Διαειδική – ενδοειδική παραλλακτικότητα και μυκοτοξικογόνος ικανότητα στελεχών του Alternaria spp. που σχετίζονται με τη σήψη του ενδοκαρπίου των μήλων:
Creators: name: Ντάσιου, Παναγιώτα Σεραφείμ
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2014
Subjects: Αλτερνάρια
Σήψη ενδοκαρπίου των μήλων
Μυκοτοξίνες
Alternaria
Core rot on apple
Mycotoxins

description: Ο μύκητας Alternaria spp. που προκαλεί τη σήψη του ενδοκαρπίου σε καρπούς μηλιάς, αποτελεί μια από τις σοβαρότερες μετασυλλεκτικές ασθένειες των μήλων στην Ελλάδα και έχει εξαιρετικά δυσμενείς επιπτώσεις στην παραγωγή αλλά και στην ποιότητα των καρπών. Πρόσφατη μελέτη έδειξε ότι στην ποικιλία Fuji αποτελεί το σημαντικότερο αίτιο μετασυλλεκτικών σήψεων. Σκοπός της εργασίας ήταν η ταυτοποίηση των αιτίων της ασθένειας, η μελέτη της γενετικής παραλλακτικότητας και ο προσδιορισμός της μυκοτοξικογόνου ικανότητας στελεχών του μύκητα Alternaria spp. που σχετίζονται με τη σήψη του ενδοκαρπίου. Για το σκοπό αυτό, μελετήθηκε ένα δείγμα 75 απομονώσεων του Alternaria spp. που είχαν απομονωθεί από καρπούς μηλιάς με συμπτώματα σήψης του ενδοκαρπίου. Κατά τη πρώτη σειρά πειραμάτων έγινε η ταυτοποίηση του είδους των απομονώσεων με αλληλούχιση των περιοχών ΙΤS1 και ITS2 του ριβοσωμικού DNA που έδειξε ότι οι απομονώσεις ανήκαν στα είδη Alternaria tenuissima και A. arborescens. Για τη μελέτη της φυλογενετικής ομοιότητας των απομονώσεων έγινε αλληλούχηση δύο επιπλέον γονιδιακών τόπων, του Alta 1 και του endoPG. Στη συνέχεια, η μέτρηση της ευπάθειας των ποικιλιών έγινε σε δύο θερμοκρασίες συντήρησης των μήλων, στους 0 και 23˚C όπου παρατηρήθηκαν διαφορές μεταξύ των ποικιλιών με περισσότερο ευπαθή την Fuji. Στη συνέχεια μελετήθηκαν τα μορφολογικά χαρακτηριστικά αλλά και η επίδραση της θερμοκρασίας στη μυκηλιακή αύξηση, όπου με βάση τα αποτελέσματα καταγράφηκαν διαφορές μεταξύ των 2 ειδών. Στη δεύτερη σειρά πειραμάτων, επιλέχθηκαν τυχαία 30 απομονώσεις και των δύο ειδών και μελετήθηκε η ικανότητα παραγωγής των μυκοτοξινών alternariol, alternariol monomethyl ether και tentoxin από αυτές. Οι μετρήσεις έγιναν τόσο in vivo σε καρπούς μήλου όσο και in vitro σε τεχνητό υπόστρωμα PDA. Η ανίχνευση και ο ποσοτικός προσδιορισμός των τριών μεταβολιτών έγινε σε σύστημα υγρής χρωματογραφίας υψηλής απόδοσης με ανιχνευτή διάταξης φωτοδιόδων (HPLC-DAD). Τα αποτελέσματα έδειξαν ότι στις περισσότερες από τις υπό μελέτη απομονώσεις ανιχνεύθηκαν και οι 3 μυκοτοξίνες τόσο στις in vivo όσο και στις in vitro μετρήσεις ενώ, βρέθηκαν στατιστικά σημαντικές διαφοροποιήσεις ως προς την παραγωγή μυκοτοξινών στις in vivo μετρήσεις.
description: Alterrnaria spp. is the main causal agent of core rot on apple, one of the most serious post-harvest diseases of apples in Greece that has a large negative impact on the yield and quality of apples. A recent study has showed that Alternaria spp. is the major cause of postharvest rots in cv. Fuji. The aim of this study was to identify Alternaria spp. at species level and to investigate the molecular variability and the mycotoxigenic ability among isolates associated with core rot. For this purpose, 75 isolates were collected from diseased apple fruits with core rot symptoms. The isolates were identified using sequences analysis of the PCR-amplified internal transcribed spacer (ITS) rDNA region. Two species were identified, namely Alternaria tenuissima και A. arborescens at frequencies of 89,3 and 10,7%, respectively. Moreover, sequences analysis of Alta 1 and endoPG genes were used for phylogenetic analysis. In addition, the cultivar susceptibility was estimated in two incubation temperatures (0 and 23 ˚C) and was found that Fuji was the most susceptible cultivar. The morphological characteristics and the effect of temperature on mycelial growth were compared in ten isolates of the two species, and showed significant variation between species. Moreover, in 30 isolates of both species the production of three mycotoxins, alternariol, alternariol, alternariol monomethyl ether and tentoxin was measured. The analyses of mycotoxins were made in vivo in apple fruit and in vitro on PDA medium, and carried out using high performance liquid chromatography with diode array detector (HPLC-DAD). The results showed that in most of the isolates the three metabolites were detected in both the in vivo and the in vitro measurements.