Preparation and Properties of Serum and Plasma Proteins, XXXV
Authors: Surgenor Douglas M. , Pennell Robert B. , Alameri Eva , Batchelor William H. , Brown Ray K. , Hunter Margaret J. , Mannick Virginia L. 
Published: March 2009

Advantage has been taken of the altered solubilities of the zinc complexes of plasma proteins in developing a new system of fractionation. Zinc complexes are readily and reversibly formed; they exhibit generally reduced solubility in the neutral pH range, thus obviating exposure of the proteins to harsh conditions of pH, ionic and dielectric strengths. Many zinc protein complexes can be separated without the use of ethanol; the most soluble ones are precipitated from 15% ethanol at neutral pH. A key step involves separation of the proteins whose zinc complexes are water soluble at neutral pH from those which are insoluble. The latter fraction comprises mostly high molecular weight globulins. The water soluble fraction consists mainly of albumin and certain α‐ and β‐pseudoglobulins; it has been called Stable Plasma Protein Solution in view of its properties following zinc removal. The zinc is removed from each fraction by chelation, ion exchange, or a combination of the two. Quantitative data document the separations achieved by this new system of fractionation.

Pour établir un nouveau système de fractionnement des protéines plasmatiques, les auteurs ont tiré avantage de la modification de la solubilité que présentent des complexes constitués par des protéines plasmatiques traitées par le zinc. Les complexes au zinc se forment rapidement et sont reversibles; d'une manière générale, ils montrent une solubilité réduite au niveau d'un pH neutre, pour autant qu'on évite d'exposer les protéines à des conditions de pH, force ionique et diélectriques trop discordantes. Les complexes protéiniques au zinc peuvent être séparés sans utiliser l'éthanol; les plus solubles d'entre eux sont traités par l'éthanol à 15° à un pH neutre. Cette méthode permet la séparation de deux fractions: la première constituée de protéines dont le complexe au zinc est soluble dans l'eau à un pH neutre et la seconde constituée de protéines dont le complexe au zinc est insoluble. Parmi cette dernière fraction, on trouve plus particulièrement des globulines à hauts poids moléculaires. La fraction hydrosoluble est constituée surtout d'albumine et de certaines alpha‐et beta‐pseudoglobulines; cette fraction a reçu le nom de Stable Plasma Protein Solution (solution de protéine plasmatique stable) du fait de ses propriétés apres libération du zinc excédentaire. Chaque fraction est libérée du zinc excédentaire par des chélateurs, des échangeurs d'ions ou par la combinaison des deux systèmes. Les données quantitatives corroborent les résultats de séparations obtenus par ce nouveau système de fractionnement.

Manche Plasmaproteine bilden leicht und reversibel Komplexe mit Zinkionen und ändern dabei ihre Löslichkeitseigenschaften. Diese Tatsache bildete die Grundlage zur Entwicklung einer neuen Fraktionierungsmethode.

Die Zn**‐Protein‐Komplexe sind im neutralen pH‐Bereich im allgemeinen schlecht löslich. Die Proteine brauchen daher zur Fällung keinen extremen pH‐Werten, Ionenstärken oder dielektrischen Bedingungen ausgesetzt zu werden. Zahlreiche Zn**‐Protein‐Komplexe kannen so überhaupt ohne Alkoholzugabe abgetrennt werden. Selbst die leichtest löslichen Proteine sind bei neutralem pH mit 15% Aethano1 ausfällbar.

In einem ersten Fraktionierungsschritt werden die Proteine, die wasserlösliche Zn**‐Komplexe bilden, von denen, deren Zn**‐Komplexe wasserunlöslich sind, abgetrennt. Die zweite Fraktion enthält vorwiegend Eiweiße mit hohem Molekulargewicht. Die wasserlösliche Fraktion besteht vorwiegend aus Albumin; sie enthält daneben gewisse α‐ und β‐Pseudoglobuline. Sie wurde, nach Entfernung der Zn‐Ionen, ihrer Eigenschaften wegen stabile Plasma‐Protein‐Lösung (Stable Plasma Protein Solution, SPPS) genannt.

Die Zinkionen werden aus den einzelnen Fraktionen durch Bildung von Chelatkomplexen, durch Ionenaustausch oder durch Kombination beider Methoden entfernt.

Die Resultate der quantitativen Untersuchungen geben einen Überblick über die mit der neuen Fraktionierungsmethode erzielten Ergebnisse.