Comparação das soluções de criopreservação e métodos de sincronização do ciclo em G0/G1 de fibroblastos de onças-pardas, Puma concolor (Linnaeus, 1771)
Authors:   , Rodrigues Luanna Lorenna Vieira 
Published: February 2025

A ameaça ao quantitativo populacional de onças-pardas, atrelada a sua
importância ecológica, resultam no desenvolvimento de estratégias como os bancos de
recursos somáticos. Esses bancos atuam na preservação de células somáticas, as quais podem
ser empregadas em estudos de produção de células pluripotentes e crias clones. Neste
contexto, o estabelecimento de condições de criopreservação e sincronização do ciclo celular
são etapas importantes na qualidade destes bancos. Portanto, o objetivo foi comparar
soluções de criopreservação em células somáticas e avaliar metodologias de sincronização
do ciclo em G0/G1. Para tanto, fibroblastos derivados da pele de três animais foram
cultivados até a 3ª passagem e submetidos aos experimentos. No primeiro experimento,
células foram criopreservadas utilizando diferentes soluções compostas por etilenoglicol e
dimetilsulfóxido em duas concentrações (2,5% e 10%), na ausência e presença de 0,2 M de
sacarose e avaliadas quanto à morfologia, viabilidade, atividade metabólica, análise
proliferativa e níveis de apoptose. Células não criopreservadas foram usadas como controle.
No segundo experimento, células foram submetidas a três técnicas de sincronização em
diferentes tempos: inibição por contato (IC) (24, 48 e 72 h), privação de soro (PS) (24, 48,
72 e 96 h) e roscovitina (RO) (12 e 24 h). Células não sincronizadas foram usadas como
controle. Neste experimento, células foram avaliadas quanto ao ciclo por citometria de fluxo
e viabilidade e níveis de apoptose por ensaios microscópicos. No primeiro experimento,
nenhuma diferença foi observada entre as diferentes soluções de criopreservação para
nenhum dos parâmetros. Os valores de viabilidade e atividade metabólica variaram de 79,1%
± 8,3 a 91,5% ± 0,6 e 87,2% ± 5,4% a 99,9 ± 0,1, respectivamente. Adicionalmente, para a
análise proliferativa, os valores variaram de 43,3% ± 9,7 a 92,7% ± 28,2. Quanto aos níveis
de apoptose, os resultados variaram de 68,0% ± 7,4 a 80,0% ± 3,8 em células viáveis, 10,0%
± 2,5 a 18,0% ± 4,9 em células em apoptose inicial, 2,0% ± 0,8 a 8,0% ± 1,6 de células em
apoptose tardia e 3,0% ± 0,7 a 9,0% ± 3,4 de células em necrose. No segundo experimento,
fibroblastos submetidos à IC por 24 h (84,0% ± 1,8) e 48 h (84,6% ± 0,6) apresentaram um
maior percentual de G0/G1, quando comparados ao controle (73,9% ± 3,0). Já aqueles
submetidos a PS, somente o tempo de 96 h foi hábil para a sincronização em G0/G1 (85,4%
± 3,4) quando comparado ao controle (73,9% ± 3,0). Além disso, RO por 12 h (78,6% ± 3,5)
e 24 h (82,1% ± 4,5) não foi capaz de sincronizar células. As taxas de viabilidade em todos
os grupos variaram de 76,8% ± 6,7 a 96,0% ± 2,8. Para os níveis de apoptose, foi observado
que IC e RO não afetaram esses parâmetros (P>0,05). Contudo, PS causou diferenças quanto
as células viáveis e necróticas no tempo de 96 h (P<0,05). Em conclusão, fibroblastos de
onças-pardas podem ser criopreservados utilizando ambos os crioprotetores intracelulares,
em concentrações reduzidas, e na presença ou ausência de sacarose. Ainda, a IC se mostrou
mais eficiente para a síncronização em G0/G1, sendo este estudo uma importante etapa
elucidada visando o emprego dessas células para a conservação da onça-parda.