title: Einfluss der Oberflächenmarkerexpression auf Leukozyten von Hodentumorpatienten in fortgeschrittenen Stadien auf das rezidivfreie Überleben nach Hochdosischemotherapie und autologer Stammzelltransplantation
title: Influence of cell surface marker expression on leukocytes of germ cell cancer patients in advanced stages on the relapse free survival after high-dose chemotherapy and autologous stem cell transplantation
Creators: name: Nilius-Eliliwi, Verena Christina
Publisher: name: Philipps-Universität Marburg
Year: 2018
Subjects: Biomarker
Keimzelltumor
Biomarker, CD31
monocytes
t-lymphocytes
Medical sciences, Medicine
Medizin, Gesundheit
Prognose, Leukozyten
IL10
biomarker, CD31
rezidivfreies Überleben, Hochdosischemother
T-Lymphozyten
Hodentumor, Beta-1,4-Galactosyltransferase
relapse free survival, high-dose chem
CD49d
Monozyten
CD184
germ cell cancer, beta-1,4-galactosyltransferase

description: Testicular cancer is the most
      common tumor in 15 to 45 year old men. Even in advanced
      stages it has a quite good prognosis with a survival rate of
      about 70-80%. In order to better estimate the prognosis of
      those patients with metastatic or relapsed disease the
      International Germ Cell Collaborative Group has developed a
      score (IPF-score). In the last years a lot of research on the
      field of tumorimmunology has been done. In Non-small cell
      lung cancer proteins that are part of the leukocyte adhesion
      pathway have a significant influence on the relapse
      probability of the patients. Furthermore the enzyme
      β-1,4-galactosyltransferase was found to be significantly
      higher in patients who do not suffer a relapse of disease. In
      testicular germ cell tumors little is known about
      tumorimmunologic interactions so far. Besides most of the
      studies have investigated the expression levels on the tumor
      cells themselves. In this paper we tested them on the
      patients´ leucocytes. This study was supposed to investigate
      the influence of B4GALT1, as well as different surface
      molecules, which are part of the leucocytes adhesion pathway,
      on the relapse probability of the patients. Three different
      surface markers were chosen for analysis. Those were platelet
      endothelial cell adhesion molecule 1 (PECAM1), very late
      antigen 4 (VLA-4) and CXC receptor 4 (CXCR4). Furthermore we
      measured the expression of IL10, which has impact on tumor
      control because of immunoregulatory functions. All of the 46
      patients received high-dose chemotherapy and autologous stem
      cell transplantation. During stem cell apheresis retention
      samples were taken. Patients had given written informed
      consent in research usage of the samples. The surface
      expression levels of PECAM-1, VLA-4 and CXCR4 were measured
      with flow cytometry. Moreover T-cells and monocytes were
      separated from the other cells. Afterwards RNA was extracted
      from all cells in order to determine mRNA-expression levels
      of B4GALT1 and IL10 with real time-polymerase chain reaction
      (RT-PCR). For analysis the IPF-score of all patients was
      calculated and patients were grouped according to the further
      course of disease into the groups “no relapse”, “early
      relapse” and “late relapse”. The analysis of the surface
      marker expression levels did not show any significant
      differences between the groups neither for T-cells nor for
      monocytes. Whereas the expression of B4GALT1 was
      significantly higher in T-cells of patients without relapse
      compared to the other groups. In monocytes and the all
      cell-population no differences were found. Kaplan-Meier
      analysis showed that patients with a high B4GALT1 expression
      in T-cells had a longer relapse-free survival. This study was
      conducted with a limited number of thawed patient samples.
      For validation of the results, further studies, such as
      prospective trials, are needed.
description: Hodentumore stellen die häufigste
      Tumorentität bei 15- bis 45-jährigen Männern dar. Auch in
      fortgeschrittenen Stadien hat die Erkrankung mit einer
      Überlebensrate von 70-80% eine vergleichsweise gute Prognose.
      Um die Prognose insbesondere in diesen Stadien besser
      abschätzen zu können, wurde von der „International Germ Cell
      Collaborative Group“ ein Punktesystem entwickelt (IPF-Score).
      In den letzten Jahren wurde intensiv auf dem Gebiet der
      Tumorimmunologie geforscht. Für Zellen des
      Nicht-kleinzelligen Lungenkarzinoms stellte sich heraus, dass
      insbesondere die Expression von Proteinen, die an der
      Leukozytenadhäsion beteiligt sind, einen signifikanten
      Einfluss auf die Rezidivhäufigkeit der Patienten haben. Des
      Weiteren korrelierte die Expression des Enzyms
      β-1,4-Galactosyltransferase (B4GALT1) signifikant mit der
      Rezidivwahrscheinlichkeit. Für testikuläre Keimzelltumore ist
      bislang wenig über tumorimmunologische Zusammenhänge bekannt.
      Um jene zu beleuchten, sollte in dieser Arbeit der Einfluss
      sowohl von B4GALT1, als auch von an der Leukozytenadhäsion
      beteiligten Oberflächenmolekülen auf die
      Rezidivwahrscheinlichkeit der Patienten untersucht werden.
      Dazu wurden drei an der Leukozytenadhäsion beteiligte
      Oberflächenmarker ausgewählt. Diese waren das
      Thrombozyten-Endothelzellen-Adhäsionsmolekül 1 (englisch
      platelet endothelial cell adhesion molecule 1, PECAM1), das
      α4-β1-Intergrin (englisch very late antigen 4, VLA-4) und der
      CXC Chemokin Rezeptor 4 (CXCR4). Des Weiteren wurde die
      Expression von IL10 bestimmt, welches durch
      immunregulatorische Funktionen ebenfalls Einfluss auf die
      Tumorkontrolle hat. Die Untersuchungen wurden im Gegensatz zu
      den oben genannten an den Leukozyten, nicht den Tumorzellen
      durchgeführt, um die tumorimmunologischen Zusammenhänge von
      anderer Seite zu betrachten. Bei den Patienten handelte es
      sich um 46 Hodentumorpatienten in fortgeschrittenen Stadien,
      die allesamt eine Hochdosischemotherapie mit anschließender
      autologer Stammzelltransplantation erhalten hatten. Im Rahmen
      der Stammzellapharese waren Rückstellproben eingefroren
      worden. In die Verwendung dieser zu Forschungszwecken hatten
      die Patienten schriftlich eingewilligt. Die
      Oberflächenexpression von PECAM-1, VLA-4 und CXCR4 wurde
      durchflusszytometrisch gemessen. Außerdem wurden die Zellen
      in die Fraktionen Monozyten, T-Lymphozyten und übrige
      mononukleären Zellen sortiert. Mittels quantitativer
      Polymerase-Kettenreaktion wurde die mRNA-Expression von
      B4GALT1 und IL10 bestimmt. Für die Analyse der Daten wurde
      der IPF-Score berechnet und die Patienten nach dem weiteren
      Krankheitsverlauf in die Gruppen „kein Rezidiv“,
      „Frührezidiv“ und „Spätrezidiv“ eingeteilt. Die Analyse der
      Oberflächenmarkerexpression zeigte keine signifikanten
      Unterschiede zwischen den drei Gruppen, weder auf Monozyten
      noch auf T-Lymphoyzten. Die Expression von B4GALT1 war auf
      T-Lymphozyten, nicht jedoch auf Monozyten oder der
      Gesamtpopulation, der Gruppe „kein Rezidiv“ signifikant höher
      als in den beiden anderen Gruppen. Eine Kaplan-Meier Analyse
      zeigte weiterhin, dass diejenigen Patienten mit einer hohen
      B4GALT1-Expression in T-Zellen ein signifikant längeres
      Rezidiv freies Überleben hatten. Die hier vorliegende
      Untersuchung fand an einer limitierten Anzahl von aufgetauten
      Patientenproben statt. Um die Ergebnisse zu validieren, sind
      in Zukunft noch weitere Untersuchungen, beispielsweise als
      prospektive Studie, nötig.