Bestimmung von Antikörpern gegen Adeno‐assoziierte Viren beim Huhn mit Hilfe des ELISA
Authors: Schwarzmaier Johanna , Bauer H. J. , Monreal G. 
Published: August 2010

ZusammenfassungDer indirekte Enzyme‐linked Immunosorbent Assay (ELISA) wurde auf seine Eignung für den Nachweis von Antikörpern gegen aviäres Adeno‐assoziiertes Virus (AAAV) geprüft.Für die Gewinnung des Antigens wurde das Virus nach Behandlung mit Trichlortrifluorethan über Stufen‐ und Gleichgewichtsdichtegradienten gereinigt und konzentriert.Die Spezifität des AAAV‐ELISA‐Systems wurde durch Untersuchung von 27 SPF‐Normalseren sowie einigen gegen andere Virusarten gerichteten Hyperimmunseren abgesichert. Als Grenzwert zur Unterscheidung von positiven und negativen Seren wurde ein Extinktionswert von 0,200 festgesetzt.Der Vergleich der Sensibilität von ELISA und AGP zum Nachweis von Antikörpern gegen AAAV ergab eine starke Überlegenheit des ELISA gegenüber dem Immundiffusionstest.Der Verlauf der Antikörperbildung im Infektionsversuch zeigte einen Anstieg der Antikörpertiter über 6 Wochen und eine Persistenz über weitere 6 Wochen.Untersuchungen von Broiler‐Elterntierbeständen auf AAAV‐Infektionen ergaben, daß in allen untersuchten Herden Antikörper gegen AAAV nachzuweisen waren. Die Antikörpertiter fast aller Herden fielen nach der 12. Lebenswoche ab und stiegen um die 30. Lebenswoche wieder an.SummaryDetermination of antibodies against adeno‐associated antibodies in the hen with the aid of ELISAThe indirect enzyme‐linked immunosorbent assay (ELISA) was examined for its suitability for demonstrating antibodies against avian adeno‐associated virus (AAAV).To obtain antigen the virus was treated with trichlortrifluorethane on density gradients with steps and equilibration for its concentration and purification.The specificity of the AAAV‐ELISA system was proved by a study of 27 SPF normal sera and a number of hyperimmune sera prepared against other viral species. The dividing line to distinguish positive and negative sera was an extinction value of 0.200.Comparison of the sensitivity of the ELISA and the AGP (agar gel precipitation) for demonstration of antibodies against AAAV gave a marked superiority of the ELISA over the AGP.The course of antibody production in the course of infection showed a rise in antibody titre after 6 weeks and persistence for a further 6 weeks.Studies on broiler‐older bird flocks for AAAV infection showed that antibodies against AAAV were present in all the flocks. The antibody titres in almost all flocks fell after week 12 and rose again around the 30th week after hatching.RésuméDétermination des anticorps contre des Adenovirus associés chez la poule avec ELISAOn a examiné la capacité d'un Enzyme‐linked Immunosorbent Assay indirect (ELISA) pour la mise en évidence d'anticorps contre un Adenovirus associé aviaire (AAAV).Le virus a été purifié et concentré après un traitement au trichlortrifluorethane sur des gradients de densité en paliers et d'équilibrage pour l'obtention de l'antigène.La spécificité du système AAAV‐ELISA a été assurée en examinant 27 sérums SPF normaux et quelques hyperimmunsérums d'autres espèces virales. Une valeur d'extinction de 0,200 a servi de limite de différentiation entre les sérums positifs et négatifs.La comparaison de la sensibilité entre ELISA et la précipitation sur gel d'agar (AGP) pour la mise en évidence des anticorps anti‐AAAV a révélé une forte suprématie de l'ELISA par rapport au test d'immunodiffusion. L'évolution de la formation des anticorps dans un essai d'infection a montré une augmentation du titre des anticorps sur 6 semaines et une persistence sur 6 autres semaines.Des recherches concernant des infections AAAV dans des exploitations parentales de «Broiler» ont montré que des anticorps anti‐AAAV existaient dans tous les troupeaux examinés. Les titres d'anticorps de presque tous les troupeaux sont tombés après la douzième semaine de vie pour remonter autour de la trentième semaine.ResumenLa verificación de anticuerpos frente a virus adeno‐asociados en la gallina con ayuda del ELISASe examinó el ensayo inmunosorbente indirecto ligado a la enzima (ELISA) en cuanto a su idoneidad para la puesta en evidencia de anticuerpos frente al virus aviar adenoasociado (AAAV).Para la consecución del antígeno se purificó y concentró el virus, tras tratamiento a base de triclorotrifluoretano, a través de gradientes escalonados y de equilibrios.La especificidad del sistema AAAV‐ELISA se aseguró por medio de exámenes de 27 sueros normales SPF así como algunos sueros hiperinmunes dirigidos frente a otras especies de virus. Como valor límite para distinguir los sueros positivos de los negativos se estableció un valor de extinción de 0,200.La comparación de la sensibilidad del ELISA y AGP para la puesta en evidencia de anticuerpos frente a AAAV arrojó una supremacía considerable del ELISA frente a la prueba de inmunodifusión.El curso de la anticuerpogénesis en el ensayo de infección mostró un incremento de los títulos de anticuerpos a lo largo de 6 semanas y una persistencia durante otras 6 semanas.Las indagaciones en los efectivos de animales padres de «broilers» con respecto a infecciones AAAV tuvieron por resultado que en todas las gallinerías examinadas se pudieron poner en evidencia anticuerpos frente a AAAV. Los títulos de anticuerpos de casi todas las averías disminuyeron tras la 12asemana de vida, volviendo a aumentar de nuevo hacia la 30asemana de vida.