INSULIN DERIVATIVES MODIFIED IN POSITION B 30, PROCESS FOR THEIR PREPARATION, THEIR VUSE AND PHARMACEUTICAL AGENTS FOR THE TREATMENT OF DIABETES MELLITUS

Abstract: 1. Claims for the Contracting States : BE CH DE FR GB IT LI LU NL SE A medicament having a delayed action for the treatment of diabetes mellitus, comprising at least one insulin derivative of the formula I see diagramm : EP0137361,P16,F1 in which R**1 denotes H or H-Phe R**30 represents the radical of a neutral, genetically codable L-aminoacid whose OH group, where present, can be free or protected by a physiologically acceptable group, and R**31 denotes a physiologically acceptable neutral group blocking the carboxyl group, with the exception of des-B30 human insulin Leu**B30 -NH2 and des-B30 human insulin Gly**B30 -NH2 and des-B30 human insulin Phe**B30 -NH2 and a pharmaceutically acceptable carrier. 1. Claims for the Contracting State : AT A process for the preparation of a medicament having a delayed action for the treatment of diabetes mellitus, which comprises bringing into a suitable dosage form at least one insulin derivative of the formula I see diagramm : EP0137361,P17,F1 in which R**1 denotes H or H-Phe R**30 represents the radical of a neutral, genetically codable L-aminoacid whose OH group, where present, can be free or protected by a physiologically acceptable group, and R**31 denotes a physiologically acceptable neutral group blocking the carboxyl group, with the exception of des-B30 human insulin Leu**B30 -NH2 and des-B30 human insulin Gly**B30 -NH, and des-B30 human insulin Phe**B30 -NH2 Phe**B30 -NH2 and a pharmaceutically acceptable carrier.

Description: In Position B 30 modifizierte Insulin-Derivate, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung sowie pharmazeutische Mittel zur Behandlung des Diabetes mellitus Bei der Therapie des Diabetes mellitus werden heue im allgemeipen Zubereitungen des blutzuckersenkenden Hormons Insulin parenteral verabreicht. Die spezielle Natur des Insulin und desscn Metabolismus bringen es mit sich, dass die Wirkungsdauer einer einfachen Lösung nur sehr kurz ist, dass also zur anhaltenden Blutzuckerkontrolle beim Diabetiker entweder eine Dauer-Infusion mit Dosiergeräten, mehrfache tägliche Injektionen oder eine verzögert wirksame Insulinzubereitung appliziert werden müssen. Als Verzögerungsprinzipien sind dabei von besonderer Bedeutung solche Zustands- formen des Insulin, die am Ort der Injektion schwerlöslich sind (z.B. kristallin oder amorph). Dazu zu rechnen sind beispielsweise Zink-Insulinkristalle oder Protamin-Insulin Kristalle, die während ihrer langsamen Wiederauflösung über einen gewissen Zeitraum Insulin freisetzen, Nun hat es sich bei der Therapie als äusserst hilfreich erwiesen, verschiedene Insulinpräparate zur Verfügung zu haben, die in ihrer Wirkungscharakteristik den Bedürfnissen des cinzelnen Patienten möglichst nahe kommen. Im Zusammenhang mit nicht-optimaler Einstellung werden neben unmittelbaren Effekten wie HYper- oder Hypoglykämien insbesondere die diabetischen Spätkomplikationen diskutiert, zu denen Retinopathie, Neuropathie, Nephropatie, Mikro- und Makroan ziopathe zählen. Der Insulinmangel beim Diabetiker führt dazu, dass der Körper sein natürliches hormonelles Cleifchgewicht nicht mchr erreichen kann. Aufgabe der Erfindung ist die Bereitstellung eines Insulin Derivates bzw. eines entsprechenden pharmazeutischen Mittels, durch das man sich dem natürlichen hormonellen Gleichgewicht in einem diabetischen Zustand besser annähern kann und wodurch dieses sich besser aufrechterhalten lässt als durch die Verabreichung von Insulin in den bisher üblichen Formen. Diese Aufgabe wird nun erfindungsgemäss gelöst durch Insulin-Derivate, deren C-terminale Aminosäure in Position B 30 verestert ist bzw. durch ein pharmazeutisches Mittel, das dadurch gekennzeichnet ist, dass es dieses Insulin-Derivat als Wirkstoff enthält. Einige in Position B 30 veresterte Humaninsuline sowie Verfahren zu ihrer Herstellung wurden schon als Zwischen- produkte bei der Semisynthese von Humaninsulin beschrieben. So ist Humaninsulin-ThrB 30-OBut beispielsweise aus den US-Patenten 4 320 196 und 4 320 197 bekannt. In der GB-A-2 069 502 werden Humaninsulin-ThrB 30-OMe, Humaninsulin-ThrB 30-OEt, Humaninsulin-ThrB 30-O-(2,4,6 Trimethylbenzyl) sowie Humaninsulin-ThrB 30(But)-OBut beschrieben. Aus der EP-A-45 187 ist Sumaninsulin-(B 30)amid bekannt. Die Erfindung betrifft Insulin Derivate der Formel 1, Insulin-Derivat der Formel 1, EMI2.1 <tb> <SEP> Al <SEP> S <SEP> S <SEP> A21 <tb> <SEP> H- <SEP> Gly <SEP> A-Kette <SEP> Asn <SEP> - <SEP> OH <tb> <SEP> S <SEP> S <tb> <SEP> S <SEP> S <SEP> (I) <tb> <SEP> B2 <SEP> B29 <tb> R1- <SEP> Val <SEP> B-Kette <SEP> -R30-R31 <tb> in welcher a) R1 H bedeutet, R30 für den Rest einer neutralen1 genetisch kodier baren L-Aminosäure, deren gegebenenfalls vorhan dene OH-Gruppe frei oder durch eine physiologisch verträgliche Gruppe geschützt vorliegen kann, steht und R31 eine physiologisch verträgliche, die Carboxy gruppe blockierende neutrale Gruppe SN bedeutet, b) Rl H-Phe bedeutet, b1) R30 für den Rest einer neutralen, genetisch kodier baren L-Aminosäure mit der Ausnahme von Thr steht, wobei eine gegebenenfalls vorhandene OH Gruppe frei oder durch eine physiologisch ver träyliche Gruppe geschützt vorliegen kann und R31 wie unter a) definiert ist, b2) R30 für Thr steht, 30 b2.1) wobei die OH-Gruppe von ThrB 30 ungeschützt vor- liegt und R31 eine physiologische verträgliche neutrale Gruppe -NRaRb oder -ORC bedeutet, worin Ra und Rb gleich oder verschieden sind und für (C1-C6)-Alkyl, (C3-C8)-Cycloalkyl, (C6-C10)-Aryl, (C7-C11)-Aralkyl, (C3-C9)-Heteroaryl oder -(CH2-CH2-O--)mR mit m= 1 bis etwa 120 und R= (C1-C4)-Alkyl stehen, wobei Ra auch Wasser stoff sein kann und wobei diese Gruppen im Arylteil auch durch einen oder mehrere gleiche oder verschiedene Substituenten aus der Reihe Halogen, Nitro, (C1-C4)-Alkoxy, Methylendioxy und (C1-C)-Alkyl substituiert sein können oder und Rb gemeinsam -[CH@]@- mit @@ 4 - 6, worin eine Methylengruppe auch durch 0 oder Nil ersetzt sein kann, bedeutet und für Propyl, Isopropyl, Butyl, Isobutyl, sec. Butyl, (C5-C6)-Alkyl, (C3-C8)-Cycloalkyl, (C6-C10)-Aryl, (C7-C11)-.Aralkyl, (C3-Cg)- Heteroaryl oder (CH2-CH2-O-)mR mit m= 1 bis etwa 120 und R= (C1-C4)-Alkyl stehen, wobei diese Gruppen im Arylteil auch durch einen oder zwei gleiche oder verschiedene Substituenten aus der Reihe Halogen, Nitro, (C1-C4)-Alkoxy, Methylendioxy und (C1-C4)-Alkyl substituiert sein können, b2.2) wobei ThrB 30 als tert.-Butylether vorliegt und R31 eine physiologisch verträgliche neutrale Gruppe -NRaRb oder -ORc bedeutet, worin Ra und Rb wie unter b2.1) definiert ist und Rb auch Wasser stoff bedeuten kann und Rc für (C1-C3)-Alkyl, butyl, Isobutyl, sec. Butyl, (C5-C6)-Alkyl, (C3-C8)-Cycloalkyl, (C6-C10)-Aryl, (C7-C11)-Aralkyl, (C3-C9) Heteroaryl oder (CH2-CH2-O-}mR, worin m und R wie oben definiert sind, wobei diese Gruppen ein Arylteil durch einen oder mehrere Substi tuenten aus der Reihe Halogen, Nitro, (C1-C4) Alkoxy, Methylendioxy und (C1-C4)-Alkyl sub stituiert sein können, b2.3) wobei die OH-Gruppe von ThrB 30 durch eine physiologisch verträgliche Gruppe aus der Reihe (C1-C3)-Alkyl, Butyl, Isobutyl, sec. Butyl, (C5-C6)-Alkyl, (C3-C8)-Cycloalkyl, (C6-C10)-Aryl, (C8-C11)-Aralkyl, (C3-C9) Heteroaryl, Formyl, (C3-C6)-Alkanoyl und (C7-Ca Aroyl, die im Arylteil wie unter b2.1) für Ra und Rb dcfiniert, substituiert sein können, oder einen anderen, in der Peptidchemie gängigen, physiologisch verträglichen Rest geschützt ist und R31 wie unter a)definiert ist oder b2.4) wobei die OH-Gruppe von ThrB 30 durch Acetyl oder Benzyl geschützt vorliegt und R31 eine physiologisch verträgliche, neutrale Gruppe -NRaRb oder -ORC bedeutet, worin Ra und abgesehen von Rb= (C7-C10)-Aryl, wie unter b2.1) definiert sind und worinRC wie unter b2.2ì definiert ist, und deren physiologisch verträglichen Salze. Genetisch kodierbar sind die folgenden L-Aminosäuren: Gly, Ala, Ser, Thr, Val, Leu, Ile, Asp, Asn, Glu, Gln, Cys, Met, Arg, Lys, His, Tyr, Phe, Trp, Pro (neutrale Aminosäuren unterstrichen). Unter neutralen Gruppen SN, die die freie Carboxyfunktion am C-terminalen Ende der B-Kette in, den erfindungsgemässen Verbindungen blockieren, versteht man physiologisch ver- - trägliche ungeladene Gruppen, vor allem Ester- und Amidgruppen, oder andere COOH-Schutzgruppen, wie sie beispielsweise im Bodanszky et al., Peptide Synthesis, 2nd Edition (1976) John Wiley & Sons beschrieben werden, vorzugsweise Gruppen der Formel -NRaRb oder ORc, worin ba und Rb gleich oder verschieden sind und für Wasserstoff, C1-C6)-Alkyl, (C3-C)-Cycloalkyl, (C6-C10)-Aryl, (C7-C11)-Aralkyl, (C3-C9)-Heteroaryl oder -(CH2-CH2-O)mR mit mr 1 bis etwa 120 und R= (C1-C4)-Alkyl, wobei diese Gruppen im Alkylteil auch durch einen oder mehrere gleiche oder verschiedene Substituenten aus der Reihe Halogen, Nitro, (C1-C4)-Alkoxy, Methylendioxy und (C1-C4)-Alkyl substituiert sein können oder Ra und Rb gemeinsam für [CH2]n- mit n= 4 - 6 stellt, worin eine Methylengruppe auch durch 0 oder NI! ersetzt sein kann, und Rc für (C1-C6)-Alkyl, (C3-C8)-Cycloalkyl, (C6-C10) Aryl, (C7-C11)-Aralkyl, (C3-C9)-Heteroaryl oder den vorstehend definierten Rest (CH2CH2-O-)mR stehen, wobei Arylrest wie bei Ra und Rb substituiert sein können. Als OH-Schutzgruppen für Ser, Thr bzw. Tyr kommen in Frage physiologisch verträgliche Gruppen aus der Reihe (C1-C6)-Alkyl, (C3-C8)-Cycloalkyl, (C6-C10)-Aryl, (C8-C11)-Aralkyl, (C3-C9)-Heteroaryl, (C1-C6)-Alkanoyl und (C7-C11)-Aroyl oder einen anderen, in der Peptidchemie gängigen, physiologisch verträglichen Rest (vgl. z.B. Bodanszky et al., loc. cit. ...) geschützt is7t. Im obigen Zusammenhang und auch in der Folge wird unter (C1-C6)-Alkyl beispielsweise Methyl, Ethyl, Propyl, Isopropyl, Butyl, tert.-Butyl, Amyl oder Hexyl, unter (C3-C8)-Cycloalkyl beispielsweise Cyclopropyl, Cyclobutyl, Cyclohexyl usw., unter (C6-C10)-Aryl beispielsweise Phenyl oder Naphthyl, vorzugsweise Phenyl, unter (C7-C11)-Aralkyl beispielsweise Benzyl, Phenethyl u.ä., unter (C3-Cg)-Heteroaryl beispielsweise Pyridyl, Pyrrolidyl, Pyrimidinyl, Morpholinyl, Pyrazinyl, Imidazolyl, Indolyl oder Chinolinyl, unter (C1-C6)-Alkanoyl beispielsweise Formyl, Acetyl, Propionyl, Butyryl usw., und unter (C7-C11)-Aroyl beispielsweise Benzoyl, Naphthoyl oder Toluyl verstanden. Insulin-Derivate, die in Position B1 Phenylalanin tragen, sind besonders bevorzugt. Weiterhin sind solche bevorzugt, die in der Position B30 Ala, Thr oder Ser aufweisen. Die A-Kette und die Kette (B 2 - 30) der erfindungsgemässen Verbindungen weisen zweckmässigerweise die Sequenz des Rindex- oder Schweineinsulins, insbesondere aSer die des Humaninsulins auf. Bevorzugt sind auch Insulin-Derivate, in denen R31 Alkoxy oder Aralkoxy bzw. -O(CH2CH2-O)mR bedeuten Bevorzugte OH-Schutzgruppen für Ser, Thr dder Tyr sind tC1-C6)-Alkyl, (C1-C6)-Alkanoyl oder (C7-C11)-Aralkyl. In der Reihe der erfindungsgemässen Insulin-Derivat seien beispielsweise die nachstehenden Verbindungen erwähnt, ohne die Erfindung auf diese zu beschränken: Des-PheB 1-Schweineinsulin-(B 30)-OBut Des-PheB 1-Humaninsulin-(B 30) Des-PheB 1-Schweineinsulin-(B 30)-OCH3 Des-PheB 1-Humaninsulin-(B 30)-OBZL Schweineinsulin-(B 30)-O-Cyclohexyl Humaninsulin- (B 30) EMI7.1 Rinderinsulin-(B 30)-OCH3 Schweineinsulin-(B 30)-O-(CH2-CH2-O)20-C2H5 Humaninsulin-(B 30)-NH-C2H5 Des-ThrB 30-Humaninsulin-ValB 30-O-C2H5 Des-ThrB 30-Humaninsulin-ValB 30-NH2 Humainsulin-(B 30) EMI7.2 Humahninuslin-(B 30)-NH-(CH2-CH2-O)30-CH3 Humaninsulin-(B 30)-N(CH3)2 Humaninsulin-(B 30)-OBZL Humaininsulin-(B EMI7.3 Humaninsulin-ThrB 30(Et)OEt Humaninsulin-ThrB 30(CH3)OCH3 Humaninsulin-(b 30)-O-[CH2]5CH3 Humaninsulin-Thr(Ac)-O-Et Humaninsulin -THr(Bz)OBut Humaninsulin Humaninsulin EMI7.4 Humaninsulin-ThrB30(POR)-OPr Humaninsulin-(B 30)-NH2 Die Erfindung betrifft auch ein Verfahren zur Herstellung von Insulin-Derivaten der Formel I, das d a d u r c h g e k e n n z e i c hnet ist, dass man a) ein Des-Octapeptid (B23-30)-Insulin der Formel II, EMI8.1 <tb> <SEP> A1 <SEP> S <SEP> S <SEP> A21 <tb> S1- <SEP> Gly <SEP> A-Kette <SEP> Asn <SEP> -OH <tb> <SEP> S <SEP> S <SEP> (II) <tb> <SEP> B2 <SEP> S <SEP> S <SEP> B22 <tb> S1-R1-Val <SEP> B-Kette <SEP> Arg <SEP> -OH <tb> in der R1 Phe oder eine Bindung und S1 eine protonen- solvolytisch oder durch ss-Eliminierung abspaltbare Aminoschutzgruppe wie den tert-Butyloxycarbonyl-(Boo), den tert-Amyloxycarbonyl-(Acc) oder den Methylsulfonylethyloxycarbonyl-(Msc)-rest bedeuten, kondensiert mit einem Peptid der Formel III H-Gly-Phe-Phe-Tyr(Sê)-Thr(Sê)-Pro-Lys(S )-R30-R31 (III) in welcher R30 oder R31 die oben definierten Bedeutungen haben, s2 für Wasserstoff, Bzl oder But und S für eine Urethanschutzgruppe, wie Boc, Moc, Fmoc oder Z stehen, undvorhandene Schutzgruppen in an sich bekannter Weise abspaltet, oder b) ein Des-B30-Insulin der Formel I, in welcher R1 rür H ein Des-B30-Insulin der Formel I, in welcher RÚ für H oder H-Phe und der C-Terminus R30-R31 zusammen für OH stehen, in Gegenwart von Trypsin oder einer trypsinähnlichen Endopeptidase umsetzt r.it einer Verbindung der Formel IV H-R30-R31 (IV) in der R30 und. R31 die oben definierten Bedeutungen haben und anschliessend gegebenenfalls vorhandene Schutzgruppen in an sich bekannter Weise abspaltet und die nach a) oder b) erhaltenen Verbindungen gegebenenfalls in ihre physiologisch verträglichen Salze überführt. Bei der Verfahrensvariante a) setzt man beispielsweise das N&alpha;A1, N&alpha;N1-Bis-Boc-Derivat eines Des-Octapeptid-(B23-30) Insulins analog der im US-Patent 4 029 642 beschriebenen Verfahrensweise direkt mit einem hquivalent einer Verbindung der Formel III um, wobei als Kondensationsmittel Dicyclohexylcarbodiimid im geringen Unterschuss in Anwesenheit von 1-Hydroxybenzotriazol dient. Da bei dieser Verfahrensvariante gewöhnlich kein Schutz der Carboxylgruppen erforderlich ist, entfällt normalerweise auch die Schädigung des Insulin-Derivats sowohl bei der Veresterung als auch bei der alkalischen Verseifung. Nicht umgesetztes Des-Octapeptid und ein Peptid, das durch Konden- sation von IV an AspA21-OH entsteht, sind auf Grund der unterschiedlichen t50lekülgrösse und Ladungszahl leicht durch Verteilungschromatographic an SephadexR-LH 20 oder durch Gelchchrornatographie an Sephadex0-G 75 oder G 50 superfine abtrennbar. Zur Abspaltung der tert-Butylschutzgruppen muss das Reaktions- produkt nur mit Trifluoressigsäure während 30 - 60 Minuten bei Raumtemperatur behandelt werden. Diese Reaktion schädig das Insulin-Derivat nicht. Wählt man als N-Schutzgruppe cn Methylsulfonylethyl-oxy-carbonylrest, so ist zur Abspaltung durch B-Eliminierung eine Alkalibehandlung notwendig. Die Reaktionsbedingungen sind so (z.B. 0,1 N NaOH, 0 C, 5 sek), dass das Insulin-Derivat nicht geschädigt wird. Das als Ausgangsprodukt verrundete N&alpha;A1, N&alpha;B1-Bis-Boc-Des- B23-30-Octapeptid-Insulin vo Schwein stellt man beispiels- weise auf folgendem Wege her: Schweincinzulin wird in einer Mischung aus Dimethylformamid Dimethylsulfoxid und Wasser in Anwesenheit von N-Ethylmor pholin mit überschüssigem tert. - Butyloxycarbenyl-hydroxysuccinimidester umgesetzt. Dabei entsteht das zu erwartende N&alpha;A1, N&alpha;B1, NEB29-Tris-Boc-Insulin. Man gibt nun zu der Lösung dieser Verbindung in Dirnethylformamid und Tris-Puffer (pH 7,5) Trypsin in kleinen Portionen so lange zu, bis in der Elektrophorese kein Ausgangsprodukt mehr zu erkennen ist. Das N &alpha;B1-Bis-Boc-Des-B23-30-Octapeptid-Insulin wird durch Verteilungschromatographie an Sephadex L 20 gelseinigt. Diese Verbindung wird nun mit einem Mol des Peptids der Formel III, das in an sich bekannter Weise nach den Methoden der Peptidchemie hergestellt wird, 1 - 2 Mol 1-Hydroxybenzo- triazol und etwa 0,9 Mol Dicyclohexylcarbodiimid in Dimethyl- formamid bei etwa pH 7 - 8 zur }lealction gebracht (vgl. Chem. Ber. 103 (1970), Seite 788). Das Rohprodukt wird durch Verteilungschromatographie gereinigt und durch Behandeln mit Trjfluoressigväure/Anisoi bei Raumtemperatur von den Sehutzgruppen befreit. Nach Fällung mit Ether isoelektrischer Fällung aus Wasser und Chromato- graphic an Sephadext-G 75 oder G 50 superfine ist die Verbindung elektrophoretisch rein und kann in bekannter Weise zur Kristallisation gebracht werden. Das so gewonnene Insulin-Derivat ist biologisch voll aktiv. Des-PheB1-Insuline als Ausgangsverbindungen für die erfindungsgemässen Verfahren sind beispielsweise aus der DE-PS 20 05 658 oder aus der EP-A- 46 979 bekannt. Die bei der Verfahrensvariante b) als Ausgangsverbindungen verwendeten Des-B30-Insuline sind beispielsweise aus der EP-A-46 979 oder Hoppe-Scyler's Z. Physiol. Chem. 359 (1978) 799 bekannt. Das bei Variante b) verwendete Ausgangsmaterial der Formel IV wird in an sich bekannter Weise nach den Methoden der Peptidchemie hergestellt. Das Des-B 30-Insulin und die Verbindung der Formel IV werden in Analogie zu der im US-Patent 4 320 196 beschriebenen Verfahrensweise in Gegenwart von Trypsin oder einer trypsinähnichen Endopeptidase in einem organisch-wässrigen Lösemittel-System bei pH 5 - 9 und einer Temperatur von 20 bis 40 C miteinander kondensiert. Das erhaltene Insulin-Derivat kann nach den gebräuchlichen Methoden der Pcptidchemie isoliert werden. Weiterhin können die erfindungsgemässen Verbindungen analog zu den beispielsweise in der GB-A-2 069 502, EP-A-56 951, WO 82/4069, DE-A-31 29 404 oder WO 83/1074 beschriebenen semisynthetischen Verfahrensweisen zur Herstellung der bekannten Insulin-(B 30)-ester synthetisiert werden. Aminosäureester der Formel IV, in denen R31 für eine Alkylpolyoxyethylenoxykette steht, werden in Analogie zu der in der EP-A-27 161 beschriebenen Verfahrensweise hergestellt. Andere Verbindungen der Formel IV sind bekannt oder können in Analogie zu bekannten Verfahren hergestellt werden. Alle die genannten Insulin-Derivate der Formel I haben gemeinsam, dass durch die Blockierung der (B 30)-Carboxygruppe das Molekül effektiv eine zusätzliche positive Ladung erhält, die ihm einen in richtung Neutralpunkt verschobenen isoelektrischen Punkt verleihn. Je nach Derivat werden isoelektrische Punkte zwischen 5,8 und 7,3 in der isoelektrischen Fokussierung gemessen. Damit sind die Derivate im Neutralbereich weniger löslich als natives Insulin oaer Proinsulin, die ihren isoelektrischen Punkt und damit den Bereich maximaler Unlöslichkeit bei pH= 5,4 haben, während sie im Neutral- bereich normalerweise gelöst vorliegen. Die Löslichkeitseigenschaften von Insulin und Proinsulin lassen sich im Bereich oberhalb des isoelcktrischen Punktes. d.h. im therapeutisch besonders interessanten Neutralbereich, durch Zugabe von Zinkionen beeinflussen. Zink wirkt dabei als Depotprinzip in der Weise, dass es den hexameren Zustand des Insulins sowie dessen Kristal lierungstendenz stabilisiert. Im subkutanen Gewebe lösen sich diese Aggregate wieder. Ein weiteres geläufiges Depotprinzip ist die Kristallisation des Insulins oder Proinsulins als Komplex mit einem ba sischen Protein, z.B. Globin oder Protamin. Bei der Anwendung des Proinsulins. in Lösung oder in Verbin- dung mit einem der beschriebenen Depotprinzipien bedarf es eines weiteren proteolytischen Abbaus, um natives, voll wirksames Insulin freizusetzen. Intaktes Proinsulin hat nur etwa 1/8 der biologischen Wirksamkeit des Insulins, weil, so die Vorstellung1 ein Teil der biologisch aktiven Ober- flächenregion, die Rezeptor-Bindungsregion, durch das im Proinsulin vorhandene C-Peptid maskiert ist. Als Proinsulin kommt allerdings für die Diabetes.therapie nur honiologes, also nur solches mit menschlicher Sequenz, in Frage (vgl. z.B. DE-A1-32 32 036). Heterologes Proinsulln besitzt eine signifikante Immunogenität. Es ist in diesem Zusammenhang bemerkenswert, dass auch humane Proinsuline Variationen im C-Peptidteil, aufweisen können. Überraschenderweise wurde nun gefunden, dass die Insulin Derivate, der Formel I deren B-Kette C-terminal blockiert ist, im Unterschied zum Proinsulin in äguimolarer Menge eine etwa gleich hol biologische Aktivität wie natives Insulin aufweisen. Die Erfindung betrifft nun weiterhin die Verwendung. von Insulin-Derivaten der Formel I, in welcher R30 für den Rest einer neutralen, genetisch kodierbaren L-Aminosäure, deren gegebenenfalls vorhandene OH Gruppe frei oder durch eine physiologisch verträg liche Gruppe geschützt vorliegen kann, steht und R31 eine physiologisch verträgliche, die Carboxygruppe blockierende neutrale Gruppe sN bedeutet, als Heilmitiel. Die Erfindung betrifft auch Arzneimittel zur Behandlung des Diabetes mellitus aus einem pharmazeutisch unbedenk- lichen Träger und einem Insulin-Derivat der Formel I als Wirkstoff. Dieseer findungsgemässen Arzneimittel stellen vollkommen neue Verzögerungsprinzipien dar, die ohne Depot-Hilfsstoffe, wie Zink oder Protaminsulfat, zur W wcrden können Die Depotwirkung geht auf ein inhärentes, zur Wirkung gebracht proteinchemisch bedingtes, physikalisches Prinzip, die Schwerlöslichkeit des Insulin-Derviats an dessen isoelektrischem Punkt, zurück. Seine Wiederauflösung unter physiologischen Bedingungen wird möglicherweise durch Abspaltung der zusätzlichen Gruppe(n) erreicht, z.B. durch Enzyme mit Esterase-A@tivität. Die jeweils abgespaltene(n) Gruppe(n) sind entweder rein physiologische Metaboliten oder aber leicht metabolisierbare, physiologisch unbedenkliche Substanzen. Die Insulin-Derivate als Wirkstoffe dieser neuen Arznei- mittel sind auch im Unterschied zu in der Literatur beschriebenen Intermediaten, die noch Teile des heterologen C-Peptids enthalten, in der Regel nicht stärker Immunogen als das entsprechende Insulin selbst. Die erfindungsgemässen Mittel enthalten als Wirkstoff eines oder mehrere der neuen Insulin-Derivate der Formel I. Sie weisen vorzugsweise einen pH-Wert zwischen 2,5 und 8,5 auf, enthalten ein geeignetes Isotoniemittel, ein geeignetes Konservierungsmittel und gegebenenfalls einen geeigneten Puffer für einen pH-Bereich zwischen 5,0 und 8,5. Eine typische Anwendungsforin der beschriebenen Derivate stellen Präparationen dar, die unterhalb de. isoelektrischen Punktes als Lösungen in einem physiologisch unbedenklichen Träger vorliegen. Dabei kann der pH der Lösung typischer- weise pH=4,5 betragen, liegt also deutlich höher als cler von sauren Altinsulinen (typischerweise pH=3,0). Eine neutralere Injektionslösung bietet u.U. deutliche Vorteile in Bezug auf deren Verträglichkeit. Eine weitere typische Änwendungsform sind Suspensionen aus amorphen oder kristallinen Niederschlägen der beschriebenen Derivate in einem physiologisch unbedenklichen Träger on etwa neutralem pH. Es ist aber auch möglich, die in den Derivaten inhärente Schwerlöslichkeit im physiologischen pH-Bercich durch zusätzliche Depotprinzipien, wie etwa durch Zugabe-von Zink oder Protaminsulfat, zu verstärken. Die zugesetzte Zinkmenge kann dabei bis zu 100 g Znê+/100 Insulineinheiten, typischerweise etwa 50 g ZNê+/100 Insulineinheiten, betragen. Die Protaminmenge kann zwischen 0,28 mg und 0,6 mg pro 1 100 Einheiten betragen (bezogen auf Protaminsulfat). Auf diese Weise sind besonders lang wirksame präparationen herstellbar für die es in Zunkunft breitere Andung als bischer geben wird, nachdem gerade eine Basalmenge an Insulin therapeutisch vorteilhaft erscheint. Dies ist schon jetzt eine Erkenntnis aus der Therapie mit Insulindosiergeräten. Als physiologisch unbedenkliches und mit dem Insuliderivat verträgliches Trägermedium eignet sich eine sterile wässrige Lösung, die zu Blut in der üblichen Weise, z.B. durch Glycerip, Kochsalz, Glucose, isotonisch gemacht wird und daneben noch eines der gebräuchlichen Konservierungsmittel z.B. Phenol, m-Kresol oder p-Hydroxybenzoesäureester, enthalt. Das Trägermedium kann zustatzlich eine Puffersubstanz, z.B. Natriumacetat, Natriumcitrat, Natriumphosphat, enthalten. Zur Einstellung des pH werden verdunnte Säuren (typischerweise HCl) bzw. Laugen (typischerweise RaOH) verwendet. Die Insulin-Derivate können in den erfindungsgemässen Mitteln auch als Alkali- oder als ammoniumsalze eingesetzt werden. Ein beliebiger Anteil eines oder merker Insulin-Derivate der Formel oder ein Insulin-Derivat der Formel I kann in einer Hischung weiterer dieser Insulin-Derviate unabhängig voneinander joweils in gelöster, amorpher und/oder kristalliner Form vorliegen. Es ist manchmal vorteilhaft, der erfindungsgemässen Zubereitung eine geeignete Menge eines geeigneten Stabilisatcrs zu- zusetzen, der die Präzipitatien von Protein bei thermisch- mechanischer Belastung bei Kontakt mit verschiedenen Materialien verhindert. Solche Stabilisatoren sind beispiels weise aus der EP-A-18609 der DE-A-32 40 177 oder aus der WO-83/00288 bekannt. Bei dcn erfindungsgemässen Mitteln, die auch eines der bekannten Verzögerungsprinzipien, wie etwa Protaminsulfat, Glebin oder Zink in geeignetes Mengen enthalten können, kann ein solches Verzögerunsprinzip in Kombination mit dem gesamten Wirkstoffanteil oder mit Teilen davon oder einem oder mehrere Insulin-Derivaten der Formel 1 in einer Mischung angewandt werden. Ein Mittel kann verschiedene Insulin-Derivate der Formel I in Kombination mit mehreren verschiedenen verzögernd wirkenden Hilfsstoffen enthalten. Die erfindungsgemässen Arzneimittel können neben den Insulin Derivaten der Formel I auch natives Insulin und/oder Pro insulin und/oder des-Phe-Insulin unabhängig voneinander jeweils in gelöster, amorpher und/oder kristalliner Form enthalten. Mit den erfindungsgemässen therapeutischen Mitteln sind also offenkundig vielfältige und sehr fein abstirnmbare Wirkungs- charakteristiken erzielbar; damit sollten nach den eingangs gemachten Bemerkungen Fortschritte insbesondere im hinblick auf diabetische Spätkomplikationen verbunden sein. Zur weiteren Erläuterung der Erfindung sollen die folgenden Beispiele dienen: Herstellungsbeispiel 1: Humaninsulin-(B30)-O-CH2-CH2-CH3 5 g Schweineinsulin werden in 45 ml Dimethylformamid, 25 ml Dimethylsulfoxid, 0,5 ml N-Ethylmorpholin un 2,5 ml Wasser gelöst. Unter Rühren gibt man bei Raumtemperatur 1,5 g tert-Butyloxycarbonyl-N-hydroxysuccinimid zu und lässt 6 Stunden reagieren. Dann wird durch Zugabe eines Tropfens Eisessig gestoppt, das Produkt mit Ether gefällt und abfiltriert. Der Rückstand wird in 360 ml Dimethylformamid gelöst und mit 320 ml Tris-Puffer (0,05 M, 0,01 M an CaCl2, pH 7,5) verdünnt. Bei 36 C werden im Abstand von je 1 Stunde Portionen von 20 mg Trypsin zugegeben. Nach insgesamt 12 Zugaben stellt man mit Essigsäure auf pH 4,5 und dampft die Lösung ein. Die anschliessende Reinigung des Materials an einer Sephadex#-LH 30-Säule (8 x 200 cm) mittels Verteilungschromatographie im System n-Butanol-Eisessig-Wasser (2:1:10) ergibt 3.25 g N&alpha;A1, N&alpha;B1- Bis-Boc-Des-B23-30-Octapeptid-Insulin (Schwein) , das in der sauren und basischen Elektrophorese kein Ausgangsmate- rial mehr zeigt. Die Aminosäureanalyse der Substanz ist korrekt. t7ach einer probeweisen Abspaltung den BOC-Gruppen ist keine Insulinaktivität mehr zu finden. Dieses Material (3,25 g) wird in 30 ml Dimethylformamid zusammen mit 100 mg 1-Hydroxybenzotriazol, 750 mg HCl Gly-Phe-Phe-Tyr(BUt)-Thr Pro-Lys(Boc)-Thr(But)-OCH2CH2-CH3 und 0,5 ml N-Ethylmorpholin gelöst. Dann giöt man bei Raumtemperatur 120 mg Dicyclohexylcarbodiimid zu und rührt die Reaktion 24 Stunden. Der abgeschiedene Dicyclohexylharnstoff wird abfiltriert, das Product durch Etherzugabe gefällt. Den Niederschlag filtriert man ab, wäscht mit Ether und trocknet. Die Substanz wird durch Verteilungschromatographic an Sephadex#-LH 2G in obigen System vorgereinigt. 2,6 g Material aus dem Hauptpeak isoliert man durch Fällung mit Accten/Ether. Das getrocknete, noch ungeschützte Derivat lässt man mit einem Gemisch aus 5 nl Trifluoressigsäure und 1 ml Anisol 60 Minuten bei Raumtemperatur reagieren. Aus dc mit Eis gekühlten Lösung fällt man anschliessend die Rohsubstanz durch Zugabe von Ether. Den getrockneten Niederschlag löst man in Wasser, präzipitiert mit wässrigem Ammoniak une zentrifugiert. Die Reinigung des Produktes erfolgt in 10%iger Essigsäure über SephadexR-G 50 superfine oder G 75. Aus den Fraktionen des gewünschten peaks kann man das Humaninsulin-(B30)-CH2CH2CH3 durch Gefriertrocknung isolieren (Ausbeute nach Kristalli sation: 1; 2 g). Das so gewonnene Insulin-Derivat zeigt im biologischen Test eine dem Humaninsulin äquivalente Wirksamkeit. Die Herstellung des Oktapeptids der Formel III erfolgt gemäss folgendem Kondensationsschema nach üblichen Peptid-Kondensatiosmethoden: Syntheseschema für das Octapeptid der Formel III EMI18.1 <tb> Gly <SEP> Phe <SEP> Phe <SEP> Tor <SEP> ' <SEP> Thr <SEP> Pro <SEP> Lys <SEP> Thr' <tb> <SEP> lt <tb> <SEP> Z <SEP> OH <SEP> N-OBu <tb> <SEP> DCC/ <SEP> H <SEP> OBau <tb> <SEP> DCC/IXOSt <tb> <SEP> Z <SEP> OBut <tb> <SEP> ii <SEP> (Pd <SEP> 1; <SEP> But <SEP> . <SEP> . <SEP> BUt <SEP> zur <tb> <SEP> Z <SEP> tH <SEP> lOBut <SEP> OH <SEP> H <SEP> OMe <SEP> 2 <SEP> OPr <tb> <SEP> I > r'uC/H03 <SEP> DCC/HO3 <SEP> DCC/HOBT <tb> <SEP> But <SEP> =4 <SEP> But <tb> <SEP> Z <SEP> .\ <SEP> . <SEP> mm <SEP> OXs <SEP> ¸ <tb> <SEP> z <SEP> TFsE <SEP> H2(Pd <SEP> }32/Pd <tb> <SEP> J <SEP> d <SEP> nn <SEP> op <tb> <SEP> Z <SEP> ----- <SEP> -- <SEP> CiJ <SEP> Z( <SEP> - <SEP> -OMe <SEP> Z- <SEP> i <tb> <SEP> - <SEP> I <SEP> IV"Jf'il: <SEP> - <SEP> DCC/H331; <tb> <SEP> But <SEP> l <SEP> gUt <tb> <SEP> Z <SEP> V <SEP> / <SEP> ----- <SEP> .Ote <SEP> Z <tb> <SEP> NaOi <SEP> }I2/Pd <tb> <SEP> But <SEP> BOC <SEP> But <tb> <SEP> z <SEP> - <SEP> OH <SEP> - <SEP> / <SEP> - <SEP> - <SEP> II <SEP> 7ohr <tb> <SEP> DCC/flOB <tb> <SEP> t <SEP> -1 <SEP> mb <SEP> B <tb> <SEP> Z <SEP> / <SEP> -------- <SEP> v <SEP> / <SEP> -- <tb> <SEP> I,/Pc! <tb> <SEP> But <SEP> 13ut <tb> Aminosäure- und Elementaranalyse entsprechen der Theoric Arzneimittel Beispiel 1: : Insulin-(B 30)-OCH3 vom Schwein (semisynthetisch aus Des-B 30 Schweineinsulin hergestellt) in schwach saurer, gelöster Formulierung mit 110 I.E. pro ml und deren Depot-Wirksamkeit: Man löst in einem Gesamtvolumen von 10 ml Wasser Insulin-(B 30)-OCH3 vom Schwein 14,5 mg (27,5I.E./mg) Traubenzucker (Monohydrat) krist. 540,0 mg p-Hydroxybenzoesäurementhylester 10,0 mg Der pH-Wert wird durch Zugabe von 1 N HCl bzw. 1 N NaOH auf pH = 4,5 cingestellt. Eine solche Lösung zeigt bei einer Dosierung von 0,5 I.E./kg am Kaninchen eine ausgeprägte depot-Wirksamkeit. Die Fläche unter der Blutzuckerkurve ist gleich wie die eines Standard präparates mit 110 I.E./ml. Beispiel 2: Humanisulin-Thr B30(But)OBut (Pr=6,8), hergestellt durch Semisynthese aus Schweineinsulin, in neutraler Formulierung mit 40 I.B. pro ml und deren Depot-Wirksamkeit: Man löst in einem Gesamtvolumen von 10 ml Wasser Humaninsulin-ThrB 30(But)OBut 14,8 mg (27 I.E/mg) Natriumdihydrogenphosphat-dihydrat 21,0 mg m-Kresol 27,0 mg Glycerin 160,0 mg Der pH-Wert wird durch Zugabe von 1 HC1 bzw. 1 N NaOH auf pH - 7,3 eingestellt. Eine solche Suspension zeigt bei einer Dosierung von 0,4 I.E./kg am Kaninche eine ausgeprägte Depot-Wirksamkeit Beispiel 3: Humaninsulin-(B 30)-NH2 hergestellt aus Schweineinsulin durch Semisynthese, in Form einer kristallinen NPH-Zubereitung mit 40 I.E./ml und deren stark verzögerte Wirkung: Man löst in einem Gesamt-Volumen von 10 ml mit Wasser: Humaninsulin- (B 30) -NH2 111,5 mg (27,5 I.E./mg) Protaminsulfat 1,3 mg Natriumdihydrogenphosphat-dihydrat 21,0 mg m-Kresol 15,0 mg Phenol 6,0 mg Glycerin 160,0 mg Der pH-Wert wird durch Zugabe von 1 N i}C1 bzw. 1 N NaOH auf pH = 7,3 eingestellt. Eine solche Kristall suspension zeigt bei einer Dosierung von 0,4 I.E./kg am Kaninchen eine stark verzögerte Wirkung. Beispiel 4: Mischung von Humaninsulin-Arg-B31-OH und Humaninsulin Thrn 30But(OBut) beide hergestellt durch Semisynthese aus Schweineinsulin, in Form einer zinkhaltigen Suspension mit 40 I.E./ml und deren stark verzögerte Wirkung Man löst in einem Gesamt-Volumen von 10 ml mit Wasser: Humainsulin-Agr-B31-OH (27,5 I.E./mg) 7,3 mg Humainsulin-ThrB 30But(OBut) (27,0 I.E./mg) 7,4 mg Zinkchlorid, wasserfrei 0,46 ing Natriumacetat 14,0 mg p-Hydroxybenzoesäuremethylester 10,0 mg Kochsalz 80,0 mg Der pH-Wert wird durch Zugabe on 1 N HCl bzw. 1 N NaOH auf pH = 7,0 eingestellt. Eine solche Suspension zeigt bei einer Dosierung von 0,4 I.E./kg am Kaninchen eine stark verzögerte Wirkung. Beispiel 5: Humaninsulin-(B 30)-O-(CH2CH2-O-)20C2H5, hergestellt durch Semisynthese aus Schweineinsulin, in Form einer neutralen Zubereitung mit 100 I/ml und deren verzögerte Wirkung: Man löst in einem Gesamt-Volumen von 10 ml tiit Wasser: Humaninsulin-(B 30)-O-(CH2CH2-O-)20C2H5 (24,0 I.E./mg) 41,7 mg Natriumacetat 14,0 mg p-Hydroxybenzoesäuremethylester 10,0 mg Kochsalz 80,0 mg Durch Zugabe von 1 N HCl bzw. 1 N NaOH wird pH 7,0 ein gestellt. Eine solche Suspension zeigt am Kaninchen eine verzögerte Wirkung. Patentansprüche: 1 Insulin-Derivat der Formel 1, EMI22.1 <tb> <SEP> A1 <SEP> S <SEP> S <SEP> A21 <tb> <SEP> H- <SEP> Gly <SEP> A-Kette <SEP> Asn <SEP> -OH <tb> <SEP> S <SEP> S <SEP> (I) <tb> <SEP> S <SEP> S <tb> <SEP> B2 <SEP> B29 <tb> R1-Val <SEP> B-Kette <SEP> -R30-R31 <tb> in welcher a) R1 H bedeutet, R30 für den Rest einer neutralen1 genetisch kodier- baren L-Aminosäure, deren gegebenenfalls vor handene OH-Gruppe frei oder durch eine physio logisch verträgliche Gruppe geschützt vorliegen kann, steht und R31 eine physiologisch vertraglichet die Carboxy gruppe blockierende neutrale Gruppe SN bedeutet, b) RÚ H-Phe bedeutet, b1) R30 für den Rest einet neutralen, genetisch kodier baren L-Aminosäure mit der Ausnahme von Thr steht, wobei eine gegebenentalls vorhandene Oh1- Gruppe frei oder durch eine physiologisch verträg liche Gruppe geschützt vorliegen kann und R31 wie unter a) definiert ist, b2) R30 für Thr steht, b2.1) wobei die OH-Gruppe von ThrB30 ungeschützt vor liegt und R31 eine physiologische vorträgliche neutrale Gruppe -NRaRb oder -ORc bedeutet, worin Ra und Rb glcich oder verschieden sind und für (C1-C6)-Alkyl, (C3-C8)-Cycloalkyl, (C6-C10)-Aryl, (C7-C11)-Aralkyl, (C3-C9)-Heteroaryl oder -(CH2-CH2-O-)mR mit m= 1 bis etwa 120 und R= (C1-C4 > -Alkyl stehen, wobei Ra auch Wasser stoff sein kann und wobei diese Gruppen im Atyl- teil auch durch einen oder mehrere gleiche ode verschiedene Substituenten aus der Reihe Halogen, Nitro, (C1-C4)-Alkoxy, Metlendioxy und (C1-C4) Alkyl substituiert sein können oder Ra und Rb ge meinsam -[CH2]n- mit n= 4 - 6, worin eine Methylen gruppe auch durch 0 oder NH ersetzt sein kann, be deuten und RC für Propyl, Isopropyl, Butyl, Isobutyl, sec. Butyl, (C5-C6)-Alkyl, (C3-C8)-Cycloalkyl, (C 6-C10 Aryl, (C7-C11)-Aralkyl, (C3-C9)-Heteroaryl oder (CH2-CH2-O-)mR mit m= 1 bis etwa 120 und R= (C1-C4) Alkyl stehen, wobei diese Gruppen im Arylteil auch durch einen oder zwei gleiche oder verschiedene Substituenten aus der Reihe Halogen, Nitro, (C1-C4)-Alkoxy, Methylendioxy und (C1-C)-Alkyl substituiert sein können, b2.2) wobei Thr als tert.-Butylether vorliegt und R31 eine physiologisch verträgliche neutrale Gruppe NRaRb oder -ORC bedeutet, woriii Ra und Rb wie unter b.2.1) definiert ist und Rb auch Wasser stoff bedeuten kann und Rc für (C1-C3)-Alkyl, Butyl, Isobutyl, sec.-Butyl, (C5-C6)-Alkyl, (C3-C8)-Cycloalkyl, (C6-C10)-Aryl, (C7-C11)-Aralkyl, (C3-C9)-Heteroaryl oder (CH2-CH2-O-)mR, worin m und R wie oben definiert: sind, wobei diese Gruppen im Arylteil durch einen oder mehrere Substituenten aus der Reihe Halogen, Nitro, (C1-C4) -Alkoxy, Mothylendioxy und (C1-C4)-Alkyl substituiert sein können, b9.3) wobei die OH-Gruppe von ThrB30 durch eine phy biologisch verträglichc Gruppen aus der clhe (C1-C3)-Alkyl, Butyl, Isobutyl, sec.-Butyl, (C5-C6)-Alkyl, (C3-C8)-Cycloalkyl, (C6-C10)-Aryl, (C8-C11)-Aralkyl, (C3-C9)-Hetero aryl, Formyl, (C -C6)-Alkanoyl und (C7-C11)-Aroyl, die im Arylteil wie unter b2.1) für Ra und R de finiert, substituiert sein können,oder einen anderen, in der Peptidchemie gängigcn, physio logisch verträglichen Rest geschützt ist und R31 wie unter a) definiert ist oder b2.4) wobei die OH-Gruppe von ThrB3Q durch Acetyl oder Benzyl geschützt vorliegt und R31 eine physiologisch verträgliche, neutrale Gruppe oder - ORc bedeutet, worin Ra und Rb, ab gesehen von R@= (C7-C10)-Aryl, wie unter b2.1) definiert sind und worin Rc wie unter b2.2) definiert ist und deren physiologisch verträglichen Salze. 2. Insulin-Derivat nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass R31 für Alkoxy oder Aralkyloxy stehen, die wie im Anspruch 1 definiert sind. 3. Insulin-Derivat der Formel I, in welcher R1 LT,Phe bedeutet, R30 für denRest einer neutralen7 genetisch kodierharen L-Aminosäure, deren gegebenenfalls vorhandene OH- Gruppe frei oder durch eine physiologisch ver trägliche Gruppe geschützt vorliegen kann, steht und R31 eine physiologisch verträgliche, die Carboxygruppe blockierende neutrale Gruppe 5N bedeutet, und deren physiologisch verträgliche Salze zur Verwen dund als Heilmittel. 4. Insulin-Derivat nach einem der Ansprüche 1 bis2 , da durch gekennzeichnet, dass R1 für H steht. 5. Insulin-Derivat nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, dass R30 für Ala, Thr oder Ser steht. 6. Insulin-Derivat nach einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, dass die A-KetLe und die Kette (B 2 - 29) die Sequenz des Humaninsulins aufweisen. 7. Insulin-Derivat nach einem der Ansprüche 1 oder 3 bis 6, dadurch gekennzeichnet, dass R31 für -O-(CH2-CH2- 0-) mR steht wobei m und R wie im Anspruch 1 definiert sind. 8. Insulin-Derivat nach einem der Ansprüche 3 bis 6, dadurch gekennzeichnet, dass R31 für (C1-C6)-Alkoxy oder (C7-C11)-Aralkoxy steht. 9. Insulin-Derivat nach einem der Ansprüche 1 bis 8, dadurch gekennzeichnet, dass eine in R30 gegebenenfalls vorhandene CH-Gruppe frei oder durch (C1-C)-Alkyl, (C1-C6) Alkanoyl oder (C7-C11)-Aralkyl geschützt vorliegt. 10. Insulin-Derivat nach einem der Ansprüche 1 bis 9 zur Be handlung des Diabetes mellitus. 11. Verfahren zur Herstellung eines Insulin-Derivats der Formel 1 gemäss Anspruch 1 oder 3, dadurch gekennzeichnet, dass man a) ein Des-Octapeptid (B 23-30)-Insulin der Formel II, Insulin-Derivat der Formel I, EMI26.1 <tb> <SEP> A1 <SEP> S <SEP> S <SEP> A21 <tb> S1- <SEP> Gly <SEP> A-Kette <SEP> Asn <SEP> -OH <tb> <SEP> S <SEP> S <SEP> (II) <tb> <SEP> S <SEP> S <tb> <SEP> B2 <SEP> B22 <tb> S1-R1- <SEP> Val <SEP> B-Kette <SEP> Arg <SEP> -OH <tb> in der R1 Phe oder eine Bindung und S1 eine protonensolvolytisch oder durch ss-Eliminierung abspaltbare Aminoschutzgruppe wie den tert-Butyloxycarbonyl-(Boc), den tert-Amyloxycarbonyl-(Aoc) oder den Methylsulfonylethyloxy carbonyl-(Msc)-Rest bedeuten, kondensiert mit einem Peptid der Formel III H-Gly-Phe-Phe-Tyr(Sê)-Thr(Sê)-Pro-Lys(S )-R30-R31 (III) in welcher R30 oder p,31 die in den Ansprüchen 1 und3 definierten Bedeutungen haben, Sê für Wasserstoff, Bzl oder But und S für eine Urethanschutzgurppe, wie Boc, Moc, Fmoc oder Z stehen und vorhandene Schutzgruppen in an sich bekannter Weise abspaltet, oder ein Des-B30-Insulin der Formel I, in welcher R1 für H oder H-Phe und der C-Terminus R30-R31 zusammen für OH stehen, in Gegenwart von Trypsin oder einer trypsinähn- lichen Endopeptidase umsetzt mit einer Verbindung der Formel IM B-H30-R31 (IV) in der R30 und R31 die in den Ansprüchen 1 oder 3 definierten Bedeutungen haben und anschliessend gegebenenfalls vorhandene Schutzgruppen in an sich bekannter Weise abspaltet, , und die nach a) oder b) erhaltenen Verbindungen geqebenenfalls-in ihre physiologisch ver träglichen Sdlze überführt. 12. Arzneimittel aus einem pharmazeutisch unbedenklichen Träger und einem Wirkstoff gemäss einem der Ansprüche 1 bis 10. 13. Mittel gemäss Anspruch 12 dadurch gekennzeichnet, dass dieses einen pH-Wert zwischen 2,5 und 8,5 aufweist, ein geeignetes Isoltonie-Mittel und ein geeignetes Konser vierungsmittel enthält und dass das Insulin-Derivat der Formel 1 gelöst und/oder in Suspension vorliegt. 14. Mittel gemäss einen der Ansprüche 12 oder 13, dadurch gekennzeichnet, dass dieses einen geeigneten Puffer enthält und der pH-Wert zwischen 5, 0 und 8,5 liegt. 15. Mittel gemäss einem der Ansprüche 12 bi gekennzeichnet, dass dieses zwischen 0 und 100 Zink/100 I.U. enthält. 16. Mittel gemäss einem der Ansprüche 12 bis 15, d a d u r c h g e k e n n z e i c h n e t, dass der Wirkstoff der Formel I in Form eines Alkalisalzes oder des Ammoniumsalzes vorliegt. 17. Mittel gemäss einem der Ansprüche 12 bis 16, dadurch gekennzeichnet, dass ein beliebiger Anteil eines oder mehrerer Insulin-Derivate der Formel I oder ein Insulin -Derivat der Formel I in einer Mischung weiterer dieser Insulin-Derivate unabhängig voneinander jeweils in ge löster, amorpher und/oder kristalliner Form vorliegen. 18 Mittel gemäss eincm der Ansprüche 12 bis 17, dadurch gekennzeichnet, dass dieses eine gecignete Menge eines Hilfsmittels mit verzögernder Wirkung enthält. 19. Mittel gemäss Anspruch 18, d a d u r c h g e k e n n z e i c h n e t, dass dieses Verzögerungsprinzip in Kombination Init dem gesamten Wirkstoffanteil oder mit Teilen davon oder einem oder mehreren Insulin-Derivaten der Formel I in einer Mischung angewandt wird. 20. Mittel gemäss einem der Ansprüche 12 bis 19, dadurch gekennzeichnet, dass es verschiedene Insulin-Derivate der Formel. I in Kombination mit mehreren verschiedenen ver- zögernd wirkenden llilfstoffen enthält. 21. Verfahren zur Herstellung eines Mittels gemäss einem der Ansprüche 12 bis 20, dadurch gekennzeichnet, dass man die Wirkstoffe in eine geeignete Darreichungsform bringt. 22. Verwendung eines Insulin-Derivats gemäss einem der Ansprüche 1 bis 10 oder eines Mittels gemäss einem der Ansprüche 12 bis' 20 zur Behandlung des Diabetes mellitus.

Claims: Patentansprüche für den Vertragsstaat AT: 1. Verfahren zur Herstellung eines Insulin-Derivats der Formel I EMI29.1 <tb> <SEP> A1 <SEP> S <SEP> S <SEP> A21 <tb> H- <SEP> Gly <SEP> A-Kette <SEP> Asn <SEP> -OH <tb> <SEP> S <SEP> S <SEP> (I) <tb> <SEP> S <SEP> S <tb> <SEP> B2 <SEP> B29 <tb> R1-Val <SEP> B-Kette <SEP> -R30-R31 <tb> in welcher a) R1 H bedeutet, R30 für den Rest einer neutralen1 genetisch kodier baren L-Aminosäure, deren gegebenenfalls vor handene OH-Gruppe frei oder durch eine physio logisch verträgliche Gruppe geschützt vorliegen kann, steht und R31 eine physiologisch verträgliche, die Carboxy gruppe blockierende neutrale Gruppe SN bedeutet, b) RÚ H-Phe bedeutet, b1). R30 für den Rest einer neutralen, genetisch kodier baren L-Aminosäure mit der Ausnahme von Thr steht,wobei eine gegebenenfalls vorhandene OH- Gruppe frei oder durch eine physiologisch verträg liche Gruppe geschützt vorliegen kann und R31 wie unter a) definiert ist, b2) R30 für Thr steht, b2.1) wobei die OH-Gruppe von Thr@@@ ungeschützt vor liegt und R31 eine physiologische verträgliche neutrale Gruppe -NRaRb oder -ORc bedeutet, worin Ra und Rb gleich oder verschieder sind und für (C1-C6)-Alkyl, (C3-C8)-Cycloalkyl, (C6-C10)-Aryl, (C7-C11)-Aralkyl, (C3-C9)-Heteroaryl oder -(CH2-CH2-O-)mR mit m=' 1 bis etwa 120 und R= (C1-C4)-Alkyl stehen, wobei Ra auch Wasser stoff sein kann und wobei diese Gruppen im Aryl teil auch durch einen oder mehrere gleiche oder verschiedene Substituenten aus der Reihe Halogen, Nitro, (C1-C4)-Alkoxy, Metlendioxy und (C1-C)- Alkyl substituiert sein können oder Ra und Rb ge meinsam -[CH2]n- mit n= 4 - 6, worin eine Methylen gruppe auch durch 0 oder NH ersetzt sein kann, be deuten und RC für Propyl, Isopropyl, Butyl, Isobutyl, sec. Butyl, (C5-C6)-Alkyl, (C3-C8) -Cycloalkyl, (C6-C10= Aryl, (C7-C11)-Aralkyl, (C3-Cg)-Heteroaryl oder (CH2-CH2-O-) mR mit m='1 bis etwa 120 und R= (C1-C4) Alkyl stehen, wobei diese Gruppen im Arylteil auch durch einen oder zwei gleiche oder verschiedene Substituenten aus der Reihe Halogen, Nitro, (C1-04) -Alkoxy, Methylendioxy und (C1-C4)-Alkyl substituiert sein können, b2.2) wobei ThrB30 als tert. - Butlether vorliegt und R31 eine physiologisch verträgliche neutrale Gruppe -NR ab oder -ORc bedeutet, worin Ra und Rb wie unter b.2.1) definiert ist und Rb auch Wasser stoff bedeuten kann und RC für (C1-C3)-Alkyl, Butyl, Isobutyl, sec.-Butyl, (C5-C6)-Alkyl, (C3-C8)-Cycloalkyl, (C6-C10)-Aryl, (C7-C11)-Aralkyl, (C3-C9)-Heteroaryl oder (CH2-CH2-O-)mR, worin m und R wie oben definiert winde wobei diese Gruppen im Arylteil durch einen oder mehrere #ubstituenten aus der Reihe Halogen, Nitro, (C1-C4)-Alkoxy, Methylendioxy und (C1-C4)-Alkyl substituiert sein können, b2.3) wobei die OH-Gruppe von ThrB30 durch eine phy siologisch verträgliche Gruppe aus der Reihe (C1-C3)-Alkyl, Butyl, Isobutyl, sec.-Butyl, (C5-C6)-Alkyl, (C3-C8)-Cycloalkyl, (C6-C10)-Aryl, (C8-C11)-Aralkyl, (C3-C9)-Hetero aryl, Formyl, (c3-C6)-Alkanoyl und (C7-C11)-Aroyl, die im Arylteil wie unter b2.1) für Ra und R de- finiert, substituiert sein können,oder einen anderen, in der Peptidchemie gängigen, physio logisch verträglichen Rest geschützt ist und R31 wie unter a) definiert ist oder b2.4) wobei die OH-Gruppe von ThrB30 durch Acetyl oder Benzyl geschützt vorliegt und R31 eine physiologisch verträgliche, neutrale Gruppe -NRaRb oder - ORC bedeutet, worin Ra und Rb, ab gesehen von Rb= (C7-C10)5Aryl, wie unter b2.11 definiert sindund worin R@ wie unter b2.2) definiert ist; und ihren physiologisch verträglichen Salzen, dadurch gekennzeichnet, dass man a) ein Des-Octapeptid )B 23-30)-Insulin der Formel II, EMI31.1 <tb> <SEP> A1 <SEP> S <SEP> S <SEP> A21 <tb> S1- <SEP> Gly <SEP> A-Kette <SEP> Asn <SEP> -OH <tb> <SEP> S <SEP> S <SEP> (II) <tb> <SEP> B2 <SEP> S <SEP> S <SEP> B22 <tb> S1-R1-Val <SEP> B-Kette <SEP> Arg <SEP> -OH <tb> in der R1 Phe oder eine Bindung und S1 eine protonen- solvolytisch oder durch ss-Eliminierung abspaltbarc Amino- schutzgruppe wie den tert-Butyloxycarbonyl- ( Boc) den tert-Amyloxycarbonyl-(Aoc) oder den Methylsulfonylethyloxycarbonyl-(Msc)-Rest debeuten, kondensiert mit einem Peptid der Formel III H-Gly-Phe-Phe-Tyr(Sê)-Thr(Sê)-Pro-Lys(S )-R30-R31 (III) in welcher R30 oder R31 die oben definierten Bedeutungen haben, S2 für Wasserstoff, Bzl oder und und für eine Urethanschut'zgruppe, wie Boc, Moc, Fmoc oder Z stehen und vorhandene Schutzgruppen in an sich bekannter Weise abspaltet, oder b) ein Des-B30-Insulin der Formel 1, in welcher RÚ für Ii oder H-Phe und der C-Terminus R30-R31 zusammen für OH stehen, in Gegenwart von Trypsin oder einer trypsinähn-. lichen Endopeptidase umsetzt mit einer Verbindung der Formel IV R-R30-R31 (IV) in der R30 and R31 die oben definierten Bedeutungen haben und anschliessend gegebenenfalls vorhandene Schutzgruppen in an sich bekannter Weise abspaltet, und die nach a) oder b) erhaltenen Verbindungen gegebenenfalls in ihre physiologisch verträglichen Salze überführt. 2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass ein Insulin-Derivat der Formel I hergestellt wird, worin R31 für Alkoxy oder Aralkyloxy stehen, die wie im An spruch 1 definiert sind. 3. Verfahren zur Herstellung eines Insulin-Derivats der Formel I in welcher R1 H-Phe bedeutet, R30 für den Rest einer neutralen, genetisch kodierbaren L-Aminosäure, deren gegebenenfalls vorhandene OH Gruppe frei oder durch eine physiologisch verträg liche Gruppe geschützt vorliegen kann, steht und R31 eine physiologisch verträgliche, die Carboxygruppe blockierende neutrale Gruppe SN bedeutet, und deren physiologisch verträglichen Salzen, zur Verwendung als Heilmittel, bei der Behandlung das Diabetes mellitus, dadurch gekennzeichnet, dass man a) ein Des-Octapeptid (B 23-30)-Insulin der Formel II, Insulin-Derivat der Formel I, in der RÚ Phe und SÚ eine protonen solvolytisch oder durch ss-Eliminierung abspaltbare Amino schutzgruppe wie den tert-Butyloxycarbonyl-(Boc), den tert-Amyloxycarbonyl-(Aoc) oder den Methylsulfonylethyloxy carbonyl-(Msc)-Rest bedeuten, kondensiert mit einem Peptid der Formel III, in welcher R30 oder R31 die oben definierten Bedeutungen habeln, Sê für Wasserstoff, Bzl oder Du und S für eine Urethanschutzgruppe, wie Doc, Moc, Fmoc oder Z stehen und vorhandene Schutzgruppen in an sich bekannter Weise abspaltet, oder b) ein Des-B30-Insulin der Formel I, in welcher R1 für H-Phe und der C-Terminus R30-R31 zusammen für OH stehen, in Gegenwart von Trypsin oder einer trypsinähn- lichen Endopeptidase umsetzt mit einer Verbindung der Formel 1V1 in der R und R31 die definierten Bedeutungen haben und anschliessend gegebenenfalls vorhandene Schutzgruppen in an sich bekannter Weise abspaltet, und die nach a) oder b) erhaltenen Verbindungen gegebenenfalls in ihre physiologisch verträglichen Salze überführt. 4. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 2, oadurch ge kennzeichnet, dass ein Insulin-Derivat der Formel I her gestellt wird, worin R1 für H steht. 5. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch ge kennzeichnet, dass ein Insulin-Derivat der Formel I her gestellt wird, worin R30 für Ala, Thr oder Ser steht. 6. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch ge kennzeichnet, dass ein Insulin-Derivat der Formel I her gestellt wird, worin die A-Kette und die Kette (B 2 - 29) die Sequenz des Humaninsulins aufweisen. 7. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 oder 3 bis 6, dadurch gekennzeichnet, dass ein Insulin-Derivat der Formel I hergestellt wird, worin R 1 für -0-(CH2-CII2-0-)mR steht wobei m und R wie im Anspruch 1 definiert sind. 8. Verfahren nach einem der Ansprüche 3 bis 6, dadurch gekennzeichnet, dass ein Insulin-Derivat der Formel I hergestellt wird, worin R31 für (C1-C6)-Alkoxy oder (C7-C11)-Aralkoxy steht. 9. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 8, dadurch gekennzeichnet, dass ein Insulin-Derivat der Formel I hergestellt wird, worin eine in R30 gegebenenfalls ¯vorhandene OH-Gruppe frei oder durch (C1-C6)-Alkyl, (C1-C6) -Alkanoyl oder (C7-C11) -Aralkyl geschützt vorliegt. 10. Verfahren zur Herstellung eines Arzneimittels aus einem pharmazeutisch unbedenklichen Träger und einem Wirkstoff gemäss einem der Ansprüche 1 bis 9, dadurch gekennzeich net, dass man diese in eine geeignete Darreichungsform bringt. 11. Verfahren gemäss Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, dass ein Mittel hergestellt wird, welches einen pU-Wert zwischen 2,5 und 8,5 aufweist, ein geeignetes Isotonie Mittel und ein geeignetes Konservierungsmittel enthält und dass das Insulin-Derivat der Formel I gelöst und/oder in Suspension vorliegt. 12. Verfahren gemäss einem der Ansprüche 10 oder 11, dadurch gekennzeichnet, dass ein Mittel hergestellt wird, welches einen geeigneten Puffer enthält und der pH-Wert zwischen 5,0 und 8,5 liegt. 13. Verfahren gemäss einem der Ansprüche 10 bis 12, dadurch gekennzeichnet, dass ein Mittel hergestellt wird, welches zwischen 0 und 100 ssg Zink/100 I.U. enthält. 14. Verfahren gemäss einem der Ansprüche 10 bis 13, dadurch gekennzeichnet, dass ein Mittel hergestellt wird, worin der Wirkstoff der Formel I in Form eines Alkalisalzes oder des Ammoniumsalzes vorliegt. 15. Verfahren gemäss einem der Ansprüche 10 bis 14, dadurch gekennzeichnet, dass ein Mittel hergestellt wird, worin ein beliebiger Anteil eines oder mehrerer Insulin Derivate der Formel I oder ein Insulin-Derivat der Formel I in einer Mischung weiterer dieser Insulin Derivate unabhängig voneinander jeweils in gelöster, amorpher und/oder kristalliner Form vorliegen. 16. Mittel gemäss einem der Ansprüche 10 bis 15, dadurch ge kennzeichnet, dass ein Mittel hergestellt wird, welches eine geeignete Menge eines Hilfsmittels mit verzögernder Wirkung enthält. 17. Mittel gemäss Anspruch 16, dadurch gekennzeichnet, dass ein Mittel hergestellt wird, worin dieses Verzögerugs- prinzip in Kombination mit dem gesamten Wirkstoffanteil oder mit Teilen davon oder einem oder mehreren Insulin Derivaten der Formel I in einer Mischung angewandt wird. 18. Mittel gemäss einem der Ansprüche 10 bis 17, dadurch ge kennzeichnet, dass ein Mittel hergestelltwird1 welches verschiedene Insulin-Derivate der Formel I in Ko;Tbina- tion mit mehreren verschiedenen verzögernd wirkenden Hilfsstoffen enthalt.

Inventors: GEIGER, ROLF, PROF. DR., GRAU, ULRICH, DR., OBERMEIER, RAINER, DR.
Applicants: HOECHST AKTIENGESELLSCHAFT
Application year: 1984
Main classification: C07K7
IPC codes: A61K38, C07K14, A61P5, C07K1