Zellvermittelte Zytotoxizität und Lymphozytenstimulierung bei Aujeszkyscher Krankheit
Authors: Wittmann G. , Leitzke Ilse , Höhn U. 
Published: August 2010

Achtzehn Schweine, die mit einer inaktivierten Aujeszkyvirus (AV)‐Vakzine zweimal geimpft und 2 Wochen später mit AV intranasal infiziert wurden, konnten auf Grund ihrer Fieberreaktion und der Virusausscheidung in 3 Gruppen eingeteilt werden. Gruppe I umfaßte 6 Tiere mit hohem Fieber, von denen drei AV im Nasensekret ausschieden. Gruppe II umfaßte 8 Tiere mit mittlerem Fieber, von denen zwei AV ausschieden, und Gruppe III umfaßte 4 Tiere ohne Fieber, von denen eines Virusspuren ausschied.

In der Vakzinierungs‐ und Infektionsphase wurde mit verschiedenen in vitro‐Reaktionen (SCC, AV‐CC, AV‐ADCC, AV‐LYST) die zellvermittelte Immunität parallel dazu die Bildung von neutralisierenden Antikörpern untersucht.

Die Ergebnisse aller 18 Tiere ohne Berücksichtigung der Gruppeneinteilung ergaben folgendes: Vor der Vakzinierung zeigten 66,7 % der Tiere SCC und 11,1 % AV‐CC. Nach der ersten Vakzinierung änderte sich dies nur unwesentlich, dagegen war nun bei 44,4 % AV‐ADCC und bei 33,3 % AV‐LYST nachweisbar. Der Mittelwert der Neutralisationstiter betrug 1 : 44. Eine Woche nach der zweiten Vakzinierung reagierten 100 % der Tiere mit SCC, 38,9 % mit AV‐CC, 94,4 % mit AV‐ADCC und 50 % mit AV‐LYST. Nach 2 Wochen war der Anteil der SCC‐ und AV‐LYST‐Reagenten auf 38,9 % bzw. 27,8 % zurückgegangen, während der Prozentsatz der AV‐CC‐Reagenten auf 50 % anstieg und die AV‐ADCC‐Reagenten bei 100% blieben. Der Mittelwert der Neutralisationstiter (NT) erhöhte sich um das Fünffache. Auffallend war, daß einige Tiere der Gruppe I und II nach der Impfung eine reduzierte zytotoxische Aktivität gegen AV‐infizierte Zielzellen zeigten. Nach der Infektion stieg die Reagentenzahl bei der SCC auf 100%. Derselbe Prozentsatz reagierte in der AV‐ADCC. Bei der AV‐CC und AV‐LYST kam es in der ersten Woche p. inf. zu einem vorübergehenden Anstieg auf 83,3% bzw. 100%, nach 2 Wochen waren diese Werte jedoch auf 44,4 % und 72,2 % zurückgegangen. Der mittlere NT erfuhr eine sechsfache Steigerung.

Beim Vergleich der Testergebnisse der 3 Tiergruppen miteinander zeigten sich einige auffallende Unterschiede. In der Vakzinierungsphase reagierten in Gruppe I und II weniger Tiere mit AV‐CC und AV‐LYST als in Gruppe III und die NT‐Mittelwerte von Gruppe I und II waren deutlich niederer als jener von Gruppe 111. In der Infektionsphase, besonders nach der 2. Woche, reagierte Gruppe I schwach in der AV‐CC und AV‐LYST. Die Unterschiede waren gegenüber Gruppe III am stärksten ausgeprägt, während Gruppe II eine gewisse Mittelstellung einnahm.

Alle aufgeführten Unterschiede waren nur in wenigen Fällen signifikant.

Die Vakzinierung rief bei den Impflingen neben den AV‐spezifischen Reaktionen auch eine starke Sensibilisierung der Lymphozyten gegen nicht‐virale Vakzinebestandteile (N‐LYST) und eine entsprechende Antikörperbildung hervor, die sich in der N‐ADCC außerte.

Die Ergebnisse werden im Hinblick auf Zusammenhänge zwischen zellvermittelter Zytotoxizität, neutralisierenden Antikörpern und Impfschutz diskutiert.

Cell‐mediated cytotoxicity and lymphocyte stimulation with Aujeszky's disease

II. After vaccination of pigs followed by infection

Eighteen pigs vaccinated twice with an inactivated Aujeszky's disease virus (AV) vaccine and intranasally infected with AV two weeks later, could be divided into 3 groups according to febrile reactions and AV excretion. Group I: 6 animals with high fever, 3 of them excreting AV in their nasal excrete. Group II: 3 animals with moderate fever, 2 of them excreting AV. Group III: 4 animals without fever, one of them excreting traces of AV.

During the vaccination and infection period cell‐mediated immunity was investigated by the following in vitro methods: Spontaneous cell‐mediated cytotoxicity against non‐AV infected target cells (SCC), cell‐mediated cytotoxicity against AV infected cells (AV‐CC), antibody‐dependent cell‐mediated cytotoxicity against AV infected cells (AV‐ADCC) and AV specific stimulation of lymphocytes (AV‐LYST). Determination of neutralizing antibody titres was done in parallel.

Considering the results irrespective of group distribution the following was found: Before vaccination SCC was shown by 66.7% of the animals and AV‐CC by 11.1 %. After the first vaccination no essential change occurred in these two tests and additionally AV‐ADCC was shown by 44.4% of the animals and AV‐LYST by 33.3%. The mean value of the neutralization titres (NT) was 1:44. One week after the second vaccination SCC was shown with 100 % of the animals AV‐CC with 38.9 %, AV‐ADCC with 94.4 %, and AV‐LYST by 50%. After 2 weeks the percentage of SCC and AV‐LYST reacting animals declined to 38.9 % and 27.7 %, respectively, whereas the AV‐CC positive animals rose to 50% and the AV‐ADCC positive animals remained on the level of 100%. The mean value of the NT was increased fivefold. It was striking that some animals of groups I and II had a reduced cytotoxic activity against AV infected target cells after vaccination. After infection the number of reacting animals was 100 % in SCC and in AV‐ADCC. A temporary rise to 83.3 % was noticed in AV‐CC and to 100 % in AV‐LYST. However, the latter values fall to 44.4 % and 72.2 %, respectively, after 2 weeks. The mean value of the NT was increased sixfold.

By comparing the test results of the 3 groups of animals with each other some marked differences could be noticed. During the vaccination period fewer animals reacting in AV‐CC and AV‐LYST were in groups I and II than in group III, and the mean NT of groups I and II were distinctly lower than that of group III. During the infection period, especially after the second week, the AV‐CC and AV‐LYST response of group I was low. These differences were strongest in group III, whereas group II took an intermediate position.

Besides AV specific reactions, strong sensitization of lymphocytes to non‐viral vaccine constituents (N‐LYST) and corresponding antibody production, which was measured in N‐ADCC, was evoked by vaccination in the animals.

The results are discussed with regard to correlations between cell‐mediated cytotoxic‐ity, neutralizing antibodies and protection against infection.

Cytotoxicité liée à la cellule et stimulation lymphocytaire lors de la maladie d'Aujeszky

II. Après une vaccination des porcs et une infection successive

Dix‐huit porcs qui avaient été inoculés deux fois avec un vaccin inactivé du virus d'Aujeszky (AV) et infectés avec AV par voie intranasale 2 semaines plus tard ont pu être répartis en 3 groupes sur la base de leur réaction fiévreuse et de l'excrétion virale. Le groupe I comprenait 6 animaux avec forte fièvre dont trois sécrétèrent AV dans les sécrétions nasales. Le groupe II comprenait 8 animaux avec une fièvre moyenne, dont deux ont sécrété AV et le groupe III comprenait 4 animaux sans fièvre dont un sécréta des traces virales.

L'immunité liée à la cellule et parallèlement la formation des anticorps neutralisants ont été recherchées dans la phase de vaccination et d'infection avec différentes réactions in vitro (SCC, AV‐CC, AV‐ADCC, AV‐LYST).

Les résultats chez les 18 animaux, sans référence à la répartition en groupes, ont été les suivants: 66,7% des animaux ont présenté SCC et 11,1 % AV‐CC avant la vaccination. Cette situation ne s'est que secondairement modifiée après la première vaccination, par contre on a mis en évidence seulement AV‐ADCC chez 44,4 % et AV‐LYST chez 33,3%. La valeur moyenne du titre de neutralisation fut 1 : 44. Une semaine après la deuxième vaccination, 100% des animaux ont réagi avec SCC, 38,9% avec AV‐CC, 94,4% avec AV‐ADCC et 50 % avec AV‐LYST. Après 2 semaines, la proportion des réagissants SCC et AV‐LYST fut ramenée à 38,9 % et 27,8 %, alors que le pourcentage des réagissants AV‐CC augmenta à 50% et les réagissants AV‐ADCC demeurérent à 100%. La valeur moyenne du titre de neutralisation (NT) augmenta de cinq fois. Il fut frappant de remarquer que quelques animaux des groupes I et II ont présenté une activité cytotoxique diminuée contre des cellules‐cibles AV‐infectées après la vaccination. Le nombre des réagissants pour SCC monta à 100 % après l'infection. Le même pourcentage a réagi avec AV‐ADCC. Pour AV‐CC et AV‐LYST il y a eu une augmentation à 83,3 % et 100 % dans la première semaine après l'infection et ces deux valeurs sont redescendues après 2 semaines à 44,4% et 72,2%. La valeur moyenne du titre de neutralisation fut l'objet d'une augmentation de 6 fois.

Quelques différences marquées sont apparues en comparant les résultats des tests des 3 groupes d'animaux les uns avec les autres. Dans la phase de vaccination, moins d'animaux des groupes I et II ont réagi avec AV‐CC et AV‐LYST que dans le groupe III; les valeurs moyennes du titre de neutralisation des groupes I et II furent netternent plus basses que celles du groupe III. Le groupe I a réagi faiblement dans AV‐CC et AV‐LYST dans la phase infectieuse, particulièrement après la deuxième semaine. Les différences les plus marquées vis‐à‐vis du groupe III alors que le groupe II avait une position moyenne.

Toutes les différences ne furent significatives que dans peu de cas. La vaccination développa chez les animaux vaccinés à côté des réactions AV‐spécifiques également une forte sensibilisation des lymphocytes contre des particules non virales du vaccin (N‐LYST) et une formation d'anticorps correspondants qui est ressortie dans N‐ADCC.

Les résultats sont discutés en fonction des relations entre la cytotoxicité liée à la cellule, les anticorps neutralisants et la vaccination.

Citotoxicidad mediada por la célula y la estimulación linfocitaria en la enfermedad de Aujeszky

II. En cerdos infectados experimentalmente

La finalidad de los estudios presentes era poner en evidencia las relaciones que hay entre el curso clínico de la enfermedad de Aujeszky en el cerdo y algunas reacciones in vitro de la inmunidad de intercesión celular, la formación de interferón y la anticuerpogenia. Como parámetros de la inmunidad mediada por las células, se analizaron la citotoxicidad espontánea de intercesión celular (SCC) frente a las células objetivo no infectadas, la citotoxicidad de intercesión celular frente a células objetivo infectadas con virus Aujeszky (AV) (AV‐CC), la citotoxicidad de intercesión celular, dependiente de los anticuerpos, frente a células target u objetivo infectadas con AV (AV‐ADCC), y la estimulación linfocitaria específica AV (AV‐LYST).

Ya antes de la infección existía SCC en el 61,1 % de los 18 animales. El porcentaje de reaccionantes positivos aumentó después de la infección AV, sobre todo en aquellos cerdos que enfermaron en grado medio o débilmente. Aunque la diferencia no era significante. Mientras que las células efectoras conservaban, en la semana primera de infección de los animales, su actividad citotóxica frente a células blanco no infectadas, incluso después de la infección de los animales, se redujo su actividad citotóxica frente a las células target infectadas con AV. Esto atañía en primer lugar a las células efectoras procedentes de animales enfermos graves o de gravedad rnediana. AV‐CC apareció 9—11 días después de la infección, disminuyendo fuertemente entre los días 14° y 21°. AV‐ADCC se pudo poner en evidencia en todos los animales que habían sobrevivido el estadio agudo de la enfermedad. Sin embargo, su aparición (9—11 días p. inf.) se hallaba diferida en comparación con la aparición de los anticuerpos neutralizantes (6 días p. inf.). Este hecho se explica de la forma siguiente: en la ADCC se abarcaron solo los anticuerpos IgG, mientras que en la prueba de neutralización en presencia del complemento también se abarcaban los anticuerpos IgM. Los linfocitos sensibilizados mediante AV (AV‐LYST) se pusieron de relieve en algunos animales 4 días p. inf. y en todos ellos tras 6 días y más tarde. No existían relaciones conocibles entre anticuerpos neutralizantes, AV‐ADCC o AV‐LYST y la patocronia. Acaece lo mismo con respecto a la formatión de interferón en el estadio inicial de infección. Sin embargo, en el curso ulterior, una parte de los animales que habían enfermado de forma benigna presentó una formación prolongada de interferón.

Sigue incierto si los resultados de los diferentes tests se pueden aplicar a la situación in vivo en los cerdos infectados con AV, ya que existían grandes oscilaciones individuales y se trabajó solo con un número reducido de animales. A pesar de todo, los resultados habidos ofrecen ciertos indicios de que mecanismos de citotoxicidad de mediación celular, independientes de los anticuerpos (SCC y AV‐CC), en el estadio temprano de infección AV podrían jugar cierto papel corno mecanismos de defensa en el organismo, pues los anticuerpos neutralizantes y AV‐ADCC aparecen solo cuando los procesos patológicos en el cuerpo se hallan muy avanzados.