Judul: Diagnosis malaria dengan amplifikasi DNA mitokondria parasit
Abstrak: Malaria masih merupakan rnasalah kesehatan yang utama di Indonesia dan dunia. Metode diagnosis malaria yang selama ini digunakan secara luas adalah perneriksaan preparat apusan darah tebal pada kaca objek dengan pewama Giemsa di bawah mikroskop. Metode ini sederhana dan murah tapi membutuhkan waktu, keterampilan, dan ketelitian yang tinggi. Karena keterbatasan ini dikembangkan metode altematif untuk diagnosis malaria, diantaranya adalah dengan teknik Polymerase Chain Reaction (PCR). Kelebihan metode ini adalah sangat sensitif, Iebih cepat, juga relatif tidak memerlukan keahlian khusus. Parasit malaria, Plasmodium spp. diketahui memiliki tiga sistem genom, yaitu genom inti sel dan dua DNA ekstrakromosom. Salah satu dari DNA ekstrakromosom tersebut berukuran 6 kb linear tersusun berulang, dan diperkirakan merupakan DNA mitokondria karena menyandi tiga protein komponen sistem transpor elektron Apositokrom b serta sitokrom c oksidase subunit I dan III. DNA mitokondria ini secara teoritis sangat ideal sebagai target amplifikasi untuk diagnosis berdasarkan PCR karena jumlah salinann; a per sel haploid jauh lebih banyak dibandingkan gen-gen pada DNA inti sel yang selama ini digunakan untuk tujuan tersebut. Selain itu DNA ini juga mengandung variasi antar spesies sehingga dapat digunakan untuk penentuan spesies den·gan teknik Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP). Dalam penelitian ini, sepasang primer untuk PCR dirancang berdasarkan sekuens DNA mitokondria beberapa spesies Plasmodium yang telah dipublikasi. diharapkan menghasilkan fragmen sebesar 504 pb. Primer ini dapat mengamplifikasi berbagai spesies Plasmodium pada manusia maupun hewan lainnya. baik isolat yang berasal dari kultur maupun pasien. Selanjutnya fragmen hasil PCR dianalisis dengan teknik RFLP menggunakan enzim Sspl dan Hindlll. Dengan Sspl dapat dibedakan tiga spesies: P. falciparum yang terpotong di satu situs menjadi dua fragmen sebesar 165 pb dan 339 pb. P. vivax, yang tidak terpotong dan P. malariae yang terpotong di satu situs menghasilkan dua fragmen berukuran 160 pb dan 24-l pb. Dengan Hindlll hanya dapat dibedakan satu spesies, yaitu P. falciparum yang terpotong di satu situs menghasilkan dua fragmen sebesar I 35 pb dan 369 pb. sedangkan dua spesies lainnya tidak terpotong. Untuk menyederhanakan prosedur diagnosis, digunakan sampel berupa tetesan darah pada kertas saring yang langsung digunakan dalam PCR tanpa melalui proses ekstraksi DNA. Sampel tersebut dapat disimpan pada suhu kamar dan dikirim melalui pas ke laboratorium yang memiliki fasilitas PCR. Reaksi PCR dengan cara ini cukup sensitif, dapat mendeteksi sampai I 00 paras it per tabung PCR atau 10 parasit/µI darah.
Keyword: Malaria, Amplikasi

Judul: Restriction fragment length polymorphism (RFLP) daerah sitokrom b DNA mitokondria dari tujuh spesies mamalia
Abstrak: Indonesia adalah negara yang kaya dengan biodiversitas dan menempati ranking nomor dua setelah negara Brazil. Di Indonesia, satwa liar banyak diburu walaupun dilindungi undang-undang. Selain diburu untuk dipelihara, beberapa satwa liar juga diburu untuk dikonsumsi karena dipercaya sebagai obat untuk beberapa penyakit. Beberapa tahun belakangan ini marak tejadi pemalsuan daging, salah satunya adalah daging sapi dengan daging celeng (babi liar, babi hutan). Daging hewan yang telah dipotong-potong dan dijual di pasar maupun dari hasil penyelundupan terkadang sulit diidentifikasi dari spesies apa daging tersebut berasal jika ciri-ciri morfologinya sudah hilang. Salah satu metode yang dapat digunakan untuk mengetahui data molekuler dan mendeteksi dari spesies apa daging tersebut berasal adalah dengan metode PCR-RFLP berdasarkan daerah sitokrom b dari DNA mitokondria. Metode ini sudah secara luas digunakan untuk identifikasi mamalia, burung, dan reptil. Walaupun sudah digunakan secara luas untuk mengetahui data molekuler hewan, namun identifikasi data molekuler hewan lokal yang ada di Indonesia baru sedikit yang dilakukan, antara lain ayam dan itik. Metode yang digunakan dalam penelitian ini dibagi menjadi pengumpulan sampel, ekstraksi DNA genom, amplifikasi fragmen DNA mitokondria, pemotongan DNA hasil PCR menggunakan enzim Hinf I dan Rsa I, pembacaan hasil menggunakan elektroforesis, dan penghitungan ukuran fragmen DNA. Pengumpulan sampel ketujuh spesies mamalia dilakukan di sekitar Bogor kemudian di dalam larutan DMSO 25 % dan NaCl 4,5 M. Ekstraksi DNA genom dengan metode presipitasi amonium asetat. Selanjutnya dilakukan amplifikasi daerah sitokrom b dengan teknik PCR. Reaksi PCR terdiri dari air milique steril (ddH2O) 16,5 μl, buffer 10X 2,5 μl, MgCl 2 μl, dNTP 2 mM, primer sitokrom b1 L14841 (5’CCATCCAACATCTCAGCATGATGAAA3’) 1 μg, primer sitokrom b2 H15149 (5’CCCCTCAGAATGATATTTGTCCTCA3’) 1 μg, taq polymerase 2,5 unit, dan DNA template ± 100ng sehingga diperoleh volume total 25μl. PCR mix tersebut dimasukkan ke dalam mesin PCR dan dilakukan amplifikasi sebanyak 35 siklus. DNA hasil amplifikasi atau amplikon kemudian dipotong dengan menggunakan enzim restriksi Hinf I (2,5 U) dan Rsa I (20 U). Bahan dan reagen yang dimasukkan dan dicampurkan dalam pemotongan DNA hasil PCR (amplikon) dengan enzim restriksi HinfI secara berurutan adalah 10 μl amplikon ditambahkan air milique steril (ddH2O) 12,25 μl, buffer 10 X 2,5 μl, dan enzim restriksi Hinf I 2,5 U, sehingga volume total menjadi 25 μl, sedangkan bahan dan reagen yang dimasukkan dan dicampurkan dalam pemotongan amplikon dengan enzim restriksi RsaI secara berurutan adalah 10 μl amplikon ditambahkan air milique steril (ddH2O) 10,5μl, buffer 10X 2,5μl, dan enzim restriksi RsaI 20 U sehingga volume total menjadi 25 μl. Amplikon yang dipotong dengan kedua enzim restriksi tersebut kemudian diinkubasi pada suhu 37 °C selama 2 jam untuk pemotongan dengan enzim restriksi Hinf I dan selama 6 jam untuk pemotongan dengan enzim restriksi Rsa I dengan mesin PCR. Penghitungan ukuran amplikon dan fragmen hasil pemotongan enzim atau fragment restriksi dilakukan dengan mengukur jarak antara migrasi DNA sampel dengan migrasi marka DNA dengan gel agarose masing-masing 1,5 % dan 2 % di atas sinar UV transluminator (260nm). Amplifikasi daerah sitokrom b dengan menggunakan primer L14841/H15149 memakai metode PCR menghasilkan amplikon yang sama pada setiap spesies yaitu sebesar 359 pb. Amplikon sitokrom b DNA mitokondria ketujuh spesies mamalia dipotong
Keyword: Species identification, Mammals, Cytochrome b, Mitochondrial DNA, PCR-RFLP

Judul: Socioeconomic and psychological variables influencing household debt
Abstrak: The overall objective of this study was to examine factors influencing total debt, total debt payment, and patterns of debt payments. The study examined the impacts of both psychological (credit attitudes and perception of future income) and socioe- conomic variables on total debt, total debt payment and patterns of debt payments. A conceptual model for this study was developed by incorporating the theory of borrower risk, the economic and psychological economic theory of borrowing, and the results of previous studies. This model identifies socioeconomic and psycholog- ical variables that influence total debt, total debt payment, and patterns of debt payments. Socioeconomic variables included in the model are gender, race, mari- tal status, employment status, household size, age, education, and household assets. Psychological variables are credit attitudes toward the use of credit, and perception of future income. This study used data from the 1989 Survey of Consumer Finances. The survey was sponsored by the Federal Reserve in cooperation with some other federal agencies. Data for the survey were collected by the Survey Research Center at the University of Michigan between August 1989 and March 1990. dst ...
Keyword: Gender