Ανάπτυξη μεθοδολογίας προσδιορισμού τερπενικών ενώσεων σε βιολογικά υγρά με την συνδυαστική χρήση της μικροεκχύλισης στερεάς φάσης από υπερκειμενη αέρια φάση συζευγμένη με φασματομετρία μάζας:
Creators: name: Νταντάσιος, Νικόλαος
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2010
Subjects: Τερπένια
Μικροεκχύλιση στερεάς φάσης
Αιθέρια έλαια
Αέρια χρωματογραφία
Βιολογικά υγρά
Terpenes
Essential oils
GC MS
Spme
Biological fluids

description: Τα αρωματικά και φαρμακευτικά φυτά, όπως υποδηλώνει και το όνομα τους αποδίδουν στο περιβάλλον τους ένα κάποιο ειδικό άρωμα, χαρακτηριστικό για κάθε είδος ή και για κάθε ποικιλία ενός φυτού. Την ιδιότητα τους αυτή την οφείλουν στην ύπαρξη σε ορισμένα μέρη του φυτού, ειδικών πτητικών χημικών ουσιών που είναι γνωστές ως αιθέρια έλαια. Η σύνθεσή τους είναι αποτέλεσμα αποκλειστικά φυσικών ενζυματικών αντιδράσεων. Το χαρακτηριστικό άρωμα κάθε αιθέριου ελαίου είναι συνισταμένη όλων των συστατικών του, αλλά πολλές φορές η παρουσία ενός μόνο συστατικού σε αναλογία 1% ή και μικρότερη, έχει σαν αποτέλεσμα την αλλαγή του αρώματος.Από χημική άποψη, τα φυτικά αιθέρια έλαια αποτελούνται κυρίως από τερπένια. Τα τερπένια είναι μικρά οργανικά μόρια που εμφανίζουν τεράστια ποικιλομορφία ως προς τη δομή τους.Τρία από αυτά μελετήθηκαν στην παρούσα εργασία και είναι τα α–πινένιο, β-μυρκένιο, π-κυμένιο τα οποία περιέχονται σε αιθέρια έλαια δενδρολίβανου, ευκαλύπτου, κύμινου, θυμαριού, Μάνγκο και Κάνναβης. Στην παρούσα εργασία αναπτύχθηκε μια μέθοδος ποσοτικού προσδιορισμού α–πινένιο, β-μυρκένιο, π-κυμένιο σε βιολογικά δείγματα και συγκεκριμένα σε ούρα με την συνδυαστική χρήση της GC-MS και ΗS-SPME μελετήθηκε ο μεταβολισμός των α–πινένιο, β-μυρκένιο, π-κυμένιο και οι πιθανοί μεταβολίτες τους. Κατά την διάρκεια του πειράματος κατασκευάστηκαν πρότυπες καμπύλες αναφοράς των υπό προσδιορισμό δραστικών ουσιών σε επιμολυσμένα διαλύματα ούρων. Στην συνέχεια εθελοντής κατανάλωσε συγκεκριμένο όγκο υδατοαιθανολικού διαλύματος μίγματος των ουσιών γνωστής συγκέντρωσης και ούρα του εθελοντή συλλέχτηκαν σε τακτά χρονικά διαστήματα και έγινε εκχύλισή τους με HS-SPME και ανάλυση αυτών σε GC-MS. Ο εθελοντής, κατά την 24ωρη συλλογή του δείγματος ούρων, ακολούθησε απόλυτη νηστεία ενώ κατανάλωσε συνολικά 1Lt νερό. Συγκεκριμένα εντοπίστηκαν οι α–πινένιο, β-μυρκένιο, π-κυμένιο σε δείγμα του εθελοντή, 14 ώρες μετά τη κατάποση του μίγματος.Η ταυτοποίηση και ποσοτικοποίηση και των τριών ουσιών έγινε σε scan mode με πολύ καλά χαρακτηριστικά επίδοσης. Τα χαρακτηριστικά επίδοσης για την προτεινόμενη μέθοδο όσον αφορά στην επαναληψιμότητά της, είναι σε επίπεδα για τα α-πινένιο 0,5%, β-μυρκένιο 0,7%, π-κυμένιο 2,3%, ενώ τα όρια ανίχευσης (LOD) είναι για τα α–πινένιο 0,03 μg/L, β-μυρκένιο 0,90 μg/L, π-κυμένιο 0,02μg/L και τέλος τα όρια ποσοτικοποίησης (LOQ) είναι για τα α–πινένιο 0,08μg/L, β-μυρκένιο 1,3 μg/L, π-κυμένιο 0,04 μg/L. Η μέθοδος αυτή είναι κατάλληλη για την ποσοτική αποτίμηση των α-πινένιο, β-μυρκένιο, π-κυμένιο και γενικότερα τερπενοειδών σε βιολογικά δείγματα.
description: In a chemical aspect, herbal essential oils consist mainly of terpenes and terpenoids. The terpenes are relatively small organic molecules that exhibit great diversity in their structure. They are found in aromatic and medicinal plants as components of their essential oils. Their composition is the result solely of natural enzymatic reactions. Except of their dietary and cosmetic uses, there is a great interest for their use in traditional and alternative medicines, since they are known to affect the properties of several drugs. For this reason three terpenes were chosen and studied in this work, namely a-pinene, b-myrcene and p-cymene. The above terpenes are contained in perfume oils, rosemary, eucalyptus, caraway, thyme, mango, hemp, etc. Despite of their wide use, in literature there are no reports on standard analytical methods for the determination of these compounds in human urine.Consequently, a quantitative method was developed in this study for the above terpenes in biological samples and particularly in human urine by combinatorial use of GC-MS and HS-SPME. During the experiment, standard reference curves were constructed in order to identify active substances in urine contaminated solutions. Calibration curves were obtained using either single analyte and multi-analyte standard solutions. On the other hand standard addition reference curves were obtained by adding known amounts of the mixtures of the three analytes in blank human urine matrix.In order also to investigate the fate of the studied compounds in the organism, experiments were conducted after consumption of them by a volunteer. For this purpose a solution in ethanol-water containing mixtures of substances of a known concentration was used. Urine samples were collected at regular intervals, extracted with HS-SPME and finally analyzed by capillary GC-MS, under optimum instrumental conditions of helium flowrate and temperature program. During the 24 hours that lasted the collection of the urine sample, the volunteer followed complete fasting and consumed standard quantity of water. The result was to identify traces of a-pinene, b-myrcene and p-cymene in the volunteer’s urine sample after several hours. Some other compounds were also detected may be resulting from the terpene metabolism. The developed method was employed for the identification and quantification of all three substances in scan mode with very good performance features. The repeatability of the method varied between 0.5-2.5 % and the detection limits (LOD) in the range 0,02-0,9 mg/L, respectively.Accordingly the developed method is considered reliable and sensitive and it is suitable for quantitative evaluation of a-pinene, b-myrcene, p-cymene and probably for other similar compounds also, in human urine samples.