Conservação de tecido somático de catetos (pecari tajacu linnaeus, 1758) submetido a diferentes condições de armazenamento
Authors:   , Queiroz Neta Luiza Bento de 
Published: January 2025

clonagem por transferência nuclear de células somáticas consiste numa atraente
ferramenta para a conservação da biodiversidade e sua eficiência depende da obtenção e
seleção de células doadoras de núcleo derivadas da pele de indivíduos de interesse.
Especificamente para catetos, mamíferos silvestres encontrados algumas vezes em regiões de
difícil acesso ou distantes de laboratórios especializados, o armazenamento a 4–6°C de
tecidos da pele seria uma alternativa para a conservação do material genético desses animais.
Portanto, o objetivo foi avaliar diferentes períodos de armazenamento e a presença de meio
nutritivo sobre a recuperação de células somáticas derivadas da pele de catetos. Para tanto,
476 explantes auriculares (9,0 mm3) recuperados de onze animais adultos, oriundos do Centro
de Multiplicação de Animais Silvestres (CEMAS/UFERSA), foram distribuídos em sete
grupos: amostras não refrigeradas (controle) e refrigeradas na ausência ou presença de Meio
de Eagle Modificado por Dulbecco suplementado com 2,2 g/L de bicarbonato de sódio, 10%
de soro fetal bovino e 2% de solução de antibiótico-antimicótico por 10, 30 e 50 dias de
estocagem. Para as análises histológicas, amostras foram fixadas em paraformaldeído a 4%,
processadas e coradas com hematoxilina-eosina para avaliação da espessura da epiderme e
derme, número de fibroblastos e halos. Além disso, fragmentos foram avaliados quanto à
quantificação de regiões argirofílicas organizadoras nucleolares (AgNORs) e atividade
metabólica por brometo de 3-[4,5-dimetil-tiazol-2-il]-2,5-difeniltetrazólio (MTT). Para as
análises de cultivo in vitro, explantes foram cultivados e avaliados quanto à morfologia
celular, qualidade do cultivo, viabilidade celular por azul de tripan, atividade proliferativa
pela determinação da curva de crescimento e tempo de duplicação da população celular e
atividade metabólica pelo ensaio de MTT. Comparações entre os fragmentos refrigerados e
não refrigerados foram analisadas usando o software GraphPad Prisma. Quanto à espessura
tecidual, apenas os fragmentos armazenados por 50 dias na ausência de meio nutritivo,
apresentaram uma redução e aumento, respectivamente, da espessura da epiderme (55,8 ± 3,2
μm vs. 64,8 ± 2,1 μm) e derme (172,7 ± 2,5 μm vs. 147,6 ± 2,5 μm) quando comparado ao
controle (P < 0,05). Além disso, o período de estocagem, independente da presença de meio,
promoveu uma redução do número de fibroblastos e aumento no número de halos. Ainda, o
número de AgNORs indicando atividade proliferativa, e atividade metabólica dos explantes,
diminuíram com o período de armazenamento. Após o cultivo in vitro dos explantes, apenas
os fragmentos armazenados sem meio por 50 dias não foram capazes de obter células
somáticas. Além disso, células oriundas de explantes na presença de meio por 10 dias
mostraram características similares às células de explantes não refrigerados, especialmente
quanto à duração do cultivo, tempo de duplicação da população celular, dia de todos os
explantes aderidos e tempo total de subconfluência. Desta forma, células viáveis de catetos
podem ser recuperadas de fragmentos teciduais armazenados por até 50 dias na presença de
meio nutritivo; contudo, tecidos somáticos refrigerados até 10 dias na presença de meio
resultaram em células mais viáveis.