Untersuchungen zur Diagnostik der Listerienenzephalitis bei Wiederkäuern unter Anwendung kultureller und immunhistologischer Verfahren
Authors: Peters M. , Hewicker‐Trautwein M. , Amtsberg G. 
Published: May 2010

Studies on the diagnosis of listeric encephalitis in ruminants using cultural and immunohistological techniques

II. Communication: Immunohistological investigations on formalin‐fixed paraffin sections

The unlabelled peroxidase‐antiperoxidase (PAP)‐technique was compared with the avidin‐biotin‐peroxidase‐complex (ABC)‐technique in the identification of Listeria antigen in formalin‐fixed paraffin sections of 58 ruminant brains, 44 of which showed histopathological lesions typical for listeric encephalitis. Rabbit hyperimmune serum, obtained by immunization with a Listeria monocytogenes strain of serotype 1/2 a, served as primary serum in the immunohistochemical investigations. The antiserum was tested for specificity using formalin‐fixed smears of various bacterial species. Listeria antigen was demonstrated in 40 of the 44 brains with histopathological CNS alterations, as seen in listeriosis, using the ABC method, whereas their identification with the PAP method only succeeded in 34 of the brains. Despite the higher dilution of the primary antibody, the ABC method distinguished itself further, in comparison with the PAP method, through more intense immunohis‐tochemical staining of Listeria antigen. Listeria spp. could be isolated from 46 of 52 brains, which were also examined bacteriologically. They could be isolated from 14 brains, which showed no histopathological lesions indicative of listeriosis. In contrast to this, Listeria antigen was only detected immunohistologically in brains with typical histological listeric CNS alterations. In three cases the presumptive histological diagnosis could not be confirmed immunohistologically.

An formalinfixierten Paraffinschnitten von 58 Wiederkäuergehirnen, von denen 44 histopathologische Veränderungen wie bei Listeriose zeigten, wurde die ungekoppelte Peroxidase‐Antiperoxidase‐(PAP)‐Methode mit der Avidin‐Biotin‐Peroxidase‐Komplex‐(ABC)‐Methode beim Listerien‐Antigen‐Nachweis verglichen. Als Primärserum für die immunhistologischen Untersuchungen diente ein durch Immunisierung mit einem L. m.‐Stamm der Serovar 1/2a hergestelltes Kaninchenhyperimmunserum, welches hinsichtlich seiner Spezifität an formalinfixierten Objektträgerausstrichen verschiedener Bakterienspezies überprüft wurde. In 40 von 44 Gehirnen mit auf Listeriose hinweisenden histopathologischen Veränderungen konnte mit Hilfe der ABC‐Methode Listerien‐Antigen darge‐stellt werden, während der Nachweis mittels PAP‐Methode nur in 34 der 44 Gehirne gelang. Trotz einer höheren Gebrauchsverdünnung des primären Antiserums zeichnete sich die ABC‐Methode gegenüber der PAP‐Methode zudem durch eine höhere Farbintensität des immunhistochemisch dargestellten Listerien‐Antigens aus. Listeria spp. wurden aus 46 der 52 auch bakteriologisch untersuchten Gehirne isoliert. In 14 Fällen gelang der kulturelle Nachweis, ohne daß sich histologische Veränderungen wie bei Listeriose fanden. Demgegenüber ließ sich Listerien‐Antigen immunhistologisch ausschließlich in Gehirnen mit auf Listeriose hinweisenden histopathologischen Veränderungen nachweisen. In drei Fällen konnte die histologische Verdachtsdiagnose immunhistologisch nicht abgesichert werden.

Danksagung

Für die Bereitstellung von Wiederkäuergehirnen für die bakteriologischen, histologischen und immunhistologischen Untersuchungen sei den Herren Prof. Dr. J. Pohlenz, Direktor des Instituts für Pathologie der Tierärztlichen Hochschule Hannover, Dr. P. Krabisch und Dr. J. Weikel, Tierge‐sundheitsdienst Bayern e. V. in Grub, Dr. M. von Keyserlingk, Veterinäruntersuchungsamt Hannover, und Dr. G. Matschullat, Tiergesundheitsamt Hannover, herzlich gedankt.