In vitro μελέτη ανθελμινθικής δράσης φυτικών ειδών, έναντι στα γαστρεντερικά παράσιτα των προβάτων
Creators: name: Σαράτση, Αικατερίνη Αναστασίου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2016
Subjects: Γαστρεντερικά νηματώδη
Δευτερογενείς μεταβολίτες - Ταννίνες
Αντιπαρασιτική δράση
Gastrointestinal nematodes
Secondary metabolites - Tannins
Antiparasitic effect

description: Ο στόχος της παρούσας εργασίας ήταν να διερευνηθεί η in vitro ανθελμινθική δράση 13 φυτικών εκχυλισμάτων, πλούσιων σε δευτερογενείς μεταβολίτες, ενάντια σε δυο είδη γαστρεντερικών παρασίτων (Haemonchus contortus και Trichostrongylus colubriformis) των προβάτων. Πιο συγκεκριμένα, χρησιμοποιήθηκαν εκχυλίσματα φυτικών ειδών (Arbutus unedo, Arbutus andrachne, Quercus coccifera, Amorpha fruticosa, Coronilla varia, Olea europaea, Robinia pseudoacacia, Lotus corniculatus, Erica arborea, Erica manipuliflora, Onobrychis aliacmonia subsp. peloponnesiaca, Onobrychis alba subsp. laconica), των οποίων η δράση εξετάστηκε σε 4 διαφορετικές συγκεντρώσεις (Μάρτυρας, 150μg/ml, 300μg/ml, 600μg/ml και 1.200μg/ml), ανά 20 λεπτά της ώρας, με 4 επαναλήψεις για κάθε συγκέντρωση, ώστε να διαπιστωθεί εάν και κατά πόσο αυτά παρεμποδίζουν την εξέλιξη του βιολογικού κύκλου του παρασίτου, δηλαδή την μετάβαση από προνύμφη γ΄ σε δ΄ σταδίου, που λαμβάνει χώρα εντός του ξενιστή. Η διαδικασία που ακολουθήθηκε αφορούσε τη συλλογή των αυγών των παρασίτων από αρνιά πειραματικώς μολυσμένα (με στελέχη των παραπάνω παρασίτων) και την καλλιέργεια των εν λόγω αυγών, ώστε να προκύψουν οι προνύμφες γ΄ σταδίου (L3), οι οποίες και φυλάχθηκαν σε ουδέτερο διάλειμμα (PBS) στους 4ο C, ώσπου εκτέθηκαν στα παραπάνω φυτικά εκχυλίσματα. Τα εν λόγω εκχυλίσματα προέκυψαν μετά από ξήρανση των φυτών (ή μέρος αυτών), εκχύλιση με ανάδευση, συμπύκνωση, διαδοχικές πλύσεις με διχλωρομεθάνιο, και λυοφιλοποίηση των παρασκευασμάτων, τα οποία και διατηρήθηκαν στους 4οC, έως ότου χρησιμοποιήθηκαν στη Δοκιμή Έκδυσης των Προνυμφών (Larval Exsheathment Inhibition Assay). Από τα αποτελέσματα προέκυψε ότι τα εκχυλίσματα των ανθέων C. varia και φύλλων Ol. europaea δεν παρουσίασαν ανθελμινθική δράση και στα δυο είδη παρασίτων, ενώ αυτά των A. andrachne και On. aliacmonia subsp. peloponnesiaca έδρασαν στις 3 υψηλότερες συγκεντρώσεις (1200/600/300μg/ml), παρουσιάζοντας δοσο-εξαρτώμενη δράση και τις χαμηλότερες τιμές Μέσης Αποτελεσματικής Δόσης (EC50-value). Επίσης, υψηλή ανθελμινθική δράση ενάντια και στα δυο είδη παρασίτων, εμφάνισαν τα εκχυλίσματα C. varia (βλαστοί και φύλλα), Q. cocciferea και L. corniculatus, αλλά μόνο στην υψηλότερη συγκέντρωση των 1200μg/ml. Αποτελεσματικότερα ενάντια στις προνύμφες H. contortus σε σχέση με αυτές του είδους Tr. colubriformis, φάνηκαν να είναι τα είδη R. pseudoacacia, On. alba subsp. laconica, A. fruticosa, A. unedo και Er. arborea. Μάλιστα το τελευταίο δεν παρουσίασε καμία δράση ενάντια στις προνύμφες του παρασίτου H. contortus. Τέλος το εκχύλισμα της E. manipuliflora, ήταν το μοναδικό αποτελεσματικότερο έναντι των προνυμφών του Tr. colubriformis σε σχέση με του H. contortus. Τα εν λόγω αποτελέσματα, επιβεβαιώνουν την ανθελμινθική δράση των φυτικών ειδών που είναι πλούσια σε ταννίνες. Ωστόσο, για την διεξαγωγή ασφαλών συμπερασμάτων απαιτείται περαιτέρω έρευνα. Ιδιαίτερο ενδιαφέρον θα παρουσίαζε η in vivo μελέτη της ανθελμινθικής δράσης των εκχυλισμάτων που παρουσίασαν in vitro δράση.
description: The present study aimed to screen the in vitro effects of 13 extracts from 12 tannin rich Mediterranean plants (Arbutus unedo, Arbutus andrachne, Quercus coccifera, Amorpha fruticosa, Coronilla varia, Olea europaea, Robinia pseudoacacia, Lotus corniculatus, Erica arborea, Erica manipuliflora, Onobrychis aliacmonia subsp. peloponnesiaca, Onobrychis alba subsp. laconica), against two species gastrointestinal parasites (Ηaemonchus contortus and Trichostrongylus colubriformis) of sheep. Namely, acetone/water extracts of above plants were tested against third stage larvae (which produced from faeces from donor sheep, monospecifically infected) of both H. contortus and Tr. colubriformis sheep gastrointestinal (GIN) parasites by using the Larval Exsheathment Inhibition Assay at different extract concentrations (1200/600/300/150μg/ml PBS). According to the results there was no anthelmintic effect for flowers of C. varia and leaves of Ol. europaea against both parasites, while A. andrachne and On. aliacmonia subsp. peloponnesiaca showed a similar high and dose-dependent anthelmintic effect for both parasites at the 3 highest concentrations (1200/600/300μg/ml) and the lowest EC50-values. Moreover, C. varia (stems &amp; leaves), Q. coccifera and L. corniculatus had a high antiparasitic activity, but only at the highest concentration of extract 1200μg/ml. On the other hand, the extracts of R. pseudoacacia, On. alba subsp. laconica, A. fruticosa, A. unedo and E. arborea, proved to be more effective against L3 of H. contortus than Tr. colubriformis. The last (E. arborea) showed no effect against Tr. colubriformis. Finally, Er. manipuliflora was the only one plant extract, which proved to be more effective against L3 of Tr. colubriformis. Overall, the study confirms the potential for using tannin-rich plants, or their parts, to disturb the biology of GINs. However, the variability in their in vitro effects suggests a strong need for further research and in vivo studies.