Judul: IPB (Bogor Agricultural University)
Abstrak: The use of Percoll gradients for Leydig cells isolation has been reported to influence cell toxicity and reduce the viability and the amount of living cells after culture. To dissolve this problem, study has been carried out used non toxic Nycodenz gradient to isolated and purified the Leydig cells. The use of Nycodenz gradient for the isolation and purification of Leydig cells has not been done by other researchers. To obtain the optimum condition of Leydig cells production, growth factor is required as supporting factors for development of growing cells. Therefore, hCG and ITS has been used in this study. Leydig cells conditioned medium (LCM) contained bioactive materials such as testosterone and growth factors. The Leydig cells conditioned medium as culture medium for bone marrow mesenchymal stem cells will be used to determine its influence to differentiation of cells. The phase of this study included: 1. Isolation and purification of Leydig cells using Nycodenz gradient : (I) with 3 column ( 5 % , 10 % , 15 % ) and ( II ) with 5 columns ( 4 % , 8 % , 10 % , 12 % , 15 % ) and Percoll gradient ( 21 % , 26 % , 34 % , 40 % , 60 % ) as a control . 2. In vitro culture of the best result from cell purification was cultured with the addition of hormones and growth factors : (1) DMEM+NBCS 10% as control, (2) DMEM + NBCS + 2.5 IU/ml hCG , (3) DMEM + NBCS+ 5 ug / ml insulin, 10 ug/ml transferrin, selenium 5 ug/ml (ITS ) and (4) DMEM +NBCS + hCG+ITS . 3 . The concentration of testosteron and protein analyzed from Leydig cells conditioned medium has been used for culturing bone marrow mesenchymal stem cells. The result of first phase study was Nycodenz gradient have the same purity and viability compared with Percoll gradient. After 3 days cultured, in Nycodenz gradient the concentration and viability of Leydig cells more higher than Percoll gradient. The combination of hCG and ITS in DMEM produced Leydig cell proliferation (90.64%) higher compared with hCG (86.99%), ITS (88.35%) and control (86.82%). Proliferation rate (population doubling time, PDT) from primary culture using combination of hCG and ITS showed the fastest (0.88 day) compared with ITS (0.97 day), hCG (1.02 day) and control (1.03 day). The same result of Leydig cells proliferation rate has also showed in first and second cell lines. Testosterone consentration analyzed was the highest (5.25 ng/ml) in DMEM combination with hCG and ITS compared with other treatments (hCG 5.06 ng/ml; ITS 3.19 ng/ml and control 2.46 ng/ml). Differentiation to became Leydig cells from bone marrow mesenchymal stem cells has been known from positive reaction to 3β-HSD staining. Added of hCG to Leydig cells conditioned medium was able to increased the number of Leydig cells to 71.9%. It was also showed that concentration of testosterone has been increased (0.93 ng/ml and 10.22 ng/ml) in the culture medium. The combination of hCG and ITS in DMEM had testosterone (0.71 ng/ml) and protein
Keyword: Leydig cells, rat, Nycodenz, testosterone, mesenchymal stem cells, bone marrow, conditioned medium, transdiferentiation

Judul: IPB (Bogor Agricultural University)
Abstrak: Primordial Germ Cells (PGC) merupakan sel prekursor sel gamet jantan maupun betina. Sel ini berasal dari lapis epiblast kemudian bermigrasi melewati mesenterium menuju rigi kelamin. Pada umur 13.5 hari pascakoitus (hpk) sel ini berada di rigi kelamin dan sudah mengalami determinasi jenis kelamin. Primordial Germ Cells (PGC) bersifat totipoten dengan gen penanda OCT-4, sehingga PGC diharapkan dapat digunakan dalam terapi penyakit degenaratif ataupun pada kasus infertilitas. Penelitian ini betujuan untuk profiling protein di dalam conditioned medium (CM) dari sel testikuler mencit umur 5 hari, mengkarakterisasi PGC dan menganalisis kemampuan CM dalam menginduksi PGC menjadi sel gamet jantan yang haploid. Penelitian tahap pertama bertujuan untuk mengkarakterisasi perkembangan sel testikuler dan mengidentifikasi spermatogonial stem cells (SSC) dalam kultur in vitro. Sel testiskuler dari mencit umur 5 hari di kultur dalam Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM) yang ditambahkan serum 10%, kemudian diinkubasi pada suhu 37 °C, 5% CO2. Perkembangan sel diamati selama 6 hari yang meliputi viabilitas dan population doubling time (PDT). Sel kultur hari ke-1, ke-3 dan ke-6 diwarnai dengan pewarna Periodic Acid Schiff (PAS) untuk mengidentifikasi dan mengukur luas sel testikuler. Secara spesifik, identifikasi SSC menggunakan pewarnaan imunositokimia menggunakan antibodi OCT-4 dan CD90. Hasil penelitian menunjukkan PDT sel testikuler sebesar 0.63 hari dan viabilitas >90%. Persentase sel Sertoli-like meningkat selama kultur, begitu juga dengan sel fibroblast-like yang meningkat pada hari ke-3 dan menurun pada hari ke-6 walaupun tidak signifikan. Sementara itu, sel spermatogonia-like menurun dari hari ke-1 sebesar 54.3%, menjadi 18.7% pada hari ke-6. Luas sel testikuler meningkat signifikan setelah kultur selama 6 hari. Sel testikuler dan SSC di dalam kultur diduga menghasilkan growth factors di dalam niche. Pada akhir kultur (hari ke-6), medium kultur diganti dengan DMEM tanpa serum dengan tujuan sebagai sumber conditioned medium (CM). Penelitian tahap kedua dilaksanakan untuk menganalisis kandungan protein (profiling) serta kandungan hormon testosteron dalam conditioned medium yang diperoleh dari kultur sel testikuler. Profiling protein menggunakan liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS/MS), dan ditemukan 26 jenis protein yang berperan sebagai struktur sel dan proses seluler. Protein yang paling banyak diidentifikasi dalam CM adalah kolagen, yang terdiri atas beberapa jenis, yaitu: Collagen alpha-1(I) chain (Col1a1), Collagen alpha-2(I) chain (Col1a2), Collagen alpha-1(III) chain (Col3a1), Collagen alpha-1(IV) chain (Col4a1) dan Collagen alpha-2(V) chain (Col5a2). Kolagen berperan sebagai matrix extracellular (ECM) dan akan berinteraksi dengan reseptor. Konsentrasi testosteron di dalam CM adalah 0.542 ng/mL. Kandungan CM sel testikuler diharapkan mendukung proses perkembangan sel germinal. Penelitian tahap ketiga adalah karakterisasi fetus sumber rigi kelamin, serta karakterisasi rigi kelamin sebagai sumber PGC baik secara makroskopis maupun mikroskopis, serta perbanyakan PGC. Penelitian tahap ini menggunakan fetus mencit umur 13.5 hpk sebagai sumber rigi kelamin. Fetus diukur dan ditimbang, rigi kelamin diisolasi untuk preparat histologi dan dikultur. Rigi kelamin diwarnai dengan Hematoksilin Eosin (HE) dan pewarnaan immunositokimia menggunakan antibodi VASA sebagai penanda PGC. Perbanyakan PGC dilakukan dengan kultur in vitro selama 9 hari, medium yang digunakan adalah DMEM+Serum 15% dan DMEM+Serum 15% dengan perlakuan penambahan leukemia inhibitory factor (LIF) 1000 IU/mL. Sel kultur diwarnai pada hari ke-3, ke-6 dan ke-9 kultur dengan pewarnaan immunositokimia menggunakan antibodi OCT-4. Hasil penelitian menunjukkan bahwa fetus umur 13.5 hpk dengan ukuran
Keyword: conditioned medium, PGC, proteomik, sel testikuler, spermatogenesis in vitro

Judul: Mencari Aproksimasi Akar-Akar Polinomial Kompleks Dengan Algoritma Weyl
Abstrak: Mencari akarMakar polinomial dengan menggunakan algoritma Weyt. Algoritma WeyJ merupakan algoritma rekursif yang proses kerjanya dapat diana10gkan dengan algoritma Bisection. Karena algoritma Weyl bergerak dalam bidang kompleks maka memerlukan nilai awal hempa bujur sangkar. Dalam proses penyempitan bujur sangkar tersebut algoritma Weyl memerlukan algorittna Turan untuk menentukan jarak antara suatu titik dengan akar polinomial yang terdekat dengan titik tersebut. Karena apabiJa jarak tersebut temyata lebih hesar dari Yl panjang diagonal bujur sangkar yang diamati maka bujur sangkar tersebut tidak memuat satu pun akar polinomial. Untuk seJanjutnya bujur sangkar tersebut diabaikan. Sebaliknya apabila jarak yang diperoleh lebih keeil dari \6 panjang diagonal bujur sangkar yang diamati, maka bujur sangkar tersebut yang akan diperkeciL
Keyword: