title: Untersuchung der Protein Expression verschiedener Mutanten des L-Typ Kalziumkanals Cav1.4
Creators: name: Korkmaz, Sakine
Publisher: name: :none
Year: 2013

description: Der Defekt in L-Type-Kalzium-Kanal (LTCC) können zu unterschiedlichen menschlichen Krankheiten führen (Kanalopathien). LTCCs kommen in vier verschiedene Isoformen vor. Diese sind; die Cav1.1 (α 1S), Cav1.2 (α 1C), Cav1.3 (α1D) und Cav1.4 (α1F). Cav1.4. Kanäle werden hauptsächlich in retinalen Zellen exprimiert. Im CACNA1F, welches für Cav1.4 Kanäle kodiert wurden mehrere Mutationen veröffentlicht. Diese Mutationen verursachen X-chromosomale kongenitale stationäre Nachtblindheit (CSNB2) (Bech-Hansen, Naylor et al. 1998, Boycott, Pearce et al. 1998, Strom, Nyakatura et al. 1998, Boycott, Pearce et al. 2000, Boycott, Maybaum et al. 2001), X-chromosomale-Zapfen-Stäbchen-Dystrophie (CORDX3) (Jalkanen, Mantyjarvi et al. 2006), Åland Island Augenkrankheit; AIED (Jalkanen, Bech-Hansen et al. 2007), eine X-chromosomale Netzhauterkrankung (XRD) (Hope, Sharp et al. 2005) und der Netzhaut- und Papillenatrophie. Die Symptome in CSNB2 Patienten sind unterschiedliche Grade der der Nachtblindheit, visueller Nystagmus, reduzierte Sehschärfe und Myopie (Boycott, Pearce et al. 2000). Der Zweck dieser Untersuchung war zunächst verschiedene Mutanten von Cav1.4 α1 zu klonen und sie auf Proteinebene zu charakterisieren. Ich habe zwei Cav1.4 α1-Mutanten (G1339V und L216R) mittels Ortsspezifische-Mutagenese hergestellt und mittels Western Blotting analysiert, um die Expression der Proteine zu testen. Die Mutanten R1816X, L849P, G255E und G359R die zuvor von der Gruppe von Alexandra Koschak generiert wurden, habe ich ebenfalls durch Western Blotting getestet. Wildtyp (Newton, Bingham et al.) Cav1.4 α1 und alle Mutanten Kanäle haben Expression gezeigt, allerdings exprimierte die L849P Mutante im Vergleich zum WT weniger Protein. Eine Insertion der Aminosäure Prolin an der gegebenen Position dürfte daher der Transport des Cav1.4 Kanals an die Zellmembran verhindern.
description: The defects in L-type calcium channel (LTCC) can cause several human diseases (channelopathies). L-type calcium channels (LTCCs) comprise four different isoforms; Cav1.1 (α1S), Cav1.2 (α1C), Cav1.3 (α1D) and Cav1.4 (α1F). Cav1.4 LTCCs are expressed mainly in retinal cells. The CACNA1F gene encodes the pore-forming α1 subunit. In the CACNA1F gene several mutations have been published. These mutations cause X-linked congenital stationary night blindness type 2 (CSNB2) (Bech-Hansen, Naylor et al. 1998, Boycott, Pearce et al. 1998, Strom, Nyakatura et al. 1998, Boycott, Pearce et al. 2000, Boycott, Maybaum et al. 2001), X-linked cone rod dystrophy (CORDX3) (Jalkanen, Mantyjarvi et al. 2006), Åland Island eye disease (AIED) (Jalkanen, Bech-Hansen et al. 2007), an X-linked retinal disorder (XRD) (Hope, Sharp et al. 2005), and retinal and optic disc atrophy. The symptoms of CSNB2 patients are varied levels of night blindness, low visual nystagmus, acuity, as well as myopia (Boycott, Pearce et al. 2000). The purpose of this investigation was to clone various mutants of Cav1.4 α1 and characterize them biophysically. Therefore, two Cav1.4 α1 (G1339V and L216R) were constructed via site-directed mutagenesis. They were analysed by western blotting in order to analyse their expression on the protein level. The mutants (R1816X, L849P, G255E, and G359R) were previously generated by the group Alexandra Koschak and I tested them by western blot analysis. I have observed that the wild type (Newton, Bingham et al.) Cav1.4 α1 and all the mutants expressed protein, but the L849P mutant appeared to express less protein compared to WT. The position of the mutation at suggest that insertion of a Proline might affect plasma membrane trafficking.