ઇસાબેલાના ભાઇ, પોર્ટુગલના જોહ્ન III, અગાઉ 1525 માં ચાર્લ્સ વીની બહેન, ઓસ્ટ્રિયાના કેથરીન સાથે લગ્ન કર્યા હતા