DYSREGULATION OF INTESTINAL STEM CELLS IN CROHN'S DISEASE
Creators: name: MAESTRONI, ANNA MARIA
Publisher: name: Universit� degli Studi di Milano
Year: 2019

description: Riassunto Introduzione. Numerosi fattori, tra cui eventi immunitari, agenti ambientali tossici, predisposizione genetica e microbiota anormale svolgono un ruolo chiave nella patogenesi della malattia di Crohn, ma il principale meccanismo alla base � ancora oggetto di studio. L'omeostasi della mucosa intestinale si basa su un delicato equilibrio tra auto-rinnovamento e differenziazione, che � garantita dal ricambio delle cellule staminali intestinali all'interno delle cripte. Recenti studi suggeriscono che una differenziazione alterata delle cellule staminali intestinali (ISC) pu� facilitare l'insorgenza della malattia di Crohn attraverso la formazione di una barriera antimicrobica difettosa, che consente ai batteri intestinali di provocare l'infiammazione. Lo scopo del nostro studio � quello di esplorare se le ISC sono danneggiate e le loro propriet� rigenerative sono alterate nella malattia di Crohn, rappresentando cos� un nuovo attore nell'insorgenza della malattia e un potenziale bersaglio terapeutico per ripristinare le capacit� di auto-rinnovamento della mucosa intestinale. Metodi. Su campioni intestinali (sia area marginale che infiammata rispetto alla sede della malattia) ottenuti da pazienti con e senza malattia di Crohn � stata condotta un?analisi del trascrittoma per valutare l'espressione dei marcatori per ISC. Le propriet� rigenerative delle ISC sono state studiate utilizzando il test del mini-guts, in cui le cripte purificate sono state coltivate come organoidi tridimensionali e la loro morfologia / sviluppo sono stati valutati. Infine, mini-guts sono stati coltivati a partire dalle cripte di soggetti sani con siero di pazienti affetti da malattia di Crohn per dimostrare se i fattori circolanti / citochine potessero esercitare un effetto significativo nell'abrogazione dello sviluppo di organoidi e influenzare l'espressione dei marcatori per ISC. Risultati. I marcatori per ISC, in particolare LGR5 e EPHB2, sono scarsamente espressi in cripte isolate da campioni intestinali di pazienti con malattia di Crohn. � interessante notare che i marcatori per ISC sono pi� preservati nella zona sana, mentre la loro espressione � quasi assente nell'area infiammata. Ancora pi� importante, la capacit� delle ISC di auto-rinnovamento testata nel saggio mini-guts, � stata trovata significativamente ridotta nei pazienti con malattia di Crohn, con solo il 40% dei mini-guts che si sviluppano da cripte ottenute dall'area marginale e meno del 5% da quelle isolate dalla parte infiammata del campione intestinale. Quando i mini-guts ottenuti dalle cripte dei controlli sono stati coltivati in presenza di siero di pazienti affetti da malattia di Crohn non riuscivano a generare organoidi normali e mostravano una ridotta espressione dei marcatori per ISC EPHB2 e LGR5. Conclusione. Abbiamo dimostrato che il pool delle ISC � ridotto nella malattia di Crohn e che questo si associa a una perdita di propriet� rigenerative delle ISC all'interno delle cripte. La crescita di mini-gut in vitro in presenza del siero di pazienti affetti da morbo di Crohn, � quasi completamente annullata, suggerendo quindi che nel contesto della malattia di Crohn esiste un difetto del pool e della funzione rigenerativa delle ISC.