Judul: Construction of Saccharomyces cerevisiae KEX2-650  and KEX2-620 Genes Expression Vector in Escherichia coli DH5α
Abstrak: Kex2 merupakan protease spesifik (EC3.4.21.61) asal Saccharomyces cerevisiae yang memiliki fungsi mirip dengan furin pada mamalia dan memiliki homologi sekuen sebesar 47%. Kex2 secara alami merupakan protein intraselular sebagai protein transmembran, khususnya ditemukan pada membran retikulum endoplasmik dan trans golgi. Kex2 merupakan serin-protease yang mengikat ion Ca2+. Protein ini berperan dalam proses pemotongan protein prekursor pheromone mating-factor-α dan killer toxin M1 pada situs spesifik dimana dijumpai pasangan asam amino basa Lys-Arg atau Arg Arg saat protein tersebut dikirim keluar sel melalui jalur sekresi. Fungsi unik Kex2 dalam konversi prepro-protein menjadi protein matang, banyak dimanfaatkan seperti untuk pematangan proinsulin glargine menjadi glargine matang. Hal ini membuat pemilihan sistem ekspresi Kex2 secara ekstraselular pada pengoptimasian proses konversi akan sangat menguntungkan untuk optimasi proses konversi. Kex2 ekstraselular dapat diperoleh melalui rekayasa genetik, seperti delesi transmembran domain. Penelitian ini bertujuan mengkonstruksi varian vektor pD902-KEX2 dengan mengoptimalkan strategi modifikasi penghapusan daerah terminal-C termasuk domain transmembran dan Ser/Thr dari sekuen gen KEX2, serta introduksinya ke dalam Escherichia coli DH5α. Varian KEX2 yang dikonstruksi adalah KEX2-650 (tanpa domain transmembran) dan KEX2-620 (tanpa domain Ser/Thr dan domain transmembran). Plasmid rekombinan dikonstruksi melalui metode mutagenesis terarah dengan teknik PCR terhadap vektor pD902-KEX2-699 menggunakan pasangan primer FP-Kex2-699/RP-Kex2-650 dan FP-Kex2-699/RP-Kex2-620, masing-masing untuk KEX2-650 dan KEX2-620. Seluruh primer untuk mutagenesis terarah yang digunakan mengandung situs BamHI untuk religasi plasmid. Proses PCR pada mutagenesis terarah menghasilkan amplikon DNA dengan panjang sesuai yang diharapkan, yaitu sekitar 5551 pb dan 5461 pb masing-masing untuk KEX2-650 dan KEX2-620. Setelah dilakukan restriksi dengan BamHI dan ligasi, pD902-KEX2-650 dan pD902-KEX2-620 diintroduksi kembali ke E. coli DH5α. Hasil analisis menunjukkan plasmid rekombinan telah berhasil diintroduksi ke dalam E. coli DH5α. Verifikasi PCR dari gen target menunjukkan bahwa satu dari beberapa koloni transforman KEX2-650 yang diperoleh memiliki amplikon yang sesuai dengan panjang yang diharapkan, yaitu sekitar 646 pb. Namun, koloni KEX2-620 tidak menghasilkan amplikon dengan ukuran yang sesuai target (556 pb). Hasil analisis sekuensing DNA dari klon KEX2-650 terpilih, mengkonfirmasi bahwa domain transmembran telah terdelesi dari konstruk gen untuk membentuk konstruk KEX2-650.
Keyword: Escherichia coli DH5α, KEX2 gene, site-directed mutagenesis, Ser/Thr domain, transmembrane domain

Judul: Konstruksi dan Ekspresi Gen Penyandi D-Xylose Isomerase di Escherichia coli BL21(DE3).
Abstrak: D-fruktosa merupakan gula pentosa yang berpotensi sebagai pionir rare sugar karena dapat diubah menjadi beberapa rare sugar lain yang multifungsi sebagai pemanis, bahan kosmetik, pengawet, penstabil, zat aditif, antidiabetes, dan antiobesitas. D-fruktosa dapat diisomerisasi secara enzimatis dengan menggunakan D-Xylose Isomerase (D-XI). D-XI disandi oleh gen xylA. Tujuan dari penelitian ini adalah mengkonstruksi vektor ekspresi untuk gen penyandi DXI, dan mengekspresikan D-XI di dalam Escherichia coli BL21 (DE3). Untuk itu, gen xylA penyandi D-XI dari Lactobacillus pentosus BTCC 646 telah berhasil diklon di dalam vektor pGEM-T Easy di dalam Escherichia coli DH5α. Nukleotida ke 225 dari gen xylA telah berhasil diubah dengan mutagenesis situs terarah agar tidak dikenali oleh enzim BamHI tanpa mengubah asam amino yang disandinya sehingga gen xylA225 dapat disisipkan ke dalam vektor ekspresi pET-32b pada situs BamHI. Vektor ekspresi pET-32b-xylA225 telah berhasil dimasukkan ke dalam E. coli BL21 (DE3). Gen xylA225 di dalam pET32b-xylA225 telah berhasil diekspresikan membentuk protein D-XI yang berfusi dengan Trx tag sehingga berukuran sekitar 69.3 kDa di dalam E.coli BL21 (DE3).
Keyword: D-fruktosa, D-Xylose Isomerase, vektor ekspresi, xylA, Escherichia coli

Judul: Iklim Pulau Bali
Abstrak: Curah hujan rata-rata bulanan di Bali berkisar antara 47 mm sampai 327 mm, dengan curah hujan maksimum jatuh pada bulan Januari dan minimum pada bulan Agustus. Total hujan setahun rata-rata di Bali 1901 mm. Pada muim angin barat, curah hujan di utara pegunungan relatif sama dengan di selatan pegunungan, sedangkan pada musim angin timur curah hujan di selatan pegunungan lebih tinggi daripada di utara pegunungan. Isohyet tiap bulan di Bali menunjukkan pengaruh ого- grafis terjadi di bagian timur P. Bali yang mengakibatkan di selatan pegunungan lebih basah daripada di di utara pegunungan selama musim kemarau (monsoon timur). Dari isohyet tersebut dapat juga dilihat bahwa potensi air tertinggi ada di bagian timur P. Bali ini khususnya di bawah kaki G. Agung. Musim angin barat di Bali terjadi pada bulan Desember sampai dengan bulan Maret, dan pada bulan April sampai bulan September merupakan musim angin timur. Musim panca roba terjadi pada bulan Oktober sampai bulan November. ..
Keyword: