electroforesis capilar hoy: una herramienta para el estudio de perfiles proteicos con utilidad clínica
Authors: De Proteínas Foro 
Published: October 2024

Desde la revolucionaria innovación que permitía la separación de las proteínas séricas en un medio líquido, desarrollada por Tiselius, la electroforesis solo ha emprendido un camino de creciente evolución (del papel, acetato de celulosa gelatinizado (ACG) / gel de agarosa (AG) / gel de agarosa en capa fina/ gel de agarosa de capa fina de alta resolución (AGAR) a la electroforesis capilar de zona (ECZ)). Dichos desarrollos han permitido separar cinco (albúmina, alfa-1, alfa-2, beta y gamma) o seis fracciones (beta-1 (transferrina) y beta-2 (complemento 3)), que se asemejan a una distribución de curva gaussiana en las curvas densitográficas, con la mayor asimetría observada en la zona gamma, por su especial composición, dada la naturaleza heterogénea de las inmunoglobulinas policlonales.El desafío de la interpretación de los perfiles proteicos séricos y su valor en la asociación con patologías siempre estuvo ligado al desarrollo metodológico con capacidad para distinguir distintos perfiles con precisión, focalizando la atención en abandonar la subjetividad en la visualización y en disminuir el tiempo demandante por ser técnicas intrínsecamente artesanales. Desde esta perspectiva, la ECZ ocupa un lugar predominante.Como describe la Dra. Raquel Osatinsky, la mayor ventaja en la separación de las proteínas séricas mediante ECZ es la posibilidad de observarlas de manera muy similar a la tradicional obtenida en soportes sólidos. En estos equipos, la lectura de las proteínas es directa y la medida a 200 nm de los enlaces peptídicos expresa el contenido de cada fracción visualizada. Se construye así una curva virtual que deberá ser validada por el operador. Se acortan los tiempos de corrida al eliminar las etapas de coloración, decoloración y densitometría, permitiendo al profesional mayor tiempo para el análisis del perfil proteico. A diferencia de las metodologías de uso tradicional (ACG/AG, etc.), en la ECZ es el flujo electroendosmótico el que produce la migración de un líquido (solución amortiguadora) respecto de una superficie cargada (pared del capilar), al aplicar un campo eléctrico, y, por lo tanto, el que permite la separación de distintas partículas. Los capilares de sílice recubiertos con polímeros para otorgarles flexibilidad facilitan la aplicación de campos eléctricos con un gran voltaje, con una alta eficiencia en la disipación de calor. La ionización de los grupos silenoles genera una capa negativa de iones, seguida por una segunda capa móvil compuesta de cationes en exceso, que es la que establece el flujo neto de migración hacia el polo negativo. Esta técnica ha demostrado su utilidad en el área de química clínica tanto para la separación de las proteínas del suero como de péptidos (insulina), hemoglobinas normales y patológicas, y de pequeñas moléculas ionizadas como nucleósidos, nucleótidos, aminoácidos, vitaminas y drogas iónicas; la misma ha sido descripta en todas sus aplicaciones, fundamentos y características metodológicas por Castagnino. Además, cabe mencionar que es una técnica muy versátil, que permite utilizar mecanismos de separación diferentes y complementarios simplemente cambiando la composición del líquido dentro del capilar. El mayor reto que debió afrontar esta metodología fue, sin lugar a dudas, incorporar nuevos algoritmos para producir una interpretación rápida y estandarizada del análisis matemático de los datos obtenidos mediante EC de todo el electroferograma con el fin de definir distintos perfiles como, por ejemplo, el de inflamación, que permitieran la interpretación clínica de una manera objetiva. En cuanto a la automatización de los procedimientos empleados en la ECZ, también es de destacar que ha mejorado la reproducibilidad de la medida con respecto a los procedimientos manuales, lo que ha permitido alcanzar los objetivos de calidad en algunas de las fracciones. Los datos de imprecisión aportados por diferentes estudios realizados con distintos equipos de electroforesis capilar y de electroforesis en gel de agarosa muestran que la imprecisión es menor en los primeros.