Επίδραση Λιποπολυσακχαριτών (LPS) σε κύτταρα νευροβλαστώματος και πιθανή θεραπευτική επίδραση φυσικών προϊόντων
Creators: name: Καρανάσιου, Κωνσταντίνα Παναγιώτη
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2023
Subjects: Λιποπολυσακχαρίτες
Νευροβλάστωμα
Κανναβιδιόλη
Lipopolysaccharides
Neuroblastoma
Cannabidiol

description: Στην παρούσα ερευνητική εργασία εξετάζεται η επίδραση διαβαθμισμένης συγκέντρωσης λιποπολυσακχαριτών (LPS), προερχόμενων από το Gram-αρνητικό βακτήριο Escherichia coli σε κύτταρα N2a, καθώς και η επίδραση διαβαθμισμένης συγκέντρωσης ελαίου κανναβιδιόλης (CBD) σε διεγερμένα από LPS κύτταρα N2a. Κατά την επίδραση με λιποπολυσακχαρίτες μελετήθηκε η ποσοτική ανίχνευση των παραγόντων της φλεγμονής TLR4, IL-1β, IL6, PARP-1 και TNF-α. Για την εκτίμηση της αντιφλεγμονώδους δράσης της CBD μελετήθηκε η επίδραση που έχει αυτή στους προφλεγμονώδεις παράγοντες IL-1β και TNF-α. Μετά από την επίδραση σε κύτταρα Neuro2a με διαβαθμισμένες συγκεντρώσεις λιποπολυσακχαριτών 100 ng/mL, 1000 ng/mL και 10 μg/mL, διαπιστώθηκε πως η ποσότητα του γλυκοζυλιωμένου TLR4 μειώνεται, ενώ ενισχύεται η παρουσία του μη γλυκοζυλιωμένου TLR4. Η έκφραση της προ-φλεγμονώδους κυτταροκίνης IL-1β αυξάνεται αυξανόμενης της συγκέντρωσης LPS ωστόσο δείχνει τάση για μείωση στην υψηλότερη συγκέντρωση LPS. Η IL-6 δεν μεταβάλλεται υπό την επίδραση LPS 100 ng/mL, αυξάνεται έντονα στο δείγμα των 1000 ng/mL και ελαττώνεται και πάλι σε LPS 10 μg/mL. Ο διαμεμβρανικός TNF-α αυξάνεται μόνο στο δείγμα με συγκέντρωση LPS 10 μg/mL. Αντίθετα, ο διαλυτός TNF-α αυξάνεται ακόμη και στις χαμηλότερες συγκεντρώσεις LPS, αλλά μειώνεται στην υψηλότερη συγκέντρωση LPS. Η GAPDH, η οποία χρησιμοποιήθηκε ως loading control, παραμένει σχετικά σταθερή μετά από την επίδραση των λιποπολυσακχαριτών. Η παρουσία του ακέραιου μορίου της PARP-1 αυξάνεται μόνο στο δείγμα με την υψηλότερη συγκέντρωση σε LPS, ενώ αποδυναμώνεται στα δείγματα με τις δύο χαμηλότερες συγκεντρώσεις LPS. H έκφραση της iNOS εντείνεται αυξανόμενης της συγκέντρωσης των LPSs. Σε ό,τι αφορά στην επίδραση της κανναβιδιόλης σε κύτταρα Neuro2a εκτεθειμένα σε LPS 0,5 μg/mL η IL-1β μειώνεται καθώς αυξάνεται η συγκέντρωση της CBD. Ο TNF-α μειώνεται με επίδραση της χαμηλότερη συγκέντρωσης CBD ωστόσο παρουσιάζει τάση για αύξηση στα δείγματα με μεγαλύτερη περιεκτικότητα σε CBD.
description: The present study experimentally investigated the effect of the graded concentration of lipopolysaccharides (LPS) deriving from the Gram-negative bacterium Escherichia coli on N2a cells as well as the result of treating the LPS-stimulated N2A cells with graded concentration of cannabidiol oil. The quantitative detection of TLR4, IL-1β, IL6, PARP-1 and TNF-α factors was studied to allow the visualization of the effects of the lipopolysaccharides on microglial cells. To assess the anti-inflammatory properties that CBD may possess, the pattern of production of the factors IL-1β and TNF-α was also studied. The expression of the pro-inflammatory cytokine IL-1β is increasing as the LPS concentration rises, however IL-1β shows a tendency to decrease at the highest LPS concentration of 10 mg/mL. The expression of IL-6 does not seem to be affected by the 100 ng/mL LPS, but it rises significantly in the 1000 ng/mL LPS sample, while it appears to be reducing again at 10 μg/mL LPS. Transmembrane TNF-α rises only in the sample with an LPS concentration of 10 μg/mL. In contrast, the soluble TNF-α is increased even at the low LPS concentrations, but decreases at the highest LPS concentration. GAPDH, which was used as a loading control, remains relatively stable after the effect of lipopolysaccharides. The presence of the intact PARP-1 molecule is elevated only in the sample with the highest LPS concentration, while its presence is weakened in the samples with the two lowest LPS concentrations. The expression of iNOS is being enhanced as the concentration of LPS rises. Regarding the effect of cannabidiol on Neuro2a cells that got exposed to 0.5 μg/mL LPS, IL-1β is being reduced as the concentration of CBD rises. TNF-α seems to be decreasing under the effect of the lowest CBD concentration, however it displays a tendency to increase in the samples with higher CBD content.