A synthetic leu-enkephalin analogue prevents the natural activation of neutrophils induced by serum of patients with severe polytrauma
Authors: А.Ю. Рыжков, , А.А. Баева, , А.В. Лобанов, , О.А. Гребенчиков, 
Published: January 2023

Актуальность. Полиорганная недостаточность - основная причина летальных исходов у пациентов с тяжёлой сочетанной травмой (ТСТ). В её патогенезе ведущую роль занимают такие процессы, как системная воспалительная реакция, окислительный дистресс и вызванная ими эндотелиальная дисфункция. Цель исследования: оценить влияние различных доз синтетического аналога лей-энкефалина даларгина на провоспалительную активацию и апоптоз нейтрофилов под влиянием сывороток пациентов с ТСТ. Материалы и методы: исследование проводилось на нейтрофилах, которые были выделены из крови здоровых доноров (7 человек) и активированы токсическими сыворотками пациентов (7 пациентов) с ТСТ. Активацию нейтрофилов изучали при помощи флуоресцентных антител к белковым молекулам CD11b и CD66b, апоптоз нейтрофилов оценивали спустя 22 часа, окраской аннексином V и йодистым пропидием. Даларгин добавляли к интактным и активированным нейтрофилам в концентрациях 1, 10, 50 и 100 мкг/мл. Результаты: Даларгин показал противовоспалительные свойства, дозозависимо снижал экспрессию белковых молекул CD11b и CD66b на поверхности нейтрофилов, активированных сыворотками пациентов с системной воспалительной реакцией (СВР), осложнившей течение ТСТ. Даларгин в дозах более 50 мкг/мл был способен предотвратить снижение уровня апоптоза нейтрофилов, который развивался под воздействием сывороток пациентов с СВР. Заключение: Результаты выполненного исследования показали хорошие перспективы для применения даларгина для лечения и профилактики органной дисфункции у пациентов с тяжёлой сочетанной травмой.

Relevance. Multiple organ failure is the major cause of late mortality in patients with severe polytrauma. The pathogenesis of multiple organ failure primarily involves systemic inflammatory response syndrome (SIRS), oxidative stress, and ensuing endothelial dysfunction. The aim of this study was to investigate the effect of a synthetic analogue of leu-enkephalin, Dalargin, at various doses on the pro-inflammatory activation and apoptosis of neutrophils induced in vitro by blood serum of patients with SIRS following severe polytrauma. Materials and methods. The experiments were performed on neutrophils obtained from seven healthy donors. Neutrophils were activated by adding serum samples from severe polytrauma patients with SIRS. The neutrophil status was evaluated using immunofluorescence microscopy with antibodies against CD11b and CD66b. The prevalence of neutrophil apoptosis was assessed at 22 hours after the derivation; cell viability was determined after annexin V and propidium iodide staining by fluorescence-based flow cytometry. Intact and activated neutrophils were treated with Dalargin 1, 10, 50, and 100 µg/ml. Results. Dalargin attenuated the degranulation and activation of neutrophils by suppressing the expression of CD11b and CD66b in the neutrophils pretreated with serum of patients with SIRS caused by severe polytrauma. This anti-inflammatory effect was dose-related. The Dalargin dose of >50 µg/ml was able to induce spontaneous apoptosis in neutrophils pre-treated with serum samples from patients with polytrauma-related SIRS. Conclusion. Our findings provide potential opportunities for using Dalargin for prophylaxis and treatment of SIRS in patient with severe polytrauma as well as for prevention of multiple organ dysfunction.