Ο ρόλος της πρωτεΐνης TRAF3 στην αναστολή της απόπτωσης που προκαλείται από την πρωτεΐνη GMEB1
Creators: name: Κότσαρης, Γεώργιος Ηλία
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2016
Subjects: Πρωτεΐνη GMEB1
Πρωτεΐνη TRAF3
Απόπτωση
GMEB1 protein
TRAF3 protein
Apoptosis

description: Οι ενδοκυτταρικές πρωτεΐνες TRAFs (tumor necrosis factor receptor TNFR – associated factor) δρουν κυρίως ως σηματοδοτικά μόρια που συνδέονται απευθείας στην κυτταροπλασματική περιοχή μελών της οικογένειας των υποδοχέων παραγόντων νέκρωσης όγκων (TNFRs). Συγκεκριμένα η πρωτεΐνη TRAF3 προσδένεται στον υποδοχέα CD40, μέλος της οικογένειας TNFR, καθώς και στην ογκογόνο πρωτεΐνη LMP1 του ιού Epstein-Barr. Κατέχει ιδιαίτερα ρόλο στις αποκρίσεις του ανοσοποιητικού. Πρόκειται για έναν από τους πιο σημαντικούς ρυθμιστές της σηματοδότησης κατά την ενεργοποίηση του μονοπατιού του μεταγραφικού παράγοντα NF-κΒ, είτε από τους υποδοχείς TNFRs είτε από την ογκογόνο πρωτεΐνη LMP1. Μεταλλάξεις της TRAF3 έχουν συνδεθεί με νεοπλασίες, όπως το πολλαπλό μυέλωμα. Για τον καλύτερο χαρακτηρισμό των μοριακών μηχανισμών σηματοδότησης από την TRAF3, χρησιμοποιήθηκε η τεχνική των δύο υβριδίων στο ζυμομύκητα, για να ταυτοποιηθούν πρωτεΐνες που αλληλεπιδρούν με την πρωτεΐνη TRAF3. Ανάμεσα στις πρωτεΐνες που ανιχνεύτηκαν, ήταν η πρωτεΐνη GMEB1 (Glucocorticoid Modulatory Element-Binding Protein 1). Πρόκειται για ένα συμπαράγοντα πυρηνικών υποδοχέων, η οποία δρα επίσης ως ισχυρός αναστολέας της απόπτωσης, καθώς έχει δειχθεί ότι η υπερέκφραση της αναστέλλει την ενεργοποίηση ορισμένων εναρκτήριων κασπασών. Ο σκοπός της παρούσας εργασίας είναι να διερευνήσει τον πιθανό ρόλο της πρωτεΐνης TRAF3 στην αναστολή της απόπτωσης από την πρωτεΐνη GMEB1. Μελετήθηκε λοιπόν η επίδραση της υπερέκφρασης τόσο της πρωτεΐνης TRAF3 όσο και ενός μεταλλάγματός της, στην αναστολή της απόπτωσης από την GMEB1, και βρέθηκε ότι η πρωτεΐνη TRAF3 ενισχύει τον αντι-αποπτωτικό ρόλο της GMEB1. Καταστολή της έκφρασης της πρωτεΐνης TRAF3, με πειράματα παρεμβολής RNA, μείωσε σημαντικά την ικανότητα της GMEB1 να αναστέλλει την απόπτωση. Επιπρόσθετα, η πρωτεΐνη LMP1(1-231), μια μετάλλαξη της πρωτεΐνης LMP1, η οποία αλληλεπιδρά με την TRAF3 και ενεργοποιεί το μεταγραφικό παράγοντα NF-κΒ, δείχθηκε ότι συνεργάζεται με τη GMEB1 στην παρεμπόδιση της απόπτωσης. Τέλος διερεύνηθηκε ο υποκυτταρικός εντοπισμός της GMEB1 και της TRAF3 με πειράματα ανοσοφθορισμού.
description: Members of TNF Receptor-Associated Factors (TRAFs) family interact with the cytoplasmic tails of TNF receptor family members, such as CD40, lymphotoxin β-receptor, Herpes Virus Entry Mediator (HVEM), Receptor Activator of NF-κB (RANK) and the latent membrane protein 1 (LMP1) of Epstein-Barr virus, which is an oncoprotein. TRAF3 has a major immunomodulatory function and TRAF3 deficiency has been linked to malignancies, such as multiple myeloma and lymphoid defects in the mouse. In order to characterize the molecular mechanisms of TRAF3 signaling, the yeast two-hybrid system was used to identify proteins that interact with TRAF3. From this approach, GMEB1 (Glucocorticoid Modulatory Element-Binding Protein 1) protein was identified as a TRAF3-interacting protein. Previous studies indicated that GMEB1 functions as a potent inhibitor of caspase activation and apoptosis. The objective of this work is to investigate the interaction between TRAF3 and GMEB1 proteins, as well as the possible participation of TRAF3 protein in apoptosis inhibition by the GMEB1 protein. Firstly, it was investigated the effect of the overexpression of TRAF3 to the apoptosis inhibition by the GMEB1, and it was found that TRAF3 is likely to increase the ability to inhibit apoptosis of GMEB1. Furthermore, downregulation of TRAF3 by RNA interference decreased significantly the ability of GMEB1 to inhibit apoptosis. In addition, LMP1 (1-231), a truncated form of the oncoprotein LMP1, that interacts with TRAF3, was also able to cooperate with GMEB1 in order to inhibit apoptosis. Finally, the subcellular localization of the two proteins was investigated. Our data support a regulatory role of TRAF3 in GMEB1-mediated inhibition of apoptosis.