Patent ES-2759782-T3 (ES)
Title: Procedimiento de detección por PCR múltiplex para tipos sanguíneos humanos poco comunes y kit
Inventor: YE LUYI
IPC: C12Q1/686
Filed: 2012-01-18
Granted: 2020-05-12
Abstract: Un procedimiento de cribado rápido por PCR múltiplex de grupos sanguíneos humanos poco comunes, en el que el procedimiento comprende las siguientes etapas: A. preparar una muestra para analizar: construir un grupo con múltiples muestras de sangre, extrayendo respectivamente plantillas de ADN de las muestras de sangre que forman el grupo y mezclar las plantillas de ADN para obtener una muestra para analizar del grupo; B. cribar un grupo positivo: utilizando las etapas i)-v) para realizar la detección por PCR múltiplex en la muestra a analizar del grupo obtenido en la etapa A, y cribar el grupo cuyo resultado de detección es positivo: i) preparar un sistema de reacción PCR múltiplex: el sistema de reacción PCR múltiplex comprende pares múltiples de cebadores específicos, solución tampón de PCR, dNTP, enzima Taq y ddH2O, y las secuencias de los pares múltiples de cebadores específicos son las SEQ ID NOs: 1-6, SEQ ID NOs: 7-12 o SEQ ID NOs: 13- 16; los cebadores específicos son cebadores específicos para loci de SNP de antígeno de grupos sanguíneos poco comunes en genes que codifican antígeno de superficie de células sanguíneas; ii) agregar la muestra a analizar preparada por el procedimiento de recolección de muestras de sangre y extracción de plantillas de ADN para el sistema de reacción PCR múltiplex preparado en la etapa i), para obtener una solución de reacción PCR; iii) realizar una reacción de amplificación en la solución de reacción PCR en la etapa ii) de acuerdo con un procedimiento de amplificación por PCR múltiplex; iv) realizar electroforesis en productos de amplificación obtenidos de la reacción de amplificación en la etapa iii) en gel de agarosa, y observar los resultados de electroforesis a través de un formador de imágenes en gel; y v) si la electroforesis muestra la aparición de una banda, el resultado de detección de un grupo sanguíneo poco común es positivo; y si la electroforesis no muestra banda, el resultado de detección del grupo sanguíneo poco común es negativo; C. la detección y resolución de grupo positivo se selecciona de cualquiera de los siguientes: a) si el número de muestras de sangre en el grupo cuyo resultado de detección es positivo es menor o igual a 5, se toman las plantillas de ADN de las muestras de sangre en el grupo como una muestra para analizar, respectivamente, utilizando las etapas i)-v) para realizar la detección por PCR múltiplex y cribar las muestras de sangre cuyo resultado de detección es positivo; b) si el número de muestras de sangre en el grupo cuyo resultado de detección es positivo es mayor que 5, se resuelven las muestras de sangre del grupo cribado en la etapa B cuyo resultado de detección es positivo para formar dos nuevos grupos, mezclando respectivamente plantillas de ADN de las muestras de sangre de los dos grupos, para obtener muestras que se analizan de los dos grupos, y utilizando las etapas i)-v) para realizar la detección por PCR múltiplex, para cribar el grupo cuyo resultado de detección es positivo; y D. repetir la etapa C.