Judul: Heterologous Expression of Bacterial Lipases in Cereibacter sphaeroides 2.4.1
Abstrak: Penentuan sistem inang merupakan salah satu faktor yang penting untuk mengekspresikan protein rekombinan. Cereibacter sphaeroides 2.4.1 merupakan bakteri ungu non-sulfur yang memiliki potensi untuk dikembangkan sebagai sistem inang karena kemampuan metabolismenya yang sangat beragam. Bakteri ini dapat hidup pada kondisi aerobik maupun anaerobik sebagai organisme fototropik, kemotropik, autotropik, dan heterotropik. Kultivasi fotoheterotrof anaerobik adalah potensi dari bakteri ini karena dapat memanfaatkan energi cahaya tanpa perlunya penambahan oksigen kedalam kultur. Kondisi tumbuh ini menjadi penting untuk meningkatkan keberlanjutan pada industri bioteknologi. Penelitian bertujuan menguji C. sphaeroides 2.4.1 sebagai sistem inang untuk ekspresi heterolog lipase G. stearothermophilus T1.2RQ dan M. luteus EMP-48D. Gen lipase T1.2RQ dan EMP-48D diklon ke vektor ekspresi pRK415. Plasmid pRK415-T1.2RQ dan pRK415-EMP-48D kemudian ditransformasikan ke E. coli S17-1λpir. Koloni positif E. coli yang telah membawa plasmid rekombinan kemudian dikonjugasi dengan C. sphaeroides 2.4.1 menggunakan metode diparental mating. C. sphaeroides 2.4.1 yang telah membawa plasmid rekombinan kemudian digunakan untuk produksi lipase secara aerobik heterotrof dan anaerobik fotoheterotrof. Aktivitas lipase hanya terdeteksi pada C. sphaeroides 2.4.1 yang membawa lipase T1.2RQ. Lipase T1.2RQ diekspresikan secara intraseluler pada sistem inang C. sphaeroides 2.4.1. Aktivitas spesifik lipase T1.2RQ dari kultur aerobik heterotrof adalah 1,09±0,08 U/mg dan pada kondisi kultur anaerobik fotoheterotrof adalah 0,42±0,08 U/mg, sedangkan aktivitas spesifik pada kontrol E. coli BL21 bernilai 3,06±0,17 U/mg. Hasil ini menunjukkan aktivitas lipase T1.2RQ pada kondisi tumbuh aerobik 2,5 kali lebih tinggi dibandingkan anaerobik fotoheterotrof. Lipase T1.2RQ yang dihasilkan C. sphaeroides optimum pada suhu 65 ℃ namun hanya stabil hingga suhu 50℃ setelah inkubasi selama 180 menit. Suhu optimum yang diperoleh mengalami perbedaan dengan aktivitas lipase T1.2RQ yang diekspresikan pada G. stearothermophilus T1.2RQ dan E. coli. Lipase T1.2RQ optimum pada pH 10 dan stabil pada rentang pH 5-10, perubahan pH optimum juga terjadi pada lipase yang diekspresikan oleh C. sphaeroides 2.4.1. Lipase T1.2RQ diujikan pada beberapa substrat p-NP ester dan menunjukkan hasil tertinggi pada p-NP butirat, semakin pendek rantai asam lemak semakin tinggi aktivitas T1.2RQ. Ion Ca2+, Mn2+, dan Zn2+ mampu meningkatkan aktivitas lipase T1.2RQ yang dihasilkan C. sphaeroides. Lipase T1.2RQ dari C. sphaeroides memiliki ketahanan yang baik pada pelarut organik metanol, n-heksana, dan n-heptana. Penelitian awal ini menunjukkan bahwa ekspresi lipase rekombinan di C. sphaeroides 2.4.1 dapat dilakukan. Sistem ekspresi C. sphaeroides sebagai sistem inang perlu dikembangkan untuk meningkatkan hasil lipase rekombinan sehingga dapat diaplikasikan pada industri bioteknologi secara berkelanjutan.
Keyword: C. sphaeroides, Fotoheterotrof, Lipase T1.2RQ, pRK415

Judul: Isolasi Bakteri Penghasil Lipase Termofilik Kloning Dan Ekspresi Gen Penyandi Lipase.
Abstrak: Bakteri termofil merupakan kelompok bakteri yang dapat tumbuh optimal pada suhu 70-80oC. Enzim lipase yang berasal dari bakteri ini memiliki ketahanan terhadap denaturan kimia seperti detergen, agen chaotropic (urea, guanidinium chloride), pelarut organik dan pH ekstrem, sehingga cukup menjanjikan hasil yang maksimal untuk digunakan dalam proses industri. Lipase (triacyl glycerol acylhidrolase EC 3.1.1.3) merupakan kelompok enzim kelas hidrolase yang mengkatalisis reaksi hidrolisis ikatan ester pada rantai panjang asam lemak (trigliserida) menjadi gliserol dan asam lemak bebas pada permukaan air dengan minyak. Selain itu lipase mendapat perhatian khusus karena keunikannya yaitu pada kondisi yang sedikit air (micro-aqueous) mampu mengkatalisis reaksi esterifikasi, trans-esterifikasi, aminolisis dan asidolisis. Tujuan penelitian ini ialah melakukan isolasi bakteri termofilik penghasil lipase; identifikasi dari isolat terpilih; kloning dan ekspresi gen lipase dari isolat terpilih yang berasal dari sumber air panas geiser di Cisolok, Sukabumi, Jawa Barat yang suhunya dapat mencapai 95oC. Bakteri termofil yang diisolasi dari sumber air panas geiser, Sukabumi, Jawa Barat, Indonesia yang memiliki pH 8 dan suhu mencapai 95oC menggunakan metode pengenceran bertingkat yang disebar pada media padat Luria Bertani Rhodamine B. Bakteri termofil ini memiliki kemampuan menghasilkan lipase secara ekstraseluler yang ditunjukkan dengan terjadinya pendaran orange bila diamati di bawah sinar UV dengan panjang gelombang 350 nm. Isolat yang diperoleh diukur kemampuannya dalam menghasilkan lipase dengan metode titrasi. Isolat bakteri termofilik S4-01 memiliki aktivitas tertinggi sebesar 3.91 U menit-1 yang dipilih untuk dilakukan uji selanjutnya. Identifikasi bakteri dilakukan secara molekuler dengan metode 16S rRNA, hasil sekuensing parsial gen 16S rRNA menunjukkan isolat ini berkerabat paling dekat dengan Bacillus amyloliquefaciens. Gen lipase yang berasal dari isolat S4-01 diisolasi dengan primer BamyKpnI-F dan BamyNotI-R yang didesain berdasarkan gen yang diambil dari genebank ncbi.nih.nlm.gov. Hasil isolasi menunjukkan gen lipase memiliki panjang 645 pb dan telah berhasil dikloning ke dalam vektor p-GEMT-Easy pada E. coli TOP10 dengan metode heat shock. Untuk ekspresi gen lipase dilakukan pada vektor ekspresi pET15-by dalam inang E. coli BL21(DE3) pLyss. Produksi lipase rekombinan dilakukan dengan induksi 0.5 mM IPTG pada nilai 0.5-0.6 OD600nm. Penentuan suhu optimum dilakukan dengan metode 4-para nitrofenil palmitat (pNPP) dan pH optimum menggunakan metode 4-para nitrofenil oktanoat (pNPC). Hasil uji menunjukkan lipase rekombinan ini memiliki suhu dan pH optimum pada 40oC dan pH 8. Pengujian terhadap pelarut organik dengan metode pNPP menunjukkan bahwa lipase rekombinan toleran terhadap n-heksan dan substrat nitrofenil ester dilakukan dengan metode pNPP dan pNPC yang menunjukkan lipase rekombinan lebih suka terhadap substrat C6 (heksanoat) dan C14 (miristat).
Keyword: Bakteri termofil, Bacillus amyloliquefaciens, Gen lipase, Kloning, Ekspresi

Judul: Dampak Perceraian dan Hubungan Sosial terhadap Kesejahteraan Psikologis Ibu sebagai Orang Tua Tunggal
Abstrak: Family with a single mothers who came from divorced, often bring the impact such as problem or change on a single mothers well-being. The aim of this research to indentify characteristics of single mother and relations with psychological well-being and social relations, and also analyze impact divorce on psychological well-being and social relations. Descriptive analysis, regression, and Pearson correlation was used in this study. The respondents were sixty single mother who come from the length divorced more than six month. The result showed that compare with present condition, psychological well-being, impact of divorce and social relation respondent are more significant lower than the first six month after divorce. There was relationship between age of present and divorce, family’s income, and size of family with level of depression, social support, and economic impact. Based on regression analysis we found there was negative effect of impact of divorce to psychological well-being at the first six month after divorce and the present. Other wise, we found there was not significant effect of divorce to social relationship.
Keyword: economic impact, level of depression, social support