Judul: Kloning Dan Ekspresi Gen Penyandi Fragmen Protein Intimin Dari Enterohemorraghic Escherichia Coli O157:H7
Abstrak: Bakteri Enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) O157:H7 adalah salah satu serotipe utama yang paling virulen diantara bakteri patogen EHEC. Bakteri ini merupakan penyebab yang paling umum penularan diare berdarah dan gagal ginjal akut pada anak-anak yang mengalami hemolytic uremic syndrome (HUS). Bakteri ini telah dilaporkan sebagai yang paling sering terkait dengan insiden wabah penyakit infeksi EHEC di seluruh dunia. Hewan perantara utama bakteri ini adalah ruminansia, terutama sapi. Dosis infeksi yang sangat rendah dan karakteristik transmisi yang cepat tersebar, membuat paparan minimalpun terhadap bakteri ini dapat menyebabkan penyakit infeksi EHEC tersebut. Oleh karena itu, strategi kontrol yang tepat diperlukan dalam rangka mencegah dan mengurangi kolonisasi dan transmisi bakteri tersebut. Strategi tersebut termasuk pengembangan protein antigen rekombinan untuk sistem vaksin dan diagnostik. Intimin adalah kandidat antigen yang menarik dan potensial karena Intimin merupakan salah satu faktor virulensi kunci dari bakteri ini. Intimin adalah adhesin utama yang diperlukan untuk kolonisasi bakteri terus-menerus ke sel inang eukariotik. Aktivitas pengikatan reseptor Intimin terlokalisasi pada 282 asam amino C-terminal (Intimin282). Oleh karena itu, Intimin282 atraktif sebagai kandidat antigen yang dapat bermanfaat dalam sistem tersebut di atas. Penelitian sebelumnya telah melaporkan ekspresi Intimin pada sitoplasma E. coli menggunakan sistem ekspresi prokariotik yang umum digunakan, seperti pLac dan T7 polimerase. Namun, hal tersebut biasanya menghadapi beberapa kendala, yaitu tingkat ekspresi yang rendah, kebocoran ekspresi, pembentukan badan inklusi, dan protein terpotong. Vektor pRHA, yang dikontrol secara ketat oleh L-rhamnosa dan Dglukosa, telah dilaporkan merupakan sistem ekspresi E. coli alternatif yang layak untuk kloning dan ekspresi protein rekombinan fungsional yang stabil. Selain itu, periplasma E. coli telah dilaporkan dapat menjaga fungsionalitas dan stabilitas protein dengan lebih efisien dibandingkan sitoplasma. Namun, hingga saat ini belum ada penelitian tentang ekspresi Intimin menggunakan sistem ekspresi pRHA dan/atau pada periplasma E. coli. Oleh karena itu, kami mengkonstruksi sebuah vektor pRHA rekombinan untuk meneliti ekspresi fragmen Intimin imunogenik dari EHEC O157:H7 pada periplasma E. coli. Intimin282 dengan tag His6 (Int282) bersama dengan sekuen sinyal pelB diklon ke dalam vektor pRHA, kemudian diekspresikan pada E. coli JM109, dan dipurifikasi. Hasil tersebut menunjukkan bahwa pelB-Int282 telah berhasil dikloning ke dalam vektor pRHA dengan ukuran gen target sekitar 984 bp yang sesuai dengan ukuran gen target teoritis. Lebih lanjut, Int282 juga telah berhasil diekspresikan pada periplasma E. coli dengan ukuran protein sekitar 32 kDa yang sesuai dengan ukuran protein yang diprediksi berdasarkan sekuen asam aminonya.
Keyword: EHEC O157:H7, Intimin282, pRHA, L-rhamnosa, periplasma E. coli

Judul: Telaah pengklonan gen protease dari Bacillus stearo thermophilus ke dalam Escherichia coli
Abstrak: Fragmen-fragmen genom dari Bacillus stearothermophilus, yang dipotong secara parsial dengan Eco RI atau HindIII, telah diklon dalam Escherichia coli dengan teknik shot gun cloning menggunakan plasmid pRK415 sebagai vektornya untuk gen protease. Media agar MacConkey (Jennings dan Beacham, 1989) dengan sedikit modifikasi dipakai untuk deteksi koloni pembawa plasmid rekombinan atau plasmid nonrekombinan. Media tersebut terdiri dari 10 g tripton, 5 g ekstrak kha­ mir, 10 g laktose, 0.075 g neutral red, 15 g agar dalam 1 L dH20, pH diatur pada 7 .4. Untuk deteksi ekspresi gen protease, media tersebut ditambahkan 2 % susu skim. Media ini dinamakan SMMCA (skim milk modified MacConkey agar). Penghilangan kristal violet, garam empedu dan garam memberikan hasil yang baik untuk deteksi koloni-koloni tersebut. Sel koinpeten untuk keperluan pengklonan disiapkan dengan metode miniprep, sesuai prosedur Lederberg dan Cohen (1974) dengan sedikit modifikasi, dilakukan dengan cara mensentrifusi 1.5 mL kultur fase log dalam tabung mikro setelah sebe­lumnya diinkubasikan selama 30 menit pada 0°C. Pelet sel dicuci dengan 1 mL 0.1 M CaC12 dingin, kemudian sel disuspensikan dalam 0.5 mL 0.1 M CaC12 dingin dan diinkubasikan pada 0°C selama 20 menit, sentrifusi terakhir dilakukan dan pelet sel disuspensikan dalam 0.2 mL 0.1 M CaC12 dingin, pada kondisi ini sel siap digu­ nakan untuk transformasi. Isolasi DNA kromosom dengan metode Marmur (1961) mendapatkan DNA dengan kualitas yang cukup baik, dan dapat dipakai untuk keperluan kloning, walauiv pun dilakukan tidak sampai pada tahap pemurnian lanjutan seperti penghilangan RNA dan pemekatan. Dari 500 mL kultur fase log diperoleh lebih kurang 2 mg DNA kromosom. ...
Keyword: Escherichiacoli, Proteinase

Judul: Socioeconomic and psychological variables influencing household debt
Abstrak: The overall objective of this study was to examine factors influencing total debt, total debt payment, and patterns of debt payments. The study examined the impacts of both psychological (credit attitudes and perception of future income) and socioe- conomic variables on total debt, total debt payment and patterns of debt payments. A conceptual model for this study was developed by incorporating the theory of borrower risk, the economic and psychological economic theory of borrowing, and the results of previous studies. This model identifies socioeconomic and psycholog- ical variables that influence total debt, total debt payment, and patterns of debt payments. Socioeconomic variables included in the model are gender, race, mari- tal status, employment status, household size, age, education, and household assets. Psychological variables are credit attitudes toward the use of credit, and perception of future income. This study used data from the 1989 Survey of Consumer Finances. The survey was sponsored by the Federal Reserve in cooperation with some other federal agencies. Data for the survey were collected by the Survey Research Center at the University of Michigan between August 1989 and March 1990. dst ...
Keyword: Gender