context: Virus que causan gastroenteritis: lo conocido, lo nuevo y los más alláhttps://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4776197/SHA: f7b30ee89775bc82607cc6bc87feb5934b47625fAutores: Oude Munnink, Bas B.; van der Hoek, LiaFecha: 2016-02-19DOI: 10.3390/v8020042Licencia: cc-byAbstract: La lista de virus gastrointestinales recientemente descubiertos se está expandiendo rápidamente. Si estos agentes están realmente involucrados en una enfermedad como la diarrea es la pregunta esencial, pero difícil de responder. En esta revisión se presenta un resumen de todos los virus encontrados en la diarrea, junto con el conocimiento actual sobre su conexión con la enfermedad. Texto: El tracto gastrointestinal es un órgano vulnerable para las infecciones ya que hay contacto constante con el exterior, principalmente por vía oral. La inflamación del estómago y los intestinos (gastroenteritis) puede causar náuseas, vómitos y diarrea. La gastroenteritis es responsable de dos a tres millones de muertes cada año, por lo que es una de las causas más comunes de mortalidad [1]. Principalmente los niños en los países en desarrollo, pero también los individuos inmunocomprometidos en los países desarrollados, sufren de diarrea. Mientras que las infecciones gastrointestinales bacterianas y parasitarias están disminuyendo como resultado de la eliminación adecuada de aguas residuales y agua potable, la gastroenteritis viral no está disminuyendo en los países en desarrollo [2]. En el mundo desarrollado, los virus ya son los patógenos más comunes que causan diarrea [3]. Aunque los virus que infectan a los seres humanos ya habían sido descritos desde 1901 [4] y se sospechaba que los virus desempeñaban un papel en la diarrea, duró hasta 1972, cuando se identificó el primer virus causante de gastroenteritis (norovirus) en un brote de diarrea en Norwalk (California, Estados Unidos) [5]. Poco después del descubrimiento de norovirus se descubrieron varios otros virus causantes de gastroenteritis: rotavirus en células epiteliales de niños con gastroenteritis [6], astrovirus en casos de diarrea infantil [7], adenovirus entéricos en las heces de niños con diarrea aguda [8], y sapovirus durante un brote de gastroenteritis en un orfanato de Sapporo, Japón [9]. Todos estos virus se propagan a través de la vía fecal-oral a través de la transmisión de persona a persona y Los norovirus forman parte de la familia Caliciviridae y los brotes de gastroenteritis por norovirus han sido reportados en cruceros, centros de salud, escuelas y militares, pero el norovirus también es responsable de alrededor del 60% de todos los casos de diarrea esporádica (casos de diarrea en los que se pudo encontrar un enteropatógeno), revisados en la literatura [10, 11]. La patogénesis de la infección por norovirus ha sido probada in vivo. El norovirus filtrado fue administrado a voluntarios sanos después de lo cual la mayoría de ellos desarrollaron diarrea [12]. La cultivo del virus, sin embargo, ha sido un problema desde su descubrimiento, sin embargo, un estudio ha descrito recientemente el cultivo de norovirus en células B, y ha revelado que los cofactores, como el antígeno histosangre que expresa bacterias entéricas, son probablemente necesarios antes de que los virus entéricos Los sapovirus también son miembros de los Caliciviridae. Hay cinco genogrupos humanos de sapovirus descritos [14] que representan el 2,2%-12,7% de todos los casos de gastroenteritis en todo el mundo [14, 15]. Los brotes de sapovirus ocurren a lo largo del año y pueden transmitirse a través de alimentos [16]. Para los sapovirus se ha descrito que el virus no se encontró antes del inicio de un brote, y que se encontró en el 95% de los pacientes durante un brote, mientras que disminuyó al 50% después de un brote, lo que indica que el virus introduce enfermedad en un huésped naturalmente infectado [17]. La infección por rotavirus es la causa más común de gastroenteritis viral entre los niños; sin embargo, los padres de niños infectados también se enferman a menudo y como resultado el rotavirus es la segunda causa más común de gastroenteritis Los estudios en voluntarios humanos han demostrado que la infección por rotavirus causa diarrea, resulta en el desprendimiento del virus y un aumento en el título antivirus de anticuerpos después de la infección [19]. Además, las infecciones por astrovirus son comunes, representando alrededor del 10% de todos los casos de diarrea esporádica [20]. Astrovirus ha sido aislado de personas enfermas, filtrado y administrado a individuos sanos después de lo cual en algunos voluntarios se observó enfermedad diarreica y se derramó astrovirus en sus heces [21]. El virus puede replicarse en células renales embrionarias humanas y fue detectado por microscopía electrónica (EM) [21]. Los adenovirus son responsables de alrededor del 1,5%-5,4% de los casos de diarrea en niños menores de 2 años, revisados en la literatura [22]. De los 57 tipos de adenovirus identificados [ Junto a estos dos tipos, el adenovirus tipo 52 también puede causar gastroenteritis [25], aunque se ha argumentado si el tipo 52 es en realidad un tipo separado ya que no hay suficiente distancia al adenovirus tipo 41 [26]. Los adenovirus generalmente se pueden propagar en líneas celulares; sin embargo, el adenovirus entérico 40/41 es difícil de cultivar, revisado en la literatura [27]. En los años 80 y 1990 se identificaron algunos agentes virales para los cuales la asociación directa con la enfermedad es menos clara. Los virus Aichi son miembros de los Picornaviridae identificados en muestras fecales de pacientes con gastroenteritis [28]. Desde su descubrimiento, se realizaron dos estudios de casos y controles, pero aunque ambos estudios sólo encontraron virus Aichi en heces de pacientes diarreicos, la prevalencia del virus Aichi (0,5% y 1,8%) fue demasiado baja para encontrar una asociación significativa con la diarrea [30, 31]. En los pacientes inmunocomprometidos el virus se encuentra en mayores cantidades y no está asociado con diarrea [32]. Los torovirus, parte de los Coronaviridae, se identificaron por primera vez en 1984 en heces de niños y adultos con gastroenteritis [33]. La infección por Torovirus se asocia con diarrea [34] y se observa con más frecuencia en pacientes inmunocomprometidos y en individuos nosocomiales infectados [34]. El análisis retrospectivo de la gastroenteritis viral nosocomial en un hospital pediátrico reveló que en el 67% de los casos se podía detectar el torovirus [35]. Sin embargo, sólo un número limitado de estudios reportan la detección de torovirus y por lo tanto la verdadera patogénesis y prevalencia de este virus sigue siendo elusiva. Picobirnavirus pertenecen a los Picobirnaviridae y fueron detectados por primera vez en las heces de niños con gastroenteritis [36]. Desde el descubrimiento inicial, el virus se ha detectado en muestras fecales de varias especies animales, y se ha demostrado que los virus son genéticamente muy diversos sin una clara agrupación de especies, revisado en la literatura [37]. Esta alta diversidad secuencial también se ha observado dentro de brotes particulares de gastroenteritis [38, 39], limitando la probabilidad de que los picobirnavirus estén causando brotes en realidad, ya que no se puede identificar ninguna fuente única de infección. En 1907 se desarrolló el primer sistema de cultivo tisular que fue considerado como el estándar de oro para la detección de virus durante En la década de 1930 se introdujeron la serología y la microscopía electrónica que impulsaron el descubrimiento de nuevos virus. Durante estos años, estos métodos se desarrollaron fructíferamente pero los virus que infectaban el tracto gastrointestinal fueron especialmente difíciles de cultivar. A lo largo de las últimas décadas, se han desarrollado varias técnicas basadas en el ADN para el descubrimiento de virus que impulsaron la identificación de virus nuevos en muestras de heces. Los cuatro métodos más utilizados son: 1. Imprimación universal-PCR [41] ; 2. PCR basado en la primografía aleatoria [42] ; 3. Descubrimiento de virus cDNA, Polimorfismo de longitud del fragmento amplificado (VIDISCA) [43] ; y 4. Amplificación de primer único independiente de secuencia (SISPA) [44]. Primer-PCR universal es una técnica de descubrimiento de virus que utiliza imprimaciones universales diseñadas sobre partes conservadas de una familia viral específica, que se pueden utilizar para detectar variantes novedosas de esta familia viral. PCR basado en imprimación aleatoria es una técnica que amplifica aleatoriamente todos los ácidos nucleicos presentes en las muestras, después de lo cual los productos PCR resultantes se pueden clonar y secuenciar. SISPA y VIDISCA son técnicas de descubrimiento de virus que se basan en la digestión con enzimas de restricción, después de lo cual se pueden ligar adaptadores. Estos métodos han tenido éxito en el descubrimiento de virus nuevos, pero hay algunas limitaciones. Los imprimaciones universales son útiles para descubrir virus nuevos de una familia elegida, pero los imprimadores, basados en nuestros conocimientos actuales de la familia viral, pueden no caber en todas las variantes desconocidas. La desventaja de la PCR, SISPA y VIDISCA al azar es que el virus debe estar presente en una alta concentración, mientras que el ADN y/o ARN de fondo del huésped deben ser mínimos y preferiblemente no complejos. En los últimos años, las técnicas de amplificación independientes de secuencias mejoraron considerablemente mediante el acoplamiento de estas técnicas a plataformas de secuenciación de próxima generación y, como resultado, se han descrito varios virus nuevos en casos de gastroenteritis, como el cosavirus [45], el virus Saffold [46], el virus klasse/salivirus [47], el poliomavirus [49], el bufavirus [50], el tusavirus [51] y el recovirus [52]. Aunque estos virus se encuentran en individuos con diarrea, para la mayoría de ellos el grado de circulación (prevalencia) y la capacidad de causar enfermedades morbosas (patogénesis) queda por determinar, como se describe a continuación (véase también la Tabla 1). Sólo se encuentra en baja prevalencia; **: Sólo se dispone de datos limitados sobre este virus; ***: Se observaron anticuerpos contra el HMO-C del astrovirus, mientras que no se encontraron anticuerpos contra el HMO-A del astrovirus (HMO = astrovirus de tipo humano-mink-ovina); -No se han publicado datos disponibles;•El Picobirnavirus, el tunavirus y el recovirus se identificaron en el tracto gastrointestinal después de la secuenciación de la próxima generación, pero no se dispone de información sobre la respuesta de anticuerpos o la asociación con diarrea. El primer clado consiste en los astrovirus VA-1, VA-2, VA-3, VA-4 y VA-5, que están genéticamente relacionados con los astrovirus felinos y porcinos, mientras que el segundo clado consiste en los astrovirus MLB1, MLB2 y MLB3 y forman un grupo separado [55, 57, [74] [75] [76] [77] [78]. Para estos nuevos clados queda por determinar la patogénesis ya que los virus se han identificado en pacientes con y sin diarrea, y en algunos estudios los virus se asociaron con diarrea mientras que en otros no se pudo encontrar ninguna asociación [55] [56]. Además se observó una respuesta de anticuerpos contra algunos pero no todos los tipos nuevos de astrovirus [54, 58]. Recientemente, también se ha detectado astrovirus MLB2 en el plasma sanguíneo de un niño febril [79] y astrovirus VA1 en una muestra de biopsia de corteza frontal de un paciente con encefalitis [80], lo que sugiere que la infección por astrovirus puede no limitarse al tracto gastrointestinal. En 2008, se observó el virus Saffold en una muestra de heces de un paciente pediátrico con fiebre de origen desconocido [46]. Aunque el virus Saffold tipo 3 fue cultivado en una línea celular epitelial del carcinoma cervical humano (HeLa), se observaron efectos citopáticos y se encontraron anticuerpos neutralizantes en muestras séricas [59], estudios de casos y controles posteriores mostraron que el virus no estaba significativamente asociado con diarrea [53, 60, 61]. Además, en 2008 se identificó el virus cosavirus en un paciente con diarrea [45]. Sin embargo, un estudio de caso-control mostró que este virus también fue detectado en una cantidad sustancial de individuos sin diarrea y no está asociado con diarrea [32, 62, 63]. El virus Klasse/salivirus fue identificado en 2009 en dos muestras fecales de lactantes con trastornos gastrointestinales [47, 48]. En dos estudios la detección de este virus fue asociada con diarrea [48, 53], mientras que en otro estudio no se encontró asociación con enfermedad [65]. Se obtuvo evidencia serológica de infección por klassevirus humano, sugiriendo que el virus infecta células humanas [64]. Con el uso de técnicas de secuenciación de próxima generación, también se identificaron tres poliomavirus nuevos en muestras fecales humanas. El poliomavirus MW se identificó en las heces de un niño sano de Malawi en 2012 [49], y en el mismo año se encontró poliomavirus MX en muestras de heces de pacientes con y sin diarrea de México, Estados Unidos y Chili [68]. Un año después, se encontró poliomavirus STL en las heces de un niño sano de Malawi [71]. Se observó una respuesta de anticuerpos contra el poliomavirus MX [66] y el poliomavirus MW [69], aunque el poliomavirus MW [67] y el poliomavirus STL [70] no se asociaron significativamente con diarrea en dos estudios independientes de control de casos. El bufavirus es miembro del Parvoviridae y fue descrito por primera vez en 2012 [50]. Dos casos de control en Tailandia y Turquía mostraron que el virus sólo se encontró en pacientes con diarrea y no en controles [72, 73] ; sin embargo, debido a la baja prevalencia (respectivamente 0,3% en Tailandia y 1,4% en Turquía), no se encontró ninguna asociación significativa con la enfermedad. Tusavirus, otro miembro recientemente descrito de los Parvoviridae, fue identificado en las heces de un niño de Túnez con diarrea inexplicable [51], y hasta ahora este es el único estudio que describe este virus. Recovirus es un miembro nuevo de los Caliciviridae y se encontró en muestras de diarrea de Bangladesh [52]. Al igual que el tunavirus, este es el único estudio que describe este virus hasta ahora. La identificación de los virus nuevos mencionados sin duda aumentó nuestros conocimientos sobre virus que se pueden encontrar en el tracto gastrointestinal de los humanos, sin embargo se desconoce cuántos de estos virus nuevos son realmente enteropatógenos. Las heces humanas contienen una amplia variedad de virus que se pueden derivar de diferentes hospedadores: Además de los virus humanos genuinos, los virus alimentarios vegetales [32,81] y los virus alimentarios animales [82] también se pueden encontrar en las heces humanas, así como bacteriófagos y virus que infectan a los protozoos [32]. Incluso los virus derivados de otras partes del cuerpo se pueden encontrar en muestras fecales, como el virus del polioma de John Cunningham originario del riñón que termina en heces a través de orina [83], y los rinovirus [84], bocavirus [85] y coronavirus [86] procedentes del tracto respiratorio y probablemente ingeridos. Además, los virus que infectan células sanguíneas como el virus de inmunodeficiencia humana (VIH)-1 también se pueden detectar en muestras fecales [87]. Por lo tanto, una vez identificado un virus nuevo en muestras de heces humanas, no se indica que este virus se esté replicando en células intestinales humanas. Koch reconoció ya en 1891 que asociar la presencia de un determinado agente con una determinada enfermedad es complejo, y por lo tanto postula directrices que deben seguirse antes de que un agente pueda ser clasificado como patógeno [88]. Sus postulados pueden resumirse en tres puntos: (1) El microbio ocurre en cada caso de la enfermedad en cuestión y en circunstancias que pueden explicar los cambios patológicos y el curso clínico de la enfermedad; (2) el microbio no ocurre en ninguna otra enfermedad como un parásito fortuito y no patogénico; y (3), después de estar completamente aislado del cuerpo y crecido repetidamente en cultivo puro, el microbio puede inducir la enfermedad de nuevo. Si un microbio ha cumplido estos tres postulados, puede afirmarse que "la aparición del microbio en la enfermedad ya no puede ser accidental, pero en este caso no se puede considerar ninguna otra relación entre ella y la enfermedad, excepto que el microbio es la causa de la enfermedad". Sin embargo, para los virus entéricos, estos postulados no son aplicables. Primero, los virus entéricos no se cultivan fácilmente [89] [90] [91], y, segundo, se ha descrito la vaina prolongada de agentes virales e infección asintomática [92], revisado en la literatura [93]. Aunque se han hecho intentos de ajustar los postulados de Koch específicamente para virus y las metodologías actuales implementadas [94] [95] [96], el cumplimiento de estos postulados todavía no es factible en la mayoría de las ocasiones debido a la falta de un sistema eficiente de cultivo celular, dificultades en la síntesis de antígenos y altos niveles de diversidad genética viral dentro de los grupos virales, revisados en la literatura [97]. Se han hecho varios enfoques para desarrollar una metodología que añade mayor importancia al descubrimiento de un nuevo virus.Un enfoque se basa en el enriquecimiento de virus inmunogénicos antes de la secuenciación de la próxima generación mediante el uso de la captura autóloga de anticuerpos antes de la secuenciación.Este método fue probado y validado en varias muestras fecales que contienen adenovirus, sapovirus y norovirus, y ha demostrado enriquecer virus inmunogénicos, mientras que los virus vegetales y bacteriófagos no se Otro método para enriquecer a los virus relevantes antes de la secuenciación de la próxima generación es la llamada plataforma de secuenciación de captura del viroma para los virus vertebrados (VirCapSeq-VERT) que utiliza ~2 millones de sondas que cubren los genomas de todos los miembros de los taxones virales conocidos por infectar vertebrados [99]. Sin embargo, ambos métodos tienen limitaciones: Para el método de captura de anticuerpos, los virus necesitan estar presentes en cargas virales altas, y la sangre, suero o plasma convalecientes necesita estar disponible. Una desventaja de la técnica VirCapSeq-VERT es que no se identificarán virus completamente nuevos, por ejemplo, virus de una nueva familia de virus. El método más sencillo para demostrar la asociación con la enfermedad es el uso de estudios de casos y controles. Además, mientras que en los últimos años se han realizado estudios de casos y controles utilizando PCR convencionales en tiempo real (RT-PCR), en el futuro se pueden utilizar técnicas de secuenciación independientes de próxima generación para tales estudios de casos y controles. Dado que permite la detección de prácticamente todos los ácidos nucleicos, la secuenciación de la próxima generación tiene varias ventajas en comparación con los RT-PCR específicos. La secuenciación de la próxima generación impide la necesidad de realizar numerosos RT-PCR para detectar todos los virus que se sospecha que están asociados con la enfermedad, y se pueden detectar nuevas variantes de familias virales conocidas actualmente o nuevas especies de virus que pueden ser especialmente beneficiosas si sólo se dispone de unos pocos genomas de referencia. El principal beneficio de esta base de datos es que en el futuro inmediato la pregunta más importante puede ser respondida si se identifica un virus nuevo en casos de diarrea: ¿es probable que el virus cause enfermedad? En conclusión, la Es de esperar que en un futuro próximo se describan varios virus nuevos, ya que la detección de estos agentes utilizando las actuales tecnologías de secuencia de la próxima generación ya no es una dificultad. Por lo tanto, añadir relevancia al descubrimiento de virus nuevos debería ser el objetivo principal para futuros estudios.
question: ¿Cuándo se desarrolló el primer sistema de cultivo de tejidos?
answers.text: 1907