PROCESS FOR THE PRODUCTION OF FORSKOLIN DERIVATIVES BY MICROBIAL TRANSFORMATIONS

Abstract: 1. A process for the preparation of forskolin derivatives, which comprises a particular microorganism being allowed to act on a particular forskolin derivative as substrate in a nutrient medium in a customary manner and, after completion of the fermentation, the compound which has formed being isolated from the culture broth and the mycelium by extraction with an organic solvent and subsequent chromatography and/or crystallization, where a) with the compound of the formula III see diagramm : EP0189801,P16,F1 as substrate and using the strain H/134 (DSM 3205), there is obtained the compound of the formula IV see diagramm : EP0189801,P16,F2 b) with the compound of the formula IV as substrate and using the strain FF/406 (DSM 3211), there is obtained the compound of the formula V see diagramm : EP0189801,P16,F3 in which Ac denotes the radical CH3 CO-, c) with the compound of the formula VI see diagramm : EP0189801,P16,F4 in which Ac denotes the radical CH3 CO-, as substrate and c1 ) using the strain FF/172 (DSM 3208), there is obtained the compound of the formula VII see diagramm : EP0189801,P17,F5 or c2 ) using the strain FF/101 (DSM 3207), there is obtained the compound of the formula VIII see diagramm : EP0189801,P17,F6 in which Ac denotes the radical CH3 CO-, or c3 ) using the strain H/134 (DSM 3205), there is obtained the compound of the formula IX see diagramm : EP0189801,P17,F7 or c4 ) using the strain FF/101 (DSM 3207), there is obtained the compound of the formula X see diagramm : EP0189801,P17,F8 in which Ac denotes the radical CH3 CO-, or c5 ) using the strain H/134 (DSM 3205), there is obtained the compound of the formula XI see diagramm : EP0189801,P18,F9 in which Ac denotes the radical CH3 CO-, or c6 ) using the strain FF/173 (DSM 329) or H/1 (DSM 3202), there is obtained the compound of the formula XII see diagramm : EP0189801,P18,F10 in which Ac denotes the radical CH3 CO-, or c7 ) using the strain FF/383 (DSM 3210), there is obtained the compound of the formula XIII see diagramm : EP0189801,P18,F11 or C8 ) using the strain FF/695 (DSM 3212), there is obtained the compound of the formula XIV see diagramm : EP0189801,P18,F12 in which Ac denotes the radial CH3 CO-, or c9 ) using the strain FF/93 (DSM 3206) or FF/172 (DSM 3208), there is obtained the compound of the formula XV see diagramm : EP0189801,P19,F13 or c10 ) using the strain H/3 (DSM 3203) or H/19 (DSM 3204) or Y-82 52 904 (DSM 3213), there is obtained the compound of the formula XVI see diagramm : EP0189801,P19,F14 or c11 ) using the strain H/1 (DSM 3202), there is obtained the compound of the formula XVII see diagramm : EP0189801,P19,F15 in which Ac denotes the radical CH3 CO-.

Description: Forskolin, seine Analoge und Derivate, Verfahren zu deren Herstellung mittels mikrobieller Umwandlungen und die verwendung dieser Verbindungen als Arzneimittel Die Erfindung betrifft Forskolinm seine Analoge und Derivate, die Verfahren zu deren Herstellung mittels mikrobieller Umwandlungen und die Anwendung der Substanzen als pharmazeutische Mittel, insbesondere als Medikamente zur Behandlung von Glaukom, Herzinsuffizienz, Hypertonie, Entzündung, Allergien, Bronchialerkrankungen und Erkrankungen des Immunsystems. Porskolin und seine natürlich vorkommenden Analoge stellen eine Gruppe von Labdan-Terpenoiden dar, die aus der Pflanze Coleus forskohlii (Briqu.) isoliert werden. Die Strukturformeln von Forskolin und seinen natürlich vorkommenden, isolierten Analogen werden in der Formel I dargestellt. EMI1.1 Für Forskolin ist R1 EMI1.2 und R4 = OH Bis heute sind folgende natürlich vorkommende Forskolin Analoge nachgewiesen worden: 1,9-Didesoy forskolin: EMI2.1 9-Desoxy- forskolin: EMI2.2 1,9-Didesoy-7-deascetyl forskolin: EMI2.3 1-Desoxy forskolin EMI2.4 7-Peacetyl- forskolin EMI2.5 6-Acetyl-7-deacetyl forskolin EMI2.6 (Tetrahedron i;ett. 19, 1669 (1977); J.Med.Chem. 26, 486 (1983). Forskolin ist eines der wichtigen Diterpene der Pflanze Coleus Forskohlii, und kann verwendet werden als wertvolles Arzneimittel bei der Behandlung verschiedener Erkrankungen wie Glaukom, Rypertonie, Rerzinsuffizienz, Entzündung, Allergien, Bronchokonstriktion und ganz allgemein von Erkrankungen, die durch Störungen der cAMP Produktion und -Metabolismus hervorgerufen werden DE-OS 25 57 784, Indisches Patent Nr. 147 630 und entsprechende DE-OS 26 40 275; Med.Res.Revs. 3, 201-19 (1983)). Von allen bekannten Forskolin-Analogen mit ähnlichen biologischen Eigenschaften (DE-AS 26 40 275 undDE-OS 26 54 796) ist Forskolin zur Zeit die für die klinische Anwendbarkeit bevorzugte Substanz (DE-OS 33 14 9993. Ein Verfahren zur Isolierung des Hauptanteils von Porskolin aus Coleus forskohlii ist bereits beschrieben (s.DE-OS 25 57 784). Bei diesen Verfahren werden ausserdem Porskolin-Analoge gewonnen. Diese Analoge können verwendet werden als Zwischenprodukte zur Herstellung von Forskolin. Es sind bereits Methoden beschrieben worden, durch die die Analoge mit gleicher Oxidationsstufe wie Forskolin, s.B. 7-Deacetyl-Forskolin und 6-Acetyl-7 Deacetylforskolin in Porskolin umgewandelt werden können (DE-nS 26 54 796, J.Chem.Perk.Trans. 1, 767 (1982)). Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist nun ein Verfahren der mikrobiellen Umwandlung, durch das die weniger hydroxylierten Forskolin-Analoge in Forskolin, 7-Deacetyl Forskolin oder 6-Acetyl-7-deacetylforskolin, oder in solche Derivate umgewandelt werden, die sich durch bekannte chemische Methoden leicht in Forskolin umwandeln lassen. Gegenstand der Erfindung sind ferner neue mit dem Forskolin verwandte Analoge und Derivate, die bei dem Verfahren der mikrobiellen Umwandlung gewonnen werden und interessante pharmakologische Eigenschaften aufweisen. Ein dritter Aspekt der Erfindung ist es, die Mikroorganismen zu beschreiben, die die Umwandlung bewirken, sowie die Art und Weise, in der sie in dem Verfahren der mikrobiellen Umwandlung von Porskolin und seinen Analogen verwendet werden. Es sind mikrobielle Umwandlungen von Verbindungen beschrieben worden, die zur Gruppe der Steroide gehören ("Steroide", L.F. Pieser und N. Fieser, Asia Publishing House, S. 672-75 (1962)). Unseres Wissens sind derartige Umwandlungen bei Forskolin-Derivaten bisher nicht angewandt worden. Die erfindungsgemässen Substanzen können als Medikamente zur Behandlung von Glaukom, Hypertonie, Herzinsuffizienz, Entzündungen, Allergien, Bronchialerkrankungen und von Erkrankungen, die durch das Immunsystem beeinflusst werden, verwendet werden. Das erfindungsgemässe Verfahren ist in Schema 1 dargestellt, wobei in Formel I die Substituenten die folgende Bedeutung haben: R1 = R2, EMI4.1 R4 = H oder OX, mit X=H oder-COCH3 und in Formel II die Substituenten R1 - R4 die zur Formel I genannten Bedeutungen haben und R5, R6 und R7 die Bedeutungen H2, EMI4.2 und R8 die Be deutung -Cn=CE2 oder -CROX-CR20X besitzen, wo X = H oder -CR mit R = C1-Cµ-Alkyl darstellt n EMI4.3 Formel I Formel II Zur Erläuterung der Erfindung werden die nachfolgenden Beispiele eingehender beschrieben. In Schema 2 ist die mikrobielle Umwandlung von 7-Deacetyl-f,g-Didesoxyfors- kolin in 7-Deacetyl-Forskolin, und in Schema 3 die von 7-Deacetylforskolin in 3ss-Acetoxy-7-deacetylforskolin dargestellt. EMI5.1 7-Deacetyl-2,9-didesoxyforskolin 7-Deacetylforskolin EMI5.2 Schema 3 7-Deacetylforskolin 38-acetoxy-7-deacetylforskolin Die Umwandlung von 1,9-Didesoxyforskolin in die neuen Derivate wird in Schema 4 dargestellt. EMI5.3 Verbindung der Formel II Schema 4 1,9-Didesoxyforskolin In Formel II haben R1 - R8 die oben genannten Bedeutungen. Ein besonderes Merkmal der Erfindung besteht darin, dass die Umwandlung von Forskolin und seinen in der Formel 1 dargestellten Analogen in Substanzen der Formel II durch mikrobielle Stämme erfolgt, die nach konventionellen Methoden aus Bodenproben gewonnen werden. Die Stämme, die diese Umwandlungen bewirken, sind nachstehend in Tabelle I aufgeführt und, wie angegeben, identifiziert worden. TABELLE 1 Stamm-Nr. Spezies H/1 (DSM) 3202) Aspergillus niger R/3 (DSM 3203) noch nicht bestimmt H/19 (DSM 3204) noch nicht bestimmt H/134 (DSM 3205) Scopulariopsis so. FF/93 (DSM 3206) noch nicht bestimmt FF/101 (DSM 3207) S,yncenhalastrum so. FF/172 (DSM 3208) noch nicht bestimmt FF/173 (DSM 3209) nocn nicht bestimmt FF1383 (DSM 3210) Aspergillus niger FP/406 (DSM 3211) noch nicht bestimmt FF/695 (DSM 3212) noch nicht bestimmt Y-8252904 (DSM 3213) Pseudomonas species Die Stämme wurden unter den oben genannten Nummern bei der Deutschen Sammlung von Mikroorganismen, Göttingen, hinterlegt am 22.1.1985. In der nachfolgenden Tabelle II werden die bei den Umwandlungen verwendeten Substrate, die Stämme, die diese Umwandlungen bewirken, die erzeugten Produkte und deren Schmelzpunkte aufgeführt. TABELLE II Substanz Substrat Stamm Produkt Schmelz- Beispiel Nr. punkt Nr. C 1 7-Deacetyl-1,9- H/134 7-Deacetyl- 177-178 1 didesoxyforskolin forskolin (Fig. 12) (Fig. 3) 2 7-Deacetylforskolin FF/406 38-Acetoxy-7- 256-258 2 (Fig. 3) deacetyl-fors kolin (Fig. 2) 3 1,9-Didesoxyforskolin FF/172 7-Deacetyl-2&alpha; 86-88 3 (Fig. 1) hydroxy-1,9-di desoxy-forskolin (Fig. 4) 4 1,9-Didesoxyforskolin FF/101 2&alpha; ;-Hydroxy-1,9- 209-211 4 (Fig. 1) didesoxyforsklin (Fig. 5) 5 1,9-Didesoxyforsklin H/134 7-Deacetyl-28- 84-86 5 (Fig. 1) hydroxy-1,9-di desoxyforskolin (Fig.6) 6 1,9-Didesoxyforskolin FF/101 2ss-Hydroy-1,9- 258-61 6 (Fig. 1) didesoxyforsklin (Fig. 7) 7 1,9-Didesoxyforskolin H/134 6ss-Acetyl-7-de- 168-70 7 acetyl-2ss-hydroxy 1,9-didesoxyforskolin (Fig. 8) TABELLE II (Fortsetzung) Substanz- Substrat Stamm Produkt Schmelz- Beispiel Nr. punkt Nr. C 8 1,9-Didesoxyforskolin FF/383 3ss-Hydroxy-1,9- 271-272 8 (Fig. 1) FF/173 didesoxyforskolin H/1 (Fig. 9) 9 1,9-Didesoxyforskolin FF/383 7-Deacetyl-3ss- 78-80 9 (Fig. 1) hydroxy-1,9-di desoxyforskolin (Fig. 10) 10 1,9-Didesoxyforskolin FF/695 6ss-Acetyl-7- 200-202 10 (Fig. 1) deacetyl-3ss-hydroxy 1,9-didesoxyforskolin (Fig. 11) 11 1,9-Didesoxyforskolin FF/93 7-Deacetyl-1,9- 121-122 11 (Fig. 1) F/172 didesoxyforskolin (Fig. 12) 12 1,9-Didesoxyforskolin H/3 6-ss-Acetyl-7- 149 12 (Fig. 1) H/19 deacetyl-1,9-dides oxyforskolin (Fig. 13) 13 1,9-Didesoxyforskolin H/1 3ss-14,15-trihydroxy- Ö1 13 (Fig. 1) 1,9-didesoxyforskolin (Fig. 14) Einem weiteren Merkmal dieser Erfindung entsprechend wird ein Verfahren zur Herstellung der Substanzen der Erfindung beschrieben. Das Verfahren ist gekennzeichnet durch die Fermentierung des genannten Forskolins oder seiner Analoge der Formel I in einem üblichen Nährmedium definierter Zusammensetzung, das einen der oben erwähnten Mikroorganismen-Stämme (wie in Tabelle I aufgeführt) für jedes Substrat enthält; die Permentierung erfolgt 8 bis 10 Tage lang bei einer Temperatur von 28 bis 50-C. Das Nährmedium enthält Kohlenstoff- und Stickstoffquellen, gegebenenfalls auch anorganische Nährsalze sowie Spurenelemente. Als Kohlenstoffquellen eignen sich z.B. Glucose, Stärke, Dextrin und Glycerin. Geeignete Stickstoffquellen sind z.B. Sojamehl, Hefeextrakt, Fleischextrakt, Malzextrakt, Maisquellwasser, Pepton und Casein. Als anorganische Nährsalze kommen z.B. Natriumchlorid, Magnesiumsulfat oder Calciumcarbonat, als Spurenelemente z.B. Eisen, Magnesium, Kupfer, Zink und Kobalt in Form geeigneter Salze in Frage. Die Kulturbrühe wird filtriert und das Mycel und das Filtrat getrennt mit organischen Lösungsmitteln wie Methylenchlorid, Chloroform oder Äthylacetat extrahiert. Die Extrakte werden vereinigt, über Trocknungsmitteln wie Na2S04 getrocknet und im Vakuum konzentriert. Der Rückstand wird dann durch Trennungsverfahren wie beispielsweise Chromatographie und durch Kristallisation gereinigt. Die Strukturen sind den Produkten auf der Basis ihrer Spektral- und Elementaranalyse zugeordnet worden. Die erfindungagemässen Verbindungen, für die Forskolin als Beispiel steht, besitzen pharmakologische Eigenschaften, die in mehreren Veröffentlichungen über Forskolin be schrieben worden sind. Die Verfahren zur Prüfung der verschiedenen pharmakologischen Eigenschaften sind in den erwähnten Veröffentlichungen über Forskolin beschrieben worden. Die erfindungsgemässen Verbindungen eignen sich zur Be handlung von Glaukom, Hypertonie, Eerzflnsuffizienz, Ent- zündung, Allergien und Eronchialerkrankungen sowie Er krankungen des Immunsystems. Die erfindungesgemässen Labdan-Derivate können oral, beispielsweise mit einem inerten Verdünnungsmittel oder mit einem essaren Trager, verabreicht werden. Sie können in Gelatinekapseln eingeschlossen oder zu Tabletten verpresst werden. Zum Zwecke einer oralen therapeutischen Verabreichung können die obigen Verbindungen mit Hilfs- und TrÅa- gerbstoffen vermischt werden und in Porm von Tabletten, Pa- stillen, Kapseln, ieren, Suspensionen, Sirup, Waffeln, Kaugummi usw. verwendet werden. Diese Zubereitungen sollten wenigstens 0,5% der erfindungsgemässen Verbindungen as enthalten, jedoch kann dieser Gehalt in Abhängigkeit' von der jeweiligen Form zwischen 4% und 70% des Gewichtes der Einheit schwanken. Die Menge der erfindungsgemässen Verbindung in solche Zubereitungen sollte so bemessen sein, dass eine entsprechende Dosierung ermöglicht wird. Bevorzugte erfindungsgemässe Zubereitungen werden so hergestellt, dass eine orale Dosiseinheitsform zwischen 0,5 und 10 mg/kg Körpergewicht der erfindungsgemässen Verbindung enthält. Die Tabletten, Pillen, Kapseln, Pastillen usw. können weiterhin die folgenden Stoffe enthalten: Bindemittel wie mi krokristalline Cellulose, Tragantgummi oder Gelatine; Rilfs- und Trägerstoffe wie Utärke oder Milchzucker, Zer faltmittel wie Alginsäure, Maisstärke usw.; Gleitmittel wie Magnesiumstearat oder kolloidales Siliciumdioxid; Süssstoffe wie Rohrzucker oder Saccharin oder Geschmacksstoffe wie Pfefferminze, Methylsalicylat oder Orangenaroma. Wenn die Dosiseinheit eine Kapsel ist, kann sie noch zusätzlich in obigen Substanzen flüssige Träger wie Fettöl enthalten. Andere Dosiseinheiten können weitere Substanzen enthalten, die die physische Form der Dosiseinheit verändern, beispielsweise iiberzüge. So können Tabletten oder Pillen mit Zucker, Schellack oder anderen enterischen Xberzugsmitteln überzogen sein. Ein Sirup kann zusätzlich zum erfindungsgemässen Benzotb]thio- phen Rohrzucker als Süssstoff und bestimmte Konservierungsstoffe, Farbstoffe und Aromastoffe enthalten. Die bei der Herstellung dieser verschiedenen Zubereitungen verwendeten Stoffe sollten pharmazeutisch rein und in den verwendeten Mengen nicht toxisch sein. Zum Zwecke der parenteralen therapeutischen Verabreichung können die erfindungsgemässen Labdan-Derivato in eine Iö- sung oder Suspension gebracht werden. Solche Zubereitungen sollten wenigstens o,i% der obigen Verbindung enthalten, jedoch kann dieser Gehalt zwischen 0,5 und ca. 30% des Gewichts der Zubereitung schwanken. Die Menge der vorliegenden Verbindung in diesen Zubereitungen sollte so bemessen sein, das eine entsprechende Dosierung erreicht wird. Bevorzugte erfindungsgemässe Zubereitungen werden so hergestellt, dass eine parenterale Dosiseinheit zwischen 0,03 urd 10 mg/kg Körpericht der erfindungsgemässen Verbindung enthält. Die Lösungen und Suspensionen können weiterhin die folgenden Komponenten enthalten; sterile Verdnnungsmittel wie Wasser zur Injektion, Salzlösung, gebundene Öle, Polyäthylenglykole, Glyzerin, Propylenglykol oder andere synthet:- sche Lösungsmittel; antibakteriell wirksame Mittel wie Benzylalkohol oder Methylparabene; Antioxidantien wie Ascorbinsäure oder Natriumbisulfit; Geliermittel wie Athylen- diamintetraessigsäure; Puffer wie Acetate, Citrate oder Phosphate sowie Mittel zur Regulierung des osmotischen Druckes, wie Natriumchlorid oder Dextrose. Die parenterale Zubereitung kann in Ampullen, Einwegspritzen oder Mehrfachdosisampullen aus Glas oder Plastik eingeschweisst sein. Die nachfolgenden Beispiele sollen die Erfindung illu strieren. Allgemeines Verfahren zur mikrobiellen Transformation und Isolierung der Substanzen 100 ml einer Nährlösung (Sabouraud- oder Czapek Dox Medium (Difco Manuel, 9. Aufl., 1969), dem Hefeextrakt (0,02 bis 0,2 i Maisquellwasser (0,2 - 1,0 %) und Spuren elemente zugesetzt worden sind, werden in einen 500 ml Erlenmeyer-Kolben gefüllt und 20 Minuten lang bei i20'C sterilisiert. Das sterilisierte, abgekühlte Medium wird mit einer Sporensuspension des Mikroorganismus inokuliert. Nach 48 Stunden Wachstum bei 28-C - 30*C auf einem Dreh schüttler mit 220 Umdrehungen/Min., 4,8 cm Hub, werden 5 ml in 100 ml des gleichen sterilisierten Mediums- ino kuliert und dieses weitere 8 bis 10 Tage wachsen ge lassen. Das Substrat (20 mg/100 mi Nährlösung) wird in Methanol (0,5 ml bis 1 ml) gelöst durch gesinterten Glas filter vorsterilisiert (G-5, Corning) und jedem Kolben entweder gleichzeitig mit der Vorkultur-Inokulation oder nach 36 bis 48 Stunden Wachstum zugesetzt. Das Substrat wird vorzugsweise nach 48 Stunden zugesetzt. Die Gesamt inkubationsdauer beträgt 8 bis 10 Tage, dann werden die Kolbeninhalte zusammengeschüttet und das KulturbrUhen- filtrat durch Filtration von der Mycelmasse separiert. Die Brühe und Mycelmasse werden getrennt mit organischen Lösungsmitteln wie Äthylacetat, Chloroform oder Methylenchlorid extrahiert. Als Lösungsmittel wird Chloroform bevorzugt. Die kombinierten Extrakte werden mit Wasser gewaschen, über Trocknungsmitteln wie Natriumsulfat getrocknet und dann im Vakuum zu einem Rückstand konzentriert, der durch Chromatographie auf einem geeigneten Adsorbens und Kristallisation gereinigt wird. Als Adsorbens wird Kieselgel bevorzugt. Als Medium wird das Sabouraud-Medium mit 0,2 % Hefeextrakt und 0,2 % Maisbrühe bevorzugt. Die bevorzugte Temperatur liegt bei 28-C, die bevorzugte Erntezeit liegt bei 8 Tagen. Beispiel 1 Nach dem allgemeinen, oben beschriebenen Verfahren wurde unter Verwendung des Substrats 7-Deacetyl-1,9-Didesoxyforskolin und des mikrobiellen Stammes H/134 die Substanz 7-Deacetylforskolin mit einem Schmelzpunkt von 177-78-C gewonnen. Beispiel 2 Nach dem allgemeinen, oben beschriebenen Verfahren wurde unter Verwendung des Substrats 7-Deacetylforskolin und des mikrobiellen Stammes FF/406 die Substanz Dss-Acetoxy- 7-deacetylforskolin mit einem Schmelzpunkt von 256-58-C gewonnen. BeisPiel 3 Nach dem allgemeinen, oben beschriebenen Verfahren wurde unter Verwendung des Substrats 1,9-Didesoxyforskolin und des mikrobiellen Stammes FF/172 die Substanz 7-Deace tyl-2-hydroxy-1 , 9-didesoxyforekolin mit einem Schmelz- punkt von 86-88iC gewonnen. Beispiel 4 Nach dem allgemeinen, oben beschriebenen Verfahren wurde unter Verwendung des Substrats 1,9-Didesoxyforskolin und des mikrobiellen Stammes FF/101 die Substanz 2&alpha; -Hydroxy1,9-didesoxyforskolin mit einem Schmelzpunkt von 209 2110C gewonnen. Eeistiel 5 Nach dem allgemeinen, oben beschriebenen Verfahren wurde unter Verwendung des Substrats 1,9-Didesoxyforskolin und des mikrobiellen Stammes H/134 die Substanz 7-Deacetyl-. 2ss-hydroxy-1,9-Didesoxyforskolin als feste Substanz mit einem Schmelzpunkt von 84-86*C gewonnen. Beispiel 6 Nach dem allgemeinen, oben beschriebenen Verfahren wurde unter Verwendung des Substrats 1,9-Didesoxyforskolin und des mikrobiellen Stammes FF1101 die Substanz 2ss-Hydroxy- 1,9-didesoxyforskolin mit einem Schmelzpunkt von 258 261 C gewonnen. Beispiel 7 Nach dem allgemeinen, oben beschriebenen Verfahren wurde unter Verwendung des Substrats 1,9-Didesoxyforskolin und des mikrobiellen Stammes B/134 die Substanz 6ss-Acetyl7-deacetyl-2ss-hydroxy-1,9-didesoxyforskolin mit einem Schmelzpunkt von 168 - 170 C gewonnen. Beispiel 8 Nach dem allgemeinen, oben beschriebenen Verfahren wurde unter Verwendung des Substrats 1,9-Didesoxyforskolin und des mikrobiellen Stammes FF1173 die Substanz 3ss-Hydroxy- 1,9-didesoxyforskolin mit einem Schmelzpunkt von 271 272 C gewonnen. BeisPiel 9 Nach dem allgemeinen, oben beschriebenen Verfahren wurde unter Verwendung des Substrats 1,9-Didesoxyforskolin und des mikrobiellen Stammes FF/383 die Substanz 7-Deacetyl1,9-didesoxyforskolin mit einem Schmelzpunkt von 78 80-C gewonnen. Beispiel 10 Nach dem allgemeinen, oben beschriebenen Verfahren wurde unter Verwendung des Substrats 1,9-Didesoxyforskolin und des mikrobiellen Stammes FF/695 die Substanz 6B-Acetyl- 7-deacetyl-3ss-hydroxy-1,9-didesoxyforskolin mit einem Schmelzpunkt von 200 - 2020C gewonnen. Beispiel 11 Nach dem allgemeinen, oben beschriebenen Verfahren wurde unter Verwendung des Substrats 1,9-Didesoxyforskolin und des mikrobiellen Stammes FF/93 die Substanz 7-Deacetyl1,9-didesoxyforskolin mit einem Schmelzpunkt von 121 122'C gewonnen. Beispiel 12 Nach dem allgemeinen, oben beschriebenen Verfahren wurde unter Verwendung des Substrats 1,9-Didesoxyforskolin und des mikrobiellen Stammes Y-8252904 die Substanz 6ss-Ace- tyl-7-deacetyl-1 ,9-didesoxyforskolin mit einem Schmelzpunkt von 149 - 150.C gewonnen. Beispiel 13 Nach dem allgemeinen oben beschriebenen Verfahren wurde unter Verwendung des Substrats 1,9-Didesoxyforskolin und des mikrobiellen Stammes H/1 die Substanz Dss-14,15-tri- hydroxy-1,9-didesoxyforskolin in Form eines dicken, viskosen Öls gewonnen.

Claims: PATENTANSPRUCHE: 1. Verbindungen der Formel II EMI16.1 worin bedeuten: EMI16.2 wobei X' H oder EMI16.3 mit R= C1-C3-Alkyl, darstellt. 2. Verbindungen der Formel II gemäss Anspruch 1 worin mindestens einer der Substituenten R,-R? EMI16.4 bedeutet. 3. Verbindungen der Formel II gemäss Anspruch 1 worin R8 die Gruppe EMI17.1 darstellt. 4. Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der For mel II gemäss Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man auf eine Verbindung der Formel I EMI17.2 worin R1-R4 die zur Formel II genannten Bedeutungen haben und R8 die Vinylgruppe darstellt, als Substrat in einem Nährmedium auf Ubliche Weise einen Mikro organismus einwirken lässt und die gebildeten Ver bindungen nach Beendigung der Permentation aus der Kulturbrühe und dem Mycel durch Extraktion mit einem organischen Lösungsmittel und anschliessende Chromato graphie und/oder Kristallisation isoliert. 5. Verfahren nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, dass einer der Stämme DSM 3202, DSM 3203, DSM 3204, DSM 3205, DSM 3206, DSM 3207, DSM 3208, DSM 3209, DSM 3210, DSM 3211, DSM 3212 oder DSM 3213 verwendet wird. 6. Verfahren nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, dass man aus der Verbindung der Formel III EMI17.3 als Substrat und unter Verwendung des Stammes H/134 (DSM 3205 ) die Verbindung der Formel IV EMI18.1 erhält. 7. Verfahren nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, dass man aus der Verbindung der Formel IV in Anspruch 5 als Substrat und unter Verwendung des Stammes FF/406 (DSM 3211 ) die Verbindung der Formel V EMI18.2 worin Ac den Rest CR3CO- bedeutet, erhält. 8 . Verfahren nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, dass man aus der Verbindung der Formel VI EMI18.3 worin Ac den Rest CH3CO- bedeutet, als Substrat und unter Verwendung des Stammes FF1172 (DSM 3208 ) die Verbindung der Formel EMI19.1 oder b) unter Verwendung des Stammes FF/101 (DMS 3207) die Ver bindung der Formel VIII EMI19.2 worin Ac den Rest CH3C0- bedeutet, oder c) unter Verwendung des Stammes H/134 (DSM 3205) die Ver bindung der Formel IX EMI19.3 d) unter Verwendung des Stammes FF/101 (DSM 3207) die Ver bindung der Formel X EMI20.1 worin Ac den Rest CH3 CO- bedeutet, oder e) unter Verwendung des Stammes H/134 (DSM 3205) die Ver bindung der Formel XI EMI20.2 worin Ac den Rest CR3CO- bedeutet, oder f) unter Verwendung des Stammes FF/173 (DSM 3209) oder H/1 (DSM 3202) die Verbindung der Formel EMI20.3 worin Ac den Rest CR3CO- bedeutet, oder g) unter Verwendung des Stammes FF/383 (DSM 3210) die Ver bindung der Formel XIII EMI21.1 oder h) unter Verwendung des Stammes FF/695 (DSM 3212) die Ver bindung der Formel XIV EMI21.2 worin Ac den Rest CH3-CO- bedeutet, oder j) unter Verwendung des Stammes FF/93 (DSM 3206) oder FF/172 (DSM 3208) die Verbindung der Formel XV EMI21.3 oder k) unter Verwendung des Stammes H/3 (DSM 3203) oder H/19 (DSM 3204) oder Y-82 52 904 (DSM 3213) die Verbindung der Formel XVI EMI22.1 worin Ac den Rest CH3CO- bedeutet, oder 1) unter Verwendung des Stammes H/1 (DSM 3202) die Ver bindung der Formel XVII EMI22.2 worin Ac den Rest CH3CO- bedeutet, erhält. 9. Arzneimittel, gekennzeichnet durch einen Gehalt an einer Verbindung gemäss Anspruch 1 in Mischung mit physiologisch verträglichen Hilfs- und/oder Träger stoffen. 10. Verwendung einer Verbindung gemäss Anspruch 1 zur Herstellung eines Arzneimittels. PATENTANSPRÜCHE für Österreich: 1. Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der Formel II EMI23.1 worin bedeuten: EMI23.2 und R8 die Reste -CH=CH2 oder EMI23.3 wobei X' H oder EMI23.4 mit R= C1-C3-Alkylm darstellt. dadurch gekennzeichnet, dass man eine Verbindung der Formel I EMI23.5 worin R1-R4 die zur Formel II genannten Bedeutungen haben und R8 die Vinylgruppe darstellt, als Substrat in einem Nährmedium auf übliche Weise einen Mikro organismus einwirken lässt und die gebildeten Ver bindungen nach Beendigung der Fermentation aus der KulturbrUhe und dem Mycel durch Extraktion mit einem organischen Lösungsmittel und anschliessende Chromato graphie und/oder Kristallisation isoliert. 2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass einer der Stämme DSM 3202, DSM 3203, DSM 3204, DSM 3205, DSM 3206, DSM 3207, DSM 3208, DSM 3209, DSM 3210, DSM 3211, DSM 3212 oder DSM 3213 verwendet wird. 3. Verfahren nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, dass man aus der Verbindung der Formel III EMI24.1 als Substrat und unter Verwendung des Stammes H/134 (DSM 3205 ) die Verbindung der Formel IV EMI24.2 erhält. 4. Verfahren nach Anspruchl , dadurch gekennzeichnet, dass man aus der Verbindung der Formel IV in Anspruch 5 als Substrat und unter Verwendung des Stanmes FF/406 (DSM 3211 ) die Verbindung der Formel V EMI25.1 worin Ac den Rest CEDCO- bedeutet, erhält. 5, Verfahren nach Anspruch l, dadurch gekennzeichnet, dass man aus der Verbindung der Formel VI EMI25.2 worin Ac den Rest CH3C0- bedeutet, als Substrat und a) unter Verwendung des Stammes FF1172 (Z)SM 3208 ) die Verbindung der Pormel EMI26.1 oder b) unter Verwendung des Stammes FF/101 (DMS 3207) die Ver bindung der Formel VIII EMI26.2 worin Ac den Rest CE3CO- bedeutet, oder c) unter Verwendung des Stammes H/134 (DSM 3205) die Ver bindung der Formel IX EMI26.3 oder d) unter Verwendung des Stammes FF1101 (DSM 3207) die Ver bindung der Formel X EMI27.1 worin Ac den Rest CH3CO- bedeutet, oder e) unter Verwendung des Stammes H/134 (DSM 3205) die Ver bindung der Formel XI EMI27.2 worin Ac den Rest CR3CO- bedeutet, oder f) unter Verwendung des Stammes FF/173 (DSM 3209) oder H/1 (DSM 3202) die Verbindung der Formel EMI27.3 worin Ac den Rest CRDCO- bedeutet, oder g) unter Verwendung des Stammes FF/383 (DSM 3210) die Ver bindung der Formel XIII EMI28.1 oder h) unter Verwendung des Stammes FF/695 (DSM 3212) die Ver bindung der Formel XIV EMI28.2 worin Ac den Rest CH3-CO- bedeutet, oder j) unter Verwendung des Stammes FF/93 (DSM 3206) oder FF/172 (DSM 3208) die Verbindung der Formel XV EMI28.3 oder k) unter Verwendung des Stammes H/3 (DSM 3203) oder H/19 (DSM 3204) oder Y-82 52 904 (DSM 3213) die Verbindung der Formel XVI EMI29.1 worin Ac den Rest CH3CO- bedeutet, oder 1) unter Verwendung des Stammes H/1 (DSM 3202) die Ver bindung der Formel XVII EMI29.2 worin Ac den Rest CH3CO- bedeutet, erhält. 6. Verwendung einer Verbindung gemäss Anspruch 1 zur Berstellung eines Arzneimittels.

Inventors: CHATTERJEE, SUKUMAR, DR., DE SOUZA, NOEL JOHN, DR., DOHADWALLA, ALIHUSSEIN N., DR., GANGULI, BIMAL NARESH, DR., INAMDAR, PRABHAKAR KRISHNAJI, DR., KHANDELWAL, YATENDRA, DR., NADKARNI, SURESH RUDRA, DR., RUPP, RICHARD HELMUT, DR.
Applicants: HOECHST AKTIENGESELLSCHAFT
Application year: 1986
Main classification: C07D311
IPC codes: A61P3, A61P37, C12R1, A61P27, A61K31, C12P17, A61P9, C07D311