Patent ES-2880336-T3 (ES)
Title: Métodos y productos para la síntesis de proteínas de fusión
Inventor: HOWARTH MARK
IPC: C07K14/315
Filed: 2016-06-03
Granted: 2021-11-24
Abstract: Método para producir una proteína de fusión, en el que dicho método comprende: a) poner en contacto una Cebadora proteína con una segunda proteína bajo condiciones que permiten la formación de un enlace isopeptídico entre dichas proteínas, en el que dicha Cebadora proteína y dicha segunda proteína comprenden, cada una, un conector peptídico, en el que dichos conectores peptídicos son un par de conectores peptídicos que reaccionan formando un enlace isopeptídico que une dicha Cebadora proteína a dicha segunda proteína para formar una proteína unida, y b) poner en contacto la proteína unida de (a) con una tercera proteína bajo condiciones que permiten la formación de un enlace isopeptídico entre dicha tercera proteína y dicha proteína unida, en el que dicha tercera proteína comprende un conector peptídico que reacciona con un conector peptídico adicional en la proteína unida de (a), y en el que dichos conectores peptídicos son un par de conectores peptídicos que reaccionan formando un enlace isopeptídico que une dicha tercera proteína a dicha proteína unida formando una proteína de fusión, en el que dicho par de conectores peptídicos utilizado en (a) es ortogonal al par de conectores peptídicos utilizado en (b), y en el que los pares ortogonales de conectores peptídicos se seleccionan de cualquiera de entre: (1) un conector peptídico que comprende una secuencia de aminoácidos tal como se indica en la SEC ID nº 1 o una secuencia con una identidad de secuencia de por lo menos 70% respecto a una secuencia de aminoácidos tal como se indica en la SEC ID nº 1, en la que dicha secuencia de aminoácidos comprende un residuo de lisina en la posición 9 y un conector peptídico que comprende una secuencia de aminoácidos tal como se indica en la SEC ID nº 2 o una secuencia con una identidad de secuencia de por lo menos 70% respecto a una secuencia de aminoácidos tal como se indica en la SEC ID nº 2, en la que dicha secuencia de aminoácidos comprende un residuo de glutamato o aspartato en la posición 55, un residuo de treonina en la posición 94, un residuo de glicina en la posición 100 y un residuo de asparagina o aspartato en la posición 106, (2) un conector peptídico que comprende una secuencia de aminoácidos tal como se indica en la SEC ID nº 5 o una secuencia con una identidad de secuencia de por lo menos 70% respecto a una secuencia de aminoácidos tal como se indica en la SEC ID nº 5, en la que dicha secuencia de aminoácidos comprende un residuo de aspartato o asparagina en la posición 8 y un conector peptídico que comprende una secuencia de aminoácidos tal como se indica en la SEC ID nº 6 o una secuencia con una identidad de secuencia de por lo menos 70% respecto a una secuencia de aminoácidos tal como se indica en la SEC ID nº 6, en la que dicha secuencia de aminoácidos comprende un residuo de lisina en la posición 8, (3) un conector peptídico que comprende una secuencia de aminoácidos tal como se indica en la SEC ID nº 9 o una secuencia con una identidad de secuencia de por lo menos 70% respecto a una secuencia de aminoácidos tal como se indica en la SEC ID nº 9, en la que dicha secuencia de aminoácidos comprende un residuo de asparagina o aspartato en la posición 17 y un conector peptídico que comprende una secuencia de aminoácidos tal como se indica en la SEC ID nº 10 o una secuencia con una identidad de secuencia de por lo menos 70% respecto a una secuencia de aminoácidos tal como se indica en la SEC ID nº 10, en la que dicha secuencia de aminoácidos comprende un residuo de lisina en la posición 9 y un residuo de glutamato o aspartato en la posición 70, (4) un conector peptídico que comprende una secuencia de aminoácidos tal como se indica en la SEC ID nº 109 o una secuencia con una identidad de secuencia de por lo menos 70% respecto a una secuencia de aminoácidos tal como se indica en la SEC ID nº 109, en la que dicha secuencia de aminoácidos comprende un residuo de asparagina o aspartato en la posición 17, un residuo de glicina en la posición 11 y opcionalmente un residuo de isoleucina en la posición 20, un residuo de prolina en las posiciones 21 y 22 y un residuo de lisina en la posición 23, y un conector peptídico que comprende una secuencia de aminoácidos tal como se indica en la SEC ID nº 10 o una secuencia con una identidad de secuencia de por lo menos 70% respecto a una secuencia de aminoácidos tal como se indica en la SEC ID nº 10, en la que dicha secuencia de aminoácidos comprende un residuo de lisina en la posición 9 y un residuo de glutamato o aspartato en la posición 70, (5) un conector peptídico que comprende una secuencia de aminoácidos tal como se indica en la SEC ID nº 13 o una secuencia con una identidad de secuencia de por lo menos 70% respecto a una secuencia de aminoácidos tal como 0 se indica en la SEC ID nº 13, en la que dicha secuencia de aminoácidos comprende un residuo de aspartato o asparagina en la posición 7 y un conector peptídico que comprende una secuencia de aminoácidos tal como se indica en la SEC ID nº 14 o una secuencia con una identidad de secuencia de por lo menos 70% respecto a una secuencia de aminoácidos tal como se indica en la SEC ID nº 14, en la que dicha secuencia de aminoácidos comprende un residuo de glutamato o aspartato en la posición 56 , y un residuo de lisina en la posición 10, y 5 (6) un conector peptídico que comprende una secuencia de aminoácidos tal como se indica en la SEC ID nº 13 o una secuencia con una identidad de secuencia de por lo menos 70% respecto a una secuencia de aminoácidos tal como se indica en la SEC ID nº 13, en la que dicha secuencia de aminoácidos comprende un residuo de aspartato o asparagina en la posición 7 y un conector peptídico que comprende una secuencia de aminoácidos tal como se indica en la SEC ID nº 33 o una secuencia con una identidad de secuencia de por lo menos 70% respecto a una secuencia de aminoácidos tal como se indica en la SEC ID nº 33, en la que dicha secuencia de aminoácidos comprende un residuo de lisina en la posición 8, en la que los pares ortogonales de conectores peptídicos comprenden (1) y (4), (1) y (5), (1) y (6), (1) y (3), (1) y (2), (2) y (5), (2) y (6), (3) y (5), (3) y (6), (4) y (5) o (4) y (6).