Patent AR-037083-A1 (AR)
Title: Metodos para la produccion de proteinas redox y complejos proteicos heteromultimericos; composiciones relacionadas
IPC: A61K38/00
Filed: 2001-12-19
Abstract: Un método para producir un cuerpo graso asociado con un complejo proteico multimérico recombinante, comprendiendo dicho método los pasos de: a) producir en una célula que contiene cuerpos grasos, un primer polipéptido recombinante y un segundo polipéptido recombinante, donde dicho primer polipéptido recombinante tiene la capacidad de asociarse con dicho segundo polipéptido recombinante para formar dicho complejo proteico multimérico; y b) asociar dicho complejo proteico multimérico con un cuerpo graso por medio de una proteína direccionadora a cuerpos grasos capaz de asociarse con dicho cuerpo graso dicho primer polipéptido recombinante. El método contempla además el aislamiento de los cuerpos grasos asociados con dicho complejo proteico multimérico recombinante. Cada una de dichas proteínas direccionadoras a cuerpos grasos puede ser una proteína del cuerpo graso o una inmunoglobulina. La proteína direccionadora a cuerpos grasos es una oleosina o una caleosina. El primer polipéptido recombinante se puede fusionar a dicha oleosina o caleosina, de manera similar, se puede fusionar el segundo polipéptido recombinante a una segunda oleosina o una segunda caleosina capaz de asociarse con un cuerpo graso. El complejo proteico multimérico es un complejo redox enzimáticamente activo o una inmunoglobulina. Reivindicación 21: Un método para expresar un complejo proteico multimérico recombinante que comprende un primer y segundo polipéptido recombinante de una célula, comprendiendo dicho método los pasos de: a) introducir en una célula una primera secuencia de ácido nucleico quimérica que comprende: (i) una primera secuencia de ácido nucleico capaz de regular la transcripción de dicha célula ligada operativamente a; (ii) una segunda secuencia de ácido nucleico que codifica al primer polipéptido recombinante; b) introducir en dicha célula una segunda secuencia de ácido nucleico quimérica que comprende: (i) una tercera secuencia de ácido nucléico capaz de regular la transcripción en dicha celula ligada operativamente a; (ii) una cuarta secuencia de ácido nucléico que codifica un segundo polipéptido recombinante; © cultivar dicha célula bajo condicions que permitan la expresión de dicho primer y segundo polipéptido recombinante en una célula de la progenie que contenga cuerpos grasos, donde dicho primer polipéptido recombinante y dicho segundo polipéptido recombinante tiene la capacidad de formar un complejo proteico multimerico y (d) asociar dicho primer polipéptido recombinante con un cuerpo graso por medio de una proteína direccionadora a cuerpos grasos capaz de asociarse con dicho cuerpo graso y dicho primer polipéptido recombinante. Reivindicación 26: El método de la cláusula 25, donde cada una de dichas proteínas direccionadoras a cuerpos grasos se selecciona entre una proteína del cuerpo graso o una inmunoglobulina. Reivindicación 27: El método de la cláusula 26, donde dicha proteína del cuerpo graso es una oleosina o una caleosina. Reivindicación 35: El método de la cláusula 21, donde dicho primer polipéptido recombinante es una tioredoxina y dicho segundo polipéptido recombinante es una tioredoxina-reductasa. Reivindicación 38: El método acorde con la cláusula 21, donde dicho primer polipéptido recombinante es una cadena liviana de una inmunoglobulina y dicho segundo polipéptido recombinante es una cadena pesada de una inmunoglobulina. Reivindicación 39: El método acorde con la cláusula 38, donde dicha proteína direccionadora a cuerpos grasos es una proteína A, proteína L o proteína G. Reivindicación 40: El método de la cláusula 21, donde dicha célula es una célula vegetal. Reivindicación 42: Un método para producir en una planta un complejo proteico multimérico recombinante, comprendiendo dicho método los pasos de: a) preparar una primera planta que comprenda células, donde dichas células contienen cuerpos grasos y un primer polipéptido recombinante donde dicho primer polipéptido recombinante tiene la capacidad de asociarse con dichos cuerpos grasos por medio de una proteína direccionadora a cuerpos grasos; b) preparar una segunda planta que comprenda células, donde dichas células contienen cuerpos grasos y un segundo polipéptido recombinante; y c) cruzar sexualmente dicha primera planta con dicha segunda planta con el fin de producir una planta de progenie que comprenda células, donde dichas células contienen cuerpos grasos, donde dichos cuerpos grasos tienen la capacidad de asociarse con dicho primer polipéptido recombinante y dicho primer polipéptido recombinante tiene la capacidad de asociarse con dicho segundo polipéptido recombinante para formar dicho complejo proteico multimérico recombinante. Reivindicación 56: Una secuencia de ácido nucleico quimérica que codifica una proteína de fusión multimérica, comprendiendo dicho ácido nucleico: a) una primera secuencia de ácido nucleico que codifica la proteína direccionadora a cuerpos grasos ligada operativamente en el sentido del marco de lectura con; b) una segunda secuencia de ácido nucleico que codifica al primer polipéptido recombinante; ligada en el sentido del marco de lectura con; c) una tercera secuencia de ácido nucleico que codifica un segundo polipéptido recombinante, donde dicho primer y segundo polipéptido recombinante tienen la capacidad de formar un complejo proteico multimérico. Reivindicación 60: La secuencia de ácido nucleico quimérica de la cláusula 56, donde dicho primer y segundo polipéptido recombinante forman un complejo redox heteromultimérico enzimáticamente activo. Reivindicación 67: Una proteína de fusión multimérica recombinante que comprende (i) una proteína direccionadora a cuerpos grasos, o un fragmento de la misma, (ii) un primer polipéptido recombinante y un (iii) segundo polipéptido recombinante, donde dicho primer y segundo polipéptido recombinante tienen la capacidad de formar un complejo proteico multimérico. Reivindicación 72: El polipéptido de fusión recombinante de la cláusula 71, donde dicho primer polipéptido recombinante es una tioredoxina y dicho segundo polipéptido recombinante es una tioredoxina-reductasa. Reivindicación 78: Cuerpos grasos aislados que comprenden un complejo proteico multimérico, que comprenden (i) una proteína direccionadora a cuerpos grasos y (ii) un primer polipéptido recombinante, donde dichos cuerpos grasos además comprenden un segundo polipéptido recombinante, donde dicho primer y segundo polipéptido recombinante tienen la capacidad de formar un complejo proteico multimérico. Reivindicación 93: Una célula que comprende cuerpos grasos y (i) una proteína direccionadora a cuerpos grasos, (ii) un primer polipéptido recombinante y (iii) un segundo polipéptido recombinante, donde (1) dicho primer polipéptido recombinante tiene la capacidad de asociarse con dicha proteína direccionadora a cuerpos grasos; y (2) dicho primer polipéptido recombinante tiene la capacidad de asociarse con dicho segundo polipéptido recombinante para formar un complejo proteico multimérico. Reivindicación 108: Una planta que comprende las células de la cláusula 93. Reivindicación 116: El método de la cláusula 110, donde dicha composición farmacéutica se usa para el tratamiento de la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (COPD), cataratas, diabetes, envenenamiento, enfermedad broncopulmonar, procesos malignos, psoriasis, lesiones por reperfusión, cicatrización de heridas, sepsia, hemorragia GI, enfermedad intestinal inflamatoria (IBD), úlceras, GERD (enfermedad de reflujo gastroesofágico). Reivindicación 117: Una composición que comprende cuerpos grasos aislados, tioredoxina y tioredoxina-reductasa. Reivindicación 121: Un producto alimentario, un producto para el cuidado personal o una composición farmacéutica que comprenden la composición de la cláusula 117. Reivindicación 127: Un método para reducir la alergenicidad de un alimento que comprende los pasos de: proveer los cuerpos grasos aislados de la cláusula 78; y agregar los cuerpos grasos aislados al alimento, con lo cual se reduce la alergenicidad del alimento.