Patent AR-044858-A1 (AR)
Title: Conjugados polimericos de interferon- beta con potencia biologica aumentada
Filed: 2004-06-22
Abstract: Se suministran métodos para la síntesis de conjugados poliméricos de citoquinas y sus antagonistas de unión al receptor, especialmente un interferón-beta no glicosilado, conjugados que retienen una potencia biológica elevada. La preparación de conjugados poliméricos de acuerdo con los métodos reduce o evita la inhibición estérica de interacciones receptor-ligando que comúnmente se producen a partir de la unión de polímeros a las regiones de unión al receptor de las citoquinas, como así también a sus análogos agonistas y antagonistas. Se suministra, además, conjugados y composiciones producidos por tales métodos. Los conjugados retienen un elevado nivel de potencia biológica comparados con los producidos por los métodos tradicionales de acoplamiento de polímeros que no se han orientado para evitar los dominios de unión al receptor de citoquinas. En ensayos in vitro, la potencia biológica de estos conjugados de interferón-beta no glicosilado es sustancialmente mayor que la del interferón-beta no conjugado y es similar a la del interferón-beta-1ª glicosilado. Los conjugados muestran además mayor vida in vitro comparados con la correspondiente citoquina no conjugada. Se suministra, además, kits que comprenden tales conjugados y composiciones, y métodos de uso de tales conjugados y composiciones en una variedad de aplicaciones diagnósticas, profilácticas y terapéuticas, incluyendo el tratamiento de la esclerosis múltiple. Reivindicación 1: Un método para aumentar la potencia biológica de un interferón-beta no glicosilado, que comprende el acoplamiento selectivo de uno o más polímeros sintéticos solubles en agua al aminoácido amino terminal de dicho interferón-beta, en el cual el aminoácido amino terminal se localiza en forma remota con respecto al dominio (a los dominios) de unión al receptor de dicho interferón-beta. Reivindicación 10: El método de la reivindicación 3, en el cual dicho polímero es un polialquilenglicol. Reivindicación 24: Un conjugado que comprende un interferón-beta acoplado covalentemente en su aminoácido amino terminal a uno o más polímeros sintéticos solubles en agua, en el cual la potencia biológica de dicho conjugado de interferón-beta aumenta en comparación con el mismo interferón-beta en el cual uno o más de los mismos polímeros sintéticos solubles en agua se ha acoplado al azar a residuos de lisina accesibles a solventes. Reivindicación 55: El método de la reivindicación 50, en el cual dicho trastorno físico que responde al interferón-beta se selecciona del grupo que consiste en cáncer, una enfermedad infecciosa, un trastorno neurodegenerativo, un trastorno autoinmune y un trastorno genético. Reivindicación 65: Un método para determinar la cantidad de un polímero que se une al amino terminal de una proteína que presenta un residuo de serina o de treonina N-terminal, en un conjugado polímero-proteína sintetizado por alquilación reductiva, que comprende: a) hacer reaccionar el conjugado con una cantidad suficiente de un agente oxidante durante un tiempo suficiente para escindir el polímero del residuo de serina o de treonina; y b) determinar el aumento en la preparación de la porción de proteína no conjugada. Reivindicación 71: Un método para la ruptura oxidativa selectiva de un residuo de serina o treonina N-terminal de una proteína bioactiva sin oxidar residuos de aminoácidos esenciales para la función de dicha proteína bioactiva, que comprende: a) ajustar la concentración de iones H de una solución de dicha proteína bioactiva a un pH de entre alrededor de 7 y alrededor de 8; b) mezclar dicha solución de proteína bioactiva con alrededor de 0,5 a alrededor de 5 moles de un peryodato por mol de proteína bioactiva; y c) incubar la mezcla durante por lo menos una hora a una temperatura de entre alrededor de 2ºC y alrededor de 40ºC.