MEANS FOR IMMUNOLOGIC DIAGNOSIS AND METHOD FOR ITS PREPARATION

Abstract: 1. Claims (for the Contracting States : BE, CH, DE, FR, GB, IT, LI, LU, NL, SE) An agent for the detection and determination of an immunological reaction partner present in a liquid formed by the surface of a carrier with the associated partner being present thereon, wherein the carrier is irradiated with gamma-rays. 1. Claim (for the Contracting State : AT) A process for the preparation of an agent for the detection and determination of an immunological reaction partner present in a liquid, in which a partner of an immunological reaction is applied to a carrier, wherein the carrier is irradiated beforehand or afterwards with gamma-rays.

Description: Mittel zur Immunologischen Diagnose sowle Verfahren zu seiner Herstellung Die Erfindung betrifft ein Mittel zum Nachweis und zur Bestimmung eines in einer Flüssigkeit befindlichen Part- ners einer immunologischen Reaktion, worin sich der zugehörige Partner auf der Oberfläche eines Trägers befindet, dadurch gekennzeichnet, dass der Träger bestrahlt ist Es ist bekannt, einen Partner einer immunologischen Reaktion adsorptiv oder kovalent an einen Träger zu binden, um den entsprechenden Partner aus einer Lösung zu isol ie- ren und diesen dann nachzuweisen oder seine Menge zu bestimmen. Es ist Jedoch auch bekannt, dass auf diesem Prinzip beruhende Testverfahren Mängel aufweisen können. So beschreiben Chessum und Denmark in The Lancet (1978), Seite 161, dass die in einem allgemein als ELISA (Enzyme Llnked Immuno Sorbent Assay) bezeichneten Verfahren zur Bestimmung von Antigenen oder Antikörpern als Träger verwendeten bekannten Mikrotiterplatten aus Polystyrol zu untragbar grossen Schwankungen des Testergebnisses führen können. Ebenso berichten Bidwell et al. in J.Infect.Disease 136, Supplement, Seite 274 (1977), über Schwankungen der Ergebnisse eines ELISA-Tests, die auf Unterschiede in den als Träger eingesetzten Mikrotiterplatten zurückgeführt werden konnten. Diese grossen, durch Unterschiede in den Oberflächeneigenschaften der Mikro titerpiatten hervorgerufenen Schwankungen des Testergebnisses sollten nicht auf die Verwendung dieser Platten beschränkt sein, sondern auch bei anders geformten, aus denselben Materlalien hergestellten Trägern auftreten. Es bestand demnach die Aufgabe, Trägermaterlalien mit gleichmässigeren Oberflächeneigenschaften zu finden, bel deren Verwendung die Ergebnisse immunologischer Tests weniger variieren. Oberraschend wurde nun gefunden, dass diese Aufgabe dadurch gelöst werden kann, dass das Trägermaterial, vorzugsweise hieraus hergestellte Mikrotiterplatten, mit, vorzugsweise 0,1 bis 100-, besonders 0,5 bis 10 Megarad, Gammastrahlen bestrahlt wird, vorzugsweise mit Cobalt-Strahlen. Gegenstand der Erfindung ist also ein Verfahren zum Nachweis und zur Bestimmung eines Partners einer immunologischen Reaktion, worin sich der entsprechende Partner auf der Oberfläche eines Trägers befindet, dadurch gekennzeichnet, dass der Träger bestrahlt wird, bevor oder nachdem seine Oberfläche mit diesem Partner beschichtet wurde. Es ist nicht erforderlich, den Träger unverzüglich nach dem Bestrahlen zu beschichten. Die vorteilhafte Wirkung einer Bestrahlung wird auch beobachtet, wenn zwischen Bestrahlung und Beschichtung ein Zeitraum von Tagen oder Monaten verstreicht. Trägermaterialien, die in diesem Verfahren verwendet werden können, sind im Prinzip alle Kunststoffe, insbesondere aber Polystyrol und Polyvinylchlorid. Bestrahlte Träger können vorteilhaft in an sich bekannten, beispielsweise auf einer Antigen-Antikörper Reaktion beruhenden Immuntestsystemen eingesetzt werden, beispielsweise ELISA-Systemen (Enzyme Linked Sorbent Assay-Systemen), wobei ein ssindungspartner an den be strahlten Träger gebunden ist. Solche Bindungspartner können beispielsweise Protelne wle Immunglobuline, antimikrobielle Antikörper, Plasmaproteine, beispielsweise CIq oder antigen wirksame Materialien, beispielsweise Allergene oder mikrobielle Antigene, sein. Das folgende Beispiel erläutert die Erfindung: Beispiel Herstellung eines Testbestecks zur Bestimmung von Antikörpern der IgG- und IgM-Klasse gegen Mumpsvirus in Humanserum. 1. Binden des Virusantigens an den Träger (Polystyrol Mikrotiterplatte) a. bestrahlt (etwa 2 Mrad) b. unbestrahlt 2. Waschen 3. Auftragen und Inkubieren von Serumverdünnungen 4. Waschen 5. Auftragen und Inkubieren von Anti-Human IgG- oder IgM-alkal ische Phosphatase-Konjugat 6. Waschen 7. Auftragen der Substratlösung 8. Abstoppen der enzymatischen Spaltung durch Zugabe von 2N NaOH 9. Photometrieren bei 405 nm Tabelle Vergleich der Empfindlichkeit eines Tests mit bestrahltem mit der eines unbestrahlten Trägers: EMI4.1 <tb> <SEP> Nachweisgrenze <SEP> (Titer) <tb> <SEP> bestrahlter <SEP> Träger <SEP> unbestrahlter <SEP> Träger <tb> Serum <SEP> IgG <SEP> IgM <SEP> IgG <SEP> IgM <tb> <SEP> A <SEP> 20480 <SEP> 20480 <SEP> 1280 <SEP> 2560 <tb> <SEP> B <SEP> 1280 <SEP> 160 <SEP> 640 <SEP> 20 <tb> Aus den Zahlen ergibt sich der Vorteil einer Verwendung bestrahlter Träger. Die Nachweisfähigkeit (Sensitivität) ist deutlich erhöht.

Claims: Patentansprüche 1. Mlttel zum Nachweis und zur Bestimmung eines in einer Flüssigkeit befindlichen Partners einer immunologischen Reaktion, wobei sich der zugehörige Partner auf der Oberfläche eines Trägers befindet, dadurch gekennzeichnet, dass der Träger bestrahlt ist. 2. Verfahren zur Herstellung eines Mittels nach Anspruch 1, In welchem ein Partner einer immunolo gischen Reaktion auf einen. Träger aufgebracht wird, dadurch gekennzeichnet, dass zuvor oder danach bestrahlt wird. Patentanspruch für Österreich: Verfahren zur Herstellung eines Mlttels zum Nachweis und zur Bestimmung eines In einer Flüssigkeit befindlichen Partners einer immunologischen Reaktion, In welchem ein Partner einer Immunologischen Reaktion auf einen Trager aufgebracht wird, dadurch gekennzeichnet, dass zuvor oder danach bestrahlt wird.

Inventors: ZIEGELMAIER, ROBERT, DR.
Applicants: BEHRINGWERKE AKTIENGESELLSCHAFT
Application year: 1982
Main classification: G01N33
IPC codes: A61K41, G01N33