Nachweisspezifität eines für Pseudomonas aeruginosa und Pseudomonas mallei optimierten Festphasen‐Enzym‐Immunoverfahrens
Authors: Niederwöhrmeier Bärbel , Böhm R. 
Published: May 2010

A solid‐phase enzyme‐immunoassay for the rapid detection of Pseudomonas aeruginosa and Pseudomonas mallei

The evaluation and application of an enzyme‐immunoassay (EIA) for the detection of Pseudomonas (Ps.) aeruginosa and Ps. mallei is described. Polystyrene beads (¼″) as the solid‐phase are prepared by coating the balls with purified IgG from the serum of rabbits (9–12 μg/bead) in Coating‐Buffer pH9.6. After washing the balls they are saturated with 10% BSA or 10% FCS in PBS‐Tween 20. The bacteria bound to the coated balls are detected by the specific peroxidase labelled IgG.

This EIA using Ps. aeruginosa (P 9) as a model is able to detect this bacterium within 5 hours, with stored coated balls 3.5 hours, with a detection limit of 104 CFU. Nine Pseudomonas‐strains react stronger than other strains. These cross‐reactions can be substantially reduced by absorbing the P 9‐conjugate with the cells of Ps. stutzeri (P 15). With the other Pseudomonas‐strains a high specificity is found with the P9‐conjugate.

After modifying this EIA for the detection of Ps. mallei (P.18) the strains Ps. mallei (P57), Ps. pseudomallei (P17) and Ps. cepacia (P 67) react with the P 18‐conjugate. With the other tested strains a high specificity is found at 107 CFU.

The polystyrene bead‐EIA is recommended as a sensitive and specific test for the detection of Ps. aeruginosa in about 5 resp. 3.5 hours. It only requires normal laboratory equipment and is thus a highly practible method for routine diagnostic of Ps. aeruginosa.

Das bereits auf eine schnelle, automatisierbare und empfindliche bakteriologische Diagnosestellung mit Ps. aeruginosa als Modellkeim optimierte enzymimmunologische Verfahren wird in der vorliegenden Arbeit auf seine Anwendbarkeit zur Differenzierung dieser Keime gegenüber anderen Stämmen untersucht.

Die in der Stärke erheblich variierenden Reaktionen mit 14 überprüften Ps. aeruginosa‐Stämmen zeigen, daß mit dem eingesetzten peroxidasemarkierten polyklonalen IgG nicht alle Serovare abge‐deckt werden. Von den heterologen Pseudomonaden‐Stämmen, die bei 104 – 106 KBE alle vom homologen Testkeim zu differenzieren sind, zeigen neun Stämme (Ps. fluorescens, Ps. aureofaciens, Ps. alcaligenes, Ps. stutzeri) stärkere und die übrigen Stämme nur schwache oder keine Reaktionen. Der Versuch, durch Absorption mit Ps. stutzeri (P15) an das Ps. aeruginosa‐spezifische Konjugat die Reaktion abzuschwächen oder gar zu verhindern, gelingt.

Wird Ps. mallei (P18) als Testkeim eingesetzt, zeigen bei 107 Keimen die Stämme Ps. mallei (P57), Ps. pseudomallei (P17) und Ps. cepacia (P67) starke Reaktionen, alle anderen berücksichtigten Pseudomonaden‐Stämme lassen sich eindeutig abgrenzen.

Das hier vorliegende Nachweisverfahren für Ps. aeruginosa ermöglicht den Nachweis von 104 Keimen in der Probe, und zwar innerhalb von etwa 5 Stunden, bei Lagerung der antikörperbeschichteten Kugeln von etwa 3,5 Stunden. Das Auftreten von die diagnostische Aussage einschränkenden Kreuzreaktionen kann durch Absorption verhindert werden.