1-HYDROXY-CYTORHODINES, A MICROBIOLOGICAL METHOD FOR THEIR PREPARATION AND THEIR USE AS CYTOSTATIC AGENTS

Abstract: 1. Claims for the Contracting States : BE, CH, DE, FR, GB, IT, LI, LU, NL, SE Compounds of the formula I see diagramm : EP0167954,P12,F1 wherein a) R1 and R2 are identical and each represent the sugar combination Roa-Rod-Rod or Roa-dF=CinB, or b) R1 and R2 are different and each represent the sugar combination Roa-Rod-Rod and Roa-dF-Rod, or c) R1 and R2 are different, R1 representing the sugar combination Roa-dF-CinA and R2 representing the sugar combination Roa-Rod-Rod or Roa-Rod-Acu, or R1 representing the sugar combination Roa-Rod-Acu and R2 representing the sugar combination Roa-Rod-Rod and their physiologically acceptable acid addition salts. 1. Claims for the Contracting State : AT A process for the preparation of a compound of the formula I see diagramm : EP0167954,P12,F2 wherein a) R1 and R2 are identical and each represent the sugar combination Roa-Rod-Rod or Roa-dF=CinB, or b) R1 and R2 are different and each represent the sugar combination Roa-Rod-Rod and Roa-dF-Rod, or c) R1 and R2 are different, R1 representing the sugar combination Roa-dF-CinA and R2 representing the sugar combination Roa-Rod-Rod or Roa-Rod-Acu, or R1 representing the sugar combination Roa-Rod-Acu and R2 representing the sugar combination Roa-Rod-Rod, and their physiologically acceptable acid addition salts, which comprises fermenting the microorganism Streptomyces purpurascens (DSM 2658) in the presence of a nutrient medium with an elevated oxygen supply, otherwise in a customary manner under aerobic conditions, and isolating the compounds formed from the culture liquid and the mycelium by extraction with organic solvents followed by chromatography or partition in a customary manner.

Description: l-Rydroxy-Cytorhodine, ein mikrobiologisches Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung als Cytostatika Die vorliegende Erfindung betrifft l-Hydroxy-Cytorhodine der Formel 1 EMI1.1 worin R1 Wasserstoff oder den Rest OR3 und R2 die Reste -OR, oder -COOR5 bedeuten, wobei R5 C1-C3-Alkyl bedeutet und R3 und Rq gleich oder verschieden sind und für Wasserstoff oder eine Zuckerkombination der folgenden Zusammensetzung stehen: : Roa-dF-Rod, Roa-dF-CinA, Roa-dF=CinB, Roa-Rod-Rod, Roa-dF-Acu, Roa-Rod-CinA, Roa-Rod-Acu oder Rod-Rod-Rod, worin Roa Rhodosamin, dF Desoxyfucose, Rod Rhodinose, Acu Aculose, CinA Cinerulose A und Cin B Cinerulose B bedeutet und dF = Cin B bedeutet, dass die beiden Zuckerbausteine durch eine zusätzliche Atherbrücke neben der üblichen gly- kosidischen Bindung verknüpft sind. Die vorliegende Erfindung betrifft ferner ein Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der Formel 1, das dadurch gekenzeichnet ist, dass man den Stamm Streptomyces purpurascens-DSM 2658 bei einem pH-Wert von 6s5 - 8,5, einer Temperatur von 24-40 C und einer hohen Beltftungs- rate in einem geeigneten Nährmedium fermentiert und die Verbindungen der Formel I aus der KulturRlüssigkelt und dem Mycel nach üblichen Methoden isoliert. Die Isolierung und Identifizierung von Streptomyces purpurascens-DSM 2658 ist in der deutschen Patentanmeldung P 332 325.0 beschrieben. Der Mikroorganismus wurde am 24.5.1983 bei der DSM (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen) in D-3400 Göttingen (Grisebachstr. 8) hinterlegt. In der genannten Patentanmeldung wird auch ein Verfahren zur Herstellung von l-Deshydroxy-Anthracyclin-Derivaten der Formel I, den sogenannten Cytorhodinen, durch Fermentation des Stammes Streptomyces purpurascens-DSM 2658 unter aeroben Bedingungen beschrieben. Es wurde nun überraschenderweise gefunden, dass bei Er höhung der so Satoffversorgung bei der Fermentation l-Hydroxy-Cytorhodine gebildet werden. Diese neuen vor allem cytostatisch wirksamen Verbindungen gehören zur Gruppe der l-Hydroxy-Anthracycline, von denen die folgenden Vertreter bereits beschrieben sind: l-Hydroxy-ss-Rhodomycine - auch ss-Iso-Rhodomycine genannt-: z.B. Violamycine A2 und B I - 1 (W. Fleck et al., Z. Allgem. Mikrobiologie 14, 551 (1974) und ss-Isorhodomycine (H. Brockmann et al., Chem. Ber. 98, 3145 (1965). s-Pyrromycine (Cinerubine): -z.B. Cinerubin A (W. Keller Schierlein, Antimicrob. Agents Chemother. 68 (1970)), verschiedene Rhodirubine (H. Umezawa et al., J. Antib. 30, 616 (1977) und die Aclacinomycine A2, B2, M2, S2 und T2 (T. Oki et al., J. Antib. 28, 830 (1975) und , 801 (1979), sowie Musetta-, Marcello-, Rudolphomycin u.ä. (D.E. Nettleton et al., J. Nat. Prod. 43, 242 (1980)). Das erfindungsgemässe Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der allgemeinen Formel I, wird durch Fermentation von Streptomyces purpurascens-DSM 2658 bei einem pH-Wert von 6,5 - 8,5 und einer Temperatur von 24-400C unter aeroben Bedingungen bei einer genügend hohen Sauerstorfversorgung z.B. durch eine hohe eiüftungsrate in einem Kohlenstoff- und Stickstoffquellen sowie anorganische Nährsalze und Spurenelemente enthaltenden Nährmedium und anschliessende Isolierung der Verbindungen aus der Kulturflüssigkeit und dem Mycel nach üblichen Methoden wie nachfolgend beschrieben, durchgeführt. Als Kohlenstoffquellen eignen sich Glucose, Stärke, Dextrin und Glycerin. Geeignete Stickstoffquellen sind Soja- mehl, Hefeextrakt, Fleischextrakt, Malzextrakt, Maisquellwasser, Pepton oder Casein. Als anorganische Nährsalze eigne sich z.B. Natriumchlorid, Magnesiumsulfat oder Calciumkarbonat. Als Spurenelemente kann man Eisen, Magnesium, Kupfer, Zink und Kobalt verwenden. Streptomyces purpurascens - DSM 2658 kann bei Temperaturen von 24-40 C bei einem pH von 6,5 - 8,5 und einer Belüftungsrate von 0,8 - 1,2 vvm fermentiert werden. Vorzugsweise erfolgt die Fermentation des Streptomyces purpurascens - DSM 2658 unter aeroben Bedingungen bei 300C und bei einem pH-Wert von 7,0. Nach 70 - 130, vorzugsweise 90 - 110 Stunden, wenn die höchste Ausbeute erreicht ist, bricht man die Fermentation ab. Vorzugsweise kann es sich bei der Fermentation um eine Submers-Fermentation handeln. Der Fortschritt der Fermentation und die Bildung der Anthracyclinverbindungen kann anhand der antibakteriellen Wirksamkeit gegen S.aureus 209 P und Bac. subt. sowie direkt durch Extraktion der gesamten Kulturlösung (Mycel und Kulturfiltrat) mit einem organischen Lösungsmittel und Messung der Absorptionsintensität der violetten Verbindungen bei 495, 525 und 568 nm verfolgt werden. Als organisches Lösungsmittel verwendet man vorzugsweise Xthylacetat. Die Anthracyclinverbindungen im Kulturfiltrat und im Mycel werden gemäss dem Schema im Schaubild I (vgl. auch Beispiel 3) der vorliegenden Anmeldung isoliert. Die Anthracyclinverbindungen im Mycel werden mit einem organischen Lösungsmattel, vorzugsweise mit wässrigem Aceton, das auf einen pH-Wert von 3,5 eingestellt wurde, extrahiert. Nach Entfernung des Acetons stellt man den pH-Wert der wässrigen Phase auf 7,5 ein und extrahiert dann bei einem pH-Wert von 7,5 mit einem organischen Lösungsmittel wie Butylacetat, Äthylacetat oder Chloroform, vorzugsweise mit Xthylacetat. Die Xthylacetatextrakte aus dem Mycel und dem Kulturfiltrat werden vereinigt oder separat aufgearbeitet, konzentriert und in einem organischen Lösungsmittel, wie Benzol oder Toluol, aufgenommen. Vorzugsweise verwendet man Toluol. Die Toluollösung extrahiert man dann mit einem Acetatpuffer von einem pH-Wert von 3,5. Auf dieser Stufe teilt man das Gemisch der Anthracyclin-Derivate in zwei Fraktionen auf. Das in der Toluolphase verbleibende Gemisch bezeichnet man als Fraktion A, das in der wässrigen Phase verbleibende Glykosidgemisch bezeichnet man als Fraktion B. Die Fraktion B wird weiter gereinigt gemäss Schaubild II. Wie im Schaubild II dargestellt, erhält man aus der Fraktion B die l-Hydroxy-Cytorhodine A, B, C und P und das Gemisch N + 0 (1:1). Bei den Fraktionen I, II, III und IV handelt es sich um nicht aufgetrennte Mischungen aus Anthracyclinverbindungen der Formel I. Die aus der Kulturlösung von Streptomyces purpurascens DSM 2658 isolierten und gemäss Schaubild I gereinigten Verbindungen haben die allgemeine Formel I. Scha id 1 Isolierung des antibiotischen Komplexes aus Streptomyces purpurascens - DSM 2568 EMI5.1 <tb> <SEP> fermentierte <SEP> Kulturlösung <SEP> pH <SEP> auf <SEP> 5,2 <SEP> eingestellt <tb> Mycel <SEP> Kulturfiltrat <tb> <SEP> mit <SEP> Aceton <SEP> ausgerührt <SEP> I <SEP> pH <SEP> auf <SEP> 7,5 <SEP> - <SEP> 8,0 <tb> <SEP> eingestellt <tb> <SEP> 1 <SEP> konzentriert, <SEP> mit <SEP> Acetatpuffer <SEP> 11 <SEP> mit <SEP> Xthylacetat <tb> <SEP> pH <SEP> 3,5 <SEP> versetzt, <SEP> mit <SEP> Toluol <SEP> extrahiert <tb> <SEP> gewaschen <SEP> und <SEP> mit <SEP> Xthylacetat <tb> <SEP> bei <SEP> pH <SEP> 7,5 <SEP> extrahiert <tb> <SEP> 1J <SEP> I <tb> wässrige <SEP> Phase <SEP> Xthylacetatphase <SEP> wässrige <SEP> Phase <tb> <SEP> eingeengt <tb> <SEP> nit <SEP> einem <SEP> Acetatpuffer <SEP> (pH <SEP> 3,5) <tb> <SEP> extrahiert <tb> <SEP> v <tb> <SEP> wässrige <SEP> Phase <tb> <SEP> v <tb> Xthylacetatphas <SEP> e <SEP> mit <SEP> Toluol <SEP> extrahiert <tb> <SEP> wässrige <SEP> Phase <SEP> Toluolphase <tb> <SEP> Fraktion <SEP> A <tb> <SEP> auf <SEP> pH <SEP> 7,9 <tb> <SEP> eingestellt <tb> <SEP> II <SEP> mit <SEP> Xthylacetat <SEP> extrahiert <tb> <SEP> s <SEP> . <SEP> k <tb> <SEP> XthyIacetatphase <SEP> wässrige <SEP> Phase <tb> Fraktion B Schaubild II EMI6.1 <tb> Aufarbeitung <SEP> der <SEP> wässrigen <SEP> Phase <tb> <SEP> 1. <SEP> I. <SEP> pH <SEP> auf <SEP> 7,5 <SEP> eingestellt <tb> <SEP> II. <SEP> mit <SEP> Äthylacetat <SEP> extrahiert <tb> <SEP> 1. <tb> Xthylacetatphase <SEP> wässrige <SEP> Phase <tb> <SEP> (verworfen) <tb> konzentriert <tb> an <SEP> Glykosiden <SEP> angereicherte <tb> Fraktion <SEP> (l-Hydroxy-Cyto <tb> rhodine-Rohgemisch) <tb> 1. <SEP> Verteilung <SEP> zwischen <SEP> Toluol <SEP> und <SEP> Methanol-Wasser <tb> <SEP> und/oder <tb> <SEP> Chromatographie <SEP> an <SEP> Säulen <tb> II. <SEP> prdparative <SEP> DUnnschichtchromatographie <SEP> (PDC) <SEP> oder <tb> <SEP> Hochdruckflüssigkeitschromatographie <SEP> (HPLC) <tb> <SEP> 1 <tb> angereicherter <SEP> Komplex <SEP> I <SEP> angereicherter <SEP> Komplex <SEP> II <tb> (wenig <SEP> polar) <SEP> (stärker <SEP> polar) <tb> <SEP> lIP <SEP> ± <SEP> HPLC <tb> Cytorhodine <SEP> und <SEP> Cytorhodine <SEP> und <tb> l-Hydroxy-Cytorhodine <SEP> l-Hydroxy-Cytorhodine <tb> <SEP> III <SEP> II <SEP> 1 <tb> Yr.I <SEP> C <SEP> P <SEP> y <SEP> Fraktion <SEP> II <SEP> Fr. <SEP> III <SEP> A <SEP> B <SEP> N <SEP> +0 <SEP> Fr; <SEP> IV <tb> <SEP> /1\ <SEP> /1-t <tb> PDC <SEP> oder <SEP> ilPLC- <SEP> (an <SEP> reversed <SEP> phasen <tb> PDC <SEP> LC- <SEP> E,t.h,dine <SEP> l-Hyia/rOXY <tb> l-Hydroxy- <SEP> ytorhodine <SEP> 1-Hydroxy-Cytorhodine <tb> <SEP> H-P6 <SEP> A <SEP> 1-( <tb> 1-OH-; <SEP> 1-OH-P <SEP> 1-OH-V <SEP> 1- <SEP> -A <SEP> l-OR-B <SEP> l-OH-N+O <tb> Die bevorzugten erfindungsgemässen Verbindungen haben die in Formel II EMI7.1 dargestellte Struktur, wobei R4 und R5 die folgenden Bedeutungen haben. Verbindung R4 R5 l-Hydroxy-Cytorhodin V Roa-Rod-Acu Roa-Rod-Rod (Formel III) (Formel VI) lt C Roa-dF=Cin B Roa-dF=Cin B (Formel IV) (Formel IV) " B Roa-dF-Cin A Roa-Rod-Rod (Formel V) (Formel VI) A A Roa-Rod-Rod Roa-Rod-Rod (Formel VI) (Formel VI) " N Roa-Rod-Rod Roa-dF-Rod (Formel VI) (Formel VII) n O Roa-dF-Rod Roa-Rod-Rod (Formel VII) (Formel VI) " P Roa-dF-Cin A Roa-Rod-Acu (Formel VII) (Formel V) EMI8.1 Roa-Rod-Acu Roa-dF=Cin B Roa-dF-Cin A Roa-Rod-Rod EMI9.1 Rod-dF-Rod Die erfindungsgemässen Anthracyclinverbindungen zeichnen sich durch eine starke Wirkung gegen grampositive Bakterien sowie eine ausgeprägte cytostatische Wirkung aus. Die vorliegende Erfindung wird durch die nachfolgenden Beispiele näher erläutert: Beispiel 1 Herstellung von l-Hydroxy-Cytorhodinen durch Fermentation von Streptomyces purpurascens - DSM 2658. Streptomyces purpurascens - DSM 2658 wurde auf Hefe-Malz Agar der folgenden Zusammensetzungn gegeben: Malzextrakt 10 g Hefeextrakt 4 g Glukose 4g Agar 15 g dest. Wasser 1 1 pH 7,0. Dazu wurde das Medium auf Roux-Flaschen verteilt und 30 Minuten bei 1210C 5terllislert, abgekühlt, mit einer Sporensuspension beimpft und 7 - 14 Tage bei 250C inkubiert. Danach konnte man ein gutes Wachstum und eine gute Sporenbildung feststellen. Von dieser Stammkultur wurde eine Sporensuspension mit 107 Sporen/ml in steriler NaCl (0,8 Sig) hergestellt. 10 ml dienten als Inokulum von 500 ml folgenden Vorkulturmediums: Glukose 15 g Sojamehl 15 g Cornsteep (fest) 5 g CaCO3 2g NaCl 5g dest. Wasser 1 1 pH 7,0. Je 500 ml des obigen Mediums wurden auf 2 000 ml Erlenmeyerkolben verteilt und 30 Min. bei 1210C sterilisiert. Die beimpften Kolben wurden 2 Tage bei 250C und 200 Upm auf einem Rotationsschüttler inkubiert. 500 ml der gewachsenen Vorkultur wurden als Inokulum für folgende Hauptkultur verwendet: Glukose 20 g Malzextrakt 10 g Hefeextrakt 4 g dest. Wasser 1 1 pH 6,8. 9 Liter des obigen Mediums wurden in einen 12 l-Fermenter gegeben und 50 Min. bei 1210C sterilisiert. Die Fermentation wurde bei 280C, einer Rührergeschwidigkelt von 600 Upm und einer Belüftungsrate von 8 - 9 1 Luft/Min. durchgeführt. Die Fermentationsdauer betrug 90 - 110 Stunden. Zur Feststellung des Aberntezeitpunktes wurde die Ausbildung des Absorptionsmaximums bei 568 nm verfolgt. Dazu wurden Proben der Kulturlösung mit Äthylacetat extrahiert und das Absorptionsspektrum zwischen 400 und 600 nm aufgenommen. Beispiel 2 Fermentation von Streptomyces purpurascens - DSM 2658 in grösserem Massstab. Gemäss Beispiel 1 wurde Streptomyces purpurascens - DMS 2658 in 2 000 ml-Erlenmeyerkolben mit 500 ml Vorkulturmedium angezogen und nach 2 Tagen in einen 30 l-Fermenter mit 20 l-Vorkulturmedium überimpft. Die Fermentation erfolgte bei 280C unter Rühren bei 160 - 180 Upm mit einer Belüftungsrate von 6 - 7 1/Min. Nach 48 Stunden diente diese Vorkultur als Inokulum für einen 300 l-Fermenter mit 200 l-Hauptkulturmedium (Beispiel 1). Die Fermentation erfolgte 90 - 110 Stunden bei 280C, einer Rührerumfangsgeschwindigkeit von 3,5 m/sec. und einer Belüftungsrate von 1 vvm (200 ml/min). Die Aberntekriterien entsprechenden denen in Beispiel 1. Beispiel 3 Isolierung des Rohgemisches der Anthracyclinverbindungen. 190 1 KL wurden mit 0,5 S Formalin versetzt und mit Essigsäure auf pH - 5,2 gestellt. Das Mycel wurde mit den üblichen Methoden (Feststoffseparator, Filterpresse) abgetrennt und mehrmals mit wenig Wasser gewaschen. Das Kulturfiltrat (ca. 185 1) wurde mit dem Waschwasser vereinigt, mit NaOH auf pH g 7,5 - 8,0 gestellt und 2 x mit je 50 1 Ethylacetat extrahiert. Die wässrige Phase wurde verworfen. Die organischen Phasen wurden vereinigt, im Vakuum auf 8 1 eingeengt und dann 4 x mit 3 1 Natriumacetat-Pufferlösung (pH 3,5) extrahiert. Die ver einigten Pufferlösungen wurden anschliessend 3 x mit 3 1 Toluol gewaschen. Das abgetrennte Mycel (ca. 3,4 kg) wurde 3 mal mit 15 1 Aceton ausgerührt, die abdekantierte Acetonlösung im Vakuum eingeengt, mit 5 1 einer Na-Acetat-PufSerlösung vom pH 3,5 versetzt und 3 mal mit 2,5 1 Toluol gewaschen. Die wässrige Pufferphase der Kulturfiltrataufarbeitung wurde mit NaOH auf pH t 7,9 gestellt und 3 x mit 3 1 Ethylacetat extrahiert. Die vereinigten Ethylacetatextrakte wurden im Vakuum eingeengt. Die wässrige Pufferphase der Mycelaufarbeitung wurde mit NaOH auf pH - 8,0 gestellt und 3 x mit Je 2,5 1 Ethylacetat extrahiert. Die vereinigten organischen Extrakte wurden im Vakuum eingeengt. Die verbleibenden wässrigen Phasen wurden verworfen. Beispiel 4 Isolierung von l-Hydroxy-Cytorhodin A durch reverse phase" HPLC. Eine stark violette Charge von Cytorhodin A aus rohem polarem Cytorhodin-Gemisch (Komplex II), gewonnen durch übliche Säulenchromatogrpahie an Kieselgel mit essigsäurehaltiger mobiler Phase und nachfolgende, weitere Anreicherung durch präparative HPLC an SiO2, wurde durch präparative HPLC an einem reverse phase" Adsorbens weiter aufgetrennt. So wurden z.B. 250 mg in 4 ml einer mobilen Phase CHC13-Methanol-10 S Ammonacetat in Wasser 150 : 1050 : 375 gelöst und auf eine Stahlsäule (3,2 x 25 cm), mit ca. 120 g LiChrosorb(R) RP-18, 25-40 11 (Merck) unter Druck gefüllt gegeben und bei einem Fluss von 4 ml/Min. chromatographiert. Die Trennung wurde mit zwei hintere.nander geschalteten Durchflussphotometern bei den Wlienlängen 490 und 560 nm verfolgt. Nach Zusammenfassung und üblicher Aufarbeitung jeweils der roten und der violetten Fraktionen wurde folgendes Ergebnis erreicht. Fr. 88 - 108 62 mg Cytorhodin A (nach 1H-NMR) 109 - 120 46 mg l-Hydroxy-Cytorhodin A (ca. 80 90 % Reinheit) Etwa 150 mg von auf obige Weise gewonnenem l-Hydroxy Cytorhodin A wurde durch erneute präparative HPLC an RP-18, 25-40 unter obigen Bedingungen weiter gereinigt. Erhalten wurden 60 mg l-Hydroxy-Cytorhodin A mit weniger als 2 S restlichem Cytorhodin A. 1-OH-A: 1H-NMR Abb. 1 Adsorptions- a) 240 (4,67) 298 (3,73) 522 (4,06) 550 (4,07) 561 (4,10) spektrum b) 240 (4,75) 255 (SCH) 270 (4,37) 522 (4,30) 550 (4,29) 561 (4,30) (nm) c) 243 (4,69) 276 (3,81) 589 (4,30) 635 (4,44) C60H88N2021, M ber.: 1172 (FAB-MS bestätigt). Beispiel 5 Isolierung von l-Hydroxy-Cytorhodin V durch präparative Mitteldruck- und Schichtchromatographie. 7 g rohes Cytorhodingemisch, gewonnen durch Extraktion aus der Kulturlösung wie im Schema I beschrieben, wurden an 620 g Kieselgel 31 u (Grace) in zwei radial komprimierten Silica-Patronen (Waters, Prep LC/System 500(R)) mit dem Laufmittelgemisch CHC13XMethanol/96Sige Essigsäure/Wasser = 80 : 10 : 10 : 2 chromatographiert. Die Probe wurde in 65 ml der mobilen Phase auf die äquilibrierte Säule gegeben und bei einem Fluss von 25 ml/Min. in Fraktionen zu 23 ml aufgetrennt. Die Beurteilung erfolgte dünnschichtchromatographisch und mit Hilfe der analytischen HPLC. In Fraktion 29 - 34 fielen 195 mg eines Gemisches aus Cytorhodin V und l-Hydroxy-Cytorhodin V in einer Reinheit von 80 % an (Rf 0,38 im System A). 60 mg dieser Probe wurden durch präparative Dünnschichtchromatographie (Merck, DC-Fertigplatten Kieselgel 60) weiter gereinigt. Die Elution der herausgeschabten Banden erfolgte mit CHC13/Methanol 1 : 1. Die Elutionslösung wurde mit wässriger Dinatriumhydrogenphosphat-Lösung neutralisiert und mit Wasser bis zur Abtrennung der CHC13-Phase versetzt. Die Chloroformphase wurde separiert, einmal mit wenig Wasser gewaschen, über wasserfreiem Na2so4 getrocknet und eingedampft. Nach Aufnehmen in wenig Chloroform wurde mit der lOfachen Volumenmenge Petroläther gefällt und der Niederschlag i.V. getrocknet. Es wurden neben 12 mg Cytorhodin V 17 mg l-Hydroxy-Cytorhodin V erhalten. V: durch 1H-NMR identifiziert C6oH84N2020 > M ber, 1152 (FAB-MS bestätigt). 1-OH-V: 1H-NMR Abb.2 Absorptions- a) 237 (4,54) 295 (3)i2) 522 (4,03) 548 (3,86) 561 (368) spektrum b) 237 (4,57) 2)5 (3,79) 522 (4,10) 548 (3,93) 561 (3,93) (nm) c) 244 (4,46) 280 (3,76) 590 (3,99) 630 (4,04) C60H84N2021, M ber.: 1168 (FAB-MS bestätigt). Beispiel 6 Isolierung von l-Hydroxy-Cytorhodin B durch reverse phase HPLC. Eine durch übliche präparative Säulenchromatographie an Kieselgel (essigsäurehaltige mobile Phase) gewonnen violette Charge von Cytorhodin B wurde an einer mit 30 g 10 Lichrosorb(R) RP-18 (Merck) gefüllten Stahlsäule (1,6 x 25 cm) unter Druck chromatographiert. Dazu wurden 120 mg in 1 ml der mobilen Phase CHC13-MeOH-10 % Ammonacetat in Wasser 150 : 1050 : 375 gelöst und injiziert. Bei einem Fluss von 4 ml/Min. wurden Fraktionen von 4 ml aufgefangen und durch Messung der Extinktion bei 490 und 570 nm beurteilt. Zusammengehörende Fraktionen wurden vereinigt und wie üblich aufgearbeitet. Es wurden erhalten: Fr. 1 - 32 15 mg Cytorhodin B 38 - 50 10 mg l-Hydroxy-Cytorhodin B B: Identifizierung durch 1H-NMR, Absorptionsspektrum und FAB-MS 1-OH-B: 1H-NMR: Abb. 3 Absorptions- a) 259 (4,42) 290 (3,66) 522 (3,95) 549 (3,82) 562 (3,85) spektrum b) 238 (4,45)298 (3,57) 522 (4,03) 549 (3,91) 562 (3,93) (nm) c) 244 (4,41) 280 (3,62) 590 (3,93) 632 (4,01) C60H86N2022, M ber: 1186 (FAB-MS bestätigt). Beispiel 7 Isolierung von l-Hydroxy-Cytorhodin C durch reverse phase" HPLC. Ein durch übliche präparative Säulenchromatographie an Kieselgel gewonnenes rohes violettes Cytorhodin C haltiges Produkt (25 mg) wurde an einer mit 30 g 10 ii Lichrosorb(R) RP-18 (Merck) gefüllten Stahlsäule (1,6 x 25 cm) mit der Mischung CHC13-Methanol-10 % Ammonacetat in Wasser 150 : 1050 : 375 bei einem Fluss von 2 ml/Min. chromatographiert. Fraktionen von 2 ml wurden aufgefangen und nach Beurteilung durch Messung der Extinktionen bei 490 und 570 nm vereinigt. Nach üblicher Aufarbeitung wurden erhalten: Fr. 80 - 142 10 mg Cytorhodin C 159 - 175 7 mg l-OH-Cytorhodin C 1-OH-C: 1H-NMR Abb.: 4 Absorptions- a) 2110 (4,62) 296 (3,80) 523 (4,13) 550 (4,10) 562 (4,11) spektrum b) 240 (4,64) 296 (3,80) 523 (4,21) 550 (4,15) 562 (4,16) (nm) c) 243 (4,69) 270 (SCH) 300 (SCH) 590 (4,24) 635 (4,35) C60H80N2O23, M ber., 1196 (FAB-MS bestätigt). Beispiel 8 Isolierung von l-Hydroxy-Cytorhodin N + 0 durch "reversed phase" - HPLC. Durch übliche mehrstufige Säulenchromatographie an 31 p Kieselgel, pH 7,5, und anschliessend an 10 ii LiChrosorb(R) RP-18 (s.a. Beispiel 4) wurde eine stark violette Charge eines sich nach DC und analytischer HPLC an Kieselgel mit System B wie Cytorhodin N + 0 verhaltenden Produktes gewonnen, die durch wiederholte präparative HPLC an reverse phase"-Adsorbentien weiter in einen roten und einen violetten Anteil aufgetrennt werden konnte. Dazu wurden z.B. 230 mg des violetten Produktes in 4 ml der mobilen Phase CHC13-Methanol-l0 % Ammonacetat in Wasser 150 : 1050 : 375 gelöst und an ca. 100 g 10 ii Lichrosorb(R) RP-18 (Merck) in einer Stahlsäule 3,2 x 25 cm unter Druck bei einem Fluss von 4 ml/Min. chromatographiert. Fraktionen von 8 ml wurden gesammelt und nach Beurteilung durch analytische "reverse phase" HPLC mit Doppelwellenlängendetektion bei 490 und 560 nm zusammengefasst. Erhalten wurden nach üblicher Aufarbeitung: Fr. 70 - 85 97 mg Cytorhodin N + O (ca. 70 - 80 % Rein heit - nach 1H-NMR) 86 - 95 40 mg l-Hydroxy-Cytorhodin N + O (ca. 60 S Reinheit) Aus zwei ähnlichen chromatographischen Läufen wurden zusammen 73 mg l-Hydroxy-Cytorhodin N + 0 gewonnen und in der obigen Weise rechromatographiert. Erhalten wurden 18 mg l-Hydroxy-Cytorhodin N + O mit weniger als 10 S restlichem Cytorhodin N + 0. 1-OH-N + O: 1H-NMR Abb. 5 Absorptions- a) 240 (4,62) 295 (3,77) 523 (4,16) 550 (4,09) 562 (4,11) spektrum b) 240 (4,64) 295 (3,83) 523 (4,22) 550 (4,15) 562 (4,16) (nm) c) 244 (4,64) 280 (SCH) 592 (4,19) 634 (4,28) C60H88N2022, M ber., 1188 (FAB-MS bestätigt). - Das Iso- lierte Produkt ist ein 1 : 1 Gemisch der beiden strukturisomeren Komponenten 1-OH-N + 1-OH-0. Dies geht aus dem lH-NMR-Spektrum, Abbauversuchen (Hydrogenolyse) und Bestimmung der einzelnen Zuckerbausteine nach Hydrogenolyse und Totalhydrolyse hervor. Beispiel 9 Isolierung von l-Hydroxy-Cytorhodin P durch "reverse phase" -HPLC Durch übliche Säulenchromatographie an 31 ti Kieselgel pH 7,5 wurde ein stark violettes Produkt erhalten, dessen Hauptkomponente bei DC (System A) und analytischer HPLC an Kieselgel eine geringfügig höhere Retention als l-Hydroxy Cytorhodin C zeigte. Durch wiederholte präparative nreversed phase"-HPLC konnte die neue Verbindung isoliert werden. Dazu wurden z.B. 175 mg des violetten Rohproduktes in 2,5 ml der mobilen Phase CHC13-Methanol 15 S Ammonacetat in Wasser 500 : 1100 : 300 gelöst, und an ca. 100 g 10 LiChrosorb(R) RP-18 (Merck) in einer Stahlsäule 3,2 x 25 cm unter Druck bei einem Fluss von 4 ml/Min. chromatographiert. Das Eluat wurde in Fraktionen von 8 ml gesammelt und zusammengehörende Fraktionen nach Beurteilung durch analytische "reversed-phase"-HPLC mit Doppelwellen längendetektion bei 490 und 560 nm vereinigt. Erhalten wurden: nach analytischer reverse phase"-HPLC Fr.: 21 - 45 85 mg u.a. l-Hydroxy-Cytorhodine C und V 46 - 52 50 mg u.a. Cytorhodin P und nicht identi fizierte stärker polare Verbindungen 53 - 61 25 mg hauptsächlich l-Hydroxy-Cytorhodin P. Aus mehreren gleichartigen chromatographischen Läufen gewonnene stark angereicherte l-OH-Cytorhodin Chargen wurden vereinigt und erneut unter obigen Bedingungen chromatographiert. Aus ca. 80 mg wurden 20 mg reines l-Hydroxy Cytorhodin P erhalten. 1-OH-P 1H-NMR Abb.6 Absorptions- a) 238 (4,58) 292 (3,77) 522 (4,03) 549 (3,92) spektrum b) 237 (4,63) 296 (3,77) 522 (4,17) 549 (4,03) 561 (4,03) (nm) c) 2113 (4,65) 275 (3,85) 590 (4,11) 632 (4,17) C60H82N2022, M ber, 1182 (FAB-MS bestätigt). Experimentelle Bedingungen: 1. Hochdruckflüssigkeitschromatographie (HPLC) an Kieselgel: Stahlsäulen (4,6 x 250 mm), gepackt mit 7 ii LiChrosorb(R) Si 60 (Merck) oder 7 ii Kieselgel 60 (Grace); mobile Phase: CHCl3-Methanol-86%ige Essigsäure Triäthylamin-Wasser 80 : 10 : 10 : 2 : 0,01 Fluss; 0,5 - 1,5 ml/Min.; Nachweis bei 260 oder 490 nm mit Durchflussphotometer. 2. reverse phase" HPLC Stahisäulen (4,6 x 250 mm) gepackt mit 10 ti Lichrosorb(R) RP-18 (Merck) mobile Phase: CHC13-Methanol-10 S Ammonacetat in Wasser 250 : 1050 : 375 Fluss: 0,5 - 1,5 ml/Min.; Nachweis bei 490 nm und 560 nm mit Durchflussphotometer. Die verwendeten analytischen und präparativen HPLC Säulen wurden i.a. mit den von der Fa. Merck (Darmstadt) empfohlenen Verfahren mit Hilfe einer pneumatischen Pum pe (Haskel) selbst gefüllt. 3. Präparative Säulenchromatographie Zur üblichen präparativen Säulenchromatographie wurde 31 Kieselgel 60 (Gracc) oder 15-40 tj Kieselgel 60 (Merck) in offenen Glassäulen oder in unter Druck ge packten Stahlsäulen verwendet. Als mobile Phase dienten Lösungsmittelgemische ähnlicher Zusammensetzung wie das o.a. analytische HPLC System gegebenenfalls mit herab gesetzten Anteilen an Methanol, Essigsäure und Wasser. Zur Chromatographie v.a. starker polarer Komponenten wurde 31 Kieselgel 60 (Gracc) mit 2 N HC1 metallfrei gewaschen lmd nach Auswaschen der Säure in wässriger Suspension mit 5 N NaOH behandelt, bis sich ein pH von 7.5 eingestellt hatte. Nach Dekantieren wurde das modi fizierte Kieselgel bei 1300C getrocknet, gesiebt und mit der mobilen Phase in die Säule eingeschlämmt. Als mobile Phase wurden Lösungsmittelgemische CHCl3 / Wasser / Me thanol 13 : 4 3-7 eingesetzt. Das Belastungsverhältnis betrug etwa 1 : 100 - 1 : 300. 4. Dünnschichtchromatographie (DC) Kieselgelplatten F254 (Merck) wurden entwickelt mit System A: CHCl -Methanol-96 S Essigsäure-Wasser 3 Triäthylamin 80 : 10 : 10 : 2 : 0,01 oder System B: CHC13-Methanol-99%ige Essigsäure 75 : 15 : 10 : 2. 5. Übliche Aufarbeitung Die übliche Aufarbeitung wurde wie folgt ausgeführt: vereinigte Fraktionen aus reverse phase-HPLC, wurden mit etwa der Hälfte ihres Volumens an Wasser ver setzt und anschliessend Chloroform bis zur Phasentrennung zugegeben. Die abgetrennte Chloroformphase wurde mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Na2SO4 getrocknet und i.V. eingedampft. Die so erhaltenen Produkte wurden auf folgende Weise von begleitenden Fetten, Weichmachern und Metallionen befreit: das Produkt - z.B. 30 mg - wur den in 20 ml Natrium-Acetatpuffer, pH 3,5 gelöst, mit 1 ml 0,001 M wässriger Xthylendiamintetraessigsäure (EDTA; mit NaOH auf pH 3,5 eingestellt) versetzt, und mit 5 ml Toluol geschüttelt. Die Toluolphase wurde verworfen, die wässrige Phase mit 2 N NaOH auf pH 7,5 eingestellt und mit 20 ml CHCl3 unter gutem Schütteln extrahiert. Nach dem Trocknen über wasserfreiem Na2 SO4 wurde filtriert und im Vakuum eingedampft. Gegebenenfalls wurde der Rückstand in wenig CHCl3 gelöst, die Lösung durch eine Glasfritte abgesaugt und nach Zusatz von Heptan bis zur Trübung i. V. eingedampft. 6. Spektroskopische Untersuchungen Die Identifizierung der Komponenten in den vorstehenden Beispielen erfolgte unter den anschliessend beschriebenen Messbedingungen: Die Protonen-Resonanzspektren (1H-NMR-Spektren) wurden auf einen HX-270 BRUKER Fourier-Transform Kernresonanz spektrometer bei 270 MHZ gemessen. Die Konzentrationen betrugen 2 - 4 mg/0,5 ml 99,8 S CDC13; die Lösungen wur den sofort nach Herstellung mit 0,1 ml 5%Der Na2co3 in 99,5 S D20 geschüttelt. Die in den Abbildungen mit einem Stern versehenen Sig nale rühren her von niedermolekularen Verunreinigungen im Zo-Bereich und von Lösungsmittelresten. Die Massenspektren wurden auf dem Massenspektrometer MS-902 S, AEI, unter Verwendung einer FAB-(Fast-Atom Bombardment-) Ionenquelle gemessen. Die Substanzen wur den in einer Matrix von Thioglycerin in die Ionenquelle eingebracht, teilweise unter Zusatz von Ammoniumchlorid. Die Absorptionsspektren wurden im Bereich 200 - 700 nm gemessen in: a) Wasser-Methanol 1 : 9 b) 10 S 1 n HC1 in Methanol c) 10 S 1 n NaOH in Methanol. Die Substanzkonzentration betrug 10 - 30 mg/l; angegeben werden die Absorptionsmaxima in nm und die molaren Ex tinktionskoeffizienten (log E). 7. Ermittlung der zytotoxischen Aktivität Die Bestimmung der zytostatischen Wirksamkeit der hier beschriebenen Verbindungen erfolgte an L1210 Leukämie- zellen der Maus. Im einzelnen wurden folgende Test systeme verwendet: a) Proliferationsassay Bei dieser Methode wird in vitro nach Inkubation der Zellen mit unterschiedlichen Konzentrationen der Testsubstanz ermittelt, inwieweit die Zellen radioaktive DNA-Vorläufer (z.B. C14 markiertes Thymidin) einbauen können. Unbehandelte L1210 Zellen werden den gleichen Testbedingungen unterworfen und dienen als Kontrolle. Im folgenden ist die Methode kurz beschrieben. L1210 Zellen in exponentieller Wachstumsphase (5 x 103/ml in RPMI 1640) werden in einer Mikrotiterplatte 72 Stunden mit unterschiedlichen Konzentrationen der Testsubstanz inkubiert (370C, 5 S CO2, 95 % relative Luftfeuchte). Kontrolle bestehen aus Zellen, die lediglich mit frischem Medium inkubiert werden. Alle Bestimmungen werden als 4fach Bestimmungen durchgeführt. Nach 65 Stunden werden 50 1 C-1 14 Thymidin (1,5 ssc/ml) zugegeben, um die DNA der Zelle radioaktiv zu markieren. Nach 7 Stunden Inkubation werden die Zellen abgesaugt, die DNA mit 5hier Trichloressigsäure gefällt und nacheinander mit Wasser bzw. Methanol gewaschen. Nach Trocknung bei 500C wird die in die DNA eingebaute Radioaktivität nach Zugabe von 5 ml Szintilla tionsflüssigkeit ermittelt. Die Ergebnisse werden angegeben als Verhältnis des Szintillationsindex nach Inkubation mit der Testsubstanz in Prozent der unbehandelten Kontrolle. Aus den so erhaltenen Messwerten wird die Dosiswirkungskurve ermitelt und graphisch die 1C50, d. h. die Konzentration, die unter Testbedingungen den Einbau von radioaktivem Thymidin um 50 S gegenüber der Kontrolle erniedrigt, ermittelt. Die IC50Werte der hier beschriebenen Verbindungen im Vergleich zu Adriamycin (ADM) werden in der Tabelle 1 zusammengefasst. b) Koloniebildung von L1210 Leukämiezellen in soft agar. Diese Methode dient zum Nachweis eines Einflusses der Testsubstanzen auf das Wachstumsverhalten der Zellen über mehrere Generationen (bei einer Zellzykluszeit von 10-12 Stunden werden in der Testzeit von 7 Tagen ca. 14 aufeinanderfolgende Generationen beobachtet). Zytostatisch wirksame Substanzen bewirken in diesem Test eine Reduktion der zu beobachtenden Koloniezahl gegenüber einer unbehandelten Kontrolle. Im einzelnen wird der Test wie folgt durchgeführt: 500 Leukämiezellen pro Platte werden mit unterschied lichen Konzentrationen von Testsubstanz 1 Stunde bei 370C inkubiert. Anschliessend werden die Zellen zwei mal mit McCoy5A Medium gewaschen und schliesslich in Petrischalen nach Zusatz von 0,3 % Agar ausgegossen. Kontrollen werden lediglich mit frischem Medium inkubiert. Anstelle der lstündigen Inkubation werden in manchen Fällen unterschiedliche Konzentrationen und Testsubstanz der oberen Agarschicht zugemischt, um so eine kontinuierliche Exposition der Zellen über die gesamte Inkubationszeit zu erreichen. Nach Er starren des Agars werden die Platten im Brutschrank 7 Tage bei 370C inkubiert (5 S C02, 95 S relative Luftfeuchtigkeit). Anschliessend wird die Anzahl der entstandenen Kolonien mit einem Durchmesser 60 gezählt. Die Ergebnisse werden angegeben als Kolonie zahl in behandelten Agarplatten in Prozent der unbe handelten Kontrolle. Aus der so erhaltenen Dosiswirkungskurve wird die 1C50 als Mass für die Wirksamkeit der Substanz ermittelt. Die Ergebnisse für die hier beschriebenen Verbindungen im Vergleich zu Adriamycin sind in der Tabelle 1 zusammengefasst. Tabelle 1 Proliferationstest Koloniebildungstest IC50 (g/ml) IC50 (g/ml) 7 Tage 1 Stunde Inkubation Inkubation ADM 6,o x 10-3 2,2 x 10-2 4 ,in x 10 2 l-0H-Cytorhodin A 3 x 10-3 2,8 x 10-3 2,6 x 10-2 V 2,8 x 10-3 4,5 x 10-4 2,4 x 10-3 Wie vorstehend ausgefUhrtt besitzen die erfindungsgemässen Verbindungen zytostatische Wirksamkeit, d.h. therapeutische Wirkung gegen Tumoren, insbesondere maligne Tumoren bei Tieren und Menschen. Die Verbindungen und die Säureadditionssalze können daher als Medikamente zur Behandlung von Tumoren verwendet werden. Die Verbindungen können auf verschiedene Weise in Abhängig kei von der Dosierungsform verabreicht werden. Normaler weise werden die Verbindungen mit pharmazeutisch üblichen Trägerstoffen oder Verdünnungsmitteln vermischt verabreicht. So können sie z.B. einzeln oder in Mischung zusammen mit Trägerstoffen wie Maltose oder Lactose oder als nicht toxische Komplexe, z.B. als Desoxyribonukleinsäure-Komplex verabreicht werden. Eine typische Verabreichungsart ist die Injektion einer Lösung der erfindungsgemässen Verbindungen in destillier tem Wasser oder in physiologischer Kochsalzlösung. Die Lösungen können intraperitoneal, intravenös oder intra arteriell injiziert werden. Tagesdosis und Einheitsdosis können aus Tierversuchen und auch aus in vitro-Tests in der Weise festgesetzt werden, dass die Gesamtdosis, die kontinuierlich oder in Abständen verabreicht wird, einenvorher festgelegten Bereich nicht -überschreitet. So beträgt die Gesamtdosis für einen Behand lungszyklus etwa 0,5-5 mg/kg Körpergewicht. Diese Dosis kann in entsprechenden Bruchteilen über einen Zeitraum von 7 Tagen verabreicht werden. Es ist jedoch klar, dass konkrete Dosen für die Behandlung von Mensch oder Tier individuell festgelegt werden können in Abhängigkeit von der jeweiligen Situation, z.B. Alter, Körpergewicht, Geschlecht, Ewpfind- lichkeit, Nahrung, Zeitpunkt der Verabreichung, weiterenverabreichten Medikamenten, körperlichem Zustand der Patienten und Schwere der Erkrankung.

Claims: PATENTANSPRÜCHE 1. Verbindungen der Formel I EMI27.1 worin R1 Wasserstoff oder den Rest OR3 und R2 die Reste -OR4 oder -COOR5 bedeuten, wobei R5 C1-C3-Alkyl bedeu tet und R3 und R4 gleich oder verschieden sind und für Wasserstoff oder eine Zuckerkombination der folgenden Zusammensetzung stehen: Roa-dF-Rod, Roa-dF-CinA, Roa-dF=CinB, Roa-Rod-Rod, Roa-dF-Acu, Roa-Rod-CinA, Roa-Rod-Acu oder Rod-Rod-Rod, worin Roa Rhodosamin, dF Desoxyfucose, Rod Rhodinose, Acu Aculose, CinA Cinerulose A und Cin B Cinerulose B bedeutet und dF = Cin B bedeutet, dass die beiden Zuckerbausteine durch eine zusätzliche Ätherbrücke ne ben der üblichen glykosidischen Bindung verknüpft sind, sowie deren physiologisch unbedenkliche Säure additionssalze. 2. Verbindungen der Formel I gemäss Anspruch 1, worin R1 den Rest -OR3 und R2 den Rest OR4 bedeuten, wobei R3 und R4 gleich oder verschieden sind und für eine der genannten Zuckerkombinationen stehen. 3. Eine Verbindung gemäss Anspruch 2, wobei R3 die Zucker kombination Roa-Rod-Rod und R4 die Zuckerkombination Roa-Rod-Rod darstellt, sowie deren physiologisch unbe denkliche Säureadditonssalze. II. Eine Verbindung gemäss Anspruch 2, wobei R3 die Zucker kombination Roa-Rod-Rod und R4 die Zuckerkombination Roa dF-Cin A darstellt, sowie deren physiologisch unbedenkliche Säureadditonssalze. 5. Eine Verbindung gemäss Anspruch 2, wobei R3 und R4 die Zuckerkombination Roa-dF=Cin B darstellen, sowie deren physiologisch unbedenkliche Säureadditonssalze. 6. Eine Verbindung gemäss Anspruch 2, wobei R3 die Zuckerkom bination Roa-dF-Rod und R4 die Zuckerkombination Roa-Rod Rod darstellt, sowie deren physiologisch unbedenkliche Säureadditionssalze. 7. Eine Verbindung gemäss Anspruch 2, wobei R3 die Zuckerkom bination Roa-Rod-Rod und R4 die Zuckerkombination Roa-dF Rod darstellt, sowie deren physiologisch unbedenkliche Säureadditionssalze. 8. Eine Verbindung gemäss Anspruch 2, wobei R3 die Zuckerkom bination Roa-Rod-Rod und R2 die Zuckerkombination Rod Rod-Acu darstellt, sowie deren physiologisch unbedenkliche Säureadditionssalze. 9. Eine Verbindung gemäss Anspruch 2, wobei R1 die Zucker kombination Roa-Rod-Acu und R2 die Zuckerkombination Roa-dF-Cin A darstellt, sowie deren physiologisch unbe denkliche Säureadditionssalze. 10. Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der Formel I gemäss Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass der Mikro organismus Streptomyces purpurascens (DSM 2658) bei erhöhter Sauerstoffversorgung auf sonst übliche Weise unter aeroben Bedingungen in Gegenwart eines Nährmediums fermentiert wird, und die gebildeten Verbindungen aus der Kulturflüssigkeit und dem Mycel durch Extraktion mit or ganischen Lösungsmitteln und anschliessende Chromato graphie oder Verteilung in üblicher Weise isoliert werden. 11. Verfahren gemäss Anspruch 9, dadurch gekennzeichnet, dass der Mikroorganismus Streptomyces purpurascens DSM 2658 in einem Kohlenstoff- und Stickstoffquellen sowie anor ganische Nährsalze und Spurenelemente enthaltenden Nährmedium bei Temperaturen von 24 - 400C und einem pH von 6,5 - 8,5 fermentiert wird, die gebildeten Ver bindungen aus der Kulturflüssigkeit mit Ethylacetat und Chloroform und aus dem Mycel zunächst mit wässrigem Ace ton, aus der abgetrennten wässrigen Phase sodann mit Ethylacetat extrahiert werden, die vereinigten Ethyl acetatextrakte konzentriert und mit Benzol oder Toluol aufgenommen, die erhaltene Lösung mit einem Ace tatpuffer bei einem pH-Wert von 3,5 extrahiert wird und aus der erhaltenen Lösung durch Chromatographie oder Verteilung die Verbindung en der Formel 1 isoliert wer den. 12. Verfahren gemäss Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, dass die chromatographische Isolierung der Verbindungen der Formel 1 durch Kieselgel-Säulen, "reversed phase-Adsor- bentien, Tropfen-Gegenstrom-Chromatographie oder Vertei lung und anschliessende Dünnschicht- oder Hochdruckflüssig- keitschromatographie erfolgt. 13. Verfahren zur Herstellung von Arzneimitteln, dadurch ge kennzeichnet, dass man eine Verbindung der Formel 1 gemäss Anspruch 1, gegebenenfalls mit üblichen pharmazeutischen Trägern und/oder Stabilisatoren in eine therapeutisch geeignete Darreichungsform bringt. 14. Arzneimittel, gekennzeichent durch einen Gehalt an einer Verbindung der Formel I gemäss Anspruch 1. 15. Verbindung der Formel 1 gemäss Anspruch 1 zur Verwendung als Arzneimittel.

Inventors: ARETZ, WERNER, DR., BERSCHEID, HANS GERD, DR., BOTTGER, DIRK, DR., FEHLHABER, HANS-WOLFRAM, DR., KRAEMER, HANS PETER, DR., Böttger, Dirk, Dr.
Applicants: HOECHST AKTIENGESELLSCHAFT
Application year: 1985
Main classification: C07H15
IPC codes: A61K31, C07C45, C12P19, C12R1, C07H15, C07C67, A61P35, C07C50