Judul: ip
Abstrak: Stem cells atau sel punca merupakan sel yang memiliki kemampuan memperbarui diri dan belum berdiferensiasi secara spesifik. Sel ini secara umum terdiri dari sel punca dewasa dan sel punca embrionik. Sel punca embrionik atau embryonic stem cells (ESC) berasal dari perkembangan embrio tahap blastosis. Blastosis hasil fertilisasi sebagai sumber propagasi ESC sayangnya menimbulkan polemik karena embrio merupakan awal dari kehidupan yang baru sehingga penggunaannya dinilai tidak etis. Salah satu alternatif yang kemudian dikembangkan adalah pseudo embryo yang diperoleh melalui metode partenogenesis. Partenogenesis adalah strategi reproduksi tanpa fertilisasi oleh spermatozoa. Partenogenesis secara alami tidak ditemukan pada mamalia, akan tetapi pemahaman mekanisme seluler aktivasi oosit selama proses fertilisasi memungkinkan proses ini dapat dilakukan. Embrio partenogenesis akan gagal berkembang menjadi individu baru dikarenakan hilangnya kontribusi gen-gen spesifik asal paternal akan tetapi dapat dikultur sampai tahap blastosis untuk kemudian dipropagasi menjadi sel punca. Propagasi blastosis menjadi sel punca membutuhkan beberapa tahapan penting. Blastosis dikultur membentuk koloni primer pada tahap pertama. Koloni primer kemudian dipasase dan dilakukan karakterisasi sampai benar-benar stabil memenuhi kriteria ESC. Koloni primer asal blastosis dapat diarahkan untuk berdiferensiasi dengan metode tertentu salah satunya dengan pemanfaatan conditioned medium. Conditioned medium (CM) adalah medium yang berasal dari kultur sel tertentu, khususnya sel punca dan berbagai jenis sel progenitor lainnya, serta mengandung protein-protein yang disekresikan oleh sel dalam bentuk sekretom. Bukti-bukti ilmiah telah menunjukkan bahwa CM bukan hanya limbah biologis tetapi berpeluang untuk dimanfaatkan. Rangkaian penelitian ini dilakukan untuk menguji potensi CM asal sel otak fetus tikus terhadap diferensiasi neuronal koloni primer dari blastosis fertilisasi dan partenogenetik. Penelitian tahap pertama membuktikan bahwa CM asal sel otak fetus tikus E17 mampu menginduksi diferensiasi neuronal dari koloni primer blastosis fertilisasi. Penambahan CM 50% dapat memerantarai pertumbuhan neurit menghasilkan neuron like cells pada hari ke-7 setelah penambahan CM. Proses diferensiasi awal membentuk struktur menyerupai embryoid bodies, kemudian menjadi round shape cells yang memiliki karakteristik sel neuroepitelial atau radial glial, diikuti dengan perpanjangan neurit. Kandungan dalam CM yang berasal dari sekresi sel otak fetus tikus mendorong terjadinya perpanjangan neurit tersebut. Penelitian tahap kedua mengeksplorasi proses produksi CM untuk mengetahui efek heterogenitas sel dan waktu puasa sel serta mengidentifikasi protein-protein yang ada dalam CM. Hasil penelitian kedua menunjukkan bahwa proses kultur tanpa serum atau proses puasa sel akan memengaruhi heterogenitas sel dan profil sekretom. Berdasarkan analisis dari penelitian tahap ini diketahui bahwa CM1 dengan waktu puasa 24 jam didominasi oleh sel neuron immature. Protein yang terkandung dalam CM1 ini berfungsi untuk pengaturan pertumbuhan sel, stimulasi diferensiasi dan produksi energi. Durasi waktu puasa sel yang lebih panjang yaitu 48 jam menyebabkan dominasi astrosit dan sel glia pada populasi sel. Hal ini disebabkan ketahanan sel glia khususnya astrosit terhadap cekaman stres pada kondisi kultur dan daya hidup astrosit lebih tinggi dibandingkan dengan neuron. Sel progenitor yang masih ada juga memiliki tendensi yang lebih tinggi untuk berdiferensiasi menjadi sel glia pada kondisi tanpa serum. Protein yang disekresikan setelah puasa sel 48 jam yang terkandung dalam CM2 merupakan jenis-jenis protein yang disekresikan oleh astrosit dan lebih berperanan dalam proteksi neuron yang masih tersisa. Identifikasi protein dan analisis fungsional mendasari pemilihan CM1 untuk proses induksi koloni
Keyword: blastosis, conditioned-medium, diferensiasi, koloni primer, neuronal