Physico‐chemical Characterization of Proteins Obtained by Elution from Blood Cells Incubated with Autoantibody containing Sera
Authors: Auerswald W. , Doleschel W. , Rosak M. , Steffen C. 
Published: March 2009

Sera from patients with idiopathic granulocytopenia and thrombopenic purpura, which were serologically positive in the anti‐globulin‐consumption test, and normal sera as controls were incubated with leucocytes and thrombocytes, respectively. The serum proteins remaining fixed onto these cells after several washings were removed by elution at an elevated temperature. The proteins contained in the eluates were studied serologically with the anti‐globulin‐consumption test, in vivo in rabbits, electrophoretically and by sedimentation analysis.

The anti‐globulin‐consumption tests of the eluates containing the patient's autoantibodies were positive and the injection of these eluates into rabbits caused a cytopenic effect corresponding with the cytopenia observed in the respective patients.

All eluates containing autoantibodies showed a 7 S fraction in the sedimentation diagram and in the electrophoretic evaluation a gamma globulin fraction. These eluates contained 4.6 S and sometimes 18 S fractions in the same way as the control eluates.

These results indicate that it is possible to isolate by the elution method autoantibodies against leucocytes and platelets. The protein fraction with the mobility of gamma globulin and the sedimentation constant 7 S which was found in the autoantibody‐containing eluates seems to be identical with the antibody. The observation of other protein fractions in both these eluates and in the controls allows the conclusion that during incubation of autoantibody containing sera with their appropriate cells specific binding and non‐specific adsorption of proteins is involved.

Sera von Patienten mit idiopathischer Granulozytopenie und thrombopenischer Purpura, die im Anti‐Globulin‐Consumptionstest positiv reagierten, und normale Kontrollsera wurden mit Leukozyten bzw. Thrombozyten inkubiert. Die nach mehreren Waschungen an den Zellen gebunden bleibenden Protéine wurden bei erhöhter Temperatur eluiert. Die in die Eluate überführten Eiweißkörper wurden mit serologischen Methoden (Anti‐Globulin‐Consumption), in vivo bei Kaninchen, elektrophoretisch und mittels Ultrazentrifuge untersucht.

Der Anti‐Globulin‐Consumptionstest war bei den antikörperhaltigen Eluaten positiv, und diese verursachten bei den Kaninchen einen zytopenischen Effekt, der mit der bei den jeweiligen Patienten beobachteten Zytopenie übereinstimmte.

Alle autoantikörperhaltigen Eluate zeigten im Sedimentationsdiagramm eine 7‐S‐Fraktion und in der Elektrophorese eine Gamma‐Globulin‐Fraktion. In gleicher Weise wie die Kontroll‐Eluate wiesen sie ferner regelmäßig eine 4.6‐S‐ und manchmal eine 18‐S‐Fraktion auf.

Diese Ergebnisse deuten darauf hin, daß man mit der Elutionsmethode Autoantikörper gegen Leukozyten und Thrombozyten isolieren kann. Die Proteinfraktion mit der Mobilität eines Gamma‐Globulins und der Sedimentationskonstante 7 S, die regelmäßig in den autoantikörperhaltigen Eluaten gefunden wurde, scheint mit dem Antikörper identisch zu sein. Die Beobachtung, daß andere Proteinfraktionen sowohl in diesen Eluaten wie in den Kontrolleluaten vorkommen, läßt den Schluß zu, daß während der Inkubation autoantikörperhaltiger Sera mit den ihnen entsprechenden Zellen, sowohl eine spezifische Bindung wie eine unspezifische Adsorption an die Zelloberfläche auftreten.

Des sérums de patients atteints de granulocytopénies idiopathiques et de purpura thrombocytopéniques qui présentaient une réaction positive au test de consommation de l'anti‐globuline, et, des sérums témoins normaux ont été incubés avec des leucocytes et des thrombocytes, respectivement.

Après plusieurs lavages successifs, les protéines résiduelles fixées à ces cellules ont été éluées par chauifage à température élevée. Les protéines contenues dans l'éluat ont été étudiées sérologiquement au moyen du test de consommation de l'antiglobuline, in vivo par injection chez le lapin, par l'électrophorèse et par sédimentation à l'ultracentrifuge.

Les tests de consommation de l'anti‐globuline pratiqués avec les éluats provenant de sérums de patients contenant des auto‐anticorps étaient positifs; l'injection de ces mêmes éluats au lapin provoquait une cytopénie correspondante à la cytopénie observée chez le patient.

Tous les éluats contenant des auto‐anticorps présentaient la fraction 7 S dans le diagramme de sédimentation et, à l'électrophorèse, une fraction gamma‐globulinique. Ces éluats contenaient en outre des fractions 4.6 S et parfois 18 S au même titre que les éluats provenant de sérums témoins.

Ces résultats démontrent qu'il est possible d'isoler, grâce au procédé de l'élution, des auto‐anticorps antileucocytaires et antithrombocytaires. La fraction protéinique trouvée dans les éluats provenant de sérums contenant des auto‐anticorps présente la mobilité électro‐phorétique des gamma‐globulines et la constante de sédimentation 7 S et semble donc être identique à un anticorps. La mise en évidence d'autres fractions protéiniques dans ces éluats et dans les éluats témoins nous autorise à conclure que, durant l'incubation des sérums contenant des auto‐anticorps avec les cellules correspondantes, il se produit une fixation de protéines spécifiques et de protéines non spécifiques.