Άμεσες αλληλεπιδράσεις μεταξύ της ICP0, ενός ιϊκού ενεργοποιητή της γονιδιακής έκφρασης, και αρχιτεκτονικών πρωτεϊνών της χρωματίνης της οικογένειας HMGA.:
Creators: name: Στόικου, Μαρία Γεωργίου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2010
Subjects: ICP0
HMGA
Συγκατακρήμνιση
Pull down

description: Η πρωτεΐνη ICP0 του ιού του απλού έρπητα τύπου 1 (HSV-1), είναι μια πυρηνική φωσφοπρωτεΐνη, που δρα ως ενεργοποιητής της μεταγραφής τόσο ιικών όσο και κυτταρικών γονιδίων. Είναι μια πολυλειτουργική πρωτεΐνη καθώς, πέρα από την ενεργοποίηση της μεταγραφής, μπορεί να οδηγήσει και στην πρωτεασωμική αποικοδόμηση πρωτεϊνών, μέσω της δράσης της ως Ε3 λιγάση της ουβικουιτίνης, όπως και στην αναδιαμόρφωση του περιβάλλοντος του πυρήνα. Πρόσφατη μελέτη έδειξε ότι ταυτόχρονη έκφραση της ICP0 με την πρωτεΐνη HMGA1, μια μη-ιστονική αρχιτεκτονική πρωτεΐνη της χρωματίνης, επηρεάζει την ενεργοποίηση της έκφρασης των ΙΕ γονιδίων του HSV-1 από την ICP0. Προκειμένου να εξακριβωθεί εάν το συγκεκριμένο γεγονός είναι αποτέλεσμα της άμεσης αλληλεπίδρασης της HMGA1 με την ICP0, πραγματοποιήθηκαν μια σειρά από in vitro πειράματα συγκατακρήμνισης πρωτεϊνών, χρησιμοποιώντας GST ανασυνδυασμένες πρωτεΐνες που αντιστοιχούν σε τμήματα της ICP0 και καθαρής, πλήρους μεγέθους HMGA1 που φέρει ουρά ιστιδινών στο αμινοτελικό άκρο της. Οι ανασυνδυασμένες πρωτεΐνες που χρησιμοποιήθηκαν, αντιπροσωπεύουν την αμινοτελική περιοχή της ICP0 (αμινοξέα 1-103, 1-213, 1-385, 1-553) και την κεντρική και καρβοξυτελική περιοχή (αμινοξέα 312-400, 395-553, 553-769), και τα αποτελέσματα της συγκατακρήμνισης έδειξαν ότι η κεντρική περιοχή της ICP0 (αμινοξέα 312-553) αλληλεπιδρά με την HMGA1. Με την ίδια περιοχή της ICP0 βρέθηκε να αλληλεπιδρά και η πρωτεΐνη HMGA2, η οποία ανήκει στην ίδια οικογένεια με την HMGA1 και έχει το χαρακτηριστικό μοτίβο των τριών αγκίστρων AT. Για την εύρεση της θέσης σύνδεσης της HMGA1 παρασκευάσθηκαν μια σειρά από ανασυνδυασμένες πρωτεΐνες από τις οποίες έλλειπε κάποιο αμινοτελικό ή κάποιο καρβοξυτελικό τμήμα της HMGA1 τα οποία απέδειξαν ότι η ICP0 αναγνωρίζει την πρωτεΐνη HMGA1 στο σύνολο της και όχι κάποια ξεχωριστή περιοχή. Στο μέλλον, περαιτέρω in vivo πειράματα θα μπορούσαν να πραγματοποιηθούν, προκειμένου να γίνει κατανοητή η βιολογική σημασία αυτής της αλληλεπίδρασης.
description: ICP0 is a Herpes Simplex Virus type 1 (HSV1) nuclear phosphoprotein known to act as a promiscuous transactivator of viral and cellular genes. The majority of its affects have been attributed to the ability of ICP0 to act as a RING finger-containing E3 ubiquitin ligase that reorganizes the nuclear environment by differentially affecting protein stability. We have previously shown that co-expression of ICP0 with HMGA1, a non-histone architectural chromatin protein, interfered with the ICP0-mediated transactivation of HSV-1 IE promoters. To establish whether the observed effect is due to a direct physical interaction of HMGA1 with ICP0, we carried out in vitro protein interaction studies using GST-fusion pull-down experiments with bacterially expressed recombinant proteins. To this end, we tested the ability of GST-ICP0 fusion proteins, that contain GST and ICP0 N-terminal amino acids 1 to 103, 1 to 213, 1 to 385, 1 to 553 or central fragments 312 to 400, 395 to 553 and 553-769, to interact with full-length, His-tagged HMGA1 and we found that proteins containing the central region of ICP0 (aa 312-553) do interact with HMGA1. The ICP0-interacting surface on HMGA1 was mapped by constructing a series of HMGA1 recombinant proteins carrying C-terminal or N-terminal deletions. The same region of ICP0 that interacts with HMGA1 was also found to interact in vitro with HMGA2, the second member of the HMGA protein family that also contains three DNA-binding AT-hook domains. We are presently investigating the in vivo relevance of these interactions, as well as their biological effects on the various functions of ICP0.