Patent ES-2805740-T3 (ES)
Title: Método de electroforesis con inmunofijación con inmunodesplazamiento en gel de componentes diana
Inventor: NOUADJE GEORGES
IPC: G01N33/561
Filed: 2016-07-27
Granted: 2021-02-15
Abstract: Un método para el análisis por electroforesis con inmunofijación (IFE) de una muestra biológica que comprende una o más proteínas, en particular para el análisis por IFE de una inmunoglobulina (o inmunoglobulinas) que pertenece a una clase seleccionada entre IgG, IgA, IgM, IgD e IgE, o un fragmento de la misma que puede estar presente en dicha muestra biológica, que comprende las etapas de: a. depositar al menos una parte alícuota de la muestra biológica en un área de depósito de una placa de gel electroforética, estando dicha área de depósito de muestras en una posición de la placa de gel que permita la migración electroforética del contenido proteico de la muestra depositada hacia el lado anódico de la placa de gel, y b. depositar al menos un anticuerpo que está modificado para portar cargas eléctricas negativas adicionales, teniendo dicho anticuerpo modificado especificidad antigénica para una inmunoglobulina diana predeterminada o fragmento de la misma que puede estar presente en la muestra biológica y teniendo la capacidad de formar un inmunocomplejo con dicha inmunoglobulina diana predeterminada o fragmento de la misma, en donde el al menos un anticuerpo modificado se deposita en un área de depósito de la placa de gel electroforética que coincide con el área de depósito de muestras de la etapa a. o está separada del área de depósito de la etapa a., estando en el mismo carril pero en una posición que es más catódica con respecto a la posición del área de depósito de muestras de la etapa a., en particular entre la extremidad catódica de la placa de gel y el área de depósito de muestras de la etapa a., en donde las etapas a. y b. pueden realizarse en cualquier orden o al mismo tiempo cuando el área de depósito de anticuerpos modificados y el área de depósito de muestras están separadas o, cuando el área de depósito de anticuerpos modificados y el área de depósito de muestras coinciden, el depósito de un anticuerpo de acuerdo con la etapa b. se lleva a cabo antes o después del depósito de una parte alícuota de la muestra biológica de acuerdo con la etapa a., y c. someter a electroforesis la placa de gel para obtener un perfil de separación de proteínas de la muestra biológica depositada en la etapa a., desplazando específicamente el al menos un anticuerpo modificado depositado en la etapa b. la inmunoglobulina diana predeterminada o fragmento de la misma que puede estar presente en la muestra biológica fuera de la zona gamma y/o el perfil de proteínas durante la migración electroforética, y d. aplicar al menos un anticuerpo de captura en la zona (o zonas) apropiada de la placa de gel sometida a electroforesis, en donde dicho anticuerpo de captura tiene especificidad para un isotipo de anticuerpo particular, o tiene especificidad para la inmunoglobulina diana o fragmento de la misma, o tiene especificidad para un isotipo de anticuerpo particular y/o la inmunoglobulina diana o fragmento de la misma como se encuentra en un inmunocomplejo entre la inmunoglobulina diana o fragmento de la misma y el al menos un anticuerpo modificado, y permitir su reacción para hacer posible la formación de inmunocomplejos precipitados y/o detectables, y e. opcionalmente, teñir los inmunocomplejos formados en la etapa c. y opcionalmente la etapa d.