ИДЕНТИФИКАЦИЯ ЛЕКАРСТВЕННОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ ГФ РБ С ПОМОЩЬЮ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Аннотация: Изучены методики проведения тонкослойной хроматографии для идентификации лекарственного растительного сырья, содержащего фенольные соединения, флавоноиды, алкалоиды, терпеноиды и полисахариды. Обозначены основные преимущества использования этих методик при проведении контроля качества лекарственного растительного сырья.

Ключевые слова: тонкослойная хроматография, сорбенты, хроматографическая пластинка, идентификация, контроль качества.

Введение. В последнее время возрос интерес к лекарственным средствам на основе лекарственных растений. Растительные препараты не могут полностью заменить терапию синтетическими препаратами, но за счет их этиопатогенетического действия, легкости индивидуального подхода к больному, возможности длительного приема, высокой степени их безопасности при достаточной эффективности находят применение при различных патологиях. В связи с этим большое внимание уделяется вопросам контроля качества отечественных и зарубежных лекарственных средств и биологически активных добавок к пище. Стандартизация ЛРС и ЛРП является гарантией их качества и обеспечивает эффективность и безопасность их применения.

Актуальность темы. Анализ Государственной фармакопеи Республики Беларусь показал, что во многих частных фармакопейных статьях на лекарственное растительное сырье отсутствуют разделы «Качественные реакции», «Хроматография», «УФ-спектр», «Количественное определение» и др.

Цель. Установить  возможности контроля качества фармакопейного ЛРС хроматографическими методами.

Идентификация ЛРС с помощью тонкослойной хроматографии

Тонкослойная хроматография (ТСХ) является наиболее простым методом хроматографии, сочетающим такие качества, как универсальность, высокая чувствительность, быстрота и простота выполнения анализа. Благодаря этим качествам, несложности оборудования, наглядности, четкому разделению ничтожно малых количеств разделяемых веществ и надежности их идентификации метод ТСХ широко используется для анализа ЛС .

ТСХ можно рассматривать как разновидность метода бумажной хроматографии. Вместо свободно свисающих полос бумаги используют стеклянные пластинки, на которые тонким слоем наносят подходящий сорбент. На такой слой на стартовую линию наносят анализируемую смесь веществ, а край пластинки ниже стартовой линии погружают в систему растворителей. По мере продвижения жидкости на пластинке происходит разделение смеси веществ благодаря действию сил адсорбции, распределения,  ионообмена или совокупности действия всех перечисленных факторов. В зависимости от того, в каком направлении поступает растворитель на пластинку, различают методы восходящей и горизонтальной хроматографии, а также нисходящей .

В настоящее время в ТСХ применяют главным образом следующие сорбенты: для разделения липофильных веществ - силикагель, окись алюминия, ацетилированную целлюлозу, полиамиды; для разделения гидрофильных веществ - целлюлозу, ионообменники целлюлозные, кизельгур, полиамиды и др. .

ТСХ анализ фенольных соединений и флавоноидов

Пятна флавоноидов на хроматограмме зачастую могут быть обнаружены просто при облучении пластинки УФ-светом. Широко используются методы обработки хроматограмм такими проявляющими (детектирующими) реагентами, как спиртовой раствор АlCl3, пары йода и концентрированная серная кислота, а также нагревание (только для силикагелевых пластинок) . Метод ТСХ позволяет широко варьировать сочетание сорбента и подвижной фазы, подбирая наиболее оптимальный вариант для конкретного объекта (таблица 2).

Специфическим для хроматография флавоноидов является полиамидный сорбент. Полиамидный сорбент (стационарная фаза), в зависимости от состава подвижной фазы, может проявлять двойственный характер, а именно выступать в роли полярной или неполярной фазы. Соответственно разделение веществ может протекать либо как обычный распределительный (в водно-спиртовых элюентных системах), либо как обращено-фазовый распределительный (в системе растворителей метанол:хлороформ) процессы .

Центром сорбции является амидная группировка полиамидной макромолекулы, например капрона. Хроматографируемые вещества образуют обратимые водородные связи между протонодонорной гидроксильной группой флавоноидного соединения и карбонильной группой амидного фрагмента. Агликоны сорбируются на полиамиде прочнее, чем их гликозиды. Сорбция агликонов находится в пропорциональной зависимости от числа гидроксильных групп в молекуле, от их местоположения в молекуле .

ТСХ анализ алкалоидов

Для ТСХ анализа лекарственных растений, содержащих алкалоиды, используется несколько способов выделения в зависимости от данных о количественном содержании данного класса БАВ в исследуемом ЛРС и от вида анализируемого сырья . 1. ЛРС и ЛС с содержанием алкалоидов более 1 % экстрагируются метанолом или этанолом в смеси 1:1 с 10 % раствором аммиака или 10 % раствором Na2CO3. 2. ЛРС и ЛС с содержанием алкалоидов менее 1 % изначально смешивается с 10 % раствором аммиака и оксидом алюминия в соотношении 2:2:7 соответственно. Данная смесь помещается в стеклянную колонку, через которую пропускается 5–10 мл хлороформа. 3. В случае исследования ЛРС «листья» готовится смесь с 0.1н раствором серной кислоты и последующим добавлением раствора аммиака. Далее экстракция проводится диэтиловым эфиром или хлороформом

Основные подвижные фазы, используемые для ТСХ анализа алкалоидов, а также ЛРС и ЛС, содержащих данный вид БАВ представлены на таблице 3 .

Обнаружение алкалоидов проводится с помощью УФ-облучения (254 и 365 нм) и проявителей как общих (реактив Драгендорфа, йодплатиновый реактив), так и специфических (10 % серная кислота, нингидрин, реактив Маркиза, реактив ван Урка) .

ТСХ анализ терпеноидов

При анализе ЛРС, содержащего эфирные масла чаще всего используют перегонку с водяным паром. В некоторых случаях используется экстракция 96% этанолом (Acori calami rhizomata), метиленхлорид (Origani herba, Thymi herba, Serpilli herba), экстракция спиртом с помощью ультразвука (Valerianae rhizomata cum radicibus) . Примеры подвижных фаз представлены на таблице 4 .

ТСХ анализ полисахаридов <P Lang="be-BY" MCID="96">