Judul: Kualitas dan Daya Fertilisasi Spermatozoa Semen Beku Sapi Friesian Holstein yang Disimpan dalam Waktu yang Berbeda
Abstrak: Kriopreservasi semen adalah penyimpanan semen pada suhu rendah (-196 oC) dalam nitrogen cair dengan tujuan penggunaan masa depan. Spermatozoa yang dibekukan dalam nitrogen cair dapat bertahan hidup untuk waktu yang lama. Kehidupan spermatozoa dapat dipertahankan jika manajemen kontainer yang berisi semen beku dilakukan dengan baik. Tujuan penelitian ini adalah untuk menguji kualitas dan kemampuan fertilisasi post-thawing semen beku sapi Friesian Holstein (FH) setelah disimpan dalam waktu yang lama. Penelitian menggunakan semen beku sapi FH yang telah disimpan selama 25, 20, 15, 10, 5 dan 1 tahun dari Balai Besar Inseminasi Buatan (BBIB) Singosari, Malang, Jawa Timur. Variabel evaluasi post-thawing semen beku yakni motilitas spermatozoa menggunakan computer-assisted sperm analysis (CASA), keutuhan membran plasma (MPU) menggunakan hypo-osmotic swelling (HOS) test, abnormalitas dan viabilitas spermatozoa menggunakan pewarnaan eosin-nigrosin. CASA juga menilai curvilinear velocity (VCL), straight-line velocity (VSL), average pathway velocity (VAP), linearity (LIN), straightness (STR), wobble (WOB), beat cross frequency (BCF), amplitude of lateral displacement (ALH). Pengujian daya fertilisasi secara in vitro menggunakan medium IVMD101 untuk tahap maturasi dan medium IVF100 untuk tahap fertilisasi. Data diolah menggunakan one-way ANOVA dan disajikan dalam rerata ± SEM, jika terdapat perbedaan maka dilakukan dengan uji lanjut Duncan. Motilitas total dan motilitas progresif spermatozoa tertinggi ditunjukkan oleh spermatozoa yang disimpan selama 5 tahun diikuti spermatozoa yang disimpan selama 15, 10, 1 dan 20 tahun. Motilitas terendah ditunjukkan oleh spermatozoa yang disimpan selama 25 tahun. Selaras dengan nilai motilitas, viabilitas spermatozoa terendah (P<0.05) terdapat pada semen beku lama simpan 25 tahun dengan nilai 45.92 ± 8.1%. Viabilitas spermatozoa pada lama simpan 1, 5, 10, 15 dan 20 tidak berbeda (P>0.05) dengan nilai 65 – 78%. Abnormalitas spermatozoa menunjukkan <20% dan sesuai dengan persyaratan yang tertuang dalam Permentan no 10/Permentan/PK.210/3/2016. Abnormalitas spermatozoa tertinggi ditunjukkan semen beku dengan lama simpan 10 tahun, dengan nilai 10.61 ± 2.3% dan nilai abnormalitas spermatozoa pada lama simpan lainnya menunjukkan antara 3.5 sampai dengan 6%. Nilai MPU spermatozoa semen beku sapi FH pada lama simpan yang berbeda menunjukkan nilai 85 sampai dengan 95%. Hasil penelitian untuk nilai VCL, VSL dan VAP tidak menunjukkan perbedaan (P>0.05) dengan nilai masing-masing 100 sampai dengan 150 μm/s, 39 sampai dengan 65 μm/s dan 53sampai dengan 75 μm/s. Nilai STR pada semua lama simpan sesuai standar >50% berkisar 67 – 105% dan LIN antara 31 sampai dengan 55%, semen beku dengan lama simpan 1 dan 5 tahun di bawah standar optimal <35% dengan nilai 31.69 ± 4.6% dan 34.24 ± 5.5%. Nilai WOB antara 45 sampai dengan 64%. Nilai ALH tidak menunjukkan perbedaan (P>0.05) dengan nilai 1 sampai dengan 2 μm dan BCF menunjukkan nilai 10 sampai dengan 23 Hz. Daya fertilisasi spermatozoa dari lama simpan berbeda tidak menunjukkan perbedaan (P>0.05). Daya fertilisasi untuk pembentukan pronukleus normal (2PN) dengan antara 43 sampai dengan 60% dan polispermia (>2PN) dengan nilai antara 1 sampai dengan 6%. Penelitian ini menyimpulkan kualitas semen beku sapi FH yang disimpan selama 25, 20, 15, 10, 5 dan 1 tahun tidak berbeda dan masih memiliki kemampuan fertilisasi yang tinggi sehingga masih dapat digunakan untuk program inseminasi buatan (IB).
Keyword: semen beku, lama waktu simpan, sapi FH, kualitas spermatozoa, fertilisasi in vitro