Heat Stable Human Plasma Protein Fractions Electrophoretically Rich in Albumin*
Authors: Mealey E. H. , Larsen L. H. , Dwyer R. C. , Mulford D. J. 
Published: March 2009

The effect of increasing ethanol Concentration and decreasing pH on the separation of Fraction II +III from human plasma on the heat stability of the protein fraction in the supernatant fluid remaining has been studied. When the ethanol concentrations used to separate Fraction II + III were 30 to 35% and the pH and temperature maintained at 6.3 to 6.8 and ‐5° C, respectively, the plasma protein fractions obtained from the supernatant fluids showed electrophoretically, an albumin concentration of 88 to 92%. On heating for 10 hours at 60° C very little of a fast moving component in the ultracentrifuge and very little change in the electrophoresis patterns were observed. Nephelometric changes due to heating were also quite small. The ratio of the area of the main ultra centrifugal component of the heated fractions to that of the unheated was 0.97 to 0.90.

Thus, these findings stand in contrast to the results obtained with earlier methods which approximated the corresponding steps of the Cohn group [1]. When the ethanol concentration used to separate the Fraction II + III proteins was 25%, the fractions obtained from the supernatant fluid showed electrophoretically, an albumin concentration of 80 to 83%. On heating of this fraction for 10 hours at 60° C the amount of fast moving component in the ultracentrifuge was larger and the change in the electrophoretic patterns was greater than those observed above. Nephelometric changes were also greater. The ratio of the areas of the main ultracentrifuge component of the heated fraction to that of the unheated was 0.92.

L'effet de l'augmentation de la concentration de l'éthanol et de la diminution du pH sur la séparation des fractions II et III du plasma humain et sur la thermostabilité des fractions protéiniques dans le liquide surnageant résiduel a été étudié. Quand les concentrations d'éthanol utilisées pour séparer la fraction II + III est de 30 à 35%, et, le pH et la température maintenue de 6,3 à 6,8 et à ‐5° C respectivement, les fractions plasmatiques obtennes à partir du surnageant montrent à l'analyse électrophorétique une concentration d'albumine se situant entre 88 et 92%. Après chauffage de 10 heures à 60' C, il y a très peu de composant à sédimentation rapide à l'ultracentrifugation et l'image électrophorétique ne présente que de très faibles modifications. Les modifications nephelométriques dues au chauffage sont aussi très faibles. Le rapport des surfaces des composants principaux observés à l'ultracentrifugation entre les fractions chauffées et non chauffées est de 0,97 à 0,98.

Ainsi, ces découvertes contragtent avec les résultats obtenus avec les produits de fractionnement fabriqués selon les anciennes méthodes dérivdées des données du groupe de Cohn [1]. En effet, lorsque la concentration en éthanol pour la préparation des fractions II+III du plasma est de 25%, les fractions obtenues dans le liquide surnageant montrcnt à l'analyse électrophorétique une concentration d'albumine de 80 à 82%. Après chauffage de cette fraction à 60° C pendant 10 heures, la quantité du composant à sédimentation rapide à l'ultracentrifugation est plus grande, et les modifications de l'image électrophorétique sont plus marquées que celles observées avec la méthode précédente. Les modifications nephelométriques sont aussi plus accentuées. Le rapport des surfaces des composants principaux observés à l'ultracentrifugation entre les fractions chauffées et non chauffées est de 0,92.

Der Einfluß steigender Äthanolkonzentrationen und sinkender pH‐Werte bei der Abtrennung der Cohnschen Fraktion II+III aus humanem Plasma auf die Wärmestabilität der Proteinfraktion in der überstehenden Lösung wurde untersucht. Sofern die Äthanolkonzentratiou zur Abtrennung der Fraktion II + III auf 30–35% erhöht wurde, während das pH 6,3–6,8 und die Temperatur ‐5° C betrugen, wies die im Überstehenden verbleibende Proteinfraktion einen Alburningehalt von 88–92% auf. Nach dem Erwärmen einer 5%igen Lösung dieser Fraktion während 10 h auf 60° C waren in der Ultrazentrifuge nur eine sehr geringe schnellere Komponente und in der Elektrophorese nur kleine Änderungen featstellbar. Die Trübungszunahme durch die Wärmebehandlung war gering. Das Verhältnis der Hauptkomponente der erhitzten zur unerhitzten Lösung in der Ultrazentrifuge war 0,97 bis 0,98.

Diese Befunde sind im Widerspruch zu den mit älteren Methoden, die sich an die Cohnschen Verfahren [1] anlehnten, gefundenen Ergebnissen. Wenn die Äthanolkonzentration zur Abtrennung der Fraktion II + III 250% betrug, zeigte die Proteinfraktion in der überstehenden Lösung einen Albumingehalt von 80–82%. Nach der Wärmebehandlung dieser Fraktion während 10 h bei 60° C war die schnelle Komponente in der UZ größer und die Äderungen in der Elektrophorese waren stärker ausgeprägt. Auch waren die Trübungszunahmen erheblicher. Das Verhältnis der Hauptkomponenten der erhitzten und der unerhitzten Präparate in der Ultrazentrifuge war 0,92.