Approbating progressive technology of cattle cloning
Authors: Кириенко К.В. , Миронова А.Г. , Икономов П.Г. , Апрышко В.П. , Бондаренко М.С. , Гришин Д.С. , Заводовская М.С. , Мартын В.Ф. , Васильева О.В. , Семенова Е.И. , Шокирова Н.С. , Крашенинников М.Е. , Яковенко С.А. 
Published: August 2024

Перенос ядер соматических клеток (SomaticCellNuclearTransfer, SCNT) до настоящего времени был наиболее эффективным и жизнеспособным методом размножения ценных или находящихся под угрозой исчезновения животных. Более 99% эмбрионов или живого потомства, о которых ранее сообщалось, были получены с помощью подхода, основанного на микроманипуляциях, т.е. с использованием традиционного SCNT. При «ручном» клонировании (Hand-madeCloning, HMC) процедуры энуклеации ооцитов и реконструирования эмбрионов осуществляются в отсутствии zonapellucida, и все манипуляции проводятся без использования микроманипуляторов. К настоящему времени, в мире были получены положительные результаты по получению клонированного потомства от крупного рогатого скота, буйволов, овец, свиней и лошадей с использованием HMC. Цель исследования – апробация технологии клонирования крупного рогатого скота по методу HMC.Яичники коров голштинской породы были получены с местной бойни в течение 20–30 мин после убоя и доставляныв лабораторию в течение 3 ч. Изучена эффективность основных этапов технологии клонирования методом HMC: дозревание ооцитов крупного рогатого скота invitro, с последующим их использованием в качестве доноров цитопластов; получение культуры соматических клеток от высокопродуктивной коровы голштинской породы, использование её в качестве клеток доноров кариопластов; активация, культивирование и трансплантация реконструированных эмбрионов корове-реципиенту, генетическое тестирование полученного потомства. В результате исследования впервые в Российской Федерации получена клонированная тёлочка голштинской породы с использованием метода HMC. Полученные результаты свидетельствуют о возможности практического использования технологии HMC для получения потомства высокопродуктивных коров.

Somatic cell nuclear transfer (SCNT) was up to date the most effective and viable method for propagating valuable or endangered animals. More than 99% of embryos or living offspring previously reported were obtained using a micromanipulation approach, i.e. using traditional SCNT. With hand-made cloning (HMC), the procedures of oocyte enucleation and embryo reconstruction are carried out in the absence of the zona pellucida, and all manipulations are carried out without the use of micromanipulators. To date, using HMC, positive results have been obtained in the world in obtaining cloned offspring from cattle, buffaloes, sheep, pigs and horses. The aim of this work is to test the technology of cloning cattle using the HMC method. The selection of materials for the study and the organization of calving were carried out on the basis of the dairy farm using Holstein cows. Cow ovaries were obtained from a local slaughterhouse within 20–30 minutes after slaughter and delivered to the laboratory within 3 hours. The effectiveness of the main stages of cloning technology using the HMC method was studied: maturation of cattle oocytes in vitro, followed by their use as cytoplast donors; obtaining a culture of somatic cells from a highly productive Holstein cow and using it as karyoplast donor cells; activation, cultivation and transplantation of reconstructed embryos into a recipient cow, genetic testing of the resulting offspring and cow recipient.As a result of the study, for the first time in the Russian Federation, a cloned Holstein heifer was obtained using the HMC method. The results obtained indicate the possibility of practical use of HMC technology to produce offspring of highly productive cows.