Επίδραση του διαλύτη παραλαβής του πολικού κλάσματος του παρθένου ελαιολάδου στη φθορισμομετρική εκτίμηση του περιεχομένου σε ολικές φαινόλες χωρίς και μετά από διαχωρισμό
Creators: name: Τσιαγγάλη, Μαρία Αντωνίου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2015
Subjects: παρθένο ελαιόλαδο
φαινόλες
φθορισμομετρική εκτίμηση
virgin olive oil
phenols
fluorimetric determination

description: Οι πολικές φαινόλες αποτελούν ήσσονα συστατικά του παρθένου ελαιολάδου. Ο προσδιορισμός τους προϋποθέτει την παραλαβή τους από το παρθένο ελαιόλαδο με εκχύλιση, συνήθως υγρού-υγρού. Παρά το πλήθος δοκιμών εδώ και δεκαετίες, η επιλογή του κατάλληλου διαλύτη για την παραλαβή τους, κύρια παράμετρος της εκχύλισης, εξακολουθεί να είναι υπό διερεύνηση καθώς νέες προτάσεις εμφανίζονται κατά διαστήματα. Οι προτάσεις αυτές γίνονται συνήθως αξιοποιώντας μια μόνο αναλυτική τεχνική, χωρίς απαραίτητα να είναι βέλτιστες για κάποια άλλη. Λαμβάνοντας υπόψη τα παραπάνω στην παρούσα εργασία διερευνήθηκε η επίδραση του διαλύτη παραλαβής των ολικών πολικών φαινολών στην εκτίμηση των επιπέδων τους φθορισμομετρικά, χωρίς ή μετά από υγροχρωματογραφικό διαχωρισμό. Δοκιμές παραλαβής έγιναν με μεθανόλη, μίγματα μεθανόλης-νερού που χρησιμοποιούνται κατεξοχήν στη βιβλιογραφία, αλλά και με ακετονιτρίλιο και μίγματά του με νερό. Η σύσταση των τελευταίων μιγμάτων επιλέχθηκε χρησιμοποιώντας δυο διαθέσιμες φυσικοχημικές προσεγγίσεις, ώστε να έχουν ανάλογη πολικότητα με εκείνη των μιγμάτων μεθανόλης-νερού. Η μελέτη έγινε σε δείγμα παρθένου ελαιολάδου που περιείχε τόσο απλές, όσο και σύνθετες φαινόλες. Η παραλαβή δεν ήταν εφικτή σε όλες τις περιπτώσεις. Το ποσοστό του οργανικού διαλύτη ήταν καθοριστικό για την παραλαβή των σύνθετων φαινολών που απαντώνται και σε μεγαλύτερη συγκέντρωση, ενώ σημαντική ήταν η επίπτωση της ικανότητας του διαλύτη να σχηματίζει διαμοριακούς δεσμούς υδρογόνου στην εκτίμησή των ολικών φαινολών με την τεχνική του ολικού φθορισμού. Επιλεγμένα μίγματα διαλυτών που ήταν εφικτό να αναλυθούν και με τις δυο τεχνικές εξετάστηκαν στη συνέχεια ως προς την επίδρασή τους παρουσία ή απουσία κοινών ανόργανων/οργανικών οξέων που χρησιμοποιούνται στην υγρή χρωματογραφία για τη ρύθμιση της τιμής του pH. Η τιμή παρουσία οξέος καθορίστηκε σε 2,5. Η προσθήκη οξέος δε βελτίωσε την παραλαβή, σε ορισμένες δε περιπτώσεις η επίδραση ήταν αρνητική καθώς φάνηκε να επηρεάζεται η σταθερότητα συστατικών με το χρόνο. Η επίδραση του διαλύτη μεταβάλλοντας το χρόνο εκχύλισης είχε μικρή επίδραση καθώς τα επίπεδα αυξήθηκαν 3-6% ανάλογα με το διαλύτη. Για την επιβεβαίωση των ευρημάτων, επιλεγμένα μίγματα μεθανόλης ή ακετονιτριλίου με νερό εφαρμόστηκαν και σε άλλα 5 δείγματα παρθένου ελαιολάδου. Στο σημείο αυτό, αξιοποιήθηκε συμπληρωματικά και η φασματοσκοπία1Η-NMR και συγκεκριμένα δημοσιευμένο πρωτόκολλο για τον ποσοτικό προσδιορισμό των φαινολών του παρθένου ελαιολάδου. Από τις δοκιμές που έγιναν συνολικά διαπιστώθηκε ότι η παραλαβή με επιλεγμένο μίγμα ακετονιτριλίου-νερού ήταν πιο αποτελεσματική από τα μίγματα μεθανόλης-νερού που χρησιμοποιούνται εκτεταμένα στη βιβλιογραφία. Η παρατήρηση αυτή επιβεβαιώθηκε εν μέρει με την τεχνική 1Η-NMRπου εφαρμόστηκε ωστόσο σε μικρότερο αριθμό δειγμάτων, οπότε επιβάλλεται περαιτέρω διερεύνηση.
description: The polar phenols are minor components of virgin olive oil. Their estimation requires their extraction from virgin olive oil, usually with the technique of liquid-liquid extraction. Despite the number of trials for decades, the selection of an appropriate solvent for the extraction is still under investigation, as well as new proposals do appear. These proposals usually utilize a single analytical technique, not necessarily the optimal for another. Considering the above, in the present thesis, the effect of the extraction solvent has been investigated,in thetotal polar phenols estimation, by fluorimetric analysis, prior or after liquid chromatographic separation. Methanol, methanol-water mixtures, acetonitrile and it’s mixtures with water have been usedas extraction solvents. The composition of the acetonitrile-water mixtures was chosen by using two physicochemical approaches, so that they could have a similar polarity with the methanol-water mixtures. The experiments were performed in a sample of virgin olive oil containing both simple and complex phenols. The extraction was not possible in all cases. The proportion of the organic solvent was an essential parameter for the extraction of complex phenols, while the ability of the solvent to form intermolecular hydrogen bonds was also important in the estimation of total phenols with the technique of total fluorescence. The effect of selected mixtures of solvents which were possible to be analyzed with both techniques was investigated, in the presence or absence of common inorganic/organic acids used in liquid chromatography for adjusting the pH. The pH value, by the presence of acid was set at 2.5. The addition of acid did not improve the extraction, and in some cases the effect was negative as it seemed to affect the stability of the components over time. The effect of solvent by varying the extraction time had little effect, as levels increased only 3-6% depending on the solvent. To verify the results, selected mixtures of methanol or acetonitrile with water were applied to other 5 samples of virgin olive oil. Additionally, 1H-NMR spectroscopy was performed, with the use of a published protocol for the quantitative determination of phenols of virgin olive oil. In conclusion, the overallfindingsdemonstrate that the extractionwith theacetonitrile-water mixture was more effective than the methanol-water mixtures that have been used extensively in the literature. This observation was partially confirmed by 1H-NMR technique, which however, was applied to a smaller number of samples, therefore needs further investigation.