Patent AR-126884-A1 (AR)
Title: Medios y métodos para detoxificar ocratoxina a
Inventor: BENSON SVEN
IPC: A23L5/20
Filed: 2022-08-26
Abstract: La presente invención se relaciona con novedosos usos de los polipéptidos y novedosas variantes de dichos polipéptidos capaces de detoxificar Ocratoxina A (OTA) y métodos (por ejemplo, para detoxificar micotoxinas) basados en los mismos. La presente invención se relaciona además con composiciones, kits, plantas transgénicas, semillas transgénicas, granos de polen transgénicos, alimentos, alimentos intermedios; forrajes, forrajes intermedios; piensos, piensos intermedios; aditivos (por ejemplo, aditivos para alimentos, forrajes o piensos), aditivos intermedios (por ejemplo, aditivo intermedio para alimentos, forrajes o piensos); agente detoxificante, agente detoxificante intermedio; suplemento nutricional, suplemento nutricional intermedio, prebiótico, prebiótico intermedio y/o mezcla/s de los mismos que comprenden uno o más polipéptidos y/o variantes capaces de detoxificar Ocratoxina A (OTA).  Reivindicación 1: Un método (por ejemplo, in vitro, ex vivo, in vivo o método de fabricación) para detoxificar (por ejemplo, modificar o hidrolizar) una micotoxina que tiene la fórmula (1) (por ejemplo, Ocratoxina A, Ocratoxina B y/u Ocratoxina C), en donde R¹ está seleccionado del grupo que consiste en H y OH, R² está seleccionado del grupo que consiste en H y CH₂-CH₃ y R³ está seleccionado del grupo que consiste en H y Cl; comprendiendo dicho método: (a) proporcionar: (i) uno o más polipéptidos que tienen al menos 70% de identidad de secuencia (por ejemplo al menos 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o 100%) con la secuencia de aminoácidos seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID Nº 1, SEQ ID Nº 2, SEQ ID Nº 22, SEQ ID Nº 318, SEQ ID Nº 336, SEQ ID Nº 348, SEQ ID Nº 16 - 359, 368 - 370; en donde dicho uno o más polipéptidos son capaces de detoxificar (por ejemplo, modificar o hidrolizar) al menos una micotoxina que tiene dicha fórmula (1); preferentemente dicho/s polipéptido/s que tiene/n actividad peptidasa que tiene EC 3.4.13.X, en donde X está seleccionado del grupo que consiste en: 9, 4, 5, 7, 12, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23; lo más preferentemente dicho/s polipéptido/s que tiene/n actividad peptidasa que tiene EC 3.4.13.9; lo más preferentemente dicho uno o más polipéptidos que comprenden una o más de las siguientes secuencias de aminoácidos (por ejemplo, motivos conservativos): i) PGFIDAHVH (SEQ ID Nº 3), preferentemente dicha SEQ ID Nº 3 está comprendida en las posiciones de aminoácidos correspondientes a las posiciones 87 - 95 de SEQ ID Nº 1 (por ejemplo, utilizando la numeración de SEQ ID Nº 1); ii) PAEQA (SEQ ID Nº 4), preferentemente dicha SEQ ID Nº 4 está comprendida en las posiciones de aminoácidos correspondientes a las posiciones 116 - 120 de SEQ ID Nº 1 (por ejemplo, utilizando la numeración de SEQ ID Nº 1); iii) GVCNG (SEQ ID Nº 5), preferentemente dicha SEQ ID Nº 5 está comprendida en las posiciones de aminoácidos correspondientes a las posiciones 197 - 201 de SEQ ID Nº 1 (por ejemplo, utilizando la numeración de SEQ ID Nº 1); iv) CRAAVR (SEQ ID Nº 6), preferentemente dicha SEQ ID Nº 6 está comprendida en las posiciones de aminoácidos correspondientes a las posiciones 205 - 210 de SEQ ID Nº 1 (por ejemplo, utilizando la numeración de SEQ ID Nº 1); v) IKFMPSGGVLSL (SEQ ID Nº 7), preferentemente dicha SEQ ID Nº 7 está comprendida en las posiciones de aminoácidos correspondientes a las posiciones 220 - 231 de SEQ ID Nº 1 (por ejemplo, utilizando la numeración de SEQ ID Nº 1); vi) RKVAAH (SEQ ID Nº 8), preferentemente dicha SEQ ID Nº 8 está comprendida en las posiciones de aminoácidos correspondientes a las posiciones 257 - 262 de SEQ ID Nº 1 (por ejemplo, utilizando la numeración de SEQ ID Nº 1); vii) AGVDSIEHG (SEQ ID Nº 9), preferentemente dicha SEQ ID Nº 9 está comprendida en las posiciones de aminoácidos correspondientes a las posiciones 275 - 283 de SEQ ID Nº 1 (por ejemplo, utilizando la numeración de SEQ ID Nº 1); viii) VMPGLIDAH (SEQ ID Nº 10), preferentemente dicha SEQ ID Nº 10 está comprendida en las posiciones de aminoácidos correspondientes a las posiciones 51 - 59 de SEQ ID Nº 2 (por ejemplo, utilizando la numeración de SEQ ID Nº 2); ix) AGFTTVRDCG (SEQ ID Nº 11), preferentemente dicha SEQ ID Nº 11 está comprendida en las posiciones de aminoácidos correspondientes a las posiciones 96 - 105 de SEQ ID Nº 2 (por ejemplo, utilizando la numeración de SEQ ID Nº 2); x) QTFGH (SEQ ID Nº 12), preferentemente dicha SEQ ID Nº 12 está comprendida en las posiciones de aminoácidos correspondientes a las posiciones 135 - 139 de SEQ ID Nº 2 (por ejemplo, utilizando la numeración de SEQ ID Nº 2); xi) ATGGVLS (SEQ ID Nº 13), preferentemente dicha SEQ ID Nº 13 está comprendida en las posiciones de aminoácidos correspondientes a las posiciones 185 - 191 de SEQ ID Nº 2 (por ejemplo, utilizando la numeración de SEQ ID Nº 2); xii) YVAAHAHGD (SEQ ID Nº 14), preferentemente dicha SEQ ID Nº 14 está comprendida en las posiciones de aminoácidos correspondientes a las posiciones 219 - 227 de SEQ ID Nº 2 o 22 (por ejemplo, utilizando la numeración de SEQ ID Nº 2 o 22); xiii) LTPTL (SEQ ID Nº 15), preferentemente dicha SEQ ID Nº 15 está comprendida en las posiciones de aminoácidos correspondientes a las posiciones 262 - 266 de SEQ ID Nº 2 o 22 (por ejemplo, utilizando la numeración de SEQ ID Nº 2 o 22); xiv) VMPGLID (SEQ ID Nº 360), preferentemente dicha SEQ ID Nº 360 está comprendida en las posiciones de aminoácidos correspondientes a las posiciones 52 - 58 de SEQ ID Nº 22 (por ejemplo, utilizando la numeración de SEQ ID Nº 22); xv) KGGSL (SEQ ID Nº 361), preferentemente dicha SEQ ID Nº 361 está comprendida en las posiciones de aminoácidos correspondientes a las posiciones 67 - 71 de SEQ ID Nº 22 (por ejemplo, utilizando la numeración de SEQ ID Nº 22); xvi) LLLAGFTTVRDCG (SEQ ID Nº 362), preferentemente dicha SEQ ID Nº 362 está comprendida en las posiciones de aminoácidos correspondientes a las posiciones 93 - 105 de SEQ ID Nº 22 (por ejemplo, utilizando la numeración de SEQ ID Nº 22); xvii) QTFGHGE (SEQ ID Nº 363), preferentemente dicha SEQ ID Nº 363 está comprendida en las posiciones de aminoácidos correspondientes a las posiciones 135 - 141 de SEQ ID Nº 22 (por ejemplo, utilizando la numeración de SEQ ID Nº 22); xviii) FATGGVLSQRD (SEQ ID Nº 364), preferentemente dicha SEQ ID Nº 364 está comprendida en las posiciones de aminoácidos correspondientes a las posiciones 184 - 194 de SEQ ID Nº 22 (por ejemplo, utilizando la numeración de SEQ ID Nº 22); xix) IVNEA (SEQ ID Nº 365), preferentemente dicha SEQ ID Nº 365 está comprendida en las posiciones de aminoácidos correspondientes a las posiciones 209 - 213 de SEQ ID Nº 22 (por ejemplo, utilizando la numeración de SEQ ID Nº 22); xx) IGVDEWGL (SEQ ID Nº 366), preferentemente dicha SEQ ID Nº 366 está comprendida en las posiciones de aminoácidos correspondientes a las posiciones 279 - 286 de SEQ ID Nº 22 (por ejemplo, utilizando la numeración de SEQ ID Nº 22); xxi) GFETGL (SEQ ID Nº 367), preferentemente dicha SEQ ID Nº 367 está comprendida en las posiciones de aminoácidos correspondientes a las posiciones 317 - 322 de SEQ ID Nº 22 (por ejemplo, utilizando la numeración de SEQ ID Nº 22); ii) una o más variantes de un polipéptido parental, en donde dicha/s variante/s comprende/n una alteración (por ejemplo, una sustitución, deleción y/o inserción) en una o más posiciones correspondientes a las posiciones del polipéptido parental, en donde dicha/s variante/s tiene/n al menos el 70% (por ejemplo al menos 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o 99%), pero menos del 100% de identidad de secuencia con una secuencia de aminoácidos parental seleccionada del grupo que consiste en: SEQ ID Nº 1, 2, 16 - 21, 22, 23 - 34, 317 - 318, 326 - 335, 336 - 337, 348 - 349, 368 - 370; en donde dicha/s variantes/s son capaces de detoxificar (por ejemplo, modificar o hidrolizar) al menos una micotoxina que tiene dicha fórmula (1) (por ejemplo, ocratoxina A, ocratoxina B y/u ocratoxina C); preferentemente dicha/s variante/s que tiene/n actividad peptidasa que tiene EC 3.4.13.X, en donde X está seleccionado del grupo que consiste en: 9, 4, 5, 7, 12, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23; lo más preferentemente dicha/s variante/s que tiene/n una actividad peptidasa que tiene EC 3.4.13.9; lo más preferentemente dicha/s variante/s que comprenden una o más de las siguientes secuencias de aminoácidos (por ejemplo, motivos conservativos): (i) - (xxi) según (i); además, lo más preferentemente dicho polipéptido parental está seleccionado del grupo que consiste en: SEQ ID Nº 1, 2, 16 - 21, 22, 23 - 34, 317 - 318, 326 - 335, 336 - 337, 348 - 349, 368 - 370; (iii) uno o más polinucleótidos, constructos de ácido nucleico y/o vectores de expresión que codifiquen y/o son capaces de expresar uno o más polipéptidos y/o una o más variantes según (i) - (ii); (iv) una o más células hospedadoras recombinantes, esporas, plantas transgénicas, semillas transgénicas y/o granos de polen transgénicos que comprendan (i), (ii) y/o (iii); y/o (v) alimentos, alimentos intermedios; forrajes, forrajes intermedios; piensos, piensos intermedios; aditivos (por ejemplo, aditivos para alimentos, forrajes o piensos), aditivos intermedios (por ejemplo, aditivos intermedios para alimentos, forrajes o piensos); agentes detoxificante, agente detoxificante intermedio; suplemento nutricional, suplemento nutricional intermedio; prebiótico, prebiótico intermedio y/o mezcla/s de los mismos que comprendan (i), (ii), (iii) y/o (iv); (b) aplicar (a) a dicha micotoxina que tiene la fórmula (1).