Ο ρόλος του ενζύμου αποουβικιτίνωσης CYLD στη μόλυνση με τον ιό Herpes Simplex
Creators: name: Χαρισίου, Σοφία Κωνσταντίνου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2016
Subjects: CYLD πρωτεΐνη
πρωτεάση ουβικιτίνης
HSV-1
CYLD protein
ubiquitin protease

description: Ο ερπητοϊός HSV-1 (Herpes simplex virus type 1) μπορεί να προκαλέσει σοβαρές παθολογικές καταστάσεις, όπως εγκεφαλίτιδα. Αντικείμενο της παρούσας μελέτης είναι ο ρόλος της ογκοκατασταλτικής πρωτεΐνης CYLD στην ανοσολογική απόκριση του κυττάρου, μετά από μόλυνση με τον ιό HSV-1. H CYLD δρα ως ένζυμο αποουβικιτίνωσης, ρυθμίζοντας λειτουργίες που σχετίζονται με την ανοσoλογική απόκριση του κυττάρου, καθώς και την επιβίωση και τον πολλαπλασιασμό του κυττάρου. Επίσης η πρωτεΐνη CYLD ρυθμίζει αρνητικά την έκφραση του μεταγραφικού παράγοντα NF-kΒ, που εμπλέκεται στην ανοσολογική απόκριση. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι η πρωτεΐνη CYLD παίζει ρυθμιστικό ρόλο στον μηχανισμό άμυνας του κυττάρου ενάντια στην ιϊκή μόλυνση. Σκοπός της παρούσας εργασίας ήταν διερεύνηση του ρόλου της πρωτεΐνης CYLD στον μηχανισμό παραγωγής ιντερφερόνης β κατά την μόλυνση από τον HSV-1.Σε κύτταρα HeLa που είχαν μολυνθεί με τον HSV-1, διεξήχθησαν πειράματα συνδιαμόλυνσης και διερευνήθηκε η επίδραση της υπερέκφρασης της πρωτεΐνης CYLD στην παραγωγή ιντερφερόνης β. Βρέθηκε πως η πρωτεΐνη CYLD καταστέλλει την παραγωγή ιντερφερόνης β μετά από μόλυνση με HSV-1. Καταστολή της έκφρασης της CYLD, μέσω παρεμβολής RNA, αυξάνει την παραγωγή ιντερφερόνης β μετά τη μόλυνση με HSV-1. Επίσης, με πειράματα Real Time-PCR διαπιστώθηκε πως η πρωτεΐνη CYLD μειώνει τα επίπεδα mRNAτης ιντερφερόνης β. Συμπερασματικά, η πρωτεΐνη CYLD ρυθμίζει αρνητικά την έκφραση ιντερφερόνης β σε κύτταρα που έχουν μολυνθεί από τον ιό HSV-1. Τα αποτελέσματα αυτά υποδεικνύουν την πιθανή χρησιμότητα της CYLD ως στόχο θεραπευτικών προσεγγίσεων και προγνωστικών μεθόδων που αφορούν σε παθολογικές καταστάσεις που σχετίζονται με την μόλυνση από τον HSV-1.
description: Herpes simplex virus type I infections is the cause of serious pathologies such as encephalitis. Innate mechanisms of viral recognition play a critical role in controlling viral infections. Membrane and cytosolic receptors of foreign double-stranded DNA induce a signaling cascade that leads to type I interferon production. The main objective of this work was to elucidate the role of the tumor suppressor protein CYLD in type I IFNβ production in response to HSV-1 infection. The CYLD protein was first identified as a tumor suppressor that is associated with the development of familiar cylindromatosis, a syndrome that manifests as multiple tumors in the hairy areas of head and neck. CYLD is a deubiquitinating enzyme which regulates different cellular responses such as cell survival, cell division and immunity. It was also identified as a negative regulator of the transcription factor NF-κB, which plays a key role in immune responses. In order to elucidate the role of CYLD after infection by HSV-1, CYLD was overexpressed in HeLa cells, followed by HSV-1 infection of the cells. Luciferase reporter assays, indicated that CYLD overexpression inhibited the activity of the IFNβ promoter. In addition, it was shown that CYLD downregulation by RNA interference augmented interferon production by HSV-1. Finally, real-time qPCR analysis showed that CYLD overexpression attenuates the IFNβ mRNA levels, after virus infection. These data support a critical regulatory role of CYLD in IFNβ production following HSV-1 infection. Our work identifies CYLD as a possible future therapeutic target and prognostic tool in serious conditions associated with HSV-1 infections