Caracterização e criopreservação de folículos ovarianos pré-antrais de jumentas da raça nordestina
Authors:   , Lopes Katia Regina Freire 
Published: November 2024

Os jumentos (Equus asinus) são animais historicamente relevantes para a ocupação de áreas inóspitas
em todo o mundo, mas tem perdido espaço devido à modernização dos centros urbanos e a
mecanização agrícola e transporte motorizado. Assim, muitas raças de jumentos já foram extintas ou
encontram-se em rápido processo de queda populacional, e dentre elas está a raça Nordestina,
endêmica do Brasil. Uma das estratégias de conservação é o uso de biotecnologias que favoreçam a
reprodução assistida, como a manipulação de oócitos inclusos em folículos pré-antrais (MOIFOPA)
que maximiza a disponibilidade de oócitos para outras biotécnicas. O ponto de partida para o uso
desta e outras biotécnicas é conhecer detalhes da fisiologia reprodutiva e dos gametas da espécie ou
raça que se deseja manipular. O objetivo desta tese é caracterizar e conservar por meio da vitrificação
a população de folículos ovarinos pré-antrais (FP) em fêmeas asininas da raça Nordestina. No
primeiro experimento, dez fêmeas com idade média de 5,1 ± 3,2 anos e peso médio de 105,2 ± 18,6
kg, constituíram o grupo de estudo. As mesmas foram submetidas a procedimento de ovariectomia
guiada por laparoscopia para coleta dos ovários. Assim como nos demais equídeos, os ovários das
jumentas apresentam formato reniforme e suas zonas parenquimatosa, incluindo a fossa ovariana,
foram extraídas. Fragmentos do ovário foram fixados com carnoy, desidratados com etanol em
concentrações crescentes (70 a 99%), clarificados usando xilol e finalmente inclusos em blocos de
parafina histológica. Estes blocos foram sequencialmente seccionados em micrótomo em frações de
7μm. Uma a cada 120 frações foi montada em lâminas de vidro e corada com hematoxilina-eosina e
lida em microscópio ótico. Os FPs que apresentaram núcleo visível foram fotografados, mensurados
com uso de software e classificados como primordiais, primários e secundários. Os FPs classificados
e contados foram identificados como normais ou degenerados. A população de FPs foi estimada
usando a fórmula: (número de PF observados × número total de secções × espessura das secções)
dividido pelo (número de secções observadas × diâmetro médio do núcleo dos oócitos). A população
média estimada foi de 21.135,3 ± 10.646,1 FPs por animal. Destes, 91,3% foram identificados como
primordiais, 8,2% como folículos primários e 0,4% como secundários. Folículos com múltiplos
oócitos foram observados em todos os animais, todos classificados como primordiais, representando
0,99% do total de folículos. A população de PF estimada estava distribuída entre os ovários direito e
esquerdo, em 54,6% e 45,4% respectivamente. A maior parte dos PFs foi considerada
morfologicamente normal (90,2%) e a menor parcela, degenerados (9,8%). Foi identificada uma
relação inversamente proporcional entre a idade e a população folicular, semelhante à relação entre
peso e população folicular. No segundo experimento, o tecido ovariano de jumentas foram
submetidos a procedimento de vitrificação em superfície sólida usando dimetil sulfóxido (DMSO) e
etileno glicol (EG), isoladamente em diferentes concentrações (3M e 6M) e associados, como agentes
crioprotetores. Quando comparados aos tratamentos o uso do DMSO 3M (81,7 ± 37,5%), EG 3M
(83,7 ± 27,4%) e a combinação de DMSO 3M + EG 3M (81,8 ± 46,8%) apresentaram um grande
percentual de folículos morfologicamente normais. O uso do DMSO 3M + EG 3M, apresentou o
maior percentual (62,5 ± 29,1%) de folículos viáveis em relação aos demais tratamentos (P <0,05).
Pela técnica TUNEL, todos os tratamentos apresentaram fragmentação de DNA nas células
foliculares, exceto no caso do DMSO 3M + EG 3M. Quando avaliada a presença de NORs, não foi
verificada diferenças significativas entre o número de NORs no grupo controle e no tratamento
DMSO 3M + EG 3M (P < 0,05). A combinação DMSO 3M e EG 3M mostrou-se mais eficiente para
a vitrificação de tecido ovariano de jumentas, apresentando-se de forma adequada para a preservação
da morfologia e viabilidade de folículos pré antrais, bem como a integridade do DNA e a capacidade
de proliferação celular. Este trabalho apresentou de forma inédita a estimativa de folículos pré-antrais ovarianos em jumentas da raça nordestina bem como uma estratégia de criopreservação com
resultados positivos