Experimentelle Untersuchungen zur extraossären Verkalkung bei der Hypervitaminose D3.: V. Licht‐ und elektronenoptische Lokalisation von Kalzium‐bindendem‐Protein (CaBP) im Uterus legereifer Wachteln
Authors: Regal D. S. 
Published: August 2010

Mittels indirekter Immunofluoreszenz‐ bzw. Immunoperoxidasetechnik gelang ein licht‐ und elektronenoptischer Nachweis von Vitamin D‐abhängigem CaBP im Uterus legereifer Wachteln, die nach 17tägiger Depletion wieder mit 4000 i. E. Vitamin D3 bzw. 10% lyophilisiertem Goldhafer angefüttert worden waren. Die Präparation der Schnitte mit dem Gefrier‐Auftau‐Verfahren ergab eine Lokalisation von CaBP im Zytoplasma der Drüsenepithelzellen. Unter Verwendung der Gefriertrocknung und der Gefriersubstitution hingegen zeigte sich eine CaBP‐spezifische Reaktion im Zytoplasma sowohl der Drüsen‐ als auch der Oberflächenepithelzellen.

Elektronenmikroskopisch erfolgte mit allen drei Verfahren ein Nachweis von CaBP in den Polysomen und gelegentlich auch in den Mitochondrien der Drüsenepithelzellen sowie in unterschiedlichen elektronendichten Gebilden in den Tropfen von Drüsenepithelzellen, die in der Lamina propria situiert waren. Während mit dem Gefrier‐Auftau‐Verfahren — möglicherweise infolge eines “Auswascheffektes” — im Oberflächenepithel kein CaBP festzustellen war, fand sich mit den beiden anderen Präparationsmethoden eine CaBP‐spezifische Färbung in den Polysomen und in den Mitochondrien der Becherzellen und der Flimmerepithelzellen des Oberflächenepithels.

Diese Befunde weisen CaBP im Uterus als zytoplasmatisches Protein aus. Seine Beteiligung am intrazellulären Kalziumtransport während der Eischalenbildung wird diskutiert.

Experimental studies on extraosseous calcification in hypervitaminosis D3 V. Light and electronoptical localization of calcium‐binding protein (CaBP) in the uterus of egg‐laying quail

Using immune‐peroxidase or immunofluorescence techniques a light‐ and EM‐demonstration of vitamin D‐dependent CaBP in the uterus of laying quail which after 17 days depletion were fed with 4000 i. u. of vitamin D3 or 10% lyophilized “goldhafer”, was successfully carried out. Preparation of sections with the freeze‐thaw method enabled localization of CaBP to be identified in the cytoplasm of glandular epithelial cells. By using freeze‐drying and freeze‐substitution a CaBP‐specific reaction was detected in the cytoplasm of both glandular and surface epithelial cells.

With the EM it was possible to demonstrated CaBP in the polysomes and occasionally also in the mitochondria of glandular epithelial cells as well as in various electron‐dense structures in the droplets of glandular epithelial cells situated in the lamina propria. Although in the freeze‐thaw method — possibly as a result of a ‘washing‐out’ effect — no CaBP could be found in the surface epithelium, the two other techniques gave a CaBP‐specific staining in the polysomes and in the mitochondria of goblet cells in the ciliated epithelial cells of the surface epithelium.

These findings show that CaBP is present in the uterus as a cytoplasmic protein. Its involvement in intracellular Ca transport during shell formation is discussed.

Recherches expérimentales sur la calcification extraosseuse lors d'hypervinaminose D3 V. Localisation au microscope optique et électronique de la protéine liant le calcium (CaBP) dans l'utérus de cailles pondeuses.

Il a été possible au moyen de la technique par immunofluorescence et immunooperoxydase de mettre en évidence par microscopie optique et électronique la présence de CaBP dépendant de la vitamine D dans l'utérus de cailles pondeuses qui après une depletion de 17 jours avaient reçu à nouveau 4000 UI de vitamins D3 et respectivement 10% d'avoine dorée lyophilisée. Les préparations des coupes par la technique congélation‐décongélation a permis une localisation de CaBP dans le cytoplasme des cellules épithéliales glandulaires. L'emploi de la lyophilisation et de la subsitution par congélation a montré par contre une réaction CaBP spécifique aussi bien dans le cytoplasme des cellules épithéliales glandulaires que superficielles. Le microscope électronique a permis avec les trois procédés de mettre en évidence CaBP dans les polysomes, de temps en temps également dans les mitochondries des cellules epitheliales glandulaires ainsi que dans différentes images étanches aux électrone dans les gouttes des cellules epitheliales glandulaires qui étaient situées dans Lamina propria. Avec la méthode congélation‐décongélation probablement à la suite d'un effet de ≤lavage≥, CaBP n'a pas été mis en évidence dans l'épithélium de surface. Les deux autres méthodes de préparation ont permis de trouver une coloration spécifique de CaBP dans les polysomes et dans les mitochondries des cellules caliciformes et les cellules épithéliales à cils vibratifs de l'épithélium de surface.

Ces résultats montrent que CaBP est une protéine cytoplasmique dans l'utérus. On discute sa participation au transport intracellulaire du calcium durant la formation de la coquille de l'œuf.

Estudios experimentales sobre la calcificacion extraósea en la hipervitaminosis D3 V. Localización foto y electrónicoóptica de la proteína fijadora de calcio (PFCa) en el útero de codornices ponedoras

Mediante la técnica de la inmunofluorescencia indirecta resp. de la inmunoperoxidasa, se logró la puesta en evidencia foto y electronicoóptica de PFCa dependiente de la vitamina D en el útero de codornices maduras para la puesta, las cuales habían sido vueltas a alimentar, tras una depleción de 17 días, con 4000 u. i. de vitamina D3 resp. un 10% de avena dorada liofilizada. La preparación de los cortes con el procedimiento de congelación‐descongelación reveló una localización de PFCa en el citoplasma de las células del epitelio glandular. Sin embargo, utilizando la liofilización y la criosubstitución se reveló una reacción específica de PFCa en el citoplasma tanto de las células glandulares como de las del epitelio superficial.

Al microscopio electrónico se pudo poner en evidencia con todas las tres técnicas la PFCa en los polisomas y, en ocasiones también, en las mitocondrias de las células de los epitelios glandulares así como en formaciones opacas de forma diferente en las gotas de células de epitelios glandulares, que se hallaban situados en la lámina propia. Mientras que con el procedimiento de congelación‐descongelación — probablemente a causa de un ≤efecto de lavado≥ — no se pudo apreciar ninguna PFCa en el epitelio superficial, se halló con las otras dos técnicas de preparación una coloración específica de PFCa en los polisomas y en las mitocondrias de las células caliciformes y de las células de los epitelios vibrátiles del epitelio superficial.

Estos hallazgos justifican a la PFCa en el útero como proteína citoplasmática. Se discute su participación en el transporte intracelular del calcio durante la formación de la cáscara de huevo.