ОЦЕНКА КОМПЕТЕНТНОСТИ К РАЗВИТИЮ IN VITRO ООЦИТОВ КОРОВ ИЗ ФОЛЛИКУЛОВ РАЗНОГО ДИАМЕТРА
Authors: Т.И. Кузьмина , Д.Н. Татарская , И.В. Чистякова , Ю. С. Щербаков 
Published: December 2024

Технология экстракорпорального созревания (ЭКС) ооцитов используется в инновационных клеточных репродуктивных технологиях как источник получения нативных и реконструированных эмбрионов (клонированных, трансгенных), в качестве тест-системы биологически активных веществ, идентификации роли гормонов в механизмах оогенеза. В настоящем исследовании с использованием модели ЭКС ооцитов идентифицированы эффекты рекомбинантного бычьего соматотропина (rBST) на компетентность к развитию ооцитов коров из фолликулов разного диаметра (<3 мм, 3-5 мм, >5-8 мм). В экспериментах использовали ооцит-кумулюсные комплексы (ОКК) антральных фолликулов постмортальных яичников коров и нетелей Ленинградского типа голштинизированного скота. ОКК культивировали 24 часа в ТС-199 с 10% фетальной бычьей сыворотки, 1х106 клеток гранулезы на мл среды при температуре 38,5oС, в атмосфере 5% СО2. Опытные группы дополняли 10 нг/мл rBST. После созревания ооциты оплодотворяли заморожено-оттаянной бычьей спермой (Alm et al., 2005). Эмбрионы культивировали 7 дней в синтетической жидкостия яйцевода (SOF). Выявлены особенности воздействия rBST на мейотическое созревание ооцитов и оплодотворяемость в зависимости от источника их получения (диаметр фолликула). Эффект rBST выражался в значительном росте доли созревших ооцитов из фолликулов диаметром менее 3 мм (60% против 38% в контроле, Р<0,05). Показано положительное влияние rBST на проспективные потенции ооцитов, независимо от диаметра фолликулов, из которых они были выделены, к развитию до стадии бластоцисты. Максимальный выход эмбрионов на стадии бластоцисты (39%-40%) отмечен при использовании донорских ооцитов из фолликулов диаметром от 3 мм до 8 мм. Представленные данные позволяют рекомендовать введение 10 нг/мл rBST в состав культуральных сред для ЭКС ооцитов коров с целью формирования яйцеклеток с высокими потенциями к дальнейшему развитию и получению из них нативных и реконструированных эмбрионов.

The extracorporeal maturation technology (ECM) of oocytes is used in the innovative cellular reproductive technologies as a source of obtaining native and reconstructed embryos (cloned, transgenic), as a test-system of biologically active substances, and identifying the role of hormones in the mechanisms of oogenesis. In this study, using the ECM model of bovine oocyte, the effects of recombinant bovine somatotropin (rBST) on developmental competence of oocytes from follicles of different diameters were identified. In the experiments, cumulus- oocyte- complexes (COCs) from antral follicles of post-mortal ovaries of cows and heifers of Holsteinized cattle (Leningrad type) were used. COCs were cultured for 24 hours in TC-199 with 10% fetal bovine serum, 1×106granulosa cells per ml of medium at the temperature of 38.5oC and the atmosphere of 5% CO2. 10 ng / ml rBST was added to the experimental groups. After maturation, oocytes were fertilized with frozen-thawed bovine sperm (Alm et al., 2005). Embryos were cultured for 7 days in SOF medium. Impact features of rBST on the meiotic maturation of oocytes and their in vitro fertilization, depending on the source of their obtaining (follicle diameter), were revealed. The effect of rBST was expressed in a significant increase in the proportion of mature oocytes, which were obtained from follicles with a diameter of less than 3 mm (60% versus 38% in the control, P <0.01). The positive effect of rBST on the prospective potentials of oocytes to develop to the blastocyst stage, regardless of the diameter of the follicles from which they were isolated was shown. The maximum yield of blastocysts (39% -40%) was observed when oocytes from antral follicles with a diameter of 3 mm to 8 mm were used. The obtained data allow us to recommend the addition of 10 ng/ ml rBST into the culture media for ECM of bovine oocytes with the aim of forming eggs with high potencies for further development and obtaining native and reconstructed embryos from them.