MICROPARTICLES AND ULTRASONIC CONTRAST MEANS CONTAINING GAS BUBBLES

Abstract: 1. Contrast medium containing microparticles and gas bubbles for ultrasound diagnostics, characterised in that it contains microparticles of a solid surface-active substance, optionally in combination with microparticles of a non-surface-active solid, in a liquid carrier.

Description: Beschreibung: Die Erfindung betrifft die in den Ansprüchen gekennzeichneten GegenstÅande Die blltersuchung von Organen mit Ultraschall (Sono graphit) ist eine seit einigen Jahren gut eingeführte und praktizierte diagnostische Methode. Ultraschallwellen im Megahertz-Bereich (oberhalb 2 Mega-Hertz mit Wellenlängen zwischen 1 und 0,2 mm) werden an Grenzflächen von unterschiedlichen Gewebearten reflektiert. Die dadurch entstehenden Echos werden verstärkt und sichtbar gemacht. Von besonderer Bedeutung ist dabei die Untersuchung des Herzens mit dieser Methode, die Echokardiographie genannt wird (Haft, J.I. et al.: Clinical echocardiography, Futura, Mount Kisco, New York 1978; Köhler, E. Klinische Echokardiographie, Enke, Stuttgart 1979; Stefan, G. et al.: Echokardiographie, Thieme, Stuttgart-New York 1981; G. Biamino, L. Lange: Echokardiographie, Hoechst AG, 1983. Da Flüssigkeiten - auch das Blut - nur dann Ultraschail Kontrast liefern, wenn Dichte-Unterschiede zur Umgebung bestehen, wurde nach Möglichkeiten gesucht, das Blut und seine Strömung für eine Ultraschall-Untersuchung sichtbar zu machen, was durch die Zugabe von feinsten Gasbläschen auch möglich ist. Aus der Literatur sind mehrere Methoden zur Herstellung und Stabilisierung der Gasbläschen bekannt. Sie lassen sich beispielsweise vor der Injektion in den Blutstrom durch heftiges Schütteln oder Rühren von Lösungen wie Salzlösungen, Farbstofflösungen oder von vorher entnommenem Blut erzeugen. Obwohl man dadurch eine Ultraschall-Kontrastgebung erreicht, sind diese Methoden mit schwerwiegenden Nachteilen verbunden, die sich in schlechter Reproduzier barkeit, stark schwankender Grösse der Gasbläschen und - bedingt durch einen Anteil an sichtbaren grossen Bläschen - einem gewissen Embolie-Risiko äussern. Diese Nachteile wurden durch andere Herstellungsverfahren teilweise behoben, wie beispielsweise durch das US-Patent 3,640,271, in dem Bläschen mit reproduzierbarer Grösse durch Filtration oder durch die Anwendung einer unter Gleichstrom stehenden Elektrodenvorrichtung erzeugt werden. Dem Vorteil in der Möglichkeit, Gasbläschen mit reproduzierbarer Gro#sse herstellen zu können, steht der erhebliche technische Aufwand als Nachteil gegen über. In dem US-Patent 4,276,885 wird die Herstellung von Gasbläschen mit definierter Grösse beschrieben, die mit einer vor dem Zusammenfliessen schützenden Gelatine Hülle umgeben sind. Die Aufbewahrung der fertigen Bläschen kann nur im eingefrarenen Zustand erfolgen, beispielsweise durch Aufbewahren bei Kühlschranktempera tur, wobei sie zur Verwendung wieder auf Körper- temperatur gebracht werden müssen. In dem US-Patent 4,265,251 wird die Herstellung und Verwendung von Gasbläschen mit einer festen Hülle aus Sacchariden beschrieben, die mit einem unter Druck stehenden Gas gefüllt sein können. Stehen sie unter Normaldruck, so können sie als Ultraschallkontrastmittel eingesetzt werden; bei Verwendung mit erhöhtem Innendruck dienen sie der Blutdruckmessung Obwohl hierbei die Aufbewahrung der festen Gasbläschen kein Problem darstellt, ist der technische Aufwand bei der Herstellung ein erheblicher Kostenfaktor. Die Risiken der nach dem Stand der Technik zur Verfügung stehenden Kontrastmittel werden durch zwei Faktoren hervorgerufen: Grösse und Anzahl sowohl der Feststoffpartikel als auch der Gasbläschen. Der bisher geschiiderte Stand der Technik gestattet die Herstellung von Ul raschallkontrastmitteln, die stets nur einige der gefo.-derten Eigenschaften besitzen: 1.) Ausschalten des Embolierisikos - Gasbläschen (Grösse und Anzahl) - Feststoffpartikel (Grösse und Anzahl) 2.) Reproduzierbarkeit 3.) genügend lange Stabil tat 4.) Lungengängigkeit, z.B. um Ultraschall-Kontrastierung des linken Herzteiles zu erhalten 5.) Kapillargängigkeit 6.) Sterilität und Pyrogenfreihtit der Zubereitung 7.) leichte Herstellbarkeit mit v'rtretbarem Kostenauf wand 8.) und problemlose Bevorratung. In der europäischen Patentanmeldung mit der Veröffentlichungs-Nummer 52575 wird zwar die Hers#ellung von Gasbläschen beschrieben, die diese erforderlivhen Eigen schaften besitzen sollen. Zu ihrer lierstelluns werden Mikropartikel einer festen kristallihen Substanz, wie beispielsweise Galaktose, in einer Trägerflüssigkeit suspendiert, wobei das Gas, das an der Partikeloberfläche adsorbiert, in Hohlräumen zwischen den Partikel oder in interkristallinen Hohlräumen eingeschlossen ist, die Gasbläschen bildet. Die so entstandene Suspension von Gasbläschen und Mikropartikel wird innerhalb von 10 Minuten injiziert. Obwohl in der europäischen Patentschrift 52575 behauptet wird, dass die nach der beschriebenen Methode hergestellte Suspension geeignet ist, nach Injektion in eine periphere Vene sowohl auf der rechten herzseite als auch nach Passage der Lunge in der linken Herz-Seite zu erscheinen und dort das Blut und dessen Strömung bei Ultraschall-Untersuchung sichtbar zu machen, hielt diese Behauptung einer Nachprüfung nicht stand. So wurde festgestellt, dass das nach der in der europäischen Anmeldung Nr. 52575 beschriebenen Methode hergestellte und in eine periphere Vene injizierte Kontrastmittel keine Ultraschall-Echos im linken Herzteil erzeugten. Es war die Aufgabe der vorliegenden Erfindung, ein Kontrastmittel für die Ultraschall-Diagnostik bereitzustellen, das in der Lage ist, nach intravenöser Applikation das Blut und dessen Strömungsverhältnisse nicht nur auf der rechten Seite des Herzens, sondern auch nach der Passage des Kapillarbettes der Lunge auf der linken Herzseite für Ultraschall sichtbar zu machen Darüberhinaus soll es auch die Darstellung der Durchblutung anderer Organe wie Elyocard, Leber, Milz und Niere gestatten. Die neuen erfindungsgemässen Mittel gemäss der Ansprüche 1 bis 14 besitzen alle Eigenschaften, die von einem solchen Kontrastmittel erwartet werden und die auf Seite 3 aufgezählt wurden. Es wurde überraschenderweise festgestellt, dass durch Sllspendieren von Mikropartikel einer festen grenzflächenaktiven Substanz gegebenenfalls in Kombination mit Mikropartikel eines nicht grenzflächenaktiven Feststoffes in einer Trägerflüssigkeit ein Ultraschall Kontrastmittel erhalten wird, das nach Injektion in eine periphere Vene auch vom Blut in der arteriellen linken Herzseite reproduzierbare Ultraschall-Aufnahme ermöglicht. Da mit dem erfindungsgemässen Ultraschall-Kontrastmittel nach intravenöser Gabe die linke Herzseite erreicht werden kann, sind so auch Ultraschall-Kontraste von anderen von der Aorta aus mit Blut versorgten Organen nach venöser Applikation möglich, wie Myokard, Leber, Milz, Niere u.a.m. Es versteht sich von selbst, dass das erfindungsgemässe Ultraschall-Kontrastmittel auch für Rechtsherz Kontraste und für alle übrigen Anwendungen als Ultra 3chall-Kontrastmittel geeignet ist is grenzflächenaktive Substanz für die Herstellung von hskropartikel sind alle Stoffe geeignet, die in den ange wndten Mengen physiologisch verträglich sind, d.h. die eiae geringe Toxizität besitzen und/oder biologisch ab bs bar sind und deren Schmelzpunkt grösser als Raumtempe rallr ist. Insbesondere geeignet sind Lecithine, Lecithinfra tionen und deren Abwandlungsprodukte, Polyoxyethylen fett.äureester wie Poiyoxyethylenfettalkoholäther, polyoxye hylierte Sorbitanfettsäureester, Glycerin-poly ethyl#nglykoloxystearat, Glycerinpolyethylenglykol rhizilrleat, ethoxylierte Sojasterine, ethoxylierte Rizinuöle und deren hydrierte Derivate, Cholesterol, Polyoxbithylenfettsäurestearate und Polyoxyethylenpoly oxyproplien-Polymere mit dem Molgewicht von 6800-8975, 13300 un 16250, Saccharoseester wie Zuckerester, bei spielsweise Saccharosedipalmitat und Saccharosemono laurat od r Saccharoseglvceride sowie Xyloglyceride, gesättigte oder ungesattigte (c4-C 20)-Fettalkollole oder (C,-Cn )-Fettsnuren oder deren Metallsalze1 Polyoxyäthylen fettsaureester, xlono-, Di- und Triglyceride' Sorbitan fettsaureester, Fettsäureester der Saccharose oder Fett säureester wie Butylstearat und Ascorbylpalmitat, wobei Calciumstearat1 die Saccharoseester der Laurinsäure, der Stearinsäure und der Palmitinsäure sowie Ascorbylpalmitat bevorzugt sind Als grenzflächenaktive Substanzen sind solche besonders gut geeignet, die in der Trägerflüssigkeit relativ schwer löslich und im Blut relativ leicht löslich sind. Durch diesen Sprung im Auflöseverhalten der grenzflächenaktiven Substanzen kann die Auflösung des festen Materials, das reich an eingeschlossener Luft ist, gesteuert werden Die grenzflächenaktive Substanz wird in einer Konzentration von 0,01 bis 5 Gevichtsprozent, vorzugsweise von 0,04 bis 0,5 Gewichtsprozent verwendet. Falls erwünscht1 können die Mikropartikel der grenzflächenaktiven Substanz mit Mikropartikel eines physiologisch verträglichen kristallinen Feststoffes kombiniert werden. Man kann dafür organische und anorganische Stoffe verwenden, zum Beispiel Salze wie Natriumchlorid, Natriumcitrat, Natriumacetat oder Natriumtartrat, Monosaccharide wie Glucose, Fructose oder Galaktose, Disaccharide wie Saccharose, Lactose oder Maltose, Pentosen wie Arabinose, Xylose oder Ribose oder Cyclodextrine wie z-, ss- oder y-Cyclodextrin, wobei Galactose, Lactose und a-Cyclodextrin bevorzugt sind. Sie sind in einer Konzentration von 5 bis 50 Gewichtsprozent, vorzugsweise von 9 bis 40 Gewichtsprozent, im erfindungsgemässen Mittel enthalten. Zur Iierstellung der Mikropartikel werden die dafür vorgesehenen Substanzen unter sterilen Bedingungen rekristallisiert. Anschlieend werden sie unter sterilen Bedingungen zerkleinert, z.B. durch Vermahlung in einer Luftstrahlmühle, bis die gewünschte Partikelgrösse erreicht ist. Brhalten wird eine Partikelgrösse vonC10 ¯ihm, vorzugsweise < 8#m, insbesondere 1-3 ¯ihm. Die Parikelgrösse wird in geeigneten Messgeräten bestimmt. Die erzeugten Mikropartikel bestehen entweder aus der zerkleinerten grenzflächenaktiven Substanz allein oder aus einer Mischung der Mikropartikel von grenzflächenaktiver Substanz und nicht grenzflächenaktivem Feststoff. In diesem Fall beträgt das Gewichtsverhältnis von fester grenzflächenaktiver Substanz zu nicht grenzflächenaktivem Feststoff 0,01 bis 5 zu 100. Sowohl die durch das Zerkleinerungsverfahren erreichte Grösse der Mikropartikel als auch die Grösse der im er- findnngsgemässen Kontrastmittel enthaltenen Gasbläschen gewährleistet eine gefahrlose Passage des Kapillarsystems und des Lungenkapillarbettes und schliesst das Entstehen von Embolien aus. Die für die Kontrastgebung benötigten Gasbläschen werden teilweise durch die suspendierten Mikropartikel transportiert, an der Oberfläche der Mikropartikel absorbiert, in den Hohlräumen zwischen den Mikropartikel oder interkristallin eingeschlossen. Das von den Mikropartikel transportierte Gasvolumen in Form von Gasbläschen beträgt 0,02 bis o,6 ml pro Gramm Mikropartikel. Die Trägerflüssigkeit hat neben der Transportfunktion die Aufgabe, die aus Mikropartikel und Gasbläschen bestehende Suspension zu stabilisieren, z.B. das Sedimentieren der Mikropartikel und das Zusammenfliessen der Gasbläschen zu verhindern bzw. den Lösevorgang der Mikropartikel zu verzögern. Als flüssiger Träger kommen in Frage Wasser, wässrige Lösungen eines oder mehrerer anorganischer Salze wie physiologische Kochsalziösung und Pufferlösungen, wässrige Lösungen von Mono- oder Disacchariden wie Galactose, Glucose oder Lactose, ein- oder mehrwertige Alkohole, soweit sie physiologisch verträglich sind wie Äthanol, Propanol, Isopropylalkohol, Polyethylenglykol, Ethylenglykol, Glycerin, Propylenglykol, Propylenglycolmethylester oder deren wässrige Lösungen. Bevorzagt sind Wasser und physiologische Elektrolytlösungen wie physiologische Kochsalzlösung sowie wässrige Lösungen von Galactose und Lactose. Werden Lösungen verwendet, beträgt die Konzentration des gelösten Stoffes 0,1 bis 30 Gewichtsprozent, voizugsweise bis 25 Gewichtsprozent, insbesondere verwendet man 0,9 ige wässrige Kochsalzlösung oder 20 Sige wässrige Galactose-Lösung. Die Erlindung betrifft auch ein Verfahren zur Herstellung des erfindungsgemässen Mittels gemäss Anspruch 16. Zur Herstellung des gebrauchsfertigen Ultraschall-Kontrast- mittels gibt man die sterile Trägerflüssigkeit zu der in Form von Mikropartikel vorliegenden sterilen festen grenzflächenaktiven Substanz, die gegebenenfalls mit einem sterilen nicht-grenzflächenaktiven Stoff kombiniert ist und schüttelt diese Mischung, bis sich eine homogene Suspension gebildet hat, wofür ca. 5 bis 10 sec. erforderlich sind. Die entstandene Suspension wird sofort nach ihrer Herstellung, spätestens jedoch bis 5 Minuten danach als Bolus in eine periphere Vene oder einen schon vorhandenen Katheder injiziert, wobei von 0,01 ml bis 1 ml/kg Körpergewicht appliziert werden. Aus Gründen der Zweckmässigkeit werden die zur Herstellung des erfindungsgemässen Mittels benötigten Komponenten wie Trägerflüssigkeit (A) und Mikropartikel der grenzflächenaktiven Substanz, gegebenenfalls kombiniert mit Mikropartikel des nicht-grenzflächenaktiven Feststoffes (B) in der für eine Untersuchung erforderlichen Menge steril in zwei getrennten Gefässen aufbewahrt. Beide Gefässe haben Verschlüsse, die Entnahme und Zugabe mittels Injektionsspritze unter sterilen Bedingungen ermöglichen (Vials). Die Grösse von Gefäss B muss so beschaffen sein, dass der Inhalt von Gefäss A mittels Injektionsspritze nach B überführt werden kann und die vereinigten Komponenten geschüttelt werden können. Die Erfindung betrifft deshalb auch ein Kit gemäss Anspruch 15. Die Durchführung einer echokardiographischen Untersuchung an einem 10 kg schweren Pavian soll die Verwendung des erfindungsgemässen Kontrastmittels demonstrieren: 5 ml Trägerflüssigkeit (hergestellt nach Beispiel 1 A) werden aus einem Vial mit einer Injektionsspritze entnommen und zu 2 g Mikropartikel (hergestellt nach Beispiel 1 B), die sich in einem zweiten Vial befinden gegeben und etwa 5-10 sec geschüttelt, bis sich eine homogene Suspension gebildet hat. Man injiziert 2 ml dieser Suspension in eine periphere Vene (V. jugularis, brachialis oder saphena) über einen 3-Wege-Hahn mit einer Infusionsgeschwindigkeit von mindestens 1 ml/sec., besser mit 2-3 ml/sec. An die Kontrastmittelinjektion schliesst sich mit derselben Geschwindigkeit sofort die Injektion von 10 ml physiologischer Kochsalzlösung an, damit der Kontrastmittel-Bolus so weitgehend wie möglich bis zum Erreichen des rechten Herzteils erhalten bleibt. Yor, während und nach der Injektion wird ein handels üblicher Schallkopf für die Echokardiographie an den Thorax des Versuchstieres gehalten, so dass ein typischer Querschnitt durch das rechte und linke Herz erhalten wird. Diese Versuchsanordnung entspricht dem Stand der Technik und ist dem Fachmann bekannt. Erreicht das Ultraschallkontrastmittel das rechte Herz, kann man im 2-D-Echobild oder im M-mode-Echo-BiId verfolgen, wie das durch das Kontrastmittel markierte Blut zunächst die Höhe des rechten Vorhofes, dann die des rechten Ventrikels und der Pulmonalarterie erreicht, wobei für ca. 10 sec eine homogene Füllung auftritt: Während die Höhlen des rechten Herzens im Ultraschallbild wieder leer werden, erscheint das mit Kontrastmittel markierte Blut nach der Lungenpassage in den Pulmonalvenen wieder, füllt den linken Vorhof, den linken Ventrikel und die Aorta homogen, wobei der Kontrast 2 bis 3 mal länger anhält als auf der rechten Herzseite. Neben der Darstellung des Blutflusses durch die Hohlen des linken Herzens kommt es auch zu einer Darstellung des Myokards, die die Durchblutung wiederspiegelt. Die Verwendung des erfindungsgemässen Ultraschall-Kontrastmittels ist aber nicht beschränkt auf die Sichtbarmachung des Blutstroms im arteriellen Teil des Herzens nach venöser Applikation sondern es wird mit ausgezeichneten Erfolg auch bei der Untersuchung des rechten Herzens und anderer Organe als Kontrastmittel verwendet Beispiel 1 A) Herstellung der Trägerflüssigkeit 80 g Galactose werden im Wasser für Injektionszwecke gelöst bis zu einem Volumen von 400 ml aufgefüllt durch ein 0,2 Rm-Filter gedrückt, jeweils 4 ml dieses Filtrats in 5 ml-Vials abgefüllt und 20 Minuten bei 120 Cund sterilisiert. B) Herstellung der Mikropartikel: Unter sterilen Bedingungen werden 198 g Galactose mit 2 g Magnesiumstearat durch homöopathische Anreibung intensiv vermischt, durch ein o,8 mm-Sieb gegeben, lose gemischt und mit einer Luftstrahlmühle vermahlen, bis folgende Verteilung der Partikelgrösse erreicht ist: Median 1,9 Am 99 46 < 6 Wm 90 % < 3 km. Die Bestimmung der Partikelgrösse und deren Verteilung erfolgt im Partikel-Messgerät nach Suspendierung im' wasser- freiem Isopropanol. Die Mikropartikel werden zu je 2 g in 5 ml-Vials abgefüllt. C) Zur Herstellung von 5 ml des gebrauchsfertigen Ultra schall-Kontrastmittels wird der Inhalt eines Vials mit Trägerflüssigkeit (20 h Galactoselösung in Wasser, A) mittels einer Injektionsspritze in das Vial mit Mikropartikeln (B) gegeben und bis zum Entstehen einer homogenen Suspension geschüttelt (5 bis 10 Sekunden). Beispiel 2 A) Herstellung der Trazerflussigkeit: Es wird Wasser für Injektionszwecke verwendet, je weils 4 ml in 5 ml-Vials abgefüllt und diese 20 Minuten bei 120 OC sterilisiert. B) Herstellung der Mikropartikel: Unter sterilen Bedingungen werden 198 g Galactose mit 2 g Ascorbylpalmitat durch homöopathische Anreibung intensiv vermischt und weiter verarbeitet, wie bei Beispiel 1 unter B) beschrieben, wobei sich folgende Verteilung der Partikelgrösse ergibt: Median 1,9 Wm 100 % 46 pm 90 % c 3 wm. Die Bestimmung der Partikelgrösse erfolgt wie in Bei spiel 1 unter B) beschrieben. Die Mikropartikel werden zu je 1200 mg in 5 ml-Vials abgefüllt. C) Zur Herstellung von 4,5 ml des gebrauchsfertigen Ultra schall-Kontrastmittels wird der Inhalt eines Vials mit Trägerflüssigkeit (Wasser, A) mittels einer In- jektionsspritze in ein Vial mit Mikropartikel, (B) gegeben und bis zum Entstehen einer homogenen Suspension (5 bis 10 Sekunden) geschüttelt. Beispiel 3 A) Herstellung der Trägerflüssigkeit: Man löst 4,5 g Natriumchlorid in Wasser bis zum Volumen von 500 ml, drückt die Lösung durch ein 0,2 gm-Filter, füllt jeweils 4 ml dieser Lösung in 5 ml-Vials und sterilisiert 20 Minuten bei 120 OC. B) Herstellung der Mikropartikel: Unter sterilen Bedingungen werden 198 g Lactose anhydrous ( < 0,3 mm) mit 2 g Ascorbylpalmitat durch homöopathische Anreibung intensiv vermischt und die Mischung weiter verarbeitet wie in Beispiel 1 unter B) beschrieben, wobei sich folgende Verteilung der Partikelgrösse ergibt: Median 2,8 #m 100 % < 48 Wm 99 % C12 wm. Die Bestimmung der Partikelgrösse erfolgt wie in Bei spiel 1 unter B) beschrieben. Die Mikropartikel werden zu je 1,6 g in 5 ml-Vials abgefüllt. C) Zur Herstellung von 5 ml des gebrauchsfertigen Ultra schall-Kontrastmittels wird der Inhalt eines Vials (0,9 % Natriumchloridlösung in Wasser, A) mittels einer Injektionsspritze in ein Vial mit Mikropartikel (B) gegeben und bis zum Entstehen einer homogenen Suspension (5 bis 10 Sekunden) geschüttelt. Beispiel 4 A) Herstellung der Trägerflüssigkeit: Wie in Beispiel 3 unter A) beschrieben stellt man 0,9 sige wässrige Natriumchloridlösung her, füllt sie in 4 ml-Portionen in 5 ml-Vials ab und sterilisiert 20 Minuten bei 120 OC, B) Herstellung der Mikropartikel; Unter sterilen Bedingungen werden 199 g a-Cyclodextrin mit 1 g Ascorbylpalmitat durch homöopathische Anreibung intensiv vermischt und die Mischung weiterverarbeitet wie in Beispiel 1 unter B) beschrieben, wobei man Mikropartikel mit folgender Grössenverteilung erhält: Median 2 wm 99 % c6 Wm 90 % < 4 Wm. Die Bestimmung der Partikelgrösse erfolgt wie in Bei spiel 1 unter B) beschrieben. Die Mikropartikel werden zu je 400 mg in 5 ¯ir#i-Vials abgefüllt. C) Zur Herstellung von 4 ml des gebrauchsfertigen Ultra schall-Kontrastmittels wird der Inhalt eines Vials (0,9 ziege wässrige Natriumchloridlösung, A) mittels einer Injektionsspritze in ein Vial mit Mikro partikel (B) gegeben und bis zum Entstehen einer homogenen Suspension (5 bis 10 Sekunden) geschüttelt. Beispiel 5 A. Herstellun# der Trägerflüssigkeit 50 g Lactose werden in Wasser für Injektionszwecke ge löst, bis zu einem Volumen von 500 ml aufgefüllt, durch ein 0,2 wm-Filter gedrückt, zu jeweils 4 ml in 5ml- Vials gefüllt und 20 Minuten bei 120 C sterilisiert. B. Herstellung der Mikropartikel Ascorbylpalmitat wird in Methanol gelöst, durch ein 0,2 #m-Filter steril filtriert, unter sterilen Be dingungen rekristallisiert, getrocknet und durch ein o,8 mm-Sieb gegeben. Anschliessend wird das sterile Ascorbylpalmitat unter sterilen Bedingungen mit einer Luftstrahlmühle vermahlen, bis folgende Grössenver- teilung der Partikel erreicht ist: Medianwert 1,9 Sm 99 % < 6 um 90 % ¯3 Rm- Die Bestimmung der Partikelgrösse und deren Verteilung erfolgt im Partikel-Messgerät nach Suspendierung in kalter wässriger O,1 zeiger Pluronic F68-Lösung. Die Mikropartikel werden zu je 40 mg in sterile 5. ml- Vials abgefüllt. C. Zur Herstellung von 4 ml des gebrauchsfertigen Ultra schall-Kontrastmittels wird der Inhalt eines Vials mit Trägerflüssigkeit (10 ziege Lactose-Lösung, A) mittels einer Injektionsspritze in das Vial mit den Mikropartikel gegeben und bis zum Entstehen einer homogenen Suspension geschüttelt. Beispiel 6 A. Herstellunz der Trägerflussigkeit Man löst 4,5 g Natriumchlorid in Wasser bis zum Volumen von 500 ml, drückt die Lösung durch ein 0,2 #um-Filter, füllt jeweils 4 ml dieser Lösung in 5 ml-Vials und sterilisiert 20 Minuten bei 120 OC. B. Herstellung der Mikropartikel Unter sterilen Bedingungen wird eine sterilfiltrierte Lösung von 0,5 g Ascorbylpalmitat in 40 g Isopropanol auf 199,5 g sterile Galactosepartikel aufgezogen, bei 40 OC und 200 Torr das Isopropanol abgetrocknet und mit einer Luftstrahlmühle zerkleinert, bis folgende Grössenverteilung der Partikel erreicht ist: Medianwert 1,9 gm 99 ,¯ < 6 jum 90 % < 3 sm Die Bestimmung der Partikelgrösse und deren Verteilung erfolgt in einem Partikelmessgerät, z.B. nach Suspen dierung in Isopropanol. Die Abpackung der Mikro partikel erfolgt in 5 ml-Vials zu jeweils 2 g. C. Zur Herstellung von 5 ml des gebrauchsfertigen Ultra schall-Kontrastmittels wird der Inhalt eines Vials mit Trägerflüssigkeit (0,9 % Natriumchloridlösung in Wasser, A) mittels einer Injetionsspritze in das Vial mit Mikropartikel (B) gegeben und bis zum Entstehen einer homogenen Suspension geschüttelt (5 bis 10 Se kunden). Beispiel 7 A. Herstellung der Trägerflüssigkeit Man ldst 4,5 g Natriumchlorid in Wasser, füllt bis zu einem Volumen von 500 ml auf, drückt die Lösung durch ein 0,2 Mm-Filter, füllt jeweils 4 ml dieser Lösung in 5 ml-Vials und sterilisiert 20 Minuten bei 120 OC. B. Herstellung der Mikropartikel Unter sterilen Bedingungen werden 199,5 g Galactose mit 0,5 g Ascorbylpalmitat angerieben, intensiv gemischt, durch ein 0,8 mm-Sieb gegeben und mit einer Luftstrahlmühle zerkleinert, bis folgende Grössenverteilung der Partikel erreicht ist: Medianwert 1,9 Fm t 99 % C jum 9o #,o' c 3 ¯um. Die Bestimmung der Partikelgrösse und deren Verteilung erfolgt in einem Partikelmessgerät, z.B. nach Suspen dierung in Isopropanol. Die Abpackung der Mikropar tikel erfolgt in 5 ml-Vials zu jeweils 2 g. C. Zur Herstellung von 5 ml des gebrauchsfertigen Ultra schall-Kontrastmittels wird der Inhalt eines Vials mit Trägerflüssigkeit (0,9 % Natriumchloridlösung in Wasser, A) mittels einer Injektionsspritze in das Vial mit Mikropartikel (B) gegeben und bis zum Ent stehen einer homogenen Suspension geschüttelt (5 bis 10 Sekunden). BeisT#iel 6 A. herstellung der Tragerflüssigkeit Es wird Wasser für Injektionszwecke verwendet, Jeweils zu 4 rl in 5 ml-Vials abgefüllt und diese 20 Minuten bei 120 C sterilisiert. B. ilerstellung der Mikropartikel Unter sterilen Bedingungen werden 0,5 g Saccharose monopalmitat mit 199,5 g Galactose angerieben, intensiv gemIscht, durch ein 0,8 mm-Sieb gegeben und mit einer Luftstrahlmühle vermahlen, bis fol gende Grössenverteilung der Partikel erreicht ist: Medianwert 1,9 m min. 99 % < 6 m min. 90 % < 3 m. Die Bestimmung der Grösse der Partikel und deren Ver teilung erfolgt in einem Partikelmessgerät, z.B. nach Suspendierung in Isopropanol. Die Abpackung der Mikro partikel erfolgt in 5 ml-Vials zu jeweils 2 g. C. Zur Herstellung von 5 ml des gebrauchsfertigen Ultra schall-Kontrastmittels wird der Inhalt eines Vials mit Trägerflüssigkeit (steriles Wasser für Injektions- zwecke, A) mittels einer Injektionsspritze in das Vial mit Mikropartikel (B) gegeben und bis zum Entstehen einer homogenen Suspension geschüttelt (5 bis 10 Se kunden). beispiel 9 A. lierstellung der Trägerflüssigkeit Wasser für Injektionszwecke wird zu jeweils 4 ml in 5 ml-Vials abgefüllt und 20 Minuten bei 120 OC steri lisiert. B. Ilerstellung der Mikropartikel Unter sterilen Bedingungen wird eine sterilfiltrierte Lösung von 0,5 g Saccharosemonopalmitat in 40 g Iso propanol auf 199,5 g sterile Galactosepartikel aufge zogen, bei 40 OC und 200 Torr das Isopropanol abge trocknet und mit einer Luftstrahlmühle vermahlen, bis folgende Grössenverteilung der Partikel erreicht ist: Medianwert 1,9#um min. 99 % C 6 juni min. 90 % < 3 Juni Die Bestimmung der Partikelgrösse und deren Verteilung erfolgt in einem Partikelmessgerät, z.B. nach Suspen dierung in Isopropanol. Die Abpackung der Mikropar tikel erfolgt in 5 ml-Vials zu jeweils 2 g. C. Zur Herstellung von 5 ml des gebrauchsfertigen Ultra schallkontrastmittels wird der Inhalt eines Vials mit Trägerflüssigkeit (Wasser für Injektionszwecke, A) mittels einer Injektionsspritze in das Vial mit Mikro partikel (B) gegeben und bis zum Entstehen einer homogenen Suspension geschüttelt (5 bis 10 Sekunden). Beispiel 10 A. Herstellung der Srägerflüssiskeit Wasser für Injektionszwecke wird zu jeweils 4 ml in 5 ml-Vials abgefüllt und 20 Minuten bei t20 OC steri lisiert. B. Herstellung der Mikropartikel Unter sterilen Bedingungen wird eine sterilfiltrierte Lösung von 0,5 g Saccharosemonostearat in 40 g Iso propanol auf 199,5 g sterile Galactosepartikel auf gezogen, bei 40 OC und 200 Torr des Isopropanol abge trocknet und mit einer Luftstrahlmühle vermahlen, bis folgende Grössenverteilung der Partikel erreicht ist: Medianwert 1,9 Mm min. 99 % < 6 nm min. 90 % c 3 juni Die Bestimmung der Partikelgrösse und deren Verteilung erfolgt in einem Partikelmessgerät, z.B. nach Suspen dierung in Isopropanol. Die Abpackung der Mikropar tikel erfolgt in 5 ml-Vials zu jeweils 2 g. C. Zur Herstellung von 5 ml des gebrauchsfertigen Ultra schall-Kontrastmittels wird der Inhalt eines Vials mit Trägerflüssigkeit (Wasser für Injektionszwecke, A) mittels einer Injektionsspritze in das Vial mit Mikro partikel (B) gegeben und bis zum Entstehen einer homo genen Suspension geschüttelt (5 bis 10 Sekunden). beispiel 11 A. Herstellung der Trägerflüssigkeit Es wird Wasser für Injektionszwecke verwendet, jeweils zu 4 ml in 5 ml-Vials abgefüllt und diese 20 Minuten bei 120 OC sterilisiert. B. Herstellung der Mikropartikel Unter sterilen Bedingungen werden 0,5 g Saccharose monostearat mit 199,5 Galactose angerieben, intensiv gemischt, durch ein 0,8 mm-Sieb gegeben und mit einer Luftstrahlmühle vermahlen, bis folgende Grössenvertei lung der Partikel erreicht ist: Medianwert: 1,9 Uum min. 99 % < 6 am min. 90 50 < 3 Mm. Die Bestimmung der Grösse der Partikel und deren Ver teilung erfolgt in einem Partikelmessgerät, z.B. nach Suspendierung in Isopropanol. Die Abpackung der Mikro partikel erfolgt in 5 ml-Vials zu jeweils 2 g. C. Zur Herstellung von 5 ml des gebrauchsfertigen Ultra schall-Kontrastmittels wird der Inhalt eines Vials mit Trägerflüssigkeit (steriles Wasser für Injektion zwecke, A) mittels einer Injektionsspritze in das Vial mit Mikropartikel (B) gegeben und bis zum Entstehen einer homogenen Suspension geschüttelt (5 bis 10 Se kunden). Beispiel 12 A. Iferstellunc der Trägerflüssigkeit Wasser für lnjektionszwecke wird zu jeweils 4 ml in 5 ml-Vials abgefüllt und 20 Minuten bei 120 C steri lisiert. B. Herstellung der Mikropartikel Unter sterilen Bedingungen wird eine steriifiltrierte Lösung von 0,5 g Saccharosedistearat in 40 g Isopro panol auf 199,5 g sterile Galactosepartikel aufge zogen, bei 40 OC und 200 Torr das Isopropanol abge trocknet und mit einer buStstrahlmühle vermahlen, bis folgende Grössenverteilung der Partikel erreicht ist: Medianwert: 1,9 m min. 99% < 6 m min. 90% < 3 m. Die Bestimmung der Partikelgrösse und deren Verteilung erfolgt in einem Partikelmessgerät, z.B. nach Suspen dierung in Isopropanol. Die Abpackung der Mikropartikel erfolgt in 5 ml-Vials zu jeweils 2 g. C. Zur Herstellung von 5 ml des gebrauchsfertigen Ultra schall-Kontrastmittels wird der Inhalt eines Vials mit Trägerflüssigkeit (Wasser für Injektionszwecke, A) mittels einer Injektionsspritze in das#Vial mit Mikro partikel (B) gegeben und bis zum Entstehen einer homogenen Suspension geschüttelt (5 bis 10 Sekunden). Beispiel 13 A. iierstellung der Trägerflüssigkeit Es wird Wasser für Injektionszwecke verwendet, jeweils zu 4 ml in 5 ml-Vials abgefüllt und diese 20 Minuten bei 120 C sterilisiert. B. Herstellung der Mikropartikel Unter sterilen Bedingungen werden 0,5 g Saccharose distearat mit 199,5 g Galactose angerieben, intensiv gemischt, durch ein 0,8 mm-Sieb gegeben und mit einer Luftstrahlmühle vermahlen, bis folgende Grössenverteilung der Partikel erreicht ist: Medianwert: 1,9 um min. 99 % < 6 Fm min. 90 % c 3 lum. Die Bestimmung der Grösse der Partikel und deren Ver teilung erfolgt in einem Partikelmessgerät, z.B. nach Suspendierung in Isopropanol. Die Abpackung der Mikro partikel erfolgt in 5 ml-Vials zu jeweils 2 g. C. Zur Herstellung von 5 ml des gebrauchsfertigen Ultra schall-Kontrastmittels wird der Inhalt eines Vials mit Trägerflüssigkeit (steriles Wasser für Injektions zwecke, A) mittels einer Injektionsspritze in das Vial mit Mikropartikel (B) gegeben und bis zum Entstehen einer homogenen Suspension geschüttelt (5 bis 10 Se kunden).

Claims: Patentansprüche l ropartikel und Gasbläschen enthaltende Kontrast mittel für die Ultraschall-Diagnostik1 dadurch ge kennzeichnet, dass es Nikropartikel einer festen, grenzflächenaktiven Substanz, gegebenenfalls in kombination mit Nikropartikel eines nicht grenz flächenaktiven Fest stoffes in einem flüssigen Träger enthält. 2.) Mittel nach Anspruch I, dadurch gekennzeichnet, dass es als feste grenzflächenaktive Substanz Lecithine, Polyoxyethylenfettsäureester, Glycerinpolyethylen glykolrhizinoleat, Cholesterol, Polyoxyethylenpoly oxypropylen-Pol#inere, Saccharoseester, Xyloglyceride, gesättigte oder ungesättigte (C4-C20)-Fettalkohole, gesättigte oder ungesättigte (C4-C20)-Fettsäuren oder deren Metallsalze, Mono-, Di- und Triglyceride, Fettsäureester als Mikropartikel in einer Menge von 0,01 bis 10 Gewichtsprozent enthält 3.) Mittel nach Anspruch 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, dass es Magnesiumstearat, Ascorbylpalmitat, Saccharose monopalmitat, Saccharosemonostearat oder Saccharose distearat als feste grenzflächenaktive Substanz in Form von Mikropartikel in einer Konzentration von 0,01 bis 5 Gewichtsprozent, vorzugsweise 0,04 bis 1 Gewichtsprozent, enthält. 4.) Mittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass es als gegebenenfalls vorhandene Mikropartikel eines nicht-grenzflächenaktiven Feststoffes Cyclo dextrine, Monosaccharide, Disaccharide, Trisaccharide, Polyole oder anorganische oder organische Salze als Mikro partikel mit einer Konzentration von 5 bis 50 Ge wichtsprozent enthält. 5.) Mittel nach Anspruch 1 und 4, dadurch gekennzeichnet, dass es als gegebenenfalls vorhandenen nicht-grenz flächenaktiven Feststoff Galactose, Lactose oder a-Cyclodextrin als Mikropartikel in einer Konzentration von 5 bis 50 Gewichtsprozent, vorzugsweise von 9 bis 40 Gewichtsprozent, enthält. 6.) Mittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass es als physiologisch verträglichen flüssigen Träger Wasser, physiologische Elektrolytlösung, die wässrige Lösung von ein- oder mehrwertigen Alkoholen wie Glycerin, Polyethylenglycol oder von Propylenglykolmethylester oder die wässrige Lösung eines Mono- oder Disaccharides enthält. 7.) Mittel nach Anspruch 1 und 6, dadurch gekennzeichnet, dass es als physiologisch verträglichen flüssigen Träger Wasser, physiologische Kochsalzlösung, 10 %ige wässrige Lactose-Lösung oder 20 sige wässrige Galactose Lösung enthält. 8.) Mittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass es Mikropartikel von Magnesiumstearat und von Galactose in einer 20 %igen wässrigen Galactose-Lösung enthält. 9.) Mittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass es Mikropartikel von Ascorbylpalmitat und von Galactose in Wasser enthält. 10.) Mittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass es Mikropartikel von Ascorbylpalmitat und von a-Cyclodextrin in physiologischer Kochsalzlösung enthält. 11.) Mittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass es Mikropartikel von Ascorbylpalmitat in einer 10 sorgen wässrigen Lactoselösung enthält. 12.) Mittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass es Mikropartikel von Saccharosemonopalmitat und von Galactose in Wasser enthält. 13.) Mittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass es Mikropartikel von Saccharosemonostearat und von Galactose in Wasser enthält. t4.) Mittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass es Mikropartikel von Saccharosedistearat und von Galactose in Wasser enthält. 15.) Ein Kit für die Herstellung eines Mikropartikel und Gasbläschen enthaltenden Ultraschall-Kontrast- mittels bestehend a) aus einem Behälter mit einem Volumen von 5-10 ml, versehen mit einem Verschluss, der die Entnahme des Inhalts unter sterilen Bedingungen ermöglicht, gefüllt mit 4 ml des flüssigen Trägers und b) aus einem zweiten Behälter mit einem Volumen von 5-10 ml, versehen mit einem Verschluss, der die Entnahme des Inhalts oder Zugabe eines Stoff gemisches unter sterilen Bedingungen ermöglicht, gefüllt mit Mikropartikel einer festen grenz flächenaktiven Substanz, gegebenenfalls in kombination mit Mikropartikel eines nicht grenzflächenaktiven Feststoffes mit einer durch schnittlichen Partikelgrösse von < 1 bis 10 Wm, wobei das Gewichtsverhältnis von grenzflächen aktiver Substanz zu gegebenenfalls vorhandenen nicht-grenzflächenaktivem Feststoff ,01 bis 5 zu 100 beträgt und die Mikropartikel in einer Menge von 5 bis 50 Gewichtsprozent, vorzugs weise von 9 bis 4t Gewichtsprozent, enthalten sind. 16.) Verfahren zur Herstellung eines Mikropartikel und Gasbläschen enthaltenden Kontrastmittels für die Ultraschall-Diagnostik,dadurch gekennzeichnet, dass man Mikropartikel einer physiologisch verträglichen, festen grenzflächenaktiven Substanz gegebenenfalls in Kombination mit Mikropartikel eines physiologisch verträglichen nicht-grenzflächenaktiven Feststoffes mit einer physiologisch verträglichen Trägerflüssig keit vereinigt und bis zum Entstehen einer homogenen Suspension schüttelt.

Inventors: HILMANN, JURGEN, LANGE, LOTHAR, DR., ZIMMERMANN, INGFRIED, DR., Hilmann, Jürgen 
Applicants: SCHERING AKTIENGESELLSCHAFT BERLIN UND BERGKAMEN
Application year: 1984
Main classification: A61K49
IPC codes: A61B17, A61K49