Untersuchung der KMT9a-Expression an einer retrospektiven Kohorte von Patienten mit Adenokarzinom des Rektums mittels Tissue Microarray (TMA) Technologie
Authors:   , Sure Julia 
Published: January 2025

Hintergrund und Ziele:
Darmkrebs ist bei Frauen die zweithäufigste und bei Männern die dritthäufigste Tumorerkrankung in Deutschland. In vielen wissenschaftlichen Arbeiten werden Rektumkarzinom und Kolonkarzinom unter dem Begriff Kolorektales Karzinom (CRC) zusammengefasst untersucht. Über ein Drittel der CRC sind im Rektum lokalisiert. Aufgrund der anatomischen Besonderheiten (retro-/extraperitoneale Lage, spezielle Gefäßversorgung) bestehen große Unterschiede zum Kolonkarzinom hinsichtlich Diagnostik, Therapie und Prognose. Im Rahmen dieser Arbeit wurden klinisch etablierte Marker sowie ein potenziell relevanter neuer Biomarker (KMT9a) anhand einer reinen Rektumkarzinomkohorte getestet und ihre Relevanz diskutiert.
Methoden:
In einer Kohorte von 81 Patienten mit histologisch diagnostiziertem Rektumkarzinom wurden histologische Schnittpräparate ausgewählt und tumorreiche Regionen annotiert. Es folgte die digital gesteuerte Tissue Microarray (TMA) Konstruktion, um im Anschluss die Gewebeproben einer einheitlichen und reproduzierbaren Färbung unterziehen zu können. Zunächst wurde eine HE-Färbung des TMAs durchgeführt, dann folgte die Färbung weiterer immunhistochemischer Marker: TP53, Beta-Catenin, MLH-1, PMS-2, MSH-6, MSH-2, Sat-B2, Ki67, Gamma-H2AX und KMT9a. Diejenigen Fälle, bei welchen die Mismatch-Repair-Proteine in der IHC einen Expressionsverlust aufwiesen, wurden mithilfe einer molekularen Referenzmethode validiert (Biocartis Idylla MSI). Die Schnitte wurden zuerst digitalisiert und anschließend entweder visuell oder mithilfe einer Software analysiert. Abschließend erfolgte die statistische Auswertung mittels Fisher’s Exact Test im Hinblick auf mögliche Assoziationen der Färbeergebnisse mit den klinisch-pathologischen Daten. Zusätzlich zur Häufigkeitsverteilung der gesammelten Daten wurde ein Clustering erstellt, um die Kohorte weiter zu stratifizieren.
Ergebnisse:
Die Gegenüberstellung der Auswertung von TP53 mit klinisch-pathologischen und histopathologischen Parametern mithilfe des Fisher’s Exact Tests ergab eine Assoziation des mutierten Tumorsuppressor-Proteins mit einem fortgeschrittenem pT-Stadium (p=0,016) sowie einer gesteigerten Ki67- Proliferation (p=0,016). Dies stützt die wissenschaftlich bereits vielfach belegte Annahme, dass eine Mutation von TP53 die Tumorgenese begünstigt.
In der untersuchten Kohorte konnte KMT9a in allen Tumoren nachgewiesen werden, wohingegen das Normalgewebe keine KMT9a-Expression zeigte. Des weiteren zeigte sich, dass die KMT9a-Expression in den Fällen mit einer hohen Ki67-Expression sowie mit nukleärer Expression von Beta-Catenin signifikant erhöht war (p=0,018 mit Fishers‘ Exact Test). Dies könnte ein Hinweis darauf sein, dass hohe Konzentrationen der Histonmethyltransferase KMT9a mit gesteigertem Tumorwachstum assoziiert sind.
Die Cluster-Analyse ergab, dass sich die Kohorte hauptsächlich anhand der TP53 Expression stratifizieren lässt.
Schlussfolgerung:
Die im Rahmen dieser Arbeit hergestellten TMAs ermöglichen ein effizientes, ressourcenschonendes Screening der Kohorte auch für zukünftige Fragestellungen.
Die Daten deuten darauf hin, dass KMT9a eine wichtige Rolle in der Karzinogenese der Rektumkarzinome spielt. Weitere Studien werden zeigen, ob KMT9a als prognostischer Marker klinische Relevanz hat und sich eventuell sogar als therapeutisches Ziel nutzen lässt.