Влияние мезенхимальных стволовых клеток из различных частей плаценты на пролиферацию и дифференцировку гемопоэтических стволовых клеток пуповинной крови
Authors: Новикова М.А. , Исайкина Я.И. , Шман Т.В. , Фролова Р.Л. , Лях Е.Г. , Савич Ю.В. 
Published: October 2024

Цель. Исследование влияния МСК из разных частей послеродовой плаценты на пролиферацию, дифференцировку и самоподдержание популяции гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) пуповинной крови (ПК) in vitro. Материалы и методы. МСК были выделены из децидуальной ткани, ворсин хориона, амниотической мембраны плаценты и костного мозга (КМ). ГСК изолировали с использованием конъюгированных с магнитными частицами антител к маркеру CD34. Селектированные CD34+-клетки культивировали в среде, содержащей ростовые факторы на фидерном слое МСК. Подсчет количества ядросодержащих клеток (ЯСК) и иммунофенотипический анализ ГСК проводили на 0-е и 7-е сутки на проточном цитометре. Пролиферативную активность ГСК оценивали по колониеобразующей способности клеток-предшественников гемопоэза в среде метилцеллюлозы. Результаты. При культивировании ГСК на фидерном слое МСК из децидуальной ткани плаценты наблюдались достоверный прирост ЯСК и CD34+-клеток (p<0,05), а также сохранение популяции CD34+CD3– клеток. МСК из децидуальной ткани после- родовой плаценты способствовали ранней дифференцировке ГСК, что выражалось в приросте ранних предшественников лимфопоэза и миелопоэза (p<0,05). Анализ колоний показал, что ГСК ПК после культивирования как с МСК из разных частей плаценты, так и с МСК-КМ не отличались по способности к колониеобразованию, и во всех случаях наблюдался прирост колониеобразующей единицы (КОЕ) в среднем в 1,8 раза по сравнению с 0-м днем (р<0,05), тогда как при отсутствии МСК число КОЕ увеличилось лишь в 1,1 раза. Заключение. Применение МСК из разных частей плаценты для in vitro экспансии ГСК пуповинной крови позволяет увеличить число бипотентных и сохранить уровень ранних мультипотентных клеток-предшественников гемопоэза.

Purpose. The study of the influence of MSCs from different parts of placenta at the proliferation, differentiation and self-renewal of the umbilical cord blood hematopoietic stem cells (HSCs) population in vitro. Materials and methods. MSCs were isolated from decidual tissue, chorionic villi, and amniotic membrane of the placenta and bone marrow (BM). HSCs were isolated using antibodies to the CD34 marker conjugated to magnetic particles and then were cultured in the medium containing growth factors on the MSCs feeder layer. The nucleated cells counting and immunophenotypic analysis performed on days 0 and 7 using a flow cytometer. The proliferative activity of HSCs assessed by the colony-forming ability in a methylcellulose medium. Results. A significant increase in TNCs and CD34+ cells on the feeder layer of MSCs from the decidual tissue of the placenta was shown (p<0.05), as well as preservation of the population of CD34+CD38- cells. MSCs derived from the decidual tissue promoted early differentiation of HSCs and the growth of early precursors of lymphopoiesis and myelopoiesis (p<0.05). Analysis of the colony forming capacity didn’t show the different between the cultivation HSCs on MSCs from various parts of the placenta and from BM, and the numbers of colony-forming units (CFUs) increased 1.8 times compared to 0 day (p<0.05), whereas in the absence of MSCs the number of CFU increased only 1.1 times. Conclusion. The use of MSCs from different parts of the placenta for in vitro expansion of umbilical cord blood HSCs allows increasing the number of bipotent hematopoiesis precursors and support the level of early multipotent hematopoietic precursor cells.