Нейтрофильные экстраклеточные ловушки при воспалительных заболеваниях брюшной полости
Authors: Казимирский А.Н. , Салмаси Ж.М. , Порядин Г.В. , Панина М.И. , Рогожина Л.С. , Ступин В.А. , Ким А.Э. , Титова Е.Г. , Турищева О.О. , Хамнагдаева Н.В. 
Published: October 2024

Развитие инфекционных осложнений у больных с воспалительными заболеваниями определяется тем, насколько эффективную защитную реакцию нейтрофилы больного будут развивать при контакте с патогеном. Противоинфекционная устойчивость организма во многом определяется готовностью нейтрофилов формировать нейтрофильные сети, способные эффективно захватывать патогены. Цель исследования. Определение параметров нейтрофильных экстраклеточных ловушек (НЭЛ) у больных с воспалительными заболеваниями брюшной полости. Методика. Обследованы 28 прооперированных больных с различными формами абдоминального воспаления и 6 терапевтических больных с язвенным колитом, 6 пациентов обследованы при поступлении. Нейтрофилы выделяли, используя градиентное центрифугирование. Для подсчета НЭЛ использовали флюоресцентную микроскопию с красителем SYBR Green (Evrogen; Россия), специфично взаимодействующего с двухцепочечной ДНК. Функциональную активность НЭЛ определяли в тесте с захватом Klebsiella pneumoniae (ATCC 700603). Результаты. При исследовании больных в послеоперационном периоде обнаружили, что при остром аппендиците/абсцессе, остром холецистите и остром панкреатите/панкреонекрозе обнаруживаются близкие количества НЭЛ – 12,63±2,13%, 15,66±2,81% и 12,64±2,73%. В этих же группах больных регистрируются достоверные различия в размерах НЭЛ, которые достигают 46,82±6,70 мкм, 73,62±16,29 мкм и 96,84±27,17 мкм, соответственно. Увеличение размеров НЭЛ в этих группах больных объясняется присутствием, помимо сетевидных структур, дополнительно еще и нитевидных, волокнистых и вуалеобразных нейтрофильных внеклеточных структур. Группа больных с неспецифическим язвенным колитом, получающих консервативное лечение (группа сравнения), демонстрирует тенденцию к уменьшению размеров НЭЛ – до величины 31,96±14,75 мкм. Исследование функциональной активности НЭЛ показывает, что её снижение предшествует развитию септического состояния (на примере выявленного клинического случая). Заключение. Все, без исключения, исследованные нозологические формы воспаления в брюшной полости сопровождаются формированием НЭЛ в виде нейтрофильных сетей. Помимо нейтрофильных сетей воспаление индуцирует у части больных формирование НЭЛ в виде одиночных нитей, волокон и вуалей. Количественные параметры НЭЛ коррелируют с размерами и распространением очага воспаления на соседние анатомические области. На примере описанного клинического случая обнаружено резкое ослабление функциональной активности НЭЛ, которое предшествовало развитию септического осложнения. Прослеживается связь между исходно ослабленной функциональной активностью НЭЛ и развитием септического осложнения у пациента в послеоперационном периоде.

The development of infectious complications in patients with inflammatory diseases is determined by how effective protective reaction the patient’s neutrophils will develop upon contact with the pathogen. The body’s anti-infective resistance is largely determined by the willingness of neutrophils to form neutrophilic networks capable of effectively capturing pathogens. Aim. Determination of parameters of neutrophil extracellular traps (NETs) in patients with inflammatory diseases of the abdominal cavity. Methods. 28 operated patients with various forms of abdominal inflammation and 6 therapeutic patients with ulcerative colitis were examined, 6 patients were examined upon admission. Neutrophils were isolated using gradient centrifugation. To calculate the NETs, fluorescence microscopy with the dye SYBR Green (Evrogen; Russia), which specifically interacts with double-stranded DNA, was used. The functional activity of NETs was determined in the Klebsiella pneumoniae capture test (ATCC 700603). Results. In the study of patients in the postoperative period, it was found that in acute appendicitis/abscess, acute cholecystitis and acute pancreatitis/pancreonecrosis, similar amounts of NETs are found – 12,63±2,13%, 15,66±2,81% and 12.64±2.73%. In the same groups of patients, significant differences in the size of the NETs are recorded, which reach 46.82±6.70 microns, 73.62±16.29 microns and 96.84±27.17 microns, respectively. The increase in the size of the NETs in these groups of patients is explained by the presence, in addition to network-like structures, additionally filamentous, fibrous and cloud-like neutrophil extracellular structures. A group of patients with nonspecific ulcerative colitis receiving conservative treatment (comparison group) shows a tendency to decrease the size of the NEL to a value of 31.96±14.75 microns. A study of the functional activity of NETs shows that its decrease precedes the development of a septic condition (using the example of an identified clinical case). Conclusion. All, without exception, the studied nosological forms of inflammation in the abdominal cavity are accompanied by the formation of NETs in the form of neutrophilic networks. In addition to neutrophilic networks, inflammation induces the formation of NETs in the form of single strands, fibers and clouds form in some patients. The quantitative parameters of the NETs correlate with the size and spread of the inflammatory focus to neighboring anatomical areas. On the example of the described clinical case, a sharp decrease in the functional activity of NETs was found, which preceded the development of a septic complication. There is a connection between the initially weakened functional activity of NETs and the development of septic complications in the patient in the postoperative period.