Judul: Identifikasi dan Kloning Gen CalBsyn ke dalam Plasmid pJ912-AGα-RFP di Escherichia coli
Abstrak: Sistem tampilan permukaan khamir telah menjadi teknik yang semakin popular untuk rekayasa protein dan pembuatan pustaka protein. Protein heterolog yang ditampilkan pada permukaan sel khamir diekspresikan dalam bentuk fusi dengan suatu protein penahan atau protein permukaan. Protein CALB (Candida antratica Lipase B) yang disandikan oleh gen sintetik CalBsyn dapat ditingkatkan efektivitasnya melalui ekspresi pada permukaan sel khamir. Plasmid pJ912-AGα- RFP mengandung gen penyandi protein permukaan, AGα (Agglutinin-α) dan gen penyandi protein penanda ekspresi, RFP (Red fluorescent protein). Penelitian ini bertujuan untuk memperoleh konstruksi vektor pJ912-AGα-RFP-CalBsyn untuk ekspresi protein CALB rekombinan pada permukaan sel khamir Pichia pastoris melalui kloning gen CalBsyn ke dalam plasmid pJ912-AGα-RFP pada Escherichia coli. Gen CalBsyn tanpa sinyal sekresi natifnya diperoleh dari plasmid pJ912- CALB melalui amplifikasi PCR menggunakan pasangan primer mCalB-Sal-F dan mCalB-His-Sal-R. Gen mCalBsyn yang diperoleh berukuran panjang 1004 bp. Baik gen mCalBsyn maupun plasmid pJ912-AGα-RFP dipotong dengan enzim restriksi SalI, kemudian diligasi dan ditransformasi ke dalam E. coli dengan metode kejut panas. Transformasi menghasilkan 11 koloni transforman putatif yang selanjutnya dipurifikasi menjadi koloni-koloni tunggal. Analisis PCR dengan primer AOX1-F dan mCalB-His-Sal-R menunjukkan adanya 34 koloni tunggal dari klon yang dianalisis terindikasi positif membawa plasmid rekombinan pJ912-AGα-RFPCalBsyn.
Keyword: agglutinin-α, Candida antartica Lipase B, sistem tampilan permukaan khamir, Pichia pastoris

Judul: Konstuksi Vektor Dan Ekspresi Protein Rekombinan Lipase Candida Antarctica (Calb) Dengan Cellulose Binding Module (Cbm) Pada Pichia Pastoris
Abstrak: Gen CalBsyn telah dikonstruksi secara sintetik untuk menyandi Candida antarctica lipase B (CALB). Enzim tersebut memiliki peranan penting sebagai biokatalis yang efektif di bidang bioteknologi dan industri. Sekuens gen CalBsyn telah dimodifikasi dengan mengintroduksi mutasi pada tiga asam amino, yaitu V210I, A281E, dan V221D untuk meningkatkan termostabilitas enzim tersebut. Fragmen gen cellulose binding module (cbm) endoglukanase I (egl1) dari Trichoderma reesei difusikan pada ujung karboksil gen CalBsyn pada plasmid rekombinan pGAPZα-CalBsyn. CBMmerupakan suatu domain protein yang umum dijumpai pada enzim selulase dan berfungsi dalam pengikatan enzim pada matrik selulosa. Dalam penelitian ini CBM digunakan untuk memfasilitasi imobilisasi CALB pada matrik selulosa melalui fusi dari dua protein tersebut. Penelitian ini bertujuan mengkonstruksi vektor ekspresi gen CalBsyn yang difusi dengan cbm dan mengekspresikan CALB pada Pichia pastoris SMD1168H. Baik plasmid maupun gen cbm dipotong dengan enzim ClaI. Plasmid rekombinan pGAPZα-CalBsyn-cbm dikonstruksi dengan cara meligasikan gen cbm ke dalam plasmid pGAPZα-CalBsyn. Plasmid rekombinan pGAPZα-CalBsyn-cbm diklon dan diseleksi pada Eschericia coli TOP10F’. Plasmid rekombinan pGPAZα-CalBsyn telah berhasil diintroduksi ke dalam genom P. pastoris SMD1168H melalui metode elektroporasi. Efisiensi transformasi yang diperoleh sebesar 1,01 x 102 cfu/μg DNA. Analisis ekspresi protein rekombinan dilakukan terhadap beberapa galur rekombinan P. pastoris terpilih. Uji aktivitas lipase secara kualitatif pada media seleksi menunjukkan bahwa galur transforman P. pastoris yang diperoleh positif mensekresikan lipase rekombinan (CALB) dan memiliki aktivitas lipolitik. Uji aktivitas lipase secara kuantitatif dari salah satu galur transforman P. pastoris menunjukkan bahwa aktivitas enzim mencapai 6,35 Units/ml pada jam ke-48. Analisis protein dengan SDS-PAGE menunjukkan bahwa CALB berhasil diekspresikan secara ekstraseluler dengan ukuran sekitar 45 kDa.
Keyword: Candida antarctica lipase B, cellulose binding module, recombinant Pichia pastoris

Judul: Impact Of water policy on poverty reduction and women roles in water management In Zimbabwe
Abstrak: Water management is a key factor in the battle to remove the scourge of extreme poverty and to build secure and prosperous lives for people in the developing world. The water sector in Zimbabwe is complicated by the large number of actors; it is interwoven within various ministries. The research used secondary data and review of literature to evaluate how the current water policy has contributed towards marginalising women and the poor. It looked at how actors can also marginalise or put other actors at risk thereby undermining their role through prioritisation of certain projects, stakeholder participation and usage policy. From a descriptive analysis it is found that women are further relegated and marginalised. The poor are further impoverished through marginalisation and vulnerability. The policy environment favours business and state interests against those of grassroots actors and women. It recommends the establishment of home grown pro- poor water management strategies.
Keyword: