Η εκτίμηση της έκφρασης της μεθυλίωσης του DNA στα γονίδια του αναστολέα της μεταλλοπρωτεϊνάσης 3 του υποστρώματος(TIMP-3) και της κινάσης της πρωτεΐνης της σχετιζόμενης με το θάνατο( DAPK) σε ασθενείς με προκαρκινικές και καρκινικές αλλοιώσεις ενδοστοματικά, ως μέσο πρώιμης διάγνωσης και πρόβλεψης της εξέλιξης των αλλοιώσεων
Creators: name: Παπαδόπουλος, Πέτρος Α.
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2023
Subjects: Μεθυλίωση
Ανοσοιστοχημική έκφραση
Κινάση της πρωτεΐνης της σχετιζόμενης με το θάνατο
Αναστολέας της μεταλλοπρωτεϊνάσης 3 του υποστρώματος
Methylation
Immunohistochemical expression
DAPK ( Death associated protein kinase)
TIMP3 (Tissue inhibitor of metalloproteinase 3)

description: Στην στοματική κοιλότητα ο ομαλός λειχήνας (ΟΛ) η λευκοπλακία(Λ) εμφανίζουν σημαντικό δυναμικό κακοήθους εξαλλαγής. Έτσι, η πρώιμη ανίχνευση της πιθανότητας κακοήθους εξαλλαγής των δυνητικά κακοήθων βλαβών αλλά και η εκτίμηση της πρόγνωση της εξέλιξης του ΚΠΕ είναι σημαντική για την βελτίωση του προσδόκιμου ζωής των ασθενών. Υπό το πρίσμα αυτών των αναγκών η εύρεση δεικτών που θα μπορούν να τις εξυπηρετήσουν είναι εξαιρετικά σημαντική . Με βάση τα παραπάνω ως σκοπός της μελέτης μας ορίστηκε η διερεύνηση της έκφρασης αφενός της υπερμεθυλιωμένης –ανενεργής μορφής των γονιδίων DAPK-1 (9q21.33) και TIMP-3 (22q12.1–q13.2) με τη χρήση ms-PCR, αφετέρου της πρωτεϊνικής έκφραση τους σε δείγματα ΟΛ, Λ διαφόρων βαθμών δυσπλασίας και χωρίς δυσπλασία , αλλά και ΚΠΕ.Η μελέτη αναφέρεται στην αξιολόγηση της υπερμεθυλίωσης των γονιδίων DAPK ή DAPK-1 και TIMP-3 μέσω της μεθόδου της ειδικής της μεθυλίωσης αλυσιδωτής αντίδρασης της πολυμεράσης (ms-PCR/ Methylation Specific Polymerase Chain Reaction) σε ιστοτεμάχια από 21 περιστατικά ΟΛ , δικτυωτής και διαβρωτικής μορφής, 62 περιστατικά λευκοπλακίας , χωρίς δυσπλασία,με ήπια δυσπλασία , με μέτρια/σοβαρή δυσπλασία και από 39 περιστατικά ΚΠΕ. Επίσης ,διερευνήθηκε η ανοσοιστοχημική έκφραση του βιοδείκτη DAPK-1( NBP2-38468 Novus Biologicals a biotechne brand,Centennial, Colorado, USA) του οποίου η χρώση ολοκληρώθηκε μέσω του συστήματος Dako Envision System Flex + (Dako Denmark A/S). Τα ιστοτεμάχια προήλθαν από 6 περιστατικά ΟΛ , δικτυωτής και διαβρωτικής μορφής, 30 περιστατικά λευκοπλακίας , χωρίς δυσπλασία , με ήπια δυσπλασία και με μέτρια και σοβαρή δυσπλασία, όπως και 22 περιστατικά ΚΠΕ. Αναφορικά με την μεθυλίωση του DAPK-1 , στις βλάβες ΟΛ διαβρωτικής μορφής εμφανίστηκε στατιστικά αυξημένη έναντι των αντίστοιχων του ΟΛ δικτυωτής μορφής. Επίσης , στον ΟΛ συνολικά η μεθυλίωση ήταν μειωμένη συγκριτικά με την μεθυλίωση στα ΚΠΕ. Η μεθυλίωσης του DAPK-1 στις βλάβες Λ με ήπια δυσπλασία ήταν μεγαλύτερη από αυτήν στις βλάβες Λ με μέτρια/σοβαρή δυσπλασία και μικρότερη έναντι της μεθυλίωσης στις βλάβες ΚΠΕ. Επιπλέον διαπιστώθηκε μεγαλύτερη παρουσία μεθυλίωσης στις βλάβες ΚΠΕ έναντι τόσο των βλαβών Λ χωρίς δυσπλασία , όσο και έναντι των αντίστοιχων Λ οποιουδήποτε βαθμού δυσπλασίας .Αναφορικά με την ανοσοιστοχημική έκφραση της DAPK-1(η οποία ήταν κυρίως κυτταροπλασματική) σε αντίστοιχες βλάβες ΟΛ, Λ και ΚΠΕ διαπιστώθηκε ότι η έκφραση της DAPK-1 ήταν εντονότερη (ποσοτικά) στους φυσιολογικούς ιστούς , στον ΟΛ, στην Λ χωρίς δυσπλασία και στην Λ με ήπια δυσπλασία έναντι της Λ με μέτρια/σοβαρή δυσπλασία .Το προφίλ μεθυλίωσης του DAPK-1 επιβεβαιώνει την χρησιμότητα του στην πράξη ως πρώιμου διαγνωστικού δείκτη πρόβλεψης πιθανής κακοήθους εξαλλαγής ιδιαίτερα των βλαβών ΟΛ διαβρωτικής μορφή. Επίσης η έκφραση της μεθυλίωσης του DAPK-1 παρουσιάζει διαγνωστική και προγνωστική αξία κυρίως στην μετάπτωση της λευκοπλακίας με ήπια δυσπλασία στην λευκοπλακία με μέτρια και σοβαρή δυσπλασία και δευτερευόντως στην μετάπτωση από την τελευταία στα ΚΠΕ. Επιπλέον η έκφραση του πρωτεϊνικού προϊόντος του DAPK-1 εγείρει ενδείξεις ως προς την εκτίμηση της φλεγμονής ως δείκτη κακοήθους εξαλλαγής σε βλάβες ΟΛ.
description: Oral Lichen Planus(OLP) or Leukoplakia(L) show significant malignant transformation potential . Thus, the early detection of the malignant transformation of potentially malignant lesions, as well as the prediction of the evolution of OSCC are crucial for the improvement of the life expectancy of the patients. In light of this need, the discovery of several markers that are able to fulfill them is extremely important. The aim of the present study is to investigate the expression of the methylated –inactive form of DAPK or DAPK-1(9q21.33) and TIMP-3 (22q12.1–q13.2) genes by the use of ms-PCR(methylation specific Polymerase Chain Reaction) as well as to detect the expression of the genes’ protein products in samples of OLP, L of no dysplasia and of several degrees of dysplasia and in OSCC OF all stages of differentiation .The study focuses on the evaluation of hypermethylation of DAPK-1(VWR - Providing Life Science Products and Service Solutions, Radnor, USA) and TIMP-3( VWR - Providing Life Science Products and Service Solutions, Radnor, USA) through methylation specific Polymerase Chain Reaction (ms-PCR) in tissue samples of 21 cases of OLP, of reticular and erosive type, 62 cases of leukoplakia subdivided into no dysplasia, mild dysplasia and moderate/severe dysplasia and 39 cases of OSCC. Furthermore, the immunohistochemical expression pattern of DAPK-1( NBP2-38468Novus Biologicals a biotechne brand,Centennial, Colorado, USA) biomarker was investigated using the Dako Envision System Flex + (Dako Denmark A/S). The tissue samples were obtained from 6 cases of OLP of reticular and erosive form, 30 cases of leukoplakia (with no dysplasia, with mild dysplasia and with moderate/severe dysplasia) as well as 22 cases of OSCC(well differentiated, moderately differentiated and poor differentiation). DAPK-1 methylation levels were found significantly increased in OLP of erosive type than in the reticular one (p=0,007 Fisher’s exact Test).In the whole sum of OLP cases methylation levels were significantly lower than in the OSCC cases. DAPK-1 methylation in leukoplakia lesions with mild dysplasia was significantly increased compared to leukoplakias with moderate/severe dysplasia and decreased compared to OSCCs. The distribution of DAPK-1 methylation was greater in OSCCs compared to that in normal tissues . Ιn addition higher levels of methylation were revealed in OSCC lesions compared to both methylation levels in leukoplakias without dysplasia and leukoplakias of any degree of dysplasia . Immunohistochemical analysis of DAPK-1 expression in OLP, leukoplakias and OSCC (which was mainly cytoplasmic) found that DAPK-1 was expressed significantly less (quantitatively) in leukoplakias with moderate/severe dysplasia compared to normal tissues, to OLP , to leukoplakias without dysplasia and to leukoplakias with mild dysplasia.The methylation profile of DAPK-1 confirms its utility as a potential predicting biomarker of malignant transformation in OLP ,especially in erosive one. Furthermore reveals a diagnostic and prognostic value of the marker mainly at the point of the transition between mild dysplasia to moderate and severe dysplasia and secondarily at the point of transition between the latter and OSCC.