Ein Beitrag zur Modifizierung von Maul‐ und Klauenseucheviren im Verlaufe von Passagen in Gewebekulturen und die dabei festgestellten Beziehungen zwischen Mäusevirulenz und rct Merkmalen*
Authors: Bauer K. 
Published: August 2010

Die Stämme A4 Westdeutschland, C Riems und O3 Venezuela des MKS‐Virus wurden auf Kälbernierenkulturen in Röhrchen bei 28° C und 22° C sowie über Einzelplaques bei 28° C fortlaufend passiert. Im Verlaufe der Passagen wurde die Vermehrungsfähigkeit bei 22° C, 28° C, 37° C und 40° C (rct‐Marker) sowie die Virulenz für die Säuglingsmaus geprüft. Die schnellsten Verfahren zur Virulenzabschwächung waren Passagen über Einzelplaques bei 28° C, etwas weniger wirksam war die Passierung in Röhrchenkulturen bei 22° C und am schlechtesten schnitt die Passierung bei 28° C ab.

Es ergaben sich stammesspezifische Unterschiede, die sich besonders in der zur Attenuierung benötigten Zeit sowie in der Reihenfolge des Verlustes der rct40‐ und rct37‐Marker und der Virulenz ausdrücken. Weiterhin wurden bei der Passierung über Einzelplaques für die attenuierten Stämme andere Markerkombinationen gefunden, wie nach Röhrchenpassagen bei 22° C.

Eine genetische Kopplung zwischen den rct‐Markern untereinander und der Virulenz konnte nicht nachgewiesen werden. Es bestand jedoch eine von Fall zu Fall unterschiedlich starke Kovarianz innerhalb der rct‐Marker und in ihrem Verhältnis zur Virulenz. Diese Kovarianz scheint von dem Passierungsmodus beeinflußt zu werden.

Die Möglichkeit von Rückmutationen zur Virulenz als Ursache einer unzureichenden Attenuierung wird diskutiert.

Modification of foot‐and‐mouth disease virus by passage in tissue culture; relationship between virulence for mice and rct characteristics

Three strains of foot‐and‐mouth disease virus, A4 West Germany, C Riems and O3 Venezuela, were repeatedly passaged in calf kidney cultures in tubes at 28° C and 22° C and as individual plaques at 28° C. In the course of the passage the ability to multiply at 22, 28, 37 and 40 degrees Centigrade (rct‐marker) and also virulence for the suckling mouse were determined. The most rapid method for reducing virulence was individual plaque passage at 28° C; slightly less effective was passage in tube cultures at 22° C; and least effective was passage in tubes at 28° C. Strain‐specific differences were found, particularly evident in the form of the time necessary for attenuation and the order in which losses of the rct40 and rct37 markers and virulence occurred. Furthermore, by passage of the attenuated strains in individual plaques, other marker combinations were found, such as after tube passage at 22° C.

A genetic link between the rct markers and virulence could not be demonstrated, although it was possible from time to time to detect a variable degree of co‐variance between rct markers and their relationship to virulence. This co‐variance seemed to be influenced by the method used for passage.

The possibilities of reverse mutations towards virulence as a result of insufficient attenuation are discussed.

Contribution à la modification des virus de la fièvre aphteuse par passage sur cultures de tissus et relations observées entre la virulence sur souris et la rct

On effectue des passages continuels sur cultures de reins de veaux en tubes à 28° C et 22° C, de même qu'avec des plaques isolées à 28° C, avec les souches du virus de la fièvre aphteuse A4 Westdeutschland, C Riems et O3 Vénézuéla. On teste au cours des passages la capacité de multiplication à 22° C, 28° C, 37° C et 40° C (rct‐Marker), de même que la virulence sur des souriceaux. Pour obtenir une diminution de la virulence, les procédés les plus rapides sont des passages par plaques isolées à 28° C, un peu moins efficace le passage sur cultures en tubes à 22° C et le moins efficace le passage à 28° C.

Des différences spécifiques aux diverses souches apparurent, en particulier dans le temps nécessaire pour l'atténuation, de même que dans la succession de la perte du Marker rct40 et rct37, ainsi que dans la perte de la virulence. De plus on observe des combinaisons de Marker différentes pour les souches atténuées, selon que le passage a été effectué par plaques isolées ou en tubes à 22° C.

On peut mettre en évidence une relation génétique entre les différents Marker rct et la virulence. Il se produit cependant, d'un cas à l'autre, une covariance très distincte parmi les Marker rct et leur comportement envers la virulence. Il semble que cette covariance puisse être influencée par le mode de passage. On discute la possibilité d'une rétromutation à un état virulent à la suite d'une atténuation insuffisante.

Una contribución a la modificación de los virus de la fiebre aftosa durante el curso de pases por cultivos hísticos; las relaciones así observadas entre la virulencia para ratones y las características rct

Las cepas A4 Alemania Occidental, C Riems y O3 Venezuela del virus de la glosopeda se pasaron de forma continuada por cultivos de riñones de ternera en tubitos a 28° C y 22° C, así como por placas individuales a 28° C. En el transcurso de los pases se examina la capacidad de multiplicación a 22° C, 28° C, 37° C y 40° C (marcador rct), así como la virulencia para el ratón lactante. El procedimiento más rápido para atenuar la virulencia eran los pases a través placas individuales a 28° C; algo menos eficaz era el pasaje por cultivos en tubitos a 22° C, obteniéndose el peor resultado con el pase a 28° C.

Comprobáronse diferencias específicas de cepa, que se expresan sobre todo en el tiempo precisado para la atenuación, así como en la sucesión de la pérdida del marcador rct40 y rct37 y de la virulencia. En el pasaje a través de placas individuales se hallaron además para las cepas atenuadas otras combinaciones de marcador que tras pases por tubitos a 22° C.

No se logró demostrar un acoplamiento genético entre los marcadores rct entre sí y la virulencia. Sin embrago, existía una covariación con potencia diferente de caso en caso dentro de los marcadores rct y en su relación con la virulencia. Esta covariación parece estar bajo el influjo de la forma en que se efectúa el pasaje. Se discute la posibilidad de que se produzcan retromutaciones a la virulencia como causa de una atenuación insuficiente.