બીજા એન્ટીબોડી, વ્યાપારી રૂપે ફ્લોરોસન્ટ ડાયે સાથે ટૅગ કરેલા, દર્દીના સીરમના મિશ્રણમાં અને સ્લાઇડ પર વ્યાપારીરૂપે તૈયાર કરેલા કોશિકાઓને ઉમેરવામાં આવે છે.