context: Virus-Vectored Influenza Virus Vacunashttps://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4147686/SHA: f6d2afb2ec44d8656972ea79f8a833143bbeb42bAutores: Tripp, Ralph A.; Tompkins, S. MarkFecha: 2014-08-07DOI: 10.3390/v6083055Licencia: cc-byAbstract: A pesar de la disponibilidad de una vacuna inactivada que ha sido autorizada durante más de 50 años, el virus de la gripe sigue causando morbilidad y mortalidad en todo el mundo. La evolución constante de las cepas de virus de la gripe circulante y la aparición de nuevas cepas disminuye la eficacia de vacunas anuales que se basan en una combinación con cepas de gripe circulante. Por lo tanto, sigue siendo necesario contar con vacunas nuevas y eficaces que confieran protección cruzada para evitar la necesidad de reformular bianualmente las vacunas estacionales contra la gripe. Las vacunas recombinantes con vectores de virus son una alternativa atractiva a las vacunas clásicas inactivadas porque los vectores de virus permiten la expresión nativa de antígenos de la gripe, incluso de virus de la gripe virulenta, mientras se expresan en el contexto del vector que puede mejorar la inmunogenicidad. Además, una vacuna vectorizada a menudo permite la entrega de la vacuna a sitios de inmunidad inductiva como el tracto respiratorio que permite la protección contra la infección por el virus de la gripe. Además, la capacidad de manipular fácilmente vectores de virus para producir nuevas vacunas contra la gripe puede proporcionar el camino más rápido hacia una vacuna universal que proteja contra todos los virus de la gripe. Texto: La gripe estacional es un problema de salud mundial que causa una alta movilidad y una mortalidad sustancial [1] [2] [4]. Además, la infección por gripe a menudo empeora las condiciones médicas preexistentes [5] [6] [7]. Las vacunas contra las cepas de gripe circulantes están disponibles y se actualizan anualmente, pero todavía hay muchos problemas, incluida la baja eficacia en las poblaciones con mayor riesgo de complicaciones por la infección por el virus de la gripe, es decir, los jóvenes y los ancianos [8, 9]. A pesar del aumento de las tasas de vacunación, las hospitalizaciones relacionadas con la gripe están aumentando [8, 10], y se ha desarrollado una resistencia sustancial a los medicamentos antirretrovirales en dos de los cuatro fármacos actualmente aprobados [11, 12]. Los tipos generales de vacunas contra la gripe disponibles en los Estados Unidos son la vacuna contra la gripe inactivada trivalente (TIV), la vacuna contra la gripe cuatrivalente (QIV) y la vacuna contra la gripe atenuada viva (LAIV; en formas trivalente y cuadrivalente).Hay tres tipos de vacunas inactivadas que incluyen vacunas contra el virus entero inactivadas, inactivadas contra el virus dividido y subunidades.En las vacunas contra el virus dividido, el virus se ve interrumpido por un detergente.En las vacunas de subunidad, la HA y la NA se han purificado aún más mediante la eliminación de otros componentes virales.La TIV se administra por vía intramuscular y contiene tres o cuatro virus inactivados, es decir, dos cepas de tipo A (H1 y H3) y una o dos cepas de tipo B. La eficacia de la TIV se mide mediante la inducción de respuestas humor Las respuestas de anticuerpos séricos a la HA se miden mediante el ensayo de inhibición de la hemaglutinación (HI), y el título de HI específico para cepas se considera la correlación oro-estándar de la inmunidad a la gripe, donde un aumento de cuatro veces en el título post-vacunación, o un título de ≥1:40 de HI se considera protector [4, 14]. La protección contra la enfermedad clínica se confiere principalmente por anticuerpos séricos; sin embargo, los anticuerpos IgA de mucosa también pueden contribuir a la resistencia contra la infección. Las vacunas inactivadas por virus divididos pueden inducir respuestas de anticuerpos específicas de la neuraminidasa (NA) [15] [16] [17], y los anticuerpos anti-NA se han asociado con la protección contra la infección en humanos [18] [19] [20] [22]. La LAIV se administra como aerosol nasal y contiene las mismas tres o cuatro cepas del virus de la gripe que las vacunas inactivadas, pero sobre una columna vertebral atenuada de la vacuna [4]. La LAIV es sensible a la temperatura y se adapta al frío, por lo que no se replican eficazmente a la temperatura corporal central, sino que se replican en la mucosa de la nasofaringe [23]. La inmunización LAIV induce respuestas de anticuerpos séricos, respuestas de anticuerpos mucosas (IgA) y respuestas de células T. Mientras que las respuestas de anticuerpos séricos robustos y anticuerpos de lavado nasal (mucoso) están asociadas con la protección contra infecciones, otras respuestas inmunes, como las respuestas CD8 + linfocitos citotóxicos (CTL) pueden contribuir a la protección y no hay una correlación clara de inmunidad para la LAIV [4, 14, 24]. Las vacunas del virus de la Las porciones inmunodominantes de las moléculas HA y NA experimentan un proceso constante de deriva antigénica, una acumulación natural de mutaciones, permitiendo la evasión del virus de la inmunidad [9, 25]. Así, las cepas circulantes de la gripe A y B se revisan anualmente para determinar si son compatibles antigénicas con las vacunas actuales, la sustitución de cepas vacunales puede ocurrir regularmente, y se recomienda la vacunación anual para asegurar la protección [4, 26, 27]. Para el hemisferio norte, la selección de cepas vacunales se produce en febrero y luego los fabricantes comienzan la producción, tomando al menos seis meses para producir los millones de dosis de vacunas necesarias para la caída [27]. Si la predicción es imperfecta, o si los fabricantes tienen problemas con la producción de vacunas, la eficacia o la disponibilidad de vacunas puede verse comprometida [28]. La LAIV no se recomienda para todas las poblaciones; sin embargo Mientras que LAIV se basa en la compatibilidad antigénica y los antígenos HA y NA se sustituyen en el mismo esquema que la IVT [4, 9], hay alguna sugerencia de que la VIT puede inducir una protección más amplia que la IVT debido a la diversidad de la respuesta inmune consistente en inducir anticuerpos séricos y mucosas neutralizantes del virus, así como respuestas ampliamente reactivas de las células T [9, 23, 29]. Si bien en general tanto la IVT como la IVL se consideran seguras y eficaces, existe una necesidad reconocida de mejorar las vacunas estacionales contra la gripe [26]. Además, una mejor comprensión de la inmunidad a los antígenos del virus de la gripe conservados ha aumentado la posibilidad de una vacuna universal, y estos antígenos universales probablemente requerirán vacunas novedosas para la entrega efectiva [30] [31] [32]. Esto a su vez permite modificar los vectores para atenuar el virus o aumentar la inmunogenicidad, además de añadir y manipular los antígenos del virus de la gripe. Muchos de estos vectores han sido ampliamente estudiados o utilizados como vacunas contra formas salvajes del virus. Finalmente, cada uno de estos vectores de la vacuna es replicativo-defectivo o causa una infección autolimitante, aunque como LAIV, la seguridad en individuos inmunocomprometidos sigue siendo una preocupación [4, 13, [33] [35]. En el cuadro 1 se resumen los beneficios y preocupaciones de cada una de las vacunas con vectores de virus que se discuten aquí. Hay 53 serotipos de adenovirus, muchos de los cuales han sido explorados como vectores de la vacuna. Una vacuna de adenovirus vivo que contiene serotipos 4 y 7 ha estado en uso por los militares durante décadas, sugiriendo que los adenovirus pueden ser seguros para el uso generalizado de la vacuna Sin embargo, los problemas de seguridad han llevado a que la mayoría de las vacunas basadas en adenovirus se centren en vectores defectuosos de replicación. El adenovirus 5 (Ad5) es el serotipo más estudiado, habiendo sido probado para el suministro de genes y agentes anticancerosos, así como para vacunas de enfermedades infecciosas. Los vectores de adenovirus son atractivos como vectores de vacunas porque su genoma es muy estable y hay una variedad de sistemas recombinantes disponibles que pueden acomodar hasta 10 kb de material genético recombinante [37]. El adenovirus es un virus no envuelto que es relativamente estable y puede ser formulado para almacenamiento a largo plazo a 4 °C, o incluso almacenamiento hasta seis meses a temperatura ambiente [33]. Las vacunas con adenovirus pueden ser cultivadas a títulos altos, superando 10 unidades de formación de placa de 1° (PFU) por mL cuando se cultivan en células 293 o PER.C6 [38], y el virus puede ser purificado por métodos simples [39]. Las vacunas con adenovirus también pueden ser entregadas a través de múltiples vías, incluyendo inyección intramuscular, inyección subcutánea, inyección intradérmica, administración oral utilizando una cápsula protectora y mediante el parto intranasal. Es importante destacar que estos dos últimos métodos de administración inducen respuestas inmunes mucosales robustas y pueden evitar la inmunidad vectorial preexistente [33]. Incluso los vectores de adenovirus defectivos de replicación son naturalmente inmunoestimuladores y adyuvantes eficaces al antígeno recombinante que se está entregando. El adenovirus ha sido ampliamente estudiado como vector vacunal de enfermedad humana. El primer informe utilizando adenovirus como vector de la vacuna contra la gripe demostró la inmunogenicidad de adenovirus recombinante 5 (rAd5) que expresaba la HA de un virus de la gripe porcina, A/Swine/Iowa/1999 (H3N2). La inmunización intramuscular de ratones con este constructo indujo respuestas robustas de anticuerpos neutralizantes y protegió a los ratones del desafío con un virus heterólogo, A/Hong Kong/1/1968 (H3N2) [40]. La replicación defectuosa de las vacunas rAd5 que expresaban la influenza HA también se han probado en humanos. Un rAd5-HA que expresaba la HA de A/Puerto Rico/8/1934 (H1N1; PR8) se entregó a los seres humanos epicutánea o intranasal y se evaluó por seguridad e inmunogenicidad. La vacuna Si bien los ensayos clínicos con vectores rAd han tenido éxito en general, demostrando seguridad y cierto nivel de eficacia, rAd5 como vector ha sido eclipsado negativamente por dos fracasos de los ensayos clínicos. El primer ensayo fue un examen de terapia génica en el que la administración intravenosa de dosis altas de un vector Ad resultó en la muerte de un varón de 18 años [42, 43]. El segundo fracaso clínico fue el uso de una vacuna contra el VIH con vectores Ad5 que se probó como parte de un estudio de fase, un ensayo clínico de fase 2B. En este estudio, los individuos fueron vacunados con el vector de vacuna Ad5 que expresaba genes HIV-1 gag, pol y nef. La vacuna indujo respuestas de células T específicas del VIH; sin embargo, el estudio se interrumpió después de un análisis provisional sugirió que la vacuna no alcanzó eficacia y los individuos con títulos de anticuerpos Ad5 preexistentes Posteriormente, se confirmó el riesgo asociado a la vacuna rAd5 [47]. Aunque estos dos casos no sugieren que las vacunas ad-vectoras sean inseguras o inefectivas, las notas de los ensayos clínicos indican que la umbra ha afectado el interés por todas las vacunas adenovirus, pero sigue existiendo interés. La inmunización con vectores de adenovirus induce potentes respuestas inmunes celulares y humorales que se inician a través de vías independientes y dependientes de receptores de peaje que inducen respuestas robustas de citoquinas proinflamatorias. Las vacunas ad recombinantes que expresan antígenos HA de pandemia H1N1 (pH1N1), H5 y H7 virus de gripe aviar altamente patógena (HPAIV) y virus de gripe aviar H9 se han probado para la eficacia en varios modelos animales, incluidos pollos, ratones y hurones, y se ha demostrado que son eficaces y proporcionan protección Se han explorado varios vectores rAd5 para el suministro de antígenos no-HA, nucleoproteína de gripe (NP) y proteína de la matriz 2 (M2) [29, [50] [51] [52]. La eficacia de antígenos no-HA ha llevado a su inclusión con vacunas basadas en HA para mejorar la inmunogenicidad y ampliar la amplitud de la inmunidad humoral y celular [53, 54]. Sin embargo, como tanto las respuestas de células CD8 + T como las de anticuerpos neutralizantes son generadas por antígenos vectoriales y vacunales, la memoria inmunológica a estos componentes puede reducir la eficacia y limitar el uso repetido [48]. Un inconveniente de un vector Ad5 es el potencial de inmunidad preexistente, por lo que se han explorado serotipos de adenovirus alternativos como vectores, especialmente serotipos humanos no humanos y poco comunes. Los vectores de adenovirus no humanos incluyen los de primates no humanos (NHP), perros, ovejas, cerdos, vacas, aves y otros [48, 55]. Estos vectores pueden infectar una variedad de tipos de células, pero generalmente son atenuados en los seres humanos evitando preocupaciones de inmunidad preexistente. Porcino, NHP y adenovirus bovinos que expresan antígenos H5 HA también se ha demostrado que inducen inmunidad comparable a las vacunas humanas rAd5-H5 [33, 56]. Recombinantes, replicación-defectiva adenovirus de los serotipos de baja prevalencia también se ha demostrado que son eficaces. Serotipos de baja prevalencia como los tipos de adenovirus 3, 7, 11 y 35 pueden evadir las respuestas inmunes anti-Ad5 manteniendo la administración eficaz de antígenos y la inmunogenicidad [48, 57]. Las estrategias de primer impulso, utilizando la inmunización de ADN o proteína junto con una inmunización de refuerzo de la vacuna contra adenovirus, también han sido exploradas como un medio para evitar la inmunidad preexistente [52]. Los virus asociados a adeno (AAV) fueron explorados por primera vez como vectores de terapia génica. Al igual que los vectores de rAd, los rAAV tienen un amplio tropismo que infecta una variedad de huéspedes, tejidos y tipos de células proliferantes y no proliferantes [58]. Los AAV generalmente no se habían considerado vectores de vacunas porque se consideraban poco inmunogénicos. Un estudio seminal usando AAV-2 para expresar una glucoproteína HSV-2 mostró que este vector vacunador del virus induce respuestas potentes de células CD8 + T y anticuerpos séricos, abriendo así la puerta a otros estudios asociados a la vacuna rAAV [59, 60]. Los virus de tipo salvaje no son patógenos y la replicación es incompetente en humanos y los sistemas de vectores AAV recombinantes son aún más atenuados [61]. Como miembros de la familia de parvovirus, los AAV son pequeños virus no envueltos que son estables y susceptibles de almacenamiento a largo plazo sin una cadena fría. Si bien existe una inmunidad preexistente limitada, la disponibilidad de cepas no humanas como candidatos a la vacuna elimina estas preocupaciones. Las modificaciones al vector han aumentado la inmunogenicidad, así como [60]. Hay estudios limitados que utilizan AAVs como vectores de vacunas para la gripe. Un AAV que expresa un antígeno HA se mostró por primera vez para inducir protección en 2001 [62]. Más tarde, un AAV híbrido derivado de dos aislados de primates no humanos (AAVrh32,33) se utilizó para expresar influenza NP y proteger contra el desafío PR8 en ratones Más recientemente, después de la pandemia del virus H1N1 de la gripe de 2009, se generaron vectores rAAV que expresaban las proteínas HA, NP y matriz 1 (M1) de A/Mexico/4603/2009 (pH1N1), y en los estudios de inmunización y desafío murino, se demostró que las proteínas rAAV-HA y rAAV-NP eran protectoras; sin embargo, los ratones vacunados con rAAV-HA + NP + M1 tenían la protección más robusta. Además, los ratones vacunados con rAAV-HA + rAAV-NP + rAAV-M1 también estaban parcialmente protegidos contra el desafío heterólogo (PR8, H1N1) [63]. En estos estudios, se utilizó el AAV (AAV8 y AAV9) para administrar un anticuerpo transgénico que codificaba un anticuerpo monoclonal antiinfluenza ampliamente cruzado de protección para la expresión in vivo. Se demostró que la administración intramuscular e intranasal de los AAVs protegía contra una serie de desafíos del virus de la gripe en ratones y hurones, incluidos los virus H1N1 y H5N1 [64, 65]. Estos estudios sugieren que los vectores rAAV son vectores prometedores de vacunas e inmunoprofilaxis. Hasta este punto, mientras que aproximadamente 80 ensayos clínicos en fase I, I/II, II o III del rAAV están abiertos, completados o en revisión, estos se han centrado en estudios de transferencia genética y por lo tanto todavía hay datos limitados de seguridad para el uso del rAAV como vacunas [66]. Los alfavirus son virus de ARN de sentido positivo de la familia Togaviridae. Se han desarrollado una variedad de alfavirus como vectores de vacunas, incluyendo el virus Semliki Forest (SFV), el virus Sindbis (SIN), el virus Venezolano de la encefalitis equina (VEE), así como virus quiméricos que incorporan porciones de virus SIN y VEE. La replicación de vacunas defectuosas o replicones no codifican proteínas estructurales virales, ya que estas porciones del genoma se sustituyen por material transgénico. Las proteínas estructurales se proporcionan en los sistemas de producción de cultivos celulares. Una característica importante de los sistemas de replicon es la naturaleza autorreplicante del ARN. A pesar del genoma viral parcial, los ARN son auto-replicantes y pueden expresar transgenes a niveles muy altos [67]. El SIN, el SFV y el VEE han sido probados para determinar su eficacia como vectores de la vacuna contra el virus de la gripe [68] [69] [70] [71]. Se demostró que un sistema de replicación basado en el VEE que codifica la HA desde el PR8 induce una potente respuesta inmune específica de la HA y está protegido contra el desafío en un modelo murino, a pesar de la inmunización repetida con el vector que expresa un antígeno de control, lo que sugiere que la inmunidad preexistente no puede ser un problema para la vacuna de replicación [68]. Un estudio separado desarrolló un sistema de replicación de la VEE que expresa la HA desde el A/Hong Kong/156/1997 (H5N1) y demostró una eficacia variable después de la vacunación de ovo o la vacunación de pollitos de 1 día [70]. El epítopo NP bien caracterizado se expresó transgénicamente en el sistema SIN y demostró ser inmunogénico en ratones, primiendo una respuesta robusta de células CD8 + T y reduciendo el título del virus de la gripe después del desafío [69]. Más recientemente, se demostró que un sistema de replicación de VEE que expresa la proteína HA de PR8 protege a ratones adultos jóvenes (de 8 semanas de edad) y ancianos (12 meses de edad) de un desafío homólogo letal [72]. Los sistemas de replicación de VEE son particularmente atractivos ya que el VEE se dirige a las células que presentan antígenos en los tejidos linfáticos, estimulando respuestas inmunes rápidas y robustas [73]. Los sistemas de replicación de VEE pueden inducir respuestas inmunitarias mucosas robustas mediante inmunización intranasal o subcutánea [72] [73] [74], y la inmunización subcutánea con partículas de replicación vírica (VRP) que expresan anticuerpos IgG sistémicos específicos de antígenos inducidos por HA y anticuerpos IgA fecal [74]. Los VRP derivados del virus VEE se han desarrollado como vacunas candidatas para el citomegalovirus (CMV). Un ensayo clínico de fase I con el VRP CMV mostró que la vacuna era inmunogénica, induciendo respuestas de anticuerpos neutralizantes de CMV y respuestas potentes de células T. Además, la vacuna fue bien tolerada y considerada segura [75]. Un ensayo clínico independiente evaluó la eficacia de la inmunización repetida con un VRP que expresaba un antígeno tumoral. La vacuna era segura y a pesar de la elevada inmunidad específica de vectores tras la Aunque se necesitan datos clínicos adicionales, estos informes sugieren que los sistemas de replicación de virus alfa o VRPs pueden ser seguros y eficaces, incluso frente a la inmunidad preexistente. Baculovirus se ha utilizado ampliamente para producir proteínas recombinantes. Recientemente, una vacuna de HA recombinante derivada de baculovirus fue aprobada para uso humano y estaba disponible por primera vez para su uso en los Estados Unidos para la temporada de gripe 2013-2014 [4]. Los Baculovirus también se han explorado como vectores de vacunas. Los Baculovirus tienen una serie de ventajas como vectores de vacunas. Los virus han sido ampliamente estudiados para la expresión de proteínas y para el uso de pesticidas y por lo tanto son fácilmente manipulados. Los vectores pueden acomodar grandes inserciones genéticas, mostrar un efecto citopático limitado en células de mamíferos, y se ha demostrado que infectan y expresan genes de interés en un espectro de células de mamíferos [77]. Si bien los promotores de insectos no son eficaces para la expresión génica de los mamíferos, los promotores apropiados pueden ser clonados en los vectores de la vacuna contra baculovirus. Los vectores de Baculovirus han sido probados como vacunas contra la gripe, con la primera vacuna reportada usando el virus de la poliedrosis nuclear de Autographa californica (AcNPV) expresando la HA de PR8 bajo control del promotor de CAG (AcCAG-HA) [77]. Inmunización intramuscular, intranasal, intradérmica e intraperitoneal o ratones con AcCAG-HA obtuvo respuestas anticuerpos específicos de HA, sin embargo sólo la inmunización intranasal proporcionó protección contra el desafío letal. Curiosamente, la inmunización intranasal con el tipo salvaje AcNPV también resultó en protección contra el desafío PR8. La respuesta inmune innata robusta al baculovirus proporcionó Aunque estos estudios no demostraron una protección específica, hubo respuestas inmunes específicas de antígenos y posibles efectos adyuvantes por la respuesta innata. También se han explorado virus pseudotipo del Baculovirus. Se utilizó la proteína G del virus de la estomatitis vesicular controlada por el promotor del poliedro de insectos y la HA de A/Chicken/Hubei/327/2004 (H5N1) HPAIV controlada por un promotor del CMV para generar el BV-G-HA. La inmunización intramuscular de ratones o pollos con BV-G-HA provocó fuertes respuestas de anticuerpos séricos HI y VN, respuestas IFN-γ, y protegida contra el desafío H5N1 [79]. Un estudio separado demostró la eficacia utilizando un vector pseudotipo bivalente del baculovirus [80]. El Baculovirus también se ha utilizado para generar una vacuna antipartícula inactiva La HA de A/Indonesia/CDC669/2006(H5N1) fue incorporada a un vector comercial de baculovirus controlado por el promotor e1 del Virus del Síndrome de White Spot. El virus recombinante resultante fue propagado en células de insectos (Sf9) e inactivado como una vacuna de partículas [81, 82]. La administración intranasal con toxina de cólera B como adyuvante obtuvo títulos robustos de IH y protegido contra el desafío letal [81]. La administración oral de esta vacuna encapsulada indujo títulos robustos de IH sérico y títulos de IgA mucosal en ratones, y protegido contra el desafío H5N1 HPAIV. Más recientemente, también se ha demostrado que las coformulaciones de vectores de baculovirus inactivados son eficaces en ratones [83]. Aunque hay datos crecientes sobre el uso potencial del baculovirus o el baculovirus pseudotipo como vector de la vacuna, no hay datos de eficacia en modelos animales de mamíferos distintos de los ratones. Tampoco hay datos sobre la seguridad en los seres humanos, lo que reduce el entusiasmo por el baculovirus como vector de la vacuna contra la gripe en este momento. El virus de la enfermedad de Newcastle (NDV) es un virus de ARN de sentido negativo de una sola cadena que causa la enfermedad en las aves de corral. NDV tiene una serie de cualidades atractivas como vector de la vacuna. Como virus aviar, hay poca o ninguna inmunidad preexistente a NDV en humanos y NDV propaga a títulos altos tanto en huevos de pollo como en cultivos celulares. Como paramixovirus, no hay fase de ADN en el ciclo vital del virus que reduce las preocupaciones de los eventos de integración, y los niveles de expresión génica son impulsados por la proximidad a Este gradiente de expresión génica permite la atenuación a través del reordenamiento del genoma, o por la inserción de transgenes dentro del genoma. Finalmente, la patogenicidad de la NDV está determinada en gran medida por las características de la proteína de fusión que permiten la atenuación rápida del vector vacunal [84]. Genética inversa, método que permite rescatar a NDV de los plásmidos que expresan la polimerasa de ARN viral y proteínas nucleocápsidas, fue reportado por primera vez en 1999 [85, 86]. Este proceso ha permitido la manipulación del genoma NDV, así como la incorporación de transgenes y el desarrollo de vectores NDV. La gripe fue la primera enfermedad infecciosa dirigida con un vector NDV recombinante. La proteína HA de A/WSN/1933 (H1N1) se insertó en la cepa Si bien el virus fue atenuado en comparación con la cepa de la vacuna parental, indujo una fuerte respuesta de anticuerpos séricos y se protegió contra el desafío del virus de la gripe homóloga en un modelo murino de infección [87]. Posteriormente, se probó el rNDV como vector de la vacuna contra el virus HPAIV con una eficacia variable frente a las infecciones por el virus de la gripe H5 y H7 en aves de corral [88] [89] [90] [91] [92] [93] [94]. Estas vacunas tienen el beneficio añadido de proporcionar potencialmente protección contra el virus de la gripe y la infección por el NDV. También se ha explorado el NDV como vector de la vacuna para seres humanos. La administración intranasal e intratraqueal de las vacunas rNDV-HA o rNDV-NA indujo las respuestas de anticuerpos séricos y mucosas y protegió del desafío HPAIV [95, 96]. NDV tiene datos clínicos limitados; sin embargo, los ensayos clínicos de fase I y fase I/II han demostrado que el vector NDV está bien tolerado, incluso a altas dosis entregadas por vía intravenosa [44, 97]. Aunque estos resultados son prometedores, se necesitan estudios adicionales para avanzar en el NDV como vector de vacuna humana contra la gripe. Parainfluenza virus tipo 5 (PIV5) es un vector vacunal paramixovirus que se explora para el suministro de antígenos de la vacuna contra la gripe y otras enfermedades infecciosas. PIV5 ha sido descrito recientemente como vector vacunal [98]. Al igual que otros virus ARN, PIV5 Por ejemplo, PIV5 tiene un genoma de ARN estable y ninguna fase de ADN en el ciclo de replicación del virus reduciendo preocupaciones de integración o modificación del genoma del huésped. PIV5 puede crecer a títulos muy altos en sustratos de cultivos celulares de vacunas de mamíferos y no es citopática permitiendo un cultivo prolongado y cosecha del virus de la vacuna [98, 99]. Al igual que NDV, PIV5 tiene un gradiente de 3' a 5' de expresión génica e inserción de transgenes en diferentes lugares en el genoma puede invariablemente atenuar el virus y alterar la expresión de transgenes [100]. PIV5 tiene un amplio tropismo, infectando muchos tipos de células, tejidos y especies sin causar enfermedad clínica, aunque PIV5 se ha asociado con la tos de perno en perros [99]. Se utilizó por primera vez un sistema de genética inversa para la PIV5 para insertar el gen HA de A/Udorn/307/72 (H3N2) en el genoma de PIV5 entre el gen hemaglutinina-neuraminidasa (HN) y el gen polimerasa grande (L). Al igual que el NDV, la HA se expresó en altos niveles en células infectadas y se repitió de manera similar al virus del tipo salvaje, y lo que es más importante, no fue patógena en ratones inmunodeficientes [98]. Además, se demostró que una única inmunización intranasal en un modelo murino de infección por gripe induce respuestas neutralizantes de anticuerpos y protege contra un virus que expresa la proteína homóloga de HA [98]. Los ratones vacunados intranasalmente con una dosis única de vacuna PIV5-H5 tuvieron respuestas sólidas de anticuerpos séricos y mucosas, y fueron protegidos contra el desafío letal. En particular, aunque las respuestas inmunes celulares parecían contribuir a la protección, los anticuerpos séricos fueron suficientes para la protección frente al desafío [100, 101]. La inmunización intramuscular con PIV5-H5 también demostró ser eficaz para inducir respuestas de anticuerpos neutralizantes y proteger contra el desafío del virus de la gripe letal [101]. La PIV5 que expresa la proteína NP del HPAIV también fue eficaz en el modelo de inmunización y desafío murino, donde una única inmunización intranasal indujo respuestas robustas de células CD8 + T y protegida contra el desafío del virus homólogo (H5N1) y heterosubtípico (H1N1) [102]. Actualmente no hay datos clínicos de seguridad para el uso Sin embargo, la PIV5 viva ha sido un componente de las vacunas veterinarias para la tos de perrera durante > 30 años, y los veterinarios y dueños de perros están expuestos a la PIV5 viva sin enfermedad notificada [99]. Esto combinado con los datos preclínicos de una variedad de modelos animales sugiere que la PIV5 como vector es probable que sea segura en los seres humanos. Como la inmunidad preexistente es una preocupación para todas las vacunas con vectores de virus, debe señalarse que no hay datos sobre los niveles de inmunidad preexistente a la PIV5 en humanos. Sin embargo, un estudio que evalúa la eficacia de una vacuna PIV5-H3 en caninos previamente vacunados contra la PIV5 (tos de perrera) mostró inducción de respuestas de anticuerpos séricos anti-H3 robustas, así como altos niveles de anticuerpos séricos a la vacuna PIV5, lo que sugiere que la inmunidad preexistente al vector PIV5 La terminación del programa de vacunación contra el virus de la viruela ha dado lugar a que una gran población de individuos naïve del virus de la viruela tenga la oportunidad de utilizar los virus de la viruela como vectores sin inmunidad preexistente [103]. En 1982 se propuso por primera vez la utilización de vacunas con vectores del virus de la viruela con dos informes de virus de la vaccinia recombinante que codificaban y expresaban el gen funcional de la timidina cinasa del virus del herpes [104, 105]. En un año, se demostró que un virus de la vaccinia que codificaba la HA de un virus H2N2 expresaba una proteína funcional del virus de la HA (dejada en las subunidades HA1 y HA2) y era inmunogénico en conejos y hamsters [106]. Posteriormente, las diez proteínas primarias de la gripe se han expresado en virus vacunal [107]. El trabajo temprano con vectores intactos del virus de la vaccinia planteó problemas de seguridad, ya que hubo una reactogenicidad sustancial que obstaculizó el desarrollo de la vacuna recombinante [108]. Se desarrollaron dos vectores de vaccinia para abordar estos problemas de seguridad. La cepa modificada del virus de la vaccinia Ankara (MVA) fue atenuada por el paso 530 veces en cultivos de fibroblastos embrionarios de pollitos. El segundo virus de la vaccinia de Nueva York (NYVAC) fue un clon purificado en placa de la cepa de la vacuna de Copenhague atenuada racionalmente por la eliminación de 18 marcos de lectura abiertos [109] [119]. El virus modificado de la vaccinia Ankara (MVA) fue desarrollado antes de la erradicación de la viruela para reducir o prevenir los efectos adversos de otras vacunas de la viruela [109]. Los defectos afectaron a las etapas tardías del ensamblaje del virus en células no aviares, una característica que permite el uso del vector como vector de expresión monorredominal en huéspedes no permisivos. Curiosamente, hace más de dos décadas, se demostró que el MVA recombinante que expresa el HA y el NP del virus de la gripe era eficaz contra el desafío del virus de la gripe letal en un modelo murino [112]. Posteriormente, el MVA que expresa diversos antígenos de estacionalidad, pandemia (A/California/04/2009, pH1N1), equinos (A/Equina/Kentucky/1/81 H3N8), y virus HPAI (VN1203) han demostrado ser eficaces en modelos de desafío murina, hurón, NHP y equinos [113]. Las vacunas MVA son estimulantes muy eficaces de la inmunidad celular y humoral. Por ejemplo, la infección abortiva proporciona la expresión nativa de los antígenos de gripe que permiten respuestas robustas de anticuerpos a antígenos virales de superficie nativa. Al mismo tiempo, los péptidos intracelulares de gripe expresados por el vector de la viruela entran en la vía de procesamiento y presentación del antígeno MHC de clase I que permite la inducción de respuestas antivirales de células CD8 + T. MVA también induce respuestas de células CD4 + T que contribuyen aún más a la magnitud de las funciones efectoras específicas del antígeno [107, [112] [113] [114] [114]. MVA también es un potente activador de respuestas inmunes tempranas innatas que mejoran aún más las respuestas inmunes adaptativas [116]. Con amplios datos preclínicos, las vacunas de VAM recombinantes que expresan antígenos de gripe han sido probadas en ensayos clínicos y han demostrado ser seguras e inmunogénicas en seres humanos [117] [118]. Estos resultados, combinados con datos de otros estudios clínicos y preclínicos (no influenza), apoyan al VAM como una de las principales vacunas candidatas a los vectores virales. El vector NYVAC es una cepa del virus de la vaccinia altamente atenuada. NYVAC está restringido a la replicación; sin embargo, crece en fibroblastos embrionarios de pollitos y células de Vero que permiten la producción a escala vacunal. En las células no permisivas, las proteínas estructurales tardías críticas no se producen deteniendo la replicación en el estadio del virión inmaduro [120]. El NYVAC es muy atenuado y se considera Tanto el VAM como el NYVAC provocan respuestas humorales robustas, y se pueden administrar mucosas para inducir respuestas de anticuerpos mucosas [121]. Se ha demostrado que la exploración del VAMC como vector de la vacuna contra el virus de la gripe es limitada; sin embargo, se ha demostrado que una vacuna que expresa la HA de A/chicken/Indonesia/7/2003 (H5N1) induce respuestas de anticuerpos neutralizantes potentes y protege contra el desafío en los cerdos [122]. Si bien hay datos sólidos de seguridad y eficacia para el uso de vacunas de NYVAC o de gripe con VAM, la inmunidad preexistente sigue siendo motivo de preocupación. Aunque la campaña de vacunación contra la viruela ha dado lugar a una población de personas que no han recibido la vacuna contra el virus de la viruela, el inicio de un programa de vacunación contra el VIH, la gripe u otros patógenos de la VAMC para Si bien existe un interés significativo en el desarrollo de vacunas contra el virus de la gripe con vectores de viruela, las estrategias actuales de vacunación contra la gripe se basan en la vacunación regular con vacunas combinadas con cepas circulantes, lo que probablemente limitaría el uso y/o la eficacia de las vacunas contra el virus de la gripe con vectores de viruela para su uso regular y estacional [13]. Es curioso que el NYVAC pueda tener una ventaja para su uso como vector de la vacuna contra la gripe, ya que la inmunización con este vector induce respuestas inmunes específicas de la vacuna más débiles en comparación con otras vacunas contra el virus de la viruela, una característica que puede abordar las preocupaciones relacionadas con la inmunidad preexistente [123]. La vacuna con vectores de virus de la gripe aviar, que expresa el antígeno HA del virus de la gripe aviar, tiene el beneficio añadido de proporcionar protección contra la infección por esta enfermedad. Actualmente, al menos diez vacunas con vectores de virus de la viruela han sido autorizadas para uso veterinario [126]. Estos vectores de virus de la viruela tienen el potencial de ser utilizados como vectores de vacunas en seres humanos, similar al primer uso de la viruela para la vacunación contra la viruela [127]. La disponibilidad de estos vectores de virus de la viruela no humanos con amplios datos de seguridad y eficacia de los animales puede abordar los problemas con la inmunidad preexistente a las cepas de vacunas humanas, aunque la reactividad cruzada descrita originalmente con el virus de la viruela también podría limitar el uso. Tanto los vectores de la vacuna VSV vivos como los defectuosos de replicación han demostrado ser inmunogénicos [128, 129], y como Paramyxoviridae, el genoma de Rabdoviridae tiene un gradiente de expresión génica de 3' a 5' que permite la atención mediante la inserción selectiva del gen vacunal o el reordenamiento del genoma [130]. El VSV tiene otras ventajas, incluyendo el tropismo de tejido amplio y el potencial de inmunización intramuscular o intranasal. Este último método de administración permite la inducción de la inmunidad mucosal y la eliminación de agujas necesarias para la vacunación. Además, hay poca evidencia de la seropositividad del VSV en seres humanos que eliminan preocupaciones de inmunidad preexistente, aunque el uso repetido puede ser una preocupación. Tanto la HA como la NA se expresaron como proteínas funcionales y se incorporaron a las partículas VSV recombinantes [131]. Posteriormente, VSV-HA, expresando la proteína HA de A/WSN/1933 (H1N1), demostró ser inmunogénica y proteger a los ratones del desafío del virus de la gripe letal [129]. Para reducir las preocupaciones de seguridad, se desarrollaron vectores VSV atenuados. Una vacuna candidata tenía una proteína VSV G truncada, mientras que un segundo candidato era deficiente en la expresión de la proteína G y se basó en la proteína G expresada por una línea celular de vacuna ayudante para proporcionar el receptor del virus. Ambos vectores se encontraron atenuados en ratones, pero mantuvieron la inmunogenicidad [128]. Más recientemente, las vacunas VSV replicantes de un solo ciclo han sido probadas para la eficacia frente a H5N1 HPAIV. Se demostró que los vectores VSV que expresan la HA de A/Hong Kong/156/97 (H5N1) son inmunogénicos e inducen respuestas de anticuerpos de reacción cruzada y protegen contra el desafío con el desafío H5N1 heterólogo en los modelos murino y NHP [132] [134]. Los vectores VSV no carecen de preocupaciones potenciales. El VSV puede causar enfermedad en una serie de especies, incluyendo humanos [135]. El virus también es potencialmente neuroinvasivo en algunas especies [136], aunque los estudios del NHP sugieren que esto no es una preocupación en humanos [137]. Además, si bien la incorporación del antígeno de gripe en el virion puede proporcionar algún beneficio en inmunogenicidad, los cambios en el tropismo o la atenuación podrían surgir de la incorporación de diferentes glicoproteínas de gripe. No obstante [134]. En la actualidad, no existen datos de seguridad humana para las vacunas con VSV. Si bien los datos experimentales son prometedores, es necesario realizar un trabajo adicional antes de considerar la vacunación contra la gripe humana. Las vacunas actuales se basan en la compatibilidad del antígeno de HA de la vacuna con cepas circulantes para proporcionar respuestas de anticuerpos neutralizantes específicas por cepas [4, 14, 24]. Hay un interés significativo en desarrollar vacunas universales contra la gripe que no requieran una reformulación anual para proporcionar una inmunidad protectora robusta y duradera. Estas vacunas se basan en la generación de respuestas inmunes específicas a las porciones del virus altamente conservadas que son refractarias a la mutación [30] [31] [32]. Las vacunas tradicionales pueden no ser adecuadas para estas estrategias de vacunación; sin embargo, las vacunas vectorizadas que tienen la capacidad de ser fácilmente modificadas y de expresar transgenes son compatibles para estas aplicaciones. El trabajo temprano con vectores virales recombinantes demostró que la inmunización con vacunas que expresan antígenos de gripe indujo respuestas potentes de células CD8 + T [107, [138] [139] [140] [141]. Estas respuestas, incluso al antígeno HA, podrían ser cruzadas [138]. Varios estudios han demostrado que la inmunización con NP expresada por AAV, rAd5, vectores de virus alfa, MVA u otros sistemas vectores induce respuestas potentes de células CD8 + T y protege contra el desafío del virus de la gripe [52, 63, 69, 102, 139, 142]. Dado que la proteína NP es altamente conservada a través de virus influenza A, las células T específicas de NP pueden proteger contra los desafíos heterólogos e incluso del virus heterosubtípico [30]. La proteína M2 también es altamente conservada y expresada en la superficie de células infectadas Gran parte del trabajo de la vacuna en esta área se ha centrado en partículas víricas o subunidades que expresan el ectodominio M2; sin embargo, estudios que utilizan estrategias de DNA-prime, rAd-boost para vacunar contra toda la proteína M2 han demostrado que el antígeno es inmunogénico y protector [50]. En estos estudios, anticuerpos contra la proteína M2 protegidos contra desafíos homólogos y heterosubtípicos, incluyendo un desafío H5N1 HPAIV. Más recientemente, NP y M2 se han combinado para inducir respuestas ampliamente reactivas de células CD8 + T y anticuerpos, y vacunas rAd5 que expresan estos antígenos han demostrado proteger contra desafíos pH1N1 y H5N1 [29, 51]. Históricamente, el HA no ha sido ampliamente considerado como un antígeno vacunal universal. Sin embargo, la reciente identificación de anticuerpos monoclonales neutralizantes del virus que reaccionan de forma cruzada con muchos subtipos del virus de la gripe [143] ha presentado la oportunidad de diseñar antígenos vacunales a las respuestas de anticuerpos focalizados principales a las regiones altamente conservadas reconocidas por estos anticuerpos monoclonales. La mayoría de estos anticuerpos ampliamente reactivas reconocen regiones en el tallo de la proteína HA [143]. El tallo HA es generalmente menos inmunogénico en comparación con la cabeza globular de la proteína HA, por lo que la mayoría de los enfoques han utilizado proteínas HA sin cabeza como inmunogenes. Las vacunas HA tallo se han diseñado utilizando ADN y partículas similares a virus [144] y MVA [142] ; sin embargo, estos enfoques son susceptibles de expresión en cualquiera de los virus vectores descritos aquí.El objetivo de cualquier vacuna es proteger contra infecciones y enfermedades, al tiempo que induce la inmunidad basada en la población Es evidente que las vacunas contra la gripe actualmente autorizadas no han cumplido plenamente estos objetivos, ni las específicas para inducir una inmunidad sólida a largo plazo. Hay una serie de cuestiones relacionadas con la vacuna que deben abordarse antes de que se optimicen las estrategias de vacunación contra la gripe basadas en la población. Es necesario actualizar el concepto de una vacuna de un solo tamaño que se ajuste a todas las vacunas, dada la reciente capacidad de investigar la interfaz virus-anfitriona mediante enfoques de interferencia del ARN que faciliten la identificación de genes anfitriones que afecten a la replicación del virus, la inmunidad y la enfermedad. También es necesario revisar las estrategias actuales de vacunación contra el virus de la gripe para las poblaciones en riesgo, en particular las de ambos extremos del espectro de edad. Un ejemplo de un régimen mejorado de vacunas podría incluir el uso de una vacuna contra el virus de la gripe vectorizada que exprese las proteínas HA, NA y M y/o NP para los dos subtipo Las vacunas Vectoradas pueden ser construidas para expresar proteínas del virus de la gripe de larga duración, así como generar epitopos conformacionalmente restringidos, características críticas para generar una protección humoral adecuada. La inclusión de antígenos de la gripe interna en una vacuna vectorizada también puede inducir altos niveles de inmunidad celular protectora. Para generar inmunidad sostenida, es una ventaja inducir inmunidad en sitios de inmunidad inductiva a la infección natural, en este caso el tracto respiratorio. Varias vacunas vectorizadas se dirigen al tracto respiratorio. Típicamente, las vacunas vectorizadas generan antígenos durante semanas después de la inmunización, en contraste con la vacunación subunidad. Este aumento de la presencia y el nivel de antígeno de la vacuna contribuye y ayuda a mantener una respuesta inmune de memoria duradera, incluso aumentando la selección de células secretas de anticuerpos de afinidad superior. Por lo tanto, para los antígenos más débiles típicos de la HA, las vacunas vectorizadas tienen la capacidad de superar las limitaciones reales para lograr una protección robusta y duradera. Cumplir los mandatos del desarrollo estacional de la vacuna contra la gripe es difícil, y responder a una cepa pandémica es aún más difícil. Los problemas con la selección de cepas de la vacuna contra la gripe basada en virus que circulan recientemente a menudo reflejan recomendaciones de la Organización Mundial de la Salud (OMS), un proceso que es engorroso. Las cepas de virus de la gripe A que se utilizan en la fabricación de vacunas no son virus de tipo salvaje, sino más bien reasociantes que son virus híbridos que contienen al menos los segmentos de genes HA y NA de las cepas objetivo y otros segmentos genéticos de la cepa principal, PR8, que tiene propiedades de alto crecimiento en los huevos de gallina fertilizada. Este proceso adicional requiere más tiempo y control de calidad En cambio, las vacunas con vectores virales son relativamente fáciles de manipular y producir, y tienen perfiles de seguridad bien establecidos. Existen varios vectores basados en virus empleados actualmente como sistemas vectores de antígenos, incluyendo poxvirus, adenovirus baculovirus, paramixovirus, rabdovirus, y otros; sin embargo, la mayoría de los ensayos clínicos humanos que evalúan las vacunas contra la gripe con vectores virales utilizan vectores de poxvirus y adenovirus. Si bien cada uno de estos enfoques vectoriales tiene características únicas y se encuentra en diferentes etapas de desarrollo, los éxitos combinados de estos enfoques apoyan el enfoque de la vacuna con vectores virus en su conjunto. Las vacunas con vectores de virus son particularmente prometedoras para la vacunación con antígenos universales o enfocados donde los métodos de vacunación tradicionales no son adecuados para la administración eficaz de estos antígenos. Los enfoques más prometedores actualmente en desarrollo son, sin duda, los dirigidos a los epitopos de la región de tallo de HA conservada.
question: ¿Qué protege contra las enfermedades clínicas?
answers.text: anticuerpos séricos