Judul: Ekspresi dan Purifikasi Protein Inti Virus Hepatitis B (HBcAg) pada Lactococcus lactis.
Abstrak: Protein Inti Virus Hepatitis B (HBcAg) mempunyai kemampuan untuk menginduksi sel B, sel T, sitotoksik sel T, respon imun dan menimbulkan respon antibodi setelah vaksinasi. Oleh karena itu, HBcAg dapat digunakan sebagai vaksin terapetik pada pasien Hepatitis B Virus (HBV) kronis. Vaksin terapetik dibutuhkan untuk menstimulasi kekebalan dalam pengobatan infeksi HBV. Produksi HBcAg rekombinan sudah dilakukan pada beberapa inang seperti Escherihia coli dan Pichia pastoris. Namun, E. coli memiliki beberapa kelamahan untuk memproduksi protein yaitu antara lain protein membentuk badan inklusi, memiliki hasil samping yang bersifat endotoksin dan terkontaminasi oleh protein lain sehingga memerlukan purifikasi yang panjang. Sementara itu P. pastoris memiliki kekurangan yaitu membutuhkan waktu kultur yang lama (empat hari) dan menggunakan inducer methanol yang merupakan senyawa toksik. Ekspresi HBcAg di dalam L. lactis belum pernah dilaporkan sebelumnya. L. lactis adalah bakteri inang yang memenuhi kriteria aman pangan dan kesehatan. Penelitian ini bertujuan untuk mengekspresikan gen penyandi HBcAg di dalam sel L. lactis NZ3900. Gen HBcAg yang digunakan pada penelitian ini adalah gen dari HBV subgenotip B3 yang merupakan subgenotip dominan di Indonesia. Penelitian ini terdiri dari beberapa tahap yaitu analisis sekuen gen HBcAg yang tersisip di plasmid pNZ8148, optimasi waktu induksi terhadap L. lactis yang mengandung plasmid rekombinan pNZ8148-HBcAg, dan ekspresi gen HBcAg pada tingkat transkripsi dan tingkat translasi. Hasil analisis sekuen gen HBcAg yang tersisip di dalam plasmid pNZ8148 dan telah diintroduksikan ke dalam bakteri L. lactis menunjukkan tidak terdapat mutasi dan 100% identik dengan sekuen HBcAg dari HBV subgenotip B3 (Gene bank nomor aksesi 1839 Java). Waktu induksi yang optimum pada fase midlog adalah pada Optical Density (OD) 0.4-0.5. Analisis ekspresi gen HBcAg tingkat transkripsi menunjukkan bahwa induksi dengan konsentrasi nisin 10 ng/mL menghasilkan tingkat ekspresi tertinggi dibandingkan dengan konsentrasi nisin 0, 5 dan 50 ng/mL. Induksi nisin 10 ng/mL menghasilkan peningkatan ekspresi 4.59 kali dibandingkan dengan perlakuan yang tidak diinduksi. Sementara analisis ekspresi gen HBcAg pada tingkat translasi menunjukkan bahwa induksi dengan konsentrasi nisin 10 ng/mL juga menghasilkan tingkat ekspresi tertinggi yang dapat dilihat dari analisis bobot molekul dengan SDS PAGE, immunoblotting dan konsentrasi protein total. Purifikasi protein dengan size exclusion chromatography telah berhasil menghasilkan protein pada ukuran 21 kDa sesuai dengan prediksi bobot molekul protein HBcAg berdasarkan sekuen asam amino. Induksi dengan dosis nisin 10 ng/mL adalah yang paling efisien dalam menginduksi ekspresi protein HBcAg.
Keyword: Virus Hepatitis B, gen HBcAg, L. lactis, ekspresi, nisin

Judul: Imunogenisitas Kandidat Vaksin Oral Lactococcus lactis Rekombinan HBcAg dan IFNα-2b untuk Pencegahan Hepatitis B.
Abstrak: Hepatitis merupakan peradangan pada organ hati yang disebabkan infeksi virus, dan dapat memicu kondisi akut dan kronis. Virus Hepatitis B merupakan penyebab utama sirosis dan kanker hati di wilayah endemik, terutama Indonesia. Virus Hepatitis B subgenotipe B3 merupakan jenis virus yang banyak tersebar di Indonesia, dan memiliki dua protein struktural utama yaitu HBsAg dan HBcAg. Antigen inti Hepatitis B (HBcAg) dilaporkan sebagai komponen virus yang bersifat antigenik, dapat menginduksi sel T dan sel B spesifik yang tinggi dibandingkan HBsAg. Rekombinan HBcAg sudah dikembangkan sebagai kandidat vaksin oral di dalam vektor ekspresi Lactococcus lactis NZ3900. IFNα- 2b merupakan protein imunomodulator terhadap sistem imun adaptif yang sudah disetujui sebagai agen terapeutik untuk penyakit hepatitis B. Kebutuhan protein IFNα-2b untuk penanganan penyakit hepatitis cukup tinggi, maka sediaan protein rekombinan IFNα-2b dikembangkan di dalam vektor L. lactis pNZ8148 untuk dapat digunakan dalam sediaan vaksin oral. Kombinasi kedua protein tersebut diharapkan dapat menghasilkan respon antibodi yang lebih tinggi. Penelitian ini bertujuan menganalisis ekspresi protein rekombinan IFNα-2b yang sudah dikonstruksi menggunakan validasi western blot. Reaksi imunogenisitas dari kandidat vaksin L. lactis rekombinan HBcAg dan IFNα-2b diuji secara in vivo pada mencit Balb/c betina. Respon antibodi yang terbentuk dianalisis menggunakan ELISA, dan jenis imunoglobulin yang ada di dalam serum dianalisis menggunakan MagPix®. Protein rekombinan IFNα-2b pada L. lactis NZ3900 berhasil diekspresikan secara ekstraseluler melalui purifikasi kromatografi filtrasi gel, yang tervalidasi positif dengan anti- IFNα-2b pada ukuran 19 kDa. Imunisasi yang diberikan pada hewan uji menghasilkan respon imun humoral (IgG) total yang optimal di hari ke- 35 dengan rataan konsentrasi 4.96±1.03 mg/ml. Perlakuan tunggal dengan HBcAg menghasilkan respon IgG total lebih tinggi dibandingkan dengan kombinasi menggunakan IFNα-2b. Imunisasi oral menggunakan L. lactis rekombinan HBcAg mempertahankan imunitas mukosal dengan terbentuknya konsentrasi IgA yang lebih tinggi dibandingkan kontrol sampai hari ke-51. Ekspresi IgA yang tinggi mengindikasikan bahwa tingkat stress pada hewan uji rendah, karena stress menghasilkan persinyalan untuk produksi hormon yang dapat menekan ekspresi IgA. Penggunaan L. lactis rekombinan pada penelitian ini mendemonstrasikan bahwa pemberian imunisasi peroral dapat meningkatkan imunitas mukosal, tidak menimbulkan stress pada hewan uji. Sediaan kandidat vaksin bersifat aman karena tidak menghasilkan penurunan berat badan, tidak menghasilkan kerusakan jaringan hati hingga terjadi nekrosis, dan tidak terdapat kelainan pada organ limpa.
Keyword: HBcAg, IFNα-2b, IgA, L. lactis, vaksin oral

Judul: Structural Stability Analysis of Rain Trees (Samanea saman (Jacq.) Merr) Subjected to Dead, Live and Wind Loads Combination
Abstrak: Pohon tumbang dapat terjadi akibat ketahanan dan stabilitas, keduanya terkait pembebanan, selain gangguan biotik dan stabilitas tanah. Penelitian ini bertujuan menganalisis stabilitas struktur pohon trembesi (Samanea saman (Jacq.) Merr) yang menerima beban mati, hidup, dan angin, serta menghitung keamanannya. Analisis struktur berformat ASD (allowable stress design) berdasarkan National Design Specification (NDS) 2018 dilakukan terhadap 50 pohon. Tiga tahapan analisis dilakukan: (1) D+L+W, (2) D+L, dan (3) D saja. Beban mati (D) adalah berat sendiri berupa bagian tajuk dan batang di atas potongan amatan. Beban hidup (L) adalah orang yang memanjat atau benda yang digantung. W adalah beban angin. Kombinasi D+L+W mengakibatkan tekan dan lentur, sedangkan D+L dan D saja menghasilkan tekan. Tinggi kritis minimum menentukan keamanan pohon berdiri. Berdasarkan keamanannya, pohon diklasifikasikan menjadi tiga kategori: tidak aman, aman, dan sangat aman. Penelitian menunjukkan tinggi kritis minimum selalu dihasilkan oleh pembebanan kombinasi D+L+W karena superposisi resultante tekan dan lentur. Beban angin merupakan kondisi pembatas keamanan pohon berdiri. Pohon yang menerima beban angin bersama berat sendiri dan beban hidup memiliki keamanan lebih rendah daripada pohon yang hanya menerima berat sendiri. Analisis struktur menunjukkan 18, 30, dan 2 pohon berturut-turut tidak aman, aman, dan sangat aman. Tajuk pohon yang tidak aman perlu dipangkas.
Keyword: combined load, critical height, safety factor, structural stability