Μελέτη της επίδρασης της θυρεοειδοτρόπου ορμόνης και των θυρεοειδικών ορμονών στην in vitro ανάπτυξη πρώιμων πρωτογενών ωοθυλακίων επίμυος, στη γονιμοποίηση και στην πρώιμη εμβρυϊκή ανάπτυξη στο στάδιο της βλαστοκύστης και η ανίχνευση της έκφρασης των υποδοχέων τους στα διάφορα στάδια ωρίμανσης των ωοθυλακίων
Authors: Παρτσινέβελος Γεώργιος 
Published: September 2021

ΣΚΟΠΟΣ. Ο σκοπός της μελέτης ήταν η αξιολόγηση της επίδρασης της Θυρεοειδοτρόπου ορμόνης (TSH) και των θυρεοειδικών ορμονών Τριιωδοθυρονίνη (T3) και Θυροξίνη (Τ4) στην in vitro ανάπτυξη πρώιμων πρωτογενών προκοιλοτικών ωοθυλακίων επίμυος, στη γονιμοποίηση και στην πρώιμη εμβρυϊκή ανάπτυξη στο στάδιο της βλαστοκύστης. Επιπλέον, σκοπός της μελέτης ήταν η ανίχνευση της έκφρασης των υποδοχέων των ανωτέρω ορμονών στα ωοθυλάκια κατά τα διάφορα στάδια της ωοθυλακικής ανάπτυξης. ΥΛΙΚΟ & ΜΕΘΟΔΟΣ. Στη μελέτη χρησιμοποιήθηκαν άνηβα θήλεα υβρίδια F1 ηλικίας 13-14 ημερών και ενήλικα άρρενα υβρίδια F1 ηλικίας 3-4 μηνών, προϊόντα διασταύρωσης επίμυων C57BL/6 (θήλυ) X CBA (άρρεν). Πρώιμα προκοιλοτικά ωοθυλάκια απομονώθηκαν από τις ωοθήκες, καλλιεργήθηκαν in vitro για 10 ημέρες και τα ώριμα ωάρια γονιμοποιήθηκαν με σπέρμα που ελήφθη από τα ενήλικα άρρενα υβρίδια. Αξιολογήθηκε η επίδραση της TSH σε συγκέντρωση 2 mIU/ml, 1 mIU/ml και 0,2 mIU/ml και η επίδραση των T3 και T4 σε συγκέντρωση 10-9 M, 10-8 M, 10-7 M η καθεμιά. Επιπλέον, τις ημέρες 0, 2, 5 και 8 της καλλιέργειας, συλλέχθηκαν ωοθυλάκια, ενώ την ημέρα 10 συμπλέγματα κοκκωδών κυττάρων-ωοκυττάρου (COCs) και απογυμνωμένα ωάρια (DO) προς απομόνωση ολικού RNΑ, από το οποίο συντέθηκε συμπληρωματικό DNA, το οποίο με τη σειρά του υπεβλήθη στην αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης πραγματικού χρόνου προς ανίχνευση και ποσοτικοποίηση της έκφρασης του υποδοχέα της TSH, TSHR, και των υποδοχέων των θυρεοειδικών ορμονών TRα και TRβ. ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ. Η Τ3 είχε μία αρνητική επίδραση στην ωοθυλακική ανάπτυξη στην μικρότερη, 10-9 M, και ενδιάμεση συγκέντρωση, 10-8 Μ. Παρόμοια, η Τ4 είχε μία αρνητική επίδραση στην ωοθυλακική ανάπτυξη στην ενδιάμεση συγκέντρωση 10-8Μ. Σε αντίθεση με τις θυρεοειδικές ορμόνες, η TSH δεν είχε καμία επίδραση στην ωοθυλακιογένεση. Η Τ3 είχε μία αρνητική επίδραση στη γονιμοποίηση και την πρώιμη εμβρυική ανάπτυξη στο στάδιο των 2-κυττάρων στην ενδιάμεση συγκέντρωση 10-8 M και η T4 μία αρνητική επίδραση στη γονιμοποίηση στη μικρότερη και στη μεγαλύτερη συγκέντρωση, 10-9 Μ και 10-7 Μ αντίστοιχα. Ωστόσο, στην ενδιάμεση συγκέντρωση 10-8 Μ είχε μία θετική επίδραση, αφού οδήγησε σε μεγαλύτερα ποσοστά εμβρύων 2-κυττάρων, 4-κυττάρων και μοριδίου/βλαστοκύστης. Η TSH δεν είχε καμία επίδραση στη γονιμοποίηση και στην πρώιμη εμβρυική ανάπτυξη.Τέλος σε ότι αφορά την έκφραση των ορμονικών υποδοχέων, την ημέρα 0 δεν εκφραζόταν κανένας από τους TSHR, TRα και TRβ. Ο υποδοχέας TRβ, εξακολουθούσε να μην εκφράζεται σε όλα τα μετέπειτα στάδια της ωοθυλακιογένεσης, όπως και στα COCs και DO. Οι υποδοχείς ΤRα και TSHR εκφράζονταν στα ωοθυλάκια τις ημέρες 2, 5, 8 και στα COCs, ενώ δεν εκφράζονταν στα DO. ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑΤΑ. Στα διάφορα είδη ζώων υπάρχουν αντικρουόμενες αναφορές για την επίδραση της TSH και των T3 και T4 στην ωοθυλακιογένεση. Ωστόσο όμως, και στο ίδιο είδος, οι επιδράσεις φαίνεται ότι διαφοροποιούνται ανάλογα με τον τύπο των κυττάρων που καλλιεργούνται, το είδος και τον εμπλουτισμό του καλλιεργητικού μέσου, το στάδιο ανάπτυξης των ωοθυλακίων, και τη χρονική διάρκεια της καλλιέργειας.Η διαπίστωση της αρνητικής επίδρασης της Τ3 και της θετικής επίδρασης της ενδιάμεσης συγκέντρωσης 10-8 Μ της Τ4 στην πρώιμη εμβρυική ανάπτυξη, ανοίγει νέους δρόμους έρευνας της επίδρασης ορμονών αυτών σε διάφορους συνδυασμούς μεταξύ τους, σε συνθήκες που προσομοιάζουν την φυσιολογία της ωοθυλακικής ανάπτυξης, με δεδομένο ότι οι ορμόνες αυτές in vivo συνυπάρχουν στο μικροπεριβάλλον των ωοθυλακίων.