Patent ES-2907786-T3 (ES)
Title: Aparato y procedimiento para detectar automáticamente sustancias odorantes en solución utilizando nematodos caenorhabditis elegans
Inventor: FOLLI VIOLA
IPC: G01N33/50
Filed: 2018-10-19
Granted: 2022-04-26
Abstract: Aparato automatizado (1000) para la detección de sustancias odorantes en base a la utilización de nematodos, que incluye una unidad de selección mecánica (100) configurada para seleccionar nematodos en fase adulta a partir de una población inicial de nematodos obteniendo una población intermedia de nematodos, una unidad de selección óptica de nematodos (200) configurada para seleccionar de la población intermedia una población final de nematodos en fase adulta y para seleccionar nematodos en fase adulta joven respecto de nematodos en fase adulta de producción de huevos, para enviar a una unidad de medición (300) configurada para detectar la respuesta de los nematodos de la población final a un estímulo de una sustancia odorante, estando conectada la unidad de selección mecánica (100) a la unidad de selección óptica (200) mediante un canal de conexión con una ramificación de, por lo menos, tres vías, y estando conectada la unidad de selección óptica (200) a la unidad de medición (300) mediante un microcanal de carga, en el que: - la unidad de selección mecánica (100) comprende un recipiente de recogida (12) dotado de, por lo menos, una primera boquilla de entrada que se puede cerrar configurada para introducir líquido tampón de mantenimiento que contiene nematodos en el recipiente (12) y, por lo menos, una segunda boquilla de entrada que se puede cerrar configurada para introducir líquido tampón adicional en el recipiente (12), donde el recipiente (12) está dotado de un orificio de salida que se puede cerrar (15) y de una doble rejilla motorizada (14), configurada para adoptar una primera configuración abierta y una segunda configuración cerrada, donde dicha, por lo menos, una primera boquilla y dicha, por lo menos, una segunda boquilla están situadas cerca de una base del recipiente (12) y están configuradas para llenar el recipiente (12) comenzando por la base, estando colocada la doble rejilla motorizada (14) en paralelo a la base del recipiente a una distancia de esta mayor que dicha, por lo menos, una primera boquilla y dicha, por lo menos, una segunda boquilla, y configurada para hacer que solo los huevos o larvas de nematodos pasen a través de sus propios orificios; - la unidad de selección óptica (200) comprende, por lo menos, tres canales microfluídicos de medición configurados para canalizar, uno por uno, los nematodos de la población intermedia, tres sensores ópticos (22, 23, 24) configurados para realizar una medición de longitud de los nematodos canalizados, un iluminador (25) configurado para iluminar los, por lo menos, tres canales microfluídicos de medición y que está asociado con dobles fotodiodos (26) configurados para realizar una medición de autofluorescencia de los nematodos canalizados individuales, estando configurada la unidad de selección óptica (200) para dirigir un nematodo hacia la unidad de medición (300) o hacia un depósito de residuos (16), y una válvula de bloqueo configurada para bloquear el paso de nematodos en la unidad de medición (300); - la unidad de medición (300) comprende una capa central que incluye un chip microfluídico (50) con un circuito microfluídico de columnas (51) dotado de un orificio de carga conectado al microcanal de carga, configurado para introducir nematodos en el circuito microfluídico (51), y de un orificio de drenaje configurado para retirar nematodos del circuito microfluídico (51), estando configurado el chip (50) para recibir un líquido de ensayo a través de un primer canal de entrada y para recibir un líquido tampón neutro a través de un segundo canal de entrada, incluyendo una primera capa extrema fuentes configuradas para emitir luz continua y luz modulada que ilumina el circuito microfluídico (51), estando configurada la luz modulada emitida para estimular una fluorescencia de los nematodos, y estando asociadas las fuentes con fotodiodos configurados para recibir fluorescencia de nematodos, incluyendo una segunda capa extrema un sensor óptico opuesto a la primera capa extrema con respecto a la capa central, configurado para adquirir imágenes de luz transmitida del circuito microfluídico (51) cuando este es iluminado por la luz continua emitida y para analizar la motilidad de los nematodos en presencia y en ausencia de una sustancia odorante; comprendiendo, además, el aparato (1000) una unidad de control para controlar la unidad de selección mecánica (100), la unidad de selección óptica (200) y la unidad de medición (300).