Selective adsorbent for binding immunocouplers

Abstract: The adsorbent is used for the selective removal of circulating immune complexes from body fluids by biospecific binding thereof to the protein C1q which is immobilised by means of a bridging bond on poly(hydroxyethyl methacrylate) copolymers, cellulose-containing or silica-containing materials as solid phase, the immune complexes which have been bound in this way being separated by removal of the solid phase, and the solid phase being regenerated by treatment with non-denaturing media.

Description: Selektives Adsorbens zur Bindung von Immunkomplexen Die Erfindung betrifft ein Adsorbens zur selektiven Bindung von zirkulierenden Immunkomplexen aus Körperflüseigkeiten unter wiederholtem und reprodusierbarem Einsatz eines beschichteten Trägers. Das Verfahren ist anwendbar in der pharmazeutischen Industrie sowie der Medizin. Es gilt als gesichert, dass den in Körperfltissigkeiten, z. 3. im Blut, zirkulierenden Antigen-Antikörper-Komplexen (Immunkomplexe) eine wesentliche pathogenetische Bedeutung bei einer Vielzahl von Erkrankungen (u. a. Autoimmunerkrankungen wie Lupus erythematodes visceralis und Rheumatoid-Arthritis, Transplantatabstossung, Infektionen, möglicherweise auch bei Neoplasien) zukommt. Zirkulierende Immunkomplexe können sich an den Gefässwänden ablagern und über verschiedene Wirkungsmechanismen entzündliche Reaktionen in den jeweils disponierten. Organen mit den entsprechenden Symptomen (u. a. Vasculitia, Arthritis, Nephritis, Serösitis, Karditis, Cerebritis, Anämie, Beukopenie, Thrombopenie) induzieren. Insbesondere bei Autoimmunerkrankungen korreliert die Immunkomplexkonzentration im Serum/Plasma oder anderen Körperfltlssigkeiten mit der Aktivität der Erkrankung. Deshalb erscheint es sinnvoll, den PathemecX ismus dieser Erkrankungen durch Entfernung zirkulierender Immunkomplexe aus den KörperflUssigkeiten zu beeinflussen, um dadurch das Fortschreiten der oben erwähnten Erkrankungen und unerwünschte Immunreaktionen zu verhindern, die Krankheitsaktivität zu mindern, die damit verbundenen Symptome zu lindern bzw. zu beseitigen. Die Erfolge der Plasmapheresebehandlung werden u. a. auf die Be- seitigung bzw. Reduzierung der pathogenetisch bedeutsamen Immunkomplexe zurückgefUhrt Lvgl. E. Apostoloff et al., Dt. Gesundheitsw. 34, 64 (1979); H. F. Parry et al., Ann. Rheum. Dis. 40 224-228 (1981); T. Sharon et al., Plasma Eher, Tranefus. Technol SL 163-169 (1982); M. Valbonesi et al., Int. J. Art. Organs. 4. 234-236 (1981); J. V. Jones et al., Arthritis Rheum. 24, 1113-1120 (1981,7. Nachteile dieser Methode sind das nicht selektive Entfernen alles Plasmabestandteile und die dadurch erforderliche Zufuhrung grö sserer Mengen Premdplasma oder Humanalbumin, die auch aus Kapazitäts- und ökonomischen Grunde limitierend sein können. Aus den gunannten GrUnden existieren seit einigen Jahren Bemühungen um die Entwicklung von Adsorbentien, die eine eelektive Entfernung zirkulierender Immunkomplexe aus Körperflüssigkeiten erlauben. hierbei wurden im weeentlichen folgende Wege beschritten: - Staphylokokken-Protein A, an einen unlöslichen Träger fixiert (fixierte Staphylokokken, Protein A-Sepharose) Lvgl. D. S. Torman et al., J. Immunol. 124. 798 (1980); New England J. Med. 305, 1195; E. Behm u. H. Kiinkmann, in Plasma Separation and Plasma Fraotionation, S. 254-265 (Karger, Basel 1983)] - Poröses Harz vom Akrylsäureester-Typ [z.B. XAS-7, geliefert von Rohm und Hass Co., USA; vgl. T. Agishi, Zinko Zoki, 2; 264 (198017 - Kationenaustauschglied wie Carboxymethylcellulose [vgl. L. D. Johnson et al., Can. J. Biochem. 42 795 (1964l7 - Adsorbens, enthaltend eine Oberfläche und mit der Oberfläche verbunden wenigstens ein hydrophobes Glied mit 6 - 700 Koh lenstoff-Atomen und wenigstens eine negative Ladung erzeu gendes Glied r. Kuroda et al., japanisches Patent J. P. P58-59199, P58-591977 Diese Adsorbentien haben jedoch verschiedene Nachteile: Protein A ist in der Lage, Immunkomplexe zu binden, jedoch nicht ausreichend selektiv, denn es bindet ebenfalls nicht immunkomplexgebundenes IgG. Ausserdem ist Protein A ein Fremdpro tein , mit den ihm anhaftenden Nachteilen beim Einsatz des Adeor- bens, wenn es in Berlihrung mit den KörperflAssigkeiten gehalten wird. Die Herstellungskosten für Protein A sind sehr hoch. Die Verwendung inaktivierter Staphylokokken als "natürliche" Träger des Protein A ermöglicht den Einsatz des Protein A ohne seine weitere Reinigung, bringt aber zusätzliche Probleme bei Bertth- rung der Körperflüssigkeit mit den inaktivierten Bakterien (z. B. Freisetzung von Pyrogenen) mit sich. Weiterhin sollen Protein-A-Träger das Komplementsystem aktivieren. Das poröse Harz vom Acrylsäureester-Typ und Carboxymethylcellulose besitzen nur ungentigendes Adsorptionsvermögen und unzureichende Adsorp tionsspezifität (u. a. wird Albumin aus Körperflüssigkeit adsorbiert). Das aus einem hydrophoben und einem eine negative Ladung enthaltenden Glied bestehende Adsorbens ist ebenfalls flir die Adsorption von Immunkomplexen nicht ausreichend spezifisch. Hier will die Erfindung Abhilfe schaffen. Die Erfindung, wie sie in den AnsprUchen gekennzeichnet ist, löst die Aufgabe, zirkulierende Immunkomplexe selektiv, einfach und schonend aus Körperflüsaigkeiten unter Nutzung sterilisierbarer Träger zu entfernen. Die Träger lassen sich einfach, schnell und reproduzierbar zwecks Wiederverwendung regenerieren. Die erfindungsgemässe Lösung der Aufgabe erfolgt dadurch, dass das Protein Clq - eine Untereinheit der ersten Komplementkomponente - biospezifisch an beschichtete Träger, vorzugsweise makroporöse sphäri- sche Copolymere von 2-Hydroxyethylmethacrylat mit Sthylenglykol- dimethacrylat oder flächenförmige Copolymere der gleichen chemischen Struktur oder an zellulosehaltige Materialien, vorzugsweise Perlzellulose oder flächenfrmige Zelluloseträger, über eine Brüokenbindung oder an siliziumdioxidhaltige Träger, vorzugsweise poröses Glas, Glasfasern oder flächenförmige Glasfa- serfilter, Uber Silanhaftmittel kovalent gebunden wird, sowie an weitere Träger, und dieses trägergebundene Protein C1q zur Bindung und Entfernung der zirkulierenden Immunkomplexe eingesetzt wird, wobei die an das Protein Oiq gebundenen Immunkomplexe aus den Körperflüssigkeiten durch Abtrennung der festen Phase separiert werden und die feste Phase durch Behandlung mit nicht denaturierenden Medien funktionell regeneriert wird. Das erfindujsmässe Verfahren ist weiterhin dadurch gekennzeichnet, dass das im menschlichen und tierischen Blut vorkommende und für die Bindung von Immunkomplexen und der physiologischen Eliminierung verantwortliche Protein C1q an oben genannte Träger mit hinreichend grosser Oberfläche und Porosität auf an sich bekannte vorherige chemische Oberflächenmodifizierung des Trägers mit Epichlorhydrin bzw. durch Chlorameinsensäureester, CNBr, Cyanurchlorid, Carbodiimiden LUbersicht: M. D. Lilly: Methods in Enzymology 44. (1976), 467 oder aber mit Silanhaftmitteln und gegebenenfalls hetero- oder homobifunktionellen Reagenzien gebunden wird und dieses trägergebundene Protein Ciq fUr die in vivo und in vitro-Entfernung der zirkulierenden Immunkomplexe aus Körperflüssigkeiten eingesetzt wird und danach die so gebundenen Immunkomplexe durch nicht denaturieren de Medien wieder abgespalten werden, so dass der mit dem Protein C1q beladene Träger erneut eingesetzt werden kann. Der als feste Phase dienende Träger hat eine unterschiedliche geometrische Form, wobei kugelförmige, faserförmige oder flächenförmige vernetzte Träger mit oder ohne Zusätze besonders geeignet sind. Denkbar sind aber auch Filme, Lacke und andere dünne Schichten der genannten Copolymere auf anderen inerten und biologisch verträglichen Trägermaterialien. Das Poly(hydroxyethylmethacrylat)-haltige Material hat im wesentlichen eine sphärische Struktur, wobei deren Partikelgrösse, Zu- sammensetzung und Porosität unterschiedlich sein kann. Besonders vorteilhaft sind Partikelgrössen zwischen 100 - 400/um und Poren weiten 50 nm. Die maximale Porenweite beträgt ca. 100/um, wobei mit zunehmender Porenweite die zur Verfügung stehende Fläche und damit die Kapazität des Trägers immer kleiner wird. Das zellulosehaltige Material ist im wesentlichen Perlzellulose, wobei deren Partikelgrösse, Zusammensetzung, Struktur und Porosität unterschiedlich sein kann. Besonders vorteilhaft sind Partikelgrössen zwischen 100 - 400/um und Porenweite 50 nm. Die maximale Porenweite beträgt ca. 100/um, wobei mit zunehmender Poren- weite die zur Verfügung stehende Fläche und damit die Kapazität des Trägers in analoger Art und Weise immer kleiner wird. Das Protein 01q wird an den zellulosehaltigen Träger au9 an sich bekannte vorherige chemische Oberflächenmodifikation des Trägers, vorzugsweise durch Ohlorameisensäureester, CNBr, Cyanurchlorid, Carbodiimiden oder aber mit Silanhaftmitteln gebunden. Der siliziumdioxidhaltige Träger hat ebenfalls eine unterschiedliche geometrische Form, wobei kugelförmige oder faserförmige Träger mit oder ohne Zusätze, die auch durch Packung, Sinterung oder Verwendung eines Bindemittels zu Ubergeordneten Strukturen (wir Filtern, Fritten und dergleichen) mit definierter Durchlässigkeit angeordnet sein können, besonders geeignet sind. Die siliziumdioxidhaltigen Materialien sind nd im wesentlichen poröse Gläser (s. hierzug F. Janowski, W. Heyer: Poröse Gläser, Deutscher Verlag für Grundstoffindustrie, Leipzig 1982), die bekanntlich problemlos sterilisiert und steril gehalten werden können, wobei deren Partikelgrösse, Struktur und Porosität genau festgelegt wird. Besonders vorteilhaft sind ideal sphärische Partikel (DD-WP 0033 259 5548, DD-WP 301 J 269 4382, DD-WP 301 J 26 94390) mit Partikelgrössen zwischen 1 bis 1 0001um und Porenweiten von 0,05 bis 100/um, wobei sich die Porenweiten und die zur Vert gung stehende Fläche, die die Kapazität des Trägers entacheidend beeinflusst, reziprok proportional verhalten. Die ideal sphärische Form der Matrix hat einen entscheidenden Einfluss auf die schonenden Bedingungen des Verfahrens, da die au9 die Proteine einwirkenden Scherkräfte drastisch reduziert sind. Des weiteren zeichnen sich die ideal sphärischen und abriebfesten Glaspartikel durch ihre Erosionsbeständigkeit, ihre günstigen hydrodynamischen Eigenschaften, ihre Variationsbreite der Textur und somit auch der Durchfluss eigenschaften sowie durch die Abwesenheit toxischer Bestandteile aus. Insbesondere unter dem Aspekt technologischer Verfahren sind flächenförmige Träger oder Patronen mit Kornmaterial oder Membranen aus porösem Glas mit übergeordneten Strukturen bzw. flächenförmige Träger, die als Filter in geeigneten Filtrationssystemen eingesetzt werden, hervorzuheben. Hier zeichnen sich besonders Glasfasern enthaltende Filtermaterialien aufgrund ihrer mechanischen Festigkeit aus. Die nicht denaturierenden Medien fUr die Abspaltung der gebundenen Immunkomplexe setzen sich aus gepufferten Lösungen hoher Ionenstärke zusammen, wobei insbesondere 0,5 - 3 M NaCL-Lösungen oder aber auch chaotropische Reagenzien sowie Säuren und Laugen geeignet sind. Die Oberflächenmodifizierung der Poly (hydroxyethylmethacrylate) zum Zwecke der Schaffung der Bedingungen für das Eingehen kovalenter Bindungen mit dem Protein C1q erfolgt auf an sich bekannte Art und Weise, vorzugsweise durch Epichlorhydrin, kann aber auch durch andere Modiiizierungsverfah- ren wie CNBr, Carbodiimiden oder andere hetero- oder homobifunktia nelle Reagenzien erfolgen. Die Oberflächenmodifizierung der Zellulose erfolgt auf an sich bekannte Art und Weise, vorzugsweise durch Chlorameieensäureester, kann aber auch durch andere bekannte Modifizierungsverfahren wie CNBr, Cyanurchlorid, Carbodiimide, Glutaraldehyd erfolgen. Die Oberflächenmodifizierung der siliziumdioxidhaltigen Träger erfolgt durch sogenannte Silanhaftmittel wie EMI5.1 wobei R Alkylreste und x z. B. Amino-, Epoxy-, Diazo-, SulShydryl- oder Nitroso-Gruppen sind und durch Umsetzen der verbleiben den funktionellen Gruppe auf an sich bekannte Art und Weise mit homo- oder heterofunktionellen Reagenzien oder direkte Umsetzung mit den reaktiven Gruppen des Proteins. Der erfindungsgemä&beta;e 01Träger ist chemisch stabil, mikrobiell schwer angreifbar, sterilisierbar und biokompatibel. Dadurch ist die Wiederverwendbarkeit gewährleistet. Der so mit dem Protein C1q beladene Träger wird dann zur Bindung und Entfernung der zirkulierenden Immunkomplexe eingesetzt, wobei der Träger sowohl im Durchflussverfahren in üblicher Weise (Hämoperfusion, Plasmaperfusion) als auch im batch-Verfahren (bei der Isolie- rung von Immunkomplexen für in vitro-Untersuchungen) genutzt werden kann. Nach Ablauf der Reaktion und Entfernung des Trägers von den zu behandelnden Körperflüssigkeiten werden die gebundenen Immunkomplexe durch nicht denaturierende Medien wie z. B. 2 M NaCl-Lösung abgespalten, so dass das kovalent gebundene Protein Ciq für einen erneuten Einsatz zur Verlegung steht. Das erfindungsgeniässe Verfahren nutzt die physiologische Funk- tion des Proteins C1q für die selektive und schonende Bindung und damit Entfernung von zirkulierenden Immunkomplexen aus Kör per ssigkeitsn. Anhand der vorliegenden Beispiele wird die Erfindung im folgenden näher erläutert: Beispiel 1: 5 g makroporöses sphärisches Copolymer von 2-Hydroxyethylmethacrylat und Ethylenglykodimethacrylat mit einer Aus- schlussgrenze von 2x106 D und einer Oberfläche von ca. 70 m2/g sowie reaktiven Epoxygruppen (1,020m Mol/g Träger) (Separon Hema 1000 ER) werden mit Protein Olq (1 mg/ml) in PBS-Puffer, pH 7,4, 10 mM EDTA enthaltend, versetzt und 48 h bei 4 9o unter leichtem Schütteln inkubiert. Die Bestimmung des gebundenen Pro teinsCiq erfolgt durch Differenzmessung der Ausgangslösung bzw. des Uberstandes bei 280 nm (E280= 6,8) oder mit Hilfe der ein 1% fachen radialen Immundiffusion mittels eines spezifischen Antiserums. Abschliessend wird der Träger mit 1 M Äthanolaminlösung in PBS-Puffer, pH 7,4, versetzt, um eventuell noch freie reaktive Gruppen abzublocken. Schliesslich wird der Träger mit einem 0,01 M Phosphat-Puffer, pH 7,4, der 0,05 m NaCL enthält, gewaschen. Dieses trägergebundene Protein Ciq wird nunmehr zur Bindung der Immunkomplexe eingesetzt. Hierzu wird der mit dem Protein Ciq beladene Separon-Träger mit Heparin-Plasma, das eine erhöhte Konzentration zirkulierender Immunkomplexe enthält (Patient mit Lupus erythematodes visceralis), im batch Verfahren versetzt und 2 h bei Raumtemperatur inkubiert. Nach Entfernung des Trägers durch Dekantieren oder Zentrifugieren wird dieser im folgenden mit 0,01 mM Phosphat-Puffer, pH 7,4, 0,05 M NaCl, gewaschen und anschliessend mit 2 M NaCl in PBS- Puffer, pH 7,4, regeneriert. Die Bestimmung der Immunkomplexe erfolgte mit einem Protein C1q-Pestphasen-Enzymimmunoassay. Zur Ermittlung der unspezifischen Bindung an den Träger wurde die Eiweisskonzentration im spezifischen Eluat nach Lowry sowie bei 280 nm bestimmt sowie eine Immunelektrophorese, doppelte radiale Immunodiffusion mit spezifischen Antiaeren und Polyacrylamidgelelektrophorese durchge±hrt. Im Eluat konnten spezifisch zirkulierende Immunkomplexe nachgewiesen werden. Kontaminierende Begleitproteine waren nicht vorhanden. Eine Aktivierung des Komplementsystems konnte nicht nachgewiesen werden. Beispiel 2: An aktiviertes Separon Hema 1000 ER wird, wie in Beispiel 1 beschrieben, humanes Protein 01q gebunden. Diese Matrix wird in eine Chromatographiesäule ( 4 mm) gefUllt und mit einem 0,01 M Phosphat-Puffer, pII 7,4, 0,05 M NaCL, gespült. Anschliessend wird 2 ml Heparin-Plasma eines Patienten mit erhöhtem Immunkomplexspiegel aufgetragen und mit o. g. Puffer eluiert (Durchfluss 10 ml/h). Die Abspaltung der spezifisch gebundenen Immunkomplexe und die hiermit verbundene Regenerierung der Matrix erfolgt, wie in Beispiel 1 beschrieben, mit 2 M NaC1-T,ösung in PBS-Puffer, pit 7,4. Die Eiweisslçonzentra- tion wurde kontinuierlich mit einem UV-Durchflussphotometer verfolgt. Die Ergebnisse entsprachen den in Beispiel 1 dargestellten Resultaten. Beispiel 3: Die mit Chlorameisensäureestern aktivierte Perlzellulose (Aktivierungsgrad 63/umol/ml) wird zunächst stufen- weise in das wässrige Milieu dberführt, da die Perlzellulose mit Dioxan versetzt ist. Hierzu wird der Träger mit einem hinreichend grossen Überschuss (50 ml Waschlösung/ml Träger) Dioxan Wasser-Gemischen folgender Abstufungen unter RUhren gewaechen: 90/10; 70/30; 10/90; 0/100. Die Gesamtdauer des Waschprozesses sollte nicht länger als 10 - 15 Minuten betragen, um Hydrolyseverluste an aktiven Gruppen zu vermeiden. Danach wird der Träger mit Protein C1q (1 mg/ml) in PBS-Puffer, pH 7,4, 10 mM EDTA enthaltend, versetzt und 4 h bei Raumtemperatur unter leichtem Schütteln inkubiert. Die Bestimmung des gebundenen Proteins Oiq erfolgt durch Differenzmessung der Ausgangslösung bzw. des Überstandes nach vorheriger Dialyse bei 280 nm (F280 6,8) 1% oder mit Hilfe der einfachen radialen Immundiffusion. Abschlie- ssend wird der Träger mit 1 m Äthanolaminlösung in PBS-PufLer, pH 7,0, versetzt, um eventuell noch freie reaktive Gruppen ab zublocken. Schliesslich wird der Träger mit einem 0,01 m Phos phat-Puff er, pH 7,4, der 0,05 M NaCl enthält, gewaschen. Dieses trägergebundene Protein Ciq wird nunmehr zur Bindung der Immunkomplexe eingesetzt. Hierzu wird die mit dem Protein C1q beladene Perlzellulose mit einem Patientenserum, das erhöhte Konzentrationen zirkulierender Immunkomplexe enthält (Patient mit Lupus erythematodes visceralis), im batch-Verfahren versetzt und 2 h bei Raumtemperatur inkubiert. Nach EntSernung des Trägers durch Dekantieren oder Zentrifugieren wird dieser im folgenden mit 0,01 mM Phosphat-Puffer, pH 7,4, 0,05 M NaCl, gewachen und anschliessend mit 2 M NaCL in PBS-Puffer, pH 7,4, regeneriert. Die Bestimmung der Immunkomplexe erfolgte wie in Beispiel 1 und 2 mit einem Protein C1q Pestphasen-Enzymimmunoassay. Zur Ermittlung der unspezifischen Bindung an den Träger wurde die iweisskonzentration im spezifischen Eluat nach Lowry bestimmt sowie eine Immunelektrophorese durchgeführt. Eine mögliche Aktivierung des Komplementsysteme wurde durch quantitative Bestimmung der Komplementkomponenten der Proteine C1q und C3 verfolgt. Tabelle 1 zeigt ein charakteristisches Ergebnis einer derartigen Behandlung. Tabelle 1: zirkulierende Immunkomplexe (/ug/ml Äquivalente aggr. IgG) (7,o) Patientenserum vor Behandlung 90 100 nach Behandlung 62 69 Eine Aktivierung des Komplementsysteme konnte nicht nachgewiesen werden. Beispiel 4: An aktivierte Perizellulose wird, wie in Beispiel 3 beschrieben, das humane Protein C1q gebunden. Diese Matrix wird in eine Chromatographiesäule ( 4 mm) gefüllt und mit einem 0,01 M Phosphat-Puffer, pH 7,4, 0,05 M NaCl, gespült. Anschliessend wird 1 ml Serum eines Patienten mit erhöhtem Immunkomplexspiegel aufgetragen und mit o. g. Puffer eluiert (Durchfluss 10 ml/h). Die Abspaltung der spezifisch gebundenen Immunkomplexe und die hiermit verbundene Regenerierung der Ma trix erfolgte,wie in Beispiel 1 beschrieben, mit2 X NaCI-Lösung in PBS-Puffer, pH 7,4. Die Eiweisskonzentration wurde kontinuiez lich mit einem UV-Durchflussphotometer verfolgt. Dle Ergebnisse entsprachen den in Beispiel 3 dargestellten Resultaten. Beispiel 5: Poröse Glaskugeln mit einer Porenweite von 135 nm werden nach Kochen mit 30%iger Salpetersäure und neutralem Waschen mit einer 2%igen Lösung des Silanhaftmittels NB 114 (Aminopropyltriäthoxysilan, VEB Chemiewerk NUnchritz) in Äthanol/Wasser (1:1), pH 3,5, fUr 4 h bei 60 0C und 6 h bei 120 OC aktiviert. Nach Waschen mit Äthanol/Wasser sowie mehrmaligem Waschen mit PBS-Puffer, pH 7,4, wird das so funktionalisierte Glas mit 2%dem Glutardialdehyd in 0,1 M Phosphat-Puffer, pH 6,8, für 2 Stunden bei 37 oC inkubiert. Nach erneutem Waschen mit PBS Puffer wird das aktivierte Glas mit Protein C1q (500/ug/ml) in PBS-Puffer, pH 7,4, der 10 mM EDTA enthält, versetzt und 4 h bei 37 0C inkubiert. Nach weiteren Waschvorgängen werden die noch freien Aldehydgruppen mit 1 M Äthanolaminlösung blockiert. Nach wiederholtem Waschen mit 0,01 M Phosphat-Puffer, pH 7,4, der 0,05 M NaCl enthält, wird diese mit Protein C1q beladene Matrix zur Bindung der zirkulierenden Immunkomplexe eingesetzt. Hierzu werden die mit Protein C1q beladent Glaskugeln mit einen Patientenserum, das erhöhte Konzentrationen an zirkulierenden Immunkomplexen enthält (Patient mit einem Lupus erythematodes visceralis), im batch-Verfahren versetzt und 2 Stundep bei Raum temperatur inkubiert. Nach Entfernung des Trägers durch Dekantieren oder Zentrifugieren wird dieser im folgenden mit 0,01 M Phosphat-Puffer, pH 7,4, 0,05 M NaCl, gewasohen und anschlie ssend mit 2 M NaCl in PBS- Puffer, pH 7,4, regeneriert. Die Bestimmung der Immunkomplexe erfolgte wiederum mit einem Protein C1q-Festphasen-Enzymimmunoassay. Zur Ermittlung der unspezifi schen Bindungen an den Träger wurde die Eiweisskonzentration im spezifischen Eluat nach Lowry bestimmt sowie eine Immunelektrophorese durchgef Wirt. Tabelle 2 zeigt ein charakteri- stisches Ergebnis einer derartigen Behandlung. Tabelle 2: zirkulierende Immunkomplexe (/ug/ml Äquivalente aggr. IgG) (%) Patientenserum vor Behandlung 90 100 nach Behandlung 68 73

Claims: Use of C1Q covalently bound to a solid phase by means of bridging substances for producing a therapeutic agent for removing pathogenic immune complexes from blood circulation. Use according to claim 1, characterised in that copolymers of 2-hydroxyethylmethacrylate and ethylene glycol dimethacrylate or cellulose-containing or silicon dioxide-containing materials are used as the solid phase. Use according to claim 1 or 2, characterised in that the solid phases consist of spherical, planiform or fibrous mouldings but are also applied to other substrates as thin layers, films or lacquers. Use according to one of claims 1 to 3, characterised in that spherical poly(hydroxyethylmethacrylate) copolymers are used as substrate material, the particle size thereof being 10 to 1,000 µm and the porosity thereof being >10 nm. Use according to one of claims 1 to 3, characterised in that the cellulose-containing material is bead cellulose, the particle size thereof being 10 - 500 µm and the porosity thereof being >10 nm. Use according to one of claims 1 to 3, characterised in that the silicon dioxide-containing substrate materials are spherical having a particle size of 1 - 1,000 µm and a pore width of 0.05 - 100 µm, or are used as fibres. Use according to one of claims 1 to 4, characterized in that epichlorohydrin, CNBr, carbodiimides or other homobifunctional or heterobifunctional reagents are used as bridging substances. Use according to one of claims 1 to 3 and 5, characterised in that chloroformate, CNBr, carbodiimides or glutaraldehyde are used as bridging substances. Use according to one of claims 1 to 4 and 6, characterised in that silane adhesives, preferably with addition of homobifunctional or heterobifunctional reagents, are used as bridging substances.

Inventors: APOSTOLOFF EMIL PROF DR, BECKER MANFRED DR, COUPEK JIRI DIPL ING DR, HEYMANN STEPHAN DIPL PHYS DR, HIEPE FALK DR, PRECHT KLAUS PROF DR, SCHOESSLER WERNER DR, APOSTOLOFF, EMIL, PROF.DR., BECKER, MANFRED, DR., COUPEK, JIRI, DIPL.ING.DR., HEYMANN, STEPHAN, DIPL.PHYS.DR., HIEPE, FALK, DR., PRECHT, KLAUS, PROF.DR., SCHOESSLER, WERNER, DR., Schössler, Werner, Dr.
Applicants: FRESENIUS AG
Application year: 1986
Main classification: G01N33
IPC codes: G01N33