Judul: Development of Mice Parthenogenetic Embryos Cultured at CHIR99021 as a Source of Primary Colonies of Parthenogenetic Embryonic Stem Cells (pESC)
Abstrak: Parthenogenetic embryonic stem cell (pESC) merupakan sel punca (stem cell) yang berasal dari inner cell mass (ICM) embrio partenogenetik fase blastosis. Kelebihan stem cell ini dibandingkan dengan stem cell lainnya adalah sifat pluripotensi dan self renewal yang baik. Kendala kultur pESC adalah kemampuan embrio partenogenetik untuk membentuk blastosis masih rendah. Selain itu, blastosis partenogenetik yang dihasilkan memiliki kualitas yang rendah. Hal ini tentunya memengaruhi efektivitas kultur koloni primer dan cell line dari pESC. Tujuan penelitian ini melakukan produksi blastosis partenogenetik dengan penambahan CHIR99021 sebagai inhibitor glycogen synthase kinase 3 (GSK3) yang berkaitan dengan mekanisme aktivasi jalur Wnt/β-catenin. Tujuan kedua adalah membandingkan kuantitas dan kualitas blastosis partenogenetik yang dikultur pada CHIR99021 dengan konsentrasi 0 µM, 3 µM, dan 10 µM. Tujuan ketiga adalah melakukan kuantifikasi terhadap sekretom basic fibroblast growth factor (bFGF), epidermal growth factor (EGF), dan insulin like growth factor 1 (IGF1) yang dihasilkan oleh sel rat embryonic fibroblast (REF) pada pasase 3, 10, dan 16. Tujuan keempat adalah menganalisis kemampuan blastosis partenogenetik yang dihasilkan dari kultur yang menggunakan CHIR99021 sebagai sumber koloni primer pESC. Tujuan kelima adalah menganalisis kualitas dan pluripotensi koloni primer pESC mencit yang dihasilkan. Tujuan keenam adalah menganalisis kemampuan koloni pimer pESC yang dihasilkan untuk berdiferensiasi menjadi sel somatis. Mencit betina berusia 3 bulan disuperovulasi menggunakan penyuntikan pregnant mare serum gonadotropin (PMSG) dan human chorionic gonadotropin (HCG). Sebagian dari mencit yang disuperovulasi dikawinkan dengan pejantan dan sisanya dibiarkan tanpa perkawinan. Oosit mencit dikoleksi 14 jam pascapenyuntikan HCG. Oosit yang dikoleksi kemudian diaktivasi menggunakan medium yang mengandung strontium klorida (SrCl2) 10 mmol/l dan sitokalasin B 5 µg/ml. Zigot partenogenetik kemudian dikelompokkan menjadi 3 berdasarkan medium kulturnya (kelompok CHIR99021 0 µM, CHIR99021 3 µM, dan CHIR99021 10 µM). Zigot hasil fertilisasi digunakan sebagai kontrol positif. Kultur dilakukan selam 4 hari. Sel REF dihasilkan dari metode kultur eksplan. Conditioned medium (CM) sel REF pasase 3, 10, dan 16 dikoleksi kemudian dilakukan enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) untuk mengukur konsentrasi bFGF, EGF, dan IGF1. Tingkat pasase sel REF dengan nilai sekretom terbaik akan digunakan sebagai feeder cell pada kultur koloni primer pESC. Blastosis kelompok kontrol, CHIR99021 0 µM, dan CHIR99021 3 µM kemudian dikultur menggunakan feeder cell REF. Kelompok CHIR99021 10 µM tidak digunakan sebagai sumber koloni primer pESC karena memiliki kualitas yang tidak berbeda nyata dibandingkan dengan kelompok CHIR99021 0 µM dan lebih rendah dari kelompok CHIR99021 3 µM. Koloni primer dikarakterisasi dengan metode pewarnaan imunositokimia menggunakan antibodi anti-Nanog, Oct4, dan SSEA1. Selain itu, karakterisasi juga dilakukan menggunakan pewarnaan terhadap alkaline phosphatase (ALP). Koloni primer didiferensiasikan dengan cara memperpanjang masa kultur tanpa menggunakan leukemia inhibitory factor (LIF). Diferensiasi dilakukan selama 14 hari. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa aktivasi partenogenesis menghasilkan zigot partenogenetik diploid yang ditandai dengan 2 pronukleus. Senyawa CHIR99021 3 µM mampu meningkatkan pembentukan blastosis partenogenetik secara nyata (p < 0,05) bila dibandingkan dengan kelompok perlakuan yang lain. Kualitas blastosis yang dihasilkan juga meningkat secara nyata (p < 0,05). Tingkat pembentukan dan kualitas blastosis partenogenetik mengalami penurunan (p < 0,05) karena peningkatan CHIR99021 menjadi 10 µM. Sekresi growth factor bFGF sel REF pasase 10 dan 16 lebih tinggi (p < 0,05)
Keyword: blastosis, CHIR99021, embryonic stem cells, koloni primer, partenogenetik, rat embryonic fibroblast

Judul: Produksi dan Karakteristik Blastosis Partenogenetik Mencit dalam Medium Kultur Bebas Fosfat.
Abstrak: Partenogenesis adalah proses aktivasi sel telur buatan tanpa kontribusi paternal sehingga embrio berkembang tanpa spermatozoa. Proses partenogenesis merupakan strategi reproduksi spesies-spesies dari kelas insekta, pisces, maupun amphibi, yang tidak memerlukan implantasi. Partenogenesis secara alami tidak terjadi pada mamalia tetapi pemahaman mekanisme seluler selama fertilisasi memungkinkan proses ini dapat dilakukan. Blastosis partenogenetik berpeluang digunakan dalam studi ilmu perkembangan, rekonstruksi embrio dan sebagai salah satu sumber alternatif sel punca pluripoten. Penelitian-penelitian yang telah dilakukan sayangnya melaporkan bahwa embrio partenogenetik tidak mencapai tingkat perkembangan blastosis yang menggembirakan. Salah satu unsur yang diprediksi menghambat perkembangan embrio partenogenetik adalah fosfat. Modifikasi medium kultur dilakukan untuk mengatasi permasalahan tersebut. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk memproduksi dan menganalisis karakteristik blastosis partenogenetik mencit dalam medium bebas fosfat. Oosit mencit sebagai materi awal penelitian diperoleh dari mencit dewasa galur DDY dengan prosedur superovulasi menggunakan preparat hormon PMSG 5 IU dan hCG 5IU. Aktivator yang digunakan yaitu strontium klorida 10 mM dan diploidisasi dengan cytochalasin B 5 μg/mL. Medium aktivasi dan medium kultur yaitu modified rat 1 cell embryo medium (MR1ECM) yang tidak mengandung unsur fosfat. Tingkat perkembangan embrio diobservasi pada 48 dan 96 jam setelah kultur. Hasil dari eksperimen pertama penelitian ini menunjukkan bahwa aktivasi dapat dilakukan dan mampu menghasilkan embrio diploid ditandai dengan adanya dua pronukleus dalam waktu paparan 6 jam. Embrio partenogenetik yang dikultur dalam medium bebas fosfat mencapai tingkat perkembangan blastosis lebih tinggi dibanding kelompok dengan penambahan fosfat dalam medium. Peningkatan konsentrasi fosfat dalam medium kultur menyebabkan gangguan perkembangan embrio partenogenetik. Penurunan tingkat perkembangan embrio secara signifikan terjadi pada tahap 4 sel sampai blastosis. Konsentrasi fosfat 2 mM dalam medium mengakibatkan tidak adanya embrio yang dapat berkembang sampai tahap blastosis. Tingkat perkembangan blastosis dalam medium kultur bebas fosfat menunjukkan hasil lebih baik dibandingkan penelitian-penelitian sebelumnya. Penelitianpenelitian yang telah dilaporkan tersebut diketahui menggunakan medium yang mengandung fosfat. Hal ini memperkuat indikasi awal adanya efek negatif fosfat terhadap perkembangan embrio partenogenetik. Efek hambatan perkembangan akibat keberadaan fosfat terkait dengan aktivitas maturation/ metaphase-II promoting factor (MPF). Fosfat dalam medium kultur menyebabkan hambatan pembelahan embrio pada siklus sel kedua. Mekanisme kerja MPF melibatkan sintesis cyclin B dan defosforilasi bentuk inaktif dari MPF yaitu pre-MPF oleh cdc25 phosphatase. Keberadaan fosfat dapat menganggu defosforilasi pre-MPF sehingga pembelahan sel terganggu. Embrio partenogenetik diperkirakan memiliki perbedaan tingkat ekspresi gen cdc25 yang mengakibatkan sensitivitas terhadap fosfat. Eksperimen kedua dilakukan untuk menganalisis perbedaan embrio partenogenetik dan embrio terfertilisasi dalam medium bebas fosfat. Hasil eksperimen kedua menunjukkan embrio partenogenetik tidak dapat berkembang sebaik embrio hasil fertilisasi. Hal ini dikarenakan hilangnya faktor paternal yang menyebabkan tidak adanya transisi kontrol genomik dari maternal ke aktivasi genom zigotik. Kualitas blastosis partenogenetik berdasarkan parameter jumlah sel, viabilitas, dan rasio ICM, lebih rendah dibandingkan dengan blastosis terfertilisasi. Berdasarkan studi literatur hal ini dapat dijelaskan terjadi karena proporsi sel yang mengalami kematian pada embrio partenogenetik lebih besar dibandingkan embrio terfertilisasi akibat viabilitas sel yang berbeda. Berdasarkan hasil penelitian ini dapat disimpulkan bahwa embrio partenogenetik mencit berkembang lebih baik dalam medium bebas fosfat. Karakteristik blastosis partenogenetik mencit dalam medium bebas fosfat yaitu dapat mencapai blastocyst rate 30%, memiliki jumlah sel 51.3 ± 2.9 dengan viabilitas
Keyword: blastosis, fosfat, karakteristik, partenogenetik, produksi

Judul: Studi yuridis formal bagi posisi Indonesia dalam sengketa blok ambalat di perairan laut Sulawesi
Abstrak: Indonesia memiliki 17.504 pulau dan merupakan begara maritim terbesar dunia. Hal tersebut memberikan suatu tantangan tersendiri bagi Indonesia, di antaranya mengenai masalah pulau terluar yang terdapat memicu konflik perbatasan. Konflik Blok Ambalat merupakan konflik yang terjadi antara Indonesia dengan Malaysia.
Keyword: