Μελέτη υποδοχέων έμφυτης ανοσίας στα Β λεμφοκύτταρα ασθενών με χρόνια λεμφοκυτταρική λευχαιμία:
Creators: name: Λεοντιάδου, Αθανασία Δημητρίου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2010
Subjects: Β-λεμφοκύτταρα
Χρόνια λεμφοκυτταρική λευχαιμία
Εμφυτη ανοσία
B-lemphocytes
Chronic lymphocytic leukemia
Innate immunity

description: Η Χρόνια λεµφοκυτταρική λευχαιµία διακρίνεται για την ύπαρξη υποσυνόλων ασθενών µε στερεότυπους Β κυτταρικούς υποδοχείς BCR. Η στερεοτυπία των BCR της προσαρµοστικής ανοσίας αποτελεί ισχυρή ένδειξη επιλογής από περιορισµένη ποικιλία αντιγόνων. Επίσης υποδηλώνει ότι οι λευχαιµικοί κλώνοι µε στερεότυπους BCRs πιθανόν προέρχονται από έναν πληθυσµό Β λεµφοκυττάρων µε ιδιότητες κυττάρων της έµφυτης ανοσίας, τα οποία εγγενώς εµφανίζουν περιορισµένη ποικιλότητα. Σηµαντικό ρόλο στη λειτουργία της έµφυτης ανοσίας διαδραµατίζουν οι υποδοχείς TLR. Ονοµάστηκαν έτσι λόγω της οµοιότητας τους µε τους υποδοχείς Toll της Drosophila. Είναι υποδοχείς αναγνώρισης µοριακών µοτίβων οι οποίοι αναγνωρίζουν στερεότυπα δοµικά µοτίβα σε παθογόνους µικροοργανισµούς και αυτοαντιγόνα. Μέχρι σήµερα έχουν αναγνωριστεί 11 µέλη της οικογένειας TLR στον άνθρωπο. Σκοπός της παρούσας µελέτης ήταν η ανάλυση του ρεπερτορίου, του προτύπου έκφρασης και της λειτουργικότητας των TLR στη ΧΛΛ. Επίσης µελετήθηκαν τα επίπεδα έκφρασης των ενδοκυττάριων υποδοχέων NOD στα Β λεµφοκύτταρα της ΧΛΛ. Οι υποδοχείς NOD αποτελούνται από δύο µέλη και έχουν τη δυνατότητα αναγνώρισης τµηµάτων της βακτηριακής πεπτιδογλυκάνης. Με την τεχνική των συστοιχιών PCR (PCR arrays) καταγράφηκε η έκφραση συνολικά 84 γονιδίων που κωδικοποιούν υποδοχείς, συνδέτες, προσαρµοστές και τελεστές της σηµατοδοτικής οδού TLR και των γονιδίων που κωδικοποιούν τους δύο υποδοχείς NOD. Συνολικά αναλύθηκαν 50 ασθενείς και στο σύνολο τους διαπιστώθηκε υψηλή έκφραση για τους TLR6 και TLR7, χαµηλή έκφραση για τους TLR4 και TLR9, ενώ απουσία έκφρασης για τους TLR3 και TLR5. Σηµαντικές διακυµάνσεις παρατηρήθηκαν ως προς την έκφραση των υποδοχέων TLR1, TLR2, TLR8 και TLR10. Επίσης ανιχνεύτηκε υψηλή έκφραση των γονιδίων NOD1 και NOD2, PELI1 HSPA1A, UBE2N και των µορίων που εµπλέκονται στο σηµατοδοτικό µονοπάτι του NF-κΒ. Αντίθετα, η έκφραση του αναστολέα των TLRs, SIGIRR, ήταν πολύ χαµηλή εώς αρνητική. Στο πλαίσιο της προτεινόµενης συνδιεγερτικής δράσης προς τους BCR αναζητήθηκαν διαφορές ως προς τα πρότυπα έκφρασης των γονιδίων της σηµατοδοτικής οδού TLR σε υποοµάδες που ορίστηκαν µε i) την έκφραση µεταλλαγµένων/ αµετάλλακτων αλληλουχιών IGHV, ii) την έκφραση του µορίου CD38 (CD38-/CD38+) iii) το ρεπερτόριο γονιδίων IGHV (IGHV4- 34/άλλες µεταλλαγµένες αλληλουχίες). Η σχετική ανάλυση έδειξε: i) αυξηµένη έκφραση CD80, CD86, ιντερφερόνης γ, PTGS2, ενώ αντίθετα ελαττωµένη έκφραση του TLR8 σε ασθενείς µε µεταλλαγµένα έναντι αµετάλλακτων γονιδίων IGHV, ii) παρόµοια αποτελέσµατα µε την σύγκριση i και iii) υψηλή έκφραση των µορίων HSPA1, IL-6, IL-10, IFNγ, TNF, IRAK2 και cFOS στους ασθενείς που φέρουν µεταλλαγµένες αλληλουχίες IGHV γονιδίων εκτός από το IGHV4-34 γονίδιο σε σύγκριση µε τους ασθενείς µε µεταλλαγµένες αλληλουχίες για το IGHV4-34 γονίδιο. Συµπερασµατικά, η σηµατοδοτική οδός TLR είναι ενεργός στη ΧΛΛ µε σηµαντικές διακυµάνσεις σε διάφορες υποοµάδες ασθενών. Ενισχύεται η άποψη ότι τα λευχαιµικά κύτταρα της ΧΛΛ είναι Β λεµφοκύτταρα µε εµπειρία αντιγόνου και καταδεικνύεται η σηµασία των συνδιεγερτικών σηµάτων στην τροποποίηση της απάντησης των κλωνοτυπικών BCR. Τέλος, επισηµαίνεται ότι η στερεοτυπία σε επίπεδο BCR συνδέεται µε ιδιαίτερα πρότυπα ενεργοποίησης της οδού TLR.
description: Chronic Lymphocytic Leukemia (CLL) is characterized by the presence of subsets of patients with stereotyped B Cell Receptors (BCRs). This stereotypy of adaptive immunity receptors consists a powerful clue of selection from a limited variety of antigens. Also, it implies that the B cells with stereotyped BCRs likely emanate from a population of B lymphocytes with attributes of innate immunity cells, which naturally present limited diversity. Toll-like Receptors (TLRs) play an important role in innate immunity. Mammalian TLRs hold their name from the Drosophila Toll protein. TLRs are pattern recognition receptors (PRRs), which recognize pathogen associated molecular patterns (PAMPs) and self-antigens. Up-to-date, 11 members of the TLR family have been recognized in human. The present study aims to analyze the repertoire, the profile of expression and the functionality of TLRs in CLL. Apart from that, Nucleotide oligomerization domain (NODs) receptors were analyzed in the B CLL cells. NOD receptors consists of 2 members which can recognize parts of the bacterial peptidoglycan. The expression of 84 genes that encode receptors, adaptors and effectors of the TLR signaling pathway was investigated with PCR arrays. Overall, 50 patients were analyzed. High expression of TLR6 and TLR7, low expression of TLR4 and TLR9 and no expression of the TLR3 and TLR5 was recorded. Important fluctuations were observed regarding the expression of TLR1, TLR2, TLR8 and TLR10. Also high expression of the following genes: NOD1 και NOD2, PELI1 HSPA1A, UBE2N and those included in the NF-κΒ pathway was detected. On the contrary, the expression of TLR signaling pathway inhibitor SIGIRR, was very low or undetectable. Based on the proposed co- stimulatory function of TLRs to BCRs, differences were sought as for the gene expression profile of the TLR signaling pathway in subgroups that were determined according to: i) expression of mutated/unmutated IGHV sequences, ii) expression of molecule CD38 (CD38-/CD38+), iii) IGHV genes repertoire (mutated IGHV genes except for IGHV4-34/ mutated IGHV4-34 gene). The relevant analysis revealed: i) increased expression of CD80, CD86, ιντερφερόνης γ, PTGS2, but decreased expression of TLR8 in patients with mutated versus patients with unmutated IGHV genes, ii) same results as in the previous comparison iii) high expression of the following molecules: IL- 6, IL-10, IFNγ, TNF, IRAK2 and cFOS in patients with mutated IGHV genes except for IGHV4-34 versus patients with mutated IGHV genes. In conclusion, TLR signaling pathway is functional in CLL, displaying important fluctuations in various subgroups of patients. This further supports the opinion that the leukaemic CLL cells are B lymphocytes with antigen experience. Moreover, it underlines the importance of co-stimulatory signals in modifying the response of clonotypic BCRs. Finally, it appears that BCR stereotypy corresponds to distinct activation patterns of the TLR signaling pathway.