Patent ES-2695999-T3 (ES)
Title: Expresión de proteínas a partir de múltiples ácidos nucleicos
Inventor: GOEPFERT ULRICH
IPC: C12N15/85
Filed: 2008-10-09
Granted: 2019-01-11
Abstract: Procedimiento para la producción recombinante de una inmunoglobulina heteróloga en una célula CHO que se secreta al medio de cultivo que comprende: a) proporcionar una célula CHO, que está - adaptada al crecimiento en cultivo en suspensión. - adaptada al crecimiento en medio sin suero, - sin micoplasmas, b) proporcionar un ácido nucleico que comprende - un origen de replicación procariótico, - una primera secuencia de ácido nucleico que confiere resistencia a un agente de selección procariótico, - una segunda secuencia de ácido nucleico que codifica la cadena pesada de dicha inmunoglobulina heteróloga, y/o - una tercera secuencia de ácido nucleico que codifica la cadena ligera de dicha inmunoglobulina heteróloga, de manera que se proporciona un primer vector de transfección que comprende dicho ácido nucleico proporcionado y una cuarta secuencia de ácido nucleico adicional que confiere resistencia a un primer agente de selección eucariótico, de manera que se proporciona un segundo vector de transfección que comprende dicho ácido nucleico proporcionado y una cuarta secuencia de ácido nucleico adicional que confiere resistencia a un segundo agente de selección eucariótico, de manera que dicho segundo agente de selección eucariótico sea diferente de dicho primer agente de selección eucariótico, b1) proporcionar un ácido nucleico que comprende - un origen de replicación procariótico, - una primera secuencia de ácido nucleico que confiere resistencia a un agente de selección 40 procariótico, - una segunda secuencia de ácido nucleico que codifica la cadena pesada de dicha inmunoglobulina heteróloga, y/o una tercera secuencia de ácido nucleico que codifica la cadena ligera de dicha inmunoglobulina heteróloga, de manera que se proporciona un tercer vector de transfección que comprende dicho ácido nucleico proporcionado y una secuencia adicional de un cuarto ácido nucleico que confiere resistencia a un tercer agente de selección eucariótico, de manera que dicho tercer agente de selección eucariótico es diferente de dicho primer agente de selección eucariótico y también es diferente de dicho segundo agente de selección eucariótico, c) transfectar dicha célula CHO, en la que dicha transfección comprende las siguientes etapas en el siguiente orden: (i) transfectar dicha célula CHO con dicho primer vector de transfección, (ii) seleccionar una célula CHO transfectada en (i) mediante crecimiento seleccionado en un medio de cultivo que contiene un primer agente de selección eucariótico al que el primer vector de transfección confiere resistencia, (iii) transfectar dicha célula CHO seleccionada en (ii) con dicho segundo vector de transfección, (iv) seleccionar una célula CHO transfectada en (iii) mediante crecimiento seleccionado en medio de cultivo que contiene dicho primer agente de selección eucariótico al que el primer vector de transfección confiere resistencia y dicho segundo agente de selección eucariótico al que el segundo vector de transfección confiere resistencia, (v) transfectar dicha célula CHO seleccionada en (iv) con dicho tercer vector de transfección, (vi) seleccionar una célula CHO transfectada en (v) mediante crecimiento seleccionado en medio de cultivo que contiene dicho primer agente de selección eucariótico al que el primer vector de transfección confiere resistencia y dicho segundo agente de selección eucariótico al que el segundo vector de transfección confiere resistencia y dicho tercer agente de selección eucariótico al que el tercer vector de transfección confiere resistencia, d) cultivar dicha célula CHO transfectada en un medio en presencia de dicho primer y dicho segundo y dicho tercer agente de selección eucariótico, en condiciones adecuadas para la expresión de dicho primer, segundo y/o tercer ácido nucleico, e) recuperar dicha inmunoglobulina heteróloga secretada del medio de cultivo y producir así una inmunoglobulina heteróloga en una célula CHO que se secreta al medio de cultivo, en el que el primer, segundo y tercer vector de transfección difieren cada uno solo en el ácido nucleico que confiere resistencia a dicho primero, segundo y tercer agente de selección eucariótico.