context: Ensayo de eficacia controlada que confirma la resistencia al toltrazuril en un campo aislado de ovinos Eimeria spp. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6034276/SHA: ef000d8cdab3895e23212886f16cce2b8aea458d1Autores: Odden, Ane; Enemark, Heidi L.; Ruiz, Antonio; Robertson, Lucy J.; Ersdal, Cecilie; Nes, Silje K.; Tømmerberg, Vibeke; Stuen, SnorreFecha: 2018-07-05DOI: 10.1186/s13071-018-2976-4Licencia: cc-byAbstract: ANTEGRADO: Coccidiosis debida a Eimeria spp. La resistencia anticoccidial en aves de corral y cerdos, y recientemente describimos la reducción de la eficacia del toltrazuril en ovinos Eimeria spp. en algunas explotaciones ovinas noruegas utilizando una prueba de reducción del recuento de ooquistes fecales recientemente desarrollada (FOCRT), el objetivo del presente estudio fue utilizar un ensayo de eficacia controlada para evaluar la eficacia del toltrazuril frente a un aislado de campo sospechoso de ser resistente. MÉTODOS: Veinte corderos, de 17 a 22 días de edad y criados protegidos contra la exposición a coccidia, fueron infectados con un aislado de campo de 100.000 Eimeria spp. ooquistes. Este aislado se obtuvo de una granja con una eficacia farmacológica previamente calculada del 56% (intervalo de confianza del 95%: -433,9 a 96,6%). En el día 7 de la postinfección, 10 de los corderos fueron tratados por vía oral con 20 mg/kg de toltrazuril (Baycox Sheep vet., Bayer Animal Health), mientras que los otros 10 corderos (controles) recibieron solución salina fisiológica; se realizaron exámenes clínicos y se registraron aumentos de peso; se obtuvieron muestras fecales diarias de diarrea en una escala de 1 a 5 y se determinó la excreción de ooquiste mediante una técnica modificada de McMaster; se identificaron morfológicamente los ooquistes a nivel de especie; a los 17 a 24 días después de la infección, los corderos fueron eutanizados y necropsiados. RESULTADOS: El aislado de Eimeria probado fue resistente contra el toltrazuril, y se observó resistencia tanto en especies patógenas como no patógenas; además, no se La E. ovinoidalis patógena fue la especie dominante, y no se encontró diferencia significativa en la prevalencia individual de E. ovinoidalis post-tratamiento entre corderos tratados (66,9%) y corderos de control (61,9%). Otras especies identificadas incluyeron E. crandallis/weybridgensis, E. parva, E. marsica, E. faurei, E. pallida, E. ahsata y E. bakuensis. CONCLUSIONES: Este estudio confirma la resistencia al toltrazuril en ovinos Eimeria spp. ; además, los datos apoyan el uso de FOCRT como herramienta apropiada para la evaluación de campo de la eficacia anticoccidial. Debido a las limitadas alternativas de tratamiento anticoccidial, estos hallazgos pueden tener implicaciones importantes para la industria ovina, particularmente en el norte de Europa. MATERIAL COMPLEMENTARIO ELECTRÓNICO: La versión en línea de este artículo (10.1186/s13071-018-2976-4) contiene material suplementario, que está disponible para los usuarios autorizados. Texto: Resistencia anticoccidial (ACR), que se desarrolla principalmente como resultado del uso intensivo a largo plazo de fármacos anticoccidiales, se produce ampliamente en la producción avícola y también se ha identificado en Cystoisospora suis en lechones [1] [2] [3] [4] [5]. Además, se ha desarrollado recientemente un método de campo para la evaluación de la eficacia anticoccidial reducida (ECA) en ovinos Eimeria spp., la prueba de reducción del recuento de ooquisto fecal (FOCRT), e indicó que la eficacia del toltrazuril se reduce en algunas manadas de ovejas noruegas [6]. Infecciones con Eimeria spp. En cambio, el tratamiento de la coccidiosis clínica se considera ineficiente debido a los extensos daños intestinales ya causados por la infección [20, 21]. Por lo tanto, la pérdida de sensibilidad al toltrazuril, el único anticoccidial registrado para su uso en ovinos en los países nórdicos [22] [23] [24], debe ser motivo de grave preocupación para la producción de cordero. Las directrices de la Asociación Mundial para el Avance de la Parasitología Veterinaria para la evaluación de la ECA en mamíferos [25], declaran que es necesario contar con métodos verificados para la evaluación de la ECA. Métodos de campo para la evaluación de la eficacia de los fármacos, como el FOCRT [6] y la prueba de reducción del recuento de óvulos fecales utilizada para evaluar la eficacia antihelmíntica [26], dan sólo una indicación de una reducción de la eficacia y necesitan ser verificados mediante ensayos de eficacia controlada (CET) [27, 28]. Además, debido a la variación de patogenicidad entre Eimeria El objetivo del presente estudio fue realizar una ETC para determinar si diferentes especies en un campo aislado de ovinos Eimeria spp. con sospecha de ACR, basado en la FOCRT [6], realmente demostraron resistencia al toltrazuril. Un total de 20 corderos de 8 ovejas de la raza blanca noruega ("Norsk kvit sau") fueron incluidos en el estudio, que fue aprobado por la Autoridad Noruega de Investigación Animal (ID: 11657). Las ovejas fueron sincronizadas usando Chronogest® CR y PMSG® (MSD Animal Health, Buckinghamshire, Reino Unido) y servidas por apareamiento natural. Los corderos fueron arrebatados al nacer (n = 16) o entregados por cesáreas (n = 4) durante un período de 6 días, y posteriormente criados artificialmente. Inmediatamente después del nacimiento, todos los corderos fueron lavados con jabón Optima pH 4 (Optima Produkter AS, Norheimsund, Noruega) y secados antes de ser colocados en cajas con suelos metálicos expandidos, en grupos de cuatro. Durante todo el ensayo se utilizaron calentadores infrarrojos. Una visión general de los grupos de estudio, incluyendo la edad del cordero, el peso al nacer y el género se puede encontrar en el archivo adicional 1: Tabla S1. Los corderos recibieron calostro ovino de ovejas vacunadas contra Clostridium spp. (Covexin-8, Zoetis) durante los primeros 30 minutos de vida, seguidos por calostro de vacas vacunadas (Covexin-8, Zoetis) durante las próximas 24 h. Para evitar casos de anemia hemolítica, el calostro de vaca había sido probado previamente en corderos criados de forma natural. Los corderos fueron alimentados ad libitum con un sustituto comercial de leche (Denkamilk, Denkavit, Fiskå, Mølle, Stavanger), utilizando un sistema de alimentación automática (Holm & Laue, Godkalven, Figgjo, Noruega). Los corderos tenían acceso ad libitum al agua, heno y concentrado comercial de arranque de cordero (FORMEL lam vår, Felleskjøpet, Noruega). Para asegurar que la transmisión de Eimeria a los corderos a través de calostro contaminado y heno no podía ocurrir, ambos fueron congelados a -75°C durante un mínimo de 24 h, antes de la provisión a los corderos. El campo aislado de Eimeria spp. se obtuvo de una de las manadas (ID 35) que participaron en el reciente estudio FOCRT [6]. De acuerdo con los resultados de la FOCRT, toltrazuril había reducido la eficacia frente a Eimeria en dos rebaños. Sin embargo, ninguno de estos rebaños estaba disponible para el CET, por razones geográficas y prácticas. Así, se encontró que el tratamiento con toltrazuril en el rebaño seleccionado tenía una eficacia del 56,0%, pero los resultados fueron clasificados como inconclusos, debido al amplio intervalo de confianza del 95% (IC) de -433,9 y 96,6% [6]. Para obtener suficientes eimeria ooquistes de este aislado de campo mixto (llamado "NMBU ID 35") para el presente estudio, se obtuvieron muestras fecales de 35 corderos en este rebaño 9 días después del tratamiento con toltrazuril (Baycox® Sheep vet., Bayer Animal Health, Oslo, Noray). En resumen, las heces se mezclaron 1:1 con agua y se filtraron. El filtrado de la mezcla fecal se mezcló 1:1 con solución de azúcar saturada (densidad: 1,5 g/l) en un recipiente de plástico y se dejó flotar sobre un portaobjetos de vidrio. El portaobjetos se lavó cada dos horas con agua desionizada durante tres días consecutivos y los lavados se recolectaron. Los lavados se centrifugaron a 2300× g durante 20 minutos, el sobrenadante se desecharon y el sedimento se mezcló 1:1 con agua desionizada en un matraz de vidrio con aireación constante. Los ooquistes del frasco se dejaron esporular durante 7 días a temperatura ambiente. Los ooquistes esporulados se almacenaron durante 18 días a 4°C. Basándose en la morfología [30], vista por microscopía ligera a 400× magnificación (véase también la sección de muestras fecales), y la clasificación de 300 ooquistes, el aislado de campo consistía en E. parva (32%), E. crandallis/ weybridgensis (25%), E. ovinoidalis (24%), E. faurei (9%), E. marsica (8%), E. pallida (1%), E. ahsata (< 1%) y E. bakuensis (< 1 %). Todos los corderos estaban infectados (día 0) a los 17-22 días de edad, utilizando un tubo esofágico. Se administró a cada uno de los 20 corderos una dosis de aproximadamente 100.000 ooquistes esporulados, diluidos en agua hasta un volumen total de 5 ml. A continuación, se trataron por vía oral (día 7) dos corderos seleccionados aleatoriamente (de cada grupo de cuatro) con 0,4 ml/kg de toltrazuril (baycox® ovejero. 50 mg/ml, Bayer Animal Health) y los corderos restantes (controles) se administraron 0,4 ml/kg de NaCl al 0,9% (B. Braun Medical AS, Vestskogen, Noruega). Durante el ensayo se realizaron exámenes clínicos diarios. La temperatura rectal se midió a los días 0, 1, 2 y 7, y al día a partir del día 14, y las temperaturas > 40,5°C se consideraron fiebre. Los corderos se pesaron una vez a la semana utilizando un peso calibrado (Kruuse, Drøbak Norway) con sensibilidad de 0,1 kg, hasta 14 días después de la infección, y posteriormente tres veces por semana. Dos corderos (controles) fueron tratados por vía oral con trimetoprim/sulphamethoxasole (Bactrim, Roche, Etterstad, Noruega) durante los tres primeros días de vida debido a sospecha de infección por Escherichia coli, de la que ambos se recuperaron a las 48 h. Seis corderos, dos controles y cuatro tratados con toltrazuril, desarrollaron cojera debido a absceso interdigital, y Streptococcus aureus fue detectado en dos corderos. Cuatro corderos recuperados sin tratamiento, y dos de los corderos recuperados después del tratamiento con bencilpenicilinaprocaína (Penovet vet., Boehringer Ingelheim Vetmedica, Copenhague, Dinamarca) administrados por vía intramuscular durante tres días. En el examen clínico, se prestó especial atención a los signos clínicos asociados con infecciones por Eimeria spp., Deshidratación, pirexia, debilidad, anorexia y, en particular, la presencia de diarrea. Diarrea hemorrágica grave y deshidratación en un cordero en el día 17, llevó a la eutanasia de todo ese grupo de cuatro corderos. En el día 18, otro cordero mostró signos de diarrea hemorrágica, y todos los corderos de este grupo también fueron eutanasia. Los tres grupos restantes fueron eutanasiados en los días 21, 23 y 24. Se extrajeron muestras de sangre de v. yugularis utilizando tubos vacuette (tratados con EDTA; BD, Franklin Lakes, EE.UU.) a 48 ± 2 h después del nacimiento y a los días 0, 7 y en eutanasia. La hematología se realizó utilizando el sistema de hemotología ADVIA 120 (Bayer Diagnostics, Leverku Se consideró la deshidratación con un hematocrito (hct) de > 45,0% [31]. Se centrifugaron tubos sanguíneos enteros, se extrajo y se almacenó el suero a -20°C hasta un análisis posterior. El análisis bioquímico fue realizado por ABX Pentra 400 (Horiba, Les Ulis, Francia), e incluyó análisis de hierro, proteína total, albúmina, urea, creatinina, gamma-glutamil transferasa, deshidrogenasa de glutamato y ácido betahidroxibutírico. Se obtuvieron muestras fecales individuales de cada cordero diariamente desde el día 10 de vida hasta el final del experimento. Se realizó la puntuación visual de la consistencia fecal en una escala de uno a cinco (1: normal, pelado; 2: blando; 3: líquido; 4: acuoso; 5: acuoso con sangre y/o tejido intestinal Una puntuación ≥ 3 fue considerada como diarrea. Las muestras fueron recolectadas utilizando una "cuchara fecal" interna [6] y las muestras fecales fueron puestas en bolsas con cierre de cremallera, las cuales fueron empaquetadas al vacío (Fresh'n'easy, OBH Nordica, Sundbyberg, Suecia), almacenadas a 4°C, y analizadas en 37 días. La tasa de excreción de ooquiste se determinó mediante una técnica modificada de McMaster con una sensibilidad teórica de 5 ooquistes por gramo (OPG) [6]. Cien ooquistes de Eimeria de todas las muestras ≥ 1000 OPG fueron examinados mediante microscopía ligera a 400× magnificación e identificados a nivel de especie, utilizando criterios morfológicos [30]. Sin embargo, debido a su similitud morfológica, los ooquistes de E. cranda Los recuentos de ocyst fueron analizados por la FOCRT [6], que consiste en un procedimiento en dos etapas. Primero, se evaluó el tiempo de tratamiento y muestreo, seguido de la evaluación de la eficacia del tratamiento, comparando muestras fecales de corderos tratados después del tratamiento con muestras equivalentes de controles no tratados. Se obtuvieron muestras pretratamiento (muestra 1) en el día 7 (día de tratamiento), y muestras posttratamiento (muestra 2) en los días 14-18; luego se realizó la FOCRT utilizando los recuentos de oocyst post-tratamiento para los cinco intervalos de tiempo posibles (7-11 días) entre muestras 1 y 2. Se analizaron muestras fecales obtenidas en eutanasia para rotavirus, coronavirus, Cryptosporidium spp. y bacteriología general. Se realizaron pruebas adicionales para Cryptosporidium spp. en corderos diarreicos en el momento de la infección (día Se analizaron frotis fecales en el Instituto Veterinario Noruego de Oslo para Cryptosporidium mediante análisis de inmunofluorescencia directa (Crypt-a-GloTM, Waterborne Inc., Nueva Orleans, EE.UU.), mientras que la presencia de rotavirus y coronavirus se probó mediante métodos diagnósticos estándar. Se obtuvieron muestras de análisis bacteriológicos a partir de la mitad del yeyuno y la espiral del colon, se esparcieron en placas de agar de sangre de oveja, y se incubaron en condiciones anaeróbicas y anaeróbicas para las 24-48 h a 37°C y el 5% de CO 2. En casos de diarrea hemorrágica, se obtuvieron muestras adicionales de cisteína de lactosa azul bromotimol agar (brolactina/CLED agar) para la posible identificación de Salmonella [33] Los corderos fueron eutanasiados en los días 17-24, por inyección intravenosa con pentobarbital (Euthasol vet., Virbac, Sollihøgda, Noruega) a 140 mg/kg. Inmediatamente después se realizó la necropsia estándar, con énfasis en los intestinos. Se tomaron muestras histológicas del íleo medio, proximal y distal, medio y base de cecum, espiral de colon y colon distal, además del corazón, pulmón, hígado y riñón. Las muestras fueron fijas por inmersión en un 4% de formaldehído, parafina embebidos, y manchadas con hematoxilina y eosina (HE). La evaluación histológica se realizó mediante microscopía ligera y se realizó una evaluación semi-cuantitativa ciega (evaluador único) para evaluar la patología intestinal. Los parámetros de evaluación incluyeron cambios en: i) velli, ii) epitelio superficial (atrofia/atenuación), iii) grado de infección por Eimeria, iv) hiperemia, v) edema, vi) infiltración de células inflamatorias y vii) abscesos en criptas, y fueron anotados de la siguiente manera: 0 = mínimo; 1 = pequeño; 2 = moderado; 3 = severo, incluyendo la clasificación de medio paso. Además, la presencia de necrosis epitelial se clasificó como presente (1) o ausente (0). Se calculó una puntuación histológica total para cada tejido mediante la suma de todos los parámetros evaluados (i-vii). Los datos fueron gestionados en Excel 2013 (Microsoft Inc., Redmond, EE.UU.), y posteriormente analizados en R [34] y Stata 14 (Statata Statistical Para los cálculos de significancia basados en la media, se utilizó una prueba t. P < 0,05 se consideró significativa; las tasas medias de crecimiento fueron superiores a 300 g/día hasta los días 14-16, con lo cual la tasa media de crecimiento disminuyó a alrededor de 0 g/día (fig. 1); las tasas de crecimiento volvieron a aumentar a partir del día 21; se observó el mismo patrón tanto en corderos tratados como en corderos de control; desde el día 15, tanto tratados como control tuvieron una puntuación fecal media ≥ 3, indicando diarrea; la puntuación fecal media máxima se observó en el día 17 (3,9 ± 0,2) y el día 18 (4,4 ± 0,3) en los grupos tratados y control, respectivamente; se observó diarrea hemorrágica a partir del día 14, en dos corderos tratados y cinco de control, y se observó tenesmo en dos corderos de control (día 17). Se observó un aumento de la temperatura rectal desde el día 14, con temperaturas máximas medidas en el día 18 (40,4 ± 0,4 °C) y 16 (40,9 ± 0,4 °C) en los grupos tratados y control, respectivamente; la duración media de la fiebre (> 40,5 °C) fue de 2,3 ± 0,5 días y 1,9 ± 0,4 días para los grupos tratados y control, respectivamente; para estos parámetros, no se observaron diferencias significativas entre los grupos en ningún momento; en la eutanasia, la media de hct fue de 39,2 ± 1,7% y 41,4 ± 1,9% en los grupos tratados y control, respectivamente; sin embargo, la deshidratación (hct > 45,0%) sólo se observó en 3 corderos, de los cuales uno había sido tratado con toltrazuril; la media de proteína sérica total disminuyó en ambos grupos desde La excreción de oocisto se registró por primera vez en un cordero tratado en el día 10 (10 OPG), seguido por la excreción de oocisto en todos los corderos en ambos grupos desde el día 14 en adelante. La excreción máxima de oocisto se observó en el grupo tratado en el día 20 (media de OPG: 5.438.500) y en el grupo control en el día 21 después de la infección (media de OPG: 3.630.850) (Fig. 2). Posteriormente, la excreción de oocisto disminuyó. No hubo diferencia significativa en la excreción de oocisto y la distribución de especies entre los grupos en ningún momento. Todas las especies presentes en el aislado de campo fueron aisladas de las muestras fecales de todos los 20 corderos infectados. E. ovinoidalis fue la especie más prevalente tanto en corderos tratados como en corderos de control (Ta La eficacia, según la FOCRT, se evaluó con confianza si la pendiente era ≥ 0,75 y con precaución si la pendiente era ≥ 0,5 y < 0,75 [6]. La pendiente osciló entre 1,24 y 1,69 para la excreción total de ooquistes en los corderos de control. En la Tabla 2 se presentan pendientes, estimaciones de máxima probabilidad y IC 95% para la eficacia media geométrica de todos los ooquistes, E. ovinoidalis, E. crandallis/weybridgensis, y la Eimeria spp. no patógena; la eficacia reducida de toltrazuril es aparente tanto frente a especies patógenas como no patógenas. La pendiente fue ≥ 0,75 para todos los intervalos de tiempo y especies, excepto para cuatro de los cinco intervalos de tiempo de E. crandallis/weybridgensis. Las muestras analizadas para Cryptosporidium spp., Salmonella, coronavirus y rotavirus fueron todas negativas. Los análisis bacteriológicos mostraron una flora mixta, dominada por coliformes y Enterococcus spp. Los hallazgos patológicos brutos incluyeron mucosa ileal engrosada y plegada difusa (7 controles tratados y 7 controles), y contenido ileal fibrinos en dos corderos (uno tratado y otro controlado). Se observaron focos nodulares o plasmáticos en la mucosa ileal en 4 corderos tratados y 6 de control (fig. 3a ). Los ganglios linfáticos distales yeyunos regionales aumentaron moderadamente en tamaño y edematosos en 5 corderos tratados y 6 de control. Finalmente, se observó contenido abomasal acuoso en > 50 % de los animales de ambos grupos. La evaluación de la microscopía mostró lesiones, principalmente en el íleo, el cecum y el colon, con lesiones menores en el yeyuno (fig. 3b-f ); sin embargo, no hubo diferencias significativas con respecto a los puntajes histológicos entre los grupos tratados y control en cualquiera de los segmentos intestinales; la puntuación histológica calculada más alta se encontró en el íleo proximal y en la base del cecum (fig. 4); la puntuación media para cada parámetro se puede encontrar en el archivo adicional 2: Tabla S2 ; se observaron diferentes cantidades de estadios de Eimeria intracelular en todos los segmentos intestinales, excepto en el jejunum, y se localizaron principalmente en el epitelio vil, con menos parásitos en la cripta epitelio y lamina propia, y pocos en los vasos submucosa y linfáticos. Tanto en los corderos tratados como en los de control, los cambios en las superficies intestinales variaron desde la atrofia de la luz del epitelio yeyuno y el rompimiento de las vellosidades ileales afectadas (Fig. 3b), hasta las áreas de aplanamiento total, atenuación del epitelio superficial (Fig. 3e) y necrosis (Fig. 3d). Se encontraron parches de necrosis epitelial en todos los corderos.La infiltración de células inflamatorias incluyó principalmente monocitos y eosinófilos, pero también neutrófilos y macrófagos, y se encontró tanto en la lámina propia como en la submucosa.Se observaron diferentes grados de edema, hiperemia y hemorragia en todas las secciones tisulares examinadas, así como en los corderos tratados y controlados. 3b) fueron encontrados en diverso grado en todos los corderos, y contenían células inflamatorias, escombros y diferentes etapas de Eimeria spp. Por lo que sabemos, este es el primer informe de resistencia toltrazuril confirmada experimentalmente en un campo aislado de Eimeria spp. Los resultados también apoyan el uso de FOCRT como herramienta para evaluar ECA en el campo. Aunque diez de los 20 corderos infectados experimentalmente con Eimeria fueron tratados metafilácticamente con la dosis recomendada de 20 mg/kg de toltrazuril (Baycox® Sheep vet., Bayer Animal Health), este tratamiento no resultó en una reducción significativa de la excreción de oocitos en los animales tratados, en comparación con los controles. Además, no se observaron diferencias significativas en la presentación clínica, patología bruta y hallazgos histopatológicos. Los datos de especiación mostraron que tanto las especies patógenas como las no patógenas de Eimeria en este aislado eran resistentes al toltrazuril. Los corderos excretaron un alto número de ooquistes, como se ha registrado previamente en infecciones experimentales con múltiples Eimeria spp. [35]. Aunque la excreción de ooquiste disminuyó alrededor del día 20 después de la infección, no se pudo determinar la duración total de la excreción, ya que los corderos fueron eutanizados. El patrón de excreción observado aquí, con un aumento exponencial, una fase de meseta y una disminución, se ha observado previamente en infecciones experimentales [35] [36]. Sin embargo, debido a la reinfección continua en condiciones de campo natural, la excreción de ooquiste puede ser más larga [38, 39] que la observada en el presente estudio, lo que también podría explicar La resistencia de varias especies, como se observa aquí, también se ha observado en aislados de campo de Eimeria spp. aviar [3, 40]. Notas: Las estimaciones se basaron en los recuentos de ooquistes post-tratamiento durante cinco intervalos de tiempo entre la muestra 1 (día 7 después de la infección) y la muestra 2, y se calcularon de acuerdo con la FOCRT [6]. Se evaluó con precaución una pendiente ≥ 0,5 y < 0,75, mientras que una pendiente < 0,5 se interpretó como inválida a Cuatro corderos se eutanalizaron en el día 17 Abreviaturas: E. ovi, E. ovinoidalis; E. c/w, E. crandallis/weybridgensis; No patogénica, todas las especies excepto E. ovinoidalis y E. crandallis/weybridgensisDe especial importancia en este estudio es Como esta especie es una de las más patógenas Eimeria spp. en ovinos [41, 42], la resistencia contra el fármaco anticoccidial más comúnmente utilizado indica que puede esperarse que la coccidiosis clínica grave ocurra en manadas resistentes. Aunque E. ovinoidalis fue la especie dominante excretada, la especie más prevalente en el inóculo de aislamiento de campo original fue E. parva. Esto podría reflejar similitudes entre E. ovinoidalis y E. ninakholyakimovae en cabras, esta última de las cuales desarrolla macroesquizontes en células endoteliales, resultando en la liberación de miles de merozoitas [42, 43]. Así, el grado de multiplicación/ replicación intracelular, que presumiblemente también está relacionado con la extensión de patogenicidad asociada con esta especie, es mayor para E. Para E. crandallis/weybridgensis, los cálculos de la FOCRT mostraron resultados no válidos de tres de los cinco puntos de tiempo de muestreo, probablemente debido a que las pruebas se realizaron demasiado pronto en la infección. La excreción de E. crandallis/weybridgensis aumentó predominantemente desde el día 16 en adelante, y la eutanasia se realizó en los días 17-24. Así, los períodos de prepatentes más largos para estas especies en comparación con E. ovinoidalis [44] probablemente explican estos resultados. Este es un hallazgo importante, ya que el número de granjas inválidas probadas en la FOCRT [6] podría haber sido menor si la muestra 2 hubiera sido recogida 10-11 días después de la muestra 1. Estos hallazgos también destacan el hecho de que aunque Eimeria spp. se considera a menudo como un grupo relativamente uniforme, son en realidad especies separadas con diferencias potencialmente importantes en Dos de los corderos fueron tratados con trimetoprim/ sulfa durante sus primeros días de vida, preparados que han demostrado ser eficaces en el tratamiento de la coccidiosis ovina [45, 46]. Sin embargo, los períodos de espera para medicamentos comparables autorizados en el ganado bovino son de 10-15 días para la carne [47], y estos corderos fueron tratados > 17 días antes de la infección experimental. Además, estos corderos tratados estaban en el grupo control, y por lo tanto este tratamiento no debería haber afectado los resultados del estudio. Signos clínicos similares como los observados aquí podrían ser causados por Cryptosporidium spp., coronavirus, rotavirus y Salmonella spp., pero ninguno de estos patógenos fueron detectados. Además, los hallazgos de coliformes y Enterococcus spp. pueden ser considerados como flora intestinal normal de corderos [48]. Los signos clínicos observados fueron, por lo tanto, casi seguramente causados por Eimeria spp., particularmente las dos principales especies patógenas, E. ovinoidalis y E. crandallis [35, 36]. La mucosa ileal engrosada se observa a menudo en corderos infectados con E. ovinoidalis [49]. Además, los cambios histológicos, como las vellosidades embotadas y la necrosis superficial, así como la presencia de coccidia, hiperemia, edema, infiltración de células inflamatorias y abscesos de criptas, también están de acuerdo con informes anteriores [42, 50, 51]. Para mejorar nuestro estudio, un grupo adicional de corderos no infectados podría haber sido ventajoso ya que esto habría permitido una mejor comparación entre el aumento de peso y los cambios histopatológicos. Sin embargo, esto no era factible en el momento del Además, debido a la falta de valores de corte definidos para la ECA, podría haber sido ventajoso incluir un aislado de ooquiste de una granja no sospechada (es decir, un aislado susceptible) [25]. Esto habría permitido comparar diferentes parámetros, como la excreción de ooquiste, entre corderos tratados y controlados infectados con Eimeria spp susceptible o resistente. Sin embargo, debido a la falta de herramientas para la selección de estos aislados de ovinos sensibles, optamos por restringir nuestro CET a los corderos infectados con el aislado "NMBU ID 35" como primer paso en la caracterización de la resistencia anticoccidial en Eimeria spp. Aunque los valores iniciales de eficacia no han sido previstos para toltrazuril por el fabricante, varios estudios han investigado su efecto sobre la excreción de ooquiste. Por ejemplo, su eficacia ha sido del 96,9-99,9% en el período de 7 a 98 días después del primer tratamiento, en un estudio en el que los corderos fueron tratados cada 14 días [52]. Otros estudios han mostrado eficacias toltrazuriles [proporcionadas en la publicación o calculadas como 1-(grupo tratado con OPG medio)/(grupo de control de OPG medio) a partir de los datos de la publicación] que oscilan entre 90,0 y 100,0% en el período de dos a tres semanas después del tratamiento [13, 18, 19, [53] [55] [55]. Estas eficacias son mucho más altas que las calculadas en el presente estudio, y por lo tanto los datos comparativos proporcionan una indicación más clara de resistencia en el aislado "NMBU ID 35". Toltrazuril ha sido comercializado para el tratamiento anticoccidial en ovinos desde los años 80, y su uso ha aumentado en los últimos años, tanto en Noruega [57] como en el Reino Unido (Dr. Gillian Diesel, comunicación personal). El uso extensivo de un medicamento puede dar lugar a una disminución de la eficacia, posiblemente debido a las etapas haploides de Eimeria, que seleccionan inmediatamente la resistencia [1, 5]. Dado que toltrazuril es el único anticoccidial registrado para ovinos en varios países, el desarrollo de la resistencia en especies ovinas Eimeria puede dar lugar a que haya pocas opciones de tratamiento disponibles para los ovinos, especialmente en Europa septentrional [22] [23] [24]. Diclazuril es un anticoccidial que ha sido registrado para el tratamiento de ovinos en varios países, pero como puede compartir un modo de acción común al de toltrazuril [58], la resistencia cruzada entre estos dos derivados de triazina en ovinos Eimeria spp. parece muy probable y debe ser investigada. De hecho, la resistencia cruzada entre diclazuril y toltrazuril fue reportada para un aislado de Eimeria spp. aviar hace más de 20 años [3]. Nuestros resultados indican que existe una clara necesidad de herramientas para evaluar la ECA, tales que se pueden evitar tratamientos ineficientes y, por lo tanto, el potencial de reducción del bienestar animal y la productividad. Tales herramientas están disponibles para aves de corral, utilizando diferentes métricas, tales como índice de ooquiste, ganancia de peso corporal, ganancia relativa de peso, puntuaciones de lesión e índice anticoccidia Sin embargo, aún no se han establecido tales métodos para su uso en rumiantes [25], con la figura 4 Parcelas de caja y silbato con valores atípicos que ilustran la puntuación histológica. La puntuación fue una suma de todos los parámetros histológicos evaluados (ver texto) en los 20 corderos infectados por Eimeria spp., rojos: tratados con toltrazuril y azules: controla la excepción de la recién publicada FOCRT [6]. Aunque la FOCRT puede servir como herramienta para la evaluación de campo de la ECA, existe un claro requisito para seguir probando su uso en diferentes entornos. La confirmación del espectro de resistencia en especies de Eimeria ovina aumenta la urgencia de identificar tratamientos alternativos y optimizar otras estrategias de control. Los efectos anticoccidiales de diferentes plantas y extractos naturales, como la sainfoína (Onobrichis viciifolia), las vainas de algarroba (Ceratonia siliqua), el extracto de cáscara de granada (Punica granatum), los extractos de proantocianidina de semillas de uva y diferentes antioxidantes naturales, han sido investigados in vivo e in vitro en diferentes hospedadores [60] [61] [62] [64]. Sin embargo, ninguna de estas sustancias bioactivas ha sido, hasta ahora, comercializada para la prevención de la coccidiosis clínica. Además, existen vacunas disponibles para Eimeria spp. aviar [65, 66], y la inmunización exitosa de los cabritos de cabra con Eimeria spp. atenuada se ha realizado [67]. Por lo tanto, los esfuerzos actuales deben centrarse en identificar la ECA y mantener la eficacia del toltrazuril en rebaños sensibles. Las estrategias de manejo que reduzcan la necesidad de anticoccidiales reduciendo la presión de infección, posiblemente lograda mediante la aplicación de estrictas medidas higiénicas, y la mejora del manejo de rebaños y pastos deben ser activamente fomentadas por veterinarios e incentivos de política agrícola [11]. Además, los agricultores deben ser informados sobre la importancia de las técnicas correctas de dragado, incluyendo la estimación de dosis y calibración de pistolas, ya que se ha demostrado que éstas son inadecuadas en varias granjas [12]. Hasta nuestro conocimiento, este es el primer informe de ACR contra toltrazuril en un aislado de campo de Eimeria ovino, que incluyó la especie altamente patógena, E. ovinoidalis. Los resultados también apoyan el uso de FOCRT para la evaluación de En el futuro, las dificultades en el manejo de la coccidiosis sin quimioterapia, debido a las pocas opciones de tratamiento disponibles, pueden afectar gravemente tanto el bienestar animal como la economía de la industria ovina. Fichero adicional 1: Tabla S1. Información sobre los 20 corderos infectados con Eimeria spp. en el día 0. (PDF 22 kb) Fichero adicional 2: Tabla S2. Hallazgos histopatológicos de corderos tratados con toltrazuril y controles eutanizados 17-24 días después de la infección con 100.000 Eimeria oocists. (PDF 118 kb) Abreviaturas ECA: eficacia anticoccidial; ACR: resistencia anticoccidial; CET: ensayo de eficacia controlada; FOCRT: prueba de reducción del recuento de ooquiste fecal; hct: hematocrito; OPG: oocysts per gram
question: ¿Qué se usa toltrazuril para tratar?
answers.text: anticoccidial