ANALISI IMMUNOISTOCHIMICA E MOLECOLARE DEL PATTERN DI RIMODELLAMENTO OSSEO NELL�ALVEOLO POST-ESTRATTIVO
Creators: name: CANCIANI, ELENA
Publisher: name: Universit� degli Studi di Milano
Year: 2014

description: Analisi immunoistochimica e molecolare del pattern di rimodellamento osseo nell?alveolo post-estrattivo
SCOPO
Il sito dell?alveolo post-estrattivo � un modello ampiamente utilizzato nello studio del rimodellamento osseo fisiologico o patologico e del comportamento di biomateriali per la rigenerazione ossea. 
Lo scopo di questo progetto � stato quello di caratterizzare il pattern morfologico e molecolare dei marker coinvolti nel rimodellamento osseo alveolare, prima e dopo l?estrazione dentale, ed eventualmente in combinazione con un biomateriale utilizzato per preservare l?anatomia del sito ai fini riabilitativi.
MATERIALI E METODI 
Per questo studio sono stati arruolati 36 pazienti, suddivisi in 3 gruppi indipendenti: osso alveolare (OA, n=14), guarigione spontanea (GS, n=10) e biomateriale (B, n=12). Durante la seduta di estrazione dentaria sono state raccolte 2 piccole biopsie per paziente per effettuare l?analisi morfologica (tessuto decalcificato) e molecolare (mRNA retro-trascritto in cDNA e Real Time-PCR) (gruppo OA). Dopo 4-6 mesi dall?estrazione dentale, sono state prelevate 3 biopsie per paziente, in concomitanza dell?inserimento dell?impianto dentale, nel sito guarito spontaneamente (GS) o mediante biomateriale (B) (idrossiapatite arricchita con magnesio). Per ogni gruppo sono state effettuate le stesse analisi del gruppo OA e l?analisi istomorfometrica (tessuto calcificato). L?analisi morfologica ha previsto: colorazione Ematossilina/Eosina per osservare un eventuale infiltrato infiammatorio, colorazione immunoistochimica dei fattori caratterizzanti il pattern di rimodellamento osseo (TNF-?, IL-6, RANK, RANKL e OPG), espressa come marcatura percentuale. L?analisi molecolare � stata effettuata sugli stessi marcatori normalizzati sul gene housekeeping 18S. Sui tessuti ottenuti per usura, � stata valutata l?osteointegrazione del biomateriale e la componente minerale mediante la valutazione delle frazioni di volume (stereologia). Per ciascun parametro sono state calcolate la media e la deviazione standard; � stato utilizzato il test di Kruskal Wallis (p&lt;0,05) per valutare le eventuali differenze tra i 3 gruppi per ogni parametro e successivo test post hoc di Wilcoxon (p&lt; 0,05/3).
RISULTATI
All?osservazione i campioni raccolti non presentavano n� anomalie strutturali n� infiltrato infiammatorio. Sia l?analisi immunoistochimica (AI) che molecolare (AM) ha mostrato un incremento per tutti i biomarker. AI: I tre gruppi erano significativamente differenti per il marcatore TNF-? (p&lt;0.05), RANK (p&lt;0.01), IL-6 e RANKL (p&lt;0.001). Il test post hoc ha mostrato una differenza tra OA e B per RANK (p? 0.01), IL-6 e RANKL (p ?0.001); tra GS e B per IL-6 (p?0.01). AM: Il test di Kruskal Wallis ha mostrato differenze tra i gruppi per IL-6 (p?0.05), RANKL e OPG (p?0.001); il test post hoc ha riscontrato una significativa differenza tra OA e B per IL-6 (p?0.01); OA e GS per RANKL e OPG (p?0,001); tra GS e B per IL-6 e RANKL (p?0,01), OPG (p?0,001). Il rapporto RANKL/OPG ha mostrato una tendenza alla riduzione dell?osteoclastogenesi nel gruppo B. L?analisi istomorfometrica ha mostrato un?alta percentuale di componente mineralizzata nel gruppo con il biomateriale; tutte le particelle innestate erano circondate da osso rigenerato che creava ponti tra di esse. 
CONCLUSIONI
Rispetto al rimodellamento fisiologico tutti i marker indagati hanno mostrato un incremento in entrambi i gruppi in fase di guarigione dell?alveolo post-estrattivo. Nei siti trattati con il biomateriale si � osservato un aumento della citochina IL-6 ed una diminuzione di RANK, RANKL e OPG rispetto alla guarigione spontanea. Questo pu� significare un rallentamento della ricostituzione del sito anatomico, dovuto ad una possibile down-regulation dell?osteoclastogenesi. Tuttavia, l?analisi della struttura dell?alveolo ha mostrato una buona rigenerazione ossea, in entrambi i gruppi; pertanto il biomateriale analizzato pu� essere considerato un valido ausilio per la preservazione dell?alveolo post-estrattivo.