Complement and the Antiglobulin Test*
Authors: Rosenfield Richard E. , Haber Gladys V. , Gilbert Harriet S. 
Published: March 2009

To study the specificity of antiglobulin reactions which are dependent upon C‘ uptake by the sensitized erythrocytes, “antisera to C’” were prepared by immunizing animals with washed specific precipitates containing bound C‘. These antisera, as well as antisera to whole human serum, agglutinated the red cells of cold hemolytic anemia, Lea sensitized red cells, and sensitized sheep erythrocytes exposed to sublytic doses of C’. Antisera to GAhuC‘ (specific precipitate with bound human complement) and antisera to whole human serum, were assayed for complement antiglobulin reactions by cross‐titration with sensitized sheep cells (EA) exposed to decreasing sublytic amounts of human C’ (EAhuC‘). Because EAhuC’ red cells are agglutinable with anti‐human γ globulin sera, reagents for cross‐titration should first be freed of such antibodies by specific precipitation with human y globulin. In addition, heterophile (anti‐sheep cell) antibodies should be absorbed from reagents and sources of C‘, and controls maintained to ensure absence of “rheumatoid” effect.

Antisera to GAhuC' and to whole human serum agglutinated the erythrocytes from ordinary refrigerated clotted blood specimens of adults and some newborns. For this reason, these reagents are not generally applicable for compatibility testa involving clotted donor pilot tubes, or erythroblastosis tests where the clotted cord blood has been chilled.

Complement, or an indistinguishable co‐factor of C', or an antigen resulting from C' activity, appeared to be the specificity of those antiglobulin reactions that are positive only when there has been complement uptake by the sensitized erythrocytes. Therefore, the term complement antiglobulin test has been suggested for these reactions.

Pour étudier la spécificité des réactions à l'anti‐globuline qui se produisent à la suite de la fixation du complément sur des érythrocytes aensibilisés, les auteurs ont préparé des anti‐sérums anti‐complément (anti‐C') en immunisant des animaux avec des précipités spécifiques lavés contenant du C'. Ces anti‐sérums, au même titre que lee antisénuns anti‐séums humains agglutinent les érythrocytes d'anémie hémolytique à autoanticorps froids, des érythrocytes sensibilisés par l'anti Lea et lea érythrocytes de mouton sensibilisés sur lesquels on a fixé du C' a des doses sublytiques.

Les auteurs ont tenté de pratiquer des réactions à l'anti‐globuline pour le complément en testant des érythrocytes de mouton sensibilisés EA sur lesquels ils ont firé des quantités décroissantes des complément humain sublytique (EAhuC') avec des anti‐sérums anti‐GAhuC' (précipités spécifiques contenant du complément humain) et des antiaérums anti‐sérum humain. Comme les érythrocytes EAhuC' sont agglutinables par les antisérums anti‐gammaglobuline humaine, les réactifs utilisés pour les titrations croisées doivent Btre débarrassés de ces anticorps par absorption préalable avec des gammaglobulines humaines. En outre, les réactifs et les substances utilisées comme source de complément doivent être débarrassés des anticorps hétérophiles anti‐érythrocytes de mouton; enfin, il faut s'assurer que les réactifs sont dépourvus du facteur rhumatolde de la PCE (polyarthrite chronique évolutive).

Les autisérums anti‐GAhuC' et anti‐sénuns humains agglutinent les érythrocytes provenant de sang d'adultes et de quelques nouveaux‐nés coagulé à froid selon la méthode habituelle. C'est pour cette raison que ces réactifs ne sont généralement pas utilisables pour des tests de compatibilité pratiqués avec des sangs récoltés dans les tubes pilotes ordinaires ou, dans les cas d'érythroblastose, avec des sangs du cordon préalablement refroidis.

Le complément C', ou un facteur non décelable de C', ou nn antigène résultant de l'action de C' apparait être responsable de la sécificité de ces réactions à l'anti‐globuline qui ne sont positives que lorsqu'on fixe le complément SUI des érythrocytes sensibilisés. C'est pourquoi les auteurs suggérent d'appeler ce genre de réactions «complement antiglobulintest» (test à l'antiglobuline pour le complément).

Zum Studium der Spezifität der Antiglobulinreaktionen, die von der Fixation von C' durch die sensibilisierten Erythrozyten abhängig sind, wurden «Antiseren gegen C'» hergestellt, welche durch Immunisierung von Tieren mit gewaschenen Immunpräzipitaten, welche C' gebunden hatten, gewonnen wurden. Diese Antiseren, sowie solche, welche durch Immunisierung mit Gesamtseren gewonnen wurden, agglutinierten Erythrozyten von Patienten mit kälteantikörperbedingter erworbener hamolytischer Anämie, Erythrozyten, welche mit Anti‐Lea‐Seren sensibilisiert worden waren sowie sensibilisierte Hammelerythrozyten, welche subhämolytische Mengen von menschlichem Komplement gebunden hatten. Mit den Antiseren gegen GAhuC' (Immunpräzipität mit gebundenem memchlichem Komplement) und den Antiseren gegen menschliches Gesamtserum wurden Komplement‐Antiglobulinreaktionen an sensibilisierten Hammelerythrozyten (EA), welche su bhämolytische Mengen von menschlichem Komplement gebunden hatten (EAhuC'), durchgeführt. Da die EAhuC'‐Erythrozyten durch Antiseren gegen menschliches γ‐Globulin agglutiniert werden, müssen die bei solchen Titrationsversuchen verwendeten Antiseren vorgängig durch Immunpräzipitation mit menschlichem γ‐Globulin von ihren Anti‐γ‐Globulin‐Antikorpern befreit werden. Außerdem müssen allfällig in den Antiseren oder den Komplementquellen enthaltene heterophile Anti‐Hammel‐erythrozyten‐Antikörper wegabsorbiert werden. Im weiteren sind die verwendeten Reagenzien auf die Abwesenheit des «rheumatoiden» Effektes zu prüfen.

Die Antiseren gegen GAhuC' sowie diejenigen gegen menschliches Gesamtserum agglutinierten die Erythrozyten gekühlter geronnener Blutproben von Erwachsenen und einiger Neugeborener. Aus diesem Grunde eignen sich diese Seren nicht ohne weiteree für Vertraglichkeitsproben, bei denen geronnene Spenderblutproben verwendet werden. Dasselbe gilt für serologische Untersuchungen an geronnenen und gekühlten Nabelschnurblutproben im Rahmen der Abklärung von Morbus haemolyticus‐Geburten.

Das Komplement selbst, oder ein davon nicht unterscheidbarer Kofaktor, oder aber ein Antigen, welches bei der Komplementaktivierung in Erscheinung tritt. bilden das Substrat für die Spezifität derjenigen Antiglobulinreaktionen, welche nur dann positiv ausfallen, wenn die sensibilisierten Erythrozyten Komplement gebunden haben. Aus diesem Grunde wird für diese Art Reaktion die Bezeichnung « Komplement‐Antiglobulintest « vorgeschlagen.