Zur spontanen und induzierten Rückdissoziation bei Brucellen
Authors: Reusse U. 
Published: September 2010

ZusammenfassungDie von Braun beschriebene induzierte Reversion (Rückdissoziation) von Br. abortus M‐ oder R‐Formen zur S‐Phase durch Kinetin konnte in eigenen Versuchen nicht bestätigt werden. Doch wurde von 8 geprüften Br. abortus‐Stämmen bei 3 Stämmen insgesamt 5mal (7% der angesetzten Versuche) spontan auftretende M → S‐Mutationen festgestellt.Theoretisch müßte es möglich sein, durch Anlegen entsprechend vieler Subkulturen aus jeder Dissoziationsform der 3 Brucella‐Species wieder S‐Formen zu isolieren.Mit Hilfe von Ein‐Zell‐Kulturen konnte der Beweis erbracht werden, daß die aus Mucoid‐Kulturen isolierten S‐Formen nicht etwa schon mit dem Inokulum in die Kulturen gelangt waren, sondern daß es sich wirklich um eine Mutation M → S gehandelt hat.Die erhaltenen Reversionen wurden mit Hilfe verschiedener Methoden (morphologischer Vergleich, Acriflavin‐Agglutination, Farbstoffhemmung, H2S‐Produktion, Stabilität in NaCl, Langsamagglutination, Papierchromato‐graphie, Feststellung des Dissoziationsindex und Virulenzprüfung an Mäusen) mit ihren zugehörigen Stamm S‐Formen verglichen. Während drei Reversionen typische S‐Formen darstellten und mit ihren Stamm S‐Formen völlig überein‐stimmten, erwiesen sich die Reversionen des Vakzinestammes 19 als zwei verschiedene SI‐Formen.Abschließend wird die Möglichkeit diskutiert, mit Hilfe der Virulenzprüfung an Mäusen und der Feststellung des Dissoziationsindex den Stamm 19 von Feldstämmen abzutrennen.SummarySpontaneous and induced reversion among BrucellaThe reversion of M‐ or R‐forms to the S‐phase of Br. abortus induced by Kinetin which was described by Braun could not be confirmed. Nevertheless, from a total of 8 strains of Br. abortus 3 strains on 5 occasions (7% of experiments) showed spontaneous M → S mutation.Theoretically it must be possible, if sufficient sub‐cultures were made, to obtain anew the S‐forms from each dissociation form of 3 Brucella species.With the help of single cell cultures it was shown that the S‐forms isolated from mucoid cultures were not present in the inoculum, but were in fact produced by a true mutation M → S.The reversions were compared with their corresponding S‐strain by a variety of methods (morphology, agglutination with acriflavin, inhibition by dyes, production of H2S, stability in NaCl, slow agglutination, paper chromatography, determination of the dissociation index and virulence determination in mice). Whereas 3 reversions represented typical S‐forms and were completely identical with the S‐forms of their strains, the reversions of vaccine Strain 19 appeared as two different SI‐forms.In conclusion, the possibility is discussed of distinguishing Strain 19 from field strains by virulence tests in mice and determining the dissociation index.RésuméLa réversion spontanée et provoquée des BrucellesLa réversion provoquée (Rückdissoziation) de Br. abortus décrite par Braun des formes M ou R à la phase S par le Kinetin ne put être confirmée par nos recherches personelles. Pourtant, sur un total de 8 souches de Br. abortus nous pûmes constater chez 3 souches et en tout 5 fois, soit 7% des essais entrepris des mutations spontanées M → S.Théoriquement il devrait être possible en effectuant un nombre suffisant de cultures d'obtenir à nouveau des formes S à partir de chaque forme de dissociation des trois espèces de Brucellas.En ensemencant des cellules bactériennes isolées on put administrer la preuve que les formes S obtenues à partir des cultures mucoïdes n'avaient pas été apportées par l'inoculum mais qu'il s'agissait vraiment d'une mutation M → S.Les réversions obtenues furent comparées avec la souche S correspondante au moyen de plusieurs méthodes (comparaison morphologique, agglutination à l'acriflavine, inhibition par les colorants, production de H2S, stabilité dans NaCl, agglutination lente, chromatographie sur papier, détermination de l'index de dissociation et essais de virulence sur la souris). Alors que 3 réversions représentaient des formes S typiques et correspondaient exactement aux formes S de leurs souches, les réversions de la souche vaccinale 19 se présentaient comme 2 formes SI différentes.Pour terminer on discute la possibilité de distinguer la souche 19 des souches de campagne au moyen de l'essai de virulence sur la souris et de la détermination de l'index de dissociation.ResumenSobre la retrodisociación espontánea e inducida en las brucellasLa reversión inducida (retrodisociación) de las formas M y R de Br. abortus a la fase S mediante cinetina, descrita por Braun, no se pudo confirmar por medio de ensayos propios. Sin embargo, de 8 cepas de Br. abortus estudiadas, en 3 de ellas se observó un total de cinco (7% de los ensayos realizados) mutaciones espontáneas de M a S.Teóricamente debería ser posible que obteniendo un gran número de subcultivos correspondientes a partir de cada forma disociativa de las 3 especies de Brucella se pudieran volver a aislar formas S.Con ayuda de cultivos unicelulares pudo demostrarse que las formas S aisladas de cultivos mucoides no habían ya llegado a los cultivos con el inóculo, sino que en realidad se trataba de una mutación M → S.Las reversiones obtenidas se compararon con ayuda de varios métodos (comparación morfológica, aglutinación con acriflavina, inhibición por colorantes, producción de ácido sulfhídrico, estabilidad en cloruro sódico, aglutinación lenta, papirocromatografía, determinación del índice de disociación y pruebas de virulencia en ratones) con sus correspondientes formas S originales. Mientras que tres reversiones representaban formas S típicas y coincidían por completo con sus formas S originales, las reversiones de la cepa vacunadora 19 presentaban dos formas SI diferentes.Al final se discute la posibilidad de separar la cepa 19 de la cepas campestres con ayuda de la prueba de virulencia en ratones y la determinación del índice de disociación.