Judul: In Vitro Infectivity Analysis of Simian-Human Immunodeficiency Virus (SHIV) on Peripheral Blood Mononuclear Cell (PBMC) Macaca fascicularis and M. nemestrina
Abstrak: Keterbatasan utama dalam upaya pengembangan vaksin dan pengobatan anti-retroviral terhadap infeksi human immunodeficiency virus type-1 (HIV-1) antara lain adalah ketiadaan model hewan yang dapat menunjukkan semua gejala menonjol infeksi HIV-1 seperti pada manusia. SHIV dikonstruksi untuk mengatasi keterbatasan model SIVmac dan telah dimanfaatkan pada banyak penelitian menggunakan satwa primata untuk mempelajari virus yang memiliki kedekatan dengan HIV-1 pada manusia. Satwa primata Macaca fascicularis dan M. nemestrina digunakan sebagai hewan coba penelitian HIV/AIDS dengan memanfaatkan virus kimera SHIV yang dihasilkan melalui penggantian susunan nukleotida bagian cyclophilin A binding region, gen viral infectivity factor (vif) dan gen negative factor (nef) HIV-1 dengan bagian cyclophilin A binding region, gen vif dan gen nef Simian Immunodeficiency Virus (SIV). Penelitian bertujuan untuk mengkaji model HIV/AIDS pada PBMC satwa primata secara in vitro menggunakan SHIV. Secara khusus, penelitian ini bertujuan untuk menganalisis kemampuan atau daya replikasi SHIV pada kultur sel PBMC asal M. fascicularis dan M. nemestrina secara in vitro. Penelitian dilakukan secara in vitro dengan menggunakan PBMC M. fascicularis dan M. nemestrina. Karakteristik M. fascicularis dan M. nemestrina yang digunakan dalam penelitian ini, yaitu jantan, dewasa dengan umur empat sampai enam tahun. SHIV merupakan hasil kontruksi Budiman Bela dan Silvia Triwidyaningtyas dari Pusat Riset Virologi dan Kanker Patobiologi (PRVKP) FKUI-RSCM. Isolasi PBMC dilakukan dengan metode densitas gradien sentrifugasi. Aktivasi PBMC dilakukan dengan menggunakan agen mitogenik, yaitu phytohaemagglutinin (PHA). PBMC terstimulasi PHA dihitung dengan hemositometer. PBMC terstimulasi PHA diinfeksi dengan supernatan sel transfektan yang mengandung SHIV dengan pengenceran 1:10. PBMC terstimulasi PHA juga diinfeksi dengan supernatan yang mengandung HIV dengan pengenceran 1:10 sebagai pembanding. Kultur PBMC terstimulasi PHA dilakukan selama 21 hari. Pemeliharaan kultur PBMC terstimulasi PHA dilakukan dengan pemberian nutrisi setiap minggu sekali. Supernatan PBMC terstimulasi PHA dikoleksi setiap hari. Pengamatan cytopathic effect (CPE) dilakukan menggunakan mikroskop cahaya. Konfirmasi CPE dilakukan dengan pemeriksaan imunofluoresen terhadap protein p24. Analisis CPE dilakukan secara kualitatif deskriptif dan ekspresi protein p24 dianalisis secara semi kuantitatif. Penggantian cyclophilin A binding region, gen vif dan gen nef HIV-1 dengan cyclophilin A binding region, gen vif dan gen nef SIV dapat meningkatkan kemampuan SHIV dalam menginfeksi PBMC M. fascicularis dan M. nemestrina. Infeksi SHIV pada kultur PBMC terstimulasi PHA M. fascicularis dan M. nemestrina ditandai dengan pembentukan CPE berupa multinucleated giant cell (MGCs). CPE pada kultur PBMC terstimulasi PHA M. fascicularis dan M. nemestrina mengekspresikan protein p24 dengan nilai masing-masing + (<10% sel terwarnai) dan ++ (10%-50% sel terwarnai). Penggantian susunan nukleotida cyclophilin A binding region meningkatkan pengikatan cyclophilin A (CypA) dengan gag SIV. Gen vif berperan sebagai pertahanan balik terhadap apolipoprotein B mRNA editing enzyme catalytic subunit 3G (APOBEC3G) yang dapat menghambat replikasi retrovirus. Gen nef berperan dalam perkembangan AIDS dan antagonis terhadap tetherin. CPE dan ekspresi protein p24 pada kultur PHA-stimulated PBMC M. nemestrina lebih banyak dibandingkan pada kultur PHA-stimulated PBMC M. fascicularis. Perbedaan ini disebabkan adanya protein tripartite motif containing 5 (TRIM5) yang dapat membatasi replikasi virus. M. nemestrina mengekspresikan protein TRIMCyp yang tidak membatasi replikasi virus. Sementara itu, M. fascicularis mengekspresikan TRIM5α dan TRIMCyp yang dapat membatasi replikasi HIV-1 atau HIV-2. M. nemestrina memberikan hasil yang lebih baik sebagai model
Keyword: CPE, expression of p24 protein, M. fascicularis, M. nemestrina, SHIV