Zellvermittelte Zytotoxizität und Lymphozytenstimulierung bei Aujeszkyscher Krankheit
Authors: Wittmann G. , Leitzke Ilse , Höhn U. 
Published: August 2010

Das Ziel vorliegender Untersuchungen war es, Zusamrnenhänge zwischen dem klinischen Verlauf der Aujeszkyschen Krankheit beim Schwein und einigenin vitro‐Reaktionen der zellvermittelten Immunität, der Interferonbildung und der Antikörperbildung nachzuweisen. Als Parameter der zellvermittelten Immunität wurden die spontane zellvermittelte Zytotoxizität (SCC) gegen nicht‐infizierte Targetzellen, die zellvermittelte Zytotoxizität gegen Aujeszkyvirus (AV)‐infizierte Targetzellen (AV‐CC), die antikörperabhängige zellvermittelte Zytotoxizität gegen AV‐infizierte Targetzellen (AV‐ADCC) und die AV‐spezifische Lymphozytenstimulierung (AV‐LYST) geprüft.

Bereits vor der Infektion bestand bei 61,1 % der 18 Tiere SCC. Der Prozentsatz der positiven Reagenten stieg nach der AV‐Infektion an, besonders bei jenen Tieren, die mittelgradig oder schwach erkrankten. Allerdings war der Unterschied nicht signifikant. Während die Effektorzellen in der ersten Woche der Infektion der Tiere ihre zytotoxische Aktivität gegenüber nicht‐infizierten Targetzellen auch nach Infektion der Tiere beibehielten, wurde ihre zytotoxische Aktivität gegenüber AV‐infizierten Targetzellen reduziert. Dies traf in erster Linie für Effektorzellen zu, die von schwer und mittelgradig kranken Tieren stammten. AV‐CC trat 9 bis 11 Tage nach der Infektion auf und ging zwischen 14 und 21 Tagen stark zurück. AV‐ADCC konnte bei allen das akute Krankheitsstadium überlebenden Tieren nachgewiesen werden. Ihr Auftreten (9 bzw. 11 Tage p. inf.) war jedoch irn Vergleich zum Auftreten der neutralisierenden Antikörper (6 Tage p. inf.) verzögert. Dies ist damit zu erklären, daß in der ADCC nur IgG‐Antikörper erfaßt wurden, während der Neutralisationstest in Gegenwart von Komplement auch IgM‐Antikörper erfaßte. AV‐sensibilisierte Lymphozyten (AV‐LYST) wurden bei einigen Tieren 4 Tage p. inf. und bei allen Tieren nach 6 Tagen und später nachgewiesen. Erkennbare Zusammenhänge zwischen neutralisierenden Antikörpern, AV‐ADCC oder AV‐LYST und dem Krankheitsverlauf bestanden nicht. Dasselbe trifft hinsichtlich der Interferonbildung im Anfangsstadium der Infektion zu. Im weiteren Verlauf wies allerdings ein Teil der schwach erkrankten Tiere eine verlängerte Interferonbildung auf.

Es bleibt ungewiß, ob die Ergebnisse der verschiedenen Tests auf diein vivo‐Situation bei AV‐infizierten Schweinen angewandt werden können, da große individuelle Schwankungen bestanden und nur mit einer kleinen Tierzahl gearbeitet worden ist. Trotzdem geben die Ergebnisse gewisse Hinweise, daß zellvermittelte, antikörper‐unabhängige Zytotoxizitätsmechanismen (SCC und AV‐CC) im Frühstadium der AV‐Infektion als Abwehrmechanismen des Körpers eine Rolle spielen könnten, da neutralisierende Antikörper und AV‐ADCC erst dann auftreten, wenn die pathologischen Prozesse im Körper weit fortgeschritten sind.

Cell‐mediated cytotoxicity and lymphocyte stimulation with Aujeszky's disease

I. In experimentally infected pigs

The investigations were conducted to reveal relations between the clinical course of Aujeszky's disease (AD) in pigs and somein vitrotests of cell‐mediated immunity (CMI), interferon production and antibody production. The following tests of CMI were applied: Spontaneous cell‐mediated cytotoxicity against non‐infected target cells (SCC), cell‐mediated cytotoxicity against Aujeszky's disease virus (AV)‐infected target cells (AV‐CC), antibody‐dependent cell‐mediated cytotoxicity against AV‐infected target cells (AV‐ADCC), and AV‐specific lymphocyte stimulation (AV‐LYST).

Before infection 61, l % of the 18 animals showed SCC. The percentage value of positive reactants rose after AV‐infection, predominantly with those animals showing medium‐graded or weak symptoms of AD, however, the differences were not significant. During the first week of infection of the animals the effector cells retained on the one hand their cytotoxic activity against non‐infected target cells, but on the other hand, their cytotoxic activity was reduced against AV‐infected target cells. This was especially true for effector cells from heavily and medium‐graded diseased pigs. AV‐CC appeared 9 to 11 days after infection and was strongly reduced between 14 and 21 days. AV‐ADCC was demonstrated with all the animals surviving the acute phase of infection. Its appearance (9—11 days p. inf.) was however delayed with regard to the appearance of neutralizing antibodies (6 days p. inf.). The reason for this is that AV‐ADCC was a function of IgG antibodies, whereas the neutralization test in the presence of complement also captured IgM antibodies. AV‐sensitized lymphocytes (AV‐LYST) were demonstrated in some of the animals 4 days p. inf. and in all the animals after 6 days and later. Discernible relations to the course of the disease existed neither with neutralizing antibodies, AV‐ADCC nor AV‐LYST. The same is true regarding the production of interferon in the initial phase of the infection, but during the further course prolonged interferon production was demonstrated with some of the slightly ill animals.

It remains uncertain whether the results of the different tests can be applied to thein vivosituation in AV‐infected pigs, since great individual variations occurred and only a small number of animals was used. Nevertheless, the results give some hints that cell‐mediated, antibody independent cytotoxicity (SCC and AV‐CC) might play a rôle in the defence mechanisms of the body, because neutralizing antibodies and AV‐ADCC only appeared when the pathological processes had already extensively proceeded in the body.

Cytotoxicité like à la cellule et stimulation lymphocytaire dans la maladie d'Aujeszky

I. Chez des porcs infecté expérimentalement

Le but des recherches a été de mettre en évidence des rapports entre l'évolution clinique de la maladie d'Aujeszky chez le porc et quelques réactionsin vitrode l'immunité liée a la cellule, de la formation d'interféron et de la formation d'anticorps. Comme paramètres de l'immunité liée à la cellule, on a examiné la cytotoxicité spontanée liée à la cellule (SCC) contre des cellules‐cibles non infectées, la cytotoxicité liée à la cellule contre des cellules‐cibles infectées avec le virus (AV) d'Aujeszky (AV‐CC), la cytotoxicité liée à la cellule et dépendant des anticorps contre des cellules‐cibles AV‐infectées (AV‐ADCC) et la stimulation AV‐spécifique des lymphocytes (AV‐LYST).

SCC existait déjà chez 61,1 % des 18 animaux avant l'infection. Le pourcentage des réagissants positifs augmenta après l'AV‐infection, en particulier chez les animaux qui tombèrent moyennement ou gravement malades. La différence ne fut toutefois pas significative. Alors que les cellules effectrices maintenaient leur activité cytotoxique vis‐à‐vis des cellules‐cibles non infectées également après une infection des animaux, leur activité cytotoxique vis‐à‐vis des cellules‐cibles non infectées igalement après une infection des animaux, leur activité cytotoxique vis‐à‐vis des cellules‐cibles AV‐infectées fut réduite. Ceci concernait en premier lieu les cellules effectrices qui provenaient des animaux gravement et moyennement malades. AV‐CC est apparu 9 à 11 jours aprés l'infection et diminua fortement entre le 14e et le 21e jour. AV‐ADCC a pu être mis en évidence chez tous les animaux qui ont survécu au stade aigu de la maladie. Son apparition (9 et 11 jours après l'infection) fut toutefois ralentie en comparaison avec l'apparition des anticorps neutralisants (6 j. p. inf.). Cela peut s'expliquer par le fait que seuls les anticorps IgG étaient compris dans ADCC, alors que le test de neutralisation a permis de prendre en compte les IgM en présence du complément. Les lymphocytes AV‐sensibilisés (AV‐LYST) ont été mis en évidence chez quelques animaux 4 jours p. inf. et chez tous les animaux après 6 jours et plus tard. Des liens reconnaissables entre anticorps neutralisants, AV‐ADCC ou AV‐LYST et le cours de la maladie n'ont pas existé. Ce fut la même chose en ce qui concerne la formation d'interféron au début de l'infection. Pendant l'évolution, une partie toutefois des animaux faiblement malades présentèrent une formation prolongée d'interféron.

Il n'est pas certain que les résultats des différents tests puissent être appliqués à la situationin vivochez des porcs AV‐infectés, étant donné l'existence de grandes variations individuelles et du petit nombre d'animaux testés. Les résultats donnent cependant certaines indications concernant le rôle joué comme mécanisme de défense du corps par des mécanismes de cytotoxicité liés à la cellule et indépendants des anticorps (SCC et AV‐CC), étant donné que des anticorps neutralisants et AV‐ADCC n'apparaissent que lorsque les processus pathologiques dans le corps sont bien avancés.

Citotoxicidad mediada por la célula y la estimulaciôn linfocitaria en la enfermedad de Aujeszky

I. Tras la vacunaciôn de los cerdos y la subsiguiente infecciciôn

Dieciocho cerdos, que estaban vacunados dos veces con una virus‐vacuna inactivada Aujeszky (AV) y habían sido infectados 2 semanas más tarde con AV por vía intranasal, se pudieron clasificar en 3 grupos con arreglo a su estado febril y a la eliminación de virus. El grupo I abarcaba 6 animales con fiebre elevada, tres de los cuales eliminaban AV con la secreción narítica. El grupo II abarcaba 8 animales con fiebre mediana, dos de los cuales difundían AV, y el grupo III englobaba cuatro animales apiréticos, uno de los cuales eliminaba vestigios de virus.

En las fases de vacunación e infección se estudiaron con diversas reaccionesin vitro(SCC, AV‐CC, AV‐ADCC, AV‐LYST) la inmunidad de intercesión celular y, de forma paralela, la formación de anticuerpos neutralizantes.

Los resultados de todos los 18 animales, sin consideración de clasificación en grupos, revelaron lo siguiente: Antes de la vacunación mostraban el 66,7% de los animales SCC y 11,1 % AV‐CC. Tras la vacunación primera esto solo se modificó ligeramente, pero ahora se podía poner de manifiesto Av‐ADCC en el 44,4 % y AV‐LYST en el 33,3 % de los cerdos. El valor medio del título de neutralización era de 1 : 44. Una semana después de proceder a la vacunación segunda reaccionaba el 100 % de los animales con SCC, 38,9 % con AV‐CC, 94,4 % con AV‐ADCC y el 50 % con AV‐LYST. Al cabo de 2 semanas había descendido la cuota de los reactivos a SCC y AV‐LYST a 38,9 % y 27,8 %, resp., mientras que el porcentaje de los animales reactivos a AV‐CC aumenté hasta 50 % y los reactivos AV‐Adccpermanecian en 100 %. El valor medio de los títulos de neutralización (TN) se quintuplicó. Resultó sorprendente que algunos animales de los grupos I y II mostrasen después de ser vacunados una actividad citotóxica reducida frente a las células‐meta infectadas con AV. A raiz de la infección aumentó el número de reactivos en la SCC a un 100 %. El mismo porcentaje reaccionaba en la AV‐ADCC. En la AV‐CC y AV‐LYST se producía en la semana primera p. inf. un aumento pasajero a 83,3 % y 100%, resp., pero después de 2 semanas se habían reducido los valores a 44,4 % y 72,2 %. El valor medio de los TN se sextuplicó.

Al comparar entre si los resultados de lostestsde los 3 grupos animales se observaron algunas diferencias notables, En la fase de vacunación reaccionaban menos animales en los grupos I y II con AV‐CC y AV‐LYST que en el grupo III, y los valores medios TN de los grupos I y II eran claramente inferiores a los del grupo III. En la fase de infección, sobre todo después de la semana 2a, reaccionaba el grupo I débilmente en la AV‐CC y AV‐LYST. Las diferencias eran harto manifiestas frente al grupo III, mientras que el grupo II ocupaba cierta posición intermedia.

Todas las diferencias mencionadas eran solo significativas en casos contados.

La vacunación también ocasionó en los vacunados, al lado de reacciones AV‐específicas, una sensibilización considerable de los linfocitos frente a los componentes no virales de la vacuna (N‐LYST) y la anticuerpogenia correspondiente, la cual se expresaba en la N‐ADCC.

Se discuten los resultados con respecto a las relaciones que existen entre la citotoxicidad de intercesion celular, los anticuerpos neutralizantes y la inmunidad vacunal.