Patent AR-041752-A1 (AR)
Title: Promotores sinteticos que inducen una actividad transcripcional aumentada en celulas cardiacas
Inventor: DRAGHIA-AKLI RUXANDRA
IPC: C12Q1/68
Filed: 2003-11-03
Abstract: Los trangenes conducidos por promotores cardiacos naturales tiene bajos niveles relativos de expresión del gen cardiaco transgenico, y tienen consecuentemente un uso limitado en el músculo cardiaco para la suplementación génica medida por plásmidos. Sin embargo, mediante el ensamblado de motivos al azar de elementos caja-E, MEF-2, TEF-1 y SER, se han producido bibliotecas recombinante de promotores sintéticos cardiacos específicos. Mediante la búsqueda en los cientos de clones resultantes de la actividad transcripcional tanto in vitro como in vivo, se descubrieron unos pocos promotores sintéticos específicos que comprenden una potencia transcripcional que excede por mucho los niveles transcripcionales obtenidos a partir de promotores miogenicos naturales o de genes virales. Estor promotores son utilizados para conducir la expresión de genes deseados en una construcción de ácido nucleico específica para células cardiacas. Por ello, estos promotores sintéticos cardiaco específicos pueden ser utilizados para la suplementación génica mediada por plásmidos de serias condiciones de enfermedad tales como la enfermedad isquémica, el infarto de miocardio o las fallas cardiacas. Es un aspecto de la presente un promotor sintético cardiaco específico producido por un método que genera una biblioteca de construcciones de expresión recombinantes de promotores sintéticos al azar. Otro aspecto de la presente está orientado hacia un método para usar la construcción de expresión sintética cardiaco específica para la expresión de un gen de interés en una célula cardiaca. Reivindicación 1: Un promotor sintético cardiaco específico producido por un método que comprende: (a) introducir una biblioteca de construcciones de expresión recombinantes de promotores sintéticos al azar dentro de una primer población de células que forma una primer población de células a ensayar; (b) buscar en la primer población de células a ensayar un primer clon cardiaco específico que tiene una primer actividad transcripcional que es mayor que una actividad transcripcional control; y (c) utilizar al promotor sintético cardiaco específico del primer clon cardiaco específico como el promotor sintético cardiaco específico de una construcción de expresión sintética cardiaco específica; en donde, cada una de las construcciones de expresión recombinante de promotor sintético al azar están operativamente ligadas a un gen reportero para formar una construcción de expresión de ácido nucleico; y el clon cardiaco específico control comprende un promotor conocido operablemente ligado a un gen reportero para formar una construcción de expresión de ácido nucleico control que tiene la actividad transcripcional control en la primer población de células. Reivindicación 5: el promotor sintético cardiaco específico de la reivindicación 1, en donde el promotor sintético cardiaco específico comprende C5-15 ( SeqID 5). Reivindicación 6: el promotor sintético cardiaco específico de la reivindicación 1, en donde el promotor sintético cardiaco específico comprende c1-26 (SeqID 9); c6-5 (SeqID 20); c6-16 (SeqID 21); o c6-39 (SeqID 22). Reivindicación 8: El promotor sintético cardiaco específico de la reivindicación 7, en donde los elementos regulatorios que actúan en cis comprenden SER (SeqID 1); MEF-1 (SeqID 2); MEF-2 (SeqID 3); y TEF-1 (SeqID 4). Reivindicación 15: El método de la reivindicación 9, en donde el gen expresable comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica una hormona de liberación de la hormona de crecimiento ("GHRH") o un equivalente biológico funcional de la misma.