context: Glicirrizina ejerce efectos antioxidantes en las células infectadas por el virus H5N1 Influenza A e inhibe la replicación del virus y la expresión génica proinflamatoriohttps://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3096629/SHA: f3b7f4469ac01f1ce916d24172570c43c537627eAutores: Michaelis, Martin; Geiler, Janina; Naczk, Patrizia; Sithisarn, Patchima; Leutz, Anke; Doerr, Hans Wilhelm; Cinatl, JindrichFecha: 2011-05-17DOI: 10.1371/journal.pone.001705Licencia: cc-byAbstract: Glicirrizinina es conocida por ejercer efectos antivirales En este caso, se investigaron los efectos de un preparado de glicirrhizina parenteral aprobado (Stronger Neo-Minophafen C) sobre la replicación del virus H5N1 de la gripe altamente patógena, la apoptosis inducida por H5N1 y las respuestas proinflamatorias inducidas por H5N1 en células epiteliales pulmonares (A549). Las concentraciones terapéuticas de glicirrizina inhibieron sustancialmente la expresión inducida por H5N1 de las moléculas proinflamatorias CXCL10, interleucina 6, CCL2 y CCL5 (concentración efectiva de glicirrizina 25 a 50 μg/ml), pero interfirieron con la replicación de H5N1 y la apoptosis inducida por H5N1 en menor grado (concentración efectiva de glicirrizina 100 μg El mecanismo por el cual la glicirrizina interfiere con la replicación de H5N1 y la expresión génica proinflamatoria inducida por H5N1 incluye la inhibición de la formación inducida por H5N1 de especies de oxígeno reactivo y (a su vez) la reducción de la activación de la gripe H5B, JNK y p38, los eventos de señalización sensibles a la redox conocidos como relevantes para la replicación del virus influenza A. Por lo tanto, la glicirrizina puede complementar el arsenal de fármacos potenciales para el tratamiento de la enfermedad H5N1. Texto: Los virus H5N1 altamente patógenos se consideran progenitores potenciales de pandemias de gripe [1] [3] [4] [5] [6]. Al menos para la primera ola de una pandemia de H5N1 no se dispondrá de cantidades suficientes de vacunas adecuadas [1] [2] [4] [6] [7] [7] [8]. Por lo tanto, la terapia antiviral para los virus de la gripe A, incluidas las cepas altamente patógenas del virus H5N1 sigue siendo de gran importancia para la defensa de primera línea contra el virus [1] [2] [3] [4] 6, 9]. Los inhibidores de la neuraminidasa oseltamivir y zanamivir, así como los adamantanes amantadin y rimantadin que interfieren con la proteína de la gripe M2 están autorizados para el tratamiento de la gripe [1] [2] [3] [4] 6]. Sin embargo, el uso de ambas clases de fármacos está limitado por la aparición de cepas de virus resistentes. En las cepas de gripe estacional, la mayoría de los virus H3N2 y una gran proporción de virus H1N1 en humanos se consideran ahora resistentes a la amantadina y a la rimantadina [10] [11] [12] [13]. Además, durante la temporada de gripe 2007/08 se ha notificado un aumento drástico de los virus H1N1 resistentes a oseltamivir en el hemisferio norte [14] [15] [16] [17]. Datos preliminares de los Estados Unidos predicen un aumento adicional para la temporada 2008/09, lo que puede dar lugar a que más del 90% de las cepas circulantes de H1N1 sean resistentes a oseltamivir [14]. Las cepas del virus H5N1 parezcan ser generalmente menos sensibles al tratamiento antiviral que las cepas estacionales del virus A y las cepas H5N1 resistentes al tratamiento surjan [1] [2] [3] [4] 6, [18] [19] [20] [21]. Más aún, faltan agentes parenterales para el tratamiento de pacientes gravemente enfermos. Se ha encontrado que interfiere con la replicación y/o la inducción del efecto citopatógeno (ECP) de muchos virus incluyendo virus respiratorios tales como virus respiratorios sincitiales, coronavirus SARS, virus del VIH y virus de la gripe [22] [23] [25] [26] [27]. Además, las propiedades antiinflamatorias e inmunomoduladoras fueron atribuidas a la glicirrhizina [26]. La gravedad de la enfermedad humana H5N1 se ha asociado con hipercitokinemia (''citokine storm'') [29, 30]. El tratamiento antiviral más inmunomodulador retardado redujo la mortalidad inducida por H5N1 en ratones [31]. Por lo tanto, los efectos antiinflamatorios e inmunomoduladores ejercidos por la glicirrizina pueden ser beneficiosos para el tratamiento de H5N1. Además, la glicirrhizina es un antioxidante conocido [26] y los antioxidantes ya han demostrado interferir con la replicación del virus influenza A y las respuestas proinflamatorias inducidas por el virus [32] [33]. El Neo-Minophagen C (SNMC) es un preparado de glicirrizina (disponible como tabletas o formulación parenteral) que está aprobado en Japón para el tratamiento de enfermedades hepáticas crónicas y se comercializa en Japón, China, Corea, Taiwán, Indonesia, India y Mongolia. Aquí, investigamos la influencia de la SNMC en la replicación H5N1, en la expresión citoquina inducida por H5N1, en el estrés oxidativo celular inducido por H5N1 y en eventos críticos de señalización celular inducidos por H5N1 en neumocitos humanos (línea celular A549). La cepa de gripe A/Vietnam/1203/04 (H5N1) fue recibida del Centro de Influenza de la OMS (Instituto Nacional de Investigación Médica, Londres, Reino Unido). La cepa de gripe H5N1 A/Tailandia/ 1(Kan-1)/04 fue obtenida del Prof. Pilaipan Puthavathana (Universidad de Mahidol, Bangkok, Tailandia). Las existencias de virus se prepararon mediante la infección de células de Vero (Renino de mono verde africano; ATCC, Manassas, VA) y alícuotas se almacenaron en 280uC. Los títulos de virus se determinaron como dosis infecciosa del 50% de cultivo tisular (TCID 50/ml) en células de Vero confluentes en placas de microtiros de 96well. Las células A549 (carcinoma de pulmón humano; ATCC: CCL-185, obtenidas de LGC Standards GmbH, Wesel, Alemania) fueron cultivadas a 37uC en medio esencial mínimo (MEM) complementado con un 10% de FBS, 100 UI/ml de penicilina y 100 mg/ml de estreptomicina. Los monocitos humanos fueron aislados de capas buffy de donantes sanos, obtenidos del Instituto de Medicina de Transfusión y Hematología Inmune, Centro Alemán de Donantes de Sangre de la Cruz Roja, Johann Wolfgang Goethe-University, Frankfurt am Main. Después de la centrifugación en Ficoll (Biocoll)-Hypaque gradiente de densidad (Biochrom AG, Berlín, Alemania), las células mononucleares fueron recogidas de la interfaz y lavadas con PBS. Luego, Los monocitos fueron cultivados en IMDM complementado con 10% de suero humano agrupado, 100 UI/ml de penicilina, y 100 mg/ml de estreptomicina. La viabilidad celular fue evaluada en capas de células confluentes con CellTiter-GloH Ensayo de Viabilidad Celular Luminiscente (Promega GmbH, Mannheim, Alemania) de acuerdo con el protocolo del fabricante. La viabilidad celular se expresó como porcentaje del control no tratado. Para determinar la localización de NP intracelular, H5N1 infectada A549 se fijaron 8 horas p.i. durante 15 minutos con acetona/ metanol helado (40:60, Mallinckrodt Baker B.V., Deventer, Países Bajos) y se mancharon con un anticuerpo monoclonal de ratón (1 h de incubación, 1:1000 en PBS) dirigido contra la nucle Se utilizó como anticuerpo secundario un IgG (H&L) antimouse de cabra Alexa Fluor 488 (Invitrogen, Eugene, Oregon, EE.UU.) (1 h de incubación, 1:1000 en PBS). Nuclei se tiñó utilizando 49,6-diamidin-2fenilindol (DAPI) (Sigma-Aldrich Chemie GmbH, Munich, Alemania). Se visualizó la fluorescencia utilizando el microscopio de fluorescencia Olympus IX 1 (Olympus, Planegg, Alemania). Para el análisis citométrico de flujo se utilizaron los mismos anticuerpos. El ensayo de reducción del efecto citopatógeno (CPE) se realizó como se describe anteriormente [34]. Los monocapas de células A549 confluentes cultivados en placas de microtitre de 96 pocillos fueron infectados con cepas de influenza A en las multiplicidades de Después de un período de adsorción de una hora, las células fueron lavadas para eliminar el virus no desechado. La EPC inducida por el virus se registró a las 24 h después de la infección (p.i.). Salvo que se indique lo contrario, las células A549 fueron tratadas continuamente con glicirrizina a partir de un período de pre-incubación de 1 h. Para los experimentos de tiempo de adición, la glicirrizina se añadió exclusivamente durante el período de pre-incubación de 1 h, exclusivamente durante el período de adsorción de 1 h, o después exclusivamente después de la eliminación del virus de entrada. El ARN total se aisló de cultivos celulares utilizando reactivo TRI (Sigma-Aldrich, Munich, Alemania). Se utilizaron los siguientes imprimadores: sentido 59 acg tat gac tac ccg cag tat tca g 39; antisense 59 aga cca gcy acc atg att gc 39; sonda 6-FAM-tca aca gtg gcg agct cta gca-TAMRA. La fracción de células con contenido de ADN fraccionado (sub-G1' subpoblación celular) indica citotoxicidad. Las células sub-G1 se consideran células muertas (generalmente apoptóticas). Las células se fijaron con un 70% de etanol durante dos horas a 220uC. El ADN celular se tiñó utilizando propidium ioduro (20 mg/ml) y se analizó mediante citometría de flujo (FacsCalibur, BD Biosciences, Heidelberg, Alemania). Se midió la activación de caspasa utilizando los ensayos Caspasa-Glo 8, 9 ó 3/7 (Promega, Mannheim, Alemania) siguiendo las instrucciones del fabricante. Se recogieron y congelaron sobrenadantes del cultivo celular a 280uC. Se cuantificaron citoquinas/quimioquinas mediante conjuntos específicos ELISA Duo (R&D Systems GmbH, Wiesbaden, Alemania) siguiendo las instrucciones del fabricante. La actividad NFkB se investigó en células infectadas por H5N1 (MOI 0,01) mediante la cuantificación de las subunidades NFkB Rel A (p65) y NFkB1 (p50) a partir de extractos nucleares utilizando el factor de transcripción TransAM TM ELISAs (Active Motif, Rixensart, Bélgica). El extracto nuclear se preparó utilizando el kit de extracto nuclear (Motif activo, Carlsbad, CA, EE.UU.) siguiendo las instrucciones del fabricante. Se investigaron sobrenadantes del cultivo celular para la actividad quimiotáctica mediante la medición de la actividad para inducir la migración de monocitos a través de insertos de membrana en placas de 24 pocillos (tamaño de poro 8 mm; BD Biosciences, Heidelberg, Alemania). Se añadieron monocitos (1610 6 en 100 ml de IMDM con 10% de suero humano agrupado) a los insertos de cultivo celular (cámara superior) y sobrenadantes de cultivo celular (300 ml), a la cámara inferior del pozo. Después de un período de incubación de 48 h, las células se fijaron con paraformaldehído al 4% y permeabilizadas con PBS que contenían un 0,3% de Tritron X- La parte superior de la membrana se limpió con un hisopo húmedo para extraer las células, mientras que la parte inferior de la membrana se enjuagó con PBS. El número de células en la parte inferior de cada membrana se cuantificó mediante el recuento de células de tres secciones elegidas al azar (3,7 mm 2) utilizando un microscopio de fluorescencia Olympus IX 1 (Olympus, Planegg, Alemania). Las células se lisaron en tampón de muestra de Triton X y se separaron por SDS-PAGE. El extracto nuclear se preparó utilizando el kit de extracto nuclear (Motif activo, Carlsbad, CA, EE.UU.) siguiendo las instrucciones del fabricante. Las proteínas se detectaron utilizando anticuerpos específicos contra la bactina (Sigma-Aldrich Chemie GmbH, Munich, Alemania), JNK, fosforilado JNK, p38, o fosforilado p38, (todos comprados a New England Biolabs GmbH, Frankfurt am Main, Alemania) y fueron visualizados mediante una quimioluminiscencia mejorada utilizando un kit disponible comercialmente (Amersham, Friburgo, Alemania). Se detectaron especies de oxígeno reactivas (ROS) utilizando el Kit de Especies de Oxígeno Verde Reactivo Image-iT LIVE (sondas moleculares, distribuidas por Invitrogen, Karlsruhe, Alemania). Se compararon dos grupos por t-test. Se compararon más grupos por ANOVA con la siguiente prueba de Student-Newman-Keuls. La línea celular A549, derivada de un adenocarcinoma pulmonar humano, es un modelo establecido para los neumocitos tipo II [36], y se utiliza comúnmente para la investigación del efecto de los virus de la gripe en este tipo de células [ver por ejemplo 6,37,38]. Si no se indica lo contrario, la glicirrizina estuvo continuamente presente en los medios de cultivo celular a partir de un período de preinfección de 1 h. La glicirrizina 200 mg/ml (la concentración máxima probada) no afectó a la viabilidad celular de A549 (datos no mostrados) pero disminuyó claramente la formación de CPE en células A549 infectadas con la cepa de gripe H5N1 A/Tailandia/1(Kan-1)/04 en MOIs de 0,01, 0,1 ó 1 (figura 1A ). Se obtuvieron resultados similares en células A549 infectadas con la cepa A La tinción de células A549 para la nucleoproteína A de gripe 24 h después de la infección con la cepa H5N1 A/Tailandia/1(Kan-1)/04 indicó que la glicirrhizina 200 mg/ml reduce significativamente el número de células positivas de nucleoproteína A de gripe (Figura 1B). Para examinar la influencia de la glicirrizina en la progenie vírica, las células A549 fueron infectadas con la cepa H5N1 de gripe A/ Tailandia/1(Kan-1)/04 en el MOI 0,01 o el MOI 1 y se determinaron títulos de virus infecciosos 24 h después de la infección (Figura 1C ). Si bien la glicirrizina en concentraciones de hasta 50 mg/ml no afectó a la replicación de H5N1, los efectos moderados fueron ejercidos por la glicirrizina 100 mg/ ml y efectos más pronunciados por la glicirrizina 200 mg/ml (MOI 0,01: reducción de 13 veces, MOI 1: reducción de 10 veces). A continuación, la influencia de la glicirrizina en la replicación de H5N1 fue confirmada por la detección de ARN viral (H5) utilizando PCR cuantitativo. Sólo las concentraciones de glicirrizina 100 mg/ml disminuyeron significativamente Figura 1B) o H5N1 A/Vietnam/1203/04-infectado (Suplemento Figura 1C ) Células A549 (MOI 0,01) 24 h después de la infección. La adición de glicirrizina después de la infección mostró efectos antivirales reducidos mientras que la preincubación sola o la adición de glicirrizina durante el período de adsorción no afectó significativamente a la replicación de H5N1.Para la investigación de la expresión de citocina inducida por H5N1, se eligieron cinco genes proinflamatorios que se habían correlacionado con la gravedad de la enfermedad por gripe: CXCL10 (también conocido como proteína 10, IP-10), interleucina 6 (IL6), interleucina 8, (IL8; también conocido como CXCL8), CCL2 (también conocido como proteína monocito quimioatractante 1, MCP-1) y CCL5 (también conocido como RANTES). Las células A549 fueron infectadas con H5N1 A/Tailandia/ 1(Kan-1)/04 o H5N1 A/Vietnam El tratamiento con glicirrizina se realizó con 25, 50, 100 ó 200 mg/ml. Se detectó la expresión citoquina 24 h después de la infección por ELISA. La glicirrizina no afectó a la expresión citoquina de células no infectadas (datos no mostrados) pero inhibió la expresión de todas las citoquinas investigadas en células infectadas por H5N1 de forma dosis-dependiente (figura 2, figura 3A ). Los efectos fueron más pronunciados en los MOI inferiores. Cabe destacar que la expresión de todas las citoquinas excepto IL8 fue significativamente inhibida después del tratamiento con glicirrizina 50 mg/ml Figura 3A ) aunque estas concentraciones de glicirrizina no tuvieron efecto sobre la replicación de H5N1 en células A549 (figura 1, figura S1 ). La expresión de citoquinas por influenza Las células respiratorias infectadas por el virus A causan el reclutamiento de monocitos de sangre periférica en los pulmones de los pacientes en los que se diferencian de los macrófagos que se cree que contribuyen a la patogenicidad del virus A de la gripe [5, 39]. En un ensayo de quimiotaxis, se investigó la influencia de la glicirrizina en la migración de monocitos hacia sobrenadantes de células infectadas por H5N1 A/Tailandia/1(Kan-1)/04 (MOI 0,1) infectadas por A549 células a través de filtros de 8 mm. La migración de monocitos hacia sobrenadantes de células infectadas por H5N1 aumentó fuertemente en relación con la migración hacia sobrenadantes de células no infectadas. Se ha demostrado que los virus de la gripe, incluyendo H5N1, inducen apoptosis dependiente de caspasa en las células de las vías respiratorias y esta apoptosis se ha correlacionado con la patogenicidad del virus [40, 41]. Las concentraciones de glicirrizina hasta 200 mg/ml no afectaron a la activación de caspasa en las células no infectadas (Figura 4A-C). Concentraciones de glicirrizina 100 mg/ml inhibidas H5N1 A/Tailandia/1(Kan-1)/04 (MOI 0,01) inducidas por la activación de las caspas iniciadoras 8 y 9 así como de las caspas efectoras 3/7 en las células A549 determinadas 24 h después de la infección (Figura 4A-C). La detección de células en la fase sub-G1 resultó en hallazgos similares (Figura 4D ). Sustancias que inhiben la activación de la caspasa inducida por H5N1 incluyendo inhibidores de la caspasa 3 causan retención nuclear de complejos de RNP [34, 42]. De acuerdo, la glicirrizina también interfirió con la exportación nuclear RNP en el MOI 1 (Figura S2 ). Resultados similares se obtuvieron en las células infectadas por MOI 0,01 H5N1 A/Tailandia/1(Kan-1)/04 (Figura S3 ). Influencia de la glicirrizina en la activación inducida por H5N1 del factor nuclear kB (NFkB), p38, y en la formación de especies celulares reactivas de oxígeno inducida por H5N1 (ROS) La activación de NFkB, p38 y JNK se ha asociado con la replicación del virus influenza A y la expresión génica proinflamatoria inducida por virus [44, [44] [45] [46] [47]. Si bien la glicirrizina no influyó en la actividad NFkB en células A549 no infectadas en las concentraciones probadas (datos no mostrados), la glicirrizina inhibió la activación NFkB en células infectadas por H5N1 (figura 5A ). Además, la glicirrizina inhibió la fosforilación inducida por H5N1 de los MAPKs p38 y Además de sus funciones durante la replicación del virus influenza A y la expresión citoquina/quimoquina inducida por el virus, NFkB, p38 y JNK son componentes de las vías de señalización sensibles a la redox [48] [49] [50] [51]. Ya se había descubierto que los antioxidantes interferían con la señalización inducida por el virus influenza A a través de NFkB, p38 y JNK, con la replicación del virus influenza A, y con la expresión proinflamatoria del virus A [32] [34]. Dado que se sabe que la glicirrhizina ejerce efectos antioxidantes [26], especulamos que la glicirrizina puede interferir con la formación de ROS inducida por el virus H5N1. De hecho, la glicirrhizina ejerció efectos antioxidantes claros en las células infectadas por H5N1 (MOI 0.01) (Figura 5C ) causando una reducción significativa de la formación de ROS ya a una concentración de 25 mg/ml (Figura 5D ). Aquí, se muestra que la glicirrizina inhibe la replicación del virus H5N1 influenza A altamente patógeno, la apoptosis inducida por H5N1 y la expresión inducida por H5N1 de citoquinas proinflamatorias en células A549 derivadas de los pulmones. Después de la administración intravenosa, las concentraciones plasmáticas alcanzables de glicirrizina se han descrito como alrededor de 100 mg/ml [52]. Por lo tanto, las concentraciones de glicirrizina encontradas para interferir con la replicación de H5N1 y la expresión génica proinflamatoria inducida por H5N En particular, aunque se necesitaron concentraciones más altas de glicirrizina para interferir con la replicación del coronavirus del SARS [22] que con la replicación del H5N1, se reportaron resultados beneficiosos en pacientes con SARS tratados con glicirrizina (SNMC) en comparación con pacientes con SARS que no recibieron glicirrizina [23]. En particular, la investigación de diferentes derivados de la glicirrizina contra el coronavirus del SARS llevó a la identificación de compuestos con mayor actividad antiviral [53]. Por lo tanto, la glicirrizina también podría servir como estructura de plomo para el desarrollo de nuevos fármacos anti-influenza. Los resultados experimentales sugieren que la glicirrizina podría afectar a la gripe estacional Enfermedad del virus A por efectos antivirales e inmunomoduladores [26, 27]. El mecanismo fue sugerido como inducción de interferón-c en células T por glicirrhizin [54]. Además, se demostró que la glicirrizin influyó en la replicación del virus A estacional a través de la interacción con la membrana celular [25, 28]. Sin embargo, estos efectos se observaron sólo en concentraciones de 200 mg/ml cuando se añadió glicirrizin durante el período de adsorción del virus. Dado que la adición de glicirrizin durante el período de adsorción no influyó en la replicación de H5N1 en nuestros experimentos, no parece probable que los efectos de membrana contribuyan a los efectos anti-H5N1 detectados aquí en concentraciones más bajas. Nuestros resultados sugieren más bien que la glicirrizin interfiere con el estrés oxidativo inducido por H5N1. Se encontró que los antioxidantes inhiben la replicación del virus influenza A y la expresión génica proinflamatoria inducida por el virus influenza A [32] [33] y se sabe que la glicirrizina ejerce efectos antioxidantes [26]. En este caso, la glicirrizina interfirió con la activación inducida por el virus H5N1 de NFkB, p38 y JNK que representa eventos de señalización sensibles al redox [48] [49] [49] [50] [51] implicada en la replicación del virus influenza A y la producción de citoquinas/quimioquinas celulares inducidas por el virus A [34, [43] [44] [45] [46] 55]. La glicirrizina 50 mg/ml redujo significativamente la activación inducida por el H5N1 de NFkB. Además, las concentraciones de glicirrhizina tan bajas como 25 mg/ml interfirieron eficazmente con la formación de ROS inducida por H5N1 y con la fosforilación de los MAPKs sensibles al redox p38 y JNK. En nuestro modelo, la activación de p38 parece ser crítica para la señalización redox asociada al H5N1, ya que la inhibición del p38 se había mostrado antes para imitar los efectos antioxidantes de la N-acetil-cisteína (NAC) [34]. Curiosamente y en contraste con la glicirrizina, el NAC no inhibió la replicación del H5N1 o la expresión citoquina/quimioquina inducida por H5N1 en concentraciones terapéuticamente relevantes. La glicirrhizina disminuyó la producción de citocinas/quimioquinas celulares inducidas por H5N1 en concentraciones (#50 mg/ml) que no interfirieron con la replicación de H5N1, aunque se ha descrito que las vías de señalización sensibles al redox están implicadas en ambos procesos. Por lo tanto, la expresión proinflamatoria inducida por H5N1 parece ser más sensible a la inhibición de la formación de ROS que la replicación de H5N1. De hecho, se ha demostrado que los virus de la gripe inducen vías celulares a través de eventos dependientes de replicación e independientes [56]. En un informe anterior, se pudo demostrar que concentraciones similares de glicirrizina como las investigadas aquí interfirieron con la expresión de genes proinflamatorios inducidas por H5N1 pero no con replicación de H5N1 en macrófagos derivados de monocitos humanos [ Además, otros regímenes de tratamiento inmunomodulador que no influyeron en la replicación de H5N1 redujeron la mortalidad en ratones infectados por H5N1 [31, 58]. Por lo tanto, la glicirrizina representa una posible opción de tratamiento adicional que interfiere con la replicación de H5N1 y la expresión inducida por H5N1 de citocinas proinflamatorias en células pulmonares. La interferencia con las respuestas inmunes también puede resultar en la pérdida del control de la replicación de virus por células inmunes citotóxicas incluyendo células asesinas naturales y CD8 citotóxicos + linfocitos T. Los inmunosupresores globales como los corticosteroides no pudieron proteger de la infección por el virus de la gripe letal [59]. Además, los fármacos antivirales pueden interferir con las células citotóxicas que controlan la replicación de virus como se demostró para ribavirina que En este contexto, ya se ha demostrado que la glicirrhizina no afecta a la actividad celular mortal natural en las concentraciones utilizadas aquí [57]. En conclusión, en este informe se muestra que las concentraciones terapéuticas de glicirrizina (utilizada como preparado parenteral aprobado clínicamente SNMC) interfieren con la replicación altamente patógena del virus H5N1 influenza A y la expresión génica proinflamatoria inducida por H5N1 al menos en parte a través de la interferencia con la formación de ROS inducida por H5N1 y, a su vez, con la reducción de la activación de p38, JNK y NFkB en las células pulmonares. Se considera que los agentes antiinflamatorios e inmunomoduladores son candidatos importantes como componentes de estrategias de tratamiento anti-influenza que pueden salvar vidas en una situación de pandemia de gripe [61]. Por lo tanto, la glicirrizina puede complementar el arsenal de fármacos potenciales para el tratamiento de la enfermedad causada por H5N1.
question: ¿Qué se ha correlacionado con la patogenicidad de la infección por H5N1?
answers.text: apoptosis dependiente de caspasa en las células de las vías respiratorias