IMMUNOMODULATING MEDICINE OF BIOLOGICAL ORIGIN, AND PROCESS FOR PREPARING IT

Abstract: 1. Immunomodulating medicament of biological origin, of which the active principle is formed by the products of lysis or a fraction of these products of bacteria lysed by bacteriophagic route, characterised in that it contains, as active principle, the sterile lysis filtrate of at least two bacteria lysed by homologous bacteriophagic route ; the bacteria chosen being Klebsiella pneumoniae and Escherichia coli.

Description: "MEDICAMENT IMMUNOMODULATEUR D'ORIGINE BIOLOGIQUE ET SON PROCEDE DE PREPARATION". La présente invention concerne dss m6dioamenti immunomow dulateurs, d'origine biologique et leur procédé de préparation. De nombreuses préparations modulant la réponse immune par des fractions ou des extraits de corps microbiens lys sont connus. On peut citer notamment les produits décrits dans les brevets fran çais n 2.374.042, 2.396.018 et 2.426.470. Ces lysats ou extraits sont généralement obtenus par des procédés physiques, chimiques et plus rarement enzymatiques. Si la plupart de Ces préparations possède une oertaine activité immunomodulatrice mise en évidence chez l'animal, les activités thérapeutiques chez l'homme font encore l'objet de nombreux travaux (Immuno-pharmacologie olinique. Réalités et Perspectives G. RENOUX. Pharmacologie et thérapeutique. R.P. 1982, 32, 41-42. Il était donc important de rechercher des médicaments offrant aussi bien à la médecine humaine que vétérinaire une arme susceptible d'être utilisée chaque fois qu'il s'agit de rétablir ou de renforcer les défenses immunitaires. Il a été trouvé un nouveau procédé de préparation utilisant le bactériophage. Le bactériophage représentant in vitro un excellent outil de lyse bactérienne, son utilisation pour la fabrication de préparations immunomodulatrices a été effective aveo différent genres et espèces bactériens. Cette technique de lyse bactérienne par voie bactériophagique est sans limitation concernant le genre ou l'es- pèce des bactéries. Ce procédé a permis d'obtenir des médicaments remarquables par leurs propriétés de modulation du système immunitaire, préparés à partir d'un ou plusieurs germes bactériens ou d'un mélange de ces germes bactériens. Ces médicaments possèdent notamment un pouvoir induoteur d'interférons. Ces médicaments modulant la réponse immune dont le principe actif est constitué par les produits de lyse ou une fraction de ces produits de bactérie lysée par voie bactériophagique, selon l'invention, contiennent comme principe actif les produits de lyse d'au moins deux bactéries lysées par voie bactériophagique homologue. Parmi les bactéries, on peut citer de manière nullement limitative Escherichia coli, Streptococcus faecalis, Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus aureus. La préparation obtenue avec utilisation des bactéries des genres Kiebsiella et Esoherichia s'avère particulièrement interessante. Le médicament, selon l'invention, peut être associé à une substance antibiotique, telles des tétracyclines, antivirale, tels des nucléosides synthétiques interférant avec la synthèse de l'acide nucléique viral, antifongique, tel le buclosamide, ou antiparasitai- re, telle la chloroquine. Dans une autre forme de réalisation, le médicament, selon l'invention, peut être associé à d'autres produits et compositions pharmaceutiques, tel un agent anti-tumoral (cytostatiques), un agent immuno-suppressif, (immunoglobulinesantilymphocytaires) un agent antimitotique, tels les dérivés de l'acide folique ou anti-inflammatoire, telle l'indométhacine. Le médicament de l'invention peut se présenter sous diverses formes en vue de l'administration percutanée, transcutanée, perlinguale, topique, entérale, parentérale ou aérienne. Suivant les cas, le médicament est conditionné avec un excipient approprié, tel sous forme d'une solution aqueuse ou alcoolique ou en suspension dans un excipient huileux, soit sous forme lyophilisée ou d'aérosols, ou de pommades. La posologie utile est susceptible de larges variations en fonction de la composition du médicament, de l'indication prescrite, de la forme d'administration et de l'age du sujet traité. La détermination des doses utiles est laissée à l'appréciation du médecin ou du vétérinaire, comme il est de pratique habituelle, dans les traitements de modulations de la réponse immune. Â titre d'exemple, la posologie quotidienne peut comporter dans le traitement des infections chroniques ou récidivantes des voies respiratoires, dans la prévention des complications infectieuses postopératoires, ou dans la prophylaxie des infections urinaires, des doses de I Åa 50 ml, suivant la concentration de la préparation immunomoadulatrice. Le médicament selon ltinvention est toléré de manière excellente, sa toxicité est faible ainsi que le montre le test de la qui n'a pu être atteinte per os compte tenu de la capacité gastrique des animaux utilisés (souris, rats). Les médicaments de l'invention sont particulièrement indiqués dans le traitement des dysrégulations de la réponse immune dans la prévention ou le traitement des agressions infectieuses bactériennes, virales, fongiques ou parasitaires, ainsi qu'en rhumatologie et dans la cicatrisation ou la protection des plaies. L'invention a également pour objet le procédé de prépara tion du médicament du type lyse bactérienne qui repose sur une séquen- ce en au moins deux stades indispensables} à savoir une lyse bactérie phagique, puis l'élimination des bactéries non lysées et des débris bactériens par un procédé connu des spécialistes, tels filtration, centrifugation, etc. Selon un mode de mise en oeuvre du procédé à partir d'une bactérie, on ensemence un milieu de culture adapte. avec un inoculum de bactéries, puis au cours de la phase de croissance, on infecte les bactéries par introduction de leur phages homologues, on suit ltévo- lution de la lyse, à l'aide d'un compteur cellulaire, préalablement étalonné, jusqu'à un stade fixé correspondant à un nombre de bactéries par millilitre du milieu, ensuite on procède à l'élimination des bactéries non lysées et des débris bactériens, et l'on recueille le filtrat de lyse qui constitue la préparation immunomodulatrice. Le procédé de l'invention peut être mis en oeuvre avec utilisation successive de bactéries de genres différents. Dans ce cas, on procède à un premier ensemencement d'un milieu de culture adapté avec un inoculum de bactéries d'un certain genre, au cours de la phase de croissance, on infecte les bactéries par introduction de leurs phages homoiogues, on suit l'évolution de la lyse jusqu'à un stade fixé, de la même manière que précédemment, puis on procède alors à un second ensemencement du milieu de culture avec un inoculum de bactéries d'un autre genre, au cours ae la phase de croissance des bactéries du second genre, on infecte ces bactéries par introduction de leurs phages homologues, on suit l'évolution de la lyse des bactéries de ce second genre jusqu'à un stade fixé, enfin on élimine les bactéries non lysées et les débris bactériens par les méthodes connues pour ce type de séparation, et l'on recueille le filtrat de lyse obtenu à partir des deux bactéries. Selon ce procédé on peut préparer un médicament en utilisant successivement, par exemple, des bactéries des genres Kiebsiella et Es cheri chia. Il est donné, ci-après, des exemples qui illustrent l'inven- tion à titre non limitatif. EiCENPLE 1 préparation à partir d'une bactérie du genre ischerichia. La bactérie utilisée est du genre Escberichia, espèce coli, sérotype 0119 : 14, répertoriée par l'institut Pasteur de Paris sous la référence 62.23. Le coliphage appartient au groupe morphologique C1 (nomenclature du sous-comité de Taxonomie des Bactériophages de l'Interna tional Committee for Taxonomy of Virus de l'I.A S.), il a une tête isométrique, une queue très courte, difficile à mettre en évidence, un manchon et une plaque terminale non détectables. Sur milieu gélosés les plages de lyse ont un diamètre de 1 à 1,5 mu, une forme ronde, des contours réguliers, un centre voilé et des clones r + con fluent s. Le milieu de culture par litre est constitué de : extrait de boeuf 2,5 g, peptone 4,1 g, chlorure de sodium 7,0 g, eau bidistiS lée complément. Le milieu est ensemencé avec un inoculum de bactéries qui se trouvent en phase de croissance exponentielle et la densité initiale de la culture est de 1.106 bactéries par ml. L'incubation se poursuit à 370C sous agitation modérée. Au milieu de la phase de croissance exponentielle, soit environ 60 minutes après l'ensemencement, les bactéries sont infectées par leurs phages homologues. La multiplicité d'infection est de 0,02. L'évolution de la lyse est suivie à l'aide d'un compteur cellulaire, préalablement étalonné. Lorsqu'il reste moins de 1000 bactéries par ml, une filtration stérilisante est réalisée par passage sur un filtre membrane de porosité voisine de 0,22 m. Le filtrat de lyse constitue lui-même la préparation immunomodulatrice. tPLE 2 : préparation à partir d'une bactérie du genre Streptococcus. On utilise une bactérie du genre Streptococcus, espèce faecalis, variété zymogenes, répertoriée par l'institut Pasteur de Paris sous la référence 53.152. La phage appartient au groupe morphologique A1 (nomenclature du sous-comité de Taxonomie des Bactériophages de L'international Committee for Taxonomy of Virus de l'I.A.M.S.), sa tête est isométrique, sa queue longue, le manchon est visible et la plaque terminale est complexe. Sur milieu gélosé, les plagies de lyse sont rondes, in férieures à 0,8 mm, leurs contours sont réguliers et leur centre clan Il n'y a pas de clone r + ou il n'y en a qu'un seul. Par litre, le milieu de culture a pour constitution extrait ae boeuf 0,3 g, tryptase 1,0 g, dextrose 1,0 g, chlorure de sodium 0,5 g, complément eau bidistillée. Le milieu est ensemencé avec un inoculum de bactéries qui se trouvent en phase stationnaire et la densité initiale est de bactéries par ml. il est placé à l'obscurité et à 370C, sous agitation modérée. Au début de la phase de croissance exponentielle, soit environ 40 minutes après l'ensemencement, les bactéries sont infectées par leurs phages homologues. La multiplicité d'infection est de 0,1. L'évolution de la lyse est suivie à l'aide d'un compteur cellulaire. Lorsqu'il reste moins de 10 bactéries par ml, la culture est centrifugée stérilement à 5000 G pour éliminer les bactéries ly sogénes et les corps bactériens non lysés. Le surnageant constitue la préparation immunomodulatrice. EXEMPLE 3 : préparation avec utilisation successive des bactéries des genres Kiebsiella et Escherichia. La bactérie du genre Klebsiella, espèce pneumoniae, est répertoriée par l'institut Pasteur de Paris sous la référence 58.5. Les caractéristiques de la bactérie du genre Escherichia sont celles décrites dans l'exemple 1. Le phage, homologue de Kiebsiella, appartient au groupe morphologique C1 (nomenclature du Sous-Comité de Taxonomie des Bacté- riophages de l'international Committee for Taxonomy of Virus de l'I.AL M. s.), il a une tête icosaédrique, une queue courte, difficile à mettre en evidence, le manchon et la plaque terminale ne sont pas détectables. Sur milieu gélosé, les plages de lyse ont de 0,5 à 3 mm et sont de forme très irrégulière, avec des contours estompés et un centre clair. Les clones r sont rares. Les caractéristiques du coliphage sont décrites dans l'exem- ple 1. Par litre, le milieu de culture a pour constitution extrait de boeuf 3 g, peptone 5 g, chlorure de sodium 7 g, complément en eau bidistillée. Le milieu est ensemencé avec un inoculum de Kiebsiella pneumoniae qui se trouvent en phase ae croissance stationnaire. la densité initiale est de 1.107 bactéries par ml. la culture est placée à 37cC, sous agitation modérée. A la fin de la phase de latence, soit environ 60 minutes après l'ensemencement, les bactéries sont infectées par leurs phages homologues, la multiplicité d'infection est de 0,03. L'évolution de la lyse est suivie à l'aide d'un compteur cellulaire. Lorsqu'il reste moins de 10 bactéries par ml, le milieu est à nouveau ensemencé avec un inoculum d'Escherichia qui se trouve en phase de croissance stationnaire. La densité initiale de cette nouvelle culture est de 5.107 Escherichia par ml. À la fin de la phase de latence soit, dans ces conditions expérimentales, 20 minutes après le deuxième ensemencement, les bactéries sont infectées par les coliphages. La multiplicité d'infec- tion est de 0,1. L'évolution de la lyse est suivie à l'aide d'un compteur cellulaire. Lorsqu'il reste moins de 103 Escherichia par ml, la culture est stoppée par passage à travers un filtre membrane stérilisant de 0,22m. Le filtrat de lyse obtenu à partir des deux bactéries, Kiebsiella pneumoniae et Escherichia coli, constitue la préparation immunomodulatrice. EXEMPLE 4 : préparation en utilisant une bactérie du genre Staphylococcux La bactérie du genre Staphylococcus, espèce aureus, séroty- pe 1, est répertoriée par l'institut Pasteur de Paris sous la référence 65.6. Le phage homologue du Staphylocoque appartient au groupe morphologique Ai (nomenclature du Sous-Comité de Taxonomie des 3actériophages de l'international Committee for Taxonomy of Virus de l'I.A. M.S.) ; il a une tête octaédrique et une queue recouverte d'un manchon et d'une plaque terminale complexe. Sur milieu gélosé, les plages de lyse ont un diamètre de 1 à 2 mm, elles sont rondes et régulières, leur centre est clair, il n'y a pas de clone Les bactéries sont étalées sur un milieu solide contenant par litre : protéose peptone n03 Difco 10,0 g, dextrose 1,2 g, amidon soluble 6,0 g, chlorure de sodium 3,0 g diphospnate de sodium 2,0 g, bacto-gélatine 13,0 g, bacto-agar 6,0 g, eau purifiée Q.S. Après 24 heures, les germes formant un épais tapis bactérien, sont récoltés stérilement, numérés et resaspenous dans un milieu contenant par litre : extrait de boeuf 2,5 g, peptone 4,1 g, chlorure de sodium 7,0 g, eau bidistillée Q. S., pour avoir une densité de 5,106 bactéries par ml. Simultanément, les phages homologues sont introduits dans le milieu. La multiplicité d'infection est de 0,01. L'évolution de la lyse est suivie à l'aide d'un compteur cellulaire. Lorsqu'il reste moins de 10ê bactéries par ml, une filtration à travers une membrane de porosité voisine de 0,22sm est réalisée. Le filtrat de lyse lui-même constitue la préparation immunomodulatrice. ETUDE PHARMACOLOGIQUE Les activités sur lzanimal des préparations de l'invention sont illustrées avec une préparation correspondant au filtrat de lyse d'Escherichia coli obtenu selon la méthode décrite dans l'exemple 1. Le filtrat a été lyophilisé puis resolubilisé dans de l'eau distillée stérile. Le facteur de concentration de cette nouvelle solution est exprimé par rapport à la préparation avant lyophilisation. ACTIVITE PROTECTRICE CONTRE UNE INFECTION BACTERIENNE AIGUE. Ce test, mettant en évidence une stimulation globale du système immunitaire, a été réalisé avec des germes infectants difté- rents de ceux entrant dans la préparation. Caca afin ae démontrer que la préparation n'est pas active par un éventuel pouvoir vaccinant ou par un phénomène bactériophagique direct, mais bien par une sti mulation des défenses immunitaires. Deux germes ont été testés, Klebsiella pneumoniae, une bactérie z développement intracellulaire et Staphylococcus aureus, une bactérie à développement estracellulaire. Les bactéries infectantes ont été administréeS à des lots de 10 souris Swiss femelles, d'un poids moyen de 18 g, au jour JO par la voie intrapéritonéale sous un volume de 0,5 ml. La préparation immunomodulatrice a été injectée le jour précédent l'infection, à J-1, il s'agit donc de la recherche d'une activité préventive. La préparation a été administrée par la voie intrapéritonéale ou intraveineuse, afin d'écarter un éventuel résul- tat positif dl Åa une interférence directe de la préparation avez les germes infectants au point d'injection. Pour connaître la virulence de la souche infectante oui peut varier dans des limites considérables d'une expérience à l'autre, sa dose léthale 50 a été établie lors de chacun des tests. L'activité protectrice de la préparation contre une infection bactérienne aiguë est présentée dans le tableau I ci-dessous. TABLEAU I EMI7.1 <tb> Bactéries <SEP> Traitement <SEP> Survivants <SEP> (%) <SEP> : <tb> infectantes <SEP> DL <SEP> 50 <SEP> voie <SEP> volume <SEP> dose <SEP> traités <SEP> témoins <SEP> P <tb> <SEP> facteur <SEP> de <SEP> (n <SEP> = <SEP> 10) <SEP> (n <SEP> = <SEP> 10) <tb> <SEP> concentra <tb> <SEP> tion <tb> Clebsiella <SEP> 10-2 <SEP> I.P. <SEP> 1,0 <SEP> ml <SEP> 1 <SEP> x <SEP> 0 <SEP> 10 <SEP> NS <tb> <SEP> 10-3 <SEP> I.P. <SEP> 1.0 <SEP> nil <SEP> : <SEP> 1 <SEP> x <SEP> : <SEP> 70 <SEP> : <SEP> 30 <SEP> : <SEP> 0,050 <SEP> <tb> <SEP> 10-4 <SEP> I.P. <SEP> 1,0 <SEP> ml <SEP> 1 <SEP> x <SEP> 100 <SEP> 20 <SEP> 0,001 <tb> <SEP> 10-2 <SEP> I.V. <SEP> 0,5 <SEP> ml <SEP> 1 <SEP> x <SEP> 20 <SEP> 10 <SEP> NS <tb> TABLEAU I (Suite) EMI8.1 <tb> Bactéries <SEP> Traitement <SEP> Survivants <SEP> (%) <tb> infectantes <SEP> DL50 <SEP> voie <SEP> volume <SEP> facteur <SEP> de <SEP> traités <SEP> témoins <SEP> P <tb> <SEP> concentra- <SEP> (n <SEP> = <SEP> 10) <SEP> (n <SEP> = <SEP> 10) <tb> <SEP> tion <tb> Clebsiella <SEP> 10-3 <SEP> I.V. <SEP> 0,5 <SEP> ml <SEP> : <SEP> 1 <SEP> Z <SEP> : <SEP> 80 <SEP> : <SEP> 20 <SEP> :0,025 <SEP> <tb> <SEP> : <SEP> 10-4 <SEP> I.V. <SEP> 0,5 <SEP> ml <SEP> : <SEP> 1 <SEP> z <SEP> : <SEP> 100 <SEP> : <SEP> 20 <SEP> :0,001 <tb> taphylo- <SEP> 10-2 <SEP> I.P. <SEP> 1,0 <SEP> ml <SEP> 1 <SEP> x <SEP> 10 <SEP> 10 <SEP> NS <tb> occus <SEP> 10-3 <SEP> I.P. <SEP> 1,0 <SEP> ml <SEP> 1 <SEP> x <SEP> 80 <SEP> 10 <SEP> 0,001 <tb> ureus <tb> <SEP> 10-2 <SEP> I.V. <SEP> 0,5 <SEP> ml <SEP> 1 <SEP> x <SEP> 10 <SEP> 20 <SEP> NS <tb> <SEP> 10-3 <SEP> I.V. <SEP> 0,5 <SEP> ml <SEP> 1 <SEP> x <SEP> 100 <SEP> 30 <SEP> 0,001 <tb> STIMULATION DE L'ACTIVITE PHAGOCYTAIRE DES MACROPHAGES. Le test de Ealpern (Stiffel C., 1958. J. Phys. 58, 911-949) consiste à injecter à des souris, par la voie intraveineuse, des particules de carbone colloidal qui seront phagocytées par les cellulesréticulo-endothéliales du foie et de la rate essentiellement. Leur vitesse d'épuration est représentative de l'activité phagocytaire. Elle est mesurée en dosant, par photométrie en fonction du temps, les particules restées libres dans le sang. Le IJPS, une endotoxine lipopolysaccharidique extraite d'entérobactéries et puissant activateur des macrophages, est utilisé comme substance de référence. Le test est réalisé de la manière suivante : - 0,6 mi du filtrat d'Escherichi2 coli ou d'une solution de LPS (lipopolysaccharides) à 0,625 g/ml sont injectes à des lots de 5 souris Swiss femelles, d'un poids moyen de 24 g, par voie intrapéritonéales. - 27 heures plus tard, 0,12 ml d'une suspension de carbone colloidal dosé à 32 mg/ml de carbone dans de la gélatine à 4 % est injecté aux souris par voie intraveineuse. - 20 l de sang sont prélevés au sinus rétro-orbital toutes les deux minutes pendant 12 minutes. se prélèvement de sang est immédiatement dilué dans 4 ml de Na2CO3 à 1 %. La solution est alors photométrée. - La lecture de l'extinction se fait à 620 nm. - La concentration en carbone colloïdal dans le sang au temps t de l'ex?érience est obtenue en se rapportant à une droite étalon établie préalablement. L'index phagocytaire se calcule selon la formule sui- vante : log C2 - log C I.P. = @/T2 - T1, C2 et centration sanguine en carbone C1 représentent respectivement la con colloidal lors du dernier et premier prélèvement de sang, T2 et T1 représentent le moment de ces prélèvements. Les résultats consignés dans le tableau Il montrent que l'activité des macrophages péritonéaux de la souris est stimulée après une administration intrapéfltonéale de la préparation. TABLEAU II EMI9.1 <tb> <SEP> Traitement <SEP> Volume <SEP> injecté <SEP> I.P. <tb> Préparation <SEP> (filtrat <SEP> de <SEP> 0,6 <SEP> ml <SEP> 0,028 <SEP> # <SEP> <SEP> 0,003 <tb> lyse <SEP> bactériophagique <tb> d'E. <SEP> coli) <tb> Bouillon <SEP> de <SEP> culture <SEP> : <SEP> 0,6 <SEP> mi <SEP> : <SEP> 0,012 <SEP> - <SEP> 0,001 <tb> non <SEP> ensemencé <tb> (Témoin <SEP> négatif) <tb> LPS <SEP> (référence <SEP> positive) <SEP> 0,6 <SEP> ml <SEP> 0,025 <SEP> # <SEP> <SEP> 0,002 <tb> ACTIVITE INDUCTRICE D'INTERFERON SERIQUE (IFN SERIQUE). L'IFN est une glycoprotéine de poids moléculaire compris entre 10'000 et 20'000 daltons. Il a ae nombraI ses activités immuno- modulatrices, en particulier, il stimule 'activit des cellules NK (Natural Killer). Son mode d'action est encore en cours d'étude. Sa participation à la défense antivirale est bien établie. Deux heures après une administration de la préparation chez 8 souris Swiss femelles, de 25 g, 0,3 ml de sang sont recueillis chez chacune d'elles sur tube non hépariné. L'INF sérique est dosé classi- quement en mesurant 1 effet cytopathique du virus vSV (Vesicular Stomatitis Virus) infectant des cellules murines L cultivées pendant 2 heures en présence du sérum à tester. (Eavell E.A. et Vilcèk Anti- microb. Agents Chemotherapy 2, 476-484. 1972). L'effet protecteur de l'IFN induit est comparé à celui d'IFN murin, référence Internationale provenant du National Institute of Health, Bethesda, USA. La préparation induit de l'IFN sérique chez la souris, deux heures après son administration intrapéritonéale, intraveineuse ou oraie, comme indiqué dans le tableau III. TABLEAU III EMI10.1 <tb> <SEP> Voie <SEP> Produit <SEP> Volume <SEP> Facteur <SEP> de <SEP> U.I. <SEP> IFN/ml <tb> <SEP> concentration <tb> I.P. <SEP> préparation <SEP> 1,5 <SEP> ml <SEP> 80 <SEP> 1058 <tb> <SEP> placebo <SEP> : <SEP> 1,5 <SEP> ml <SEP> : <SEP> 80 <SEP> 0 <SEP> O <tb> I.V. <SEP> préparation <SEP> 0,7 <SEP> ml <SEP> 80 <SEP> 950 <tb> <SEP> placebo <SEP> 0,7 <SEP> ml <SEP> 80 <SEP> 0 <tb> P.O. <SEP> : <SEP> préparation <SEP> : <SEP> 1,0 <SEP> ml <SEP> : <SEP> 1000 <SEP> : <SEP> 1 <SEP> 1200 <tb> <SEP> placebo <SEP> 1,0 <SEP> ml <SEP> : <SEP> 1000 <SEP> : <SEP> 0 <SEP> O <tb> L'activité sur l'homme a été testée avec une préparation selon l'exemple 3, administrée d'abord chez le volontaire, ensuite chez le malade. Une étude aouble-aveugle réalisée avec 15 patients volontaires a permis de mettre en évidence que l'administration orale de la préparation entrainait après 10 jours de traitement une augmenta- tion significative des réponses immunitaires z médiation cellulaire. Une deuxième étude réalisée sur 25 patients z démontré qu'une administration orale unique de différentes doses de la préparation permettait d'induire après 24 heures, une lymphokine sérique de type MIF - LIF. Cette induction est dépendante de la dose. Plusieurs études ont permis de mettre en évidence la stimulation de la production d'IFN par des lymphocytes et monocytes hu- mains obtenus par cytophérèse et cultivés en speener. L'IFN induit par la préparation a pu être caractérisé en utilisant des antisera anti-IFN &alpha;, ss ou #. Sa production est dépendante de la dose utilisée. A titre d'exemples, quelques travaux cliniques sont rap- portés ci-après. PREVENTION ET TRAITEMENT DES INFECTIONS CHRONIQUES OU RECIDIVANTES DES VOIES RESPIRATOIRES. Deux groupes de 25 patients atteints d'infections bactériennes chroniques ou récidivantes au niveau broncho-pulmonaire ont été traités oralement respectivement, l'un par 15 ml de la préparation précitée; 20 jours par mois pendant trois mois, l'autre par des traitements antibiotiques classiques. La diminution du nombre d'epi- sodes infectieux aigus pendant les six mois quta duré l'essai est si- gnificativement plus importante dans le groupe traité par la prépara- tion que dans le groupe traité classiquement aux antibiotiques. PREVENTION DES INFECTIONS POST-OPERATOIRES Une administration orale de 20 ml de la préparation a permis de diminuer de façon significative les complications infectieuses post-opératoires chez 109 patients comparativement à 72 autres malades traités classiquement. PREVENTION ET TRAITEMENT DES INFECTIONS URINAIRES Quatre auteurs ont étudié sur le plan clinique la préparation ci-dessus, chez une population de patientes atteintes d'infection urinaire chronique ou récidivante. Une administration orale de 15 ml par jour, 20 jours par mois pendant trois mois, a permis de réduire significativement la fréquence et la durée des épisodes infectieux ainsi que la consommation des anti-infectieux pendant les sio mois d'observation comparativement aux six mois précédant le traitement. Dans tous les essais, la tolérance de la préparation a été jugée excellente par le méaecin et le patient (volontaire ou malade).

Claims: REVENDICATIONS 1. Médicament immunomodulateur d'origine biologique dont le principe actif est constitué par les produits de lyse ou une frac- tion de ces produits ae bactérie lysée par voie bactériophagique, ca bactérie en ce qu'il contient comme principe actif les produits de lyse d'au moins deux bactéries lysées par voie bactériophagique homologue. 2. Médicament immunomodulateur selon la revenaication 1, caractérisé en ce qu'il contient comme principe actif les produits de lyse par voie bactériophagique homologue des bactéries des genres Klebsellia et Escherichia. 3. Médicament immunomodulateur selon la revendication 2, caractérisé en ce que les bactéries choisies sont Klebsellia pneumoniae et sscherichia coli. 4. Médicament selon la revenaication 1, caractérisé en ce qu'il comporte en outre une substance antibiotique, antivirale, antifongique ou antiparasitaire. 5. Médicament selon la revendacation 1, caractérisé en ce ou'il comporte en outre un agent anti-tumoral ou immuno-suppressif. 6. Médicament selon la revendication 1, caractérisé en ce qu1il comporte en outre un agent antimitotique ou anti-inflammatoire. 7. Médicament selon la revendication 1, caractérisé en ce que le principe actif est associé à un excipient adapté en vue de l'ad- ministration peroutanée, transoutanée, perlinguale, topique, entérale, parentérale ou aérienne. 8. Procédé de préparation du médicament selon la revendica- tion 1, caractérisé en ce qu'on procède à un premier ensemencement àtun milieu de culture adapté avec un inoculum de bactéries alun certain genre, au cours de la phase de croissance on infecte les bactéries par introduction de leurs phages homologues, on suit l'évolution de la lyse jusqu'à un stade fixé, puis on procède à un second ensemencement du milieu de culture avec un inoculum de bactéries d'un autre genre, au cours de la phase de croissance des bactéries du second genre, on infecte ces bactéries par introduction de leurs phages homologues, suit l'évolution de la lyse de ces bactéries du second genre jusqu'à un stade de firé, enfin on élimine les bactéries non lysées, et recueille le filtrat de lyse obtenu à partir des deux bactéries. 9. Application des médicaments dans la thérapeutique curapréventive des infections bactérienne, virale, fongique ou parasitaire ; en thérapeutique antimitotique ou anti-inflanmatoire ; en tant qu'adjuvant de thérapeutique immuno-suppressives ou anti-cancereuses.

Inventors: PAGE, YVES-MARIE, VANDERHOVEN, CHRISTINE
Applicants: LIPHA, LYONNAISE INDUSTRIELLE PHARMACEUTIQUE
Application year: 1984
Main classification: A61K35
IPC codes: A61P37, A61K35