Σύνθεση και βιολογική δράση αναλόγων της GnRH (Gonadotropin Releasing Hormone), με υποκατάσταση στις θέσεις 5,6,9
Authors: Κεραμυδά Μαρία 
Published: August 2021

Στην παρούσα διατριβή συντέθηκαν 33 πεπτιδικά ανάλογα της εκλυτικής ορμόνης των γοναδοτροπινών mGnRH ή LHRH με αλλαγές στις θέσεις 5, 6, 9, 10 με σκοπό την μελέτη της βιολογικής τους δράσης και την δυνατότητα χρησιμοποίησης τους στις ιχθυοκαλλιέργειες. Με βάση τα δεδομένα της βιβλιογραφίας και της μελέτης της διαμόρφωσης αναλογών της GnRH με την χρήση τεχνικών φασματοσκοπίας 2D-NMR σχεδιάστηκαν και συντέθηκαν τα παρακάτω ανάλογα (εννεαπεπτίδια και δεκαπεπτίδια). 1. [Tyr(OMe)5]GnRH 2. [Tyr(OMe)5, Aibu6]GnRH 3. [Tyr(OMe)5, D-His(tCl)6]GnRH 4 .[Tyr(OMe)5, Aibu6, Pro9NHEt]GnRH 5. [Tyr(OMe)5, D-His(tCl)6, Pro9NHEt]GnRH 6. [Tyr(OMe)5, Aibu6, Pro9NHEtOH]GnRH 7. [Tyr(OMe)5, Aibu6, Aze9]GnRH 8. [Tyr(OMe)5, D-Lys6, Aze9]GnRH 9. [Tyr(OMe)5, D-Arg6, Aze9]GnRH 10. [Tyr(OMe)5, D-Glu6, Aze9]GnRH 11. [Tyr(OMe)5, D-Asp6, Aze9]GnRH 12. [Tyr(OMe)5, D-Ser6, Aze9]GnRH 13. [Tyr(OMe)5, D-Thr6, Aze9]GnRH 14. [Tyr(OMe)5, D-Tyr6, Aze9]GnRH 15. [Tyr(OMe)5, D-Arg(Tos)6, Aze9]GnRH 16. [Tyr(OMe)5, D-Asp(Bzl)6, Aze9]GnRH 17. [Tyr(OMe)5, Aibu6, Aze9NHEt]GnRH 18. [Tyr(OMe)5, D-Lys6, Aze9NHet]GnRH 19. [Tyr(OMe)5, D-Arg6, Aze9NHEt]GnRH 20. [Tyr(OMe)5, D-Glu6, Aze9NHEt]GnRH 21. [Tyr(OMe)5, D-Asp6, Aze9NHEt]GnRH 22. [Tyr(OMe)5, D-Ser6, Aze9NHEt]GnRH 23. [Tyr(OMe)5, D-Thr6, Aze9Het]GnRH 24. [Tyr(OMe)5, D-Tyr6, Aze9NHEt]GnRH 25. [Tyr(OMe)5, D-Arg(Tos)6, Aze9Het]GnRH 26. [Tyr(OMe)5, D-Asp(OMe)6, Aze9NHEt]GnRH 27. [Tyr(OMe)5, Aze9NHEtOH]GnRH 28. [Tyr(OMe)5, D-Glu6, Aze9NHEtOH]GnRH 29. [Tyr(OMe)5, D-Arg6, Aze9NHEtOH]GnRH 30. Cyclo (4,9)[Lys4, D-Trp6, Glu9]GnRH 31. Cyclo (4,9)[D-Phe2, Lys4, D-Trp6, Glu9]GnRH 32. [Tyr(OMe)5, Aze9]GnRH 33. [Tyr(OMe)5, Aze9NHEt]GnRH. Η σύνθεση των πεπτιδίων έγινε σε στερεή φάση επί της 2-χλωροτριτυλοχλωρίδιο ρητίνης η οποία συνδυάζεται με την χρήση N-Fmoc προστατευμένων αμινοξέων και DCC/HOBt ως αντιδραστήρια σύζευξης. Στην περίπτωση των C-τελικών αμιδίων χρησιμοποιήθηκε η ίδια ρητίνη εστεροποιημένη με τον συνδέτη (Linker) των Rink- Bernatowitz. Οι ήπιες συνθήκες αποκοπής των πεπτιδίων από την ρητίνη έδωσαν κατάλληλα προστατευμένα πεπτίδια τα οποία έδωσαν με απομάκρυνση των προστατευτικών ομάδων τα τελικά προϊόντα. Ο καθαρισμός των πεπτιδίων έγινε με ημιπαρασκευαστικό RP-HPLC και η ταυτοποίηση τους με αναλυτικό RP-HPLC, FAB-MS και ανάλυση αμινοξέων. Από την μελέτη την NMR πειραμάτων προέκυψε για την διαμόρφωση του πεπτιδίου της GnRH ότι το μόριο έχει κυκλική διαμόρφωση και υπάρχει αλληλεπίδραση τριών αμινοξέων των Tyr / Trp / His τα οποία σχηματίζουν στο χώρο δακτύλιο. Η μελέτη της βιολογικής δράσης των πεπτιδίων έγινε σε 4 κατηγορίες βιολογικών μοντέλων και περιελάμβαναν πειράματα in vivo και in vitro. 1. Έλεγχος δραστικότητας των αναλογών και επιβεβαίωση αγωνιστικής ή ανταγωνιστικής δράσης. Χρησιμοποιήθηκαν τμήματα υπόφυσης χρυσόψαρου τα οποία εκτέθηκαν (για ορισμένο χρονικό διάστημα) σε συγκεκριμένες συγκεντρώσεις αναλόγου. 2. Έλεγχος δεσμευτικής ικανότητας των αναλογών της GnRH στον υποδοχέα θηλαστικού. Χρησιμοποιήθηκε η υπόφυση ποντικιού. 3. Πειράματα in vivo σε μεσογειακά είδη ψαριών (τσιπούρα, κέφαλο, λαβράκι, συναγρίδα). 4. Έλεγχος της δράσης σε καρκινικές σειρές κυττάρων. Χρησιμοποιήθηκαν κύτταρα από κακοήθεις όγκους ασθενών με καρκίνο του μαστού και ωοθηκών. Από τα αποτελέσματα των βιολογικών πειραμάτων προέκυψε ότι από τα ανάλογα που συντέθηκαν κάποια έχουν ισχυρή αγωνιστική δράση και μπορούν να χρησιμοποιηθούν στις ιχθυοκαλλιέργειες για αύξηση της αναπαραγωγής αλλά και να δοκιμαστούν σε πειράματα με στόχο τον ανθρώπινο οργανισμό τόσο στο επίπεδο της αναπαραγωγής όσο και στην θεραπεία αρκετών μορφών καρκίνου.