Μέτρηση απόλυτου αριθμού βιωσιμότητας στον χρόνο και πιθανών παραγόντων ανάπτυξης σε cd34+ βλαστικά κύτταρα ομφαλοπλακουντιακού αίματος σε κυτταρομετρία ροής
Authors: Καλοδήμου Βασιλική 
Published: September 2021

Η απομόνωση των βλαστικών κυττάρων προσφέρει την υπόσχεση για μια αξιόλογη σειρά νέων θεραπευτικών μεθόδων. Βιολογικές θεραπείες που προέρχονται από τέτοια κύτταρα, (μέσω αναγέννησης και επιδιόρθωσης ιστών, καθώς και μέσω της στοχευόμενης παράδοσης του γενετικού υλικού), αναμένεται να είναι αποτελεσματική στη θεραπεία ενός ευρέος φάσματος ιατρικών νοσημάτων.Ασθένειες όπως ο καρκίνος (1ο μεταμόσχευση από αυτόλογα βλαστικά κύτταρα του αίματος έχει αναφερθεί από μια αμερικανική ομάδα, σε ένα 3χρονο κορίτσι και μετά από 3 χρόνια παρακολούθηση βρέθηκε να είναι υγιής και χωρίς καμία ένδειξη της νόσου, Paediatrics: volume 119, number 1, January 2007), και γενετικές ανωμαλίες είναι αποτέλεσμα της μη φυσιολογικής κυτταρικής διαίρεσης και διαφοροποίησης. Η κατανόηση των μηχανισμών αυτών θα μας οδηγήσουν στην ανάπτυξη νέων θεραπειών. Εν κατακλείδι, η κρυοσυντήρηση και η επεξεργασία ΟΠΑ, μέσα από την μέτρηση των απόλυτων αριθμών CD34+ κυττάρων και της βιωσιμότητας, βρέθηκε να παραμείνει το ίδιο κατά τη διάρκεια των διαφορετικών χρονικών περιόδων. Η μέτρηση της βιωσιμότητας και των απόλυτων αριθμών των CD34+ κυττάρων μας δίνουν την δυνατότητα για αξιολόγηση και έλεγχο κατά την επεξεργασία των βλαστικών κυττάρων ομφαλίου λώρου.Η προσπάθεια πολλαπλασιασμό των μονάδων ΟΠΑ και κυττάρων από τον ομφάλιο λώρο ανοίγουν νέους τομείς έρευνας και χρήσεις τους στον τομέα τις αναγεννητικής ιατρικής.Τα βλαστικά κύτταρα είναι μια μεγάλη υπόσχεση για την χρήση τους στην αναγεννητική ιατρική και την κυτταρική θεραπεία στο μέλλον.Με βάση τα σημερινά δεδομένα οι πιθανότητες να χρησιμοποιηθούν τα βλαστικά κύτταρά του καθ’ όλη τη διάρκεια της ζωής του άνθρωπου είναι 1/200, (www.eae.gr), και σύμφωνα με μελέτη στις ΗΠΑ ένας στους τρείς χρόνια πάσχοντες ασθενείς άνω των 65 ετών (128 εκατ.) θα έχει ανάγκη κυτταρικής θεραπείας στα επόμενα χρόνια. (Nietfeld, Lifetime probabilities of hematopoietic stem cell transplantation in the U.S. Biol. Blood Marrow Transplant. 2008, 14:316-322)Το ομφαλοπλακουντιακό αίμα και ο μυελός των οστών έχουν προταθεί ως μέσο θεραπείας κυρίως για ασθένειες του αίματος, κακοηθών και μη, όγκων της παιδικής ηλικίας, ασθενειών του ανοσοποιητικού, όπως σκλήρυνση κατά πλάκας και νεανική ρευματοειδή αρθρίτιδα. Επίσης, το ομφαλοπλακουντιακό αίμα των ίδιων των παιδιών χρησιμοποιείται σήμερα σε κλινικές μελέτες για τη θεραπεία της εγκεφαλικής παράλυσης και του νεανικού σακχαρώδη διαβήτη,(Duke University Hospital, Dr. Joanne Kurtzberg). Τα αποτελέσματα των μελετών αυτών είναι ενθαρρυντικά, αλλά ακόμη πρώιμα, και αναμένεται να βοηθήσουν παιδιά τα οποία έχουν κρυοσυντήρηση τα βλαστικά κύτταρά τους κατά τη γέννηση. Στόχος είναι η συλλογή ομφαλοπλακουντιακού αίματος, διατηρώντας ταυτόχρονα επαρκή προγονικά κύτταρα για να καταστεί δυνατή η μεταμόσχευση καθώς και να μειωθεί ο κίνδυνος μικροβιακής μόλυνσης κατά τη διάρκεια της επεξεργασίας. Η τεχνική απομόνωσης τους παραμένει ο πιο σημαντικός παράγοντας της συλλογής ομφαλοπλακουντιακού αίματος. Η τεχνική αυτή εξαρτάται από μια πλειάδα διαφόρων παραγόντων. Η τεχνική της συλλογής ομφαλοπλακουντιακού αίματος ποικίλλει ανάλογα με την εκπαίδευση και την σωστή συλλογή από το εκπαιδευμένο προσωπικό μεταξύ των διαφόρων τραπεζών φύλαξης και επεξεργασίας.Η επικρατούσα τεχνική συλλογής ήταν in utero συλλογή, όταν δηλαδή έχει αρχίσει η σύσπαση της και η ομφάλια φλέβα δίνει αρκετό αίμα. Συμπερασματικά, η αποδεκτή τιμή αρχέγονων αιμοποιητικών κυττάρων για μια μεταμόσχευση είναι 1.00x106 κύτταρα ανά χιλιόγραμμο σωματικού βάρους (ΕΟΜ). Επίσης, η μέση τιμή βιωσιμότητας είναι στα 90% (n = 4.000), εξαρτάται από τις καλές τεχνικές που ακολουθήθηκαν κατά την κρυοσυντήρηση και αποθήκευση των δειγμάτων. Η βιωσιμότητα των κυττάρων ΟΠΑ ελέγχτηκε και με trypan blue (n = 4000) , και είναι 92% κατά μέσο όρο. Τα αποτελέσματα μας μπορούν να χρησιμεύσουν ως δείκτες ελέγχου και ποιότητας για τη μέθοδο μας.Η παρουσία ερυθροβλαστών (erythroblast) σε μεγάλους όγκους ΟΠΑ επηρεάζει τις μετρήσεις των WBC κυττάρων σε έναν αιματολογικό αναλυτή, αλλά αυτή μας η υπόθεση δεν παρατηρήθηκε στην μελέτη αυτή. Παρατηρήθηκε επίσης, ότι οι χαμηλές μετρήσεις σε WBC κύτταρα θα δώσουν χαμηλό αριθμό CD34+ κυττάρων στο δείγμα. Επίσης παρατηρήσαμε ότι σε μικρά δείγματα όγκων υπάρχει ισχυρή συσχέτιση μεταξύ της βιωσιμότητας των WBC κυττάρων και απόλυτου αριθμού των CD34+ κυττάρων. Η στατιστική ανάλυση επιβεβαίωσε τα αποτελέσματα της μελέτης.Έγινε επίσης μικροβιακή και ιογενείς ανάλυση των μονάδων που συλλέχθηκαν.Το ομφαλοπλακουντιακό αίμα είναι μια καθιερωμένη πηγή για τις διαδικασίες μεταμόσχευσης βλαστικών κυττάρων. Σε αντίθεση με το μυελό, τα CD34+ κύτταρα από αίμα ομφάλιου λώρου έχουν υψηλότερο πολλαπλασιαστικό δυναμικό, καθώς και μια υψηλότερη συχνότητα της μακροπρόθεσμης ανακατάληψης σε SCID κύτταρα βάση βιβλιογραφίας.