Das Agar‐Präzipitationsverfahren bei der Entenhepatitis, der Newcastle‐Krankheit und besonders der klassischen Schweinepest — Seine Leistungsfähigkeit und Grenzen in der Virusdiagnostik —*
Authors: Wachendörfer G. 
Published: August 2010

Zusammenfassung

Das Agar‐Präzipitationsverfahren nach Ouchterlony gibt beim Nachweis des Viruspräzipitiogens und der entsprechenden Präzipitine klare und spezifische Ergebnisse, sofern die notwendigen Kontrollsysteme eingeschaltet werden. Dies wird anhand des Testes bei der klassischen Schweinepest gezeigt. Eine wertvolle Hilfe leistet hierbei die Identitätslinie nach Ouchterlony, wodurch die Spezifität der Reaktionen sichergestellt ist. Auszuschließen sind gegebenenfalls durch Antigenverwandtschaft der Viren bedingte Kreuzreaktionen. Durch diese wird die Spezifität des Testes eingeengt.
Präzipitinogene und Präzipitine nicht viraler Natur komplizieren den Agargel‐Test und können zu Fehlbeurteilungen führen, da es in vielen Fällen nicht gelingt, das Virus von den im Nährmedium vorhandenen Proteinen völlig zu trennen. Diese Verhältnisse haben vermutlich bei der Entenhepatitis zu Fehlbeurteilungen Anlaß gegeben.
Obgleich sehr empfindlich im Qualitativen, ist die Agar‐Präzipitation nach Ouchterlony im Quantitativen anderen Antigen‐Antikörperreaktionen unterlegen. Dies ist beispielsweise aus der hohen Diskrepanz der Hämagglutinin‐ und Präzipitinogentiter beim Newcastle‐Virus abzuleiten. Die relative Unempfindlichkeit in quantitativer Hinsicht ermöglicht unter bestimmten Voraussetzungen bei der Newcastle‐Krankheit die Abgrenzung vakzinationsbedingter Titer von Infektionstitern in Hühnerseren.
Eindeutige Ergebnisse lassen sich im phenolhaltigen Diffusionsmedium nur erzielen, wenn weitgehend von Lipoiden gereinigte Seren benutzt werden. Die bei der klassischen Schweinepest in der Literatur vertretene Ansicht über „falsch positive” Reaktionen bei der Untersuchung von Pankreasproben gesunder Schweine wird auf die Verwendung nicht lipoidfreier Seren zurückgeführt.
Auch bei der Viruspräzipitation im Agargel ist mit dem Zonenphänomen zu rechnen. Hieraus ergibt sich die Notwendigkeit, beim Nachweis des Präzipitinogens mit mehreren Verdünnungen des Testserums zu arbeiten. Dies bestätigte sich bei Untersuchungen an diagnostischem Material der klassischen Schweinepest. Der Antigengehalt in etwa ein Drittel der Bauchspeicheldrüsen wurde erst mit Verdünnungen des Testserums erfaßt, weil er in Relation zum unverdünnten Serum zu gering war.
Die Leistungsfähigkeit des Testes in der Routinediagnostik wird am Modell der klassischen Schweinepest demonstriert. Er stellt zur Zeit bei dieser Krankheit die einzige serodiagnostische Methode dar, die in jedem Fall in einem Bestand eine spezifische Diagnose ermöglicht.

SummaryThe agar precipitation test in duck hepatitis, Newcastle disease and particularly classical swine fever—its functional capacity and limitations in virus diagnosis

So long as the necessary control systems are included, Ouchterlony's agar precipitation test gives clear and specific results. These are illustrated in classical swine fever. Valuable assistance is obtained from the lines of identity which ensure the specificity of the reactions. Cross‐reactions as a result of related viruses are sometimes a problem and interfere with the specificity of the test.
Precipitinogens and precipitins of non‐virual nature complicate the test and can lead to false results as it may not be possible in many cases to distinguish between the virus and proteins present in the medium. This is probably the reason for failures in the case of duck hepatitis.
Although the test is very effective qualitatively it is not so effective quantitatively as other antigen‐antibody reactions. This accounts, for example, for the considerable discrepancy between the haemagglutinin and precipitinogen titres with Newcastle disease virus. The relative insensitiveness quantitatively makes it possible under certain conditions to distinguish in Newcastle disease between titres produced by vaccination and those resulting from infection.
Clear results with diffusion media containing phenol can be obtained only with sera freed from lipoids. Reports of false positive reactions in the literature dealing with classical swine fever in pancreas tests from healthy pigs were probably attributable to the use of sera which were not free from lipoids.
The agar gel test is also susceptible to the zone phenomenon and this makes it necessary to use several dilutions of the test serum when demonstrating the precipitinogen. Classical swine fever provides an example. In about one‐third of pancreases the antigen is detected only when dilutions of the test serum are used because its concentration is too low to react with undiluted serum.
The value of the test in routine diagnosis is demonstrated with the model of classical swine fever in which at the present time it is the only method of serological diagnosis which permits a specific diagnosis in each case in a herd.

RésuméLe test de précipitation sur gélose dans l'hépatite des canetons, la maladie de Newcastle et surtout la peste porcine classique. — Ses possibilités et ses limites dans le diagnostic des maladies à virus

Le test de précipitation sur gélose selon Ouchterlony donne des résultats clairs et spécifiques pour la mise en évidence du précipitinogène du virus et des précipitines correspondantes, à condition d'utiliser des systèmes de contrôle appropriés. La ligne d'identité d'Ouchterlony représents à cet effet une aide précieuse et garantit la spécificité de la réaction.
Au cours de recherches personnelles, l'auteur ne put découvrir aucune réaction spécifique pour le virus de l'hépatite des canetons.
Bien que qualitativement très sensible, le précipito‐diagnostic sur gélose selon Ouchterlony est inférieur du point de vue quantitatif à d'autres méthodes de réaction antigène‐anticorps. Dans la maladie de Newcastle, cette insensibilité relative permet de distinguer dans des conditions déterminées, les titres sériques post‐vaccinaux des titres consécutifs à une infection.
On ne peut obtenir des résultats certains dans un milieu de diffusion contenant du phénol que si l'on utilise des sérums exempts de lipoïdes suffisamment purifiés. Dans le cas de la peste porcine classique, l'opinion souvent exprimée concernant des réactions positives trompeuses lors d'analyse de spécimens de pancréas de porcs sains est due à l'emploi de sérums contenant des lipoïdes.
Même dans le précipito‐diagnostic du virus sur gel d'agar‐agar, il faut compter avec les phénomènes de zones. D'où la nécessité, selon les expériences de l'auteur, au moins pour le cas de la peste porcine classique, de travailler avec plusieurs dilutions de serum‐test pour la mise en évidence du précipitinogène.
Le test sur gel d'agar‐agar représente actuellement dans la peste porcine la seule méthode de séro‐diagnostic qui permette dans tous les cas un diagnostic spécifique dans une porcherie.

ResumenLa técnica de precipitación en agar en la hepatitis del pato, la enfermedad de Newcastle y, en especial, en la peste porcina clásica. Su capacidad de rendimiento y límites en el diagnóstico virósico

La técnica de precipitación en agar según Ouchterlony ofrece en la identificación del precipitinógeno virósico y de las precipitinas correspondientes unos resultados claros y específicos, siempre y cuando se intercalen los sistemas precisos de control. La línea de identidad según Ouchterlony proporciona aquí una ayuda muy valiosa, con lo cual se salvaguarda la especificidad de la reacción.
En investigaciones propias no se pudieron lograr reacciones específicas de virus en la hepatitis de los patos.
Aunque muy sensible en cuanto a la calidad, la precipitación en agar según Ouchterlony resulta inferior a otras reacciones antígeno‐anticuerpo. Esta relativa insensibilidad en el aspecto cuantitativo permite, bajo determinadas condiciones previas, delimitar en la enfermedad de Newcastle los títulos condicionados por vacunación de los títulos debidos a infección en sueros sanguíneos de gallinas.
Resultados inequívocos solo se obtienen en el medio de difusión, que contiene fenol, cuando se emplean sueros purificados de lipoides a suficiencia. El punto de vista admitido en la peste porcina clásica por parte de la bibliografía sobre reacciones “positivas falsas” en el examen de muestras pancreáticas de cerdos sanos se atribuye al empleo de sueros no liberados de lipoides.
También en la precipitación virósica en gel de agar debe contarse con el fenómeno de zona. De aquí se desprende, con arreglo a las experiencias hechas hasta la fecha, al menos en lo concerniente a la peste porcina clásica, la necesidad de trabajar en la identificación del precipitinógeno con varias diluciones del suero problema.
La prueba en gel de agar es, hoy por hoy, en la peste porcina el único método serodiagnóstico que en cada caso permite establecer un diagnóstico específico en cualquier explotación.