title: Einfluss von Hyperthermie auf die Wirkung von Chemotherapeutika auf uveale und konjunktivale Melanomzelllinien
Creators: name: Hoyer, Torsten
Publisher: name: Friedrich-Alexander-Universität Erlangen-Nürnberg (FAU)
Year: 2024
Subjects: subject: Melanom, Chemotherapie, Hyperthermie, Zellkultur

description: Zusammenfassung Hintergrund und Ziele Melanome des Auges sind seltene, aber gefährliche Erkrankungen mit hoher Mortali-tät. Ziel dieser Arbeit war es in vitro zu überprüfen, ob bei Kombination von Hyper-thermie und Chemotherapie ein therapeutisch nutzbarer Synergieeffekt auftritt. Dieser Effekt könnte vor allem bei der Behandlung von aus diesen Melanomen resultierenden Metastasen von Nutzen sein. Methoden Das Wachstum von Zellen etablierter, okulärer Melanomzelllinien wurde sowohl unter dem Einfluss von Chemotherapeutika, von Hyperthermie als auch einer kombinierten Chemotherapeutika-Hyperthermie-Anwendung untersucht. Verwendet wurden die konjunktivalen Linien CRMM1 und CRMM2 sowie die uvealen Linien UPMM3 und 92-1. Die Chemotherapeutika Docetaxel, Mitoxantron und Cisplatin wurden in verschiedenen Konzentrationen verwendet. Hyperthermie erfolgte für jeweils 1 h bei 42 °C, 45 °C und 47 °C. Die Entwicklung der Zellen wurde über einen Zeitraum von 162 h per Live-Cell-Analysis (LCA) gemessen. Konditionen mit einem erkennbaren Synergieeffekt wurde per Real-Time Cell Analysis (RTCA) erneut getestet um das Ergebnis zu überprüfen. Mittels Western Blot und Immunocytochemie (ICC) wurde die HSP 60 und HSP 70 Expression nach Hyperthermie untersucht. Ergebnisse und Beobachtungen LCA und RTCA Synergieeffekte konnten per LCA bei CRMM1 für die Kombination von Hyperthermie mit Cisplatin und Mitoxantron nachgewiesen werden. Bei der Zelllinie CRMM2 wurde nur für Mitoxantron in Kombination mit Hyperthermie ein Synergieeffekt festgestellt. Für die Zelllinie UPMM3 zeigten sich in den LCA-Daten für Hyperthermie mit allen 3 Chemotherapeutika Synergieeffekte. Bei Zelllinie 92-1 ist bei Docetaxel und Mitoxant-ron mit Hyperthermie ein leichter Synergieeffekt erkennbar. Per RTCA konnten die zuvor bei der LCA beobachteten Effekte bei CRMM1 für Cisplatin und Mitoxantron, bei CRMM2 für Mitoxantron und bei UPMM3 für alle 3 Chemotherapeutika nachge-wiesen werden. Die Zelllinie 92-1 wurde nicht per RTCA untersucht, da die Effekte hier im LCA sehr schwach waren. Insgesamt konnte bei höheren Chemotherapeutika-Konzentrationen und stärkerer Hyperthermie eine stärkere Hemmung des Wachstums beobachtet werden. Allerdings zeigte Hyperthermie bei 42 °C teils keinen hemmenden Effekt oder verstärkte sogar das Wachstum. HSP-Expressionsanalyse per Western Blot und per Immunocytochemie Im Western Blot zeigte sich bei CRMM1 für die HSP 60-Konzentration bei 45 °C rela-tiv zu 37 °C ein Anstieg auf des 1,5-fache, die HSP 70-Konzentration sieg ebenfalls bei Hyperthermie. Bei CRMM2 gab es weder bei HSP 60 noch bei HSP 70 einen deutlichen Anstieg nach Hyperthermie. Nach Hyperthermie stieg HSP 60 bei UPMM3 geringfügig und HSP 70 bei 45 °C auf das 3,5-fache verglichen mit 37 °C. Bei 92-1 änderten sich die HSP 60- und HSP 70-Konzentrationen hyperthermieabhängig mit Maxima bei 42 °C. In der Immunocytochemie (ICC) war die unterschiedliche Vertei-lung der HSP erkennbar. HSP 60 und HSP 70 kamen hauptsächlich im Zytosol vor, HSP 90 eher im Kern. Bei CRMM1 sowie CRMM2 war bei HSP 60 und HSP 70 nach Hyperthermie ein Anstieg zu beobachten. HSP 60 und HSP 70 stiegen bei UPMM3 nach Hyperthermie nicht signifikant an. Bei 92-1 gelang es, anders als im Western Blot, nicht HSP 60 in der Kontrolle ohne Hyperthermie, also bei 37 °C, zu färben. Der HSP 70-Gehalt änderte sich nach Hyperthermie nicht. Die Ergebnisse von Western Blot und ICC decken sich teilweise, weichen jedoch teilweise auch voneinander ab. Zwischen der Entwicklung des HSP-Gehalts und der synergistischen Wirkung von Hyperthermie und Chemotherapie konnte kein Zusammenhang gezeigt werden. Schlussfolgerungen Die Kombination von Hyperthermie und Chemotherapie stellt eine vielversprechende Möglichkeit dar, die Chemotherapeutika-Dosis zu reduzieren oder deren Wirksamkeit zu erhöhen. Langfristig könnte das die bislang relativ schlechte Prognose bei okulären Melanomen verbessern. Die hier vorliegenden Daten geben zwar Hinweise auf einen möglicherweise therapeutisch nutzbaren Effekt, allerdings sollte dieser Effekt zu-nächst mit weiteren Experimenten überprüft werden. Denkbare nächste Schritte wä-ren die Untersuchung weiterer Chemotherapeutika, Zellkultur mit Sphäroiden und an-schließend in vivo-Experimente in einem Tiermodell.