Studies of I131 Tagged Rh Antibody of D Specificity*
Authors: Evans R. S. , Turner Elizabeth , Bingham Margaret 
Published: March 2009

Summary

The anti‐D antibody of one donor has been tagged with I131 and partially separated from other proteins by adsorption to and elution from the stroma of D positive red cells.
D positive cells presumed to be homozygous for the D antigen adsorbed more labelled anti‐D antibody than did heterozygous cells. The presence of the C antigen depressed the uptake of anti‐D antibody by D positive cells.
The agglutination of D positive cells sensitized by I131 tagged D antibody in dilutions of antiglobulin serum was more intense and occurred at higher dilution as the concentration of adsorbed D antibody was increased. However, when a certain intensity of agglutination in dilutions of the antiglobulin serum was reached a manyfold addition of I131 tagged anti‐D antibody did not increase the intensity of agglutination.
When antibody‐coated cells were incubated with normal cells, antibody dissociated spontaneously and transferred to normal cells. The rate of transfer of I131 tagged antibody was directly related to the concentrations of antibody on the donor cells.
When cells coated with I131 tagged antibody were incubated in large volumes of medium the percentage loss of antibody was directly related to the concentration of the antibody adsorbed to the cell and to the volume of medium. The rate of spontaneous dissociation was greatest at 37°C and was progressively reduced at 25°C and 5°C.
Cells coated with I131 tagged antibody lost antibody more rapidly when untagged antibody was present in the surrounding medium, and the rate of loss was directly related to the concentration of unlabelled antibody in the surrounding medium. Observations of progressive dissociation of antibody indicate that antigen antibody binding is not homogeneous since a residual of bound antibody dissociated less rapidly than the majority.

Résumé

° L'anticorps anti‐D d'un donneur a été marqué au I131 et partiellement séparé des autres protéines par absorption et élution sur et à partir d'un stroma d'érythrocytes D positif
° Les érythrocytes D positif présumés homozygotes quant à l'antigène D absorbent davantage d'anti‐D marqué que les hétérozygotes. La présence de l'antigène C a une action dépressive sur la fixation de l'anti‐D sur les érythrocytes D positifs
° L'agglutination des érythrocytes D positifs sensibilisés par l'anti‐D marqué au I131 par des dilutions de sérum antiglobuline est d'autant plus forte et à des dilutions d'autant plus élevées que l'anti‐D absorbé est plus concentré. Cependant, quand un certain degré d'agglutination est atteint avec des dilutions du sérum anti‐globuline, un surcroit d'anticorps anti‐D marqué au I131 n'augmente pas l'intensité de la réaction
° Quand les érythrocytes sensibilisés sont incubés avec des érythrocytes normaux, l'anticorps se dissocie et se fixe aux érythrocytes normaux. Le degré de fixation aux érythrocytes normaux est directement proportionnel à la concentration d'anticorps fixés aux érythrocytes donneeurs
° Lorsque les érythrocytes sensibilisés par I'anticorps marqué au I131 sont incubés dans de grandes quantités du milieu la diminution d'anticorps en pour cent est directement proportionnelle à la concentration de l'anticorps absorbé à l'érythrocyte et au volume du milieu. Le degré de dissociation spontanée est le plus fort à 37°C et diminue progressivement à 25°C et 5°C
° Les érythrocytes sensibilisés par l'anticorps marqué au I131 perdent l'anticorps plus rapidement quand il se trouve dans le milieu ambiant un anticorps non marqué; le degré de perte est directement proportionnel à la concentration de l'anticorps non marqué se trouvant dans le milieu ambiant. Ces observations sur la dissociation progressive de l'anticorps indiquent que la liaison antigène‐anticorps n'est pas homogène puisque un résidu d'anticorps lié se dissocie moins rapidement que la plus grande partie de l'anticorps.

Zusammenfussung

Der Anti‐D‐Antikörper eines Einzelspenders wurde mit I131 markiert und durch Adsorption‐Elution an Stroma D‐positiver Erythrozyten teilweise von Begleitproteinen befreit.
Homozygote D‐positive Zellen adsorbierten größere Mengen dieses markierten Anti‐D‐Antikörpers als heterozygote Zellen. Die Adsorption von Anti‐D durch D‐positive Zellen wurde durch die Anwesenheit von C‐Antigen gehemmt.
Die Agglutination von I131‐Anti‐D‐sensibilisierten D‐positiven Zellen durch stufenweise verdünntes Antiglobulinserum war abhängig von der Konzentration der an der Zelloberfläche adsorbierten Antikörper. Stark beladene Zellen wurden durch höhere Verdünnungen des Antiglobulinserums agglutiniert als schwach beladene. Diese Reaktion zeigte insofern einen oberen Grenzwert als eine gewisse Agglutinationsstärke auch bei Zugabe eines Überschusses von I131‐Anti‐D nicht überschritten werden konnte.
Bei Vermischung antikörperbeladener Zellen mit Normalzellen erfolgte eine Spontandissoziation des Antikörpers mit Übergang desselben auf die Normalzellen. Die Transfergeschwindigkeit des Antikörpers stand in direkter Beziehung zur Antikörperkonzentration an der Oberfläche der «Spenderzellen«.
Bei Inkubation von I131‐Anti‐D‐sensibilisierten Zellen in großen Mengen Aufschwemmungsflüssigkeit findet eine Antikörperabgabe von den Zellen an die Flüssigkeit statt. Die abgegebene Menge steht in direkter Beziehung einerseits zur Menge der an der Zelloberfläche adsorbierten Antikörper und andererseits zum Flüssigkeitsvolumen. Bei 37° C war die Spontandissoziationsrate am größten; bei tieferen Temperaturen nahm sie progressiv ab.
Bei Anwesenheit unmarkierter Antikörper in der Aufschwemmungsflüssigkeit war die Dissoziation der markierten Antikörper von der Zelloberfläche erheblich erhöht. Die abgegebene Menge stand in direkter Beziehung zur Antikörper‐Konzentration in der Aufschwemmungsflüssigkeit. Beobachtungen über den fortlaufenden Antikörperschwund von der Zelloberfläche deuten auf eine Inhomogenität der Antigen‐Antikörperbindung hin, indem eine kleine Restmenge fester als die Hauptmenge des Antikörpers gebunden blieb.