Δράση του φυτού βαλσαμόχορτο (Hypericum perforatum) στον καρκίνο της ουροδόχου κύστης
Authors: Τσίμαρης Ιωάννης 
Published: September 2021

Σκοπός της παρούσας διδακτορικής διατριβής ήταν η συστηματική και εις βάθος έρευνα της αντικαρκινικής δράσης του φυτού βαλσαμόχορτου γνωστού και ως Hypericim Perforatum (HP) κατά του καρκίνου της κύστης. Με την βοήθεια υγρής χρωματογραφίας υψηλής απόδοσης αντίστροφης φάσης (RP-HPLC) αναγνωρίστηκε ότι το κύριο συστατικό του υδατικού διαλύματος που λαμβάνεται στα πλαίσια της παραδοσιακής ηπειρώτικης ιατρικής είναι η υπερφορίνη (2,36 ± 0,03 mg/g).Τοπειραματικό μοντέλο περιλάμβανε αρσενικά ποντίκια BULBc τα οποία εκτέθηκαν σε νιτροζαμίνη (OH-BBN) σε συγκέντρωση 1000ppm μέρα παρά μέρα για 6 εβδομάδες. Θυσιάστηκαν μετά από 26 εβδομάδες. Τα ιστολογικά δεδομένα έδειξαν ότι το υδατικό διάλυμα ασκεί στατιστικώς σημαντική αντικαρκινική δράση (Fisher’s exact test p=0.048) όταν χορηγείται για 26 εβδομάδες αφού επιδράσει ο καρκινογόνος παράγοντας. Η χορήγηση του εκχυλίσματος το διάστημα που λάμβαναν νιτροζαμίνη δεν εμφάνισε σημαντική αντικαρκινική δράση (Fisher’s exact test p=0.093). Στην συνέχεια προχωρήσαμε στην αναζήτηση του πιο δραστικού παραγώγου του φυτού, είτε με μορφή διαλυμάτων, είτε με την μορφή εκχυλισμάτων, είτε μετά από κλασματοποίηση. Η ανάλυση των συστατικών τους έγινε με RP-HPLC. Η αντικαρκινική δράση αποτιμήθηκε σε καρκινικές κυτταρικέςσειρές ουροδόχου κύστεως Τ24 και NBT-II σε συνθήκες σκότους. Η διαδικασία κλασματοποίησης ανέδειξε το έκτο κατά σειρά κλασματοποίησης κλάσμα του Εκχυλίσματος Πετρελαϊκού Αιθέρα (ΕΠΑ6) ως το πλέον δραστικό (LC50 0.17 μg/mL). Στην αναζήτηση των συστατικών που ευθύνονται για την αντικαρκινική δράση διαπιστώθηκε ότι αυτή δεν οφείλεται στην υπερφορίνη αλλά σε άγνωστες ουσίες οι οποίες δεν ήταν δυνατόν να ταυτοποιηθούν στην δεδομένη χρονική στιγμή. Ηδοκιμασία TUNEL απέδειξε πως ο κυτταρικός θάνατος επέρχεται μέσω της απόπτωσης. Από την φυσικοχημική ανάλυση των εκχυλισμάτων διαπιστώθηκε πως το Πολικό Μεθανολικό Κλάσμα (ΠΜΚ), σε μορφή πούδρας, περιέχει υπερικίνη σε συγκέντρωση 0.57% μόνο, είναι υδατοδιαλυτό, σταθερό σε θερμοκρασία δωματίου καθιστώντας το ενδιαφέρον φωτοευαισθητοποιητή για περαιτέρω μελέτη.Προχωρήσαμε σε σύγκριση του ΠΜΚ, σε διάφορες συγκεντρώσεις με το Photofrin® , εγκεκριμένη από το FDA ουσία για την Φωτοδυναμική Θεραπεία (ΦΔΘ). Το ΠΜΚ στη συγκέντρωση των 60 μg/mL, προκαλούσε κυτταρικό θάνατο στο 86% και στο 80% των Τ24 και RT4 καρκινικών κυττάρων αντίστοιχα. Το Photofrin® εμφάνισε κυτταρικό θάνατο στο 77% των Τ24 μόνο. Μετά από σύγκριση πηγών φωτισμού λευκού φωτός και ΠΜΚ σε Τ24 κύτταρα διαπιστώθηκε ότι η πιο αποτελεσματική ήταν η πηγή ψυχρού φωτισμού με λάμπα αλογόνου (Storz 482 Cold Light Fountain). Πειραματιζόμενοι με θηλυκούς Wistar αρουραίους με ποικίλες ενδοκυστικές δόσεις ΠΜΚ, με κλιμακούμενους χρόνους ενδοκυστικής παραμονής και ποικίλες ενέργειες διέγερσης καταλήξαμε στην δοσολογία των 36.5mg/ml του ΠΜΚ, δεκαπεντάλεπτη ενδοκυστική παραμόνή και διέγερση με 700J/cm2 λευκού φωτός. Με βάση το παραπάνω προχωρήσαμε σε πειραματικό μοντέλο ορθότοπης εμφύτευσης ουροθηλιακών καρκινικών κυττάρων ΑΥ27. Είχαμε πλήρη (100%) εξάλειψη επιφανειακών καρκινικών βλαβών αλλά και του φυσιολογικού ουροθηλίου στις 30 ημέρες μετά την θεραπεία. Το ουροθήλιο αναγεννάτε πλήρως, χωρίς την ύπαρξη ουλών, 90 ημέρες μετά την φωτοδυναμική θεραπεία. Συμπερασματικά το εκχύλισμα του υπέρικου, στη δοσολογία που το λάμβαναν οι ασθενείς, παρουσιάζει στατιστικώς σημαντική αντικαρκινική δράση όταν χορηγείταιμετά την δράση του καρκινογόνου. Η αντικαρκινική δράση που παρατηρείται in vitro στο αποδίδεται σε άγνωστες, προς το παρόν ουσίες, που περιέχονται στο ΕΠΑ6. Το ΠΜΚ εμφανίζει σημαντική αντικαρκινική δράση τόσο in vitro, μετά από διέγερση με λέιζερ ή λευκό φως, όσο και in vivo, με πλήρη εξάλειψη των καρκινικών λαβών, χωρίς την εμφάνιση ουλών στην ουροδόχου κύστη με πλήρως αναγεννημένο του ουροθήλιο μετά από 90 ημέρες.