Patent RU-2630645-C1 (RU)
Inventor: PAVLOVICH NATALYA VLADIMIROVNA
IPC: G01N33/00
Filed: 2016-03-31
Granted: 2017-09-11
Abstract: Изобретение относится к области медицины. Изобретение представляет собой способ снижения резистентности возбудителя туляремии к цефалоспоринам, где в качестве препарата используют неионогенное поверхностно-активное вещество твин 80 в количестве (0,5-1)%, посредством которого повышают проницаемость наружных структур клеток возбудителя туляремии, при этом исследования осуществляют in vivo и in vitro, причем в последнем случае используют диско-диффузионный метод и метод серийных разведений, после этого проводят оценку результатов исследований, соответствующую проведенным методам. При этом для диско-диффузионного метода готовят чашки с агаром Мюллера-Хинтона в два ряда, в один из которых вводят (0,5-1)% твин 80, затем на поверхность агара засевают бактерии исследуемых штаммов туляремии из предварительно подготовленной суспензии, содержащей 10 8  м.кл./мл, после впитывания суспензии в агар на его поверхность накладывают диски с цефалоспориновыми антибиотиками, а на контрольные чашки с твином и без него диски не накладывают, посевы инкубируют в течение 24-48 часов при 37°С, оценку результатов проводят визуально по формированию зон подавления роста бактерий, если последние имеют в диаметре 25-40 мм, то подтверждают их чувствительность к антибиотику, причем на чашках со средой без твина 80 зоны подавления отсутствуют. Кроме того, для метода серийных разведений готовят два ряда чашек с питательной средой Мюллера-Хинтона, куда вводят цефалоспориновый антибиотик в различных концентрациях, а именно 25, 50, 100, 250, 500 мкг/мл среды, при этом параллельно готовят такой же ряд чашек, но в среду дополнительно вводят твин 80 в концентрации (0,5-1)%, затем на чашки засевают по 0,05 мл исследуемого штамма из бактериальной взвеси, содержащей 10 8  м.кл./мл по оптическому стандарту мутности 10 ед., в качестве контроля используют среду Мюллера-Хинтона без антибиотика и среду Мюллера-Хинтона, содержащую (0,5-1)% твина 80 без антибиотика, посевы инкубируют при 37°С в течение 24-48 часов, после этого учитывают рост бактерий по величине минимальной подавляющей концентрации, чем она меньше, тем чувствительней штамм туляремийного микроба к антибиотикам при обязательном росте бактерий на контрольных чашках. При этом для проведения in vivo, животных заражают подкожно предварительно подготовленной культурой возбудителя туляремии в объеме 0,1 мл, содержащем 10 3  м.кл./мл, затем через 24 часа животных начинают лечить цефтазидимом в количестве 12 мг/мышь, разведенным в растворе (0,5-1)% твина 80, курс проводят 7 дней, а результаты оценивают по эффективности терапии, а именно по процентному отношению выживших животных к количеству зараженных или средней продолжительности жизни выживших животных. Причем предварительную подготовку исследуемых штаммов проводят по следующей технологии: готовят бактериальную взвесь концентрацией 10 9  м.кл./мл по оптическому стандарту мутности 10 ед., разводят ее физиологическим раствором в 10 раз до 10 8  м.кл./мл. Кроме того, предварительную подготовку культуры возбудителя туляремии осуществляют следующим образом: из суточной агаровой культуры готовят суспензию на физиологическом растворе, соответствующую 1 млрд м.кл./мл по оптическому стандарту мутности 10 ед., после ее титруют с помощью 10-кратных разведений в физиологическом растворе до концентрации 10 4  м.кл./мл. Изобретение позволяет повысить антибактериальную активность цефалоспоринов в отношении туляримийного микроба in vitro и in vivо, с использованием нетоксичного ПАВ – твин 80.  5 з.п. ф-лы, 1 ил., 3 табл.,  3 пр.