Patent ES-2840456-T3 (ES)
Title: Secuenciación de ADN
Inventor: ESHOO MARK W
IPC: C07H21/04
Filed: 2013-05-02
Granted: 2021-07-06
Abstract: Un método para secuenciar un ácido nucleico objetivo usando un enfoque de secuenciación por síntesis (SBS), el método comprendiendo: a) proporcionar una primera pluralidad de una primera base de nucleótidos, una segunda pluralidad de una segunda base de nucleótidos, una tercera pluralidad de una tercera base de nucleótidos, y una cuarta pluralidad de una cuarta base de nucleótidos, en donde: (1) una primera proporción de una primera porción de la primera pluralidad marcada con un primer marcador en relación a una segunda porción de la primera pluralidad marcada con un segundo marcador; y (2) una segunda proporción de una tercera porción de la segunda pluralidad marcada con el primer marcador en relación con una cuarta porción de la segunda pluralidad marcada con el segundo marcador, son detectablemente diferentes entre sí; b) incorporar mediante polimerización la primera pluralidad de la primera base de nucleótidos, la segunda pluralidad de la segunda base de nucleótidos, la tercera pluralidad de la tercera base de nucleótidos, o la cuarta pluralidad de la cuarta base de nucleótidos en una pluralidad de copias de un ácido nucleico que es complementario al ácido nucleico objetivo; c) determinar una proporción de señales producida a partir de la primera pluralidad de la primera base de nucleótidos o una proporción de señales producida a partir de la segunda pluralidad de la segunda base de nucleótidos en la pluralidad de copias de un ácido nucleico que es complementario al ácido nucleico objetivo, en donde una primera proporción de señales producida por la primera pluralidad de la primera base de nucleótidos es detectablemente diferente de una segunda proporción de señales producida por la segunda pluralidad de la segunda base de nucleótidos y en donde la proporción de señales producida a partir de la primer pluralidad se produce por al menos dos marcadores que emiten dos longitudes de onda distinguibles y la proporción de señales producida a partir de la segunda pluralidad se produce por al menos dos marcadores que emiten dos longitudes de onda distinguibles; d) asociar la proporción de señales o señal con la primera base de nucleótidos o la segunda base de nucleótidos para identificar la base de nucleótidos en la pluralidad de copias de un ácido nucleico que es complementaria al ácido nucleico objetivo; y e) analizar un conjunto de datos de proporciones de señales ordenadas para producir una secuencia de nucleótidos del ácido nucleico objetivo, en donde el método de SBS es un enfoque de secuenciación basado en conjuntos la secuencia del ácido nucleico objetivo se determina detectando la señal producida después de cada incorporación de bases, y en donde: (i) cada uno de los nucleótidos comprende un grupo 3' hidroxilo que está bloqueado químicamente y los cuatro nucleótidos se añaden simultáneamente a una reacción que comprende ADN polimerasa y agrupaciones de complejos plantilla-cebador; o (ii) cada nucleótido se añade uno a la vez a una mezcla de la reacción que contiene un complejo de objetivo de ácido nucleico-cebador y una polimerasa.