Patent ES-2857553-T3 (ES)
Title: Humanización de anticuerpos basada en ángulo interdominio VH-VL
Inventor: BUJOTZEK ALEXANDER
IPC: C07K16/00
Filed: 2015-10-21
Granted: 2021-09-29
Abstract: Un procedimiento para seleccionar uno o más fragmentos Fv de anticuerpo variante derivados de un fragmento Fv de anticuerpo no humano que comprende las siguientes etapas: - generar una multitud de fragmentos Fv de anticuerpo variante mediante injerto/transferencia de los residuos determinantes de la especificidad de unión a antígeno del fragmento Fv del anticuerpo no humano en/a una secuencia de aminoácidos de línea germinal de fragmento Fv de anticuerpo humano, con lo que cada fragmento Fv de anticuerpo variante de la multitud de fragmentos Fv de anticuerpo variante difiere de los otros fragmentos Fv de anticuerpo variante en al menos un residuo de aminoácido, - determinar el ángulo VH-VL para el fragmento Fv no humano y para cada uno de los fragmentos Fv de anticuerpo variante de la multitud de fragmentos Fv de anticuerpo variante en base a un conjunto de residuos de interfase VH-VL que comprenden los residuos L44, L46, L87, H45, H62 (numeración de acuerdo con el índice de Chothia) del fragmento Fv de anticuerpo, - seleccionar aquellos fragmentos Fv de anticuerpo variante que tienen la diferencia más pequeña en el ángulo VH- VL en comparación con el ángulo VH-VL del anticuerpo no humano y, de este modo, seleccionar uno o más fragmentos Fv de anticuerpo variante derivados de un fragmento Fv de anticuerpo no humano, con lo que el uno o más fragmentos Fv de anticuerpo variante se unen al mismo antígeno que el fragmento Fv de anticuerpo no humano, en el que el ángulo VH-VL se determina calculando los seis parámetros - la longitud de C, dc, - el ángulo de torsión, HL, de H1 a L1 medido alrededor de C, - el ángulo de curvatura, HC1, entre H1 y C, - el ángulo de curvatura, HC2, entre H2 y C, - el ángulo de curvatura, LC1, entre L1 y C, y - el ángulo de curvatura, LC2, entre L2 y C, en el que los planos de la región estructural de referencia se registran i) alineando las coordenadas Cα correspondientes a las ocho posiciones H36, H37, H38, H39, H89, H90, H91 y H92 de VH y ajustando un plano a través de ellas y ii) alineando las coordenadas Cα correspondientes a las ocho posiciones L35, L36, L37, L38, L85, L86, L87 y L88 de VL y ajustando un plano a través de ellas, iii) colocando un colocado en cada plano, con lo que cada estructura tiene puntos de malla equivalentes y pares de punto de malla VH-VL equivalentes, y iv) midiendo la distancia euclidiana para cada par de puntos de malla en cada estructura, con lo que el vector C une el par de puntos con la varianza mínima en su distancia de separación, en el que H1 es el vector que discurre paralelo al primer componente principal del plano de VH, H2 es el vector que discurre paralelo al segundo componente principal del plano de VH, L1 es el vector que discurre paralelo al primer componente principal del plano de VL, L2 es el vector que discurre paralelo al segundo componente principal del plano 0 de VL, el ángulo HL es el ángulo de torsión entre los dos dominios, HC1 y LC1 son los ángulos de curvatura equivalentes a variaciones de tipo inclinación de un dominio con respecto al otro, y los ángulos de curvatura HC2 y LC2 son equivalentes a las variaciones de tipo torsión de un dominio con respecto al otro.