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Caracterização citogenética de Cycloramphus bolitoglossus (Anura, Cycloramphidae)
Authors: Biernaski Vilmar , Ferreira Camila Leandro , Moreira Fernanda Sabadin , Santos Karine Antoniacomi dos , Cestari Marta Margarete , Leivas Peterson Trevisan , Crivellari Lucas , Struett Michelle Micarelli , Moura Maurício , Recco-Pimentel Shirlei Maria , Bruschi Daniel Pacheco
Published: January 2023

AApesar de extremamente informativa em estudos taxonômicos e evolutivos, os dados sobre a estrutura cromossômica de anuros neotropicais ainda são escassos, o que dificulta a inferência dos mecanismos de evolução cariotípica nesse grupo. O gênero Cycloramphus é um exemplo claro dessa carência de informações citogenéticas. O referido gênero é composto atualmente por 27 espécies, das quais apenas doze apresentam seus cariótipos descritos, e desses, grande parte se limitam ao conhecimento do número e da morfologia cromossômica. Cycloramphus apresenta uma distribuição restrita à região sul da Mata Atlântica e a maioria das espécies são conhecidas apenas em suas localidades-tipo. Esse fato motivou a inclusão de espécies desse gênero, como C. bolitoglossus, no Plano de Ações Nacionais de Conservação de espécies ameaçadas de extinção (PAN), visto a necessidade de adicionar dados da biologia, ecologia e genética para a avaliação de estado de conservação dessa unidade taxonômica. Nesse trabalho, descrevemos pela primeira vez o cariótipo, padrão de distribuição de heterocromatina e localização das Regiões Organizadoras de Nucléolo (NOR) de uma população de C. bolitoglossus coletada no Parque Estadual Pico do Marumbi, Piraquara, Paraná. O cariótipo de C. bolitoglossus é composto por 2n=26 cromossomos, constituídos por quatro pares de metacêntricos (pares 1, 5, 8), nove pares de submetacêntricos (pares 2, 4, 6, 7, 9, 11-13) e um par subtelocêntrico (par 3). Blocos de heterocromatina foram detectados essencialmente na região centromérica. Impregnação pela prata detectou apenas um par de NOR, localizada na região pericentromérica dos braços longos dos homólogos do par 6, coincidente com as constrições secundárias observadas por coloração convencional. Comparativamente, as espécies desse gênero apresentam cariótipos conservados, sendo possível o reconhecimento de homeologias cromossômicas com as demais espécies do gênero. Nossos dados descrevem a macroestrutura cariotípica de C. bolitoglossus, fornecendo informações iniciais sobre a genética dessa espécie e contribuem para uma melhor compreensão dos mecanismos envolvidos na diversificação cariotípica no gênero.
Caracterização citogenética do Boto da Bolívia (Inia boliviensis): mais uma ferramenta de diferenciação entre as espécies
Authors: Gravena Waleska , Hamada Fearnside Natsumi , Tavares Édika Sabrina Girão Mitozo , Carvalho Natália Dayane Moura , Gross Maria Claudia , Schneider Carlos Henrique , Silva Vera Maria Ferreira da
Published: January 2023

Dados citogenéticos de cetáceos são particularmente raros por conta da dificuldade em conseguir amostras de animais vivos. Apesar disso, este estudo caracteriza mais uma espécie de golfinho dos rios amazônicos, o boto da Bolívia, Inia boliviensis. Esta espécie, com distribuição restrita aos rios da Bolívia e à bacia do Rio Madeira, por muito tempo foi considerada uma subespécie de Inia geoffrensis, que possui ampla distribuição pela bacia amazônica. Por vezes a classificação taxonômica desses animais ainda é contestada, apesar de evidencias tanto morfológicas quanto moleculares de sua distinção. A fim de utilizar as técnicas de citogenética como mais uma ferramenta na classificação das espécies, foram utilizadas amostras de sangue de 3 machos e 3 fêmeas de I. boliviensis coletados no Rio Guaporé, divisa do Brasil com a Bolívia, para determinar a fórmula cariotípica e os padrões de heterocromática constitutiva da espécie. Em um trabalho anterior, a fórmula cariotípica de I. geoffrensis foi descrita possuindo 2n = 44, assim como a maioria dos cetáceos, e com 12m + 14sm + 6st + 10t + XX/XY. Já nas amostras de I. boliviensis, foi determinada fórmula cariotípica de 14m + 12sm + 6st + 10t + XX/XY, sendo diferenciado da espécie relacionada por um par a mais de cromossomos metacêntricos e um a menos de submetacêntricos. Utilizando a técnica de banda C, foram observados blocos de heterocromatina constitutiva nas posições terminais, intersticiais e pericentroméricas. Baseados nesses resultados as espécies mostram diferenciação na fórmula cariotípica e na quantidade de heterocromatina constitutiva, já que I. boliviensis apresentou blocos maiores de heterocromatina do que já foram descritos para I. geoffrensis. Esses dados podem contribuir para o estabelecimento da espécie de boto da Bolívia, além de contribuir para o entendimento da carioevolução do grupo e por isso se faz necessário a utilização de mais marcadores, incluindo marcadores citogenéticos moleculares.
Comparação da ação mutagênica entre Arsênio, Mercúrio e Chumbo em linhagem de fibroblastos humanos por meio do ensaio do Cometa e teste do Micronúcleo
Authors: Silva Ludmilla Souza Campos da , Sagica Fernanda do Espirito Santo , Oliveira Edivaldo Herculano  Correa de
Published: January 2023

Mutágenos são agentes que causam alterações no material genético. Muitas substâncias são sabidamente mutagênicas, destacando-se entre elas os metais pesados, que são prejudiciais por não serem biodegradáveis, acumulando-se em diversos tecidos. Constantemente, esses metais são despejados no meio ambiente sem tratamento prévio, sendo atualmente os poluentes ambientais mais comuns pela excessiva utilização industrial e agrícola, acumulando-se no solo e corpos aquáticos, afetando assim a qualidade e a segurança alimentar. A realização de bioensaios, como o ensaio cometa e o teste do micronúcleo, torna-se fundamental para avaliação e melhor entendimento de seu potencial mutagênico. O arsênio (As) é um dos metais mais nocivos à saúde humana, sendo amplamente distribuído no ambiente devido à ação antropogênica, assim como o mercúrio (Hg), e o chumbo (Pb). Avaliar comparativamente as propriedades mutagênicas do As, do Hg e do Pb, por meio do teste do micronúcleo e ensaio cometa, em linhagem de fibroblastos humanos. Exposição das culturas a quatro tratamentos diferentes: MeHg (5mM), Pb (0,05?g), As (0,001?g) e meio sem metais. Foram encontradas diversas alterações relacionadas com anomalias celulares e quebras no DNA, com frequências diferentes para cada tratamento. A frequência de apoptose foi estatisticamente maior no tratamento com Pb (p<0,05), e a frequência de micronúcleos, maior no tratamento com MeHg (p<0,05). A frequência de brotos e pontes foi estatisticamente maior nas células tratadas com MeHg e As (p<0,05), e as células necróticas foram mais frequentes nas células tratadas com Pb e As (p<0,05). O ensaio cometa demonstrou que a média de DNA fragmentado pela exposição ao MeHg (46,70%) foi maior, seguido pelo As (14,15%), Pb (7,63%) e C- (3,56%). Os três metais induzem quebras no DNA, porém em intensidades diferentes: a maior foi observada após a exposição ao MeHg, seguida pelo As e Pb. Conclui-se que as células in vitro respondem de maneiras distintas aos metais a que foram expostas. Esses aparentes mecanismos diferentes de citotoxicidade estão servindo de base para novos experimentos empregando metodologias que avaliam aspectos do metabolismo celular.
Confirmação da indução da hexaploidia do alotriploide “Híbrido de Timor” ‘CIFC 4106’ por contagem cromossômica
Authors: Sanglard Natália Arruda , Amaral-Silva Paulo Marcos , Oliveira Stéfanie Cristina de , Sattler Mariana Cansian , Carvalho Carlos Roberto , Clarindo Wellington Ronildo
Published: January 2023

As diversas estratégias empregadas para indução da duplicação cromossômica geram indivíduos com diferentes ploidias, inclusive mixoploides. Nesse sentido, é fundamental o uso de métodos que distinguem esses indivíduos. Dentre os métodos diretos, o único que inequivocamente confirma o nível de ploidia é a contagem cromossômica. Dessa forma, o presente trabalho tem por objetivo determinar o número cromossômico de alotriploides e hexaploides putativos oriundos da indução da duplicação cromossômica do alotriploide Híbrido de Timor (HT) ‘CIFC 4106’ (Coffea arabica x Coffea canephora). 48 plântulas foram regeneradas a partir de um novo procedimento, envolvendo calos embriogênicos friáveis tratados com colchicina (0,5; 1,5 ou 2,5 mM) por 96 h. A citometria de fluxo (CF) foi realizada a partir de fragmentos foliares dos indivíduos regenerados, pré-selecionando os alotriploides e os supostos hexaploides. Meristemas radiculares desses indivíduos foram tratados com 90 µM de ciclohexamida e 4 µM amiprofos-metil durante 1 h 45 min a 25ºC, e macerados em pool enzimático (celulase 4%, macerozime 1% e hemicelulase 0,4%) por 2 h a 34ºC. Em lâminas preparadas por dissociação celular e secagem ao ar, metáfases com 2n=3x=33 e com 2n=6x=66 cromossomos foram encontradas. A técnica empregada permitiu a obtenção de cromossomos bem espalhados na lâmina, garantindo uma contagem precisa do número de cromossomos. O procedimento citogenético foi primordial em virtude do elevado número de cromossomos, uma vez que, a técnica de esmagamento amplamente empregada, possivelmente resultaria em cromossomos sobrepostos. A CF possibilitou o screening de muitas plântulas em um curto período de tempo, mas a contagem cromossômica foi primordial para a determinação do nível de ploidia, uma vez que, pequenas alterações aneuploides podem não ser detectadas pelo citômetro de fluxo. Por se tratar de um experimento conduzido in vitro, a obtenção de cromossomos metafásicos é favorecida pela alta taxa proliferativa do material biológico, aliado a uma padronização refinada dos pré-tratamentos citogenéticos. O resultado da CF corroborou com a citogenética, permitindo avaliar o nível de ploidia a partir de diferentes tecidos, folhas e raízes, respectivamente. Dessa forma, a determinação do número de cromossomos deve ser parte indispensável do rigor experimental em experimentos de duplicação cromossômica.
Detecção de longos trechos contínuos em homozigose na região 11p11.2 em crianças com deficiência intelectual
Authors: Silva Juliana Ferreira da , Pinto Irene Plaza , Melo Aldaíres Vieira de , Minasi Lysa Bernardes , Silva Cláudio Carlos da , Cruz Aparecido Divino da
Published: January 2023

Os transtornos do desenvolvimento neurológico podem ocorrer por variações no número de cópias, rearranjos cromossômicos, mutações pontuais e alterações epigenéticas. Além disso, longos trechos contínuos em homozigose (LCSH) podem influenciar no desenvolvimento de desordens neurológicas. Mecanismos responsáveis pelo surgimento de longos trechos contínuos de homozigose compreendem dissomia uniparental (UPD), homozigose ancestral e consanguinidade dos pais. No presente estudo relatamos o caso de três garotas encaminhadas ao Laboratório de Citogenética Humana e Genética Molecular – LaGene/Lacen/SES, com indicação clínica de atraso no desenvolvimento neuropsicomotor, que foi observada a presença de LCSH no cromossomo 11 através da técnica de Análise Cromossômica por Microarranjo. A citogenética convencional com bandeamento GTG usando o software IKAROS® (Metasystems Corporation, Alemanha) mostrou cariótipo do sexo feminino (46,XX) para as três meninas. O DNA genômico das três pacientes foi isolado usando o kit GE HealthCareIllustraTMbloodGenomicPrep Mini Spin. Em seguida, a Análise Cromossômica por Microarranjo usando o GeneChip®CytoScanHDTM da Affymetrixe filtro de análise para LCSH > 5000 pb, revelou para as três pacientes uma LCSH com tamanho em torno de 5,27 Mb na região cromossômica 11p11.2 abrangendo 31 genes mórbidos. A LCSH foi observada em uma região do cromossomo 11 que é classificada como de retardo mental autossômico recessivo (OMIM614344), que já foi relatada para uma família de indivíduos consanguíneos que apresentavam severa deficiência intelectual. Ademais, a região 11p11.2 está relacionada com a Síndrome de Potocki-Shaffer (OMIM601224), classificada como uma síndrome rara de deleção de genes contíguos devido à haploinsuficiência da região 11p12-p11.2, sendo caracterizada fenotipicamente por atraso no desenvolvimento, deficiência intelectual e anormalidades craniofaciais. É importante que seja feito estudo de expressão dos genes, presentes na região em homozigose, para observar o comportamento gênico e a correlação com o fenótipo clínico da deficiência intelectual observado nas pacientes. Além disso, é recomendado que estas famílias façam o aconselhamento genético com o objetivo de tentar entender o mecanismo que gerou a formação de longos trechos em homozigose, fazer o cálculo de risco de recorrência e proporcionar uma melhor qualidade de vida para estas famílias.
Distribuição cromossômica do elemento transponível CR1-like em pica-paus (Aves Piciformes)
Authors: Bertocchi Natasha Ávila , Oliveira Thays Duarte de , Torres Fabiano Pimentel , Gunski Ricardo José , Garnero Anália del Valle
Published: January 2023

O retroelemento Chicken Reapet 1 (CR1) é um elemento transponível (ET) típico da Classe aves. Na ordem Piciformes (Pica-paus), especialmente no genoma de Picoides pubescens, ocorreu uma expansão de elementos CR1 acarretando em uma fração bem mais expressiva de TEs, aproximadamente 22% do seu genoma. Além disso, em outras espécies de pica-paus foram relacionado o tamanho grande dos primeiros pares de macrocromossomos, incluindo o cromossomo sexual Z, com o maior acúmulo de sequências repetitivas. Por estas razões, este trabalho teve como objetivo conhecer o padrão de distribuição de um elemento CR1-like nos cromossomos de quatro espécies de pica-paus com ênfase nos maiores pares do complemento cariotípico (par 1 e cromossomo sexual Z). Para realização do trabalho, utilizou-se de análises in silico na prospecção dos primers de elementos CR1-like, os mesmos foram amplificados no genoma de Veniliornes spilogaster e o produto utilizado na confecção da sonda para os experimentos de Hibridização in situ Fluorescente. As metáfases foram obtidas através da cultura direta de medula e cultivo de fibroblastos de um macho de Veniliornes spilogaster, três machos e uma fêmea de Colaptes campestris, cinco fêmeas de Colaptes melanochloros e um macho de Melanerpes candidus. Nossos resultados demonstram que o element CR1-like está presente nas espécies de pica-paus estudadas, tanto em macrocromossomos como em microcromossomos. Evidenciou-se também, que a distribuição do elemento, não está restrita às regiões de heterocromatina e sua localização no cromossomo varia entre as espécies, porém a maior concentração de hibridizações ocorre nos maiores pares do complemento (cromossomo Z e par 1). Por fim, a concentração de marcações nos cromossomos Z nas espécies estudadas corrobora com a hipótese do acúmulo de sequências repetitivas nesse cromossomo na perspectiva dos elementos de transposição.
Distribuição de sequências repetitivas no genoma de duas espécies da ordem Caprimulgiformes (Aves) evidenciado por hibridização in situ fluorescente
Authors: Souza Marcelo Santos de , Kretschmer Rafael , Barcellos Suziane Alves , Costa Alice Lemos , Oliveira Edivaldo Herculano de , Cioffi Marcelo B. , Garnero Analia Del Valle , Gunski Ricardo Jose
Published: January 2023

Apesar da pequena quantidade de Sequências Repetitivas (SRs) no genoma das aves, estas apresentam uma grande importância para diversidade genética dessa classe. Dentre os SRs destacam-se os microssatélites e clusters de rDNA18s. Assim o objetivo desse trabalho foi identificar os sítios das sequências rDNA18s e o acúmulo de algumas sequências microssatélites no genoma das espécies Nyctibius griseus (NGR) 2n=86 e Hydropsalis torquata (HTO) 2n=74. As preparações cromossômicas foram obtidas através de cultura de fibroblastos e cultura de curta duração de medula óssea. Para identificação de heterocromatina constitutiva aplicou-se a técnica de bandeamento C, e nos experimentos de FISH utilizaram-se sondas (CGG)10, (CAC)10, (CA)15 (CAA)10, (CAG)10 e (GAG)10 marcadas diretamente com avidina-CY3. No bandeamento C observou-se que o cromossomo W de NGR possui o mesmo tamanho e morfologia do cromossomo Z, porém totalmente heterocromático localizando-se entre os pares 3 e 4. As sequências (CAA)10 apresentam-se acumuladas na região pericentromérica do braço longo do cromossomo W de NGR, além de alguns microcromossomos. (CAG)10 também marcou um grande bloco na região pericentromérica, porém na região proximal do braço curto do mesmo cromossomo. E (GAG)10 se distribuiu pelas regiões intersticiais dos braços p e q e na extremidade do braço q do cromossomo W de NGR. Essas três sondas não apresentaram marcações positivas no genoma de HTO. A sequência (CGG)10 foi acumulada preferencialmente em microcromossomos nas duas espécies, porém em NGR percebe-se um acúmulo elevado na região pericentromérica do cromossomo W. As sondas (CAA)10 e (CA)15 hibridizaram nas regiões adjuntas aos telômeros de quase todos os microcromossomos, contudo nas duas espécies foi possível observar um particular acúmulo dessas sequências também na região pericentromética (p) do 5º par do complemento cromossômico. Nessas espécies, os clusters ribossomais estão localizados em um par de microcromossomos, assim como em espécies basais da classe Aves. Embora NGR e HTO pertençam a mesma ordem ambas demonstram diferentes estágios de acúmulo de SRs. Em NGR ainda destaca-se o cromossomo W, sendo possível inferir que o mesmo passou por um processo de acúmulo de sequências repetitivas, o que explicaria o tamanho deste cromossomo, fato incomum para as aves.
Epimarcas do cromossomo B de Astatotilapia latifasciata e causas e efeitos deste elemento na expressão de genes da maquinaria de metilação do DNA
Authors: Cardoso Adauto Lima , Fantinatti Bruno Evaristo de Almeida , Venturelli Natália Bortholazzi , Carmello Bianca de Oliveira , Oliveira Rogério Antônio de , Martins Cesar
Published: January 2023

Cromossomos supernumerários são polimorfismos numéricos frequentemente registrados em eucariotos, sendo que seus efeitos são pouco elucidados. Em alguns indivíduos da espécie Astatotilapia latifasciata pode-se identificar um ou dois isocromossomos B, que são totalmente heterocromáticos. Em vista de compreender sua origem, evolução e efeitos, este elemento vem sendo largamente explorado por técnicas integradas de citogenética, biologia molecular e genômica. Dados prévios revelam seus efeitos na expressão de diversas classes de RNAs canônicos. É possível que estes efeitos sejam consequências de alterações epigenéticas, semelhante ao que ocorre em aneuploidias. Assim, o objetivo deste estudo foi identificar o padrão de epimarcas do DNA no cromossomo B de A. latifasciata e as causas e efeitos deste cromossomo na expressão de genes da maquinaria de metilação do DNA (Dnmt1, Dnmt3a, Dnmt3b, Tet1, Tet2, Tet3 e Tdg). Para isso, foram empregadas técnicas de imunocitogenética usando-se anticorpos contra metilcitosina (5mC) e hidroximetilcitosina (5hmC) em cromossomos metafásicos do rim cefálico, expressão de mRNAs e epi-miRNAs (miRNAs que regulam genes da maquinaria epigenética) por RT-qPCR e quantificação global dos conteúdos de 5mC e 5hmC com uso dos kits MethylFlash™ Methylated DNA Quantification e MethylFlash™ Hydroxymethylated DNA Quantification (Epigentek), respectivamente. Nos experimentos de RT-qPCR e quantificação global de 5mC e 5hmC foram avaliados os tecidos: cérebro, músculo e gônadas. Predição de epi-miRNAs foi realizada pelos programas PITA, miRanda e RNAhybrid. Os dados foram comparados com uso do test t e de um modelo linear generalizado com médias ajustadas pela distribuição gama (GENMOD). Os resultados indicam que o cromossomo B possui um padrão de marcas de 5mC e 5hmC semelhante ao complemento A, mas com distinção entre seus braços. Além disso, foram identificados efeitos heterogêneos deste cromossomo na expressão de epi-miRNAs e mRNAs e no conteúdo global de 5mC e 5hmC. Esse conjunto de dados reforça a hipótese de que mecanismos epigenéticos são afetados pelo cromossomo B, o que pode explicar as diferenças previamente observadas na expressão de RNAs canônicos. Além disso, estes dados estão em desacordo com a ideia mais difundida de que cromossomos B sejam elementos inertes. Apoio: FAPESP, CNPq, CAPES.
Estudo dos cromossomos de uma espécie do gênero Ancistrus (Siluriformes: Loricariidae) proveniente do córrego Tamanduá, bacia do Rio Paraguai, Mato Grosso
Authors: Borba Rafael Splendore de , Mariotto Sandra , Centofante Liano , Ferreira Daniela Cristina , Parise Maltempi Patrícia Pasquali
Published: January 2023

O gênero Ancistrus é um dos mais diversificados da tribo Ancistrini, possuindo atualmente 64 espécies nominais. O grupo é diferenciado dos demais loricariideos pela ausência de placas e odontódeos na margem anterior do focinho, onde existem apenas pequenos tentáculos carnudos e odontódeos interoperculares bem desenvolvidos. Diversas espécies do gênero Ancistrus já foram descritas na região das bacias dos rios Amazonas e Paraguai. Estes peixes têm a taxonomia bastante duvidosa, não existindo ainda uma chave precisa de identificação para estas espécies. Ferramentas citogenéticas como análise de número diploide, detecção de AgNORs, bandamento C e análises de citogenética molecular funcionam como importantes marcadores, utilizados para a diferenciação de população e de espécies de Ancistrus. Dessa forma, o presente trabalho teve como objetivo caracterizar os cromossomos de uma espécie de Ancistrus proveniente do córrego Tamanduá (Bacia do Rio Paraguai) utilizando técnicas de coloração convencional e FISH (18S), e comparar as características de seu cariótipo com o de outras espécies provenientes das demais localidades desta mesma bacia. A espécie estudada apresenta um número diploide de 2n=44 cromossomos, com fórmula cariotípica igual a: 9 pares m, 8 pares sm, 3 pares st e 2 pares a, o bandamento C evidenciou poucas marcações, estas sempre nas regiões cetroméricas, e duas grandes bandas coincidentes com a NOR. A técnica de FISH usando como sonda o rDNA 18S detectou duas marcações nas regiões intersticiais dos braços longos de dois cromossomos submetacêntricos, sendo que estas marcações coincidem com as regiões AgNOR positivas Algumas características do cariótipo desta espécie se assemelham com a de outras espécies encontradas nas demais localidades da bacia do Rio Paraguai, como por exemplo o número diploide de 2n=44 com NOR em regiões intersticiais encontrados em Ancistrus cf. dubius e Ancistrus sp. 12 (Córrego Santa Cruz Cuiabá). Contudo outras características do cariótipo da espécie estudada são divergentes, como a presença de cromossomos acrocêntricos e a marcação do rDNA18S localizada no braço longo de cromossomos submetacêntricos. Tais características confirmam as evidências sobre a grande diversidade cariotípica encontrada no gênero, mesmo entre espécies com mesmo número de cromossomos, e também mostram como determinados caracteres dos diferentes cariótipos podem ser uteis na separação das espécies desta região.Apoio Financeiro: FAPESP (2013/17826-9)
Filogenética de morcegos nectarívoros (Phyllostomidae: Lonchophyllinae) baseada em pintura cromossômica multidirecional (ZOO-FISH), com a descrição de dois novos citótipos para o gênero monotípico Hsunycteris
Authors: Benathar Thayse Cristine Melo , Nagamachi Cleusa Yoshiko , Geise Lena , Rodrigues Luis Reginaldo Ribeiro , O’Brien Patrícia Caroline Mary , Ferguson-Smith Malcom Andrew , Yang Fengtang , Pieczarka Júlio Cesar
Published: January 2023

A subfamília Lonchophyllinae foi recentemente dividida em duas tribos, Lonchophyllini e Hsunycterini. Lonchophyllini abriga os gêneros Lionycteris Lonchophylla, Platalina e Xeronycteris. Hsunycterini abriga o gênero Hsunycteris, que, além de abrigar vários citótipos diferentes, também possui elevados níveis de divergência genética entre táxons coespecíficos, sugerindo que a sua diversidade está subestimada. A citogenética clássica, atrelada ao uso da pintura cromossômica multidirecional, permite comparações mais detalhadas entre os taxa e a identificação de rearranjos entre espécies e/ou gêneros, permitindo assim uma boa resolução de questões filogenéticas. Neste contexto, o presente estudo verifica a existência de possíveis variações cromossômicas intrapopulacionais atribuídas à H. thomasi através dos bandeamentos cromossômicos, como também investigar as relações evolutivas desta subfamília através da reconstrução filogenética baseada em pintura cromossômica multidirecional (ZOO-FISH), utilizando sondas de cromossomos totais de Carollia brevicauda e Phyllostomus hastatus. As análises filogenéticas foram realizadas utilizando métodos cladísticos baseados no critério de parcimônia, com o auxílio do software PAUP. Utilizamos como grupo externo as subfamílias Desmodontinae e Macrotinae, visando estabelecer um mapeamento cromossômico comparativo entre os gêneros Hsunycteris, Lionycteris e Lonchophylla. Os resultados encontrados sugerem que os representantes da tribo Lonchophyllini (Lionycteris e Lonchophylla) estão intimamente relacionados, baseados nos dados cromossômicos (clássicos e moleculares), compartilhando a mesma morfologia cromossômica, número diploide (2n = 28), número fundamental (FN = 50) e associações sintênicas (PHA 1p/5p/3p, PHA 1q/8inv e PHA 5q/12p/9q). Observamos a presença de variação intraespecífica em Hsunycteris thomasi, com 2n variando entre 30 a 36 cromossomos e NF variando de 38 a 48. Além disso descrevemos dois novos citótipos, 2n=36/NF=46 e 2n=34/NF=48. As associações sintênicas que apoiam o clado Hsunycterini são PHA10/13p, PHA14/4/14 e inversão em PHA11. Os processos responsáveis pela diversificação cariotípica desta subfamília seriam translocações (Lonchophyllini), fusões e fissões (Hsunycterini). As associações sintênicas PHA5/3, PHA14/4 e inversão em PHA8 podem ser consideradas como assinatura cromossômica que define a subfamília Lonchophyllinae. A nossa proposta filogenética mostra-se bem apoiada, congruente com a topologia molecular recente sobre a relação das tribos como taxa irmã, bem como a monofilia de Lonchophyllinae.
Ganhos citogenômicos e LOH em paciente com síndrome mielodisplásica
Authors: Silva Danilo Conrado , Ribeiro Cristiano Luiz , Pinto Irene Plaza , Minasi Lysa Bernardes , Silva Claudio Carlos da , Da Cruz Aparecido Divino
Published: January 2023

A Síndrome Mielodisplásica (SMD) compreende um grupo de desordens hematopoiéticas heterogêneas de natureza clonal. Essas desordens têm em comum graus variados de insuficiência medular, níveis distintos de citopenias no sangue periférico e displasias na diferenciação celular. Os portadores de SMD podem apresentar alterações cromossômicas e/ou genômicas, e cerca de 20% a 40% dos casos evoluem para leucemia, principalmente Leucemia Mieloide Aguda (LMA). Essas alterações podem ser diagnosticadas por análise citogenética clássica, citogenômica e/ou técnicas moleculares, sendo esses diagnósticos determinantes para o prognóstico e tratamento específico. O objetivo do presente trabalho foi avaliar, por meio da citogenética clássica e citogenômica, um paciente com diagnóstico de SMD. O paciente de 75 anos, do sexo feminino, apresentando plaquetopenia, foi encaminhado via Sistema Único de Saúde (SUS) ao Laboratório LaGene, SES / Replicon, PUC-Goiás. A análise citogenética com bandeamento GTG em resolução > 450 bandas revelou um cariótipo sem alterações para o sexo feminino (46, XX). A Análise Cromossômica por Microarranjo (CMA, do inglês Chromosomal Microarray Analysis), mediante o uso do GeneChip CytoScanHDTM (Affymetrix, USA), revelou três ganhos no cromossomo 17, sendo dois ganhos na citobanda 17p11.2 (~ 0,13Mb e ~ 0,15Mb) contendo o gene SPECC1 e um ganho na citobanda 17q25.3 (~ 0,15Mb). SPECC1 é altamente expresso em algumas linhagens de células tumorais. Uma translocação cromossômica envolvendo regiões que flanqueiam os genes SPECC1 e o receptor de fator de crescimento derivado de plaquetas beta (PDGFRB), pode resultar na Leucemia Mielomonocítica Juvenil. A CMA também revelou no paciente estudado uma perda de heterozigosidade (LOH, do inglês loss of heterozygosity) de ~ 8,19 Mb em 18q21.1. Apesar de não conter genes mórbidos, a região de LOH abrange 37 genes. Dados emergentes têm demonstrado que a LOH pode ser frequente em pacientes com doenças hematológicas que apresentam o cariótipo sem alterações. Nas neoplasias mielóides, a LOH tem sido associada à duplicação de mutações oncogênicas com perda concomitante do alelo normal. Conclui-se que ganhos citogenômicos no cromossomo 17, principalmente aqueles relacionados a região do gene SPECC1, e a perda de heterozigosidade podem estar associados a SMD.
Genômica comparativa entre Cerradomys scotti e Cerradomys subflavus por pintura cromossômica
Authors: Malcher Stella Miranda , Pieczarka Julio Cesar , Geise Lena , Rossi Rogério Vieira , O’Brien Patricia Caroline Mary , Ferguson Smith Malcolm Andrew , Nagamachi Cleusa Yoshiko
Published: January 2023

O gênero Cerradomys apresenta atualmente 8 espécies, todas com cariótipos básicos descritos. Essas espécies apresentam grande variação cromossômica, com número diploide variando de 2n=46 em Cerradomys langguthi a 2n=60 em C. akroai. Neste trabalho estudamos comparativamente os cariótipos de Cerradomys scotti (CSC) e Cerradomys subflavus (CSU) por bandeamntos G, C e pintura cromossômica utilizando sondas cromossomos totais de Hylaeamys megacephalus (HME: 2n=54, NFa=62). Analisamos 3 exemplares de C. scotti (1 macho e 2 fêmeas) coletados nos estados de Mato Grosso e Minas Gerais e 3 exemplares de C. subflavus (2 machos e 1 fêmea) coletados no estado de Minas Gerais. C. scotti apresenta 2n=58 e NFa=70, sendo composto por 7 pares de dois braços e 21 pares acrocêntricos, o X é submetacêntrico grande e o Y é submetacêntrico médio. C. subflavus apresenta 2n=54 e NFa=62, sendo composto por 5 pares de dois braços e 21 pares acrocêntricos, o X é acrocêntrico grande e o Y é acrocêntrico pequeno. A Heterocromatina Constitutiva foi observada na região pericentromérica em todos os pares autossômicos, nas duas espécies. As FISHs (Hibridização in situ fluorescente) com as sondas de HME revelaram 36 segmentos de homologia no cariótipo de CSC e 6 associações sintênicas: HME19/7/[9,10] (CSC1), HEM21/6 (CSC2), HME12/[9,10] (CSC4), HME[13,22]/20 (CSC7), HME19/14/19/[13,22] (CSC8) e HME[16,17]/11 (HME10). No cariótipo de CSU, as FISHs revelaram 39 segmentos de homologia e 6 associações sintênicas: HEM6/21/8/1 (CSU1), HME 3/14/7/[9,10] (CSU2), HME15/12/[9,10] (CSU3), HME[13,22]/20 (CSU4), HME[16,17]/11 (CSU5) e HME14/19 (CSU9). O mapeamento genômico comparativo mostra que as duas espécies compartilham 4 associações sintênicas (HME 7/[9,10], HME12/[9,10], HME[13,22]/20 e HME14/19) das quais, somente a associação HME[13,22]/20 é compartilhada sem modificações; as demais formam blocos sintênicos diferentes nas duas espécies. Estes resultados demonstram que as duas espécies de Cerradomys apresentam cariótipos muito reorganizados entre si e ambos, em relação a HME. Rearranjos cromossômicos como translocações, inversões e fusões/fissões diferenciam o cariótipo das duas espécies. Análises nas demais espécies do gênero permitirão uma melhor compreensão dos mecanismos de rearranjos cromossômicos envolvidos na diferenciação das espécies de Cerradomys.
High-throughput sequencing data reveals evolutionary conservation and differential transcription of satellites DNA among crickets species (Orthoptera; Gryllinae)
Authors: Palacios Gimenez Octavio Manuel , Bardella Vanessa Bellini , Lemos Bernardo , Cabral de Mello Diogo Cavalcanti
Published: January 2023

Satellite DNA (satDNA) is a class of non-coding repetitive DNA abundant in most eukaryotic genomes. Mostly satDNAs constitute clustered arrays of tandemly repeated sequences located in the gene-poor heterochromatin of centromeres and telomeres. Moreover in some cases, they are also dispersed in eu/heterochromatin of sex chromosomes and as single or short arrays nearby protein-coding genes within euchromatin. Here we take advantages of DNA- and RNA-seq data from cricket’s species in order to perform a comparative analysis of content and expression of satDNAs. By graph-based clustering analysis of DNA-seq reads using RepeatExplorer software, dotplots analysis and FISH mapping we found that ~ 4% of the G. assimilis genome is represented by 13 A+T-rich satDNAs consisting of 11 well-defined families mainly located in the heterochromatic areas of chromosomes, and some of them able to form high-order repeats (HORs). In order to determine transcription profiles the raw RNA-seq reads from different tissues library of Gryllus species were mapped to each of the G. assimilis satDNAs using Bowtie2 and the method FPKM (fragments per kilo-base of transcript per million mapped reads) was used. The in silico transcriptional analysis of RNA-seq reads in G. assimilis, G. bimaculatus, G, firmus and G. rubens showed that some satDNAs are conserved in Gryllus species but differentially expressed in distinct tissues, sexes and besides tissue- and species-specific. In concordances with the transcriptional activity we found that G. assimilis satDNAs are also capable to adopt RNA secondary structures with well-defined helices ranging from 2 bp to 7 bp lengths. The folding possibility forming secondary structure helps to the satDNA dispersion along the genome by rolling-circle replication mechanism, in which circular monomer result from secondary structure RNA processing into linear monomers and subsequently circularization by a host-specific RNA ligase. The conservation of expression for different satDNAs in Gryllus species suggests a functional role for these sequences, as observed in other insects. Our data suggests functional roles of satDNAs for sexual differentiation at the chromatin levels, heterochromatin formation and centromeric function.
Inferências Evolutivas e Citotaxonômicas em duas famílias de Pentatomomorpha (Heteroptera)
Authors: Firmino Tatiani Seni de Souza , Cabral de Mello Diogo Cavalcanti , Itoyana Mary Massumi
Published: January 2023

A infraordem Pentatomomorpha possui famílias com características macro-cromossômicas distintas, apresentando diferentes complementos cromossômicos. Essa diferenciação é observada, por exemplo, entre as famílias Coreidae e Pentatomidae. Considerando as inconsistências ainda existentes nessa infraordem, o emprego de técnicas citomoleculares (com ênfase citotaxonômica), pode auxiliar no entendimento de algumas relações entre os táxons ainda não resolvidas. Com o intuito de traçar os processos evolutivos de Pentatomomorpha, dez espécies foram analisadas, utilizando a sonda de DNAr 18S, sendo seis representantes de Coreidae (Corocoris fuscus, Corocoris sp, Dalacoris pictus, Dalacoris obscura, Anasa Bellator e Acantocephala parensis) e 4 de Pentatomidae (Loxa virencis, Mormidae v-luteum, Odmalea sp e Thyanta perditor). O número diploide nos Coreidae variou entre 2n= 18 (Dalacoris pictus, Dalacoris obscura, Anasa Bellator e Acantocephala parensis) e 2n=21 (Corocoris fuscus e Corocoris sp), com o sistema cromossômico do sexo sendo invariavelmente XO e apresentando micro cromossomos. Já nos representantes de Pentatomidae o sistema cromossômico do sexo observado foi o XY, com o numero diploide de 2n= 12. Para todas as espécies estudadas, os sítios de DNAr 18S foram localizados principalmente nos autossomos, sendo observados dois clusters, com localização terminal. Padrões variantes foram observados em duas espécies: Acantocephala parensis (Coreidae) com os clusters nos micro cromossomos e Odmalea sp (Pentatomidae), no cromossomo sexual X. Essa variação na localização do 18S de ambas famílias, sugere que os mecanismos que poderiam causar a dispersão dos sítios de DNAr 18S estão operando eficientemente tanto em Pentatomidae quanto em Coreidae. Geralmente, entre diferentes grupos de insetos, essa variabilidade é descrita como sendo causada por recombinação ectópica e/ou movimento associado com os elementos transponíveis. Houve variação, na localização do gene 18S, na família Pentatomidae evidenciando que apesar da extrema conservação do complemento cromossômico na família, em nível de clusters de DNAr 18S ocorrem variações. Assim, continuaremos com as análises nessas famílias e ampliaremos a quantidade de famílias estudadas, a fim de traçarmos os processos evolutivos, que possivelmente ocorreram durante a evolução cromossômica dos Pentatomomorfos. Processo FAPESP 2016/10135-9
Investigação de Alteração Citogenética Rara em Paciente com Síndrome Mielodisplásica (SMD): Relato de Caso
Authors: Souza Nayara Lopes de , Ribeiro Cristiano Luiz , Cunha Damiana Mirian da Cruz e , Oliveira Lorraynne Guimarães , Cruz Aparecido Divino da , Silva Cláudio Carlos da , Vieira Thaís Cidália
Published: January 2023

A síndrome mielodisplásica (SMD) encontra-se em um grupo heterogêneo de doenças com variadas manifestações clínicas e morfológicas, bem como anomalias hematológicas. A SMD pode ser primária, relacionadas a modificações nas células da medula, com anomalias citogenéticas em 40% a 60% dos casos. Já as secundárias são comuns em indivíduos que já foram expostos a algum agente tóxico, como quimioterápicos ou radiação ionizante. Estudos recentes destacam a importância da análise das alterações citogenéticas para auxiliar no diagnóstico, nas definições prognósticas, no acompanhamento evolutivo bem como na conduta terapêutica. Neste sentido, este trabalho tem como objetivo relatar uma alteração citogenética rara encontrada em um paciente com síndrome mielodisplásica. A amostra foi obtida a partir da medula óssea do paciente que foi encaminhado pelo Sistema Único de Saúde (SUS) para o Laboratório de Citogenética Humana e Genética Molecular (LaGene/Lacen/SES-GO) e Núcleo de Pesquisas Replicon (NPR). A análise foi realizada por citogenética convencional com bandeamento GTG, com o auxílio da utilização do Software IKAROS® (Metasystems Corporation Alemanha) para análise dos dados. Em todas as células analisadas foi observada uma conotação cariotípica de 47, XX, +15. Estudos recentes destacam que deleções, translocações não balanceadas, inversões, cromossomos derivativos e dicêntricos são mais frequentemente encontradas em pacientes com SMD, como as anomalias nas regiões a -7, del (5q), + mar, 8, del (7q), -5, del (20q), -17, -18, -Y, del (12p), -20. Por outro lado, existem poucos relatos de anomalias envolvendo o cromossomo 15 em pacientes com SMD, tornando necessária a realização de exames adicionais para confirmação como técnica de hibridação in situ por fluorescência (FISH).
Longos trechos de contíguos de homozigose frequentes em exames de CGH array, no estado de SC
Authors: Chaves Tiago Fernando , Oliveira Luan Freitas de , O'Campos Maristela , Barbato Ingrid Tremel , Luca Gisele Rozoni de , Barbato Filho Jorge Humberto , Pinto Louise L. , Bernardi Pricila , Maris Angélica Francesca
Published: January 2023

Longos trechos contínuos de homozigose (LCSH) são segmentos cromossômicos neutros, resultantes de homozigose cromossômica ou segmentar (HMZ). Os LCSH podem ser detectadas por plataformas de hibridização genômica comparativa por arrays (CGH array) através de sondas específicas para polimorfismo de um único nucleotídeo (SNP). Dificilmente serão realizados exames de CGH array de base populacional no Brasil, para inferir polimorfismos comuns. Portanto, neste trabalho pesquisamos as LCSH em exames de CGH array de pacientes com distúrbios do desenvolvimento (DD) para identificar algumas das variações comuns. Metodologia: Foram analisadas as citobandas que mais frequentemente apresentaram regiões com LCSH em 374 exames de CGH array (Affymetrix CytoScan® HD ou 750k) de pacientes com DD, cujos responsáveis assinaram o termo de consentimento. Os exames foram solicitados por médicos geneticistas e neurologistas dos Hospitais Infantil e Universitário e de clínicas particulares de Florianópolis, e realizados pelo laboratório Neurogene no período de 2013 a 2016. Foram considerados LCSH apenas quando eram superiores a 3Mbp e nos cromossomos autossômicos e frequentes apenas as que apareceram em mais de 5% dos exames, já que estamos lidando com uma população onde o índice de 1% não seria aplicável. Resultados: Dos 374 exames analisados, 4% não apresentaram nenhum LCSH >3Mbp nos cromossomos autossômicos. A região mais envolvida com a homozigose foi a 16p11.2 (59%)[ (~31,451,698-35,220,544) tamanho médio de 3,5Mbp], essa região é conhecida por estar envolvida em rearranjos cromossômicos devido à presença de flanqueamento de duplicações segmentares. Também foi encontrada homozigose frequente em 11p11.2 (18%), 3p21.31(14%), 15q15.1(10%), 1q21.1(10%), 1q21.2(7%), 2q11.1(6%), 10q22.1(6%) e 1p33(5%). Não há genes envolvidos com imprinting nessas regiões [http://www.geneimprint.com], sugerindo que as mesmas podem ser consideradas variações comuns. Outras 300 regiões genômicas com LCSH apresentaram menores frequências e características que podem ser exploradas para interpretações etiológicas, podendo evidenciar genes candidatos a mutações autossômicas recessivas; um grau de consanguinidade; dissomia uniparental; recombinações cromossômicas ou rearranjos. Conclusão: Relatamos uma série de LCSHs que estão presentes em frequência acima de 5% em indivíduos com o neurodesenvolvimento afetado, sugerindo que provavelmente sejam variações normais na população de SC. Esta informação é importante para a interpretação de achados nos exames de CGH array.
Mapeamento cromossômico das sequências de histonas H1, H3 e H4 e U1, U2 snRNA no gênero Omophoita (Coleoptera, Chrysomelidae)
Authors: Wolski Michele Andressa Vier , Barros Alain Victor de , Nogaroto Viviane , Vicari Marcelo Ricardo , Almeida Mara Cristina de
Published: January 2023

As proteínas histônicas estão presentes no nucleossomo e possuem um importante papel em eventos de modificação da cromatina e controle da expressão gênica. A família multigênica U Small nuclear RNA (U snRNA) compõem a maquinaria do spliceosomo. Embora adequados para utilização como sondas, pouco tem sido explorado em insetos. Com isso, o objetivo deste estudo foi compreender parte dos mecanismos geradores da variação citogenética no gênero Omophoita. Para isso foram caracterizadas as sequências das famílias gênicas H1, H3, H4 e U1, U2 snRNA para posterior  utilização em localização in situ nas espécies: O. octoguttata, O. personata, O. magniguttis e O. sexnotata. Com os resultados foi possível determinar as sequências parciais dos genes aqui estudados. Além disso, foi possível associar a sequência de cada gene com elementos repetitivos: gene H1 e transposon L1-9_LCh; gene U1 snRNA e transposon SINEU-1A_Croc; gene U2 snRNA e transposon DIRS-1d_Lch. A localização in situ destas sequências resultou em: O. octoguttata evidenciou sítios marcados de H3 em todos os cromossomos e, 9 pares autossômicos, X+y, com clusters de H3, U2, U1; O. personata  mostrou 5 bivalentes, X+y, com marcações de H1, H3 e, 8 bivalentes, X+y, com H4, U2, U1; O. magniguttis apresentou marcações de H1 em todos os cromossomos, 8 pares autossômicos e y com H3 e H4, 6 bivalentes e y com U2 e, 5 bivalentes e y com U1; O. sexnotata mostrou a presença de H3 em todos os cromossomos, 3 pares autossômicos, X+y, com H1, 9 bivalentes, X+y, com H4, U2 e, 7 bivalentes, X+y, com U1. Além disso, houve sintenia de localização cromossômica para todas as sequências em todas as espécies analisadas. Os resultados da localização in situ com presença de transposons inseridos mostram variações moleculares nos cariótipos de Omophoita que anteriormente eram consideradas conservadas. Também reforça a hipótese de transposição de sequências associadas a elementos transponíveis e origem de pseudogene de famílias multigênicas. Embora preliminares, os resultados obtidos para a caracterização das famílias gênicas histônicas e U snRNA mostraram-se promissores para o entendimento das variações cariotípicas interespecíficas em Omophoita.Apoio: CNPq, SETI-PR, Fundação Araucária e CAPES
Mapeamento físico de snDNA U2 em espécies da família Cichlidae
Authors: Usso Mariana Campaner , Baldissera Joana Neres da Cruz , Vanzela André Luis Laforga , Caetano Lucia Giuliano , Dias Ana Lúcia
Published: January 2023

O processo de splicing do RNA mensageiro é realizado pelo spliceossomo em um dos maiores e mais complexos mecanimos moleculares da célula. O spliceossomo consiste em cinco RNAs nucleares (snRNAs) – U1, U2 U4,U5 e U6 que, unidos com vários fatores proteicos, formam uma  ribonucleoproteína nuclear (snRNPs). Os ciclídeos são um dos maiores e mais diversificados grupos de peixes, sendo importantes modelos de evolução biológica, além de serem apreciados na aquariofilia e aquicultura. Apesar disso, ainda são poucos os trabalhos citogenéticos, com somente 154 espécies cariotipadas até o momento e este número se restringe ainda mais quando se trata de análises com sequências de DNAs repetitivos, principalmente em ciclídeos neotropicais. Sendo assim, o presente estudo tem como objetivo a localização cromossômica do gene snRNA U2 em diferentes espécies da família Cichlidae. Foi realizada a extração de DNA de Cichlasoma e utilizada como molde para amplificação do gene U2, com os primers U2F (59-ATC GCT TCT CGG CCT TAT G–39) e U2R (59-TCC CGG CGG TAC TGC AAT A-39). Essa PCR foi marcada com Cy3dUTP. O fragmento da PCR obtido no presente trabalho foi de, aproximadamente, 200 pb o que parece ser semelhante ao encontrado para o mesmo gene no genoma humano, que mostra uma região codificante de 188 pb. A hibridação fluorescente in situ (FISH) foi realizada em seis espécies de ciclídeos neotropicais. Cichlasoma portalegrense, Gymnogeophagus gymnogenys, Crenicichla lepdota, Crenicichla maculata  e Crenicichla niederleinii  apresentaram um par portador do sitio de DNAsn U2, enquanto Crenicichla britski apresentou dois pares. Os estudos com a sequência de DNAsn U2 em peixes ainda são muito restritos, mas em sua maioria evidenciam essa sequência em um único par cromossômico contudo, estudos recentes demonstram uma variabilidade maior em relação ao mapeamento físico desta sequência. Em ciclideos existem análises de DNAsn U1 para 12 espécies, todas com um único sítio portador da sequência entretanto, para DNAsn U2 os dados aqui apresentados são os primeiro neste grupo de peixes e, apesar de preliminares, já indicam que análises desta e outras sequências de DNA repetitivo podem contribuir para um maior entendimento da organização genômica da família Cichlidae.
Potencial citogenotóxico de extratos aquoso de Pimenta Rosa
Authors: Amaral Isabela Schiavon , Kuentzer Mônica , Peter Rejane , Santi Ivandra , Rocha Beatriz Helena Gomes , Bobrowski Vera Lúcia
Published: January 2023

Schinus terebinthifolius Raddi, popularmente conhecida como aroeira mansa, vermelha ou aroeira pimenteira, é uma espécie nativa do Brasil e com ampla distribuição geográfica. A aroeira é uma espécie de valor apícola, medicinal e condimentar. A pimenta-rosa é o fruto da aroeira-mansa, de sabor levemente picante e adocicado, rico em vitamina A, vitamina B1, vitamina B2, vitamina B3, vitamina E, cálcio, ferro e fibras, contudo seu uso requer cautela, devido a sua toxicidade. Em estudos com aroeira mansa, os autores desta pesquisa observaram efeitos alelopáticos de extratos aquosos de folhas e flores de aroeira mansa em Lactuca sativa L., porém não encontraram alterações cito e genotóxicas, com as concentrações testadas. Nessa perspectiva, objetivou-se avaliar os efeitos citotóxicos e genotóxicos do extrato aquoso de sementes de aroeira mansa sobre células meristemáticas radiculares de sementes de alface. Foram testadas cinco concentrações do extrato (0; 12,5; 25; 50 e 100% v/v), com quatro repetições de 100 sementes por tratamento e crescidas a 20ºC, em delineamento estatístico inteiramente casualizado. Foram avaliadas as variáveis índice mitótico, índice metafásico e índice anafásico e anormalidades cromossômicas, analisando-se células meristemáticas de pontas de raízes de quatro dias, seguindo a metodologia descrita por Fonseca et al. (2015). As diferentes concentrações do extrato aquoso de sementes aroeira não diferiram estatisticamente em todas as variáveis analisadas nem induziram alterações cromossômicas significativas. Pode-se concluir que, as diferentes concentrações do extrato aquoso de sementes de aroeira não causaram alteração no processo de divisão celular do organismo teste utilizado. Contudo, é recomendada a utilização de outros bioindicadores para comparação.