Patent AR-099146-A1 (AR)
Title: Métodos y composiciones para la autodirección de células madre mesenquimales
IPC: A61K35/28
Filed: 2015-01-21
Abstract: La divulgación se refiere a métodos y composiciones para la autodirección de células madre mesenquimales (MSC). Las composiciones incluyen compuestos descriptos en la presente solicitud, capaces de inducir la expresión por MSC de moléculas de ligando de autodirección de superficie celular, tales como CD11a, favorecer la mayor adhesión firme por MSC en un ensayo de flujo de corte in vitro, incrementar la unión a una molécula de adhesión tal como E-selectina o ICAM-1, y/o demostrar actividad antiinflamatoria con la administración sistémica in vivo en la terapia celular usando MSC humanas. Además, se describen métodos de detección sistemática a fin de identificar compuestos de moléculas pequeñas para mejorar una función de autodirección de MSC. Reivindicación 1: Un método de tratamiento de un sujeto con una enfermedad o una afección de lesión, donde el método comprende las etapas de: (a) la provisión de células madre mesenquimales (MSC); (b) el contacto de las MSC con una cantidad eficaz de una composición de compuesto que comprende el compuesto que tiene la fórmula (1), de modo de generar una composición que comprende MSC pretratadas, donde el compuesto es capaz de mejorar una función de autodirección en MSC pretratadas en relación con aquella de MSC no tratadas, donde dicho contacto opcionalmente incluye la incubación de las MSC con la composición de compuesto; y (b) opcionalmente, el lavado de las MSC pretratadas; (c) la administración de una cantidad eficaz de la composición que comprende MSC pretratadas, al sujeto; donde el compuesto tiene la estructura de la fórmula (1) donde: R¹ se selecciona de la serie que consiste en hidrógeno, C₁₋₄-alquilo, fenil-C₁₋₄-alquilo- y heteroarilo-C₁₋₄-alquilo-, donde fenilo y heteroarilo están no sustituidos o sustituidos con sustituyentes de la serie que consiste en halógeno, C₁₋₄-alquilo y C₁₋₄-alquilo-O-; R² y R³ se seleccionan, de manera independiente entre sí, de la serie que consiste en halógeno, C₁₋₄-alquilo y C₁₋₄-alquilo-O-; R⁴ se selecciona de la serie que consiste en hidrógeno y C₁₋₄-alquilo; R¹⁰ se selecciona de la serie que consiste en hidrógeno, C₁₋₆-alquilo y Het¹, donde C₁₋₆-alquilo está no sustituido o sustituido con R²⁰, y donde Het¹ está no sustituido o sustituido con R²¹; R¹¹ se selecciona de la serie que consiste en hidrógeno y C₁₋₄-alquilo, o R¹⁰ y R¹¹ juntos son un grupo divalente seleccionado de la serie que consiste en los grupos -(CH₂)ₘ-C(R²²)(R²³)-(CH₂)ₙ- y -(CH₂)ₙ-N(R²⁴)-(CH₂)ₙ-, donde los restos (CH₂)ₘ y (CH₂)ₙ están no sustituidos o sustituidos con C₁₋₄-alquilo; R²⁰ se selecciona de la serie que consiste en R³⁰-O-, R³¹-N(R³²)-, H₂N-C(=NH)-S-, piridinilo y Het², donde Het² está no sustituido o sustituido con R³³; R²¹ se selecciona de la serie que consiste en C₁₋₄-alquilo, fenil-C₁₋₄-alquilo- y piridinilo-C₁₋₄-alquilo-, donde fenilo y piridinilo están no sustituidos o sustituidos con sustituyentes de la serie que consiste en halógeno, C₁₋₄-alquilo y C₁₋₄-alquilo-O-; R²² se selecciona de la serie que consiste en hidrógeno y C₁₋₄-alquilo; R²³ se selecciona de la serie que consiste en hidrógeno, C₁₋₄-alquilo, R³¹-N(R³²)- y R³¹-N(R³²)-C₁₋₄-alquilo-; R²⁴ se selecciona de la serie que consiste en hidrógeno, C₁₋₄-alquilo, piridinilo-C₁₋₄-alquilo- y R³¹-N(R³²)-C₁₋₄-alquilo-; R³⁰, R³¹ y R³² se seleccionan, de manera independiente entre sí, de la serie que consiste en hidrógeno y C₁₋₄-alquilo; R³³ se selecciona de la serie que consiste en C₁₋₄-alquilo; Het¹ es un heterociclo de 4 a 7 miembros, monocíclico, saturado, que comprende un átomo de nitrógeno de anillo, que está enlazado por medio de un átomo de carbono de anillo; Het² es un heterociclo de 4 a 7 miembros, monocíclico, saturado, que comprende uno o dos átomos de nitrógeno de anillo, que está enlazado por medio de un átomo de carbono de anillo o un átomo de nitrógeno de anillo; heteroarilo es un heterociclo de 5 miembros o de 6 miembros, monocíclico, aromático, que comprende uno o dos heteroátomos de anillo idénticos o diferentes seleccionados de la serie que consiste en N, O y S; a y b se seleccionan, de manera independiente entre sí, de la serie que consiste en 0, 1 y 2; m y n se seleccionan, de manera independiente entre sí, de la serie que consiste en 1 y 2. Reivindicación 8: El método de la reivindicación 1, donde en el compuesto de la fórmula (1), la denominación química del compuesto es 3-(8-aminometil-6,7,8,9-tetrahidro-pirido[1,2-a]indol-10-il)-4-(1-metil-1H-indol-3-il)-pirrol-2,5-diona; y tiene la estructura de la fórmula (2). Reivindicación 19: Una composición que comprende una combinación de MSC purificadas in vitro y una cantidad eficaz de un compuesto como se describe en esta solicitud, donde el compuesto es capaz de mejorar una función de autodirección de MSC, donde el compuesto es opcionalmente de la fórmula (1) o cualquiera de las fórmulas (2) a (20). Reivindicación 20: Un método de detección sistemática para la identificación de un compuesto de molécula pequeña capaz de mejorar una función de autodirección de MSC, que comprende las etapas de: (a) la provisión de una composición candidata que comprende un compuesto de molécula pequeña candidato; (b) la provisión de MSC; (c) el tratamiento de las MSC con la composición candidata, de modo de generar MSC tratadas; (d) la medición de una característica de las MSC tratadas, donde la característica comprende una o más de la expresión in vitro de una molécula de superficie celular capaz de facilitar una función de autodirección, la adhesión in vitro de las MSC tratadas en un ensayo de flujo de corte, y la actividad antiinflamatoria con la administración sistémica in vivo en un modelo de inflamación animal; (e) la comparación de una o más de las características de MSC tratadas en relación con una característica de MSC de control negativo, donde las MSC de control negativo son no tratadas o tratadas con una composición candidata de control negativo que no es capaz de mejorar una función de autodirección de MSC; y (f) la identificación del compuesto de molécula pequeña capaz de mejorar una función de autodirección de MSC, donde el compuesto de molécula pequeña, para MSC tratadas en relación con MSC de control negativo, demuestra una o más de mayor expresión de una molécula de superficie celular capaz de facilitar una función de autodirección, mayor adhesión in vitro en un ensayo de flujo de corte, reducida actividad de enfermedad autoinmunitaria con la administración sistémica in vivo en un modelo animal, y mayor actividad antiinflamatoria con la administración sistémica in vivo en un modelo de inflamación animal. Reivindicación 24: Un cultivo in vitro purificado de MSC, donde las MSC expresan un mayor nivel de superficie celular de CD11a en relación con un nivel correspondiente a aquel de MSC cultivadas, donde el mayor nivel de superficie celular es de origen endógeno y no diseñado. Reivindicación 27: Un método de elaboración de una composición terapéutica de MSC pretratadas capaces de una mejorada función de autodirección, que comprende las etapas de: (a) la provisión de una población de MSC; (b) el pretratamiento de las MSC mediante el contacto de las MSC con una composición que comprende un compuesto como se describe en esta solicitud, donde el compuesto es capaz de mejorar una función de autodirección de las MSC; donde el compuesto, en forma opcional, es de la fórmula (1) o cualquiera de las fórmulas (2) a (20), y donde la función de autodirección es una o más de: (i) mayor expresión de una molécula de superficie celular capaz de facilitar una función de autodirección, donde, en forma opcional, la molécula de superficie celular es CD11a, (ii) mayor adhesión in vitro por las MSC en un ensayo de flujo de corte, (iii) mayor unión de E-selectina o ICAM-1, y (iv) mayor actividad de autodirección y/o antiinflamatoria de las MSC con la administración sistémica in vivo de las MSC en un modelo de inflamación animal, (c) opcionalmente, la preparación de una alícuota de dosis única o de una alícuota de múltiples dosis, de la composición de MSC pretratadas; y (d) opcionalmente, la congelación de las MSC pretratadas, de modo de generar MSC pretratadas congeladas; a fin de generar la composición terapéutica de las MSC pretratadas.