Ανάπτυξη νέων αναλυτικών μεθόδων προσδιορισμού θειολών σε τρόφιμα και βιολογικά δείγματα με σύζευξη της υγρής χρωματογραφίας με αυτοματοποιημένα συστήματα ροής
Authors: Καρακώστα Θεανώ 
Published: August 2021

Συνοψίζοντας, τα πειραματικά δεδομένα της Διδακτορικής Διατριβής προκύπτουν ταπαρακάτω:1) Στην πρώτη πειραματική εργασία προτείνεται μια νέα φασματοφωτομετρικήμέθοδος ταυτόχρονου προσδιορισμού τριών θειολών, της κυστεΐνης, τηςγλουταθειόνης και της Ν-ακελυτοκυστεΐνης σε φρούτα. Η ανάπτυξη της μεθόδουπραγματοποιήθηκε με σύζευξη δύο επιμέρους αναλυτικών τεχνικών, της Τεχνικήςτων Διαδοχικών Εγχύσεων και της Υγρής Χρωματογραφίας Υψηλής Απόδοσης.Χαρακτηριστικό της μεθόδου είναι η πλήρης αυτοματοποίηση του συζευγμένουσυστήματος και η δυνατότητα ανεξάρτητης λειτουργίας και ελέγχου των επιμέρουςδιατάξεων από ηλεκτρονικό υπολογιστή. Στην προτεινόμενη μέθοδο γίνεται χρήσηγια πρώτη φορά των άλκυλο εστέρων του προπιολικού οξέως για τηνπαραγωγοποίηση θειολών, πριν τον διαχωρισμό τους σε χρωματογραφική στήλη. Μετην Τεχνική των Διαδοχικών Εγχύσεων επιτυγχάνεται η εν-ροή προσθήκη τωνδειγμάτων και του αντιδραστηρίου παραγωγοποίησης, ενώ με την ΥγρήΧρωματογραφία πραγματοποιείται ο διαχωρισμός των σχηματιζόμενων παραγώγωνμε τη χρήση μονολιθικής χρωματογραφικής στήλης αντίστροφης φάσης υπόισοκρατικές συνθήκες έκλουσης. Η εν ροή αντίδραση των τριών θειολών με τααντιδραστήρια παραγωγοποίησης μεθυλικός εστέρας του προπιολικού οξέος καιαιθυλικός εστέρας του προπιολικού οξέος πραγματοποιείται σε καναλικό σύστημα, τοοποίο παράλληλα χρησιμεύει για τη σύζευξη των δυο οργανολογικών διατάξεων. Ηχρήση μονολιθικής στήλης επιτρέπει την ταχεία έκλουση των παραγώγων και οδηγείσε υψηλούς ρυθμούς δειγματοληψίας. Η ανίχνευση πραγματοποιείταιφασματοφωτομετρικά στα 285 nm. Η προτεινόμενη μέθοδος επικυρώθηκε ως προς τηγραμμικότητα (έως 200 × 10-6 mol L-1), τα όρια ανίχνευσης (0,24 – 0,40 μmol L-1),ποσοτικού προσδιορισμού, την ακρίβεια, την εκλεκτικότητα και εφαρμόστηκε μεεπιτυχία για τον προσδιορισμό των τριών θειολών και την παρακολούθηση τουρυθμού κατανάλωσής στους σε φρούτα.2) Στη δεύτερη πειραματική εργασία προτείνεται μια νέα χρωματογραφική μέθοδοςγια τον προσδιορισμό της καπτοπρίλης σε βιολογικά δείγματα. Η αναλυτικήδιαδικασία χωρίζεται σε τρία μέρη. Κατά το πρώτο μέρος πραγματοποιείται αυτοματοποιημένα, με τη βοήθεια της Τεχνικής των Διαδοχικών Εγχύσεων, εκχύλισηκαι προσυγκέντρωση του αναλύτη με χρήση μικροστηλών εκχύλισης στερεής φάσηςOASIS HLB. Στη συνέχεια, διαμέσου της βαλβίδας πολλαπλής επιλογής, η θειόληπροωθείται στο βρόγχο της βαλβίδας έγχυσης της χρωματογραφίας, εγχύεται σεαναλυτική στήλη αντίστροφης φάση και διαχωρίζεται από τα λοιπά συστατικά τουυποστρώματος υπό ισοκρατικές συνθήκες έκλουσης. Τέλος, μετά την έξοδό της απότη στήλη, η καπτοπρίλη συναντά τα αντιδραστήρια παραγωγοποίησης μεθυλικόςεστέρας του προπιολικού οξέος ή αιθυλικός εστέρας του προπιολικού οξέος σε ρεύμασυνεχούς ροής, όπου και πραγματοποιείται εν ροή η αντίδραση παραγωγοποίησης. Τοτελικά σχηματιζόμενο προϊόν οδηγείται σε φασματοφωτομετρικό ανιχνευτή, όπου καιανιχνεύεται. Όμοια με την προηγούμενη μέθοδο οι δύο διατάξεις λειτουργούνανεξάρτητα η μία από την άλλη και ελέγχονται από ηλεκτρονικό υπολογιστή. Ηπροτεινόμενη μέθοδος δίνει τη δυνατότητα προσδιορισμού όχι μόνο της ανηγμένηςμορφής της καπτοπρίλης, αλλά και της συνολικής της ποσότητας, καθώς η παρουσίααναγωγικών αντιδραστηρίων στο μίγμα που εγχύεται στη στήλη δεν επηρεάζει τηναντίδραση παραγωγοποίησης. Σε σύγκριση με παλαιότερες μεθόδους προσδιορισμούτης καπτοπρίλης μετά από παραγωγοποίηση η προτεινόμενη μέθοδος πλεονεκτεί ωςπρος την ευαισθησία για την εφαρμογή της σε δείγματα ούρων και την απλότητα πουτης χαρίζει ο αυτοματοποιημένος χαρακτήρας της. Η προτεινόμενη μέθοδοςεπικυρώθηκε ως προς τη γραμμικότητα (150 μg L-1- 2500 μg L-1), τα όριαανίχνευσης και ποσοτικού προσδιορισμού (10 μg L-1και 35 μg L-1αντίστοιχα), τηνακρίβεια και την εκλεκτικότητα και εφαρμόστηκε με επιτυχία στον προσδιορισμόκαπτοπρίλης σε δείγματα ούρων.3) Στην τρίτη πειραματική εργασία προτείνεται μια νέα φασματοφωτομετρικήμέθοδος για τον προσδιορισμό γλουταθειόνης και κυστεΐνης σε δείγματα μαγιάς.Αρχικά πραγματοποιήθηκε ο χρωματογραφικός διαχωρισμός των δύο θειολών μεχρήση χρωματογραφικής στήλης υδρόφιλων αλληλεπιδράσεων και στη συνέχεις οιθειόλες παραγωγοποιήθηκαν εν-ροή με τον μεθυλικό εστέρα του προπιολικού οξέος.Τα τελικά σχηματιζόμενα παράγωγα ανιχνεύθηκαν στα 285 nm. Η μέθοδος είναισύμφωνα με τη βιβλιογραφία μια από τις πρώτες μεθόδους που πραγματοποιείαντίδραση παραγωγοποίησης μετά από χρωματογραφικό διαχωρισμό σε σύστημαυδρόφιλων αλληλεπιδράσεων. Από τη μια η ικανότητα της Υγρής ΧρωματογραφίαςΥδρόφιλων Αλληλεπιδράσεων να συγκρατεί ικανοποιητικά και να διαχωρίζει πολικέςενώσεις και από την άλλη η αύξηση της ευαισθησίας ως αποτέλεσμα τωναντιδράσεων παραγωγοποίησης μετά τη χρωματογραφική στήλη προσέφεραν τηδυνατότητα ανάλυσης των δειγμάτων χωρίς επιδράσεις λόγω του υποστρώματος. Ηπροτεινόμενη μέθοδος επικυρώθηκε ως προς τη γραμμικότητα (έως και 200 μg L-1), αόρια ανίχνευσης και ποσοτικού προσδιορισμού 0,6 × 10-6 mol L-1και 2,0 × 10-6 mol L-1αντίστοιχα), την ακρίβεια και την εκλεκτικότητα και εφαρμόστηκε με επιτυχίαστον προσδιορισμό γλουταθειόνης και κυστεΐνης σε δείγματα μαγιάς.