PROCESS FOR THE DETERMINATION OF THE PERCUTANEOUS ABSORPTION OF A SUBSTANCE IN MAMMALS

Abstract: 1. A process for the determination of the quantity of a product which has penetrated into the body of a mammal after the skin of said mammal has been contacted with said product for a time T0 , in which process, after the contacting of skin/product and after washing of the epidermal zone treated : there is provided on the treated zone a zone of stratum corneum ; the quantity X of the product contained in the stratum corneum is determined ; and the quantity y is deduced from the quantity X by a relation Y = aX - b with y = 0 if Y is negative or zero, and y = Y if Y is positive, a and b being predetermined positive constants in said relation and independent of the product applied to the skin, all diagnostic methods applied to the human body or to the animal body within the ambit of Article 52 (4) EPC being excluded.

Description: PROCEDE POUR LA DETERMINATION DE L'ABSORPTION PERCUTANEE D'UN PRODUIT CHEZ LES MAMMIFERES L'invention concerne la détermination de l'absorption percutanée d'un produit chez les mammifères. On sait qu'il est particulièrement important de déterminer dans quelle mesure un produit mis en contact avec la peau d'un mammifère, notamment avec la peau de l'hotmne, est susceptible de passer la barrière cutanée et de se retrouver dans l'organisme. La détermination de l'absorption percutanée est notnmment très utile en cosmétique ou dans le domaine médical pour pouvoir définir des compositions cosmétiques ou médicinales permettant de limiter ou d'augmenter selon le cas la pénétration des produits utilisés à l'inté- rieur de l'organisme. Dans l'état de la technique, on a indiqué que le stratum corneum constituait la barrière principale s'opposant au passage des molécules à l'intérieur de ltorganisme et l'on a défini que le stratum corneum jouait un rible de réservoir pour les molécules appliquées sur la peau (voir notamment MALKINSON FD et FERGUSON EH, J. INVEST. DERMATOL. 25, 281-283, 1955). On a également constaté que les mesures de la pénétration in vivo sont fonction des techniques utilisées, de l'espèce animale étudiée, de l'emplacement anatomique soumis à l'application, de la concentration et de la nature des produits testés et de la durée du temps d'application. Jusqu'd ce jour, pour déterminer la quantité de produit ayant pénétré dans un organisme de mammifère après une application d'un produit, il était nécessaire de sacrifier le mammifère traité ; il en résulte qu'il était impossible d'obtenir des résultats précis concernant l'homme, ce qui constituait un obstacle pour l'amélioration des caractéristiques d'innocuité des compositions cosmétiques. La présente invention a pour but de proposer un procédé pour la détermination de l'absorption percutanée d'un produit chez les mammifères. Selon l'invention, on a consta té que si l'on déte='nait la quantité de produit qui, après l'application sur la peau, reste stockée dans le stratum corneun, on pouvait facilement en déduire pour les conditions d'application données et pour un mammifère donné, la quantité totale de produit qui sera introduite dans ltorga- nisme. Selon l'invention, on a constaté que le procédé de détermination était utilisable quel que soit le produit testé et qu'il suffît donc d'en définir les paramètres au moyen de produits ayant une totale innocuité pour pouvoir utiliser le procédé afin de déterminer l'absorption percutanée pour des produits éventuellement moins inoffensifs. La présente invention a, en conséquence, pour objet, un procédé pour la détermination de la quantité y d'un produit qui a pénétré dans le corps d'un mammifère après que la peau dudit marmnifère ait été mise en contact avec ledit produit pendant un temps tos procédé suivant lequel, après la mise en contact peau/produit et après lavage de la zone de la peau traitée, on prélève sur la peau traitée une zone de stratum corneum et on détermine la quantité X de produit contenu dans le stratum corneum prélevé, ce procédé étant caractérisé par le fait que l'on déduit la quantité y de la quantité X par une relation Y s aX - b avec y P O si Y est négatif ou nul et y = Y si Y est positif, formule dans laquelle a et b sont des constantes positives indépendantes du produit appliqué sur la peau. Dans un mode préféré de mise en oeuvre du procédé selon l'inventlon, on effectue le prélèvement de stratum corneum par arrachages (ou strippings) successifs des couches de stratum corneum ; on effectue, de préférence, six à quinze strippings successifs, chaque stripping étant réalisé au moyen d'un ruban adhésif que l'on applique sur la peau puis que l'on arrache ; on effectue le prélèvement de stratus corneum juste après la fin de la mise en contact du produit avec la peau ; on met en contact le produit testé avec la peau sous forme liquide, notamment en solution ou en formulation. Pour mieux faire comprendre l'objet de l'invention, on va décrire ci-après, des expériences réalisées sur le rat Hairless et sur l'homme pour définir des relations Y w aX-b utilisables pour ces mammifères. A. Expériences réalisées sur des rats Hairless On a testé la pénétration percutanée de dix molécules radiomarquése à savoir l'acide benzoïque (cycle 14C) à deux concentrations (respectivement produit A et B), l'acide acétyl (carboxyle 14C) salicylique (produit C), la déhydro (1, 2,6,7 3H) épiandrostérone (produit D), le salicylate (carbo xyle 14C) de sodium (produit E), la testostérone (4 14C) (produit F), la caféine (8 3H) (produit G), la thiourée produit H), le D-mannitol (1 14C) (produit I), l'hydrocortisone (1,2,6,7 3H) (produit J), la dexaméthasone (1,2 3H) (produit K). L'activité mise en oeuvre pour chaque produit et le solvant utilisé sont indiqués dans le tableau I. Pour chaque produit, on utilise un lot de douze rats Sprague Dawley Hairless femelles âgés de douze semaines pesant 240 # 10g. Les produits testés sont appliqués sur 1 cm2 de la peau du dos des animaux préalablement anesthésiés par administration intra péritonéale de gamma butyrolactone à la dose de 0,5 ml/kg. La surface d'application est délimi 2 tée par une cellule circulaire ouverte de 1 cm maintenue en place par une colle siliconée. Les produits sont déposés sur la peau à des doses et dans des solvants définis dans le tableau I. La durée de l'application a été limitée à 30 minutes. L'excès de produit se trouvant sur la zone traitée est ensuite éliminé par une série de deux lavages utilisant le solvant qui a servi de véhicule au produit (voir tableau I) et de deux rinçages à l'eau distillée ; on sèche ensuite légèrement la zone avec un coton. Le lot de douze animaux est alors partagé en deux groupes égaux. Le stratum corneum de la zone d'application de chaque animal du premier groupe est prélevé par une série de six strippings pratiquée a du ruban adhésif vendu par la société "3S' ; on sait que de la sorte, on enlève la majeure partie du stratum corneum, la couche cornée de la peau du rat Hairless ayant une épaisseur de 10 à 15 et étant constituée de 7 à 8 assises cellulaires. La radioactivité portée par chaque ruban est mesurée après digestion complète du matériau kératinique dans un produit "Soluène 350 (PackardY' puis addition du produit t'Dimilume 30 (Packard)@, on compte en scintillation liquide (Packard 460 C) ; on obtient ainsi les quantités de produit contenues dans le stratum corneum. les animaux du deuxième groupe, munis de collerettes afin d'éviter tout léchage, sont placés individuellement pendant 4 jours dans des cages à métabolisme. Pendant cette période, la nourriture (Extra-labo) et l'eau de ville sont fournies l'ad lnbitum". Les urines et les fécès sont collectées quotidiennement ; les fécès sont lyophilisées et homogénéisées ; après combustion des échantillons à 1' 'Oxidizer 306 (Packard)", on compte globalement la radio-activité en scintillation liquide. Après quatre jours, les animaux sont sacrifiés. Une série de six strippings est pratiquée sur la zone d'application afin de déterminer la quantité de produit non pénétrée 96 heures après le début de l'expérience. Le reste de la peau de la zone traitée (épiderme + derme) est prélevé et compté en scintillation liquide après digestion dans le produit ',Soluène 350". Les animaux sont lyophilisés, homogénéisés et les échantillons sont comptés en scintillation liquide après combustion. Pour les molécules marquées au tritit, on prend soin de compter la radio-activité présente dans l'eau de lyophilisation et dten tenir compte dans l'établissement du bilan final. La quantité totale de produit pénétrée en 96 heures est donc déterminée par addition des quantités retrouvées dans les excrétats (urine et fécès), ltépiderme et le derme du site d'application et dans le corps de Iranimal. Ces quantités sont données dans le tableau 11. Sur ce tableau ainsi que sur le tableau suivant, on a fait figurer le nombre n (qui est ici égal à 6) de sujets traités, ce qui signifie que chacun des résultats reportés dans ces tableaux représente la moyenne arith=Stique des n résultats donnés par l'expérience. Le tableau III indique les quantités de produit présentes dans le stratum corneum à la fin du temps d'application de 30 minutes et les quantités totales pénétrées en 96 heures. On constate que les quantités totales y peuvent tre obtenues à partir des quantités X présentes dans le stratum corneum après l'application grtce à la relation y = 1,644 X - 0,536. Il est clair que y étant toujours positif, la relation susmentionnée ne s'applique qu'à compter du moment où l'expression (1,644 - 0,536) est positive, y restant nul lorsque cette expression est négative, c'est à-dire lorsque la quantité de produit appliquée est suffisamment faible. Le traitement statistique des résultats montre que les variables y et X sont corrélées avec un coefficient de 0,998. Sur la figure 1, on a représenté, en coordonnées logarithmiques, les résultats fournis dans le tableau III, les points du graphique étant identifiés par les lettres qui désignent les produits correspondants. On a porté en ordonnées la quantité y de produit ayant pénétré dans l'organisme en 96 heures exprimée en nano-moles par cm2 et en abscisses la quantité x de produit présente dans le stratum corneum après 30 minutes d'application exprimée en nano 2 moles par cm également. B. Expériences réalisées en parallèle sur des rats Hairless et sur des hommes Les expériences qui viennent d'être décrites, réa- lisées sur dix molécules radiomarquées de propriétés physicochimiques très différentes, ont donc montré la relation lis néaire existant, pour une modalité d'application donnée, entre les quantités de substance présentes dans le réservoir du stratum corneum en fin d'application, c'est-à-dire après 30 minutes, et les quantités totales pénétrées en 4 jours, ce qui permet une approche prédictive de l'absorption percutanne des molécules chez cette espèce. On a pu également remarquer que cette relation est, pour une molécule donnée, indépendante de la dose administrée. Il restait donc à véri- fier que le mâne type de phénomène existe chez d'autres espèces et, en particulier, chez l'homme. L'étude ci-après établit la relation existant entre le réservoir du stratum corneum et l'absorption percutanée de substances, comparativement chez l'homme et chez le rat. On a testé la pénétration percutanée de quatre doses, respectivement 125, 250, 500 et 1000 nano-moles, d'une molécule radiomarquée, à savoir l'acide benzoique (cycle 14C). Le choix de l'acide benzoique a été guidé par l'innocuité de cette molécules son excellente absorption percutanée et sa rapide et quasi-totale élimination par voie urinaire L'acide benzol'que utilisé a été fourni par "The Radio-Chemical Center Amersham" L'activité spécifique mise en oeuvre pour ce produit est égale à 0,1 micro-Curie/nano-mole et 1es doses de ce produit ont été appliquées en solution dans l'éthylène-glycol auquel on a ajouté 10 % d'alkylphényl polyéthylèneglycol (agent tensio-actif non ionicue vendu sous le nom commercial "Triton X100") afin d'en augmenter la mouillabilité. Chaque dose à appliquer est contenue dans 20 1 du mélange précité. Pour chaque dose de produit, on utilise un lot de douze rats Sprague-Dawley Hairless femelles agies de douze semaines pesant 240 - lOg et un groupe de cinq à sept patients mâles, de race caucasienne, âgé de 25 + 25 + 0,8 ans et pesant 74 - 1,6 kg. Chez le rat, les doses du produit testé sont appli , sur 1 cm2 de la peau du dos de ces animaux préalablement anesthésiés par administration intrapéritonéale de ammabutyrolactone à la dose de 0,5 ml par kg. Chez l'homme, l'administration des différentes doses du produit a été pratiquée sur la face externe du bras, sur l cm2 de peau. Tant chez l'homme que chez le rat, la surface d'application est délimitée par une cellule circulaire ouverte de 1 cm maintenue en place par une colle siliconée (Tecsil). Les doses de produit, dans le solvant précité, sont déposées sur la peau, la durée de l'application étant limitée à 30 minutes. L'excès de produit se trouvant dans la zone traitée est éliminée rapidement par une série de deux lavages avec, à chaque fois, 300 microlitres d'un mélange éthanol/eau dans un rapport volumique 95/5, et de deux rinçages avec, à chaque fois, 300 microlitres d'eau distillée ; on sèche ensuite légèrement la zone avec un coton. A la fin de la procédure d'application, chaque lot de douze animaux est alors partagé en deux groupes égaux. Les animaux des premiers groupes sont utilisés pour déterminer les teneurs en acide benzoique présentes dans le réservoir du stratum corneum à la fin du temps d'application. La procédure utilisée pour cette détermination est identique à celle décrite précédemment. Les animaux des deuxièmes groupes sont utilisés pour la mesure des quantités totales d'acide benzofque pénétréesen 96 heures, obtenues par sommation des quantités retrouvées dans les excrétats (urine + fécès), dans l'épiderme et le derme de la zone traitée et dans le corps des animaux. La procédure utilisée pour cette détermination est identique à celle décrite précédemment. Chez l'homme, chaque groupe a d'abord reçu une dose d'acide benzolque, l'application ayant lieu sur 1 cm2 de la face externe du bras droit suivant la modalité d'application indiquée plus haut. L'absorption percutanée totale en 4 jours de l'acide benzoïque chez l'homme a été déduite du résultat de la mesure en scintillation liquide des urines émises pendant les 48 heures suivant l'application. L'étude des cinétiques d'éli mination urinaire de l'acide benzoique a montré que ltexeré- tion par cette voie est extrEmement rapide ; on a ainsi pu constater que, chez le rat, les quantités d'acide benzoïque trouvées dans les urines de 48 heures représentent 80 % des quantités pénétrées en 4 jours. Ce taux de recouvrement est en accord avec celui obtenu lors de l'administration par voie intra-veineuse de cette molécule. De plus, il a été démontré que l'acide benzoïque administré chez l'homme ou chez le rat par la voie orale était totalement retrouvé dans les urines de 24 heures. L'ensemble de ces données a donc permis de calculer chez l'homme la quantité totale d'acide benzoïque pénétrée en 4 jours à partir des quantités excrétées par voie urinaire en 48 heures, considérant que celles-ci représentent environ 80 X de la quantité totale absorbée. Afin de mesurer l'effet réservoir du stratum corna=4- chaque sujet reçoit 5 jours après la première application, sur la face externe du bras gauche, la même dose d'acide benzoique que lors de la première administration sur le bras droit. En fin de procédure d'application, 15 strippings sont pratiqués sur-la zone traitée, le principe de la mesure de la radioactivité présente dans chacun des strippings étant le même que celui précédemment décrit. Le tableau IV montre : 10) Chez le rat : - la distribution de l'acide benzoïque dans les voies d'excrétion urinaire et fécale ainsi que sa rétention corporelle ; - les taux de pénétration des doses d'acide benzoi- que 96 heures après leur administration ; et - les quantités d'acide benzoque présentes dans le stratum corneum à la fin du temps d'application, c'est-à- dire après 30 minutes. 20) Chez l'homme les quantités d'acide benzorque excrétées par voie urinaire dans les 48 heures suivant l'application ; - les taux de pénétration en 96 heures des différentes doses d'acide benzoique, calculés à partir des quantiés excrétées par la voie urinaire en 48 heures ; et - les quantités d'acide benzolque présentes dans la couche cornée à la fin de la période d'application, c'est à-dire après 30 minutes. Sur ce tableau, on a également fait figurer le nombre n de sujets traités, chacun des résultats reportés dans ce tableau représentant par conséquent la moyenne arithmssti- que des n résultats obtenus. Sur la figure 2, on a représenté, en coordonnées linéaires, les résultats fournis par le tableau IV, les points du graphique étant identifiés par les chiffres 1 à 4 qui correspondent à l'application d'une dose respectivement de 125, 250, 500 et 1000 nano-moles d'acide benzorque par cm2 de peau, les points matérialisés par des disques pleins noirs représentant les résultats obtenus pour l'homme et ceux matérialisés par de simples cercles étant ceux obtenus pour le rat. On a porté, en ordonnées, la quantité y de produit ayant pénétré dans l'organisme en 96 heures exprimée en nano-moles par cm2, et, en abscisses, la quantité x de produit présente dans le stratum corneum après 30 minutes d'application exprimée en nano-moles par cm2 également. Il est remarquable de voir que les points obtenus pour les deux espèces étudiées ici peuvent être considérés, pour la modalité particulière d'application, comme appartenant à la mme droite, du type y P aX- b, où a @ 1,83 et b - 0,52. 52. Le traitement statistique des résultats montre que les variables y et X sont correlées avec un coefficient de 0,998. On peut remarquer également que la droite repréoentée en traits pleins sur la figure 2 est pratiquement identique à la droite établie lors de l'étude décrite au paragraphe A, cette dernière droite étant représentée en traits pointillés sur la figure 2. Compte tenu des incertitudes des mesures, dues notamment aux différents lots d'animaux utilisés, on peut considérer que ces deux droites ne sont pas 'statistiquement" distinctes et que, par conséquent, les valeurs de a et b déterminées dans l'un et l'autre cas sont les mimes On constate qu'il suffit, pour pouvoir appliquer le procédé selon l'invention, de déterminer la droite correspondant à un mammifère donné et à une modalité d'application donnée, pour que la simple connaissance de la quantité de produits retenus dans le stratum corneum en fin d'application permette de savoir quelle est l'absorption percutanée totale dans l'organisme pour le produit considéré. Il est bien entendu que les modes de mise en oeuvre ci-dessus décrits ne sont aucunement limitatifs et pourront donner lieu à toute modification désirable, sans que l'on s'écarte pour cela du cadre de l'invention. TABLEAU I EMI11.1 --------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- <SEP> Véhicule <SEP> de <SEP> la <SEP> mo <SEP> lécule <SEP> appliquée <SEP> : <SEP> Qantité <SEP> Activitémise <SEP> Solution <SEP> de <tb> MOLECULES <SEP> P.M. <SEP> 20 <SEP> @1 <SEP> d'un <SEP> mélange <SEP> appliquée <SEP> en <SEP> oeuvre <SEP> rinçage <tb> <SEP> ethanol/eau <SEP> éthanol/eau <tb> <SEP> ------------------------------------------------------------------------------------------- <SEP> vol. <SEP> échanol/vol. <SEP> eau <SEP> n-moles/cm2 <SEP> micro-Curies <SEP> vol <SEP> éthanol/vol. <SEP> eau <tb> --------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- ACIDE <SEP> BENZOIQUE <SEP> 95/5 <SEP> 450 <SEP> 13,0 <SEP> 95/5 <tb> <SEP> 122 <SEP> 95/5 <SEP> 200 <SEP> 13,0 <SEP> 95/5 <tb> ---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- ACDE <SEP> ACETYL SALI <SEP> CYLIQUE <SEP> 180 <SEP> 95/5 <SEP> 200 <SEP> 4,0 <SEP> 95/5 <tb> ---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- DEHYDROEPI ANDROSTERONE <SEP> 288 <SEP> 95/5 <SEP> 200 <SEP> 83,0 <SEP> 95/5 <tb> ---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- SALICYLATE <SEP> DE <tb> SODIUM <SEP> 160 <SEP> 50/50 <SEP> 200 <SEP> 4,0 <SEP> 95/5 <tb> ---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- TESTOSTERONE <SEP> 290 <SEP> 95/5 <SEP> 200 <SEP> 12,5 <SEP> 95/5 <tb> ---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- CAFEINE <SEP> 194 <SEP> 95/5 <SEP> 200 <SEP> 19,5 <SEP> 95/5 <tb> ---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- THIOUREE <SEP> 76 <SEP> 95/5 <SEP> 200 <SEP> 12,5 <SEP> 95/5 <tb> ---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- MANNITOL <SEP> 182 <SEP> 25/75 <SEP> 200 <SEP> 1,5 <SEP> 25/75 <tb> ---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- HYDROCORTISONE <SEP> 369 <SEP> 95/5 <SEP> 200 <SEP> 10,5 <SEP> 95/5 <tb> ---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- DEXAMETHASONE <SEP> 392 <SEP> 95/5 <SEP> 200 <SEP> 99,5 <SEP> 95/5 <tb> ---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- TABLEAU II EMI12.1 -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- <SEP> EPIDERME <SEP> CORPS <SEP> TOTAL <SEP> PENETRE <SEP> EN <SEP> 96 <SEP> h <tb> <SEP> + <SEP> -------------------------- MOLECULES <SEP> URINES <SEP> FECES <SEP> DERME <SEP> DES <SEP> n-moles/cm2 <SEP> Z <tb> <SEP> zone <SEP> traités <SEP> ANIMAUX <SEP> DE <SEP> LA <SEP> ZONE <tb> <SEP> APPLIQUEE <tb> -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- ACIDE <SEP> BENZOIQUE <tb> 450 <SEP> nanomoles/cm2 <SEP> 71,2 <SEP> 6,25 <SEP> 1,70 <SEP> 0,16 <SEP> 79,30 <SEP> 17,60 <tb> <SEP> (2,90)* <SEP> (1,65) <SEP> (0,40) <tb> (0,02) <SEP> (3,60) <SEP> (0,80) <tb> 200 <SEP> nanomoles/cm2 <SEP> 24,80 <SEP> 1,32 <SEP> 0,50 <SEP> 0,01 <SEP> 26,60 <SEP> 13,30 <tb> <SEP> (0,50) <SEP> (0,30) <SEP> (0,05) <tb> (0,004) <SEP> (0,65) <SEP> (0,32) <tb> -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- ACIDE <SEP> ACETYL- <SEP> 5,40 <SEP> 0,43 <SEP> 0,85 <SEP> 0 <SEP> 6,70 <SEP> 3,35 <tb> SALICYLIQUE <SEP> (0,70) <SEP> (0,15) <SEP> (0,20) <SEP> (0,70) <SEP> (0,35) <tb> -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- DEHYDOEPI- <SEP> 1,67 <SEP> 3,00 <SEP> 0,19 <SEP> 0,43 <SEP> 5,28 <SEP> 2,65 <tb> ANDROSTERONE <SEP> (0,15) <SEP> (0,30) <SEP> (0,03) <SEP> (0,08) <SEP> (0,20) <SEP> (0,10) <tb> -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- SALICYLATE <SEP> DE <SEP> 3,50 <SEP> 0,48 <SEP> 1,00 <SEP> 0 <SEP> 4,98 <SEP> 2,50 <tb> SODIUM <SEP> (0,50) <SEP> (0,10) <SEP> (0,17) <SEP> (0,70) <SEP> (0,35) <tb> -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- TESTOSTERONE <SEP> 1,72 <SEP> 2,05 <SEP> 0,24 <SEP> 0,33 <SEP> 4,32 <SEP> 2,16 <tb> <SEP> (0,43) <SEP> (0,60) <SEP> (0,05) <SEP> (0,15) <SEP> (0,45) <SEP> (0,23) <tb> -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- CAFEINE <SEP> 2,52 <SEP> 0,42 <SEP> 0,15 <SEP> 0,65 <SEP> 3,73 <SEP> 1,86 <tb> <SEP> (0,25) <SEP> (0,07) <SEP> (0,01) <SEP> (0,06) <SEP> (0,30) <SEP> (0,15) <tb> -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- THIOUREE <SEP> 2,10 <SEP> 0,76 <SEP> 0,20 <SEP> 0,20 <SEP> 3,23 <SEP> 1,61 <tb> <SEP> (0,40) <SEP> (0,04) <SEP> (0,02) <SEP> (0,04) <SEP> (0,50) <SEP> (0,25) <tb> -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- MANNITOL <SEP> 1,60 <SEP> 0,42 <SEP> 0,30 <SEP> 0,30 <SEP> 2,63 <SEP> 1,32 <tb> <SEP> (0,20) <SEP> (0,15) <SEP> (0,10) <SEP> (0,10) <SEP> (0,17) <SEP> (0,08) <tb> -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- HYDOCORTISONE <SEP> 0,46 <SEP> 0,33 <SEP> 0,04 <SEP> 0,03 <SEP> 0,86 <SEP> 0,43 <tb> <SEP> (0,07) <SEP> (0,07) <SEP> (0,01) <SEP> (0,01) <SEP> (0,08) <SEP> (0,04) <tb> -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- DEXAMETHASONE <SEP> 0,16 <SEP> 0,30 <SEP> 0,10 <SEP> 0,04 <SEP> 0,60 <SEP> 0,30 <tb> <SEP> (0,02) <SEP> (0,05) <SEP> (0,02) <SEP> (0,01) <SEP> (0,06) <SEP> (0,03) <tb> -------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- Ecart - type (n-6) --------------------------------- TABLEAU III EMI13.1 ----------------------------------------------------------------------------------------------------------- DESIGNATION <SEP> NANO-MOLES <SEP> DE <SEP> PRODUITS <tb> <SEP> --------------------------------------------------- <SEP> DES <SEP> PRODUITS <SEP> TESTES <SEP> PRESENTES <tb> <SEP> PRODUITS <SEP> DANS <SEP> LE <SEP> STRATUM <SEP> CORNEUM <tb> <SEP> PENETREES <SEP> EN <SEP> 96 <SEP> HZURES <SEP> DE <SEP> LA <SEP> ZONE <SEP> TRAITEE <tb> <SEP> APRES <SEP> 30 <SEP> MINUTES <tb> <SEP> D'APPLICATION <tb> ------------------------------------------------------------------------------------------------------------ <SEP> ACIDE <SEP> RENZOIQUE <tb> <SEP> A <SEP> 450 <SEP> n-moles/cm2 <SEP> 79,30+ <SEP> 48,10 <tb> <SEP> (3,60)* <SEP> (5,10) <tb> <SEP> B <SEP> 200 <SEP> n-moles/cm2 <SEP> 26,60 <SEP> 17,60 <tb> <SEP> (0,70) <SEP> (1,50) <tb> ------------------------------------------------------------------------------------------------------------ <SEP> C <SEP> ACIDE <SEP> ACETYL- <SEP> 6,70 <SEP> 5,15 <tb> <SEP> SALICYLIQUE <SEP> (0,70) <SEP> (0,64) <tb> ------------------------------------------------------------------------------------------------------------ <SEP> D <SEP> DEHYDOEPI- <SEP> 5,28 <SEP> 1,95 <tb> <SEP> ANDROSTERONE <SEP> (0,20) <SEP> (0,40) <tb> ------------------------------------------------------------------------------------------------------------ <SEP> E <SEP> SALICYLATE <SEP> DE <SEP> 4,98 <SEP> 3,85 <tb> <SEP> SODIUM <SEP> (0,71) <SEP> (0,29) <tb> ------------------------------------------------------------------------------------------------------------ <SEP> F <SEP> TESTOSTERONE <SEP> 4,32 <SEP> 2,06 <tb> <SEP> (0,46) <SEP> (0,23) <tb> ------------------------------------------------------------------------------------------------------------ <SEP> G <SEP> GAFEINE <SEP> 3,73 <SEP> 2,76 <tb> <SEP> (0,30) <SEP> (0,34) <tb> ------------------------------------------------------------------------------------------------------------ <SEP> H <SEP> THIOUREE <SEP> 3,23 <SEP> 2,63 <tb> <SEP> (0,48) <SEP> (0,33) <tb> ------------------------------------------------------------------------------------------------------------ <SEP> I <SEP> MANNITOL <SEP> 2,63 <SEP> 2,22 <tb> <SEP> (0,17) <SEP> (0,37) <tb> ------------------------------------------------------------------------------------------------------------ <SEP> J <SEP> HYDROCCRTISONE <SEP> 0,86 <SEP> 0,93 <tb> <SEP> (0,08) <SEP> (0,15) <tb> ------------------------------------------------------------------------------------------------------------ <SEP> K <SEP> DEXAMETHASONE <SEP> 0,60 <SEP> 0,41 <tb> <SEP> (0,06) <SEP> (0,02) <tb> ------------------------------------------------------------------------------------------------------------ *Ecat-type (n@6) + nano-moles/cm2 ----------------------------------------- TABLEAU IV EMI14.1 ----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- <SEP> QUANTITES <SEP> PRESENTES <tb> <SEP> QUANTITES <SEP> TOTALES <SEP> TROUVEES <SEP> 4 <SEP> JOURS <SEP> APRES <SEP> ADMINISTRATION <SEP> TOPIQUE <SEP> DANS <SEP> LE <SEP> STRATUM <tb> <SEP> ACIDE <SEP> ---------------------------------------------------------------------------------------------------------- <SEP> BENZOIQUE <SEP> EPIDERME <SEP> CORNEUM <SEP> DE <SEP> LA <SEP> ZONE <tb> <SEP> APPLIQUE <SEP> URINES <SEP> FECES <SEP> + <SEP> CORPS <SEP> PENETRATION <SEP> TOTALE <SEP> TRAITES <SEP> APRES <SEP> 30 <tb> <SEP> (nanomole/cm2) <SEP> (a) <SEP> DERME <SEP> DES <SEP> EN <SEP> MINUTES <SEP> D'APPLICA <SEP> zone <SEP> traitée <SEP> ANIMAUX <SEP> 4 <SEP> JOURS <SEP> (b) <SEP> TION <tb> ----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- <SEP> rat <SEP> 2,52 <SEP> (c) <SEP> 0,14 <SEP> 0,05 <SEP> 0 <SEP> 2,71 <SEP> 1,69 <tb> <SEP> n <SEP> = <SEP> 5 <SEP> (0,43) <SEP> (d) <SEP> (0,03) <SEP> (0,008) <SEP> (0,44) <SEP> (0,18) <tb> <SEP> 125 <SEP> --------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- <SEP> homme <SEP> 0,92 <SEP> 1,14 <SEP> 0,81 <tb> <SEP> n <SEP> = <SEP> 5 <SEP> (0,06) <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> (0,07) <SEP> (0,04) <tb> ----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- <SEP> rat <SEP> 5,23 <SEP> 0,48 <SEP> 0,15 <SEP> 0,03 <SEP> 5,89 <SEP> 3,88 <tb> <SEP> n <SEP> = <SEP> 5 <SEP> (0,92) <SEP> (0,15) <SEP> (0,06) <SEP> (0,03) <SEP> (1,06) <SEP> (0,69) <tb> <SEP> 250 <SEP> --------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- <SEP> homme <SEP> 1,84 <SEP> 2,30 <SEP> 1,61 <tb> <SEP> n <SEP> = <SEP> 6 <SEP> (0,22) <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> (0,28) <SEP> (0,18) <tb> ----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- <SEP> rat <SEP> 8,24 <SEP> 1,06 <SEP> 0,22 <SEP> 0,05 <SEP> 9,57 <SEP> 5,47 <tb> <SEP> n <SEP> = <SEP> 5 <SEP> (0,72) <SEP> (0,37) <SEP> (0,05) <SEP> (0,04) <SEP> (0,74) <SEP> (0,64) <tb> <SEP> 500 <SEP> --------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- <SEP> homme <SEP> 3,65 <SEP> 4,56 <SEP> 2,64 <tb> <SEP> n <SEP> = <SEP> 5 <SEP> (1,20) <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> (1,49) <SEP> (0,36) <tb> ----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- <SEP> rat <SEP> 16,25 <SEP> 2,03 <SEP> 0,40 <SEP> 0,06 <SEP> 18,75 <SEP> 10,46 <tb> <SEP> n <SEP> = <SEP> 5 <SEP> (2,38) <SEP> (0,27) <SEP> (0,13) <SEP> (0,02) <SEP> (2,57) <SEP> (0,98) <tb> <SEP> 1000 <SEP> --------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- <SEP> homme <SEP> 7,12 <SEP> 8,90 <SEP> 5,01 <tb> <SEP> n <SEP> = <SEP> 7 <SEP> (2,10) <SEP> - <SEP> - <SEP> - <SEP> (2,63) <SEP> (1,06) <tb> ----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- (a) pour l'homme : quantités trouvées au cours des premières 48 heures (b) pour l'homme : valeurs corrigées à partir de (a) (c) exprimés en nanomoles par cm2 de zone d'application (d) écart - type

Claims: REVENDICATIONS 1 - Procédé pour la détermination de la quantité y d'un produit, qui a pénétré dans le corps d'un mammifère après que la peau dudit mammifère ait été mis en contact avec ledit produit pendant un temps to, procédé suivant lequel, après la mise en contact peau /produit et après lavage de la zone d'épiderme traitée, on prélève sur la peau traitée, une zone de stratum corneum ; et on détermine la quantité X de produit contenue dans le stratum corneum prélevé ; caractérisé par le fait que l'on déduit la quantité y de la quantité X par une relation Y - aX - b avec y - O si Y est négatif ou nul et y r Y si Y est positif, formule dans laquelle a et b sont des constantes positives indépendantes du produit appliqué sur la peau. 2 - Procédé selon la revendication 1, caractérisé par le fait que l'on effectue le prélèvement de stratum corneum par arrachages (6u strippings) successifs des couches de stratum corneum. 3 - Procédé selon la revendication 2, caractérisé par le fait que l'on effectue fi à quinze strippings successifs, chaque stripping étant réalisé au moyen d'un ruban adhésif que lon applique sur la peau puis que l'on arrache. 4 - Procédé selon l'une des revendications 1 à 3 > caractérisé par le fait que l'on effectue le prélèvement de stratum corneum-juste après la fin de la mise en contact du produit avec la peau. 5 - Procédé selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisé par le fait que l'on met en contact le produit testé avec la peau sous forme liquide.

Inventors: DUPUIS, DIDIER, LOTTE, CLAIRE, ROGUET, ROLAND, ROUGIER, ANDRE, Rougier, André
Applicants: L'OREAL
Application year: 1983
Main classification: A61B5
IPC codes: A61B5