συνολικά τον οργανισμό.
description: The rich in bacterial pathogens aquatic environment from one hand and the conditions of intensive fish farming on the other hand, make the defence system of the fish one of the most critical factors for their survival. Although sea bream is one of the most popular farmed fish in Greece, our knowledge regarding its immune system is limited to date. Within this framework, the increased research interest concerning the role of PPARs (Peroxisome Proliferator-Activated Receptors) in mammals’ immune system has led to the need of investigating their implication in the innate immune system of fish and of sea bream particularly. The main purpose of this master thesis was to investigate the mechanisms of sea bream’s immune system, after the stimulation with an immune activator, through gene expression analysis with an emphasis on the expression of PPARs. Therefore, in vivo LPS stimulation resulted in the alteration of PPARs’ expression, which was studied with Real Time PCR method, in white and red muscle, liver, gills, anterior intestine and adipose tissue. Whereas, in vitro LPS stimulation affected only the expression of PPAR γ. Furthermore, LPS administration affected the expression of TNF α and the phosphorylation of p38. Moreover, the expression profile of sea bream’s muscle tissue after in vivo LPS stimulation and by using specially designed cDNA platforms revealed changes in the expression of many genes involved in various cellular functions. Gene ontology of differentially expressed genes has shown that many of the down regulated genes may be grouped in categories that regulate apoptosis and immune mechanisms. The above results, actually confirm the involvement of PPARs in the regulation of defense responses of fish and in sea bream particularly, and specially the anti-inflammatory role of the PPAR γ, while the microarray analysis has demonstrated that the immune stimulation actually activates the organism as a whole.