Die Guadiana (Portugees: [ɡwɐðiˈɐnɐ]; Spaans: [ɡwaˈðjana]) is 'n groot suidwes-vloeiende rivier in Spanje en Portugal. Die rivier, met 'n lengte van 818 km, is die vierde langste rivier op die Iberiese Skiereiland na die Taag, Ebro en Douro. Die Guadiana vorm die oostelike grens van die Portugese streek Algarve. Die Guadiana ontspring naby Ojos del Guadiana in die Villarrubia de los Ojos in die outonome gewes Kastilië-La Mancha van Spanje. Aansluitend vloei die rivier in 'n westelike rigting tot by die grens met Portugal en vanaf hier in 'n suidelike rigting. Op twee gedeeltes vorm die rivier die grens tussen Spanje en Portugal, voordat hy by Vila Real de Santo António in die Golf van Cadiz (Atlantiese Oseaan) uitmond. Die Guadiana vloei onder ander deur die Spaanse outonome geweste Kastilië-La Mancha, Extremadura en Andalusië. Nadat Mérida deur die Spaanse koning Alfons IX tydens die Reconquista in 1230 herower is, het die Guadiana vir enkele jare die grens tussen die Christelike en Islamitiese invloedsfeer gevorm. Aan die noordelike oewer van die Guadiana is die historiese stadsentrum van Mérida, wat deur die Romeine opgerig is, geleë.