THYMUS EXTRACTION PROCESS

Abstract: 1. A method of extraction of therapeutically effective hormones from the thymus glands of freshly slaughtered calves by extraction by water, characterized in that the thymus glands of calves of about 12-16 weeks old are removed under sterile precautions, the substance removed is cooled down to low temperatures of at least - 30 degrees C, after thawing is homogenized with the addition of distilled water, the homogenized liquid is set aside for a few days at about + 4 degrees C and subsequently centrifuged rapidly and filtered, that the supernatant above the sediment from the filtrate is decanted, is set aside for a few days at about + 4 degrees C and again centrifuged rapidly and filtered, and the supernatant from the second filtrate is processed into an applicable preparation.

Description: Beschreibung Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Gewinnung eines therapeutisch wirkaamen Wirkstoffes aus der Thymusdrüse. Aus der Thymusdrüse kann man folgende Substanzen extrahieren: 1) Die Thymushormone 2) Gewebsenzyme - 3) Unspezifische Eiweisskörper. Von den Thymushormonen weiss man besonders durch die Untersuchungen Goldsteins, dass sie das lymphatische System auch des menschlichen Körpers stimulieren. Dadurch wird unter anderem auch die Abwehrmöglichkeit des menschlichen Körpers gegenüber dem Krebs angeregt. Von den Gewebsenzymen der Thymusdrüse weiss man seit jüngster Zeit, dass sie direkt tumorschädlich sind und die Tumorzelle so verändern kann, dass diese der körpereigenen Abwehr besser zugänglich wird. Von den unspezifischen Eiweisskörpern ist bekannt, dass sie nach Injektion beim Menschen unspezifische Abwehrreaktionen stimulieren. Ausserdem wird auch die körpereigene Produktion von Interferon dadurch angeregt. Wenn man aufgrund dieser Kenntnisse einen Thymusextrakt herstellen und therapeutisch verwenden will, sind folgende Punkte zu berücksichtigen: Das Präparat muss verträglich sein, es muss in wirksamer Dosierung applizierbar sein, es muss ferner in ausreichender Menge herstellbar sein, das Herstellungsverfahren darf für die allgemeine Anwendung nicht zu teuer sein, und es sollten möglichst alle wirksamen Komponenten verwendet werden können. In bezug auf die Extraktion der Thymusdrüsen Wirkstoffe ergeben sich nun folgende Probleme: Im Hinblick auf die Verträglichkeit und damit ausreichender Dosierbarkeit verursachen die unspezifischen Eiweisskörper des Thymus-Gesamtextraktes die meisten Schwierigkeiten. Sie lösen bei wirksamer Dosierung meistens heftige lokale Reaktionen aus und können auch zu anaphylaktischen Reaktionen führen. Nun führt aber eine gründliche Eliminierung dieser Eiweiss-Körper dazu, dass gleichzeitig ein Grossteil der Hormone mit eliminiert wird und dass praktisch alle therapeutisch wertvollen Enzyme zerstört werden. Es gibt auf dem Markt Präparate, die nach diesem Prinzip hergestellt sind. Da man daher auf die Enzyme weitgehend verzichten zu müssen glaubte, hat man versucht, Thymus-Hormone synthetisch herzustellen. Da jedoch die Enzyme der Thymusdrüse wesentlich komplizierter aufgebaut sind als die Hormone, bereitet eine Synthese erhebliche Schwierigkeiten. Dagegen hat Sandberg in Schweden ein einfaches Herstellungsverfahren angegeben: die steril entnommenen Thymusdrüsen werden unter Zusatz von destilliertem Wasser grob homogenisiert und 48 Stunden kühl abgestellt. Dann wird der über- stand entnommen und das Sediment verworfen. In einem auf diese Weise gewonnenen Präparat sind Hormone Enzyme und unspezifische Eiweisskörper enthalten. Dieses Präparat hat sich bei der Behandlung von Autoimnunerkrankungen, Arthrosen und zum Teil auch bei der chronischen Polyarthritis als recht wirksam erwiesen. Bei der Behandlung von bösartigen Tumoren erwies es sich aber in den allermeisten Fällen als nicht wirksam genug. Es kam über die Rolle eines zusätzlichen Adjuvans nicht hinaus. Eine wesentliche Erhöhung der Dosierung ist wegen der Nebenwirkungen nicht möglich, so dass eine Steigerung der Wirkung in dieser Richtung nicht möglich war. Der Erfindung liegt daher folgendes Ziel zugrunde: Das Präparat muss bei wesentlich höherer Wirkstoffkonzentration verträglicher sein, die Ausbeute des Rohmaterials muss wesentlich besser sein, um die höheren Herstellungskosten weitgehend abzufangen, es muss die Hormone und Enzyme möglichst in Original-Konzentration enthalten, weil diese beiden Komponenten sich in ihrer Wirksamkeit ergänzen, und es muss der Anteil der unspezifischen Eiweisskörper schonend so weit reduziert werden, dass es zu keinem wesentlichen Verlust der erwünschten Wirksubstanzen kommt, wobei aber gleichzeitig die Verträglichkeit des Präparates soweit verbessert werden soll, dass es in ausreichender Dosierung verabreicht werden kann. Dieses Ziel wird erfindungsgemäss mit dem im beigefügten Hauptanspruch definierten Verfahren grundsätzlich gelöst. Nachstehend wird eine besonders optimale Verfahrensführung dargestellt: In einem ersten Schritt wird die Thymusdrüse von frisch geschlachteten, gesunden, etwa 12 bis 16 Wochen alten Kälbern unter sterilen Kautelen entnommen. Um die Grundsubstanz und die Fasern hinreichend zu zerkleinern empfiehlt es sich, die entnommene Masse durch einen üblichen Fleischwolf zu zerkleinern. Die zerkleinerte Masse wird dann in einem zweiten und wesentlichen Verfahrensschritt auf tiefe Temperaturen eingefroren, und zwar bis wenigstens - 300 C. Die tiefgekühlte Masse kann bei dieser Temperatur je nach Bedarf eine kürzere oder längere Zeitspanne gelagert werden. Durch das Tiefkühlen werden die Zellwände zerstört und die in den Zellen eingeschlossenen Organellen sowie die Enzyme freigesetzt. Danach wird die eingefrorene Masse aufgetaut und im Überschuss mit aqua dest. versetzt, wobei sich ein Volumenverhältnis von einem Volumenteil Masse zu drei Volumenteilen Wasser empfiehlt. Die aufgeschlemmte Masse wird durch einen Mixer intensiv homogenisiert. Die auf diese Weise gewonnene trübe Flüssigkeit wird, etwa in einem Kühlschrank, einige Tage bei ca. + 40 C stehengelassen. Während dieser Zeit tritt eine Autolyse ein, bei der die freigesetzten Enzyme die langen Eiweissketten zum Teil abbauen. Die Zeitspanne, während der die Flüssigkeit stehengelassen wird, ist für die Wirksamkeit des fertigen Präparates ein kritischer Parameter; praktische Versuche haben gezeigt, dass ein Zeitraum von 4 - 5 Tagen zu optimalen Ergebnissen führt. Die trübe Flüssigkeit wird sodann in einer schnellen Zentrifuge mit einer Leistung oberhalb 20.000 g abzentrifugiert, so dass die Zelltrümmer, die grossen, verbliebenen Eiweissmoleküle und die meisten Bakterien und Pilze sich im Sediment sammeln. Nach etwa zehn Minuten Zentrifugierzeit wird der über stand über dem Sediment durch ein Gazefilter gegeben, der Filterrückstand und das Sediment werden verworfen. Der gewonnene Überstand wird erneut einige Tage bei ca. + 4 C stehengelassen, um die Autolyse weiter fortschreiten zu lassen. Auch hier empfiehlt sich ein Zeitraum von 4-5 Tagen für das AbStellen. Danach wird die Flüssigkeit erneut solange zentrifugiert, bis der Uberstand stark opalescierend, jedenfalls nicht mehr trüb ist. Das Sediment wird wieder verworfen. Der Über stand wird dann zu einem applizierbaren Präparat in üblicher Weise weiterverarbeitet, also etwa in Einmal Spritzen aufgezogen oder zur Lagerung eingefroren oder zur Gewinnung der Trockensubstanz gefriergetrocknet. Das auf diese Weise gewonnene Präparat ist wesentlich konzentrierter als bislang bekannt, kann ausserdem in grösserer Menge appliziert werden, und zwar intramuskulär oder subcutan. Das Präparat ist überraschend wirksam bei seiner Anwendung als Klistier. Diese Anwendung hat den Vorteil, dass sie mit wesentlich weniger Nebenwirkungen behaftet ist als bei der Injektion und daher noch höher dosiert werden kann. Die Vorteile und die Wirkungen des erfindungsgemäss gewonnenen Präparates bestehen nach eingehenden Untersuchungen bei der Behandlung von Krebserkrankungen im folgenden: 1) Bei Anwendung ohne Zusatz-Therapie in vielen Fällen Stabilisierung des Tumors oder sogar seine Rückbil dung, und 2) in Kombination mit Bestrahlung oder Chemotherapie deutlich bessere Wirksamkeit der konventionellen Behandlung und Reduzierung der damit gekoppelten unerwünschten Nebenwirkungen.

Claims: Verfahren zur Extraktion der Thymusdrüse Patentansprüche 1. Verfahren zur Gewinnung von therapeutisch wirksamen Wirk stoffen aus der Thymusdrüse von frisch geschlachteten Kälbern, dadurch gekennzeichnet, dass die Thymusdrüse von etwa 12-16 Wochen alten Kälbern unter sterilen Kautelen entnommen, die entnommene Masse auf tiefe Temperaturen von wenigstens - 300 C abgekühlt wird, nach dem Auftauen unter Zusatz von destilliertem Wasser homogenisiert wird, die homogenisierte Flüssigkeit einige Tage bei etwa + 4 C abgestellt und anschliessend schnell abzentrifugiert und gefiltert wird, dass der Überstand über dem Sediment des Filtrats dekantiert, einige Tage bei ca. + 4 C abgestellt und erneut schnell zentrifugiert und gefiltert wird, und der Über stand aus dem zweiten Filtrat zu einem applizier baren Präparat verarbeitet wird. 2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die den Kälbern entnommene Thymusdrüse vor dem Einfrieren durch einen Fleischwolf zerkleinert wird. 3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass einem Volumenteil aufgetauter Drüsenmasse drei Volumen teile aqua dest. zugesetzt werden. 4. Verfahren nach einem der vorstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die homogenisierte Flüssigkeit etwa 4-5 Tage bei ca. + 40 C abgestellt wird. 5. Verfahren nach einem der vorstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass der Überstand aus dem ersten Filtrat etwa 4-5 Tage abgestellt wird. 6. Verfahren nach einem der vorstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass mit einer Zentrifugierleistung ober halb 20.000 g abzentrifugiert wird. > ., 7. Verfahren nach einem der vorstehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass das zweite Zentrifugieren solange ausgeführt wird, bis der Überstand stark opalescierend ist.

Inventors: OLLENDIEK, HEINRICH, DR. MED.
Applicants: OLLENDIEK, HEINRICH, DR. MED.
Application year: 1981
Main classification: A61K35
IPC codes: A61K35