Patent ES-2700442-T3 (ES)
Title: Método para producir anticuerpos
Inventor: STEPHENS PAUL EDWARD
IPC: C12N15/64
Filed: 2010-02-25
Granted: 2019-02-15
Abstract: Un método para obtener un anticuerpo recombinante con una capacidad deseada para unirse a un antígeno seleccionado que evita múltiples etapas de digestión y ligación para producir vectores y múltiples transformaciones en células huésped, que comprende: (a) proporcionar una población de células linfocíticas formadoras de anticuerpos que se sospecha que contienen al menos una célula capaz de producir un anticuerpo que comprende una cadena pesada y una cadena ligera que muestra dicha especificidad deseada; (aa) una primera etapa de selección previa a la etapa (b) en la que la población de células formadoras de anticuerpos proporcionadas en la etapa (a) se seleccionan para identificar una célula formadora de anticuerpos o una población de células formadoras de anticuerpos que producen un anticuerpo que muestra la capacidad deseada: (aaa) identificar y aislar una única célula formadora de anticuerpos que produce un anticuerpo que muestra la capacidad deseada a partir de una población de células formadoras de anticuerpos identificada por la primera etapa de selección (aa); (b) generar un polinucleótido lineal recombinante transcripcionalmente activo que codifica una cadena ligera o un fragmento de la misma y un polinucleótido lineal recombinante transcripcionalmente activo que codifica una cadena pesada o un fragmento de la misma para cada anticuerpo recombinante a partir de la única célula aislada formadora del anticuerpo obtenida en la etapa (aaa), en la que cada polinucleótido lineal recombinante transcripcionalmente activo comprende una primera secuencia de polinucleótidos codificante que codifica un dominio variable de un anticuerpo producido por la única célula aislada formadora de anticuerpos obtenida en la etapa (aaa), una segunda secuencia de polinucleótidos codificante que codifica una o más secuencias de polinucleótidos codificantes de dominio constante y uno o más elementos reguladores de la transcripción y no es capaz de replicación autónoma; en donde la etapa (b) comprende: bb) proporcionar la primera secuencia de polinucleótidos codificante, la segunda secuencia de polinucleótidos codificante y los uno o más elementos reguladores de la transcripción; bbb) unir la primera secuencia de polinucleótidos codificante y la segunda secuencia de polinucleótidos codificante mediante PCR, y bbbb) unir uno o más elementos reguladores de la transcripción a la primera secuencia de polinucleótidos codificante y/o a la segunda secuencia de polinucleótidos codificante mediante PCR; (c) expresar un anticuerpo recombinante que comprende una cadena pesada y una cadena ligera de polinucleótidos lineales recombinantes transcripcionalmente activos generados en la etapa (b) mediante transfección transitoria de los polinucleótidos lineales recombinantes transcripcionalmente activos en una célula, cultivando dichas células huésped en un medio apropiado y aislando el anticuerpo a partir de la célula; (d) seleccionar el anticuerpo recombinante producido por la etapa (c) para la capacidad deseada; y (e) repetir opcionalmente las etapas (b), (c) y (d) para identificar un anticuerpo recombinante que muestra la capacidad deseada.