BIOCHEMICALLY ACTIVE INGREDIENT, PROCESS FOR ITS PRODUCTION AND A PHARMACEUTICAL PREPARATION THAT CONTAINS THIS INGREDIENT

Abstract: 1. Water-soluble, low molecular lignoid active agent, characterized in that it shows a) as solid an ESR spectrum according to Fig. 1, b) in aqueously neutral solution an ESR spectrum according to Fig.2, in aqueously alkaline solution at pH 10 an ESR spectrum according to Fig.3, c) in aqueous solution a fluorescence spectrum according to Fig.4 to 6, d) in the chromophoric group test with increase of the pH value from the acid to the basic range a decline of transparency from 100 % to about 20 % and e) in the glutathione redox status test according to Hohorst et al., 1959, Biochem. Z. 332, 18-46, beginning with 60 sec. after the application a characteristic increase of the reduced glutathione with simultaneous decline of the oxidized glutathione and the mixed glutathionedisulfides according to table (cf. page 12).

Description: Beschreibung Die Fähigkeit des lebenden Organismus, exogene Belastungen erfolgreich zu überwinden, hängt von der Güte aller biochemischen Systeme und deren konzentriertem Zusammenwirken ab. Dieses Zusammenwirken ist bekanntlich eine von der Parität kataboler und anaboler Regulationsfaktoren abhängige Leistungsgrösse, die z.B. durch verschiedene exogene Belastungsfaktoren wie z.B. psychosozialer Stress, Bakterien, Viren usw. vermindert wird. Auch ist bei schwacher zellulärer Leistungsfähigkeit die Wirkung hochspezifischer Arzneimittel wie z.B. von Antibiotika gering und die tragenden reparativen Prozesse wie Infektionsabwehr, gewebliche Regeneration und Entzündungsausheilung nehmen einen unzureichenden Ablauf. Um die allgemeine Belastungsüberwindungsfähigkeit zu erhöhen, hat die medizinische Wissenschaft bisher nur wenige und verhältnismässig ungezielte Methoden zur Verfügung, wie z.B. die Gabe von Vitaminen, unspezifischen Reizkörpern und bestimmten Gewebs- oder Blutextrakten. In gewissen Fällen werden auch körperliche Trainingskuren eingesetzt. Es ist jedoch bekannt, dass beispielsweise unspezifische Reizkörper und ein Muskeltraining zuerst einmal eine im einzelnen unbekannte Reaktionskette in Gang setzen, an deren Ende erst die erhoffte Wirkung stehen kann. Die bekannten unspezifischen Reizkörper bedeuten für den meist ohnehin schon geschwächten Organismus eine zusätzliche Belastung, die sich im Anstieg der Körpertemperatur, erhöhtem Krankheitsgefühl, negativen Auswirkungen auf bestimmte Grund- oder Begleitkrankheiten, wie Allergien, Schilddrüsenfunktionsstörungen, Diabetes usw. auswirkt. Es besteht deshalb ein Bedürfnis nach einer Wirksubstanz, die unmittelbar an einem Grundprozess der intrazellulären Stoffwechselregulation eingreift, so dass.die Belastungs überwindungs fähigkeit ohne Belastungsphase und ohne toxisches Risiko rasch ansteigt. Eine solche Wirkung sollte nicht auf bestimmte Gewebe-Typen. beschränkt, sondern gewebeunspezifisch sein. Es wurde nunmehr gefunden, dass diese biologischen Wirkungen in therapeutisch nutzbarem Ausmass durch einen neuen biochemischen Wirkstoff erzielt werden können, der sich von nativen undXoder synthetischen lignoiden Dehydrierungspolymerisaten (DHPs) ableiten lässt und der die kennzeichnenden chemischen Strukturen des Lignins in alkali- und wasserlöslicher Form enthält. Lignine sind schwer lösliche Dehydrierungspolymerisate (DHPs) aus Monolignolen, chemisch höchst inert und biologisch inaktiv. Die erfindungsgemässe Substanz wird dadurch erhalten, dass man natives oder synthetisches Lignin zusammen mit Kohlehydraten - vorzugsweise Monound/oder Oligosaccharide, insbesondere Glucose - in alkalisch-wässrigem Milieu in Gegenwart von wasserunlöslichen, anorganischen Oxidationskatalysatoren mit Ozon, Sauerstoff und/oder Wasserstoffperoxid - vorzugsweise Luft - oxidiert, durch Druckfiltration an Membranen mit nominellen Trennschnittgrenzen von 5000 bis 35000, vorzugsweise 10000 bis 25000 Dalton fraktioniert und anschliessend durch weitere Reinigungsschritte gewinnt. Synthetische Lignine wurden bisher lediglich zum Zweck der Konstitutionsaufklärung durch enzymatische Dehydrierung von Monolignolen dargestellt. Je nach Wahl der Ausgangsprodukte (Monolignole: p-Cumar-, Coniferyl- und Sinapinalkohol) und ihrem Verhältnis zueinander lassen sich lignoide DHPs vom Laubholz-, Nadelholz- oder Graslignin-Typ darstellen. Auch durch die Methodik der DHP Synthese lassen sich unterschiedliche Typen darstellen, je nachdem man das Zutropf- oder das Zulaufverfahren oder eine Kombination beider Verfahren zur Anwendung bringt. Als Reduktase findet meist Laccase aus dem Saft des Pilzes Psalliota campestria Verwendung. Als Lignine können erfindungsgemäss Syntheseprodukte aus Monolignolen wie p-Cumar-, Coniferyl- und/oder Sinapinalkohol nach dem Zutropf-, dem Zulauf- oder dem Kombinationsverfahren sowie native Lignine wie Björkmann Lignin, Brauns-Lignin, Wildstätter-Lignin - vorzugsweise aber Nord's-Lignin - verwendet werden. Mit Nord's-Lignin werden die höchsten Ausbeuten erhalten. Nicht geeignet sind andere lösliche Lignin-Derivate wie Säure-Lignin, Cuproxan-Lignin bzw. Lignin-Sulfonsäure, da sie offenbar nicht die erforderlichen Strukturelemente enthalten. Als Kohlehydrate werden Mono- und Oligosaccharide, insbesondere Mono- und Disccharide - vorzugsweise Glucose eingesetzt. Als Oxidationskatalysatoren sind anorganische Oxidationskatalysatoren geeignet, die eine hohe Katalaseaktivität aufweisen, wie z.B. Mangandioxide. Da die erfindungsgemässe Mischrepolymerisation zu Mischrekombinaten nur dann mit wirtschaftlich tragbarem Erfolg abläuft, werden erfindungsgemäss wasserunlösliche, anorganische Oxidations Freudenberg, Holzforschung 18, H6, S. 167 (1964) katalysatoren eingesetzt, die sich ohne Schwierigkeit durch herkömmliche Methoden der Feststofftrennung von den alkalilöslichen, organischen Mischrekombinaten abtrennen lassen. Bei dieser oxidativen Radikalpolymerisation zu lignoiden Redukton-Mischrekombinaten, bilden sich naturgemäss Systeme sehr unterschiedlichen Molekulargewichts, die sich zum Teil durch intermolekulare Wechselbeziehung gegenseitig inhibieren, was ihre biologische Aktivität betrifft. Es wird deshalb erfindungsgemäss durch eine aktive Molekulartrennung nach dem Prinzip der Ultrafiltration unter Druck eine Isolierung niedermolekularer, biochemisch hoch reaktiver Rekombinate vorgenommen und das hierbei anfallende Retinat verworfen. Nachfolgend wird anhand des beigefügten Fliessschemas das erfindungsgemässe Verfahren allgemein erläutert: Die vorgenannten synthetischen oder nativen Lignine werden zusammen mit einem geeigneten Kohlehydrat - vorzugsweise Glucose - und einem geeigneten anorganischen Oxidationskatalysator mit hoher Katalaseaktivität gemischt und mit verdünnter Natronlauge angeteigt. Man setzt verdünnte Ammoniaklösung zu, bis eine rührfähig Dispersion entsteht. Bei Raumtemperatur wird unter Rühren das Oxidationsmittel - vorzugsweise Luft durch eine Tauchfritte zugeführt. Die Reaktion ist beendet, wenn der pH-Wert um 1 bis 2 Einheiten abgesunken ist. Dies ist erfahrungsgemäss nach 15 bis 18 Monaten der Fall. Die ungelösten Bestandteile werden sedimentiert und verworfen. Die flüssige Phase wird bis zum Trocknen eingeengt (vgl. Fliessschema W)und(2)). Das getrocknete Zwischenprodukt wird mit 10 bis 20 Teilen 2 %iger bis 1 %iger Natronlauge suspendiert und teilweise aufgelöst. Der ungelöste Anteil wird nach den üblichen Methoden abgetrennt und verworfen. Mit einem Kationenaustauscher wird in der wässrigen Phase ein pH Wert von 9,5 bis 14 - vorzugsweise 10,5 bis 11,5 eingestellt (vgl. Fliessschema (3), (4) und (5)). Alle Substanzen bis zu einem Molekulargewicht von 5000 werden durch Molekulartrennung an geeigneten Membranen, vorzugsweise an Membranen mit nominellen Trennschnittgrenzen von 5000 bis 35000, vorzugsweise 10000 bis 25000 Daltons isoliert (vgl. Fliessschema(6)). Das so erhaltene Filtrat wird entweder durch Zugabe eines geeigneten Kationenaustauschers in der 11+-Form auf einen pH von 4,5 bis 6,0 gebracht und ist als solches vrwendbar oder kann vorzugsweise durch Zugabe eines geeigneten Kationenaustauschers in der H+Form auf einen pH Wert von 2,1 gebracht werden. Der Ionenaustauscher wird dann abgetrennt und die Lösung zentrifugiert (vgl. Fliess schema(7)). Das gelartige Sediment und die überstehende Lösung werden getrennt weiterverarbeitet. a) Das Sediment wird in verdünnter Alkalilauge bei pH 9 gelöst. Die klare alkalische Lösung wird durch Zugabe eines geeigneten Kationenaustauschers auf pH 5,5 zurückgestellt (vgl. Fliessschema(8a)). b) Die überstehende Lösung wird durch Erwärmen auf 950C und rasches Abkühlen auf 5 0C einem Thermoschock ausgesetzt. Man trennt vom entstehenden Sediment und bringt die überstehende Lösung durch Zugabe von Alkalilauge auf pH 5,5 (vgl. Fliessschema(8b)). Die nach a) und b) erhaltenen Lösungen vom pH 5,5 werden gemischt und unter schonenden Bedingungen zur Trockne eingeengt. Der verbleibende Rückstand stellt die erfin dungsgemässe Wirksubstanz dar (vgl. Fliessschema(9)} Die erfindungsgemässe Wirksubstanz ist eine nichtkristali- sierbare, röntgenamorphe, wasserlösliche organische Säure. Die Substanz ist hell- bis dunkelbraun gefärbt und zeigt einen hohen metallischen Glanz, der auf ungepaarte Elektronen hinweist. Es handelt sich um ein Polymerengemisch, das durch Rekombination der oxidativen Ligninabbauprodukte unter Einbau der Zuckerreduktone gebildet wird. Die Polymeren enthalten redoxamphotere Strukturen mit ungepaarten Elektronen (ESR-Spektrum) sowie phenolische OH-Gruppen, Carboxylfunktionen, Ketogruppen und Endiolgruppierungen, die auch in wässriger Lösung erhalten bleiben. Als typisches Ligninderivat kann der erfindungsgemässe Wirkstoff ebenso wie die Lignine nicht durch eine Strukturformel exakt beschrieben werden. Auch die meisten konventionellen Analysendaten wie Schmelzpunkt, Kristallstruktur, Infrarotspektrum und Summenformel können bei dieser Substanz nicht zur Charakterisierung herangezogen werden. Dagegen kann der neue Wirkstoff durch folgende Methoden charakterisiert werden: 1. Nachweis auch in wässriger Lösung stabiler unge paarter Elektronen durch ESR-Spektroskopie (ESR Spektren). 2. Das Fluoreszenz-Spektrum (Emisgnn und Anregung) in wässriger Lösung. 3. Den Quotienten der Extinktionen bei 375 und 450 nm in wässriger Lösung bei pH 5,5, der von der Feinstruk tur der Membran und ihrer nominellen Trennschnittgren ze abhängig ist. 4. Spezifische Vermehrung lichtabsorbierender Gruppen durch Alkalisierung einer wässrig-sauren Lösung. 5. Das Molekulargewichtsverteilungsprofil: 500 - 5000 (Mittelwert 2000). 6. Das Aussehen des Trockenstoffes ist dunkelbraun. 7. Beeinflussung des Glutathionredoxstatus der leben den Leberzelle im biochemischen Test. 8. Der Schwimm-Leistungstest. Erläuterungen zu: 1.) ESR-Spektren Der Festkörper zeigt ein intensives ESR-Signal (vgl. Abb. 1), das aus einer Linie mit der peak-to-peak Breite von 3,2 Gauss besteht. Der g-Faktor wurde zu 2,0042 bestimmt. Die Untersuchungen der wässrigen Lösungen wurden bei einem pH-Wert von 9 durchgeführt. Die 5 %igen Lösun gen zeigen ein kräftiges Ein-Linien-Signal, das leicht unsymmetrisch ist (vgl. Abb. 2). Die Linienbreite wurde zu 4,2 Gauss ermittelt. Der Nulldurchgang des Signals entspricht einem g-Faktor von 2,0045 und ist somit dem Festkörper recht ähnlich. Die Fehlergrenze wird durch die Linienbreite bestimmt. Die Signalinten sität zeigt eine nicht-lineare Abhängigkeit von der Konzentration. Des weiteren ist eine Steigerung der experimentell ermittelten Signalintensitäten sowohl durch Einwirkung von Luftsauerstoff als auch nach Zugabe von Xscorbinsäure klar zu erkennen. Bei Zu satz von 1 ml 10 %aber Ascorbinsäure-Lösung zu 3 ml 5 %aber Substanz-Lösung wird eine Steigerung der Signalintensität um den Faktor 2 beobachtet. Die Linienbreite wird durch den Zusatz von Ascorbinsäure praktisch nicht verändert, während der g-Faktor auf 2,0037 absinkt. Gleichzeitig ist eine weitgehende Symmetrierung des in Form der ersten Ableitung registrierten Absorptionssignals zu beobachten. Die Absorption der wässrigen Lösung ohne Pufferzusatz liegt bei nahezu gleichem g-Faktor, wie er beim Festkörper gefunden wurde, ist aber mit einer Linienbreite nach 3,8 G schmaler. Die Linienform ändert sich nach Spülen der Messprobe mit Stickstoff und nach Optimierung der Feldmodulation ist eine Andeutung einer Aufspaltung erkennbar. Der Zusatz von Kaliunchlorid ist ohne Einfluss auf das Signal. Erhöhung des pH-Wertes auf ca. 10 führt zu drastischen Veränderungen (Abb. 3). Jetzt lassen sich drei scharfe Linien L1, L2 L3 erkennen mit den entsprechenden g-Faktoren gl = 2,0051, g2 = 2,0048 bzw. g3 = 2,0045. Die Breiten dieser drei Komponenten sind vergleich-.- bar und liegen bei 150 mG. Bei sorgfältiger Untersuchung des Signals zeigt sich, dass unter diesen drei Linien eine vierte, wesentlich breitere (AH 1, 5G) Absorption vorhanden ist. Nach Luftoxidation nimmt die Intensität ab, um nach Zusatz- von Glucose auf den alten Wert anzusteigen. Mit fortschreitender Redukti- onszeit ändern sich die relativen Intensitäten aller vier Komponenten. Offenbar handelt es sich bei der erfindungsgemässen Wirksubstanz um ein redoxamphoteres System, das stark pH-abhängig ist. Für die ESR Spektren sind vermutlich mehrere Radikale verantwortlich, die sich in Redox- und Protonierungsgleichgewichten befinden. 2.) Fluoreszenzspektren Wenn auch Fluoreszenzspektren wenig über die Struk tur einer Verbindung aussagen, so dienen sie doch zur Charakterisierung. Die Emissions- und Anregungs spektren der erfindungsgemässen Wirksubstanz wurden in wässriger Lösung mit dem Spektralfluorimeter PE 3000 der Firma PERKIN ELMER aufgenommen. Insgesamt drei Proben aus verschiedenen Produktionsansätzen ergaben identische Emissions- und Anregungsspek tren. Die Spektren sind in den Abbildungen 4 bis 9 wiedergegeben. Die Wirksubstanz weist ein Emissions Maximum bei 450 - 4 nm auf. 3.) Qutient der Extinktionen E375nm und E450nm wässri ger Lösungen der Wirksubstanz bei pH 5,5 Zur weiteren Charakterisierung der erfindungsgemässen Wirksubstanz können die Extinktionen wässrig-saurer Lösungen herangezogen werden. Der Quotient der Ex tinktionen bei x = 375 nm und A = 450 nm nimmt da bei bei gleichen Membraneigenschaften, d.h. Fein struktur und nominelle Molekulartrennschnittgrenze immer den gleichen Wert an. Es gilt bei Membranen mit nomineller Trennschnitt grenzen von 10000 Daltons: E375@nm = 2,40 - 3,45 E450 nm 4 ) Chromophor-Gruppentest Messprinzip Durch Alkalisierung einer wässrig-Sauren Lösung bil den sich zusätzliche lichtabsorbierende chromophore Gruppen, die zu einer messbaren Steigerung der Licht absorption führen. Methode Eine Wirkstofflösung wird soweit mit destilliertem Wasser verdünnt, dass sie in einer 1 cm Küvette bei 485 nm und fast voller Blende genau 100 % Durch lässigkeit zeigt. Der pH-Wert dieser Lösung liegt zwischen 4 und 6. Unter Kontrolle mit derGlaselektrode gibt man tropfenweise 1 n Kalilauge zu (ca. 1 Tropfen pro ml), bis der pH-Wert 9 - 10 beträgt. Die Lösung wird intensiv gemischt. Nach 20 Minuten wird erneut die Transparenz gemessen. Sie soll 9 % betragen. 5.) Beeinflussung des Glutathionstatus der Leber im Rattenversuch (Anabole Wirksamkeit) Männliche Wistar-Ratten des SPF-Stammes Han/Bö (120 g Körpergewicht) wurden um 9 Uhr vormittags mit 0,4 ml Equi-Thesin (Jensen Salsbury Laboratories, Kansas City, USA) pro 100 g Körpergewicht in All gemeinnarkose versetzt, eröffnet und 0,3 pg des erfindungsgemässen Wirkstoffes in O,l.mlphysiolo- gischer Kochsalzlösung direkt in die vena portae injiziert. Nach 1, 2, 10 und 30 Minuten wurde der lobus dexter der Leber durch Frierstopp (1) ent nommen und bis zur Analyse bei -1500C aufbewahrt. Die Bestimmung des Glutathionstatus erfolgte nach der unter (2) und (3) beschriebenen Methode. Redu ziertes (GSH), oxidiertes (GSSG) und Gesamtglutathion (1) HOHORST, H.J., KREUTZ, F.H. und Bücher, Th. (1959); Biochem. Z. 332, 18-46 (2) HARISCH, G. und SCHOLE, J. (1971); Str.ahlentherapie 142, 494-501; (3) HARISCH, G. und SCHOLE, J. (1974); Z. Naturforsch. 29c , 261-266; (TG) wurden separat erfasst und die gemischten Glutathiondisulfide (XSSG) nach der Formel TG-(GSH + 2GSSG) errechnet. Die Ergebnisse sind in der folgenden Tabelle zusammengestellt. Tabelle Glutathionkonzentration der Rattenleber (Wistar, männlich, 120 g Körpergewicht) nach Verabreichung von 0,3 g Wirkstoff direkt in die vena portae Glutathionkonzentration Minuten nach Wirkstoffapplikation 0 1 2 10 30 TG 8,02 # 0,66 8,00 # 0,54 - 8,24 # 0,33 8,21 # 0,71 / g/g Leber g/g Leber g/g Leber g/g Leber (7)# (8) (7) (5) GSH 5,24 # 0,12 6,77 # 0,21## 6,20 # 0,50## 5,76 # 0,24## 5,34 # 0,11 g/g Leber g/g Leber g/g Leber g/g Leber g/g Leber (12) (9) (13) (6) (3) GSSG 0,161 # 0,02 0,116 # 0,01## - 0,120 # 0,04## 0,138 # 0,01 g/g Leber g/g Leber g/g Leber g/g Leber (10) (10) (12) (3) XSSG 2,46 1,00 - 2,24 2,59 (als SH Gluta- g/g Leber g/g Leber g/g Leber g/g Leber thion) GSH 32,5 58,4 48,0 38,7 GSSG # = Tierzahl TG = Gesamtglutathion GSSG = oxidiertes Glutathion ## = p < 0,001 GSH = reduziertes Glutathion XSSG = gemischte Glutathiondisulfi Schon 1 Minute nach der Wirkstoffgabe tritt eine für die Einwirkung einer anabolen (synthesefördern den) Substanz charakteristische, hochsignifikante Zunahme des reduzierten Glutathions ein, unter gleich eeitiger Abnahme der oxidierten Verbindung und der gemischten Glutathiondisulfide. Gesamtglutathion bleibt unverändert. Nach einer unter genau gleichen Bedingungen vorgenommenen Insulininjektion (0,1 E) ist 10 Minuten nach der Hormongabe eine entsprechende Reduktion des Glutathionsystems zu beobachten. Eine Natriumchlorid-Injektion (0,1 ml einer physiologi schen Kochsalz-Lösung) führt zu keiner signifikanten Änderung des Glutathionstatus. 6.) Schwimm-Leistungstest Unter streng kontrollierten Prüfbedingungen ist die ser Test besonders geeignet zur Gütekontrolle der er findungsgemässen Wirksubstanz, da mit Hilfe dieses Tests sowohl katabole wie anabole Effekte erfasst werden. Versuchsanstellung Für alle Versuche wurden weibliche Albino-Mäuse (NMRJ; 41-50 g Körpergewicht; Alter: 10 Monate) ver wendet. Diese Tiere wurden etwa 10 Tage an die neuen Umgebungsbedingungen adaptiert und während dieser Zeit in Versuchsgruppen zu je 10 Tieren vergleich baren Gewichts pro Käfig gehalten und Futter und Wasser ad libitum angeboten. Die Raumtemperatur lag bei 240C, die relative Luftfeuchtigkeit bei 50 % und die tägliche Beleuchtungsdauer betrug 12 Stunden. 16 Stunden vor dem Schwimmversuch wurde den Tieren das Futter entzogen. Für den Schwimmversuch wurden um 9,30 Uhr morgens jeweils 10 Tiere zeitlich versetzt in ein Wasser becken von 0,64 qm Oberfläche (Inhalt 0,32 m3} ge + Die bracht. Die Wassertemperatur betrug 200C + 1 C. Ausserdem wurden dem Wasser 20 ml eines neutralen Detergens zugesetzt, um eine Luftpolsterbildung im Fell bei den schwimmenden Tieren zu verhindern. Die Schwimmzeit bis zur Erschöpfung (Untertauchen des Kopfes) wurde für jede Maus getrennt registriert. Anschliessend wurden die Tiere mit einem Föhn ge trocknet. Jede Gruppe kam nur einmal in den Ver such. Todesfälle traten bei diesem Versuch nicht auf. Die Wirkstoffverabreichung erfolgt in 0,2 ml einer physiologischen Kochsalzlösung pro 20 g Maus. Die damit verbundene Stresssituation wurde durch ent sprechende Kontrollgruppen, die nur das Lösungsmit tel erhielten, berücksichtigt. Ergebnis: Durch 0,09 pg/g Tier wird die Schwimmleistung unter den gegebenen Prüfbedingungen um 186,7 % gesteigert. (vgl. Fig. 10). Nachfolgend wird die Herstellung der erfindungsgemässen Substanz anhand eines Beispiels erläutert. Beispiel 20 kg pulverisiertes NORD's-Lignin und 2 kg einer pulverförmigen Mischung aus Fe203, Braunstein und Montmorillonit im Verhältnis 85 -: 10 : 5 werden mit 2 n-Natrolauge und dann mit 0,3 n-Ammoniumhydroxidlösung zu einer rührfähigen Dispersion verdünnt. Man rührt 185 g d-Glucose ein und leitet dann in die bei Raumtemperatur gerührte Suspension durch eine Tauchfritte Sauerstoff ein Nach ca. 15 bis 18 Monaten ist die Reaktion beendet. Der pH Wert der Suspension ist dann um 1 - 2 Einheiten gestiegen. Man filtriert die ungelösten Anteile ab und dampft das Filtrat am Rotationsverdampfer unter Vakuum ein. Ein Teil des getrockneten Filtrats wird in 10 Teilen 2 Zeiger Natronlauge suspendiert und dabei teilweise aufgelöst. Der. ungelöste Anteil wird auf übliche Weise abfiltriert und verworfen. Durch Einrühren eines Kationenaustauschers in das wässrige Filtrat wird ein pH-Wert von 11,0 eingestellt. Der Kationenaustauscher wird anschliessend abfiltriert. Die wässrige Lösung wird unter einem Druck von 2,8 bar durch eine asymmetrische Druckfiltrationsmembran mit einer nominellen Molekulartrennschnittsgrenze von 20000-Daltons filtriert. Während der-Filtration lässt man Schwingungen von 100 Hertz senkrecht zur Membranoberfläche einwirken. In-das erhaltene Filtrat wird ein Kationenaustauscher -eingerührt, bis ein pH-Wert von 2,1 eingestellt ist. Man filtriert rasch vom Ionenaustauscher ab und zentrifugiert. Das gelartige Sediment und der klare Uberstand werden durch Dekantieren getrennt. a) Das gelartige Sediment wird in verdünnter Ralilauge bei pH 9 gelöst. Die klare Lösung wird mit einem Kationenaustauscher versetzt, bis ein pH-Wert von 5,5 erreicht ist. b) Die überstehende Lösung von pH 2,1 wird mit einem Magnetron dielektrisch auf +95OC erwärmt und dann rasch auf +5 0C abgekühlt. Das entstehende Sediment wird abzentrifugiert und verworfen Durch Zugabe von Kaliumhydroxidlösung zum klaren Uberstand wird unter Kontrolle mit der Glaselektrode pH 5,5 einge stellt. Die nach a) und b) erhaltenen Lösungen werden vereinigt und lyophilisiert. Es verbleibt ein dudkelbrauner Feststoff. Galenische Zubereitungen Ampulle, Lösung, Spray, Sirup, Suppositorium, Stylus, Granulat, Tablette, Dragee, Kapsel, Salbe (Haft-Gel, -Creme, -Paste). Anwendungsformen i.m., i.v., s.c., i.a., lokal, oral, rektal, vaginal. Ampullen Konzentrationsbereich: 4 bis 4000 jig, bevorzugt 8 bis 40 Lösungsmittel: 0,9 %ige NaCl-Lösung Volumen: 1,0 ml i.m., i.v., i.c., s.c., i.a. Lokale Anwendung Als Gel, Creme, Spray, Haftpaste, Tropfen, Granulat u.a. Konzentration 0,05 - 10 e Standardwerte: 0,4 - 2 %. Orale Anwendung Syrup, Lutschtablette, Pastille usw. Konzentrationsbereich -0,5 - 3 %. Indikationsgebiete Entzündliche und degenerative sowie schmerzhafte Erkrankung an - Haut und Schleimhaut wie Verbrennungen, Dekubitus, Allergien, Pruritus, Stomatitis, Gingivitis, Parodontitis, Rhinitis, Konjunktivitis, Vaginitis, Ulzerationen im Gastrointestinaltrakt - Gefässen wie Venopathien, Ulcus cruris, hämorrhoidales Syndrom, Arteriosklerose - Bindegewebe und Stützgewebe wie Rheuma, Arthrosen, Arthritiden, Osteoporose, Osteosynthese-Störungen - Organen wie Leber, Herz, Gehirn, Skelettmuskel sowie zur Prophylaxe und Therapie bei Regulationsstörungen des intermediären Stoffwechsels wie Prä-Diabetes, Diabetes, Proteinstoffwechsel-Störungen, mangelhafter Energieverwertung, verminderter Gewebereagibilität, verzögerter Wundheilung, verminderter Resistenz gegen Erreger und Tumoren. Vergleich der relativen Wirkungen am Entzündungsmodell zwischen der erfindungsgemässen Substanz (FL 70) und Phenylbutazon Modell Dosierung FL 70 Phenylbutazon Bolus-alba-ödem i.m. 122,2 100 3 x 10 mg/kg Carrageenin-ödem i.m. 109 100 3 x 10 mg/kg Formalin-ödem i.m. 241 100 3 x 10 mg/kg Dextran-ödem i.m. 475 100 3-x 10 mg/kg Exsudationshemmung i @ 266 100 im Polyurethan- 40 mg/kg schaumtest Chloroform- i.v., i.p. 166 100 Reiztest 40 mg/kg Erythemverzögernde @@ 2 102 100 Wirksamkeit epi-300 g/cm kutan Akute Toxizität von FL 70 (LD50 in mg/kg) Tierart Applikation LD50 mg/kg Maus i.v. 367,5 i.p. 628 s.c. 1080 p.o. 12700 Ratte i.p. 480 i.m. 710 s.c. 900 p.o. 10200 Hund p.o. > 4000 Akute Toxizität von Phenylbutazon (LD50 in mg/kg) Maus i.v. 123 i.p. 336 p.o. 680 Ratte i.p. 215 p.o. 467 Vergleich der akuten Toxizität von FL 70 und Phenylbutazon/PB Tierart Applikation Quotient FL 70 Phenylbutazon Maus i.v. # 4,2 i.p. # 1,4 p.o. > 5,9 Ratte i.p. N2,7 p.o. > 8,5 Je nach Tierart und Applikationsart ist Phenylbutazon #1,4 bis > 8,5 mal toxischer als FL 70.

Claims: Patentansprüche 1. Wasserlöslicher, niedermolekularer, lignoider Wirkstoff, d a d ur c h g e k e n n z e i c h n'e t dass er a)'als Feststoff ein ESR-Spektrum gemäss Abb. 1, b) in wässrig-neutraler Lösung ein ESR-Spektrum gemäss Abb. 2, in wässrig-alkalischer Lösung bei pH 10 ein ESR-Spektrum gemäss Abb. 3, c) in wässriger Lösung ein Fluoreszenzspektrum gemäss Abb. 4 bis 9, d) beim Chromophor-Gruppentest bei Erhöhung des pH Wertes vom sauren in den basischen Bereich einen Rückgang der Transparenz von 100 % auf etwa 20 % und e) beim Glutathion-Redoxstatustest nach Hohorst et al, 1959, Biochem. Z. 332, 18-46) ab 60 sec. nach der Applikation eine charakteristische Zunahme des reduzierten Glutathions bei gleichzeitiger Abnahme des oxidierten Glutathions und der gemischten Gluta thiondisul:fide gemäss Tabelle (vgl. S 12) zeigt. 2. Verfahren zur Herstellung des Wirkstoffs nach Anspruch 1, d a d u r c h g e k e n n z e i c h n e t, dass man a) kunstliche oder native Monolignole in wässriger oder wässrig/organischer, saurer oder neutraler Lösung unter Sauerstoffzufuhr und unter Zusatz von wasser löslichen Polysacchariden einer enzymatischen De hydrierungspolymerisation unterwirft, b) die anfallenden Dehydrierungspolymerisate (DHPs) in alkalischem Milieu in Gegenwart von Sauerstoff und in Anwesenheit eines Oxidationskatalysators bis zur Bildung wasserlöslicher, gefärbter Umsetzungsproduk te oxidativ depolymerisiert und gleichzeitig re polymerisiert, c) von dem aus wasserunlöslichen, oxidativ noch. nicht umgesetzten DHPs und wasserlöslichen, umgesetzten Reaktionsprodukten bestehenden Gemisch den wasser löslichen Anteil abtrennt und verwirft, d) den Überstand klar filtriert und unter Einwirkung mechanischer Schwingungen einer Molekularfiltration an Ultrafiltrationsmembranen mit nomineller Trenn schnittgrenzen von 5000 bis 35000 Daltons unter wirft, e) das alkalische Molekularfiltrat auf einen pH-Wert von 4,5 - 6,0 einstellt und das Filtrat gewinnt oder f) vorzugsweise auf etwa 2,1 bis -3,4 einstellt, an- schliessend zentrifugiert, die bei der Zentrifugation als Gel erhaltene säureempfindliche Fraktion abtrennt, mittels Alkali auf etwa pH 9 einstellt und die da bei entstehende klare wässrige Lösung zur Entfer nung von überschüssigem Alkali mittels eines Kationen austauschers auf pH 3,5 bis 6,9 zurückstellt (Frak tion 1), die als Uberstand der Zentrifugation erhal- tene säurestabile Fraktion einem Thermoschock aus setzt und die erhaltene leicht getrübte Lösung vom unlöslichen Niederschlag abtrennt, den klaren Uber stand mittels Alkali auf¯pH 3,5 bis 6,9 einstellt und diese Fraktion 2 mit der Fraktion 1 vereinigt. 3. Verfahren nach Anspruch 2, d a d u r c h g e k e n n z e i c h n e t , dass die Verfahrensstufe a) in Gegenwart von 1,5 bis 9,5 Gew.-% wasserlöslicher Polysaccharide durchgeführt wird. 4. Verfahren nach einem der Ansprüche 2 bis 3, d a d u r c h g e k e n n z e i c h n e t , dass man die Verfahrens stufe a) mittels Reduktase oder Peroxydase durchführt. 5. Verfahren nach einem der Ansprüche 2 bis 4, d a d u r c h g e k e n n z e i c h n .e t , dass man die Verfahrens stufe b) unter Einleiten und/oder katalytischer Erzeugung von Sauerstoff durchführt. 6. Verfahren nach einem der Ansprüche 2 bis 5, d a d u r c h g e k e n n z e i c h n e t , dass die Verfahrensstufe b) in Gegenwart von MnO2, 05-Fe203 und/oder hochdispersem SiO2 als Oxidationskatalysator durchgeführt wird. 7. Verfahren nach einem der Ansprüche 2 bis 6, d a d u r c h g e k e n n z e i c h n e t , dass die Verfahrens stufe b) in einem Temperaturbereich von +10 bis +6O0C durchgeführt wird. 8. Verfahren nach einem der Ansprüche 2 bis 7, d a d u r c h g e k e n n z e i c h n e t , dass die Verfahrensstufe b) bis zur Bildung von 25 bis 95 % wasserlöslicher Umsetzungsprodukte, bezogen auf die eingesetzten DHPs, durchgeführt wird. 9. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 bis 8, dadurch gekennzeichnet, dass man im Schallbereich die Schwingungen vorzugsweise senkrecht und im Ultraschallbereich vorzugsweise parallel zur Molekularfiltrationsmembran einwirken lässt. 10. Verfahren nach einem derAnsprüche 2 bis 9, d a d u r c h g e k e n n .z e i c h n e t , dass man in der Verfahrens stufe d) eine alkali-beständige Molekularfi ltrationsmembran mit nominellen Trennschnittgrenzen zwischen 10000 bis 25000 Dalton verwendet. 11. Verfahren nach einem der Ansprüche 2 bis 10, d a d u r c h g e k e n n z e i c h n e t , dass man in der Verfahrensstufe f) die säurestabile Fraktion auf +95 C erhitzt und anschliessend rasch auf +50C abkühlt. 12. Verfahren nach einem der Ansprüche 2 und 5 bis 11, da a d u r c h g e k e n n z e i c h n e t , dass man anstelle von synthetischen Dehydrierungspolymerisaten in der. Verfahrensstufe b) native Dehydrierungspolymerisate als Ausgangsmaterial einsetzt. 13. Pharmazeutische Zubereitung, efithaltend die Wirksubstanz nacheinem der Ansprüche l bis 12, neben tb- lichen Zusatz- und/oder Trägerstoffen. 14. Pharmazeutische Zubereitung zur lokalen Anwendung enthaltend die Wirksubstanz nach einem der Ansprüche 1 - 12 zusammen mit Salicylsäurederivaten, Aminosäuren oder Vitaminen neben üblichen Zusatz- und/oder Trägerstoffen.

Inventors: MACH, WALTER, DR., DIPL.-PHYS.
Applicants: MACH, WALTER, DR., DIPL.-PHYS.
Application year: 1980
Main classification: A61K35
IPC codes: A61K35, C07G1, A61P3, A61P29, A61K36, A61P43, A61K31, A61K45