Μελέτη των αλληλεπιδράσεων των ενδοθηλιακών κυττάρων ανθρώπου με την λαμινίνη σε διεργασίες προσκόλλησης
Creators: name: Τοπουρίδου, Κωνσταντίνα Λαζάρου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2008
Subjects: Λαμινίνη
Οξείδωση
Ενδοθηλιακά Κύτταρα
Μονοκύτταρα
Προσκόλληση
Εξωκυττάρια ουσία
Laminin
Oxidation
Endothelial cells
Monocytes
Adhesion
Extracellular matrix

description: Η προσκόλληση των μονοκυττάρων και των ενδοθηλιακών κυττάρων στην εξωκυττάρια ουσία έχει συνδεθεί με την αθηροσκλήρωση. Επίσης, η οξείδωση των πρωτεϊνών της εξωκυττάριας ουσίας, ως αποτέλεσμα της δράσης των ελευθέρων ριζών, επιδρά στις αλληλεπιδράσεις τους με τα κύτταρα.Με δεδομένο ότι η λαμινίνη αποτελεί βασικό συστατικό της βασικής μεμβράνης, μελετήθηκε η επίδραση της οξείδωσής της στην προσκόλληση ανθρώπινων ενδοθηλιακών κυττάρων πάνω σε αυτή. Επιπρόσθετα, έχοντας υπ’όψη ότι τα ενδοθηλιακά κύτταρα εκφράζουν το μόριο προσκόλλησης ICAM-1 στην κυτταρική τους επιφάνεια, διερευνήθηκε η έκφραση του ICAM-1 από ενδοθηλιακά κύτταρα που προσκολλώνται σε οξειδωμένη λαμινίνη ή στη μη οξειδωμένη της μορφή. Τέλος, μιας και το μόριο προσκόλλησης ICAM-1 συμβάλλει στην προσκόλληση των μονοκυττάρων στο ενδοθήλιο, εξετάστηκε εάν η οξείδωση της λαμινίνης επιδρά στην προσκόλληση των μονοκυττάρων στα ενδοθηλιακά κύτταρα, τα οποία είναι ήδη προσκολλημένα πάνω σε αυτή.Τα ενδοθηλιακά κύτταρα απομονώθηκαν από ομφάλιους λώρους, ενώ τα μονοκύτταρα από δείγματα αίματος. Η διερεύνηση της προσκόλλησης των ενδοθηλιακών κυττάρων στην οξειδωμένη ή μη οξειδωμένη λαμινίνη πραγματοποιήθηκε σε πλάκα τύπου ELISA με τη βοήθεια του Hemacolor staining kit, το οποίο βάφει το DNA των κυττάρων. Επίσης, η έκφραση του μορίου προσκόλλησης ICAM-1 από ενδοθηλιακά κύτταρα, τα οποία ήταν προσκολλημένα σε οξειδωμένη ή μη οξειδωμένη λαμινίνη, μελετήθηκε με τη μέθοδο ανοσοενζυμομέτρησης ELISA, χρησιμοποιώντας αντίσωμα που αναγνωρίζει το ICAM-1. Τέλος, η προσκόλληση των μονοκυττάρων στα ενδοθηλιακά κύτταρα, τα οποία ήταν προσκολλημένα σε οξειδωμένη ή μη οξειδωμένη λαμινίνη, εξετάστηκε σε πλάκα τύπου ELISA με τη μέθοδο της μυελοϋπεροξειδάσης.Τα αποτελέσματα της παρούσας εργασίας έδειξαν ότι τα ενδοθηλιακά κύτταρα προσκολλώνται περισσότερο στην οξειδωμένη μορφή της λαμινίνης και ότι τα ενδοθηλιακά κύτταρα που προσκολλώνται στην οξειδωμένη λαμινίνη εκφράζουν το μόριο προσκόλλησης ICAM-1 σε μεγαλύτερο ποσοστό, συγκριτικά με τα ενδοθηλιακά κύτταρα που προσκολλώνται στη μη οξειδωμένη της μορφή. Τέλος, τα μονοκύτταρα του αίματος προσκολλώνται περισσότερο σε ενδοθηλιακά κύτταρα, τα οποία έχουν προσκολληθεί σε υπόστρωμα οξειδωμένης λαμινίνης.Συμπεραίνουμε λοιπόν ότι η οξείδωση των πρωτεινών της εξωκυττάριας ουσίας, στην περίπτωσή μας της λαμινίνης, επηρεάζει την αλληλεπίδρασή τους με τα ενδοθηλιακά κύτταρα και συμβάλλει στην αυξημένη προσκόλληση των μονοκυττάρων του αίματος σε αυτά. Δηλαδή, η οξείδωση της λαμινίνης του υπενδοθηλιακού χώρου συμβάλλει στην ενισχυση των πρώτων σταδίων της αθηροσκλήρωσης. Με δεδομένη την εμπλοκή του παράγοντα NFkB στους μηχανισμούς ρύθμισης έκφρασης του μορίου προσκόλλησης ICAM-1, η παρούσα πειραματική εργασία θα μπορούσε να ολοκληρωθεί στο μέλλον με τη μελέτη της έκφρασης του παράγοντα NFkB και του μορίου προσκόλλησης ICAM-1 σε επίπεδο mRNA. Τέλος, για μια πιο ολοκληρωμένη εικόνα της συμβολής τροποποιήσεων της εξωκυττάριας ουσίας στην αλληλεπίδρασή της με τα ενδοθηλιακά κύτταρα, θα βοηθούσε η επανάληψη των πειραμάτων σε υπόστρωμα οξειδωμένου και μη οξειδωμένου κολλαγόνου IV, το οποίο αποτελεί ακόμα μια άφθονη πρωτεΐνη της εξωκυττάριας ουσίας.
description: In an attempt to investigate the biological role of laminin oxidation in the initiation of the atherosclerotic process, we studied human endothelial cell (HUVEC) attachment to oxidised and native laminin, the expression of intercellular adhesion molecule, ICAM-1, from HUVEC and, finally, monocytes attachment to HUVEC already attached to oxidised and native laminin.