The Purification of Antibody to PR8 Influenza A Virus
Authors: Isliker H. C. , Stuuss P. H. 
Published: March 2009

Summary

The solubility of human γ‐globulin in presence of various polymethacrylate concentrations was studied as a function of pH and ionic strength. At pH 5.9 and at ionic strengths below 0.1 maximal precipitation occurred at a polymer/protein ratio of 0.1. Under the same conditions PR 8 influenza A virus was not precipitated.
When subjected to a similar treatment a complex of influenza A virus with its homologous antibody yielded one third of the antibody present in the starting material purified by a factor of 50. Though time‐consuming and expensive this method is unique in that it permits the dissociation of antibody from a protein antigen in the inter‐isoelectric range.
Instead of using polyelectrolyte the virus‐antibody complex has also been dissociated at pH 3.2. In order to remove the virus the acidified solution has been centrifuged at 34 000 g. leaving the free antibody in the supernatant solution. The procedures (2) and (3) have been compared with the purification of antibody by adsorption on virus linked to an ion exchange resin and subsequent elution at pH 3.2.
The stability of antibodies has been studied as a function of pH and the efficiency of the methods with respect to yield and purity of antibodies is discussed.

Résumé

La solubilité de γ‐globuline humaine en présence de différentes concentrations de polymethacrylate a été étudiée en fonction du pH et de la concentration des ions. A un pH de 5,9 et à une concentration ionique inférieure à 0, 1, une precipitation maximum fut obtenue à une proportion polymère/protéine de 0,l. Dans ces mêes conditions, le virus PR8 d'influenza A ne fut pas précipité.
Soumis à un traitement semblable, un complexe virus‐anti‐corps‐homologue rendit un tiers de l'anticorps présent dans le complexe, purifié par un facteur de 50. Bien que cette méthode demande beaucoup de temps et qu'elle soit couteuse, elle est unique en ce qu'elle permet la dissociation d'un anticorps de son antigène protidique dans la zone inter‐isoélectripue.
Le complexe virus‐anticorps a pu aussi btre dissocié à un pH de 3,2. Ici, le virus fut séaré par centrifugation à 34 000 g., laissant l'anticorps en solution. Les procédés (2) et (3) ont été comparés avec la purification de l'anticorps par absorption sur virus lié à une résine échangeur d'ions et éution à pH 3,2.
La stabilité des anticorps en fonction du pH a été étudiée, et l'efficacité des méthodes par rapport à la pureté des anticorps obtenus, ainsi que leur rendement, sont discutés.

Zusammenfassung

Die Loslichkeit humanen γ‐Globulins wurde in Gegenwart eines kationischen Polyelektrolyten (Polymethacrylat) als Funktion des pH's und der Ionenstärke untersucht. Eine maximale Ausfällung erfolgte bei pH 5,9 und einem Verhiiltnis Polyelektrolyt/Eiweiß von 0,1. Niedrige Ionenstärken begünstigen die Ausflockung. PR8 Influenza A Virus läat sich unter keinen der angewendeten Unter‐suchungsbedingungen durch PolymethacryIat ausfällen.
Unter gleichartigen Bedingungen gelingt, es einen Komplex von Influenza A Virus mit dem homogenen Antiklörper zu spalten und ein Drittel des in der Ausgangslösung enthaltenen Antikörpers 50‐fach angereichert daraustellen. Dieses Verfahren weicht insofern von früheren Methoden ab, als es die Dissoziation eines Antikörpers von einem Eiweißantigen im interisoelektrischen Bereich ermöglicht.
Zum Vergleich wurde der Virus‐Antikörper‐Komplex statt mit Polyelektrolyt bei pH 3,2 dissoziert. Zur Entfernung des Virus wurde die Lösung bei 34 000 g zentrifugiert und der freie Antikörper aus der uberstehenden Lösung isoliert.
Die Stabilität verschiedener Antikörper wurde in Abhängigkeit des pH's untersucht. Die Ausbeute und der Reinheitsgrad der mit den beschriebenen Methoden dargestellten Antikörperpräparate wurden verglichen.