Valutazione preclinica di oligonucleotidi antisenso come nuovo approccio terapeutico specifico per le leucemie acute con riarrangiamenti di MLL
Creators: name: Lombardini, Lorenza <1982>
Publisher: name: Alma Mater Studiorum - Università di Bologna
Year: 2011
Subjects: BIO/16 Anatomia umana

description: Le Leucemie Acute Mieloidi di sottotipo FAB M4 e M5, le Leucemie Acute Linfoblastiche e le Leucemie Bifenotipiche sono frequentemente caratterizzate da traslocazioni del gene 11q23/MLL con formazione di oncogeni di fusione e produzione di oncoproteine che inducono la trasformazione neoplastica. Tali leucemie con riarrangiamenti di 11q23/MLL sono caratterizzate da prognosi infausta e scarsa responsività alle terapie convenzionali.
Data la necessità di trovare terapie efficaci per le leucemie con traslocazione di MLL, in questo lavoro di ricerca sono stati progettati, caratterizzati e validati siRNA per il silenziamento genico degli oncogeni di fusione di MLL, con lo scopo di valutare il ripristino delle normali funzionalità di differenziamento cellulare e l’arresto della proliferazione neoplastica.
Sono stati progettati siRNA specifici per gli oncogeni di fusione di MLL, sia per le regioni conservate nei diversi oncogeni di fusione, sia a livello del punto di fusione (breakpoint), sia per le regioni sui geni partner.
I siRNA sono stati valutati su linee cellulari contenenti diverse traslocazioni del gene MLL. Il silenziamento è stato valutato sia a livello cellulare in termini di riduzione della capacità proliferativa e del numero delle cellule leucemiche, sia a livello molecolare tramite l’analisi della diminuzione dell’mRNA degli oncogeni di fusione di MLL.
E’ stata valutata la diminuzione delle oncoproteine di fusione di MLL in seguito a trattamento con siRNA.
E’ stata analizzata la variazione dell’espressione di geni dipendenti da MLL in seguito a trattamento con siRNA.
Sono stati messi a punto modelli murini bioluminescenti di leucemie acute con traslocazioni di MLL innanzitutto per studiare il trafficking in vivo e la progressione leucemica delle leucemie acute con traslocazione di MLL. Successivamente sono stati utilizzati i modelli murini per lo studio in vivo dell’efficienza e della tossicità dei siRNA progettati e validati in vitro, valutando diversi sistemi di delivery per i siRNA in vivo.
description: Chromosomal translocations involving 11q23/MLL gene represent frequent abnormalities in Acute Myeloid Leukemias (AML) subtype FAB M5 and M4, Acute Lymphoblastic Leukemias (ALL) and Biphenotypic Leukemias. MLL-related leukemias are generally associated with aggressive disease and poor prognosis.
MLL-related leukemias need validation of new therapies, so we designed and validated anti-MLL siRNA to downregulate MLL-fusion oncogenes.
We tested anti-MLL siRNA in MLL-carrying acute leukemias cell lines, and we evaluated both MLL mRNA downregulation, cellular viability and proliferation, and protein inhibition.
We also evaluated gene expression of MLL-dependent genes.
We generated bioluminescent acute leukemias xenograft mouse models of the most frequent MLL fusion genes. We evaluated leukemias trafficking and progression, and we evaluated delivery methods for siRNA delivery in vivo.