Μηχανισμοί ρύθμισης της γονιδιακής έκφρασης από τον ιό Epstein-Barr:
Creators: name: Χάντουε, Πωλ Μ.
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2015
Subjects: Ιός Epstein-Barr
Γονιδιακή ρύθμιση
TRAF πρωτεΐνες
RNA παρεμβολή
Epstein-Barr virus
Genomic regulation
TRAF proteins
RNA interference

description: Ο ιός Epstein-Barr (EBV) είναι ένας ευρύτατα διαδεδομένος ανθρώπινος ερπητοϊός που έχει την ικανότητα να μολύνει επιθηλιακά κύτταρα και Β λεμφοκύτταρα ακολουθώντας είτε μια λυτική είτε μία λανθάνουσα πορεία. Η λανθάνουσα μόλυνση από τον ΕBV σχετίζεται με την ανάπτυξη διάφορων τύπων νεοπλασιών. Η πρωτεΐνη LMP1 είναι η κύρια ογκογονική πρωτεΐνη του EBV καθώς έχει αυτόνομη ικανότητα μετασχηματισμού ινοβλαστών, είναι απόλυτα απαραίτητη για την διαδικασία της αθανατοποίησης των Β λεμφοκυττάρων από τον EBV και εκφράζεται στις περισσότερες νεοπλασίες που σχετίζονται με τον EBV. Η LMP1 στο καρβοξυτελικό της άκρο περιέχει 2 περιοχές (CTAR1 και CTAR2) που αποτελούν θέσεις πρόσδεσης διάφορων κυτταροπλασματικών παραγόντων που λαμβάνουν μέρος στα διάφορα σηματοδοτικά μονοπάτια που ενεργοποιεί η πρωτεΐνη LMP1. Ανάμεσα στους κυτταροπλασματικούς παράγοντες που έχουν εμπλακεί στη σηματοδότηση από την LMP1 είναι πέντε μέλη της οικογένειας των πρωτεϊνών TRAF (TRAF1, -2, -3, -5 και -6) που έχουν συσχετιστεί με την κατευθυνόμενη από την LMP1 ενεργοποίηση του μεταγραφικού παράγοντα NF-κB και των κινασών JNK και p38. Στο πλαίσιο της παρούσας διδακτορικής διατριβής μελετήθηκε η σημασία της φυσιολογικής έκφρασης των πρωτεϊνών TRAF1, TRAF2, TRAF3, TRAF5 καιTRAF6 στην βιωσιμότητα μετασχηματισμένων από τον EBVανθρώπινων Β λεμφοκυττάρων. Δείχθηκε ο σημαντικός ρόλος που μπορούν να διαδραματίζουν γενικά οι πρωτεΐνες αυτές στην μακροχρόνια επιβίωση Β λεμφοκυττάρων που έχουν μετασχηματισθεί από τον EBV.Επίσης αναλύθηκε ο ρόλος των πρωτεϊνών TRAF1, TRAF2 και TRAF3 στην κατευθυνόμενη από την LMP1 ενεργοποίηση κυτταρικών γονιδίων με καταστολή της έκφρασης τους με παρεμβολή RNA. Διαπιστώθηκε ο ειδικός ρόλος που μπορούν να διαδραματίζουν τα μέλη της οικογένειας των πρωτεϊνώνTRAFστην ενεργοποίηση της έκφρασης κυτταρικών γονιδίων από τη LMP1. Τέλος μελετήθηκε και χαρακτηρίστηκε ένας νέος μηχανισμός ρύθμισης της δράσης των πρωτεϊνών TRAF2 και TRAF6 που βασίζεται στην αλληλεπίδραση των πρωτεϊνών αυτών με την ρυθμιστική υπομονάδα PP4R1 της φωσφατάσης PP4. Δείχθηκε η ικανότητα της PP4R1 να καταστέλλει την επαγόμενη από τις TRAF2 καιTRAF6 ενεργοποίηση του μεταγραφικού παράγοντα NF-κB. Επιπλέον, η ικανότητα της PP4R1 να καταστέλλει την ενεργοποίηση του NF-κΒ από την TRAF2 συσχετίστηκε με τη εξαρτώμενη από την καταλυτική υπομονάδα PP4cτης PP4 αποφωσφορυλίωση της TRAF2 στη σερίνη 11. Η παρούσα διατριβή κατέδειξε τη σημασία συγκεκριμένων πρωτεϊνών της οικογένειας TRAF στην μακροχρόνια επιβίωση μετασχηματισμένων από τον EBV B-λεμφοκυττάρων και ανέδειξε σημαντικά στοιχεία της λειτουργίας και ρύθμισης τους . Τα αποτελέσματα της διατριβής ανέδειξαν μόρια και μηχανισμούς ρύθμισης της μεταγωγής σήματος που θα μπορούσαν να στοχευθούν για την ανάπτυξη μεθόδων αντιμετώπισης νεοπλασιών που σχετίζονται με τον ιό EBV.
description: The Epstein-Barr virus (EBV) is a widespread human herpes virus, which is capable of infecting epithelial cells as well as B-lymphocytes following either a lytic or a latent type of infection. Latent infection by EBV is associated with the development of epithelial and lymphoid malignancies. LMP1 is the major oncogenic protein of EBV. It has the ability to transform fibroblasts, it is absolutely necessary for the transformation of human B-lymphocytes by EBV and it is expressed in the majority of the neoplasias linked to EBV. LMP1 contains in its carboxyl terminal end 2 regions (CTAR1 and CTAR2) that bind various cytoplasmic factors implicated in the different signaling pathways triggered by LMP1. Among those factors are included five members of the TRAF family, (TRAF1, -2, -3, -5 and -6), which have been implicated in LMP1-mediated activation of NFκB, JNK and p38. In the present study the importance of physiological expression of TRAF1, TRAF2, TRAF3 TRAF5 and TRAF6 in the survival of EBV-transformed human B lymphocytes was evaluated. In general, it was found that TRAF1, TRAF2, TRAF3, TRAF5 and TRAF6 can play a critical role in the long-term survival of EBV-transformed lymphoblastoid cell lines. Furthermore the functional role of TRAF1, TRAF2 and TRAF3 in LMP1-mediated induction of cellular gene expression was assessed by RNA interference induced downregulation of the TRAF proteins. The results of these experiments support a specific role for TRAF family members in modulating the induction of individual genes by LMP1. Finally, a novel regulatory mechanism of TRAF2 and TRAF6 function, which is based on the interaction of these proteins with the PP4R1 regulatory subunit of protein phosphatase PP4, was characterized. The ability of PP4R1 to inhibit TRAF2- and TRAF6-dependent NF-κB activation was demonstrated. In addition, the inhibition of TRAF2-mediated activation of NF-κΒ by PP4R1 was associated with TRAF2 serine 11 dephosphorylation in a manner that depends on the catalytic subunit PP4c of protein phosphatase PP4. This dissertation demonstrated the importance of specific TRAF molecules in the long-term survival of EBV-transformed lymphoblastoid cell lines and highlighted critical aspects of TRAF function and regulation. The results of this dissertation identified molecules and mechanisms that can be targeted for the development of therapeutic approaches against EBV-associated lymphomas.