એન્ઝાઇમ-સબસ્ટ્રેટ સંકુલના અસ્તિત્વ માટેના કેટલાક સીધા પુરાવા કિસ્સાઓ માટે મેળવવામાં આવ્યા હતા જ્યારે કેટેલિટીકલ ચક્રના એક તબક્કે એન્ઝાઇમ સહસંયોજક બંધન દ્વારા સબસ્ટ્રેટને બંધાયેલ છે .