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BIOENSAYO PARA EVALUAR LA PATOGENICIDAD DE Beauveria bassiana (Bals.) Vuill. SOBRE LA BROCA DEL CAFÉ, Hypothenemus hampei (Ferrari)
Authors: GONZÁLEZ-G. MARÍA TERESA , POSADA-F. FRANCISCO J. , BUSTILLO-P. ALEX E. 
Published: June 2022

La broca del café, Hypothenemus hampei (Ferrari), es el insecto plaga más importante que afecta el cultivo del café. Entre las medidas de control de tipo biológico, el hongo Beauveria bassiana (Bals.) Vuill. puede jugar un papel importante en la reducción de sus poblaciones. En la presente investigación se estandarizó un método de bioensayo para evaluar la patogenicidad del hongo B. bassiana sobre H. hampei. La evaluación de la patogenicidad se hizo sobre broca criada en el laboratorio en granos de café pergamino. Las brocas fueron desinfectadas por inmersión en hipoclorito de sodio al 0,5% durante 10 minutos y luego se lavaron tres veces con agua destilada estéril. Posteriormente se expusieron al hongo usan­do una concentración de 1 x 107 conidias/ml durante dos minutos. Las brocas, después de expuestas al inóculo, se colocaron individual­mente en frascos de vidrio de 4 cm3 de capaci­dad con papel de filtro húmedo y tapados con algodón. En esta forma permanecieron 24 ho­ras, después de este tiempo, a cada frasco se le adicionó un grano de café pergamino con 45% de humedad, encerado y libre de inóculo. El experimento se organizó en un diseño com­pletamente al azar con tres tratamientos com­puestos por: el aislamiento Cenicafé Bb-9205 obtenido de Diatraeasaccharalis, denominado Bb-9205 DS, este mismo aislamiento pero activado en broca y denominado Bb-9205 BFC y un testigo. Se utilizaron tres repeticiones, cada una con 30 brocas. Los resultados mues­tran que 24 horas después de la inoculación, las brocas infectadas presentan una menor actividad, pérdida de las patas y antenas, y, por consiguiente, inhibición en la actividad de bro­cado. En los tratamientos con B. bassiana, el porcentaje de brocado fue de 14,44% mientras en el testigo fue de 44,44%. El promedio de mortalidad causado por Bb-9205 DS fue de 88,88% y para Bb-9205 BFC de 100%. Se presentaron diferencias significativas entre los tratamientos (10,05). El tiempo letal medio (TL50) fue de 92,4 horas para Bb-9205 DS y de 54,72 horas para Bb-9205 BFC. Se indentificaron cinco etapas en el desarrollo de B. bassiana sobre H. hampel: inoculación a muerte, muerte a inicio de micelio, muerte a cubrimiento con micelio, muerte a conidiogé­nesis y muerte a liberación de conidias. Estas etapas tuvieron una duración para Bb-9205 DS de 20,16; 31,92; 56,40; 83,28 y 198 horas, respectivamente, y de 20,88; 44,4; 66,88; 116 y 182 horas para Bb-9205 BFC, respectiva­mente. Este bioensayo se puede utilizar como un modelo para probar diferentes entomopató­genos a evaluar contra H. hampei.
Clonaje, expresión y toxicidad de un gen tóxico de Bacillus thuringiensis subsp. medellin
Authors: RESTREPO NORA , GUTIÉRREZ DIANA , PATIÑO MARÍA MERCEDES , THIÉRY ISABELLE , DELÉCLUSE ARMELLE , ORDUZ SERGIO 
Published: June 2022

Bacillus thuringiensis (Bt) subsp. medellin (Btmed) produce inclusiones paraesporales cristalinas las cuales son tóxicas a larvas de mosquito. Se ha demostrado que las inclusio­nes de esta bacteria contienen, principalmen­te, proteíná de 94, 68 y 28-30 kDa. ADN total de Btmed, parcialmente digerido con la enzima EcoRI, fue clonado utilizando el kit de clonaje Lambda Zap II. Las placas recombinantes fueron analizadas con un anti­cuerpo policlonal producido en ratón contra la proteína del cristal de 94 kDa de Btmed. Una de las placas positivas fue seleccionada y, por excisión in vivo, se obtuvo pBluescript SK(-) recombinante. El gen que codifica la proteína tóxica de 94 kDa de Btmed fue donado en un fragmento de ADN de 4.4 kb. El ADN de Btmed luego fue subclonado como un fragmento EcoRI/EcoRI en el vector bifuncional pBU4, produciendo el plásmido recombinante pBTM3 y utilizado para trans­formar, por electroporación, la cepa cristal negativa 4Q2-81 de Bt subsp. israelensis (Bti). La toxicidad a larvas de mosquito fue estimada utilizando larvas de primer estadio de Aedes aegypti y Culex quinquefasciatus criadas en el laboratorio retadas con cristales completos. Los resultados de toxicidad indi­can que las inclusiones purificadas de la cepa de Bti recombinante son tóxicas a todas las especies de mosquitos analizadas, aunque la toxicidad no fue tan alta como la producida por el cristal de la cepa nativa de Btmed. La electroforesis en gel de poliacrylamida (SDS­PAGE) reveló que las inclusiones producidas por la cepa recombinante Bti (pBTM3) están principalmente compuestas de la proteína de 94 kDa del cristal de Btmed como fue deter­minado por Western blot.
Relación de ADN plasmídico y actividad larvicida en cepas nativas de Bacillus sphaericus
Authors: DUSSÁN JENNY , ANDRADE DIANA , LOZANO LUCÍA 
Published: June 2022

Se determinó que 18 cepas nativas deBacillus sphaericus (Bs), con alta patogenicidad (80­100%) en larvas de tercer ínstar de Culex quinquefasciatus, presentaban plásmidos de alto peso molecular. Con el fin de asociar la toxicidad de las cepas con la presencia y ex­presión de estos plásmidos se realizaron tra­tamientos con agentes curantes, como temperatura y Naranja de Acridina. Para el curaje con temperatura se realizaron siembras de las cepas a 40°C-41°C y con Naranja de Acridina se probaron diferentes concentracio­nes permisivas de crecimiento para los bacilos (20-100 p,g/m1). Para confirmar el curaje, es decir la pérdida del plásmido, de las cepas tra­tadas se realizó extracción deADN plasmídico y electroforesis en geles de agarosa. La pérdi­da de la patogenicidad en las cepas curadas se evaluó realizando bioensayos en larvas de C. quinquefasciatus. De las 18 cepas de B. sphaericus estudiadas, inicialmente 5 fueron curadas con tempera­tura (reporte anterior) y en este estudio 8 fue­ron curadas con Naranja de Acridina y 3 aún presentaban plásmidos. Los bacilos que per­dieron el plásmido continuaron siendo patógenos para las larvas lo que indica que la expresión de los genes involucrados en la toxi­cidad es cromosomal. Se encontraron diferen­cias entre las cepas en cuanto a resistencia hacia los agentes curantes y en general se ob­servó una gran estabilidad del plásmido.
Producción masiva y preformulación de Metarhizium spp. para el control biológico de la langosta llanera
Authors: GÓMEZ-ALVAREZ MARTHA ISABEL , VILLAMIZAR-RIVERO LAURA FERNANDO , COTES ALBA MARINA 
Published: June 2022

Con el propósito de estandarizar las condicio­nes para un prototipo de bioplaguicida para el control de la langosta llanera Rhammatocerus schistocercoides se evaluaron condiciones para la producción masiva y preformulación de Metarhizium spp.. Para la producción ma­siva se probaron dos métodos de inoculación del hongo en un sustrato consistente en arroz humedecido estéril contenido en bolsas de polietileno de alta densidad e incubado durante 15 días a 25°C; el primero de estos métodos consistió en la utilización de un preinóculo lí­quido crecido durante dos días y el segundo consistió en la inoculación directa del arroz, para ambos casos se utilizó como inóculo una suspensión de 106 esporas deMetarhizium spp. por mililitro, encontrándose en este último mé­todo los mayores niveles de esporulación, ex­presadas en 30 x 108 u.f.c./g para M. anisopliae y 70 x 10'3 u.f.c./g para M. flavoviridae. Después de separar las conidias del sustrato, la biomasa obtenida se secó por 24 horas a 25 °C. Posteriormente se hizo un ensayo para la determinación de compatibili­dad entre las conidias y diferentes excipientes aplicados individualmente. Esta determinación permitió escoger un adherente, un aceite ve­getal y los filtros solares CBUVO1 y CBUVO2 que sirvieron para obtener un producto en pol­vo, consistente en esporas recubiertas con los protectores de luz ultravioleta. Este polvo fue diseñado para reconstituirse en una emulsión aceite en agua (0/W) conformada por aceite de girasol, Tween 80, Span 80 y agua. Las esporas recubiertas fueron expuestas a la luz ultravioleta tanto bajo condiciones de labora­torio (253,7 nm) como de campo (exposición solar directa en Puerto López, Meta) demos­trando en ambos casos que los excipientes uti­lizados protegen efectivamente las conidias de los efectos adversos de la radiación UV. Bajo condiciones controladas de laboratorio se de­terminó que los excipientes utilizados en di­cho producto no alteran la actividad biocontroladora de Metarhizium spp. contra la langosta llanera.
Producción de esporas de aislamientos de Beauveria bassiana y Metarhizium anisopliae en diferentes sustratos
Authors: NARVÁEZ-G MÓNICA DEL PILAR , GONZÁLEZ-G. MARÍA TERESA , BUSTILLO-P. ALEX E. , CHAVES-C. BERNARDO , MONTOYA-R. ESTHER CECILIA 
Published: June 2022

El objetivo de este trabajo fue cuantificar la producción de esporas de 12 aislamientos de M. anisopliae y 10 de B. bassiana, proceden­tes de los órdenes Coleoptera, Homoptera, Lepidoptera y Orthoptera, que mostraron una patogenicidad sobre la broca del café mayor o igual al 80 % a nivel de bioensayo. Estos se cultivaron tanto en sustrato de arroz como en la broca del café. Para el caso del sustrato de arroz, se inocularon dos botellas por ais­lamiento cada una con 50 gramos de arroz, éstas se incubaron durante de 30 días, al cabo de los cuales se tomaron 5 muestras de arroz esporulado por botella, de cada muestra se hizo el conteo de esporas, haciendo dilucio­nes sucesivas de la muestra inicial. Con res­pecto al sustrato broca, se inocularon 30 individuos por aislamiento y se incubaron en cámara humeda durante un período de 10 días y posteriormente cada broca colonizada por el hongo se llevó a un tubo con 4,5 ml de agua destilada con el fin de realizar los conteos respectivos. En el sustrato arroz los aisla­mientos que presentaron número mayor de esporas fueron : Bb 9207 con 3,57 x 101° es­poras/g, Bb 9301 con 1,53 x 1010 esporas/g y Ma 9236 con 1,31 x 1010 esporas/g, los cua­les fueron estadísticamente diferentes de los demás; el aislamiento que produjo número menor de esporas fue Ma 9303 con 1,65 x 100 esporas/g. En el sustrato broca, el aisla­miento que presentó mayor esporulación fue Bb 9218 con 1,36 x 107 esporas/broca y los aislamientos que mostraron la menor esporulación fueron ocho de M. anisopliae y uno de B. bassiana, los cuales presentaron en promedio 5,86 x 105 esporas/broca. El es­tudio muestra que la patogenicidad y la esporulación son características independien­tes entre si; y que la producción de esporas depende del aislamiento y su interacción con el medio de cultivo en el cual se desarrolle.
Evaluación de cepas nativas de Metarhizium anisopliae para el control biológico de Rhammatocerus schistocercoides (Orthoptera: Acrididae)
Authors: ESPINEL-CORREAL CARLOS , EBRATT EVERTH E. , COTES ALBA MARINA 
Published: June 2022

En 1994 se presentó una invasión de la lan­gosta llanera Rhammatocerus schistocercoides (Rehn) en los Llanos Orientales de Colombia, constituyéndose en una amenaza potencial para cultivos como arroz, sorgo y caria de azú­car. De acuerdo con el potencial que el con­trol biológico representa, el objetivo del presente trabajo fue el de seleccionar, mediante ensayos de laboratorio y campo, cepas nati­vas de Metarhizium anisopliae (Metschnikov) para el control de la langosta llanera. En labo­ratorio (28°C y humedad relativa 70%) se eva­luaron, a una concentración de 1x108 conidios/ ml, 3 cepas nativas de M. anisopliae (M3, M5 y M11) sobre ninfas de octavo ínstar. La cepa M5 produjo un 100% de mortalidad al día once, mientras que las cepas M3 y M11 pro­dujeron el 100% de mortalidad al día trece. Posteriormente, a las tres cepas se les deter­minó la dosis letal media. Mediante el progra­ma probit, se encontró una DL50 de 5 conidios/ insecto para la cepa M5, y de 7 conidios/in­secto para las cepas M3 y M11, no siendo sig­nificativas estas diferencias (f=0.78; g1=4; p<0.05). Las 3 cepas nativas fueron evalua­das en campo, en Carimagua-Meta, (36°C y H.R 56%). Para tal fin, se sometieron a un proceso de producción masiva y formulación mediante la encapsulación de los conidios con protectores de luz ultravioleta. El ensayo se realizó en jaulas que contenían langostas adul­tas; a un grupo se les asperjó una suspensión del hongo formulado y a otro lote se les asperjó una suspensión del hongo sin formular (conidios desnudos). Se aplicaron dos con­centraciones (1x107y 1x108 propágulos/ml) por medio de una bomba de ultra bajo volu­men. Al décimo séptimo día de iniciado el ensayo se obtuvo un porcentaje de mortalidad en las langostas del 67.8%, 64.1% y 56.5% cuando se utilizaron las cepas formuladas MS, Mily M3, respectivamente. Estos resultados fueron significativamente diferentes (f=4.66; g1=12; p<0.05) a los obtenidos cuando se uti­lizó el hongo en forma de conidios desnudos, en donde se obtuvieron porcentajes de morta­lidad de 9.5%, 26.4% y 28.2% para las cepas M5, M11 y M3, respectivamente. Estos re­sultados permitieron demostrar que la formu­lación no afectó la actividad entomopatogénica del hongo y le confirió tolerancia a los conidios bajo condiciones de campo.
Efecto depredador del parasitoide Cephalonomia stephanoderis (Hymenoptera: Bethylidae) sobre los estados inmaduros de Hypothenemus hampei (Coleoptera: Scolytidae) en condiciones de campo
Authors: ARISTIZÁBAL-A. LUIS F. , BUSTILLO-P. ALEX E. , BAKER PETER S. , OROZCO-H. JAIME , CHAVES-C. BERNARDO 
Published: June 2022

La broca del café Hypothenemus hampei (Ferrari) es la plaga de mayor importancia en las plantaciones de café en el mundo. En Co­lombia se está implementando un programa de manejo integrado de la broca (MIB), cu­yos principales componentes son el control cultural, las prácticas agronómicas, el control biológico y, como última medida, el control químico. Uno de los enemigos naturales más promisorios para el control biológico de la broca es el parasitoide Cephalonomia stephanoderis. Además de la acción parasíti­ca que presenta C. stephanoderis sobre los estados inmaduros de H. hampei, también se ha observado el efecto depredador del parasitoide sobre ellos; sin embargo, las po­cas referencias que se tienen al respecto son observaciones importantes y no necesaria­mente investigaciones con la finalidad de eva­luar dicho efecto. Por tanto, el objetivo de esta investigación fue determinar el efecto depre­dador del parasitoide C. stephanoderis sobre todos los estados biológicos de H. hampei en condiciones de campo. El experimento se realizó en la Subestación Experimental "Rafael Escobar" de Cenicafé, localizada en Supía, Caldas, a 1320 msnm, 21,9 °C de temperatura media anual, 2020 mm de precipitación anual y 75% de humedad re­lativa, en un lote de café variedad Colombia de tercer año de cosecha. Se seleccionaron ramas con frutos sanos, los cuales se infesta­ron artificialmente con H. hampei mediante la utilización de mangas entomológicas. Se evaluaron nueve tratamientos, conformados por tres tiempos de infestación: 5,10 y 15 días; en tres condiciones diferentes se liberaron los parasitoides: dentro de las mangas entomoló­gicas, en campo abierto y los controles. Se realizaron cuatro evaluaciones a los 3, 10, 20 y 30 días después de la liberación de los parasitoides. En los tratamientos testigo los promedios de estados biológicos de H. hampei durante las cuatro evaluaciones fueron de 10, 13 y 15 es­tados por fruto, para los 5, 10 y 15 días de infestados, mientras que, en los tratamientos de liberación en mangas los promedios fue­ron de 3, 5 y 6 estados por fruto y para los tratamientos con liberaciones a campo abier­to los promedios fueron de 4, 7 y 8 estados por fruto, siendo significativamente menores con respecto a los testigos. Según estos resul­tados, el parasitoide C. stephanoderis logró reducir en promedio el 65% de la población de H. hampei cuando fue liberado dentro de mangas entomológicas y el 49% cuando fue liberado a campo abierto, comprobándose la eficacia que presenta como depredador de es­tados biólogicos de H. hampei. Por lo tanto, la mortalidad adicional que ocasiona C. stephanoderis como depredador, aumenta la eficacia del parasitoide como control biológi­co en un programa de manejo integrado.
Evaluación de dos variedades de Bacillus thuringiensis para el control de Diaphania spp. (Lepidoptera: Pyralidae) en melón
Authors: SÁNCHEZ-R. MARTHA YAZMIN , VARGAS-B. HEBER LUIS , SÁNCHEZ-G. GUILLERMO 
Published: June 2022

El experimento se realizó en el Centro de in­vestigación Nataima de CORPOICA para eva­luar sobre el melón híbrido Excelsior el efecto de dos variedades de Hacinas thurigieusis. kurstaki y aizawaii, en el control del perfora­dor del fruto Diaphania spp. Se establecieron 3 niveles de población que fueron: 0.1.0.5 y 0.9 larvas por planta (LPP) o por terminal (LPT) sobre los cuales se aplicaron los insecticidas. Se utilizó un producto químico con base en monocrotolos para comparar el efecto de éste con respecto al mostrado por I os bioinsecticidas. El ataque del perforador se inició II días des­pués de la emergencia (DDE) y la primera apli­cación se realizó a los 18 DDE; a los 25 DM, la plaga presentó larvas de todos los instares y estados de prepupa. Al evaluar la cantidad de fruto pequeño sano. el tratamiento químico pre­sentó el mayor promedio al nivel 0.1 LIT se­guido de la variedad kurtaki al nivel de 0,5 LPP. En fruto grande el mayor promedio lo pre­sentó el control químico al nivel 0.1 LPP. FI área hajo la curva, que muestra la población acumulada de Diaphnia durante el proceso de evaluación indicó mayor presión de las lar­vas en el testigo con respecto a los 3 productos utilizados. demostrando la eficiencia letal de los insecticidas. La determinación de los instares de la larva y la época de inicio de ata­que son dos variables importantes para lograr mayor efectividad del bioinsecticida el cual debe ser implementado dentro de un manejo integrado de plagas con miras a reducir las apli­caciones de insecticidas de amplio espectro pero en ningún momento eliminándolas com­pletamente.
Estudios biológicos del parasitoide Trichogramma lopezandinensis (Hymenoptera: Trichogrammatidae) orientados al control de la polilla guatemalteca de la papa Tecia solanivora (Lepidoptera: Gelechiidae)
Authors: RINCÓN-LÓPEZ CLAUDIA , LÓPEZ-ÁVILA A. 
Published: June 2022

El objetivo de esta investigación fue determi­nar algunos parámetros biológicos básicos para la utilización futura del parasitoide nati­vo Trichogranana lopezandinensis en el con­trol de la polilla guatemalteca de la papa Tedia solanivom aprovechando las ventajas relati­vas del uso de un parasitoide de huevos y la adaptación evolutiva de la avispa a las condi­ciones agroecológicas de la zona papera co­lombiana. El estudio se desarrolló en condiciones controladas, en el laboratorio de entomología general del Programa Nacional de Manejo Integrado de Plagas en el Centro de Investigaciones Tibai tata de Corpoica a 19 ±3 °C de temperatura y 75 ±5 % de H.R. La determinación del ciclo de vida se realizó so­bre huevos de T solanivora. La duración pro­medio para cada estado fue de dos días el huevo, siete días el estado larval. con tres instares. seis días el estado de pupa y la longevidad del adulto varió de acuerdo con la alimentación. Se determinaron parámetros de eficiencia como: la eficiencia de búsqueda, el tiempo de manipuleo y la interferencia mutua. Se obser­vó que la actividad parasítica es influenciada por la densidad de hospederos y de parasitoides. Existe una densidad de huevos a partir de la cual la avispa realiza su mayor es­fuerzo parasítico. En densidades altas de huevos se encuentra una mayor proporción de avispas que paraitan los huevos expuestos, en bajas densidades esta proporción disminuye. La respuesta funcional fue de tipo II. Un incremento en la densidad de parasitoides disminuye la eficiencia de bús­queda de las avispas, reduciendo la actividad parasítica individual del parasitoide.
Development and evaluation of new artificial diet for mass rearing Hypothenemus hampei ( Coleoptera: Scolytidae)
Authors: PORTILLA MARIBEL 
Published: June 2022

A new artificial diet called CENIBROCA (C) was developed for rearing coffee berry borer. It has fewer ingredients, good characteristics of nutrition to the target pest. good consistency keeps humidity longer, has low contamination, and is easy to prepare. Its reproductive potential and rate of increase were evaluated and compared with the following diets: Diet 140 (A), developed in Mexico in 1993; ECOBROVILL-160 (B), developed in Mexico in 1995, which is a simplification of the diet (A); and parchment coffee (D), the natural medium of rearing coffee berry borer used since 1989. Diets A, B, and C were poured into 50x10 mm glass tubes. Each tube contained 1 mi of diet and a recently emerged female. Parchment coffee was evaluated by individual infestation in the same way as an artificial diet. On evaluation after 40 days, diet Chad a mean production of 53,9 ± SD=6,3 insects per tube of diet, followed by diets Aand B with a mean production of 46,0 ± SD=6,1 and 40,1 ± SD=8,9 insects percent of diet respectively, the lowest production was for parchment coffee with 26,9 ± SD=5 insects of CBB. At 60 days, 254,6 ± SD=80,0 stages (50% were eggs, probably the third generation) were found on CENIBROCA, showing a significant difference (p<0,05) in relation to the diets, 140 with a mean production of 125,8 ± 49,4 states and 107,5 ± 50,9 to ECOBROVILL, respectively. The highest reproductive rate ( R0 ) and the maximum values of the intrinsic rate of increase (rm) of CBB were found in artificial diet C.
Utilización del cebo Mirex-S (Sulfluramida 0.3%) para el control de Atta sexdens rubropilosa (Hymenoptera: Formicidae) en área estratificada de hormigueros
Authors: ZANUNCIO JOSÉ C. , MAGESTE GERALDO , PEREIRA JOSÉ M. M. , ZANETTI RONALD 
Published: June 2022

La eficiencia del cebo granulado Mirex-5 (sulfluramida 0.3%) fue estudiada en las dosis de 6, 8 y 10 g por metro cuadrado en el control de hormigueros de Atta sexdens rubropilosa Forel, 1908, comparándose con aquellos a base de dodecacloro, de acuerdo con el área estratificada de los mismos, para el cálculo de la cantidad de producto a ser aplicado. Los hormigueros tratados se evaluaron 24 horas después de la aplicación de los cebos y a cada 7, 15, 30, 54, 90, 120 y 150 días. Para todos los tratamientos, la paralización de las hormigas, en los hormigueros, ocurrió entre 30 y 54 días después de la aplicación de los cebos, sin embargo la actividad de corte cesó entre el primero y séptimo día, mostrando no haber diferencias entre los productos formulados con dodecacloro y. con sulfluramida. La eficiencia del Mirex-5 fue de 88.89, 77.77 y 77.77% para las dosis de 6, 8 y 10 g, respectivamente. Por su parte, la eficiencia del cebo basado en dodecacloro fue de 77.77%, esto muestra que el cebo Mirex-5 puede substituir los cebos con compuestos clorados para el control de A. sexdens rubropilosa. La utilización de área estratificada de hormigueros permitió una reducción promedio de 63.31 % en la cantidad de cebo aplicado, comparado con el área total, representando una buena eficiencia de control y reducción en los costos de combate a las hormigas cortaderas.