PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS CONTAINING SYMMETRICAL DISULFIDES

Abstract: 1. A pharmaceutical composition for the inhibition of the malformation or destruction of the red blood corpuscles due to a genetic modification of the hemeoglobin or to parasites, useful in particular in the treatment of drepanocytosis, of malaria and of babebiosis, characterized in that it contains, as active ingredient, a symmetrical disulfide of formula : R - S - S - R in which R represents : a group - see diagramm : EP0126012,P11,F4 in which R1 represents hydrogen and R2 represents an NH2 group or R1 and R2 taken with the atoms of nitrogen and of carbon to which they are attached form a 4,5-dihydro-1H-imidazol-2-yl, 4,5-dihydro-1-methyl-1H- imidazol-2-yl, thiazol-2-yl, 4,5-dihydrothiazol-2-yl, 1H-1,2,4-triazol-3-yl, 1-methyl-1H-1,2,4-triazol-3-yl, pyrimidin-2-yl or quinolein-2-yl radical ; a group see diagramm : EP0126012,P11,F5 in which R3 represents an atom of oxygen or an NH group and R4 represents a group - see diagramm : EP0126012,P11,F6 where R5 and R6 independently represent hydrogen, methyl or ethyl or R3 and R4 , together, represent an atom of nitrogen ; optionally in the form of a pharmaceutically acceptable salt thereof.

Description: Compositions pharmaceutiques a base de disulfures symétriques La présente invention a pour objet des compositions pharmaceutiques pour l'inhibition de la malformation ou de la destruction des érythrocytes due Åa une modification génétique de l'hémoglobine ou à des parasites et donc utiles dans le traitement de la drépanocytose et du paludisme. I1 est connu que la drépanocytose est une maladie génétique qui comporte une anomalie de la structure de l'hémoglobine, dont l'acide aminé Glu-6 de la channe bêta est remplacé par l'acide aminé Val pour donner l'hémoglobine S qui polymérise. Ladite polymérisation, lors de la désoxygénation du globule rouge, entratne la falciformation de ce dernier qui devient rigide, circule mal et se bloque dans les petits vaisseaux. tes individus porteurs de'deux gènes drépanocytaires sont ainsi sous la menace permanente d'une complication fatale. Certains disulfures ont été décrits dans la littérature comme inhibant la falciformation ; notamment, la cystamine a été indiquée comme particulièrement active ("Developments of Therapeutic Agents for Sikle Cell Disease", Inserm Sumposium, 1979, North Holland : Amsterdam, Editeurs J. Rosa, Y. Beuzard, J. Hercules ; p. 139-153). I1 a été maintenant trouvé que les disulfures de formule I: R - S - S - R (I) dans laquelle R représente - un groupe EMI1.1 dans lequel R1 représente l'hydrogène et N représente un groupe NH2 ou encore R1 et R2 pris avec les atomes d'azote et de carbone auxquels ils sont attachés forment un radical 1H-imidazol- 2-yle, -méthyl-1H-imidazol-2-yle, 4,5-dihydro-1H-imidazol-2-yle, 4,5-dihydro-1-méthyl-1H-imidazol-2-yle, thiazol-2-yle, 4,5 dihydro-thiazol-2-yle, 1H-1,2,4-triazol-3-yle, 1-méthyl-1H 1,2,4-triazol-3-yle, pyrimidin-2-yle ou quinoléin-2-yle ; ; - un groupe EMI2.1 dans lequel R@ représente un atone d'oxygène ou un groupe NH et R4 représente un groupe EMI2.2 où R5 et R6 représentent indépendamment l'hydrogène, méthyle ou éthyle ou bien R3 et R4, ensemble, représentent un atone d'azote ainsi que les sels éventuels, sont très actifs dans I inhibition de la polymérisation de l'hémoglobine S et de la falciformation des globules rouges. Il a été également trouvé que les disulfures symétriques de formule I ci-dessus sont actifs sur les parasites affectant les érythrocytes, tels que les Plasmodia et les Babesiae. Plus particulièrement, ils montrent une activité schizonticide in vitro sur "Plasmodium falciparum" et in vivo sur "Plasmodium berghei". Par conséquent, l'expression "inhibition de la malformation ou de la destruction des érythrocytes", telle qu'utilisée ici, définit une inhibition qui peut être soit directe sur l'hémoglobine soit indirecte par l'inhibition de la croissance des parasites dans le globule rouge. L'inhibition de la falciformation des érythrocytes humeins a été évaluée selon la méthode consistant à laver et incuber, dans un tampon salin (pH 7,40 - 0,15 M), les globules rouges des drépanocytaires pendant une heure 370C dans un bainmarte sous agitation circulaire en présence du produit ci-dessus a différentes concentrations. Dans cette opération le rapport molaire produit/hémoglobine est testé initialement dans l'intervalve allant de 0,5 à 20. En fonction des résultats obtenus, ce rapport est modifié. A la fin de l'incubation, l'excès de produit est enlevé par lavage. La suspension cellulaire ajustée à un hématocrite de 5 % est transférée dans un Erlenmeyer et incubée à 370C sous un courant d'un mélange humidifié d'azote et d'oxygène. La concentration d'oxygène est réglée par une pompe à mélange gazeux. Le gaz effluent est transféré dans un autre tube contenant du formaldéhyde. A la fin de l'incubation, la suspension cellulaire est transférée dans le formaldéhyde par simple retournement de la fiole. La proportion des cellules déformées et de celles ayant les caractéristiques de drépanocytes (présentant deux prolongements filiformes) est évaluée à l'aide d'un microscope ayant une optique interférentielle de NOMARSKY. L'inhibition de la falciformation a été calculée selon la formule suivante % cellules falciformées - 7. cellules falcifgormées en témoins présence de la drogue % cellules falciformées du témoin Le tableau I montre le pourcentage d'inhibition de la falciformation des érythrocytes pour certains composés inclus dans la formule I ci-dessus en comparaison avec la cystamine. Tableau I Composé % inhibition cystamine 33 dithiodiformamidine 100 2,2'-dithiodi-lH-imidazole 80 2,2'-dithiodi(4,5-tihydrothiazole) 90 3,3'-dithiodi-lH-1,2,4-triazole 100 2,2'-dithiodipyrimidine 50 dithio-diacétamide 80 dithiodi(N,N-diméthyl)acétamide 95 De ce tableau, il ressort que les composés qui sont inclus dans la formule I ci-dessus inhibent la falciformation des érythrocytes des drépanocytaires et sont beaucoup plus actifs que le composé de référence. Ainsi, la présente invention se réfère à des compo- situions pharmaceutiques pour l'inhibition de la malformation ou de la destruction des érythrocytes due à une modification gêné- tique de l'hémoglobine ou a des parasites renfermant, en tant qu'ingrédient actif, un disulfure de formule I ci-dessus ou un sel éventuel pharmaceutiquement acceptable dudit disuifure. Dans les compositions pharmaceutiques de la présente invention pour l'administration orale, sublinguale, sous-cutanée, intramusculaire intraveineuse, transdermique ou rectale, les ingrédients actifs de formule I ci-dessus peuvent être administrés sous forme unitaire d'administration, en mélange avec des supports pharmaceutiques classiques, aux aux animaux et aux êtres humains pour le traitement de la drépanocytose, du paludisme ou de la babébiose Parmi les fores unitaires d'administration appropriées, il y a les formes par voie orale, telles que les comprimés, les gélules, les poudres les granules et les solutions ou suspensions orales et les formes d'administration sublinguale et buccale, de même que les formes d'administration sous-cutanée, intramusculaire ou intraveineuse, éventuellement par perfusion, et les formes d'administration rectale. Afin d'obtenir l'effet désiré, la dose de principe actif peut varier entre 0,1 et 100 Eg par kg de poids du corps et par 3our. Chaque dose unitaire peut contenir de 10 à 1 000 mg d'ingrédient actif en combinaison avec un support pharmaceutique. Cette dose unitaire peut être administrée 1 à 4 fois par jour, éventuellement par perfusion5 pour le traitement par exemple de la drépanocytose, du paludisme et de la babébiose. On prépare simplement les poudres pour l'adminis- tration orale en broyant le composé actif à une finesse convenable et en mélangeant avec un diluant broyé similairement. Le diluant peut être un matérian de glucide comestible, tel que l'amidon. Il est avantageux qu'un agent édulcorant ou un sucre ainsi qu une huile aromatisante soient présents. On prépare les granules destinés à la reconstitution d'une préparation liquide orale en utilisant des diluants solubles dans l'eau, on souille le composé actif et un diluant soluble dans l'eau, tel que le saccharose, le glucose, etc., avec un liant, tel que le mucilage d'acacia, une solution de gélatine, une solution de méthylcellulose et on fait passer sur un tamis en forçant pour former des granulés que l'on fait sécher. I1 est avantageux d'introduire dans la composition un agent de mise en suspension comme la gomme adragante. On fait les gélules en préparant un mélange pulvérulent comme il est décrit ci-dessus et en le mettant dans des gaines de gélatine mises en forme. Comme adjuvant l'opération de remplissage il est avantageux d'ajouter un lubrifiant tel que le talc, le stéarate de magnésium et le stéarate de calcium au mélange pulvérulent avant l'opération de remplissage. On fait les comprimés en préparant un mélange pulvérulent, en granulant ou en tronçonnant, en ajoutant un lubrifiant et en comprimant pour former des comprimés. On prépare le mélange pulvérulent en mélangeant le composé désirés convenablement broyé, avec un diluant ou une base, tel que l'amidon, le saccharose, le kaolin, le phosphate bicalcique, etc. On peut granuler le mélange pulvérulent en mouillant avec le liant tel qu'un sirop, une pâte d'amidon ou un mucilage d'acacia et en forçant à travers un tamis. Comme méthode autre que la granulation on peut tronçonner le mélange pulvérulent, c'est-à-dire, le faire passer à travers la machine à comprimés et casser les comprimés résultants imparfaitement formés en fragments (tronçons). On peut lubrifier les tronçons pour les empêcher de coller aux comprimés en formant des cubes, en ajoutant un sel stéarate, du talc ou une huile minérale. On comprime ensuite le mélange lubrifiant pour constituer des comprimés. Les comprimés peuvent être avantageusement munis d'un revêtement protecteur constitué d'un enduit de scellement de gomme-laque, un revêtement de sucre et de méthylcellulose, et un enduit vernis de cire de carnauba, ou encore on peut les traiter d'une autre manière de telle sorte qu'ils aient une activité prolongée ou retarde et qu'ils libèrent continuellement une quantité prédéterminée de principe actif. On prépare les fluides pour administration orale sous des formes posologiques unitaires,teles que sirops où chaque . cuillère à café de composition contient une quantité prédéter minée du composé actif a administrer. Une préparation sous forme de sirop ou d'élixir peut contenir l'ingrédient actif conjointement avec un édul- corant, du Méthylparaben et du Propylparaben comme antiseptiques, ainsi qu'un agent donnant du goût et un colorant approprié. Pour une application rectale, on recourt a des suppositoires qui sont préparés avec des liants fondant a la température rectales par exemple du beurre de cacao ou des polyéthylèneglycole Pour une application parentérale, on utilise des suspensions aqueuses, des solutions salines isotoniques ou des solutions stériles et injectables qui contiennent des agents de dispersion et/on mouillants pharmacologiquement compatibles, par exemple le propylèneglycol ou le butylèneglycol. Le principe actif peut être formulé également sous forme de microcapeules, éventuellement avec un ou plusieurs supports ou additifs. Les composés de formule I ci-dessus sont connus en littérature ou ils peuvent être aisément préparés par oxydation des thiols correspondants selon des méthodes de synthèse bien connues (Houben-Weil, Methoden der Organischen Chemie, Vol. IX, p. 19, 4e Ed., G. Thieme-Verlag, Stuttgart). les exemples suivants illustrent 1' invention sans toutefois la limiter Pré para t ions Le composé (I) od R représente EMI6.1 avec R1 = H et h = -NH2 (dithiodiformamidine) est un produit bien connu. Les autres disulfures (I) où R a la signification mentionnée ci-dessus sont aisément préparés par oxydation des thiols correspondants par l'iode, par le broDe ou µ l'air. A titre d'exemple, on indiquera ci-après la prepa- ration du 2,2'-dithio-diimidazole. Dans un ballon muni d'un réfrigérant, on place du mercaptoimidazole 1 g, dans un mélange de dichlorométhane (10 ml) et de bicarbonate de sodium à 5 % (20 mi). Le ballon est immergé dans un bain d'eau et une solution de brome (0,26 ml) est ajoutée très lentement au mélange bien agité. Au cours de l'addition la coloration jaune du brome disparait. La solution est laissée encore une heure sous agitation après que tout le brome a été ajouté. La solution est filtrée et un produit insoluble est récupéré. On obtient ainsi 230 mg de 2,2'-dithiodiimidazole. Rendement : 23,2 % ; F : 1580C. Les disulfures (I) où R représente EMI7.1 peuvent être obtenus à partir des dérivés halogénés correspondants par action de sulfure de sodium et oxydation simultanée. A titre d'exemple, on décrit la préparation du dithiodi(N,N-diméthyl)acétamide. On chauffe à 5O0C pendant 2 heures un mélange de 0,24 mol de Na2S . 9H20, 0,24 mol de soufre et 200 ml d'eau. Au mélange orange ainsi obtenu, on ajoute, à la température ambiante 0,48 mol de N,N-diméthyl-chloroacétamide. La température monte jusqu'à 40 C et le mélange devient jaune pâle. On chauffe 2 heures à 6O0C pour achever la réaction, puis on filtre la solution, on évapore l'eau sous pression réduite, on reprend le liquide visqueux ainsi obtenu par de l'acétone et l'on élimine d'abord le chlorure de sodium par filtration et ensuite l'acétone par évaporation sous pression réduite. On obtient ainsi le dithiodi(N,N-diméthyl)- acétamide pur, sous forme d'un liquide très visqueux. De la même manière on obtient le dithiodiacétonitrile, également sous forme de liquide visqueux et le dithiodiacétamide sous forme de cristaux blancs très fins recristallisés de l'éthanol F 1640C. Exemple 1 Comprimés ayant la composition suivante 2 > 2' -dithiodi-ili-imidazole 500 mg glycine 120 mg cellulose microgranulaire 70 mg silice précipitée 18 ""g carboxyméthylamidon 30 mg stéarate de magnésium 11 mg talc 11 mg On mélange les quantités calculées des composants pendant 30 minutes, puis on granule à sec et on fait passer le mélange à travers un tamis à mailles de 1,6 mm. On comprime ensuite en utilisant tin poinçon ayant la forme d'un petit bâton. On obtient ainsi des comprimes pesant chacun 760 mg et renfermant chacun 500 mg de principe actif. Exemple 2 On prépare des comprimés selon l'exemple 1. Les comprimés ainsi obtenus sont enrobés à l'aide d'une suspension de phtalate de dibutyle, de polyméthacrylate de butyle et diméthyl aminoéthyle, de polyéthylèneglycol 1500, de silice précipitée, de bioxyde de titanium et de talc dans un mélange acétone : iso- propanol 1:1 ayant une concentration en résidu sec de 10 Z environ. On obtient ainsi des comprimés enrobés pesant chacun 780 mg et renfermant chacun 500 mg de principe actif. Exemple 3 Comprimés ayant la composition suivante dithiodiacétamide 500 mg glycine 120 mg cellulose microgranulaire 70 mg silice précipitée 18 mg carboxyméthylamidon 30 mg stéarate de magnésium 11 mg talc 11 mg On opère corme dans l'exemple 1 à partir des constituants mentionnés ci-dessus. Exemple 4 On prépare un granule destiné à la reconstitution d'une préparation liquide orale ayant la composition suivante 2,2'-dithiodi(4,5-dihydrothiazole) 3,60 g saccharose 50,00 g carboxyméthylcellulose sodium 0,80 g acide citrique 0,10 g citrate trisodique 0,90 g benzoate de sodium 0,25 8 saccharine sodique 0,15 g aromatisant 0,50 g Le volume de granulé ainsi obtenu est porté à 100 ml avec de l'eau pour sirops, Une dose unitaire de 5 ml de sirop extemporané ainsi obtenu contient 180 mg de principe actif. Pour préparer le granulé, on pulvérise les quantités calculées de tous les composants, sauf le saccharose, puis on mélange la poudre ainsi obtenue avec le saccharose jusqu'à obtenir un granulé homogène. Exemple 5 On prépare selon l'exemple 4 un granulé destiné à la reconstitution d'une préparation liquide orale ayant la composition suivante 3,3'-dithiodi-lH-1,2,4-triazole 7,00 g saccharose 46,60 g carboxyméthylcellulose sodium 0,90 g acide citrique 0,10 g citrate trisodique 0,90 g benzoate de sodium 0,25 g saccharine sodique 0,15 g aromatisant 0,50 g Une dose unitaire de 5 ml du sirop extemporané ainsi obtenu contient 350 mg de principe actif. Exemple 6 Selon l'exemple 4, on prépare un granulé destiné la reconstitution d'une préparation liquide orale ayant la composition suivante dithiodi(N,N-diméthyl)acétamide 3,60 g saccharose 50,00 g carboxyméthylcellulose sodium 0,80 g acide citrique 0,10 g citrate trisodique 0,90 g benzoate de sodium 0,25 g saccharine sodique 0,15 g aromatisant 0,50 g Exemple 7 On prépare selon l'exemple 4 un granule destiné à la reconstitution d'une préparation liquide orale ayant la composition suivante : dithiodiacétamide 7,00 g saccharose 46,60 g carboxyméthylcellulose sodium 0,90 g acide citrique 0,10 g citrate trisodique 0,90 g benzoate de sodium 0,25 g saccharine sodique 0,15 g aromatisant 0,50 g Exemple 8 On prépare selon l'exemple 4 un granulé destiné à la reconstitution d'une préparation liquide orale ayant la composition suivante 2,2'-dithiodipyrimidine 8,00 g saccharose 45 > 60 g carboxyméthylcellulose sodium 1,00 g acide citrique 0,10 g citrate trisodique 0,90 g benzoate de sodium 0,25 g saccharine sodique 0,15 g aromatisant 0,50 g Une dose unitaire de 5 ml du sirop extemporané ainsi obtenu contient 400 ""g de principe actif. Exemple 9 On prépare selon l'exemple 4 un granule destiné à la reconstitution d'une préparation liquide orale ayant la composition suivante dithiodiacétamidine 8,00 g saccharose 45,60 g carboxyméthylcellulose sodium. 1,00 g acide citrique 0,10 g citrate trisodique 0 > 90 g benzoate de sodium 0,25 g saccharine sodique 0,15 g aromatisant 0 > 50 g Une dose unitaire de 5 ml du sirop extemporané ainsi obtenu contient 400 mg de principe actif. Exemple 10 On prépare des comprimés ayant la composition suivante dithiodiacétonitrile 350 mg cellulose microcristalline 100 mg lactose 125 mg stéarate de magnésium 10 mg talc 15 mg On fait passer les poudres à travers un tamis de 0,3 mm, puis on mélange les ingrédients jusqu'à ce qu'on obtienne un mélange homogène qui est comprimé et granulé. Les granules ainsi obtenus sont utilisés pour former des comprimés par compression. Poids d'un comprimé : 600 mg. Exemple 11 Selon l'exemple 10, on prépare des comprimés ayant la composition suivante dithiodiformamidine 350 mg cellulose microcristalline 100 mg lactose 125 mg stéarate de magnésium 10 mg talc 15 mg On fait passer les poudres à travers un tamis de 0,3 mm, puis on mélange les ingrédients jusqu'à ce qu'on obtienne un mélange homogène qui est comprimé et granulé. Les granules ainsi obtenus sont utilisés pour former des comprimés par compression. Poids d'un comprimé : 600 mg. Exemple 12 Comprimés ayant la composition suivante 2,2'-dithiodi(1-méthyl-1H-imidazole) 150 mg cellulose microcristalline 75 mg talc 15 mg polyvimylpyrrolidome 30 mg silice précipitée 25 ""g stéarate de magnésium 5 ""g On mélamge intimement dans une mélangeuse-pétris setise tous les ingrédients, sauf le lubrifiant, pendant 15 minutes, puis on pétrit par addition graduelle d'eau. On fait passer la masse à travers un tamis de 1,25 mm. On sèche le granulé dans une étuve à ventilation forcée jusqu'à ce qu'on obtienne une humidité résiduelle relativement réduite (environ 2 %). On uniformise le granulé, on ajoute le lubrifiant et on forme des comprimés par compression. Poids d'un comprimé : 300 mg. De la même façon on prépare des comprimés contenant 250 mg de principe actif. Exemple 13 Selon l'exemple 12, on prépare des comprimés ayant la composition suivante dithio(N,N-diéthyl)acétamide 150 mg cellulose microcristalline 75 mg talc 15 mg polyvinylpyrrolidone 30 mg silice précipitée 25 ""g stéarate de magnésium 5 ""g Exemple 14 On prépare des comprimés ayant la composition suivante : 2,2'-dithiodi-quinoléine 150 mg carboxyméthylamidon 10 mg cellulose microcristalline 85 mg lactose 135 mg huile de ricin hydrogénée 10 mg stéarate de magnésium 5 mg en opérant comme décrit à l'exemple 10. On recouvre les comprimés ainsi obtenus par un revêtement ayant la composition suivante phtalate de butyle 0,300 mg polyméthacrylate de butyle de diméthylaminoéthyle 1,850 mg polyéthylèneglycol 1500 0,080 mg silice précipitée 0,020 mg talc 0,900 mg bioxyde de titane 1,850 mg dissous dans un solvant qui est éliminé par évaporation dans une étuve à ventilation forcée. Poids d'un comprit : 400 mg Exemple 15 Comme dans l'exemple 14, on prépare des comprimés ayant la composition suivante dithiodi(N,N-diméthyl)acetamide 150 mg carb oxymé thylamid on 10 mg cellulose microcristalline 85 mg lactose 135 mg huile de ricin hydrogénée 10 mg stéarate de magnésium 5 mg On recouvre les comprimés ainsi obtenus par un revêtement ayant la composition suivante phtalate de butyle 0,300 mg polyméthacrylate de butyle de diméthylaminoéthyle 1,850 mg polyéthylèneglycol 1500 0,080 mg silice précipitée 0,020 mg talc 0,900 900 mg bioxyde de titane 1,850 mg Exemple 16 Suppositoires ayant la composition suivante: : d ithiod iacétamide 300 mg masse pour suppositoires 1 450 mg On met en suspension la substance active finement pulvérisée dans la masse pour suppositoires à 370C et on verse le mélange dans des moules légèrement refroidis au préalable. Poids d'un suppositoire : 1 750 mg. Exemple 17 En opérant comme dans l'exemple 16, on prépare des suppositoires ayant la composition suivante 2,2' -dithiodi-lH-imidazole 300 mg masse pour suppositoires 1 450 mg

Claims: R E V E N D I C A T I O N S 1. Composition pharsaceutique pour l'inhibition de la malformation ou de la destruction des érythrocytes due à une modification génétique de l'hémoglobine ou à des parasites, utile notamment pour le traitement de la drépanocytose, du paludisme et de la babébiose, caractérisée an ce qu'elle contient, en tant que primcipe actif, un disulfure symétrique de formule R - S - S - R dans lequel R représente - un groupe EMI14.1 dans lequel R1 représente l'hydrogène et R2 représente un groupe ou encore R1 et R2 pris avec les atomes d'azote et de carbone auxquels ils sont attachés forment un radical 1H-imidazol-2-yle, 1-méthyl-1H-imidazol-2-yle, 4,5-dihydro-1H-imidazol-2-yle, 4,5dihydro-1-méthyl-1H-imidazol-2-yle, thiazol-2-yle, 4,5-dihydrothiazol-2-yle, 1H-1,2,4-triazol-3-yle, 1-méthyl-1H-1,2,4-triazol3-yle, pyrimidin-2-yle ou quinoléin-2-yle ; - un groupe EMI14.2 dans lequel R3 représente un atome d'oxygène ou un groupe Nil et R4 représente un groupe EMI14.3 où R5 et R6 représentent indépendamment l'hydrogène, méthyle ou éthyle ou bien R3 et R4, ensemble, représentent un atome d'azote ; éventuellement sous forme de sel pharmaceutiquement acceptable. 2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle est sous forme d'unité de dosage. 3. Composition selon la revendication 2, caractérisée an ce que chaque unité de dosage contient de 10 A 1 000 mg de principe actif.

Inventors: BEUZARD, YVES, DEMARNE, HENRI, GAREL, MARIE-CLAUDE, SEBILLE, BERNARD
Applicants: INSTITUT NATIONAL DE LA SANTE ET DE LA RECHERCHE MEDICALE (INSERM), SANOFI, SOCIETE ANONYME
Application year: 1984
Main classification: A61K31
IPC codes: A61K31