Εφαρμογή μικροεκχύλισης με κάψουλα για τον προσδιορισμό στατινών σε ούρα ανθρώπου με hplc
Creators: name: Κεχαγιά, Αργυρούλα Αφεντούλη
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2023
Subjects: Στατίνες
Μικροεκχύλιση με κάψουλα
Χρωματογραφία Υγρού Υψηλής Πίεσης
Statins
Capsule Phase Microextraction
High-performance liquid chromatography

description: Στη παρούσα εργασία, πραγματοποιήθηκε μελέτη της προσρόφησης τεσσάρων στατινών (ροσουβαστατίνη, πραβαστατίνη, ατορβαστατίνη, πιταβαστατίνη) σε ανθρώπινα ούρα με τη χρήση κάψουλας CPME, η οποία αποτελείται από το οργανικό πολυμερές sol-gel carbowax 20M (πολικό πολυμερές) και ένα επαμφοτερίζον ιονικό υγρό (3-[(3-χολαμιδοπροπυλ) διμεθυλ αμμωνιο]-1-προπανοσουλφονικό. Το προσροφητικό υλικό ενσωματώθηκε in situ μέσα σε δύο ενωμένους πορώδεις σωλήνες πολυπροπυλενίου μαζί με μια κυλινδρική μαγνητική ράβδο για να αποφευχθεί η ανάγκη για εξωτερική μαγνητική ράβδο ανάδευσης. Η παρουσία ιοντιζόμενων καρβοξυ- λειτουργικών ομάδων στις στατίνες απαιτεί προσαρμογή του pH του δείγματος ώστε να διασφαλιστεί οι προσδιοριζόμενες ενώσεις βρίσκονται στη πρωτονιωμένη μορφή τους (το pH θα πρέπει να είναι 2 μονάδες κάτω από τις τιμές pKa), πράγμα που ενέχει τον κίνδυνο ακούσιας επιμόλυνσης του δείγματος. Η πρόκληση αυτή αντιμετωπίστηκε με το σύνθετο προσροφητικό υλικό, που αποτελείται από οργανικό πολυμερές sol-gel carbowax 20M και ένα επαμφοτερίζον ιονικό υγρό. Ως εκ τούτου, η κάψουλα CPME μπορεί να εκχυλίσει ταυτόχρονα ουδέτερα, κατιονικά και ανιονικά είδη. Αυτή η ιδιότητα της κάψουλας εξαλείφει την ανάγκη ρύθμισης του pH του δείγματος και, κατά συνέπεια, απλοποιεί τη τεχνική προκατεργασίας του δείγματος. Μελετήθηκαν διάφορες πειραματικές παράμετροι, όπως ο όγκος του δείγματος, ο χρόνος εκχύλισης, η ιοντική ισχύς, ο τύπος του διαλύτη έκλουσης κ.λπ. που επηρεάζουν την απόδοση της εκχύλισης των στατινών. Οι παράμετροι διερευνήθηκαν με τη χρήση πειραματικού σχεδιασμού και της προσέγγισης «one-factor-at-a-time», στην οποία αξιολογείται ένας παράγοντας τη φορά. Η μέθοδος επικυρώθηκε και διαπιστώθηκε ότι είναι γραμμική για όλες τις ενώσεις. Η ακρίβεια της μεθόδου ήταν μικρότερη από 9,9 και 10,4 % κατά τη διάρκεια μιας μέρας και κατά τη διάρκεια μερικών ημερών, ενώ οι σχετικές ανακτήσεις ήταν αποδεκτές και κυμαίνονταν μεταξύ 83,4 - 115,8 % σε όλες τις περιπτώσεις. Τέλος, ελέγχθηκε εάν η μέθοδος που αναπτύχθηκε βρίσκει εφαρμογή σε πραγματικά δείγματα ούρων από ασθενείς που έχουν λάβει πιταβαστατίνη και ροσουβαστατίνη.
description: In the present study, a sol-gel Carbowax 20M/3-[(3-Cholamidopropyl) dimethyl ammonio]-1-propanesulfonate composite sorbent based capsule phase microextraction device is fabricated and characterized for the determination of four statins (pravastatin, rosuvastatin, pitavastatin and atorvastatin) in human urine. The synthesized sorbent was incorporated in situ within two conjoined porous polypropylene tubes together with a cylindrical magnetic bar to avoid the need of an external stirring bar. The presence of ionizable carboxy functional groups in statins requires pH adjustment of the sample matrix to ensure that the target molecules are in their protonated form (pH should be 2 units below their pK a values) which is not only cumbersome but risks unintended contamination of the sample. This challenge was addressed by introducing zwitterionic ionic liquid in addition to neutral, polar Carbowax 20M polymer in the composite sorbent. As such, the composite zwitterionic multi-modal sorbent can simultaneously extract neutral, cation and anionic species. This special attribute of the composite sorbent eliminates the necessity of the matrix pH adjustment and consequently simplifies the overall sample preparation workflow. Various experimental parameters such as sample volume, extraction time, ionic strength, stirring rate, elution solvent type, etc. affecting the extraction performance of the statins were systematically investigated using central composite design and one-parameter-at-a-time approach. The method was validated and found to be linear for all compounds. The method precision was less than 9.9 and 10.4% for intra-day and inter-day respectively while the relative recoveries were acceptable ranging between 83.4 – 115.8 % in all cases. Finally, the applicability of the method was demonstrated in the determination of the statins in authentic human urine after oral administration of pitavastatin and rosuvastatin-containing tablets.