Zellvermittelte Zytotoxizität und Lymphozytenstimulierung bei Saugferkeln mit und ohne kolostrale Immunität gegen Aujeszkyvirus
Authors: Wittmann G. , Ohlinger V. 
Published: August 2010

Fünfundzwanzig Saugferkel, die von mit inaktivierter Aujeszkyvakzine geimpften Sauen stammten, und kolostral übertragene Antikörper gegen Aujeszkyvirus (AV) besaßen, sind auf zelluläre Immunität untersucht worden. Folgende Parameter wurden geprüft: a) spontane zellvermittelte Zytotoxizität (SCC), b) AV‐spezifische zellvermittelte Zytotoxizität (AV‐CC), die anscheinend verstärkte SCC gegen AV‐infizierte Zellen widerspiegelt, c) AV‐spezifische antikörperabhängige zellvermittelte Zytotoxizität bei Verwendung von autologem Serum (AV‐ADCC), d) nicht AV‐spezifische ADCC (N‐ADCC), z. B. durch Antikörper gegen nicht virale Vakzinebestandteile, e) ADCC durch AV‐Schweine‐Hyperimmunserum (HIS‐ADCC), f) AV‐spezifische Lymphozytenstimulierung (AV‐LYST), g) Lymphozytenstimulierung durch nicht virale, in der Vakzine enthaltene Antigene (N‐LYST) und h) LYST mit ConA und LPS. Zellen aus der Plasmafraktion des Blutes (weiße Blutzellen = WBZ) und aus Milz, Leber, einer Mischung von retropharyngealen und inguinalen Lymphknoten (RLK/ILK), Darmlymphknoten (DLK) und aus Thymus wurden als Effektorzellen verwendet. 51Cr‐markierte AV‐infizierte und nicht infizierte Verozellen dienten als Targetzellen. In der gleichen Weise wurden vier Saugferkel ohne kolostrale Antikörper untersucht.

Die einzigen zytotoxischen Reaktionen, die bei Saugferkeln ohne kolostrale AV‐Antikörper nachgewiesen werden konnten, waren SCC und AV‐CC. Die zytotoxische Aktivität beschränkte sich auf WBZ, Leber‐ und Milzzellen.

Von den 25 Ferkeln mit kolostralen Antikörpern zeigten mehr als die Hälfte SCC, besonders mit Leber‐ und Milzzellen. WBZ, RLK/ILK‐ und Thymus‐Zellen waren nur bei wenigen Tieren aktiv. AV‐CC konnte bei einigen Tieren, bevorzugt mit Leberzellen, nachgewiesen werden. AV‐ADCC trat nur bei 68,8% der Ferkel auf, trotz Anwesenheit von neutralisierenden Antikörpern im Serum aller Tiere. WBZ und Leberzellen waren am häufigsten, Milzzellen weniger oft aktiv. Keine Reaktion trat mit RLK/ILK‐, DLK‐ und Thymuszellen auf. Andererseits zeigten 86,7% der Ferkel HIS‐ADCC, besonders mit WBZ, Milz‐ und Leberzellen und in einigen Fällen auch mit RLK‐ILK‐ und Thymuszellen. Da der Antikörperspiegel der Seren anscheinend ohne Einfluß auf die ADCC war, könnte die Diskrepanz zwischen AV‐ADCC und HIS‐ADCC durch quantitative Unterschiede der kolostral übertragenen Antikörper (AV‐ADCC) und der aktiv gebildeten Antikörper (HIS‐ADCC) verursacht sein. Drei der Ferkel zeigten N‐ADCC mit WBZ, was darauf hinweist, daß Antikörper gegen nicht virale Vakzinebestandteile mit dem Kolostrum übertragen worden sind. AV‐LYST war mit Milzzellen von zwei Ferkeln nachweisbar, was nur durch eine AV‐spezifische Sensibilisierung der Lymphozyten über das Kolostrum erklärbar ist. Eine N‐LYST trat nicht auf, dagegen wurden die Lymphozyten durch ConA und LPS gut stimuliert.

Die Ergebnisse der verschiedenen Tests sind diskutiert und Betrachtungen über die kolostrale Übertragung von zellvermittelter Immunität und ihrer möglichen Rolle nach der AV‐Infektion von Ferkeln angestellt worden.

Danksagung

Wir danken Frau H. Fastenrath und Frau I. Leitzke für ihre ausgezeichnete Mitarbeit.

Cell‐mediated cytotoxicity and lymphocyte stimulation with suckling piglets with and without colostral immunity against Aujeszky's disease virus (AV)

Twenty‐five suckling piglets from sows, vaccinated with inactivated AV‐vaccine, having colostrally transferred AV antibodies were investigated for (a) spontaneous cell‐mediated cytotoxicity (SCC), (b) AV specific cell‐mediated cytotoxicity (AV‐CC), which apparently reflects enhanced SCC against AV infected cells, (c) AV specific antibody‐dependent cell‐mediated cytotoxicity using autologous serum (AV‐ADCC), (d) non‐AV specific ADCC (N‐ADCC), e. g. by antibodies against non‐viral vaccine constituents, (e) ADCC by AV pig hyperimmune serum (HIS‐ADCC), (f) AV specific lymphocyte stimulation (AV‐LYST), (g) lymphocyte stimulation by non‐viral antigens contained in the vaccine (N‐LYST), and (h) LYST by ConA und LPS. Cells from the plasma fraction of the blood (white blood cells = WBZ) and cells from spleen, liver, mixed retropharyngeal and inguinal lymph nodes (RLK/ILK), mesenteric lymph nodes (DLK), and from thymus were used as effector cells. 51Cr‐labelled AV infected and non‐infected Vero cells were used as target cells. The same investigation was performed with four suckling piglets without colostral AV‐antibodies.

The only cytotoxic reactions demonstrated with piglets without colostral AV‐antibodies were SCC and AV‐CC. Cytotoxic activity was limited to WBZ, liver cells and spleen cells.

From 25 piglets with colostral antibodies more than 50% showed SCC, especially with liver cells and spleen cells. WBZ, RLK/ILK cells and thymus cells were only reactive with a few animals. AV‐CC was shown by some of the animals, predominantly with liver cells. AV‐ADCC was demonstrated with only 68.8% of the piglets, despite the presence of neutralizing antibodies in the serum of all the piglets. WBZ and liver cells were the most reactive, spleen cells were less reactive. No reaction occurred with RLK/ILK, DLK and thymus cells. On the other hand, HIS‐ADCC was shown by 86.7% of the piglets, especially with WBZ, spleen cells and liver cells, and in some instances also with RLK/ILK cells and thymus cells. Since the antibody level apparently was of no influence on ADCC, the discrepancy between AV‐ADCC and HIS‐ADCC may be caused by qualitative differences of colostral transferred antibodies (AD‐ADCC) and actively produced antibodies (HIS‐ADCC). Three of the piglets showed N‐ADCC with WBZ which might be an indication for the colostral transfer of antibodies against non‐viral vaccine constituents. AV‐LYST occurred with the spleen cells of two piglets, indicating an AV specific sensitization of the lymphocytes, via colostrum. No N‐LYST was observed, but the lymphocytes were well stimulated by ConA and LPS.

The results of the different tests are discussed and considerations are presented on colostral transfer of cell‐mediated immunity and the possible role of it after AV infection of piglets.

Cytotoxicitý à médiation cellulaire et simulation des lymphocytes chez des porcelets sous la mère avec et sans immunité colostrale contre le virus d'Aujeszky

25 porcelets provenant de truies vaccinées avec un vaccin d'Aujeszky inactive qui possédaient des anticorps colostraux transmissibles contre le virus d'Aujeszky (AV), ont été examinés du point de vue de leur immunité cellulaire. Les paramètres suivants ont été examinés: a) Cytotoxicité spontanée à médiation cellulaire (SCC), b) Cytotoxicité à médiation cellulaire spécifique d'AV (AV‐CC) qui reflétait apparemment une SCC renforcée contre des cellules infectées avec AV, c) Cytotoxicité à médiation cellulaire dépendant des anticorps spécifiques d'AV en utilisant un sérum autologue (AV‐ADCC), d) ADCC non spécifique d'EV (N‐ADCC), par exemple avec des anticorps contre des parties non virales de vaccins, e) ADCC par hyperimmunsérum‐AV de porcs (HIS‐ADCC), f) Stimulation lymphocytaire spécifique d'EV (AV‐LYST), g) Stimulation lymphocytaire par des antigènes non‐viraux contenus dans les vaccins (N‐LYST), h) LYST avec ConA et LPS.

On a utilisé comme effectrices des cellules de la fraction du plasma sanguin (globules glancs = WBZ) et à partir de la rate, du foie, d'un mélange de ganglions rétropharyngés et inguinaux (RLK/ILK), de ganglions intestinaux (DLK) et du thymus. Des cellules Vero infectées avec AV marquées au 51Cr et non infectées ont servi de cellules target. Quatre porcelets sans anticorps colostraux ont été examinés de la même manière

Les seules réactions cytotoxiques qui ont pu être observées chez des porcelets sous anticorps‐AV colostraux ont été SCC et AV‐CC. L'activité cytotoxique s'est limitée aux globules glancs et aux cellules du foie et de la rate.

Plus de la moitié des 25 porcelets avec anticorps colostraux ont présenté SCC, en particulier avec des cellules hépatiques et spléniques.

Les cellules WBZ, RLK/ILK et du thymus ne furent actives que chez peu d'animaux. AV‐CC a pu être mise en évidence chez quelques animaux, avant tout avec des cellules hépatiques. AV‐ADCC n'est apparu que chez 68,8% des porcelets malgré la présence d'anticorps neutralisants dans le sérum de tous les animaux. WBZ et les cellules hépatiques furent actives le plus souvent, les cellules spléniques le moins. Aucune réaction n'est apparue avec des cellules RLK/ILK, DLK et du thymus. D'autre part, le 86,7% des porcelets ont présenté HIS‐ADCC, en particulier avec WBZ, cellules hépatiques et spléniques, et dans quelques cas également avec RLK/ILK et cellules du thymus. Etant donné que le taux d'anticorps des sérum n'avait apparemment pas d'influence sur ADCC, la discrépance entre AV‐ADCC et HIS‐ADCC a pu être provoquée par une différence quantitative des anticorps colostraux transmissibles (AV‐ADCC) et les anticorps activement formés (HIS‐ADCC). Trois des porcelets ont présenté N‐ADCC avec WBZ, ce qui prouve que des anticorps contre des composants non‐viraux des vaccins sont transportés avec le colostrum. AV‐LYST fut mis en évidence avec des cellules de la rate chez deux porcelets, ce qui n'est explicable que par une sensibilisation spécifique AV des lymphocytes par l'intermédiaire du colostrum. Une N‐LYST n'est pas intervenue, mais par contre les lymphocytes furent bien stimulés par ConA et LPS.

Les résultats des différents tests sont discutés et des considérations sur la transmission colostrale de l'immunité à médiation cellulaire et de son rôle possible après une infection AV des porcelets sont présentées.

Citotoxicidad de intercesión celular y estimulación de linfocitos en lechones con y sin inmunidad calostral frente al virus Aujeszky

Se examinaron en cuanto a inmunidad celular 25 lechones procedentes de parideras inoculadas con una vacuna Aujeszky inactivada, y que poseían anticuerpos contra el virus Aujeszky (AV) transmitidos por vía calostral. Se contrastaron los parámetros siguientes: a) citotoxicidad espontánea de intercesión celular (SCC), b) citotoxicidad AV específica de intercesión celular (AV‐CC), la cual refleja al parecer la SCC acrecentada frente a células infectadas con AV, c) citotoxicidad dependiente de anticuerpos, específica de AV de intercesión celular al utilizar suero autólogo (AV‐ADCC), d) ADCC no específica de AV (N‐ADCC), por ej. mediante anticuerpos contra componentes no virales de la vacuna, e) ADCC por suero sanguíneo hiperinmune porcino AV (HIS‐ADCC), f) estimulación de linfocitos específica de AV (AV‐LYST), g) estimulación de linfocitos por antígenos no virales, comprendidos en la vacuna (N‐LYST) y h) LYST con ConA y LPS. Células de la fracción plasmática de la sangre (glóbulos sanguíneos blancos = WBZ) y del bazo, hígado, una mezcla de ganglios linfáticos retrofaríngeos e inguinales (RLK/ILK), ganglios linfáticos intestinales (DLK) y del timo fueron utilizadas como células efectoras. Células verdaderas infectadas con AV y no infectadas marcadas con 51Cr sirvieron como células blanco. Del mismo modo fueron examinados cuatro lechones sin anticuerpos calostrales.

Las reacciones citotóxicas únicas que se pudieron poner en evidencia en lechones, sin anticuerpos AV calostrales, eran SCC y AV‐CC. La actividad citotóxica se limitaba a WBZ, células de hígado y bazo.

De los 25 lechones con anticuerpos calostrales mostraban más de la mitad SCC, sobre todo con células hepáticas y esplénicas. WBZ, células RLK/ILK y del timo eran solo activas en muy pocos animales. AV‐CC se pudo poner en evidencia en algunos animales, de modo predilecto con células hepáticas. AV‐ADCC apareció solo en 68,8% de los lechones, a pesar de la presencia de anticuerpos neutralizantes en el suero sanguíneo de todos los animales. WBZ y células hepáticas eran activas con suma frecuencia, siéndolo menos las células esplénicas. No apareció reacción alguna con las células RLK/ILK, DLK y del timo. Por el contrario mostraban 86,7% de los lechones HIS‐ADCC, sobre todo con WBZ, células esplénicas y hepáticas y en algunos casos también con células RLK/ILK y del timo. Puesto que el nivel de anticuerpos de los sueros sanguíneos no ejercía al parecer ningún influjo sobre la ADCC, la discrepancia entre AV‐ADCC e HIS‐ADCC podría estar ocasionada por diferencias cuantitativas de los anticuerpos transmitidos con el calostro (AV‐ADCC) y los anticuerpos formados activamente (HIS‐ADCC). Tres de los lechones mostraban N‐ADCC con WBZ, lo cual señala que con el calostro fueron transmitidos anticuerpos contra componentes no virales de la vacuna. AV‐LYST se podía poner en evidencia con células esplénicas de dos lechones, lo cual se puede explicar nada más mediante una sensibilización de los linfocitos, específica de VA, a través del calostro. No se produjo ninguna N‐LYST, mientras que los linfocitos fueron estimulados muy bien por medio de ConA y LPS.

Se discuten los resultados obtenidos en las pruebas diversas y se reflexiona sobre la transmisión calostral de inmunidad de intercesión celular y el papel que pudiera jugar tras la infección AV de los lechones.