PROCESS FOR DETECTING HOUSE DUST CONTAINING ALLERGENS

Abstract: 1. Process for detecting the presence of allergencontaining house dust such as is produced during or after the appearence of house dust mites, in which samples of dust appearing in buildings are thoroughly suspended in aqueous-alcoholic alkali metal hydroxide solution, and a colour reaction is carried out with the resulting extract using an aromatic diazo compound, characterized in that in order to evaluate the allergological activity of the dust sample, quantitative measurement of the colour intensity of the colour reaction is carried out.

Description: Verfahren zum Nachweis von allergenhaltigem Hausstaub Beschreibung Dem Auftreten von Hausstaubmilben (Dermatophagoides pteronyssinus, farinae etc.) wird in neuerer Zeit zunehmend Aufmerksamkeit gewidmet (G. Hoffmann in "Luftqualität in Innenräumen" Gustav Fischer Verlag Stuttgart - New York 1982, Seite 385 bis 401). Grund dafür ist, dass festgestellt wurde, dass ein beträchtlicher Teil der Bevölkerung - man rechnet mit etwa 5 % - unter asthmatischen Erscheinungen leidet, die auf Bestandteile des Hausstaubes zurückzuführen sind. Bei diesen Eestandteiler. handelt es sich hauptsächlich um den Kot der e.g. Hausstaubmilben sowie ur. Bruchstücke abgestorbener Milben. ir. Darmtrakt der lebenden und abgestorbenen Milben sind die die Gesundheitsstörungen auslösenden Allergene enthalten (E. Petri et al in Alergologie, Jg. 5, Nr. 3/1982 Seite 109 bis 119). Eine lebende Milbe selbst enthält nur etwa ein Tausendstel der Allergenmenge, die sie in der Zeit ihres Lebens erzeugt. Der Kot selbst ist vielfach von Pilzen besiedelt, die ihrerseits ebenfalls Allergene hervorbringen können. Die Hauptmenge der Allergene befindet sich in den Staubablagerungen, und zwar auch dann noch, wenn die ursprüngliche Milbenpopulation durch Bekämpfungsmassnahmen abgetötet bzw. reduziert wurde. Xufenthaltsorte der Hausstaubmilben sind Polstermöbel, Betten, Fussböden und Hände, insbesondere wenn sie mit textilen Materialien überzogen sind. Flachemässig gesehen dürften Teppichböden die grösste Rolle spielen. Von den Fussböden und Polstermöblen wird durch Begehen und Benutzen Feinststaub aufgewirbelt, der sich oft an unzugänglichen Stellen, die weitgehend frei von Luftzug sind, z.B. hinter Schränken, ansammelt. Auch beim Staubsaugen selbst wird dieser Feinststaub z.T. aufgewirbelt und gelangt so auch an Stellen, die selbst nicht von Milben besiedelt sind. In allen Fällen führt erneutes Aufwirbeln zu erneuten Belästigungen der Bewohner der betreffenden Räume. Die Beseitigung der Ursachen für die Hausstaub-Allergie hat zur Voraussetzung, dass die Ursache erkannt wird. Denn es gibt auch andere Allergien, z.B. gegen Pollen (Heuschnupfen). Die Hausstaub-Allergie belästigt jedoch die davon betroffenen Menschen das ganze Jahr über, da Milbenkot und Milbenreste praktisch ununterbrochen vorhanden sind. Arzt und Patienten stehen deshalb immer wieder vor der Frage, ob ein Milbenbefall vorliegt. Mit der europäischen Patentanmeldung & 11R705.2 sowie der weiteren europäischen Patentammeldung 85101299.7wurde der Weg zur Lösung der Aufgabe beschrieben, ein einfaches Verfahren zum Nachweis allergenhaltiger Milben-Rückstände zu finden. Aufgrund der vorhandenen aromatischen Diazo-Verbindung, z.B. Diazosulfanilsäure, bildet sich bei Anwesenheit von Milben Lxkrementen eine ziegelrote Färbung, die, wie die Anmelderin festgestellt hat, in ihrer Intensität proportional zu der in der Staubprobe vorhandenen Milbenkot-Konzentration ist. In Weiterführung dieser Arbeiten hat sich nun ergeben, dass der In Hauptpatent beschriebene Weg zur Beurteilung der Milbenkot Konzentration auch geeignet ist für die Beurteilung der aller gologischen Gesamtaktivität Giner Staubprobe. Damit ist es nicht nur möglich, allergenhaltigen Hausstaub durch eine Farbreaktion qualitativ und halbquantitativ nachzuweisen, sondern darüber hinaus auch eine Aussage über die Belastung durch Allergene zu machen, die in diesem liausstaub enthalten sind. Bestätigt wird dies durch einen Vergleich der Messergebnisse nach dem erfindungsgemässen Verfahren mit derjenigen Testmethode, die, dem Stand der Technik entsprechend, derzeit als die wirksamste anzusehen ist, d.h. mit dem Radio-Allergo Sorbens-Test (RAST). Die statistische Auswertung der Untersuchungsergebnisse, die an gleichen Staubproben sowohl mit RAST als auch dem hier beschriebenen Verfahren (mit Hilfe der Farbreaktion)gewonnen wurden, sowie deren Bezug auf die mikroskopisch kontrollierte Milbenpopulation erbringt einen hohen Grad von Ubereinstimmung in der Beurteilung der allergologischen Gesamtaktivität, wobei die Auswertung nach der Spearman-Correlticn-Coefficiet- Methode erfolgte (Sidney Siegel, "Nonparametric Statistics", McGraw Hill Intern. Bock Comp., Auckland (1956)). im Vergleich mit RAST ist cas erfindungsgemässe Verfahren einfacher durchzuführen, da die betreffende Staubprobe lediglich extrahiert werden muss und die Farbintensität dann direkt im Extrakt gemessen werden kann. Die Methode nach RAST ist bereits vom Yonzept her aufwendiger und unterliegt in ihren einzelnen Schritten der ihr gemässen Problematik; so wird versucht, von der Indizierung mit radioaktiven Substanzen wieder wegzukor.men (s. dazu D. Nolte "Allergiediagnostik", Dustri-Verlaq, Karl Feistle, München-Deisenhofen (1981), insbesondere Seite 29 ff. sowie M. Werner & V. Ruppert "Praktische Allergiediagnostik", Georg Thieme-Verlag, Stuttgart (1979), Seite 96 ff.). der Anmelderin Diese neuen BefundeVüber die Beurteilung der Farbreaktion ver anlassten die norliegende Weiterbildung des Hauptpatents, nAm- lich eine quantitative Messung. Einige bevorzugte Ausführungsformen des erfindungsgemässen Verfahrens werden nachstehend wiedergegeben: Bevorzugt wird die zu untersuchende Staubprobe vorher durch Behandeln mit einem erwärmten wässrig-alkoholischen Lösemittelgemisch von nachweisstörenden Bestandteilen befreit. Aus der verbleibenden Staubprobe werden die nachweisrelevanten Bestandteile durch Extraktion mit einer wäBrig-alkoholischen Alkalimetallhydroxid-Lösung abgetrennt. Einzelheiten finden sich in der europäischen Patentanmeldung 84113705.2. Mit Hilfe von Nachweispapieren, z.B. gemäss europäischer Patent 85101299 Z - . -. - - - anmeldung lässt sich an einer Probe des erhaltenen extrakts als Vorversuch feststellen, welche Farbintensität zu erwarten ist. Einzelheiten finden sich in dieser europäischen Patentanmeldung 8,101299.7, Je nach Intensität wird ein Anteil zwischen 1 und 10 ml des Extrakts entnommen, mit Sodalösung und anschliessend mit einer geeigneten aromatischen Diazo-Verbindung, z.B. Diazosulfanilsäure, versetzt. Einzelheiten bezüglich der aromatischen Diazo verbindung finden sich in Hauptpatent. Nach etwa 20 Minuten Farbentwicklung wird wässrig-alkoholisches Lösemittelgemisch zugefügt und die so erhaltene Farblösung spektralphotometrisch gegen eine Blindprobe gemessen. Das Messergebnis wird mit Hilfe einer Guanin-Eichkurve ausgewertet. Die Ausgestaltung des hier beschriebenen Verfahrens im einzelnen kann von dem jeweils damit befassten fachkundigen Analytiker durchgeführt werden. Nur beispielhaft, jedoch nicht obli gatorisch, sei folgender eg genannt: Beispiel 1. Einwaage Einwaage: 250 mg allergenhaltigen Hausstaubes. 2. Reinigung Die Staubprobe wird im Zentrifugenglas von 10 ml Inhalt mit 5 ml "Lösung 1" digeriert, die zuvor auf 60 C erwärmt wurde. Nach Zentrifugieren und Abdekantieren wird der Vorgang wiederholt. 3. Extraktion Die noch feuchte vorgereinigte Staubprobe wird im Zentri fugenglas mit 3 ml "Lösung II" durchmischt und dann zentri fugiert. Mit 3 ml "Lösung I" wird nachgewaschen. 4. Farbentwicklung Die so erhaltene Nachweislösung einschliesslich Waschlösung wird filtriert und in einer 100 ml Messkolben mit dest. Wasser aufgefüllt. Von dieser Lösung werden 1 bis 10 ml (je nach zu erwartender Farbintensität entsprechend Vor versuch) in einen 25 ml Messkolben pipettiert, 3 ml 20 %ige Sodalösung und 2 ml 0,05 %ige wässrige Diazosulfanilsäurelö- sung zugefügt. Nach 20 Minuten werden 10 ml "Lösung I" zu gegeben und dann mit dest. Wasser aufgefüllt. 5. Farbmessung Die Messung erfolgt bei 490 Nanometer gegen eine Blindwert probe. Die Auswertung geschieht anhand einer Elchkurve mit Guanin. (Hierzu stellt man verschiedene Lösungen von Guanin (in "Lösung II") mit einem Gehalt zwischen 20 g und 100 ijg in mehreren 25 ml Messkolben her. Die Farbentwicklung er folgt entsprechend der bei Ziff. 4 angegebenen Vorschrift für die Staubprobe). Lösung I : 20 Volumenteile Methanol und 100 Volumenteile Wasser; Lösung II : 1,9 g KOH in 200 ml "Lösung I."

Claims: Patentansprüche 1. Verfahren zur Feststellung des Vorkommens von allergenhaltigem Hausstaub, wie er sich bei oder nach Auftreten von Hausstaubmilben ergibt, bei dem man Proben von in Gebäuden vorkommendem Staub in wässrig-alkoholischer Alkalimetallhydroxid-Lösung gründlich suspendiert, mit dem entstehenden Extrakt eine Farbreaktion mit Hilfe einer aromatischen Diazo-Verbindung durchführt und wobei man aufgrund der Intensität der Färbung die Konzentration an Milben-Rückständen beurteilt, dadurch gekennzeichnet, dass man die Beurteilung der Farbintensitat in der Weise durchführt, dass man sie quantitativ misst. 2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Farbmessung mit Hilfe eines Spektralphotometers durchg- führt wird. 3. Verfahren nach Anspruch 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, daB die eingesetzte Staubprobe (zum Zweck der Reinigung) vorher mit einem wässrig-alkoholischen Gemisch vorbehandelt worden ist. 4. Verfahren nach Anspruch 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass man die (für die Extraktion der nachweisrelevanten Be standteile) zweckmässig stark alkalische Lösung im Interesse der nachfolgenden rarbentwicklung auf die Minimalmenge beschränkt. 5. Verfahren nach Anspruch 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, dass man don nach Anspruch 4 erhaltenen stark alkalischen Extrakt durch Verdünnung (mit Wasser) auf die Messkonzentration in der Alkalität so stark abschwächt, dass durch Zugabe von Sodalösung (zweckmässig im Uberschuss) die Bedingungen für die Bildung des Azofarbstoffes optimiert werden 6. Verfahren nach Anspruch 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, dass man die Messergebnisse mit Hilfe einer Eichkurve auswertet, die durch Lösen definierter engen von Guanin in der Weise erhalten wurde, wie sie erfindungsgemäss für die Behandlung der Staubprobe durchgeführt wird sowie Durchführung der Farbreaktion bei diesen Eichlösungen ebenfalls in der Weise, wie sie erfindungsgemäss für den aus den Staubproben erhaltenen Extrakt beschrieben wird.

Inventors: BISCHOFF, EDELBERT, DR., SCHIRMACHER, WOLFGANG, DIPL.-CHEM.
Applicants: WERNER & MERTZ GMBH
Application year: 1985
Main classification: G01N31
IPC codes: G01N31, G01N21, G01N33