Η Επίδραση της Σιλδεναφίλης και της Ταδαλαφίλης σε Τ Λεμφοκύτταρα ασθενών με Συστημικό Ερυθηματώδη Λύκο
Creators: name: Δεμιρτζόγλου, Γεώργιος Σάββα
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2023
Subjects: Συστημικός Ερυθηματώδης Λύκος
Σιλδεναφίλη
Ταδαλαφίλη
Systemic Lupus Erythematosus
Sildenafil
Tadalafil

description: Εισαγωγή: Ο Συστημικός Ερυθηματώδης Λύκος (ΣΕΛ) αποτελεί ένα συστημικό χρόνιο αυτοάνοσο νόσημα άγνωστης αιτιολογίας που χαρακτηρίζεται από διαταραχή της φυσικής και της ειδικής ανοσίας και βλάβες σε πολλά όργανα στόχους. Η ανεπάρκεια του κυτταρικού δικτύου απόκρισης και επιδιόρθωσης της βλάβης του DNA-DDR/R κατέχει κεντρικό ρόλο στην παθογένειά του. Η σιλδεναφίλη και η ταδαλαφίλη είναι αναστολείς PDE5 που έχουν ένδειξη για τη θεραπεία της στυτικής δυσλειτουργίας και της πνευμονικής υπέρτασης. Πειραματικά δεδομένα από προκλινικά μοντέλα αυτοανοσίας υποστηρίζουν την πιθανή ευεργετική τους δράση στην ανεπάρκεια του DDR/R. Σκοπός: Η παρούσα ερευνητική εργασία έχει σαν σκοπό τη διερεύνηση της επίδρασης της σιλδεναφίλης και της ταδαλαδίλης στο DNA καλλιεργημένων Τ λεμφοκυττάρων με κυτταρογενετικές μεθόδους. Η παραπάνω μελέτη αφορά τόσο υγιείς αιμοδότες όσο και ασθενείς με ΣΣκ. Υλικό και Μέθοδος: Έγινε επιλογή τριών υγιών αιμοδοτών και τριών ασθενών με ΣΕΛ βάσει προκαθορισμένων κριτηρίων. Για όλους τους συμμετέχοντες έγινε καταγραφή δημογραφικών στοιχείων . Επιπλέον, για κάθε ασθενή, καταγράφηκε η διάρκεια, ο κλινικός φαινότυπος της νόσου, τα προσβεβλημένα όργανα στόχοι η φαρμακευτική αγωγή, το ατομικό αναμνηστικό και η παρουσία ειδικών αυτοαντισώματων. Ακολούθησε ενημέρωση των συμμετεχόντων, λήψη έγγραφης συγκατάθεσης και φλεβοκέντηση υπό άσηπτες συνθήκες. Παρασκευάσθηκαν διαλύματα σιλδεναφίλης 25,50,75,100 μg/ml και ταδαλαφίλης 5,10,20,40 μg/ml τα οποία προστέθηκαν στις καλλιέργειες των Τ λεμφοκυττάρων, οι οποίες χωρίστηκαν σε 5 ομάδες ανά συμμετέχοντα ανά φάρμακο (μία για κάθε διάλυμα φαρμάκου και η καλλιέργεια μάρτυρας). Για τον προσδιορισμό SCEs , PRI και ΜΙ, τα λεμφοκύτταρα καλλιεργήθηκαν για 72 ώρες. Ακολούθησε απομόνωση DNA από το ίζημα και χρώση του με τη μέθοδο Fluorescence Plus Giemsa. Για τον προσδιορισμό των ΜΝ, τα λεμφοκύτταρα καλλιεργήθηκαν για 48ώρες έγινε προσθήκη κυτοχαλασίνης Β και επώαση για 24ώρες και χρώση με Giemsa. Από τα παρασκευάσματα προσδιορίστηκαν με το οπτικό μικροσκόπιο οι τέσσερεις κυτταρογενετικοί δείκτες. Η στατιστική επεξεργασία έγινε στο στατιστικό πρόγραμμα SPSS Version 22.0 με παραμετρικά κριτήρια (Students t-test, ANOVA test, συντελεστής συσχέτισης Pearson). Αποτελέσματα: Οι μεταβολές στις συχνότητες των SCEs, PRI, MI και MN στα λεμφοκύτταρα των ασθενών διαφέρουν σημαντικά σε σχέση με των υγιών. Οι μεταβολές στις συχνότητες των SCEs που παρατηρούνται από τις υπό μελέτη συγκεντρώσεις και των δύο φαρμάκων μειώνονται δοσοεξαρτώμενα στην ομάδα των ασθενών. Στην ομάδα των υγιών παρατηρείται οριακά στατιστική σημαντική αύξηση στις μεταβολές των SCEs μόνο για την σιλδεναφίλη. Για τους PRΙ και ΜΙ , και στις δυο ομάδες προέκυψε στατιστικά σημαντική μείωση των τιμών τους αναφορικά με τις συγκεντρώσεις και των δύο φαρμάκων . Ο ΜΝ δεν μεταβλήθηκε σημαντικά στην ομάδα των υγιών για κανένα από τα δύο φάρμακα, ενώ στην ομάδα στων ασθενών παρουσίαζε στατιστικά σημαντική δοσοεξαρτώμενη πτώση και για τα δύο φάρμακα. Παρατηρήθηκε ισχυρή θετική συσχέτιση για τις μεταβολές των SCEs και ΜΝ στην ομάδα των ασθενών. Συμπεράσματα: Η μείωση των SCEs και των MN ενισχύουν τις ενδείξεις για την πιθανή ευεργετική επίδραση της αναστολής PDE5 στην ανεπάρκεια του DDR/R που χαρακτηρίζει τον ΣΕΛ με μηχανισμούς που ίσως σχετίζονται με επιγενετικές τροποποιήσεις αλλά χρειάζονται περισσότερες μελέτες για να προκύψουν ασφαλή συμπεράσματα
description: Background: Systemic Lupus Erythematosus (SLE) is a chronic autoimmune disease of unknown etiology characterized by both innate and adaptive immune dysregulation and multiple organ damage. Genetic instability by DNA Damage Response and Repair (DDR/R) mechanism dysfunction and epigeletic alterations are involved in SLE pathogenesis. Sildenafil and tadalafil are PDE5 inhibitors. They indicate for erectile dysfunction and pulmonary hypertantion treatment. They though to affect DDR/R due to preclinical data of autoimmunity animal models and immune cell cultures. Objectives: The evaluation of sildenafil’s and tadalafil’s effect on cultured T lymphocyte DNA from SLE patients and healthy donors, using cytogenetic methods (SCEs, PRI, MI and MN) Methods: Three consecutive donors for each group were chosen for enrolling the study and the demographic characteristics were recorded. For patient group members, the disease characteristics, major organ involvement, treatment and patient’s medical history were recorded. Siledenafil (25,50,75,100 μg/ml) and tadalafil (5, 10,20,40 μg/ml) solutions were prepared. Blood from both patients and healthy individuals was used for T lymphocyte culture. Each group divided into five subgroups for each drug (4 for different drug concentrations and one control). For SCEs, PRI and MI measurement, DNA was isolated after 72h incubation of lymphocytes and was dyed using Fluorescence Plus Giemsa method. For MN measurement, DNA was isolated after 72h incubation of lymphocytes (Cytohalasin B was added at each culture at 48h incubation) and was dyed using Giemsa. Cytogenetic indices were estimated with an optical microscope. Statistical analysis took place using SPSS version 22.0. Results: The SCE PRI, MI and MN score alterations are significantly different between healthy controls and SLE patients. The reduction in SCEs values concerning the patient group is dose dependent and statistically significant for all concentrations for both drugs. PRI and MI scores drop significantly due to sildenafil’s and tadalafil’s effects for both groups. The reduction in MN score concerning the patient group is statistically significant in a dose dependent manner for both drugs. This finding is strongly correlated with SCEs reduction. Conclusions: SCEs and MN reduction support the possible beneficial effect of PDE5 inhibition in DDR/R dysfunction, but further study needs for the evaluation of these findings. Epigenetic alterations may be involved