Die Immunperoxidase‐Methode zum Nachweis von Virus‐ und Chlamydien‐Antigenen
Authors: Mields W. , Hentschke J. , Becker W. , Teufel P. 
Published: August 2010

Mit der direkten Immunperoxidase‐Methode und der Immunfluoreszenz konnte in Peritonealmakrophagen von Mäusen, die mit dem Psittakosestamm P 121/71 i. p. infiziert worden waren, der 6tägige Entwicklungszyklus des Erregers nachgewiesen werden. Die Immunperoxidase‐Technik zeigte dabei geringere Unspezifitätsreaktionen und ließ in der antigenspezifischen Färbung detailreichere Strukturen erkennen.

Die eigentliche Vermehrungsphase der Chlamydien innerhalb der Plaques war am 2. Tag p. i. abgeschlossen. Am 3. Tag p. i. befanden sich die neu gebildeten Elementarkörperchen in Form von Clusters im gesamten Zytoplasma der infizierten Zelle. Zu diesem Zeitpunkt färbt sich mit immunologischen Färbemethoden das gesamte Plasma der Wirtszelle an. Die am 5. Tag p. i. zu beobachtende Morulaform wurde als Versuch der infizierten Zelle interpretiert, die neu gebildeten Elementarkörperchen abzukapseln.

Mäuse, die 48 Stunden vor der Infektion eine Gelatinelösung i. p. injiziert bekamen, starben in der Regel am 6. Tag p. i., während nicht vorbehandelte Tiere überlebten. Die Ursache dafür wurde in dem veränderten Verhältnis der Peritonealzellen in der Bauchhöhle zum Infektionszeitpunkt gesehen. 48 Stunden nach einer i. p. Inokulation von Gelatinelösung sind die Granulozyten, die die Chlamydien intrazellulär abbauen, in der Bauchhöhle vermindert, während die für die Infektion empfänglichen Makrophagen in großer Anzahl vorliegen. Dadurch kommen mehr Chlamydien zur Vermehrung, was zu einer tödlichen Erkrankung der Versuchstiere führt.

The immunoperoxidase method for detection of viral and chlamydial antigens 2. Demonstration of development cycle of Chlamydia psittaci in peritoneal macrophages of infected mice

By the direct immune peroxidase method and immunofluorescence it was possible to demonstrate the 6‐day development cycle of the causal agent in peritoneal macrophages of mice infected i. p. with the psittacosis strain P 121/71. The peroxidase technique was less non‐specific and gave more structural detail in the antigen‐specific staining.

The true proliferation phase of chlamydia within the plaques ended on the 2nd day after infection. On the 3rd day there were new elementary bodies in the form of “clusters” throughout the cytoplasm of infected cells. At this time the immunological method showed staining of the whole cytoplasm of the host cell. The “morula” form found on the 5th day after infection was interpreted as an attempt by the host cells to encapsulate the newly formed elementary bodies.

Mice injected i. p. 48 hours before infection with a gelatine solution usually died on the 6th day after infection whereas controls survived. The reason is seen in the changed relationship of the peritoneal cells at the time of infection. 48 hours after injecting gelatine i. p. the granulocytes which break down the chlamydia within their cytoplasm are reduced in number in the peritoneal cavity whereas the susceptible macrophages are more numerous. The result is greater multiplication of the chlamydia leading to death of the host.

La méthode de l'immunoperoxydase dans la recherche des antigènes viraux et de Chlamydia Communication II: Représentation du cycle de développement de Chlamydia psittaci dans des macrophages du péritoine chez des souris infectées

On a pu montrer le cycle de développement de 6 jours de Chlamydia psittaci dans des macrophages du péritoine de souris infectées i. p. avec la souche P 121/71 au moyen de la méthode d'immunoperoxydase directe et de l'immunofluorescence. La technique de l'immunoperoxydase montra une plus faible aspecificité et une coloration antigénique spécifique aux structures plus détaillées.

La phase de multiplication proprement dite des Chlamydias à l'intérieur des plaques était terminée 2 jours après l'injection. Les corpuscules élémentaires nouvellement formés se trouvaient au 3ème jour après l'injection sous forme de «clusters» dans tout le cytoplasme des cellules infectées à ce moment. Tout le plasma des celluleshôtes se colorait avec des méthodes de coloration immunologiques. La forme de morula observée au 5ème jut interprêtées comme la tentative des cellules infectés d'encapsuler les corpuscules élémentaires nouvellement formés.

Les souris ayant reçu une solution gélatineuse i. p. 48 heures avant l'infection moururent dans la règle le 6ème jour p. i.; les animaux non traités survécurent. La cause fut attribuée au rapport modifié des cellules du péritoine dans la cavité abdominale au moment de l'infection. On observe 48 heures après une inoculation i. p. d'une solution gélatineuse que les granulocytes qui détruisent intracellulairement les Chlamydias sont en diminution dans la cavité abdominale alors que les macrophages réceptifs à l'infection sont très nombreux. Cela permet une plus grande multiplication des Chlamydias qui provoque une maladie mortelle chez les animaux d'expérience.

El método de la inmunoperoxidasa para identificar los antígenos de virus y de clamidios II° comunicación: Representación del ciclo evolutivo de Chlamydia psittaci en los macrófagos peritoneales de los ratones infectados

Con el método directo de la inmunoperoxidasa y la inmunofluorescencia se pudo identificar en los macrófagos peritoneales de los ratones, que habían sido infectados con la estirpe de psitacosis P 121/71 por vía i. p., el ciclo evolutivo de 6 días del agente etiológico. La técnica de la inmunoperoxidasa mostraba aquí reacciones más escasas de inespecificidad y permitía reconocer en la coloración específica del antígeno unas estructuras mas ricas en detalles.

La fase propia de multiplicación de los clamidios dentro de los plaqués había concluído el 2° día p. i. El día 3° p. i. se hallaban los corpúsculos elementales neoformados en calidad de racimos en todo el citoplasma de la célula infectada. En este momento se colorea, con las técnicas tintoriales inmunológicas, el plasma total de la célula anfitriona. La forma de morula que se observa el 5° día p. i. se interpretó como intento de la célula infectada de encapsular los corpúsculos elementales neoformados.

Los ratones, a los cuales se había inyectado 48 horas antes de la infección una solución de gelatina por vía i. p., murieron por regla general el 6° día p. i., mientras que sobrevivían los animales no pretratados. Se ve la causa de esto en la relación alterada de las células peritoneales en la cavidad abdominal en el instande de la infección. 48 horas después de la inoculación i. p. de la solución de gelatina se encuentran disminuidos los granulocitos, los cuales desintegran los clamidios en el interior de la célula, en la cavidad abdominal mientras que se hallan presentes en cantidad elevada los macrófagos receptibles para la infección. Con ello se multiplican más clamidios, lo que conducía al desenlace fatal de los animales de experimentación.