CARACTERIZACIÓN DE EXOSOMAS PRODUCIDOS POR CÉLULAS OVIDUCTALES IN VIVO E IN VITRO, EN LA ESPECIE BOVINA
Authors: Toledo Guardiola Santa María , Matás Parra Carmen , Rueda Gomariz Almudena 
Published: June 2023

Recent studies have shown that extracellular vesicles may play an important role in modulating the fertilization capacity of sperm during their journey through the female reproductive tract. Extracellular vesicles (EVs), exosomes and micro vesicles, are a type of heterogeneous structures present in most body fluids, including bovine oviductal fluid. EVs contain various compounds derived from the original cell, such as proteins, lipids, mRNA, miRNA and DNA. EVs in the oviduct are produced by epithelial cells and their functions include interaction with spermatozoa, maintenance of their viability, participation in oocyte maturation and in the fertilization process.
During the in vitro fertilization process and in order to improve it by mimicking in vivo conditions, numerous researchers have used bovine oviductal epithelial cell (BOEC) cultures with remarkable improvements. These cells produce, among others components, VEs, for this reason, in this work we have proposed a comparative study of the EVs present in the bovine oviductal fluid (OF) collected at times close to ovulation (in vivo) and those produced in BOEC cultures after 7 days of culture (in vitro) comparing the size, population distribution and protein concentration in both types. The EVs were identified by electron microscopy, their size by laser light scattering and their protein concentration by Bradford's method.
The results showed that the EVs size evaluated per intensity were similar between both experimental groups. On the other hand, differences were observed in terms of protein concentration. EVs obtained in vivo contained a greater amount of protein in their cargo than the EVs obtained in vitro.Regarding the identification of VEs by transmission electron microscopy, only those obtained in vivo could be observed. This fact could be due to the place where they have been collected, to the method of culture of bovine oviductal epithelial cells or the shortage in their production.

Las vesículas extracelulares (VEs), exosomas y micro vesículas son un tipo de estructuras heterogéneas presentes en la mayoría de los fluidos orgánicos incluyendo el fluido oviductal. Las VEs contienen varios compuestos derivados de la célula original, como proteínas, lípidos, ARNm, miARN y ADN. Las VEs en el oviducto son producidas por las células epiteliales y entre sus funciones se encuentran: interacción con los espermatozoides, mantener la viabilidad de estos, participar en la maduración de los ovocitos y en el proceso de fecundación.
Durante la fecundación in vitro y, con el fin de mejorarla imitando las condiciones in vivo, numerosos investigadores han utilizado cultivos de células del epitelio oviductal bovino (CEOB) con notables mejoras. Estas células producen, entre otros componentes VEs, por ello, en este trabajo hemos planteado un estudio comparativo de VEs presentes en el fluido oviductal (FO) bovino recogido en momentos próximos a la ovulación (in vivo) y de aquellas VEs producidas en cultivos de CEOB a los 7 días de cultivo (in vitro) comparando el tamaño, la distribución de la población y la concentración de proteína en ambos tipos. Las VEs se identificaron mediante microscopía electrónica, su tamaño mediante dispersión de luz láser y la concentración de proteínas mediante el método Bradford.
Los resultados mostraron que el tamaño de las VEs fue similar entre ambos grupos experimentales. Por otro lado, sí que se observaron diferencias en cuanto a la concentración de proteínas. Las VEs obtenidas in vivo contenían mayor cantidad de proteína en su cargo que en las VEs obtenidas in vitro.
En cuanto a identificación de las VEs mediante microscopía electrónica de transmisión, solo pudieron ser observadas aquellas obtenidas in vivo. Este hecho podría deberse al lugar de dónde han sido recogidas, al método de cultivo de células epiteliales oviductales bovinas o la escasez en su producción.