નિરુપયોગીતા બાદ, નમૂનાને વધુ મધ્યમ શ્રેણીમાં ઠંડવામાં આવે છે, જે આશરે 54 ડિગ્રી હોય છે, જે એકલ-અસંદિગ્ધ ડીએનએ ટેમ્પલેટો માટે પ્રાઇમરોના એન્નેલીંગ (બાઇન્ડિંગ) ને સરળ બનાવે છે.