context: Neutralización Interfiriendo Anticuerpos: ¿Un “Novela” Ejemplo de Disfunción Inmune Humoral Facilitando la Escape Viral? https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3499828/SHA: f4f75af02b7226c5b2363de1a75821a4b9b20412Autores: Nicasio, Mancini; Sautto, Giuseppe; Clementi, Nicola; Diotti, Roberta A.; Criscuolo, Elena; Castelli, Matteo; Solforosi, Laura; Clementi, Massimo; Burioni, RobertoFecha: 2012-09-24DOI: 10.3390/v4091731Licencia: cc-byAbstract: La respuesta inmune contra algunos patógenos virales, en particular aquellos que causan infecciones crónicas, es a menudo ineficaz a pesar de una respuesta neutralizante humoral robusta. Se han descrito varios mecanismos de evasión capaces de subvertir la actividad de los anticuerpos neutralizantes (nAbs), entre los que se encuentra la hipótesis de la excitación de los Abs no neutralizantes e interferentes. Recientemente, este mecanismo de evasión ha adquirido un interés creciente por su posible impacto en los nuevos enfoques antivirales terapéuticos y profilácticos basados en nAb. En esta revisión, ilustramos los mecanismos de interferencia mediada por Ab y los patógenos virales descritos en la literatura como capaces de adoptar esta estrategia de evasión “novela”. Texto: Los virus hipervariables adoptan varios mecanismos para hacer frente a la respuesta inmune humoral del huésped. El mecanismo más estudiado es la acumulación de mutaciones puntuales en regiones inmunodominantes de proteínas superficiales, lo que ya no son reconocibles por anticuerpos neutralizantes (nAbs) [1] [2] [4]. Otros mecanismos de escape que involucran proteínas superficiales incluyen la glicosilación de residuos funcionalmente pivotales (el escudo de glicanos) o su asociación con componentes séricos del huésped (por ejemplo, lipoproteínas) con el fin de ocultarlos del sistema inmunitario [5] [6] [7] [9] (Figura 1A ). Otros mecanismos de escape conocidos son: i) una especie de vía protegida de propagación del virus, como la transmisión de células a células [10, 11] ; ii) la mímica molecular entre las proteínas virales y los autoantígenos del huésped o iii) la estimulación inducida por virus de anticuerpos subfamiliares restringidos (Abs), ambas con implicaciones obvias en enfermedades autoinmunes inducidas por virus como la crioglobulinemia para el VHC [12] [13] [14]. El posible efecto de interferencia de los abs no neutralizantes (nonabs) fue propuesto originalmente por Dul en 1956 [15], para explicar la aparente inhibición de la neutralización del virus ejercida por algunas muestras séricas. Recientemente, este mecanismo de escape inmune propuesto ha readquirido un interés relevante, especialmente teniendo en cuenta el uso clínico potencial de nAbs antiinfeccioso neutralizante o el diseño de aproximaciones vaccinales basadas en epitopes [16]. Hasta la fecha, se han propuesto dos mecanismos principales para los efectos de interferencia de nonAbs: (i) interferencia de unión directa por obstáculo esterínico, (ii) inhibición de la unión tras cambios conformacionales del antígeno viral unido por interferir nonAbs. Además, se ha especulado que, incluso cuando no interfiere directamente con la unión de nAbs, nonAbs puede conducir también a la mejora de la infección viral a través de la interacción con receptores Fc o receptores de complemento [17]. En general, los no-nAbs posiblemente provocados en individuos infectados o vacunados pueden interferir con el potencial neutralizante de los nAbs. En más detalle, estos Abs interferentes son capaces de unirse a proteínas virales a nivel de inmunodominante pero funcionalmente irrelevantes regiones de proteínas virales, disminuyendo o bloqueando la unión de nAbs a epítopos virales cruciales (por ejemplo, dominios de unión a receptores) (Figura 1B ) [18]. Un anticuerpo monoclonal antiviral candidato (mAb) o preparación policlonal no debe ser sometido a este mecanismo de interferencia, o a los otros mecanismos de escape mencionados anteriormente. Del mismo modo, nuevos enfoques vaccinales deben evitar la excitación de los Abs interferentes que incluso podrían empeorar la enfermedad en caso de una infección real. En los siguientes párrafos discutimos estos mecanismos con ejemplos específicos de su papel en el El virus de la hepatitis C (VHC) es un virus envuelto de ARN de sentido positivo que causa hepatitis crónica en la mayoría de los pacientes no tratados (alrededor del 80%), con el consiguiente riesgo de desarrollar cirrosis y carcinoma hepatocelular. Más de 170 millones de personas (2%-3% de la población mundial) están infectadas en todo el mundo, y todavía no se dispone de una vacuna protectora, mientras que las opciones terapéuticas siguen siendo limitadas y no son completamente eficaces [19]. Por estas razones, la infección crónica por VHC representa la principal indicación de trasplante hepático en Europa y Estados Unidos. Además, los receptores trasplantados están sujetos a un alto riesgo de reinfección del injerto y a una progresión más severa y rápida de la enfermedad hepática [20]. Representación esquemática de los mecanismos de escape viral de la respuesta inmune humoral frente a proteínas virales superficiales: mutaciones puntuales en regiones inmunodominantes, glicosilación de residuos funcionalmente pivotales (escudo glucano) de las proteínas superficiales virales y asociación del virus con los componentes séricos del huésped (por ejemplo, lipoproteínas) (B) Mecanismos de interferencia en la neutralización del virus mediado por nAb mediante la unión de los Abs non-n-n-Abs interferentes: los Abs noneutralizantes/interferentes pueden interferir en la unión de nAbs por un obstáculo estéril tras una ocupación espacial de su epítopo o una competencia por la unión; de lo contrario, la unión de los Abs noneutralizantes/interferentes puede inducir cambios conformacionales en la proteína viral, afectando así la unión de nAbs al El genoma del VHC codifica una sola poliproteína de unos 3.000 aminoácidos que es procesada por las proteasasas del huésped y virales en al menos 3 proteínas estructurales (núcleo, E1 y E2) y 7 no estructurales (p7, NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A y NS5B) [21, 22]. En particular, las glicoproteínas de membrana de tipo I E1 y E2 forman heterodímeros no covalentes en la superficie de la envoltura del VHC y permiten que la endocitosis viral mediada por clatrina interactúe consecutivamente con varios factores celulares de entrada tales como los glicosaminoglicanos [23] [24] [25], el receptor de lipoproteínas de baja densidad [26, 27], el receptor de la clase B del escavenger tipo I [28], el CD81 de tetraspanina [29], las proteínas de unión estrecha claudin-1 y ocludin, y el recientemente descrito receptor de absorción de colesterol Niemann-Pick C1 similar a [30] [31] [33] [34]. El desarrollo de enfoques profilácticos y terapéuticos eficaces contra este virus se ha visto obstaculizado principalmente por su alta tasa de mutación que da lugar a variantes virales altamente diversificadas, incluso dentro de un solo paciente (cuasiespecies) [35]. De hecho, siete genotipos principales, que varían hasta un 30% en la secuencia de nucleótidos, y varios subtipos son reconocidos, cada uno caracterizado por diferentes características clínicas tales como diferentes tasas evolutivas a las enfermedades hepáticas crónicas o diferente respuesta a las terapias antivirales disponibles [21, 36, 37]. El desarrollo y uso de mAbs anti-VHC capaces de dirigir regiones estructural y funcionalmente conservadas de las partículas virales altamente variables se consideran como nuevas herramientas terapéuticas [38] [39] [40] [42] [43]. En particular, se ha demostrado que la producción de nAbs potentes en infecciones Además, en los chimpancés vacunados, una respuesta sostenida de Ab a las glicoproteínas envolventes E1 y E2 se correlaciona con una viremia reducida [45], mientras que la administración pasiva de mAbs neutralizante en un modelo de infección de ratón quimérico uPA-SCID fue capaz de proteger contra el desafío con un inóculo de cuasiespecie del VHC [46]. Los mAbs ampliamente neutralizantes humanos dirigidos contra la glicoproteína superficial E2 del VHC (HCV/E2) se dirigen típicamente contra regiones funcionalmente importantes dentro del sitio de unión CD81 [47] [48] [48] [50] [51] [52] [53] [54], así como contra otros residuos críticos altamente conservados entre diferentes genotipos [55, 56]. Este aspecto es crucial para el posible uso terapéutico in vivo de estos mAbs, pero puede no ser suficiente ya que recientemente se ha supuesto que otras poblaciones nonAb pueden interferir con su actividad neutralizante [39, [57] [58] [59] [61]. De hecho, en los individuos persistentemente infectados contra el VHC/E2 los abdominales cruzados generalmente son provocados en un título bajo y en una etapa tardía de la infección, lo que conduce a un pobre control de la viremia, mientras que el uso in vivo de preparados de inmunoglobulina policlonal anti-VHC tanto en chimpancés como en humanos ha sido decepcionante, y los estudios clínicos han demostrado que estos preparados no previenen infecciones recurrentes en pacientes después del trasplante hepático [63]. A este respecto, un documento reciente ha sugerido que el efecto de algunos de estos nAbs, dirigidos contra residuos funcionalmente importantes involucrados en la unión viral al CD81 (dentro del epítopo I, que abarca residuos aminoácidos 412-426), podría verse obstaculizado por la presencia de residuos no nAbs vinculantes dentro del epítopo II en el VHC/E2 (residuos aminoácidos 434-446) [58]. En particular, el bloqueo de estos Abs específicos del epítopo II interferentes no sólo aumentó el título neutralizante del suero que contiene tanto el epítopopopo I como el Abs específico del epítopo II, sino que también descubrió una respuesta más amplia neutralizante del genotipo cruzado [58]. Sin embargo, el papel (y la existencia misma) de estos Abs interferentes en la influencia de la infección por medio de ensayos de neutralización in vitro utilizando VHC derivados del suero del genotipo 4a y Abs policlonales derivados de cabras inmunizadas con diferentes péptidos conservados que abarcan residuos aminoácidos 412-419, 430-447 y 517-531 de glucoproteína VHC/E2 [64]. En particular, este grupo encontró una actividad interferida ejercida por los débiles neutralizantes 430-447-eliminados Abs sobre la actividad neutralizante tanto de la 412-419 como de la 517-531-eliminada Abs [64]. Curiosamente, de acuerdo con el modelo putativo para plegado E2, las tres regiones mencionadas estarían unas junto a otras en la glucoproteína [48]. Por lo tanto, esta predicción estructural posiblemente apoya el efecto interferente del epitopope II dirigido Abs. Sin embargo, mientras Con este fin, la disponibilidad de cristal E1-E2 sin duda acelerará la dilucidación fina de las proximidades espaciales de neutralización e interferencia de mAbs en la estructura E1-E2 y, en consecuencia, el progreso de la vacuna basada en la estructura. Además, cabe destacar que los individuos con Abs que se dirigen a la región de E2 que abarca el epítopo I albergan frecuentemente Abs que reconocen la región que contiene el epítopo II, confirmando así la co-inmunogenicidad de estos epitopes [58]. Por último, se ha demostrado tanto una baja prevalencia (menos del 2,5%) y un bajo título de Epítopo I-reactiva Abs en suera de infecciones crónicas y agudas resueltas, apoyando así la hipótesis de un enmascaramiento conformacional por regiones adyacentes como la que contiene el epítopo II [65]. Al principio se planteó la idea de que una vez que el epítopo II se une a un Ab, el sitio del epítopo I se enmascara y ya no puede ser reconocido por nAbs específicos. De hecho, el agotamiento de Abs al epítopo II en plasma de un paciente con VHC crónicamente infectado y chimpancés vacunados recuperó una actividad neutralizante de otro genotipo cruzado indetectable [58]. Otra posibilidad es que la unión inicial de Abs a la región que contiene el epítopo II puede inducir cambios conformacionales en E2 que inhiben la unión por el epítopopeo I-dirigido Abs, como recientemente sugirió Lapierre et al. para otros anti-HCV/E2 Abs [66]. Por el contrario, estas conclusiones no fueron apoyadas en un estudio reciente de Tarr et al. utilizando murina (AP33) y ratas (2/69a) mAbs, así como fracciones de inmunoglobulina humana de afinidad purificada en péptidos lineales que representan dominios distintos VHC/E2 agrupados dentro de las regiones 412-426 y 434-446 [67]. Aunque confirmando la co-inmunogenicidad previamente reportada de estas dos regiones, los autores no demostraron ninguna inhibición entre estos dos grupos de Abs. Teniendo en cuenta sus resultados, los autores sugirieron de hecho que la interferencia de non-Abs, al menos en la región que abarca residuos 434-446, no es un mecanismo posible para la persistencia del VHC en individuos infectados crónicamente, como había sido propuesto originalmente por Zhang y otros. De acuerdo con los hallazgos de Tarr y colegas, Keck et al. describieron anti-HCV/E2 mAbs encuadernación epítopos Estos mAbs son ampliamente neutralizantes y no conducen a mutantes de escape viral, demostrando la importancia funcional de sus epítopos. Los autores concluyen que no todos los Abs dirigidos contra el epítopo II están interfiriendo, pero también especulan que la actividad de interferencia podría limitarse a Abs reconociendo epitopes lineales dentro de él [56]. Recientemente, hemos confirmado en parte las observaciones de Zhang et al. utilizando un panel de anti-HCV/E2 mAbs: el ratón bien caracterizado anti-HCV/E2 mAb AP33, cuyo epítopo abarca el epítopo I (residuos aminoácidos 412-423), y un anti-HCV/E2 mAb humano débilmente neutralizante (llamado e509), cuyo epítopo abarca el epítopo II [68]. En particular, encontramos que e509 es capaz de interferir con la actividad neutralizante de AP33 en el virus del genotipo 1a (cepa H77). En cambio, encontramos que e509 no interfiere mínimamente con la actividad de otros dos seres humanos ampliamente neutralizantes anti-VHC/E2 mAbs, llamados e20 y e137 [49, 69]. Curiosamente, encontramos que tanto e20 y e137 se unen también a residuos dentro del epitope II, a una afinidad más alta que e509, desplazándolo así del epitope interferente y, por lo tanto, manteniendo inalterada su actividad neutralizante. Así, en nuestra opinión, las observaciones divergentes descritas anteriormente pueden depender de las diferentes especificidades Ab presentes en las preparaciones policlonales utilizadas y, probablemente, también en los diferentes genotipos VHC que infectan a los pacientes estudiados [68 Además, las diferentes estrategias adoptadas para aislar el epítopo I y el epítopo II Abs, seguidas en los estudios anteriores, podrían explicar los diferentes datos obtenidos. De hecho, las inmunoglobulinas purificadas en péptidos que representan distintas regiones del VHC/E2 [67] están obviamente dirigidas contra epítopos lineales; estos preparados son ciertamente diferentes de mAbs clonados utilizando una glucoproteína VHC/E2 de larga duración, que son más probablemente dirigidas contra epítopos conformacionales incluyendo también residuos fuera de las regiones lineales investigadas [54]. En resumen, en el campo del VHC varios trabajos apoyan la existencia de poblaciones de Ab que interfieren e hipotetizan su posible papel en la persistencia del VHC, como se demostró con preparados de inmunoglobulina derivados del plasma humano, mAbs humanos y sura de animales vacunados con pé El posible mecanismo que conduce a la interferencia sigue siendo controversial, pero tanto el obstáculo esterico directo como los cambios conformacionales inducidos por antígenos han sido hipotetizados. Por otro lado, otros documentos no confirman estos hallazgos, sugiriendo que el epítopo interferente putativo II puede ser dirigido por Abs dotados de una actividad ampliamente neutralizante. Nuestro artículo reciente, utilizando bien caracterizado mAbs [68], muestra que los Abs interferentes existen pero que su efecto global puede estar sesgado por la presencia de nAbs con diferentes características de unión y por el genotipo del VHC infectado. Los trabajos futuros que investigan el papel in vivo de estas subpoblaciones interferentes en la persistencia del VHC sin duda serán muy útiles. Los virus de la gripe circulan por todo el mundo en depósitos de animales, especialmente aves acuáticas, que pueden afectar a los seres humanos de cualquier grupo de edad. El tipo más clínicamente relevante y variable es la gripe A, que se divide en varios subtipos, según la característica antigénica de las dos glicoproteínas envolventes, y causa infecciones epidémicas y pandémicas [70]. Las epidemias anuales recurrentes de gripe se asocian con morbilidad y mortalidad significativas, particularmente entre los grupos de riesgo (como personas de edad avanzada o con enfermedades crónicas, mujeres embarazadas y niños) [71] ; la propagación mundial de virus de gripe pandémica puede causar millones de muertes [72]. Dentro del virio de gripe envuelto ocho segmentos de ARN de una sola cadena negativa están protegidos por la proteína nucleocápsida, formando la ribonucleoproteína (RNP). Los primeros seis segmentos de ARN cada uno para una sola proteína: PB2, PB1 y PA (todos constituyen la polimerasa ARN dependiente de ARN), la hemaglutinina (HA), la nucleoproteína (NP), la neuraminidasa (NA). Los últimos dos segmentos cada uno para dos proteínas diferentes: las proteínas de la matriz (M1 y M2) y las proteínas no estructurales (NS1 y NS2). Tres proteínas diferentes (HA, NA y M2) están presentes en la envoltura viral. La glucoproteína HA es la más abundante y es el objetivo principal de la respuesta inmune humoral. Junto con la glucoproteína transmembrana NA, HA es capaz de provocar una respuesta inmune subtipo-específica que es totalmente protectora dentro, pero sólo parcialmente protectora a través de diferentes subtipos [73]. La HA se sintetiza como precursor inactivo que pasa a su forma activa sobre la escisión por proteasasas de células huésped, y que está presente en la membrana viral como homotrimeros. Los recortadores de HA se unen a moléculas de ácido siálico 2,6 vinculadas a proteínas de membrana celular o lípidos a través de dominios ubicados en la cabeza globular de cada monómero. Posteriormente, la envoltura viral se fusiona por mecanismos dependientes de clatrina e independientes con la membrana de vesícula endocítica a través del péptido de fusión de HA ubicado en la región madre de cada monómero. Como consecuencia, los componentes virales se liberan en la célula huésped y pueden subvertir las capacidades sintéticas de la célula huésped para la producción y liberación de partículas de progenie [74]. La inmunidad humoral juega un papel importante en la defensa del huésped contra la infección por el virus de la gripe, ya que la mayoría de los virus de la gripe neutralizan el Abs y, por lo tanto, limitan la infección [75] [77] [78]. De hecho, un gran cuerpo de trabajos experimentales sugiere que la oclusión del sitio de unión del receptor en la HA por Abs es el principal mecanismo de neutralización viral de la gripe. Menos común, pero más ampliamente nAbs puede neutralizar el virus de la gripe al inhibir la fusión de la envoltura viral con la membrana endocítica-vesícula [50, [79] [80] [81] [82] [83]. Los cambios aminoácidos en la HA, más frecuentes en la cabeza globular inmunodominante, tienen efectos complejos sobre la neutralización viral por Abs, generalmente permitiendo que las variantes mutadas escapen de Los estudios clásicos utilizando mAbs de ratón neutralizante identificaron cinco sitios antigénicos distintos (A-E) en la región globular de la cabeza HA1 en la estructura tridimensional de la molécula H3 HA (A/Hong Kong/1/68) [85] [86] [87] así como en los subtipos H1 [88] y H2 [89]. Durante los primeros días de una infección, el título de nAb es a menudo bajo, mientras que el título de nonAbs es más alto y puede desempeñar un papel en el resultado de una infección, como se ha observado recientemente en los pacientes infectados por el virus pandémico influenza A/2009 H1N1 por To et al. [90]. En particular, este grupo encontró que la cantidad, así como la avidez, de nonAbs eran mayores para los pacientes con enfermedad grave que para aquellos con enfermedad leve. Los autores concluyeron que una respuesta no-nAb exagerada durante la etapa temprana de la infección se asoció con enfermedad grave [90]. Además, los autores especularon que los no-nAbs presentes en los sueros de los pacientes durante la etapa temprana de la infección eran probablemente preexistentes o el resultado de una respuesta inmune humoral heterosubtípica secundaria contra epítopos más conservados en varias proteínas de la gripe [91]. Esta respuesta humoral temprana puede ser provocada dentro de unos pocos días después de la infección, debido a la inmunidad por la exposición previa a epitopos virales compartidos. De hecho, las proteínas matrices y nucleoproteínas han conservado secuencias aminoácidos, y por lo tanto Abs contra estas proteínas de la infección anterior del virus de la gripe estacional o vacunación podría ser inducido [92]. De hecho, tras la infección por el virus de la gripe, las células B de la memoria pueden proliferar rápidamente y generar una gran cantidad de estas avidez non-Abs, especialmente en pacientes con enfermedad grave, lo que concuerda con la observación de que el número de células B de sangre periférica es mayor en pacientes con enfermedad grave que en aquellos con enfermedad leve durante la fase temprana de la infección. El mecanismo de interferencia de neutralización de Ab también ha sido especulado indirectamente por Ndifon et al., quienes observaron que algunos cambios aminoácidos en la HA en realidad aumentan la eficiencia de neutralización de variantes de escape por Abs previamente generados, aunque no influyan directamente en su unión [93]. En detalle, este grupo sugirió que el aumento de la actividad neutralizante después de la mutación de HA podría ser el resultado de una menor interferencia estéril entre Abs. Específicamente, si hay una competencia esterical para la unión a la HA por Abs con diferente eficiencia de neutralización, entonces una mutación que reduce la unión de Abs con baja actividad neutralizante podría aumentar la neutralización viral general. De hecho, al igual que lo que se ha especulado para el VHC, Abs que se unen a los epítopos de HA ubicados a una distancia del sitio de unión al receptor puede por lo tanto no ocupar este sitio de manera eficiente, lo que conduce a una disminución de la neutralización viral. Además, se ha demostrado que Abs que se unen a un determinado epítopope de HA puede impedir una mayor unión de Abs a otros epítopos de la misma proteína de HA, e incluso a los epítopos encontrados en proteínas de HA adyacentes. Las observaciones anteriores sugieren que Abs que se unen a los epítopos de baja eficiencia de neutralización de Considerando la estructura de la HA, la unión de los Abs interferentes estaría en el nivel del epítopo C y E situado lejos del sitio de unión del receptor en la cabeza globular de la HA. Sin embargo, la unión de estos Abs puede influir en la unión de nAbs a los epítopos A, B y D, situados más cerca del sitio de unión del receptor [93]. A este respecto, los cambios en el epítopo A, B y D podrían ser muy favorecidos por la selección natural, mientras que los cambios en los epítopos C y E podrían ser desfavorables a los virus de la gripe [93]. De hecho, los obstáculos estericos por Abs que unen estos epítopos podrían reducir en gran medida el grado de mutación necesario para que un virus evada la neutralización por el huésped Abs. En consecuencia, una disminución en la afinidad de Abs por los epítopos con una eficiencia de baja neutralización podría conducir a un aumento en la neutralización viral. Esto sugiere un posible enfoque para diseñar vacunas de "baja interferencia" que podrían disminuir en gran medida el impacto de la interferencia Ab. Estos inmunogenes son modificados genéticamente desde el objetivo viral sólo en el nivel de los epítopos de baja eficiencia de neutralización. De hecho, los abs inducidos por la vacuna sólo reconocen epitopes de alta eficiencia de neutralización del objetivo y los abs inducidos por la cepa vacuna de baja interferencia tienen baja afinidad por los epítopos de baja eficiencia de neutralización de la cepa de virus circulante objetivo. En consecuencia, limitando la interferencia mediada por Ab, el virus diana no puede escapar del Abs inducido por la vacuna a través de pequeños cambios epitópicos. Alternativamente, las vacunas podrían ser diseñadas para incluir solamente aquellas regiones que corresponden a epítopos con alta eficiencia de neutralización. Además, los fármacos antivirales podrían ser diseñados para incluir proteínas virales que transportan modificaciones a nivel de epítopos de alta eficiencia de neutralización; estas proteínas "decoy" competirían con el virus por la unión a la eficiencia de baja neutralización Abs de una manera similar a la que juegan los inhibidores de la neuraminidasa. En síntesis, la disponibilidad de la estructura cristalina de HA ha ayudado a confirmar la existencia y explicar los mecanismos de interferencia por anti-HA Abs no o débilmente neutralizantes. [90] evidenciando que una respuesta non-Ab durante la fase temprana de la infección está asociada con una enfermedad grave, puede ser la primera prueba del papel de estos Abs interferentes en el curso de una infección natural. Los [94]. Más de 8.000 casos, incluyendo casi 800 muertes, fueron reportados durante el período del brote y el aumento de la edad y la comorbilidad fueron factores de riesgo de enfermedad grave y muerte [95]. Desde 2003, sólo se han reportado casos esporádicos; sin embargo, la posibilidad de que brotes de SARS puedan reaparecer de forma natural o ser liberados deliberadamente es un problema de salud pública. Al igual que los virus de la gripe, el SARS-CoV circula en depósitos de animales, con murciélagos que se cree que transmiten el virus a pequeños mamíferos con exposición a estos pequeños animales como fuente de infecciones humanas [96]. La enfermedad clínica es similar a otras infecciones respiratorias agudas graves, incluyendo la gripe, y la definición de caso SRAS incluye criterios clínicos, epidemiológicos y de laboratorio [97, 98]. La organización básica del genoma y el ciclo replicativo es similar para todas las CoVs. Gene 1 codifica todas las proteínas predichas de replicase/transcriptasa, que se traducen a partir de ARN genómico de entrada, mientras que los genes 2-9 codifican proteínas estructurales y accesorias, incluyendo la proteína de pico de sobre (S), que se traducen a partir de ARNm subgenómicos separados. Las CoVs utilizan un mecanismo discontinuado único para transcribir una serie de ARNm subgenómicos progresivamente más grandes, y cada una contiene una secuencia de ARN líder que se deriva del extremo 5' del genoma [99]. La proteína S de CoVs se inserta en la envoltura de los eventos de unión y fusión del virión necesarios para la infección, y es el objetivo principal de la inmunidad protectora humoral [100]. Aunque la proteína S de SARS-CoV (SARS-S) comparte poca identidad aminoácida (aproximadamente 20%-27%), comparte características estructurales comunes con las proteínas S de los otros miembros de la familia Coronaviridae. La proteína SRAS-S es una glicoproteína transmembrana tipo I de aproximadamente 1.255 aminoácidos en longitud y dividida en dos dominios funcionales: S1 (residuos aminoácidos 15-680) y S2 (residuos aminoácidos 681-1,255) [101]. En muchas CoVs, la proteína S se escinde durante la biogénesis y estos dos dominios funcionales se mantienen juntos no covalentes; sin embargo, como en el caso de la CoV humana 229E, la proteína S no se escinde en el SARS-CoV [102]. El dominio S1 forma una estructura globular que media la interacción de la proteína S con su receptor principal, la enzima de conversión de la angiotensina 2 (ACE2), mientras que el dominio S2 media la fusión y contiene el péptido de fusión putativa y dos regiones helicoidales conservadas (HR1 y HR2) que sobre la escisión por la catepsina proteasa endosomal L forman el núcleo de fusión de seis paquetes de hélice [103]. Sin embargo, tal estrategia plantea un dilema singular para las COV, ya que los protocolos de vacunación anteriores han puesto de relieve la posibilidad de una mejora inmunomediada de la enfermedad [104]. A este respecto, el grupo de Zhong et al. investigaron el papel de los ABS interferentes no neutralizantes también en el caso de la infección por SARS-CoV [105]. En particular, encontraron que dos mAbs dirigidos contra la región que abarca residuos aminoácidos 491-510 de SARS-S (341C y 540C) actúan sinérgicamente para inhibir in vitro la infección por SARS-CoV, mientras que un mAb (240C) no neutralizante, cuyo epítopo abarca la región mencionada, interrumpió la actividad neutralizante de 341C y 540C [105, 106]. Al analizar la estructura cristalina de la proteína SARS-S, los autores propusieron una posible explicación a lo observado, evidenciando que los epítopos de todos los mAbs están estrechamente empaquetados y proximales entre sí pero distales del sitio de unión del receptor ACE2 [105]. Además, el epítopo del mAb 240C no neutralizante se superpone parcialmente por al menos 2 aminoácidos (P507 y A508) con el del mAb 341C neutralizante. Como consecuencia, mAb 240C podría inhibir la unión de mAb 341C de manera relacionada con el equilibrio. Por otro lado, los autores encontraron que los 240C mAb podrían interferir estericamente con la unión del mAb 540C a través del mecanismo propuesto de ocupación espacial (Figura 1B). De hecho, la accesibilidad de mAb 540C a su epítopo puede ser bloqueada por la unión mAb 240C que enmascara la superficie que lo contiene. De hecho, como especulan Davies y Cohen, la zona enterrada de un Ab puede variar de 500 Å 2 a más de 800 Å 2 correspondiente a 21-32 aminoácidos, aunque sólo 9-20 residuos de aminoácidos (el epítopo real) hacen contacto directo con el Ab [107]. De hecho, como se observó anteriormente para el VHC, la gripe y otros virus humanos y animales [108], uno de los posibles mecanismos es que el bloque esterico por non-Abs reduce la unión de nAbs en la neutralización de la proteína SRAS. Por el contrario, a pesar de los epítopos de mAbs 341C y 540C se encuentran en un solo lazo; se separan espacialmente proporcionando interfaces distintas para la unión independiente de Ab. Para concluir, el SARS-CoV puede provocar potencialmente interferencias non-Abs presentando en su superficie regiones estrechamente embalados con diferentes características biológicas. Por otro lado, el huésped puede montar una vigorosa respuesta humoral neutralizante produciendo Abs que reconocen diferentes epitopes y actúan sinérgicamente. En particular, estos resultados sugieren que un cóctel de mAb humano neutralizante que puede unirse a epitopes únicos y tener diferentes mecanismos de acción podría ser de utilidad clínica contra la infección por SARS-CoV, e indicar que se puede aplicar un enfoque similar para tratar otras infecciones virales [109]. El virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) es un retrovirus positivo del ARN de una sola cadena, que causa morbilidad y mortalidad considerables en todo el mundo, especialmente en los países en desarrollo. Los virus de la inmunodeficiencia humana de tipo 1 y 2 (VIH-1 y VIH-2) son los resultados de las transmisiones de múltiples especies del virus del simio al ser humano. La prevalencia del VIH-2 es baja y hay una mayor proporción de personas infectadas por el VIH-2 que no progresan hacia el síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) en comparación con las infectadas por el VIH-1 [110]. Los virus del VIH-1 son muy divergentes y se clasifican en cuatro grupos: M, N, O y P. En particular, el grupo M se subdivide en nueve subtipos y numerosas formas recombinantes circulantes [111]. El genoma de todos los retrovirus codifica las proteínas estructurales Gag, Pol y Env. Entre las proteínas estructurales del VIH, gp120 y gp41 envuelven la superficie glicoproteínas forman heterodímeros que se organizan como recortadores en la superficie de la membrana viral. La entrada del VIH-1 en las células diana se inicia por la interacción de estas glicoproteínas envolventes superficiales con CD4 y un co-receptor (típicamente CCR5 o CXCR4) en las células diana [112]. La porción gp120 une los receptores de las células diana, mientras que gp41 promueve la fusión de membranas virales y celulares [113]. Al unirse al receptor CD4, gp120 sufre un cambio conformacional, resultando en la exposición de epitopos que pueden ser unidos por moléculas co-receptoras y en la eventual formación de la conformación intermedia pre-pirpina transitoria [114] [115] [116]. En el intermedio pre-hairpin, las moléculas gp41 se reorganizan para que los péptidos N-terminales formen un recortador de hélices que exponen el péptido de fusión a la célula diana, mientras que los hélices C-terminales permanecen anclados a la membrana viral [113]. Esta etapa es vulnerable a un número de nAbs y péptidos capaces de unir los péptidos N-o C-terminales [117, 118]. Tras la fusión con la membrana celular diana, una mayor reorganización de gp41 resulta en la asociación de N-y C-terminales para crear un haz de seis hélices post-fusión [119]. Después de la fusión y la entrega del capsid viral en el citoplasma, el descubrimiento conduce a la liberación de enzimas virales, proteínas y ARN genómico dentro de la A continuación, se inicia la transcripción inversa del ARN positivo genómico viral de una sola cadena para producir un ADN proviral de doble cadena para ser importado en el núcleo e integrado en el cromosoma huésped. La transcripción activa del ADN proviral integrado se produce en presencia de NF-B y Tat viral. El empalme del ARNm viral produce proteínas accesorias tempranas como Tat, Rev y Nef, que ayudan en la transcripción, empalme y modificación de la maquinaria celular, respectivamente. La acumulación de Rev protege el ARNm viral de la empalme, lo que produce ARNm cada vez más largos capaces de codificar proteínas estructurales y envolventes, y finalmente los ARN genómicos virales están listos para ser cautivados [111]. La terapia antirretroviral para el VIH es altamente eficaz en el control de la infección; sin embargo, la erradicación de este virus es actualmente imposible y el Una vacuna es ampliamente considerada como crucial para el control de la epidemia, pero varios esfuerzos avanzados para desarrollar una profilaxis efectiva resultaron infructuosos [120, 121]. Uno de los mayores desafíos en el desarrollo de una vacuna contra el VIH es superar su capacidad de mutar constantemente y escapar de las respuestas inmunitarias anti-VIH [122]. Esta alta tasa de mutación es un resultado directo de la presencia de ARN polimerasa de baja fidelidad del virus, así como los altos niveles de recombinación que sufre y el escudo glucano en constante evolución de las glucoproteínas de envoltorio [123] [124] [125]. A este respecto, tanto los linfocitos citotóxicos como los nAbs han sido reportados durante mucho tiempo para seleccionar variantes de escape inmune durante el curso de la infección por el VIH-1 [126] [127]. Una inmunoterapia pasiva candidata podría consistir, como se sugirió anteriormente para la infección por SARS-CoV, en la administración de un cóctel de mAbs ampliamente neutralizante, que podría minimizar la aparición de mutantes de escape viral [129]. Se han estudiado varias combinaciones de mAbs humanos en los últimos años que han mostrado efectos aditivos, sinérgicos o antagónicos en la neutralización del VIH-1 [130] [133] [133] [134] [135]. El efecto antagonista en la neutralización del VIH-1 se ha reportado previamente con un par de anti-gp120 mAbs dirigidos contra el V3-lazo y el sitio de unión CD4, respectivamente [136]. Los mecanismos moleculares que determinan el antagonismo no han sido estudiados en detalle. El único estudio que describió por primera vez a nivel molecular un posible mecanismo de interferencia también para el VIH se realizó utilizando combinaciones de pares de anti-gp41 mAbs [137]. Más en detalle, los autores observaron un efecto antagonista cuando los anti-gp41 neutralizantes mAbs 2F5 o 50-69 se combinaron con los anti-gp41 mAb 98-6 [137]. En particular mAbs 50-69 y 98-6 reconocen diferentes epítopos gp41 ubicados dentro del grupo I (residuos aminoácidos 579-613) y el grupo II (residuos aminoácidos 644-667), respectivamente. Por otro lado, mAb 2F5 reconocen un epítope diferente de mAb 98-6, dentro de la región externa proximal de membrana gp41 (MPER), en una porción adyacente al grupo II de gp41. Además, hay cierta superposición entre los epítopos del grupo II y el epítopo reconocido por mAb 2F5 [138], explicando la inhibición de la unión de mAb 2F5 por mAb 98-6 [137, 139]. Así, en el caso del antagonismo entre mAbs 2F5 y 98-6 el autor hipoteticó un mecanismo de obstáculo esterico entre los dos mAbs, ya que podían unir péptidos y complejos péptidos que representaban las formas prefusogénicas y fusogénicas de gp41 [140]. En particular, mAb 98-6 tenía una afinidad más alta por los complejos péptidos que representaban la forma fusogénica, que 2F5. Así, la unión de 98-6, que no neutraliza el aislado del VIH-1 89.6 (VIH-1 89.6 ), podría interferir con la unión de 2F5, En contraste, mAbs 50-69 y 2F5 reconocen epítopos distintos en gp41, y muestran reactividad independiente (additiva) contra el VIH-1 89.6 en combinación con la mayoría de los otros anti-gp41 y anti-gp120 mAbs probados [137]. Para concluir, los anti-gp120 y anti-gp41 Abs son inducidos en individuos infectados por VIH-1 pero son predominantemente no neutralizantes, ya que las regiones funcionalmente importantes de proteínas superficiales del VIH están casi completamente ocultas al sistema inmune [139]. Una hipótesis intrigante es que, junto con otros mecanismos de escape del VIH, el efecto de los extremadamente raros anti-gp41 y anti-gp120 nAbs también puede verse obstaculizado por la cantidad abrumadora de no-nabs que interfieren. Hasta la fecha, la existencia de interferencias no-n-Abs se ha evidenciado claramente sólo utilizando anti-gp41 mAbs con diferentes características biológicas, mientras que no se han generado datos utilizando anti-gp120 mAbs. El posible papel de interferencias no-n-Abmediated en facilitar la fuga del VIH en el curso de la infección natural ciertamente merece estudios futuros. Enfoques inmunoprofilácticos o inmunoterapéuticos con mAbs todavía se consideran una posible herramienta de apoyo en el manejo de enfermedades infecciosas. En particular, la disponibilidad de mAbs ampliamente neutralizantes dirigidos contra patógenos virales, cuyos enfoques profilácticos y terapéuticos reales están lejos de ser efectivos, ha llevado a muchos ensayos clínicos en curso. Sin embargo, la evidencia reportada en esta revisión sugiere que los mAbs candidatos para ser posiblemente utilizados en enfoques de inmunización pasiva antiviral, o para ser provocados por futuras estrategias de vacunación, no sólo tienen que ser moléculas altamente neutralizantes [141, 142], sino también moléculas a medida cuya actividad no está influenciada por posibles Abs interferentes producidos en el curso de la infección. Para ello, deben estar dirigidas contra epitopes altamente neutralizantes no sujetos al mecanismo de interferencia, o deben presentar una alta afinidad por el antígeno para desplazar la unión de posibles Abs interferentes [51, 68].
question: ¿Por qué ha sido difícil desarrollar una terapia para el virus de la hepatitis C?
answers.text: alta tasa de mutación