Ανίχνευση της Ε7 ογκοπρωτεΐνης και του DNA του ιού των ανθρωπίνων θηλωμάτων ως μεθόδων δευτερογενούς πρόληψης του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας
Creators: name: Χατζησταματίου, Κίμων Σ.
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2017
Subjects: Πρόληψη καρκίνου τραχήλου μήτρας
Ιός των ανθρωπίνων θηλωμάτων
Ε7 πρωτεΐνη
Προκαρκινική βλάβη τραχήλου μήτρας
Cervical cancer prevention
Human papillomavirus
E7 protein
Precancerous cervical lesion

description: Η παρούσα διατριβή είχε ως στόχο την ανάπτυξη και αρχική διαγνωστική αξιολόγηση μίας νέας μεθόδου ανίχνευσης της Ε7 πρωτεΐνης του HPV ως μεθόδου διαλογής των HPV θετικών γυναικών προς κολποσκόπηση. Γυναίκες, 30-60 ετών υποβλήθηκαν σε λήψη κολποτραχηλικού επιχρίσματος, που εξετάστηκε κυτταρολογικά (κυτταρολογία υγρής φάσης) αλλά και ως προς την ανίχνευση high-risk (hr) HPV DNA, σύμφωνα με τη μέθοδο Multiplex Genotyping (MPG). Γυναίκες θετικές για τουλάχιστο μία από αυτές τις δοκιμασίες υποβλήθηκαν σε κολποσκόπηση και όπου χρειαζόταν, σε ιστοληψία. Σε έναν αριθμό από αυτές τις γυναίκες έγινε ανίχνευση της Ε7 πρωτεΐνης του HPV (sandwich ELISA) χρησιμοποιώντας πέντε διαφορετικές δοκιμασίες ανίχνευσης, που αντιστοιχούσαν σε διαφορετικό συνδυασμό τύπων HPV, τις εξής: recomWell HPV 16/18/45 KJhigh, recomWell HPV 39/51/56/59, recomWell HPV 16/31/33/35/52/58, recomWell HPV HR screen και recomWell HPV 16/18/45 KJlow. Σε 1.723 από τις 1.762 γυναίκες της μελέτης ο επιπολασμός hrHPV ήταν 17,7% και των τύπων HPV16/18, 9,6%. Η κυτταρολογία είχε αποτέλεσμα ASCUS+ (Atypical Squamous Cells of Undetermined Significance or worse) στο 7,6%. Τραχηλική Ενδοεπιθηλιακή Νεοπλασία βαθμού 2 ή χειρότερου (Cervical Intraepithelial Neoplasia grade 2 or worse – CIN2+) ανιχνεύθηκε σε 28 περιπτώσεις (1,6%). Η ευαισθησία της κυτταρολογίας (ASCUS+) και του HPV DNA test για την ανίχνευση CIN2+ ήταν 50,0% και 100,0% και η ειδικότητα 94,49% και 85,49% αντίστοιχα. Η προσέγγιση κατά την οποία παραπομπή προς κολποσκόπηση γίνονταν μόνο για HPV16/18 θετικές γυναίκες και από τις υπόλοιπες hrHPV θετικές μόνο σε όσες υπήρχε θετική κυτταρολογία παρουσίασε ευαισθησία 78,57% και θετική προγνωστική αξία 13,17%. Η ανάλυση, σχετικά με τη διαλογή των HPV θετικών γυναικών έγινε επί 1.473/1.723, για τις οποίες υπήρχε αποτέλεσμα για την Ε7 πρωτεΐνη. Στις HPV16/18 θετικές γυναίκες ανιχνεύθηκαν 16 CIN2+. Η μη διαλογή των γυναικών αυτών προς κολποσκόπηση παρουσίασε ευαισθησία 100,0%, θετική προγνωστική αξία 11,11% ενώ ο αριθμός των κολποσκοπήσεων που χρειάστηκε για την ανίχνευση μίας περίπτωσης CIN2+ ήταν 9,0. Η ευαισθησία ανίχνευσης της Ε7 πρωτεΐνης ως μεθόδου διαλογής των HPV16/18 θετικών γυναικών προς κολποσκόπηση ήταν 75,0-100,0% με θετική προγνωστική αξία 16,86-26,08% ενώ ο αριθμός κολποσκοπήσεων για τη διάγνωση μίας περίπτωσης CIN2+ ήταν 3,83-5,93, ανάλογα με την Ε7 δοκιμασία. Η κυτταρολογία ως μέθοδος διαλογής των HPV θετικών γυναικών, εκτός HPV16/18, στην ομάδα των οποίων ανιχνεύθηκαν 11 περιπτώσεις CIN2+, παρουσίασε ευαισθησία 45,45%, θετική προγνωστική αξία 27,77%, ενώ ο αριθμός των απαραίτητων κολποσκοπήσεων για τη διάγνωση μίας περίπτωσης CIN2+ ήταν 3,6. Οι τιμές αυτών των δεικτών για τις δοκιμασίες ανίχνευσης της Ε7 πρωτεΐνης ήταν 72,72-100,0%, 16,32-25,0% και 4,0 έως 6,12 ανάλογα με τη δοκιμασία. Συμπερασματικά, τα αποτελέσματα της διατριβής, υποστηρίζουν τη χρήση του HPV DNA test ως μεθόδου αρχικού ελέγχου για την πρόληψη του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας, με ταυτόχρονη HPV16/18 τυποποίηση και κυτταρολογία για τις γυναίκες που είναι αρνητικές για HPV16/18 αλλά θετικές για κάποιον άλλο τύπο υψηλού κινδύνου του HPV. Επιπλέον, υποστηρίζεται η χρήση της ανίχνευσης της Ε7 πρωτεΐνης του HPV για τη διαλογή των HPV16/18 θετικών γυναικών προς κολποσκόπηση σε σχέση με τη μη διαλογή, αλλά και για τη διαλογή των HPV θετικών γυναικών για τύπους HPV εκτός των HPV16/18, σε σχέση με την κυτταρολογία.
description: The presented thesis aimed to the development and initial clinical assessment of a novel assay for the detection of E7 HPV protein, which could serve as a method for the triage of HPV positive women to colposcopy. Women aged 30-60 years old were recruited and subjected to cervicovaginal sampling. Each sample was tested in terms of liquid-based cytology (LBC) and for the detection of high-risk (hr) HPV DNA using Multiplex Genotyping (MPG). Women positive for either of the two were referred for colposcopy, and when needed biopsy. A fraction of this female population was tested for E7 HPV protein, using five different assays (sandwich ELISA), corresponding to different combinations of HPV types, namely: recomWell HPV 16/18/45 KJhigh, recomWell HPV 39/51/56/59, recomWell HPV 16/31/33/35/52/58, recomWell HPV HR screen and recomWell HPV 16/18/45 KJlow. Diagnostic accuracy analysis was conducted, firstly, concerning primary screening on 1,723/1,762 women initially recruited. For this fraction of the population, hrHPV and HPV16/18 prevalence had been 17.7% and 9,6% respectively. The LBC result had been Atypical Squamous Cells of Undetermined Significance or worse (ASCUS+) in 7.6%. Cervical Intraepithelial Neoplasia grade 2 or worse (CIN2+) was detected in 28 cases (1.6%). The sensitivity of LBC and HPV DNA test for the detection of CIN2+ was 50.0% and 100.0% and the specificity was 94,49% and 85,49% respectively. The approach according to which women positive for HPV16/18 were referred to colposcopy and women positive for other hrHPVs, except HPV16/18, were referred to colposcopy only in case of positive LBC presented sensitivity 78,57% and positive predictive value (PPV) 13.17%. The analysis concerning the E7 testing for the triage of hrHPV positive women was conducted on 1,473/1,723 women, for whom there had been E7 tests results. Among HPV16/18 positive women there had been 16 cases of CIN2+. Performing no triage for HPV16/18 positive women to colposcopy yielded sensitivity 100.0%, PPV 11.11%, whereas the number of colposcopies to detect one case of CIN2+ was 9.0. The sensitivity of the E7 HPV protein detection as a method for the triage of HPV16/18 positive women to colposcopy was 75.0-100.0%, PPV was 16.86-26.08%, and the number of colposcopies to detect one CIN2+ case was 3.83-5.93, depending on the particular E7 test. Cytology, as a method of triage of hrHPV (non 16/18) positive women, a group including 11 CIN2+ cases, to colposcopy, presented sensitivity 45.45%, PPV 27.77%, whereas the number of colposcopies to detect one CIN2+ case was 3.6. The respective values of these indices for the detection of E7 protein was 72.72-100.0%, 16.32-25.0% and 4.0-6.12%, depending on the particular E7 test. As a conclusion, the results of the presented thesis support the use of HPV DNA testing with HPV16/18 genotyping and cytology for the hrHPV (non 16/18) positive women, as a method of primary cervical cancer screening. Moreover, the results support the use of E7 HPV detection tests for the triage of HPV16/18 positive women to colposcopy compared to no triage, and, also, for hrHPV (non 16/18) positive women compared to cytology.