Patent BR-0006501-A (BR)
Title: Processo de isolamento e purificação do fungo guignardia citricarpa; processo de estocagem do fungo guignardia citricarpa; processo de extração do dna genÈmico do fungo guignardia citricarpa; processo de obtenção de oligonucleotìdeos iniciadores ("primers") especìficos para detecção de linhagens patogênicas de guignardia citricarpa causadoras da mancha preta de citros (mpc); oligonucleotìdeos iniciadores ("primers") obtidos de acordo com o processo e kit para diagnóstico molecular de linhagens patogênicas de guignardia citricarpa causadora da mancha preta de citros (mpc)
Inventor: AZEVEDO JOAO LUCIO DE
IPC: C12Q1/6895
Filed: 2000-09-01
Abstract: "PROCESSO DE ISOLAMENTO E PURIFICAçãO DO FUNGO Guignardia citricarpa ; PROCESSO DE ESTOCAGEM DO FUNGO Guignardia citricarpa ; PROCESSO DE EXTRAçãO DO DNA GENÈMICO DO FUNGO Guignardia citricarpa; PROCESSO DE OBTENçãO DE OLIGONUCLEOTìDEOS INICIADORES ("PRIMERS") ESPECìFICOS PARA DETECçãO DE LINHAGENS PATOGêNICAS DE Guignardia citricarpa CAUSADORAS DA MANCHA PRETA DE CITROS (MPC); OLIGONUCLEOTIDEOS INICIADORES ("PRIMERS") OBTIDOS DE ACORDO COM O PROCESSO E KIT PARA DIAGNóSTICO MOLECULAR DE LINHAGENS PATOGêNICAS DE Guignardia citricarpa CAUSADORA DA MANCHA PRETA DE CITROS (MPC)". Trata-se de um processo relacionado ao isolamento, detecção e purificação de isolados patogênicos de Guignardia citricarpa cuja manifestação dos mesmos revela a presença da doença denominada Mancha Preta de Citros (MPC), trata-se também de um processo de estocagem dos ditos fungos com a finalidade de manter o material disponível para ulterior utilização em técnicas de análises laboratoriais; trata-se de um processo de extração do DNA genómico do dito fungo contendo a seq³ência específica responsável pelo diagnóstico da MPC; refere-se também a obtenção de oligonucleotídeos iniciadores (PRIMERS) que serão os componentes do Kit para diagnóstico molecular de linhagens patogênicas causadoras do MPC e o Kit de diagnóstico molecular com a finalidade de detectar isolados patogênicos na agricultura, especialmente em pomares de citros. Visando a detecção e eliminação de mudas de citros contaminadas que poderão ser comercializadas entre regiões e/ou países diferentes com o objetivo de formação de pomares ; visando a obtenção de pomares saudáveis evitando uma diminuição crescente da produção de citros, especialmente laranjas, e visando a diminuição da permanência das mudas de citros em locais de quarentena, o presente pedido vem propor etapas inovadoras que se iniciam com o processo de isolamento e purificação do fungo Guignardia citricarpa, estocagem , extração do DNA genómico do fungo, obtenção de oligonucleotídeos iniciadores ( PRIMERS ), específicos para a detecção de linhagens patogênicas do referido fungo causadoras da MPC até a obtenção do kit para diagnóstico molecular da presença de linhagens patogênicas de <B>G. citricarpa<D>. O Processo que se basca na extração do DNA genómico do fungo em questão caracteriza-se pelo fato de que a amplificação da sequência de bases do DNA genómico de 305 pares de bases, corresponde a parte da sequência da banda que apresenta 373 pares de bases, banda esta que foi clonada e sequenciada dando origem aos primers específicos capazes de diferenciar linhagens patogênicas do fungo G. citricarpa de outros não patogênicos da mesma ou de diferentes espécies. Deve ficar claro que a banda de RAPD está presente apenas em isolados patogênicos. Na etapa final do processo iniciado com o isolamento do fungo patogênico obteve-se um Kit para diagnóstico molecular de linhagens patogênicas de Guignardia citricarpa, causadora da mancha preta dos citros (MPC)" tendo como componente fundamental o par de primer (GCPI e GCP2) específico para a detecção de linhagens patogênicas do dito fungo. A presente invenção tem aplicação direta no campo da agricultura pois através da detecção da presença de isolados patogênicos em citros, evita-se a contaminação de mudas contaminadas com a Mancha Preta Dos Citros ( MPC ) responsável pela perda na produção final da colheita em pomares de citros.