ВЫДЕЛЕНИЕ И ИЗУЧЕНИЕ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ПЕПТИДОВ ИЗ СЛИЗИ МОЛЛЮСКОВ

Аннотация: Разработана методика анализа пептидов слизи улитки вида Achatina fulica, заключающаяся в сочетании фильтрации, гель-фильтрации и высокоэффективной жидкостной хроматографии. Показано наличие 4 групп пептидов и белков с широким диапазоном молелярных масс, в том числе несколько групп пептидов, не охарактеризованных ранее. Данные пептиды по анализу молекулярных масс представляют собой соответственно пента-, три- и дипептиды.

Ключевые слова: улитка Achatina fulica, слизь, пептиды.

Секрет желез улиток содержит ряд важнейших биологически активных компонентов: коллаген, гликолевая кислота, аллантоин, натуральные антибиотики, белки, пептиды и витамины. Состав слизи аналогичен составу кожи человека, благодаря чему он имеет регенерирующее действие на кожу человека путем удаления шрамов и морщин.

Слизь моллюсков обладает бактерицидными свойствами, так как содержит лектины, которые могут прилипать к бактериальным клеткам. Таким образом, лектины лишают бактерий их способности проявлять свои патогенные свойства. Данные исследований показали, что слизь имеет специфические антибактериальные свойства против различных бактериальных штаммов.

В ходе испытаний в секрете желез улиток были обнаружены пептиды и гликопептиды, которые являются природными антибиотиками эффективными против различных видов бактерий, вызывающих инфекции у человека . Они являются более эффективными, чем синтетические препараты, к которым часто развивается резистентность, вызывая аллергические заболевания. Пептиды имеют способность (преимущество) проникать через клеточную стенку бактерий и уничтожать их, так что он может развивать сопротивление против них очень сложно.

Хорошо известно, что улиточная слизь содержит много белков, которые имеют различные функции, в результате которых нарушается нормальная работа различных заболеваний.

Таким образом, цель работы заключается в выделении и изучении фракций с низкомолекулярными пептидами из слизи улиток.

В качестве материала для исследования была выбрана слизь улитки вида Achatina fulica. Проведены опыты с 10% гомогенатом слизи на наличие белков и пептидов после кипячения методом Лоури. Выяснили, что в исследуемом образце нет белков или имеются их небольшие следы. Анализируя собранные фракции 10% гомогената методом гель-фильтрации, можно также подтвердить наличие в слизи только пептидов. Фракции, имеющие наибольшие значения оптических плотностей были пропущены через ВЭЖХ.

Пептидный профиль элюции слизи улитки, на котором отчетливо виден пик, представлен на рисунке 1.

Для анализа пептидных компонентов слизи была проведена ВЭЖХ, в ходе которой получили профиль элюции представленный на рисунке 2.

10 % раствор слизи (1г слизи улитки Achatina fulica в 9мл дистиллированной воды) фильтровали через бумажный фильтр.

Проба была делипидизирована гексаном и этилацетатом. Объем вводимой пробы 50 мкл.

В данном исследовании использовался высокоэффективный жидкостный хроматограф Bio RAD NGC Quest ™ 100 с коллектором фракций BioFrac ™. Колонка Discovery BIO Wide Pore C18, 15cm x 4.6mm, 5μm, фирмы «SIGMA - ALDRICH». Для проведения ВЭЖХ использовали следующие элюенты: А - 0,1М ТФУ, B –50% ацетонитрил (скорость потока 0,25мл/мин, программа градиента: 0-60 мин. - 0-100% В, 60-120 мин. - 100% В, температура колонки 25 °С).

В ходе нашей работы сочетанием методов гель-фильтрации и высокоэффективной жидкостной хроматографии мыло обнаружено: 1. Метод гель-фильтрации (рис. 1) показал наличие 4 пиков с молекулярными массами: а) первый пик (фракция 7) – белки и пептиды с молекулярными массами более 9 кДа; б) второй пик (фракция 13) –пептиды с молекулярной массой 500 Да; в) третий пик (фракция 16) –пептиды с молекулярной массой 300 Да; г) второй пик (фракция 19) –пептиды с молекулярной массой 200 Да; 2) Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии показал наличие как минимум 3 групп пиков со сходным распределением молекулярных масс – более 9 кДа, 500 и 200-300 Да.

Таким образом, в результате нашего исследования были описаны новые пептиды, содержащиеся в слизи улитки вида Achatina fulica с молекулярными массами 500, 300 и 200 Да. Можно предположить, что это соответственно пента-, три- и дипептиды. Подобные пептиды не были описаны ранее.

К настоящему времени охарактеризовано огромное количество подобных пептидов практически у всех групп животных и отмечено большое разнообразие физиологических эффектов, которые оказывают подобные пептиды .

В настоящее время одним из самых перспективных направлений в фармакологии является создание биологически активных препаратов на основе биологически активных веществ природного происхождения. Такие препараты характеризуются высокой биологической активностью, менее выраженным побочным действием и высокой биодоступностью.