Patent ES-2908748-T3 (ES)
Title: Métodos para medir interacciones inter- y/o intramoleculares
Inventor: BAASKE PHILIPP
IPC: G01N33/543
Filed: 2018-06-22
Granted: 2022-05-03
Abstract: Un método para medir interacciones entre partículas marcadas y ligandos que comprende las etapas: a) proporcionar una muestra que comprende partículas marcadas y ligandos en una solución, en donde las partículas marcadas están disueltas o dispersas en la solución o están inmovilizadas en un soporte sólido; b) excitar fluorescentemente las partículas marcadas y detectar la fluorescencia de las partículas excitadas a una temperatura predeterminada; c) repetir las etapas (a) y (b) múltiples veces a diferentes concentraciones de los ligandos en la solución; y d) determinar la interacción entre las partículas marcadas y los ligandos basados en el cambio dependiente de la concentración de ligando de la fluorescencia de las partículas marcadas, en donde la etapa (b) comprende las siguientes etapas: b1) excitar fluorescentemente las partículas marcadas y detectar la fluorescencia de las partículas excitadas a una primera temperatura predeterminada; b2) calentar o enfriar la solución a una segunda temperatura predeterminada; b3) excitar fluorescentemente las partículas marcadas y detectar la fluorescencia de las partículas excitadas a la segunda temperatura predeterminada; en donde las partículas marcadas están marcadas con uno o más colorantes seleccionados del grupo que consiste en colorantes representados por las fórmulas generales (I), (IIa), (IIb) o (III): **(Ver fórmula)** en donde X1 es O, S o CR5R6; X2 es O, S o CR7R8; R1 y R2 se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, y grupos alquilo que pueden estar sustituidos; R3, R4, R5, R6, R7 y R8 se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidroxi, carboxi, ácido sulfónico, tiol o una sal del mismo, hidrógeno, halógeno, grupos éster carboxilato que pueden estar sustituidos, grupo nitro, aminas, amidas, grupos alquilo que pueden estar sustituidos, grupos alcoxi que pueden estar sustituidos, y grupos alquenilo que pueden estar sustituidos; con la condición de que al menos uno de R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7 y R8 sea un grupo espaciador por el que el colorante se conjuga a la partícula, en donde el grupo espaciador es más largo que dos grupos CH2-; a es un número entero de 0 a 4; b es un número entero de 0 a 4; y n es un número entero de 1 a 3, preferiblemente 1 o 2; **(Ver fórmula)** en donde uno de X3 y X4 es NR9 y el otro de X3 y X4 es O, S o CR13R14; R9 se selecciona del grupo que consiste en hidrógeno, y grupos alquilo que pueden estar sustituidos; R10, R11, R12, R13 y R14 se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidroxi, carboxi, ácido sulfónico, tiol o una sal del mismo, hidrógeno, halógeno, grupos éster carboxilato que pueden estar sustituidos, grupo nitro, aminas, amidas, grupos alquilo que pueden estar sustituidos, grupos alcoxi que pueden estar sustituidos, y grupos alquenilo que pueden estar sustituidos; con la condición de que al menos uno de R9, R10, R11, R12, R13 y R14 sea un grupo espaciador por el que el colorante se conjuga a la partícula, en donde el grupo espaciador es más largo que dos grupos CH2-; c es un número entero de 0 a 4; d es un número entero de 0 a 2; e es un número entero de 0 a 4; y m es un número entero de 1 a 3, preferiblemente 1 o 2; y **(Ver fórmula)** en donde Y es OR18 o NR19R20; Z es O o +NR21R22; R15, R16 y R17 se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidroxi, carboxi, ácido sulfónico, tiol o una sal del mismo, hidrógeno, halógeno, grupos éster carboxilato que pueden estar sustituidos, grupo nitro, aminas, amidas, grupos alquilo que pueden estar sustituidos, grupos alcoxi que pueden estar sustituidos, y grupos alquenilo que pueden estar sustituidos; con la condición de que al menos uno de R17 sea un grupo espaciador por el que el colorante se conjuga a la partícula; R18 es H o un ion de metal alcalino, R19, R20, R21 y R22 se seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en hidrógeno, y grupos alquilo que pueden estar sustituidos, preferiblemente, R19, R20, R21 y R22 son cada uno iguales; f es un número entero de 0 a 3; g es un número entero de 0 a 3; y h es un número entero de 1 a 5.