Judul: Transformasi Inti Spermatozoa Domba di dalam Sitoplasma Oosit setelah Fertilisasi In Vitro
Abstrak: Fertilisasi merupakan suatu proses sel spermatozoa dan oosit melakukan fusi untuk menghasilkan individu baru yang diploid dengan potensi genetiknya sama dengan induk. Fertilisasi mengalami beberapa proses kejadian seperti: penetrasi spermatozoa pada zona pelusida (ZP), reaksi akrosom spermatozoa, transformasi spermatozoa yang diikuti oleh lanjutnya resume meiosis pada oosit, fusi materi genetik spermatozoa dan oosit, dan aktivasi metabolisme dari oosit untuk perkembangan embrio. Pada penelitian ini fokus mengamati kejadian dari transformasi spermatozoa saat fertilisasi. Proses transformasi inti spermatozoa yang terjadi saat fertilisasi akan mengalami beberapa proses perubahan bentuk. Urutan transformasi spermatozoa di dalam sitoplasma oosit diawali dengan kondensasi, dekondensasi spermatozoa, prepronukleus, kemudian pronukleus. Transformasi inti spermatozoa saat fertilisasi in vitro erat kaitannya dengan waktu inkubasi. Waktu inkubasi spermatozoa dan oosit yang terlalu lama dapat meningkatkan kejadian polispermi, sementara waktu inkubasi yang terlalu singkat dikhawatirkan belum sempat berkembang menjadi pronukleus. Oleh karena itu, penting untuk diketahui proses transformasi dari spermatozoa agar mendapatkan informasi mengenai kebutuhan waktu transformasi hingga terbentuk pronukleus. Waktu inkubasi spermatozoa dengan oosit bervariasi tiap spesies. Informasi pada domba belum dilaporkan, untuk itu perlu dilakukan penelitian pada domba mengenai transformasi spermatozoa yang terjadi saat fertilisasi in vitro dengan pematangan oosit secara in vitro. Waktu inkubasi spermatozoa dan oosit yang tepat diharapkan dapat meningkatkan fertilisasi dengan tingkat polispermi yang rendah sehingga harapan tingkat perkembangan zigot menjadi embrio semakin meningkat. Ovarium didapatkan dari rumah potong hewan. Oosit dimatangkan secara in vitro selama 24 jam. Oosit yang telah matang, kemudian difertilisasi dengan konsentrasi spermatozoa 5x106 sel/ml dalam inkubator dengan 5% CO2 pada 38.5°C. Proses inkubasi dilakukan selama 3, 6, 9, 12, dan 15 jam untuk setiap perlakuan. Oosit tiap perlakuan waktu inkubasi spermatozoa dan oosit dari tahap fertilisasi in vitro, kemudian difiksasi dan diwarnai dengan aceto-orcein 2% sebelum dievaluasi dengan mikroskop fase kontras. Rangkaian perubahan status inti spermatozoa diolah secara kualitatif dan data persentase transformasi spermatozoa dianalisis menggunakan analysis of variance (ANOVA) pada signifikansi 5%, kemudian uji lanjut dengan menggunakan uji Duncan. Hasil penelitian menunjukkan kondensasi dan dekondensasi spermatozoa terlihat pada tiga jam setelah inkubasi spermatozoa dengan oosit. Enam jam setelah inkubasi ditemukan prepronukelus dan pronukelus. Pronukleus mulai terbentuk pada enam jam setelah inkubasi dan secara nyata meningkat pada sembilan jam setelah inkubasi spermatozoa dengan oosit (P<0.05). Kejadian polispermia mengalami peningkatan secara signifikan pada 12-15 jam setelah interaksi spermatozoa dengan oosit (P<0.05).
Keyword: domba, fertilisasi in vitro, inti spermatozoa, transformasi

Judul: Tingkat Fertilisasi in vitro Oosit Domba setelah Difertilisasi dalam Media dengan Penambahan Cysteamine
Abstrak: Keberhasilan fertilisasi in vitro ditandai dengan terbentuknya dua pronukleus hasil dari fertilisasi normal sehingga memiliki kesempatan untuk berkembang menjadi embrio. Pembentukan pronukleus dapat dioptimalkan dengan cara meningkatkan konsentrasi glutathione (GSH). Glutathione memiliki sejumlah peran penting yaitu mereduksi radikal bebas, proteksi seluler dari stress oksidatif, sebagai reservoir dari cysteine dan membantu pembentukan pronukleus melalui mekanisme dekondensasi inti sel spermatozoa. Apabila konsentrasi GSH yang dicapai selama pematangan tidak optimal, maka akan menyebabkan akumulasi ROS yang berakibat terjadinya aging dan apoptosis. Salah satu komponen yang dapat meningkatkan kadar glutathione adalah cysteamine. Cysteamine dapat memecah ikatan disulfida cystine yang terdapat dalam media menjadi bentuk cysteine yang merupakan prekursor glutathione sehingga memicu uptake cysteine dan sintesis glutathione intraseluler. Cysteamine dengan dosis 100 μM dilaporkan dapat meningkatkan jumlah oosit yang terfertilisasi secara efektif pada hewan kambing, sapi, dan babi. Oleh karena itu, cysteamine dapat digunakan untuk membantu pembentukan pronukleus pada oosit domba. Tujuan penelitian ini yaitu untuk mengkaji peningkatan kompetensi oosit domba setelah penambahan cysteamine pada media maturasi dan fertilisasi atau kombinasinya, terhadap pembentukan pronukleus setelah fertilisasi. Koleksi ovarium dilakukan dengan cara dibilas dengan media transprotasi dengan suhu 34 ̶ 36°C kemudian dibawa ke laboratorium dalam waktu kurang dari 3 jam setelah pemotongan. Oosit dikoleksi dengan teknik slicing, hanya oosit dengan minimum 3 lapis sel kumulus yang kompak dan sitoplasma yang homogen dipilih untuk proses maturasi. Maturasi oosit dilakukan di dalam mikrodroplet 100 μL media maturasi dan ditutup mineral oil kemudian diinkubasi dalam inkubator CO2 5% pada suhu 39 °C selama 24 jam. Fertilisasi oosit menggunakan semen beku domba yang di thawing kemudian diencerkan dengan media fertilisasi hingga mencapai konsentrasi 5×106 spermatozoa/mL. Oosit yang matang dicuci kemudian dipindahkan ke dalam mikrodroplet spermatozoa, ditutup mineral oil dan diinkubasi dengan suhu 39°C selama 12-14 jam. Perlakuan dalam penelitian ini terbagi menjadi empat berdasarkan suplementasi 100 μM cysteamine, kelompok P1 tanpa penambahan cysteamine, kelompok P2 dengan penambahan cysteamine pada media maturasi, kelompok P3 dengan penambahan cysteamine pada media fertilisasi, dan kelompok P4 dengan penambahan cysteamine pada media maturasi dan fertilisasi. Oosit yang telah difertilisasi didenudasi dan difiksasi di atas gelas objek selama 48 - 72 jam kemudian diwarnai dengan aseto-orsein 1% untuk diamati pembentukan pronukleusnya. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa tidak terdapat perbedaan yang signifikan (P>0.05) tingkat fertilisasi normal baik pada kelompok dengan penambahan cystemine di media maturasi (P2), media fertilisasi (P3), maupun kombinasinya (P4) terhadap kelompok kontrol (P1). Dilaporkan sebelumnya bahwa peningkatan perkembangan oosit dan produksi GSH selama maturasi oosit domba secara signifikan baru dicapai pada cysteamine dosis 200μM. Diduga bahwa cysteamine dosis 100 μM tidak mampu meningkatkan sintesis glutathione baik di media maturasi maupun media fertilisasi sehingga glutathione yang ada terbentuk pada level basal atau diperoleh secara maternal seperti pada kelompok kontrol. Diketahui bahwa puncak proses pembentukan GSH oosit terjadi pada saat proses kematangan inti dan berangsur-angsur menurun pada awal proses fertilisasi hingga memasuki tahap awal perkembangan embrio. Oleh karena itu diduga bahwa pembentukan GSH hanya terjadi pada proses maturasi tidak pada proses fertilisasi. Cystine dan cysteine sebagai prekursor sintesis glutathione terdapat dalam media maturasi namun tidak ada di dalam media fertilisasi sehingga tidak terdapat perbedaan tingkat fertilisasi normal
Keyword: cysteamine, domba, GSH, oosit, pronukleus

Judul: Which one use to overcome multicollinearity ? Ridge regression or principal component regression
Abstrak: In multiple linear regression the effect of nonorthogonality of the prediction vectors is to pull the least squares estimates of the regression coefficient away from the true coefficient that one is trying to estimate. Separating the effects of each factor of the regressors has been found to be difficult because of high correlation among independent variables. Although the multicollinearity problem has been recognized by many ways, ordinary least squares is still the main technique used in many fields, but the estimation of regression coefficient can present problems when the data vectors for the predictors are not orthogonal, or in this case are multicollinear. In using ordinary least squares, the regression coefficient may be unstable, too large in absolute value, and incorrect with respect to sign. Introduced biased estimation refer to unbiased one that measure the average closeness to the parameter being estimated corresponding to its mean square error (MSE). Ridge regression and principal component can produce better estimates by its own way than those given by ordinary least squares. It may well be preferred estimator since it will have larger probability of being close to true parameter value. Two of the biased regression methods, ridge regression and principal component regression will be applied into this research and discuss briefly for each of its properties. These methods have its particular idiosyncrasy. The biased regression methods attack the collinearity problem by computationally suppressing the effects of the collinearity. Ridge regression does this correctly by modifying the correlation matrix adding a biased constant driving through nonsingular matrix. Principal component regression attacks the problem by regressing Y on the important principal component and then parceling out the effect of the principal component variables to the original variables. Finally translated back the obtained variables into original variables yield the same sign and nearly the same coefficients for both methods.
Keyword: Regresssion analysis