Μορφολογική, ανοσοϊστοχημική και μοριακή διερεύνηση των αναπλαστικών λεμφωμάτων (ACLC)
Creators: name: Μπομπός, Ματθαίος Θ.
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2009
Subjects: Αναπλαστικό λέμφωμα από μεγάλα κύτταρα
Κυκλινη D1
ALK
FASCIN
MUC-1

description: Το συστηματικό αναπλαστικό λέμφωμα από μεγάλα κύτταρα (Σ-ΑΛΜΚ) αποτελεί σπάνιο Τ-κυτταρικής αρχής λέμφωμα, από μεγάλα λεμφοειδή κύτταρα και χαρακτηριστικά εκφράζει το αντιγόνο CD30/Ki-1. Μεγάλο ποσοστό των Σ-ΑΛΜΚ εκφράζουν την κινάση του αναπλαστικού λεμφώματος (ALK-anaplastic lymphoma kinase). Το πρωτοπαθές δερματικό αναπλαστικό λέμφωμα από μεγάλα κύτταρα (ΠΔ-ΑΛΜΚ) είναι επίσης ένα Τ-κυτταρικής αρχής λέμφωμα του δέρματος, το οποίο ανήκει στις λεγόμενες πρωτοπαθείς δερματικές CD30+ Τ-κυτταρικής αρχής λεμφοϋπερπλασίες. Πρόσφατα, τα ΑΛΜΚ, ALK+ αποτελούν αυτόνομη κατηγορία στη νεώτερη κατάταξη της Π.Ο.Υ., όπου και διαχωρίσθηκαν από τα ΑΛΜΚ, ALK-. Τα ΑΛΜΚ, ALK+ εμφάνιζουν πολύ συχνά την μετάθεση t(2;5)(p23;q35) μεταξύ των NPM και ALK γονιδίων που οδηγεί στην δημιουργία ενός νέου «χιμαιρικού» γονιδίου, του NPM-ALK, που δύναται να προκαλέσει ογκογένεση. Εκτός από την παραπάνω μετάθεση, έχουν αναφερθεί σε ποσοστό περίπου 20% των Σ-ΑΛΜΚ και άλλες 9 μεταθέσεις που εμπλέκουν το γονίδιο της ALK. Ο σκοπός της παρούσας μελέτης ήταν να διερευνηθούν σε μια σειρά 45 περιπτώσεων ΑΛΜΚ, Τ-Null-κυτταρικής αρχής, από 42 ασθενείς το προφίλ των γενετικών/μοριακών αλλαγών σε σχέση με κλασσικές παραμέτρους που μελετώνται στα ΑΛΜΚ. Ειδικότερα μελετήθηκαν με μεθόδους ανοσοϊστοχημείας (ΑΙΧ) η ALK πρωτεΐνη, ανάστροφης αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης (RT-PCR) η μετάθεση t(2;5)(p23;q35) και φθορίζοντος υβριδισμό in situ (FISH) οι μεταθέσεις και χρωμοσωμικές ανωμαλίες του ALK γονιδίου. Διερευνήθηκε επίσης, με PCR, η παρουσία ανασυνδυασμού του Τ-κυτταρικού υποδοχέα τύπου γ (TCR-γ, Τ-cell receptor γ). Επιμέρους στόχους αποτέλεσαν η διερερεύνηση της έκφρασης των ισομορφών (mRNA) και της πρωτεΐνης hTERT, η διερεύνηση του γονιδιακού προφίλ του CCND1 γονιδίου, της έκφρασης του mRNA της cyclin D1 και της πρωτεΐνης Cyclin D1 με ΑΙΧ, καθώς και η ανίχνευση της πρωτεϊνικής έκφρασης των Fascin και MUC-1 (EMA, CD227) με ΑΙΧ. Επιπρόσθετα, στην περίπτωση της μελέτης του CCND1, εφαρμόσθηκε η μέθοδος της ταυτόχρονης φθορίζουσας ανοφαινοτυπικής και γονιδιακής ανάλυσης (FICTION). Οι ανοσοϊστοχημικές και in situ τεχνικές πραγματοποιήθηκαν στην πλειονότητα των περιπτώσεων σε ιστικές μικροσυστοιχίες (ΤΜΑ), μία σύγχρονη τεχνική, η οποία επέτρεψε την σημαντική μείωση του κόστους, του χρόνου, και του χρησιμοποιούμενου βιοπτικού υλικού της μελέτης
description: The systematic anaplastic lymphoma (ALCL) constitutes an infrequent type of T-cell lymphoma, which characteristically expresses the CD30/Ki-1antigen. A high fraction of ALCL expresses the anaplastic lymphoma kinase (ALK). Primary cutaneous anaplastic lymphoma (C-ALCL) is a T-cell lymphoma, which belongs in the group of T-cell lymphoproliferative disorders. Recently, the ALCL, ALK+ constitutes an autonomous category in the newer WHO classification, where they were apart from the ALCL, ALK- group of tumors. The ALCL, ALK+ tumors show very often the chromosomal translocation t(2;5)(p23;q35) between the NPM and ALK genes that leads to the creation of the “chimeric” gene, NPM-ALK, that is capable to drive oncogenesis. Variant translocation involving ALK and other genes has also reported. The aim of present study was to investigate in a series of 45 cases ALCL biopsies, from 42 patients the profile of genetic/molecular changes in combination with classic parameters that studied in the ALCL. More specifically, the ALK1 protein expression with IHC, the presence of t(2;5)(p23;q35) with RT-PCR and the rearrangements and/or chromosomal aberrations of ALK gene with FISH. The chromosome 2 status was also investigated with the centromeric 2 FISH probe. PCR, for the presence of T-cell receptor γ clonality performed. Probes for the identification of mRNAs containing (Bplus) and lacking (Bdel) exons 7 and 8 of the hTERT were studied with RT-PCR and ISH, while the hTERT protein with IHC. Cyclin D1 was investigated with simple-and-double IHC at the protein level using two monoclonal antibodies, cyclin D1 mRNA, with ISH and RT-PCR and the CCND1 gene with FISH. Besides the above-mentioned methods, in the case of CCND1, the FICTION method was also applied. Fascin and MUC-1 proteins were also investigated. The IHC and in situ techniques were realised in the majority of cases in TMA sections, a modern technique, which allowed an important reduction of cost, time, and tissue material