Judul: The cellular and molecular studies of sperm X and sperm Y separation based on viability on extremely acidic and alkaline media
Abstrak: Separasi sperma adalah suatu proses untuk memisahkan sperma X dan sperma Y menggunakan metode spesifik sehingga diharapkan dapat memperoleh keturunan sesuai dengan jenis kelamin yang diinginkan. Beberapa metode yang telah dikembangkan untuk separasi sperma diantaranya adalah: coloumn albumin, densitas gradien, elektroforesis, antigen H-Y, filtrasi dengan kolom Sephadex dan flow cytometry. Metode yang memiliki akurasi 85-95% sampai saat ini adalah flow cytometry. Aplikasi metode flow cytometry sangat mahal, memerlukan waktu lama dan terjadinya kerusakan selama proses separasi yang menyebabkan berkurangnya fertilitas sperma serta abnormalitas pada embrio. Metode separasi berdasarkan pada sifat alami yang mampu memisahkan sperma X dan sperma Y dikembangkan. Ilmuwan meyakini bahwa sperma X dan sperma Y dapat dipisahkan berdasarkan pada perbedaan ketahanan pada media asam dan basa. pH vagina yag cukup extrem yaitu antara 3,8-4 kemungkinan berperan penting dalam pengaturan seleksi sperma X atau sperma Y sehingga berpengaruh terhadap jenis kelamin keturunan yang dihasilkan. Penelitian sebelumnya melaporkan bahwa sperma Y tidak dapat bertahan lama pada media asam, suhu tinggi, ataupun lingkungan yang mengandung reactive oxygen species (ROS) tinggi. Pada penelitian ini dilakukan separasi sperma berdasarkan pada hipotesis perbedaan ketahanan dan sifat fisiologis sperma pada media yang memiliki pH asam dan basa ekstrem. Proses separasi tersebut diharapkan dapat memisahkan sperma X dan sperma Y secara akurat. Tujuan dari penelitian ini adalah melakukan kajian komprehenship secara seluler dan molekuler serta fertilitas sperma hasil separasi dengan metode inkubasi menggunakan media pH ekstrem. Penelitian dibagi menjadi tiga tahap: (1) Karakteristik sperma pada media dengan pH yang berbeda, (2) Kajian seluler dan molekuler sperma pada inkubasi menggunakan media asam dan basa ekstrem, (3) Separasi sperma dan uji fertilitas serta potensi perkembangan embrio. Pada tahap pertama, dilakukan penelitian untuk mengevaluasi kisaran nilai pH media yang dapat ditoleransi oleh sperma dan pengaruhnya terhadap kualitas sperma. Sejumlah 250 x 106 sperma beku Sapi Pasundan di thawing dan dibagi menjadi 10 bagian yang sama. HCL atau NaOH ditambahkan ke dalam media bufer untuk membuat media asam dengan pH 3,4,5,6 kontrol 7,2-7,4 dan media basa dengan pH 8,9,10,11,12. Sampel diinkubasi dalam media dengan nilai pH yang spesifik selama 5 menit pada suhu ruang, selanjutnya segera ditambahkan larutan bufer untuk mengembalikan ke pH 7,2-7,4. Evaluasi dilakukan setelah 10 menit inkubasi di suhu ruang. Penelitian tahap dua, metode thawing dan preparasi media dilakukan sesuai dengan penelitian tahap 1. Media yang digunakan memiliki pH 4 untuk asam ekstrem, kontrol memiliki pH 7,2-7,2 dan pH 11 untuk basa ekstrem. Sperma diinkubasi di dalam media yang memiliki pH spesifik selama 5 menit pada suhu ruang, kemudian segera ditambahkan larutan buffer mengembalikan ke pH 7,2-7,4 dan diinkubasi selama 10 menit di suhu ruang. Evaluasi terhadap motilitas, viabilitas, membran utuh, akrosom utuh, morfologi dan DNA utuh pada menit ke 0, 15 dan 30 pasca 10 menit inkubasi di suhu ruang. Level H2O2, aktivitas mitokondria, dan level Ca2+intraseluler dianalisa dengan menggunakan confocal laser scanning microscope (CLSM). Produksi embrio in vitro dilakukan dengan metode intracytoplasmic sperm injection (ICSI) menggunakan sperma yang diinkubasi pada media pH 4 dan pH 11 dibandingkan dengan kontrol. qPCR dilakukan untuk menganalisa ekspresi gen PLP, ZFY, BAX dan PLC ζ pada sperma dan PLP, ZFY
Keyword: asam, basa, sperma, embrio, separasi

Judul: Kualitas dan Daya Fertilitas Spermatozoa X dan Y Sapi Sumba Ongole Yang Dipisahkan Menggunakan Ekstrak Protein Ikan Gabus
Abstrak: Sexing spermatozoa merupakan salahsatu bioteknologi reproduksi yang mampu mengontrol kelahiran ternak untuk tujuan tertentu dengan memisahkan spermatozoa pembawa kromosom X dan Y. Penelitian ini bertujuan untuk menguji efektifitas ekstrak protein ikan gabus sebagai bahan pemisahan spermatozoa X dan Y, mengevaluasi tingkat akurasi kesesuaian kromosom kelamin serta memprediksi kemampuan daya fertilitas spermatozoa melalui evaluasi kinematika spermatozoa X dan Y. Penelitian ini menggunakan sapi pejantan sumba ongole (SO) tersertifikasi sebanyak 3 ekor berumur 4-5 tahun dan ikan gabus dengan berat ±250 g/ekor. Semen dikoleksi menggunakan vagina buatan kemudian dievaluasi secara makroskopis dan mikroskopis. Protein ikan gabus diekstrak dari fillet daging ikan gabus dan dilakukan pengeringbekuan (freeze dry). Kolom ekstrak protein ikan gabus dibuat dalam konsentrasi yang berbeda pada fraksi atas dan bawah yaitu 2%:4%; 3%:5%; 4%:6% dan kontrol bovine serum albumin (BSA) 5%:10%. Semen kemudian ditransfer ke kolom ekstrak protein ikan gabus kemudian diinkubasi selama 30 menit pada suhu ruang. Setiap fraksi dikoleksi dan disentrifugasi kecepatan 1800 rpm selama 10 menit. Supernatan dibuang dan pellet dievaluasi karakteristiknya meliputi; motilitas, abnormalitas, viabilitas dan integritas membran serta morfometrik kepala spermatozoa untuk identifikasi spermatozoa X dan Y. Hasil menunjukkan ekstrak protein ikan gabus mampu mepertahankan motilitas spermatozoa pada fraksi atas dibandingkan fraksi bawah. Viabilitas dan integritas membran spermatozoa pada kontrol lebih tinggi (P<0.05) dibandingkan dengan perlakuan ekstrak protein ikan gabus. Morfometrik kepala spermatozoa pada fraksi atas memiliki luas area 36.82 - 39.02 μm2 dengan perimeter 24.49 - 25.03 μm, panjang dan lebar kepala spermatozoa masing-masing 8.82 - 9.36 μm and 4.66 - 5.04 μm. Morfometrik kepala spermatozoa pada fraksi bawah 34.87 - 36.54 μm2 dengan perimeter 23.82-24.26 μm, panjang dan lebar kepala spermatozoa masing-masing 8.61- 9.08μm dan 4.58-4.84 μm. Proporsi spermatozoa X and Y pada pemisahan menggunakan BSA 5%:10% (69%:76.77%) lebih tinggi dibandingkan perlakuan 2%:4% (42.33%:79.13%), 3%:5% (55.97%:75.73%) dan 4%:6% (62.77%:68%). Spermatozoa X perlakuan ekstrak protein ikan gabus setelah pembekuan memiliki nilai kinematika motilitas yang lebih baik dari spermatozoa Y dengan total motilitas 42.13-64.09%, motilitas progresif 38.7-62.01%, velocity curve line (VCL) 55.89-61.85μm/s, velocity average path (VAP) 102.53-110.14 μm/s, velocity straight line (VSL) 42.19-45.33μm/s, amplitude head displacement (ALH) 4.46-5.45μm dan beat cross frequency (BCF) 21.82-22.36 Hz. Kesimpulan, kolom ekstrak protein ikan gabus 4%:6% mampu memisahkan spermatozoa X dan Y lebih baik dari kombinasi kosentrasi lainnya. Secara umum fraksi atas (spermatozoa X) memiliki nilai kinematika lebih tinggi dibandingkan dengan kontrol daripada fraksi bawah (Spermatozoa Y). Spermatozoa X ekstrak protein ikan gabus memiliki daya fertilitas yang lebih baik dibandingkan dengan spermatozoa Y berdasarkan parameter total motilitas, motilitas progresif, VAP, VCL, VSL, ALH dan BCF menggunakan Spermvision (CASA system, Minitube).
Keyword: CASA, Ekstrak protein, Ikan gabus, Pemisahan spermatozoa, Sumba ongole

Judul: Closed Knight’s Tour pada Papan Catur Berbentuk Persegi Panjang dengan Ukuran Maksimal 8 × 8
Abstrak: Closed Knight’s Tour merupakan langkah kuda yang mengunjungi setiap kotak pada papan catur tepat satu kali dengan langkah kuda berawal dan berakhir pada kotak yang sama. Graf yang terbentuk dari closed knight’s tour dinotasikan sebagai graf G(m,n), dengan m adalah banyaknya baris dan n adalah banyaknya kolom. Graf tersebut memuat Hamiltonian cycle. Sebuah graf terhubung G adalah graf bipartite jika dan hanya jika graf tersebut tidak memiliki cycle dengan panjang ganjil. Papan catur yang memenuhi syarat cukup untuk memiliki closed knight’s tour adalah papan catur berukuran 5 × 6, 5 × 8, 6 × 6, 6 × 7, 6 × 8, 7 × 8, dan 8 × 8.
Keyword: bipartite, closed knight’s tour, hamiltonian cycle, knight’s tour, teori graf