context: Se extiende del fregadero al paciente: Estudio in situ utilizando proteínas fluorescentes verdes (GFP)-expresión Escherichia coli A Modelo de dispersión bacteriana de depósitos de fregaderos de lavado a manohttps://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5377511/SHA: 615071c8c959f24857b1bad521cc432b59719bfbAutores: Kotay, Shireen; Chai, Weidong; Guilford, William; Barry, Katie; Mathers, Amy J. Fecha: 2017-03-31DOI: 10.1128/aem.03327-16Licencia: cc-byResumen: Ha habido un número creciente de informes que implican Gammaproteobacteria como a menudo llevar genes de resistencia a los medicamentos de trampas de fregadero colonizados a pacientes hospitalizados vulnerables. Sin embargo, el mecanismo de transmisión de las aguas residuales de la trampa P del fregadero a los pacientes sigue siendo poco entendido. En este informe se informa el uso de una galería de laboratorio de lavabo designado para modelar la dispersión de proteína fluorescente verde (GFP) que expresa Escherichia coli de aguas residuales del fregadero al entorno circundante. No se encontró dispersión de GFP-expresando E. coli directamente desde la trampa P a la cuenca del fregadero o encimera circundante con flujo de agua coincidente desde un grifo. Sin embargo, cuando se permitió que las células E. coli que expresaban GFP maduraran en la trampa P en condiciones similares a las de un ambiente hospitalario, una biopelícula putativa con E. coli que expresaba GFP se extendía hacia arriba durante 7 días para llegar al colador, lo que resultó posteriormente en dispersión de gotitas a las áreas circundantes (<30 in.) durante la operación del grifo. También demostramos que la colonización de la trampa P podría ocurrir mediante una transmisión retrógrada a lo largo de un tubo común. Postulamos que los organismos se movilizan hasta el colador de la trampa P, resultando en dispersión de gotitas en lugar de dispersión directamente desde la trampa P. Este trabajo ayuda a definir más a fondo el modo de transmisión de bacterias desde un reservorio de P-trap a un paciente hospitalizado vulnerable. IMPORTANCIA Muchos informes recientes demuestran que las tuberías de drenaje se colonizan con bacterias Sin embargo, el mecanismo de dispersión de bacterias del fregadero a los pacientes no ha sido completamente aclarado. Mediante el establecimiento de una galería de fregaderos única, este trabajo encontró que un modo escalonado de transmisión que implica el crecimiento de biofilm desde el tubo inferior al colador del fregadero y posterior salpicadura al recipiente y área circundante se produce en lugar de salpicar directamente desde el agua en el tubo inferior. También hemos demostrado que la transmisión bacteriana puede ocurrir a través de conexiones en la plomería de aguas residuales a los sumideros vecinos. Este trabajo ayuda a definir más claramente el mecanismo y el riesgo de transmisión de una fuente de aguas residuales a pacientes hospitalizados en un mundo con bacterias cada vez más resistentes a los antibióticos que pueden prosperar en entornos de aguas residuales y causar infecciones en pacientes vulnerables. Recientemente ha habido un aumento alarmante de brotes relacionados con los sumideros en todo el mundo, con muchos informes que establecen un vínculo observacional (6) (7) (8) (9) (10) (12) (13). Un fregadero a menudo funciona como un conducto abierto a las aguas residuales en un área de atención al paciente que a menudo se encuentra en la misma habitación que el paciente. Los establecimientos de atención de la salud a menudo invierten en intervenciones desesperadas para hacer frente a brotes nosocomiales. El método preferido para abordar la mayor parte de la transmisión relacionada con el medio ambiente es utilizar una limpieza mejorada utilizando agentes químicos y físicos (14, 15). Desafortunadamente, los enfoques rutinarios son ineficientes en la eliminación completa de las Gammaproteobacterias resistentes a los medicamentos en una zona microbiológicamente activa inaccesible como una trampa del fregadero (6, 16) (18) (19) (20). El ambiente húmedo, húmedo y relativamente protegido en una trampa del fregadero favorece la Estas comunidades estarán expuestas a líquidos y desechos que se desechan en un fregadero y pueden incluir antimicrobianos, bebidas desechadas, jabón, bacterias presumiblemente patógenas de las manos de los trabajadores de la salud, y otros artículos. En resumen, las trampas de los sumideros podrían servir como caldo de cultivo para bacterias oportunistas y altamente resistentes a los antimicrobianos que no se pueden limpiar o eliminar fácilmente (23) (24) (25) (26) (28). Hay muchos informes de una asociación genética entre patógenos encontrados en las trampas de los sumideros y los encontrados en pacientes (29, 30). Sin embargo, sorprendentemente se ha hecho poco trabajo para entender la dinámica de transmisión a microescala. Anteriormente se demostró mediante la suspensión de partículas fluorescentes (Glo Germ; Glo Germ Co., Moab, UT) que el material inyectado en la trampa P se dispersa alrededor En última instancia, muchos detalles siguen sin ser abordados en torno a la propagación de Enterobacteriaceae en los sistemas de aguas residuales de las trampas de los sumideros: (i) pueden crecer organismos retrógrados desde el agua de las trampas P hasta el colador de los sumideros, (ii) pueden propagarse organismos de un fregadero a otro a lo largo de las superficies internas de tuberías con sistemas de drenaje compartidos, y (iii) qué porción de una tubería de drenaje colonizada resulta en dispersión en el recipiente del fregadero durante un evento de lavado a mano? En los primeros 14 días después de la instalación de la P-trap con proteína fluorescente verde establecida (GFP) que expresa Escherichia coli y sólo el agua corriendo desde el grifo, GFPexpresando E. coli no fue detectado en el tubo de escape más allá de 1.5 pulg. por encima del nivel de líquido en la P-trap. GFP-expresando E. coli, sin embargo, se encontró que era viable en la P-trap sin ningún nutriente añadido. A continuación, se instituyó un régimen de nutrientes para entender la influencia de los nutrientes en la movilidad y el crecimiento ascendente. La adición de caldo de soja triptic (TSB) promovió el crecimiento de GFP-expresando E. coli tan pronto como el día 1, con el crecimiento observado en el tubo de escape 2 pulg. sobre la superficie líquida en la P-trap (Tabla 1). por encima del líquido de la trampa P) se encontró colonizado con E. coli que expresa GFP. Esto se traduce en una tasa media de crecimiento de 1 pulg./día a lo largo de la longitud del tubo de escape con la adición de nutrientes y sin funcionamiento de grifo. E. coli que expresa GFP no se detectó en el agua del grifo. Transmisión de la bacteria de la gota a la gota. En estos experimentos, un fregadero flanqueador (sumidero 5) fue el único P-trap inoculado con E. coli que expresa GFP y por lo tanto fue la única fuente para la transmisión a los sumideros conectados. Comenzando con una concentración de inóculo más baja (10 3 CFU/ml) en el fregadero 5, el día 7, E. coli que expresa GFP fue detectado en el fregadero 2 y el fregadero 3 P-traps (Fig. 1a). Con concentraciones de inóculo de 10 6 UFC/ml y 10 10 UFC/ml en el fregadero 5, todas las trampas P del fregadero en la galería del fregadero, con la excepción del fregadero 1, fueron colonizadas con E. coli que expresaba GFP después de 7 días (Fig. 1b y c). Agua de grifo y aireadores probados negativos para E. coli que expresaba GFP. Independientemente de la concentración de inóculo inicial, el día 7 se registró el nivel más alto de colonización en el fregadero 3 P-trap. Después del día 7, cuando el régimen de nutrientes (descrito anteriormente) fue seguido durante 7 días adicionales en cada uno de los sumideros en la galería del fregadero con una concentración de inóculo de 10 10 UFC/ml, E. coli que expresa GFP fue detectado en los coladores de los sumideros 2 y 3 el día 14. Este hallazgo validó el crecimiento ascendente y la tasa de crecimiento en el tubo de escape cuando se añadieron nutrientes. En ocasiones se observaron colonias no fluorescentes en las muestras de agua de la trampa P recogidas de los sumideros, que posteriormente fueron identificadas como Pseudomonas sp. o Stenotrophomonas maltophilia, y colonias fluorescentes fueron confirmadas como E. coli. Dispersión de microesferas de los sumideros. En el primer experimento de dispersión, cuando las microesferas fluorescentes fueron inoculadas en la cola de drenaje offset sólo 4 pulg. debajo del colador, no se detectaron microesferas en las láminas de poliéster colocadas en el espacio del contador. Sin embargo, cuando el recipiente del fregadero fue recubierto con las microesferas, las láminas de poliéster superpuestas en el espacio del contador capturaron las microesferas dispersas causadas por la operación del Se observaron niveles relativamente más altos de dispersión a lo largo de los ejes mayor y menor del recipiente del fregadero elíptico (zonas 2, 5, 6, 9, 11, y 12). Las esquinas anteriores del espacio del contador del fregadero (zonas 4 y 7), que estaban más distantes del impacto del agua en el recipiente del fregadero, recibieron la menor dispersión. Dispersión de E. coli que expresa GFP de los sumideros. Inicialmente la trampa P sola fue inoculada con E. coli que expresa GFP y cuidadosamente instalada, manteniendo el tubo de escape y el colador libre de E. coli que expresa GFP antes de operar los grifos. No se observó UFC fluorescente en las placas colocadas en el mostrador o conectadas a la superficie del recipiente después de la operación del grifo. Curiosamente, cuando había una visible reserva de agua sobre el colador como resultado de un mayor caudal de agua del grifo que la tasa de drenaje de la trampa P, se detectó dispersión en las placas conectadas a la superficie del recipiente. El patrón de dispersión registrado cuando el recipiente del fregadero fue recubierto con E. coli expresivo de GFP fue comparable al patrón registrado cuando el recipiente del fregadero fue recubierto con microesferas fluorescentes (Fig. 2). La dispersión fue significativamente más alta a lo largo de los ejes (zonas 6, 9, 11 y 12) y más baja en las esquinas del espacio del contador del fregadero (zonas 4, 7 y 10). En contraste, la dispersión de E. coli que expresaba GFP causada por la operación del grifo fue mucho más extensa cuando se permitió que el colador fuera colonizado con GFPexpresante E. coli antes del experimento de dispersión. Además del espacio del contador del fregadero, se midió la dispersión al recipiente del fregadero, grifo, manijas del grifo, escudos de salpicaduras, y la superficie extendida del contador. La dispersión de E. coli que expresa GFP fue más alta en las placas unidas al recipiente del fregadero (Fig. 3b). Además, la dispersión fue mayor a lo largo del " y "" denotan la ausencia y presencia de E. coli que expresa GFP, respectivamente. Eje menor del recipiente del fregadero (Fig. 3b, zonas B3, B4 y B10) que a lo largo del eje principal del recipiente del fregadero, asociado con una distancia más corta desde el punto de ataque del agua del grifo hasta el recipiente a lo largo de este eje. El siguiente conteo más alto de UFC de la dispersión se registró en el área del contador cerca de los grifos (Fig. 3a, zonas 12 y 11). También se observó un patrón similar de mayor dispersión cerca de los grifos y menor dispersión en las esquinas del espacio de contador (Fig. 3a, zonas 4, 7 y 10) utilizando microesferas. También se registró dispersión en otras zonas del espacio de contador, en los escudos de salpicadura de Plexiglas, grifos, asas de grifo y superficie extendida (Fig. 3c). No hubo GFP-expresando E. coli CFU registrada en placas colocadas más allá de 30 pulg. del colador, demarcando el rango de dispersión bajo estas condiciones experimentales. La Tabla 2 da un resumen de las cargas de distribución total registradas utilizando microesferas fluorescentes y E. coli de GFP-expresando en cada experimento. Las cargas de dispersión en el contador del fregadero fueron comparables cuando el recipiente del fregadero fue recubierto con microesferas o E. coli de expresión GFP antes de la operación Aunque la carga de dispersión en el contador del fregadero fue menor cuando el colador del fregadero fue colonizado, es interesante notar que el recipiente del fregadero recibió la mayor dispersión. Para imitar la dispersión en un entorno hospitalario, primero investigamos si GFPexpresando E. coli establecería colonización consistente en una trampa del fregadero como muchas otras Gammaproteobacterias implicadas en brotes nosocomiales han hecho (6, 28). Muchos informes recientes demuestran que las trampas P se colonizan con Gammaproteobacterias altamente consecuentes, lo que luego resulta en transmisión nosocomial (29, 31, 32). El agua retenida en una trampa P del fregadero está presente para proporcionar una barrera de agua para evitar el desgastamiento del olor de las cloacas, pero puede proporcionar condiciones favorables para que microorganismos patógenos y oportunistas resistentes a antibióticos sobrevivan y desarrollen biopelículas resilientes (3, 33). Sin embargo, el mecanismo de dispersión de la bacteria en la P-trap a los pacientes o el área de atención médica circundante no había sido completamente dilucidado. Comenzamos con la hipótesis de que la bacteria se origina en la P-trap a través de la creación de gotitas cuando el agua del grifo golpea el agua de la P-trap, contaminando así el recipiente del fregadero y el área circundante. El hallazgo de esta teoría había sido reportado previamente usando partículas Glo Germ (6). Sin embargo, en el presente estudio con cuidadosa atención para evitar la contaminación por cola y cola, la dispersión directamente de la P-trap del fregadero con microesferas o E. coli que expresa GFP no pudo ser reproducida como se informó previamente (6). Más bien este trabajo demuestra un modo diferente y más escalonado de transmisión desde un depósito de P-trap al fregadero y entorno circundante. GFP-expresión de E. coli en la P-trap solamente se mantuvo durante 14 días, pero no creció o movilizó hasta el tubo de escape al colador con la exposición del agua sólo intermitente. Sin embargo, cuando los nutrientes fueron agregados posteriormente al sistema, los organismos crecieron rápidamente hasta el tubo de escape al colador a aproximadamente una pulgada por día. En un entorno real, la motilidad de las bacterias dentro del tubo de escape se limita a eventos de humectación relativamente esporádicos y breves en los que la natación es una oportunidad para colonizar nuevas superficies. Se supone que una vez establecido, el biofilm promueve el crecimiento ascendente de GFP-expresión de E. coli en el tubo de escape a un ritmo acelerado. El régimen de nutrientes que promovió la colonización en nuestro modelo refleja nuestras y otras observaciones de artículos comúnmente eliminados en los sumideros del hospital (fluidos intravenosos, suplementos de alimentación y bebidas sobra La transmisión de bacterias entre los sumideros a través de una tubería común fue un hallazgo clave en este estudio, ya que esto pone de relieve el concepto de que la fontanería local puede ser un sistema más continuo con microbiología compartida que un único fregadero aislado. La galería de fregaderos utilizada en este estudio proporcionó una ventaja in situ única para investigar la transmisión de bacterias entre el fregadero y el fregadero a través de desagües comunes. Los dos posibles mecanismos para los coladores de trampas P que se colonizan son la siembra de organismos desde arriba y la propagación retrógrada de organismos a lo largo de tuberías comunes en una infraestructura de aguas residuales hospitalarias. Aquí demostramos que es posible que E. coli, que expresa el GFP, contamine las trampas P adyacentes con un tiempo justo y agua dada una elevación estándar de la tubería del código de los EE.UU. de 0,25 pies/pie. La transmisión del fregadero al fregadero o retrógrada pueda El fregadero 3 fue el más bajo de la pendiente de la línea de drenaje (ver Fig. 4) con posiblemente la mayor oportunidad de reflujo y humectación retrógrada. El fregadero 1, por otro lado, estaba más alejado de la fuente (sink 5), y su P-trampa tenía la mayor inclinación en la línea de drenaje que conectaba los sumideros, lo que tal vez podría contribuir a las razones por las que no se había detectado colonización E. coli que expresara GFP después de 7 días. Ha habido más investigación sobre la dinámica microbiológica de partículas víricas infecciosas como las del síndrome respiratorio agudo severo (SARS) y los virus del Ébola a través de sistemas de fontanería local (34) (35) (36). Sin embargo, la microbiología, sostenibilidad y dinámica podrían ser muy diferentes, aunque los problemas de reflujo e inoculación podrían tener algunos paralelos al comparar virus con bacterias. Como Enterobacteriaceae puede multiplicarse o permanecer viable durante largos períodos de tiempo en biofilms que recubren el interior de las trampas P y las tuberías conectadas, puede no ser sostenible dirigir cualquier intervención limitada a un único fregadero aislado como fuente de un patógeno en particular. Los datos de diferentes experimentos de dispersión sugieren que aunque las trampas P pueden actuar como fuente o depósito de patógenos, la presencia física del organismo en el recipiente del fregadero o la colonización del colador es necesaria para que ocurra la dispersión. La colonización de coladores o desagües reportados en estudios anteriores (7, 10, 13, 24, 37) fue quizás el resultado del crecimiento ascendente de biofilm desde la trampa P al colador o la introducción a través de fluidos contaminados. Una vez que el colador fue colonizado, el agua del grifo resultó en la dispersión de E. coli que expresa GFP en el recipiente y en las superficies circundantes de hasta 30 pulg. El rango de dispersión (6). Mayor dispersión cerca del grifo puede atribuirse a los diseños específicos del recipiente del fregadero y grifo en este estudio, que determinan el ángulo de contacto del impacto del agua. Esto es un hallazgo importante ya que muchos fregaderos en los hospitales son similares en diseño, con asas del grifo que representan una superficie de alto toque para los usuarios del fregadero (38). También se puede concluir de los experimentos de dispersión que las dispersaciones secundarias y sucesivas probablemente aumentarían el grado y el alcance de dispersión. Hay varias limitaciones a este trabajo. Primero el uso de tazones del fregadero similares en estos sumideros sólo examina el patrón de dispersión de este diseño particular del fregadero. Del mismo modo, la transmisión del fregadero al fregadero puede no ser aplicable a todos los sistemas de plomería de aguas residuales, ya que los accesorios de la tubería están muy cerca, a diferencia de la mayoría de los diseños en entornos de salud. Sin embargo, especulamos que la transmisión podría ocurrir en sistemas más grandes a mayor escala de tiempo, especialmente si también se incluyen nutrientes pesados y cargas de contaminación. GFP-expresando E. coli es un sustituto de laboratorio, y los biofilms putativos establecidos en el corto período de tiempo de nuestros experimentos son poco probables para ser tan complejos o estables como biofilms desarrollados en un sistema de aguas residuales hospitalario durante muchos años. Sin embargo, para abordar el dominio monomicrobiano del GFP-expresando E. coli añadido al sistema, mantuvimos el sistema abierto, y otros organismos ambientales fueron capaces de cocolonizar en un intento de imitar el sistema hospitalario. Otra limitación fue la necesidad No estamos claros cuán extendida está la práctica de eliminar líquidos intravenosos o bebidas sobrantes que contienen dextrosa en los lavabos de lavado de manos; sin embargo, hemos observado esta práctica, y anecdóticamente parece ser relativamente común en los Estados Unidos. Tampoco caracterizamos completamente los tamaños de gotitas, ni demostramos muestreo de aire para entender si la dispersión es sólo gotita o si también hay aerosoles que contienen E. coli que expresan GFP. Esto requeriría pruebas adicionales y está previsto como trabajo futuro. En resumen, este trabajo por primera vez modela mejor los mecanismos de propagación de patógenos multirresistentes derivados del drenaje del fregadero e infectando a los pacientes. La dispersión de la gota de la trampa P no ocurre directamente. Más bien es un proceso multietapa: la dispersión se origina en el colador y/o el cuenco después del crecimiento del biofilm desde el depósito microbiano de la P-trap. También demostramos la transmisión del fregadero al fregadero a través de una tubería sanitaria común. Este trabajo podría tener implicaciones para la seguridad del paciente, el control de infecciones y las intervenciones, así como el diseño de futuros sistemas de fontanería hospitalaria para eliminar este modo de transmisión a pacientes hospitalizados vulnerables. Diseño de galería de fregaderos. Se creó una galería dedicada al fregadero para simular los lavabos de lavado de manos del hospital. La galería estaba compuesta por cinco módulos de fregaderos montados uno al lado del otro (Fig. 4). Las cinco estaciones de fregaderos de lavado de manos eran idénticas en diseños y dimensiones de cuencos y se modelaron a partir del tipo de fregadero de lavado de manos más común de la unidad de cuidados intensivos en Se instalaron particiones de chapa de plexiglás de 24 pulgadas de altura entre los lavabos para evitar salpicaduras y contaminación cruzada. Cada módulo de fregadero fue construido con fregadero/encimeras integrados Corian sin desbordamiento y equipado con un grifo de cuello de botella de 2 agujas de 8 pulgadas (Elkay, Oak Brook, IL). La línea de desagüe (Dearborn Brass-Oatey, Cleveland, OH). Todos los accesorios estaban hechos de latón con cromado. Cada una de las trampas P del fregadero estaba conectada a una tubería de hierro fundido común de 3 pulgadas que se inclinaba en una junta en T que conducía a la línea sanitaria del edificio situada detrás del fregadero 3 (Fig. 4). Inoculación, crecimiento y establecimiento de E. coli de expresión GFP en las trampas P del fregadero. Para la cepa E. coli que expresa GFP (ATCC 25922GFP), el gen de la proteína fluorescente verde (GFP) está contenido en un plásmido que también contiene un gen de resistencia a la ampicilina. Una colonia aislada de E. coli que expresa GFP cultivada a partir de un stock de 80°C fue inoculada en caldo de soja triptíca de 5 ml (TSB) (Becton, Dickinson y Company, Sparks, MD) que contenía 100 g/ml de ampicilina (mediante ATCC 2855). La concentración y método del inóculo variaban para cada experimento. Para el establecimiento de E. coli que expresa GFP en las trampas P del fregadero, las nuevas trampas P autoclave fueron rellenadas con 100 ml de TSB 0.1 e inoculadas con 10 3 CFU Después de la inoculación, ambos extremos de las P-traps fueron cubiertos con Parafilm perforado (Bemis, Inc., Oshkosh, WI) y permitidos incubar a temperatura ambiente (22  2°C) durante 14 días para facilitar el crecimiento bacteriano adherente. El medio en la P-trap fue decantado y reemplazado por fresco 0.1 TSB cada 48 h. Una alícuota de medio decantado y una muestra de hisopo de la superficie interna de la P-trap fueron plateados en agar de soja triptic (Becton, Dickinson y Company, Sparks, MD) placas que contenían 100 g/ml de ampicilina (TSA) para monitorear el crecimiento de E. coli de la GFP-expresante en las P-traps. Las placas TSA fueron incubadas durante la noche a 37 Todos los cultivos preparatorios de E. coli que expresa GFP tuvieron lugar en una sala separada de la galería del fregadero para evitar la contaminación no intencional. Instalación de P-trampas colonizadas con E. coli que expresa GFP. Después de la incubación de 14 días, P-trampas se fijaron en la plomería de los lavabos (Fig. 5a). El resto de la línea de drenaje fue autoclave (tramposo, tubo de escape y brazos de trampa) antes de la instalación o superficie desinfectada (tazón de fregadero, encimera y grifos) con Caviwipes-1 (Meterx Research, Romulus, MI), manteniendo al menos 1 minuto de tiempo de contacto. Después de la instalación de la P-trampa, se siguió un régimen diario en el que 25 ml de TSB seguido de 25 ml de solución NaCl del 0,9% (salina 5b) para imitar la exposición potencial de nutrientes en el hospital. Muestreo y enumeración de E. coli que expresa GFP. Para monitorear el crecimiento de E. coli que expresa GFP en la fontanería, se perforaron puertos de muestreo a lo largo de la cola (entre la P-trampa y el colador) y el brazo de la trampa (entre la P-trampa y la línea común). Estos agujeros fueron provistos de tapones de silicona tamaño 00 (Cole-Parmer, Vernon Hills, IL) (Fig. 5a). Se insertaron hisopos estériles de algodón (Covidien, Mansfield, MA) en solución salina a través de estos puertos de muestreo, y se recolectaron muestras girando el hisopo en un movimiento circular en la superficie interna (20 cm 2 ) de los tubos de cola. Las muestras de hisopos fueron vórtices de pulso en 3 ml de solución salina, y las diluciones en serie fueron chapadas en TSA. El colador, el aireador de grifo y la superficie del recipiente fueron muestreados con hisopos presacinados y procesados como se describió anteriormente. Transmisión de bacterias de fregadero a fregadero. Para investigar la transmisión de bacterias de fregadero a fregadero, un fregadero distal (sumidero 5) (Fig. 4) fue equipado con una P-trampa inoculada con E. coli que expresa GFP. Se investigaron los efectos de diferentes concentraciones de inóculo de E. coli-10 3, 10 6, y 10 10 UFC/ml (colonizado durante 14 días). La identificación del nivel de especies de colonias fluorescentes y no fluorescentes identificadas a partir de cultivos de tuberías mixtas se realizó utilizando un espectrómetro de masas asistido por láser de desorción (MALDI-TOF) de desorción por matriz (MALDI-TOF) (Vitek-MS; bioMérieux, Durham, NC). Las vías de aguas residuales de los sumideros 1 a 4 fueron autoclaves (espectro, tubo de escape, trampas P y armas trampa) antes de la instalación o desinfectadas en superficie (tazón de fregadero, encimera y grifos) con Caviwipes-1 (Meterx Research, Romulus, MI). Los grifos de cada uno de los cinco sumideros se activaron simultáneamente durante 1 min, suministrando agua a un caudal de 8 litros/min, una vez cada 24 h durante 7 días. No se añadió alimentación adicional a En los días 0 y 7, las trampas P en cada uno de los cinco lavabos no se fijaron, y se recolectaron y procesaron muestras de hisopos de la trampa P como se describió anteriormente. La dispersión medida utilizando microesferas fluorescentes. Microesferas de carboxilato de fluoresbrita YO (Polysciences, Inc.) que tenían un diámetro de 1 m y una excitación máxima y emisión de 529 nm y 546 nm, respectivamente, se utilizaron como trazador en los experimentos preliminares para entender la dispersión de gotitas de los sumideros de lavado manual. Para comprobar si las microesferas podían dispersarse desde debajo del colador del fregadero, se inyectó una suspensión de 1 ml de microesferas (10 10 partículas) a través de un colador conectado a un tubo de drenaje de 4,5 pulgadas offset utilizado típicamente para los sumideros accesibles en silla La distancia vertical entre el colador y la suspensión de microesfera inyectada en el tubo de escape fue de 4 pulg. El espacio de contador alrededor del recipiente del fregadero fue completamente limpiado con toallitas de alcohol (Covidien Webcol 6818; Kendall), y las hojas de poliéster precortadas a formas apropiadas fueron colocadas en el mostrador para cubrir todo el contador del fregadero y etiquetadas de acuerdo con la posición (Fig. 6a). El grifo fue encendido durante 5 minutos a un caudal de agua de 1,8 a 3,0 litros/min. Las hojas de poliéster fueron cosechadas y analizadas inmediatamente usando un sistema ChemiDoc MP (Bio-Rad Laboratories, Inc.) con un tiempo de exposición de 5 s. Microesferas fluorescentes fueron enumeradas a partir de los micrografos digitales utilizando el Software de Laboratorio de Imagen (Bio-Rad Laboratories Para comprobar si las microesferas podían dispersarse de la superficie del recipiente del fregadero, el recipiente del fregadero se recubrió uniformemente con una suspensión de microesfera de 20 ml (10 10 partículas/ml) utilizando un hisopo desechable (Sage Products, Inc., Cary, IL), y el experimento de dispersión se repitió siguiendo el protocolo descrito anteriormente. Para comprobar que no había fluorescencia de fondo no específica en el fregadero y/o el agua del grifo, se realizó un control utilizando el mismo protocolo pero sin las microesferas fluorescentes antes de cada experimento. Para comprobar si los organismos vivos en la trampa P podían ser dispersados por agua corriente, se añadió E. coli en solución salina de 10 CFU/ml y se instaló en la línea de desagüe preautoclave (tramposo, tubo de escape y brazos trampa). Del mismo modo, para comprobar si los organismos vivos podían ser dispersados de las piezas de cola de los sumideros accesibles en silla de ruedas, se añadió una suspensión de E. coli de 10 CFU/ml con una jeringa a través del colador en el tubo de escape de 4.5 pies (Fig. 5c ). Al igual que en el experimento de dispersión de microsfera, la distancia vertical entre la suspensión del colador y la E. coli de GFP inyectada en el tubo de escape fue de 4 pulgadas. A continuación probamos si los organismos vivos de la superficie del recipiente del fregadero podían ser dispersados por agua corriente. La superficie del recipiente del fregadero estaba cubierta uniformemente con una suspensión de aproximadamente 20 ml de E. coli, que expresaba 10 UFC/ml GFP. Finalmente, para imitar todas estas condiciones, se instaló una trampa P colonizada con E. coli que expresaba GFP (durante 14 días), y se siguió un régimen de nutrientes (Fig. 5b) durante 14 días para promover intencionadamente la colonización de E. coli que expresa GFP en el tubo de escape y colador adjunto. El día 15 se realizó el experimento de dispersión. Antes de cada uno de los experimentos de dispersión de E. coli que expresa GFP, el espacio del contador fue completamente desinfectado con Caviwipes-1. A continuación, se colocaron placas TSA en el mostrador del fregadero que rodeaba el recipiente y una plataforma de extensión (Fi Se colocaron placas adicionales en el recipiente del fregadero, grifos, tabiques de plexiglás y asas de grifo con cinta adhesiva. Las placas de TSA se colocaron a 3 m de distancia del fregadero como controles negativos. El grifo se encendió durante 5 minutos con un caudal de agua de 1,8 a 3,0 litros/min. Los lides de las placas de TSA se quitaron sólo durante el funcionamiento del grifo. Las muestras de Swab de los aireadores del grifo antes y después del funcionamiento se recolectaron y se plasmaron en TSA. Antes de cada experimento de dispersión, también se recogió agua de 50 ml del grifo, y se plastó alícuotas para evaluar la presencia de E. coli que expresa GFP en el agua de origen y asegurar que no se hubiera producido contaminación cruzada de E. coli que expresa GFP. También se realizó un experimento de dispersión de control utilizando el mismo protocolo La dispersión por área definida (UFC por centímetro cuadrado) se dedujo dividiendo los recuentos de UFC en la placa TSA por la superficie de la placa TSA.
question: ¿Cuál puede ser la causa probable de la propagación de patógenos en el hospital?
answers.text: a través de una tubería sanitaria común