OPTIMASI DAN EVALUASI METODE KRIOPRESERVASI PURWOCENG
Authors: ROOSTIKA IKA , DARWATI IRENG , MEGIA RITA 
Published: June 2020

<p>ABSTRAK<br />Optimasi dan evaluasi metode kriopreservasi perlu dilakukan dalam<br />menentukan protokol standar untuk penyimpanan jangka panjang biakan<br />purwoceng. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh kombinasi<br />perlakuan pratumbuh, prakultur, dan formulasi media pemulih terhadap<br />daya tumbuh dan daya regenerasi tunas in vitro dan kalus embriogenik<br />serta untuk mengevaluasi metode kriopreservasi melalui observasi<br />morfologi, anatomi, dan sitologi. Penelitian dilakukan di Laboratorium<br />Kultur Jaringan Kelompok Peneliti Biologi Sel dan Jaringan BB Litbang<br />Biogen pada tahun 2008-2009. Teknik kriopreservasi yang digunakan<br />adalah vitrifikasi (untuk apeks) dan enkapsulasi-vitrifikasi (untuk kalus<br />embriogenik). Pada teknik vitrifikasi, tunas pucuk diberi perlakuan<br />pratumbuh dengan sukrosa (3, 4, 5, dan 6%) selama 1 dan 2 minggu,<br />perlakuan prakultur dilakukan pada media yang mengandung sukrosa 0,3<br />M selama 1 dan 3 hari, perlakuan dehidrasi dengan PVS2 diberikan selama<br />15 dan 30 menit, dan media pemulih yang diujikan adalah media dasar MS<br />atau DKW dengan dan tanpa penambahan adenin sulfat 20 ppm. Pada<br />teknik enkapsulasi-vitrifikasi, kalus embriogenik dienkapsulasi terlebih<br />dahulu dengan Na-alginat 3%, perlakuan dehidrasi dengan PVS2 diberikan<br />selama 0, 30, dan 60 menit. Evaluasi metode teknik kriopreservasi<br />dilakukan melalui pengamatan morfologi secara visual, anatomi meristem<br />dengan scanning electron microscope (SEM), pengujian viabilitas dengan<br />fluorescein diacetate (FDA), dan analisis ploidi secara flowcytometry.<br />Hasil penelitian menunjukkan bahwa teknik enkapsulasi-vitrifikasi lebih<br />baik daripada teknik vitrifikasi untuk kriopreservasi purwoceng. Walaupun<br />persentase keberhasilan kriopreservasi rendah (10%), kalus embriogenik<br />purwoceng mampu berproliferasi dan beregenerasi menjadi ribuan embrio<br />somatik dewasa. Evaluasi metode kriopreservasi dengan SEM dan FDA<br />dapat diterapkan untuk memperkirakan keberhasilan teknik kriopreservasi<br />secara dini sedangkan analisis flowcytometry dapat diterapkan untuk<br />menguji stabilitas genetik bahan tanaman pasca-kriopreservasi.<br />Kata kunci: Pimpinella pruatjan Molk., kriopreservasi, SEM, FDA,<br />flowcytometry</p><p>ABSTRACT<br />Optimization and evaluation of cryopreservation methods should be<br />conducted to obtain standard protocol for long term conservation of<br />pruatjan. The objective of this study was to evaluate the effect of<br />combined treatments of pregrowth, preculture, and recovery media to the<br />survival and regeneration rate of in vitro shoots and embryogenic calli and<br />to evaluate the cryopreservation methods by observing the morphological,<br />anatomical, and cytological characters. The techniques of vitrification (for<br />apex) and encapsulation-vitrification (for embryogenic calli) were applied<br />in this study. On vitrification technique, the apical shoots were pregrown<br />on media containing of 3, 4, 5, and 6% sucrose for 1 and 2 weeks,<br />precultured on media containing of 0,3 M sucrose for 1 and 3 days,<br />dehydrated by PVS2 solution for 15 and 30 minutes, and planted on<br />recovery media (MS or DKW basal media supplemented with 20 ppm<br />adenine sulphate). On encapsulation-vitrification technique, embryogenic<br />calli were encapsulated by 3% Na-alginate, dehydrated by PVS2 solution<br />for 0, 30, and 60 minutes. The evaluation of cryopreservation methods was<br />done through visual observation, SEM analysis, viability test, and<br />flowcytometry determination. The result showed that encapsulation-<br />vitrification was better than vitrification technique for cryopreservation of<br />pruatjan. The successful rate of this method was low (10%) but the<br />embryogenic calli could proliferate and regenerate into thousands mature<br />somatic embryos. The evaluation by SEM and FDA can be applied as<br />early detection to estimate the successful of cryopreservation, whereas<br />flowcytometry  analysis  may  determine  the  genetic  stability  of<br />cryopreserved materials.<br />Key words: Pimpinella pruatjan Molk., cryopreservation, SEM, FDA,<br />flowcytometry</p>