Judul: The Activity of NADP(H) Oxidoreductase and Quinine Production of Elicitated Cells Culture of Cinchona ledgeriana Moens
Abstrak: Tanaman kina (Cinchona ledgeriana) merupakan tanaman industri penghasil senyawa sekunder alkaloid kinolin. Salah satu senyawa alkaloid kinolin yang sangat potensial adalah kinin. Kinin dapat dimanfaatkan sebagai obat malaria, antioksidan, dan pengaya flavor dalam produk minuman ringan. Kulit batang kina umumnya dipanen untuk diekstrak alkaloidnya. Lamanya budidaya dan waktu panen tanaman, serta lamanya waktu pemulihan tanaman setelah dipanen merupakan beberapa kendala dalam upaya mempertahankan dan meningkatkan produksi kinin secara konvensional. Untuk mengatasi masalah tersebut, peningkatan produksi kinin dengan sistem kultur in vitro melalui metode kultur sel diharapkan menjadi solusi. Kultur sel tergolong efisien baik dari segi bahan baku maupun waktu, tidak bergantung iklim dan musim, serta produksi dapat ditingkatkan secara berkelanjutan. Metode kultur sel biasanya dilakukan dengan elisitasi, yaitu suatu teknik untuk menciptakan kondisi stres (cekaman) yang menyebabkan perubahan fisiologi dan biokimia sehingga meningkatkan produksi senyawa sekunder. Elisitasi dilakukan dengan menambahkan senyawa yang dinamakan elisitor. Apabila penggunaan elisitor dapat meningkatkan produksi suatu metabolit sekunder, maka aktivitas enzim-enzim pada lintasan biosintesis metabolit sekunder tersebut diduga juga meningkat. Untuk kinin, hal ini menimbulkan pertanyaan tentang enzim mana pada lintasan biosintesis kinin yang nyata terelisitasi oleh perlakuan yang diberikan. Sejauh ini, informasi mengenai enzim yang berperan dalam pembentukan alkaloid kinolin, khususnya kinin masih sangat terbatas. Diketahui bahwa enzim yang terdekat dalam jalur biosintesis kinin adalah NADP(H) oksidoreduktase. Oleh karena itu, penelitian ini bertujuan untuk menguji aktivitas NADP(H) oksidoreduktase pada kultur sel kina yang dielisitasi dan mengetahui keterkaitan aktivitas enzim tersebut dengan produksi alkaloid kinin. Penelitian ini dibagi menjadi beberapa tahapan. Tahap pertama merupakan tahap kultur suspensi sel. Tahap kedua, dilakukan ekstraksi dan fraksinasi senyawa alkaloid dari hasil kultur yang dielisitasi, kemudian dianalisis melalui HPLC, untuk mengetahui konsentrasi kinin dalam sel. Tahap ketiga merupakan uji aktivitas enzim. Pada tahap ini, dilakukan ekstraksi serta pengukuran kadar protein kasar, dan dilanjutkan dengan pengujian aktivitas enzim dengan substrat kinin dan koenzim NADP dengan metode fluorometri. Kultur sel kina dielisitasi menggunakan asam absisat (ABA) dan paklobutrazol (PBZ) yang dikombinasikan dengan susbtitusi gula alkohol berupa sorbitol dan manitol. Perlakuan terdiri dari lima kombinasi, yaitu: (1) K (tanpa elisitor), (2) A3K (ABA 3 mg/L + sukrosa 30 g/L); (3) A3S (ABA 3 mg/L + sorbitol 5.3 g/L + sukrosa 20 g/L); (4) P7M (PBZ 7 mg/L + manitol 5.3 g/L + sukrosa 20 g/L); dan (5) P7-3M (PBZ 7 mg/L yang dimasukkan pada minggu ketiga kultur + manitol 5.3 g/L + sukrosa 20 g/L). Sel dipanen setelah berumur 7 minggu dan dianalisis pertumbuhan, biomassa, alkaloid kinin, dan aktivitas enzim NADP(H) oksidoreduktase hasil kultur yang dielisitasi. Hasil penelitian menunjukkan bahwa pertumbuhan sel terbaik pada minggu ke-7 diperoleh pada kultur dengan media yang tidak diberi elisitor (kontrol). Pertumbuhan dan biomassa terbaik untuk kultur dengan media yang mengandung elisitor, terdapat pada perlakuan A3S dan A3K, sedangkan kultur dengan media yang ditambah PBZ, baik perlakuan P7M dan P7-3M menghasilkan pertumbuhan dan biomassa sel terendah. Aktivitas enzim biosintesis alkaloid kinolin, NADP(H) oksidoreduktase, terdeteksi pada kontrol dan semua perlakuan elisitasi. Penambahan elisitor pada kultur berpengaruh dalam meningkatkan aktivitas enzim. Aktivitas enzim tertinggi terdapat pada perlakuan P7M (165.42 μM/mg protein) dan A3S (156.37 μM/mg protein) yang bersesuaian dengan akumulasi/produksi senyawa
Keyword: biosynthetic enzyme, paclobutrazol, quinoline alkaloids, elicitor, fluorometry

Judul: Senyawa Sekunder dalam Jaringan dan Suspensi Sel Kina (Cinchona ledgeriana Moens): Analisis Anatomi, Histokimia dan Kadarnya
Abstrak: Kelompok utama senyawa sekunder pada tumbuhan antara lain terpenoid, fenol, flavonoid, senyawa lipofil, dan alkaloid. Peranan senyawa sekunder bagi tumbuhan di antaranya terpenoid sebagai perlindungan diri di lingkungan abiotik dan biotik. Fenol memiliki efek alelopati dan bekerja memecah dormansi biji agar biji segera berkecambah. Flavonoid berguna sebagai antioksidan yang melindungi jaringan dari spesies oksigen reaktif (ROS). Senyawa lipofil berperan dalam menekan autotoksisitas senyawa yang berpotensi toksik pada sel. Alkaloid diketahui mampu memproteksi tanaman dari serangan predator, khususnya mamalia karena bersifat toksik. Alkaloid sudah banyak dimanfaatkan untuk kebutuhan manusia, khususnya di bidang farmasi. Beberapa penggunaan alkaloid di antaranya, dalam pengobatan disentri, pengobatan sakit telinga dan bagian abdominal, serta efektif melawan sel kanker. Meskipun kina telah lama dimanfaatkan, informasi mengenai anatomi dan histokimia jaringan kina belum banyak diketahui, sehingga analisis anatomi dan histokimia dilakukan untuk melengkapi pengetahuan dasarnya. Analisis alkaloid kuinin menjadi fokus dalam penelitian ini, karena C. ledgeriana memiliki alkaloid kuinin tinggi. Selain itu, kuinin banyak dimanfaatkan sebagai tonikum, antipiretikum, antimalaria, pemberi cita rasa pahit, bahan kosmetika, dan bahan baku industri penyamakan. Kebutuhan kuinin yang terus meningkat, tidak sebanding dengan hasil panen dari kulit batang kina. Selain waktu budidaya yang lama, proses pemulihan bagi tumbuhan setelah dipanen juga memerlukan waktu lama. Hal tersebut mendorong diproduksinya obat malaria sintetik. Namun, obat malaria sintetik ini menimbulkan resistensi parasit yang lebih besar, sehingga kuinin masih digunakan. Upaya untuk memproduksi kuinin dengan cepat, salah satunya melalui kultur sel. Namun penelitian yang dilakukan belum memberikan biomassa sel dan kadar kuinin yang optimal. Oleh karena itu, dilakukan penelitian lanjutan untuk mengoptimasi biomassa sel dan kadar kuininnya. Penggunaan elisitor ganda menciptakan kondisi cekaman dalam kultur sel sehingga mampu meningkatkan produksi kuinin. Penelitian ini bertujuan menganalisis struktur sekretori pada jaringan segar dan pada sel yang dikulturkan, yang mengakumulasi senyawa sekunder, serta efek berbagai perlakuan elisitor ganda terhadap kandungan alkaloid kuinin pada kultur suspensi sel kina. Identifikasi struktur sekretori dan anatomi jaringan segar daun dan kulit batang menggunakan mikroskop cahaya. Anatomi jaringan segar diamati melalui sayatan paradermal, transversal dan longitudinal. Sayatan paradermal dibuat dengan metode sediaan utuh, sedangkan sayatan transversal dan longitudinal dibuat metode sayatan segar. Reagen Wagner, Kupri asetat, pewarna Sudan IV, Feri triklorida, dan Aluminium triklorida digunakan untuk analisis histokimia. Lamina daun Cinchona ledgeriana digunakan sebagai eksplan untuk inisiasi kalus. Kalus remah yang dihasilkan diperbanyak di media padat dan dihomogenisasi di media cair sebelum perlakuan. Kalus remah yang berukuran 50 mesh digunakan untuk kultur suspensi sel yang diberi perlakuan elisitor ganda berupa ABA atau PBZ (Paklobutrazol) yang dikombinasikan dengan manitol atau sorbitol. Sel yang berumur 7 minggu dipanen untuk diukur bobot basah dan kering, juga viabilitas selnya. Viabilitas sel diukur menggunakan pewarna TTC (Tripenil Tetrazolium Klorida). Sel yang sudah kering dan digiling hingga berukuran 60 mesh digunakan untuk proses ekstraksi dan purifikasi dan dilanjutkan dengan analisis HPLC untuk kandungan alkaloid kuininnya. Hasil penelitian menunjukkan bahwa daun kina memiliki hipodermis, selain epidermis atas dan bawah, jaringan palisade dan bunga karang. Kulit batang tersusun atas periderm, korteks, dan floem sekunder. Melalui sayatan paradermal daun nampak jelas adanya trikoma non kelenjar dan stomata bertipe parasitik, sedangkan pada kulit batang ditemukan struktur kanal sekresi
Keyword: Alkaloid kuinin, elisitor, sel sekretori

Judul: Penggunaan Teorema Homeomorphy 2-Manifold dan Teorema Euler Poincare pada Torus 𝑇�� dan Simplicial Complex 𝐾��
Abstrak: Two dimensional topological spaces are said to be homeomorphic if they have the same topological invariant, where one of topological invariant used is an Euler characteristic. Homeomorphy 2-Manifold’s Theorem and Euler Poincare’s Theorem are used to distinguish two topological spaces. Homeomorphy 2-Manifold’s Theorem uses Euler characteristic to identify two dimensional topological spaces. Euler Poincare’s Theorem is an alternative way to find Euler characteristic with Betti number, which is topological invariant as well. The objective of this paper is to investigate the homeomorphism of torus 𝑇����� and simplicial complex 𝐾�����. Topological space torus and simplicial complex 𝐾����� have the same Euler characteristic, which is two. Based on Homeomorphy 2-Manifold’s Theorem topological space torus 𝑇����� and simplicial complex 𝐾����� is homeomorphic.
Keyword: simplicial, torus, Euler, homeomorphism, topology