Judul: Isolasi Dan Karakterisasi Protein Kepiting (Scylla Serrata), Cumi-Cumi (Photololigo Duvaucelii), Kacang Hijau (Vigna Radiata (L.) R. Wilczek), Dan Kacang Koro Pedang (Canavalia Ensiformis (L.) Dc) Untuk Pembuatan Isolat Alergen
Abstrak: Alergi makanan merupakan salah satu reaksi hipersensitivitas yang memiliki manifestasi klinik yang cukup fatal. Sampai saat ini, metode pencegahan penyakit alergi pangan yang dianjurkan adalah menghindari pangan sumber alergen, yaitu protein penyebab alergi. Hal ini menyebabkan alergi merupakan masalah ganda yaitu reaksi imun yang tidak normal dan berdampak pada kondisi kekurangan zat gizi protein. Untuk menghindari hal tersebut, diagnosis alergi pangan sangat penting dilakukan. Diagnosis alergi pangan bertujuan untuk mengetahui penyebab alergi pangan sehingga hanya menghindari atau membatasi mengkonsumsi makanan penyebab alergi. Skin prick test (SPT) atau uji tusuk kulit merupakan metode yang dipercaya dan diyakini dapat digunakan untuk mengetahui penyebab alergi yang dimediasi oleh antibodi IgE. Bahan utama yang digunakan untuk SPT adalah ekstrak alergen atau reagen SPT yang ketersediaannya di rumah sakit atau klinik di Indonesia masih kurang dan masih impor. Penelitian ini bertujuan untuk membuat reagen SPT dari bahan baku lokal terdiri dari makanan laut (cumi-cumi dan kepiting) dan kacang-kacangan (kacang hijau dan kacang koro pedang). Spesifikasi reagen SPT mengacu pada standar European Pharmacopoeia 7 Monograph on Allergen Products 01/2010:1063 (EDQM 2010). Metode ekstraksi protein yang digunakan pada pangan laut adalah dengan cara memisahkan protein sarkoplasma dan miofibril sedangkan isolasi protein kacang dilakukan dengan metode isoelektrik. Karakterisasi isolat dilakukan dengan metode elektroforesis dan uji alergenisitas dilakukan dengan metode ELISA dan immunoblotting. Pembuatan reagen SPT dilakukan secara aseptis menggunakan larutan gliserol saline. Setelah memenuhi persyaratan European Pharmacopoeia Monograph on Allergen Products 7 01/2010:1063 (EDQM 2010), reagen SPT diaplikasikan pada uji SPT menggunakan responden manusia kemudian dihitung sensitivitas dan spesifisitas diagnosisnya. Rendemen protein miofibril dan sarkoplasma cumi-cumi hasil ekstraksi masing-masing adalah 27,8% dan 19,4% (% protein cumi-cumi). Fraksi protein miofibril terdiri dari 11 pita protein dengan bobot molekul 18,2 -108,4 kDa dan fraksi protein sarkoplasma terdiri dari 13 pita protein dengan bobot molekul 9,5-119,3 kDa. Protein miofibril yang bersifat alergen adalah bobot molekul 8,9 – 122,7 kDa dan protein sarkoplasma yang bersifat alergen adalah 11,8 -143,9 kDa. Reagen miofibril dan sarkoplasma cumi-cumi memenuhi persyaratan European Pharmacopoeia 7 Monograph on Allergen Products 01/2010:1063 untuk parameter kadar air, kadar protein, sterilitas dan mikrobiologi. Uji tusuk kulit pada responden menunjukkan bahwa nilai sensitivitas reagen miofibril cumi-cumi adalah 86% dan sarkoplasma cumi-cumi adalah 64% dengan tingkat kesalahan negatifnya untuk masing-masing reagen miofibril dan sarkoplasma adalah 14% dan 36%. Hasil diagnosis miofibril dan sarkoplasma cumi-cumi akan diperoleh nilai sensitivitas 100%. Pemisahan protein cumi-cumi menjadi mofibril dan sarkoplasma untuk uji tusuk kulit dapat meningkatkan nilai sensitivitasnya dan menurunkan kesalahan diagnosis negatif. Nilai spesifisitas masing-masing protein miofibril dan sarkoplasma adalah 100% dengan tingkat kesalahan terjadinya diagnosis positif 0 %. Rendemen protein miofibril dan sarkoplasma kepiting masing-masing adalah 28,4% dan 18,4% (% protein kepiting). Fraksi protein miofibril terdiri dari 19 pita protein dengan bobot molekul 9.6-111.6 kDa dan fraksi protein sarkoplasma terdiri dari 19 pita protein dengan bobot molekul 9,5-104,6 kDa. Protein miofibril yang bersifat alergen adalah bobot molekul 13.9-155.4 kDa dan protein sarkoplasma yang bersifat alergen adalah 8.4-129.4 kDa. Reagen miofibril dan sarkoplasma kepiting memenuhi persyaratan European Pharmacopoeia 7 Monograph on Allergen Products 01/2010:1063 untuk parameter kadar air, kadar protein, sterilitas dan mikrobiologi. Hasil SPT pada responden menunjukkan
Keyword: Cumi-cumi, kepiting, kacang hijau, kacang koro pedang, protein alergen, diagnosis alergi, reagen SPT, skin prick test.