Anti‐γ‐Globulin Factors in Human Sera Revealed by Enzymatic Splitting of Anti‐Rh Antibodies*
Authors: Antibodies Anti‐γ‐Globulin Factors in Human Sera Revealed by Enzymatic , Osterland C. K. , Harboe M. , Kunkel H. G. 
Published: March 2009

SummaryAnti‐Rh antibodies split with pepsin at pH 4.1 with or without cysteine furnished antibody fragments which readily coated Rh positive red cells for agglutination by Coombs' serum. Agglutinating factors active against such cells were found in some normal sera and in a higher proportion of sera of patients with rheumatoid arthritis and bacterial endocarditis. Density gradient ultracentrifugation showed that the agglutinating factor sedimented as a 7S protein in most cases.Some sera agglutinated cells coated with pepsin‐digested antibody and not cells coated with the native antibody. The agglutination of cells coated with pepsin‐digested antibody was inhibited by pepsin‐digested γ‐globulin but not by native γ‐globulin. These observations indicated that the agglutinator reacts with a hidden antigenic determinant on the S part of the γ‐globulin molecule which is revealed by enzymatic digestion.A comparison was made between the fragments of human γ‐globulin produced by pepsin and papain at the same and different pH. Similarities and differences between the fragments were described. The use of pepsin‐treated Rh antibodies as well as inhibition experiments with γ‐globulin fragments furnished evidence that various anti‐γ‐globulin factors in human sera react with different portions of the γ‐globulin molecule.RésuméLes anticorps anti‐Rhésus scindés par la pepsine à pH 4,1 en présence ou non de cysteine fournissent des fragments d'anticorps qui peuvent réagir sur des érythrocytes Rh positif et donner une agglutination avec le sérum de Coombs. Des facteurs agglutinants actifs contre de tels érythrocytes ont été trouvés dans les sérums normaux et dans une très forte proportion de sérum provenant de patients atteints de P.C.E. et d'endocardite bactérienne. Le gradient de densité à l'ultra‐centrifugation démontre que le facteur agglutinant sédimenté fait partie la plupart du temps de la fraction des protéines 7 S.Certains sérums agglutinent les érythrocytes sensibilisés par l'anticorps traité à la pepsine et n'agglutinent pas les érythrocytes sensibilisés par l'anticorps natif. L'agglutination des érythrocytes sensibilisés par l'anticorps traité à la pepsine est inhibée par des gamma‐globulines traitées à la pepsine, mais n'est pas inhibée par les gamma‐globulines natives. Ces observations démontrent que l'agglutinateur réagit avec un déterminant antigénique masqué se situant sur le fragment S des gammaglobulines et qui se manifeste à la suite du traitement enzymatique.Une comparaison a été faite entre les fragments de gamma‐globulines humaines produites aprés traitement à la pepsine et à la papaïne à des pH semblables et è des pH différents. Les ressemblances et les dissemblances entre les fragments sont décrites. L'utilisation d'anticorps anti‐Rh traités par la pepsine ainsi que les épreuves d'inhibition par des fragments de gamma‐globulines fournissent la preuve que différents facteurs anti‐gamma‐globulinique dans les sérums humains réagissent avec différentes parties de la molécule de gamma‐globulines.ZusammenfussungRhesusantikörper liefern bei Behandlung mit Pepsin bei pH 4,1 mit oder ohne Zusatz von Cystein Antikörperfragmente, welche Rh‐positive Erythrozyten sensibilisieren, so daß sie von Coombs‐Serum agglutiniert werden. Agglutinationsfaktoren gegen solcherweise vorbehandelte Zellen findet man häufig in Seren von Patienten mit rheumatoider Arthritis und bakterieller Endokarditis, selten auch in Seren gesunder Individuen. Ultrazentrifugenversuche im Dichtegradient zeigten, daß die meisten dieser Agglutinationsfaktoren als 7S‐Proteine sedimentieren.Einige Seren agglutinierten lediglich Zellen, die mit pepsinangedauten Antikörpern beladen waren, nicht aber solche, die mit nativen Antikörpern sensibilisiert worden waren. Die Agglutination der mit pepsinisierten Antikörpern beladenen Zellen wurde durch pepsinbehandeltes γ‐Globulin, nicht aber durch Nativ‐γ‐Globulin gehemmt. Diese Beobachtungen zeigen, daß der Agglutinationsfaktor mit einer versteckten Antigendeterminante des S‐Fragments des γ‐Globulinmoleküls reagiert, die erst bei enzymatischer Andauung an die Oberfläche tritt.Die Fragmente von menschlichem γ‐Globulin, welche durch Andauung mit Pepsin und Papain beim selben und bei unterschiedlichen pH gewonnen worden waren, wurden vergleichend untersucht. Es werden die Ähnlichkeiten und Unterschiede dieser Fragmente beschrieben. Die Verwendung von pepsinbehandelten Rh‐Anti‐körperfragmenten sowie Hemmversuche mit γ‐Globulinfragmenten zeigten, daß die verschiedenen Anti‐γ‐Globulin‐Faktoren des menschlichen Serums mit verschiedenen Teilen des γ‐Globulinmoleküls reagieren.