Rol de la tirosina quinasa Abl1 en la activación de linfocitos B en respuesta al reconocimiento de antígenos
Authors:   , Valls Jiménez Cristián 
Published: October 2023

Los linfocitos B son un componente esencial del sistema inmunológico, los cuales reconocen antígenos de manera específica a través de receptores de membrana denominados BCR. Este reconocimiento desencadena procesos que culminan con la endocitosis del antígeno para posteriormente procesarlo y presentarlo a linfocitos T CD4+ . La interfaz entre linfocitos B y células presentadoras de antígenos que permite el reconocimiento y la endocitosis de antígenos es llamada sinapsis inmunológica (SI), y su formación y maduración son fundamentales para la activación del linfocito B. La conformación de la SI es orquestada mediante la reorganización del citoesqueleto, lo que permite la amplificación de la señalización del BCR y coordina procesos rio abajo del receptor. El reclutamiento lisosomal a la SI es uno de estos procesos y facilita la extracción e internalización de antígenos. Si bien se han identificado ciertos componentes de la vía de señalización del BCR, al igual que ciertos efectores del remodelamiento del citoesqueleto y otros procesos biológicos, la caracterización de intermediarios entre el receptor BCR y la activación de esos efectores, aún permanece sin ser identificada. Este trabajo aborda el rol de la tirosina quinasa Abl1 en la regulación de los procesos necesarios para procesar y presentar antígenos en respuesta a la activación del receptor BCR. Esto en base a antecedentes que han vinculado a Abl1 con funciones citoplasmáticas relacionadas a la adhesión, spreading y motilidad celular como también a la regulación de la localización y motilidad lisosomal; todos procesos necesarios para la activación de linfocitos B. Si bien se ha determinado que animales deficientes de Abl1 presentan alteraciones en la maduración de linfocitos B, su rol en linfocitos maduros permanece desconocido. A pesar de esto, se ha observado que la actividad quinasa de Abl1 aumenta en respuesta a la inducción del receptor BCR y que su deficiencia altera la endocitosis del BCR. Asimismo, de un punto de vista funcional se ha vinculado a Abl1 con el desarrollo y maduración del sistema inmunológico, pero su rol en linfocitos B maduros, no ha sido clarificado. Es por esto que primero se caracterizó la activación de Abl1 rio abajo del receptor BCR, luego se estudió si la regulación de Abl1 impacta procesos asociados a la activación de linfocitos B para finalmente analizar la activación de linfocitos B en un contexto donde previamente se ha descrito una actividad aberrante de Abl1. La activación de Abl1 en respuesta al reconocimiento de antígenos fue evaluada a través de modelos in vitro realizando incubación con anti-F(ab)2. Estos resultados confirmaron que Abl1 es activada en respuesta al cross-linking del receptor BCR. Además, revelaron que los niveles de ARN mensajero de Abl1 disminuyen significativamente a los 120 minutos post activación de linfocitos B. Luego, utilizando purificaciones de fracciones subcelulares y análisis por microscopia de fluorescencia, revelaron que Abl1 se encuentra principalmente en el compartimento citoplasmático, y que la activación de linfocitos B induce el reclutamiento de Abl1 hacia la sinapsis inmune. Estos resultados son fundamentales considerando que las funciones de Abl1 están altamente asociadas a su localización celular. Posteriormente, mediante el uso de un inhibidor y un activador farmacológico de Abl1 se evaluó el rol de esta quinasa en la activación de linfocitos B. Estos resultados indicaron que la extracción de antígenos, el spreading celular, y la polarización lisosomal y del centrosoma se ven alterados por el uso de moduladores farmacológicos de Abl1, sugiriendo un vínculo funcional de Abl1 y la activación de linfocitos B. Para confirmar estos resultados, se prosiguió evaluando en sistemas in vitro e ex vivo, si la modulación de Abl1 altera la capacidad de linfocitos B para presentar antígenos. Interesantemente estos resultados indicaron que Imatinib disminuye la capacidad de presentar antígenos ex vivo e in vitro, pero DPH tiene un efecto observable solo en condiciones in vivo. Estos resultados son relevantes dado que la capacidad de procesar y presentar antígenos se relaciona directamente con la activación de linfocitos B y su posterior transformación en células productoras de anticuerpos de alta afinidad; sugiriendo que la modulación de Abl1 inhibe la activación de estas células. Finalmente se estudió la biología de linfocitos B en una enfermedad denominada NiemannPick tipo C (NPC), la cual es clasificada como una enfermedad de depósito lisosomal. Pacientes y modelos NPC no presentan un fenotipo evidente de alteración en el sistema inmunológico adaptativo, sin embargo, se ha descrito que los linfocitos B periféricos presentan acumulación de lípidos en endosomas tardíos/lisosomas homologando lo que ocurre en el sistema nervioso central. Utilizando linfocitos B derivados de bazos de animales deficientes de NPC, se evaluó la capacidad de presentar antígenos en donde se evidencio que células NPC -/- presentan una disminución en la capacidad de presentar antígenos, avalando el estudio de la activación de linfocitos B en este contexto. Dado que no se registran trabajos evaluando la biología de linfocitos B en modelos NPC, proseguimos con la caracterización de un modelo farmacológico de acumulación de lípido en estas células, para esto se utilizó el fármaco U18666A Este trabajo presenta evidencia de la dependencia de Abl1 en el procesamiento y presentación de antígenos en respuesta a su reconocimiento a través del BCR. Además, sugiere que los moduladores farmacológicos de Abl1 presentan actividad inmuoreguladora a través de la actividad de linfocitos B y no linfocitos T, lo cual no había sido descrito hasta el momento. Por último, esta tesis demuestra que modelos de la enfermedad de Niemann-pick tipo C poseen alteraciones en la activación de linfocitos B, y que el uso de la droga U186666A es un buen modelo farmacológico para continuar y profundizar su estudio.