Efeito da metformina na competência oocitária bovina e viabilidade embrionária pós-criopreservação
Authors:   , Shebli Wasim Al 
Published: November 2024

O presente trabalho objetivou avaliar o efeito de concentrações da MT entre 0,05 (MT1), 0,1 (MT>) e 0,2 (MTs) mM adicionadas durante a pré-maturação e a maturação in vitro-MIV nos experimentos (EXPs) 1 e 2,e o cultivo in vitro-CIV com renovação do meio (EXP3.1) (50% nos 3º e 6º dias de cultivo) ou sem renovação (EXP3.2). No EXP4, os oócitos maturaram e os zigotos desenvolveram com 0,1 e 0,05 mM MT nos grupos: MMTo+CMTo, MMTo+CMT+, MMT>+CMTo e MMT>+CMT:+, e o EXP5 comparou a criotolerância entre o controle e MMT>+CMT:. Os parâmetros avaliados nos blastocistos foram: o número de blastômeros apoptóticos e totais usando o ensaio de TUNEL (terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP- digoxigenin nick end-labeling) e a coloração de DAPI (4'6-diamidino-2-phenylindole), respectivamente (EXP2, 3.2 e 5), a área ocupada pelos lipídios e a taxa da peroxidação no EXP4, utilizando a sonda de BODIPY*8!59C14 e a re-expansão e a eclosão pós-vitrificação no EXP5. O software utilizado para contar as células e medir a àrea lipídica e a intensidade da florescência foi ImageJ (1.54d; National Institutes of Health, Wisconsin, EUA). A regressão logística (desenvolvimento embrionário e a indice da apoptose), a análise da variância com teste das médias (contagem das células e a oxidação de lipídios) e Qui-quadrado (dados qualitativos) foram os métodos estatísticos utilizados para analisar os dados. Média+tEPM representou os resultados e a consideração da diferença significativa foi quando P<0,05. A MT não afeitou (P>0,05) a produção de blastocistos quando adicionada na pré-maturação induzida por 12 horas com 50 uM da butirolactona | (EXP1). No EXP2, a MIV com 0,1 mM MT apresentou as maiores taxa (P<0,05) de blastocisto expandido, número de células e índice da apoptose (27,5+1,8%, 173,77+7 e 33,95+3,7/6%, respectivamente) do que o controle (18,1+4,8%, 138,33+11,12 e 19,05+2,9/%, respectivamente). No EXP3.1,0,1 mM MT resultou em uma taxa maior (P<0,05) de blastocisto (34,6+4,9%) do que controle (12,2+1,4%). Porém, no EXP3.2, a concentração de 0,05 mM MT resultou na maior proporção (P<0,05) de blastocisto total (60,3+2,5%) entre os grupos e no controle houve menor índice da apoptose (24,5+2,5%) (P<0,05) do que nos grupos tratados com 0,1 mM (27,9+1,9%) e 0,05 mM (26,4+1,9%) e semelhante (P>0,05) ao 0,2 mM (22,9+2%). No EXP4, MT não alterou a área de lipídios, mas a oxidação lipídica foi menor (P<0,05) no MMT>+CMT: (48,/5+2,76%) do que nos MMTo+CMTo (55,99+1,92%) e MMT>+CMTo (57,47+2,35%) e similar (P>0,05) ao MMTo+CMT: (52,16+2,67%). No EXP5, não houve efeito (P>0,05) do tratamento na viabilidade embrionária, mas blastocistos produzidos do MMT>+CMT+ mostrou maior (P<0,05) taxa de eclosão (15,93+9,33%) do que no controle (6,54+1,58%) com 24 horas após a devitrificação. Em conclusão, a metformina contribuiu para proteger os lipídios embrionários contra os agentes oxidantes, o que reflete em criotolerância maior após a vitrificação. Contudo, os efeitos no desenvolvimento embrionário dependem da dose e podem ser influenciados pela metodologia de cultivo adotada