Patent ES-2609439-T3 (ES)
Title: Humanización rápida de anticuerpos
Inventor: SHORT JAY
IPC: C12N15/12
Filed: 2011-12-28
Granted: 2017-04-20
Abstract: Un método para producir un anticuerpo humanizado, comprendiendo el método: (a) sintetizar bibliotecas de fragmentos de ADN de doble hebra de cadena pesada de inmunoglobulina que comprenden bibliotecas que codifican fragmentos de regiones determinantes de complementariedad y bibliotecas de codificación de fragmentos de marcos, en las que cada biblioteca de fragmentos de regiones determinantes de complementariedad se deriva de un anticuerpo molde y cada biblioteca de fragmentos de marco se deriva de un conjunto de marco humano obtenido a partir de anticuerpos humanos expresados funcionalmente; (b) sintetizar bibliotecas de fragmentos de ADN de doble hebra de cadena ligera de inmunoglobulina que comprenden bibliotecas de codificación de fragmentos de regiones determinantes de complementariedad y bibliotecas de codificación de fragmentos de marcos, en las que cada biblioteca de fragmentos de regiones determinantes de complementariedad se deriva del anticuerpo molde y cada biblioteca de fragmentos de marco se deriva de un conjunto de marcos obtenido a partir de anticuerpos humanos expresados funcionalmente; (c) ensamblar las bibliotecas de fragmentos de cadena pesada mediante ligación en fase líquida por etapas de fragmentos codificantes de la estructura de cadena pesada y fragmentos codificantes de la región determinante de la complementariedad que codifican fragmentos en el orden de: marco1 - región determinante de complementariedad1 - marco2 - región determinante2 de complementariedad - marco3 - región determinante de complementariedad3 para producir una biblioteca de codificación de dominio variable de cadena pesada humanizada; (d) ensamblar a partir de las bibliotecas de fragmentos de la cadena ligera por ligación en fase líquida escalonada de fragmentos codificantes de la estructura de cadena ligera y fragmentos codificantes de la región determinante de complementariedad que codifican fragmentos en el orden de: marco1 - región determinante de complementariedad1 - marco2 - región determinante2 de complementariedad - marco3 - región determinante de complementariedad3 para producir una biblioteca de codificación de dominio variable de cadena ligera humanizada; (e) clonar la biblioteca de dominio variable de cadena pesada humanizada ensamblada y la biblioteca de dominio variable de cadena ligera ensamblada en un vector de expresión para crear una biblioteca de humanización y cuando dicho anticuerpo es un anticuerpo de longitud completa, el vector de expresión comprende una secuencia de nucleótidos que codifica el marco 4 de cadena pesada derivado de un dominio variable de cadena pesada humana de un anticuerpo humano expresado funcionalmente y una secuencia de nucleótidos que codifica el marco 4 derivado de un dominio variable de cadena ligera humana de un anticuerpo humano expresado funcionalmente; (f) transfectar la biblioteca de humanización en células; (g) expresar anticuerpos humanizados en las células para crear una biblioteca de anticuerpos humanizada; (h) seleccionar la biblioteca de anticuerpos humanizada para determinar el nivel de expresión de los anticuerpos humanizados; y i) cribar la biblioteca de anticuerpos humanizada para determinar la afinidad de los anticuerpos humanizados para un antígeno en comparación con la afinidad del anticuerpo molde para el antígeno.