Patent AR-123758-A1 (AR)
Title: VARIANTES TETRAMÉRICAS DE a/b HIDROLASA CON ESTABILIDAD AUMENTADA A LA TEMPERATURA Y MÉTODOS DE USO Y PRODUCCIÓN DE LAS MISMAS
Inventor: HOEBARTNER-GUSSL ANDREAS
IPC: C12N15/82
Filed: 2021-10-12
Abstract: La presente invención se relaciona con variantes de a/b hidrolasa con propiedades mejoradas en comparación con una a/b hidrolasa parental, por ejemplo, que tienen estabilidad aumentada a la temperatura, métodos de uso y producción de dichas variantes que incluyen métodos para dirigir la formación de estructuras cuaternarias a partir de homo-dímeros en homo-tetrámeros.  Reivindicación 1: Una variante de una a/b hidrolasa parental, la variante que comprende una sustitución en una o más posiciones que corresponden a las posiciones: 167, 168, 174, 218, 155, 175, 179, 182, 183, 186, 187, 268, 306, 10, 17, 28, 39, 47, 50, 57, 58, 59, 63, 65, 69, 126, 139, 225, 230, 245, 251, 281, 287, 289, 293 y 304 de SEQ ID Nº 1 (preferentemente mediante el uso de la numeración de SEQ ID Nº 1), en donde dicha variante tiene actividad de a/b hidrolasa y en donde la variante es un polipéptido que tiene al menos 71% (preferentemente: al menos 72%, al menos 73%, al menos 74%, al menos 75%, al menos 76%, al menos 77%, al menos 78%, al menos 79%, al menos 80%, al menos 81%, al menos 82%, al menos 83%, al menos 84%, al menos 85%, al menos 86%, al menos 87%, al menos 88%, al menos 89%, al menos 90%, al menos 91%, al menos 92%, al menos 93%, al menos 94%, al menos 95%, al menos 95,5%, al menos 96%, al menos 96,5%, al menos 97%, al menos 97,5%, al menos 98%, al menos 98,5%, al menos 99% o al menos 99,5%), pero menos de 100% de identidad de secuencia con respecto al polipéptido de SEQ ID Nº 1, preferentemente dicha variante tiene una actividad de hidrolasa EC: 3.1.1. Reivindicación 2: La variante de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde dicha variante tiene uno o más de los siguientes: i) una propiedad mejorada con respecto a la a/b hidrolasa parental, en donde dicha propiedad mejorada comprende una estabilidad aumentada a la temperatura, preferentemente en comparación con SEQ ID Nº 1; es capaz de tetramerización, preferentemente tiene una estructura cuaternaria tetramérica, más preferentemente dicha tetramerización es una homotetramerización; ii) un punto de fusión (Tₘ) mayor de 50ºC, preferentemente dicho Tₘ está en el rango de aproximadamente 51ºC a aproximadamente 70ºC; iii) capaz de degradar zearalenona y/o derivados de esta; iv) comprende al menos un (preferentemente al menos dos, con mayor preferencia al menos tres, con máxima preferencia al menos cuatro) motivo o motivos de aminoácidos que tienen una identidad de secuencia de al menos 80% (preferentemente al menos 83%, con mayor preferencia al menos 90%) con respecto a una secuencia de aminoácido seleccionada de: a) SEQ ID Nº 36 (QVDLGEX¹X²MN), en donde X¹ es V o I, preferentemente V, y en donde X² es V o T, preferentemente V; b) SEQ ID Nº 37 (EYDPEWX³RX⁴FX⁵EGTV), en donde X³ es G o A, preferentemente A, y en donde X⁴ es A o V, preferentemente A, y en donde X⁵ es F o Y; c) SEQ ID Nº 38 (MLX⁶QVKTPX⁷LX⁸THH), en donde X⁶ es S o G, preferentemente S, y en donde X⁷ es I o V, preferentemente I, y en donde X⁸ es I o L, preferentemente I; y d) SEQ ID Nº 39 (PAX⁹LLX¹⁰PEQTGSWWSYEX¹¹X¹²X¹³GLLX¹⁴EX¹⁵FHVX¹⁶AVDX¹⁷RGQGRSX¹⁸WTPX¹⁹RYSLDNFGNDLVRFIX²⁰LVX²¹KRPVX²²VX²³GNSSGGX²⁴LAAWLSAYX²⁵MPGQX²⁶RX²⁷X²⁸LCEDX²⁹X³⁰FFASELVPAX³¹GHSVX³²QX³³AGPX³⁴FELX³⁵R), en donde X⁹ es V o L, preferentemente L, y en donde X¹⁰ es L o I, preferentemente L, y en donde X¹¹ es P o E, preferentemente P, y en donde X¹² es V o A, preferentemente V, y en donde X¹³ es I o M, preferentemente I, y en donde X¹⁴ es A o S, preferentemente A, y en donde X¹⁵ es S, N o H, preferentemente S, y en donde X¹⁶ es F o Y, preferentemente F, y en donde X¹⁷ es I o L, preferentemente I, y en donde X¹⁸ es T o S, preferentemente T, y en donde X¹⁹ es K o R, preferentemente K, y en donde X²⁰ es S, A o N, preferentemente S, y en donde X²¹ es V o I, preferentemente V, y en donde X²² es I o V, preferentemente I, y en donde X²³ es S o A, preferentemente S, y en donde X²⁴ es V o L, preferentemente V, y en donde X²⁵ es A o S, preferentemente A, y en donde X²⁶ es I o L, preferentemente I, y en donde X²⁷ es A o G, preferentemente A, y en donde X²⁸ es A o V, preferentemente A, y en donde X²⁹ es T, A o P, preferentemente T, y en donde X³⁰ es P o A, preferentemente P, y en donde X³¹ es Y o H, preferentemente H, y en donde X³² es L o R, preferentemente R, y en donde X³³ es A o G, preferentemente A, y en donde X³⁴ es A o V, preferentemente A, y en donde X³⁵ es Y o F, preferentemente Y.