Patent PL-419809-A1 (PL)
Inventor: SZAFRAN ROMAN
IPC: C12Q1/02
Filed: 2016-12-15
Abstract: Sposób generowania stabilnego, przeciwbieżnego gradientu stężenia dwóch substancji aktywnych w mikrosystemach do prowadzenia hodowli komórek, charakteryzujący się tym, że w pierwszym etapie zbiorniki płynów zasilających komory mikrourządzenia wypełnia się rozpuszczalnikami, kolejno: zbiorniki pierwszej i kolejnych komór (ślepa próba i hodowla właściwa) rozpuszczalnikiem zawiesiny komórkowej, a ostatnią komorę (komora wskaźnikowa) rozpuszczalnikiem barwnych substancji wskaźnikowych, w tym celu do zbiorników po jednej stronie mikrourządzenia wprowadza się ciecz i pochyla się mikrosystem, tak by wymusić jej przepływ ze zbiorników zasilających przez komory mikrourządzenia do zbiorników wypływowych usytuowanych po przeciwnej jego stronie, a po wypełnieniu komór, ciecz ze zbiorników usuwa się. W drugim etapie wprowadza się zawiesinę komórek do co najmniej dwóch zbiorników zasilających usytuowanych po jednej stronie mikrourządzenia (ślepa próba i hodowla właściwa), a rozpuszczalnik barwnych substancji wskaźnikowych do ostatniego zbiornika (komora wskaźnikowa) i pochyla się mikrosystem, tak by wymusić przepływ płynów ze zbiorników zasilających przez komory do zbiorników usytuowanych po przeciwnej ich stronie, tak by poziom płynów w przeciwległych zbiornikach wyrównał się. W trzecim etapie prowadzi się krótkotrwałą hodowlę komórek w celu ich adhezji do powierzchni komór. W czwartym etapie opróżnia się zbiorniki po obu stronach komór mikrourządzenia, przy czym komory pozostają wypełnione płynem i do zbiorników zasilających komory mikrourządzenia usytuowanych po tej samej stronie wprowadza się każdorazowo taką samą objętość płynu, kolejno: rozpuszczalnik zawiesiny komórkowej do zbiornika zasilającego pierwszej komory (ślepa próba), roztwór pierwszej substancji aktywnej do zbiornika zasilającego drugiej i kolejnych komór (hodowla właściwa), roztwór pierwszej substancji wskaźnikowej do zbiornika zasilającego ostatniej komory (komora wskaźnikowa), następnie pochyla się mikrosystem pod kątem od 10 do 90 stopni w kierunku pustych zbiorników, wymuszając przepływ płynu przez komory mikrourządzenia do całkowitego opróżnienia zbiorników zasilających uprzednio wypełnionych płynem, jednak bez opróżniania zawartości komór mikrourządzenia, po czym usuwa się ciecz ze zbiorników. W piątym etapie wprowadza się do zbiorników zasilających usytuowanych po jednej stronie mikrourządzenia odmierzone objętości płynów, kolejno: rozpuszczalnik zawiesiny komórkowej do zbiornika zasilającego pierwszej komory (ślepa próba), roztwór drugiej substancji aktywnej do zbiornika zasilającego drugiej i kolejnych komór (hodowla właściwa), roztwór drugiej substancji wskaźnikowej do zbiornika zasilającego ostatniej komory (komora wskaźnikowa), następnie pochyla się mikrosystem pod kątem od 10 do 90 stopili w kierunku pustych zbiorników, wymuszając przepływ płynu przez komory mikrourządzenia do całkowitego opróżnienia zbiorników zasilających uprzednio wypełnionych płynem, jednak bez opróżniania zawartości komór, po czym usuwa się nadmiar cieczy ze zbiorników. W szóstym etapie wprowadza się do zbiorników usytuowanych po stronie wypływowej niewielkie objętości płynów, kolejno: rozpuszczalnik zawiesiny komórkowej do zbiornika pierwszej komory (ślepa próba), roztwór pierwszej substancji aktywnej do zbiornika drugiej i kolejnych komór (hodowla właściwa), roztwór pierwszej substancji wskaźnikowej do zbiornika ostatniej komory i przechyla się mikrosystem w kierunku pustych zbiorników w celu wymuszenia przepływu płynu w komorach mikrourządzenia do czasu całkowitego opróżnienia zbiorników uprzednio wypełnionych płynem, jednak bez opróżniania komór mikrourządzenia, następnie mikrosystem przechyla się w przeciwnym kierunku i wymusza powrotny przepływ płynu w komorach mikrourządzenia, czynność naprzemiennego wychylania mikrosystemu powtarza się wielokrotnie do uzyskania pożądanego rozkładu stężenia substancji barwnych w komorze wskaźnikowej, po czym usuwa się ciecz ze zbiorników. W siódmym etapie zbiorniki wypełnia się jednakową objętością płynu, adekwatnie do składu płynu na wylotach z komór do nich przyległych - odpowiednim rozpuszczalnikiem, roztworem pierwszego barwnika, roztworem drugiego barwnika, roztworem pierwszej substancji aktywnej lub roztworem drugiej substancji aktywnej W ósmym etapie wszystkie zbiorniki zabezpiecza się osłonami zbiorników dla zapewnienia stabilizacji poziomu płynów w komorach mikrourządzenia.