Μελέτη της διαφοροποίησης μεσεγχυματικών κυττάρων οδοντικού πολφού DPSCs με νευροτροφικούς παράγοντες
Creators: name: Παυλίδης, Αλέξανδρος Γεωργίου
Publisher: name: Aristotle University of Thessaloniki
Year: 2022
Subjects: Μεσεγχυματικά κύτταρα οδοντικού πολφού DPSCs, PC12, διαφοροποίηση
Νευρογένεση, νευροτροφίνες, νευρο-ειδικοί δείκτες
RT-PCR, Western blot ανάλυση, κυτταροκαλλιέργεια, ηλεκτροφόρηση, DNA, πρωτεΐνη
Dental pulp stem cells (DPSCs), PC12, Differentiation
Neurogenesis, neurotrophins, neuro- specific markers
RT-PCR, Western blot analysis, cell culture, electrophoresis, DNA, protein

description: This master’s dissertation examines the ability of human dental pulp stem cells, DPSCs, to differentiate into neural cells, in vitro. More specifically, DPSCs were studied at intervals following the effects of neurotrophic factors, such as the Nerve Growth Factor, Neurotrophin 3 (NT3), and, potential neurotrophic peptides. The stem cell differentiation was initially evaluated by the study of the expression of specific for the nerve cells markers with qualitative analysis provided by the use of the Polymerase Chain Reaction-Reverse Transcriptase technique, RT-PCR. In addition, analysis of the protein extracts was carried out, after lysis of the DPSCs cells, by electrophoresis and western immunoblotting on a nitrocellulose membrane. The results confirmed the existence of the corresponding proteins that have been biosynthesized during the differentiation process of dental pulp stem cells into nerve cells. The results demonstrate an increase in the expression levels of the nervespecific- markers Nestin, Tubulin-βIII, MAP2, NeuN and to a small extent GFAP, when exposed to the above neurotrophic factors. In fact, the peptide Asp-Ile-Asp-Ser-Pro-Val-Phe extends the time of differentiation, allowing more cells to change their phenotype and differentiate into nerves, for the same growth period and even at a lower concentration. It is actually noteworthy that the peptide Asp-Ile-Asp-Ser-Pro-Val-Phe may display the same or better action as a neurotrophin and therefore induce neuronal differentiation, committing the mesenchymal cells of to an exclusively differentiation fate, even at much lower concentrations than other neurotrophins.
description: Στην προκείμενη διπλωματική εργασία μελετήθηκε η δυνατότητα νευρογενούς διαφοροποίησης των ανθρώπινων μεσεγχυματικών κυττάρων οδοντικού πολφού, DPSCs, με νευροτροφικούς παράγοντες, in vitro. Συγκεκριμένα, μελετήθηκαν τα κύτταρα DPSCs έπειτα από την επίδραση νευροτροφικών παραγόντων, όπως ο Νευρικός αυξητικός παράγοντας, NGF (Nerve Growth Factor), η Νευροτροφίνη 3, ΝΤ3 καθώς και, εν δυνάμει, νευροτροφικά πεπτίδια του NGF . Η διαφοροποίηση αξιολογήθηκε, αρχικά, με τη μελέτη της έκφρασης ειδικών για τα νευρικά κύτταρα δεικτών με ποιοτική ανάλυση που παρέχεται από τη χρήση της τεχνικής της Αλυσιδωτής Αντίδρασης Πολυμεράσης- με Αντίστροφη Μεταγραφάση, RTPCR. Επιπρόσθετα, πραγματοποιήθηκε ανάλυση των πρωτεϊνικών εκχυλισμάτων, έπειτα από λύση των DPSCs κυττάρων, με ηλεκτροφόρηση και ανοσοαποτύπωση σε μεμβράνη νιτροκυτταρίνης κατά western, η οποία επιβεβαίωσε την ύπαρξη των αντίστοιχων πρωτεϊνών που έχουν βιοσυντεθεί κατά τη διαφοροποίηση των νευρικών κυττάρων οδοντικού πολφού σε νευρικά κύτταρα. Σύμφωνα με τα αποτελέσματα οι παραπάνω νευροτροφικοί παράγοντες αυξάνουν τα επίπεδα έκφρασης των δεικτών Νεστίνη, Τουμπουλίνη-βΙΙΙ, ΜΑΡ2, NeuN και σε μικρό ποσοστό GFAP, και μάλιστα το πεπτίδιο AspIle-Asp-ser-Pro-Val-Phe φαίνεται να είναι πιο δραστικό όσον αφορά την επαγωγή διαφοροποίησης μεσεγχυματικών κυττάρων, επιτρέποντας σε περισσότερα κύτταρα για το ίδιο χρονικό διάστημα καλλιέργειας και με μικρότερη συγκέντρωση να αλλάξουν φαινότυπο και να διαφοροποιηθούν σε νευρικά. Αξιοσημείωτη επισήμανση αποτελεί το γεγονός ότι το πεπτίδιο Asp-Ile-Asp-Ser-Pro-Val-Phe μπορεί να έχει την ίδια ή καλύτερη δράση ως νευροτροφίνη και ως εκ τούτου να επάγει τη νευρογενή διαφοροποίηση, δεσμεύοντας τα κύτταρα αποκλειστικά προς το μονοπάτι της διαφοροποίησης σε κατά πολύ μικρότερες συγκεντρώσεις σε σχέση με τις υπόλοιπες νευροτροφίνες.