Patent ES-2606688-T3 (ES)
Title: Ácidos nucleicos de control para parámetros múltiples
Inventor: EICKHOFF MEIKE
IPC: C12Q1/70
Filed: 2011-07-27
Granted: 2017-03-27
Abstract: Un proceso para aislar y amplificar simultáneamente al menos un primer y un segundo ácido nucleico diana que pueden estar presentes en una o más muestras líquidas, comprendiendo dicho proceso las etapas automatizadas de: a. añadir un ácido nucleico de control interno mezclado, seleccionado del grupo de SEQ ID NO: 45 a 49, a cada una de dichas muestras líquidas, en el que la secuencia de dicho ácido nucleico de control interno es idéntica para dicho al menos primer y segundo ácido nucleico diana b. combinar a la vez un material de soporte sólido y dicha una o más muestras líquidas en uno o más recipientes durante un período de tiempo y en condiciones suficientes para permitir a los ácidos nucleicos que comprenden los ácidos nucleicos diana y el ácido nucleico de control interno, inmovilizarse en el material de soporte sólido c. aislar el material de soporte sólido del otro material presente en las muestras líquidas en una estación de separación d. purificar los ácidos nucleicos en dicha estación de separación y lavar el material de soporte sólido una o más veces con un tampón de lavado e. poner en contacto los ácidos nucleicos diana purificados y el ácido nucleico de control interno purificado con reactivos de amplificación que comprenden una polimerasa con actividad transcriptasa inversa y al menos un conjunto de cebadores distinto para cada uno de dichos ácidos nucleico diana y para dicho ácido nucleico de control interno en al menos dos recipientes de reacción, en el que al menos un primer recipiente de reacción comprende cebadores para al menos dicho primer ácido nucleico diana y al menos un segundo recipiente de reacción comprende cebadores para al menos dicho segundo ácido nucleico diana y en el que los cebadores para el segundo ácido nucleico diana no están en el primer recipiente de reacción e2. incubar en dichos recipientes de reacción dichos ácidos nucleicos purificados con dichos reactivos de amplificación durante un periodo de tiempo y en condiciones adecuadas para que se produzca la transcripción del ARN por dicha polimerasa con actividad transcriptasa inversa, en el que el periodo de tiempo es de hasta 10 minutos f. incubar en dichos recipientes de reacción dichos ácidos nucleicos diana purificados y dicho ácido nucleico de control interno purificado con dichos reactivos de amplificación durante un período de tiempo y en condiciones suficientes para que se produzca una reacción de amplificación indicadora de la presencia o de la ausencia de dichos ácidos nucleicos diana g. detectar y medir las señales generadas por los productos de amplificación de dichos ácidos nucleico diana y que son proporcionales a la concentración de dichos ácidos nucleico diana, y detectar y medir una señal generada por dicho ácido nucleico de control interno, en el que las condiciones para la amplificación y la detección en las etapas e. a g. son idénticas para dichos al menos primer y segundo ácidos nucleicos diana purificados y dicho ácido nucleico de control interno, y en el que el primer y/o el segundo ácido nucleico diana es un ácido nucleico bacteriano, y en el que los al menos dos ácidos nucleicos diana comprenden ARN y ADN.