Patent AR-126145-A1 (AR)
Title: Método para producir linfocitos citolíticos naturales a partir de células madre pluripotentes
Inventor: CAO LAN
IPC: C12N5/00
Filed: 2022-06-14
Abstract: La presente descripción proporciona, entre otras cosas, un método para producir de forma eficaz una población celular enriquecida en linfocitos citolíticos naturales (linfocitos NK) a partir de células pluripotentes inducidas Reivindicación 1: Un método para producir una población celular enriquecida en linfocitos NK, donde el método comprende las etapas de: (A) cultivar una población de células madre pluripotentes en un primer conjunto de condiciones que dan como resultado una población celular que comprende al menos un 20% de HPC CD34⁺ (masa de HPC); y (B) cambiar el primer conjunto de condiciones por un segundo conjunto de condiciones, lo que da como resultado una población celular que comprende al menos un 5% de células CD4⁻; y (C) cambiar el segundo conjunto de condiciones a un tercer conjunto de condiciones, lo que da como resultado una población celular enriquecida en linfocitos NK. Reivindicación 2: El método de la reivindicación 1, donde el método se realiza sin una etapa de aislamiento. Reivindicación 66: Un método para producir linfocitos NK derivados de células madre pluripotentes inducidas (iPSC) que comprende las siguientes etapas: (1) cultivar las iPSC en un primer conjunto de condiciones que comprende un medio que comprende al menos un compuesto seleccionado de factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), factor de crecimiento de fibroblastos básico (bFGF) y ácido ascórbico para obtener una población que comprende al menos 20% de HPC CD34⁺ (masa de HPC); (2) cultivar la masa de HPC obtenida en (1) en un segundo conjunto de condiciones que comprenden un medio de cultivo que comprende uno o más de ácido ascórbico, inhibidor de p38 y SDF-1 para obtener una población celular que comprende al menos un 5% de células CD4⁻; y (3) cultivar la población de células de (2) en un tercer conjunto de condiciones que comprenden un medio de cultivo que comprende al menos un compuesto seleccionado del grupo que consiste en un activador de CD3, IL-2 e IL-7. Reivindicación 67: Un método para producir linfocitos NK derivados de células madre pluripotentes inducidas (iPSC) que comprende las siguientes etapas: (1) cultivar una población de células en masa que comprende células progenitoras hematopoyéticas (masa de HPC) en un segundo conjunto de condiciones que comprende un medio de cultivo que comprende uno o más de ácido ascórbico, inhibidor de p38 y SDF-1 para obtener una población de células que comprende al menos al menos 5% de células CD4⁻; (2) aislar las células CD4⁻ de (1); y (3) cultivar las células CD4- aisladas en medios de inducción de NK que comprenden al menos un compuesto seleccionado del grupo que consiste en un activador de CD3, IL-2 e IL-7 Reivindicación 79: Un método para tratar a un sujeto que necesita terapia celular, que comprende administrar al sujeto los linfocitos NK de cualquiera de las reivindicaciones anteriores. Reivindicación 82: Un método para producir una población celular que comprende células progenitoras hematopoyéticas (HPC) CD34⁺, donde el método comprende cultivar una población de células madre pluripotentes en un primer conjunto de condiciones que comprende un medio que comprende al menos un compuesto que se selecciona de factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), factor de crecimiento de fibroblastos básico (bFGF) y ácido ascórbico para obtener una población que comprende HPC CD34⁺ (masa de HPC).