Αξιολόγηση της δράσης μικρομοριακών ενώσεων ως αναστολέων της αλληλεπίδρασης των πρωτεϊνών TRAF Με την ογκογονική πρωτεΐνη LMP1 του ιού Epstein-Barr
Creators: name: Καρυπίδου, Νικολέττα Ευστάθιου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2022
Subjects: Αναστολείς
Ογκογόνοι ιοί
Β-λεμφοκύτταρα
LMP1
TRAF
Inhibitors

description: Ο ιός Epstein-Barr (EBV) είναι ένας ευρύτατα διαδεδομένος ανθρώπινος ερπητοϊός, με την ικανότητα να μολύνει κυρίως Β-λεμφοκύτταρα. Η αρχική μόλυνση με τον ιό συνήθως παρατηρείται σε μικρή ηλικία και είναι στις περισσότερες περιπτώσεις ασυμπτωματική. Σε προχωρημένη ηλικία η μόλυνση ευθύνεται για την εμφάνιση της λοιμώδους μονοπυρήνωσης, ενώ υπό προϋποθέσεις η εμμένουσα μόλυνση σχετίζεται με την εμφάνιση πληθώρας αιμοποιητικών, επιθηλιακών και μεσεγχυματικών νεοπλασιών, οι οποίες αναμένεται ότι θα συνεχίσουν να εμπλουτίζονται με νέες στο μέλλον, αν και ο ακριβής ρόλος του ιού στην παθογένεια αρκετών από αυτές παραμένει υποθετικός ή όχι απόλυτα κατανοητός. Η εμπλοκή του ιού EBV σε τόσο μεγάλο αριθμό υπερπλαστικών ή κακοήθων ανθρώπινων νόσων, συνεπάγεται πλήθος διαφορετικών θεραπευτικών αναγκών, οι οποίες μέχρι στιγμής δεν έχουν καλυφθεί. Η φαρμακολογική παρεμπόδιση των μονοπατιών που ενεργοποιούνται από την κύρια ογκογονική ιική πρωτεΐνη LMP 1, όπως αυτό του NF-κΒ και της JNK, έχει δώσει υποσχόμενα αποτελέσματα μέχρι στιγμής. Σε αυτό το πλαίσιο, η σύγχρονη έρευνα έχει εστιαστεί κυρίως στην αναζήτηση μικρομοριακών χημικών αναστολέων της αλληλεπίδρασης της LMP 1 με διάφορους σηματοδοτικούς παρτενέρ. Στην παρούσα εργασία, έγινε in vitro αξιολόγηση μικρομοριακών χημικών ενώσεων που συντέθηκαν από την ερευνητική ομάδα της Αναπληρώτριας Καθηγήτριας του Τμήματος Χημείας του Α.Π.Θ. Σαρλή Βασιλικής έπειτα από in silico σχεδιασμό έτσι ώστε να στοχεύουν σε αναστολή της αλληλεπίδρασης του ομόλογου του CD40 καρβοξυτελικού άκρου της LMP 1 με την TRAF 3, και κατ’επέκταση της ενεργοποίησης του εναλλακτικού NF-κΒ μονοπατιού. Δεκαεννέα συνολικά ενώσεις δοκιμάστηκαν ως προς την ικανότητά τους να αναστέλλουν την ανάπτυξη EBV+ και ΕBV- καρκινικών κυτταρικών σειρών με τη δοκιμασία ΜΤΤ και τέσσερις από αυτές ελέγχθηκαν περαιτέρω με πειράματα συγκατακρήμνισης της TRAF 3 και του καρβοξυτελικού άκρου της LMP 1 σημασμένου με την τρανσφεράση της γλουταθειόνης GST. Αν και δεν προέκυψαν ενθαρρυντικά στοιχεία για τη δράση τους, οι ενώσεις αυτές αποτέλεσαν τη βάση για βελτιωμένες εκδόσεις νέας γενιάς, οι οποίες βρίσκονται ήδη υπό δοκιμή.
description: Epstein-Barr virus (EBV) is a widespread human herpes virus, with a strong tropism for B-lymphocytes. The initial viral infection usually occurs at a young age and is in most cases asymptomatic. In older age the infection causes infectious mononucleosis while, under certain conditions, persistent infection is associated with a variety of hematopoietic, epithelial, and mesenchymal tumors. More such associations are expected to be revealed in the future, although the exact role of the virus in the pathogenesis of several of them remains hypothetical or not fully understood. The involvement of the EBV virus in such many hyperplastic or malignant human diseases implies several different therapeutic needs, which have not yet been met. Pharmacological inhibition of pathways activated by the major oncogenic viral protein LMP 1, such as that of NF-κB and JNK, has yielded promising results so far. In this context, current research has focused primarily on the search for micromolecular chemical inhibitors of LMP 1 interactions with various signaling partners. Our study is an in vitro evaluation of such micromolecular chemical compounds, synthesized by the research team of the Associate Professor of the Department of Chemistry of AUTh Sarli Vassiliki, in silico designed to aim at inhibiting the interaction of the CD40 homologue carboxy terminus of LMP 1 with TRAF 3, and subsequently the activation of the alternative NF-κB pathway. A total of nineteen compounds were tested for their ability to inhibit the viability of EBV+ and EBV- cancer B-cell lines by the MTT assay, and four of them were further tested by co-precipitation experiments of TRAF 3 and the GST-tagged carboxy terminus of LMP1. Although no encouraging evidence of their inhibiting action occured, these compounds formed the basis for improved next-generation versions, which are already being tested.