The Preparation of Human Fibrinolysin (Plasmin)*
Authors: Sgouris J. T. , Inman J. K. , McCall K. B. , Hyndman L. A. , Anderson H. D. 
Published: March 2009

To date, methods reported for purifying human profibrinolysin have given erratic yields and purities. A versatile method is described for purification which can be used with most preparations of Fraction III from human plasma. This method results in a good yield of a highly purified profibrinolysin. Both profibrinolysin and the activator, urokinase, prepared from human urine, can be heat‐treated for ten hours at 60° C. with little or no loss of activity. In addition, fibrinolysin, profibrinolysin and urokinase are free of clotting components and entities such as fibrinogen, prothrombin, thrombin and thromboplastin.

A method is described for the activation of heat‐treated profibrinolysin both spontaneously and with heat‐treated human urokinase. The fibrinolysin formed has been shown to be highly soluble and stable in 50% synthetic glycerol at pH 7.4 and can be sterile filtered with little or no loss in activity while in this medium.

The fibrinolysin (spontaneously or urokinase activated in 50% synthetic glycerol) has passed tests for sterility, pyrogenicity, animal safety and identity.

Several physical and chemical characteristics have been determined for profibrinolysin and spontaneously activated fibrinolysin and are reported herein.

Jusqu'aujourd'hui, les méthodes décrites pour obtenir la fibrinolysine humaine purifiée se soldent par des résultats inégaux quant au rendement et à la pureté des produits obtenus. Les auteurs décrivent une méthode assez souple pour être utilisée avec la plupart des préparations de Fraction III provenant de plasma humain. Cette méthode donne des résultats excellents quant au rendement de profibrinolysine hautement purifiée. La profibrinolysine et un activateur, l'urokinase, préparé à partu de l'urine humaine peuvent btre incubés pendant 10 heures à 60° sans que l'on observe une diminution notoire de leur activité. En outre, fibrinolysine, profibrinolysine et urokinase sont débarrassés, grâce à cette méthode, des facteurs de coagulation tels que fibrinogène, prothrombine, thrombine et thromboplastine.

Les auteurs décrivent une méthode qui permet d'activer la profibrinolysine incubée à 60° soit spontanément, soit à l'aide d'urokinase humaine. La fibrinolysine formée s'avère être hautement soluble; elle est stable en solution glycérolée synthétique à 50% au pH 7,4; dans ce milieu elle peut être stérilisée sans que l'on observe une diminution de eon activité dans le temps. La fibrinolysine (spontanée ou activée par l'urokinase) dans le glycérol à 50 % a passé au crible des tests de stérilité, pyrogénie, toxicité, pratiqués sur l'animal. Les auteurs ont déterminé et rapportent plusieurs propriétés physicochimiques de la profibrinolysine et de la fibrinolysine activée spontanément.

Die bisher bekannten Methoden zur Reinigung von menschlichem Profibrinolysin ergaben bei stark wechselnder Ausbeute Präparate von unterschiedlicher Reinheit. Es wird eine praktische Methode beschrieben, die gestattet, aus den meisten Fraktion III‐Präparationen des menschlichen Plasmas hochgereinigtes Profibrinolysin in guter Ausbeute zu gewinnen. Sowohl das Profibrinolysin ale auch der aus menschlichem Urin gewonnene Aktivator, die Urokinase können ohne nennenswerte Aktivitätseinbde während 10 Stunden auf 60° C erwärmt werden. Die in der angegebenen Weise hergestellten Fibrinolysin‐, Profibrinolysin‐ und Urokinasepräparate enthalten keine Gerinnungsfaktoren; sie sind frei von Fibrinogen, Prothrombin, Thrombin und Thromobplastin.

Es wird eine Methode zur Spontanaktivierung und eine solche zur Urokinaseaktivierung des warmebehandelten Profibrinolysins beschrieben. Bei pH 7,4 ist das in dieser Weise aktivierte Fibrinolysin leicht löslich in 50% igem synthetischem Glyzerin. Das auf diese Weise stabilisierte Fibrinolysin kann ohne nennenswerten Aktivitätsschwund sterilfiltriert werden. Die in 50% igem Glyzerin stabilisierten spontan oder urokinase‐aktivierten Fibrinolysinpräparate zeigten bei der Sterilitätsprüfung, der Prüfung auf Abwesenheit pyrogener Stoffe und der Toxizitätsprüfung am Tier zufriedenstellende Ergebnisse.

Im übrigen werden mehrere physikalische und chemische Eigenschaften von Profibrinolysin und spontan aktiviertem Fibrinolysin mitgeteilt.