Patent AR-124061-A1 (AR)
Title: Juego de análisis para monitorear la presencia en una muestra de un ligando capaz de generar una respuesta genómica de hormona esteroide, método de ensayo para detectar un ligando en una muestra, método para determinar el estado de dopaje de un atleta y método para determinar el estado del receptor de hormona esteroide de un humano o animal empleando dicho juego de análisis
Inventor: HEATHER ALISON KAY
IPC: G01N33/74
Filed: 2021-11-12
Abstract: El presente invento proporciona juegos de análisis de diagnóstico y métodos de ensayo que involucran la detección de ligando(s) de hormona esteroide en una muestra de análisis. Por ejemplo, en la detección de ligandos que se unen a y activan un receptor andrógeno, receptor estrógeno, receptor progesterona, receptor mineralocorticoide y receptor glucocorticoide. En particular, los juegos de análisis y métodos de ensayo descriptos en la presente se configuran para aplicaciones basadas a campo, por ejemplo, para rastreo de análisis de medicamento en atletas o análisis casero de humanos o animales sobre la actividad de la hormona esteroide, juegos de análisis, ensayos y métodos de lectura colorimétrica que involucran ya sea pirofosfato inorgánico o separación sonda ARN CRISPR / Cas inducido involucrando (por ej.) sondas que tienen un rótulo detectable incluyendo fluoróforo / moléculas de sofocación o fluoróforo / moléculas rotuladas. Consecuentemente, los juegos de análisis de diagnóstico y métodos de ensayo descriptos en la presente eliminan el requisito de instrumentación de detección permitiendo análisis reproducibles de fuego rápido en el campo.  Reivindicación 1: Un juego de análisis para monitorear la presencia en una muestra de un ligando capaz de generar una respuesta genómica de hormona esteroide, el juego de análisis caracterizado porque comprende: (i) un receptor de hormona esteroide que es capaz de formar un complejo ligando receptor con un ligando de la muestra; (ii) una primera molécula de ácido nucleico comprendiendo: (a) una secuencia promotora polimerasa ARN polipéptido simple; (b) un elemento de respuesta que es capaz de unirse mediante el complejo ligando receptor; y (c) una secuencia de reconocimiento CRISPR Cas ARN (crARN); en donde el elemento de respuesta (b) se ubica entre la secuencia promotora (a) y la secuencia de reconocimiento crARN (c), y donde la primera molécula de ácido nucleico opcionalmente comprende una secuencia espaciadora (d) ubicada entre la secuencia promotora polimerasa (a) y el elemento de respuesta (b), siempre que [(a), (b) y (c)] o [(a), (d), (b) y (c)] estén operativamente unidos; (iii) una segunda molécula de ácido nucleico comprendiendo una secuencia crARN que es complementaria a la secuencia de reconocimiento crARN en la primera molécula de ácido nucleico; (iv) una endonucleasa CRISPR activada con objetivo ARN; (v) una sonda ARN comprendiendo por lo menos un rótulo detectable; y (vi) opcionalmente, una polimerasa ARN. Reivindicación 11: Un método de ensayo para detectar un ligando en una muestra cuyo ligando es capaz de generar una respuesta genómica de hormona esteroide empleando el juego de análisis conforme a cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, el método de ensayo caracterizado porque comprende las etapas de: (1) contactar una muestra con: (i) un receptor de hormona esteroide que forma un complejo ligando receptor con un ligando de la muestra; (ii) una primera molécula de ácido nucleico comprendiendo: (a) una secuencia promotora polimerasa ARN; (b) un elemento de respuesta que es capaz de unirse mediante el complejo ligando receptor; y (c) una secuencia de reconocimiento CRISPR Cas ARN (crARN); donde el elemento de respuesta (b) se ubica entre la secuencia promotora (a) y la secuencia de reconocimiento crARN (c), y donde la primera molécula de ácido nucleico opcionalmente comprende una secuencia espaciadora (d) ubicada entre la secuencia promotora polimerasa (a) y el elemento de respuesta (b), siempre que [(a), (b) y (c)] o [(a), (d), (b) y (c)] estén operativamente unidos; (iii) una segunda molécula de ácido nucleico comprendiendo una secuencia crARN que es complementaria a la secuencia de reconocimiento crARN en la primera molécula de ácido nucleico; (iv) una endonucleasa CRISPR activada con objetivo ARN; (v) una sonda ARN comprendiendo por lo menos un rótulo detectable; (vi) una polimerasa ARN; y (vii) trifosfatos ribonucleósidos, (2) midiendo un cambio en la cantidad de rótulo detectable asociado con la sonda ARN causada por unión del complejo ligando receptor al elemento de respuesta, donde, un cambio medido en la cantidad de rótulo detectable asociado con la sonda ARN refleja la detección de un ligando en la muestra. Reivindicación 12: Un método conforme a la reivindicación 11, caracterizado porque también comprende contactar la muestra con por lo menos un coactivador del receptor de hormona esteroide y/o por lo menos un corepresor de receptor de hormona esteroide.