Patent PL-419814-A1 (PL)
Inventor: SZAFRAN ROMAN
IPC: C12Q1/02
Filed: 2016-12-15
Abstract: Sposób generowania dynamicznie zmiennego gradientu stężenia substancji aktywnej w mikrosystemach do prowadzenia hodowli komórek, charakteryzujący się tym, że w pierwszym etapie zbiorniki płynów zasilających komory mikrourządzenia wypełnia się rozpuszczalnikami, kolejno: zbiorniki pierwszej i kolejnych komór (ślepa próba i hodowla właściwa) rozpuszczalnikiem zawiesiny komórkowej, a ostatnią komorę (komora wskaźnikowa) rozpuszczalnikiem barwnej substancji wskaźnikowej, w tym celu do zbiorników po jednej stronie mikrourządzenia wprowadza się ciecz i pochyla się mikrosystem w kierunku pustych zbiorników, tak by wymusić przepływ medium ze zbiorników zasilających przez komory mikrourządzenia do zbiorników wypływowych usytuowanych po przeciwnej jego stronie, a po wypełnieniu komór mikrourządzenia, medium ze zbiorników usuwa się. W drugim etapie wprowadza się zawiesinę komórek do co najmniej dwóch zbiorników zasilających usytuowanych po jednej stronie mikrourządzenia (ślepa próba i hodowla właściwa), a rozpuszczalnik barwnej substancji wskaźnikowej do ostatniego zbiornika (komora wskaźnikowa) i pochyla się mikrosystem w kierunku pustych zbiorników, tak by wymusić przepływ płynów ze zbiorników zasilających przez komory mikrourządzenia do zbiorników usytuowanych po przeciwnej ich stronie, tak by poziom płynów w przeciwległych zbiornikach wyrównał się. W trzecim etapie prowadzi się krótkotrwałą, wstępną hodowlę komórek w celu wymuszenia ich adhezji do powierzchni komór mikrourządzenia. W czwartym etapie opróżnia się zbiorniki po obu stronach komór mikrourządzenia, przy czym komory pozostają wypełnione płynem i wprowadza się odmierzoną objętość rozpuszczalnika zawiesiny komórkowej do zbiornika zasilającego pierwszej komory (ślepa próba), roztworu substancji aktywnej do zbiornika zasilającego drugiej i kolejnych komór (hodowla właściwa) i barwnego roztworu wskaźnikowego do zbiornika zasilającego ostatniej komory (komora wskaźnikowa), następnie pochyla się mikrosystem pod kątem od 10 do 90 stopni w kierunku pustych zbiorników, wymuszając przepływ płynu przez komory mikrourządzenia, do całkowitego opróżnienia zbiorników zasilających uprzednio wypełnionych płynem, jednak bez opróżniania zawartości komór, po czym usuwa się ciecz ze zbiorników. W piątym etapie wprowadza się do każdego ze zbiorników po stronie wypływowej określoną niewielką objętością odpowiedniego rozpuszczalnika i przechyla się mikrosystem w kierunku pustych zbiorników w celu wymuszenia przepływu płynu w komorach mikrourządzenia i do całkowitego opróżnienia zbiorników zasilających, następnie mikrosystem przechyla się w przeciwnym kierunku i wymusza powrotny przepływ płynu w komorach mikrourządzenia, czynność powtarza się wielokrotnie do uzyskania pożądanego początkowego rozkładu stężenia substancji barwnej w komorze wskaźnikowej, czemu sprzyja posuwisto-zwrotny ruch płynu w komorach mikrourządzenia (adwekcyjny ruch masy), po czym usuwa się ciecz ze zbiorników. W szóstym etapie zbiorniki mikrourządzenia wypełnia się jednakową objętością płynu zadając kolejno: do obu zbiorników pierwszej komory (ślepa próba) rozpuszczalnik zawiesiny komórkowej, do zbiorników drugiej i następnych komór (hodowla właściwa) po stronie niższego stężenia substancji aktywnej w komorze hodowlanej - roztwór substancji aktywnej, a po stronie wyższego stężenia substancji aktywnej w komorze hodowlanej - rozpuszczalnik zawiesiny komórkowej, do zbiorników ostatniej komory (komora wskaźnikowa) po stronie niższego stężenia substancji wskaźnikowej w komorze - barwny roztwór wskaźnikowy, a po stronie wyższego stężenia substancji wskaźnikowej w komorze - rozpuszczalnik barwnej substancji wskaźnikowej. W siódmym etapie wszystkie zbiorniki zabezpiecza się osłonami zbiorników dla zapewnienia stabilizacji płynów w komorach mikrourządzenia.