Development after Separation and Reaggregation of Blastomeres from Early Pig Embryos cultured in vitro
Authors: Smith S.D. , Schmidt M. , Purwantara R. , Greve T. 
Published: October 2007

Contents:The in vitro developmental potential of blastomeres from early porcine embryos war studied. Two‐, 4‐, and 8‐cell embryos were separated into component blastomeres and replaced into zonae pellucidae in the following configurations (designated by number of blastomeresl original cell stage): half embryos (1/2, 2/4, and 4/8); quarter embryos (1/4 and 2/8); and eighth embryos (1/8). Culture was done in 50 μl droplets under paraffin oil in either Whitten's medium supplemented with 4 mg/ml bovine serum albumin (BSA) and 10% fetal calf serum (FCS) or in the same medium supplemented with porcine oviductal cells. Cultures were observed on a daily baris when the morphology was recorded and at the end of culture (144—168 h after the expected time of ovulation), the embryos were stained with Hoechst 33342 and cell counts made. Generally, no significant differences in developmental rate were found between the two culture system and the data was pooled. Blastocyst formation rate in half embryos was 23%, 28%, and 44% for 1/2, 2/4, and 4/8 embryos, respectively. The respective blastocysts contained an average of 24.3 ± 4.4 and 28.8 ± 2.0 versa 41.2 ± 6.4 cells (p < 0.05 and p < 0.05). Blastocyst formation rate in quarter embryos was 15% and 35% (p < 0.01) for 1/4 and 2/8 embryos, respectively and they possessed an average of 17.0 ± 1.8 and 22.8 ± 1.4 cells (p < 0.02), respectively. Blastocyst formation rate in 1/8 embryos was 9% and the blastocysts averaged 13.0 ± 1.3 cells. Two‐,4‐, and 8‐cell control embryos formed blastocysts at rates of 22%, 85%, and 64%, respectively, and had average cell counts of 45.8 ± 10.8, 69.1 ± 4.0, and 75.4 ± 7.3, respectively. The timing of the initiation of blastocoel formation was similar for reaggregated and control embryos that started culture at the same stage. This along with the cell counts of reaggregated embryos at cavitation, which were proportional to the reduction in cell mars (7.2 ± 0.6, 12.6 ± 1.9, and 25.6 ± 2.8 for quarter, half and control embryos, respectively) supports the assumption that in pigs blastocoel formation occurs independent of the number of cells present. Inhalt: Entwicklung von frühen in vitro kultivierten Schweineblastomeren nach Abtrennung und Reaggregation Es wurde die Entwicklungspotenz von Blastomoren aus frühen Schweineembryonen studiert. Zwei‐, Vier‐ und Achtzell‐Embryonen wurden in ihre Blastomerenbestandteile zerlegt und nachfolgendem Schema in Zonae pellucidae zurückverbracht: Halbierte Embryonen (1/2, 2/4, 4/8) Viertelembrynnen (1/4 und 2/8) und Achtelembryonen (1/8). Die Kulturphase erfolgte in 50 μl Tropfen, die mit Parafinöl überschichtet waren. Es wurde Whitten's Medium, entweder mit 4 mg/ml BSA und 10% FCS verwendet oder das Medium mit porcinen Eileitenellen supplementiert. Die Kultur wurde täglich überpüft und die Morphologie beurteilt. Am Ende der Kulturzeit (144–168 Std nach dem berechneten Ovulationszeitpunkt) wurden die Embryonen mit dem Hoechstfarbstoff 33342 gefärbt und die Zellen gezählt. Signifikante Unterschiede in der Entwicklungsrate zwischen den beiden Medien wurden nicht gefunden und die Daten wurden zusammengefaβt. Die Blastozystenbildungsrate der Embryonenhälften betrug 23% und 44% für 1/2, 2/4 und 4/8 Embryonen. Diese Blastozysten enthielten im Mittel 24,3 ± 4,4 und 28 ± 2,0 gegenüber 41,2 ± 6,4 Zellen (p ≤ 0,05). Die Blastozystenbildungsrate aus Embryoversuchen betrug 1.5% und 35% (p ≤ 0,01) für 1/4 und 2/8 Embryonen. Im Mittel waren 17,0 ± 1,8 und 22,8 ± 1,4 Zellen (p ≤ 0,02) enhvickelt worden. Die Blastozystenbildungsrate in 1/8 Embryonen betrug 9% und durchschnittlich wurden 13,0 ± 1,3 Zellen in den gebildeten Blastozysten nachgewiesen. Zwei‐, Vier‐ und Achtzell‐Embryonen der Kontrollgruppe formten zu 22%, 85% und 64% Blastozysten und die mittlere Zellzahl betrug 45,8 ± 10,8, 69,1 ± 4,0 und 75,4 ± 7,3. Der Zeitpunkt der Blastozoelbildung war für reaggregierte und Kontrollembryonen ähnlich, wenn sie die Kulturphase im gleichen Enhvicklungsstadium begannen. Diese Tatsache und die vorhandene Zellzahl in reaggregierten Embryonen zum Zeitpunkt der Kavitation, die sich proportional zur Verringerung der Zellzaiilen verhielt (7,2 ± 0,6, 12,6 ± 1,9 und 25,6 ± 2,8 für Viertel‐, Halb‐ und Kontrollembryonen), unterstützt die Annahme, daβ die Blastozoelbildung beim Schwein unabhängig yon der Zellzahl erfolgt.