Os efeitos da interação do tecido adiposo de indivíduos com obesidade sobre fibroblastos pulmonares e seu papel no câncer de mama
Authors:   , Costa Augusto César da 
Published: December 2024

A obesidade está relacionada com a gênese e/ou agravamento de diversas doenças, como o câncer de mama. O desenvolvimento da doença metastática nessa neoplasia está relacionado com pior prognóstico. Todavia, ainda permanece a ser melhor compreendido se e como o tecido adiposo de indivíduos com obesidade (TAO) pode modular células estromais em sítios secundários, como os fibroblastos, e contribuir, dessa forma, para a disseminação das células malignas e metástase. Aqui, investigamos se fatores solúveis e pequenas vesículas extracelulares (pVEs) derivadas do TAO (pVEsOb) poderiam influenciar a alterações funcionais nos fibroblastos, bem como se essas possíveis alterações poderiam aumentar a migração de células tumorais mamárias triplo-negativas MDA-MB-231 in vitro. O tecido adiposo foi obtido de voluntários eutróficos e com obesidade e cultivado em meio de cultura. O sobrenadante foi recolhido e ultracentrifugado para a obtenção de meios depletados de pVEs do TA de indivíduos eutróficos (MdEu) e com obesidade (MdOb) e as pVEsOb. As pVEs isoladas foram caracterizadas por espalhamento dinâmico da luz (DLS) e microscopia eletrônica de transmissão. Fibroblastos pulmonares Wi-38 foram tratados com MdEu, MdOb ou pVEsOb e ensaios de internalização das pVEs, viabilidade, proliferação, formação de colônias e cicatrização in vitro foram realizados. Ademais, foram investigados mediadores solúveis pró-inflamatórios no sobrenadante de fibroblastos trados, além da expressão gênica de genes associados com a ativação de fibroblastos. Os fibroblastos tratados também foram co-cultivados com células MDA-MB-231, utilizando inserto Transwell, para verificar a migração das células tumorais. Isolamos pVEs com diâmetro hidrodinâmico médio de 122,4 nm e morfologia de prato típica de pVEs. Ademais, essas nanovesículas foram internalizadas com sucesso por fibroblastos pulmonares. Nenhum dos tratamentos alterou a proliferação celular e a viabilidade avaliada por método de exclusão por azul de tripan. Todavia, a viabilidade metabólica, avaliada por MTT, foi aumentada em células tratadas com MdEu e diminuída em células tratadas com MdOb, após 48 horas do tratamento. Além disso, pVEsOb diminuíram a viabilidade metabólica 24 e 48h após o tratamento. Observamos que o MdEu, mas não o MdOb, favoreceu a formação de colônias após 14 dias de tratamento. Somente MdEu aumentou a migração coletiva no ensaio de cicatrização in vitro 24 horas após o tratamento. Ademais, observamos o aumento dos mediadores solúveis Ang1, IL1-β, IL-6, RANTES, MIF e TNF-α em fibroblastos tratados com MdOb 24 e 48 horas após o tratamento. pVEsOb induziram apenas a secreção de Ang1 por fibroblastos pulmonares. Não observamos diferença na expressão dos genes S100A4 e CCL2 entre os diferentes grupos. Por fim, não observamos aumento da migração de células MDA-MB-231 co-cultivadas com fibroblastos tratados. Os fibroblastos pulmonares sofrem alterações funcionais no contexto da obesidade, mas nessas condições, in vitro, não estão relacionados no aumento da migração de células tumorais. Entretanto, mais investigações são necessárias para verificar se a comunicação endócrina entre o TAO e fibroblastos pode ser importante para outras fisiopatologias do sistema respiratório, bem como para a quimioatração e ativação de leucócitos que, em conjunto, podem potencializar respostas pró-metastáticas no câncer de mama.