Experimental Medications for Using in Endodontics: Cytotoxicity, Genotoxicity and Mutagenesis Analysis
Authors: Mori Graziela Garrido , Sako Thais , Machado Nathália Evelyn da Silva , Azevedo Fabíola Mello , Pires Flávia Beltrão , Bertin Larissa Dragonetti , Goldoni Paulo Roberto , Prado Rosana Leal , Santinoni Carolina dos Santos , Maia Luciana Prado , Nai Gisele Alborghetti 
Published: October 2024

Abstract
The objective was to evaluate the cytotoxic, genotoxic and mutagenic properties of two experimental medication in Endodontics. For cytotoxic evaluation, fibroblast and osteoblast cells (1x104 cells/well) were plated and divided into groups conforming to the product added in culture medium: EM1 - 20 µL of experimental medication 1 (EM1); EM2  20 µL of experimental medication 2 (EM2); VE 20 µL of vehicle used in medications; C without product. The MTT assay was performed at 24, 48 e 72 hours for cytotoxic analysis. For genotoxic and mutagenic evaluation, 42 male rats were used. After 1 and 7 days of tubes containing EM1 or EM2, or empty (NC) were subcutaneously implanted, and after 1 day, a single dose of cyclophosphamide (CY) to be applied, the bone marrow was collected and submitted to comet and micronuclei assay. The significance level of 5% was considered for all statistical analysis. The viability of fibroblasts was <70% to both medications at 24h, and EM1 at 72h; at 72h, the proliferation cells was observed in EM2 (>100%). Both medications were non cytotoxic to osteoblasts, and the EM2 stimulate the cell proliferation at 72h. The damage frequency of CY was statistically similar to EM1 anddifferent to EM2 (p<0.05). The number of micronuclei was insignificant to EM1 and EM2 and no difference to group NC (p>0.05). Despite the absence of mutagenesis and non-cytotoxicity to osteoblasts, the EM1 was cytotoxic and genotoxic to fibroblasts. The EM2 was non genotoxic, non cytotoxic and non mutagenic.
Keywords: Cytotoxicity Tests. Genotoxicity Tests. Mutagenicity Tests. Root Canal Medicament.
Resumo
O objetivo foi avaliar as propriedades citotóxicas, genotóxicas e mutagênicas de dois medicamentos experimentais em Endodontia. Para avaliação citotóxica, células fibroblásticas e osteoblásticas (1x104 células/poço) foram plaqueadas e divididas em grupos de acordo com o produto adicionado no meio de cultura: EM1 20 µL da medicação experimental 1 (EM1); EM2 20 µL da medicação experimental 2 (EM2); VE - 20 µL de veículo utilizado em medicamentos; C sem produto. O ensaio MTT foi realizado aos 24, 48 e 72 horas para análise citotóxica. Para avaliação genotóxica e mutagênica foram utilizados 42 ratos machos. Após 1 e 7 dias foram implantados por via subcutânea tubos contendo EM1 ou EM2, ou vazios (NC), e após 1 dia, foi aplicada dose única de ciclofosfamida (CY), a medula óssea foi coletada e submetida ao ensaio de cometa e micronúcleos. O nível de significância de 5% foi considerado para todas as análises estatísticas. A viabilidade dos fibroblastos foi <70% para ambas as medicações às 24h e ao EM1 às 72h; às 72h, a proliferação de células foi observada em EM2 (>100%). Ambas as medicações foram não citotóxicas para os osteoblastos, e o EM2 estimulou a proliferação celular às 72h. A frequência de dano do CY foi estatisticamente semelhante ao EM1 e diferente do EM2 (p<0,05). O número de micronúcleos foi insignificante para EM1 e EM2 e não houve diferença para o grupo NC (p>0,05). Apesar da ausência de mutagênese e não citotoxicidade para osteoblastos, o EM1 foi citotóxico e genotóxico para fibroblastos. O EM2 era não genotóxico, não citotóxico e não mutagênico.
Palavras-chave: Testes de Citotoxicidade. Testes de Genotoxicidade. Testes de Mutagenicidade. Medicamento para Canal Radicular