નિદાનની પુષ્ટિ કરવા માટે, ગુદામાં બાયોપ્સી કરવામાં આવે છે, જે કોલોન અને ગુદામાર્ગના અંતમાં ગેંગલેશન કોશિકાઓની અભાવ દર્શાવે છે.