The Purification, Assay, Sterilization, and Removal of Pyrogenicity of Human Urokinase*
Authors: Sgouris J. T. , Storey R. W. , Mccall K. B. , Anderson H. D. 
Published: March 2009

Summary

A method is described for the isolation and purification of urokinase from human urine. The procedure includes: adsorption on and elution from the cation exchanger, cellulose phosphate; precipitation with 20% ethanol; adsorption on and elution from ion exchange resin XE‐97; dialysis to remove salts; and drying from the frozen state. Sterilization is accomplished by treating with betapropiolactone (1:6000 to 1:8000).
When necessary, pyrogenicity may be removed by incubation of urokinase in 0.15 M NaCl solution at pH 7.2–7.4 for four days at 37° C.
The resulting urokinase passes standard tests for sterility, safety, and pyrogenicity. It has a potency of 1000 activator units per mg protein and is stable under normal storage conditions.
A method is described for in vitro urokinase activation of human profibrinolysin in 50% glycerol.
A simple, reliable and economical assay system is described for urokinase activity.

Résumé

1° Une méthode pour isoler et purifier l'urokinase à partir de l'urine humaine est décrite. Le processus comprend: absorption sur et élution à partir de la phosphate cellulose, échangeur cationique, précipitation par l'ithanol à 20% ou relar‐page (salting out); absorption sur et Clution à partir de la resine XE‐97; dyalyse pour déminéraliser; lyophilisation. La stirilisation est obtenue par traitement au betapropiolactone (1/6000 à 1/8000).
S'il y a lieu, la pyroginicité du produit peut itre éliminée par incubation de l'urokinase en solution NaCl 0,15 M ou au pH 7,2–7,4 pendant 4 jours à 37°.
L'urokinaue obtenue de cette manière peut passer au crible des examens de stérilité, d'innocuité et de pyrogènie. Elle a une puissance d'activation de 1000 unités par mg de protéine et est stable dans des conditions normales de conservation.
Une méthode est décrite pour l'activation par I'urokinase de la profibrino‐lysine humaine dans le glycérol à 50%.
Une méthode d'essai simple, skre et économique de l'activité de l'urokinase est décrite.

Zusammenfassung

Es wird eine Methode zur Anreicherung und Reinigung von Urokinase aus menschlichem Urin beschrieben. Die Methode besteht in folgendem: Adsorption an und Elution von einem Kationenaustauscher, Zellulosephosphat; Fallung mit 20%‐igem äithylalkohol oder Aussalzung; Absorption an und Elution von einem Ionen‐austauscherharz XE‐97; Dialyse zur Entfernung der Salze; Gefriertrocknung. Die Sterilisation erfolgt durch eine Betapropiolactonbehandlung (1:6000‐1:8000).
Falls nötig läßt sich eine allfällige Pyrogenität der Präparate durch Inkubation in 0,15 M NaCl‐Losung bei pH 7,2–7,4 während 4 Tagen bei 37° C beseitigen.
Die in dieser Weise gewonnene Urokinase durchlauft alsdann die Standardtests für Sterilität, Sicherheit und Apyrogenität. Sie hat eine Aktivität von 1000 Aktivatoreinheiten pro mg Protein und ist bei normalen Lagerbedingungen stabil.
Es wird eine Methode zur In‐vitro‐Urokinase—Aktivierung von menschlichem Profibrinolysin in 50%igem Glyzerin ‐ heschrieben.
Ein einfaches, verläßliches und sparsames Testsystem zur Bestimmung der Urokinaseaktivität wird beschrieben.