bluuebunny/crossref_metadata_2025 huggingface dataset:
Influence of chromatin‐structure on accessibility and transcriptional regulation of the duck histone H5‐gene
Authors: Kober I. , Seifart K. H.
Published: February 2011

The structure in which genes are packaged in chromatin is presumably of paramount importance for the regulation of their expression in vivo and much current research is centred on unravelling the underlying mechanisms. Here we show, that a nucleosomal core particle can be efficiently reconstituted in vitro over the transcription initiation site of the duck histone H5‐gene specifically expressed in avian and amphibian erythrocytes. Under these conditions binding of transcription activator eUSF is still possible although the specific binding site for this factor is incorporated into the nucleosome. In contrast we found that corresponding promoter regions of the duck histone H5‐gene are nuclease‐sensitive in differentiated erythrocytes and are hence free of nucleosomes. In vitro reconstitution of nucleosomes on plasmids harboring the H5‐gene leads to complete repression of H5‐transcription. This repression can be specifically prevented by preincubating the template DNA with a particular protein fraction from HeLa cells, whereas addition of the same fraction after nucleosome assembly can not relieve repression.

Einfluß der Chromatinstruktur auf die Zugänglichkeit und Transkriptionsregulation des Histon‐H5‐Gens der Ente

Elemente der Chromatinstruktur, in die eukaryontische Gene in vivo integriert sind, beeinflussen in hohem Maße deren Expression und die Analyse der zugrundeliegenden Mechanismen ist für das funktionelle Verständnis der Genregulation von groier Bedeutung. Der vorliegende Bericht zeigt, daß es möglich ist, ein Nukleosom in vitro spezifisch über dem Transkriptionsstartpunkt des erythroid‐spezifisch exprimierten Histon H5‐Genes der Ente zu positionieren. Obwohl eine Bindungsstelle für den Transkriptionsaktivator eUSF sich im Bereich des Nukleosoms befindet, kann eUSF auch unter solchen Bedingungen diesen DNA‐Bereich spezifisch binden. Anhand von in vivo Untersuchungen wiesen wir nach, daß im Gegensatz zu diesen Rekonstitutionsexperimenten entsprechende Bereiche des H5‐Promotors in differenzierten Erythrocyten besonders zugänglich für Nukleasen und daher frei von Nukleosomen sind. Wir zeigen ferner, daß in vitro Rekonstitution von Nukleosomen an H5‐Plasmid‐DNA zu vollständiger Inhibition der Transkription führt und daß Vorinkubation der Matrizen‐DNA mit einer aus HeLa‐Zellen chromatographisch gewonnenen Proteinfraktion diese Hemmung spezifisch verhindern kann. Die selbe Proteinfraktion bewirkt keine Aufhebung der Repression, wenn ihre Zugabe erst nach Beendigung der Nukleosomenrekonstitution erfolgt, eine Remodelierung des Chromatins, die zur Aufhebung des reprimierten Zustandes führt, kann also durch diese Fraktion nicht erzielt werden.
Defining candidate genes for mastitis resistance in cattle: the role of lactoferrin and lysozyme
Authors: Seyfert H.‐M. , Henke M. , Interthal H. , Klussmann U. , Koczan D. , Natour S. , Pusch W. , Senft B. , Steinhoff U. M. , Tuckoricz A. , Hobom G.
Published: February 2011

We summarize our previous and ongoing efforts to characterize two potential candidate genes (lactoferrin and lysozyme) for mastitis resistance and examine their relevance for an improvement of udder‐health in cows. The genes encoding lactoferrin (Lf) and lysozyme (Lys) have been isolated and characterized at the DNA‐sequence level, besides the αS1‐casein gene. Starting from these data, two different strategies are being persued to analyse their relevance in breeding for mastitis resistance. First, based on the molecular characterization of their natural variants we are searching for high‐performance alleles of both genes in the active breeding population. A first trend for the implication of a Lf‐gene variant in mastitis‐resistance is seen in the Norwegian breeding population. Second, we want to assess experimentally the value of these genes for mastitis resistance under physiological conditions in transgenic experiments, under expression control of the bovine αS1 ‐casein gene promoter. Based upon extensive molecular and cell biological characterizations of the bovine αS1 ‐casein gene and its regulatory elements, a vector cassette has been constructed for transgene expression in the mammary gland. Positive expression of a lactoferrin expressing transgene in the mammary gland of mice has been demonstrated.

Zur Definition von Kandidatengenen für Mastitisresistenz beim Rind: Die Bedeutung von Laktoferrin und Lysozym

Es wird eine Übersicht gegeben über unsere langjährigen Untersuchungen zur Charakterisierung zweier möglicher Kandidatengene für Mastitisresistenz (Laktoferrin und Lysozym) beim Rind. Beide Gene wurden isoliert und sequenziert, sowie das αS1 ‐Casein‐Gen. Hierauf aufbauend werden zwei Strategien verfolgt, um ihre grundsätzliche Bedeutung für Mastitis Resistenz zu analysieren. Zum einen wurden ihre natürliche Genvarianten beschrieben, um nun nach Hochleistungsvarianten in der aktiven Zuchtpopulation suchen zu können. Ein erster Hinweis auf die Beteilung einer Lf‐Genvariante wurde anhand der Norwegischen Zuchtpopulation erhalten. Zum zweiten soll experimentell die Bedeutung beider Gene zur Abwehr euterpathogener Organismen unter den physiologischen Bedingungen der Milchdrüse in transgenen Experimenten untersucht werden, und zwar unter der Expressions‐Kontrolle durch den bovinen αS1‐Caseingen‐Promotor. Basierend auf der molekularen und zellbiologischen Charakterisierung des bovinen αS1‐Caseingens und seiner genetischen Steuerelemente wurde ein Vektorkassette zur Transgenexpression in der Milchdrüse aufgebaut. Die Expression des bovinen Laktoferringens wurde in der Milchdrüse von transgenen Mäusen nachgewiesen.
Molecular characterization of the porcine MHC class I region
Authors: Shabahang M. , Gaycken U. , Meyer J.‐N. , Hertner U. , Glodek P.
Published: February 2011

Four different clones, PG2, PG3, PG5 and PG6, were isolated by screening a cosmid library of an inbred homozygous SLA typed pig with a human MHC class I cDNA probe (Hertner 1991). These clones were mapped with four different restriction endonucleases (EcoRI, BamHI, HindIII and KpnI). After hybridization, nine SLA class I genes were identified. By transfection of the four clones into Ltk‐ cells, the expression of the SLA class I genes was measured cytometrically using an SLA specific antiserum. To differentiate between classical and‐non‐classical genes, the exons 2 and 3 of the 9 genes were sequenced. After determination of the G/C content at the third codon position and comparison with sequences of published SLA class I genes, three of them could be identified as classical genes. A specific primer was constructed for one of these classical class I genes and used to amplify and differentiate the exon 2 of 200 animals from four different German pig breeds.

Molekulargenetische Charakterisierung der MHC Klasse I Region beim Schwein

Vier unterschiedliche Klone PG2, PG3, PG5 und PG6 wurden durch Screening der Cosmidbank eines in seinen SLA‐Haplotypen homozygoten Hausschweines mit einer humanen MHC‐Klasse I‐cDNA‐Sonde isoliert (Hertner 1991). Eine Restriktionskarte für diese Klone wurde mit vier verschiedenen Endonukleasen (EcoRI, BamHI, HindIII und KpnI) erstellt. Durch Hybridizierungsversuche ließen sich neun SLA‐Klasse I‐Gene identifizieren. Nach der Transfektion der vier Klone in Ltk‐ Zellen wurde die Expression der SLA‐Klasse I‐Gene mit Hilfe eines spezifischen Antiserums cytometrisch gemessen. Um die neun Klasse I‐Gene den ‘klassischen’ oder ‘nicht klassischen’ Genen zuzuordnen, wurden die hoch polymorphen Exon 2‐ und 3‐Regionen sequenziert. Nach Bestimmung des G/C‐Gehaltes an der dritten Codonposition der sequenzierten Regionen und des Vergleichs mit den publizierten Sequenzen der SLA‐Klasse I‐Gene wurden drei Gene als ‘klassisch’ zugeordnet. für ein ‘klassisches’ Klasse I‐Gen wurde ein spezifischer Primer konstruiert, mit dem die Exon 2‐Region von 200 Tiere aus vier verschiedenen Schweinerassen amplifiziert wurden.
Major histocompatibility and T‐cell receptor genes in Artiodactyls: characterization, polymorphism and genetic resistance to a helmintic infection
Authors: Buitkamp J. , Epplen J. T.
Published: February 2011

Resistance or susceptibility to an infectious disease is determined to some extend by genetic variation of the host. This genetic variation can be used to breed more resistant animals to reduce costs for the control of the infection. Since the recording of parameters for disease resistance is usually time consuming, it was not feasible to include these into classical selection indices. Disease resistance associated markers could be used to select for this trait more efficiently. We developed PCR based characterization of an artiodactyl T cell receptor variable element (TCRVB6) and a major histocompatibility complex(MHC)‐DRBgene. Both genes could be amplified in a wide range of artiodactyl species. They harbour simple repetitive sequences in almost the same genomic position as in the human homologes. We developed anMHC‐DRBtyping system combining the microsatellite information with the hybridization of polymorphism specific oligonucleotides. To investigate possible associations to the faecal egg count (FEC), a flock of Scottish Blackface sheep has been typed for theTCRBVand theMHC‐DRBloci. TheMHC‐DRBshowed a highly significant association to the FEC. Potential applications and evolutionary aspects are discussed.

Haupthistokompatibilitäts‐Komplex und T‐Zell‐Rezeptor‐Gen bei Paarhufern: Charakterisierung, Polymorphismen und genetische Resistenz bei einer Wurminfektion

Individuelle Unterschiede in der Resistenz gegen Infektionen sind teilweise durch genetische Variation des Wirtes bedingt. Diese genetische Variation kann genutzt werden, um auf Resistenz zu Züchten und damit die durch Krankheiten bedingten Kosten zu vermindern. Die Erfassung geeigneter Parameter für Krankheitsresistenz ist zeitaufwendig, wodurch die Berücksichtigung in klassischen Zuchtverfahren bisher nicht möglich war. Genetische Marker, welche mit der Resistenz assoziiert sind, können für eine effizientere Selektion benutzt werden. Es wurden PCR‐Systeme für ein variables Element des T‐Zell‐Rezeptor‐Komplexes (TCRVB6) und für ein Haupthistokompatibilitätsgen (MHC‐DRB) entwickelt. Beide Systeme konnten bei verschiedenen Paarhufern angewendet werden. In beiden Genen liegen simple repetitive Sequenzen an fast der gleichen Position wie bei den entsprechenden menschlichen Genen. Dies ermögfichte die Etablierung von PCR‐Typisierungssystemen, welche die gleichzeitige Darstellung von Längenvariationen der Mikrosatelliten und von exonischen Polymorphismen erlauben. In einer Herde von Scottish Blackface Schafen wurde die Assoziation beider Loci mit der Eizahl im Kot untersucht. DasMHC‐DRB‐Gen ist hochsignifikant mit der Eizahl im Kot assoziiert. Mögliche Anwendungen und evolutionäre Aspekte werden diskutiert.
Molecular characterization of the sheep mitochondrial genome
Authors: Hiendleder S.
Published: February 2011

Mitochondrial DNA (mtDNA) from 240 sheep of 10 breeds and several wild sheep was analysed in an RFLP study with 14 restriction enzymes. Phylogenetic analyses revealed two major domestic sheep mtDNA lineages, and the mitochondrial genome of one sheep from each lineage was mapped and cloned. The complete nucleotide sequence of one of these mtDNAs, which comprises 16616 bp, was determined and 7160 bp were comparatively sequenced. The D‐loop region and the genes encoding Cyt. b, ND 3, CO III, 8 tRNAs (Ala, Arg, Asn, Gln, Gly, Ile, Met, Trp) as well as the origin of L‐strand replication were completely characterized. Partial sequence data were obtained from ND1, ND2, ND41, ND5, ATPase 6, 12s RNA and 5 tRNA (Cys, Glu, Phe, Pro, Thr) genes. Several nucleotide substitutions, some of which cause changes in the predicted amino acid sequences, were observed. Statistical analysis showed significant mtDNA effects on birthweight of lambs, but maternal contributions could not be completely separated from cytoplasmic effects.

Molekulare Analyse des mitochondrialen Genoms von Schafen

Die mitochondriale DNA (mtDNA) von 240 Schafen aus 10 Rassen sowie verschiedener Wildschafe wurde in einer RFLP‐Studie mit 14 Restriktionsenzymen untersucht. Die phylogenetische Analyse zeigte zwei Haupt‐mtDNA‐Linien beim Hausschaf auf. Die mitochondrialen Genome von einem Schaf aus jeder dieser Linien, wurden kartiert und kloniert. Die Nukleotidsequenz einer mtDNA, die 16616 bp umfaßt, wurde vollständig bestimmt und 7160 bp vergleichend sequenziert. Die D‐Loop‐Region sowie die Gene für Cyt. b, ND 3, CO III, 8 tRNAs (Ala, Arg, Asn, Gln, Gly, Ile, Met, Trp) und der L‐Strang‐Replikationsursprung wurden vollständig verglichen. Teilsequenzvergleiche konnten im Bereich der ND 1‐, ND 2‐, ND 4L‐, ND 5‐, ATPase 6‐, 12s RNA‐Gene sowie verschiedener tRNA‐Gene (Cys, Glu, Phe, Pro, Thr) durchgeführt werden. Dabei wurden Nukleotidsubstitutionen beobachtet, die teilweise Veränderungen in den abgeleiteten Aminosäuresequenzen zur Folge haben. Die statistische Analyse ergab signifikante mtDNA‐Effekte auf das Merkmal Geburtsgewicht, die jedoch nicht vollständig von anderen maternalen Einflüssen getrennt werden konnten.
Isolation and mapping of porcine chromosome‐specific microsatellites
Authors: Nagel M. , Looft Chr. , Renard C. , Chardon P. , Reinsch N. , Vaiman M. , Kalm E.
Published: February 2011

Isolation of microsatellites from targeted chromosomes is an alternative approach for constructing high density genetic maps. In this study new microsatellite markers from a targeted chromosome were isolated and integrated in the USDA map. Flow sorted chromosomes were amplified with different random primers by PARM‐PCR, selected by fragment size and cloned. Material of a second PARM‐PCR and a (TG)10probe were used for screening a porcine genomic cosmid library. A number of 10 000 flow sorted chromosomes were also used to construct a partial chromosome specific library. After cloning, re‐screening, and sequencing 11 microsatellites were identified. For polymorphism studies DNA of 25 animals from 13 breeds was analysed. For linkage analysis reference families were typed with three informative microsatellites and 4 already mapped markers. The physical localization of the microsatellites was performed by FISH.

Isolierung und Kartierung von cbromosomen‐spezifischen Mikrosatelliten beim Schwein

Ziel dieser Forschungsarbeit war es, zur Ergänzung der genetischen Karte beim Schwein chromosomenspezifische Mikrosatellitenmarker zu isolieren und zu kartieren. Die 1000 Chromosomen der ersten Sortierung wurden unter Verwendung von unterschiedlichen Zufallsprimern mit der PARM‐PCR amplifiziert, z.T. größenfraktioniert und kloniert. Das Material einer zweiten PARM‐PCR wurde als Sonde zum Screenen einer Cosmidbibliothek verwendet, um eine partielle chromosomenspezifische Bibliothek zu erstellen. für einen weiteren Versuch wurden 10000 Chromosomen gewonnen und die DNA kloniert. Nach Screenen, Selektion und Sequenzierung der positiven Klone konnten 11 verschiedene Mikrosatelliten identifiziert werden. Die Charakterisierung der Mikrosatelliten erfolgte anhand von 25 Tieren, die 13 unterschiedliche Schweinerassen repräsentieren. Anschließend wurden die Referenzfamilien mit den Markern typisiert und die genetischen Abstände anhand einer Kopplungsanalyse geschätzt. Ergänzend dazu erfolgte die physikalische Kartierung der Mikrosatelliten aus den Cosmidklonen mit Hilfe der FISH.
Isolation and characterization of bovine chromosome region specific sequence‐tagged microsatellite sites (STMS)
Authors: Weikard R. , Goldammer T. , Brockmann G. , Kühn Ch. , Schwerin M.
Published: February 2011

A strategy to fill in gaps in small targeted regions of bovine chromosomes is presented. The procedure involved microdissection of subchromosome areas, their PCR amplification and cloning. Out of three approaches which have been tested to amplify chromosome material two have shown tobe not suitable for generation of bovine chromosome region specific probes. In contrast, probes generated by DOP‐PCR after treatment with Topoisomerase I showed region specific rehybridization on the corresponding dissected chromosome areas indicating a representative and complex pattern of specific sub‐chromosomal sequences. Nevertheless, all methodical steps still require special emphasis on accurate handling to exclude formation of artifacts and contamination with DNA of other sources. Using this approach chromosome region specific libraries were established from the chromosome areas 1q1.1‐1.4, 5q2.1‐2.4, 1q1.3‐2.4 and 12q2.4‐2.6 providing an average of 0,06–0,6% microsatellite containing sequences, several of which were of human. Three of the isolated bovine specific microsatellites revealed polymorphism (FBN5 and FBN8 from chr 5q2.1‐2.4; FBN7 from chr 1q1.3‐2.4); one of them (FBN5) was genotyped in the IBRP and assigned to its predefined subchromosomal origin by linkage analysis.

Isolierung und Charaktesierung boviner chromosom enfragment‐spezifischer ‘sequence tagged microsatellite sites’ (STMS)

Mit dem Ziel der gerichteteten Isolierung boviner chromosomenfragmentspezifischer Mikrosatelliten, wird eine Methode, die die Mikrosektion subchromosomaler Bereiche, deren PCR‐Amplifikation und Klonierung umfaßt, beschrieben. Während sich zwei der drei Versuche, das Chromosomenmaterial zu amplifizieren als nicht geeignet für die Erzeugung fragmentspezifischer Sonden erwiesen, zeigten PCR‐Produkte, die mittels DOP‐PCR nach Topoisomerase I Vorbehandlung der isolierten Fragmente amplifiziert wurden, spezifische Rehybridisierungen zu den entsprechenden subchromosomalen Regionen im Rindergenom, was auf ein komplexes Muster spezifischer genomischer Sequenzen schließen läßt. Die einzelnen methodischen Schritte erfordern jedoch ein Höchstmaß an experimenteller Genauigkeit, um die Bildung von Artefakten und Kontamination mit DNA anderen Ursprungs zu vermeiden. Partielle DNA‐Bibliotheken wurden von den in dieser Weise amplifizierten Chromosomenbereichen 1q1.1‐1.4, 1q1.3‐2.4, 5q2.1‐2.4 und 12q2.4‐2.6 erstellt, die durchschnittlich 0,060–6% Mikrosatellitensequenzen enthielten, die jedoch vorwiegend humanen Ursprungs waren. Drei der isolierten bovinen Mikrosatelliten wiesen Polymorphismen auf (FBN5 und FBN8 von Chr 5q2.1‐2.4; FBN7 von Chr 1q1.3‐2.4); einer wurde genetisch kartiert (FBN5) und dessen subchromosomaler Ursprung mittels Kopplungsanalyse nachgewiesen.
Molecular characterization of ovine α‐, βAand βB‐inhibin/activin alleles
Authors: Hiendleder S. , Leyhe B. , Jaeger C. , Erhardt G. , Wassmuth R.
Published: February 2011

The ovine inhibin/activin genes were investigated as QTL candidates for litter size. An RFLP study with five breeds of differing fecundity identified 4INHA, 2INHBAand 2INHBBalleles. The frequency of aTaqIINHBAallele was correlated with the average litter size of the investigated breeds (n = 40–169). Statistical analysis of lambing records from East Friesian Milksheep (n = 146) yielded significantINHBAgene effects on litter size. Sequence analysis of PCR products identified several nucleotide substitutions in coding regions of theINHBAgene, some of which change the predicted amino acid sequences. Genomic cloning and sequence analyses of three copies each of all three inhibin/activin genes identified additionalINHBAandINHBBalleles, and revealed further sequence polymorphism in coding regions and regulatory elements. All three genes were mapped byin situhybridization. This excludedINHBBas the site of the Fee8mutation. ForINHAandINHBA, the assignments were confirmed by linkage mapping.

Molekulare Charakterisierung oviner α‐, βA‐ und βB‐Inhibin/Aktivin Allele

Die ovinen Inhibin/Aktivin‐Gene wurden als QTL‐Kandidaten für das Merkmal Wurfgröße untersucht. In einer RFLP‐Studie an fünf Rassen mit unterschiedlicher Fruchtbarkeit wurden 4INHA‐, 2INHBA‐ und 2INHBB‐Allele identifiziert. Die Frequenz einesTaqIINHBA‐Allels korrelierte mit der durchschnittlichen Fruchtbarkeit der untersuchten Rassen (n = 40–169). Die statistische Analyse der Ablammdaten von Milchschafen (n = 146) ergab signifikante Effekte desINHBA‐Genes auf das Merkmal Wurfgröße. Die Sequenzanalyse von PCR‐Produkten zeigte mehrere Nukleotidsubstitutionen in kodierenden Regionen desINHBA‐Genes, von denen einige zu einer veränderten abgeleiteten Aminosäuresequenz führen. Durch die genomische Klonierung von jeweils 3 Kopien aller 3 Gene und den nachfolgenden Sequenzanalysen wurden zusätzlicheINHBA‐ undINHBB‐Allele nachgewiesen und weitere Sequenzvarianten in kodierenden und regulatorischen Bereichen identifiziert. Alle 3 Gene wurden mittelsin situHybridisierung kartiert. Auf diese Weise wurdeINHBBals FecB‐Kandidat ausgeschlossen. Die Zuordnung vonINHAundINHBAkonnte über Kopplungsanalysen bestätigt werden.
Mapping of quantitative‐trait loci by means of marker genes in F2 generations of Wild boar, Pietrain and Meishan pigs
Authors: Geldermann H. , Müller E. , Beeckmann P. , Knorr C. , Yue G. , Moser G.
Published: February 2011

Three F2 families have been established for QTL mapping by crossing genetically divergent Wild boar, Meishan and Pietrain pigs. More than 900 F2 animals are typed for a large number of marker loci and are recorded for over 100 quantitative traits. In a first analysis QTLs on chromosome 6 have been mapped in the region of the ryanodine receptor gene. Also several traits were significantly associated with different GH haplotyes.

Einsatz von Markergenen zur Kartierung quantitativer Merkmale in Wildschwein, Pietrain und Meishan F2‐Generationen

Zur Kartierung von QTLs wurden durch Kreuzung der genetisch sehr unterschiedlichen Rassen Wildschwein, Meishan und Pietrain, drei F2 Familien erstellt. Bei mehr als 900 Tieren wurde eine große Zahl an Markerloci bestimmt und mehr als 100 quantitative Merkmale erfaßt. In einer ersten Analyse konnten QTLs in der Region des Ryanodin Rezeptor Gens auf Chromosom 6 kartiert werden. Weiterhin zeigten zahlreiche Merkmale signifikante Beziehungen zu verschiedenen Haplotypen des GH Gens.
Development of an efficient and safe integration system for the production of transgenic farm animals
Authors: Salmons B. , Günzburg W. H. , Janka I. , Brem G.
Published: February 2011

Subretroviral particles can be utilized as gene transfer systems. We have shown that the micro‐injection of such particles into tissue culture cells results in the expression of indicator genes carried within the vector. The injection of such ‘retroviral cores’ into fertilized oozytes results in the integration of the vector in the resulting transgenic mice. However, in these mice there is a deletion of part of the transferred vector sequences. Our preliminary data suggest that this method is very efficient since 81% of the live progeny carry the vector.

Entwicklung eines hocheffizienten und sicheren Integrationssystems zur Erstellung transgener Nutztiere

Sub‐retrovirale Vektor Partikel können als Gentransfer System verwendet werden. Dabei konnten wir zeigen, dai die Mikroinjektion von solchen Partikeln in Zellkulturzellen zur Expression eines vom Vektor getragenen Indikatorgens führt. Die Injektion solcher ‘Cores’ in befruchtete Oozyten führte zur Integration des Vektors in den daraus entstehenden Mäusen. Jedoch lag in diesen transgenen Mäusen eine Deletion eines Teils der übertragenen Sequenz vor. Die vorläufigen Ergebnisse zeigten aber, dai die entwickelte Methode sehr effizient ist. 81% der lebend geborene Mäuse wiesen den BAG Vektor auf.
Liposome‐mediated gene transfer via sperm cells. High transfer efficiency and persistence of transgenes by use of liposomes and sperm cells and a murine amplification element
Authors: Rottmann O. , Antes R. , Höfer P. , Sommer B. , Wanner G. , Görlach A. , Grummt F. , Pirchner F.
Published: February 2011

Plasmid DNA was encapsulated in liposomes to protect from degradation and to support the incorporation into sperm cells. Transgenic spermatozoa carry the foreign DNA to the target cell when fertilizing the egg. Several plasmid constructs were transferred into rabbits, cattle and chicken. The plasmid apparently can persist when provided with a murine amplification promoting sequence. The transgeneity of sperm cells as well as fetuses or offspring was demonstrated by dot blot, Southern blot analysis and PCR. Expression of the transgene was shown as enzymatic activities of the reporter genes SEAP or β‐galactosidase and by gelelectrophoretic characterization of the expressed gene products. The transfer efficiency and the persistence of the gene constructs is significantly increased due to the use of sperm cells as gene carriers mediated by liposomes and the amplification element.

Gentransfer mittels Liposomen und Spermien

Plasmid‐DNA wurde in Liposomen eingeschlossen, um sie vor enzymatischem Abbau zu schützen und ihre Inkorporation in die Spermienzelle zu ermöglichen. Bei der Befruchtung bringt das Spermium die Fremd‐DNA in die Eizelle. Es wurden verschiedene Genkonstrukte in Kaninchen, Rind und Huhn übertragen. Das Plasmid kann offensichtlich persistieren, wenn es eine murine amplifikationsfördernde Sequenz enthält. Die Transgenität von Spermien, Feten und Nachkommen wurde mit Dot Blot, Southern Blot und PCR nachgewiesen, die Expression der Reportergene SEAP und β‐Galaktosidase gelelektrophoretisch bzw. enzymatisch charakterisiert. Der Einsatz von Spermien und Liposomen zur Genübertragung sowie die Verwendung einer ‘amplification promoting sequence' erhöhen die Transfereffizienz und die Persistenz der Genkonstrukte beträchtlich.
Identification, isolation and culture of pluripotent cells from the porcine inner cell mass
Authors: Ropeter‐Scharfenstein M. , Neubert N. , Prelle K. , Holtz W.
Published: February 2011

This investigation addresses the issue of establishing a porcine embryonic stem cell line. By staining for the intracellular filaments vimentin and keratin in whole‐mount‐preparations it was concluded that the ICM has to be isolated before D9. Although the isolation by way of Ca‐ionophore or immunosurgery was possible, a mechanical approach was preferred. A range of feeder cell layers—both primary and established cell lines—and of conditioned media was found to be less suitable for the culture of ICM cells than was DMEM substituted with LIF or ESG. Eventually a two‐stage culture system was established comprising a 4 day culture of embryos on a three‐dimensional collagen matrix followed by culture of the ICM in a fortified medium supplemented with LIF. With this system, undifferentiated ICM cells could be cultured on average 5.6 and up to 8 passages of 7–10 days each. Attempts to use these cells to make chimaeras or embryo clones are forthcoming.

Identifizierung, Isolierung und Kultur pluripotenter Zellen der Inneren Zellmasse (ICM) beim Schwein

Das Ziel der Arbeit war die Erstellung porciner embryonaler Stammzellinien. Als erstes wurde durch Intermediärfilamentfärbung von ‘whole mount'‐Präparaten mit Anti‐Keratin und Anti‐Vimentin ermittelt, daß eine Isolierung der ICM vor D9 zu erfolgen hat. Obschon dies auf immunologischem Wege oder mit Hilfe von Ca‐Ionophor möglich war, wurde der mechanischen Isolierung der Vorzug gegeben. Die Kultur von ICM‐Zellen in DMEM mit LIF oder ESG war erfolgreicher als auf verschiedenen Feeder layern—sowohl primären als auch etablierten Zellinien — oder in konditionierten Medien. Am geeignetsten erwies sich eine Zwei‐Phasen‐Kultur bestehend aus einer 4‐tägigen Vorkultivierung der Embryonen auf einer dreidimensionalen Kollagen‐Matrix mit anschließender Kultivierung der isolierten ICM in LIF‐haltigem angereicherten DMEM Medium. Damit wurden durchschnittlich 5,6 und maximal 8 Passagen von jeweils 7–10 Tagen erreicht, bis die Vitalität der Zellen erschöpft war.

Derzeitige Bemühungen richten sich auf die Verwendung dieser Zellen zur Erstellung von Injektionschimären oder zur Embryoklonierung.
An efficient algorithm for segregation analysis in large populations
Authors: Kerr R. J. , Kinghorn B. P.
Published: February 2011

A computationally tractable approach to complex segregation analysis for large data sets is described. This is then used to extend the value of DNA tests for major locus genotype, by calculating probabilities of belonging to each genotype class for all animals not DNA tested. Under the conditions simulated, this approach led to an approximate doubling of the number of animals genotyped with 100% confidence, the ability to exclude many more animals from one genotype class, plus a high probability (> 90%) of belonging to a given genotype class for many other animals.

Verwendung von Spaltungsanalyse für rationelle Anwendung von DNA Tests für Hauptgene

Ein rechnermäßig traktabler Ansatz zu komplexer Spaltungsanalyse großer Datenmengen wird beschrieben. Dieser wird verwendet, um den Wert der DNA Tests für Hauptgene zu erweitern und zwar dadurch, daß die Wahrscheinlichkeiten der Zugehörigkeit zu jeder Genotypenklasse für Tiere ohne DNA Diagnose berechnet wird. Die Simulation ergab eine Verdopplung der Zahl der Tiere, die mit 100% Sicherheit genotypisiert werden konnten sowie Ausschluß von mehr Tieren aus einer gegebenen Genotypenklasse und schließlich eine hohe Wahrscheinlichkeit (> 90%) der Zuweisung vieler Tiere zu gegebenen Genotypenklassen.
Environmental effects and genetic parameters for measurements of hunting performance in the Finnish Spitz
Authors: Karjalainen L. , Ojala M. , Vilva V.
Published: February 2011

Genetic parameters for seven measures of hunting performance in the Finnish Spitz were estimated by applying the animal model and the Restricted Maximum Likelihood (REML) method to a data set, which consisted of 12 432 test results from 1683 dogs. Environmental effects on the measures of hunting performance were evaluated by the F‐test, and the solutions for the fixed effects were calculated from the mixed animal model. All seven measures of hunting performance were affected by the age of the dog, testing month, testing area and season, and the interaction between area and season. Differences between the sexes were statistically significant for barking frequency, searching and barking scores. The combined wind and rain effect was important for all measures, except barking frequency. Heritability estimates were moderate for frequency of barking (h2 = 0.15–0.17) and for searching scores (h2 = 0.14–0.15), and somewhat lower for other measures of hunting performance. Phenotypic and genetic correlations between the measures of hunting performance were positive, and their magnitude was usually moderate or high.

Umwelteinflüsse auf und genetiche Parameter von Jagdhundemerkmalen des Finnischen Spitz

Genetische Parameterschätzung für sieben Maße der Jagdhundeeignung wurde mit Tiermodell und mittels REML an 12432 Testergebnissen von 1683 Hunden durchgeführt. Umwelteinflüsse wurden mittels F‐Test geprüsft und Lösungen für fixe Wirkungen mittels des gemischten Modells errechnet. Die sieben Merkmale für Jagdeignung werden beeinflußt von Hundealter, Testmonat, Testgebiet und Saison und der Interaktion zwischen diesen. Geschlechtsunterschiede waren signifikant für Häufigkeit des Bellens, Suchen und Intensität des Bellens. Die kombinierte Wirkung von Regen und Wind war für alle Merkmale außer für Häufigkeit des Bellens wichtig. Heritabilitätsschätzungen waren mäßig für Häufigkeit des Bellens (0,15–0,17) und für Suchpunkte (0,14–0,15) und etwas niedriger für die anderen Merkmale. Die phänotypischen und genetischen Korrelationen zwischen den Merkmalen waren mäßig bis stark positiv.
Prenatal growth in lines of mice selected for body weight
Authors: Güneren G. , Bünger L. , Hastings I. M. , Hill W. G.
Published: February 2011

Body weight and crown‐rump length were recorded on 874 fetuses from 105 females at 10–18.5 days of gestation in selected lines of mice and, in a non‐contemporaneous experiment, in their reciprocal crosses. The lines had been selected High and Low, for 10‐week body weight for approximately 50 generations. Fetuses from the High line were heavier than those from the Low line at all ages recorded. The almost two‐fold ratio of weight changed little with age. Fetuses of the reciprocal crosses did not differ greatly in weight, although those with the large dam were heavier, and were intermediate between those of pure lines. Fetal crown‐rump length showed similar growth characteristics to fetal weight.

The selection for body weight had therefore produced genetic change in fetal growth from an early age, and the change was mainly associated with the genotype of the fetus rather than that of the mother.

Pränatales Wachstum in auf Körpermasse selektierten Mäuselinien

Erfaßt wurden Körpermassen und ‐längen von insgesamt 874 Feten zwischen dem 10. und 18.5. Trächtigkeitstag von 105 Müttern aus selektierten Linien und (in einem zeitlich nicht korrespondierenden Experiment) aus den reziproken Kreuzungen. Die Linien wurden divergent über ca. 50 Generationen auf hohe bzw. niedrige Körpermasse selektiert. Feten der ‘High’‐Linie (H) waren an allen Alterspunkten schwerer als die der ‘Low’‐Linie (L). Das Massenverhältnis (1:2) zwischen beiden Linien verändwerte sich kaum mit dem Alter. Zwischen Feten aus den reziproken Kreuzungen bestanden weit geringere Unterschiede in der Körpermasse. Dabei waren die Feten aus L‐Müttern schwerer im Vergleich zu Feten aus L‐Müttern. Beide lagen intermediär zwischen den reinen Linien. Die Körperlange zeigte ähnliche Ergebnisse. Die Selektion auf Körpermasse am 70.
Hha I enzyme reveals genetic polymorphisms at the second exon of porcine‐growth‐hormone gene
Authors: Jiang Z. H. , Rottmann O. J. , Pirchner F.
Published: February 2011

A 230‐bp fragment, which contains the second exon of the porcine‐growth‐hormone (pGH) gene, was amplified using DNA samples of 30 Erhualian, 36 Pietrain, and 30 German Landrace pigs. Polymorphic restriction sites for Hha I were identified at bases 506–509 and 555–558, respectively. The digestion yields a single 230‐bp fragment, two fragments of 173 and 57 bp, two fragments of 106 and 124 bp, or three fragments of 124, 57, and 49 bp, respectively. The allele frequencies are significantly different (p < 0.01) between Chinese pigs and European pigs, when each or both restriction sites with Hha I were considered. The sequence analysis indicated that a C/T substitution at position 507 caused the polymorphisms at 506–509, while both a G/A substitution at position 555 and a C/A substitution at position 556 resulted in the polymorphic bands at 555–558. These mutations caused amino‐acid substitutions in the amino‐acid sequence of pGH.

Hha I–Polymorphismus im zweiten Exon des porcinen Wachstumshormongens

Ein 230 bp–Fragment des zweiten Exons im Wachstumshormongen der Schweinerassen Erhualian (30 Tiere), Pietrain (36) und Deutsche Landrasse (30) zeigte sich bei einer Restriktionsanalyse polymorph. Hhal generierte Fragmente folgender Längen: ein Fragment mit 230 bp, zwei mit 173 und 57 bp, zwei mit 106 unde 124 bp oder drei mit 124, 57 und 49 bp. Die Schnittstellen befanden sich innerhalb der Basen 506–509 und 555–558. Die Allelfrequenzen unterschieden sich signifikant zwischen der chinesischen und den europäischen Rassen (p < 0.01). Die Sequenzanalyse ergab eine Basensubstitution C/T an Position 507 und weiterhin and den Positionen 555 (G/A) und 556 (C/A), welche jeweils auch auch eine Aminosäuresubstitition bewirken.
Comparison of mating systems in a fish population: a simulation st udy
Authors: Engström G. , McMillan I. , McKay L. , Quinton M.
Published: February 2011

Inbreeding can lead to significant depression of growth and other important traits in fish. Computer simulation was used to compare two mating systems in a fish population, for a trait controlled by different number of loci and different levels of dominance. The choice of a suitable mating system is one way of avoiding inbreeding. A fish population was modelled, in which the simulated traits were controlled by a different number (75 and 150) of unlinked loci, each with equal gene effects. The initial gene frequencies were 0.5 for the two alleles. The dominance was either complete or partial. Parents for the next generation were selected on individual phenotypic performance. Selection was carried out over five generations in a population of 2000 offspring. For each generation, 0.5% of the individuals were selected and mated, according to either a single‐pair mating system or a factorial mating system. The factorial mating system produced a higher genetic response and lower inbreeding depression for all traits, compared with single‐pair mating, with the difference being most pronounced for traits with complete dominance and controlled by a large number of loci.

Paarungssystemvergleich in einer Fischpopulation–Eine Simulationsuntersuchung

Computersimulierung wurde verwendet, um zwei Paarungssysteme in einer Fischpopulation zu vergleichen. Das simulierte Merkmal wurde von unterschiedlich vielen Loci beeinflusst und auch Dominanz nahm Werte verschiedener Höhe an. Inzucht kann zu signifikanter Depression des Wachstums und auch anderer wichtiger Merkmale führen. Die Wahl eines geeigneten Paarungssystem kann aber dazu beitragen, Inzucht zu vermeiden. Es wurde eine Fischpopulation, in der das simulierte Merkmal von unterschiedlich vielen nicht gekoppelten Loci (75 oder 150), mit den selben Geneffekten, beeinflusst wurde, erstellt mit anfänglichen Genfrequenzen viz 0.5. Die Dominanzeffekte entsprachen entweder der Hälfte oder dem ganzen additiven Geneffekt. Die Elterntiere der folgende Generation wurden auf ihre individuelle phänotypische Leistung wurde über 5 Generationen selektiert, und aus jeder Generation 0,5% der 2000 Nachkommen genommen. Die selektierten weiblichen Individen wurden entweder mit einem oder mit sämtlichen männlichen Individen angepaart. Die Anpaarungen mit den gesamten männlichen Individen erzielten, für sämtliche Merkmale, den höchsten genetischen Fortschritt. Der Unterschied war besonders auffällig für Mermale mit vollständiger Dominanz, die gleichzeitig auch von einen grorsen Anzahl von Loci beeinflusst wurden.
Analysis of powdery mildew resistance in the Spanish barley core collection
Authors: Silvar C. , Flath K. , Kopahnke D. , Gracia M. P. , Lasa J. M. , Casas A. M. , Igartua E. , Ordon F.
Published: February 2011

With 2 figures and 4 tables

The Spanish Barley Core Collection, consisting of one hundred and fifty‐nine landrace‐derived inbred lines and sixteen cultivars, was characterized for resistance to powdery mildew (Blumeria graminis f. sp. hordei) using a set of 27 isolates with a wide spectra of virulences/avirulences on most of the genes expected to occur in Europe. No landrace‐derived line and no cultivar were resistant to all the isolates but at least three landraces showed infection types below 2 for 23 isolates. Twenty‐two landraces and one cultivar showed resistance against half of the isolates used. Eleven isolates were sufficient to separate the majority of resistance profiles. In total, thirty‐four resistance spectra were detected and fourteen resistance genes/alleles were postulated alone or in combination: MlLa, Mlh, Mlg, Mla22, Mla7(Mlu), Mla7(Mlk), Mlk, Mla12, Mla9, Mla3, Mla6(Mla14), Mlra and Mla1. The majority of resistance spectra are composed only by one line. Resistance in twenty‐one landrace‐derived lines and four cultivars was based on either unidentified genes or combinations of known and unknown genes/alleles. Therefore, the SBCC may be a source for broadening the genetic base of powdery mildew resistance.
Molecular mapping of the AOX1a and β‐AmyI genes in potato
Authors: Krusiewicz Dominika , Jakuczun Henryka , Wasilewicz‐Flis Iwona , Strzelczyk‐Żyta Danuta , Marczewski Waldemar
Published: February 2011

With 1 figure and 1 table

Two genes, AOX1a and β‐AmyI, were mapped in diploid potato. AOX1a (alternative oxidase 1a) is the cyanide insensitive component of the electron transport chain in plants induced by environmental stress. The enzyme β‐amylase (β‐AmyI) is involved in hydrolytic starch breakdown in both photosynthetic and storage organs. AOX1a and β‐AmyI are located in the central region on potato chromosome VIII, where other genes for potato tuber quality traits were mapped.
Master John of Arderne (1307–1380): a founder of modern surgery
Authors: Pearn John
Published: February 2011

Background:  John of Arderne (1307–1380) was one founder of surgery as the profession is known today. He was the first English surgeon of whom biographic details survive. Born on the Arderne Estates at Newark, England, he served as a military surgeon in France in campaigns where gunpowder was used in combat for the first time. His best‐known work, the Practica (De Arte Phisicali et de Cirurgia), formed the basis of practical surgical teaching in the medical schools of medieval Europe.

Method:  Biographic research of primary and secondary archives and documents.

Results:  John of Arderne's surgical practice was undertaken against a background of turbulent political, military and medical events. He survived the Black Death (1347) and its cyclical recurrences. He lived through the turbulent reigns of Edward II and Edward III and practised in London in the decades preceding the simmering unrest which preceded the Peasant's Revolt of 1381. Surgical and medical practice in the late Middle Ages was enmeshed in astrological beliefs. It was greatly influenced by church doctrine of disease causation.

Conclusion:  In this paper, the known details of John of Arderne's life are placed in the perspective of these societal and professional influences. He is one of several pre‐Renaissance European doctors who were the first to challenge the received medical lore of Galen and later Arabic surgeons. Writing when he was 70 years of age, John of Arderne was the first to advocate that surgeons should trust their own clinical experience ‘Wele ymagynyng subtile things’ rather than following the directions of others, even including those advocated by himself.
Developmental pharmacogenomics
Authors: Neville Kathleen A. , Becker Mara L. , Goldman Jennifer L. , Kearns Gregory L.
Published: February 2011

Interindividual variability in the disposition and action associated with similar doses of a given medication is an inherent characteristic of both adult and pediatric populations. Genotype–phenotype relationships in infants and children must take into account the role that ontogeny plays in producing variability in both pharmacokinetics and pharmacodynamics. This review explores pharmacogenomics in the context of ontogeny and relates these to the expression of drug‐metabolizing enzymes and transporters and the consequent effect on the exposure–response relationship in the early years of life.
Microassay of drugs and modern measurement techniques
Authors: Millership Jeff S.
Published: February 2011

Details of the development of conventional analytical methods for the determination of drugs in pediatric plasma/serum samples via microassays are presented. Examples of the development of small‐volume sampling and the use of the newer detection systems such as LC/MS/MS for enhanced detection are presented. Dried blood spot sampling has conventionally been used for the study of inborn errors of metabolism using Guthrie cards. Limited applications in the area of drug‐level determination, for example, in therapeutic drug monitoring had been reported but the methodology had not been widely used up until relatively recently. In the last few years, there has been a resurgence of interest in this methodology for drug‐level determinations, and examples of drug analysis in pediatric and neonatal patients where the small‐volume samples are particularly useful are presented. The application of the methodology in pharmacokinetic/pharmacodynamic studies is discussed. The utilization of solid‐phase microextraction and stir bar sorptive extraction in drug analysis is presented. Clinical applications of these methodologies are reported including the development of in vivo solid‐phase microextraction.
Tips and traps analyzing pediatric PK data
Authors: Anderson Brian J. , Holford Nick H.G.
Published: February 2011

Pharmacokinetic (PK) and pharmacodynamic (PD) modeling has elucidated aspects of developmental pharmacology of value to the anesthetic community. The increasing sophistication of modeling techniques is associated with pitfalls that may not be readily apparent to readers or investigators. While size and age are considered primary covariates for PK models, the impact of birth on clearance maturation is poorly documented, dose in obese children is poorly investigated, pharmacologic implications of physiologic changes poorly portrayed, disease progression on drug response poorly depicted and the impact of metabolites on effect poorly illustrated. This review identifies some of these pitfalls and suggests ideas to circumvent or investigate these hazards.
The female cloaca of an oviparous caecilian amphibian (Gymnophiona): functional and seasonal aspects
Authors: Kuehnel Susanne , Herzen Julia , Kleinteich Thomas , Beckmann Felix , Kupfer Alexander
Published: February 2011

Kuehnel, S., Herzen, J., Kleinteich, T., Beckmann, F. and Kupfer, A. 2011. The female cloaca of an oviparous caecilian amphibian (Gymnophiona): functional and seasonal aspects. —Acta Zoologica (Stockholm) 00:1–14.

Reproductive morphology is receiving increased attention in animals that have variable reproductive modes combined with internal fertilization. Exceptionally among amphibians all caecilian species practice internal fertilization via an intromittent organ: an everted part of the male cloaca (phallodeum or phallus). Because research has mostly concentrated on males, knowledge of the female cloacal morphology is scarce. Here, we present the first single‐species study of the functional morphology of the female cloaca of an oviparous, phylogenetically basal caecilian (Ichthyophis cf. kohtaoensis). We have analyzed female cloacal shape during the reproductive cycle combining conventional histology with 3D‐reconstruction. All females are similar in their overall cloacal structure with some differences in size and histology associated with the reproductive cycle. The female cloaca is divided into two distinct chambers similar to the male condition. The cranial chamber contains urogenital pockets into which oviducts and Wolffian ducts open and which may have function during oviposition. The caudal cloacal chamber bears a novel feature – dorsolateral blind sacs, which are homologous to the male condition, but are considerably smaller. The study of female cloacal morphology is essential to understanding the evolution of the caecilian reproductive system and contributes to the understanding of tetrapod genital morphology in general.
21st century nursing practice in Ghana: challenges and opportunities
Authors: Donkor N.T. , Andrews L.D.
Published: February 2011

DONKOR N.T. & ANDREWS L.D. (2011) 21st century nursing practice in Ghana: challenges and opportunities. International Nursing Review58, 218–224

Aim:  This article is intended to stimulate critical thinking and generate fruitful discussion on nursing practice in Ghana as experienced by the authors. Its rationale is to promote exchange of ideas and creative partnerships to ensure that right decisions are made in preparing competent, adaptable and resourceful nurses who can contribute to health for all in the 21st century.

The problem:  The challenges of nursing education, practice and migration in Ghana seem grim. There is inadequate capacity of training institutions, low staff morale, poor distribution and serious workforce shortages.

Methods:  Government reports and policy documents on nursing were sourced from official websites and reviewed and discussed in the context of the international scholarly published literature.

Opportunities:  The authors note that despite the severe crises, a number of opportunities such as improved home‐based training, international nursing education partnerships and welfare and human resource development could foster effective nurse retention and managed migration.

Conclusions:  To address the issues with nursing health service delivery and nursing shortages in Ghana requires all stakeholders to move beyond the traditional stereotypes and be flexible and forward‐looking. Needed policy options include expansion of local nursing education and training capacity, collaborative training opportunities, improving the welfare and retention rates of current staff and international exchange of nurse resources that is mutually beneficial to both source and sink countries.