Ανάπτυξη και εφαρμογή μεθόδου προσδιορισμού του αντιβιοτικού φουμαγγιλίνη στο μέλι
Creators: name: Λάγγα, Πηνελόπη Χρήστου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2013
Subjects: Φουμαγγιλίνη
Υγρή χρωματογραφία
Εκχύλιση στερεάς φάσης
Fumagillin
Liquid chromatography
Solid phase extraction

description: Αντικείμενο της έρευνας αποτέλεσε η διερεύνηση της επιβάρυνσης του μελιού με τη δραστική ουσία φουμαγγιλίνη η οποία περιέχεται στο αντιβιοτικό Fumidil-B. Αν και η φουμαγγιλίνη είναι αποτελεσματική για την αντιμετώπιση της νοσεμίασης που εμφανίζεται στις μέλισσες, εντούτοις δεν επιτρέπεται η χρήση της. Έναυσμα για την έναρξη αυτής της διατριβής ήταν η έξαρση της ασθένειας και η πιθανή χρήση του συγκεκριμένου αντιβιοτικού από τους μελισσοκόμους. Στόχοι της συγκεκριμένης διατριβής ήταν η ανάπτυξη της μεθόδου ανίχνευσης και ποσοτικού προσδιορισμού της φουμαγγιλίνης στο μέλι, η μελέτη της συμπεριφοράς της στο μέλι τόσο σε συνθήκες υπαίθρου όσο και κατά την έκθεση στο φως και η ανάλυση δειγμάτων από παραγωγούς και από μέλια του εμπορίου, προκειμένου να διερευνηθεί η εικόνα του μελιού που διακινείται στην Ελληνική αγορά, όσον αφορά το συγκεκριμένο σκεύασμα. Προκειμένου να επιτευχθούν οι προαναφερθέντες στόχοι, πραγματοποιήθηκαν επιμέρους πειράματα που συνοψίζονται σε: Ανάπτυξη μιας μεθόδου σύντομης, σταθερής και επαναλήψιμης για τον προσδιορισμό υπολειμμάτων φουμαγγιλίνης στο μέλι και επικύρωσή της. Ο συντελεστής προσδιορισμού γραμμικής παλινδρόμησης R των καμπυλών, ήταν 0,9715 και 0,97406 για το επίπεδο των χαμηλών συγκεντρώσεων και για μήκη κύματος 350 και 351nm αντίστοιχα και 0,9845 και 0,9832 για το επίπεδο των υψηλών συγκεντρώσεων για τα δύο προαναφερθέντα μήκη κύματος επίσης. Το ποσοστό ανάκτησης κυμάνθηκε από 86 έως 95%, ενώ το LOQ ήταν 25μgkg-1. Η μελλοντική χρήση της μεθόδου ως εργαλείο έρευνας είναι ιδιαίτερα σημαντική και εφικτή. Επόμενο πείραμα αποτέλεσε η διερεύνηση της συμπεριφοράς της φουμαγγιλίνης σε συνθήκες υπαίθρου, με εφαρμογή της αναπτυχθείσας μεθόδου, έπειτα από επιβάρυνση σιροπιού τροφοδοσίας σε δύο επίπεδα συγκεντρώσεων. Κατά τη διάρκεια του πειράματος πραγματοποιήθηκαν τέσσερις δειγματοληψίες σε χρονικά διαστήματα που κυμάνθηκαν από δύο έως 70 ημέρες μετά την τέταρτη και τελευταία εφαρμογή. Η συγκέντρωση της φουμαγγιλίνης εμφανίζεται μειωμένη σε συνάρτηση με το χρόνο. Ακολούθησε μελέτη της συμπεριφοράς της φουμαγγιλίνης στο μέλι κατά την έκθεση σε φως, όπου διαπιστώθηκε ότι για χρονικά διαστήματα μίας, έξι και 24 ωρών οδήγησε σε μείωση της κατά 50% για τα δύο πρώτα διαστήματα και κατά 95% για την περίπτωση του 24ώρου. Τέλος πραγματοποιήθηκε εφαρμογή της μεθόδου στην ανάλυση μελιών που διατίθενται στο εμπόριο. Συγκεκριμένα αναλύθηκαν δέκα τυποποιημένα μέλια από την Ελληνική αγορά και είκοσι δείγματα παραγωγών. Και στις δύο ομάδες περιλαμβάνονται μέλια διάφορης βοτανικής και γεωγραφικής προέλευσης, με υπολείμματα fumagillin να έχουν ποσοτικοποιηθεί, σε ένα τυποποιημένο και σε τρία δείγματα παραγωγών. Παρατηρώντας λοιπόν τα αποτελέσματα των αναλύσεων των δειγμάτων διαπιστώνεται ότι η φουμαγγιλίνη ελαττώνεται όσον αφορά τη συγκέντρωση της στο μέλι, τόσο στην ύπαιθρο όσο και κατά την έκθεση σε φως, αφού καταλήγει μη προσδιορίσιμη ποσοτικά έπειτα από 70 ημέρες στις περισσότερες περιπτώσεις και έπειτα από 24 ώρες αντίστοιχα. Σε κάποιες περιπτώσεις όμως εμπορικών δειγμάτων οι συγκεντρώσεις της φουμαγγιλίνης προσδιορίστηκαν σε τιμές μεγαλύτερες από το LOQ. Η μεγαλύτερη ποσότητα που βρέθηκε σε μέλι παραγωγού ήταν 35μg kg-1 ενώ σε μέλι του εμπορίου 30μg kg-1. Η διαπίστωση αυτή σε συνδυασμό με την απουσία MRLs καθώς επίσης και με το γεγονός ότι δεν υπάρχουν ADIs καθορισμένα για τη fumagillin, δημιουργούν προβληματισμό σχετικά με την εμπορία του προϊόντος σύμφωνα με την κείμενη νομοθεσία.
description: The object of this research was the investigation of the contamination of honey with the active substance fumagillin, which is the main ingredient of the antibiotic Fumidil-B. Although fumagillin is effective for the treatment of nosemosis, it is not allowed for the treatment of bees. The trigger of the beginning of this investigation was the outbreak of the Nosema disease and the potential use of this antibiotic by the beekeepers. The aim of this investigation was to develope a method of detection and quantification of fumagillin in honey, the study of the stability of fumagillin in honey both under field conditions and during its exposure to light and the investigation of the potential contamination of commercial samples by beekeepers and of honey available in markets. To achieve the above objectives, individual experiments took place and are summarized as follow: Development of a short, stable and repeatable method for the determination of fumagillin residues in honey and its ratification. The coefficient of determination of linear regression of the curves R, was 0,9715 and 0,97406 for the level of low concentrations and for wavelengths of 350 and 351nm, respectively and 0,9845 and 0,9832 for the level of high concentrations for the two wavelengths as well. The recovery rate ranged from 86% to 95%, while the LOQ was 25mg kg-1. The future use of the method as a research tool is particularly important and feasible. The second experiment that took place had to do with the examination of honey contamination with fumagillin in field conditions by feeding bees with syrup containing this substance in two level concentration. During the experiment, four samplings took place at intervals ranging from two to 70 days after the fourth and last application. The concentration of fumagillin seems to be decreased in function of time. Then, investigation of the stability of fumagillin in honey under intense light conditions took place. The exposure to light during one, six and 24hours resulted in degradation of 50% after six hours and 95% in 24hour exposure. At the end ten standard honey samples from the Greek market and twenty samples from beekeepers were analysed. In both groups, honeys of various botanical and geographical origin were included, with residues of fumagillin quantified in one sample from the market and in three beekeeper honeys. So, observing the results of sample analysis, fumagillin’s concentration in honey was found decreased, both in field conditions and under the exposure to light experiment, since non-quantifiable samples resulted after 70 days and 24 hours respectively. In some cases, however, commercial sample fumagillin concentrations exceeded LOQ. The greatest amount quantified in a beekeeper’s honey was 35μg kg-1 while in honey available in the Greek market was 30μg kg-1. This finding combined with the absence of MRLs as well as the fact that there are no specified ADIs for fumagillin, raises concerns about the handling of the product in accordance with current legislation.