ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ МЕСТНОГО НАНЕСЕНИЯ НА ОБЛАСТЬ РАНЫ ЛИГАНДА РЕЦЕПТОРА CLEC4E НА ПРОЦЕСС РЕПАРАЦИИ

Аннотация: Изучено влияние трегалозы дибегената, лиганда рецептора врожденного иммунного ответа  CLEC4E, на процесс репарации ран кожи. Изучено изменение площади ран и кинетика инфильтрации тканей раны макрофагами.

Ключевые слова: раневый процесс, трегалозы дибегенат, врожденный иммунный ответ, С-лектиновые рецепторы, макрофаги, CLEC4E.

Микробная флора является обязательным участником процесса заживления ран кожи. Полагают, что микроорганизмы, способствуя воспалению и лизису омертвевших тканей, играют важную роль в очищении от них раневого дефекта; вместе с тем известно, что контаминация раны микроорганизмами может отрицательно сказываться на течение раневого процесса [1, с. 149; 2, с. 96]. Известно, что одну из ключевых ролей в регулировании процессов репарации играют рецепторы врожденного иммунного ответа, распознающие эволюционно консервативные фрагменты молекул бактериального или вирусного происхождения  [3, с. 125]. Активация рецепторов врожденного иммунного ответа их лигандами приводит к индукции секреции ряда факторов (цитокинов, хемокинов, молекул адгезии), регулирующих процесс репарации.

Целью данного исследования являлось определение влияния местного нанесения на область раневого дефекта трегалозы дибегената на процесс репарации ран кожи. Трегалозы дибегенат представляет собой синтетический аналог корд-фактора микобактерий (трегалозы димиколята), и является лигандом рецептора CLEC4E, принадлежащего к семейству C-лектиновых рецепторов врожденного иммунного ответа.

В качестве интегрального показателя, характеризующего эффективность процесса репарации, была выбрана динамика в изменении площади раны. Площадь раны является интегральным показателем, отражающим эффективность процесса регенерации, косвенно характеризующим процессы воспаления, неоваскуляризации, пролиферации фибробластов и коллагенообразования.

В эксперименте использовались 60 нелинейных мышей ICR, самцов, в возрасте 5-6 недель (Питомник «Андреевка»). Моделирование раны было проведено по известной методике [4, с. 3711]. Животные были анестезированы, и после проведения механической депиляции на спине животных с использованием биопсийного инструмента диаметром 8 мм (Sterylab) были созданы раны, путем оттягивание кожи и последующего штампования. Биопсийный инструмент проникал через эпидермис, дерму и подкожную клетчатку, при этом фасция сохранялась интактной. Животные были разделены на две группы. На раны первой группы животных (экспериментальной) ежедневно в течение семи дней, в объеме 150 мкл, в одно и то же время (в пределах 4 ч) наносили гель на основе карбоксиметилцеллюлозы, содержащий 2 мг/г трегалозы дибегената (Avanti Polar Lipids, 890808). На раны животных второй группы (контрольной) аналогично наносили гель, не содержащий трегалозу дибегенат. Первое нанесение препаратов проводили через 24 часа после моделирования раны. На 7-ой, 14-ый, 21-ый дни после первого нанесения препаратов, площади ран были измерены планиметрически. На 1-ый, 3-ий и 7-ой дни из каждой группы было выведено по пять животных. У животных были взяты полоски кожи 1,5х2 см, содержащие раневый дефект, для  проведения иммуногистологических исследований.

Из отобранного материала были изготовлены парафиновые срезы для окраски с использованием антител на F4/80 (маркер макрофагов, Acris-Antibodies, BM4007). Численная плотность F4/80-положительных клеток была определена в пяти произвольно выбранных полях зрения для каждого раневого дефекта при увеличении х400.

Статистическую обработку проводили, используя программу Statistica 6.0. Значимость отличий значений контрольной и экспериментальной групп оценивали с использованием дисперсионного анализа (ANOVA), различия считались значимыми при p&lt;0.05.