ડાયરેક્ટ ઑપ્ટિકલ માઈક્રોસ્કોપીએ દર્શાવ્યું છે કે દા વિન્સી ચાર સ્તરોને સુપરિમૉસ કરીને માંસના ટોન પ્રાપ્ત કરે છે: લીડ વ્હાઇટની એક મુખ્ય આંગળી, સફેદ સફેદ, વર્મિલિયન અને પૃથ્વીની મિશ્રિત ગુલાબી સ્તર; ઘેરા કણ સાથે કેટલાક અપારદર્શક રંગથી અર્ધપારદર્શક ગ્લેઝ અને એક વાર્નિશ સાથે શેડો લેયર બનાવવામાં આવે છે.