Autochthonous tuscan olive leaves (Olea europaea var. Olivastra seggianesse) as antioxidant, antimicrobial and immunomodulatory source for biomedicine and tissue engineering
Creators: name: DE LA OSSA GUERRA, JOSE GUSTAVO
Publisher: name: Universit� degli Studi di Siena
Year: 2021

description: Introduzione. L'Olea europaea � uno degli alberi pi� antichi della regione mediterranea. Gli estratti di foglie di olivo (Olive Leaf Extracts, OLE) hanno suscitato interesse nei ricercatori di diverse discipline scientifiche principalmente a causa della particolare composizione fenolica, presumibilmente correlata alla sua potente attivit� biologica. Obiettivi. Lo scopo di questo studio � stato valutare: a) le propriet� degli OLE di Olea europaea Toscana per proteggere le cellule endoteliali dallo stress ossidativo generato dalle specie reattive dell'ossigeno (ROS), sia in coltura 2D sia in innovativi scaffold 3D (P (VDF-TrFE)); b) studiare l'effetto antimicrobico di OLE rispetto alla tecnologia Cold Atmospheric Plasma (CAP), o la loro combinazione, contro agenti patogeni, ad esempio Escherichia coli, Staphylococcus aureus e Listeria innocua, cresciuti a livello esponenziale o in fase stazionaria; c) caratterizzare fibre composite elettrofilate a base di PHBHV caricate con OLE per applicazioni nella guarigione delle ferite; d) valutare la capacit� di OLE incorporato nelle fibre di poliidrossialcanoati (PHA) di modulare il rilascio di citochine da cheratinociti umani sani (HaCaT). Metodi: I polifenoli totali (total polyphenols, TP) di OLE sono stati caratterizzati con il metodo di Folin-Ciocalteu. Le cellule endoteliali sono state coltivate in colture convenzionali (cio� bidimensionali, 2D) e su impalcature tridimensionali fabbricate tramite elettrofilatura. La vitalit� cellulare e la misurazione dei ROS dopo lo stress indotto da H2O2 sono state eseguite tramite WST-1, alamar Blue e la sonda CM-H2DCFDA per ROS. La crescita di E. coli, S. aureus e L. innocua � stata valutata mediante il test di unit� (CFU) formanti colonie (espressa in CFU/ml) e CAP. � stata eseguita la reazione a catena della polimerasi in tempo reale (real-time PCR) per valutare le propriet� immunomodulatorie; analisi di spettroscopia infrarossa in trasformata di Fourier (FT-IR), per discriminare la composizione chimica in entrambe le fibre elettrofilate; cromatografia a permeazione su gel (GPC) per consentire l'analisi della biodegradazione; microscopia SEM per lo studio della morfologia delle fibre ed in fine, HPLC per eseguire lo studio di rilascio. Risultati: il contenuto in TP di OLE era 23,29 mg di acido gallico equivalente (GAE)/g e l'oleuropeina era il composto principale. La curva di vitalit� dose-dipendente ha evidenziato l'assenza di effetti citotossici significativi a concentrazioni di OLE inferiori a 250 ?g GAE/ml di TP. Il pretrattamento di 100 ?g GAE/ml di TP di OLE ha avuto effetti protettivi sullo stress ossidativo indotto da H2O2 in entrambi i modelli (2D e 3D). La combinazione di CAP e OLE ha determinato una sostanziale inattivazione microbica contro tutti i ceppi in fase esponenziale mostrando una completa inattivazione. OLE ha dimostrato una significativa attivit� antinfiammatoria, sottoregolando l'espressione di tutte le citochine proinfiammatorie e sovraregolando IL-8, IL-1? e TNF-? nel modello HaCaT. Conclusione: OLE possiede una significativa attivit� antiossidante e antinfiammatoria; la fibra a base di PHBHV + OLE preserva gli effetti benefici di OLE e rappresenta uno scaffold 3D di alto valore con un grande potenziale nella rigenerazione dei tessuti. CAP e OLE possiedono un'attivit� antibatterica sinergica; pertanto, la tecnologia CAP in combinazione con OLE pu� essere utilizzata per una decontaminazione efficace, ad esempio nella guarigione delle ferite ed in dispositivi biomedicali.