Patent AR-109271-A2 (AR)
Title: Construcción de adn recombinante aislada, vector aislado y célula vegetal aislada que la comprenden, proceso para producir una planta con dicha construcción y procesos relacionados
IPC: C12Q1/68
Filed: 2017-07-26
Abstract: Reivindicación 1: Una construcción de ADN recombinante aislada caracterizada porque comprende un polinucleótido aislado seleccionado del grupo formado por: (a) un complemento de la secuencia de nucleótidos consistente en una primera secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido que tiene una secuencia de aminoácidos de la SEQ ID Nº 246 capaz de conferir o mejorar la resistencia a Colletotrichum cuando se coexpresa en una planta con una segunda secuencia de nucleótidos que codifica a la SEQ ID Nº 3, en donde dicho complemento y la secuencia de nucleótidos consisten del mismo número de nucleótidos y son 100% complementarios; y (b) una primera secuencia de nucleótidos que codifica un polipéptido que confiere o mejora la resistencia a Colletotrichum, cuando se coexpresa en una planta con una segunda secuencia de nucleótidos que codifica a la SEQ ID Nº 3, en donde el polipéptido tiene una secuencia de aminoácidos de la secuencia del plásmido depositado con el Nº Depósito de Patentes NRRL B-50050 basado en el algoritmo de alineación de Needleman-Wunsch; en donde, el polinucleótido está ligado operativamente a por lo menos una secuencia reguladora heteróloga. Reivindicación 3: Un vector aislado caracterizado porque comprende la construcción de ADN recombinante de la reivindicación 1. Reivindicación 8: Una célula vegetal aislada, incapaz de generar un individuo completo, caracterizada porque comprende la construcción de ADN recombinante de la reivindicación 1 o la reivindicación 4. Reivindicación 12: Un proceso para alterar el nivel de expresión de proteínas capaces de conferir resistencia a la podredumbre del tallo debido a Colletotrichum en una célula vegetal, en donde la célula vegetal obtenida no se encuentra incluida, caracterizado porque comprende: (a) transformar una célula vegetal con la construcción de ADN recombinante de la reivindicación 4; y (b) cultivar la célula vegetal transformada bajo condiciones adecuadas para la expresión de la construcción de ADN recombinante, donde dicha expresión de la construcción de ADN recombinante da como resultado la producción de niveles alterados de proteínas capaces de conferir resistencia a la podredumbre del tallo en la célula vegetal transformada. Reivindicación 24: Un proceso para identificar una planta de maíz obtenida mediante el proceso de la reivindicación 10, y que presenta mayor resistencia a una infección por Colletotrichum, donde el proceso comprende detectar en la planta de maíz la presencia o ausencia de al menos un marcador en el locus Rcg1, en donde dicho al menos un marcador se encuentra sobre o dentro de una secuencia de polinucleótidos seleccionada del grupo formado por la SEQ ID Nº 255, 256, 257, 258 y 266, y seleccionar la planta de maíz en donde está presente dicho al menos un marcador. Reivindicación 37: Un proceso para identificar una planta de maíz obtenida mediante el proceso de la reivindicación 10, y que presenta resistencia o mayor resistencia a una infección por Colletotrichum, el proceso caracterizado porque comprende: (a) detectar en una planta de maíz donante alelos de al menos un marcador sobre o dentro de la región no colineal excluyendo las secuencias codificantes de los genes Rcg1 y Rcg1b, (b) introducir de la planta donante de maíz alelos de dicho marcador en una planta de maíz receptora para producir una planta de maíz con introgresión, y c) evaluar la presencia de los genes Rcg1 y Rcg1b en dicha la de maíz con introgresión, en donde dicha evaluación se selecciona del grupo formado por: i) aislar moléculas de ácido nucleico de dicha planta de maíz y amplificar secuencias homólogas del gen Rcg1 y Rcg1b, ii) aislar moléculas de ácido nucleico de dichas plantas de maíz ,y conducir una hibridación Southern para detectar la presencia de los genes Rcg1 y Rcg1b, iii) (c) aislar proteínas de dicha planta de maíz y efectuar una transferencia Western usando anticuerpos contra las proteínas Rcg1 y Rcg1b, iv) (d) aislar proteínas de dicha planta de maíz y efectuar un ensayo ELISA usando anticuerpos contra las proteínas Rcg1 y Rcg1b, v) demostrar la presencia de secuencias de ARNm derivadas del transcripto de ARNm Rcg1, únicas del gen Rcg1 y demostrar la presencia de secuencias de ARNm derivadas del transcripto de ARNm Rcg1b, únicas del gen Rcg1b; y vi) demostrar la presencia de resistencia recién conferida o mejorada a una infección por Colletotrichum mediante un ensayo fenotípico.