PROCESS AND APPARATUS FOR HARVESTING THE ALLANTOIC LIQUID IN EMBRYONATED EGGS

Abstract: 1. A process for collecting an allantoic liquid containing substances and in particular a virus, for example an influenza virus, in embryonated eggs, comprising cropping the eggs and inspecting them, then introducing in the allantoidian cavity an aspiration needle for taking off the allantoic liquid, characterized by the fact that, after having taken off the allantoic liquid, there is introduced in said cavity an aqueous liquid in sufficient quantity for at least partly filling said cavity, the liquid is left in said cavity for a period between a few seconds and a few minutes, and then an aspiration needle is again introduced in the cavity and said liquid is aspirated.

Description: Procédé et dispositif de récolte de liquide allantolque dans des oeufs embryonnés. La présente invention a trait à un procédé de récolte de liquide allantoique chargé en substance et notamment en virus, par exemple en virus de la grippe, ou en autres substances biologiques ou chimiques, dans des oeufs embryonnés et à un dispositif pour la mise en oeuvre de ce procédé. La multiplication de certains virus, et notamment du virus de la grippe, dans le but de fabriquer des vaccins viraux, s'effectue sur oeufs embryonnés, notamment oeufs de poules, conservés en couveuse, par exemple pendant environ quatorze jours, l'injection ayant lieu au onzième jour. Pour récolter le virus, on prélève le liquide allantorque des oeufs, ce liquide, chargé en virus, étant ensuite traité pour la fabrication du vaccin proprement dit. Dans la pratique, la récolte s'effectue sur des machines, conçues à cet effet, dans lesquelles les oeufs, rangés dans des alvéoles, progressent pas à pas. Les oeufs passent tout d'abord dans un poste de décalottage où ils sont ouverts et inspectés visuellement, puis parviennent de là dans un poste de prélèvement. Ce dernier contient une pluralité d'aiguilles verticales au pas des oeufs, ces aiguilles étant mobiles pour pénétrer dans la cavité allan toidienne et aspirer le liquide. Les oeufs sont ensuite rejetés par basculement dans une poubelle. L'opérateur qui inspecte visuellement les oeufs décalottés sélectionne les oeufs non utilisables, par exemple à l'aide d'un clavier actionnant un dispositif de commande approprié de sorte que les aiguilles correspondant à ces oeufs ne pénètrent pas dans l'oeuf lorsque les oeufs sont arrivés au poste de prélèvement. L'aspiration du liquide allantolque par les aiguilles d'aspiration doit évidemment se faire sans crever le vitellus et il est donc nécessaire de limiter suffisamment le mouvement de descente des aiguilles dans les oeufs pour être certain de ne pas aspirer autre chose que le liquide allantoique, quelle que soit la conformation intèrne relativement variable de l'oeuf embryonné. L'invention a pour but de perfectionner un tel procédé et d'augmenter le rendement de la récolte sans risque de recueillir des éléments indésirables. Un autre objectif de l'invention est de fournir un tel procédé qui se prête à une mise en oeuvre automatique. Un autre objectif encore de l'invention est de fournir un dispositif permettant de façon simple et économique la mise en oeuvre de ce procédé. L'invention a pour objet un procédé de récolte de liquide allantolque et notamment de liquide allantoique chargé en virus de la grippe dans des oeufs embryonnés, dans lequel on décalotte les oeufs et on les inspecte, puis on introduit dans la cavité allantoidienne une aiguille ou tubulure d'aspiration pour prélever le liquide allantolque, caractérisé par le fait qu'après avoir prélevé le liquide allantoique, on introduit dans ladite cavité un liquide aqueux en quantité suffisante pour remplir au moins partiellement ladite cavité, que l'on laisse le liquide dans la cavité pendant une durée comprise entre quelques secondes et quelques minutes, puis que l'on introduit dans la cavité une nouvelle fois une aiguille ou tubulure d'aspiration et que l'on aspire ledit liquide. Comme liquide aqueux, on peut avantageusement utiliser une solution aqueuse dont la nature est compatible avec l'utilisation ultérieure du liquide traité pour la réalisation d'un vaccin. Ce liquide peut être avantageusement une solution de citrate de sodium, par exemple de l'ordre de 0,125 M dans l'eau distillée. En variante, on peut également utiliser de façon avantageuse une solution physiologique de chlorure de sodium ou des solutions tampons telles que par exemple le tampon .B.S. On peut avantageusement ajouter à ces solutions des enzymes telles que par exemple la neuraminidase ou des tensio-actifs. En variante, on peut également utiliser une solution gazeuse formant des bulles, ladite solution pouvant être soumise, au moment de l'utilisation, à des ultra-sons pour former une sorte de bouillonnement de bulles. La durée pendant laquelle on laisse la solution dans la cavité allantoldienne avant l'aspiration est avantageusement au moins égale à une minute et de préférence de l'ordre d'une minute trente, mais elle peut être bien plus importante selon les cas. La quantité de liquide introduite dans la cavité allantoldienne est de préférence de l'ordre de 7 à 8 ml par oeuf. Dans un mode de mise en oeuvre préféré de l'invention, on introduit le liquide dans la cavité allantoldienne sous forme d'un jet à pression relativement faible. De préférence, on peut utiliser un jet conique et, de façon avantageuse, le jet peut être conçu de façon à laver la paroi de la cavité allantoldienne au fur et à mesure de la descente de l'aiguille dans ladite cavité. On constate, de façon surprenante, que l'invention permet d'accroître le rendement de la culture de virus sur oeufs embryonnés de tordre de 25 à 30 %, ce qui représente une grande importance pratique si l'on tiertcompte du très grand nombre d'oeufs nécessaires à la production industrielle de vaccins. L'invention a également pour objet un dispositif pour la mise en oeuvre de ce procédé et comportant des ensembles successifs d'alvéoles recevant des oeufs, des moyens pour faire progresser pas à pas lesdits ensembles d'alvéoles avec leurs oeufs, un poste de décalottage, des moyens d'inspection et de sélection des oeufs non utilisables, un poste de prélèvement du liquide allantoique comprenant une pluralité d'aiguilles ou tubulures de prélèvement, à savoir une par oeuf, susceptibles d'un mouvement vertical pour pénétrer dans les cavités allantoldiennes des oeufs décalottés et prélever par aspiration le liquide allantolque, les aiguilles correspondant aux oeufs sélectionnés non utilisables n'effectuant pas le prélèvement, et des moyens pour évacuer les oeufs, caractérisé en ce qu'il comporte des moyens pour introduire dans les cavités allantoldiennes une quantité déterminée de liquide aqueux, et des moyens comprenant des aiguilles ou tubulures d'aspiration pour prélever, après une durée d'attente, ledit liquide par aspiration. Dans une forme de réalisation préférée7 lesdits moyens d'introduction de liquide dans les cavités allantoldiennes sont disposés en un poste situé en aval du poste de prélèvement du liquide allantolque et, de préférence, les moyens de prélèvement dudit liquide aqueux sont également disposés en un poste situé en aval dudit poste d'introduction du liquide. Dans cette dernière forme de réalisation, la distance entre le poste d'introduction du liquide et le poste de prélèvement du liquide introduit peut avantageusement être choisie de façon telle que plusieurs ensembles d'alvéoles se déplacent simultanément entre lesdits deux postes, ce qui permet de garder le liquide introduit dans les cavités allantoidiennes suffisamment longtemps tout en conservant les cadences élevées de fonctionnement des dispositifs antérieurs qui ne possèdent qu'un seul poste de prélèvement. Dans une forme de réalisation préférée du dispositif selon l'invention, les moyens d'introduction du liquide aqueux dans la cavité allantoidienne comprennent des tubulures éventuellement susceptibles d'un ajustement vertical au-dessus des cavités allantoidiennes, ces aiguilles se terminant par une buse formant un jet conique sous faible pression. De façon avantageuse, l'information entrée par l'opérateur et ayant trait à la position des oeufs non utilisables sélectionnés pour ne pas être récoltés, est prélevée et mémorisée pendant la durée de la progression des oeufs vers le poste d'introduction de liquide, puis le poste de prélèvement de liquide introduit, de façon à ne pas actionner les buses et les aiguilles d'aspiration correspondantes. D'autres avantages et caractéristiques de l'invention apparaîtront à la lecture de la description suivante, faite à titre d'exemple non limitatif et se référant au dessin annexé dans lequel La figure 1 représente une vue schématique en perpective d'un dispositif selon l'invention. La figure 2 représente une vue de la partie inférieure d'une aiguille de prélèvement. La figure 3 représente une vue de la partie inférieure, avec une coupe partielle, d'une aiguille d'injection: On se réfère tout d'abord à la figure 1. Le dispositif représenté comporte successivement les postes suivants : poste d'introduction 1, poste de décalottage 2, poste d'inspection 3, poste de prélèvement de liquide allantolque 4, poste d'introduction de liquide 5, poste de prélèvement de liquide 6, et poste d'évacua tion 7 (par basculement dans une poubelle). Les oeufs sont transportés d'un poste à l'autre dans les plateaux 8 représentés de façon schématique et comportant une pluralité d'alvéoles régulièrement disposés, contenant chacun un oeuf. Le transport des plateaux 8 s'effectue grâce à une première paire de chaînes latérales sans fin 9 s'étendant du poste 1 au poste 6 puis à une deuxième paire de chaînes 10 similaires, situées dans le prolongement des chaînes 9 et s'étendant du poste 5 au poste d'évacuation 7. Bien entendu, une seule paire de chaînes de grande longueur pourrait être prévue ou tout autre moyen de convoyage. Ces chaînes convoyeuses sont animées d'un mouvement d'avance pas à pas permettant de faire défiler les plateaux 8 successivement dans les différents postes. Le plateau mis en place sur les chaînes au poste 1 est alors d'abord convoyé jusqu'au poste 2 où il s'immobilise. On effectue le décalottage des extrémités supérieures des oeufs placés dans les alvéoles grâce par exemple à une lame transversalement mobile 11, les calottes sectionnées étant évacuées d'une façon en soi connue. Le plateau passe ensuite au poste 3. Un miroir 12 convenablement incliné y permet à l'opérateur de repérer ceux des oeufs qui, en raison de leur état déficient, ne doivent pas faire l'objet d'un prélèvement. Il sélectionne ces oeufs en introduisant, dans des moyens électroniques en soi connus, les coordonnées de chaque oeuf sélectionné sur le plateau, grâce par exemple à un clavier numérique. Les informations correspondantes sont conservées dans une première mémoire pour que, lorsque le plateau 8 se trouve amené à l'étape suivante sous le poste de prélèvement 4, les oeufs sélectionnés ne fassent l'objet d'aucun prélèvement. Le poste de prélèvement 4 comporte une pluralité d'aiguilles de prélèvement 13 disposées au-dessus des chaînes de convoyage, ces aiguilles 13 étant mobiles verticalement depuis une position élevée au-dessus des oeufs vers une position abaissée dans laquelle elles pénètrent dans la cavité allantoidienne des oeufs respectifs en s'arrêtant à une distance suffisante avant le fond de cette cavité pour ne pas atteindre le vitellus. Lorsque les aiguilles 13 sont mises en place dans la cavité allantoldienne, à l'exception des aiguilles correspondant aux oeufs sélectionnés qui restent maintenues dans leur position élevée, on effectue une aspiration du liquide allantoque par les aiguilles 13. On voit sur la figure 2 qu'une telle aiguille 13 présente avantageusement une extrémité 14 se terminant de façon conique en 15, cette extrémité étant pourvue d'une pluralité d'orifices d'aspiration 16 débouchant dans un canal central (non représenté), le liquide ainsi prélevé étant ensuite repris par des tubulures convenables vers un récipient de prélèvement. A la fin du prélèvement, qui dure par exemple 1,2 seconde, les aiguilles 13 se déplacent à nouveau vers le haut et sortent des cavités allandoîdiennes des oeufs. Le mouvement ultérieur des chaînes 9 provoque alors le passage du plateau 8 sur les chaînes 10 et le positionnement du plateau 8 sous le poste d'introduction de liquide 5. La quantité de liquide allantoique recueillie au poste 4 varie en général de 6 à 13 ml par oeuf et il reste en moyenne 1 ml de liquide allantoique dans chaque oeuf, cette quantité variant en fait dans des proportions assez condidérables suivant les oeufs individuels. Le poste 5 comporte une pluralité d'aiguilles ou tubulures d'introduction de liquide 17, également disposées au pas des oeufs dans les alvéoles et qui sont immobiles. On a représenté sur la figure 3 une vue d'une telle aiguille 17 qui comporte un passage central 18 dans l'extrémité inférieure duquel est vissée une pièce creuse se terminant par une buse tronconique 19, de préférence avec un faible angle d'ouverture. L'injection du liquide, qui passe par le passage central 18 puis qui sort sous forme d'un jet conique évasé hors de la buse 19,s'effectue lorsque l'oeuf est situé sous l'aiguille. La distance verticale entre la partie supérieure de l'oeuf décalotté et la buse 19 est de préférence réglable entre O et 10 mm. Comme on le voit sur le dessin, la distance entre le poste 5 et le poste de prélèvement de liquide injecté 6 est relativement importante de façon qu'entre l'injection de liquide et le prélèvement, il s'écoule une durée d'une minute trente. Le poste 6 est, en ce qui concerne sa construction, identique au poste 4 et présente une pluralité d'aiguilles 13 disposées de la même façon au pas des alvéoles. Lorsque le plateau 8 s'est immobilisé sous le poste 6, les aiguilles 13 descendent puis pénètrent dans les cavités allantoldiennes des oeufs et aspirent le mélange formé par le liquide injecté et la quantité résiduelle de liquide al lantoique non prélevée au poste 5. Cette aspiration fournit environ 5 ml de ce mélange liquide en moyenne par oeuf. Le liquide prélevé est soit traité séparément, soit de préférence purement et simplement mélangé à la récolte de liquide allantoique provenant du poste 5. Après relèvement des aiguilles 13 du poste 6, le plateau 8 peut être évacué par le poste d'évacuation 7. Par ailleurs, pour chaque plateau 8, les informations concernant les oeufs sélectionnés ont également été adressées à une deuxième mémoire qui permet d'éviter, pour les oeufs sélectionnés, le fonctionnement des aiguilles 17 du poste 5 et des aiguilles 13 du poste 6. Le liquide utilisé est de préférence du citrate de sodium 0,125 M dans de l'eau distillée. Cependant, on peut utiliser un grand nombre d'autres solutions, telles que les solutions physiologiques de chlorure de sodium, différentes solutions salin.es habituellement utilisées ou toutes solutions tampon convenables. L'augmentation de rendement en virus grippal observée en moyenne est de l'ordre de 25 à 30 %, ce qui est nettement supérieur au pourcentage représenté par le volume de liquide allantoique non récolté dans le poste 3. Ce supplément de rendement provient du fait que du virus non présent dans le liquide allantoique est extrait par le liquide injecté, et recueilli. Bien que l'invention ait été décrite à propos d'une forme de réalisation particulière, il est bien entendu qu'elle n'y est nullement limitée et qu'on peut lui apporter diverses modifications, sans pour cela s'éloigner ni de son cadre ni de son esprit.

Claims: REVENDICATIONS 1. Procédé de récolte de liquide allantoique chargé en substances et notamment en virus, par exemple en virus de la grippe, dans des oeufs embryonnés, dans lequel on décalotte les oeufs et on les inspecte, puis on introduit dans la cavité allantoldienne une aiguille d'aspiration pour prélever le liquide allantolque, caractérisé par le fait qu'après avoir prélevé le liquide allantolque, on introduit dans ladite cavité un liquide aqueux en quantité suffisante pour remplir au moins partiellement ladite cavité, que l'on laisse le liquide dans ladite cavité pendant une durée comprise entre quelques secondes et quelques minutes, puis que l'on introduit dans la cavité unenouvelle fois une aiguille d'aspiration et que l'on aspire ledit liquide. 2. Procédé selon la revendication î, caractérisé par le fait que l'on laisse le liquide dans la cavité pendant une durée supérieure à une minute. 3. Procédé selon l'une des revendications 1 et 2, caractérisé en ce que l'on introduit le liquide en dirigeant un jet de liquide dans la cavité. 4. Procédé selon la revendication 3, caractérisé en ce que l'on utilise un jet conique de faible angle à faible pression. 5. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, caractérisé en ce qu'on utilise comme liquide un liquide choisi dans le groupe formé par les solutions de citrate de sodium, les solutions physiologiques de chlorure de sodium, les solutions tampon, et les solutions à bulles. 6. Procédé selon la revendication 5, caractérisé en ce que l'on ajoute à la solution des enzymes et/ou des tensio-actifs. 7. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que la quantité de liquide injecté est de l'ordre de 7 à 8 ml par oeuf. 8. Dispositif pour la mise en oeuvre du procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, et comportant des ensembles successifs d'alvéoles (8) recevant des oeufs, des moyens (9,10) pour faire progresser pas à pas lesdits ensemble successifs (9) d'alvéoles recevant les oeufs, un poste d'inspection et de sélection (3) des oeufs non utilisables, un poste de décalottage (2), un poste de prélèvement de liquide allantolque (4) comprenant une pluralité d'aiguilles de prélèvement (13), à savoir une par oeuf, susceptibles d'un mouvement vertical pour pénétrer dans les cavités allantoidiennes des oeufs décalottés et prélever par aspiration le liquide allantolque, les aiguilles correspondant aux oeufs sélectionnés non utilisables n'effectuant pas le prélèvement, et des moyens pour évacuer les oeufs, caractérisé en ce qu'il comporte des moyens (5,17) pour introduire dans les cavités allantoldiennes une quantité déterminée de liquide aqueux et des moyens (6) comprenant des aiguilles d'aspiration (13) pour prélever, après une durée d'attente, ledit liquide par aspiration. 9. Dispositif selon la revendication 8, caractérisé en ce que lesdit moyens d'introduction de liquide (5,17) et lesdits moyens de prélèvement (6,13) sont disposés en des postes (5,6) successivement placés en aval du poste de prélèvement de liquide allantolque (4). 10 . Dispositif selon la revendication 9, caractérisé en ce qu'une distance importante sépare ledit poste d'injection (5) dudit poste de prélèvement de liquide injecté (6), afin de permettre au liquide de séjourner dans les cavités allantoidiennes pendant la durée nécessaire. 11. Dispositif selon l'une quelconque des revendications 8 à 10, caractérisé en ce que lesdits moyens pour introduire dans les cavités allantoidiennes une quantité déterminée de liquide aqueux, comportent des aiguilles ou tubulures (17) munies d'un passage intérieur (18) débouchant dans une buse d'injection (19). 12. Dispositif selon la revendication 11, caractérisé en ce que ladite buse adresse un jet de forme généralement conique avec une faible ouverture.

Inventors: GALY, MICHEL GERMAIN HENRI
Applicants: INSTITUT MERIEUX (SOCIETE ANONYME)
Application year: 1982
Main classification: C12M3
IPC codes: C12N7, C12M3