In vitro και in vivo διερεύνηση της αντιφλεγμονώδους δράσης καρβακρόλης και θυμόλης
Creators: name: Ελευθεριιάδου, Ιωάννα Λάζαρου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2016
Subjects: Αντιφλεγμονώδης δράση
Καρβακρόλη
Θυμόλη
Anti-inflammatory effect
Carvacrol
Thymol

description: Η κλινική αποτελεσματικότητα πολλών φαρμάκων, η εμφάνιση παρενεργειών, αλλά και το κόστος έχουν στρέψει το ερευνητικό ενδιαφέρον στα φυσικά προϊόντα και στη βιολογική δράση που έχουν καθώς και στο ρόλο τους στη θεραπεία φλεγμονωδών νόσων. Η καρβακρόλη και η θυμόλη είναι δύο σημαντικά φυσικά προϊόντα που χαρακτηρίζονται ως φαινολικά μονοτερπένια και βρίσκονται σε πολλά αρωματικά φυτά. Σκοπός της παρούσας εργασίας ήταν η διερεύνηση της αντιφλεγμονώδους δράσης της καρβακρόλης και θυμόλης in vitro μέσω της μελέτης της έκκρισης του TNF-α και της IL-6, σε διεγερμένα με LPS μονοπύρηνα κύτταρα περιφερικού αίματος (PBMCs) αλλά και η διερεύνηση της αντιφλεγμονώδους δράσης τους in vivo χρησιμοποιώντας ένα μοντέλο αλλεργικής εξ επαφής δερματίτιδας σε μύες. Τα περιφερικά μονοπύρηνα κύτταρα (PBMCs) καλλιεργήθηκαν παρουσία των ουσιών που εξετάζονται ενώ στη συνέχεια ακολούθησε επώαση παρουσία του λιποπολυσκχαρίτη LPS για 16 ώρες. Ακολούθησε συλλογή των υπερκειμένων και προσδιορίστηκαν τα επίπεδα των κυτοκινών IL-6 και TNF-α με τη χρήση Elisa kit. Παράλληλα, προηγουμένως εκτιμήθηκε η βιωσιμότητα των κυττάρων παρουσία διαφόρων συγκεντρώσεων καρβακρόλης και θυμόλης με τη μέθοδο ΜΤΤ. Τόσο η καρβακρόλη όσο και η θυμόλη ανέστειλαν την παραγωγή της IL-6. Ωστόσο, η καρβακρόλη παρουσίασε καλύτερη αντιφλεγμονώδη δράση καθώς μείωσε και τα επίπεδα του TNF-α και γι αυτό διερευνήθηκε περαιτέρω η δράση της in vivo. H αντιφλεγμονώδης δράση της καρβακρόλης in vivo εξετάστηκε χρησιμοποιώντας ένα μοντέλο αλλεργικής εξ επαφής δερματίτιδας επαγόμενη από οξαζολόνη. Η φλεγμονή αξιολογήθηκε μέσω της μέτρησης του οιδήματος των αφτιών αλλά και ιστολογικά. Η καρβακρόλη, η οποία εφαρμόστηκε τοπικά στο αφτί σε δόση 5mg/αφτί , μείωσε σημαντικά το οίδημα αλλά και τη συσσώρευση των λευκοκυττάρων στο σημείο της φλεγμονής συγκριτικά με το μάρτυρα. Τα παραπάνω στοιχεία, δείχνουν ότι η καρβακρόλη παρουσιάζει σημαντική αντιφλεγμονώδη δράση και θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί στην ανάπτυξη νέων φαρμάκων για τη θεραπεία αντιφλεγμονωδών νόσων.
description: Clinical efficacy, the onset of side effects and the cost make natural products an increasingly subject of investigation for their biological activity and their role in the treatment of inflammatory diseases. Thymol and carvacrol are two important natural terpenoid products present in many aromatic plants, known to possess antimicrobial and perhaps immunoregulatory effects. In the present study, the possible anti-inflammatory effect of carvacrol and thymol has been investigated in vitro by the production of pro-inflammatory cytokines TNF-α and IL-6 by LPS- stimulated PBMCs. The anti- inflammatory effect was also evaluated in vivo, using a model of allergic contact dermatitis in mice. Freshly isolated PBMCs were cultured in the presence of carvacrol and thymol and then were stimulated with LPS for 16 hours. Pro-inflammatory cytokines (TNF-α, IL-6) were measured in the supernatants using Elisa kit. Earlier, cells were cultured in the presence of various concentrations of the compounds and then cell viability was determined using MTT reduction assay. Carvacrol and thymol, dose-dependently inhibited the production of Il-6. However, carvacrol seemed to be more effective than thymol in reducing the levels of TNF-α. For this reason, carvacrol was further tested in vivo. The anti-inflammatory effect of carvacrol in vivo was investigated using a model of oxazolone (OX) – induced contact dermatitis in mice. The inflammatory response was determined by ear thickness and histology after oxazolone challenge. Oxazolone - induced contact dermatitis was suppressed markedly in mice that were pretreated with carvacrol at a dose of 5mg/ear, as evidenced by significant decrease in the ear edema and reduced leukocytes’ infiltration compared to control. These results indicate that carvacrol might be potentially interesting in the development of novel tools for management and treatment of inflammatory diseases.