Patent KR-100204258-B1 (KR)
Inventor: MILLLER TIMOTHY
IPC: C07K19/00
Filed: 1991-11-14
Granted: 1999-06-15
Abstract: 본 발명은 신규한 갈락토키나제/FIVP에스 융합단백질, 백신성분, 치료제 및 진단제로서의 그들의 용도, 및 이들의 제조방법을 제공한다. 
     한가지 관점으로서, 본 발명은 고양이 코로나바이러스에스 유전자의 단백질 및 펩타이드 단편을 제공한다. 이들 펩타이드들은 재조합적으로 발현되거나 합성될 수 있으며 진단용성분, 치료용성분 또는 백신용성분으로서 유용하다. 한가지양태로서, 고양이 코로나바이러스에스-유도된 펩타이드들은 여러 가지의 FIVP 스트레인의에스 게놈의 아미노산 1번 내지 약 1454번의 범위 및 FECV에스 게놈의 1번 내지 약 1454번의 범위, 또는 이들 보다 좀더 작은 펩타이드 단편에 속한다. 바람직한 양태로서, 고양이 코로나바이러스에스-유도된 펩타이드는 FIVP 스트레스인의에스 유전자의 아미노산 1번 내지 약 748번의 범위 또는 FIVP에스게놈의 1내지 약 748번 범위[서열동정번호 : 32]에 속한다. 더욱 특히, FIVP 또는 FECV에스 게놈의 약 아미노산 94번 내지 약 아미노산 223번의 범위에 속하는 펩타이드가 바람직하다. 특히 바람직한 양태로서, 고양이 코로나바이러스에스-유도된 펩타이드는 FIVP 또는 FECV에스 게놈의 아미노산 92번 내지 222번의 범위에 속하는 것으로 발견된다. 
     또다른 양태로서, FIVP 또는 FECV 게놈의 약 아미노산 121번 내지 약 아미노산 180번의 범위에 속하는 펩타이드가 기술된다. 
     본발명의 펩타이드 단편은 효소 연결된 면역흡착검정(ELISA)또는 웨스턴 블룻과 같은 진단검정법에 사용할 때 FIVP와 FECV를 구분하거나 FIVP의 스트레인들을 구분할 수 있다. 또한, 이들 펩타이드들은 항체의 존재를 파악하기위해 고양이 혈청을 선별하는 항원으로서, 또는 FEPV와 FECV를 구분하거나 FIVP의 상이한 스트레인들을 구분할 수 있는 항체를 유도하는 항원으로서 사용될 수 있다. 
     또다른 관점에서 본 발명은 상기된 펩타이들을 암호화하거나 상기된 펩타이드-암호화서열을 플랭킹한, 뉴클레오타이드 1번 내지 약 4365번 및 1번 내지 약2246번의 영역에 속하는 FIVP와 FECV의 뉴클레오타이드 서열을 제공한다. 이들 뉴믈레오타이드들은 PCR 프라이머 또는 하이브리드화 탐침으로서 진단검정에 사용할 때 FIVP와 FECV에스 게놈을 구분할 수 있다. 본 발명의 또다른 관점은 신규한 재조합 FIVP 또는 FECV에스 융합 단백질을 제공한다. 본 발명의 고양이 코로나바이러스에스-유도된 펩타이드들은에스 펩타이드의 재조합 발현시에 필요한 이점을 부여하는 선별된 단백질과 융합시킬 수 있다. 예를 들면, 융합 파트너는 바람직한 숙주 세포 시스템에서 고도로 발현되거나 고도의 분비정도에의해 특징지워지는 단백질일 수 있다. 융합 파트너는, 또한, 시그날서열이거나, 선별된 숙주 세포 시스템내에서 S-유도된 펩타이드의 안정성을 강화하는 서열일 수 있다. 
     본 발명의 이러한 관점에서 한가지 양태로서, 고양이 코로나바이러스의에스 유전자로부터 유도된 펩타이드들은 갈락토키나제(Galk)의 N-말단 52개 아미노산과 융합시킨다. 
     또다른 관점으로서 본 발명은 임의로 검출가능한 가벨과 연결된, 본 발명의 FIVP에스-유도된 펩타이드 또는 융합 단백질을 함유한 진단용시약 조성물을 제공한다. 이러한 진단용 시약은 표 준 검정절차를 사용하여 고양이 체내에서 FIVP 또는 FECV의 존재에 대하여 검정하기 위해 사용될 수 있다. 
     유사한 관점으로 본 발명은 본 발명의 FIVP에스-유도된 펩타이드 또는 융합 단백질을 암호화하거나 플랭킹하고, 임의로, 검출가능한 표 지와 연결된 뉴클레오타이드 서열을 함유한 진단용 시약 조성물을 제공한다. 이러한 진단용 시약은 하이브리드화 검정 또는 PCR기술에서 고양이 체내의 FIVP또는 FECV의 존재에 대해 검정하기 위해 사용될 수 있다. 
     본 발명의 또다른 관점으로서, 에스-우도된 펩타이드 및/또는에스-유도된 융합 단백질은 FIVP 또는 FECV의 감염에 대하여 동물을 보호하는 백신중에서 활성성분으로서 사용될 수 있다. 백신 조성물은 하나이상의 병원성 고양이 코로나바이러스에 대하여 면역성을 자극할 수 있는 유효량의 본 발명의 FIVP 또는 FECV에스-유도된 펩타이드 또는 융합 단백질과 체내 투여에 적합한 담체를 함유한다. 또한, 이들 펩타이드 및 단백질에 대한 면역반응의 특성화는 백신중에 함유되어야하는 FIVP또는 FECV 서열의 다른 영역(들)을 제시한다. 
     또다른 양태로서, 본 발명은 치료 유효향의 본 발명의 FIVP 도는 FECV에스-유도된 펩타이드 또는 융합단백질과 약제학적으로 유효한 량의 담체를 함유한 FIVP 또는 FECV 감염증 치료용 약제 조성물을 제공한다. 
     또다른 관점에서 본 발명은 수의사가 FECV 또는 천연FIVP에 노출되었거나 비감염된 고양이들을 분류하기위해 사용할 수 있는 진단용 키트를 제공한다. 이 키트는 상기 질병에 대하여 면역화된 고양이들을 선별가케한다. 또한 이 키트는 FIVP의 상이한 스트레인들을 구분하거나 FIVP감염의 발전단계별로 고양이들을 분류할 수 있게 한다. 
     이 키트는에스 유전자 뉴클레오타이드 서열들로부터 선택된 본 발명의 PCR프라이며 선별된 FIVP에스-유도된 펩타이드 또는 융합단백질 관련되거나 유사한 바이러스의 프라이머, 펩타이드 및 융합단백질 및 하기된 컨센서스 서열로부터의 프라이머, 펨타이드 및 융합단백질-암호화영역으로 이루어질 수 있다. 
     또다른 관점에서, 본 발명은 이미 노출된 고양이와 순수한 고양이들을 분류할 뿐만 아니라FIVP에 노출된 경우를 다른 연관된 코로나바이러스에 노출된 경우로부터 분리하기 위하여 본 발명의 PCR에스-유도된 프라이머 및 /또는에스-유도된 펩타이드와 융합단백질을 사용하는 방법을 제공한다. 본 발명의 또다른 진단방법은 고양이 혈청에서 본 바이러스에 대한 항체를 검출하기 위하여 ELISA에서에스-유전자 유도된 펩타이드를 사용가능케 한다. 
     본 발명의 또다른 관점은 유효 백신량의 본 발명의 에스-유도된 펩타이드 또는에스-유도된 융합 단백질을 투여하여 FIVP의 감염에 대하여 동물을 면역화하는 방법과 관련이 있다. 
     또 다른 관점에서, 본 발명은 본 발명의 약제학적 조성물을 동물에 투여하여 FIVP 감염증을 치료하는 방법을 제공한다. 
     본 발명의 또 다른 관점은 FIVP 또는 FECV, 또는 연관된 코로나바이러스에피토프에 대한 항체를 제공하며, 이 항체는 이들 바이러스들을 구분지을 수 있다. 
     이들 항체는 본 발명의 펩타이드 또는 융합단백질을 항원으로서 사용하여 생성한다. 
     이러한 항체들은 또한 진단용 또는 치료용 시약으로서 사용할 수 있으며 검출가능한 라벨 또는 독소, 또는 다른 치료화합물에 임의로 부착시킬 수 있다. 
     본 발명의 다른 관점 및 이점들은 본 발명의 양태에 대한 상세한 설명에서 추가로 하기된다.