COUPLING COMPOUNDS, PROCESS FOR THEIR PREPARATION AND THEIR USE AS MEDIATORS IN THE DEVELOPMENT OF THE EFFECTS OF INTERFERONS

Abstract: For the Contracting States : BE, CH, DE, FR, GB, IT, LI, LU, NL, SE 1. Coupling compounds represented by the formula (I) defined below : see diagramm : EP0203870,P77,F1 in which : - Y and T, identical or different, represent independently of one another O, S, Se or NH ; - Z and W, identical or different, represent independently of one another O, S, or NH ; - A represents adenine or one of its derivatives, particularly those of the formula : see diagramm : EP0203870,P77,F2 - SIGMA is a whole number equal to n-1, n being a whole number greater than or equal to 3 ; - m is a whole number greater than or equal to 0 and preferably greater than or equal to 2 ; - X is a whole number greater than or equal to 1, preferably comprised from 2 to 10 ; - Pr is a polypeptide chain comprising at least 5 amino acids, and the nitrogen atom belonging to the ring : see diagramm : EP0203870,P77,F3 belonging also to the end of a lateral sequence of the polypeptide Pr and/or belonging to a group see diagramm : EP0203870,P77,F4 coming from a COOH group modified by hydrazine. For the Contracting State : AT 1. Process for preparing coupling compounds of formula (I) : see diagramm : EP0203870,P85,F1 in which : - Y and T, identical or different, represent independently of one another O, S, Se or NH ; - Z and W, identical or different, represent independently of one another O, S, or NH ; - A represents adenine or one of its derivatives, particularly those of the formula : see diagramm : EP0203870,P85,F2 - SIGMA is a whole number equal to n-1, n being a whole number greater than or equal to 3 ; - m is a whole number greater than or equal to 0 and preferably greater than or equal to 2 ; - X is a whole number greater than or equal to 1, preferably comprised from 2 to 10 ; - Pr is a polypeptide chain comprising at least 5 amino acids, and the nitrogen atom belonging to the ring : see diagramm : EP0203870,P85,F3 belonging also to the end of a lateral sequence of the polypeptide Pr and/or belonging to a group see diagramm : EP0203870,P85,F4 coming from a COOH group modified by hydrazine characterized in that it comprises : - the oxidation of the starting compound of the following formula (Ibis) : see diagramm : EP0203870,P86,F5 in which Y, Z, T, W, A, m, SIGMA have the above mentioned meanings ; to introduce two aldehyde functions on to the carbons at the 2' and 3' positions of the last nucleoside unit and to obtain the compound of the following formula (Iter) : see diagramm : EP0203870,P86,F6 - the reductive alkylation of the compound (Iter) by a polypeptide Pr-NH2 whose chain comprises at particularly NH2 , this reaction taking place between the aldehyde functions of the compound (Iter) with the NH2 group of the polypeptide to obtain the compound of formula (I) : see diagramm : EP0203870,P86,F7 - the fractionation between the coupling compounds according to the invention and the uncoupled products particularly by molecular filtration.

Description: NOUVEAUX COMPOSES DE COUPLAGE. LEUR PROCEDE DE PREPARATION ET LEURS APPLICATIONS COMME MEDIATEURS DANS LE DEVELOPPEMENT DES EFFETS DES INTERFERONS L'invention a pour objet de nouveaux composés de couplage obtenus entre un oligonucléotide et un vecteur d'introduction dans les cellules, leur procédé de préparation et leurs applications biologiques, comme médiateurs dans le développement de l'action des interférons, notamment dans le développement d'une partie au moins de l'action antivirale des interférons. On sait que les interférons constituent une famille de protéines caractérisées notamment par leurs propriétés antivirales. On a observé que l'effet antiviral des interfé- rons est médiatisé par la synthèse de protéines particulières. Des essais spécifiques ont permis d'identifier la fonction de deux d'entre elles , qui sont toutes les deux des enzymes (BAGLIONI C., 1979, Interferon induced enzymatic acti-viiies and their role in the antiviral state, Cell 17, 255-264). L'une d'entre elles est une oligonucléotide polymérase (2-5A synthétase). Cette oligonucléotide polymérase catalyse, après activation par les ARS bicaté- flaires et a partir d'ATP, la synthèse d'une famille d'oligonucléotides. Ces oligonucléotides sont des channes courtes d'adénosines reliées par des liaisons phosphodiester 2' EMI1.1 5' ( < ER? I. M. et BROWN R. E., 1978, ppp.AZ'- p5'A2'p5'A : An inhibitor ot protein synthesis syntnesized with an enzyme fraction from interferon treated cells, PNAS 75, 256-260) dont la formule générale peut être représentée par pppA(2'p5'A)n. Ces oligonucléotides peuvent être désignés par "oligonucléotides 2'-5'", notamment 1oligoadénylates 2'-5'" ou par (2'-5')(S L'un de ces oligoadénylates peut être représenté par la formule suivante EMI2.1 Il est composé de chaînes courtes contenant plusieurs groupes adénosine (adénine + ribose), liés entre eux par des liaisons phosphodiester, comme représenté, et dans laquelle la position en 5' du noyau d'adénine de l'adénosine terminal est lié à un nombre variable de groupes phosphate (jusqu'à 3 sur I'oligoadénylate 2' EMI2.2 5' représenté). Lorsque l'oligoadénylate 2' EMI2.3 5' est totalement déphosphorylé, c'est-à-dire lorsque la position en 5' du noyau d'adénine de l'adénosine terminal est libre du susdit nombre variable de groupes phosphate, le composé résultant est désigné par "noyau (2' EMI3.1 5' )A3", qui est une abréviation pour "noyau riboadénylyl (2' EMI3.2 5') riboadénylyl (2' EMI3.3 5') riboadénosine". Les noyaux 2'-5' correspondant aux oligoadénylates (2'-5') déphosphorylés sont également appelés n corest. Dans la suite de la description, on désignera également par "oligoadénylate 2'-5' non modifiés" les oligoadénylates 2'-5' induits dans les cellules traitées par de l'interféron. Il est convenu que l'expression "oligoadénylate 2' i5'" mentionnée ci-dessus et utilisée ci-après désignera également, par commodité de langage, le noyau (2'-5')(A) n partiellement ou entierement déphosphorylé, La découverte de ces oligoadénylates 2' -+ 5' a révélé une nouvelle classe d'oligonucléotides biologiquement actifs, que l'on suppose présenter un rôle important comme médiateurs de l'action de l'interféron, notamment dans l'activation de l'endoribonucléase L, qui est présente aussi bien dans les cellules traitées par l'interféron que dans celles non traitées, et dans l'inhibition de la synthèse des protéines. Mas les liaisons phosphodiester 2' EMI3.4 5' de ces adylates sont rapidement clivées par une enzyme désignée par 2'-phosphodiestérase (cf. la référence de BAGLIONI mentionnée cidessus). L'endoribonucléase L ainsi que la 2'-phosphodiestérase sont présentes à des taux sensiblement égaux dans les cellules traitées ainsi que dans les cellules non traitées par l'interféron. Lorsque la cellule est traitée par l'interféron, la concentration d'oligonucléotide 2'-5' polymérase augmente. L'infection par certains virus de cellules ainsi traitées entraine la production au site de réplication virale d'-ARN bicaténaires activant l'oligonucléotide 2'-5 polymérase. Il en résulte une augmentation, transitoire et éventuellement localisée au site de réplication du virus, de la concentration en oligoadénylate 2' EMI4.1 5' (Nilsen T. W. et Baglioni C., 1984, Interferon 5, J. Gresser Ed. r Academic Press, New York).Ces oligonucléotides activent eux-mêmes en s'y liant spécifiquement l'endoribonucléase L qui dégrade les ARN messagers viraux. Lorsque l'interféron est enlevé du milieu de culture, l'activité de l'oligonucléotide 2' EMI4.2 5' polymérase décroît et la cellule perd son état antiviral. La synthèse des protéines induites par l'interféron est transitoire et, par conséquent, les cellules maintenues dans les cultures de tissu ne maintiennent pas un niveau élevé de ces protéines. Par ailleurs, les oligoadénylates 2' EMI4.3 5' induits dans les cellules traitées par l'interféron présentent l'inconvénient d'avoir une stabilité métabolique faible. En effet, les oligoadénylates 2' EMI4.4 5' non modifiés sont, d'une part, rapidement hydrolysés par une phosphodiestérase spécifique dégradant la molécule de manière processive à partir de son ribose 2' terminal, d'autre part, sont dégradés sous l'action d'une phosphatase du côté du premier ribose relié au nombre variable de groupes phosphate (Lebleu B et Content J., 1982, Interferon 3, J. Gresser Ed., Academic Press, New York). Des recherches ont été entreprises pour trouver des composés analogues aux oligoadénylates 2' EMI4.5 5' non modifiés et présentant une activité accrue, en comparaison avec l'activité d'oligoadénylates 2' EMI4.6 5' induits dans les cellules traitées par l'interféron (BAGLIONI C. et coll., 1981, Analogs of (2'-5')oligo(A). Endonuclease activation and inhibition of protein synthesis in intact cells, The Journal of Biological Chemistry, vol. 256, n- 7, p. 3 253-3 257). i Différentes recherches ont été effectuées pour synthétiser (par voie enzymatique et/ou chimique) des analogues modifiés des oligoadénylates 2' EMI5.1 5' induits dans les cellules traitées par l'interféron, qui seraient résistants aux actions de dégradation, sans perdre leur activité biologique. Parmi ces recherches, on peut citer la synthèse enzymatique à l'aide de la 2-5A synthétase de "cordyc- pine 2 EMI5.2 5A" à partir de 2'déoxyadénosine triphosphate (DOETSCH et coll., 1981). La cordycépine a été considérée comme inhibant la synthèse des protéines en système acellulalre et le composé déphosphorylé correspondant ("core" ou "noyau") a été considéré comme bloquant la transformation blastique de lymphocytes humains. Ces résultats ont cependant été infirmés (CHAPEXAR M. S. et colt., 1983, Biochem. Res. Comm., 115, 137-143) et il semble que les effets cbservés aient été provoqués essentiellement par l'accumulation de produits toxiques de dégradation de la cordycépine. On peut également citer, parmi les recherches effectuées, la synthèse chimique d'un analogue du noyau des oligoadénylates 2' EMI5.3 5', en série xylcse (IM3ACH J. L. et coll., 1981, Tetrahedron Letters, VOl. 22, n 47, p. 4 699-4 702) , dénommé "xylo 2'--5'A". Cet analogue s'est révélé présenter une stabilité plus importante vis-à-vis des phosphodiestérases que le noyau des oligoadénylates 2'-5' non modifiés, une activité intéressante vis-à-vis de virus à ADN, tel que l'Herpès, mais pas vis-à-vis de virus à ARN, (EPPSTEIN D., et coll., 1983, Nature, 302, 723-724. On peut aussi mentionner la synthèse chimique et la modification à son extrémité 2' terminale d'un oligoadénylate 2'-5'A en un composé appelé "tailed 2'-5'A" dans lequel une chaîne d'hexylamine a été associée à un noyau morpholine, lui-meme condensé par un groupe phosphate sur le groupOH en 2' du ribose terminal. Ce dérivé est très stable vis-à-vis des phosphodiestérases et active l'endoribonucléase L en système acellulaire (1MAI J. et coll., 1982, J. Biol Chem., 257, 12 739-12 741), mais scn activité antivirale n'a pas été établie. Parmi ces recherches, on peut également mentionner la synthèse chimique de dérivés modifiés d'oligoadénylates 2'-5' tels que les dérivés du 2'-5'A triphosphatés (représenté par la formule pppA2'p5'A2'p5A) dans lesquels les atomes de phosphore en bêta et gamma du groupe triphosphate en 5' sont séparés par un groupe mé thylène. Une autre modification pour obtenir des oligoadénylates-2'-5'A modifiés concerne le remplacement d'un groupe hydroxyle en 3' par un groupe OCH3, soit dans l'adénosine terminal, soit dans tous les adénosines (J. A. J. DEN HARTOG et coll., 1981, J. Org. Chem., 46, 2 242-2 251). Mais il s'est révélé que ces deux derniers groupes de composés étaient faiblement actifs, voire inactifs et ne présentaient pas une stabilité mtaboli- que satisfaisante (cf. la référence mentionnée ci-dessus et BAGLIONI et coll., 1981, J. Biol. Chem., 256, 2 3532 357). D'autres ana loges, tels que des 5'S-methylthio- phosphorothioates ont été synt:étisés. Certains de ces analogues se sont révélés stables. Mais a priori, les differences apparentes des propriétés de ces analogues ne semblent pas permettre d'envisager leur utilisation sur des cellules humaines à des fins thérapeutiques (HAUGH M. C., CAYLEY P. J et coll., 1983, Europ. J. Biochem., 132; 77-84). Des recherches ont également porté sur l'incidence de la modification du ou des groupes phosphate portés par le carbone en 5' des oligoadénylates 2'-5' vis-à-vis de l'activité antimitogénique (cf. TORRENCE et colt, 1983, J. Medicinal Chemistry 26, n4 12,1674-1678). Les composés préparés dans le cadre de ces recherches se sont révélés présenter une activité antimitogénique, mais on a trouvé que certains d'entre eux n'activent pas l'endoribonucléase L dans un système cellulaire in vitro, ce qui empêche d'établir une corrélation entre l'activité antimitogénique et l'action antivirale. D'autres oligonucléotides analogues des (2'-5')(A) ont été synthétisés par voie enzymatique en remplaçant l'adénosine, notamment par la 8-azaadénosine, la toyocamycine, la sangivamycine, la formycine la 8-bromoadénosine, la tubercidine et la guanosine. Il s'est révélé que la plupart de ces composés étaient dégradés dans des extraits cellulaires. Seuls des tests d'inhibition de la synthèse des protéines et de la prolifération cellulaire ont été effectués dans des cellules intactes, mais l'activité antivirale n'a pas été établie (B. G. HUGUES et R. K. RCBINS, 1983, Biochemistry, 22, n 9, 2 127-2135). On a également proposé des oligonucléotides (2'-5')(A)n modifiés à leurs extrémités 3' et/ou 5' présentant une augmentation très forte de la stabilité par rapport aux oligonucléotides non modifiés, vis-à-vis des phosphatases et des phosphodiestérases, sans modifier les propriétés de reconnaissance de l'endoribonucléase L. Ces oligonucléotides (2'-5')(A) n modifiés en 3' et/ou 5' stabilisés inhibent la synthèse protéique et exercent une activité antivirale efficace lorsqu'ils sont introduits dans les cellules par microinjection à l'aide de micropipettes (B. BAYARD et coll., 1984, Eur. J. Biochem. 142, p; 291 à 298 ; B. BAYARD et colt, 1985, Nucleosidy and nucleotides, vol. 4 (112), p. 157 à 160). Mais le problème qui se pose à ce jour est l'in- troduction des oligonucléotides 2'-5' dans les cellules, qui n'a pas encore trouvé de solutions satisfaisantes. On a utilisé, dans ce but, les dérivés déphosphorylés, des oligonucléotides 2'-5' ci-dessous désignés par "core" 2-5A. Ces composés se sont effectivement révélés avoir une certaine activité biologique anti-herpès et antimitogène, mais une étude approfondie de leur mode d'action pour certains cas a montré que leur activité biologique pourrait résulter de la dégradation de ces composés en produits toxiques, ce qui les rend inutilisables dans le traitement thérapeutique des affections virales. On a également proposé des modifications chimiques des (2'-5')(A)n, visant à augmenter l'hydrophobici- té ou à diminuer le caractère polaire, tout en maintenant les groupes phosphate à l'extrémité 5'. On peut par exemple citer la synthèse de dérivés couples à leur extrémité 3' à une chaîne d'hexylamine par un noyau N-morpholine (1MAI J. et coîl. 1982, J. Biol. Chem. 257, 12 739-12 741j ou la synthèse de dérivés de structure générale A5tppX5'AX'(p5'A)n (IMhI J. et TORRENCE P., 19a4, Biochemistry, 23, 766-774). Mais l'ensemble des composés proposés à ce jour sont soit biologiquenent inactifs, soit incapables de traverser efficacement la membrane plasmique et il n'est par conséquent pas possible d'envisager leur utilisation dans le traitement thérapeutique des affections virales. La Société Demanderesse a trouvé de nouveaux composés de couplage1 dont une partie de la structure moléculaire correspond à celle d'oligonucléotides, no-- tamment oligoadénylates 2'-5'A non modifiés ou leurs analogues ou des oligonucléotides modifiés, et une autre partie de la structure moléculaire correspond à celle d'un vecteur approprié susceptible d'être internalisé par les cellules, c'est-à-dire de traverser la membrane des cellules, lesquels composés présentent une activité antivirale semblable à celle de l'interféron, sont résistants vis-à-vis de la dégradation par la 2'-phosphodiestérase et par les phosphates, et peuvent traverser efficacement la membrane des cellules, permettant ainsi d'envisager leur utilisation dans le traitement des affections virales. Ces nouveaux composés de couplage sont obtenus notamment par couplage entre un oligonucléotide et un vecteur approprié. La Société Demanderesse a en effet trouvé que le couplage entre un oligonucléotide et un vecteur approprié, notamment un enchaînement polypeptidique approprié conduit à l'obtention d'un composé de couplage, qui malgré la modification de charge de l'enchaînement polypeptidique dû à la présence de la partie oligonucléotidique, peut néanmoins traverser la membrane des cellules et relarguer à l'intérieur de la cellule l'oligonucléo- tide, sans que l'activité biologique dudit oligonucléotide ne soit modifiée, ni par la présence du vecteur se trouvant également à l'intérieur de la cellule, ni par le fait que le susdit oligonucléotide a été modifié en vue du couplage. La Société Demanderesse a également trouvé que le couplage entre un oligonucléotide et un vecteur approprié, notamment un enchaînement polypeptidique approprié dont la structure permet de reconnaître des récepteurs spécifiques de certaines cellules, conduit à l'obtention d'un composé de couplage dont la reconnaissance spécifique de certaines cellules par l'enchainement polypeptidique n'a pas été affecté, lequel composé de couplage est doue de la propriété de traverser lesdites cellules et de relarguer à l'intérieur de la cellule le susdit oligonucléotide, sans que l'activité biologique dudit oligonucléotide ne soit modifiée, ni par la présence du vecteur se trouvant également à l'intérieur de la cellule, ni par le fait que le susdit oligonucleotide a été modifié en vue du couplage. L'un des aspects de l'invention est de proposer de nouveaux composés de couplage, mettant en jeu des oligonucléotides, qui peuvent etre reconnus par l'endoribonucléase L, c'est-à-dire qui peuvent former avec l'endoribonucléase L un complexe actif. Un autre aspect de l'invention est de proposer de nouveaux composés de couplage mettant en jeu des oligonucléotides, qui ont une résistance accrue vis-àvis de la dégradation par les phosphodiestérases. Un autre aspect de l'invention est de fournir de nouveaux composés de couplage, mettant en oeuvre des oligonucléotides, et qui sont susceptibles d'inhiber la synthèse des protéines cellulaires ou virales dans les cellules intactes. Un autre aspect de l'invention est de fournir de nouveaux composés de couplage biologiquement actifs, qui présentent notamment une activité antivirale efficace. Un autre aspect de l'invention est de fournir de nouveaux composés de couplage, mettant en jeu des oligonucléotides et qui sont susceptibles d'être internalisés par les cellules, c'est-à-dire de traverser efficacement la membrane plasmique des cellules, tout en gardant leur activité biologique Un autre aspect de l'invention est de fournir de nouveaux composés de couplage susceptibles ae réagir spécifiquement avec des récepteurs particuliers de la surface membrane de la cellule, d'être internalisés par les cellules possédant lesdits récepteurs et d'exercer, à l'intérieur de ces cellules, leur activité biologique. Un autre aspect de l'invention est de fournir de nouveaux composés de couplage biologiquement actifs, qui présentent notamment une activité antivirale efficace et qui peuvent être ciblés, c'est-à-dire dirigés spécifiquement sur les cellules vis-à-vis desquelles il est souhaitable que l'activité des composés de couplage s'exerce. Ces différents aspects sont obtenus par de nouveaux composés de couplage - dont une partie de la structure moléculaire correspond à celle d'un oligonucléotide, non modifié ou modifié, comprenant une chaine de n unités nucléosidiques identiques ou différentes, n étant égal ou supérieur à 3, ces unités nucléosidiques étant reliées par des liaisons 2'-5' qui comprennent un groupe phosphate, et dans lesquels la première unité nucléosidique de la susdite chaine peut être reliée par l'intermédiaire de son carbone en 5' à un nombre variable de groupes phosphate, l'un au moins des atomes d'oxygène des groupes phosphate, lequel atome d'oxygène relié uniquement au phosphore des groupes phosphate et n'intervenant pas dans la liaison entre deux groupes phosphate, peut être remplacé par un atome de soufre, de sélénium ou un groupe NH ; et/ou l'une au moins des liaisons entre deux groupes phosphate adjacents peut comporter un groupe NH ou un atome de soufre et/ou la liaison 2'-5' phosphonate qui relie deux unités nucléosidiques adjacentes est telle que l'oxygène, relié uniquement au phosphore et lequel atome d'oxygène n'entre pas dans la liaison directe entre les deux unités nucléosidiques adjacentes est remplacé par un atome de soufre, de sélénium ou un groupe NH ou bien est telle que l'oxygène qui relie le phosphore à l'extrémité 5' de l'une des unités nucléosidiques est remplacé par un atome de soufre ou un groupe NH - et dont une autre partie de la structure moléculaire correspond à celle d'un enchainement peptidique qui comporte au moins une séquence latérale dont l'extrémité est constituée par un groupe aminé, notamment NH2. Une unité nucléosidique désigne un composé constitué par un pentose lié à une base purique ou pyrimidi .que, dans laquelle le pentose peut être sous la forme pyrane ou furane. Dans la suite de la description, les formules représenteront les pentoses généralement sous la forme furane. Les composés de couplage selon l'invention ont leurs unités nucléosidiques avantageusement constituées par des adénosines1 l'adénosine désigne le composé constitué par du ribose lié à de l'adénine et peut etre représenté par la formule EMI12.1 dans laquelle le ribose est sous la forme furane1 mais peut etre également sous la forme pyrane et dans laquelle A représente l'adénine. Dans le cadre de l'invention, l'adénine désigne la molécule représentée par la formule suivante EMI13.1 Les composés de couplage selon l'invention peuvent avoir leurs unités nucléosidiques qui sont constituées par des dérivés d'adénosines, les dérivés d'adénosine désignant le composé constitué par du ribose, lié à un dérivé de l'adénine. Parmi ces dérivés de l'adénine, on peut citer ceux de formule suivante EMI13.2 Les dérivés d'adénosine correspondants seront respectivement désignés par 8-azaadénosine, sangivamy cirer toyocamycine, formycine, tubercidine, 8-bromoadénosine. Le nombre d'unités nucléosidiques entrant dans la constitution des composés de couplage selon l'in- vention est égal ou supérieur à 3, ceci pouvant être expliqué par le fait qu'on a constaté la nécessité d'une certaine distance entre l'endoribonucléase L et le vecteur sus-défini sur lequel est fixé l'oligonucléotide, afin que l'affinité de l'oligonucléotide vis-à-vis de l'endoribonucléase L ne soit pas modifiée. Le nombre d'unités nucléosidiques entrant dans la constitution des composés de couplage de l'invention n'est pas limité dans les valeurs supérieures, sous réserve que les composés de couplage obtenus puissent être associés à un véhicule physiologiquement acceptable. Le nombre d'unités nucléosidiques peut rapidement être limité dans la mesure où l'augmentation de ce nombre et la synthèse correspondante plus difficiles ne seraient pas supportées par une augmentation suffisante de l'activité. Le nombre d'unités nucléosidiques devrait être choisi de façon à ce que le poids moléculaire de loli- gonucléotide entrant dans la constitution du composé de couplage selon l'invention soit de préférence compris de t 500 à 5 000 daltons. Dans une classe préférée de composés de couplage selon l'invention, la valeur de n n'est pas supérieure à 10, et va notamment jusqu'à 7 ou 8. Les composés de couplage selon l'invention dans lesquels la valeur de n est 3, 4 ou 5 sont particulièrement préférés. Dans une classe préférée d'oligonucléotides selon I'invention, la première unité nucléosid que est liée à un ou plusieurs groupes phosphate. De préférence, le nombre de ces groupes phosphate est de 2 ou 3. Dans une classe préférée de composés de couplage de l'invention, la première unité nucléosidique est liée aux groupes phosphate suivants EMI14.1 EMI15.1 dans lesquelles R', R", R"' représentent, indépendamment les uns des autres - un atome d'hydrogène, - un radical alcoyle ayant de 1 à 4 atomes de carbone, en particulier un méthyle, - un radical éthyle substitué en bêta par un groupe cyano, aryle ou arylsulfonyle, - un radical trihalogénoéthyle. Dans une classe préférée de composés de couplage selon l'invention, la liaison 2' ,5' 5' reliant deux unités nucléosidiques et comprenant au moins un atome de phosphore est une liaison phosphodiester, une liaison phosphotriester, une liaison alcoylphosphonate. La liaison 2' EMI15.2 5' phosphodiester qui relie deux unités nucléosidiques adjacents dans les composés de couplage selon l'invention peut être représentée com me suit : EMI15.3 La liaison 2' EMI15.4 5' phosphotriester qui relie deux unités nucléosidiques adjacents dans les composés de couplage de l'invention peut être représentée comme suit EMI15.5 dans laquelle R1 représente un radical alcoyle ayant de 1 à 4 atomes de carbone - un radical alcoyle ayant de 1 à 4 atomes de carbone, en particulier un méthyle, - un radical éthyle substitué en bêta par un groupe cyan, aryle ou arylsulfonyle, - un radical trihalogénoéthyle. La liaison 2' EMI16.1 5' phosphonate qui relie deux unités nucléosidiques adjacentes dans les composés de couplage selon l'invention peut être représentée comme suit EMI16.2 dans laquelle R2 peut représenter un alcoyle ayant de 1 à 4 atomes de cardon, en particulier le méthyle. Par oligonucléotide modifié, on désigne une chaîne de n unités nucléosidiques dans lesquelles - soit l'un au moins des atomes d'oxygène des groupes phosphate reliés à la première unité nucléosi disque, lequel atome d'oxygène est relié uniquement au phosphore des groupes phosphate et n'intervient pas dans la liaison entre deux groupes phosphate1 est remplacé par un atome de soufrer de sélénium ou un groupe NH - soit l'une au moins des liaisons entre deux groupes phosphate adjacents comporte un groupe NH ou un atome de soufre ; ; - soit l'une au moins des liaisons phosphonate entre deux nucléosides adjacents comporte à la place de l'oxygène qui est relié uniquement au phosphore un atome de S, Se ou un groupe Na - soit ltune au moins des liaisons phosphonate qui relient deux nucléosides adjacents comporte, à la place de l'oxygène qui lie le phosphore à l'extrémité 5' de l'une des unités nucléosidiques, un atome de soufre ou un groupe NH. Par oligonucléotide non modifié, on désigne une chaîne de n unités nucléosidiques dans lesquelles aucun des atomes d'oxygène des groupes phosphate n'est remplacé par un autre atome. L'enchaînement polypeptidique selon l'invention comporte au moins une séquence latérale dont l'extrémité est constituée par un groupe aminé, notamment NH2 qui est accessible, c'est-à-dire capable de réagir avec un groupe fonctionnel, notamment une fonction aldéhyde des oligonucléotides avec lesquels on souhaite effectuer le couplage entre le susdit oligonucléotide et l'enchaine- ment polypeptidique. L'enchaînement polypeptidique entrant dans la constitution des composés de couplage selon l'invention doit être non toxique vis-à-vis des cellules dans lesquelles les composés de couplage sont introduits. On désigne par groupe aminé, notamment NH2, d'une séquence latérale, le groupe aminé, notamment NH2, d'un polypeptide qui n'entre pas dans les liaisons EMI17.1 peptidiques. De façon avantageuse, la séquence latérale dont l'extrémité est constituée par un groupe NH2 appartient au résidu lysyle. L'enchainement polypeptidique peut également avantageusement comporter des résidus arginyle, étant donné qu'il présente une séquence latérale terminée par un groupe NH2. L'enchaînement polypeptidique entrant dans la constitution des composés de couplage selon l'invention comporte avantageusement une charge globale positive pour pouvoir induire par effet de charge la pénétration dans les cellules des oligonucléotides sus-définis. L'enchaînement polypeptidique entrant dans la constitution des composés de couplage selon l'invention comporte avantageusement des molécules susceptibles d'être reconnues spécifiquement par des récepteurs de la membrane cellulaire et induire la pénétration dans les cellules des oligonucléotides sus-définis. L'enchaînement polypeptidique entrant dans la constitution des composés de couplage selon l'invention comporte avantageusement au moins 5 acides aminés1 de préférence au moins 6 acides aminés. Dans le cas de polypeptides synthétiques r on a avantageusement recours à des polypeptides de 5 à environ 100 acides aminés. L'enchaînement polypeptidique doit avoir un poids moléculaire suffisant notamment pour être reconnu par les récepteurs spécifiques de la surface membranaire des cellules. L'enchainement polypeptidique entrant dans la constitution des composés de couplage selon l'invention a avantageusement un poids moléculaire moyen au moins d'environ 1 000. L'enchaînement polypeptidique entrant dans la constitution des composés de couplage selon l'invention est avantageusement constitué par la polyarginine, et de préférence par la polylysine. La polylysine entrant dans les composés de couplage de l'invention comporte avantageusement 5 à environ 100 résidus lysyle La polylysine entrant dans les composés de couplage selon l'invention a avantageusement un poids moléculaire moyen d'environ 14 000. Les composés de couplage de l'invention sont tels qu'il y ait au moins une molécule d'oligonucléotides fixée sur le blême enchaînement polypeptidique, par l'intermédiaire de deux séquences latérales terminées par un groupe aminé, notamment NH2, appartenant à l'enchaînement peptidique. De façon avantageuse, le nombre de molécules d'oligonucléotides par rapport à une molécule d'enchaînement polypeptidique est au moins égal à 2, sans limite supérieure théorique. En pratique, le nombre de molécules d'oligonucléotides couplées à une molécule polypeptidique est limité par le nombre de NH2 disponibles sur l'enchaînement polypeptidique, c'est-à-dire par le nombre de séquences latérales terminées par des groupes aminés, notamment NH2, ainsi que par le rendement de la réaction de couplage, lequel peut être modulé entre autres par les quantités respectives d'oligonucléotide et de polypeptide mises en oeuvre. De façon avantageuse, les composés de couplage selon l'invention comportent 2 à environ 10 molécules d'oligonucléotides par molécule de polypeptide. L'invention a également pour objet de nouveaux composés de couplage, dans lesquels une partie de la structure moléculaire correspond aux oligonucléotides ci-dessus définis et dans lesquels l'autre partie de la structure moléculaire est constituée par un enchaînement polypeptidique dans lequel des groupes NH2 ont été fixés sur les groupes carboxyliues. Les groupes carboxyliques d'un polypeptide sur lesquels on fixe un groupe NH2 sont - le groupe carboxylique terminal libre qui figure dans tout polypeptide - et/ou les groupes carboxyliques libres des résidus glutamyle et aspartyle. On fixe par exémple le groupe -NH2 sur un groupe -COOH, par l'intermédiaire de l'hydrazine NH2N'R2, ce qui transforme EMI20.1 Dans le cas où le groupe COOH sur lequel on a fixé le groupe NH2 appartient à un résidu aspartyle, celui-ci devient un aspartate hydrazide Dans le cas où le groupe COOH sur lequel on a fixé le groupe NH2 appartient à un résidu glutamyle, celui-ci devient un glutamate hydrazide. On appellera "polypeptide hydrazide' le polypeptide dans lequel l'un au moins des groupes COOH a été transformé en EMI20.2 comme indiqué ci-dessus. La présence de ces groupes NE2 libres permet d'effectuer le couplage entre les oiigonuclotides susdéfinis et le polypeptide hydrazide. L'invention vise également les composés de couplage dans lesquels une partie de la structure moléculaire correspond aux oligonucléotides sus-définis, et l'autre partie de la structure moléculaire correspond à un polypeptide qui comporte des séquences latérales terminées par un groupe ¯NEz et des groupes carboxyliques qui ont été transformés en EMI20.3 De tels polypeptides sont par exemple constitues par des asialoglycoprotéires, telles que l'asialofétui- ne. L'invention vise également les composés de couplage dans lesquels une partie de la structure mol écu- laire correspond aux oligonucléotides sus-définis et l'autre partie de la structure moléculaire correspond à une néoglycoprotéine, par exemple une néoglycoprotéine à mannose, telle que le mannose-polylysine qui est constitué par de la polylysine, sur laquelle a été fixée au moins une molécule de mannose. L'invention concerne plus généralement les composés de couplage dans lesquels une partie de la structure moléculaire correspond aux oligonucléotides susdéfinis, et l'autre partie de la structure moléculaire correspond à un vecteur polypeptidique approprié, tel que des anticorps vis-à-vis d'antigènes, de la surface cellulaire des hormones, des glycoprotéines, des chaîne; B de toxines animales ou végétales, lequel vecteur peut être couple aux oligonucléotides par l'intermédiaire du -NH2 libre des séquences latérales du polypeptide ou bien par l'intermédiaire du -NH2 des groupes EMI21.1 provenant de la réaction avec l'hydrazine du groupe carboxyle terminal du polypeptide ou des groupes carboxyle appartenant aux résidus aspartyle et ou glutamyle. Les composés de couplage selon l'invention peuvent être représentés par la formule (I) définie cidessous EMI21.2 dans laquelle Y Y et T, identiques ou différents, représentent indépendamment l'un de l'autre 0, S, Se ou NH - Z et W, identiques ou différents, représentent indépendamment l'un de l'autre 0, S ou NH - A représente l'adénine out'un de ses dérivés comme défini ci-dessus - r est un nombre entier égal à n - 1, n étant un nombre entier supérieur ou égal à 3 - m est un nombre entier égal à O et de préférence supérieur ou égal à 2 - X est un nombre entier supérieur ou égal à 1, de préférence compris de 2 à 10 - P est un enchaînement polypeptidique comportant au moins 5 acides aminés, et l'atome d'azote appartenant au cycle EMI22.1 appartenant également à l'extrémité d'une séquence latérale du polypeptide P et/ou appartenant a un groupe EMI22.2 provenant d'un groupe COOH modifié par l'hydrazine. Un groupe préféré de composés de couplage selon l'invention est constitué par ceux de fornule ( EMI23.1 dans laquelle - Y et T, identiques ou différents, représentent indépendamment l'un de l'autre O, S, Se ou NH - Z et W, identiques ou différents, représentent indépendamment l'un de l'autre 0, S ou NH - A représente l'adénine ou l'un de ses dérivés comme défini ci-dessus - r est un nombre entier égal à n - 1, n étant un nombre entier supérieur ou égal à 3 - m est un nombre entier égal à O et de préférence supérieur ou égal à 2 - X est un nombre entier supérieur ou égal à 1, de préférence compris de 2 à 10 - P est un enchaînement polypeptidique comportant au moins 5 acides aminés, et l'atome d'azote appartenant au cycle EMI23.2 appartenant également à l'extrémité d'une séquence latérale du polypeptide P. Un autre groupe préféré de composés selon l'invention est constitué par ceux de formule ( EMI24.1 dans laquelle Y, Z, T, W, #, X ont les significations ci-dessus définies, P' représente un enchaînement polypeptidique comportant au moins 5 acides aminés, et dans lequel le groupe EMI24.2 représenté sur la figure provient du groupe EMI24.3 terminal du polypeptide et/ou d'un groupe EMI24.4 libre d'un résidu aspartyle et/ou glutamyle. Un groupe préféré de composés de couplage selon l'invention est constitué par ceux de formule CIII > (III) sui- vante EMI25.1 dans laquelle - Y et T identiques ou différents, représentent indépendamment l'un de l'autre O, S, Se ou NH - Z et W, identiques ou différents, représentent indépendamment l'un de l'autre 0, S ou NH - A représente I'adénine ou l'un de ses dérivés comme définis ci-dessus - E est un nombre entier égal à n - 1, n étant un nombre entier supérieur ou égal à 3 - X est un nombre entier égal ou supérieur à 1, de préférence compris de 2 à 10 - m est un nombre entier égal à O et de préférence supérieur ou égal à 2 - P est un enchaînement polypeptidique comportant au moins 5 acides aminés et dans laquelle le groupe -(CH2)4- représenté dans la formule appartient à la séquence latérale d'un résidu lysyle entrant dans la constitution de l'enchaînement polypeptidique P. Un autre groupe préféré de composés de couplage selon l'invention est constitué par ceux de formule (I), dans laquelle Y, T, Z, W, A, T, n, X, m ont les significations ci-dessus indiquées, P est un enchaînement pep tidique comportant au moins 5 acides aminés et l'atome d'azote appartenant au cycle EMI26.1 appartient également à l'extrémité de la séquence latérale d'un résidu d'arginyle. Un tel groupe de composés peut être représente par la formule (IV) suivante : EMI26.2 Un groupe préféré de composés de couplage selon l'invention est constitué par ceux de formule suivante (vu : EMI27.1 dans laquelle - A représente l'adénine ou l'un de ses dérivés comme défini ci-dessus - r est un nombre entier égal à n - 1, n étant un nombre entier supérieur ou égal à 3 - m est un nombre entier égal à O et de préférence supérieur à 2 - X est un nombre entier égal à 1 , d préférence compris de 2 à 10 - P est un enchanement peptidique cnortant au moins 5 acides amines et dans laquelle le groupe -(CH2)4- représenté dans la formule appartient à la séquence latérale d'un résidu lysyle entrant dans la constitution de l'en- chainement polypeptidique P. Un groupe préféré de composés de couplage selon l'invention est constitué par ceux de formule suivante EMI28.1 dans laquelle : - Y et T, identiques ou différents, représentent indépendamment l'un de l'autre O, St Se ou NH - Z et W, identiques ou différents, représentent indépendamment l'un de l'autre 0, S ou NH - A représente l'adénine ou Irun de ses dérivés comme définis ci-dessus - E est un nombre entier égal à n - 1, n etant un nombre entier supérieur ou égal à 3 - m est un nombre entier égal à O et de préférence supérieur ou égal à 2 - X est un nombre entier égal à t, de préférence compris de 2 à 10 - P est un enchaînement peptidique comportant au moins 5 acides aminés et dans lequel le groupe (CH2)4- représenté dans la formule appartient à la séquence latérale d'un résidu lysyle entrant dans la constitution de l'enchainement polypeptidique P sous réserve que l'un au moins des éléments Y ou Z est différent de l'oxygène. Une classe préférée de composés de couplage selon l'invention est constituée par ceux répondant à la formule (I), (11), (III), (IV) ou (V) ci-dessus définies dans lesquelles A est choisi parmi l'adénine ou ses dérivés, notamment ceux de formule EMI29.1 Dans une classe préférée de composés de couplage selon l'invention, le nombre m varie de 1 à 3. Parmi les groupes reliés à la première unité nucléosidique, et de formule EMI29.2 l'un au moins est tel que Y représente Se, S ou NH et/ou Z représente S ou NH, et les autres groupes EMI29.3 représentant des groupes phosphate. Dans une classe préférée d'oligonucléotides selon l'invention, Y représente S, et Z représente 0. Une classe préférée de composés de couplage selon l'invention est constituée par ceux de formule (VI) suivante EMI30.1 dans laquelle - Y1, Y2, , T sont identiques ou différents et représentent 0, S, Se, NH ¯ Z1 et Z2 sont identiques ou différents et représentent O, S, NH l'un au moins des éléments Y1, Y2, Y3, Z11 Z2 étant différent de l'oxygène - E représente un nombre entier égal à n - 1, n étant un nombre entier égal au supérieur à 3 - X est un nombre entier égal à 1, ou de préférence compris de 2 à 10 ; ; - A est une base choisie parmi l'adénine ou ses dérivés, notamment ceux de formule EMI31.1 - P est un enchaînement peptidique comportant au moins 5 acides aminés et dans lequel le groupe -(CH2)4- représenté dans la formule appartient à la séquence latérale d'un résidu lysyle dans la constitution de l'enchaînement polypeptidique. Le phosphore du groupe EMI31.2 sera appelé phosphore alpha. Le phosphore du groupe EMI31.3 sera appelé phosphore bêta. Le phosphore du groupe EMI31.4 sera appelé phosphore gamma. A l'intérieur de la classe de composés de couplage de formule (VI), une classe préférée de composés de couplage selon l'invention est constituée par les composés de couplage de formule (VII) EMI32.1 dans laquelle - Y1 représente S, Se ou NH - Z1 représente 0, NH ou S - r, X, A et P ayant les significations indiquées ci-dessus. Une autre classe préférée de composés de couplage selon l'invention est constituée par ceux de formule (VIII) suivante EMI32.2 dans laquelle - Y3 représente S, Se ou NH - E, X, A et P ont les significations indiquées cidessus. Une autre classe de composés de couplage préférés selon l'invention est constituée par ceux de formule (IX) suivante EMI33.1 dans laquelle - Y1 représente Se, S ou NH - E, X, A et P ont les significations indiquées ci dessus - Une autre classe préférée de composés de couplage selon l'invention est constituée par ceux de formule (X) suivante EMI34.1 dans laquelle - Z1 représente S ou NH - E, X, A et P ont les significations ci-dessus indi quées. Une autre classe préférée de composés de couplage selon l'invention est constituée par ceux de formule (XI) suivante EMI35.1 dans laquelle - Y2, Y3 et T sont identiques ou différents et représentent 0, S, Se, NH - Z2 représente 0, S, NH l'un au moins des éléments Y2, Y3, Z2 étant différent de l'oxygène - E est un nombre entier égal à n - 1, n étant un nombre entier variant de 3 à 10 - X est un nombre entier égal à 1 ou de préférence compris de 2 à 10 - A est une base choisie parmi l'adénine ou ses dérivés notamment ceux de formule EMI35.2 A l t intérieur de cette classe de composés de couplage, une classe préférée est constituée par ceux dans lesquels T représente l'oxygène. Une autre classe préférée de composés de couplage selon l'invention est constituée par ceux de formule (XII) suivante EMI36.1 dans laquelle - Y3 représente S, Se, NH - T représente 0, S, Se, NH ; - E est un nombre entier égal à n - 1, n variant/3 à 10 - X est un nombre entier égal à 1 ou de préférence compris de 2 à 10 - A est une base choisie parmi l'adénine ou ses dérivés, notamment ceux de formule EMI36.2 A l'intérieur de cette classe de composés de couplage, une classe préférée est constituée par ceux dans lesquels T représente I 'oxygène. Des composés de couplage particulièrement préférés selon l'invention ont pour formule : EMI37.1 EMI38.1 EMI39.1 L'invention concerne également les sels qui peuvent être obtenus par réaction des susdits oligonucléotides avec les bases appropriées, en particulier les sels d'ammoniums quaternaire, tels que le sel de triéthylammonium, et les sels minéraux, tels que le sel de sodium. L'invention concerne également un procédé de préparation des composés de couplage. Pour preparer les composés de couplage selon l'invention, on peut avoir recours au procédé décrit ci-après. Ce procédé comprend - l'oxydation du composé de départ de formule (Ibis) suivante EMI40.1 dans laquelle Y, Z, T, W, A, n, E ont les significations indiquées ci-dessus pour introduire deux fonctions aldéhyde sur les carbones en 2' et 3' de la dernière unité nucléosidique et obtenir le composé de formule (Iter) suivante EMI41.1 - l'alcoylation réductive du composé de formule (Iter) par un polypeptide P-NH2 dont l'enchaînement comprend au moins une séquence latérale dont l'extrémité est un groupe NH2, cette réaction ayant lieu entre les fonctions aldéhyde du composé (Iter) avec le groupe NH2 du polypeptide pour obtenir le composé de formule (I) EMI41.2 - le fractionnement entre les composés de couplage selon l'invention et les produits non couplés, notamment par filtration moléculaire. L'oxydation se fait notamment par le périodate, notamment périodate de sodium, dans des conditions de pH rigoureusement contrôlées pour éviter une bêta élimination. L'expression "conditions de pH rigoureusement con trôlées" signifie le maintien du milieu réactionnel à pH 4,0, à 0-4 C et dans l'obscurité. L'alcoylation réductive du composé de formule (Iter) se fait par des méthodes classiques telles que celles décrites dans Khym J. C., Biochemistry, 1963, 2, 344-350 ; Gray C., Arch. Biochem. Biophys., 1974, 163, 426-428 ; Lee R. T. et tee Y. C., Methods in Enzymol., 1982, 83, 289-295 ; Imai J., Johnson M. r Torrence P., J. Biol. Chem., 1982, 21, 12 739-12 741. On peut utiliser notamment le borohydrure de so- dium, ou de préférence le cyanoborohydru.e de sodium, pour effectuer l'alcoylation réductive du composé (Iter). Le nombre de molécules d'oligonucléotides dépend des quantités respectives du composés (Iter) par rapport à la quantité du polypeptide. En ce qui concerne la synthèse chimique des composés de formule (Ibis}, on peut avoir recours soit à une synthèse chimique totale, soit à une synthèse enzymatique suivie de modifications chimiques. En ce qui concerne la synthèse chimique, on peut se reporter au protocole décrit dans Methods of Enzymology, 79, 1981, 233-234 En ce qui concerne la synthèse enzymatique des composés de formule (Ibis), elle comprend - la polymérisation du composé de formule (quater) suivante EMI43.1 dans laquelle : : - Y représente 0, S, Se ou NH - Z représente 0, S ou NH l'un au moins des éléments Y et Z pouvant être différent de l'oxygène - m est supérieur ou égal à 3 - A a les significations indiquées ci-dessus pour obtenir un composé de formule suivante (Ibis) EMI43.2 dans laquelle - Y et T, identiques ou différents, représentent G, S, Se, NH - Z et W, identiques ou différents, représentent 0, S, NH l'un au moins des éléments Y et Z pouvant être différent de l'oxygène - E est un nombre entier égal à n - 1, n étant supérieur ou égal à 3 - m est un nombre entier supérieur ou égal à 1 - A a les significations indiquées ci-dessus. C'est ainsi que pour-obtenir l'oligonucléotide de formule suivante (XVI) EMI44.1 dans laquelle - Y et T, identiques ou différents, représentent 0, S, Se, NH - Z et W, identiques ou différents, représentent 0, S, NH - Y et Z ne représentent pas simultanément l'oxygène - E est un nombre entier variant de 2 à 9 - A est une base choisie parmi l'adénine ou ses dérivés, notamment ceux de formule EMI44.2 on effectue les étapes suivantes 1 la polymérisation d'un composé de formule suivante (XVIbis) EMI45.1 dans laquelle - Y représente 0, S, Se ou NH - Z représente 0, S ou NH - Y et Z ne représentent pas simultanément l'oxygène - A a les significations indiquées ci-dessus. Parmi les composés de formule sont disponibles dans le commerce, ceux de formule suivante (XVIbis) EMI45.2 dans lesquels Y représente le soufre et Z représente l'oxygène, ainsi que ceux dans lesquels Y représente l'oxygene et Z représente le groupe NH, A représentant l'adénine ou un de ses dérivés comme définis ci-dessus. Un procédé d'obtention des oligonucléotides de formule suivante (XVII) EMI46.1 dans laquelle - Y1 représente NH, Se, S - r est un nombre entier égal à n - t, n variant de 3 à 10 comprend la polymérisation du composé de formule suivante (XVIIbis) EMI46.2 Un procédé d'obtention des oligonucléotides de formule suivante CXVIII) EMI47.1 dans laquelle - E a les significations précédemment indiquées - A a la signification précédemment indiquée, et de préférence représente l'adénine comprend la polymérisation d'un composé de formule suivante (XVIIIbis) EMI47.2 Un procédé d'obtention des oligonucléotides de formule suivante (XIX) : : EMI48.1 dans laquelle - Z1 représente NH ou S - F est un nombre entier égal à n - 1, n variant de 3 à 10 comprend la polymérisation du composé de formule suivante (XIXbis) EMI48.2 dans laquelle Z1 représente S ou NH et A a la signification indiquée ci-dessus. Un procédé d'obtention d'oligonucléotides de formule suivante (XX) EMI49.1 dans laquelle - Y3 représente NH, S ou Se - E et A ont les significations indiquées ci-dessus comprend la polymérisation du composé de formule suivante (XXbis) EMI49.2 dans laquelle - Y3 représente S, Se, NH - A a les significations indiquées ci-dessus EXEMPLE 1 Cet exemple concerne la préparation d'oligonucléotides (2'-5')(A) synthétisés par voie enzymatique et modifiés chimiquement, que l'on désigne ci-après par yS-(2'-5')An et qui peut être représenté par la formule suivante EMI50.1 dans laquelle E est un nombre entier égal ou supérieur à 2 Le produit de départ est l'adénosine 5'-0-(3thiotriphosphate) (ci-après nommé &gamma;S ATP) de formule EMI50.2 que l'on polymérise par exemple par voie enzymatique à l'aide dtune préparation partiellement purifiée de 2-5A synthétase, pour obtenir le composé de formule ci-dessus désignée par XS-(2'-5')(A)n. EXEMPLE 2 Cet exemple concerne la préparation du composé de couplage entre un composé de formule ci-après représenté et désigné par (2'-5')(A)n et la polylysine pour donner le composé de formule EMI51.1 dans laquelle ± est supérieur ou égal à 2 et P représente la polylysine. Ce composé de couplage est obtenu à partir du composé (2'-5')(A)n de formule suivante EMI52.1 et de la polylysine. La réaction se fait entre les fonctions aldéhyde obtenue à partir de l'oxydation de la dernière unité nucléosidique du compose représenté ci-dessus et les groupes NH2 en epsilon des résidus de la lysine. On fait agir 0,6 moles de (2'-5')(A)n dans 400 pl sur 0,6 moles de iO4Na dans 4 pl de tampon acétate-de sodium 0,1 M à pH 4,75. La réaction d'oxydation est effectuée à l'abri de la lumière, à O-4-C, pendant une heure. Dans le produit obtenu, il y a eu oxydation à 100 % du glycol du (2'-5')(A)n. On effectue ensuite l'alcoylation réductive par le cyanoborohydrure de sodium. Pour ce faire, on additionne au produit qui vient d'être obtenu ci-dessus 300 pl de cyanoborohydrure de sodium (2 pmoles) dans du tampon phosphate de sodium 0,2 M, à pH 8,0, ainsi que 400 plage polylysine de poids moléculaire moyen de 14 000 (0,14 moles). La réaction se déroule à 20-22-C pendant environ une heure. On purifie ensuite par exemple sur une colonne de gel commercialisé sous le nom de Sephadex G-25. On repère le composé de couplage de l'invention avec la méthode de dosage de Lowry à une densité optique de 260 nm. Le composé de couplage obtenu contient deux molécules de (2'-5')An pour une molécule de polylysine. Le couplage entre les molécules de (2'-5')(A-)n et la polylysine peut se faire par tout autre méthode de couplage connue; telle que celle décrite à propos du couplage entre le méthotrexate et la polylysine dans Proc. Nat. Acad. Sci. USA, vol. 75, n- 8, p. 3 867-3 870 August, 1978, Cell Biology. temple 3 Cet exemple concerne la préparation d'un composé de couplage entre un composé (2'-5')(A)n et une asialoglycoprotéine. On rappeile que les glycoprotéines comportent des séquences latérales dont l'extrémité est générale- ment constituée par une galactose et un acide sialiqu¯ terminal. Par traitement approprié, on peut éliminer l'acide sialique terminal, obtenant ainsi une asialo glycoprotéine comportant des séquences latérales dont les extrémités sont des- galactoses. Ces asialoglycoprotéines sont internalisées tés efficacement par les hépatocytes après interaction spécifique avec les récepteurs au galactose sur les membranes des cellules d'hépatocyte. Cet exemple concerne plus particulièrement le couplage entre l'asialofétuine et un composé de (2'-5' ) (A)n. Le composé de couplage est obtenu de la façon suivante. L'asialofétuine est disponible dans le commerce, distribuée notamment par la Société SIGMA. On a préalablement transformé les groupes COOH des résidus aspartyle et glutamyle de I'asialofétuine en groupe EMI54.1 à l'aide d'hydrazine, pour augmenter le nombre de groupes NH2 disponibles. L'asialofétuine ainsi modifiée est appelée asialofétuine hydrazide. Pour ce faire, on ajoute 7 pl d'hydrazine pure distillée à 40 mg d'asialofétuine dans 400 pl d'eau, le pH de la solution ayant été ajusté à 4,75 à l'aide d'acide, notamment d'HCl O,1N. On verse sur cette solution de la carbodiimide (62 mg dans 100 î d'eau) goutte à goutte, et on ajuste constamment le pH à 4,75 avec HCl IN ; la carbodiimide est utilisée comme catalyseur pour fixer l'hydrazine sur le carboxyle de l'aspartyle et du glutamyle et pour obtenir des aspertate hydrazide et des glutamate hydrazide. Le composé obtenu est de l'asialofétuine hydrazide que l'on purifie par gel filtration sur une colonne de Sephadex G-50, tampon acétate de sodium 0,1 M, pH 4,75. A la sortie de la colonne, on récupère I'asialofétuine hydrazide, et on effectue le couplage avec le composé de (2'-5')(A)n. Pour ce faire, on ajoute 1 pmole de (2'-5')An dont le dernier nucléoside a été préalablement oxydé par 12 pl d'acide périodique dans les conditions suivantes solution à 21,4 mg/ml, tampon acétate de sodium 0,1 M, pH 4,75, à l'obscurité, pendant une heure à 4-C. Après la réaction de couplage, on passe le composé obtenu sur une colonne de gel filtration G-50 pour éliminer le (2'-5')(A)n non fixé à l'asialofétuine. Le composé de couplage obtenu comporte deux molécules de (2'-5')An pour une molécule asialofétuine. D'autres composés de couplage peuvent être obtenus entre notamment à partir d'un composé (2'-5')An de formule indiquée ci-dessus et de tout polypeptide naturel ou synthétique susceptible d'interagir avec les récepteurs de la surface cellulaire, par l'intermédiaire de leurs groupes NH2 situés à l'extrémité de séquences latérales et/ou des groupes COOH modifiés par l'hydrazine. On peut également obtenir des composés de couplage entre un composé de (2'-5')(A)n et une néoglycoprotéine, telle qu'une néoglycoprotéine à mannose, par exemple le mannose-polylysine. Le composé de couplage obtenu est susceptible d'être internalisé spécifiquement par les cellules possédant des récepteurs au mannose, à savoir les macrophages. Les composés de couplage de ce type permettent ainsi de cibler le (2'-5')An sur les macrophages. On peut également obtenir des composés de couplage entre un composé de (2'-5')An et des anticorps (mono ou polyclonaux) dirigés contre des antigènes de la surface cellulaire. Activité Dharmacoloqique 1' Matériaux Les milieux proviennent d'Eurobio (Paris) et les sérums des Laboratoires Flow. 2 Cellules et virus On maintient des cellules leucémiques murines L1210 en suspension dans un milieu commercialisé sous la désignation RPMI 1640, notamment par les Laboratoires Eurobio, Paris, complété par du sérum de veau foetal à 10 s (vu), 50 UI/mS de pénicilline et 50 pg/ml de streptomycine. On fait croître des cellules L929 dans un milieu minimal essentiel additionné de 5 s (v/v) de sérum de cheval donneur, de 3 g/i de bouillon de phosphate bacto-tryptose, 3,4 g/l de glucose et d'antibiotiques comme mentionné ci-dessus. On utilise la souche Indiana du virus de stomatite vésiculaire (VSV) et on la fait pousser dans des cellules L929. 2' Introduction du composé de couplage dans les cellules On laisse incuber les cellules avec les composés de couplage selon l'invention. 3* Essai de l'activité antivirale Les cellules sont infectées à des temps indi qués, avec du virus de stomatite vésiculaire (VSV) à une multiplicité de 10 pendant une heure à 37'C dans un milieu RPMI 1640 additionné de sérum de veau foetal 5 % (v/v). Les virus non adsorbés sont soigneusement éliminés par trois lavages avec du RPMI contenant du sérum de veau foetal à 10 % (v/v). On détermine le titre de virus produit 18 heures plus tard selon les méthodes connues (Stewart W. E., 1970, J. Virol., 6, 795-799). Pour résumer 106 cellules L929 sont mises dans des boites de Petri destinées à la culture de tissus (2 cm de diamètre). 24 heures après l'incubation, on étend 0,05 ml des suspensions de virus diluée (facteur de dilution 50) soigneusement sur la monocouche des cellules. Une heure plus tard, la suspension virale est éliminée par succion et on étend 2 ml d'agarose fondu à 1,6 % (v/v) dans un milieu essentiel minimum complété par du sérum de veau foetal à 2 % (v/v) sur la monocouche des cellules. Les plaques sont incubées pendant 18 heures dans un incubateur à C02. Les plaques sont ensuite révélées par une solution à 1 % (v/v) de rouge neutre dans une solution saline tamponnée isotonique de phosphate. Résultats concernant la synthèse des protéines On a déterminé l'effet de l'inhibition de la synthèse des protéines cellulaires par des composés de couplage selon l'invention (en fonction de la dose) après incorporation de méthionine 35S dans les cellules L1210, servant à repérer les protéines synthétisées. On a aussi comparé les effets dose réponse re latifs aux composés suivants - mélange de deux composés non couplés entre eux : polylysine et de (2'-5')A4Ox Red de formule suivante EMI57.1 - (2'-5')A3-polylysine selon l'invention (deux molécules de (2'-5'-)A3 par molécule de polylysine) EMI58.1 - (2'-5')A4-polylysine selon l'invention (deux molécules de (2'-5')A4 par molécule de lysine) EMI59.1 Pour ce faire, les cellules sont incubées en présence d'un mélange de polylysine et de (2'-5')A4 Ox Red non couplé, du composé (2'-5')A4-polylysine selon l'invention et du composé (2'-5')A3-polylysine. 35 L'incorporation de méthionine 35S est suivie par le dosage de la radioactivité incorporée après un marquage de 30 minutes. Ces résultats apparaissent sur la figure 1 sur laquelle on a représenté en abscisses la quantité en nM de composés testés ét en ordonnées, exprimée en 10 4 cpm la quantité de protéine synthétisée. Le mélange de polylysine et de (2'-5')A4 Ox Red non couplé est représenté par la courbe en pointillés qui porte les ronds noirs. Le composé de couplage (2'-5')A4-polylysine est représenté par la courbe en traits pleins qui porte les ronds blancs. Le- composé de couplage (2'-(4)A3-polylysine est représenté par la courbe en traits pleins qui porte les triangles noirs. On constate que le composé (2'-5')A4 Ox Red ne modifie sensiblement pas la synthèse des protéines dans les cellules L1210, tandis que les deux composés de couplage selon l'invention sont actifs vis-à-vis de l'inhibition de la synthèse de protéines. Activité antivirale des composés de couplage (2'-5')Anpolylysine selon l'invention Pour tester l'activité biologique des composés de couplage conformes à l'invention, dans les cellules intactes, on fait incuber les cellules avec les composés de couplage selon l'invention ainsi qu'avec des composés non couplés, pour faire une étude comparative. Le tableau I ci-après est relatif à l'activité antivirale - du composé de couplage (2'-5')A4-polvlysine dont la formule a été représentée c-i-dessus - du composé de couplage entre le (2'-5')A4 déphosphorylé et la polylysine, ci-après dénommée "core (2'-5')A4-polylysine" de formule : EMI61.1 - du mélange de deux composés suivants (2'-5')A4 et polylysine - du mélange de deux composés suivants (2'-5')A40xRed dont la formule a été ci-dessus représentée et polylysine. TABLEAU I EFFET ANTIVIRAL DE (2'-5')(A) COUPLE A LA POLYLYSINE COMPARE A n DES MELANGES DE POLYLYSINE ET DE (2'-5')(A) NON COUPLE n Traitement des cellules Concentration en Titre en VSV avec poly lysine (nM) (Z du contrôle) Poly lysine 500 100 Poly Iysine+2'-5'(A)nox Red 500 100 Poly lysine+(2'-5')A4 500 100 core (2'-5')A4 poly lysine 500 19 (2'-5')Aa poly lysine 500 0,01 (2'-5')A4 poly lysine 180 0,6 (2'-5')A4 poly lysine 100 5,0 (2t-5')Aa poly lysine 36 100 Les essais dont les résultats ont été rassemblés dans le tableau I ont été effectués comme suit. Des cellules L1210 en suspension sont incubées avec les différents composés aux concentrations indiquées dans le tableau. Une heure après, les cellules sont infestées avec du virus de stomatite vésiculaire (multiplicité de l'infection = 10) et le rendement du virus est déterminé 18 heures après, par essai de plaques dans des cellules L929. Comme le montre le tableau I, le mélange de polylysine et de composé (2'-5')A4 non couplé ainsi que le mélange de polylysine et de composé (2'-5')A40x Red non couplé n'affectent pas la production de virus de stomatite vésiculaire. Au contraire, à partir d'une concentration de 100 nM de composé de couplage (2'-S')A4-polylysine de l'invention (qui comporte deux molécules de (2'-5')A4 pour une molécule de polylysine), la croissance du virus est réduite de 20 fois, environ 200 fois, 10 000 fois pour des concentrations respectives de 100, 180 et 500 nM de composé de couplage (2'-5')A4-polylysine. Exemple 4 Cet exemple concerne la préparation d'un composé de couplage entre un composé (2'-5')(A)n et l'asialofétuine hydrazide. Les modifications chimiques sont celles décrites à l'exemple 3 et les conditions expérimentales sont celles décrites dans la partie intitulée "activité pharmacologique" avec la modification suivante - Les cellules L1210 sont remplacées par les hépatocytes tranformés, lignées de cellules répondant au nom de Hep G2 caractérisées par B. Knowles du Wistar Institute, Philadelphie. Elles sont cultivées dans un milieu essentiel minimum tel que défini ci-dessus et complémenté par 10 % (v/v) de sérum de veau foetal. -Résultats concernant la synthèse des Protéines Le composé de couplage possède un effet d'inhibition de la synthèse des protéines. Pour ce faire, les cellules sont incubées en présence de (2'5') A-asialofétuine hydrazide (rapport molaire 5 : 1) à différentes doses, et la synthèse des protéines est. suivie par l'incorporation de méthionine [35S3 et le dosage de la radioactivité incorporée dans les protéines est estimé après marquage des cellules pendant 30 minutes. Les résultats sont illustrés par la figure 2 sur laquelle on a représenté en ordonnée le pourcentage d'incorporation de la radioactivité ( du contrôle non traité), en abcisse les concentrations micromolaires en (2'-5')A couplé (exprimé en concentration d'asialofétuine hydrazide). Le mélange asialofétuine hydrazide et de (2'-5')A4 Ox Red non couplé est représenté par la courbe en pointillé. Le composé de couplage (2'-5')A4-asialofétuine hydrazide est représenté par la courbe en trait plein. On constate que les composés non couplés sont sans. effet sur la synthèse des protéines alors que le composé résultant du couplage est actif vis-à-vis des l'inhibition de la synthèse des protéines. Activité antivirale du composé de couplage (2'-5' )A4-asialofétuine hydrazide Pour tester l'activité antivirale du composé de couplage dans les cellules Hep G2, on fait incuber les cellules avec le composé de couplage ainsi qu'avec les composés non couplés. Le tableau II ci-après est relatif à l'activité antivirale de ces composés. Dans le tableau II, on a également indiqué les résultats obtenus avec un mélange de composé (2'-5')A Ox Red et d'asialofétuine hydrazide (non couplé) dans le rapport molaire 5 : 1. TABLEAU II EFFET ANTIVIRAL DE (2'-5')tA1 COUPLE A L'ASIALOFETUINE titre de virus titre en VSV composés concentration VSV (MM) (unités infectieuses/ml) du contrôle) 1.70 x 109 100 asialofétuine hydrazide 1 1.7 x 109 100 +(2'-5')A Ox Red asialofétuine hydrazide +(2'-5')A Ox Red 2 1.3 x î09 76 (2'-5')A4-asia- lofétuine hydrazide 0.5 4.2 x 108 24 1 4.2 x 108 24 2 7.8 x 105 0 0.45 3 2.3 x 104 0.01 Les cellules Hep G2 en suspension sont incubées avec les composés couplés ou non couplés aux concentrations indiquées dans le tableau II. Une heure après, les cellules sont infectées avec le virus de la stomatite vésiculaire (VSV) et le rendement en virus est déterminé 18 heures après par essai de plaques dans les cellules L929. Comme l'illustre le tableau II, le mélange d'asialofétuine hydrazide et le composé (2'-5')A4 Ox Red non couplé n'affectent pas la production du virus et les cellules meurent par infection virale après 20 heures. En effet, la différence de résultats obtenus avec 10 6 M de mélange d'asialofétuine hydrazide et de (2'-5')A Ox Red et 2 x 10 6 M de mélange d'asialofétuine hydrazide et de (2'-5')A Ox Red n'est pas significative. Par contre, les concentrations de 2 et 3 micromoles de composé de couplage (2'-5')A4-asialofé- tuine hydrazide protègent complètement les cellules qui restent viables au-delà de 20 heures d'incubation. Le composé de couplage est sans effet sur d'autres types cellulaires comme les L1210 ou L929 qui ne posèdent pas les récepteurs appropriés. Ce qui démontre bien que ce produit ne peut être que ciblé sur des cellules portant à leur surface le récepteur membranaire approprié comme les hépatocytes. Ce composé est capable d'activer l'endoribonucléase L et de dégrader L'ART viral en empêchant ainsi le virus de se développer. Le choix de la molécule de transport ou vecteur permet de véhiculer la molécule active le (2'-5')An très spécifiquement sur un seul type cellulaire d'hépatocyte. Conclusion Les composés de couplage selon l'invention obtenus à partir du couplage de (2'-S')An, naturel ou mcdifié et d'un polypeptide porteur approprié, sont des composés actifs vis-à-vis de ltendoribonucléase L, qui peuvent être interalisés par la cellule et présentent une activité antivirale efficace dans les cellules. L'invention concerne également les sels que les composés de couplage ci-dessus peuvent former avec les bases en particulier les basX minérales ou organiques Pari les sels de base minérale, on préfère les sels de sodium et de potassium. Parmi les sels organiques, on préfère les sels d'amine, d'alcoylamine et d'arylamine, en particulier ceux d'amines secondaires, tels que la diéthylamine, la pipérazine, ou d'amines tertiaires; tels que la méthylamine, la pyridine, la méthylpipérazine etc. Parmi tous ceux-ci, les sels physiologiquement acceptables sont préférés. Les sels peuvent être lyophilisés. Les composés selon l'invention ont des propriétés biologiquement intéressantes, en particulier des propriétés du type de l'interféron, et plus particulièrement une activité antivirale. Les composés selon l'invention sont capables d'activer l'endoribonucléase L, de dégrader l'ARN viral, en empêchant ainsi la synthèse des protéines virales dans les cellules infectées par un virus. Les oligonucléotides selon l'invention sont donc des substituts appropriés de l'interféron et de ses ap plications connues. Ils peuvent être préparés reproductiblement sous forme hautement purifiée, comme réactifs biologiques, en particulier comme référence de comparaison dans les essais qualitatifs et quantitatifs, dans les cultures cellulaires, des composés de l'interféron ou d'autres substances semblables à l'interféron. L'invention concerne également les sels pharma ceutiquement acceptables des composés de couplage définis ci-dessus en particulier ceux appropriés pour l'administration in vive. L'invention concerne également les compositions pharmaceutiques associant les susdits composés de couplage, de préférence sous la forme de sels pharmaceutiquement acceptables, avec un véhicule pharmaceutique. L'invention fournit ainsi des compositions pharmaceutiques ayant une activité semblable à celle de l'interféron en utilisant un composé chimique déterminé sous forme de haute pureté, ne présentant pas de toxicité, étant stable et facile à manipuler. La composition selon l'invention peut être sous forme de préparations administrables par voie orale ou rectale, en utilisant des solides ou des liquides appropriés pour un tel type d'administration ou sous forme de préparations injectables stériles contenant au moins l'un quelconque des composés de couplage en association avec des véhicules liquides appropriés stériles, de préférence isotoniques. D'autres formes appropriées de préparations consistant en pommades dans lesquelles les composés de couplage de l'invention sont associés avec des véhicules en pommade. L'une quelconque des techniques de préparation classiquement utilisées pour associer l'interféron avec les supports pharmaceutiques peut être utilisée pour préparer les compositions pharmaceutiques selon l'invention. Les compositions de l'invention ont des propriétés antivirales et sont en particulier susceptibles d'inhiber les maladies virales susceptibles d'être suivies de troubles tumoraux, par exemple les maladies induites par les virus de l'hépatite B ou les différentes formes de virus de l'herpès. Plus généralement, les compositions de 1 'inven- tion sont utiles pour le traitement et la prévention de maladies virales, et pour les traitements antitumoraux vis-à-vis des tumeurs susceptibles d'être également délimitées par les traitements à l'interféron. On notera que les doses auxquelles les compositions sont utilisées sont déterminées selon la nature de la maladie qui afflige le patient et les conditions particulières de santé. Les dosages appropriés sont déterminés par le médecin, comme la pratique l'exige dans ces domaines d'application.

Claims: REVENDICATIONS 1. Composés de couplage représentés par la formule (I) définie ci-dessous EMI71.1 dans laquelle - Y et T, identiques ou différents, représentent in aépendamment l'un de l'autre 0, S, Se cu NH - Z et W, identiques ou différents, représentent indépendamment l'un de l'autre 0, S ou NH - A représente l'adénine ou l'un de ses dérivés, notamment ceux de formule EMI71.2 - E est un nombre entier égal à n - 1, n étant un nombre entier supérieur ou égal à 3 - m est un nombre entier égal à O et de préférence supérieur ou égal à 2 - X est un nombre entier supérieur ou égal à 1, de préférence compris de 2 à 10 - P est un enchaînement polypeptidique comportant au moins 5 acides aminés, et l'atome d'azote appartenant au cycle EMI72.1 appartenant également à l'extrémité d'une séquence latérale du polypeptide P et/ou appartenant à un groupe EMI72.2 provenant d'un groupe COOH modifié par l'hydra- zine. 2. Composés de couplage selon la revendication 1 de formule EMI72.3 dans laquelle - Y et T, identiques ou différents, représentent indépendamment l'un de l'autre 0, S, Se ou NH - Z et W, identiques ou différents, représentent indépendamment l'un de l'autre 0, S ou NH - A représente l'adénine ou l'un de ses dérivés selon la revendication 1 - E est un nombre entier égal à n - 1, n étant un nombre entier supérieur ou égal à 3 - m est un nombre entier égal à O et de préférence supérieur ou égal à 2 - X est un nombre entier supérieur ou égal à 1, de préférence compris de 2 à 10 - P est un enchaînement polypeptidique comportant au moins 5 acides aminés, et l'atome d'azote appartenant au cycle EMI73.1 appartenant également à I'extrémité d'une séquence latérale du polypeptide P. 3 Composés de couplage selon la revendication 1 de-formule (II) : EMI73.2 dans laquelle Y, Z, T, W, E, X ont les significations ci-dessus définies, P' représente un enchaînement polypeptidique comportant au moins 5 acides aminés, et dans lequel le groupe EMI74.1 représenté sur la figure provient du groupe EMI74.2 terminal du polypeptide et/ou d'un groupe EMI74.3 libre des résidus aspartyle et/ou glutamyle. 4. Composés de couplage selon la revendication 1 de formule (III) EMI74.4 dans laquelle - Y et T identiques ou différents, représentent indépendamment l'un de l'autre 0, S, Se ou NH - Z et W, identiques ou différents, représentent indépendamment l'un de l'autre 0, S ou NH - Areprésente l'adénine ou l'un de ses dérivés selon la revendication 1 - r est un nombre entier égal à n - 1, n étant un nombre entier supérieur ou égal à 3 - X est un nombre entier égal ou supérieur à 1, de préférence compris de 2 à 10 - m est un nombre entier égal à O et de préférence supérieur ou égal à 2 - P est un enchaînement polypeptidique comportant au moins 5 acides aminés et dans laquelle le groupe -(CH2)4- représenté dans la formule appartient à la séquence latérale d'un résidu lysyle entrant dans la constitution de l'enchaînement polypeptidique P. 5. Composés de couplage selon la revendication 1 de formule (IV) EMI75.1 dans laquelle Y, T, Z, W, A, ±, n, X, m ont les significations indiquées à la revendication 1, P est un enchaî- nement peptidique comportant au moins 5 acides aminés et l'atome d'azote appartenant au cycle EMI76.1 appartient également à l'extrémité de la séquence latérale d'un résidu d'arginyle entrant dans la constitution de l'enchaînement polypeptidique P. 6. Composés de couplage selon la revendication 1 de formule (V) EMI76.2 dans laquelle - A représente l'adénine ou l'un de ses dérivés selon la revendication 1; - E est un nombre entier égal à n - 1, n étant un nombre entier supérieur ou égal à 3 - m est un nombre entier égal à O et de préférence supérieur à 2 - X est un nombre entier égal à 1 ou , de préférence compris de 2 à 10 - P est un enchaînement peptidique comportant au moins 5 acides aminés et dans laquelle le groupe -(CH2)4- repré senté dans la formule appartient à la séquence ? latérale d'un résidu lysyle entrant dans la constitution de l'enchaînement polypeptidique P. 7. Composés de couplage selon la revendication 1 de formule suivante EMI77.1 dans laquelle - Y et T, identiques ou différents, représentent indépendamment l'un de l'autre 0, S, Se ou NH - Z et W, identiques ou différents, représentent indépendamment l'un de l'autre 0, S ou NH - A représente l'adénine ou l'un de ses dérivés selon la revendication 2 '; - t est un nombre entier égal à n - 1, n étant un nombre entier supérieur ou égal à 3 - m est un nombre entier égal à O et de préférence supérieur ou égal à I - X est un nombre entier égal à 1, de préférence compris de 2 à 10 ; ; - P est un enchaînement peptidique comportant au moins 5 acides aminés et dans lequel le groupe (CH2)4- représenté dans la formule appartient à la séquence latérale d'un résidu lysyle entrant dans la constitution de l'enchainement polypeptidique P sous réserve que l'un au moins des éléments Y ou Z est différent de l'oxygène. 8. Composés de couplage selon la revendication 1 de formulee-suivantes EMI78.1 EMI79.1 EMI80.1 9. Procédé de préparation des composés de couplage selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il comprend - l'oxydation du composé de départ de formule (Ibis) suivante EMI81.1 dans laquelle Y, Z, T, W, A, n, E ont les significations indiquées à l'une des revendications 1 à 8 pour introduire deux fonctions aldéhyde sur les carbone's en 2' et 3' de la dernière unité nucléosidique et obtenir le composé de formule (Iter) suivante EMI81.2 - l'alcoylation réductive du composé de formule (Iter) par un polypeptide P-NH2 dont l'enchaînement comprend au moins une séquence latérale dont l'extrémité est un groupe aminé, notamment NH2, cette réaction ayant lieu entre les fonctions aldéhyde du composé (Iter) avec le groupe NH2 du polypeptide pour obtenir le composé de formule (I) EMI82.1 - le fractionnement entre les composés de couplage selon l'invention et les produits non couplés, notamment par filtration moléculaire.

Inventors: BAYARD, BERNARD, LEBLEU, BERNARD RES. LE JARDIN AUX FONTAINES B2, Lebleu, Bernard Rés. le Jardin aux Fontaines B2
Applicants: ETABLISSEMENT PUBLIC DIT:  CENTRE NATIONAL DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE (CNRS)
Application year: 1986
Main classification: C07H21
IPC codes: C07H21, A61K38, C07K16, C07K14, C07K1