Judul: Expression and Characterization of Lipase from Kosakonia oryzae BL11
Abstrak: Pemanfaatan enzim dalam bidang bioteknologi dan industri semakin meningkat, oleh karena itu pengkajian enzim perlu dilakukan untuk dapat digunakan dalam bidang tersebut. Salah satu enzim yang banyak digunakan dalam proses industri yaitu lipase. Lipase menempati posisi penting dan dikomersialkan karena memiliki potensi untuk diaplikasikan dalam berbagai sektor industri dan bioteknologi seperti zat aditif dalam deterjen, industri makanan, kertas, susu, bahan kimia, farmasi dan produksi biodiesel. Lipase (triacylglycerol acylhydrolases, EC 3.1.1.3) merupakan enzim yang mampu mengkatalisis hidrolisis asam lemak rantai panjang (triasilgliserol) menjadi asam lemak dan gliserol pada permukaan air dengan lemak. Enzim ini menjadi biokatalis pilihan untuk saat ini dan masa depan karena sifatnya yang unik seperti mampu beraktivitas pada rentang suhu dan pH yang beragam serta stabil dalam berbagai pelarut organik. Sifat unik lainnya yaitu dalam kondisi sedikit air, lipase mampu melakukan reaksi yang sebaliknya menyebabkan esterifikasi, alkoholisis dan asidolisis. Beberapa karakteristik tersebut memungkinkan lipase untuk diaplikasikan secara luas dalam proses industri. Permintaan terhadap lipase terus meningkat, namun harga lipase sebagai biokatalis masih belum ekonomis. Hal ini mendorong untuk melakukan eksplorasi enzim lipase yang berasal dari mikrob. Mikrob merupakan penghasil enzim lipase terbanyak. Mikrob penghasil lipase antara lain bakteri, aktinomiset, kapang dan khamir. Bakteri lipolitik dipilih karena memiliki beberapa keunggulan yaitu bersifat stabil, memiliki waktu generasi yang pendek, membutuhkan nutrisi yang sederhana, memiliki aktivitas katalitik yang beragam, dan mudah untuk dilakukan rekayasa secara genetik Lipase yang berasal dari bakteri telah banyak diteliti, termasuk lipase dari Bacillus pumilus, Anoxybacillus flavithermus HBB134 dan Burkholderia cepacia. Terdapat kendala dalam penggunaan bakteri lipolitik yaitu lipase yang dihasilkan relatif sedikit, sehingga perlu adanya pendekatan molekuler. Pendekatan molekuler dilakukan untuk meningkatkan produksi enzim ke tingkat tertinggi dengan kloning dan mengekspresikan gen lipase pada inang yang sesuai. Upaya ini dapat meningkatkan jumlah enzim yang diproduksi dalam waktu singkat dan mengurangi biaya produksi sehingga proses produksi menjadi lebih efisien. Tujuan penelitian ini ialah melakukan ekspresi dan karakterisasi gen lipase dari isolat BL11. Isolat BL11 termasuk dalam kelompok bakteri Gram negatif dan bersifat anaerob fakultatif. Bakteri ini diisolasi dari limbah kulit biji jambu mete dari perkebunan jambu mete, Desa Bone Kancitala, Kecamatan Bone, Kabupaten Muna, Provinsi Sulawesi Tenggara. Identifikasi bakteri menggunakan 16S rRNA sebagai penanda molekuler berdasarkan sekuensing parsial gen 16S rRNA, isolat BL11 berkerabat dekat dengan Kosakonia oryzae., The use of enzymes in the fields of biotechnology and industry is currently increasing, thus enzyme assessment needs to be conducted to support enzyme utilisation. Lipase occupies an important position and is commercialized because it has the potential to be applied in various industrial sectors and biotechnology such as additive compounds in detergents, industrial food, paper, milk, chemicals, pharmaceuticals, and biodiesel production. Lipase (triacylglycerol acylhydrolases, EC 3.1.1.3) is an enzyme that is able to catalyse the hydrolysis of triacylglycerol into fatty acid and glycerol at an oil-water interface, a phenomenon known as interfacial activation. This enzyme has became the alternative biocatalyst this day and in the future due to its unique properties, such as it can be active in a wide spectrum of pH and temperature, as well as considened stable in various organic solvents. Another unique characteristic of lipase is
Keyword: Escherichia coli, Characterization, Cloning, Kosakonia, Enzymes

Judul: Isolation and Cloning of Thermo-halotolerant Lipase Gene from Bacillus tequilensis isolated from Lainea Hot Spring in Southeast Sulawesi
Abstrak: Kebutuhan lipase oleh berbagai bidang industri dengan aplikasi yang beragam membuat lipase perlu diproduksi secara cepat dan banyak. Namun lipase yang diproduksi saat ini belum sepenuhnya sesuai dengan industri yang memerlukan pemrosesan dengan kondisi suhu tinggi dan pelarut organik serta interaksi ion dalam larutan seperti kadar garam atau salinitas. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi bakteri penghasil lipase termo-halotoleran dari sumber air panas, mengkloning dan mengekspresikan gen penyandi lipase serta karakterisasi biokimia lipase termo-halotoleran. Pengayaan dilakukan sebelum mengisolasi bakteri lipolitik dari habitat ekstrim seperti sumber air panas. Pengayaan dilakukan secara langsung pada habitat asli atau in situ enrichment. Bakteri lipolitik diisolasi dari sampel hasil pengayaan in situ dengan metode Spread Plate pada media Rhodamin B–Agar. Isolat bakteri lipolitik diidentifikasi berdasarkan gen 16S rRNA. Gen penyandi lipase diisolasi dengan teknik PCR menggunakan degenerate primer. Gen lipase diklon pada vektor pGEM-T Easy kemudian ditransformasi ke Escherichia coli DH5α untuk preservasi gen dan diklon pada vektor pET24a, ditransformasi ke E. coli BL21 (DE3) pLysS untuk diekspresikan. Ekspresi LipA_BTeq dilakukan 2 perlakuan yaitu mengikutsertakan sekuen signal peptida dan diekspresikan tanpa signal peptida (lipase mature). Analisis massa molekuler protein enzim lipase dilakukan dengan SDS-PAGE dan zimogram. Selain itu dilakukan analisis struktur 3D serta kekerabatan dalam Family lipase dianalisis menggunakan aplikasi MEGA XI. Karakterisasi lipase yang dilakukan adalah suhu optimum, pH optimum, stabilitas enzim terhadap salinitas (larutan NaCl), spesifisitas substrat, ketahanan terhadap pelarut organik, serta pengaruh ion logam. Tujuh belas isolat berhasil diisolasi dari sampel hasil pengayaan. Gen lipase dari 5 isolat bakteri lipolitik berhasil diklon dengan kode isolat HSAS, HSDS2, HSC3.1, HSC3.2 dan HSB3. Hasil identifikasi terhadap isolat HSAS, memiliki tingkat kemiripan 99.5% dengan Bacillus tequilensis strain A13 dengan panjang gen lipase (LipA_Bteq) 639 bp yang menyandikan 213 asam amino dengan 31 asam amino di awal sekuen merupakan sekuen signal peptida. Hasil ekspresi gen lipase menunjukkan perlakuan lipase mature memiliki aktivitas spesifik lebih tinggi (17 ± 1.12 U/mg) daripada yang memiliki signal peptida (8 ± 1.11 U/mg), sehingga lipase mature dipilih untuk dikarakterisasi. Hasil analisis SDS-PAGE dan Zimogram menunjukkan berat protein LipA_Bteq sebesar ~20 kDa. Hasil tersebut dikonfirmasi pula analisis MEGA XI yang membentuk klad dengan subfamily lipase I.4. LipA_Bteq memiliki suhu optimum 30 oC, dan memiliki rentang stabilitas suhu 30 oC - 60 oC dengan rata-rata aktivitas relatif 98 %. LipA_Bteq memiliki ketahanan terhadap konsentrasi NaCl 0.1M sampai 3M, dan memiliki aktivitas optimum pada konsentrasi NaCl 2 M. LipA_Bteq digolongkan sebagai lipase halotoleran karena membutuhkan NaCl untuk mencapai aktivitas optimum. Untuk parameter pH, LipA_Bteq memiliki aktivitas tertinggi pada pH 8. LipA_Bteq memiliki preferensi yang baik pada substrat C6 (rantai pendek). Kehadiran ion logam (Fe3+, Cu2+, Mg2+, Ca2+, Na+, dan Mn2+) dengan konsentrasi 100 mM dalam campuran reaksi mampu meningkatkan aktivitas LipA_Bteq. Disisi lain Zn2+ menurunkan aktivitas lipase sampai 83%. Penambahan pelarut organik 50% metanol, isopropanol dan etanol menurunkan aktivitas enzim, sedangkan kehadiran butanol dan n-heksan meningkatkan aktivitas enzim sebesar 12 % dan 20 % secara berurutan., The need for lipase by various industrial fields with diverse applications makes lipases need to be produced quickly and in large quantities. However, the lipases produced today are not fully suitable
Keyword: lipase bakteri, kloning gen lipase, lipase termo-halotoleran

Judul: Rancang Bangun Alat Pengukur Intensitas Hujan Dengan Metode Jungkat-Jungkit Berbasis Sensor Medan Magnet UGN3503.
Abstrak: This research has been done on making rain intensity gauge using a magnetic field sensor UGN3503. Sensor UGN3503 can detect the magnetic field on its surface. The sensor is placed above a seesaw that was inserted magnet. The magnet used is Neodymium magnet is a type of permanent magnet with stongest magnetic field compared to other types of fixed magnetic field magnets. When the seesaw discards rainwater, the distance between sensor and magnet is closer and causing the keluaran voltage of the sensor increases. The keluaran voltage of the sensor is compared with a reference voltage by the comparator so that the sensor keluaran data is in digital form and ready to be processed. As the processing and sending of data used ATmega16 microcontroller, microcontroller take sensor data once every 100 ms and display data to the LCD (Liquid Crystal Display) 16x2. Every 30 minutes the data is processed into the rain intensity is then stored into a computer.
Keyword: rain intensity, seesaw, comparator, microcontroller, sensor UGN3503.