Interacción de receptores gonadales de testículo de rata con gonadotrofina coriónica humana: Implicaciones experimentales del efecto de dilución
Authors: Rojas Francisco J. , Moretti‐Rojas Ines , de Bellabarba Gabriela , Bishop Walter 
Published: August 2010

ResumenEste trabajo demuestra que la estimación del número de sitios receptores testiculares (Bmax) a LH/hCG y de su constante de disociación (Kd) son afectados por la dilución de la reacción. Las implicaciones de estos resultados fueron consideradas en relación a los estudios de un factor inhibidor de la unión de LH/hCG a receptores gonadales, obtenido de un extracto acuoso de testículo de rata. Se demostró que después de corregir el efecto de dilución producido por la incubación y el lavado de la reacción, 200 μl. del extracto testicular era capaz de inhibir la formación del complejo de hCG‐receptor en un 35% (P < 0,0005). La no consideración del efecto de dilución hubiera conducido a la interpretación, que el factor inhibidor ejercía también un efecto significativo sobre la disociación de dicho complejo (28%, P < 0,001). Estas observaciones fueron inherentes a la reacción hormona‐receptor ya que en la ausencia de hCG, no se detectó ningún efecto por la incubación o por el lavado sobre la preparación de receptores. Se enfatiza, por lo tanto, la importancia de considerar los efectos de dilución de la reacción que ocurren cuando se usan volúmenes de reacción grandes, o cuando se lava la preparación de receptores una vez completada la reacción de unión con la hormona.ZusammenfassungWechselwirkungen zwischen testikulären Gonadotropin‐Rezeptoren bei der Ratte und menschlichem Choriongonadotropin: Einfluß der experimentellen VerdünnungDie Schätzung der Anzahl testikulärer Rezeptoren für die Bindung von LH/HCG bei der Ratte (Bmax) und die Dissoziationskonstante (Kd) sind abhängig vom Reaktionsvolumen des Testansatzes. Ursache für dieses Phänomen ist ein Faktor, der aus dem Überstand (105,000 g) eines Ratten‐Hodenextraktes gewonnen werden kann und der bei der Bildung des Hormon‐Rezeptor‐Komplexes zu interferieren vermag. Werden keine Korrekturen bezüglich der Verdünnung gemacht, so resultiert durch diesen Faktor auch ein signifikanter Einfluß auf die Dissoziation des Komplexes (p < 0,001). Aufgrund dieser Beobachtungen ergibt sich die Notwendigkeit, bei Gonadotropin‐Bindungs‐Assays durch adäquate Kontrollen den Verdünnungseffekt zu korrigieren.SummaryInteraction of rat testicular receptors with human chorionic gonadotrophin: Experimental implications of the effects of dilutionThe effects of reaction volume and washing upon the binding of human chorionic gonadotrophin (hCG) to rat testicular receptors were studied. It was demonstrated that the number of detectable hormone‐binding sites (Bmax) and the apparent equilibrium dissociation constant (Kd) were highly dependent upon the reaction volume in which the binding assays were carried out. Thus, the results suggest that caution be exercised in the application of the rapid equilibrium model as a true representation of the actual binding interaction between gonadotrophins and particulate receptors. These findings prompted us to re‐examine the studies with respect to a factor obtained from a 105,000 g. supernatant of rat testis which inhibits hCG binding to gonadal receptors. It was revealed that after correction for dilution of the binding reaction, the binding inhibitor prevented hCG binding principally, if not entirely, by interfering with the formation of the hormone‐receptor complex. However, if no such corrections were made, then the binding inhibitor also appeared to exert a significant effect upon dissociation of the complex (28 p%; P < 0.001). Our results, therefore, emphasize the need to introduce the appropriate controls to correct for the dilution effects occurring during gonadotrophin‐binding assay studies.RésuméInteractions des récepteurs testiculaires du rat avec la gonadotropine chorionique humaine: Implications expérimentales des effets de dilutionl'évaluation du nombre des récepteurs testiculaires pour la liaison de LH/HCG chez des rats (Bmax) et la constante de dissociation (Kd) dépendent du volume de réaction de la disposition du test. L'origine de ce phénomène est un facteur qui peut être obtenu à partir du surnageant (105 000 g) d'un extrait testiculaire de rat et qui pourrait interférer lors de la formation du complexe hormone‐récepteur. Si des corrections concernant la dilution ne sont pas faites, il en résulte par ce facteur une influence significative sur la dissociation du complexe (p < 0,001). Il est nécessaire sur la base de ces observations lors d'essais de liaison de la gonadotropine de corriger l'effet de dilution par des contrôles adéquats.