Judul: Validasi Metode Analisis DNA Babi pada Produk Pangan dengan Primer Terseleksi dan Exogenous Internal Positive Control pada Real-Time PCR
Abstrak: Pengujian DNA babi menggunakan real-time PCR banyak diaplikasikan dalam proses sertifikasi halal maupun pengawasan produk pangan. Namun belum adanya standar metode pengujian ini perlu dilakukan validasi. Penelitian ini ditujukan untuk melakukan validasi metode amplifikasi DNA babi pada real-time PCR dengan menggunakan primer terseleksi dan exogenous internal positive control (IPC) sebagai alternatif metode yang digunakan pada Laboratorium LPPOM MUI. Adapun validasi metode ekstraksi tidak menjadi cakupan pada tesis ini karena menggunakan metode ekstraksi eksisting yang sudah tervalidasi pada Laboratorium LPPOM MUI, yaitu dengan metode solid-phase extraction menggunakan spin column. Tahapan penelitian dimulai dari seleksi pustaka untuk mendapatkan primer terseleksi dan dilanjutkan dengan ekstraksi sampel, uji efisiensi dan uji validasi metode. Sebelum validasi metode amplifikasi DNA, dilakukan uji efisiensi konsentrasi IPC terendah dan konsentrasi DNA sampel maksimum yang dapat diamplifikasi. Hasil uji efisiensi menunjukkan penggunaan IPC pada konsentrasi setengah dari konsentrasi awal, yaitu Exo IPC Mix 5X dan Exo IPC DNA 25X masih memberikan performa yang baik dengan mengamplifikasi DNA IPC pada Ct 27.57 ± 0.28 dan RFU pada 205.5 ± 14.85. Selain itu, diperoleh konsentrasi maksimum isolat DNA yang dapat diamplifikasi dengan baik tanpa ada inhibisi sebesar 100 ng/μl. Validasi metode amplifikasi DNA babi dilakukan pada lingkup uji spesifisitas, sensitifitas, linearitas, efisiensi amplifikasi dan uji robustness. Sebanyak 23 sampel positif dan 23 sampel negatif dievaluasi pada uji spesifitas. Dua sampel positif (kolagen babi dan kolagen peptida babi) menghasilkan hasil false negative dan maksimum nilai Ct untuk hasil true positive adalah 35.69 ± 0.95 pada sampel kapsul gelatin babi. Metode yang digunakan sudah sesuai untuk semua sampel yang diujikan, kecuali kolagen dan kolagen peptida. Di sisi lain, tiga sampel negatif menghasilkan hasil false positive dan terdeteksi di atas Ct 42.26. Oleh karena itu, dari sejumlah sampel yang diujikan, batasan Ct maksimum pada metode ini yang memberikan hasil true positive atau tidak memberikan hasil false positive adalah 35.69 ± 0.95. Nilai LOD yang memenuhi nilai keberterimaan berada pada konsentrasi 0.01 ng/μl pada Ct 33.29 ± 0.92 yang diperoleh dari hasil uji sensitivitas, linearitas (r2 = 0.996) dan efesiensi PCR (ɛ = 96.32). Metode ini teruji robust terhadap beberapa perubahan kecil seperti jenis master mix, volume master mix, konsentrasi primer, konsentrasi probe dan suhu annealing, yaitu DNA babi pada titik LOD yang masih teramplifikasi pada rentang 33.29 ± 0.92. Tidak hanya robust terhadap beberapa perubahan kecil yang mungkin terjadi secara tidak sengaja pada saat pengujian, metode ini juga tahan terhadap keberadaan beberapa inhibitor seperti alginat, selulosa, EDTA, ion kalsium, kolagen peptida dan polisakarida pada konsentrasi 1 μg/μl. Berdasarkan hasil validasi ini, metode amplifikasi DNA babi dengan menggunakan primer terseleksi dan exogenous IPC dapat digunakan sebagai metode alternatif pengujian DNA babi.
Keyword: Method Validation, Porcine DNA, Primer, Internal Positive Control, Real-Time PCR

Judul: Identification of Pork DNA Fragments in Gelatin Samples Using Real Time Polymerase Chain Reaction (qPCR) methods
Abstrak: Gelatin merupakan suatu jenis protein yang diperoleh melalui hidrolisis parsial kolagen dari kulit dan tulang hewan yang memiliki banyak fungsi untuk keperluan berbagai industri. Kebutuhan gelatin dalam negeri umumnya dipenuhi secara impor. Gelatin yang berasal dari kulit babi adalah yang tertinggi dari total produksi gelatin di dunia. Produk babi dan turunannya termasuk gelatin babi dilarang untuk dikonsumsi oleh Muslim, sehingga diperlukan adanya pengujian untuk mengetahui sumber gelatin. Penelitian ini bertujuan untuk mengidentifikasi fragmen DNA babi pada sampel gelatin dengan menggunakan metode real time Polymerase Chain Reaction (qPCR) dengan primer dan probe sudah termasuk ke dalam master mix mericon Pig Kit. Sebanyak 53 sampel gelatin diekstraksi sesuai dengan prosedur standar dari DNeasy mericon Food Manual Book. Hasil ekstraksi sampel gelatin dikuantifikasi menggunakan nanodrop spectrofotometer 2000c dan diperiksa menggunakan kit komersial. Proses amplifikasi dilakukan sesuai dengan prosedur standar dari DNeasy mericon Pig Kit Handbook. Hasil uji qPCR mampu mengidentifikasi adanya fragmen DNA babi pada sampel gelatin yang ditunjukkan dengan nilai Ct<45. Sebanyak 4 sampel gelatin dari 53 sampel positif mengandung DNA babi, sedangkan 49 sampel gelatin menunjukkan hasil negatif. Uji qPCR dapat dijadikan sebagai metode pengujian untuk mengidentifikasi adanya fragmen DNA babi pada sampel gelatin., Gelatin is a protein obtained by hydrolysis of collagen from animal skin and bone that has great importance in many industry. Domestic gelatin is generally obtained by import. The raw materials used in gelatin production are highly from porcine sources. Porcine gelatin is forbidden for Muslim. For this reason, analytical methods to detect gelatin are needed to make sure the source of gelatin. The aim of this research was to identify the presence of pork DNA fragments in gelatin by real time PCR (qPCR) methods. The primer and probes of qPCR were included in mericon Pig Kit master mix. The samples consisted of 53 gelatins. They were extrated according to the procedure of DNeasy mericon Food Manual Book. The result of extracted gelatins was quantified by nanodrop spectrofotometer 2000c and examined by a commercial kit. The amplification process of gelatins was carried out according to the procedure of DNeasy mericon Pig Kit Handbook. The result showed that gelatins with pork DNA can be identified by Ct value<45. There were 4 samples positive contained pork DNA, while 49 samples were negatives. The qPCR methods can be used to identify the presence of pork DNA fragments in gelatin samples.
Keyword: DNA, gelatin, pork, qPCR

Judul: Hamiltonian formulation for linear waves motion in two layers fluid
Abstrak: The surface wave could be considered as a wave that separates two fluids, namely water and air. Based on this assumption, it is introduced the interfacial wave, a wave between two layers of fluid with different density. The formulation of interfacial waves motion begins with deriving the base equation of irrotational ideal fluid. Furthermore, according to irrotational fluid assumption, the base equation can be stated in velocity potential. In this derivation, the fluids domain is assumed to be restricted by rigid lid boundary conditions, both at the upper and lower limit. Therefore, the interfacial waves motion can be explained in a hamiltonian formulation. In the hamiltonian formulation, total energy is defined as the sum of kinetic and potential energy. The hamiltonian system is obtained from reduction of kinetic energy by using the Dirichlet Neumann Operator. The resulted kinetic energy equation is nonlinear. Therefore, this form is linearized by first part of the Taylor expansion. This linearization gives a dispersion relation of linear wave. Based on this dispersion relation, the phase speed of the linear wave depends on the density ratio of the two layers fluid.
Keyword: