Συμβολή στη μελέτη της ανοσολογικής απάντησης ενήλικων και ανήλικων προβάτων και αιγών με κλασικές και νεότερες ορολογικές δοκιμές μετά από οφθαλμικό εμβολιασμό με εμβόλιο REV-1
Authors: Στουρνάρα-Τσελεπίδου Αθανασία 
Published: January 2014

Η παρούσα έρευνα είχε ως στόχο να συμβάλει στη μελέτη της ανοσολογικής απάντησης ενήλικων και ανήλικων προβάτων και αιγών μετά από οφθαλμικό εμβολιασμό με κανονική δόση εμβολίου Rev-1. Εφαρμόστηκαν οι εγκεκριμένες δοκιμές του ερυθρού της Bεγγάλης (Rose Bengal, RB) και σύνδεση του συμπληρώματος (CF), καθώς και οι νεότερες, όπως η τροποποιημένη Rose Bengal (m-RB), η έμμεση ανοσοενζυμική δοκιμή (i-ELISA), η ανταγωνιστική ανοσοενζυμική δοκιμή ( c-ELISA) και η δοκιμή πόλωσης του φθορίζοντος φωτισμού (FPA). Σκοπός της έρευνας ήταν ο έλεγχος της πορείας των εμβολιακών αντισωμάτων μετά τον εμβολιασμό, προκειμένου να καθοριστεί ο ακριβής χρόνος ελέγχου των εμβολιασμένων ζώων, που είναι ιδιαίτερα σημαντικός στην εφαρμογή προγράμματος ελέγχου της βρουκέλλωσης. Παράλληλα αξιολογήθηκαν οι νεότερες δοκιμές προκειμένου να διαπιστωθεί αν θα μπορούσαν να αποδειχθούν χρήσιμες για την ασφαλή διάκριση εμβολιασμένων ζώων από τα μολυσμένα με φυσικά στελέχη των ειδών του γένους Brucella. Επιλέχθηκαν δύο εκτροφές του νομού Λαρίσης, μία προβάτων, από την οποία επιλέγησαν 106 πρόβατα και 49 αμνοί και μία αιγών, από την οποία επιλέγησαν 69 η αίγες και 64 ερίφια. Οι εκτροφές είχαν χαρακτηρισθεί ως «επίσημα απαλλαγμένες» βρουκέλλωσης, διότι τηρούσαν όλους τους κανόνες που τίθενται από το Διεθνές Γραφείο Επιζωοτιών (Ο.Ι.Ε.). Επιπλέον, 94 ζώα (30 πρόβατα, 15 αμνοί, 10 κριοί, 19 αίγες, 10 ερίφια, 10 τράγοι) επιλέχθηκαν για να χρησιμοποιηθούν ως μάρτυρες. Πριν από τον εμβολιασμό, όλα τα επιλεγμένα ζώα ελέγχθηκαν με τις δοκιμές RB και CF και ήταν αρνητικά ως προς τη βρουκέλλωση. Την ημέρα μηδέν σε όλα τα επιλεγμένα ζώα, εκτός από τους μάρτυρες, χορηγήθηκε κανονική δόση (1,6X10cfu) εμβολίου Rev-1 δια της οφθαλμικής οδού. Στα ζώα μάρτυρες αντί για εμβόλιο, χορηγήθηκε μία σταγόνα φυσιολογικού ορού στον επιπεφυκότα. 9 Aπό τα εμβολιασμένα ζώα πραγματοποιήθηκαν αιμοληψίες σε προκαθορισμένα χρονικά διαστήματα μετά τον εμβολιασμό, δηλαδή την 21η, 42η, 63η, 91η, 125η, 159η, 223η, 330η ημέρα για τα πρόβατα και τους αμνούς και την 22η, 44η, 65η, 95η, 125η, 155η, 230η, 335η για τις αίγες και τα ερίφια. Παράλληλα πραγματοποιήθηκαν αιμοληψίες και από τα ζώα μάρτυρες. Τα δείγματα ορών ελέγχθηκαν με τις δοκιμές RB, m-RB, CF, i-ELISA, c-ELISA και FPA. Ως κριτήρια θετικότητας ορίστηκαν για τις RB και m-RB τα ίχνη συγκόλλησης, για την CF τίτλος ? 20 ICFU/ml, για την i-ELISA τιμή OD>100% της τιμής OD του μάρτυρα θετικού ορού, για την c-ELISA τιμή PI>30% σε σχέση με τον μάρτυρα του ρυθμιστικού διαλύματος (0% PI) και για την FPA τιμή >87 mP. Όλα τα ζώα μάρτυρες έδωσαν αρνητικό αποτέλεσμα σε όλες τις ορολογικές δοκιμές, σε όλη τη διάρκεια του πειραματισμού. Το σύνολο των εμβολιασμένων ζώων έδωσε θετικό αποτέλεσμα 3 εβδομάδες μετά τον εμβολιασμό, σε περισσότερες από μία ορολογικές δοκιμές, γεγονός που επιβεβαιώνει ότι ο εμβολιασμός εκτελέστηκε σωστά. Το ίδιο χρονικό διάστημα διαπιστώθηκαν τα μεγαλύτερα ποσοστά οροθετικών ζώων, σε όλες τις δοκιμές εκτός από την i-ELISA. Στη συγκεκριμένη δοκιμή, το μεγαλύτερο ποσοστό οροθετικών παρατηρήθηκε καθυστερημένα, σε σχέση με τις υπόλοιπες, κατά 6 εβδομάδες για τα πρόβατα και κατά 3 εβδομάδες για τους αμνούς, αίγες και ερίφια.