Ανίχνευση των Ε6 και Ε7-mrnas του ιού HPV με κυτταρομετρία ροής: διερεύνηση της αξίας της μεθόδου στις προκαρκινικες αλλοιώσεις του τραχήλου της μήτρας σε σχέση με την κυτταρομορφολογία και το HPV Dna test
Creators: name: Ζάχου, Μαρία Αθανασίου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2009
Subjects: ΗPV
Hybrid capture 2
Κυτταρομετρία ροής (flow cytometry)
Εξωτραχηλικά
Τράχηλος

description: Η δεδομένη άμεση συσχέτιση του HPV με την τραχηλική καρκινογένεση επιβάλλει σήμερα την ακριβέστερη ανίχνευσή του καθώς επίσης και τη στενή παρακολούθηση της απρόβλεπτης βιολογικής συμπεριφοράς της HPV λοίμωξης. Οι μέχρι σήμερα τεχνικές ανίχνευσης DNA, όπως HC2 (hybrid capture 2) και PCR, στοχεύουν στην ανίχνευση του L1 γονιδίου, που σε περίπτωση ενσωμάτωσης του ιϊκού γονιδιώματος στο χρωμόσωμα του ξενιστή απορρυθμίζεται ή εξαλείφεται. Ωστόσο, τα ογκογονίδια E6 και E7 είναι τα μόνα τμήματα του ιού που διατηρούν την έκφρασή τους κατά την ενσωμάτωση του ιού στο κύτταρο ξενιστή. Η ανίχνευση των mRNAs των E6 και Ε7 γονιδίων του ιού HPV μας δίνει πληροφορίες σχετικά με τη φάση της λοίμωξης (επισωματική ή ενσωματωμένη) και της μη αναστρέψιμης αλλοίωσης. Στην παρούσα μελέτη αναφέρεται η ανάπτυξη μίας τεχνικής ανίχνευσης, με κυτταρομετρία ροής (HPV mRNA Flow FISH), των ενδοκυττάριων ιϊκών E6, E7 mRNAs που εκφράζονται μετά από ενσωμάτωση του ιϊκού HPV γονιδιώματος στα εξωτραχηλικά κύτταρα. Η τεχνική αυτή αποτελεί δείκτη κυτταρικού μετασχηματισμού καθώς διαπιστώνεται συσχέτιση κακοήθειας με την ενσωμάτωση του ιϊκού DNA στο γένωμα του ξενιστή.Από τη συγκριτική μελέτη της HPV mRNA Flow FISH με την κυτταρομορφολογία και το HPV DNA test, προέκυψε ότι η θετική έκφραση των ενδοκυττάριων Ε6/Ε7 mRNAs συσχετίστηκε πρωτίστως με την κυτταρολογική διάγνωση και κατά δεύτερον με το HPV DNA test. Eπειδή η τεχνική HPV mRNA Flow FISH παρουσίασε μεγαλύτερη ευαισθησία σε σχέση με τον υβριδισμό ΗC2, κυρίως σε σε ASCUS και ΗSIL αλλοιώσεις, η ανίχνευση των Ε6/Ε7 mRNAs των ογκογόνων στελεχών ίσως αποτελεί ένα καλύτερο προγνωστικό δείκτη σε σχέση με την ανίχνευση του HPV DNA για την πρόβλεψη μίας μελλοντικής εξέλιξης CIN2/CIN3 από ASCUS επιχρίσματα και την αναγνώριση εκείνων των γυναικών με εμμένουσες CIN3 αλλοιώσεις, που διατρέχουν υψηλό κίνδυνο εξέλιξης σε διηθητικό καρκίνωμα. Από την αξιολόγηση της μεθόδου HPV mRNA Flow FISH ως «θεραπευτικό τέστ» συγκριτικά με τον υβριδισμό HC2, διαπιστώθηκε ότι η ανίχνευση των ενδοκυττάριων Ε6/Ε7 mRNAs αποτελεί καταλληλότερο δείκτη επιτυχούς θεραπείας περιορίζοντας τον αριθμό των γυναικών που χρήζουν στενής παρακολούθησης μετά από κωνοειδή εκτομή τραχήλου.Όλα τα παραπάνω δείχνουν ότι η παρουσία των ενδοκυττάριων Ε6/Ε7 mRNAs του HPV, που εμπλέκεται στην καρκινογένεση, είναι πιο χρήσιμη σε σχέση με το HPV DNA test για την ανίχνευση ενεργών και πιθανά εμμένουσων λοιμώξεων.
description: Given the direct correlation of HPV in the cervical carcinogenesis requires far more accurate detection as well as close monitoring of unpredictable biological behavior of HPV infection. To date techniques for detecting DNA, as HC2 (hybrid capture 2) and PCR, aimed at detecting the L1 gene, where integration of the viral genome in the host chromosome deregulate or eliminated. However, the E6 and E7 oncogenes are only parts of the virus retain their expression in the incorporation of virus into the host cell. The detection of mRNAs of the E6 and E7 genes of HPV gives us information about the phase of infection (episomal or integrated) and irreversible deterioration. This study reports the development of a detection technique with flow cytometry (HPV mRNA Flow FISH), the intracellular viral E6, E7 mRNAs expressed after integration of HPV viral genome in ectocervical cells. This technique is an indicator of cell transformation and malignancy found correlation with the integration of viral DNA into the genome of the host.A comparative study of HPV mRNA Flow FISH with cytomorphology and HPV DNA test, showed that positive expression of intracellular E6/E7 mRNAs associated primarily with the cytological diagnosis and secondly with the HPV DNA test. Because the technique HPV mRNA Flow FISH has a higher sensitivity compared with hybridization HC2, particularly in HSIL and ASCUS lesions, detection of E6/E7 mRNAs of oncogenic strains might be a better predictor than the presence of HPV DNA in anticipating a future trend in ASCUS smears CIN2/CIN3 and identification of those women with persistent CIN3 lesions, which are at high risk of progression to invasive carcinoma. The evaluation method of HPV mRNA Flow FISH as a "therapeutic test" compared to the hybridization HC2, found that the detection of intracellular E6/E7 mRNAs is most appropriate indicator of successful treatment by reducing number of women who need close monitoring after connoid resection of cervix. All these suggest that the presence of intracellular E6/E7 mRNAs of HPV, which is involved in carcinogenesis, it is more useful than the HPV DNA test for detecting potential active and persistent infection.