Judul: Isolation and Potential of Bacteriophage for Control  of Vibrio parahaemolyticus Infection in Whiteleg Shrimp
Abstrak: Vibrio parahaemolyticus yang menghasilkan toxin PirA dan PirB merupakan agen penyebab penyakit acute hepatopancreatic necrosis disease yang menyebabkan kematian massal hingga 100% udang di tambak. Pengendalian penyakit bakterial dapat dilakukan menggunakan antibiotik, akan tetapi penggunaan ini telah dibatasi dan adanya larangan ekspor udang yang teridentifikasi mengandung antibiotik tertentu. Hal ini disebabkan, penggunaan antibiotik yang terus menerus di lingkungan akuakultur dapat menyebabkan bahaya pada organisme akuatik dan manusia sebagai konsumen. Penggunaan bakteriofage (fage) dapat menjadi solusi alternatif ramah lingkungan untuk menggantikan antibiotik. Fage adalah pembunuh bakteri spesifik dan efektif untuk mengendalikan infeksi bakteri. Penelitian ini bertujuan melakukan isolasi dan evaluasi potensi fage untuk pengendalian infeksi V. parahaemolyticus pada udang vaname. Fage diisolasi dari sampel air, sedimen dan udang dari tambak di berbagai daerah di Indonesia, yaitu provinsi Lampung, Banten, Jawa Barat, Jawa Tengah, DI Yogyakarta, Jawa Timur dan Nusa Tenggara Barat. Selanjutnya sampel sedimen dihomogenkan dengan phosphate buffer saline (PBS) 1:1 (b/v) dan usus udang digerus dengan menambahkan PBS 1:1 (b/v). Tiap cairan sampel disentrifugasi, supernatan yang diperoleh ditambahkan V. parahaemolyticus dan diplating menggunakan metode double layer agar, plak yang terbentuk diindikasikan sebagai fage. Penelitian ini menggunakan rancangan acak lengkap dengan dua tahap yaitu uji in vitro dan in vivo. Uji in vitro terdiri dari 6 perlakuan dengan 3 ulangan, yaitu saline magnesium (SM)-buffer tanpa V. parahaemolyticus (KN), SM-buffer dan V. parahaemolyticus 107 CFU/mL (KP), antibiotik klortetrasiklina dan V. parahaemolyticus 107 CFU/mL (KA), fage 107 PFU/mL dan V. parahaemolyticus 107 CFU/mL (FB7), dan fage 108 PFU/mL dan V. parahaemolyticus 107 CFU/mL (FB8), fage 109 PFU/mL dan V. parahaemolyticus 107 CFU/mL (FB9). Uji in vivo dilakukan dengan uji tantang V. parahaemolyticus (105 CFU/mL) pada udang melalui perendaman dan mengaplikasikan densitas fage melalui pakan, dengan cara pakan disemprot campuran suspensi fage dan putih telur, dikering anginkan dan disimpan pada suhu 4 oC sampai digunakan. Uji ini menggunakan 7 perlakuan dengan 3 ulangan, dengan 6 perlakuan sama dengan uji in vitro dan ditambahkan 1 perlakuan yaitu pakan + fage 109 PFU/mL (KF). Uji in vitro dilakukan dengan masing-masing perlakuan dimasukkan ke dalam microplate dan diamati menggunakan spektrofometer. Uji in vivo pada akuarium dilakukan uji tantang dengan V. parahaemolyticus pada hari ke-0 (sebelum perlakuan) dan satu jam kemudian diberi pakan uji sesuai perlakuan dengan penambahan fage dan antibiotik sebanyak 2 kali sehari secara at satiation, kemudian diamati setiap hari selama 7 hari. Parameter yang diukur yaitu kelangsungan hidup, uji hambat bakteri dan parameter sistem imun meliputi total hemocyte count (THC), aktivitas fagositosis (AF), aktivitas respiratory burst (RB), aktivitas phenoloxidase (PO), gejala klinis dan histopatologi. iii Penelitian ini berhasil mengisolasi fage yang bersumber dari air tambak udang di daerah Jawa Timur yang ditandai terbentuknya plak pada media double layer agar, dengan ciri morfologisnya berbentuk titik-titik dan bulat besar, tepian rata dan bergelombang serta memiliki warna plak yang jernih. Plak fage berhasil diperbanyak dengan densitas fage rata-rata 3,5 x 109 PFU/mL. Hasil kisaran inang fage menggunakan 6 bakteri (3 jenis bakteri dan 3 strain V. parahaemolyticus yang berbeda) menunjukkan hanya bakteri V. parahaemolyticus asal Situbondo yang dapat lisis oleh fage hasil isolasi, sedangkan bakteri lainnya tidak. Pada uji in
Keyword: aquaculture, AHPND, bacteriophage, Vibrio parahaemolyticus, whiteleg shrimp