Judul: Profile of Gut Bacteria in Hypertensive Patients Based on Terminal Restriction Fragment Length Polymorphism Analysis Profile of Gut Bacteria in Hypertensive Patients Based on Terminal Restriction Fragment Length Polymorphism Analysis
Abstrak: Hipertensi merupakan salah satu penyakit tidak menular yang menjadi masalah kesehatan sangat serius saat ini, disebut sebagai the silent killer karena kerap terjadi tanpa adanya keluhan. Penyakit hipertensi dipengaruhi oleh faktor genetik, fisiologi dan lingkungan. Perubahan komposisi keragaman mikrobiota di usus dapat menyebabkan ketidakseimbangan mikrobiota yang dapat memicu terjadinya beberapa penyakit diantaranya hipertensi. Kendala yang terjadi saat ini adalah belum terdapat data yang jelas terkait kelimpahan mikrobiota pada penderita hipertensi, sebab kelimpahan mikrobiota pada setiap orang berbeda tergantung jenis asupan makanan yang dikonsumsi. Analisis metagenomik mikrobiota pada penderita hipertensi belum pernah dilaporkan di Indonesia, sehingga kajian mengenai keragaman mikrobiota tersebut perlu dilakukan untuk mengetahui profil dan karakteristik bakteri usus pada penderita hipertensi dan perbandingannya dengan yang tidak menderita hipertensi guna pengembangan pengendalian penyakit hipertensi berbasis mikrobiota. Penelitian ini diawali dengan pencarian responden untuk dijadikan sampel. Responden diberi kuesioner untuk mendapatkan informasi terkait beberapa karakteristik yang dijadikan sebagai syarat dalam menentukan sampel feses yang akan dianalisis. Kriteria responden yang dapat digunakan adalah sehat, tidak mengkonsumsi antibiotik selama 6 bulan dan tidak mengalami diare. Genom mikrobiota usus diisolasi secara langsung dari sampel feses penderita hipertensi dan non-hipertensi menggunakan Quick-DNA™ Fecal/Soil Microbe Miniprep Kit (USA). Gen 16S rRNA selanjutnya diamplifikasi dari genom bakteri menggunakan primer 516F berlabel fluoresens (6-FAM) dan 1510R. Amplikon gen 16S rRNA dipurifikasi dengan Gel/PCR DNA Fragments Kit (Geneaid Biotech Ltd.) dan hasil purifikasi dipotong dengan enzim restriksi BslI (New England, BioLab). Fragmen hasil pemotongan dianalisis dengan Applied Biosystems Genetic Analyzer dan diinterpretasi menggunakan software analisis GeneMapper® v4.0. Pendugaan untuk setiap unit klasifikasi dan OTU yang sesuai diidentifikasi menurut referensi profiling T-RFLP mikrobiota usus manusia oleh kelompok peneliti Koji Nagashima. Hasil analisis T-RFLP dengan pemotongan oleh enzim BslI pada 8 sampel feses penderita hipertensi menghasilkan lebih banyak TRF dibandingkan 6 sampel feses non-hipertensi. Analisis Indeks Shannon-Wienner (H’) digunakan untuk mengestimasi keragaman mikrob pada setiap sampel. Indeks keragaman (H’) berdasarkan gen 16S rRNA pada 8 sampel penderita hipertensi berkisar antara 1.00-2.09, sedangkan pada 6 sampel non-hipertensi berkisar antara 0.91-1.62. Indeks kemerataan (E’) gen 16S rRNA berkisar antara 0.80-0.91. Hasil analisis afiliasi dari 26 TRF yang diperoleh terdapat 6 kelompok bakteri pada penderita hipertensi dan non-hipertensi. Pemotongan gen 16S rRNA dengan enzim restriksi BslI berhasil mendeteksi kelompok mikrobiota usus yaitu Clostridium subcluster XIVa, Prevotella, Clostridium cluster IV, Clostridium cluster XI, Bacteroides dan kelompok bakteri lainnya. Perbandingan kelimpahan mikrobiota pada penderita hipertensi lebih tinggi dibandingkan non-hipertensi terlihat pada kelompok Clostridium cluster XI, Clostridium cluster IV dan Clostridium subcluster XIVa. Pada kelompok Bacteroides, penderita hipertensi lebih rendah (42%) dibandingkan non-hipertensi (58%). Persentase rendah pada penderita hipertensi juga ditemukan pada kelompok Prevotella yaitu 8%. Keragaman mikrobiota usus juga dikelompokkan menjadi tiga enterotipe yaitu enterotipe I, enterotipe II dan enterotipe III. Penderita hipertensi memiliki lebih banyak enterotipe III, sedangkan pada non-hipertensi persentase lebih tinggi ada pada Enterotipe I dan Enterotipe II. Rasio F/B pada penelitian ini terjadi peningkatan pada penderita hipertensi., Hypertension is a severe public health problem due to its high prevalence all around the globe. Hypertension is called a "silent killer" because it may have no warning signs or symptoms. The hypertensive disease is influenced by
Keyword: Bacteroides, Clostridium, gut microbiota, Prevotella, T-RFLP