Features of Implementing Alpha-Fetoprotein Immunochemical Assay Techniques for Achieving Diagnostically Significant Results of Its Quantification
Authors: Рогачева Т.А. , Грибок И.А. , Баюр Н.Г. , Анисько Л.А. 
Published: May 2024

Введение. Альфа-фетопротеин (АФП) – гликопротеин, который впервые был идентифицирован в сыворотке крови плода человека в 1956 г. и описан как онкофетальный антиген в 1964 г. Количественная оценка содержания АФП нашла широкое применение в онкологии и пренатальной диагностике. Определение концентрации АФП в динамике при онкопатологии имеет прогностическое значение для оценки эффективности проводимой терапии, риска рецидива опухолевого процесса, выживаемости пациентов. Отмечено, что повышение уровня АФП при заболеваниях печени доброкачественного характера чаще носит временный характер, в связи с чем ряд исследователей не рекомендуют использовать этот тест в качестве скринингового при онкопоиске. Однако в руководствах, изданных в странах Запада и Азии, не рекомендовано использовать тест определения АФП для диагностики гепатоцеллюлярной карциномы (ГЦК) из-за его низкой диагностической чувствительности и диагностической специфичности, а его оптимальный диагностический порог для ГЦК к настоящему времени все еще остается спорным. Методом определения концентрации АФП является иммунохимический в различных его модификациях: иммуноферментный (ИФА), хемилюминесцентный, фермент-связанный флуоресцентный и другие. Цель. Определить наиболее подходящую модификацию иммунохимического метода исследования для количественного определения АФП и оценить значимость данного лабораторного теста в скрининге ГЦК у пациентов с хроническим вирусным гепатитом. Материалы и методы. В исследование включены 3048 пациентов с хроническим вирусным гепатитом, состоявших на амбулаторном учете консультативно-диагностического кабинета по вирусным гепатитам УЗ «Городская клиническая инфекционная больница» г. Минска. Для количественной оценки АФП использовались следующие модификации иммунохимического анализа: иммуноферментный и иммунохемилюминесцентный анализ. Результаты. Среди обследуемой группы пациентов методом ИФА был получен положительный результат (содержание АФП выше 15 МЕ/мл) в 15,2% образцов. Повторно взятые образцы крови у пациентов с высоким содержанием АФП (более 200–400 МЕ/мл и выше) исследовались в другой модификации иммунохимического анализа (иммунохемилюминесценция), и полученные результаты не совпадали с результатами ИФА, то есть не подтверждались, а уровни АФП, полученные в результате использования иммунохемилюминесценции, в большинстве случаев входили в референтные значения. При проведении одномоментного тестирования сывороток крови пациентов двумя различными модификациями иммунохимического анализа совпадение положительного результата исследования АФП наблюдалось лишь в 9,3% случаев, то есть более 90% повышенных уровней АФП при использовании ИФА не подтверждались в ИХЛ. Результаты исследования позволяют допустить возможность получения ложноположительных данных (неспецифичное реагирование) при использовании технологии иммуноферментного анализа (ИФА). Заключение. Для повышения качества результатов лабораторного исследования АФП необходимо придерживаться комплексного подхода к выбору метода исследования с учетом аналитических характеристик, реагентов производителей, ограничений в использовании метода, интерференции, а также когорты пациентов, подлежащих данному тестированию. В случае отсутствия возможности исключения ИФА как самого распространенного «бюджетного» метода из лабораторной практики определения АФП и (по всей вероятности) других онкомаркеров считаем целесообразным и даже необходимым использование иммунохемилюминесцентного метода исследования – как подтверждающего.

Introduction. Alpha-fetoprotein (AFP) is a glycoprotein that was first identified in human fetal serum in 1956, and described as an oncophetal antigen in 1964. Quantification of AFP level has found wide application in oncology and prenatal diagnostics. Determination of AFP concentration in dynamics in oncopathology has prognostic value for evaluating the effectiveness of therapy, the risk of recurrence of the tumor process, and patient survival. It was noted that the increase in in the level of this cancer marker in benign liver diseases was mostly temporary; therefore, a number of researchers did not recommend using this test as a screening test in oncology screening. However, current Western and Asian guidelines do not recommend using AFP assay for diagnosing hepatocellular carcinoma (HCC) because of its low diagnostic sensitivity and specificity, and its optimal diagnostic threshold for HCC remains controversial. The method for determining AFP concentration is immunochemical assay in its various modifications: enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), chemiluminescent immunoassay, enzyme-linked fluorescent assay and others. Purpose. To determine the most appropriate modification of the immunochemical assay tecnique for AFP quantification and to evaluate the significance of this laboratory test in HCC screening in patients with chronic viral hepatitis. Materials and methods. The study included 3048 patients with chronic viral hepatitis, who were under outpatient observation at the consultative and diagnostic office for viral hepatitis of the Minsk City Clinical Infectious Diseases Hospital. The following modifications of immunochemical assay were used for AFP quantification: enzyme immunoassay and chemiluminescent immunoassay. Results. Among the examined group of patients, a positive result (AFP level above 15 IU/ mL) was obtained in 15.2% of samples by ELISA method. Repeated blood samples taken from patients with high AFP levels (more than 200–400 IU/mL and higher) were tested using another immunochemical assay modification (Chemiluminescent immunoassay), and the results obtained did not comply with ELISA results, i.e. they were not confirmed, and AFP levels obtained by chemiluminescent immunoassay were in most cases within reference values. When conducting simultaneous testing of patients’ blood sera by two different immunochemical assay modifications, the coincidence of positive AFP results was observed only in 9.3% of cases, i.e. more than 90% of elevated AFP levels obtained using ELISA were not confirmed in chemiluminescent immunoassay (CLIA). The results of the study allow assuming a possibility of false-positive results (non-specific response) when using ELISA technique. Conclusion. To improve the quality of AFP laboratory test results, a comprehensive approach to test method selection should be implemented, taking into account analytical characteristics, manufacturers’ reagents, limitations in method use, interferences, as well as patients’ cohort to be tested. In case when there is no possibility to exclude ELISA as the most common low-cost method from the laboratory practice of AFP and (apparently) other cancer markers assays, we consider as appropriate and even indispensable the use of chemiluminescent immunoassay as a confirmatory one.