Ανάπτυξη νέων αναλυτικών μεθόδων προσδιορισμού θειολών σε τρόφιμα και βιολογικά δείγματα με σύζευξη της Υγρής Χρωματογραφίας με αυτοματοποιημένα συστήματα ροής:
Creators: name: Καρακώστα, Θεανώ
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2013
Subjects: Υγρή χρωματογραφία
Συστήματα ροής
Θειόλες
Αυτοματοποιημένη προκατεργασία δείγματος
Liquid Chromatography
Flow systems
Thiols
Tutomated sample preparation

description: Στην παρούσα Διδακτορική Διατριβή περιγράφεται η ανάπτυξη τριών νέων αυτόματων αναλυτικών μεθόδων για τον φασματοφωτομετρικό προσδιορισμό της κυστεΐνης, Ν ακετυλοκυστεΐνης, γλουταθειόνης και καπτοπρίλης σε βιολογικά δείγματα και δείγματα τροφίμων. Κοινό χαρακτηριστικό των μεθόδων είναι η αυτοματοποίηση των σταδίων προκατεργασίας του δείγματος και η χρήση αποκλειστικά αλκυλο-εστέρων του προπιολικού οξέως για την παραγωγοποίηση των θειολικών αυτών ενώσεων. Στην πρώτη πειραματική εργασία αναπτύχθηκε μια μέθοδος για τον προσδιορισμό κυστεΐνης, γλουταθειόνης και Ν-ακέτυλοκυστεΐνης σε φρούτα. Το πρωτόκολλο περιελάμβανε την αυτοματοποιημένη αντίδραση των θειολών με τα αντιδραστήρια παραγωγοποίησης σε οργανολογική διάταξη της Τεχνικής των Διαδοχικών Εγχύσεων και απευθείας προώθηση των παραγώγων στη Υγρή Χρωματογραφία. Στη μέθοδο χρησιμοποιήθηκε για πρώτη φορά ο αιθυλικός εστέρας του προπιολικού οξέος για την παραγωγοποίηση των θειολών πριν τη χρωματογραφική στήλη. Στη δεύτερη πειραματική εργασία αναπτύχθηκε μια μέθοδος για τον προσδιορισμό καπτοπρίλης σε δείγματα ούρων. Στόχος ήταν η ανάπτυξη για πρώτη φορά μιας πλήρως αυτοματοποιημένης οργανολογικής διάταξης, κατά την οποία αρχικά πραγματοποιείται εκχύλιση και προσυγκέντρωση της καπτοπρίλης, ακολούθως χρωματογραφικός διαχωρισμός της και τέλος εν-ροή παραγωγοποίησής της. Στην τρίτη, πειραματική εργασία χρησιμοποιείται για πρώτη φορά σύμφωνα με τη βιβλιογραφία ο μεθυλικός εστέρας του προπιολικού οξέως για την εν-ροή αντίδραση παραγωγοποίησης της γλουταθειόνης και της κυστεΐνης μετά από χρωματογραφική διάταξη Υγρής Χρωματογραφίας Υδρόφιλων Αλληλεπιδράσεων. Η μέθοδος εφαρμόστηκε σε δείγματα μαγιάς με ιδιαίτερα ικανοποιητική ευαισθησία.
description: The first study reports the very first application of ethyl propiolate as an advantageous pre-column derivatization reagent for the determination of cysteine, glutathione and N-acetylcysteine by liquid chromatography. Τhiols were derivatized online under stopped-flow conditions in a sequential injection system coupled to liquid chromatography. The reaction was rapidly allowed to proceed under stopped-flow conditions in the loop of the LC setup. The formed derivatives were separated isocratically using a monolithic stationary phase and were detected spectrophotometrically. The proposed method was satisfactorily applied to the analysis of the selected thiols in fresh fruit samples. The second study reports a new High Performance liquid chromatographic method for the determination of the anti-hypertension drug captopril in human urine. After its separation from the sample matrix in a reversed phase column, captopril reacts with the thiol-selective reagent ethyl-propiolate in a post-column configuration and the formed thioacrylate derivative is detected spectrophotometrically at 285 nm. Automated 4-fold preconcentration of the analyte prior to analysis was achieved by an on - line solid phase extraction step using a Sequential Injection manifold. The Oasis cartridges offered quantitative recoveries and effective sample cleaning by applying a simple SPE protocol. Finally the last work reports one of the very first applications of on-line post-column derivatization to hydrophilic interaction chromatography, offering a viable tool for the determination of low molecular weight thiolic compounds. More specifically it proposes a new method for the determination of Glutathione and Cysteine in yeast samples. The analytes were separated isocratically from the sample matrix by Hydrophilic Interaction Chromatography and they were detected at 285 nm following on-line post-column derivatization by methyl-propiolate in alkaline medium. The absence of matrix effect allowed the determination of cysteine and glutathione in various yeast samples.