Contribution au Dépistage de Falsifications de Préparations de Viande par Adjonction de Viande de Cheval, Application de la Méthode de Double Diffusion dans le Gel (Ouchterlony)
Authors: Bubloz Axel 
Published: September 2010

Les immunsérums de lapin anti‐extraits de viande et antisérums de 5 animaux domestiques sont fabriqués selon les méthodes de Freund et de Proom. Ces immunsérums sont précipités avec leurs antigènes, en tube d'après Uhlenhuth et dans le gel (double diffusion d'Ouchterlony et immunoélectrophorèse avec la microméthode de Scheidegger). Alors que les immunsérums de lapin antisérums font apparaître de nombreuses lignes de précipitation dans l'analyse immunoélectrophorétique homologue, les immunsérums anti‐extraits de viande précipitent leurs extraits de viande homologues presqu' exclusivement en une ligne albuminique, précipitation due à des restes de sérum contenus dans les extraits de viande.

La réaction usuelle de précipitation (Uhlenhuth) pour le dépistage de l'origine d'une viande est une réaction purement sérique, dans laquelle la protéine de la viande n'intervient pas.

Par la méthode de double diffusion d'Ouchterlony, les déterminants antigéniques des extraits de viande sont comparés lorsque ces extraits réagissent avec chacun des immunsérums antisérums fabriqués.

Tous les extraits de viande ont des déterminants antigéniques communs. Appliquées au dépistage de la présence de viande de cheval dans des mélanges de viande de cheval et de vache, la méthode d'Ouchterlony permet d'identifier la viande de cheval dans une proportion de 1 part de viande de cheval pour 9 parts de viande de vache.

Beitrag zum Nachweis der Verfälschung von Fleischwaren mit Pferdefleisch Anwendung der Doppel‐Diffusions‐Methode in Gel (Ouchterlony)

Die Antifleischextrakt‐ und Antiserum‐Immunseren von 5 Haustieren wurden nach den Freund‐ und Proom‐Verfahren hergestellt. Diese Immunsera wurden im Röhrchen nach Uhlenhuth und im Gel nach Ouchterlony und nach Scheidegger (Mikromethode der Elektrophorese) präzipitiert. Die immunelektrophoretischen Untersuchungen mit Antiserum‐Immunseren und ihren homologen Seren erzeugten zahlreiche Präzipitationslinien. Die Antifleisch‐Immunseren hingegen präzipitierten ihre homologen Fleischextrakte fast ausschließlich in einer Albuminlinie, die durch Serumreste in den Fleisch‐extrakten bedingt ist.

Das übliche Präzipitations‐Verfahren (Uhlenhuth) zum ***Nachweis der spezifischen Herkunft eines Fleischstückes ist ein reines serologisches Verfahren, in dem das Fleischeiweiß nicht reagiert.

Die Antigen‐Determinanten der Fleischextrakte wurden im Doppeldiffusions‐Verfahren nach Ouchterlony verglichen, wobei sie gegen ihre homo‐ und heterologen Antiserum‐Seren präzipitiert wurden: Alle Fleischextrakte haben gemeinsame Antigendeterminanten.

Das Präzipitationsverfahren nach Ouchterlony ermöglichte es uns, Pferdefleisch im Verhältnis Rindfleisch zu Pferdefleisch 1:9 noch nachzuweisen.

Contribution to the Detection of Falsification of Meat Preparations by the Addition of Horse Meat

The use of the Double Diffusion Gel Method (Ouchterlony)

Immune sera were prepared in rabbits against extracts of meat and serum of five animal species by the methods of Freund and Proom. These immune sera were precipitated in three ways — the tube method of Uhlenhuth, the double diffusion gel method of Ouchterlony, and by immuno‐electrophoresis by the micromethod of Scheidegger. Immuno‐electrophoresis with the immune antisera set against homologous sera gave many precipitation lines, whereas immune sera set against meat extracts gave almost exclusively a single albumin line which resulted from traces of serum in the meat extracts.

The ordinary Uhlenhuth precipitation method for demonstrating the specificity of a piece of meat is a pure serological test in which meat protein itself does not react. The antigen determinants of meat extracts were compared by the double diffusion method of Ouchterlony in which they were set up against homologous and heterologous antisera. The results showed that all meat extracts have the same antigen determinants. The precipitation technique of Ouchterlony allows horse meat to be detected when present in a proportion of one part to nine parts of ox meat.

Contribución a la identificación de falsificaciones de productos cárnicos con carne de caballo

Aplicación del método de doble difusión en gel (Ouchterlony)

Los sueros inmunes antiextractos de carne y antisueros de 5 animales se prepararon con arreglo a las técnicas de Freund y Proom. Estos sueros inmunes se precipitaron en tubitos según Uhlenhuth y en gel según Ouchterlony y según Scheidegger (micrométodo de electroforesis). Los estudios inmunoelectroforéticos con sueros inmunes antisueros y sus sueros homólogos producían múltiples líneas de precipitacion. Sin embargo, los sueros inmunes anticarne precipitaban sus extractos homólogos de carne casi exclusivamente en una línea proteica, que está condicionada por restos séricos en los extractos cárnicos.

La técnica usual de precipitacion (Uhlenhuth) para probar la procedencia específica de una pieza de carne es un procedimiento serológico puro, en el cual la proteina cárnica no reacciona. Las determinantes antigénicas de los extractos cárnicos se compararon en el procedimiento de doble difusión según Ouchterlony, siendo precipitadas frente a sus sueros antisueros homo y heterólogos:

Todos los extractos cárnicos tienen determinantes antigenicas comunes.

La técnica de precipitación según Ouchterlony nos ha posibilitado apreciar aún carne de caballo en la relación carne de vaca a carne de caballo como 1:9.

Remerciements

A la fin de ce travail, j'aimerais remercier en premier lieu Monsieur le Professeur Fey de ses directives et conseils ainsi que de l'intérêt constant témoigné au travail qu'il m'a proposé. Je remercie également Mesdemoiselles Margadant, Keller et Widmer, laborantines à l'Institut de bactériologie vétérinaire de Berne, de leur assistance technique. Un témoignage de reconnaissance est adressé ici à Messieurs les vétérinaires Blaser, Directeur des abattoirs de Berne, et Grossenbacher, pour leur empressement à me faciliter la tâche lorsque j'avais besoin de sérum de porc.

Ma reconnaissance s'adresse encore à Monsieur Freudiger, chef de la clinique pour petits animaux de l'Hôpital vétérinaire de Berne, et à Monsieur Bader, assistant à cette clinique, qui m'ont aimablement procuré le sang de chien qu'il me fallait.