Judul: Development of Mice Parthenogenetic Embryos Cultured at CHIR99021 as a Source of Primary Colonies of Parthenogenetic Embryonic Stem Cells (pESC)
Abstrak: Parthenogenetic embryonic stem cell (pESC) merupakan sel punca (stem cell) yang berasal dari inner cell mass (ICM) embrio partenogenetik fase blastosis. Kelebihan stem cell ini dibandingkan dengan stem cell lainnya adalah sifat pluripotensi dan self renewal yang baik. Kendala kultur pESC adalah kemampuan embrio partenogenetik untuk membentuk blastosis masih rendah. Selain itu, blastosis partenogenetik yang dihasilkan memiliki kualitas yang rendah. Hal ini tentunya memengaruhi efektivitas kultur koloni primer dan cell line dari pESC. Tujuan penelitian ini melakukan produksi blastosis partenogenetik dengan penambahan CHIR99021 sebagai inhibitor glycogen synthase kinase 3 (GSK3) yang berkaitan dengan mekanisme aktivasi jalur Wnt/β-catenin. Tujuan kedua adalah membandingkan kuantitas dan kualitas blastosis partenogenetik yang dikultur pada CHIR99021 dengan konsentrasi 0 µM, 3 µM, dan 10 µM. Tujuan ketiga adalah melakukan kuantifikasi terhadap sekretom basic fibroblast growth factor (bFGF), epidermal growth factor (EGF), dan insulin like growth factor 1 (IGF1) yang dihasilkan oleh sel rat embryonic fibroblast (REF) pada pasase 3, 10, dan 16. Tujuan keempat adalah menganalisis kemampuan blastosis partenogenetik yang dihasilkan dari kultur yang menggunakan CHIR99021 sebagai sumber koloni primer pESC. Tujuan kelima adalah menganalisis kualitas dan pluripotensi koloni primer pESC mencit yang dihasilkan. Tujuan keenam adalah menganalisis kemampuan koloni pimer pESC yang dihasilkan untuk berdiferensiasi menjadi sel somatis. Mencit betina berusia 3 bulan disuperovulasi menggunakan penyuntikan pregnant mare serum gonadotropin (PMSG) dan human chorionic gonadotropin (HCG). Sebagian dari mencit yang disuperovulasi dikawinkan dengan pejantan dan sisanya dibiarkan tanpa perkawinan. Oosit mencit dikoleksi 14 jam pascapenyuntikan HCG. Oosit yang dikoleksi kemudian diaktivasi menggunakan medium yang mengandung strontium klorida (SrCl2) 10 mmol/l dan sitokalasin B 5 µg/ml. Zigot partenogenetik kemudian dikelompokkan menjadi 3 berdasarkan medium kulturnya (kelompok CHIR99021 0 µM, CHIR99021 3 µM, dan CHIR99021 10 µM). Zigot hasil fertilisasi digunakan sebagai kontrol positif. Kultur dilakukan selam 4 hari. Sel REF dihasilkan dari metode kultur eksplan. Conditioned medium (CM) sel REF pasase 3, 10, dan 16 dikoleksi kemudian dilakukan enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) untuk mengukur konsentrasi bFGF, EGF, dan IGF1. Tingkat pasase sel REF dengan nilai sekretom terbaik akan digunakan sebagai feeder cell pada kultur koloni primer pESC. Blastosis kelompok kontrol, CHIR99021 0 µM, dan CHIR99021 3 µM kemudian dikultur menggunakan feeder cell REF. Kelompok CHIR99021 10 µM tidak digunakan sebagai sumber koloni primer pESC karena memiliki kualitas yang tidak berbeda nyata dibandingkan dengan kelompok CHIR99021 0 µM dan lebih rendah dari kelompok CHIR99021 3 µM. Koloni primer dikarakterisasi dengan metode pewarnaan imunositokimia menggunakan antibodi anti-Nanog, Oct4, dan SSEA1. Selain itu, karakterisasi juga dilakukan menggunakan pewarnaan terhadap alkaline phosphatase (ALP). Koloni primer didiferensiasikan dengan cara memperpanjang masa kultur tanpa menggunakan leukemia inhibitory factor (LIF). Diferensiasi dilakukan selama 14 hari. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa aktivasi partenogenesis menghasilkan zigot partenogenetik diploid yang ditandai dengan 2 pronukleus. Senyawa CHIR99021 3 µM mampu meningkatkan pembentukan blastosis partenogenetik secara nyata (p < 0,05) bila dibandingkan dengan kelompok perlakuan yang lain. Kualitas blastosis yang dihasilkan juga meningkat secara nyata (p < 0,05). Tingkat pembentukan dan kualitas blastosis partenogenetik mengalami penurunan (p < 0,05) karena peningkatan CHIR99021 menjadi 10 µM. Sekresi growth factor bFGF sel REF pasase 10 dan 16 lebih tinggi (p < 0,05)
Keyword: blastosis, CHIR99021, embryonic stem cells, koloni primer, partenogenetik, rat embryonic fibroblast

Judul: ip
Abstrak: Stem cells atau sel punca merupakan sel yang memiliki kemampuan memperbarui diri dan belum berdiferensiasi secara spesifik. Sel ini secara umum terdiri dari sel punca dewasa dan sel punca embrionik. Sel punca embrionik atau embryonic stem cells (ESC) berasal dari perkembangan embrio tahap blastosis. Blastosis hasil fertilisasi sebagai sumber propagasi ESC sayangnya menimbulkan polemik karena embrio merupakan awal dari kehidupan yang baru sehingga penggunaannya dinilai tidak etis. Salah satu alternatif yang kemudian dikembangkan adalah pseudo embryo yang diperoleh melalui metode partenogenesis. Partenogenesis adalah strategi reproduksi tanpa fertilisasi oleh spermatozoa. Partenogenesis secara alami tidak ditemukan pada mamalia, akan tetapi pemahaman mekanisme seluler aktivasi oosit selama proses fertilisasi memungkinkan proses ini dapat dilakukan. Embrio partenogenesis akan gagal berkembang menjadi individu baru dikarenakan hilangnya kontribusi gen-gen spesifik asal paternal akan tetapi dapat dikultur sampai tahap blastosis untuk kemudian dipropagasi menjadi sel punca. Propagasi blastosis menjadi sel punca membutuhkan beberapa tahapan penting. Blastosis dikultur membentuk koloni primer pada tahap pertama. Koloni primer kemudian dipasase dan dilakukan karakterisasi sampai benar-benar stabil memenuhi kriteria ESC. Koloni primer asal blastosis dapat diarahkan untuk berdiferensiasi dengan metode tertentu salah satunya dengan pemanfaatan conditioned medium. Conditioned medium (CM) adalah medium yang berasal dari kultur sel tertentu, khususnya sel punca dan berbagai jenis sel progenitor lainnya, serta mengandung protein-protein yang disekresikan oleh sel dalam bentuk sekretom. Bukti-bukti ilmiah telah menunjukkan bahwa CM bukan hanya limbah biologis tetapi berpeluang untuk dimanfaatkan. Rangkaian penelitian ini dilakukan untuk menguji potensi CM asal sel otak fetus tikus terhadap diferensiasi neuronal koloni primer dari blastosis fertilisasi dan partenogenetik. Penelitian tahap pertama membuktikan bahwa CM asal sel otak fetus tikus E17 mampu menginduksi diferensiasi neuronal dari koloni primer blastosis fertilisasi. Penambahan CM 50% dapat memerantarai pertumbuhan neurit menghasilkan neuron like cells pada hari ke-7 setelah penambahan CM. Proses diferensiasi awal membentuk struktur menyerupai embryoid bodies, kemudian menjadi round shape cells yang memiliki karakteristik sel neuroepitelial atau radial glial, diikuti dengan perpanjangan neurit. Kandungan dalam CM yang berasal dari sekresi sel otak fetus tikus mendorong terjadinya perpanjangan neurit tersebut. Penelitian tahap kedua mengeksplorasi proses produksi CM untuk mengetahui efek heterogenitas sel dan waktu puasa sel serta mengidentifikasi protein-protein yang ada dalam CM. Hasil penelitian kedua menunjukkan bahwa proses kultur tanpa serum atau proses puasa sel akan memengaruhi heterogenitas sel dan profil sekretom. Berdasarkan analisis dari penelitian tahap ini diketahui bahwa CM1 dengan waktu puasa 24 jam didominasi oleh sel neuron immature. Protein yang terkandung dalam CM1 ini berfungsi untuk pengaturan pertumbuhan sel, stimulasi diferensiasi dan produksi energi. Durasi waktu puasa sel yang lebih panjang yaitu 48 jam menyebabkan dominasi astrosit dan sel glia pada populasi sel. Hal ini disebabkan ketahanan sel glia khususnya astrosit terhadap cekaman stres pada kondisi kultur dan daya hidup astrosit lebih tinggi dibandingkan dengan neuron. Sel progenitor yang masih ada juga memiliki tendensi yang lebih tinggi untuk berdiferensiasi menjadi sel glia pada kondisi tanpa serum. Protein yang disekresikan setelah puasa sel 48 jam yang terkandung dalam CM2 merupakan jenis-jenis protein yang disekresikan oleh astrosit dan lebih berperanan dalam proteksi neuron yang masih tersisa. Identifikasi protein dan analisis fungsional mendasari pemilihan CM1 untuk proses induksi koloni
Keyword: blastosis, conditioned-medium, diferensiasi, koloni primer, neuronal

Judul: Studi yuridis formal bagi posisi Indonesia dalam sengketa blok ambalat di perairan laut Sulawesi
Abstrak: Indonesia memiliki 17.504 pulau dan merupakan begara maritim terbesar dunia. Hal tersebut memberikan suatu tantangan tersendiri bagi Indonesia, di antaranya mengenai masalah pulau terluar yang terdapat memicu konflik perbatasan. Konflik Blok Ambalat merupakan konflik yang terjadi antara Indonesia dengan Malaysia.
Keyword: