Απομόνωση καλλιέργεια και χαρακτηρισμός υποπληθυσμών μεσεγχυματικών βλαστικών κυττάρων από διάφορες πηγές από τον άνθρωπο και το ποντίκι
Authors: Κατσαρά Όλγα 
Published: September 2021

Κατά τη διάρκεια αυτής της εργασίας εστιάσαμε :Στον διεξοδικό χαρακτηρισμό των Μεσεγχυματικών Βλαστικών Κυττάρων (MSC) από το μυελό των οστών BALB/c ποντικών (mBM-MSC), λαμβάνοντας υπόψη τη σημασία του μοντέλου αυτού ανάμεσα στα ζωικά μοντέλα. Συγκεκριμένα, εξετάστηκε πως επηρεάζει το φύλο και η ηλικία του δότη τις βασικές ιδιότητες (πολλαπλασιασμό, διαφοροποίηση και ανοσοκατασταλτική δράση) των mBM-MSC. Παρατηρήθηκε, μείωση της συχνότητας των προγονικών κυττάρων στο BM με την ηλικία και χαμηλότερες συχνότητες MSC σε όλους τους θηλυκούς δότες ανεξαρτήτως ηλικίας. Η εκτενής καλλιέργεια τους, προκάλεσε αύξηση του ρυθμoύ διπλασιασμού, μείωση του μεγέθους και της πολυπλοκότητας των κυττάρων. Επιπλέον, τα mBM-MSC εξετάστηκαν για την έκφραση των τριών πιο σημαντικών μεταγραφικών παραγόντων των εμβρυϊκών βλαστικών κυττάρων (ESC): Oct3/4, Sox-2, και Nanog, καθώς και για την έκφραση δυο mRNA δεσμευτικών πρωτεϊνών της Crd-bp/Imp1 και της Dazl, οι οποίες εκφράζονται στα αιμοποιητικά προγονικά κύτταρα του ομφαλιοπλακουντικού αίματος (UCB-CD34+-HSC) και στα βλαστικά κύτταρα του αμνιακού υγρού, αντίστοιχα. Αναφέρουμε, για πρώτη φορά, την έκφραση της Crdbp/Imp1 και της Dazl στον mBM-MSC πληθυσμό. Η έκφραση του Dazl, Oct3/4, και Sox2 ανιχνεύθηκε σε σχετικά χαμηλά επίπεδα, σε αντίθεση με αυτήν των Crd-bp/Imp1, c-Μyc (τον πιο σημαντικό στόχο της Crd-bp/Imp1) και Nanog, που εκφράζονταν σε υψηλά επίπεδα, ανεξάρτητα από το φύλο και την ηλικία του δότη, ή την in vitro καλλιέργεια.Στον προσδιορισμό της επίδρασης της ενδοφλέβιας χορήγησης νεαρών mBM-MSC σε ηλικιωμένα ποντίκια για την καταπράυνση του φαινοτύπου της γήρανσης μιας και. μελέτες των τελευταίων χρόνων έχουν συνδέσει την γήρανση με την εξάντληση της αποθήκης των βλαστοκυττάρων. Εδώ δείχνουμε για πρώτη φορά την θετική έκβαση αυτής της χορήγησης, πιθανά μέσω παρακρινούς δράσης: α) στον οργανισμό σαν σύνολο (πρόληψη μυοσκελετικού εκφυλισμού, δερματικής ατροφίας, μείωση φλεγμονώδους απόκρισης κλπ.) και β) στον ίδιο τον mBM-MSC πληθυσμό.Συνεπώς, το πιλοτικό αυτό προκλινικό μοντέλο καθώς και τα δεδομένα από το πρώτο μέρος της μελέτης ενισχύουν την αντίληψη ότι τα βλαστοκύτταρα έχουν την ικανότητα να πολλαπλασιάζονται επ 'αόριστον εάν παρέχονται τα απαραίτητα σήματα. Στην έκφραση του CRD-BP/IMP1 στους διαφορετικούς πληθυσμούς MSC ανθρώπινης προέλευσης, συγκεκριμένα BM-MSC, ΑΤ-MSC (λιπώδους ιστού) και UC-MSC (ομφάλιου λώρου). Εδώ δείχνουμε για πρώτη φορά ότι αυτά τα MSC έχουν ένα μοτίβο διαφορικής έκφρασης του CRD-BP/IMP-1 που μπορεί να συσχετιστεί με τον ρυθμό πολλαπλασιασμού τους. Τα UC-MSC που έχουν υψηλότερο ρυθμό πολλαπλασιασμού εκφράζουν επίσης CRD-BP/IMP1 σε υψηλότερα επίπεδα. Μετά από πειράματα επιλεκτικής παρεμπόδισης της έκφρασης του CRD-BP/IMP1 παρατηρήθηκε σημαντική μείωση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων και της in vitro αυτοανανέωσης τους. Επιπλέον επιβεβαιώνεται πως η έκφραση της CRD-BP/IMP1 βρίσκεται υπό επιγενετικό έλεγχο και μέλη της οικογένειας των ΤΕΤ απομεθυλασών εμπλέκονται στην ρύθμιση της στα ανθρώπινα MSC. Ειδικότερα το TET1, TET2, CRD-BP/IMP1 μαζί με το c-Μyc αποτελούν αναπόσπαστα κομμάτια ενός πολύπλοκου δικτύου που συμμετέχουν στη ρύθμιση του πολλαπλασιασμού των MSC.