Patent ES-2545792-T3 (ES)
Title: Bancos de polipéptidos sintéticos y métodos para generar variantes de polipéptidos diversificados de forma natural
Inventor: FISCHER NICOLAS
IPC: C12N15/10
Filed: 2010-05-20
Granted: 2015-09-15
Abstract: Un método para producir una colección de ácidos nucleicos, donde cada ácido nucleico codifica un dominio variable de la inmunoglobulina humana que comprende una pluralidad de secuencias de la región determinante de complementariedad 3 (CDR3) aisladas separadamente del repertorio del dominio variable de la inmunoglobulina de una especie de mamífero, aislado separadamente del repertorio del dominio variable de la inmunoglobulina de un ser humano, aislado separadamente del repertorio del dominio variable de la inmunoglobulina de una especie de mamífero no humano, o aislado separadamente de los dominios variables de la inmunoglobulina de un mamífero no humano humanizado, el método que comprende: (a) proporcionar una pluralidad de secuencias de ácidos nucleicos de la estructura aceptora que codifican dominios variables de inmunoglobulina humana distintos, cada secuencia de ácidos nucleicos de la estructura aceptora que comprende una primera región estructural (FR1), una segunda región estructural (FR2), una tercera región estructural (FR3), y una cuarta región estructural (FR4), donde las regiones FR1 y FR2 están intercaladas en una región determinante de complementariedad 1 (CDR1), las regiones FR2 y FR3 están intercaladas en una región determinante de complementariedad 2 (CDR2), y las regiones FR3 y FR4 están intercaladas en una secuencia de ácidos nucleicos de relleno que comprende al menos dos sitios de reconocimiento de la enzimas de restricción Tipo IIs intercalados en una secuencia de ácidos nucleicos aleatoria; (b) proporcionar una pluralidad de secuencias de ácidos nucleicos diversificadas que codifican las secuencias de la región determinante de complementariedad 3 (CDR3) aisladas del repertorio de inmunoglobulina de la especie de mamífero donde cada una de la pluralidad de secuencias de ácidos nucleicos diversificadas comprende un sitio de reconocimiento de las enzimas de restricción Tipo IIs en cada extremidad; (c) digerir cada una de la pluralidad de las secuencias de ácidos nucleicos que codifica las regiones CDR3 usando una enzima de restricción Tipo II que se une al sitio de reconocimiento de la enzima de restricción Tipo IIs de la etapa (b) y digerir la secuencia de ácidos nucleicos de relleno de la etapa (a) de la estructura aceptora usando una enzima de restricción Tipo II que se une al sitio de reconocimiento de la enzima de restricción Tipo IIs de la etapa (a); y (d) ligar las secuencias de ácidos nucleicos digeridas que codifican las regiones de CDR3 o las secuencias de aminoácidos de la etapa (c) en la estructura aceptora digerida de la etapa (c) de modo que las regiones FR3 y FR4 se intercalan en las secuencias de ácidos nucleicos que codifican la región CDR3 o la secuencia de aminoácidos que puede cumplir el papel de una región CDR3 y se restauran secuencias que codifican el dominio variable de la inmunoglobulina completa que no contienen los sitios de reconocimiento de la enzimas de restricción Tipo IIs de las etapas (a) y (b).