Προσδιορισμός διαφόρων ανοσοβιολογικών παραμέτρων σε αρθριτικούς επίμυς
Authors: Τέστα Θεοδολίντα 
Published: August 2021

Ως απόκριση σε ενδογενείς και εξωγενείς παράγοντες, οι ανώτεροιοργανισμοί ενεργοποιούν την απόκριση οξείας φάσης με σκοπό την επαναφοράτης ομοιόστασης. Η α1-όξινη γλυκοπρωτεΐνη (AGP) αποτελεί κύρια πρωτεΐνη οξείαςφάσης που αυξάνεται σημαντικά κατά τη διάρκεια της απόκρισης οξείας φάσης ήσε χρόνιες φλεγμονώδεις αντιδράσεις, όπως η ρευματοειδής αρθρίτιδα. Η AGPείναι ένα υπεργλυκοσυλιωμένο μόριο που μπορεί, θεωρητικά, να βρεθεί σε 105διαφορετικές ισομορφές. Έχει δειχθεί ότι η αύξηση της συγκέντρωσης της AGPστον ορό, έπειτα από συστημική χορήγηση καθαρής AGP, οδηγεί σε επιδείνωσητων συμπτωμάτων της αρθρίτιδας σε ΑΑ επίμυς, ενώ η αύξηση των επιπέδων τηςτοπικά στο αρθρικό υγρό των ΑΑ επίμυων, έπειτα από αγωγή με δηλητήριο τηςμέλισσας, συνοδεύεται από πλήρη καταστολή της νόσου. Το σύστημα του ραχιαίουαεροθύλακα προσομοιάζει την άρθρωση αφού περιλαμβάνει μία μεμβράνηπαρόμοια με την αρθρική που συμπεριφέρεται ως φραγμός και μπορεί ναχρησιμοποιηθεί προκειμένου να διερευνηθεί η τοπική δράση της AGP.Σκοπός της παρούσας διδακτορικής διατριβής είναι να προσδιοριστεί ημικροετερογένεια της σύνθεσης και της γλυκοσυλίωσης της AGP κατά τη διάρκειατης ανάπτυξης της αρθρίτιδας στον ορό του αίματος και το μυελό των οστών σεσύγκριση με την αντίστοιχη απόκριση στον ιστό του αεροθύλακα ως σύστημαπροσομοίωσης της άρθρωσης. Επιπλέον, στόχος είναι: (α) να προσδιοριστεί ορόλος της AGP στο μηχανισμό παθογένειας της αρθρίτιδας στους επίμυς και (β) ναδιερευνηθεί ο πιθανός ρόλος των κυττάρων, που επιδεικνύουν συγκεκριμένοπρότυπο σύνθεσης των ισομορφών της AGP, στην ανάπτυξη της αρθρίτιδας στουςεπίμυς.Η ανάπτυξη αρθρίτιδας στους επίμυς συνοδεύεται από την μικροετερογένειαστη σύνθεση των διαφόρων ισομορφών της AGP που παρατηρείται στο αίμα και τομυελό των οστών και τη σημαντική μείωση του αριθμού των κυττάρων του μυελούτων οστών λόγω της κινητοποίησής τους προς το περιφερικό σύστημα. Τααποτελέσματα αυτής της διατριβής ανέδειξαν την 45 kDa AGP ως την αποκλειστικήεκκρινόμενη ισομορφή κατά τη συστημική απόκριση οξείας φάσης. Αυτή ηισομορφή συντίθεται από τα μονοπύρηνα κύτταρα του αίματος των αρθριτικώνεπίμυων, ενώ δεν συντίθεται από τα κύτταρα του μυελού των οστών. Η σύνθεσητης 45 kDa ισομορφής της AGP από τα μονοπύρηνα κύτταρα του αίματος και ηέκκρισή της στο πλάσμα αυξάνονται πριν από την έναρξη των συμπτωμάτων τηςαρθρίτιδας. Ο μυελός των οστών των επίμυων επιδεικνύει διφασική σύνθεση της55 kDa ισομορφής της AGP, όπως φαίνεται από τη μείωση των επιπέδων της πριναπό την έναρξη της νόσου και τη σημαντική αύξησή της κατά την ενεργό φάσητης αρθρίτιδας. Η εργασία αυτή ανέδειξε ότι η συστημική αύξηση στη σύνθεση καιέκκριση της 45 kDa AGP ισομορφής σε συνδυασμό με τη μείωση στην τοπικήΠερίληψη160σύνθεση της 55 kDa ισομορφής της AGP στο μυελό των οστών είναι γεγονότα πουπιθανά σχετίζονται με την ομοιοστατική δράση της AGP ή με το μηχανισμόανάπτυξης ΑΑ στους επίμυς. Επιπλέον, η συστημική χορήγηση αντισωμάτωνενάντια στην AGP οδηγεί σε βελτίωση των συμπτωμάτων της αρθρίτιδας, ενώ ησυστημική υπερέκφραση της 45 kDa ισομορφής παρουσιάζει διπλήανοσοτροποποιητική δράση αφού επιταχύνει την έναρξη και επιτείνει τη βαρύτητατης νόσου, ενώ δεν επιτρέπει την παραμόρφωση της άρθρωσης.Τα αποτελέσματα αυτής της διατριβής επιβεβαιώνουν όλα τα μορφολογικάστοιχεία που δείχνουν ομοιότητα ανάμεσα στην άρθρωση και το σύστημα τουαεροθύλακα. Επιπλέον, δείχνουν ότι το FCA στον αεροθύλακα ενεργοποιεί, όπωςκαι στην άρθρωση των ΑΑ επίμυων, την παραγωγή ανοσορυθμιστικών προϊόντων,όπως παράγοντες της φλεγμονής (COX-1, COX-2), κυτοκίνες (IFNγ, IL-8, TNFα)και υποδοχείς (TLRs). Στο σύστημα του αεροθύλακα μετά από χορήγηση FCA,παρατηρείται διαφορική ενεργοποίηση της σύνθεσης της AGP, καθώς η μεμβράνητου αεροθύλακα παράγει κυρίως τη 45 kDa ισομορφή, ενώ τα πολυμορφοπύρηνακύτταρα που τη διηθούν εκκρίνουν βασικά τις υψηλού μοριακού βάρουςισομορφές. Η 55 kDa ισομορφή της AGP δεν εκκρίνεται στο εξίδρωμα τουαεροθύλακα αμέσως μετά τη χορήγηση του FCA. Η κυτταρική θεραπεία με τοπικήχορήγηση φυσιολογικών κοκκιοκυττάρων του μυελού των οστών που παράγουντην 55 kDa ισομορφή της AGP ή πολυμορφοπύρηνων κυττάρων πουσυσσωρεύονται στον αεροθύλακα που παράγουν τόσο την 55 kDa όσο και την 45kDa ισομορφή της AGP, οδηγεί σε ύφεση των συμπτωμάτων της αρθρίτιδας. H 50kDa ισομορφή της AGP εκκρίνεται κυρίως από τα κύτταρα της μεμβράνης τουαεροθύλακα και πιθανά από τα ενδοθηλιακά κύτταρα των αγγείων της μεμβράνης,δρώντας ως αντιφλεγμονώδες μόριο αναστολής της εξαγγείωσης των κυττάρων.Συμπερασματικά, αυτή η έρευνα παρέχει στοιχεία που αποδεικνύουν τη διπλήανοσοτροποποιητική δράση της AGP που εξαρτάται τόσο από το μικροπεριβάλλονστο οποίο παράγεται όσο και τη μετα-μεταφραστική της γλυκοσυλίωση, γεγονόςπου την καθιστά υποψήφια για εφαρμογή θεραπευτικών σχημάτων πουπεριλαμβάνουν γονιδιακή, κυτταρική ή κυτταρική/γονιδιακή θεραπεία