Patent AR-126287-A1 (AR)
Title: Composiciones, sistemas y métodos para la modificación del genoma
Inventor: JOYCE ADAM PATRICK
IPC: C12N9/22
Filed: 2022-06-30
Abstract: La presente divulgación proporciona composiciones, construcciones de expresión recombinante y sistemas genomodificados que incluyen un polinucleótido que incluye o codifica un ARNtracr de Cas12a, y métodos para su uso. Los materiales y métodos de la divulgación son especialmente adecuados para la modificación genómica específica de secuencia de secuencias genómicas eucariotas.  Reivindicación 1: Un sistema de expresión de ADN que comprende (a) una secuencia de ADN de un primer promotor; y (b) unido operativamente y heterólogo al primer promotor, ADN que codifica una primera molécula de ARN que comprende un ARNtracr de Cas12a y que comprende un sitio de escisión de una endonucleasa de restricción que es adecuado para la inserción de una secuencia codificante de un resto de ARN funcional; y (c) opcionalmente, un terminador en 3 de y unido operativamente al ADN que codifica la primera molécula de ARN. Reivindicación 2: El sistema de expresión de ADN de la reivindicación 1, que comprende además: (d) opcionalmente, una secuencia de ADN para un segundo promotor; (e) unido operativamente y heterólogo al primer promotor o al segundo promotor, ADN que codifica un ARNcr de Cas12a capaz de hibridar con un segmento de la primera molécula de ARN; y (f) opcionalmente, un terminador en 3 de y unido operativamente al ADN que codifica el ARNcr de Cas12a. Reivindicación 11: Un método para anclar una molécula de ARN funcional a un ARNcr de Cas12a, método que comprende hibridar (a) una molécula de ARN funcional que comprende un ARN tracr de Cas12a y un resto de ARN funcional; y (b) un ARNcr de Cas12a que es capaz de hibridar con un segmento de la molécula de ARN funcional; anclando así la molécula de ARN funcional al ARNcr de Cas12a. Reivindicación 12: El método de la reivindicación 11, en donde la molécula de ARN funcional se proporciona mediante la transcripción de una molécula de ADN que comprende el ADN que codifica el ARNtracr de Cas12a y el ADN que codifica el resto de ARN funcional, en donde el ADN que codifica el resto de ARN funcional está, o se ha insertado en, un sitio de escisión de una endonucleasa de restricción en o adyacente al ADN que codifica el ARNtracr de Cas12a. Reivindicación 18: Un sistema genomodificado que comprende: (a) una nucleasa Cas12a, o una o más secuencias de nucleótidos que codifican la nucleasa Cas12a; y (b) al menos un ARNcr de Cas12a genomodificado diseñado para formar un complejo con la nucleasa Cas12a y que comprende al menos una repetición directa o un fragmento de la misma y una secuencia espaciadora diseñada para hibridar con una secuencia objetivo en una célula eucariota, o una o más secuencias de nucleótidos que codifican el al menos un polinucleótido de ARNcr de Cas12a genomodificado; y (c) un ARNtracr de Cas12a que comprende una secuencia de nucleótidos que tiene al menos un 50% de complementariedad con la secuencia de nucleótidos de la al menos una repetición directa o un fragmento de la misma del ARNcr de Cas12a genomodificado, o una o más secuencias de nucleótidos que codifican el ARNtracr de Cas12a. Reivindicación 24: Un método de modificación de una secuencia objetivo en un locus de interés de una célula eucariota que comprende la administración del sistema genomodificado de la reivindicación 18 al locus de interés, en donde la secuencia espaciadora hibrida con la secuencia objetivo, mediante lo cual se produce la modificación del locus de interés.