Patent ES-2631554-T3 (ES)
Title: Procedimiento de producción de ácido 2,4-dihidroxibutírico
Inventor: WALTHER THOMAS
IPC: C12P7/16
Filed: 2011-10-27
Granted: 2017-09-01
Abstract: Procedimiento de producción del ácido 2,4-dihidroxibutírico (2,4-DHB), que comprende: - una primera etapa de transformar el malato en 4-fosfo-malato utilizando una malato cinasa, en el que la malato cinasa se obtiene mediante por lo menos una mutación de una aspartato cinasa, mejorando dicha(s) mutación(ones) la actividad y/o la afinidad por el sustrato del polipéptido mutado por el malato cuando se compara con los enzimas de tipo salvaje, la aspartato cinasa mutada comprende por lo menos una mutación cuando se compara con el enzima de tipo salvaje, en una de las posiciones siguientes: S39, T45, V115, E119, F184 y/o S201, refiriéndose dichas posiciones a la SEC ID nº 4, en el que el aminoácido natural en dicha(s) posición(ones) es sustituido por cualquiera de los otros 19 aminoácidos proteinógenos que existen de manera natural, es decir, por alanina, arginina, asparagina, ácido aspártico, cisteína, ácido glutámico, glutamina, glicina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, triptófano, tirosina o valina, y preferentemente, la aspartato cinasa mutada comprende adicionalmente por lo menos una mutación en los aminoácidos siguientes: E250, M318, S321, V339, S338, F324, L325, S345, E346, D340, T344 y/o T352, refiriéndose dichas posiciones a la SEC ID nº 4 y en el que cada uno de dichos aminoácidos es sustituido por cualquiera de los otros 19 aminoácidos proteinógenos que existen de manera natural, es decir, por alanina, arginina, asparagina, ácido aspártico, cisteína, ácido glutámico, glutamina, glicina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, triptófano, tirosina o valina, todavía más preferentemente la malato cinasa consiste en la SEC ID nº 9, SEC ID nº 12, SEC ID nº 14, SEC ID nº 16, SEC ID nº 18, SEC ID nº 20, SEC ID nº 22, SEC ID nº 24, SEC ID nº 26, SEC ID nº 39, SEC ID nº 41, SEC ID nº 43 o SEC ID nº 45. - una segunda etapa de transformar 4-fosfo-malato en malato-4-semialdehído utilizando una malato semialdehído deshidrogenasa, en el que la malato semialdehído deshidrogenasa se obtiene mediante por lo menos una mutación de una aspartato semialdehído deshidrogenasa, mejorando dicha(s) mutación(ones) la actividad y/o la afinidad por el sustrato del polipéptido mutado por el 4-fosfo-malato cuando se compara con los enzimas de tipo salvaje, la aspartato semialdehído deshidrogenasa mutada comprende por lo menos una mutación cuando se compara con el enzima de tipo salvaje, en una de las posiciones siguientes: T136, Q162, I230, E241 y/o H274, refiriéndose dichas posiciones a la SEC ID nº 20, en el que el aminoácido natural en dichas posiciones se sustituye por cualquiera de los otros 19 aminoácidos proteinógenos que existen de manera natural, es decir, alanina, arginina, asparagina, ácido aspártico, cisteína, ácido glutámico, glutamina, glicina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, triptófano, tirosina o valina, y más preferentemente la aspartato semialdehído deshidrogenasa mutada consiste en SEC ID nº 68, y más específicamente SEC ID nº 54, SEC ID nº 56, SEC ID nº 58, SEC ID nº 60, SEC ID nº 62, SEC ID nº 64 o SEC ID nº 66 o SEC ID nº 231 - una tercera etapa de transformar malato-4-semialdehído en 2,4-DHB utilizando una DHB deshidrogenasa seleccionada de entre semialdehído succínico reductasa que comprende por lo menos una mutación cuando se compara con el enzima de tipo salvaje, mejorando dicha(s) mutación(ones) la actividad y/o la afinidad por el sustrato del enzima mutado por el malato-4-semialdehído cuando se compara con los enzimas de tipo salvaje, en una de las posiciones siguientes: S40, N43, H39, T49, F85, Q108, L281 y/o N305, refiriéndose las posiciones a la SEC ID nº 76, en el que el aminoácido natural en dichas posiciones se ha sustituido por cualquiera de los otros 19 aminoácidos proteinógenos que existen de manera natural, es decir, por alanina, arginina, asparagina, ácido aspártico, cisteína, ácido glutámico, glutamina, glicina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, triptófano, tirosina o valina, todavía más particularmente dicho enzima consiste en SEC ID nº 74, SEC ID nº 76 o SEC ID nº 81, SEC ID nº 225 o SEC ID nº 227.