Judul: Ekspresi dan Purifikasi Protein Inti Virus Hepatitis B (HBcAg) pada Lactococcus lactis.
Abstrak: Protein Inti Virus Hepatitis B (HBcAg) mempunyai kemampuan untuk menginduksi sel B, sel T, sitotoksik sel T, respon imun dan menimbulkan respon antibodi setelah vaksinasi. Oleh karena itu, HBcAg dapat digunakan sebagai vaksin terapetik pada pasien Hepatitis B Virus (HBV) kronis. Vaksin terapetik dibutuhkan untuk menstimulasi kekebalan dalam pengobatan infeksi HBV. Produksi HBcAg rekombinan sudah dilakukan pada beberapa inang seperti Escherihia coli dan Pichia pastoris. Namun, E. coli memiliki beberapa kelamahan untuk memproduksi protein yaitu antara lain protein membentuk badan inklusi, memiliki hasil samping yang bersifat endotoksin dan terkontaminasi oleh protein lain sehingga memerlukan purifikasi yang panjang. Sementara itu P. pastoris memiliki kekurangan yaitu membutuhkan waktu kultur yang lama (empat hari) dan menggunakan inducer methanol yang merupakan senyawa toksik. Ekspresi HBcAg di dalam L. lactis belum pernah dilaporkan sebelumnya. L. lactis adalah bakteri inang yang memenuhi kriteria aman pangan dan kesehatan. Penelitian ini bertujuan untuk mengekspresikan gen penyandi HBcAg di dalam sel L. lactis NZ3900. Gen HBcAg yang digunakan pada penelitian ini adalah gen dari HBV subgenotip B3 yang merupakan subgenotip dominan di Indonesia. Penelitian ini terdiri dari beberapa tahap yaitu analisis sekuen gen HBcAg yang tersisip di plasmid pNZ8148, optimasi waktu induksi terhadap L. lactis yang mengandung plasmid rekombinan pNZ8148-HBcAg, dan ekspresi gen HBcAg pada tingkat transkripsi dan tingkat translasi. Hasil analisis sekuen gen HBcAg yang tersisip di dalam plasmid pNZ8148 dan telah diintroduksikan ke dalam bakteri L. lactis menunjukkan tidak terdapat mutasi dan 100% identik dengan sekuen HBcAg dari HBV subgenotip B3 (Gene bank nomor aksesi 1839 Java). Waktu induksi yang optimum pada fase midlog adalah pada Optical Density (OD) 0.4-0.5. Analisis ekspresi gen HBcAg tingkat transkripsi menunjukkan bahwa induksi dengan konsentrasi nisin 10 ng/mL menghasilkan tingkat ekspresi tertinggi dibandingkan dengan konsentrasi nisin 0, 5 dan 50 ng/mL. Induksi nisin 10 ng/mL menghasilkan peningkatan ekspresi 4.59 kali dibandingkan dengan perlakuan yang tidak diinduksi. Sementara analisis ekspresi gen HBcAg pada tingkat translasi menunjukkan bahwa induksi dengan konsentrasi nisin 10 ng/mL juga menghasilkan tingkat ekspresi tertinggi yang dapat dilihat dari analisis bobot molekul dengan SDS PAGE, immunoblotting dan konsentrasi protein total. Purifikasi protein dengan size exclusion chromatography telah berhasil menghasilkan protein pada ukuran 21 kDa sesuai dengan prediksi bobot molekul protein HBcAg berdasarkan sekuen asam amino. Induksi dengan dosis nisin 10 ng/mL adalah yang paling efisien dalam menginduksi ekspresi protein HBcAg.
Keyword: Virus Hepatitis B, gen HBcAg, L. lactis, ekspresi, nisin

Judul: Ekspresi dan Purifikasi Protein Inti Virus Hepatitis B (HBcAg) pada Inang Escherichia coli.
Abstrak: Hepatitis merupakan suatu peradangan pada organ hati yang dapat disebabkan oleh gaya hidup yang kurang baik, kelainan sistem kekebalan tubuh, dan infeksi mikroorganisme termasuk virus. Terdapat beberapa jenis hepatitis, yaitu hepatitis A, B, C, D, E, dan G. Hepatitis B merupakan salah satu jenis hepatitis yang berbahaya karena efek jangka panjangnya dapat menyebabkan sirosis dan kanker hati. Penyakit hepatitis B tersebar di seluruh dunia dan negara berkembang seperti Indonesia memiliki angka kejadian yang tinggi. Virus hepatitis B memiliki dua protein struktural, yaitu hepatitis B surface antigen (HBsAg) dan hepatitis B core antigen (HBcAg). HBsAg, anti-HBs, HBcAg, dan anti-HBc pada serum darah merupakan beberapa penanda serologi pada infeksi hepatitis B dan digunakan untuk diagnosa tingkat keparahan infeksi. Protein HBcAg memiliki imunogenisitas yang tinggi dan berpotensi untuk dikembangkan menjadi vaksin terapeutik bagi penyakit hepatitis B kronis. Keragaman genetik dari virus berperan penting dalam pengembangan terapi yang lebih efektif. Virus hepatitis B memiliki keragaman genetik yang tersebar secara khas di dunia. Virus hepatitis B subgenotipe B3 merupakan tipe virus hepatitis B yang dominan di Indonesia khususnya di pulau Jawa. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mensintesis protein HBcAg virus hepatitis B subgenotipe B3 pada inang Escherichia coli sebagai kontribusi terhadap pengembangan vaksin terapeutik hepatitis B di Indonesia. Ekspresi protein rekombinan HBcAg menghasilkan produk berupa protein fusi (Thioredoxin–His(6)tag–HBcAg). Plasmid pET32a-HBcAg diintroduksikan ke E. coli BL21 (DE3) pLysS. Konfirmasi keberhasilan transformasi dilakukan menggunakan seleksi antibiotik, PCR koloni, pemotongan gen dengan enzim restriksi, dan sekuensing nukleotida. Transforman ditumbuhkan pada media Luria- Bertani (LB) yang mengandung antibiotik ampisilin dengan agitasi. Induksi ekspresi protein rekombinan HBcAg dilakukan dengan penambahan isopropyl-β- D-thiogalactopyranoside (IPTG). Lisis sel dilakukan menggunakan metode bekucair yang dilanjutkan dengan sonikasi. Protein fusi yang dihasilkan dipurifikasi menggunakan kromatografi afinitas logam dengan resin TALON® Clontech. Bobot molekul protein fusi diperkirakan menggunakan perangkat lunak DNAMAN versi 9 dan dianalisis menggunakan Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis (SDS-PAGE), analisis dot-blot, dan analisis western-blot. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa protein HBcAg berhasil diekspresikan dengan pada inang E. coli (DE3) pLysS dalam bentuk protein fusi yang soluble dengan bobot molekul sekitar 38.5 kDa. Ekspresi protein rekombinan optimum dengan penambahan 0.3 mM IPTG dan purifikasi optimum dilakukan menggunakan larutan buffer pH 8.
Keyword: protein inti, hepatitis B, subgenotipe B3, protein terapeutik

Judul: Structural Stability Analysis of Rain Trees (Samanea saman (Jacq.) Merr) Subjected to Dead, Live and Wind Loads Combination
Abstrak: Pohon tumbang dapat terjadi akibat ketahanan dan stabilitas, keduanya terkait pembebanan, selain gangguan biotik dan stabilitas tanah. Penelitian ini bertujuan menganalisis stabilitas struktur pohon trembesi (Samanea saman (Jacq.) Merr) yang menerima beban mati, hidup, dan angin, serta menghitung keamanannya. Analisis struktur berformat ASD (allowable stress design) berdasarkan National Design Specification (NDS) 2018 dilakukan terhadap 50 pohon. Tiga tahapan analisis dilakukan: (1) D+L+W, (2) D+L, dan (3) D saja. Beban mati (D) adalah berat sendiri berupa bagian tajuk dan batang di atas potongan amatan. Beban hidup (L) adalah orang yang memanjat atau benda yang digantung. W adalah beban angin. Kombinasi D+L+W mengakibatkan tekan dan lentur, sedangkan D+L dan D saja menghasilkan tekan. Tinggi kritis minimum menentukan keamanan pohon berdiri. Berdasarkan keamanannya, pohon diklasifikasikan menjadi tiga kategori: tidak aman, aman, dan sangat aman. Penelitian menunjukkan tinggi kritis minimum selalu dihasilkan oleh pembebanan kombinasi D+L+W karena superposisi resultante tekan dan lentur. Beban angin merupakan kondisi pembatas keamanan pohon berdiri. Pohon yang menerima beban angin bersama berat sendiri dan beban hidup memiliki keamanan lebih rendah daripada pohon yang hanya menerima berat sendiri. Analisis struktur menunjukkan 18, 30, dan 2 pohon berturut-turut tidak aman, aman, dan sangat aman. Tajuk pohon yang tidak aman perlu dipangkas.
Keyword: combined load, critical height, safety factor, structural stability