Βελτιστοποίηση πρωτεϊνικών δοκιμασιών για διαφοροδιάγνωση νευροεκφυλιστικών νόσων
Creators: name: Χατζηευσταθίου, Αθανασία Κωνσταντίνου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2020
Subjects: Πρωτεϊνικές δοκιμασίες
Διαφοροδιάγνωση
Νευροεκφυλιστικοί νόσοι
Protein assays
Diagnosis
Neurodegenerative diseases

description: Η παρούσα μεταπτυχιακή εργασία είχε ως αντικείμενο μελέτης την ανάλυση δειγμάτων Εγκεφαλονωτιαίου Υγρού (ΕΝΥ) για την ποσοτικοποίηση επιλεγμένων πρωτεϊνικών βιοδεικτών με πιθανή διαγνωστική αξία. Σκοπός, είναι η βελτιστοποίηση και εκτίμηση της αποτελεσματικότητάς τους για τη διάγνωση νευροεκφυλιστικών διαταραχών, και πιο συγκεκριμένα της πιο κοινής νόσου prion του ανθρώπου (sporadic Creutzfeldt-Jacob Disease - sCJD) και παρκινσονικών συνδρόμων (Nόσος Parkinson - PD, Dementia with Lewy Bodies - DLB, Multiple System Atrophy - MSA). Χρησιμοποιήθηκαν δυο κοόρτες δειγμάτων που περιλάμβαναν, δείγματα ΕΝΥ ασθενών με υποψία της νόσου sCJD (συλλογή ΑΠΘ) και ασθενών με συνουκλεϊνοπάθειες (PD, MSA, DLB, συλλογή ΙΙΒΕΑΑ). Η πρωτεΐνη 14-3-3 και η πρωτεΐνη uPAR (urokinase-type Plasminogen Activator), εκτιμήθηκαν ως προς τη συμβολή τους στην αύξηση της βεβαιότητας διάγνωσης της sCJD. Η πιθανή διαγνωστική αξία της α-συνουκλεΐνης, της πρωτεΐνης tau και της YKL-40 εκτιμήθηκε σε παρκινσονσονικά σύνδρομα. Η πρωτεΐνη 14-3-3 ανιχνεύτηκε με ανοσοστύπωμα κατά Western. Οι υπόλοιποι βιοδείκτες ποσοτικοποιήθηκαν είτε με εφαρμογή μεθόδου ELISA (uPAR, α-συνουκλεΐνη), είτε με εφαρμογή της τεχνολογίας Luminex (α-συνουκλεΐνη, tau, YKL-40). H τεχνολογία Luminex που εφαρμόστηκε στηρίζεται στη χρήση παραμαγνητικών μικροσφαιριδίων, με χρωματική κωδικοποίηση, τα οποία είναι επικαλυμμένα με αντίσωμα έναντι του βιοδείκτη-στόχου, επιτρέποντας την ανοσοανίχνευση και ποσοτικοποίηση των υπό μελέτη πρωτεϊνικών μορίων. Τα αποτελέσματα που προέκυψαν υποδηλώνουν την τάση ανίχνευσης υψηλότερων επιπέδων της uPAR σε ασθενείς με sCJD σε σχέση με δείγματα ελέγχου που προέρχονται από ασθενείς με άλλες νευρολογικές διαταραχές. Επιπρόσθετα, διαπιστώθηκε τάση διαφοροποίησης των επιπέδων της α-συνουκλεΐνης μεταξύ των κατηγοριών παρκινσονικών συνδρόμων που μελετήθηκαν. Ειδικότερα διαπιστώθηκε στατιστικά σημαντική διαφοροποίηση μεταξύ PD και MSA. Περαιτέρω μελέτες αξιοποιώντας μεγαλύτερο αριθμό δειγμάτων αναμένεται να συμβάλλουν στην ασφαλέστερη εκτίμηση της διαγνωστικής αξίας των παραπάνω βιοδεικτών.
description: The aim of the current dissertation, is the analysis of Cerebrospinal fluid samples (CSF) for the quantification of selected protein biomarkers with potential diagnostic value. The main goal is to evaluate their effectiveness for the diagnosis of neurodegenerative disorders, and more specifically the diagnosis of the most common prion disease in humans, sCJD (sporadic Creutzfeldt-Jakob Disease - sCJD) and other Parkinsonian syndromes (Parkinson Disease - PD, Dementia with Lewy Bodies - DLB, Multiple System Atrophy - MSA). During the experimental procedure, two different sample cohorts were used. The first one derived from the AUTH collection, which consists of CSF samples of patients with suspected sCJD. And the other one were samples from the BRFAA collection of patients with synucleinopathies (PD, DLB, MSA). 14-3-3 and uPAR (urokinase-type Plasminogen Activator Receptor) proteins were evaluated for their increased diagnostic accuracy of suspected sCJD. While, a-synuclein, tau and YKL-40 proteins were evaluated for their increased diagnostic accuracy and discrimination potential of the Parkinsonian syndromes. Protein 14-3-3 was detected by immunoblotting, while the remaining biomarkers were quantified either by ELISA (uPAR, a-synuclein) or via Luminex technology (a-synuclein, tau, YKL-40). Luminex technology, is based on color-coded paramagnetic microspheres, which are coated with an antibody against the target-biomarker, allowing the immunodetection and quantification of the target protein molecules. The results suggest a tendency to detect higher levels of uPAR in patients with sCJD compared to neurological controls (patients with other neurological disorders that in this case are used as controls versus patients with sCJD). In addition, between the subcategories of Parkinsonian syndromes we observed a tendency to differentiate α-synuclein levels. Interestingly, statistically significant differences were observed between DLB and MSA. Further studies, utilizing larger number of samples, are expected to contribute to increased accuracy and reliable evaluation of the diagnostic potential of these biomarkers.