Development of cryopreservation of human neural tissue as strategy to produce clinical-grade stem cells
Creators: name: FIDANZA, LUCIA MICHELA PIA
Publisher: name: Universit� degli Studi di Foggia
Year: 2019

description: L'Unit� Produttiva per Terapie Avanzate dell'Istituto per la Biologia delle Cellule Staminali, la Medicina Rigenerativa e le Terapie innovative (ISBReMIT), guidata dal Prof. Angelo Luigi Vescovi, con sede a San Giovanni Rotondo (FG ? Italia), � una Cell-Factory autorizzata dalla Comitato Etico di Casa Sollievo della Sofferenza ad isolare cellule staminali neurali umane, in stretto regime GMP (Good Manufacturing Practice), da cervelli di feti morti per cause naturali in utero o aborto spontaneo, per la ricerca e le applicazioni cliniche in ambito di malattie neurodegenerative. Cellule staminali neurali fetali sono gi� state utilizzate in pazienti affetti da Sclerosi Laterale Amiotrofica (SLA) nell?ambito di in uno studio clinico di fase I condotto e conclusosi presso l?Azienda Ospedaliera Santa Maria di Terni (Mazzini L. et al., 2015). In questo studio le staminali neurali umane sono state trapiantate nel midollo spinale, senza riscontrare nei pazienti alcun evento avverso imputabile alla procedura chirurgica o alle cellule trapiantate; inoltre, in uno studio molto simile condotto dal Prof. Boulis e colleghi ad Atlanta, le staminali neurali sono state monitorate fino a 30 mesi dopo il trapianto e i pazienti hanno mostrato un miglioramento transitorio della funzione motoria (Boulis et al. 2011; 2011 Riley J.P. et al., Riley J. et al. 2014, Glass J.D. et al. 2012, Feldman E. et al. 2014, Tadesse T. et al. 2014). Attualmente, stiamo pianificando uno studio clinico di fase II sulla SLA mentre la sperimentazione di fase I sui pazienti con Sclerosi Multipla Progressiva Secondaria (SMPS) � gi� in corso. Considerata la fonte delle cellule staminali neurali, il materiale di partenza � molto raro e prezioso; inoltre, dal momento che l'aborto spontaneo pu� verificarsi in qualsiasi momento e il nostro metodo di produzione richiede che i campioni di tessuto cerebrale umano fetale debbano essere ricevuti ed immediatamente trasferiti in un impianto GMP per essere processati e trasformati, ci� potrebbe comportare carichi di lavoro gravosi e, in caso di indisponibilit� di personale adeguatamente addestrato, perdita del tessuto prezioso. Pertanto, � molto importante trovare un modo per ottimizzare il processo di produzione delle staminali neurali umane per lo sviluppo di future sperimentazioni cliniche. Ipotizziamo che il tessuto cerebrale umano fetale possa essere crioconservato e che le cellule staminali neurali possano essere utilizzate in un secondo momento con alta vitalit� post-scongelamento. Attualmente non esiste un protocollo GMP per la crioconservazione ottimale del tessuto cerebrale umano. Il dimetilsolfossido (DMSO) � l?agente crioprotettivo pi� frequentemente usato in clinica, ma non � ben definita la concentrazione ottimale per cellule o tessuti. Stabilire la giusta concentrazione � importante, perch� il DMSO � citotossico. In letteratura � descritta il 10% di DMSO come percentuale ampiamente usata per la crioconservazione delle cellule. Il nostro centro di ricerca per la terapia avanzata traslazionale segue lo "standard" del 10% per la crioconservazione delle cellule (Gelati M. et al. 2013); tuttavia, la tendenza � di ridurne la concentrazione. In questo lavoro, riportiamo un protocollo di congelamento GMP per tessuto derivante della zona sotto-ventricolare del cervello fetale umano, testando tre diverse percentuali di DMSO nel mezzo di congelamento. I saggi cellulari dimostrano che le colture cellulari derivate dal tessuto congelato sono equivalenti a quelle colture derivate da tessuto fresco senza differenze significative tra il 5%, l'8% e il 10% delle soluzioni DMSO. Inoltre, i nostri risultati sostengono che il congelamento dei tessuti fino a 5 giorni a -80 �C e fino a 2 e 9 mesi in azoto liquido non altera sensibilmente la vitalit� delle cellule e la multipotenza delle staminali neurali. I dati preliminari contribuiscono a dimostrare che la crioconservazione del tessuto permette di creare un sistema di bio-banking delle cellule staminali per la nostra terapia cellulare somatica, garantendo al contempo gli standard necessari di sicurezza e controllo di qualit�.