Исследование структурно-функционального состояния тромбоцитов методом проточной цитометрии и значимость его использования в диагностике геморрагического синдрома невыясненного генеза
Authors: Е.В. Шамова , А.Ю. Кохан , Л.М. Лукьяненко , В.В. Дмитриев 
Published: November 2024

Введение. Среди пациентов с геморрагическим синдромом можно выделить группу лиц, для которых характерно отсутствие нарушений со стороны плазменного звена гемостаза. В данной работе для выяснения причин геморрагического синдрома невыясненного генеза у детей исследована функциональная активность тромбоцитов методом проточной цитометрии. Цель. Оценить параметры функциональной активности тромбоцитов у детей с геморрагическим синдромом невыясненного генеза методом проточной цитометрии. Материалы и методы. В исследование включены 35 детей с проявлениями гемор- рагического синдрома, в том числе 15 – с нарушением агрегации тромбоцитов и 20 – без нарушений (по данным оптической и импедансной агрегатометрии). У всех детей были исключены нарушения плазменного звена свертывания крови. Анализ функционального состояния тромбоцитов проводили методом проточной цитометрии с использованием флуоресцентно меченных аннексина V и антител к СD41, PAC-1, CD42b, CD62P, CD63. Результаты. В группе пациентов с геморрагическим синдромом и сниженной агрегацией при активации тромбоцитов установлено достоверное увеличение (по отношению к контрольной группе) их размеров (FSC) и гранулярности (SSC), снижение общего количества мембранного рецептора GPIIb/IIIa (CD41) и его активированной формы (PAC-1). В отсутствие активации тромбоцитов в данной группе обнаружено достоверное снижение количества адгезионного рецептора GPIb (CD42b). В группе пациентов с сохраненной агрегацией у 12 из 15 обследуемых выявлено значительное снижение дегрануляции плотных гранул при активации по сравнению с показателями контрольной группы пациентов. Заключение. Проточная цитометрия является информативным инструментом анализа функционального состояния тромбоцитов и выявления причин их дисфункций. Наличие неидентифицированной тромбоцитопатии у пациентов с клиническими проявлениями геморрагического синдрома при отсутствии нарушений со стороны плазменного звена является поводом для расширения объема исследований с использованием проточной цитометрии.

Introduction. Among patients with hemorrhagic syndrome, a group can be distinguished characterizing by the absence of plasma hemostatic system disorders. In this work, to elucidate the causes of hemorrhagic syndrome of unknown origin in children, the functional activity of platelets was studied using flow cytometry. Purpose. To evaluate parameters of platelet functional activity in children with hemorrhagic syndrome of unknown origin using flow cytometry. Materials and methods. In this study 35 children with manifestations of hemorrhagic syndrome were involved, including 15 with platelet aggregation disorders and 20 without disorders (according to optical and impedance aggregometry). Plasma coagulation disorders were excluded in all children. Analysis of platelet functional state was performed by flow cytometry using fluorescently labeled Annexin V and antibodies to CD41, PAC-1, CD42b, CD62P, and CD63. Results. In the group of patients with hemorrhagic syndrome and reduced aggregation a significant increase in platelet size (FSC) and granularity (SSC) and a decrease in the total amount of membrane receptor GPIIb/IIIa (CD41) and its activated form (PAC-1) compared to control group was found during platelet activation. In the absence of platelet activation, a significant decrease in the amount of platelet adhesion receptor GPIb (CD42b) was found in these patients. In the group of patients with preserved aggregation, a significant decrease in degranulation of dense granules upon activation was found in 12 of 15 subjects compared to the control group. Conclusion. Flow cytometry is an informative tool for analyzing platelet functional activity and identifying the causes of their dysfunction. The presence of unidentified thrombocytopathy in patients with clinical manifestations of hemorrhagic syndrome in the absence of plasma disorders is a reason to expand the scope of studies using flow cytometry.