Η ανεύρεση συσχέτισης, κλινικών χαρακτηριστικών, ασθενών με ορθοκολικό αδενοκαρκίνωμα και πρωτεϊνικής –γονιδιακής έκφρασης των αδενοκαρκινωμάτων του παχέος εντέρου, όπως εξειδικεύτηκε στην m-RNA έκφραση της καλλικρεΐνης 4 (KLK-4)
Authors: Χαντζής Δημήτριος 
Published: August 2021

Ο καρκίνος του παχέος εντέρου και ορθού αποτελεί μείζον ιατροκοινωνικό πρόβλημα λόγω της συνεχούς αυξανόμενης συχνότητας και της υψηλής θνησιμότητας.Ο καρκίνος του παχέος εντέρου είναι ο 4ος σε συχνότητα καρκίνος μετά τον καρκίνο του μαστού, των πνευμόνων και του προστάτη και η 2η πιο συχνή αιτία θανάτου μετά από τον καρκίνο του πνεύμονα.Ο καρκίνος του παχέος εντέρου είναι κατά 95% αδενοκαρκίνωμα, που εξορμάται από κυλινδρικό μονόστιβο επιθήλιο και εμφανίζει ποικίλου βαθμού διαφοροποίηση.Μια ποικιλία παραγόντων κινδύνου έχουν συνδεθεί με τον καρκίνο του παχέος εντέρου, συμπεριλαμβανομένων των γενετικών παραγόντων, ηλικία, φύλο, έκθεση σε περιβαλλοντικούς παράγοντες, τις καθημερινές συνήθειες ζωής (διατροφή, κάπνισμα, παχυσαρκία και η έλλειψη σωματικής άσκησης),καθώς και άλλες παθήσεις του παχέος εντέρου που αποτελούν προ-καρκινικές καταστάσεις όπως η ιδιοπαθής φλεγμονώδης νόσος του εντέρου-Ελκώδη κολίτιδα&Crohn, αδενωματώδεις πολύποδες, οικογενής πολυποδίαση, σύνδρομο κληρονομικού μη πολυποδιασικού καρκίνου του παχέος εντέρου Lynch I&II. Στη διάρκεια των τελευταίων ετών, το ποσοστό θανάτων που προκαλούνται από τον καρκίνο του παχέος εντέρου έχει μειωθεί, κυρίως λόγω της αυξημένου προληπτικού ελέγχου που βασίζεται στους βιοδείκτες του ορού, όπως το καρκινοεμβρυϊκό αντιγόνο, τον ενδοσκοπικό έλεγχο και τη βελτίωση της θεραπείας της νόσου . Υπάρχει μια αυξανόμενη ζήτηση για βιοδείκτες του καρκίνου του παχέος εντέρου για την αξιολόγηση του κινδύνου, την έγκαιρη διάγνωση, και την πρόγνωση. Οι ιστικοί βιοδείκτες έχουν προταθεί ως πιθανοί δείκτες πρόγνωσης και αξιολόγησης της ανταπόκρισης στη θεραπεία.Οι πρωτεάσες μπορεί να αποτελέσουν μια ομάδα προγνωστικών βιοδεικτών, δεδομένου ότι εμπλέκονται στην ανάπτυξη του καρκίνου.Οι ανθρώπινες ιστικές Καλλικρεΐνες είναι μια ομάδα 15 πρωτεασών σερίνης, οι οποίες έχουν ανιχνευτεί σε διαφοροποιημένους ιστούς και εντοπίζονται στο χρωμόσωμα 19q13.4.Η Καλλικρεΐνη 4(KLK4) είναι μια πρωτεάση σερίνης με δράση τύπου θρυψίνης(trypsin-like),που ανήκει στην οικογένεια των πεπτιδασών συγγενών της καλλικρεΐνης(kallikrein-related peptidases-KLKs),τα μέλη της οποίας εκφράζονται σε αδενοκαρκινώματα που προέρχονται από ιστούς των οποίων η ρύθμιση πραγματοποιείται από στεροειδείς ορμόνες καθώς και σε αρκετές άλλες κακοήθειες, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του παχέος εντέρου. Μια πρόσφατη μελέτη αποκάλυψε ότι η KLK4 αντιπροσωπεύει ένα νέο ενδογενή ενεργοποιητή των υποδοχέων που ενεργοποιούνται από πρωτεάσες-1 (PAR1) στα HT-29 κύτταρα του αδενοκαρκινώματος του παχέος εντέρου, επάγοντας την σηματοδότηση των υποδοχέων που ενεργοποιούνται από πρωτεάσες-1 (PAR1) και μετέπειτα την ERK1 / 2 ενεργοποίηση. Ο σκοπός της παρούσας μελέτης ήταν να αναλύσει την έκφραση του mRNA της KLK4 σε δείγματα αδενοκαρκινώματος του παχέος εντέρου και να εξετάσει την προγνωστική της αξία και την πιθανή κλινικής της εφαρμογή, ως νέος μοριακός ιστικός βιοδείκτης για το αδενοκαρκίνωμα του παχέος εντέρου. Για το σκοπό αυτό, απομονώθηκε το ολικό RNA από πρωτοπαθείς όγκους από 81 ασθενείς με αδενοκαρκίνωμα του παχέος εντέρου, και παρασκευή cDNA από αντίστροφη μεταγραφή. Μια εξαιρετικά ευαίσθητη σε πραγματικό χρόνο PCR μεθοδολογία αναπτύχθηκε, για την ποσοτικοποίηση του mRNA της KLK4 και ακολούθως πραγματοποίηση της ανάλυσης της έκφρασης του mRNA της KLK4, χρησιμοποιώντας τοB2M ως γονίδιο αναφοράς και την εφαρμογή των συγκριτικών μεθόδων CT (2-ΔΔCT).Στην παρούσα μελέτη έχουμε αποδείξει, για πρώτη φορά, ότι τα επίπεδα της έκφρασης του mRNA της KLK4 συνδέονται σημαντικά με το κλινικό στάδιο της νόσου, καθώς και με το βαθμό διαφοροποίησης του όγκου, το μέγεθος, και την κατάσταση των λεμφαδένων. Οι καμπύλες επιβίωσης Kaplan-Meier έδειξαν ότι ασθενείς με αδενοκαρκίνωμα του παχέος εντέρου και θετική έκφραση του mRNA της KLK4 έχουν μικρότερη ελευθέρας νόσου επιβίωση (DFS). Η Cox παλίνδρομη ανάλυση στο σύνολο των ατόμων των ασθενών δηλώνει ότι η υπερέκφραση της KLK4 αποτελεί δυσμενή προγνωστικό ιστικό βιοδείκτη που προβλέπει αποτελεσματικά ελαττωμένη την ελεύθερης νόσου επιβίωση(DFS), ανεξάρτητα από την κατάσταση των λεμφαδένων των ασθενών και το μέγεθος του όγκου. Τα ευρήματά μας υποδηλώνουν ότι η έκφραση του mRNA της KLK4 μπορεί να θεωρηθεί ως ένας νέος πιθανός ιστικός βιοδείκτης πρόβλεψης της βραχυπρόθεσμης υποτροπής του αδενοκαρκινώματος του παχεος εντέρου.