context: Ensayos serológicos basados en proteínas virales recombinantes para el diagnóstico de heces hemorrágicas del virus Arenahttps://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3497043/SHA: f1d308db379b3c293bcfc8fe251c043fe8842358Autores: Fukushi, Shuetsu; Tani, Hideki; Yoshikawa, Tomoki; Saijo, Masayuki; Morikawa, ShigeruFecha: 2012-10-12DOI: 10.3390/v4102097Licencia: cc-byAbstract: La familia Arenaviridae, género Arenavirus, consta de dos grupos filogenéticamente independientes: Complejos del Viejo Mundo (OW) y del Nuevo Mundo (NW). Los virus Lassa y Lujo en el complejo OW y los virus Guanarito, Junin, Machupo, Sabia y Chapare en el complejo NW causan fiebre hemorrágica viral (VHF) en los seres humanos, provocando graves preocupaciones de salud pública. Estos virus también son considerados agentes bioterroristas potenciales. Por lo tanto, es de gran importancia detectar estos patógenos de forma rápida y específica para minimizar el riesgo y la escala de brotes de virus de arena. Sin embargo, estos virus de arena se clasifican como patógenos BSL-4, lo que dificulta el desarrollo de técnicas diagnósticas para estas infecciones por virus en institutos sin instalaciones BSL-4. Para superar estas dificultades, se desarrollaron sistemas de detección de anticuerpos en forma de un ensayo inmunosorbente enzimático (ELISA) y un ensayo indirecto de inmunofluorescencia utilizando nucleoproteínas recombinantes (rNPs) derivados Además, se desarrollaron varios ensayos de detección de antígenos; por ejemplo, se desarrollaron nuevos anticuerpos monoclonales (mAbs) frente a los rNP de los virus Lassa y Junin. Los ELISAs a base de antígenos Sandwich (Ag-capture) utilizando estos mAbs como anticuerpos de captura fueron confirmados como sensibles y específicos para la detección de los respectivos NPs de los Arenavirus. Estos ensayos basados en rNP fueron propuestos para ser útiles no sólo para un diagnóstico etiológico de los VHFs, sino también para estudios seroepidemiológicos sobre los VHFs. Recientemente desarrollamos ensayos de neutralización de este virus utilizando pseudotipos de estomatitis vesiculares basados en VSV que contienen glucoproteínas recombinantes por el virus arena. El objetivo de este artículo es revisar los avances recientes en el desarrollo de ensayos diagnósticos de laboratorio basados en proteínas virales recombinantes para el diagnóstico de los VHF y estudios epidemiológicos sobre los VHF causados por los arenavirus. Texto: El virus Arenaviridae consiste en sólo un género, pero la mayoría de los virus dentro de este género se pueden dividir en dos grupos diferentes: los Viejos Mundos arenavirus y los Nuevos Mundo arenavirus (también conocidos como el complejo Tacaribé) [1, 2]. Las diferencias entre los dos grupos se han establecido mediante el uso de ensayos serológicos. La mayoría de los arenavirus causan infección persistente en roedores sin ningún síntoma, y los seres humanos adquieren una variedad de enfermedades cuando zoonópticamente infectados. También se han notificado infecciones por LCMV congénitas [4, 5]. Lo más importante es que la fiebre hemorrágica viral (VHF) puede ser causada por varios estadiovirus. La fiebre de Lassa, causada por el virus de Lassa (LASV), un virus de arena del Viejo Mundo, es uno de los VHF más devastadores en humanos [6]. La hemorragia y el fallo de órganos ocurren en un subconjunto de pacientes infectados con este virus, y se asocia con una alta mortalidad. Muchos casos de fiebre de Lassa ocurren en África occidental en países como Guinea, Sierra Leona y Nigeria [7] [9] [10] [11] [12] [13]. El linaje complejo de Tacaribé B del Nuevo Mundo arenavirus consiste en el virus Junin (JUNV), el virus Guanarito (GUNV), el virus Sabia (SABV) y el virus Machupo (MACV), los agentes etiológicos de las fiebres hemorrágicas argentinas, venezolanas, brasileñas y bolivianas, respectivamente [14, 15]. Aunque genéticamente distintos entre sí, parecen producir síntomas similares, acompañados de hemorragias en humanos [14, 15]. Estas especies patógenas del Nuevo Mundo arenavirus están estrechamente asociadas con una especie específica de roedores [6]. Los seres humanos suelen estar infectados con arenavirus patógenos a través del contacto directo con tejido o sangre, o después de inhalar partículas aerosolizadas de orina, heces y saliva de roedores infectados. Después de un período de incubación de 1-3 semanas, los individuos infectados desarrollan bruscamente fiebre, dolor retroesternal, dolor de garganta, dolor de espalda, tos, dolor abdominal, vómitos, diarrea, conjuntivitis, hinchazón facial, proteinuria y hemorragia mucosa. También se han descrito problemas neurológicos, incluyendo pérdida auditiva, temblores y encefalitis. Debido a que los síntomas de enfermedad relacionada con el estadio patógeno son variados y no específicos, el diagnóstico clínico es a menudo difícil [14, 16]. La transmisión humana a humana puede ocurrir a través de contacto cutáneo o mucosa, o a través de contaminación nosocomial [14, 16]. Estos virus también se consideran agentes potenciales de bioterrorismo [2]. Recientemente se han descubierto varias especies de este tipo de virus como resultado de estudios de roedores y brotes de enfermedades [17] [18] [20] [22] [23] [25] [ Un nuevo virus patógeno de la arena del Nuevo Mundo, el virus Chapare (CHPV), ha sido aislado de un caso fatal de VHF en Bolivia [20]. Además, se han reportado cinco casos de VHF en Sudáfrica, y un nuevo virus de la arena, llamado Virus Lujo, fue aislado de un paciente [17]. El virus Lujo está más distantemente relacionado con los otros virus de la arena del Viejo Mundo [17]. Hasta la fecha, no hay información sobre el huésped vertebrado de los virus Chapare y Lujo. Hay alguna evidencia de endemicidad del virus Lassa en los países vecinos [27, 28]. Sin embargo, como la magnitud del comercio internacional y los viajes está aumentando continuamente, y la perturbación del medio ambiente (debido a la actividad humana o a cambios ecológicos naturales) puede resultar en cambios de comportamiento de los roedores del reservorio, los virus de la arena altamente patógenos podrían introducirse De hecho, se han notificado más de veinte casos de fiebre de Lassa fuera de la región endémica en áreas como EE.UU., Canadá, Europa y Japón [29] [30] [31] [32] [33]. Es de gran importancia detectar estos patógenos de forma rápida y específica para minimizar el riesgo y la escala de brotes de VHF causados por virus de arena. Sin embargo, estos virus de arena se clasifican como patógenos de nivel de bioseguridad (BSL)-4, lo que dificulta el desarrollo de técnicas diagnósticas para estas infecciones virales en laboratorios sin instalaciones BSL-4. Para superar estas dificultades, se han establecido ensayos serológicos basados en nucleoproteínas virales recombinantes (NPRs), como el ensayo inmunosorbentes IgG-enzima (ELISA), el ensayo de inmunofluorescencia indirecta (IFA) y el análisis de antígenos (Ag)-captura ELISA para el diagnóstico de los VHF causados por los arenavirus altamente patógenos. Además, se han desarrollado ensayos de neutralización de virus utilizando GPs del virus portador pseudotipo. En esta revisión, se describe la utilidad de tales ensayos diagnósticos basados en proteínas recombinantes para el diagnóstico de los VHFs causados por los estadios. En brotes de VHFs, las infecciones son confirmadas por diversos métodos de diagnóstico de laboratorio. La detección de virus se realiza por aislamiento del virus, reacción inversa de transcripción-polimerasa (RT-PCR) y ELISA antígeno-captura. Se ha demostrado que los paneles de anticuerpos monoclonales contra los arenavirus patógenos son útiles para detectar antígenos virales en las células infectadas por el virus, así como para investigar las relaciones antigénicas de los arenavirus [34] [35] [36]. La detección del genoma del virus es adecuada para un diagnóstico rápido y sensible de los pacientes con VHF en la fase temprana de la enfermedad, y se han descrito extensas revisiones de tales ensayos RT-PCR [37, 38]. Más recientemente, también se han notificado avances en el método RT-PCR que abarca las variaciones genéticas de los virus de la fiebre hemorrágica (HFVs) [39, 40] y un microarray de oligonucleótido multiplexado para el diagnóstico diferencial de los VHFs [41]. Por otro lado, los anticuerpos contra estos virus pueden ser detectados mediante el ensayo indirecto de inmunofluorescencia (IFA Una IFA detecta el anticuerpo en el suero, que es capaz de unirse a la monocapa fija de las células infectadas por el virus. Aunque la interpretación de los resultados de inmunofluorescencia requiere experiencia, el ensayo tiene ventajas sobre otros métodos, ya que cada virus genera un patrón de fluorescencia característico que añade especificidad al ensayo en comparación con una simple lectura de ELISA. Un diagnóstico serológico mediante la detección de anticuerpos IgM e IgG específicos a los VHFs debe ser sensible, específico y confiable, ya que un diagnóstico erróneo puede llevar al pánico en la población general. Una ELISA específica de IgM es adecuada para detectar infecciones recientes, pero la relevancia de las pruebas IgM para la VHF aguda depende del virus y la duración de la enfermedad; la IgM específica no está presente a menudo en la etapa muy temprana de la enfermedad, y los pacientes que mueren de VHF a menudo no logran seroconvert. Una ELISA específica de IgG es eficaz, no sólo en el diagnóstico de un gran número de casos de VHF, especialmente durante la convalecencia, sino también para estudios epidemiológicos en las regiones endémicas.Los métodos detallados utilizados para las IFA e IgG- e IgM-ELISA para el diagnóstico de VHF utilizando auténticos antígenos virus [42] [43] [44] [44]. Los virus de Arena tienen un genoma de ARN bisegmentado, de sentido negativo, de un solo canal con una estrategia de codificación ambisense única que produce sólo cuatro proteínas conocidas: una glucoproteína, una nucleoproteína (NP), una proteína matriz (Z) y una polimerasa (L) [46]. De estas proteínas, la NP es la más abundante en células infectadas por virus. La tecnología de proteínas recombinantes podría satisfacer la demanda de un sistema de prueba de VHF sencillo y fiable, y se ha demostrado que el NP recombinante (rNP) es útil para los estudios serológicos de anticuerpos IgM e IgG contra los arenavirus [47] [48] [48] [49]. Los baculovirus recombinantes que expresan el rNP completo de los arenavirus se han generado [48, 50, 51]. El método utilizado para la purificación del rNP de arenavirus de células Tn5 infectadas con baculovirus recombinantes es eficaz y sencillo en comparación con los del Ébola, Marburg y los virus hemorrágicos del virus de la fiebre de Crimea-Congo [51] [52] [53] [55]. La mayoría de los rNPs de arenavirus expresados en células de insectos que utilizan los baculovirus recombinantes se cristalizan [56] y se solubilizan en PBS que contienen urea 8M. Dado que la mayoría de las proteínas celulares de Tn5 se solubilizan en PBS que contienen urea 2M, los rNPs de arenavirus en la fracción insoluble en PBS que contienen urea 2M pueden solubilizarse por sonación en PBS que contienen urea 8M. Después de una centrifugación simple de los lisatos en PBS que contienen urea 8M, las fracciones sobrenadantes pueden utilizarse como antígenos rNP purificados sin más pasos de purificación [51]. El antígeno de control se produce a partir de células Tn5 infectadas por baculovirus que carecen del gen poliedrín (ΔP) de la misma manera La expresión y la eficiencia de purificación del rNP de arenavirus fueron analizadas por electroforesis de gel dodecil-poliacrilamida (SDS-PAGE) tras tinción de los geles con azul Coomassie. Se muestran antígenos NP purificados con un peso molecular aproximado de 62 kDa de Luna, LCM, Lassa, Lujo, Junin, Machupo, Guanarito, Sabia y Chapare y el antígeno de control negativo purificado (ΔP). Como se ha descrito anteriormente, los baculovirus recombinantes permiten la entrega de antígenos rNP sin utilizar virus vivos infecciosos. Se utiliza una placa ELISA recubierta con la cantidad óptima predeterminada de rNPs purificados (aproximadamente 100 ng/well) para el ensayo de detección de anticuerpos IgG. Una ventaja del uso de rNP recombinante para el IgG-ELISA es que permite una comparación directa de la reactividad cruzada de anticuerpos entre los rNPs de la arenavirus, ya que los preparados de antígenos de todos los rNPs de la arenavirus probados se realizan utilizando el mismo método [51]. Rabbit anti-sera planteado frente a LCMV-rNP y LASV-rNP muestran reactividad cruzada a LASV-rNP y LCMV-rNP, respectivamente, lo que indica que los anticuerpos de conejo contra rNPs de la arenavirus del Viejo Mundo reaccionan de forma cruzada con rNPs de otras arenavirus del Viejo Mundo (Tabla 1 ) [51]. Del mismo modo, los anti-sera de conejo generados frente a JUNV-NP muestran reactividad cruzada a LASV-rNP y LCMV-rNP Sin embargo, los anti-sera de conejos contra LASV-NP y LCMV-NP muestran una reacción negativa al JUNV-rNP (Tabla 1 ) [51], lo que indica que los anticuerpos de conejos contra JUNV (un patógeno New World arenavirus) NP podrían reaccionar de forma cruzada con el Old World arenavirus NP, mientras que los anticuerpos contra Old World arenavirus NPs pueden no ser capaces de reaccionar con patógenos New World arenavirus NPs. El rNP basado en IgG-ELISA también se ha utilizado para la caracterización de un anticuerpo monoclonal de ratón (MAb). Nakauchi et al. [50] han investigado la reactividad cruzada de MAbs contra JUNV rNP a patógenos New World arenavirus rNPs, así como LASV rNP. MAb C11-12 reacciona al mismo nivel con los rNPs de todos los virus patógenos de la arena del Nuevo Mundo, incluyendo JUNV, GTOV, MACV, SABV y CHPV, indicando que este MAb reconoce un epitope conservado entre los virus patógenos de la arena del Nuevo Mundo. Otro MAb, C6-9, reacciona específicamente con el rNP de JUNV, pero no reacciona con los de los otros virus patógenos de la arena del Nuevo Mundo [50]. Esto indica que MAb C6-9 reconoce un epitope específico de JUNV. Ninguno de estos MAbs reacciona con el rNP del virus patógeno humano de la arena del Viejo Mundo LASV. Así, el MAb C11-12 se considera un MAb ampliamente reactivo contra los virus de la arena del Nuevo Mundo, mientras que MAb C6-9 es específico de JUNV. Estos hallazgos han sido confirmados por análisis detallados de epítopos utilizando mapeo péptido [50]. Del mismo modo, se ha analizado la reactividad cruzada de MAbs frente a LASV rNP [51]. La reacción cruzada de MAb 4A5 con el virus Mopeia (MOPV) pero no con el LCMV rNP. La reacción cruzada de MAb 6C11 con LCMV rNP, mientras que la reacción cruzada de MAb 2-11 no se produce con LCMV rNP [51]. Tabla 1. La reactividad antiserum para rNPs de diferentes arenavirus en IgG ELISAs. La reactividad para rNP de LASV LCMV JUNV anti-LASV NPIt es importante para evaluar si la ELISA basada en rNP es útil para el diagnóstico de casos de La especificidad de la IgG ELISA basada en LASV-rNP se ha confirmado utilizando sera obtenida de pacientes con fiebre de Lassa [51]. La sera de los pacientes con fiebre de Lassa muestra una reacción altamente positiva en la IgG-ELISA basada en LASV-rNP, pero sera de pacientes con fiebre hemorrágica argentina (AHF), causada por JUNV, no. El suero de un paciente con IC mostró una reacción altamente positiva en la IgG-ELISA basada en JUNV-rNP [49]. Además, se demostró que, utilizando sera obtenida de casos de IC, los resultados de la IgG ELISA basada en JUNV se correlacionan bien con una auténtica IgG ELISA basada en antígenos JUNV [49]. Para evitar el uso de virus altamente patógenos para la preparación de antígenos, se han desarrollado células mamíferas que expresan rNP recombinante [51, 57, 66] [67] [68]. El antígeno NP del virus de Lassa para la AFI puede prepararse simplemente como se describe [51]. Brevemente, el procedimiento consiste en (1) transfeccionar las células HeLa con un vector de expresión celular de mamíferos insertado con el ADNc del ADNc del NP clonado; (2) expandir las células de expresión NP estables mediante selección de antibióticos; (3) mezclar las células que expresan rNP con células HeLa no transfectadas (en una proporción de 1:1); (4) manchar las mezclas celulares en diapositivas de vidrio, luego secarlas y fijarlas en acetona. En la AFI específica para LASV-NP, los sera anticuerpos positivos muestran patrones tinción granular característicos en el citoplasma (figura 2 ) [69], lo que facilita la distinción entre muestras positivas y negativas. La especificidad del ensayo también ha sido confirmada mediante el uso de sera obtenida de pacientes con fiebre de Además, se ha desarrollado una IFA que utiliza células HeLa que expresan rNP de JUNV para detectar anticuerpos contra JUNV, y el ensayo ha sido evaluado utilizando sera de pacientes con HF [70]. Se sugiere que los sistemas de detección de anticuerpos basados en rNP de LASV, como ELISA e IFA, son útiles no sólo para el diagnóstico de fiebre de Lassa, sino también para estudios seroepidemiológicos de infección por LASV. En nuestro estudio preliminar, aproximadamente el 15% de los sera recolectados de 334 ghaneses y menos del 3% de 280 zambianos mostraron reacciones positivas en el IgG ELISA basado en rNP de LASV [58]. Estos resultados concuerdan con el hecho de que la fiebre de Lassa es endémica en la región de África Occidental, incluida Ghana, pero menos en la región de África Oriental. Para el diagnóstico de muchas infecciones virales, se ha demostrado que los ensayos de PCR tienen una excelente sensibilidad analítica, pero las técnicas establecidas están limitadas por su requerimiento de equipos costosos y experiencia técnica. Además, el alto grado de variabilidad genética de los virus ARN, incluyendo el arenavirus y el bunyavirus, plantea dificultades para seleccionar imprimaciones para ensayos RT-PCR que puedan detectar todas las cepas del virus. Puesto que la sensibilidad de la Ag-capture ELISA es comparable a la de la RT-PCR para varias enfermedades infecciosas mediadas por virus, incluyendo fiebre de Lassa y fiebre hemorrágica del filovirus [51, [71] [72] [73], la Ag-capture ELISA es un enfoque sofisticado que puede utilizarse para el diagnóstico de infecciones virales. Las ELISAs de captura de Ag se han aplicado ampliamente para detectar diversos virus, ya que son los antígenos virales más abundantes y tienen secuencias de aminoácidos altamente conservadas [50, 51, 54, 71, 72, 74, 75]. Antisera policlonal o una mezcla de MAbs presentes en los fluidos ascéticos de animales inmunizados para VHFs se han utilizado para la captura-anticuerpos en la ELISA de captura de Ag [36, [76] [77] [78] [79]. Los MAbs que reconocen los epítopos conservados del rNP también se utilizan como anticuerpos de captura, ya que tienen una alta especificidad para los antígenos, y una identificación de los epítopos de estos MAbs es de importancia crucial para la evaluación de la especificidad y la reactividad cruzada del sistema de ensayo [50, 51, 53, 54, 71, 75]. Para desarrollar una prueba de diagnóstico sensible para la fiebre de Lassa y la AHF, se han preparado rNPs de LASV y JUNV (véase más arriba), y se han caracterizado y utilizado MAbs recién establecidos contra ellos para el Ag-capture ELISAs [50, 51]. Se ha confirmado que el Ag-capture ELISA utilizando MAb 4A5 es útil para la detección de antígeno LASV auténtico en sera recolectado serialmente a partir de hámsteres infectados con LASV [51] La sensibilidad de la ELISA basada en Ag-captura de MAb 4A5 fue similar a la de la RT-PCR convencional, sugiriendo que la ELISA de Ag-captura puede ser utilizada eficientemente en el diagnóstico de la fiebre de Lassa [51]. Por lo tanto, la ELISA basada en Ag-captura de MAb 4A5 se considera útil en el diagnóstico de la fiebre de Lassa. Además, mediante el uso de MAbs levantados contra el rNP de JUNV, Ag-capture ELISAs específico para JUNV y ampliamente reactivos a los patógenos humanos New World arenavirus se han desarrollado [50]. La ELISA de Ag-captura utilizando MAb E4-2 y C11-12 detectó los Ags de todos los patógenos New World arenavirus probados, incluyendo JUNV. Por otro lado, la ELISA de Ag-captura utilizando Teniendo en cuenta que los síntomas de la infección por el virus JUNV en humanos son indistinguibles de los que se deben a otros virus patógenos de la arena del Nuevo Mundo, la captura de Ag ELISA utilizando MAb C6-9 puede ser una herramienta de diagnóstico útil, especialmente para la AHF [50]. El ensayo de neutralización del virus se acepta como el ensayo serodiagnóstico "estándar de oro" para cuantificar la respuesta de anticuerpos a la infección y la vacunación de una amplia variedad de virus asociados con enfermedades humanas [80] [81] [82] [83] [84] [85] [86]. La presencia de anticuerpos neutralizantes es un indicador fiable de inmunidad protectora contra la VHF [87] [88] [89]. Sin embargo, debido a la alta patogenicidad de los VHF para los seres humanos y a la estricta regulación de determinados agentes, sólo un número limitado de laboratorios son capaces de realizar tales pruebas de neutralización.Para muchos VHF, partículas virales incompetentes de pseudotipos de replicación con proteína de envoltura viral (GP) se ha demostrado que imitan las respectivas infecciones por VHF, por lo que los ensayos de neutralización utilizando los pseudotipos pueden ser ventajosos en algunos entornos de laboratorio para la detección de anticuerpos contra los VHF sin necesidad de mayores requisitos de biocontención.El vector basado en VSV ya se ha utilizado para generar VSV recombinantes con capacidad de replicación para estudiar el papel de los GP de varios virus [90] [91] [92]. Los recientes avances en la producción de partículas de virus pseudotipo han permitido investigar la entrada de células víricas, el tropismo viral y el efecto de los inhibidores de la entrada, así como la medición de los títulos de neutralización, mediante el uso de vectores basados en virus de inmunodeficiencia humana, virus de inmunodeficiencia felina, virus de leucemia murina o VSV [86, [93] [94] [95] [96] [97] [98] [99] [101] [102] [103]. Los pseudotipos basados en VSV tienen ventajas en comparación con otros pseudotipos basados en retrovirus por las siguientes razones. En primer lugar, el título de virus pseudotipo obtenido con el sistema VSV es generalmente superior al del sistema retrovirus pseudotipo [104]. En segundo lugar, la infección de células diana con un pseudotipo de VSV puede detectarse fácilmente como células fluorescentes verdes (GFP) positivas a 7-16 h después de la infección debido al alto nivel de expresión de GFP en el sistema VSV [104, 105]. En cambio, el tiempo requerido para la infección en el sistema retrovirus pseudotipo es de 48 h [106, 107], lo que es similar al tiempo necesario para que los virus infecciosos se reproduzcan a un nivel que resulta en la formación de placas o efectos citopáticos en las células infectadas. También se ha desarrollado un ensayo de alto rendimiento para determinar títulos de anticuerpos neutralizantes utilizando pseudotipos VSV que expresan fosfatasa alcalina secretada [108, 109] o luciferasa (Figura 3 ). Recientemente hemos desarrollado un pseudotipo basado en VSV portando el virus de Lassa GP (VSV-LAS-GP) para la detección de anticuerpos neutralizantes en el suero obtenido de un paciente con fiebre de Lassa. Se muestra un ejemplo del ensayo de neutralización de LASV utilizando el pseudotipo de VSV (Figura 4 ). En presencia de suero de pacientes con fiebre de Lassa, el número de células GFP positivas (infectividad de VSV-LAS-GP) se reduce significativamente en comparación con el número en ausencia del suero del paciente (Figura 4A ). El pseudotipo de control VSV portando VSV GP (VSV-VSV-G) no es neutralizado por ningún sera. Cuando la dilución sérica de corte se fija en un 50% de inhibición de la infectividad en comparación con la infectividad en ausencia del suero de prueba, el título de neutralización del suero de este paciente para VSV-LAS-GP se calcula en 75 (Figura 4B ). Asimismo, se ha desarrollado un pseudotipo basado en VSV con el virus Junin GP para la detección de anticuerpos neutralizantes de los sueros de pacientes con AHF. La exactitud de los resultados de los ensayos de neutralización basados en VSV se ha confirmado en comparación con los resultados del ensayo de neutralización utilizando el virus Junin vivo [70]. El virus Lujo es un nuevo miembro de la familia de virus de la arena hemorrágica asociada a la fiebre de Zambia y el sur de África, y el virus se clasifica como un patógeno BSL-4 [17]. El análisis de la secuencia del genoma del virus Lu Para estudiar la infectividad de este nuevo virus arena identificado, hemos desarrollado recientemente un pseudotipo de VSV que expresa luciferasa portando el virus Lujo GPC (VSV-Lujo-GP). Como se muestra en la Figura 3, la infección con VSV-Lujo-GPC es específicamente neutralizada por el suero anti-Lujo GPC del conejo. Así, el VSV-Lujo-GP puede ser una herramienta útil no sólo para determinar el título de anticuerpos neutralizantes dentro del suero, sino también para explorar receptores celulares aún por definir para la infección por el virus Lujo o para detectar inhibidores de la entrada celular mediada por el virus Lujo. Los brotes de fiebre hemorrágica causados por los virus arena patógenos resultan en altas tasas de mortalidad. Un diagnóstico rápido y preciso es un primer paso crítico en cualquier brote. Los métodos de diagnóstico serológico de la ICV más frecuentemente emplean un ensayo de ELISA, IFA y/o neutralización del virus. Se han desarrollado métodos de diagnóstico utilizando proteínas virales recombinantes y se han revisado sus utilidades para el diagnóstico de la ICV. Las IgG- e IgM-ELISA y las IFAs que utilizan rNPs como antígenos son útiles para la detección de anticuerpos inducidos en los sueros de los pacientes. Estos métodos también son útiles para las encuestas seroepidemiológicas para los VHF. Las ELISAs de captura de Ag utilizando MAbs para el virus arena son específicas para la especie del virus o pueden ser ampliamente reactivas para los virus de arena del Nuevo Mundo, dependiendo del MAb utilizado. Además, el sistema de pseudotipo basado en VSV proporciona una herramienta segura y rápida para medir los títulos de anticuerpos neutralizadores de virus, así como un modelo para analizar la entrada de los respectivos virus arena en células sensibles sin usar virus arena vivos.Los recientes descubrimientos de nuevas especies de virus arena [17, 26, 110] y su potencial para evolucionar predominantemente a través del cambio de host, en lugar de con sus anfitriones [110, 111], sugieren que un virus arena patogénico desconocido puede surgir en el futuro, y que los métodos diagnósticos de VHF causados por los virus arena deben así desarrollarse y mejorarse.
question: ¿Cómo se pueden diferenciar los Arenavirus del Viejo Mundo y del Nuevo Mundo?
answers.text: mediante el uso de ensayos serológicos