Αποδιαφοροποίηση – διαφοροποίηση ευκαρυωτικών κυττάρων σε οστεοκύτταρα και χονδροκύτταρα
Creators: name: Μπαμπανούτσα, Καρολίνα Βαλέριου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2018
Subjects: Αποδιαφοροποίηση
Διαφοροποίηση
Ρεβερσίνη
Οστεοκύτταρα
Χονδροκύτταρα
Dedifferentiation
Differentiation
Reversine
Osteocytes
Chondrocytes

description: Στα πλαίσια της προκείμενης διπλωματικής εργασίας ασχοληθήκαμε με την αποδιαφοροποίηση και τη διαφοροποίηση ευκαρυωτικών κυττάρων. Πιο συγκεκριμένα, μελετήσαμε την αποδιαφοροποιητική ικανότητα που έχει το μόριο ρεβερσίνη πάνω σε ευκαρυωτικά κύτταρα προς αρχέγονα μεσεγχυματικά κύτταρα. Για την εκπλήρωση των πειραμάτων χρησιμοποιήθηκαν οι κυτταρικές σειρές MRC5, HeLa και L929. Στη συνέχεια, μελετήθηκε κατά πόσο μπορούν να διαφοροποιηθούν προς χονδροκύτταρα ή οστεοκύτταρα οι πρόδρομες κυτταρικές σειρές που ελήφθησαν από τη διαδικασία της αποδιαφοροποίησης. Για τη διαφοροποίηση έγινε χρήση πεπτιδίων της μορφογενετικής πρωτεΐνης οστού-2 (BMP-2) και θρεπτικού υλικού χονδρογένεσης και οστεογένεσης, αντίστοιχα. Η σειρά πειραμάτων που διεξήχθη έδειξε την ικανότητα του μορίου ρεβερσίνη να επαναπρογραμματίζει και τους ινοβλάστες ποντικού L929 και τα καρκινικά κύτταρα HeLa σε μια πολυδύναμη κατάσταση πέρα από τα πνευμονικά κύτταρα MRC5, τα οποία είχαν μελετηθεί και στο παρελθόν. Επιπλέον, τόσο η πρόδρομη κυτταρική σειρά που προέρχεται από τα L929, όσο και αυτή από τα HeLa φαίνεται να διαφοροποιούνται προς οστεοκύτταρα με τη δράση της BMP2 αλλά και των πεπτιδίων αυτής, όπου και επιβεβαιώθηκε η ικανότητα που έχει ως μορφογενετική πρωτεΐνη οστού. Τέλος, εξετάστηκε και η διαφοροποίηση των μεσεγχυματικών αρχέγονων κυττάρων που προέρχονται από την κυτταρική σειρά L929 και HeLa προς χονδροκύτταρα. Σε αυτήν την περίπτωση, ωστόσο, δεν μπορέσαμε να αποφανθούμε για την χονδρογονική δράση τόσο της BMP-2 όσο και των μικρότερων τμημάτων της, για αυτό είναι απαραίτητο να επαναληφθούν τα πειράματα χρώσης με το Μπλε Αλσατίας και να γίνει έλεγχος σε γονιδιακό επίπεδο της έκφρασης της COMP ποντικού στα L929
description: In the context of this diplomatic work, we dealt with dedifferentiation and differentiation of eukaryotic cells. More specifically, we studied the dedifferentiation capacity of the reversine molecule on eukaryotic cells to mesenchymal stem cells. Cell lines MRC5, HeLa, L929 and human fibroblasts were used to perform the experiments. Furthermore, it was studied whether the precursor cell lines derived from the dedifferentiation process can be differentiated into osteocytes or chondrocytes. For the osteogenic and chondrogenic differentiation, the bone morphogenetic protein-2 (BMP-2) and its peptides as well as the medium for osteogenesis and chondrogenesis were used, respectively. The series of experiments conducted demonstrated the ability of the reversine molecule to reprogram both L929 mouse fibroblasts and HeLa cells in a multivalent state beyond the MRC-5 pulmonary cells that had been studied in the past. Furthermore, both the L929 and HeLa derived precursor cell lines appear to differentiate into osteocytes by the action of BMP2 and its peptides, where its ability as a morphogenetic protein bone has been confirmed. Finally, the differentiation of mesenchymal stem cells derived from the L929 cell line and HeLa to chondrocytes was also examined. In this case, however, we cannot decide on the chondrogenic action of BMP-2 and its smaller segments, so it is necessary to repeat the staining experiments with Alcian Blue and to test for gene level of mouse COMP expression in L929