Διερεύνηση μοριακών μηχανισμών άμυνας στο αναπαραγωγικό σύστημα των πτηνών:
Creators: name: Αναστασιάδου, Μαρία
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2013
Subjects: Αναπαραγωγικό σύστημα
Εκφραση γονιδίων
Ανοσοποιητικό σύστημα
Σαλμονέλα
Reproductive system
Genes expression
Immune system
Salmonella

description: Παγκόσμια τάση στη ζωική παραγωγή είναι η πρόληψη των ασθενειών και η ενίσχυση της άμυνας του ζωικού οργανισμού στοχεύοντας στην αποφυγή μετάδοσης παθογόνων μικροοργανισμών και τροφιμογενών λοιμώξεων. Επομένως, η γνώση των ενδογενών μηχανισμών του έμφυτου ανοσοποιητικού συστήματος, που λειτουργούν στην αναπαραγωγωγική οδό των αρσενικών και θηλυκών ορνίθων, μειώνοντας την πιθανότητα της μετάδοσης λοιμώξεων στον άνθρωπο από μολυσμένα αυγά και κρέατα όρνιθας, κρίνεται απαραίτητη. Σκοπός της παρούσας διατριβής ήταν να μελετηθεί το πρότυπο έκφρασης των TLRs, των AvβDs και των κυτταροκινών στην ωοθήκη, τον ωαγωγό, τους όρχεις, την επιδιδυμίδα, τα κύτταρα Sertoli και σε έμβρυα όρνιθας σε διάφορα στάδια της εμβρυικής ανάπτυξης. Επίσης, διερευνήθηκε η επίδραση της αναπαραγωγικής ηλικίας στα επίπεδα της έκφρασης των TLRs, των AvβDs και των κυτταροκινών στα παραπάνω αναπαραγωγικά όργανα και προσδιορίστηκαν οι επιπτώσεις της μόλυνσης με σαλμονέλα των αναπαραγωγικών οργάνων στην έκφραση των παραπάνω γονιδίων και η επίδραση της επώασης με LPS στα επίπεδα της έκφρασής τους, σε in vitro καλλιέργειες κυττάρων Sertoli. Τα αποτελέσματα της παρούσης διατριβής έδειξαν ότι για την οικογένεια των TLRs, 9 γονίδια εκφράζονται στους όρχεις και στην επιδιδυμίδα, ενώ και τα 10 γονίδια της οικογένειας των TLRs εκφράζονται στα κύτταρα Sertoli. Σχετικά με την οικογένεια των AvβDs, προέκυψε ότι 11 μέλη εκφράζονται στον ωαγωγό, 9 στους όρχεις, 10 στην επιδιδυμίδα και 9 στα κύτταρα Sertoli. Τέλος, όσον αφορά στις κυτταροκίνες, διαπιστώθηκε ότι 9 γονίδια εκφράζονται στα έμβρυα, 12 γονίδια στην ωοθήκη, 11 στον ωαγωγό, 10 στους όρχεις, 11 στην επιδιδυμίδα και 8 στα κύτταρα Sertoli. Από τα πειράματα προσδιορισμού των επιπέδων έκφρασης κατά τη διάρκεια της αύξησης της αναπαραγωγικής ηλικίας, παρατηρήθηκε σημαντική (P&lt;0.05) αύξηση των επιπέδων έκφρασης σε 8 κυτταροκίνες στην ωοθήκη, σε 5 AvβDs και 6 κυτταροκίνες στον ωαγωγό. Στα αρσενικά εντοπίστηκε σημαντική (P&lt;0.05) αύξηση των επιπέδων έκφρασης σε 5 TLRs, 2 AvβDs και 6 κυτταροκίνες στους όρχεις καθώς και 4 AvβDs και μιας κυτταροκίνης στην επιδιδυμίδα. Επίσης, παρατηρήθηκε σημαντική (P&lt;0.05) μείωση μιας κυτταροκίνης στην ωοθήκη, ενός AvβD και μιας κυτταροκίνης στον ωαγωγό, 1 TLR, 4 AvβDs και 2 κυτταροκινών στους όρχεις καθώς και 4 TLRs, ενός AvβD και 7 κυτταροκινών στην επιδιδυμίδα. Η in vivo μόλυνση με σαλμονέλα, οδήγησε σε σημαντική (P&lt;0.05) αύξηση στην ωοθήκη των επιπέδων έκφρασης 6 κυτταροκινών στα αναπαραγωγικά ώριμα και 5 κυτταροκινών στα αναπαραγωγικά γερασμένα πτηνά. Επίσης, η μόλυνση επέφερε στον ωαγωγό σημαντική (P&lt;0.05) αύξηση των επιπέδων έκφρασης 6 AvβDs στα αναπαραγωγικά ώριμα και 2 AvβDs στα αναπαραγωγικά γερασμένα ορνίθια, καθώς και 7 κυτταροκινών στα αναπαραγωγικά ώριμα και 3 κυτταροκινών στα αναπαραγωγικά γερασμένα θηλυκά. Στα αρσενικά, η in vivo μόλυνση με σαλμονέλα, οδήγησε σε σημαντική (P&lt;0.05) αύξηση των επιπέδων έκφρασης 4 AvβDs, 5 TLRs και 5 κυτταροκινών, καθώς και μείωση ενός TLR στους όρχεις. Επιπλέον, στην επιδιδυμίδα παρατηρήθηκε σημαντική (P&lt;0.05) αύξηση των επιπέδων έκφρασης 4 AvβDs, 6 TLRs και 5 κυτταροκινών. Τέλος, η in vitro επώαση των κυττάρων Sertoli με λιποπολυσακχαρίτη οδήγησε σε σημαντική (P&lt;0.05) αύξηση των επιπέδων έκφρασης 6 TLR, 6 AvβD και 4 κυτταροκινών, καθώς και σε σημαντική (P&lt;0.05) μείωση 2 κυτταροκινών.
description: Worldwide trend in animal production is the support of the defense mechanisms in livestock in order to prevent microbial pathogens and zoonoses of being incorporated in animal products. Thus, knowledge of the endogenous mechanisms of the innate immune system, functioning in the reproductive tract of male and female species, protecting naturally from microbial colonization, is crucial. The antimicrobial protection of reproductive organs is becoming an emerging area of reproductive physiology, the objectives of this study were to determine the expression pattern of TLRs, AvβDs and cytokines in the chicken ovary, oviduct, testis, epididymis Sertoli cells and in chicken embryos during early stages of embryonic development. Furthermore, the effects of aging and Salmonella infection in the expression levels of these genes was investigated, as well as the effects of lipopolysaccharide in in vitro cultures of Sertoli cells. The results revealed that 9 members of the chicken TLR family were expressed in the rooster testis and epididymis, while all 10 TLRs were expressed in the Sertoli cells. Furthermore, RT-PCR analysis revealed that 11 genes of the AvβD family were expressed in the oviduct, 9 genes were expressed in the testis and Sertoli cells and 10 genes in the epididymis. Regarding cytokines, expression analysis data revealed that 9 cytokines were expressed in the chicken embryos, 12 genes in the ovary, 11 genes in the oviduct and epididymis, 10 genes in the testis and 8 genes in Sertoli cells. Quantification of expression levels of these genes during reproductive aging, revealed a significant (P&lt;0.05) up-regulation in the expression levels of 8 cytokines in the ovary and in 5 AvβDs and 6 cytokine genes in the oviduct. In the rosters, reproductive aging resulted in a significant (P&lt;0.05) increase of 5 TLRs, 2 AvβDs and 6 cytokines in the testis, as well as for 4 AvβDs and one cytokine in the epididymis. Furthermore, a significant (P&lt;0.05) down-regulation of one cytokine in the ovary, one AvβD gene and one cytokine in the oviduct, 1 TLR, 4 AvβDs and 2 cytokines in the testis, as well as 4 TLRs, one AvβD and 7 cytokines in the epididymis were also observed. In vivo Salmonella infection resulted in the ovary in a significant (P&lt;0.05) up-regulation of the expression levels of 6 cytokines in the mature and 5 cytokines in the aged birds. Furthermore, SE infection resulted in a significant (P&lt;0.05) induction in the oviduct in the expression of 7 cytokines and 6 AvβDs in the mature and 3 cytokines and 2 AvβDs in aged birds. Regarding roosters, revealed a significant (P&lt;0.05) up-regulation of 4 AvβDs, 5 TLRs and 5 cytokines and a decrease in the expression levels of one TLR gene in the testis, as well as a significant (P&lt;0.05) up-regulation of 4 AvβDs, 6 TLRs and 5 cytokines in the epididymis. Finally, in vitro incubation of LPS in the Sertoli cells, resulted in a significant (P&lt;0.05) up-regulation of the mRNA levels of 6 TLR, 6 AvβD and 4 cytokines, as well as a significant (P&lt;0.05) down-regulation of 2 cytokines.