Patent ES-2531664-T3 (ES)
Title: Detección de eventos de plantas transgénicas
Inventor: VAN DEN BULCKE MARC HENRI GERMAIN
IPC: C12Q1/68
Filed: 2008-01-29
Granted: 2015-03-18
Abstract: Un método para examinar en una muestra la presencia o ausencia de material derivado de uno o más eventos de una planta transgénica que comprende las etapas de: (1) detectar la presencia o ausencia en la muestra de ácidos nucleicos que comprende: - uno, más de uno o todos los ácidos nucleicos elegidos entre: a) "Zm": un ácido nucleico derivado de y específico para el taxón Zea mays, preferentemente Zea mays ssp. mays, b) "Bn": un ácido nucleico derivado de y específico para el taxón Brassica napus, c) "Gm": un ácido nucleico derivado de y específico para el taxón Glycine max, o) "Or": un ácido nucleico derivado de y específico para el taxón Oryza sativa, p) "Bv": un ácido nucleico derivado de y específico para el taxón Beta vulgaris, q) "Gs": un ácido nucleico derivado de y específico para el taxón Gossypium, y t) "St": un ácido nucleico derivado de y específico para el taxón Solanum tuberosum; y - todos los ácidos nucleicos d) - i): d) "p35S": un ácido nucleico derivado del promotor 35S del Virus del mosaico de la coliflor, e) "tNOS": un ácido nucleico derivado del terminator 3' del gen de la nopalina sintetasa de Agrobacterium tumefaciens, f) "Cry1Ab": un ácido nucleico derivado del gen de la proteína cristal Cry1Ab de Bacillus thuringiensis, g) "PAT/bar": un ácido nucleico derivado del gen de la fosfinotricina acetiltransferasa (PAT) bar de Streptomyces hygroscopicus, h) "PAT/pat": un ácido nucleico derivado del gen de la fosfinotricina acetiltransferasa (PAT) pat de Streptomyces viridochromogenes, y i) "CP4-EPSPS": un ácido nucleico derivado del gen de la 5-enol-piruvilshikimato-3-fosfato sintasa EPSPS de Agrobacterium sp. CP4; y (2) concluir la presencia o ausencia en la muestra de material derivado de uno o más eventos de plantas transgénicas elegidos entre el grupo que comprende: eventos Bt176, Bt11, Bt10, MON810, MON863, TC1507, NK603, T25, GA21, DAS-59122, MIR604, LY038, MON88017, cruces de los mismos, y eventos relacionados de los mismos; eventos Topas 19/2, MS1, RF1, RF2, RF3, MS8, GT73, T45, Liberator pHoe6/Ac, GS40/90pHoe6/Ac, OXY235, cruces de los mismos incluyendo MS1/RF1, MS1/RF2, MS8/RF3, y eventos relacionados de los mismos; eventos MON 40-3-2, MON89788, A2704-12, A5547-127, cruces de los mismos, y eventos relacionados de los mismos, eventos LL62, LL06 y LL601, cruces de los mismos, y eventos relacionados de los mismos; eventos T120- 7, H7-1 y A5-15, cruces de los mismos, y eventos relacionados de los mismos; eventos LL cotton 25, MON 1445, MON 531, MON 15985, cruces de los mismos, y eventos relacionados de los mismos; y evento EH92-527-1 y eventos relacionados del mismo, en el cual dichos eventos relacionados se han generado introduciendo en el mismo taxón que el del evento con el cual están relacionados la misma construcción transformante que la del evento con el cual están relacionados, en el cual en la etapa (1) la presencia o ausencia de ácidos nucleicos en una muestra se detecta usando amplificación por PCR, preferentemente amplificación por PCR a tiempo real, en el cual la amplificación por PCR de los ácidos nucleicos se realiza simultáneamente a las mismas condiciones de temperatura de ciclación, usando los respectivos pares de cebadores de la siguiente tabla, o variantes que muestran al menos un 85% de identidad de secuencia con dichos pares de cebadores:**Tabla** "Zm" Dir: 5' TCTCTTCCTCCTTTAGAGCTACCACTA 3' (SEC ID Nº 56) Inv: 5' AATCGATCCAAAGCGAGATGA 3' (SEC ID Nº 57) "Bn" Dir: 5' CAGCTCAACAGTTTCCAAACGA 3' (SEC ID Nº 24) Inv: 5' CGACCAGCCTCAGCCTTAAG 3' (SEC ID Nº 25) "Gm" Dir: 5' AACCGGTAGCGTTGCCAG 3' (SEC ID Nº 58) Inv': 5' AGCCCATCTGCAAGCCTTT 3' (SEC ID Nº 59) "p35S" Dir: 5' AAAGCAAGTGGATTGATGTGATA 3' (SEC ID Nº 60) Inv: 5' GGGTCTTGCGAAGGATAGTG 3' (SEC ID Nº 61) "tNOS" Dir: 5'-GATTAGAGTCCCGCAATTATACATTTAA-3' (SEC ID Nº 9) Inv: 5'-TTATCCTAGKTTGCGCGCTATATTT-3' (SEC ID Nº 10) "Cry1Ab" Dir: 5'-ACCGGTTACACTCCCATCGA-3' (SEC ID Nº 11) Inv: 5'-CAGCACCTGGCACGAACTC-3' (SEC ID Nº 12) "PAT/bar" Dir: 5'-CGTCAACCACTACATCGAGACAA-3' (SEC ID Nº 13) Inv: 5'-GTCCACTCCTGCGGTTCCT-3' (SEC ID Nº 14) "PAT/pat" Dir: 5'-CCGCGGTTTGTGATATCGTT-3' (SEC ID Nº 15) Inv: 5'-TCTTGCAACCTCTCTAGATCATCAA-3' (SEC ID Nº 16) "CP4-EPSPS" Dir: 5' GCATGCTTCACGGTGCAA 3' (SEC ID Nº 22) Inv: 5' GGACCTGTGGGAGATAGACTTGTC 3' (SEC ID Nº 23) Inv 1: 5' TGAAGGACCGGTGGGAGAT 3' (SEC ID Nº 62) Inv 2: 5' TGAAGGACCTGTGGGAGAT 3' (SEC ID Nº 63) "Or" Dir': 5' GCTTAGGGAACAGGGAAGTAAAGT 3' (SEC ID Nº 51) Inv: 5' CTTAGCATAGTCTGTGCCATCCA 3' (SEC ID Nº 21) "Bv" Dir: 5' GACCTCCATATTACTGAAAGGAAG 3' (SEC ID Nº 64) Inv: 5' GAGTAATTGCTCCATCCTGTTCA 3' (SEC ID Nº 65) "Gs" Dir: 5' AGTTTGTAGGTTTTGATGTTACATTGAG 3' (SEC ID Nº 66) Inv: 5' GCATCTTTGAACCGCCTACTG 3' (SEC ID Nº 67) "St" Dir: 5' GGACATGTGAAGAGACGGAGC 3' (SEC ID Nº 68) Inv: 5' CCTACCTCTACCCCTCCGC 3' (SEC ID Nº 69)