STRIP FOR IMMUNOLOGICAL ANALYSIS AND METHOD FOR ITS PREPARATION

Abstract: This strip consists of a narrow backing sheet (1) made of a semi-rigid material, for example PVC, bearing a plurality of nitrocellulose pads (2) each possessing a zone (3) impregnated with a reactant, facing a large-diameter hole (4) in the backing (1). This strip is formed by applying a nitrocellulose sheet to a backing sheet (1) and advancing it in contact with spaced heating members in order to burn spaced bands of the nitrocellulose and thereby to weld the edges of the remaining bands to the backing sheet. The reactants are applied longitudinally to the remaining bands, and the whole is impregnated with protein and cut in the wet state into strips transversely to the said remaining bands. <IMAGE>

Description: Bandelette d'analyse immunologique et procédé pour sa fabrication. La presente invention concerne, d'une façon géné rale, les analyses OU tests médicaux, notamment d'immunologie ou d'allergologie, et elle est plus particulièrement relative Åa des moyens destinés à être utilisés pour effectuer de tels analyses ou tests d'une façon commode, ainsi qu'a la fabrication de ces moyens. On sait que ces analyses ou tests sont effectués en utilisant une phase solide sur laquelle sont fixes, par liaison stable, covalente ou non, des antigènes dont des allergènes ou des anticorps ; cette phase solide prut notamment être constituée par diverses membranes poreuses dont la plus connue est Åa base de nitrocellulose avec laquelle on met er. contact des prélèvements sur des malades, puis les divers réactifs de révélation des réactior.s spécifiques antigènes-anticorps. La nitrocellulose utilisée pour ces examens est une matière fragile, cassante facilement contaminable, qui implique des mdripulations extrêmement délicates nécessitant notamment des conditions hygrométriques particulières. On a, en conséquence, réalisé des feuilles composites formées d'un support sur lequsrl est fIXé±: une feuille de nitrocellulose, commr: décrit, par exemplc, dais la demande de brevet européen n 0063810 Ciba-Geigy AG, ces feuilles composites étant découpées en bandes suivant les besoins, pour chaque analyse. Cependant, la nature fragile de la nitrocellulose n'a pas permis jusqu'à présent une fabrication en série automatisée Ct peu coûteuse de ces feuilles composites. Par ailleurs, leur utilisation n'est pas extrêmement commode, notamment pour la lecture des résultats dans les appareils d'examen (réfractomètres, densimètres ou autres). D'autres par, ces feuilles composites ont une sensibilité qui est loin d'être optimale et sont dc plus difficiles a laver et à@sécher. L'invention a pour but de remédier Åa ces inconvénients en réalisant des moyens d'analyse du type ci-dessus sous forme individuelle pour chaque malade, d'une manipulation et d'un examen faciles aux instruments de mesure et présentant une sensibilité accrue, et en fournissant un procédé de fabrication industrielle de ces moyens. Elle a pour objet a cet effet une bandelette d'analyse ou de test médical, notamment d'immunologie, du type précité, caractérisée e ce qu'elle comporte une pluralité de plages sucessives de membranes de nitrocellulose ou d'une autre membrane présentant les mêmes propriétés, fixées sur une étroite bandelette allongée de support en matière semirigide, chacune desdites plages comportant, d'une façon connue en soi, une zone imprégnée de réactif, la plage étant elle-mêmc saturée de protéine, ladite bandelette présentant, au droit de chaque zone, une ou plusieurs perforations de grande surface par rapport a l'épaisseur de la membrane. Les plages de membrane peuvent être reliées d la bandelette de support par collage mais de préférence elles sont soudées sur le support. De préférence, les plages successives de membrane sont séparées lrs unes des autres par des espaces dépourvus de membrane. La bandelette de support peut comporter des repères codes correspondant à chaque plage ou zone réactive. Elle peut également comporter, de façon avantageuse, des moyens d'indexation et/ou d'entraînement pour coopérer avec un appareil d'examen. Ces moyens d'indexation et/ou d'entraîne mf:rt peuvent, par exemple, consister e; un ou de préférence dcux ou plusieurs trous ou perforations pratiqués de préferonce dans ure partie de la bandelette de support dépourvue de membrane, de préférence vers une cxtremité de la bandelet- te. L'invention a également pour objet ur procédé de fabrication ae ces moyens d'analyse ou de test, caractérise en ce que l'on applique une feuille de membrane adsorbante de nitrocellulose ou d'un autre matériau présentant les mêmes propriétés sur une feuille de support en matière semirigide, préalablement perforée d'une pluralité de trous au droit des emplacements des zones de réactifs, que l'on fixe la feuille de membrane sur la feuille de support, que l'on applique les réactifs sur les zones de plages successives, et que l'on sature, d'uns façon en soi cornue, la membrane de protéine. De préférence, les dimensions des feuilles de membrane et de support correspondent a une pluraliste de bandelettes adjacentes et, dans ce cas, on découpe les feuilles superposées et fixées, à l'état encore humide après saturation de protéine. La fixation de la feuille de membrane sur le support peut s'effectuer par collage, notamment avec des colles souples, du type colle caoutchouc, mais de préférence on réalise cette fixation par soudage à la chaleur ou aux ultrasons. De façon particulièrement préférée, on peut réaliser cette fixation en enlevant la membrane par chauffage chaque fois entre deux plages successives, ce qui réalise simultanément le soudage des plages de membrane sur la feuille de support et la formation d'espaces dépourvus de membrane entre deux plages consécutives, le découpage final s'effectuant perpendiculairement aux lignes de soudage. Suivant une autre caractéristique de l'invention, la préparation des feuilles composites est réalisée jusqu' d la dépose des réactifs en conservant, sur la face non encol létt, un papier de protection de la membrane qui est seulement soulevé mécaniquement pendant la phase de brûlage des zones de separation des plages réactives. Suivant un mode de mise en oeuvre avantageux de l'invention, lesdits réactifs sont appliqués sous forme de traits rectilignes ap moyen de styles mais, en variante, ils peuvent l'être sous forme de points grâce a des micropipettes. D'autres avantages et caractéristiques de l'invention apparaîtront au cours de la description qui va suivre faite en se référant au dessin annexé donné uniquement a titre d'exemple et dans lequel la figure 1 est une vue de dessus d'une bandelette d'analyse immunologique suivant l'invention la figure -2 est une vue en coupe longitudinale de cette bandelette la figure 3 est une vue de dessus des feuilles de nitrocelluloste et de support avant l'application des réactifs. En se référant a la figure 1 du dessin, une bandelette individuelle d'analyse immunologique suivant l'invention comprend une lame ou bandelette de support 1 sur laquelle sont fixées Åa intervalles égaux des plages sous forme d plaquettes 2 de nitrocellulose. Chaque plaquette 2 comporte une zone rectiligne ou ponctuelle 3 imprégnée d'un réactif tel qu'un allergène ou plus généralement un antigène ou un anticorps. L'ensemble de chaque plaquette a, d'autre part, été imprégné et sature de protéine, par exemple une albumine La lame 1 de support de chaque bandelette comporte au droit de chaque plage 2 unc perforation 4 ayant un grand diamètre par rapport à l'épaisseur de membrane formant la plage et se projetant donc sur une grande partie de la zone rectiligne de réactif 3. Dans cette forme de réalisation, chaque plage ou plaquette 2 est séparée dc la plaquette adjacente par un espace 5 dont la largeur représentée est assez faible, mais qui pourrait autre plus importante, et t provenant, commit on le verra, de l'opération d( soudage. A l'extrémité de droite, la bandelette présente une portion de support 1 assez longue, depourvue de nitrocellulose et munie de deux perforations écartées 6, 7 servant pour la fabrication, l'indexage et/ou l'avancement de la bandelette dans un apparèil de lecture. Lorsqu'on désire effectuer une analyse ou un test d'immunologie, on dépose sur chaque zone 3 de réactif une quantité appropriée d'un prélèvement effectué sur un malade puis de solution de lavage et de marquage, et on fait passer la bandelette dans un appareil de mesure tel qu'un réfracto- mètre, un densitomètre ou autre en faisant passer successive- ment chaque plaquette 2 dans les appareils d'examen a l'aide d'un mécanisme d'avance pas a pas d'un type quelconque approprié connu dans la technique (qui ne fait pas partir de l'invention). La lame 1 est avantageusement constituée d'une matière semi-rigide telle que, par exemple, du chlorure de polyvinyle (PvC). Son épaisseur est de préférence de l'ordre de 200 a 800 La manipulation de ces bandelettes d'analyse est facile en raison de la nature non cassante du support tandis que la nitrocellulose est extrémement fragile. En outre, le traitement des bandelettes par les différents réactifs est facile ainsi que la lecture des résultats des réactifs dans les appareils utilises dans cette technique. Les opérations de lavage et de séchage de la bandelette s'cffectue.lt dans les meilleures conditions sur les deux faces de chaque zone 3 et on obtint une grande sensibilité de détection. La séparation des plaquettes 2 par des partis dépourvues de nitrocellulose facilite l'application de la substance a examiner et évite des erreurs. En outre, des réactifs complémentaires peuvent être associés a la ou aux substances a examiner pour un mmc malade. On se réfère maintenant Åa la figure 3 a l'aide de laquelle va être détaillé le procédé de fabrication des bandelettes selon 1' invention. On utilise initialement une feuille 8 de membrane nitrocellulose sur laquelle est appliquée une feuille de protection en un papier mince. L'épaisseur de la feuille 8 est de 100 a 200t . La face découverte de la feuille 8 de nitrocellulose est appliquée sur une feuille de support 9 en un matériau approprié semi-rigide tel que du chlorure de polyvinyle, la feuille de support 9 étant préalablement perforée par estampage d'une pluralité de trous 4, 6, 7 disposés en rangées longitudinales. Ces trous 4, 6, 7 sont effectués par une presse et une matrice de poinçons. La face de la feuille de support 9 destinée a recevoir la feuille de membrane 8 est celle dépourvue des ébarbures de poinçonnage. On peut facultativement enduire, par exemple a l'aide d'un rouleau, la face de la feuille 8 destinée a être appliquée contre le support 9, d'une colle, par exemple d'une colle souple du type solution de caoutchouc.La feuille 8 est saisie, du côté de la feuille de protection de papier qui la recouvre, a l'aide d'un plateau formant ventouse de transport puis est appliquée contre la feuille 9, le plateau formant presse. On obtient ainsi une excellente planéité de la membrane 8 sur la feuille de support 9. Après avoir soulevé la feuille de papier de protoc- tion, on applique sur l'ensemble soit une rangée d'organes chauffants d'environ 1 mm de largeur chacun et on fait défiler l'ensemble de façon que les organes chauffants décrivent des trajectoires rectilignes formant des rainures 5 par élimination de la nitrocellulose sous-jacente, soit une pression avec un plateau composé de lignes chauffées et de zones réfrigérées, cette opération provoquant simultané- ment le soudage des bandes 10 de nitrocellulose délimitées entre les rainures 5, et ceci au niveau des bords desdite bandes 10. On effectu ensuite le dépôt des réactifs sur les zones de test soit sous forme d'une micro-goutte, soit sous forme d'un trait régulier 3 d'une largeur adaptée à la feinte de l'appareil de lecture. Cette charge nécessite un dispositif d 'avance. a vitesse constante de l'ensemble des feuilles 8 et 9 et une batterie de micro-pipettes ou de styles de hauteur préglable avec une grande précision a partir de la surface de la membrane de nitrocellulose. On comprend que chaque bande 10 reçoit un seul et même réactif. Après ce traitement, l'ensemble est imprégné par exemple par trempage dans une solutio. d'albumine ou oe caséine, plus économique et tout aussi efficace, qui pénètre la feuille 8 de nitrocellulose par sa face libre et a travers les trous 2 de la feuille de support. Après égouttage et séchage partiel, l'ensemble encore humide est découpé transversalement en bandelettes, par exemple au moyen d'un massicot comme indiqué par les traits interrompus 11, formant ainsi des bandelettes telles que représentées à la figure 1, présentant chacune des plages alternées 5 de PVC et des plaquettes 2 de nitrocellulose présentant chacune une zone 3 imprégnée de réactif. Le massicot peut strie muni d'ergots correspondant aux trous 6 et 7 pour réunir automatiquement toutes les bandelettes issues d'un meme ensemble de feuilles 8 et 9 en les empilant. D'une façon avantageuse, la feuille de support 1 en PVC ou polystyrène est pourvue de repères codes tels que Y dans des positions prédéterminées de façon d correspondre a chaque plaquette. On effectue ensuite le séchage final jusqu'au dégré d'hygrométrie convenable, puis un contrôle d'activité, puis éventuellement l'impression des données d'étalonnage. Les bandelettes peuvent ensuite etre conditionnées en tubes ou sous forme individuelle formant, après ouverture, cuvétte d'incubation pour les essais et tests ultérieurs.

Claims: A strip for analysis or medical testing, particularly in the field of immunology or allergology, of the type comprising a membrane of nitrocellulose bound to a support, characterised in that it includes : a narrow elongated strip (1) made of a semi-rigid backing material, a plurality of successive nitrocellulose areas (2) bound to said support, each of said areas including a reagent-impregnated zone (3), the area being itself protein-impregnated, a plurality of perforations (4) with a large surface area made in said support opposite each reactive zone. A strip according to claim 1, characterised in that the membrane areas (2) are bonded onto the support. A strip according to any one of claims 1 and 2, characterised in that successive areas (2) are separated from each other by spaces (5) devoid of membrane. A strip according to any one of claims 1 to 3, characterised in that said backing strip (1) consists of polyvinyl chloride or polystyrene. A strip according to any one of claims 1 to 4, characterised in that each zone (3) takes the form of a linear streak or a succession of spots. A strip according to any one of claims 1 to 5, characterised in that the backing strip has a thickness comprised between 200 and 800 microns. A strip according to any one of claims 1 to 5, characterised in that the membrane of nitrocellulose has a thickness comprised between 100 and 200 microns. A strip according to any one of claims 1 to 7, characterised in that it is provided with indexation and/or driving means (6,7). A strip according to claim 8, characterised in that it includes holes (6,7) at one end of the support (1) devoid of membrane. A process for making a strip for analysis or testing as defined in any one of claims 1 to 9, characterised in that a sheet (8) of nitrocellulose membrane or some other material with similar properties is applied to a backing sheet (9) of semi-rigid material which has previously been perforated with several holes opposite the location of the zones for the reagents, that the membrane sheet (8) is bound to the backing sheet (9), that the reagents are deposited on the successive zones of areas and that the membrane of nitrocellulose is saturated with protein. Process according to claim 10, characterised in that an assembly of sheets intended for the production of several strips is cut while still moist after protein saturation. Process according to any one of claims 10 and 11, characterised in that the membrane sheet (8) is bound to the backing sheet (9) by means of heat-treatment or ultrasound bonding. Process according to claim 12, characterised in that the heat-bonding is carried out by removing the membrane between successive pairs of areas (2), so as to form spaces (5) without membrane between successive areas (2). Process according to claim 13, characterised in that the nitrocellulose sheet (8) is covered by a thin protective sheet and that this protective sheet is removed to expose the nitrocellulose before the heat-treatment and bonding of the strips onto the support (1). Process according to any one of claims 10 to 14, characterised in that the membrane sheet (8) is glued to the backing sheet (9). Process according to any one of claims 10 to 15, characterised in that the reagents are applied in the form of linear streaks using styles or as spots by means of of micropipettes. Process according to claim 11, characterised in that the assembly is cut whilst still moist following impregnation of the strips with protein, transversely to the remaining strips, using a trimmer combined with a mechanism for stacking the cut strips. Process according to claim 13, characterised in that the alternating strips of nitrocellulose are heated and burned using a transversal row of heating elements progressing along the membrane sheet (8).

Inventors: DE WECK, ALAIN LADISLAS, GUERIN, BERNARD
Applicants: DE WECK, ALAIN LADISLAS, GUERIN, BERNARD
Application year: 1985
Main classification: G01N33
IPC codes: C12Q1, G01N33, A61K39