Kontinuierliche Vermehrung von Coxiella burnetii durch persistierende Infektion in Buffalo‐Green‐Monkey‐(BGM)‐Zellkulturen
Authors: Arens M. 
Published: August 2010

Es wurde der Stamm München (5. Dottersackpassage) von Coxiella burnetii (C. b.) in BGM‐Zellkulturen angezüchtet. Mit den gewonnenen Erregern wurden BGM‐Monolayer in Kunststoff‐Zellkulturflaschen (75 cm2/Flasche) infiziert und 145 Tage ohne Passagierung der Zellen gehalten. Während dieses Zeitraumes wurden von 75 cm2 BGM‐Monolayern durchschnittlich 14 times 1010 Coxiellenpartikeln mit etwa 76 000 komplementbindenden Einheiten produziert.

Größere Antigenmengen konnten aus infizierten BGM‐Zellrasen in Roux‐Flaschen gewonnen werden. Aus sieben Flaschen (etwa 220 cm2 Zellrasen/Flasche) konnte in 38 Tagen ein Antigen erzeugt werden, das ohne weitere Reinigungsschritte sowohl in der KBR, als auch im ELISA für serologisch‐diagnostische Belange einsetzbar war. Seine antigene Aktivität — gemessen in komplementbindenden Einheiten — entsprach der eines Frigen‐gereinigten Dottersack‐Antigens von umgerechnet 1500 infizierten Hühnereiern.

Continuous multiplication of Coxiella burnetii through persisting infection in buffalo‐green‐monkey (BGM) cell cultures

The Munich (5th egg passage) strain of Coxiella burnetii was grown in BGM cell cultures. BGM monolayers in synthetic material cell culture flasks (75 cm2 flask) were infected with the strain and were held for 145 days without passaging the cells. During this period 75 cm2 of BGM monolayer produced an average of 14 times 1010 Coxiella particles with about 76,000 complement‐fixing units.

Larger amounts of antigen could be produced from BGM cell limes in Roux flasks. From 7 flasks (about 220 cm2 of cell mat per flask) it was possible to produce an antigen in 38 days which, without further stages of purification, could be used both in the KBR and in the ELISA tests for serological‐diagnostic purposes. Its antigenic activity — measured in complement‐fixing units — was equivalent to Frigen‐purified antigen from around 1,500 infected hen eggs.

Multiplication continue de Coxiella burnetii par infection persistante dans des cultures cellulaires de Buffalo‐Green‐Monkey (BGM)

La souche «München» (5e passage dans le sac vitellin) de Coxiella burnetii (C. b.) a été élevée en cultures cellulaires BGM. Des BGM‐monolayers dans des flacons en matière synthétique de culture cellulaire (75 cm2/flacon) ont été infectés avec les agents obtenus et maintenus 145 jours sans passage de cellules. Durant ce laps de temps et à partir de 75 cm2 BGM‐monolayers, on a produit en moyenne 14 times 1010 particules de Coxiella avec environ 76 000 unités fixant le complément.

De plus grandes quantités d'antigène ont été obtenues à partir de surfaces cellulaires BGM dans des bouteilles de Roux. Avec sept bouteilles (env. 220 cm2 surface cellulaire/bouteille), on a produit un antigène en 38 jours qui a pu être utilisé sans autre procédé de purification aussi bien dans la réaction de fixation du complément que dans l'ELISA pour le diagnostic sérologique. L'activité antigénique, mesurée en unité fixant le complément, a correspondu à un antigène Frigen de type sac vitellin purifié d'environ 1500 oeufs de poule infectés.

Multiplicación continuada de Coxiella burnetii mediante la infección persistente en cultivos celulares del mono de Buffalo‐Green (BGM)

Se cultivó la estirpe Munich (5° pase por saco vitelino) de Coxiella burnetti (C. b.) en cultivos celulares de BGM. Con los agentes etiológicos obtenidos, se infectaron monoestratos BGM en frascos de plástico para cultivos celulares (75 cm2./frasco), teniéndose 145 días sin efectuar pase de células. Durante este espacio de tiempo fueron producidas por cada 75 cm2. de monocapas BGM una media de 14 times 1010 partículas de coxiellas con unas 76.000 unidades fijadoras del complemento.

Cantidades mayores de antígeno pudieron ser obtenidas de céspedes celulares BGM infectados en frascos de Roux. De siete frascos (unos 220 cm2. césped celular/frasco) se pudo producir en 38 días un antígeno, el cual se logró utilizar en la RFC y en el ELISA para esferas de interés diagnóstico‐serológicas, sin que se precisasen fases nuevas de purificatión. Su actividad antigénica — medida en unidades fijadoras de complemento — equivalía a la de un antígeno de saco vitelino purificado con Frigen de una conversión de 1.500 huevos de gallina infectados.