Γονοτύπηση με αλληλούχιση νέας γενιάς ασθενών με Οικογενή Μεσογειακό Πυρετό και μακροχρόνια παρακολούθηση της πορείας της νόσου με σύγχρονες μεθόδους
Creators: name: Σγουροπούλου, Βασιλική Φ.
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2021
Subjects: Οικογενής Μεσογειακός Πυρετός
Γονοτύπηση
Μεταλλάξεις
Αλληλούχιση Νέας Γενιάς
Familial Mediterranean Fever
Genotype
Mutations
Next Generation Sequencing

description: Ο Οικογενής Μεσογειακός Πυρετός (ΟΜΠ) είναι το συχνότερο μονογονιδιακό αυτοφλεγμονώδες νόσημα, το οποίο κληρονομείται παραδοσιακά με τον αυτοσωματικό υπολειπόμενο χαρακτήρα. Ο ΟΜΠ οφείλεται σε μεταλλάξεις στο γονίδιο MEFV (MEditerraneanFeVer), και χαρακτηρίζεται από επεισόδια με πυρετό και ορογονίτιδα (περιτονίτιδα, πλευρίτιδα, αρθρίτιδα). Η θεραπεία είναι η δια βίου λήψη κολχικίνης, η οποία καταστέλλει την έλευση των περιοδικών επεισοδίων και παράλληλα προλαμβάνει την εκδήλωση αμυλοείδωσης. Τον τελικό πληθυσμό της μελέτης αποτέλεσαν 94 ασθενείς με ΟΜΠ, στους οποίους η μακροχρόνια παρακολούθηση από το κέντρο μας επέτρεψε την αποτύπωση του κλινικού φαινοτύπου στην έναρξη της νόσου, του γονιδιακό profile, καθώς και την παρακολούθηση της πορείας και έκβαση της νόσου, την απάντηση στη θεραπεία, τη συμμόρφωση των ασθενών και την καταγραφή απώτερων επιπλοκών. Επίσης, σε 31 ασθενείς, που από τη γονιδιακή τους ανάλυση δεν προέκυψε επιβεβαιωτικός γονότυπος για τη νόσο, δηλαδή εμφάνιζαν ετεροζυγωτία ή φυσιολογικό γονότυπο, υποβλήθηκαν σε περαιτέρω μοριακή ανάλυση με Next Generation Sequencing (NGS). Τέλος, σε 43 από τους 94 ασθενείς, καθώς και σε 42 υγιείς μάρτυρες, διενεργήθηκε μέτρηση της Συστολικής Αρτηριακής Πίεσης (ΣΑΠ) και μελέτη των δεικτών αρτηριακής σκληρίας, ταχύτητα σφυγμικού κύματος (PWV) και δείκτης ενίσχυσης (AIx75), χρησιμοποιώντας τη συσκευή SphygmoCor XCEL, προκειμένου να εκτιμηθεί ο καρδιαγγειακός κίνδυνος. Η μελέτη κατέληξε στα εξής συμπεράσματα: 1.Με την εφαρμογή των συμβατικών μεθόδων γονοτύπησης PCR και NIRCA αποτυπώθηκε το γονιδιακό profile των ασθενών με συχνότερες τις ακόλουθες μεταλλάξεις: M694V (55.3%), M680I (29.8%), V726A (8.5%) και η E148Q (7.4%). 2. Η πλειονότητα των ασθενών εμφάνιζε ήπιας και μέτριας βαρύτητας νόσο. 3.Η μετάλλαξη M694V και η ομοζυγωτία M694V/M694V συσχετίστηκε με μεγαλύτερη βαρύτητα της νόσου. 4. Ο ΟΜΠ στην Ελλάδα έχει ήπια πορεία. Ακρογωνιαίο λίθο για την ικανοποιητική έκβαση της νόσου αποτελεί η συμμόρφωση του ασθενούς στην θεραπεία, γεγονός που αποτρέπει την εγκατάσταση επιπλοκών της νόσου, με κύριο εκπρόσωπο την νεφρική αμυλοείδωση. 5. Η μετάλλαξη R202Q συσχετίζεται με το φλεγμονώδη φαινότυπο της νόσου και η παρουσία της συνεισφέρει στην έκφραση αυτής. 6. Η NGS αποτελεί μία μέθοδο με αυξημένη ευαισθησία και ειδικότητα, χρήσιμη στην υποστήριξη της κλινικής διάγνωσης. 7. Η αυξημένη ειδικότητα της μεθόδου NGS αποκάλυψε την γενετική ετερογένεια στους ασθενείς, υποστήριξε τη διαχείριση του νοσήματος και συνέβαλε στην αποσαφήνιση του γενετικού profile Ελλήνων ασθενών με ΟΜΠ. 8. Μετά την εφαρμογή της NGS οι συχνότητες των μεταλλάξεων άλλαξαν ως εξής: R202Q (61.3%), M694V (48.4%) και M680I (19.4%). 9. H NGS ανίχνευσε σπάνιες μεταλλάξεις R761H, E148V, E167D, F479L, R408Q και P369S, ορισμένες εκ των οποίων δεν περιλαμβάνονται στο panel των μεταλλάξεων όλων των συμβατικών μεθόδων. 10. Οι ασθενείς με ΟΜΠ, στους οποίους δεν ελέγχεται η ενεργότητα της νόσου, διατρέχουν αυξημένο καρδιαγγειακό κίνδυνο, όπως έδειξαν οι αυξημένες τιμές AIx75 σε σχέση με τους υγιείς μάρτυρες. 11. Ο δείκτης αρτηριακής σκληρίας AIx75 συσχετίστηκε με την απάντηση στη θεραπεία και τη διάρκεια αυτής, καθώς και με τον γονότυπο M694V/M680I. 12. Οι φυσιολογικές τιμές cf-PWV στους ασθενείς με ΟΜΠ πιθανόν να αντικατοπτρίζουν τη συμμόρφωση των ασθενών στη θεραπεία.
description: Familial Mediterranean Fever (FMF) is the most common monogenic autoinflammatory disease, which is traditionally inherited with the autosomal recessive pattern. It is caused by mutations in the MEFV (MEditerraneanFeVer) gene and it is characterized by attacks of fever and serositis (peritonitis, pleuritis, arthritis). The treatment is the lifelong intake of colchicine, which suppresses the onset of recurrent attacks and prevents the development of amyloidosis. The population included in this thesis consisted of 94 patients with FMF, in whom the long-term follow-up by our center allowed the recording of the clinical phenotype at the disease onset, the genetic profile, as well as the monitoring of the course and outcome of the disease, the response to treatment, patients’ compliance and the recording of long-term complications. From the patients, 31 whose genetic analysis did not reveal a confirmatory genotype for the disease, presenting with heterozygosity or normal genotype, underwent further molecular analysis with Next Generation Sequencing (NGS). At the same time, in 43 of the 94 patients, as well as in 42 healthy controls, Systolic Blood Pressure was measured, and a study of arterial stiffness parameters, Pulse Wave Velocity (PWV) and Augmentation Index (AIx75) was performed, using the SphygmoCor XCEL device, in order to assess the cardiovascular risk. The study examined and presented the following findings: 1. The application of conventional genotyping techniques PCR and NIRCA recorded the genetic profile of patients. The most common mutations were M694V (55.3%), M680I (29.8%), V726A (8.5%) and E148Q (7.4%). 2. The majority of patients presented mild to moderate disease severity. 3. Mutation M694V and homozygosity M694V/M694V were associated with higher disease severity. 4. FMF in Greece presents with mild course. The cornerstone for the satisfactory outcome of the disease is patient's compliance to treatment, which prevents the development of complications of the disease, with the main representative being renal amyloidosis. 5. The mutation R202Q is associated with the inflammatory phenotype of the disease and its presence contributes to its expression. 6. NGS is a method with increased sensitivity and specificity, useful in supporting clinical diagnosis. 7. The increased specificity of the NGS revealed the genetic heterogeneity of the patients, contributed to the clarification of the genetic profile of Greek patients with FMF and supported the management of the disease. 8. After the application of NGS the frequency of the mutations changed as follows: R202Q (61.3%), M694V (48.4%) and M680I (19.4%). 9. NGS detected rare mutations R761H, E148V, E167D, F479L, R408Q and P369S, some of which are not included in the mutation panel of all conventional methods. 10. Patients with FMF, in whom disease activity is not controlled, are at increased cardiovascular risk, as indicated by increased AIx75 values compared to healthy controls. 11. AIx75 was correlated with response to treatment and its duration, as well as with the genotype M694V/M680I. 12. Normal cf-PWV values in FMF patients may reflect patients' compliance to treatment.