Ιστικός και ποσοτικός προσδιορισμός των TLRs στο έντερο και στους πνεύμονες σε σηπτικά μοντέλα μυών
Authors: Μπακόπουλος Ανάργυρος 
Published: September 2021

Εισαγωγή: Η σήψη χαρακτηρίζεται από υψηλά ποσοστά θνητότητας και συχνά συνοδεύεται από πολυ-οργανική ανεπάρκεια. Κατά την σήψη το αναπνευστικό σύστημα μπορεί να επηρεαστεί οδηγώντας στην εμφάνιση Συνδρόμου Οξείας Αναπνευστικής Δυσχέρειας (ARDS). Οι υποδοχείς ανάλογοι των Toll (Toll Like Receptors) ως τμήματα της πρώτης γραμμής άμυνας του οργανισμού ενάντια στους παθογόνους μικροοργανισμούς παρουσιάζουν σημαντική έκφραση κατά την σήψη. Η έκφραση των TLRs στους πνεύμονες πειραματόζωων σε κατάσταση σήψης θα ήταν ενδεικτική της συμμετοχής των TLRs στο αναπνευστικό σύστημα και επίσης να αποτελέσουν δείκτη της βαρύτητας και της κλινικής πρόγνωσης. Εφόσον αποδειχθεί η συμμετοχή των TLRs στο πνευμονικό παρέγχυμα κατά την σήψη, περαιτέρω μελέτη θα μπορούσε να καταλήξει στην ανάπτυξη θεραπείας μέσω της μεταβολής της λειτουργίας των TLRs.Σκοπός: Να μελετηθεί η έκφραση των υποδοχέων TLRs σε εντερικούς και πνευμονικούς ιστούς σε σηπτικά μοντέλα μυών. Επίσης να προσδιοριστεί ο ρόλος των υποδοχέων TLRs στο ARDS/ALI και το σύνδρομο πολυοργανικής ανεπάρκειας.Πειραματικός σχεδιασμός: Προοπτική, τυχαιοποιημένη, ελεγχόμενη μελέτη παρέμβασης.Τοποθεσία: Κέντρο Πειραματικής Χειρουργικής, Ίδρυμα Ιατροβιολογικών Ερευνών Ακαδημίας Αθηνών.Πειραματόζωα: Άρρενες μύες C57BL/6J ηλικίας 12 έως 14 εβδομάδων. Μέθοδος: Χρησιμοποιήθηκαν 90 πειραματόζωα που χωρίστηκαν σε τρεις σηπτικές ομάδες (ομάδες S) και τρεις ομάδες ελέγχου (ομάδες C). Οι ομάδες S υπεβλήθησαν σε απολίνωση και νύξη του τυφλού, ενώ οι ομάδες C υπεβλήθησαν σε ψευδή επέμβαση. Δείγματα αίματος ελήφθησαν από όλα τα πειραματόζωα ώστε να αναλυθούν για συγκεκριμένους δείκτες. Δείγματα πνευμονικού και εντερικού ιστού λήφθηκαν μετά την ευθανασία στις 24, 48 και 72 ώρες, και εξετάσθηκαν μέσω ανοσοφθορισμού και ποσοτικής PCR πραγματικού χρόνου για την έκφραση των TLR 2, 3, 4 και 7.Αποτελέσματα: Τα λευκά αιμοσφαίρια και τα λεμφοκύτταρα αυξήθηκαν σε όλες τις ομάδες S συγκριτικά με τις αντίστοιχες ομάδες C, ενώ τα ερυθρά είχαν μια σταδιακή πτωτική πορεία στις ομάδες S με την μεγαλύτερη αύξηση στην ομάδα S72. Τα μονοκύτταρα ήταν υψηλότερα στις ομάδες S συγκριτικά με τις ομάδες C και πιο χαρακτηριστικά ανάμεσα στις ομάδες S48-C48 και S72-C72. H κρεατινίνη, η IL-6 και η IL-10 ήταν σημαντικά υψηλότερες στις ομάδες S συγκριτικά με τις αντίστοιχες ομάδες C (S24-C24, S48-C48 και S72-C72). Ο ανοσοφθορισμός έδειξε αυξημένη έκφραση των TLRs 2, 3, 4 και 7 στις ομάδες S συγκριτικά με τις αντίστοιχες ομάδες C. Παρόμοια αποτελέσματα είχε και η ποσοτική PCR πραγματικού χρόνου για την έκφραση όλων των TLRs που μελετήθηκαν σε δείγματα ιστών πνεύμονα και εντέρου. Συγκριτικά στους δύο αυτούς ιστούς από τις ομάδες S, οι TLRs 2 και 4 ήταν αυξημένοι στον πνεύμονα στις 24, 48 και 72 ώρες, ενώ ο TLR 3 ήταν υψηλότερος στο έντερο σε όλες τις χρονικές περιόδους. Τέλος, τα επίπεδα του TLR 7 ήταν σημαντικά υψηλότερα στο έντερο στις 24 ώρες ενώ στον πνεύμονα η υψηλότερη συγκέντρωση του ήταν στις 48 ώρες. Οι TLRs φαίνεται πως εκφράζονται σημαντικά στους πνεύμονες των μυών σε σήψη, εύρημα που δικαιολογείται από έναν πιθανό ρόλο τους στην παθογένεση του ARDS κατά την σήψη. Παρότι περαιτέρω μελέτες απαιτούνται για να κατανοηθεί πλήρως ο μηχανισμός, οι TLRs θα μπορούσαν να αποτελούν υποσχόμενο στόχο για την δημιουργία νέων θεραπευτικών στρατηγικών στην θεραπεία της σήψης.