Patent AR-124480-A1 (AR)
Title: Métodos de purificación de proteínas de fusión con protección de carga
Inventor: MEANS CHRISTOPHER KABLE
IPC: C12N15/62
Filed: 2021-12-22
Abstract: La presente invención se refiere a un método para purificar las proteínas con protección de carga a partir del lisado celular o liberado periplásmico usando cromatografía de interacción hidrofóbica como una primera etapa de cromatografía. Asimismo, en la presente, también se proveen las composiciones que comprenden proteínas con protección de carga y los métodos de tratamiento utilizando proteínas purificadas con protección de carga.  Reivindicación 1: En algunas formas de realización, en la presente se proporciona un método para purificar una proteína de fusión con protección de carga a partir de un lisado celular o un liberado periplásmico, en donde la proteína de fusión con protección de carga comprende un dominio biológicamente activo y un dominio con protección de carga, y en donde el método comprende una cromatografía de interacción hidrofóbica como una primera etapa de la cromatografía. Reivindicación 2: En algunas formas de realización, en la presente se proporciona un método para producir una proteína de fusión con protección de carga a partir de un lisado celular o un liberado periplásmico, en donde la proteína de fusión con protección de carga comprende un dominio biológicamente activo y un dominio con protección de carga, en donde el método comprende i) cultivar células que comprenden un ácido nucleico que codifica la proteína de fusión con protección de carga; y ii) purificar la proteína de fusión con protección de carga, en donde la proteína con protección de carga se purifica a partir del lisado celular o liberado periplásmico usando cromatografía de interacción hidrofóbica como primera etapa de cromatografía. Reivindicación 17: Un método para producir una proteína de fusión PASilada biológicamente activa a partir de un lisado celular o un liberado periplásmico que comprende i) cultivar células que comprenden un ácido nucleico que codifica la proteína de fusión PASilada biológicamente activa; y ii) purificar la proteína de fusión PASilada biológicamente activa, y en donde la proteína PASilada biológicamente activa se purifica a partir del lisado celular o liberado periplásmico usando cromatografía de interacción hidrofóbica como primera etapa de cromatografía. Reivindicación 18: Un método para purificar una proteína de fusión con protección de carga que comprende un dominio biológicamente activo y un dominio de protección de carga de un lisado celular o liberación periplásmica, el método comprende las siguientes etapas en orden i) aplicar una solución de carga que comprende la proteína de fusión con protección de carga a una columna de cromatografía de interacción hidrofóbica; ii) aplicar una solución de lavado a la columna de cromatografía de interacción hidrofóbica; iii) aplicar una solución de elución a la columna de interacción hidrofóbica para eluir la proteína con protección de carga; vi) aplicar la proteína de fusión con protección de carga eluida en iii) como una solución de carga a una columna de cromatografía de intercambio aniónico; v) eluir la proteína de fusión con protección de carga de la columna de cromatografía de intercambio aniónico; vi) aplicar la proteína de fusión con protección de carga eluida en vi) como una solución de carga a una columna de cromatografía de intercambio catiónico; vii) aplicar una solución de lavado a la columna de cromatografía de intercambio viii) aplicar una solución de elución a la columna de cromatografía de intercambio de cationes para eluir la proteína con protección de carga.