Fluoreszenzserologischer Nachweis des Hühner‐Bronchitisvirus in Zellkulturen und Küken
Authors: von Bülow Vicco , Schneider Lothar G. 
Published: August 2010

Fluoreszenzserologisch darstellbares IBV‐Antigen wurde in Zellkulturen von Hühnerembryonieren in allen Infektionsstadien ausschließlich im Zytoplasma beobachtet. Es war dort ab 4 Stunden p. i. festzustellen. Der Höhepunkt des ersten Vermehrungszyklus wurde je nach Virusvirulenz 6 bis 8 Stunden p. i. erreicht.

Die drei IBV‐Serotypen Massachusetts, Connecticut und Cuxhaven (IBV‐10) ließen sich nach Färbung der Zellkulturen mit markierten homologen und heterologen Antikörpern durch die Intensität der Fluoreszenz voneinander unterscheiden.

Feldstämme konnten in der Zellkultur nur dann fluoreszenzserologisch nachgewiesen werden, wenn sie vorher ausreichend an das embryonierte Hühnerei adaptiert waren.

Bei experimentell infizierten, bronchitiskranken Küken wurde Virusantigen zu verschiedenen Zeiten p. i. in allen Abschnitten der Atmungsorgane beobachtet. Für Routineuntersuchungen mit der FA‐Technik sind Ausstriche von abgeschabtem Tracheaepithel besonders zu empfehlen.

Aufgrund der vorliegenden Befunde bietet sich der direkte FA‐Test für die Laboratoriumsdiagnose von IB‐Infektionen als eine sehr zuverlässige, spezifische und zugleich einfache Untersuchungsmethode an. Der FA‐Test ist den anderen bekannten Verfahren auch deshalb weit überlegen, weil dabei das IBV‐Antigen im infizierten Tier unmittelbar nachgewiesen wird und die Diagnose außerordentlich schnell gestellt werden kann.

Wir danken den technischen Assistentinnen Fräulein Marita Schultes und Fräulein Irma Hamann für ihre gute Mitarbeit.

Demonstration of infectious bronchitis virus in cell cultures of chicks by serological fluorescence

I. B. V. antigen was observed with the use of fluorescent antibody in cell cultures of chick embryos at all stages of infection but only within the cytoplasm, where it was detected as early as four hours after infection. The peak of the first cycle of viral multiplication occurred 6 to 8 hours after infection, the exact time depending on the degree of virulence.

The three I. B. V. serotypes Massachusetts, Connecticut and Cuxhaven (IBV‐10) could be differentiated from one another by the intensity of the fluorescence using labelled homologous and heterologous antibodies.

Field strains could only be demonstrated by their fluorescence in cell cultures if they had first been sufficiently adapted to the chick embryo.

In chicks experimentally infected with infectious bronchitis, viral antigen was observed at varying periods after infection in all parts of the respiratory organs. For routine examination by the fluorescent antibody technique, films of tracheal scrapings are particularly recommended.

These findings indicate that the direct fluorescent antibody test for the laboratory diagnosis of infectious bronchitis is a very certain, specific and simple method. The test is superior to others since the I. B. antigen can be directly identified in the infected bird and diagnosis can be made extremely rapidly.

Mise en évidence par immunofluorescence du virus de la bronchite aviaire sur cultures de tissus et sur poussins

Par immunofluorescence, on ne peut mettre en évidence le virus de la bronchite infectieuse que dans le cytoplasme de cultures de tissus d'embryons de poulets, à n'importe quel stade de l'infection. On détecte l'antigène 4 heures après l'infection. L'apogée du premier cycle de reproduction est atteinte 6 à 8 heures après l'infection, suivant la virulence.

On peut différencier les trois sérotypes du virus de la bronchite infectieuse, Massachusett, Connecticut et Cuxhaven (VBI‐10), par l'intensité de la fluorescence, après coloration des cultures de tissus à l'aide d'anticorps marqués homologues et hétérologues.

On ne parvient à mettre en évidence des souches sauvages à l'immunofluorescence sur cultures de tissus, qu'après les avoir suffisamment adaptées à l'embryon de poulet. Après infection expérimentale de poussins, on retrouve l'antigène viral, à différents intervalles après l'infection, dans toutes les parties des voies respiratoires de l'oiseau malade. Pour les examens de routine, les frottis obtenus par râclage de l'épithélium de la trachée, selon la technique AF, se révèlent particulièrement indiqués. — Sur la base de ces résultats, le test direct AF apparaît comme une méthode très sûre, spécifique et simple à la fois, pour la mise en évidence des infections de bronchite infectieuse dans le diagnostic de laboratoire. De plus, le test AF est bien supérieur aux autres méthodes connues, car il permet de mettre en évidence l'antigène VBI directement dans l'animal infecté et de poser un diagnostic extrêment rapide.

Identificación fluorescenteserológica del virus de la bronquitis infecciosa aviar en cultivos celulares y pollitos

El antígeno del virus de la bronquitis infecciosa aviar (BI), representable con la técnica fluorescenteserológica, se observó en los cultivos celulares de embriones de pollo, en todos sus estadios infecciosos, exclusivamente en el citoplasma. Se podía comprobar allí a partir de las 4 horas tras la infección. El acmé del primer ciclo de multiplicación se alcanzó según la virulencia vírica a las 6 u 8 horas p. i.

Los tres serotipos del virus de la BI Massachusetts, Connecticut y Cuxhaven (VBI‐10) se pudieron distinguir entre sí tras coloración de los cultivos celulares con anticuerpos marcados homólogos y heterólogos mediante la intensidad de la fluorescencia.

Las estirpes campales solo se podían evidenciar en el cultivo celular por el procedimiento fluorescenteserológico cuando con prioridad habían sido adaptadas suficientemente al embrión de pollo. — En los pollos infectados de forma experimental, enfermos de bronquitis, se observó antígeno vírico en tiempos diferentes p. i. en todos los tramos de los órganos respiratorios. Para los exámenes de rutina con la técnica de los antígenos fluorescentes (AF), se recomiendan sobre todo los frotes de epitelio traqueal raspado. — En vista de los hallazgos presentes, la prueba directa de los AF se ofrece para el diagnóstico de laboratorio de las infecciones de BI como una técnica de reconocimiento muy segura, específica y simple a la par. La prueba de los AF también es muy superior a las otras técnicas conocidas, porque con ello se puede identificar inmediatamente el antígeno vírico de la BI en el animal infectado, estableciéndose el diagnóstico con velocidad extraordinaria.