Hämagglutination und Hämolyse durch einen eiadaptierten Stamm des Osttyps des amerikanischen Pferdeencephalitis‐Virus
Authors: Mussgay Manfred , Lederhilger Gisela 
Published: September 2010

ZusammenfassungEs wird die Agglutination von Kückenerythrozyten durch einen eiadaptierten Stamm des Osttyps der amerikanischen Pferdeencephalitis beschrieben. Das Hämagglutinin wurde aus infizierten hühnerembryonen durch Aceton‐Äther‐Extraktion gewonnen. Die Hämagglutinations‐Reaktion hat ihr Maximum bei einem pH von 5,9 bis 6,3 und bei einer Temperatur von 37° C. Der pH‐Bereich, in dem die Hämagglutinations‐Reaktion abläuft, erweitert sich mit steigender Salzkonzentration und verschiebt sich dabei schwach auf niedrigere pH‐Stufen. Bei hohen Salzkonzentrationen (0,4 m NaCl‐Phosphatpuffer) erhöht sich der Hämagglutinations‐Titer. Auch die Agglutination der Erythrozyten bei 20° C oder 4° C steht in Abhängigkeit von der Salzkonzentration. Sie ist bei diesen Temperaturgraden schwächer als bei 37° C.Bei Temperaturen über 20° C ist mit der Hämagglutination eine Hämolysereaktion gekoppelt. Die Hämolyseaktivität ist bei einem pH von 6,0 und bei einer Temperatur von 44° C bis 50° C am stärksten. Der Hämagglutinations‐Titer und die Menge der gelösten Erythrozyten sind dabei auch von der Konzentration der Reagenzien abhängig. Das Hämolysin ist hitzebeständiger als das Hämagglutinin. Bei Ultraviolett‐Bestrahlung wird zuerst die Infektiosität aufgehoben, während die Hämagglutinations‐ und Hämolysetiter parallel abfallen. Die Bebrütung der Erythrozyten mit RDE (Receptor Destroying Enzyme) hatte keinen Einfluß auf die Hämagglutination und Hämolyse.Überstände, die aus viruspositiven Embryohomogenaten durch Protaminfällung gewonnen wurden, zeigten eine Hämagglutination, aber keine Hämolyse.Das Hämagglutinations‐ und Hämolysevermögen ist nicht an die Infektiosität gebunden.Negative Kontrollversuche und die Hemmung durch Antiserum sprechen für eine Spezifität der Hämagglutinations‐ und Hämolysereaktion.SummaryHaemagglutination (HA) and Haemolysis (HL) by an egg‐adapted strain of the Eastern type of the American equine encephalitis virus. 1. Studies on the conditions of the reaction and on some characteristics of the haemagglutinin and haemolysinThe authors describe the agglutination of fowl erythrocytes by a haemagglutinin extracted from chick embryos infected with an egg‐adapted strain of the Eastern type of the E. E. virus. The agglutinin was extracted with acetone and ether. HA was maximal at pH 5.9–6.3 and at a temperature of 37° C. The range of pH over which the reaction occurred became wider with increasing salt concentration and at the same time moved somewhat towards lower pH values. At high salt concentrations (0.4 M NaCl‐phosphate buffer) the HA titre is raised. Agglutination at 20° C or 4° C also depends on the salt concentration, being weaker at these temperatures than at 37° C.At temperatures above 20° C HL is coupled with HA. HL is most marked at pH 6.0 and in the temperature range 44–50° C. The HA titre and the mass of lysed red cells also depend on the concentration of the reagents. The haemolysin is more heat resistant than the haemagglutinin. Ultraviolet irradiation first eliminates the infectivity, while the HA and HL titres fall. Incubation of red cells with receptor‐destroying‐enzyme had no effect on HA and HL.Fractions resulting from precipitation of virus‐positive embryo homogenates with protamine showed HA but no HL.HA and HL activities are not bound up with infectivity.Negative control experiments and inhibition by antiserum support the view that HA and HL are specific reactions.RésuméHémagglutination et hémolyse provoquées par une souche du type est du virus américain de l'encéphalite du cheval adaptée à l'embryon de poulet1ere communication: Recherches sur les conditions de réaction et quelques particularités de l'hémagglutinine et de l'hémolysine.Les auteurs décrivent l'agglutination des hématies de poulet provoquée par une forme adaptée à l'oeuf du type est de l'encéphalite américaine du cheval. L'hémagglutinine fut obtenue par extraction à l'éther‐acétone à partir du embryons de poulets infectés. La réaction d'hémagglutination atteint son maximum à un pH de 5,9–6,3 et à une température de 37° C. Le champ de variation du pH dans lequel la réaction d'hémagglutination peut avoir lieu augmente avec une concentration saline plus grande et se déplace légérement vers des valeurs plus faibles du pH. A de hautes concentrations salines (solution tampon à 0,4 n NaCl‐phosphate), le titre de l'hémagglutination augmente. L'agglutination des hématies à 20° C ou 4° C dépend également de la concentration saline. Elle est plus faible à ces températures qu'à 37° C.A des températures dépassant 20° C une réaction d'hémolyse s'ajoute à l'hémagglutination. L'activité hémolytique est maxima à un pH de 6,0 et à une température de 44°–50° C. Le titre d'hémagglutination et la quantité des hématies détruites dépendent également de la concentration des solutions employées. L'hémolysine est plus thermostabile que l'hémagglutinine. Au cours d'expositions aux rayons ultra‐violets l'infectiosité est d'abord supprimée, tandis que les titres d'hémagglutination et d'hémolyse tombent parallèlement. L'incubation des hématies au contact du RDE (Receptor Destroying Enzyme) n'eut aucune action sur l'hémagglutination et l'hémolyse.Les solutions obtenues à partir d'émulsions homogénéisées d'embryons de poulet contenant du virus après précipitation des protamines provoquaient une hémagglutination, mais non une hémolyse.Le pouvoir d'hémagglutination et le pouvoir d'hémolyse ne sont pas liés à l'infectiosité.Des essais de contrôle négatifs et l'inhibition des réactions par des antisérums semblent confirmer la spécificité des réactions d'hémagglutination et d'hémolyse.ResumenLa hemoaglutinación y la hemolisis producidas por una cepa adaptada al huevo del tipo oriental del virus de la encefalitis equina americana1. Comunicación: Investigaciones sobre las condiciones reactivas y algunas propiedades de la hemoaglutinina y la hemolisina.Se describe la aglutinación de los hematíes de pollo producida por una cepa adaptada al huevo del tipo oriental de la encefalitis equina americana. La hemoaglutinina se obtuvo mediante extracción con acetona‐éter de los embriones de pollo infectados. La reacción de la hemoaglutinación tiene su máximo con un pH de 5,9–6,3 y con una temperatura de 37° C. La amplitud del pH, en la cual se produce la reacción de hemoaglutinación, se incrementa aumentando la concentración salina y se desplaza, con ello, ligeramente a escalas de pH más bajas. En las concentraciones salinas elevadas (0,4 m de tampón ClNa‐fosfato) se aumenta el título de la hemoaglutinación. También la aglutinación de los eritrocitos a 20° C. ó 4° C. está en dependencia de la concentración salina. En estos grados de temperatura es algo más débil que a los 37° C.En las temperaturas superiores a 20° C., a la hemoaglutinación se acopla una reacción hemolítica. La actividad hemolítica es máxima con un pH de 6,0 y a la temperatura de 44° C.–50° C. El título de la hemoaglutinación y la cantidad de los eritrocitos lisados también dependen aquí de la concentración de los reactivos. La hemolisina es más termorresistente que la hemoaglutinina. Tras la irradiación ultravioleta se inhibe primeramente la infecciosidad, mientras que los títulos de hemoaglutinación y de hemolisis disminuyen paralelamente. El enturbiamiento de los hematíes producido por el RDE (fermento destructor del receptor) no ejercía ninguna influencia sobre la hemoaglutinación y la hemolisis.Los precipitados, obtenidos a partir de los homogenados embrionarios con protamina, presentaban hemoaglutinación pero no la hemolisis.Las capacidades hemoaglutinantes y hemolítica no se hallan ligadas a la infecciosidad.Los ensayos de control negativos y la inhibición por el antisuero abogan por la especificidad de las reacciones de hemoaglutinación y de hemolisis.