Patent BR-9800133-A (BR)
Title: Método e kit para detecção de anticorpos em lìquidos biológicos, dirigidos contra antìgenos presente no esquistossoma ou em representantes do seu ciclo evolutivo
Inventor: MACHADO JOSE AUGUSTO NOGUEIRA
IPC: G01N33/569
Filed: 1998-02-12
Abstract: A presente invenção refere-se ao campo geral do imunodiagnóstico das doenças infecciosas e parasitárias. Usualmente a presença do antígeno em líquidos biológicos constitui uma prova direta da presença do parasita, ao passo que, a detecção de anticorpos significa uma demonstração indireta. O diagnóstico da esquistossomose envolve técnicas e métodos cujos resultados podem originar respostas falso negativas (exame de fezes), alguns são invasivos (biópsias), outros são sensibilizantes e podem originar resultados falsos positivos (intradermorreação) e outros, ainda, demandam pessoal treinado e equipamento caros (ELISA). Considerando a importância económica e social da esquistossómulos, o seu atual estado de expansão e aparecimento de cepas resistentes, obriga-nos a pensar em solução rápida, de baixo custo, não sensibilizante e que não requeira pessoal treinado que possa ser utilizada em inquéritos epidemiológicos. O método que origina o Kit atende a tais requisitos. No método que origina o Kit, antígenos extraídos do verme adulto (esquistossoma), esquistossómulos, ovo ou cercárias são usados para sensibilizar um suporte físico, como por exemplo o látex. Em um a primeira metodologia, as partículas de látex de diâmetro variável são incubadas em presença de antígeno (0,01 a 15,0mg/ml) durante 30 a 600 minutos em temperatura que varia de 15 a 60°C. Os reagentes ( látex e antígenos) são diluídos em tampão do tipo borato ou glicina com o pH variando entre 4 a 9,5. Ao final, uma outra incubação é realizada na faixa de temperatura de 4 a 19°C durante 6 a 32 horas. Após centrifugação ( 100 a 4500Xg) por 5 a 120 minutos, o depósito originado é ressuspenso em tampão do tipo borato ou glicina ( pH de 4 a 9,0) contendo ou não 0,001 a 12% de proteína não relacionada ao <B>S.mansoni<D> ou representantes de seu ciclo evolutivo. Desta forma,obtemos partículas sensibilizadas com o antígeno do <B>S.mansoni<D> ou de representante de seu ciclo evolutivo.Em uma segunda metodologia, usada também na elaboração do Kit, quantidades variáveis de látex (0,01 a 10ml) são incubadas com 3,0 a 104 ml de 0,01 a 5% de proteína do verme ou de representantes de seu ciclo em tampão do tipo borato ou glicina durante 10 a 600 minutos em temperatura que varia de 2 a 47°C. Ao final, o material é centrifugado a 100-4500Xg durante 15 a 120 minutos e o depósito ressusepenso em tampão do tipo borato ou glicina contendo ou não de 0,01 a 12% de proteína não relacionada. Esta metodologia pode ser aplicada em sistemas imunológicos de detecção de reação Ag.Ac, tais como, ELISA, imunodifusão, aglutinação, hemaglutinação,imunocromatografia, quimioluminescência, imunoblot, radioimunoensaio, calorimetria e imunoprecipitação. O kit originado pelo método contém partículas sensibilizadas com o antígeno (látex como exemplo), acompanhado de controles positivos e negativos. O Kit originado pelo método caracteriza um aperfeiçoamento em relação aos demais métodos diagnósticos por não ser sensibilizante, ser realizado "in vitro", ser de baixo custo e ser o mais adequado para ser usado em inquéritos epidemiológicos sobre esquistossomose.