Προσδιορισμός αμφοτερικίνης Β σε ούρα ανθρώπου με HPLC-UV μετά από μικροεκχύλιση με υφασμάτινο μέσο (fabric phase sorptive extraction)
Creators: name: Ασημακοπούλου, Ευμορφία Δημητρίου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2024
Subjects: Αμφοτερικίνη Β
Μικροεκχύλιση με Υφασμάτινο Μέσο
Υγρή Χρωματογραφία Υψηλής Πίεσης
Amphotericin B
Fabric Phase Sorptive Extraction
High Pressure Liquid Chromatography

description: Στο πλαίσιο της παρούσας εργασίας, περιγράφεται ένα σύστημα με βάση τη μικροεκχύλιση με υφασμάτινο μέσο (Fabric Phase Sorptive Extraction – FPSE) για τον προσδιορισμό της αμφοτερικίνης Β στα ανθρώπινα ούρα. Η μέθοδος που αναπτύχθηκε επέτρεψε την άμεση εκχύλιση του προσδιοριζόμενου συστατικού από το βιολογικό υπόστρωμα με βελτιωμένη εκλεκτικότητα, επαναληψιμότητα και ανάκτηση. Λόγω της διαμορφωμένης συγγένειας της μεμβράνης προς το προσδιοριζόμενο συστατικό, η ισορροπία εκχύλισης επιτεύχθηκε σε 30 λεπτά. Επιπλέον, δεν κατέστη αναγκαία καμία επιπρόσθετη προκατεργασία του δείγματος λόγω της υψηλής διαπερατότητας της μεμβράνης FPSE και του μικρού όγκου διαλύτη έκλουσης που απαιτείται για την ποσοτική οπισθοεκχύλιση των συστατικών. Τη βέλτιστη απόδοση εκχύλισης παρείχε η υδρόφοβη μεμβράνη επικαλυμμένη με πολυδιμεθυλοδιφαινυλοσιλοξάνιο (sol-gel PDMDPheS). Για τη βελτιστοποίηση της μεθόδου, διερευνήθηκαν διεξοδικά σημαντικές παράμετροι που επηρεάζουν την απόδοση της εκχύλισης όπως ο όγκος του δείγματος, ο χρόνος εκχύλισης, το μέγεθος της μεμβράνης, ο ρυθμός ανάδευσης, η ιοντική ισχύς του υποστρώματος του δείγματος, ο χρόνος και ο διαλύτης έκλουσης. Το προσδιοριζόμενο συστατικό διαχωρίστηκε από το εσωτερικό πρότυπο (νιμεσουλίδη) και τις ενδογενείς ενώσεις των ανθρώπινων ούρων χρησιμοποιώντας ένα πρόγραμμα βαθμωτής έκλουσης. Η προτεινόμενη μέθοδος ήταν γραμμική εντός του εύρους 0,10-10,0 μg/mL, ενώ οι σχετικές τυπικές αποκλίσεις της επαναληψιμότητας (sr) και της αναπαραγωγιμότητας εντός του εργαστηρίου (sR) ήταν μικρότερες από 12,7% σε όλες τις περιπτώσεις. Επιπλέον, επέδειξε καλή ακρίβεια η οποία κυμάνθηκε μεταξύ 88,1 και 110,3%. Τέλος, η μέθοδος που αναπτύχθηκε εφαρμόστηκε με επιτυχία για την παρακολούθηση της συγκέντρωσης της αμφοτερικίνης Β σε πραγματικά δείγματα ανθρώπινων ούρων.
description: Herein, a fabric phase sorptive extraction-based scheme was reported for the determination of amphotericin B in human urine. The developed method allowed the direct extraction of the analyte from the biological matrix with improved selectivity, repeatability and recovery. Due to the membrane’s engineered affinity towards the analyte, extraction equilibrium was achieved in 30 min. Moreover, no additional sample pretreatment was required due to the high permeability of the FPSE membrane and the small volume of eluting solvent required for quantitative back-extraction of the analytes. The hydrophobic sol–gel polydimethylphenylsiloxane (sol–gel PDMDPheS) coated membrane provided the optimum extraction performance. Important parameters that affect the extraction efficiency (such as sample volume, extraction time, membrane size, stirring rate, ion strength, elution solvent and time) were thoroughly investigated. The analyte was separated from the internal standard (nimesulide) and endogenous compounds of the human urine using a gradient elution program. The proposed assay was linear within the range of 0.10–10.0 μg/mL while the relative standard deviation of the repeatability (sr) and within-laboratory reproducibility (sR) were less than 12.7% in all cases. The method exhibited good accuracy which varied between 88.1 to 110.3%. The developed method was successfully applied for the monitoring of amphotericin B concentration in human urine.