Patent CA-2476854-A1 (CA)
Inventor: FRIEDMAN STEPHEN B
IPC: C07K19/00
Filed: 2003-02-19
Abstract: L'invention porte sur un procédé de production de molécules d'anticorps de susbtitution qui imitent la structure, la stabilité et les caractéristiques de liaison d'un anticorps naturel. L'invention porte également sur la structure des anticorps de substitution, la composition des bibliothèques des anticorps de susbtitution, et sur des procédés de préparation des anticorps de substitution ainsi que sur leurs applications. L'invention porte, de plus, sur des procédés visant à stabiliser la structure des anticorps de substitution et leur résistance aux nucléases. Les anticorps de substitution comprennent un brin relatif à une spécificité et un brin relatif à la stabilisation. Le brin relatif à la spécificité comprend une séquence d'acides nucléiques dont la région de spécificité est flanquée d'une première région constante et d'une seconde région constante. Le brin relatif à la stabilisation comprend une première région de stabilisation qui a une interaction avec la première région constante et une seconde région de stabilisation qui a une interaction avec la seconde région constante. Selon d'autres formes d'exécution, le brin relatif à la stabilisation et le brin relatif à la spécificité comprennent des molécules distinctes. Selon encore d'autres formes d'exécution, les molécules des anticorps de substitution comprennent des polyoligonucléotides qui possèdent au moins une séquence de nucléotides qui forme une boucle avec des propriétés spécifiques de liaison aux ligands. Les bibliothèques des anticorps de substitution contenant une grande population de molécules de liaison aléatoires sont pré-assemblées et utilisées dans un processus qui capture et amplifie ces molécules ayant des caractéristiques de liaison prérequises. La molécule amplifiée de l'anticorps de substitution obtenue dans ce processus a une structure et des caractéristiques de liaison identiques à celles de la molécule parent capturée dans la bibliothèque initialement assemblée. Les molécules des anticorps de substitution contiennent une ou des boucles de liaison qui sont formées et stabilisées par l'hybridation d'au moins deux brins adjacents et juxtaposés, un brin ayant un nombre supérieur de nucléotides à celui de l'autre brin. La préparation d'un réactif polyclonal d'un anticorps de substitution passe par des phases de capture/enrichissement et d'amplification, de renforcement de la spécificité et de renforcement de l'affinité. Selon l'application prévue, les réactifs polyclonaux des anticorps de substitution peuvent être traités par rapport à leur monoclonalité. Ces molécules se dilatent selon les caractéristiques de liaison des immunoglobulines naturelles et ne nécessitent pas l'emploi d'animaux, d'installations pour animaux, de culture de cellules ou la stimulation d'une réponse immune, dans leur développement. Elles peuvent être utilisées comme molécules de remplacement des molécules d'anticorps naturels et, par conséquent, dans les méthodes de test telles que l'analyse immunologique, comme agents thérapeutiques pour l'étiquetage spécifique et à des fins de recherche. Des ligands cibles compatibles avec le développement des anticorps de susbtitution comprenant des composés, des organismes et des cellules qui, lorsqu'ils sont complexés à un anticorps de substitution en solution, acquièrent des caractéristiques qui peuvent être physiquement ou chimiquement différenciées de celles d'un anticorps de susbtitution non complexé.