context: El complejo Schiff Base-Derived Copper (II) es un potente inductor de Apoptosis en las células cancerosas de colon al activar la ruta intrínsecahttps://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3967396/SHA: f1f24521928f5d8565a15a17bd7f79239a3d4116Autores: Hajrezaie, Maryam; Paydar, Mohammadjavad; Zorofchian Moghadamtousi, Soheil; Hassandarvish, Pouya; Gwaram, Nura Suleiman; Zahedifard, Maryam; Rouhollahi, Elham; Karimian, Hamed; Looi, Chung Yeng; Ali, Hapipah Mood; Abdul Majid, Nazia En las últimas décadas, las bases de Schiff y sus complejos se han hecho bien conocidos por su extenso potencial biológico. En el presente estudio, se examinó el efecto antiproliferativo de un complejo de cobre (II) sobre las células cancerosas de colon HT-29. El compuesto base de Cu(BrHAP)(2 ) Schiff demostró un potente efecto antiproliferativo en las células HT-29, con un valor IC(50) de 2,87 μg/ml después de 72 h de tratamiento. Las células HT-29 tratadas con complejos de Cu (II) sufrieron muerte por apoptosis, como se muestra por una elevación progresiva en la proporción de la población celular G(1 ). A una concentración de 6,25 μg/ml, el compuesto Cu(BrHAP)(2 ) causó una elevación significativa en la producción de ROS tras la perturbación del potencial de membrana mitocondrial y la liberación del citocromo c, evaluada mediante la medición de la intensidad de fluorescencia en las células manchadas. Además, la activación de las caspas 3/7 y 9 fue parte de la apoptosis inducida por complejos Cu (II), que confirmó la implicación de la apoptosis mediada por mitocondrial. Mientras tanto, no hubo activación significativa de la caspasa-8. Tomada en conjunto, estos resultados implican que el compuesto Cu(BrHAP)(2 ) es un candidato potencial para estudios adicionales de cáncer de colon in vivo y clínico para desarrollar nuevos agentes quimioterapéuticos derivados de agentes metálicos. Texto: El cáncer es una enfermedad debilitante que afecta a una parte sustancial de la población mundial en todas las generaciones y es un importante problema de salud de preocupación mundial [1]. Entre los diversos tipos de cáncer, el cáncer colorrectal es el segundo y tercer cáncer más prevalente entre hombres y mujeres en los Estados Unidos, respectivamente. A pesar de todos los avances considerables en los métodos de protección y las recientes mejoras en las técnicas de detección y quimioterapia, las tasas de supervivencia relativas de 1 y 5 años para los pacientes que padecen cáncer colorrectal son del 83,2% y 64,3%, respectivamente [2]. Además, debido a la amarga controversia sobre los métodos óptimos para la detección temprana, el pleno cumplimiento de las recomendaciones de detección sigue siendo un obstáculo importante para el diagnóstico en las etapas tempranas del desarrollo del cáncer. El desarrollo de resistencia a la quimioterapia también representa un problema crítico para el cual el tratamiento simultáneo con diversas clases de terapéuticas para reducir la resistencia ha Además, los numerosos efectos secundarios de los fármacos quimioterapéuticos en pacientes con cáncer, incluyendo pérdida de cabello, diarrea, sangrado e inmunosupresión, han hecho el proceso 2El Scientific World Journal de tratamiento más complicado [4]. El proceso altamente regulado de muerte celular programada de la apoptosis es una cuestión de gran interés en oncología y terapia contra el cáncer y representa una vía molecular común para la resistencia a fármacos y carcinogénesis [5]. El mantenimiento de un número celular constante en la mucosa colónica está altamente regulado a través del equilibrio entre la apoptosis y la proliferación celular. La perturbación en este equilibrio conduce a una fuga de homeostasis número celular normal y se asocia con la progresión de células cancerosas [6, 7]. Así, la supresión de la proliferación y elevación de la apoptosis en estas células aberantes se sugiere como el mecanismo esencial para la inhibición del cáncer de colon. Además, la apoptosis y los factores involucrados en su mecanismo de acción también presentan una ventana que puede ser explotada para la mejora de agentes terapéuticos potenciales con alta efectividad y menos efectos secundarios adversos [8]. Por lo tanto, la detección de compuestos novedosos capaces de inducir apoptosis en células de cáncer de colon que puedan ser utilizados solos o en combinación con otros fármacos quimioterapéuticos es una necesidad significativa y representa un desafío crítico en la química medicinal. Los complejos metálicos han sido ampliamente utilizados en clínicas durante siglos y han atraído a numerosos químicos inorgánicos para analizarlos, con el foco principal en aplicaciones médicas [9, 10]. El cobre, un oligoelemento esencial de naturaleza oxidativa y actividad bioesencial en el metabolismo humano, no existe en forma iónica en los sistemas biológicos. Así, la medición del cobre en el cuerpo se evalúa en forma de complejos con compuestos orgánicos [11]. Las bases Schiff son una clase crítica de compuestos en química médica que han demostrado una aplicación quimioterapéutica y antibacteriana significativa [12, 13]. Los complejos Schiff base Cu(II) revelaron un gran potencial para la actividad antiproliferativa, antibacteriana y gastroprotectora [14] [15] [16] [17] [18]. Este estudio evaluó el potencial anticanceroso de un complejo de cobre (II) derivado de N,N - dimetiletilen diamina y 2-hidroxiacetofenona Schiff base ligand, Cu(BrHAP) 2. Además, también se examinó el posible mecanismo apoptótico subyacente a esta actividad. Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM, Life Technologies, Inc., Rockville, MD) que contiene 10% de suero bovino fetal, 100 g/ml de estreptomicina y 100 U/ml de penicilina G a 37 °C en una atmósfera humidificada de 5% de CO 2 /95% de aire. Las células fueron chapadas a una densidad de ajuste en frascos de cultivo de tejidos (Corning, EE.UU.) según cada escala experimental. La viabilidad celular fue medida mediante un ensayo convencional de reducción de MTT [3-(4,5-dimetiltiazol-2yl)-2,5-difeniltetrazolio bromuro]. Después de 48 h de exposición a seis concentraciones de Cu(BrHAP) 2, las células fueron tratadas con solución de MTT (2 mg/ml) durante 2 h. Los cristales formazanos oscuros formados en células intactas fueron disueltos en DMSO, y la absorbancia se midió a 570 nm y 650 nm como fondo utilizando un lector de microplacas (Hidex, Turku, Finlandia). El valor IC 50 se determinó como la concentración de Cu(BrHAP) 2 necesaria para reducir la absorción de células tratadas al 50% de las células de control tratadas con DMSO. Todas las muestras se prepararon por triplicados. Ensayo. Medición de la liberación de lactato deshidrogenasa (LDH) es un biomarcador para determinar la citotoxicidad de un compuesto. Brevemente, las células HT-29 fueron tratadas con diferentes concentraciones de Cu(BrHAP) 2 y Triton X-100 (control positivo) durante 48 h, y los sobrenadantes de las células no tratadas y tratadas fueron transferidos a una nueva placa de 96 pocillos para el análisis de actividad LDH. A continuación, se añadieron 100 L de solución de reacción LDH a cada pozo, la placa fue incubada a temperatura ambiente durante 30 min, y la absorbancia fue leída a 490 nm utilizando un lector de microplacas Tecan Infinite 200 Pro (Tecan, Männedorf, Suiza). La cantidad de sal formazana y la intensidad de color rojo en muestras tratadas y no tratadas fueron representadas como la actividad LDH de las células. El nivel de liberación LDH en células tratadas con Cu(BrHAP) 2 se expresó como un porcentaje del control positivo. Para la detección de la apoptosis en las células tratadas se realizó un ensayo de doble tinción de propidium y naranja acridina (AO) mediante un microscopio fluorescente (Leica conectado con el software Q-Floro) de acuerdo con un procedimiento estándar. Las células HT-29 (5 × 10 4 células/ml en un matraz de cultivo de 25 mL) fueron chapadas, tratadas con Cu(BrHAP) 2 en la concentración IC 50, e incubadas durante 24, 48 y 72 h. Después de la recolección de las células, fueron manchadas con colorantes fluorescentes y observadas bajo un microscopio fluorescente UV (Olympus BX51) en un plazo de 30 min. En resumen, las células HT-29 (1 × 10 4 células/pozo en placa de 96 pocillos) fueron suplementadas con Cu(BrHAP) 2 (2 g/ml) o DMSO (control negativo) durante 24 h. Las células vivas fueron incubadas con tintes BrdU y Phospho-Histone H3 durante 30 min. Después de que las células fueron fijas y manchadas según lo descrito por las instrucciones del fabricante, fueron visualizadas y analizadas utilizando el lector de HCS Cellomics ArrayScan (Thermo Scientific). Las intensidades de fluorescencia de los tintes fueron medidas mediante un módulo de bioaplicación de activación diana. Para confirmar el resultado del análisis del ciclo celular de fluorescencia, las células HT-29 (5 × 10 4 células/ml) fueron tratadas con Cu(BrHAP) 2 para 24, 48 y 72 h para el Después de la incubación, las células HT-29 fueron giradas a 1800 rpm durante 5 min. A continuación, se realizó la fijación de una población celular para el análisis de citometría de flujo para restaurar la integridad. En resumen, los pellets celulares fueron fijados mezclándolos con 700 L de etanol frío (90%) y luego se mantuvieron a 4 °C durante la noche. Las células HT-29 tratadas fueron giradas y el etanol fue desechado. Después de lavar y suspender las células en PBS, 25 L de Rnasa A (10 mg/ml) y 50 L de propidium iodide (PI) (1 mg/ml) fueron añadidas a las células fijas durante 1 h a 37 °C. La RNase A añadida limitó la capacidad de PI para unirse únicamente a moléculas de ADN. Al final, el contenido de ADN de las células fue analizado por un citometro de flujo ( El ensayo de la capacidad antioxidante radical de oxígeno (ORAC) se realizó en base a los protocolos descritos en detalle anteriormente [19]. En resumen, se utilizó Cu(BrHAP) 2 a la concentración de 100 g/ml para este ensayo en un volumen de reacción total de 200 L. El experimento se realizó en una microplaca negra de 96 pocillos con 25 L de compuesto, en blanco (solvente/PBS), estándar (trolox), o control positivo (quercetina). La placa fue suplementada con la solución de fluoresceína de trabajo (150 L), seguida de una incubación de 5 minutos a 37 °. El volumen total de 200 L se compuso sumando 25 L de solución de trabajo AAPH. La intensidad de fluorescencia se midió a una longitud de onda de excitación de 485 nm y una longitud de onda de emisión de 538 nm cada 2 min durante 2 h. El resultado se cuantificó calculando las diferencias de área bajo la curva de descomposición de fluorescencia (AUC) de muestras y en blanco. Los valores fueron equivalentes Trolox (TE). En resumen, las células HT-29 (1 × 10 4 células/ml) fueron sembradas en placas de 96 pocillos y tratadas con diferentes concentraciones de Cu(BrHAP) 2 y DMSO (control negativo) durante 24 h. Después de 30 min de tratamiento con tinte dihidroetidium (DHE), las células fueron fijas y lavadas con tampón de lavado según las instrucciones del fabricante. En presencia de superóxidos, el tinte DHE se oxida a etidium. La intensidad de fluorescencia fue determinada por un lector de placas fluorescente a una longitud de onda de extensión de 520 nm y una longitud de onda de emisión de 620 nm. Los factores críticos para monitorear la salud celular, a saber, pérdida celular, cambios en la permeabilidad celular, liberación citocroma, cambios potenciales en la membrana mitocondrial, tamaño nuclear y cambios morfológicos, fueron estudiados utilizando un kit de citotoxicidad multiparamétrica Cellomics 3 como se describe en detalle anteriormente [20]. Las placas con células manchadas fueron analizadas utilizando el sistema ArrayScan HCS (Cellomics, PA, USA). Caspas 3/7, -8 y 9 actividades fueron determinadas utilizando el kit comercial caspasa-Glo 3/7, 8 y 9 de ensayo (Promega, Madison, WI). Las células HT-29 (1,0 × 10 4 células/pozo) fueron sembradas durante la noche en placas de 96 pocillos de pared blanca y tratadas con diferentes concentraciones de Cu(BrHAP) 2 durante 24 h. Según el protocolo del fabricante, las células tratadas fueron suplementadas con reactivo caspasa-Glo (100 L) e incubadas a temperatura ambiente durante 30 min. Las caspas activas de células apoptóticas causaron la escisión del tetrapéptido sintético marcado con aminoluciferina, lo que llevó a la liberación de sustrato para la enzima luciferasa. Las actividades de caspas se analizaron mediante un lector de microplacas Tecan Infinite 200 Pro (Tecan, Männedorf, Suiza). En resumen, las células HT-29 (1,0 × 10 4 células/pozo en una placa de 96 pocillos) fueron tratadas con diferentes concentraciones de Cu(BrHAP) 2 durante 3 h, seguidas de estimulación con TNF-(1 ng/ml) durante 30 min. Después de desechar el medio, las células fueron fijas y manchadas utilizando un kit de activación del núcleo Cellomics factor-B (NF-B) (Thermo Scientific) según las instrucciones del fabricante. A continuación, se utilizó un Array Scan HCS Reader para la evaluación de la placa. Las relaciones de intensidad NF-B citoplasmática y nuclear se calcularon utilizando el software de bioaplicación Cytoplasma a Nucleus Translocation. Se determinó la intensidad media de 200 células/pozo. Se compararon las proporciones de células no tratadas, tratadas y estimuladas por TNF. Todos los experimentos Los resultados se presentaron como la media ± desviación estándar (DE) del número de experimentos mostrados en las leyendas. Se realizó un análisis de varianza (ANOVA) utilizando el paquete estadístico prisma (GraphPad Software, EE.UU.). < 0,05 se consideró estadísticamente significativo. Células del colon. Inicialmente, la citotoxicidad de Cu(BrHAP) 2 se probó en líneas celulares HT-29 y CCD 841. Los valores IC 50 del compuesto base Schiff se determinaron a partir del resultado recogido de tres experimentos MTT independientes. Como se indica en la Tabla 1, Cu(BrHAP) 2 produjo un efecto citotoxicidad significativo e inhibidor celular después de 24, 48 y 72 h de tratamiento en células HT-29. 2 - Liberación LDH inducida. La liberación de lactato deshidrogenasa (LDH) en el medio es un marcador que muestra la pérdida de integridad de la membrana, apoptosis o necrosis. La citotoxicidad del compuesto Cu(BrHAP) 2, determinado por el ensayo de liberación de LDH, se cuantificó en células HT-29 tratadas con diversas concentraciones del compuesto base de Schiff durante 48 h. Cu(BrHAP) 2 indujo una elevación significativa en la liberación de LDH, demostrando citotoxicidad en las concentraciones de 6,25 y 12,5 g/ml en comparación con las células de control (Figura 2 ). Microscopía y doble tinción AO/PI. Se observaron cambios morfológicos en células HT-29 tratadas con Cu(BrHAP) 2 bajo un microscopio fluorescente a las 24, 48 y 72 h. Las células fueron puntuadas bajo un microscopio fluorescente para analizar células La apoptosis temprana, definida como OA interviniente dentro del ADN fragmentado, se observó bajo fluorescencia verde brillante, al mismo tiempo que se visualizaron células de control con una estructura nuclear verde intacta. Después de 24 y 48 h de tratamiento con Cu(BrHAP) 2, se observó apoptosis moderada en forma de blebing y condensación nuclear de cromatina. Además, en la etapa tardía de la apoptosis, se observaron cambios, como la presencia de color rojizo-naranja debido a la unión de PI al ADN desnaturalizado, después de 72 h de tratamiento (Figura 3). Los resultados mostraron que el compuesto de Cu(BrHAP) 2 indujo características morfológicas de la apoptosis de manera dependiente del tiempo. Figura 4, demostró que no existe parada del ciclo celular en las fases S/M. La falta de parada del ciclo celular en las fases S/M sugirió una posible parada del ciclo celular en las fases G 1 / G 2. Para determinar la fase exacta detenida, se analizaron células HT-29 tratadas para la progresión del ciclo celular utilizando citometría de flujo. Como era de esperar, no hubo parada significativa en las fases S/M. Mientras tanto, se observó parada significativa del ciclo celular en la fase G 1 para las células HT-29 después de 24 y 48 h de tratamiento (Figura 5). Ensayo. La capacidad antioxidante se midió mediante ensayo ORAC, que es el único ensayo que implica el uso de peroxil radical como actividad prooxidante y cuantificada a través del área bajo la técnica de curva (AUC). En nuestro experimento, la quercetina se utilizó como control positivo. El resultado demostró que Cu(BrHAP) 2 mostró actividad antioxidante baja a moderada en comparación con la quercetina (Tabla 2) Las células HT-29 fueron tratadas con diferentes concentraciones de Cu(BrHAP) 2 durante 24 h y teñidas con tinte DHE para determinar la influencia del compuesto base de Schiff en la producción de ROS. Las intensidades de fluorescencia de la oxidación de DHE por ROS fueron cuantificadas utilizando un lector de microplacas de fluorescencia. Como se muestra en la Figura 6, la exposición al compuesto base de Schiff causó una elevación significativa en los niveles de ROS de las células HT-29 tratadas a la concentración de 6,25 g/ml. Para investigar la inducción de la apoptosis por Cu(BrHAP) 2, los cambios morfológicos nucleares en las células HT-29 fueron analizados mediante la detección de condensación nuclear. Como se muestra en la Figura 7, la tinción de Hoechst 33342 demostró que la condensación nuclear, que está directamente relacionada con los cambios de la cromatina apoptótica, surgió en algunas células después del tratamiento con Cu(BrHAP) 2. Mientras tanto, la permeabilidad de las células tratadas también fue elevada. Las mitocondrias son la principal fuente para la producción de ROS y trifosfato de adenosina (ATP) y son críticas para controlar la muerte y supervivencia de las células. La reducción de la intensidad de fluorescencia representada en la Figura 6 Cu(BrHAP) 2 desencadenó la translocación de citocromo de mitocondria en el citosol durante la apoptosis en células HT-29. Activación. La elevación en la producción de ROS asociada con un colapso en MMP puede conducir a la activación de Para investigar la activación de la caspasa, las intensidades bioluminiscentes que representan caspas 3/7, 8 y 9 actividades fueron cuantificadas en células HT-29 tratadas con diferentes concentraciones de Cu(BrHAP) 2 durante 24 h. Como se muestra en la Figura 8, se observó una elevación significativa en la actividad de caspasa-3/7 en la concentración de 6,25 g/mL y caspasa-9 en las concentraciones de 6,25 y 12,5 g/mL en las células tratadas de Cu(BrHAP), mientras que no se detectó ningún cambio significativo en la actividad de caspasa-8 entre células HT-29 tratadas y no tratadas. Así, la apoptosis inducida por el compuesto base de Schiff en células HT-29 posiblemente se media a través de la vía intrínseca, pero no de la vía extrínseca. es un factor de transcripción que tiene un papel crítico en la La activación NF-B y la translocación al núcleo para permitir la actividad de unión al ADN y facilitar la expresión génica diana están mediadas por citocinas inflamatorias como el factor de necrosis tumoral (TNF-). El compuesto base de Cu(BrHAP) 2 Schiff no mostró ningún efecto inhibidor en la translocación del TNF--NF-B estimulado en células tratadas con HT-29, y el TNF--estimulación llevó a la translocación del NF-B del citoplasma al núcleo (Figura 9). La carcinogénesis es un proceso multietapa en el que la proliferación celular no regulada, así como una reducción en la incidencia de apoptosis, sirve como caracterización inicial para su progresión [21]. Uno de los procedimientos de defensa en organismos multicelulares es la destrucción del desarrollo celular indeseable, que se define como muerte celular programada. La apoptosis es el mecanismo de muerte celular programado más notorio y se caracteriza por cambios morfológicos distintos como la permeabilidad de la membrana, la contracción celular, la interrupción de la membrana mitocondrial y la condensación de la cromatina [22, 23]. La interrupción de la homeostasis celular entre la muerte celular y la proliferación celular conduce a la incidencia de cáncer [24], y se sabe que los agentes que pueden inducir apoptosis tienen efectos potenciales contra el cáncer [25, 26]. Las vías de apoptosis son objetivos eficaces para la terapia del cáncer así como la quimioprevención. Se han determinado numerosos fármacos quimiopreventivos para regular eventos clave o moléculas en las vías de transducción de señales que inducen apoptosis [27]. En el presente estudio, se evaluó el compuesto básico Cu(BrHAP) 2 Schiff por su Las células HT-29 se han caracterizado recientemente como un modelo adecuado para estudios de cáncer de colon [28] [30]. células de cáncer de colon humano de forma dependiente del tiempo y de la dosis. Mientras tanto, la línea celular de colon no tumorígena (CCD 841) no mostró citotoxicidad después del tratamiento con el compuesto. El efecto citotóxico del compuesto Cu(II) también fue confirmado mediante la medición del nivel de liberación de LDH de las células tratadas. La liberación de LDH significativamente elevada mostró que la citotoxicidad del compuesto Cu(BrHAP) 2 posiblemente ocurrió a través de la pérdida de integridad de la membrana, ya sea mediante la activación de la apoptosis o la vía de necrosis [31]. La observación de la apoptosis temprana y la apoptosis tardía mediante microscopía fluorescente y doble tinción AO/PI después del tratamiento de las células HT-29 con el compuesto incluyó algunos signos de apoptosis, a saber, contracción citoplasmática, blebbing de membrana y fragmentación del ADN [32, 33]. Encontramos que el número de células con características de apoptosis temprana fue mayor en etapas tempranas del tratamiento. Sin embargo, cuando el tiempo de tratamiento aumentó a 72 h, las caracterizaciones de apoptosis tardía o necrosis fueron dominantes entre las células HT-29 tratadas. La detección concomitante de apoptosis tardía o necrosis es científicamente posible porque las células HT-29 tratadas sometidas a apoptosis pueden haber progresado en necrosis debido a la incubación prolongada con el compuesto base Schiff. Para dilucidar los mecanismos subyacentes al efecto antiproliferativo observado del complejo Cu(II) sobre las células cancerosas, se analizó la distribución del ciclo celular utilizando la tinción BrdU y Phospho-Histone H3 junto con la citometría de flujo [34] [35]. El tinte BrdU puede unirse al ADN sintetizado de las células replicantes durante la fase S del ciclo celular, mientras que las células tinturas Phospho-Histone H3 en diferentes estadios mitóticos. El ciclo celular resulta del ensayo de doble tinción BrdU y Phospho-Histone H3 indicó que no hubo cambios significativos en el número de células en las fases S/M después de la exposición de células HT-29 al compuesto base Schiff, lo que sugiere la posibilidad de que las células fueran detenidas en la fase G 1 o G 2 del ciclo celular. Así, el análisis de citometría de flujo del ciclo celular fue realizado para determinar la fase exacta detenida, y los resultados demostraron una parada significativa del ciclo celular en G 1 después de 24 y 48 h de tratamiento, sugiriendo supresión proliferativa por inducción de apoptosis [37, 38]. La perturbación del potencial de membrana mitocondrial es uno de los eventos intracelulares más tempranos que ocurren después de la inducción de la apoptosis [39]. Como fuente principal de ROS celular y trifosfato de adenosina (ATP), las mitocondrias son los reguladores clave de los mecanismos que controlan la supervivencia o muerte de las células. Después de confirmar que el compuesto base de Cu(BrHAP) 2 Schiff no tenía capacidad antioxidante significativa en células cancerosas HT-29 utilizando el ensayo ORAC, se analizó la inducción de la producción de ROS en células tratadas. De acuerdo con nuestro estudio, después de exponer el compuesto Cu(II) a células HT-29 y analizar los niveles de ROS, se demostró que el nivel de ROS en células HT-29 tratadas fue significativamente elevado a una concentración compuesta de 6,25 g/ml. En la apoptosis inducida por metales, las mitocondrias tienen el papel crucial en mediar la apoptosis a través de ROS inducida por metales [40]. La vía de señalización intrínseca o dependiente de mitocondrial involucra diferentes factores de estímulos no mediados por receptores que inducen señales intracelulares. Estas señales, principalmente a través de la proteína p53, actúan sobre los eventos mitocondrializados. La producción excesiva de ROS es una señal negativa que puede resultar en el fracaso de la supresión de los factores antiapoptoticos, desencadenando así la apoptosis. Por lo tanto, utilizamos sondas fluorescentes de potencial de membrana mitocondrial (MMP) para examinar el efecto de la producción elevada de ROS en la función de las mitocondrias en células tratadas HT-29. Como se muestra en la Figura 7, los cambios en el MMP después del tratamiento con el compuesto base Cu(BrHAP) 2 Schiff que llevó a la despolarización de la membrana de las mitocondrias fueron demostrados por la liberación de Rhodamine 123 al citoplasma de la matriz mitocondria. El resultado implica que la inducción de los complejos base de Schiff por Cu(II) Schiff puede estar asociada con la vía mitocondrial [26, 41, 42]. Una de las señales importantes para iniciar el procedimiento de la apoptosis es citocromo citosólico. La liberación de citocromo en el citosol y la reducción de sus niveles en las mitocondrias se han demostrado como resultado de los cambios en el MMP [30]. Como el resultado ilustrado, el compuesto de base sintético Schiff también llevó a un aumento en el nivel de citocromo en el citosol en comparación con el control. La producción excesiva de ROS de mitocondrias y el colapso de MMP puede activar las moléculas de caspasa aguas abajo y consecuentemente conducir a la muerte celular apoptótica. Después de la unión del citocromo al factor activador apoptótico-1, la caspasa-9 se activa a través de la formación de apoptosomas, que conduce a la caspasa activa-3/7, la caspasa más eficaz con muchos objetivos celulares [43]. En la vía extrínseca, la apoptosis es mediada por receptores de muerte. Como ejemplo, el ligando FAS interactúa con el receptor FAS, lo que conduce a la activación de la caspasa-8 [44]. La activación Caspasa-8 se corta y activa caspas del verdugo aguas abajo como caspasa-3/7 [45, 46]. En nuestro estudio, el compuesto base Cu(BrHAP) 2 Schiff indujo una elevación significativa en las caspas 3/7 y 9 actividades en comparación con el control. Mientras tanto, no hubo activación de caspasa-8, lo que sugiere que la apoptosis inducida en las células HT-29 fue mediada a través de la vía mitocondrial intrínseca, pero no la vía extrínseca, receptor de muerte ligada a la caspasa-8. La evidencia de soporte de liberación de LDH, producción de ROS, supresión de MMP, elevación en el nivel de citocromo, y activación de caspas 3/7 y 9 demostró la prometedora actividad anticancerosa del compuesto base de Cu(BrHAP) 2 Schiff contra la línea celular de cáncer de colon HT-29 a través de la vía mitocondrial intrínseca.
question: ¿Cuál es el tercer cáncer más prevalente en mujeres en los Estados Unidos?
answers.text: cáncer colorrectal