Μέτρηση αριθμού των πολύ μικρών εμβρυϊκού τύπου βλαστοκυττάρων (VSELs) και έκφραση του Oct-4
Creators: name: Κοψαχείλη, Άννα Στυλιανού
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2022
Subjects: Πολύ μικρά εμβρυϊκού τύπου βλαστοκύτταρα
Δείκτης πολυδυναμίας Oct-4
Κυτταρομετρία ροής
Very small embryonic like stem cells
Pluripotent marker Oct-4
Flow cytometry

description: Τα πολύ μικρά εμβρυϊκού τύπου βλαστοκύτταρα (Very small embryonic like stem cells, VSELs) αποτελούν αρχέγονα, πολυδύναμα βλαστικά κύτταρα πολύ μικρού μεγέθους που συναντώνται σε ιστούς ενηλίκων και εμφανίζουν χαρακτηριστικά παρόμοια με αυτά των εμβρυϊκών βλαστοκυττάρων. Εκφράζουν δείκτες πολυδυναμίας, συμπεριλαμβανομένου του δείκτη Oct-4 και διαδραματίζουν καθοριστικό ρόλο στην αναγέννηση ιστών και οργάνων. Σύμφωνα με προηγούμενες μελέτες, ο αριθμός των VSELs στα ποντίκια, επηρεάζεται από παράγοντες όπως η ηλικία και ο θερμιδικός περιορισμός. Επομένως οι παραπάνω μελέτες μας ώθησαν στην ιδέα της παρούσας διπλωματικής εργασίας, για μελέτη στον άνθρωπο, και πιο συγκεκριμένα τίθεται η ερώτηση αν ο δείκτης μάζας σώματος (ΔΜΣ) και η ηλικία θα μπορούσαν να συνεισφέρουν στα επίπεδα των VSELs. Σκοπός της παρούσας μελέτης ήταν να διαπιστωθεί αν υπάρχει συσχέτιση μεταξύ του αριθμού των VSELs στο περιφερικό αίμα υγιών ανθρώπων με την ηλικία και τον δείκτη μάζας σώματος (ΔΜΣ). Επιπλέον ζητούμενο αποτέλεσε η συσχέτιση μεταξύ του αριθμού κυκλοφορόντων VSELs στο περιφερικό αίμα, καθώς και του ΔΜΣ και της ηλικίας με τα επίπεδα έκφρασης του δείκτη πολυδυναμίας Oct-4. Συλλέχθηκαν 10 ml περιφερικού αίματος από 14 άτομα, με σκοπό να ακολουθήσει απομόνωση και απαρίθμηση των VSELs μέσω της μεθόδου της κυτταρομετρίας ροής. Ακολούθησε απομόνωση ολικού RNA και μελέτη της έκφρασης του δείκτη Oct-4 μέσω της μεθόδου qRT-PCR. Η στατιστική ανάλυση πραγματοποιήθηκε μέσω αναλύσεων συσχέτισης Pearson και Spearman. Σύμφωνα με τα αποτελέσματα μας, δεν παρατηρήθηκαν στατιστικά σημαντικές συσχετίσεις μεταξύ του αριθμού των VSELs με την ηλικία και τον ΔΜΣ. Αναφορικά με την συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης του Oct-4 με την ηλικία και τον αριθμό των VSELs, δεν παρατηρήθηκε στατιστικά σημαντική συσχέτιση. Αντιθέτως διαπιστώθηκε υψηλή αρνητική, στατιστικά σημαντική συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης του Oct-4 και του ΔΜΣ. Σ’ αυτή την μελέτη αποδείχθηκε πως τα VSELs κυκλοφορούν σε παρόμοια επίπεδα στο περιφερικό αίμα νεαρών, μεσηλίκων και ηλικιωμένων ατόμων, καθώς και σε άτομα ελλιποβαρή με φυσιολογικό βάρος, υπέρβαρα και παχύσαρκα. Παρόμοιο ήταν και το προφίλ έκφρασης του δείκτη πολυδυναμίας Oct-4 σε συμμετέχοντες με διαφορετικές ηλικίες και διαφορετικό αριθμό VSELs, ενώ διαπιστώθηκε πως καθώς αυξάνεται ο ΔΜΣ μειώνεται η έκφραση του Oct-4.
description: Very small embryonic stem cells (VSELs) are small, pluripotent stem cells of very small size which are found in adult tissues and exhibit characteristics similar to those of embryonic stem cells. They express markers of pluripotent stem cells, such as Oct-4, and play a key role in tissue and organ regeneration. According to previous studies, the number of VSELs in mice is affected by factors such as age and caloric restriction. Therefore, the above studies pushed us to the idea of the present dissertation, for study in humans, and more specifically the question arises whether body mass index (BMI) and age could contribute to the levels of VSELs. The aim of this study was to determine whether there is a correlation between the number of VSELs in the peripheral blood of healthy people with age and BMI. An additional question was the correlation between the age, BMI and the number of circulating VSELs in the peripheral blood with the expression levels of Oct-4. 10 ml of peripheral blood was collected from 14 volunteers. Isolation and enumeration of VSELs were performed by using flow cytometry. RNA extraction and analysis of expression for Oct-4 marker was confirmed by qRT-PCR method. The statistical analysis was performed through Pearson correlation and Spearman correlation method. According to our results, no statistically significant correlations were observed between the number of VSELs with age and with BMI. Regarding the correlation between the expression of Oct-4 with age and the number of VSELs, no statistically significant correlation was observed. On the contrary, a high negative, statistically significant correlation was found between the expression of Oct-4 and BMI. In this study, it was shown that VSELs circulate at similar levels in the peripheral blood of underweight, normal-weight, overweight and obese people, as well as in young, middle-aged and elderly people. The expression profile of the pluripotent marker Oct-4 was similar in participants with different ages and different VSELs numbers, while it was found that as the BMI increases, the expression of Oct-4 decreases.
description: Σε συνεργασία με: Ιατρικής (Δημοκρίτειο Πανεπιστήμιο Θράκης)