Patent ES-2821753-T3 (ES)
Title: Procedimientos de producción de Fab y de anticuerpos biespecíficos
Inventor: DEMAREST STEPHEN J
IPC: C07K16/00
Filed: 2014-03-12
Granted: 2021-04-27
Abstract: Un procedimiento para la producción de un primer y un segundo fragmento, de unión a antígeno (Fab), que comprende: (1) la coexpresión de un primer ácido nucleico, un segundo ácido nucleico, un tercer ácido nucleico y un cuarto ácido nucleico en una célula hospedadora, en los que: (a) el primer ácido nucleico codifica tanto un dominio variable de la primera cadena pesada como un dominio constante CH1 de la primera cadena pesada de IgG, en el que dicho dominio variable de la primera cadena pesada comprende una lisina en el resto 39 y un ácido glutámico en el resto que está cuatro aminoácidos corriente arriba del primer resto del HFR3 de acuerdo con Kabat, y dicho dominio constante CH1 de la primera cadena pesada de IgG comprende una alanina o una arginina en el resto 172 y una glicina en el resto 174; (b) el segundo ácido nucleico codifica tanto un dominio variable de la primera cadena ligera como un dominio constante de la primera cadena ligera, en el que dicho dominio variable de la primera cadena ligera es un isotipo kappa y comprende una arginina en el resto 1 y un ácido aspártico en el resto 38, y dicho dominio constante de la primera cadena ligera comprende una tirosina en el resto 135 y un triptófano en el resto 176; (c) el tercer ácido nucleico codifica tanto un dominio variable de la segunda cadena pesada como un dominio constante CH1 de la segunda cadena pesada de IgG, en el que dicho dominio variable de la segunda cadena pesada comprende una tirosina en el resto 39 y dicho dominio constante CH1 de la segunda cadena pesada de IgG comprende una secuencia de WT, y el cuarto ácido nucleico codifica tanto un dominio variable de la segunda cadena ligera como un dominio constante de la segunda cadena ligera, en el que dicho dominio variable de la segunda cadena ligera comprende una arginina en el resto 38 y dicho dominio constante de la segunda cadena ligera comprende una secuencia de WT; o (d) el tercer ácido nucleico codifica tanto un dominio variable de la segunda cadena pesada como un dominio constante CH1 de la segunda cadena pesada de IgG, en el que dicho dominio variable de la segunda cadena pesada comprende una tirosina en el resto 39 y dicho dominio constante CH1 de la segunda cadena pesada de IgG comprende un ácido aspártico en el resto 228, y el cuarto ácido nucleico codifica tanto un dominio variable de la segunda cadena ligera como un dominio constante de la segunda cadena ligera, en el que dicho dominio variable de la segunda cadena ligera comprende una arginina en el resto 38 y dicho dominio constante de la segunda cadena ligera comprende una lisina en el resto 122 en el que cada uno de dichos dominios variables de las primeras cadena pesada y cadena ligera comprende tres regiones determinantes de complementariedad (las CDR) que dirigen la unión a un primer antígeno y además en el que cada uno de dichos dominios variables de las segundas cadena pesada y cadena ligera comprende tres regiones determinantes de complementariedad (las CDR) que dirigen la unión a un segundo antígeno que difiere de dicho primer antígeno; en el que dichos dominios constantes de las primera y segunda cadena pesada de IgG son el isotipo IgG1 o IgG4 humano; (2) el cultivo de dicha célula hospedadora en condiciones tales que se produzcan dichos dominios variable y constante CH1 de IgG de las primera y segunda cadena pesada y dichos dominios variable y constante de la primera y segunda cadena ligera; y (3) la recuperación a partir de dicha célula hospedadora de un primer y segundo Fab, en el que dicho primer Fab comprende dichos dominios variable y constante de la primera cadena pesada y dichos dominios variable y constante de la primera cadena ligera, y dicho segundo Fab comprende dichos dominios variable y constante de la segunda cadena pesada y dichos dominios variable y constante de la segunda cadena ligera.