Η επίδραση του μονοπατιού των ιντερφερονών στη βιωσιμότητα μετασχηματισμένων Β-λεμφοκυττάρων από τον ιό Epstein-Barr
Creators: name: Ψευτογκάς, Αθανάσιος Δημητρίου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2013
Subjects: Ιός Epstein-Barr
Β-λεμφοκύτταρα
Iντερφερόνες
Epstein-Barr virus
B-lymphocytes
Interferons

description: Ο ιός Epstein-Barr (EBV), είναι ένας γ-ερπητοϊός, ο οποίος μεταδίδεται μέσω της ανταλλαγής σιέλου και μολύνει το 90-95 % του ανθρώπινου πληθυσμού. Μολύνει κυρίως Β-λεμφοκύτταρα αλλά και επιθηλιακά κύτταρα και έχει συσχετιστεί με αρκετές νεοπλασίες όπως το ενδημικό λέμφωμα του Burkitt (BL), το λέμφωμα του Hodgkin, λεμφώματα των Τ-λεμφοκυττάρων καθώς και το ρινοφαρυγγικό καρκίνω- μα. Η LMP1 είναι η κύρια ογκογονική πρωτεΐνη του EBV, η οποία ευθύνεται για το μετασχηματισμό των μολυσμένων κυττάρων. Λειτουργεί ως κλασικό ογκογονίδιο και είναι απαραίτητη για το μετασχηματισμό των Β-λεμφοκυττάρων in vitro. Λειτουργικά, η LMP1 μιμείται μέλη της οικογένειας των υποδοχέων του TNF και ενεργοποιεί αρκετά σηματοδοτικά μονοπάτια. Η ενεργοποίηση του μεταγραφικού παράγοντα IRF7 καθώς και του εναλλακτικού μονοπατιού του NF-kB από την ιική πρωτεΐνη LMP1, αποτέλεσε το θεωρητικό υπόβαθρο για τη διαμόρφωση του κύριου σκοπού της παρούσης μεταπτυχιακής εργασίας, ο οποίος αφορά τη διερεύνηση της επίδρασης του μονοπατιού των ιντερφερονών στη βιωσιμότητα Β-λεμφοκυττάρων, μετασχηματισμένων από τον EBV. Πιο συγκεκριμένα, εξετάστηκε ο ρόλος των γονιδίων IRF3, TBK1 και ΙΚΚε, τα οποία διαδραματίζουν σημαντικό ρόλο στη μεταγραφική ενεργοποίηση των ιντερφερονών, στη βιωσιμότητα Β-λεμφοκυττάρων που έχουν μετασχηματιστεί από τον ιό EBV. Για το σκοπό αυτό, χρησιμοποιήθηκε η μέθοδος της RNA παρεμβολής, προκειμένου να προκληθεί η μείωση των ενδογενών επιπέδων έκφρασης των τριών γονιδίων στόχων, και προσδιορίστηκε η βιωσιμότητα των κυττάρων με τη χρωστική Trypan Blue και τη δοκιμασία ΜΤΤ. Παρατηρήθηκε ότι η μείωση των ενδογενών επιπέδων έκφρασης των γονιδίων IRF3, TBK1 και ΙΚΚε, οδήγησε σε μειωμένη βιωσιμότητα των κυττάρων LCL-WT. Συνεπώς, εξήχθη το συμπέρασμα ότι τα συγκεκριμένα γονίδια είναι απαραίτητα για το μετασχηματισμό των Β-λεμφοκυττάρων από τον ιό Epstein-Barr.
description: Epstein-Barr virus (EBV), is a gamma-herpesvirus, which is transmitted through the exchange of saliva and infects 90-95 % of the human population. It infects mainly B cells and epithelial cells and has been associated with several malignancies such as endemic Burkitt lymphoma, Hodgkin lymphoma, lymphomas of T-lymphocytes and nasopharyngeal carcinoma. LMP1 is the main transforming protein of EBV. It functions as a classic oncogene and is essential for the transformation of B-lymphocytes in vitro. Functionally, LMP1 mimics members of the Tumor Necrosis Factor receptor (TNFR) family and activates several signalling pathways. The modulation of interferon response mediators by the viral protein LMP1 was the theoretical basis for the formulation of the principal objective of this thesis, which involved the investigation of the effect of the interferon pathway on the viability of EBV-transformed B cells. More specifically, the role of IRF3, TBK1 and IKKε on the viability of an EBV-transformed B cell line and an EBV-negative Burkitt’s lymphoma cell line was evaluated by RNAi-mediated downregulation of the aforementioned genes. It was observed that the reduction of the endogenous levels of expression of the genes IRF3, TBK1 and IKKε, resulted in decreased viability of EBV-transformed B cells. Therefore, it was concluded that these genes are likely to be essential for the transformation of B lymphocytes by EBV.