ROLE OF PROGESTERONE RECEPTOR MEMBRANE COMPONENT 1 (PGRMC1) IN CONTROLLING GERMINAL AND SOMATIC CELL DIVISION AND FUNCTION.
Creators: name: TERZAGHI, LAURA
Publisher: name: Universit� degli Studi di Milano
Year: 2018

description: La sub-fertilit� rappresenta uno dei principali problemi che l'industria lattiero-casearia si trova ad affrontare attualmente. Si tratta di un problema multifattoriale che dipende da diversi aspetti della funzione riproduttiva. La qualit� dell'ovocita, determinata durante la follicologenesi, � sicuramente cruciale per ottenere risultati riproduttivi ottimali. Per migliorare la fertilit� femminile nel bovino � fondamentale definire i fattori e i meccanismi che determinano la qualit� del gamete femminile, in quanto il declino della funzione riproduttiva in questa specie � dovuto principalmente alla scarsa qualit� degli ovociti. In particolare, � importante conoscere quali proteine regolano la meiosi, la fecondabilit� e lo sviluppo embrionale dell'ovocita. In questo progetto, abbiamo considerato principalmente il ruolo del Progesterone Receptor Membrane Component-1 (PGRMC1) sia nell'ovocita che nel compartimento follicolare, considerato che il dialogo tra compartimento germinale e compartimento somatico � uno dei fattori chiave coinvolti nell'acquisizione della competenza allo sviluppo del gamete femminile. Il PGRMC1 � una proteina multifunzionale ed altamente conservata in specie anche filogeneticamente distanti. Nei mammiferi � espressa in diversi sistemi, compresi gli organi riproduttivi, e localizza in diversi compartimenti subcellulari. Tuttavia, il suo ruolo e il preciso meccanismo d'azione in ogni sistema e/o compartimento subcellulare non sono ancora del tutto conosciuti. La parte pi� considerevole di questo progetto di dottorato riguarda gli studi effettuati sul ruolo del PGRMC1 nella divisione cellulare, data la sua localizzazione a livello di fuso mitotico e meiotico. Abbiamo dimostrato che la deplezione del PGRMC1 determina difetti nella divisione cellulare e la sua interazione con l'Aurora chinasi B (AURKB) indica che potrebbe svolgere la sua azione durante la citodieresi, l'ultima fase della divisione. Durante la maturazione meiotica, abbiamo valutato anche il suo ruolo nel mediare l'azione del progesterone (P4) confrontando il suo effetto con quello del recettore nucleare del progesterone (nPGR). L'inibizione di entrambi i tipi di recettore determina lo stesso effetto sull'organizzazione della piastra metafasica e sulla competenza allo sviluppo dell'ovocita, ma in fasi differenti. Inoltre, abbiamo testato l'ipotesi che il PGRMC1 possa modulare la funzione del nucleolo. Studi di immunofluorescenza hanno confermato la presenza del PGRMC1 nel nucleolo di cellule della granulosa (bGC) e negli ovociti di bovino, nonch� la colocalizzazione con la nucleolina, la proteina nucleolare pi� abbondante che svolge importanti funzioni in questo compartimento subcellulare. Inoltre, la down-regolazione del PGRMC1 determina uno spostamento della nucleolina dal nucleolo al nucleoplasma suggerendo un'associazione funzionale tra queste due proteine. Questa interazione � probabilmente mediata dalla presenza di ulteriori molecole in quanto successivi esperimenti di "in-situ proximity ligation" mostrano che le due proteine non interagiscono direttamente. Oltre al tema principale di questo progetto, la divisione cellulare � uno dei processi pi� importanti anche nel cancro e l'espressione del PGRMC1 � elevata in molti tipi di tumore nell'uomo. Per questo abbiamo intrapreso uno studio preliminare per caratterizzare la sua espressione nei diversi tipi di tumore mammario di cane. In base ai nostri risultati, l'espressione del PGRMC1 diminuisce con l'aumentare della malignit� del tumore e le diverse isoforme di PGRMC1 sono presenti sia nel tessuto sano che in quello neoplastico. In conclusione, i nostri risultati suggeriscono che il PGRMC1 pu� avere un ruolo nel compartimento follicolare, in particolare sia nella mitosi che nella meiosi. La sua funzione potrebbe essere legata alla sua localizzazione nucleolare, nonch� alla sua capacit� di mediare l'azione del P4 durante la meiosi dell'ovocita. Il suo ruolo come regolatore della divisione cellulare pu� essere rilevante anche in alcune patologie quali il cancro. Ulteriori studi saranno diretti a valutare i meccanismi di azione molecolari tramite i quali il PGRMC1 agisce in questi processi al fine di ampliare la nostra conoscenza di questa proteina poliedrica.