Patent ES-2404405-T3 (ES)
Title: Un procedimiento para la preparación de una composición farmacéutica que contiene un portador de oxígeno termoestable
Inventor: WONG BING LOU
IPC: A61K41/00
Filed: 2011-04-11
Granted: 2013-05-27
Abstract: Un procedimiento para la preparación de una composición farmacéutica que contiene un portador deoxígeno altamente purificado y termoestable, incluyendo la composición farmacéutica que contiene un portador deoxígeno hemoglobina, consistiendo la hemoglobina esencialmente en hemoglobina tetramérica reticulada nopolimérica, y comprendiendo el procedimiento: a) proporcionar sangre completa de mamífero que incluye al menos eritrocitos y plasma; b) separar los eritrocitos del plasma en la sangre completa de mamífero; c) filtrar los eritrocitos que se separaron del plasma para obtener una fracción de eritrocitos filtrados; d) lavar la fracción de eritrocitos filtrados para retirar las impurezas proteicas plasmáticas, dando como resultadoeritrocitos lavados; e) disgregar los eritrocitos lavados mediante una lisis hipotónica precisa y controlada durante 2 a 30 s o un tiempopor otro lado suficiente para lisar los eritrocitos en un aparato de citólisis instantánea, creando una disolución quecomprende un lisado de eritrocitos disgregados a un caudal de 50-1000 l/h; f) efectuar una filtración para retirar al menos una parte del retenido de desecho del lisado; g) extraer una primera disolución de hemoglobina del lisado; h) efectuar un primer proceso de ultrafiltración usando un filtro de ultrafiltración configurado para retirar lasimpurezas que tienen un peso molecular mayor que la hemoglobina y para retirar adicionalmente cualquier virus yretenido de desecho residual de la primera disolución de hemoglobina, obteniéndose una segunda disolución dehemoglobina; i) efectuar una cromatografía en columna de flujo continuo con la disolución de hemoglobina purificada para retirarlas impurezas proteicas; j) efectuar un segundo proceso de ultrafiltración usando un filtro de ultrafiltración configurado para retirar impurezas ypara concentrar la disolución de hemoglobina; k) reticular al menos las subunidades α-α de la hemoglobina con fumarato de bis-3,5-dibromosalicilo, formandohemoglobina reticulada en un entorno desoxigenado, en el que la hemoglobina reticulada es hemoglobinatetramérica reticulada no polimérica; l) intercambiar un tampón fisiológico adecuado por la hemoglobina tetramérica reticulada; m) retirar cualquier producto químico residual por filtración por flujo tangencial; n) tratar térmicamente la hemoglobina reticulada en un entorno desoxigenado para desnaturalizar y precipitarcualquier hemoglobina no reaccionada residual, hemoglobina dimérica no estabilizada y cualquier otra impurezaproteica de tal modo que la hemoglobina tetramérica reticulada termoestable resultante tenga una concentraciónindetectable de dímero y consista esencialmente en hemoglobina tetramérica reticulada no polimérica, en el que eltratamiento térmico se efectúa a 70 a 95ºC durante un tiempo de 30 s a 3 h en una o más de las siguientescondiciones: n1) seguido inmediatamente por enfriamiento a aproximadamente 25ºC, y/o n2) se añade N-acetilcisteína a la hemoglobina tetramérica reticulada antes del tratamiento térmico; o) añadir N-acetilcisteína inmediatamente después de tratar térmicamente la hemoglobina tetramérica reticuladapara mantener un bajo nivel de metahemoglobina; p) retirar el precipitado mediante una centrifugación o un aparato de filtración formando una disolución transparente; y q) añadir la hemoglobina tetramérica reticulada purificada y termoestable a un portador farmacéuticamenteaceptable.