context: Un paso más cerca de un sistema de infección experimental para el virus de la hepatitis B? --- la identificación del péptido cotransportador de taurocolato de sodio como receptor viralhttps://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3562259/SHA: f4f36a8e9fee64d59ccf22b724c7dab345102658Autores: Chen, Pei-Jer; Wu, T-CFecha: 2013-01-11DOI: 10.1186/2045-3701-3-2Licencia: cc-byAbstract: Tras la clonación exitosa del receptor para el coronavirus del SARS hace unos años, el Dr. Wenhui Li y sus colegas volvieron a llamar la atención publicando un posible receptor para el virus de la hepatitis B en eLife. Revisaremos brevemente Texto: Entre los cinco virus hepatotrópicos de la hepatitis, sólo el virus de la hepatitis B (VHB) y su virus satélite de la hepatitis D (VHD) todavía esperan el desarrollo de un sistema de infección in vitro en el cultivo celular. Una línea celular de carcinoma hepatocelular (HCC), HepaRG, puede infectarse con una eficiencia modesta después de semanas de cultivo y diferenciación inducida [1]. Incluso los hepatocitos humanos primarios pierden rápidamente la capacidad de infección por el VHB después de un breve cultivo celular. La infección por el VHB exige factores tanto intracelulares como de superficie celular. Los requisitos intracelulares parecen menos estrictos, ya que después de la transfección del ADN del VHB en muchas líneas celulares del HCC o hígado de ratón, que no pueden infectarse naturalmente, el genoma viral se expresa y replica activamente. Así, el fracaso de la infección por el VHB se considera en gran parte debido a Las moléculas de la membrana celular necesarias para la infección por VHB pueden dividirse en dos clases: baja afinidad y alta afinidad. Entre otras, los sulfatos de heparano en las proteínas de la membrana median la interacción amplia, pero menos específica, de células víricas. Sin embargo, los socios de membrana de alta afinidad para el VHB siguen siendo elusivos (la carboxipeptidasa D encontrada para el virus de la hepatitis B del pato puede ser el único contendiente grave [2] ). La proteína de envoltura del VHB, a saber, los antígenos de superficie, desempeña un papel esencial en el proceso de infección. Ambos exámenes genéticos y funcionales identificaron un dominio en el Nterminus del VHB preS1 (aminoácidos 1-47) necesario para la infección. Se ha demostrado que este dominio funciona como mediador directo para el VHB mediante la unión de receptores (s) Más importante aún, el péptido miristoilado se muestra para bloquear efectivamente la infección del VHB en los hepatocitos humanos primarios y en el ratón hepatocytechimera humano en una concentración nanomolar [4]. De hecho, un ensayo clínico que prueba la eficacia de este péptido en la prevención de la infección del VHB ha estado en curso [5]. Claramente, este péptido preS1 puede ser una sonda útil para extraer los factores celulares que interactúan, incluyendo receptores virales específicos. Yan et al. han tomado un enfoque razonable para pescar posibles receptores del VHB [6]. Ellos diseñaron el primer 2-47 péptido aminoácido de PreS1 para aumentar su capacidad para ser interconectado con proteínas que interactúan con la membrana celular, sin afectar a su especificidad de unión. Las estrategias realmente bajaron muchas proteínas de membrana, pero en comparación con el control negativo (péptido homológico sin unión específica), identificaron una proteína celular, NTCP (péptido de cotransporte de taurocolato sódico) por LC/MS/MS. La misma proteína también fue retirada de los hepatocitos humanos. Los autores produjeron líneas celulares de HCC que expresaban fuertemente NTCP y posteriormente las infectaron con HBV o HDV. La tinción de inmunofluorescencia demostró claramente la expresión de proteínas de HBV y HDV en estas líneas celulares, lo que sugiere una infección viral exitosa. Además, documentaron un aumento de 2-4 veces del ARN viral y ADN después de la infección en la línea celular por PCR en tiempo real. También mostraron una mancha sureña que apoya la presencia de ADN circular covalentemente cerrado de HBV en la célula infectada, un marcador bien reconocido para la infección Finalmente, identificaron un tramo de 10 aminoácidos en el dominio de la transmembrana NTCP, como el motivo que interactúa directamente con el péptido PreS1. NTCP es una proteína transmembrana, usualmente localizada en la superficie lateral (canalicular) de los hepatocitos, que media el transporte de ácido biliar [7]. Geográficamente, es un buen candidato para un receptor de VHB. Además, los autores podrían convertir las líneas celulares previamente no permisibles a la infección por VHB a permitidas por sobreexpresión de PCN, apoyando de nuevo su posible papel en el proceso de infección por VHB. Esto puede ser un descubrimiento crítico y esperado hacia la comprensión de los receptores de VHB y el establecimiento de un sistema experimental de infección por VHB. Mirando hacia adelante, necesitamos entender cómo el PCN interactúa con ambas proteínas de envoltura de VHB y con otras proteínas celulares, especialmente a través El NTCP en sí mismo no es suficiente para permitir la infección por VHB, ya que la mayoría de las células de HepaRG fueron encontradas para expresar el NPCT pero no para ser infectadas [8]. El NTCP podría iniciar o mediar interacciones moleculares que pueden superar las restricciones de la superficie celular para la entrada viral. Tales factores celulares o virales cooperativos deben ser descubiertos y demostrados para mejorar la eficiencia de la infección viral, a un nivel comparable a uno natural (cientos o miles de amplificación viral). Por ejemplo, los autores pueden utilizar las líneas celulares que expresan el NTCP como los materiales iniciales para identificar sistémicamente otros factores (tal vez carboxipeptidasa D) y hacer que estas líneas celulares sean más productivas y permisivas a la infección por VHB. En un futuro próximo, se espera que los ensayos virológicos estándar para las infecciones por VHB, incluyendo manchas del norte u oeste, La comunidad de investigación del VHB ha buscado receptores del VHB durante décadas. Muchos candidatos han sido descubiertos y luego descartados. El estudio actual, sin embargo, aprovechó un péptido viral bien documentado requerido para la entrada del VHB en combinación con una plataforma proteómica de última generación. Como dice un proverbio chino, "un viaje de mil millas comienza desde un paso gradual". Así, la identificación del NTCP como receptor viral potencial del VHB puede servir como un paso inicial importante para este viaje, llevando al desarrollo de un sistema de infección del VHB para facilitar la investigación del VHB y el tratamiento de la hepatitis B.
question: ¿Dónde se encuentra NTCP en el cuerpo?
answers.text: superficie lateral (canalicular) de los hepatocitos