METHOD OF PERFORMING CHEMICAL OR BIOLOGICAL ANALYSES AS WELL AS DEVICE AND INSTALLATION FOR CARRYING OUT THIS METHOD

Abstract: 1. A method of carrying out chemical-biological analyses according to which use is made of unit doses of reagents, and in conformity with which the absorption is effected of a unit dose of biological reagents, liquid or in solution, on a solid support constituted by a porous substance, particulary paper, by adding a known volume of an aqueous solution of these reagents in a known concentration, drying it and desorbing it from its support at the time of its use through the action of an appropriate aqueous solvent, it being possible for the evaporation of the water contained in the absorbed solution to be effected in the open ar, in dehydrated air, or in a lyophilizer, a process characterised in that the addition is made to the reagents, prior to their absorption, of an agent able to accelerate desorption, constituted by a protein and particularly bovine serum-albumin.

Description: "Procédé de mise en oeuvre d'analyses en chimie-biologique ainsi que dispositif et installation permettant la mise en oeuvre de ce procédé." La présente invention a pour objet un procédé de mise en oeuvre d'analyses en chimie biologique ainsi qu'un dispositif et un appareillage permettant la mise en oeuvre de ce procédé. Depuis longtemps, on a cherché à effectuer de manière automatique, diverses analyses habituelles en chimie biologique, et par suite, un certain nombre de procédés ainsi que de dispositifs ont déJi été proposés sur le marché. Ces dispositifs et appareillages sont basés sur des technologies différentes, parmi lesquelles on peut noter le transfert des liquides par pompes péristaltiques (Technicon), ou le transfert des liquides par la force centrifuge (Centrifichem, Cobas). Depuis quelques temps, on a proposé des sys tèmes séquentiels, c'est-à-dire réalisant automatiquement plusieurs étapes de 1' analyse qui utilisent un dispositif jetable à dose unitaire des réactifs. Ces appareillages, de par leur c8té pratique et leur faible coût de revient, sont appelés, dans l'avenir, à connaître un développement important, et attirent de plus en plus l'intérêt des techniciens. Parmi les exemples de tels types d'appareil lage qui ont dé été proposés, on peut noter le système ÂCÂ de tUPON? DE NEMOURS qui utilise des cassettes de ré- actifs constituées d'une enveloppe de plastique souple accrochée b une barrette rigide, Dans ce dispositif, la barrette supporte un code et l'enveloppe plastique est équipée de plusieurs cavités qui contiennent des réactifs en solution ou sous forme de comprimés, et une cavité qui sert au mélange de l'échantillon et des réactifs. Par ailleurs, il a également été mis au point une installation permettant l'utilisation de ces cassettes de manière totalement automatique. Dans le même ordre d'idée, on peut mentionner également le dispositif Sktachem de KODAE qui utilise des films de 30 x 40 mm environ, formés de plusieurs couches de papier t certaines couches renferment les réactifs nécessaires, la couche supérieure est destinée à assurer la bonne répartition de l'échantillon déposé à la surface et la couche inférieure sert à réfléchir le faisceau lumineux utilisé pour le dosage par réflexion à travers les couches semi-transparente s. Cependant, les dispositifs et appareillages mentionnés ci-dessus ne sont pas sans présenter un certain nombre d'inconvénients, étant donné que l'utilisation de réactifs sous forme de doses unitaires se heurte à la difficulté de conservation de certains des réactifs utilisés en chimie biologique. En effet, certains de ces réactifs d'origine biologique (principalement les enzymes et les anticorps) doivent autre lyophilisés ou mis sous forme de comprimés, ce qui augmente notablement la difficulté de fabrication et la longueur nécessaire à la mise en oeuvre des analyses. La présente invention a pour objet de-remé- dier à ces inconvénients, tout en proposant un procédé, un dispositif et un appareillage permettant d'utiliser les avantages des solutions mentionnées ci-dessus, c'est-b-dire l'utilisation de "cassettes" renfermant des doses unitaires de réactifs spécifiques aux tests, dans lesquelles il ne reste plus qu'à ajouter l'échantillon à doser et un diluant, la cassette contenant la dose de réactifs étant ensuite purement et simplement jetée. À cet effet, la présente invention se rapporte à un procédé de mise en oeuvre d'analyses en chimie biologique par lequel on utilise des doses unitaires de réactifs, caractérisé en ce que l'on absorbe une dose unitaire de réactifs biologiques liquides ou en solution sur un support solide constitué par une substance poreuse, notamment du papier, on la sèche et on la désorbe de son support au moment de son utilisation par action d'un solvant aqueux approprié. Il est en effet reconnu qu'une alternative à la conservation par lyophilisation des produits d'origine biologique est l'introduction de ce produit dans une matrice poreuse et rigide qui lui sert de protection. La présente invention est donc basée sur cette propriété qu'ont les substances poreuses, et plus particu lièrement certains types de papier, de maintenir intactes les propriétés des substances biologiques qui y ont été absorbées en solution puis séchées. Il s'agit là d'un procédé original, étant donné qu'il comporte une étape de désorption du réaction biologique de son support, par action d'un solvant aqueux approprié. Conformément à l'invention, le matériau absorbant peut être du papier et plus particulièrement les papiers tels que ceux Réf. 2992 de Schleider et Schull et Réf. 818 de Macherey-Nagel, du coton sous différentes formes absorbantes, ou également des fibres synthétiques sous des formes absorbantes. L'objectif est d'obtenir une matrice semi-rigide poreuse qui protégera les substances biologiques. Selon une autre caractéristique de l'invention, pour réaliser l'absorption de la dose unitaire de réactifs, on ajoute un volume connu d'une solution aqueuse de ces réactifs, à une concentration connue, ltévaporation de l'eau contenue dans la solution absorbée pouvant s'ef- fectuer à l'air libre, sous air deshydraté ou dans un lyophilisateur. Dans tous les cas, la stabilité est assurée selon des conditions de séchage qui peuvent varier d'une substance à l'autre mais qui nécessitent toujours une deshydratation assez complète. Par ailleurs, il a été également reconnu que, selon le support solide choisi, la substance à protéger désorbe plus ou moins vite. En conséquence, et selon une autre caractéristique de l'invention, on ajoute au réactif, préalablement à son absorption, un agent susceptible d'accélérer sa désorption, tel que par exemple une protéine. Par exemple, dans le cas des enzymes et des anticorps, on ajoute une quantité de sérum albumine bovine égale à 5 à 20 fois la quantité pondérale du réactif. Par ailleurs, et selon une autre caractéristique de l'invention, l'étape de désorption se compose en fait de deux étapes qui peuvent être dans certains cas quasi-simultanée s. En effet, on réhydrate tout d'abord le support solide par une solution aqueuse et quelque fois tamponnée, telle que par exemple le tampon phosphate pR 7,4 , ensuite, on sépare de ce support solide la solution aqueuse imprégnante. Les modalités de mise en oeuvre du procédé décrit ci-dessus, ainsi que les dispositifs tels que les cassettes utilisées, peuvent être de plusieurs types, permettant une mise en oeuvre plus ou moins automatisée, sans pour cela sortir du cadre de l'invention. Notamment, et selon une autre caractéristique de l'invention, on dépose la dose unitaire de réactif (s) sur un ou plusieurs support (8) constitué (s) par un disque de papier que l'on laisse sécher à l'air, puis, on place sous atmosphère sèche le ou les disque (s) de papier dans un tube similaire au tube en plastique couramment utilisé en biologie que lton ferme et ouvre pour y insérer la substance à analyser et effectuer la désorption, puis on aspire la solution contenue dans le tube pour la transférer dans un appareillage d'analyse biologique connu en lui-meme, notamment un photomètre à cellule de lecture fixe. 11 s'agit là en fait du processus d'application le plus simple du procédé qui est à la base de la présente demande; ce procédé particulièrement simple est bien adapté aux dosages des analyses non enzymes telles que l'urée, le glucose, le cholestérol, l'acide urique, etc.0. Dans le cas où le test nécessite l'addition de deux réactifs, non pas simultanément, mais à des temps dif ±dents, il est possible que le second réactif soit déposé hors du tube, sur une feuille de papier mise dans une enveloppe plastique souple et étanche. Ces doses unitaires sont alors empilées en paquets et disposées dans un magasin alimentant par un système à tiroir un système perforant qui découpe des disques au diamètre coulu dans le papier et les enveloppes. Le mandrin perforant pousse ensuite les disques dans le tube situé en-dessous. La mesure optique ne s'effectue bien entendu pas dans le tube à cause de la présence des disques de papier, mais par exemple dans un photomètre à cellule de lecture fixe où la solution contenue dans le tube est aspirée. Une variante du procédé ci-dessus est carac térisée en ce que l'on pose les disques de papier sur lesquels ont été déposés les réactif s sur un support venant se placer à l'extrémité supérieure d'un tube d'analyse biolo gique de type classique, on ajoute dans le tube la substance à analyser et sur ce ou ces disque (s) de papier les liquides nécessaires à la mise en oeuvre de l'étape de désorption, puis on pousse les liquides réactionnels à l'intérieur du tube en exerçant une pression d'air sur son sommet, et on effectue l'analyse notamment à l'aide d'un appareillage de mesure optique. Lors de la mise en oeuvre de ce procédé, il est nécessaire que la décroissance de la pression soit réalisée lentement afin d'éviter que les disques ne soient projetés au-dessus du tube. Selon l'invention, et dans certains cas particuliers, pour lesquels la substance à analyser est constituée par une substance pouvant elle aussi être absorbée et désorbée facilement, telle que par exemple le sang, on peut également utiliser le processus ci-dessus en absorbant en plus cette substance à analyser sur un support solide tel qu'un disque de papier similaire au support utilisé pour le ou les réactifs. Dans ce cas, la désorption des substances à analyser s'effectue d'une manière identique à la désorption des doses unitaires de réactifs. La présente invention se rapporte également à un dispositif permettant la mise en oeuvre du procédé décrit ci-dessus. Ce dispositif est caractérisé en ce qu'il se compose d'un tube d'analyse de type classique ainsi que d'un support venant se placer à son extrémité supérieure. Cependant, dans le cas où pour réaliser l'analyse, au moins deux réactifs doivent être ajoutés à des temps différents, il devient impossible d'utiliser des tubes d'analyse de type classique, tels qu'ils ont été décrits ci-dessus. À cet effet, la présente invention propose également un dispositif permettant la mise en oeuvre du procédé décrit ci-dessus, dans le cas où plusieurs réactifs doivent être ajoutés à des temps différents. Ce dispositif est caractérisé en ce qu'il se compose d'une cassette en forme de parallèlépipède creux en matériau plastique dont l'un des petits côtés est ouvert et destiné à recevoir un bouchon supportant au moins deux canes en plastique ouverts à leurs extrémités équipés chacun d'un cane en papier filtre destiné chacun à recevoir une solution de réactifs, le bouchon comportant en outre, un trou destiné à permettre l'introduction des substances à analyser. Les canes en plastique sont en fait identiques pour leur forme à ceux utilisés dans les pipettes à embout jetable. Bien entendu, ils seront prévus en nombre correspondant au nombre de réactifs à utiliser. Dans le cas oh, comme mentionné précédemment, la substance à analyser est elle aussi absorbée sur un support solide similaire à celui où sont absorbés les réactifs, le trou destiné à permettre l'introduction des substances à analyser peut entre supprimé et un cône en plastique sup plémentaire est prévu. La présente invention se rapporte également à une installation permettant, notamment à partir du dispositif décrit ci-dessus, la mise en oeuvre de façon automatique du procédé objet de l'invention. Cette installation est caractérisée en ce qu'elle se compose d'un poste d'échantillonnage, équipé d'un diluteur dans lequel on prélève la substance à analyser et on l'introduit avec un volume donné de diluant dans la cassette, un poste d'analyse dans lequel on effectue l'introduction de la cassette ainsi que de données sVr le patient, et le dosage à effectuer dans l'appareillage d'analyses biologiques, ainsi qu'un magasin de stockage des cassettes. Le poste d'échantillonnage, ainsi que le magasin de stockage des cassettes, sont en fait des disposi tifs qui sont connus en eux-mmes, et ne nécessitent donc pas une description plus précise dans le cadre de cet ex- posé. Le diluteur peut être un produit commercial actuellement disponible; il en existe beaucoup de modèles dont certains sont très satisfaisants. Le magasin de cassettes, s'il doit entre construit aux dimensions des cassettes ne comporte aucune innovation particulière. Il suffit simplement que l'accès à tous les types différents de cassettes soit facile et rapide. Un tourniquet portant un nombre de magasins verticaux correspondant au nombre de cassettes différentes, avec prélèvement manuel, simple par glissement au bas du magasin, donne toute satisfaction. Selon une autre caractéristique de l'invention, le poste d'analyse comporte deux disques dont l'un est fixe et dont l'autre est mobile selon un mouvement pas-à-pas et comporte à sa périphérie des orifices destinés à recevoir les cassettes d'analyse; les cassettes sont maintenues par la table tournante, mais glissent sur la table fixe, et les deux disques sont situés à une certaine distance l'un de 1' autre pour permettre l'insertion de l'appareillage d'analyse biologique, notamment des conduits de lumière du dispositif de mesure optique. Les dispositifs permettant la mise en oeuvre du procédé selon l'invention, sont décrits plus en détails en se référant aux dessins annexés qui représentent deux variantes de ce dispositif. Selon la figure 1, un dispositif particulièrement simple permettant la mise en oeuvre du procédé décrit ci-dessus est constitué par un tube d'analyses biologiques 10 de type classique à l'extrémité supérieure 11du- quel vient se placer un support annulaire 12 en un matériau quelconque, notamment en métal ou en un matériau synthétique. Ce support 12 présente à son extrémité inférieure un orifice 13 permettant le passage des liquides nécessaires à la mise en oeuvre de l'étape de désorption et à son extrémité supérieure un rebord 14 qui vient s'appuyer sur les extrémités supérieures Il du tube 10 pour permettre de maintenir le support 12. La figure 2 se rapporte à un dispositif permettant d'effectuer des analyses biologiques dans lesquelles au moins deux réactifs doivent autre ajoutés à des temps différents. Ce dispositif se compose d'une cassette I en forme de parallèlépipède creux en matériau plastique dont l'un des petits côtés 2 est ouvert et reçoit un bouchon 3 qui supporte au moins deux cônes 4 et 5 équipés chacun de cônes en papier filtre 40 et 50 destinés chacun à recevoir une solution de réactifs. Le bouchon 3 comporte, en outre, un trou 6 destiné à permettre l'introduction des substances à analyser. Les différentes variantes correspondant au procédé qui fait l'objet de l'invention, seront décrites plus en détail en se référant aux exemples ci-après. EXILE 1 - - Préparation et mise en oeuvre d'une analyse de glucose à l'aide du dispositif représenté sur la figure 1. Le réactif suivant a été préparé dans 5,6 ml d'eau distillée (méthode de Barthelmai et Crock) - Hexokinase (source : levure) 15 UI - Glucose 6 phosphate deshydrogénase 15 Ul source t leuconostoe mésentérovdes) - Adénosine triphosphate 16,95 mg - Nicotamide Adénine Dinucléotide 7,5 mg - Chlorure de magnésium en tampon triéthanol-amine 51,3 mg - Chlorhydrate de triéthanolamine 139 mg 2 x 150 microlitres du réactif décrit ci-dessus ont été déposés sur deux disques de 12 mm de diamètre en papier Réf. 2992 de Schleicher et Schull (U.S.A.). Ces disques ont été posés sur un support mince pour autoriser une circulation aussi complète que possible de l'air autour du papier. Une lampe infrarouge a été dirigée sur les deux disques afin d'accélérer le séchage. Après quarante minutes, les deux papiers étaient secs. Deux supports de diamètre extérieur 14 mm correspondant au dispositif représenté sur la figure 1, ont été équipés avec les deux disques ci-dessus. Dans deux tubes, on a ajouté 5 microlitres d'un sérum à concentration connue de glucose dilué avec 50 microlitres d'eau distillée. Les deux supports précédemment décrits ont été disposés respectivement au-dessus des deux tubes, et 350 microlitres d'eau distillée ont été rajoutés sur chacun des deux supports. Après une minute, une pression d'air a été exercée au-dessus du support à l'aide d'une seringue et d'un bouchon. Après six minutes de contact entre le sérum dilué et le réactif, une mesure a été effectuée sur un appareil Centrifichem 500 à 340 nanomètres à 300C. On a ainsi lu deux valeurs très voisines, à savoir 0,75 et 0,77,g/litre inférieures à la valeur réelle du sérum (0,88) car l'incubation a eu lieu à une température inférieure (270C au lieu de 30 C). EXEMPLE 2 - - Préparation et mise en oeuvre d'une analyse de glucose en utilisant un dispositif analogue à celui représenté sur la figure 2. On a utilisé un réactif correspondant à celui qui a été utilisé pour l'exemple 1. 150 microlitres de ce réactif ont été disposés sur un embout de pipette équipé d'un filtre Réf. 2992 de Schleicher et Schull. Ceci a été répété sur un deuxième embout. Les deux embouts ont été mis à sécher en utilisant un jet d'air sec et chaud à 350C dirigé sur le haut des embouts. Le papier a ainsi séché en environ 30 minutes et a été conservé ainsi pendant 24 heures. Afin de bien vérifier que l'solution du réactif donne un résultat convenable, 150 microlitres d'eau distillée ont été rajoutés au-dessus de chacun des deux embouts et poussés à l'aide d'une pipette dans deux cuvettes d'un disque de transfert de Centrifichem 500, les deux positions "échantillon" de ces deux cuvettes ayant été préalablement remplies avec 5 microlitres (dilués avec 50 microlitres d'eau distillée) d'un sérum à concentration de glucose connue. Après 6 minutes d'incubation à 300C, le résultat a 6té lu à 340 nanomètres, On a trouvé des valeurs de 0,84 et 0,87 g/litre pour une valeur connue de 0,88 g/litre.

Claims: REVENDICATIONS 1.- Procédé de mise en oeuvre d'analyses en chimie-biologique par lequel on utilise des doses unitaires de réactifs, caractérisé en ce que l'on absorbe une dose unitaire de réactifs biologiques liquides ou en solution sur un support solide constitué par une substance poreuse, notamment du papier, on la sèche et on la désorbe de son support au moment de son utilisation par action d'un solvant aqueux approprié. 2.- Procédé selon la revendication 1, carac térisé en ce que pour réaliser l'absorption de la dose unitaire de réactifs, on ajoute un volume connu d'une 50- lution aqueuse de ces réactifs à une concentration connue, l'évaporation de l'eau contenue dans la solution absorbée pouvant s'effectuer à l'air libre, sous air deshydraté, ou dans un lyophilisateur. 3.- Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 et 2, caractérisé en ce que l'on ajoute aux réactifs préalablement à leur absorption, un agent susceptible d'accélérer la désorption. 4.- Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que l'agent susceptible d'accélérer la désorption est une protéine et notamment de la sérum-albumine bovine. 5.- Procédé selon l'une quelconque des revendications I à 4, caractérisé en ce que l'on effectue la désorption en deux étapes, la première de ces étapes étant constituée par une réhydratation du support solide par une solution aqueuse, le cas échéant tamponnée, et la seconde par une séparation du support solide et de la solution des réactifs. 6.- Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que l'on dépose la dose unitaire de réactif (s) sur un ou plusieurs support (s) constitué (s) par un disque de papier que l'on laisse sécher à l'air, puis on place sous atmosphère sèche le ou les disque (s) de papier dans un tube similaire aux tubes en plastique couramment utilisés en biologie que l'on ferme et ouvre pour y insérer la substance à analyser et effectuer la désorption, puia on aspire la solution contenue dans le tube pour la transférer dans un appareillage d'analyse biologique connu en lui-même, notamment un photomètre à cellule de lecture fixe. 7.- Procédé selon l'une quelconque des re vendications 1 à 6, caractérisé en ce que l'on pose le ou les disque (8) de papier sur lequel (leaquels) a ou ont été déposé (s) le ou les réactif (8) sur un support venant se placer à l'extrémité supérieure d'un tube d'ana- lyse biologique de type classique, on ajoute dans le tube la substance à analyser et sur ce ou ces disque (8) de papier les liquides nécessaires à la mise en oeuvre de l'étape de désorption, puis on pousse les liquides réactionnels à l'intérieur du tube en exerçant une pression d'air sur son sommet et on effectue l'analyse notamment à l'aide d'un appareillage de mesure optique. 8.- Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, dans lequel la substance à analyser est oonstituée par du sang ou une substance autre pouvant Outre absorbée et désorbée facilement, caractérisé en ce que l'on absorbe cette substance à analyser sur un support solide tel qu'un disque de papier similaire au (x:) support (s) utilisé (s) pour le ou les réactif (s). 9.- Dispositif permettant la mise en oeuvre du procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisé en ce qu'il se compose d'un tube d'analyse de type classique ainsi que d'un support venant se placer à son extrémité supérieure. 10.- Dispositif permettant la mise en oeuvre du procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, dans le cas d'analyses biologiques dans lesquelles au moins deux réactifs doivent être ajoutés à des temps différents, carattérisé en ce qu'il se compose d'une cassette en forme de parallèlépipède creux en matériau plastique dont l'un des petits côtés est ouvert et destiné à recevoir un bouchon supportant au moins deux cônes en plastique équipés chacun d'un cône en papier filtre destiné chacun à recevoir une solution de réactifs, le bouchon comportant en outre, un trou destiné à permettre l'introduction des substances à analyser. 11.- Installation permettant, à partir des dispositifs selon les revendications 9 et 10, la mise en oeuvre de façon automatique du procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, installation caractérisée en ce qu'elle se compose d'un poste d'échantillonnage équipé dtun diluteur dans lequel on prélève la substance à analyser et on l'introduit avec un volume donné de diluant dans la cassette, un poste analyse dans lequel on effectue l'introduction de la cassette ainsi que de données sur le patient, et le dosage à effectuer dans l'appareillage d'analyse biologique, ainsi qu'un magasin de stockage des cassettes. 12.- Installation selon la revendication Il, caractérisée en ce que le poste d'analyse comporte deux disques dont l'un est fixe et dont l'autre est mobile selon un mouvement pas-à-pas et comporte, à sa périphérie, des orifices destinés à recevoir les cassettes d'analyse, les deux disques étant situés à une certaine distance l'un de l'autre pour permettre l'insertion de l'appareil d'analyse biologique, notamment des conduits de lumière d'un photomètre à cellule de lecture fixe, les cassettes étant maintenues par la table tournante mais glissant sur la table fixe.

Inventors: HENRY, ROBERT
Applicants: HENRY, ROBERT
Application year: 1982
Main classification: G01N33
IPC codes: B01L3, C12M1, G01N33, C12Q1