Determination of Prolactin in Bovine Blood by Radioligand Receptor Assay and Comparison with Radioimmunological Evaluation
Authors: Nawito M. , Schams D. 
Published: August 2010

SummaryA specific and sensitive radioreceptor assay (RRA) using rabbit mammary gland as the receptor source is described for the measurement of bovine prolactin in blood. The sensitivity of the assay was improved by modifications of the conditions of the assay, including temperature and time of incubation, concentration of labelled hormone and concentration of calcium ions in the buffer system. The sensitivity of the method for endogenous bovine serum prolactin was 5 ng./ml. serum. Criteria of validation such as recovery of added prolactin to plasma or serum, reproducibility and specificity gave good results.The pattern of prolactin concentrations in serum samples under different physiological conditions such as around parturition, after teat stimulation and machine milking and after injection of TRH showed a very close correlation whether measured by radioimmunoassay or receptorassay. This provides additional proof of the biological validity of the sensitive and efficient radioimmunoassay, which also specifically measures prolactin.ZusammenfassungBestimmung von Prolaktin im Rinderblut mittels Radiorezeptortest und Vergleich mit dem RadioimmuntestEs wird ein spezifischer und empfindlicher Radiorezeptortest (RRA) unter der Verwendung von Zellmembran aus Kaninchenmilchdrüsen für die Messung von Prolaktin im Rinderblut beschrieben. Die Empfindlichkeit der Methode konnte durch Modifikationen der Testbedingungen einschließlich der Temperatur, Inkubationszeit, Konzentration von markiertem Hormon sowie der Konzentration von Calciumionen im Puffersystem verbessert werden. Die Empfindlichkeit der Methodik für die Messung von endogenem Rinderserumprolaktin beträgt 5 ng./ml. Die Gültigkeitskriterien, wie Wiederfindung von zugesetztem Prolaktin zu Rinderserum oder ‐plasma, die Reproduzierbarkeit und Spezifität ergeben gute Ergebnisse. Im Vergleich mit den gemessenen Prolaktinkonzentrationen im Blutserum von Proben erhalten unter verschiedenen physiologischen Bedingungen, z. B. um den Zeitpunkt der Geburt, nach Zitzenstimulation oder Maschinenmelken sowie nach TRH Stimulation, ergab sich eine enge Korrelation zwischen Radioimmuntest und Radioreceptortest. Die biologische Relevanz des empfindlichen und effizienten sowie für die Prolaktinmessung spezifischen Radioimmuntests konnte damit erneut unter Beweis gestellt werden.RésuméDétermination de la prolactine dans le sang de bovin au moyen du test de radiorécepteur par comparaison avec le test radioimmunologiqueUn test de radiorécepteur (RRA) spécifique et sensible en utilisant une membrane cellulaire de la glande mammaire du lapin pour la mesure de la prolactine dans le sang de bovin est décrit. La sensibilité de la méthode a pu être améliorée en modifiant les conditions du test comprenant la température, le temps d'incubation, la concentration de l'hormone marquée et la concentration des ions de calcium dans le système tampon. La sensibilité de la méthode pour la mesure de la prolactine endogène du sérum bovin fut de 5 ng/ml. Les critères de validité comme la mise en évidence de la prolactine ajoutée au sérum ou au plasma bovin, la reproductibilité et la spécificité ont donné de bons résultats. Par comparaison avec des concentrations de prolactine mesurées dans le sérum sanguin et obtenues à partir d'échantillons provenant de différentes situations physiologiques telles que le moment de la mise‐bas, après une stimulation des pis ou traite à la machine et stimulation au TRH, il y a eu étroite corrélation entre le test radioimmunologique et le test de radioréception. L'application biologique du test radioimmunologique sensible, efficace et spécifique dans la mesure de la prolactine a pu ainsi être à nouveau démontrée.ResumenLa determinación de prolactina en sangre vacuna mediante el ensayo radiorreceptor y comparación con la prueba radioinmunológicaSe describe una prueba radiorreceptora (RRA), específica y sensible, empleando una membrana celular de glándulas lácteas de coneja para la medida de la prolactina en la sangre de vacas. La sensibilidad del método se pudo mejorar mediante modificaciones de las condiciones de prueba incluso de la temperatura, tiempo de incubación, concentración de hormona marcada así como de la concentración de iones de calcio en el sistema tampón. La sensibilidad de la metodología para la medición de prolactina endógena del suero sanguíneo vacuno es del orden de 5 ng/ml. Los criterios de validez, tales como la recuperación de la prolactina añadida a suero o plasma bovino, la reproducibilidad y especificidad arrojan resultados buenos. En la comparación con las concentraciones de prolactina medidas en el suero sanguíneo de muestras obtenidas bajo condiciones fisiológicas diversas, por ej. en el momento del parto, tras estimulación de los pezones u ordeño mecánico como tras estimulación con TRH, se infirió una correlación estrecha entre la prueba radioinmunológica y la prueba radiorreceptora. Con lo cual se pudo demonstrar de nuevo la relevancia biológica de la prueba radioinmunológica sensible, eficiente y específica en la valoración de la prolactina.