Απομόνωση και καθαρισμός της Α2 επικράτειας (domain) του παράγοντα von Willebrand για νανοτεχνολογικές εφαρμογές
Creators: name: Χριστοφορίδου, Θεοδώρα Αθανασίου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2015
Subjects: νανοτεχνολογία
υπερέκφραση
Α2 επικράτεια
von Willebrand factor
vWF
A2 domain

description: Ο vWF είναι μια πολυμερής γλυκοπρωτεϊνη, η οποία διαμεσολαβεί το σχηματισμό θρόμβου σε σημεία αγγειακού τραυματισμού και σε συνθήκες υψηλής διατμητικής τάσης. Μέχρι στιγμής έχουν διευκρινιστεί οι βιολογικές ιδιότητες του vWF σε επίπεδο γενετικής ρύθμισης, βιοσύνθεσης και μοριακών αλληλεπιδράσεων, έχουν επίσης προσδιοριστεί οι τρισδιάστατες δομές επιλεγμένων επικρατειών του vWF, αλλά δεν έχει ακόμα πλήρως αποσαφηνιστεί η σχέση δομής-δράσης των εν λόγω επικρατειών, λόγω της πολυπλοκότητας και του μεγέθους του μορίου του vWF. Πρόσφατες μελέτες πρότειναν την αλληλεπίδραση των επικρατειών Α1 και Α2 ως υπεύθυνη για την αναστολή της προσκόλλησης των αιμοπεταλίων. Προτείνεται ότι η πρόσδεση της επικράτειας Α1 στον υποδοχέα GPIbα αναστέλλει την πρωτεόλυση της Α2, η οποία παρεμποδίζει το σχηματισμό του συμπλόκου Α1-GPIbα. Συνεπώς, η μελέτη του μηχανισμού σχηματισμού του συμπλόκου Α1-Α2 θα μπορούσε να συμβάλει στο σχεδιασμό αντιθρομβωτικών φαρμάκων. Το ανθρωπινο γονίδιο που κωδικοποιεί την επικράτεια Α2 του vWF κλωνοποιήθηκε και εκφράστηκε σε βακτηριακό σύστημα και η ανασυνδυασμένη πρωτεΐνη της επικράτειας Α2 υπερεκφράστηκε, απομονώθηκε και καθαρίστηκε επιτυχώς. Η ανασυνδυασμένη Α2 επικράτεια είναι πλέον διαθέσιμη σε μεγάλη ποσότητα και με υψηλή καθαρότητα, έτοιμη να χρησιμοποιηθεί. Σε δεύτερο χρόνο θα μπορούσε να μελετηθεί η αλληλεπίδραση μεταξύ των επικρατειών Α1 και Α2 του vWF πάνω σε βιοσυμβατές νανοεπιφάνειες, καθώς και η πιθανή αντιθρομβωτική δράση του συμπλόκου αυτού. Τα αποτελέσματα των πειραμάτων αυτών θα μπορούσαν να είναι χρήσιμα όσον αφορά την ανάπτυξη νέων αντιθρομβωτικών παραγόντων.
description: The vWF is a multimeric glycoprotein which mediates the formation of thrombus at the sites of vascular injury and under high shear stress conditions. So far the biological properties of vWF have been elucidated in terms of genetic regulation, biosynthesis and molecular interactions. Also the three-dimensional structures of selected domains of vWF have been determined, but the structure-activity relationship of these domains has not been fully clarified yet, due to the complexity and the size of the molecule of vWF. Recent studies suggested that interaction between domains A1 and A2 can be responsible for the inhibition of platelet adhesion. It is suggested that the binding of the A1 domain to the GPIbα receptor inhibits proteolysis of the A2 domain, which prevents the formation of complex A1-GPIbα. Therefore, studying the mechanism of formation of the A1-A2 complex could help in the design of novel antithrombotic drugs. The human gene encoding the A2 domain of vWF was cloned and expressed in a bacterial system and the recombinant protein of the A2 domain was isolated and overexpressed in the absence of post-translational modifications that take place in vivo, and then it was successfully purified. The recombinant A2 domain is now available in large quantity and with high purity, ready to be used. Later on, the interaction between A1 and A2 domains of vWF on biocompatible nano-surfaces could be studied, and the possible antithrombotic activity of this complex could be assessed. The results of these experiments could be useful in the development of new antithrombotic agents.