ВЛИЯНИЕ ИНГИБИТОРОВ ПРОТЕИНКИНАЗ НА АКРОСОМНУЮ РЕАКЦИЮ И КОНЦЕНТРАЦИЮ ВНУТРИКЛЕТОЧНОГО СА2+ В СПЕРМАТОЗОИДАХ БЫКОВ
Creators: name: ДЕНИСЕНКО В. Ю.
Publisher: name: Достижения науки и техники АПК
Year: 2020
Subjects: ИНГИБИТОРЫ ПРОТЕИНКИНАЗ
АКРОСОМНАЯ РЕАКЦИЯ
ВНУТРИКЛЕТОЧНЫЙ КАЛЬЦИЙ
СПЕРМАТОЗОИДЫ БЫКОВ
PROTEIN KINASE INHIBITORS
ACROSOME REACTION
INTRACELLULAR CALCIUM
BOVINE SPERMATOZOA

description: В работе с помощью флуоресцентного зонда хлортетрациклина (ХТЦ) изучали влияние ингибиторов протеинкиназ А и С (соединений Н-89 и Ro 31-8220 соответственно) на акросомную реакцию и количество кальция внутриклеточных депо в сперматозоидах быков. Работу проводили в 2019 г. на эякуляте быков черно-пестрой и айришской пород. В присутствии прогестерона воздействие на сперматозоиды отдельно гуанозиндифосфата (ГДФ) в концентрации 50 мкМ или пролактина (ПРЛ) в концентрации 10 нг/мл стимулировало освобождение Са2+ из внутриклеточных депо сперматозоидов как в присутствии ингибитора протеинкиназы А, так и после обработки ингибитором протеинкиназы С. Совместное действие ПРЛ и ГДФ активировало дополнительное освобождение Са2+ из внутриклеточных депо сперматозоидов в присутствии ингибитора протеинкиназы А, в то же время присутствие соединения Ro 31-8220 оказывало ингибирующее воздействие на этот процесс. Использование ХТЦ-теста позволяет разделить клетки на три группы, имеющие различный функциональный статус: некапацитированные, капацитированные и акросома-реактивные сперматозоиды. Инкубация в присутствии прогестерона в течение 4 ч при добавлении отдельно ГДФ или ПРЛ не оказывала влияние на соотношение разных типов клеток, оно оставалось таким же, как и без добавок. Это отмечено как в присутствии Н-89, так и Ro 31-8220. В варианте с ингибитором протеинкиназы С совместная инкубация ПРЛ и ГДФ в течение 4 ч приводила к уменьшению количества акросома-реактивных клеток и увеличению числа капацитированных сперматозоидов, тогда как обработка клеток ингибитором протеинкиназы А не вызывала изменения в соотношении сперматозоидов с различным функциональным статусом. Протеинкиназа С опосредует увеличение акросома-реактивных сперматозоидов быков и дополнительное освобождение Са2+ из внутриклеточных депо при инкубации клеток в присутствии ПРЛ и ГДФ.In this study, the effect of protein kinase A and C inhibitors (compounds H-89 and Ro 31-8220, respectively) on the acrosome reaction and the amount of intracellular calcium in bovine spermatozoa was studied using chlortetracycline (CTC) fluorescence assay. The work was carried out in 2019 on the ejaculate of Black-and-White and Irish bulls. In the presence of progesterone, the separate introduction of guanosine diphosphate (GDP) at a concentration of 50 uM and prolactin (PRL) at a concentration of 10 ng/mL stimulated the release of intracellular Ca2+ in bovine spermatozoa both in the presence of the protein kinase A inhibitor and after the treatment with the protein kinase C inhibitor. The combined action of GDP and PRL activated an additional release of intracellular Ca2+ in the presence of H-89; however, the presence of the Ro 31-8220 compound had an inhibiting effect. Using chlortetracycline (CTC) fluorescence assay, the cells were divided into the following three groups in terms of their functional status: uncapacitated, capacitated and acrosome-reactive spermatozoa. Incubation in the presence of progesterone for 4 hours with a separate addition of either GDP or PRL did not affect the ratio of different cell types, leaving it unchanged. This was noted in the presence of both H-89 and Ro 31-8220. Under the action of the protein kinase C inhibitor, co-incubation of GDP and PRL for 4 hours resulted in a decrease in the number of acrosome-reactive cells and an increase in the number of capacitated sperm cells. At the same time, the treatment of cells with the protein kinase A inhibitor did not change the ratio of spermatozoa with a different functional status. The protein kinase C was shown to mediate an increase in the acrosome-reactive bovine spermatozoa and provide an additional release of intracellular Ca2+ during cell incubation in the presence of GDP and PRL.