READY FOR USE, RAPIDLY DISINTEGRATING, SOLID CULTURE MEDIUM, AND PROCESS FOR ITS PREPARATION

Abstract: 1. Culture medium characterized in that it is in the form of a tablet comprising all the components necessary for performing the desired analysis, with a mixture of tartaric acid and of sodium bicarbonate and/or lysine carbonate which results in effervescence and the disintegration of the tablet when the said tablet is placed in water, and enabling the production of a ready-for use culture medium, wherein the mixture of tartaric acid and the mixture of sodium bicarbonate and/or of lysine carbonate represents 13-22% of the total weight of the tablet, and wherein the association of tartaric acid-sodium bicarbonate and/or lysine carbonate is made in the proportions 1:2 to 1:4.

Description: La présente invention est relative 3 un nouveau milieu de culture, solide, à délitement rapide et pret l'eztlploi. Dès 1909, DOERR en Allemagne avait desseché sur plaques de verre des milieux de culture pour pouvoir les conserver. Quelques années plus tard FRONT (aux USA) avait effectué une étude systématique de la dessication des milieux de culture. Actuellement, les milieux solides sont préparés d'une manière industrielle. Par exemple, la maison DIFCO de Détroit propose un nombre considérable de milieux souvent très complexes, à l'état desse^hé. L'emploi de tels milieux nécessite toutefois de nombreuses manipulations : il faut peser, stériliser, répartir stérilement, dissoudre. Ces différentes opérations sont souvent longues, certaines pouvant être plus ou moins complètes et leur succession source d'erreurs lors de dosages utérieurs. La présente invention s'est par conséquent fixée pour but de pourvoir à un milieu solide, prêt à l'emploi, ne nécessitant aucune pesée, aucune manipulation de stérilisation et de répartition, d'une solubilisation parfaite, rapide et totale. La présente invention a pour objet un nouveau milieu de culture, solide, caractérisé en ce qu'il se présente sous forme d'un comprimé contenant tous les composants nécessaires pour effectuer l'analyse souhaitée, ledit comprimé étant pourvu d'un agent de délitement. Selon un mode de réalisation particulièrement avantageux de l'objet de la présente invention, 11 agent de délitement est un agent effervescent composé d'une association acide tartrique-bicarbonate de sodium et/ou carbonate de lysine selon les proportions : 1:2 à 1:4. Selon une modalité avantageuse de ce mode de réalisation, la teneur d'agent effervescent est com prise entre 5 et 50 % et de préférence entre 13 et 22 t du poids total du comprimé. Ce mode de réalisation est trs avantageux dans ces conditions, au moment d'addition de l'eau de dissolution le comprimé flotte et les bulles dégagées qui peuvent être gênantes pour les mesures optiques éventuelles se regroupent par le fait même a la surface. Conformément à l'invention, le comprimé est formé d'une quantité de divers réactifs composant le 'ni lieu, quantité juste nécessaire et suffisante pour une opération analytique unitaire, le poids dudit comprime étant compris entre 0,01 g et 5 g. Selon un mode de réalisation avantageux de l'ob jet de l'invention, le comprime peut être rendu stérile. Le comprimé selon l'invention peut contenir si on le désire, un réactif d'inhibition de croissance de tout microorganisme (bactéries, virus, champignon, leveure...) à différentes concentrations. Selon un autre mode de réalisation, le comprimé selon l'invention peut contenir des indicateurs de crois sance (indicateurs d'oxydo-réduction, indicateur de pH, indicateurs colorés de croissance, etc). Selon encore un autre mode de réalisation de l'objet de l'invention, le comprimé peut contenir des réactifs d'identification des caractéristiques métabo- liques (tels que par exemple des substrats enzymatiques mannitol, lactose, etc) Conformément a l'invention, le comprimé = tient en outre, un ou des agent (s) lubrifiant (s) qui peut par ailleurs être un stabilisant (du benzotate de sodium et/cu du P.E.G. 6000 par exemple). Les avantages de tels Milieux de culture solides sont remarquables : ils peuvent être tamponnés au pH désiré, optimal pour une croissance donnée : ils sont immédiate- ment , tels quels , prêts a l'emploi , très maniables et d'une solubilité rapide et totale ; ils conviennent aussi bien à la croissance de bactéries, virus, champignons, leveures, qu'à la croissance cellulaire. La présente invention a galement pour objet un procécé de preparation du milieu solide conforme à la présente invention, caractérisé en ce que l'on procède à une pluralité de prémélanges successif s de tous les constituants du milieu avant d'effectuer la compression et, éventuellement la stérilisation. Selon un mode de réalisation avantageux du procédé objet de la présente invention, un, plusieurs ou la totalité des constituants entrant dans la composition du milieu sont séchés par lyophilisation. L'invention pourra être mieux comprise a l'aide du complément de description qui va suivre, qui se réfère à des exemples de compositions et de préparation du milieu conforme à la présente invention. I1 doit être bien entendu, toutefois, que les différents exemples de mise en oeuvre qui seront décrits ci-après, sont donnés uniquement à titre d'illustration de l'objet de l'invention, mais n'en constituant en aucune manière une limitation. EXEMPLE I. Comprimé contenant un antibiotique Tableau I EMI3.1 <tb> <SEP> Minima <SEP> : <SEP> Maxima <tb> : <SEP> Antibiotique <SEP> : <SEP> 0,0003 <SEP> : <SEP> 10 <tb> Milieu <SEP> de <SEP> culture <SEP> lyophilisé <SEP> <SEP> - <SEP> <tb> : <SEP> contenant <SEP> l'antibiotique <SEP> : <SEP> 0,6 <SEP> : <SEP> 90 <tb> <SEP> : <SEP> Acide <SEP> tartrique <SEP> : <SEP> 3,33 <SEP> : <SEP> 15 <tb> : <SEP> Bicarbonate <SEP> de <SEP> sodium <SEP> : <SEP> 6,67 <SEP> : <SEP> 40 <tb> Benzoate <SEP> de <SEP> Sodium <SEP> <SEP> : <SEP> 10 <tb> <SEP> Milieu <SEP> de <SEP> culture <SEP> 50 <SEP> 95 <SEP> <tb> Les quantités sont indiquées en pourcentage poids sur poids). EXAMPLE II.Composition de comprimés contenant de la Gentamycine a différentes concentrations. TABLEAU II EMI4.1 GENTAMICINE <SEP> 0,000333 <SEP> 0,000666 <SEP> 0,001333 <SEP> 0,00266 <SEP> 0,005333 <SEP> 0,01066 <SEP> 0,02133 <tb> MILIEU <SEP> DE <SEP> CULTURE <SEP> LYOPHILISE <tb> CONTENANT <SEP> 0,624 <SEP> 1,248 <SEP> 2,496 <SEP> 4,992 <SEP> 9,984 <SEP> 19,968 <SEP> 39,936 <tb> LA <SEP> GENTAMICINE <tb> ACIDE <SEP> TARTRIQUE <SEP> 4,333 <SEP> 4,333 <SEP> 4,333 <SEP> 4,333 <SEP> 4,333 <SEP> 4,333 <SEP> 4,333 <tb> BICARBONATE <SEP> DE <SEP> SODIUM <SEP> 10,666 <SEP> 10,666 <SEP> 10,666 <SEP> 10,666 <SEP> 10,666 <SEP> 10,666 <SEP> 10,666 <tb> BENZONATE <SEP> DE <SEP> SODIUM <SEP> 5,000 <SEP> 5,000 <SEP> 5,000 <SEP> 5,000 <SEP> 5,000 <SEP> 5,000 <SEP> 5,000 <tb> MILLEU <SEP> DE <SEP> CULTURE <SEP> 79,386 <SEP> 78,773 <SEP> 77,493 <SEP> 75,000 <SEP> 70,000 <SEP> 60,000 <SEP> 40,000 <tb> Les quantités sont indiquées en puorcentage. EXAMPLE III. Composition de comprimés contenant de la Gentamycine a des concentrations allant de 0,125 g á 8 g par comprimé et de raison 2. TABLEAU III EMI5.1 GENTAMICINE <SEP> 0,125 <SEP> 0,250 <SEP> 0,500 <SEP> 1 <SEP> 2 <SEP> 4 <SEP> 8 <tb> MILIEU <SEP> DE <SEP> CULTURE <tb> LYOPHILISE <SEP> CONTENANT <SEP> 234 <SEP> 469 <SEP> 938 <SEP> 1875 <SEP> 3750 <SEP> 7500 <SEP> 15000 <tb> LA <SEP> GENTAMICINE <tb> ACIDE <SEP> TARTRIQUE <SEP> 1625 <SEP> 1625 <SEP> 1625 <SEP> 1625 <SEP> 1625 <SEP> 1625 <SEP> 1625 <tb> BICARBONATE <SEP> DE <SEP> SODIUM <SEP> 4000 <SEP> 4000 <SEP> 4000 <SEP> 4000 <SEP> 4000 <SEP> 4000 <SEP> 4000 <tb> BENZONATE <SEP> DE <SEP> SODIUM <SEP> 1875 <SEP> 1875 <SEP> 1875 <SEP> 1875 <SEP> 1875 <SEP> 1875 <SEP> 1875 <tb> MILLEU <SEP> DE <SEP> CULTURE <SEP> 29766 <SEP> 29531 <SEP> 29062 <SEP> 28125 <SEP> 26250 <SEP> 22500 <SEP> 15000 <tb> POIDS <SEP> D'UN <SEP> COMPRIME <SEP> 37500 <SEP> 37500 <SEP> 37500 <SEP> 37500 <SEP> 37500 <SEP> 37500 <SEP> 37500 <tb> Les quantités sont indiquées en microgrammes. EXEMPLE IV. Composition centésimale de milieux de culture. Milieu 1 Bio-trypcase.................. 39,58 Bio-soyase.................... 13,19 Chlorure de sodium ............ 10,55 Bicarbonate de sodium ............ 10,55 Sulfite de sodium ............. 0,53 Acide tartrique ............ 4,29 Cystine....................... 1,85 Glucose....................... 14,51 Benzoate de sodium ............ 4,95 100,00 Milieu 2 Peptone de caséine .......... 45,33 Peptone de farine de soja ..... 8,00 Glucose...................... 6,67 Chlorure de sodium ........... 13,33 Bicarbonate de sodium ............ 10,67 Acide tartrique ............ 4,33 Phosphate dipotassique .......... 6,67 Benzoate de sodium .......... 5,00 100,00 M lieu 3 Bio- txase 37,13 Bio-soyase 12,38 Chlorure de sodium 9,90 Sulfite de sodium 0,50 Acide tartrique 4,93 Cystine 1,73 Glucose 13,61 Benzoate de sodium 2,47 P.E.G. 6000 2,48 Carbonate de lysine 14,87 100,00 EXEMPLE V. Exemple de préparation d'un mélange destiné à la fabrication de comprimés de milieu de culture renfermant de la Ticarcilline dosée de 4 pg à 64 pg par comprimé. On prépare un mélange contenant 16 g d'antibiotique dans 1,875 mg. Pour garantir une répartition homogène de l'antibiotique dans le milieu de culture, on opère par trois prémélanges successifs dans un mélangeur rapide (par exemple Lodige, Stephan, Henschel). Exemple : 0,500 grammes d'antibiotique + 5 grammes de milieu de culture ; on mélange 30 secondes en mélangeur rapide. On additionne à ce premier mélange 25 grammes du meme milieu de culture et on mélange 30 secondes environ en mélangeur rapide. On additionne à ce deuxième mélange 28,61 grammes du même milieu de culture ; on on melange 30 secondes environ en mélangeur rapide. Le mélange obtenu contient 16 g d'antibiotique dans 1,875 mg. Le Tableau IV suivant indique les quantités de ce mélange qui entrent dans la composition de comprimés titrant respectivement 4 ug, 8 ug, 16 ug, 32 ug, 64 g de Ticarcilline par comprimé terminé de 37,5 mg. Les quantités sont indiquees en mg. TABLEAU IV EMI7.1 <tb> Mélange <SEP> contenant <tb> l'antibiotique <SEP> 0,469 <SEP> 0,938 <SEP> 1,875 <SEP> 3,750 <SEP> 7,500 <tb> <SEP> Acide <SEP> tartrique <SEP> 1,625 <SEP> 1,625 <SEP> 1,625 <SEP> 1,625 <SEP> 1,625 <tb> Bicarbonate <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 4,000 <SEP> 4,000 <SEP> 4,000 <SEP> 4,000 <SEP> 4,000 <tb> <SEP> Benzonate <SEP> de <SEP> sodium <SEP> 1,875 <SEP> 1,875 <SEP> 1,875 <SEP> 1,875 <SEP> 1,875 <tb> <SEP> Milieu <SEP> de <SEP> culture <SEP> : <SEP> <SEP> 29,540 <SEP> : <SEP> <SEP> 29,000 <SEP> : <SEP> <SEP> 28,125 <SEP> : <SEP> 26,250 <SEP> : <SEP> 22,500 <tb> Il résulte de la description qui précède que quels que soient les modes de mise en oeuvre, de réalisation et d'application adoptés, l'on obtient des milieux solides qui presentent par rapport aux milieux antérieurement connus des avantages importants, dont certains ont déjà été mentionnés dans ce qui précède, et notamment : - le comprimé, très maniable et très soluble, peut être destiné à la reconstitution de milieux de culture solides, semi-solides ou liquides - le comprimé est particulièrement adapté pour contenir par exemple les antibiotiques ou les antifonçiques cifferentes concentrations ; - Le comprimé peut être préparé à partir de tOt: : milieu de culture pour bactéries, levures, cham pignons, virus et cellules - le comprimé permet l'utilisation d'un systère de lecture optique dans d'excellentes conditions et de ce fait permet la réalisation de toute technique microbiologique et notamment la détection et la numération à partir d'un échantillon quelconque : sérum, urine, liquide cephalo-rachidien, liquide de ponction, produit laitier, eau, etc... - le comprimé à délitement rapide permet la reconstitution de milieux prêts à l'emploi pour la détermination d'un antibiogramme, d'une concentration minimale inlibitrice, d'une identification et d'une caractérisation du microorganisme par étude différentielle de croissance - le comprimé conforme à la présente invention, grâce a sa parfaite et rapide solubilité permet de réaliser un milieu de culture (pour bactéries, virus, levures, crampignons. . et cellules) prêt l'emploi dans des délais très brefs par simple addition d'eau distillée. Ainsi que cela ressort de ce qui precede, l'invention ne se limite nullement à ceux de ses modes de mise e oeuvre, de réalisation et d'application qui viennent d'être décrits de façon plus explicite ; elle en embrasse au contraire toutes les variantes qui peuvent venir à l'esprit du technicien en la matière, sans s'écarter du cadre, ni de la portée, de la présente invention.

Claims: REVENDICATION S 10) Nouveau milieu de culture, solide, caractérisé en ce qu'il se présente sous forme d'un comprimé contenant tous les composés nécessaires pour effectuer l'analyse souhaitée, ledit comprimé étant pourvu d'un agent de délitement, dont la teneur est comprise entre 5 et 50%, et de préférence entre t3 et 22t, du poids total du comprimé. 20) Milieu selon la revendication Ir caractérisé en ce que l'agent de délitement est un agent effervescent composé d'une association acide tartriquebicarbonate de sodium et/ou carbonate de lysine selon les proportions 1:2 Åa 1:4. 30) Milieu selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il est formé d'une quantité de divers réactifs composant le milieu, quantité juste nécessaire et suffisante pour une opération analytique unitaire, le poids dudit comprimé étant compris entre 0,01 g et 5 g. 40) Milieu selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qutil peut être rendu stérile. 50) Milieu selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il peut contenir, si on le désire, un réactif d'inhibition de croissance de tout microorganisme (bactéries, virus, champignon, levure...) à différentes concentrations. 6 ) Milieu selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il peut contenir des indicateurs de croissance (indicateurs d'oxydo-réduction, indicateur de pH, indicateurs colorés de croissance). 7") Milieu selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il peut contenir des réactifs d'identification des caractéristiques métaboliques (tels que des substrats enzymatiques, mannitol, lactose). 8D) Milieu selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il contient, en outre, un ou des agent(s) lubrifiant(s) qui peut par ailleurs être un stabilisant (du benzoate de sodium et/ou du P.E.G. 6000). 9 ) Procédé de préparation du milieu solide selon les revendications 1 à 8, caractérisé en ce que l'on procède à une pluralité de prémélanges successifs de tous les constituants du milieu avant d'effectuer la compression et, éventuellement, la stérilisation. 10 ) Procédé selon la revendication 9, caract6- risé en ce qu'un, plusieurs ou la totalité des constituants entrant dans la composition du milieu, sont séchés par lyophilisation.

Inventors: DEMIAUX, JEAN-BERNARD, GALLIE, JEAN-CLAUDE, SPIESER, CLAUDE, VOLLE, PIERRE-JEAN
Applicants: HOECHST BEHRING APPLIC PHARMA
Application year: 1984
Main classification: C12Q1
IPC codes: C12N5, C12Q1, C12N1