Influence of athletes hyperhydration on sample collection procedure in terms of plasma and urine pharmacokinetics of representative prohibited substances
Authors: Αθανασιάδου Ιωάννα 
Published: September 2021

Το ντόπινγκ είναι ένα πολύπλευρο φαινόμενο, που ορίζεται επίσημα ως η εμφάνιση μιας ή περισσοτέρων παραβιάσεων σύμφωνα με τον Παγκόσμιο Κώδικα Αντι-Ντόπινγκ. Η παρουσία απαγορευμένης ουσίας (ή των μεταβολιτών της), η κατάχρηση ή η απόπειρα χρήσης ή κατοχής, η άρνηση ή η αποτυχία ενός ελέγχου ντόπινγκ, η (απόπειρα) χορήγησης σε οποιονδήποτε αθλητή οποιασδήποτε απαγορευμένης μεθόδου ή ουσίας και η αλλαγή ή οποιαδήποτε προσπάθεια αλλαγής των συλλεχθέντων δειγμάτων θεωρούνται όλα ως αδικήματα ντόπινγκ.Η υπερβολική πρόσληψη υγρών (υπερενυδάτωση), δεν απαγορεύεται ως πρακτική σύμφωνα με τους ισχύοντες κανονισμούς του Παγκόσμιου Οργανισμού Αντι-Nτόπινγκ (World Anti-Doping Agency). Εντούτοις, η υπερενυδάτωση μπορεί να υιοθετηθεί από τους αθλητές ως μέθοδος κάλυψης του ντόπινγκ κατά τη δειγματοληψία με στόχο να επηρεάσει το προφίλ απέκκρισης απαγορευμένων ουσιών και επομένως να εμποδίσει την ανίχνευσή τους.Σκοπός της παρούσας μελέτης ήταν να εκτιμηθεί ο ρόλος της υπερενυδάτωσης ως πιθανής μεθόδου κάλυψης της χρήσης απαγορευμένων ουσιών, αξιολογώντας την επίδραση στο αιματολογικό και στεροειδές προφίλ των αθλητών (Αthlete Βiological Ρassport), στα επίπεδα της ενδογενούς ωχρινοτρόπου ορμόνης (Luteinizing Hormone) στα ούρα καθώς και στο φαρμακονιητικό προφίλ στο αίμα και στα ούρα και στην ικανότητα ανίχνευσης δύο αντιπροσωπευτικών απαγορευμένων ουσιών, της Epoetin beta (rHuEPO) και του budesonide (BDS) μετά από υποδόρια και δια του στόματος χορήγηση, αντίστοιχα.Η παρουσίαση των αποτελεσμάτων της μελέτης είναι δομημένη σε τρία μέρη (Α-Γ). Στο πρώτο μέρος, «Μέρος Α: Εισαγωγή & Σχεδιασμός Μελέτης», παρουσιάζεται η λογική της μελέτης και η περιγραφή του πρωτοκόλλου και της μεθοδολογίας μαζί με τον σκοπό και τους στόχους της μελέτης, ως «Κεφάλαιο 1: Εισαγωγή» και «Κεφάλαιο 2 : Σχεδιασμός μελέτης και μεθοδολογία». Το πλήρες πρωτόκολλο της μελέτης, όπως εγκρίθηκε από την Επιτροπή Υγείας, Ιατρικής και Έρευνας του Παγκόσμιου Οργανισμού Αντι-Nτόπινγκ (10D21CG) και από την Επιτροπή Ηθικής του Εργαστηρίου Αντι-Ντόπινγκ του Κατάρ (F2013000006) παρουσιάζεται στο Παράρτημα Γ.Εν συντομία, επτά υγιείς, Καυκάσιοι, μη καπνιστές άνδρες συμμετείχαν σε όλες τις φάσεις της μελέτης. Η μελέτη περιελάμβανε τις ακόλουθες φάσεις: μια βασική φάση, δηλαδή χωρίς χορήγηση φαρμάκου, με και χωρίς υπερενυδάτωση και δύο φάσεις φαρμάκου, δηλαδή χορήγηση φαρμάκου με και χωρίς υπερενυδάτωση. Ο στόχος της βασικής φάσης ήταν να εξεταστεί η επίδραση της υπερενυδάτωσης στα προφίλ συγκέντρωσης στο αίμα και στα ούρα ενδογενών ουσιών όπως ενδογενή αναβολικά ανδρογόνα στεροειδή, ενδογενής ερυθροποιητίνη, ενδογενής ωχρινοτρόπος ορμόνη καθώς και στους αιμοδυναμικούς δείκτες που περιλαμβάνονται στο αιματολογικό προφίλ των αθλητών. Σκοπός της φάσης χορήγησης του φαρμάκου ήταν η διεξαγωγή φαρμακοκινητικής μελέτης για κάθε μια από τις επιλεχθείσες απαγορευμένες φαρμακευτικές ουσίες, δηλαδή της rHuEPO και του BDS μετά τη χορήγηση μίας εφάπαξ δόσης, προκειμένου να εξετασθεί η επίδραση υπερενυδάτωσης στα προφίλ συγκέντρωσης-χρόνου και στην ικανότητα ανίχνευσης κάθε ουσίας κατά την ανάλυση ελέγχου ντόπινγκ.Η υπερενυδάτωση εφαρμόσθηκε είτε με νερό είτε με αθλητικό ποτό με λήψη 20 mL/kg σωματικού βάρους (1400 mL για άτομο βάρους 70 kg) σε διάτημα 30 λεπτών.Η συλλογή και αποθήκευση δειγμάτων ούρων και αίματος διεξήχθη σύμφωνα με τις επίσημες οδηγίες του Παγκόσμιου Οργανισμού Αντι-Nτόπινγκ, ακολουθώντας το πρόγραμμα δειγματοληψίας όπως περιγράφεται στο πρωτόκολλο της μελέτης. Όλες οι αναλύσεις δειγμάτων αίματος και ούρων πραγματοποιήθηκαν με τις επικυρωμένες αναλυτικές μεθόδους σύμφωνα με τις επίσημες οδηγίες του Παγκόσμιου Οργανισμού Αντι-Nτόπινγκ.Η στατιστική ανάλυση των δεδομένων πραγματοποιήθηκε με το λογισμικό πρόγραμμα SPSS 25.0 (IBM SPSS Statistics για Windows, Έκδοση 25.0, IBM Corporation, Armonk, NY, USA). Το λογισμικό Phoenix® έκδοση 8.0 PK / PD (Certara, Princeton, NJ, USA) χρησιμοποιήθηκε για την ανάλυση των φαρμακοκινητικών δεδομένων. Σε όλες τις περιπτώσεις εφαρμόσθηκε μη διαμερισματική φαρμακοκινητική ανάλυση (Non-compartmental analysis, NCA) ενώ για την rHuEPO πραγματοποιήθηκε και φαρμακοκινητική μοντελοποίηση.Το δεύτερο και τρίτο μέρος της μελέτης (Μέρη B & Γ) διαρθρώνονται σε κεφάλαια τα οποία είναι δομημένα ώστε να μπορούν να διαβαστούν ανεξάρτητα. Πιο συγκεκριμένα:«Μέρος Β: Η επίδραση της υπερενυδάτωσης των αθλητών στις αιματολογικές παραμέτρους και το προφίλ συγκέντρωσης στα ούρα ενδογενών βιοδεικτών που χρησιμοποιούνται στην ανάλυση ντόπινγκ», αποτελείται από τρία κεφάλαια που περιγράφουν την επίδραση της υπερενυδάτωσης στο αιματολογικό προφίλ των αθλητών (Κεφάλαιο 3), στο στεροειδές προφίλ των αθλητών, (Κεφάλαιο 4) και στα επίπεδα της ενδογενούς ωχρινοτρόπου ορμόνης στα ούρα (Κεφάλαιο 5), αντίστοιχα, ως εξής:Κεφάλαιο 3: Επίδραση της υπερενυδάτωσης στις αιματολογικές παραμέτρους του βιολογικού διαβατηρίου των αθλητών (Athlete Biological Passport)Το Athlete Biological Passport είναι μια έμμεση προσέγγιση, η οποία εφαρμόζεται από τον Παγκόσμιο Οργανισμό Αντι-Nτόπινγκ, με στόχο την ανίχνευση χειραγώγησης των δειγμάτων αίματος με βάση τις μη φυσιολογικές αλλαγές στους αιματολογικούς δείκτες. Περιπτώσεις ντόπινγκ αναφέρουν τη χρήση της υπερενυδάτωσης από τους αθλητές ως μέθοδο κάλυψης του ντόπινγκ κατά τη συλλογή δειγμάτων ούρων, η οποία θα μπορούσε ενδεχομένως να καλύψει τις ύποπτες διακυμάνσεις στα αιματολογικά προφίλ. Η παρούσα μελέτη διερεύνησε την επίδραση της υπερενυδάτωσης στους αιματολογικούς δείκτες, δηλαδή συγκέντρωση αιμοσφαιρίνης, ποσοστό δικτυοκυττάρων και OFF-hr, με και χωρίς χορήγηση rHuEPO. Οι επτά υγιείς, καθμερινά αθλούμενοι εθελοντές συμμετείχαν για μια περίοδο πέντε εβδομάδων, εκ των οποίων οι δυο πρώτες αφορούσαν στη βασική φάση και οι επόμενες τρεις στη φάση χορήγησης rHuEPO. Το νερό και ένα εμπορικά διαθέσιμο αθλητικό ποτό χρησιμοποιήθηκαν ως παράγοντες υπερενυδάτωσης σε όγκο 20 mL/kg σωματικού βάρους. Σύμφωνα με το πρωτόκολλο της μελέτης, για να εξεταστεί η επίδραση της υπερενυδάτωσης στο φυσιολογικό αιματολογικό προφίλ κάθε εθελοντή, εφαρμόστηκε υπερενυδάτωση στις 0, 24 και 48 ώρες κατά τη διάρκεια της βασικής φάσης. Κατά τη διάρκεια της φάσης χορήγησης rHuEPO, οι εθελοντές έλαβαν μία δόση 3000 IU Epoetin beta χωρίς και με κάθε παράγοντα υπερενυδάτωσης που χορηγήθηκε στις 0, 24 και 48 ώρες μετά τη χορήγηση του φαρμάκου. Τα δείγματα αίματος και ούρων συλλέχθηκαν και αναλύθηκαν σύμφωνα με τις κατευθυντήριες οδηγίες και τα τεχνικά έγγραφα του Παγκόσμιου Οργανισμού Αντι-Nτόπινγκ. Δεν παρατηρήθηκε σημαντική επίδραση (P > 0,05, 95% CI) στους αιματολογικούς δείκτες λόγω υπερενυδάτωσης σε οποιαδήποτε στιγμή κατά τη διάρκεια της μελέτης. Τα δεδομένα πριν και μετά την υπερενυδάτωση δεν ήταν στατιστικά σημαντικά διαφορετικά ανεξάρτητα από τον παράγοντα υπερενυδάτωσης με και χωρίς χορήγηση φαρμάκου. Συμπερασματικά, η υπερενυδάτωση δεν επηρεάζει το αιματολογικά προφίλ.Κεφάλαιο 4: Επίδραση της υπερενυδάτωσης στο «στεροειδές προφίλ» στα ούρα κατά την ανάλυση ελέγχου ντόπινγκΤο «στεροειδές προφίλ» των ούρων στην ανάλυση ελέγχου ντόπινγκ είναι ένα ισχυρό εργαλείο που στοχεύει στην ανίχνευση των ενδοατομικών αποκλίσεων που σχετίζονται με την κατάχρηση ενδογενών στεροειδών. Οι παράγοντες που μεταβάλλουν το προφίλ των στεροειδών περιλαμβάνουν, μεταξύ άλλων, την υπερβολική λήψη υγρών που οδηγεί σε χαμηλές συγκεντρώσεις ενδογενών στεροειδών σε σύγκριση με τις φυσιολογικές τιμές. Υπάρχουν περιπτώσεις που αναφέρουν τη χρήση της υπερενυδάτωσης από τους αθλητές ως μέθοδο κάλυψης του ντόπινγκ κατά τη συλλογή δειγματών ούρων. Οι επτά υγιείς καλής φυσικής κατάστασης εθελοντές εξετάστηκαν για μια περίοδο 72 ωρών χρησιμοποιώντας το νερό και ένα εμπορικά διαθέσιμο αθλητικό ποτό ως παράγοντες υπερενυδάτωσης (20 mL/kg σωματικού βάρους). Τα δείγματα ούρων συλλέχθηκαν και αναλύθηκαν σύμφωνα με τα τεχνικά έγγραφα του Παγκόσμιου Οργανισμού Αντι-Nτόπινγκ. Παρόλο που παρατηρήθηκαν σημαντικές διαφορές στις συγκεντρώσεις των ενδογενών στεροειδών κάτω από τις συνθήκες υπερενυδάτωσης που μελετήθηκαν, η μέθοδος διόρθωσης της συγκέντρωσης με βάση την τιμή ειδικού βάρους 1.020 μπορεί να εξαλείψει την επίδραση που προκαλείται από την υπερενυδάτωση. Οι μέθοδοι διόρθωσης της συγκέντρωσης με βάση την κρεατινίνη και την ταχύτητα ροής ούρων εξετάστηκαν επίσης, ωστόσο, η διόρθωση με βάση το ειδικό βάρος ήταν η βέλτιστη μέθοδος από άποψη αποτελεσματικότητας και πρακτικότητας. Δεν παρατηρήθηκε σημαντική επίδραση στους λόγους των στεροειδών με την παρατηρούμενη μεταβλητότητα να μην υπερβαίνει το 30% του μέσου όρου για την πλειονότητα των δεδομένων. Επιπλέον, δεν παρατηρήθηκε μείωση της ικανότητας ανίχνευσης των ενδογενών στεροειδών λόγω υπερενυδάτωσης. Μπορεί να εξαχθεί το συμπέρασμα ότι οποιαδήποτε απόκλιση στις συγκεντρώσεις ενδογενών στεροειδών εξαιτίας της υπερβολικής πρόσληψης υγρών μπορεί να αντισταθμιστεί από την διόρθωση με βάση το ειδικό βάρος και κατά συνέπεια η υπερενυδάτωση δεν είναι αποτελεσματική ως μέθοδος κάλυψης του ντόπινγκ.Κεφάλαιο 5: Επίδραση της υπερενυδάτωσης στις συγκεντρώσεις ωχρινοποιητικής ορμόνης στα ούρα στην ανάλυση ελέγχου ντόπινγκΟι χαμηλές τιμές της ωχρινοτρόπου ορμόνης έχουν συζητηθεί ως δείκτης για την ανίχνευση της κατάχρησης στεροειδών. Ωστόσο, οι μειωμένες συγκεντρώσεις της ωχρινοτρόπου ορμόνης που σχετίζονται με πολύ αραιωμένα δείγματα ούρων θα μπορούσαν να είναι μια παραπλανητική ένδειξη κατάχρησης αναβολικών στεροειδών. Ένας από τους στόχους της παρούσας μελέτης ήταν η εξέταση της επίδρασης της υπερενυδάτωσης στην ερμηνεία των μετρούμενων επιπέδων της ωχρινοτρόπου ορμόνης κατά τη διάρκεια της ανάλυσης ελέγχου ντόπινγκ και η διερεύνηση διαφορετικών δυνατοτήτων για τη διόρθωση των μεταβολών στις συγκεντρώσεις της ορμόνης που σχετίζονται με τον όγκο. Οι επτά υγιείς καλής φυσικής κατάστασης εθελοντές εξετάστηκαν για μια περίοδο 72 ωρών χρησιμοποιώντας το νερό και ένα εμπορικά διαθέσιμο αθλητικό ποτό ως παράγοντες υπερενυδάτωσης (20 mL/kg σωματικού βάρους). Τα δείγματα ούρων συλλέχθηκαν και αναλύθηκαν σύμφωνα με τα τεχνικά έγγραφα του Παγκόσμιου Οργανισμού Αντι-Nτόπινγκ. Οι αρχικές συγκεντρώσεις της ομρόνης στα ούρα για κάθε άτομο ήταν εντός του αποδεκτού φυσιολογικού εύρους τιμών (7,11 ± 5,42 IU/L). Η σύγκριση των μετρούμενων τιμών και για τις δύο φάσεις της υπερενυδάτωσης (Φάση Α: 4,24 ± 5,60 IU/L, Φάση Β: 4,74 ± 4,72 IU/L) με τις τιμές αναφοράς («κανονικές») έδειξε σημαντικές διαφορές (Φάση Α: Ρ < 0,001, Φάση Β: Ρ < 0,001), γεγονός που υποδηλώνει την καθαρή επίδραση της αραίωσης ούρων λόγω υπερενυδάτωσης. Ωστόσο, η διόρθωση των συγκεντρώσεων της ορμόνης των ούρων με βάση το ειδικό βάρος και την τιμή αναφοράς 1.020 φαίνεται να διορθώνει επαρκώς την επαγόμενη από υπερενυδάτωση μείωση των επιπεδων της ορμόνης.«Μέρος Γ: Η επίδραση της υπερενυδάτωσης των αθλητών στην ικανότητα ανίχνευσης και το φαρμακοκινητικό προφίλ στα ούρα και στο αίμα εξωγενώς χορηγούμενων απαγορευμένων ουσιών στην ανάλυση ελέγχου ντόπινγκ» αποτελείται από δύο κεφάλαια που περιγράφουν την επίδραση της υπερενυδάτωσης στα προφίλ συγκέντρωσης-χρόνου της Epoetin beta (Κεφάλαιο 6) και BDS (Κεφάλαιο 7) μετά από υποδόρια και δια του στόματος χορήγηση, αντίστοιχα:Κεφάλαιο 6: Επίδραση της υπερενυδάτωσης στην ικανόττηα ανίχνευσης και στις φαρμακοκινητικές παραμέτρους της ανασυνδυασμένης ανθρώπινης ερυθροποιητίνης στην ανάλυση ελέγχου ντόπινγκ σε ούρα και ορό αίματος Σκοπός της παρούσας μελέτης ήταν να εκτιμηθεί η επίδραση της υπερενυδάτωσης στην ικανότητα ανίχνευσης της rHuEPO με ανάλυση «Sodium N-Lauroylsarcosinate ('Sarcosyl') ηλεκτροφόρηση πολυακρυλαμιδίου» (SAR-PAGE). Εξετάστηκε επίσης η επίδραση της υπερενυδάτωσης στο φαρμακοκινητικό προφίλ της rHuEPO στο αίμα και στα ούρα. Οι επτά υγιείς καλής φυσικής κατάστασης εθελοντές συμμετείχαν σε μια κλινική μελέτη 31 ημερών που περιελάμβανε μια βασική φάση (ημέρες 0, 1-3, 8-10) και μια φάση φαρμάκου (ημέρες 15-17, 22-24, 29-31). Η Epoetin beta χορηγήθηκε υποδορίως σε δόση 3000 IU στις ημέρες 15, 22 και 29. Η υπερενυδάτωση εφαρμόστηκε το πρωί σε τρεις διαδοχικές ημέρες (ημέρες 1-3, 8-10, 22-24, 29-31), δηλαδή, 0, 24 και 48 ώρες μετά την πρώτη πρόσληψη υγρού. Το νερό και ένα εμπορικά διαθέσιμο αθλητικό ποτό χρησιμοποιήθηκαν ως παράγοντες υπερενυδάτωσης (20 mL/kg σωματικού βάρους). Τα προφίλ συγκέντρωσης-χρόνου στο αίμα και τα ούρα περιεγράφηκαν καλύτερα από το μονοδιαμερισματικό μοντέλο με πρωτοταξική κινητική απορρόφησης. Τα αποτελέσματα δεν παρουσίασαν στατιστικά σημαντική διαφορά (Ρ > 0,05, 95% CI) στις συγκεντρώσεις της ερυθροποιητίνης σε ορό ή ούρα υπό συνθήκες υπερυδάτωσης. Δεν παρατηρήθηκαν επίσης σημαντικές διαφορές (P > 0,05, 95% CI) λόγω υπερενυδάτωσης για οποιαδήποτε από τις φαρμακοκινητικές παραμέτρους στον ορό. Η νεφρική απέκκριση της ενδογενούς ερυθροποιητίνης και της rHuEPO, όπως αντανακλάται στην αθροιστική ποσότητα ούρων, αυξήθηκε περίπου δύο φορές μετά την υπερενυδάτωση και αυτό συμφωνεί τη μη σημαντική διαφορά στις συγκεντρώσεις ούρων. Η ανάλυση των δειγμάτων ορού και ούρων ήταν ικανή να ανιχνεύσει την rHuEPO έως και 72 ώρες μετά τη χορήγηση του φαρμάκου. Το εύρος συγκεντρώσεων και το όριο ανίχνευσης της rHuEPO παρέμεινε ανεπηρέαστο μετά από την υπερενυδάτωση με νερό ή αθλητικό ποτό. Η υπερενυδάτωση δεν είχε καμία επίδραση στην ικανότητα ανίχνευσης της ΕΡΟ είτε σε δείγματα ορού είτε ούρων.Κεφάλαιο 7: Επίδραση της υπερενυδάτωσης στην ικανότητα ανίχνευσης και στις φαρμακοκινητικές παραμέτρους του BDS και των μεταβολιτών του στην ανάλυση ελέγχου ντόπινγκ σε ούρα και πλάσμαΣτόχος της παρούσας μελέτης ήταν να διερευνηθεί εάν η υπερενυδάτωση θα μπορούσε να επηρεάσει την απέκκριση και την επακόλουθη ανίχνευση του BDS και των κύριων μεταβολιτών του (6β-hydroxy-budesonide και 16α-hydroxy-prednisolone) κατά την ανάλυση ελέγχου ντόπινγκ οδηγώντας σε συγκεντρώσεις κάτω από το επίπεδο αναφοράς του Παγκόσμιου Οργανισμού Αντι-Nτόπινγκ (30 ng/mL). Εξετάστηκε επίσης, η επίδραση της υπερενυδάτωσης στο φαρμακοκινητικό προφίλ σε πλάσμα και ούρα του BDS και των μεταβολιτών του. Οι επτά υγιείς εθελοντές συμμετείχαν σε 15-ημερη κλινική μελέτη. Το BDS χορηγήθηκε δια του στόματος σε δόση των 9 mg στις ημέρες 1, 7 και 13. Η υπερενυδάτωση εφαρμόστηκε το πρωί σε δύο διαδοχικές ημέρες, δηλ., 0 και 24 ώρες μετά την πρώτη πρόσληψη υγρού. Το νερό και ένα εμπορικά διαθέσιμο αθλητικό ποτό χρησιμοποιήθηκαν ως παράγοντες υπερενυδάτωσης (20 mL/kg σωματικού βάρους). Τα αποτελέσματα δεν εμφάνισαν στατιστικά σημαντική διαφορά (Ρ > 0,05, 95% CI) στις φαρμακοκινητικές παραμέτρους τόσο στο πλάσμα όσο και στα ούρα υπό τις συνθήκες υπερενυδάτωσης για όλες τις εξεταζόμενες ουσίες. Ωστόσο, παρατηρήθηκαν σημαντικές διαφορές (P < 0,05, 95% CI) λόγω υπερενυδάτωσης στις συγκεντρώσεις του BDS και των μεταβολιτών του στα ούρα. Για να αντισταθμιστεί η επίδραση αραίωσης που οφείλεται στην υπερενυδάτωση, εφαρμόστηκαν διάφορες μέθοδοι διόρθωσης της συγκέντρωσης με βάση το ειδικό βάρος, την ταχύτητα ροής ούρων και την κρεατινίνη. Όλες οι εφαρμοζόμενες μέθοδοι ήταν σε θέση να διορθώσουν τις τιμές συγκέντρωσης πλησίον των φυσιολογικών τιμών (χωρίς υπερενυδάτωση) για κάθε αναλυόμενη ουσία, ωστόσο, η μέθοδος του ειδικού βάρους ήταν η βέλτιστη μέθοδος όσον αφορά την αποτελεσματικότητα και την πρακτικότητα. Επιπλέον, δεν παρατηρήθηκε κάλυψη της ικανότητας ανίχνευσης του BDS και των μεταβολιτών του λόγω της υπερενυδάτωσης τόσο στα δείγματα πλάσματος όσο και των ούρων.Συμπερασματικά, η παρούσα μελέτη αποκάλυψε μια ξεκάθαρη επίδραση της υπερενυδάτωσης στα προφίλ ενδογενών ουσιών υπό τις εφαρμοζόμενες πειραματικές συνθήκες. Ωστόσο, η διόρθωση της συγκέντρωσης σύμφωνα με την επίσημη μέθοδο του ειδικού βάρους όπως αυτή εφαρμόζεται από τον Παγκόσμιο Οργανισμό Αντι-Nτόπινγκ αποδείχθηκε ότι αντισταθμίζει επαρκώς την επίδραση της υπερενυδάτωσης, ενώ η αραίωση των δειγμάτων δεν επηρέασε την ικανότητα ανίχνευσης των εφαρμοζόμενων αναλυτικών μεθόδων. Με βάση τα αποτελέσματα της παρούσας μελέτης, μπορεί να είναι χρήσιμη η διόρθωση των συγκεντρώσεων των ούρων με τη μέθοδο του ειδικού βάρους ανεξάρτητα από την τιμή ειδικού βάρους του κάθε δείγματος ούρων. Δεν παρατηρήθηκε καμία επίδραση υπερενυδάτωσης ούτε στα προφίλ συγκέντρωσης-χρόνου ούτε στην αξιοπιστία και την ικανότητα ανίχνευσης της ανάλυσης της rHuEPO. Αντίθετα, οι συγκεντρώσεις του BDS και των μεταβολιτών του (6OH-BDS και 16OH-PREDN) στα ούρα επηρεάστηκαν λόγω της υπερενυδάτωσης, με αποτέλεσμα αυξημένο ποσοστό δειγμάτων κάτω από το επίπεδο αναφοράς (MRPL) των 30 ng/mL. Παρ 'όλα αυτά, η επίσημη μέθοδος διόρθωσης της συγκέντρωσης με βάση το ειδικό βάρος του Παγκόσμιου Οργανισμού Αντι-Nτόπινγκ ήταν σε θέση να αντισταθμίσει την επίδραση της αραίωσης ρυθμίζοντας τις τιμές συγκεντρώσεων κοντά στις φυσιολογικές τιμές (χωρίς υπερενυδάτωση) και, κατά συνέπεια, μειώνοντας το ποσοστό των δειγμάτων κάτω από το MRPL.Παρά το μικρό αριθμό εθελοντών, τα αποτελέσματα της μελέτης είναι αρκετά σαφή και ελπιδοφόρα όσον αφορά την επίδραση της υπερενυδάτωσης στα προφίλ ενδογενών ουσιών, καθώς και στα προφίλ ορού / πλάσματος και ούρων εξωγενώς χορηγούμενων απαγορευμένων ουσιών ντόπινγκ σύμφωνα με τους κανονισμούς του Παγκόσμιου Οργανισμού Αντι-Nτόπινγκ. Ωστόσο, για να διευρυνθούν τα αποτελέσματα της παρούσας μελέτης και για να εκτιμηθεί περαιτέρω η δυνατότητα εφαρμογής τους στον έλεγχο ντόπινγκ, θα ήταν ενδιαφέρουσα η χορήγηση πολλαπλών δόσεων απαγορευμένων ουσιών, καθώς και η εφαρμογή διαφορετικών σεναρίων υπερενυδάτωσης (π.χ. δύο φορές την ημέρα).