LIQUID PREPARATION CONTAINING LIVING MICROORGANISMS, PROCESS FOR PREPARING IT, PELLETED PRODUCT CONTAINING LIVING MICROORGANISMS AND PROCESS FOR PREPARING IT

Abstract: The microorganisms in the preparation are suspended in a liquid oil phase, and the preparation can be stored at room temperature for two years or more without considerable numbers of the microorganisms having died if the microorganisms suspended in the oil phase are enveloped in at least one protective layer which is insoluble in the oil phase and is soluble or swells in water. The protective layer should preferably be solid at room temperature and not degradable by the microorganisms. The preparations are produced by mixing the microorganisms, which have been removed from the culture medium, with an aqueous medium which contains a solution or dispersion of a material of the protective layer which is soluble or swells in water, drying this mixture at least until the material of the protective layer is solid, but preferably completely drying it, and then introducing the dried enveloped microorganisms into the oil phase. The dried microorganisms enveloped in the protective layer can also be mixed with inert solid products and pelleted under pressure at elevated temperatures. These pellets can also be stored at room temperature for several years with retention of the viability of the microorganisms.

Description: Titel der Erfindung Lebende Mikroorganismen enthaltendes flüssiges Präparat, Verfahren Zll dessen Herstellung, lebende Mikroorganismen enthaltendes pelletiertes Produkt und Verfahren zu dessen Herstellung. Hintergrund der Erfindung Die vorliegende Erfindung betrifft ein lebende Mikroorganismen enthaltendes Präparat, das bei Zimmertemperatur lagerfähig ist, in flüssiger Form vorliegt und dadurch bei seiner Verwendung leicht dosierbar ist. Die lebenden Mikroorganismen dieser Präparate sind von einer wasserlöslichen oder in Wasser quellenden Schutzschicht umhüllt und in einer flüssigen Oelphase suspendiert, in welcher die Schutzschicht unlöslich ist. Des weiteren betrifft die Erfindung ein Verfahren zur Herstellung des lebende Mikroorganismen enthaltenden Präparates und ferner ein pelletiertes diätetisches Nahrungsmittel oder einen Futtermittelzusatz, der die üblichen proteinhaltigen Komponenten, stärkehaltigen Komponenten, sowie gegebenenfalls Mineralstoffe und Vitamine enthält und ausserdem lebende Mikroorganismen, die von der wasserlöslichen oder in Wasser quellenden Schutzschicht, die in Oel unlöslich ist, umhüllt sind. Ausserdem betrifft die Erfindung ein Verfahren zur Herstellung derartiger pelletierter diätetischer Nahrungsmittel. Es ist bekannt, dass Mikroorganismen, beispielsweise Bakterien, bei sehr tiefen Temperaturen, die weit unter dem Gefrierpunkt liegen, einige Zeit hindurch gelagert werden können und dennoch ihre Lebensfähigkeit behalten. Bei der praktischen Verwendung von solchen lebende Mikroorganismen enthaltenden Präparaten ist es jedoch nachteilig, dass eine Lagerung im tiefgefrorenen Zustand nötig ist. Es ist ferner bekannt, Mikroorganismen durch Trocknung, insbesondere Gefriertrocknung, für einige Zeit in lebendem Zustand haltbar zu machen. Ein Nachteil dieser durch Gefriertrocknung hergestellten Präparate besteht darin, dass grosse Anteile der lebens fähigen Mikroorganismen dennoch bei einer Lagerung bei Zimmertemperatur ihre Lebensfähigkeit verlieren. Die Hersteller derartiger Präparate verlangen deshalb, dass die Produkte im Kühlschrank aufbewahrt werden, um eine Haltbarkeit während einiger Monate zu gewährleisten. Wenn derartige Präparate in der Landwirtschaft eingesetzt werden, um Nutz- pflanzen oder Zierpflanzen gegen den Angriff von Schädlingen zu schützen oder in der Tierhaltung eingesetzt werden, um die Darmflora von Zuchttieren günstig zu beeinflussen, dann stehen häufig keine ausreichenden Kühlkapazitäten zur Verfügung und die Präparate werden oft von wenig geschulten Personen verwendet, für die es nicht offensichtlich ist, dass die fraglichen Präparate bei Aufbewahrung ausserhalb des Kühlschrankes rasch ihre Aktivität verlieren. Durch die Verwendung von Präparaten, die vorzeitig ihre Aktivität verloren haben und dementsprechend nicht mehr die vermutete Wirksamkeit besitzen, sind im Ackerbau und in der Tierzucht schon grosse Schäden entstanden. In trockener Form vorliegende Mikroorganismenpräparate, die zur Regulierung der Darflora dem Tierfutter zugesetzt werden, müssen vor ihrer Verwendung mit entsprechenden Mengen an Wasser vermischt werden. Dabei ergeben sich natürlich häufig Schwierigkeiten durch falsche Dosierung. Ein weiterer Nachteil besteht darin, dass die Gefässe, in denen das Präparat mit Wasser vermischt wurde, nach der Verwendung sorgsam gereinigt werden müssen, um die Mikroorganismen zu entfernen, die an den Gefässwänden haften geblieben sind. Auch eine Verunreinigung der Umgebung, beispielsweise des Stalles, durch Verschütten des wässrigen Mediums, welches die Mikroorganismenpräparate darin dispergiert enthält, muss sorgsam vermieden werden. Dies ist insbesondere dann wichtig, wenn der Mikroorganismus des Präparates ein Bakterium der Klasse Streptokokkus faecium ist, weil Oberflächen, die mit diesem Mikroorganismus verseucht sind, in kurzer Zeit einen äusserst unangenehmen Geruch entwickeln. Es ist ferner bekannt, dass Mikroorganismen, die in wässrigen Flüssigkeiten dispergiert sind, innerhalb von wenigen Tagen ihre Aktivität verlieren, wenn sie beispielsweise bei Temperaturen 0 im Bereich von 10 - 30 C aufbewahrt werden. Bei die- sen Temperaturen führt die Stoffwechselaktivität der Mikroorganismen rasch zu einer Abtötung und Zerstörung der fraglichen Mikroorganismen. bs ist ferner bekannt, dass lebende Mikroorganismen, die in einer Oelphase aus einem pflanzlichen Oel oder einem Mineralöl dispergiert sind, während gewisser Zeiträume ihre Lebensfähigkeit aufrecht erhalten. Derartige Präparate besitzen gegenüber in trockener Form vorliegenden Mikroorganismenpräparaten den Vorteil einer leichteren Dosierbarkeit und in der Tierzucht ist es nicht nötig, die Präparate mit dem Futtermittel zu vermischen, sondern sie können auch direkt in flüssiger Form an die Tiere verabreicht werden. Dadurch werden die oben beschriebenen Schwierigkeiten bezüglich der Verunreinigung der Umgebung vermieden. Dennoch ist jedoch die Haltbarkeit derartiger bisher beschriebener Präparate unbefriedigend, insbesondere dann, wenn sie ausserhalb des Kühlschrankes gelagert werden. Ein Ziel der vorliegenden erfindung war es dementsprechend, ein lebende Mikroorganismen enthaltendes Präparat zu entwickeln, bei dem die Mikroorganismen in einer flüssigen Oelphase suspendiert sind, das jedoch gegenüber bisher bekannten entsprechenden Präparaten eine verbesserte Lagerfähigkeit besitzt. Futtermittelzusätze, die proteinhaltige Komponenten, stärkehaltige Komponenten, sowie gegebenenfalls Mineralstoffe und/oder Vitamine enthalten, werden häufig in pelletierter Form in den Handel gebracht, weil in dieser Form die Verabreichung besonders vorteilhaft ist. Lebende Mikroorganismen konnten jedoch derartigen pelletierten Nahrungsmitteln nicht einverleibt werden, weil sie den Pelletierungsvorgang, der ein Erhitzen nötig macht, nicht oder nur in geringem Masse Uberlebten. ps alzrde bereits versucht, tiIikroorganis- men mit einer Schicht aus wachsartigen Materialien zu überziehen und diese mit der Schutzschicht überzogenen Mikroorganismen, zusammen mit den übrigen Komponenten des Futtermittelzusatzes, zu pelletieren. Bei der praktischen Durchführung dieses Verfahrens waren dann aber in den fertigen Futtermittelpellets noch zu wenige lebende Mikroorganismen enthalten. Ein weiteres Ziel der vorliegenden Erfindung war es, ein pelletiertes diätetisches Nahrungsmittel oder einen pelletierten Futtermittelzusatz zur Verfügung zu stellen, wobei diese Produkte neben den üblichen Energie liefernden Bestandteilen, den üblichen Zusätzen, wie Mineralstoffen und/oder Vitaminen, noch lebende Mikroorganismen enthalten sollen. Stand der Technik In der Schweizer Patentschrift Nr. 457 332 wird ein Verfahren zur Konservierung von lebender Hefe beschrieben, die auf einen Wassergehalt von 5 bis 20 % entwässert ist und in einem wasserfreien Fettmaterial, das gegebenenfalls ein Emulgiermittel enthält, dispergiert ist. Gegebenenfalls enthält das Produkt noch rohe Stärke, deren Körnchen vorzugsweise eine ähnliche Grösse besitzen, wie die Hefezellen. In der belgischen Patentveröffentlichung Nr. 667 201 wird ein Verfahren zur Herstellung von Zusammensetzungen beschrieben, die Bakterien, Enzyme oder Aehnliches enthalten, wobei die fraglichen Zusammensetzungen gegen Feuchtigkeiten und chemische Substanzen der Umgebung durch eine Umhüllung mit einer flüssigen Schutzschicht geschützt sind, die aus einem Oel, beispielsweise Pflanzenöl oder Paraffinöl, oder Propylenglykol (siehe Seite 2, Zeilen 21 bis 24) bestehen kann. Die französische Patentveröffentlichung Nr. 2 233 941 betrifft Zusammensetzungen, die trockene Hefe und ein geniessbares Fett oder Oel, sowie gegebenenfalls ausserdem Mehl enthalten. Des weiteren können in diesen Zusammensetzungen geringe Mengen an zusätzlichen Bestandteilen enthalten sein, die bei der Verwendung des Produktes die Konsistenz des Teiges günstig beeinflussen, wie zum Beispiel l-Cystein oder Azodicarbonamid. In der USA-Patentschrift Nr. 3 034 968 wird ein Verfahren zur Herstellung von lebensfähigen trockenen Mikroorganismen aus der Klasse Bakterien und Schimmelpilze beschrieben, wobei die Trocknung in einem Oel vorgenommen werden kann. Es wurde ferner festgestellt, dass in dem Endprodukt mehr lebende Mikroorganismen enthalten sind, wenn die feuchten Mikroorganismen während des Trockenvorganges mit einem von ihnen abbaubaren Kohlehydrat in Beruhrung stehen, wie zum Beispiel Saccharose, Dextrose, Maltose und Stärkehydrolysate. Nach dem Trocknungsvorgang werden die Mikroorganismen im allgemeinen von dem Oel befreit, sodass die Endprodukte nurmehr einen Oelgehalt von 10 % oder 5 6 oder noch geringere Oelgehalte aufweisen. Früher wurde festgestellt, dass es bei der Gefriertrocknung von verschiedenen feuchten Bakterienstämmen vorteilhaft ist, wenn vorher dem wässrigen Medium verschiedene Materialien zugesetzt werden, wie Glucose, Detrin, Ammoniumchlorid und Aehnliches (siehe die Veröffentlichungen von Record und Taylor in J. Gen. Microbiol., Band 9, 5. 475, 1953 und von Naylor und Smith in J. Bact., Band 52, s. 565, 1946; In der französischen Patentveröffentlichung Nr. 1 242 371 wird ein Verfahren zur Herstellung einer aktiven Trockenhefe beschrieben, bei dem die Hefe in einer Flüssigkeit, beispielsweise einem essbaren Oel, suspendiert und getrocknet wird. Auch in diesem Fall wurden in dem Endprodukt ein höherer Gehalt an lebenden Hefezellen festgestellt, wenn während des Trocknungsvorganges ein von der Hefe abbaubares Kohlehydrat anwesend war, beispielsweise Zucker oder Maissirup. Weitere Verfahren, gemäss denen lebende Mikroorganismen haltbar gemacht werden, indem man sie mit einem Oel beschichtet oder in einem Oel suspendiert, sind in der USA-Patentschrift Nr. 1 457 097 und der britischen Patentschrift Nr. 1 151 669 beschrieben. Die französische Patentveröffentlichung Nr. 2 116 110 betrifft Produkte, bei denen Mikroorganismen in nicht öligen Suspendiermitteln suspendiert sind, wie zum Beispiel in wasserlöslichen Alginaten, Gelatine, natürlichen Gummen, kolloidaler Kieselsäure, Zellulosegummen, saureiiPolysacchariden, Poly- saccharidderivatenvon Algen und insbesondere Natriumalginat. Die Produkte, in denen die Mikroorganismen suspendiert sind, sollen keinerlei Nährwirkung für die Mikroorganismen besitzen (siehe Seite 2, Zeilen 32 bis 36). Auch in der europäischen Patentveröffentlichung Nr. 0 097 571 werden Mikroorganismenkultu- ren beschrieben, die in einem Polymergel eingeschlossen sind und deren Wassergehalt unter 0,3 % liegt. Beschreibung der Erfindung Ziel der vorliegenden Erfindung war es, ein lebende Mikroorganismen enthaltendes Präparat zur Verfügung zu stellen, bei dem die Mikroorganismen in einer flüssigen Oelphase suspendiert sind, wobei dieses Präparat im Vergleich zu bisher bekannten entsprechenden Präparaten, eine wesentlich erhöhte Lagerfähigkeit bei einer Lagerung bei Zimmertemperatur besitzen soll. Ueberraschenderweise zeigte es sich, dass die angestrebten Ziele erreicht werden können, indem man die Mikroorganismen mit mindestens einer wasserlöslichen oder in Wasser quellenden Schutzschicht umhüllt, ehe sie in der flüssigen Oelphase suspendiert sind. Ein Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist daher ein lebende Mikroorganismen enthaltendes Präparat, bei dem die Mikroorganismen in einer flüs- sigen Oelphase suspendiert sind, das dadurch gekennzeichnet ist, dass es ein bei Zimmertemperatur lagerfähiges Präparat ist, und dass die Mikroorganismen, die in der Oelphase suspendiert sind, von mindestens einer wasserlöslichen oder in Wasser quellenden Schutzschicht umhüllt sind, die in der Oelphase unlöslich ist, wobei die Oelphase aus einem Mineralöl und/oder pflanzlichen Oel und/oder tierischen 0e1, und/oder synthetischen flüssigen Fettsäureester aufgebaut ist. Vorzugsweise besteht die Schutzschicht aus dem wasserquellbaren oder wasserlöslichen Material aus einem entsprechenden Produkt, das bei Zimmertemperatur fest ist und das ferner vorzugsweise von den Mikroorganismen nicht abbaubar ist. Bevorzugte Materialien der die Nikroorganismen umhUllen- den Schutzschicht sind wasserlösliche Zellulosederivate, wasserlösliche Stärkederivate, wasserlösliche Pflanzengummen, wasserlösliche Pektine oder Mischungen aus zwei oder mehr derartigen wasserlöslichen Produkten. Besonders gute Ergebnisse bezüglich der Haltbarkeit der lebende Mikroorganismen enthaltenden Präparate wurden dabei erzielt, wenn als Material für die Schutzschicht wasserlösliche pflanzliche Gummen verwendet werden, insbesondere Gummiarabikum. Es zeigte sich ferner, dass die Lebensfähigkeit der in den erfindungsgemässen Präparaten enthaltenen Mikroorganismen bei einer Lagerung bei Zimmertemperatur über mehr als zwei Jahre gewährleistet werden kann, indem man die von der wasserlöslichen oder wasserquellbaren Schutzschicht umhüllten Mikroorganismen trocknet, beispielsweise gefriertrocknet oder sprühtrocknet und die getrockneten, von der Schutzschicht umhüllten Mikroorganismen dann in der Oelphase suspendiert. In bevorzugten erfindungsgemässen Präparaten liegen dementsprechend die Mikroorganismen in getrockneter Form vor und die sie umhüllende wasserlösliche oder wasserquellbare Schutzschicht ist ebenfalls in im wesentlichen was serfreiez Zustand anwesend. Die erfindungsgemässen flüssigen Präparate enthalten im allgemeinen 107 bis 1010 von der Schutzschicht umhüllte Mikroorganismen pro ml Oel, und vorzugsweise 108 bis 109 von der Schutzschicht umhüllte Mikroorganismen pro ml Oel. Das Material der Schutzschicht wird im allgemeinen in solchen Mengen eingesetzt, dass im trockenen Zustand ein Gewichtsteil an Mikroorganismen mit 0,5 bis 10 Gew.-Teilen, vorzugsweise 2 bis 6 Gew.-Teilen, des trockenen Materiales aus der wasserlöslichen oder wasserquellbaren Schutzschicht umhüllt sind. Die erfindungsgemässen lebende Mikroorganismen enthaltenden Präparate enthalten vorzugsweise als Mikroorganismen Bakterien oder Pilze, gegebenenfalls können jedoch die Mikroorganismen auch entsprechend umhüllte Hefen sein. Gemäss einer bevorzugten Ausführungsart der Erfindung ist das lebende Mikroorganismen enthaltende Präparat ein in der Humanmedizin oder Veterinärmedizin einsetzbares Präparat, welches solche Mikroorganismenstämme enthält, die sich in der Mikroorganismenflora des Magen-Darmtraktes vorteilhaft auswirken. Diese Mikroorganismen können beispielsweise Milchsäure bildende Bakterien sein. Es ist bekannt, dass es vorteilhaft ist, bei der Aufzucht von Jungtieren, insbesondere jungen Schweinen, die Darmflora der Tiere mit einem Bakterienstamm von Streptokokkus faecium anzureichern. Es ist ferner bekannt, dass durch Verabreichung dieses Bakterienstammes auch das Wachstum der Tiere gesteigert werden kann. Wenn man zu diesem Zwecke ein getrocknetes pulverförmiges Präparat verwendet, das den Streptokokkus faecium enthält und dieses mit Wasser anrührt und sodann dem Futter beisetzt, dann ergeben sich die weiter vorne ausführlich erläuterten Nachteile bezüglich der unerwünschten Geruchsentwicklung auf Oberflächen, die mit dem fraglichen Bakterium verunreinigt sind. Erfindungsgemässe flüssige Präparate, die einen Bakterienstamm von Streptokokkus faecium, vorzugsweise den Stamm Streptokokkus faecium Cernelle 68, der von der wasserlöslichen oder in Wasser quellenden Schutzschicht umhüllt ist, in dem Oel dispergiert enthalten, können ohne vorherige Verdünnung direkt in der gewünschten Dosis an die Tiere verabreicht werden. Vorzugsweise sind diese Präparate in einem entsprechenden Behälter abgepackt, der es erlaubt, den Ferkelchen eine gewünschte winzel- dosis durch Sinträufeln oder Einspritzen in das Maul zu verabreichen. Gemäss einer weiteren Ausführungsart der Erfindung ist das lebende Mikroorganismen enthaltende Präparat ein bei der Züchtung von Nutzpflanzen oder Zierpflanzen eingesetztes Präparat, welches solche Mikroorganismenstämme enthält, die krankheitserregend gegenüber tierischen und pflanzlichen Schädlingen, insbesondere Schadinsekten, sind. Bei der Verwendung derartiger Präparate kann man das flüssige Oel enthaltende Präparat direkt auf die Pflanzen oder ihre Umgebung aufbringen. Im all gemeinen ist es jedoch vorteilhafter, das fragliche Präparat, zusammen mit einem entsprechenden Dispergiermittel, in Wasser einzubringen und darin zu dispergieren und die entsprechend verdünnte Lösung, beziehungsweise Dispersion, dann auf die Pflanzen und/ oder ihre Umgebung, beispielsweise den Erdboden, auf zuspruhen, beziehungsweise die entsprechende Flüssigkeit als Giessflüssigkeit einzusetzen. Derartige Präparate sind ferner auch geeignet, um gelagerte landwirtschaftliche Produkte oder Lebensmittel gegen den Angriff von Schädlingen, insbesondere tierischen Schädlingen, wie Sc'nadinsek- ten, zu schützen. Die erfindungsgemässen lebende Mikroorganismen enthaltenden Präparate können ferner bei der industriellen Herstellung von Nahrungsmitteln angewandt werden, beispielsweise um Milchsäuregärungen oder alkoholische Gärungen durchzuführen. Bekanntlich sind sehr viele spezielle Käsesorten nur in sehr begrenzten Regionen herstellbar, weil die Erzeugung des fraglichen Käses von der in der speziellen Region vorliegenden Mikroorganismenpopulation abhängig ist, welche die Umwandlung des Milchkoagulates, das durch Milchsäuregärung oder Labzugabe gewonnen wurde, in die spezielle Käsesorte, bewirkt. Für die Käseherstellung sind naturlich auch die klimatischen Bedingungen wichtig, insbesondere Temperatur und Luftfeuchtigkeit, die während der Umwandlung des Milchkoagulates in Käse vorherrschen. Die klimatischen Bedingungen einer bestimmten Region können durch Einhaltung entsprechender Temperaturen und Luftfeuchtigkeiten auch an anderen Orten, beispielsweise einer im Tiefland liegenden Käserei, simuliert werden. Doch war es bei vielen Käsesorten bisher nicht möglich, sie an fremden Orten herzustellen, weil die fragliche Mikroorganismenpopulation dort nicht vorhanden war. Rrfindungsgemässe Präparate, in welchen die von der wasserlöslichen oder in Wasser quellenden Schutzschicht umhüllten, in der Oelphase suspendierten Mikroorganismen diejenige Mikroorganismenpopulation sind, die zur Herstellung einer bestimmten Käse orte nötig ist, können somit verwendet werden, um die fragliche Käsesorte an einem fremden Ort zu erzeugen. Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung des erfindungsgemässen lebende Mikroorganismen enthaltenden Präparates. Dieses Verfahren ist dadurch gekennzeichnet, dass man die Mikroorganismen aus dem Zuchtmedium abtrennt und sie mit einem wässrigen Medium vermischt, welches das in der Oelphase unlösliche, wasserlösliche oder in Wasser quellende Material der Schutzschicht gelöst oder dispergiert enthält, diese Mischung mindestens so weit trocknet, dass die Mikroorganismen von der festen Schutzschicht aus dem wasserlöslichen oder in Wasser quellenden Material umhüllt werden und die umhüllten Mikroorganismen in der Oelphase, die aus einem Mineralöl und/oder pflanzlichen Oel und/oder tierischen Oel, und/oder synthetischen flüssigen Fettsäureester aufgebaut ist, suspendiert. Gemäss einer bevorzugten Ausführungsart dieses Verfahrens wird die Trocknung der mit der Schutzschicht umhüllten Mikroorganismen so weit fortgesetzt, dass die Mikroorganismen getrocknet werden und die wasserlösliche oder wasserquellbare Schutzschicht ebenfalls in einen im wesentlichen wasserfreien Zustand übergeführt wird, und diese getrockneten umhüllten Mikroorganismen werden dann in der Oelphase dispergiert. Besonders vorteilhaft ist es, die Trocknung der Mischung aus den Mikroorganismen und dem wässrigen Medium, welches das Material der Schutzschicht gelöst oder dispergiert enthält, als Gefriertrocknung durchzuführen. Es zeigte sich jedoch, dass während des Trocknungsvorganges die sich ausbildende Schutzschicht aus dem festen wasserlöslichen oder in Wasser quellenden Material die Mikroorganismen ausreichend schützt, sodass gegebenenfalls die Trocknung auch als Sprühtrocknung vorgenommen werden kann. Bei der Herstellung der erfindungsgemässen Präparate wird vorzugsweise ein Gewichtsteil des Materiales der Schutzschicht in 5 bis 15 Gew.-Teilen Wasser, vorzugsweise 8 bis 12 Gew.-Teilen Wasser, gelöst und die aus dem Zuchtmedium abgetrennten Mikroorganismen werden in dieser Lösung dispergiert, vorzugsweise in einem Gewichtsverhältnis von 1 Gew.-Teil der feuchten, abgetrennten Mikroorganismen zu 1 bis 10 Gew.-Teilen, vorzugsweise 3 bis 6 Gew.-Teilen, dieser wässrigen Lösung. Als Oelphase können in den erfindungsgemässen Präparaten verschiedene pflanzliche oder tierische Oele eingesetzt werden. Es zeigte sich dabei, dass solche tierischen Oele und pflanzlichen Oele, die geringere Anteile an Resten ungesättigter Fettsäuren enthalten, besser geeignet sind, als solche tierischen Oele und pflanzlichen Oele, die einen höheren Anteil an Resten ungesättigter Fettsäuren aufweisen. Es wurden viele Oele getestet, wie zum Beispiel Olivenöl, Erdnussöl, Sojaöl, Reiskeimöl, Mais öl, Sonnenblumenöl, Rapsöl, Jojobaöl und andere. Es zeigte sich dabei, dass Erdnussöl besonders gut geeignet ist und auch mit Sonnenblumenöl und Reiskeimöl waren gut geeignet. Auch mit sogenannten synthetischen Oelen konnten gute Erfolge erzielt werden. Diese unterscheiden sich von den tierischen und pflanzlichen Oelen, die bekanntlich hauptsächlich aus Fettsäuretriglyceriden bestehen, dadurch, dass sie Fettsäureester einwertiger Alkohole darstellen oder Mischungen derselben enthalten. Als Beispiel für synthetische flüssige Fettsäureester seien genannt: Mristinsäure- isopropylester, Palmitinsäure-isopropylester, Oelsäure-äthylester, Oleyl-oleat und ähnliche Produkte. Auch das sogenannte Neutraöl mit der Markenbezeichnung 'tMiglyal" liefert gute Ergebnisse. Die durchgeführten Versuche zeigten ferner, dass solche erfindungsgemässen Präparate, die als Oelphase ein Mineralöl enthalten, eine längere Lagerfähigkeit besitzen, als solche Präparate, die ein pflanzliches und/oder tierisches Oel enthalten. Die besten Ergebnisse wurden erzielt, wenn als Oelphase Paraffinöl verwendet wurde. Es wurden Vergleichsversuche durchgeführt, die zeigten, dass trockene Nikroorganismen, die von keiner Schutzschicht umhüllt sind, und in einer bestimmten Oelphase dispergiert sind, bei einer Lagerung bei Zimmertemperatur eine wesentlich geringere Lagerfähigkeit besitzen, als die gleichen Mikroorganismenstämme, die von der wasserlöslichen oder in Wasser quellenden Schutzschicht umhüllt sind und im trockenen Zustand ebenfalls in dem gleichen Oel suspendiert wurden. In den erfindungsgemässen Präparaten waren nach einer dreijährigen Lagerung bei Zimmertemperatur nur 20 bis 40 % der Mikroorganismen abgestorben. Im Gegensatz dazu waren bei den Präparaten zu Vergleichszwecken, bei welchen die gleichen Mikroorganismen in unumhüllten Zustand in der gleichen Oelphase dispergiert waren, bereits nach einer Lagerungszeit von drei Monaten bei Zimmertemperatur 20 bis 40 % der lebenden Mikroorganismen abgestorben. Die getrockneten, von der Schutzschicht aus dem wasserlöslichen oder in Wasser quellenden Material umhüllten Mikroorganismen, besitzen bei Lagerung bei Zimmertemperatur eine höhere Ueberlebensrate als entsprechende, ohne umhüllende Schutzschicht getrocknete Mikroorganismen. Versuche zu Vergleichszwecken zeigten jedoch, dass entsprechende, von der wasserlöslichen oder wasserquellenden Schutzschicht umhüllte Mikroorganismen, die bei Zimmertemperatur trocken aufbewahrt, jedoch nicht in einer Oelphase dispergiert waren, keine ausreichende Haltbarkeit besitzen. Nach einer Lagerungszeit von zwei bis vier Wochen bei Zimmertemperatur waren schon 20 bis 40 rA der Mikroorganismen abgestorben. Ueberraschenderweise zeigte es sich jedoch, dass lebende Mikroorganismen, die nur von der wasserlöslichen oder in Wasser quellenden Schutzschicht umhüllt sind, kurzzeitig hohe Temperaturen überleben, wenn sie dabei von einem Feststoff oder Gemisch von Feststoffen umgeben werden, das fest zusammengepresst wird und so bei der weiteren Lagerung des Produktes eine puffernde Wirkung gegen den Zutritt von Luftsauerstoff oder atmosphärischer Feuchtigkeit zu den von der Schutzschicht umhüllten Mikroorganismen ausübt. Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist daher ein pelletiertes Produkt, das dadurch gekennzeichnet ist, dass es lebende Mikroorganismen enthält, die von einer wasserlöslichen oder in Wasser quellenden Schutzschicht, die in Mineralöl, pflanzlichem Oel, tierischen Oelen, synthetischen flüssigen Fettsäureestern, sowie Mischungen davon, unlöslich ist, umhüllt sind, wobei in dem pelletierten Produkt die Mikroorganismen in einem fest zusammengepressten Feststoff oder Gemisch auf Feststoffen, eingebettet sind und diese zus amme ngepressten Feststoffe den Zutritt von Sauerstoff oder atmosphärischer Feuchtigkeit zu den eingebetteten Mikroorganismen hemmen. Derartige pelletierte Produkte, die lebende Mikroorganismen enthalten, besitzen im Vergleich zu pulverförmigen lebende Mikroorganismen enthaltenden Produkten ferner den Vorteil der leichteren Dosierbarkeit. in bevorzugtes, lebende Mikroorganismen enthaltendes, pelletiertes Produkt ist ein entsprechendes pelletiertes diätetisches Nahrungsmittel oder ein pelletierter Futtermittelzusatz. In diesem Falle sind die zusammengepressten Feststoffe, in denen die umhüllten Mikroorganismen eingebettet sind, proteinhaltige Bestandteile, stärkehaltige Bestandteile, Mineralstoffe oder Mischungen aus zwei oder mehr derartigen Komponenten. Gegebenenfalls enthalten diese Produkte ausserdem noch Vitamine. Des weiteren betrifft die vorliegende Erfindung ein Verfahren zur Herstellung eines lebende Mikroorganismen enthaltenden pelletierten Produktes. Dieses Verfahren ist dadurch gekennzeichnet, dass man die lebenden Mikroorganismen aus dem Zuchtmedium abtrennt und sie mit einem wässrigen Medium vermischt, welches das in Mineralöl, pflanzlichem Oel, tierischem Oel, synthetischen flüssigen Fettsäureestern und Mischungen davon unlösliche, jedoch wasserlösliche oder in Wasser quellende Material der Schutzschicht gelöst oder dispergiert enthält, diese Mischung mindestens so weit trocknet, dass die Mikroorganismen von der festen Schutzschicht aus dem wasserlöslichen oder in Wasser quellenden Material umhüllt werden und die umhüllten Mikroorganismen mit dem Feststoff oder dem Gemisch aus Feststoffen, vermischt und diese Mischung in Anwesenheit von Dampf bei einer Temperatur von 70 - 900 C unter Druck pelletiert. Wenn dieses Verfahren zur Herstellung von Futtermittelpellets oder Pellets eines diätetischen ixahrungsmittels angewandt wird, dann ist es nicht nctig, dass entsprechende proteinhaltige Bestandteile oder stärkehaltige Bestandteile in vollständig trockenem Zustand zugefügt werden, sondern sie können ohne weiteres ziemlich feucht sein, sofern gewährleistet ist, dass sofort nach der Vermischung der umhüllten Mikroorganismen mit diesen Produkten der Pelletierungsvorgang vorgenommen wird. Bei der Pelletierung entweicht nämlich die überschüssige Feuchtigkeit noch ehe die die Mikroorganismen umhüllende Schutzschicht in irgendeinem wesentlichen Ausmass gelöst wird oder zu quellen beginnt. Die Erfindung sei nun anhand von speziellen Beispielen näher erläutert, die jedoch den Schutzbereich der vorliegenden Erfindung in keiner Weise einschränken sollen. Beispiel 1 Herstellung eines Präparates, welches als Mikroorganismus ein Bakterium enthält Als Bakterienstamm wurde der Stamm Streptococcus faecium SF68 verwendet. Dieser wurde in üblicher Weise gezüchtet und durch Zentrifugieren aus dem Zuchtmedium abgetrennt. Nach dem Waschen wurde die abgetrennte Bakterienmasse mit einer Lösung von einem Teil Gummiarabikum in neun Teilen Wasser vermischt. Das Gewichtsverhältnis von abzentrifugierten Bakterien zu der Gummiarabikumlösung betrug etwa 1 : 4. Der so erhaltene Brei wurde dann gefriergetrocknet. Es bildeten sich dabei kleine Kügelchen, welche die mit der Gummiarabikum-Schutzschicht überzogenen Bakterien enthielten. Das Produkt wurde von groben Partikeln abgesiebt und in der Oelphase suspendiert. Die Menge an der Oelphase wurde dabei so gewählt, dass jeweils 10 - 100 x 108 Mikroorganismen pro ml Oel enthalten waren. Beispiel 2 Testung der Lagerfähigkeit Es wurde das nach dem Verfahren gemäss Beispiel 1 hergestellte erfindungsgemässe Präparat getestet und ferner auch ein Präparat zu Vergleichszwecken, bei dem der gleiche Mikroorganismenstamm nach der Abtrennung aus dem Zuchtmedium gewaschen uncl ohne Zugabe einer Lösung von Gummiarabikum di ret gefrier-getrocknet wurde. Dieses gefriergetrocknete Produkt wurde in der Oelphase in einer solchen Menge suspendiert, dass wieder 10 - 100 x 108 unumhüllte Mikroorganismen pro ml Oel enthalten waren. Sowohl beim erfindungsgemässen Präparat als auch bei dem Präparat zu Vergleichszwecken, wurde als Oelphase Paraffinöl verwendet. Bei den erfindungsgemässen Präparaten und den Präparaten zu Vergleichszwecken wurde am Beginn des Tests die Anzahl der lebenden Keime pro ml Paraffinöl bestimmt und nach einer Lagerung der Proben bei Zimmertemperatur wurde wieder die Anzahl der lebenden Keime pro ml Paraffinöl getestet. Die bei diesen Tests erzielten Ergebnisse sind in der nachfolgenden Tabelle zusammengestellt. % der während der Anzahl der lebenden Keime pro ml Testdauer Testdauer abgestorbenen Präparat bei Testbeginn bei Testende in Tagen Mikroorganismen erfindungs gemäss 89 . 108 59 . 108 603 34 erfindungs gemäss 77 . 108 52 . 108 603 32 Vergleich 182 . 107 133 . 107 98 27 Vergleich 147 . 107 96 . 107 98 35 Nan sieht aus den in der Tabelle angeführten erten, dass in den Präparaten zu Vergleichszwecken, nach einer Testzeit von nur 98 Tagen ein Verlust an lebenden Keimen von 25 %, bzw. 35 5 aufgetreten war. Die erfindungsgemässen Präparate, bei welchen die gleichen Mikroorganismen, jedoch umhüllt von der Schutzschicht aus Gummiarabikum, dispergiert in dem Paraffinöl getestet wurden, waren nach einer Lagerungszeit von nahezu zwei Jahren bei Zimmertemperatur, nämlich einer Lagerung von 603 Tagen, nur 34 %, bzw. 32 % der am Testbeginn vorhandenen lebenden Mikroorganismen abgestorben.

Claims: Preparation containing living microorganisms, in which the microorganisms are suspended in a fluid oil phase, characterised in that the preparation is a preparation which can be stored at room temperature and in that the microorganisms, which are suspended in the oil phase, are present in dried form and are encased by at least one protective layer which is water-soluble or swells in water, which layer is substantially free from water and is insoluble in the oil phase, with the oil phase being built up out of a mineral oil and/or vegetable oil and/or animal oil and/or synthetic fluid fatty acid ester and with, in the dry state, one part by weight in terms of microorganisms being encased by 0.5 to 10 parts by weight of the material of the protective layer which is water-soluble or swells in water. Preparation containing living microorganisms according to claim 1, characterised in that the protective layer which encases the microorganisms and which is water-soluble or capable of swelling in water, consists of a material which is solid at room temperature and is not capable of being broken down by the microorganisms. Preparation containing living microorganisms according to claim 1 or 2, characterised in that the protective layer which encases the microorganisms is a protective layer consisting of a water-soluble cellulose derivate, a water-soluble starch derivate, a water-soluble vegetable gum, a water-soluble pectin or a mixture of two or more of such water-soluble products. Preparation containing living microorganisms according to one of the claims 1 to 3, characterised in that in the dry state one part by weight in terms of microorganisms is encased by 2 to 6 parts by weight of the material of the protective layer which is water-soluble or capable of swelling in water. Preparation containing living microorganisms according to one of the claims 1 to 4, characterised in that it contains, as microorganisms, bacteria or fungi. Preparation containing living microorganisms according to one of the claims 1 to 5, characterised in that it is a preparation which can be used in human medicine or veterinary medicine and which contains such microorganism strains which have advantageous effects in the microorganism flora of the gastro-intestinal tract, preferably bacteria which form lactic acid, preferably bacterial strains of Streptococcus faecium , in particular Streptococcus faecium cernelle 68 . Preparation containing living microorganisms according to one of the claims 1 to 5, characterised in that it is a preparation which is used in growing useful plants or ornamental plants and contains such microorganism strains which are pathogenic in relation to animal and vegetable pests, in particular insect pests. Method for preparing the preparation containing living microorganisms according to claim 1, characterised in that the microorganisms are separated from the growing medium and are mixed with an aqueous medium which contains the material of the protective layer in a dissolved or dispersed manner, which material is insoluble in the oil phase, is water-soluble or swells in water, this mixture is dried at least to such an extent until the dried microorganisms are encased by the substantially water-free, solid protective layer consisting of the material which is water-soluble or swells in water and the encased microorganisms are suspended in the oil phase which is built up out of a mineral oil and/or vegetable oil and/or animal oil and/or synthetic fluid fatty acid ester. Method according to claim 8, characterised in that the drying is carried out as freeze-drying or spray-drying and subsequently the dry, encased material is then dispersed in the oil phase. Method according to claim 8 or 9, characterised in that a water-soluble cellulose derivate, a water-soluble starch derivate, a water-soluble vegetable gum, for example, gum arabic, a water-soluble pectin or a mixture of two or more of such water-soluble products is dissolved in water, preferably in a quantity of one part by weight of this material of the protective layer in 5 to 15 parts by weight water, and the separated microorganisms are mixed with this aqueous solution in a weight ratio of 1 part by weight microorganisms to 1 to 10 parts, preferably 3 to 6 parts, of the aqueous solution. Pelletized product, characterised in that it contains living microorganisms which are encased by a protective layer which is water-soluble or swells in water and which is insoluble in mineral oil, vegetable oil, animal oils, synthetic fluid fatty acid esters and also mixtures thereof and is solid at room temperature, with the protective layer containing corresponding cellulose derivates, starch derivates, vegetable gums, pectins or mixtures of two or more of such products, and the microorganisms encased by the protective layer being embedded in a firmly compressed solid or a mixture of solids, and these solids acting as buffers for the access of oxygen of the air or atmospheric moisture to the living microorganisms encased by the protective layer. Pelletized product according to claim 11, characterised in that it is a pelletized dietary foodstuff or a feedstuff additive, in which the compressed solids, in which the encased microorganisms are embedded, are products which contain protein and/or starch and with, if applicable, minerals or vitamins additionally being present in the pelletized product. Method for preparing the pelletized product according to claim 11, characterised in that the living microorganisms are separated from the growing medium and are mixed with an aqueous medium which contains the material of the protective layer in a dissolved or dispersed manner, this mixture is dried at least to such an extent that the microorganisms are encased by the solid protective layer consisting of the material which is water-soluble or swells in water and the encased microorganisms are mixed with the solid or the mixture of solids and this mixture is pelletized in the presence of steam under pressure at a temperature of 70 - 90 o C.

Inventors: LEWENSTEIN, ARI
Applicants: CERNITIN S.A.
Application year: 1985
Main classification: C12N1
IPC codes: A61K35, A01N63, A23K1, C12N1