ИСПОЛЬЗОВАНИЕ дбцАМФ ДЛЯ КАПАЦИТАЦИИ СПЕРМАТОЗОИДОВ ПРИ ОПЛОДОТВОРНИИ ЯЙЦЕКЛЕТОК КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА in vitro
Authors: Сметанина И.Г. 
Published: December 2024

В момент эякуляции сперматозоиды млекопитающих не обладают способностью пенетрировать созревшие ооциты, а in vitro они приобретают оплодотворяющую способность в процессе капацитации, для активации которой в икубационную среду вводят различные биологически активные добавки. Недостатки этого метода заключаются в трудности подбора этих добавок для моделирования естественных условий капацитации в матке или яйцеводе. Альтернативный подход состоит в создании системы капацитации, в которой вместо биологических добавок используются определённые химически чистые соединения. Цель проведенного исследования – разработка химически “определенной” системы получения созревших in vitro ооцитов и криоконсервированных сперматозоидов. В безбелковую среду оплодотворения Тироде в качестве капацитирующего агента вводили дбцАМФ в концентрации 100 мкМ (вместо гепарина в концентрации 10 мкг/мл); при этом среда оплодотворения не содержала глюкозы, или других добавок, активирующих сперматозоиды. Критерием нормального оплодотворения считали развитие эмбрионов до 4-8-клеточной стадии. Полученные результаты показывают, что сперматозоиды, капацитированные в инкубационной среде в присутствии дбцАМФ, могут с высокой эффективностью оплодотворять in vitro ооциты крупного рогатого скота, созревшие вне организма в безбелковой среде. Это позволяет создать полностью химически “определённую” систему получения эмбрионов данного вида in vitro без добавок, активирующих сперматозоиды, что особенно важно для исследовательских целей по повышению эффективности получения in vitro эмбрионов крупного рогатого скота.
At the moment of ejaculation, mammalian spermatozoa do not have the ability to penetrate mature oocytes, and in vitro they acquire fertilizing ability in the process of capacitation, to activate which various biologically active additives are introduced into the incubation medium. The disadvantages of this method are the difficulty in selecting these additives to simulate the natural conditions of capacitation in the uterus or oviduct. An alternative approach is to create a capacitation system that uses certain chemically pure compounds instead of biological additives. The aim of the study was to develop a chemically defined system for obtaining in vitro matured oocytes and cryopreserved spermatozoa. As a capacitating agent, dbcAMP was introduced into a protein-free Tyrode fertilization medium at a concentration of 100 μm (instead of heparin at a concentration 10 μg/ml); while the fertilization medium did not contain glucose, as well as any additives that activate spermatozoa. The development of embryos up to the 4-8-cell stage was considered as the criterion for normal fertilization. The results obtained show that spermatozoa capacitated in an incubation medium in the presence of dbcAMP can fertilize in vitro bovine oocytes matured outside the body in a protein-free medium with high efficiency. This makes it possible to create a completely chemically “defined” system for obtaining embryos of this species in vitro without additives t activating spermatozoa, which is especially important for research purposes to increase the efficiency of obtaining bovine embryos in vitro.