Η in vivo επίδραση των αναστολέων των ιονοτροπικών υποδοχέων του γλουταμινικού οξέος στα κύτταρα του αίματος και του μυελού των οστών επίμυων:
Creators: name: Ξωχέλλη, Αλίκη Α.
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2011
Subjects: Γλουταμινικό
ΝΜΔΑ
Λεμφοκύτταρα
Μεγακαρυοκύτταρα
Glutamate
Lymphocytes
Megakaryocytes

description: Το γλουταμινικό οξύ είναι ένα από τα κύρια ενδογενή αμινοξέα του ΚΝΣ. Έρευνες των τελευταίων ετών, υποδεικνύουν την παρουσία υπομονάδων των υποδοχέων του γλουταμινικού οξέος και σε περιφερικούς, εκτός νευρικού συστήματος ιστούς, όπως το αιμοποιητικό σύστημα. Ο σκοπός αυτής της διατριβής είναι να ερευνήσει τη παρουσία των NMDA υποδοχέων στο αιμοποιητικό σύστημα με την in vivo χορήγηση των ιονοτροπικών αναστολέων, ΜΚ801 και NBQX, και του άλατος του γλουταμινικού, MSG σε άρρενες επίμυες. Οι επίμυες χωρίστηκαν σε τρεις ομάδες, την ομάδα μελέτης του περιφερικού αίματος, την ομάδα μελέτης του μυελού των οστών και την ομάδα ελέγχου. Στην ομάδα μελέτης του περιφερικού αίματος πραγματοποιήθηκε έλεγχος : - Των Hb, Ht, MCHC, MCV, MCH, WBC, RBC, αιμοπεταλίων και του λευκοκυτταρικού τύπου (απόλυτες τιμές ουδετεροφίλων, λεμφοκυττάρων, εωσινοφίλων, βασεοφίλων) με τη μελέτη επιχρίσματος σε αντικειμενοφόρο πλάκα. - Της πήξης με τον έλεγχο της συγκόλλησης των αιμοπεταλίων και με τον υπολογισμό του χρόνου προθρομβίνης, κεφαλίνης-καολίνης και ινωδογόνου και, - Της λειτουργικότητας των λεμφοκυττάρων με τη μέθοδο της κυτταρομετρίας ροής και την ανίχνευση των αντιγόνων επιφανείας CD3, CD49a και ICAM-1 (CD54). Στη ομάδα μελέτης του μυελού των οστών εκτιμήθηκε ο αριθμός των προγονικών κυττάρων της ερυθράς και της μυελοειδούς σειράς, καθώς επίσης και ο αριθμός των μεγακαρυοκυττάρων. Μετρήσεις γίνονταν 12 και 24 ώρες μετά τη χορήγηση των ουσιών. Η στατιστική ανάλυση των δεδομένων έγινε με τη βοήθεια του στατιστικού λογισμικού SPSS 11,5 for Windows. Ο έλεγχος της κανονικότητας των μεταβλητών έγινε με τη χρήση της στατιστικής δοκιμασίας Shapiro-Wilk. Οι μεταβλητές ήταν κανονικά κατανεμημένες και η περιγραφή του δείγματος έγινε με τον μέσο όρο ( mean) και την τυπική απόκλιση (standar deviation). Για την σύγκριση των ομάδων χρησιμοποιήθηκε το unpaired t-test. Aπό τα αποτελέσματα της μελέτης του περιφερικού αίματος προκύπτουν συνοπτικά τα εξής: 12 ώρες μετά τη χορήγηση του MK801 παρατηρήθηκε μείωση μόνο των λεμφοκυττάρων, ενώ 24 ώρες μετά τη χορήγηση παρατηρήθηκε λευκοπενία και μείωση όλων των κυτταρικών σειρών. Λευκοπενία επίσης παρατηρήθηκε 12 και 24 ώρες μετά τη χορήγηση του NBQX, όπως και 12 ώρες μετά τη χορήγηση του MSG ενώ 12 ώρες μετά, ο αριθμός των ουδετεροφίλων ήταν στα επίπεδα της ομάδος ελέγχου. Ο αριθμός των RBC και της Hb αυξήθηκε 12 και 24 ώρες μετά τη χορήγηση του ιονοτροπικού υποδοχέα NBQX , ενώ η τιμή της Hb και του Hct αυξήθηκε τόσο 12 όσο και 24 ώρες μετά τη χορήγηση του αγωνιστή MSG. Όσον αφορά την έκφραση των αντιγόνων επιφανείας CD3, CD49a και CD54, τα δύο πρώτα παρουσίασαν πτώση 12 ώρες μετά τη χορήγηση των υπο μελέτη ουσιών, ενώ το CD54 ήταν αυξημένο μόνο μετά τη χορήγηση του MK801 και του NBQX. Είκοσι τέσσερεις ώρες μετά τη χορήγηση του ΜΚ801 δεν παρουσιάστηκε κάποια στατιστικως σημαντική διαφορά συγκριτικά με την ομάδα ελέγχου. Αντιθέτως, 24 ώρες μετά τη χορήγηση του NBQX όλες οι τιμές ήταν αυξημένες και 24 ώρες μετά τη χορήγηση του MSG, η έκφραση των αντιγόνων CD3 και CD49a παρουσίασε ελάττωση και η έκφραση του CD54, αύξηση. Η συσσώρευση των αιμοπεταλίων ελαττώθηκε 12 ώρες μετά τη χορήγηση του NBQX με το κολλαγόνο σαν αγωνιστή και αυξήθηκε 12 ώρες μετά τη χορήγηση του MSG με το ADP σαν αγωνιστή. 24 ώρες μετά τη χορήγηση όλες οι τιμές είχαν επιστρέψει στο φυσιολογικό. Ο χρόνος μερικής θρομβοπλαστίνης, κεφαλίνης-καολίνης και το ινωδογόνο δεν επηρεάστηκαν από τη χορήγηση των ουσιών. Aπό τα αποτελέσματα της μελέτης του μυελού των οστών προκύπτουν συνοπτικά τα εξής: Kαμία στατιστικώς σημαντική διαφορά δεν παρατηρήθηκε στο μυελό των οστών 12 ώρες μετά τη χορήγηση των υπό μελέτη ουσιών. Αντιθέτως, 12 ώρες αργότερα ο αριθμός των πολυμορφοπύρηνων και των εωσινόφιλων ήταν αυξημένος στην ομάδα χορήγησης ΜΚ801, ενώ ο αριθμός των πολυμορφοπύρηνων και των λεμφοκυττάρων ήταν ελαττωμένος στην ομάδα χορήγησης ΝBQX, και ο αριθμός των πρώιμων και ενδιάμεσων νορμοβλαστών ελαττωμένος. Τέλος, 24 ώρες μετά τη χορήγηση του ΜΚ801 ο αριθμός των μεγακαρυοκυττάρων ήταν αυξημένος ενώ 24 ώρες μετά τη χορήγηση του NBQX ήταν ελαττωμένος. Με βάση τα αποτελέσματα της έρευνάς μας, διαπιστώνουμε ότι, τόσο οι ιονοτροπικοί ανταγωνιστές του γλουταμινικού οξέος, όσο και το ίδιο το άλας του γλουταμινικού οξέος, επηρεάζουν λειτουργικά και ποσοτικά τα έμμορφα στοιχεία του περιφερικού αίματος χωρίς να υπάρχει κάποια προηγούμενη διέγερση από το γλουταμινικό οξύ. Ως ένα σημείο, επηρεασμένη φαίνεται να είναι και η λειτουργία του μυελού των οστών, είτε πρόκειται για αντιδραστική προσαρμογή στα δεδομένα της περιφέρειας, είτε για επίδραση στα κύτταρα του μυελού καθ’εαυτά. Γεγονός πάντως είναι, ότι υπάρχει ένα τεράστιο χάσμα στις γνώσεις μας, όσον αφορά στην ακριβή επίδραση του γλουταμινικού οξέος στο αιμοποιητικό σύστημα. Περαιτέρω έρευνες θα χρειαστούν στο μελλον ώστε να διαπιστωθεί ο ακριβής μηχανισμός της όποια επίδρασης και το πώς η τελευταία μπορεί να χρησιμοποιηθεί προς όφελος του ασθενούς.
description: Glutamate acid is one of the main endogenous amino acids in CNS. Research over the last years has proven the existence of glutamate subunit receptors in additional non-neuronal tissues outside CNS such as the haematopoietic system. The purpose of this paper is to define the possible presense of ionotropic receptors in the hematopoietic system by administrating in vivo the ionotropic antagonists, MK-801 and NBQX, and glutamate agonists, MSG, in adult male rats. They were separated in three groups, one for peripheral blood studies and one for bone marrow studies and a control group. In peripheral blood group we studied the following: -WBC, RBC, MCV, MCH, MCHC, Hct, Hb, PLTs, absolute neutrophils, lyphocytes, eosinophils and baseophils number. -Coagulation was studied with platelet aggregation and INR, APTT and inodogen counts, - and finally, flow cytometry was used to identify antigen expression CD3, CD49a and ICAM-1 (CD54) 9 ml from each animal was needed. In bone marrow group, we studied the number of megakaryocytes and the number of erythroid and myeloid progenitor cells. Studies were performed 12 and 24 hours after drug administration. Statistical analysis was done with Statistical Package SPSS 11.5 for windows. Normality was tested with Shapiro-Wilk test. All parameters were normally distributed and the sample was described with mean and standar deviation. For group comparison we used unpaired t-test. Peripheral blood group results were the following. 12 hours after MK801 administration, there was a reduction in lymphocyte number whereas 24 hours after the administration, there was leukopenia and reduction in all white blood cell types. Leukopenia was also noticed 12 and 24 hours after NBQX administration as well as 12 hours after MSG administration whereas, 12 hours later, neutrophils absolute number was back to normal. RBC and Hb values were increased 12 and 24 hours after ionotropic antagonist NBQX administration and Hb and Hct values were increased 12 and 24 hours after MSG administration CD3 and CD49a were decreased 12 hours after MK801, NBQX and MSG administration and CD54 was increased after MK801 and NBQX administration. 24 hours after MK801 administration there was no statistical important difference compared to control group. In contrast, 24 hours after MSG administration, all values were increased and 24 hours after MSG administration, CD3 and CD49a expression was reduced and CD54 expression was increased. Platelet aggregation was reduced 12 hours after NBQX administration with collagen as the agonist and increased 12 hours after MSG administration with ADP as the agonist. 24 hours after the administration, all values were back to normal. INR, APTT and inodogen were not affected by drug administration. Bone marrow results were the following: No statistical important differences were noticed in bone marrow 12 hours after drug administration. In contrast, 24 hours after MK801 administration, segmented and eosinophil cells were increased whereas segmented cells and lymphocytes number was decreased in NBQX 24h group. Prorubricytes and rubricytes were decreased 24 hours after MSG administration and band cells were increased. Megakaryocyte number was increased 24 hours after MK801 administration and decreased 24 hours after NBQX administration. Based on the above results, we came to the conclusion that glutamate ionotropic antagonists as well as glutamate itself, affect blood elements function and number, without any previous glutamate administration. Bone marrow function is also affected either as an adjustment to peripheral blood or as an effect of glutamate itself to bone marrow cells. More research is needed in the future in order to determine the exact mechanism of this affect and how we can use it in patient’s favour.