Ανθεκτικότητα του Botrytis cinerea σε μυκητοκτόνα και ανταγωνιστική ικανότητα στελεχών με μεταλλαγές στην sdh:
Creators: name: Καλογεροπούλου, Παναγιώτα Νικολάου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2013
Subjects: Ανθεκτικότητα
Ανταγωνιστική ικανότητα
SDHI's
Resistance
Competitive ability

description: Στην παρούσα εργασία η οποία εκπονήθηκε στο Εργαστήριο Φυτοπαθολογίας της Γεωπονικής Σχολής του Αριστοτελείου Πανεπιστημίου Θεσσαλονίκης, μελετήθηκε η πολλαπλή ανθεκτικότητα του μύκητα Botrytis cinerea από καλλιέργειες φράουλας και θερμοκηπιακής τομάτας σε μυκητοκτόνα και η ανταγωνιστική ικανότητα στελεχών με μεταλλαγές στο γονίδιο sdh. Αρχικά διερευνήθηκε το προφίλ ευαισθησίας του παθογόνου από καλλιέργειες φράουλας (περιοχές Ηλείας και Πιερίας) και θερμοκηπιακής τομάτας (περιοχές Πρέβεζας, Κυπαρισσίας και Κρήτης). Συλλέχτηκαν συνολικά 1.160 απομονώσεις οι οποίες μελετήθηκαν ως προς την ευαισθησία τους στα μυκητοκτόνα cyprodinil (ανιλινοπυριμιδινικό), fenhexamid (υδροξιανιλίδιο), fludioxonil (φαινυλοπυρολικό), carbendazim (βενζιμιδαζολικό), pyraclostrobin (QoI’s) και boscalid (SDHI’s).Οι απομονώσεις διαχωρίστηκαν σε ανθεκτικές και ευαίσθητες σε κάθε ένα από τα μυκητοκτόνα μετά από βιοδοκιμή σε κατάλληλη δόση διαχωρισμού. Στις απομονώσεις που εμφάνισαν ανθεκτικότητα στο μυκητοκτόνο boscalid έγινε ανίχνευση των sdhB μεταλλαγών με την τεχνική PIRA-PCR. Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι στην Κρήτη το μεγαλύτερο ποσοστό ανθεκτικότητας (48.9%) παρατηρήθηκε ταυτόχρονα στα βενζιμιδαζολικά και στις ανιλινοπυριμιδίνες ενώ στην Πρέβεζα μόνο στα βενζιμιδαζολικά (57,4%). Στην Ηλεία παρατηρήθηκε πολλαπλή ανθεκτικότητα (57%) σε ανιλινοπυριμιδίνες, βενζιμιδαζολικά, Qol’s και SDHI’s. Στην Κυπαρισσία το 52,87% ήταν ευαίσθητες σε όλα τα φάρμακα. Καμία απομόνωση δεν βρέθηκε να είναι ανθεκτική στις ομάδες των υδροξυανιλιδίων και των φαινυλοπυρρολικών. Η ανίχνευση των μεταλλαγών της sdhB έδειξαν ότι σε όλους τους πληθυσμούς που μελετήθηκαν κυρίαρχη μεταλλαγή ήταν η Η272R. Στη συνέχεια, διερευνήθηκε η ανταγωνιστική ικανότητα των ευαίσθητων στελεχών: α) σε σχέση με τα ανθεκτικά στελέχη που έφεραν μια από τις πέντε μεταλλαγές της sdhB, απουσία παράγοντα επιλογής, β) σε σχέση με τα ανθεκτικά στελέχη που έφεραν και τις πέντε μεταλλαγές, σε αναλόγια 1:1:1:1:1:1, απουσία και παρουσία παράγοντα επιλογής. Τέλος, μετά το πέρας 4 κύκλων καλλιέργειας, μελετήθηκε η συχνότητα εμφάνισης των μεταλλαγών της sdhB. Με βάση τα αποτελέσματα της ανταγωνιστικής ικανότητας διαπιστώθηκε ότι σε όλα τα μείγματα ευαίσθητων και ανθεκτικών στελεχών, απουσία του παράγοντα επιλογής, επικράτησαν τα ευαίσθητα στελέχη. Αντίθετα, παρουσία του παράγοντα επιλογής boscalid, επικρατήσαν τα ανθεκτικά στελέχη τα οποία έφεραν τις μεταλλαγές H272L και P225F ενώ παρουσία του fluopyram επικράτησαν τα στελέχη που έφεραν την μεταλλαγή P225F. Τα αποτελέσματα δείχνουν ότι η επικράτηση των ευαίσθητων στελεχών απουσία παράγοντα επιλογής δείχνει ότι η χρήση των SDHI’s σε εναλλαγές με μυκητοκτόνα άλλων ομάδων μπορεί να καθυστερήσει την επιλογή στελεχών με μεταλλαγές στο sdh γονίδιο ή να οδηγήσει σε μείωση της συχνότητας τους.
description: The present study was conducted at the Plant Pathology Laboratory of the School of Agriculture at the Aristotle University of Thessaloniki. The multiple resistance of Botrytis cinerea’s strains, collected from strawberry (Pieria, Ilia) and greenhouse tomato crops (Preveza, Kiparissia and Crete), towards fungicides was studied. In addition, the competitive ability of the fungus’ strains with mutations located on the sdh gene was investigated. A total of 1160 isolates were collected and tested for their sensitivity to the following fungicides: cyprodinil (Anilinopyrimidine), fenhexamid (Hydroxyanilide), fludioxonil (Phenylpyrrole), carbendazim (Benzimidazole), pyraclostrobin (Qol’s) and boscalid (SDHI’s). The isolates were divided into two groups: resistant to some or sensitive to all the fungicides, based on bioassays. PIRA-PCR was performed in isolates resistant to boscalid, in order to detect the mutations on the sdh gene. In Crete, the vast majority of isolates (48.9%) proved to be resistant to both benzimidazole and the aminilinopyrimidine fungicides, whereas in Preveza most isolates were found resisitant only towards the benzimidazole fungicide. In Ilia, multiple resistance (57%) towards benzimidazole, aminilinopyrimidine, Qol’s and SDHI’s fungicides was observed. In Kiparissia, most isolates (52.87%) were sensitive to all the fungicides tested. None of the isolates was resistant to hydroxyanilide and phenylpyrrole fungicides. H272R was the dominant mutation on the sdh gene. Competition experiments were conducted to compare the sensitive strains a) with resistant strains with one of the 5 mutations of sdhB, in the absence of a selective factor, b) with resistant strains with the 5 mutations in a ratio 1:1:1:1:1:1, in the presence and absence of a selective factor (boscalid, fluopyram). Finally, after 4 disease cycles, the frequency of the mutations on the sdh gene was studied. The competition experiments showed that in absence of the selective factor, the sensitive strains dominated. In the contrary, in presence of boscalid strains bearing the H272L and P225F mutations dominated, whereas in presence of fluopyram, the strain with the P225F mutation was dominant. Results showed that the use of the SDHI’s fungicides alternated with other fungicides could delay the predominance of the strains with the mutations on the sdh gene or lead to a decreased frequency of resistant strains.