Patent RU-202193-U1 (RU)
Title: Устройство для иммунохроматографической высокочувствительной и внелабораторной детекции фитопатогенной бактерии Clavibacter michiganensis, основанное на повышении интенсивности регистрируемого колориметрического сигнала за счет каталитических свойств наномаркера
IPC: B82B3/00
Filed: 2020-06-09
Granted: 2021-02-05
Abstract: Заявленное устройство предназначено для иммунохроматографической высокочувствительной, внелабораторной и экспрессной детекции фитопатогенной бактерии Clavibacter michiganensis в экстрактах листьев и клубней картофеля. Устройство представляет собой мультимембранный композит с предварительно нанесенными и высушенными иммунореагентами (тест-полоску). В состав мультимембранного композита входят рабочая нитроцеллюлозная мембрана с предварительно нанесенными иммунореагентами, закрепленная на твердой полистироловой основе, стекловолоконная мембрана с нанесенными конъюгатом пористых наночастиц типа ядро-оболочка - Au-Pt, стабилизированных поливинилпирролидоном с кроличьими поликлональными антителами, специфичными к бактериальным клеткам С.michiganensis, мембрана для впитывания и сепарации компонентов исследуемой пробы и конечной адсорбирующей мембраны для впитывания компонентов пробы после прохождения реакции и поддержания миграции жидкости по тест-полоске за счет капиллярных сил. Отличительной особенностью заявленного устройства является то, что в качестве метки использован конъюгат пористых наночастиц ядро-оболочка - Au-Pt, стабилизированных поливинилпирролидоном с поликлональными антителами против С.michiganensis. Частицы Au-Pt обладают как оптическими, так и каталитическими (пероксидаза-подобными свойствами), что позволяет использовать их в иммунохроматографическом анализе (ИХА) как наноразмерную метку с собственным оптическими сигналом, так и для снижения предела обнаружения ИХА, основанного на повышении интенсивности окрашивания при низких концентрациях антигена в пробе за счет пероксидаза-подобных свойств наночастиц, приводящих к накоплению окрашенных продуктов окисления субстрата. Высокая устойчивость частиц к химическим ингибиторам пероксидаз (азид натрия) и температуре (до 100°С) позволяет использовать наночастицы Au-Pt для амплификации сигнала даже в пробах с высокой эндогенной пероксидазной активностью после ее нивелирования. В контрольную зону (К.З.) нанесен иммуноглобулин-связывающий белок А. В тестовую зону (Т.З.) нанесены кроличьи поликлональные антитела, специфичные к бактериальным клеткам С.michiganensis. На стекловолоконную мембрану нанесен конъюгат поликлональных кроличьих антител, специфичных к детектируемым бактериальным клеткам, с пористыми наночастицами типа ядро-оболочка Au-Pt, стабилизированных поливинилпирролидоном. Для проведения анализа не требуется никаких дополнительных стационарных устройств. Продолжительность анализа составляет 15 мин, включает в себя стадии подготовки анализируемой пробы, проведение иммунохроматографического анализа с использованием тест-полоски, добавления субстратного раствора для повышения интенсивности регистрируемого колориметрического сигнала. Технической задачей заявленной полезной модели является повышение интенсивности регистрируемого окрашивания Т.З. за счет реакции, катализируемой пористыми наночастицами типа ядро-оболочка Au-Pt непосредственно на тест-полоске. Технический результат заявленной полезной модели заключается в снижении предела обнаружения фитопатогенной бактерии С.michiganensis за счет использования простой одностадийной процедуры, обеспечиваемой за счет добавления на тест-полоску субстратного раствора, содержащего смесь 3,3'-диаминобензидина, пероксида водорода и ионов Ni2+. 4 табл., 3 пр., 2 ил.