Patent WO-2018185301-A1 (WO)
Title: Système pour l'adaptation de dosages à base de cellules en vue d'une analyse sur des plateformes de dosage immunologique automatisées
Inventor: TOVEY MICHAEL
IPC: C07K16/24
Filed: 2018-04-06
Abstract: La présente invention concerne des dosages à base de cellules qui sont nécessaires pour la détection d'une activité biologique et, par conséquent, sont requis pour une utilisation en tant que tests d'activité biologique, la détection d'anticorps neutralisants et la détection et la quantification de la fonction de cellule effectrice d'anticorps thérapeutiques ou la quantification de la réponse d'anticorps de puissance ou de neutralisation à des vecteurs viraux tels que des vecteurs AAV utilisés en thérapie génique. Selon l'invention, le dosage à base de cellules est également nécessaire pour la quantification de fonctions effectrices induites par des anticorps, notamment la cytotoxicité dépendante du complément (CDC), la phagocytose cellulaire dépendante des anticorps (ADCP) et la cytotoxicité à médiation cellulaire dépendante des anticorps (ADCC). Les dosages à base de cellules sont difficiles à adapter pour une utilisation sur des plateformes de dosage immunologique automatisées. L'invention concerne également des gènes rapporteurs codant pour des protéines facilement visibles qui peuvent être quantifiées à l'aide de fluorescence ou de luminescence telles que des luciférases (luciole, Renilla, Gaussia, Nano-luciférase, etc.), des protéines fluorescentes telles que la protéine fluorescente verte (GFP) ou dsRED ou une enzyme telle que l'acétyltransférase de chloramphénicol (CAT) ou une protéase et répondent à la transduction de signal, qui est directement liée au mécanisme d'action d'un médicament, peuvent être utilisés pour quantifier la puissance d'un médicament suite à la liaison d'un médicament à une cible soluble ou à une surface cellulaire cible (réceptrice ou autre molécule de surface cellulaire). L'invention concerne en outre, des anticorps anti-médicament neutralisant et une fonction de cellule effectrice induite par un anticorps thérapeutique. Le principal objet de l'invention est que le produit de gène rapporteur ou le sous-produit réalisé soit au cours du dosage à base de cellules soit à l'issue du dosage à base de cellules, est quantifié soit dans le milieu cellulaire, soit dans le surnageant cellulaire, pour une protéine sécrétée, ou suite à la lyse des cellules avec un tampon de lyse passif approprié. Le produit de gène rapporteur, tel que la luciférase de luciole, est ensuite détecté dans le milieu cellulaire ou le surnageant de cellule ou le lysat cellulaire à l'aide d'une paire d'anticorps spécifique (monoclonal ou polyclonal) pour le produit génique tel qu'une luciférase de luciole marquée avec le système de détection double spécifique d'un ELISA ou d'une plate-forme de dosage automatisée particulière telle que l'électro-chimioluminescence de découverte à méso-échelle (MSD-ECL), Luminex, SMC, Alpco, AlphaLISA, Gyros ou la détection sans marqueur à l'aide d'un SPR tel que la plate-forme Biacore. Selon l'invention, l'expression du produit de gène rapporteur, tel que la luciférase de luciole, peut être normalisée par rapport à l'expression d'un second produit de gène rapporteur tel que la luciférase de Renilla ou la Nano-luciférase sous la commande d'un promoteur constitutif.