Κλωνοποίηση και έκφραση γλυκοπρωτεϊνών του ιού του απλού έρπητα τύπου 1 (HSV-1) και του έρπητα ζωστήρα (VZV) με σκοπό τη δημιουργία πρότυπου ορολογικού ελέγχου των ιών αυτών
Creators: name: Σαββόγλου, Κυριάκος Ηλία
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2007
Subjects: Ιός του απλού έρπητα τύπου Ι
Ιός του έρπητα ζωστήρα
Ορολογικός έλεγχος
Ανοσοαποτύπωμα
Μοριακές ταινίες
HSV-1
VZV
Western blot
Serological test

description: Οι ιοί του απλού έρπητα τύπου 1 (HSV-1) και του έρπητα ζωστήρα (VZV) είναι ευρέως διαδεδομένοι στον άνθρωπο και παρουσιάζουν μεγάλο ποσοστό μολυσματικότητας. Οι δύο αυτοί ιοί εγκαθιδρύουν λανθάνουσα μόλυνση στα γάγγλια του νευρικού συστήματος. Η διάγνωσή τους μπορεί να επιτευχθεί είτε κατά την οξεία φάση της νόσου με τη χρήση κυτταροκαλλιεργειών όπου αντιχνεύεται η παρουσία ιοσωμάτων στον οργανισμό είτε με τη χρήση ορολογικών ελέγχων μέσω της τεχνικής του ανοσοαποτυπώματος western blot όπου εντοπίζεται η παρουσία αντισωμάτων ενάντια στους ιούς αυτούς και κυρίως ενάντια στις γλυκοπρωτεϊνες τους. Πλεονέκτημα των τελευταίων αποτελεί η δυνατότητα ανίχνευσης αντισωμάτων εναντίον τους ακόμη και μετά από μεγάλο χρονικό διάστημα από την είσοσο του ιού στον οργανισμό. Στην παρούσα εργασία δημιουργήθηκαν μοριακές ταινίες με τη χρήση αντιγονικών τμημάτων των γλυκοπρωτεϊνών gB και gD του ιού HSV-1 και τμημάτων των γλυκοπρωτεϊνών gE(ORF68) και gL(ORF60) του ιού VZV και πραγματοποιήθηκε έλεγχος ορών εθελοντών με σκοπό την ανίχνευση της παρουσίας αντισωμάτων ενάντια στις παραπάνω πρωτεϊνες. Παράλληλα επιτεύχθηκε παραγωγή αντισωμάτων εναντίον των γλυκοπρωτείνών gB και gD σε κουνέλια και χρήση τους ως θετικών μαρτύρων στον ορολογικό έλεγχο. Τα αντίστοιχα γονιδιακά τμήματα κλωνοποιήθηκαν σε φορείς έκφρασης, τα τμημάτων πρωτεϊνών εκφράστηκαν σε βακτήρια και ακολούθως καθαρίστηκαν με τη χρήση χρωματογραφίας συγγένειας. Στη συνέχεια, δημιουργήθηκαν οι μοριακές ταινίες και ακολούθησε ο έλεγχος των ορών εθελοντών
description: Herpes Simplex Virus Type I (HSV-1) and Varicella Zoster Virus (VZV) are widely spread human pathogens. The can be really infectious because of their capacity to establish a latency phase in the nervous system. Their diagnosis can be achieved either during the active phase of the disease by measuring their cytopathic effects on cultured cells or during the latency phase by using serological tests in order to detect the presence of circulating serum antibodies directed to virus' glycopoteins. The last technique provides the ability to detect host response even after a long period of the virus' entry in the human organism. The goal of this project was the use of the antigenic regions of HSV-1 glycoproteins B and D(gB and gD) and VZV glycoproteins E(ORF68) and L(ORF60) for the production of molecular strips in order to develop a model serological test and check the serum of volunteers for the presence of viral antibodies. At the same time, antibodies against glycoprotein B and glycoprotein D were produced in rabbits and used as a positive control for the serological test. The appropriate gene parts were cloned at expression vectors and the recombinant peptides were produced in bacterial cultures. These peptides were purified with affinity chromatography and used for the production of the moleculat strips to perform the serological test