Differenzierung von Brucella‐Stämmen, die aus serologisch positiv reagierenden Schlachtrindern gezüchtet wurden*
Authors: Lerche M. , Entel H. J. 
Published: September 2010

Bei den einzelnen Brucella‐Bakterientypen bestehen die verschiedenartigsten Möglichkeiten einer Infektion unter den Tierarten und den Menschen. Infolge der allgemeinen Ausbreitung der drei Erregerarten — auch in Deutsch‐land — ist daher für die Erforschung der Brucellose neben einer Isolierung auch die Typenbestimmung des Erregers unumgänglich geworden. In der vorliegenden Arbeit werden die von dem Fachausschuß der WHO/FAO empfohlenen biochemischen bakteriostatischen und serologischen Differenzierungsverfahren für eine Typenbestimmung von Brucella‐Bakterien besprochen.

Aus Euter, Milch, Milz, Leber, Darmbein‐ und Buglymphknoten sowie aus Blut und verschiedenen Muskelproben von 41 serologisch positiven Schlacht‐rindern gelang uns der Erregernachweis in 96 Fällen. Alle isolierten Brucella‐Stämme lagen in der S‐smooth‐Form vor.

Ihre Differenzierung mit Hilfe des Wachstumsnachweises in einer 10 %igen CO2 Atmosphäre, die Fähigkeit, H2S zu bilden und Harnstoff zu spalten sowie die Prüfung auf ihre Farbstoffresistenz (Verfahren nach Hudd‐leson und nach Bendtsen), Verhalten auf Petragnaninährböden mit und ohne Malachitgrünzusatz und auch der serologische Nachweis mit monospezifischen Antiseren ergaben bei den aus Geweben und Organen von 39 Kühen gezüchteten Kulturen in allen Fällen das Vorliegen von Brucella abortus. Die aus den Proben von zwei Kühen gezüchteten Brucella‐Kulturen erwiesen sich als Brucella suis (Traum).

Der Nachweis von Brucella suis bei Schlachtrindern (in 5 % der Fälle) bestätigt erneut, daß ein Übergreifen eines Erregertypes auf Tierarten, die für die Brucellenart nicht „spezifisch” sind, vorkommt.

Wegen der hohen Pathogenität des Suis‐Types sind Schweine besonders stark gefährdet, zumal sie reichlich Gelegenheit haben, den Erreger mit Kuhmilch sowie durch das Fressen von Nachgeburtsteilen und Wühlen im Kuhmist aufzunehmen. Eine Infektion kann dann leicht zu einer seuchenhaften Ausbreitung in Schweinebeständen führen.

In fleischhygienischer Hinsicht ist eine unterschiedliche Beurteilung und Behandlung der verschiedenen Tierarten auf Grund der bei den einzelnen Tieren am häufigsten vertretenen Brucella‐Arten nicht mehr angebracht.

Bei der Typenbestimmung verhielten sich die isolierten Brucellen — im Vergleich zu bekannten Kontrollstämmen — im allgemeinen ihrer Art entsprechend. Einzelne Brucella abortus‐Kulturen zeigten geringgradige Abweichungen bei der Prüfung ihres Verhaltens auf der Thioninfarbstoffplatte (Huddleson'sches Verfahren), in der H2S‐Bildung und der Harnstoffspaltung.

Durch die Anwendung mehrerer Differenzierungsverfahren kann eine Typeneinteilung der Brucellose‐Erreger auch dann vorgenommen werden, wenn einzelne Stämme in dem einen oder anderen Bestimmungstest vom Schema abweichen.

The differentiation of Brucella strains isolated from serologically positive slaughter cattle

In the different Brucella types there exist a variety of possibilities of infection among animals and man. Because of the general distribution of the three species — also in Germany — it is necessary in studying brucellosis not only to isolate the organism but also to type it. In this article the recommendations of the specialist group of WHO/FAO for biochemical, bacteriostatic and serological differentiation of the Brucella are discussed.

From the udder, milk, spleen, liver, precrural and popliteal lymph nodes as well as blood and various muscle samples from 41 serologically positive slaughter cattle we succeeded on 96 occasions in demonstrating the organism. All the Brucella strains isolated were in the S‐form.

Their differentiation with the aid of culture in 10 % CO2 the ability to produce H2S and to split urea as well as demonstration of their resistance to dyes (methods of Huddleson and Bendtsen), behaviour on Petragnani's medium with and without malachite green, and also serological demonstration with monospecific antisera, showed the presence of Br. abortus in all cases from the tissues and organs of cultures from 39 cows. Samples from the remaining 2 cows yielded cultures identified as Br. suis (Traum).

The demonstration of Br. suis in slaughter cattle (in 5 % of cases) confirms once again that an encroachment of a causal organism on animal species which are not “specific” for that Brucella species occurs.

Because of the high pathogenicity of the Br. suis type there is a particular danger to pigs, since they have abundant opportunity of picking up the organism in milk and eating portions of after‐birth and routing in cowdung. An infection could thus very easily take on epidemic proportions in a herd of pigs.

From the point of view of meat hygiene, there is no point in differentiating in the judgement of the different animal species merely on account of the most commonly occurring Brucella types in the individual animals.

By type determination, the Brucella isolated — in comparison to known control strains — behaved in general in the way typical of their species. Individual Br. abortus cultures showed slight variations in their behaviour on thionine plates (Huddleson's technique), in H2S production and in their ability to split urea.

By the use of several methods of differentiation it is possible to differentiate the organisms even although individual strains in one or other test show variation from the scheme laid down.

La différenciation des souches de brucellas isolées chez des vaches de boucherie réagissant positivement

A partir des mamelles, du lait, de la rate, du foie, des ganglions lymphatiques inguinaux et axillaires et de divers échantillons de musculature de 41 bovins de boucherie sérologiquement positifs on put mettre en évidence les bactéries dans 96 cas. Toutes les souches de brucellas se présentaient sous la forme S‐smooth.

La différenciation des germes fut effectuée par des essais de croissance dans une atmosphère contenant 10 % de CO2, le pouvoir de produire H2S et de décomposer l'urée, par l'étude de leur résistance aux colorants (selon les procédés de Huddleson et de Bendtsen), leur comportement sur milieu de Petragnani avec ou sans adjonction de vert malachite et les épreuves sérologiques à l'aide de sérums monovalents. Les souches isolées des organes de 39 vaches étaient dans tout les cas Brucella abortus. La culture des brucellas obtenus chez deux vaches s'avérèrent comme étant Br. suis (Traum). La mise en évidence de Br. suis chez des vaches de boucherie (5 % des cas) confirme une fois encore que le passage d'un type de brucella sur une espèce pour laquelle il n'est pas spécifique se produit effectivement. Par suite de la grande pathogénité du type suis les porcs sont particulièrement exposés, d'autant plus qu'ils ont amplement l'occasion d'absorber les germes avec le lait de vache ou en fouillant dans le fumier avec leur groin.

Du point de vue de l'hygiène des viandes, il n'y a plus aucune raison de traiter les différentes espèces animales selon le type spécifique de brucellas le plus fréquemment rencontré.

Diferenciación de las cepas Brucella cultivadas a partir de reses de matadero que dieron reacción serológica positiva

A partir de mamas, leche, bazo, hígado, ganglios linfáticos ilíacos y cervicales superficiales, así como diversas muestras musculares de 41 bóvidos serológicamente positivos, en 96 casos se consiguió identificar los agentes etiológicos. Todas las cepas Brucella aisladas se hallaban en forma lisa S.

Se diferenciación con ayuda de la comprobación de crecimiento en una atmósfera de un 10% de CO2, la capacidad de producir SH2 y desdoblar urea, así como el control de su resistencia frente a los colorantes (técnicas según Huddleson y según Bendtsen), el comportamiento en los medios nutritivos de Petragnani con o sin adición de verde de malaquita y también la identificación con antisueros monoespecíficos en los cultivos aislados de tejidos y órganos de 39 vacas, en todos los casos evidenciaron la presencia de Brucella abortus. Los cultivos de Brucella aislados de dos vacas se comprobaron como Brucella suis (Traum). La identificación de Brucella suis en bóvidos de abasto (en un 5% de los casos) confirma de nuevo que se dá la intrusión de un tipo de agente etiológico sobre especies animales que no son “específicas” para la especie brucelar. Debido a la elevada acción patógena del tipo suis, los cerdos peligran muy en especial, sobre todo al tener ocasiones suficientes de ingerir el agente etiolögico con la leche de vaca y hozando en el estiércol de vaca.

Desde el punto de vista de la higiene cárnica, ya no tienen actualidad el pronóstico y tratamiento de las diversas especies animales en relación con las especies Brucella representadas con mayor frecuencia en los distintos animales.