TRIPEPTIDE DERIVATIVES AND THEIR USE IN A PROCESS FOR DETERMINING ENZYMES

Abstract: Tripeptidic derivatives are used for the quantitative determination of proteolytic enzymes, particularly enzymes of the class E.C. 3.4.21. These tripeptidic derivatives are compounds of the formula H-D-X-Y-Z-R, wherein X is one of the cyclohexylglycyl, cyclohexylalanyl, p-hydroxyhexylalanyl, phenylglycyl phenylalanyl, tyrosyl, leucyl, isoleucyl, norleucyl, valyl, norvalyl, //c-aminobutyryl, alanyl, prolyl or pipecolinoyl groups; Y is one of the cyclohexylglycyl, cyclohexylalanyl, p-hydroxycyclohexylalanyl, phenylglycyl, phenylalanyl or tyrosyl groups and, in as much as X is restricted to the cyclohexylglycyl, cyclohexylalanyl, p-hydroxycyclohexylalanyl, phenylglycyl, phenylalanyl or tyrosyl group s, the symbol Y may represent a leucyl, isoleucyl, norleucyl, valyl, norvalyl, //c-aminobutyryl, alanyl, prolyl or pipecolinoyl group; Z is an arginyl or lysyl group; and R is a chromogenic group, which may be eliminated by enzymatic hydrolysis and which is susceptible to produce a colour or fluorescent compound. The tripeptidic derivatives mentionned are used preferably in the form of the salts thereof with acids.

Description: 11Tripeptidderivate und Verfahren zur Bestimmung von Enzymen mittels derselben" Die vorliegende Erfindung betrifft neue Tripeptidderivate, die als Substrate zur quantitativen Bestimmung von proteolytischen Enzymen, insbesondere Enzymen, der Enzymklasse 3.4.21, z.B. von Organ- oder Glandulärkallikreinen, Thrombin und Plasmin, verwendbar sind. Sogenanntes Organkallikrein oder Glandulärkallikrein wird von verschiedenen Organen und Düsen, z.B. Pankreasdrüse, Speicheldrüse, Niere, Schleimhaut des Verdauungstraktes, etc., erzeugt und ion Form von Proenzym oder in aktiver-Form ausge schieden. Diese Organ- oder Glandulärkallikreine sind in chemischer und physiologischer Hinsicht von Plasmakallikrein verschieden. Bei gewissen pathologischen Zuständen sinkt oder steigt der Organkallikrein-Sekretspiegel unter bzw. über den Normalwert. So sinkt beispielsweise die Kallikreinausscheidung im Harn von Nierenkranken wesentlich unter den Normalwert. Bei Kranken mit Scbrumpfnieren ist die Kallikreinausscheidung nahezu vollstandig unterbunden. Bei Kranken mit essentiellem Bluthochdruck ist die Ausscheidung von Kalltkrein im 24-Stunden-Harn signifikant, durchschnittlich um 50 des Normalwertes, herabgesetzt (siehe z.B. H.S. Margolius in "Chemistry and Biology of the Kallikrein-Kinin System in Health and Disease", 1974, S. 399-409). Es ist deshalb wichtig, tiber einfache Methoden zur raschen quantitativen Bestimmung der OrgankAlli- kreine zu verfUgen.- Es ist bekannt, z.B. Harnkallikrein durch Esterolyse von gewissen Argininestern, z.B. Tosyl-argininmethylester (TAME), zu bestimmen. Bei einer verbesserten este rolytischen Methode wird mit Tritium markierter Tosyl-argininmethylester verwendet und die Radioaktivität des esterolytisch freigesetzten markierten Methanols gemessen. Diese esteroly- tischen Methoden besitzen den Nachteil, dass sie unbiologisch sind, insofern als die Kallikreine proteolytische Enzyme sind, die natürliche Peptidketten amidolytisch und nicht esterolytisch spalten. Estersubstrate besitzen ferner den Nachteil, dass sie durch zahlreiche andere Enzyme unspezifisch, d.h. durch Kallikrein nicht spezifisch gespalten werden. Die unter Verwendung von mit Tritium markiertem TAME durchgeführte Bestimmungsmethode ist insofern umständlich, als vor der Messung der Radioaktivität des mit Tritium markierten Methanols das letztere aus dem Esterolysegemisch mit einer mit Wasser nicht mischbaren Flüssigkeit extrahiert werden muss, da sonst der noch im Esterolysegemisch vorhandene markierte TAME die Messung verunmöglichen würde. In der deutschen Offenlegungsschrift Nr. 25 27 932 sind Substrate der Formel R1-Pro-X-Arg-NH-R2 beschrieben, in welcher R1 eine blockierende Gruppe, -NH-R2 eine chromogene Gruppe und X eine Phenylalanyl-, ss-Cyclohexylalanyl-, Phenylglycyl- oder Tyrosylgruppe darstellen. Diese Substrate werden durch Plasmakallikrein sehr leicht gespalten und liefern ein farbiges Spaltprodukt R -NHS, dessen Menge durch photometrische, spektrophotometrische oder fluoreszenzphotometrische Methoden gemessen werden kann. Man hat versucht, diese Substrate auch zur Bestimmung von Organ- oder Glandulärkallikreinen zu verwenden. Es hat sich jedoch gezeigt, dass die genannten Substrate überraschenderweise gegenüber Organ- oder Glandu lärkallikreinen unempfindlich sind, d.h. von den letzteren nicht oder nur in geringem Ausmass gespalten werden. In der deutschen Offenlegungsschrift Nr. 26 29 067 sind Tripeptidderivate beschrieben, die als Substrate zur Be sv rmmmXg von gewissen proteolytischen Enzymen, z.B. Glandu lÅarkallikreinen und Plasmin, verwendbar sind. Zwei Beispiele sind dort genannt, nämlich H-D-Valyl-leucyl-arginyl-p-nitro- anilid.ihydrochlorid und H-D-Valyl-leucyl-lysyl-p-nitroanilid.dihydrochlorid. Das erste Tripeptidderivat ist ein Sub strat für Glandulärkallikrein, während das zweite Tripeptidderivat ein Substrat für Plasmin darstellt. Die beiden Verbindungen werden durch die genannten Enzyme gespalten, wobei sich p-Nitroanilin bildet, dessen Menge photometrisch oder spektrophotometrisch gemessen werden kann. Die Suszeptibilität des H-D-Valyl-leucyl-arginyl-p-nitroanilid.dihydrochlorids erreicht Jedoch gerade knapp den Grenzwert, der für die genaue Bestimmung des Urinkallikreins in unkonzentriertem Urin erforderlich ist. Verwendet man Jedoch das genannte Amidsubstrat in konzentriertem Urin, so wird die photometrische Messung des p-Nitroanilins durch die Eigenfarbe des Urins stark gestört. Die beiden ersten Aminosäuren der Tripeptidkette der in der oben genannten Auslegeschrift beschriebenen zwei Tripeptidderivate tragen hydrophobe Isopropylgruppen in a- bzw. 8-Stellung. Man hat versucht, durch Ersetzen der Isopropylgruppen durch aromatische Gruppen, z.B. Phenylreste, jedoch unter Beibehaltung der Grundstruktur der Dipeptidkette, die Hydrophobizität des Substrates und damit dessen Suszeptibilität gegenüber Glandulärkallikrein zu erhöhen. Dieser Versuch ist jedoch fehlgeschlagen. Die durch Einführung von aromatischen Gruppen erhaltenen Tripeptidsubstrate werden durch Glandulärkallikreine überhaupt nicht oder höchstens in sehr geringem Ausmass gespalten. Es hat sich jedoch gezeigt, dass diese aromatische Gruppen tragenden Tripeptidsubstrate eine überraschend hohe Suszeptibilität gegenüber Plasmin aufweisen. Es wurde ferner unerwarteterweise gefunden, dass man durch Hydrierung der aromatischen Reste in den genannten Tripeptid Plasminsubstraten zu neuen Tripeptidsubstraten gelangt, die eine erstaunlich hohe Suszeptibilität gegenüber Organ- oder Glandulärkallikreinen aufweisen. Man hatte bis jetzt geglaubt, dass man zum Aufbau der Tripeptidketten nur natürlich vorkommende Aminosäuren verwenden konne, um Substrate zu erhalten, die von proteolytischen Enzymen gespalten würden. Es war deshalb überraschend, dass man durch Verwendung von Cyclohexylreste enthaltenden Aminosäuren, die in der Natur nicht vorkommen, chromogene Substrate erhalten kann, die durch Organoder Glandularkallikreine und andere proteolytische Enzyme, z.B. Plasiakallikrein, leicht gespalten werden. Die Erfindung betrifft neue chromogene Substrate, die eine hohe Suszeptibilität gegenüber gewissen proteolytischen Enzymen, insbesondere Enzymen der Enzymklasse E.C. 3.4.21., z.B. Organ- oder Glandulärkallikreinen, Plasmin und Thrombin, aufweisen und somit zur quantitativen Bestimmung dieser Enzyme verwendbar sind. Diese Substrate sind Tripeptidderivate der Formel R-D-K-Y-Z-R I in welcher X eine Cyclohexylglycyl-, Cyclohexylalanyl-, p-Hydroxycyclo hexylalanyl-, Phenylglycyl-, Phenylalanyl-, Tyrosyl-, Leucyl-, ISoleucyl-, Norleucyl-, Valyl-, Norvalyl-, a-Aminobutyryl-, Alanyl-, Prolyl- oder Pipecoliroyl-Gruppe darstellt, Y eine Oyc lohexylglycyl-, Cyclohexylalanyl-, p-Hydroxycyclo- hexylalanyl-, Phenylglycyl-, Phenylalanyl- oder Tyrosyl Gruppe und, falls die Bedeutung von X auf Cyclohexylglycyl, Cyclohexylalanyl, p-Hydroxycyclohexylalanyl, Phenylglycyl, Phenylalanyl oder Tyrosyl beschrankt ist, zusätzlich eine Leucyl-, Isoleucyl-, Norleucyl-, Valyl-, Norvalyl-, a-Ami- nobutyryl-, Alanyl-, Prolyl- oder Pipecolinoyl-Gruppe dar stellt, Z eine Arginyl- oder Lysylgruppe darstellt und R eine chromogene Gruppe darstellt, welche durch enzymatische Hydrolyse abspaltbar ist und eine farbige oder fluoreszie- rende Verbindung R-NH2 zu bilden vermag. Die in Formel I mit R bezeichnete chromogene Gruppe kann beispielsweise eine p-Nitrophenylamino-, 2-Naphthylamino-, 4-Methoxy-2-naphthylamino-, 4-Methyl-cumaryl-(7)-amino1,3-Di (Methoxycarbonyl)-phenyl-(5)-amino-, Chinonyl- oder Nitrochinonyl-Gruppe sein. Die Tripeptidderivate der Formel I sind als solche in wässrigen Medien schwer löslich und werden deshalb vorzugsweise in Form ihrer Salze mit Säuren verwendet, insbesondere ihre Salze mit Mineralsäuren, z.B. HCl, HBr, H2SO4, H3PO4, oder mit organischen Säuren, zB. Ameisensäure, Essigsäure, Propionsäure, Trimethylessigsäure, Methoxyessigsäure, halogenierte Essigsäuren, wie Trichlor- oder Trifluoressigsäure > Glykokollsäure, Milchsäure, Oxalsäure, Malonsäure, Zitronen- säure, Benzoesäure, im Kern substituierte aromatische Säuren, wie Toluylsäuren, Chlor- oder Brombenzoesäuren, Methoxybenzoe- säuren und Aminobenzoesäuren, Phthalsäure, etc. Die Art der verwendeten Säure ist nicht kritisch, da sie an der Reaktion zwischen den Substraten und den Enzymen nicht teilnimmt. Die Substrate der Formel I bzw. deren Salze mit Säuren werden unter der Einwirkung von gewissen proteolytischen Enzymen, insbesondere Enzymen der Enzymklasse E.C. 3.4.21. (s. "Enzyme Nomenclature", Elsevier Scientific Publishing Company, Amsterdam 1973, S. 238 u.f.), z.B. Organ- und Glandulärkallikreinen, Plasmin und Thrombin, hydrolytisch gespalten, wobei ein farbiges oder fluoreszierendes Spaltprodukt der Formel R-NH2 entsteht, dessen Menge durch photometrische, spektrophotometrische, fluoressenzspektrophotometrische oder elektrochemische Methoden gemessen werden kann. Die neuen Substrate sind somit zur quantitativen Bestimmung von proteolytischen Enzymen, insbesondere Enzymen der Enzymklasse E.C. 3.4.21., welche natürliche Peptidketten an der Carboxylseite. sowohl von Arginin als auch Lysin spalten, z.B. Organ- oder Glandulärkallikreinen, Plasmin, Plasmakallikrein, Thrombin sowie deren Inhibitoren und Proenzyme und auch anderer Faktoren, die an der Bildung oder Inhibition der genannten Enzyme beteiligt sind, geeignet. Eine bevorzugte Gruppe von Trlpeptidderivaten beinhaltet Verbindungen der Formel I, in welcher a) X eine CyclohexylElycyl-, Cyclohexylalanyl- oder Cyclohe xyltyrosyl-Gruppe und eine lanyl-, a-Aminobutyryl-, Valyl-, Norvalyl-, Leucylr Norleucyl-, Isoleucyl-, Prolyl- oder Pipecolyl-Gruppe dar stellen, oder b) Y eine Phenylalanyl-, Phenylglycyl- oder Tyrosyl-Gruppe und X eine Cyclohexylglycyl-, Cyclohexylalanyl-, Cyclohexyl- tyrosyl-, Phenylalanyl- oder Phenylglycyl-Gruppe darstel len, oder c) Y eine Cyclohexylglycyl-, Cyclohexylalanyl-, Cyclohexyl tyrosyl-, Phenylglycyl- oder Tyrosyl-Gruppe darstellen und X eine Alanyl-, a-Aminobutyryl-, Valyl-, Nvalyl-, Leucyl-, Norleucyl-, Isoleucyl- oder Prolyl-Gruppe darstellen, oder d) X eine Phenylalanyl-, Phenylglycyl- oder Cyclohexylglycyl- Gruppe und Y eine Cyclohexylalanyl-, Cyclohexylglycyl- oder Cyclohexyltyrosyl-Gruppe darstellen. Die Tripeptidderivate, die in den nachfolgenden Ausführungsbeispielen 3, 5, 7, 9, 12, 13, 14, 15, 16, 19, 23, 24, 34, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 65, 71, 72 und 73 beschrie ben sind, eignen sich besonders als Substrate zur Bestimmung von Urinkallikrein. Zur Bestimmung von Kallikrein in menschlichem Sputum kann man die in den nachfolgenden Ausführungsbeispielen 1, 3, 5, 7, 9, 12, 13, 15, 16, 23, 27, 34, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 65, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 75, 76 und 77 beschriebenen Tripeptidderivate verwenden. Die in den nachfolgenden Ausführungsbeispielen 1, 2, 4, 6, 8, 10, 16, 17, 18, 19, 23, 29, 32, 33, 35, 36, 37, 39, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 51, 57, 63, 64, 67, 68, 71, 73 und 74 beschriebenen Tripeptidderivate bilden eine Gruppe von Substraten, die zur Bestimmung von Plasmin eingesetzt werden können. Die in den nachfolgenden Ausfehrungsbeispielen 19, 23, 27, 28, 48, 49, 51, 52, 56, 57, 58, 65, 66, 68, 69, 70, 75, 76 und 77 beschriebenen Tripeptidderivate stellen sehr empfindliche Substrate für die Bestimmung von Thrombin dar. Die Erfindung bezieht sich ferner auf ein Verfahren zur quantitativen Bestimmung von proteolytischen Enzymen der Enzymklasse E.C. 3.4.21., welche natürlich Peptidketten auf der Carboxylseite sowohl von Arginin als auch von Lysin spalten, z.B. von Organ- oder Glandulärkallikreienen, Plasmin und Thrombin. Das erfindungsgemässe Verfahren ist dadurch gekennzeichnet, dass man Materialien, welche die oben genannten Enzyme enthalten oder in welchen die letzteren gebildet oder verbraucht werden, mit einem Tripeptidderivat der Formel I zur Reaktion bringt und die Menge des durch die hydrolytische Ein wirkung des Enzyms auf das Tripeptidderivat gebildeten farbigen oder fluoreszierenden Spaltproduktes R-NH2 durch photometrische, spektrophotometrische, fluoresaenzspektrophotometri- sche oder elektrochemische Methoden misst. Man kann nach diesem Verfahren beispielsweise den Enzymgehalt von Enzymprä paraten oder den Enzymspiegel in Körperflüssigkeiten des Men schen, z.B. in Urin, Pankreassaft, Darmschleim, MilchdrCsen- sekret, Schweissdrüsensekret, Sputum und Blut, und der Säuge tiere bestimmen. Das erfindungsgemässe Verfahren eignet sich insbesondere zur quantitativen Bestimmung von Organ- oder Glandulärkallikreinen in den oben genannten Köfrperflüssigkei- ten und von Plasmakallikrein. Mittels dieses Verfahrens kön nen freie Organkallikreine und Schleimkallikreine sowie die sich aus Präklallikreinen bildenden Kallikreine und ferner phy siologische oder nicht-physiologische Inhibitoren der Kallikre ine und physiologische oder nicht-physiologische Aktivatoren der Präkallikreine bestimmt werden. Die Tripeptidderivate der Formel I können nach den im Folgenden beschriebenen Methoden hergestellt werden: 1) Die chromogene Gruppe R wird an die Carboxylgruppe des C-terminalen Arginins oder Lysins angehängt, wobei deren a-Aminogruppe durch eine Schutzgruppe, z.B. eine Carbobenzoxy- oder tert.-Butoxycarbonylgruppe, die 6-Guanidylgruppe im Fall des Arginins durch Protonisierung, z.B. mit HC1, Nitrierung oder Tosylierung, und die -Aminogruppe im Fall des Lysins mit einer Carbobenzoxygruppe oder einer p-Methyl-, p-Methoxyoder p-Chlor-benzyloxyearbonylgruppe oder einer tert.-Butoxycarbonylgruppe geschützt werden. Die C-terminale R-NH-Gruppe dient während des stufenweisen Aufbaus der Peptidkette ebenfalls als Schutzgruppe. Die anderen Schutzgruppen können Je nach Bedarf selektiv abgespalten werden, um die weiteren Aminosäurederivate anzuknüpfen, bis die gewünschte Peptidkette vollständig aufgebaut ist. Zum Schluss kennen die verbleibenden Schutzgruppen vollständig abgespalten werden, ohne dass die R-NH-Gruppe in Mitleidenschaft gezogen wird (siehe z.B. Miklos Bodansky et al., "Peptide Synthesis", Interscience Publishers, 1966, 8. 163-165). 2) Zuerst wird die Peptidkette (nach Bodansky, loc. cit.) aufgebaut, wobei jedoch die C-terminale Carboxylgruppe des Arginins bzw. Lysins mit einer üblichen Estergruppe, z.B. einer Methoxy-, Aethoxy- oder Benzyloxygruppe im Fall des Arginins oder einer tert. -Butoxygruppe im Fall des Lysins, geschützt wird. Die Estergruppen können durch alkalische Hydrolyse abgespalten werden, mit Ausnahme der tert. -Butoxygruppe, die selektiv mittels Trifluoressigsäure abgespalten werden muss. Falls die 6-Guanidylgruppe des Arginins protonisiert ist, wird die genannte Estergruppe mittels Trypsin enzymatisch abgespalten, wobei keine Racemisierung eintritt. Hierauf wird die chromogene Gruppe R-NH- angeknüpft. Wenn die 6-Guanidinogruppe des Arginins durch eine Nitro- oder Tosylgruppe bzw. die E-Aminogruppe des Lysins durch eine Carbobenzoxy oder tert.-Butoxygruppe und die N-terminale a-Aminogruppe des Tripeptidderivates durch eine Carbobenzoxygruppe oder eine p-Methyl-, p-Methoxy- oder p-Chlor-benzyloxycarbonylgruppe oder eine tert.-Butoxygruppe geschützt sind, so werden diese Schutz -gruppen gleichzeitig abgespalten. Die Abspaltung kann durch Behandlung des geschützten Tripeptidderivats mit wasserfreiem HF bei Raumtemperatur durchgeführt werden, wobei alle oben genannten Amino- bzw. 6-Guanidino-Schutzgruppen abgespalten werden. Die Abspaltung kann auch durch Behandlung mit 2N HBr in Eisessig bei Raumtemperatur durchgeführt werden, wenn das ge schützt Tripeptidderivat keine Nitro- oder Tosyl-Schutzgruppe enthält. Die Herstellung der erfindungsgemässen Tripeptidderivate ist in den nachfolgenden Ausführungsbeispielen ausfUhr- lich beschrieben. Die Analysen der gemäss den Beispielen erhaltenen Eluate und Produkte wurden durch Dünnscbichtchromatographie unter Verwendung von mit Siliciumdioxidgel überzogenen Glasplatten (Merck, F 254) durchgeführt. Die Dünnschichtchromatogramme wurden mittels der folgenden Lösungsmittelsysteme entwickelt: A Chloroform/Methanol (9 : 1) Bn-Propanol/Essigsäureäthyloster/Wasser (7 : 1 : 2) C n-Butanol/Essigsäure/Wasser (3 : 1 : 1) Es werden die folgenden Abkürzungen verwendet: AcOH = Essigsäure Ala = Alanin Arg = Arginin BOC = tert. - Butoxycarbonyl But = a-Aminobuttersäure Cbo = Carbobenzoxy CHA = Cyclohexylalanin CHG = Cyclohexylglycin CHT = Cyclohexyltyrosin = p-Hydroxycyclohexylalanin DMF = Dimethylformamid DPA = 1,3-Di(methoxycarbonyl)-phenyl-(5)-amid DSC = Dünnschichtchromatogramm Et3N = Triäthylamin HMPTA N,N,N',N',N",N"-Hexamethjyl-phosphorsäure triamid Ile = Isoleucin = Leucin = Lösungsmittelsystem Lys = Lysin MCA = 4-Methyl-cumaryl-(7)-amid MeOH = Methanol 4-MeO-2-NA = 4-Methoxy-2-naphthylamid NLeu = Norleucin NVal = Norvalin OpNP = p-Nitrophenoxy Phe = Phenylalanin Ph'Gly = Phenylglycin Pip = Pipecolinsäure pNA = p-Nitroanilid Pro = Prolin THF = Tetrahydrofuran Tyr = Tyrosin Val = Valin Wenn nichts anderes vermerkt ist, besitzen die Aminosäuren in den Peptidketten die L-Form. Beispiel 1 H-D-CHG-CHA-Arg-pNA.2HBr la. Cbo-Arg-pNA.HC1 In einem Dreihalsrundkolben von 250 ml Inhalt wurden 16,0 g (47,0 mMol) über P205 im Vakuum getrocknetes Cbo-Arg OH.HC1 in 90 ml absolutem HMPTA unter Feuchtigkeitsausschluss bei 20 0C gelöst. Bei Zimmertemperatur wurden der erhaltenen Lösung zuerst eine Lösung von 4,74 g (47,0 mMol) Et3N in 10 ml HMPTA und dann 16,4 g (100 mMol) p-Nitrophenylisocyanat (100%iger Ueberschuss) portionenweise zugesetzt. Nach 24 Stunden Reaktionszeit bei 20 0C wurde das HMPTA im Vakuum grösstenteils abdestilliert. Der Rückstand wurde mehrmals mit 30%iger AcOH extrahiert. Der Rückstand wurde verworfen. Die vereinigten Essigsäureextrakte wurden zur weiteren Reinigung auf eine mit 30%iger AcOH äquilibrierte "Sephadex G-15"-Säule aufgetragen und mit 30%iger AcOH eluiert. Diejenige Fraktion des AcOH-Eluates, die sich durch Trypsinbehandlung unter Freiset- zung von p-Nitroanilin spalten liess, wurde gefriergetrocknet. Man erhielt 12,6 g eines amorphen Pulvers, das im DSC im LMS C einheitlich war. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C20H25N6O5Cl aergaben die folgenden Werte (die aus der Bruttoformel ermittelten Werte sind in Klammern gesetzt): C - 51,29% (51,67%), H = 5.48 (5,42%), N = 17,92 (18,08%), Cl = 7,50 (7,63%). 1b. 2HBr. H.Arg-pNA Unter Feuchtigkeitsausschluss wurden 4,65 g (10 mMel) der Verbindung la mit 40 ml .2N HBr in Eisessig unter Rühren 45 Min. bei 200C behandelt. Das Aminosäurederivat löste sich dabei unter C02-Entwicklung. Die Reaktionslösung wurde unter intensivem RUhren zu 250 ml absolutem Aether zugetropft, wobei 2HBr-R-Arg-pNA ausfiel. Die Aetherphase wurde abgesaugt, worauf die feste Phase noch viermal mit je 100 ml absolutem Aether gewaschen wurde, um das als Nebenprodukt gebildete Benzylbromid sowie den Ueberschuss an HBr und AcOH weitgehend zu entfernen. Der Rückstand wurde in 50 ml Methanol gelöst, mit Et3N auf pH 4,5 eingestellt und zur Trocknung im Vakuum bei 3000 eingeengt. Dieses so erhaltene Produkt wurde in 75 ml MeOH gelöst und durch eine mit MeOH äquilibrierte Säule von "Sephadex lH-20" (vernetztes Dextrangel) laufen gelassen. Aus einer Fraktion des Eluates erhielt man 4,18 g (9,16% der Theorie) der amorphen Verbindung lb, die im DSC im LMS C einheitlich war. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C12H20N603Br2 ergaben die folgenden Werte: C = 31,15 (31,60%) H = 4,k35% (4,42%), N = 18,84 (18,43%) und Br = 54,81% (35,03%). lc. Cbo-CHA-Arg-pNA.HBr 4,56 g (10 mMCl) der Verbindung Ib wurden in 30 ml frisch destilliertem DMF gelost und nach Kühlung auf -10 C unter Rühren mit 1,40 ml (10 mMol) Et3N versetzt. Das gebildete Et N.HBr wurde abfiltriert und mit wenig kaltem DMF gewaschen. Zum Filtrat wurden unter Rühren bei -10 C 4,69 g (11 mMol) 1) Cbo-CHA-OpNP gegeben und unter Feuchtigkeitsausschluss 2-3 Stunden lang reagieren gelassen, wobei die Temperatur der Reaktionslösung allmählich auf etwa 200C stieg. Die Lösung wurde wieder auf -100C gekühlt, mit 0,70 ml (5 mMol) Et3N gepuffert und etwa 2 Stunden bei -100C und 3 Stunden bei Raumtemperatur reagieren gelassen. Diese Prozedur wurde nochmals mit 0,70 ml Et f wiederholt, und nach weiteren 16 Stunden wurde die Reaktionslösung im Vakuum bei 500C zur Trockne eingeengt. Der Rückstand wurde in 75 ml 50%iger AcOH gelöst und durch Gelfiltration auf einer mit 50%iger AcOH äquilibrierten Säule von "Sephadex G-15" gereinigt. Diejenige Hauptfraktion des AcOH-Eluates, die sich durch Trypsinbehandlung unter Freisetzung von p-Nitroanilin spalten liess, wurde im Vakuum bei 400C zur Trockne eingeengt. Der Rückstand wurde in 150 ml MeOH gelöst und nochmals zur Trockne eingeengt. Nach Trocknung des erhaltenen Rückstandes im Vakuumtrockenschrank bei 60 C über P205 erhielt man 5,85 g (88,3% der Theorie) der amorphen Verbindung lc, die im DSC im LMS C einheitlich war. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C29H30N7O6 Br ergaben die folgenden Werte : C = 52,28% (52,57%), H = 6,16 % (6,09%), N = 15,09 % (14,80 %) und Br = 11,85 % (12,06%). ld. 2HBr.H-CHA-Arg-pNA 5,30 g (8 mMol) der Verbindung lc wurden unter Feuchtigkeitsausschluss mit 32 ml 2N HBr in Eisessig unter Rühren 40 Min. lang bei 20 0C behandelt. Das Dipeptidderivat löste sich dabei allmählich unter C02-Entwicklung. Die Reaktionslösung wurde unter intensivem Rühren zu 250 ml absolutem Aether zugetropft, wobei 2HBr.H-CHA-Arg-pNA ausfiel. Die Aetherphase wurde abgesaugt, worauf die feste Phase noch viermal mit je 100 ml absolutem Aether gewaschen wurde, um das als Nebenpro dukt gebildete Benzylbromid sowie den Ueberschuss an HBr und AcOH weitgehend zu entfernen. Der Rückstand wurde in 50 ml MeOH gelöst. Nach Einstellung des pH auf 4,5 mit Et3N wurde die Lösung im Vakuum bei 30 C zur Trockne eingeengt. Der so erhaltene RUckstand wurde in 50 ml MeOH gelöst und auf einer mi MeOH äquilibrierten Säule von nSephadex LH-20" gereinigt. Diejenige Fraktion des MeOH-Eluates, die sich durch Trypsinbchandlung unter Freisetzung von p-Nitroanilin spalten liess, wurde im Vakuum bei 300C zur Trockne eingeengt. Nach Trocknung des erhaltenen Rückstandes im Vakuumtrockenschrank bei 40 C Wner P2O5 erhielt man 4,48 g (91,9 der Theorie) der amorphen Verbindung 1d, die im DSC im LMS C einheitlich war. Elementaranalyse und Berechnung aus der Brutto formel C21H35N7O4Br ergaben die folgenden Werte: C = 41,80% (41,39%), H = 5,86 (5,79%), N = 16,31% (16,09%) und Br = 25,85 % (26,23%). le. Cbo-D-CHG-CRA-Arg-pNA.HBr 3,05 g (5 mMo1) der Verbindung ld wurden in 20 ml frisch destilliertem DMF gelost und nach Kühlung auf -10 C unter Rühren mit 0,70 ml (5 mMol) Et3N versetzt. Das gebildete Et3N.HBr wurde abfiltriert und mit wenig kaltem DMF gewaschen. Zum Filtrat wurden unter Rühren bel -100C 2,27 g (5,5 mMol) Cbo-D-CHG.OpNP gegeben. Man liess das Reaktionsgemisch unter Feuchtigkeitsausschluss 2-3 Stunden lang reagieren, worauf die Temperatur der Reaktionslösung allmählich auf etwa 200 C stieg. Die Lösung wurde wieder auf -100C gekühlt, mit 0,35 ml (2,5 mMol) EtDN gepuffert und etwa 2 Stunden bei -10 C und weitere 3 Stunden bei Raumtemperatur reagieren gelassen. Diese Proze dur wurde nochmals mit 0,35 ml Et3N wiederholt und nach weiteren 16 Stunden wurde die Reaktionslösung im Vakuum bei 500C zur Trockne eingeengt. Der Rückstand wurde in 50 ml 50%iger AcOH gelöst und durch Gelfiltrierung auf einer mit 50%iger AcOH aquilibrierten Säule von nSephadex G-15" gereinigt. Die jenige Hauptfraktion des AcOH-Eluates, die sich durch Trypsinbehandlung unter Freisetzung von p-Nitroanilin spalten liess, wurde im Vakuum bei 40 C zur Trockne eingeengt. Der Rückstand wurde in 100 ml MeOH gelöst, worauf die Lösung nochmals zur Trockne eingeengt wurde. Nach Trocknung des erhaltenen Rück- standes im Vakuumtrockenschrank bei 60 OC über P205 erhielt man 3,24 g (80,8 der Theorie) der amorphen Verbindung le, die im DSC im LMS C einheitlich war. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C37H53N8O7Br ergaben die folgenden Werte: C = 55,72$ (55,43%), H = 6,73 (6,66%), N = 14,25$ (13,98%) und Br = 9,86 (9,97%). If. 2HBr.H-D-CHG-CHA-Arg-pNA 2,41 g (3 mMol) der Verbindung le wurden unter Feuchtigkeitsausschluss mit 12 ml 2N HBr in Eisessig unter Rühren 40 Minuten lang bei 2O0C behandelt. Das Tripeptidderivat löste sich dabei allmählich unter Decarboxylierung und gleichzeitiger C02-Entwicklung. Die Reaktionslosung wurde unter kräftigem Rühren zu 120 ml absolutem Aether zugetropft, wobei 2HBr.H-D- CHG-CHA-Arg-pNA ausfiel. Die Aetherphase wurde mit einem Filtrierstab abgesaugt, und danach wurde die feste Phase noch viermal mit Je 50 ml absolutem Aether gewaschen. Der so erhaltene Rückstand wurde in 40 ml MeOH gelöst. Nach Einstellung des pH auf 4,5 mit t=N wurde die Lösung im Vakuum bei 30 C zur Trockne eingeengt. Der Rückstand wurde in 30 ml MeOH gelöst und auf einer mit MeOH äquilibrierten Säule von "Sephadex LH 20" gereinigt. Diejenige Fraktion des MeOH-Eluates, die sich durch Trypsinbehandlung unter Freisetzung von p-Nitroanilin spalten liess, wurde im Vakuum bei 300C zur Trockne eingeengt. Zur weiteren Reinigung wurde der vorgereinigte Rückstand in 30 ml 33%iger AcOH gelöst und durch Gelfiltrierung auf einer mit 33%iger AcOH aquilibrierten Säule von " Sephadex G-15" gereinigt. Die Hauptfraktion des AcOH-Eluates, die sich durch Trypsinbehandlung unter Freisetzung von p-Nitroanilin spalten liess, wurde im Vakuum bei 400C zur Trockne eingeengt. Nach Trocknung des so erhaltenen Rückstandes im Vakuumtrockenschrank bei 400C über P205 erhielt man 1,68 g (74,8 der Theorie) der amorphen Verbindung lf, die im DSC im LE4S C einheitlich war. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C29H48N8O5Br2 ergaben die folgenden Werte: C = 46,18% (46,53%), H , 6,55% (6,46%), N = 15,18 % (14,97%) und Br = 21,12 (21,35%). Die Aminosäureanalyse ergab die zu erwartenden Aminosäuren im richtigen Verhältnis: Arg: 1,00 - CRA: 0,96 - D-CHG: 0,98. Beispiel 2 2HBr.H-D-CHG-Phe-Lys-pNA 2a. BOC-Lys (E-Cbo)-pNA In einem Dreihalsrundkolben von 500 ml Inhalt wurden 38,05 g (0,1 Mol) getrocknetes Oel von Boc-Lys (E-Cbo)-OH in 150 ml absolutem HMPTA unter Feuchtigkeitsausschluss bei 20 OC gelöst. Bei Raumtemperatur wurden der erhaltenen Lösung zuerst eine Lösung von 10,12 g (0,1 Mol) Et3N in 25 ml HMPTA und dann 24,62 g (0,15 Mol) p-Nitrophenylisocyanat (50iger Ueberschuss) portionenweise zugesetzt, wobei jedesmal eine heftige co2-Entwicklung auftrat. Nach 24 Stunden Reaktionszeit bei 20 0C wurde das HMPTA im Vakuum grösstenteils abdestilliert. Der Rückstand wurde mehrmals mit 2%iger NaHCO3-Lösung und anschliessend mit dest. H2O digeriert. Der so erhaltene Rückstand wurde im Vakuum bei 400C getrocknet und danach mit war mem MeOH mehrmals extrahiert, bis der Rückstand nur noch das sohwerlösliche Nebenprodukt N,N'-bis (p-Nitrophenyl)-harnstoff enthielt. Die MeOH-Extrakte wurden auf 300 ml konzentriert, wobei einige Verunreinigungen flockig aufielen. Nach Filtration wurde das Filtrat (330 ml) auf einer mit MeOH aquilibrierten Säule von "Sephadex LH-20" gereinigt. Die Hauptfraktion des MeOH-Eluates wurde im Vakuum bei 30 0C auf ein kleines Volumen eingeengt, wobei eine nadelformige Substanz auskristallisierte. Die erhaltenen Kristalle wurden abriltriert und mit 50 ml eiskaltem MeOH portionenweise gewaschen. Nach Trocknung im Vakuumtrockenschrank über P205 bei 400C erhielt man 31,1 g (62,1 der Theorie) der kristallinen Verbindung 2a mit Smp. die im DSC in den LMS A und 3 einheitlich war. Die Mutterlauge lieferte noch 5,8 g (11,6% der Theorie) der Substanz 2a mit Smp. , die im DSC in den LMS A und B einheitlich war. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel CD25H32N4O7 ergaben die folgenden Werte: C = 60,23 (59,99%)., H = 6,50 % (6,44%) und N = 11,38 % (11,19 %). 2b. CF COOH.H-Lys (5-Cbo)-pNQ 25,03 g (50 mMol) der Verbindung 2a wurden unter Feuchtigkeitsausschluss unter intensivem Rühren 60 Minuten bei 20 0C mit 50 ml frisch destillierter wasserfreier Trifluores sigsäure behandelt, wobei die BOC-Gruppe unter CO2-Entwicklung und Freisetzung von Isobutylen selektiv abgespalten wurde. Die Reaktionslösung wurde unter kräftigem Rühren zu 750 ml absolutem Aether zugetropft, wobei CF3COOH.H-Lys (E-Cbo)-pNA flockig ausfiel. Die Aetherphase wurde mit einem Filtrierstab abgesaugt. Die reste Phase wurde noch viermal mit Je 100 ml absolutem Aether behandelt. Der erhaltene RUckstand wurde in 200 ml MeOH gelöst. Nach Einstellung des pH auf 4,5 5 mit Et3N wurde die Lösung im Vakuum bei 300C zur Trockne eingeengt. Der RUck- stand wurde in 200 ml MeOH gelöst und auf einer mit MeOH äquilibrierten Säule von "Sephadex LH-20" gereinigt. Die Hauptfraktion des MeOH-Eluates, die sich im DSC im LMS C einheitlich verhielt, wurde im Vakuum bei 30 0C eingeengt. Nach Trocknung des so erhaltenen Rückstandes im Vakuumtrockenschrank bei 40 C über P205 erhielt man 22,64 g (88,0% der Theorie) der amorphen Verbindung 2b. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C22H25N407F3 ergaben die folgenden Werte: C = 51,66 (51,36%), H = 4,88 (4,90%) und N = 11,08 (10,89%). 2c. EOC-Phe-Lys(e-Cbo)-pNA 7,72 g (15 mMol) der Verbindung 2b wurden in 50 ml frisch destilliertem DMF gelöst und nach Kühlung auf -10 C unter Rühren mit 6,38 g (16,5 mMol) BOC-Phe-OpNP und 2,09 ml (15 mMol) Et3N versetzt. Man liess das Gemisch unter Feuchtigkeits ausschlue@ 3 Stunden reagieren, wobei die Reaktionstemperatur allmählich auf Raumtemperatur stieg. Die Lösung wurde erneut auf -100C gekühlt und mit 1,05 ml (7,5 mMol) Et3N gepuffert. Nach 5 Stunden Reaktionszeit wurde diese Prozedur nochmals mit 1,05 ml Et3N wiederholt. Nach 16 Stunden Reaktionszeit bei 20 C wurde die Reaktionslösung im Vakuum bei 500C zur Trockne eingeengt. Der Rückstand wurde in 150 ml MeOH gelost und durch Gelfiltrierung auf einer mit MeOH äquilibrierten Säule von "sephadex LH-20" gereinigt. Die erste Hauptfraktion des MeOX- Eluates, die sich im DSC in den LMS A und B einheitlich verhielt, wurde im Vakuum bei 30 C auf ein kleines Volumen eingeengt, wobei die gewünschte Substanz auskristallisierte. Die Kristalle wurden abfiltriert und mit 30 ml eiskaltem MeOH portionenweise nachgewaschen. Aus der Mutterlauge liess sich. eine zusätzliche Menge von 1,0 g kristalliner Substanz gewinnen. Nach Trocknung im Vakuumtrockenschrank bei 40 C, aber P205 erhielt man 7,72 g (79,5% der Theorie) der Verbindung 2c mit Smp. , die im DSC in den LMS A und B einheitlich war. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C34H41N508 ergaben die folgenden Werte: C = 62,88 % (63,05%), H = 6,42 % (6,38 %) und N = 11,06 % (10,81 %). 2d. Cf3COOH.Phe-Lys(E-Cbo)-pNA ),24 g (5 mMol) der Verbindung 2c wurden unter Feuchtigkeitsausschluss mit 10 ml frisch destillierter wasserfreier Trifluoressigsäure unter intensivem Rühren 60 Minuten bei 200C behandelt. Die Reaktionslösung wurde unter krErtigem Rühren zu 100 ml absolutem Aether zugetropft, wobei CF3COOH.H-Phe- Lys(-Cbo)-pNA amorph ausfiel. Die Aetherphase wurde abgesaugt. Der feste Rückstand wurde noch dreimal mit Je 30 ml absolutem Aether gewaschen. Der so erhaltene Rückstand wurde in 50 ml MeOH gelost. Nach Einstellung des pH auf 4,5 mit Et3N wurde die Losung im Vakuum bei 300C zur Trockne eingeengt. Der Rückstand wurde in 75 ml MeOH gelöst und auf einer mit MeOH äqui llbrierten Säule von "Sephadex LH-20" gereinigt. Die Hauptfraktion des MeOH-Eluates, die sich im DSC im LMS C einheitlich verhielt, wurde im Vakuum bei 30 0C eingeengt. Nach Trocknung des Rückstandes im Vakuumtrockenschrank bei 400C über P205 erhielt man 2,95 g (89,2 der Theorie) der amorphen Verbindung 2d. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C31H34N5O8F3 ergaben die folgenden Werte: C = 56,82 (56,27 %), H = 5,16 % (5,18 %) und N = 10,63 % (10,59 %). 2e. Cbo-D-CHe-Phe-Lys (E-Cbo)-pNA 1,99 g (3 mMol) der Verbindung 2d wurden in 15 ml frisch destilliertem DMF gelost und nach Kühlung auf -10 C unter Rühren mit 1,36 g (3,3 mMol) Cbo-D-CHG-OpNP und 0,42 ml (3 mMol) Et3N versetzt. Man liess das Gemisch unter Feuchtig keitsausschluss während 3 Stunden reagieren, wobei die Temperatur allmählich auf 200 C stieg. Die Reaktionslösung wurde erneut auf -100C gekühlt und mit 0,21 ml (1,5 mMol) Et3N gepuffert. Nach einer Reaktionszeit von 5 Stunden bei -10 C liess man die Temperatur des Reaktionsgemisches allmählich auf Zimmertemperatur steigen. Diese Prozedur wurde nochmals mit 0,21 ml Et3N durchgeführt, wobei die Reaktionszeit etwa 16 Stunden betrug. Das Reaktionsgemisch wurde im Vakuum bei 500C zur Trockne eingeengt, worauf der Rückstand in 50 ml MeOH gelöst und durch Gelfiltrierung auf einer mit MeOH äquilibrierten Säule von " Sephadex LH-20" gereinigt wurde. Die erste Hauptfraktion des MeOH-Eluates, die sich im DSC in den LMS A und B einheitlich verhielt, wurde im Vakuum bei 30 C zur Trockne eingeengt. Nach Trocknung des Rückstandes im Vakuumtrockenschrank bei 4000 über P205 erhielt man 2,03 g (82,4 der Theorie) der teilweise kristallinen Verbindung 2e. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C45H52N6O9 ergaben die folgenden Werte: C = 66,22 (65,84%), H = 6,32 % (6,38%) und N = 10,49 (10,24%). 2f. 2HBr.H-D-CHG-Phe-Lys-pNA 1,64 g (2 mMol) der Verbindung 2e wurden unter Feuchtigkeitsausschluss unter Rühren 40 Minuten bei 200C mit 12 ml 2N HBr in Eisessig behandelt. Das Tripeptidderivat löste sich allmählich unter gleichzeitiger Abspaltung der beiden Schutzgruppen Cbo und BOC, wobei C02-Entwicklung auftrat. Die Reaktionslösung wurde unter kräftigem Rühren zu 100 ml absolutem Aether getropft, wobei 2HBr.H-D-CHG-Phe-Lys-pNA flockig ausfiel. Die Aetherphase wurde nach 30 Minuten abgesaugt, worauf die feste Phase noch viermal mit Je 25 ml abs. Aether gewaschen wurde. Der erhaltene Rückstand wurde in 40 ml MeOH gelost. Nach Einstellung des pH auf 4,5 mit Et3N wurde die Lösung im Vakuum bei 300C zur Trockne eingeengt. Der Rückstand wurde in 30 ml MeOH gelost und auf einer mit MeOH äquilibrier- ten Kaule von "Sephadex LH-20" gereinigt. Diejenige Hauptfraktion des MeOH-Eluates, die sich durch Trypsinbehandlung unter Freisetzung von p-Nitroanilin spalten liess, wurde im Vakuum bei 300C zur Trockne eingeengt. Zur weiteren Reinigung wurde das vorgereinigte Produkt in 25 ml 33%iger AcOH gelöst und durch Gelfiltrierung auf einer mit 33%iger AcOH äquilibrierten Säule von Sephadex G-15" gereinigt. Diejenige Fraktion des AcOH-Eluates, die sich durch Trypsinbehandlung unter Freisetzung von p-Nitroanilin spalten liess, wurde im Vakuum bei 400C zur Trockne eingeengt. Nach Trocknung des so erhaltenen RUck- standes im Vakuumtrockenschrank bei 400C über P 205 erhielt man 1,13 g (79,1 der Theorie) der amorphen Verbindung 2f, die im DSC im LMS C einheitlich war. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C29H42N6O5Br2 ergaben die folgenden Werte: C = 48,41 (48k,75%), H = 6,02 (5,93%), N = 12,11 (11,76%) und Br - 22,02 % (22,37%). Die Aminosaureanalyse ergab die zu erwartenden Aminosäuren im richtigen Verhältnis: Phe: 1,00 - Lys: 0,98 - D-CHG: 1,02. Beispiel 3 2HBr-H-D-Val-CHA-Arg-MCA 3b. 2HBr.H-Arg-MCA 13,0 g (25,9 mMol) käufliches Cbo-Arg-MCA.HCl wurden mit 104 ml (208 mMol) einer Lösung von 2N HBr in Eisessig gemäss Beispiel lb deblockiert. Der trockene Rückstand wurde in 400 ml MeOH gelost und auf einer Säule von "Sephadex LH-20" gereinigt. Diejenige Fraktion des MeOH-Eluates, die sich durch Tryipsinbehandlung unter Freisetzung von 4-Methyl-7-aminocumarin spalten liess, wurde im Vakuum bei 300C zur Trockne eingeengt. Nach Trocknung des erhaltenen Rückstandes im Vakuumtrockenschrank bei 40 C über P2O5 erhielt man 11,2 g (87,7 der Theorie) der amorphen Verbindung 3b, die im DSC¯im LMS C einheitlich war. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C16H23N503Br2 ergaben die folgenden Werte: c = 39,4 % (38,96 %), H = 4,61 (4,70%), N = 14,48% (14,20ss) und Br = 31,90 % (32,40%). 3c. Cbo-CHA-Arg-MCA.HBr 4,93 g (10 mMol) der Verbindung 3b und 4,69 g (11 mMol) Cbo-CHA-OpNP wurden zu 75 ml frisch destilliertem DMF gegeben. Nach KUhlung auf -10 C wurden unter Rühren zuerst 1,40 ml (10 mMol) und anschliessend 0,70 ml (5 mMol) Et3N zugegeben. Man liess das Gemisch unter Feuchtigkeitsausschluss zuerst 3 Stunden bei -10 C und dann weitere 4 Stunden bei Raumtemperatur reagieren. Die Reaktionslösung wurde erneut auf -10 C gekëhlt, mit o,70 ml Et3N gepuffert und über Nacht bei 20 0C gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde im Vakuum bei 500C zur Trockne eingeengt, worauf der Rückstand in 200 ml 50% iger AcOH gelost und auf einer Säule von "Sephadex G-15" gereinigt wurde. Diejenige Fraktion des AcOH-Eluates, die sich durch Trypsinbehandlung unter Freisetzung von 4-Methyl7-amino-cumarin spalten liess, wurde im Vakuum bei 400C zur Trockne eingeengt. Nach Trocknung des erhaltenen Rückstandes im Vakuumtrockenschrank bei 60 C über P205 erhielt man 5,95 E (85,0% der Theorie) der kristallinen Verbindung 3c mit Smp. die im DSC im LMS C einheitlich war. Elementes analyse und Berechnung aus der Bruttoformel C33H43N6O6Br er gaben die folgenden Werte: C = 56,33% (56,65 %), H = 6,28 (6,19 %), N = 12,25 % (12,01 %) und Br = 11,30 % (11,42 %). 3d. 2HBr.H-CHA-Arg-MCA$40 C $C25H38N6O4Br2 $(46,45%), $(5,93%), $(13,00%) $mMol) $mMol) $60 C 5,60 g (8 mMo1) der Verbindung 3c wurden gemäss Beispiel ld mit 32 ml 2N HBr in Eisessig deblockiert. Das erhaltene Rohprodukt wurde in 100 ml MeOH gelöst und auf einer Säule von Sephadex LH-20" gereinigt. Diejenige Fraktion des MeOH Eluates, die sich durch Trypsinbehandlung unter Freisetzung von 4-Methyl-7-amino-cumarin spalten liess, wurde im Vakuum bei 300C zur Trockne eingeengt. Nach Trocknung des erhaltenen Rückstandes im Vakuumtrockenschrank bei 40 C über P205 erhielt man 4,76 g (92,1 der Theorie) der amorphen Verbindung Dd, die im DSC im LM5 C einheitlich war. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C25H38N6O4Br2 ergaben die folgenden Werte: C = 47,02 (46,45%), H = 6,02 (5,93 %), N = 13,21 (13,00 %) und Br = 24,48 (24,72X). 3e. Cbo-D-Val-CHA-Arg-MCA.HBr 3,23 g (5 mMol) der Verbindung 3d wurden gemäss Beispiel le mit 2,05 g (5,5 mMol) Cbo-D-Val-OpNP umgesetzt. Das erhaltene Rohprodukt wurde in 75 ml 50%iger AcOH gelöst und auf einer Säule von "Sephadex G-15" gereinigt. Diejenige Fraktion des AcOH-Eluates, die sich durch Trypsinbehandlung unter Freisetzung von 4-Methyl-7-amino-cumarin spalten liess, wurde im Vakuum bei 400C zur Trockne eingeengt. Nach Trocknung des Rückstandes im Vakuumtrockenschrank bei 60 C über P205 erhielt man 3,21 g (80,4 der Theorie) der amorphen Verbindung 3e, die im DSC im LMS C einheitlich war. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C38H52N7O7Br ergaben die folgenden Werte: C = 57,05% (57,14%), H = 6,61 (6,56%), N = 12,49% (12,28%) und Br = 9,82k (10,00%). 3f. 2HBr.H-D-Val-CHA-Arg-MCA 2,40 g (3 mMol) der Verbindung 3d wurden gemäss Beispiel lf mit 12 ml 2N HBr in Eisessig deblockiert. Das erhaltene Rohprodukt wurde in 50 ml MeOH gelöst und auf einer Säule von "Sephadex LH-20" gereinigt. Diejenige Fraktion des MeOH-Eluates, die sich durch Trypsinbehandlung unter Freisetzung von 4-Methyl-7-amino-cumarin spalten liess, wurde im Vakuum bei 300C zur Trockne eingeengt. Zur weiteren Reinigung wurde das vorgereinigte Produkt in 40 ml 50%iger AcOH gelöst und durch Gelfiltrierung an einer Säule von nSephadex G-15" gereinigt. Die Hauptfraktion des AcOH-Eluates, die sich durch Trypsinbehandlung unter Freisetzung von 4-Methyl-7-aminocumarin spalten liess, wurde im Vakuum bei 400C zur Trockne eingeengt. Nach Trocknung des Rückstandes im Vakuumtrockenschrank bei 400C über P205 erhielt man 1,73 g (77,3% der Theorie) der amorphen Verbindung 3f, die im DSC im LMS C einheitlich war. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C30H47N7O5Br2 ergaben die folgenden Werte: C = 48,12% (48,33%), H = 6,43 (6,35ss), N = 13,38 (13,15%) und Br = 21,8% (21,44%). Die Aminosäureanalyse ergab die zu erwartenden Aminosäuren im richtigen Verhältnis: Val: 1,00 - Arg: 1,02 - D-CHA: 0,97. Beispiel 4 2HBr. -D-CHG-Phe-Lys-MCA 4a. BOC-Lys (a-Cbo) -MCA In einem Dreihalskolben von 1000 ml Inhalt wurden 58,05 g (0,1 Mol) getrocknetes BOC-Lys (-Cbo)-OH in einem Gemisch von 50 ml frisch destilliertem wasserfreiem DMF und 300 ml absolutem THF bei 20 0C gelöst. Der auf -10 C gekühlten Lösung wurde unter Feuchtigkeitsausschluss und unter Rühren eine Lösung von 10,2 g (0,1 Mol) Et3N in 75 ml THF zugesetzt. Dann wurde innerhalb von 20 Minuten eine Lösung von 13,65 g (0,1 Mol) Chlorameisensäure-isobutylester in 50 ml THF zugetropft, wobei man die Reaktionstemperatur nie über -50C steigen liess. Nach einer Reaktionszeit von etwa 10 Minuten bei einer Temperatur von -10 C bis -50C wurde eine Lösung von 17,52 g (0,1 Mol) 4-Methyl-7-amino-cumarin in 75 ml DMF innerhalb von 25 Minuten zugetropft, wobei man die Temperatur nie über -5 0C steigen liess. Das Reaktionsgemisch wurde anschliessend 1 Stunde bei -50C und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt und dann wieder auf -100C gektihlt. Das auskristallisierte Et3N. HCl wurde abfiltriert. Das Filtrat wurde im Vakuum bei 500C zur Trockne eingeengt. Der Rückstand wurde in 500 ml MeOH gelöst und durch Gelfiltrierung auf einer Säule von "Sephadex LH-20" gereinigt. Das MeOH-Eluat lieferte ausser dem gewünschten Produkt BOC-LYS (E-Cbo)-MCA noch drei weitere Fraktionen, welche das Nebenprodukt n-[4-Methyl-cumaryl-(7)]-karaminsäureisobutylester und die Ausgangsprodukte BOC-Lys(e-Cbo)-OR bzw. 7-Amino-4-methyl-cumarin enthielten. Die das Produkt BOC-Lys- (E-Cbo)-MCA enthaltende Fraktion wurde im Vakuum bei 300C zur Trockne eingeengt. Nach Trocknung des Rückstandes im Vakuum trockenschrank bei 50 0C über P205 erhielt man 26,3 g (48,9 der Theorie) der teilweise kristallinen Verbindung 4a, die im DSC in den LMS A und B einheitlich war. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C29H35N3O7 ergaben die folgenden Werte: C = 64,90 (64,79 %), H = 6,52 (6,56 %) und N = 7,88 (7,82%). 4b. CF3COOH.H-Lys (E-Cbo)-MCA 21,5 g (40 mMol) der Verbindung 4a wurden gemäss Beispiel 2b mit 60 ml Trifluoressigsäure deblockiert. Das nach Aufarbeitung erhaltene Rohprodukt wurde in 250 ml MeOH gelöst und durch Gelfiltrierung auf einer Säule von " Sephadex LH-20" gereinigt. Die erste Hauptfraktion des MeOH-Eluates, die sich im DSC im LMSC einheitlich verhielt, wurde im Vakuum bei 300C zur Trockne eingeengt. Nach Trocknung des Rückstandes im Vakuumtrockenschrank bei 40 C über P205 erhielt man 19,5 g (88,4 % der Theorie) der amorphen Verbindung 4b. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C26H28N3O7F3 ergaben die folgenden Werte: C = 57,02% (56,62%), H = 5,20 (5,12%) und N = 7,58% (7,62%). 4c. BOC-Phe-Lys (E-Cbo)-MCA 5,52 g (10 mMol) der Verbindung 4b wurden gemäss Beispiel 2c mit 4,25 g (11 inMol) BOC-Phe-OpNP umgesetzt. Das nach Aufarbeitung erhaltene Rohprodukt wurde in 100 ml MeOH gelost und durch Gelfiltrierung auf einer Säule von "Sephadex LH-20" gereinigt. Die Hauptfraktion des MeOH-Eluates, die sich im DSC in den LMS A und B einheitlich verhielt, wurde im Vakuum bei 300C zur Trockne eingeengt. Nach Trocknung des Rückstandes im Vakuumtrockenschrank bei 50 0C über P205 erhielt man 5,78 g (84,4% der Theorie) der teilweise kristallinen Verbindung 4c. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C38H44N4O8 ergaben die folgenden Werte : C = 66,09 % (66,65 %), H = 6,44 (6,48%) und N = 8,32% (8,18%). 4d. Cf3COOH.H-Phe-Lys (E-Cbo)-MCA 3,42 g (5 mMol) der Verbindung 4c wurden gemäss Beispiel 2d mit 15 ml Trifluoressigsäure deblockiert. Das nach Aufarbeitung erhaltene Rohprodukt wurde in 75 ml MeOH gelöst und durch Gelfiltrierung auf einer Säule von "Sephadex LH-20" gereinigt. Die Hauptfraktion des MeOB-Eluates, die sich im DSC im LMS C einheitlich verhielt, wurde im Vakuum bei 30 0C zur Trockne eingeengt. Nach Trocknung des Rückstandes im Vakuumtrockenschrank bei 400C über P205 erhielt man 3,41 g (97,6% der Theorie) der amorphen Verbindung 4d. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C35H37N408F3 ergaben die folgenden Werte: C = 59,54% (60,16%), H = 5,31% (5,34%) und N = 8,33 (8,02%). 4e. Cbo-D-CHG-Phe-Lys(E-Cbo)-MCA 2,10 g (3 mMol) der Verbindung 4d wurden gemäss Beispiel 2e mit 1,36 g (3,3 mMol) Cbo-D-CHG-OpNP umgesetzt. Das nach Aufarbeitung erhaltene Rohprodukt wurde in 40 ml MeOH gelöst und durch Gelfiltrierung auf einer Säule von "Sephadex LH-20" gereinigt. Die erste Hauptfraktion des MeOH-Eluates, die sich im DSC in den LMS A and B einheitlich verhielt, wurde im Vakuum bei 300C zur Trockne eingeengt. Nach Trocknung des Rückstandes im Vakuumtrockenschrank bei 60 OC über P 205 erhielt man 2,12 g (82,4 der Theorie) der amorphen Verbindung 4e. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C49H55N509 ergaben die folgenden Werte: C = 69,03 % (68,59%), H = 6,49 (6,46%) und N = 8,32 % (8,16%). 4f. 2HBr.H--D-CHG-Phe-Lys-MCA 1,72 g (2 mMol) der Verbindung 4e wurden gemäss Beispiel 2f mit 12 ml 2N HBr in Eisessig deblockiert. Das nach Aufarbeitung erhaltene Rohprodukt wurde in 30 ml MeOH gelost und auf einer Säule von "Sephadex LH-20" gereinigt. Diejenige Fraktion des MeOH-Eluates, die sich durch Trypsinbehandlung unter Freisetzung von 4-Methyl-7-amino-cumarin spalten liess, wurde im Vakuum bei 30 0C zur Trockne eingeengt. Zur weiteren Reinigung wurde das vorgereinigte Produkt in 40 ml 50%iger AcOH gelost und durch Gelfiltrierung auf einer Säule von "Sephadex G-15" gereinigt. Die Hauptfraktion des AcOH-Eluates, die sich durch Trypsinbehandlung unter Freisetzung von 4 Methyl-7-amino-cumarin spalten liess, wurde im Vakuum bei 40 C zur Trockne eingeengt. Nach Trocknung des Rückstandes im Vakuumtrockenschrank bei 400c über P2O5 erhielt man 1,10 g (73,2 der Theorie) der amorphen Verbindung 4f, die im DSC im LMS C einheitlich war. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C33H45H5O5Br2 ergaben die folgenden Werte: C = 53,20% (52,74%), H - 6,12% (6,04%), N = 9,18 (9,32%) und Er 8 21,16 (21,26%). Die Aminosäureanalyse ergab die zu erwartenden Aminosäuren im richtigen Verhältnis: Phe: 1,00 - Lys: 0,99 - D-CHG: 0,97. Beispiel 5 2HBr.B-D-Val-CHA-Arg-DPA 5a. Cbo-Arg-DPA.SCl In einem Dreihalsrundkolben von 1000 ml Inhalt wurden 34,48 g (0,1 Mol) getrocknetes Cbo-Arg-OH.HCl in einem Gemisch von 150 ml frisch destilliertem wasserfreiem DMF und 300 ml absolutem THF bei 20 C gelöst. Der auf -10 C gekühlten Lösung wurden unter Rühren und Feuchtigkeitsausschluss 10,2 g (0,1 Mol) Et3N zugesetzt. Dann wurde dem Gemisch innerhalb von 20 Minuten eine Lösung von 13,65 g (0,1 Mol) Chlorameisensäureisobutylester in 50 ml THF tropfenweise zugesetzt, wobei man die Reaktionstemperatur nie über -5 0C steigen liess. Nach einer zusätzlichen Reaktionszeit von 10 Minuten bei einer Temperatur von -10 C bis -50C wurde dem Reaktionsgemisch eine Lösung von 20,92 g (0,1 Mol) 5-Amino-isophthalsäure-dimethyl ester in 75 ml DMF innerhalb von 30 Minuten tropfenweise zugesetzt, wobei man die Reaktionstemperatur immer unterhalb -5 0C hielt. Man liess das Reaktionsgemisch noch 1 Stunde bei -5 C weiterreagieren. Es wurde über Nacht bei 20 C gerührt und dann auf -150C gekühlt, um das es Et.HCl auskristallisieren zu lassen. Das gebildete EtDN.HCl wurde abfiltriert und mit wenig kaltem DMF nachgewaschen. Das Filtrat zusammen mit der Waschlösung wurde im Vakuum bei 50 0C zur Trockne eingeengt. Der Rückstand wurde in 1000 ml 50%iger AcOH gelost und durch Gelfiltrierung auf einer mit sOfiiger AcOH äquilibrierten Säule von "Sephadex G-15" gereinigt. Diejenige Hauptfraktion des AcOH-Eluates,P34 die sich durch Trypsinbehandlung unter Freiset zung von 5-Amino-isophthalsäure-dimethylester spalten liess, wurde im Vakuum bei 400C zur Trockne eingeengt. Nach Trocknung des Rückstandes im Vakuumtrockenschrank bei 5000 über P205 erhielt man 24,6 g (45,9% der Theorie) der amorphen Verbindung 5a, die im DSC im LMS C einheitlich war. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C24H30N5O7Cl ergaben die folgenden Werte: C = 53,21% (53,78%), H = 5,71% (5,64%), N = 13,20 (13,07%) und C1 = 6,52 (6,62ss). 5b. 2HBr.H-Arg-DPA 21,44 g (40 mMol) der Verbindung 5a wurden gemäss Bei spiel lb deblockiert. Nach Aufarbeitung wurde das erhaltene Rohprodukt in 250 ml MeOH gelöst und durch Gelfiltrierung auf einer Säule von "Sephadex LH-20" gereinigt. Diejenige Fraktion des MeOH-Eluates, die sich durch Trypsinbehandlung unter Freisetzung von 5-Amino-isnphthalsäure-dimethylester spalten liess, wurde im Vakuum zur Trockne eingeengt. Nach Trocknung des Rückstandes im Vakuumtrockenschrank bei 400C über P 205 erhielt man 19,63 g (93,1% der Theorie) der amorphen Verbindung Sb, die im DSC im LMS C einheitlich war. Elementaranalyse und Berechnung aus der Brutto formel C16H25N505Br2 ergaben die folgenden Werte : C = 36,82 % (36,45%), H = 4,67 % (4,78%), N = 13,45 % (13,28%) und Br = 29,85 % (30,31 %). 5c. Cbo-CRA-Arg-DPA.HBr 5,27 g (10 mMol0 der Verbindung 5b wurden gemäss Beispiel lc mit 4,69 g (11 mMol) Cbo-CHA-OpNP umgesetzt. Das nach Aufarbeitung erhaltene Rohprodukt wurde in 200 ml 50%iger AcOH gelost und auf einer Skule von "Sephadex G-15" gereinigt. Die jenige Fraktion des AcOH-Eluates, die sich durch Trypsinbehandlung unter Freisetzung von 5-Amino-isophthalsäure-dimethylester spalten liess, wurde im Vakuum bei 400C zur Trockne eingeengt. Nadi Trocknung des RUckstandes im Vakuumtrockenschrank bei 600C über P2O5 erhielt man 6,o6 g (82,6% der Theorie) der amorphen Verbindung 5c, die im DSC im LMS C einheitlich war. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C33H45N6O8Br ergaben die folgenden Werte: C = 53,74 (54,02%), H = 6,28 % (6,18 %), N = 11,90 % (11,46 %) und Br = 10,68 % (10,89%). 5d. 2HBr.H-CHA-Arg-DPA 5,87 g (8 mMol) der Verbindung 5c wurden gemäss Beispiel 1d mit 32 ml 2N HBr in Eisessig deblockiert. Das nach Aufarbeitung erhaltene Rohprodukt wurde in 100 ml MeOH gelost und auf einer Säule von " Sephadex LH-20" gereinigt. Diejenige Fraktion des MeOH-Eluates, die sich durch Trypsinbehandlung unter Freisetzung von 5-Amino-isophthalsäure-dimethylester spalten liess, wurde im Vakuum bei 30 C zur Trockne eingeengt. Nach Trocknung des Rückstandes im Vakuumtrockenschrank bei 400C über P205 erhielt man 4,79 g (88,0% der Theorie) der amorphen Verbindung 5d, die im DSC im LMS C einheitlich war. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C25H40N6O6Br ergaben die folgenden Werte : C = 43,75 % (44,13 %), H = 5,88% (5,93%), N = 12,69 (12,35%) und Br , 23,22% (23,49%). 5e. Cbo-D-Val-CHA-Arg-DPA. HBr 3,40 g (5 mMol) der Verbindung 5d wurden gemäss Bei spiel le mit 2,05 g (5,5 mMol) Cbo-D-Val-OpNP umgesetzt. Das nach Aufarbeitung erhaltene Rohprodukt wurde in 100 ml zeiger AcOH gelöst und auf einer Säule von "Sephadex G-15'1 gereinigt. Diejenige Fraktion des AcOH-Eluates, die sich durch Trypsinbehandlung unter Freisetzung von 5-Amino-isophthalsäure-dimethyl- ester spalten liess, wurde im Vakuum bei 400C zur Trockne eingeengt. Nach Trocknung des Rückstandes im Vakuumtrockenschrank bei 600C über P205 erhielt man 3,25 g (78,1$ der Theorie) der amorphen Verbindung 5e, die im DSC im LMS C einheitlich war. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C38H54N7O9Br ergaben die folgenden Werte: C = 53,95% (54,80%), H = 6,65 (6,54 %), N = 12,07% (11,77%) und Br = 9,38 % (9,59%). 5f. 2HBr.H-D-Val-CHA-Arg-DPA 2,50 g (3 mMol) der Verbindung 5e wurden gemäss Beispiel 1f mit 12 ml 2N HBr in Eisessig deblockiert. Das nach Aufarbeitung erhaltene Rohprodukt wurde in 50 ml MeOH gelost und auf einer Säule von "Sephadex LH-20" vorgereinigt. Die jenige Fraktion des MeOH-Eluates, die sich durch Trypsinbehandlung unter Freisetzung von 5-Amino-isophthalsäure-dimethylester spalten liess, wurde im Vakuum bei 300C zur Trockne eingeengt. Das vorgereinigte Produkt wurde im 50 ml 50%iger AcOH gelost und durch Gelfiltrierung auf einer Säule von "Se- phadex G-15" gereinigt. Die Hauptfraktion des AcOH-Eluates, die sich durch Trypsinbehandlung unter Freisetzung von 5-Ami no-isophthalsSure-dimethylester spalten liess, wurde im Vakuum bei 400C zur Trockne eingeengt. Nach Trocknung des RUck- standes im Vakuumtrockenschrank bei 40 C über F2O5 erhielt man 1,93 g (82,6 % der Theorie) der amorphen Verbindung 5f, die im DSC im LMS C einheitlich war. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C30H49N7O7Br2 ergaben die folgenden Werte : C = 46,84 % (46,22%), H = 6,42% (6,34%), N = 12,16 % (12,58 %) und Br = 20,50%). Die Aminosäureanalyse ergab die zu. erwartenden Aminosäuren im richtigen Verhältnis: D-Val: 1,00 - Arg: 0,98 - CHA: 1,02. Beispiel 6 2HBr.H-D-CHG-Phe-Lys-DPA 6a. BOC-Lys(E-Cbo)-DPA In einem Dreihalsrundkolben von 1000 ml Inhalt wur- den 58,05 g (0,1 Mol) getrocknetes BOC-Lys(s-Cbo)-OH in einem Gemisch von frisch destilliertem wasserfreiem DMF und 300 ml absolutem THF bei 200C gelöst. Der auf -10 C gekühlten Lösung wurde unter RUhren und Feuchtigkeitsausschluss eine Lösung von 10,2 g (0,1 Mol) Et3N in 75 ml THF zugesetzt. Dann wurde innerhalb 20 Minuten eine Lösung von 13,65 g (0,1 Mol) Chlorameisensäure-isobutylester in 50 ml THF zugetropft, wobei man die Reaktionstemperatur nie über -5 0C steigen liess. Nach einer Reaktionszeit von etwa 10 Minuten bei -10 C bis -5 C wurde eine Lösung von 20,92 g (0,1 Mol) 5-Amino-isophthalsäure-dimethylester in 75 ml DMF innerhalb 30 Minuten zugetropft. Das Reaktionsgemisch wurde gemäss Beispiel 4a aufgearbeitet. Der erhaltene RUckstand wurde in 500 ml MeOH gelost und durch Gelfiltrierung auf einer Säule von "Sephadex LH-20" gereinigt. Das MeOH-Eluat enthielt neben dem erwünsch- ten Produkt BOC-Lys (E-Cbo)-DPA drei weitere Produkte, nämlich das Nebenprodukt N-[1,3-Dimethoxycarbonyl-phenyl-(5)]-karb aminsäure-isobutylester und die beiden Ausgangsprodukte BOC Lys(±-Cbo)-OH bzw. 5-Amino-isophthalsäure-dimethylester in drei verschiedenen Fraktionen. Die Fraktion, die das Produkt BOC-Lys (E-Cbo)-DPA enthielt, wurde im vakuum bei 30 C zur Trockne eingeengt. Nach Trocknung des RUckstandes im Vakuumtrockenschrank bei 500C über P205 erhielt man 27,4 g (47,9% der Theorie) der kristallinen Verbindung 6a mit Smp. die im DSC in den LMS A und B einheitlich war. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C29H37N3O9 ergaben die folgenden Werte: C = 60,58 (60,93%), H = 6,55 (6,52%) und N = 7,48 (7,35%). 6b. CF3COOH.H-Lys (E-Cbo)-DFA 22,87 g (40 mMol) der Verbindung 4a wurden gemäss Beispiel 2b mit 70 ml Trifluoressigsäure deblockiert. Das nach Aufarbeitung erhaltene Rohprodukt wurde in 250 ml MeOH gelöst und durch Gelfiltrierung auf einer Säule von "Sephadex LH-20" gereinigt. Die Hauptfraktion des MeOH-Eluates, die sich im DSC im LMS C einheitlich verhielt, wurde im Vakuum bei 300C zur Trockne eingeengt. Nach Trocknung des Rückstandes im Vakuumtrockenschrank bei 400C über P205 erhielt man 20;7 g (88,4 det Theorie) der amorphen Verbindung 6b. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C26H30N3O9F3 ergaben die folgenden Werte: C = 52,77% (53,33%), H = 5,25% (5,16%) und N = 7,02 (7,18%). 6c. BOC-Phe-Lys(E-Cbo)-DPA 5,86 g (10 nuN\ol) der Verbindung 6b wurden gemäss Beispiel 2c mit 4,25 g (11 mMol) BOC-Phe-OpNP umgesetzt. Das nach Aufarbeitung erhaltene Rohprodukt wurde in 100 ml MeOH gelöst und durch Gelfiltrierung auf einer Säule von "Sephadex LH-20" gereinigt Die erste Hauptfraktion des MeOH-Eluates, die sich im DSC in den LMS A und B einheitlich verhielt, wurde im Vakuum bei 3000 zur Trockne eingeengt. Nach Trocknung des Rückstandes im VakuumtrockenschrarJc bei 500C erhielt man 5,87 g (81,7% der Theorie) der kristallinen Verbindung 6c. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C38H46N4010 ergaben die folgenden Werte: C -= 63,82% (63,50%), H = 6,49% (6,45%) und N = 7,64 % (7,80%). 6d. CF3COOH.Phe-Lys (E-Cbo)-DPA 3,59 g (5 mMol) der Verbindung 6c wurden gemäss Beispiel 2d mit 15 ml Trifluoressigsäure deblockiert. Das nach Aufarbeitung erhaltene Rohprodukt wurde in 60 ml MeOH gelost und durch Gelfiltrierung auf einer Säule von "Sephadex LH-20" gereinigt. Die Hauptfraktion des MeOH-Eluates, die sich im DSC im LMS C einheitlich verhielt, wurde im Vakuum bei 300C zur Trockne eingeengt. Nach Trocknung des Rückstandes im Vakuumtrockenschrank bei 400C über P205 erhielt man 3,40 g (9218 der Theorie) der amorphen Verbindung 6d. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C35H39N4C10F3 ergaben die folgenden Werte: C = 57,11% (57,37%), H a 5,40 % (5,36%) und N 8 7,79% (7,65%). 6a. Cbo-D-CHG-Phe-Lys(E-Cho)-DPA 2,20 g (3 mMol) der Verbindung 6d wurden gemäss Bei spiel 2e mit 1,36 g (3,3 mMol) Cbo-D-CHG-OpNP umgesetzt. Das nach Aufarbeitung erhaltene Rohprodukt wurde in 60 ml MeOH gelöst und durch Gelfiltrierung auf einer Säule von "Sephadex LH-20" gereinigt. Die erste Hauptfraktion des MeOH-Eluates, die sich im DSC in den LMS A und B einheitlich verhielt, wurde im Vakuum bei 300C zur Trockne eingeengt. Nach Trocknung des Rückstandes im Vakuumtrockenschrank bei 60 C über P205 erhielt man 2,07 g (77,4% der Theorie) der teilweise kristallinen Verbindung 6e. Elementaranalyse und Berechnung aus der BruttoSor- mel C49H57N5O11 ergaben die folgenden Werte : C = 66,18 % (65,98 %). H = 6,52 (6,44%) und N = 7,59% (7,85%). 6f. 2HBr.H-D-CHG-Phe-Lye-DPA 892 mg (1 mMol) der Verbindung 6e wurden gemäss Beispiel 2f mit 6 ml 2N HBr in Eisessig deblockiert. Das nach Aufarbeitung erhaltene Rohprodukt wurde in 20 ml MeOH gelöst und auf einer Säule von " Sephadex LH-20" vorgereinigt. Die Fraktion des MeOH-Eluates, die sich durch Trypsinbehandlung unter Freisetzung von 5-Amino-isophthalsäure-dimethylester spalten liess, wurde bei 30 0C zur Trockne eingeengt. Zur weiteren Reinigung wurde das vorgereinigte Produkt in 30 ml 50%iger AcOH gelöst und durch Gelfiltrierung auf einer Säule von " Sephadex G-15" gereinigt. Die Hauptfraktion des AcOH-Eluates, die sich durch Trypsinbehandlung unter Freisetzung von 5-Amino-isophthalsauredimethylester spalten liess, wurde im Vakuum bei 400C zur Trockne eingeengt. Nach Trocknung des Rückstandes im Vakuumtrockenschrank bei 400C über P205 erhielt man 602 mg (76,6% der Theorie) der amorphen Verbindung 6r, die im DSC im LMS C einheitlich war. Elementaranalyse und Berechnung aus der Brut formel C33H37N5O7Br2 ergaben die folgenden Werte: C = 49,79 % (50,45%), H = 6,10 % (6,03%), N = 9,09% (8,92%) und Br = 19,87% (20,34%). Die Aminosäureanalyse ergab die zu erwartenden Aminosäuren im richtigen Verhältnis: Phe: 1,00 - Lys: 1,01 - D-CHG: 0,97. Beispiel 7 2HBr.H-D-Val-CHA-Arg-2-NA 7b. 2HBr.H-Arg-2-NA 9,40 g (20 mMol) käufliches Cbo-Arg-20-MA.HCl wurden gemäss Beispiel lb mit einer Lösung von 80 ml 2N HBr in Eisessig deblockiert. Das nach Aufarbeitung erhaltene Produkt wurde in 150 ml MeOH gelost und auf einer Säule von "Sephadex LH-20" gereinigt. Diejenige Fraktion des MeOH-Eluates, die sich durch Trypsinbehandlung unter Freisetzung von 2-Naphthylamin spalten liess, wurde im Vakuum bei 300C zur Trockne ein--geengt. Nach Trocknung des RUckstandes im Vakuumtrockenschrank bei 400c über P205 erhielt man 8,60 g (93,2 der Theorie) der amorphen Verbindung 7b, die im DSC im LMS C einheitlich war. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C16H23N5oBr2 ergaben die folgenden Werte: C = 42,08% (41,67%), H = 5,12 % (5,03 %), N = 14,68% (15,19 %) und Br = 33,96 % (34,65%). 7c. Cbo-CHA-Arg-2-NA.HBr 4,6 g (10 mMol) der Verbindung 7b wurden gemäss Beispiel lc mit 4,69 g (11 mMol) Cbo-CHA-OpNP umgesetzt. Das nach Aufarbeitung erhaltene Rohprodukt wurde in 150 ml 50%iger AcOH gelöst und auf einer Säule von "Sephadex G-15" gereinigt. Die jenige Fraktion des AcOH-Eluates, die sich durch Trypsinbehandlung unter Freisetzung von 2-Naphthylamin spalten liess, wurde im Vakuum bei 400C zur Trockne eingeengt. Nach Trocknung des Rückstandes im Vakuumtrockenschrank bei 600C über P 205 erhielt man 5,31 g (79,5 % der Theorie) der amorphen Verbindung 7c, die im DSC im LMS C einheitlich war. Elementaranaly se und Berechnung aus der Bruttoformel C33H43N6O4Br ergaben die folgenden Werte: C = 59,18% (59,37%), H = 6,58% (6,49%), N = 12,87 % (12,59%) und Br = 11,55 % (11,97 %). 7d. 2HBr.H-CHA-Arg-2-NA 4,67 g (7 mMol) der Verbindung 7c wurden gemäss Beispiel ld mit 28 ml 2N HBr in Eisessig deblockiert. Das nach Aufarbeitung erhaltene Rohprodukt wurde in 100 ml MeOH gelost und auf einer Säule von ' Sephadex LH-20" gereinigt. Diejenige Fraktion des MeOH-Eluates, die sich durch Trypsinbehandlung unter Freisetzung von 2-Naphthylamin spalten liess, wurde im Vakuum bei 30 0C zur Trockne eingeengt. Nach Trocknung des Rückstandes im Vakuumtrockenschrank bei 400C über P205 erhielt man 3,95 g (91,8% der Theorie) der amorphen Verbindung 7d, die im DSC im LMS C einheitlich war. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C25H38N602Br2 ergaben die folgenden Werte: C = 49,22 (48,87%), H = 6,30% (6,23%), N = 13,61 (13,68 %) und Br = 2f,84 (26,01%). 7e. Cbo-D-Val-CHA-Arg-2-NA.HBr -3,07 g (5 mMol) der Verbindung 7d wurden gemäss Bei spiel le mit 2,05 g (5,5 mMol) Cbo-D-Val-OpNP umgesetzt. Das nach Aufarbeitung erhaltene Rohprodukt wurde in 100 ml 50%iger AcOH gelöst und auf einer Säule von "Sephadex G-15" gereinigt. Die erste Hauptfraktion des AcOH-Eluates, die sich durch Trypsinbehandlung unter Freisetzung von 2-Naphthylamin spalten liess, wurde im Vakuum bei 400C zur Trockne eingeengt und dann im Vakuumtrockenschrank bei 600C über P205 getrocknet. Man ernielt 3,14 g (81,9 der Theorie) der amorphen Verbindung 7e, die im DSC im LMS C einheitlich war. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C38H52N7O5Br ergaben die folgenden werte : C = 58,92 % (59,52 %), H = 6,93 % (6,84 %), N = 13,02 (12,79%) und Br = 10,18 % (10,42%). 7f. 2HBr.H-D-Val-CHA.Arg-2-NA 1,53 g (2 mMol) der Verbindung 7e wurden gemäss Beispiel 1f mit 8 ml 2N HBr in Eisessig deblockiert. Das nach Aufarbeitung erhaltene Rohprodukt wurde in 40 ml MeOH gelost und auf einer Säule von "Sephadex LH-20" gereinigt. Die Hauptfraktion des MeOH-Eluates, die sich durch Trypsineinwirkung unter Bildung von 2-Naphthylamin spalten liess, wurde im Vakuum bei 300 C zur Trockne eingeengt. Dieses Produkt wurde in 50 ml 50%iger AcOH gelöst und auf einer Säule von "Sephadex G-15" gereinigt. Die Hauptfraktion des AcOH-Eluates, die sich durch Trypsinbehandlung unter Entstehung von 2-Naphthylamin spalten liess, wurde bei 400C im Vakuum zur Trockne eingeengt. Nach Trocknung des Rückstandes im Vakuumtrockenschrank bei 400C über P205 erhielt man 1,05 g (7),6% der Theorie) der amor phen-Verbindung 7f > die im DSC im LMS C einheitlich war. Ele mentaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C30H47N7O3Br2 ergaben dis folgenden Werte: C = 50,16 (50,50%), H = 6,71 % (6,64 %), N = 14,00 % (13,74 %) und Br = 22,05 % (22,40 %). Die Aminosäureanalyse ergab die zu erwartenden Aminosäuren im richtigen Verhältnis: D-Val: 1,00 - Arg: 0,98 - CHA: 0,97. Beispiel 8 2HBr.H-D-CHG-Phe-Dys-2-NA 8a. BOC.Lys(±-Cbo)-2-NA Gemäss Beispiel 4a wurden 38,05 g (0,1 Mol) BOC-Lys (e-Cbo)-OH mit 14,32 g (0,1 Mol) 2-Naphthylamin zur Reaktion gebracht. Der nach Aufarbeitung erhaltene RUckstand wurde in 500 ml MeOH gelöst und auf einer Säule von "Sephadex LH-20" gereinigt. Aus dem MeOH-Eluat wurden neben dem erwünschten Produkt BOC-Lys(E-Cbo)-2-NJA drei weitere Produkte, nämlich das Nebenprodukt N-[1,3-Dimethoxy-phenyl-(5)]-karbaminsäureisobutylester und die beiden Ausgangsprodukte BOC-Lys(±-Cbo)- OH bzw. 2-Naphthylamin in drei verschiedenen Fraktionen erhalten. Die Fraktion, die BOC-Lys (E-Cbo)-2-NA enhielt, wurde im Vakuum bei 300C eingeengt. Nach Trocknung des Rückstandes im Vakuumtrockenschrank bei 500C über P205 erhielt man 26,9 g (53,2 der Theorie) der kristallinen Verbindung 8a mit Smp. die im DSC in den LMS A und B einheitlich war. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C29H35N3O5 ergaben die-folgenden Werte: C = 68,23 % (68,89%), = 7,07 % (6,98%) und N = 8,52% (8,31 %). 8b, CF3COOH.H-Lys (E-Cbo)-2-NA 20,22 g (40 mMol) der Verbindung 8a wurden gemäss Beispiel 2b mit 75 ml Trifluoressigsäure deblockiert. Das nach Aufarbeitung erhaltene Rohprodukt wurde in 250 ml MeOH gelöst und auf einer Säule von "Sephadex LH-20" gereinigt. Die Hauptfraktion des MeOH-Eluates, die sich im DSC im LMS C einheitlich verbielt, wurde im Vakuum bei 300C zur Trockne eingeengt. Nach Trocknung des Rückstandes im Vakuumtrockenschrank bei 4000 über P205 erhielt man 18,29 g (88 > o% der Theorie) der amorphen Verbindung 8b. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C26H28N3O5F3 ergaben die folgenden Werte: C = 59,70% (60,11%), H = 5,38% (5,43 %) und N = 8,26% (8,09 %). 8c. BOC-Phe-Lys(E-Cbo)-2-NA 5,20 g (10 mMol) der Verbindung 8b wurden gemäss Beispiel 2c mit 4,25 g (11 mMol) BOC-Phe-OpNP umgesetzt. Das nach Aufarbeitung erhaltene Rohprodukt wurde in 100 ml MeOH gelöst und auf einer Säule von "Sephadex LH-20" gereinigt. Die erste Hauptfraktion des MeOH-Eluates, die sich im DSC in den LMS A und B einheitlich verhielt, wurde im Vakuum bei 300C zur Trockne eingeengt. Der Rückstand wurde im Vakuumtrockenschrank bei 500C über P205 getrocknet. Man erhielt 5,48 g (83,9% der Theorie) der teilweise kristallinen Verbindung 8c. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C38H44N406 ergaben die folgenden Werte: C = 70,41 (69,92%), H = 6,74 (6,79%) und N = 8,69 (8,58%). 8d. CF3COOH.H-Phe-Lys (E-Cbo)-2-NA 3,26 g (5 mMol) der Verbindung 8c wurden gemäss Beispiel 2d mit 17 ml Trifluoressigsäure deblockiert. Das nach Aufarbeitung erhaltene Rohprodukt wurde in 75 ml MeOH gelöst und auf einer Säule von "Sephadex LH-20" gereinigt. Die Hauptfraktion des MeOH-Eluates, die sich im DSC im LMS C einheitlich verhielt, wurde im Vakuum bei 30 0C zur Trockne eingeengt. Nach Trocknung des Rückstandes im Vakuumtrockenschrank bei 400C über P205 erhielt man 3,18 g (95,4% der Theorie) der amorphen Verbindung 8d. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C35H37N4O6F3 ergaben die folgenden Werte: C = 62,63% (63,05 %), H = 5,66% (5,59 %) und N = 8,19% (8,40%). 8e. Cbo-D-CHG-Phe-Lys(E-Cbo)-2-NA 1,67 g (2,5 mMol) der Verbindung 8d wurden gemäss Beispiel 2e mit 1,14 g (2,76 mMol) Cbo-D-CHG-OpNP umgesetzt. Das nach Aufarbeitung erhaltene Rohprodukt wurde in 50 ml MeOH gelöst und auf einer Säule von ' Sephadex LH-20" gereinigt. Die erste Hauptfraktion des MeOH-Eluates, die sich im DSC in den LMS A und B einheitlich verhielt, wurde im Vakuum bei 30 0C zur Trockne eingeengt. Der RUckstand wurde im Vakuumtrockenschrank bei 600C über P205 getrocknet. Man erhielt 1,58 g (76,5 der Theorie) der amorphen Verbindung 8e. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C4 55N507 ergaben die folgenden Werte: C = 70,91 (71,25%), H = 6,66 (6,71%) und N = 8,69% (8,48%). 8±. 2HBr. H-D-CHG-Phe-Lys-2-NA 1,24 g (1,5 mMol) der Verbindung 8e wurden gemäss Beispiel 2f mit 9 ml 2N HBr in Eisessig deblockiert. Das nach Auf arbeitung erhaltene Rohprodukt wurde in 25 ml MeOH gelöst und auf einer Säule von Sephadex LH-20" vorgereinigt. Die Hauptfraktion des MeOH-Eluates, die sich durch Trypsineinwirkung unter Freisetzung von 2-Naphthylamin spalten liess, wurde bei 300C zur Trockne eingeengt. Das vorgereinigte Produkt wurde in 40 ml zeiger AcOH gelöst und auf einer Säule von "Sepha- dex G-15" weitergereinigt. Die Hauptfraktion des AcOH-Eluates, die unter der Einwirkung von Trypsin 2-Naphthylamin bildete, wurde im Vakuum bei 400C zur Trockne eingeengt. Nach Trocknung des Rückstandes im Vakuumtrockenschrank bei 400C über P205 erhielt man 805 mg (74,6 der Theorie) der amorphen Verbindung 8S, die im DSC im LMS C einheitlich war. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C33H45N5O3Br2 ergaben die folgenden Werte: C = 54,73 (55,08%), H = 6,38 (6,30%), N = 10,5 % (9,73 %) und Br = 21,88 % (22,21 %). Die Aminosäureanalyse ergab die zu erwartenden Aminosäuren im richtigen Verhaltnis: Phe: 1,00 - Lys: 0,99 - D-CHG: 0 > 98. Beispiel 9 2HBr .H-D-Val-CHA-Arg-4-Me0-2-NA 9b. 2HBr. H-Arg-4-MeO-2-NA 10,0 g (20 mMol) käufliches Cbo-Arg-4-MeO-2-NA.HCl wurden gemäss Beispiel lb mit 80 ml 2N HBr in Eisessig deblockiert. Das nach Aufarbeitung erhaltene Rohprodukt wurde in 150 ml MeOH gelöst und auf einer Säule von "Sephadex LH-20" gereinigt. Die Hauptfraktion des MeOH-Eluates, die sich durch Trypsinbehandlung unter Freisetzung von 4-Methoxy-2-naphthyl amin spalten liess, wurde im Vakuum bei 30 C zur Trockne eingeengt. Nach Trocknung des Rückstandes im Vakuumtrockenschrank bei 400C über P205 erhielt man 8,98 g (91,4 der Theorie) der amorphen Verbindung 9b, die im DSC im LMS C einheitlich war. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttofor- mel C17H25N5O2Br2 ergaben die folgenden Werte: C = 41,22 (41,57%), H = 5,19 (5,13 %), N = 14,40 (14,26%) und Br = 32,01 % (32,53%). 9c. Cbo-CHA-Arg-4-MeO-2-NA.HBr 4,91 g (10 mMol) der Verbindung 9b wurden gemäss Beispiel lc mit 4,69 g (11 mMol) Cbo-CHA-OpNP umgesetzt. Das nach Aufarbeitung erhaltene Rohprodukt wurde in 150 ml 50% iger AcOH gelost und auf einer Säule von "Sephadex G-15" gereinigt. Die erste Hauptfraktion des AcOH-Eluates, die sich durch Trypsinbehandlung unter Freisetzung von 4-Methoxy-2-naphthylamin spalten liess, wurde im Vakuum bei 400C zur Trockne eingeengt. Nach Trocknung des Rückstandes im Vakuumtrockenschrank bei 600C über P205 erhielt man 5,36 g (76,8 der Theorie) der amorphen Verbindung 9c, die im DSC im LMS C einheitlich war. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C34H45N605Br ergaben die folgenden Werte: C = 58,85 (58,53 %), H = 6,59% (6,50%), N = 11,91% (12,05%) und Br = 11,32% (11,45%). 9d. 2HBr.H-CHA-Arg-4-MeO-2-NA 4,88 g (7 mMol) der Verbindung 9c wurden gemäss Beispiel ld mit 28 ml 2N HBr in Eisessig deblockiert. Das nach Aufarbeitung erhaltene Rohprodukt wurde in 100 ml MeOH gelöst und auf einer Säule von "Sephadex LH-20" gereinigt. Die Hauptfraktion des MeOH-Eluates, die sich durch Trypsinbehandlung unter Bildung von 4-Methoxy-2-naphthylamin spalten liess, wurde im Vakuum bei 3000 zur Trockne eingeengt. Nach Trocknung des Rückstandes im Vakuumtrockenschrank bei 400C über P205 erhielt man 4,12 g (91,3 % der Theorie) der amorphen Verbindung 9d, die im DSC im LMS C einheitlich war. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C26H40N603Br2 ergaben die folgenden Werte: C = 48,92% (48,46 %), H = 6,36 (6,26%), N = 12,84 % (13,04%) und Br = 24,33 % (24,80%). 9e. Cbo-D-Val-CHA-Arg-4-MeO-2-NA.HBr 3,22 g (5 mMol) der Verbindung 9d wurden gemäss Beispiel le mit 2,05 g (5,5 mMol) Cbo-D-Val-OpNP umgesetzt. Das nach Aufarbeitung erhaltene Rohprodukt wurde in 125 ml zeiger AcOH gelöst und auf einer Säule von " Sephadex G-15" gereinigt Die erste Hauptfraktion des AcOH-Eluates, die sich durch Trypsinbehandlung unter Freisetzung von 4-Methoxy-2-naphthylamin spalten liess, wurde im Vakuum bei 400C zur Trockne eingeengt. Nach Trocknung des Rückstandes im Vakuumtrockenschrank bei 600C über P205 erhielt man 3,15 g (79,1% der Theorie) der amorphen Verbindung 9e, die im DSC im LMS C einheitlich war. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C39H54N706Br ergaben die folgenden Werte: C = 58,)5 (58,79 %), H = 6,78% (6ss3'%), N = 12,68 (12,31%) und Br = 9,82% (10,03%). 9f. 2HBr.H-D-Val-CHA-Arg-4-MeO-2-NA 1,59 g (2 mMol) der Verbindung 9e wurden gemass Beispiel lf mit 8 ml 2N HBr in Eisessig deblockiert. Das nach Aufarbeitung erhaltene Rohprodukt wurde in 40 ml MeOH gelöst und auf einer Säule von "Sephadex LH-20" vorgereinigt. Die Hauptfraktion des MeOH-Eluates, die sich durch Trypsinbehand lung unter Bildung von 4-Methoxy-2-naphthylamin spalten liess, wurde bei 300C zur Trockne eingeengt. Dieses vorge reinigte Produkt wurde in 60 ml 50%iger AcOH gelöst und auf einer Säule von "Sephadex G-15" gereinigt. Die Hauptfraktion des AcOH-Eluates, die sich durch Trypsinbehandlung unter Ent stehung von 4-Methoxy-2-naphthylamin spalten liess, wurde bei 400C im Vakuum zur Trockne eingeengt. Nach Trocknung des Rück standes im Vakuumtrockenschrank bei 400C über P 205 erhielt man 1,09 g (73,3 % der Theorie) der amorphen Verbindung 9f, die im DSC im LMS C einheitlich war. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C31H49N7O4Br2 ergaben die folgenden Wer te: C = 49,63 (50,07%), H = 6,70% (6,64 %), N = 13,42 (13,19%) und Br = 21,22 % (21,49%), Die Aminosäureanalyse ergab die zu erwartenden Amino säuren im richtigen Verhältnis: D-Val: 1,00 - Arg: 1,01 - D-CHA: 0.98. Beispiel 10 2HBr.H-D-CHG-Phe-Lys-4-MeO-2-NA lOa. BOC-Lys (E-Cbo) -4-MeO-2-NA Gemass Beispiel 4a wurden 9,51 g (25 mMol) BOC-Lys (E-Cbo)-OH mit 4,)3 g (25 mMol) 4-Methoxy-2-naphthylamin zur Reaktion gebracht. Der nach Aufarbeitung erhaltene RUckstand wurde in 175 ml MeOH gelöst und auf einer Säule von sephadex -LH-20" gereinigt. Aus dem Me OH-Eluat wurden neben dem er wünschten Produkt BOC-Lys(-Cbo)-4-MeO-2-NA drei weitere Produkte, nämlich das Nebenprodukt N-(4-Methoxy-2-naphthyl)karbaminsäure-isobutylester sowie die beiden Ausgangsprodukte BOC-Lys (E-Cbo)-OH bzw. 4-Methoxy-2-naphthylamin in drei verschiedenen Fraktionen erhalten. Die das gewünschte Produkt enthaltende Fraktion wurde im Vakuum bei 300C eingeengt. Nach Trocknung des RUckstandes im Vakuumtrockenschrank bei 50 C über P205 erhielt man 6,28 g (46,9 der Theorie) der teilweise kristallinen Verbindung 10a, die im DSC in den LMS A und B einheitlich war. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C30H37N3O6 ergaben die folgenden Werte: C = 66,83 % (67,27%), H = 7,04 % (6,96 %) und N = 8,09 % (7,85%). 10b. CF3COOH.H-Lys (E-Cbo)-4-Meo¯-2-NA 5,36 g (10 mMol) der Verbindung lOa wurden gemäss Beispiel 2b mit 20 ml Trifluoressigsäure deblockiert. Das nach Aufarbeitung erhaltene Rohprodukt wurde in 75 ml MeOH gelöst und auf einer Säule von "Sephadex LH-20" gereinigt. Die Hauptfraktion des MeOH-Eluates, die sich im DSC im LMS C einheitlich verhielt, wurde im Vakuum bei 300C zur Trockne eingeengt. Nach Trocknung des Rückstandes im Vakuumtrockenschrank bei 4o0C über P205 erhielt man 5,10 g (92,8 der Theorie) der amorphen Verbindung lOb. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C27H30N3O6F ergaben die folgenden Werte: C = 58,66% (59,01%), H = 5,61 % (5,50 %) und N = 7,92 % (7,65 %). 10c,. BOC-Phe-Lys(E-Cbo)-4-MeO-2-NA 4,40 g (8 mMol) der Verbindung lOb wurden gemäss Beispiel 2c mit 3,40 g (8,8 mMol) BOC-Phe-OpNP umgesetzt. Das nach Aufarbeitung erhaltene Rohprodukt wurde in 75 ml MeOR gelöst und auf einer Saule von "Sephadex LH-20" gereinigt. Die erste Hauptfraktion des MeOH-Eluates, die sich im DSC in den LMS A und B einheitlich verhielt, wurde im Vakuum bei 300C zur Trockne eingeengt. Nach Trocknung des Rückstandes im Vakuumtrockenschrank bei 500C Uber P205 erhielt man 4,54 g (83,1 der Theorie) der amorphen Verbindung lOc. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C39H46N407 ergaben die folgenden Werte : C = 68,24 % (68,60 %), H = 6,85 % (6,79%) und N = 8,41 (8,21 %). 10d. CF3COOH.H-Phe-Lys(E-Cbo)-4-MeO-2-NA 3,41 g (5 mMol) der Verbindung 10c wurden gemäss Beispiel 2d mit 20 ml Trifluoressigsäure deblockiert. Das nach Aufarbeitung erhaltene Rohprodukt wurde in 80 ml MeOH gelöst und auf einer Säule von "Sephadex LH-20" gereinigt. Die Hauptfraktion des MeOH-Eluates, die sich im DSC im LMS C einheitlich verhielt, wurde im Vakuum bei 300C zur Trockne eingeengt. Nach Trocknung des Rückstandes im Vakuumtrockenschrank bei 400C über P205 erhielt man 3,29 g (94,4% der Theorie) der amorphen Verbindung lOd. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C36H39N4O7F3 ergaben die folgenden Werte: c = 61,82 % (62,06%), H = 5,63% (5,64 %) und N = 8,21 % (8,04 %). 10e. Cbo-D0-CHG-Phe-Lys (E-Cbo)-4-MeO-2-NA 1,74 g (2,5 mMol) der Verbindung lOd wurden gemäss Beispiel 2e mit 1,14 g (2,76 mMol) Cbo-D-CHG-OpNP umgesetzt. Das nach Aufarbeitung erhaltene Rohprodukt wurde in 6o ml MeOH gelöst und auf einer Säule von "Sephadex LH-20" gereinigt. Die erste Hauptfraktion des MeOH-Eluates, die sich im DSC in den LMS A und B einheitlich verhielt, wurde im Vakuum bei 300C zur Trockne eingeengt. Nach Trocknung des Rückstandes im Vakuumtrockenschrank bei 6000 über P205 erhielt man 1,76 g (82,2 der Theorie) der amorphen Verbindung lOe. Elementar analyse und Berechnung aus der Bruttoformel C50H 57N5O8 erga- ben die folgenden Werte: C = 69,75% (70,15%), H = 6,82 (6,71%) und N = 8,28 % (8,18%). 10f. 2HBr.H-D-CHG-Phe-Lys-4-MeO-2-NA 856 mg (1 mMol) der Verbindung 10e wurden gemäss Beispiel mit 6 ml 2N HBr in Eisessig deblockiert. Das nach Aufarbeitung erhaltene Rohprodukt wurde in 20 ml AcOH gelost und auf einer Säule von " Sephadex LH-20" vorgereinigt. Die Hauptfraktion des AcOH-Eluates, die sich durch Trypsinbehandlung unter Freisetzung von 4-Methoxy-2-naphthylamin spalten liess, wurde bei 300C zur Trockne eingeengt. Das vorgereinigte Produkt wurde in 30 ml 50% iger AcOH'gelost und auf einer Säule von "Sephadex G-15" gereinigt. Die Hauptfraktion des AcOH Eluates, die unter der Einwirkung von Trypsin 4-Methoxy-2 naphthylamin bildete, wurde im Vakuum bei 400C zur Trockne eingeengt. Nach Trocknung des Rückstandes im Vakuumtrockenschrank bei 400C über P 205 erhielt man 553 mg (73,8% der Theorie) der amorphen Verbindung lOf, die im DSC im LMS C einheitlich war. Elementaranalyse und Berechnung aus der Bruttoformel C34H47N5O4Br2 ergaben die folgenden Werte: C = 54,09% (54,48%), H = 6,)1 (6,32%), N = 9,52 (9,34%) und Br = 20,86% (21,32%). Die Aminosäureanalyse ergab die zu erwartenden Aminosäuren im richtigen Verhältnis: Phe: 1,00 - Lys: 1,02 - D-CHG: 0,99. Nach den in den vorangehenden Beispielen beschriebenen Methoden wurde eine Reihe weiterer Tripeptidderivate hergestellt, welche in der Tabelle 1 zusammengestellt sind. Die zur Herstellung der in Tabelle 1 aufgeführten Tripeptidderivate verwendeten Di- und Tripeptidzwischenprodukte sind in den Tabellen 2 und 3 zusammengestellt. Tabelle 1 Bei- Endprodukt Ausgangs- Methode Elementar- Aminosäurespiel produkte (Beispiel) analyse analyse (mMol) Ausbeute gef. % ber. % % 11 2HBr. H-D-CHG-Leu-Arg-pNA 11e (1 mMol) (1f) C 43,72 44,08 CHG : Leu : Arg C26H44N8O5Br2 2N HBr/AcOH 88,2 H 6,31 6,26 0,97 : 1,00 : 0,98 N 16,28 15,82 Br 22,33 22,56 12 2HBr.H-D-Val-CHA-Arg-pNA 12e (1 mMol) (1f) C 43,60 44,08 Val : CHA : Arg C26H44N8O5Br2 2N HBr/AcOH 86,4 H 6,41 6,26 1,00 : 0,96 : 1,02 N 16,15 15,82 Br 22,21 22,56 13 2HBr.H-D-Ile-CHA-Arg-pNA 13e (1,5 mMol) (1f) C 44,48 44,88 Ile : CHA : Arg C27H46N8O5Br2 2N HBr/AcOH 88,9 H 6,53 6,42 1,00 : 0,98 : 0,99 N 16,09 15,51 Br 21,85 22,12 14 2HBr.H-D-Val-CHA-Lys-pNA 14e (0,8 mMol) (2f) C 45,30 45,89 Val : CHA : Lys C26H44N6O5Br2 2N HBr/AcOH 91,0 H 6,58 6,52 1,00 : 1,03 : 0,99 N 12,69 12,35 Br 23,17 23,49 15 2HBr.H-D-Ile-CHA-Lys-pNA 15e (1,2 mMol) (2f) C 46,10 46,69 Ile : CHA : Lys C27H46N6O5Br2 2N HBr/AcOH 90,3 H 6,75 6,68 1,00 : 0,98 : 1,02 N 11,81 12,10 Br 22,75 23,01 16 2HBr.H-D-CHG-Phe-Arg-pNA 16e (1 mMol) (1f) C 46,22 46,91 CHG : Phe : Arg C29H42N8O5Br2 2N HBr/AcOH 85,6 H 5,78 5,70 0,97 : 1,00 : 1,01 N 14,82 15,09 Br 21,33 21,52 17 2HBr.H-D-CHT-Phe-Arg-pNA 17e (1,25 mMol) (1f) C 45,95 46,64 CHT : Phe : Arg C30H44N8O6Br2 2N HBr/AcOH 79,4 H 5,80 5,74 0,96 : 1,00 : 1,03 N 14,70 14,51 Br 20,55 20,69 Tabelle 1 (Fortsetzung) 18 2HBr.H-D-Ph'Gly-CHA-Arg-pNA 18e (1,1 mMol) (1f) C 46,54 46,91 Ph'Gly : CHA : Arg C29H42N8O5Br2 2N HBr/AcOH 82,6 H 5,73 5,70 1,00 : 0,99 : 1,00 N 15,25 15,09 Br 21,28 21,52 19 2HBr.H-D-CHA-Pro-Arg-pNA 19e (1 mMol) (1f) C 44,15 44,20 CHA : Pro : Arg C26H42N8O5Br2 2N HBr/AcOH 86,4 H 6,06 5,99 0,98 : 0,99 : 1,00 N 16,13 15,86 Br 22,44 22,62 20 2HBr.H-D-CHG-CHA-Lys-pNA 20e (1 mMol) (2f) C 47,81 48,34 CHG : CHA : Lys C29H48N6O5Br2 2N HBr/AcOH 92,4 H 6,72 6,71 1,02 : 0,99 : 1,00 N 11,59 11,66 Br 21,83 22,18 21 2HBr.H-D-CHG-Leu-Lys-pNA 21e (0,9 mMol) (2f) C 45,35 45,89 CHG : Leu : Lys C26H44N6O5Br2 2N HBr/AcOH 92,4 H 6,72 6,71 0,99 : 1,00 : 1,02 N 12,67 12,35 Br 23,17 23,49 22 2HBr.H-D-Pro-CHA-Arg-pNA 22e (1,1 mMol) (1f) C 43,74 44,20 Pro : CHA : Arg C26H42N8O5Br2 2N HBr/AcOH 88,8 H 6,08 5,99 0,98 : 1,01 : 1,00 N 16,16 15,86 Br 22,41 22,62 23 2HBr.H-D-CHT-Pro-Arg-pNA 23e (0,75 mMol) (1f) C 43,05 43,22 CHT : Pro : Arg C26H42N8O6Br2 2N HBr/AcOH 82,4 H 5,96 5,86 1,00 : 1,02 : 1,00 N 15,70 15,51 Br 21,88 22,12 24 2HBr.H-D-Pro-CHG-Arg-pNA 24e (1 mMol) (1f) C 42,94 43,36 Pro : CHG : Arg C25H40N8O5Br2 2N HBr/AcOH 85,4 H 5,91 5,82 0,98 : 0,97 : 1,00 N 16,34 16,18 Br 22,75 23,08 25 2HBr.H-D-Pro-CHT-Arg-pNA 25e (0,9 mMol) (1f) C 42,85 43,22 Pro : CHT : Arg C26H42N8O6Br2 2N HBr/AcOH 76,8 H 5,96 5,86 1,01 : 0,96 : 1,00 N 15,86 15,51 Br 21,84 22,12 Tabelle 1 (Fortsetzung) 26 2HBr.H-D-Ph'Gly-Leu-Arg-pNA 26e (0,8 mMol) (1f) C 43,60 43,71 Ph'Gly : Leu : Arg C26H38N8O5Br2 2N HBr/AcOH 79,5 H 5,44 5,36 0,99 : 1,00 : 0,99 N 16,06 15,68 Br 22,17 22,37 27 2HBr.H-D-CHG-Pro-Arg-pNA 27e (1,2 mMol) (1f) C 42,80 43,36 CHG : Pro : Arg C25H40N8O5Br2 2N HBr/AcOH 84,8 H 5,92 5,82 1,01 : 1,02 : 1,00 N 16,44 16,18 Br 22,70 23,08 28 2HBr.H-D-CHT-Pip-Arg-pNA 28e (0,65 mMol) (1f) C 43,96 44,03 CHT : Pip : Arg C27H44N8O6Br2 2N HBr/AcOH 82,6 H 6,09 6,02 0,99 : 0,96 : 1,00 N 15,77 15,22 Br 21,53 21,70 29 2AcOH.H-D-CHA-Pro-Lys-pNA 29e (0,75 mMol) (2f) C 56,09 56,59 CHA : Pro : Lys C30H48N6O9 2N HBr/AcOH 87,5 H 7,65 7,60 0,99 : 0,98 : 1,00 N 13,48 13,20 30 2AcOH.H-D-Val-CHG-Lys-pNA 30e (0,75 mMol) (2f) C 56,02 55,75 Val : CHG : Lys C29H48N6O9 2N HBr/AcOH 88,8 H 7,82 7,74 1,00 : 0,98 : 1,01 N 13,59 13,45 31 2AcOH.H-D-CHG-Pro-Lys-pNA 31e (0,75 mMol) (2f) C 55,49 55,93 CHG : Pro : Lys C29H46N6O9 2N HBr/AcOH 85,4 H 7,55 7,45 0,97 : 0,99 : 1,00 N 13,18 13,50 32 2AcOH.H-D-CHT-Pro-Lys-pNA 32e (0,75 mMol) (2f) C 55,01 55,20 CHT : Pro : Lys C30H48N6O10 2N HBr/AcOH 79,8 H 7,44 7,41 0,96 : 0,99 : 1,00 N 13,18 12,88 33 2AcOH.H-D-Ph'Gly-CHA-Lys-pNA 33e (0,75 mMol) (2f) C 59,25 58,91 Ph'Gly : CHA : Lys C33H48N6O9 2N HBr/AcOH 75,5 H 7,18 7,19 0,99 : 0,98 : 1,00 N 12,66 12,49 34 2AcOH.H-D-Val-CHT-Lys-pNA 34e (0,75 mMol) (2f) C 54,90 55,03 Val : CHT : Lys C30H50N6O10 2N HBr/AcOH 84,4 H 7,78 7,70 1,00 : 0,98 : 1,01 N 13,05 12,84 35 2AcOH.H-D-Ph'Gly-CHT-Lys- 35e (0,75 mMol) (2f) C 57,18 57,54 Ph'Gly : CHT : Lys C33H48N6O10 2N HBr/AcOH 73,8 H 7,09 7,02 0,98 : 0,96 : 1,00 N 12,40 12,20 Tabelle 1 (Fortsetzung) 36 2HBr.H-D-Leu-CHA-Arg-pNA 36e (1 mMol) (1f) C 44,55 44,88 Leu : CHA : Arg C27H46N8O5Br2 2N HBr/AcOH 85,2 H 6,53 6,42 1,00: 0,98: 0,99 N 15,85 15,51 Br 21,82 22,12 37 2HBr.H-D-Nleu-CHA-Arg-pNA 37e (1 mMol) (1f) C 44,75 44,88 Nleu : CHA : Arg C27H46N8O5Br2 2N HBr/AcOH 86,0 H 6,49 6,42 1,00 : 0,97: 0,99 N 15,79 15,51 Br 21,82 22,12 38 2HBr.H-D-Nval-CHA-Arg-pNA 38e (1 mMol) (1f) C 44,39 44,08 Nval : CHA : Arg C26H44N8O5Br2 2N HBr/AcOH 87,1 H 6,28 6,26 1,00 : 0,98: 0,98 N 16,09 15,82 Br 22,33 22,56 39 2HBr.H-D-Phe-CHA-Arg-pNA 39e (1 mMol) (1f) C 47,47 47,63 Phe : CHA : Arg C30H44N8O5Br2 2N HBr/AcOH 82,3 H 5,92 5,86 1,00: 0,98: 1,01 N 15,08 14,81 Br 20,85 21,12 40 2HBr.H-D-Ala-CHA-Arg-pNA 40e (1 mMol) (1f) C 41,97 42,36 Ala : CHA : Arg C24H40N8O5Br2 2N HBr/AcOH 86,0 H 5,92 5,93 1,00: 0,97: 0,99 N 16,59 16,47 Br 23,11 23,49 41 2HBr.H-D-CHA-Trg-pNA 41e (1 mMol) (1f) C 43,18 43,24 But : CHA : Arg C25H42N8O5Br2 2N HBr/AcOH 81,9 H 6,16 6,10 1,00: 0,98: 1,01 N 16,27 16,14 Br 22,73 23,01 42 2HBr.H-D-CHG-Tyr-Arg-pNA 42e (0,5 mMol) (1f) C 45,77 45,92 CHG : Tyr : Arg C29H42N8O6Br2 2N HBr/AcOH 77,8 H 5,64 5,58 0,97: 1,00: 0,99 N 15,01 14,77 Br 20,84 21,07 43 2HBr.H-D-CHA-Tyr-Arg-pNA 43e (0,5 mMol) (1f) C 46,39 46,64 CHA : Tyr : Arg C30H44N8O6Br2 2N HBr/AcOH 72,1 H 5,73 5,74 0,98: 1,00: 1,00 N 14,60 14,51 Br 20,50 20,69 Tabelle 1 (Fortsetzung) 44 2HBr.H-D-Nval-Tyr-Arg-pNA 44e (0,5 mMol) (1f) C 43,29 43,47 Nval : Tyr : Arg C26H38N8O6Br2 2N HBr/AcOH 70,5 H 5,31 5,33 1,02 : 1,00: 0,98 N 15,82 15,60 Br 22,07 22,24 45 2HBr.H-D-CHT-Tyr-Arg-pNA 45e (0,5 mMol) (1f) C 45,20 45,69 CHT : Tyr : Arg C30H44N8O7Br2 2N HBr/AcOH 69,9 H 5,68 5,62 0,96: 1,00: 0,99 N 14,39 14,21 Br 20,05 20,27 46 2HBr.H-D-Phe-Tyr-Arg-pNA 46e (0,5 mMol) (1f) C 47,51 47,01 Phe : Tyr : Arg C30H38N8O6Br2 2N HBr/AcOH 73,0 H 5,07 5,00 1,00: 1,01: 0,98 N 14,88 14,62 Br 20,46 20,85 47 2HBr.H-D-ph'Gly-Tyr-Arg-pNA 47e (0,5 mMol) (1f) C 46,57 46,30 Ph'Gly : Tyr : Arg C29H36N8O6Br2 2N HBr/AcOH 67,8 H 4,90 4,82 0,97 : 1,00 : 0,99 N 15,13 14,89 Br 20,98 21,24 48 2HBr.H-D-CHG-Ala-Arg-pNA 48e (1 mMol) (1f) C 41,66 41,45 CHG : Ala : Arg C23H38N8O5Br2 2N HBr/AcOH 83,4 H 5,74 5,75 0,96: 1,00: 0,99 N 17,09 16,82 Br 23,90 23,98 49 2HBr.H-D-CHG-Ala-Arg-pNA 49e (1 mMol) (1f) C 42,54 42,36 CHA : Ala : Arg C24H40N8O5Br2 2N HBr/AcOH 88,1 H 5,98 5,93 0,98: 1,00: 1,00 N 16,60 16,47 Br 23,19 23,49 50 2HBr.H-D-Phe-Leu-Arg-pNA 50e (1 mMol) (1f) C 45,49 45,26 Phe : Leu : Arg C27H40N8O5Br2 2N HBr/AcOH 84,4 H 5,66 5,63 1,01: 1,00: 0,99 N 15,69 15,64 Br 22,03 22,31 51 2HBr.H-D-CHT-Leu-Arg-pNA 51e (1 mMol) (1f) C 43,80 43,91 CHT : Leu : Arg C27H46N8O6Br2 2N HBr/AcOH 80,7 H 6,33 6,28 0,96: 1,00: 0,99 N 15,42 15,17 Br 21,37 21,64 Tabelle 1 (Fortsetzung) 52 2HBr.H-D-CHA-Leu-Arg-pNA 52e (1 mMol) (1f) C 44,38 44,88 CHA : Leu : Arg C27H46N8O5Br2 2N HBr/AcOH 84,5 H 6,41 6,42 0,97: 1,00: 1,01 N 15,75 15,51 Br 21,85 22,12 53 2HBr.H-D-Leu-Ph'Gly-Arg-pNA 53e (0,5 mMol) (1f) C 44,18 44,46 Leu : Ph'Gly : Arg C26H38N8O5Br2 2N HBr/AcOH 82,3 H 5,50 5,45 1,00: 0,97 : 0,98 N 16,18 15,95 Br 22,48 22,75 54 2HBr.H-D-Nval-Ph'Gly-Arg-pNA 54e (0,5 mMol) (1f) C 43,24 43,62 Nval : Ph'Gly : Arg C25H36N8O5Br2 2N HBr/AcOH 79,8 H 5,33 5,27 1,00 : 0,98 : 1,01 N 16,39 16,28 Br 22,87 23,21 55 2HBr.H-D-Ala-Ph'Gly-Arg-pNA 55e (0,5 mMol) (1f) C 41,46 41,83 Ala : Ph'Gly : Arg C23H32N8O5Br2 2N HBr/AcOH 82,1 H 4,93 4,88 1,00: 0,98 : 0,99 N 17,19 16,97 Br 23,92 24,20 56 2HBr.H-D-CHA-Ph'Gly-Arg-pNA 56e (0,5 mMol) (1f) C 46,75 46,91 CHA : Ph'Gly : Arg C29H42N8O5Br2 2N HBr/AcOH 77,6 H 5,73 5,70 0,97: 0,98 : 1,00 N 15,40 15,09 Br 21,22 21,52 57 2HBr.H-D-CHT-Ph'Gly-Arg-pNA 57e (0,5 mMol) (1f) C 45,64 45,92 CHT : Ph'Gly : Arg C29H42N8O6Br2 2N HBr/AcOH 76,4 H 5,61 5,58 0,96: 0,99 : 1,00 N 15,00 14,77 Br 20,69 21,07 58 2HBr.H-D-CHG-Ph'Gly-Arg-pNA 58e (0,5 mMol) (1f) C 46,02 46,16 CHG : Ph'Gly : Arg C28H40N8O5Br2 2N HBr/AcOH 75,9 H 5,59 5,53 0,98: 0,98 : 1,00 N 15,67 15,38 Br 21,48 21,94 59 2HBr.H-D-CHG-CHG-Arg-pNA 59e (1 mMol) (1f) C 45,65 45,78 CHG : Arg C28H46N8O5Br2 2N HBr/AcOH 84,6 H 6,38 6,31 1,93 : 1,00 N 15,44 15,26 Br 21,52 21,76 Tabelle 1 (Fortsetzung) 60 2HBr.H-D-Pip-CHG-Arg-pNA 60e (1 mMol) (1f) C 43,91 44,20 Pip : CHG : Arg C26H42N8O5Br2 2N HBr/AcOH 80,1 H 6,05 5,99 0,97: 0,99: 1,00 N 16,18 15,86 Br 22,47 22,62 61 2HBr.H-D-Phe-CHG-Arg-pNA 61e (1 mMol) (1f) C 46,70 46,91 Phe : CHG : Arg C29H42N8O5Br2 2N HBr/AcOH 88,4 H 5,68 5,70 1,00: 0,98: 1,01 N 15,27 15,09 Br 21,33 21,52 62 2HBr.H-D-Ph'Gly-CHG-Arg-pNA 62e (1 mMol) (1f) C 46,18 46,16 Ph'Gly : CHG : Arg C28H40N8O5Br2 2N HBr/AcOH 82,7 H 5,60 5,53 0,98 : 0,98 : 1,00 N 15,62 15,38 Br 21,77 21,94 63 2HBr.H-D-Ph'Gly-Phe-Arg-pNA 63e (0,5 mMol) (1f) C 47,08 47,29 Ph'Gly : Phe : Arg C29H36N8O5Br2 2N HBr/AcOH 80,0 H 5,00 4,93 0,97 : 1,00 : 0,99 N 15,38 15,22 Br 21,61 21,70 64 2HBr.H-D-CHA-Phe-Arg-pNA 64e (0,5 mMol) (1f) C 47,32 47,63 CHA : Phe : Arg C30H44N8O5Br2 2N HBr/AcOH 82,5 H 5,84 5,86 0,96: 1,00: 0,99 N 14,90 14,81 Br 20,88 21,12 65 2HBr.H-D-CHG-Pip-Arg-pNA 65e (0,5 mMol) (1f) C 43,87 44,20 CHG : Pip : Arg C26H42N8O5Br2 2N HBr/AcOH 77,7 H 6,04 5,99 0,98: 0,96: 1,00 N 16,18 15,86 Br 22,40 22,62 66 2HBr.H-D-CHA-Pip-Arg-pNA 66e (0,5 mMol) (1f) C 44,76 45,01 CHA : Pip : Arg C27H44N8O5Br2 2N HBr/AcOH 76,9 H 6,18 6,16 0,98: 0,95: 1,00 N 15,73 15,55 Br 22,01 22,18 67 2HBr.H-D-CHG-Nleu-Arg-pNA 67e (1 mMol) (1f) C 43,68 44,08 CHG : Nleu : Arg C26H44N8O5Br2 2N HBr/AcOH 85,8 H 6,30 6,26 0,97: 1,00 : 0,99 N 16,02 15,82 Br 22,33 22,56 Tabelle 1 (Fortsetzung) 68 2HBr.H-D-CHA-Nleu-Arg-pNA 68e (1 mMol) (1f) C 44,59 44,88 CHA : Nleu : Arg C27H46N8O5Br2 2N HBr/AcOH 87,4 H 6,45 6,42 0,98: 1,00 : 0,98 N 15,62 15,51 Br 21,87 22,12 69 2HBr.H-D-CHA-Nval-Arg-pNA 69e (0,5 mMol) (1f) C 43,90 44,08 CHA : Nval : Arg C26H44N8O5Br2 2N HBr/AcOH 90,2 H 6,32 6,26 0,97: 1,00 : 0,99 N 16,18 15,82 Br 22,39 22,56 70 2HBr.H-D-CHG-Nval-Arg-pNA 70e (0,5 mMol) (1f) C 43,20 43,24 CHG : Nval : Arg C25H42N8O5Br2 2N HBr/AcOH 88,5 H 6,15 6,10 0,96: 1,00 : 1,01 N 16,36 16,14 Br 22,78 23,01 71 2HBr.H-D-Nval-CHA-Lys-pNA 71e (1 mMol) (2f) C 45,73 45,89 Nval : CHA : Arg C26H44N6O5Br2 2N HBr/AcOH 76,4 H 6,61 6,52 1,00 : 0,98: 0,99 N 12,48 12,35 Br 23,18 23,49 72 2HBr.H-D-But-CHA-Lys-pNA 72e (1 mMol) (2f) C 44,75 45,05 But : CHA : Lys C26H42N6O5Br2 2N HBr/AcOH 74,6 H 6,39 6,35 1,02: 0,98: 1,00 N 12,67 12,61 Br 23,68 23,98 73 2HBr.H-D-CHA-Lys-pNA 73e (1 mMol) (2f) C 46,39 46,69 Leu : CHA : Lys C27H46N6O5Br2 2N HBr/AcOH 78,0 H 6,63 6,68 1,00: 0,97: 1,01 N 12,27 12,10 Br 22,81 23,01 74 2HBr.H-D-CHA-Lys-pNA 74e (1 mMol) (2f) C 46,88 46,69 Nleu : CHA : Lys C27H46N6O5Br2 2N HBr/AcOH 77,6 H 6,72 6,68 0,99 : 0,97: 1,00 N 12,33 12,10 Br 22,75 23,01 75 2HBr.H-D-CHG-Lys-pNA 75e (1 mMol) (1f) C 42,18 42,36 CHG : But : Arg C24H40N8O5Br2 2N HBr/AcOH 84,7 H 6,00 5,93 0,97: 0,99: 1,00 N 16,52 16,47 Br 23,18 23,49 Tabelle 1 (Fortsetzung) 76 2HBr.H-D-CHA-But-Arg-pNA 76e (1 mMol) (1f) C 42,96 43,24 CHA : But : Arg C25H42N8O5Br2 2N HBr/AcOH 88,5 H 6,12 6,10 0,98: 0,98: 1,00 N 16,25 16,14 Br 22,69 23,01 77 2HBr.H-D-CHT-But-Arg-pNA 77e (1 mMol) (1f) C 41,89 42,26 CHT : But : Arg C25H42N8O6Br2 2N HBr/AcOH 82,3 H 6,01 5,96 0,96: 0,99: 1,00 N 15,96 15,77 Br 22,15 22,49 Tabelle 2 Methode Bei- Dipeptid- Ausgangsprodukt (Beispiel) Elementaranalyse spiel Zwischenprodukt (mMol) Ausbeute % gef. % ber. % 11c Cbo-Leu-Arg-pNA.HBr 1b (5 m Mol) (1c) C 50,75 50,16 C26H36N7O6Br Cbo-LeuOpNP 82,4 H 5,95 5,83 (5,5 m Mol) N 16,10 15,75 Br 12,69 12,84 11d 2HBr.H.Leu-Arg-pNA 11c (3 mMol) (1d) C 38,42 37,98 C18H31N7O4Br2 2N HBr/AcOH 90,3 H 5,55 5,49 N 17,84 17,23 Br 27,67 28,07 14c BOC-CHA-Lys (#-Cbo)-pNA 2b (5 m Mol) (2c) C 63,05 62,46 C34H47N5O8 BOC-CHA-OpNP 84,2 H 7,35 7,25 (5,5 m Mol) N 10,98 10,71 14d CF3COOH.H-CHA-Lys (#-Cbo)-pNA 14c (3 m Mol) (2d) C 56,08 55,77 C31H40N5O8F3 6ml CF3COOH 91,6 H 6,15 6,04 N 11,01 10,49 16c Cbo-Phe-Arg-pNA.HBr 1b (5 m Mol) (1c) C 53,45 53,05 C29H34N7O6Br Cbo-Phe-OpNP 84,8 H 5,30 5,22 (5,5 m Mol) N 15,15 14,94 Br 11,95 12,17 16d 2HBr.H-Phe-Arg-pNA 16c (3 m Mol) (1d) C 41,38 41,81 C21H29N7O4Br2 2N HBr/AcOH 93,5 H 4,78 4,85 N 16,50 16,25 Br 26,15 26,49 19e Cbo-Pro-Arg-pNA.HBr 1b (5 m Mol) (1c) C 49,95 49,51 C25H32N7O6Br Cbo-Pro-OpNP 88,1 H 5,40 5,32 (5,5 m Mol) N 16,19 16,17 Br 12,82 13,17 19d 2HBr.H-Pro-Arg-pNA 19c (3 m Mol) (1d) C 37,41 36,91 C17H27N7O4Br2 2N HBr/AcOH 92,0 H 5,03 4,92 N 18,15 17,72 Br 28,50 28,88 21c BOC-Leu-Lys(E-Cbo)-pNA 2b (5 m Mol) (2c) C 61,10 60,67 C31H43N5O8 BOC-Leu-OpNP 87,3 H 7,15 7,06 (5,5 m Mol) N 11,88 11,41 Tabelle 2 (Fortsetzung) 21d CF3COOH.H-Leu-Lys (E-Cbo)-pNA 21c (3 m Mol) (2d) C 53,40 53,58 C28H36N5O8F3 6ml CF3COOH 90,9 H 5,85 5,78 N 11,50 11,16 24c Cbo-CHG-Arg-pNA.HBr 1b (5 m Mol) (1c) C 52,20 51,85 C28H38N7O6Br Cbo-CHG-OpNP 79,6 H 6,09 5,91 (5,5 m Mol) N 15,55 15,12 Br 12,05 12,32 24d 2HBr.H-CHG-Arg-pNA 24c (3 m Mol) (1d) C 40,95 40,35 C20H33N7O4Br2 2N HBr/AcOH 88,4 H 5,53 5,59 N 17,06 16,47 Br 26,58 26,84 25c Cbo-CHT-Arg-pNA.HBr 1b (5 m Mol) (1c) C 52,08 51,33 C29H40N7O7Br Cbo-CHT-OpNP 75,7 H 6,04 5,94 (5,5 m Mol) N 14,90 14,45 Br 11,60 11,76 25d 2HBr.H-CHT-Arg-pNA 25c (2,5 m Mol) (1d) C 40,87 40,33 C21H35N7O5Br2 2N HBr/AcOH 88,9 H 5,56 5,64 N 16,18 15,68 Br 25,22 25,55 28c Cbo-Pip-Arg-pNA.HBr 1b (5 m Mol) (1c) C 50,80 50,33 C26H34N7O6Br Cbo-Pip-OpNP 82,3 H 5,50 5,52 (5,5 m Mol) N 16,19 15,80 Br 12,66 12,88 28d 2HBr.H-Pip-Arg-pNA 28c (2,5 m Mol) (1d) C 38,49 38,11 C18H29N7O4Br2 2N HBr/AcOH 91,0 H 5,14 5,15 N 17,90 17,28 Br 27,86 28,17 29c BOC-Pro-Lys (E-Cbo)-pNA 2b (5 m Mol) (2c) C 59,82 60,29 C30H39N5O8 BOC-Pro-OpNP 88,5 H 6,65 6,58 (5,5 m Mol) N 11,94 11,72 29d CF3COOH.H-Pro-Lys(E-Cbo)-pNA 29c (3 m Mol) (2d) C 52,91 53,03 C27H32N5O8F3 6ml CF3COOH 93,0 H 5,32 5,27 N 11,66 11,45 <RTI ID=66.1> Tabelle 2 (Fortsetzung) 30c BOC-CHG-Lys (E-Cbo)-pNA 2b (5 m Mol) (2c) C 61,50 61,95 C33H45N5O8 BOC-CHG-OpNP 84,6 H 7,08 7,09 (5,5 mMol) N 11,18 10,95 30d CF3COOH.H-CHG-Lys (E-Cbo)-pNA 30c (3 mMol) (2d) C 54,75 55,12 C30H38N5O8F3 6ml CF3COOH 90,5 H 5,93 5,86 N 11,08 10,71 34c BOC-CHT-Lys(E-Cbo)-pNA 2b (5 mMol) (2c) C 60,48 60,97 C34H47N5O9 BOC-CHT-OpNP 84,3 H 7,11 7,07 (5,5 mMol) N 10,76 10,46 34d CF3COOH.H-CHT-Lys (E-Cbo)-pNA 34c (3 mMol) (2d) C 54,08 54,46 C31H40N5O9F3 6ml CF3COOH 90,8 H 6,00 5,90 N 10,18 10,24 42c Cbo-Tyr (OBzl)-Arg-pNA.HBr 1b (5 mMol) (1c) C 56,08 56,69 C36H40N7O7Br Cbo-Tyr(OBzl)-OpNP 77,6 H 5,35 5,29 (5,5 mMol) N 12,95 12,86 Br 10,15 10,48 42d 2HBr.H-Tyr-Arg-pNA 42c (5 mMol) (1d) C 40,63 40,73 C21H29N7O5Br2 2N HBr/AcOH 83,7 H 4,77 4,72 N 16,08 15,83 Br 25,38 25,80 48c Cbo-Ala-Arg-pNA.HBr 1b (5 mMol) (1c) C 47,19 47,59 C23H30N7O6Br Cbo25, Cbo-Ala-OpNP 88,5 H 5,22 5,21 (5,5 mMol) N 17,18 16,89 Br 13,60 13,77 48d 2HBr.H-Ala-Arg-pNA 48c (3 mMol) (1d) C 34,01 34,17 C15H25N7O4Br 2N HBr/AcOH 90,8 H 4,76 4,78 N 18,85 18,60 Br 29,88 30,31 53c Cbo-Ph'Gly-Arg-pNA.HBr 1b (5 mMol) (1c) C 52,00 52,34 C28H32N7O6Br Cbo-Ph'Gly-OpNP 86,7 H 4,99 5,02 (5,5 mMol) N 15,17 15,26 Br 12,23 12,44 Tabelle 2 (Fortsetzung) 53d 2HBr.H-Ph'Gly-Arg-pNA 53c (3 mMol) (1d) C 40,38 40,76 C20H27N7O4Br 2N HBr/AcOH 93,4 H 4,66 4,62 N 16,92 16,64 Br 26,84 27,12 67c Cbo-Nleu-Arg-pNA.HBr 1b (5 mMol) (1c) C 49,82 50,16 C26H36N7O6Br Cbo-Nleu-OpNP 90,0 H 5,88 5,83 (5,5 mMol) N 16,03 15,75 Br 12,62 12,84 67d 2HBr.H-Nleu-Arg-pNA 67c (3mMol) (1d) C 48,52 48,78 C28H31N7O4Br2 2N HBr/AcOH 94,6 H 4,57 4,53 N 14,50 14,22 Br 22,91 23,18 69c Cbo-Nval-Arg-pNA.HBr 1b (5 mMol) (1c) C 49,13 49,35 C25H34N7O6Br Cbo-Nval-OpNP 90,8 H 5,69 5,63 (5,5 mMol) N 16,38 16,11 Br 13,00 13,13 69d 2HBr.H-Nval-Arg-pNA 69c (3 mMol) (1d) C 36,45 36,77 C17H29N7O4Br2 2N HBr/AcOH 96,0 H 5,30 5,26 N 18,01 17,66 Br 28,55 28,78 75c Cbo-But-Arg-pNA.HBr 1b (5 mMol) (1c) C 48,09 48,49 C24H32N7O6Br Cbo-But-OpNP 91,6 H 5,46 5,43 (5,5 m Mol) N 16,83 16,49 Br 13,22 13,44 75d 2HBr.H-But-Arg-pNA 75c (3 m Mol (1d) C 35,50 35,51 C16H27N7O4Br2 2N HBr/AcOH 94,2 H 5,08 5,03 N 18,40 18,12 Br 29,08 29,53 Tabelle 3 Bei- Tripeptid- Ausgangs- Methode Elementaranalyse spiel Zwischenprodukt produkt (Beispiel) (mMol) Ausbeute gef. % ber. % % 11e Cbo-D-CHG-Leu-Arg-pNA.HBr 11d (2 mMol) (1e) C 53,04 53,67 C34H49N8O7Br Cbo-D-CHG-OpNP 78,6 H 6,49 6,48 (2,2 mMol) N 15,15 14,71 Br 10,22 10,49 12e Cbo-D-Val-CHA-Arg-pNA.HBr 1d (2 mMol) (1e) C 52,88 53,61 C34H49N8O7Br Cbo-D-Val-OpNP 82,7 H 6,54 6,48 (2,2 mMol) N 15,03 14,71 Br 10,25 10,49 13e Cbo-D-Ile-CHA-Arg-pNA.HBr 1d (2 mMol) (1e) C 53,80 54,19 C35H51N8O7Br Cbo-D-Ile-OpNP 83,3 H 6,64 6,63 (2,2 mMol) N 14,75 14,45 Br 10,11 10,30 14e Cbo-D-Val-CHA-Lys(#-Cbo)-pNA 14d (2 mMol) (2e) C 63,74 64,10 C42H54N6O9 Cbo-D-Val-OpNP 85,8 H 7,09 6,92 (2,2 mMol) N 10,93 10,68 15e Cbo-D-Ile-CHA-Lys(#-Cbo)-pNA 14d (2 mMol) (2e) C 64,11 64,48 C43H56N6O9 Cbo-D-Ile-OpNP 86,9 H 7,13 7,05 (2,2 mMol) N 10,60 10,49 16e Cbo-D-CHG-Phe-Arg-pNA.HBr 16d (1,5 mMol) (1e) C 55,21 55,85 C37H47N8O7Br Cbo-D-CHG-OpNP 84,1 H 6,01 5,95 (1,65 mMol) N 14,23 14,08 Br 9,85 10,04 17e Cbo-D-CHT-Phe-Arg-pNA.HBr 16d (1,5 mMol) (1e) C 54,96 55,27 C38H49N8O8Br (Cbo-D-CHT-OpNP 81,0 H 5,99 5,98 (1,65 mMol) N 13,75 13,57 Br 9,39 9,68 Tabelle 3 (Fortsetzung) 18e Cbo-D-Ph'Gly-CHA-Arg-pNA.HBr 1d (2 mMol) (1e) C 54,86 55,85 C37H47N8O7Br Cbo-D-Ph'Gly-OpNP 82,7 H 6,04 5,95 (2,2 mMol) N 14,38 14,08 Br 9,81 10,04 19e Cbo-D-CHA-Pro-Arg-pNA.HBr 19d (2 mMol) (1e) C 53,41 53,75 C34H47N8O7Br Cbo-D-CHA-OpNP 80,5 H 6,30 6,24 (2,2 mMol) N 15,08 14,75 Br 10,24 10,52 20e Cbo-D-CHG-CHA-Lys(#-Cbo)-pNA 14d (1,5 mMol) (2e) C 64,84 65,36 C45H58N6O9 Cbo-D-CHG-OpNP 88,2 H 7,11 7,07 (1,65 mMol) N 10,36 10,16 21e Cbo-D-CHG-Leu-Lys(#-Cbo)-pNA 21d (2,5 mMol) (2e) C 63,73 64,10 C42H54N6O9 Cbo-D-CHG-OpNP 90,2 H 7,00 6,92 (2,75 mMol) N 10,85 10,68 22e Cbo-D-Pro-CHA-Arg-pNA.HBr 1d (2 mMol) (1e) C 53,20 53,75 C34H47N8O7Br Cbo-D-Pro-OpNP 85,0 H 6,25 6,24 (2,2 mMol) N 15,09 14,75 Br 10,34 10,52 23e Cbo-D-CHT-Pro-Arg-pNA.HBr 19d (1,5 mMol) (1e) C 51,96 52,64 C34H47N8O8Br Cbo-D-CHT-OpNP 83,3 H 5,13 6,11 (1,65 mMol) N 14,87 14,45 Br 10,09 10,30 24e Cbo-D-Pro-CHG-Arg-pNA.HBr 24d (2 mMol) (1e) C 52,91 53,15 C33H45N8O7Br (Cbo-D-Pro-OpNP 81,4 H 6,11 6,08 (2,2 mMol) N 15,38 15,03 Br 10,40 10,72 25e Cbo-D-Pro-CHT-Arg-pNA.HBr 25d (1,5 mMol) (1e) C 51,75 52,64 C34H47N8O8Br Cbo-D-Pro-OpNP 78,6 H 6,09 6,11 (1,65 mMol) N 14,77 14,45 Br 10,13 10,30 Tabelle 3 (Fortsetzung) 26e Cbo-D-Ph'Gly-Leu-Arg-pNA.HBr 11d (1,5 mMol) (1e) C 53,44 54,04 C34H43N8O7Br Cbo-D-Ph'Gly-OpNP 82,4 H 5,81 5,74 (1,65 mMol) N 15,07 14,83 Br 10,47 10,57 27e Cbo-D-CHG-Pro-Arg-pNA.HBr 19d (2 mMol) (1e) C 53,04 53,15 C33H45N8O7Br Cbo-D-CHG-OpNP 85,5 H 6,17 6,08 (2,2 mMol) N 15,49 15,03 Br 10,45 10,72 28e Cbo-D-CHT-Pip-Arg-pNA.HBr 32d (1,5 mMol) (1e) C 52,54 53,23 C35H49N8O8Br Cbo-D-CHT-OpNP 78,1 H 6,27 6,25 (1,65 mMol) N 14,38 14,19 Br 9,85 10,12 29e Cbo-D-CHA-Pro-Lys(#-Cbo)-pNA 29d (2 mMol) (2e) C 64,54 64,27 C42H52N6O9 Cbo-D-CHA-OpNP 82,5 H 6,75 6,68 (2,2 mMol) N 10,92 10,71 30e Cbo-D-Val-CHG-Lys(#-Cbo)-pNA 30d (1,5 mMol) (2e) C 63,88 63,71 C41H52N6O9 Cbo-D-Val-OpNP 86,0 H 6,79 6,78 (1,65 mMol) N 11,18 10,87 31e Cbo-D-CHG-Pro-Lys (#-Cbo)-pNA 29d (2 mMol) (2e) C 63,73 63,88 C41H50N6O9 Cbo-D-CHG-OpNP 88,4 H 6,61 6,54 (2,2 mMol) N 11,18 10,90 32e Cbo-D-CHT-Pro-Lys (#-Cbo)-pNA 29d (2 mMol) (2e) C 62,61 62,98 C42H52N6O10 Cbo-D-CHT-OpNP 80,8 H 6,58 6,54 (2,2 mMol) N 10,70 10,49 33e Cbo-D-Ph'Gly-CHA-Lys (#-Cbo)-pNA 14d (2 mMol) (2e) C 65,59 65,84 C45H52N6O9 Cbo-D-Ph'Gly-OpNP 76,7 H 6,41 6,38 (2,2 mMol) N 10,33 10,24 34e Cbo-D-Val-CHT-Lys (#-Cbo)-pNA 34d (1,5 mMol) (2e) C 62,80 62,83 C42H54N6O10 Cbo-D-Val-OpNP 77,9 H 6,87 6,78 (1,65 mMol) N 10,61 10,47 35e Cbo-D-Ph'Gly-CHT-Lys(#-Cbo)-pNA 34d (1,5 mMol) (2e) C 64,40 64,58 C45H52N6O10 Cbo-D-Ph'Gly-OpNP 75,4 H 6,27 6,26 (1,65 mMol) N 10,28 10,04 Tabelle 3 (Fortsetzung) 36e Cbo-D-Leu-CHA-Arg-pNA.HBr 1d (2 mMol) (1e) C 53,95 54,19 C35H51N8O7Br Cbo-D-Leu-OpNP 79,8 H 6,70 6,63 (2,2 mMol) N 14,66 14,45 Br 10,14 10,30 37e Cbo-D-Nleu-CHA-Arg-pNA.HBr 1d (2 mMol) (1e) C 54,08 54,19 C35H51N8O7Br Cbo-D-Nleu-OpNP 80,4 H 6,73 6,63 (2,2 mMol) N 14,58 14,45 Br 10,08 10,30 38e Cbo-D-Nval-CHA-Arg-pNA.HBr 1d (2 mMol) (1e) C 53,28 53,61 C34H49N8O7Br Cbo-D-Nval-OpNP 82,6 H 6,55 6,48 (2,2 mMol) N 14,93 14,71 Br 10,25 10,49 39e Cbo-D-Phe-CHA-Arg-pNA.HBr 1d (2 mMol) (1e) C 56,23 56,36 C38H49N8O7Br Cbo-D-Ala-OpNP 84,5 H 6,18 6,10 (2,2 mMol) N 14,10 13,84 Br 9,75 9,87 40e Cbo-D-Ala-CHA-Arg-pNA.HBr 1d (2 mMol) (1e) C 52,01 52,39 C32H45N8O7Br Cbo-D-But-OpNP 88,2 H 6,19 6,18 (2,2 mMol) N 15,44 15,27 Br 10,62 10,89 41e Cbo-D-But-CHA-Arg-pNA.HBr 1d (2 mMol) (1e) C 52,88 53,01 C33H47N8O7Br Cbo-D-But-OpNP 87,6 H 6,40 6,34 (2,2 mMol) N 15,28 14,99 Br 10,53 10,69 42e Cbo-D-CHG-Tyr-Arg-pNA.HBr 42d (1 mMol) (1e) C 54,59 54,75 C37H47N8O8Br Cbo-D-CHG-OpNP 74,1 H 5,88 5,84 (1,1 mMol) N 14,05 13,81 Br 9,57 9,84 43e Cbo-D-CHA-Tyr-Arg-pNA.HBr 42d (1 mMol) (1e) C 54,96 55,27 C38H49N8O8Br Cbo-D-CHA-OpNP 70,6 H 6,04 5,98 (1,1 mMol) N 13,77 13,57 Br 9,51 9,68 Tabelle 3 (Fortsetzung) 44e Cbo-D-Nval-Tyr-Arg-pNA.HBr 42d (1 mMol) (1e) C 52,70 52,92 C34H43N8O8Br Cbo-D-Nval-OpNP 69,8 H 5,64 5,62 (1,1 mMol) N 14,82 14,52 Br 10,12 10,35 45e Cbo-D-CHT-Tyr-Arg-pNA.HBr 42d (1 mMol) (1e) C 54,18 54,22 C38H49N8O9Br Cbo-D-CHT-OpNP 67,8 H 5,93 5,87 (1,1 mMol) N 13,29 13,31 Br 9,35 9,49 46e Cbo-D-Phe-Tyr-Arg-pNA.HBr 42d (1 mMol) (1e) C 55,38 55,68 C38H43N8O8Br Cbo-D-Phe-OpNP 70,5 H 5,34 5,29 (1,1 mMol) N 13,88 13,67 Br 9,60 9,75 47e Cbo-D-Ph'Gly-Tyr-Arg-pNA.HBr 42d (1 mMol) (1e) C 54,96 55,16 C37H41N8O8Br Cbo-D-Ph'Gly-OpNP 74,0 H 5,19 5,13 (1,1 mMol) N 14,11 13,91 Br 9,84 9,92 48e Cbo-D-CHG-Alg-pNA.HBr 48d (1,5 mMol) (1e) C 51,66 51,74 C31H43N8O7Br Cbo-D-CHG-OpNP 86,7 H 6,06 6,02 (1,65 mMol) N 15,80 15,57 Br 10,96 11,10 49e Cbo-D-CHA-Arg-pNA.HBr 48d (1,5 mMol) (1e) C 52,09 52,39 C32H45N8O7Br Cbo-D-CHA-OpNP 88,4 H 6,22 6,18 (1,65 mMol) N 15,55 15,27 Br 10,70 10,89 50e Cbo-D-Phe-Leu-Arg-pNA.HBr 11d (2 mMol) (1e) C 54,48 54,62 C35H45N8O7Br Cbo-D-Phe-OpNP 86,2 H 5,91 5,89 (2,2 mMol) N 14,65 14,56 Br 10,22 10,38 51e Cbo-D-CHT-Leu-Arg-pNA.HBr 11d (2 mMol) (1e) C 52,78 53,09 C35H51N8O8Br Cbo-D-CHT-OpNP 79,4 H 6,51 6,49 (2,2 mMol) N 14,30 14,15 Br 9.92 10.09 Tabelle 3 (Fortsetzung) 52e Cbo-D-CHA-Leu-Arg-pNA.HBr 11d (2 mMol) (1e) C 53,88 54,19 C35H51N8O7Br Cbo-D-CHA-OpNP 86,0 H 6,65 6,63 (2,2 mMol) N 14,75 14,45 Br 10,18 10,30 53e Cbo-D-Leu-Ph'Gly-Arg-pNA.HBr 53d (1 mMol) (1e) C 53,80 54,04 C34H43N8O7Br Cbo-D-Leu-OpNP 79,5 H 5,76 5,74 (1,1 mMol) N 15,08 14,83 Br 10,41 10,57 54e Cbo-D-Nval-Ph'Gly-Arg-pNA.HBr 53d (1 mMol) (1e) C 53,19 53,44 C33H41N8O7Br Cbo-D-Nval-OpNP 80,4 H 5,62 5,57 (1,1 mMol) N 15,24 15,11 Br 10,65 10,77 55e Cbo-D-Ala-Ph'Gly-Arg-pNA.HBr 53d (1 mMol) (1e) C 52,00 52,18 C31H37N8O7Br Cbo-D-Ala-OpNP 81,6 H 5,29 5,23 (1,1 mMol) N 15,95 15,70 Br 11,03 11,20 56e Cbo-D-CHA-Ph'Gly-Arg-pNA.HBr 53d (1 mMol) (1e) C 55,80 55,85 C37H47N8O7Br Cbo-D-CHA-OpNP 78,5 H 6,01 5,95 (1,1 mMol) N 14,33 14,08 Br 9,88 10,04 57e Cbo-D-CHT-Ph'Gly-Arg-pNA.HBr 53d (1 mMol) (1e) C 54,85 54,75 C37H47N8O8Br Cbo-D-CHT-OpNP 74,6 H 5,90 5,84 (1,1 mMol) N 14,08 13,81 Br 9,70 9,84 58e Cbo-D-CHG-Ph'Gly-Arg-pNA.HBr 53d (1 mMol) (1e) C 55,39 55,31 C36H45N8O7Br Cbo-D-CHG-OpNP 77,0 H 5,86 5,80 (1,1 mMol) N 14,53 14,34 Br 10,08 10,22 59e Cbo-D-CHG-CHG-Arg-pNA.HBr 24d (1,5 mMol) (1e) C 54,99 54,89 C36H51N8O7Br Cbo-D-CHG-OpNp 82,6 H 6,60 6,53 (1,65 mMol) N 14,41 14,23 Br 9,89 10,14 Tabelle 3 (Fortsetzung) 60e Cbo-D-Pip-CHG-Arg-pNA.HBr 24d (1,5 mMol) (1e) C 53,66 53,75 C34H47N8O7Br Cbo-D-Pip-OpNP 80,1 H 6,31 6,24 (1,65 mMol) N 14,93 14,75 Br 10,42 10,52 61e Cbo-D-Phe-CHG-Arg-pNA.HBr 24d (1,5 mMol) (1e) C 55,78 55,85 C37H47N8O7Br Cbo-D-Phe-OpNP 88,7 H 6,01 5,95 (1,65 mMol) N 14,22 14,08 Br 9,88 10,04 62e Cbo-D-Ph'Gly-CHG-Arg-pNA.HBr 24d (1,5 mMol) (1e) C 55,45 55,31 C36H45N8O7Br Cbo-D-Ph'Gly-OpNP 83,5 H 5,86 5,80 (1,65 mMol) N 14,55 14,34 Br 10,09 10,22 63e Cbo-D-Ph'Gly-Phe-Arg-pNA.HBr 16d (1 mMol) (1e) C 56,18 56,27 C37H41N8O7Br Cbo-D-Ph'Gly-OpNP 86,0 H 5,24 5,23 (1,1 mMol) N 14,33 14,19 Br 9,95 10,12 64e Cbo-D-CHA-Phe-Arg-pNA.HBr 16d (1 mMol) (1e) C 56,18 56,36 C38H49N8O7Br Cbo-D-Ph'Gly-OpNP 85,6 H 6,12 6,10 (1,1 mMol) N 14,01 13,84 Br 9,81 9,87 65e Cbo-D-CHG-Pip-Arg-pNA.HBr 28d (1 mMol) (1e) C 53,53 53,75 C34H47N8O7Br Cbo-D-CHG-OpNP 42,1 H 6,27 6,24 (1,1 mMol) N 14,95 14,75 Br 10,39 10,52 66e Cbo-D-CHA-Pip-Arg-pNA.HBr 28d (1 mMol) (1e) C 54,17 54,33 C35H49N8O7Br Cbo-D-CHA-OpNP 44,8 H 6,41 6,38 (1,1 mMol) N 14,62 14,48 Br 10,13 10,33 67e Cbo-D-CHG-Nleu-Arg-pNA.HBr 67d (2 mMol) (1e) C 53,43 53,61 C34H49N8O7Br Cbo-D-CHG-OpNP 86,7 H 6,53 6,48 (2,2 mMol) N 14,95 14,71 Br 10,28 10,49 Tabelle 3 (Fortsetzung) 68e Cbo-D-CHA-Nleu-Arg-pNA.HBr 67d (2mMol) (1e) C 53,88 54,19 C35H51N8O7Br Cbo-D-CHA-OpNP 83,5 H 6,71 6,63 (2,2 mMol) N 14,59 14,45 Br 10,21 10,30 69e Cbo-D-CHA-Nval-Arg-pNA.HBr 69d (1 mMol) (1e) C 53,48 53,61 C34H49N8O7Br Cbo-D-CHA-OpNP 86,0 H 6,46 6,48 (1,1 mMol) N 14,80 14,71 Br 10,31 10,49 70e Cbo-D-CHG-Nval-Arg-pNA.HBr 69d (1 mMol) (1e) C 52,88 53,01 C33H47N8O7Br Cbo-D-CHG-OpNP 88,8 H 6,35 6,34 (1,1 mMol) N 15,18 14,99 Br 10,49 10,69 71e Cbo-D-Nval-CHA-Lys(#-Cbo)-pNA 14d (1,5 mMol) (2e) C 63,90 64,10 C42H54N6O9 Cbo-D-Nval-OpNP 90,6 H 6,98 6,92 (1,65 mMol) N 10,82 10,68 72e Cbo-D-But-CHA-Lys (E-Cbo)-pNA 14d (1,5 mMol) (2e) C 63,48 63,71 C41H52N6O9 Cbo-D-But-OpNP 91,4 H 6,82 6,78 (1,65 mMol) N 10,99 10,87 73e Cbo-D-Leu-CHA-Lys(E-Cbo)-pNA 14d (1,5 mMol) (2e) C 64,28 64,48 C43H56N6O9 Cbo-D-Leu-OpNP 88,5 H 7,11 7,05 (1,65 mMol) N 10,75 10,49 74e Cbo-D-Nleu-CHA-Lys(E-Cbo)-pNA 14d (1,65 mMol) (2e) C 64,18 64,48 C43H56N6O9 Cbo-D-Nleu-OpNP 88,9 H 7,08 7,05 (1,65 mMol) N 10,60 10,49 75e Cbo-D-CHG-But-Arg-pNA.HBr 75d (2 mMol) (1e) C 52,19 52,39 C32H45N8O7Br Cbo-D-CHG-OpNP 84,7 H 6,17 6,18 (2,2 mMol) N 15,35 15,27 Br 10,70 10,89 76e Cbo-D-CHA-But-Arg-pNA.HBr 75d (2 mMol) (1e) C 52,87 53,01 C33H47N8O7Br Cbo-D-CHA-OpNP 80,6 H 6,41 6,34 (2,2 mMol) N 15,17 14,99 Br 10,55 10,69 Tabelle 3 (Fortsetzung) 77e Cbo-D-CHT-But-Arg-pNA.HBr 75d (2 mMol) (1e) C 51,72 51,90 C33H47N8O8Br Cbo-D-CHT-OpNP 83,3 H 6,25 6,20 (2,2 mMol) N 14,88 14,67 Br 10,37 10,46 Example 78 2AcOH.H-D-Nval-CHA-Arg-pNA 7, 09 g (10 mMol) 2HBr.H-D-Nval-CHA-Arg-pNA (hergestellt gemäss Beispiel 38) wurden in 75 ml 60Xigem wässrigem MeOH gelöst. Die Lösung wurde auf eine Säule von "Amberlite" JRA-401 in der Acetatform gegeben. Die Säule wurde mittels 60%igem wässrigem MeOH eluiert, wobei durch Ionenaustausch HBr durch AcOH ersetzt wurde. Das Eluat wurde im Vakuum bei 400C zur Trockne eingeengt. Nach dem Trocknen im Vakuumtrokkenschrank bei 400C über P205 erhielt man 6,33 g bromidfreies 2AcOH.H-D-Nval-CHA-Arg-pNA (98,5 % der Theorie). Nach dieser Methode kann man aus dem oben genannten Tripeptidderivat entsprechend andere Salze mit organischen Säuren, z.B. Ameisen-, Propion-, Oxal-, Wein-, Zitronen-, Milch-, Benzoe-, Chlorbenzoe-, Salicyl- oder Phthalsäure, herstellen. Man kann als Ionenaustauscher z.B. "Amberlite" JRA-401 in der Hydrochloridform verwenden und in die gewUnsch- te Säuresalzform überführen, indem man den genannten Ionenaustauscher durch Behandlung mit Natronlauge in die basische OH-Form überführt und dann mit einer Lösung eines 1:1-Ge- misches der gewünschten organischen Säure und deren Natriumsalz in 60%igem wässrigem MeOH behandelt. Die quantitativen Enzymbestimmungen mittels der er findungsgemässen Tripeptidsubstrate können folgendermassen durchgeführt werden: 1. Bestimmung von Urinkallikrein. 1 ml Urin und 1 ml TRIS-Imidazol-Puffer mit pH 7,9 und Ionenstärke 1,0 werden 5 Min. bei 37 0C inkubiert und wann zentrifugiert, um Sedimente zu entfernen. In einer'Plastikküvette werden 1,4 ml dest. H20 von 37 0C und 0,4 ml des Zentrifugats gut gemischt. Zu dieser Mischung gibt man 0,2 ml einer 2 x 10- 3 molaren wässrigen Substratlösung und durchmischt-die Komponenten schnell. Dieses Gemisch wird genau 15 Min. bei 370C inkubiert. Dann wird dem Reaktionsgemisch 0,2 ml Eisessig zugemischt, um die Enzymreaktion zu unterbrechen. Zur Farbmessung verwendet man eine Vergleichsprobe (Blindprobe), die aus den gleichen Komponenten zusammengesetzt ist, wobei jedoch der Eisessig vor Zugabe des Substrates zugesetzt wird, um die Enzymreaktion zu verhindern. Dann wird bei 405 nm photometrisch oder spektrophotometrisch die Menge der gebildeten farbigen Verbindung RNH2 aus der Differenz zwischen der Blindprobe und der zu bestimmenden Probe ermittelt. Aus dem ermittelten Wert wird die Uriokallikreinaktivität im Urin nach der folgenden Formel berechnet: EMI78.1 OD = Zunahme der optischen Dichte bei 405 nm während 15 Min. V = Totalvolumen des Bestimmungsansatzes = 2,2 ml 1000 = Umrechnungsfaktor zur Umwandlung von U in mU F = VerdUnnungsfaktor des Urins (2) v = Volumen der Probe = 0,4 ml 45 = Extinktionskoeffizient dividiert durch 1000 = 10,4 Die Berechnung des Urinkallikreins im Urin kann auch durch eine kontinuierliche Messung des entstehenden Produktes R-NH2 (z.B. des p-Nitroanilins) durchgeführt werden. Diese Methode ist nachstehend für die Bestimmung von Glandulärkallikrein im Sputum beschrieben. Im Urin ist neben dem Urinkallikrein auch Urokinase als proteolytisches Enzym vorhanden, welches gegebenenfalls die erfindungsgemässen Substrate ebenfalls, wenn auch nur ge ringfügig spalten kann. Bei der oben beschriebenen Bestimmungsmethode misst man somit die Summe der Aktivitäten von Urinkallikrein und Urokinase. Um die genaue Urinkallikrein aktivität zu verhalten, muss man die Urokinaseaktivität abziehen, welche dadurch bestimmt werden kann, dass man in einem Vergleichsversuch durch Zugabe von 0,075 Einheiten Trypsininhibitor (Trypsininhibitor aus Rinderlunge) pro ml Puffer die Urinkallikreinaktivität vollständig hemmt und nur die Urokinaseaktivität misst. 2. Bestimmung des Glandulärkallikreins im Sputurn: Man mischt 0,5 ml Sputum mit 2 ml TRIS-Imidazol-Puf- fer (Ionenstärke 1,0) und präinkubiert die Mischung 5 Min. bei 370C. Das Inkubat wird zentrifugiert. In eine Testküvette wird 1,5 ml dest. H20 von 370C vorgelegt und mit 0,25 ml des Zentrifugats versetzt. Die Komponenten werden gut gemischt. Dann wird 0,2 ml 2 x 10 3 molare wässrige Substratlösung zugesetzt und gemischt. Dann wird bei 405 nm die Extinktions änderung kontinuierlich mittels eines Schreibers während 5-10 Min. verfolgt. Aus dem ermittelten L OD pro Min. wird mittels der nachstehenden Formel die Kallikreinaktivität pro ml Sputum in mU errechnet: : EMI80.1 F=5 V = 1,95 v - 0,25 1 U (Einheit) = Enzymmenge, die während 1 Min. 1 > lMol Substrat unter optimalen oder sonst festgelegten Be dingungen in Bezug auf pH, Ionenstärke, Tem peratur und Substratkonzentration zu spalten vermag In Pankreassaft liegt das Pankreaskallikrein hauptsächlich in Form von Prnkallikrein vor und kann erst nach Aktivierung, z.B. mittels Trypsin, bestimmt werden. Das Trypsin wird dabei nach der Aktivierung des Präkallikreins mittels Soyabohnentrypsininhibitor (SBT1:) gehemmt. In diesem Aktivierungsgemisch lässt sich der Kallikreingehalt nach einer der oben beschriebenen Methoden bestimmen. 3. Bestimmung von Plasmin: Man mischt 1,7 ml TRIS-Imidazol-Puffer (pH 7,5, Ionenstarke 0,2) bei 370C mit 0,1 ml einer Lösung von Plasmin in 25%igem Glycerin und inkubiert die Mischung während 1 Min. bei 37 0C. Dann gibt man der Mischung 0,2 ml einer wässrigen 2 x 10 molaren SubstratlBsung von 370C zu und durchmischt das Ganze schnell. Man ermittelt dann kontinuierlich die pro Zeiteinheit aus dem Substrat freigesetzte Menge des Spaltproduktes R-NH2. Aus dem pro Min. ermittelten Wert berechnet man dann die Plasminaktivität pro ml Probe in mU nach der folgenden Formel: EMI81.1 AE = pro Min. freigesetzte Menge des Spaltproduktes V = Totalvolumen des Testansatzes v = Volumen der Probe ± = Extinktionskoeffizient dividiert durch 1000 4. Bestimmung von Antiplasmin in Humanplasma: 0,1 ml von mit TRIS-Imidazol-Puffer im Verhältnis 1:20 verdünntem Plasma wird mit 0 > 02 ml einer Lösung von 1,25 CU Humanplasmin (Präparat der Firma AB Kabi, Stockholm, Schweden) und 50 ATU Hirudin (Präparat der Firma Pentapharm AG, Basel, Schweiz) pro ml in 25% igem Glycerin gemischt. Die Mischung wird während 90 Sek. bei 370C inkubiert. Man mischt das Inkubat mit 1,7 ml TRIS-Imidazol-Puffer von 3700 (pH 7 > 5, Ionen stärke 0,2) und dann mit 0,2 ml 2 x 10 3 molarer wässriger Substratlösung. Dann misst man kontinuierlich die pro Zeiteinheit aus dem Substrat freigesetzte Menge des Spaltproduktes R-NH2. Aus dem ermittelten Wert berechnet man in der oben angegebenen Weise die restliche Plasminaktivität. In einem Blindversuch wird das Plasma durch die entsprechende Menge Puffer ersetzt, sonst aber in der oben be schriebenen Weise gearbeitet. Die ermittelte Plasminaktivität entspricht der eingesetzten Menge Plasmin. Man ermittelt die Antiplasminaktivität aus der Differenz zwischen der im Blindversuch bestimmten Plasminaktivität und der im Test mit Plasma bestimmten restlichen Plasminaktivität nach folgender Formel: EMI82.1 F = Verdünnungsfaktor des Plasmas (20) Mit den erfindungsgemässen Substraten kann man ferner Plasminogen in Humanplasma bestimmen, indem man in einem Puffersystem das im Plasma vorhandene Plasminogen mittels Urokinase oder Streptokinase in Plasmin überführt und die Menge des entstandenen Plasmins mittels eines erfindungsgemässen Substrat es nach der oben beschriebenen Plasminbestimmungsmethode bestimmt. Aus dem für Plasmin ermittelten Wert ergibt sich die im Plasma ursprünglich vorhandene Menge Plasminogen, da bei der Aktivierung aus 1 Molekül Plasminogen 1 Molekül Plasmin entsteht. In der nachfolgenden Tabelle 4 ist die Suszeptibilität einiger der erfindungsgemässen Substrate gegenüber Organ- oder Glandulärkallikreiilen , Plasmin und Thrombin angegeben. Tabelle 4 Aktivität von Urinkallikrein in 1 ml menschlichem Urin*, Submandibularis-Kallikrein in 1 ml Sputum, Humanplasmin und humanem NIH-Thrombin, gemessen mittels der erfindungsgemässen Substrate bei konstanter Substrat- und Enzymkonzentration. Zum Vergleich (ausgenommen Thrombin) sind die entsprechenden Werte für die vorbekannten, im Handel erhältlichen Substrate 2HCl.H-D-Val-Leu-Arg-pNA (A) und 2HCl.H-D-Val-Lys-pNA (B) (s. DOS 26 29 067) angeführt. Substratkonzentration 2 x 10 molar. EMI83.1 <SEP> Menge <SEP> des <SEP> durch <SEP> 1 <SEP> ml <SEP> Humanurin, <SEP> 1 <SEP> ml-Humansputum, <SEP> <tb> <SEP> 1 <SEP> CU-Einheit <SEP> Humanplasmin <SEP> und <SEP> 1 <SEP> NIH-Einheit <SEP> Thrombin <tb> <SEP> pro <SEP> Min. <SEP> freigesetzten <SEP> Spaltproduktes <SEP> R-NH2 <SEP> in <tb> <SEP> Nanomo <SEP> 1 <SEP> <tb> <SEP> Urinkallikrein <SEP> Submandibu- <SEP> Humanplasmin <SEP> Human <SEP> laris- <SEP> thrombin <tb> <SEP> Kallikrein <tb> A <SEP> 0,90 <SEP> 12,2 <SEP> 83 <tb> B <SEP> 0,30 <SEP> 5,7 <SEP> 347 <tb> Substra <tb> <SEP> te <SEP> gem. <tb> <SEP> Beispiel <tb> <SEP> 1 <SEP> 0,84 <SEP> 12,9 <SEP> 699 <SEP> 8,27 <tb> <SEP> 2 <SEP> 0,80 <SEP> 25,6 <SEP> 1150 <tb> <SEP> 3 <SEP> 2,55 <SEP> 31,2 <SEP> 430 <tb> <SEP> 4 <SEP> O, <SEP> <SEP> 60 <SEP> 15,7 <SEP> 1120 <tb> <SEP> 5 <SEP> 2,42 <SEP> 28,5 <SEP> 408 <tb> <SEP> -6 <SEP> 0,72 <SEP> 24,8 <SEP> 1215 <tb> <SEP> 7 <SEP> 2,55 <SEP> 31,1 <SEP> 428 <tb> <SEP> 8 <SEP> 0,58 <SEP> 17,6 <SEP> 1180 <tb> <SEP> 9 <SEP> 2,38 <SEP> 25,4 <SEP> 388 <tb> <SEP> 10 <SEP> 9,61 <SEP> 14,9 <SEP> 1165 <tb> <SEP> 11 <SEP> 0,60 <SEP> 11,6 <SEP> 381 <SEP> 33,9 <tb> <SEP> 12 <SEP> 2,75 <SEP> 30,5 <SEP> 421 <tb> <SEP> 13 <SEP> 2,67 <SEP> 36,6 <SEP> 446 <SEP> 7,44 <tb> <SEP> 14 <SEP> 1,02 <SEP> 6,7 <SEP> 505 <SEP> 0,35 <tb> <SEP> 15 <SEP> 2,50 <SEP> 23,1 <SEP> 440 <SEP> 0,39 <SEP> <tb> <SEP> 16 <SEP> 3,31 <SEP> 32,2 <SEP> 1200 <SEP> 17,1 <tb> <SEP> 17 <SEP> 0,77 <SEP> 7,4 <SEP> 860 <SEP> 18,7 <tb> Tabelle 4 (Fortsetzung) EMI84.1 <tb> <SEP> 18 <SEP> 0,67 <SEP> 8,5 <SEP> 1200 <SEP> 4,53 <tb> <SEP> 19 <SEP> 1,40 <SEP> 8,1 <SEP> 1200 <SEP> 54,4 <SEP> <tb> <SEP> 20 <SEP> 0,28 <SEP> 4,4 <SEP> 500 <SEP> 0,99 <tb> <SEP> 21 <SEP> 0,40 <SEP> 2,2 <SEP> 460 <SEP> 1,20 <tb> <SEP> 22 <SEP> 0,63 <SEP> 11,7 <SEP> 250 <SEP> 0,75 <SEP> <tb> <SEP> 23 <SEP> 1,20 <SEP> 21,4 <SEP> 690 <SEP> 45,8 <SEP> <tb> <SEP> 24 <SEP> 1,87 <SEP> 5,7 <SEP> 10 <SEP> 0,29 <tb> <SEP> 25 <SEP> 0,52 <SEP> 10,7 <SEP> 390 <SEP> 1,52 <tb> <SEP> 26 <SEP> 0,19 <SEP> 8,3 <SEP> 194 <SEP> 0,8 <tb> <SEP> 27 <SEP> 0,33 <SEP> 12,9 <SEP> 511 <SEP> 96,3 <tb> <SEP> 28 <SEP> o <SEP> 9,9 <SEP> 122 <SEP> 80, <SEP> 4 <tb> <SEP> 29 <SEP> 0,71 <SEP> 4,4 <SEP> 639 <SEP> 4,54 <tb> <SEP> 30 <SEP> O <SEP> 1,3 <SEP> 61 <SEP> 0,27 <tb> <SEP> 31 <SEP> 0 <SEP> 1,9 <SEP> 231 <SEP> 3,78 <tb> <SEP> 32 <SEP> 0,20 <SEP> 3,8 <SEP> @ <SEP> 613 <SEP> o,8 <tb> <SEP> 33 <SEP> 0,10 <SEP> 0,9 <SEP> 837 <SEP> 0,4 <tb> <SEP> 34 <SEP> 1,40 <SEP> 16,5 <SEP> 532 <SEP> 0,4 <tb> <SEP> 35 <SEP> 0,10 <SEP> 0,9 <SEP> 894 <SEP> 0,5 <tb> <SEP> 36 <SEP> 3, <SEP> 11 <SEP> 35,9 <SEP> 1069 <SEP> 6,8 <SEP> <tb> <SEP> 37 <SEP> 2,08 <SEP> 28,1 <SEP> 1179 <SEP> 7,3 <SEP> <tb> <SEP> 38 <SEP> 3,12 <SEP> 41,3 <SEP> 969 <SEP> 5,1 <tb> <SEP> 39 <SEP> 2,14 <SEP> 28,5 <SEP> 814 <SEP> 3,9 <tb> <SEP> 40 <SEP> 1,73 <SEP> 22,4 <SEP> 433 <SEP> 1,5 <tb> <SEP> 41 <SEP> 2,99 <SEP> 31,2 <SEP> 623 <SEP> 2,8 <tb> <SEP> 42 <SEP> 0,49 <SEP> 3,9 <SEP> 969 <SEP> 2,0 <tb> <SEP> 43 <SEP> 0,49 <SEP> - <SEP> 5,2 <SEP> 1407 <SEP> 8,3 <SEP> <tb> <SEP> 44 <SEP> 0,42 <SEP> 4,9 <SEP> 1219 <SEP> 1,8 <tb> <SEP> 45 <SEP> 0,59 <SEP> 10,9 <SEP> 1252 <SEP> 9,5 <tb> <SEP> 46 <SEP> | <SEP> 0,26 <SEP> 6,1 <SEP> 843 <SEP> 2,6 <SEP> <tb> <SEP> 47 <SEP> 0,19 <SEP> 7,0 <SEP> 818 <SEP> 1,0 <tb> 48 <SEP> 0,72 <SEP> 9,5 <SEP> 239 <SEP> 158 <tb> <SEP> 49 <SEP> 0,66 <SEP> 10,6 <SEP> 389 <SEP> 163,5 <tb> <SEP> 50 <SEP> 0,61 <SEP> 6,8 <SEP> 313 <SEP> 14,4 <tb> <SEP> 51 <SEP> 0,33 <SEP> 11,7 <SEP> 596 <SEP> 58,1 <tb> Tabelle 4 (Fortsetzung) EMI85.1 <tb> <SEP> 52 <SEP> 0,64 <SEP> 8,8 <SEP> 555 <SEP> 57,6 <tb> <SEP> 53 <SEP> 0,67 <SEP> 25,8 <SEP> 422 <SEP> 27,4 <tb> <SEP> 54 <SEP> 0,58 <SEP> 22,9 <SEP> 382 <SEP> 19,2 <tb> <SEP> 55 <SEP> 0,42 <SEP> 23,5 <SEP> 141 <SEP> 4,2 <tb> 56 <SEP> 0,64 <SEP> 29,4 <SEP> 559 <SEP> 120,2 <tb> <SEP> 57 <SEP> 0,45 <SEP> 31,1 <SEP> 591 <SEP> 112,1 <tb> <SEP> 58 <SEP> 0,38 <SEP> 22,1 <SEP> 446 <SEP> 63,7 <tb> <SEP> 59 <SEP> 0,33 <SEP> 5,9 <SEP> 101 <tb> <SEP> 60 <SEP> 0 <SEP> 1,4 <SEP> 10 <SEP> 1,3 <tb> <SEP> 61 <SEP> 0,33 <SEP> 4,9 <SEP> 60 <SEP> 3,7 <tb> <SEP> 62 <SEP> 0,25 <SEP> 7,2 <SEP> 26 <SEP> 2,4 <tb> <SEP> 63 <SEP> 0,42 <SEP> 7,0 <SEP> 841 <SEP> 2,4 <tb> <SEP> 64 <SEP> i <SEP> 0, <SEP> 5 <SEP> 9,7 <SEP> 1261. <SEP> 25,8 <tb> 65 <SEP> 1,92 <SEP> 14,2 <SEP> 259 <SEP> 142,5 <tb> 66 <SEP> 0,53 <SEP> 9,8 <SEP> 228 <SEP> 114,2 <tb> <SEP> 67 <SEP> 0,53 <SEP> 13,5 <SEP> 739 <SEP> 41,0 <tb> <SEP> 68 <SEP> 0,45 <SEP> 15,0 <SEP> 899 <SEP> 77,6 <tb> <SEP> 69 <SEP> 0,35 <SEP> 14,2 <SEP> 574 <SEP> 97,1 <tb> 70 <SEP> 0,38 <SEP> 24,2 <SEP> 488 <SEP> 67,4 <tb> 71 <SEP> 1,87 <SEP> 18,04 <SEP> 655 <SEP> 6,9 <tb> <SEP> 72 <SEP> 2,22 <SEP> 21,0 <SEP> 532 <SEP> 3,6 <tb> <SEP> 73 <SEP> 1,73 <SEP> 19,3 <SEP> 778 <SEP> 3,4 <tb> <SEP> 74 <SEP> 0,77 <SEP> 8,4 <SEP> 695 <SEP> 3,9 <SEP> <tb> <SEP> 75 <SEP> 0,51 <SEP> 14,5 <SEP> 439 <SEP> 102,9 <tb> <SEP> 76 <SEP> 0,51 <SEP> 18,1 <SEP> 478 <SEP> 108,9 <tb> <SEP> 77 <SEP> 0,64 <SEP> 18,2 <SEP> 463 <SEP> 114,2 <SEP> * Urinprobe erhalten durch Mischen von je 100 ml Morgenurin gesunder Personen Bei der Messung des durch die enzymatische Hydrolyse des Substrates gebildeten Spaltproduktes R-MI2 geht man von der Voraussetzung aus, dass das Spaltprodukt ein UV-Spektrum besitzt, das von demjenigen des Substrates verschieden und in Richtung höherer Wellenlängen verschoben ist. Die Absorption des Substrates bei 405 nm ist praktisch Null. p-Nitroanilin als Spaltprodukt weist ein Absorptionsmaximum bei 380 nm und einen molaren Estinktionskoeffizienten von 13,200 auf. Bei 405 nm ist der Extinktionskoeffizient nur wenig niedriger, d.h. 9650. Der Grad der enzymatischen Hydrolyse des Substrates, welcher der Menge des abgespaltenen p-Nitroanilins proportional ist, lässt sich durch spektrophotometrische Messung bei 405 nm bestimmen. Auch bei Anwesenheit eines Ueberschusses an Substrat wird die Messung bei 405 nm nicht gestört. Bei den Substraten, die als chromogene Gruppe eine 2-Naphthylamino-, 4-Methoxy-2-naphthylamino-, 4-Methyl-cumaryl (7) -amino- oder l,3-!(methoxycarbonyl) -phenyl- (5) -amino-Gruppe enthalten, wird die Menge des Spaltproduktes R-NH2 durch Fluoreszenzspektrophotometrie gemessen. In einem aus Enzym, Puffer und Substrat bestehenden Testsystem misst man kontinuierlich das energieärmere emittierte Licht bei 400-470 nm, nachdem man das gebildete fluoreszierende Spaltprodukt mit energiereicherem Licht erregt hat. Die pro Zeiteinheit gebildete Menge Spaltprodukt ist ein Mass für die vorhandene Enzymaktivität. 1 Mol Spaltprodukt pro Minute entspricht definitionsgemäss 1 Enzym-Einheit, bezogen auf ein gegebenes Substrat.

Claims: Patentansprüche 1. Tripeptidderivate der allgemeinen Formel H-D-X-Y-Z-R 1 in welcher X eine Cyclohexylglycyl-, Cyclohexylalanyl-, p-Hydroxycyclo- hexylalanyl-, Phenylglycyl-, Phenylalanyl-, Tyrosyl-, Leu cyl-, Isoleucyl-, Norleucyl-, Valyl-, Norvalyl-, a -Aminobu- tyryl-, Alanyl-, Prolyl- oder Pipeco)irryi-Gruppe darstellt, Y eine Cyclohexylglycyl-, Cyclohexylalanyl-, p-Hydroxycyclo hexylalanyl-, Phenylglycyl-, Phenylalanyl- oder Tyrosyl Gruppe und, falls die Bedeutung von X auf Cyclohexylglycyl, Cyclohexylalanyl, p-Hydroxycyclohexylalanyl, Phenylglycyl, Phenylalanyl oder Tyrosyl beschränkt ist, zusätzlich eine Leucyl-, Isoleucyl-, Norleucyl-, Valyl-, Norvalyl-, a-Ami- nobutyryl-, Alanyl-, Prolyl- oder Pipecolinoyl-Gruppe dar stellt, Z eine Arginyl- oder Lysyl-Gruppe darstellt und R eine chromogene Gruppe darstellt, welche durch enzymatische Hydrolyse abspaltbar ist und eine farbige oder fluoreszie rende Verbindung zu bilden vermag, und deren Salze mit Säuren. 2. Tripeptidderivate gemäss Patentanspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass a) X eine Cyclohezylglycyl-, Cyclohexylalanyl- oder Cyclohe xyltyrosyl-Gruppe und Y eine Alanyl-, a-Aminobutyryl-, Valyl-, Norvalyl-, Leucyl-, Norleucyl-, Isoleucyl-, Prolyl- oder Pipecolinoyl-Gruppe darstellen, oder b) Y eine Phenylalanyl-, Phenylglycyl- oder Tyrosyl-Gruppe und X eine Cyclohexylglycyl-, Cyclohexylalanyl-, Cyclohexyl tyrosyl-, Phenylalanyl- oder Phenylglycyl-Gruppe darstel len, oder c) Y eine Cyclohexylglycyl-, Cyclohexylalanyl-, Cyclohexyl tyrosyl-, Phenylglycyl- oder Tyrosyl-Gruppe darstellen und X eine Alanyl-, &alpha; ;-Aminobutyryl-, Valyl-, Nvalyl-, Leucyl-, Norleucyl-, Isoleucyl- oder Prolyl-Gruppe darstellen, oder d) X eine Phenylalanyl-, Phenylglycyl- oder Cyclohexylglycyl-, Gruppe und Y eine Cyclohexylalanyl-, Cyclohexylglycyl- oder Cyclohexyl- tyrosyl-Gruppe darstellen. 3. Tripeptidderivate gemäss Patentanspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass das an Arg oder Lys geknüpfte Dipeptidfragment eine CHG-Ala-, CHG-But-, CHG-Nval-, CHG-Leu-, CHG-Nleu-, CHG-Pro-, CHG-Pip-, CHA-Ala-, CHA-But-, CHA-Nval-, CHA-Leu-, CHA-Nleu-, CHA-Pro-, CHA-Pip-, CHT-But-, CHT-Leu-, CHT-Pro- oder CHT-Pip-Gruppe, oder eine CHG-Phe-, CHG-Ph'Glyn, CHG-Tyr-, CHA-Phe-, CHA-Ph'Gly-, CHA-Tyr-, CHT-Phe-, CHT PhtGly-, CHT-Tyr-, Phe-Tyr-, PhlGly-Phe- oder Ph'Gly-Tyr Gruppe, oder eine Ala-CHA-, Ala-Ph'Gly-, But-CHA-, Val-CHG-, Val-CHA-, Val-CHT-, Nval-CHA-, Nval-Ph'Gly-, Nval-Tyr-, Leu CHA-, Leu-Ph'Gly-, Nleu-CHA-, Ile-CHA-, Pro-CHG-, Pro-CHAoder Pro-CHT-Gruppe, oder eine Phe-CHA-, Phe-CHG-, Ph'Gly CHA-, Ph'Gly-CHG, Ph8Gly-CHT-, CHG-CHA-oder CHG-CHG-Gruppe ist. 4. Tripeptidderivate gemäss Patentanspruch 1 bis 3, in welchen R eine p-Nitrophenylamino-, 2-Naphthylamino-, 4 Methoxy-2-naphthylamino-, 4-Methyl-cumaryl- (7) -amino-, 1,3 Di(methoxyearbonyl)-phenyl-(5)-amino-, Chinonylamino- oder Nitrochinonylamino-Gruppe ist. 5. Tripeptidderivate gemäss Patentanspruch 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass sie mit einer Mineralsäure, z.B. HC1, HBr, H2S04, H3P04 oder einer organischen Säure, z.B. Ameisensäure, Essigsäure, Prop,ionsäure, Trimethylessigsäure, Methoxyessigsäure, einer halogenierten Essigsäure, wie Trichlor- oder Trifluoressigsäure, Glykokollsäure, Milchsäure, Oxalsäure, Malonsäure, Zitronensäure, Benzoesäure, eine im Kern substituierte aromatische Säure, wie Toluylsäuren, Chlor- oder Brombenzoesäuren, Methoxybenzoesäuren und Aminobenzoesäuren, oder Phthalsäure, protonisiert sind. 6. Verfahren zur quantitativen Bestimmung von proteolytischen Enzymen, insbesondere Enzymen der Enzymklasse E.C. 3.4.21., welche natürliche Peptidketten an der Carboxylseite sowohl von Arginin als auch von Lysin spalten, in Medien, welche die genannten Enzyme enthalten oder in welchen die letzeren gebildet oder verbraucht werden, dadurch gekennzeichnet, dass man das genannte Medium mit einem Tripeptidderivat der Formel I gemäss Patentanspruch 1 bis 3 zur Reaktion bringt und die Menge des durch die hydrolytische Einwirkung des Enzyms auf das Tripeptidderivat gebildeten farbigen oder fluoreszierenden Spaltproduktes R-NH2 durch photometrische, spektrophotometrische, fluoreszenzspektrophotometrische oder elektrochemische Methoden misst. 7. Verfahren gemäss Patentanspruch 6, dadurch gekennzeichnet, dass man Organ- oder Glandulärkallikreine in menschlichen Körperflüssigkeiten, z.B. Urin, Pankreassaft, Darmschleim, Milchdrüsensekret, SchweissdrUsensekret, Sputum oder Blut, bestimmt. 8. Verfahren gemäss Patentanspruch 6, dadurch gekennzeichnet, dass man Plasmin in Blut oder Blutplasma bestimmt. 9. Verfahren gemäss Patentanspruch 6, dadurch gekennzeichnet, dass man Thrombin in Blut oder Blutplasma bestimmt.

Inventors: GUNDRO, SVENDSEN LARS
Applicants: PENTAPHARM A.G.
Application year: 1980
Main classification: C07C103
IPC codes: C12Q1, C07K5