Laboratory Studies in Assessing the Safety of a Biomedical Natural Killer Cell Product Obtained for the Purposes of Antitumor Adoptive Cellular Immunotherapy
Authors: Горбач Е.И. , Мигас А.А. , Вашкевич Е.П. , Игнатович А.С. , Шман Т.В. 
Published: December 2022

Введение. Естественные киллерные (ЕК) клетки обладают высокой противоопухолевой и противовирусной активностью. Получение биомедицинского клеточного продукта (БМКП) на основе ЕК-клеток в объеме, необходимом для эффективного клинического применения, является нетривиальной задачей. ЕК-клетки, экспансированные ex vivo в присутствии генетически модифицированных клеток линии К-562, широко используются в клинических исследованиях у пациентов с онкологическими заболеваниями. Как и любой БМКП, данный клеточный продукт должен соответствовать определенным требованиям безопасности. В дополнение к базовым параметрам (микробиологическая чистота, содержание целевой популяции клеток) в контроль качества описываемого БМКП должны быть включены критерии, учитывающие особенности технологии его получения. Цель. Оценка микробиологической и онкогенной безопасности БМКП ЕК-клеток, полученных методом экспансии с фидерными клетками для целей адоптивной иммунотерапии. Материалы и методы. Материалом для исследования являлись 27 образцов продуктов ЕК-клеток доноров до и после проведения экспансии. В качестве параметров безопасности конечного клеточного продукта определяли потенциальную контаминацию фидерными клетками, экспрессию маркеров злокачественной трансформации, микробиологическую чистоту и контаминацию микоплазмой методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени. Результаты. Было показано, что полученные БМКП ЕК-клеток соответствовали критериям микробиологической чистоты, отсутствовала контаминация фидерной культурой, а также отсутствовали признаки злокачественной трансформации полученных клеток. Было выявлено достоверное снижение экспрессии c-Myc в конечных клеточных продуктах по сравнению с исходным материалом, выявлена зависимость между уровнем экспрессии hTERT в конечных БМКП и длительностью культивирования клеток. Заключение. Экспансия ЕК-клеток с использованием генно-инженерной фидерной культуры при условии соблюдения технологии позволяет получить БМКП, соответствующийустановленным требованиям безопасности.

Introduction. Natural killer (NK) cells have high antitumor and antiviral activity. Obtaining a biomedical cell product (BMCP) based on NK cells in the amount necessary for effective clinical use is a nontrivial task. NK cells expanded ex vivo in the presence of genetically modified K-562 cells are widely used in clinical trials in cancer patients. Like any BMCP, this cell product must meet certain safety requirements. In addition to the basic parameters (microbiological purity, content of the target cell population), the quality control of the described BMCP should include criteria co criteria taking into account specific technological features of its production. Purpose. Evaluation of microbiological and oncogenic safety of BMCP NK cells obtained by expansion with feeder cells for purposes of adoptive immunotherapy. Materials and methods. Materials for the study consisted of 27 samples obtained from donors NK cells products before and after expansion. Potential contamination by feeder cells, expression of malignant transformation markers, microbiological purity, and mycoplasma contamination by real-time polymerase chain reaction were determined as safety parameters for the final cellular product. Results. It was found that the obtained BMCPs of NK cells met the criteria of microbiological purity, and there was no contamination by feeder culture, as well as no signs of malignant transformation of cells. A significant decrease in c-Myc expression level in the final cell products was revealed in comparison with the baseline, and a correlation between hTERT expression level in the final BMCPs and the duration of cell cultivation was detected. Conclusion. Expansion of NK cells using genetically engineered feeder culture, given compliance with the technology, makes it possible to obtain BMCP that meets the established safety requirements.