Συσχέτιση της ανοσοτροποποιητικής δράσης των πολυακόρεστων λιπαρών οξέων μακράς αλύσου με τον πολυμορφισμό -1082 A/G της ιντερλευκίνης 10 σε παιδιά με τροφική αλλεργία
Creators: name: Νεδελκοπούλου, Ναταλία N.
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2020
Subjects: Τροφική Αλλεργία
Ιντερλευκίνη 10 (IL-10)
Πολυακόρεστα λιπαρά οξέα μακράς αλύσου, (LCPUFA)
Πολυμορφισμός IL-10 -1082 A/G
Food allergy
Interleukin 10 (IL-10)
Long chain polyunsaturated fatty acids, (LCPUFA)
IL-10 -1082 A/G gene polymorphism

description: Η μελέτη αποτελεί την πρώτη «in vitro μελέτη» σε παιδιά με τροφική αλλεργία και υγιείς μάρτυτες που διερεύνησε τη συσχέτιση της επίδρασης του γονιδιακού πολυμορφισμού IL-10-1082 A/G με την ανοσοτροποποιητική δράση των LCPUFA. Την ομάδα μελέτης αποτέλεσαν 62 παιδιά 1-5 ετών με IgE-μεσολαβούμενη τροφική αλλεργία. Στην ομάδα ελέγχου συμμετείχαν 92 παιδιά ηλικίας 1-7.5 ετών με αρνητικό ιστορικό ατοπίας και εργαστηριακό έλεγχο για κοινά τροφικά αντιγόνα. Οι συμμετέχοντες παρακολουθήθηκαν προοπτικά για διάστημα 12 μ-7.5 έτη. Η μελέτη περιλαμβάνει δύο στάδια. Στο πρώτο στάδιο πραγματοποιήθηκε ο προσδιορισμός του πολυμορφισμού IL-10 -1082A/G με τη μέθοδο Sanger. Προσδιορίστηκαν οι συχνότητες των γονοτύπων και αλληλόμορφων του πολυμορφισμού της IL-10. Συσχετίστηκαν οι γονοτύποι με τον κίνδυνο εμφάνισης τροφικής αλλεργίας, με κλινικές, εργαστηριακές παραμέτρους και συνοδά ατοπικά νοσήματα. Στο δεύτερο στάδιο, πραγματοποιήθηκαν καλλιέργειες λεμφοκυττάρων. Σε 36 παιδιά (21 με τροφική αλλεργία, 15 μάρτυρες) έγινε εκ νέου αιμοληψία και πραγματοποιήθηκαν καλλιέργειες λεμφοκυττάρων από το περιφερικό αίμα πριν και μετά από διέγερση με LCPUFA σε 4 διαφορετικές συνθήκες: μετά από προσθήκη αραχιδονικόυ οξέος (ΑΑ, ω-6), δοκοσαεξανοϊκού οξέος (DHA ω-3), συνδυασμό ΑΑ/DHA σε αναλογία 1:1 και συνδυασμό ΑΑ/DHA σε αναλογία 3:1. Προσδιορίστηκαν ο αριθμός των Τregs, το επίπεδο της IL-10 στο υπερκείμενο των καλλιεργειών και η έκφραση του υποδοχέα της IL-10 στην επιφάνεια των CD4+ T λεμφοκυττάρων στις καλλιέργειες πριν (δείγματα ελέγχου) και μετά την επίδραση των LCPUFA. Ο πλυθυσμός της μελέτης βρέθηκε σε ισορροπία Hardy- Weinberg. Δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές διαφορές ως προς την κατανομή των γονοτύπων και τη συχνότητα των αλληλόμορφων μεταξύ των αλλεργικών παιδιών και των μαρτύρων (p=0.528 και p=0.642 αντίστοιχα).Ο γονότυπος -1082 ΑΑ σχετίστηκε σχεδόν με διπλάσια συχνότητα μέτριων-σοβαρών αλλεργικών εκδηλώσεων (p= 0.0487, OR= 3.518, 95% CI: 1.074-11.764) και σχεδόν πενταπλάσια συχνότητα συνύπαρξης άσθματος (p=0.0237, OR=5.318, 95% CI:1.271-22.258). Πολυπαραγοντική μελέτη ανέδειξε ότι ο γονότυπος -1082ΑΑ αποτελεί ανεξάρτητο παράγοντα για την παραγωγή της IL-10 και συσχετίστηκε με υψηλότερα επίπεδα IL-10 στον ορό. Σημαντικό εύρημα της μελέτης είναι η υπερέκφραση του υποδοχέα της IL-10 στην επιφάνεια των CD4+ T-λεμφοκυττάρων στα παιδιά με τροφική αλλεργία σε σχέση με τους υγιείς μάρτυρες (p&lt;0.0001), καθώς και το σημαντικά υψηλότερο ποσοστό των γδ T κυττάρων που διαπιστώθηκε στα παιδιά με τροφική αλλεργία σε σχέση με τους υγιείς μάρτυρες ίδιας ηλικίας και φύλου (p=0.0116). Κάθε λιπαρό οξύ ξεχωριστά, όσο και οι συνδυασμοί τους οδήγησαν σε σημαντική αύξηση του αριθμού των Tregs και στις 2 ομάδες (p&lt;0.05 για όλες τις συγκρίσεις). Κάθε λιπαρό οξύ ξεχωριστά και η αναλογία DHA/AA 1:3 οδήγησε σε σημαντική αύξηση του επιπέδου της IL-10 στο υπερκείμενο των καλλιεργειών και για τις δύο ομάδες, με σημαντικότερη αύξηση στους μάρτυρες (p&lt;0.0001). Ο γονότυπος -1082 ΑΑ συσχετίστηκε με σημαντικά μεγαλύτερη αύξηση των επιπέδων της IL-10 μετά την επίδραση των LCPUFA στις καλλιέργειες των λεμφοκυττάρων τόσο στους ασθενείς (p=0.0174) όσο και στους μάρτυρες (p=0.015). Διαπιστώθηκε ελάττωση της έκφρασης του υποδοχέα της IL-10 για τους τέσσερις συνδυασμούς των LCPUFA χωρίς αυτή η διαφορά να είναι στατιστικά σημαντική. Η παρούσα μελέτη και τα in vitro πειράματα επιβεβαιώνουν την ανοσοτροποποιητική δράση των LCPUFA που φαίνεται ότι εξαρτάται από το ανοσολογικό υπόβαθρο των ατόμων και τη γενετική ποικιλομορφία.
description: The present study is the first in vitro study in children with food allergy and healthy controls that investigatesthe association between IL-10 -1082A/G and the immunomodulatory effect of LCPUFA. The study group included 62 children 1-5y with IgE- mediated food allergy. The control group included 92 children 1-7.5y with negative history of atopy and negative allergy tests. The participants were followed up prospectively for 12m- 7.5y. The study consists of two parts. In the first part, IL-10-1082A/G was determined by Sanger sequencing. We determined the frequencies of alleles and genotypes for each group and investigated the association with the risk of developing food allergy, with clinical, surrogate parameters and concomintant allergic diseases. In the second part, lymphocyte cultures were carried out. We collected fresh blood from 36 participants (21 with food allergy, 15 healthy controls) and performed lymphocyte cultures before and after the interaction with LCPUFA. We created 4 different conditions: interaction with AA (n-6), interaction with DHA (n-3), combination of AA and DHA (1:1 ratio) and combination of AA and DHA (3:1 ratio). We determined the number of Tregs, IL-10 level in the supernatant and the expression of IL-10 receptor (IL-10R) on the surface of CD4+ T-lymphocytes in the cultures before and after the interaction with LCPUFA. The Hardy- Weinberg equilibrium was satisfied for both groups. Analysis of the genotype distributions and allele frequencies showed that there is no significant difference between the two groups (p=0.528 and p=0.642, respectively). The results indicated that -1082A/G was associated with moderate to severe symptoms of FA (p= 0.0487, OR= 3.518, 95% CI: 1.074-11.764). The genotype -1082 AA was associated with a higher prevalence of atopic asthma in children with FA (p=0.0237, OR=5.318, 95% CI:1.271-22.258). A multiple regression analysis model confirmed that the genotype -1082AA is an independent predictor of the serum IL-10 levels and was associated with higher levels of serum IL-10. Another important finding is the higher expression of IL-10R on the surface of CD4+ T lymphocytes in children with food allergy compared with healthy controls (p&lt;0.0001) and the higher percentage of γδ Τ-cells in children with food allergy compared with age and sex-matched healthy controls (p=0.0116). Each LCPUFA separately and their combinations resulted in significantly increased number of Tregs in both groups (p&lt;0.05 applied to each combination). The interaction of each LCPUFA and the combination DHA/AA 1:3 showed that the level of IL-10 was significantly increased in the supernatant in both groups with more apparent increase in the control group (p&lt;0.0001). The genotype -1082AA was correlated with significantly higher level of IL-10 in the supernatant of the lymphocyte cultures in both FA patients (p=0.0174) and healthy controls (p=0.015). After the addition of LCPUFA to the lymphocyte cultures, all four combinations of LCPUFA resulted in decreased expression of IL-10R without this reduction reaching the level of significance. The present study and the in vitro experiments confirmed the immunomodulatory effect of LCPUFA that seems to be influenced by the immunological profile of the individuals and the genetic variation.